CN106496173A - 用于制备可用作atr激酶抑制剂的化合物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于制备可用作ATR激酶抑制剂的化合物(例如氨基吡嗪‑异唑衍生物和相关分子)的方法和中间体。本发明还涉及可用作ATR蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还涉及包含本发明的所述化合物的药学上可接受的组合物；使用本发明的所述化合物治疗各种疾病、障碍和病症的方法；用于制备本发明的所述化合物的方法；用于制备本发明的所述化合物的中间体；以及本发明的所述化合物的固体形式。本发明的所述化合物具有式I或II,其中所述变量如本文所限定。

Description

用于制备可用作ATR激酶抑制剂的化合物的方法

本申请是申请日为2012年9月28日、申请号为2012800557724(PCT/US2012/058127)、发明名称为“用于制备可用作ATR激酶抑制剂的化合物的方法”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于制备可用作ATR激酶抑制剂的化合物(例如氨基吡嗪-异唑衍生物和相关分子)的方法和中间体。本发明还涉及可用作ATR蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还涉及包含本发明的所述化合物的药学上可接受的组合物；使用本发明的所述化合物治疗各种疾病、障碍和病症的方法；用于制备本发明的所述化合物的方法；用于制备本发明的所述化合物的中间体；以及本发明的所述化合物的固体形式。

背景技术

ATR(“ATM和Rad3相关的”)激酶是涉及细胞对DNA损伤应答的蛋白激酶。ATR激酶与ATM(“毛细血管扩张性共济失调突变”)激酶和许多其他蛋白质一起起作用以调节细胞对DNA损伤的应答，通常称为DNA损伤应答(“DDR”)。DDR刺激DNA修复，促进存活和通过激活细胞周期检查点而阻止细胞周期进程，这提供了修复时间。没有DDR，则细胞对DNA损伤敏感得多，并且易死于由内源性细胞过程例如DNA复制诱导的DNA损害或常用于癌症疗法的外源性DNA损伤剂诱导的DNA损害。

健康细胞可以依赖于许多用于DNA修复的不同蛋白质，包括DDR激酶ATR。在一些情况中，这些蛋白质可以通过激活功能性冗余的DNA修复过程彼此补偿。相反，许多癌细胞在其一些DNA修复过程中(例如ATM信号传导)隐藏缺陷，从而对其剩余的未受损DNA修复蛋白(包括ATR)表现出更大依赖性。

此外，许多癌细胞表达激活的致癌基因或缺乏关键肿瘤抑制基因，这可以使得这些癌细胞易处于DNA复制的失调期，这继而引起DNA损伤。ATR牵涉在受损DNA复制的应答中作为DDR的关键成分。因此，这些癌细胞比健康细胞更依赖于ATR活性以用于存活。因此，ATR抑制剂可以单独使用或与DNA损伤剂联用来用于癌症治疗，因为它们切断了DNA修复机制，而该修复机制对许多癌细胞的细胞存活而言比健康正常细胞的细胞存活更重要。

实际上，已显示ATR功能的破坏(例如通过基因缺失)在无论有无DNA损伤剂的存在下都促进癌细胞死亡。这表明ATR抑制剂作为单一活性剂和作为有效增敏剂在放疗和具遗传毒性的化疗中都可能是有效的。

由于所有这些原因，对于研发作为单一作用剂或作为联合疗法与放疗或具遗传毒性的化疗联用的用于治疗癌症的有效和选择性的ATR抑制剂存在需求。此外，期望具有能够大规模合成并且在目前已知的方法上改进的ATR抑制剂的合成路线。

可以使用文献中已知的各种方法表达和分离ATR肽(参见例如，etal,PNAS 99:10,pp6673-6678,May 14,2002(等人，《美国科学院院刊》，第99卷，第10期，第6673-6678页，2002年5月14日)；还可参见Kumagai et al.Cell 124,pp943-955,March 10,2006(Kumagai等人，《细胞》，第124卷，第943-955页，2006年3月10日)；Unsal-Kacmaz et al.Molecular and Cellular Biology,Feb 2004,p1292-1300(Unsal-Kacmaz等人，《分子和细胞生物学》，2004年2月，第1292-1300页)；以及Hall-Jackson et al.Oncogene 1999,18,6707-6713(Hall-Jackson等人，《致癌基因》，1999年，第18卷，第6707-6713页))。

附图说明

图1a：化合物I-2游离碱的XRPD

图2a：化合物I-2游离碱的TGA

图3a：化合物I-2游离碱的DSC

图4a：化合物I-2游离形式单晶结构的不对称单元的ORTEP图

图1b：化合物I-2·HCl的XRPD

图2b：化合物I-2·HCl的TGA

图3b：化合物I-2·HCl的DSC

图4b：化合物I-2·HCl无水结构的不对称单元的ORTEP图。

图1c：化合物I-2·2HCl的XRPD

图2c：化合物I-2·2HCl的TGA

图3c：化合物I-2·2HCl的DSC

图1d：化合物I-2·HCl一水合物的XRPD

图2d：化合物I-2·HCl一水合物的TGA

图3d：化合物I-2·HCl一水合物的DSC

图1e：化合物I-2·HCl·2H₂O的XRPD

图2e：化合物I-2·HCl·2H₂O的TGA

图3e：化合物I-2·HCl·2H₂O的DSC

图5a：化合物I-2游离碱的固态¹³CNMR

图5b：化合物I-2·HCl的固态¹³CNMR

图5c：化合物I-2·2HCl的固态¹³CNMR

发明内容

本发明涉及用于制备可用作ATR激酶抑制剂的化合物(例如氨基吡嗪-异唑衍生物和相关分子)的方法和中间体。氨基吡嗪-异唑衍生物可用作ATR抑制剂并且还可用于制备ATR抑制剂。本发明还涉及ATR抑制剂以及氘代ATR抑制剂的固体形式。

本发明的一个方面提供制备式I化合物的方法：

包括在合适的肟形成条件下由式3化合物制备式4化合物：

另一个方面包括在合适的肟形成条件下由式3化合物制备式4化合物：

本发明的另一个方面包括式II化合物：

或其药学上可接受的盐，其中各R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³独立地为氢或氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R¹³中的至少一者为氘。

本发明的又一个方面提供式I-2化合物的固体形式：

本文示出了本发明的其他方面。

本发明与先前已知的方法相比具有若干优势。第一，本发明方法与先前公开的方法相比具有更少的总合成步骤数。第二，本发明方法与先前公开的方法相比具有提高的收率。第三，本发明方法对其中R³为各种不同的基团(例如烷基)或较大的受阻部分(例如环)的化合物是有效的。第四，本发明方法包括更稳定并且具有更长储存寿命的中间体。在某些实施例中，本发明方法中肟基的非酸性形成允许在合成过程中保留诸如Boc或CBz的酸敏感性保护基。在其他实施例中，该方法由于消除了色谱法纯化步骤而更易于按比例扩大至更大的量。

具体实施方式

本发明的一个方面提供用于在合适的肟形成条件下由式3化合物制备用于制备式4化合物的化合物的方法：

其中

R¹为C_1-6烷基；

R²为C_1-6烷基；

或R¹和R²与它们附接的氧原子一起形成具有两个氧原子的任选地取代的5或6元饱和杂环；

R³为氢、C_1-6烷基或具有1-2个选自氧、氮和硫的杂原子的3-6元饱和或部分不饱和的杂环基；其中该杂环基任选地被1个卤素或C_1-3烷基取代；

J¹为卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基；

PG为氨基甲酸酯保护基。

另一个方面提供用于制备式I化合物的方法：

包括以下步骤：

在合适的肟形成条件下由式3化合物制备式4化合物：

其中

R¹为C_1-6烷基；

R²为C_1-6烷基；

或R¹和R²与它们附接的氧原子一起形成具有两个氧原子的任选地取代的5或6元饱和杂环；

R³为氢、C_1-6烷基或具有1-2个选自氧、氮和硫的杂原子的3-6元饱和或部分不饱和的杂环基；其中该杂环基任选地被1个卤素或C_1-3烷基取代；

R⁴为

Q为苯基、吡啶基或N-烷基化吡啶；

J¹为H、卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基；

J²为卤素、CN、苯基、唑基或C_1-6脂族基团，其中最多2个亚甲基单元任选地被O、NR”、C(O)、S、S(O)或S(O)₂置换；所述C_1-6脂族基团任选地被1-3个氟或CN取代；

q为0、1或2；

PG为氨基甲酸酯保护基。

另一个实施例还包括在合适的保护条件下保护式2化合物：

以形成式3化合物的步骤。

另一个实施例还包括使式1化合物：

与合适的胺在合适的还原胺化条件下反应以形成式2化合物的步骤。

在一些实施例中，合适的胺为NHCH₃。在其他实施例中，合适的胺为

另一个实施例还包括使式4化合物：

在合适的异唑形成条件下反应以形成式5化合物：

的步骤。

另一个实施例还包括使式5化合物在合适的偶合条件下然后在合适的去保护条件下反应以形成式I化合物的步骤。

在一些实施例中，PG为Boc或Cbz。在一些实施例中，PG为Boc。

在其他实施例中，R¹为乙基并且R²为乙基。

在其他实施例中，R³为CH₃或

在一些实施例中，R⁴为其中Q为苯基。在一些实施例中，Q在对位被J₂取代，其中q为1。

在一些实施例中，J¹为H或卤素。在一些实施例中，J¹为H。在其他实施例中，J¹为卤素。

在其他实施例中，J²为C_1-6脂族基团，其中最多1个亚甲基单元任选地被S(O)₂置换。在一些实施例中，J²为-S(O)₂-(C_1-5烷基)。在一些实施例中，q为1。

根据另一个实施例，

R¹为乙基；

R²为乙基；

R³为CH₃或

PG为Boc或Cbz；

J¹为H；

R⁴为其中Q为苯基；J²为-S(O)₂-CH(CH₃)₂；

q为1；

在一些实施例中，R³为CH₃。在一些实施例中，R³为CH₃。在另外的实施例中，R³为CH₃或

根据另一个实施例，

R¹为乙基；

R²为乙基；

R³为

PG为Boc；

J¹为H；

R⁴为其中Q为吡啶基；J²为

q为1；

在一些实施例中，R⁴为

反应条件

在一些实施例中，合适的肟形成条件包括单步骤序列或两步骤序列。

在一些实施例中，两步骤序列包括：首先使式3化合物中的缩酮基在合适的去保护条件下去保护形成醛，然后在合适的肟形成条件下形成式4 的肟。在一些实施例中，合适的去保护条件包括添加催化量的对甲苯磺酸(pTSA)、丙酮和水；并且合适的肟形成条件包括将羟胺、催化量的酸、脱水剂和醇溶剂混合在一起。在其他实施例中，酸为pTSA或HCl，脱水剂为分子筛或二甲氧基丙酮，并且醇溶剂为甲醇或乙醇。

在其他实施例中，单步骤序列包括添加NH₂OH.HCl以及THF和水的混合物。在其他实施例中，该序列包括添加NH₂OH.HCl以及任选地用Na₂SO₄缓冲的2-甲基四氢呋喃和水的混合物。在一些实施例中，将1当量的式3化合物与1.1当量的NH₂OH.HCl在体积比为10:1的THF和水的混合物中合并。在一些实施例中，将1当量的式3化合物与1.1当量的NH₂OH.HCl在任选地用Na₂SO₄缓冲的体积比为10:1的2-甲基四氢呋喃和水的混合物中合并。

在其他实施例中，保护条件选自

·R-OCOCl、合适的叔胺碱和合适的溶剂；其中R为任选地被苯基取代的C_1-6烷基；

·R(CO₂)OR’、合适的溶剂以及任选地催化量的碱，其中R和R’各自独立地为任选地被苯基取代的C_1-6烷基；

·[RO(C＝O)]₂O、合适的碱和合适的溶剂。

在一些实施例中，合适的碱为Et₃N、二异丙基胺和吡啶；并且合适的溶剂选自氯化溶剂、醚或芳香烃。在其他实施例中，合适的碱为Et₃N，合适的溶剂为选自DCM的氯化溶剂。在其他实施例中，保护条件包括在DCM中添加1.20当量的(Boc)₂O和1.02当量的Et₃N。

根据另一个实施例，合适的偶合条件包括在合适的溶剂中添加合适的金属和合适的碱。在其他实施例中，合适的金属为Pd[P(tBu)₃]₂；合适的溶剂为乙腈和水的混合物；并且合适的碱为碳酸钠。在其他实施例中，合适的偶合条件包括在60-70℃下在体积比为2:1的乙腈/水中添加0.1当量的Pd[P(tBu)₃]₂；1当量的硼酸或酯；以及2当量的碳酸钠。

根据另一个实施例，合适的去保护条件包括在合适的溶剂中将式5化合物与合适的酸合并。在一些实施例中，合适的酸选自对甲苯磺酸(pTSA)、HCl、TBAF、H₃PO₄或TFA，并且合适的溶剂选自丙酮、甲醇、乙醇、CH₂Cl₂、EtOAc、THF、2-MeTHF、二烷、甲苯或二乙醚。

根据另一个实施例，合适的异唑形成条件包括两个步骤，第一个步骤包括使式4化合物在合适的氯代肟形成条件下反应以形成氯代肟中间体；第二个步骤包括使氯代肟中间体与乙炔在合适的环加成条件下反应以形成式5化合物。

根据另一个实施例，合适的氯代肟形成条件选自

·N-氯代丁二酰亚胺和合适的溶剂，或

·过一硫酸氢钾、HCl和二烷。

在一些实施例中，合适的溶剂选自非质子溶剂、芳香烃或乙酸烷基酯。根据另一个实施例，合适的氯代肟形成条件为在40-50℃下1.05当量的N-氯代丁二酰亚胺在乙酸异丙酯中。

根据另一个实施例，合适的环加成条件包括合适的碱和合适的溶剂。在一些实施例中，合适的碱选自吡啶、DIEA、TEA、t-BuONa和K₂CO₃，并且合适的溶剂选自乙腈、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、MTBE、EtOAc、i-PrOAc、DCM、甲苯、DMF和甲醇。在其他实施例中，合适的碱选自Et₃N，并且合适的溶剂选自DCM。

根据另一个实施例，第二个步骤包括在室温下使1当量的乙炔与1.2当量的氯代肟中间体和1.3当量的Et₃N在DCM中反应。

根据另一个实施例，合适的异唑形成条件包括在合适的溶剂中将式4化合物与氧化剂合并。在一些实施例中，所述氧化剂为[双(三氟乙酰氧基)碘]苯，并且所述溶剂为甲醇、水和二烷的1:1:1混合物。

化合物I-2和I-3的合成

一个实施例提供用于制备式I-2化合物的方法：

包括以下步骤中的一个或多个：

a)使式1b化合物：

与甲胺在合适的还原胺化条件下反应以形成式2b化合物：

b)使式2b化合物在合适的Boc保护条件下反应以形成式3b化合物：

c)使式3b化合物在合适的肟形成条件下反应以形成式4-i化合物：

d)使式4-i化合物在合适的氯代肟形成条件下反应以形成式4-ii化合物：

e)使式4-ii化合物与式4-iii化合物

在合适的环加成条件下反应以形成式4-iv化合物：

f)使式4-iv化合物与式A-5-i化合物：

在合适的偶合条件下反应以形成式5-i化合物：

g)使式5-i化合物在合适的Boc去保护条件下去保护，然后任选地在碱性水溶液条件下处理以形成式I-2化合物。

另一个实施例提供用于制备式I-3化合物的方法：

包括以下步骤中的一个或多个：

a)使式A-1化合物：

与四氢-2H-吡喃-4-胺在合适的还原胺化条件下反应以形成式A-2化合物：

b)使式A-2化合物在合适的Boc保护条件下反应以形成式A-3化合物：

c)使式A-3化合物在合适的肟形成条件下反应以形成式A-4化合物：

d)使式A-4化合物：

在合适的氯代肟形成条件下反应以形成式A-4-i化合物：

e)使式A-4-i化合物与式A-4-ii化合物：

在合适的环加成条件下反应以形成式A-5化合物：

f)使式A-5化合物与式A-5-i化合物：

在合适的偶合条件下反应以形成式A-6化合物：

g)使式A-6化合物在合适的Boc去保护条件下去保护，然后任选地在碱性水溶液条件下处理以形成式I-3化合物。

合适的偶合条件包括将合适的钯催化剂与合适的碱在合适的溶剂中合并。合适的钯催化剂包括(但不限于)Pd[P(tBu)₃]₂、Pd(dtbpf)Cl₂、Pd(PPh₃)₂Cl₂、Pd(PCy₃)₂Cl₂、Pd(dppf)Cl₂和Pd(dppe)Cl₂。合适的溶剂包括(但不限于)甲苯、MeCN、水、EtOH、IPA、2-Me-THF或IPAc。合适的碱包括(但不限于)K₂CO₃、Na₂CO₃或K₃PO₄。

合适的肟形成条件包括单步骤序列或两步骤序列。两步骤序列包括：首先使式A-3化合物中的缩酮基在合适的去保护条件下去保护形成醛，然后在合适的肟形成条件下形成式A-4的肟。

单步骤序列包括(例如)将羟胺、酸、有机溶剂和水混合在一起。在一些实施例中，将NH₂OH.HCl加入THF和水的混合物中。在一些实施例中，将1当量的式3-A化合物与1.1当量的NH₂OH.HCl在体积比为10:1的THF和水的混合物中合并。

合适的去保护条件包括添加酸、丙酮和水。合适的酸包括pTSA或HCl，合适的有机溶剂包括氯化溶剂(如，二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、CH₂Cl₂和氯仿)；醚(如，THF、2-MeTHF和二烷)；芳香烃(如，甲苯和二甲苯)或其他非质子溶剂。

合适的环加成条件包括合适的碱(如，吡啶、DIEA、TEA、t-BuONa或K₂CO₃)和合适的溶剂(如，乙腈、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、MTBE、EtOAc、i-PrOAc、DCM、甲苯、DMF和甲醇)。

合适的氯代肟形成条件包括在选自非质子溶剂(DCM、DCE、THF和二烷)、芳香烃(如甲苯、二甲苯)和乙酸烷基酯(如，乙酸异丙酯、乙酸乙酯)的合适溶剂中在存在NCS的情况下将HCl的二烷溶液添加至肟的溶液中。

合适的Boc去保护条件包括添加合适的Boc去保护剂(如，TMS-Cl、HCl、TBAF、H₃PO₄或TFA)和合适的溶剂(如，丙酮、甲苯、甲醇、乙醇、1-丙醇、异丙醇、CH₂Cl₂、EtOAc、乙酸异丙酯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二烷和乙醚)。在一些实施例中，合适的Boc去保护条件包括添加选自HCl、TFA的合适的Boc去保护剂以及选自丙酮、甲苯、乙酸异丙酯、四氢呋喃或2-甲基四氢呋喃的合适的溶剂。

合适的Boc保护条件包括(Boc)₂O、合适的碱和合适的溶剂。合适的碱包括(但不限于)Et₃N、二异丙基胺和吡啶。合适的溶剂包括(但不限于)氯化溶剂(如，二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、CH₂Cl₂和氯仿)；醚(如，THF、2-MeTHF和二烷)；芳香烃(如，甲苯和二甲苯)或其他非质子溶剂。在一些实施例中，合适的碱为Et₃N，合适的溶剂为DCM、四氢呋喃或2-甲基四氢呋喃。在某些实施例中，保护条件包括在2-甲基四氢呋喃或DCM中添加1.05当量的(Boc)₂O。

合适的还原胺化条件包括在存在选自二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、醇溶剂(选自甲醇、乙醇、1-丙醇、异丙醇)、或非质子溶剂(选自二烷、四氢呋喃或2-甲基四氢呋喃)的溶剂以及任选地选自Et₃N或二异丙基乙胺的碱的情况下添加选自NaBH₄NaBH₄、NaBH₃CN或NaBH(OAc)₃的还原剂。在一些实施例中，合适的还原胺化条件包括在存在Et₃N的情况下在MeOH中添加1.2当量的NaBH₄囊片。

