CN107406396B - 阳离子性脂质 - Google Patents
阳离子性脂质 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107406396B CN107406396B CN201680012926.XA CN201680012926A CN107406396B CN 107406396 B CN107406396 B CN 107406396B CN 201680012926 A CN201680012926 A CN 201680012926A CN 107406396 B CN107406396 B CN 107406396B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- lipid
- cationic lipid
- present
- membrane structure
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- -1 Cationic lipid Chemical class 0.000 title claims abstract description 153
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 151
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 151
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 150
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 120
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 88
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 44
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 38
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 36
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 25
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical group 0.000 claims description 23
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 20
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 20
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 20
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 20
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 16
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 10
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 7
- 125000002328 sterol group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 32
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 abstract description 31
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 abstract description 11
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 abstract description 9
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 81
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 78
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 53
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 37
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 21
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 12
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 12
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 12
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 11
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 10
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 9
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 9
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 9
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 9
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 8
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 150000003432 sterols Chemical group 0.000 description 8
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 8
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 7
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 7
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 7
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 7
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 7
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N [3-(dimethylamino)-2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CN(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 6
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 6
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 229950000812 dexamethasone palmitate Drugs 0.000 description 5
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 5
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 5
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 5
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 1-methylsulfonylpiperidin-4-one Chemical compound CS(=O)(=O)N1CCC(=O)CC1 RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 125000002889 tridecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ATHVAWFAEPLPPQ-VRDBWYNSSA-N 1-stearoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC ATHVAWFAEPLPPQ-VRDBWYNSSA-N 0.000 description 3
- 108010051913 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000276569 Oryzias latipes Species 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical group C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 3
- QEJYJQHAIFZUHZ-UHFFFAOYSA-L copper phosphoric acid sulfate Chemical compound [Cu+2].OP(O)(O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O QEJYJQHAIFZUHZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 125000000755 henicosyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 3
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 3
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 3
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 3
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N (5alpha)-cholestan-3beta-ol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- UHUSDOQQWJGJQS-QNGWXLTQSA-N 1,2-dioctadecanoyl-sn-glycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC UHUSDOQQWJGJQS-QNGWXLTQSA-N 0.000 description 2
- KYNFOMQIXZUKRK-UHFFFAOYSA-N 2,2'-dithiodiethanol Chemical compound OCCSSCCO KYNFOMQIXZUKRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFCSWCVEJLETKA-UHFFFAOYSA-N 2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound OCCN1CCNCC1 WFCSWCVEJLETKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 2
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N D-alpha-Tocopheryl Acid Succinate Chemical compound OC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N 0.000 description 2
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000271567 Struthioniformes Species 0.000 description 2
- 241000255588 Tephritidae Species 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 2
