NO331305B1 - Levende rekombinant leporipox-virus, dets anvendelse, samt vaksine omfattende viruset - Google Patents
Levende rekombinant leporipox-virus, dets anvendelse, samt vaksine omfattende viruset Download PDFInfo
- Publication number
- NO331305B1 NO331305B1 NO20033912A NO20033912A NO331305B1 NO 331305 B1 NO331305 B1 NO 331305B1 NO 20033912 A NO20033912 A NO 20033912A NO 20033912 A NO20033912 A NO 20033912A NO 331305 B1 NO331305 B1 NO 331305B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- virus
- exogenous dna
- recombinant
- leporipox
- control element
- Prior art date
Links
- 241000700563 Leporipoxvirus Species 0.000 title claims abstract description 56
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 53
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 24
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 19
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000700562 Myxoma virus Species 0.000 claims description 37
- 241000714201 Feline calicivirus Species 0.000 claims description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 16
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 15
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 claims description 10
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 claims description 10
- 241000701915 Feline panleukopenia virus Species 0.000 claims description 6
- 241000283960 Leporidae Species 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims description 3
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 17
- 230000010076 replication Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 abstract description 3
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 26
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 8
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 7
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 7
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 7
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 7
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 7
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 241000700564 Rabbit fibroma virus Species 0.000 description 5
- 241000714203 Rabbit hemorrhagic disease virus Species 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 101710197665 Capsid protein VP2 Proteins 0.000 description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 3
- 101900316143 Feline calicivirus Capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 3
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- -1 IP10 Proteins 0.000 description 3
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 3
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 3
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 208000009091 myxoma Diseases 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710083734 CTP synthase Proteins 0.000 description 2
- 102100039866 CTP synthase 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 208000004729 Feline Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 102100034221 Growth-regulated alpha protein Human genes 0.000 description 2
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 2
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 2
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 2
- 241000712045 Morbillivirus Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108010071023 Bacterial Outer Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023702 C-C motif chemokine 13 Human genes 0.000 description 1
- 101710112613 C-C motif chemokine 13 Proteins 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 1
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 1
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 1
- 101710155833 C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 1
- 102000001902 CC Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010040471 CC Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 101900009576 Canine coronavirus Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101800001383 Capsid protein VP60 Proteins 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 102400000498 Connective tissue-activating peptide III Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000700662 Fowlpox virus Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101001069921 Homo sapiens Growth-regulated alpha protein Proteins 0.000 description 1
- 101000973997 Homo sapiens Nucleosome assembly protein 1-like 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000947178 Homo sapiens Platelet basic protein Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 102100036154 Platelet basic protein Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 101900083372 Rabies virus Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710181917 Serine proteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710181913 Serine proteinase inhibitor 2 Proteins 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001224 bacterial fimbriae Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 102220361483 c.31A>T Human genes 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 108010035886 connective tissue-activating peptide Proteins 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 208000005098 feline infectious peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N mcp 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical class O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 108010045075 rabbit hemorrhagic disease virus viral protein 60 Proteins 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/23—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/16011—Caliciviridae
- C12N2770/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Det beskrives anvendelse av et levende, rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA som er operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement, og som er innlemmet i en ikke-essensiell region av virusgenomet, ved fremstilling av en vektorvaksine for behandling og/eller forebygging av infeksiøse sykdommer i ikke-lepori-arter. Oppfinnelsen angår videre et levende, rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement og innlemmet i en ikke-essensiell region av virusgenomet, kjennetegnet ved at det eksogene DNA koder for minst ett antigen av et ikke-lepon-patogen På grunn av sitt begrensede vertsområde, er det rekombinante leponpox-virus ikke-patogent i ikke-mottakelige verter så som ikke-lepon-virveldyr Vaksinering med det rekombinante leponpox-virus induserte en antigen eller immunogen respons i den vaksinerte ikke-lepon-vert selv om produktiv replikasjon av viruset ikke ble observert i verten.
Description
Foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av et levende, rekombinant leporipox-virus for fremstilling av en vektor-vaksine for ikke-mottakelige vertsarter, levende, rekombinant leporipox-virus, samt vaksine omfattende nevnte virus.
Vektorvaksiner basert på orthopox- og avipoxvirus og deres potensial som rekombinante virusvektorer ved vaksinering er beskrevet. US-patent nr. 5 759 841 beskriver et rekombinant vacciniavirus som inneholder morbillivirus-DNA som koder for minst ett glykoprotein, og en promoter for ekspresjon av DNA, i en ikke-essensiell region av vacciniavirus-genomet. Det rekombinante vacciniavirus kan anvendes i vaksiner for bevirking av en immunrespons overfor morbillivirus hos hunder. Det rekombinante vacciniavektorvirus har imidlertid adgang til et stort antall forskjellige arter innbefattende mennesker, og følgelig har det beskrevne vacciniavektorvirus potensiell risiko for å forårsake en ukontrollert infeksjon i den vaksinerte vert, eller for overføring fra vaksinerte til ikke-vaksinerte verter.
WO 9527780 beskriver et rekombinant avipoxvirus, som på grunn av sitt begrensede vertsområde har svekket virulens i en ikkefugl-vert. De rekombinante avipoxvirus inneholder eksogent DNA i en ikke-essensiell region i virusgenomet, hvorved det eksogene DNA koder for minst ett hundevalpesyke-virus- (CDV)-antigen, eller meslingvirus- (MV)- M- eller N-antigen. Disse virus kan anvendes til bevirking av en antigen eller immunologisk respons hos hunder og andre kjøttetende dyr samt hos mennesker. De rekombinante avipoxvektorvirus er begrenset til sin naturlige vert, og vaksinering av ikke-fuglearter med disse vektorvirus resulterer i ekspresjon av det eksogene antigen uten produktiv replikasjon av viruset. Imidlertid forblir ekspresjonsnivået for det eksogene antigen lavt etter vaksinering med avipoxvirusvektoren. Følgelig er det behov for forbedrede ekspresjonsnivåer for det eksogene antigen. Videre tilveiebringer ikke immunisering med avipoxvirusvektor alltid tilstrekkelig av nøytraliserende antistoffer overfor det eksogene antigen. Vaksinering av katter med en kanaripox-basert FeLV-vektorvaksine førte ikke til dannelse av nøytraliserende anti-FeLV-antistoffer (J. Tartaglia et al., 1993, J. Virol. 67, s. 2370-2375). Nyfødte kattunger er spesielt mottakelige for FeLV-infeksjon. Siden kattunger ikke har et fullt utviklet immunsystem i de første uker etter fødselen, er de avhengige av antistoffene fra moren for beskyttelse mot FeLV-infeksjon. Hvis vaksinering ikke har tilført moren nøytraliserende antistoffer, vil kattungene ikke bli beskyttet mot Fe LV, og de vil bukke underfør infeksjonen.
EP 0 972 840 omhandler et levende rekombinant myxoma virus, som er svekket og har kapasitet til en kontrollert transmisjon og som omfatter, i sitt genom, en nukleotidsekvens som koder for og uttrykker et antigenprotein av Rabbit Hemorrhagic Disease Virus (RHDV).
EP 0 972 840 foreslår ikke anvendelse av et levende rekombinant myxoma virus som viral vektor for å indusere en antigen eller immunogen respons i ikke-mottakelige arter, mere spesielt ikke-lepori-arter.
Det ble overraskende funnet at et levende rekombinant leporipoxvirus omfattende eksogent DNA som koder for minst ett antigen, kunne anvendes til å indusere en antigen- eller immunogenrespons hos en vert som normalt ikke er mottakelig for produktiv infisering med leporipox-virus, dvs. at leporipox-viruset ikke er i stand til å replikere i denne vert etter replikasjon. Produktiv infisering med leporipox-virus er begrenset til bare leporiarter. Følgelig vil ikke infisering av ikke-leporiarter med et leporipox-virus føre til replikasjon av leporipox-viruset. Det var derfor overraskende å finne ut at et levende rekombinant leporipox-virus var i stand til å infisere en ikke-mottakelig vert og uttrykke antigenet i fravær av produktiv replikasjon av det rekombinante virus i verten, noe som bevises ved det faktum at utbredelse av virusvektoren til noe annet kontaktdyr ikke finner sted. Mer overraskende er det at infisering av en ikke-leporivert med leporipox-viruset resulterte i høye ekspresjonsnivåer av antigenet som kodes for av det eksogene DNA selv om produktiv replikasjon av viruset i verten ikke ble observert. Vekst av virusvektoren in vitro finner sted i noen pattedyr-cellelinjer. Videre vil leporipox-viruset være ikke-patogent i ikke-lepori-artene, på grunn av fravær av produktiv replikasjon av leporipox-virusvektoren i en slik ikke-mottakelig vert, noe som gjør disse virusvektorer enda mer egnet for vaksinasjon.
Vaksinering med et rekombinant myxoma virus omfattende eksogent DNA er beskrevet i FR-A-2736358. Det rekombinante myxoma virus ble anvendt til vaksinering av kaniner mot myxomatose og infeksiøse sykdommer forårsaket av andre kaninpatogener. FR-A-2736358 foreslår ikke noe sted anvendelse av et levende rekombinant myxoma virus som virusvektor for bevirking av en antigen eller immunogen respons i ikke-mottakelige arter, mer spesielt ikke-lepori-arter.
Følgelig angår foreliggende oppfinnelse anvendelse av et levende, rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA, som er operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement, og som er innlemmet i en ikke-essensiell region av virusgenomet, ved fremstilling av en vektorvaksine for behandling og/eller forebygging av infeksiøse sykdommer i ikke-lepori-arter. Fortrinnsvis anvendes et levende, rekombinant myxoma virus omfattende eksogent DNA, som er operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement, og som er innlemmet i en ikke-essensiell region i virusgenomet, ved fremstilling av en vektorvaksine for behandling og/eller forebygging av infeksiøse sykdommer i ikke-lepori-arter. Mer spesifikt angår oppfinnelsen anvendelse av det levende, rekombinante leporipox-virus ved fremstilling av en vektorvaksine for behandling og/eller forebygging av infeksiøse sykdommer hos fugle-, katte-, hunde-, grise-, saue-, storfe-, heste- og menneske-artene. Det levende rekombinante leporipox-virus anvendes fortrinnsvis ifølge oppfinnelsen til fremstilling av en vektorvaksine for behandling av infeksiøse sykdommer i hunde- og kattearter.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre et levende rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement og innlemmet i en ikke-essensiell region av virusgenomet, hvilket eksogent DNA koder for minst ett antigen av et ikke-lepori-patogen. Dette patogen gir en infeksiøs sykdom i non-leporidae. Mer spesifikt koder det eksogene DNA fortrinnsvis for minst et antigen av et patogen som forårsaker en infeksiøs sykdom i menneske-, storfe-, fugle-, katte- hunde-, grise-, heste- eller fuglearter. Det eksogene DNA koder fortrinnsvis for et antigen av et katte- eller hundepatogen. Patogenet kan være av virus-, bakterie- eller parasittopprinnelse, avhengig av sykdommen individet må vaksineres mot. Hvis patogenet har et RNA-genom, kan det aktuelle antigen kodes for av cDNA svarende til genet. Det eksogene DNA kan kode for to eller flere antigener, som kan stamme fra det samme patogen eller fra forskjellige patogener.
Egnet eksogent DNA for anvendelse i et rekombinant leporipox-virus koder fortrinnsvis for virus-glykoproteiner, virus-kappeproteiner, virus-matriksproteiner, bakterie-ytremembran-proteiner, bakterie-enterotoksiner, bakterie-fimbrier eller parasittproteiner. Det eksogene DNA koder mer spesifikt for katte-leukemivirus-(FeLV)-kappeproteinet (Stewart et al. (1986) J. Virol. 58 s. 825-834) eller -matriksproteinet (Donahue et al., 1988, J. Virol. 62, s. 722-731), ytre-membran-protein hos katte- eller saue-chlamydia (GenBank Deponeringsnr. henholdsvis CPFPNMOMP og CHTMOMPX), katte-panleukopenivirus- (FPV)-VP2-protein (J. Carlson et al., 1985, J. Virol. 55, s. 574-582), katte-calicivirus-kapsidprotein (M.J. Carter et al., 1992, J. Arch. Virol. 122, s. 223-235), katte-immunsviktvirus- (FIV)-Gag-, -Pol-, -Rev-, -Tat- eller -Vif-protein (R.l. Talbot et al. 1989, Proe. Nati. Acad Sei. USA 86, s. 5743-5747; T.R. Philips et al. 1990, J. Virol. 64, s. 4605-4613; K.M. Lockridge et al. 1999, J. Virol. 261, s. 25-30), infeksiøst katte-peritonittvirus-(FlPV)-membran-, -nukleokapsid- eller-piggprotein (R.J. de Groot et al. 1987, J. Gen. Virol. 68, s. 2639-2646; H. Vennema et al. 1991, Virology, 181, s. 327-335), hunde-valpesyrevirus-Env-, -HA-, -fusjons- eller-nukleokapsidprotein (M. Sidhu et al. 1993, Virology 193, s. 66-72; U. Gassen et al. 2000, J. Virol. 74, s. 10737-10744), hunde-parvovirus-VP2-protein (P. Reed et al., 1988, J. Virol. 62, s. 266-276), rabiesvirus-glykoprotein G (T.J. Wiktor et al. 1984, Proe. Nati. Acad Sei. USA 81, s. 7194-7198), hunde-coronavirus-piggprotein (B. Horsburgh et al. 2000, J. Gen. Virol. 73, s. 2849-2862). I tillegg til gener som koder for immunogene proteiner fra ikke-lepori-patogener, kan det eksogene DNA også omfatte gener som koder for cytokiner så som for eksempel INFy (GenBank Deponeringsnr. D30619), IL-1 (5 (GenBank Deponeringsnr. M92060), IL-2/15 (GenBank Deponeringsnr. AF054601), IL-4, II-5 (GenBank Deponeringsnr. AF025436), IL-6, 11-12 (GenBank Deponeringsnr. U83184 og U83185), IL-16 (GenBank Deponeringsnr. AF003701) eller IL-18 (GenBank Deponeringsnr. AB046211), eller kjemotaktiske cytokiner så som a-kjemokinene IL-8 (GenBank Deponeringsnr. XM003501), GROa, GRO(5, NAP-2, PF-4, IP10, CTAP-III, (5-TG og p-kjemokinene MCP-1 (GenBank Deponeringsnr. NM002982), MIP-1a, MIP-lp, RANTES (GenBank Deponeringsnr. XM012656), MCP-2 (GenBank Deponeringsnr. AJ251190), MCP-3 (GenBank Deponeringsnr. NM 006273), MCP-4 (GenBank Deponeringsnr. AJ251191). Genene som koder for egnede cytokiner, stammer fortrinnsvis fra den samme art som vaksinen vil bli administrert til.
Det eksogene DNA er operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement, som vil kontrollere og regulere ekspresjonen av det eksogene DNA. Ved en foretrukket utførelsesform kontrolleres hvert gen som finnes i det eksogene DNA av et separat og særskilt ekspresjonskontrollelement. Ekspresjonskontroll-elementer er kjent på området og innbefatter promotere. Egnede promotere for ekspresjon av det eksogene DNA er virus- eller syntetiske promotere, som er i stand til å modulere ekspresjon i cytoplasma. Promotere som er anvendelige ved den foreliggende oppfinnelse, er poxvirus-promotere, fortrinnsvis en vaccinia- promoter (se DE-A-19627193; Mackett et al., "DNA Cloning Volume III", red. D.M. Glover, 1985, IRL Press Ltd.). Foretrukne promotere er syntetiske promotere, mer foretrukket syntetiske tidlig- eller tidlig/sen-promotere. Syntetiske vacciniavirus-tidlig/sen-promotere er beskrevet i Chakrabati et al., BioTechniques 23, vol. 6, s. 1094-1097, 1997. Promoterne kan syntetiseres ved anvendelse av standard teknikker på området, så som for eksempel beskrevet i Chakrabati et al., 1997, som ovenfor.
Egnede leporipox-virus som kan anvendes ifølge oppfinnelse, innbefatter, men er ikke begrenset til, myxoma virus eller Shope-fibromvirus. Egnede myxoma virus-stammer innbefatter Lausanne-stammen (fra ATCC), SG33 (M.D. Mainil et al. 2000, J. Comp. Pathol. 122, s. 115-122). Borghi og Boerlage (Fenner & Fantini, "Biological control of Vertebrate Pests", CABI publishing 1999, ISBN
0 85199 323 0 og referanser i denne). Egnede Shope-fibromvirusstammer innbefatter oprinnelig A-stamme (ATCC kat. nr. VR-112) og Kasza-stamme (ATCC kat. nr. VR-364). Det levende rekombinante leporipox-virus ifølge oppfinnelsen stammer fortrinnsvis fra et myxoma virus. På grunn av sin vertsbegrensning til leporiarter er leporipox-viruset ikke virulent i en ikke-lepori-vert. Det er imidlertid foretrukket å anvende et svekket leporipox-virus for frembringelse av de levende rekombinante virus ifølge oppfinnelsen. For oppfinnelsens formål er et svekket leporipox-virus definert som et leporipox-virus som er i stand til produktiv replikasjon i sin mål-leporivert uten at det forårsakes sykdom. Svekking av leporipox-virusstammer kan utføres ved serieoverføring ("serial passage") av stammen eller ved utelukkelse av ett eller flere virulente gener som ikke er essensielle for virusreplikasjon. Den komplette DNA-sekvens i leporipox-virusgenomet, dens genomiske organisering og lokaliseringen av alle åpne leserammer (ORF'er) er presentert i Cameron et al., Virology 164, s. 298-318
(1999). Den komplette DNA-sekvens i Shope-fibromvirusgenomet, dens genomiske organisering og lokaliseringen av alle åpne leserammer (ORF'er) er presentert i Willer et al., Virology 264, s. 319-343 (1999).
Det eksogene DNA innsettes fortrinnsvis i en ikke-essensiell genregion i leporipox-virus-genomet. Mer foretrukket innsettes det eksogene DNA i en ikke-essensiell genregion som er involvert i leporipox-virusets virulens. Egnede ikke-essensielle genregioner i myxoma virus-genomet eller Shope-fibromvirusgenomet er TK-genet som koder for thymidinkinase, M11L ORF, SERP-1, -2 og -3-ORF'ene og MGF ORF (Cameron et al., 1999, som ovenfor; Willer et al., 1999 som ovenfor). Ved en foretrukket utførelsesform utelukkes ett eller flere av de ikke-essensielle virusgener, fulgt av innsetting av det eksogene DNA og promoter. Delesjon av minst en del av MGF ORF er spesielt foretrukket siden denne ORF koder for en virulens faktor og er ikke essensiell for vekst in vitro eller in vivo (Graham et al., Virology 191, s. 112-124, 1992). Delesjon av MGF ORF resulterer i redusert virulens av leporipox-viruset.
Det levende rekombinante leporipox-virus ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles under anvendelse av in vivo-rekombinasjonsteknikken som innbefatter innsetting av eksogent DNA i leporipox-virus-genomet ved setespesifikk rekombinasjon av eksogent DNA. Dette kan utføres ved anvendelse av en metode i likhet med metodene beskrevet for fremstilling av rekombinant vaccinia-virus og rekombinant fugle-poxvirus (se USP 4 603 112; USP 5 093 258; P.X. Guo; J. Virol. 63: 4189-4198 (1990); Mackett et al., " Construction And Characterization Of Vaccinia Virus Recombinants Expressing Exogenous Genes" i "DNA Cloning Volume III" red. D.M. Glover, 1985, IRL Press Ltd.). Vanligvis kan det levende, rekombinante leporipox-virus ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles ved anvendelse av setespesifikk rekombinasjon mellom et parental-leporipox-genom og en DNA-vektor som bærer det eksogene DNA under kontroll av minst ett ekspresjonskontrollelement. Egnede DNA-vektorer for anvendelse ved setespesifikk rekombinasjon kan stamme fra hvilket som helst plasmid som omfatter et multippel-kloningssete. DNA-vektoren omfatter det eksogene DNA knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement og som befinner seg mellom virus-DNA-sekvenser som er homologe til en region av leporipox-genomet som det eksogene DNA skal innlemmes i. Virus-DNA-sekvensene som flankerer det eksogene DNA, er fortrinnsvis valgt fra en region som er ikke-essensiell for replikasjon av leporipox-viruset. DNA-vektoren for rekombinasjon med leporipox-genomet kan i tillegg omfatte et gen som koder for en seleksjonsmarkør under kontroll av en poxvirus-promoter. Det ytterligere gen og promoter befinner seg også mellom virus-DNA-sekvensene som stammer fra leporipox-genomet. DNA-vektoren transfekteres inn i vertsceller infisert med et parental-leporipox-virus. Egnede vertsceller er eukaryote celler som er tillatelige ("permissive") for leporipox-viruset og som kan transfekteres med DNA-vektoren. Eksempler på vertsceller er kanin-nyreceller LLC-RK1 og RK13, kaninlungeceller R9ab, kaninhudceller SF 1 Ep, DRS og RAB-9, kanin-korneaceller SIRC, kanin-karsinomceller Oc4T/cc, kaninhud/karsinom-celler CTPS, Vero-celler, alle tilgjengelige fra ATCC.
Parentalt leporipox-virus egnet for frembringelse av de levende, rekombinante leporipox-virus ifølge foreliggende oppfinnelse er myxoma virus-stammer så som Lausanne-stammen (fra ATCC), SG33 (M.D. Mainil et al, 2000, J. Comp. Pathol. 122, s. 115-122), Borghi og Boerlage (Fenner & Fantini, "Biological control of Vertebrate Pests", CABI publishing 1999, ISBN
0 85199 323 0 og referanser deri), og Shope Fibroma Virus-stammer innbefattende opprinnelig A-stamme (ATCC kat. nr. VR-112) og Kasza-stamme (ATCC kat. nr. VR-364). Myxoma virus-stammer anvendes fortrinnsvis til fremstilling av det levende rekombinante leporivirus ifølge oppfinnelsen. Det parentale leporipox-virus er fortrinnsvis et svekket virus, dvs. et leporipox-virus som er i stand til produktiv replikasjon i sin mål-leporivert uten at det forårsakes sykdom. Svekking av Leporipox-virusstammer kan utføres ved serieoverføring "serial passage" av stammen eller ved delesjon av ett eller flere virulente gener som ikke er essensielle for virusreplikasjon (for fullstendig genomsekvens og lokalisering av gener, se Cameron et al. 1999, som ovenfor, og Willer et al., 1999, som ovenfor).
Viruset får replikere i vertscellen under hvilken rekombinasjon finner sted mellom leporipox-DNA-sekvensene på DNA-vektoren og det tilsvarende DNA på det parentale leporipox-genom. Rekombinasjonen resulterer i innsetting av det eksogene DNA knyttet til ekspresjonskontrollelementet (-elementene) i leporipox-genomet. De rekombinante leporipox-virus velges og renses under anvendelse av standard-seleksjons- eller -screeningmetoder som er velkjente på området innbefattende deteksjon av det integrerte eksogene DNA ved hybridisering med prober som er homologe til det eksogene DNA, deteksjon av ekspresjon av seleksjonsmarkøren ko-integrert med det eksogene DNA, og deteksjon av fravær av ekspresjonsproduktet av det utelukkede leporipox-gen i hvilket det eksogene DNA er blitt innlemmet. Innsetting av det eksogene DNA i det rekombinante leporipox-virus-genom kan bekreftes ved polymerasekjedereaksjonsanalyse.
Den rekombinante leporipox-virus-vektor ifølge oppfinnelsen er spesielt egnet for anvendelse som immuniseringsmiddel i non-leporidae på grunn av at det kan nås ekspresjonsnivåer for antigenet in vivo som er tilstrekkelige for immunisering av verten. På grunn av sitt begrensede vertsområde blir viruset svekket i en ikke-lepori-vert, og følgelig er det ingen risiko for sykdom forårsaket av leporipox-viruset. Vertsbegrensningen vil videre hindre leporipox-virusene ifølge oppfinnelse i å spres blant verter som ikke er mål for vaksinasjon. Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer følgelig en vaksine omfattende en farmasøytisk akseptabel bærer og et levende rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement og innlemmet i en ikke-essensiell region av virusgenomet, idet det eksogene DNA koder for minst ett antigen av et patogen som frembringer en infeksiøs sykdom i non-leporidae. Vaksinen ifølge oppfinnelse omfatter fortrinnsvis en farmasøytisk akseptabel bærer og et levende rekombinant myxoma virus ifølge foreliggende oppfinnelse som uttrykker minst et immunogent protein av et ikke-lepori-patogen. Et rekombinant leporipox-virus ifølge oppfinnelsen som uttrykker to eller flere immunogene proteiner, er spesifikt egnet for fremstilling av en multivalent vaksine.
Vaksinepreparater ifølge oppfinnelsen kan fremstilles ifølge standardmetoder. Det rekombinante leporipox-virus kan dyrkes på en cellekultur som viruset tillater, så som kanin-nyreceller LLC-RK1 og RK13, kanin-lungeceller R9ab, kanin-hudceller SF 1 Ep, DRS og RAP-9, kanin-korneaceller SIRC, kanin-karsinomceller Oc4T/cc, kanin-hud/karsinomceller CTPS, Vero-celler, som alle er tilgjengelige fra ATCC. Virusene som dyrkes på denne måte, kan høstes ved oppsamling av vevscellekulturfluidene og/eller -cellene. Under høsting kan utbyttet av virusene eventuelt understøttes ved hjelp av teknikker som forbedrer frigjøringen av de infeksiøse partikler fra vekstsubstratet, f.eks. sonikering og frysetining. Den levende vaksine kan fremstilles i form av en suspensjon, eller den kan lyofiliseres.
Farmasøytisk akseptable bærere som er egnet for anvendelse i en vaksine ifølge oppfinnelsen, er sterilt vann, saltoppløsning, vandige buffere så som PBS og liknende. I tillegg kan vaksinen ifølge oppfinnelsen omfatte andre additiver så som adjuvanser, stabilisatorer, antioksidanter og andre.
Egnede stabilisatorer er for eksempel karbohydrater innbefattende sorbitol, mannitol, stivelse, sakkarose, dekstran og glukose, proteiner og nedbrytningsprodukter derav innbefattende, men ikke begrenset til, albumin og kasein, proteinholdige midler så som bovint serum eller skummet melk, samt buffere innbefattende, men ikke begrenset til, alkalimetallfosfater. I lyofiliserte vaksinepreparater er det foretrukket å tilsette én eller flere stabilisatorer.
Egnede adjuvanser innbefatter, men er ikke begrenset til, aluminiumhydroksid, -fosfat eller-oksid, amfigen, tokofenoler, monofosfenyl-lipid A, muramyldipeptid, oljeemulsjoner, glukaner, karbomerer, blokk-kopolymerer, cytokiner og saponiner så som Quil A. Mengden av tilsatt adjuvans avhenger av beskaffenheten av selve adjuvansen. Cytokiner så som INFy, IL-12, IL18 er meget godt egnet for anvendelse i en vaksine ifølge oppfinnelsen.
De rekombinante leporipox-virus ifølge oppfinnelsen administreres fortrinnsvis til ikke-lepori-arten via parenterale administreringsveier innbefattende, men ikke begrenset til, intramuskulært, intradermalt eller subkutant. Alternativt kan vaksinen administreres via ikke-parenterale administreringsveier så som oral, sprøyting, intra-okular, intranasal eller in ovo-administrering.
Vanligvis administreres det rekombinante leporipox-virus ifølge oppfinnelsen i en mengde som er effektiv til indusering av passende ekspresjonsnivåer av det eksogene protein. Dosen vil vanligvis avhenge av administreringsmåten, administreringstidspunktet samt alder, helse og kosten for dyret som skal vaksineres. Det rekombinante leporipox-virus kan administreres i en mengde på mellom 10<2>og 10<11>pfu pr. dose pr. individ, fortrinnsvis mellom 10<4>og 10<9>pfu pr. dose, og mer foretrukket fra 10<6>til 10<7>pfu pr. dose pr. individ (pfu er "plakkdannende enheter").
Vaksinene ifølge oppfinnelsen kan også gis samtidig eller sammen med andre levende eller inaktiverte vaksiner. Disse ytterligere vaksiner kan administreres ikke-parenteralt eller parenteralt. De ytterligere vaksiner anbefales fortrinnsvis for parenteral administrering.
Følgende forsøk er illustrerende for oppfinnelsen.
Det vises nå til figurene.
Fig. 1: skjematisk presentasjon av konstruksjon av intermediære plasmider pVLog PVel- RHD representerer cDNA fra hemoragisk kaninvirus. ab(5') og cd(3') representerer de myxoma virus-MGF-flankerende regioner. Promoter representerer henholdsvis syntetisk sen- eller tidlig/sen-promoter. "mcs" representerer nukleotidsekvens omfattende multiple kloningsseter for innføring av eksogent DNA. Fig. 2: de forskjellige rekombinante DNA-plasmider basert på pVLpVEi_ som er blitt konstruert. P representerer den syntetiske sen-(pVL)- eller tidlig/sen-(pVEi_)-promoter-region; ab(5') og cd(3') representerer de myxoma virus-MGF-flankerende regioner. RHDV Vp60 representerer genet som koder for RHDV VP60-protein. FeLV gp85 representerer katteleukemivirus-env-genet. FCV Vp60 representerer gen som koder for katte-calicivirus-kapsidprotein. FPL Vp2 representerer katte-panleukopenivirus-vp2-gen. CPV VP2 representerer hunde-parvovirus-vp2-gen. GFP representerer gen som koder for grønt fluorescerende protein. Alle plasmider omfatter Amprsom seleksjonsmarkør (ikke vist).
EKSEMPLER
Eksempel 1: Fremstilling av intermediære DNA-plasmider pVLog pVEi_
Utgangsplasmidet for metoden var det kommersielt tilgjengelige plasmid pCITE 2-b (Novagen inc.) inneholdende et cDNAfra hemoragisk kaninsykdoms-virus (G. Meyers et al. 1991, Virology 184, s. 664-676) innsatt i Sali- og Hincll-setene i vektoren. Dette plasmid omtales som pCITE/RHD.
Det første trinn var innføring av de MGF-flankerende sekvenser. PCR-primere myx a og myx b ble anvendt til amplifikasjon av den 5-flankerende sekvens.
En 2 ul prøve av vevskultur-dyrket MR24 (10<6>pfu pr. ml) ble anvendt som templat for PCR-reaksjonen, som ble utført under anvendelse av PCR-kuler (Pharmacia) ifølge fabrikantens instruksjoner. PCR-fragmentet ble klonet under anvendelse av standard-laboratoriemetoder som et Ncol/stump-fragment i pCITE/RHD. pCITE/RHD ble først fremstilt ved nedbryting med Kpnl, fulgt av buttende-dannelse med T4 DNA-polymerase, og deretter nedbryting med Ncol. Det resulterende plasmid ble kalt pCITE/RHDab.
En andre PCR-reaksjon på et identisk templatpreparat med anvendelse av primerne
(sekv id nr. 3) Xhol
myxd: 5' GC TCTAGATATATCGTGTACGTAGTTCCCAAAAC 3'
(sekv id nr. 4) Xbal
ble utført for fremstilling av den 3-flankerende sekvens. PCR-fragmentet ble klonet som et Xhol/Xbal-fragment i Xhol/Xbal-kuttet pCITE/RHDab. Det resulterende plasmid ble kalt pCITE/RHDabcd.
Syntetiske poxvirus-promotere ble så fremstilt ved hybridisring av følgende oligonukleotider:
Disse to komplementære oligonukleotider koples sammen under dannelse av kohesive ender som er kompatible med Kpnl- og Ncol-restriksjonsseter. Likeledes koples følgende to oligonukleotider også sammen under dannelse av et Kpnl/Ncol-kompatibelt fragment.
Vp5 og Vp6 utgjør sammen en tidlig/sen-promoter, mens Vp3 og Vp4 frembringer en sen-promoter (Chakrabarti et al. Biotechniques 23, s. 1094-1097, 1997). Ett eller annet av de koplede oligonukleotidpar ble så klonet i Kpnl/Ncol-kuttet pCITE/RHDabcd under dannelse av pVP/RHD (sen promoter) eller pEL/RHD (tidlig/sen-promoter). På grunn av at RHD-kapsidgenet ikke er i ramme med det første metionin i noen av de to konstruksjoner (pVP/RHD og pEL/RHD), var det nødvendig å re-klone RHD-kapsidgenet (Vp60) og fjerne den intervenerende sekvens for oppnåelse av ekspresjon. Plasmidene pVP/RHD og pEL/RHD ble kuttet med Ncol og EcoRI under fjerning av den Vp60-kodende sekvens og ikke-kodingssekvensen 5' i forhold til det initierende ATG. Vp60-genet ble så erstattet med et PCR-frembrakt fragment fremstilt under anvendelse av følgende oligonukleotider:
Templat for PCR-reaksjonen var pCITE/RHD. Det PCR-frembrakte fragment ble nedbrutt med Ncol og EcoRI og klonet i det fremstilte pVP/RHD og pEL/RHD. De resulterende plasmider ble betegnet pVP/Vp60 og pEL/Vp60. For å muliggjøre innføring av gener flankert av andre restriksjonsseter ble et multippel-kloningssete innført nedstrøms for det unike Ncol-sete i pVP/Vp60 og pEL/Vp60. Følgende oligonukleotider:
sammenkoples under oppnåelse av overhengende ender som er kompatible med Ncol- og Xhol-restriksjonsendonukleaseseter. Erstatning av Ncol/Xhol-fragmentet, som bærer hele den RHD-tilknyttede sekvens, med de koplede oligonukleotider resulterer i følgende to plasmider: pVLog pVEi_ (se fig. 1).
Plasmidene pVLog pVEi_ ble anvendt til konstruering av forskjellige rekombinante DNA-plasmider omfattende følgende gener: hemoragisk kanin-sykdom-kapsidprotein VP60 (Meyers et al. 1991, som ovenfor), grønt-fluorescerende protein (Clonetech Laboratories Inc, Palo Alto, California, USA), katteleukemi-kappeglykoprotein gp85 (Stewart et al., 1986, J, Virol. 58, s. 825-834), katteleukemi-matriks-(gag)-proteiner (Donahue et al., 1998, J. Virol. 62, s. 722-731), katte-calicivirus-kapsidprotein (GenBank Deponeringsnr. Z11536 og NC 001481), katte-panleukopenivirus-kapsidprotein VP2 (J. Carlson et al. 1985, J. Virol. 55, s. 574-582), hunde-parvovirus-kapsidprotein VP2 (P. Reed et al, 1988, J. Virol. 62, s. 266-276). I tabell 1 er de forskjellige DNA-plasmider som ble konstruert for fremstilling av de rekombinante myxoma virus ifølge oppfinnelsen, oppregnet. Hvert rekombinant plasmid ble konstruert på samme måte, ved at mål-genet enten ble kuttet fra et eksisterende plasmid eller amplifisert ved PCR slik at restriksjonsenzym-seter i endene av genet var kompatible med setene i mcs i pVLeller pVEL.
Fremstilling av DNA- plasmid pVLGFP
Et plasmid inneholdende GFP-gen ble anskaffet fra Clonetech Laboratories, Inc, Palo Alto, California, USA og nedbrutt med Ncol og EcoRI under frakutting av GFP-genet fra plasmidet. Genet ble innsatt i pVL, noe som resulterte i pVLGFP.
Fremstilling av DNA- plasmid pVELFeLVenv
Kappe-genet ble amplifisert ved PCR fra pFGA5 (Stewart et al 1986 som ovenfor) under anvendelse av oligonukleotidene:
PCR-fragmentet ble kuttet med Clal og EcoRI og innsatt i pVEi_, noe som resulterte i pVELFeLVenv
Fremstilling av DNA- plasmid pVEiFPL
FPL-kapsidgenet ble oppnådd ved PCR-amplifikasjon fra replikativ-form (rf)-DNA ved hjelp av PCR under anvendelse av følgende primere:
rf-DNA ble fremstilt ut fra kattenyreceller (CRFK) infisert med en vaksinestamme av FPL ved standardmetoder (P. Reed et al. 1988, J. Virol. 62, s. 266-276).
Fremstilling av DNA- plasmid pVEi_ FCV
Kattenyreceller (CRFK) ble infisert med FCV-stamme F9 i en multiplisitet på 0,1 pfu pr. celle. Etter trettiseks timer ble cellene høstet og total-RNA ble fremstilt under anvendelse av Guanidin-isotiocyanat (TRIzol-reagens GibCoBRL). Førstetråd-cDNA-syntese ble utført under anvendelse av oligo-dT primere (SuperScript Choice GibCo BRL). Den komplette nukleotidsekvens og genom-organiseringen av F9-stammen av FCV er rapportert (GenBank Deponeringsnr. M86379). Oligonukleotider ble syntetisert for priming av annentråd-DNA-syntese og for påfølgende PCR-amplifikasjon av kapsidgenet. Følgende oligonukleotider ble anvendt til fremstilling av Vp60-kapsidproteingenet i FCV (F9-stamme):
Vp60-kapsidgenet ble innsatt i mcs i pVLog pVEi_, noe som resulterte i henholdsvis pVLFCV og pVELFCV.
Fremstilling av DNA- plasmid pVEi_ CPV
Genet som koder for kapsidprotein VP2, ble PCR-amplifisert fra CPV-vaksinestamme fra Nobivac Parvo®, kuttet med Ncol og EcoRI og innsatt i pVEL.
Eksempel 2: Fremstilling av rekombinant myxoma virus
En ikke-patogen stamme av myxoma virus (betegnet MR24), som var blitt svekket ved en langvarig runde i kanin-nyreceller (RK13), ble selektert. Dette svekkede myxoma virus (MR24) ble vist å være ikke-patogent (0% dødelighet) i kaniner ved administrering til kaniner på subkutan, intradermal eller intramuskulær måte. MR24 er en kandidat-myxomatosevaksinestamme for anvendelse i kaniner. Alle virustitreringer og -amplifikasjoner ble utført i kanin-nyre-(RK13)-celler.
Rekombinante myxoma virus fremstilles ifølge metodene beskrevet for konstruering av rekombinante vacciniavirus (Mackett et al. 1985, som ovenfor). For denne fremstilling ble kanin-nyreceller (RK13) infisert med myxoma virus MR24 i en multiplisitet på 0,1 pfu pr. celle. Etter to timer ble cellene så transfektert med plasmid-DNA under anvendelse av lipofectamin-transfeksjonsreagenset (GibCo BRL). Seleksjon med henblikk på rekombinante virus var basert på begrensende fortynning og identifikasjon ved immunfluorescens.
Syttito timer etter transfektering ble de infiserte/transfekterte cellekulturer frysetint tre ganger for frigjøring av virus. Denne primære blanding av villtype- og rekombinant virus ble fortynnet 50 ganger med vevsdyrkningsmedium, og deretter ble 10 mikroliter av virusblandingen anvendt til infisering av hver brønn i en 96-brønns vevsdyrkningsplate tidligere tilsådd med RK13-celler. 96-brønns-platen ble så inkubert i 72 timer for å muliggjøre at infisering og formering av viruset kunne foregå. Etter dette tidsrom ble platen behandlet med tre sykluser med frysing og tining, mens den individuelle status for hver brønn i platen ble opprettholdt. Dette ble førsterunde-"master"-platen. Deretter ble 5 mikroliter virusholdig medium fra hver brønn utplatet på en duplikat-96-brønnsplate hvor det var blitt sådd RK13-celler. Etter 48 timer ble duplikatplaten fiksert med iskald metanol og platen screenet med henblikk på ekspresjon av det rekombinante protein ved immunfluorescens.
Cellene som var blitt infisert og transfektert med pVELFeLVenV, ble for eksempel screenet med henblikk på produksjon av FeLV-kappeprotein som følger: monoklonalt museantistoff 3-17- (European Veterinary Laboratory, Woerden, Nederland)-ascitesvæske ble fortynnet 1000 ganger og deretter tilsatt i hver brønn i den fikserte 96-brønnsplate. Platen ble inkubert ved 37°C i én time. Platen ble så vasket 5 ganger med PBS og deretter inkubert med FITC-merket kanin-antimus-IgG (Sigma Chemical Co), og inkuberingen ble så fortsatt i ytterligere én time. Til slutt ble platen vasket 5 ganger med PBS og undersøkt under et fluorescens-mikroskop. Brønner inneholdende fluorescerende infeksjons-foci ble identifisert og notert. De tilsvarende brønner fra førsterunde-"master"-platen ble deretter fortynnet over flere RK-13-tilsådde 96-brønnsplater, som i sin tur ble annenrunde-"master"-plater. Prosessen med gradvis anriking ble fortsatt til rekombinante virus utgjorde 20-50% av den totale mengde virus. Ekspresjon av det rekombinante protein fra de andre rekombinante myxoma virus ble screenet på liknende måte.
Sluttrensing av rekombinantene ble oppnådd ved plukking av individuelle infeksjons-foci fra agar-overlagte kulturer.
Eksempel 3: myxo/RHD i kyllinger
For bestemmelse av om hvorvidt ikke-lepori-arter infisert med de rekombinante myxoma vimser ville fremkalle en antistoffrespons, ble kyllinger immunisert med myxo/RHD, subkutant eller intramuskulært. Fuglene fikk 10<5>pfu virus på dag 0 og dag 14 i immuniseringsprogrammet. Blodprøver ble tatt på dagene 0, 14 og 28 og analysert med henblikk på antistoffer mot RHDV, og resultatene er vist i tabell 2. Alle fuglene forble klinisk normale gjennom hele forsøket.
Eksempel 4: Myxo-FCV i katter
Det ble oppsatt et forsøk for påvisning av effektiviteten av et rekombinant myxoma/katte-caliciviruskapsid-virus (myxo/FCV) for indusering av en nøytraliserende antistoffrespons og beskyttelse av katter mot angrep av virulent katte-calicivirus. En gruppe på 4 katter (gruppe 1) ble immunisert subkutant med 5 x 10<6>fokusdannende enheter (ffu) av myxo/FCV. Immuniseringen ble gjentatt 3 uker etter den første immunisering. Fire uvaksinerte kontrolldyr (gruppe 2) ble oppbevart sammen med testdyrene. Fire uker etter den andre immunisering ble alle kattene intranasalt tilført 10<5,3>TCID50av en virulent stamme av katte-calicivirus. Det tilførte virus ble innført dråpevis, 0,5 ml i hvert nesebor.
Vattpinneprøver ble tatt ved begynnelsen av forsøket for å sikre at ingen av dyrene hadde tilstedeværende katte-calicivirus i munn/svelg. Liknende blodprøver ble tatt for å sikre at ingen av dyrene hadde anti-FCV-antistoffer før igangsetting av undersøkelsen. Vattpinneprøver ble tatt etter virustilføring for undersøkelse av utskillelse av virus.
Blodprøver tatt under forsøket ble anvendt i virusnøytraliseringsanalyser. Disse analyser betemmer nivåene av sirkulerende antistoffer i katten. Det er velkjent at de serumnøytraliserende antistoffer er til stede i rekonvalesensdyrene, og at før-eksisterende nøytraliserende antistoffer tilveiebrakt som resultat av vaksineringen hjelper til ved tilveiebringelse av beskyttelse mot sykdom (Hohdatsu et al. 1999 J. Vet. Med. Sei. 61, 299-301).
Tabell 4: Resultater av inokulering ( serumnø<y>tralisehngstiter) av katter med myxo/ FCV ( MS0013). Figurene viser den maksimale serumfortynning ved hvilken virusnøytralisering oppnås. Blodprøvene tatt før vaksinering ( før- blodtapping) viser ingen antistoffer mot FCV. Serum fortynnet 1- 4 ganger vil vise en ikke- spesifikk inhibering av virusvekst in vitro.
<*>Det anvendte kliniske bedømmelsesskjema er det som er angitt i den Europeiske Farmakopé for fremstilling av en katte-calicivirusvaksine (Tredje utgave juni 1996 ISBN 92-871-2991-6). Dette angir at vaksinen tilfredsstiller testen hvis det kliniske poengtall er betydelig lavere enn for kontrollene. I denne undersøkelse har den vaksinerte gruppe et klinisk middel-poengtall på 4,5 sammenliknet med 34 for kontrollene.
Ved sammenlikning av resultatene oppnådd etter vaksinering med myxo-FCV (tabell 4) med resultatene med konvensjonelle vaksiner (tabell 5) er det klart at etter den første vaksinering har dyrene i gruppe 1 en antistoffrespons som kan sammenliknes med dyr som fikk to doser av mange kommersielle vaksiner, noe som tydet på at disse katter ville bli beskyttet mot sykdom. Etter den andre vaksinering er antistofftiterne godt over dem som fås med kommersielle vaksinepreparater (Hohdatsu et al. 1999 J. Vet. Med. Sei. 61, 299-301, DeSilver et al. 1997, Proe. 1st Int. Symp. Calicivirus ESW 131-143).
Katte-herpesvirusvektorer som uttrykker FCV-antigener, bevirker også meget lave titere av serumnøytraliserende antistoffer (i området 2,5 og 3,0) før tilføring, ifølge rapportering av Yokoyama et al. (1998).
Referanser
T. Hohdatsu, K Sato, T Tajima & H Koyama, Neutralizing feature of a commercially available feline calicivirus (FCV) vaccine immune sera against FCV field isolates. J Vet Med Sei 1999; 61:299-301.
N Yokoyama, K Fujita, Damiani et al. Further development of a recombinant feline herpesvirus type 1 vector expressing feline calicivirus immunogenic antigen. J of Vet Med Sei 1998; 60:717-723.
LJ Reed & H Meunch. A simple method of estimating fifty per cent end points. Am J of Hygiene 1938; 27:493-497.
Eksempel 5: Nøytraliseringsforsøk med Myxo/FCV i griser og storfe.
Anvendbarheten av myxoma viruset som en eukaryot ekspresjonsvektor for induksjon av en beskyttende immunrespons hos ikke-naturlige verter, f.eks. storfe og griser, ble testet ved intradermal og intramuskulær injeksjonsmåte.
En myxoma virusvektor inneholdende katte-calicivirus-genfragmentet som koder for den fullt utviklede form av kapsidantigenet, ble anvendt både for kalver og griser. To grupper omfattende fire 12 uker gamle kalver og fire 6 uker gamle griser ble medtatt i denne undersøkelse.
Blodprøver (10 ml/dyr) ble tatt én uke før start av undersøkelsen for testing av om hvorvidt dyrene var seronegative med hensyn til katte-calicivirus.
Deretter ble alle dyrene injisert både intradermalt og intramuskulært med 1 ml PBS inneholdende 1 x 10<8>FFU av det rekombinante myxoma viruset pr. injeksjonsmåte pr. dyr. Dyrene ble oppbevart som én gruppe pr. art. Etter fire uker ble blodprøver (10 ml pr. dyr) tatt, og dyrene ble på nytt injisert intradermalt og intramuskulært med den samme dose av myxoma viruset, dvs. 1 ml av 1 x 10<8>FFU av det rekombinante myxoma viruset pr. injeksjonsmåte pr. dyr. To uker etter den siste injeksjon ble blodprøver (10 ml pr. dyr) tatt, og dyrene ble avlivet i henhold til retningslinjene for GMO-testing in vivo. Oppsamlede blodprøver ble testet med henblikk på tilstedeværelse av antistoffer rettet mot calicivirus ved hjelp av en virus-nøytraliseringsanalyse in vitro.
Metode for FCV- serumnøytraliseringsanalyse
Serumnøytralisering ble bedømt ved c.p.e. på CrFK-celler. Fem paralleller med to hundre TCID50av virus ble blandet med seriefortynninger (start med 1:4), av serum i et sluttvolum på 600 mikroliter. Virus/serum-blandinger ble så inkubert i 60 minutter ved 37°C i sterile 5 ml fortynningsrør. 100 mikroliter av testblandingene ble så tilsatt i 96-brønns vevsdyrkningsskåler tilsådd med CrFK-celler i 100 mikroliter vekstmedium. Inkuberingen ble fortsatt i 5 dager. TCID50-verdiene ble beregnet i henhold til metoden ifølge Reed & Meunch [1].
L.J. Reed og H. Meunch. 1938. A simple method of estimating fifty percent end points. Am. J. Hyg., 27:492-497.
Eksempel 6: Dyrking av myxoma virus-stammer i forskjellige celletyper in vitro.
Cellene ble infisert med rekombinante myxoma viruser som uttrykte grønt-fluorescerende protein oppbygd ut fra 2 forskjellige stammer av myxoma virus. Veksten ble analysert ved en økning i antallet fluorescerende celler over tid. Fluorescens ble observert når det rekombinante myxo/GFP-virus ble utplatet på forskjellige celletyper i kultur, som vist i tabell 8. Dette viste at viruset var i stand til å gå inn i og uttrykke GFP-genet i ikke-kanin-celler. Tabell 8 viser at vekst av viruset in vitro ble observert i noen celletyper, og at mønsteret var forskjellig for de to testede konstruksjoner.
Eksempel 7: ELISA med henblikk på responser overfor hunde-parvovirus-vaksinering
For vurdering av immunresponsene frembrakt ved vaksinering av hunder med et rekombinant myxoma virus som uttrykte hunde-parvovirus-kapsidprotein Vp2, ble det satt opp en ELISA. Responsene overfor vaksinering ble sammenliknet med dem som ble funnet hos konvensjonelt vaksinerte hunder.
Materialer og metoder:
Materialer:
TBS (50 mM Tris-bufret saltoppløsning)
50 mM Tris-bufret saltoppløsning, pH 7,5
6,35 g Tris-HCI
1,18 g Tris-base
8,77 g NaCI
800 ml dH20
pH justert til 7,5 og volum brakt opp til 1 liter med dH20.
TBS-Tween
TBS ble tillaget som ovenfor. Tilsett så 0,5 ml TWEEN 20. Bland godt.
Metoder
1. Monoklonalt anti-CPV-antistoff ble oppslemmet på nytt i 0,1 M Na2C03-buffer pH 9,6 i en konsentrasjon på 5-10 mikrogram pr. ml. En ELISA-plate ble inkubert over natten ved 40^ med 100 mikroliter pr. brønn av antistoffsuspensjonen. 2. Etter avristing av overskudd av antigenbeleggingsoppløsning ble gjenværende bindingsseter blokkert i hver brønn ved inkubering med 200 mikroliter 1% BSA og 2% tørrmelkpulver i TBS ved romtemperatur i én time. 3. Etter avristing av blokkeringsoppløsningen, ble den erstattet med 100 mikroliter vevskultursupernatant inneholdende hunde-parvovirus i en titer på omtrent 10<7>p.f.u. pr. ml. Inkubering ble utført ved romtemperatur i 1-2 timer.
4. Platene ble vasket fire ganger med TBS - Tween.
5. Seriefortynninger av serumet som skulle testes, ble laget i TBS. 100 mikroliter av disse ble tilsatt i brønnene i ELISA-platen, og inkubering ble fortsatt i 1-2 timer ved romtemperatur.
6. Deretter ble platen vasket fire ganger i TBS-Tween.
7. Et antihund-alkalisk fosfatase-konjugert andre-antistoff, (f.eks. ICN Biomedical Research Products kat. nr. 675071) ble tilsatt i en fortynning angitt av fabrikanten. Inkubering ble utført ved romtemperatur i 1-2 timer.
8. Platen ble vasket fire ganger i TBS-Tween
9. ELISA ble fremkalt ved tilsetting av substrat PNPP (p-Nitrofenylfosfat, f.eks. SIGMA Chemical Company kat. nr. N2770).
10. Absorbans ble avlest i et spektrofotometer ved 420 nm.
Resultatene er vist i tabell 9.
ELISA-resultatene viser tydelig at en fortynning på 1:40 av seraene fra konvensjonelt vaksinerte hunder resulterer i et bakgrunns-absorbansnivå, dvs. det som sees med ikke-vaksinerte hundesera, skjønt det med myxoma-CPV (Vp2)-vaksinerte hundesera trenges en fortynning på 1:1280 for oppnåelse av samme bakgrunnsnivå.
Claims (11)
1. Anvendelse av et levende, rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA, som er operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement og som er innlemmet i en ikke-essensiell region av virusgenomet, ved fremstilling av en vektorvaksine for behandling og/eller forebygging av infeksiøse sykdommer i ikke-lepori-arter.
2. Anvendelse av et virus ifølge krav 1 ved fremstilling av en vektorvaksine for behandling og/eller forebygging av infeksiøse sykdommer hos katter eller hunder.
3. Vaksine,
karakterisert vedat den omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer og et levende rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement og innlemmet i en ikke-essensiell region i virusgenomet, hvilket eksogent DNA koder for minst ett antigen av et patogen som frembringer en infeksiøs sykdom i non-leporidae.
4. Levende, rekombinant leporipox-virus omfattende eksogent DNA operabelt knyttet til minst ett ekspresjonskontrollelement og innlemmet i en ikke-essensiell region av virusgenomet,
karakterisert vedat det eksogene DNA koder for minst ett antigen av et ikke-lepori-patogen.
5. Virus ifølge krav 4,
karakterisert vedat leporipox-viruset er et myxoma virus.
6. Virus ifølge krav 4 eller 5,
karakterisert vedat det eksogene DNA koder for minst et antigen av et katte- eller hundepatogen.
7. Virus ifølge krav 4 eller 5,
karakterisert vedat det eksogene DNA koder for minst et antigen av et katte- eller hundevirus.
8. Virus ifølge krav 4-7,
karakterisert vedat det eksogene DNA koder for katteleukemivirus-(FeLV)-kappeproteinet, katte-calicivirus-(FCV)-kapsidproteinet, katte-panleukopenivirus-(FPL)-VP2-proteinet, og/eller hunde-parvovirus (CPV) VP2.
9. Virus ifølge krav 4-8,
karakterisert vedat det eksogene DNA og ekspresjonskontroll-elementet er innsatt i MGF ORF i virusgenomet.
10. Virus ifølge krav 4-9,
karakterisert vedat ekspresjonskontrollelementet operabelt knyttet til den eksogene er en syntetisk poxviruspromoter.
11. Virus ifølge krav 10,
karakterisert vedat promoteren er en tidlig/sen-promoter.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP01200869 | 2001-03-08 | ||
| PCT/EP2002/002858 WO2002072852A2 (en) | 2001-03-08 | 2002-03-07 | Leporipox-based vector vaccines |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20033912D0 NO20033912D0 (no) | 2003-09-04 |
| NO20033912L NO20033912L (no) | 2003-10-22 |
| NO331305B1 true NO331305B1 (no) | 2011-11-21 |
Family
ID=8179978
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20033912A NO331305B1 (no) | 2001-03-08 | 2003-09-04 | Levende rekombinant leporipox-virus, dets anvendelse, samt vaksine omfattende viruset |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6942864B2 (no) |
| EP (1) | EP1370668B1 (no) |
| JP (1) | JP4037273B2 (no) |
| CN (1) | CN1258596C (no) |
| AT (1) | ATE318321T1 (no) |
| AU (1) | AU2002304856B2 (no) |
| BR (1) | BR0207761A (no) |
| CA (1) | CA2439872C (no) |
| DE (1) | DE60209345T2 (no) |
| DK (1) | DK1370668T3 (no) |
| ES (1) | ES2258628T3 (no) |
| MX (1) | MXPA03007862A (no) |
| NO (1) | NO331305B1 (no) |
| NZ (1) | NZ527940A (no) |
| PT (1) | PT1370668E (no) |
| WO (1) | WO2002072852A2 (no) |
| ZA (1) | ZA200306607B (no) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2457584B1 (en) * | 2006-06-01 | 2017-08-09 | Robarts Research Institute | Myxoma virus mutants for cancer treatment |
| KR100831537B1 (ko) * | 2007-01-19 | 2008-05-22 | 리엔 창 일렉트로닉 엔터프라이즈 컴퍼니 리미티드 | 하프 브릿지 드라이버 |
| KR100831536B1 (ko) * | 2007-01-19 | 2008-05-22 | 리엔 창 일렉트로닉 엔터프라이즈 컴퍼니 리미티드 | 풀 브릿지 드라이버 |
| FR2925067B1 (fr) * | 2007-12-18 | 2010-01-15 | Agronomique Inst Nat Rech | Vecteurs vaccinaux derives de leporipoxvirus |
| WO2021202971A1 (en) * | 2020-04-02 | 2021-10-07 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Covid-19 vaccine based on the myxoma virus platform |
| CN111904981A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-11-10 | 威世药业（如皋）有限公司 | 一种痘苗病毒致炎兔皮生产方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5833975A (en) * | 1989-03-08 | 1998-11-10 | Virogenetics Corporation | Canarypox virus expressing cytokine and/or tumor-associated antigen DNA sequence |
| US5174993A (en) * | 1981-12-24 | 1992-12-29 | Health Research Inc. | Recombinant avipox virus and immunological use thereof |
| US5505941A (en) * | 1981-12-24 | 1996-04-09 | Health Research, Inc. | Recombinant avipox virus and method to induce an immune response |
| DE10399032I1 (de) * | 1987-08-28 | 2004-01-29 | Health Research Inc | Rekombinante Viren. |
| AU2347692A (en) | 1991-07-09 | 1993-02-11 | Cornell Research Foundation Inc. | Recombinant viral vaccine |
| TW377373B (en) | 1993-09-22 | 1999-12-21 | Wyeth Corp | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline infectious peritonitis virus disease |
| US6001349A (en) * | 1995-02-22 | 1999-12-14 | Therion Biologics Corporation | Generation of human cytotoxic T-cells specific for carcinoma self-associated antigens and uses thereof |
| FR2736358B1 (fr) * | 1995-07-05 | 1997-09-26 | Agronomique Inst Nat Rech | Virus myxomateux recombinant |
| WO1998012311A2 (en) * | 1996-09-11 | 1998-03-26 | The General Hospital Corporation | Use of a non-mammalian dna virus to express an exogenous gene in a mammalian cell |
| US6127172A (en) | 1998-05-29 | 2000-10-03 | University Of Florida | Materials and methods for delivery and expression of heterologous DNA in vertebrate cells |
| ES2153284B1 (es) | 1998-06-10 | 2001-09-01 | Fundacion Para El Estudio Y De | Nuevo virus recombinante de mixoma atenuado y su uso en la preparacion de vacunas mixtas contra la mixomatosis y la enfermedad hemorragica de los conejos. |
| US6294176B1 (en) * | 1998-07-10 | 2001-09-25 | Schering-Plough Veterinary Corp. | Recombinant raccoonpox virus and uses thereof as a vaccine in mammalian and avian species |
-
2002
- 2002-03-07 AU AU2002304856A patent/AU2002304856B2/en not_active Ceased
- 2002-03-07 NZ NZ527940A patent/NZ527940A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-03-07 EP EP02732485A patent/EP1370668B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-07 WO PCT/EP2002/002858 patent/WO2002072852A2/en active IP Right Grant
- 2002-03-07 MX MXPA03007862A patent/MXPA03007862A/es active IP Right Grant
- 2002-03-07 PT PT02732485T patent/PT1370668E/pt unknown
- 2002-03-07 ES ES02732485T patent/ES2258628T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-07 AT AT02732485T patent/ATE318321T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-03-07 CN CN02806102.0A patent/CN1258596C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-03-07 BR BR0207761-2A patent/BR0207761A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-03-07 DK DK02732485T patent/DK1370668T3/da active
- 2002-03-07 CA CA002439872A patent/CA2439872C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-03-07 US US10/471,300 patent/US6942864B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-03-07 DE DE60209345T patent/DE60209345T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-07 JP JP2002571903A patent/JP4037273B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-08-25 ZA ZA2003/06607A patent/ZA200306607B/en unknown
- 2003-09-04 NO NO20033912A patent/NO331305B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20040137599A1 (en) | 2004-07-15 |
| CA2439872A1 (en) | 2002-09-19 |
| CN1527883A (zh) | 2004-09-08 |
| DE60209345T2 (de) | 2006-08-03 |
| MXPA03007862A (es) | 2004-05-24 |
| PT1370668E (pt) | 2006-06-30 |
| NO20033912D0 (no) | 2003-09-04 |
| JP4037273B2 (ja) | 2008-01-23 |
| NZ527940A (en) | 2005-01-28 |
| EP1370668A2 (en) | 2003-12-17 |
| BR0207761A (pt) | 2006-01-31 |
| ZA200306607B (en) | 2005-02-23 |
| DK1370668T3 (da) | 2006-06-06 |
| US6942864B2 (en) | 2005-09-13 |
| WO2002072852A3 (en) | 2002-12-27 |
| CN1258596C (zh) | 2006-06-07 |
| EP1370668B1 (en) | 2006-02-22 |
| DE60209345D1 (de) | 2006-04-27 |
| CA2439872C (en) | 2009-12-15 |
| ATE318321T1 (de) | 2006-03-15 |
| JP2004528833A (ja) | 2004-09-24 |
| WO2002072852A2 (en) | 2002-09-19 |
| ES2258628T3 (es) | 2006-09-01 |
| AU2002304856B2 (en) | 2006-08-24 |
| NO20033912L (no) | 2003-10-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10655146B2 (en) | Turkey herpesvirus vectored recombinant containing avian influenza genes | |
| JP5106398B2 (ja) | Ｐｃｖ−２ワクチン | |
| Hertig et al. | Field and vaccine strains of fowlpox virus carry integrated sequences from the avian retrovirus, reticuloendotheliosis virus | |
| RU2446823C2 (ru) | Рекомбинантная вакцина против вируса африканской катаральной лихорадки | |
| US20090253185A1 (en) | Avipox recombinants expressing foot and mouth disease virus genes | |
| US20200354410A1 (en) | Modified s1 subunit of the coronavirus spike protein | |
| US20220204568A1 (en) | Method for rapid preparation of epidemic infectious bronchitis vaccine | |
| Haygreen et al. | In ovo DNA immunisation followed by a recombinant fowlpox boost is fully protective to challenge with virulent IBDV | |
| US6241989B1 (en) | Recombinant multivalent viral vaccine | |
| NO331305B1 (no) | Levende rekombinant leporipox-virus, dets anvendelse, samt vaksine omfattende viruset | |
| JP2023506919A (ja) | 多価ｈｖｔベクターワクチン | |
| AU2002304856A1 (en) | Leporipox-based vector vaccines | |
| US7087234B1 (en) | Recombinant multivalent viral vaccine | |
| CN109234315A (zh) | 一种表达传染性法氏囊病毒vp2基因的重组火鸡疱疹病毒株 | |
| US11033616B2 (en) | Recombinant viral vector systems expressing exogenous feline paramyxovirus genes and vaccines made therefrom | |
| Skinner et al. | Advances in fowlpox vaccination. | |
| TWI361695B (en) | Pcv-2 vaccine | |
| Tian et al. | Expression and immunological analysis of capsid protein precursor of swine vesicular disease virus HK/70 | |
| Sato et al. | Further development of a recombinant feline herpesvirus type 1 expressing the Gag protein of feline immunodeficiency virus | |
| Singh et al. | Reticuloendotheliosis Virus Sequences | |
| JPH07255488A (ja) | 組換えマレック病ウイルスおよびその作出法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |