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CN104774792A - 一株耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌及其应用 - Google Patents

一株耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌及其应用 Download PDF

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CN104774792A
CN104774792A CN201510171096.2A CN201510171096A CN104774792A CN 104774792 A CN104774792 A CN 104774792A CN 201510171096 A CN201510171096 A CN 201510171096A CN 104774792 A CN104774792 A CN 104774792A
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Abstract

本发明公开了一株耐受高浓度甲醇的甲烷氧化菌及其应用，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.9873，保藏日期为：2014年10月29日，分类命名为：MethyLomonas sp。本发明所述甲基单胞菌MethyLomonas sp能够利用甲烷快速生长，且能够耐受高浓度的甲醇。且该菌能够利用一碳化合物如甲烷和甲醇来生产高附加值的产品如类胡萝卜素和多糖，在一碳化工的生物转化方面具有很高的应用前景，适用于大规模生产，生产过程，安全可靠，保护环境。

Description

一株耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物应用技术领域，特别涉及一株耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌及其应用。
背景技术
全世界蕴藏着巨量的甲烷，其主要分布在西伯利亚沼泽(约有近8百亿吨)、南北极冰原(约蕴藏5千亿吨)及海底中(约有2.5～10兆吨)，同时地球上还有大量的非常规甲烷来源如煤层甲烷、垃圾场废气、沼气和海洋甲烷水合物，及由焦炉气和炼厂气回收的甲烷。甲烷是温室气体，对大气的暖化威力比二氧化碳强23倍。目前人类对甲烷的利用主要是当作燃料燃烧。将甲烷转变成更高价值的化学品和液体燃料能提供重大的经济、环境和战略利益。
目前工业化甲烷转化工艺是间接的，主要分三步，这些复杂的多级工艺在苛刻条件下操作如：在800-1000℃、20-30大气压下蒸汽转化；在1200-1500℃下部分氧化；在200-300℃、50-100大气压下甲醇合成。而微生物却能在常温常压下转化甲烷生成碳链长短不一的各种代谢中间物。这使得微生物转化甲烷成为一种非常具有潜力和前景的生物技术。
商业化的生物转化甲烷经历了三个阶段：1)生产单细胞蛋白。2)利用甲烷单加氧酶制备环氧丙烷。3)生物降解氯化物污染物。但是目前为止只有利用甲烷单加氧酶制备环氧丙烷取得了一定的经济效益。限制微生物转化甲烷的产业化的一个重要因素是生长速率低。
甲醇是甲烷转化工艺的主要产物，同时也是煤化工的主要产物，是C1化工的基础，原料来源广泛，最大的用途是生产其它含氧有机化学品，如甲醛、乙酸和醚类。甲醇的生物转化的研究还处于实验室水平，以甲醇为底物发酵生产单细胞蛋白，是生物技术在甲醇产品开发中最典型的应用。甲醇虽然能够被大部分甲烷氧化菌直接利用，但是具有较强的生理毒性，已报道的甲烷氧化菌耐受甲醇的能力较差，如MethyLomonas Lenta对培养基中添加0.1％到0.5％的甲醇就表现出敏感。经过诱变驯化的菌株可耐受2.4％的甲醇，而且稳定性较差。而本发明报道的野生型未经过驯化的菌株，在甲醇浓度达到3.5％时依然可以生长。
目前国内甲烷氧化菌的专利中，主要是包括甲烷氧化菌的培养方法和其在污水处理、单细胞蛋白、甲醇生产中的应用，部分专利报道了利用甲烷氧化菌发酵生产PHA的报道。目前，国内未见利用微生物转化甲烷制备多糖和类胡萝卜素的报道。
本发明涉及的甲烷氧化菌能够高效的利用甲烷生长，同时能够耐受较高浓度的甲醇。这就为利用该微生物发酵甲烷或者甲醇来生产高附加值产品如类胡萝卜素，多糖奠定了良好的基础。
发明内容
本发明目的之一在于提供一株耐受高浓度甲醇的甲烷氧化菌。本发明公开的甲基单胞菌的筛选自湿地的污泥，其能够利用甲烷快速生长，且能够耐受高浓度的甲醇。
本发明目的之二在于提供一株耐受高浓度甲醇的甲烷氧化菌的应用。本发明公开的甲基单胞菌的能够在以甲烷或者甲醇为底物的液体发酵培养基中生产类胡萝卜素，这一应用未在其他甲烷氧化菌中提及。
本发明目的之三在于提供一株耐受高浓度甲醇的甲烷氧化菌的另一个应用。本发明公开的甲基单胞菌的能够在以甲烷或者甲醇为底物的液体发酵培养基中生产多糖，这一功能也未在其他甲烷氧化菌中提及。
为实现上述目的及一些其他目的，本发明所采取的技术方案为：
一株耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌，其特征在于，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.9873，保藏日期为：2014年10月29日，分类命名为：MethyLomonas sp.。
一种耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌在生产类胡萝卜素中的应用。
优选的是，以甲烷或者甲醇为底物在发酵温度为20～30℃条件下接种所述甲基单胞菌并发酵之后获得发酵产物用于提取类胡萝卜素。
优选的是，所述发酵温度为25℃。
优选的是，所述甲基单胞菌的以甲醇为底物时，甲醇占发酵培养基的质量百分比浓度≤3.5％。
一种耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌在生产多糖中的应用。
优选的是，以甲烷或者甲醇为底物在发酵温度为20～30℃条件下接种所述甲基单胞菌并发酵之后获得发酵产物用于提取多糖。
优选的是，所述发酵温度为25℃。
优选的是，所述甲基单胞菌的以甲醇为底物时，甲醇占发酵培养基的质量百分比浓度≤3.5％。
优选的是，所述多糖为杂多糖，所述杂多糖主要包括氨基葡萄糖，葡萄糖和甘露糖。
本发明所公开的甲基单胞菌的菌落的形态特征为：
在NMS培养基上形成圆形光滑的菌落，中央隆起，边缘整齐，菌落呈现鲜艳的橘红色，菌落粘稠，格兰氏染色镜检阴性。
本发明的有益效果是：
本发明所公开的甲基单胞菌具有以下优点：
①较易培养：以甲烷为碳源，在NMS培养基中培养生长良好，培养基配方简单，不需要添加有机氮源；
②能以甲烷为碳源快速生长：挑取平板单菌落，接种于NMS培养基，以甲烷为底物，无机盐为氮源，培养48h，能达到108cfu/mL；
③能耐受较高浓度的甲醇：能在甲醇浓度达到35g/L的NMS培养基中良好生长，培养3天OD600达到2.5；
④能以甲烷和甲醇为底物产生类胡萝卜素和多糖：
以甲烷为底物，培养10天，发酵液因菌体产生的类胡萝卜素和多糖而呈现鲜艳的橘红色粘稠液体；
以甲醇为底物，培养3天，发酵液因菌体产生的类胡萝卜素和多糖而呈现鲜艳的粉红色粘稠液体；
综上所述，本发明通过筛选，获得一株能够利用甲烷快速生长，且能够耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌MethyLomonas sp.ZR，而且，该菌能够利用一碳化合物如甲烷和甲醇来生产高附加值的产品如类胡萝卜素，多糖，在一碳化工的生物转化方面具有很高的应用前景，可应用于大规模生产；本发明所述的甲基单胞菌在生产多糖和类胡萝卜素的应用过程简单，操作方便，能够利用甲烷或者甲醇快速生产，产生具有高附加值的类胡萝卜素和多糖，同时能够耐受较高浓度的甲醇，具有很高的工业应用价值。
附图说明
图1为本发明所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以甲烷为底物的生长曲线。
图2为本发明所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以不同浓度甲醇为底物的生长比较图。
图3为本发明实施例4所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以甲烷为底物发酵生产类胡萝卜素，之后，对发酵产物中提取色素进行种类检测获得的全波长扫描吸收峰图。
图4为本发明实施例5所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以甲烷为底物发酵生产类胡萝卜素，之后，对发酵产物中提取色素进行种类检测获得的全波长扫描吸收峰图。
图5为本发明实施例6所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以甲烷为底物发酵生产类胡萝卜素，之后，对发酵产物中提取色素进行种类检测获得的全波长扫描吸收峰图。
图6为本发明实施例7所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以甲烷为底物发酵生产多糖，之后，对发酵产物中提取多糖进行液相分析获得的水解液的HPLC图。
图7为本发明实施例8所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以甲烷为底物发酵生产多糖，之后，对发酵产物中提取多糖进行液相分析获得的水解液的HPLC图。
图8为本发明实施例9所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌以甲烷为底物发酵生产多糖，之后，对发酵产物中提取多糖进行液相分析获得的水解液的HPLC图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
NMS培养基：溶剂为水，溶质为KNO31g/L，KH2PO40.717g/L，Na2HPO40.272g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，CaCL2·6H2O 0.2g/L，EDTA铁钠0.005g/L，微量元素溶液1mL，以甲烷为碳源或者底物时，气相中甲烷含量为15-50％，空气为50-85％；以甲醇为碳源或者底物时，甲醇的添加量为1.0％-3.5％。
固体培养基：每升上述NMS培养基中添加15g琼脂制备得到的培养基。微量元素溶液为在1L水中加入EDTA 0.5g/L，FeSO4·7H2O 0.2g/L，H3BO30.03，ZnSO4·7H2O 0.01g/L，MnCL2·4H2O 0.003g/L，CoCL2·6H2O 0.02g/L，CuSO4·5H2O 0.1g/L，NiCL2·6H2O 0.002g/L以及Na2MoO40.003g/L。
实施例1
甲烷氧化菌MethyLomonas SP.ZR1的筛选方法：
甲基单胞菌的筛选来源于湿地的污泥，将湿地污泥的样品1g直接接种于装有100mL的NMS培养基的250mL厌氧瓶中，厌氧瓶中补充100mL的甲烷气做碳源，使得厌氧瓶气相中甲烷的含量达到30％。25℃，180rpm震荡培养直至培养液的OD600达到稳定。1％的接种量接种于新鲜的培养基，传代培养3次。将液体培养物稀释涂布平板，将涂布平板放置于含有30％甲烷的空气中培养。通过这种筛选方法可以筛选到大量的甲烷氧化菌，其中形成鲜艳的橘红色菌落的甲基单胞菌ZR1生长最快，形成的菌落最大。
提取ZR1的基因组，扩增其16S rRNA基因序列并测序，16S rRNA的多核苷酸序列为SEQ ID No：1所示的多核苷酸序列。根据其16S rRNA基因序列在NCBI上BLAST比对，数据显示其16S rRNA基因序列与MethyLomonas methias S1具有97.9％的相似性，根据这一结果，结合ZR1的生理生化特征，确定ZR1属于甲基单胞菌属。
实施例2
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲烷为底物的生长：
挑取平板上形成的ZR1单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，28℃，180rpm进行培养。每天取样测量发酵液的菌体浓度，从如图1所示，随着发酵时间的延长，菌体浓度逐渐增大，说明甲基单胞菌的菌体数量逐渐增加，该菌种在以甲烷为底物的培养基中生长良好。
实施例3
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲醇为底物的生长：
ZR1以甲醇为底物的生长ZR单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，28℃，180rpm进行种子培养。培养2天，OD600达到0.7，以5％的接种量接种于新鲜的甲醇含量分别为12.5g/L，15g/L，17.5g/L，20g/L，22.5g/L，25g/L，27.5g/L，30g/L，32.5g/L，35g/L的NMS培养基100mL，于250mL摇瓶中震荡培养，25℃，180rpm培养3天，培养结果如图2所示，表明甲基单胞菌在不同浓度甲醇含量的情况下均能比较好的生长繁殖。
实施例4
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲烷为底物发酵生产类胡萝卜素
挑取平板上形成的ZR单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，25℃，180rpm进行培养2天，OD600达到0.7，以5％的接种量接种于新鲜的NMS培养基，28℃进行柱式反应器发酵，培养2天，ZR发酵液呈现桔红色粘稠液体。8000rpm，离心10min收集菌体。收集到的菌体用蒸馏水清洗两遍，真空冷冻干燥。称取干燥菌粉，加入10倍体积的甲醇溶液浸提3次，获得橘红色的甲醇色素提取液，过滤，旋转蒸发仪旋干，获得从ZR菌体提取到的红色色素。
色素的浓硫酸显色反应：
1mL二氯甲烷重溶提取的色素。取50uL的色素溶液，用氯仿稀释至0.5mL，在色素溶液中滴加几滴浓硫酸，溶液由红色转变为蓝绿色。这说明所提色素为类胡萝卜素。
色素的全波长扫描，取300uL的色素溶液，加入石英96孔板，以300uL的二氯甲烷溶液为对照，进行220nm至700nm全波长扫描，扫描结果如图3所示。
色素的全波长扫描结果显示，其在500nm左右出现三指峰，这是典型的类胡萝卜素类色素的典型特征峰，这也说明，所提取的色素为类胡萝卜素。
实施例5
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲烷为底物发酵生产类胡萝卜素
挑取平板上形成的ZR单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，30℃，180rpm进行培养2天，OD600达到0.7，以5％的接种量接种于新鲜的NMS培养基，28℃进行柱式反应器发酵，培养5天，ZR发酵液呈现桔红色粘稠液体。8000rpm，离心10min收集菌体。收集到的菌体用蒸馏水清洗两遍，真空冷冻干燥。称取干燥菌粉，加入10倍体积的甲醇溶液浸提3次，获得橘红色的甲醇色素提取液，过滤，旋转蒸发仪旋干，获得从ZR菌体提取到的红色色素。
色素的浓硫酸显色反应：
1mL二氯甲烷重溶提取的色素。取50uL的色素溶液，用氯仿稀释至0.5mL，在色素溶液中滴加几滴浓硫酸，溶液由红色转变为蓝绿色。这说明所提色素为类胡萝卜素。
色素的全波长扫描，取300uL的色素溶液，加入石英96孔板，以300uL的二氯甲烷溶液为对照，进行220nm至700nm全波长扫描，扫描结果如图4所示。
色素的全波长扫描结果显示，其在500nm左右出现三指峰，这是典型的类胡萝卜素类色素的典型特征峰，这也说明，所提取的色素为类胡萝卜素。
实施例6
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲烷为底物发酵生产类胡萝卜素
挑取平板上形成的ZR单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，28℃，180rpm进行培养2天，OD600达到0.7，以5％的接种量接种于新鲜的NMS培养基，28℃进行柱式反应器发酵，培养10天，ZR发酵液呈现桔红色粘稠液体。8000rpm，离心10min收集菌体。收集到的菌体用蒸馏水清洗两遍，真空冷冻干燥。称取干燥菌粉，加入10倍体积的甲醇溶液浸提3次，获得橘红色的甲醇色素提取液，过滤，旋转蒸发仪旋干，获得从ZR菌体提取到的红色色素。
色素的浓硫酸显色反应：
1mL二氯甲烷重溶提取的色素。取50uL的色素溶液，用氯仿稀释至0.5mL，在色素溶液中滴加几滴浓硫酸，溶液由红色转变为蓝绿色。这说明所提色素为类胡萝卜素。
色素的全波长扫描，取300uL的色素溶液，加入石英96孔板，以300uL的二氯甲烷溶液为对照，进行220nm至700nm全波长扫描，扫描结果如图5所示。
色素的全波长扫描结果显示，其在500nm左右出现三指峰，这是典型的类胡萝卜素类色素的典型特征峰，这也说明，所提取的色素为类胡萝卜素。
实施例7
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲烷为底物发酵生产多糖
挑取平板上形成的ZR单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，20℃，180rpm培养2天，OD600达到0.7，以5％的接种量接种于新鲜的NMS培养基，20℃进行柱式反应器发酵，培养3天，ZR发酵液呈现桔红色粘稠液体。8000rpm，离心10min，收集上清液。旋转蒸发仪，将收集的上清液体积浓缩10倍。在浓缩的上清液中添加95％乙醇，使乙醇的浓度达到70％，4℃，过夜，5000rpm，10min，收集沉淀，依次采用无水乙醇，丙酮和石油醚洗涤，50℃烘箱烘干，得EPS粗品。将EPS粗品重溶于蒸馏水中，至截流分子量为3.5KDa的透析袋中，蒸馏水透析3天，除盐。除盐的多糖溶液，加入相同体积的Sevage溶液(氯仿∶正丁醇＝4∶1，V∶V)，剧烈震荡5min，8000rpm离心10min，取上层多糖溶液重复除蛋白6-8次。除蛋白后的多糖溶液减压浓缩，冷冻干燥，获得多糖干品。
多糖溶液的定性反应：
多糖溶液游离多糖分析：
取多糖干品5mg溶于1mL蒸馏水中，按照3，5-二硝基水杨酸法测定溶液中的还原糖，测定结果表明提取的多糖溶液中不含有游离性的还原多糖。
MoLish反应：
取多糖干品5mg溶于1mL蒸馏水中，取200uL溶液加入干净的玻璃试管中，然后加入100uL 6％的苯酚，最后加入1mL浓硫酸。以水做阴性对照，以葡萄糖作阳性对照。多糖样品和葡萄糖样品均呈现黄色，而水没有发生颜色变化。
多糖水解液的液相分析：
取多糖干品5mg溶于1mL的浓度为4M的TFA水溶液中，115℃，水解8h。对获得的水解液进行液相分析。分析采用BioRad42A色谱柱，超纯水为流动相，流速0.6mL/min，55℃，示差折光检测器分析，如图6所示。
液相分析表明，多糖水解液在6.2min出峰，与标准品氨基葡萄糖的出峰时间一致，16.2min处出峰，与标准品葡萄糖出峰时间一致，17.8min处所出峰与标准品甘露糖出峰时间一致。液相分析表明ZR所产多糖主要为氨基葡萄糖，葡萄糖，甘露糖等组成的杂多糖。
实施例8
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲烷为底物发酵生产多糖
挑取平板上形成的ZR单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，25℃，180rpm培养2天，OD600达到0.7，以5％的接种量接种于新鲜的NMS培养基，28℃进行柱式反应器发酵，培养6天，ZR发酵液呈现桔红色粘稠液体。8000rpm，离心10min，收集上清液。旋转蒸发仪，将收集的上清液体积浓缩10倍。在浓缩的上清液中添加95％乙醇，使乙醇的浓度达到70％，4℃，过夜，5000rpm，10min，收集沉淀，依次采用无水乙醇，丙酮和石油醚洗涤，50℃烘箱烘干，得EPS粗品。将EPS粗品重溶于蒸馏水中，至截流分子量为3.5KDa的透析袋中，蒸馏水透析3天，除盐。除盐的多糖溶液，加入相同体积的Sevage溶液(氯仿∶正丁醇＝4∶1，V∶V)，剧烈震荡5min，8000rpm离心10min，取上层多糖溶液重复除蛋白6-8次。除蛋白后的多糖溶液减压浓缩，冷冻干燥，获得多糖干品。
多糖溶液的定性反应：
多糖溶液游离多糖分析：
取多糖干品5mg溶于1mL蒸馏水中，按照3，5-二硝基水杨酸法测定溶液中的还原糖，测定结果表明提取的多糖溶液中不含有游离性的还原多糖。
MoLish反应：
取多糖干品5mg溶于1mL蒸馏水中，取200uL溶液加入干净的玻璃试管中，然后加入100uL 6％的苯酚，最后加入1mL浓硫酸。以水做阴性对照，以葡萄糖作阳性对照。多糖样品和葡萄糖样品均呈现黄色，而水没有发生颜色变化。
多糖水解液的液相分析：
取多糖干品5mg溶于1mL的浓度为4M的TFA水溶液中，115℃，水解8h。对获得的水解液进行液相分析。分析采用BioRad42A色谱柱，超纯水为流动相，流速0.6mL/min，55℃，示差折光检测器分析，分析结果如图7示。
液相分析表明，多糖水解液在6.2min出峰，与标准品氨基葡萄糖的出峰时间一致，16.2min处出峰，与标准品葡萄糖出峰时间一致，17.8min处出峰与标准贫甘露糖出峰时间一致。液相分析表明ZR所产多糖主要为氨基葡萄糖，葡萄糖，甘露糖等组成的杂多糖。
实施例9
甲基单胞菌MethyLomonas SP.ZR1以甲烷为底物发酵生产多糖
挑取平板上形成的ZR单菌落，接种于30mL的NMS液体培养基培养(甲烷为碳源)，28℃，180rpm培养2天，OD600达到0.7，以5％的接种量接种于新鲜的NMS培养基，28℃进行柱式反应器发酵，培养10天，ZR发酵液呈现桔红色粘稠液体。8000rpm，离心10min，收集上清液。旋转蒸发仪，将收集的上清液体积浓缩10倍。在浓缩的上清液中添加95％乙醇，使乙醇的浓度达到70％，4℃，过夜，5000rpm，10min，收集沉淀，依次采用无水乙醇，丙酮和石油醚洗涤，50℃烘箱烘干，得EPS粗品。将EPS粗品重溶于蒸馏水中，至截流分子量为3.5KDa的透析袋中，蒸馏水透析3天，除盐。除盐的多糖溶液，加入相同体积的Sevage溶液(氯仿∶正丁醇＝4∶1，V∶V)，剧烈震荡5min，8000rpm离心10min，取上层多糖溶液重复除蛋白6-8次。除蛋白后的多糖溶液减压浓缩，冷冻干燥，获得多糖干品。
多糖溶液的定性反应：
多糖溶液游离多糖分析：
取多糖干品5mg溶于1mL蒸馏水中，按照3，5-二硝基水杨酸法测定溶液中的还原糖，测定结果表明提取的多糖溶液中不含有游离性的还原多糖。
MoLish反应：
取多糖干品5mg溶于1mL蒸馏水中，取200uL溶液加入干净的玻璃试管中，然后加入100uL 6％的苯酚，最后加入1mL浓硫酸。以水做阴性对照，以葡萄糖作阳性对照。多糖样品和葡萄糖样品均呈现黄色，而水没有发生颜色变化。
多糖水解液的液相分析：
取多糖干品5mg溶于1mL的浓度为4M的TFA水溶液中，115℃，水解8h。对获得的水解液进行液相分析。分析采用BioRad 42A色谱柱，超纯水为流动相，流速0.6mL/min，55℃，示差折光检测器分析，分析结果如图8所示。
液相分析表明，多糖水解液在6.2min出峰，与标准品氨基葡萄糖的出峰时间一致，16.2min处出峰，与标准品葡萄糖出峰时间一致，17.8min处所出峰与标准贫甘露糖出峰时间一致。液相分析表明ZR所产多糖主要为氨基葡萄糖，葡萄糖，甘露糖等组成的杂多糖。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出的图例。

Claims (10)

1.一株耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌，其特征在于，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.9873，保藏日期为：2014年10月29日，分类命名为：Methylomonas sp.。
2.一种如权利要求1所述的耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌在生产类胡萝卜素中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，以甲烷或者甲醇为底物在发酵温度为20～30℃条件下接种所述甲基单胞菌并发酵之后获得发酵产物用于提取类胡萝卜素。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵温度为25℃。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述甲基单胞菌以甲醇为底物时，甲醇占发酵培养基的质量百分比浓度≤3.5％。
6.一种如权利要求1所述耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌在生产多糖中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，以甲烷或者甲醇为底物在发酵温度为20～30℃条件下接种所述甲基单胞菌并发酵之后获得发酵产物用于提取多糖。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述发酵温度为25℃。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述甲基单胞菌以甲醇为底物时，甲醇占发酵培养基的质量百分比浓度≤3.5％。
10.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述多糖为杂多糖，所述杂多糖主要包括氨基葡萄糖，葡萄糖和甘露糖。
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