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N alpha-cholestanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940099418 d- alpha-tocopherol succinate Drugs 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical compound [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001196 nonadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 125000002958 pentadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 2
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000002294 steroidal antiinflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 2
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- 239000003021 water soluble solvent Substances 0.000 description 2
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 1
- MWRBNPKJOOWZPW-NYVOMTAGSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-NYVOMTAGSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- JFBCSFJKETUREV-LJAQVGFWSA-N 1,2-ditetradecanoyl-sn-glycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC JFBCSFJKETUREV-LJAQVGFWSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030489 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase [NAD(+)] Human genes 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJJVAFUKOBZPCB-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-(4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trienyl)-3,4-dihydrochromen-6-ol Chemical compound OC1=CC=C2OC(CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1 GJJVAFUKOBZPCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N Dehydrocholesterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Chemical class 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N Isobutene Chemical group CC(C)=C VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M Methanesulfonate Chemical compound CS([O-])(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229940122426 Nuclease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241001446509 Psoralea Species 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Natural products N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N UNPD88870 Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)=CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 229930002945 all-trans-retinaldehyde Natural products 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 125000001204 arachidyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 125000002511 behenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940076810 beta sitosterol Drugs 0.000 description 1
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002537 betamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N betamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N bis(4-nitrophenyl) carbonate Chemical group C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960000590 celecoxib Drugs 0.000 description 1
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N cholesteryl hemisuccinate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)CCC(O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILYCWAKSDCYMBB-OPCMSESCSA-N dihydrotachysterol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1/C[C@@H](O)CC[C@@H]1C ILYCWAKSDCYMBB-OPCMSESCSA-N 0.000 description 1
- 229960000465 dihydrotachysterol Drugs 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 1
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 125000005064 octadecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 125000005702 oxyalkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 150000004885 piperazines Chemical class 0.000 description 1
- QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N piroxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=CC=CC=N1 QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002702 piroxicam Drugs 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical class 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- IGFXRKMLLMBKSA-UHFFFAOYSA-N purine Chemical compound N1=C[N]C2=NC=NC2=C1 IGFXRKMLLMBKSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000011604 retinal Substances 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N retinal group Chemical group C\C(=C/C=O)\C=C\C=C(\C=C\C1=C(CCCC1(C)C)C)/C NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N rofecoxib Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1C1=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)OC1 RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000371 rofecoxib Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 description 1
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 description 1
- 229940032091 stigmasterol Drugs 0.000 description 1
- 235000016831 stigmasterol Nutrition 0.000 description 1
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005063 tetradecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000013076 thyroid tumor Diseases 0.000 description 1
- 229930003802 tocotrienol Natural products 0.000 description 1
- 239000011731 tocotrienol Substances 0.000 description 1
- 235000019148 tocotrienols Nutrition 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000002469 tricosyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N vitamin A aldehyde Natural products O=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 1
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 description 1
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 1
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
- C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
- C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
- C07D295/084—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
- C07D295/088—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings to an acyclic saturated chain
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
- A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
- C07D311/70—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with two hydrocarbon radicals attached in position 2 and elements other than carbon and hydrogen in position 6
- C07D311/72—3,4-Dihydro derivatives having in position 2 at least one methyl radical and in position 6 one oxygen atom, e.g. tocopherols
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Abstract
本发明的目的在于提供能够用作核酸递送载体的阳离子性脂质、使用了阳离子性脂质的脂质膜结构体、及使用了阳离子性脂质的核酸导入剂、以及使用包含阳离子性脂质的核酸导入剂而实现核酸导入的方法。包含式(1)所示(式中各符号的定义如说明书中记载)的阳离子性脂质的脂质膜结构体的血液中稳定性、肿瘤聚集性优异。使用了该阳离子性脂质的核酸导入剂能够实现向细胞质内递送核酸的高核酸递送效率。
Description
技术领域
本发明涉及改善了核酸递送效率的阳离子性脂质、包含该阳离子性脂质的脂质膜结构体、以及它们的用途。
背景技术
核酸治疗是将核酸(RNA)递送到细胞质内而抑制致病蛋白的表达的治疗法，基因治疗是将核酸(DNA)递送到细胞核内而促进对治疗有用的蛋白的表达的治疗法。在这些治疗法中，将核酸递送到细胞内是重要的。然而，单独的核酸会因血液中的酶的存在而迅速地分解，因此难以实现向细胞内的递送。为此，为了使这些治疗药物实用化，要求用于将核酸递送到细胞内的载体。
在将外来物质递送到细胞内这样的载体的性质方面，以较少的使用量发挥出显著的效果是必要的。即，对于核酸递送载体而言，要求提高被摄取到细胞质内的每单位载体对应的核酸的递送量，也就是要求提高向细胞质内的核酸递送效率。
以逆转录病毒及腺病毒为代表的病毒载体是核酸递送效率高的载体。但另一方面却存在着会因病毒载体插入至基因组而引起瘤的形成、或对靶细胞以外造成非特异性的影响这样的问题。从这些问题出发，非病毒载体的开发得到了进行。其中，使用了阳离子性脂质的核酸递送载体(脂质膜结构体)是最为普遍地被使用的非病毒载体。
对于使用了阳离子性脂质的核酸递送载体而言，为了提高其核酸递送效率，要求对体内动力学(例如，在血液中的稳定性、瘤等在靶细胞中的聚集性等)加以改善。进一步，为了提高核酸向细胞质内的递送效率，除了上述体内动力学以外，还需要对细胞内动力学(例如，细胞吸收、从核内体的逸出、细胞质内的核酸从载体的释放等)加以改善(非专利文献1)。
阳离子性脂质大致可区分为由疏水性部分和亲水性部分构成。作为其构成，疏水性部分已被采用的有脂肪酸基团、甾醇基等疏水性基团，亲水性部分已被采用的有氨基等阳离子性基团。作为阳离子性脂质的组成，较多地被已知的是相对于1个亲水性基团而包含2个疏水性基团的结构(以下称为“双链型阳离子性脂质”)。
如上所述，在使用了阳离子性脂质的核酸递送载体中，需要对体内动力学及细胞内动力学加以改善。已发现，由于核酸、细胞膜显示阴离子性，因此，与它们显示静电性相互作用的阳离子性脂质的阳离子性基团对于解决这些问题而言可起到重要的作用。因此，对于阳离子性脂质，已以阳离子性基团、即以氨基为中心而进行了开发。
为了改善细胞内动力学，已知有使用具有季铵的阳离子性脂质的方法。例如，在具有季铵的公知的双链型阳离子性脂质1,2-Dioleoyl-3-dimethylammonium propane(以下称为“DOTAP”)中，DOTAP的氨基可通过与显示阴离子性的核酸发生静电性相互作用而形成带正电的脂质膜结构体。该带正电的脂质膜结构体可通过与显示阴离子性的细胞膜发生相互作用而提高向细胞的摄入。然而，在具有季铵的DOTAP中，由于与核酸之间的静电性相互作用过强，因此存在核酸不易从载体中释放出来的问题(非专利文献2)。
另一方面，对于叔胺也进行了各种探讨。作为具有叔胺的公知的双链型阳离子性脂质，可列举1,2-Dioleoyl-3-dimethylamino propane(以下称为“DODAP”)。根据记载，DODAP可通过与核酸之间的静电性相互作用而形成脂质膜结构体，从而成为能够向靶细胞递送核酸的载体(非专利文献2)。
在非专利文献3中，针对体内动力学进行了阐述。在该文献中，将双链型阳离子性脂质的pKa调整到了中性附近。使用了该阳离子性脂质的脂质膜结构体显示出了下述性质：在静脉内注射后长时间在血液中稳定、聚集于瘤部位。
在非专利文献4中，针对细胞内动力学进行了阐述。在该文献中，记载了下述内容：对于双链型阳离子性脂质，通过改变氨基周边的结构，能够将作为脂质膜结构体的pKa调整为对于细胞内的核内体逸出有利的值。由此表明，核内体逸出得到促进、核酸递送效率提高。
另外，还针对具有疏水性基团和氨基数不同的叔氨基的阳离子性脂质进行了开发。例如，在专利文献1及3中，针对具有将包含1个疏水性基团和1个亲水性基团的化合物彼此间以显示生物降解性的二硫键连结而成的结构的阳离子性脂质进行了阐述。该文献中显示，该阳离子性脂质能够改善血液中稳定性、肿瘤靶向性等体内动力学。另外还阐明，该阳离子性脂质由于与作为公知的阳离子性脂质的DOTAP、DODAP相比显示出高核酸递送效率，因此能够实现核酸向细胞质内的递送效率的提高等细胞内动力学的改善。
然而，尽管在本领域已取得了这样的技术进展，利用使用了阳离子性脂质的脂质膜结构体所实现的向细胞质内的核酸递送效率仍然未能得到充分满足。
正如在专利文献2中阐述的那样，为了提高向细胞内的递送能力，大量地含有氨基是有用的。但是，由于大量地含有氨基时，会导致细胞内核酸从载体的释放受到抑制，因此无法期待核酸递送效率的改善。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2013/073480号
专利文献2：日本特开2011-121966号公报
专利文献3：US20140335157
非专利文献
非专利文献1：Molecular Therapy 13(4):786-794,2006
非专利文献2：Biomaterials 29(24-25):3477-96,2008
非专利文献3：Journal of Controlled Release 107:276-287,2005
非专利文献4：Nature Biotechnology 28:172-176,2010
发明内容
发明要解决的问题
本发明的目的在于提供能够用作核酸递送载体的阳离子性脂质、使用了阳离子性脂质的脂质膜结构体、及使用了阳离子性脂质的核酸导入剂。
另外，在于提供使用包含阳离子性脂质的核酸导入剂而实现核酸导入的方法。
解决问题的方法
为了提高向细胞质内的核酸递送效率，需要在使氨基数增加、从而使向细胞内的递送能力提高的同时，实现核酸在细胞质内的有效释放。
本发明人等着眼于该技术问题而进行了深入研究，结果发现，具有将包含疏水性基团和以哌嗪为叔胺的亲水性基团的化合物彼此间以二硫键连结而成的结构的阳离子性脂质(相对于2个疏水性基团而具有4个亲水性基团的结构、以下也称为本发明的阳离子性脂质)具有高核酸递送效率，进而完成了本发明。
即，本发明包含以下内容。
[1]一种阳离子性脂质，其以式(1)表示。
[化学式1]
(式(1)中，R1a及R1b独立地为碳原子数8以下的亚烷基或氧二亚烷基,
Xa及Xb独立地表示酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、或醚键，
R2a及R2b独立地表示甾醇残基、脂溶性维生素残基、或碳原子数13～23的脂肪族烃基)。
[2]上述[1]所述的阳离子性脂质，其中，R1a及R1b独立地为亚烷基。
[3]上述[1]或[2]所述的阳离子性脂质，其中，Xa及Xb为酯键。
[4]上述[1]～[3]中任一项所述的阳离子性脂质，其中，R2a及R2b独立地为脂溶性维生素残基或碳原子数13～23的脂肪族烃基。
[5]上述[1]～[4]中任一项所述的阳离子性脂质，其中，R2a及R2b独立地为脂溶性维生素残基。
[6]上述[1]～[4]中任一项所述的阳离子性脂质，其中，R2a及R2b独立地为碳原子数13～23的脂肪族烃基。
[7]一种脂质膜结构体，其包含[1]～[6]中任一项所述的阳离子性脂质作为膜的构成脂质。
[8]一种核酸导入剂，其包含[1]～[6]中任一项所述的阳离子性脂质或[7]所述的脂质膜结构体。
[9]一种核酸导入剂，其是在[1]～[6]中任一项所述的阳离子性脂质或[7]所述的脂质膜结构体封入抗炎剂而成的。
[10]一种将核酸递送到细胞内的方法，其包括：使包封有核酸的[8]或[9]所述的核酸导入剂与细胞在生物体外接触。
[11]将核酸导入细胞内的方法，其包括：将封入有核酸的[8]或[9]所述的核酸导入剂以递送至靶细胞的方式向生物体给药。
发明的效果
本发明涉及阳离子性脂质。该阳离子性脂质能够形成脂质膜结构体、并且能够制成包含该阳离子性脂质的核酸导入剂。就包含该阳离子性脂质的脂质膜结构体而言，由于能够使其pKa达到中性附近，因此具有血液中稳定性、肿瘤聚集性。另外，在细胞内的还原性环境中，本发明的阳离子性脂质中包含的二硫键将被切断，从而使内包物(核酸)的释放得到促进。因此，使用了本发明的阳离子性脂质的核酸导入剂能够实现向细胞质内递送核酸的高核酸递送效率。
另外，在使用本发明的阳离子性脂质或脂质膜结构体进行核酸导入时，由血清成分引起的核酸的分解得到抑制，因此对于在血清存在下的核酸导入、在生物体内的核酸导入而言是有利的。
附图说明
[图1]是示出了由各种阳离子性脂质(Myr-C3M、TS-C3M、TS-PZ4C2)制备的各种MEND(多功能性信封式纳米结构体)的基因表达活性的图。
[图2]是示出了由调整了Dex-Pal的内封量的TS-PZ4C2制备的MEND的基因表达活性的经时变化的图。
[图3]是示出了pDNA、或由封入有pDNA的市售的转染试剂制备的基因转染剂、以及由封入有pDNA的TS-PZ4C2制备的MEND经静脉给药后在肝脏中的基因表达活性的图。
[图4]是示出了由封入有pDNA的TS-C3M制备的MEND、或由TS-PZ4C2制备的MEND经静脉给药后在肝脏中的基因表达活性的图。
[图5]上段是示出了由搭载有脂溶性荧光色素的各种阳离子性脂质(Myr-C3M、TS-PZ4C2、L-PZ4C2、O-PZ4C2)制备的各种MEND经静脉给药后向各脏器及肿瘤的聚集性的照片。中段是示出了给药后24小时后的向肝脏的聚集量的图。下段是示出了给药后24小时后向肿瘤的聚集量的图。
[图6]是示出了由封入有pDNA的各种阳离子性脂质(Myr-C3M、L-PZ4C2、O-PZ4C2)制备的各种MEND经静脉给药后48小时后在肿瘤中的基因表达活性的图。
[图7]是示出了由封入有基因的L-PZ4C2制备的MEND经静脉给药后的抗肿瘤效果的图。
具体实施方式
以下，对本发明的实施方式进行说明，但本发明并不限定于这些实施方式。
本发明提供式(1)所示的化合物(以下也称为本发明的化合物或本发明的阳离子性脂质)。
R1a及R1b独立地表示碳原子数8以下的亚烷基或氧二亚烷基，优选为碳原子数8以下的亚烷基。
碳原子数8以下的亚烷基可以为直链状，也可以具有分支，但优选为直链状。该亚烷基中所含的碳原子数优选为6以下、最优选为4以下。作为碳原子数8以下的亚烷基，具体可列举：亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、四亚甲基、亚异丁基、五亚甲基、六亚甲基、七亚甲基、八亚甲基等，优选为亚甲基、亚乙基、亚丙基、四亚甲基，最优选为亚乙基。
所述碳原子数8以下的氧二亚烷基，表示介入了醚键的亚烷基(亚烷基-O-亚烷基)，所存在的2个亚烷基的碳原子数的总和为8个以下。这里，所存在的2个亚烷基可以相同也可以不同，优选相同。作为碳原子数8以下的氧二亚烷基，具体可列举：氧二亚甲基、氧二亚乙基、氧二亚丙基、氧二亚丁基等。优选为氧二亚甲基、氧二亚乙基、氧二亚丙基，最优选为氧二亚乙基。
R1a可以与R1b相同也可以不同，但优选R1a是与R1b相同的基团。
Xa及Xb独立地为酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、醚键，优选为酯键、酰胺键，最优选为酯键。Xa及Xb的成键的朝向并无限制，但在Xa及Xb为酯键的情况下，优选呈R2a-CO-O-R1a-及R2b-CO-O-R1b-结构。
Xa与Xb可以相同也可以不同，但优选Xa是与Xb相同的基团。
R2a及R2b独立地表示甾醇残基、脂溶性维生素残基或碳原子数13～23的脂肪族烃基，优选为脂溶性维生素残基或碳原子数13～23的脂肪族烃基。最优选为脂肪族烃基。另外，从脏器(特别是肝脏)特异性这样的观点出发，还优选R2a及R2b为脂溶性维生素残基。
作为“甾醇残基”，可列举去除参与和Xa或Xb键合的反应性官能团(例如羟基)而成的源自甾醇或甾醇衍生物的残基，但优选为源自甾醇衍生物的残基。所述甾醇衍生物可列举例如：使甾醇的羟基与二羧酸中的一侧羧酸反应而成的甾醇半酯(此时，另一侧的羧酸成为反应性官能团)。甾醇可列举例如胆甾醇、胆甾烷醇、豆甾醇、β-谷甾醇、羊毛甾醇、及麦角甾醇等，优选为胆甾醇、或胆甾烷醇。作为二羧酸，可列举例如丙二酸、丁二酸、戊二酸、或己二酸等，优选为丁二酸或戊二酸。作为甾醇衍生物的具体例，可列举胆甾醇半丁二酸酯、胆甾醇半戊二酸酯等。
作为“脂溶性维生素残基”，可列举去除参与和Xa或Xb键合的反应性官能团(例如羟基)而成的源自脂溶性维生素或脂溶性维生素衍生物的残基，但优选为源自脂溶性维生素衍生物的残基。所述脂溶性维生素衍生物可列举使反应性官能团为羟基的脂溶性维生素的羟基与二羧酸中的一侧羧酸反应而成的脂溶性维生素半酯(此时，另一侧的羧酸成为反应性官能团)。作为脂溶性维生素，可列举例如视黄酸、视黄醇、视黄醛、麦角甾醇、7-脱氢胆甾醇、钙化醇、胆钙化醇、二氢麦角钙化醇、二氢速甾醇、生育酚、或生育三烯酚等，优选为视黄酸、或生育酚，最优选为生育酚。作为二羧酸，可列举丙二酸、丁二酸、戊二酸、及己二酸等，优选为丁二酸及戊二酸。作为脂溶性维生素衍生物的具体例，可列举生育酚半丁二酸酯、生育酚半戊二酸酯等。
