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CN105611827A - 转基因玉米事件mon87403和其检测方法 - Google Patents

转基因玉米事件mon87403和其检测方法 Download PDF

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CN105611827A
CN105611827A CN201480055624.1A CN201480055624A CN105611827A CN 105611827 A CN105611827 A CN 105611827A CN 201480055624 A CN201480055624 A CN 201480055624A CN 105611827 A CN105611827 A CN 105611827A
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CN
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seqidno
plant
event
corn
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CN201480055624.1A
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T·R·亚当斯
J·A·科特
A·M·桑特
J·P·泰勒
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Monsanto Technology LLC
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Monsanto Co
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Abstract

本公开提供了一种包含事件MON87403的转基因玉米，其表现出增加的粮食产量。本公开还提供了与该事件相关的细胞、植物部分、种子、植物、商业产品以及对于该事件是独特的并通过将转基因DNA插入玉米植物的基因组而产生的DNA分子。本公开进一步提供了用于检测样品中所述玉米事件核苷酸序列的存在的方法，用于检测诊断所述玉米事件的存在的核苷酸序列的探针和引物。

Description

转基因玉米事件MON87403和其检测方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年10月9日提交的美国临时申请第61/888,978号的权益，该申请以引用方式整体并入本文中。
序列表的并入
序列表包含在名为"MONS342WO_ST25.txt"的文件中，其在MicrosoftWindows操作系统中测定的大小为24千字节并生成于2014年9月30日，该文件以电子提交方式与此一道递交，并且以引用方式并入本文中。
领域
本公开涉及转基因玉米事件MON87403以及包含该事件的植物，该植物表现出增加的产量。本公开还提供了与该事件相关的细胞、植物部分、种子、植物、商业产品以及对于该事件是独特的并通过将转基因DNA插入玉米植物的基因组而产生的DNA分子。本公开进一步提供了用于检测样品中所述玉米事件核苷酸序列的存在的方法，用于检测诊断所述玉米事件的存在的核苷酸序列的探针和引物。
背景
玉米是一种重要的作物，并且是世界上许多地区的主要食物来源。生物技术的方法已经应用于玉米以改进产品的农学性状和品质。一种这样的农学性状是增加的产量。
增加的产量可以在转基因植物中通过表达能够提供这样的增产的转基因来实现。转基因在植物中的表达可以受许多因素的影响，例如转基因盒中使用的调节元件、转基因插入物的染色体位置、靠近转基因插入位点的任何内源性调节元件的接近性以及环境因素例如光和温度。例如，在以类似方式产生的事件之间，转基因表达的总体水平或转基因表达的空间或时间模式存在广泛的变化。出于这个原因，单一的特定转化事件的表现可以变化。因此，赋予有益特性的转化事件的鉴定可以代表重要的任务。
概要
在一个方面，本发明提供一种重组DNA分子，其包含选自由SEQIDNO:1-8、SEQIDNO:10和其完全互补物组成的组的核苷酸序列。在一个实施方案中，重组DNA分子是由插入的异源核酸分子和玉米植物、植物细胞或种子的基因组DNA的接合形成。在另一个实施方案中，重组DNA分子来自包含事件MON87403的转基因玉米植物，一种包含所述事件的种子的代表性样品，其已以ATCC保藏号PTA-13584保藏。在另一个实施方案中，重组DNA分子是诊断来自转基因玉米事件MON87403的DNA的存在的扩增子。在另一个实施方案中，重组DNA分子是在玉米植物、植物细胞、种子、后代植物、植物部分或商业产品中。在另一个实施方案中，本发明提供包含重组DNA分子的转基因玉米植物、种子、细胞或其植物部分。在其它实施方案中，包含重组DNA分子的转基因玉米植物、种子、细胞或其植物部分具有增加的产量，且/或此玉米植物、种子、细胞或其植物部分的基因组当在DNA扩增方法中进行测试时产生包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10的连续核苷酸组成的组的DNA分子的扩增子。在另一个实施方案中，本发明提供包含重组DNA分子的无生命植物材料和/或微生物。在另一个实施方案中，包含重组DNA分子的微生物是植物细胞。
在另一个方面，本发明提供一种DNA探针，其包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA探针，该DNA探针在严格杂交条件下与包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交，并且在严格杂交条件下不与不含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交。
在另一个方面，本发明提供DNA分子对，其包含第一DNA分子和不同于第一DNA分子的第二DNA分子，其中所述第一DNA分子和第二DNA分子各自包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA引物，当与来自事件MON87403的DNA在扩增反应中一起使用时，产生用于诊断样品中的转基因玉米事件MON87403DNA的扩增子。
在另一个方面，本发明提供一种检测样品中来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子的存在的方法，所述方法包括：(a)使所述样品与权利要求6的DNA探针接触；(b)使所述样品和所述DNA探针接受严格杂交条件；和(c)检测所述DNA探针与所述样品中的DNA分子的杂交，其中所述DNA探针与所述DNA分子的杂交表明所述样品中存在来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子。
本发明的另一个方面提供一种检测样品中来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子的存在的方法，所述方法包括：(a)使所述样品与权利要求7的DNA分子对接触；(b)进行足以产生包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10的连续核苷酸组成的组的序列的DNA扩增子的扩增反应；和(c)检测所述反应中的所述DNA扩增子的存在，其中所述反应中存在所述DNA扩增子表明所述样品中存在来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子。
在另一个方面，本发明提供一种DNA检测试剂盒，其包括：(a)DNA分子对，其包含第一DNA分子和不同于第一DNA分子的第二DNA分子，其中所述第一DNA分子和第二DNA分子各自包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA引物，当与来自事件MON87403的DNA在扩增反应中一起使用时，产生用于诊断转基因玉米事件MON87403DNA的扩增子；和(b)DNA探针，其包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA探针，该DNA探针在严格杂交条件下与包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交，并且在严格杂交条件下不与不含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交。
本发明的另一个方面提供包含事件MON87403的玉米植物或种子，一种包含所述事件的种子的代表性样品，其已以ATCC保藏号PTA-13584保藏。在一个实施方案中，玉米植物或种子是具有至少一个包含事件MON87403的亲本的杂交种。
在另一个方面，本发明提供一种由包含事件MON87403且包含根据权利要求1所述的重组DNA分子的转基因玉米植物产生的商业产品，其中在源自所述商业产品的样品中检测到所述核苷酸序列可确定所述商业产品是由所述包含事件MON87403的转基因玉米植物产生。在一个实施方案中，商业产品选自由完整或加工的种子、动物饲料、油、膳食、面粉、薄片、糠、生物质和燃料产品组成的组。本发明的其它实施例提供一种生产商业产品的方法，其包括：(a)获得包含转基因玉米事件MON87403的玉米植物或其部分；和(b)从该玉米植物或其部分生产玉米商业产品。
本发明的另一个方面提供一种提高作物的产量的方法，其包括：(a)种植包含事件MON87403的作物植物或种子；和(b)使所述作物植物或种子生长。在一个实施例中，作物植物或种子是玉米植物或玉米种子。
在另一个方面，本发明提供一种产生具有增加的产量的玉米植物的方法，其包括：(a)将包含事件MON87403的转基因玉米植物与第二玉米植物有性杂交，从而产生种子，该转基因玉米植物包含含有选自由SEQIDNO:1-8、SEQIDNO:10的连续核苷酸和其完全互补物组成的组的核苷酸序列的核酸分子；(b)收集由所述杂交产生的所述种子；(c)使所述种子生长以产生多个后代植物；和(d)选择具有增加的产量的后代植物。
在另一个方面，本发明提供一种产生具有增加的产量的玉米植物的方法，其包括：(a)将包含事件MON87403的转基因玉米植物自交，从而产生种子，该转基因玉米植物包含含有选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10的连续核苷酸组成的组的核苷酸序列的核酸分子；(b)收集由所述自交产生的所述种子；(c)使所述种子生长以产生多个后代植物；和(d)选择具有增加的产量的后代植物。
本发明的另一个方面提供一种产生杂交玉米种子的方法，其包括：(a)在区域内种植包含事件MON87403的转基因玉米种子；(b)由所述种子生长玉米植物；(c)用来自第二亲本玉米植物的花粉对所述玉米植物授粉；和(d)从所述玉米植物收获种子，其中所述种子是由包含事件MON87403的转基因玉米植物与第二亲本植物杂交产生的杂交玉米种子。在一个实施方案中，该方法进一步包括在所述区域内种植第二亲本玉米植物种子和由所述第二亲本玉米植物生长玉米植物。在另一个实施方案中，所述第二亲本玉米植物具有增加的产量。
在另一个方面，本发明提供一种确定样品中包含玉米事件MON87403DNA的玉米植物基因组的接合性的方法，其包括：(a)将该样品与第一对DNA分子和第二对不同的DNA分子接触，该DNA分子：(i)当与玉米事件MON87403DNA在核酸扩增反应中一起使用时，产生用于诊断玉米事件MON87403的第一扩增子；和(ii)当与非MON87403DNA的玉米基因组DNA在核酸扩增反应中一起使用时，产生用于诊断非事件MON87403DNA的玉米野生型基因组DNA的第二扩增子；(b)进行核酸扩增反应；以及(c)检测所述第一扩增子和所述第二扩增子；其中所述第一扩增子和第二扩增子的存在诊断所述样品中的基因组是杂合的，且其中仅存在所述第一扩增子诊断基因组对于所述样品中的玉米事件MON87403而言为纯合的。在一个实施方案中，第一组DNA分子包含SEQIDNO:11和SEQIDNO:12，且第二组DNA分子包含SEQIDNO:14和SEQIDNO:15。
附图简述
图1-示出了包含事件MON87403的玉米的基因组中的转基因插入物的图解表示；[A]对应于SEQIDNO:1、3和5的相对位置，它们全部形成转基因插入物的5’部分与侧翼基因组DNA的3’部分之间的接合点；[B]对应于SEQIDNO:2、4和6的相对位置，它们全部形成转基因插入物的5’部分与侧翼基因组DNA的3’部分之间的接合点；[C]对应于SEQIDNO:7的相对位置，其包含玉米基因组侧翼区域和转基因DNA插入物的任意指定的5’端的一部分；[D]对应于SEQIDNO:8的相对位置，其包含玉米基因组侧翼区域和转基因DNA插入物的任意指定的3’端的一部分；[E]代表SEQIDNO:9，其为整合入包含事件MON87403的玉米植物的基因组中的包括ATHB17表达盒的转基因DNA插入物的序列；[F]代表SEQIDNO:10，其为包含5’侧翼基因组序列、转基因插入物和3’侧翼基因组序列的连续序列，如图中从左至右所示包含SEQIDNO:7、SEQIDNO:9和SEQIDNO:8，其中如上所述并入了SEQIDNO:1、3和5以及SEQIDNO:2、4和6，这些序列存在于包含事件MON87403的植物的基因组中。
图2-示出了2009年的推进到田间试验的14个个别事件的比较数据。所示的数据来自从11个地点获取的2009年多重测试试验，且总共重复22次。星号表示前5名的事件。
图3–示出了转化载体pMON97046的质粒图谱。
图4–示出了历年来包含基于转化种质的杂交种中的MON87403事件的植物的增强的产量表现。
序列简述
SEQIDNO:1是代表玉米基因组DNA与整合的转基因表达盒的5'接合区的20个核苷酸的序列(SEQIDNO:10的位置1336至1355)。
SEQIDNO:2是代表玉米基因组DNA与整合的转基因表达盒的3'接合区的20个核苷酸的序列(SEQIDNO:10的位置4468至4487)。
SEQIDNO:3是代表玉米基因组DNA与整合的转基因表达盒的5'接合区的60个核苷酸的序列(SEQIDNO:10的位置1316至1375)。
SEQIDNO:4是代表玉米基因组DNA与整合的转基因表达盒的3'接合区的60个核苷酸的序列(SEQIDNO:10的位置4448至4507)。
SEQIDNO:5是代表玉米基因组DNA与整合的转基因表达盒的5'接合区的100个核苷酸的序列(SEQIDNO:10的位置1296至1395)。
SEQIDNO:6是代表玉米基因组DNA与整合的转基因表达盒的3'接合区的100个核苷酸的序列(SEQIDNO:10的位置4428至4527)。
SEQIDNO:7是位于MON87403的插入DNA侧翼，直到并包括转基因DNA插入的区域的3000个核苷酸的5'序列(SEQIDNO:10的位置1至3000)。
SEQIDNO:8是位于MON87403的插入DNA侧翼，直到并包括转基因DNA插入的区域的2624个核苷酸的3'序列(SEQIDNO:10的位置3121至5744)。
SEQIDNO:9是完全整合入玉米基因组DNA中并包含表达盒DNA的序列(SEQIDNO:10的位置1346至4477)。
SEQIDNO:10是代表位于MON87403的插入DNA侧翼的5'序列(SEQIDNO:7)、完全整合入玉米基因组DNA中并包含表达盒的序列(SEQIDN0:9)和位于MON87403的插入DNA侧翼的3'序列(SEQIDNO:8)的叠连群的核苷酸序列，并且包括SEQIDNO:1-6。
SEQIDNO:11是用于鉴定事件MON87403的转基因特异性测试引物SQ23846。由(PEAppliedBiosystems，FosterCity，CA)测试(使用引物SEQIDNO:11和SEQIDNO:12的组合)产生的PCR扩增子对于事件MON87403的存在是阳性结果。
SEQIDNO:12是用于鉴定事件MON87403的转基因特异性测试引物SQ4603。
SEQIDNO:13是用于鉴定MON87403的转基因特异性测试6-FAM标记型探针PB10644。该探针是6FAMTM标记的合成寡核苷酸。在测试中，在扩增反应(使用引物SEQIDNO:11-12结合使用6FAMTM标记的探针)中释放出荧光信号用于诊断事件MON87403的存在。
SEQIDNO:14是转基因特异性测试内部对照引物SQ25061。
SEQIDNO:15是转基因特异性测试内部对照引物SQ25062。
SEQIDNO:16是转基因特异性测试内部对照VICTM标记的PB10866。
SEQIDNO:17是用于鉴定MON87403的PCR的转基因特异性正向引物AS349。
SEQIDNO:18是用于鉴定MON87403的PCR的转基因特异性反向引物AS350。
SEQIDNO:19是用于检测事件MON87403的5'(左侧)接合区的引物SQ6164。
SEQIDNO:20是在PCR中用于检测事件MON87403的5'(左侧)接合区的引物SQ13205。
SEQIDNO:21是用于检测事件MON87403的5'(左侧)接合区的引物SQ6165。
SEQIDNO:22是用于检测事件MON87403的5'(左侧)接合区的引物SQ22458。
SEQIDNO:23是用于检测事件MON87403的5'(左侧)接合区的引物SQ22459。
SEQIDNO:24是用于检测事件MON87403的3'(右侧)接合区的引物SQ21173。
SEQIDNO:25是用于检测事件MON87403的3'(右侧)接合区的引物SQ22464。
SEQIDNO:26是用于检测事件MON87403的3'(右侧)接合区的引物SQ22460。
SEQIDNO:27是用于检测事件MON87403的3'(右侧)接合区的引物SQ22465。
SEQIDNO:28是用于检测事件MON87403的3'(右侧)接合区的引物SQ22461。
SEQIDNO:29是用于检测事件MON87403的3'(右侧)接合区的引物SQ22471。
详述
提供以下定义和方法以更好地定义本公开并指导本领域一般技术人员实施本公开。除非另有说明，否则可以根据本领域普通技术人员的常规用法来理解术语。分子生物学中的常用术语的定义还可以见于Rieger等人，GlossaryofGenetics:ClassicalandMolecular，第5版，Springer-Verlag:NewYork,1991；和Lewin,GenesV,OxfordUniversityPress:NewYork,1994中
本公开提供了转基因玉米事件MON87403(在本文中也称为MON87403)。如本文所使用的术语“事件”是指由将转基因DNA插入植物的基因组中的染色体上的特定位置而产生的DNA分子。事件MON87403是指通过将具有本文所提供的SEQIDNO:9序列的转基因DNA插入玉蜀黍(Zeamays)基因组中的特定染色体位置而产生的DNA分子。在本公开中还提供了包含事件MON87403的植物、种子、后代、细胞和其植物部分。包括MON87403的植物表现出增加的粮食产量。
如本文所使用，术语“玉米(corn)”或“玉米(maize)”是指玉蜀黍且包括可以与玉米繁殖的所有植物品种，包括野生玉米物种以及那些允许物种间繁殖的玉蜀黍属。
转基因“事件”是通过以下产生：用异源DNA(即，包含感兴趣的转基因的核酸构建体)转化植物细胞；使通过将转基因插入植物的基因组中所得到的独立转化的转基因植物群体再生；以及选择具有期望的分子特性(例如，转基因的单拷贝插入特定的基因组位置、转基因DNA的完整性和增强的性状例如增加的粮食产量)的特定植物。包含该事件的植物可以指包括插入到该植物的基因组中的特定位置上的转基因的原始转化体。包含该事件的植物还可以指将转基因保留在该植物的基因组中的相同特定位置上的原始转化体的后代。这样的后代可以通过自交产生，或通过与包含相同事件的不同植株或其后代用以及另一种植物有性异型杂交而产生。该另一种植物可以是包含相同或不同转基因的转基因植物；或者可以是非转基因植物，例如来自不同品种的植物。所得后代就事件MON87403DNA而言可以是纯合或杂合的(插入DNA和侧翼DNA)。即使在重复回交至轮回亲本后，来自转化亲本的事件DNA仍存在于杂交后代的相同基因组位置处。
包含事件MON87403的DNA分子是指包含插入转基因DNA(提供为SEQIDNO:9)的至少一部分和紧邻插入DNA的侧翼基因组DNA的至少一部分的DNA分子。正因为如此，包含事件MON87403的DNA分子具有代表转基因DNA插入物的至少一部分和被插入转基因DNA的植物基因组的特定区域的至少一部分的核苷酸序列。相对于周围的植物基因组中的事件MON87403插入的DNA的排列是特异和独特的事件MON87403和作为这种DNA分子的这样的核苷酸序列是诊断和识别为事件MON87403。本文中提供了这种DNA分子的序列的实例SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10。这种DNA分子还是包含事件MON87403的植物的染色体的组成部分并且可以传递至该植物的后代。
如本文所使用，“重组DNA分子”是包含不会天然地共同存在并且是人类干预的结果的DNA分子组合的DNA分子，例如，由至少两种彼此异源的DNA分子组成的DNA分子，和/或人工合成并且包含与自然中通常会存在的多核苷酸序列有所偏差的多核苷酸序列的DNA分子，和/或包含并入宿主细胞的基因组DNA的转基因和宿主基因组的相关侧翼DNA的DNA分子。重组DNA分子的一个实例是由将转基因插入玉蜀黍基因组中所产生的本文描述的DNA分子，这可能最终导致在该生物体中表达重组RNA和/或蛋白质分子。如果DNA分子可以从来自植物或种子或植物组织的细胞或组织或匀浆中提取；或可以作为扩增子从来自植物或种子或植物组织的细胞或组织或匀浆的提取DNA或RNA产生(其中任何一个源自源自包含事件MON87403的植物的这类材料)，则核苷酸序列或由其衍生的任何片段也将被认为是重组DNA分子。就此而言，如SEQIDNO:1-6中所述的接合序列和源自事件MON87403的同样含有这些接合序列的核苷酸序列在本文中被定义为重组DNA，无论这些序列存在于包含事件MON87403的细胞的基因组内，还是以可检测量存在于源自包含事件MON87403的植物的组织、后代、生物样品或商业产品中。如本文所使用，术语“转基因”是指并入宿主细胞的基因组中的多核苷酸分子。这种转基因对于宿主可以是异源的。术语“转基因植物”是指包括这种转基因的植物。“转基因植物”包括基因组已经通过重组DNA的稳定整合而改变的植物、植物部分、植物细胞或种子。转基因植物包括由原始转化植物细胞再生的植物以及来自转化植物的后代或杂交的后代转基因植物。由于这样的基因组改变，转基因植物与相关的野生型植物明显不同。转基因植物的一个实例是本文描述的包含事件MON87403的植物。
如本文所使用，术语“异源的”是指这样的序列，其在目前发现该序列的遗传背景下通常不存在于给定的宿主基因组中。就此而言，该序列对于宿主基因组而言可以是天然的，但可以相对于宿主序列内的其它基因序列进行重新排列。
本公开提供了DNA分子及其对应的核苷酸序列。如本文所使用，术语“DNA序列”、“核苷酸序列”和“多核苷酸序列”是指DNA分子的核苷酸的序列，通常是从5'(上游或左侧)端呈现至3'端(下游或右侧)。本文所用的命名法是美国联邦法规(UnitedStatesCodeofFederalRegulations)§1.822的第37条所要求的命名法，并且记述于WIPO标准ST.25(1998)的附录2的表1和表3中。本公开仅参照在转基因事件MON87403中提供的两条核苷酸序列链中的一条链来公开。因此，通过暗示和推导，互补序列(在本领域中也称为完整互补物或反向互补序列)是在本发明的范围内，且因此也意图落在要求保护的主题的范围内。
对应于插入转基因DNA的完整核苷酸序列和在插入转基因DNA的任一端的侧翼的玉蜀黍基因组DNA的大部分片段的核苷酸序列在本文中作为SEQIDNO:10提供。这当中的一个分段是作为SEQIDNO:9提供的插入转基因DNA。位于插入转基因DNA的5'端侧翼的基因组DNA的核苷酸序列和插入DNA的5'端的一部分在本文中作为SEQIDNO:7提供。位于插入转基因DNA的3'端侧翼的基因组DNA的核苷酸序列和插入DNA的3'端的一部分在本文中作为SEQIDNO:8提供。跨越其中转基因DNA连接和链接到基因组DNA的位置的区域在本文中称为接合点。“接合序列”或“接合区”是指跨越插入转基因DNA和相邻的侧翼基因组DNA的DNA序列和/或相应的DNA分子。事件MON87403的接合序列的实例在本文中作为SEQIDNO:1-6提供。在源自玉米植物或种子的核苷酸分子中鉴定到这些接合序列中的一个可以确定DNA是从事件MON87403获得的，并且诊断出来自事件MON87403的DNA的存在。SEQIDNO:1是跨越基因组DNA与插入DNA的5'端之间的接合点的20bp核苷酸序列。SEQIDNO:3是跨越基因组DNA与插入DNA的5'端之间的接合点的60bp核苷酸序列。SEQIDNO:5是跨越基因组DNA与插入DNA的5'端之间的接合点的100bp核苷酸序列。SEQIDNO:2是跨越基因组DNA与插入DNA的3'端之间的接合点的20bp核苷酸序列。SEQIDNO:4是跨越基因组DNA与插入DNA的3'端之间的接合点的60bp核苷酸序列。SEQIDNO:6是跨越基因组DNA与插入DNA的3'端之间的接合点的100bp核苷酸序列。源自转基因事件MON87403的包括SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸或SEQIDNO:3的31、32、33、34、35、40、45、50、55个或所有连续核苷酸或SEQIDNO:5的51、52、53、54、55、60、65、70、75、80、85、90、95个或所有连续核苷酸的任何DNA片段是在本公开的范围内。源自转基因事件MON87403的包括SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸或SEQIDNO:4的31、32、33、34、35、40、45、50、55个或所有连续核苷酸或SEQIDNO:6的51、52、53、54、55、60、65、70、75、80、85、90、95个或所有连续核苷酸的任何DNA片段是在本公开的范围内。另外，包含与本段中所述的任何序列互补的序列的任何多核苷酸分子是在本公开的范围内。图1是包含事件MON87403的玉米植物的基因组中的转基因DNA插入物以及从5’至3’排列的SEQIDNO:1-10的相对位置的图解。本公开还提供了包含具有与SEQIDNO:10的全长至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多核苷酸的核酸分子。
本公开进一步提供了可以作为引物或探针用于诊断样品中源自事件MON87403的DNA的存在的示例性DNA分子。这样的引物或探针对于靶核酸序列是特异性的，且因此可用于通过本文所述的本公开的方法鉴定事件MON87403核酸序列。
“探针”是分离的核酸，其上连接有可检测的标记或报道分子，例如放射性同位素、配体、化学发光剂或酶。这种探针与靶核酸的链互补。在本公开的情况下，这种探针与源自包含事件MON87403的玉米的基因组DNA的链互补，无论该链来自玉米植物还是来自包含源于该事件的DNA的样品。根据本公开的探针不仅包括脱氧核糖核酸或核糖核酸，而且还包括聚酰胺和特异性结合靶DNA序列的其它探针材料。这种结合的检测可以用于诊断/确定/确认特定样品中靶DNA序列的存在。
“引物”通常是分离的多核苷酸，其被设计成在特定的退火或杂交方法中用于与互补的靶DNA链杂交形成该引物与靶DNA链之间的杂交体，且然后通过聚合酶例如DNA聚合酶沿靶DNA链延伸。在热或等温扩增(例如聚合酶链式反应(PCR))或其它核酸扩增方法中可以使用一对引物和模板DNA(例如玉蜀黍基因组DNA的样品)以产生扩增子，其中由这种反应产生的扩增子将具有对应于位于引物与模板杂交的两个位点之间的模板DNA的序列的DNA序列。如本文所使用，“扩增子”是已经使用扩增技术合成的DNA的一段或片段，即扩增反应的产物。在本公开的一个实施方案中，用于诊断事件MON87403的扩增子包含未在玉蜀黍基因组中天然发现的序列。如本公开中所使用的引物对意指使用结合双链核苷酸片段的相反链的两个引物，其目的是通常在热或等温扩增反应或其它核酸扩增方法中线性扩增位于将被引物对的个别成员结合的位置之间的多核苷酸片段。在实施方案中，可用作引物的示例性DNA分子作为SEQIDNO:11-12、14-15、17-18和19-29提供。例如，在PCR中用于鉴定事件MON87403的示例性事件特异性引物作为SEQIDNO:17-18提供。可以用于分析5’(左)接合区的示例性引物被提供为SEQIDNO:19-23，且可以用于分析3’(右)接合区的示例性引物被提供为SEQIDNO:24-29。可以用于事件MON87403的接合性测试的示例性引物被提供为SEQIDNO:11-12和SEQIDNO:14-15。术语“扩增子”的使用明确排除了可以在DNA扩增反应中形成的引物二聚体。
根据本公开的探针和引物可以具有与靶序列的完全序列一致性，然而可以通过常规方法设计不同于靶序列而保留优先与靶序列杂交的能力的引物和探针为了使核酸分子用作引物或探针，只需要它们在序列上充分互补以能够在所采用的特定的溶剂和盐浓度下形成稳定的双链结构。任何核酸杂交或扩增方法都可以用于鉴定样品中来自事件MON87403的转基因DNA的存在。探针和引物的长度通常为至少约11个核苷酸、至少约18个核苷酸、至少约24个核苷酸以及至少约30个核苷酸或更长。这样的探针和引物在高严格杂交条件下特异性地与靶序列杂交。
用于制备和使用探针和引物的方法描述于例如MolecularCloning:ALaboratoryManual，第2版，第1-3卷，Sambrook等人编辑，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989(下文中为"Sambrook等人，1989")；CurrentProtocolsinMolecularBiology，Ausubel等人编辑，GreenePublishingandWiley-Interscience,NewYork,1992(定期更新)；以及Innis等人，PCRProtocols:AGuidetoMethodsandApplications,AcademicPress:SanDiego,1990中。PCR引物对可以从已知序列得到，例如通过使用用于该目的的计算机程序例如Primer(版本0.5，1991,WhiteheadInstituteforBiomedicalResearch,Cambridge,MA)。
基于本文所公开的侧翼DNA和插入序列的引物和探针可以用于通过已知方法来确认公开的序列，例如通过对这些序列进行再克隆和测序。
本公开的核酸探针和引物在严格条件下与靶DNA序列杂交。任何核酸杂交或扩增方法都可以用于鉴定样品中来自转基因事件的DNA的存在。核酸分子或其片段能够在某些情况下与其它核酸分子特异性杂交。如本文所使用，如果两个核酸分子能够形成反平行双链核酸结构，那么这两个分子被认为能够特异性地彼此杂交。如果两个核酸分子表现出完全互补性，则一个核酸分子被认为是另一个核酸分子的“互补物”。如本文所使用，当一个分子的每个核苷酸都与另一个分子的核苷酸互补时，这些分子被认为表现出“完全互补性”。如果两个分子能够以足够的稳定性互相杂交从而允许它们在至少“低严格”条件下保持彼此退火，那么这两个分子被认为是“最低程度互补的”。类似地，如果分子能够以足够的稳定性互相杂交从而允许它们在“高严格”条件下保持彼此退火，那么这些分子被认为是“互补的”。Sambrook等人，1989和Haymes等人，In:NucleicAcidHybridization,APracticalApproach,IRLPress,Washington,D.C.(1985)描述了严格条件。因此偏离完全互补性是允许的，只要这种偏离没有完全消除分子形成双链结构的能力。为了使核酸分子用作引物或探针，只需要它们在序列上充分互补以能够在所采用的特定的溶剂和盐浓度下形成稳定的双链结构。
如本文所使用，大体上同源的序列是在高严格条件下将与和其相比较的核酸序列的互补物特异性杂交的核酸序列。促进DNA杂交的适当的严格条件(例如，约45℃下的6.0x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)，随后用50℃下的2.0xSSC冲洗)是本领域技术人员已知的或可以见于CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6中。例如，冲洗步骤中的盐浓度可以从低严格度的50℃下的约2.0xSSC至高严格度的50℃下的约0.2xSSC之间选择。另外，冲洗步骤中的温度可以从低严格条件下的约22℃的室温升高至高严格条件下的约65℃。温度和盐都可以变化，或者温度或盐浓度中的任一者可以保持不变，而另一变量改变。在一个实施方案中，本公开的核酸在高严格条件下将与SEQIDNO:1-6中陈述的核酸分子中的一个或多个或其互补物或片段特异性杂交。探针与靶DNA分子的杂交可以通过本领域技术人员已知的许多方法来检测。这些可以包括但不限于荧光标签、放射性标签、基于抗体的标签和化学发光标签。
关于使用特定扩增引物对扩增靶核酸序列(例如通过PCR)，“严格条件”是允许该引物对只与具有相应的野生型序列(或其互补物)的引物在DNA扩增反应中将与其结合且优选产生独特的扩增产物扩增子的靶核酸序列杂交的条件。DNA扩增方法的实例包括PCR、重组酶聚合酶扩增(RPA)(参见例如美国专利号7,485,428)、链置换扩增(SDA)(参见例如美国专利号5,455,166和5,470,723)、转录介导扩增(TMA)(参见例如Guatelli等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:1874-1878,1990)、滚环扩增(RCA)(参见例如Fire和Xu,Proc.Natl.AcadSci.USA92:4641-4645,1995；Lui,等人,J.Am.Chem.Soc.118:1587-1594,1996；Lizardi等人，NatureGenetics19:225-232,1998；美国专利号5,714,320和6,235,502)、解链酶依赖性扩增(HDA)(参见例如Vincent等人,EMBOReports5(8):795-800,2004；美国专利号7,282,328)以及多重置换扩增(MDA)(参见例如Dean等人，Proc.Natl.AcadSci.USA99:5261-5266,2002)。
术语“(对靶序列)具有特异性的”表示探针或引物在严格杂交条件下仅与包含靶序列的样品中的该靶序列杂交。
如本文所使用，术语“分离的”是指至少部分分离一种分子与在天然或自然状态下通常与其结合的其它分子。在一个实施方案中，术语“分离的”是指这样的DNA分子，它与在其天然或自然状态下通常位于DNA分子侧翼的核酸至少部分分离。例如通过重组技术融合至与它们通常不相关的调控或编码序列的DNA分子在本文中被认为是分离的。因此，任何转基因的、重组的、嵌合的或人造的核苷酸序列将被认为是分离的核苷酸序列，因为这些不是天然存在的序列。转基因的、重组的、嵌合的或人造的核苷酸序列将被认为是分离的核苷酸序列，无论它存在于用于转化植物细胞的质粒、载体或构建体中，该植物的基因组中，还是以可检测量存在于源自该植物的组织、后代、生物样品或商业产品中。因此，如果DNA分子可以从来自植物或种子或植物器官的细胞或组织或匀浆中提取；或可以作为扩增子从来自植物或种子或植物器官的细胞或组织或匀浆的提取DNA或RNA产生(其中任何一个源自源自转基因改造植物的这类材料)，则核苷酸序列或由其衍生的任何片段将被认为是分离的或可分离的。
本领域技术人员熟知的许多方法都可以用于分离和操作本发明公开的DNA分子或其片段。例如，PCR(聚合酶链反应)技术可以用于扩增特定的起始DNA分子和/或产生原始分子的变体。DNA分子或其片段还可以通过其它技术获得，例如通过化学方法直接合成片段，这通常是通过使用自动化寡核苷酸合成仪来实现。
能够检测特定植物的转基因/基因组DNA的存在以确定自花授粉或有性杂交的后代是否含有感兴趣的转基因/基因组DNA将是有利的。另外，当遵守要求上市前批准以及标记源自转基因作物的食品的法规时，用于检测特定转基因植物的方法是有帮助的。
可以通过任何熟知的核酸检测方法(例如聚合酶链反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交)检测转基因的存在。这些检测方法一般关注经常使用的遗传元件，例如启动子、终止子、标记基因等。因此，这类方法可能不适用于区别不同的转化事件，特别是那些使用相同的DNA构建体产生的事件，除非邻近插入DNA的染色体DNA(“侧翼DNA”)的序列是已知的。例如，Taverniers等人(J.Agric.FoodChem.,53:3041-3052,2005)讨论了事件特异性PCR分析，其中展现了用于转基因玉米株系Bt11、Bt176和GA21以及用于油菜事件GT73的事件特异性追踪系统。在此研究中，事件特异性引物和探针是基于每个事件的基因组/转基因接合的序列而设计。转基因植物事件特异性DNA检测方法还已经描述在美国专利号6,893,826、6,825,400、6,740,488、6,733,974、6,689,880、6,900,014和6,818,807中。
因此，本文提供的DNA分子和对应的核苷酸序列尤其可用于鉴定事件MON87403、筛选包含事件MON87403的植物品种或杂交种、检测样品中源自事件MON87403的DNA的存在以及监测样品中存在和/或缺乏事件MON87403或包含事件MON87403的植物和植物部分。
本公开提供了植物、后代、种子、植物细胞、植物部分(例如花粉、胚珠、花、根或茎组织、纤维和叶子)和商业产品。这些植物、后代、种子、植物细胞、植物部分和商业产品含有可检测量的本公开的多核苷酸，例如包含被提供为SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的序列中的至少一个的多核苷酸。本公开的植物、后代、种子、植物细胞、植物部分和商业产品还可以包含一个或多个额外的转基因。这种转基因可以是编码赋予理想性状的蛋白质或RNA分子的任何核苷酸序列，该性状包括但不限于增强的昆虫抗性、增强的水利用效率或抗旱性、增强的产量表现、增加的产量潜力、提高的氮利用效率或增强的氮胁迫(例如高或低的氮供应)耐性、增强的种子质量、增强的抗病性、改善的营养质量和/或增强的除草剂耐性(例如草甘膦或麦草畏耐性)，其中该理想性状是相对于缺乏这种额外的转基因的可比较植物而测量。
本公开提供了源自包含事件MON87403的转基因植物的植物、后代、种子、植物细胞和植物部分(例如花粉、胚珠仁、花、根或茎组织以及叶子)。为了实现本公开，包含事件MON87403的种子的代表性样品已经根据布达佩斯条约(BudapestTreaty)进行保藏。被选择来接收该保藏物的贮藏库是美国典型培养物保藏中心(ATCC)，其地址为10801UniversityBoulevard，Manassas，VirginiaUSA，邮编20110。ATCC贮藏库将保藏号PTA-13584分配给包含事件MON87403的种子。
本公开提供了包含具有选自由存在于基因组中的SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸组成的组的核苷酸序列的DNA分子的微生物。这种微生物的一个实例是转基因植物细胞。微生物例如本公开的植物细胞可用于许多工业应用，包括但不限于：(i)用作科学探索或工业研究的研究工具；(ii)在培养中用于产生可以用于随后的科学研究或用作工业产品的内源的或重组的碳水化合物、脂质、核酸、酶或蛋白质产品或小分子；以及(iii)与现代植物组织培养技术一起使用以产生随后可以用于农业研究或生产的转基因植物或植物组织培养物。微生物例如转基因植物细胞的生产和使用利用现代微生物技术和人类干预以产生人造的独特微生物。在此过程中，重组DNA被插入植物细胞的基因组中以创造与天然存在的植物细胞不同且独特的转基因植物细胞。然后该转基因植物细胞可以利用现代微生物技术像细菌和酵母细胞一样培养，且可以以未分化的单细胞状态存在。新的植物细胞的基因组成和表型是由异源DNA整合进细胞基因组而产生的技术效应。本公开的另一个方面是使用本公开的微生物的方法。使用本公开的微生物例如转基因植物细胞的方法包括：(i)通过将重组DNA整合进细胞的基因组且然后用该细胞衍生具有相同的异源DNA的额外细胞的方法；(ii)使用现代微生物技术培养包含重组DNA的细胞的方法；(iii)产生并纯化来自培养细胞的内源或重组的碳水化合物、脂质、核酸、酶或蛋白质产品的方法；以及(iv)使用现代植物组织培养技术和转基因植物细胞来产生转基因植物或转基因植物组织培养物的方法。
如本文所使用，“后代”包括包含源自祖先植物的事件DNA和/或具有被提供为SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的序列中至少一个的多核苷酸的任何植物、种子、植物细胞和/或可再生植物部分。植物、后代和种子对于MON87403事件DNA而言可以是纯合或杂合的。后代可以由包含事件MON87403的植物产生的种子和/或用包含事件MON87403的植物的花粉或胚珠授粉的植物产生的种子生长而成。
后代植物可以自花授粉(也称为“自交”)，以产生植物的纯育种系，即对于MON87403事件DNA而言纯合的植物。或者，后代植物可以异型杂交，即，与另一种植物繁殖，以产生变种或杂交种子或植物。其它植物可以是转基因的或非转基因的。本公开的变种或杂交种子或植物因此可以通过使缺少事件MON87403的特异和独特的DNA的第一亲本与包含事件MON87403的第二亲本杂交生成包含事件MON87403的特异和独特的DNA来衍生。每个亲本可以是杂交种或近交/品种，只要杂交或育种产生本公开的植物或种子，即具有包含事件MON87403的特异和独特的DNA和/或SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的至少一个等位基因的种子。两种不同的转基因植物因此可以交配产生包含两个独立分隔、添加的转基因的杂交后代。例如，包含事件MON87403的具有增加的产量的植物可以与另一种转基因植物(例如耐受草甘膦的转基因植物)杂交，以产生具有两个转基因亲本的特性的植物。适当后代的自交可以产生对两个添加转基因而言都是纯合的植物。还预期了与亲本植物回交以及与非转基因植物异型杂交，以及无性繁殖。常用于不同性状和作物的其它育种方法的描述可以见于若干参考文献中的一个，例如Fehr，BreedingMethodsforCultivarDevelopment,WilcoxJ.编辑，AmericanSocietyofAgronomy,MadisonWI(1987)。可以通过人类干预来实现或促进一种植物与另一种植物的有性杂交，即异花授粉，例如：通过手工收集一种植物的花粉并使该花粉与第二种植物的花柱或柱头接触；通过人手和/或人类行为去除、破坏或覆盖植物的雄蕊或花药(例如，通过人工干预或通过施用化学杀雄剂)，以便防止自然的自花授粉以及为了受精而将发生异花授粉；通过人为将传粉昆虫放置在用于"定向授粉"的位置(例如，通过在果园或田间放置蜂房或通过将植物和传粉昆虫包罩在一起)；通过人为开放或去除花的部分以允许外来花粉在花柱或柱头上的布置或接触；通过植物的选择性布置(例如，故意将植物种植在传粉邻近区)；和/或通过施用化学物质以促成开花或促进(柱头对花粉)的感受能力。
在实施该方法中，可以通过人类干预来实现或促进一种植物与它本身的有性杂交(即自花授粉或自交)的步骤，例如：通过手工收集该植物的花粉并使该花粉与同一植物的花柱或柱头接触，然后任选地阻止该植物的进一步受精；通过人手和/或行为去除、破坏或覆盖其它附近植物的雄蕊或花药(例如，通过去雄或通过施用化学杀雄剂)，以便防止自然的异花授粉以及为了受精而将发生自花授粉；通过人为将传粉昆虫放置在用于"定向授粉"的位置(例如，通过将植物和传粉昆虫单独包罩在一起)；通过人为操作花或其部分以允许自花授粉；通过植物的选择性布置(例如，故意将植物种植在传粉邻近区以外)；和/或通过施用化学物质以促成开花或促进(柱头对花粉)的感受能力。
本公开提供了源自包含事件MON87403的植物的植物部分。如本文所使用，“植物部分”是指是由直接来自或源自包含事件MON87403的植物的材料组成的植物的任何部分。植物部分包括但不限于细胞、花粉、胚珠、仁、花、根或茎组织、纤维和叶子。植物部分可以是有活力的、无活力的、可再生的和/或不可再生的。
本公开提供了从包含事件MON87403的植物衍生的商业产品。如本文所使用，“商业产品”是指由源自包含事件MON87403的植物、种子、植物细胞或植物部分的材料组成的任何组合物或产品。商业产品可以出售给消费者，且可以是有活力的或无活力的。无活力的商业产品包括但不限于：无活力的种子和谷粒；加工的种子、种子部分和植物部分；脱水植物组织、冷冻的植物组织和加工的植物组织；被加工成供陆地动物和/或水生动物食用的动物饲料的种子和植物部分、油、膳食、面粉、薄片、糠、纤维、牛奶、奶酪、纸、奶油、酒和供人类食用的任何其它食物；以及生物质和燃料产品。有活力的商业产品包括但不限于种子和植物细胞。包含事件MON87403的植物因此可以用于制造通常从玉米获得的任何商业产品。从包含事件MON87403的植物衍生的任何这样的商业产品可以包含至少可检测量的对应于事件MON87403的特异且独特的DNA，且具体地说可以含有可检测量的多核苷酸，该多核苷酸具有SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的核苷酸序列。可以使用多核苷酸分子的任何标准检测方法，包括本文公开的检测方法。如果商业产品中存在任何可检测量的SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸，则该商业产品是本公开的范围之内。
因此，本公开的植物、后代、种子、植物细胞、植物部分(例如花粉、胚珠、仁、花、根或茎组织以及叶子)和商业产品可用于出于农业目的为了产生包含事件MON87403的种子和/或植物部分而使植物生长、出于植物育种和研究目的而产生包含事件MON87403的后代、利用微生物技术用于工业和研究应用以及出售给消费者等等。
本公开提供了用于生产具有增加的粮食产量的植物和包含事件MON87403的植物的方法。包含事件MON87403的植物是通过农杆菌(Agrobacterium)介导的转化方法，使用具有构建体pMON97046(表1和图3)的玉米近交系而产生。构建体pMON97046包含用于在玉米植物细胞中表达ATHB17蛋白质的植物表达盒。使转基因玉米细胞再生为完整玉米植物并从独立转化的转基因植物群体中选择展现出期望的分子特性(例如在单基因座处的转基因盒的单拷贝、转基因盒的完整性、缺乏构建体骨架序列以及未连接的草甘膦抗性筛选盒的丢失)的植物个体。此外，进行反向PCR和DNA序列分析来确定5'和3'插入物-植物基因组接合点，以确认插入物内的元件的组织(图1)，并确定玉米事件MON87403中的插入物的完整DNA序列(SEQIDNO:9)。另外，在田间条件下筛选和选择具有增加的产量的转基因植物。在其基因组中包含MON87403事件DNA的玉米植物是本公开的一个方面。
本公开的转基因植物的增加产量可以以许多方式来测量，包括测试重量、单株种子数、种子大小、种子重量、单位面积种子数(即，每英亩的种子或种子重量)、每英亩蒲式耳数、每英亩吨数或每公顷公斤数。在包含事件MON87403的植物中ATHB17基因的表达导致粮食产量增加。ATHB17基因在包含事件MON87403的植物中的表达还导致R1下的穗大小增加。
提供了用于产生具有增加的产量的包含转基因事件MON87403的植物的方法。在这些方法中使用的转基因植物就转基因而言可以是纯合的或杂合的。由这些方法产生的后代植物可以是变种或杂种植物；可以从由植物产生的种子生长而成和/或从由用来自包含事件MON87403的植物的花粉或胚珠授粉的植物产生的包含事件MON87403的种子生长而成；并且对于事件MON87403DNA而言可以是纯合的或杂合的。后代植物可以随后自花授粉以产生植物纯育种系(即，对于事件MON87403DNA而言为纯合的植物)，或者可以异型杂交，即：与另一种无关植物繁殖，以产生变种或杂交种子或植物。如本文所使用，术语“接合性”是指在植物的特定染色体位置(基因座)处的DNA的相似性。在本公开中，DNA专指转基因插入物连同接合序列(事件DNA)。如果连同接合序列的转基因插入物存在于染色体对的每个染色体上的相同位置上(2个等位基因)，则植物是纯合的。如果连同接合序列的转基因插入物仅存在于染色体对的一个染色体上(1个等位基因)，则植物被认为是杂合的。野生型植物就事件DNA而言为空。
具有增加的产量的植物可以通过以下方式产生：有性杂交包含事件MON87403的植物与另一种植物并由此产生种子，然后使其生长为后代植物，该包含事件MON87403的植物包含具有SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的核苷酸序列的多核苷酸。这些后代植物可以使用诊断方法进行分析，以选择包含事件MON87403DNA的后代植物或具有增加的产量的后代植物。所用的其它植物可以是或可以不是转基因的。所产生的后代植物和/或种子可以是变种或杂交种子。
具有增加的产量的植物可以通过以下方式产生：将包含事件MON87403的植物自交并由此产生种子，然后使其生长为后代植物，该包含事件MON87403的植物包含具有SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的核苷酸序列的多核苷酸。这些后代植物然后可以使用诊断方法进行分析，以选择包含事件MON87403DNA的后代植物。
这些方法所涵盖的以及通过使用这些方法产生的后代植物和种子与其它植物不同，例如因为这些后代植物和种子包含重组DNA且本身通过人类干预而产生；在包含本公开的转基因DNA的特定染色体位置含有至少一个等位基因；和/或包含可检测量的选自由以下组成的组的多核苷酸序列：SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸。种子可以从个体后代植物中选择，且只要该种子包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸，它就将在本公开的范围内。
可以评价本公开的植物、后代、种子、植物细胞、植物部分(例如花粉、胚珠、仁、花、根或茎组织以及叶子)和商业产品的DNA组成、基因表达和/或蛋白质表达。这种评价可以通过使用各种方法例如PCR、测序、北方印迹分析(Northernanalysis)、南方印迹分析(Southernanalysis)、西方印迹分析(Westernanalysis)、免疫沉淀和ELISA来进行或通过使用本文提供的检测方法和/或检测试剂盒进行。
提供了检测样品中特异于事件MON87403的组合物的存在的方法。一种方法由检测特异于且源自包含事件MON87403的细胞、组织、种子、植物或植物部分的DNA的存在组成。该方法提供了待与引物对接触的模板DNA样品，该引物对能够在经受适于扩增的条件后从事件MON87403DNA产生扩增子，特别是包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸或其互补物的扩增子。该扩增子是从源自事件MON87403的模板DNA分子产生，只要该模板DNA分子并入SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的特异且独特的核苷酸序列。根据用于产生扩增子所选定的聚合酶，扩增子可以是单链或双链DNA或RNA。该方法可用于检测在任何这样的扩增反应中产生的扩增子分子，并且确认该扩增子的序列内存在对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸或其互补物的核苷酸。在扩增子内检测到对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸或其互补物的核苷酸可以确定和/或诊断样品中存在事件MON87403特异性DNA和因此存在包含事件MON87403的生物材料或商业产品。
提供了另一种方法，用于检测由源自植物或植物部分的材料组成的样品中对应于SEQIDNO:7和SEQIDNO:8的DNA分子的存在。该方法由以下组成：(i)从植物或植物部分或从一组不同的植物获取DNA样品；(ii)使该DNA样品与包含如SEQIDNO:1或SEQIDNO:2中所陈述的核苷酸的DNA探针分子接触；(iii)允许探针和DNA样品在严格杂交条件下杂交；以及然后(iv)检测探针与靶DNA样品之间的杂交事件。检测到杂交组合物可诊断DNA样品中存在SEQIDNO:7或SEQIDNO:8，视具体情况而定。如果适当的阳性对照同步进行，则缺少杂交可另外判断样品中不存在转基因事件。或者，确定特定的植物或植物部分包含对应于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2或其互补物的序列中的一者或两者可以确定该植物或植物部分包含至少一个对应于事件MON87403的等位基因。
因此，可以通过任何熟知的核酸扩增和检测方法(例如聚合酶链反应(PCR)或另一种DNA扩增方法或使用核酸探针的DNA杂交)检测本公开的核酸分子的存在。例如，Taverniers等人(J.Agric.FoodChem.,53:3041-3052,2005)讨论了事件特异性PCR分析，其中展现了用于转基因玉米株系Bt11、Bt176和GA21以及用于油菜事件RT73的事件特异性追踪系统。在此研究中，事件特异性引物和探针是基于每个事件的基因组/转基因接合的序列而设计。转基因植物事件特异性DNA检测方法还已经描述在美国专利号6,893,826、6,825,400、6,740,488、6,733,974、6,689,880、6,900,014和6,818,807中。
提供了DNA检测试剂盒。其中一类试剂盒包含具有SEQIDNO:7、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的至少一种DNA分子，以作为专用于检测样品中源自转基因事件MON87403的DNA的存在的引物或探针。用该试剂盒检测的DNA分子包含如SEQIDNO:1、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸或SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸中所述的序列的连续核苷酸。或者，该试剂盒可以包含具有SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的至少一种DNA分子，以作为专用于检测样品中源自转基因事件MON87403的DNA的存在的引物或探针。用该试剂盒检测的DNA分子包含如SEQIDNO:2、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸中所述的连续核苷酸。本发明的试剂盒可以任选地包括说明书、用于增加该试剂盒的易用性的装置例如缓冲剂和试管等。
替代性试剂盒采用以下方法：其中使靶DNA样品与上文所述的引物对接触，然后进行足以产生包含SEQIDNO:1的至少19个连续核苷酸、SEQIDNO:2的至少18个连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸的扩增子的核酸扩增反应。检测到扩增子以及确定扩增子的序列内存在SEQIDNO:1的连续核苷酸、SEQIDNO:2的连续核苷酸、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸或其互补物可以诊断DNA样品中存在事件MON87403特异性DNA。
提供了足以用作DNA探针的DNA分子，该DNA探针可用于确定、检测或判断样品中存在或甚至不存在事件MON87403DNA的特异性和独特的DNA。该DNA分子含有SEQIDNO:1的连续核苷酸或其互补物、SEQIDNO:2的连续核苷酸或其互补物、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸或其互补物、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸或其互补物、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸或其互补物、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸或其互补物。
可以通过本领域已知的各种核酸扩增方法中的任一种(包括热和等温扩增方法)来完成核酸扩增。来自事件MON87403的异源DNA插入物、接合序列或侧翼序列的序列可以通过使用源自本文提供的序列的引物扩增这些序列，接着对扩增子或克隆的DNA进行标准DNA测序来验证。
可以通过多种技术来检测由这些方法产生的扩增子。一种这样的方法是遗传位分析(GeneticBitAnalysis)(Nikiforov等人，NucleicAcidRes.22:4167-4175,1994)，其中设计了与相邻的侧翼基因组DNA序列和插入DNA序列重叠的DNA寡核苷酸。将该寡核苷酸固定在微孔板的孔中。继感兴趣的区域的热扩增(对插入序列使用一个引物，且对相邻的侧翼基因组序列使用另一个引物)之后，可以将单链扩增子与固定的寡核苷酸杂交，并用作单碱基延伸反应的模板，该反应使用DNA聚合酶和对于预期的下一个碱基特异性的标记ddNTP。读数可以是荧光或基于ELISA的。检测到荧光或其它信号表明由于成功的扩增、杂交和单碱基延伸而存在插入/侧翼序列。
另一种方法是Winge(Innov.Pharma.Tech.00:18-24,2000)所描述的焦磷酸测序技术。在此方法中，设计与相邻的基因组DNA和插入DNA接合区重叠的寡核苷酸。将该寡核苷酸与来自感兴趣区域的单链扩增子杂交(对插入序列使用一个引物，且对侧翼基因组序列使用另一个引物)，并在DNA聚合酶、ATP、硫酸化酶、荧光素酶、腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase)、腺苷5'磷酰硫酸和荧光素的存在下孵育。单个地加入ddNTP，且掺入产生光信号，对该光信号进行测量。光信号表明由于成功的扩增、杂交以及单或多碱基延伸而存在转基因插入/侧翼序列。
如Chen等人(GenomeRes9:492-498,1999)所描述的荧光偏振是一种可用于检测扩增子的方法。使用此方法，设计了与基因组侧翼DNA和插入DNA接合区重叠的寡核苷酸。将该寡核苷酸与来自感兴趣区域的单链扩增子杂交(对插入DNA使用一个引物，且对侧翼基因组DNA使用另一个引物)，并在DNA聚合酶和荧光标记的ddNTP的存在下孵育。单碱基延伸导致ddNTP的掺入。可以使用荧光计以偏振的变化来测定掺入。偏振的改变表明由于成功的扩增、杂交和单碱基延伸而存在转基因插入/侧翼序列。
还可以根据制造商提供的说明书，利用(PEAppliedBiosystems,FosterCity,CA)来检测和/或量化DNA序列的存在。简单地说，设计与基因组侧翼DNA和插入DNA接合区重叠的FRET寡核苷酸探针。FRET探针和扩增引物(插入DNA序列使用一个引物，且侧翼基因组序列使用另一个引物)在热稳定聚合酶和dNTP的存在下循环。FRET探针的杂交导致荧光部分从FRET探针上的猝灭部分裂解和释放。荧光信号表明由于成功的扩增和杂交而存在侧翼/转基因插入序列。
如Tyangi等人(NatureBiotech.14:303-308,1996)所描述，已描述了分子信标用于序列检测。简单地说，设计与侧翼基因组DNA和插入DNA接合区重叠的FRET寡核苷酸探针。FRET探针的独特结构导致它含有保持荧光部分和猝灭部分紧密接近的二级结构。FRET探针和扩增引物(插入DNA序列使用一个引物，且侧翼基因组序列使用另一个引物)在热稳定聚合酶和dNTP的存在下循环。在成功扩增之后，FRET探针与靶序列的杂交导致探针二级结构的消除以及荧光和猝灭部分的空间分离，这导致荧光信号的产生。荧光信号表明由于成功的扩增和杂交而存在侧翼/转基因插入序列。
其它描述的方法例如微流体法(美国专利公开号2006/068398；美国专利号6,544,734)提供了用于分离和扩增DNA样品的方法和装置。光学染料被用来检测和测量特定DNA分子(WO/05017181)。构成用于检测DNA分子或结合特定的DNA分子的纳米珠的电子传感器的纳米管装置(WO/06024023)随后被检测到。
可以使用本文公开的组合物和DNA检测领域已知的方法开发DNA检测试剂盒。试剂盒可用于鉴定样品中的事件MON87403，且可以应用于繁育含有适当的事件DNA的植物的方法。试剂盒可以包含与SEQIDNO:1-6或其片段或互补物类似或互补的DNA引物或探针。
因此，本公开的试剂盒和检测方法尤其可用于鉴定事件MON87403、筛选包含事件MON87403的植物品种或杂交种、检测样品中源自事件MON87403的DNA的存在以及监测样品中存在和/或缺乏事件MON87403或包含事件MON87403的植物、植物部分或商业产品。
包括以下实施例以说明本公开的某些实施方案的实施例。本领域的技术人员应该理解，下列实施例中公开的技术代表本发明人已发现在本公开的实施中运用良好的方法，且因此可以被认为构成实施本公开的优选方式的实施例。然而，本领域的技术人员根据本公开内容应该理解，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以对公开的具体实施方案进行许多改变，并且仍然获得相同或类似的结果。
实施例
实施例1：使用pMON97046的玉米转化和事件选择
本实施例描述转基因玉米事件的转化和产生，以及事件MON87403的选择。
使用农杆菌介导转化法，用被称为pMON97046的质粒载体转化玉米细胞。该构建体包含如图3中所示的右边界、ATHB17表达盒、左边界和CP4表达盒，以及在细菌中复制和选择所必需的其它遗传元件。如SEQIDNO:9中所阐述的转基因插入物中的ATHB17盒包含源自拟南芥(Arabidopsisthaliana)的HB17编码区，其由CaMV35S增强子、水稻肌动蛋白1启动子、小麦叶绿素a/b结合蛋白前导子、水稻肌动蛋白1内含子和hsp173'聚腺苷酸化序列调控。ATHB17属于同源结构域亮氨酸拉链(HD-Zip)II类基因家族。CP4表达盒包含由水稻肌动蛋白启动子、前导子和内含子以及NOS3'聚腺苷酸化序列调控的CP4编码区。CP4表达盒被用作选择标记。表1是pMON97046中的遗传元件的概述。
表1.pMON97046中的遗传元件的概述
1B，边界
2P，启动子
3L，前导子
4I，内含子
5CS，编码序列
6T，转录终止序列
7TS，靶向序列8OR，复制起点
在用构建体pMON97046转化后，允许转化细胞在选择性培养基上生长和繁殖。使植物从存活细胞再生。共产生2687个独立的R0转化事件并针对插入物拷贝数和ATHB17与CP4盒的连接进行表征。将R1植物组织用于对插入物拷贝数、与CP4表达盒的连接和转化载体骨架的存在的进一步分子表征。筛选R3世代事件的拷贝数(一个基因座内的T-DNA的拷贝数)、插入盒的完整性、骨架序列的缺乏、插入物的基因组位置和ATHB17转基因转录物的表达。消除具有不期望的表型或分子特性(例如存在转基因的多个拷贝和/或插入物的分子复杂性、转化载体骨架序列的存在以及转基因插入基因内区域)的事件。此外，进行连接Southern分析以除去其中ATHB17表达盒与CP4选择标记盒连接的事件。在这些事件的基因组未鉴定到源自连接或未连接至完整盒的原始转化载体的额外元件。基于R0分析共有324个事件满足基本分子选择标准并将这些事件推进至R1世代。随后，74个事件被推进到R2世代，67个事件被推进到第1年田间试验，22事件被推进到R3世代，且15个事件被推进到第2年田间试验。图2示出了2009的年推进到田间试验的14个个别事件的比较数据。另外表明在整合MON87403T-DNA后发生了基因组DNA的155-nt的缺失。
实施例2：使用反向PCR分离侧翼序列以及通过测序鉴定侧翼序列
本实施例描述了针对事件MON87403使用反向PCR分离位于转基因DNA插入物侧翼的玉米基因组DNA序列，并且通过测序鉴定侧翼基因组序列。
使用反向PCR测定事件MON87403中的T-DNA插入的侧翼序列。使用本领域中已知的方法，利用来自包含事件MON87403的植物的基因组DNA进行PCR程序。引物位于农杆菌左边界序列内并且是SQ6164(SEQIDNO:19)和SQ13205(SEQIDNO:20)，它们以该顺序与SQ22459(SEQIDNO:23)和SQ22458(SEQIDNO:22)一起使用。在1％TAE琼脂糖凝胶上检测扩增子，并使用左边界引物SQ6165(SEQIDNO:21)对样品进行测序。遵循相同的程序用于分离右边界侧翼，其中使用引物SQ21173(SEQIDNO:24)和SQ22464(SEQIDNO:25)进行首轮PCR，引物SQ22460(SEQIDNO:26)和SQ22465(SEQIDNO:27)进行第二轮PCR以及引物SQ22461(SEQIDNO:28)和SQ22471(SEQIDNO:29)进行第三轮PCR。
对通过对于玉米事件MON87403的左和右边界反应的反向PCR程序得到的扩增子进行测序。扩增子序列的随后比对产生5'至T-DNA的右边界的约531bp的侧翼序列以及3'至T-DNA的左边界序列的277bp的侧翼序列。
使通过反向PCR获得的短侧翼序列(RB和LB侧翼)经受BLAST分析。使匹配的基因组序列沿玉米基因组电子延伸至超过1kb，以获得实质上延伸的侧翼。实质上延伸的侧翼序列然后被用于设计用于基因组PCR的引物和确认实际基因组序列。
侧翼序列和野生型序列被用来设计用于端点分析的引物，该分析用于如实施例3中描述的那样来鉴定事件和确定接合性。
实施例3：事件特异性端点和接合性分析
本实施例描述了用于鉴定样品中的事件MON87403DNA的事件特异性的端点热扩增方法。
可用于事件MON87403特异性的端点方法的条件的实例描述在表2和表3中。在端点分析中使用的DNA引物是引物SQ23846(SEQIDNO:11)和SQ4603(SEQIDNO:12)，且6-FAMTM标记的寡核苷酸探针是PB10644(SEQIDNO:13)。6FAMTM是连接在DNA探针上的AppliedBiosystems(FosterCity,CA)的荧光染料产品。就MGB(小沟结合)探针而言，TaqDNA聚合酶的5'外切核酸酶活性从5'端使探针在荧光团与猝灭剂之间裂解。当与靶DNA链杂交时，猝灭剂和荧光团充分分离以产生荧光信号。
引物SQ23846(SEQIDNO:11)和SQ4603(SEQIDNO:12)当如所描述与探针PB10644(SEQIDNO:13)一起使用时产生诊断事件MON87403DNA的扩增子。该分析包括来自已知包含事件MON87403DNA的玉米的阳性对照、来自野生型玉米或不包含事件87403DNA的玉米的阴性对照以及不包含模板DNA的阴性对照。
优化这些分析以用于AppliedBiosystemsGeneAmpPCR系统9700、ABI9800快速热循环仪和MJOpticon。可以使用本领域技术人员已知的其它方法和装置来产生鉴定事件MON87403DNA的扩增子。
表2.玉米MON87403事件特异性的接合性端点PCR条件
表3.端点接合性热循环仪条件
以下实施例描述了被开发来确定样品中事件MON87403的接合性的事件特异性的端点热扩增方法。接合性分析可用于确定包含事件的植物就事件DNA而言是纯合的、杂合的还是空的。如果转基因DNA存在于染色体对的每个染色体上的相同位置上，则包含事件的植物就事件DNA而言是纯合的。如果转基因DNA仅存在于染色体对的一个染色体上，则包含事件的植物就事件DNA而言是杂合的。如果植物不包含事件DNA，则该植物就事件DNA而言为空；也就是说，该植物就基因座而言为野生型。在该分析中使用一组引物(SEQIDNO:11和12，以及SEQIDNO:14和15)、6FAMTM标记的探针(SEQIDNO:13)和VICTM标记的探针(SEQIDNO:16)。这些引物具有诊断性。在这个实施例中，引物SEQIDNO:11和12以及6FAMTM标记的寡核苷酸探针SEQIDNO:13产生由从探针SEQIDNO:13释放的荧光信号揭示的DNA扩增子，其可用于诊断事件MON87403DNA，这表明基因组DNA中存在插入转基因DNA的至少一个拷贝。引物SEQIDNO:14和15以及VICTM标记的寡核苷酸探针SEQIDNO:16产生由从探针SEQIDNO:16释放的荧光信号揭示的扩增子，其可用于诊断野生型等位基因，这表明基因组DNA中不存在插入转基因DNA的拷贝。当在PCR中将该引物和探针与从植物中提取的DNA混合在一起时，只从6FAMTM标记的寡核苷酸探针(SEQIDNO:13)释放荧光信号指示和诊断植物就事件MON87403而言是纯合的。当在PCR中将该引物和探针与从植物中提取的DNA混合在一起时，从6FAMTM标记的寡核苷酸探针(SEQIDNO:13)和VICTM标记的寡核苷酸探针(SEQIDNO:16)两者释放荧光信号指示和诊断植物就事件MON87403而言是杂合的。当在PCR中将该引物和探针与从植物中提取的DNA混合在一起时，只从VICTM标记的寡核苷酸探针(SEQIDNO:16)释放荧光信号指示和诊断植物就事件MON87403而言为空，即野生型。分析还包括来自含有事件MON87403DNA的玉米的阳性对照、来自野生型玉米或不包含事件87403DNA的玉米的阴性对照以及不包含模板DNA的阴性对照。
表4.用于端点和接合性分析的引物和探针组合的实例
实施例4：事件MON87403的检测
本实施例描述如何可以鉴定含有MON87403玉米的任何育种事件的后代内的MON87403事件。
使用事件DNA引物对来产生诊断玉米事件MON87403的扩增子。诊断MON87403的扩增子包含至少一个接合序列，在本文中被提供为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸或其互补物(分别如图1中所示的[A]或[B])。
产生诊断MON87403的扩增子的事件引物对包括使用侧翼序列和整合的转基因DNA序列设计的引物对。为了获得其中发现有SEQIDNO:1的至少19个核苷酸的诊断性扩增子，将设计基于SEQIDNO:10的5’侧翼序列的碱基1至1335的正向引物和基于插入表达盒DNA序列SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的1356至4477位的反向引物，其中该引物具有足够长度的连续核苷酸以特异性地与SEQIDNO:10在接合序列的任一侧上杂交。为了获得其中发现有SEQIDNO:2的至少18个核苷酸的诊断性扩增子，将设计基于插入表达盒DNA序列SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的1346至4467位的正向引物和基于SEQIDNO:10的3’侧翼序列的碱基4488至5744的反向引物，其中所述引物具有足够长度的连续核苷酸以特异性地与SEQIDNO:10在接合序列的任一侧上杂交。为了实践目的，应该设计产生大小范围有限的(例如100至1000个碱基)的扩增子的引物。大小较小(较短的核苷酸长度)的扩增子一般可以在PCR反应中更可靠地产生，允许更短的循环时间，并且可以容易地在琼脂糖凝胶上分离和显现或适用于端点样分析中。另外，使用引物对产生的扩增子可以被克隆到载体中，增殖，分离并测序，或可以利用本领域中确立的方法直接测序。源自来自SEQIDNO:10的侧翼序列和整合转基因DNA序列的组合的可用于DNA扩增方法以产生可诊断MON87403、包含MON87403的植物或其后代的扩增子的任何引物对是本发明的一个方面。可用于DNA扩增方法以产生可诊断MON87403、包含MON87403的植物或其后代的扩增子的包含足够长度的连续核苷酸(例如SEQIDNO:10的至少11个连续核苷酸或其互补物)的任何单个分离的DNA引物分子是本公开的一个方面。在另一个实施方案中，本公开提供了包含来自SEQIDNO:7或8的侧翼序列和整合转基因DNA序列的组合的可诊断MON87403的分离DNA引物分子。
表2和表3中说明了用于这种分析的扩增条件的实例。然而，对于这些方法的任何修改或使用产生可判断MON87403的扩增子的与SEQIDNO:7、8和10同源或互补的DNA引物都在本公开的范围内。诊断性扩增子包含与至少一个转基因/基因组接合DNA(SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:4的至少31个连续核苷酸、SEQIDNO:5的至少51个连续核苷酸、或SEQIDNO:6的至少51个连续核苷酸或其互补物)或其实质部分同源或互补的DNA分子。
对样品中的事件MON87403DNA的分析应该包括来自事件MON87403的阳性对照、来自不包含事件MON87403的玉米植物的阴性对照(例如但不限于野生型对照)以及不包含玉米基因组DNA的阴性对照。扩增内源性玉米DNA分子的引物对将用作DNA扩增条件的内部对照。另外的引物序列可以由DNA扩增方法领域的技术人员从SEQIDNO:7、8和10中选择，并且被选择用于通过表2和表3中所示的方法产生扩增子的条件可以是不同的，但产生可诊断事件MON87403DNA的扩增子。使用这些DNA引物序列并对表2和表3的方法进行修改是在本公开的范围内。由源自SEQIDNO:7、8和10的至少一个DNA引物序列产生的可诊断MON87403的扩增子是本公开的一个方面。
包含源自SEQIDNO:7、8和10的至少一个DNA引物并且当在DNA扩增方法中使用时产生针对MON87403、包含MON87403的植物或其后代的诊断性扩增子的DNA检测试剂盒是本公开的一个方面。其中当在DNA扩增方法中测试时其基因组DNA产生可诊断MON87403的扩增子的玉米植物或种子是本公开的一个方面。对MON87403扩增子的分析可以通过使用AppliedBiosystemsGeneAmpPCR系统9700、ABI9800快速热循环仪和MJOpticon、StratageneRoboCycler、MJEngine、Perkin-Elmer9700或EppendorfMastercyclerGradient热循环仪或可用于产生诊断MON87403的扩增子的任何其它扩增系统来进行。
以上公开的并在权利要求书中叙述的包含事件MON87403的种子的代表性样品已经根据布达佩斯条约保藏于ATCC。保藏日期为2013年3月1日，且ATCC保藏号为PTA-13584。在颁发专利后，对保藏物的所有限制将被删除，并且保藏物意在满足37C.F.R.§§1.801-1.809的所有要求。该保藏物将在该保藏机构保存30年或最后请求后的5年或专利的有效期(以较长者为准)，并且在此期间将根据需要进行更换。
实施例5：包含MON87403事件的植物表现出增加的产量
在最佳的生产管理实践和最大的杂草和害虫防治下，在多个地点以多重测试方式种植包含MON87403事件的植物数年。图4中的数据显示：与适当的对照植物相比，包含MON87403事件的植物在所有年份(除了有一年以外)表现出跨地点的平均产量优势。
实施例6：包含MON87403事件的植物表现出增加的R1穗重
为了研究ATHB17基因的表达对R1穗重的影响，从在美国主要玉米产区内进行的田间试验收集数据。将包含MON87403事件的植物与2012年美国13地点的近等基因常规对照进行比较，以比较R1阶段的穗重。以随机完全区组设计种植实验物，每个位置重复4次。从13个位置收集数据(N＝51)。通过从植物分离主穗对植物进行采样。在称重之前，在送风型烘箱中将穗在80℃下干燥至恒重。在组合位点分析中，相比于常规对照，观察到包含MON87403事件的植物的R1穗重具有统计显著性增加(表5)。
表5：来自美国田间试验的包含MON87403事件的植物和常规对照的R1穗重的组合位点分析
虽然已经说明和描述了本公开的原理，但本领域技术人员应当明白，可以在不背离这些原理的情况下在配置和细节方面对本公开进行修改。我们要求保护在所附权利要求书的精神和范围内的所有修改。

Claims (30)

1.一种重组DNA分子，其包含选自由SEQIDNO:1-8、SEQIDNO:10和其完全互补物组成的组的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的重组DNA分子，其中所述重组DNA分子是由插入的异源核酸分子和玉米植物、植物细胞或种子的基因组DNA的接合形成。
3.根据权利要求1所述的重组DNA分子，其中所述DNA分子来自包含事件MON87403的转基因玉米植物，其为包含所述事件的种子的代表性样品且已以ATCC保藏号PTA-13584保藏。
4.根据权利要求1所述的重组DNA分子，其中所述DNA分子是诊断来自转基因玉米事件MON87403的DNA的存在的扩增子。
5.根据权利要求1所述的重组DNA分子，其中所述重组DNA分子是在玉米植物、植物细胞、种子、后代植物、植物部分或商业产品中。
6.一种DNA探针，其包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA探针，所述DNA探针在严格杂交条件下与包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交，并且在严格杂交条件下不与不含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交。
7.一种DNA分子对，其包含第一DNA分子和不同于所述第一DNA分子的第二DNA分子，其中所述第一DNA分子和第二DNA分子各自包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA引物，当与来自事件MON87403的DNA在扩增反应中一起使用时，产生用于诊断样品中的转基因玉米事件MON87403DNA的扩增子。
8.一种检测样品中来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子的存在的方法，所述方法包括：
(a)使所述样品与根据权利要求6所述的DNA探针接触；
(b)使所述样品和所述DNA探针接受严格杂交条件；和
(c)检测所述DNA探针与所述样品中的DNA分子的杂交，其中所述DNA探针与所述DNA分子的杂交表明所述样品中存在来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子。
9.一种检测样品中来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子的存在的方法，所述方法包括：
(a)使所述样品与根据权利要求7所述的DNA分子对接触；
(b)进行足以产生包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10的连续核苷酸组成的组的序列的DNA扩增子的扩增反应；和
(c)检测所述反应中的所述DNA扩增子的存在，其中所述反应中存在所述DNA扩增子表明所述样品中存在来自包含事件MON87403的转基因玉米植物的DNA分子。
10.一种DNA检测试剂盒，其包括：
(a)DNA分子对，其包含第一DNA分子和不同于所述第一DNA分子的第二DNA分子，其中所述第一DNA分子和第二DNA分子各自包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA引物，当与来自事件MON87403的DNA在扩增反应中一起使用时，产生用于诊断转基因玉米事件MON87403DNA的扩增子；和
(b)DNA探针，其包含具有SEQIDNO:10的足够长度的连续核苷酸的核苷酸序列或其完全互补物作为DNA探针，所述DNA探针在严格杂交条件下与包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交，并且在严格杂交条件下不与不含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10组成的组的核苷酸序列的DNA分子杂交。
11.一种转基因玉米植物、种子、细胞或其植物部分，其包含根据权利要求1所述的重组DNA分子。
12.根据权利要求11所述的转基因玉米植物、种子、细胞或其植物部分，其中所述植物、种子、细胞或其植物部分具有增加的产量。
13.根据权利要求11所述的转基因玉米植物、种子、细胞或其植物部分，其基因组当在DNA扩增方法中进行测试时产生包含选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10的连续核苷酸组成的组的DNA分子的扩增子。
14.一种包含事件MON87403的玉米植物或种子，其为包含所述事件的种子的代表性样品且已以ATCC保藏号PTA-13584保藏。
15.根据权利要求14所述的玉米植物或种子，其中所述玉米植物或种子是具有至少一个包含事件MON87403的亲本的杂交种。
16.一种无生命植物材料，其包含根据权利要求1所述的重组DNA分子。
17.一种微生物，其包含根据权利要求1所述的重组DNA分子。
18.根据权利要求17所述的微生物，其中所述微生物是植物细胞。
19.一种商业产品，其由包含事件MON87403且包含根据权利要求1所述的重组DNA分子的转基因玉米植物产生，其中在源自所述商业产品的样品中检测到所述核苷酸序列可确定所述商业产品是由所述包含事件MON87403的转基因玉米植物产生。
20.根据权利要求19所述的商业产品，其中所述商业产品选自由完整或加工的种子、动物饲料、油、膳食、面粉、薄片、糠、生物质和燃料产品组成的组。
21.一种生产根据权利要求19所述的商业产品的方法，所述方法包括：
(a)获得包含转基因玉米事件MON87403的玉米植物或其部分；和
(b)从所述玉米植物或其部分生产玉米商业产品。
22.一种提高作物的产量的方法，其包括：
(a)种植包含事件MON87403的作物植物或种子；和
(b)使所述作物植物或种子生长。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述作物植物或种子是玉米植物或玉米种子。
24.一种产生具有增加的产量的玉米植物的方法，其包括：
(a)将包含事件MON87403的转基因玉米植物与第二玉米植物有性杂交，从而产生种子，所述转基因玉米植物包含含有选自由SEQIDNO:1-8、SEQIDNO:10的连续核苷酸和其完全互补物组成的组的核苷酸序列的核酸分子；
(b)收集由所述杂交产生的所述种子；
(c)使所述种子生长以产生多个后代植物；和
(d)选择具有增加的产量的后代植物。
25.一种产生具有增加的产量的玉米植物的方法，其包括：
(a)将包含事件MON87403的转基因玉米植物自交，从而产生种子，所述转基因玉米植物包含含有选自由SEQIDNO:1-8和SEQIDNO:10的连续核苷酸组成的组的核苷酸序列的核酸分子；
(b)收集由所述自交产生的所述种子；
(c)使所述种子生长以产生多个后代植物；和
(d)选择具有增加的产量的后代植物。
26.一种产生杂交玉米种子的方法，其包括：
(a)在区域内种植包含事件MON87403的转基因玉米种子；
(b)由所述种子生长玉米植物；
(c)用来自第二亲本玉米植物的花粉对所述玉米植物授粉；和
(d)从所述玉米植物收获种子，其中所述种子是由包含事件MON87403的转基因玉米植物与第二亲本植物杂交产生的杂交玉米种子。
27.根据权利要求26所述的方法，其进一步包括在所述区域内种植第二亲本玉米植物种子以及由所述第二亲本玉米植物生长玉米植物。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述第二个亲本玉米植物具有增加的产量。
29.一种确定样品中包含玉米事件MON87403DNA的玉米植物基因组的接合性的方法，其包括：
(a)将所述样品与第一对DNA分子和第二对不同的DNA分子接触，所述DNA分子：
(i)当与玉米事件MON87403DNA在核酸扩增反应中一起使用时，产生用于诊断玉米事件MON87403的第一扩增子；和
(ii)当与非MON87403DNA的玉米基因组DNA在核酸扩增反应中一起使用时，产生用于诊断非事件MON87403DNA的玉米野生型基因组DNA的第二扩增子；
(b)进行核酸扩增反应；以及
(c)检测所述第一扩增子和所述第二扩增子；
其中所述第一扩增子和第二扩增子的存在诊断所述样品中的基因组是杂合的，且其中仅存在所述第一扩增子诊断基因组对于所述样品中的玉米事件MON87403而言为纯合的。
30.根据权利要求29所述的方法，其中第一组DNA分子包含SEQIDNO:11和SEQIDNO:12，且第二组DNA分子包含SEQIDNO:14和SEQIDNO:15。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107142322A (zh) * 2017-06-22 2017-09-08 中华人民共和国黄埔出入境检验检疫局 转基因玉米mon87403品系特异性实时荧光pcr检测引物、探针、方法和试剂盒
CN116064888A (zh) * 2022-07-14 2023-05-05 中国检验检疫科学研究院 用于转基因玉米Mon87403品系定量检测的引物、探针、试剂盒及方法

Families Citing this family (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2594228C (en) 2004-12-21 2016-11-01 Monsanto Technology Llc Recombinant dna for expression of proteins for imparting enhanced agronomic traits to transgenic plants
CN105611828A (zh) 2013-10-09 2016-05-25 孟山都技术公司 干扰基因表达的hd-zip转录因子抑制以产生具有增强的性状的植物
BR112016007566A2 (pt) 2013-10-09 2017-09-12 Monsanto Technology Llc evento de milho transgênico mon87403 e métodos para a detecção do mesmo
US10392626B1 (en) 2013-10-09 2019-08-27 Monsanto Technology Llc Plant regulatory elements and uses thereof
UA126550C2 (uk) 2015-09-11 2022-11-02 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти, що кодує гфпд, і спосіб її застосування
WO2018114393A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
US11425910B2 (en) 2017-02-21 2022-08-30 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
EP3606912A1 (en) 2017-04-07 2020-02-12 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018188962A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018202491A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
US20210084900A1 (en) 2017-05-04 2021-03-25 Basf Se Substituted 5-(haloalkyl)-5-hydroxy-isoxazoles for Combating Phytopathogenic Fungi
WO2018219797A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018234139A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se 2 - [[5- (TRIFLUOROMETHYL) -1,2,4-OXADIAZOL-3-YL] ARYLOXY] (THIO) ACETAMIDES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
WO2019025250A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI
WO2019038042A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
US11076596B2 (en) 2017-09-18 2021-08-03 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
EP3713936B1 (en) 2017-11-23 2021-10-20 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
WO2019145221A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 BASF Agro B.V. New agrochemical formulations
WO2019154665A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
CN111683933A (zh) 2018-02-07 2020-09-18 巴斯夫欧洲公司 新型吡啶羧酰胺类
US11917995B2 (en) 2018-03-01 2024-03-05 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions of mefentrifluconazole
EP3781693A4 (en) * 2018-04-18 2022-01-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. GENES, CONSTRUCTIONS AND ACTIVITY OF CORN DP-202216-6
WO2019219464A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
AU2019314261B2 (en) 2018-07-30 2023-03-30 Monsanto Technology Llc Corn transgenic event MON 95379 and methods for detection and uses thereof
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
EP3870581B1 (en) 2018-10-23 2023-06-14 Basf Se Tricyclic pesticidal compounds
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3670501A1 (en) 2018-12-17 2020-06-24 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
RS64357B1 (sr) 2019-01-11 2023-08-31 Basf Se Kristalni oblici 1-(1,2-dimetilpropil)-n-etil-5-metil-n-piridazin-4-il-pirazol-4-karboksamida
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
BR112021019416A2 (pt) 2019-05-29 2021-12-07 Basf Se Compostos, composição, métodos de proteção de safras e de combate, controle, prevenção ou proteção contra infestações, método não terapêutico de tratamento de animais infestados, semente e uso
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2020244968A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Fungicidal n-(pyrid-3-yl)carboxamides
WO2020244969A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Pyridine derivatives and their use as fungicides
WO2020244970A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se New carbocyclic pyridine carboxamides
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
CN110563827B (zh) * 2019-09-27 2021-07-06 中国农业科学院作物科学研究所 与玉米籽粒产量相关的蛋白质及其编码基因
WO2021063736A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se Bicyclic pyridine derivatives
WO2021063735A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se New bicyclic pyridine derivatives
EP3903581A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3903584A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv
CN115443267A (zh) 2020-04-28 2022-12-06 巴斯夫欧洲公司 杀害虫化合物
EP3903583A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2021249800A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
CN112301146A (zh) * 2020-10-13 2021-02-02 中国农业科学院生物技术研究所 转基因水稻b2a68-1的rpa检测引物与探针组合、试剂盒及检测方法
WO2022089969A1 (en) 2020-10-27 2022-05-05 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022090071A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
KR20230121790A (ko) 2020-12-14 2023-08-21 바스프 에스이 술폭시민 살충제
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
BR112023022818A2 (pt) 2021-05-03 2024-01-16 Basf Se Líquido de pulverização, mistura de aditivo, kit de pelo menos duas partes, método para controlar fungos fitopatogênicos ou bactérias fitopatogênicas, e, usos de uma mistura de aditivo, de um líquido de pulverização e de um kit de pelo menos duas partes
EP4091451A1 (en) 2021-05-17 2022-11-23 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
BR112023023989A2 (pt) 2021-05-18 2024-01-30 Basf Se Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente
AU2022278417A1 (en) 2021-05-18 2023-11-30 Basf Se New substituted pyridines as fungicides
IL308529A (en) 2021-05-18 2024-01-01 Basf Se New converted pyridines as fungicides
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
IL310497A (en) 2021-08-02 2024-03-01 Basf Se (3-quinolyl)-quinazoline
CA3227665A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Wassilios Grammenos (3-pirydyl)-quinazoline
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
CN118715211A (zh) 2022-02-17 2024-09-27 巴斯夫欧洲公司 杀有害生物活性氨硫脲化合物
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
EP4565581A1 (en) 2022-08-02 2025-06-11 Basf Se Pyrazolo pesticidal compounds
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
WO2024104822A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
CN120202204A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 巴斯夫欧洲公司 新型取代的四氢苯并氧氮杂䓬
CN120202196A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 巴斯夫欧洲公司 作为杀真菌剂的取代的苯并二氮杂䓬类
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
WO2024194038A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi
EP4455137A1 (en) 2023-04-24 2024-10-30 Basf Se Pyrimidine compounds for the control of invertebrate pests
WO2024223034A1 (en) 2023-04-26 2024-10-31 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xvi
EP4467535A1 (en) 2023-05-25 2024-11-27 Basf Se Lactam pesticidal compounds
WO2025008226A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Basf Se Substituted quinolyl/quinoxalyl dihydropyrrolotriazine compounds for combatting phyto-pathogenic fungi
WO2025008227A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazinyl dihydropyrrolotriazine compounds for combatting phytopath-ogenic fungi
EP4488270A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488269A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488273A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
WO2025031843A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Basf Se New substituted benzoxazine picolinonitrile compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025031842A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Basf Se New substituted benzoxazepine picolinonitrile compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025068226A2 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur and selected terpenes
WO2025078183A1 (en) 2023-10-09 2025-04-17 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted quinazolyl quinolines
WO2025078181A1 (en) 2023-10-09 2025-04-17 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted pyridines
WO2025131902A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur, selected terpenes and phosphites.
EP4574819A1 (en) 2023-12-22 2025-06-25 Basf Se Diazinone compounds for the control of invertebrate pests

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1933723A (zh) * 2003-12-15 2007-03-21 孟山都技术有限公司 玉米植株mon88017和组合物以及检测它们的方法

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7705215B1 (en) 1990-04-17 2010-04-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US6777589B1 (en) 1990-01-22 2004-08-17 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5455166A (en) 1991-01-31 1995-10-03 Becton, Dickinson And Company Strand displacement amplification
US5714320A (en) 1993-04-15 1998-02-03 University Of Rochester Rolling circle synthesis of oligonucleotides and amplification of select randomized circular oligonucleotides
US5470723A (en) 1993-05-05 1995-11-28 Becton, Dickinson And Company Detection of mycobacteria by multiplex nucleic acid amplification
US6235502B1 (en) 1998-09-18 2001-05-22 Molecular Staging Inc. Methods for selectively isolating DNA using rolling circle amplification
US20120137382A1 (en) 1998-09-22 2012-05-31 Mendel Biotechnology, Inc. Stress tolerance in plants
US7238860B2 (en) 2001-04-18 2007-07-03 Mendel Biotechnology, Inc. Yield-related polynucleotides and polypeptides in plants
US7960612B2 (en) * 1998-09-22 2011-06-14 Mendel Biotechnology, Inc. Plant quality with various promoters
US7511190B2 (en) 1999-11-17 2009-03-31 Mendel Biotechnology, Inc. Polynucleotides and polypeptides in plants
US20030121070A1 (en) 2000-08-22 2003-06-26 Luc Adam Genes for modifying plant traits IV
US7956242B2 (en) * 1998-09-22 2011-06-07 Mendel Biotechnology, Inc. Plant quality traits
US6572830B1 (en) 1998-10-09 2003-06-03 Motorola, Inc. Integrated multilayered microfludic devices and methods for making the same
US6196636B1 (en) 1999-03-22 2001-03-06 Larry J. McSweeney Cutting bit insert configured in a polygonal pyramid shape and having a ring mounted in surrounding relationship with the insert
US20110138499A1 (en) 1999-03-23 2011-06-09 Mendel Biotechnology, Inc. Plant quality traits
US9447425B2 (en) 2000-11-16 2016-09-20 Mendel Biotechnology, Inc. Transcription factor sequences for conferring advantageous properties to plants
US20090087878A9 (en) 1999-05-06 2009-04-02 La Rosa Thomas J Nucleic acid molecules associated with plants
US20080229439A1 (en) 1999-05-06 2008-09-18 La Rosa Thomas J Nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription in plants and uses thereof for plant improvement
US7365185B2 (en) * 2000-07-19 2008-04-29 Monsanto Technology Llc Genomic plant sequences and uses thereof
US6509516B1 (en) 1999-10-29 2003-01-21 Plant Genetic Systems N.V. Male-sterile brassica plants and methods for producing same
WO2001045492A2 (en) 1999-12-22 2001-06-28 Basf Plant Science Gmbh Protein kinase stress-related proteins and methods of use in plants
BRPI0100752B1 (pt) 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
CA2420555C (en) 2000-08-24 2012-10-23 Jeffrey F. Harper Stress-regulated genes of plants, transgenic plants containing same, and methods of use
WO2002027004A2 (en) 2000-09-29 2002-04-04 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant wheat plant 33391 and compositions and methods for detection thereof
USH2191H1 (en) * 2000-10-24 2007-06-05 Snp Consortium Identification and mapping of single nucleotide polymorphisms in the human genome
AU1536302A (en) 2000-10-25 2002-05-06 Monsanto Technology Llc Cotton event pv-ghgt07(1445) and compositions and methods for detection thereof
US20030024005A1 (en) 2000-11-17 2003-01-30 Hillyard Jeanna R. Cotton event PV-GHBK04 (757) and compositions and methods for detection thereof
US6733974B1 (en) 2000-12-01 2004-05-11 Monsanto Technology, Llc Methods and compositions for detection of specific genetic constructs in plant transformation events
EP1402042A2 (en) 2001-06-22 2004-03-31 Syngenta Participations AG Abiotic stress responsive polynucleotides and polypeptides
US6818807B2 (en) 2001-08-06 2004-11-16 Bayer Bioscience N.V. Herbicide tolerant cotton plants having event EE-GH1
CA2456972C (en) 2001-08-09 2013-04-16 Mendel Biotechnology, Inc. Stress-related polynucleotides and polypeptides in plants
US20040016025A1 (en) 2001-09-26 2004-01-22 Paul Budworth Rice promoters for regulation of plant expression
US20040010815A1 (en) 2001-09-26 2004-01-15 Lange B. Markus Identification and characterization of plant genes
US8426678B2 (en) 2002-09-18 2013-04-23 Mendel Biotechnology, Inc. Polynucleotides and polypeptides in plants
EP1499738B1 (en) 2002-02-21 2008-07-09 ASM Scientific, Inc. Recombinase polymerase amplification
DE60324810D1 (de) 2002-09-20 2009-01-02 New England Biolabs Inc HELICASE-ABHuNGIGE AMPLIFIKATION VON NUKLEINSUREN
US20040216190A1 (en) 2003-04-28 2004-10-28 Kovalic David K. Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement
AU2003237161B2 (en) 2003-05-02 2010-09-16 Bioceres SA Transcription factor gene induced by water deficit conditions and abscisic acid from helianthus annuus, promoter and transgenic plants
EP1631677B1 (en) 2003-05-20 2010-11-17 Investigen, Inc. System for detecting polynucleotides
US20060150283A1 (en) 2004-02-13 2006-07-06 Nickolai Alexandrov Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby
US20070054278A1 (en) * 2003-11-18 2007-03-08 Applera Corporation Polymorphisms in nucleic acid molecules encoding human enzyme proteins, methods of detection and uses thereof
US7371848B2 (en) * 2004-01-20 2008-05-13 Monsanto Technology Llc Chimeric promoters comprising a caulimovirus promoter enhancer for use in plants
US7629444B1 (en) * 2004-06-15 2009-12-08 Monsanto Technology Llc Nucleotide and amino acid sequences from Xenorhabdus bovienii strain Xs85831 and uses thereof
EP1913011B1 (en) 2004-08-04 2016-11-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase
WO2006024023A2 (en) 2004-08-24 2006-03-02 Nanomix, Inc. Nanotube sensor devices for dna detection
US20060068398A1 (en) 2004-09-24 2006-03-30 Cepheid Universal and target specific reagent beads for nucleic acid amplification
US8481306B2 (en) * 2004-12-09 2013-07-09 Monsanto Technology Llc Methods for ligation independent cloning of DNA
CA2594228C (en) 2004-12-21 2016-11-01 Monsanto Technology Llc Recombinant dna for expression of proteins for imparting enhanced agronomic traits to transgenic plants
WO2007023190A2 (en) 2005-08-26 2007-03-01 Vib Vzw Genes involved in asymmetric cell division
US8853492B2 (en) 2005-11-07 2014-10-07 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
EP2543732A1 (en) 2006-08-02 2013-01-09 CropDesign N.V. Plants transformed with a nucleic acid encoding chloroplastic fructose-1,6-bisphosphatase having increased yield, and a method for making the same
US20110252501A1 (en) * 2006-08-17 2011-10-13 Monsanto Technology Llc Transgenic plants with enhanced agronomic traits
CN100999549B (zh) 2006-12-30 2010-12-08 中国科学技术大学 一种植物耐逆相关蛋白及其编码基因与应用
US20100242140A1 (en) 2007-10-19 2010-09-23 Sergiy Lopato Modulation Of Plant Cell Wall Deposition
CL2009000440A1 (es) * 2008-02-29 2010-11-12 Monsanto Technology Llc Polinucleotidos que comprende un promotor de actina de arroz truncado ligado operativamente al gen cspb, cromosoma de maiz que comprende dicho policleotido, procedimiemto para la generacion de especies vegetales resisentes a la sequia, y alimento basado en semillas de dichas especies vegetales.
US20120017292A1 (en) 2009-01-16 2012-01-19 Kovalic David K Isolated novel nucleic acid and protein molecules from corn and methods of using those molecules to generate transgene plants with enhanced agronomic traits
US20100218278A1 (en) * 2009-02-24 2010-08-26 Syngenta Participations Ag Method for improved stress tolerance
CN102724865A (zh) 2009-08-25 2012-10-10 目标栽培公司 修饰的编码植物中生长和/或发育相关蛋白的转基因
US20130145493A1 (en) 2010-01-12 2013-06-06 Edwards Allen Transgenic Plants with Enhanced Agronomic Traits
EP3603662B1 (en) 2011-02-28 2022-01-19 Seattle Children's Research Institute Coupling endonucleases with end-processing enzymes drive high efficiency gene disruption
CN102154321B (zh) * 2011-03-09 2013-08-07 中国科学技术大学 一种培育抗逆转基因水稻的方法
WO2013012643A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Polynucleotides encoding trehalose-6-phosphate phosphatase and methods of use thereof
US9758791B2 (en) 2012-04-09 2017-09-12 Mendel Biotechnology, Inc. Mutation of the ear motif of class II HD-Zip polypeptides
CN105611828A (zh) 2013-10-09 2016-05-25 孟山都技术公司 干扰基因表达的hd-zip转录因子抑制以产生具有增强的性状的植物
US10392626B1 (en) 2013-10-09 2019-08-27 Monsanto Technology Llc Plant regulatory elements and uses thereof
BR112016007566A2 (pt) 2013-10-09 2017-09-12 Monsanto Technology Llc evento de milho transgênico mon87403 e métodos para a detecção do mesmo

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1933723A (zh) * 2003-12-15 2007-03-21 孟山都技术有限公司 玉米植株mon88017和组合物以及检测它们的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELENA RICE等: ""Expression of Arabidopsis thaliana HB17 Gene in Corn Leads to Improved Sink Potential"", 《IN VITRO CELL.DEV.BIOL.-ANIMAL》 *
GRAHAM J.HYMUS等: ""Application of HB17, an Arabidopsis class II homeodomainleucine zipper transcription factor, to regulate chloroplast number and photosynthetic capacity"", 《JOURNAL OF EXPERIMENTAL BOTANY》 *
曾佑炜等: "《基因工程技术》", 31 July 2010, 中国轻工业出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107142322A (zh) * 2017-06-22 2017-09-08 中华人民共和国黄埔出入境检验检疫局 转基因玉米mon87403品系特异性实时荧光pcr检测引物、探针、方法和试剂盒
CN116064888A (zh) * 2022-07-14 2023-05-05 中国检验检疫科学研究院 用于转基因玉米Mon87403品系定量检测的引物、探针、试剂盒及方法

Also Published As

Publication number Publication date
AR097980A1 (es) 2016-04-20
US20170088904A1 (en) 2017-03-30
US10858710B2 (en) 2020-12-08
BR112016007566A2 (pt) 2017-09-12
US20200087738A1 (en) 2020-03-19
EP3054764B1 (en) 2018-12-05
EP3054764A1 (en) 2016-08-17
EP3502127A1 (en) 2019-06-26
UY35777A (es) 2015-05-29
US20210108277A1 (en) 2021-04-15
EP3054764A4 (en) 2017-03-15
MX2016004595A (es) 2016-08-01
US9469880B2 (en) 2016-10-18
US20150101076A1 (en) 2015-04-09
US20190055612A1 (en) 2019-02-21
CA2924222C (en) 2023-08-01
CA2924222A1 (en) 2015-04-16
US10233507B2 (en) 2019-03-19
US10407741B2 (en) 2019-09-10
WO2015053998A1 (en) 2015-04-16
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