CN107857818A - 一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白 - Google Patents
一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107857818A CN107857818A CN201710668287.9A CN201710668287A CN107857818A CN 107857818 A CN107857818 A CN 107857818A CN 201710668287 A CN201710668287 A CN 201710668287A CN 107857818 A CN107857818 A CN 107857818A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fusion protein
- tnf
- bispecific fusion
- fragments
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 65
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 65
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 57
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 45
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 40
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 40
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 29
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 24
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 19
- 102000004554 Interleukin-17 Receptors Human genes 0.000 claims description 12
- 108010017525 Interleukin-17 Receptors Proteins 0.000 claims description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 12
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 9
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 108010005636 polypeptide C Proteins 0.000 claims description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims 1
- 229940046728 tumor necrosis factor alpha inhibitor Drugs 0.000 claims 1
- 239000002452 tumor necrosis factor alpha inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 7
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 4
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 4
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 2
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001313855 Bletilla Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241000206575 Chondrus crispus Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 239000004383 Steviol glycoside Substances 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000000216 gellan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010492 gellan gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 229930182488 steviol glycoside Natural products 0.000 description 1
- 235000019411 steviol glycoside Nutrition 0.000 description 1
- 150000008144 steviol glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 235000019202 steviosides Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7151—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF], for lymphotoxin [LT]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白及其制备方法和用途。本发明一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白，所述双特异性融合蛋白为二聚体，均分别包括三个结构功能区域，所述三个结构功能区域为TNF‑α受体片段、Fcγ片段和IL‑17受体片段。本发明所提供的双特异性融合蛋白包括IL‑17受体片段和TNF‑α受体片段，能够分别有效结合IL‑17和/或TNFα，具有良好的生物活性、特异性和稳定性。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白及其制备方法和用途。