碳原子数13～23的脂肪族烃基可以是直链的也可以具有分支，但优选为直链。该脂肪族烃基可以是饱和的也可以是不饱和的。对于不饱和烃基的情况而言，该脂肪族烃基中所含的不饱和键的个数为1～6个、优选为1～3个、最优选为1～2个。不饱和键包括碳-碳双键及三键，但优选为双键。对于直链的情况而言，该脂肪族烃基中所含的碳原子数优选为13～21、最优选为13～17。作为碳原子数13～23的脂肪族烃基，可列举例如：十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、十三碳烯基、十四碳烯基、十五碳烯基、十六碳烯基、十七碳烯基、十八碳烯基、十九碳烯基、二十碳烯基、二十一碳烯基、二十二碳烯基、二十三碳烯基、十三碳二烯基、十四碳二烯基、十五碳二烯基、十六碳二烯基、十七碳二烯基、十八碳二烯基、十九碳二烯基、二十碳二烯基、二十一碳二烯基、二十二碳二烯基、十八碳三烯基、二十碳三烯基、二十碳四烯基、二十碳五烯基、二十二碳六烯基、甲基十二烷基、甲基十三烷基、甲基十四烷基、甲基十五烷基、甲基十七烷基、甲基十八烷基、甲基十九烷基、甲基二十烷基、甲基二十一烷基、甲基二十二烷基、乙基十一烷基、乙基十二烷基、乙基十三烷基、乙基十四烷基、乙基十五烷基、乙基十七烷基、乙基十八烷基、乙基十九烷基、乙基二十烷基、乙基二十一烷基、己基庚基、己基壬基、庚基辛基、庚基癸基、辛基壬基、辛基十一烷基、壬基癸基、癸基十一烷基、十一烷基十二烷基、六甲基十一烷基等。作为直链的碳原子数13～23的脂肪族烃基，优选为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、十七碳烯基、十七碳二烯基，特别优选为十三烷基、十七烷基、十七碳烯基、十七碳二烯基。作为分支的碳原子数13～23的脂肪族烃基，优选为甲基十五烷基、己基壬基、庚基癸基、辛基十一烷基、六甲基十一烷基，特别优选为甲基十五烷基、己基壬基、庚基癸基。
在一个实施方式中，碳原子数13～23的脂肪族烃基可采用源自脂肪酸、脂肪族醇、或脂肪族胺的基团。在R2a源自脂肪酸的情况下，Xa为酯键或酰胺键，源自脂肪族的羰基碳包含在Xa中。在R2b源自脂肪酸的情况下，Xb为酯键或酰胺键，源自脂肪族的羰基碳包含在Xb中。作为脂肪族烃基的具体例，在使用亚油酸作为脂肪酸的情况下，为十七碳二烯基，在使用油酸作为脂肪酸的情况下，为十七碳烯基。
R2a与R2b可以相同也可以不同，但优选R2a是与R2b相同的基团。
在一个实施方式中，R1a与R1b相同、Xa与Xb相同、R2a与R2b相同。
在一个实施方式中，
R1a及R1b独立地表示碳原子数8以下(碳原子数1～8)的亚烷基，
Xa及Xb表示酯键，
R2a及R2b独立地表示脂溶性维生素残基(例如，源自生育酚半丁二酸酯的基团)。
在一个实施方式中，
R1a及R1b独立地表示碳原子数8以下(碳原子数1～8)的亚烷基，
Xa及Xb表示酯键，
R2a及R2b独立地表示碳原子数13～23的脂肪族烃基(例如，十七碳二烯基、十七碳烯基)。
在一个实施方式中，
R1a及R1b表示碳原子数8以下(碳原子数1～8)的亚烷基，
Xa及Xb表示酯键，
R2a及R2b表示脂溶性维生素残基(例如，源自生育酚半丁二酸酯的基团)，
R1a与R1b相同、
R2a与R2b相同。
在一个实施方式中，
R1a及R1b表示碳原子数8以下(碳原子数1～8)的亚烷基，
Xa及Xb表示酯键，
R2a及R2b表示碳原子数13～23的脂肪族烃基(例如，十七碳二烯基、十七碳烯基)，
R1a与R1b相同、
R2a与R2b相同。
在一个实施方式中，
R1a及R1b表示亚乙基，
Xa及Xb表示-CO-O-，
R2a及R2b独立地表示脂溶性维生素残基(例如，源自生育酚半丁二酸酯的基团)。
在一个实施方式中，
R1a及R1b表示亚乙基，
Xa及Xb表示-CO-O-，
R2a及R2b独立地表示碳原子数13～23的脂肪族烃基(例如，十七碳二烯基、十七碳烯基)。
在一个实施方式中，
R1a及R1b表示亚乙基，
Xa及Xb表示-CO-O-，
R2a及R2b表示脂溶性维生素残基(例如，源自生育酚半丁二酸酯的基团)，
R2a与R2b相同。
在一个实施方式中，
R1a及R1b表示亚乙基，
Xa及Xb表示-CO-O-，
R2a及R2b表示碳原子数13～23的脂肪族烃基(例如，十七碳二烯基、十七碳烯基)，
R2a与R2b相同。
作为本发明的阳离子性脂质的具体例，可列举以下的TS-PZ4C2、L-PZ4C2、O-PZ4C2。
[表1]
以下，针对本发明的化合物的制造方法进行说明。
本发明的化合物具有-S-S-(二硫)键。因此，作为制造方法，可列举：在制造具有R2a-Xa-R1a-的SH(硫醇)化合物及具有R2b-Xb-R1b-的SH(硫醇)化合物之后，通过将这些化合物氧化(偶联)而得到包含-S-S-键的本发明的化合物的方法，由包含-S-S-键的化合物出发，依次合成必要的部分并最终获得本发明的化合物的方法等。优选为后一种方法。
将后一种方法的具体例列举如下，但制造方法并不限定于此。
作为起始化合物，可列举：包含-S-S-键的两末端羧酸、两末端胺、两末端异氰酸酯、两末端醇、具有甲磺酰基等离去基团的两末端醇、具有对硝基苯基碳酸酯基等离去基团的两末端碳酸酯等。
例如，在制造R1a及R1b为亚乙基、Xa及Xb相同地为X(酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、或醚键)、R2a及R2b相同地为R2(甾醇残基、脂溶性维生素残基、或碳原子数13～23的脂肪族烃基)的化合物的情况下，在使包含-S-S-键的化合物(I)中的两末端官能团与4位经由亚乙基而具有官能团的哌嗪衍生物(以下称为“化合物(II)”)的1位的仲氨基反应之后，通过使衍生物(II)中的官能团与包含R2-X的化合物(III)中的官能团反应，可得到包含-S-S-键、2个哌嗪骨架、R1a及R1b、X1a及X1b、及R2a及R2b的本发明的化合物。
在化合物(I)与化合物(II)的反应中，作为催化剂，可使用碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾等碱催化剂，也可以在无催化剂下进行。可优选使用碳酸钾或碳酸钠作为催化剂。
作为催化剂量，相对于化合物(I)为0.1～100mol当量、优选为0.1～20mol当量、更优选为0.1～5mol当量。相对于化合物(I)，化合物(II)的投料量为1～50mol当量、优选为1～10mol当量。
作为在化合物(I)与化合物(II)的反应中使用的溶剂，只要是不会破坏反应的溶剂、水溶液即可，可以没有特殊限制地使用。可列举例如：乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲苯等。这些中，优选甲苯、氯仿、乙腈。
反应温度为-20～150℃、优选为0～80℃、更优选为20～50℃。反应时间为1～48小时、优选为2～24小时。
使化合物(I)与化合物(II)的反应产物(以下称为反应产物(I))、和化合物(III)反应的情况下，如在化合物(I)与化合物(II)的反应中使用的催化剂那样，可以使用碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾等碱催化剂，也可以在对甲苯磺酸、甲磺酸等酸催化剂、或无催化剂下进行。
另外，可以使用二环己基碳二亚胺(以下称为“DCC”)、二异丙基碳二亚胺(以下称为“DIC”)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(以下称为“EDC”)等缩合剂而使反应产物(I)与化合物(III)直接反应，或者，也可以在使用缩合剂而将化合物(III)转变为酸酐之后再使其与反应产物(I)反应。
化合物(III)的投料量相对于反应产物(I)为1～50mol当量、优选为1～10mol当量。
在反应产物(I)与化合物(III)的反应中使用的催化剂可根据待反应的官能团彼此而适当选择。
催化剂量相对于反应产物(I)为0.05～100mol当量、优选为0.1～20mol当量、更优选为0.2～5mol当量。
作为在反应产物(I)与化合物(III)的反应中使用的溶剂，只要是不会破坏反应的溶剂、水溶液即可，可以没有特殊限制地使用。可列举例如乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲苯等。这些中，优选氯仿、甲苯。
反应温度为0～150℃、优选为0～80℃、更优选为20～50℃。反应时间为1～48小时、优选为2～24小时。
通过上述反应得到的反应物可通过萃取纯化、重结晶、吸附纯化、再沉淀、柱色谱法、离子交换色谱法等常规的纯化法进行适当纯化。
作为具体例，后述给出以具有-S-S-键、且在两末端具有甲磺酸酯基(MsO-)等离去基团的化合物为起始原料，在使其与1-哌嗪乙醇结合之后，与脂溶性维生素或脂肪酸结合的实施例(实施例1～3)。只要是本领域技术人员，则能够通过适当选择原料、并按照本说明书的实施例的方法进行反应而制造期望的本发明的化合物。
以下，针对本发明的脂质膜结构体进行说明。本发明的脂质膜结构体含有本发明的化合物、即上述通式(1)所示的化合物作为膜的构成物质。这里，本发明的所述“脂质膜结构体”是指，具有两亲性脂质的亲水基团朝着界面的水相侧排列的膜结构的粒子。所述“两亲性脂质”指的是具有显示亲水性的亲水性基团及显示疏水性的疏水性基团这两者的脂质。作为两亲性脂质，可列举例如：阳离子性脂质、磷脂等。
本发明的脂质膜结构体的形态没有特殊限定，但作为例如在水性溶剂中分散有本发明的阳离子性脂质的形态，可列举脂质体(例如单层脂质体、多层脂质体等)、O/W型乳液、W/O型乳液、球状胶束、蠕虫状胶束、或不特定的层状结构体等。本发明的脂质膜结构体优选为脂质体。
本发明的脂质膜结构体除了本发明的阳离子性脂质以外，还可以进一步含有除其以外的其它构成成分。作为该其它构成成分，可列举例如：脂质(磷脂(磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱等)、糖脂、肽脂、胆甾醇、本发明的阳离子性脂质以外的阳离子性脂质、PEG脂质等)、表面活性剂(例如，3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]丙烷磺酸酯、胆酸钠盐、辛基葡糖苷、N-D-葡糖-N-甲基烷酰胺类等)、聚乙二醇、蛋白质等。本发明的脂质膜结构体中的该其它构成成分的含量通常为5～100mol％、优选为10～90mol％、更优选为30～70mol％。
本发明的脂质膜结构体中包含的本发明的阳离子性脂质的含量没有特殊限定，但通常，在将脂质膜结构体用作后述的核酸导入剂的情况下，可包含为了导入核酸而言充分量的本发明的阳离子性脂质。例如为总脂质的5～100mol％、优选为10～90mol％、更优选为30～70mol％。
本发明的脂质膜结构体可通过使本发明的阳离子性脂质及其它构成成分(脂质等)分散在适当的溶剂或分散介质、例如水性溶剂、醇性溶剂中，并根据需要进行诱导组装化的操作来制备。
作为“诱导组装化的操作”，可列举例如：乙醇稀释法、单纯水合法、超声波处理、加热、涡旋、醚注入法、法式压滤法、胆酸法、Ca2+融合法、冻融法、反相蒸发法等自身公知的方法，但并不限定于这些方法。
可以通过使核酸包封在包含本发明的阳离子性脂质的脂质膜结构体中、并使其与细胞接触，从而在生物体内和/或生物体外将该核酸导入该细胞内。因此，本发明提供包含上述本发明的阳离子性脂质或脂质膜结构体的核酸导入剂。
本发明的核酸导入剂可以将任意的核酸导入细胞内。作为核酸的种类，可列举DNA、RNA、RNA的嵌合核酸、DNA/RNA的杂合体等，但并不限定于这些。另外，核酸可以使用1～3根链的任意核酸，但优选为单链或双链。核酸也可以是作为嘌呤或嘧啶碱基的N-葡糖苷的其它类型的核苷酸、或具有非核苷酸骨架的其它低聚物(例如，市售的肽核酸(PNA)等)、或具有特殊键的其它低聚物(需要说明的是，该低聚物含有存在于DNA、RNA中那样的碱基配对、具有容许碱基附着的构型的核苷酸)等。此外，该核酸还可以是例如：施加了公知的修饰的核酸、具有本领域已知的标记的核酸、带有帽的核酸、经过了甲基化的核酸、将1个以上天然核苷酸用类似物取代而成的核酸、经过了分子内核苷酸修饰的核酸、具有无电荷键(例如，甲基磺酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)的核酸、具有含电荷的键或含硫键(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的核酸、具有例如蛋白质(例如，核酸酶、核酸酶抑制剂、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)、糖(例如，单糖等)等侧链基团的核酸、具有插入性化合物(例如，吖啶、补骨脂等)的核酸、含有螯合化合物(例如，金属、具有放射活性的金属、硼、氧化性的金属等)的核酸、含有烷基化剂的核酸、具有经过了修饰的键的核酸(例如，α异头型的核酸等)等。
能够在本发明中使用的DNA的种类没有特殊限制，可根据使用目的而适当选择。可列举例如质粒DNA、cDNA、反义DNA、染色体DNA、PAC、BAC等，优选为质粒DNA、cDNA、反义DNA，更优选为质粒DNA。质粒DNA等环状DNA可通过限制性内切酶等被消化，也可以用作线性DNA。
能够在本发明中使用的RNA的种类没有特殊限制，可根据使用目的而适当选择。可列举例如：siRNA、miRNA、shRNA、反义RNA、信使RNA(mRNA)、单链RNA基因组、双链RNA基因组、RNA复制子、转运RNA、核糖体RNA等，优选为siRNA、miRNA、shRNA、mRNA、反义RNA、RNA复制子。
对于本发明中使用的核酸，优选利用本领域技术人员通常使用的方法进行纯化。
在一个实施方式中，本发明中使用的核酸中，CpG序列的频度被抑制于低水平，优选不包含CpG序列。通过使用CpG序列的频度低的核酸，被导入到细胞内的核酸会长时间停留在细胞内，从而长时间保持其生理效应。例如，使用不包含CpG序列的质粒DNA(表达载体)作为在本发明中使用的核酸的情况下，能够使目标基因持续地表达更长时间。在本说明书中，所述CpG序列是从5’向3’在胞嘧啶之后出现鸟嘌呤的类型的2碱基序列。例如，本发明中使用的核酸中CpG序列的频度为每50个碱基有1个以下、优选为每100个碱基有1个以下、更优选为每1000个碱基有1个以下、最优选不包含CpG序列。
另外，CpG序列诱导先天免疫应答，因此通过在本发明中使用CpG序列的频度被抑制于低水平的核酸(优选为不包含CpG序列的核酸)，可以避免由先天免疫应答引起的炎症等副作用的发生。特别是，由于本发明的化合物或脂质膜结构体本身的刺激性低、在向生物体内给药时基本不会诱导产生炎性细胞因子，因此，通过将本发明的脂质膜结构体和CpG序列的频度被抑制于低水平的核酸(优选为不包含CpG序列的核酸)组合使用，能够将由先天免疫应答引起的炎症等副作用的发生风险抑制在最低限度。
本发明的核酸导入剂也可以和抗炎剂组合使用，另外，还可以使抗炎剂包封在脂质膜结构体中。与抗炎剂组合使用时，不仅能够将伴随核酸导入的副作用的发生风险抑制在最低限度，还能够如后述实施例中也阐明的那样进一步提高基因表达效率，因此是优选的实施方式。作为抗炎剂，可列举非甾体类抗炎剂(例如，布洛芬、酮洛芬、萘普生、吲哚美辛、阿司匹林、双氯芬酸、吡罗昔康、乙酰氨酚、塞来昔布、罗非昔布等)、甾体类抗炎剂(例如，氢化可的松、强的松龙、地塞米松、倍他米松等)，优选为甾体类抗炎剂。这些抗炎剂也可以根据给药方式而使用经过了衍生物化的那些。例如，地塞米松优选经过脂肪酸酯化，特别优选以地塞米松棕榈酸酯的形式使用。抗炎剂向脂质膜结构体的包封可以与后述的将核酸包封至脂质膜结构体的方法同样地进行。
出于例如疾病的预防和/或治疗的目的，可以将包封有核酸的本发明的核酸导入剂进行生物体内(in vivo)给药。因此，本发明中使用的核酸优选为对某种给定疾病具有预防和/或治疗活性的核酸(预防/治疗用核酸)。作为这样的核酸，可列举例如可用于所谓的基因治疗的核酸等。
为了使用本发明的核酸导入剂将核酸导入细胞内，在形成本发明的脂质膜结构体时，通过使目标的核酸共存而形成包封有该核酸的本发明的脂质膜结构体。例如，在利用乙醇稀释法形成脂质体的情况下，在将核酸的水溶液和本发明的脂质膜结构体的构成成分(脂质等)的乙醇溶液通过涡旋等剧烈地进行混合之后，利用适当的缓冲液对混合物进行稀释。在利用单纯水合法形成脂质体的情况下，将本发明的脂质膜结构体的构成成分(脂质等)溶解在适当的有机溶剂中，并将该溶液加入玻璃容器，通过进行减压干燥而将溶剂蒸馏除去，从而得到脂质薄膜。在向其中加入核酸的水溶液并使其发生水合之后，利用Sonicator进行超声波处理。本发明还提供这样的包封有核酸的上述脂质膜结构体。
作为包封有核酸的脂质体的实施方式之一，可列举通过将核酸与聚阳离子(例如，鱼精蛋白)间的静电性复合体封入脂质体而制备的多功能性信封式纳米结构体(MEND；multifunctional envelope-type nano device、以下称为“MEND”)(Kogure K et al.,Multifunctional envelope-type nano device(MEND)as a non-viral gene deliverysystem.Adv Drug Deliv Rev.2008)。该结构体(MEND)可作为用于将核酸等选择性地递送到特定的细胞内的药物递送系统使用，对于例如基于向树突细胞的抗原基因转染的DNA疫苗、肿瘤的基因治疗等而言是有用的。
包封有核酸的本发明的脂质膜结构体的粒径优选为10nm～300nm、更优选为100nm～200nm。粒径的测定可使用Zetasizer Nano(Malvern公司)进行。脂质膜结构体的粒径可通过脂质膜结构体的制备方法而适当调整。
包封有核酸的本发明的脂质膜结构体的表面电位(ξ电位)优选为-15～+10mV、进一步优选为-15～+5mV。在以往的基因转染中，主要被使用的是带正的表面电位的粒子。这作为用于促进具有负电荷的细胞表面与硫酸肝素之间的静电性相互作用、从而促进向细胞的摄取的方法是有用的，但正的表面电荷存在会在细胞内与递送核酸之间的相互作用而抑制核酸从载体的释放、或因mRNA与递送核酸之间的相互作用而抑制蛋白质的合成的可能性。通过将表面电荷调整至上述范围内，可以解决该问题。表面电荷的测定可使用Zetasizer Nano进行。脂质膜结构体的表面电荷可根据包含本发明的阳离子性脂质的脂质膜结构体的构成成分的组成而进行调整。
通过使包封有核酸的本发明的脂质膜结构体与细胞接触，可以将包封的核酸导入细胞内。该“细胞”的种类没有特殊限定，可使用原核生物及真核生物的细胞，但优选为真核生物。真核生物的种类也没有特殊限定，可列举例如：包括人类在内的哺乳类(例如，人、猴、小鼠、大鼠、仓鼠、牛等)、鸟类(例如，鸡、鸵鸟等)、两栖类(例如，蛙等)、鱼类(例如，斑马鱼、青鳉鱼等)等脊椎动物、昆虫(蚕、蛾、果蝇等)等无脊椎动物、植物、微生物(例如，酵母等)等。在本发明中成为对象的细胞更优选为动物或植物细胞、进一步优选为哺乳动物细胞。该细胞可以是包含癌细胞的培养细胞系，也可以是从个体、组织中分离出的细胞、或组织或组织片的细胞。另外，细胞可以是贴壁细胞，也可以是非贴壁细胞。
以下，对使包封有核酸的本发明的脂质膜结构体与细胞在生物体外(in vitro)接触的工序进行具体说明。
对于细胞，可以在使其与该脂质膜结构体接触的数日前悬浮在适当的培养基中，并在适当的条件下进行培养。在与脂质膜结构体接触时，细胞可以是在增殖期，也可以不是在增殖期。
该接触时的培养液可以是含血清的培养基也可以是不含血清的培养基，但培养基中的血清浓度优选为30重量％以下、更优选为20重量％以下。培养基中包含过量的血清等蛋白质时，存在阻碍该脂质膜结构体与细胞的接触的可能性。
该接触时的细胞密度没有特殊限定，可考虑细胞的种类等而适当设定，但通常在1×104～1×107细胞/mL的范围。
在这样制备的细胞中，添加例如上述包封有核酸的本发明的脂质膜结构体的悬浮液。该悬浮液的添加量没有特殊限定，可考虑到细胞数等而适当设定。就与细胞接触时的脂质膜结构体的浓度而言，只要能够实现目标核酸向细胞内的导入则没有特殊限定，但以脂质浓度计，通常为1～10nmol/mL、优选为10～50nmol/mL，以核酸的浓度计，通常为0.01～100μg/mL、优选为0.1～10μg/mL。
将上述悬浮液添加至细胞后，对该细胞进行培养。培养时的温度、湿度、CO2浓度等可考虑到细胞的种类而适当设定。细胞为源自哺乳动物的细胞的情况下，通常，温度约为37℃、湿度约为95％、CO2浓度约为5％。另外，培养时间也可以考虑到所使用的细胞的种类等条件而适当设定，但通常为0.1～24小时的范围、优选为0.2～4小时的范围、更优选为0.5～2小时的范围。上述培养时间如果过短，则可能导致核酸无法充分导入细胞内，培养时间如果过长，则可能导致细胞变弱。
通过上述培养，核酸被导入细胞内，但优选将培养基交换为新鲜的培养基、或向培养基中添加新鲜的培养基而进一步继续培养。细胞为源自哺乳动物的细胞的情况下，新鲜的培养基优选包含血清或营养因子。
另外，通过如上所述地使用本发明的脂质膜结构体，不仅在生物体外(in vitro)、在生物体内(in vivo)也能够将核酸导入细胞内。即，通过将包封有核酸的本发明的脂质膜结构体向对象给药，可使该脂质膜结构体到达并接触靶细胞，从而在生物体内将包封在该脂质膜结构体中的核酸导入细胞内。作为能够给药该脂质膜结构体的对象，没有特殊限定，可列举例如：哺乳类(例如，人、猴、小鼠、大鼠、仓鼠、牛等)、鸟类(例如，鸡、鸵鸟等)、两栖类(例如，蛙等)、鱼类(例如，斑马鱼、青鳉鱼(rice-fish)等)等脊椎动物、昆虫(例如，蚕、蛾、果蝇等)等无脊椎动物、植物等。作为本发明的脂质膜结构体的给药对象，优选为人或其它哺乳动物。
靶细胞的种类没有特殊限定，通过使用本发明的脂质膜结构体，可以向各种组织(例如，肝脏、肾脏、胰脏、肺、脾脏、心脏、血液、肌肉、骨、脑、胃、小肠、大肠、皮肤、脂肪组织等，优选为肝脏、肾脏、脾脏)中的细胞导入核酸。
本发明的阳离子性脂质及包含该阳离子性脂质的脂质膜结构体具有肿瘤聚集性，因此，对于肿瘤、尤其是恶性肿瘤的治疗是有用的。作为这样的恶性肿瘤，可列举例如：纤维肉瘤、鳞状细胞癌、神经芽细胞瘤、乳腺癌、胃癌、肝细胞癌、膀胱癌、甲状腺肿瘤、尿路上皮癌、神经胶母细胞瘤、急性髓细胞性白血病、胰腺癌及前列腺癌等，但并不限定于这些。
另外，本发明的脂质膜结构体中，核酸以外的化合物(例如，抗癌剂等)可与核酸一起、或单独地被导入。作为向导入了核酸以外的化合物的脂质膜结构体的对象(例如，脊椎动物、无脊椎动物等)的给药方法，只要是能够使该脂质膜结构体到达并接触靶细胞，从而将导入至该脂质膜结构体的化合物导入细胞内的方法则没有特殊限定，可考虑导入化合物的种类、靶细胞的种类、部位等而适当选择本身公知的给药方法(例如，口服给药、非口服给药(例如，静脉内给药、肌内给药、局部给药、经皮给药、皮下给药、腹腔内给药、喷雾等)等)。该脂质膜结构体的给药量只要在能够实现化合物向细胞内的导入的范围则没有特殊限定，可考虑到给药对象的种类、给药方法、导入化合物的种类、靶细胞的种类、部位等而适当选择。
将本发明的阳离子性脂质或脂质膜结构体作为核酸导入剂使用的情况下，可以按照常规方法进行制药。
提供该核酸导入剂作为研究用试剂的情况下，该本发明的核酸导入剂可以直接、或使用与例如水或除水以外的生理学上可接受的液体(例如，水溶性溶剂(例如，苹果酸缓冲液等)、有机溶剂(例如，乙醇、甲醇、DMSO等)或水溶性溶剂与有机溶剂的混合液等)形成的无菌性溶液或悬浮液而提供本发明的脂质膜结构体。本发明的核酸导入剂可适当地包含本身公知的生理学上可接受的添加剂(例如，赋形剂、媒介物(vehicle)、防腐剂、稳定剂、结合剂等)。
另外，提供该核酸导入剂作为药物的情况下，该本发明的核酸导入剂可以直接使用本发明的脂质膜结构体、或通过将本发明的脂质膜结构体与药学上可接受的公知添加剂(例如，担载体、香味剂、赋形剂、媒介物、防腐剂、稳定剂、结合剂等)一起使用并将它们以常规认可的制药实施所要求的单位用量形式进行混和而以口服剂(例如，片剂、胶囊剂等)或非口服剂(例如注射剂、喷雾剂等)的形式、优选以非口服剂(更优选为、注射剂)的形式制造。
本发明的核酸导入剂除了可用于成人以外，还可以作为儿科用制剂。
本发明的核酸导入剂也可以以试剂盒的形式提供。该试剂盒中除了本发明的阳离子性脂质或脂质膜结构体以外，还可以包含在导入核酸时使用的试剂。在一个实施方式中，本发明的核酸导入剂(或试剂盒)进一步包含聚阳离子(例如，鱼精蛋白)。通过使用该实施方式的本发明的核酸导入剂(或试剂盒)，可以容易地将核酸与聚阳离子(例如，鱼精蛋白)间的静电性复合体封入本发明的脂质膜结构体而构成MEND，从而用于核酸向细胞内的导入。
实施例
以下，针对本发明的实施例进行更为详细的说明，但本发明完全不受到该实施例的限定。
在实施例的说明中使用的简称的含义分别如下所述。
pDNA：质粒DNA
Chol：胆甾醇
PEG2000-DMG：1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油,甲氧基聚乙二醇(PEG MW 2000)
PEG2000-DSG：1,2-二硬脂酰基-sn-甘油,甲氧基聚乙二醇(PEG MW 2000)
PEG5000-DSG：1,2-二硬脂酰基-sn-甘油,甲氧基聚乙二醇(PEG MW 5000)
DOPE：1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺
SOPC：1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱
Dex-Pal：地塞米松棕榈酸酯
DiR：1,1’-双十八烷基-3,3,3’,3’-四甲基吲哚三羰花青
PBS：磷酸缓冲生理盐水
15PGDH：15-羟基前列腺素脱氢酶
表2中示出了在下述实施例及比较例中制造的阳离子性脂质的名称和结构。比较例1及2分别是基于专利文献1的实施例1及实施例5而制造的。
[表2]
[实施例1]TS-PZ4C2的合成
<甲磺酰化>
将双(2-羟基乙基)二硫醚15g(东京化成工业公司制)(97mmol)加入到乙腈143mL中，并于20～25℃使其溶解。加入三乙胺33.3g(关东化学公司制)(328mmol)之后，边搅拌边冷却至10℃。以使温度在20℃以下的方式花费1小时滴加了甲磺酰氯34.5g(关东化学公司制)(300mmol)。滴加结束后，于20～25℃进行了3小时反应。通过TLC分析(展开溶剂:氯仿、碘显色)而确认到双(2-羟基乙基)二硫醚的斑点消失，结束了反应。向反应溶液中加入乙醇29mL，使反应停止之后，通过过滤而滤除了不溶物。向滤液中加入10％碳酸氢钠水溶液150g，搅拌5分钟之后，静置了10分钟。将水层除去之后，进一步进行了4次利用碳酸氢钠水溶液的萃取纯化。向所得有机层中加入硫酸镁4.5g，进行了脱水。通过过滤而滤除了不溶物后，使用蒸发仪将滤液的溶剂蒸馏除去，得到了褐色固体(以下称为“di-Ms体”)29.4g。
<1H-NMR谱(600MHz、CDCl3)>
所得化合物di-Ms体的1H-NMR谱的分析结果如下所示。
δ2.95～3.20ppm(m、CH 3-SO2-O-CH2-CH 2-S-、10H)、δ4.45～4.50ppm(t、CH3-SO2-O-CH 2-CH2-S-、4H)
<叔氨基化>
向di-Ms体1.2g(4mmol)中加入乙腈31mL，于20～25℃使其溶解之后，加入碳酸钾1.3g(关东化学工业公司制)(10mmol)，并进行了5分钟搅拌。其后，加入4-哌嗪乙醇5.0g(东京化成工业公司制)(39mmol)，于25～35℃进行了13小时反应。通过TLC分析(展开溶剂:氯仿/甲醇/28％氨水＝80/20/2(v/v/v)、碘显色)而确认到di-Ms体的斑点消失，结束了反应。通过过滤而滤除了不溶物后，利用蒸发仪将滤液的溶剂蒸馏除去。将所得褐色液体溶解在氯仿25mL中之后，加入蒸馏水25mL并进行了5分钟搅拌。搅拌后，静置10分钟，然后除去了水层。其后，进一步进行了2次利用蒸馏水的萃取纯化。向所得有机层中加入硫酸镁0.6g，进行了脱水。通过过滤而滤除了不溶物后，使用蒸发仪将滤液的溶剂蒸馏除去，得到了淡黄色的液体(以下称为“di-PZ4C2体”)1.0g。
<1H-NMR谱(600MHz、CDCl3)>
所得化合物di-PZ4C2体的1H-NMR谱的分析结果如下所示。
δ2.40～2.66ppm(m、HO-CH2-CH 2-N-CH 2-CH 2-N-、20H)、δ2.67～2.72ppm(m、-N-CH2-CH 2-S-、4H)、2.74～2.85ppm(m、HO-CH2-、-N-CH 2-CH2-S-、6H)、3.60～3.65ppm(t、HO-CH 2-CH2-、4H)
<酰基化>
将di-PZ4C2体3.0g(8mmol)和D-α-生育酚丁二酸酯8.4g(SIGMA-ALDRICH公司制)(16mmol)于20～25℃溶解在氯仿45mL中。其后，加入4-二甲基氨基吡啶0.4g(广荣化学工业公司制)(3mmol)、EDC4.6g(东京化成工业公司制)(24mmol)，于30℃进行了4小时反应。通过TLC分析(展开溶剂:氯仿/甲醇＝9/1(v/v)、磷酸硫酸铜显色)而确认到D-α-生育酚丁二酸酯的斑点消失，结束了反应。利用蒸发仪将反应溶剂蒸馏除去之后，加入了己烷200mL。其后，加入乙腈100mL，并进行了5分钟搅拌。静置10分钟之后，回收己烷层，利用蒸发仪将溶剂蒸馏除去，得到了淡黄色的液体10.7g。将该液体9.0g利用硅胶柱色谱法进行纯化(溶离液:氯仿/甲醇＝99/1～98/2(v/v))，得到了作为目标物的5.7g的TS-PZ4C2。
<1H-NMR谱(600MHz、CDCl3)>
所得化合物TS-PZ4C2的1H-NMR谱的分析结果如下所示。
δ0.83～0.88ppm(m、(CH 3)2CH-(CH2)3-(CH 3)CH-(CH2)3-(CH 3)CH-、24H)、δ1.03～1.82ppm(m、(CH3)2CH-(CH 2)3-(CH3)CH-(CH 2)3-(CH3)CH-(CH 2)3-(CH 3)C-、-C-CH 2-CH2-C-C-O-、52H)、δ1.95～2.09ppm(m、Ar-CH 3、18H)、δ2.40～2.60ppm(m、-N-CH 2-CH 2-N-、-C-CH2-CH 2-C-C-O-、20H)、δ2.61～2.68ppm(m、-O-CH2-CH 2-N-、-N-CH2-CH 2-S-、8H)、δ2.75～2.84ppm(m、Ar-O-C(O)-CH 2-、-N-CH 2-CH2-S-、8H)、δ2.91～2.95ppm(m、Ar-O-C(O)-CH2-CH 2-、4H)、δ4.21～4.25ppm(t、-C(O)-CH 2-CH2-N-、4H)
[实施例2]L-PZ4C2的合成
<酰基化>
将di-PZ4C2体2.5g(7mmol)和亚油酸3.7g(日油公司制)(13mmol)于20～25℃溶解在氯仿25mL中。其后，加入4-二甲基氨基吡啶0.3g(3mmol)、EDC3.8g(20mmol)，并于30℃进行了4小时反应。通过TLC分析(展开溶剂:氯仿/甲醇＝9/1(v/v)、磷酸硫酸铜显色)而确认到亚油酸的斑点消失，结束了反应。利用蒸发仪将反应溶剂蒸馏除去之后，加入了己烷57mL。其后，加入乙腈24mL，并进行了5分钟搅拌。静置10分钟之后，回收己烷层，利用蒸发仪将溶剂蒸馏除去，得到了淡黄色的液体4.9g。将该液体4.9g利用硅胶柱色谱法进行纯化(溶离液:氯仿/甲醇＝99/1～97/3(v/v))，得到了作为目标物的3.1g的L-PZ4C2。
<1H-NMR谱(600MHz、CDCl3)>
所得化合物L-PZ4C2的1H-NMR谱的分析结果如下所示。
δ0.87～0.91ppm(t、CH 3-(CH2)3-CH2-、6H)、δ1.25～1.38ppm(m、CH3-(CH 2)3-CH2-、-(CH 2)4-CH2-CH2-C(O)-、28H)、δ1.58～1.63ppm(m、-(CH2)4-CH 2-CH2-C(O)-、4H)、δ2.00～2.07ppm(m、-CH 2-CH＝CH-CH2-CH＝CH-CH 2-、8H)、δ2.30～2.32ppm(t、-(CH2)4-CH2-CH 2-C(O)-、4H)、δ2.50～2.70ppm(m、-N-CH 2-CH 2-N-、-N-CH2-CH 2-S-、-O-CH2-CH 2-N-、24H)、δ2.75～2.84ppm(m、-CH＝CH-CH 2-CH＝CH-、-N-CH 2-CH2-S-、8H)、δ4.18～4.21ppm(t、-O-CH 2-CH2-N-、4H)、δ5.30～5.41ppm(m、-CH2-CH＝CH-CH2-CH＝CH-CH2-、8H)
[实施例3]O-PZ4C2的合成
将di-PZ4C2体0.8g(2mmol)和油酸1.2g(日油公司制)(4mmol)于20～25℃溶解在氯仿8mL中。其后，加入4-二甲基氨基吡啶0.1g(1mmol)、EDC1.2g(6mmol)，并于30℃进行了3小时反应。通过TLC分析(展开溶剂:氯仿/甲醇＝9/1(v/v)、磷酸硫酸铜显色)而确认到油酸的斑点消失，结束了反应。利用蒸发仪将反应溶剂蒸馏除去之后，加入了己烷12mL。其后，加入乙腈5mL，并进行了5分钟搅拌。静置10分钟之后，回收己烷层，利用蒸发仪将溶剂蒸馏除去，得到了淡黄色的液体1.8g。将该液体1.7g利用硅胶柱色谱法进行纯化(溶离液:氯仿/甲醇＝99/1～97/3(v/v))，得到了作为目标物的1.1g的O-PZ4C2。
<1H-NMR谱(600MHz、CDCl3)>
所得化合物O-PZ4C2的1H-NMR谱的分析结果如下所示。
δ0.86～0.90ppm(t、CH 3-(CH2)6-CH2-、6H)、δ1.25～1.34ppm(m、CH3-(CH 2)6-CH2-、-CH2-(CH 2)4-CH2-CH2-C(O)-、40H)、δ1.58～1.64ppm(m、-CH2-(CH2)4-CH 2-CH2-C(O)-、4H)、δ1.99～2.03ppm(m、-CH 2-CH＝CH-CH 2-、8H)、δ2.28～2.32ppm(m、-CH2-(CH2)4-CH2-CH 2-C(O)-、4H)、δ2.45～2.70ppm(m、-N-CH 2-CH 2-N-、-O-CH2-CH 2-N-、-N-CH2-CH 2-S-、24H)、δ2.80～2.85ppm(m、-N-CH 2-CH2-S-、4H)、δ4.18～4.21ppm(t、-O-CH 2-CH2-N-、4H)、δ5.13～5.38ppm(m、-CH2-CH＝CH-CH2-、4H)
[试验例1]
1.各种MEND的制备
使用了Myr-C3M的MEND的制备
(1)包含质粒DNA(pDNA)和鱼精蛋白的核酸静电性复合体的形成
作为载体的核，利用10mM HEPES缓冲液将编码荧光素酶基因的pDNA溶液、鱼精蛋白(CALBIOCHEM公司制)溶液分别稀释至0.15mg/mL、96.3μg/mL，在对0.15mg/mL的pDNA溶液100μL进行搅拌的同时，少量多次地滴加96.3μg/mL鱼精蛋白100μL，制备了鱼精蛋白和pDNA的静电性复合体(N/P比＝1.0)。
(2)基于乙醇稀释法的MEND的制备
脂质的乙醇溶液如下地制备：向Eppendorf管中以目标的比例混合5mM的阳离子性脂质(Myr-C3M)、5mM磷脂(SOPC)、5mM胆甾醇(Chol)，并使总脂质达到330nmol，进一步添加相当于总脂质的3摩尔％的量的PEG2000-DSG(1mM乙醇溶液)，加入乙醇，并使总量达到200μL。在使用涡旋混合机对脂质溶液进行搅拌的同时，迅速地加入[试验例1](1)中制备的核酸静电性复合体200μL(10mM HEPES；pH5.3)，然后加入了调整至pH5.3的10mM HEPES缓冲液1.6mL。进一步，加入调整至pH5.3的10mM HEPES缓冲液2mL，进行稀释直至乙醇浓度达到5％，使用Amicon Ultra4(Millipore公司)、以离心条件(室温,1000g,15min)进行超滤而浓缩至约50μL。其后，使用调整至pH7.4的100mM HEPES缓冲液定容至4mL，并再次在室温条件下通过进行离心(1000g,15min)而进行了浓缩。其后，使用10mM HEPES缓冲液(pH7.4)定容至4mL，并再次在室温条件下通过进行离心(1000g,15min)而进行了浓缩。最后，利用10mMHEPES缓冲液(pH7.4)定容至目标的脂质浓度。
使用了TS-PZ4C2或TS-C3M的MEND的制备
将pDNA溶液(1mg/mL)、100mM苹果酸缓冲液(pH4.0)、5M氯化钠水溶液及无菌水混合，制备了最终浓度分别为0.1mg/mL、20mM、40mM的溶液，作为DNA溶液。
脂质的乙醇溶液如下地制备：向5mL管中以目标的比例混合5mM的阳离子性脂质(TS-PZ4C2或TS-C3M)、10mM胆甾醇(Chol)，并使总脂质达到600nmol，进一步添加相当于总脂质的3摩尔％的量的PEG2000-DMG(5mM乙醇溶液)，加入乙醇，并使总量达到200μL。在使用涡旋混合机对脂质溶液进行搅拌的同时，迅速地加入上述的DNA溶液300μL，然后加入了20mM苹果酸缓冲液(pH4.0、含有100mM氯化钠)500μL，然后加入磷酸缓冲生理盐水，进行稀释直至乙醇浓度达到10％。在进行了3次同样的操作之后，进一步加入磷酸缓冲生理盐水，进行稀释直至乙醇浓度达到5％。其后，使用Amicon Ultra 15(Millipore公司)，以离心条件(室温,2267rpm,20min)进行超滤而浓缩至约200μL。其后，使用磷酸缓冲生理盐水定容至15mL，并再次在室温条件下通过进行离心(2267rpm,20min)而进行了浓缩。最后，利用磷酸缓冲生理盐水定容至目标的脂质浓度。
2.各种MEND的粒径、及表面电位的测定
对于粒径及表面电位，使用动态光散射法(Zetasizer Nano；Malvern公司)进行了测定。上述1.中制备的各种MEND的粒径、表面电位如表3～5所示。
[表3]
[表4]
[表5]
3.结果
对于任一阳离子性脂质，生理性pH下的电荷均为理想形态的-15～+10mV。
[试验例2]基因表达活性-1(生物体内的基因表达活性:向肝脏的基因递送)
1.各种MEND的制备
利用[试验例1]中记载的方法制备了各种MEND。
2.基因表达活性评价
将制备的MEND溶液分别以对应于20μg DNA的量向4周龄的雄性ICR小鼠进行尾静脉给药。24、48小时后，利用颈椎脱臼法使小鼠安乐死，摘出肝脏，并利用液氮进行了冷冻处理。使其在Lysis缓冲液中融解，进行了匀浆的制作。将其以13,000rpm、10分钟、4℃进行离心，采集上清，并将其作为测定样品。将样品溶液20μL与荧光素酶基质50μL混合，使用Luminescenser-PSN(AB2200ATTO)测定了荧光素酶活性。另外，使用BCA protein assaykit对样品中的蛋白质浓度进行定量，并以RLU/mg protein测定了基因表达活性。
3.结果
结果如图1所示。值越高、即荧光素酶活性越高，则表示基因表达活性越高。与使用了比较例1(专利文献1的实施例1)及比较例2(专利文献1的实施例5)的阳离子性脂质的脂质膜结构体相比，使用了本发明的阳离子性脂质的脂质膜结构体显示出了更高的基因表达活性。而已知，TS-C3M、Myr-C3M等专利文献1中记载的阳离子性脂质与DOTAP、DODAP等阳离子性脂质相比，显示出更高的核酸递送效率(专利文献1)，由此可知，本发明的阳离子性脂质不仅与TS-C3M、Myr-C3M相比、与作为传统的阳离子性脂质的DOTAP、DODAP相比，也具有优异的生物体内的基因导入活性。
[试验例3]生物体内的基因表达活性、及活性持续时间(基于与抗炎剂组合使用的效果)
1.MEND的制备
在制备[试验例1]中记载的MEND时，以使最终浓度达到0.5mM的方式向脂质溶液中加入地塞米松棕榈酸酯的乙醇溶液，由此进行了包封有地塞米松棕榈酸酯的MEND的制备。
2.基因表达活性评价
将利用[试验例3]1.项中示出的方法制备的MEND溶液分别以对应于20μg DNA的量向4周龄的雄性ICR小鼠进行尾静脉给药。在给药的1、3、7、10日后，将相当于3mg的荧光素(in vivo grade,Promega)向小鼠进行腹腔内给药，并使用IVIS LuminaII(Caliper LifeSciences)进行了成像。由取得的图像以photons/sec/cm2/sr计算出了小鼠腹部的亮度的平均值，并将其作为肝脏中的基因表达活性的指标。
3.结果
结果如图2所示。通过在使用了本发明的阳离子性脂质的脂质膜结构体中包封作为抗炎剂的地塞米松棕榈酸酯，基因表达活性得到了提高。进一步，在生物体内实现了10天的基因表达。
[试验例4]基因表达活性-2(生物体内的基因表达活性:与市售核酸导入剂的比较)
1.核酸导入剂的制备
将naked-pDNA在HEPES缓冲液中稀释至2.4μg/150μL。脂质体2000(Invitrogen)+pDNA如下地制作：在HEPES缓冲液中添加脂质体2000、并使其达到9.6μL/75μL，在室温下温育5分钟而成的溶液中等量地添加在HEPES缓冲液中以达到2.4μg/75μL的方式添加pDNA而成的溶液，并在室温下温育了20分钟。TS-PZ4C2_MEND是利用[试验例1](2)的乙醇稀释法、使用PEG2000-DMG作为PEG脂质而制作的。
2.基因表达活性评价
将利用[试验例4]1.项中示出的方法制备的naked-pDNA、脂质体2000+pDNA分别以对应于2.4μgDNA的量，另外，将TS-PZ4C2_MEND溶液以对应于1.2μgDNA的量向6周龄的雌性BALB/c小鼠的颈后部进行了皮下给药。24小时后，将相当于3mg的荧光素(in vivo grade,Promega)向小鼠进行腹腔内给药，并使用IVIS LuminaII(Caliper Life Sciences)进行了成像。由取得的图像计算出了小鼠颈部的亮度，并以photons/sec算出，将其作为基因表达活性的指标。
3.结果
结果如图3所示。与使用了pDNA单体或作为市售核酸导入剂的脂质体2000的任一情况相比，在将使用了本发明的阳离子性脂质的脂质膜结构体用作核酸导入剂的情况下，显示出了更高的活性。
[试验例5]基因表达活性-3
1.各种MEND的制备
组成为(阳离子性脂质:DOPE:Chol)＝(5:2:3),(4:3:3),(3:4:3)的MEND是利用[试验例1](2)的乙醇稀释法、使用DOPE作为磷脂、并使用PEG2000-DMG作为PEG脂质而制作的。而对于组成为(阳离子性脂质:Chol)＝(7:3)的MEND，利用[试验例1]中记载的方法进行了制备。
2.基因表达活性评价
将利用[试验例5]1.项中示出的方法制备的TS-PZ4C2_MEND溶液及TS-C3M_MEND溶液分别以对应于1.2μgDNA的量向6周龄的雌性BALB/c小鼠的颈后部进行了皮下给药，并利用与[试验例4]2.项同样的方法进行了评价。
3.结果
结果如图4所示。可知，与由2种脂质成分及2个氨基构成的比较例2相比，具有2种脂质成分及4个氨基的本发明显示出了更高的基因导入效率。
[试验例6]
1.各种MEND的制备
使用了TS-PZ4C2或Myr-C3M的MEND的制备
各种MEND的制备通过[试验例1](2)的乙醇稀释法实施，且磷脂使用了DOPC。另外，PEG脂质使用了PEG5000-DSG，在Myr-C3M的MEND中，添加了相当于总脂质的5摩尔％的量，以及在TS-PZ4C2的MEND中，添加了相当于总脂质的10摩尔％的量。
使用了L-PZ4C2或O-PZ4C2的MEND的制备
将pDNA溶液(1mg/mL)、100mM苹果酸缓冲液(pH4.0)、5M氯化钠水溶液及无菌水混合，制备了最终浓度分别为0.1mg/mL、20mM、40mM的溶液，作为DNA溶液。
脂质的乙醇溶液如下地制备：向5mL管中以目标的比例混合5mM的阳离子性脂质(L-PZ4C2、O-PZ4C2)、10mM胆甾醇(Chol)、10mMDOPC，并使总脂质达到840nmol，进一步添加相当于总脂质的5摩尔％的量的PEG5000-DSG(1mM乙醇溶液)，加入乙醇及20mM苹果酸缓冲液(pH4.0)，并使总量达到200μL(80％乙醇溶液)。在使用涡旋混合机对脂质溶液进行搅拌的同时，迅速地加入上述的DNA溶液200μL，然后加入了20mM苹果酸缓冲液(pH4.0)1600μL，然后加入磷酸缓冲生理盐水，进行稀释直至乙醇浓度达到8％。在进行了3次同样的操作之后，进一步加入磷酸缓冲生理盐水，进行稀释直至乙醇浓度达到4％。其后，使用Amicon Ultra15(Millipore公司)，以离心条件(室温,2267rpm,30min)进行超滤而浓缩至约200μL。其后，使用磷酸缓冲生理盐水定容至15mL，并再次在室温条件下通过进行离心(2267rpm,30min)而进行了浓缩。最后，利用磷酸缓冲生理盐水定容至目标的脂质浓度。
2.各种MEND的粒径、及表面电位的测定
对于粒径及表面电位，使用动态光散射法(Zetasizer Nano)进行了测定。上述1.中制备的各种MEND的粒径、表面电位如表6～9所示。
[表6]
[表7]
[表8]
[表9]
3.结果
对于任一阳离子性脂质，生理性pH下的电荷均为理想形态的-15～+10mV。
[试验例7]生物体内的脏器聚集性的评价
1.各种MEND的制备
在制备[试验例6]中记载的MEND时，以使最终浓度达到3.6μM的方式向脂质溶液中加入DiR的乙醇溶液，由此进行了经荧光标记的MEND的制备。
2.向各脏器的聚集性的评价
对6周龄的雌性Balb/c小鼠的皮下进行源自小鼠乳腺癌的癌细胞系4T1细胞的悬浮液(1x106cells/mouse)的皮下给药，由此制作了荷瘤小鼠。在癌细胞皮下移植7日后，将所制备的MEND溶液分别以对应于DiR 1nmol的量进行了尾静脉内给药。在给药24小时后，利用颈椎脱臼法使小鼠安乐死，摘出各脏器，并使用IVIS LuminaII(Caliper LifeSciences)进行了成像(激发波长:710nm、检测:ICG过滤器)。由取得的图像计算出各脏器及肝脏、肿瘤中的亮度，并以[photons/sec]/[μW/cm2]算出，将其作为脏器聚集性及肝脏聚集性、肿瘤聚集性的指标。
3.结果
结果如图5所示。与使用了比较例1(专利文献1的实施例1)的阳离子性脂质的脂质膜结构体相比，在使用了本发明的阳离子性脂质TS-PZ4C2的脂质膜结构体中显示出了更高的向肝脏的聚集性。另外，与使用了比较例1(专利文献1的实施例1)的阳离子性脂质的脂质膜结构体相比，在使用了本发明的阳离子性脂质L-PZ4C2或O-PZ4C2的脂质膜结构体中显示出了更高的向肿瘤的聚集性。
[试验例8]生物体内的基因表达活性(向肿瘤的基因递送)
1.各种MEND的制备
利用[试验例6]所述的方法制备了各种MEND。
2.基因表达活性评价
对6周龄的雌性Balb/c小鼠的皮下进行源自小鼠乳腺癌的癌细胞系4T1细胞的悬浮液(1x106cells/mouse)的皮下给药，由此制作了荷瘤小鼠。在癌细胞皮下移植7日后，将所制备的MEND溶液分别以对应于25mgDNA的量进行了尾静脉内给药。在给药48小时后，利用颈椎脱臼法使小鼠安乐死，摘出肿瘤，并利用液氮进行了冷冻处理。使其在Lysis缓冲液中融解，进行了匀浆的制作。将其以13,000rpm、10分钟、4℃进行离心，采集上清，并将其作为测定样品。将样品溶液20μL与荧光素酶基质50μL混合，使用Luminescenser-PSN(AB2200ATTO)测定了荧光素酶活性。另外，使用BCA protein assay kit对样品中的蛋白质浓度进行定量，并以RLU/mg protein测定了基因表达活性。
3.结果
结果如图6所示。值越高、即荧光素酶活性越高，则表示基因表达活性越高。与使用了比较例1(专利文献1的实施例1)的阳离子性脂质的脂质膜结构体相比，使用了本发明的阳离子性脂质(L-PZ4C2、O-PZ4C2)的脂质膜结构体显示出了更高的向肿瘤的基因递送表达活性。而已知，Myr-C3M与DOTAP、DODAP等传统阳离子性脂质相比，显示出更高的核酸递送效率。由此表明，本发明的L-PZ4C2及O-PZ4C2不仅与Myr-C3M相比，与作为传统的阳离子性脂质相比，也具有优异的向肿瘤的基因导入活性。
[试验例9]在使用了MEND的基因递送中的抗肿瘤效果
1.质粒DNA(pDNA)溶液的制备
作为搭载DNA，使用了编码荧光素酶基因或15PGDH基因的pDNA。
2.MEND的制备
MEND是利用[试验例6]的方法、使用L-PZ4C2作为阳离子性脂质而制作的。
3.抗肿瘤效果的评价
对6周龄的雌性Balb/c小鼠的皮下进行源自小鼠乳腺癌的癌细胞系4T1细胞的悬浮液(1x106cells/mouse)的皮下给药，由此制作了荷瘤小鼠。从癌细胞皮下移植7日后开始，每3日一次、共计3次，将上述2.中制备的MEND溶液分别以对应于30mgDNA的量进行了尾静脉内给药。经时地测定肿瘤的短径及长径，并以体积(mm3)＝短径(mm)2×长径(mm)×0.52计算出了体积。
4.结果
结果如图7所示。值越低，则表示肿瘤的肥大越得到抑制、抗肿瘤效果越高。可见，使用了封入了基因的本发明的阳离子性脂质的MEND，能够显著地抑制肿瘤的肥大。
工业实用性
根据本发明，能够高效地将核酸导入细胞内，因此可用于基因治疗、生物化学实验。
本申请以在日本提出申请的日本特愿2015-16786(申请日:2015年1月30日)为基础申请，其内容全部包含在本说明书。
Claims (11)
1.式(1)所示的阳离子性脂质，
式(1)中，R1a及R1b独立地为碳原子数8以下的亚烷基或氧二亚烷基，
Xa及Xb独立地表示酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、或醚键，
R2a及R2b独立地表示甾醇残基、脂溶性维生素残基、或碳原子数13～23的脂肪族烃基。
2.根据权利要求1所述的阳离子性脂质，其中，R1a及R1b独立地为亚烷基。
3.根据权利要求1或2所述的阳离子性脂质，其中，Xa及Xb为酯键。
4.根据权利要求1或2所述的阳离子性脂质，其中，R2a及R2b独立地为脂溶性维生素残基、或碳原子数13～23的脂肪族烃基。
5.根据权利要求1或2所述的阳离子性脂质，其中，R2a及R2b独立地为脂溶性维生素残基。
6.根据权利要求1或2所述的阳离子性脂质，其中，R2a及R2b独立地为碳原子数13～23的脂肪族烃基。
7.脂质膜结构体，其包含权利要求1～6中任一项所述的阳离子性脂质作为膜的构成脂质。
8.核酸导入剂，其包含权利要求1～6中任一项所述的阳离子性脂质或权利要求7所述的脂质膜结构体。
9.核酸导入剂，其是在权利要求1～6中任一项所述的阳离子性脂质或权利要求7所述的脂质膜结构体中封入抗炎剂而成的。
10.将核酸递送到细胞内的方法，其包括：使包封有核酸的权利要求8或9所述的核酸导入剂与细胞在生物体外接触。
11.权利要求8或9所述的核酸导入剂在制备将核酸导入细胞内的方法中使用的药物中的用途，所述方法包括：将封入有核酸的权利要求8或9所述的核酸导入剂以递送至靶细胞的方式向生物体给药。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015-016786 | 2015-01-30 | ||
| JP2015016786 | 2015-01-30 | ||
| PCT/JP2016/052690 WO2016121942A1 (ja) | 2015-01-30 | 2016-01-29 | カチオン性脂質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107406396A CN107406396A (zh) | 2017-11-28 |
| CN107406396B true CN107406396B (zh) | 2021-02-26 |
Family
ID=56543545
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201680012926.XA Active CN107406396B (zh) | 2015-01-30 | 2016-01-29 | 阳离子性脂质 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10385030B2 (zh) |
| EP (1) | EP3252043B1 (zh) |
| JP (1) | JP6640750B2 (zh) |
| CN (1) | CN107406396B (zh) |
| CA (1) | CA2975371C (zh) |
| WO (1) | WO2016121942A1 (zh) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3597197A4 (en) * | 2017-03-17 | 2021-01-06 | National University Corporation Chiba University | Novel technique for treating cancer using structurally-reinforced s-tud |
| WO2019141814A1 (en) * | 2018-01-18 | 2019-07-25 | Etherna Immunotherapies Nv | Lipid nanoparticles |
| CA3094057A1 (en) * | 2018-03-27 | 2019-10-03 | Nof Corporation | Cationic lipid exhibiting improved intracellular dynamics |
| JP2022546597A (ja) | 2019-09-06 | 2022-11-04 | ジェネレーション バイオ カンパニー | 閉端ｄｎａおよび切断可能脂質を含む脂質ナノ粒子組成物ならびにそれらの使用方法 |
| WO2021060440A1 (ja) | 2019-09-26 | 2021-04-01 | 日油株式会社 | 脂質ナノ粒子の凍結乾燥組成物 |
| EP4076647A1 (en) * | 2019-12-20 | 2022-10-26 | CureVac AG | Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids |
| JP7626405B2 (ja) | 2020-03-27 | 2025-02-04 | 日油株式会社 | シスチン骨格を有する新規カチオン性脂質 |
| CN115968280A (zh) * | 2020-05-18 | 2023-04-14 | 世代生物公司 | 新型脂质及其纳米颗粒组合物 |
| CA3208993A1 (en) | 2021-02-23 | 2022-09-01 | Joshua RYCHAK | Compositions and methods for delivery of nucleic acids |
| CN113402404B (zh) * | 2021-04-30 | 2022-03-11 | 苏州科锐迈德生物医药科技有限公司 | 脂质化合物及包含其的脂质载体、核酸脂质纳米粒组合物和药物制剂 |
| JPWO2023190166A1 (zh) * | 2022-03-28 | 2023-10-05 | ||
| JPWO2023190164A1 (zh) | 2022-03-28 | 2023-10-05 | ||
| AU2023283348A1 (en) | 2022-06-07 | 2025-01-09 | Generation Bio Co. | Lipid nanoparticle compositions and uses thereof |
| WO2024071409A1 (ja) * | 2022-09-30 | 2024-04-04 | 国立大学法人北海道大学 | 核酸複合体組成物、遺伝子導入用脂質粒子及びそれを用いた遺伝子導入方法 |
| WO2024119039A2 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Stealth lipid nanoparticles and uses thereof |
| WO2024119051A1 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Novel polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions comprising the same |
| WO2024119103A1 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Lipid nanoparticles comprising nucleic acids and lipid-anchored polymers |
| WO2024119074A1 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Stealth lipid nanoparticle compositions for cell targeting |
| WO2024178086A1 (en) | 2023-02-21 | 2024-08-29 | Poseida Therapeutics, Inc. | Aav piggybac transposon polynucleotide compositions and methods of use therefor |
| WO2024211509A1 (en) | 2023-04-05 | 2024-10-10 | Poseida Therapeutics, Inc. | Transposase polynucleotides and uses thereof |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999058512A1 (en) * | 1998-05-11 | 1999-11-18 | Glaxo Wellcome S.A. | Morpholino ethers |
| WO2000027795A1 (en) * | 1998-11-12 | 2000-05-18 | Invitrogen Corporation | Transfection reagents |
| WO2009106713A2 (fr) * | 2007-12-19 | 2009-09-03 | Oz Biosciences Sas | Nouvelle classe de lipides cationiques pour le transport d'agents actifs dans les cellules |
| WO2010129687A1 (en) * | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc | Methods of delivering oligonucleotides to immune cells |
| CN102231952A (zh) * | 2008-11-17 | 2011-11-02 | 安龙制药公司 | 用于核酸运载系统的可释放阳离子脂质 |
| CN102884041A (zh) * | 2010-04-28 | 2013-01-16 | 协和发酵麒麟株式会社 | 阳离子性脂质 |
| CN103096875A (zh) * | 2010-06-03 | 2013-05-08 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于递送活性剂的生物可降解脂质 |
| CN103930398A (zh) * | 2011-11-18 | 2014-07-16 | 日油株式会社 | 具有改进的细胞内动力学的阳离子脂质 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030092180A1 (en) * | 2001-08-27 | 2003-05-15 | David Lewis | Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo |
| US6169078B1 (en) * | 1998-05-12 | 2001-01-02 | University Of Florida | Materials and methods for the intracellular delivery of substances |
| ATE537263T1 (de) | 2004-06-07 | 2011-12-15 | Protiva Biotherapeutics Inc | Kationische lipide und verwendungsverfahren |
| EP3494963A1 (en) | 2009-12-18 | 2019-06-12 | The University of British Columbia | Methods and compositions for delivery of nucleic acids |
| JP6875685B2 (ja) * | 2015-10-08 | 2021-05-26 | 日油株式会社 | Ｏ／ｗ型エマルション |
-
2016
- 2016-01-29 WO PCT/JP2016/052690 patent/WO2016121942A1/ja active Application Filing
- 2016-01-29 US US15/547,317 patent/US10385030B2/en active Active
- 2016-01-29 JP JP2016572191A patent/JP6640750B2/ja active Active
- 2016-01-29 EP EP16743545.2A patent/EP3252043B1/en active Active
- 2016-01-29 CA CA2975371A patent/CA2975371C/en active Active
- 2016-01-29 CN CN201680012926.XA patent/CN107406396B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999058512A1 (en) * | 1998-05-11 | 1999-11-18 | Glaxo Wellcome S.A. | Morpholino ethers |
| WO2000027795A1 (en) * | 1998-11-12 | 2000-05-18 | Invitrogen Corporation | Transfection reagents |
| WO2009106713A2 (fr) * | 2007-12-19 | 2009-09-03 | Oz Biosciences Sas | Nouvelle classe de lipides cationiques pour le transport d'agents actifs dans les cellules |
| CN102231952A (zh) * | 2008-11-17 | 2011-11-02 | 安龙制药公司 | 用于核酸运载系统的可释放阳离子脂质 |
| WO2010129687A1 (en) * | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc | Methods of delivering oligonucleotides to immune cells |
| CN102884041A (zh) * | 2010-04-28 | 2013-01-16 | 协和发酵麒麟株式会社 | 阳离子性脂质 |
| CN103096875A (zh) * | 2010-06-03 | 2013-05-08 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于递送活性剂的生物可降解脂质 |
| CN103930398A (zh) * | 2011-11-18 | 2014-07-16 | 日油株式会社 | 具有改进的细胞内动力学的阳离子脂质 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3252043B1 (en) | 2020-09-30 |
| CN107406396A (zh) | 2017-11-28 |
| US20180155304A1 (en) | 2018-06-07 |
| CA2975371A1 (en) | 2016-08-04 |
| EP3252043A1 (en) | 2017-12-06 |
| EP3252043A4 (en) | 2018-08-08 |
| WO2016121942A1 (ja) | 2016-08-04 |
| JPWO2016121942A1 (ja) | 2017-11-24 |
| JP6640750B2 (ja) | 2020-02-05 |
| US10385030B2 (en) | 2019-08-20 |
| CA2975371C (en) | 2024-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107406396B (zh) | 阳离子性脂质 | |
| KR102674501B1 (ko) | 세포 내 동태를 개선한 신규 양이온성 지질 | |
| CN103930398B (zh) | 具有改进的细胞内动力学的阳离子脂质 | |
| JP5977394B2 (ja) | 脂質に封入された干渉ｒｎａ | |
| JP7597334B2 (ja) | 脂質ナノ粒子の凍結乾燥組成物 | |
| US10945956B2 (en) | Biodegradable compound, lipid particles, composition and kit comprising lipid particles | |
| CN108348615A (zh) | O/w型乳液 | |
| CN107148410B (zh) | 用于核酸递送的阳离子脂质 | |
| WO2021193397A1 (ja) | シスチン骨格を有する新規カチオン性脂質 | |
| US20240336558A1 (en) | Ionizable lipid based on endogenous dicarboxylic acid as well as preparation method and use thereof | |
| TW202426054A (zh) | 陽離子脂質及其用途 | |
| CN118251212A (zh) | 用于将核酸递送至淋巴管内皮细胞的脂质纳米颗粒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |