CN104274401A - 一种基于hcpt-peg的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种基于新型稳定剂HCPT-PEG的喜树碱类药物高载药纳米混悬剂及其制备方法。所述的纳米混悬剂采用溶剂沉淀联合高压均质法制备，其处方组成：喜树碱类药物与稳定剂HCPT-PEG的组合比例为1∶0.02～10(重量比)。制备的喜树碱类药物的纳米混悬剂，载药量最高达98％，粒径最小可达92.90nm，无需保护剂或者只需少量冻干保护剂的加入便可冻干。冻干品储存稳定性良好，加水振荡即可重建为纳米混悬剂。制备的羟基喜树碱纳米混悬剂，能显著增强药物在体内各组织中的分布，尤其是肝脏和肿瘤，抗肿瘤药效显著(可将给药剂量降低至市售羟基喜树碱注射液的1/4)，对骨髓等器官的毒副作用显著降低，具有广阔的开发前景。

Description

一种基于HCPT-PEG的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种用HCPT-PEG稳定的羟基喜树碱纳米混悬剂、其制备方法及应用。 

喜树碱类药物包括喜树碱、10-羟基喜树碱、7-乙基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、9-硝基喜树碱等，均为难溶性药物，均具有内酯环和较好的抗肿瘤活性，其中10-羟基喜树碱(10-HCPT)临床应用最为广泛。10-HCPT(也简称为HCPT)是临床治疗癌症的一线药物之一，分子式为C₂₀H₁₆N₂O₅，分子量为364.35，具有广谱抗癌活性，肾毒性小，广泛用于肝癌、胃癌、头颈部肿瘤、白血病、膀胱癌等的治疗。 

HCPT水溶性差，临床常将其活性内酯环打开制成钠盐注射剂来使用，疗效差、毒性强、半衰期短，需多次给药，病人耐受性差；同时结构中的酚羟基暴露在空气中易被氧化。已有的有关羟基喜树碱的制剂的报道，载药量大多较低(通常＜15％，少有＞25％)，且体外释放多存在突释现象。 

纳米粒是将药物通过不同的方法制备成纳米大小的颗粒，包括胶束、聚合物纳米粒、纳米混悬剂等。由于具有较大的表面积，药物溶出速度和程度均较高，纳米粒已成为解决难溶性药物的给药问题的主要方法之一。同时，药物多包封在纳米粒内部，进入体内之后可以在一定时间内与外界环境隔离，从而在一定程度上保护不稳定的药物，延缓代谢。表面具有PEG链的纳米粒，入血后还能避开血浆蛋白的调理，进而有效较少被吞噬系统的清除，起到长循环作用，包封的药物也从而能够延长半衰期在一定程度上实现长效作用。如果纳米粒的粒径较小(如300nm以内)，还可由于EPR(enhanced permeation and retention)效应而被动靶向肿瘤。因此，纳米给药系统是解决难溶性药物，尤其是难溶性抗肿瘤药物的临床应用的有效手段。 

纳米混悬剂是纳米给药系统的重要分支，是用合适的技术将药物直接制备成纳米大小的微粒，并借助于稳定剂对其进行稳定而得到的给药系统，是纳米粒的一种。和使用了大量辅料的其他纳米给药系统相比，纳米混悬剂具有许多优点：(1)理论上，纳米混悬剂是近乎纯药物的纳米粒，具有最大限度的载药量和药物传输效率，特别适合大剂量难溶性药物的口服和注射给药；(2)适用范围广，无论是难溶于水的药物，还是水、油都难溶的药物，都可利用一定的方法制得相应的纳米混悬剂，且可通过相应技术实现工业化大生产。纳米混悬剂处方组成简单、工艺简单、制备快速，干燥后所得粉末作为中间体进一步制备成口服、注射、外用等不同的剂型，方便携带，提高病人顺应性。 

稳定剂是纳米混悬剂的关键，虽然纳米混悬剂的理论载药量可以达到很高，然而迄今为止，在有药-载比数据的文献中，载药量超过60％的并不多，加上冻干保护剂等辅料，总体载药量有不少更在10％以下；且在不同程度上存在粒径偏大(200nm以内为宜)和稳定性问题。上述纳米混悬剂载药量低，除部分原因可能是处方工艺非最佳化外，主要的原因是现有的稳定剂并非很适合所研究的药物，即这些稳定剂的效率并不高。 

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种纳米混悬剂的新型稳定剂，能实现羟基喜树碱纳米混悬剂的制备简单、高载药量、高稳定性，能实现喜树碱类药物的的体外缓释、改善其体内分布、增强抗癌疗效。 

一种喜树碱类药物的纳米混悬剂，由喜树碱类药物和稳定剂组成，药物与稳定剂的质量比为1∶0.01～10。 

一种喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，选用的稳定剂为PEG修饰的羟基喜树碱，即HCPT-PEG。 

本发明目的之二在于提供一种喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂的制备方法，本发明采用的是溶剂沉淀或溶剂沉淀联合高压均质的方法制备纳米混悬剂，技术方案如下： 

(1)喜树碱类药物和稳定剂溶于能与水混溶的有机溶剂中； 

(2)超声或搅拌条件下将含有药物和稳定剂的有机溶剂加入到水中； 

(3)减压旋转蒸发或透析法除去有机溶剂，或高速离心(至上清检测不到纳米粒存在)收集沉淀后在加水悬浮； 

(4)必要时高压均质进一步减小粒径。 

上述制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的有机溶剂选自DMSO、DMF、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈、异丙醇、PEG400、PEG600中的一种或两种或多种的混合体系；或者以上溶剂与乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷等于水不相混溶的有机溶剂的混合体系，只要混合体系能和水混溶同时能很好滴溶解药物和辅料即可。药物在有机溶剂中的浓度为0.001％～20％(w/v)，稳定剂的浓度为0.001％～50％(w/v)；步骤(2)中有机溶剂与水相的体积比为1∶2～100(v/v)；步骤(3)中高速离心条件为2000～60000rpm离心1～60min，弃去上清，沉淀加水超声复溶；步骤(4)高压均质条件为温度0～80℃，压力500-4000bar，其中理想均质条件为25℃、2000～2500bar、≥10次循环。 

步骤(3)和步骤(4)还可以通过冷冻干燥、喷雾冷冻干燥或喷雾干燥等进一步固化，所用冻干保护剂可以是PVP、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、半乳糖、甘露醇中的一种或两种及两种以上的组合，优选PVP为冻干保护剂；冻干保护剂的用量为纳米粒重量的10-200％，优选纳米粒重量的20-50％的冻干保护剂。 

步骤(3)和步骤(4)通过冷冻干燥、喷雾冷冻干燥固化时，在某些时候(如Cholesterol-PEG600、合适的药载比)，甚至可以不用任何冻干保护剂，直接冻干，加水后即可重建为原来的纳米分散体系。 

本发明的目的之三在于提供一种喜树碱类药物高载药纳米混悬剂在制备注射剂中的应用，所述的注射剂包括注射液和无菌粉针。本发明的喜树碱类药物纳米混悬剂的水相分散介质可用高浓度的葡萄糖水溶液调成5％葡萄糖生理等渗体系，适应临床应用。本发明的喜树碱类药物纳米混悬剂冻干粉可加入适量的无菌药用5％葡萄糖水溶液稀释，重建成供静脉给药用的分散体系，适应临床使用。 

本发明的纳米粒的优点在于：(1)处方简单，最少可以只含有药物和稳定剂HCPT-PEG；(2)载药量可高达98％同时平均粒径可小于200nm，具有非常高的药物传输效率，同时易实现对肿瘤的被动靶向；(3)体外释放没有突释，即便在90％以上的高载药量也观察不到明显的突释现象；(4)冻干保护剂用量少，即便在高达90％的载药量下，仅药物重量的25％的冻干保护剂即可实现冻干后的加水重建；(5)载药量可根据需要再很宽的范围内(10-98％)调整。 

本发明的纳米粒经大鼠药动学实验证明，长循环和缓释效果明显，血浆AUC较注射液显著提高，表观半衰期显著延长。 

本发明的纳米混悬剂经H22荷瘤小鼠实验证明，给药后在各组织中的AUC_0-24h及MRT明显高于常用的市售注射剂组，以肝脏和肿瘤中最显著，一定程度上实现了对肿瘤组织的被动靶向。 

本发明的纳米混悬剂经H22荷瘤小鼠药效实验证明，表现出卓越的抗肿瘤治疗，相同剂量下，纳米混悬剂较市售注射液有更强的抗肿瘤活性，在1/4剂量时即可实现市售注射液相同的抗肿瘤效果。 

本发明的纳米混悬剂经荷瘤小鼠药效实验的病理报告分析显示，纳米混悬剂混悬剂组对骨髓无明显抑制作用，无明显肝肾毒性，安全性较高；相同剂量的市售注射剂则对肝脏有明显毒性，对骨髓有明显抑制。该纳米混悬剂，在提高抗肿瘤药效的同时能降低毒副作用。 

本发明的纳米混悬剂处方单纯新颖，工艺简单，易于控制，较市售注射液相比，具有显著的增效减毒作用，有广阔的产业化前景。 

附图说明

图1为实施例1中合成的mPEG₁₀₀₀-HCPT和mPEG1000的MOADI-TOF谱图 

图2为实施例1中合成的mPEG₁₀₀₀-HCPT的HPLC谱图 

图3为实施例8中透射电镜照片(×19000) 

图4为实施例9中X-粉末衍射图谱(从上到下依次为羟基喜树碱纳米混悬剂、羟基喜树碱原药与稳定剂mPEG₁₀₀₀-HCPT的物理混合物、羟基喜树碱原药) 

图5为实施例10中羟基喜树碱在PBS中的体外释放曲线(n＝3) 

图6为实施例10中羟基喜树碱在水中的体外释放曲线(n＝3) 

图7为实施例11中纳米混悬剂在荷瘤小鼠肿瘤中的分布(n＝8) 

图8为实施例12中纳米混悬剂的肝肾及骨髓病理切片照片(×40) 

具体实施方式

下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。 

实施例1 

mPEG₁₀₀₀-HCPT的合成 

称取HCPT(74mg，0.2mmol)和mPEG₁₀₀₀-COOH(100mg，0.1mmol)溶于25mL无水DMF中。0℃、氮气保护下，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(69mg，0.2mmol)和4-二甲氨基吡啶(3.3mg，0.027mmol)加入到DMF溶液中，反应体系在冰浴、氮气保护下搅拌2h，后室温反应24h。反应结束，将反应体系倒入100mL5％NaHCO₃溶液中去除多余的HCPT，然后用二氯甲烷(DCM)萃取(3×100mL)。DCM层用5％NaHCO₃溶液(3×150mL)、水(2×150mL)、0.1mol/L盐酸(2×150mL)、饱和食盐水(2×150mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、减压回收溶剂。所得固体物用乙醚重结晶，滤去结晶，旋蒸去除溶剂，即得目标产物，实验过程TLC检识所用展开剂均为二氯甲烷：甲醇＝12∶1(v/v)。 

实施例2 

称取HCPT50mg、mPEG₁₀₀₀-HCPT2.5mg溶于0.5mLDMF中，于4℃、250Hz超声条件下将DMF相缓慢滴加到5mL水中，滴加完毕，13000rpm离心20min去除DMF，沉淀加5mL水复溶，25℃超声2min分散，2000bar、4℃条件下高压均质5次改善粒径。 

将该纳米混悬剂不冻干直接4℃保存60天后复溶，粒径为94.03nm；不添加其他冻干保护剂的条件下，取适量体积的纳米混悬剂冻干，4℃避光保存半年后，加等体积水振荡复溶，粒径为97.10nm，其冻干稳定性良好。 

实施例3 

称取羟基喜树碱25mg、mPEG₁₀₀₀-HCPT2.5mg溶于1mLDMF中，加热至80℃，迅速注入至4℃的5mL水中，注入完毕，250Hz、4℃超声30min，14000rpm离心1h，沉淀于60℃、250Hz超声15min重新分散至5mL水中，25℃、2000bar、12次循环高压均质即得纳米粒，平均粒径为112.0nm。 

实施例4 

称7-乙基取羟基喜树碱25mg、mPEG₂₀₀₀-HCPT2.5mg溶于1mL DMF中，加热至80℃，迅速注入至4℃的5mL水中，注入完毕，250Hz、4℃超声30min，14000rpm离心1h，弃上清(去除DMF)，沉淀于60℃、250Hz超声15min重新分散至5mL水中，25℃、2000bar、12次循环高压均质即得纳米粒，平均粒径为151.0nm。 

实施例5 

称取9-硝基羟基喜树碱12.5mg、喜树碱12.5mg、mPEG₅₀₀₀-HCPT10mg溶于1mLDMF-EtOH(4∶1，v/v)中，加热至50℃，注入至4℃的5mL水中，250Hz、4℃超声30min，14000rpm离心1h，弃上清(去除DMF)，沉淀于60℃、250Hz超声15min重新分散至5mL水中，平均粒径为186.0nm。 

实施例6 

称取喜树碱5mg、羟基喜树碱10mg、7-乙基-10-羟基喜树碱10mg、mPEG₁₀₀₀-HCPT 15mg溶于1mL DMF-丙酮(4∶1)中，加热至40℃，滴加至4℃的5mL水中，注入完毕，250Hz、4℃超声30min，14000rpm离心1h，弃上清(去除DMF)，沉淀于60℃、250Hz超声15min重新分散至5mL水中，平均粒径为167.0nm。 

实施例7 

称取羟基喜树碱10mg、7-乙基-10-羟基喜树碱10mg、紫衫醇5mg、mPEG₂₀₀₀-HCPT10mg溶于1mL DMF-二氯甲烷(5∶1)中，滴加至4℃的5mL水中，注入完毕，250Hz、4℃超声30min，14000rpm离心1h，弃上清，沉淀于60℃、250Hz超声15min重新分散至5mL水中，平均粒径为189.0nm。 

实施例8 

制备5mg/mL浓度的混悬剂，吸取6μL滴到300目的铜网上，空气中自然晾干，后用0.1％磷钨酸染色10min，透射电镜下观察粒子的形态(图3)。 

实施例9 

X-粉末射线衍射图谱见图4，样品测量参数：Cu靶管照射，40kV，100mA，步宽：0.01°，2θ扫描范围：3-70°，结果可知羟基喜树碱纳米混悬剂中药物以晶型形式存在。 

实施例10 

羟基喜树碱纳米混悬剂的体外释放实验 

方案：实验采用透析袋法对高压均质前后的HCPT纳米混悬剂进行体外释放实验，同时用市售的HCPT注射液(Injections)及HCPT原药粉的水混悬液(Corse suspensions)做对照。取以上样品各1mL(含药200μg)于透析袋(MWCO＝3500)中，分别置于100mL释放介质中，于37℃、100rpm条件下恒温搅拌，每个时间点取1mL释放外液HPLC测其中的药物含量，同时补充等温等体积的释放介质，计算累积释放度，释放介质采用0.1mol/L、pH7.4的PBS缓冲盐或纯水，同一样品平行实验3份，结果如图所示。 

结果：本节考察了HCPT纳米混悬剂的体外释放行为，缓释效果明显，达24h，同时避免像原药粉水混悬液一样释放过快，符合Higuich释放。 

实施例11 

羟基喜树碱纳米混悬剂在H22荷瘤小鼠体内分布 

动物模型的建立：将复苏冻存的鼠源性H22肝癌细胞后，接种于5只ICR雄性小鼠腹腔下传代。按照无菌操作程序，7天后处死小鼠，取出含H22细胞的腹水，用无菌生理盐水调整瘤细胞悬液浓度为1×10⁶个/mL备用。6周龄的ICR雄性小鼠右腋下注射0.2mL的H22细胞(1×10⁶/mL)的生理盐水悬液，肿瘤生长至第7天，体积大于100mm³，筛选肿瘤大小相对一致的80只小鼠进行实验。 

给药方案：取荷瘤小鼠80只，随机分为市售注射剂和纳米混悬剂2组，给药前禁食12h，自由饮水，按照8mg/kg剂量尾静脉注射给药。 

样品采集：给药后0.5、1、4、8、24h摘眼球取血后脱颈椎处死小鼠；取心、肝、脾、肺、肾、脑及肿瘤组织，以生理盐水洗净浮血，滤纸吸干；各组织称重后加3倍质量的生理盐水进行组织匀浆；离心，取各组织匀浆液200μL加冰醋酸20μL暗处转化3h，加乙酸乙酯1mL，涡旋振荡1min，10000rpm离心10min；取上清，氮气吹干，残余物加甲醇200μL超声溶解，过0.22μm针头式滤器，取20μL以HPLC检测。各参数用Phoenix WinNonlin(version6.1)拟合计算。 

结果：纳米混悬剂组给药后在小鼠的各个组织中的AUC_0-24h及MRT明显高于市售注射剂组，其中以肝脏和肿瘤中最显著。实际上，混悬剂组明显延长了药物在各组织的滞留时间，如肺、肾中的MRT分别为注射剂组的10.02和10.59倍，心、肝、脾、肺、肾组织中的AUC_0-24h分别为注射剂的4.16、7.89、24.04、80.42倍。这说明mPEG₁₀₀₀-HCPT稳定的纳米混悬剂一定程度上实现了对肿瘤组织的被动靶向，为提高抗肿瘤药效的同时降低毒副作用奠定了基础。羟基喜树碱纳米混悬剂及市售注射剂在各组织中的分布参数如下表： 

Ra＝AUC(NSps)/AUC(Inj)Rb＝MRT(NSps)/MRT(Inj)Rc＝C_max(NSps)/C_max(Inj) 

实施例12 

羟基喜树碱纳米混悬剂在H22荷瘤小鼠的抗肿瘤药效研究 

动物模型的建立：同实施例8中相同。 

给药方案：将筛选出来的荷瘤小鼠随机分6组，每组8只，除正常饮食外，尾静脉注射给药，每3天给药一次，实验7天。空白组给予生理盐水，注射剂组按照5mg/kg的剂量尾静脉注射市售注射剂，纳米混悬剂组按照5mg/kg的剂量尾静脉注射纳米混悬剂。 

空白对照组为生理盐水；辅料对照组为0.25mg/kg的mPEG₁₀₀₀-HCPT生理盐水溶液，HCPT注射液组为5mg/kg高剂量，HCPT纳米混悬剂组为5mg/kg、2.5mg/kg、1.25mg/kg低中高三组剂量，各组均调至合适浓度以满足注射体积为0.2mL，可为小鼠所耐受。 

指标考察：实验结束处死小鼠，完整剥离腋下肿瘤称重，计算抑瘤率(％)＝(1-治疗组平均瘤重/生理盐水组平均瘤重)×100％。同时取肝、肾、骨髓、肿瘤制成组织切片，分析病理学变化。 

同为5mg/kg剂量，纳米混悬剂的抑瘤率为注射剂组的2.47倍(86.38％vs34.97％)。纳米混悬剂组给药剂量降低一半(至2.5mg/kg)时，抑瘤率仍显著高于注射剂组(70.31％vs34.97％，p＜0.01)。当剂量低至注射剂组的1/4(1.25mg/kgvs.5mg/kg)时，纳米混悬剂的体内抗肿瘤效果仍不弱于注射剂组(抑瘤率43.42％vs.34.97％)。这表明，与市售注射剂相比，纳米混悬剂在体内抗肿瘤药效方面具有非常显著的优势。纳米混悬剂及注射剂对H22荷瘤小鼠的抑瘤率如下表(n＝8，mean±SD)： 

病理报告分析，高剂量纳米混悬剂组对骨髓无明显抑制作用，无明显肝肾毒性，安全性较高；相同剂量的注射剂组对肝脏有明显毒性，对骨髓有明显抑制。综上，以mPEG₁₀₀₀-HCPT为稳定剂的HCPT纳米混悬剂，能显著提高抗肿瘤药效，降低毒副作用。 

病理报告分析，高剂量纳米混悬剂组对骨髓无明显抑制作用，无明显肝肾毒性，安全性较高；相同剂量的注射剂组对肝脏有明显毒性，对骨髓有明显抑制。综上，以mPEG₁₀₀₀-HCPT为稳定剂的HCPT纳米混悬剂，能显著提高抗肿瘤药效，降低毒副作用。 

Claims (19)

1.一种基于HCPT-PEG的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：所述的纳米混悬剂由喜树碱类药物和稳定剂组成，药物与稳定剂的质量比为1∶0.01～10。 

2.根据权利要求1所述的喜树碱药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：所述的稳定剂为HCPT-PEG，其结构如下式，其中R可以为H、CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂NH₂，n＝10-450。 

。

3.根据权利要求1至2所述的喜树碱药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：所述的喜树碱类药物，是喜树碱或具有喜树碱骨架的衍生物，包括喜树碱、10-羟基喜树碱、7-乙基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、9-硝基喜树碱等。 

4.根据权利要求1至3所述的喜树碱药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：所述的喜树碱类药物，可以是权利要求3中所述的喜树碱药物中的一种或两种或多种药物的组合物。 

5.如权利要求1至4所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于载药量最高可达98％，粒径10-1000nm，优选平均粒径在20-200nm。 

6.根据权利要求1至5所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：所述的纳米混悬剂包括纳米混悬剂和纳米晶。 

7.如权利要求1至6所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于其中的喜树碱类药物基本上是以内酯型存在。 

8.如权利要求1至7所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于其中的药物具有良好的缓释作用，没有突释。 

9.根据权利要求1至8所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：采用反溶剂法、高压均质法中的一种或两种结合来制备。 

10.根据权利要求9所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于，制备方法包括以下步骤： 

(1)喜树碱类药物和稳定剂溶于能与水混溶的有机溶剂中； 

(2)超声或搅拌条件下将含有药物和稳定剂的有机溶剂加入到水中； 

(3)减压旋转蒸发或透析法除去有机溶剂，或高速离心(至上清检测不到纳米粒存在)收集沉淀后在加水悬浮； 

(4)必要时高压均质进一步减小粒径。 

11.根据权利要求9至10所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的有机溶剂选自DMSO、DMF、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈、异丙醇、PEG400、PEG600中的一种或两种或多种的混合体系；或者以上溶剂与乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷等于水不相混溶的有机溶剂的混合体系，只要混合体系能和水混溶同时能很好滴溶解药物和辅料即可。药物在有机溶剂中的浓度为0.001％～20％(w/v)，稳定剂的浓度为0.001％～50％(w/v)；步骤(2)中有机溶剂与水相的体积比为1∶2～100(v/v)；步骤(3)中高速离心条件为2000～60000rpm离心1～60min，弃去上清，沉淀加水超声复溶；步骤(4)高压均质条件为温度0～80℃，压力500-4000bar，其中理想均质条件为25℃、2000～2500bar、≥10次循环。 

12.根据权利要求9至11所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂的制备方法，其特征在于：步骤(3)和步骤(4)还可以通过冷冻干燥、喷雾冷冻干燥或喷雾干燥等进一步固化，所用冻干保护剂可以是PVP、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、半乳糖、甘露醇中的一种或两种及两种以上的组合，优选PVP为冻 干保护剂；冻干保护剂的用量为纳米粒重量的0-100％，优选纳米粒重量的10-30％的冻干保护剂。 

13.根据权利要求9至11所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂的制备方法，其特征还在于：步骤(3)和步骤(4)通过冷冻干燥、喷雾冷冻干燥固化时，在某些时候(如Cholesterol-PEG1000、合适的药载比)，甚至可以不用任何冻干保护剂，直接冻干，加水后即可重建为原来的纳米分散体系。 

14.根据权利要求1至13所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，可用于制备注射剂，所述的注射剂包括注射液和无菌粉针；水相分散介质可用高浓度的葡萄糖水溶液调成5％葡萄糖生理等渗体系，适应临床应用；本发明的羟基喜树碱纳米粒冻干粉可加入适量的无菌药用5％葡萄糖水溶液稀释，重建成供静脉给药用的分散体系，适应临床使用。 

15.如权利要求1至14所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于注射给药后，可以较传统注射剂获得更好的药物浓度、更长的血浆半衰期和更高的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)；静脉注射后能增加药物的体内组织分布，尤其是在肝脏和肿瘤中的分布。 

16.如权利要求1至14所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，如权利要求1至12所述的喜树碱类药物的纳米粒，其特征在于给药后，可以获得较传统注射剂更好的抗肿瘤效果，且能显著降低对骨髓等器官的毒副作用。 

17.如权利要求1至14所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征还在于：纳米混悬剂中的药物，出羟基喜树碱类药物之外，还可以联合包载适量紫杉醇、多西紫杉醇、鬼臼毒素等脂溶性抗肿瘤药物。 

18.如权利要求1至17所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：纳米混悬剂表面还可以再用具有肿瘤靶向作用的各种配体进行修饰(如稳定剂处方中加入适量的HCPT-PEG-叶酸、HCPT-PEG-肽段、HCPT-PEG-单抗、HCPT-PEG-核酸适配体、HCPT-PEG-半乳糖、HCPT-PEG-半乳糖胺、HCPT-PEG-乳糖酸)，从而具有肿瘤、肝脏主动靶向作用。 

19.如权利要求1至16所述的喜树碱类药物的高载药纳米混悬剂，其特征在于：胆固醇-PEG是必不可少的核心稳定剂；为进一步改善载药纳米粒的性质，还可以加入有其他药剂上可以接受的各种辅料作为非必需的辅助稳定剂，这些辅料包括但不限于PCL-PEG、磷脂、聚乙烯醇等。