BRPI0207671B1

BRPI0207671B1 - método e sistema para a determinação quantitativa de hemoglobina em um sangue integral não diluído

Info

Publication number: BRPI0207671B1
Application number: BRPI0207671A
Authority: BR
Inventors: Joakim Pettersson; Johnny Svensson
Original assignee: Hemocue Ab
Priority date: 2001-12-28
Filing date: 2002-12-20
Publication date: 2016-09-27
Also published as: DK1456649T3; WO2003056327A1; RU2004123207A; MXPA04006323A; KR20040077865A; CN100498336C; ATE496289T1; BRPI0207671B8; SE0104443D0; AU2002359193A1; EP1698883B1; DE60212444T2; ES2266614T3; AU2002359193B2; US20030123047A1; RU2302638C2; DK1698883T3; PL369207A1; NO20033690D0; JP4532905B2

Abstract

"método de análise e sistema para o mesmo". a invenção refere-se a um método para a determinação quantitativa de hemoglobina no sangue integral não diluído, não hemolisado que compreende as etapas de: fornecer um cadinho capilar, descartável, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 1 mm; encher o dito cadinho com uma amostra de sangue integral inalterado; executar uma primeira medição de absorção em um comprimento de onda na faixa de 490 520 nm diretamente sobre a amostra no cadinho, e ainda conduzir uma segunda medição de absorção, e processar os resultados das primeira e segunda medições de absorção para determinar a concentração de hemoglobina na amostra, em que a etapa de processar compreende compensar a dispersão na amostra, a dita compensação sendo dependente do resultado da segunda medição de absorção. um sistema para implementar o método está também descrito.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODO E SISTEMA PARA A DETERMINAÇÃO QUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA EM UM SANGUE INTEGRAL NÃO DILUÍDO".

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a um método de análise e a um sistema para executar esta análise. Especifica mente a invenção refere-se a um método para a determinação de hemoglobina no sangue integral inalterado e a um sistema o qual pode ser utilizado nesta determinação.

FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

[002] Um cadinho descartável para amostrar um fluido, misturar a amostra com um reagente e executar diretamente análises óticas da amostra misturada com o reagente já é conhecido da Patente dos EUA Na 4 088 448. Este cadinho conhecido tem diversas vantagens já que ele entre outras coisas simplifica o procedimento de amostragem, reduz o número de utensílios tornando o procedimento de análise independentes da técnica de operação do operador que está executando a análise. Uma construção de cadinho com base no mesmo princípio e com características de fluxo melhoradas está descrita na Patente dos EUA Na 5 674 457.

[003] Um cadinho descartável desenvolvido de acordo com estas patentes é atualmente amplamente utilizado para a medição de hemoglobina (determinação de Hb) de sangue integral não diluído. Para este fim a cavidade do cadinho foi pré-tratada com um reagente, de tal modo que quando uma amostra de sangue é aspirada para dentro do cadinho, as paredes das células vermelhas do sangue são desintegradas e uma reação química é iniciada. O resultado da reação permite a determinação de Hb por medição de absorção diretamente através das paredes transparentes do cadinho as quais, na zona de medição, também denominada a janela ótica, têm uma distância predeterminada e precisamente definida entre as superfícies internas das paredes planas opostas. O método de medição está baseado em um método de azidamethemoglobina modificado de acordo com Vanzetti, G., Am. J. Lab. & Clin. Med. 67, 116 (1966).

[004] As medições espectrofotométricas são feitas a 570 e 880 nm. Este método de medição quantitativo baseado em química seca encontrou um considerável sucesso como pode ser visto, por exemplo, no artigo porvon Schenck et al. em Clinicai Chemistry, vol. 32, N- 3, 1986 já que o método proporciona resultados iguais ou mesmo superiores em comparação com os resultados obtidos com os métodos úmidos padronizados para a determinação de Hb. O reagente utilizado é compreendido de deoxicolato de sódio o qual hemolisa as células vermelhas do sangue, o azida de sódio e o nitrito de sódio, os quais convertem a hemoglobina em azidamethemoglobina.

[005] Devido às propriedades higroscópicas dos reagentes utilizados, a vida útil é limitada e o armazenamento dos cadinhos em embalagens vedadas incluindo um agente secante é necessário. Ainda mais problemático é o fato de que, em climas com alta umidade, o cadinho precisa ser utilizado dentro de uns poucos minutos após a remoção da embalagem, já que de outro modo os reagentes serão destruídos e a medição será imprecisa e assim inútil.

[006] Os problemas que se originam das propriedades higroscópicas dos reagentes utilizados podem no entanto ser eliminados já que foi descoberto que estes reagentes não precisam ser utilizados como descrito no Pedido de Patente Copendente PCT SE01/01442 de acordo com o qual a primeira medição de absorção é executada dentro de uma faixa de comprimento de onda de 490 - 520 nm diretamente sobre a amostra dentro do microcadinho. De acordo com a invenção descrita neste pedido de patente é no entanto necessário que o sangue seja hemolisado antes que a medição seja executada. A cavidade do cadi- nho deve assim incluir um agente hemolisante para desintegrar as células vermelhas do sangue e liberar a hemoglobina contida nestas células. A necessidade de utilizar um agente hemolisante quando executando as medições de absorbância fotométrica da hemoglobina em uma amostra de sangue está também descrita, por exemplo, na Patente dos EUA 5 064 282 (Artel).

[007] Os métodos quantitativos para a determinação ótica de hemoglobina no sangue integral sem a utilização de um agente hemolisante são conhecidos mas estes métodos têm em comum que eles são todos comparativamente complicados. Isto depende acima de tudo da não homogeneidade do sangue devido à alta concentração de células vermelhas do sangue, uma conseqüência do qual é que a luz é dispersa quando da interação com estas partículas de amostras de sangue não homogêneo. Conseqüentemente a luz não é transmitida diretamente através da amostra mas é refletida sobre uma faixa de ângulos de dispersão. Outro fator que causa problemas é o fato de que o sangue pode conter tanto quanto cinco diferentes espécies de hemoglobina. As publicações de patente que tratam destes problemas são entre outras a Patente dos EUA 6 262 798 (Shepherd) e WO 01/53806 (Radiometer).

[008] De acordo com a invenção descrita na Patente dos EUA 6 262 798 uma pluralidade de comprimentos de onda é necessária de modo a conseguir uma medição correta. O fato de que muitos comprimentos de onda são necessários torna o espectrofotômetro comparativamente complicado. Os comprimentos de onda são selecionados por sua capacidade de distinguir as espécies de hemoglobina na dispersão mínima e na absorbância máxima. A patente também descreve a utilização de um grande detector o qual reduz o problema de dispersão além da faixa de detecção.

[009] A WO 01/53806 descreve um aparelho o qual é especial- mente aplicável para as medições óticas no sangue integral. Este aparelho compreende um filtro de absorção ou um filtro de interferência, o qual fornece uma correção para as variações na sensibilidade do detector e no comprimento de percurso ótico efetivo como observado quando da variação do nível de dispersão. O aparelho utiliza um grande detector para detectar a luz dispersa transmitida através do filtro de absorção ou do filtro de interferência, [0010] A descoberta de acordo com a presente invenção de que uma determinação precisa da quantidade total de hemoglobina no sangue integral pode ser feita não somente sem utilizar um agente hemolisante mas também sem utilizar uma pluralidade de comprimentos de onda como descrito na Patente dos EUA 6 262 798 ou um filtro especial de absorção ou interferência o qual fornece uma correção para as variações na sensibilidade do detector e no comprimento do percurso ótico efetivo como observado quando da variação do nível de dispersão como descrito na WO 01/53806 foi portanto muito inesperada.

OBJETIVOS DA INVENÇÃO

[0011] Um objetivo da presente invenção é de fornecer um método quantitativo, rápido para a determinação de hemoglobina no sangue integral inalterado.

[0012] Um segundo objetivo é de fornecer um método para a determinação de hemoglobina no sangue integral inalterado, o qual pode ser executado em um microcadinho descartável.

[0013] Um terceiro objetivo é de fornecer um cadinho com uma entrada capilar e sem reagentes ativos e agente hemolisante para a determinação de hemoglobina no sangue integral inalterado.

[0014] Um quarto objetivo é de fornecer um método para processar os resultados das medições de absorção para a determinação de hemoglobina no sangue integral inalterado.

[0015] Um quinto objetivo é de fornecer um sistema para implementar os métodos para a determinação de hemoglobina no sangue integral inalterado.

[0016] Outros objetivos ficarão aparentes da seguinte descrição e dos desenhos acompanhantes.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0017] De acordo com um aspecto da presente invenção um método para fornecer uma tal determinação de hemoglobina compreende as etapas de: [0018] fornecer um cadinho capilar, descartável, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 1 mm;

[0019] encher o dito cadinho com uma amostra de sangue integral inalterado;

[0020] executar uma primeira medição de absorção em um comprimento de onda na faixa de 490 - 520 nm diretamente sobre a amostra no cadinho;

[0021] ainda conduzindo uma segunda medição de absorção; e [0022] processar os resultados das primeira e segunda medições de absorção para determinar a concentração de hemoglobina na amostra, em que a etapa de processar compreende compensar a dispersão na amostra, a dita compensação sendo dependente do resultado da segunda medição de absorção.

[0023] De acordo com outro aspecto da presente invenção um método é fornecido para determinar uma concentração de hemoglobina em uma amostra de sangue integral não dilufdo, não hemolisado de um resultado de uma primeira medição de absorção na amostra executado em um comprimento de onda na faixa de 490 - 520 nm e um resultado de uma segunda medição de absorção na amostra. O método compreende: processar os resultados das primeira e segunda medições de absorção para determinar a concentração de hemoglobina na amostra, em que a etapa de processar compreende compensar a dispersão na amostra, a dita compensação sendo dependente do resultado da segunda medição de absorção.

[0024] De acordo com um aspecto adicional da presente invenção um sistema que fornece uma tal determinação da hemoglobina compreende: [0025] um meio para emitir luz em um primeiro comprimento de onda em uma primeira faixa de 490 - 520 nm e em um segundo comprimento de onda em uma segunda faixa, [0026] um suporte de cadinho disposto para receber um cadinho capilar, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 1 mm e contém uma amostra de sangue integral inalterado, [0027] um detector para detectar a luz transmitida através da amostra em uma primeira medição de absorção para a luz na dita primeira faixa e em uma segunda medição de absorção para a luz na dita segunda faixa, e [0028] uma unidade de processamento para processar os resultados das primeira e segunda medições de absorção para determinar a concentração de hemoglobina na amostra, em que o processamento compreende compensar a dispersão na amostra, a dita compensação sendo dependente do resultado da segunda medição de absorção.

[0029] Assim foi inesperadamente descoberto que as determinações quantitativas de hemoglobina podem ser facilmente executadas sem não somente os reagentes químicos azida de sódio e nitrito de sódio mas também sem um agente hemolisante diretamente sobre o sangue integral inalterado, isto é não diluído e não hemolisado. Como o sangue integral inalterado contém células do sangue, existe uma dispersão substancial da luz na amostra. Assim, até o momento foi esperado que uma determinação de hemoglobina quantitativa em sangue integral não diluído, não hemolisado fosse requerida detectar e analisar a luz dispersa. De acordo com a invenção, a determinação de hemoglobina pode ser executada por duas medições de absorção sem a necessidade de conhecer quantitativamente os coeficientes de dispersão do conteúdo do sangue ou reduzir fisicamente os efeitos da medição da luz dispersa. Foi inesperadamente descoberto que pela compensação do nível de absorção da amostra na segunda medição de absorção, o efeito de dispersão pode ser facilmente considerado. Assim, de acordo com a invenção, a determinação de hemoglobina é simples, requerendo somente duas medições de absorção.

[0030] De acordo com a presente invenção foi assim descoberto que os reagentes higroscópicos podem ser eliminados. Mais ainda, foi descoberto que o tempo para a obtenção da determinação analítica pode ser reduzido. Como as análises são executadas em grandes quantidades em, por exemplo, hospitais e bancos de sangue, o aspecto de tempo é importante.

[0031] No contexto deste pedido, o termo "medição de absorção" deve ser considerado como uma medição relativa à absorção em uma amostra. Em uma medição de absorção, a intensidade da luz detectada após interagir com a amostra é comparada com a intensidade da luz irradiada sobre a amostra. A luz detectada corresponde à transmi-tância através da amostra. A luz que não atinge o detector é considerada como sendo absorvida. Assim, nos resultados das medições a transmitância pode ser utilizada ao invés da absorção. Como a trans-mitância é o inverso da absorção, a detecção da transmitância seria ainda uma medição de absorção. No entanto, a absorção medida não somente corresponde à luz que foi verdadeiramente absorvida na amostra, já que parte da luz foi dispersa na amostra de modo que ela não atinge o detector.

[0032] Ainda, o termo "determinação" deve ser considerado como a medição não obtendo necessariamente um valor absolutamente exa- to da concentração de hemoglobina na amostra. Assim, a concentração de hemoglobina é "determinada" dentro de margens de erro razoáveis de tal modo que o resultado não forneça meramente uma ordem de magnitude da concentração, apesar de não fornecer necessariamente um valor absoluto.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0033] A invenção será agora por meio de um exemplo descrita em mais detalhes com referência aos desenhos acompanhantes, nos quais: [0034] Figura 1 é um gráfico de fluxo de um método de acordo com a invenção, [0035] Figura 2 é um diagrama esquemático da absorbância da hemoglobina, [0036] Figura 3 é uma vista esquemãtica de um sistema de acordo com a invenção, [0037] Figura 4A é um diagrama que ilustra uma avaliação do método da invenção em comparação com os microcadinhos HemoCue atualmente utilizados, [0038] Figura 4B é um diagrama que ilustra uma avaliação do método da invenção em comparação com um método de referência internacional.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0039] Referindo-se agora à Figura 1, um método para a determinação de hemoglobina de acordo com a invenção será agora descrito. Primeiramente um cadinho capilar, descartável é cheio com uma amostra de sangue integral inalterado, etapa 1. Assim, uma amostra a qual deve ser analisada é obtida. Então, uma primeira medição de absorção na amostra é executada a um comprimento de onda na faixa de 490 - 520 nm, etapa 2. Ainda, uma segunda medição de absorção é executada na amostra, etapa 3. A segunda medição de absorção é executada a um comprimento de onda na faixa de 650 - 1200 nm. Esta segunda medição de absorção é utilizada para compensar a dispersão da luz na amostra, como será descrito em mais detalhes abaixo. Finalmente, os resultados das medições são processados, etapa 4, utilizando um algoritmo predeterminado para determinar a concentração de hemoglobina na amostra.

[0040] O microcadinho descartável utilizado de acordo com a presente invenção pode ser do tipo descrito na Patente dos EUA 4 088 448 ou preferivelmente na Patente dos EUA 5 674 457 as quais são por meio disto incorporadas por referência. O cadinho pode ser definido como um membro de corpo unitário que inclui pelo menos uma cavidade com uma janela ótica (zona de medição) em que duas superfícies, planas ou curvas, que faceiam a cavidade estão colocadas a uma distância predeterminada uma da outra e assim definem um comprimento de percurso ótico predeterminado. Esta distância entre as superfícies que definem a zona de medição é um parâmetro crítico no fornecimento do comprimento do percurso ótico apropriado para a medição de hemoglobina. O comprimento do percurso ótico deve ser menor do que 1 mm de modo a assegurar que a intensidade da luz transmitida através de uma amostra dentro do cadinho é suficiente para permitir a medição de hemoglobina na amostra. Em uma modalidade preferida, esta distância é menor do que 0,2 mm, e mais preferivelmente entre 0,05 e 0,2 mm. A distância entre as superfícies internas do resto da cavidade é preferivelmente na ordem de 0,1 - 2 mm a qual é efetiva para permitir que a amostra entre na cavidade por força capilar através da entrada da cavidade, a qual está se comunicando com o exterior do membro de corpo. Mais ainda, a cavidade tem um volume fixo predeterminado menor do que aproximadamente 25 μΙ. Nenhum aditivo ativo, tal como os reagentes ou os agentes hemolisantes, são necessários para a medição de acordo com o método da invenção.

[0041] Os cadinhos de acordo com a presente invenção podem ser formados de qualquer material adequado, o qual permite a formação dos níveis de tolerância apertados necessários. Preferivelmente o cadinho é fabricado por moldagem por injeção de um material polimé-rico transparente.

[0042] De modo a superar os problemas relativos ao enchimento capilar do cadinho pode ser necessário pré-tratar as superfícies internas do cadinho de modo a imprimir um caráter hidrofílico a estas superfícies. Isto pode ser conseguido revestindo as superfícies com um detergente adequado, tal como o Brij 35. Outra possibilidade é de selecionar um material hidrofílico para a fabricação do cadinho. Um aspecto crítico do método da invenção é que a determinação de absorção deve ser executada em um comprimento de onda na faixa de 490 - 520 nm, mais preferivelmente na faixa de 500 - 510 nm, e mais preferivelmente em 506 nm. A medição de absorção compensatória secundária é preferivelmente executada em um comprimento de onda na faixa de 650 - 1200 nm, mais preferivelmente nas faixa 850 - 910 nm, e mais preferivelmente nas faixa de 860 - 900 nm.

[0043] As medições de absorção são executadas diretamente sobre o sangue integral na amostra, isto é o sangue está inalterado (não diluído e não hemolisado).

[0044] Na faixa de comprimento de onda de 490 - 520 nm, as absorções das cinco diferentes formas de hemoglobina, a saber oxi-, deoxi-, carboxi-, met- e sulfohemoglobina, são similares e significativas. Assim, a absorção nesta faixa de comprimento de onda dependerá somente ligeiramente na distribuição entre as diferentes formas de hemoglobina no sangue. Especialmente, a 506 nm, a diferença entre as absorvências da oxi- e deoxihemoglobina é próxima de zero. Como estas formas de hemoglobina são predominantes no sangue normal, a absorção de oxi- e deoxihemoglobina pode vantajosamente ser utiliza- da para a determinação de um coeficiente para relacionar uma absorção medida com a concentração de hemoglobina a 506 nm. Conse-qüentemente, algumas suposições são feitas a respeito do conteúdo de diferentes formas de hemoglobina na amostra de sangue. Assim, a determinação de hemoglobina não será tão precisa ou o processamento dos resultados da medição precisarão ser modificados, se a medição for feita em uma amostra de sangue que tem uma distribuição muito diferenciada das formas de hemoglobina. Ainda, as medições somente determinarão a concentração total de hemoglobina e não as concentrações das formas específicas de hemoglobina.

[0045] Uma segunda medição de absorção é executada em um comprimento de onda, aonde a absorção da luz no sangue é substancialmente menor. Uma tal medição de absorção poderia adequadamente ser executada a um comprimento de onda na faixa de 650 -1200 nm. Considera-se que as diferenças entre as medições de absorção são devido à absorção da hemoglobina.

[0046] No entanto, a dispersão da luz varia com a concentração de hemoglobina na amostra, mas a dispersão da luz não é somente dependente da concentração de hemoglobina. A dispersão da luz é devido à interação da luz com as partículas dentro do sangue, tais como as células vermelhas do sangue, as células brancas do sangue, as plaquetas, os lipídios e outras macromoléculas. De acordo com a invenção, foi inesperadamente descoberto que o efeito de dispersão pode estar relacionado com o resultado da medição na segunda medição de absorção, como será explicado com referência ao diagrama es-quemático na Figura 2. Na Figura 2, a linha sólida ilustra esquemati-camente a absorção medida em uma primeira amostra que tem uma alta concentração de hemoglobina. A absorção inclui tanto a verdadeira absorção quanto a luz dispersa de modo que ela não atinge um detector. A linha tracejada na Figura 2 ilustra esquematicamente a ab- sorção medida em uma segunda amostra que tem uma concentração mais baixa de hemoglobina. Deve ser notado que o diagrama esque-mático na Figura 2 somente enfatiza os aspectos principais da absorção de amostras de sangue integral, e não ilustra a absorção de amostras reais. Como pode ser visto na Figura 2, a diferença em absorção para a primeira amostra entre um primeiro comprimento de onda em 506 nm e um segundo comprimento de onda a 880 nm é substancialmente igual à diferença correspondente em absorção para a segunda amostra. Portanto, se a concentração de hemoglobina for determinada diretamente das diferenças nas absorções medidas, um resultado errôneo seria apresentado, pelo menos para uma das amostras. Assim, uma compensação para a luz dispersa será necessária, e de acordo com a invenção foi descoberto que uma compensação para o nível de absorção levará em consideração a dispersão e permitirá uma determinação de hemoglobina simples.

[0047] Foi empiricamente determinado que quando utilizando uma compensação que é proporcional ao nível de absorção, um valor correto da concentração de hemoglobina pode ser obtido.

[0048] De acordo com o acima, os resultados das medições de absorção devem ser processados para determinar a concentração de hemoglobina na amostra. Este processamento pode ser executado por um algoritmo predeterminado. Este algoritmo calcula a concentração de hemoglobina de acordo com o esquema acima descrito.

[0049] A compensação da dispersão de luz está preferivelmente dependente do resultado da segunda medição de absorção. Uma função de compensação poderia ser determinada pela execução de medições de absorção em um conjunto de amostras de sangue que tem concentrações conhecidas de hemoglobina. Estas medições de absorção são executadas em uma disposição de medição a qual deve ser utilizada. Então, a compensação necessária para a dispersão de modo a obter resultados corretos é comparada com os valores da segunda medição de absorção. Deste modo, uma função da segunda medição de absorção pode ser encontrada que fornecería uma compensação de modo que as concentrações determinadas de hemoglobina cairiam dentro de uma margem de erro aceitável.

[0050] Em um modelo simplificado, a compensação é linearmente dependente do resultado da segunda medição de absorção pelo menos dentro de uma faixa do resultado da segunda medição de absorção. Esta faixa do resultado da segunda medição de absorção pode abranger valores típicos da segunda medição de absorção que são obtidos com a disposição de medição específica.

[0051] O processamento pode determinar a concentração de hemoglobina na amostra pela computação da seguinte fórmula: [Tot Hb] = (Abs-, - Abs2). k + F(Abs2) [0052] aonde [Tot Hb] é a concentração total de hemoglobina na amostra, Abs^ é a absorbância medida da primeira medição de absorção, Abs2 é absorbância medida da medição de absorção, k é um coeficiente de calibração, o qual depende da disposição de medição, e F(Abs2) é uma função que depende da absorbância medida da segunda medição de absorção. O coeficiente de calibração k pode ser específico para cada instrumento utilizado para a determinação de hemoglobina. A função de compensação F(Abs2) pode ter uma parte constante, a qual também é uma calibração para cada instrumento, e uma parte variável, a qual depende do resultado da segunda medição de absorção e é obtida como descrito acima. Neste caso, a parte variável pode ser zero para um resultado da segunda medição de absorção que está no centro da faixa dos resultados da segunda medição de absorção.

[0053] Referindo-se agora à Figura 3, um sistema que implementa o método acima descrito será descrito. O sistema compreende um meio 10 para emitir a luz em um primeiro comprimento de onda em uma primeira faixa de 490 - 520 nm e em um segundo comprimento de onda em uma segunda faixa de 650 - 1200 nm. Este meio 10 para emitir luz pode ser implementado por uma combinação de uma fonte de luz emitindo em diversos comprimentos de onda ou em amplas faixas de comprimento de onda com filtros. Assim, a fonte de luz fica disposta para emitir a luz tanto no primeiro comprimento de onda quanto no segundo comprimento de onda. Utilizando o filtro o comprimento de onda emitido poderia seletivamente ser controlado para ficar dentro de uma destas faixas. Alternativamente, uma primeira e uma segunda fonte de luz poderíam ser utilizadas para emitir os primeiro e segundo comprimentos de onda, respectivamente. Os diodos de emissão de luz poderíam ser utilizados como as fontes de luz. Então, ligando e desligando as duas fontes de luz, o meio 10 para emitir a luz poderia ser seletivamente controlado para emitir luz nos primeiro ou segundo comprimento de onda.

[0054] Preferivelmente, o primeiro comprimento de onda emitido pelo meio 10 para emitir a luz está na faixa de 500 - 510 nm, mas preferivelmente a 506 nm. O segundo comprimento de onda emitido pelo meio 10 para emitir a luz está preferivelmente na faixa de 850 - 910 nm, e mais preferivelmente na faixa de 860 - 900 nm.

[0055] O sistema ainda compreende um suporte de cadinho 12 disposto para receber um cadinho capilar, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 1 mm e contém uma amostra de sangue integral inalterado. Quando um cadinho é colocado neste suporte 12, a janela ótica ficará corretamente posicionada de modo que ela será irradiada com a luz da fonte de luz. Preferivelmente, o suporte de cadinho está disposto para receber um cadinho, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 0,2 mm, e mais preferivelmente na faixa de 0,05 - 0,2 mm.

[0056] A luz transmitida através da amostra será detectada por um detector 14 de modo que uma primeira medição de absorção possa ser obtida para a luz na primeira faixa e uma segunda medição de absorção possa ser obtida para a luz na segunda faixa.

[0057] O sistema ainda compreende uma unidade de processamento 16 para processar os resultados das primeira e segunda medições de absorção para determinar a concentração de hemoglobina na amostra de acordo com o algoritmo descrito acima.

[0058] O sistema pode ser adequadamente implementado em um fotômetro que compreende um meio 10 para emitir a luz, o suporte de cadinho 12, e o detector 14. Fotômetros adequados para executar estas medições podem ser obtidos pela utilização de fotômetros modificados com filtros de comprimento de onda e diodos de emissão de luz adequados. De acordo com uma modalidade preferida da invenção um fotômetro mede a absorbância nos dois comprimentos de onda e um microprocessador embutido calcula, de acordo com um algoritmo programado, a concentração total de hemoglobina no sangue. Assim, nenhum filtro especial de absorção ou de interferência o qual fornece uma correção para as variações na sensibilidade do detector e no comprimento de percurso ótico efetivo como descrito na WO 01/53806 é necessário.

[0059] No caso acima, a unidade de processamento 16 está embutida no fotômetro. No entanto, a unidade de processamento 16 pode também estar conectada no fotômetro, e assim ser implementada fora do fotômetro. Por exemplo, um computador conectado no fotômetro pode ser utilizado.

[0060] O detector 14 pode estar disposto para detectar essencialmente somente a luz diretamente transmitida, já que a luz dispersa não precisa ser detectada. Isto implica em que o detector 14 detecta a luz a qual está essencialmente dentro do diâmetro do feixe de luz irra- diado sobre a amostra e diretamente transmitido através da amostra. É claro, parte da luz pode ser dispersa, enquanto ainda estando dentro deste diâmetro. De acordo com uma modalidade preferida, o diâmetro de uma área de detecção do detector 14 pode tipicamente ser de aproximadamente 2 mm. O detector 14 está preferivelmente disposto mais próximo do que 10 mm do suporte de amostra. Isto implica em que a luz a qual foi dispersa em pequenos ângulos seja detectada.

[0061] O exemplo não limitante seguinte ilustra o método da invenção.

[0062] Foi descoberto que o período de tempo para analisar o sangue era aproximadamente 30 segundos mais curto para o método da invenção em comparação com o método para a determinação de hemoglobina nos microcadinhos HemoCue conhecidos, atualmente utilizados. Isto permite uma clara redução do tempo total da determinação de hemoglobina o que pode ser vantajoso em hospitais movimentados e em outras situações aonde muitas determinações são feitas. Outra vantagem é que não há necessidade de um cadinho contendo agentes ativos ou agentes hemolisantes. Assim, o armazenamento dos cadinhos é insensível à temperatura e à umidade no ambiente de armazenamento, o que torna a manipulação dos cadinhos antes de sua utilização muito mais simples.

[0063] Uma avaliação preliminar do novo método em comparação com o método de HemoCue está descrita na Figura 4A. A avaliação foi feita sob condições de laboratório. Como pode ser visto a concordância entre os métodos é muito boa.

[0064] As medições de absorção espectrofotométricas foram feitas a aproximadamente 570 nm para o método conhecido e a aproximadamente 505 nm para o novo método. Para ambos os métodos medições compensatórias foram feitas a aproximadamente 880 nm.

[0065] Ainda, uma segunda avaliação do novo método em compa- ração com o método de ICSH padrão está descrito na Figura 4B. Pode ser visto que a concordância entre estes métodos é também muito boa.

[0066] O acima foi uma descrição de uma certa modalidade preferida da presente invenção, mas não pretende limitar a invenção em nenhum modo. Ao contrário, muitas modificações, variações e mudanças em detalhes podem ser feitas dentro do escopo da presente invenção.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Método para a determinação quantitativa de hemoglobina em um sangue integral não diluído, não hemolisado que compreende as etapas de: fornecer um cadinho capilar, descartável, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 1 mm; encher o cadinho com uma amostra de sangue integral inalterado; executar uma primeira medição de absorção em um comprimento de onda na faixa de 490 - 520 nm diretamente sobre a amostra no cadinho; ainda conduzir uma segunda medição de absorção, em que a segunda medição de absorção é executada em um comprimento de onda na faixa de 650 - 1200 nm, mais preferivelmente na faixa de 850 - 910 nm, mais preferivelmente na faixa de 860 - 900 nm, e caracterizado pelo fato de que ainda compreende a etapa de processar os resultados das primeira e segunda medições de absorção para determinar a concentração de hemoglobina na amostra pela computação da seguinte fórmula: aonde [Tot Hb] é a concentração total de hemoglobina na amostra, Absi é a absorbância medida da primeira medição de absorção, Abs2 é absorbância medida da medição de absorção, k é um coeficiente de calibração, o qual depende da disposição de medição, e F(Abs2) é uma função que depende da absorbância medida da segunda medição de absorção, em que a etapa de processar compreende compensar a dispersão na amostra, a dita compensação sendo dependente do resultado da segunda medição de absorção.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a primeira medição de absorção é executada em um comprimento de onda na faixa de 500 - 510 nm, mais preferivelmente a 506 nm.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a medição de absorção é executada em um fotômetro sem um filtro de absorção ou um filtro de interferência, os quais fornecem correção para as variações na sensibilidade do detector e no comprimento do percurso ótico efetivo.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o cadinho tem um comprimento de percurso ótico menor do que 0,2 mm.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o cadinho tem um comprimento de percurso ótico na faixa de 0,05 - 0,2 mm.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o processamento é executado por um algoritmo predeterminado.

7. Sistema para uma determinação quantitativa de hemoglobina em um sangue integral não diluído, não hemolisado que compreende: um meio para emitir luz em um primeiro comprimento de onda em uma primeira faixa de 490 - 520 nm e em um segundo comprimento de onda em uma segunda faixa de 650 - 1200 nm, mais preferivelmente na faixa de 850 - 910 nm, mais preferivelmente na faixa de 860 - 900 nm, um suporte de cadinho disposto para receber um cadinho capilar, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 1 mm e contém uma amostra de sangue integral inalterado, um detector para detectar a luz transmitida através da amostra em uma primeira medição de absorção para a luz na dita pri- meira faixa e em uma segunda medição de absorção para a luz na dita segunda faixa, e caracterizado pelo fato de que ainda compreende uma unidade de processamento para processar os resultados das primeira e segunda medições de absorção para determinar a concentração de hemoglobina na amostra pela computação da seguinte fórmula: aonde [Tot Hb] é a concentração total de hemoglobina na amostra, Absi é a absorvería medida da primeira medição de absorção, Abs2 é absorbância medida da segunda medição de absorção, k é um coeficiente de calibração, o qual depende da disposição de medição, e F(Abs2) é uma função que depende da absorbância medida da segunda medição de absorção, em que o processamento compreende compensar a dispersão na amostra, a dita compensação sendo dependente do resultado da segunda medição de absorção.

8. Sistema, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o meio para emitir luz, o suporte de cadinho e o detector estão dispostos dentro de um fotômetro.

9. Sistema, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a unidade de processamento está embutida no fotômetro.

10. Sistema, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a unidade de processamento está conectada no fotômetro.

11. Sistema, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 10, caracterizado pelo fato de que uma área de detecção do detector tem um tamanho tal que essencialmente somente a luz transmitida diretamente é detectada.

12. Sistema, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 11, caracterizado pelo fato de que o detector está disposto mais próximo do que 10 mm do suporte de amostra.

13. Sistema, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 12, caracterizado pelo fato de que o meio para emitir luz compreende uma fonte de luz, a qual está disposta para emitir luz no primeiro comprimento de onda e emitir luz no segundo comprimento de onda.

14. Sistema, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 13, caracterizado pelo fato de que o meio para emitir luz compreende uma primeira fonte de luz, a qual está disposta para emitir luz no primeiro comprimento de onda, e uma segunda fonte de luz, a qual está disposta para emitir luz no segundo comprimento de onda.

15. Sistema, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 14, caracterizado pelo fato de que o primeiro comprimento de onda emitido pelo meio para emitir luz está na faixa de 500 - 510 nm, mais preferivelmente a 506 nm.

16. Sistema, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 15, caracterizado pelo fato de que o suporte de cadinho está disposto para receber um cadinho, o qual tem um comprimento de percurso ótico menor do que 0,2 mm.

17. Sistema, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o suporte de cadinho está disposto para receber um cadinho, o qual tem um comprimento de percurso ótico na faixa de 0,05 - 0,2 mm.

18. Sistema, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 16, caracterizado pelo fato de que a unidade de processamento utiliza um algoritmo predeterminado para executar o processamento.