本发明的另一个方面提供式II化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中各R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c独立地为氢或氘，并且

R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c中的至少一个为氘。

在一些实施例中，R^9a和R^9b是相同的。在其他实施例中，R^9a和R^9b为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R¹⁰、R^11a、R^11b、R^12a、R^12b、R^13a、R^13b、R^14a和R^14b为氘或氢。在又一个实施例中，R^9a和R^9b为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R¹⁰、R^11a、R^11b、R^12a、R^12b、R^13a、R^13b、R^14a和R^14b为氢。

在一个实施例中，R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c是相同的。在另一个实施例中，R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸为氘或氢。在一些实施例中，R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸为氢。

在其他实施例中，R^10a、R^10b和R^10c是相同的。在一个实施例中，R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氘或氢。在又一个实施例中，R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氢。

在一些实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b和R^3c是相同的。在另一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b和R^3c为氘，并且R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在又一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b和R^3c为氘，并且R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘。

在另一个实施例中，R⁶为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在又一个实施例中，R⁶为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在其他实施例中，R²为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b和R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在另一个实施例中，R²为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b和R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在另一个实施例中，R⁷为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在其他实施例中，R⁷为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b、R^10c为氢。

在又一个实施例中，R⁸为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在另一个实施例中，R⁸为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b、R^10c为氢。

在一些实施例中，R^10a、R^10b或R^10c中的至少一个是相同的。在另一个实施例中，R^10a、R^10b或R^10c中的至少一个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氘或氢。在又一个实施例中，R^10a、R^10b或R^10c中的至少一个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氢。

在一些实施例中，R^10a、R^10b或R^10c中的至少两个是相同的。在另一个实施例中，R^10a、R^10b或R^10c中的至少两个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氘或氢。在又一个实施例中，R^10a、R^10b或R^10c中的至少两个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氢。

在另一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b和R^3c是相同的。在一些实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b和R^3c为氘，并且R²、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在又一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b和R^3c为氘，并且R²、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在又一个实施例中，R⁴为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在其他实施例中，R⁴为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在另一个实施例中，R⁵为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在又一个实施例中，R⁵为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在另一个实施例中，R^9a或R^9b中的至少一个是相同的。在其他实施例中，R^9a或R^9b中的至少一个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在一些实施例中，R^9a和R^9b中的至少一个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^10a、R^10b、R^10c为氢。

在一个实施例中，R⁶、R^9a和R^9b是相同的。在一些实施例中，R⁶、R^9a和R^9b为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁷、R⁸、R^10a、R^10b、R^10c为氘或氢。在其他实施例中，R⁶、R^9a和R^9b为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁷、R⁸、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在一些实施例中，R²、R^10a、R^10b和R^10c是相同的。在另一个实施例中，R²、R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氘或氢。在又一个实施例中，R²、R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氢。

在一些实施例中，R⁷与R^10a、R^10b或R^10c中的至少两个是相同的。在另一个实施例中，R⁷与R^10a、R^10b或R^10c中的至少两个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R^9a和R^9b为氘或氢。在又一个实施例中，R⁷与R^10a、R^10b或R^10c中的至少两个为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R^9a和R^9b为氢。

在一些实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c与R^10a、R^10b或R^10c中的至少一个是相同的。在另一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c与R^10a、R^10b或R^10c中的至少一个为氘，并且R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氘或氢。在又一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c与R^10a、R^10b或R^10c中的至少一个为氘，并且R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a和R^9b为氢。

在一些实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b、R^3c和R⁵是相同的。在另一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b、R^3c和R⁵为氘，并且R²、R⁴、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在又一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b、R^3c和R⁵为氘，并且R²、R⁴、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在其他实施例中，R⁴和R⁶是相同的。在另一个实施例中，R⁴和R⁶为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁵、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在又一个实施例中，R⁴和R⁶为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁵、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在一个实施例中，R²、R⁵、R^9a和R^9b是相同的。在一些实施例中，R²、R⁵、R^9a和R^9b为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁶、R⁷、R⁸、R^10a、R^10b和R^10c为氘或氢。在另一个实施例中，R²、R⁵、R^9a和R^9b为氘，并且R^1a、R^1b、R^1c、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁶、R⁷、R⁸、R^10a、R^10b和R^10c为氢。

在又一个实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁵、R⁶、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c是相同的。在一些实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁵、R⁶、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R⁴、R⁷和R⁸为氘或氢。在其他实施例中，R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁵、R⁶、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c为氘，并且R⁴、R⁷和R⁸为氢。

在一些实施例中，变量如在包括下表中的化合物的本公开化合物中所示。

表I

表II

本发明化合物包括本文一般性描述的那些，且它们由本文公开的类、亚类和种类进一步举例说明。如本文所述，除非另有说明，否则应当适用如下定义。对于本发明而言，化学元素根据Periodic Table of the Elements,CAS version,Handbook of Chemistryand Physics,75^th Ed.(元素周期表，CAS版，《化学与物理手册》，第75版)标识。另外，有机化学的一般原理在“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999(《有机化学》，Thomas Sorrell，大学科学书籍出版社，索萨利托，1999年)和“March’s Advanced Organic Chemistry”，5^th Ed.,Ed.:Smith,M.B.and March,J.,JohnWiley&Sons,New York:2001(《马奇高等有机化学》，第5版，Smith,M.B.和March,J.编辑，约翰·威利父子出版公司，纽约，2001年)中有所描述，其全部内容据此以引用方式并入。

如本文所述，原子的指定数量范围包括其中的任何整数。例如，具有1-4个原子的基团可具有1、2、3或4个原子。

如本文所述，本发明化合物可任选地被诸如本文一般性说明的取代基或如以本发明的具体类、亚类和物种所示例的取代基之类的一个或多个取代基取代。应当理解，短语“任选地取代的”与短语“取代的或未取代的”互换使用。一般来讲，短术语“取代的”无论前面是否有术语“任选地”均表示用特定取代基的自由基替代给定结构中的氢自由基。除非另外指明，否则任选地取代的基团可在该基团的每一个可取代的位置上具有取代基，并且当任何给定的结构中不止一个位置可以被不止一个选自指定群组的取代基所取代时，在每个位置上的取代基可能相同或者不同。本发明所预想的取代基组合优选是能够形成稳定的或化学上切实可行的化合物的那些取代基组合。

除非另外指明，否则从环中心画出的键所连接的取代基意指该取代基可键合至该环中的任何位置上。在如下例子i中，例如，J¹可键合至吡啶基环上的任何位置。对于双环而言，贯穿两个环画出的键指示该取代基可从该双环的任何位置上键合。在如下例子ii中，例如，J¹可键合至5元环(例如键合于氮原子上)和6元环。

本文所用的术语“稳定的”是指这样的化合物，该化合物在经受了能够对它们进行制备、检测、回收、纯化以及用于本文所公开的一个或多个目的的条件时实质上不会发生改变。在一些实施例中，稳定的化合物或化学上切实可行的化合物是当在没有水分或其他化学反应性条件存在的情况下在40℃或更低的温度下保持至少一周时实质上不会发生改变的化合物。

本文所用的术语“脂族”或“脂族基团”意指直链(即无支链)、支链或环状的取代或未取代的烃链，该烃链是完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元，所述不饱和单元与分子其余部分具有单个连接点。

除非另外指明，否则脂族基团含有1-20个脂族碳原子。在一些实施例中，脂族基团含有1-10个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基团含有1-8个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基团含有1-6个脂族碳原子，并且在其他实施例中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。脂族基团可为直链或支链的、取代或未取代的烷基、烯基或炔基。具体例子包括(但不限于)甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基、乙烯基、正丁烯基、乙炔基和叔丁基。脂族基团也可以是环状的，或者具有直链或支链基团与环状基团的组合。这些类型的脂族基团的例子包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、-CH₂-环丙基、CH₂CH₂CH(CH₃)-环己基。

术语“脂环族的”(或者“碳环”或“碳环基”)是指单环C₃-C₈烃或双环C₈-C₁₂烃，该烃是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但其为非芳族的，其与分子的其余部分具有单个连接点，其中所述双环环系中的任何单独的环具有3-7个成员。脂环族基团的例子包括(但不限于)环烷基和环烯基。具体例子包括(但不限于)环己基、环丙烯基和环丁基。

本文所用的术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”意指非芳族单环、双环或三环环系，其中一个或多个环成员是独立选择的杂原子。在一些实施例中，“杂环”、“杂环基”或“杂环的”基团具有三至十四个环成员，其中一个或多个环成员是独立选自氧、硫、氮或磷的杂原子，并且系统中的每个环含有3至7个环成员。

杂环的例子包括(但不限于)3-1H-苯并咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉代、3-吗啉代、4-吗啉代、2-硫代吗啉代、3-硫代吗啉代、4-硫代吗啉代、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氢吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并硫杂环戊烷、苯并二噻烷和1,3-二氢-咪唑-2-酮。

环状基团(例如脂环族和杂环)可以是线性稠合、桥连或螺环的。

术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一项或多项(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环的可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR⁺(如在N-取代的吡咯烷基中))。

本文所用的术语“不饱和的”意指部分具有一个或多个不饱和单元。正如本领域技术人员所知的，不饱和基团可以是部分不饱和的或完全不饱和的。部分不饱和基团的例子包括(但不限于)丁烯、环己烯和四氢吡啶。完全不饱和基团可以是芳族、反芳族或非芳族的。完全不饱和基团的例子包括(但不限于)苯基、环辛四烯、吡啶基、噻吩基和1-甲基吡啶-2(1H)-酮。

本文所用的术语“烷氧基”或“硫代烷基”是指经由氧(“烷氧基”)或硫(“硫烷基”)原子连接的如先前所定义的烷基。

术语“卤代烷基”、“卤代烯基”、“卤代脂族基”和“卤代烷氧基”意指视情况而被一个或多个卤素原子取代的烷基、烯基或烷氧基。该术语包括全氟化烷基，例如–CF₃和-CF₂CF₃。

术语“卤素原子”、“卤素”和“卤”意指F、Cl、Br或I。

单独使用或作为如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”之类的较大部分中的一部分的术语“芳基”是指具有总共五至十四个环成员的单环、双环和三环环系，其中该系统中的至少一个环是芳族的并且其中该系统中的每个环均含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳环”互换使用。

单独使用或作为如“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”之类的较大部分中的一部分的术语“杂芳基”是指具有总共五至十四个环成员的单环、双环和三环环系，其中该系统中的至少一个环是芳族的，该系统中的至少一个环含有一个或多个杂原子，并且其中该系统中的每个环均含有3至7个环成员。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族的”互换使用。杂芳基环的例子包括(但不限于)2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、苯并咪唑基、3-异唑基、4-异唑基、5-异唑基、2-唑基、4-唑基、5-唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(例如3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(例如5-四唑基)、三唑基(例如2-三唑基和5-三唑基)、2-噻吩基、3-噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(例如2-吲哚基)、吡唑基(例如2-吡唑基)、异噻唑基、1,2,3-二唑基、1,2,5-二唑基、1,2,4-二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)和异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。

应当理解，术语“杂芳基”包括某些类型的杂芳基环，这些杂芳基环以在两种不同形式之间的平衡形式存在。更具体地说，例如，诸如氢化吡啶和吡啶酮(以及同样的，羟基嘧啶和嘧啶酮)之类的物质意在涵盖于“杂芳基”的定义内。

本文所用的术语“保护基”和“保护性基团”可互换使用，指用于暂时封闭具有多个反应位点的化合物中的一个或多个所需官能团的试剂。在某些实施例中，保护基具有如下特征中的一项或多项或优选为全部：a)以良好收率选择性地加至官能团而产生受保护的底物；b)对于在一个或多个其他反应性位点发生的反应稳定；以及c)可用不会攻击该再生的、去保护的官能团的试剂以良好的收率选择性地移除。本领域的技术人员会理解，在一些情形中，所述试剂不攻击化合物中的其他反应性基团。在其他情况下，所述试剂也可与化合物中的其他反应性基团反应。保护基的例子在Greene,T.W.,Wuts,P.G in“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”、Third Edition,John Wiley&Sons,New York:1999(Greene,T.W.、Wuts,P.G，《有机合成中的保护基》，第三版，约翰·威利父子出版公司，纽约，1999年)(以及该书的其他版本)中有详细描述，该文献的全部内容据此以引用方式并入。本文所用的术语“氮保护基”是指用于暂时封闭多官能化合物中一个或多个所需氮反应性位点的试剂。优选的氮保护基还具有以上对保护基所示例的特征，并且某些示例性氮保护基也在Chapter 7in Greene,T.W.,Wuts,P.G in“Protective Groups in OrganicSynthesis”、Third Edition,John Wiley&Sons,New York:1999(Greene,T.W.、Wuts,P.G，《有机合成中的保护基》，第三版，约翰·威利父子出版公司，纽约，1999年)的第7章中进行了详细描述，该文献的全部内容据此以引用方式并入。

在一些实施例中，烷基或脂族链的亚甲基单元任选地被另一原子或基团置换。此类原子或基团的例子包括(但不限于)氮、氧、硫、-C(O)-、-C(＝N-CN)-、-C(＝NR)-、-C(＝NOR)-、-SO-和-SO₂-。这些原子或基团可结合以形成更大的基团。这些更大的基团的例子包括(但不限于)-OC(O)-、-C(O)CO-、-CO₂-、-C(O)NR-、-C(＝N-CN)、-NRCO-、-NRC(O)O-、-SO₂NR-、-NRSO₂-、-NRC(O)NR-、-OC(O)NR-和-NRSO₂NR-，其中R是例如H或C_1-6脂族基团。应当理解，这些基团可以经由单键、双键或三键与脂族链的亚甲基单元键合。经由双键与脂族链键合的任选置换基团(在这种情况下，是氮原子)的例子是-CH₂CH＝N-CH₃。在一些情况下，尤其是在末端上，任选的置换基团可以经由三键与脂族基团键合。这样的一个例子为CH₂CH₂CH₂C≡N。应当理解，在这种情况下，末端氮不键合到另一个原子。

还应当理解，术语“亚甲基单元”还可以指支链或取代的亚甲基单元。例如，在异丙基部分[-CH(CH₃)₂]中氮原子(如NR)置换最初所述的“亚甲基单元”将产生二甲胺[-N(CH₃)₂]。在诸如这些的情况下，本领域技术人员应当理解，氮原子将不具有任何另外的与其键合的原子，并且来自“NR”的“R”在这种情况下是不存在的。

除非另外指明，否则任选的置换能够形成化学上稳定的化合物。任选的替代可在链内和/或在链的任一端处发生；即，在连接点处和/或也在末端。两个任选的置换也可以在链内彼此相邻，只要其产生化学上稳定的化合物即可。例如，C₃脂族基团可任选地被2个氮原子置换以形成–C–N≡N。任选的置换还可完全置换链中的所有碳原子。例如，C₃脂族基团可任选地被-NR-、-C(O)-和-NR-置换而形成-NRC(O)NR-(脲)。

除非另外指明，否则如果置换发生于末端上，那么置换原子与末端上的氢原子结合。例如，如果-CH₂CH₂CH₃的亚甲基单元任选地被-O-置换，那么所得的化合物可以是-OCH₂CH₃、-CH₂OCH₃或-CH₂CH₂OH。应当理解，如果末端原子不含任何自由价电子，则在末端上无需氢原子(如，-CH₂CH₂CH＝O或-CH₂CH₂C≡N)。

除非另外指明，否则本文描绘的结构也旨在包括该结构的所有同分异构(例如，对映异构、非对映异构、几何异构、构象异构和旋转异构)形式。例如，每个非对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体和(Z)和(E)构象异构体包括在本发明内。本领域的技术人员会理解，取代基可围绕任何可旋转键自由地旋转。例如，画为的取代基也代表

因此，本发明化合物的单种立体化学异构体以及对映体、非对映体、几何、构象和旋转混合物均在本发明范围之内。

除非另外指明，否则本发明化合物的所有互变异构形式均在本发明范围之内。

在本发明的化合物中，未具体指定为特定同位素的任何原子均意在表示该原子的任何稳定同位素。除非另外指明，否则当某一位置具体指定为“H”或“氢”时，则应当理解该位置具有其天然丰度同位素组成的氢。此外，除非另外指明，否则当某一位置具体指定为“D”或“氘”时，则应当理解该位置具有丰度大于氘的天然丰度(0.015％)至少3340倍的氘(即，氘的结合率为至少50.1％)。

“D”和“d”均指代氘。

另外，除非另外指明，否则本文描绘的结构也意在包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，具有本发明结构，不同的是用氘或氚替换氢或用富含¹³C-或¹⁴C的碳替换碳的化合物在本发明范围之内。这种化合物可用作(例如)生物测定法中的分析工具或探针。

方法

本文所述的方法和化合物可用于制备含有氨基吡嗪-异唑芯的ATR抑制剂。本文方案中所示的一般合成程序可用于产生大量的可用于制造药物化合物的化学物质。

方案A

步骤1

可根据方案A中概述的步骤制备式I化合物。步骤1示出使用易得的醛/缩酮作为制备式I、I-A和I-B化合物的起点。在本领域的技术人员已知的条件下化合物1与合适的伯胺之间的还原胺化产生其中已引入苄胺基团的化合物2。例如，可通过将胺和醛在诸如二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、醇溶剂(如，甲醇、乙醇)或非质子溶剂(如，二烷或四氢呋喃(THF))的合适的溶剂中合并而形成亚胺。然后可通过已知的还原剂(包括(但不限于)NaBH₄、NaBH₃CN和NaBH(OAc)₃)还原这些亚胺(参见JOC 1996,3849(《有机化学杂志》，1996年，第3849页))。在一些实施例中，将1.05当量的胺与1当量的醛在甲醇中合并。在其他实施例中，将1.2当量的胺与1当量的醛在甲醇中合并。然后在该步骤之后用0.6至1.4(例如1.2)当量的NaBH₄还原。在一些情况下，如果使用胺盐，则也可添加碱(如，Et₃N或二异丙基乙胺)。

步骤2

步骤2示出在本领域的技术人员已知的合适的保护条件下使用氨基甲酸酯基保护基来保护上面制得的苄胺1。可以使用多种保护基，例如Cbz和Boc。保护条件包括(但不限于)以下这些：

a)R-OCOCl、合适的叔胺碱和合适的溶剂；其中R为任选地被苯基取代的C_1-6烷基；

b)R(CO₂)OR’、合适的溶剂以及任选地催化量的碱，其中R和R’各自独立地为任选地被苯基取代的C_1-6烷基；

c)[RO(C＝O)]₂O、合适的碱和合适的溶剂。

合适的碱的例子包括(但不限于)Et₃N、二异丙基胺和吡啶。合适的溶剂的例子包括氯化溶剂(如，二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、CH₂Cl₂和氯仿)、醚(如，THF、2-MeTHF和二烷)、芳香烃(如，甲苯、二甲苯)和其他非质子溶剂。

在一些实施例中，可通过使苄胺与(Boc)₂O和Et₃N在DCM中反应而进行保护。在一些实施例中，使用1.02当量的(Boc)₂O和1.02当量的Et₃N。在另一个实施例中，可通过使苄胺与(Boc)₂O在2-MeTHF中反应而进行保护。在一些实施例中，使用1.05当量的(Boc)₂O。

步骤3

步骤3示出3中的缩酮官能团随后如何在单个步骤中转化成肟4。缩酮向肟的这种直接转化未在文献中进行广泛描述，并且应当理解，也可在两步骤序列中使用本领域的技术人员已知的方法在缩酮去保护后通过醛过渡来进行该步骤。

肟形成条件包括将羟胺、酸、任选地脱水剂和醇溶剂混合在一起。在一些实施例中，酸为催化量的。在一些实施例中，酸为pTSA或HCl，脱水剂为分子筛或二甲氧基丙酮，并且醇溶剂为甲醇或乙醇。在一些实施例中，使用盐酸羟胺，在这种情况下，不需要另外的酸。在其他实施例中，通过双相处理并任选地沉淀或结晶而分离所需的产物。如果使用双相处理，则不需要脱水剂。

在另一个实施例中，肟形成条件包括将羟胺、酸、有机溶剂和水混合在一起。合适的有机溶剂的例子包括氯化溶剂(如，二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、CH₂Cl₂和氯仿)、醚(如，THF、2-MeTHF和二烷)、芳香烃(如，甲苯、二甲苯)和其他非质子溶剂。在一些实施例中，使用1.5当量的盐酸羟胺，有机溶剂为2-MeTHF，并且水用Na₂SO₄缓冲。在另一个实施例中，使用1.2当量的盐酸羟胺，有机溶剂为THF。

在一些实施例中，合适的去保护条件包括添加催化量的对甲苯磺酸(pTSA)、丙酮和水；然后使用本领域的技术人员已知的条件形成肟。在其他实施例中，使用单步骤序列。在一些实施例中，单步骤序列包括添加NH₂OH.HCl以及THF和水的混合物。在一些实施例中，将1当量的式3化合物与1.1当量的NH₂OH.HCl在体积比为10:1的THF和水的混合物中合并。

步骤4

步骤4示出肟4随后如何转化并参与[3+2]环加成以形成异唑5。该转化可以一锅法进行但需要两个截然不同的步骤。第一个步骤是肟官能团氧化为硝酮或具有相同氧化度的类似中间体，例如氯代肟。该反应性物质然后与炔烃以[3+2]环加成反应而形成异唑加合物。

在一些实施例中，合适的异唑形成条件包括两个步骤，第一个步骤包括使式4化合物在合适的氯代肟形成条件下反应以形成氯代肟中间体；第二个步骤包括使氯代肟中间体与乙炔在合适的环加成条件下反应以形成式5化合物。

在一些实施例中，氯代肟形成条件选自

a)N-氯代丁二酰亚胺和合适的溶剂；

b)过一硫酸氢钾、HCl和二烷；以及

c)次氯酸钠和合适的溶剂

合适的溶剂的例子包括(但不限于)非质子溶剂(如，DCM、DCE、THF、2-MeTHF、MTBE和二烷)、芳香烃(如，甲苯、二甲苯)和乙酸烷基酯(如，乙酸异丙酯、乙酸乙酯)。

产物的分离可通过向式5化合物的溶液中添加抗溶剂而实现。用于分离氯代肟中间体的合适的溶剂的例子包括合适的溶剂(EtOAc、IPAC)与烃(如，己烷、庚烷、环己烷)或芳香烃(如，甲苯、二甲苯)的混合物。在一些实施例中，将庚烷添加到氯代肟在IPAC中的溶液中。

合适的环加成条件包括将氯代肟与乙炔以及合适的碱和合适的溶剂合并。合适的溶剂包括质子溶剂、非质子溶剂、极性溶剂和非极性溶剂。合适的溶剂的例子包括(但不限于)乙腈、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、MTBE、EtOAc、i-PrOAc、DCM、甲苯、DMF和甲醇。合适的碱包括(但不限于)吡啶、DIEA、TEA、t-BuONa和K₂CO₃。在一些实施例中，合适的环加成条件包括在DCM中添加1.0当量的氯代肟、1.0当量的乙炔、1.1当量的Et3N。

产物的分离可通过向式5化合物的溶液中添加抗溶剂而实现。用于分离氯代肟的合适的溶剂的例子包括合适的溶剂(EtOAc、IPAC)与烃(如，己烷、庚烷、环己烷)或芳香烃(如，甲苯、二甲苯)的混合物。在一些实施例中，将庚烷添加到氯代肟在IPAC中的溶液中。

步骤5

步骤5示出制备式I化合物的最终步骤。当R4基团为溴时，可使中间体5在本领域的技术人员已知的条件下与硼酸或酯进行Suzuki交叉偶合，以形成其中R4为芳基、杂芳基或由金属辅助偶合反应产生的替代部分的化合物。当使中间体5适当地官能化时，可进行去保护步骤以移除保护基并生成式I化合物。

金属辅助偶合反应在本领域中是已知的(参见如，Org.Proc.Res.Dev.2010,30-47(《有机工艺研究与发展》，2010年，第30-47页))。在一些实施例中，合适的偶合条件包括在60-70℃下在体积比为2:1的乙腈/水中添加0.1当量的Pd[P(tBu)₃]₂；1当量的硼酸或酯；以及2当量的碳酸钠。在其他实施例中，合适的偶合条件包括在70℃下在体积比为7:2的甲苯和水中添加0.010-0.005当量的Pd(dtbpf)Cl₂，1当量的硼酸或酯，以及2当量的碳酸钾。

可将最终产物用金属清除剂(硅胶、官能化树脂、木炭)处理(参见如，Org.Proc.Res.Dev.2005,198-205(《有机工艺研究与发展》，2005年，第198-205页))。在一些实施例中，用Biotage MP-TMT树脂处理产物的溶液。

也可通过从醇溶剂(如甲醇、乙醇、异丙醇)中结晶来分离产物。在一些实施例中，溶剂为乙醇。在其他实施例中，溶剂为异丙醇。

Boc基团的去保护在本领域中已知的(参见如Protecting Groups in Organic Synthesis(《有机合成中的保护基》，Greene和Wuts))。在一些实施例中，合适的去保护条件为在35-45℃下的盐酸的丙酮溶液。在其他实施例中，合适的去保护条件为TFA的DCM溶液。

步骤6

步骤6示出在本领域的技术人员已知的合适条件下如何使用碱将式I化合物转化成式I-A化合物。在一些实施例中，式I化合物的游离碱形式的分离可通过向式I化合物的醇酸性溶液中添加合适的碱(例如NaOH)使产物沉淀而实现。

步骤7

步骤7示出在本领域的技术人员已知的合适条件下如何使用酸将式I-A化合物转化成式I-B化合物。

在一些实施例中，合适的条件包括在35℃下向式I-A化合物在丙酮中的悬浮液中添加HCl水溶液，然后在50℃加热。

方案B：d1-硼酸酯的形成

方案B示出了用于制备d1-硼酸酯中间体的一般合成方法。将合适的1-卤代-(异丙基磺酰基)苯用诸如(但不限于)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱处理，然后用诸如D₂O的氘源猝灭阴离子。然后经由(例如)通过(例如)Pd(^tBu₃)₂或Pd(dppf)Cl₂·DCM催化的金属介导的交叉偶合将卤素转化成合适的硼酸酯衍生物。

方案C：d6-硼酸酯的形成

方案C示出了用于制备d6-硼酸酯中间体的一般合成方法。将合适的1-卤代-(甲基磺酰基)苯用诸如(但不限于)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱处理，然后用诸如D₃CI的氘源猝灭阴离子。重复该反应，直到所需量的氘掺入到分子中。然后经由(例如)通过(例如)Pd(^tBu₃)₂或Pd(dppf)Cl₂·DCM催化的金属介导的交叉偶合将卤素转化成合适的硼酸酯衍生物。

方案D：d7-硼酸酯的形成

方案D示出了用于制备d7-硼酸酯中间体的一般合成方法。将4-溴苯硫醇用诸如(但不限于)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱处理，然后用诸如1,1,1,2,3,3,3-七氘-2-碘-丙烷的氘源猝灭阴离子。然后使用(例如)mCPBA或过硫酸氢钾将硫化物氧化成相应的砜。然后经由(例如)通过(例如)Pd(^tBu₃)₂或Pd(dppf)Cl₂·DCM催化的金属介导的交叉偶合将卤素转化成合适的硼酸酯衍生物。

方案E：芳环氘代硼酸酯的形成

方案E示出了用于制备其中芳环被氘取代的硼酸酯中间体的一般合成方法。将合适的1-碘代-4-溴代-芳基衍生物用取代的硫醇(例如丙烷-2-硫醇)在金属催化偶合条件下使用诸如CuI的催化剂进行处理。然后使用(例如)mCPBA或过硫酸氢钾将硫化物氧化成相应的砜。然后经由(例如)通过(例如)Pd(^tBu₃)₂或Pd(dppf)Cl₂·DCM催化的金属介导的交叉偶合将溴化物转化成合适的硼酸酯衍生物。然后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘。此外，将1-溴代-(异丙基磺酰基)苯用诸如(但不限于)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱处理，然后用诸如D₂O的氘源猝灭阴离子。然后经由(例如)通过(例如)Pd(^tBu₃)₂或Pd(dppf)Cl₂·DCM催化的金属介导的交叉偶合将溴化物转化成合适的硼酸酯衍生物。然后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘。

方案F：芳环氘代硼酸酯的形成

方案F示出了用于制备其中芳环被氘取代的硼酸酯中间体的另一种一般合成方法。将取代的4-溴苯硫醇用诸如(但不限于)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱处理，然后用诸如1,1,1,2,3,3,3-七氘-2-碘代-丙烷的氘源猝灭阴离子。然后使用(例如)mCPBA或过硫酸氢钾将硫化物氧化成相应的砜。然后经由(例如)通过(例如)Pd(^tBu₃)₂或Pd(dppf)Cl₂·DCM催化的金属介导的交叉偶合将卤素转化成合适的硼酸酯衍生物。然后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘。

方案G：芳环氘代硼酸酯的形成

方案G示出了用于制备其中芳环被氘取代的硼酸酯中间体的另一种一般合成方法。将取代的4-溴苯硫醇用诸如(但不限于)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱处理，然后用例如MeI猝灭阴离子。然后使用(例如)mCPBA或过硫酸氢钾将硫化物氧化成相应的砜。将砜用诸如(但不限于)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱处理，然后用诸如D₃CI的氘源猝灭阴离子。重复该反应，直到所需量的氘掺入到分子中。然后经由(例如)通过(例如)Pd(^tBu₃)₂或Pd(dppf)Cl₂·DCM催化的金属介导的交叉偶合将卤素转化成合适的硼酸酯衍生物。然后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘。

方案H：芳环氘代肟中间体的形成

方案H示出了用于制备其中芳环被氘取代的肟中间体的一般合成方法。可在诸如AIBN催化溴化的条件下用NBS将适当取代的4-甲基苯甲酸甲酯衍生物的甲基转化成相应的二溴化物。然后例如使用丙酮/水中的AgNO₃将该二溴化物水解成相应的醛。作为合适的缩醛(例如二乙缩醛)保护醛，并且随后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘，得到氘代酯中间体。可使用诸如LiAlH₄、NaBH₄、NaBD₄或LiAlD₄的试剂将酯官能团还原，从而得到相应的醛。可在还原胺化条件下使用合适的胺(例如甲胺或d3-甲胺)使用还原剂(例如NaBH₄或NaBD₄)使该醛反应，从而得到相应的胺衍生物。可用(例如)Boc基团保护该衍生物，然后使用例如盐酸羟胺的THF/水溶液将缩醛转化成肟。

方案I：芳环氘代肟中间体的形成

方案I示出了用于制备其中芳环被氘取代的肟中间体的另一种一般合成方法。可在诸如AIBN催化溴化的条件下用NBS将适当取代的4-甲基苯甲酸甲酯衍生物的甲基转化成相应的二溴化物。然后例如使用丙酮/水中的AgNO₃将该二溴化物水解成相应的醛。作为合适的缩醛(例如二甲缩醛)保护醛，并且随后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘，得到氘代酯中间体。酯官能团可在标准条件下(例如与氨的甲醇溶液加热)转化成相应的伯酰胺。可使用不限于LiAlH₄或LiAlD₄的试剂将酰胺还原成相应的胺。可用(例如)Boc基团保护该胺。氨基甲酸酯NH可在碱性条件下使用(例如)NaH、LiHMDS或KHMDS烷基化，然后用诸如MeI或D₃CI的氘源猝灭阴离子。可使用(例如)盐酸羟胺的THF/水溶液将缩醛转化成肟。

方案J：芳环氘代肟中间体的形成

方案J示出了用于制备其中芳环被氘取代的肟中间体的另一种一般合成方法。可在诸如AIBN催化溴化的条件下用NBS将适当取代的4-甲基苯甲酸甲酯衍生物的甲基转化成相应的二溴化物。然后例如使用丙酮/水中的AgNO₃将该二溴化物水解成相应的醛。作为合适的缩醛(例如二甲缩醛)保护醛，并且随后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘，得到氘代酯中间体。酯官能团可在标准条件下(例如与氨的甲醇溶液加热)转化成相应的伯酰胺。可使用不限于LiAlH₄或LiAlD₄的试剂将酰胺还原成相应的胺。可在还原胺化条件下使用合适的胺(例如甲胺或d3-甲胺、甲醛或d2-甲醛)使用还原剂(例如NaBH₄或NaBD₄)使该胺反应，从而得到相应的胺衍生物。可用(例如)Boc基团保护该胺。可使用(例如)盐酸羟胺的THF/水溶液将缩醛转化成肟。

方案K：芳环氘代肟中间体的形成

方案K示出了用于制备其中芳环被氘取代的肟中间体的另一种一般合成方法。可在诸如AIBN催化溴化的条件下用NBS将适当取代的4-甲基苯甲酸甲酯衍生物的甲基转化成相应的二溴化物。然后例如使用丙酮/水中的AgNO₃将该二溴化物水解成相应的醛。作为合适的缩醛(例如二甲缩醛)保护醛，并且随后在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将剩余的取代基转化成氘，得到氘代酯中间体。可在还原胺化条件下使用合适的胺(例如氢氧化铵)使用还原剂(例如NaBH₄或NaBD₄)使该酯中间体反应，从而得到相应的胺衍生物。可用(例如)Boc基团保护该衍生物，并在使用(例如)NaH、LiHMDS或KHMDS的碱性条件下将氨基甲酸酯NH烷基化，然后用诸如MeI或D₃CI的氘源猝灭阴离子。可使用诸如LiBH₄或NaBH₄的合适的还原剂将酯还原成相应的醇。可使用诸如MnO₂或戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodane)的试剂将醇氧化成醛。可使用(例如)羟胺水溶液将缩醛转化成肟。

方案L：氘代肟中间体的形成

方案L示出了用于制备氘代肟中间体的一般合成方法。可在还原胺化条件下使用合适的胺(例如甲胺或d3-甲胺)使用还原剂(例如NaBH₄或NaBD₄)使4-(二乙氧基甲基)苯甲醛反应，从而得到相应的胺衍生物。可用(例如)Boc基团保护该衍生物，然后使用例如盐酸羟胺的THF/水溶液将缩醛转化成肟。

方案M：氘代肟中间体的形成

方案M示出了用于制备氘代肟中间体的另一种一般合成方法。4-(二甲氧基甲基)苯甲酸甲酯的酯官能团可在标准条件下(例如与氨的甲醇溶液加热)转化成相应的伯酰胺。可使用不限于LiAlH₄或LiAlD₄的试剂将酰胺还原成相应的胺。可用(例如)Boc基团保护该胺。氨基甲酸酯NH可在碱性条件下使用(例如)NaH、LiHMDS或KHMDS烷基化，然后用诸如MeI或D₃CI的氘源猝灭阴离子。可使用(例如)盐酸羟胺的THF/水溶液将缩醛转化成肟。

方案N：氘代肟中间体的形成

方案N示出了用于制备氘代肟中间体的另一种一般合成方法。4-(二甲氧基甲基)苯甲酸甲酯的酯官能团可在标准条件下(例如与氨的甲醇溶液加热)转化成相应的伯酰胺。可使用不限于LiAlH₄或LiAlD₄的试剂将酰胺还原成相应的胺。可在还原胺化条件下使用合适的胺(例如甲胺或d3-甲胺、甲醛或d2-甲醛)使用还原剂(例如NaBH₄或NaBD₄)使该胺反应，从而得到相应的胺衍生物。可用(例如)Boc基团保护该胺。可使用(例如)盐酸羟胺的THF/水溶液将缩醛转化成肟。

方案O：氘代肟中间体的形成

方案O示出了用于制备氘代肟中间体的另一种一般合成方法。可用(例如)Boc基团保护4-取代的苄胺。氨基甲酸酯NH可在碱性条件下使用(例如)NaH、LiHMDS或KHMDS烷基化，然后用诸如MeI或D₃CI的氘源猝灭阴离子。可使用诸如LiBH₄或NaBH₄的合适的还原剂将酯还原成相应的醇。可使用诸如MnO₂或戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodane)的试剂将醇氧化成醛。可使用(例如)羟胺水溶液将缩醛转化成肟。

方案P：异唑衍生物的形成

方案P示出了用于制备氘代吡嗪-异唑衍生物的一般合成方法。在标准Sonagashira条件下利用(例如)Pd(PPh₃)₄和CuI作为催化剂将3,5-二溴吡嗪-2-胺转化成相应的甲硅烷基保护的炔烃。然后可将吡嗪NH₂作为(例如)二-Boc衍生物加以保护。在标准Suzuki交叉偶合条件下使吡嗪溴化物与硼酸酯(例如在上述方案1至6中概述的那些硼酸酯)偶合，然后移除甲硅烷基保护基，得到所需的炔烃中间体。可使用(例如)NCS将肟(例如在上述方案7至14中概述的那些肟)转化成相应的氯代肟。炔烃和氯代肟中间体可在标准条件下，例如通过添加Et₃N来进行[3+2]环加成以得到相应的异唑。可在酸性条件下(例如TFA的DCM溶液或HCl的MeOH/DCM溶液)移除Boc保护基以得到氘代吡嗪异唑衍生物。

方案Q：氘代异唑衍生物的形成

方案Q示出了用于制备氘代异唑衍生物的一般合成方法。可在标准条件下使用三氟乙酸酐保护吡嗪NH₂和苄胺NH。用(例如)NIS卤化异唑环，然后在碱性条件下移除三氟乙酸酯保护基，得到所需的卤化中间体。然后可在氘气氛围下使用合适的金属催化剂(例如吸附在碳上的钯)通过(例如)金属催化的卤素-氘交换将卤素转化成氘。

缩写

使用如下缩写：

ATP 三磷酸腺苷

B_oc 氨基甲酸叔丁酯

Cbz 羧基苄基

DCM 二氯甲烷

DMSO 二甲亚砜

Et₃N 三乙胺

2-MeTHF 2-甲基四氢呋喃

NMM N-甲基吗啉

DMAP 4-二甲基氨基吡啶

TMS 三甲基甲硅烷基

MTBE 甲基叔丁基醚

EtOAc 乙酸乙酯

i-PrOAc 乙酸异丙酯

IPAC 乙酸异丙酯

DMF 二甲基甲酰胺

DIEA 二异丙基乙胺

TEA 三乙胺

t-BuONa 叔丁醇钠

K₂CO₃ 碳酸钾

PG 保护基

pTSA 对甲苯磺酸

TBAF 四正丁基氟化铵

¹HNMR 质子核磁共振

HPLC 高效液相色谱法

LCMS 液相色谱-质谱联用法

TLC 薄层色谱法

Rt 保留时间

方案和实例

按照本说明书使用本领域一般技术人员通常已知的步骤可以制备本公开的化合物。那些化合物可以通过已知的方法，其包括(但不限于)LCMS(液相色谱质谱联用法)和NMR(核磁共振)来分析。如下通用方案和实例示出了制备本公开化合物的方式。这些实例仅用于举例说明目的且不应该理解为以任何方式限制本发明的范围。使用Bruker DPX 400仪在400MHz下记录¹H-NMR谱。在使用电喷雾离子化的以单MS模式操作的MicroMass QuattroMicro质谱仪上分析质谱样品。

实例1：2-(4-(5-氨基-6-(3-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基氨基)甲基)苯基)异 唑- 5-基)吡嗪-2-基)吡啶-2-基)-2-甲基丙腈(化合物I-1)的合成