背景技术
白介素-17家族的细胞因子被分别命名为白介素-17A到白介素-17F，并分别有它们对应的受体，这些白介素-17细胞因子可以结合到相对应的受体成员上从而介导不同的炎症反应。白介素-17家族的细胞因子就如同一把双刃剑，在急性炎症反应中，它们可以快速地分泌出来保护机体不受外源有害物质的危害，而当人体产生由于多种遗传和环境因素所导致的慢性炎症时，它们又会加速多种慢性疾病的病程。所以，白介素-17家族细胞因子和人类的健康息息相关，而对于其调控机制的方法也成为本领域的一个研究热点。
肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，简写TNF-α)是一种能够直接杀伤肿瘤细胞的细胞因子，并有其对应的受体。肿瘤坏死因子-α是迄今为止所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一，八十年代在欧美曾展开临床研究，然而由于毒副作用严重而被迫终止。但由于TNF-α明确的抗肿瘤活性，使得学者们不愿轻易放弃。一些临床试验用TNF-α进行隔离肢体或器官灌流，取得了轰动的成果，同时通过对TNF-α的深入研究，研制出一些高效，低毒的TNF-α变构体，因此九十年代末在欧美重新确认了 TNF-α抗肿瘤的重要地位。
目前还没有关于白介素-17家族与肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，简写TNF-α)相互结合的双特异性融合蛋白相关报道。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白，所述双特异性融合蛋白为二聚体，每条链均包括三个结构功能区域，均分别包括三个结构功能区域，所述三个结构功能区域为TNF-α受体片段、Fcγ片段和IL-17受体片段；
所述IL-17受体片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的多肽；或
b)氨基酸序列与SEQ ID No.1具有80％以上同源性、且具有a)限定的多肽的功能的多肽；
所述TNF-α受体片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽；或
b)氨基酸序列与SEQ ID No.2具有80％以上同源性、且具有c)限定的多肽的功能的多肽；
所述Fcγ片段为FcγHinge-CH2-CH3片段，所述FcγHinge-CH2-CH3片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽；或
b)氨基酸序列与SEQ ID No.3具有80％以上同源性、且具有e)限定的多肽的功能的多肽；
具体的，所述b)中的多肽具体指：氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的多肽经过取代、缺失或者添加一个或多个(具体可以是1-50个，也可以是1-30个，也可以是1-20个，也可以是1-10个，也可以是1-5个，也可以是1-3个)氨基酸而得到的，且具有氨基酸序列如SEQID No.1所示的多肽功能的多肽。所述b)中的多肽的氨基酸序列可与SEQ ID No.1具有80％以上同源性，更具体可具有85％以上同源性，更具体可具有90％以上同源性，更具体可具有93％以上同源性，更具体可具有95％以上同源性，更具体可具有97％以上同源性，进一步具体可具有99％以上同源性。
具体的，所述蛋白自N端至C端依次包括TNF-α受体片段、FcγHinge-CH2-CH3片段和IL-17受体片段，为二聚体结构。
具体的，本发明所提供的针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白中，二聚体通过所述FcγHinge-CH2-CH3片段间的二硫键结合，从而可以形成Fc片段，并可以进一步在Fc片段的N端形成两分子的TNF-α受体片段，在Fc片段的C端形成两分子的IL-17受体片段。
具体的，所述双特异性融合蛋白可以为针对IL-17A和/或TNF-α的双特异性融合蛋白，所述TNF-α受体片段可以为II型肿瘤坏死因子受体(TNFR2)片段，所述IL-17受体片段可以为IL-17A受体(IL-17RA)片段。
本发明第二方面提供一种分离的多核苷酸，编码所述针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白。
具体的，所述分离的多核苷酸包括IL-17受体片段编码序列、Fcγ片段编码序列和TNF-α受体片段编码序列。
更具体的，所述IL-17受体片段编码序列如SEQ ID No.4所示，所述TNF-α受体片段编码序列如SEQ ID No.5所示，所述FcγHinge-CH2-CH3片段编码序列如SEQ ID No.6 所示。
本发明第三方面提供一种重组表达载体，包含编码所述针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白的多核苷酸。
具体的，所述重组表达载体由所述分离的多核苷酸插入到表达载体的多克隆位点构建而成。所述表达载体具体可以是本领域的技术人员所熟知的现有常用的表达载体，具体可采用的表达载体包括但不限于：pET系列表达载体、pGEX系列表达载体、pcDNA系列表达载体等。本领域技术人员可以选择合适的载体，还可以进一步对现有的载体进行修饰改造，以构建获得能够达到期望的表达水平的重组表达载体。所述期望的表达水平可以是更高的蛋白表达水平，也可以是一个相对合理的蛋白表达水平，以针对不同个体给予合理的给药量。
本发明第四方面提供一种融合蛋白表达系统，所述融合蛋白表达系统含有所述重组表达载体或基因组中整合有外源的所述的多核苷酸。
具体的，所述融合蛋白表达系统由所述重组表达载体转染到宿主细胞构建而成。任何适用于表达载体进行表达的细胞都可以作为宿主细胞。例如，酵母、昆虫、植物等的细胞。优选的，所述宿主细胞为真核细胞，可采用不会产生抗体的哺乳动物宿主细胞系，具体可采用的细胞系包括但不限于：中国仓鼠的卵巢细胞(CHO)、幼仓鼠的肾脏细胞(BHK,ATCCCCL 10)、幼鼠的塞尔托利细胞(sertoli cells)、猴的肾脏细胞(COS细胞)、通过SV40(COS-7,ATCC CRL 165 1)转化的猴的肾脏CVI细胞、人的胚肾细胞(HEK-293)、猴肾脏细胞(CVI ATCC CCL 70)、非洲绿猴的肾脏细胞(VERO-76,ATCC CRL-1587)、人的子宫颈癌细胞(HELA,ATCC CCL 2)等。
本发明第五方面提供所述双特异性融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：
1)培养所述融合蛋白表达系统，使之表达所述双特异性融合蛋白；
2)收集含有所述双特异性融合蛋白的培养物；
3)从步骤2所得培养物中分离出所述双特异性融合蛋白。
具体的，在获得编码本发明的融合蛋白的核酸序列后，可按照以下方法制备生产目的融合蛋白。例如将含有编码目标融合蛋白的多核苷酸的重组表达载体直接导入宿主细胞，获得融合蛋白表达系统，并在适当的条件下进行培养，从而诱导出被编码融合蛋白的表达。本发明中所用的重组表达载体和宿主细胞均为现有技术，可通过商业途径直接获取，培养中所用的培养基亦为各种常规培养基，本领域技术人员可根据经验选择适用的培养基，在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。在上面的方法中，重组多肽可在细胞内或在细胞膜上表达，并可以互相作用形成二聚体融合蛋白结构和/或被分泌到细胞外。一旦获得本发明所述的双特异性融合蛋白，就可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化所述双特异性融合蛋白，这些方法是本领域技术人员所熟知的，这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理 (盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术等。
在本发明一实施方式中，还可以通过在表达载体中插入标记物的方法，对融合蛋白表达系统培养获得的双特异性融合蛋白进行标记，以便于对培养物中的双特异性融合蛋白进行分离、提纯，具体可使用的标记物可以是各种本领域各种常规的适用于融合蛋白纯化的标记物。
本发明第六方面提供一种组合物，包括治疗有效量的所述双特异性融合蛋白或所述融合蛋白表达系统(例如，宿主细胞)的培养物。
在本文中，若能减少一个或多个病征或临床指标即代表该治疗是“有效”的。
具体的，所述组合物还包括药学上可接受的载体。药学上可接受的载体指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂，具体指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可包括液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如崩解剂、润湿剂、乳化剂、 pH缓冲物质、海藻胶、果胶、羧甲基纤维素钠(CMC)、黄原胶、结冷胶、瓜尔胶、卡拉胶、蔗糖、麦芽糖醇、甜菊糖苷等。
本发明第七方面提供所述双特异性融合蛋白在制备或筛选在制备或筛选TNFα抑制剂和 /或IL-17抑制剂中的用途.
所述用途具体指：以IL-17和/或TNFα为作用靶标，将所述双特异性融合蛋白作为药效成分用于制备治疗药物，所述治疗药物可通过降低IL-17和/或TNFα的表达量、抑制IL-17和/或TNFα的活性等方式。具体的，降低IL-17的表达量具体指，相比给药前，IL-17 的表达量可降低至少10％，更具体地可降低至少30％，更具体地可降低至少50％，更具体地可降低至少70％，进一步具体地可降低至少90％。具体的，降低TNFα的表达量具体指，相比给药前，TNFα的表达量可降低至少10％，更具体地可降低至少30％，更具体地可降低至少50％，更具体地可降低至少70％，进一步具体地可降低至少90％。具体的，抑制IL-17 活性具体指，相比给药前，IL-17活性可降低至少10％，更具体地可降低至少30％，更具体地可降低至少50％，更具体地可降低至少70％，进一步具体地可降低至少90％。具体的，抑制TNFα活性具体指，相比给药前，TNFα活性可降低至少10％，更具体地可降低至少 30％，更具体地可降低至少50％，更具体地可降低至少70％，进一步具体地可降低至少90％。
更具体的，所述IL-17可以为IL-17A。
本发明第八方面提供一种治疗方法，将所述药物组合物施用于个体。
所述个体是指可接受所述药物组合物和/或治疗方法的动物(包括人类)，在此涵盖了雄性与雌性两种性别，除非另有具体说明。因此，所述个体至少包含任何哺乳类动物，包括但不限于：人类、非人类的灵长类，如哺乳动物、狗、猫、马、羊、猪、牛等，其可因利用所述药物组合物进行治疗而获益。
具体的，所述治疗方法通过降低IL-17和/或TNFα的表达量、抑制IL-17和/或TNFα的活性等方式。
如上所述，本发明所提供的双特异性融合蛋白包括IL-17受体片段和TNF-α受体片段，能够有效针对IL-17和/或TNFα，具有良好的生物活性、特异性和稳定性。双特异性融合蛋白的结构能够有效降低给药量和治疗成本，具有极高的产业化价值。
附图说明
图1显示为本发明所提供的针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白的示意图。
图2显示为本发明所提供的针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白的鉴定示意图。
图3显示为本发明所所提供的针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白活性实验效果示意图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates； theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
实施例1
1.作为TNF-α受体片段的TNFR2片段的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码序列如 SEQ ID No.5所示；作为FcγHinge-CH2-CH3片段的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，编码序列如SEQ ID No.6所示；作为IL-17受体片段的IL-17RA片段的氨基酸序列如SEQ IDNo.1 所示，编码序列如SEQ ID No.4所示。
TNFR2片段的氨基酸序列(SEQ ID No.2)：
Mapvavwaalavglelwaaahalpaqvaftpyapepgstcrlreyydqtaqmccskcspgqhakvfctktsdtvcdscedstytqlwnwvpeclscgsrcssdqvetqactreqnrictcrpgwycalskqegcrlcaplrkcrpgfgvarpgtetsdvvckpcapgtfsnttsstdicrphqicnvvaipgnasmdavctstsptrsmapgavhlpqpvstrsqhtqptpepstapstsfllpmgpsppaegstgd
