[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CN108514576B - 一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用 - Google Patents

一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108514576B
CN108514576B CN201810323488.XA CN201810323488A CN108514576B CN 108514576 B CN108514576 B CN 108514576B CN 201810323488 A CN201810323488 A CN 201810323488A CN 108514576 B CN108514576 B CN 108514576B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ethanol solution
mulberry leaf
pharmaceutical composition
volume fraction
eluting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810323488.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108514576A (zh
Inventor
丁邦东
钱语怡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Shizhuangyuan Biotechnology Co.,Ltd.
Original Assignee
Yangzhou Polytechnic Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yangzhou Polytechnic Institute filed Critical Yangzhou Polytechnic Institute
Priority to CN201810323488.XA priority Critical patent/CN108514576B/zh
Publication of CN108514576A publication Critical patent/CN108514576A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108514576B publication Critical patent/CN108514576B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/60—Moraceae (Mulberry family), e.g. breadfruit or fig
    • A61K36/605—Morus (mulberry)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/06—Benzopyran radicals
    • C07H17/065—Benzo[b]pyrans
    • C07H17/07—Benzo[b]pyran-4-ones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/15—Preparation or pretreatment of starting material involving mechanical treatment, e.g. chopping up, cutting or grinding
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用，所述桑叶提取物的制备方法包括如下步骤：(1)将干燥的桑叶粉碎与适量的酵母粉和α‑乙酰乳酸脱羧酶混匀，加适量的水，调pH至6.0，于30‑40℃下，发酵24‑48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液，超声提取3‑5小时后，过滤，滤液浓缩得粗提物；(2)步骤(1)得到的粗提物经大孔树脂吸附，先用体积分数为5‑10％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40‑60％的乙醇溶液洗脱3‑5个柱体积，并收集该洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶提取物。

Description

一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用
技术领域
本发明属于中药提取领域，具体涉及一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用。
背景技术
桑叶，又称为“神仙草”，根据我国古典中医药著作记载，桑叶具有养阴活血、疏风散热、清肺止咳的效果。现代医学表明，桑叶具有抗衰老、降血脂、降血糖等诸多药理作用。桑叶中含脂肪、多糖、纤维等，化学成分包括维生素、氨基酸、生物碱、黄酮类化合物、植物甾醇等。
补体是存在于人和动物血清或组织液中的一组不耐热、经活化后具有酶活性、可介导免疫应答和炎症反应的蛋白质。正常情况下，补体以酶元的形式存在，补体的功能主要是攻击外来病原和清除免疫复合物，并维持机体平衡。然而补体系统的非正常激活会引起人体免疫系统的过度反应，导致人体自身正常组织的损伤和炎症反应，是自身免疫性炎症反应的重要介质。因此，开发一种具有补体抑制活性的提取物或化合物，成为研究的热点。
发明内容
本发明提供一种桑叶黄酮提取物，其特征在于所述桑叶黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)将干燥的桑叶粉碎与适量的酵母粉和α-乙酰乳酸脱羧酶混匀，加适量的水，调pH至6.0，于30-40℃下，发酵24-48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液，超声提取3-5小时后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经大孔树脂吸附，先用体积分数为5-10％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40-60％的乙醇溶液洗脱3-5个柱体积，并收集该洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物。
步骤(1)所述粉碎优选粉碎至20-80目，每千克桑叶使用酵母粉60-80克、α-乙酰乳酸脱羧酶8-10克，每千克桑叶使用水1.2-1.5L、95％的乙醇溶液2.0-3.0L，超声波频率为30-50kHz；
步骤(2)中大孔树脂的型号优选HPD-826、HPD-722、AB-8、D101型。
所述桑叶黄酮提取物中化合物1的含量在11％以上，化合物1的结构如下：
Figure BDA0001624117940000021
本发明的另一实施方案提供一种桑叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将干燥的桑叶粉碎与适量的酵母粉和α-乙酰乳酸脱羧酶混匀，加适量的水，调pH至6.0，于30-40℃下，发酵24-48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液，超声提取3-5小时后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经大孔树脂吸附，先用体积分数为5-10％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40-60％的乙醇溶液洗脱3-5个柱体积，并开始收集该洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物。
步骤(1)所述粉碎优选粉碎至20-80目，每千克桑叶使用酵母粉60-80克、α-乙酰乳酸脱羧酶8-10克，每千克桑叶使用水1.2-1.5L、95％的乙醇溶液2.0-3.0L，超声波频率为30-50kHz；
步骤(2)中大孔树脂的型号优选HPD-826、HPD-722、AB-8、D101型。
所述桑叶黄酮提取物中化合物1的总含量在11％以上，化合物1的结构如下：
Figure BDA0001624117940000022
本发明的另一实施方案提供上述桑叶黄酮提取物在制备抗补体药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物以上述桑叶黄酮提取物作为有效成分。所述药物组合物还任选包括药学上可接受的药用辅料(优选稀释剂、赋形剂、载体)；还任选包括其他抗补体药物；所述药物组合物的剂型优选固体制剂或液体制剂。
本发明的另一实施方案提供一种从桑叶黄酮提取物中分离化合物1的方法，其特征在于包括如下步骤：
取桑叶黄酮提取物(由上述方法制备)用1-2倍质量的甲醇溶解后，经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CH2Cl2/MeOH混合溶剂，洗脱2倍柱体积后开始收集洗脱液，收集2倍柱体积的洗脱液后减压浓缩，再经高效液相色谱HPLC制备，得化合物1。
HPLC制备的色谱条件为：色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝70∶30。
本发明的另一实施方案提供上述黄酮化合物1或其药学上可接受的盐，其特征在于化合物1的结构如下：
Figure BDA0001624117940000031
本发明的另一实施方案提供上述黄酮化合物1的制备方法。
本发明的另一实施方案提供上述黄酮化合物1或其药学上可接受的盐在制备抗补体药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物以上述黄酮化合物1或其药学上可接受的盐作为有效成分。所述药物组合物还任选包括药学上可接受的药用辅料(优选稀释剂、赋形剂、载体)；还任选包括其他抗补体药物；所述药物组合物的剂型优选固体制剂或液体制剂。
本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐，可参见“Salt selection for basic drugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
(1)将干燥的桑叶(1.0kg)粉碎至20-80目后与酵母粉(60g)和α-乙酰乳酸脱羧酶(8g)混匀，加水1.2L，调pH至6.0，于30℃下，发酵48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液(3.0L)，超声提取3小时(50kHz)后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经D101型大孔树脂吸附，先用体积分数为5％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40％的乙醇溶液洗脱5个柱体积，并收集该5个柱体积的洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物(752mg，以下简称产品A)。
实施例2
(1)将干燥的桑叶(1.0kg)粉碎至20-80目后与酵母粉(80g)和α-乙酰乳酸脱羧酶(10g)混匀，加水1.5L，调pH至6.0，于40℃下，发酵24小时后，加体积分数95％的乙醇溶液(2.0L)，超声提取5小时(30kHz)后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经HPD-826型大孔树脂吸附，先用体积分数为10％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为60％的乙醇溶液洗脱3个柱体积，并收集该3个柱体积的洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物(731mg，以下简称产品B)。
实施例3
取桑叶黄酮提取物(产品A，100mg)物用100mg甲醇溶解后上样，经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CH2Cl2/MeOH混合溶剂，洗脱2倍柱体积后开始收集洗脱液，收集2倍柱体积的洗脱液(即第3、4BV的洗脱液)后减压浓缩，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝70∶30，得化合物1(11.2mg)。
Figure BDA0001624117940000041
结构确证数据：化合物1：ESIMS m/z 505.1[M+H]+；1H,13C NMR数据见下表。
化合物1的1H,13C NMR数据(Acetone-d6，400/100MHz)
Figure BDA0001624117940000051
实施例4
取桑叶黄酮提取物(产品B，100mg)用200mg甲醇溶解后上样，经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CH2Cl2/MeOH混合溶剂，洗脱2倍柱体积后开始收集洗脱液，收集2倍柱体积的洗脱液(即第3、4BV的洗脱液)后减压浓缩，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝70∶30，得化合物1(11.8mg)。化合物1结构确证数据与实施例3一致。
实施例5
(1)将干燥的桑叶(1.0kg)粉碎至20-80目加水1.2L，调pH至6.0，于30℃下，发酵48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液(3.0L)，超声提取3小时(50kHz)后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经D101型大孔树脂吸附，先用体积分数为5％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40％的乙醇溶液洗脱5个柱体积，并收集该5个柱体积的洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得产品C(521mg)。产品C经HPLC分析，其含少量芦丁和绿原酸，并未发现化合物1。
产品A、B经HPLC分析，其色谱峰一致，并且化合物1的含量在11％以上。
实施例6
按照中国专利(申请号：201610384844.X)公开的经典途径补体抑制试验的方法进行测试，得出50％抑制溶血所需供试品的浓度(CH50)，见下表。
化合物 CH<sub>50</sub>(mg/mL)
化合物1 0.121±0.020
化合物5 >1.000
产品A 0.307±0.020
产品B 0.312±0.020
产品C >1.000
肝素钠 0.053±0.008
化合物5的结构为
Figure BDA0001624117940000061

Claims (5)

1.一种桑叶黄酮提取物，其特征在于所述桑叶黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
（1）将干燥的桑叶粉碎与适量的酵母粉和α-乙酰乳酸脱羧酶混匀，加适量的水，调pH至6.0，于30-40℃ 下，发酵24-48小时后，加体积分数95%的乙醇溶液，超声提取3-5小时后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
（2）步骤（1）得到的粗提物经大孔树脂吸附，先用体积分数为5-10%的乙醇溶液洗脱2个柱体积，再用体积分数为40-60%的乙醇溶液洗脱3-5个柱体积，并收集40-60%的乙醇溶液洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物；步骤（1）所述粉碎为粉碎至20-80目，每千克桑叶使用酵母粉60-80克、α-乙酰乳酸脱羧酶8-10克；每千克桑叶使用水1.2-1.5 L、95%的乙醇溶液2.0-3.0L；超声波频率为30-50kHz；步骤（2）中大孔树脂的型号选自HPD-826、D101型；
所述桑叶黄酮提取物中化合物1的总含量在11%以上，化合物1的结构如下：
Figure 766674DEST_PATH_IMAGE001
。
2.权利要求1所述的桑叶黄酮提取物在制备抗补体药物中的应用。
3.一种抗补体药物组合物，其特征在于所述抗补体药物组合物以权利要求1所述的桑叶黄酮提取物作为有效成分。
4.权利要求3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括药学上可接受的药用辅料。
5.权利要求3-4任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物还包括其他抗补体药物。
CN201810323488.XA 2018-04-10 2018-04-10 一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用 Active CN108514576B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810323488.XA CN108514576B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810323488.XA CN108514576B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108514576A CN108514576A (zh) 2018-09-11
CN108514576B true CN108514576B (zh) 2021-05-07

Family

ID=63432405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810323488.XA Active CN108514576B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108514576B (zh)

Also Published As

Publication number Publication date
CN108514576A (zh) 2018-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10624938B2 (en) Total flavone extract of flower of abelmoschus manihot L. medic and preparation method thereof
CN101185692B (zh) 一种胆木提取物及其制剂与用途
CN111018821B (zh) 双黄酮类化合物及其制备方法和用途
JPS62209101A (ja) エキナセアプルプレアまたはエキナセアアングステイフオリアの細胞培養物からの免疫刺激作用性ポリサツカライド、その製造方法及びこれを含む製剤
CN115154476B (zh) 青钱柳的提取物及其抗痛风和降尿酸应用
CN102872015B (zh) 一种白药子总生物碱提取物及其制备方法及应用
CN107929544B (zh) 白及属植物中militarine部位及单体的制备方法及其应用
CN108514576B (zh) 一种利用超声波提取技术制备的桑叶提取物及其应用
CN108250258B (zh) 一种利用发酵与超声波提取技术制备的新黄酮糖苷
CN108498590B (zh) 一种能提高生物利用度及避免高氯血症的天然降糖剂
CN114869923B (zh) 民族药双参水溶性提取物及其制备方法和应用
CN108125995B (zh) 一种银杏叶黄酮提取物及其应用
CN115636859A (zh) 一种从杨梅叶中同时分离纯化两种没食子酰基化杨梅苷的方法及用途
CN111150754B (zh) 板栗花提取物在制备食品或抗炎药物中的应用
CN1165545C (zh) 从栾树植物中分离提取总黄酮部位的方法及其应用
CN109303785B (zh) 一种党参炔苷类似化合物在制备治疗心率失常药物中的应用
CN115215909A (zh) 紫苏提取物、其制备方法、药物组合物及用途
JP4480204B2 (ja) カワリハラタケの抗腫瘍性画分
CN108129437B (zh) 一种黄酮化合物及其制备方法与应用
CN1095669C (zh) 含原人参二醇组分皂甙的药物组合物,其制备方法及应用
CN116392526B (zh) 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的黄山楂提取物制备方法与应用
CN1216891C (zh) 一种京尼平酸龙胆二糖苷药物化合物及其制备方法
CN108619179A (zh) 老鹳草提取物及其医药用途
CN108586553B (zh) 一种新型黄酮糖苷类化合物及其作为MptpB抑制剂的应用
CN110279751B (zh) 一种治疗胃癌的药物组合物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220622

Address after: 413100 No. 94, Taibai community, qionghu street, Yuanjiang City, Yiyang City, Hunan Province

Patentee after: Hunan food source Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 225127 No. 199, Yang Hua Xi Road, Yangzhou, Jiangsu

Patentee before: YANGZHOU POLYTECHNIC INSTITUTE

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20221201

Address after: Room 2207A, No. 28, Maji Road, China (Shanghai) Pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai, 200000

Patentee after: Shanghai Shizhuangyuan Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 413100 No. 94, Taibai community, qionghu street, Yuanjiang City, Yiyang City, Hunan Province

Patentee before: Hunan food source Biotechnology Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right