NO329906B1 - Hydroksamatinneholdende cystein- og serinproteasehemmere, sammensetning som inneholder slike, og anvendelse derav - Google Patents

Description

Denne patentsøknaden krever prioritet fra U.S. midlertidig søknad med serie nr. 60/101.414 innlevert 22. september 1998 og teksten i denne er her innarbeidet som referanse i sin helhet.

Den foreliggende oppfinnelsen er rettet mot nye hemmere av cystein- eller serinproteaser som her refereres til som hydroksamater. Den foreliggende oppfinnelsen er også rettet på en sammensetning som innbefatter disse nye forbindelsene, og anvendelse av disse.

Mengder av cystein- og serinproteaser er blitt identifisert i humant vev. En "protease" er et enzym som degraderer proteiner til mindre komponenter (peptider). Termene "cysteinprotease" og "serinprotease" henviser til proteaser som utmerker seg ved tilstedeværelsen av en cystein- eller serinrest som spiller en kritisk rolle i den katalytiske prosessen. Pattedyrsystemer, inkludert mennesker, degraderer og behandler normalt proteiner via et mangfold av enzymer inkludert cystein- og serinproteaser. Imidlertid når de foreligger på forhøyede nivåer eller når de er abnormt aktivert, kan cystein- og serinproteaser være involvert i patofysiologiske prosesser.

For eksempel omfatter kalsium-aktiverte nøytrale proteaser ("calpains") en familie av intracellulære cysteinproteaser som uttrykkes alle steder i pattedyrvev. To hoved-calpains er identifisert; calpain I og calpain II. Mens calpain II er den dominerende formen i mange vev, antas calpain I å være den dominerende formen ved patologiske tilstander av nervevev. Calpainfamilien av cysteinproteaser har blitt implisert i mange sykdommer og forstyrrelser, inkluder neurodegenerering, slag, Alzheimer's, amyotropi, motorisk nervefiberskade, akutt sentralnervesystemskade, muskulær dystropi, benresorpsjon, blodplateaggregering, katarakter og inflammasjon. Calpain I er implisert i stimulerende aminosyreinduserte neurotoksisitetsforstyrrelser inkludert iskemi, hypoglysemi, Huntington's sykdom, og epilepsi. Den lysosomale cysteinproteasen kathepsin B er blitt implisert i de følgende forstyrrelsene: artritt, inflammasjon, myokardialt infarkt, tumormetastase, og muskulær dystropi. Andre lysosomale cysteinproteaser inkluderer kathepsin C, H, L og S. Interleukin-ip omdannende enzym ("ICE") er en cysteinprotease som katalyserer dannelsen av interleukin-ip. Interleukin-lp er et immunregulerende protein implisert i de følgende forstyrrelsene: inflammasjon, diabetes, septisk sjokk, reumatoidartritt og Alzheimer's sykdom. ICE er også blitt forbundet med apoptotisk celledød av neuroner, som er implisert i et mangfold av neurodegnerative forstyrrelser inkludert Parkinson's sykdom, iskemi og amyotropisk lateral sklerose (ALS).

Cysteinproteaser produseres også ved forskjellige patogener. Cysteinproteasen clostripain fremstilles ved Clostridium histolyticum. Andre proteaser framstilles ved Trpanosoma cruzi, malariaparasitter Plasmodium falciparum og P. vinckei og Streptococcus. Hepatitt A viralt protease HAV C3 er en cysteinprotease som er vesentlig ved fremstillingen av picornavirusstrukturelle proteiner og enzymer.

Eksempler på serinproteaser som er implisert i degenerative forstyrrelser inkluderer trombin, human leukocyttelastase, bukspyttkjertelelastase, kymase og kathepsin G. Spesifikt fremstilles trombin i den blodkoagulerende kaskaden, spalter fibrinogen til å danne fibrin og aktiverer faktor VIII; trombin er implisert i tromboflebitt, trombose og astma. Human leukocyttelastase er implisert i vevsdegenerative forstyrrelser slik som reumatoid artritt, osteoartritt, aterosklerose, bronkitt, cystisk fibrose, og emfysem. Bukspyttkjertelelastase er implisert i pankreatitt. Kymase som er et enzym som er viktig i angiotensinsyntesen, er implisert i hypertensjon, myokardialt infarkt, og koronar hjertesykdom. Kathepsin G er implisert i abnorm forbindende vevsdegenerering, spesielt i lungene.

Hydroksamater som er strukturelt forskjellig fra forbindelsene beskrevet her er beskrevet som hemmere av glykogen fosforylase (Internasjonal patentsøknad med publiseringsnummer WO 96/39385) og trombin (US patent 5.563.127).

Gitt denne forbindelsen mellom cystein- og serinproteaser og forskjellige svekkende sykdommer, ville forbindelser som hemmer disse proteasene være nyttige og ville gi fremgang både i forskning og klinisk medisin. Den foreliggende oppfinnelsen er rette mot dette, så vel som andre viktige formål.

Den foreliggende oppfinnelsen er rettet på nye cystein- og serinproteasehemmere som her refereres til som hydroksamater. De nye forbindelsene er representert ved den følgende formel I:

der: W er A-B-D;

A er benzyl, fenyl, naftyl eller alkyl med fra ett til 14 karbonatomer;

B er en binding eller CO, SO, S02eller OCO;

D er en binding eller en aminosyrerest, der aminosyreresten er definert ved formelen -NH-**CH(R<6>)-CO-, der ** angir at a-karbonet i a-aminosyreresten har D-konfigurasjon, L-konfigurasjon eller en blanding av D- og L-konfigurasjon når R<6>er forskjellig fra hydrogen;

R<1>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, og alkylgruppene er eventuelt

substituert med en J-gruppe;

R er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, og alkylgruppene er eventuelt

substituert med en J-gruppe;

R<3>erH;

R<4>er benzyl, fenyl, naftyl, alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, eller cykloalkyl med fra 3 til 10 karbonatomer, alkyl- og cykloalkylgruppene er eventuelt substituert med 1-5 J-grupper; og

R6 er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer;

J er halogen, (C| - C6)-alkyl, fenyl, naftyl, (Ci-C6)-alkoksy eller benzyloksy; og

<*>angir at a-karbonet i en oc-aminosyrerest har D-konfigurasjon, L-konfigurasjon eller en blanding av D- og L-konfigurasjon, når R<2>er forskjellig fra hydrogen.

Ved noen foretrukne utførelsesformer er R<1>alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppene er eventuelt substituert med J, der J er lavere alkoksy. Ved mer foretrukne utførelsesformer er R<1>benzyl, metoksymetyl, eller butyl.

Ved ytterligere foretrukne utførelsesformer er R<2>alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppen er eventuelt substituert med J. Ved mer foretrukne utførelsesformer er R2 isobutyl eller benzyloksymetyl.

Ved noen foretrukne utførelsesformer er R<4>alkyl med fra ett til 14 karbonatomer der alkylgruppen eventuelt er substituert med J, eller cykloalkyl med fra 3 til 10 karbonatomer der cykloalkylgruppen eventuelt eT substituert med J. Mer foretrukket er R<4>metyl, etyl, propyl, butyl, benzyl, (pentafluorfenyl)metyl, tert-butyl, eller 4-metyl-cykloheksyl.

Ved noen foretrukne utførelsesformer er W benzyloksykarbonyl, metansulfonyl, benzoyl, tert-butoksykarbonyl, eller benzyloksykarbonyl-leucyl.

Ytterligere foretrukne utførelsesformer er beskrevet i de vedheftede uselvstendige kravene.

Noen spesielt foretrukne utførelsesformer ifølge oppfinnelsen er beskrevet i tabell 1 under.

Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer også sammensetninger for å hemme en protease valgt fra gruppen bestående av serinproteaser og cysteinproteaser omfattende en forbindelse ifølge oppfinnelsen.

Fremgangsmåter for å hemme en protease omfatter å kontakte en protease valgt fra gruppen bestående av serinproteaser og cysteinproteaser med en hemmende mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen, og å kontakte en protease valgt fra gruppen bestående av serinproteaser og cysteinproteaser med en hemmende mengde av en sammensetning omfattende en forbindelse ifølge oppfinnelsen.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige for å hemme cystein- og serinproteaser. Det er fordelaktig at disse forbindelsene er til nytte i mange sammenhenger. For eksempel på forskningsarenaen kan de oppfunnede forbindelsene anvendes for eksempel ved oppdagelsen av et middel for å behandle sykdommer forbundet med abnorm og/eller avvikende aktivitet av cystein- og/eller serinproteaser. På den kliniske arenaen kan forbindelsene for eksempel benyttes for å lindre, formidle, redusere og/eller forhindre forstyrrelser som er forbundet med abnorm og/eller avvikende aktivitet av cystein- og/eller serinproteaser.

Således tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen videre farmasøytiske sammensetninger omfattende en forbindelse ifølge oppfinnelsen, som fortrinnsvis også inne holder en farmasøytisk akseptabel bærer. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer også sammensetninger for behandlingen av en forstyrrelse valgt fra gruppen bestående av neurodegenerering, slag, Alzheimer's, amyotropi, motorisk nervefiberskade, akutt sentralnervesystemskade, muskulær dystropi, benresorpsjon, blodplateaggregering, katarakter og inflammasjon, omfattende en forbindelse ifølge krav 1 og en farmasøytisk effektiv bærer.

Fordi hydroksamatene ifølge oppfinnelsen hemmer cysteinproteaser og serinproteaser kan de benyttes både ved forskning og terapeutiske sammenhenger. Disse og andre trekk ved forbindelsene ifølge oppfinnelsen er forklart nærmere i detalj nedenfor.

Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer nye hemmere av cystein- og serinproteasehemmere. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har formelen I:

der:

W erA-B-D;

A er benzyl, fenyl, naftyl eller alkyl med fra ett til 14 karbonatomer;

B er en binding eller CO, SO, S02eller OCO;

D er en binding eller en aminosyrerest, der aminosyreresten er definert ved formelen -NH-**CH(R<6>)-CO-, der ** angir at a-karbonet i a-aminosyreresten har D-konfigurasjon, L-konfigurasjon eller en blanding av D- og L-konfigurasjon når R6 er forskjellig fra hydrogen;

R<1>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, og alkylgruppene er eventuelt

substituert med en J-gruppe;

R<2>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, og alkylgruppene er eventuelt substituert med en J-gruppe;

R<3>erH;

R<4>er benzyl, fenyl, naftyl, alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, eller cykloalkyl med fra 3 til 10 karbonatomer, alkyl- og cykloalkyl gruppene er eventuelt substituert med 1 - 5 J-grupper; og

R<6>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer;

J er halogen, (Ci- Ce)-alkyl, fenyl, naftyl, (C)-C6)-alkoksy eller benzyloksy; og

<*>angir at a-karbonet i en a-aminosyrerest har D-konfigurasjon, L-konfigurasjon eller en blanding av D- og L-konfigurasjon, når R<2>er forskjellig fra hydrogen.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige ved forskjellige sammenhenger. For eksempel i forskningssammenheng kan foretrukne forbindelser som har definerte egenskaper benyttes ved undersøkelser med hensyn på naturlige og syntetiske forbindelser som beviser lignende karakteristiske trekk ved hemming av protease-aktivitetet. Hemming av cysteinprotease eller serinproteaseaktivitet kan måles ved å bestemme hastigheten av inaktivering av en protease ved å benytte en forbindelse ifølge oppfinnelsen. Forbindelsene kan også benyttes i forbedringen av in vitro og in vivo modeller for å bestemme effektene av hemming av spesielle proteaser eller spesielle celletyper eller biologiske betingelser. I en terapeutisk sammenheng der sammenhengen mellom cysteinproteaser og visse definerte forstyrrelser, og serinproteaser og visse spesielle forstyrrelser er gitt, kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen benyttes til å lindre, formidle, redusere og/eller forhindre forstyrrelser som er forbundet abnorm og/eller avvikende aktivitet av cysteinproteaser og/eller serinproteaser.

Slik det her er benyttet er betegnelsen "alkyl" ment å inkludere rettkjedede, forgrenede og cykliske hydrokarbongrupper slik som for eksempel etyl og isopropylgrupper. Foretrukne alkylgrupper har 1 til omtrent 10 karbonatomer. Betegnelsen "lavere alkyl" står for alkylgrupper med 1 til 6 karbonatomer. Generelt står betegnelsen "lavere" for grupper med opptil seks karbontatomer. Betegnelsen "cykloalkyl" står for cykliske alkylgrupper slik som for eksempel cyklopropylgrupper. Betegnelsen "alkenyl" står for alkylgrupper som inneholder minst en dobbeltbinding.

Slik det her er benyttet er "alkoksy"-grupper alkylgrupper bundet via et oksygenatom. Eksempler på alkoksygrupper inkluderer metoksy (-OCH3) og etoksy (-OCH2CH3)

/

grupper. Generelt betegner betegnelsen "oksy" når den benyttes som et suffiks bindingen via et oksygenatom.

Slik det her er benyttet står betegnelsen "aminosyre" for et molekyl eller rest derav som inneholder både en aminogruppe og en karboksylgruppe. Slik det her er benyttet betyr betegnelsen "a-aminosyre" en aminosyre med generell formel HOOC-CH (sidekjede)-NH2, eller en rest av en slik aminosyre med formel for eksempel -C(=0)-CH (sidekjede)-NH-. Ved foretrukne utførelsesformer av forbindelsene ifølge oppfinnelsen består a-karbonet (d.v.s. karbonatomet som bærer sidekjeden) av aminosyrer som eksklusivt kan foreligge som L-konfigurasjonen, eksklusivt som D-konfigurasjonen, eller som en blanding av L- og D-konfigurasjonene1ethvert forhold.

Funksjonelle grupper som er tilstede på forbindelsene med formel I kan inneholde beskyttelsesgrupper. For eksempel kan aminosyresidekjedesubstituentene på forbindelsene med formel I være substituert med beskyttelsesgrupper slik som benzyloksykarbonyl eller t-butoksykarbonylgrupper. Beskyttelsesgrupper er kjente per se som kjemiske funksjonelle grupper som selektivt kan være vedheftet og fjernet fra funksjonaliteter, slik som hydroksylgrupper og karboksylgrupper. Disse gruppene er tilstede i en kjemisk forbindelse for å gjøre en slik funksjonalitet inert i forhold til kjemiske reaksjonsbetingelser som forbindelsen blir utsatt for. Ethvert av et mangfold av beskyttelsesgrupper kan benyttes innenfor den foreliggende oppfinnelsen. En slik beskyttelsesgruppe er benzoyloksykarbonyl (Cbz;Z) gruppen. Andre foretrukne beskyttelsesgrupper ifølge oppfinnelsen kan finnes i Greene, T.W. og Wuts, P.G.M., " Protective Groups in Organic Synthesis" 2. Utgave, Wiley & Sons, 1991.

Slik det her er benyttet har betegnelsen "amido" sin vanlige betydning som en gruppe med formel -C(=0)-NH-. Betegnelsen "alkylamido" betegner en amidogruppe som bærer en alkylsubstituent. Betegnelsen "sulfonamido" betegner en gruppe med formel - SO2-NH-. Generelt indikerer betegnelsen "alkyl" eller "aryl" når de benyttes som prefikser i slike betegnelser som "alkylsulfonamido", "alkylsulfonyl", "alkylsulfoksy" eller "alkyltio" at sulfonamido, sulfonyl, sulfoksy eller tiogruppen bærer en alkylsubstituent.

Noen grupper som representeres i formlene beskrevet her kan være substituerte. Slik det her er benyttet indikerer betegnelsen "substituert" at ethvert tilgjengelig hydrogenatom i enheten designert som "substituert" kan være erstattet med den indikerte gruppen.

8

Ved foretrukne utførelsesformer er sammensetninger tilveiebrakt for å hemme en serinprotease eller en cysteinprotease som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen.

De beskrevne forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige ved hemmingen av cysteinproteaser og serinproteaser. Slik det her er benyttet betyr betegnelsene "hemme" og "hemming" en ugunstig effekt på enzymatisk aktivitet. En hemmende mengde er en mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen som er effektiv for å hemme en cystein og/eller serinprotease.

Farmasøytiske akseptable salter av cystein- og serinproteasehemmerene omfattes også av omfanget av forbindelsene som her er beskrevet. Betegnelsen "farmasøytiske akseptable salter" slik det her er benyttet betyr et uorganisk syreaddisjonssalt slik som hydroklorid, sulfat og fosfat, eller et organisk syreaddisjonssalt slik som acetat, maleat, fumarat, tartrat, og sitrat. Eksempler på farmasøytisk akseptable metallsalter er alkalimetallsalter slik som natriumsalt og kaliumsalt, jordalkalimetallsalter slik som magnesiumsalt og kalsiumsalt, aluminiumsalt og sinksalt. Eksempler på farmasøytisk akseptable ammoniumsalter er ammoniumsalt og tetrametylammoniumsalt. Eksempler på farmasøytisk akseptable organiske aminaddisjonssalter er salter med morfolin og piperidin. Eksempler på farmasøytisk akseptable aminosyreaddisjonssalter er salter med lysin, glysin og fenylalanin.

Forbindelser som her er tilveiebrakt kan formuleres til farmasøytiske sammensetninger ved å blande med farmasøytisk akseptable ikke-toksiske eksipienter og bærere. Slik det er angitt over kan slike sammensetninger fremstilles for anvendelse i parenteral administrasjon, spesielt på formen av flytende løsninger og suspensjoner; eller oral administrasjon, spesielt i formen av tabletter eller kapsler; eller intranasalt, spesielt på formen av pulvere, nesedråper, eller aerosoler; eller dermalt, via for eksempel transdermale plastere; eller fremstilt på andre egnede fasonger for disse og andre former for administrering som vil være åpenbare for en fagmann på området.

Sammensetningen kan passende administreres i enhetsdoseringsform og kan fremstilles ved enhver fremgangsmåte som er velkjent innenfor det farmasøytiske fagområde, for eksempel som beskrevet i Remington ' s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton. PA, 1980). Formuleringer for parenteral administrering kan inneholde som felleseksipienter sterilt vann eller saltoppløsning, polyalkylenglykoler slik som polyetylenglykol, oljer og vegetabilske opprinnelser, hydrogenerte naftalener og lignende. Spesielt kan biokompatible, bionedbrytbare laktidpolymerer, laktid/glykolid-

y

kopolymer, eller polyoksyetylen-polyoksypropylenkopolymerer være nyttige eksipienter for å kontrollere frigivelsen av den aktive forbindelsen. Andre potensielle nyttige parenterale leveringssystemer for disse aktive forbindelsene inkluderer etylen-vinylacetatkopolymerpartikler, osmotiske pumper, implanterbare infusjonssystemer, og liposomer. Formuleringer for inhaleringsadministrering inneholder som eksipienter for eksempel laktose eller kan være vandige løsninger som inneholder for eksempel polyoksyetylen-9-lauryleter, glykocholat og deoksycholat, eller oljeaktive løsninger for administrering i form av nesedråper, eller som en gel for intranasal påføring. Formuleringer for parenteral administrering kan også inkludere glykocholat for buccal administrering, et salisylat rektal administrering, eller sintronsyre for vaginal administrering. Formuleringer for transdermale plastere er foretrukne lipofile emulsjoner.

Materialene ifølge denne oppfinnelsen kan benyttes som det eneste aktive middelet i et legemiddel eller kan benyttes i kombinasjon med andre aktive ingredienser, f.eks. andre vekstfaktorer som kunne lette neuronell overlevelse eller aksonal regenerering ved sykdommer eller forstyrrelser.

Konsentrasjonene av forbindelsene beskrevet her i en terapeutisk sammensetning vil variere avhengig av et antall faktorer, inkludert doseringen av legemiddelet som skal administreres, de kjemiske karakteristika (f.eks. hydrofobisitet) av forbindelsene som benyttes, og administrasjonsruten. I generelle termer kan forbindelsene ifølge denne oppfinnelsen gis i effektive hemmende mengder i en vandig fysiologisk bufferløsning inneholdende omtrent 0.1 til 10% vekt/volum forbindelse for parenteral administrering. Typiske doseområder er fra omtrent 1 mg/kg til omtrent 1 g/kg kroppsvekt pr. dag; et foretrukket doseområde er fra omtrent 0.01 mg/kg til 100 mg/kg kroppsvekt pr. dag. Slike formuleringer gir typisk hemmende mengder av forbindelsen ifølge oppfinnelsen. Den foretrukne doseringen av legemiddelet som skal administreres er imidlertid sannsynligvis avhengig av slike variabler som typen og omfanget av progresjon av sykdommen eller forstyrrelsen, den samlede helsestatus hos den aktuelle pasienten, den relative biologiske effekten av forbindelsen som er valgt og formuleringen av forbindelseseksipienten, og administrasjonsruten.

Slik det her er benyttet betyr betegnelsen "å kontakte" direkte eller indirekte forårsaking av at minst to enheter kommer i fysisk forbindelse med hverandre. Kontakt inkluderer således fysiske hendelser slik som å plassere enhetene sammen i en beholder, eller å administrere enhetene til en pasient. Således er for eksempel å administrere en forbindelse ifølge oppfinnelsen til et menneske som har en sykdom eller forstyrrelse

1U

forbundet med abnorm og/eller avvikende aktivitet av slike proteaser innenfor omfanget av definisjonen av betegnelsen "å kontakte".

Oppfinnelsen illustreres videre ved de følgende eksemplene som er ment å forklare oppfinnelsen. Disse eksemplene er ikke ment å være begrensende for omfanget av søknaden.

Eksempler

Generelle metoder:

Tynnsjiktskromatografi ble utført ved å benytte silikagelbelagte plater (MK6F 60A, størrelse 1 x 3, lagtykkelse 250 um, Whatman Inc.). Preparativ tynnsjiktskromatografi ble utført ved å benytte silikagelbelagte plater (størrelse 20 x 20 cm, lagtykkelse 1000 mikron, Analtech). Preparativ kolonnekromatogri ble utført ved å benytte Merck silikagel, 40 - 63 um, 230 - 400 mesh. 'H NMR spektra ble registrert på et GE QE300 Plus spektrometer ved 300 MHz ved å benytte tetrametylsilan som intern standard. Elektrospray massespektra bel registrert på et VG plattform TT instrument (Fisons Instruments).

Eksemplene 1-15 ble utført ifølge generell metode A eller B.

Forbindelsene 6a, 6b og beslektede hydroksysyrer ble syntetisert ifølge en generell prosedyre av Harbeson m.fl, J Med Chem. 1994, 37, 2918-2929

Eksempel 1

Cbz-Leu-Phe-CONHOCH3(Generell metode A).

Til en avkjølt (0°C) løsning av forbindelse 6a (500 mg, 1.69 mmol) i vannfri metanol (25 ml) ble tionylklorid (0.37 ml, 5.08 mmol) langsomt tilsatt. Blandingen ble deretter rørt ved romtemperatur i 16 timer og konsentrert under redusert trykk. Finmaling med etyleter ga forbindelse 7 som ble tørket og benyttet direkte i neste trinn.

Hvitt faststoff; 'H NMR(DMSO-d6) d 8.49 (br, 1H), 8.15 (br, 2H), 7.22 (m, 10H), 6.52 (dd, 1H), 4.35 (ddd, IH), 3.80 (ddd, 1H), 3.28 (d, 3H), 3.08 (dd, 1H), 2.80 (dd, 1H). MS/?j/<?210(M+H).

Til løsning av forbindelse la (450 mg, 1.69 mmol) i vannfri DMF (5 ml), ble 1-HOBt (229 mg, 1 69 mmol), BOP (899 mg, 2.03 mmol) og N-metylmorfohn (0.74 ml, 6.78 mmol) tilsatt. Etter 5 minutter ble forbindelse 7 (416 mg, 1.69 mmol) oppløst i 5 ml DMF tilsatt, tiøringen fortsatte i 90 minutter ved romtemperatur. Blandingen ble helt over i vann (50 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 20 ml). Det organiske laget ble vasket med 3% sitronsyreløsning (10 ml), mettet natriumbikarbonatløsning (10 ml), og saltoppløsning (10 ml). Løsningen ble tørket over MgSCu, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 700 mg rent produkt. Preparativ kolonnekromatogri (1-5% MeOH/metylenklorid) ga 533 mg av forbindelse 2 (69%).

Hvitt amorft faststoff;' H NM R (DMSO-d6) 6 8 2 (d, 2H), 8 0 8m, 2H), 7.0 (s, 3H). MS m/ e 457 (M+H).

14

Til en avkjølt (0°C) løsning av forbindelse 2 (533 mg, 1.17 mmol) i metanol (10 ml) ble en IN NaOH løsning (2.92 ml, 2.92 mmol) tilsatt sakte. Blandingen ble deretter rørt ved romtemperatur i 90 minutter og konsentrert under redusert trykk. Vann (30 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med i etyleter (30 ml). Den vandige delen ble surgjort til pH=4 med fast sitronsyre og ekstrahert med etylacetat (3 x 20 ml). Løsningen ble tørket over MgSC«4, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 439 mg forbindelse 3 (85%). Ingen videre rensing var nødvendig.

Hvitt amorft faststoff;1 H NMR (DMSO-d6) 8 7.73 (dd, 1H), 7.31 (m, 10H), 5.07 (s, 2H), 4.17 (m, 1H), 4.04 (m, 2H), 3.41 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.74 8m, 2H), 1.58 8m, 1H), 1.33 (m, 2h), 0,85 (m, 6H). MS m/ e 441 (M-H).

Til en løsning av forbindelse 3 (125 mg, 0.283 mmol) 9 vannfri DMF (5 ml), ble 1-HOBt (39 mg, 0.283 mmol), BOP (150 mg, 0.339 mmol) og N-metylmorfolin (0.109 ml, 0.99 mmol) tilsatt. Etter 5 minutter ble H2NOMeHCl (27 mg, 0.283 mmol) oppløst i 5 ml DMF tilsatt. Røringen fortsatte i 90 minutter ved romtemperatur. Blandingen ble helt over i vann (50 ml) og bel ekstrahert med etylacetat (3 x 20 ml). De organiske lagene ble vasket med 3% sitronsyreløsning (10 ml), mettet natriumbikarbonatløsning (10 ml) og saltoppløsning (10 ml). Løsningen ble tørket over MgSCu, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 110 mg råprodukt. Kromatografi med preparative tynnsjiktsplater (5% MeOH/metylenklorid) ga 79 mg av forbindelse 4a (59%). Hvitt amorft faststoff; MS m/ e 472 (M+H).

Til en avkjølt (0°C) løsning av forbindelse 4a (79 mg, 0.168 mmol) i vannfritt metylenklorid (10 ml) ble Dess-Martin periodinanreagens (71 mg, 0.168 mmol) tilsatt sakte. Avkjøhngsbadet ble fjernet og blandingen ble rørt i ytterligere 90 minutter. Blandingen ble deretter vasket med 10% natriumtiosulfatløsning (2x10 ml), mettet natriumbikarbonatløsning (5 ml) og saltoppløsning (5 ml). Løsningen ble tørket ver MgSCU, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 60 mg forbindelse 5a (76%). Hvitt amorft faststoff;1 H NMR (DMSO-d6) 8 9.55 (br s. 1H), 7.20 (m, 10H), 6.82 (d, 1H), 5.40 (m, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.95 (br s, 1H), 4.14 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.24 (dd, 1H), 2.96 (dd, 1H), 1.52 (m, 2H), 1.39 (m, 1H), 0.83 (m, 6H). MS m/ e 470 (M+H).

Eksempel 2

i Cbz-Leu-Phe-CONHOEt.

P

'0 K^ k O H

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A fra kommersielt tilgjengelig

H2NOEtHCl

;<1>H NMR (DMSO-dé) 5 8.38 (d, 1H), 7.25 (m, lOHj, 5.13 (m, IH), 5.03 (s, 2H), 4 09

(m, IH),3.83 (q, 2H),3.1l (dd, IH), 2.87 (dd, 1H), 1.59 (m, IH), 1.38 (m, 2H), 1.18 (t, 3H), 0.86 (m, 6H). MS m/ e 484 (M+H).

i Eksempel 3

Cbz-Leu-Phe-CONHOBn.

P

0 i^JH 0 H

i

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A fra kommersielt tilgjengelig HiNOBnHCl.<1>H NMR (CDCb) 5 9.39 (br s, IH), 7 25 (m, 15H), 6 82 (d, IH), 5.45 (m, IH), 5.08 (s,

2H), 5.03 (br, 1H),4.99 (dd, 2H), 4.18 (m, IH), 3.32 (dd, IH), 3 07 (dd, IH), 1.86 (m, i 2H), l .44 (m, 1H), 0.85 (m, 6H) MS m/ e 546 (M+H)

Eksempel 4

i Cbz-Leu-Phe-CO\HOCH2C6F5

<P F

0 \^_H 0 H F

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A fra kommersielt tilgjengelig

5H2NOCH2C6F5HCI.

1 H NMR (CDCI3) 6 9.76 (brS, IH), 7.23 (m, 10H),6.74(d, IH), 5.41 (m, 1H),5.08

(m,4H), 5.00 (brS, lH),4.18(m, l H), 3.24 (dd, l H), 2.95 (dd, IH), 1.60 (m, 2H), 1.42 (m, IH), 0 82 (m, 6H). MS m/ e 636 (M+H).

0

Eksempel 5

Cbz-Leu-Phe-CONHOtBu.

H O0

O UH O H '

r

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A fra kommersielt tilgjengelig H2NOtBu HC1.<1>H NMR (CDCI3) 5 8 88 (br s, 1H), 7.25 (m, 1OH), 6 62 (m, 1H), 5 42 (m, 1H), 5 08 (s,352H), 4 18 (m, IH), 3 35 (dd, IH), 3 10 (dd, IH), 1.60 (m, 3H), 1.38 (s, 9H), 0.85 8m, 6H). MS m/ e 512 (M+H)

Ytterligere O-substituerte hydroksylaminer ble fremstilt ved å benytte fremgangsmåten ifølge Mavunkel m fl. Eur J Med Chem. 1994, 29, 659-666.

Eksempel 6

Cbz-Leu-Phe-CONHO(4-metylcykloheksan)

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A fra [(4-mety lcykloheksyl)oksy] amin.<1>H NMR (CDClj) 5 9.54 (d, IH), 7.25 (m, 10H), 6.84 (m, IH), 5.44 (m, IH), 5.22 (m,

1H), 5.08 (dd, 2H), 4 18 (m, 2H), 3.30 (m, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.04 (m, 2H9, 1.42 (m, 9H), 0.80 (m, 9H). MS m/ e (M+H).

Eksempel 7

CHjS02-D-Ser(Bn)-Ser(Me)-CONHOBn (Generell metode B)

Til en suspensjon av D-Ser(Bii) (2 0 g, 10.3 mmol) i vann (10 ml) ble IN NaOH løsning

(20 ml) tilsatt Eiter at de faste stoffene var oppløst ble metansulfonylklorid (1.19 ml,515.5 mmol) tilsatt langsomt. Ytterligere IN NaOH (5 ml) ble tilsatt for å regulere til pH=l0Blandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur og surgjort til pH=2 med konsentrert HCl-løsnmg Blandingen ble ekstrahert med etylacetat ( 3 x 50 ml) og

10

vasket med saltoppløsning (30 ml). Løsningen ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 1.9 g (68%) av forbindelse lb som et hvitt faststoff. Ingen ytterligere rensing var nødvendig. Hvitt amorft faststoff;

1 H NMR (CDC13) 8 7.26 (m, 5H), 5.30 (d, IH), 4.55 (s, 2H9, 4.37 (m, IH), 3.95 (dd, IH), 3.75 (dd, IH), 3.00 (s, 3H). MS m/ e 272 (M-H). Til en løsning av forbindelse 6b (185 mg, 0.743 mmol) i vannfri DMF (5ml) ble 1-HOBt (100 mg, 0.743 mmol), BOP (394 mg, 0.892 mmol) og N-metylmorfolin (0.285 ml, 2.60 mmol) tilsatt. Etter 5 minutter ble H2HOBn HC1 (119 mg, 0.743 (mmol)oppløst i 5 ml DMF tilsatt. Røringen fortsatte i 90 minutter ved romtemperatur. Blandingen ble helt over i vann (30 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 20 ml). Det organiske laget ble vasket med 3% sitronsyreløsning (5 ml), mettet natriumbikarbonatløsning (5 ml) og saltoppløsning (5 ml). Løsningen ble tørket over MgSC^, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 400 mg råprodukt. Kromatografi med preparative tynnsjiktsplater (5% MeOH/metylenklorid) ga 189 mg av forbindelse 8 (71%). Hvitt amorft faststoff;<1>H NMR (CDCI3) 8 7.26 (m, 5H), 5.30 (d, IH), 4.55 (s, 2H), 4.37 (m, IH), 3.95 (dd, IH), 3.75 (dd, IH), 3.00 (s, 3H). MS m/ e 355 (M+H).

Til en avkjølt (0°C) løsning av forbindelse 8 (189 mg, 0.534 mmol) i vannfri etylacetat (10 ml) ble vannfri HC1 sakte boblet inn i en periode på 15 sekunder. Blandingen ble deretter rørt ved romtemperatur i 60 minutter og konsentrert under redusert trykk. Finmaling med etyleter ga forbindelse 9 som ble tørket og brukt direkte i neste trinn. Hvitt amorft faststoff; MS m/ e 255 (M+H).

En løsning av forbindelse 9 (85 mg, 0.282 mmol) og N-metylmorfolin (0.031 ml, 0.282 mmol) i vannfri DMF (10 ml) ble rørt i 5 minutter. Til denne løsningen ble forbindelse lb (77 mg, 0.282 mmol), 1-HOBt (38 mg, 0.282 mmol) og EDC1 (65 mg, 0.338 mmol) tilsatt. Blandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur, helt over i vann (30 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (5 x 20 ml). Det organiske laget ble vasket med 3% sitronsyreløsning (5 ml), mettet natriumbikarbonatløsning (5 ml) og saltoppløsning (5 ml). Løsningen ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 50 mg råprodukt. Kromatografi med preparative tynnsjiktsplater (5% MeOH/metylenklorid) ga 25 mg av forbindelse 4b (17%). Hvitt amorft faststoff; MS m/ e 510 (M+H).

Til en avkjølt (0°C) løsning av forbindelse 4b (25 mg, 0.049 mmol) i vannfri metylenklorid (10 ml) ble Dess-Martin periodinanreagens (31 mg, 0.074 mmol) tilsatt sakte. Kjølebadet ble fjernet og blandingen ble rørt i ytterligere 90 minutter Blandingen ble deretter vasket med 10% natriumtiosulfatløsning (2x5 ml), mettet natriumbikarbonatløsning (2 ml), og saltoppløsning (2 ml). Løsningen ble tørket over MgSC>4, filtrert og konsentrert under redusert trykk til å gi 14 mg av forbindelse 5b (56%). Hvitt amorft faststoff;<l>H NMR (CDC13) 5 9 09 (br, IH), 7 25 (m, l IH), 5.45 (m, IH), 5.28 (m, IH), 4 94 (dd, 2H), 4 55 (dd, 2H), 4.15 (m, 2H), 3 88 (m, IH), 3 66 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.95 (s, 3H). MS m/ e 508 (M+H).

Eksempel 8

CHjS02D-Ser(Bn)-Phe-CONHOBn.

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A.

<l>H NMR (CDClj) 5 9 53 (m, IH), 7 25 (m, 16H), 5 49 (m, IH), 4.92 (m, 2H), 4 40 (dd, 2H), 4.18 (m, 2H), 3 55 (m, 2H), 2 82 (s, 3H), 2 72 (m, 2H). MS m/ e 554 (M+H).

Eksempel 9

CH3S02-D-Ser(Bn)-Ser(Me)-CONHOEt.

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A.

<l>HNMR(CDClj)6 9.38 (d, IH), 7.21 (m, 1 IH), 5.49 (m, IH), 5.37 (m, IH), 4.49 (dd. 2H), 4 09 (q, 2H), 3 82 (m, IH), 3 61 (m, IH), 3.35 (m, IH), 3 18 (m, IH), 2.93 (s, 3H), 1.38 (t, 3H). MS m/ e 492 (M+H).

Eksempel 10

Cbz-Val-Phe-CONHOBn.

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode B.

'HNMR(CDCb)8 9.34 (brs, IH), 7.25 (m, 15H), 6.82 (d, IH), 5.45 (m, IH), 5.08 (s, 2H), 5.03 (br, IH), 4.99 (dd, 2H),4.18 (m, IH), 3 32 (dd, IH), 3.07 (dd, IH), 1.44 (m, IH), 0 87 (m, 6H). MS m/ e 532 (M+H).

Eksempel 11

Cbz-Val-Nle-CONHOBn.

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode B

'H NMR (CDCb) 5 9.46 (br s, lH),7.20(m, 10H), 6 85 (d, IH), 5.45 (m, IH), 5.11 (s, 2H), 5.01 (br, IH), 4 92 (m, IH), 4.15 (m, IH), 3.20 (br, 2H) 1.40 (m, 15H). MS m/ e 498 (M+H).

Eksempel 12

Cbz-Leu-Leu-Phe-CONHOCHj.

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A.

'H NMR (CDCI3) 5 9.48 (s, IH), 7.24 (m, 10H), 6.92 (d, IH), 6.50 (d, IH), 5.38 (m, IH), 5.09 (s, 2H), 4 39 (m, IH), 4 16 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.26 (dd, IH), 3.02 (dd, IH), 2.02 (m, IH), 1.42 (m, 5H), 0.83 (m, 12H) MS m/ e 583 (M+H).

Eksempel 13

Cbz-Leu-Leu-Phe-CONHOBn.

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A.

'H NMR (CDClj) 5 9.48 (s, IH), 7 24 (m, 15H), 6 78 (d, IH), 6.58 (d, IH), 5.43 (m, l H), 5.21 (m, 1H), 5 09 (s, 2H), 4 94 (dd, 2H), 4 42 (m, l H), 4 16 (m, 1H), 3 26 (dd, IH), 3.02 (dd, IH), 2 02 (m. IH), 1 42 (m, 5H), 0 83 (m, 12H). MS m/ e 659 (M+H)

Eksempel 14

Cbz-Leu-Phe-CONHOBu.

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode A.

lHNMR(CDCl3)5 9.2l (brs, IH), 7.26 (m, 10H), 6.82 (d, IH), 5.40 (m, 1H),5.08 (s, 2H),4.l4(m, IH), 3.68 (m, 2H). 3 35 (m, IH), 3.02 (m, IH), 1 39 (m, 7H), 0.83 (m, 9H). MS m/ e 512 (M+H).

Eksempel 15

PhCO-Phe-Nle-CONHOEt

Denne forbindelsen ble fremstilt ved generell metode B.

'H NMR (CDCI3) 8 9.12 (d, IH), 7.40 (m, 10H), 6.75 (d, 1H), 5.38 (m, IH), 5.13 (m, IH), 4.87 (m, IH), 4.25 (m, IH), 4.17 (m, IH), 4.02 (m, 2H), 3.20 (m, 2H), 2.35 (m, 2H), 1.40 (ra, 8H). MS m/ e 454 (M+H).

Eksempel 16

Hemming av Calpain

For å evaluere hemningsaktivitet ble løsninger (konsentrert 40 ganger) av hver forbindelse som skulle testes fremstilt i 100% vannfri DMSO og 5 ul av hver hemmingsfremstilling ble fordelt i hver av tre brønner i en 96-brønns skål. Rekombinant humant calpain I, fremstilt ved fremgangsmåten ifølge Meyer rn.fl. ( Biochem. J. 1996, 314: 511-519), ble fortynnet til assay-buffer (d.v.s. 50mM Tris, 50mM NaCl, ImM EDTA, ImM EGTA og 5mM P-merkaptoetanol, pH 7.5, inkludert 0.2 mM Succ-Leu-Tyr-MNA), og 175 ul ble fordelt i de samme brønnene inneholdende de uavhengige hemningsløsningene såvel som i positive kontrollbrønner inneholdende 5 ul DMSO, men ingen forbindelse. For å starte reaksjonen ble 20 ul av 50 mM CaCl2i assay-buffer tilsatt til alle brønnene i skålen, bortsett fra tre, som ble benyttet som bakgrunnssignal-grunnhnjekontroller. Substrathydrolyse ble kontrollert hvert 5. minutt i totalt 30 minutter. Substrathydrolyse i fravær av inhibitor var lineær opp til 15 minutter.

Hemming av calpain I aktivitet ble beregnet som prosent reduksjon i hastigheten av substrathydrolyse i nærvær av inhibitor relativt til hastigheten ved dens fravær. Sammenligning mellom de hemmede og kontrollhastighetene ble gjort innenfor det lineære området for substrathydrolyse. J.C50 av inhibitorene (konsentrasjon som ga 50% hemming) ble bestemt fra prosentreduksjonen i hastighetene av substrathydrolyse i nærvær av fem til sju forskjellige konsentrasjoner av testforbindelsen. Resultatene ble plottet og prosenthemming mot logg inhibitorkonsentrasjon og IC50ble beregnet ved å tilpasse data til den fire-parameter logistikklikningen vist nedenfor ved å benytte programmet GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA.).

Parametrene a, b, c og d er definert som følger:

a er % hemming i fravær av inhibitor,

b er helningen,

c er IC50, og

d er % hemming ved en uendelig konsentrasjon av inhibitor.

Resultatene er presentert i tabell I nedenfor, som gir eksempler av oppfinnelsen.

Det er ment at hver av patentene, søknadene og de trykte publikasjonene nevnt i dette patentskriftet her er innarbeidet ved referanse i sin helhet.

Slik en fagmann på området vil forstå kan utallige forandringer og modifikasjoner gjøres på de foretrukne utførelsesformene ifølge oppfinnelsen uten å forlate omfanget av oppfinnelsen. Det er ment at alle slike variasjoner skal dekkes av oppfinnelsen.

Claims (18)

1. En forbindelse med formel I:

der: W er A-B-D; A er benzyl, fenyl, naftyl eller alkyl med fra ett til 14 karbonatomer; B er en binding eller CO, SO, S02eller OCO; D er en binding eller en aminosyrerest, der aminosyreresten er definert ved formelen -NH-**CH(R<6>)-CO-, der ** angir at a-karbonet i a-aminosyreresten har D-konfigurasjon, L-konfigurasjon eller en blanding av D- og L-konfigurasjon når R6 er forskjellig fra hydrogen; R<1>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, og alkylgruppene er eventuelt substituert med en J-gruppe; R<2>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, og alkylgruppene er eventuelt substituert med en J-gruppe; R<3>erH; R<4>er benzyl, fenyl, naftyl, alkyl med fra ett til 14 karbonatomer, eller cykloalkyl med fra 3 til 10 karbonatomer, alkyl- og cykloalkyl gruppene er eventuelt substituert med 1-5 J-grupper; og R6 er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer; J er halogen, (Ci- C6)-alkyl, fenyl, naftyl, (Ci-Ce)-alkoksy eller benzyloksy; og<*>angir at a-karbonet i en a-aminosyrerest har D-konfigurasjon, L-konfigurasjon eller en blanding av D- og L-konfigurasjon, når R er forskjellig fra hydrogen.

2. Forbindelse ifølge krav 1, der R<1>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppene er eventuelt substituert med J, der J er (Ci-Ce)-alkoksy.

3. Forbindelse ifølge krav 2, der R<1>er metoksymetyl eller butyl.

4. Forbindelse ifølge krav 1, der R<2>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppene er eventuelt substituert med J.

5. Forbindelse ifølge krav 2, der R2 er isobutyl eller benzyloksymetyl.

6. Forbindelse ifølge krav 1, der R<4>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer der alkylgruppene eventuelt er substituert med J, eller cykloalkyl med fra 3 til 10 karbonatomer der cykloalkylgruppen eventuelt er substituert med J.

7. Forbindelse ifølge krav 6, der R<4>er metyl, etyl, propyl, butyl, benzyl, tert-butyl, eller 4-metylcykloheksyl.

8. Forbindelse ifølge krav 1, der W er benzyloksykarbonyl, metansulfonyl, benzoyl, tert-butoksykarbonyl, eller benzyloksykarbonyl-leucyl.

9. Forbindelse ifølge krav 1, der R<1>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppen er eventuelt substituert med J, der J er (Ci-C6)-alkoksy.

10. Forbindelse ifølge krav 1, der R<1>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppen er eventuelt substituert med J, der J er (Ci-C6)-alkoksy, og R<4>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer der alkylgruppen eventuelt er substituert med J, eller cykloalkyl med fra 3 til 10 karbonatomer der cykloalkylgruppen eventuelt er substituert med J.

11. Forbindelse ifølge krav 1, der R<1>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppen er eventuelt substituert med J der J er lavere alkoksy, R<4>er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer der alkylgruppen eventuelt er substituert med J, eller cykloalkyl med fra 3 til 10 karbonatomer der cykloalkylgruppene eventuelt er substituert med J og R er alkyl med fra ett til 14 karbonatomer og alkylgruppen er eventuelt substituert med J.

12. En forbindelse ifølge krav 1, med formelen:<?2>H 0 H R<3>o fti o 1 der W,R1, R<2>, R<3>og R<4>er valgt i henhold til den følgende tabellen:

13. En sammensetning for å hemme en protease valgt fra gruppen bestående av serinproteaser og cysteinproteaser omfattende en forbindelse ifølge krav 1.

14. Sammensetning ifølge krav 13, der forbindelsen har formelen:

der W,R<1>,R<2>,R<3>og R4 er valgt i henhold til den følgende tabellen:

15. En farmasøytisk sammensetning omfattende en forbindelse ifølge krav 1 og en farmasøytisk akseptabel bærer.

16. En sammensetning for behandlingen av en forstyrrelse valgt fra gruppen bestående av neurodegenerering, slag, Alzheimer's, amyotropi, motorisk nervefiberskade, akutt sentralnervesystemskade, muskulær dystropi, benresorpsjon, blodplateaggregering, katarakter og inflammasjon, omfattende en forbindelse ifølge krav 1 og en farmasøytisk effektiv bærer.

17. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 til fremstilling av et farmasøytisk preparat til behandling av en sykdom valgt fra gruppen bestående av neurodegenerering, slag, Alzheimer's, amyotropi, motorisk nervefiberskade, akutt sentralnervesystemskade, muskulær dystropi, benresorpsjon, blodplateaggregering, katarakter og inflammasjon.

18. Anvendelse ifølge krav 17, der forbindelsen har formelen:

I der W,R<1>,R<2>,R<3>og R<4>er valgt i henhold til den følgende tabellen: