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BR112020020802A2 - Composições farmacêuticas, composições farmacêuticas produzidas por liofilização, composições líquidas, composição farmacêutica compreendendo um imunoconjugado anti-cd79b, frasco de vidro, composição líquida compreendendo um imunoconjugado anti-cd79b, composições farmacêuticas liofilizadas, composição liofilizada, composições farmacêuticas líquidas, método para tratar um distúrbio proliferativo - Google Patents

Composições farmacêuticas, composições farmacêuticas produzidas por liofilização, composições líquidas, composição farmacêutica compreendendo um imunoconjugado anti-cd79b, frasco de vidro, composição líquida compreendendo um imunoconjugado anti-cd79b, composições farmacêuticas liofilizadas, composição liofilizada, composições farmacêuticas líquidas, método para tratar um distúrbio proliferativo Download PDF

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BR112020020802A2
BR112020020802A2 BR112020020802-7A BR112020020802A BR112020020802A2 BR 112020020802 A2 BR112020020802 A2 BR 112020020802A2 BR 112020020802 A BR112020020802 A BR 112020020802A BR 112020020802 A2 BR112020020802 A2 BR 112020020802A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
pharmaceutical composition
cd79b
seq
composition
antibody
Prior art date
Application number
BR112020020802-7A
Other languages
English (en)
Inventor
Ankit R. Patel
Jun Liu
Original Assignee
Genentech, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech, Inc. filed Critical Genentech, Inc.
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Abstract

a divulgação fornece composições farmacêuticas estáveis compreendendo um imunoconjugado anti-cd79b e um tensoativo. a divulgação também fornece métodos para usar tais composições para o tratamento de câncer.

Description

“COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS PRODUZIDAS POR LIOFILIZAÇÃO, COMPOSIÇÕES LÍQUIDAS,
COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO UM IMUNOCONJUGADO ANTI-CD79B, FRASCO DE VIDRO, COMPOSIÇÃO LÍQUIDA COMPREENDENDO UM IMUNOCONJUGADO ANTI-CD79B, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS LIOFILIZADAS, COMPOSIÇÃO LIOFILIZADA, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS LÍQUIDAS, MÉTODO PARA TRATAR UM DISTÚRBIO PROLIFERATIVO”
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório dos EUA de nº 62/657.185, depositado em 13 de abril de 2018, cuja divulgação é incorporada neste documento por referência em sua totalidade.
APRESENTAÇÃO DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS EM ARQUIVO DE TEXTO ASCII
[0002] O conteúdo da seguinte submissão em arquivo de texto ASCII é incorporado neste documento por referência em sua totalidade: uma forma legível por computador (CRF) da Listagem de Sequência (nome do arquivo: 146392044340SEQLIST.TXT, data registrada: 9 de abril de 2019, tamanho: 12 KB).
CAMPO
[0003] A presente divulgação é direcionada a composições farmacêuticas estáveis compreendendo um imunoconjugado anti-CD79b e um tensoativo. A divulgação também fornece métodos para usar tais composições para o tratamento de câncer.
ANTECEDENTES
[0004] A administração intravenosa (IV) usando bolsas de infusão é a via mais comum de liberação de produtos biológicos no ambiente comercial. Para apoiar a liberação e compatibilidade de um produto biológico, tal como um imunoconjugado, por administração IV, é necessário projetar uma formulação terapêutica adequada que mantenha a estabilidade após a diluição na bolsa de infusão, durante o transporte e durante o curso de administração (Bardin, C. et al., Annales pharmaceutiques francaises 69 (2011) 221-231).
[0005] Um desafio da administração de produtos biológicos, especialmente usando bolsas de infusão IV, é que os materiais de construção e solução de infusão podem apresentar um ambiente desestabilizador para a proteína terapêutica. Além disso, a proteína também encontra tensões interfaciais na bolsa IV. A adsorção de proteínas nas interfaces sólido-líquido e ar-água pode causar desnaturação de proteínas na superfície, levando à agregação de proteínas (Shieh, I., et al., Mol Pharm. 12 (2015): 3184-93; Sreedhara, A., et al., Pharm. Sci. 101 (2012): 21-30). Para complicar ainda mais a administração IV, a agitação das bolsas de infusão causa regeneração contínua da interface ar-líquido, resultando em danos repetidos à proteína ao longo do tempo. A agregação, causada pelas condições de solução desestabilizadora da bolsa IV ou pelo estresse interfacial, pode impactar de forma significativa e negativa a qualidade do produto, a potência e a imunogenicidade de um produto biológico.
[0006] Os efeitos deletérios da administração IV em produtos biológicos podem ser mitigados, em parte, pelo uso de tensoativos no desenvolvimento de formulações. Os tensoativos não iônicos, tais como polissorbato-20 (PS20) ou polissorbato-80 (PS80) são comumente usados em formulações de proteínas para proteger e estabilizar a molécula contra o estresse interfacial ar-água (Kerwin, BA. J. Pharm. Sci. 97 (2008) 2924-2935).
Os tensoativos podem proteger o produto de farmáco (PF) contra danos induzidos pela superfície, competindo com a proteína nas interfaces ar-água e sólido-água (Kerwin, BA. J. Pharm. Sci. 97 (2008) 2924-2935). Além disso, os tensoativos também reduzem a tensão superficial do sistema (Cleland, JL., et al., Critical reviews in therapeutic drug carrier systems 10 (1993) 307-377). No entanto, uma desvantagem crítica no uso de um tensoativo não iônico a uma concentração adequada para liberação em bolsa IV é que a exposição prolongada de um agente biológico ao tensoativo pode levar à oxidação de resíduos de aminoácidos específicos, reduzindo assim a potência terapêutica.
Lam X, et al., Pharm Res. (2011) 28:2543-2555.
[0007] É importante notar que, antes da administração IV, os produtos biológicos também devem possuir uma vida útil longa e estável sob condições de armazenamento, sem compreender a estrutura e a atividade da proteína terapêutica. As formulações líquidas de conjugados de anticorpo- fármaco (ADCs) que empregam um ligante, por exemplo, podem ser suscetíveis à hidrólise catalisada por ácido do ligante durante o armazenamento. Tal instabilidade pode causar liberação prematura do composto de fármaco após administração IV a um paciente, afetando negativamente a farmacocinética e a segurança do produto biológico.
[0008] Assim, existe a necessidade de desenvolver uma composição farmacêutica estável que seja estável para administração IV e possua uma longa vida útil sob condições de armazenamento. A presente divulgação atende a essa necessidade e oferece outras vantagens relacionadas.
BREVE DESCRIÇÃO RESUMIDA
[0009] Em um aspecto, a divulgação fornece uma composição farmacêutica incluindo um imunoconjugado anti-CD79b e um tensoativo, em que o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml) e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula:
- em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de 5, tal como cerca de 3,5).
[0010] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 5 mg/ml a cerca de 60 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 40 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 30 mg/ml, ou cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml.
[0011] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Em uma modalidade, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 10 mg/ml. Em outra modalidade, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 20 mg/ml.
[0012] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de 5 mg/ml a 60 mg/ml, 10 mg/ml a 50 mg/ml, 10 mg/ml a 40 mg/ml, 10 mg/ml a 30 mg/ml ou 10 mg/ml a 20 mg/ml.
[0013] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de 10 mg/ml a 20 mg/ml. Em uma modalidade, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de 10 mg/ml. Em outra modalidade, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de 20 mg/ml.
[0014] Em algumas modalidades, o tensoativo está a uma concentração entre cerca de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml) e cerca de 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml). Em algumas modalidades, o tensoativo está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em outra modalidade, o tensoativo está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml). Em algumas modalidades, o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v. Em outra modalidade, o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,12% p/v. Em algumas modalidades, o tensoativo está a uma concentração de 0,06% p/v. Em outra modalidade, o tensoativo está a uma concentração de 0,12% p/v.
[0015] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 10 mg/ml e o tensoativo está a uma concentração de cerca de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 20 mg/ml e o tensoativo está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,12% p/v. Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 20 mg/ml e o tensoativo está a uma concentração de cerca de 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml).
[0016] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de 10 mg/ml e o tensoativo está a uma concentração de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,12% p/v. Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo está a uma concentração de 0,12% p/v.
[0017] Em algumas modalidades de acordo com (ou conforme aplicado a) qualquer uma das modalidades acima, a composição farmacêutica é uma composição farmacêutica líquida. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é estável por pelo menos cerca de qualquer uma de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a 30°C, ou por pelo menos cerca de qualquer uma de 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a 2°C a 8°C.
[0018] Em certas modalidades da presente divulgação, o tensoativo deste documento é não iônico. Em uma modalidade exemplar, o tensoativo é escolhido a partir do grupo que consiste em polissorbato 20 (PS20), polissorbato 80 (PS80), poloxamer 188 (P188), N-octil-β-D glucopiranosídeo (OG) e uma combinação destes. Em uma modalidade específica, o tensoativo é PS20. Em ainda outra modalidade específica, o tensoativo é PS80.
[0019] Em algumas modalidades da presente divulgação, a composição inclui ainda um agente tamponante. Em certas modalidades, o agente tamponante é um tampão histidina. Em algumas modalidades, o agente tamponante é um tampão succinato. Em uma modalidade específica, o tampão succinato é um tampão succinato de sódio. Em algumas modalidades, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM. Em algumas modalidades, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de 10 mM a 200 mM. Em uma modalidade, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de cerca de 10 mM. Em outra modalidade, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de 10 mM.
[0020] Em algumas modalidades, a composição da presente divulgação tem um pH de cerca de 5,0 a cerca de 6,0. Em modalidades específicas, o tampão tem um pH de cerca de 5,0, cerca de 5,1, cerca de 5,2, cerca de 5,3, cerca de 5,4, cerca de 5,5, cerca de 5,6, cerca de 5,7, cerca de 5,8, cerca de 5,9 ou cerca de 6,0. Em uma modalidade, a composição da presente divulgação tem um pH de cerca de 5,3. Em algumas modalidades, a composição da presente divulgação tem um pH de 5,0 a 6,0. Em modalidades específicas, o tampão tem um pH de 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 ou 6,0. Em uma modalidade, a composição da presente divulgação tem um pH de 5,3.
[0021] Em certas modalidades da presente divulgação, a composição inclui ainda um açúcar. Em algumas modalidades, o açúcar está a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM. Em algumas modalidades, o açúcar está a uma concentração de 100 mM a 260 mM. Em algumas modalidades, o açúcar é selecionado a partir do grupo que consiste em: sacarose, manitol, sorbitol, glicerol, dextrano 40 e trealose.
[0022] Em uma modalidade específica, o açúcar é sacarose. Em uma modalidade da presente divulgação, a sacarose está a uma concentração de cerca de 120 mM. Em outra modalidade, a sacarose está a uma concentração de 120 mM.
[0023] Em algumas modalidades, a composição da presente divulgação é liofilizada (tal como um bolo liofilizado). Em algumas modalidades, a composição liofilizada está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0024] Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição farmacêutica produzida por liofilização de uma formulação líquida incluindo 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a formulação líquida tem um pH de 5,3, e em que o imunoconjugado anti- CD79b tem a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de 5, tal como cerca de 3,5).
[0025] Em algumas modalidades da presente divulgação, o anticorpo anti-CD79b compreende um domínio variável da cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 9 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10.
[0026] Também é fornecida uma composição farmacêutica produzida por liofilização de uma formulação líquida compreendendo 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a formulação líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti- CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5 (tal como cerca de 3,5). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é um bolo liofilizado.
[0027] Em certas modalidades, a composição farmacêutica da presente divulgação tem uma estabilidade de cerca de 60 meses a 5°C ± 3°C quando protegida da luz. Em certas modalidades, a composição farmacêutica da presente divulgação tem uma estabilidade de cerca de 48 meses a 5°C ± 3°C quando protegida da luz.
[0028] Em algumas modalidades, a estabilidade da composição farmacêutica da presente divulgação é medida por cromatografia por exclusão de tamanho de alto desempenho (SE-HPLC). Em uma modalidade, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0 conforme medido por SE-HPLC.
[0029] Em algumas modalidades, a estabilidade da composição farmacêutica da presente divulgação é medida por focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF). Em uma modalidade, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 58,0, uma região ácida (% de área) de no máximo 32,0 e uma região básica (% de área) de no máximo 12,0 conforme medido por icIEF.
[0030] Em certas modalidades, a composição farmacêutica da presente divulgação é reconstituída com água estéril para injeção (SWFI). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é reconstituída em cerca de 7,2 ml de SWFI. Em algumas modalidades, a composição reconstituída é estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a cerca de 30°C.Em algumas modalidades, a composição reconstituída é estável por pelo menos 24, 48 ou 72 horas após o armazenamento de cerca de 2°C a cerca de 8°C. Em algumas modalidades, a composição reconstituída é ainda diluída em um tampão isotônico em uma bolsa intravenosa (IV). Em algumas modalidades, o volume final da composição diluída na bolsa IV está entre cerca de 50 ml e cerca de 100 ml.
Em algumas modalidades, a concentração do imunoconjugado na bolsa IV está entre cerca de 0,72 mg e cerca de 2,7 mg.
[0031] Também é fornecida neste documento uma composição farmacêutica produzida por liofilização de uma formulação líquida compreendendo 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a formulação líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti- CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5 (tal como cerca de 3,5).
[0032] É fornecida uma composição líquida (tal como para administração intravenosa) compreendendo a) entre cerca de 0,72 e cerca de 2,7 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) entre cerca de 0,36 e cerca de 1,35 mM de succinato de sódio; c) entre cerca de 0,51 e cerca de 16,24 mM de sacarose; d) entre cerca de 0,0432 e cerca de 0,162 mg/ml de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre cerca de 5 e cerca de 5,7. Também é fornecida uma composição líquida (tal como para administração intravenosa) compreendendo a) cerca de 0,72 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) cerca de 0,36 mM de succinato de sódio; c)cerca de 0,51 mM de sacarose; d) cerca de 0,0432 mg/ml de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre 5,1 e cerca de 5,4. Também é fornecida uma composição líquida (tal como para administração intravenosa) compreendendo a) cerca de 2,7 mg/ml de polatuzumabe vedotin; b) cerca de 1,35 mM de succinato de sódio; c) cerca de 16,24 mM de sacarose; d) cerca de 0,162 mg/ml de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre cerca de 5,1 e cerca de 5,4. Em algumas modalidades, o volume da composição líquida está entre cerca de 50 ml e cerca de 100 ml. Em algumas modalidades, o volume da composição líquida é de 50 ml. Em algumas modalidades, o volume da composição líquida é de 100 ml. Em algumas modalidades, a composição líquida está contida em uma bolsa intravenosa (IV). Em algumas modalidades, as superfícies da bolsa IV que entram em contato com a composição líquida são compostas por policloreto de vinila (PVC), poliolefina (PO), polietileno (PE) ou polipropileno (PE).
[0033] Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição farmacêutica que compreende um imunoconjugado anti-CD79b, um tensoativo, um tampão succinato e um açúcar, em que a composição farmacêutica, quando reconstituída em água, forma uma formulação líquida compreendendo o imunoconjugado anti-CD79b a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml, o tensoativo a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml), o tampão succinato a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM, e o açúcar a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM, em que a formulação líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula:
- em que Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti- CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de 5, tal como cerca de 3,5). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD79b compreende um domínio variável da cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a cadeia pesada do anticorpo anti- CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 e a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10.
[0034] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é reconstituída em SWFI e subsequentemente diluída em um tampão em uma bolsa IV. Em certas modalidades, a composição farmacêutica é reconstituída em SWFI e subsequentemente diluída em um tampão isotônico em uma bolsa IV. Em uma modalidade, a concentração de tensoativo após diluição na bolsa IV é de pelo menos 0,003% p/v. Em uma modalidade, a concentração de tensoativo após diluição na bolsa IV é de pelo menos 0,004% p/v. Em algumas modalidades, o tensoativo é polissorbato 20. Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose. Em uma modalidade específica, a sacarose está a uma concentração de 120 mM. Em algumas modalidades, o tampão succinato é um tampão succinato de sódio. Em uma modalidade específica, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de 10 mM. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica, após a reconstituição, é estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a cerca de 30°C. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica, após a reconstituição, é estável por pelo menos 24, 48 ou 72 horas após o armazenamento a cerca de 2°C a cerca de 8°C.
[0035] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica, quando reconstituída em água, tem uma estabilidade de até cerca de 1 dia, até cerca de 2 dias ou até cerca de 3 dias a 30°C. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica, quando reconstituída em água, tem uma estabilidade de até cerca de 1 dia, até cerca de 2 dias, até cerca de 3 dias, até cerca de 4 dias, até cerca de 5 dias, até 6 dias, ou até cerca de 7 dias a 5°C ± 3°C. Em certas modalidades, a estabilidade da composição é medida por cromatografia líquida por exclusão de tamanho de alto desempenho (SE- HPLC). Em uma modalidade específica, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0 conforme medido por SE-HPLC.
[0036] Em certas modalidades, a estabilidade da composição é medida por focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF). Em uma modalidade específica, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 58,0, uma região ácida (% de área) de no máximo 32,0 e uma região básica (% de área) de no máximo 12,0 conforme medido por icIEF.
[0037] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica divulgada neste documento está contida em um frasco de vidro (por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição farmacêutica liofilizada. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição farmacêutica líquida.
[0038] Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição farmacêutica produzida por um processo que compreende as etapas de: (a) liofiliziar uma composição líquida compreendendo 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a composição líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5, para produzir uma composição liofilizada; (b) reconstituir a composição liofilizada com cerca de 7,2 ml de água estéril para injeção (SWFI) para produzir uma composição reconstituída; e (c) diluir a composição reconstituída em um tampão isotônico em uma bolsa intravenosa (IV) para produzir a composição farmacêutica, em que o volume final da composição farmacêutica na bolsa IV é de cerca de 100 ml, e em que a concentração final do imunoconjugado na composição farmacêutica é de cerca de 0,72 mg/ml ou cerca de 2,7 mg/ml.
[0039] Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição líquida compreendendo um imunoconjugado anti-CD79b, um tensoativo, um tampão succinato e um açúcar, em que o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml, o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml), o tampão succinato está a uma concentração de cerca de
10 mM a cerca de 200 mM e o açúcar está a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM, em que a composição líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula:
- em que: Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de
KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de
AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT
(SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência
HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de
GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de
5, tal como cerca de 3,5). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-
CD79b compreende um domínio variável da cadeia pesada (VH)
compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a cadeia pesada do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO: 9 e a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10.
[0040] Em algumas modalidades, o tensoativo é polissorbato
20. Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose. Em uma modalidade específica, a sacarose está a uma concentração de 120 mm. Em algumas modalidades, o tampão succinato é um tampão succinato de sódio. Em uma modalidade específica, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de 10 mM.
[0041] Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação é diluída em um tampão isotônico. Em uma modalidade exemplar, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico está em um bolsa IV. Em algumas modalidades, o tampão isotônico no qual a composição líquida é diluída é uma solução de cloreto de sódio a 0,9%, uma solução de cloreto de sódio a 0,45% ou uma solução de dextrose a 5%.
[0042] Em algumas modalidades, uma composição líquida fornecida neste documento que foi diluída em solução de cloreto de sódio a 0,9% é estável (de acordo com qualquer um ou mais critérios descritos aqui) após diluição por até pelo menos cerca de 24 horas a 2°C a 8°C. Em algumas modalidades, uma composição líquida fornecida no presente documento que foi diluída em solução de cloreto de sódio a 0,9% é estável (de acordo com qualquer um ou mais critérios descritos aqui) após diluição por até cerca de 4 horas de 9°C a 25°C. Em algumas modalidades, uma composição líquida fornecida neste documento que foi diluída em solução de cloreto de sódio a 0,45% é estável (de acordo com qualquer um ou mais critérios descritos em outro lugar neste documento) após diluição por até pelo menos cerca de 24 horas a 2°C a 8°C. Em algumas modalidades, uma composição líquida fornecida neste documento que foi diluída em solução de cloreto de sódio a 0,45% é estável (de acordo com qualquer um ou mais critérios descritos em outro lugar neste documento) após diluição por até cerca de 4 horas de 9°C a 25°C. Em algumas modalidades, uma composição líquida fornecida neste documento que foi diluída em solução de dextrose a 5% é estável (de acordo com qualquer um ou mais critérios descritos em outro lugar neste documento) após diluição por até pelo menos cerca de 48 horas a 2°C a 8°C. Em algumas modalidades, uma composição líquida fornecida np presente documento que foi diluída em solução de dextrose a 5% é estável (de acordo com qualquer um ou mais critérios descritos neste documento) após diluição por até cerca de 8 horas de 9°C a 25°C.
[0043] Em algumas modalidades, a composição líquida que é diluída em um tampão isotônico está em uma bolsa IV. Em algumas modalidades, as superfícies da bolsa IV que entram em contato com a composição que é diluída em um tampão isotônico são compostos de policloreto de vinila (PVC), poliolefina (PO), polietileno (PE) ou polipropileno (PE).
[0044] Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação diluída em um tampão isotônico em uma bolsa IV tem uma estabilidade de até cerca de 6 a cerca de 8 horas a 30°C. Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico em uma bolsa IV tem uma estabilidade de até cerca de 24 horas a 25°C. Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico em um bolsa IV tem uma estabilidade de até cerca de 72 horas a 5°C ± 3°C. Em certas modalidades, o tampão isotônico é solução salina normal. Em algumas modalidades, a composição líquida é estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a cerca de 30°C. Em algumas modalidades, a composição líquida é estável por pelo menos 24,
48 ou 72 horas após o armazenamento de cerca de 2°C a cerca de 8°C.
[0045] Também é fornecida uma composição farmacêutica liofilizada que compreende cerca de 150 mg de um imunoconjugado anti- CD79b, cerca de 9,0 mg de polissorbato 20, cerca de 8,88 mg de ácido succínico, cerca de 4,08 mg de hidróxido de sódio e cerca de 309 mg de sacarose, em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti- CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5 (tal como cerca de 3,5). Em algumas modalidades, a composição liofilizada (tal como um bolo) está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0046] É fornecida ainda uma composição farmacêutica liofilizada que compreende cerca de 150 mg de polatuzumabe vedotin, cerca de 9,0 mg de polissorbato 20, cerca de 8,88 mg de ácido succínico, cerca de 4,08 mg de hidróxido de sódio e cerca de 309 mg de sacarose. Em algumas modalidades, a composição liofilizada (tal como um bolo) está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0047] Também é fornecida uma composição farmacêutica liofilizada que compreende cerca de 140 mg de um imunoconjugado anti- CD79b, cerca de 8,4 mg de polissorbato 20, cerca de 8,27 mg de ácido succínico, cerca de 3,80 mg de hidróxido de sódio e cerca de 288 mg de sacarose, em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que b é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti- CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5 (tal como cerca de 3,5). Em algumas modalidades, a composição liofilizada (tal como um bolo) está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0048] É fornecida ainda uma composição farmacêutica liofilizada compreendendo cerca de 140 mg de polatuzumabe vedotin, cerca de 8,4 mg de polissorbato 20, cerca de 8,27 mg de ácido succínico, cerca de 3,80 mg de hidróxido de sódio e cerca de 288 mg de sacarose. Em algumas modalidades, a composição liofilizada (tal como um bolo) está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0049] Também é fornecida uma composição farmacêutica liofilizada que compreende cerca de 30 mg de um imunoconjugado anti-CD79b, cerca de 1,8 mg de polissorbato 20, cerca de 1,77 mg de ácido succínico, cerca de 0,816 mg de hidróxido de sódio e cerca de 61,8 mg de sacarose, em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-
CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5 (tal como cerca de 3,5). Em algumas modalidades, a composição liofilizada é um bolo liofilizado. Em algumas modalidades, a composição liofilizada (tal como um bolo) está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0050] É fornecida ainda uma composição farmacêutica liofilizada compreendendo cerca de 30 mg de polatuzumabe vedotin, cerca de 1,8 mg de polissorbato 20, cerca de 1,77 mg de ácido succínico, cerca de 0,816 mg de hidróxido de sódio e cerca de 61,8 mg de sacarose. Em algumas modalidades, a composição liofilizada (tal como um bolo) está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0051] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica liofilizada fornecida neste documento é um bolo liofilizado. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica liofilizada de acordo com qualquer uma das modalidades aqui é estável por pelo menos 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54 ou 60 meses após o armazenamento a cerca de 2°C a cerca de 8°C.
[0052] É fornecida uma composição farmacêutica líquida compreendendo a) entre cerca de 5 a 60 mg/ml de polatuzumabe vedotin; b) entre cerca de 10 a 200 mM de succinato de sódio; c) entre cerca de 100 a 260 mM de sacarose; e d) entre cerca de 0,06 a 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH das composições líquidas está entre 5 e 6. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida compreende a) entre cerca de 10 a 55 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) entre cerca de 10 a 100 mM de succinato de sódio; c) entre cerca de 150 a 260 mM de sacarose; e d) entre cerca de 0,08 a 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH das composições líquidas está entre 5,1 e 5,6. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida compreende a) entre cerca de 15 a 40 mg/ml de polatuzumabe vedotin; b) entre cerca de 10 a 50 mM de succinato de sódio; c) entre cerca de 200 a 260 mM de sacarose; e d) entre cerca de 0,1 a 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH das composições líquidas está entre 5,2 e 5,4. Em algumas modalidades, a composição líquida é obtida pela reconstituição de uma composição liofilizada (tal como um bolo). Em algumas modalidades, a composição líquida está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0053] Também é fornecida uma composição farmacêutica líquida compreendendo a) 20 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) 10 mM de succinato de sódio; c) 120 mM de sacarose; e d) 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH das composições líquidas é de cerca de 5,3. Em algumas modalidades, a composição líquida é obtida pela reconstituição de uma composição liofilizada (tal como um bolo). Em algumas modalidades, a composição líquida está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0054] Em algumas modalidades, uma composição líquida de acordo com qualquer uma das modalidades aqui é estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a cerca de 30°C.
Em algumas modalidades, uma composição líquida de acordo com qualquer uma das modalidades aqui é estável por pelo menos 24, 48 ou 72 horas após o armazenamento de cerca de 2°C a cerca de 8°C. Em algumas modalidades, a composição líquida é obtida pela reconstituição de uma composição liofilizada (tal como um bolo). Em algumas modalidades, a composição líquida está contida em um frasco, por exemplo, um frasco de vidro de 20 ml.
[0055] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica reconstituída fornecida aqui é estável após 72 horas de armazenamento em
2C− a 8C. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica reconstituída fornecida aqui é estável após 24 horas de armazenamento em 30 C com exposição à luz ambiente. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica reconstituída compreende 20 mg/mL de polatuzumabe vedotina em 10 mM de succinato, 120 mM de sacarose e 1,2 mg/mL de polissorbato 20, em que o pH é 5,3. Em algumas modalidades, a afinidade de polatuzumabe vedotina para seu alvo (ou seja, CD79b) ou na atividade biológica de polatuzumabe vedotina
[0056] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para tratar um distúrbio proliferativo em um paciente em necessidade do mesmo, incluindo administrar a um paciente a composição farmacêutica ou uma composição líquida descrita neste documento. Também é fornecido o uso de uma composição farmacêutica ou composição líquida descrita neste documento para a fabricação de um medicamento para tratar um distúrbio proliferativo em um paciente em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecida uma composição farmacêutica ou composição líquida descrita neste documento para uso no tratamento de um distúrbio proliferativo em um paciente em necessidade do mesmo. Também é fornecida uma composição farmacêutica ou uma composição líquida descrita neste documento para uso em um método para tratar um distúrbio proliferativo em um paciente em necessidade do mesmo.
[0057] Em uma modalidade, o distúrbio proliferativo celular é câncer. Em uma modalidade exemplar, o câncer é um distúrbio proliferativo de células B. Em modalidades específicas, o distúrbio proliferativo de células B é selecionado a partir do grupo que consiste em: linfoma, mieloma, linfoma não Hodgkin (NHL), linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), DLBCL recidivante/refratário, NHL agressivo, linfoma indolente, linfoma folicular (FL), NHL agressivo recorrente, NHL indolente recorrente, NHL recorrente, NHL refratário, NHL indolente refratário, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno, leucemia, leucemia de células cabeludas (HCL), leucemia linfocítica aguda (LLA) e linfoma de células do manto.
[0058] Em uma modalidade da presente divulgação, o distúrbio proliferativo de células B é o linfoma não Hodgkin (NHL). Em uma modalidade, o distúrbio proliferativo de células B é linfoma difuso de grandes células B (DLBCL). Em uma modalidade, o distúrbio proliferativo celular é um tumor. Em algumas modalidades, o distúrbio proliferativo de células B é DLBCL recidivante/refratário. Em outra modalidade, o distúrbio proliferativo de células B é NHL recidivante ou NHL refratário. Em ainda outra modalidade, o distúrbio proliferativo de células B é linfoma folicular (FL).
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0059] A Figura 1 representa um aumento nas espécies de alto peso molecular (HMWS) após 22 horas de armazenamento estático a 30°C com uma concentração fixa de PS20 ([PS20]) em três tamanhos diferentes de bolsas intravenosas (IV).
[0060] A Figura 2 representa um aumento em HMWS após 2 horas de estresse de agitação (100 rpm) a 30°C com uma concentração fixa de PS20 ([PS20]) em três tamanhos diferentes de bolsas IV.
[0061] A Figura 3 representa o efeito da temperatura na estabilidade física de anti-CD79b-vc-MMAE em bolsas de solução salina IV em várias concentrações de PS20 ([PS20]).
[0062] A Figura 4 representa o efeito do tipo de tensoativo e fluido de infusão sobre armazenamento estático a 30°C por 22 horas.
[0063] A Figura 5A representa o efeito da temperatura de 2 a 8°C na estabilidade do anticorpo anti-CD79b-vc-MMAE após agitação. A Figura 5B representa o efeito da temperatura de 25°C na estabilidade do anticorpo anti-CD79b-vc-MMAE após agitação. A Figura 5C representa o efeito da temperatura de 30°C na estabilidade do anticorpo anti-CD79b-vc-MMAE após agitação.
[0064] A Figura 6 representa a estabilidade física de anti- CD79b-vc-MMAE usando o Modelo de Agitação 1.
[0065] A Figura 7 representa a estabilidade física de anti- CD79b-vc-MMAE usando o Modelo de Agitação 2.
[0066] A Figura 8 descreve a reação de hidrólise da tiosuccinimida para estabilizar o imunoconjugado e prevenir a eliminação. A eliminação da maleimida pode ser evitada por hidrólise das ligações tiosuccinimida presentes em um imunoconjugado.
[0067] A Figura 9 representa o efeito do pH na Formação da Variante de Carga Ácida a 30°C em três pontos de tempo diferentes: 2 semanas, 4 semanas e 8 semanas.
[0068] A Figura 10 representa o efeito do pH na Formação da Variante de Carga Básica a 30°C em três pontos de tempo diferentes: 2 semanas, 4 semanas e 8 semanas.
[0069] A Figura 11 representa o efeito do pH na formação de HMWS a 30°C em três pontos de tempo diferentes: 2 semanas, 4 semanas e 8 semanas.
[0070] A Figura 12 representa o efeito do pH e das espécies tampão em espécies de baixo peso molecular (LMWS) estressadas a 30°C por 4 semanas.
[0071] A Figura 13 representa a estabilidade de formulações liofilizadas a 30°C por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC).
[0072] A Figura 14 representa a estabilidade de formulações liofilizadas a 30°C por focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF).
[0073] As Figuras 15A a 15C representam a aparência do bolo liofilizado com razões que variam de proteína para sacarose. A Figura 15A representa 10 mg/ml de anti-CD79b-vc-MMAE e 260 mM de sacarose. A Figura 15B representa 10 mg/ml de anti-CD79b-vc-MMAE e 180 mM de sacarose. A Figura 15C representa 10 mg/ml de anti-CD79b-vc-MMAE e 120 mM de sacarose.
[0074] As Figuras 16A a 16B representam a aparência do bolo liofilizado com razões que variam de proteína para sacarose. A Figura 16A representa 10 mg/ml de anti-CD79b-vc-MMAE e 260 mM de sacarose. A Figura 16B representa 20 mg/ml de anti-CD79b-vc-MMAE e 120 mM de sacarose.
[0075] A Figura 17 representa a estabilidade do fármaco de anti- CD79b-vc-MMAE liofilizado estressado a 2-8°C, 25°C e 40°C para medir variantes de HMWS por SEC.
[0076] A Figura 18 representa a estabilidade do fármaco de anti- CD79b-vc-MMAE liofilizado estressado a 2-8°C, 25°C e 40°C para medir variantes de HMWS por icIEF.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0077] A presente divulgação fornece composições farmacêuticas estáveis compreendendo um imunoconjugado anti-CD79b e um tensoativo. A divulgação também fornece métodos para usar tais composições para o tratamento de câncer.
I. DEFINIÇÕES
[0078] Antes de descrever a invenção em detalhes, deve ser entendido que esta invenção não está limitada às composições particulares ou sistemas biológicos que podem, é claro, variar. Deve também ser compreendido que a terminologia usada neste documento é para o propósito de descrever somente modalidades particulares, e não se destina a ser limitante. Tal como usado aqui e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "o(a)" incluem referentes plurais a menos que o contexto dite claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a "uma molécula" inclui opcionalmente uma combinação de duas ou mais dessas moléculas e similares.
[0079] O termo "cerca", conforme usado no presente documento, refere-se à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente conhecido pelo técnico no assunto neste campo técnico. A referência a "cerca" um valor ou parâmetro neste documento inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas para esse valor ou parâmetro em si.
[0080] Entende-se que os aspectos e variações da divulgação descrita neste documento incluem "compreendendo", "consistindo" e "consistindo essencialmente em" aspectos e modalidades.
[0081] O termo "imunoconjugado anti-CD79b" refere-se a um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD79b (ADC). Tal como usado neste documento, o imunoconjugado anti-CD79b contém um anticorpo ou fragmento do mesmo capaz de se ligar a CD79b, um ligante e uma molécula de fármaco.
O termo "ligante" é usado refere-se a 6-maleimidocaproil-valina-citrulina-p- aminobenziloxicarbonila (MC-val-cit-PAB).
[0082] O termo "anticorpo" é usado no sentido mais amplo e cobre especificamente, por exemplo, anticorpos monoclonais anti-CD79b únicos (incluindo, sem limitação, agonista, antagonista, anticorpos neutralizantes, anticorpos monoclonais inteiros ou intactos), composições de anticorpos anti-CD79b com especificidade poliepitópica, anticorpos policlonais, anticorpos multivalentes, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos, desde que exibam a atividade biológica desejada) formados a partir de pelo menos dois anticorpos intactos, anticorpos anti-CD79b de cadeia única e fragmentos de anticorpos anti-CD79b (vide abaixo), incluindo Fab, Fab', F(ab') 2 e fragmentos Fv, diacorpos, anticorpos de domínio único (sdAbs), desde que exibam a atividade biológica ou imunológica desejada. O termo
"imunoglobulina" (Ig) é usado permutavelmente com "anticorpo" neste documento. Um anticorpo pode ser quimérico, humano, humanizado e/ou maturado por afinidade.
[0083] Os termos "anticorpo anti-CD79b" e "um anticorpo que se liga a CD79b" referem-se a um anticorpo que é capaz de se ligar a CD79b com afinidade suficiente, de tal modo que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico para direcionar CD79b. Em um aspecto, a extensão da ligação de um anticorpo anti-CD79b a uma proteína não CD79b não relacionada é inferior a cerca de 10% da ligação do anticorpo a CD79b conforme medida, por exemplo, por um radioimunoensaio (RIA). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga a CD79b tem uma constante de dissociação (Kd) de ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM ou ≤ 0,1 nM. Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD79b se liga a um epítopo de CD79b que é conservado entre CD79b a partir de espécies diferentes.
[0084] A unidade básica de anticorpo de 4 cadeias é uma glicoproteína heterotetramérica composta de duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas (um anticorpo IgM consiste em 5 unidades básicas de heterotetrâmero juntamente com um polipeptídeo adicional denominado cadeia J, e portanto, contêm 10 sítios de ligação ao antígeno, enquanto os anticorpos IgA secretados podem polimerizar para formar conjuntos polivalentes compreendendo 2 a 5 das unidades básicas de 4 cadeias juntamente com a cadeia J). No caso de IgGs, a unidade de 4 cadeias é geralmente de cerca de 150.000 daltons. Cada cadeia L está ligada a uma cadeia H por uma ligação dissulfeto covalente, enquanto as duas cadeias H estão ligadas entre si por uma ou mais ligações dissulfeto, dependendo do isotipo da cadeia H. Cada cadeia H e L também tem pontes dissulfeto intracadeia regularmente espaçadas. Cada cadeia H tem no N-terminal, um domínio variável (VH) seguido por três domínios constantes (CH) para cada uma das cadeias α e γ e quatro domínios CH para os isotipos μ e ε. Cada cadeia L tem no N-terminal, um domínio variável (VL) seguido por um domínio constante (CL) em sua outra extremidade. O VL está alinhado com o VH e o CL está alinhado com o primeiro domínio constante da cadeia pesada (CH1).
Acredita-se que resíduos de aminoácidos particulares formem uma interface entre os domínios variáveis da cadeia leve e da cadeia pesada. O emparelhamento de um VH e VL juntos forma um único sítio de ligação ao antígeno. Para a estrutura e propriedades das diferentes classes de anticorpos, vide, por exemplo, Basic and Clinical Immunology, 8ª edição, Daniel P. Stites, Abba I. Terr e Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, página 71 e Capítulo 6.
[0085] A cadeia leve de um anticorpo pode ser atribuída a um de dois tipos, denominados kappa e lambda, com base na sequência de aminoácidos dos seus domínios constantes. Dependendo da sequência de aminoácidos do domínio constante de suas cadeias pesadas (CH), as imunoglobulinas podem ser atribuídas a diferentes classes ou isotipos. Existem cinco classes principais de anticorpos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, com cadeias pesadas designadas α, δ, ε, γ e μ, respectivamente. As classes γ e α são ainda divididas em subclasses com base em diferenças relativamente menores na sequência e função de CH, por exemplo, os humanos expressam as seguintes subclasses: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, e IgA2.
[0086] A "região variável" ou "domínio variável" de um anticorpo refere-se aos domínios amino-terminais da cadeia pesada ou leve do anticorpo.
O domínio variável da cadeia pesada pode ser referido como "VH". O domínio variável da cadeia leve pode ser referido como "VL". Esses domínios são geralmente as partes mais variáveis de um anticorpo e contêm os sítios de ligação ao antígeno.
[0087] O termo "variável" refere-se ao fato de que certos segmentos dos domínios variáveis diferem extensivamente na sequência entre os anticorpos. O domínio V medeia a ligação ao antígeno e define a especificidade de um determinado anticorpo para seu antígeno particular. No entanto, a variabilidade não é distribuída uniformemente ao longo da extensão de 110 aminoácidos dos domínios variáveis. Em vez disso, as regiões V consistem em extensões relativamente invariantes chamadas regiões estruturais (FRs) de 15 a 30 aminoácidos separados por regiões mais curtas de extrema variabilidade chamadas "regiões hipervariáveis" que têm cada uma 9 a 12 aminoácidos de comprimento. Os domínios variáveis das cadeias pesadas e leves nativas compreendem, cada um, quatro FRs, em grande parte adotando uma configuração de folha β, conectada por três regiões hipervariáveis, que formam laços de conexão e, em alguns casos, formando parte da estrutura de folha β. As regiões hipervariáveis em cada cadeia são mantidas juntas em estreita proximidade pelas FRs e, com as regiões hipervariáveis da outra cadeia, contribuem para a formação do sítio de ligação ao antígeno de anticorpos (vide Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.
(1991)). Os domínios constantes não estão envolvidos diretamente na ligação de um anticorpo a um antígeno, mas exibem várias funções efetoras, tais como a participação do anticorpo na citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC).
[0088] Um anticorpo "intacto" é aquele que compreende um sítio de ligação ao antígeno, bem como um CL e pelo menos os domínios constantes da cadeia pesada, CH1, CH2 e CH3. Os domínios constantes podem ser domínios constantes de sequência nativa (por exemplo, domínios constantes de sequência nativa humana) ou variante da sequência de aminoácidos destes. De preferência, o anticorpo intacto tem uma ou mais funções efetoras.
[0089] Um "anticorpo nu" para os fins deste documento é um anticorpo que não é conjugado a uma fração de fármaco ou radiomarcador.
[0090] "Fragmentos de anticorpos" compreendem uma porção de um anticorpo intacto, de preferência a ligação ao antígeno ou região variável do anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv; diacorpos; anticorpos lineares (vide Patente dos EUA de nº 5.641.870, Exemplo 2; Zapata et al., Protein Eng. 8 (10): 1057-1062
[1995]); moléculas de anticorpos de cadeia única; e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos. Em uma modalidade, um fragmento de anticorpo compreende um sítio de ligação ao antígeno do anticorpo intacto e, assim, retém a capacidade de se ligar ao antígeno.
[0091] A digestão de anticorpos com papaína produz dois fragmentos de ligação ao antígeno idênticos, chamados fragmentos "Fab" e um fragmento "Fc" residual, uma designação que reflete a capacidade de cristalizar prontamente. O fragmento Fab consiste em uma cadeia L inteira junto com o domínio da região variável da cadeia H (VH) e o primeiro domínio constante de uma cadeia pesada (CH1). Cada fragmento Fab é monovalente em relação à ligação ao antígeno, ou seja, ele tem um único sítio de ligação ao antígeno. O tratamento de um anticorpo com pepsina produz um único grande fragmento F(ab')2 que corresponde aproximadamente a dois fragmentos Fab ligados por dissulfeto tendo atividade de ligação ao antígeno divalente e ainda é capaz de reticular o antígeno. Os fragmentos Fab’ diferem dos fragmentos Fab por terem alguns resíduos adicionais no terminal carboxila do domínio CH1, incluindo uma ou mais cisteínas da região de dobradiça do anticorpo. Fab'-SH são fragmentos Fab’ em que o(s) resíduo(s) de cisteína dos domínios constantes contêm um grupo tiol livre. Os fragmentos de anticorpo F(ab')2 foram originalmente produzidos como pares de fragmentos Fab' que têm cisteínas de dobradiça entre eles. Outros acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpos também são conhecidos.
[0092] O fragmento Fc compreende as porções carbóxi-terminais de ambas as cadeias H mantidas juntas por dissulfetos. As funções efetoras dos anticorpos são determinadas por sequências na região Fc, região essa que também é a parte reconhecida pelos receptores Fc (FcR) encontrados em certos tipos de células.
[0093] “Fv” é o fragmento mínimo de anticorpo que contém um sítio completo de reconhecimento e ligação ao antígeno. Esse fragmento consiste em um dímero de um domínio de região variável da cadeia pesada e um da cadeia leve em associação estreita não covalente. Em uma espécie de Fv de cadeia única (scFv), um domínio variável da cadeia pesada e um da cadeia leve podem ser covalentemente ligados por um ligante de peptídeo flexível, de tal modo que as cadeias leve e pesada possam se associar em uma estrutura "dimérica" análoga àquela de uma espécie de Fv de duas cadeias. A partir do dobramento desses dois domínios, se emanam seis alças hipervariáveis (3 alças cada da cadeia H e L) que contribuem com os resíduos de aminoácidos para a ligação ao antígeno e conferem especificidade de ligação ao antígeno ao anticorpo. No entanto, mesmo um único domínio variável (ou metade de um Fv compreendendo somente três CDRs específicas para um antígeno) tem a capacidade de reconhecer e se ligar ao antígeno, embora com uma afinidade mais baixa do que todo o sítio de ligação.
[0094] "Fv de cadeia única" também abreviado como "sFv" ou "scFv" são fragmentos de anticorpo que compreendem os domínios de anticorpo VH e VL conectados em uma única cadeia de polipeptídeo. De preferência, o polipeptídeo sFv compreende ainda um ligante de polipeptídeo entre os domínios VH e VL que permite que o sFv forme a estrutura desejada para ligação ao antígeno. Para uma revisão de sFv, vide Pluckthun em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds.,
Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); Borrebaeck 1995, infra.
[0095] O termo "diacorpos" refere-se a fragmentos de anticorpos com dois sítios de ligação ao antígeno, cujos fragmentos compreendem um domínio variável da cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável da cadeia leve (VL) na mesma cadeia de polipeptídeo (VH-VL). Os pequenos fragmentos de anticorpo são preparados pela construção de fragmentos sFv (vide parágrafo anterior) com ligantes curtos (cerca de 5 a 10 resíduos) entre os domínios VH e VL, de tal modo que o emparelhamento intercadeia, mas não intracadeia, dos domínios V seja alcançado, resultando em um fragmento bivalente, ou seja, fragmento tendo dois sítíos de ligação ao antígeno.
Diacorpos podem ser bivalentes ou biespecíficos. Diacorpos biespecíficos são heterodímeros de dois fragmentos sFv "cruzados" nos quais os domínios VH e VL dos dois anticorpos estão presentes em diferentes cadeias de polipeptídeo.
Os diacorpos são descritos mais detalhadamente, por exemplo, em EP
404.097; WO 93/11161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); e Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993). Triacorpos e tetracorpos também são descritos em Hudson et al., Nat. Med., 9:129-134 (2003).
[0096] O termo "anticorpo monoclonal", tal como usado neste documento, refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto para possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo direcionados contra um único sítio antigênico. Em contraste com preparações de anticorpos policlonais, que normalmente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante no antígeno. Além da sua especificidade, os anticorpos monoclonais são vantajosos porque podem ser sintetizados não contaminados por outros anticorpos. O modificador "monoclonal" não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais úteis na presente divulgação podem ser preparados pela metodologia de hibridoma primeiro descrita por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), ou podem ser feitos usando métodos de DNA recombinante em bactérias, animais eucarióticos ou células vegetais (vide, por exemplo, Patente dos EUA de nº 4.816.567). Os "anticorpos monoclonais" também podem ser isolados de bibliotecas de anticorpos de fago usando as técnicas descritas em Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) e Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991), por exemplo.
[0097] Os anticorpos monoclonais no presente documento incluem anticorpos "quiméricos" em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga às sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie particular ou pertencentes a uma classe ou subclasse particular de anticorpos, enquanto o restante da(s) cadeia(s) é idêntico ou homólogo às sequências correspondentes em anticorpos derivados de outra espécie ou pertencentes a outra classe ou subclasse de anticorpos, bem como fragmentos de tais anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada (vide Patente dos EUA de nº 4.816.567; e Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 81:6851-6855 (1984)). Anticorpos quiméricos de interesse neste documento incluem anticorpos "primatizados" compreendendo sequências de ligação ao antígeno de domínio variável derivadas de um primata não humano (por exemplo, Macaco do Velho Mundo, Macaco etc.) e sequências de região constante humana.
[0098] As formas “humanizadas” de anticorpos não humanos (por exemplo, roedores) são anticorpos quiméricos que contêm uma sequência mínima derivada do anticorpo não humano. Na maior parte, os anticorpos humanizados são imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor) em que os resíduos de uma região hipervariável do receptor são substituídos por resíduos de uma região hipervariável de uma espécie não humana (anticorpo doador), tal como camundongo, rato, coelho ou primata não humano tendo a especificidade, afinidade e capacidade de anticorpo desejadas. Em alguns casos, os resíduos da região estrutural (FR) da imunoglobulina humana são substituídos pelos resíduos não humanos correspondentes. Além disso, os anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador. Estas modificações são feitas para refinar ainda mais o desempenho do anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e normalmente dois, domínios variáveis, em que todos ou substancialmente todos as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as FRs são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), normalmente a de uma imunoglobulina humana. Para mais detalhes, vide Jones et al., Nature 321:522- 525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); e Presta, Curr. Op.
Struct. Biol. 2:593-596 (1992). Vide também os seguintes artigos de revisão e referências citados no presente documento: Vaswani e Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol., 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech., 5:428-433 (1994).
[0099] Um "anticorpo humano" é aquele que possui uma sequência de aminoácidos que corresponde àquela de um anticorpo produzido por um humano e/ou que foi feito usando qualquer uma das técnicas para a produção de anticorpos humanos conforme divulgado neste documento. Esta definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado compreendendo resíduos de ligação ao antígeno não humanos.
Os anticorpos humanos podem ser produzidos usando várias técnicas conhecidas na técnica, incluindo bibliotecas de exibição de fagos. Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). Também estão disponíveis para a preparação de anticorpos monoclonais humanos os métodos descritos em Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J.
Immunol., 147(1):86-95 (1991). Vide também van Dijk e van de Winkel, Curr.
Opin. Pharmacol., 5:368-74 (2001). Os anticorpos humanos podem ser preparados pela administração do antígeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir tais anticorpos em resposta a um desafio antigênico, mas cujos locus endógenos foram desativados, por exemplo, xenomice imunizado (vide, por exemplo, as patentes dos EUA de nºs 6.075.181 e
6.150.584 em relação à tecnologia XENOMOUSETM). Vide também, por exemplo, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006) em relação a anticorpos humanos gerados por meio de uma tecnologia de hibridoma de células B humanas.
[0100] O termo “região hipervariável”, ou “HVR” ou "HV", como usado neste documento, refere-se a cada uma das regiões de um domínio variável de anticorpo que são hipervariáveis em sequência e/ou formam alças estruturalmente definidas (“alças hipervariáveis”). Geralmente, os anticorpos compreendem seis HVRs: três na VH (H1, H2, H3) e três na VL (L1, L2, L3).
Uma série de delimitações de região hipervariável estão em uso e são abrangidas neste documento. As Regiões Determinantes de Complementaridade (CDRs) de Kabat são baseadas na variabilidade da sequência e são as mais comumente usadas (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Chothia refere-se, em vez disso, à localização das alças estruturais (Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). A extremidade da alça CDR-H1 de Chothia quando numerada usando a convenção da numeração de Kabat varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento da alça (isso ocorre porque o esquema da numeração de Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A nem 35B estiverem presentes, a alça termina em 32; se somente 35A estiver presente, a alça termina em 33; se ambos 35A e 35B estiverem presentes, a alça termina em 34). As regiões hipervariáveis AbM representam um compromisso entre as CDRs de Kabat e as alças estruturais de Chothia, e são usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular. As regiões hipervariáveis de “contato” são baseadas em uma análise das estruturas cristalinas complexas disponíveis. Os resíduos de cada uma dessas regiões hipervariáveis são indicados abaixo.
Alça Kabat AbM Chothia Contato ---- ----- --- ------- ------- L1 L24-L34 L24-L34 L24-L34 L30-L36 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L56 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L89-L97 L89-L96 H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 34 H30-H35B (Numeração de Kabat) H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Numeração de Chothia) H2 H50-H65 H50-H58 H52-H56 H47-H58 H3 H95-H102 H95-H102 H95-H102 H93-H101
[0101] As regiões hipervariáveis podem compreender "regiões hipervariáveis estendidas" da seguinte forma: 24-36 ou 24-34 (L1), 46-56 ou 50-56 (L2) e 89-97 (L3) no VL e 26-35B (H1), 50-65, 47-65 ou 49-65 (H2) e 93- 102, 94-102 ou 95-102 (H3) no VH. Os resíduos do domínio variável são numerados de acordo com Kabat et al., supra, para cada uma destas definições.
[0102] Os resíduos "estruturais" ou "FR" são aqueles resíduos de domínio variável diferentes dos resíduos de região hipervariável definidos neste documento.
[0103] O termo "numeração do resíduo de domínio variável como em Kabat" ou "numeração da posição de aminoácidos como em Kabat", e variações destes, refere-se ao sistema de numeração usado para domínios variáveis da cadeia pesada ou domínios variáveis da cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Serviço de Saúde Pública, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991). Usando este sistema de numeração, a sequência de aminoácidos linear real pode conter menos ou mais aminoácidos correspondentes a um encurtamento de, ou inserção em, uma FR ou CDR do domínio variável. Por exemplo, um domínio variável da cadeia pesada pode incluir uma única inserção de aminoácido (resíduo 52a de acordo com Kabat) após o resíduo 52 de H2 e resíduos inseridos (por exemplo, resíduos 82a, 82b e 82c, etc. de acordo com Kabat) após o resíduo 82 da FR da cadeia pesada. A numeração de Kabat de resíduos pode ser determinada para um determinado anticorpo por alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada de Kabat "padrão".
[0104] O sistema de numeração de Kabat é geralmente usado quando refere-se a um resíduo no domínio variável (aproximadamente resíduos 1 a 107 da cadeia leve e resíduos 1 a 113 da cadeia pesada) (por exemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). O “sistema de numeração da UE” ou “índice da UE” é geralmente usado quando refere-se a um resíduo em uma região constante da cadeia pesada de imunoglobulina (por exemplo, o índice da UE relatado em Kabat et al., supra). O “índice da UE como em Kabat” refere-se à numeração de resíduos do anticorpo IgG1 humano da UE. A menos que indicado de outra forma neste documento, as referências a números de resíduos no domínio variável de anticorpos significam numeração de resíduos pelo sistema de numeração de Kabat. A menos que indicado de outra forma neste documento, as referências a números de resíduos no domínio constante de anticorpos significam numeração de resíduos pelo sistema de numeração da UE (por exemplo, vide o Pedido Provisório dos Estados Unidos de nº 60/640,323, Figuras para numeração da UE).
[0105] Um anticorpo "amadurecido por afinidade" é aquele com uma ou mais alterações em uma ou mais HVRs destes que resultam em uma melhoria na afinidade do anticorpo para o antígeno, em comparação com um anticorpo parental que não possui essa(s) alteração(ões). Os anticorpos amadurecidos por afinidade preferidos terão afinidades nanomolares ou mesmo picomolares para o antígeno alvo. Os anticorpos maturados por afinidade são produzidos por procedimentos conhecidos na técnica. Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992), descreve a maturação por afinidade por embaralhamento de domínios VH e VL. A mutagênese aleatória resíduos de HVR e/ou estruturais é descrita por: Barbas et al., Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al., Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al., J.
Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); e Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992).
[0106] “Afinidade” refere-se à força da soma total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e o seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A menos que indicado de outro modo, conforme usado no presente documento, “afinidade de ligação” refere-se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, anticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula X para seu parceiro Y pode geralmente ser representada pela constante de dissociação (Kd). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos no presente documento. Os anticorpos de baixa afinidade geralmente se ligam ao antígeno lentamente e tendem a se dissociar facilmente, enquanto os anticorpos de alta afinidade geralmente se ligam ao antígeno mais rapidamente e tendem a permanecer ligados por mais tempo.
Uma variedade de métodos de medição da afinidade de ligação são conhecidos na técnica, qualquer um dos quais pode ser usado para os fins da presente divulgação. As modalidades ilustrativas específicas são descritas a seguir.
[0107] "Ou melhor", quando usado aqui para referir-se a afinidade de ligação, refere-se a uma ligação mais forte entre uma molécula e seu parceiro de ligação. "Ou melhor", quando usado neste documento, refere- se a uma ligação mais forte, representada por um valor da Kd numérico menor.
Por exemplo, em um anticorpo que tem uma afinidade para um antígeno de "0,6 nM ou melhor", a afinidade do anticorpo para o antígeno será <0,6 nM, ou seja, 0,59 nM, 0,58 nM, 0,57 nM etc. ou qualquer valor inferior a 0,6 nM.
[0108] Em uma modalidade, a "Kd" ou "valor da Kd" de acordo com esta divulgação é medida por um ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado (RIA) realizado com a versão Fab de um anticorpo de interesse e seu antígeno, conforme descrito pelo seguinte ensaio que mede a afinidade de ligação da solução de Fabs para o antígeno, equilibrando Fab com uma concentração mínima de antígeno marcado com 125I na presença de uma série de titulação de antígeno não marcado, capturando então o antígeno ligado com uma placa revestida com anticorpo anti-Fab (Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881). Para estabelecer as condições para o ensaio, placas multipoços (Dynex) são revestidas durante a noite com 5 μg/ml de um anticorpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) em carbonato de sódio a 50 mM (pH 9,6), e subsequentemente bloqueadas com 2% (p/v) de albumina de soro bovino em PBS por duas a cinco horas à temperatura ambiente (aproximadamente 23°C).
Em uma placa não adsorvente (Nunc #269620), 100 pM ou 26 pM de antígeno com 125I são misturados com diluições em série de um Fab de interesse (por exemplo, consistente com a avaliação do anticorpo anti-VEGF, Fab-12, em Presta et al., (1997) Cancer Res. 57:4593-4599). O Fab de interesse é então incubado durante a noite; no entanto, a incubação pode continuar por um período mais longo (por exemplo, cerca de 65 horas) para assegurar que o equilíbrio seja alcançado. Depois disso, as misturas são transferidas para a placa de captura para incubação em temperatura ambiente (por exemplo, durante uma hora). A solução é então removida e a placa lavada oito vezes com 0,1% de Tween-20 em PBS. Quando as placas estiverem secas, são adicionados 150 l/poço de cintilante (MicroScint-20; Packard) e as placas são contadas em um contador gama TOPCOUNT™ (Packard) por dez minutos. As concentrações de cada Fab que dão menos ou igual a 20% da ligação máxima são escolhidas para uso em ensaios de ligação competitiva.
[0109] De acordo com outra modalidade, a "Kd" ou "valor da Kd" é medida usando ensaios de ressonância de plasmon de superfície usando um BIAcoreTM-2000 ou um BIAcoreTM-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25C com chips de antígeno CM5 imobilizado em ~ 10 unidades de resposta (RU). Em uma modalidade, chips biossensores de dextrano carboximetilado (CM5, BIACORE, Inc.) são ativados com N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)- carbodi-imida (EDC) e N-hidroxissuccinimida (NHS) de acordo com as instruções do fornecedor. O antígeno é diluído com 10 mM de acetato de sódio, pH 4,8, para 5 μg/ml (~ 0,2 μM) antes da injeção a um quociente de vazão de 5 μl/minuto para alcançar aproximadamente 10 unidades de resposta (UR) de proteína acoplada. Após a injeção de antígeno, etanolamina a 1 M é injetada para bloquear os grupos que não reagiram. Para medições cinéticas, diluições em série de Fab (0,78 nM a 500 nM) são injetadas em PBS com Tween 20 a 0,05% (PBST) a 25°C a um quociente de vazão de aproximadamente 25 ul/min. As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) são calculadas usando um modelo simples de ligação Langmuir individual (BIAcore Evaluation Software versão 3.2), ajustando simultaneamente o sensograma de associação e dissociação. A constante de equilíbrio de dissociação (Kd) é calculada como a razão koff/kon. Vide, por exemplo, Chen, Y., et al., (1999) J.
Mol Biol 293:865-881. Se a taxa de ativação exceder 106 M-1 S-1 pelo ensaio de ressonância de plasmon de superfície acima, a taxa de associação pode ser determinada usando uma técnica de extinção de fluorescência que mede o aumento ou diminuição na intensidade de emissão de fluorescência (excitação = 295 nm; emissão = 340 nm, passagem de banda de 16 nm) a 25 oC de 20 nM de um anticorpo anti-antígeno (forma Fab) em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno, conforme medido em um espectrômetro, tal um espectrofotômetro equipado com stop-flow (Aviv Instruments) ou um espectrofotômetro SLM-AMINCOTM da série 8000 (ThermoSpectronic) com uma cubeta agitada.
[0110] Uma "taxa-on" ou "taxa de associação" ou "taxa de associação" ou "kon" de acordo com esta divulgação também pode ser determinada com a mesma técnica de ressonância de plasmon de superfície descrita acima usando um BIAcoreTM-2000 ou um BIAcoreTM-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ), conforme descrito acima.
[0111] A frase "substancialmente semelhante" ou "substancialmente o(a) mesmo(a)", conforme usado neste documento, denota um grau suficientemente alto de similaridade entre dois valores numéricos (geralmente um associado a um anticorpo da divulgação e o outro associado a um anticorpo de referência/comparador) de tal modo que um técnico no assunto consideraria a diferença entre os dois valores como sendo de pouca ou nenhuma significância biológica e/ou estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos referidos valores (por exemplo, valores da Kd). A diferença entre os referidos dois valores é de preferência inferior a cerca de 50%, de preferência inferior a cerca de 40%, de preferência inferior a cerca de 30%, de preferência inferior a cerca de 20%, de preferência inferior a cerca de 10% em função do valor para o anticorpo de referência/comparador.
[0112] A frase "substancialmente reduzido(a)" ou "substancialmente diferente", tal como usado neste documenyo, denota um grau suficientemente alto de diferença entre dois valores numéricos (geralmente um associado a um anticorpo da divulgação e o outro associado a um anticorpo de referência/comparador), de tal modo que aquele técnico no assunto consideraria a diferença entre os dois valores como sendo de significância estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos referidos valores (por exemplo, valores da Kd, resposta HAMA). A diferença entre os referidos dois valores é de preferência superior a cerca de 10%, de preferência superior a cerca de 20%, de preferência superior a cerca de 30%, de preferência superior a cerca de 40%, de preferência superior a cerca de 50% como uma função do valor para o anticorpo de referência/comparador.
[0113] Uma "estrutura aceitadora humana" para os fins descritos neste documento é uma estrutura compreendendo a sequência de aminoácidos de uma estrutura VL ou VH derivada de uma estrutura de imunoglobulina humana ou de uma estrutura de consenso humana. Uma estrutura aceitadora humana "derivada de" uma estrutura de imunoglobulina humana ou estrutura de consenso humana pode compreender a mesma sequência de aminoácidos desta ou pode conter alterações da sequência de aminoácidos pré-existentes.
Onde alterações de aminoácidos pré-existentes estão presentes, de preferência não mais do que 5, e de preferência 4 ou menos, ou 3 ou menos, alterações de aminoácidos pré-existentes estão presentes. Onde alterações de aminoácidos pré-existentes estão presentes em um VH, preferencialmente essas alterações são somente em três, duas ou uma das posições 71H, 73H e 78H; por exemplo, os resíduos de aminoácidos nessas posições podem ser 71A, 73T e/ou 78A. Em algumas modalidades, a estrutura aceitadora humana de VL é idêntica na sequência à sequência estrutural de imunoglobulina humana de VL ou sequência estrutural de consenso humana.
[0114] Uma "estrutura de consenso humana" é uma estrutura que representa os resíduos de aminoácidos de ocorrência mais comum em uma seleção de sequências estruturais de VL ou VH de imunoglobulina humana. Geralmente, a seleção de sequências de VL ou VH de imunoglobulina humana é a partir de um subgrupo de sequências de domínio variável.
Geralmente, o subgrupo de sequências é um subgrupo, conforme em Kabat et al. Em uma modalidade, para o VL, o subgrupo é o subgrupo kappa I, conforme em Kabat et al. Em uma modalidade, para o VH, o subgrupo é o subgrupo kappa III, conforme em Kabat et al.
[0115] Uma "estrutura de consenso do subgrupo III de VH" compreende a sequência de consenso obtida a partir das sequências de aminoácidos no subgrupo III de VH de Kabat et al. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos da estrutura de consenso do subgrupo III de VH compreende pelo menos uma porção ou a toda de cada uma das seguintes sequências: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO: 11)-H1- WVRQAPGKGLEWV (SEQ ID NO: 12)-H2- RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO: 145)-H3- WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13).
[0116] Uma "estrutura de consenso do subgrupo I de VL" compreende a sequência de consenso obtida a partir das sequências de aminoácidos no subgrupo I kappa de VL de Kabat et al. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos da estrutura de consenso do subgrupo I de VL compreende pelo menos uma porção ou toda de cada uma das seguintes sequências: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 14)-L1- WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 15)-L2- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 141)-L3- FGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 16).
[0117] Uma "estrutura humana não modificada" é uma estrutura humana que tem a mesma sequência de aminoácidos que a estrutura humana aceitadora, por exemplo, sem substituição(ões) de aminoácidos humanos para não humanos na estrutura humana aceitadora.
[0118] Um imunoconjugado anti-CD79b ou anticorpo "que se liga" a CD79b é aquele que se liga ao antígeno CD79b com afinidade suficiente de tal modo que o anticorpo seja útil como um agente terapêutico no direcionamento de uma célula ou tecido que expressa o antígeno e não apresenta reação cruzada significativa com outras proteínas. Em tais modalidades, a extensão da ligação do anticorpo a uma proteína "não alvo" será inferior a cerca de 10% da ligação do anticorpo à sua proteína alvo particular, conforme determinado por análise de classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) ou radioimunoprecipitação (RIA). No que diz respeito à ligação de um anticorpo a uma molécula alvo, o termo "ligação específica" ou "especificamente se liga a" ou é "específico para" um determinado polipeptídeo ou um epítopo em um determinado polipeptídeo alvo significa a ligação que é mensuravelmente diferente de um interação não específica. A ligação específica pode ser medida, por exemplo, determinando a ligação de uma molécula alvo em comparação com a ligação de uma molécula de controle, que geralmente é uma molécula de estrutura semelhante que não tem atividade de ligação. Por exemplo, a ligação específica pode ser determinada por competição com uma molécula de controle que é semelhante ao alvo, por exemplo, um excesso de alvo não marcado. Neste caso, a ligação específica é indicada se a ligação do alvo marcado a uma sonda for inibida competitivamente por excesso de alvo não marcado. O termo "ligação específica" ou "especificamente se liga a" ou é "específico(a) para" um polipeptídeo particular ou um epítopo em um alvo polipeptídico particular, tal como usado neste documento, pode ser exibido, por exemplo, por uma molécula tendo uma Kd para o alvo de em pelo menos cerca de 10 -4 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-5 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-6 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-7 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-8 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-9 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-10 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-11 M, alternativamente pelo menos cerca de 10-12 M ou mais. Em uma modalidade, o termo "ligação específica" refere-se à ligação onde um anticorpo se liga a um epítopo em um polipeptídeo CD79b sem substancialmente se ligar a qualquer outro polipeptídeo ou epítopo polipeptídico.
[0119] As "funções efetoras" de anticorpos referem-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc (uma região Fc de sequência nativa ou região Fc variante de sequência de aminoácidos) de um anticorpo e variam com o isotipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpos incluem: Ligação a C1q e citotoxicidade dependente de complemento (CDC); ligação ao receptor Fc; citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo (ADCC); fagocitose; regulação negativa de receptores da superfície celular (por exemplo, receptor de células B); e ativação de células B.
[0120] O termo "região Fc" é usado neste documento para definir uma região C-terminal de uma cadeia pesada de imunoglobulina, incluindo regiões Fc de sequência nativa e regiões Fc variantes. Embora os limites da região Fc de uma cadeia pesada de imunoglobulina possam variar, a região Fc da cadeia pesada de IgG humana é geralmente definida para se estender de um resíduo de aminoácido na posição Cys226, ou de Pro230, até o seu terminal carboxila. A lisina C-terminal (resíduo 447 de acordo com o sistema de numeração da UE) da região Fc pode ser removida, por exemplo, durante a produção ou purificação do anticorpo, ou por engenharia recombinante do ácido nucleico que codifica uma cadeia pesada do anticorpo.
Consequentemente, uma composição de anticorpos intactos pode compreender populações de anticorpos com todos os resíduos K447 removidos, populações de anticorpos sem resíduos K447 removidos e populações de anticorpos tendo uma mistura de anticorpos com e sem o resíduo K447.
[0121] Uma “região Fc funcional” possui uma “função efetora” de uma região Fc de sequência nativa. "Funções efetoras" exemplares incluem ligação a C1q; CDC; Ligação ao receptor Fc; ADCC; fagocitose; regulação negativa de receptores da superfície celular (por exemplo, receptor de células B; BCR), etc. Tais funções efetoras geralmente requerem que a região Fc seja combinada com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável de anticorpo) e pode ser avaliada usando vários ensaios, conforme divulgado, por exemplo, em definições no presente documento.
[0122] Uma “região Fc de sequência nativa” compreende uma sequência de aminoácidos idêntica à sequência de aminoácidos de uma região Fc encontrada na natureza. As regiões Fc de sequência nativa humana incluem uma região Fc de IgG1 humana de sequência nativa (alotipos não A e A); região Fc de IgG2 humana de sequência nativa; região Fc de IgG3 humana de sequência nativa; e região Fc de IgG4 humana de sequência nativa, bem como as suas variantes de ocorrência natural.
[0123] Uma “região Fc variante” compreende uma sequência de aminoácidos que difere da de uma região Fc de sequência nativa em virtude de pelo menos uma modificação de aminoácidos, de preferência uma ou mais substituições de aminoácidos. De preferência, a região Fc variante tem pelo menos uma substituição de aminoácidos em comparação com uma região Fc de sequência nativa ou com a região Fc de um polipeptídeo parental, por exemplo, de cerca de uma a cerca de dez substituições de aminoácidos, e de preferência desde cerca de uma até cerca de cinco substituições de aminoácidos em uma região Fc de sequência nativa ou na região Fc do polipeptídeo parental. A região Fc variante do presente documento preferencialmente terá pelo menos cerca de 80% de homologia com uma região Fc de sequência nativa e/ou com uma região Fc de um polipeptídeo parental, e mais preferencialmente pelo menos cerca de 90% de homologia com este, mais preferencialmente pelo menos cerca de 95% homologia com este.
[0124] "Citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo" ou "ADCC" refere-se a uma forma de citotoxicidade na qual a Ig secretada ligada a receptores Fc (FcRs) presentes em certas células citotóxicas (por exemplo, células Natural Killer (NK), neutrófilos e macrófagos) permite que essas células efetoras citotóxicas especificamente se liguem a uma célula alvo contendo antígeno e, subsequentemente, matem a célula alvo com citotoxinas. Os anticorpos “armam” as células citotóxicas e são absolutamente necessários para tal morte. As células primárias para mediar células ADCC e NK expressam somente FcγRIII, enquanto os monócitos expressam FcγRI, FcγRII e FcγRIII. A expressão de FcR em células hematopoiéticas está em suma na Tabela 3 na página 464 de Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol., 9:457-92 (1991). Para avaliar a atividade ADCC de uma molécula de interesse, pode ser realizado um ensaio ADCC in vitro, tal como o descrito na Patente dos EUA de nº 5.500.362 ou 5.821.337. Células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células Natural Killer (NK). Alternativamente, ou adicionalmente, a atividade ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal, tal como o divulgado em Clynes et al. (USA) 95:652-656 (1998).
[0125] O “receptor Fc” ou “FcR” descreve um receptor que se liga a região Fc de um anticorpo. O FcR preferido é um FcR humano de sequência nativa. Em algumas modalidades, um FcR é um que se liga a um anticorpo IgG (um receptor gama) e inclui receptores de subclasses FcγRI, FcγRII, e FcγRIII, incluindo variantes alélicas e formas de splicing alternativas destes receptores. Os receptores FcγRII incluem FcγRIIA (um “receptor de ativação”) e FcγRIIB (um “receptor de inibição”), que têm sequências de aminoácidos semelhantes que diferem principalmente nos seus domínios citoplasmáticos. A ativação do receptor FcγRIIA contém um motivo de ativação do imunorreceptor baseado em tirosina (ITAM) no seu domínio citoplasmático. A inibição do receptor FcγRIIB contém um motivo de inibição do imunorreceptor baseado em tirosina (ITIM) no seu domínio citoplasmático. (vide revisão M. em Daëron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Os FcRs são revisados em Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); e de Haas et al., J. Lab. Clin. Med.
126:330-41 (1995). Outros FcR, incluindo aqueles a serem identificados no futuro, são englobados pelo termo “FcR” neste documento. O termo também inclui o receptor neonatal, FcRn, que é responsável pela transferência de IgGs maternais para o feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) e Kim et al., J.
Immunol. 24:249 (1994)).
[0126] A ligação ao FcRn humano in vivo e e uma meia-vida em soro de polipeptídeos de ligação de afinidade elevada a FcRn humano podem ser ensaiados, por exemplo, em camundongos transgênicos ou linhagens celulares transfectadas humanas que expressam FcRn humano ou em primatas aos quais os polipeptídeos com uma região Fc variante são administrados. WO 2000/42072 (Presta) descreve variantes de anticorpo com ligação melhorada ou diminuída a FcRs. Vide também, por exemplo, Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001).
[0127] “Células efetoras humanas” referem-se aos leucócitos que expressam um ou mais FcR e desempenham funções efetoras. Em certas modalidades, as células expressam pelo menos FcγRIII e executam as funções efetoras ADCC. Exemplos de leucócitos humanos que medeiam ADCC incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC), células natural killer (NK), monócitos, células T citotóxicas e neutrófilos; com PBMCs e células NK sendo preferidos. As células efetoras podem ser isoladas a partir de uma fonte nativa, por exemplo, a partir de sangue.
[0128] A “citotoxicidade dependente de complemento” ou “CDC” refere-se à lise de uma célula alvo na presença de complemento. A ativação da via clássica de complemento é iniciada pela ligação do primeiro componente do sistema do complemento (C1q) a anticorpos (da subclasse apropriada), que estão ligados ao seu antígeno cognato. Para avaliar a ativação de complemento, um ensaio de CDC, por exemplo, conforme descrito em Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996), pode ser realizado. As variantes de polipeptídeo com sequências de aminoácidos alteradas da região Fc (polipeptídeos com uma região Fc variante) e o aumento ou diminuição da capacidade de ligação a C1q encontram-se descritos, por exemplo, na Patente dos EUA de nº 6.194.551 B1 e WO 1999/51642. Vide também, por exemplo, Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
[0129] O termo "anticorpo compreendendo a região Fc" refere-se a um anticorpo que compreende uma região Fc. A lisina C-terminal (resíduo 447 de acordo com o sistema de numeração da UE) da região Fc pode ser removida, por exemplo, durante a purificação do anticorpo ou por engenharia recombinante do ácido nucleico que codifica o anticorpo. Consequentemente, uma composição que compreende um anticorpo tendo uma região Fc de acordo com esta divulgação pode compreender um anticorpo com K447, com todos os K447 removidos, ou uma mistura de anticorpos com e sem o resíduo K447.
[0130] Um "marcador de superfície de célula B" ou "antígeno de superfície de célula B" neste documento é um antígeno expresso na superfície de uma célula B que pode ser direcionado com um antagonista que se liga ao mesmo, incluindo, mas não se limitando a, anticorpos para um antígeno de superfície de células B ou uma forma solúvel de um antígeno de superfície de células B capaz de antagonizar a ligação de um ligante ao antígeno de células B de ocorrência natural. Marcadores de superfície de células B exemplares incluem os marcadores de superfície de leucócitos CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 e CD86 (para descrições, vide The Leukocyte Antigen Facts Book, 2ª Edição.
1997, ed. Barclay et al. Academic Press, Harcourt Brace & Co., Nova York).
Outros marcadores de superfície de células B incluem RP105, FcRH2, CR2 de células B, CCR6, P2X5, HLA-DOB, CXCR5, FCER2, BR3, BAFF, BLyS, Btig, NAG14, SLGC16270, FcRH1, IRTA2, ATWD578, FcRH3, IRTA1, FcRH6, BCMA, e 239287. O marcador de superfície de células B de particular interesse é preferencialmente expresso em células B em comparação com outros tecidos de células não B de um mamífero e pode ser expresso em células B precursoras e células B maduras.
[0131] Os termos “câncer” e “cancerígeno” referem-se ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que é normalmente distinguida por crescimento celular desregulado. Exemplos de câncer incluem, mas não estão limitados a, cânceres hematopoiéticos ou cânceres relacionados ao sangue, tais como linfoma, leucemia, mieloma ou neoplasias linfóides, mas também cânceres do baço e cânceres dos nódulos linfáticos e também carcinoma, blastoma e sarcoma.
Mais exemplos particulares de câncer incluem cânceres associados a células B, incluindo, por exemplo, linfomas de alto,
intermediário e baixo grau (incluindo linfomas de células B, tais como, por exemplo, linfoma de células B de tecido linfóide associado à mucosa e linfoma não Hodgkin (NHL), linfoma de células do manto, linfoma de Burkitt, linfoma linfocítico pequeno, linfoma da zona marginal, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), linfoma folicular (FL), linfoma de Hodgkin, linfomas de células T, leucemias (incluindo leucemia secundária, leucemia linfocítica crônica (CLL), tais como leucemia de células B (linfócitos CD5 + B), leucemia mieloide, tal como leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crônica,
leucemia linfoide, tal como leucemia linfoblástica aguda (LLA) e mielodisplasia),
e outros cânceres hematológicos e/ou associados a células B ou T.
Também estão incluídos os cânceres de células hematopoiéticas adicionais, incluindo leucócitos polimorfonucleares, tais como basófilos, eosinófilos, neutrófilos e monócitos, células dendríticas, plaquetas, eritrócitos e células natural killer.
Em algumas modalidades, o distúrbio proliferativo de células B é o linfoma, linfoma não Hodgkin (NHL), NHL agressivo, NHL recidivante e agressivo, NHL recidivante indolente, NHL refratário, NHL indolente refratário, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno, leucemia, leucemia de células cabeludas (HCL), leucemia linfocítica aguda (LLA), DLBCL, DLBCL recidivante/refratário, FL e linfoma de células do manto.
As origens dos cânceres de células B incluem as seguintes: o linfoma de células B da zona marginal se origina nas células B de memória na zona marginal, linfoma folicular e o linfoma difuso de grandes células B têm origem nos centrócitos na zona clara dos centros germinativos; a leucemia linfocítica crônica e a leucemia linfocítica pequena se originam nas células B1 (CD5 +), o linfoma de células do manto se origina em células B virgens na zona do manto e o linfoma de Burkitt se origina em centroblastos na zona escura dos centros germinativos. Tecidos que incluem células hematopoiéticas referidas neste documento como "tecidos de células hematopoiéticas" incluem timo e medula óssea e tecidos linfoides periféricos, tais como baço, nódulos linfáticos, tecidos linfoides associados à mucosa, tais como tecidos linfoides associados ao intestino, amígdalas, placas de Peyer e apêndice e tecidos linfóides associados a outras mucosas, por exemplo, os revestimentos brônquicos. Outros exemplos particulares de tais cânceres incluem câncer de células escamosas, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas, adenocarcinoma do pulmão, carcinoma escamoso do pulmão, câncer do peritônio, câncer hepatocelular, câncer gastrointestinal, câncer pancreático, glioma, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer colorretal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândula salivar, câncer de rim, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer de vulva, câncer de tireoide, carcinoma hepático, leucemia e outras doenças linfoproliferativas e vários tipos de câncer de cabeça e pescoço.
[0132] Uma "malignidade de células B" ou "distúrbio proliferativo de células B" aqui inclui linfoma não Hodgkin (NHL), incluindo LNH folicular/de baixo grau, LNH linfocítico pequeno (SL), LNH folicular/intermediário, NHL difuso de grau intermediário, alto NHL imunoblástico de grau, NHL linfoblástico de alto grau, NHL de células pequenas não clivadas de alto grau, NHL de doença volumosa, linfoma de células do manto, linfoma relacionado à AIDS e Macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma não Hodgkin (NHL), DLBCL, DLBCL recidivante/refratário, FL, doença de Hodgkin predominante de linfócitos (LPHD), linfoma linfocítico pequeno (SLL), leucemia linfocítica crônica
(CLL), NHL indolente incluindo NHL indolente recidivante e NHL indolente refratário a rituximabe; leucemia, incluindo leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia de células cabeludas, leucemia mieloblástica crônica; linfoma de células do manto; e outras doenças hematológicas. Tais doenças malignas podem ser tratadas com anticorpos direcionados contra marcadores de superfície de células B, tais como CD79b.
Tais doenças são contempladas neste documento para serem tratadas pela administração de um anticorpo direcionado contra um marcador de superfície de células B, tal como CD79b, e inclui a administração de um anticorpo não conjugado ("nu") ou um anticorpo conjugado a um agente citotóxico, conforme divulgado neste documento. Tais doenças também são contempladas neste documento para serem tratadas por terapia de combinação, incluindo um anticorpo anti-CD79b ou conjugado de fármaco com anticorpo anti-CD79b da divulgação em combinação com outro anticorpo ou conjugado de fármaco com anticorpo, outro agente citotóxico, radiação ou outro tratamento administrado simultaneamente ou em série. No método de tratamento exemplar da divulgação, um anticorpo anti-CD79b da divulgação é administrado em combinação com um anticorpo anti-CD20, imunoglobulina ou fragmento de ligação a CD20 do mesmo, tanto em conjunto como sequencialmente. O anticorpo anti-CD20 pode ser um anticorpo nu ou um conjugado de anticorpo e fármaco. Em uma modalidade da terapia de combinação, o anticorpo anti- CD79b é um anticorpo da presente divulgação e o anticorpo anti-CD20 é Rituxan® (rituximabe).
[0133] O termo "linfoma não Hodgkin" ou "NHL", conforme usado neste documento, refere-se a um câncer do sistema linfático diferente dos linfomas de Hodgkin. Os linfomas de Hodgkin geralmente podem ser diferenciados dos linfomas não Hodgkin pela presença de células de Reed- Sternberg nos linfomas de Hodgkin e pela ausência dessas células nos linfomas não Hodgkin.
Exemplos de linfomas não Hodgkin abrangidos pelo termo, tal como usado neste documento, incluem qualquer um que seria identificado como tal por um técnico no assunto (por exemplo, um oncologista ou patologista) de acordo com esquemas de classificação conhecidos na técnica, tais como o esquema Linfoma Europeu-Americano Revisado (REAL),
conforme descrito em Color Atlas of Clinical Hematology (3ª edição), A.
Victor
Hoffbrand e John E.
Pettit (eds.) (Harcourt Publishers Ltd., 2000). Vide, em particular, as listas nas Figura 11.57, 11.58 e 11.59. Exemplos mais específicos incluem, mas não estão limitados a, NHL reincidente ou refratário, NHL de baixo grau de linha de frente, NHL de estágio III/IV, NHL resistente à quimioterapia, leucemia linfoblástica precursora B e/ou linfoma, linfoma linfocítico pequeno, leucemia linfocítica crônica de células B e/ou leucemia prolinfocítica e/ou linfoma linfocítico pequeno, linfoma de células B prolinfocítico, imunocitoma e/ou linfoma linfoplasmocitário, linfoma linfoplasmocitário, linfoma de células B da zona marginal, linfoma esplênico da zona marginal, linfoma MALT da zona extranodal marginal, linfoma da zona marginal nodal, leucemia de células cabeludas, plasmocitoma e/ou mieloma de células plasmáticas, linfoma folicular/de baixo grau, NHL folicular/de grau intermediário, linfoma das células do manto, linfoma do folículo central
(folicular), NHL difuso de grau intermediário, linfoma difuso de grandes células
B, NHL agressivo (incluindo NHL agressivo de linha de frente e NHL agressivo recidivante), NHL recidivante após ou refratário ao transplante de células-
tronco autólogas, linfoma primário mediastinal de grandes células B, linfoma primário de efusão, NHL imunoblástico de alto grau, NHL linfoblástico de alto grau, NHL de células pequenas não clivadas de alto grau, NHL de doença volumosa, Linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica granular grande do precursor (periférico), micose fungóide e/ou síndrome de Sezary, linfomas cutâneos
(cutâneos), linfoma anaplásico de grandes células, linfoma angiocêntrico.
[0134] Um "distúrbio" é qualquer condição que se beneficiaria do tratamento com uma substância/molécula ou método da divulgação. Isso inclui distúrbios ou doenças crônicas e agudas, incluindo aquelas condições patológicas que predispõem o mamífero ao distúrbio em questão. Exemplos não limitantes de distúrbios a serem tratados neste documento incluem condições cancerosas, tais como tumores malignos e benignos; não leucemias e doenças malignas linfóides; distúrbios neuronais, gliais, astrocitais, hipotalâmicos e outros distúrbios glandulares, macrofágicos, epiteliais, do estroma e blastocélico; e distúrbios inflamatórios, imunológicos e outros relacionados com a angiogênese. Em algumas modalidades, o distúrbio proliferativo de células-B é o linfoma, linfoma não Hodgkin (NHL), NHL agressivo, NHL recidivante e agressivo, NHL recidivante indolente, NHL refratário, NHL indolente refratário, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno, leucemia, leucemia de células cabeludas (HCL), leucemia linfocítica aguda (LLA) e linfoma de células do manto.
[0135] Os termos “doença proliferativa celular” e “distúrbio proliferativo” referem-se a distúrbios que estão associadas a algum grau de proliferação celular anormal. Em uma modalidade, o distúrbio proliferativo celular é câncer. Em algumas modalidades de qualquer um dos modos, o câncer é uma doença proliferativa de células B.
[0136] O termo "tumor", conforme usado neste documento, refere-se a todo crescimento e proliferação de células neoplásicas, malignas ou benignas, e todas as células e tecidos pré-cancerosos e cancerosos.
[0137] "Tratar" ou "tratamento" ou "alívio" refere-se a tratamento terapêutico e medidas profiláticas ou preventivas, em que o objetivo é prevenir ou retardar (diminuir) a condição patológica ou distúrbio alvo. Aqueles que precisam de tratamento incluem aqueles que já têm o distúrbio, bem como aqueles propensos a ter o distúrbio ou aqueles nos quais o distúrbio deve ser prevenido. Um paciente ou mamífero é "tratado" com sucesso para um câncer que expressa o polipeptídeo CD79b se, após receber uma quantidade terapêutica de um anticorpo anti-CD79b de acordo com os métodos da presente divulgação, o paciente mostra redução observável e/ou mensurável na ausência de um ou mais dos seguintes: redução no número de células cancerosas ou ausência de células cancerosas; redução do tamanho do tumor; inibição (ou seja, desacelerar até certo ponto e preferencialmente parar) da infiltração de células cancerosas em órgãos periféricos, incluindo a propagação do câncer em tecidos moles e ossos; inibição (ou seja, desacelerar até certo ponto e preferencialmente parar) de metástases tumorais; inibição, até certo ponto, do crescimento do tumor; e/ou alívio, até certo ponto, de um ou mais dos sintomas associados ao câncer específico; morbidade e mortalidade reduzidas e melhoria em questões de qualidade de vida. Na medida em que o anticorpo anti-CD79b pode prevenir o crescimento e/ou matar células cancerosas existentes, ele pode ser citostático e/ou citotóxico. A redução desses sinais ou sintomas também pode ser sentida pelo paciente.
[0138] Os parâmetros acima para avaliar o sucesso do tratamento e a melhora da doença são facilmente mensuráveis por procedimentos de rotina familiares ao médico. Para a terapia do câncer, a eficácia pode ser medida, por exemplo, avaliando o tempo de progressão da doença (TTP) e/ou determinando a taxa de resposta (RR). A metástase pode ser determinada por testes de estadiamento e por cintilografia óssea e testes de nível de cálcio e outras enzimas para determinar a propagação para o osso.
As tomografias também podem ser feitas para verificar a propagação para a pelve e os nódulos linfáticos na área. Radiografias de tórax e medição dos níveis de enzimas hepáticas por métodos conhecidos são usados para procurar metástases nos pulmões e no fígado, respectivamente. Outros métodos de rotina para monitorar a doença incluem ultrassonografia transretal (TRUS) e biópsia transretal com agulha (TRNB).
[0139] Para o câncer de bexiga, que é um câncer mais localizado, os métodos para determinar o progresso da doença incluem avaliação citológica urinária por cistoscopia, monitoramento da presença de sangue na urina, visualização do trato urotelial por ultrassonografia ou um pielograma intravenoso, tomografia computadorizada (TC) e imagem por ressonância magnética (MRI). A presença de metástases à distância pode ser avaliada por TC do abdômen, radiografias de tórax ou imagens de radionuclídeos do esqueleto.
[0140] A administração "crônica" refere-se à administração do(s) agente(s) em um modo contínuo em oposição a um modo agudo, de modo a manter o efeito terapêutico inicial (atividade) por um período de tempo prolongado. A administração “intermitente” é o tratamento que não é feito consecutivamente sem interrupção, mas sim de natureza cíclica.
[0141] Um “indivíduo”, “paciente” ou “sujeito” é um vertebrado.
Em certas modalidades, o vertebrado é um mamífero. Os mamíferos incluem, mas não estão limitados a, animais de fazenda (tais como vacas), animais de esporte, animais de estimação (tais como gatos, cães e cavalos), primatas, camundongos e ratos. Em certas modalidades, um mamífero é um humano.
[0142] A administração "em combinação com" um ou mais agentes terapêuticos adicionais inclui a administração simultânea (concorrente) e consecutiva em qualquer ordem.
[0143] "Transportadores", conforme usado neste documento, incluem transportadores, excipientes ou estabilizadores farmaceuticamente aceitáveis que não são tóxicos para a célula ou mamífero exposto a eles nas dosagens e concentrações empregadas. Frequentemente, o transportador fisiologicamente aceitável é uma solução aquosa com pH tamponado.
Exemplos de transportadores fisiologicamente aceitáveis incluem tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico; polipeptídeo de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; álcoois de açúcar, tais como manitol ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, tais como sódio; e/ou tensoativos não iônicos, tais como TWEEN®, polietilenoglicol (PEG) e PLURONICS®.
[0144] O termo "composição farmacêutica" ou "formulação farmacêutica" refere-se a uma preparação de um imunoconjugado anti-CD79b que está em uma forma que permite que a atividade biológica do ingrediente ativo seja eficaz e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos a um paciente ao qual a formulação seria administrada. Tais formulações são estéreis. Excipientes "farmaceuticamente aceitáveis" (veículos, aditivos) são aqueles que podem ser razoavelmente administrados a um paciente mamífero para fornecer uma dose eficaz do ingrediente ativo empregado.
[0145] Uma formulação "estéril" é asséptica ou livre ou essencialmente livre de todos os microrganismos vivos e seus esporos.
[0146] Uma "quantidade eficaz" de um imunoconjugado anti- CD79b, conforme divulgado neste documento, é uma quantidade suficiente para realizar um propósito especificamente declarado. Um “valor efetivo” pode ser determinado empiricamente e de maneira rotineira, em relação ao propósito declarado.
[0147] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de um imunoconjugado anti-CD79b eficaz para "tratar" uma doença ou distúrbio em um sujeito ou mamífero. No caso de câncer ou tumor,
uma quantidade eficaz do fármaco pode ter o efeito de reduzir o número de células cancerígenas; reduzir o tamanho do tumor; inibir (ou seja, desacelerar até certo ponto ou desejavelmente parar) a infiltração de células cancerígenas nos órgãos periféricos; inibir (ou seja, desacelerar até certo ponto e desejavelmente parar) a metástase tumoral; inibir até certo ponto o crescimento tumoral; e/ou aliviar até certo ponto um ou mais dos sintomas associados ao distúrbio. Vide a definição neste documento de "tratamento". Na medida em que o imunoconjugado pode prevenir o crescimento e/ou matar células cancerosas existentes, ele pode ser citostático e/ou citotóxico. Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado profilático desejado. Normalmente, mas não necessariamente, uma vez que uma dose profilática é usada em pacientes antes ou em um estágio inicial da doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz.
[0148] Uma "quantidade inibidora de crescimento" de um imunoconjugado anti-CD79b é uma quantidade capaz de inibir o crescimento de uma célula, especialmente tumor, por exemplo, célula cancerosa, in vitro ou in vivo. Uma "quantidade inibidora de crescimento" de um imunoconjugado anti-CD79b para fins de inibir o crescimento de células neoplásicas pode ser determinada empiricamente e de maneira rotineira.
[0149] Uma "quantidade citotóxica" de um imunoconjugado anti- CD79b é uma quantidade capaz de causar a destruição de uma célula, especialmente tumor, por exemplo, célula cancerosa, in vitro ou in vivo. Uma "quantidade citotóxica" de um anticorpo anti-CD79b para fins de inibição do crescimento de células neoplásicas pode ser determinada empiricamente e de maneira rotineira.
[0150] Uma "célula que expressa CD79b" é uma célula que expressa um polipeptídeo CD79b endógeno ou transfectado na superfície celular ou em uma forma secretada. Um "câncer que expressa CD79b" é um câncer que compreende células que têm um polipeptídeo CD79b presente na superfície celular ou que produzem e secretam um polipeptídeo CD79b. Um "câncer que expressa CD79b" opcionalmente produz níveis suficientes de polipeptídeo CD79b na superfície celular do mesmo, de tal modo que um anticorpo anti-CD79b possa se ligar ao mesmo e ter um efeito terapêutico em relação ao câncer. Em outra modalidade, um "câncer que expressa CD79b" opcionalmente produz e secreta níveis suficientes de polipeptídeo CD79b, de tal modo que um antagonista do anticorpo anti-CD79b pode se ligar ao mesmo e ter um efeito terapêutico em relação ao câncer. No que diz respeito ao último, o antagonista pode ser um oligonucleotídeo antissenso que reduz, inibe ou previne a produção e secreção do polipeptídeo CD79b segregado por células tumorais. Um câncer que "superexpressa" um polipeptídeo CD79b é aquele que tem níveis mais elevados de polipeptídeo CD79b na superfície celular do mesmo, ou produz e secreta, em comparação com uma célula não cancerosa do mesmo tipo de tecido. Tal superexpressão pode ser causada pela amplificação do gene ou pelo aumento da transcrição ou tradução. A superexpressão do polipeptídeo CD79b pode ser determinada em um ensaio de detecção ou prognóstico avaliando os níveis aumentados da proteína CD79b presente na superfície de uma célula, ou secretada pela célula (por exemplo, por meio de um ensaio imunohistoquímico usando anticorpos anti- CD79b preparados contra um polipeptídeo CD79b isolado que pode ser preparado usando tecnologia de DNA recombinante de um ácido nucleico isolado que codifica o polipeptídeo CD79b; análise FACS, etc.).
Alternativamente, ou adicionalmente, pode-se medir os níveis de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo CD79b ou mRNA na célula, por exemplo, por meio de hibridização fluorescente in situ usando uma sonda baseada em ácido nucleico correspondente a um ácido nucleico que codifica CD79b ou complemento do mesmo; (FISH; vide WO98/45479, publicado em outubro de 1998), Southern blotting, Northern blotting ou técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR), tais como PCR quantitativo em tempo real (RT-PCR). Pode- se também estudar a superexpressão do polipeptídeo CD79b medindo o antígeno eliminado em um fluido biológico, tal como soro, por exemplo, usando ensaios baseados em anticorpos (vide também, por exemplo, Patente dos EUA de nº 4.933.294, publicada em 12 de junho de 1990; WO91/05264, publicado em 18 de abril, 1991; Patente dos EUA de nº 5.401.638, publicada em 28 de março de 1995; e Sias et al., J. Immunol. Methods 132:73-80 (1990)). Além dos ensaios acima, vários ensaios in vivo estão disponíveis para o técnico no assunto. Por exemplo, pode-se expor células dentro do corpo do paciente a um anticorpo que é opcionalmente marcado com um marcador detectável, por exemplo, um isótopo radioativo, e a ligação do anticorpo a células no paciente pode ser avaliada, por exemplo, por varredura externa para radioatividade ou pela análise de uma biópsia tirada de um paciente previamente exposto ao anticorpo.
[0151] O termo "agente citotóxico", tal como usado neste documento, refere-se a uma molécula de fármaco que inibe ou previne a função das células e/ou causa a destruição das células. O termo pretende incluir toxinas, tais como toxinas de moléculas pequenas ou toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, incluindo fragmentos e/ou variantes destes capazes de ter um efeito prejudicial no crescimento ou proliferação de uma célula. Em uma modalidade, o agente citotóxico é mono-metil auristatina E (MMAE).
[0152] Uma composição "liofilizada", tal como usada neste documento, refere-se a uma composição líquida que foi submetida a liofilização por meio do processo de liofilização, resultando em um "bolo". Em certas modalidades, o bolo liofilizado é estável sob condições de armazenamento (5°C ± 3°C e protegido da luz) sem alterações significativas na estrutura, cor, aparência ou teor de umidade do bolo. Em uma modalidade específica, o bolo liofilizado é liso, sem indentações. Em certas modalidades da presente divulgação, a composição liofilizada é estável por cerca de 60 meses. Em certas modalidades da presente divulgação, a composição liofilizada é estável por cerca de 48 meses.
[0153] Uma formulação "estável" é aquela em que o imunoconjugado na mesma retém essencialmente sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica durante o armazenamento. De preferência, a formulação retém essencialmente a sua estabilidade física e química, bem como a sua atividade biológica durante o armazenamento. O período de armazenamento é geralmente selecionado com base no prazo de validade pretendido da formulação. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade da proteína estão disponíveis na técnica e são revistas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nova York, NY, Pubs. (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 (1993), por exemplo. A estabilidade pode ser medida em uma temperatura selecionada por um período de tempo selecionado. A estabilidade pode ser avaliada qualitativamente e/ou quantitativamente em uma variedade de maneiras diferentes, incluindo avaliação da formação de agregados (por exemplo, usando cromatografia por exclusão de tamanho, medindo a turbidez e/ou por inspeção visual); avaliando a heterogeneidade de carga usando cromatografia de troca catiônica, focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF) ou eletroforese da zona capilar; análise de sequência amino-terminal ou carbóxi- terminal; análise por espectrometria de massa; Análise SDS-PAGE para comparar o anticorpo reduzido e intacto; análise por mapa de peptídeos (por exemplo tríptico ou LYS-C); avaliando a atividade biológica ou função de ligação ao antígeno do anticorpo; etc. A instabilidade pode envolver qualquer um ou mais dentre: agregação, desamidação (por exemplo, desamidação de Asn), oxidação (por exemplo, oxidação de Met), isomerização (por exemplo, isomeriação de Asp), corte/hidrólise/fragmentação (por exemplo, fragmentação da região de dobradiça), formação de succinimida, cisteína(s) desemparelhada(s), extensão N-terminal, processamento C-terminal, diferenças de glicosilação, etc.
[0154] Um imunoconjugado "retém sua estabilidade física" em uma formulação farmacêutica se não mostrar sinais ou muito pouco de agregação, precipitação e/ou desnaturação mediante exame visual de cor e/ou clareza, ou conforme medido por dispersão de luz UV ou por cromatografia por exclusão de tamanho.
[0155] Um imunoconjugado "retém sua estabilidade química" em uma formulação farmacêutica, se a estabilidade química em um determinado momento for tal que se considera que o imunoconjugado ainda retém sua atividade biológica, conforme definido abaixo. A estabilidade química pode ser avaliada pela detecção e quantificação de formas quimicamente alteradas da fração de proteína do imunoconjugado (por exemplo, o anticorpo). A alteração química pode envolver modificação de tamanho (por exemplo, corte) que pode ser avaliada usando cromatografia por exclusão de tamanho, SDS-PAGE e/ou espectrometria de massa com fonte de ionização e dessorção a laser assistida por matriz/analisador de massas do tipo tempo-de-voo (MALDI/TOF MS), por exemplo. Outros tipos de alteração química incluem alteração de carga (por exemplo, ocorrendo como um resultado da desamidação) que pode ser avaliada por cromatografia de troca iônica ou icIEF, por exemplo.
Adicionalmente ou alternativamente, a estabilidade química de um imunoconjugado pode ser avaliada pela detecção e quantificação de formas quimicamente alteradas da fração de fármaco do imunoconjugado.
Adicionalmente ou alternativamente, a estabilidade química de um imunoconjugado pode ser avaliada medindo a razão fármaco:anticorpo (DAR), por exemplo, por meio de cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) para determinar a distribuição de DAR em uma composição que compreende o imunoconjugado.
[0156] Um anticorpo de um imunoconjugado "retém sua atividade biológica" em uma formulação farmacêutica se a atividade biológica da fração de proteína do imunoconjugado (por exemplo, o anticorpo, como um anticorpo anti-CD79b) em um determinado momento for de pelo menos cerca de 60% (dentro dos erros do ensaio) da atividade biológica exibida no momento em que a formulação farmacêutica que compreende o imunoconjugado foi preparada conforme determinado em um ensaio (por exemplo, um ensaio de ligação ao antígeno).
[0157] Um anticorpo monoclonal "desamidado" no presente documento é aquele em que um ou mais resíduos de asparagina do mesmo foram derivados, por exemplo, em um ácido aspártico ou um ácido iso- aspártico.
[0158] Um anticorpo monoclonal "oxidado" neste documento é aquele em que um ou mais resíduos de triptofano e/ou uma ou mais metioninas do mesmo foram oxidados.
[0159] Um anticorpo monoclonal "glicado" aqui é aquele em que um ou mais resíduos de lisina do mesmo foram glicados.
[0160] Um anticorpo que é "suscetível a desamidação" é aquele que compreende um ou mais resíduos, que se verificou serem propensos a desamidar.
[0161] Um anticorpo que é "suscetível à oxidação" é aquele que compreende um ou mais resíduos, que se verificou serem propensos a oxidar.
[0162] Um anticorpo que é "suscetível à agregação" é aquele que se agregou com outra(s) molécula(s) de anticorpo, especialmente após congelamento e/ou agitação.
[0163] Um anticorpo que é "suscetível à fragmentação" é aquele que se verificou ser clivado em dois ou mais fragmentos, por exemplo, em uma região de dobradiça do mesmo.
[0164] Por "redução da desamidação, oxidação, agregação ou fragmentação" pretende-se prevenir ou diminuir a quantidade de desamidação, oxidação, agregação ou fragmentação em relação ao anticorpo monoclonal formulado em uma formulação diferente.
[0165] O anticorpo que é formulado é preferencialmente essencialmente puro e desejavelmente essencialmente homogêneo (por exemplo, livre de proteínas contaminantes, etc.). Anticorpo "essencialmente puro" significa uma composição compreendendo pelo menos cerca de 90% em peso do anticorpo, com base no peso total de proteínas na composição, de preferência pelo menos cerca de 95% em peso. Anticorpo "essencialmente homogêneo" significa uma composição que compreende pelo menos cerca de 99% em peso de anticorpo, com base no peso total de proteínas na composição.
[0166] Por "isotônico(a)" entende-se que a formulação de interesse tem essencialmente a mesma pressão osmótica que o sangue humano. As formulações isotônicas geralmente têm uma pressão osmótica de cerca de 250 a 350 mOsm. A isotonicidade pode ser medida usando uma pressão de vapor ou osmômetro do tipo de congelamento de gelo, por exemplo.
[0167] Conforme usado neste documento, "agente tamponante" refere-se a uma solução tamponada que resiste a alterações no pH pela ação de seus componentes de conjugado ácido-base. Exemplos não limitantes de agentes tamponantes deste documento incluem histidina, fosfato de sódio e succinato de sódio. O agente tamponante desta divulgação tem preferencialmente um pH na faixa de cerca de 4,5 a cerca de 7,0, preferencialmente de cerca de 5,0 a cerca de 6,0. Em uma modalidade, o agente tamponante tem um pH de 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 ou 6,0. Em uma modalidade exemplar, o agente tamponante tem um pH de 5,3.
Por exemplo, o succinato de sódio é um exemplo de agente tamponante que irá controlar o pH nesta faixa.
[0168] Conforme usado neste documento, um "tensoativo" refere-se a um agente tensoativo, de preferência um tensoativo não iônico.
Exemplos de tensoativos aqui incluem polissorbato (por exemplo, polissorbato 20 e polissorbato 80); poloxâmero (por exemplo, poloxâmero 188); Triton; dodecilsulfato de sódio (SDS); lauril sulfato de sódio; octil glicosídeo de sódio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetaína; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- ou cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil- ou isostearamidopropil-betaína (por exemplo, lauroamidopropil); miristamidopropil- , palmidopropil- ou isoestearamidopropil-dimetilamina; metil cocoil- de sódio, ou metil oleil-taurato dissódico; e a série MONAQUATTM (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.); polietilglicol, polipropilglicol e copolímeros de etileno e propilenoglicol (por exemplo, Pluronics, PF68 etc); etc. Em uma modalidade, o tensoativo aqui é polissorbato 20. Em outra modalidade, o tensoativo aqui é polissorbato 80.
[0169] Conforme usado neste documento, um "açúcar" refere-se a carboidratos solúveis. Exemplos não limitantes de açúcares incluem glicose, frutose, sacarose, trealose, arginina, glicerina, prolina, dextrano e álcoois de açúcar, tais como glicerol, manitol e sorbitol. II. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA
[0170] Em um aspecto, a divulgação fornece uma composição farmacêutica incluindo um imunoconjugado anti-CD79b e um tensoativo, em que o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml), e em que o anti-CD79b imunoconjugado compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de 5, tal como cerca de 3,5).
[0171] Em algumas modalidades, a composição da presente divulgação é liofilizada. Em algumas modalidades, uma composição divulgada neste documento é uma composição reconstituída, ou seja, uma composição que foi reconstituída a partir de um bolo liofilizado. Em algumas modalidades, é fornecido um frasco de vidro de 20 ml (tal como um frasco selado) que contém uma composição farmacêutica (por exemplo, uma composição liofilizada ou uma composição reconstituída) descrita neste documento.
A. IMUNOCONJUGADOS
[0172] A divulgação refere-se a imunoconjugados (alternativamente referidos como "conjugados de anticorpo-fármaco" ou "ADCs") que compreendem um anticorpo conjugado a uma pequena molécula de toxina, tal como monometilauristatina (MMAE) (análogo sintético de dolastatina). A presente divulgação fornece imunoconjugados anti-CD79b da fórmula Ab - (L - D) p, em que Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); L é um ligante que compreende 6- maleimidocaproil-valina-citrulina-p-aminobenziloxicarbonila (MC-val-cit-PAB); D é MMAE; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (tal como entre cerca de 2 e cerca de 5, por exemplo, cerca de 3,5); e em que o imunoconjugado anti- CD79b tem a estrutura:
[0173] O imunoconjugado anti-CD79b da presente divulgação pode ser referido como anti-CD79b-MC-val-cit-MMAE, anti-CD79b-MC-vc- MMAE ou anti-CD79b-vc-MMAE. Polatuzumabe vedotina é um exemplo do imunoconjugado anti-CD79b da presente divulgação. Polatuzumabe vedotina tem o número de registro CAS 1313206-42-6, o número IUPHAR/BPS 8404 e o número KEGG D10761. Os termos "polatuzumabe vedotina", "DCDS4501A" e "RG7596" abrangem todos os imunoconjugados correspondentes que cumpram os requisitos necessários para obter uma autorização de comercialização como um produto idêntico ou biossimilar em um país ou território selecionado a partir do grupo de países que consiste em EUA, Europa e Japão.
[0174] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de cerca de 5 mg/ml a cerca de 60 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 40 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 30 mg/ml, ou cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Em uma modalidade específica, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de cerca de 5 mg/ml, cerca de 6 mg/ml, cerca de 7 mg/ml, cerca de 8 mg/ml, cerca de 9 mg/ml, cerca de 10 mg/ml, cerca de 11 mg/ml, cerca de 12 mg/ml, cerca de 13 mg/ml, cerca de 14 mg/ml, cerca de 15 mg/ml, cerca de 16 mg/ml, cerca de 17 mg/ml, cerca de 18 mg/ml, cerca de 19 mg/ml, cerca de 20 mg/ml, cerca de 25 mg/ml, cerca de 30 mg/ml, cerca de 35 mg/ml, cerca de 40 mg/ml, cerca de 45 mg/ml, cerca de 50 mg/ml, cerca de 55 mg/ml ou cerca de 60 mg/ml.
[0175] Em algumas modalidades de qualquer uma das modalidades fornecida neste documento, “cerca de” um valor ou parâmetro abrange uma faixa de erro de ± 10%, ± 9%, ± 8%, ± 7%, ± 6%, ± 5%, ± 4%, ± 3%, ± 2% ou ± 1% do valor ou parâmetro declarado, incluindo qualquer faixa entre esses valores.
[0176] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Em uma modalidade exemplar, o imunoconjugado anti- CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de cerca de 10 mg/ml. Em outra modalidade exemplar, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de cerca de 20 mg/ml.
[0177] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de 5 mg/ml a 60 mg/ml, 10 mg/ml a 50 mg/ml, 10 mg/ml a 40 mg/ml, 10 mg/ml a 30 mg/ml, ou 10 mg/ml a 20 mg/ml. Em uma modalidade específica, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, mg/ml, 11 mg/ml, 12 mg/ml, 13 mg/ml, 14 mg/ml, 15 mg/ml, 16 mg/ml, 17 mg/ml, 18 mg/ml, 19 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg/ml, 35 mg/ml, 40 mg/ml, 45 mg/ml, 50 mg/ml, 55 mg/ml ou 60 mg/ml.
[0178] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de 10 mg/ml a 20 mg/ml. Em uma modalidade exemplar, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de 10 mg/ml. Em outra modalidade exemplar, o imunoconjugado anti-CD79b está a uma concentração na composição farmacêutica de 20 mg/ml.
[0179] Conforme contemplado neste documento, o imunoconjugado anti-CD79b é da Fórmula I, como mostrado abaixo, em que um anticorpo anti-CD79b ou fragmento do mesmo (Ab) é conjugado (ou seja, covalentemente ligado) a uma fração de fármaco MMAE (D) através de um ligante (L).
Ab−(L−D)p I
[0180] Na Fórmula I, p é o número médio de frações de fármaco por anticorpo, que pode variar, por exemplo, de cerca de 1 a cerca de 20 frações de fármaco por anticorpo e, em certas modalidades, de 1 a cerca de 8 frações de fármaco por anticorpo. A divulgação inclui uma composição que compreende uma mistura de compostos de anticorpo-fármaco da Fórmula I, em que a carga média de fármaco por anticorpo é de cerca de 2 a cerca de 5, ou cerca de 3 a cerca de 4, por exemplo, 3,5.
1. ANTICORPO ANTI-CD79B
[0181] A presente divulgação fornece imunoconjugados compreendendo um anticorpo anti-CD79b ou fragmentos funcionais do mesmo.
[0182] Em um aspecto, a divulgação fornece um anticorpo anti- CD79b que se liga, de preferência, especificamente a CD79b. Opcionalmente, o anticorpo é um anticorpo monoclonal, fragmento de anticorpo, incluindo fragmento Fab, Fab', F(ab')2 e Fv, diacorpo, anticorpo de domínio único, anticorpo quimérico, anticorpo humanizado, anticorpo de cadeia única ou anticorpo que inibe competitivamente a ligação de um anticorpo polipeptídeo anti-CD79b ao seu respectivo epítopo antigênico. Os anticorpos da presente divulgação podem ser opcionalmente produzidos em células CHO ou células bacterianas e, de preferência, induzem a morte de uma célula à qual se ligam.
[0183] A presente divulgação fornece um imunoconjugado anti- CD79b incluindo um anticorpo anti-CD79b humanizado em que a afinidade monovalente do anticorpo para CD79b (por exemplo, afinidade do anticorpo como um fragmento Fab para CD79b) é substancialmente a mesma que a afinidade monovalente de um anticorpo murino (por exemplo, afinidade do anticorpo murino como um fragmento Fab para CD79b) ou um anticorpo quimérico (por exemplo, afinidade do anticorpo quimérico como um fragmento Fab para CD79b).
[0184] Em uma modalidade, a divulgação fornece um imunoconjugado anti-CD79b incluindo um anticorpo anti-CD79b humanizado em que a afinidade do anticorpo em sua forma bivalente para CD79b (por exemplo, afinidade do anticorpo como uma IgG para CD79b) é 0,3 nM ou melhor. Em outra modalidade, a divulgação fornece um anticorpo anti-CD79b humanizado em que a afinidade do anticorpo em sua forma bivalente para CD79b (por exemplo, afinidade do anticorpo como uma IgG para CD79b) é de 0,5 nM. Em uma outra modalidade, a divulgação fornece um anticorpo anti- CD79b humanizado em que a afinidade do anticorpo em sua forma bivalente para CD79b (por exemplo, afinidade do anticorpo como uma IgG para CD79b) é 0,5 nM +/- 0,1. Em outra modalidade, a divulgação fornece um anticorpo anti- CD79b humanizado em que a afinidade do anticorpo em sua forma bivalente para CD79b (por exemplo, afinidade do anticorpo como uma IgG para CD79b) está entre 0,3 nM e 0,7 nM. Em outra modalidade, a divulgação fornece um anticorpo anti-CD79b humanizado em que a afinidade do anticorpo em sua forma bivalente para CD79b (por exemplo, afinidade do anticorpo como uma
IgG para CD79b) está entre 0,4 nM e 0,6 nM. Em outra modalidade, a divulgação fornece um anticorpo anti-CD79b humanizado em que a afinidade do anticorpo em sua forma bivalente para CD79b (por exemplo, afinidade do anticorpo como uma IgG para CD79b) está entre 0,5 nM e 0,55 nM.
[0185] Como está bem estabelecido na técnica, a afinidade de ligação de um ligante ao seu receptor pode ser determinada usando qualquer um de uma variedade de ensaios e expressa em termos de uma variedade de valores quantitativos. Consequentemente, em uma modalidade, a afinidade de ligação é expressa como valores Kd e reflete a afinidade de ligação intrínseca (por exemplo, com efeitos de avidez minimizados). Geralmente e preferencialmente, a afinidade de ligação é medida in vitro, seja em um ambiente livre de células ou associado a células. Conforme descrito em mais detalhes neste documento, a diferença de vezes na afinidade de ligação pode ser quantificada em termos da razão do valor de afinidade de ligação monovalente de um anticorpo humanizado (por exemplo, na forma Fab) e o valor de afinidade de ligação monovalente de um anticorpo de referência/comparador (por exemplo, na forma Fab) (por exemplo, um anticorpo murino tendo sequências da região hipervariável do doador), em que os valores de afinidade de ligação são determinados sob condições de ensaio semelhantes. Assim, em uma modalidade, a diferença de vezes na afinidade de ligação é determinada como a razão dos valores da Kd do anticorpo humanizado na forma Fab e o referido anticorpo Fab de referência/comparador.
Por exemplo, em uma modalidade, se um anticorpo da divulgação (A) tem uma afinidade que é "3 vezes menor" do que a afinidade de um anticorpo de referência (M), então se o valor da Kd para A for 3x, o valor da Kd de M seria 1x, e a razão da Kd de A para Kd de M seria 3:1. Por outro lado, em uma modalidade, se um anticorpo da divulgação (C) tem uma afinidade que é "3 vezes maior" do que a afinidade de um anticorpo de referência (R), então, se o valor da Kd para C for 1x, o valor da Kd de R seria 3x, e a razão da Kd de C para Kd de R seria 1:3. Qualquer um de uma série de ensaios conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos neste documento, podem ser usados para obter medições de afinidade de ligação, incluindo, por exemplo, Biacore, radioimunoensaio (RIA) e ELISA.
[0186] O anticorpo anti-CD79b fornecido compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6).
[0187] Em algumas modalidades da presente divulgação, o anticorpo anti-CD79b compreende um domínio variável da cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPG
KGLEWIGEILPGGGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYY CTRRVPIRLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 7); - e um domínio variável da cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de:
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKP
GKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNE DPLTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 8).
[0188] Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPG KGLEWIGEILPGGGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYY CTRRVPIRLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 9); - e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de:
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKP GKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNE DPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ
WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ GLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 10).
2. LIGANTE
[0189] A presente divulgação fornece um ligante que inclui vários componentes, incluindo 6-maleimidocaproil ("MC"), valina-citrulina ("val-cit" ou "vc") e p-aminobenziloxicarbonila (uma "PAB"). Tais componentes de ligação são conhecidos na técnica e são brevemente descritos abaixo.
[0190] Tal como usado neste documento, um ligante é da Fórmula II:
II
[0191] em que A é uma unidade extensora e a é um número inteiro de 0 a 1; W é uma unidade de aminoácido e w é um número inteiro de 0 a 12; Y é uma unidade espaçadora e y é 0, 1 ou 2. Uma “unidade extensora” liga um anticorpo a outro componente de ligação. A unidade extensora fornecida neste documento, MC, é mostrada abaixo (em que a linha ondulada indica sítios de fixação covalente a um anticorpo):
MC
[0192] Uma unidade de aminoácido permite a clivagem do ligante por uma protease, facilitando assim a liberação do fármaco do imunoconjugado após a exposição a proteases intracelulares, tais como enzimas lisossomais. Vide, por exemplo, Doronina et al., (2003) Nat.
Biotechnol. 21:778-784. Uma unidade de aminoácidos pode compreender resíduos de aminoácidos de ocorrência natural, bem como aminoácidos menores e análogos de aminoácidos de ocorrência não natural, tal como a citrulina. As unidades de aminoácidos podem ser projetadas e otimizadas em sua seletividade para clivagem enzimática por uma enzima particular, por exemplo, uma protease associada a tumor, catepsina B, C e D ou uma protease de plasmina. A unidade de aminoácidos fornecida neste documento é um dipeptídeo valina-citrulina (vc ou val-cit).
[0193] Tal como usado neste documento, uma unidade "espaçadora" é autoimolativa e liga o anticorpo a uma fração de fármaco por meio de uma unidade extensora e uma unidade de aminoácidos. Uma unidade espaçadora "autoimolativa" permite a liberação da fração de fármaco sem uma etapa de hidrólise separada como resultado de uma ligação amida e um carbamato, metilcarbamato ou carbonato feito entre o álcool benzílico e um agente citotóxico. Vide, por exemplo, Hamann et al., (2005) Expert Opin. Ther.
Patents (2005) 15:1087-1103. A unidade espaçadora fornecida aqui é p- aminobenziloxicarbonila (PAB).
[0194] Componentes de ligante, incluindo extensor, espaçador e unidades de aminoácidos, podem ser sintetizados por métodos conhecidos na técnica, tais como aqueles descritos em US 2005-0238649A1
[0195] O ligante da presente divulgação é MC-val-cit-PAB, como mostrado abaixo.
3. MONOMETILAURISTATINA (MMAE)
[0196] O imunoconjugado da presente divulgação inclui um anticorpo anti-CD79b ou fragmento do mesmo conjugado a uma auristatina, um análogo sintético da dolastatina (Patentes dos EUA de nº 5635483; 5780588). Foi demonstrado que dolastatinas e auristatinas interferem na dinâmica dos microtúbulos, hidrólise de GTP e divisão nuclear e celular (Woyke et al., (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584) e têm atividade anticâncer (Pat. dos EUA de nº 5663149) e antifúngica (Pettit et al., (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). A fração de fármaco de auristatina pode ser ligada ao anticorpo através do N-terminal N (amino) ou do C-terminal (carboxil) da fração de fármaco peptídica (WO 02/088172). A auristatina da presente divulgação é o pentapeptídeo de monometilauristatina (MMAE) sintético, não carregado, ligado ao N-terminal, como mostrado abaixo.
[0197] O imunoconjugado anti-CD79b da Fórmula I compreendendo um anticorpo anti-CD79b ou fragmento do mesmo, um ligante com vários componentes de ligante e MMAE são mostrados abaixo com as seguintes abreviaturas (em que "Ab" é um anticorpo anti-CD79b ou fragmento do mesmo; p é 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de 5, tal como cerca de 3,5), "Val-Cit" ou "vc" é um dipeptídeo valina-citrulina; e "S" é um átomo de enxofre).
[0198] Será notado que em algumas das descrições estruturais do imunoconjugado ligado a enxofre deste documento, o anticorpo é representado como "Ab-S" meramente para indicar a característica de ligação a enxofre e não para indicar que um átomo de enxofre particular carrega múltiplas frações ligante-fármaco. O parêntese esquerdo da seguinte estrutura também pode ser colocado à esquerda do átomo de enxofre, entre Ab e S, o que seria uma descrição equivalente do imunoconjugado da divulgação descrito neste documento.
4. CARREGAMENTO DE FÁRMACO
[0199] O carregamento de fármaco é representado por p, o número médio de frações de fármaco por anticorpo em uma molécula da Fórmula I. O carregamento de fármaco pode variar de 1 a 20 frações de fármaco (D) por anticorpo. ADCs da Fórmula I incluem coleções de anticorpos conjugados com uma faixa de frações de fármaco, de 1 a 20. O número médio de frações de fármaco por anticorpo em preparações de ADC a partir de reações de conjugação pode ser distinguido por meios convencionais, tais como espectroscopia de massa, ensaio ELISA e HPLC. A distribuição quantitativa de ADC em termos de p também pode ser determinada. Em alguns casos, a separação, purificação e distinção de ADC homogêneo, onde p é um certo valor de ADC com outras cargas de fármaco, podem ser obtidas por meio de HPLC de fase reversa ou eletroforese. As formulações farmacêuticas de conjugados de anticorpo-fármaco da Fórmula I podem, assim, ser uma mistura heterogênea de tais conjugados com anticorpos ligados a 1, 2, 3, 4 ou mais frações de fármaco.
[0200] Para alguns conjugados de anticorpo-fármaco, p pode ser limitado pelo número de s[itios de ligação no anticorpo. Por exemplo, onde o anexo é um tiol de cisteína, como nas modalidades fornecidas neste documento, um anticorpo pode ter somente um ou vários grupos tiol de cisteína, ou pode ter somente um ou vários grupos tiol suficientemente reativos através dos quais um ligante pode ser anexado. Em certas modalidades, o carregamento de fármaco mais elevado, por exemplo, p> 5, pode causar agregação, insolubilidade, toxicidade ou perda de permeabilidade celular de certos conjugados anticorpo-fármaco. Em certas modalidades, o carregamento de fármaco para um ADC da divulgação varia de 1 a cerca de 8; de cerca de 2 a cerca de 6; de cerca de 3 a cerca de 5 ou cerca de 3,5. Na verdade, foi demonstrado que para certos ADCs, a razão ideal de frações de fármaco por anticorpo pode ser inferior a 8 e pode ser cerca de 2 a cerca de 5. Vide US 2005-0238649 A1.
[0201] Em certas modalidades, menos do que o máximo teórico de frações de fármaco é conjugado a um anticorpo durante uma reação de conjugação. Um anticorpo pode conter, por exemplo, resíduos de lisina que não reagem com o intermediário fármaco-ligante ou reagente ligante, conforme discutido abaixo. Geralmente, os anticorpos não contêm muitos grupos tiol de cisteína livres e reativos que podem estar ligados a uma fração de fármaco; de fato, a maioria dos resíduos de tiol de cisteína em anticorpos existem como pontes dissulfeto. Em certas modalidades, um anticorpo pode ser reduzido com um agente redutor, tal como ditiotreitol (DTT) ou tricarboniletilfosfina (TCEP), sob condições de redução parcial ou total, para gerar grupos tiol de cisteína reativos. Em certas modalidades, um anticorpo é submetido a condições desnaturantes para revelar grupos nucleofílicos reativos, tais como lisina ou cisteína.
[0202] O carregamento (razão fármaco/anticorpo) de um ADC pode ser controlada de diferentes maneiras, por exemplo, por: (i) limitar o excesso molar do intermediário fármaco-ligante ou reagente ligante em relação ao anticorpo, (ii) limitar o tempo ou temperatura da reação de conjugação e (iii) condições redutivas parciais ou limitantes para modificação de tiol de cisteína.
[0203] Deve ser entendido que, onde mais de um grupo nucleofílico reage com um intermediário fármaco-ligante ou reagente ligante seguido por um reagente de fração de fármaco, então o produto resultante é uma mistura de compostos de ADC com uma distribuição de uma ou mais frações de fármaco ligadas a um anticorpo. O número médio de fármacos por anticorpo pode ser calculado a partir da mistura por um ensaio de anticorpo duplo ELISA, que é específico para o anticorpo e específico para o fármaco. As moléculas individuais de ADC podem ser identificadas na mistura por espectroscopia de massa e separadas por HPLC, por exemplo, cromatografia de interação hidrofóbica (vide, por exemplo, McDonagh et al., (2006) Prot.
Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., et al. “Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate,” Abstrato nº 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, 27-31 de março, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, março de 2004; Alley, S.C., et al., “Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates,” Abstrato nº 627, American Association for Cancer
Research, 2004 Annual Meeting, 27-31 de março, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, março de 2004). Em certas modalidades, um ADC homogêneo com um único valor de carregamento pode ser isolado da mistura de conjugação por eletroforese ou cromatografia.
5. MÉTODOS EXEMPLARES PARA PREPARAR IMUNOCONJUGADOS
[0204] Um ADC da Fórmula I pode ser preparado por várias vias empregando reações, condições e reagentes de química orgânica conhecidos pelos técnicos no assunto, incluindo: (1) reação de um grupo nucleofílico de um anticorpo com um reagente ligante bivalente para formar Ab-L por meio de uma ligação covalente, seguida por reação com uma fração de fármaco D; e (2) reação de um grupo nucleofílico de uma fração de fármaco com um reagente ligante bivalente, para formar D-L, por meio de uma ligação covalente, seguida por reação com um grupo nucleofílico de um anticorpo. Métodos exemplares para preparar um ADC da Fórmula I por meio da última via são descritos em US 2005-0238649 A1, que é expressamente incorporado neste documento por referência.
[0205] Grupos nucleofílicos em anticorpos incluem, mas não estão limitados a: (i) grupos amina N-terminais, (ii) grupos amina de cadeia lateral, por exemplo, lisina, (iii) grupos tiol de cadeia lateral, por exemplo, cisteína, e (iv) hidroxila de açúcar ou grupos amino onde o anticorpo é glicosilado. Os grupos amina, tiol e hidroxila são nucleofílicos e capazes de reagir para formar ligações covalentes com grupos eletrofílicos em frações de ligante e reagentes de ligante, incluindo: (i) ésteres ativos, tais como ésteres NHS, ésteres HOBt, haloformatos e halogenetos de ácido; (ii) halogenetos de alquila e benzila, tais como haloacetamidas; (iii) grupos aldeídos, cetonas, carboxila e maleimida. Certos anticorpos têm dissulfetos intercadeias redutíveis, ou seja, pontes de cisteína. Os anticorpos podem ser tornados reativos para conjugação com reagentes ligante por tratamento com um agente redutor, tal como DTT (ditiotreitol) ou tricarboniletilfosfina (TCEP), de tal modo que o anticorpo seja total ou parcialmente reduzido. Cada ponte de cisteína formará, teoricamente, dois nucleófilos de tiol reativos. Grupos nucleofílicos adicionais podem ser introduzidos em anticorpos através da modificação de resíduos de lisina, por exemplo, pela reação de resíduos de lisina com 2- iminotiolano (reagente de Traut), resultando na conversão de uma amina em um tiol. Os grupos tiol reativos podem ser introduzidos em um anticorpo pela introdução de um, dois, três, quatro ou mais resíduos de cisteína (por exemplo, preparando anticorpos variantes compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos de cisteína não nativos).
[0206] Os conjugados de anticorpo-fármaco da divulgação também podem ser produzidos por reação entre um grupo eletrofílico em um anticorpo, tal como um grupo aldeído ou carbonila cetona, com um grupo nucleofílico em um reagente ligante ou fármaco. Grupos nucleofílicos úteis em um reagente ligante incluem, mas não estão limitados a, hidrazida, oxima, amino, hidrazina, tiossemicarbazona, carboxilato de hidrazina e arilhidrazida.
Em uma modalidade, um anticorpo é modificado para introduzir frações eletrofílicas que são capazes de reagir com substituintes nucleofílicos no reagente ligante ou fármaco. Em outra modalidade, os açúcares de anticorpos glicosilados podem ser oxidados, por exemplo, com reagentes de oxidação de periodato, para formar grupos aldeído ou cetona que podem reagir com o grupo amina de reagentes de ligante ou frações de fármaco. Os grupos imina de base de Schiff resultantes podem formar uma ligação estável ou podem ser reduzidos, por exemplo, por reagentes de boro-hidreto para formar ligações amina estáveis. Em uma modalidade, a reação da porção de carboidrato de um anticorpo glicosilado com galactose oxidase ou meta-periodato de sódio pode render grupos carbonila (aldeído e cetona) no anticorpo que podem reagir com grupos apropriados na fármaco (Hermanson, Bioconjugate Techniques). Em outra modalidade, os anticorpos contendo resíduos de serina ou treonina N- terminal podem reagir com meta-periodato de sódio, resultando na produção de um aldeído no lugar do primeiro aminoácido (Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146; US 5362852). Tal aldeído pode reagir com uma fração de fármaco ou nucleófilo ligante.
[0207] Grupos nucleofílicos em uma fração de fármaco incluem, mas não estão limitados a: grupos amina, tiol, hidroxila, hidrazida, oxima, hidrazina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidrazina e arilhidrazida capazes de reagir para formar ligações covalentes com grupos eletrofílicos em frações ligantes e reagentes ligantes, incluindo: (i) ésteres ativos, tais como ésteres NHS, ésteres HOBt, haloformatos e halogenetos de ácido; (ii) halogenetos de alquila e benzila, tais como haloacetamidas; (iii) grupos aldeídos, cetonas, carboxila e maleimida.
[0208] Os compostos da divulgação contemplam expressamente, mas não estão limitados a, ADC preparado com os seguintes reagentes de reticulação: BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo- MBS, sulfo-SIAB, sulfo- SMCC e sulfo-SMPB e SVSB (succinimidil-(4- vinilsulfona)benzoato) que estão comercialmente disponíveis (por exemplo, da Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., EUA; vide páginas 467-498, 2003- 2004 Applications Handbook and Catalog).
[0209] Os imunoconjugados compreendendo um anticorpo e um agente citotóxico também podem ser feitos usando uma variedade de agentes de acoplamento de proteínas bifuncionais, tais como propionato de N- succinimidil-3-(2-piridilditio) (SPDP), ciclohexano-1-carboxilato de succinimidil- 4-(N-maleimidometil) (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésteres (tais como HCl de adipimidato de dimetila), ésteres ativos (tais como suberato de disuccinimidila), aldeídos (tais como glutaraldeído),
compostos bis-azido (tais como hexanodiamina de bis(p- azidobenzoíla)), derivados de bis-diazônio (tais como bis-(p-diazôniobenzoil)-etilenodiamina), di- isocianatos (tais como 2,6-di-isocianato de tolueno) e compostos de flúor bis- ativos (tais como 1,5-difluoro- 2,4-dinitrobenzeno). Por exemplo, uma imunotoxina de ricina pode ser preparada conforme descrito em Vitetta et al., Science, 238:1098 (1987). Ácido 1-isotiocianatobenzil-3-metildietileno triaminapenta-acético marcado com carbono 14 (MX-DTPA) é um agente quelante exemplar para a conjugação de radionuclotídeos ao anticorpo. Vide WO94/11026.
B. TENSOATIVO
[0210] A presente divulgação fornece uma composição incluindo um imunoconjugado anti-CD79b e um tensoativo. Em certas modalidades, o tensoativo é polissorbato (por exemplo, polissorbato 20 e polissorbato 80); poloxâmero (por exemplo, poloxâmero 188); N-octil-β-D glucopiranosídeo (OG); Triton; dodecilsulfato de sódio (SDS); lauril sulfato de sódio; octil glicosídeo de sódio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetaína; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- ou cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil- ou isostearamidopropil-betaína (por exemplo, lauroamidopropil); miristamidopropil- , palmidopropil- ou isoestearamidopropil-dimetilamina; metil cocoil- de sódio, ou metil oleil-taurato dissódico; e a série MONAQUATTM (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.); polietilglicol, polipropilglicol, um copolímero de etileno e propilenoglicol, tal como Pluronics ou PF68; ou qualquer combinação destes.
[0211] Em algumas modalidades, o tensoativo deste documento é não iônico. Em certas modalidades exemplares, o tensoativo é escolhido a partir do grupo que consiste em polissorbato 20 (PS20), polissorbato 80 (PS80), poloxâmero188 (P188), N-octil-β-D glucopiranosídeo (OG) e uma combinação destes. Em uma modalidade específica, o tensoativo é PS20. Em outra modalidade, o tensoativo do presente documento é PS80.
[0212] Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,01% p/v (ou seja, 0,1 mg/ml) e cerca de 0,20% p/v (ou seja, 2,0 mg/ml). Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,01% p/v (ou seja, 0,1 mg/ml), pelo menos cerca de 0,02% p/v (ou seja, 0,2 mg/ml), pelo menos cerca de 0,03% p/v (ou seja, 0,3 mg/ml), pelo menos cerca de 0,04% p/v (ou seja, 0,4 mg/ml), pelo menos cerca de 0,05% p/v (ou seja, 0,5 mg/ml), pelo menos cerca de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml), pelo menos cerca de 0,07% p/v (ou seja, 0,7 mg/ml), pelo menos cerca de 0,08% p/v (ou seja, 0,8 mg/ml), pelo menos cerca de 0,09% p/v (ou seja, 0,9 mg/ml), pelo menos cerca de 0,10% p/v (ou seja, 1 mg/ml), pelo menos cerca de 0,11% p/v (ou seja, 1,1 mg/ml), pelo menos cerca de 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml), pelo menos cerca de 0,13% p/v (ou seja, 1,3 mg/ml), pelo menos cerca de 0,14% p/v (ou seja, 1,4 mg/ml), pelo menos cerca de 0,15% p/v (ou seja, 1,5 mg/ml), pelo menos cerca de 0,16% p/v (ou seja, 1,6 mg/ml), pelo menos cerca de 0,17% p/v (ou seja, 1,7 mg/ml), pelo menos cerca de 0,18% p/v (ou seja, 1,8 mg/ml), pelo menos cerca de 0,19% p/v (ou seja, 1,9 mg/ml), ou pelo menos cerca de 0,20% p/v (ou seja, 2,0 mg/ml), incluindo um qualquer faixa entre esses valores. Em uma modalidade específica, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em outra modalidade específica, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição farmacêutica líquida. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é estável por pelo menos cerca de qualquer uma de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a 30°C, ou por pelo menos cerca de qualquer uma de 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a 2°C a 8°C.
[0213] Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,01% p/v (ou seja, 0,1 mg/ml) e cerca de 0,20% p/v (ou seja, 2,0 mg/ml). Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica liofilizada está a uma concentração de pelo menos 0,01% p/v, pelo menos 0,02% p/v, pelo menos 0,03% p/v, pelo menos 0,04% p/v, pelo menos 0,05% p/v, pelo menos 0,06% p/v, pelo menos 0,07% p/v, pelo menos 0,08% p/v, pelo menos 0,09% p/v, pelo menos 0,10% p/v, pelo menos 0,11% p/v, pelo menos 0,12% p/v, pelo menos 0,13% p/v, pelo menos 0,14% p/v, pelo menos 0,15% p/v, pelo menos 0,16% p/v, em pelo menos 0,17% p/v, pelo menos 0,18% p/v, pelo menos 0,19% p/v, ou pelo menos 0,20% p/v, incluindo qualquer faixa entre esses valores. Em uma modalidade específica, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica liofilizada está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v. Em outra modalidade específica, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica liofilizada está a uma concentração de pelo menos 0,12% p/v. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica liofilizada é um bolo liofilizado. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica liofilizada está contida em um frasco de vidro.
[0214] Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica líquida está a uma concentração de pelo menos cerca de 0,1 a cerca de 2,0 mg/ml. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica líquida está a uma concentração de pelo menos qualquer um de cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 ou 2,0 mg/ml, incluindo qualquer faixa entre esses valores. Em uma modalidade específica, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica líquida está a uma concentração de pelo menos cerca de 0. 6% mg/ml. Em outra modalidade específica, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica líquida está a uma concentração de pelo menos 1,2 mg/ml. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é reconstituída (por exemplo, reconstituída usando SWFI) a partir de uma composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo liofilizado). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida está contida em um frasco de vidro. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é estável por pelo menos cerca de qualquer uma de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a 30°C, ou por pelo menos cerca de qualquer uma de 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a 2°C a 8°C.
[0215] Em uma modalidade exemplar, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica liofilizada está a uma concentração de 0,06% p/v. Em outra modalidade exemplar, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica liofilizada está a uma concentração de 0,12% p/v.
Em algumas modalidades, a composição farmacêutica liofilizada é um bolo liofilizado. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica liofilizada está contida em um frasco de vidro.
[0216] Em uma modalidade exemplar, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica líquida está a uma concentração de 0,6 mg/ml. Em outra modalidade exemplar, o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica líquida está a uma concentração de 1,2 mg/ml. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é reconstituída (por exemplo, reconstituída usando SWFI) a partir de uma composição liofilizada (tal como um bolo liofilizado). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida está contida em um frasco de vidro. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é estável por pelo menos cerca de qualquer uma de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a 30°C, ou por pelo menos cerca de qualquer uma de 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a 2°C a 8°C. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é estável por pelo menos cerca de qualquer uma de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a 30°C, ou por pelo menos cerca de qualquer uma de 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a 2°C a 8°C.
[0217] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 10 mg/ml e o tensoativo na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 10 mg/ml e o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição reconstituída (por exemplo, reconstituída usando SWFI a partir de uma composição liofilizada). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica está contida em um frasco de vidro. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é estável por pelo menos cerca de qualquer uma de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a 30°C, ou por pelo menos cerca de qualquer uma de 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a 2°C a 8°C.
[0218] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 10 mg/ml e o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 10 mg/ml e o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição reconstituída (por exemplo, reconstituída usando SWFI a partir de uma composição liofilizada). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica está contida em um frasco de vidro.
[0219] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de pelo menos 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição reconstituída (por exemplo, reconstituída usando SWFI a partir de uma composição liofilizada). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica está contida em um frasco de vidro.
[0220] Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo (por exemplo, PS20) na composição farmacêutica está a uma concentração de 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml). Em algumas modalidades, o imunoconjugado anti-CD79b na composição farmacêutica está a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo na composição farmacêutica está a uma concentração de 0,12% p/v (ou seja, 1,2 mg/ml). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica líquida é estável por pelo menos cerca de qualquer uma de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a 30°C, ou por pelo menos cerca de qualquer uma de 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a 2°C a 8°C.
[0221] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma composição líquida adequada para administração intravenosa. Em algumas modalidades, a composição líquida adequada para administração compreende cerca de 0,0432 e cerca de 0,162 mg/ml de tensoativo (por exemplo, polissorbato 20). Em algumas modalidades, a composição líquida compreende entre cerca de 0,72 mg/ml e cerca de 2,7 mg/ml de polatuzumabe vedotina. Em algumas modalidades, a composição líquida adequada para administração intravenosa compreende cerca de 0,72 mg/ml de polatuzumabe vedotina e cerca de 0,0432 mg/ml de polissorbato 20. Em algumas modalidades, a composição líquida adequada para administração intravenosa compreende cerca de 2,7 mg/ml de polatuzumabe vedotina e cerca de 0,162 mg/ml de polissorbato 20.
C. AGENTE TAMPONANTE
[0222] De acordo com a presente divulgação, são fornecidas composições farmacêuticas que incluem um agente tamponante. Sem desejar ser limitado pela teoria, o uso de tampão mantém o pH da composição farmacêutica durante a fabricação, armazenamento e uso da composição.
Exemplos não limitantes de agentes tamponantes incluem histina, succinato, succinato de sódio, bicarbonato de sódio, cloreto de cálcio, sulfato de magnésio, fosfato monossódico, fosfato dissódico, fosfato monopotássico, fosfato dipotássico, ácido [tris(hidroximetil)metilamino]propanossulfônico (TAPS), 2-(Bis(2-hidroxietil)amino)ácido acético (Bicina), 2-Amino-2- (hidroximetil)propano-1,3-diol(Tris), N-(2-Hidróxi-1,1-bis(hidroximetil)etil)glicina (Tricina), ácido 3-[[1,3-di-hidróxi-2-(hidroximetil)propan-2-il]amino] -2- hidroxipropano-1-sulfônico (TAPSO), ácido 2-[4-(2-hidroxietil) piperazin-1- il]etanossulfônico (HEPES), ácido 2-[[1,3-di-hidróxi-2-(hidroximetil)propan-2- il]amino]etanossulfônico (TES), ácido 1,4-piperazinodietanossulfônico (PIPES), ácido dimetilarsínico, ácido 2-morfolin-4-iletanossulfônico (MES) ou solução salina tamponada com fosfato (PBS). Outros agentes tamponantes adequados podem ser ácido acético em um sal, ácido cítrico em um sal, ácido bórico em um sal e ácido fosfórico em um sal.
[0223] Em modalidades exemplares da presente divulgação, o agente tamponante é um tampão histidina ou um tampão succinato. Em uma modalidade específica, o tampão succinato é um tampão succinato de sódio.
[0224] Em algumas modalidades, o agente tamponante está a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM. Em uma modalidade específica, o agente tamponante está a uma concentração de cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 21 mM, cerca de 22 mM, cerca de 23 mM, cerca de 24 mM, cerca de 25 mM, cerca de 26 mM, cerca de 27 mM, cerca de 28 mM, cerca de 29 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 mM, cerca de 100 mM, cerca de 105 mM, cerca de 110 mM, cerca de 115 mM, cerca de 120 mM, cerca de 125 mM, cerca de 130 mM, cerca de 135 mM, cerca de 140 mM, cerca de 145 mM, cerca de 150 mM, cerca de 155 mM, cerca de 160 mM, cerca de 165 mM, cerca de 170 mM, cerca de 175 mM, cerca de 180 mM, cerca de 185 mM, cerca de 190 mM, cerca de 195 mM ou cerca de 200 mM.
[0225] Em outra modalidade específica, o agente tamponante está a uma concentração de 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 15 mM, 16 mM, 17 mM, 18 mM, 19 mM, 20 mM, 21 mM, 22 mM, 23 mM, 24 mM, 25 mM, 26 mM, 27 mM, 28 mM, 29 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 55 mM, 60 mM, 65 mM, 70 mM, 75 mM, 80 mM, 85 mM, 90 mM, 95 mM, 100 mM, 105 mM, 110 mM, 115 mM, 120 mM, 125 mM, 130 mM, 135 mM, 140 mM, 145 mM, 150 mM, 155 mM, 160 mM, 165 mM, 170 mM, 175 mM, 180 mM, 185 mM, cerca de 190 mM, 195 mM ou 200 mM.
[0226] Em uma modalidade exemplar da presente divulgação, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM. Em uma modalidade, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de cerca de 10 mM. Em outra modalidade, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de 10 mM
[0227] Em algumas modalidades, a composição da presente divulgação tem um pH de cerca de 5,0 a cerca de 6,0. Em modalidades específicas, o tampão tem um pH de cerca de 5,0, cerca de 5,1, cerca de 5,2, cerca de 5,3, cerca de 5,4, cerca de 5,5, cerca de 5,6, cerca de 5,7, cerca de 5,8, cerca de 5,9 ou cerca de 6,0. Em outras modalidades específicas, o tampão tem um pH de 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 ou 6,0.
[0228] Em uma modalidade exemplar, a composição da presente divulgação tem um pH de cerca de 5,3. Em outra modalidade exemplar, a composição da presente divulgação tem um pH de 5,3.
D. AÇÚCAR
[0229] De acordo com a presente divulgação, são fornecidas composições farmacêuticas que incluem um açúcar. Sem desejar ser limitado pela teoria, um açúcar funciona para promover a crioproteção da composição farmacêutica, evitando assim a agregação e mantendo a estabilidade química e física da composição farmacêutica. Em certas modalidades, o açúcar é glicose, frutose, sacarose, trealose, arginina, glicerina, prolina, dextrano, dextrano 40, glicerol, manitol ou sorbitol.
[0230] Em algumas modalidades, o açúcar é selecionado a partir do grupo que consiste em: sacarose, manitol, sorbitol, glicerol, dextrano 40 e trealose. Em uma modalidade exemplar, o açúcar é sacarose.
[0231] Em algumas modalidades, o açúcar está a uma concentração de cerca de 50 mM a cerca de 300 mM. Em uma modalidade específica, o açúcar está a uma concentração de cerca de 50 mM, cerca de 60 mM, cerca de 70 mM, cerca de 80 mM, cerca de 90 mM, cerca de 100 mM, cerca de 110 mM, cerca de 120 mM, cerca de 130 mM, cerca de 140 mM, cerca de 150 mM, cerca de 160 mM, cerca de 170 mM, cerca de 180 mM, cerca de 190 mM, cerca de 200 mM, cerca de 210 mM, cerca de 220 mM, cerca de 230 mM, cerca de 240 mM, cerca de 250 mM, cerca de 260 mM, cerca de 270 mM, cerca de 280 mM, cerca de 290 mM ou cerca de 300 mM.
Em algumas modalidades, o açúcar está a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM.
[0232] Em algumas modalidades, o açúcar está a uma concentração de 50 mM a 300 mM. Em uma modalidade específica, o açúcar está a uma concentração de 50 mM, 60 mM, 70 mM, 80 mM, 90 mM, mM, 110 mM, 120 mM, 130 mM, 140 mM, 150 mM, 160 mM, 170 mM, 180 mM, 190 mM, 200 mM, 210 mM, 220 mM, 230 mM, 240 mM, 250 mM, 260 mM, 270 mM, 280 mM, 290 mM ou 300 mM. Em algumas modalidades, o açúcar está a uma concentração de 100 mM a 260 mM.
[0233] Em uma modalidade exemplar da presente divulgação, a sacarose está a uma concentração de cerca de 120 mM. Em outra modalidade exemplar, a sacarose está a uma concentração de 120 mM.
[0234] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece uma composição farmacêutica produzida por liofilização de uma composição líquida compreendendo 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a composição líquida tem um pH de 5,3, e em que o imunoconjugado anti-CD79b tem a fórmula:
- em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de 5, tal como cerca de 3,5).
[0235] Em algumas modalidades da presente divulgação, o anticorpo anti-CD79b compreende um domínio variável da cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 9 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10.
E. ESTABILIDADE
[0236] Em algumas modalidades, a estabilidade física, estabilidade química ou atividade biológica da composição farmacêutica em um estado líquido ou em uma forma liofilizada é avaliada ou medida. Quaisquer métodos conhecidos na técnica e descritos nos Exemplos neste documento podem ser usados para avaliar a estabilidade e a atividade biológica da composição farmacêutica da presente divulgação. Por exemplo, a estabilidade do anticorpo na composição farmacêutica pode ser medida por, mas não limitada a, cromatografia por exclusão de tamanho (SEC ou SE-HPLC), focalização isoelétrica capilar (icIEF), mapeamento de peptídeo,
obscurecimento de luz de pequeno volume (HIAC) e técnicas de eletroforese capilar (CE), tais como CE-dodecil sulfato de sódio (CE-SDS) e análise de CE- glicano. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica estável (ou formulação) é aquela em que o imunoconjugado aí essencialmente retém a sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica após armazenamento,, por exemplo, o armazenamento de um determinado período ou duração de tempo (tal como horas, dias, meses, anos, etc.) sob condições especificadas (tais como temperatura, umidade relativa, umidade residual, presença ou ausência de luz, após um período de agitação, etc.)). Em algumas modalidades, o imunoconjugado presente na composição farmacêutica é biologicamente estável (por exemplo, retém sua atividade biológica) se a atividade biológica do imunoconjugado (e/ou a fração de anticorpo do imunoconjugado, tal como um anticorpo anti-CD79b) em um determinado tempo está dentro da faixa aceita por uma agência reguladora nacional ou regional para produtos farmacêuticos (por exemplo, a Federal Drug Administration (FDA) dos Estados Unidos, a Therapeutic Goods Administration (TGA) da Austrália, a European Medicines Agency (EMA) de União Europeia, etc.). Por exemplo, a atividade biológica de um imunoconjugado (tal como um imunoconjugado compreendendo um anticorpo anti-CD79b) ou uma composição farmacêutica compreendendo tal imunoconjugado pode ser medida por sua capacidade de ligar o antígeno (tal como a capacidade de um anticorpo anti-CD79b para ligar CD79b, por exemplo, CD79b humano). Vários ensaios conhecidos na técnica podem ser usados para medir medições de afinidade de ligação de anticorpos, incluindo, sem limitação, por exemplo, ressonância plasmônica de superfície (SPR), radioimunoensaio (RIA) e ELISA.
Adicionalmente ou alternativamente, a atividade biológica de um imunoconjugado (tal como um imunoconjugado compreendendo um anticorpo anti-CD79b) é medida pela sua capacidade de inibir o crescimento celular e/ou proliferação celular, por exemplo, in vitro ou in vivo, ou a capacidade de induzir a morte celular, incluindo morte celular programada (apoptose), por exemplo, in vitro ou in vivo. Detalhes adicionais sobre ensaios para medir a atividade biológica de um anticorpo anti-CD79b ou um imunoconjugado compreendendo um anticorpo anti-CD79b são fornecidos na Patente dos EUA de nº 8.088.387, cujo conteúdo é incorporado neste documento por referência em sua totalidade.
[0237] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica da presente divulgação é estável a -20°C por pelo menos cerca de 6 meses, pelo menos cerca de 8 meses, pelo menos cerca de 10 meses, pelo menos cerca de 12 meses, pelo menos cerca de 14 meses, pelo menos cerca de 16 meses, pelo menos cerca de 18 meses, pelo menos cerca de 20 meses, pelo menos cerca de 21 meses, pelo menos cerca de 22 meses, pelo menos cerca de 23 meses, pelo menos cerca de 24 meses, pelo menos cerca de 3 anos, pelo menos cerca de 4 anos, ou pelo menos cerca de 5 anos quando protegida da luz.
[0238] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica da presente divulgação é estável de 2°C a 8°C (por exemplo, 5°C ± 3°C) por pelo menos cerca de 6 meses, pelo menos cerca de 8 meses, pelo menos cerca de 10 meses, pelo menos cerca de 12 meses, pelo menos cerca de 14 meses, pelo menos cerca de 16 meses, pelo menos cerca de 18 meses, pelo menos cerca de 20 meses, pelo menos cerca de 21 meses, pelo menos cerca de 22 meses, pelo menos cerca de 23 meses, pelo menos cerca de 24 meses, em pelo menos cerca de 3 anos, pelo menos cerca de 4 anos, ou pelo menos cerca de 5 anos quando protegida da luz.
[0239] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica da presente divulgação é estável de 25°C a 40°C por pelo menos cerca de 30 minutos, pelo menos cerca de 60 minutos, pelo menos cerca de 2 horas, pelo menos cerca de 4 horas, pelo menos cerca de 6 horas, pelo menos cerca de 8 horas, pelo menos cerca de 10 horas, pelo menos cerca de 12 horas, pelo menos cerca de 14 horas, pelo menos cerca de 16 horas, pelo menos cerca de 18 horas, pelo menos cerca de 20 horas, pelo menos cerca de 22 horas, pelo menos cerca de 1 dia, pelo menos cerca de 2 dias, ou pelo menos cerca de 3 dias.
[0240] Em uma modalidade exemplar, a composição tem uma estabilidade de pelo menos cerca de 48 meses a 5°C ± 3°C quando protegida da luz. Em outra modalidade exemplar, a composição tem uma estabilidade de cerca de 48 meses a 5°C ± 3°C quando protegida da luz.
[0241] Em certas modalidades, a forma liofilizada (por exemplo, bolo liofilizado) da composição farmacêutica da presente divulgação pode ser inspecionada quanto à estabilidade. Em algumas modalidades, sob condições de armazenamento (5°C ± 3°C e protegido da luz), o bolo liofilizado não demonstra nenhuma alteração significativa na estrutura, cor, aparência ou teor de umidade. Em uma modalidade específica, o bolo liofilizado tem um teor de umidade inferior a 5% sob condições de armazenamento. Em outra modalidade específica, o bolo liofilizado é liso sem indentações sob condições de armazenamento. Em certas modalidades da presente divulgação, o bolo liofilizado é estável por pelo menos cerca de 48 meses sob condições de armazenamento.
[0242] Em algumas modalidades, a estabilidade da composição farmacêutica da presente divulgação é medida por cromatografia por exclusão de tamanho de alto desempenho (SE-HPLC). Em uma modalidade exemplar, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0 conforme medido por SE-HPLC.
[0243] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo) fornecida neste documento é estável por pelo menos cerca de 44 meses (tal como cerca de 30, 35, 40, 45, 50 ou 55 meses) quando armazenada a uma temperatura entre cerca de 2°C e cerca de 8°C ao longo de uma faixa de teor de umidade residual de cerca de 0,3% (p/p) a cerca de 3,2% (p/p), incluindo qualquer faixa entre esses valores. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo) fornecida neste documento é estável por pelo menos cerca de 7 meses (tal como cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 8 ou 10 meses) quando armazenado a cerca de 25°C ao longo de uma faixa de teor de umidade residual de cerca de 0,3% (p/p) a cerca de 3,2% (p/p), incluindo qualquer faixa entre esses valores.
[0244] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo) fornecida neste documento é robusta em relação a (a) uma concentração de proteína entre cerca de 17 e cerca de 23 mg/ml, (b) uma concentração de succinato entre cerca de 7 e cerca de 23 mM, (c) uma concentração de sacarose entre cerca de 90 e cerca de 150 mM, (d) uma concentração de polissorbato 20 entre cerca de 0,9 e cerca de 1,5 mg/ml, e (e) um pH entre cerca de 4,95 e cerca de 5,65. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo) compreendendo qualquer um ou mais de (a) a (e) acima é estável a uma temperatura entre cerca de 2°C e cerca de 8°C por até pelo menos cerca de qualquer um de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30 meses.
G. COMPOSIÇÕES PARA ADMINISTRAÇÃO INTRAVENOSA.
[0245] A presente divulgação fornece composições farmacêuticas e composições líquidas adequadas para administrações intravenosas (IV). As formulações a serem usadas para administração in vivo devem ser estéreis. Isto é facilmente conseguido por filtração através de membranas de filtração estéreis, antes ou após a preparação da composição farmacêutica. Em certas modalidades, a composição farmacêutica da presente divulgação é reconstituída com água estéril para injeção (SWFI). Em algumas modalidades, a composição reconstituída é ainda diluída em um tampão isotônico em uma bolsa intravenosa (IV).
[0246] Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição farmacêutica incluindo um imunoconjugado anti-CD79b, um tensoativo, um tampão succinato e um açúcar, em que a composição farmacêutica, quando reconstituída em água, forma uma composição farmacêutica líquida compreendendo o imunoconjugado anti-CD79b a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml, o tensoativo a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml), o tampão succinato a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca 200 mM, e o açúcar a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM, em que a composição farmacêutica líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (tal como entre cerca de 2 e cerca de 5, por exemplo, cerca de 3,5).
[0247] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é reconstituída (1:1 massa: volume) em SWFI. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica, quando reconstituída em água, forma uma composição farmacêutica líquida incluindo 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a composição farmacêutica líquida tem um pH de 5,3.
[0248] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é reconstituída em SWFI e subsequentemente diluída em um tampão isotônico em uma bolsa IV, em que a concentração de tensoativo após a diluição na bolsa IV é de pelo menos 0,003% p/v. Em uma modalidade, a concentração de tensoativo após diluição na bolsa IV é de pelo menos 0,004% p/v. Em uma modalidade exemplar, o tensoativo é polissorbato 20. Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose. Em uma modalidade específica, a sacarose está a uma concentração de 120 mM. Em algumas modalidades, o tampão succinato é um tampão succinato de sódio. Em uma modalidade exemplar específica, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de 10 mM.
[0249] Em algumas modalidades, a estabilidade da composição farmacêutica presente divulgação, quando reconstituída em água, é medida por agregação, pH, turbidez, o número de partículas visíveis e/ou subvisíveis ou a quantidade de fármaco livre (por exemplo, não conjugado). Em certas modalidades, espectrofotometria de UV, SE-HPLC, cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), icIEF ou HIAC, ou uma combinação destes, podem ser usados para avaliar a estabilidade. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica, quando reconstituída em água, tem uma estabilidade de até cerca de 1 dia, até cerca de 2 dias ou até cerca de 3 dias a 30°C. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica, quando reconstituída em água, tem uma estabilidade de até cerca de 1 dia, até cerca de 2 dias, até cerca de 3 dias, até cerca de 4 dias, até cerca de 5 dias, até 6 dias, ou até cerca de 7 dias a 5°C ± 3°C.
[0250] Em certas modalidades, a estabilidade da composição reconstituída em água é medida por cromatografia líquida por exclusão de tamanho de alto desempenho (SE-HPLC). Em uma modalidade exemplar, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0 conforme medido por SE-HPLC.
[0251] Em certas modalidades específicas, a composição tem uma HMWS (%) inferior a 4,0, conforme medido por SE-HPLC. Em certas modalidades específicas, a composição tem uma LMWS (%) inferior a 1,0, conforme medido por SE-HPLC. Em algumas modalidades, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0 e uma HMWS de menos de 4,0, conforme medido por SE-HPLC. Em algumas modalidades, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0, uma HMWS (%) inferior a 4,0 e uma LMWS (%) inferior a 1,0, conforme medido por SE-HPLC.
[0252] Em certas modalidades, a estabilidade da composição reconstituída em água é medida por focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF). Em uma modalidade, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 73,0, uma região de ácido (% de área) de no máximo 25,5 e uma região básica (% de área) de no máximo 10,0, conforme medido por icIEF.
Em uma modalidade exemplar, a composição tem um pico principal (% de área) de pelo menos 58,0, uma região de ácido (% de área) de no máximo 32,0 e uma região básica (% de área) de no máximo 12,0, conforme medido por icIEF.
[0253] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica reconstituída que compreende 20 mg/mL de polatuzumabe vedotina em 10 mM de succinato, 120 mM de sacarose, 1,2 mg/mL de polissorbato 20, em pH 5,3, é fisicoquimicamente estável após 72 horas de armazenamento a uma temperatura entre cerca de 2 C e cerca de 8 C. Em algumas modalidades, o armazenamento da composição farmacêutica reconstituída por 72 horas a uma temperatura entre cerca de 2 C e cerca de 8 C não diminui a atividade biológica do polatuzumabe vedotina. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica reconstituída que compreende 20 mg/mL de polatuzumabe vedotina em 10 mM de succinato, 120 mM de sacarose, 1,2 mg/mL de polissorbato 20, em pH 5,3, é fisicoquimicamente estável após armazenamento por 24 horas a 30 C com exposição à luz ambiente. Em algumas modalidades, o armazenamento da composição farmacêutica reconstituída por 24 horas a 30 C com a exposição à luz ambiente não diminui a atividade biológica do polatuzumabe vedotina.
[0254] Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição líquida compreendendo um imunoconjugado anti-CD79b, um tensoativo, um tampão succinato e um açúcar, em que o imunoconjugado anti- CD79b está a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml, o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v (ou seja, 0,6 mg/ml), o tampão succinato está a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM e o açúcar está a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM, em que a composição líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID
NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8 (por exemplo, entre cerca de 2 e cerca de 5, tal como cerca de 3,5).
[0255] Em algumas modalidades, o tensoativo é polissorbato 20.
Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose. Em uma modalidade exemplar, a sacarose está a uma concentração de 120 mM. Em algumas modalidades, o tampão succinato é um tampão succinato de sódio. Em uma modalidade exemplar específica, o tampão succinato de sódio está a uma concentração de 10 mM.
[0256] Em certas modalidades, a composição líquida da presente divulgação é dissolvida em um tampão. O tampão pode ser, sem limitação, solução salina normal (0,9% p/v cloreto de sódio), meia solução salina (0,45% p/v cloreto de sódio), 5% p/v dextrose, solução de Ringer com lactato ou uma combinação destes.
[0257] Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação é dissolvida em um tampão isotônico. Em certas modalidades, o tampão isotônico pode ser preparado fresco ou contido em uma bolsa IV pré-preenchida. Em certas modalidades, o tampão isotônico é solução salina normal (cloreto de sódio a 0,9%). Em uma modalidade exemplar, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico está em um bolsa IV.
[0258] Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico em uma bolsa IV tem um pH de cerca de 4,8 a cerca de 5,8. Em uma modalidade específica, o pH é cerca de 4,8, cerca de 4,9, cerca de 5,0, cerca de 5,1, cerca de 5,2, cerca de 5,3, cerca de 5,4, cerca de 5,5, cerca de 5,6, cerca de 5,7 ou cerca de 5,8. Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico em uma bolsa IV tem um pH de cerca de 5,3.
[0259] Em algumas modalidades, a estabilidade da composição líquida em uma bolsa IV da presente divulgação é medida por agregação, pH, turbidez, o número de partículas visíveis e/ou subvisíveis ou a quantidade de fármaco livre (por exemplo, não conjugado). Em certas modalidades, espectrofotometria UV, SE-HPLC, cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), icIEF ou HIAC, ou uma combinação destes, podem ser usados para avaliar a estabilidade da composição líquida em uma bolsa IV.
[0260] Em certas modalidades, a composição líquida em uma bolsa IV da presente divulgação é estável sob condições estáticas. Em certas modalidades, a composição líquida em uma bolsa IV da presente divulgação é estável sob condições de agitação. Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico em uma bolsa IV tem uma estabilidade de até cerca de 1 hora, até cerca de 2 horas, até cerca de 3 horas, até cerca de 4 horas, até cerca de 5 horas, até cerca de 6 horas, até cerca de 7 horas, ou até cerca de 8 horas a 30°C. Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico em uma bolsa IV tem uma estabilidade de até cerca de 8 horas, até cerca de 9 horas, até cerca de 10 horas, até cerca de 12 horas, até cerca de 14 horas, até cerca de 16 horas, até cerca de 18 horas, até cerca de 20 horas, até cerca de 22 horas, ou até cerca de 24 horas a 25°C. Em algumas modalidades, a composição líquida da presente divulgação dissolvida em um tampão isotônico em uma bolsa IV tem uma estabilidade de até cerca de 24 horas, até cerca de 30 horas, até cerca de 36 horas, até cerca de 42 horas, até cerca de 48 horas, até cerca de 54 horas, até cerca de 60 horas, até cerca de
66 horas, ou até cerca de 72 horas a 5°C ± 3°C. Em certas modalidades, o tampão isotônico é solução salina normal.
[0261] Em algumas modalidades, uma solução reconstituída ou uma solução diluída para infusão descrita neste documento (por exemplo, uma solução diluída para infusão compreendendo um imunoconjugado (por exemplo, polatuzumabe vedotina)) é estéril.
III. MÉTODOS DE TRATAMENTO
[0262] É contemplado que a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser usada para tratar vários distúrbios proliferativos, por exemplo, distinguidos pela superexpressão de um antígeno tumoral. Um exemplo de distúrbio proliferativo é o câncer. Exemplos de câncer incluem, mas não estão limitados a, cânceres hematopoiéticos ou cânceres relacionados ao sangue, tais como linfoma, leucemia, mieloma ou neoplasias linfóides, mas também cânceres do baço e cânceres dos nódulos linfáticos e também carcinoma, blastoma e sarcoma. Exemplos mais particulares de câncer incluem distúrbios proliferativos de células B, incluindo, por exemplo, linfomas de alto, intermediário e baixo grau (incluindo linfomas de células B, tais como, por exemplo, linfoma de células B do tecido linfoide associado à mucosa e linfoma não Hodgkin (NHL), linfoma de células do manto, linfoma de Burkitt, linfoma linfocítico pequeno, linfoma da zona marginal, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular, linfoma de Hodgkin, linfomas de células T, leucemias (incluindo leucemia secundária, leucemia linfocítica crônica (LLC), tal como Leucemia de células B (linfócitos B CD5+), leucemia mieloide, tal como leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoide, tal como leucemia linfoblástica aguda (LLA) e mielodisplasia, e outros cânceres hematológicos e/ou associados às células B ou T. Também estão incluídos os cânceres de células hematopoiéticas adicionais, incluindo leucócitos polimorfonucleares, tais como basófilos,
eosinófilos, neutrófilos e monócitos, células dendríticas, plaquetas, eritrócitos e células natural killer. Em certas modalidades, o distúrbio proliferativo da presente divulgação é um câncer recidivante ou um câncer refratário.
[0263] Em certas modalidades, a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser usada para tratar uma leucemia recidiva ou um linfoma recidivante. Em outras modalidades específicas, a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser usada para tratar uma leucemia refratária ou um linfoma refratário.
[0264] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para tratar um distúrbio proliferativo em um paciente em necessidade do mesmo, incluindo administrar ao paciente uma composição farmacêutica ou uma composição líquida descrita neste documento.
[0265] Em certas modalidades, a doença a ser tratada é um distúrbio proliferativo. Em modalidades específicas, o distúrbio proliferativo de células B é selecionado a partir do grupo que consiste em: linfoma, mieloma, linfoma não Hodgkin (NHL), linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), NHL agressivo, linfoma indolente, linfoma folicular (FL), NHL agressivo recorrente, NHL indolente recorrente, NHL recorrente, NHL refratário, NHL indolente refratário, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno, leucemia, leucemia de células cabeludas (HCL), leucemia linfocítica aguda (LLA) e linfoma de células do manto.
[0266] Em uma modalidade exemplar da presente divulgação, o distúrbio proliferativo de células B é o linfoma não Hodgkin (NHL). Em uma modalidade exemplar, o distúrbio proliferativo de células B é o linfoma difuso de grandes células B (DLBCL). Em uma modalidade específica, o distúrbio proliferativo de células B é linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) recidivante. Em outra modalidade específica, o distúrbio proliferativo de células
B é linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) refratário.
[0267] Em uma modalidade exemplar, o distúrbio proliferativo de células B é NHL recidivante ou NHL refratário. Em ainda outra modalidade exemplar, o distúrbio proliferativo de células B é o linfoma folicular.
[0268] O câncer pode compreender células que expressam CD79b, de tal modo que os imunoconjugados anti-CD79b da presente divulgação sejam capazes de se ligar às células cancerosas. Para determinar a expressão de CD79b no câncer, vários ensaios diagnósticos/prognósticos estão disponíveis. Em uma modalidade, a superexpressão de CD79b pode ser analisada por IHC. Seções de tecido embebidas em parafina de uma biópsia de tumor podem ser submetidas ao ensaio IHC e de acordo com um critério de intensidade de coloração de proteína CD79b com relação ao grau de coloração e em que proporção de células tumorais examinadas.
[0269] Para a prevenção ou tratamento de um distúrbio, a dosagem apropriada de um ADC dependerá do tipo de doença a ser tratada, conforme definido acima, da gravidade e do curso da doença, se a molécula é administrada para fins preventivos ou terapêuticos, anterior terapia, o histórico clínico do paciente e resposta ao anticorpo, e a critério do médico assistente. O anticorpo é adequadamente administrado ao paciente de uma vez ou durante uma série de tratamentos. Dependendo do tipo e da gravidade da doença, cerca de 1 μg/kg a 15 mg/kg (por exemplo, 0,1 mg/kg-20 mg/kg) de anticorpo pode ser uma dosagem candidata inicial para administração ao paciente, seja, por exemplo, por uma ou mais administrações separadas, ou por infusão contínua. Uma dosagem diária típica pode variar de cerca de 1 μg/kg a 100 mg/kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima. Uma dosagem exemplar de ADC a ser administrada a um paciente está na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 10 mg/kg do peso do paciente. Para administrações repetidas por vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento geralmente é mantido até que ocorra a supressão desejada dos sintomas da doença.
[0270] Para tratar ou prevenir um distúrbio proliferativo, a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação é administrada por meio de infusão intravenosa. A dose administrada por meio de infusão está na faixa de cerca de 1 µg/m2 a cerca de 10.000 µg/m2 por dose, geralmente uma dose por semana para um total de uma, duas, três ou quatro doses. Alternativamente, a faixa de dosagem é de cerca de 1 µg/m2 a cerca de 1000 µg/m2, cerca de 1 µg/m2 a cerca de 800 µg/m2, cerca de 1 µg/m2 a cerca de 600 µg/m2, cerca de 1 µg/m2 a cerca de 400 µg/m2, cerca de 10 µg/m2 a cerca de 500 µg/m2, cerca de 10 µg/m2 a cerca de 300 µg/m2, cerca de 10 µg/m2 a cerca de 200 µg/m2, e cerca de 1 µgm2 a cerca de 200 µg/m2. A dose pode ser administrada uma vez por dia, uma vez por semana, várias vezes por semana, mas menos de uma vez por dia, várias vezes por mês, mas menos de uma vez por dia, várias vezes por mês, mas menos de uma vez por semana, uma vez por mês ou intermitentemente para amenizar ou aliviar os sintomas da doença. A administração pode continuar em qualquer um dos intervalos divulgados até a remissão do tumor ou sintomas do linfoma ou leucemia sendo tratados. A administração pode continuar após a remissão ou alívio dos sintomas ser alcançado, quando tal remissão ou alívio for prolongado por tal administração contínua.
[0271] Para determinar a expressão de CD79b no câncer, vários ensaios de detecção estão disponíveis. Em uma modalidade, a superexpressão do polipeptídeo CD79b pode ser analisada por imunohistoquímica (IHC).
Seções de tecido embebidas em parafina de uma biópsia de tumor podem ser submetidas ao ensaio de IHC e de acordo com os critérios de intensidade de coloração da proteína CD79b conforme segue: - Pontuação 0 - nenhuma coloração é observada ou a coloração da membrana é observada em menos de 10% das células tumorais;
- Pontuação 1+ - uma coloração da membrana fraca/quase imperceptível é detectada em mais de 10% das células tumorais. As células são coradas somente em parte da sua membrana; - Pontuação 2+ - uma coloração da membrana completa de fraca a moderada é observada em mais de 10% das células tumorais; e - Pontuação 3+ - uma coloração da membrana completa de moderada a forte é observada em mais de 10% das células tumorais.
[0272] Aqueles tumores com pontuação 0 ou 1+ para a expressão do polipeptídeo CD79b podem ser distinguidos como não superexpressando CD79b, enquanto aqueles tumores com pontuação 2+ ou 3+ podem ser distinguidos como superexpressando CD79b.
[0273] Alternativamente, ou adicionalmente, os ensaios de FISH, tais como o INFORM® (vendido por Ventana, Arizona) ou PATHVISION® (Vysis, Illinois) podem ser realizados em tecido tumoral fixado em formalina e embebido em parafina para determinar a extensão (se houver) da superexpressão de CD79b no tumor.
[0274] A superexpressão ou amplificação de CD79b pode ser avaliada usando um ensaio de detecção in vivo, por exemplo, pela administração de uma molécula (tal como um anticorpo) que se liga à molécula a ser detectada e é marcada com um marcador detectável (por exemplo, um isótopo radioativo ou um marcador fluorescente) e escaneamento externo do paciente para localização da marcação.
TERAPIAS COMBINADAS
[0275] Atualmente, dependendo do estágio do câncer, o tratamento do câncer envolve uma ou uma combinação das seguintes terapias: cirurgia para remover o tecido canceroso, radioterapia e quimioterapia. A terapia com imunoconjugado anti-CD79b pode ser especialmente desejável em pacientes idosos que não toleram bem a toxicidade e os efeitos colaterais da quimioterapia e em doenças metastáticas em que a radioterapia tem utilidade limitada. Os imunoconjugados anti-CD79b que direcionam tumor da presente divulgação são úteis para aliviar os cânceres que expressam CD79b após o diagnóstico inicial da doença ou durante a recidiva. Para aplicações terapêuticas, o imunoconjugado anti-CD79b pode ser usado sozinho ou em terapia combinada com, por exemplo, hormônios, agentes antiangiogênicos ou compostos radiomarcados, ou com cirurgia, crioterapia e/ou radioterapia. A administração de uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser realizada em conjunto com outras formas de terapia convencional, consecutivamente com, terapia pré- ou pós-convencional.
Fármacos quimioterápicos tais como TAXOTERE® (docetaxel), TAXOL® (paclitaxel), estramustina e mitoxantrona são usados no tratamento do câncer, em particular, em pacientes de bom risco. No presente método da divulgação para tratar ou aliviar o câncer, o paciente com câncer pode ser administrado com anticorpo anti-CD79b em conjunto com o tratamento com um ou mais dos agentes quimioterápicos anteriores. Em particular, a terapia combinada com paclitaxel e derivados modificados (vide, por exemplo, EP0600517) é contemplada. A composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser administrada com uma dose terapeuticamente eficaz do agente quimioterápico. Em outra modalidade, a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação é administrada em conjunto com quimioterapia para aperfeiçoar a atividade e eficácia do agente quimioterápico, por exemplo, paclitaxel. O Physicians 'Desk Reference (PDR) divulga dosagens desses agentes que têm sido usados no tratamento de vários cânceres. O regime de dosagem e as dosagens desses medicamentos quimioterápicos acima mencionados que são terapeuticamente eficazes dependerão do câncer específico a ser tratado, da extensão da doença e de outros fatores familiares ao médico técnico no assunto e podem ser determinados pelo médico.
[0276] Em outra modalidade, a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser administrada em combinação com um ou mais agentes quimioterápicos ou agentes inibidores de crescimento, incluindo a coadministração de coquetéis de diferentes agentes quimioterápicos, ou outro(s) agente(s) citotóxico(s) ou outro(s) agente(s) terapêutico(s) que também inibe(m) o crescimento do tumor. Os agentes quimioterapêuticos incluem fosfato de estramustina, prednimustina, cisplatina, 5-fluorouracila, melfalano, ciclofosfamida, hidroxiureia e hidroxiureataxanos (tais como paclitaxel e doxetaxel) e/ou antibióticos antraciclina. A preparação e os programas de dosagem para tais agentes quimioterapêuticos podem ser usados de acordo com as instruções dos fabricantes ou conforme determinado empiricamente pelo médico técnico no assunto. A preparação e os programas de dosagem para tal quimioterapia também são descritos em Chemotherapy Service Ed., M.C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1992). A composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser combinada com um composto anti-hormonal; por exemplo, um composto antiestrogênio, tal como tamoxifeno; uma antiprogesterona, tal como onapristona (vide EP 616 812); ou um antiandrógeno, tal como flutamida, em dosagens conhecidas para tais moléculas. Quando o câncer a ser tratado é um câncer independente de andrógeno, o paciente pode ter sido previamente submetido a terapia antiandrógeno e, após o câncer se tornar independente de andrógeno, a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser administrada ao paciente.
[0277] Às vezes, pode ser benéfico também coadministrar um cardioprotetor (para prevenir ou reduzir a disfunção miocárdica associada à terapia) ou uma ou mais citocinas ao paciente. Além dos regimes terapêuticos acima, o paciente pode ser submetido a remoção cirúrgica de células cancerosas e/ou terapia de radiação (por exemplo, irradiação por feixe externo ou terapia com um agente marcado radioativo, tal como um anticorpo), antes, simultaneamente ou após administração de uma composição farmacêutica ou uma composição líquida da presente divulgação. As dosagens adequadas para qualquer um dos agentes coadministrados acima são aquelas atualmente usadas e podem ser reduzidas devido à ação combinada (sinergia) do agente e do anticorpo anti-CD79b.
[0278] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser administrada em combinação com uma quantidade eficaz de outro agente terapêutico a um paciente. Em uma modalidade, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo, um agente quimioterápico, um agente citotóxico, um agente antiangiogênico, um agente imunossupressor, um pró- fármaco, uma citocina, um antagonista de citocina, radioterapia citotóxica, um corticosteroide, uma vacina contra o câncer e um agente inibidor de crescimento. Em outra modalidade, o agente terapêutico é selecionado a partir de um ou mais dentre tamoxifeno, letrozol, exemestano, anastrozol, irinotecano, cetuximabe, fulvestrante, vinorelbina, erlotinibe, bevacizumabe, vincristina, mesilato de imatinibe, sorafenibe, lapatinibe, metabastatina, cisotumabite, metabastatina, lapatinibe, vinblastina, carboplatina, paclitaxel, 5- fluorouracila, doxorrubicina, bortezomibe, melfalano, prednisona, prednisolona e docetaxel.
[0279] Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um anticorpo anti-CD20.
[0280] Em certas modalidades, a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser administrada em combinação com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD20 para tratar um distúrbio proliferativo de células B. Em uma modalidade, o distúrbio proliferativo de células B é linfoma difuso de grandes células B (DLBCL). Em outra modalidade, o distúrbio proliferativo é o linfoma folicular (FL). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é rituximabe.
[0281] Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um agente quimioterápico. Em uma modalidade, o agente quimioterapêutico compreende um ou mais dentre ciclofosfamida, hidroxidaunorrubicina, vincristina e prednisona. Em outra modalidade, o agente quimioterápico compreende ciclofosfamida, doxorrubicina e prednisona.
[0282] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser administrada em combinação com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD20 e um agente quimioterápico. Em uma modalidade, o agente quimioterápico compreende ciclofosfamida, doxorrubicina e prednisona.
[0283] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser administrada em combinação com uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD20 e um agente quimioterápico para tratar um distúrbio proliferativo de células B. Em uma modalidade, o distúrbio proliferativo de células B é o linfoma não Hodgkin (NHL). Em outra modalidade, o distúrbio proliferativo de células B é o linfoma difuso de grandes células B (DLBCL). Em uma modalidade específica, o DLBCL é DLBCL recidivante/refratário. Em outra modalidade, o NHL é NHL recidivante ou NHL refratário. Em outra modalidade específica, o distúrbio proliferativo é o linfoma folicular (FL). Em outra modalidade, o FL é FL recido/refratário. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é rituximabe.
[0284] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação da presente divulgação pode ser combinada com um anticorpo anti-CD20 (um anticorpo nu ou um ADC). Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD20 é rituximabe (Rituxan®) ou seu biossimilar. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é ocrelizumabe
(2H7) (Genentech, Inc., Sul de São Francisco, CA) ou seu biossimilar. Em outra modalidade, uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação da presente divulgação pode ser combinada com um anticorpo anti- VEGF (por exemplo, Avastin®).
[0285] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação da presente divulgação pode ser combinada com um agente alquilante. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode ser combinada com um agente alquilante e um anticorpo anti-CD20 (um anticorpo nu ou um ADC). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 é rituximabe (Rituxan®) ou seu biossimilar. Em algumas modalidades, o agente alquilante é ácido 4-[5-[Bis(2-cloroetil) amino]-1-metilbenzimidazol-2- il]butanóico e sais do mesmo. Em algumas modalidades, o agente alquilante é bendamustina.
[0286] A terapia combinada pode ser administrada como um regime simultâneo ou sequencial. Quando administrada sequencialmente, a combinação pode ser administrada em duas ou mais administrações. A administração combinada inclui a coadministração, usando formulações separadas ou uma única formulação farmacêutica, e administração consecutiva em qualquer ordem, em que preferencialmente há um período de tempo enquanto ambos (ou todos) os agentes ativos exercem simultaneamente suas atividades biológicas.
[0287] As dosagens adequadas para qualquer um dos agentes coadministrados acima são aquelas atualmente usadas e podem ser reduzidas devido à ação combinada (sinergia) do agente recém-identificado e outros agentes quimioterápicos ou tratamentos.
[0288] A terapia combinada pode fornecer “sinergia” e se mostrar “sinérgica”, ou seja, o efeito obtido quando os ingredientes ativos usados juntos é maior do que a soma dos efeitos que resultam do uso dos compostos separadamente. Um efeito sinérgico pode ser alcançado quando os ingredientes ativos são: (1) coformulados e administrados ou liberados simultaneamente em uma formulação de dosagem unitária combinada; (2) liberados por alternância ou em paralelo como formulações separadas; ou (3) por algum outro regime. Quando liberado em terapia alternada, um efeito sinérgico pode ser obtido quando os compostos são administrados ou administrados sequencialmente, por exemplo, por diferentes injeções em seringas separadas. Em geral, durante a terapia de alternância, uma dosagem eficaz de cada ingrediente ativo é administrada sequencialmente, ou seja, em série, enquanto na terapia combinada, dosagens eficazes de dois ou mais ingredientes ativos são administradas em conjunto.
IV. ARTIGOS DE FABRICAÇÃO E KITS
[0289] Outra modalidade da presente divulgação é um artigo de fabricação que contém materiais úteis para o tratamento, prevenção e/ou diagnóstico de um distúrbio proliferativo. O artigo de fabricação compreende um recipiente, um rótulo ou bula no recipiente ou associado a ele. Recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas, etc. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais, tais como vidro ou plástico. O recipiente contém uma composição que é eficaz para tratar, prevenir e/ou diagnosticar a condição de câncer e pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser uma bolsa de solução intravenosa ou um frasco tendo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo na composição é um imunoconjugado anti-CD79b da presente divulgação. O rótulo ou bula indica que a composição é usada para tratar o câncer. O rótulo ou bula compreenderá ainda instruções para administrar a composição ao paciente com câncer. Além disso, o artigo de fabricação pode compreender ainda um segundo recipiente compreendendo um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como água estéril para injeção (SWFI), água bacteriostática para injeção (BWFI), solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Pode ainda incluir outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.
[0290] Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é um recipiente, tal como um frasco, ampola, seringa, que inclui a composição farmacêutica da presente divulgação. Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é um recipiente, tal como um frasco, ampola, seringa, que inclui a composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo) da presente divulgação.
Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é um recipiente, tal como um frasco, ampola, seringa, que inclui a composição farmacêutica liofilizada reconstituída da presente divulgação. Em uma modalidade específica, o artigo de fabricação é um recipiente que inclui a composição farmacêutica liofilizada que é reconstituída com água estéril para injeção (SWFI).
[0291] Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é um recipiente de plástico que inclui a composição farmacêutica da presente divulgação. Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é um recipiente de vidro que inclui a composição farmacêutica da presente divulgação.
[0292] Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é um frasco de vidro que inclui a composição farmacêutica da presente divulgação.
Em uma modalidade específica, o artigo de fabricação é um frasco de vidro que inclui a composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo) da presente divulgação. Em uma modalidade específica, o artigo de fabricação é um frasco de vidro que inclui a composição farmacêutica liofilizada reconstituída (tal como um bolo) da presente divulgação. Em uma modalidade específica, o artigo de fabricação é um frasco de vidro que inclui a composição farmacêutica liofilizada (tal como um bolo) que é reconstituída com água estéril para injeção (SWFI).
[0293] Em certas modalidades, o artigo de fabricação é uma bolsa IV contendo a composição farmacêutica ou a composição líquida da presente divulgação. A bolsa IV pode ser composta de materiais incluindo, sem limitação, poliolefina (PO), cloreto de polivinila (PVC), etileno acetato de vinila, polipropileno (PP), polietileno (PE), éter de copoliéster ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, a bolsa IV é um bolsa de poliolefina (PO), um bolsa de polipropileno (PP), um bolsa de polietileno (PE) ou um bolsa de cloreto de polivinila (PVC).
[0294] Em algumas modalidades, o artigo de fabricação contendo a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação pode acomodar um volume de pelo menos cerca de 5 mililitros (mLs), pelo menos cerca de 10 mLs, pelo menos cerca de 15 mLs, pelo menos cerca de 20 mLs, pelo menos cerca de 25 mLs, pelo menos cerca de 30 mLs, pelo menos cerca de 35 mLs, pelo menos cerca de 40 mLs, pelo menos cerca de 45 mLs, pelo menos cerca de 50 mLs, pelo menos cerca de 55 mLs, pelo menos cerca de 60 mLs, pelo menos cerca de 65 mLs, pelo menos cerca de 70 mLs, pelo menos cerca de 75 mLs, pelo menos cerca de 80 mLs, pelo menos cerca de 85 mLs, pelo menos cerca de 90 mLs, pelo menos cerca de 95 mLs, pelo menos cerca de 100 mLs, pelo menos cerca de 105 mLs, pelo menos cerca de 110 mLs, pelo menos cerca de 115 mLs, pelo menos cerca de 120 mLs, pelo menos cerca de 125 mLs, pelo menos cerca de 130 mLs, pelo menos cerca de 135 mLs, pelo menos cerca de 140 mLs, pelo menos cerca de 145 mLs, pelo menos cerca de 150 mLs, pelo menos cerca de 155 mLs, pelo menos cerca de 160 mLs, pelo menos cerca de 165 mLs, pelo menos cerca de 170 mLs, pelo menos cerca de 175 mLs, pelo menos cerca de 180 mLs, pelo menos cerca de 185 mLs, pelo menos cerca de 190 mLs, pelo menos cerca de 195 mLs, ou pelo menos cerca de 200 mLs. Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é uma bolsa de PO que pode acomodar um volume de pelo menos cerca de 25 mLs, pelo menos cerca de 50 mLs ou pelo menos cerca de 100mLs. Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é um bolsa de PVC que pode acomodar um volume de pelo menos cerca de 25 mLs, pelo menos cerca de 50 mLs ou pelo menos cerca de 100mLs.
[0295] Em certas modalidades, o artigo de fabricação é um bolsa IV incluindo a composição farmacêutica ou a composição líquida da presente divulgação e um tampão. Em uma modalidade específica, o tampão pode ser solução salina normal, meia solução salina, 5% p/v de dextrose, solução de Ringer com lactato ou uma combinação destes. Em uma modalidade, o artigo de fabricação é uma bolsa IV incluindo a composição farmacêutica ou a composição líquida da presente divulgação dissolvida em meia solução salina.
[0296] Em algumas modalidades, o artigo de fabricação é uma bolsa IV incluindo a composição farmacêutica ou a composição líquida da presente divulgação e um tampão isotônico. Em uma modalidade, o artigo de fabricação é uma bolsa IV incluindo a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação dissolvida em solução salina normal.
[0297] Em uma modalidade exemplar, o artigo de fabricação é uma bolsa de PVC incluindo a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação e solução salina normal que pode acomodar um volume de pelo menos cerca de 100 mLs. Em outra modalidade exemplar, o artigo de fabricação é uma bolsa de PVC incluindo a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação e solução salina normal que pode acomodar um volume de cerca de 100 mLs.
[0298] Em outra modalidade exemplar, o artigo de fabricação é uma bolsa de PO incluindo a composição farmacêutica ou a composição líquida da presente divulgação e solução salina normal que pode acomodar um volume de pelo menos cerca de 100 mLs. Em ainda outra modalidade exemplar, o artigo de fabricação é uma bolsa de PO incluindo a composição farmacêutica ou composição líquida da presente divulgação e meia solução salina que pode acomodar um volume de pelo menos cerca de 100 mLs.
[0299] Em qualquer uma das modalidades aqui, a composição farmacêutica ou farmacêutica líquida estável pode ser armazenada em um recipiente, tal como um frasco, ampola, seringa ou uma bolsa intravenosa (IV).
[0300] Também são fornecidos kits que são úteis para vários fins, tais como para ensaios de morte de células que expressam CD79b. O artigo de fabricação compreende um recipiente, um rótulo ou bula no recipiente ou associado a ele. O recipiente contém uma composição que compreende pelo menos um imunoconjugado anti-CD79b da divulgação. Podem ser incluídos recipientes adicionais que contenham, por exemplo, diluentes, tensoativos, tampões, anticorpos de controle. O rótulo ou bula pode fornecer uma descrição da composição, bem como instruções para o uso pretendido.
[0301] A seguinte descrição é apresentada para permitir que um técnico no assunto faça e use as várias modalidades. Descrições de dispositivos, técnicas e aplicações específicos são fornecidos somente como exemplos. Várias modificações nos exemplos descritos neste documento serão prontamente aparentes para aqueles técnicos no assunto, e os princípios gerais definidos neste documento podem ser aplicados a outros exemplos e aplicações sem se afastar do espírito e escopo das várias modalidades. Assim, as várias modalidades não se destinam a ser limitadas aos exemplos descritos neste documento e mostrados, mas devem ter o escopo consistente com as reivindicações.
EXEMPLOS EXEMPLO 1: ESTUDOS DO TENSOATIVO DO IMUNOCONJUGADO ANTI-CD79B
[0302] A formulação usada inicialmente para o teste clínico de fase inicial em pacientes para o anti-CD79b-vc-MMAE foi uma formulação líquida, compreendendo um tampão acetato de histidina com 0,02% de polissorbato 20, que foi liberada aos pacientes por meio de uma bomba de seringa intravenosa. A fim de estabelecer a formulação comercial para o fármaco, vários tensoativos não iônicos em diferentes concentrações foram testados para determinar se eles poderiam proteger e estabilizar o anti-CD79b- vc-MMAE contra a agregação quando diluídos em uma bolsa IV, o que seria a via de liberação aos pacientes no ambiente comercial. Especificamente, a estabilidade do anticorpo anti-CD79b-vc-MMAE foi avaliada sob (a) condições estáticas em uma bolsa IV e (b) condições de estresse interfacial ar-água causadas por agitação de curto prazo em uma bolsa IV.
ANTI-CD79B-VC-MMAE
[0303] O anti-CD79b-vc-MMAE foi diluído em 20 mM de acetato de histidina, pH 5,5. O tampão acetato de histidina de 20 mM, pH 5,5, foi preparado adicionando 3,11 g de histidina e 1,03 mL de ácido acético glacial em 800 mL de água ultrapura fresca. O pH medido foi de 5,5 ± 0,1. A solução resultante foi ajustada para 1 L usando água ultrapura e filtrada através de um filtro PES de 0,22 μM e armazenada a 2–8°C. As concentrações do anti- CD79b-vc-MMAE foram testadas em (i) 10 mg/mL e (ii) 20 mg/mL, por diluição em tampão filtrado para 10 mg/mL ou 20 mg/mL, conforme necessário. O material diluído foi armazenado a 2 a 8°C e protegido da luz.
TENSOATIVO
[0304] Os tensoativos testados foram: (i) polissorbato 20 (PS20), Classe USP, NF, fabricado pela Croda; (ii) polissorbato 80 (PS80), Classe USP, NF, fabricado pela Croda; (iii) poloxâmero (P188), Classe USP, NF contendo 98 ppm de hidroxitoulueno butilado, fabricado por Spectrum Chemicals; e (iv) N-octil-β-D glucopiranosídeo (OG) C14H28O6, FW: 292.4, fabricado por Affymetrix, Anagrade. A preparação da solução estoque de PS20 a 10%, 1,0% e 0,5% foi preparada como segue: dependendo da concentração alvo de PS20 na bolsa, uma solução estoque de PS20 a 10%, 1% ou 0,5% em água ultrapura foi usada. A solução estoque de PS20 a 10% foi preparada pela adição de 10 g de PS20 em um frasco volumétrico de 100 mL. O frasco foi preenchido com 60 mL de água ultrapura e depois agitado com um agitador magnético para garantir que a solução foi bem misturada. Após permitir que as bolhas diminuíssem por 30 min, o frasco foi preenchido até 100 mL com água ultrapura. A solução foi transferida para um recipiente protetor de luz e armazenada por no máximo 1 semana a 2 a 8°C. Um procedimento semelhante foi usado para preparar a solução de PS20 a 1,0% usando 1,0 g de PS20 em 100 mL de água ultrapura. Uma diluição 1:1 (v/v) do estoque de PS20 a 1,0% foi usada para fazer a solução de PS20 a 0,5%.
[0305] A preparação de PS80 a 0,5% foi como segue: um estoque de PS20 a 10% foi preparado adicionando 10 g de PS80 em um balão volumétrico de 100 mL. O frasco foi preenchido com 50 mL de água ultrapura e então agitado com um agitador magnético até a solução estar bem misturada.
A solução foi deixada em repouso por 30 min para permitir que as bolhas diminuíssem e, em seguida, a agitação foi removida. O volume da solução foi então ajustado para 100 mL usando água ultrapura. Para obter a solução estoque de PS80 a 0,5%, 0,5 mL da solução estoque de PS80 a 10% foi ajustado para 10 mL usando água ultrapura. As soluções foram transferidas para um recipiente protetor contra luz e armazenadas por no máximo 1 semana a 2 a 8°C.
[0306] A preparação de P188 a 0,5% foi como segue: Um estoque de P188 a 10% foi preparado pela adição de 10 g de P188 em um frasco volumétrico de 100 mL. O frasco foi preenchido com 60 mL de água ultrapura e então agitado com um agitador magnético até a solução estar bem misturada. A solução foi deixada em repouso por 30 min para permitir que as bolhas diminuíssem e, em seguida, a agitação foi removida. O volume da solução foi então ajustado para 100 mL usando água ultrapura. Para obter a solução estoque de P188 a 0,5%, 0,5 mL da solução estoque de P188 a 10% foi ajustado para 10 mL usando água ultrapura. As soluções foram transferidas para um recipiente protetor contra luz e armazenadas por no máximo 1 semana a 2 a 8°C.
A. ESTUDOS ESTÁTICOS DA BOLSA IV:
[0307] O anti-CD79b-vc-MMAE foi diluído em bolsas IV. A fim de simular o procedimento de preparação recomendado na farmácia, um volume igual de solução salina foi retirado da bolsa IV como o volume total do anti- CD79b-vc-MMAE e tensoativo que seria adicionado. Os tensoativos foram introduzidos nas bolsas IV antes da formulação de anti-CD79b-vc-MMAE em tampão de histidina, garantindo que o anti-CD79b-vc-MMAE como um agrupamento de diafiltração por ultrafiltração sem tensoativo (UFDF) não fosse exposto a solução salina sem qualquer tensoativo na bolsa IV. As bolsas IV foram giradas suavemente para permitir a mistura completa, evitando qualquer agitação vigorosa e agitação das bolsas contendo anti-CD79b-vc-MMAE.
[0308] Preparação de anti-CD79b-vc-MMAE em em frascos de vidro contendo solução salina: várias quantidades de solução salina (cloreto de sódio a 0,9%), tensoativos e imunoconjugado foram adicionadas a um frasco de vidro Forma Vitrum de 15 cc e tampadas com rolha Daikyo de 20 mm. As amostras foram incubadas posteriormente sob condições particulares de estudo.
[0309] Coleta da amostra: ao longo do curso de um estudo, as amostras foram removidas usando uma seringa BD Falcon de 1 cc ou 5 cc em combinação com uma agulha 18 G. As amostras coletadas foram armazenadas em recipientes PETG (Nalgene) de 10 cc.
[0310] Determinação da concentração de proteína por varredura de espectrofotometria UV: A concentração de proteína após a diluição foi determinada para amostras selecionadas usando um espectrofotômetro
Agilent. As amostras coletadas das bolsas IV foram diluídas (se necessário) volumetricamente para que o sinal UV ficasse entre 0,1 e 1,0 UA. A absorvância foi registrada a 279 nm e 320 nm. A determinação da concentração de UV foi calculada usando um coeficiente de extinção de 1,40 (mg/mL) -1 cm-1. O A279 corrigido foi obtido subtraindo A320 nm de A279 nm.
Esta correção é responsável pela turbidez da solução e permite a medição precisa da concentração de proteína.
[0311] Turbidez: A turbidez das amostras foi medida registrando- se a absorbância UV média de 340–360 nm usando uma cubeta de 1 cm de comprimento em um espectrofotômetro Agilent. O espectrofotômetro foi esvaziado com água purificada.
[0312] Partículas visíveis: A presença de quaisquer partículas visíveis foi avaliada visualmente contra uma caixa de luz de fundo preto e branco com amostras em um recipiente PETG de 10 cc. O teor de agregado solúvel, como uma medida de instabilidade da proteína, foi determinado usando uma cromatografia por exclusão de tamanho de alto desempenho Agilent 1200/1280 (HPSEC) (Agilent Technologies, Santa Clara, Califórnia) equipada com um detector de matriz de diodos definido em 280 nm e uma coluna por exclusão de tamanho TSK-Gel G3000SWXL da Tosoh Bioscience LLC (Montgomeryville, Pensilvânia) (300 × 7,8 mm, 5 μm) à temperatura ambiente. As amostras foram eluídas ao longo de 30 min com um quociente de vazão isocrático de 0,5 mL/min usando 0,2 M de K3PO4, 0,25 M de KCl, pH de 6,2.
[0313] Contador de Partículas Líquidas de Alta Precisão (HIAC): O HIAC foi usado para realizar o dimensionamento e a contagem de partículas enquanto em solução. O obscurecimento de luz foi usado para a quantificação de partículas visíveis e/ou subvisíveis (SVP) usando um instrumento HIAC (Modelo 9703+). Os seguintes tamanhos de partícula foram coletados: 1.6, 2,
3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25 e 50 µm.
ESTUDOS DE ESTABILIDADE EM BOLSAS IV EM ARMAZENAMENTO ESTÁTICO:
[0314] Para estudos do tensoativo em bolsas IV, um estudo inicial foi realizado sob condições estáticas e de agitação. A faixa de dosagem testada para esses estudos para o anti-CD79b-vc-MMAE foi projetada e realizada em uma faixa de 1,8 mg/kg a 2,4 mg/kg. Presumiu-se que a maioria dos pesos dos pacientes cairia entre 40 kg e 120 kg. Com base nessas suposições, a dose total por bolsa IV variou entre 72 mg (dose baixa/peso baixo) a 288 mg (dose alta/peso alto).
[0315] As Figuras 1 e 2 sumarizam os resultados do desempenho da bolsa IV com uma concentração de PS20 fixa de 0,005% na bolsa e uma concentração final de anti-CD79b-vc-MMAE de 0,65 mg/mL. A concentração da concentração de anti-CD79b-vc-MMAE na bolsa IV foi escolhida assumindo uma dose baixa de 1,8 mg/kg para o menor peso do paciente de 40 kg em uma bolsa IV de 100 mL. Uma vez que as bolsas IV de 100 mL têm um excesso de 10 mL, a concentração final na bolsa IV foi: (1,8 mg/kg x 40 kg)/110 mL = 0,65 mg/mL
[0316] Sob condição de armazenamento estático a 30°C por 22 horas, não houve diferenças significativas entre os tipos de bolsa IV com relação à estabilidade física do anticorpo anti-CD79b-vc-MMAE. Todas as bolsas mostraram um aumento de 0,3% + 0,1% (∆) nas espécies de alto peso molecular (HMWS) medidas pela SEC. Isso demonstrou que o anti-CD79b-vc- MMAE era instável a 30°C após diluição em NaCl a 0,9%.
ESTUDOS DO TENSOATIVO E RASTREIO SOB ARMAZENAMENTO ESTÁTICO:
[0317] Para um rastreio bem controlado e eficiente do tipo de tensoativo e da concentração de tensoativo, foi necessário usar uma concentração fixa de proteína na bolsa. Uma concentração de anti-CD79b-vc- MMAE de 2,6 mg/mL na bolsa foi escolhida com base na dose mais alta possível de 2,4 mg/kg para um paciente pesado de 120 kg administrado em uma bolsa de 100 mL, que é o tamanho de bolsa recomendado para a clínica e tem um volume de enchimento excessivo de 10%, conforme visto no cálculo a seguir: (2,4 mg/kg x 120 kg)/110 mL = 2,6 mg/mL. A maior concentração de proteína na bolsa foi considerada o pior caso, uma vez que maiores concentrações de proteína em massa conduziriam a uma adsorção mais rápida de anticorpos à interface ar-água, levando a níveis mais elevados de agregação mediada interfacialmente.
EFEITO DA TEMPERATURA NA ESTABILIDADE SOB ARMAZENAMENTO ESTÁTICO:
[0318] Fornecer uma condição de armazenamento apropriada para uma bolsa IV combinada é importante para a qualidade do produto do anticorpo terapêutico e foi avaliado. Essas informações também são necessárias para preparar manuais de farmácia e bulas para garantir o uso adequado de qualquer anticorpo terapêutico. Vários níveis de PS20 nas bolsas foram testados em temperaturas de 30°C, 25°C e 2 a 8°C. A 2 a 8°C, os níveis testados de PS20 na bolsa (0,003%, 0,005% e 0,01%) não mostraram alterações significativas na HMWS após 22 horas de armazenamento estático (Figura 3). Todas as alterações (% HMWS) foram <0,02%. A 25°C e níveis de PS20 de 0,005%, 0,01%, 0,015%, 0,025% e 0,030% na bolsa, um aumento de ~ 0,1% HMWS foi observado após 22 horas de armazenamento estático (Figura 3). O aumento em HMWS a 30°C foi muito maior do que o observado a 25°C. Com níveis de PS20 de 0,004%, 0,015%, 0,02%, 0,025%, 0,05% e 0,1% na bolsa após 22 horas de armazenamento estático, foi observado um aumento de 0,3 + 0,1% (Figura 3).
[0319] Em todas as temperaturas, o aumento de HMWS foi independente da concentração de PS20 na bolsa, indicando que a agregação sob condições estáticas não foi mediada por estresse interfacial. O aumento na HMWS mostrou uma forte correlação com a temperatura de armazenamento.
Estes resultados estão bem correlacionados com estudos subsequentes conduzidos por Beckley, N. et al., Investigation into Temperature-Induced Aggregation of an Antibody Drug Conjugate. Bioconjugate Chemistry., 24, pp:1674-1683 (2013), indicando que a formação de HMWS em conjugados fármaco-anticorpo (ADCs) em temperaturas mais altas é atribuída ao aumento da sensibilidade da estrutura terciária ao estresse térmico, presumivelmente devido à presença de fármacos conjugados nas cisteínas entre cadeias próximas ao domínio CH2.
TESTAGEM DE HÍBRIDOS DE TENSOATIVO:
[0320] Sabe-se que o poloxâmero 188 (P188) diminui a formação de HMWS em bolsas IV, mas pode haver um aumento significativo nas partículas subvisíveis (SVPs) com a agitação. Em contraste, o PS20 não aumentou as SVPs. Para investigar mais a fundo esses resultados variáveis entre os dois tensoativos, um híbrido de PS20 - P188 em uma razão igual de 1:1 em peso foi usado para determinar se o PS20 pode prevenir a formação de SVP e P188 pode limitar o aumento em HMWS. O estudo foi conduzido em bolsas IV de 25 mL usando uma concentração de anti-CD79b-vc-MMAE de 2,6 mg/mL na bolsa. Em uma base de massa, quantidades iguais de PS20 e P188 foram adicionadas para produzir uma concentração total de tensoativo na bolsa IV de 0,05% ou 0,1%. Um aumento de 0,3-0,4% na HMWS foi observado sob condição estática a 30°C por 22 horas na TABELA 1 abaixo.
TABELA 1: ESTUDO DE TENSOATIVO PS20-P188 HÍBRIDO SOB CONDIÇÕES ESTÁTICAS DE ESTRESSE TÉRMICO A 30°C Vol. SEC (porcentagem da área HIAC (partículas da relativa) (%) Conc. cumulativas/mL) Temp. Tensoativo Temp bols (mg/mL Turbidez 2 5 10 25 (°C) (%) o (h) LMW a HMWS Monômero ) μm μm μm μm
S (mL) 0,05% 0 0,7 99,2 0,2 2,7 0,02 3309 498 54 8 (0,025% 6 0,9 98,9 0,2 NT NT NT NT NT NT bolsa PS20 e de 0,025% 22 1,2 98,6 0,2 NT 0,02 3002 287 38 3 PVC 30°C P188) de 25 0,1% 0 0,7 99,2 0,2 2,7 0,05 1244 122 15 0 mL (0,05% de 6 0,8 99,0 0,2 NT NT NT NT NT NT PS20 22 1,1 98,7 0,2 NT 0,02 3652 497 54 3 e 0,05% de
P188)
[0321] Houve um pequeno aumento nos tamanhos de partículas acima de 5 μm, 10 μm e 25 μm. Quando 0,1% de tensoativo total foi usado na bolsa IV, houve um aumento nas partículas de 2 μm. Com base nos resultados, o híbrido de tensoativo não demonstrou uma diferença substancial em relação ao PS20 sozinho.
[0322] Quatro diferentes tensoativos foram avaliados para este estudo, incluindo PS20, PS80, P188 e octilglucosídeo (OG). Após incubação a 30°C por 22 horas com 0,02% de tensoativo e 2,6 mg/mL do fármaco em frascos preenchidos com solução salina de bolsas de PVC, houve um aumento de 0,3 a 0,4% de HMWS, demonstrando que a agregação também era independente do tipo de tensoativo usado (Figura 4).
ESTABILIDADE DO ANTICORPO ANTI-CD79B-VC-MMAE SOB ARMAZENAMENTO ESTÁTICO EM FRASCOS:
[0323] Considerando a instabilidade física do anticorpo anti- CD79b-vc-MMAE em solução salina normal (0,9% de NaCl) sob armazenamento estático em uma bolsa IV, a estabilidade do imunoconjugado em 5% de dextrose (D5W) e meia solução salina (0,45% p/v NaCl) foi testada em frascos para avaliar a dependência da instabilidade do imunoconjugado na força iônica. Soluções contendo 0,02% de PS20 foram preparadas com uma concentração fixa de anti-CD79b-vc-MMAE de 2,6 mg/mL. O anti-CD79b-vc- MMAE mostrou uma melhora significativa na estabilidade física tanto em meia solução salina quanto em D5W (Figura 4). Na solução D5W, não houve alteração na HMWS, enquanto a meia solução salina não mostrou mais de 0,1% de aumento na HMWS após 24 horas de armazenamento estático a 30°C. Embora a preparação em D5W limite a agregação de anti-CD79b-vc- MMAE, a glicação do anticorpo na solução D5W é um risco conhecido (vide Fischer, S. et al., Glycation during Storage and Administration of Monoclonal
Antibody Formulations. European J Pharma e Biopharm. vol.70; pp.42-50 (2008)). Portanto, a administração intravenosa de anti-CD79b-vc-MMAE com bolsas de dextrose a 5% não foi considerada posteriormente devido ao potencial de glicação. Mesmo que a meio solução salina tenha mostrado uma melhora significativa na estabilidade física em comparação à solução salina normal, devido à baixa disponibilidade de bolsas de meia solução salina pré- fabricadas em um ambiente clínico e comercial global, bem como a inconveniência e potenciais riscos de contaminação microbiana associados à preparação de bolsas de meia solução salina em farmácias, o uso de meia solução salina para infusão IV de anti-CD79b-vc-MMAE também não foi preferido.
CONCLUSÕES DOS ESTUDOS DE ESTABILIDADE ESTÁTICA EM BOLSAS IV E FRASCOS DE VIDRO:
[0324] Os estudos de estabilidade estática descritos acima demonstram que a agregação do anticorpo anti-CD79b-vc-MMAE é conduzida por ambientes de alta força iônica, indicando que a taxa de agregação no tampão de formulação é significativamente mais lenta do que na solução salina.
B. ESTUDOS DA AGITAÇÃO DA BOLSA IV:
[0325] Uma série de estudos da agitação da bolsa IV foi conduzida a fim de suportar o transporte de bolsas IV combinadas contendo anti-CD79b-vc-MMAE em um hospital ou ambiente clínico para administração de dose. Embora o transporte de bolsas IV preparadas contendo proteínas terapêuticas geralmente não seja recomendado devido ao risco de agregação, frequentemente há uma necessidade prática de transportar bolsas IV em um ambiente clínico, especialmente em locais remotos com acesso limitado às farmácias. Portanto, uma quantidade mínima de transporte deve ser suportada e o impacto sobre o fármaco devido à agitação da bolsa intravenosa deve ser avaliado durante o desenvolvimento. O estresse da agitação em bolsas IV durante o transporte pode induzir a degradação física do anticorpo terapêutico.
A degradação física (ou seja, agregação e formação de partículas) do anticorpo é provavelmente mediada pela adsorção à interface ar-líquido na bolsa IV, que sofre regeneração contínua durante a agitação. Ao longo do curso dos estudos abaixo, um agitador elíptico de laboratório MaxQ 4000 (comprimento de órbita de 0,75 pol.) foi usado para os estudos da agitação da bolsa IV. As bolsas IV foram colocadas planas no plano do agitador.
EFEITO DA TEMPERATURA NA ESTABILIDADE APÓS AGITAÇÃO EM BOLSAS IV:
[0326] Os estudos da agitação foram realizados com diferentes níveis de PS20 na bolsa a 2 a 8°C, 25°C e 30°C (Figura 5A-Figura 5C). A taxa de aumento em HMWS foi mais a 30°C do que 25°C, que foi mais do que aquela testada a 2 a 8°C. O aumento na HMWS foi correlacionado à temperatura durante a agitação na bolsa IV. Para bolsas que contêm níveis de concentração de PS20 de 0,01%, 0,005% e 0,003%, não houve aumento na HMWS após agitação por 2 horas a 2 a 8°C (Figura 5A). A 30°C, o aumento em HMWS era dependente da concentração de PS20 na bolsa (Figura 5C).
Notou-se que o aumento em HMWS após agitação em todos os níveis de PS20 a 2 a 8°C (Figura 5A) e 25°C era não linear (Figura 5B). Este comportamento não linear foi provavelmente devido à amostragem em pontos de tempo diferentes.
EFEITO DA MISTURA DE TENSOATIVO SOBRE A ESTABILIDADE APÓS AGITAÇÃO EM UMA BOLSA IV:
[0327] Um híbrido de PS20 - P188 em uma razão igual de 1:1 em peso foi usado para determinar se o PS20 pode prevenir a formação de SVP e P188 pode limitar o aumento em HMWS após agitação. O estudo foi conduzido em bolsas IV de 25 mL usando uma concentração de anti-CD79b- vc-MMAE de 2,6 mg/mL na bolsa. Em uma base de massa, quantidades iguais de PS20 e P188 foram adicionadas para produzir uma concentração total de tensoativo na bolsa IV de 0,05% ou 0,1%.
[0328] Quando 0,05% de tensoativo total foi usado na bolsa IV, um aumento de 2,9% na HMWS foi observado após agitação a 30°C por 2 horas (TABELA 2). Houve uma tendência de aumento nos tamanhos de partículas acima de 5 μm, 10 μm e 25 μm até 1 hora e as contagens de partículas estavam acima do limite de detecção (LOD) em 2 horas. Quando 0,1% de tensoativo total foi usado na bolsa IV, houve uma tendência de aumento nas partículas em todos os tamanhos, mas foi significativamente menor do que a bolsa com 0,05% de tensoativo (TABELA 2). O aumento na HMWS também foi menor em cerca de 2,8% após 2 horas de agitação em comparação com 0,05% da concentração total de tensoativo na bolsa IV. Com base nesses resultados, o híbrido de tensoativo não apresentou diferença em relação ao PS20 sozinho.
TABELA 2: ESTUDO DE TENSOATIVO PS20-P188 HÍBRIDO SOB CONDIÇÕES DE AGITAÇÃO DE 30°C SOB ESTRESSE TÉRMICO Vol. SEC (porcentagem da área HIAC (partículas da Temp. Tensoativo Tempo relativa) (%) Conc. cumulativas/mL) Turbidez bolsa (°C) (%) (h) LM (mg/mL) 2 5 10 25 HMWS Monômero (mL) WS μm μm μm μm 0,05% 0 2,2 97,6 0,2 NT 0,02 3202 383 35 0 (0,025% 1 3,2 96,7 0,2 NT 0,03 3737 485 48 0 PS20 e bolsa 0,025% 2 5,1 94,7 0,2 3,1 0,21 14666 979 76 0 de P188) PVC 30°C 0,1% 0 1,2 98,6 0,2 NT 0,03 3396 476 53 3 de 25 (0,05% de 1 1,3 98,5 0,2 NT 0,03 3973 549 56 0 mL PS20 e 0,05% de 2 2,3 97,5 0,2 2,7 0,03 3816 650 82 7 P188) AGITAÇÃO DA BOLSA IV A CURTO PRAZO A 30°C:
[0329] O objetivo deste estudo foi investigar o transporte de bolsas IV com anti-CD79b-vc-MMAE diluído por um curto prazo sob condições ambientais e determinar a concentração efetiva de PS20 na formulação de anti- CD79b-vc-MMAAE. Este estudo submete a bolsa a agitação a curto prazo a 30°C por 30 minutos. Esta agitação mais curta a 30°C pode cobrir a agitação potencial que um anti-CD79b-vc-MMAE diluído poderia experimentar durante o transporte em um hospital ou outras instalações sob condições ambientais. O estudo foi realizado com 0,001%, 0,002%, 0,003% e 0,005% de PS20 diluído na bolsa IV e agitado a 30°C a 100 rpm. Os resultados são mostrados na Figura 6. Com base nos resultados, há um aumento de <0,1% com 0,005% de PS20 na bolsa. Nessas condições, para o anti-CD79b-vc-MMAE, existe uma correlação direta do aumento de HMWS com a concentração de PS20 na bolsa IV. Com base neste estudo, para estabilidade física de anti-CD79b-vc-MMAE diluído na bolsa IV, a quantidade mínima de PS20 na bolsa IV foi entre 0,003% e 0,005% para manter os níveis de agregados abaixo do limite de quantificação.
AGITAÇÃO A 2 A 8°C ENQUANTO A BOLSA IV ESTÁ ESFRIANDO (SEM PRÉ- RESFRIAMENTO DAS BOLSAS):
[0330] O objetivo deste estudo foi suportar o transporte de bolsas IV combinadas em um cenário mais realista. Normalmente, as bolsas IV são manipuladas pelos farmacêuticos e são transportadas em veículos que podem ou não serem pré-resfriados. Antes do início deste experimento, as bolsas são equilibradas a 30°C para simular as temperaturas ambientes mais altas que podem existir em diferentes partes do mundo. Isso garante a estabilidade do produto de fármaco (PF) diluído mesmo se as bolsas não foram pré-resfriadas ou transportadas em um recipiente que não foi pré-resfriado. O estudo foi conduzido com 2,6 mg/mL de anti-CD79b-vc-MMAE com quatro níveis diferentes de PS20 em bolsas IV de 100 mL: 0,001%, 0,002%, 0,003% e 0,005%. Há um aumento de <0,1% em HMWS com ≤0,002% na bolsa IV. Com base nos resultados deste estudo de modelo de agitação, a quantidade mínima de PS20 na bolsa IV foi entre 0,001% e 0,002% para manter os níveis de agregados abaixo do limite de quantificação. Os resultados estão sumarizados na Figura 7.
CONCLUSÕES:
[0331] Conjugados de fármaco-anticorpo (ADCs) são particularmente mais sensíveis a soluções salinas e tampões de alta força iônica do que anticorpos regulares não conjugados (Adem, Y., et al., Bioconjugate Chemistry, 25 (2014) 656-664). O anti-CD79b-vc-MMAE testado demonstrou um aumento em HMWS quando diluído em solução salina a 0,3% a 30°C por 22 horas sob armazenamento estático.
[0332] Com base nos dois modelos de agitação, o anti-CD79b- vc-MMAE é estável com pelo menos 0,002% de PS20 na bolsa IV durante a agitação causada pelo transporte a curto prazo de 1 hora a 2 a 8°C. Para atender aos requisitos de estabilidade para o estresse de agitação durante o manuseio, transporte e armazenamento a curto prazo, a concentração final de tensoativo proposta na formulação anti-CD79b-vc-MMAE é de 0,12%, o que resulta em 0,004% na bolsa para o menor peso esperado do paciente (40 kg) quando combinada com o uso de uma bolsa IV de 100 mL. Este nível de tensoativo mostrou ser protetor do anti-CD79b-vc-MMAE para uma faixa de dosagem de 1,8 mg/kg a 2,4 mg/kg. É de notar que esta quantidade de tensoativo, particularmente PS20, é inesperadamente alta e contra-intuitiva em vista da literatura científica, vide Kerwin BA. Polissorbatos 20 e 80 usados em Formulation of Protein Biotherapeutics: Structure and Degradation Pathways.
Journal of Pharmaceutical Sciences. 2008;97(8):2924-2935. Esta quantidade de PS20 usada para o produto de fármaco de anti-CD79b-vc-MMAE também é inesperadamente maior em comparação com outro imunoconjugado, anti- CD22-vc-MMAE, para o qual uma formulação comercial de 0,05% de PS20 foi estabelecida como adequada para diluição em uma bolsa IV (dados não mostrados).
EXEMPLO 2: MITIGAÇÃO DA OXIDAÇÃO DO IMUNOCONJUGADO ANTI-CD79B E RISCOS
DA HIDRÓLISE DE LIGANTE
[0333] Estabelecer a concentração de tensoativo adequada para liberação em bolsa IV conforme discutido no Exemplo 1 potencialmente adicionou um problema de oxidação para o anti-CD79b-vc-MMAE. Sabe-se que níveis mais elevados de polissorbato geralmente estão associados a níveis mais elevados de peróxido devido à degradação auto-oxidativa do polissorbato.
Vide Lam XM, Yang JY, Cleland JL. Antioxidants for prevention of methionine oxidation in recombinant monoclonal antibody HER2. Journal of Pharmaceutical Sciences. 1997;86(11):1250-1255; Donbrow M, Azaz E, Pillersdorf A.
Autoxidation of polysorbates. Journal of Pharmaceutical Sciences.
1978;67(12):1676-1681; Kerwin BA. Polissorbatos 20 e 80 usados em Formulation of Protein Biotherapeutics: Structure and Degradation Pathways.
Journal of Pharmaceutical Sciences. 2008;97(8):2924-2935.
[0334] Além disso, sabe-se que a oxidação do triptofano pode ocorrer na presença de PS20. Vide Lam X, et al., Site-Specific Tryptophan Oxidation Induced by Autocatalytic Reaction of Polysorbate 20 in Protein Formulation., Pharm Res. (2011) 28:2543-2555. Notavelmente, para o anticorpo anti-CD79b usado na presente divulgação, há um triptofano na cadeia pesada variável HVR1: GYTFSSYWIE (SEQ ID NO:4). A propensão de oxidar sob condições de estresse AAPH (por exemplo, por até 2 semanas a 40°C ou 6 meses a 25°C ou 6 meses a 2 a 8°C) foi determinada por análise de espectrometria de massa de peptídeos trípticos após a formulação do anti - CD79b-vc-MMAE com AAPH. O anti-CD79b-vc-MMAE estressado foi digerido com tripsina e os peptídeos digeridos foram submetidos a LC-MS/MS para determinar a porcentagem de oxidação (dados não mostrados). 68% de oxidação do triptofano de HVR foi observada por mapeamento de peptídeo.
Isso resultou em uma perda de potência de aproximadamente 58% para o anti- CD79b-vc-MMAE (dados não mostrados). Portanto, foi necessário mitigar o risco de oxidação.
[0335] Os fatores adicionais a serem considerados incluem como gerenciar a hidrólise da succinimida do ligante do imunoconjugado. O presente imunoconjugado anti-CD79b-vc-MMAE empregou um ligante de fármaco contendo maleimida conjugado a resíduos de cisteína do anticorpo para formar ligações tio-succinimida. Sabe-se que tais ligações tio-succinimida podem sofrer duas reações concorrentes enquanto no plasma de um paciente: (a) eliminação da maleimida, resultando em uma perda indesejável de fármaco do imunoconjugado; e (b) hidrólise do anel tio-succinimida resultando em um derivado de ácido succínico que não pode ser eliminado. Vide Figura 8 e Lyon, R., et al., Self-Stabilizing ADCs: Conjugates Prepared with Maleimido Drug- Linkers that Catalyze their own Thiosuccinimide Ring Hydrolysis., Resumo nº 4333, American Association for Cancer Research (Abril de 2013). Este é um importante atributo crítico de qualidade (CQA), pois tem impacto potencial na farmacocinética (pK) e na segurança. Foi demonstrado anteriormente que a formulação líquida inicial usada para testes clínicos de fase inicial em pacientes, por exemplo, uma formulação líquida em um tampão acetato de histidina a um pH de 5,5, demonstrou um aumento de aproximadamente 9% em ácidos sob condições de armazenamento recomendadas ao longo de 2 anos (dados não mostrados).
[0336] Como resultado destes três riscos: aumento do risco de oxidação devido ao aumento das concentrações de PS20; aumento do risco de oxidação devido à oxidação do triptofano que resultaria em perda de potência; e risco de hidrólise do ligante que levaria à perda do fármaco de MMAE do imunoconjugado e resultaria em fármaco livre no plasma do paciente, uma formulação liofilizada foi proposta para mitigar esses riscos para resultar em um prazo de validade mais longo e mais estável.
A. INVESTIGAÇÃO DE ESPÉCIES DE TAMPÃO ALTERNATIVAS:
[0337] A fim de iniciar o desenvolvimento da formulação de um produto liofilizado, uma espécie tampão alternativa foi investigada. A espécie tampão usada na formulação da fase clínica inicial foi um tampão acetato de histidina. Sabe-se que a L-histidina tem potencial para se oxidar por meio de uma ampla variedade de mecanismos, dos quais o mecanismo de oxidação mais comumente observado é a foto-oxidação. Vide Mason, B., et al., Oxidation of Free L-histidine by terc-Butylhydroperoxide., Pharm Res. (2010) 27(3):447-
456. Além disso, o acetato pode evaporar durante o processo de liofilização, levando à alteração do pH, o que pode desestabilizar o produto imunoconjugado. Além disso, ter acetato pode ser considerado um risco potencial para o processo de liofilização, pois o acetato é inflamável. Portanto, espécies tampão alternativas foram avaliadas. Três formulações foram testadas como mostrado na TABELA 3.
TABELA 3: RASTREIO DE ESPÉCIES TAMPÃO E AVALIAÇÃO DA FAIXA DE PH Concentração de Espécies Tampão pH Proteína 22 mg/mL Histidina/Histidina-HCL 5,5 22 mg/mL Succinato de Sódio 5,0 22 mg/mL Succinato de Sódio 6,0
[0338] A estabilidade das composições farmacêuticas de anti- CD79b-vc-MMAE congeladas-descongeladas na TABELA 3 em recipientes de PETG descartáveis foi avaliada em experimentos de congelamento/descongelamento. As formulações de proteínas foram esterilizadas por filtração e os recipientes de PETG preenchidos. Os recipientes foram colocados a -20°C por T=0 e 1 semana. Os recipientes foram congelados e descongelados cinco vezes à temperatura ambiente. Somente o T = 0 e o terceiro ciclo de congelamento-descongelamento foram analisados.
Os resultados estão sumarizados na TABELA 4.
TABELA 4: ESTABILIDADE DO ANTI-CD79B-VC-MMAE CONGELADO-
DESCONGELADO Anti-CD79b-VC-MMAE: Estudo do congelamento e descongelamento 5X (lote Tox em larga escala) Descrição Resumida dos Resultados Ciclo Partí Conc Turbi SEC HIAC (Contagens cumulativas Formulação de CAC culas entra dez pH Porcentagem da Área médias/mL) cong Visív ção (AU) de Pico (%)
elam eis (µg/ ento ml) e HMW Monô LMW > > > > desc S mero S 2µm 5µm 10µm 25µm ongel amen to (X) Claro Nenh 0 22,3 0,09 5,57 0,6 99,2 0,2 133 15 3 0 (Líq) uma Claro Nenh 10mM de 1 23,4 0,08 5,53 0,6 99,2 0,2 213 66 17 1 (Líq) uma His/His-HCL Claro Nenh 130mM de 2 23,9 0,10 5,54 0,6 99,2 0,2 (Líq) uma Sacarose, Claro Nenh 0,06% de 3 22,7 0,09 5,53 0,6 99,2 0,2 n.a. (Líq) uma PS-20, pH de 5,5 Claro Nenh 4 23,0 0,08 5,54 0,6 99,2 0,2 (Líq) uma Claro Nenh 5 22,7 0,08 5,55 0,6 99,2 0,2 295 68 22 3 (Líq) uma Claro Nenh 0 20,9 0,08 5,04 0,6 99,2 0,2 10 2 0 0 (Líq) uma 10 mM de Claro Nenh 1 20,6 0,08 5,06 0,6 99,2 0,2 57 17 7 1 Succinato (Líq) uma de Na 130 Claro Nenh 2 20,6 0,08 5,04 0,6 99,2 0,2 mM de (Líq) uma Sacarose, Claro Nenh 3 21,0 0,08 5,06 0,6 99,2 0,2 n.a. 0,06% de (Líq) uma PS-20, pH Claro Nenh de 5,0 4 21,3 0,07 5,04 0,6 99,2 0,2 (Líq) uma Claro Nenh 5 21,5 0,07 5,06 0,6 99,1 0,2 43 10 4 1 (Líq) uma Ligeir amen te Nenh 0 opale 21,0 0,10 5,99 0,7 99,1 0,2 24 6 3 0 uma scent e (Líq) Ligeir amen te Nenh 1 opale 21,3 0,11 6,01 0,7 99,1 0,2 45 24 12 4 uma scent e (Líq) Ligeir amen te Nenh 10 mM de 2 opale 21,1 0,11 6,02 0,7 99,1 0,2 uma Succinato scent de Na 130 e mM de (Líq) Sacarose, Ligeir 0,06% de amen PS-20, pH te Nenh de 6,0 3 opale 21,4 0,10 6,04 0,7 99,1 0,2 n.a. uma scent e (Líq) Ligeir amen te Nenh 4 opale 20,9 0,11 6,02 0,7 99,1 0,2 uma scent e (Líq) Ligeir amen te Nenh 5 opale 22,1 0,10 6,03 0,7 99,1 0,2 167 56 23 8 uma scent e (Líq)
[0339] Os resultados demonstram que não houve problemas observados com nenhuma das três formulações testadas. Portanto, o uso de histidina ou succinato seria uma espécie tampão alternativa aceitável ao acetato de histidina.
[0340] Em seguida, rastreios de estabilidade testando os efeitos do pH na formação de variante de carga a 30°C foram testados.
Usando as mesmas três formulações líquidas da TABELA 3, que foram submetidas a estresse a 30°C em três pontos de tempo diferentes de 2 semanas, 4 semanas e 8 semanas, a distribuição da variante de carga foi avaliada por um analisador iCE280 (ProteinSimple) com microinjetor PrinCE e um cartucho capilar revestido de fluorocarbono de 100 μm × 5 cm (ProteinSimple). Para remover o resíduo de lisina C-terminal da cadeia pesada, carboxipeptidase B (CpB) foi adicionada a cada amostra após a etapa de diluição em uma razão enzima para substrato de 1:1000 (p/p).
Além disso, foi adicionada sialidase A para remover o ácido siálico. Após adição de CpB e sialidase A, as amostras foram incubadas a 37°C por 10 minutos. As amostras incubadas da formulação líquida foram misturadas com a solução de anfólito consistindo em uma mistura de 700 µL de metilcelulose a 1%, 1218 µL de água purificada, 8 µL de farmalito 8 -10,5, 55 µL de farmalito 5-8, 15 µL de marcador pl 5,12, 4 µL de marcador pI 7,05. As amostras foram focadas introduzindo um potencial de 1500 V por 1 minuto, seguido de um potencial de 3000 V por 5 minutos com o anólito de 80 mM de ácido fosfórico, e o católito de 100 mM de hidróxido de sódio, ambos em metilcelulose a 0,1%. Uma imagem das variantes de carga focada foi obtida passando luz ultravioleta (UV) de 280 nm através do capilar e na lente de uma câmera digital do dispositivo de carga acoplada.
Os resultados são mostrados na Figura 9 e Figura 10 que demonstraram que entre o pH de 5,0 e 5,5, houve menos formação de espécies ácidas e formação ligeiramente mais rápida em espécies básicas. Assim, parece que os componentes do tampão não têm um impacto mensurável na estabilidade da carga.
B. INVESTIGAÇÃO DOS EFEITOS DO P H NA ESTABILIDADE :
[0341] Os rastreios de estabilidade testando os efeitos do pH na formação de variante de tamanho a 30°C foram testados usando as mesmas três formulações líquidas como na TABELA 3, que foram estressadas a 30°C em três pontos de tempo diferentes de 2 semanas, 4 semanas e 8 semanas. A distribuição da variante de tamanho foi determinada por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) em um HPLC da Agilent Technologies de série 1200 (Santa Clara, Califórnia) usando uma fase móvel de 0,25 mM de cloreto de potássio, pH de 6,2. As amostras das formulações líquidas foram então carregadas em uma coluna TSKgel G3000SWXL da Tosoh Bioscience (South San Francisco, Califórnia). As amostras foram eluídas por 30 minutos usando um quociente de vazão de 0,5 ml/min e a absorvância foi monitorada a 280 nm.
Os resultados são relatados como área de pico relativa da área total sob a curva e mostrados na Figura 11. O rastreio de estabilidade demonstrou que entre o pH de 5,0 e 5,5, menos espécies de alto peso molecular (HMWS) foram observadas em comparação com o pH de 6,0. Quantidades semelhantes de espécies de baixo peso molecular (LMWS) foram observadas após 4 semanas a 30°C. Em 8 semanas, LMWS ligeiramente superior a 30°C foram observadas.
Uma vez que diminuir o pH para 5,3 pareceu reduzir a carga e a formação de variantes de tamanho, um pH de 5,3 foi selecionado.
[0342] A Figura 12 mostra um cromatograma testando duas espécies de tampão: histidina/histidina-HCl em pH de 5,5 em comparação com succinato de sódio em três pHs diferentes: 5,0, 5,5, e 6,0. O tampão histidina em pH de 5,5 exibiu uma estabilidade física ligeiramente melhor em líquido a 30°C do que o succinato de sódio em qualquer pH testado (pH 5,0, 5,5 ou 6,0).
No entanto, uma vez que o tampão succinato de sódio apresentou uma estabilidade aceitável em líquido e tendo em vista o risco potencial de oxidação com histidina, o tampão succinato de sódio foi selecionado.
C. TESTANDO FORMULAÇÕES LIOFILIZADAS:
[0343] Uma formulação liofilizada foi testada para mitigar os riscos descritos acima. O esquema geral para o ciclo de liofilização foi mostrado na TABELA 5.
TABELA 5: CICLO DE LIOFILIZAÇÃO PARA ANTI-CD79B-VC-MMAE Temperatura Pressão Tempo Etapa Descrição (°C) (μm Hg) (HH: MM) 1 Carregamento 5 N/A N/A 2 Espera 5 N/A 1:00 Rampa de 3 -35 N/A 2:00 Congelamento 4 Congelamento -35 N/A 6:00 5 Evacuação N/A 120 N/A Rampa de 6 Secagem 0 120 3:00 Primária Secagem 7 0 120 54:00 Primária Rampa de 8 Secagem 20 120 2:00 Secundária Secagem 9 20 120 10:00 Secundária
[0344] A duração do ciclo foi de aproximadamente 78 horas ou cerca de 3 dias. O teor de umidade foi definido entre 0,5% e 0,7%.
[0345] Um estudo de rastreio liofilizado foi realizado testando várias concentrações de anti-CD79b-vc-MMAE, duas espécies tampão diferentes, pHs diferentes e dois níveis de tensoativo diferentes como mostrado na TABELA 6.
TABELA 6: ESTUDO DE RASTREIO LIOFILIZADO - FORMULAÇÕES DE TESTE Concentração # Tampão Estabilizador/Tonicificador Tensoativo pH de Proteína 10 mM de 1 10 mg/ml 260 mM de Sacarose 0,06% de PS20 5,0 Succinato de Na 10 mM de 2 10 mg/ml 260 mM de Sacarose 0,06% de PS20 5,5 Succinato de Na 10 mM de 3 10 mg/ml 260 mM de Sacarose 0,06% de PS20 6,0 Succinato de Na 10 mM de 4 20 mg/ml 260 mM de Sacarose 0,06% de PS20 5,5 Succinato de Na 10 mM de 5 10 mg/ml 260 mM de Sacarose 0,08% de PS20 5,5 His/His-HCl
[0346] Estas formulações liofilizadas de teste foram armazenadas a 30°C por até 2 meses como parte do estudo de rastreio.
[0347] Para quantificar quaisquer monômeros desenvolvidos para cada formulação testada (1) a (5) como um indicador de estabilidade, a análise SEC foi empregada, após reconstituição de cada formulação testada para 10 mg/ml ou para 20 mg/ml, como descrito acima. A Figura 13 sumariza este estudo e demonstra que durante os 2 meses de estresse por calor a 30°C, não houve alterações na porcentagem de monômeros em qualquer uma das formulações testadas. Cada formulação liofilizada (1) a (5) também foi testada por icIEF como descrito acima, para determinar o pico principal percentual após 2 meses de estresse térmico a 30°C. A Figura 14 sumariza este estudo e demonstra que ao longo dos 2 meses de estresse por calor a 30°C, não houve alterações no pico principal percentual em nenhuma das formulações testadas.
Como resultado desses dois estudos, foi determinado que o tampão succinato de sódio em uma faixa de pH de 5,0 a 6,0 resultou na estabilidade aceitável para as formulações liofilizadas testadas.
D. APARÊNCIA DO BOLO LIOFILIZADO:
[0348] Um aspecto importante das formulações liofilizadas é a aparência real do bolo liofilizado, pois é um atributo de qualidade do produto.
Para a formulação liofilizada de anti-CD79b-vc-MMAE, tanto a concentração do imunoconjugado quanto a concentração do estabilizador/tonicificante foram testadas para examinar como aprimorar a aparência do bolo liofilizado. As Figuras 15A a 15C mostram três formulações liofilizadas com diferentes razões de proteína para sacarose testadas. Indentações foram observadas no fundo do bolo liofilizado para todos os três níveis de sacarose testados, o que não cria uma aparência ideal do bolo liofilizado. No entanto, sob condições de liofilização semelhantes, as formulações com menos sacarose apresentam recortes menores e menores concentrações de sacarose levam a menor umidade. Outra formulação liofilizada foi testada em que a concentração de imunoconjugado foi aumentada para 20 mg/ml enquanto a concentração de sacarose foi reduzida para 120 mM. As Figuras 16A e 16B comparam as duas aparências do bolo liofilizado. A concentração de 20 mg/ml de imunoconjugado com a combinação de 120 mM de sacarose demonstrou a aparência de bolo liofilizado mais robusta e uniforme. Na condução de estudos de estabilidade de estresse por calor por 4 semanas a 40°C, 25°C e 5°C, não foram observadas alterações na estrutura, cor ou aparência do bolo, e o teor de umidade permaneceu <5%.
E. ESTABILIDADE DA FORMULAÇÃO LIOFILIZADA:
[0349] A formulação liofilizada do produto de fármaco: 20 mg/ml de anti-CD79b-vc-MMAE, 120 mM de sacarose, PS20 a 0,12% em 10 mM de succinato de sódio em pH de 5,3 foram testados quanto à estabilidade medida pela formação de agregado solúvel ou variante de carga. Os agregados solúveis foram medidos por SEC, conforme descrito acima. A Figura 17 mostra que para o produto de fármaco liofilizado, houve um aumento inferior a 0,1% nos agregados solúveis a 25°C e 2 a 8°C ao longo de 8 semanas. Um aumento de aproximadamente 0,1% nas espécies de agregados de dímero por semana foi observado a 40°C, e a taxa dessa agregação pode ser dependente do nível de umidade. As variantes de carga foram medidas por icIEF, conforme descrito acima. A Figura 18 mostra que, para o produto de fármaco liofilizado, houve uma perda de aproximadamente 5% no pico principal e um aumento de 3,7% nos ácidos após 4 semanas a 40°C. Não houve alterações significativas medidas a 25°C e 2 a 8°C. Como resultado, não houve alterações observadas para o produto de fármaco liofilizado sob condições de estresse a 25°C e 2 a 8°C.
[0350] A TABELA 7 sumariza a formulação final de anti-CD79b- vc-MMAE obtida como um resultado dos muitos estudos descritos nos Exemplos 1 e 2.
TABELA 7: DESCRIÇÃO RESUMIDA DA FORMULAÇÃO FINAL DE ANTI-CD79B-VC-
MMAE Formulação Final do Justificativa Produto de Fármaco Comercial Forma de dosagem Liofilizado, Minimizar a hidrólise de reconstituição de uso succinimida e risco de oxidação único 1:1 com SWFI Formulação 20 mg/ml de Produto de Aparência aceitável do bolo Fármaco liofilizado 10 mM de Succinato de Adequado para liofilização; sódio minimizar o risco de oxidação Minimizar o risco de hidrólise de pH de 5,3 succinimida Aparência aceitável do bolo 120 mM de sacarose liofilizado PS20 a 0,12% Permitir estabilidade na bolsa IV Via de administração/libera Bolsa intravenosa Conveniência comercial ção
[0351] Como mostrado na TABELA 7 acima, a formulação comercial final do produto de fármaco contém 20 mg/ml do produto de fármaco, o que aumenta a razão de proteína para fármaco, resultando em uma aparência aprimorada do bolo quando a solução é liofilizada. O PS20 a 0,12% (ou seja, 1,2 mg/ml) protege a proteína na formulação de tensões interfaciais encontradas durante a administração usando bolsas IV e conjuntos de infusão IV. O pH de 5,3 minimiza a formação de variantes ácidas contribuídas pela hidrólise da succinimida. A formulação na Tabela 7 foi projetada para liberar 140 mg de produto de fármaco por frasco após reconstituição em 7,2 mL de SWFI para suportar uma dose clínica de 1,8 mg/kg.
EXEMPLO 3: AVALIAÇÃO DA ROBUSTEZ DA SUBSTÂNCIA DE FÁRMACO DE ANTI- CD79B-VC-MMAE E DAS FORMULAÇÕES DO PRODUTO DE FÁRMACO
[0352] O produto de fármaco (vide TABELA 7) na formulação liofilizada foi considerado estável por pelo menos 44 meses a 2°C a 8°C ao longo da faixa de teor de umidade residual de 0,3% (p/p) a 3,2% (p/p), bem como por pelo menos 7 meses a 25°C ao longo da faixa de teor de umidade residual de 0,3% (p/p) a 3,2% (p/p).
[0353] Em seguida, os parâmetros de formulação do produto de fármaco liofilizado foram variados e avaliados quanto ao impacto praticamente significativo sobre a estabilidade do produto de fármaco liofilizado. Os cinco parâmetros de formulação que foram testados (e as faixas nas quais os parâmetros foram variados) foram: (a) concentração de proteína (17-23 mg/ml), (b) concentração de succinato (7-23 mM), (c) concentração de sacarose (90- 150 mM), (d) concentração de polissorbato 20 (0,9-1,5 mg/ml), e (e) pH (4,95- 5,65). Nenhum efeito praticamente significativo sobre a estabilidade do produto de fármaco liofilizado foi observado após armazenamento a 2°C a 8°C por períodos de até nove meses. Com base nas taxas de degradação previstas pelo modelo, nenhum efeito praticamente significativo sobre a estabilidade do produto de fármaco liofilizado é esperado após o armazenamento a 2°C a 8°C por períodos de pelo menos 24 meses.
[0354] A solução do produto de fármaco reconstituído (ou seja, 20 mg/mL de polatuzumabe vedotina em 10 mM de succinato, 120 mM de sacarose, 1,2 mg/mL de polissorbato 20, em pH de 5,3) foi considerada fisicoquimicamente estável após 72 horas de armazenamento a 2 C− 8 C ou após 24 horas de armazenamento a 30 C com exposição à luz ambiente.
Nenhuma alteração significativa (por exemplo, alterações estatisticamente significativas) foi detectada na afinidade de polatuzumabe vedotina para seu alvo (ou seja, CD79b) ou na atividade biológica de polatuzumabe vedotina.
[0355] Embora a invenção supracitada foi descrita em alguns detalhes a título de ilustração e exemplo, para fins de clareza de entendimento, as descrições e exemplos não devem ser interpretados como limitantes ao escopo da invenção. As divulgações de toda a literatura científica e de patente citadas neste documento estão expressamente incorporadas em sua totalidade por referência.

Claims (109)

REIVINDICAÇÕES
1. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender um imunoconjugado anti-CD79b e um tensoativo, em que o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v, e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e - p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8.
2. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo imunoconjugado anti-CD79b estar a uma concentração de cerca de 5 mg/ml a cerca de 60 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 40 mg/ml, cerca de 10 mg/ml a cerca de 30 mg/ml, ou cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml.
3. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo imunoconjugado anti-CD79b estar a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml.
4. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizada pelo imunoconjugado anti-CD79b estar a uma concentração de 20 mg/ml.
5. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pela composição compreender o imunoconjugado anti-CD79b a uma concentração de 10 mg/ml e o tensoativo a uma concentração de 0,06% p/v.
6. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pela composição compreender o imunoconjugado anti-CD79b a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo a uma concentração de 0,12% p/v.
7. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pela composição compreender o imunoconjugado anti-CD79b a uma concentração de 20 mg/ml e o tensoativo a uma concentração de pelo menos 0,12% p/v.
8. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo tensoativo ser selecionado a partir do grupo que consiste em: polissorbato 20 (PS20), polissorbato 80 (PS80), poloxâmero 188 (P188), N-octil-β-D glucopiranosídeo (OG) e uma combinação dos mesmos.
9. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pela composição compreender ainda um agente tamponante.
10. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo agente tamponante ser um tampão histidina ou um tampão succinato.
11. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo agente tamponante ser um tampão histidina.
12. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo agente tamponante ser um tampão succinato.
13. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo tampão succinato ser um tampão succinato de sódio.
14. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo tampão succinato de sódio estar a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM.
15. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo tampão succinato de sódio estar a uma concentração de 10 mM.
16. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pela composição ter um pH de cerca de 5,0 a cerca de 6,0.
17. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pela composição ter um pH de 5,3.
18. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pela composição compreender ainda um açúcar.
19. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo açúcar estar a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM.
20. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com as reivindicações 18 a 19, caracterizada pelo açúcar ser selecionado a partir do grupo que consiste em: sacarose, manitol, sorbitol, glicerol, dextrano 40 e trealose.
21. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo açúcar ser sacarose.
22. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pela sacarose estar a uma concentração de 120 mM.
23. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizada pela composição ter sido reconstituída a partir de um bolo liofilizado.
24. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PRODUZIDA POR LIOFILIZAÇÃO de uma composição líquida, caracterizada por compreender 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a composição líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e - p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8.
25. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizada pelo anticorpo anti-
CD79b compreender um domínio variável da cadeia pesada (VH) que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8.
26. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizada pela cadeia pesada compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 e a cadeia leve compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10.
27. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizada por p ser um valor entre cerca de 2 e cerca de 5.
28. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PRODUZIDA POR LIOFILIZAÇÃO de uma composição líquida, caracterizada por compreender 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a composição líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5.
29. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizada por p ser cerca de 3,5.
30. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 29, caracterizada pela composição ter uma estabilidade de cerca de 48 meses a 5C 3C quando protegida da luz.
31. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pela estabilidade da composição ser medida por cromatografia líquida por exclusão de tamanho de alto desempenho (SE- HPLC).
32. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 31, caracterizada pela composição ter um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0, conforme medido por SE-HPLC.
33. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com reivindicação de qualquer uma das reivindicações 28 a 32, caracterizada pela estabilidade da composição ser medida por focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF).
34. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 33, caracterizada pela composição ter um pico principal (% de área) de pelo menos 58,0, uma região ácida (% de área) de no máximo 32,0 e uma região básica (% de área) de no máximo 12,0, conforme medido por icIEF.
35. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 34, caracterizada pela composição farmacêutica ser um bolo liofilizado.
36. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizada pela composição farmacêutica ser reconstituída com água estéril para injeção (SWFI) para produzir uma composição reconstituída.
37. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizada pela composição farmacêutica ser reconstituída em cerca de 7,2 ml de SWFI para produzir uma composição reconstituída.
38. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 36 ou 37, caracterizada pela composição reconstituída ser estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a cerca de 30°C.
39. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 36 a 38, caracterizada pela composição reconstituída ser estável por pelo menos 24, 48 ou 72 horas após armazenamento de cerca de 2°C a cerca de 8°C.
40. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 36 a 39, caracterizada pela composição reconstituída poder ser posteriormente diluída em um tampão isotônico em uma bolsa intravenosa (IV) para produzir uma composição diluída.
41. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 40, caracterizada pelo volume final da composição diluída na bolsa IV ser de cerca de 100 ml.
42. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 40 ou 41, caracterizada pela concentração do imunoconjugado na composição diluída estar entre cerca de 0,72 mg/ml e cerca de 2,7 mg/ml.
43. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por ser produzida por um processo que compreende as etapas de: (a) liofiliziar uma composição líquida compreendendo 20 mg/ml de um imunoconjugado anti-CD79b em 10 mM de tampão succinato de sódio, 0,12% p/v de polissorbato 20 e 120 mM de sacarose, em que a composição líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula:
- em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5, para produzir uma composição liofilizada; (b) reconstituir a composição liofilizada com cerca de 7,2 ml de água estéril para injeção (SWFI) para produzir uma composição reconstituída; e (c) diluir a composição reconstituída em um tampão isotônico em um bolsa intravenosa (IV) para produzir a composição farmacêutica, - em que o volume final da composição farmacêutica na bolsa IV é de cerca de 100 ml, e - em que a concentração final do imunoconjugado na composição farmacêutica é de cerca de 0,72 mg/ml ou cerca de 2,7 mg/ml.
44. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 43, caracterizada por p ser cerca de 3,5.
45. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 44, caracterizada pelo tampão isotônico ser uma solução de cloreto de sódio a 0,9%, uma solução de cloreto de sódio a 0,45% ou uma solução de dextrose a 5%.
46. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, caracterizada por compreender a) entre cerca de 0,72 a 2,7 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) entre cerca de 0,36 -0 1,35 mM de succinato de sódio; c) entre cerca de 0,51 a 16,24 mM de sacarose; d) entre cerca de 0,0432 a 0,162 mg/ml de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre cerca de 5 e cerca de 5,7.
47. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, caracterizada por compreender a) cerca de 0,72 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) cerca de 0,36 mM de succinato de sódio; c) cerca de 0,51 mM de sacarose; d) cerca de 0,0432 mg/ml de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre 5,1 e cerca de 5,4.
48. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, caracterizada por compreender a) cerca de 2,7 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) cerca de 0 1,35 mM de succinato de sódio; c) cerca de 16,24 mM de sacarose; d) cerca de 0,162 mg/ml de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre cerca de 5,1 e cerca de 5,4.
49. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 48, caracterizada pelo volume da composição líquida estar entre cerca de 50 ml e cerca de 100 ml.
50. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 49, caracterizada pelo volume da composição líquida ser de 50 ml.
51. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 49, caracterizada pelo volume da composição líquida ser de 100 ml.
52. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO UM IMUNOCONJUGADO ANTI-CD79B, um tensoativo, um tampão succinato e um açúcar, caracterizada pela composição farmacêutica, quando reconstituída em água, formar uma composição farmacêutica líquida compreendendo o imunoconjugado anti-CD79b a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml, o tensoativo a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v, o tampão succinato a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM e o açúcar a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM, em que a composição farmacêutica líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula:
- em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e - p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8.
53. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 52, caracterizada pelo anticorpo anti-CD79b compreender um domínio variável da cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8.
54. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, caracterizada pela cadeia pesada do anticorpo anti- CD79b compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10.
55. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 34 ou 52 a 54, caracterizada pela composição farmacêutica ser produzida por liofilização e em que a composição farmacêutica liofilizada é estável por pelo menos 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48,
54 ou 60 meses após armazenamento a cerca de 2°C a cerca de 8°C.
56. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 55, caracterizada pela composição farmacêutica liofilizada ser um bolo liofilizado.
57. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 56, caracterizada pela composição farmacêutica, após a reconstituição, ser estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após o armazenamento a cerca de 30°C.
58. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 57, caracterizada pela composição farmacêutica, após reconstituição, ser estável por pelo menos 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a cerca de 2°C a cerca de 8°C.
59. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 58, caracterizada pela composição farmacêutica, após a reconstituição, ser diluída em um tampão isotônico em uma bolsa IV, em que a concentração de tensoativo após diluição na bolsa IV é de pelo menos 0,003% p/v.
60. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 59, caracterizada pela concentração de tensoativo após diluição na bolsa IV ser de pelo menos 0,004% p/v.
61. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA a, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 60, caracterizada pelo tensoativo ser polissorbato 20.
62. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 61, caracterizada pelo açúcar ser sacarose.
63. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 58 e 61 e 62, caracterizada pela sacarose estar a uma concentração de 120 mM.
64. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 63, caracterizada pelo tampão succinato ser um tampão succinato de sódio.
65. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 64, caracterizada por, após reconstituição, mas antes da diluição, o tampão succinato de sódio estar a uma concentração de 10 mM.
66. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 58 e 61 a 65, caracterizada pela composição ter uma estabilidade de cerca de 7 dias a 5C  3C.
67. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 66, caracterizada pela estabilidade da composição ser medida por cromatografia líquida por exclusão de tamanho de alta eficiência (SE- HPLC).
68. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 67, caracterizada pela composição ter um pico principal (% de área) de pelo menos 95,0, conforme medido por SE-HPLC.
69. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 68, caracterizada pela estabilidade da composição ser medida por focalização isoelétrica capilar por imagem (icIEF).
70. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 69, caracterizada pela composição ter um pico principal (% de área) de pelo menos 58,0, uma região ácida (% de área) de no máximo 32,0 e uma região básica (% de área) de no máximo 12,0, conforme medido por icIEF.
71. FRASCO DE VIDRO, caracterizado por conter a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 52 a 58 e 61 a 70.
72. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA COMPREENDENDO UM
IMUNOCONJUGADO ANTI-CD79B, um tensoativo, um tampão succinato e um açúcar, caracterizada pelo imunoconjugado anti-CD79b estar a uma concentração de cerca de 10 mg/ml a cerca de 20 mg/ml, o tensoativo está a uma concentração de pelo menos 0,06% p/v, o tampão succinato está a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM, e o açúcar está a uma concentração de cerca de 100 mM a cerca de 260 mM, em que a composição líquida tem um pH de 5,3 e em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende (a) uma sequência HVR-L1 de KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) uma sequência HVR-L2 de AASNLES (SEQ ID NO: 2); e (c) uma sequência HVR-L3 de QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); em que a cadeia pesada compreende (a) uma sequência HVR-H1 de GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) uma sequência HVR-H2 de GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); e (c) uma sequência HVR-H3 de TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val é valina; Cit é citrulina; e - p é um valor de cerca de 1 a cerca de 8.
73. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 72, caracterizada pelo anticorpo anti-CD79b compreender um domínio variável da cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8.
74. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação
72 ou 73, caracterizada pela cadeia pesada do anti-CD79b compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:
10.
75. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 74, caracterizada pelo tensoativo ser polissorbato 20.
76. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 75, caracterizada pelo açúcar ser sacarose.
77. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 76, caracterizada pela sacarose estar a uma concentração de cerca de 120 mM.
78. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 77, caracterizada pelo tampão succinato ser um tampão succinato de sódio.
79. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 78, caracterizada pelo tampão succinato de sódio estar a uma concentração de 10 mM.
80. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 79, caracterizada pela composição ser diluída em um tampão isotônico.
81. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 80, caracterizada pelo tampão isotônico ser uma solução de cloreto de sódio a 0,9%, uma solução de cloreto de sódio a 0,45% ou uma solução de dextrose a 5%.
82. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 80 ou 81, caracterizada pela composição que é diluída em um tampão isotônico estar em uma bolsa IV.
83. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 79, caracterizada pela composição ter uma estabilidade de cerca de 72 horas a 5C  3C.
84. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 79, caracterizada pela composição ter uma estabilidade de cerca de 24 horas a 25C.
85. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 79, caracterizada pela composição líquida ser estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a cerca de 30°C.
86. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 72 a 79, caracterizada pela composição líquida ser estável por pelo menos 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a cerca de 2°C a cerca de 8°C.
87. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, caracterizada por compreender cerca de 150 mg de um imunoconjugado anti- CD79b, cerca de 9,0 mg de polissorbato 20, cerca de 8,88 mg de ácido succínico, cerca de 4,08 mg de hidróxido de sódio e cerca de 309 mg de sacarose, em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e - p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5.
88. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, caracterizada por compreender cerca de 150 mg de polatuzumabe vedotina, cerca de 9,0 mg de polissorbato 20, cerca de 8,88 mg de ácido succínico, cerca de 4,08 mg de hidróxido de sódio e cerca de 309 mg de sacarose.
89. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, caracterizada por compreender cerca de 140 mg de um imunoconjugado anti- CD79b, cerca de 8,4 mg de polissorbato 20, cerca de 8,27 mg de ácido succínico, cerca de 3,80 mg de hidróxido de sódio e cerca de 288 mg de sacarose, em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e - p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5.
90. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, caracterizada por compreender cerca de 140 mg de polatuzumabe vedotina, cerca de 8,4 mg de polissorbato 20, cerca de 8,27 mg de ácido succínico, cerca de 3,80 mg de hidróxido de sódio e cerca de 288 mg de sacarose.
91. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, caracterizada por compreender cerca de 30 mg de um imunoconjugado anti- CD79b, cerca de 1,8 mg de polissorbato 20, cerca de 1,77 mg de ácido succínico, cerca de 0,816 mg de hidróxido de sódio e cerca de 61,8 mg de sacarose, em que o imunoconjugado anti-CD79b compreende a fórmula: - em que: - Ab é um anticorpo anti-CD79b, em que o anticorpo anti-CD79b compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9, e em que a cadeia leve do anticorpo anti-CD79b compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; Val é valina; Cit é citrulina; e p é um valor de cerca de 2 a cerca de 5.
92. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, caracterizada por compreender cerca de 30 mg de polatuzumabe vedotina, cerca de 1,8 mg de polissorbato 20, cerca de 1,77 mg de ácido succínico, cerca de 0,816 mg de hidróxido de sódio e cerca de 61,8 mg de sacarose.
93. COMPOSIÇÃO LIOFILIZADA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87, 89 ou 91, caracterizada por p ser cerca de 3,5.
94. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, caracterizada por compreender cerca de 140 a 150 mg de polatuzumabe vedotina, cerca de 8,4 a 9,0 mg de polissorbato 20, cerca de 8,27 a 8,88 mg de ácido succínico, cerca de 3,80 a 4,08 mg de hidróxido de sódio e cerca de 288 a 309 mg de sacarose.
95. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 94, caracterizada pela composição farmacêutica liofilizada ser estável por pelo menos 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54 ou 60 meses após armazenamento a cerca de 2°C a cerca de 8°C.
96. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LIOFILIZADA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 95, caracterizada pela composição farmacêutica liofilizada ser um bolo liofilizado.
97. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LÍQUIDA, caracterizada por compreender a) 5 a 60 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) 10 a 200 mM de succinato de sódio; c) 100 a 260 mM de sacarose; d) 0,06 a 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre 5 e 6.
98. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 97, caracterizada por compreender a) 10 a 55 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) 10 a 100 mM de succinato de sódio; c) 150 a 260 mM de sacarose; d) 0,08 a 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre 5,1 e 5,6.
99. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com a reivindicação 97, caracterizada por compreender a) 15 a 40 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) 10 a 50 mM de succinato de sódio; c) 200 a 260 mM de sacarose; d) 0,1 a 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida está entre 5,2 e 5,4.
100. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LÍQUIDA, caracterizada por compreender a) 20 mg/ml de polatuzumabe vedotina; b) 10 mM de succinato de sódio; c) 120 mM de sacarose; d) 0,12% p/v de polissorbato 20, em que o pH da composição líquida é de cerca de 5,3.
101. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 100, caracterizada pela composição líquida ser estável por pelo menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 horas após armazenamento a cerca de 30°C.
101. COMPOSIÇÃO LÍQUIDA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 101, caracterizada pela composição líquida ser estável por pelo menos 24, 48 ou 72 horas após armazenamento a cerca de 2°C a cerca de 8°C.
102. MÉTODO PARA TRATAR UM DISTÚRBIO PROLIFERATIVO em um paciente em necessidade do mesmo, caracterizado por compreender administrar ao paciente a composição farmacêutica ou a composição líquida, conforme definidas em qualquer uma das reivindicações anteriores.
103. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo distúrbio proliferativo ser câncer.
104. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo câncer ser um distúrbio proliferativo de células B.
105. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 104, caracterizado pelo distúrbio proliferativo de células B ser selecionado a partir do grupo que consiste em: linfoma, mieloma, linfoma não Hodgkin (NHL), linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), NHL agressivo, linfoma indolente, linfoma folicular (FL), NHL agressivo recorrente, NHL indolente recorrente, NHL recorrente, NHL refratário, NHL indolente refratário, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno, leucemia, leucemia de células cabeludas (HCL), leucemia linfocítica aguda (LLA) e linfoma de células do manto.
106. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo distúrbio proliferativo de células B ser o linfoma não Hodgkin (NHL).
107. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo distúrbio proliferativo de células B ser o linfoma difuso de grandes células B (DLBCL).
108. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo distúrbio proliferativo de células B ser NHL recidivante ou NHL refratário.
109. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 105,
caracterizado pelo distúrbio proliferativo de células B ser o linfoma folicular
(FL).
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