方法1：

在室温下历时2分钟向四氢吡喃-4-胺(100g,988.7mmol)在MeOH(3.922L)中的溶液添加4-(二乙氧基甲基)苯甲醛(196.1g,941.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌80分钟，直至醛亚胺形成完成(通过NMR可见)。历时45分钟小心地添加NaBH4(44.49g,1.176mol)，通过冰浴维持在24℃至27℃之间的温度。室温下75分钟后，反应完成。用1MNaOH(1L)淬灭该反应混合物。使反应混合物在盐水(2.5L)与TBDME(4L，然后2×1L)之间分配。将有机相用盐水(500mL)洗涤并真空浓缩。将该粗制混合物溶解于DCM(2L)中。分离水相，将有机相用MgSO4干燥、过滤并真空浓缩得到黄色油状的标题化合物(252.99g,91％)。

方法2：

将N-[[4-(二乙氧基甲基)苯基]甲基]四氢吡喃-4-胺(252.99g,862.3mmol)和BOC酐(191.9g,202.0mL,879.5mmol)在DCM(2.530L)中的溶液冷却至3.3℃。历时4分钟添加Et3N(89.00g,122.6mL,879.5mmol)，保持内部温度低于5℃。在添加结束后45分钟移除该浴。并将反应混合物室温下搅拌过夜。将反应混合物依次用0.5M柠檬酸(1L)、NaHCO3饱和溶液(1L)和盐水(1L)洗涤。将有机相干燥(MgSO4)、过滤并真空浓缩得到无色油状物(372.38g,110％)。1H NMR(400.0MHz,DMSO)；MS(ES+)

方法3：

将N-[[4-(二乙氧基甲基)苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(372.38g,946.3mmol)溶解于THF(5L)和水(500mL)中。一次性添加盐酸羟胺(72.34g,1.041mol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。使反应混合物在DCM(5L)与水之间分配。用水(1L×2)洗涤合并的有机萃取物。真空浓缩有机相至约2L体积。将有机层用MgSO4干燥、过滤并真空浓缩得到粘性的无色油状物，将其在真空下静置结晶。(334.42g,106％)。1H NMR(400.0MHz,CDCl3)；MS(ES+)

方法4：

将N-[[4-[(E)-羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(334.13g,999.2mmol)溶解于乙酸异丙酯(3.0L)中(使该混合物升温至40℃以让所有固体溶解)。历时5分钟分份添加N-氯代琥珀酰亚胺(140.1g,1.049mol)并将该混合物加热至55℃(外部块温度)。55℃下45分钟后，反应完成。将反应混合物冷却至室温。滤出固体并用乙酸异丙酯(1L)冲洗。将合并的有机萃取物依次用水(1.5L，5次)和盐水洗涤、用MgSO4干燥、过滤并真空浓缩得到粘的黄色油状物(355.9g；96％)。1H NMR(400.0MHz,CDCl3)；MS(ES+)

方法5：

在室温下历时20分钟将Et₃N(76.97g,106.0mL,760.6mmol)添加至N-(5-溴-3-乙炔基-吡嗪-2-基)-N-叔丁氧羰基-氨基甲酸叔丁酯(233.0g,585.1mmol)和N-[[4-[(Z)-C-氯-N-羟基-碳亚胺基]苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(269.8g,731.4mmol)在DCM(2.330L)中的溶液。在添加三乙胺期间，通过在冰浴中冷却该混合物来稳定放热，然后将该反应混合物逐步升温至室温并将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物依次用水(1.5L，3次)和盐水洗涤。将有机萃取物用MgSO4干燥、过滤并在真空下部分浓缩。添加庚烷(1.5L)并继续浓缩，从而得到547.63g黄色-橙色固体。

将542.12g吸收于～2体积(1L)乙酸乙酯中。将该混合物加热至内部温度为74-75℃并搅拌直至所有的固体溶解。将庚烷(3.2L)通过加料漏斗缓慢加入内部温度保持在71℃与72℃之间的热溶液中。在添加结束时，在深棕色溶液中加入用作晶种的一些重结晶产物，并在不进行任何搅拌的情况下使反应混合物冷却到室温以使O/N结晶。滤出固体，并且用庚烷(2×250mL)冲洗，然后真空干燥得到307.38g标题产物(72％)。1H NMR(400.0MHz,CDCl3)；MS(ES+)

方法6：

将N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-溴-吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(303g,414.7mmol)和2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-2-吡啶基]丙腈(112.9g,414.7mmol)悬浮于MeCN(2L)和H₂O(1L)中。添加Na₂CO₃(414.7mL,2M, 829.4mmol)，然后添加Pd[P(tBu)3]2(21.19g,41.47mmol)，用N2使该反应混合物脱气1小时。将反应混合物置于氮气氛下并在70℃(块温度)下加热4小时(内部温度在60℃至61℃之间波动)。将反应物冷却至室温并在室温下搅拌过夜。使反应混合物在EtOAc(2L)与水(500mL)之间分配。将合并的有机萃取物用盐水(500mL)洗涤，通过短硅藻土垫过滤，然后减压浓缩到约3L的体积。将溶液用MgSO4干燥，过滤，并在真空中部分浓缩。添加iPrOH(1.5L)，然后真空除去溶剂，得到浅棕色泡沫状的所需产物(405g)。

将400g加入～5体积(2L)iPrOH中并将混合物加热至80℃直至所有固体溶解。为该暗棕色溶液加晶种，让反应混合物缓慢冷却至室温过夜。滤出固体并用iPrOH(2×250mL)和石油醚(2×200mL)冲洗。将所得的固体在石油醚(2.5L)中浆化、滤出并真空干燥。将所得的固体溶解于DCM(2.5L)中并与30g SPM32(3-巯基丙基乙硫醚二氧化硅)缓慢搅拌1小时。将该二氧化硅滤过氟罗里硅土(florisil)垫并用DCM冲洗。将该程序重复两次，然后真空浓缩DCM溶液而得到238.02g浅黄色固体。

方法7：

将N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(1-氰基-1-甲基-乙基)-4-吡啶基]吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(238g,299.0mmol)溶解于DCM(2.380L)中。在室温下历时3分钟添加TFA(500mL,6.490mol)。将反应混合物在室温下搅拌3.5小时。减压浓缩反应混合物，然后与庚烷(2×300ml)共沸。然后使油状物在无水EtOH(2.5L)中浆化，并过滤。将固体溶于乙醇(1.190L)和水(1.190L)的混合物，将碳酸钾(124.0g,897.0mmol)的水(357.0mL)溶液加入溶液中并将混合物在室温下搅拌过夜。

滤出固体，用水(2.5L)洗涤并在50℃下真空干燥以得到108.82g黄色粉末状的标题化合物(化合物I-1)。(73％)

方法6a和7a

在20℃下搅拌N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-溴-吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(110.0g,151mmol)、K₂CO₃(41.6g,301mmol)和2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-2-吡啶基]丙腈(41.0g,151mmol)在甲苯(770mL)和水(220mL)中的混合物，并用N₂脱气30分钟。添加催化剂Pd(dtbpf)Cl₂(1.96g,3.01mmol)，并将混合物再脱气10分钟。将混合物在70℃加热直到反应完成。将混合物冷却到环境温度，用水(220mL)稀释，并通过硅藻土床过滤。浓缩有机相以除去大部分溶剂。用i-PrOH(550mL)稀释浓缩物。将所得的悬浮液搅拌至少1小时，然后通过过滤收集固体，得到棕褐色粉末。将固体溶于甲苯(990mL)，并在环境温度下与Biotage MP-TMT树脂(18.6g)一起搅拌2小时。通过过滤移除树脂。浓缩滤液，然后用i-PrOH(550mL)稀释，并随后将其再次浓缩。添加i-PrOH(550mL)，并在环境温度下搅拌1小时。将悬浮液冷却到5℃，并通过过滤收集固体，然后干燥得到奶油色粉末状的N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(1-氰基-1-甲基-乙基)-4-吡啶基]吡嗪-2- 基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(化合物I-1)(81.9g；收率68％，98.7面积％纯度，通过HPLC测定)。

形式变化为化合物I-1·HCl·1.5 H ₂ O

在环境温度(20℃)下在配备有机械搅拌的烧瓶中搅拌N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(1-氰基-1-甲基-乙基)-4-吡啶基]吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-四氢吡喃-4-基-氨基甲酸叔丁酯(化合物I-1)(36.0g,72.6mmol)在CH₃CN(720mL)中的悬浮液。添加1M HCl水溶液(72.6mL；72.6mmol)。将悬浮液在环境温度下搅拌20小时。通过过滤收集固体。将滤饼用CH₃CN(3×50mL)洗涤，然后在高湿度真空下干燥2小时，得到黄色粉末状的化合物I-1·HCl·1.5H₂O(30.6g；收率74％，98.8面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.63(d,J＝4.7Hz,2H),9.05(s,1H)、8.69(d,J＝5.2Hz,1H),8.21(s,1H),8.16–8.03(m,3H),7.84(t,J＝4.1Hz,3H),7.34(br s,2H),4.40–4.18(m,2H),3.94(dd,J＝11.2,3.9Hz,2H),3.32(t,J＝11.2Hz,3H),2.17–2.00(m,2H),1.81(s,6H),1.75(dd,J＝12.1,4.3Hz,2H)。

实例2：3-[3-[4-[二氘(甲基氨基)甲基]苯基]异 唑-5-基]-5-(4-异丙基磺酰 基苯基)吡嗪-2-胺(化合物II-1)的合成

步骤1：5-溴-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡嗪-2-胺

将(三甲基甲硅烷基)乙炔(1.845g,2.655mL,18.78mmol)逐滴加入3,5-二溴吡嗪-2-胺(化合物i)(5g,19.77mmol)在DMF(25mL)中的溶液中。然后添加三乙胺(10.00g,13.77mL,98.85mmol)、碘化铜(I)(451.7mg,2.372mmol)和Pd(PPh₃)₄(1.142g,0.9885mmol)，并将所得的溶液在室温下搅拌30分钟。用EtOAc和水稀释反应混合物，并进行层的分离。用EtOAc进一步萃取含水层，并将合并的有机层用水洗涤，干燥(MgSO₄)并真空浓缩。通过柱色谱法(用15％EtOAc/石油醚洗脱)纯化残余物，得到黄色固体状的产物(3.99g，收率75％)。1H NMR(400.0MHz,DMSO)δ0.30(9H,s),8.06(IH,s)；MS(ES+)271.82。

步骤2：N-叔丁氧羰基-N-[5-溴-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡嗪-2-基]氨基甲 酸叔丁酯

将5-溴-3-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡嗪-2-胺(2.85g,10.55mmol)溶于DCM(89.06mL)，并用Boc酸酐(6.908g,7.272mL,31.65mmol)然后用DMAP(128.9mg,1.055mmol)处理。将反应物在环境温度下搅拌2小时。然后用DCM和NaHCO₃稀释混合物，并进行层的分离。将含水层用DCM进一步萃取、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(用二氯甲烷洗脱)纯化所得的残余物，得到无色油状的所需产物(4.95g，收率99％)。1H NMR(400.0MHz,DMSO)δ0.27(9H,s),1.42(18H,s),8.50(1H,s)；MS(ES+)472.09。

步骤3：N-(3-乙炔基-5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)吡嗪-2-基)N-叔丁氧羰基-氨基 甲酸叔丁酯

将N-[5-溴-3-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡嗪-2-基]-N-叔丁氧羰基氨基甲酸酯(3g,6.377mmol)和(4-异丙基磺酰基苯基)硼酸(1.491g,6.536mmol)溶于MeCN/水(60/12mL)中。添加K₃PO₄(2.706g,12.75mmol)，并将反应混合物用氮气流脱气(5个循环)。添加Pd[P(tBu)₃]₂(162.9mg,0.3188mmol)，并将所得的混合物在室温下搅拌1小时。在4℃下将反应混合物迅速倒入乙酸乙酯(500mL)、水(90mL)和1％焦亚硫酸钠水溶液的混合物中，充分摇晃，并进行层的分离。将有机馏分用MgSO₄干燥，过滤并用预吸收在硅胶上的3-巯丙基乙基硫化物/硅石(0.8mmol/g,1g)处理滤液，然后通过在硅胶上用30-40％EtOAc/石油醚洗脱而柱色谱法纯化。将溶剂真空浓缩，留下黄色粘稠油状产物，用石油醚湿磨该产物，得到米黄色晶体状的产物(1.95g，收率61％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.20(m,6H),1.39(s,18H),3.50(m,1H),5.01(s,1H),8.03(m,2H),8.46(m,2H)和9.37(s,IH)。

步骤4：4-(二甲氧基甲基)苯甲酰胺

在密封管中将4-(二甲氧基甲基)苯甲酸甲酯(3.8g,18.08mmol)和7M NH₃在MeOH(30mL,7M,210.0mmol)中的混合物在110℃下加热22小时。添加另一份7M NH₃的MeOH溶液(20mL,7M,140.0mmol)，并将反应物在135℃加热23小时。将反应物冷却到环境温度，然后真空移除溶剂。使残余物再次接受反应条件(7M NH₃的MeOH溶液(30mL,7M,210.0mmol)，115℃)另外16小时。真空移除溶剂，然后在Et₂O中湿磨残留物。通过过滤分离所得的沉淀，得到白色固体状的子标题化合物(590mg，收率17％)。通过柱色谱法(ISCO Companion，40g柱，用0至100％EtOAc/石油醚至10％MeOH/EtOAc洗脱，在EtOAc/MeOH中上样)纯化滤液，得到另一份白色固体状的子标题产物(225mg，收率6％)。总分离量(815mg，收率23％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ3.26(s,6H),5.44(s,1H),7.37(s,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),7.84-7.91(m,2H)和7.98(s,1H)ppm；MS(ES+)196.0。

步骤5：二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲胺

在0℃在氮气氛围下将LiDH₄(12.52mL,1M,12.52mmol)逐滴加入4-(二甲氧基甲基)苯甲酰胺(815mg,4.175mmol)在THF(20mL)中的搅拌溶液中。将反应物在回流下加热16小时，然后冷却到环境温度。通过顺序添加D₂O(1mL)、15％NaOH的D₂O溶液(1mL)和D₂O(4mL)来猝灭反应。通过过滤移除所得的固体，并用EtOAc洗涤。将滤液在真空中浓缩，并使残余物通过与甲苯(×3)共沸蒸馏而干燥，得到黄色油状的子标题化合物(819mg)，其无需进一步纯化即可使用；1H NMR(400MHz,DMSO)δ3.23(s,6H),5.36(s,1H)和7.30-7.35(m,4H)ppm；MS(ES+)167.0。

步骤6：N-[二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯

在0℃下将Et₃N(633.7mg,872.9μL,6.262mmol)加入二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲胺(765mg,4.175mmol)在THF(15mL)中的搅拌悬浮液中。将反应物在该温度下搅拌30分钟，然后分批加入Boc₂O(956.8mg,1.007mL,4.384mmol)。让反应物升至环境温度并搅拌18小时。在真空中移除溶剂，并通过柱色谱法(ISCO Companion，120g柱，用0至50％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到无色油状的子标题产物(1.04g，收率88％)；1HNMR(400MHz,DMSO)δ1.40(s,9H),3.23(s,6H),5.36(s,1H),7.24(d,J＝8.2Hz,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H)和7.38(s,1H)ppm。

步骤7：N-[二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

在-78℃下将LiHMDS(1M THF溶液)(1.377mL,1M,1.377mmol)逐滴加入N-[二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(300mg,1.059mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中。将溶液在该温度下搅拌10分钟，然后逐滴加入碘甲烷(225.4mg,98.86μL,1.588mmol)，并让混合物经1小时升温至环境温度。将反应物再次冷却到-78℃，并添加LiHMDS(1M THF溶液)(635.4μL,1M,0.6354mmol)。10分钟后添加碘甲烷(105.2mg,46.14μL,0.7413mmol)，并让反应物经6小时升温至环境温度。用EtOAc稀释反应物，并将有机层用饱和NaHCO₃水溶液(×2)、盐水(×1)洗涤，干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCOCompanion，24g柱，用0至30％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到无色油状的子标题产物(200g，收率63％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.41(d,J＝27.7Hz,9H),2.76(s,3H),3.24(s,6H),5.37(s,1H),7.23(d,J＝7.9Hz,2H)和7.37(d,J＝8.0Hz,2H)ppm。

步骤8：N-[二氘-[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-(甲基)氨基甲酸叔丁酯

将盐酸羟胺(51.15mg,0.7361mmol)加入N-[二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(199mg,0.6692mmol)在THF(10mL)/水(1.000mL)中的搅拌溶液中，并让反应物在环境温度下搅拌4小时。将反应物分配于DCM与盐水之间，并进行层的分离。用DCM(×2)萃取含水层，并将合并的有机萃取物用盐水(×1)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩，得到白色固体状的子标题化合物(180mg，收率100％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.41(d,J＝24.6Hz,9H)2.76(s,3H),7.25(d,J＝8.1Hz,2H),7.58(d,J＝8.0Hz,2H),8.13(s,1H)和11.20(s,1H)ppm；MS(ES+)211.0(M-Boc)。

步骤9：N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]-二氘-甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔 丁酯

用NCS(89.24mg,0.6683mmol)处理N-[二氘-[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-(甲基)氨基甲酸叔丁酯(178mg,0.6683mmol)的DMF(2mL)溶液，并将反应物升温至65℃维持1小时。将反应物冷却至环境温度并用水稀释。用EtOAc(×2)萃取混合物，并将合并的有机萃取物用盐水(×4)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩，得到白色固体状的子标题化合物(188mg，收率94％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.42(d,J＝24.7Hz,9H),2.78(s,3H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.78(d,J＝8.2Hz,2H)和12.36(s,1H)ppm。

步骤10：N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2- 基]异 唑-3-基]苯基]-二氘-甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

将Et₃N(36.31mg,50.01μL,0.3588mmol)逐滴加入N-叔丁氧羰基-N-[3-乙炔基-5-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯(150mg,0.2990mmol)和N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]-二氘-甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(89.93mg,0.2990mmol)在无水THF(3mL)中的搅拌溶液中，并将反应混合物在65℃加热3小时。将反应混合物冷却至环境温度并用EtOAc/盐水稀释。添加水直至含水层变得透明，并进行层的分离。用EtOAc(×1)萃取含水层，并将合并的有机萃取物用盐水(×1)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCO Companion，40g柱，用0至30％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到白色固体状的子标题产物(134g，收率59％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.22(d,J＝6.8Hz,6H)1.32(s,18H),1.43(d,J＝23.1Hz,9H),2.82(s,3H),3.56(五,1H), 7.43(d,J＝8.3Hz,3H),8.02-8.03(m 3H),8.06-8.11(m,2H),8.62-8.67(m,2H)和9.51(s,1H)ppm；MS(ES+)666.2(M-Boc)。

步骤11：3-[3-[4-[二氘(甲基氨基)甲基]苯基]异 唑-5-基]-5-(4-异丙基磺酰 基苯基)吡嗪-2-胺(化合物II-1)

将3M HCl的MeOH溶液(1.167mL,3M,3.500mmol)加入N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]-二氘-甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(134mg,0.1750mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中，并将反应物在回流下加热16小时。将反应物冷却到环境温度，并通过过滤分离所得的沉淀，然后在40℃下真空干燥得到黄色固体状的标题化合物的二盐酸盐(58.8mg，收率62％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.20(d,J＝6.8Hz,6H),2.60(t,J＝5.4Hz,3H),3.48(七,J＝6.8Hz,1H),7.22(br s,2H),7.69-7.75(m,2H),7.85(s,1H),7.92-7.99(m,2H),8.08-8.15(m,2H)8.37-8.42(m,2H),8.97(s,1H)和9.10(d,J＝5.8Hz,2H)ppm；MS(ES+)466.2。

实例3：3-[3-[4-[二氘-(三氘甲基氨基)甲基]苯基]异 唑-5-基]-5-(4-异丙基 磺酰基苯基)吡嗪-2-胺(化合物II-2)的合成

步骤1：N-[二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲基]-1-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯

在-78℃下将LiHMDS(1M THF溶液)(1.181mL,1M,1.181mmol)逐滴加入N-[二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(300mg,1.059mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中。将溶液在该温度下搅拌30分钟，然后逐滴加入三氘(碘)甲烷(198.0mg,84.98μL,1.366mmol)，并使混合物经21小时升温至环境温度。将反应物再次冷却到-78℃，并添加另一份LiHMDS(1M THF溶液)(635.4μL,1M,0.6354mmol)。15分钟后添加更多的三氘(碘代)甲烷(76.75mg,32.94μL,0.5295mmol)，并使反应物经5小时升温至环境温度。用EtOAc稀释反应物，并将有机层用饱和NaHCO₃水溶液(×2)、盐水(×1)洗涤，干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCO Companion，24g柱，用0至30％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到无色油状的子标题产物(213g，收率67％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.36-1.42(m,9H)3.22(s,6H),5.35(s,1H),7.21(d,J＝7.8Hz,2H)和7.35(d,J＝7.7Hz,2H)ppm。

步骤2：N-[二氘-[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁 酯

将盐酸羟胺(53.95mg,0.7763mmol)加入N-[二氘-[4-(二甲氧基甲基)苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(212mg,0.7057mmol)在THF(10mL)/水(1.000mL)中的搅拌溶液中，并使反应物在环境温度下搅拌22小时。将反应物分配于DCM与盐水之间，并进行层的分离。用DCM(×2)萃取含水层，并将合并的有机萃取物用盐水(×1)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩，得到白色固体状的子标题化合物(190mg，收率100％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.41(d,J＝24.2Hz,9H)),7.25(d,J＝8.1Hz,2H),7.58(d,J＝8.0Hz,2H),8.13(s,1H)和11.20(s,1H)ppm。

步骤3：N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]-二氘-甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲 酸叔丁酯

用NCS(94.19mg,0.7054mmol)处理N-[二氘-[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(190.0mg,0.7054mmol)的DMF(2mL)溶液，并将反应物升温至65℃维持1小时。将反应物冷却至环境温度并用水稀释。用EtOAc(×2)萃取混合物，并将合并的有机萃取物用盐水(×4)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩，得到白色固体状的子标题化合物(198mg，收率93％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.41(d,J＝26.0Hz,9H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.78(d,J＝8.2Hz,2H)和12.36(s,1H)ppm。

步骤4：N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2- 基]异 唑-3-基]苯基]-二氘-甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯

将Et₃N(36.31mg,50.01μL,0.3588mmol)逐滴加入N-叔丁氧羰基-N-[3-乙炔基-5-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯(150mg,0.2990mmol)和N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]-二氘-甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(90.84mg,0.2990mmol)在无水THF(3mL)中的搅拌溶液中，并将反应混合物在65℃加热3.5小时。将反应混合物冷却至环境温度并用EtOAc/盐水稀释。添加水直至含水层变得透明，并进行层的分离。用EtOAc(×1)萃取含水层，并将合并的有机萃取物用盐水(×1)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCO Companion，40g柱，用0至35％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到白色固体状的子标题产物(158g，收率69％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.22(d,J＝6.8Hz,6H)),1.44(d,J＝22.0Hz,9H),3.56(dt,J＝13.5,6.7Hz,2H),7.43 (d,J＝8.2Hz,3H),8.02(d,J＝6.9Hz,2H),8.08(d,J＝8.7Hz,2H),8.65(d,J＝8.8Hz,2H)和9.51(s,1H)ppm；MS(ES+)669.3(M-Boc)。

步骤5：3-[3-[4-[二氘-(三氘甲基氨基)甲基]苯基]异 唑-5-基]-5-(4-异丙基 磺酰基苯基)吡嗪-2-胺(化合物II-2)

将3M HCl的MeOH溶液(1.361mL,3M,4.084mmol)加入N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]-二氘-甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(157mg,0.2042mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中，并将反应物在回流下加热16小时。将反应物冷却到环境温度，并通过过滤分离所得的沉淀，然后在40℃下真空干燥得到黄色固体状的标题化合物的二盐酸盐(72.5mg，收率66％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.20(d,J＝6.8Hz,6H),3.48(dq,J＝13.6,6.7Hz,1H),7.21(s,2H),7.68-7.78(m,2H),7.85(s,1H),7.91-7.99(m,2H),8.08-8.13(m,2H),8.36-8.42(m,2H),8.96(s,1H)和9.14(s,2H)ppm；MS(ES+)469.1。

实例4：5-(4-异丙基磺酰基苯基)-3-[3-[4-[(三氘甲基氨基)甲基]苯基]异 唑-5-基]吡嗪-2-胺(化合物II-3)的合成

步骤1：4-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]苯甲酸甲酯

在0℃下将Et₃N(1.882g,2.592mL,18.60mmol)加入4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯(盐酸(1))(1.5g,7.439mmol)在THF(20mL)中的搅拌悬浮液中。将反应物在该温度下搅拌30分钟，然后分批加入Boc₂O(1.705g,1.795mL,7.811mmol)。让反应物升至环境温度并搅拌18小时。用EtOAc稀释混合物。用1M HCl水溶液(×2)、饱和NaHCO₃水溶液(×2)和盐水(×1)洗涤有机层。将有机层干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩，得到白色固体状的子标题化合物，其无需进一步纯化即可使用(1.93g，收率98％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.40(s,9H),3.85(s,3H),4.20(d,J＝6.1Hz,2H),7.38(d,J＝8.2Hz,2H),7.49(t,J＝6.1Hz,1H)和7.92(d,J＝8.2Hz,2H)ppm；MS(ES+)251.1(M-Me)。

步骤2：4-[[叔丁氧羰基(三氘甲基)氨基]甲基]苯甲酸甲酯

在-78℃下将LiHMDS(1M THF溶液)(8.112mL,1M,8.112mmol)逐滴加入4-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]苯甲酸甲酯(1.93g,7.275mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液中。将溶液在该温度下搅拌30分钟，然后逐滴加入三氘(碘)甲烷(1.360g,9.385mmol)，并使混合物经3小时升温至环境温度。将反应物冷却到-78℃，并添加另一份LiHMDS(1M THF溶液)(2.182mL,1M,2.182mmol)。10分钟后添加另一份三氘(碘)甲烷(527.4mg,3.638mmol)，并使反应物经17小时升温至环境温度。用EtOAc稀释反应物，并将有机层用饱和NaHCO₃水溶液(×2)、盐水(×1)洗涤，干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCO Companion，120g柱，用0至30％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到淡黄色油状的子标题产物(1.37g，收率67％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.38(d,J＝44.2Hz,9H),3.83(s,3H),4.43(s,2H),7.33(d,J＝8.2Hz,2H)和7.94(d,J＝8.1Hz,2H)ppm；MS(ES+)268.1(M-Me)

步骤3：N-[[4-(羟基甲基)苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯

将LiBH₄(158.5mg,7.278mmol)加入4-[[叔丁氧羰基(三氘甲基)氨基]甲基]苯甲酸甲酯(1.37g,4.852mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液中，并使反应物升温至85℃维持15小时。添加另一份LiBH₄(158.5mg,7.278mmol)，并将反应物在65℃下另外搅拌7小时。将反应混合物冷却至环境温度，然后倾注进碎冰中同时滴加搅拌的1M HCl，直至未观察到泡腾。将混合物搅拌10分钟，然后添加饱和NaHCO₃水溶液直至混合物处于pH 8。用EtOAc(×3)萃取含水层，并将合并的有机萃取物干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCOCompanion，120g柱，用0至100％的EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到无色油状的子标题产物(1.03g，收率84％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.42(d,J＝14.6Hz,9H),4.35(s,2H),4.48(d,J＝5.7Hz,2H),5.15(t,J＝5.7Hz,1H),7.18(d,J＝7.9Hz,2H)和7.30(d,J＝7.7Hz,2H)ppm；MS(ES+)181.1(M-O^tBu)。

步骤4：N-[(4-甲酰基苯基)甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯

将MnO₂(5.281g,1.051mL,60.75mmol)加入N-[[4-(羟基甲基)苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.03g,4.050mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中，并将反应物在环境温度下搅拌20小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用DCM洗涤。真空浓缩滤液，得到无色油状的子标题化合物(891mg，收率88％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.40(d,J＝43.4Hz,9H),4.48(s,2H),7.43(d,J＝8.0Hz,2H),7.91(d,J＝7.9Hz,2H)和10.00(s,1H),ppm。

步骤5：N-[[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯

将羟胺(466.0μL,50％w/v,7.054mmol)加入N-[(4-甲酰基苯基)甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(890mg,3.527mmol)在乙醇(5mL)中的搅拌溶液中，并将反应混合物在环境温度下搅拌45分钟。将反应混合物真空浓缩，将残余物吸收于水中并用EtOAc(×3)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(×1)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。从石油醚中湿磨残余物，并通过过滤分离沉淀，得到白色固体状的子标题产物(837mg，收率89％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.41(d,J＝25.8Hz,9H),4.38(s,2H),7.24(d,J＝8.0Hz,2H),7.58(d,J＝8.0Hz,2H),8.13(s,1H)和11.20(s,1H)ppm；MS(ES+)212.0(M-^tBu)。

步骤6：N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁 酯

用NCS(124.9mg,0.9351mmol)处理N-[[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(250mg,0.9351mmol)的DMF(2.5mL)溶液，并将反应物升温至65℃维持1小时。将反应物冷却至环境温度并用水稀释。用EtOAc(×2)萃取混合物，并将合并的有机萃取物用盐水(×4)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩，得到白色固体状的子标题化合物(259mg，收率92％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.41(d,J＝29.6Hz,9H),4.42(s,2H),7.31(d,J＝8.3Hz,2H),7.78(d,J＝8.0Hz,2H)和12.38(s,1H),ppm。

步骤7：N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2- 基]异 唑-3-基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯

将Et₃N(48.41mg,66.68μL,0.4784mmol)逐滴加入N-叔丁氧羰基-N-[3-乙炔基-5-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.3987mmol)和N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(120.3mg,0.3987mmol)在无水THF(5mL)中的搅拌溶液中，并将反应混合物在65℃加热2.5小时。将反应混合物冷却至环境温度并用EtOAc/盐水稀释。添加水直至含水层变得透明，并进行层的分离。用EtOAc(×1)萃取含水层，并将合并的有机萃取物用盐水(×1)洗涤、干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCO Companion，40g柱，用0至20％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到白色固体状的子标题产物(213.5g，收率70％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.22(d,J＝6.8Hz,6H),1.31(s,18H),1.43(d,J＝26.2Hz,9H),3.51-3.60(m,1H),4.47(s,2H),7.42(d,J＝8.1Hz,2H),8.03(d,J＝5.2Hz,3H),8.08(d,J＝8.6Hz,2H),8.65(d,J＝8.6Hz,2H)和9.52(s,1H)ppm；MS(ES+)667.4(M-Boc)。

步骤8：5-(4-异丙基磺酰基苯基)-3-[3-[4-[(三氘甲基氨基)甲基]苯基]异 唑-5-基]吡嗪-2-胺(化合物II-3)

将3M HCl的MeOH溶液(1.5mL,3M,4.500mmol)加入N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-(三氘甲基)氨基甲酸叔丁酯(213mg,0.2777mmol)在DCM(6mL)中的搅拌溶液中，并将反应物在回流下加热15小时。添加另一份3M HCl的MeOH溶液(0.5mL,3M,1.500mmol)，并将反应物在回流下另外加热7小时。将反应物冷却到环境温度，并通过过滤分离所得的沉淀，然后在40℃下真空干燥得到黄色固体状的标题化合物的二盐酸盐(97.6mg，收率65％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.20(d,J＝6.8Hz,6H),3.47(tt,J＝14.0,6.9Hz,1H),4.19-4.25(m,2H),7.23(s,2H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.85(s,1H),7.95(d,J＝8.7Hz,2H),8.11(d,J＝8.4Hz,2H),8.39(d,J＝8.7Hz,2H),8.97(s,1H)和9.11(s,2H)ppm；MS(ES+)467.2。

实例5：3-[3-[4-(甲基氨基甲基)苯基]异 唑-5-基]-5-[4-[1,2,2,2-四氘-1- (三氘甲基)乙基]磺酰基苯基]吡嗪-2-胺(化合物II-4)的合成

步骤1：1-[4-(二乙氧基甲基)苯基]-N-甲基-甲胺

用甲醇(1.000L)稀释2M甲胺的MeOH溶液(288.1mL,576.2mmol)，并在约20℃下搅拌。将4-(二乙氧基甲基)苯甲醛(100g,480.2mmol)经1分钟逐滴加入，并将反应物在环境温度下搅拌1.25小时。将硼氢化钠(29.07g,30.76mL,768.3mmol)经20分钟分批加入，同时用冰水浴将温度维持在20与30℃之间。将反应溶液在环境温度下搅拌过夜，然后通过在20分钟内逐滴加入NaOH(960.4mL,1.0M,960.4mmol)而猝灭。将反应物搅拌30分钟，并真空浓缩以除去MeOH。用MTBE(1.200L)分配反应物，并进行相的分离。将有机相用水(300.0mL)洗涤、干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩，得到黄色油状的标题化合物(102.9g，收率96％)；1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.25(t,6H),2.46(s,3H),3.45–3.65(m,4H),3.75(s,2H),5.51(s,1H),7.32(d,2H)和7.44(d,2H)ppm。

步骤2：N-[[4-(二乙氧基甲基)苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

1L的玻璃夹套反应器配备有顶置式搅拌器、热电偶和冷却器。在18℃下搅拌1-[4-(二乙氧基甲基)苯基]-N-甲基-甲胺(80.0g,358.2mmol)在DCM(480.0mL)中的溶液。将Boc酸酐(79.75g,83.95mL,365.4mmol)在DCM(160.0mL)中的溶液经10分钟加入，并将溶液在20-25℃下搅拌过夜。将反应混合物过滤、用DCM(3×50mL)冲洗并将滤液真空浓缩，得到淡黄色液体状的标题化合物(116.6g，定量收率)；1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.25(t,6H),1.49–1.54(2×s,9H),2.78–2.83(2×s,3H),3.50–3.66(m,4H),4.42(s,2H),5.49(s,1H),7.22(d,2H)和7.45(d,2H)ppm。

步骤3：N-[[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

在1L玻璃夹套反应器中在8-10℃下搅拌N-[[4-(二乙氧基甲基)苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(50.0g,154.6mmol)在2-MeTHF(400.0mL)和Na₂SO₄(100.0mL,10％w/v,70.40mmol)中的双相溶液。添加盐酸羟胺(46.38mL,5.0M,231.9mmol)，并将双相溶液在30℃搅拌16小时。用MTBE(200.0mL)稀释反应物，并进行层的分离。将有机相用水(200.0mL)洗涤、干燥(Na₂SO ₄)、过滤并真空浓缩。用庚烷(200.0mL)稀释残余物，并将所得的悬浮液在环境温度下搅拌30分钟。通过过滤收集固体，得到白色固体状的标题化合物(36.5g，收率89％)；1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.50(s,9H),2.88(br s,3H),4.60(s,2H),7.26(d,2H),7.52(d,2H)和8.15(s,1H)ppm。

步骤4：N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

在环境温度下搅拌N-[[4-[羟基亚氨基甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(100g,378.3mmol)在乙酸异丙酯(1.000L)中的悬浮液。添加N-氯代丁二酰亚胺(53.04g,397.2mmol)，并在环境温度下搅拌16小时。用水(500.0mL)分配反应物，并进行相的分离。将有机相用水(500.0mL)(2×)洗涤、干燥(Na₂SO₄)、过滤并真空浓缩以除去大部分溶剂。添加庚烷(1.000L)，并将混合物真空浓缩以除去大部分溶剂。添加庚烷(1.000L)，并通过过滤分离所得的沉淀。将滤饼用庚烷(500mL)洗涤并风干，得到灰白色粉末状的标题化合物(105.45g，收率93％)；1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.48(2×s,9H),2.90(2×s,3H),4.47(s,2H),7.26(d,2H),7.77(d,2H)和8.82(s,1H)ppm。

步骤5：N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-溴-吡嗪-2-基]异 唑-3-基]苯 基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

在环境温度下搅拌N-[[4-[氯-N-羟基-碳亚胺酰基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(100.0g,334.7mmol)和N-叔丁氧羰基-N-[3-乙炔基-5-(4-异丙基磺酰基苯基)吡嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯(121.2g,304.3mmol)在DCM(1.212L)中的悬浮液。将三乙胺(33.87g,46.65mL,334.7mmol)一次性加入，并将反应物在环境温度下搅拌16小时。用水(606.0mL)分配反应物，并进行相的分离。将有机相用水(606.0mL)洗涤、干燥(Na₂SO₄)、过滤并真空浓缩至接近干燥。添加庚烷(363.6mL)，并将混合物浓缩至约300mL。另外添加庚烷(1.212L)，并将混合物在搅拌下加热到90℃。将混合物缓慢冷却到环境温度，并在该温度下搅拌1小时。通过过滤分离所得的沉淀，并将滤饼用庚烷(2×363.6mL)洗涤并风干，得到米黄色固体状的标题化合物(181.8g，收率90％)；1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.41(s,18H),1.51(s,9H),2.88(2×s,3H),4.50(s,2H),7.36–7.38(m,3H),7.86(d,2H)和8.65(s,1H)ppm。

步骤6：1-溴-4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲基)乙基]硫烷基-苯

在0℃下将氢化钠(246.5mg,6.163mmol)分批加入4-溴苯硫醇(化合物xxxi)(970.9mg,5.135mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中。在该温度下搅拌15分钟后添加1,1,1,2,3,3,3-七氘-2-碘-丙烷(1g,5.649mmol)，并让反应物经18小时升温至环境温度。通过添加水猝灭反应，然后将混合物搅拌10分钟。用乙醚(×3)萃取混合物，并将合并的有机萃取物用水(×2)、盐水(×2)洗涤，干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩，得到子标题化合物，假定其收率和纯度为100％，则无需进一步纯化即可直接使用；1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.25-7.37(m,2H)和7.48-7.55(m,2H)ppm。

步骤7：1-溴-4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲基)乙基]磺酰基-苯

在0℃下将mCPBA(2.875g,12.83mmol)分批加入1-溴-4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲基)乙基]硫烷基-苯(1.223g,5.134mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中，并让反应物经17小时升温至环境温度。将混合物用1M NaOH水溶液(×2)、饱和Na₂S₂O₃水溶液(×3)、盐水(×1)洗涤，干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(ISCO Companion，80g柱，用0至40％EtOAc/石油醚洗脱，在DCM中上样)纯化残余物，得到无色油状的子标题产物(1.19g，收率86％)；1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.77-7.81(m,2H)和7.88-7.92(m,2H)ppm。

步骤8：4,4,5,5-四甲基-2-[4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲基)乙基]磺酰基苯基]- 1,3,2-二氧杂环戊硼烷

将Pd(dppf)Cl₂.DCM(179.8mg,0.2202mmol)加入1-溴-4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲基)乙基]磺酰基-苯(1.19g,4.404mmol)、联硼酸频那醇酯(1.342g,5.285mmol)和KOAc(1.296g,13.21mmol)在二烷(10mL)中的搅拌悬浮液中。通过5个氮气/真空循环将反应物置于氮气氛围下，并将混合物在80℃下加热4.5小时。将反应物冷却到环境温度，并真空移除溶剂。将残余物分配在Et₂O与水之间，并进行层的分离。将有机层干燥(MgSO₄)、过滤并真空浓缩。将残余物溶于30％EtOAc/石油醚(35mL)中，并添加1.2g合成硅酸铝载体(Florosil)。将混合物搅拌30分钟，然后过滤，用另外的30％EtOAc/Petrol等分试样(×3)洗涤固体。将滤液真空浓缩，并从10％EtOAc/石油醚中湿磨。通过过滤分离所得的固体，用石油醚洗涤并真空干燥，得到灰白色固体状的子标题化合物(1052.1mg，收率75％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.33(s,12H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H)和7.94(d,J＝8.4Hz,2H)ppm。

步骤9：N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲 基)乙基]磺酰基苯基]吡嗪-2-基]异 唑-3-基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

将[1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(106.8mg,0.1639mmol)加入4,4,5,5-四甲基-2-[4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲基)乙基]磺酰基苯基]-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.3g,4.098mmol)、N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-溴-吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(2.707g,4.098mmol)和K₂CO₃(1.133g,8.200mmol)在甲苯(9.100mL)、EtOH(2.600mL)和水(2.600mL)中的混合物中，并将反应混合物通过氮气流脱气(5个循环)。

将混合物在75℃下加热1.5小时。将反应物冷却到环境温度，并添加水(5.2mL)。搅拌后进行层的分离，并将有机相干燥(Na₂SO₄)、过滤并真空浓缩。用IPA湿磨残余物，并通过过滤分离所得的沉淀，用IPA(3×4mL)洗涤，并在50℃下真空干燥，得到白色固体状的标题化合物(2.4g，收率76％)；1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.41(s,18H),1.50(s,9H),2.85–2.89(m,3H),4.50(s,2H),7.36–7.38(m,3H),7.87(d,2H),8.09(d,2H),8.35(d,2H)和9.06(s,1H)ppm。

步骤10：3-[3-[4-(甲基氨基甲基)苯基]异 唑-5-基]-5-[4-[1,2,2,2-四氘-1- (三氘甲基)乙基]磺酰基苯基]吡嗪-2-胺(化合物II-4)

将浓盐酸(3.375g,2.812mL,37％w/w,34.25mmol)加入N-[[4-[5-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[4-[1,2,2,2-四氘-1-(三氘甲基)乙基]磺酰基苯基]吡嗪-2-基]异唑-3-基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(2.2g,2.854mmol)在丙酮(28.60mL)中的溶液中，并将反应物在回流下加热7小时。将反应物冷却到环境温度，并通过过滤分离所得的沉淀，用丙酮(2×4.5mL)洗涤并在50℃下真空干燥，得到黄色固体状的标题化合物的二盐酸盐(1.42g，收率92％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ2.58(t,3H),4.21(t,2H),5.67(br s,2H),7.74(d,2H),7.85(s,1H),7.94(d,2H),8.10(d,2H),8.38(d,2H),8.96(s,1H)和9.33(br s,2H)ppm；MS(ES+)471.8。

实例6：5-(4-(叔丁基磺酰基)苯基)-3-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)异 唑- 5-基)吡嗪-2-胺(化合物I-2)的合成

步骤1：化合物4-ii的制备

在环境温度下搅拌4-((羟基亚氨基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4-i)(650g,2.46mol)在乙酸异丙酯(6.5L)中的悬浮液。添加N-氯代丁二酰亚胺(361g,2.71mol)，并将反应温度维持在20-28℃过夜以确保完全反应。用水(3.25L)和EtOAc(1.3L)稀释反应混合物，并进行相的分离。将有机相用水(2×3.25L)洗涤、干燥(Na₂SO₄)并浓缩成湿饼。用庚烷(9.1L)稀释浓缩物，除去约2L溶剂，然后在环境温度下搅拌2-20小时。通过过滤收集固体。将滤饼用庚烷(2×975mL)洗涤，然后干燥，得到无色粉末状的化合物4-ii(692g；收率94％，99.2面积％纯度，通过HPLC测定)。

步骤2：(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)异 唑-5-基) 吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4-iv)的制备

在环境温度下搅拌N-(5-溴-3-乙炔基吡嗪-2-基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯(化合物4-iii)(1.59kg,3.99mol)和4-(氯(羟基亚氨基)甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.31kg，4.39mol；1.10当量)在CH₂Cl₂(12.7L)中的悬浮液。将三乙胺(444g,611mL,4.39mol)加入悬浮液，并将反应温度维持在20-30℃之间持续20-48小时以确保完全反应。用水(8L)稀释反应混合物，并彻底混合，然后进行相的分离。将有机相用水(8L)洗涤、干燥(Na₂SO₄)然后浓缩，直到留下约1L CH₂Cl₂。用庚烷(3.2L)稀释浓缩物，并在40℃/200托下再次浓缩，直到观察不到馏出物。对浓缩物进行搅拌，并进一步用庚烷(12.7L)稀释以沉淀出固体。将悬浮液搅拌过夜。通过过滤收集固体，用庚烷(2×3L)洗涤，然后干燥，得到浅棕色粉末状的化合物4-iv(2.42kg；收率92％，100面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.61(s,1H),7.82(d,J＝8.2Hz,2H),7.31(m,3H),4.46(brs,2H),2.84(br d,3H),1.57(s,2H),1.44(br s,9H),1.36(s,18H)。

步骤3：化合物5-i的制备

搅拌(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)异唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4-iv)(1.00kg,1.51mol)、K₂CO₃(419g,3.02mol)和(4-(异丙基磺酰基)苯基)硼酸(345g,1.51mol)在甲苯(7.0L)和水(2.0L)中的混合物，并用N₂脱气30分钟。然后添加1,1’-双(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(II)[Pd(dtbpf)Cl₂；19.7g,30.3mmol]，并再脱气20分钟。将反应混合在70℃温热至少1小时以确保完全反应。将反应混合物冷却到环境温度，然后通过硅藻土过滤。用甲苯(2×700mL)冲洗反应容器和过滤垫。合并滤液，并进行相的分离。将有机相与Biotage MP-TMT树脂(170g)一起搅拌4-20小时。通过硅藻土过滤除去树脂，并用甲苯(2×700mL)洗涤过滤垫。将滤液和洗出液合并，浓缩至接近干燥，然后用i-PrOH(5.75L)稀释，并再次浓缩。将浓缩液再次溶于温热的(45℃)i-PrOH(5.75L)，然后在搅拌下冷却到环境温度以引起结晶，然后搅拌约16-20小时。通过过滤收集固体，用i-PrOH(2×1L)洗涤，并干燥得到米黄色粉末状的VRT-1018729(967g；84％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.04(s,1H),8.33(d,J＝8.6Hz,2H),8.06(d,J＝8.5Hz,2H),7.85(d,J＝8.1Hz,2H),7.34(m,3H),4.47(br s,2H),3.25(七,J＝7.0Hz,1H),2.85(br d,3H),1.47(s,9H),1.38(s,18H),1.33(d,J＝6.9Hz,6H)。

步骤4：化合物I-2·2HCl的制备

将化合物5-i(950g,1.24mol)在丙酮(12.35L)中的溶液升温至40℃，然后以一定的速率加入浓盐酸(1.23kg,1.02L,37％w/w,12.4mol)以将反应温度维持在40-45℃之间持续至少5小时以确保完全反应。将悬浮液冷却到低于30℃，并通过过滤收集固体。将滤饼用丙酮(2×950.0mL)洗涤，然后干燥得到黄色粉末状的化合物I-2·2HCl(578g；收率87％，99.5面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.53(br d,J＝4.8Hz,2H),8.93(s,1H),8.37(d,J＝8.5Hz,2H),8.07(d,J＝8.3Hz,2H),7.92(d,J＝8.6Hz,2H),7.84(s,1H),7.75(d,J＝8.3Hz,2H),4.23–4.15(m,2H),3.43(七,J＝6.8Hz,1H),2.55(t,J＝5.3Hz,3H),1.17(d,J＝6.8Hz,6H).

步骤5：由化合物I-2·2HCl制备化合物I-2·HCl

两锅法

将化合物I-2·2HCl(874g,1.63mol)在i-PrOH(3.50L)和水(0.87L)中的搅拌悬浮液在50℃加热1-2小时，冷却到环境温度，并且搅拌1-20小时。对小样进行XRPD，以确保化合物I-2·2HCl已转化成另一种形式。将悬浮液冷却到5℃，并搅拌1小时。通过过滤收集固体，然后将滤饼用80/20i-PrOH/水(2×874mL)洗涤，并进行简单干燥。

如果XRPD表明为化合物I-2·HCl/无水物形式，则干燥固体，得到黄色固体状的化合物I-2·HCl/无水物(836g，收率99％，99.2面积％纯度，由HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.38(s,2H),8.96(s,1H),8.46–8.34(m,2H),8.10(d,J＝8.3Hz,2H),7.94(d,J＝8.6Hz,2H),7.85(s,1H),7.75(d,J＝8.3Hz,2H),7.23(br s,2H),4.21(s,2H),3.47(七,J＝6.7Hz,1H),2.58(s,3H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)。

如果XRPD表明为化合物I-2·HCl/水合物形式，则将固体在50℃下在新鲜i-PrOH(3.50L)和水(0.87L)中搅拌至少2小时，直至XRPD表明完全转化为化合物I-2·HCl/无水物。然后将悬浮液冷却到5℃，并搅拌1小时。通过过滤收集固体，然后将滤饼用80/20i-PrOH/水(2×874mL)洗涤，然后干燥得到化合物I-2·HCl/无水物。

所用的替代程序(一锅法)

将化合物I-2·2HCl(392g)装入反应器。将4:1IPA/水(8L)装入反应器，并在环境温度下搅拌过夜。使用XRPD以确认转化为单盐酸盐单水合物形式。将混合物加热到50℃。添加化合物I-2·HCl/无水物(16g)的晶种，并将混合物在50℃下加热，直至XRPD确认完全转化为所需的无水物形式。将混合物冷却到环境温度，过滤，并用4:1IPA/水(2×800mL)洗涤固体，然后干燥得到化合物I-2·HCl/无水物(343g，收率94％)。

步骤4：替代方法1：化合物I-2游离碱的制备

在环境温度下搅拌化合物5-i(100g,131mmol)在DCM(200mL)中的溶液，然后添加TFA(299g,202mL,2.62mol)。2小时后将反应溶液冷却到5℃。经约5分钟用EtOH(1.00L)稀释反应混合物，从而得到亮黄色悬浮液。将悬浮液冷却到10℃，然后将NaOH(1.64L,2.0M,3.28mol)经30分钟加入，然后在环境温度下搅拌过夜。通过过滤收集固体，然后用水(2×400mL)、EtOH(2×200mL)洗涤，然后干燥得到细的黄色粉末状的化合物I-2游离碱(57.0g，收率94％，99.7面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.95(s,1H),8.39(d,J＝8.5Hz,2H),7.95(dd,J＝11.6,8.4Hz,4H),7.78(s,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,2H),7.21(brs,2H),3.72(s,2H),3.47(七,J＝6.8Hz,1H),2.29(s,3H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)。

步骤4：替代方法2：化合物I-2·HCl的制备

搅拌化合物I-2游离碱(10.0g,21.6mmol)在丙酮(80mL)中的悬浮液，并将其加热到35℃。添加用水(8.0mL)稀释的HCl水溶液(11.9mL,2.0M,23.8mmol)，并将混合物在50℃加热4小时。将悬浮液冷却到环境温度，然后搅拌过夜。通过过滤收集固体。将滤饼用丙酮(2×20mL)洗涤，然后干燥得到10.2g黄色粉末状的化合物I-2盐酸盐(收率95％)。

实例7：5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)-3-(3-(4-(四氢吡喃-4-基氨基)甲基)苯基) 异 唑-5-基)吡嗪-2-胺(化合物I-3)的合成

方案：化合物I-3的实例合成

步骤1：N-(4-(二乙氧基甲基)苄基)四氢-2H-吡喃-4-胺(A-2)的制备

在约20℃下搅拌四氢-2H-吡喃-4-胺盐酸盐(1.13kg,8.21mol)在MeOH(14.3L)中的溶液，然后添加Et₃N(1.06kg,1.43L,8.21mol)。将混合物搅拌至少5分钟，然后添加对苯二甲醛缩二乙醇(1.43kg,6.84mol)，同时将反应温度维持在20-25℃之间。将混合物搅拌至少45分钟以形成亚胺。添加NaBH₄囊片(414g,11.0mol)，同时将反应温度维持在低于约25℃。完成添加后，将混合物搅拌1小时。通过添加1M NaOH(13.7L)猝灭反应混合物，然后用MTBE萃取。将有机溶液用盐水(7.13L)洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)并浓缩得到混浊油状的化合物A-2(2197g；收率109％，94.4面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.43(d,J＝8.1Hz,2H),7.31(d,J＝8.1Hz,2H),5.49(s,1H),4.66(br s,1H),4.03–3.91(m,2H),3.82(s,2H),3.69–3.47(m,4H),3.38(td,J＝11.6,2.1Hz,2H),2.78–2.65(m,1H),1.90–1.81(m,2H),1.53–1.37(m,2H),1.23(t,J＝7.1Hz,6H)。

步骤2：4-(二乙氧基甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-3)的制 备

在25℃下搅拌N-(4-(二乙氧基甲基)苄基)四氢-2H-吡喃-4-胺(A-2)(2195g,7.48mol)在CH₂Cl₂(22.0L)中的混合物，然后添加二碳酸二叔丁酯(1.71kg,7.86mol)。然后添加Et₃N(795g,1.10L)，同时将反应温度维持在20- 25℃之间。将反应混合物在约25℃下搅拌12-20小时。反应完成后，将混合物冷却到约20℃，并用0.5M柠檬酸水溶液(7.48L,3.74mol)猝灭，同时将反应温度维持在20-25℃之间。收集有机相，用饱和NaHCO₃(6.51L,7.48mol)洗涤，用盐水(6.59L)洗涤，并干燥(Na₂SO₄)，然后浓缩得到浓稠的琥珀色油状的4-(二乙氧基甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-3)(2801g；收率95％，98.8面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.40(d,J＝8.1Hz,2H),7.21(d,J＝7.9Hz,2H),5.49(s,1H),4.39(br s,3H),3.93(br dd,J＝10.8,3.8Hz,2H),3.67–3.47(m,4H),3.40(brM,2H),1.68-1.59(m,4H),1.39(br s,9H),1.23(t,J＝7.1Hz,6H)。

步骤3：4-((羟基亚氨基)甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-4) 的制备

在约20℃下搅拌4-(二乙氧基甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-3)(2.80kg,7.12mol)在THF(28.0L)和水(2.80L)中的溶液。添加盐酸羟胺(593g,8.54mol)，同时将反应温度维持在20-25℃之间。将反应混合物在约20℃搅拌16-20小时，然后用CH₂Cl₂(8.4L)和50％盐水(11.2L)稀释，并搅拌至少5分钟。分离各相，然后将有机相用50％盐水(2×2.8L)洗涤、干燥(Na₂SO₄)并浓缩。用MeOH(1.4L)稀释浓缩物，并再次浓缩。用MeOH(14.0L)稀释浓缩物，并将其转移到反应容器中。将溶液升温至约25℃，然后将水(14.0L)经约1-1.5小时加入；加入约10L水后，在混合物中加入晶种，并观察到浑浊悬浮液。在1.5小时内加入额外的水(8.4L)以进一步沉淀出产物。老化后，通过过滤收集固体。将滤饼用庚烷(5.6L)洗涤并干燥，得到灰白色粉末状的4-((羟基亚氨基)甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-4)(1678g；71％，91.5面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.12(s,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,2H),7.24(d,J＝7.9Hz,2H),4.40(br s,3H),3.96(dd,J＝10.4,3.6Hz,2H),3.41(brM,2H),1.69-1.61(m,4H),1.39(br s,9H)。

步骤4：4-(氯(羟基亚氨基)甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A- 4-i)的制备

在20℃下在反应器中搅拌(E)-4-((羟基亚氨基)甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-4)(1662g,4.97mol)在i-PrOAc(16.6L)中的悬浮液。添加N-氯代丁二酰亚胺(730g,5.47mol)，将温度维持在约20℃。在约20℃下搅拌悬浮液以完成反应。用水(8.3L)稀释悬浮液，并搅拌以溶解固体。分离各相，并用水(8.3L)洗涤有机相。浓缩有机相，然后用i-PrOAc(831mL)稀释。缓慢加入庚烷(13.3L；8V)以引起结晶。然后将浓稠悬浮液搅拌1小时。通过过滤收集固体；将滤饼用庚烷(2×1.6L；2×1V)洗涤，然后干燥得到白色粉末状的(Z)-4-(氯(羟基亚氨基)甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-4-i)(1628g；89％，98.0面积％纯度，通过HPLC测定)。

步骤5：(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基) 异 唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(A-5)的制备

在20℃下搅拌4-(氯(羟基亚氨基)甲基)苄基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(A-4-i)(1.60kg,4.34mol)和N-(5-溴-3-乙炔基吡嗪-2-基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯(化合物A-4-ii)(1.73kg,4.34mol)在CH₂Cl₂(12.8L)中的溶液。添加Et₃N(483g,665mL；4.77mol)，并将反应温度维持在低于30℃。在20℃下搅拌悬浮液以完成反应，然后用水(8.0L)稀释并搅拌。分离各相，并将有机相用水(8.0L)洗涤然后浓缩。加入i-PrOAc(1.6L)，并将混合物在50℃加热。缓慢加入庚烷(4.0L)，然后让悬浮液冷却到环境温度并搅拌过夜。将另外的庚烷(7.2L)加入悬浮液，并将其搅拌1小时。通过过滤收集固体。将滤饼用庚烷(2×1.6L)洗涤，并干燥得到细的棕褐色粉末状(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基)异唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(A-5)(2.478kg；78％，97.8面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.60(s,1H),7.78(d,J＝8.3Hz,2H),7.31(m,3H),4.42(brM,3H),4.03–3.82(m,2H),3.38(br s,2H),1.60(m,4H),1.36(s,27H)。

步骤6：叔丁氧羰基(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基) 苯基)异 唑-5-基)-5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在环境温度下搅拌(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基)异唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(A-5)(425g,582mmol)、K₂CO₃(161g，1.16mol；2.0当量)和(4-(异丙基磺酰基) 苯基)硼酸(133g,582mmol)在甲苯(2.98L)和水(850mL)中的混合物，并用N₂脱气。加入催化剂[1,1′-双(二叔丁基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(Pd(dtbpf)Cl₂；1.90g,2.91mmol)，并使混合物再脱气10分钟。将混合物在70℃加热直到反应完成。将混合物冷却到50℃，用水(850mL)稀释，并通过硅藻土床过滤。分离各相。浓缩有机相，然后将残余物用EtOH(1.70L)稀释并再次浓缩。在40℃混合下，将浓缩物用EtOH(1.70L)稀释以引起结晶。将悬浮液冷却到20℃，并搅拌4小时。通过过滤收集固体。将滤饼用EtOH(2×425mL)洗涤，并风干得到米黄色粉末状的叔丁氧羰基(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基)异唑-5-基)-5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯(A-6)。在环境温度下将固体溶于THF(2.13L)，并与Biotage MP-TMT树脂(48g)形成浆液。通过过滤除去树脂，并浓缩滤液以除去大部分THF。将浓缩物用EtOH(970mL)稀释并再次浓缩到大约一半的初始体积。再次用EtOH(970mL)稀释浓缩物，并在40℃下混合1小时。将悬浮液冷却到环境温度，并通过过滤收集固体，然后干燥得到白色粉末状的叔丁氧羰基(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基)异唑-5-基)-5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯(A-6)(416g；收率86％，99.3面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.04(s,1H),8.38–8.28(m,2H),8.10–8.01(m,2H),7.82(d,J＝8.2Hz,2H),7.34(m,3H),4.44(brs,2H),3.94(dd,J＝10.5,3.5Hz,2H),3.40(br s,2H),3.25(七,J＝6.8Hz,1H),1.65(m,4H),1.38(br s,27H),1.33(d,J＝6.9Hz,6H)。

步骤7：5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)-3-(3-(4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲 基)苯基)异 唑-5-基)吡嗪-2-胺(I-3)游离碱形式的制备

在环境温度下在烧瓶中搅拌叔丁氧羰基(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基)异唑-5-基)-5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯(A-6)(410g；492mmol)在CH₂Cl₂(410mL)中的悬浮液。加入TFA(841g,568mL；7.4mol)，同时将反应温度维持在20-25℃之间。将溶液在环境温度下搅拌约3小时，此时分析表明反应完成。将溶液冷却到约5-10℃，并用EtOH(3.3L)稀释，同时将温度维持在低于20℃。加入5.0M NaOH水溶液(1.77L；8.85mol)，同时使反应温度从约14℃升至约42℃。将悬浮液在70-75℃加热6小时，同时移除馏出物。将悬浮液冷却到环境温度。通过过滤收集固体，并用水(4×1.64L)洗涤滤饼。将滤饼用EtOH(2×820mL)洗涤，并干燥得到黄色粉末状的5-(4-(异丙基磺酰基)苯基)-3-(3-(4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基)异唑-5-基)吡嗪-2-胺(化合物I-1)(257g；收率98％，99.5面积％纯度，通过HPLC测定)。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.94(s,1H),8.44–8.33(m,2H),7.94(t,J＝8.2Hz,4H),7.76(s,1H),7.53(d,J＝8.2Hz,2H),7.20(s,2H),3.83(m,1H),3.80(s,3H),3.46(七,J＝6.8Hz,1H),3.25(td,J＝11.4,2.1Hz,2H),2.66–2.54(m,1H),1.79(br dd,2H),1.36–1.22(m,2H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)。¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.57,151.76,141.07,137.58,135.75,129.16,128.53,126.57,126.41,125.69,124.52,102.13,65.83,54.22,52.60,49.19,33.18,15.20。

化合物分析数据

中间体

实例8：肟5a的制备

方案BB：

步骤1b

在20℃下将MeOH(28.00L)和4-(二乙氧基甲基)苯甲醛(化合物1b)(3500g,16.81mol)加入反应器中。添加甲胺的33％EtOH溶液(1.898kg,2.511L,33％w/w,20.17mol)，温度维持在20-30℃，然后搅拌1.5小时以形成亚胺。添加NaBH₄(381.7g,10.09mol)囊片，温度维持在20-30℃之间。在室温下搅拌至少30分钟，以确保完全反应。添加NaOH水溶液(16.81L,2.0M,33.62mol)，维持约20℃。添加MTBE(17.50L)和盐水(7.0L)，搅拌至少5分钟，然后分离各相。用MTBE(7.0L)萃取含水层，然后将有机相合并，并用盐水(3.5L)洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)之后浓缩到6L。将双相混合物转移到分液漏斗中，并移除水相。浓缩有机相得到油状的1-(4-(二乙氧基甲基)苯基)-N-甲基甲胺(化合物2b)(3755g，16.82mol，收率100％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.43(d,J＝8.1Hz,2H),7.31(d,J＝8.1Hz,2H),5.49(s,1H),3.75(s,2H),3.68–3.46(m,4H),2.45(s,3H),1.23(t,J＝7.1Hz,6H)。

步骤2b和3b

在20℃下向反应器中添加2-MeTHF(15.00L)和1-(4-(二乙氧基甲基)苯基)-N-甲基甲胺(化合物2b)(3750g,16.79mol)。添加Boc酸酐(3.848kg,4.051L,17.63mol)在2-MeTHF(7.500L)中的溶液，维持约25℃。搅拌至少30分钟以确保完全转化成4-(二乙氧基甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3b)，然后添加Na₂SO₄(1.192kg,8.395mol)在水(11.25L)中的溶液。加热到35℃，然后添加盐酸羟胺(1.750kg,25.18mol)在水(3.75L)中的溶液，然后搅拌至少6小时以确保完全反应。冷却到20℃，停止搅拌并移除水相。将有机层用盐水(3.75L)洗涤、干燥(Na₂SO₄)、过滤并浓缩到约9L。添加庚烷(15.00L)和晶体状4-((羟基亚氨基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物5a)(每10分钟1.0g份)，直至成核现象是明显的，然后浓缩得到固体浆液。添加庚烷(3.75L)，然后冷却到室温并过滤。用庚烷(5.625L)洗涤，然后干燥得到无色固体状的4-((羟基亚氨基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物5a)(4023g，15.22mol，收率91％，97.2面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.13(s,1H),7.54(d,J＝8.1Hz,2H),7.25(br d,2H),4.44(br s,2H),2.83(br d,3H),1.47(br s,9H)。

方案CC：中间体A-4-ii的合成

式A-4-ii化合物可根据方案C中所概述的步骤来制备。Sonogashira偶合反应在本领域中是已知的(参见如，Chem.Rev.2007,874-922(《化学评论》，2007年，第874-922页))。在一些实施例中，合适的Sonogashira偶合条件包括在异丙醇中添加1当量的式C-1化合物、1当量的TMS-乙炔、0.010当量的Pd(PPh₃)₂Cl₂、0.015当量的CuI和1.20当量的NMM。可通过向醇反应混合物中添加水来分离产物。

产物的胺盐可通过将胺溶于常见有机溶剂中并添加酸而形成。合适的溶剂的例子包括氯化溶剂(如，二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、CH₂Cl₂和氯仿)、醚(如，THF、2-MeTHF和二烷)、酯(如，EtOAc、IPAC)和其他非质子溶剂。合适的酸的例子包括(但不限于)HCl、H₃PO₄、H₂SO₄、MSA和PTSA。在一些实施例中，溶剂为IPAC并且酸为PTSA。在一些实施例中，在存在合适的溶剂和合适的碱的情况下将酸加成盐转化回游离胺碱。合适的溶剂包括EtOAc、IPAC、二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、CH₂Cl₂、氯仿、2-MeTHF，并且合适的碱包括NaOH、NaHCO₃、Na₂CO₃、KOH、KHCO₃、K₂CO₃和Cs₂CO₃。在一些实施例中，合适的溶剂为EtOAc并且合适的碱为KHCO₃。

可用诸如Boc(叔丁氧羰基)的各种胺保护基保护化合物C-2的胺。Boc保护基的引入在本领域中是已知的(参见如Protecting Groups in Organic Synthesis,Greene andWuts(《有机合成中的保护基》，Greene和Wuts))。在一些实施例中，合适的条件包括在EtOAc中添加1.00当量的胺、2.10当量的二碳酸二叔丁酯和0.03当量的DMAP。

通过用金属清除剂(硅胶、官能化树脂、木炭)处理来实现Pd的还原。在一些实施例中，合适的条件包括添加木炭。

可通过本领域的技术人员已知的条件移除化合物C-3上的TMS(三甲基甲硅烷基)保护基。在一些实施例中，TMS移除条件包括使TMS保护的化合物与合适的碱在合适的溶剂中反应。合适的溶剂的例子包括氯化溶剂(如，二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、CH₂Cl₂和氯仿)、醚(如，THF、2-MeTHF和二烷)、酯(如，EtOAc、IPAC)、其他非质子溶剂和醇溶剂(如，MeOH、EtOH、iPrOH)。合适的碱的例子包括(但不限于)(如，NaOH、KOH、K₂CO₃、Na₂CO₃)。在某些实施例中，合适的条件包括添加1.00当量的TMS保护的乙炔、1.10当量的K₂CO₃、EtOAc和EtOH。在一些实施例中，在反应中最后添加诸如EtOH的醇溶剂。在一些实施例中，通过添加水来分离产物乙炔。

方案DD：化合物A-4-ii的实例合成

实例9：化合物A-4-ii的合成

步骤1：5-溴-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡嗪-2-胺(化合物C-2)的制备

将异丙醇(8.0L)装入反应器中，搅拌并用N₂流冲洗。在N₂氛围下向反应器中添加3,5-二溴吡嗪-2-胺(化合物C-1)(2000g,7.91mol)、Pd(PPh₃)₂Cl₂(56g,0.079mol)、CuI(23g,0.119mol)和NMM(1043mL,9.49mol)。将反应温度调节至25℃。通过进行至少三个真空/N₂吹扫循环用N₂吹扫反应器。将TMS-乙炔(1.12L,7.91mol)加入反应混合物中，并将反应温度维持在低于30℃。当反应完成时，将反应混合物的温度降低到15℃，然后添加水(10L)并搅拌至少2小时。通过过滤收集固体，用1:1IPA/水(2×6L)洗涤固体。在真空下干燥滤饼，然后将其装入反应器，并溶于EtOAc(12.5L)中。将PTSA水合物(1.28kg,6.72mol)作为固体装入反应器。将混合物在环境温度下搅拌至少5小时，然后通过过滤收集固体，相继用1:1庚烷/EtOAc(3.5L)和庚烷(3.5L)洗涤。对滤饼进行干燥得到PTSA盐形式的5-溴-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡嗪-2-胺(化合物C-2)(2356g，收率67％，98.9面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.12(s,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,2H),7.12(d,J＝8.0Hz,2H),2.29(s,3H),0.26(s,9H)。

步骤2和3

步骤2：N-叔丁氧羰基-N-[5-溴-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡嗪-2-基]氨基甲 酸叔丁酯(化合物C-3)的制备

将5-溴-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡嗪-2-胺PTSA盐(化合物C-2)(2350g,5.31mol)在EtOAc(11.5L)中的溶液与20％w/w KHCO₃水溶液(4.5kg，1.5当量)一起搅拌至少30分钟。分离各层，并将有机层浓缩，然后溶于EtOAc(7L)中并添加到反应器中。添加DMAP(19.5g,0.16mol)，然后缓慢加入Boc₂O(2436g,11.16mol)在EtOAc(3L)中的溶液。将反应物搅拌至少30分钟以确保完全反应，然后加入活性炭(Darco G-60,720g)和硅藻土(720g)，并搅拌至少2小时。过滤混合物，用EtOAc(2×1.8L)洗涤固体垫。浓缩滤液，得到N-叔丁氧羰基-N-[5-溴-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)吡嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物C-3)，其直接用于下一步中。

步骤3：N-(5-溴-3-乙炔基吡嗪-2-基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯(化合物A- 4-ii)的制备

将K₂CO₃(811g,5.87mol)装入反应器中，然后加入溶于EtOAc(4.6L)的化合物C-3(2300g,4.89mol)的溶液，开始搅拌。缓慢加入EtOH(9.2L)，并将混合物搅拌至少1小时以确保反应完成，然后加入水(4.6L)并搅拌至少2小时。通过过滤收集固体，并用1:1EtOH/水(4.6L，然后是2.3L)然后用EtOH(2.3L)洗涤。干燥滤饼，得到N-(5-溴-3-乙炔基吡嗪-2-基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯(化合物A-4-ii)(1568g，收率78％，97.5面积％纯度，通过HPLC测定)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.54(s,1H),3.52(s,1H),1.42(s,18H)。

化合物I-2的固体形式

已以各种固体形式制备了化合物I-2，包括盐和共溶剂化物。本发明的固体形式用于制造用于治疗癌症的药剂。一个实施例提供了本文所述的固体形式在治疗癌症方面的用途。在一些实施例中，癌症为胰腺癌或非小细胞肺癌。另一个实施例提供了包含本文所述的固体形式和药学上可接受的载体的药物组合物。

申请人在本文描述了化合物I-2的五种新型固体形式。这些固体形式中每一种的名称和化学计量在下表S-1中提供：

表S-1

实例	形式	化学计量
			实例10	化合物I-2游离碱	N/A
实例11	化合物I-2·HCl	1:1
			实例12	化合物I-2·2HCl	1:2
实例13	化合物I-2·HCl·H2O	1:1:1
			实例14	化合物I-2·HCl·2H2O	1:1:2

在配备有Bruker-Biospin 4mm HFX探针的Bruker-Biospin 400MHz Advance III宽孔光谱仪上获得固态NMR光谱。将样品装到4mm ZrO₂转子中(约70mg或更小，取决于样品可用性)。采用典型12.5kHz的幻角自旋(MAS)速度。将探针头部的温度设定为275K以使自旋过程中的摩擦生热效应最小化。使用¹H MAS T₁饱和恢复松弛实验来测量质子弛豫时间，以便建立¹³C交叉极化(CP)MAS实验的适当再循环延迟。将¹³C CPMAS实验的再循环延迟调整为比所测量的¹H T₁弛豫时间长至少1.2倍，以使碳光谱信噪比最大化。将¹³C CPMAS实验的CP接触时间设定为2毫秒。采用具有线性坡度(从50％到100％)的CP质子脉冲。针对外部参考样品(甘氨酸)使Hartmann-Hahn匹配最佳化。用通过约100kHz的场强度去耦的SPINAL 64获得碳光谱。c化学位移以高磁场共振设定为29.5ppm的金刚烷的外部标准为参考。

在室温下在配备有密封管Cu源和Vantec-1检测器(美国威斯康星州麦迪逊布鲁克衍射荧光事业部(Bruker AXS,Madison,WI))的Bruker D8 Advance System(AssetV014333)上测量实例13-14的XRPD数据。以40kV的电压和40mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于浅硅托盘上。以0.0144°的步长和0.25s的停留时间(每步105s)在3°-40°2θ范围内以反射扫描模式(锁定耦合)记录数据。使用可变发散狭缝。

实例10：化合物I-2(游离碱)

化合物I-2游离碱可根据实例6步骤4：替代方法1中所述的方法形成。

化合物I-2(游离碱)的XRPD

图1a示出了晶体药物所特有的样品的X射线粉末衍射图。

得自化合物I-2游离碱的代表性XRPD峰：

化合物I-2游离碱的热分析

进行化合物I-2游离碱的热重分析以确定重量损失百分比与时间的关系。在TAInstrument TGA Q5000(Asset V014258)上以10℃/分钟的速率将样品从环境温度加热到350℃。图2a示出了在蒸发或热分解之前的一步重量损失的TGA结果。从环境温度到215℃，重量为约1.9％。

化合物I-2游离碱的差示扫描量热分析

使用TA Instrument DSC Q2000(Asset V014259)测量化合物I-2游离碱的热性质。在预穿孔的针孔铝密封盘中称取化合物I-2游离碱样品(1.6900mg)，并以10℃/分钟从环境温度加热到350℃。在210℃处观察到一个吸热峰，其起始温度处于201℃(图3a)。与吸热峰相关的焓为78J/g。

化合物I-2游离碱的固态NMR

化合物I-2游离碱上的13C CPMAS

275K；1H T1＝1.30s

12.5kHz自旋；参考金刚烷29.5ppm

对于全光谱，参见图5a。

代表性峰

化合物I-2游离碱的晶体结构

由化合物I-2盐酸盐制备化合物I-2的游离形式。将200mg化合物I-2盐酸盐添加到1mL 6N NaOH溶液中。将20mL二氯甲烷用于萃取游离形式。通过K₂CO₃干燥二氯甲烷层。滤出溶液，并将5mL正庚烷加入其中。通过在室温下缓慢蒸发溶液过夜得到晶体。

得到的大部分晶体为薄板。发现其中有一些棱柱形晶体。

选择尺寸为0.2×0.1×0.1mm³的黄色棱柱晶体，将其安装在显微载片(MicroMount)上，并位于Bruker APEX II衍射仪的中央。得到了在倒易空间中分离的三批40帧，以提供取向矩阵和初始晶胞参数。获得最终晶胞参数，并在完成数据收集后基于完整数据集对最终晶胞参数进行精化。

对于116.96°2θ角的分辨率，使用0.5°步长并且各帧暴露10s来获得倒易空间的衍射数据集。在100(2)K温度下用氮气流低温系统收集数据。使用APEXII软件来实现强度的积分和晶胞参数的精化。

晶体数据

实例11：化合物I-2·HCl

化合物I-2·HCl可根据实例6步骤4：替代方法2和实例6步骤5中所述的方法形成。

化合物I-2·HCl的XRPD

图1b示出了晶体药物所特有的样品X射线粉末衍射图。

得自化合物I-2·HCl的代表性XRPD峰

化合物I-2·HCl的热分析

进行化合物I-2·HCl的热重分析以确定重量损失百分比与时间的关系。在TAInstrument TGA Q5000(Asset V014258)上以10℃/分钟的速率将样品从环境温度加热到350℃。图2b示出了在蒸发或热分解之前的两步重量损失的TGA结果。从环境温度到100℃，重量为约1.1％，并且从110℃到240℃，重量损失为约0.8％。

化合物I-2·HCl的差示扫描量热分析

使用TA Instrument DSC Q2000(Asset V014259)测量化合物I-2·HCl的热性质。在预穿孔的针孔铝密封盘中称取化合物I-2·HCl样品(3.8110mg)，并以10℃/分钟从环境温度加热到350℃。在293℃处观察到一个吸热峰，其起始温度处于291℃(图3b)。与吸热峰相关的焓为160.3J/g。第二个吸热峰在321℃附近。两个峰均与样品蒸发和分解有关。

化合物I-2·HCl的固态NMR

化合物I-2·HCl的¹⁵CPMAS

275K；12.5kHz旋转；参考金刚烷29.5ppm

对于全光谱，参见图5b。

代表性峰

峰号	化学位移[ppm]	强度[相对]
			1*	171.7	47.42
2	161.9	28.72
			3*	153.4	28.94
4	144.8	42.57
			5	142.9	54.14
6	138.7	44.06
			7	136.7	60.06
8*	132.9	100
			9	131.2	72.62
10	129.8	73.58
			11	127.9	63.71
12	125.4	79.5
			13	124.1	34.91
14	100.7	53.52
			15	54.5	62.56
16	53.9	61.47
			17*	31.8	61.15
18	17.0	74.78
			19*	15.7	77.79

化合物I-2·HCl的晶体结构

将180mg化合物I-2·HCl加入具有0.8mL 2-丙醇和0.2mL水的小瓶中。将密封的小瓶在70℃的烘箱中保持两周。观察衍射品质晶体。

选择尺寸为0.15×0.02×0.02mm³的黄色针状晶体，将其安装在显微载片(MicroMount)上，并位于Bruker APEX II衍射仪(V011510)的中央。得到了在倒易空间中分离的三批40帧，以提供取向矩阵和初始晶胞参数。收集最终晶胞参数并基于完整数据集进行精化。

对于106°2θ角度的分辨率，使用0.5°步长，并且对于低角度帧的每帧暴露时间为20s，以及对于高角度帧的每帧暴露时间为60s，来获得倒易空间的衍射数据集。数据在室温下收集。

为了获得表1中的数据，将干燥氮气以6L/分钟的速度吹向晶体以阻止环境水分入内。在无氮气的情况下获得表2中的数据。使用APEXII软件进行强度的积分和晶胞参数的精化。水占有率可在0与1之间变化。

CHN元素分析

化合物I-2·HCl的CHN元素分析表明为单盐酸盐。

实例12：化合物I-2·2HCl

化合物I-2·2HCl可根据实例6步骤4中所述的方法形成。

化合物I-2·2HCl的XRPD

在室温下以反射模式使用配备有密封管源和Hi-Star面积检测器(美国威斯康星州麦迪逊布鲁克衍射荧光事业部(Bruker AXS,Madison,WI))的Bruker D8DiscoverSystem(Asset Tag V012842)获得XRPD图案。以40kV的电压和35mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于镍托盘中。记录两个帧，暴露时间均为120s。随后将数据在4.5°-39°2θ范围内以0.02°的步长积分，并将其合并成一个连续图案。

图1c示出了晶体药物所特有的样品X射线粉末衍射图。

得自化合物I-2·2HCl的代表性XRPD峰

化合物I-2·2HCl的热分析

在TA Instruments TGA型号Q5000上进行化合物I-2·2HCl的热重量分析。将化合物I-2·2HCl置于铂样品盘中，并以10℃/分钟从室温加热到350℃。图2c示出了TGA结果，其表明从室温到188℃的重量损失为7.0％，这与损失1当量的HCl(6.8％)一致。降解/熔融的起始温度为263℃。

化合物I-2·2HCl的差示扫描量热分析

使用TA Instruments DSC Q2000获得化合物I-2·2HCl药物第3批次的DSC热谱曲线。将化合物I-2·2HCl以2℃/分钟从-20℃加热到275℃，并每60s以±1℃进行调制。DSC热谱曲线(图3c)显示了低于200℃的吸热峰，其可对应于损失1当量HCl。熔融/重结晶在215-245℃之间发生，然后降解。

化合物I-2·2HCl的固态NMR

化合物I-2·2HCl的¹³C CPMAS

275K；1H T1＝1.7s

12.5kHz旋转；参考金刚烷29.5ppm

对于全光谱，参见图5c。

峰号	化学位移[ppm]	强度[相对]
			1*	166.5	32.6
2	160.7	24.7
			3	145.3	15.0
4*	137.6	56.0
			5*	136.1	100.0
6	134.2	22.7
			7	132.4	55.9
8	130.0	54.9
			9	127.7	70.7
10	125.9	97.1
			11	124.7	59.0
12	123.8	91.4
			13	123.2	56.0
14	101.6	37.7
			15	56.1	60.3
16	50.7	45.6
			17*	34.2	56.8
18	18.4	63.5
			19*	16.4	70.32

化合物I-2·2HCl的晶体结构

将180mg化合物I-2·HCl加入具有0.8mL 2-丙醇和0.2mL水的小瓶中。将密封的小瓶在70℃的烘箱中保持两周。观察衍射品质晶体。

选择尺寸为0.15×0.02×0.02mm³的黄色针状晶体，将其安装在显微载片(MicroMount)上，并位于Bruker APEX II衍射仪(V011510)的中央。得到了在倒易空间中分离的三批40帧，以提供取向矩阵和初始晶胞参数。收集最终晶胞参数并基于完整数据集进行精化。

对于106°2θ角度的分辨率，使用0.5°步长，并且对于低角度帧的每帧暴露时间为20s，以及对于高角度帧的每帧暴露时间为60s，来获得倒易空间的衍射数据集。数据在室温下收集。将干燥氮气以6L/分钟的速度吹向晶体以阻止环境水分入内。使用APEXII软件进行强度的积分和晶胞参数的精化。

晶体数据

实例13：化合物I-2·HCl·H ₂ O

化合物I-2·HCl·H₂O可由化合物I-2·2HCl(E29244-17)形成。将化合物I-2·2HCl(10.0g,18.6mmol)在异丙醇(40mL)和水(10mL)中的悬浮液在50℃温热约1小时，然后冷却至低于10℃。通过过滤收集固体。将滤饼用80/20异丙醇/水(2×10mL)洗涤并风干，得到黄色粉末状的化合物I-2·HCl·H₂O。

化合物I-2·HCl·H ₂ O的XRPD

在室温下以反射模式使用配备有密封管源和Hi-Star面积检测器(美国威斯康星州麦迪逊布鲁克衍射荧光事业部(Bruker AXS,Madison,WI))的Bruker D8DiscoverSystem(Asset Tag V012842)获得XRPD图案。以40kV的电压和35mA的电流操作X射线发生器。将粉末样品置于镍托盘中。记录两个帧，暴露时间均为120s。随后将数据在4.5°-39°2θ范围内以0.02°的步长积分，并将其合并成一个连续图案。

图1d示出了晶体药物所特有的样品X射线粉末衍射图。

得自化合物I-2·HCl·H₂O的代表性XRPD峰

XRPD峰	角度(2θ±0.2)	强度％
			*1	6.6	100.0
*2	19.5	46.5
			3	16.8	37.8
4	22.9	36.0
			5	13.9	27.0
6	7.3	23.4
			7	13.0	22.7
8	16.5	21.2
			*9	24.7	20.9
10	17.7	20.8
			11	31.1	19.6
12	15.8	19.3
			*13	8.1	18.5
14	17.1	18.4
			15	12.7	17.2
16	16.0	17.2
			17	14.5	16.5
18	20.6	16.0
			19	32.7	15.5
*20	11.2	15.2
			21	33.9	11.3

化合物I-2·HCl·H ₂ O的热分析

在TA Instruments TGA型号Q5000上进行化合物I-2·HCl·H₂O的热重量分析(TGA)。将化合物I-2·HCl·H₂O置于铂样品盘中，并以10℃/分钟从室温加热到400℃。热谱曲线(图2d)表明从室温到100℃的重量损失为2.9％，并且从100℃到222℃的重量损失为0.6％，这与理论一水合物(3.5％)一致。

化合物I-2·HCl·H ₂ O的差示扫描量热分析

使用TA Instruments DSC Q2000获得化合物I-2·HCl·H₂O的热谱曲线。将化合物I-2·HCl·H₂O以2℃/分钟从-20℃加热到275℃，并每60s以±1℃进行调制。DSC热谱曲线(图3d)显示了低于200℃的吸热峰，其可对应于损失1当量HCl。熔融/重结晶在215-245℃之间发生，然后降解。

实例14：化合物I-2·HCl·2H ₂ O

化合物I-2·HCl·2H₂O可由化合物I-2·2HCl(E29244-17)形成。将化合物I-2·2HCl(10.0g,18.6mmol)在异丙醇(40mL)和水(10mL)中的悬浮液在50℃温热约1小时，然后冷却至低于10℃。通过过滤收集固体。将滤饼用80/20异丙醇/水(2×10mL)洗涤并风干，得到黄色粉末状的化合物I-2·HCl·2H₂O。

化合物I-2·HCl·2H ₂ O的XRPD

在室温下在铜辐射下使用帕纳科(PANalytical)的X-pert Pro衍射仪进行粉末X射线衍射测量。入射束光学元件由可变的发散狭缝构成，以确保在样品上以及在衍射光束上的恒定照明长度，使用快速线性固态检测器，有效长度为2.12度2θ，以扫描模式测量。将粉末样品装在零背景硅托架的凹入区域上，并进行旋转以实现更好的统计。由4-40度2θ测量对称扫描，其中步长为0.017度，并且扫描步进时间为15.5秒。

图1e示出了晶体药物所特有的样品X射线粉末衍射图。

得自化合物I-2·HCl·2H₂O的代表性XRPD峰

化合物I-2·HCl·2H ₂ O的热分析

使用TA instrument TGA Q500分别以10℃/分钟的扫描速率在25-300℃的温度范围内获得TGA(热重量分析)热谱曲线。对于TGA分析，将样品置于敞开的盘中。热谱曲线表明从室温到100℃的重量损失为约6，这与理论二水合物(6.7％)一致。

化合物I-2·HCl·2H ₂ O的差示扫描量热分析

使用TA instruments DSC Q2000以10℃/分钟的扫描速率在25-300℃的温度范围内获得DSC(差示扫描量热分析)热谱曲线。对于DSC分析，将样品称取到密封并穿有单个孔的T-zero铝密封盘中。DSC热谱曲线表明在室温与120℃之间脱水然后在170-250℃之间熔融/重结晶。

含水化合物I-2·HCl的晶体结构

将180mg化合物I-2·HCl加入具有0.8mL 2-丙醇和0.2mL水的小瓶中。将密封的小瓶在70℃的烘箱中保持两周。观察衍射品质晶体。

选择尺寸为0.15×0.02×0.02mm³的黄色针状晶体，将其安装在显微载片(MicroMount)上，并位于Bruker APEX II衍射仪(V011510)的中央。然后用内部有水的Kapton管覆盖销轴。将管密封以确保在衍射实验之前晶体与水平衡持续两天。得到了在倒易空间中分离的三批40帧，以提供取向矩阵和初始晶胞参数。收集最终晶胞参数并基于完整数据集进行精化。

对于106°2θ角度的分辨率，使用0.5°步长，并且对于低角度帧的每帧暴露时间为20s，以及对于高角度帧的每帧暴露时间为60s，来获得倒易空间的衍射数据集。数据在室温下收集。使用APEXII软件进行强度的积分和晶胞参数的精化。

晶体数据

实例15：细胞ATR抑制测定法：

可使用免疫荧光显微镜测定法来检测羟基脲处理的细胞中ATR底物组蛋白H2AX的磷酸化来筛选化合物抑制细胞内ATR的能力。以14,000个细胞/孔将HT29细胞涂布接种于96孔黑色成像板(BD 353219)中的McCoy’s 5A培养基(Sigma M8403)中，该培养基补充有10％胎牛血清(JRH Biosciences 12003)、1:100稀释的青霉素/链霉素溶液(Sigma P7539)和2mM L-谷氨酰胺(Sigma G7513)，让其在37℃下在5％CO₂中贴壁过夜。然后将化合物以3倍连续稀释液从25μM的终浓度开始添加至细胞培养基，将细胞在37℃下在5％CO₂中温育。15分钟后，添加羟基脲(Sigma H8627)至终浓度为2mM。

在用羟基脲处理45分钟后，在PBS中洗涤细胞，在稀释于PBS中的4％甲醛(Polysciences公司18814)中固定10分钟，用PBS中的0.2％Tween-20(洗涤缓冲液)洗涤，并且在PBS中的0.5％Triton X-100中透化10分钟，全部在室温下进行。然后将细胞在洗涤缓冲液中洗涤一次，在室温下于在洗涤缓冲液中稀释的10％山羊血清(Sigma G9023)(封闭缓冲液)中封闭30分钟。为了检测H2AX磷酸化水平，然后将细胞在室温下于在封闭缓冲液中以1:250稀释的一抗(小鼠单克隆抗磷酸化组蛋白H2AX Ser139抗体；Upstate 05-636)中温育1小时。然后将细胞在洗涤缓冲液中洗涤五次，接着在室温下在黑暗中于分别在洗涤缓冲液中以1:500和1:5000稀释的二抗(山羊抗小鼠Alexa Fluor 488缀合抗体；InvitrogenA11029)和Hoechst染料(Invitrogen H3570)的混合物中温育1小时。然后将细胞用洗涤缓冲液洗涤五次，最后将100ul PBS添加至每个孔中，然后成像。

使用BD Pathway 855Bioimager和Attovision软件(BD生物科学公司(BDBiosciences)，1.6/855版)针对Alexa Fluor 488和Hoechst强度对细胞进行成像，以分别定量磷酸化的H2AX Ser139和DNA染色。然后使用BD Image Data Explorer软件(BD生物科学公司，2.2.15版)对各孔计算20倍放大倍数下9个图像的剪辑画面中磷酸化Η2ΑΧ阳性细胞核的百分比。将磷酸化Η2ΑΧ阳性细胞核定义为所关注的Hoechst阳性区，其含有的Alexa Fluor 488强度是未用羟基脲处理的细胞中平均Alexa Fluor 488强度的1.75倍。最后将H2AX阳性核的百分比对每种化合物的浓度作图并且使用Prism软件(GraphPad Prism，用于Macintosh的3.0cx版，GraphPad Software公司，美国加利福尼亚州圣地亚哥(SanDiego California,USA))测定胞内ATR抑制的IC50。

还可以根据本领域中已知的其他方法测试本文所述的化合物(参见Sarkaria etal，“Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the RadiosensitizingAgent,Caffeine:Cancer Research 59:4375-5382(1999) (Sarkaria等人，“通过射线增敏剂咖啡因抑制ATM和ATR激酶活性”，《癌症研究》，第59卷，第4375-5382页，1999年)；Hicksonet al,“Identification and Characterization of a Novel and Specific Inhibitorof the Ataxia-Telangiectasia Mutated Kinase ATM”Cancer Research 64:9152-9159(2004)(Hickson等人，“毛细血管扩张性共济失调突变激酶ATM的新型和特异性抑制剂的鉴定和表征”，《癌症研究》，第64卷，第9152-9159页，2004年)；Kim et al,“SubstrateSpecificities and Identification of Putative Substrates of ATM Kinase FamilyMembers”The Journal of Biological Chemistry,274(53):37538-37543(1999)(Kim等人，“ATM激酶家族成员的推定底物的底物特异性和鉴定”，《生物化学杂志》，第274卷第53期，第37538-37543页，1999年)；以及Chiang et al,“Determination of the catalyticactivities of mTOR and other members of the phosphoinositide-3-kinase-relatedkinase family”Methodsmol.Biol.281:125-41(2004)(Chiang等人，“磷脂酰肌醇-3-激酶相关的激酶家族的mTOR和其他成员的催化活性的测定”，《分子生物学方法》，第281卷，第125-141页，2004年))。

实例16：ATR抑制测定法：

可使用放射性磷酸盐掺入测定法筛选化合物抑制ATR激酶的能力。测定法在50mMTris/HCl(pH 7.5)、10mM MgCl₂和1mM DTT的混合物中进行。最终底物浓度为10μM[γ-33P]ATP(3mCi 33P ATP/mmol ATP，珀金埃尔默公司(Perkin Elmer))和800μM靶肽(ASELPASQPQPFSAKKK)。

在存在5nM全长ATR的情况下在25℃进行测定。配制含有除ATP和所关注测试化合物之外的所有上面列出的试剂的测定储备缓冲溶液。将13.5μL储备溶液放入96孔板中，然后添加2μL含有测试化合物的连续稀释物的DMSO储备溶液(通常从3倍连续稀释液的15μM终浓度开始)，一式两份(DMSO终浓度为7％)。将板在25℃预温育10分钟，通过添加15μL[γ-33P]ATP(终浓度10μM)引发反应。

24小时后通过添加30μL含有2mM ATP的0.1M磷酸终止反应。用100μL 0.2Μ磷酸预处理多筛选磷酸纤维素滤膜96孔板(密理博公司(Millipore)，目录号MAPHN 0B50)，然后添加45μL终止测定混合物。用5×200μL 0.2M磷酸对板进行洗涤。干燥后，将100μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁混合物(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer))添加到孔中，然后进行闪烁计数(1450Microbeta液体闪烁计数器，Wallac公司)。

在除去全部数据点的平均背景值后，使用Prism软件包(GraphPad Prism，用于Macintosh的3.0cx版，GraphPad Software公司，美国加利福尼亚州的圣地亚哥)通过对初始比率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

一般来讲，本发明的化合物有效抑制ATR。化合物I-1、I-2、II-1、II-2、II-3和II-4以低于0.001μM的Ki值抑制ATR。

实例17：顺铂致敏性分析

可使用96小时细胞活力(MTS)分析针对其令HCT116结肠直肠癌细胞对顺铂敏感的能力来筛选化合物。将在对顺铂的ATM信号传导中具有缺陷的HCT116细胞(参见Kim etal.；Oncogene 21:3864(2002)(Kim等人，《致癌基因》，第21卷，第3864页，2002年)；还可参 见Takemura et al.；JBC 281:30814(2006)(Takemura等人，《生物化学杂志》，第281卷，第30814页，2006年))以470个细胞/孔涂布接种于96孔聚苯乙烯板(Costar 3596)的150μlMcCoy’s 5A培养基(Sigma M8403)中，该培养基补充有10％胎牛血清(JRH Biosciences12003)、1:100稀释的青霉素/链霉素溶液(Sigma P7539)和2mM L-谷氨酰胺(SigmaG7513)，并让其在37℃下于5％CO₂中贴壁过夜。然后将化合物和顺铂二者以从10μM最高终浓度开始的2倍连续稀释液作为一整套浓度同时添加至细胞培养基，最终细胞体积为200μl，然后将细胞在37℃下在5％CO₂中温育。96小时后，将40μl MTS试剂(普洛麦格公司(Promega)G358a)添加至每个孔，并将细胞在37℃下在5％CO₂中温育1小时。最后，用SpectraMax Plus 384读出器(分子仪器公司(Molecular Devices))在490nm测量吸光度并可报道将单独的顺铂的IC50降低至少3倍(至1个小数位)所需的化合物浓度。

实例18：单剂HCT116活性

可使用96小时细胞活力(MTS)分析针对其对抗HCT116结肠直肠癌细胞的单剂活性来筛选化合物。将HCT116以470个细胞/孔涂布于96孔聚苯乙烯板(Costar 3596)的150μlMcCoy’s 5A培养基(Sigma M8403)中，该培养基补充有10％胎牛血清(JRH Biosciences12003)、1:100稀释的青霉素/链霉素溶液(Sigma P7539)和2mM L-谷氨酰胺(SigmaG7513)，并让其在37℃下于5％CO₂中粘附过夜。然后将化合物以从10μM最高最终浓度开始的2倍连续稀释物作为整套浓度添加至细胞培养基，最终细胞体积为200μl，并将细胞在37℃下在5％CO₂中温育。96小时后，将40μl MTS试剂(普洛麦格公司(Promega)G358a)添加至每个孔，并将细胞在37℃下在5％CO₂中温育1小时。最后，用SpectraMax Plus 384读出器(分子仪器公司)在490nm测量吸光度并且可以计算IC50值。

实例18-21的数据

尽管我们已经描述了本发明的许多实施例，但显而易见，可以改变我们的基础实例以提供使用本发明化合物、方法和工艺的其他实施例。因此，应当理解本发明的范围由随附权利要求而非本文已借助实例来体现的具体实施例限定。

Claims (10)

1.一种用于在合适的肟形成条件下由式3化合物制备式4化合物的方法：

其中

R¹为C_1-6烷基；

R²为C_1-6烷基；

或R¹和R²与它们附接的所述氧原子一起形成具有两个氧原子的任选地取代的5或6元饱和杂环；

R³为氢、C_1-6烷基或具有1-2个选自氧、氮和硫的杂原子的3-6元饱和或部分不饱和的杂环基；其中所述杂环基任选地被1个卤素或C_1-3烷基取代；

J¹为H、卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基；

PG为氨基甲酸酯保护基。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法用于制备式I化合物：

其中

R⁴为

J¹为卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基；

Q为苯基、吡啶基或N-烷基化吡啶酮；

J²为卤素、CN、苯基、唑基或C_1-6脂族基团，其中最多2个亚甲基单元任选地被O、NR”、C(O)、S、S(O)或S(O)₂置换；所述C_1-6脂族基团任选地被1-3个氟基或CN取代；

q为0、1或2；并且

R³为氢、C_1-6烷基或具有1-2个选自氧、氮和硫的杂原子的3-6元饱和或部分不饱和的杂环基；其中所述杂环基任选地被1个卤素或C_1-3烷基取代。

3.一种用于制备式I-3化合物的方法：

包括使式A-6化合物：

在合适的Boc去保护条件下去保护，任选地接着在碱性含水条件下处理以形成式I-3化合物的步骤。

4.一种用于制备式I-2化合物的方法：

包括使式5-i化合物：

在合适的Boc去保护条件下去保护，任选地接着在碱性含水条件下处理以形成式I-2化合物的步骤。

5.一种用于制备式A-4-ii化合物的方法：

包括以下步骤中的一个或多个：

f)使式C-1化合物：

在合适的金属介导的偶联条件下与TMS-乙炔反应以形成式C-2化合物：

g)使式C-2化合物在合适的Boc保护条件下反应以形成式C-3化合物：

h)使式C-3化合物在合适的TMS去保护条件下反应以形成式A-4-ii化合物。

6.一种式II化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中各R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c独立地为氢或氘，并且

R^1a、R^1b、R^1c、R²、R^3a、R^3b、R^3c、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^9a、R^9b、R^10a、R^10b和R^10c中的至少一个为氘。

7.根据权利要求6所述的化合物，选自：

8.一种式I-2化合物的固体形式：

其中所述形式选自化合物I-2游离碱、化合物I-2·HCl、化合物I-2·HCl·H₂O、化合物I-2·HCl·2H₂O和化合物I-2·2盐酸。

9.一种药物组合物，包含根据权利要求8所述的固体形式和药学上可接受的载体。

10.根据权利要求8所述的固体形式在制备用于治疗癌症的药物中的用途。