TNFR2片段的编码序列(SEQ ID No.5)：
Atggcgcccgtcgccgtctgggccgcgctggccgtcggactggagctctgggctgcggcgcacgccttgcccgcccaggtggcatttacaccctacgccccggagcccgggagcacatgccggctcagagaatactatgaccagacagctcagatgtgctgcagcaaatgctcgccgggccaacatgcaaaagtcttctgtaccaagacctcggacaccgtgtgtgactcctgtgaggacagcacatacacccagctctggaactgggttcccgagtgcttgagctgtggctcccgctgtagctctgaccaggtggaaactcaagcctgcactcgggaacagaaccgcatctgcacctgcaggcccggctggtactgcgcgctgagcaagcaggaggggtgccggctgtgcgcgccgctgcgcaagtgccgcccgggcttcggcgtggccagaccaggaactgaaacatcagacgtggtgtgcaagccctgtgccccggggacgttctccaacacgacttcatccacggatatttgcaggccccaccagatctgtaacgtggtggccatccctgggaatgcaagcatggatgcagtctgcacgtccacgtcccccacccggagtatggccccaggggcagtacacttaccccagccagtgtccacacgatcccaacacacgcagccaactccagaacccagcactgctccaagcacctccttcctgctcccaatgggccccagccccccagctgaagggagcactggcgac
FcγHinge-CH2-CH3片段的氨基酸序列(SEQ ID No.3)：
Epkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
FcγHinge-CH2-CH3片段的编码序列(SEQ ID No.6)：
GAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAA
IL-17RA片段的氨基酸序列(SEQ ID No.1)：
LRLLDHRAPVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHKRWRFTFSHFVVDPGQEYEVTVHHLPKPIPDGDPNHQSKNFLVPDCEDARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKWCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSVTVSCPEMPDTPEPIPDYMPLW
IL-17RA片段的编码序列(SEQ ID No.4)：
Ctgcgactcctggaccaccgggcgccagtctgctcccagccggggctaaactgcacggtcaagaatagtacctgcctggatgacagctggattcaccctcgaaacctgaccccctcctccccaaaggacctgcagatccagctgcactttgcccacacccaacaaggagacctgttccccgtggctcacatcgaatggacactgcagacagacgccagcatcctgtacctcgagggtgcagagttatctgtcctgcagctgaacaccaatgaacgtttgtgcgtcaggtttgagtttctgtccaaactgaggcatcaccacaaacggtggcgttttaccttcagccactttgtggttgaccctggccaggaatatgaggtgaccgttcaccacctgcccaagcccatccctgatggggacccaaaccaccagtccaagaatttccttgtgcctgactgtgaggacgccaggatgaaggtaaccacgccatgcatgagctcaggcagcctgtgggaccccaacatcaccgtggagaccctggaggcccaccagctgcgtgtgagcttcaccctgtggaacgaatctacccattaccagatcctgctgaccagttttccgcacatggagaaccacagttgctttgagcacatgcaccacatacctgcgcccagaccagaagagttccaccagcgatccaacgtcacactcactctacgcaaccttaaatggtgctgtcgccaccaagtgcagatccagcccttcttcagcagctgcctcaatgactgcctcagacactccgtgactgtttcctgcccagaaatgccagacactccagaaccaattccggactacatgcccctgtgg
2.融合蛋白TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc自N端至C端依次包括，TNFR片段、FcγHinge-CH2-CH3片段、IL-17RA片段。
3.融合蛋白TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc编码序列自N端至C端依次包括，TNFR片段编码序列、FcγHinge-CH2-CH3片段编码序列、IL-17RA片段编码序列。
TNFR2-Fcγ-IL-17AR氨基酸序列:
MAPVAVWAALAVGLELWAAAHALPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPGFGVARPGTETSDVVCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNVVAIPGNASMDAVCTSTSPTRSMAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGDEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSLRLLDHRAPVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHKRWRFTFSHFVVDPGQEYEVTVHHLPKPIPDGDPNHQSKNFLVPDCEDARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKWCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSVTVSCPEMPDTPEPIPDYMPLW
实施例2
表达TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc融合蛋白
将融合蛋白TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc的编码序列克隆至表达载体的多克隆位点中，实现编码序列与表达载体的连结，获得质粒DNA。将质粒DNA转染宿主细胞，转染可以在6孔板进行。转染后的阳性细胞株传代至1L摇瓶中，温度37C，5％的CO2环境中，120RPM摇床培养，每天补充葡萄糖、氨基酸等养料，细胞活率降低至80-85％停止培养。将细胞液 2000RCF离心取出细胞后，再5000RCF离心取上清进行蛋白纯化，获得 TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc融合蛋白。
实施例3
TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc融合蛋白活性实验：
TNF-α对L929细胞有杀伤作用，因而TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc融合蛋白对细胞的杀伤有保护作用，所以可通过TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc融合蛋白拮抗TNF-α对靶细胞L929细胞株的杀伤来检测TNFa-Fab的生物学活性。实验证明，TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc融合蛋白对L929细胞具有较强的保护作用，可见TNFR2-Fcγ-IL-17RA-Fc融合蛋白针对TNF-α具有良好的活性和特异性。结果参见图3。
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (9)
1.一种针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白，所述双特异性融合蛋白为二聚体，其特征在于，均分别包括三个结构功能区域，所述三个结构功能区域为TNF-α受体片段、Fcγ片段和IL-17受体片段；
所述IL-17受体片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的多肽；或
b)氨基酸序列与SEQ ID No.1具有80％以上同源性、且具有a)限定的多肽的功能的多肽；
所述TNF-α受体片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽；或
b)氨基酸序列与SEQ ID No.2具有80％以上同源性、且具有c)限定的多肽的功能的多肽；
所述Fcγ片段为FcγHinge-CH2-CH3片段，所述FcγHinge-CH2-CH3片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽；或
b)氨基酸序列与SEQ ID No.3具有80％以上同源性、且具有e)限定的多肽的功能的多肽。
2.如权利要求1所述的一种针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白，其特征在于，所述蛋白自N端至C端依次包括TNF-α受体片段、Fcγ片段和IL-17受体片段，为二聚体。
3.如权利要求1所述的一种针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白，其特征在于，二聚体通过所述FcγHinge-CH2-CH3片段间的二硫键结合。
4.一种分离的多核苷酸，编码所述针对权利要求1至3任一项权利要求所述的IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白。
5.一种重组表达载体，包含编码所述针对权利要求1至3任一项权利要求所述的IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白的多核苷酸。
6.一种融合蛋白表达系统，所述融合蛋白表达系统含有权利要求5所述重组表达载体或基因组中整合有外源的所述的多核苷酸。
7.如权利要求1-3任一权利要求所述的针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：
1)培养所述融合蛋白表达系统，使之表达所述双特异性融合蛋白；
2)收集含有所述双特异性融合蛋白的培养物；
3)从步骤2)所得培养物中分离出所述双特异性融合蛋白。
8.一种组合物，包括治疗有效量的如权利要求1-3任一权利要求所述的针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白或如权利要求6所述的融合蛋白表达系统的培养物。
9.如权利要求1-3任一权利要求所述的针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白在制备或筛选TNFα抑制剂和/或IL-17抑制剂中的用途。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710668287.9A CN107857818A (zh) | 2017-08-07 | 2017-08-07 | 一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白 |
| US16/637,246 US20200181236A1 (en) | 2017-08-07 | 2018-01-18 | BISPECIFIC FUSION PROTEIN FOR IL-17 AND TNF-alpha |
| PCT/CN2018/073271 WO2019029129A1 (zh) | 2017-08-07 | 2018-01-18 | 一种针对IL-17和TNF-α的双特异性融合蛋白 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710668287.9A CN107857818A (zh) | 2017-08-07 | 2017-08-07 | 一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107857818A true CN107857818A (zh) | 2018-03-30 |
Family
ID=61699320
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710668287.9A Pending CN107857818A (zh) | 2017-08-07 | 2017-08-07 | 一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20200181236A1 (zh) |
| CN (1) | CN107857818A (zh) |
| WO (1) | WO2019029129A1 (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109824780A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-05-31 | 包骏 | 一种用于研发药物的双功能融合蛋白平台 |
| CN111100211A (zh) * | 2019-01-30 | 2020-05-05 | 武汉九州钰民医药科技有限公司 | 一种Fc融合蛋白及其应用 |
| WO2020113403A1 (en) * | 2018-12-04 | 2020-06-11 | Beijing Percans Oncology Co. Ltd. | Cytokine fusion proteins |
| WO2024125445A1 (zh) * | 2022-12-12 | 2024-06-20 | 江苏康缘瑞翱生物医药科技有限公司 | 一种靶向TNF-α与IL-17A的双特异性融合蛋白及其用途 |
| US12226481B2 (en) | 2018-01-24 | 2025-02-18 | Beijing Percans Oncology Co., Ltd. | Cytokine fusion proteins |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116026949A (zh) * | 2022-12-06 | 2023-04-28 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 全血中四种免疫抑制剂的检测方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008071751A1 (en) * | 2006-12-14 | 2008-06-19 | Actogenix N.V. | Delivery of binding molecules to induce immunomodulation |
| CN101490085A (zh) * | 2006-06-12 | 2009-07-22 | 特鲁比昂药品公司 | 具有效应功能的单链多价结合蛋白 |
| CN104311670A (zh) * | 2014-04-23 | 2015-01-28 | 哈尔滨博翱生物医药技术开发有限公司 | 针对IL-17和TNFα的融合多肽及其应用 |
| CN104583415A (zh) * | 2011-07-19 | 2015-04-29 | 国家生物技术研究所公司 | 新型il-17r-ecd突变体 |
| CN105283467A (zh) * | 2013-03-08 | 2016-01-27 | 伊莱利利公司 | 抗tnf-抗il-17双特异性抗体 |
| CN105418762A (zh) * | 2007-12-26 | 2016-03-23 | Xencor公司 | 与FcRn结合改变的Fc变体 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006500927A (ja) * | 2002-09-13 | 2006-01-12 | ザ・ユニバーシティ・オブ・クイーンズランド | コドン翻訳効率に基づく遺伝子発現系 |
| CA2679588A1 (en) * | 2007-03-26 | 2008-10-02 | Zymogenetics, Inc. | Soluble il-17ra/rc fusion proteins and related methods |
| CN105177032B (zh) * | 2010-09-01 | 2019-05-10 | 山东新时代药业有限公司 | 新型人肿瘤坏死因子受体-Fc融合基因及其产物蛋白 |
| UA117218C2 (uk) * | 2011-05-05 | 2018-07-10 | Мерк Патент Гмбх | Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f |
| US9446123B2 (en) * | 2012-06-01 | 2016-09-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multimeric complexes with improved in vivo stability, pharmacokinetics and efficacy |
-
2017
- 2017-08-07 CN CN201710668287.9A patent/CN107857818A/zh active Pending
-
2018
- 2018-01-18 WO PCT/CN2018/073271 patent/WO2019029129A1/zh active Application Filing
- 2018-01-18 US US16/637,246 patent/US20200181236A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101490085A (zh) * | 2006-06-12 | 2009-07-22 | 特鲁比昂药品公司 | 具有效应功能的单链多价结合蛋白 |
| WO2008071751A1 (en) * | 2006-12-14 | 2008-06-19 | Actogenix N.V. | Delivery of binding molecules to induce immunomodulation |
| CN105418762A (zh) * | 2007-12-26 | 2016-03-23 | Xencor公司 | 与FcRn结合改变的Fc变体 |
| CN104583415A (zh) * | 2011-07-19 | 2015-04-29 | 国家生物技术研究所公司 | 新型il-17r-ecd突变体 |
| CN105283467A (zh) * | 2013-03-08 | 2016-01-27 | 伊莱利利公司 | 抗tnf-抗il-17双特异性抗体 |
| CN104311670A (zh) * | 2014-04-23 | 2015-01-28 | 哈尔滨博翱生物医药技术开发有限公司 | 针对IL-17和TNFα的融合多肽及其应用 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US12226481B2 (en) | 2018-01-24 | 2025-02-18 | Beijing Percans Oncology Co., Ltd. | Cytokine fusion proteins |
| CN109824780A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-05-31 | 包骏 | 一种用于研发药物的双功能融合蛋白平台 |
| WO2020113403A1 (en) * | 2018-12-04 | 2020-06-11 | Beijing Percans Oncology Co. Ltd. | Cytokine fusion proteins |
| CN111100211A (zh) * | 2019-01-30 | 2020-05-05 | 武汉九州钰民医药科技有限公司 | 一种Fc融合蛋白及其应用 |
| WO2024125445A1 (zh) * | 2022-12-12 | 2024-06-20 | 江苏康缘瑞翱生物医药科技有限公司 | 一种靶向TNF-α与IL-17A的双特异性融合蛋白及其用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20200181236A1 (en) | 2020-06-11 |
| WO2019029129A1 (zh) | 2019-02-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107857818A (zh) | 一种针对IL‑17和TNF‑α的双特异性融合蛋白 | |
| DE69533923T2 (de) | Cytokinin-designiertes lerk-5 | |
| DE69837606T2 (de) | Cystein-reiche rezeptoren-train | |
| CN100404673C (zh) | 鉴定t细胞表位的方法及制备具有降低的免疫原性的分子的用途 | |
| DE69132925T2 (de) | An stabile proteinkernstruktur gebundene proteinpolyliganden | |
| DE3856180T2 (de) | Nukleinsaürefragmente, die mannose bindende fragmente vom menschlichen mannosebindenden protein kodieren | |
| US20100254984A1 (en) | Fusion constructs containing active sections of tnf ligands | |
| DE19963859A1 (de) | Bi- oder Oligomer eines Di-, Tri-, Quattro- oder Pentamers von rekombinanten Fusionsproteinen | |
| CN107320719A (zh) | Hgh‑xten融合蛋白及其在治疗生长激素缺乏中的用途 | |
| CN1935846A (zh) | 一种用于治疗糖尿病的融合蛋白及其制备方法和应用 | |
| KR20220043985A (ko) | 홍합 접착 단백질 유래의 재조합 폴리펩티드 및 그의 용도 | |
| CN110256575A (zh) | 一种长效重组人生长激素融合蛋白及其工程细胞 | |
| CN106432509A (zh) | 一种治疗代谢疾病的重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白及其制备方法和应用 | |
| Santo et al. | Selective inhibition of TNFR1 reduces osteoclast numbers and is differentiated from anti-TNF in a LPS-driven model of inflammatory bone loss | |
| AU2005264453B2 (en) | IL-18 receptor antagonist and pharmaceutical composition containing the antagonist | |
| CN103509814B (zh) | 一种草鱼肿瘤坏死因子α基因的重组表达方法 | |
| DE60118359T2 (de) | Humanische pellino-polypeptide | |
| KR19980071708A (ko) | 용골(溶骨)세포 형성 억제제 | |
| CN107596346A (zh) | 异常性疼痛、痛觉过敏、自发性疼痛、和幻痛的治疗 | |
| Godahewa et al. | Molecular characterization and expression analysis of B cell activating factor from rock bream (Oplegnathus fasciatus) | |
| CN101580846A (zh) | 一种用于防治肝硬化的人源细胞珠蛋白及其制备方法 | |
| KR102596264B1 (ko) | 기능성 펩티드가 결합된 생체적합 폴리펩티드를 포함하는 염증 질환의 억제용 조성물 | |
| CN101717441A (zh) | 用于镇痛的蛇毒来源的细胞毒素CTXn及其提纯方法和用途 | |
| CN102276725B (zh) | 隐孢子虫CTL和Th混合多表位基因和融合蛋白及应用 | |
| CN102816222B (zh) | 鸡柔嫩艾美耳球虫ma2基因、载体、重组菌株和蛋白及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180330 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |