MXPA05000186A

MXPA05000186A - Composiciones de acido hialuronico y metodos de uso.

Info

Publication number: MXPA05000186A
Application number: MXPA05000186A
Authority: MX
Inventors: Dmitry Zingerman
Original assignee: Pericor Science Inc
Priority date: 2002-07-03
Filing date: 2003-07-03
Publication date: 2005-08-17
Also published as: NZ537735A; EP1539193A1; JP2010270126A; JP4818608B2; CA2491054A1; AU2003256381A1; EP1539193A4; JP2006502988A; WO2004004744A1; RU2005102604A; IL165910A0; CN103638040A; CN102178692A; CN1671400A; US20060094643A1; BRPI0312331A2

Abstract

La invencion provee composiciones para el tratamiento de trastornos caracterizados por resequedad incluyendo resequedad de los ojos y resequedad de la boca; las composiciones comunmente comprenden un conjugado de acido hialuronico y polilisina; estos conjugados se unen a tejidos o superficies corporales afectados usando transglutaminasa, y preferiblemente transglutaminasa endogena.

Description

COMPOSICIONES DE ACIDO HIALURONICO Y METODOS DE USO CAMPO DE LA INVENCION La invención se refiere a composiciones y métodos para aliviar síntomas asociados con trastornos que se benefician de la administración de ácido hialurónico, incluyendo pero sin limitarse a resequedad de los ojos y resequedad de la boca.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La resequedad de los ojos es una condición de resequedad persistente de los ojos incluyendo la córnea y la conjuntiva. Puede resultar de la formación anormal o inadecuada de lágrimas, y la deficiencia en secreción de mucina (es decir, queratoconjuntivitis seca). Los síntomas de resequedad de los ojos se puede manifestar como un resultado de varios trastornos subyacentes tales como trastornos autoinmunes que dañan las glándulas lacrimales (es decir, producción de lágrimas), tales como artritis reumatoide, síndrome de Sjógren, lupus eritematoso sistémico y esclerosis y sarcoidosis sistémicas. La resequedad de los ojos también puede ser inducida después de cirugía del ojo, tal como cirugía Lasik™. La resequedad de los ojos se estima que afecta a más de 13 millones de individuos en los Estados Unidos. Independientemente de la patología subyacente, la resequedad de los ojos comúnmente implica el rompimiento rápido de la película de lágrima preocular, dando por resultado deshidratación de la superficie externa expuesta. La formación de lágrimas normal se requiere para mantener la córnea y la conjuntiva húmedas, y esto a su vez ayuda a la prevención de ulceración de ambas, así como para mantener la transparencia de la córnea. Además, las lágrimas facilitan el movimiento del párpado sobre la superficie del ojo (v.gr., en el parpadeo) y la remoción de sustancias extrañas de los ojos. Las lágrimas también normalmente contienen lisozima que es útil en la prevención de infección en los ojos. La resequedad de los ojos puede estar asociada con una incomodidad ligera hasta dolor severo en los ojos. Cuando ocurre durante períodos prolongados, puede causar visión borrosa, contextura arenosa y/o sensación de ardor, comezón. Si se deja que la condición persista sin tratamiento, puede conducir posteriormente a úlceras de la córnea y/o cicatrización. Hasta la fecha, la forma más común de tratamiento para resequedad de los ojos es el uso de lágrimas artificiales. Los productos de lágrimas artificialmente disponibles incluyen Bion Tears (Alcon), Lacriset (Merck), Tears Naturale (Alcon) y Tears Naturale II (Alcon). Un inconveniente para el uso de lágrimas artificiales, sin embargo, es Ja necesidad de aplicación frecuente, especialmente debido a que el alivio provisto por las formulaciones de lágrimas artificiales generalmente no es de larga duración. La resequedad de la boca, también conocida como xerostomia, es una condición caracterizada por la producción inadecuada de saliva. Puede ser una condición temporal causada por estrés (v.gr., temor), infección de la glándula salival (es decir, producción de saliva), o el uso de ciertos fármacos tales como anticolinérgicos, diuréticos, antihistamínicos, clonidina, levodopa, metildopa y antidepresivos tricíclicos. También puede ser una condición permanente de etiología desconocida. La resequedad de la boca también ha sido asociada con síndrome de Sjogren y esclerosis sistémica, y con terapia de radiación de la boca, cuello y cabeza (v.gr., en el tratamiento de cáncer de boca). La resequedad de la boca generalmente también conduce a dificultad y dolor en la deglución, el habla y puede interferir con sensación de gusto. En algunos casos, también puede causar descomposición de los dientes. La resequedad de la boca actualmente se trata con enjuagues bucales, aplicaciones tópicas, sustitutos salivales o estimulantes salivales tales como caramelos sin azúcar. Los estimulantes de saliva que actualmente están disponibles comercialmente incluyen agonistas colinérgicos tales como Evoxac™ HCI de cevimelina, Daiichi Pharmaceutical Corp.) y Salagen® (HCI de pilocarpina, GI Pharma, Inc.). Los sustitutos de saliva comercialmente disponibles incluyen Moi-Stir, Orex y Salivart. El tratamiento más común para tratar la resequedad de la boca es la aspersión del interior de la boca con saliva artificial. Igual que con las lágrimas artificiales, sin embargo, la saliva artificial requiere aplicación frecuente y por lo tanto es molesta para individuos afectados. Se ha reportado anteriormente que el ácido hialurónico es útil en el tratamiento de resequedad de los ojos. Sin embargo, dichos reportes se han enfocado al uso de ácido hialurónico libre que, igual que los tratamientos con lágrimas artificiales anteriormente descritas, deben ser aplicados continuamente.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Los tratamientos de actividad prolongados para resequedad de los ojos y de la boca, así como otras condiciones que se beneficiarían de la administración de ácido hialurónico, serían deseables ya que superarían la necesidad de aplicaciones continuas y frecuentes. La presente invención provee una alternativa a la aplicación continua y frecuente de agentes terapéuticos para el tratamiento de resequedad de los ojos, resequedad de la boca y otras condiciones asociadas con resequedad. La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que la eficacia del ácido hialurónico en el alivio de resequedad de los ojos y resequedad de la boca se puede incrementar al unir covalentemente ácido hialurónico a la superficie o tejido del cuerpo afectado. Dicha unión reduce la necesidad de aplicación repetida y frecuente de agentes de resequedad de los ojos o resequedad de la boca debido a que el ácido hialurónico es menos probable que sea lavado en el proceso de parpadeo o deglución. De conformidad con la invención, el ácido hialurónico es unido a la superficie del cuerpo afectado a través de una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa. La molécula enlazadora pueden incluir grupos amino y/o carboxamida que son substratos de transglutaminasa. La transglutaminasa es preferiblemente transglutaminasa endógena pero también puede ser transglutaminasa exógena. Las composiciones provistas aquí sin embargo no se limitan únicamente al uso en resequedad de los ojos y resequedad de la boca. En vez de ello, encontrarán utilidad en otros trastornos caracterizados por resequedad de otros tejidos incluyendo otros tejidos de mucosa tales como vagina, recto y nariz (por incluir otros), así como superficies externas tales como piel, cabello, uñas y labios. Además, las composiciones encuentran utilidad adicional en otros tejidos corporales tales como endotelio (especialmente endotelio aórtico), y articulaciones de huesos. Cuando se usa en endotelio vascular, las composiciones de ácido hialurónico proveen beneficio profiláctico y/o terapéutico de larga duración dados los reportes previos de que el ácido hialurónico inhibe la coagulación de plaquetas. También se ha reportado anteriormente que el ácido hialurónico reduce el dolor de las articulaciones artríticas, y por lo tanto la unión de ácido hialurónico en cartílago de articulaciones de hueso proveería alivio de larga duración de artritis. Cuando se usa en arrugas causadas por resequedad de la piel, el ácido hialurónico se aplica tópicamente y alivia la necesidad de aplicación frecuente de formulaciones de ácido hialurónico no fijable. La invención pretende abarcar formulaciones de conjugado de ácido hialurónico -molécula enlazadora ajustada a cada una de las condiciones anteriores.

Por lo tanto, en un aspecto, la invención provee una composición que comprende un conjugado de ácido hiaiurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa, y ácido hiaiurónico libre, en donde el ácido hiaiurónico libre y el conjugado están presentes en una relación molar de por lo menos 2. Varias modalidades de la invención se aplican igualmente a los aspectos que aquí se describen. Por consiguiente, esas modalidades se mencionarán una vez pero se debe entender que se aplican a varios aspectos como se enseña en la presente especificación y reivindicaciones. En una modalidad, la molécula enlazadora tiene por lo menos dos aminas alifáticas contiguas, por lo menos tres aminas alifáticas contiguas, por lo menos cuatro aminas alifáticas contiguas, por lo menos cinco aminas alifáticas o por lo menos seis aminas alifáticas. En otra modalidad, la molécula enlazadora es polilisina nativa. En otra modalidad, la polilisina se selecciona del grupo que consiste de poli-L-lisina, poli-D-lisina y poli-DL-lisina. En otra modalidad, la molécula enlazadora es un derivado de polilisina. En una modalidad, la molécula enlazadora tiene por lo menos dos carboxamidas continuas, por lo menos tres carboxamidas contiguas, por lo menos cuatro carboxamidas contiguas, por lo menos cinco carboxamidas o por lo menos seis carboxamidas. En otra modalidad, la molécula enlazadora es poliglutamina nativa. En otra modalidad, la molécula enlazadora se selecciona del grupo que consiste de poli-L-glutamina, poli-D-giutamina y poli-DL-glutamina. En otra modalidad más, la molécula enlazadora es un derivado de poliglutamina. En una modalidad, el ácido hialurónico es ácido hialurónico nativo. En otra modalidad, el ácido hialurónico es un derivado de ácido hialurónico seleccionado del grupo que consiste de una sal farmacéuticamente aceptable de ácido hialurónico, y éster de ácido hialurónico y un ácido hialurónico sulfatado. La relación molar se puede seleccionar del grupo que consiste de por lo menos 2.0 y por lo menos 4.0. En otra modalidad, la composición está provista en una forma seleccionada del grupo que consiste de gotas para los ojos, una solución para lentes de contacto, una pomada oftálmica, un paquete para los ojos y un lente de contacto. En una modalidad adicional, la composición está provista en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y gel oral. En una modalidad, el ácido hialurónico tiene un peso molecular de por lo menos 100,000. En modalidades importantes, el conjugado tiene una relación de carga negativa a carga positiva mayor que 1.0. En otra modalidad, la composición comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable. En modalidades importantes, un vehículo farmacéuticamente aceptable tiene una osmolalidad de por lo menos 280 mOsm. En otras modalidades, el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene un pH de por lo menos 6.5. El vehículo farmacéuticamente aceptable puede comprender un conservador oftálmico. En algunas modalidades, el conservador oftálmico se selecciona del grupo que consiste de mercuriales orgánicos, compuestos de amonio cuaternario, ésteres de ácido parahidroxibenzoico, alcoholes sustituidos y fenoles. En una modalidad relacionada, el mercurial orgánico se selecciona del grupo que consiste de nitrato de fenilmercúrico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico, y timerosal. En otra modalidad relacionada, el compuesto de amonio cuaternario se selecciona del grupo que consiste de cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, cloruro de cetilpiridinio y policuaternium-1 (POLYQUAD). En otra modalidad adicional, el alcohol y fenol sustituidos se seleccionan del grupo que consiste de clorobutanol, y clorobutanol/alcohol feniletílico. El conservador oftálmico, puede ser un antibiótico. En otra modalidad adicional, la composición puede comprender además un agente seleccionado del grupo que consiste de un agente saborizante, un agente colorante y un agente de esencias. En otra modalidad, la composición comprende además arginina o fluoruro. En una modalidad, el conjugado tiene una relación en peso seleccionada del grupo que consiste de por lo menos 90% en peso, por lo menos 95% y por lo menos 99%. En otra modalidad, la molécula enlazadora no forma complejo. En otro aspecto, la invención provee una composición farmacéutica que comprende ácido hialurónico covalentemente enlazado a una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa, en donde la molécula enlazadora no forma complejo. En una modalidad, la composición comprende ácido hialurónico libre. En otra modalidad, la composición está provista en una forma seleccionada del grupo que consiste de gotas para los ojos, solución para lentes de contacto, una pomada oftálmica, una cubierta para ojos y un lente de contacto. En otra modalidad más, la composición está provista en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y un gel oral. En otro aspecto más, la invención provee una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora y es un substrato de transglutaminasa, en un frasco con gotero para los ojos. En una modalidad, la composición comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, se proveen instrucciones para su uso, opcionalmente en la superficie exterior del frasco con gotero para los ojos. En una modalidad importante, la composición comprende además ácido hialurónico libre. En otras modalidades, el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene una osmolalidad de por lo menos 280 mOsm, y/o un pH de por lo menos 6.5. En otra modalidad, el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende arginina o liosozima. En una modalidad importante, la molécula enlazadora no forma complejo. En un aspecto adicional, la invención provee una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa, y un agente seleccionado del grupo que consiste de un agente saborizante, un agente colorante y un agente de esencias. En una modalidad, el agente saborizante se selecciona del grupo que consiste de manitol, sacarina de sodio, magnasweet, extracto, polvo de hojas o aceite de menta, extracto, polvo de hojas o aceite de hierbabuena; aceite de piróla; extracto de vainilla; perejil; aceite de orégano; aceite de hoja de laurel; aceite de clavo; aceite de salvia; aceite de sasafrás; aceite de limón; aceite de naranja, aceite de anís; benzaldehído, aceite de almendra; alcanfor; aceite de hoja de cedro; aceite de mejorana; aceite de citronela; aceite de lavanda; aceite de mostaza; aceite de pino; aceite de hojas de pino; aceite de romero; aceite de tomillo; aceite de hoja de canela; mentol; carvona, anetoi; eugenol; salicilato de metilo; limoneno; cimeno; alcohol-n-decílico; citronelol; oc-terpineol; acetato de metilo; acetato de citronelilo; metil eugenol; cineol; linalol; etil linalol; vainillina; timol; aceite de pelira; aceite de gaulteria; aceite de eucalipto; cafeína, crema tártara, ácido láctico, ácido málico, glutamato monosódico, nitritos, sorbitol, aspartame, acensulfame, dextrosa, levulosa, ciclamato sódico, esteviósido, neo-hesperidil- dihidrocalcona, glicirricina, perilartina, taumatina, éster metílico de aspartilfenilalanina, y aldehido p-metoxicinámico. En otra modalidad, el agente colorante se selecciona del grupo que consiste de azul #1 de FD&C, amarillo #5 de FD&C, amarillo #10 de FD&C, rojo #3 de FD&C, rojo #40 de FD&C; color o polvo de caramelo (#05439), sombra de chocolate (#05349), mezcla de laca verde (#09236), dióxido de titanio kowet (#03970), color amarillo líquido (#00403), y nitritos. En otra modalidad, el agente de esencias se selecciona del grupo que consiste de extracto de flores, extracto de hierba, floral, extracto de plantas y agente de esencias artificiales. En modalidades importantes, la composición se formula para administración oral u ocular. La composición se puede formular como una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un gel oral y un caramelo. La composición puede comprender además arginina o fluoruro. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable, que tiene aproximadamente un pH de por lo menos 6.5 y/o una osmolalidad mayor que 280 mOsm. En otro aspecto, la invención provee una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa, en un vehículo que comprende fluoruro. En una modalidad, el vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene un pH de por lo menos 6.5 y/o una osmolalidad mayor que 280 mOsm. En una modalidad, el conjugado se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y un gel oral. En otro aspecto más, la invención provee una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrado de transglutaminasa, en una forma de tableta sublingual. En una modalidad relacionada, la forma sublingual comprende además un edulcorante seleccionado del grupo que consiste de sacarina, aspartame, sorbitol, acesulfame, dextrosa, levulosa, ciclamato sódico, esteviósido, neo-hesperidil dihidrocalcona, gliciglicina, perilartina, taumatina, éster metílico de aspartilfenilalanina, y aldehido p-metoxicinámico. En otra modalidad, la forma sublingual comprende una vitamina o fluoruro. En un aspecto adicional, la invención provee una composición farmacéutica que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa, y una cantidad efectiva de ácido hialurónico libre, en donde el ácido hialurónico libre y el conjugado están presentes en una relación molar de por lo menos 2. La invención provee, en otros aspectos, métodos para tratar o prevenir un trastorno caracterizado por resequedad que comprende administrar una cantidad efectiva de cualquiera de las composiciones a un sujeto que necesita el mismo. En una modalidad, el trastorno es resequedad en los ojos. En una modalidad relacionada, el trastorno de resequedad en los ojos está asociado con un trastorno seleccionado del grupo que consiste de cicatrización conjuntival no progresiva (síndrome de Stevens-Johnson), síndrome de Sjógren, tracoma y pemfigoide cicatricial. En otra modalidad, el trastorno es resequedad de la boca. En otro trastorno, el sujeto ha pasado por o pasará por un procedimiento quirúrgico que puede inducir síntomas de resequedad de los ojos tal como cirugía ocular correctiva (v.gr., cirugía Lasik™). En otro aspecto, la invención provee un método para tratar a un sujeto que comprende administrar a un ojo de un sujeto que tiene o está en riesgo de tener resequedad de los ojos una cantidad efectiva de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa. En una modalidad, el conjugado se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de gotas para los ojos, una solución para lentes de contacto, una pomada oftálmica, una cubierta para ojos, y un lente de contacto. En otro aspecto, la invención provee un método para tratar a un sujeto, que comprende administrar a una cavidad oral de un sujeto que tiene o está en riesgo de tener resequedad de la cavidad oral una cantidad efectiva de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa. En una modalidad, el conjugado se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y un gel oral. En un aspecto adicional, la invención provee un método para tratar a un sujeto que comprende administrar a una articulación de un sujeto que tiene o está en riesgo de tener malestar de articulaciones una cantidad efectiva de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa. En otro aspecto, la invención provee un método para tratar a un sujeto, que comprende administrar a un vaso sanguíneo que tiene o está en riesgo de tener coagulación sanguínea excesiva o que tiene un riesgo elevado de coagulación sanguínea una cantidad efectiva de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa. En otro aspecto más, la invención provee un método para tratar a un sujeto, que comprende administrar a la piel de un sujeto que tiene o está en nesgo de tener arrugas y una cantidad efectiva de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un substrato de transglutaminasa. Las composiciones y conjugados anteriores son adecuados en los métodos que aquí se proveen. Las siguientes modalidades se aplican igualmente a los métodos anteriores. En una modalidad, la cantidad efectiva es menor que 0.05 pg/kg por día. Estos y otros aspectos y modalidades se describirán aquí con mayor detalle.

BREVE DESCRIPCION DEL APENDICE Y LAS FIGURAS El apéndice A es un cuadro que lista una variedad de enlazadores cjue se pueden usaj en conjugados de la invención. La figura 1A es una fotografía de microscopio de fluorescencia p µ?? sección transversal de córnea de conejo 1 hora después de la última administración de poliiisina marcada con FITC en una formulación de gotas para los ojos. La figura 1B es una fotografía de microscopio de fluorescencia de una sección transversal de córnea de conejo 36 horas después de la última administración de poliiisina marcada con FITC en una formulación de gotas para los ojos. La figura 1C es una fotografía de microscopio de fluorescencia de una sección transversal de córnea de conejo 1 hora después de la última administración de PCS-101 (poliiisina marcada con FITC conjugada a ácido hialurónico, ácido hialurónico libre y regulador de pH) en una formulación de gotas para los ojos. La figura 1D es una fotografía de microscopio de fluorescencia de una sección transversal de córnea de conejo 1 hora después de la última administración de PCS-101 (poliiisina marcada con FITC conjugada a ácido hialurónico, ácido hialurónico libre y regulador de pH) en una formulación de gotas para los ojos. La figura 1 E es una fotografía de microscopio de fluorescencia de una sección transversal de córnea de conejo 1 hora después de la última administración de vehículo de control solo en una formulación de gotas para los ojos. La figura 1 F es una fotografía de microscopio de campo brillante de una sección transversal de córnea de conejo 36 horas después de la última administración de vehículo de control solo en una formulación de gotas para los ojos. La figura 2 es un curso de tiempo de conjugación a un dedo humano in vivo. La figura 3 es una compilación de fotografías que muestran la absorción de PCS-10-FITC después de aplicaciones repetidas a córnea de conejo en ausencia de transglutaminasa añadida exógenamente. La figura 4 es una compilación de fotografías que muestran la absorción de PCS-10-FITC después de aplicaciones repetidas a córnea de conejo (sección transversal) en ausencia de transglutaminasa añadida exógenamente. La figura 5 es una compilación de fotografías de unión de PCS-201 a paladar de cerdo. La figura 6 es una compilación de fotografías de unión de PCS-201 a la superficie inferior del epitelio de la lengua de cerdo. La figura 7 es una compilación de fotografías de unión de PCS- 201 a epitelio de encía de cerdo. La figura 8 es una compilación de fotografías de unión de PCS-201 a epitelio de encía de cerdo y epitelio de lengua de cerdo. La figura 9 es una compilación de fotografías de unión de PCS-201 a paladar de cerdo, epitelio de encías de cerdo y epitelio de lengua de cerdo. La figura 10 es una fotografía de unión de PCS-201 a epitelio de boca de cerdo.

La figura 11 es una compilación de fotografías de entrelazamiento de PCS-201 y polilisina (ambas marcadas con FITC) al revestimiento interno de aortas de cerdo. La figura 2 muestra el efecto de concentración de FITC sobre el acoplamiento de ácido hialurónico-polilisina-FITC a la capa cornificada de córnea de conejo en ausencia de transglutaminasa añadida exógenamente. La figura 13 muestra la comparación de unión de PCS-101 y HA libre a la capa superficial de córnea de conejo. La figura 14 es una gráfica de barras que compara la intensidad de fluorescencia promedio de HA-FITC conjugada a PLL-TRITC a HA-FITC y células no tratadas en un modelo de córnea de conejo. Las figuras no se requieren para hacer posible la invención reclamada.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La invención provee composiciones y métodos novedosos para el tratamiento de enfermedades que se beneficiarían de la presencia de ácido hialurónico, incluyendo trastornos caracterizados por resequedad. Los trastornos caracterizados por resequedad incluyen resequedad de los ojos y resequedad de la boca, que puede resultar de la producción insuficiente de lágrimas y saliva, respectivamente. En algunas modalidades, la invención usa ácido hialurónico como un agente activo capaz de humedecer los tejidos de mucosa externos afectados, a través de su capacidad para atraer y retener moléculas de agua. Como se describe con más detalle aquí, se ha reportado que el ácido hialurónico se ha usado exitosamente en humedecer la córnea y conjuntiva de sujetos que experimentan resequedad en los ojos. La invención se basa en parte en el descubrimiento de que el ácido hialurónico puede ser unido a una superficie afectada tal como una superficie de la mucosa (v.gr., córnea o cavidad oral), endotelial o externa (v.gr., cabello o uñas) usando una reacción mediada por transglutaminasa. Las transglutaminasas son una familia de enzimas dependientes de calcio que son mediadoras de reacciones de entrelazamiento covalentes entre residuos de ?-glutaminilo unido a péptido específico y varios grupos amino primarios de lisinas o poliaminas unidas a péptido, que actúan como substratos donadores de amina (Davies, et al., Adv. Exp. Med. Biol. 250, 391-401 , 1988). En mamíferos, se han identificado, clonado y secuenciado por lo menos cinco transglutaminasas enzimáticamente activas. La invención pretende abarcar el uso de cualesquiera y todas las transglutaminasas y derivados enzimáticos de las mismas que son capaces de efectuar enlaces covalentes entre grupos carboxamida de, por ejemplo, glutamina y grupos amino de, por ejemplo, lisina. En modalidades preferidas, la transglutaminasa que afecta la unión del conjugado al tejido corporal es una transglutaminasa endógena, aunque en algunas modalidades también se puede usar transglutaminasa exógena. El ácido hialurónico no es inherentemente un substrato de transglutaminasa, ya que no contiene grupos amino o carboxamida reactivos con transglutaminasa. Sin embargo, se puede modificar de acuerdo con la invención para hacerlo susceptible a la acción de la transglutaminasa. Esto se puede lograr, por ejemplo, añadiendo un grupo(s) lateral carboxamido o amino a un grupo reactivo apropiado de ácido hialurónico (es decir, ácido hialurónico "modificado"). Esto se puede lograr uniendo covalentemente glutamina, lisina o tanto glutamina como lisina a ácido hialurónico para formar un conjugado que es un substrato de transglutaminasa. El método más preferido es acoplar una molécula enlazadora tal como poliglutamina, polilisina, involucrina (un substrato natural de transglutaminasa), o un fragmento de involucrina, a ácido hialurónico para formar un conjugado apropiado. Las transglutaminasas endógenas presentes en tejido epitelial tal como el epitelio de la córnea o el epitelio oral son entonces capaces de catalizar unión covalente de la molécula enlazadora (con ácido hialurónico unido a la misma) a substratos de amino o carboxamida en el ojo o la cavidad oral. El ácido hialurónico nativo es un polímero lineal de monómero repetidos de disacáridos de ácido-D-glucurónico y N-acetil-D-glucosamina. Como se usa aquí, el término "ácido hialurónico" pretende abarcar ácido hialurónico nativo, así como sus derivados (es decir, análogos) incluyendo pero sin limitarse a sales y ésteres, a menos que se indique explícitamente de otra manera. Las sales de ácido hialurónico incluyen sales farmacéuticamente aceptables tales como sales de sodio y sales cuaternarias de amonio. Los derivados de ácido hialurónico incluyen ácido hialurónico que ha sido modificado por otras reacciones químicas tales como esterificación, y por lo tanto incluyen ésteres de hialunorato, así como ácido hialurónico sulfatado (como se describe en la patente de E.U.A. 6,339,074 B1 ). Un ejemplo de un derivado de ácido hialurónico es hylan. Los derivados de ácido hialurónico también incluyen variantes sintéticas o semisintéticas tales como ésteres de ácido hialurónico y alcoholes alifáticos, aralifáticos, heterocíclicos y cicloalifáticos (v.gr., éster bencílico o etílico de ácido hialurónico) como se describe en las patentes de E.U.A. 4,851 ,521 ; 4,965,353; y 5,202,431. Las composiciones de la invención pueden incluir además ácido hialurónico en una forma libre además de la forma conjugada. El uso de ácido hialurónico libre se ha reportado anteriormente. Ahora se ha descubierto que el ácido hialurónico se puede unir a los ojos u otra superficie afectada a través de un enlace mediado por transglutaminasa. Dicha unión prolonga el tiempo que el ácido hialurónico está presente en el ojo (u otra superficie afectada), y por lo tanto reduce o elimina completamente la necesidad de volver a aplicar ácido hialurónico a dichas superficies. Por lo tanto, se debe entender que el efecto terapéutico de la composición se deriva principalmente de la presencia del ácido hialurónico conjugado y una vez aplicado a un tejido corporal se une covalentemente a ese tejido. Este no es el caso para el ácido hialurónico libre que puede estar presente en la composición, ya que el ácido hialurónico se ha demostrado anteriormente que sólo tiene beneficio terapéutico limitado. Como se usa aquí, el término "conjugado" incluye tanto unión directa como indirecta de la molécula enlazadora a ácido hialurónico. La unión indirecta generalmente significa que existe un separador (es decir, un enlazador) entre la molécula enlazadora y el ácido hialurónico. Aquí se describen separadores adecuados. Aunque no se pretende estar limitado por alguna teoría o mecanismo particular, el ácido hialurónico es útil en el tratamiento de trastornos caracterizados por resequedad, tal como pero sin limitarse a resequedad de los ojos, resequedad de la boca y resequedad vaginal, debido a que tiene la capacidad par actuar como un endurecedor y/o humectante. Como se usa aquí, un humedecedor es un agente que forma una película y puede atrapar así moléculas de agua y evitar o limitar el grado de su evaporación. Como se usa aquí, un humectante es un agente que incrementa el contenido de agua de un tejido, superficie u otra región. El ácido hialurónico generalmente es negativamente cargado a un pH neutro y tiene grupos hidroxi hidrofílicos por lo que es capaz de atraer y retener moléculas de agua. El ácido hialurónico puede formar una película y puede atraer y retener moléculas de agua. Por consiguiente, puede funcionar tanto como humedecedor como humectante. El ácido hialurónico también se ha reportado que inhibe la agregación de plaquetas, y es este mecanismo el que es explotado en las modalidades de la invención en relación con las formulaciones de administración vascular. El ácido hialurónico está comercialmente disponible y se vende bajo una variedad de nombres comerciales incluyendo Healon, Hyalastine, Hyalectin, Hyloran (hialuronato de sodio), e Hyaloftil (ácido hialurónico de peso molecular alto). Alternativamente, el ácido hiaíurónico se puede sintetizar o purificar a partir de fuentes animales (tales como crestas de gallo, comercialmente vendido como Hyalform) o de fermentaciones in vitro (tales como fermentación bacteriana, comercialmente vendido como Restylane), tal como se describe en las patentes de E.U.A. 3,396,081 ; 3,862,003; 4,141,973; 4,517,296; 5,316,926; 6,090,596; entre otras. La longitud de ácido hiaíurónico usado no es crítica para la invención, siempre que sea de una longitud suficiente para hidratar la superficie o tejido corporal afectado. Para ese fin, en algunas modalidades, hebras de ácido hiaíurónico más cortas (es decir, que tienen peso molecular menor que 2000) serán menos preferibles que hebras de ácido hiaíurónico más largas (es decir, que tienen peso molecular mayor que 100,000), a menos que haya algunas hebras más cortas unidas a la molécula enlazadora. En los casos en los cuales de conjugado abarca únicamente una molécula enlazadora y una hebra de ácido hiaíurónico, las hebras de ácido hiaíurónico más largas son preferidas por lo menos para aumentar al máximo el número de moléculas de agua que pueden ser detenidas. Los métodos para producir o aislar ácido hiaíurónico de peso molecular bajo y alto son conocidos y se han reportado en las patentes de E.U.A. 4,141,973 (PM por lo menos de 750,000); 5,079,236 (PM de 50,000 a 200,000); 5,316,926 (PM de 1,100,000 a 4,000,000); 5,925,626 (PM entre 50,000 y 100,000; y entre 500,000 y 730,000); 6,090,596 (PM mayor que 6,000,000); y 6,194,392 (PM entre 150,000 y 750,000).

La longitud de hebras de ácido hialurónico se referirán como el número de unidades de disacárido (cada unidad teniendo un peso molecular de aproximadamente 401 Daltons), o el peso molecular de la hebra. Por ejemplo, una hebra de ácido hialurónico que tiene un peso molecular de 200,000 está compuesta de 498 unidades de monómero de disacárido. En modalidades importantes, la hebra de ácido hialurónico tiene un peso molecular mayor que 50,000, mayor que, 60,000, mayor que 75,000, mayor que 100,000, mayor que 150,000, y mayor que 200,000. En otras modalidades más, el ácido hialurónico puede tener un peso molecular más alto mayor que 300,000, mayor que 400,000, mayor que 500,000, mayor que 600,000, mayor que 700,000, mayor que 800,000, mayor que 900,000, y mayor que 1 ,000,000. En algunas modalidades preferidas, el ácido hialurónico es por lo menos de 200,000, a por lo menos 210,000, por lo menos 220,000, por lo menos 230,000, por lo menos 240,000 o por lo menos 250,000. En algunas modalidades, los conjugados de la invención se proveen a un sujeto en combinación con ácido hialurónico libre. Como se usa aquí, ácido hialurónico "libre" no es conjugado a una molécula enlazadora. La invención no se basa en la unión de ácido hialurónico a su receptor específico (v.gr., CD44) a fin de lograr un resultado terapéutico. En vez de ello, la localización de ácido hialurónico a sitios afectados es generalmente controlada a través de la administración dirigida y el enlace mediado por transglutaminasa. La unión de ácido hialurónico a su receptor no se requiere en los métodos de la invención. La presencia de ácido hialurónico libre no es problemática ya que no reduce la eficacia del conjugado debido a que no compite con el ácido hialurónico para unirse al receptor cognado. Más aun, el conjugado de la invención se pueden unir bajo cualquier superficie o tejido siempre que contenga niveles suficientes de transglutaminasa endógena y substratos de transglutaminasa, independientemente de si también expresan receptores de ácido hialurónico. En algunas modalidades, se usa un derivado de ácido hialurónico (ya sea como la forma libre y/o la forma conjugada). Que se une a un receptor de ácido hialurónico con agilidad menor que la del ácido hialurónico nativo. En algunas modalidades, la afinidad es menor que 2 veces, menor que 5 veces, menor que 10 veces, menor que 20 veces, menor que 50 veces, o menor que 100 veces la afinidad de unión del ácido hialurónico nativo. En algunas modalidades, la relación molar de ácido hialurónico libre a ácido hialurónico conjugado en la composición es por lo menos 10, por lo menos 5, por lo menos 4, por lo menos 3.5, por lo menos 3, por lo menos 2.5, por lo menos 2, por lo menos 1.5, por lo menos 1.2, por lo menos 1 , por lo menos 0.9, por lo menos 0.8, por lo menos 0.7, por lo menos 0.6, por lo menos 0.5, por lo menos 0.4, por lo menos 0.3, por lo menos 0.2, o por lo menos 0.1. En algunas modalidades particulares, la relación molar de ácido hialurónico libre a ácido hialurónico conjugado es mayor que 1, preferiblemente mayor que 1.5, y muy preferiblemente mayor que 2. Como se usa aquí, la relación molar de ácido hialurónico libre a ácido hialurónico conjugado es la relación de número de moles de ácido hialurónico (incluyendo todas las variantes de PM) que es no conjugado a la molécula enlazadora al número de moles de ácido hialurónico (del mismo o diferente PM) que es conjugado a la molécula enlazadora. Por consiguiente, en algunas modalidades, la cantidad de ácido hialurónico libre es suficiente para competir con ácido hialurónico conjugado para unirse a un receptor de ácido hialurónico. Las moléculas enlazadoras de la invención son substratos de transglutaminasa. Por consiguiente, poseen aminas alifáticas o carboxamidas, pero preferiblemente no ambas. Las moléculas enlazadoras preferidas son polímeros que contienen carboxamidas y/o aminas alifáticas múltiples reactivas que son substratos de transglutaminasa. Los compuestos que contienen carboxamida que son substratos de transglutaminasa son bien conocidos e incluyen glutaminas. Las aminas alifáticas que son substratos de transglutaminasa también son bien conocidas y son ilustrativas, por ejemplo, en la patente de E.U.A. 5,490,980, cuya descripción se incorpora aquí por referencia. A diferencia de la patente '980, sin embargo, que ilustra porciones de amina alifática individuales, la presente invención implica en algún aspecto el uso de una pluralidad de aminas alifáticas. Las aminas alifáticas (o la pluralidad de aminas alifáticas) pueden ser contiguas, o pueden estar separadas a intervalos discretos, preferiblemente a lo largo de la longitud de un polímero ramificado o no ramificado. En algunas modalidades, la separación de las porciones reactivas es importante para unir los conjugados a un tejido corporal particular. Una modalidad implica moléculas enlazadoras que son polímeros que tienen unidades múltiples, cada unidad siendo una amina alifática que es un substrato de transglutaminasa. El polímero puede ser un homopolímero o un heteropolímero. Como se usa aquí, en conexión con las moléculas enlazadoras, un substrato de amina polialifática de transglutaminasa es una molécula enlazadora con por lo menos tres aminas alifáticas separadas unas de otras a intervalos discretos a lo largo de la estructura de base de la molécula enlazadora, separadas por uno o más átomos de la estructura de base. Esto se contempla más fácilmente, por ejemplo, con polímeros ricos en Usina, preferiblemente por lo menos 2, por lo menos 3, por lo menos 4, y por lo menos 5, o más de dichas lisinas contiguas. Los polímeros de unidades contiguas, cada uno portando una amina alifática son preferidos. En algunas modalidades, la molécula enlazadora puede tener tan pocos como dos residuos de lisina contiguos y preferiblemente éstos están ubicados en cualquier extremo.de la molécula enlazadora. De manera similar, otras moléculas enlazadoras importantes son polímeros que tienen unidades múltiples, cada unidad conteniendo un grupo carboxamida reactivo de transglutaminasa. El polímero puede ser un homopolímero o un heteropolímero. Un substrato de carboxamida de transglutaminasa es una molécula enlazadora con por lo menos 2 carboxamidas separadas una de otra a intervalos discretos a lo largo de la estructura de base de la molécula enlazadora, separadas por uno o más átomos de la estructura de base. La molécula enlazadora puede ser un polímero de carboxamidas contiguas, preferiblemente por lo menos 2, por lo menos 3, por lo menos 4, o por lo menos 5, o más carboxamidas contiguas. En algunas modalidades importantes, las carboxamidas contiguas están ubicadas en cualquier extremo de la molécula enlazadora. Las moléculas enlazadoras más preferidas son polímeros ricos en una porción de carboxamida o una porción de amina alifática, tales como glutamina o lisina, o glutamina y lisina. Un polímero rico en carboxamida es uno en el cual por lo menos 20% de sus unidades son unidades portadoras de carboxamida. Un polímero rico en aminas alifáticas es uno en el cual por lo menos 20% de sus unidades son unidades portadoras de amina alifática. Por consiguiente, estos polímeros también abarcan aquellos que tienen por lo menos 30%, por lo menos 40%, por lo menos 50%, o más de sus unidades así definidas. Un polímero rico en glutamina o lisina es un polímero por lo menos 20% de sus unidades como glutamina o lisina, o glutamina y lisina. Un polímero rico en carboxamidas o aminas alifáticas también puede ser un polímero que incluya por lo menos 3, preferiblemente 4, y muy preferiblemente 5 o más carboxamidas o aminas alifáticas separadas o especialmente separadas por una distancia regular, tal como ocurre con glutaminas o lisinas enlazadas contiguas. Se debe entender, sin embargo, que una cadena de tan pocas como dos glutaminas o lisinas se pueden unir a o enlazar a ácido hialurónico para hacer de este un substrato de transglutaminasa. En modalidades preferidas, la molécula enlazadora y el conjugado que lo comprende es un substrato para transglutaminasa endógena (es decir, tiene suficientes grupos reactivos a transglutaminasa sobre los cuales actuar por transglutaminasa endógena. Una molécula enlazadora preferida es polilisina. La polilisina incluye poli-L-lisina, poli-D-lisina, y poli-DL-lisina. Otra molécula enlazadora importante es poli-glutamina. La poli-glutamina incluye poli-L-glutamina, poli-D-glutamina, y poli-DL-glutamina. Las moléculas enlazadoras por lo tanto incluyen polilisina y poliglutamina en forma nativa o derivada. Una forma nativa de polilisina es un polímero de monómeros de lisina. Un derivado de polilisina es un polímero de monómeros de lisina, uno o más de los cuales puede ser modificado, ya sea químicamente o de otra manera. En algunas modalidades, la molécula enlazadora es una que no es digerible por proteasas. Estos últimos derivados de péptido pueden incluir modificaciones de estructura de base que no son hidrolizables. La longitud de las moléculas enlazadoras generalmente no es limitante, y en la invención se pueden usar moléculas enlazadoras cortas y largas. Por consiguiente, las moléculas enlazadoras tan cortas como de tres residuos (v.gr., tres lisinas o tres glutaminas) se pueden usar de manera efectiva. El peso molecular de la molécula enlazadora puede variar de menos de 200 Da a más de 100,000 Da, con el número de residuos correspondientes dependiendo de la constitución de la molécula enlazadora. Dependiendo de la modalidad, la molécula enlazadora puede tener un peso molecular de por lo menos 500, por lo menos 1000, por lo menos 5000, por lo menos 10,000, por lo menos 25,000, por lo menos 50,000, por lo menos 75,000, por lo menos 100,000, o más. Un experto en la técnica podrá evaluar el número de unidades de monómero de la molécula enlazadora con base en su peso molecular y su composición. La molécula enlazadora usada en los ejemplos tiene una longitud promedio de 181 residuos de lisina, y por lo tanto un peso molecular promedio de aproximadamente 23,000. En modalidades importantes, la molécula enlazadora no forma complejo, particularmente si es polilisina. Una molécula enlazadora que "no forma complejo" significa que no está asociada con compuestos distintos al ácido hialurónico de la invención, y/o sus sales o aminoácidos de una solución de vehículo. En modalidades importantes, una molécula enlazadora que no forma complejo no está en complejo, por ejemplo, con un agente terapéutico tal como un fármaco o un ácido nucleico. La capacidad de la polilisina para unirse a ácido nucleico para formar un complejo iónico se ha reportado. Puesto que la polilisina está positivamente cargada a un pH neutro, tiende a interactuar iónicamente con agentes relativamente cargados tales como ácidos nucleicos. En algunos aspectos de la invención, sin embargo, no se pretende que los conjugados suministren ácidos nucleicos, y las moléculas enlazadoras de dichos conjugados no forman complejo. Las moléculas enlazadoras tales como polilisina se pueden mantener en una forma que no sea en complejo, por ejemplo, al manipular la concentración de sal y el pH a fin de evitar las interacciones iónicas entre polNisina y agentes negativamente cargados (v.gr., agentes terapéuticos tales como fármacos o ácidos nucleicos). Por ejemplo, la concentración de aniones se puede incrementar para competir con los agentes negativamente cargados para unión iónica a la polilisina. En otras modalidades, el conjugado se puede proveer en una solución ligeramente hipertónica, tal como una osmolalidad que es mayor que 280 mOsm. En otras modalidades, la formulación tiene osmolalidad mayor que 290 mOsm, mayor que 300 mOsm, mayor que 310 mOsm, mayor que 320 mOsm, mayor que 330 mOsm, mayor que 340 mOsm, mayor que 350 mOsm, o más. Cualquier sal (incluyendo sales monovalentes y divalentes), aminoácidos o regulador de pH se pueden usar para ajusfar la osmolalidad de la solución. Las moléculas enlazadoras también se pueden proveer en una forma que no sea en complejo incluyendo otros agentes, tales como pero sin limitarse a arginina. En algunas modalidades, estos agentes compiten con unidades de monómero de lisina para unirse a ácido hialurónico, y de esta manera evitan la formación de complejo iónico entre ácido hialurónico y componentes de polilisina del conjugado. Por lo tanto, en modalidades importantes, el ácido hialurónico y los componentes de polilisina no forman complejo iónicamente unos con otros y más bien están en contacto unos con otros sólo en el punto de conjugación (v.gr., el enlace covalente entre ellos o que une ambos a una molécula separadora). En otras modalidades más, puesto que los conjugados no se pretende que porten moléculas de ácido nucleico, las nucleasas tales como DNAsas y RNAsas se pueden incluir en las formulaciones. Es importante que un número suficiente de grupos reactivos de transglutaminasa (es decir, aminas alifáticas o carboxamidas) estén disponibles para reacción al tejido a través de la acción de transglutaminasa. Por consiguiente, no todos los grupos reactivos a transglutaminasa deben formar complejo, aunque en algunos casos, tan pocos como 2-3 grupos reactivos a transglutaminasa pueden ser suficientes para la reacción mediada por transglutaminasa. En algunas modalidades, los grupos reactivos a transglutaminasa pueden estar presentes en el extremo del polímero, mientras que en otros pueden estar ubicados internamente. La estructura del conjugado puede variar en términos tanto de ácido hialuronico como de la molécula enlazadora, siempre que tenga un número suficiente de grupos reactivos a amina o carboxamida (para hacer de éste un substrato de transglutaminasa), y que el ácido hialuronico pueda humedecer la superficie o tejido afectado. En su forma más simple, el conjugado es un conjugado de 1:1 de ácido hialuronico y molécula enlazadora. Es decir, el conjugado contendría una hebra de ácido hialuronico y una hebra de molécula enlazadora unidas una con otra directamente o indirectamente. En formas más complejas, el conjugado contiene algunas hebras de ácido hialuronico unidas a una sola molécula enlazadora. Los ácidos hialurónicos pueden estar unidos a la molécula enlazadora en sitios contiguos a lo largo de la longitud de la molécula enlazadora, o pueden estar unidos a intervalos separados de longitud consistente o aleatoria. En esta última modalidad, el conjugado sería un copolímero de injerto que tuviera una molécula enlazadora en su estructura de base y hebras de ácido hialurónico como sus injertos. La longitud, número y colocación de las cadenas laterales de ácido hialuroónico a lo largo de la estructura de base de la molécula enlazadora afectarán la cantidad de conjugado que necesita ser administrada a fin de impartir beneficio terapéutico. En algunas modalidades, una cadena lateral de ácido hialurónico se puede injertar en casi cualquier grupo reactivo disponible en la molécula enlazadora, con la condición de que deba haber suficientes grupos reactivos a transglutaminasa disponibles para unir el conjugado al tejido o superficie corporal afectado. Los grupos reactivos a transglutaminasa sobre la molécula enlazadora que se usan para unir el conjugado a la superficie afectada pueden estar en los extremos de la molécula enlazadora pero no estar así limitados. Por consiguiente, en una modalidad, los grupos reactivos pueden estar a la mitad de la molécula enlazadora con hebras de ácido hialurónico unidas a la misma en uno o más lados de flanqueo. La estructura del conjugado también se puede describir en términos del grado de injerto de ácido hialurónico sobre la molécula enlazadora. Como se usa aquí, el índice de injerto se expresa como la relación de un número de monómeros de disacárido de ácido hialurónico a un número de monómeros de molécula enlazadora. Como un ejemplo, la conjugación de una cadena de ácido hialurónico que tiene un peso molecular de 220,000 (y que contiene aproximadamente 549 unidades de disacárido de ácido hialurónico) a una molécula enlazadora de polilisina que tiene un peso molecular de 23,000 (y que contiene aproximadamente 181 residuos de lisina) corresponde a una relación de injerto de aproximadamente 3 (es decir, 549/181 ). La relación de injerto puede variar dependiendo del número y longitud de cadenas de ácido hialurónico injertadas en la molécula enlazadora, y la longitud de la molécula enlazadora misma. Dependiendo de la modalidad, por lo tanto, la relación de injerto puede variar de por debajo de 0.001 y por arriba de 10,000. En modalidades importantes, el índice de injerto es de por lo menos 0.00 , por lo menos 0.01 , por lo menos 0.1 , por lo menos 0.5, por lo menos 1 , por lo menos 5, por lo menos 10, por lo menos 20, por lo menos 30, por lo menos 40, por lo menos 50, por lo menos 60, por lo menos 70, por lo menos 80, por lo menos 90, por lo menos 95, por lo menos 100, por lo menos 250, por lo menos 500, por lo menos 750, por lo menos 1000, por lo menos 2500, por lo menos 5000, por lo menos 7500 y por lo menos 10000. Cabe notar que el índice de injerto, per se, no es una indicación del número de enlaces entre el ácido hialurónico y la molécula enlazadora. En algunas modalidades preferidas, el número de unidades de disacárido de ácido hialurónico es mayor que el número de subunidades de molécula enlazadora (v.gr., residuos de lisina), y por lo tanto la relación es mayor que 1. El conjugado se puede describir de manera similar estructuralmente en términos de porción de peso total de ácido hialurónico por peso total del conjugado (es decir, el peso del ácido hialurónico y la molécula enlazadora), expresado como un porcentaje. Esta relación en peso de manera similar puede variar de menos de 0.001 a 99.9%. En modalidades importantes, la relación en peso es por lo menos 0.005%, por lo menos 0.01%, por lo menos 0.1 %, por lo menos 0.5%, por lo menos 1 %, por lo menos 5%, por lo menos 10%, por lo menos 20%, por lo menos 30%, por lo menos 40%, por lo menos 50%, por lo menos 60%, por lo menos 70%, por lo menos 80%, por lo menos 90%, por lo menos 95% y por lo menos 99%. En modalidades preferidas en las cuales el número de monómeros de disacárido de ácido hialuronico está en exceso del número de monómeros de molécula enlazadora (v.gr., residuos de lisina), la relación en peso preferiblemente estará en exceso de 90%. Por lo tanto, en modalidades preferidas, las relaciones en peso es mayor que 90%, mayor que 91 %, mayor que 92%, mayor que 93%, mayor que 94%, mayor que 95%, mayor que 96%», mayor que 97%, mayor que 98%, mayor que 99%, mayor que 99.5%, y mayor que 99.9%. Por consiguiente, el peso de molécula enlazadora en un conjugado es generalmente 10% o menos, en algunas modalidades importantes. El peso molecular del conjugado también puede variar dependiendo del material mixto del conjugado. Un conjugado ilustrativo que tiene una cadena de ácido hialuronico de peso molecular de 220,000 y una molécula enlazadora de peso molecular de 23,000 tiene un peso molecular de 243,000. El peso molecular del conjugado puede variar de aproximadamente 50,000 a un exceso de 10,000,000, con un intervalo preferido de 75,000 a 1 ,000,000, un intervalo más preferido de 100,000 a 500,000, y un intervalo aun más preferido de 100,000 a 300,000. En otros casos, el conjugado se puede describir en términos de la proporción de ácido hialurónico (en peso) a polilisina (en peso), expresado como porcentaje. El conjugado también se puede describir con respecto a su relación de carga (es decir, la relación de carga negativa a positiva). Una relación de carga de menos de 1 indica una carga positiva general, mientras que una relación de carga mayor que 1 indica una carga negativa general. En modalidades importantes, la relación de carga puede variar de mayor que 1 a mayor que 10. En algunas modalidades, la relación de carga puede ser mayor que 1 , mayor que 2, mayor que 3, mayor que 4, mayor que 5, mayor que 6, mayor que 7, mayor que 8, mayor que 9, mayor que 10, mayor que 12, o incluso mayor. En otras modalidades, la relación de carga varía de 1 a 10, preferiblemente de 2 a 8, muy preferiblemente de 3 a 7, y muy prefériblemente aun de 4 a 6. En modalidades preferidas, el conjugado tiene una carga negativa general, preferiblemente a un pH en el intervalo de 6.5 a 8. A un pH mayor que 6.5, el ácido hialurónico será negativo. A un pH mayor que aproximadamente 8, los residuos de lisina se cargan de manera neutra, pero el conjugado general aun será negativamente cargado. Para conjugados que contienen poli-glutamina, el conjugado siempre será negativamente cargado sobre un pH de 6.5, debido a la carga neutra del residuo de glutamina. Como se usa aquí, un conjugado significa dos entidades establemente unidas una a otra por cualesquiera medios químicos o fisicoqu únicos. Es importante que la naturaleza de la unión sea tal que no altere sustancialmente la efectividad de ácido hialurónico o actividad del substrato de la molécula enlazadora. Manteniendo estos parámetros en mente, se puede emplear cualquier enlace conocido para un experto en la técnica, incluyendo covalente o no covalente. Se prefiere el enlace covalente. Dichos medios y métodos de unión son bien conocidos por los expertos en la técnica. En modalidades que usan polilisina como la molécula enlazadora, el ácido hialurónico y la polilisina son conjugados por una reacción de aminación. El ejemplo provee el protocolo experimental para formar conjugados de polilisina y HA. Generalmente, el extremo reductivo de ácido hialurónico es acoplado con residuos de amino sobre la polilisina para formar una base de Schiff, seguida por reducción en un enlace de ¡mino. En un diseño experimental, el ácido hialurónico y la polilisina se disuelven en un solvente tal como un regulador de pH de borato (pH 8.5) o fosfato (pH 8.2). Un reductor tal como cianoborohidruro de sodio (NaBH3CN) se añade y la reacción se deja proceder durante un tiempo que varía de 1 hora a cinco días, a una temperatura de 0 a 50°C. La reacción puede ser controlada por la adición de solventes orgánicos tales como dimetilformamida o sulfóxido de dimetilo. Se puede incrementar evitando la interacción iónica entre ácido hialurónico y polilisina. Dicha interacción iónica puede ser reducida por la adición de sales tales como cloruro de sodio o cloruro de potasio, o al incrementar la temperatura de reacción.

En algunas modalidades, el conjugado se forma usando relaciones molares de materiales de partida en el intervalo de 0:1 a 5:1 de polilisina a ácido hialurónico. En una modalidad importante, la relación molar de partida de polilisina a ácido hialurónico es de 1.3:1. Es probable que estas relaciones molares de reactivos den origen a conjugados que tengan pocas hebras de ácido hialurónico (v.gr., una o dos) conjugadas por polilisina. Ai completarse la reacción de síntesis, la solución puede ser dializada para remover polilisina no conjugada. Sin embargo, el ácido hialurónico no conjugado preferiblemente no es removido y por lo tanto la separación es una que selectivamente remueve la polilisina no conjugada pero no el ácido hialurónico no conjugado. Por ejemplo, si la técnica de separación es diálisis, entonces el tubo de diálisis se seleccioné para un tamaño de poro que permita el movimiento de polilisina (que tenga por ejemplo un PM de 23,000) pero no ácido hialurónico (que tenga por ejemplo un PM de por lo menos 100,000). En la construcción de conjugados, puede ser deseable unir la molécula enlazadora a ácido hialurónico y mediante un separador. Esto puede eliminar, por ejemplo, cualesquiera problemas que pudieran surgir por impedimento estérico, en donde el acceso por transglutaminasa a la porción reactiva de la molécula enlazadora es impedido. Estos separadores pueden ser cualquiera de una variedad de moléculas, preferiblemente no activas, tales como cadenas de carbono rectas o incluso ramificadas de Ci-C30, saturadas o insaturadas, fosfolípidos, aminoácidos (v.gr., glicina), y similares, que ocurren naturalmente o sintéticos. Los separadores adicionales incluyen carbonatas, carbamatos, fosfatos y carbamidas de alquilo y alquenilo. Estos se relacionan todos y pueden añadir funcionalidad polar a los separadores tales como el d-C½ anteriormente mencionado. Los separadores adecuados tales como aquellos provistos en el apéndice A están comercialmente disponibles por ejemplo de Pierce Chemical Co. Las conjugaciones o modificaciones que aquí se describen emplean química de rutina, que es bien conocida por lo expertos en la técnica de química y por lo tanto no forman parte de la invención. El uso de grupos protectores y enlazadores conocidos tales como enlazadores mono-y hetero-bifuncionales están bien documentados en la literatura y no se repetirán aquí. La unión de conformidad con la invención por lo tanto no necesita ser unión dirigida. Los componentes de las composiciones de la invención se pueden proveer de grupos funcionalizados para facilitar su unión y/o los grupos enlazadores pueden ser interpuestos entre los componentes de estas composiciones para facilitar su unión. Además, los componentes de las composiciones de la presente invención se pueden sintetizar en un solo procedimiento, por lo que los componentes podrían considerarse como 1 y la misma entidad. Por ejemplo, el ácido hialurónico puede ser sintetizado para incluir una poliglutamina en un extremo para enlazar el polipéptido mediante transglutaminasa. Ejemplos específicos de enlaces covalentes incluyen aquellos en donde se usan moléculas enlazadoras bifuncionales. Las moléculas enlazadoras pueden ser homo-bifuncionales o hetero-bifuncionales, dependiendo de la naturaleza de las moléculas que han de ser conjugadas. Los enlazadores homo-bifnuncionales tienen dos grupos reactivos idénticos. Los enlazadores hetero-bifuncionales se definen como aquellos que tienen dos grupos reactivos diferentes que permiten una reacción de conjugación secuencial. Varios tipos de enlazadores comercialmente disponibles son reactivos con uno o más de los siguientes grupos: aminas primarias, aminas secundarias, sulfhidrilos, carboxilos, carbonilos y carbohidratos. Ejemplos de enlazadores específicos de amina son suberato de bis(sulfosuccinimidilo), bis[2-(succinimidooxicarboniloxi)etil]sulfona, suberato de disuccinimidilo, tartrato de disuccinimidilo, adipimato de dimetilo 2 HCI, pimelimidato de dimetilo 2HCI, suberimidato d dimetilo 2 HCI, y bis-[succinimidil-[succinato]] de etilenglicol. Los entrelazadores reactivos con grupos sulfhidrilo incluyen bismaleimidohexano, 1 ,4-di-[3'-(2'-piridilditio)-propionamido)]butano, 1-[p-acidosalicilamido]-4-[yodoacetamido]butano, y N-[4-(p-acidosalicilamido)butil]-3'-[2'-piridilditio]propionamida. Los entrelazadores preferencialmente reactivos con carbohidratos incluyen acidobenzoilhirazina. Los entrelazadores preferiblemente reactivos con grupos carboxilo incluyen 4-[(p-acidosalicilamido]butilamina. Los entrelazadores heterobifuncionales que reaccionan con aminas y sulfhidrilos incluyen 3-[2-piridilditio]propionato de N-succinimidilo, [4-yodoacetil]aminobenzoato de succinimidilo4-[N-male¡midometil]ciclohexan-1-carboxilato de succinimidilo, éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida, 6-[3-[2-piridilditio]prop¡onamido]- hexanoato de sulfosuccinimidilo, y 4-[N-maleimidometil]ciclohexan-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo. Los entrelazadores heterobifuncionales que reaccionan con grupos carboxilo y amina incluyen clorhidrato de 1-etil-3-[[3-dimetilaminopropilj-carbodiimida. Los heterobifuncionales que reaccionan con carbohidratos y sulfhidrilos incluyen hidrazida HCI 2 de 4-[N-maleimidometil]-ciclohexan-1-carboxilhidrazida-2 HCI, 4-(4-N-maleimidofenil)-butírico, y 3-[2-piridilditio]propionilhidrazida. Los entrelazadores son bis-Q3-4-acidosalicilamido)etil]disulfuro y glutaraldehído. Los grupos amina o tiol se pueden añadir en cualquier nucleótido de un ácido nucleico sintético para proveer un punto de unión para una molécula entrelazadora bifuncional. El ácido nucleico se puede sintetizar incorporando reactivos competentes a la conjugación tales como modificador de amino de uni-enlace, 3'-DMT-C6-amina-ON CPG, modificador de amino II, N-TFA-C6-modificador de amino, C6-modificador de tiol, C6-disulfuro-fosforamidita y C6-disulfuro-CPG (Clontech, Palo Alto, CA). Otros enlazadores para conjugar ácido hialurónico a los substratos de transglutaminasa de la invención incluyen enlazadores de péptido descritos en la patente de E.U.A. No. 5,342,770. Otras composiciones de enlazador químico se describen en la patente de E.U.A. No. 6,303,555 B1 (v.gr., ácidos carboxílicos que tienen 4-6 átomos de carbono, o alcohol polihídrico etoxilado, o polivinilpirrolidona, o polietilenglicol de PM 6000-10,000), patente de E.U.A. 5,952,454 (separador para conjugar donador de glicosilo a un portador que contiene amina), patente de E.U.A. 6,361 ,777 B1 (enlazador de amino tiol), patente de E.U.A. 4,680,338 (enlazadores bifuncionales), patente de E.U.A. 5,034,514, entre otros. En algunas modalidades, puede ser conveniente unir ácido hialurónico a la molécula enlazadora mediante un enlace que digiera bajo condiciones fisiológicas normales o que se pueda hacer que digiera específicamente con la aplicación de un estímulo tal como la luz, por lo que el agente puede ser liberado. En ciertas modalidades, el ácido hialurónico puede ser inactivo en su forma conjugada y activo cuando es liberado. En otros casos, el ácido hialurónico sería liberado para ejercer una actividad lejana de su punto de unión al tejido corporal. En otros casos más, el ácido hialurónico sería liberado de una manera sostenida, para prolongar su liberación en comparación con el ácido hialurónico aplicado a tejido pero no covalentemente unido al mismo. Los enlaces fácilmente digeribles incluyen enlaces fácilmente hidrolizables, por ejemplo, enlaces de éster, enlaces de amida y enlaces de tipo base de Schiff. Los enlaces que son digeribles por la luz son bien conocidos. En otras modalidades más el enlace digerible como tal puede ser el enlace peptídico entre unidades de monómero de la molécula enlazadora. Dichos enlaces pueden ser digeridos por proteinasas tales como tripsina, que se pueden usar en soluciones de resistencia variable dependiendo del tejido afectado. También se pueden usar métodos de conjugación no covalentes. La conjugación no covalente incluye interacciones hidrofóbicas, interacciones iónicas, interacciones de alta afinidad tales como formación de complejo de biotina-avidina y biotina-estreptavidina y otras interacciones de afinidad. En una modalidad, una molécula tal como avidina se une a una molécula enlazadora tal como poliglutamina. El conjugado, una vez unido a tejido de conformidad con la invención, se convierte entonces en una porción enlazadora universal para cualquier agente unido a una molécula de biotina. Las moléculas enlazadoras pueden ser parte de una micropartícula tal como una microesfera o una nanosfera, y ácido hialurónico puede estar contenido en la micropartícula, ya sea físicamente atrapado con la misma, covalentemente unido a la misma o de otra manera fisicoquímicamente unido a la micropartícula. En modalidades preferidas, las microesferas o nanoesferas portan, por lo menos sobre su superficie, polímeros ricos en glutamina, lisina o tanto glutamina como lisina. Los métodos para fabricar micropartículas están documentados y no forman una base para la presente invención. La presente invención difiere de aquellas de la técnica anterior sólo en que ya sea los polímeros de la estructura de micropartículas mismos contienen o se derivan para contener glutaminas y/o lisinas, o polímeros de glutamina, lisina o glutamina y lisina se incluyen dentro de la mezcla de polímeros que forman la matriz, por lo que dichos polímeros son atrapados en toda y/o en la superficie de las micropartículas. Ejemplos de microesferas y nanoesferas y su método de fabricación se pueden encontrar en la patente de E.U.A. 5,075,019, PCT W095/24929, PCT W094/23738 y PCT/US96/11990, cuyas descripciones se incorporan aquí por referencia. En otro aspecto adicional de la invención, los conjugados de ácido hialurónico con cualquier número de moléculas enlazadoras, incluyen aquellos mencionados aquí y aquellos conocidos en la técnica se usan para el suministro de una variedad de agentes terapéuticos a un tejido corporal o superficie corporal. En algunas modalidades importantes, los enlazadores son los enlazadores que contienen amina alifática y carboxamida que aquí se mencionan. En este aspecto de la invención, se pretende que el ácido hialurónico actúe como una molécula portadora para el agente terapéutico, y el ácido hialurónico mismo pueda o no impartir beneficio terapéutico. Otras moléculas enlazadoras se describen en la patente de E.U.A. 6,267,957 B1. Los contenidos completos de esta patente se incorporan aquí por referencia. Esta última patente también describe una variedad de agentes terapéuticos que se pueden administrar por medio del ácido hialurónico. Ejemplos de agentes terapéuticos que se pueden usar incluyen agente adrenérgico; esteroide adrenocortical; supresor adrenocortical; disuasivo de alcohol; antagonista de aldosterona; aminoácido; destoxicante de amoníaco; anabólico; analgésico; andrógeno; anestesia; auxiliar para; anestésico; anoréctico; antagonista; supresor de la pituitaria anterior; antihelmíntico; agente antiacné; antiadrenérgico; antialérgico; anti-amibas; antiandrógeno; anti-anémico; antianginal; antíansiedad; antiartrítico; antiasmático; antiaterosclerótico; antibacteriano; anticolelítico; anticolelitogénico; anticolinérgico; anticoagulante; anticoxidal; anticonvulsionante; antidepresivo; antidiabético; antidiarreico; antidiurético; antídoto; anti-emético; antiepiléptico; anti-estrógeno; antifibrinolítico; antimicótico; agente antiglaucoma; antihemofílico; antihemorrágico; antihistamínico; antihiperlipidemia; antihiperlipoproteínémico; antihipertensivo; antihipotensivo; anti-infectivo; antiinfectivo, tópico; anti-inflamatorio; agente antiqueratinizante; antimalarial; antimicrobiano; antimigraña; antimitótico; antimicótico; antináuseas; antineoplásico, antineutropénico, agente antiobesidad; antiparasítico; antiparkinsoniano; antiperistáltico, antineumocístico; antiproliferativo; antihipertrofia prostética; antiprotozuario; antiprurítico; antísicótico; antireumático; antiesquistosomal; antiseborreico; antisecretor; antiespasmódico; antitrombótico; antitusivo; antiulcerativo; anti-urolítico; antiviral; supresor del apetito; agente de terapia de hiperplasia prostética benigna; regulador de glucosa en la sangre; inhibidor de reabsorción de hueso; broncodilatador; inhibidor de anhidrasa carbónica; depresivo cardíaco; cardioprotector; cardiotónico; agente cardiovascular; colerético; colinérgico; agonista colinérgico; desactivador de colinesterasa; coxidiostático; adyuvante de cognición; incrementador de cognición; depresivo; auxiliar de diagnóstico; diurético; agente dopaminérgico; ectoparasiticida; emético; inhibidor de enzima; estrógeno; fibrinolítico; agente fluorescente; depurador de radicales de oxígeno libres; efector de motilidad gastrointestinal; glucocorticoide; principio estimulante de gonadas; estimulante del crecimiento del cabello; hemostático; antagonistas de receptor de histamina H2; hormona; hipocolesterolémico; hipoglicémico; hipolipidémico; hipotensivo; agente formador de imagen; agente inmunizante; inmunomodulador; ¡nmunoregulador; inmunoestimulante; inmunosupresor; auxiliar de terapia para impotencia; inhibidor; queratolítico; agonista de LNRH; tratamiento de trastorno hepático; luteolicina; adyuvante de memoria; mejorador de rendimiento mental; regulador del humor; mucolítico; agente protector de la mucosa; midriático; descongestionante nasal; agente bloqueador neuromuscular; neuroprotector; antagonista de NMDA; derivado de esteral no hormonal; oxitócico; activador de plasminógeno; antagonista de factor activador de plaquetas; inhibidor de agregador de plaquetas; post-accidente vascular cerebral y tratamiento de post-trauma cefálico; potenciador; progestina; prostaglandina; inhibidor de crecimiento de próstata; protirotropina; psicotrópico; superficie pulmonar; agente radioactivo; regulador; relajante; agente de repartición; escabicida; agente esclerosante; sedante; sedante-hipnótico; antagonista de adenosina A1 selectivo; antagonista de serotonina; inhibidor de serotonina; antagonista de receptor de serotonina; esferoide; estimulante; supresor; esclerosis múltiple sintomática; sinergista; hormona tiroidea; inhibidor de tiroides; tiromimético; tranquilizante; tratamiento de esclerosis lateral amiotrófica; tratamiento de isquemia cerebral; tratamiento de enfermedad de Paget; tratamiento de angina inestable; uricosúrico; vasoconstrictor; vasodilatador; vulnerario; agente de cicatrización de heridas; inhibidor de xantina; oxidasa. Como será evidente para un experto en la técnica, estos últimos conjugados en los cuales se usa ácido hialurónico como un portador para otros agentes terapéuticos se puede usar en métodos terapéuticos o profilácticos para sujetos que necesitan dicha terapéutica. Está dentro del ámbito del médico identificar sujetos que se beneficiarían de la administración de dichos agentes. Los compuestos de la invención se pueden usar en un número de métodos para tratamiento de sujetos que tienen o están en riesgo de tener trastornos o síntomas particulares, como se describe aquí. Un sujeto que tiene dichos trastornos es uno al que se ha diagnosticado ya sea por medios de un médico o por autod ¡agnóstico, tener un trastorno. Dicho diagnóstico se puede hacer con base en los síntomas del sujeto de estar experimentando o sobre la base de las pruebas de laboratorio. Un sujeto que está en riesgo de tener un trastorno es uno que puede estar predispuesto a desarrollar el trastorno debido a factores ambientales, conductuales o genéticos. El trastorno o condición se trata en un sujeto que tiene un trastorno, aunque se evita en un sujeto en riesgo de tener un trastorno. Los compuestos se pueden usar en el tratamiento o prevención en un número de trastornos, incluyendo aquellos caracterizados por resequedad. Una condición caracterizada por resequedad es una en la cual un sujeto experimenta una falta de humedad o lubricación en un tejido o tejido corporal, tal como los ojos o la boca. Cabe entender que las condiciones caracterizadas por resequedad pueden afectar cualquier región del cuerpo, tanto internamente como externamente. Ejemplos de condiciones que se pueden tratar usando los métodos provistos aquí incluyen resequedad de los ojos, resequedad de la boca, resequedad de la piel (v.gr., arrugas, resequedad en la cavidad vaginal, etc. Los compuestos se pueden usar en el 7 tratamiento y/o prevención de cualquier trastorno por el cual se ha reportado previamente que el ácido hialurónico tiene que ser terapéuticamente o profilácticamente benéfico. Dichos trastornos se describirán anteriormente y son conocidos por los médicos generales. Los trastornos de la piel que se pueden tratar usando las composiciones que aquí se describen incluyen dolores causados por la cama, úlceras trágicas, quemaduras, heridas indolentes, úlceras post-traumáticas, úlcera varicosa y posflevítica, radionecrosis, lesiones de la piel tales como aquellas inducidas por virus de herpes simples y virus de piel. En estas modalidades, las composiciones se pueden administrar usando almohadillas de gasa, crema, aspersiones, y pueden incluir un agente emulsionante. Otros agentes que se pueden incluir en formulaciones tópicas incluyen manitol, polietilenglicol, ácido oleico, glicerol, sorbitol, benzoato de p-oximetilo, jalea de parafina y glicina. Otros trastornos que se pueden tratar usando los compuestos de la invención incluyen trastornos respiratorios tales como enfisema, bronquitis crónica, asma, edema pulmonar, síndrome de insuficiencia respiratoria aguda, displasia broncopulmonar, fibrosis pulmonar y atelectasis pulmonar. Para estos trastornos, las composicones se pueden administrar por vía intratraqueal, incluyendo por medio de aerosol, nebulizador o instilación. La cistitis intersticial es otro trastorno que se puede tratar usando las composiciones de la invención. Los sujetos que tienen cistitis intersticial comúnmente tienen síntomas tales como urgencia y frecuencia incrementada de urinación, dolor suprapúbico que puede ser aliviado por urinación, artritis, colon espástico y fiebre de grado inferior. Las composiciones preferiblemente se instilan directamente en la vejiga urinaria y/o estructuras anatómicas asociadas, por ejemplo usando un catéter. Los volúmenes instilados pueden variar de 5 mi a 100 mi, con volúmenes más preferibles entre 20 mi y 70 mi. También se contempla la administración transabdominal. Los compuestos se pueden usar también en sujetos que experimentan malestar de articulaciones. Un sujeto que experimenta malestar de articulaciones es uno que experimenta malestar o dolor en las articulaciones tales como rodillas y articulaciones de los brazos. Este malestar a menudo puede ser experimentado durante el movimiento que requiere doblez de las articulaciones, y está asociado con la falta de movilidad de dichas articulaciones. A menudo es una manifestación de artritis. Los sujetos que han de ser tratados de esta manera incluyen aquellos que tienen o están en riesgo de desarrollar trastornos de articulaciones tales como osteoartritis, sinuritis aguda o crónica, procesos degenerativos en cartílago articular y enfermedad de resequedad de articulaciones. Los síntomas comúnmente asociados con estas condiciones incluyen dolor y función de articulaciones alterada. En estas modalidades, las composiciones se pueden administrar como inyecciones intra-articulares. Dichas composiciones pueden comprender colágenos, proteoglicanos, glicosaminoglicanos, glicoproteínas, ceniza sulfatada, albúmina y conservadores tales como benzoato de sodio, metilparabeno, propilparabeno. La inyección puede ocurrir en cualquier articulación del cuerpo pero sin limitarse al carpelo, espolón, falange tercera, o articulaciones tibotarsales, articulaciones intertarsales o tarsometatarsales, sacos lateral y medio de la articulación femorotibial o de la articulación femoropateral. Los métodos relacionados con el tratamiento o prevención de trastornos de articulaciones son particularmente adecuados para animales tales como caballos de carreras. Los compuestos también son útiles en sujetos que tienen coagulación sanguínea excesiva o sujetos en riesgo elevado en desarrollar un coágulo sanguíneo, o que tienen o están en riesgo de tener un evento cardiovascular adverso. Estos sujetos tienen ya sea un coágulo sanguíneo preexistente, o pueden estar predispuestos para desarrollar un coágulo sanguíneo debido a factores ambientales, conductuales (v.gr., dieta) o genéticos. Un riesgo elevado de desarrollar un coágulo sanguíneo es uno que está por arriba del riesgo de una población normal de sujetos. La coagulación sanguínea excesiva es coagulación de la sangre que ocurre de manera inapropiada, y que es ya sea más frecuente o más severa que aquella experimentada por una población normal de sujetos. A estos sujetos comúnmente se les administran compuestos de la invención mediante el uso de dispositivos médicos intravenosos o intraarteriales tales como stents o angioplastias de balón. Los compuestos pueden ser aplicados como revestimiento sobre el dispositivo médico o se pueden administrar mediante bolo o inyección continua. Las composiciones que aquí se proveen por lo tanto tienen utilidad en la prevención de restenosis. Alternativamente, los conjugados opcionalmente junto con ácido hialurónico libre se pueden usar en la preparación de canales de guía, derivaciones, venas artificiales, desviaciones, así como otros biomateriales usados en el sistema cardiovascular. En algunas modalidades, las composiciones se suministran a un tejido o superficie corporal en la preparación para tratamiento con otro agente terapéutico. Se sabe que el ácido hialurónico permeabiliza los tejidos y por lo tanto es útil para incrementar la recepción de un tejido corporal para otro agente. Los tejidos así tratados pueden ser aquellos que son subperfusionados ya sea normalmente o debido a un estado patológico. Las composiciones que aquí se proveen se pueden usar en el tratamiento de sujetos que tienen resequedad en los ojos o resesquedad de la boca, pero su uso no es limitado. La resequedad de los ojos puede resultar de un número de condiciones subyacentes incluyendo pero sin limitarse a trastornos autoinmunes que dañan las glándulas lacrimales (es decir, producción de lágrimas), tales como artritis reumatoide, síndrome de Sjógren, y lupus eritrematoso sistémico, y esclerosis y sarcoidosis sistémicas. Muchos de estos sujetos han disminuido la capacidad de formación de lágrimas. Se diagnostica a los sujetos con resequedad persistente en los ojos incluyendo la cornea y/o conjuntiva son candidatos adecuados para los métodos de tratamiento que aquí se describen. Estos sujetos generalmente pueden quejarse de malestar ligero a dolor severo en los ojos, visión borrosa, contextura arenosa y/o sensación de ardor, y comezón, y pueden estar presentes úlceras y/o cicatrización de la córnea. La invención también provee métodos para tratar a sujetos que tienen resequedad de la boca. La resequedad de la boca (es decir, cavidad oral) puede resultar del estrés, una condición subyacdente tal como síndrome de Sjógren y esclerosis sistémica, infección de glándulas salivales (es decir, producción de saliva), uso de medicamentos particulares tales como anticolinérgicos, diuréticos, antihistamínicos, clonidina, levodopa, metildopa, y antidepresivos tricíclicos, o exposición a terapia de radiación. Los sujetos que tienen resequedad de la boca generalmente se quejan de dificultad y dolor al deglutir y hablar, interferencia con la sensación del gusto y, en algunos casos, descomposición de los dientes. La resequedad de los ojos también es común en mujeres post-menopáusicas debido a cambios hormonales. Además del alivio de los síntomas de resequedad de los ojos y resequedad de la boca, los conjugados de ácido hialurónico de la invención también se pueden usar en otras situaciones en donde es deseable mantener cierto nivel de humedad y humectación en un tejido o superficie. Ejemplos incluyen cirugías intraoculares tales como remoción de cataratas, implantación de lentes intraoculares y queratoplastia. Las composiciones se pueden usar además para aliviar síntomas que implican resequedad de otros tejidos de mucosa (v.gr., vaginal, rectal, nasal, anal, etc.) así como tejidos externos (v.gr., cabello, uñas, labios, etc.). En otras modalidades, los conjugados están diseñados para usarse en sujetos en riesgo de coagulación de plaquetas anormal ya que se ha reportado que el ácido hialurónico inhibe la agregación de plaquetas. Dichos sujetos pueden sufrir procedimientos invasivos tales como colocaciones de stent o angiografía de balón, y los conjugados de la invención se pueden administrar usando estos dispositivos, aunque su administración no es tan limitada. Se debe entender que las composiciones provistas se pueden usar tanto en métodos terapéuticos como en métodos profilácticos. Cuando se usan terapéuticamente, los conjugados están diseñados para aliviar síntomas preexistentes en un sujeto y por lo tanto se pueden administrar después de que el sujeto se queja de los síntomas. Cuando se usan profilácticamente, los conjugados están diseñados para prevenir síntomas contra surgimiento, o para demorar su inicio, en sujetos que están comprometidos o que estarán comprometidos en actividades que se sabe que causan tales síntomas. Estas actividades incluyen, en el caso de resequedad de los ojos, por ejemplo por lectura excesiva, uso excesivo de la computadora y potencialmente uso prolongado de lentes de contacto. Un "sujeto" significará un humano o animal vertebrado incluyendo pero sin limitarse a un perro, gato, caballo, vaca, cerdo, oveja, cabra, pollo, primate, v.gr., mono, pez (especies de acuacultura), v.gr., salmón, rata y ratón. Las composiciones de la invención se administran en cantidades efectivas. El término "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad necesaria o suficiente para llevar a cabo un efecto biológico deseado. Por ejemplo, una cantidad efectiva de un conjugado que contiene ácido hialurónico es aquella cantidad necesaria para reducir o eliminar síntomas de resequedad de los ojos, si los sujetos están siendo tratados para esos síntomas. Sí el sujeto que está siendo tratado es uno que tiene o sospecha que tiene resequedad de la boca, la cantidad efectiva es aquella cantidad necesaria para reducir o eliminar los síntomas de resequedad de la boca. Como se usa aquí, "tratamiento" se refiere a la eliminación completa de síntomas, tal como pero sin limitarse a aquellos asociados con resequedad de los ojos o resequedad de la boca. Como un ejemplo, un sujeto que experimenta síntomas de resequedad de los ojos antes del tratamiento sería "tratado" sí los síntomas de resequedad de los ojos disminuyesen en severidad o frecuencia, o se eliminasen por completo después del tratamiento. Los síntomas asociados con resequedad de los ojos o resequedad de la boca se describen aquí. En combinación con las enseñanzas que aquí se proveen, al elegir entre las diversas estructuras conjugadas y factores de ponderación tales como potencia, biodisponibilidad relativa, peso corporal del paciente, severidad de efectos colaterales advérsos y modo de administración preferido, se puede planear un régimen de tratamiento profiláctico o terapéutico efectivo que no cause toxicidad o irritación sustancial y sin embargo que sea completamente efectivo para tratar al sujeto particular. La cantidad efectiva para cualquier aplicación particular puede variar dependiendo de factores tales como la enfermedad o condición que se esté tratando o los síntomas que se estén aliviando, el conjugado particular que se esté administrado, el tamaño del sujeto, o la severidad de la enfermedad, condición o síntoma. Un experto en la técnica puede determinar empíricamente la cantidad efectiva de un conjugado particular sin necesidad de experimentación extraordinaria. La cantidad efectiva del conjugado también dependerá de la naturaleza exacta del conjugado, incluyendo pero sin limitarse a la relación de ácido hialurónico a molécula enlazadora y la longitud o peso molecular del ácido hialurónico y la molécula enlazadora. Cuando se aplica en una forma libre, el hialuronato de sodio se ha administrado al ojo en una solución al 0.1% (p/v) (es decir, 1 mg/ml). Sin embargo, dada la capacidad del ácido hialurónico de la presente invención para unirse a la superficie ocular a través de la molécula enlazadora, se espera que una cantidad inferior de ácido hialurónico sea necesaria en la presente formulación. Preferiblemente, la forma de dosis administra una cantidad de conjugado que tiene una potencia que es el equivalente a una solución al 0.1% de ácido hialurónico libre por dosis. Generalmente se recomienda que el conjugado se formule para suministrar por lo menos 50 µg de ácido hialurónico por administración si es a los ojos, y por lo menos 1 mg de ácido hialurónico por administración si es a la cavidad oral. Las formulaciones diseñadas para la cavidad oral pueden ser más concentradas que aquellas para los ojos dada el área de superficie más grande que ha de ser tratada en la cavidad oral. Las presentes dosis de los compuestos que aquí se describen típicamente varían de aproximadamente 0.001 mg/día a 16,000 mg/día, muy típicamente de aproximadamente 0.05 mg/día a 8000 mg/día, y muy típicamente aún de aproximadamente 0.1 mg/día a 4000 mg/día. Dicho en términos de peso corporal del sujeto (y suponiendo un peso corporal promedio de 80 kg), las dosis típicas varían de aproximadamente 0.00001 a 200 mg/kg/día, muy típicamente de aproximadamente 0.0006 mg/kg/día, y muy típicamente aun de aproximadamente 0.001 a 50 mg/kg/día. De manera similar, los volúmenes en los cuales los conjugados se suministrarán variarán dependiendo del sitio de administración. Sí se suministran a los ojos, son preferibles volúmenes menores de 2 mi, menores de 1 mi, menores de 0.5 mi, menores de 0.25 mi, menores de 0.1 mi, menores de 0.05 mi, menores de 0.025 mi, o inferiores. Sí se suministran a la cavidad oral, los volúmenes entonces pueden ser mayores, particularmente sí el conjugado se suministra en una formulación de gran volumen tal como un enjuague bucal. Alternativamente, sí el conjugado se suministra como aspersión a la cavidad oral, entonces el volumen podría estar en escala de volúmenes de administración ocular. Los conjugados se pueden administrar a un sujeto por cualquier modo, sin embargo, se prefiere que el modo se relacione con la condición y síntoma que se esté tratando. Por ejemplo, cuando se usan para tratar síntomas de resequedad de los ojos, los conjugados se administran a los ojos. Cuando se usan para tratar síntomas de resequedad de la boca, los conjugados se administran a la cavidad oral. Cuando se administran oralmente, los conjugados están diseñados para ser suministrados directamente a la cavidad oral (incluyendo, en algunos casos, la región de la garganta), en vez del estómago u otras regiones del tracto intestinal. Otras vías de administración incluyen pero no se limitan a intranasal, intratraqueal, inhalación, vaginal, tópica, intraarticulación e intravenosa. Los compuestos se proveerán en diferentes recipientes, vehículos o formulaciones dependiendo del trastorno y modo de administración. Por ejemplo, y como se describe con más detalle aquí, para aplicación oral, los compuestos se pueden administrar como tabletas sublinguales, gomas, enjuagues bucales, pasta de dientes, caramelos, geles, películas, etc.; para aplicación ocular, como gotas para los ojos en goteros para los ojos, pomadas para los ojos, geles para los ojos, cubiertas para los ojos, como un revestimiento sobre un lente de contacto o un lente infraocular, en soluciones de almacenamiento o limpieza para lentes de contacto, etc.; para aplicación tópica, como lociones, pomadas, geles, cremas, aspersiones, tejidos, hisopos, toallas, etc.; para aplicación intra-articular, como una solución inyectable suministrada intra-articularmente, etc.; para aplicación en vasos sanguíneos, como un revestimiento sobre un dispositivo médico, una solución inyectable, etc; para aplicación vaginal o rectal, como una pomada, un tampón, un supositorio, una formulación mucoadhesiva, etc. Los conjugados de la invención se pueden administrar a sujetos que tienen resequedad de los ojos en una variedad de composiciones en formas físicas que son adecuadas para administración ocular. Las composiciones diseñadas para administración ocular pueden ser compatibles con el ambiente de los ojos, por lo menos en términos de pH, y composición y concentración de sales. Las composiciones no deben irritar los ojos. Las composiciones se pueden administrar a los ojos en varias formas físicas incluyendo pero sin limitarse a una solución líquida, una pomada o gel oftálmico, o cubierta para los ojos tal como un tapón de algodón. Las soluciones líquidas convenientemente se administran con el auxiliar de un gotero para los ojos y se puede proveer en un frasco con gotero para los ojos. Un frasco con gotero para los ojos es un contenedor que incluye un gotero para los ojos que se usa para remover líquido del contenedor puede ser de vidrio o de plástico, y puede ser de tamaño variable dependiendo del volumen de líquido y su vida de anaquel. Las soluciones que no contienen conservadores, tales como conservadores oftálmicos, tienden a tener una vida de anaquel más corta y por lo tanto generalmente se preparan en volúmenes más pequeños. Por lo tanto, en algunas modalidades importantes, las composiciones se proveen en frascos con gotero para los ojos que contienen a un máximo, volúmenes del orden de 0.5 mi o volúmenes del orden de 5.0 mi. Estas últimas modalidades corresponden a un solo uso, o unidades semanales individuales, y opcionalmente no contienen conservadores oftálmicos. Una pluralidad de dichos frascos de volúmenes más pequeños (v.gr., frascos preparados por el método de sellado mediante llenado por soplado) se pueden proveer en un equipo, que opcionalmente puede comprender un alojamiento externo tal como una caja o bolsa, un respaldo tal como un cartón o un respaldo de plástico. El equipo puede contener instrucciones para el uso de la composición, como se delinea aquí. Las composiciones también se pueden proveer en soluciones rutinariamente usadas y comerciaimente disponibles para cuidado de los ojos. Por ejemplo, las composiciones se pueden mezclar con soluciones para lentes de contacto, tales como soluciones de limpieza de lentes de contacto, soluciones de almacenamiento de lentes de contacto o soluciones de gotas para los ojos para usuarios de lentes de contacto. Las soluciones para lentes de contacto son conocidos en la técnica y originalmente se refieren a soluciones que se usan ya sea para almacenar o limpiar lentes de contacto, o soluciones usadas para usuarios de lentes de contacto tales como gotas para los ojos o formulaciones de lágrimas artificiales. Cuando se proveen juntas para usuarios de lentes de contacto, las composiciones pueden reducir la fricción entre la cornea y los lentes de contacto. Las composiciones también se pueden proveer en forma de películas, y dichas películas pueden ser aplicadas como revestimiento de lentes de contacto, por ejemplo, por los fabricantes de lentes de contacto, a fin de prolongar el uso de lentes de contacto sin resequedad de los ojos o irritación de los ojos. De manera similar, las composiciones se pueden incluir en la solución en la cual los lentes de contacto se proveen comerciaimente. Las composiciones se pueden formular de manera similar como geles o pomadas oculares, tales como aquellas conocidas en la técnica. Las composiciones diseñadas para administración ocular pueden contener otros agentes que se han descrito para soluciones oculares, geles, etc., o que se sabe que están presentes en las lágrimas. Un ejemplo es la lisozima que se sabe que está presente en las lágrimas. En algunas modalidades que implican administración ocular, la composición se puede tratar a fin de eliminar el color (haciendo así la solución clara e incolora). Alternativamente, puede ser deseable añadir o cambiar el color de la composición, en particular si el color se usa para confirmar el suministro de la composición a los ojos. En algunas modalidades, las composiciones oculares no contienen conservadores y más bien se filtran en forma estéril (v.gr., a través de un filtro de 0.22 µ??), y se empacan como cantidades de uso individuales. Por lo tanto, en algunos casos las composiciones de la invención se preparan y/o se empacan en unidad de cantidades de uso. Una unidad de cantidad de uso puede ser aquella cantidad que es requerida para una administración o administraciones para un día, una semana, un mes o más. Preferiblemente, una unidad de cantidad de uso será aquella cantidad requerida ya sea para una administración o para cuando mucho varios días (pero menos de una semana) de administración. La unidad de empaque de uso es útil para prevenir contaminación de soluciones, que reduce el número de veces que un individuo debe hacer contacto con la solución. Los conjugados de la invención de manera similar se pueden administrar al sujeto que tenga resequedad de la boca en una variedad de composiciones y formas físicas adecuadas para administración oral o bucal.

Los términos "oral y "bucal" se usan de manera intercambiable aquí para indicar la cavidad oral, que abarca los labios, dientes, boca, paladar y región de la garganta superior. Las composiciones diseñadas para administración oral o bucal pueden ser compatibles con el ambiente de la cavidad oral. Los requerimientos para formulaciones de suministro oral o bucal son generalmente menos estrictos que para formulaciones de suministro ocular. Sin embargo, las consideraciones de sabor y olor son importantes en formulaciones orales o bucales y muy probablemente son menos importantes para formulaciones oculares. En modalidades preferidas, las composiciones se suministran a la cavidad oral y permanecen en la misma, independientemente por su forma física. Por lo tanto, es preferible que las composiciones se provean en formas tales como pastillas, aspersiones, gomas, tabletas sublinguales, enjuagues bucales, geles orales, pastas de dientes, parches mucoadhesivos, y similares, que permanezcan en la cavidad oral y no sean digeridos en el tracto gastrointestinal. Cuando se suministran oralmente, los conjugados hacen contacto con la mucosa oral incluyendo la mucosa sublingual. "Mucosa" se refiere a una membrana mucosa. "Mucosa oral", como se usa aquí, se refiere a la mucosa de la boca y región de la garganta superior. "Sublingual" se refiere al área de la cavidad oral por debajo de la lengua. Una forma oral adecuada es una tableta sublingual. Una tableta sublingual suministra el conjugado a la mucosa sublingual. Como se usa aquí, "tableta" se refiere a forma de dosis farmacéutica preparadas por compresión o moldeo. Las tabletas sublinguales son pequeñas y planas, para colocarse debajo de la lengua y disenadas para desintegración y liberación rápida, casi instantánea de conjugado a la mucosa sublingual. El término "desintegración" significa rompimiento. Preferiblemente, las tabletas sublinguales de la presente invención se desintegran, para liberar el conjugado, dentro de cinco minutos y, muy preferiblemente, dentro de un período de dos minutos. El conjugado liberado queda entonces disponible para ser unido a la mucosa oral mediante la acción de transglutaminasa endógena presente en la cavidad oral. Otras formas de formulaciones de suministro oral incluyen pastillas, gomas y películas disolvibles delgadas. Las formulaciones orales también pueden estar en forma líquida. El líquido se puede administrar como una aspersión o gotas a la cavidad completa incluyendo regiones seleccionadas tales como el área sublingual. Las aspersiones y gotas de la presente invención se pueden administrar por medio de frascos de aspersión estándares o frascos con gotero adaptados para administración oral o sublingual. La formulación líquida preferiblemente está contenida en una frasco de aspersión, nebulizador fino o contenedor de niebla en aerosol, para facilidad en administración en la cavidad ora!. Las formulaciones líquidas en un gotero o frasco de aspersión calibrada para suministrar una cantidad predeterminada de la composición a la cavidad oral. Los frascos con aspersiones calibradas o goteros son conocidos en la técnica. Los conjugados de la invención también se pueden formular como geles orales. Como un ejemplo, el conjugado se puede administrar en un gel no soluble en agua adherente a la mucosa. El gel está hecho de por lo menos una alquilcelulosa o hidroxialquilcelulosa ¡nsoluble en agua, un solvente no acuoso volátil y el conjugado. Aunque se puede añadir un polímero bioadhesivo, no es esencial. Una vez que el gel se pone en contacto con una superficie de la mucosa, forma una película de adhesivo debido principalmente a la evaporación del solvente volátil o no acuoso. La capacidad del gel para permanecer en una superficie de la mucosa está relacionada con su consistencia de película y la presencia de componentes no solubles. El gel se puede aplicar a la superficie de la mucosa mediante aspersión, goteo o aplicación con el dedo o un hisopo. Los conjugados de la invención también se pueden conjugar como enjuagues bucales o pastas de dientes. En donde es necesario, las formulaciones de suministro pueden comprender agentes saborizantes, colorantes y/o de esencias. Los agentes saborizantes, colorantes y/o de esencias ayudan a mejorar la aceptación por el usuario de la composición. Los agentes saborizantes son agentes que proveen un sabor a una formulación de otra manera insípida, agentes que incrementan un sabor preexistente pero débil, o agentes que cubren o cambian un sabor preexistente y no paiatable a uno que es más palatable. Los agentes saborizantes son conocidos en la técnica y están comercial mente disponibles de un número de proveedores tales como Wamer-Jenkinson Company, Inc.

Ejemplos de agentes saborizantes incluyen extracto, polvo de hojas o aceite de menta, extracto, polvo de hojas o aceite de hierbabuena; aceite de piróla; extracto de vainilla; perejil; aceite de orégano; aceite de hoja de laurel; aceite de clavo; aceite de salvia; aceite de sasafrás; aceite de limón; aceite de naranja, aceite de anís; benzaldehído, aceite de almendra; alcanfor; aceite de hoja de cedro; aceite de mejorana; aceite de citronela; aceite de lavanda; aceite de mostaza; aceite de pino; aceite de hojas de pino; aceite de romero; aceite de tomillo; aceite de hoja de canela; mentol; carvona, anetol; eugenol; salicilato de metilo; limoneno; cimeno; alcohol-n-decílico; citronelol; a-terpineol; acetato de metilo; acetato de citronelilo; metil eugenol; cineol; linalol; etil linalol; vainillina; timol; aceite de pelira; aceite de gaulteria; aceite de eucalipto; cafeína, crema tártara, ácido láctico, ácido málico, glutamato monosódico, nitritos, sorbitol, etc. Los agentes saborizantes son más deseables en donde la formulación está diseñada para administración bucal u oral. Los agentes saborizantes también incluyen agentes edulcorantes (es decir, que endulzan tales como aspartame, acesulfame, sacarina, dextrosa, levulosa, ciclamato de sodio, esteviósido, neo-hesperidildihidrocalcona, glicirricina, perilartina, taumatina, éster metílico de aspartilfenilalanina, aldehido p-metoxicinámico, etc. De manera similar, los agentes colorantes son agentes que proveen color a una formulación de otra manera incolora, agentes que mejoran un color preexistente pero débil o agentes que cubren o cambian un color preexistente pero potencialmente no agradable. Los agentes colorantes también incluyen agentes que convierten una formulación de color a una incolora. Los agentes colorantes son conocidos en la técnica y se pueden encontrar de los proveedores de agentes saborizantes tales como los que se listaron anteriormente. Los agentes colorantes pueden ser deseables para formulación ocular así como oral. Un ejemplo de un agente colorante adecuado es dióxido de titanio. Los agentes colorantes de formulación oral adecuados incluyen azul #1 de FD&C, amarillo #5 y #10 de FD&C, rojo #3 y #40 de FD&C; color caramelo o polvo (#05439), sombra chocolate (#05349), mezcla de laca verde (#09236), dióxido de titanio de kowet (#03970), color líquido amarillo (#00403), y nitritos. Los agentes de esencia son agentes que proveen esencia (es decir, fragancia) a una formulación de otra manera inodora, agentes que incrementan una esencia preexistente pero débil, o agentes que cubren o cambian un olor preexistente pero potencialmente no agradable. Los agentes de esencia también incluyen agentes que convierten una formulación de olor en una inodora. Los agentes de esencia son conocidos en la técnica y se pueden encontrar en los proveedores de agentes saborizantes tales como los que se listaron anteriormente. Ejemplos de agentes de esencia incluyen agentes de esencias naturales tales como extractos de flor, hierbas, floral, o de plantas y agentes de esencias artificiales. Los agentes de esencias pueden ser deseables para formulación ocular así como oral. Un ejemplo de tableta sublingual adecuada se hace de acuerdo con la siguiente formulación: conjugado de ácido hialurónico y polilisina (formulado para proveer 1 mg de conjugado por tableta); manitol USP (grado DC) 31.5 mg; celulosa microcristalina 40.35 mi; glicolato de almidón sódico NF 2.6 mg; sacarina de sodio, USP 0.5 mg; sabor S.D. menta, laca de aluminio 0.2 mg, estearato de magnesio, NF 0.5 mg; aerosil 200, 0.4 mg. Otro ejemplo de una tableta sublingual adecuada se hace de acuerdo con la siguiente formulación: conjugado de ácido hialurónico y polilisina (formulado para proveer 1 mg de conjugado por tableta); manitol, 30.30 mg; celulosa microcristalina (FMC) 4.00, 34.00 mg; glicolato de almidón de sodio (EXPLS TAB Mendell) 2.60; estearato de magnesio NF 0.50 mg; sacarina de sodio (Mallinckrodt) 2.00 mg; aspartame (Neutrasweet) 4.00 mg; menta (Virginia Daré HF82 SD #517) 0.40 mg; vainilla (Virginia Daré 800 NAT) 0.30 mg; AFCO magnasweet 188M 0.25 mg; prosweet #560 (MM54) 0.75 mg; sabor chocolate #6822.00 mg; amarillo # 0 de D&C. Los expertos en la técnica reconocerán que se pueden hacer fácilmente modificaciones a estas formulaciones. Se debe entender que otros componentes se pueden añadir a las formulaciones de la invención, incluyendo componentes que como tales son terapéuticos o benéficos para el sujeto. Por ejemplo, las formulaciones orales de la invención pueden incluir vitaminas o fluoruro, y las formulaciones oculares pueden incluir agentes terapéuticos tales como agentes antiglaucoma, como se conoce en la técnica. En las formulaciones anteriores, manitol, sacarina de sodio, menta, magnasweet y vainilla son agentes saborizantes que son capaces de encubrir el sabor del conjugado o proveer al mínimo un sabor palatable. Los agentes saborizantes pueden ser eliminados sin sacrificar la eficacia. Sin embargo, puede ser más difícil el acatamiento por el paciente. Los saborizantes pueden ser alterados para adecuarse a las necesidades y gustos individuales. Se usa amarillo de D&C como un colorante. El colorante puede ser fácilmente eliminado o sustituido con sus colorantes. El estearato de magnesio y Aerosol-200 son lubricantes para liberar la tableta del equipo de prensado. Estos ingredientes pueden ser sustituidos o eliminados por completo dependiendo del procedimiento de fabricación. La celulosa microcristalina, manitol y glicolato de almidón de sodio proveen el núcleo de la tableta. La celulosa y almidón facilitan la unión de los ingredientes del núcleo y facilitan la desintegración de la tableta en presencia de la humedad. Las cantidades relativas de estos ingredientes se pueden alterar para ajustar la desintegración de la tableta. Las cantidades de todos los ingredientes se ponderan y todos los ingredientes, distintos al manitol y Avicel, se hacen pasar a través de un tamiz de acero inoxidable de malla 80. Los materiales se mezclan en una bolsa de politeno de tamaño adecuado durante aproximadamente 5 minutos y se transfieren a un mezclador adecuado, tal como un mezclador de PK. Las cantidades requeridas de manitol y Avicel se hacen pasar a través de un tamiz de acero inoxidable de malla 40 y se añaden al mezclador de PK con los otros ingredientes. La mezcla se licúa en el mezclador de PK durante 10 minutos y se descarga. Una muestra de la mezcla se somete a inspección para potencia y otros criterios de determinación de calidad. La densidad volumétrica se determina en la mezcla usando el aparato de densidad volumétrica usado para 100 golpes. La prensa de tabletas se fija para los troqueles designados y la mezcla se comprime a un peso de tableta de 80 mg. Las tabletas se administran colocando una sola tableta bajo la lengua. La tableta se deja desintegrar y libera el ácido hiaulónico que contiene conjugado que después se une a la mucosa oral. Las soluciones orales se hacen usando agua estéril destilada y se pueden hacer de acuerdo con la siguiente formulación: conjugado de ácido hialuronico y polilisina (formulado para proveer 1 mg/ml) de conjugado por administración); cloruro de sodio 0.9%; y cloruro de benzalconio 0.1 a 0.2%. La formulación representa una solución oral que se puede administrar por gotas o en una primera niebla, aunque no se limita en su vía de administración. Los expertos en la técnica reconocerán fácilmente que se pueden hacer fácilmente modificaciones a la formulación. En la formulación anterior, se usa cloruro de sodio para llevar la solución a isotonicidad. Dichas soluciones se hacen más cómodas para usuarios; sin embargo, el cloruro de sodio se puede eliminar si se desea. También en la formulación anterior, se usa cloruro de benzalconio como un conservador. Sin embargo, en ciertas modalidades, es preferible usar formulaciones que sean ligeramente hipertónicas, v.gr., por arriba de mOsm a fin de mantener el conjugado sin formar complejo consigo mismo o con otros compuestos cargados. Estas modalidades se han descrito aquí.

La administración oral también se puede efectuar usando dispositivos o sistemas mucoadhesivos. Los sistemas preferidos de este tipo son aquellos que se desgastan naturalmente después de la aplicación. Un ejemplo de un dispositivo o sistema mucuoadhesivo biodesgastable adecuado es BEMA™, que se puede formular como geles, discos o películas y se pueden usar en cualquier superficie de mucosa. Los dispositivos de mucoadhesivo biodesgastables sus sistemas basados en polímero que permiten el suministro de agentes activos a superficies de mucosa tales como la mucosa oral o vaginal. El dispositivo mucoadhesivo biodesgastable generalmente está compuesto de una película que puede adoptar un número de formas. En una modalidad preferida, el dispositivo mucoadhesivo biodesgastable está en forma de un pequeño disco semiblando. Los dispositivos mucoadhesivos biodesgastables tales como discos BEMA™, se pueden impregnar con el conjugado después de la formación. Estos dispositivos se pueden adherir a dispositivos de mucosa tales como las superficies de mucosa de la boca, vagina, recto o ano. A medida que la película se biodesgasta, el conjugado contenido en la misma es liberado y unido a la mucosa vecina. Debido a que el disco se disuelve esencialmente con la humedad de la superficie de la mucosa, no hay requerimiento de que el disco sea removido. Una ventaja de un dispositivo mucoadhesivo biodesgastable es que la liberación de conjugado en los tejidos o en cavidades circundantes en la unión en la mucosa, es mínima. Oralmente, sólo un lado de la película (v.gr., en la forma de disco) es adhesivo a la superficie de la mucosa. Para aplicarse a la vagina o al ano se recomienda que el dispositivo (v.gr., el disco) sea enrollado y después insertado en la cavidad, poniendo particular atención al lugar del lado adhesivo del dispositivo. El dispositivo mucoadhesivo desgastable puede ser especificado sintetizado para controlar el tiempo de residencia del conjugado en el dispositivo, cinética de biodesgastable (y por lo tanto tiempo y velocidad de liberación del agente activo), sabor del dispositivo (particularmente adecuado para administraciones orales), y forma y espresor del disco. Los sistemas mucoadhesivos biodesgastables están comercialmente disponibles de Atrix Laboratories (Fort Collins, Colorado), Epic Therapeutics, Inc., Takeda Chemical Industries. Ltd., ALZA Corp., y Alkermes Control Therapeutics, Inc. Se puede hacer referencia a las patentes de E.U.A. 5,650,173; 5,656,297; 5,679,377; 5,800,832; 5,888,533; 5,955,097; 5,962,006; 6,103,266; 6,1 0,503; 6,156,331 ; 6,159,498; 6,261 ,584; 6,265,389; 6,267,981 ; 6,268,053; 6,275,728; y 6,290,984, entre otros. El conjugado puede comprender 0.001 a 30% en peso del dispositivo y muy preferiblemente entre 0.005 a 20% en peso. Otros componentes también pueden estar presentes en el disco BEMA™ incluyendo plastificantes, saborizantes (preferiblemente para aplicaciones orales), agentes de esencias (v.gr., fragancias), agentes colorantes y conservadores. Estos últimos componentes se pueden añadir a cualquiera o ambas de las capas adhesivas o no adhesivas del disco. El disco puede adoptar una variedad de formas o dimensiones.

El espesor del disco puede variar de 0.05 mm a 1 mm, o 0.1 mm a 5 mm, con cualquiera de las capas adhesiva o no adhesiva ocupando cualquier parte de 10 a 90% del espesor global. Como se describe aquí, el conjugado se puede preparar para cargarse en un disco BEMA™ en cualquiera de un número de solventes o combinaciones de solventes apropiadas incluyendo pero sin limitarse a agua, metanol, etanol, o alcoholes alquílicos inferiores tales como alcohol isopropílico solos o en combinación. La formación de disco se logra usando cualquier número de técnicas conocidas incluyendo pero sin limitarse a inversión de película, revestimiento de película, colado de película, revestimiento giratorio o secado por aspersión. Las dos capas del disco se pueden formar juntas o se pueden formar por separado y después ponerse en contacto una con otra. El disco se puede configurar con una elipse, cuadrado y un rectángulo, pero no está limitado. Las composiciones de la invención se pueden administrar en vehículos farmacéuticamente aceptables, que rutinariamente pueden contener concentraciones farmacéuticamente aceptables de sales, agentes reguladores de pH, conservadores, vehículos compatibles, adyuvantes y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" significa uno o más llenadotes sólidos o líquidos, diluyentes o sustancias encapsulantes compatibles que son adecuados para administrarse a un sujeto. El término "vehículo" denota un ingrediente orgánico y/o inorgánico, natural o sintético, con el cual el ingrediente activo se combina para facilitar la aplicación al sujeto. Los componentes de las composiciones farmacéuticas también son capaces de ser combinados con los conjugados y composiciones de la presente invención, y unos con otros de una manera en la cual no haya interacción que sustancialmente altere la eficacia farmacéutica deseada. Los vehículos farmacéuticamente aceptables son conocidos en la técnica. La naturaleza del vehículo variará dependiendo del sitio de administración. El vehículo sin embargo debe ser adecuado para actividad de transglutaminasa. Aunque la transglutaminasa tiende a funcionar eficientemente a un pH ligeramente alcalino (v.gr., 6.5 a 9), ésta puede no ser adecuada particularmente para administración ocular. Como resultado, es necesario desviar la dependencia del pH de la transglutaminasa al incrementar la concentración de sal. También es necesario cerciorarse de que el ácido hialurónico que la molécula enlazadora no formen complejo iónicamente unos con otros a un grado que haga a la molécula enlazadora inaccesible, a la transglutaminasa y/o que evite que el ácido hialurónico funcione de manera efectiva como un humectante. El pH y la concentración de sal se determinan con base en la actividad de transglutaminasa máxima, interacciones iónicas mínimas entre ácido hialurónico y la molécula enlazadora, e irritación mínima de la superficie o tejido afectado. Los conservadores adecuados que son compatibles con la actividad de transglutaminasa incluyen kathon y metilparabeno. Los detergentes y/o agentes tensioactivos adecuados que son compatibles con actividad de transglutaminasa incluyen hampene led, Tween 20, chemophor RH-40, y DC190. Los humectantes adecuados que son compatibles con actividad de transglutaminasa incluyen propilenglicol, butilenglicol y glucacam E-20. Los conservadores que se deben evitar incluyen resbalante, Dowicil 200, BTC 2125M, y yodoacetamida. Los detergentes y/o agentes tensioactivos que se deben evitar incluyen Bioterge AS-40, CTAB, monomato CPA 40, y SDS. El ácido hialurónico así como otros compuestos administrados se pueden administrar como tales (en forma neta o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Cuando se usan en medicina, las sales deben ser farmacéuticamente aceptables, pero sales no farmacéuticamente aceptables pueden usarse convenientemente para preparar sales farmacéuticamente aceptables de las mismas. Dichas sales incluyen pero no se limitan a aquellas preparadas a partir de los siguientes ácidos: clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, maleíco, acético, salicílico, p-toluensulfónico, tartárico, cítrico, metansulfónico, fórmico, malónico, succínico, naftalen-2-sulfónico y bencensulfónico. También dichas sales se pueden preparar como sales de metal alcalino o metal alcalinotérreo, tales como sales de sodio, potasio o calcio del grupo ácido carboxílico. Los agentes reguladores de pH adecuados incluyen: ácido acético y una sal (1 -2% p/v); ácido cítrico y una sal (1-3% p/v); ácido bórico y una sal (0.5-2.5% p/v); y ácido fosfórico y una sal (0.8-2% p/v). Los conservadores adecuados incluyen cloruro de benzalconio (0.003-0.03% p/v); clorobutanol (0.3-0.9% p/v); parabenos (0.01-0.25% p/v) y timerosal (0.004-0.02% p/v). Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender vehículos o excipientes de base sólida o de gel adecuados. Ejemplos de dichos vehículos o excipientes incluyen pero no se limitan a carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros tales como polietilenglicoles. Las formas de preparación farmacéutica líquidas o sólidas adecuadas son, por ejemplo, soluciones acuosas o salinas para inhalación, microencapsuladas, encocleadas, revestidas sobre partículas de oro microscópicas, contenidas en liposomas, nebulizadas, aerosoles, comprimidos para implantación en la piel o secadas sobre un objeto agudo para ser raspadas en la piel. Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir gránulos, polvos, tabletas, tabletas revestidas, (micro)cápsulas, supositorios, jarabes, emulsiones, suspensiones, cremas, gotas o preparaciones con liberación proyectada de compuestos activos, en cuya preparación excipientes y aditivos y/o auxiliares tales como desintegrantes, aglutinantes, agentes de revestimiento, agentes inchables, lubricantes, saborizantes, edulcorantes o solubilizantes se usan de manera acostumbrada como se describió antes. Las composiciones farmacéuticas son adecuadas para usarse en una variedad de sistemas de suministro de fármacos. Para una revisión breve de los presentes métodos para suministro de fármacos, véase Langer, Science 249:1527-1533,1990, que se incorpora aquí por referencia.

Las composiciones puede ser presentadas convenientemente en forma de dosis unitaria y se pueden preparar por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Todos los métodos incluyen el paso de llevar a los compuestos a asociación con un vehículo que constituye uno o más ingredientes de accesorio. En general, las composiciones se preparan llevando uniformemente e íntimamente los compuestos en asociación con un vehículo líquido, un vehículo sólido finamente dividido o ambos y después, si es necesario, configurar el producto. Las unidades de dosis líquidas son frascos o ampolletas. Las unidades de dosis sólidas son tabletas, cápsulas, películas y supositorios. De manera importante, el vehículo debe ser adecuado para el tejido o superficie corporal con el que hace contacto. Como lo conocerán los expertos en la técnica, los vehículos adecuados para administración ocular son requeridos para inducir irritación mínima y preferiblemente nada de irritación a los ojos. Las formulaciones oculares u oftálmicas son conocidas en la técnica farmacéutica y un experto en la técnica puede consultar Remington's Pharmaceuticals para una guía en cuanto a la composición de dichos vehículos. Las formulaciones oftálmicas pueden adoptar la forma de líquidos tales como soluciones, emulsiones, dispersiones y semisólidos tales como geles y pomadas. Las formulaciones oftálmicas pueden o no contener conservadores oftálmicos. Los conservadores oftálmicos son conocidos en la técnica. Generalmente, dichos conservadores son antibióticos, ya que las infecciones bacterianas son uno de los efectos colaterales más comunes de la administración de agentes a los ojos. Ejemplos de conservadores oftálmicos incluyen mercuriales orgánicos (v.gr., nitrato fenilmercúrico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico, Thimerosal (Merthiolate®, Lilly)); compuestos de amonio cuaternario (v.gr., cloruro de benzalconio), cloruro de bencetonio, cloruro de cetilpiridinio, polyquaternium-1 (POLYQUAD)); ásteres de ácido parahidroxibenzoico; y alcoholes y fenoles sustituidos (v.gr., clorobutanol, clorobutanol/alcohol feniletílico). Otros conservadores adecuados incluyen metilparabeno y propilparabeno. Las diversas formulaciones que aquí se proveen pueden ser esterilizadas filtrando o calentando, como se conoce en la técnica. Las formulaciones oftálmicas pueden incluir además agentes de isotonicidad, agentes reguladores de pH, conservadores (como se describió antes), diluyentes, estabilizadores, agentes quelatadores, espesantes, etc. Ejemplos de agentes de isotonicidad incluyen cloruro de sodio, ácido bórico, citrato de sodio, etc. Ejemplos de agentes reguladores de pH incluyen regulador de pH de borato, regulador de pH de fosfato, etc. El pH de las formulaciones oftálmicas se debe mantener en el intervalo de 5-8. Ejemplos de diluyentes incluyen agua destilada o esterilizada o solución salina fisiológica (para formulaciones acuosas), y aceites vegetales, parafina líquida, aceite mineral, propilenglicol y p-octildodecanol (para formulaciones no acuosas). Ejemplos de estabilizadores incluyen sulfito de sodio y propilenglicol. Un ejemplo de un agente quelatador adecuado es EDTA de sodio. Ejemplos de espesantes incluyen glicerol, carboximetilcelulosa y polímero de carboxivinilo. Otros componentes que se pueden incluir en emulsiones oftálmicas incluyen ácido ascórbico, fosfato diácido de sodio, borato de sodio, hidróxido de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, glicerina, lisozima, etc. Para administración oral, dichos vehículos permiten que los compuestos de la invención se formulen como tabletas, pildoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, películas, jarabes, pastas líquidas, suspensiones y similares sublinguales o bucalmente absorbidas. Las formulaciones orales también pueden incluir pastas de dientes, polvos, dentífricos líquidos, limpiadores de dentadura, enjuagues bucales, gomas de mascar, caramelos y otros productos alimenticios. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral se pueden obtener como excipiente sólido, opcionalmente moliendo una mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, después añadiendo auxiliares adecuados, si se desea, para obtener tabletas o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, llenadores tales como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de soio y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, se pueden añadir agentes desintegrantes, tales como polivinilpirrolidona entrelazada, agar o ácido algínico o una sal del mismo tal como alginato de sodio. Opcionalmente, las formulaciones orales también se pueden formular en solución salina o reguladores de pH para neutralizar condiciones ácidas internas, aunque es menos crítico cuando el conjugado es absorbido en la cavidad oral más que en el tracto gastrointestinal. Los núcleos de grageas se pueden proveer de revestimientos adecuados. Para este propósito, se pueden usar soluciones de azúcar concentradas, que opcionalmente pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y solventes o mezclas de solventes orgánicos adecuados. Se pueden añadir colorantes o pigmentos a las tabletas o revestimientos de grageas para identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuestos activos. Las preparaciones farmacéuticas que se pueden usar oralmente incluyen cápsulas de ajuste a presión hechas de gelatina, así como cápsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste a presión pueden contener los ingredientes activos en mezcla con llenador tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y opcionalmente estabilizadores. En cápsulas blandas, los compuestos activos se pueden disolver o suspender en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Además, se pueden añadir estabilizadores. También se pueden usar microesferas formuladas para administración oral. Dichas microesferas han sido bien definidas en la técnica. Todas las formulaciones para administración oral deben estar en dosis adecuadas para dicha administración. Para administración bucal, las composiciones pueden adoptar la forma de tabletas o pastillas formuladas de manera convencional. Conservadores tales como antimicrobianos adecuados para formulaciones orales incluyen timol, mentol, tricrosan, 4-hexilresorcinol, fenol, eucaliptol, ácido benzoico, peróxido de benzoilo, butilparabeno, metilparabeno, propilparabeno, salicilamidas, etc. Los agentes espesantes para formulaciones orales tales como pastas de dientes y similares incluyen polímeros de carboxivinilo, carragenano, hidroxietilcelulosa, gomas naturales tales como goma karaya, goma de xantano, goma arábiga, goma tragacanto, etc. Las formulaciones orales pueden contener además humectantes tales como pero sin limitarse a glicerina, sorbitol, xilitoi, polietilenglicoles, propilenglicoles, etc. Si lá formulación es una pasta de dientes o un limpiador dental, puede contener además agentes abrasivos tales como sílices tales como xerogeles, hidrogeles, aerogeles, carbonatas de calcio o magnesio, fosfatos de calcio, alúmina e hidratos de la misma, aluminosilicatos, silicatos de magnesio y zirconio, etc. Estas formulaciones pueden comprender además fluoruro y agentes anticálculos tales como sales de zinc, pirofosfatos de metal alcalino, etc.

Para administración por inhalación, los compuestos para usarse de acuerdo con la presente invención pueden ser convenientemente suministrados en forma de una aspersión en aerosol, desde envolturas presurizadas o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, v.gr., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la dosis unitaria puede ser determinada proveyendo una válvula para suministrar una cantidad dosificada. Las cápsulas y cartuchos de, v.gr., gelatina para usarse en un inhalador o insuflador se pueden formular conteniendo una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón. Los compuestos que se han de administrar a la cavidad nasal también se pueden formular como geles o gotas nasales. Para administración tópica, los compuestos se pueden proveer en cualquier formulación estándar que sea adecuada para la superficie externa. Por ejemplo, si los compuestos están diseñados para la piel, se pueden proveer en una pomada, una loción, una aspersión, un gel, un tejido o una toalla (v.gr., para tratar salpullido causado por pañales), etc. Para aplicarse a los labios, los compuestos se pueden proveer en un bálsamo para labios o un lápiz labial. Como otro ejemplo, si los compuestos están diseñados para el cabello, se pueden proveer en una aspersión, un champú, un fijador del cabello tal como una aspersión para el cabello, gel o mousse, etc. Para aplicarse a las uñas, los compuestos se pueden proveer en barnices para uñas y otros productos para cuidado de uñas.

Aunque no se prefiere, en algunos casos los compuestos se pueden administrar sistémicamente si se formulan para tal propósito. La administración parenteral se puede realizar mediante inyección de bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden estar presentes en forma de dosis unitaria, v.gr., en ampolletas o en contenedores de dosis múltiples, con un conservador añadido. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizadores y/o dispersantes. Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Además, las suspensiones de los compuestos activos se pueden preparar como suspensiones de inyección oleosa apropiadas. Los solventes o vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos tales como aceite de ajonjolí, o ésteres de ácido graso sintéticos tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones de inyección acuosa pueden contener sustancias que incrementan la viscosidad déla suspensión, tales como carboximetilelulosa de sodio, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizadores adecuados o agentes que incrementen la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. Alternativamente, los compuestos activos pueden estar en forma de polvo para constitución con un vehículo adecuado, v.gr., agua estéril libre de pirógenos, antes de usarse.

Las compuestos también se pueden formular en composiciones rectales o vaginales tales como supositorios (incluyendo tampones) o enemas de retención, v.gr., que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos. También se puede usar una formulación de lavado vaginal. La administración a la mucosa también se puede realizar usando películas mucoadhesivas tales como aquellas descritas con mayor detalle aquí. En algunas modalidades que implican administración vaginal, puede ser deseable proveer la composición en un vehículo que incremente temporalmente el pH del ambiente de la vagina a fin de facilitar la unión del conjugado a la mucosa vaginal por medio de la transglutaminasa vaginal. Este incremento en pH no necesita ser prolongado, sino sólo lo suficiente para que una cantidad efectiva de conjugado se una al tejido. Como un ejemplo, el pH se puede formular a través del uso de un disco mucoadhesivo, un supositorio, una solución de lavado que provea un pH local de 6.5 a 9. Además de las formulaciones previamente descritas, los compuestos también se pueden formular como una preparación de aplicación por deposición. Dichas formulaciones de acción prolongada se pueden formular con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio de iones, o como derivados escasamente solubles, por ejemplo, como una sal escasamente soluble. Las composiciones de la invención se pueden administrar usando dispositivos de liberación sostenida, por ejemplo un sistema mucoadhesivo biodesgastable, tal como se describe aquí, así como aquellos conocidos en la técnica. Otros sistemas de suministro pueden incluir sistemas de suministro de liberación con el tiempo, liberación retardada o liberación sostenida. Tales sistemas pueden evitar administraciones repetidas de los compuestos, incrementando la conveniencia al sujeto y al médico. Muchos tipos de sistemas de suministro de liberación están disponibles y son conocidos por los expertos en la técnica. Estos incluyen sistemas de bases de polímero tales como poli(láctido-glicólido), copolioxalatos, policaprolactonas, poliesteramidas, poliortoésteres, ácido polihidroxibutírico y polianhídridos. Las microcápsulas de los polímeros anteriores que contienen fármaco se describen, por ejemplo, en la patente de E.U.A. 5,075,109. Los sistemas de suministro también incluyen sistemas que no son de polímero, que son: lípídos incluyendo esteróles tales como colesterol, ésteres de colesterol y ácidos grasos o grasas neutras tales como monoglicéridos, diglicéridos y triglicéridos; sistemas de liberación de hidrogel; sistemas silásticos; sistemas a base de péptidos; revestimientos de cera; tabletas comprimidas que usan aglutinantes y excipientes convencionales; implantes parcialmente fusionados; y similares. Ejemplos específicos incluyen pero no se limitan a: (a) sistemas desgastables en los cuales un agente de la invención está contenido en una forma dentro de una matriz tales como aquellos descritos en las patentes de E.U.A. 4,452,775, 4,675,189, y 5,736,152, y (b) sistemas de difusión en los cuales un componente activo penetra a una velocidad controlada desde un polímero tal como se describe en las patentes de E.U.A. Nos. 3,854,480, 5,133,974 y 5,407,686. Además, se pueden usar sistemas de suministro de material basado en bomba, algunos de los cuales están adaptados para implantación. Las composiciones de liberación sostenida se pueden aplicar tópicamente por ejemplo como un gel, una pomada, una crema o un parche (v.gr., un parche transdérmico o un parche de mucosa, tal como un disco de BEMA™). Como un ejemplo, las partículas biodegradables de liberación sostenida se pueden aplicar a la superficie corporal solas o en el contexto de una pomada, gel o crema. La administración tópica incluye la administración a una superficie de la piel y una superficie de la mucosa. El suministro a la superficie de la mucosa se puede efectuar mediante lápices labiales, tratamientos de labios tales como bálsamos para labios, pomadas para dolor por frío, pomadas con filtros solares; geles orales como aquellos usados para dolores de boca (v.gr., dolores de boca inducidos por radiación o quimioterapia); enjuagues bucales; pasta dental, inhalantes; parches de superficie; y similares. Alternativamente, se pueden implantar. En modalidades preferidas, los dispositivos de liberación sostenida son biodesgastables o biodegradables. En otras modalidades preferidas, los dispositivos de liberación sostenida son adhesivos a la superficie a la cual se aplican (v.gr., piel o mucosa), con formas preferidas siendo los dispositivos mucoadhesivos biodesgastables (v.gr., BEMA™) de la invención. Esta técnica está familiarizada con dichos dispositivos. Las composiciones de la invención se pueden proveer en un equipo de acuerdo con algunos aspectos. Como se usa aquí, cuando una composición se provee en un equipo, se pretende que la composición sea empacada o esté contenida en un primer contenedor (tal como un frasco) que después es empacado en un segundo contenedor (tal como una caja, cartón o bolsa). En cualquier caso, puede ser deseable incluir instrucciones para el uso de las composiciones. Tales instrucciones se pueden proveer directamente sobre la etiqueta de superficie externa del primer contenedor (es decir, aquella que directamente aloja la composición) o en la etiqueta de superficie externa del segundo contenedor (es decir, aquella que aloja al primer contenedor). Alternativamente, las instrucciones para uso se pueden proveer por separado ya sea del contenedor, tal como por ejemplo una hoja de papel separada provista dentro del segundo contenedor. Las instrucciones para uso contendrán información tales como pero sin limitarse a la cantidad que ha de ser suministrada en una sola dosis, la cantidad máxima que no debe ser excedida por ningún intervalo dado (por ejemplo, la dosis diaria máxima), el método de administración y el sitio de administración, los sujetos que han de ser tratados y aquellos que no han de ser tratados con las formulaciones, contraindicaciones, así como ingredientes activos e inactivos de la formulación. Los siguientes ejemplos se incluyen para propósitos de ilustración y no se pretende que sean limitantes del alcance de la invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Conjugación de polí(L-lisina) con ácido hialurónico mediante aminación reductiva Introducción La conjugación de polilisina (PLL) a ácido hialurónico (HA) se basa en la capacidad del grupo aldehido del residuo de azúcar terminal de ácido hialurónico para formar una base de Schiff con grupos amino de polilisina. La base de Schiff formada no es estable y es fácilmente revertida por hidrólisis. Un número de agentes reductores se puede usar para convertir la base de Schiff en una amina secundaria estable. La reacción de reducción es facilitada mejor por cianoborhidrato de sodio debido a la alta reactividad de este agente hacia la base de Schiff y baja reactividad al grupo aldehido.

ESQUEMA 1 Síntesis de conjugado de poli(L-lisina)-ácido hialurónico mediante aminación reductiva extremo reductor de HA ELL Base de Schiff Nn.CNB.tl3 Materiales y métodos: Acido hialurónico con viscosidad de peso molecular promedio de 220,000, en su forma de sal de sodio, se compró de Lifecore Biomedical (Chaska, MN). Poli-L-lisina marcada con FITC (es decir, PLL-FITC), con peso molecular de 15,000 - 30,000 y grado de sustitución de 0.003 - 0.01 moles de FITC por mol de monómero de lisina, se compró de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Cianoborhidruro de sodio (NaBH3CN) fue de Aldrich (Milwaukee, Wl). PLL se conjugó a HA por aminación reductiva usando NaBH3CN como un agente reductor, como se muetra en el esquema 1. HA (100 mg) y PLL (10 mg) se disolvieron en 15 mi de regulador de pH de borato de sodio 7 (0.1 M, pH 8.5) que contenía NaCI 1 M. La concentración de HA fue de 6 mg/ml, mientras que la concentración de PLL varió de 0.6 a 2.4 mg/ml. Se añadió cianoborhidruro de sodio a la reacción a una concentración de 24 mM, aproximadamente exceso de 1000 molar a los extremos reductores de HA. Las mezclas de reacción se incubaron a 40°C bajo agitación constante, y se extrajeron alícuotas de las reacciones inmediatamente, 3 días y 6 días después de mezclar los agentes. Las alícuotas se diluyeron con regulador de pH de fosfato a una concentración de HA de 3 mg/ml y una concentración de PLL de 0.3 mg/ml, y se analizaron por cromatografía de penetración de gel (GPC). Un experimento de control negativo se condujo bajo las mismas condiciones excepto que no se añadió cianoborhidruro de sodio a la reacción. Los productos finales se cosecharon a los 6 días del tiempo de reacción del experimento y 3 días del tiempo de reacción del control, y se dializaron contra solución acuosa de NaCI 0.5 M usando una membrana Spectra/Por 7 (corte de peso molecular de 50,000) para remover cianoborhidruro de sodio sin reaccionar. Para los experimentos conducidos a un pH bajo, las muestras se diluyeron por solución de regulador de pH de ácido acético (ácido acético 50 mM, Na2S040.2 M) a pH 3.5, se almacenaron durante un día y se analizaron por cromatografía de penetración de gel (GPC). Se llevó a cabo GPC usando un sistema de bombeo de Waters a velocidad de flujo de 1.0 ml/min a 25°C usando una columna lineal de ultrahidrogel (Waters Corporation, Milford, MA, EUA.) equipada con un controlador Waters 600 y automuestreador 717. La solución acuosa que contenía Na2S04 0.2 M y regulador de pH de fosfato de sodio 5 mM (pH 8.0) se uso como una fase móvil. Quinientos microlitros de cada muestra se inyectaron a la columna. El material eluido se detectó por un detector de disposición de fotodiodo Waters 996 Photodiode Array Detector, se procesó a longitudes de onda de 208 nm y 490 nm, y un detector de fluorescencia por escudriñamiento 474 Scanning Fluorescence Detector (con longitudes de onda de excitación de 490 nm y 530 nm). Para experimentos a pH bajo, las condiciones de corrimiento y detección fueron las mismas, excepto que la composición del regulador de pH eluyente fue ácido acético 50 mM, Na2S04 0.2 M a pH 3.5.

Resultados: Los perfiles de GPC de absorbancia de UV (a 490 nm y 208 nm) y fluorescencia (a 490 nm y 530 nm) de la mezcla de reacción se analizaron a 5 minutos, 3 días y 6 días. Un pico con tiempo de retención máximo de 7 minutos se atribuye a HA mientras que un pico con tiempo de retención máxima a 9 minutos se asigna a PLL-FITC. La asignación se basa en perfiles de GPC de los compuestos de HA y PLL-FITC individuales. Las transformaciones durante las reacciones se trazaron por la conversión de PLL-FITC, detectada por absorbancia de UV a 490 nm y fluorescencia a 530 nm. PLL-FITC tuvo absorbancia máxima mientras HA no absorbía bajo las condiciones anteriores. Después de que se inicia la reacción, el área pico correspondiente a PLL-FITC disminuye mientras que el área del pico correspondiente a HA (pico máximo a tiempo de retención de 7 minutos) incrementa. La aparición del nuevo pico (tiempo de retención de 7 minutos) se debe a conjugación de PLL-FITC a HA. El incremento de su absorbencia se puede atribuir al incremento de conjugación entre PLL-FITC y HA en el curso de la reacción. El grado de conjugación con el tiempo se determina por la integración de los picos correspondientes y constituye 2.4% (5 min), 31.2% (3 días), 37.5 % (6 días). El experimento de control negativo conducido en ausencia de NaBH3CN se comparó con la reacción en presencia de agente reductor. Los perfiles de GPC detectados por absorbancia de UV a 490 nm y fluorescencia a 530 nm se analizaron. El grado de conjugación en el experimento de control es de aproximadamente 10%, que es tres veces menor que el grado de conjugación observado en presencia de NaBH3CN. PLL-FITC es cargado positivamente mientras que HA es cargado negativamente en pH de reacción de 8.5. Aunque la reacción de conjugación entre HA y PLL-FITC se logró a una concentración de sal alta (NaCI 1 M) para evitar la formación de complejo iónico entre reactivos, la posibilidad de dicha formación de complejo permanece. A fin de distinguir entre formación de enlace iónico y covalente, la mezcla de reacción se acidificó con ácido acético a un pH de 3.5. Bajo condiciones ácidas, el HA se protonizó y si se formó un complejo iónico sería inestable. Por el contrario, el enlace covalente químico es estable bajo las mismas condiciones. El control negativo, las mezclas de reacción de prueba obtenidas con NaBHsCN, se almacenaron a pH 3.5 durante un día y se analizaron por GPC (regulador de pH acético, 50 Mm, NA2SO4 0.2 M). La fracción del pico asignada al conjugado es la misma que la acidificación anterior: 10% para control y 34% para el experimento con NaBHaCN. El conjugado de HA-PLL-FITC formado por enlace covalente es suficientemente fuerte para no ser destruido a pH de 3.5.

EJEMPLO 2 Enlace de HA-PLL-FITC en un modelo de ojo de conejo Materiales y métodos El grado y duración de unión de polilisina marcada con FITC y polilisina marcada con FITC conjugada a ácido hialurónico se probó usando un modelo de córnea de conejo in vivo. Diez Conejos blancos de Nueva Zelanda se usaron en este estudio pre-clínico de grupo contralateral, controlado por placebo, doblemente cubierto, aleatorizado. Cada uno de los ojos de los conejos se asignó aleatoriamente a uno de cuatro tratamientos: Activo 1 (vehículo más 0.42% de PCS-101 marcado con FITC (ácido hialurónico marcado a polilisina, incluyendo ácido hialurónico libre en una proporción molar de aproximadamente 1 :1 con conjugado; el peso molecular promedio de HA es 220,000 Da, y el de la polilisina es de 15,000-30,000 Da) (tamaño de muestra de 9 ojos)); Activo 2 (vehículo más 2% de polilisina marcada con FITC) (tamaño de muestra de 4 ojos)), vehículo (borato de sodio 20 mM, pH 7.8 más NaCI 80 mM) (tamaño de muestra de 5 ojos); y placebo (solución salina regulada en su pH con fosfato (PBS), pH 7.4) (tamaño de muestra de 2 ojos). La intensidad de fluorescencia en la solución original es 175 veces más baja en la solución de PCS-101 que en la solución de polilisina. Las composiciones se administyraron en volúmenes iguales de 40 µ? por administración, dos veces al día en el ojo correspondiente de un conejo vivo en cada uno de tres días consecutivos, para un total de seis gotas por ojo. Una hora, dieciséis horas, y treinta y seis horas después de la última administración de gotas, los animales fueron sacrificados, y las córneas se removieron y se cogelaron en un medio de OCT para secciones transversales. Las secciones se fotografiaron con una cámara digital Spot RT (Diagnostic Instrument, Inc.) bajo FITC e iluminación de campo brillante bajo amplificación de 40x para examinación histológica. Todos los Conejos completaron el estudio y fueron evaluables para todas las variables. Los resultados se muestran en las figuras 1A-1F que muestran el entrelazamiento de PCS-101 fluorescente y polilisina en una formulación de gotas para los ojos a córnea de conejo in vivo a 1 hora y 36 horas después de la última aplicación.

Resultados Las figuras 1A-1F son fotografías de secciones transversales de córnea de conejo que presentan productos de sistema TransLink™ marcados con marcador fluorescente del ojo de prueba. La hilera superior (figuras 1A y 1 B) muestra el anclaje de sistema de TransLink™ de polilisina con un marcador de fluoresceína (sin agente activo) sobre la córnea, de conejos sacrificados una hora y treinta y seis horas después de la última de seis gotas administradas en tres días. Se muestra claramente que el anclaje de polilisina Pericor mantiene una durabilidad remarcable a través de la capa superior de epitélio de córnea muerto después de una hora, y muestra presencia después de treinta y seis horas. La reducción en señal entre los puntos de tiempo de una hora y treinta y seis horas es muy probable el resultado del desprendimiento natural del epitelio durante 24-36 horas y la extinción de la molécula fluorescente usada como el marcador. Las figuras 1 C y 1 D muestran la unión del conjugado de ácido hialurónico y polilisina a la córnea de conejo a una hora y treinta y seis horas. La polilisina en el conjugado es similarmente marcado con FITC. Soluciones de abastecimiento de conjugado marcado con FITC mostraron aproximadamente 175 veces menos intensidad de fluorescencia comparada con composiciones de abastecimiento de polilisina marcada con FITC antes de la unión. El ácido hialurónico que contenía conjugado se entrelaza durablemente a la capa superior de células epiteliales de la córnea (y la conjuntiva/párpados, no se muestran datos) en el punto de tiempo de una hora. A las treinta y seis horas después de la última aplicación, una cantidad diminuta pero aún detectable de conjugado está presente en la córnea. La figura 1 demuestra el nivel de fluorescencia de fondo cuando se tartán córneas con vehículo solo. La figura 1 F demuestra la estructura de la córnea en sección transversal.

Conclusiones Extensión v duración de unión La administración de seis gotas de polilisina conjugada con FITC dio como resultado la unión durable de polilisina a cornea de conejo por lo menos durante treinta y seis horas después de la última aplicación de gotas. El análisis del ojo tratado indica que la molécula enlazadora de polilisina se unió a células epiteliales de superficie maduras de la córnea y a la conjunctiva y párpado también. Este hallazgo fue sorprendente ya que las células de la superficie del ojo en Conejos normales tienen una cubierta de película de lágrima natural que se esperaría que evitara la unión de agentes a la misma. La longevidad de la unión de polilisina undica que dicha unión es resistente al ambiente natural del ojo y no es alterada mecánicamente por el parpadeo. La administración de seis goats de polilisina marcada con FITC conjugada a ácido hialurónico de manera similar dio como resultado la unión de polilisina a córnea de conejo por lo menos durante una hora. Aunque cantidades mínimas de polilisina marcada fueron detectables a las treinta y seis horas, esto puede ser explicado parcialmente por la intensidad de fluorescencia menor de la solución de abstecimiento de conjugado fluorescentemente marcado. Consistente con los resultados para la lisina sola, se logró la unión durable del conjugado de ácido hialurónico a la superficie ocular. De manera importante, no se observó irritación de los ojos.

Irritación El activo 1 indujo un incremento estadísticamente significativo en hiperemia sobre la línea basal sólo en un punto de tiempo, 5 min después de la primera aplicación únicamente. Sin embargo, este cambio de menos de la mitad de grado no se considera clínicamente significativa para lograr una reacción de irritación en este modelo. El activo 2 indujo incrementos estadísticamente significativos en hiperemia sobre la línea basal en cuatro puntos de tiempo. Además, el activo 1 no indujo ningún incremento estadísticamente significativo en irritación ocular mixta sobre la línea basal, mientras que el activo 2 indujo incrementos estadísticamente significativos en irritación ocular mixta sobre la línea basal en cuatro puntos de tiempo. No hubo diferencias estadísticamente significativas en hiperemia o irritación ocular mixta entre el activo 1 y placebo en ningún punto de tiempo. Sin embargo, hubo varias diferencias estadísticamente significativas entre el activo 1 y el activo 2 durante los días 1-3, específicamente 15 puntos de tiempo para hiperemia y 8 puntos de tiempo para irritación mixta. El activo 1 no produjo ningún cambio clínicamente significativo en comparación con la línea basal o el grupo de placebo en ningún punto de tiempo. También en todos exepto un punto de tiempo, el compuesto no produjo ningún cambio clínicamente significativo en ninguna de las categorías de irritación. Como resultado, el activo 1 no mostró ser un agente irritante en este estudio.

EJEMPLO 3 Capacidad del conjugado de HA-polilisina para unirse a la capa cornificada de un dedo humano in vivo Materiales v métodos Las soluciones de reacción son 0.34 µ?/µ? de conjugado de HA-PLL-FITC (por contenido de PLL-FITC) en regulador de pH de glicina 0.1 M, NaCI 0.15 M, pH 8 en un volumen de reacción total de 20 µ?. El dedo humano se enjuagó en agua y se secó, después de lo cual se aplicó la solución de reacción. La solución de reacción se frotó sobre la piel usando un algodón para el dedo libre de polvo durante 10 segundos, y se dejó secar a temperatura ambiente. El dedo se lavó después con agua y se secó. En varios puntos de tiempo después del lavado (0, 2.5, 6 y 24 horas), la superficie superior del dedo se fotografió bajo iluminación con FITC (a amplificación de 2X) con una cámara digital Spot RT (Diagnostic Instrument, Inc.).

Resultados La figura 2 muestra los datos como un curso de tiempo de unión de 0.34 µg/µl de conjugado de HA-PLL-FITC a un dedo humano in vivo con la muestra aplicada por frotación. El curso de tiempo va de 0 horas, 2.5 horas, 6 horas y 24 horas. También se muestra el nivel de tinción de tejido no tratado (control). La fluorescencia brillante observada después del lavado demuestra que el conjugado de HA-PLL se entrelazó a la capa cornificada del dedo humano in vivo (figura 2). Incluso 24 horas después del lavado, aún está visible una cantidad significativa de fluorescencia, que muestra la durabilidad de conjugado de HA-PLL entrelazado sobre la piel humana in vivo durante un período de 24-hour horas.

EJEMPLO 4 Absorción después de aplicaciones repetidas de PCS-101 sin transqlutaminasa añadida Materiales y métodos La solución de reacción copleta contenía 10 mg/ml de PCS-101 (HA-PLL-FITC y HA libre) en regulador de pH estéril que contenía borato de sodio 20 mM, pH 7.8 más NaCI 80 mM. El volumen de la reacción total fue de 50 µ?. Los globos oculares de conejo intactos se enjuagaron en regulador de pH PBS. La solución de reacción se aplicó en el centro de cada córnea usando un cilindro de 0.5 cm2 y se incubó a 37°C durante 1 minuto en una cámara húmeda. Después del tiempo de incubación, la solución de reacción se removió y la cornea se lavó en regulador de pH PBS durante un minuto a 25°C. Después, una muestra de ojo de conejo se removió mientras cada una de las muestras restantes recibían una aplicación adicional de la solución de reacción seguida por reincubación a 37°C. Este protocolo se repitió hasta que todas las muestras se trataron con PCS-101 , para un total de 1 , 2, 4, 6, 8, 10 y 12 aplicaciones. Cada córnea se fotografió con una cámara digital Spot RT (Diagnostic Instrument, Inc.) bajo iluminación con FITC con un objetivo de 2X después del lavado. Después se extirpó la córnea y se congeló en un medio de OCT. Se hicieron secciones de tejido congelado a partir de cada muestra y las secciones se fotografiaron con una cámara digital Spot RT (Diagnostic Instrument, Inc.) bajo epifluorescencia con un objetivo de 20X y filtros apropiados Resultados Las figuras 3 y 4 demuestran la absorción de PCS-101 después de aplicaciones repetidas a la córnea de conejo sin transglutaminasa añadida. Se muestra el número de aplicaciones y varía de 1x a 12 x. La fluorescencia observada después de la primera aplicación demuestra claramente que el PCS-101 -FITC se entrelazó a la capa cornificada de córnea de conejo. La cantidad de PCS-101 -FITC retenida por la cornea del ojo de conejo parece incrementar casi linealmente con aplicaciones sucesivas de PCS-101 de hasta 12 aplicaciones (las figuras 3 y 4). Esto ocurrió en ausencia de transglutaminasa exógenamente añadida y Ca++ en el regulador de pH.

EJEMPLO 5 Acoplamiento de PCS 201 (conjugado de HA-PLL-FITC) a epitelios de paladar, encía y lengua inferior de cerdo, sin transglutaminasa añadida, e Inhibición por EDTA Materiales y métodos La solución de la reacción completa contenía 100 mM de glicina (pH 8.2), 150 mM de regulador de pH de NaCI y 1500, g de conjugado de HA-PLL-FITC. El volumen de reacción total es de 300 µ?. El control negativo contenía EDTA 140 mM en la solución de reacción. Muestras de paladar, encía y lengua inferior de cerdo se lavaron brevemente en regulador de PBS y se incubaron en las las soluciones de reacción a 37°C durante una hora. Las muetsras después se lavaron con regulador de pH PBS durante una hora bajo agitación. Se hicieron secciones de tejido congeladas y se tiñeron con DAPI. Las secciones se fotografiaron bajo iluminación de epi-fluorescencia con filtros apropiados mostrando FITC en verde y DAPI en azul.

Resultados La figura 5 demuestra el entrelazamiento de PCS-201 fluorescente a epitelio de paladar de cerdo en ausencia de transglutaminasa exógena y su inhibición por EDTA. La figura 6 demouestra el entrelazamiento de PCS-201 fluorescente a la superficie inferior de epitelio de lengua de cerdo en ausencia de transglutaminasa exógena y su inhibición por EDTA. La figura 7 demuestra entrelazamiento de PCS-201 fluorescente a epitelio de encía de cerdo en ausencia de transglutaminasa exógena y su inhibición por EDTA. La figura 8 demuestra entrelazamiento de PCS-201 fluorescente a epitelio de lengua y encía de cerdo dentro de 30 segundos de aplicación en ausencia de transglutaminasa exógena. La figura 9 demuestra entrelazamiento de PCS-101 fluorescente a epitelio de paladar, encía y lengua de cerdo dentro de 30 segundos de aplicación en ausencia de transglutaminasa exógena. La figura 10 demuestra entrelazamiento de PCS-201 fluorescente a epitelio de boca de cerdo dentro de 30 segundos de aplicación en ausencia de transglutaminasa exógena. La transglutaminasa endógena entrelaza a una cantidad significativa de conjugado de HA-PLL-FITC a la capa cornificada de los epitelios de paladar, encía y lengua inferior de cerdo. EDTA inhibe el acoplamiento de conjugado de HA-PLL-FITC a la capa cornificada de los epitelios de paladar, encía y lengua inferior de cerdo (figuras 5-10).

EJEMPLO 6 Acoplamiento de PCS 201-FITC y polilisina al revestimiento interno de aorta de cerdo sin transqlutaminasa añadida como una función del tiempo Materiales y métodos Las soluciones de reacción contenían 1 µg/µ\ de PLL-FITC (PM = 241 CD) en glicina 100 mM, NaCI 150 mM (pH 8.2) y 5 µg/µl de conjugado de HA-PLL-FITC en glicina 100 mM, NaCI 150 mM (pH 8.2) (PCS-201 -FITC). La intensidad de fluorescencia en la solución de reacción es 17 veces menor en la solución de PCS-201 que en la solución de PLL-FITC. El volumen de reacción total es de 500 µ?. La aorta de cerdo se lavó en regulador de pH PBS y, mientras se sumergía en el regulador de pH para evitar el secado del tejido, se cortó en pequeños cuadros de 0.5 cm2 cada uno. Cada pieza de aorta después se incubó en la mezcla de reacción durante diferentes períodos (1 , 15, 30 y 60 minutos) a 37°C. Después de un enjuague con PBS, las muestras se lavaron con PBS durante 1 hora bajo agitación. Las muestras de aorta después se embebieron y se congelaron en compuesto de OCT. Las muestras se seccionaron y se fotografiaron bajo iluminación fluorescente.

Resultados La figura 11 demuestra el entrelazamiento de PCS-201 fluorescente y PLL al revestimiento interno de aorta de cerdo en ausencia de transglutaminasa exógena. La intensidad de fluorescencia en la solución original es 17 veces menor en la solución de PCS-201 que en la solución de PLL. La unión de PLL-FITC y PCS-201 al revestimiento interno de la aorta se observó después de 1 minuto de incubación, como se indica por la detección de fluorescencia. La unión de PLL-FITC y PCS- 201 incrementó con la longitude de incubación, como se indicó por la intensidad de fluorescencia así como su uniformidad sobre la sección histológica (figura 11). La intensidad de fluorescencia inferior de PCS-201 retenida por el tejido de la aorta en comparación con la de PLL-FITC se atribuye parcialmente al hecho de que la intensidad de fluorescencia en la solución de reacción fue 17 veces menor en la solución de PCS-201 que en la solución de PLL-FITC.

EJEMPLO 7 Unión e conjugado de HA-polilisina a la capa cornificada de córnea de conejo a diferent6es concentraciones de sal Materiales y métodos El abastecimiento de conjugado se hizo resuspendiendo conjugado liofilizado en 0.1 M de glicina y se cuantificó usando fluorescencia de FITC (concentrtación de abastecimiento = 0. 1 mg/ml). Los grupos de reacción fueron 0.1 mg/ml de HA-PLL-FITC en glicina 0.2 M, con concentraciones de sal cada vez mayores (NaCI 0, 50, 150, 300, 500 mM), y 0.1 mg/ml de PLL-FITC en glicina 0.1 M, con concentraciones de sal cada vez mayores (NaCI 0, 50, 150, 300, 500 mM). El volumen de reacción total fue de 70 1. El globo ocular intacto de conejo se enjuagó en regulador de pH PBS. La solución de reacción se aplicó en el centro de la córnea usando un cilindro de clonación de 0.5 cm2 y se incubó durante 1 hora a 37°C. Después de 1 hora, el globo ocular se lavó en 30 mi de PBS durante 1 hora con agitación. La córnea se fotografió con una cámara digital Spot RT (Diagnostic Instrument, Inc.) bajo iluminación con F1TC antes y después del lavado. Después se extirpó la córnea y se congeló en un medio de OCT. La fluorescencia de FITC se cuantificó bajo las siguientes condiciones: PLL: ampliaciones de 2X, 2 seg de exposición, filtro ND4; conjugado de HA-PLL: ampliación de 2X, 2 seg de exposición, sin filtros.

Resultados CUADRO 1 Cuantificación de fluorescencia con FITC de la vista tópica de la córnea después del lavado La figura 12 demuestra el efecto de la concentración de NaCI sobre el acoplamiento de HA-PLL-FITC a la capa cornificada de córnea de conejo en ausencia de transglutaminasa exógéna. La concentración de sal varió de 0 a 500 mM. El cuadro 1 muestra el nivel de unión de FITC a los tejidos de la córnea usando ya sea PLL o el conjugado de HA-PLL. La unión del conjugado de HA-PLL a la capa cornificada de cornea de conejo incrementó constantemente con un incremento en la concentración de NaCI, probablemente como resultado de la disociación de cualquier complejo iónico de HA y PLL, exponiendo así el PLL como un sustrato para la transglutaminasa (figura 12). La unión de PLL por sí solo disminuyó constantemente con un incremento en la concentración de NaCI, posiblemente debido a cambios en el flujo osmótico o el efecto de la sal sobre la transglutaminasa.

EJEMPLO 8 Estudio in vivo Introducción Se condujeron ensayos humanos para determiner el efecto del conjugado de HA-PLL en pacientes con resequedad de los ojos en post-Lasik™. El esudio se diseñó para comparar la eficacia de HA-PLL en pacientes post-Lasik que experimentaron resequedad de los ojos en comparación con pacientes normales y pacientes con resequedad de los ojos que recibieron placebo.

Resultados preliminaries Al primer paciente (paciente # 1) se le dio HA de peso molecular alto, PCS-102 (0.15% de PolyL-8101kd pm HA). El paciente # 1 fue operado a hace 9 meses, por una cirugía diferente, y desde entonces había tenido resequedad de los ojos extrema. Al segundo paciente (paciente # 2) se le dio una concentración alta del peso molecular actual, PCS-101 (0.4% de PolyL-2201 kd pm HA). El paciente #2 fue operado hace tres semanas 3 y y transcurrió 1 semana antes de su tratamiento (para eliminar cualesquiera efectos de uso de esferoide tópico post-cirugía). Ambos pacientes experimentaron resequedad de los ojos.

Las medidas inicativas usadas aquí son: 1) tiempo de rompimiento de la película de lágrima (TFBUT); 2) la prueba de Schirmer ll (que mide la cantidad de humedad sobre la superficie de la córnea por medio de una "tira de tipo litmus"); y 3) la presencia de punción por fluorescencia (punto final de "tinción" clásico). La segunda y tercera medidas han sido aprobadas por la FDA como signos aceptables de eficacia. Ambos ojos fueron evaluados independientemente, con RE = ojo derecho; LE = ojo izquierdo. Cada paciente se midió antes del tratamiento para una TFBUT de línea basal y calificación de Schirmer. La gente normal tendría aproximadamente una calificación de 10 para cada una de esas dos mediciones. Ambos pacientes mostraron calificaciones por anajo del promedio en ambas medidas como se esperaba, y reportaron síntomas de dolor. A cada paciente se le dio oralmente solo una gota del conjugado de HA-PLL respectivo y después se midió a intervalos de 15 minutos hasta 90 minutos (en el caso del paciente # 2). A cada paciente se le dieron 6 gotas por día durante 2 días y después se les pidió que lo interrumpieran. Después se midió a ambos a intervalos de 15 minutos hasta 90 minutos para ver si el tratamiento mejoró su calificación de TFBUT, Schirmer y tinción fluorescente. Se pidió al paciente # 2 que continuara la terapia durante 1 semana adicional sólo a tres gotas por día (QID). Después de esto, el paciente # 2 se midió después de un periodo de 10-12 horas (durante la noche) sin ninguna aplicación de gotas adicional, y después nuevamente a intervalos de 15 minutos hasta 90 minutos adicionales. Para el paciente # 2, las calificaciiones de la prueba de Schirmer saltaron significativamente, incluso 13.5 horas después de la última aplicación. Las calificaciones de TFBUT y de tinción también parecieron ser mejoras estadísticamente significativas. Además, los pacientes reportaron gran alivio y un deseo de no dejar los productos. Los datos para ambos pacientes se dan en el cuadro 2.

EJEMPLO 9 Entrelazamiento de PCS-10 (conjugado de HA-FITC a PLL-TRITC) después de aplicaciones repetidas a córnea de conejo sin trans lutaminasa añadida en comparación con HA libre (HA-FITC) Materiales v métodos Un lote de HA libre se marcó primero en grupos de COOH usando amina de fluoresceína y se purificó. Una parte del HA marcado (HA-FITC) se mantuvo como control mientras que el resto se conjugó a polilisina que había sido previamente marcada con TRITC y se purificó. Después de la conjugación, el PCS-101 doblemente marcado (HA-FITC conjugado a PLL-TRITC) se purificó. Para evaluar el entrelazamiento a córnea de conejo, los grupos de reacción fueron Grupo I: 10 mg/ml de PCS-101 (HA-FITC conjugado a PLL- TRITC) en borato 20 mM, NaCI 80 mM, PH 7.8, y Grupo II: 10 mg/ml de HA libre (HA-FITC) en borato 20 mM, NaCI 80 mM, pH 7.8. El volumen de reacción total fue de 50 µ?. La intensidad de fluorescencia de FITC, viscosidad y peso molecular de HA en las soluciones aplicadas de PCS-10 y HA libre fueron las mismas. El globo ocular intacto de conejo se enjuagó en regulador de pH PBS. La solución de reacción se aplicó en el centro de la córnea usando un cilindro de 0.5 cm2 y se incubó durante 1 minuto a 37°C. El área de tratamiento después se lavó por menos de 1 minuto con 150 µ? de 1x de PBS dentro del cilindro. Este procedimiento de aplicación y lavado se repitió 6 veces para cada ojo. La córnea se fotografió después con una cámara digital Spot RT (Diagnostic Instrument, Inc.) bajo iluminación con FITC. Después se extirpó la córnea y se congeló en un medio de OCT. Se hicieron secciones histológicas y se fotografiaron bajo iluminación con FITC para cuantificación de fluorescencia. 10 Resultados CUADRO 3 Cuantificación de fluorescencia con FITC sobre secciones histológicas La figura 13 demuestra la doble tinción de FITC y TRITC cuando se aplican conjugados de HA-PLL a córnea de conejo en ausencia de transglutaminasa exógena (primer panel). Las fotografías se tomaron siguiendo seis aplicaciones repetidas del conjugado con un tiempo de incubación de 1 minuto por aplicación. El HA se conjugó después con FITC mientras que el PLL se conjugó posteriormente a TRITC. No se observó tinción cuando se usó únicamente HA-FITC (segundo panel). PLL-TRITC Imarcó la córnea (tercer panel). Los tejidos no tratados demostraron únicamente fluorescencia de fondo (cuarto panel). Este patrón de tinción indica que la fluorescencia con FITC observada usando PCS-101 se debió a unión de PLL a la córnea, como lo indica el tercer panel, y no de unión no específica de HA-FITC.

Conclusiones Los datos indican que el entrelazamiento de PCS-101 (conjugado de HA-PLL) a la capa superficial de la córnea de conejo incrementó con un incremento en el número de aplicaciones. Por el contrario, el HA libre (HA-FITC) no se unió significativamente a la capa superficial de la cornea de conejo. Esto fue evidenciado por el hecho de que la intensidad de fluorescencia sobre estas secciones de tejido permaneció a nivel de fondo y no incrementó al incrementar las aplicacioines. Después de seis aplicaciones repetidas, la cantidad de PCS-101 retenido por la córnea de conejo es aproximadamente 24 veces mayor que la de HA libre como se midió por sus intensidades de fluorescencia con FITC promedio corregidas, relativas (véase la figura 14).

Equivalentes Se entenderá que se pueden hacer varias modificaciones a las modalidades que aquí se describen. Por lo tanto, la descripción anterior no debe considerarse como limitante, sino simplemente como ejemplificaciones de modalidades preferidas. Los expertos en la técnica contemplarán otras modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones anexas a la presente. Todas las referencias, patentes y solicitudes de patente que aquí se describen se incorporan por referencia en su totalidad.

APENDICE A REACTIVIDAD DE ENTRELAZADORES COMERCIALMENTE DISPONIBLES Reactivo hacia Digerible por Acrónimo de Aminos Sulfhi- CarboNo selecCarboxi- Tioles Base Peryodato Hidroxil-entrelazador -NH2 drilos hidratos tivos los amina de doble -SH (foto- -COOH agente reactivos) SANPAH X X SASD X X X SDBP X SIAB X X SMCC X X SMBP X X SMPT X X SPDP X X X Sulfo- X X BSOCOES Sulfo-DST X X Sulfo-EGS X X Sulfo-G BS X X Sulfo-HSAB X X Sulfo-LC- X X X SPDP Sulfo-MBS X X Sulfo-NHS- X X ASA Sulfo-NHS-LC- X X ASA Sulfo-SADP X X X Reactivo hacia Digerible por Acrónimo de Aminos Sulfhi- CarboNo selecCarboxi- Tioles Base Per odato Hidroxil-entrelazador de -NH2 drilos hidratos tivos los amina doble agente -SH (foto- -COOH reactivos) Sulfo-SAMCA X X Sulfo-SANPAH X X Sulfo-SAPB X X Sulfo-SIAB X X Sulfo-SMCC X X Sulfo-SMBP X X Sulfo-LC-SMPT X X

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa; y ácido hialurónico libre, en donde el ácido hialurónico libre y el conjugado están presentes en una relación molar de por lo menos 2. 2. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque la molécula enlazadora tiene por lo menos dos aminas alifáticas contiguas, por lo menos tres aminas alifáticas contiguas, por lo menos cuatro aminas alifáticas contiguas, por lo menos cinco aminas alifáticas contiguas o por lo menos seis aminas alifáticas contiguas. 3. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque la molécula enlazadora es polilisina nativa. 4. - La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque la polilisina se selecciona del grupo que consiste de poli-L-lisina, poli-D-lisina y poli-DL-lisina. 5. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la molécula enlazadora es un derivado de polilisina. 6. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la molécula enlazadora tiene por lo menos dos carboxamidas continuas, por lo menos tres carboxamidas contiguas, por lo menos cuatro carboxamidas contiguas, por lo menos cinco carboxamidas o por lo menos tres carboxamidas. 7. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la molécula enlazadora es poliglutamina nativa. 8. - La composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada además porque la molécula enlazadora se selecciona del grupo que consiste de poli-L-glutamina, poli-D-glutamina y poli-DL-glutamina. 9. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la molécula enlazadora es un derivado de poliglutamina. 10. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el ácido hialurónico es ácido hialurónico nativo. 11. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el ácido hialurónico es un derivado de ácido hialurónico seleccionado del grupo que consiste de una sal farmacéuticamente aceptable de ácido hialurónico, un éster de ácido hialurónico y un ácido hialurónico sulfatado. 12. - La composición de conformidad con ia reivindicación 1 , caracterizada además porque la relación molar se selecciona del grupo que consiste de por lo menos 2.0 y por lo menos 4.0. 13. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la composición se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de un gotero para los ojos, una solución para lentes de contacto, una pomada oftálmica, una cubierta para los ojos y un lente de contacto. 14. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la composición se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y un gel oral. 15. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el ácido hialurónico tiene un peso molecular de por lo menos 100,000. 16. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de carga negativa a carga positiva mayor que 1.0. 17. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. 18. - La composición de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende un conservador oftálmico. 19.- La composición de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque el conservador oftálmico se selecciona del grupo que consiste de mercuriales orgánicos, compuestos de amonio cuaternario, ésteres de ácido parahidroxibenzoico, alcoholes y fenoles sustituidos. 20. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque el mercurial orgánico se selecciona del grupo que consiste de nitrato fenilmercúrico, acetato feniimercúrico, borato fenilmercúrico y timerosal. 21. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque el compuesto de amonio cuaternario se selecciona del grupo que consiste de cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, cloruro de cetilpiridinio y polyquaternium-1 (POLYQUAD). 22.- La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque el alcohol y fenol sustituido se selecciona del grupo que consiste de clorobutanol y clorobutanol/alcohol feniletílico. 23.- La composición de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque el conservador oftálmico es un antibiótico. 24.- La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque comprende adicionalmente un agente seleccionado del grupo que consiste de un agente savorizante, un agente colorante y un agente de escencias. 25. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de peso seleccionada del grupo que consiste de por lo menos 90%, por lo menos 95% y por lo menos 99%. 26. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque comprende adicionalmente arginina o fluoruro. 27. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la molécula enlazadora no forma complejo. 28. - Una composición farmacéutica que comprende ácido hialurónico covalentemente enlazado a una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, en donde la molécula enlazadora no forma complejo. 29. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la molécula enlazadora tiene por lo menos dos aminas alifáticas contiguas, por lo menos tres aminas alifáticas contiguas, por lo menos cuatro aminas alifáticas contiguas, por lo menos cinco aminas alifáticas contiguas o por lo menos seis aminas alifáticas contiguas. 30. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la molécula enlazadora es polilisina nativa. 31. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada además porque la polilisina se selecciona del grupo que consiste de poli-L-lisina, poli-D-lisina y poli-DL-lisina. 32.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la molécula enlazadora es un derivado de polilisina. 33.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la molécula enlazadora tiene por lo menos dos carboxamidas contiguas, por lo menos tres carboxamidas contiguas, por lo menos cuatro carboxamidas contiguas, por lo menos cinco carboxamidas o por lo menos tres carboxamidas. 34.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la molécula enlazadora es poliglutamina nativa. 35. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 34, caracterizada además porque la molécula enlazadora se selecciona del grupo que consiste de poli-L-glutamina, poli-D-glutamina y poli-DL-glutamina. 36. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la molécula enlazadora es un derivado de poliglutamina. 37.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque el ácido hialurónico es ácido hialurónico nativo. 38. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque el ácido hialurónico es un derivado de ácido hialurónico seleccionado del grupo que consiste de una sal farmacéuticamente aceptable de ácido hialurónico, un éster de ácido hialurónico y un ácido hialurónico sulfatado. 39. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque comprende adicionalmente ácido hialurónico libre. 40. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la composición se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de un gotero para los ojos, una solución para lentes de contacto, una pomada oftálmica, una cubierta para los ojos y un lente de contacto. 41. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque la composición se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y un gel oral. 42. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque el ácido hialurónico tiene un peso molecular de por lo menos 100,000. 43.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de carga negativa a carga positiva mayor que 1. 44. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. 45. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 44, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende un conservador oftálmico. 46. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 45, caracterizada además porque el conservador oftálmico se selecciona del grupo que consiste de mercuriales orgánicos, compuestos de amonio cuaternario, ásteres de ácido parahidroxibenzoico, alcoholes y fenoles sustituidos. 47. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 46, caracterizada además porque el mercurial orgánico se selecciona del grupo que consiste de nitrato fenilmercúrico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico y timerosal. 48.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 46, caracterizada además porque el compuesto de amonio cuaternario se selecciona del grupo que consiste de cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, cloruro de cetilpiridinio y polyquaternium-1 (POLYQUAD). 49.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 46, caracterizada además porque el alcohol y fenol sustituido se selecciona del grupo que consiste de clorobutanol y clorobutanol/alcohol feniletílico. 50 - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 45, caracterizada además porque el conservador oftálmico es un antibiótico. 51.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 44, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene una osmolalidad de por lo menos 280 mOsm. 52.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 44, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene un pH de por lo menos 6.5. 53 - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 44, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende arginina o fluoruro. 54. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de peso seleccionada del grupo que consiste de por lo menos 90%, por lo menos 95% y por lo menos 99%. 55. - Una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, en un frasco con gotero para los ojos. 56. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. 57. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque comprende adicionalmente instrucciones para uso. 58. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque la molécula enlazadora tiene por lo menos dos aminas alifáticas contiguas, por lo menos tres aminas alifáticas contiguas, por lo menos cuatro aminas alifáticas contiguas, por lo menos cinco aminas alifáticas o por lo menos seis aminas alifáticas. 59.- La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque la molécula enlazadora es polilisina nativa o un derivado de polilisina. 60 - La composición de conformidad con la reivindicación 59, caracterizada además porque la polilisina se selecciona del grupo que consiste de poli-L-lisina, poli-D-lisina y poli-DL-lisina. 61.- La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque la molécula enlazadora tiene por lo menos dos carboxamidas contiguas, por lo menos tres carboxamidas contiguas, por lo menos cuatro carboxamidas contiguas, por lo menos cinco carboxamidas o por lo menos tres carboxamidas. 62.- La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque la molécula enlazadora es poliglutamina nativa o un derivado de poliglutamina. 63. - La composición de conformidad con la reivindicación 62, caracterizada además porque la molécula enlazadora se selecciona del grupo que consiste de poli-L-glutamina, poli-D-glutamina y poli-DL-glutamina. 64. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque el ácido hialurónico es ácido hialurónico nativo. 65. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque el ácido hialurónico es un derivado de ácido hialurónico seleccionado del grupo que consiste de una sal farmacéuticamente aceptable de ácido hialurónico, un éster de ácido hialurónico y un ácido hialurónico sulfatado. 66.- La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque comprende adicionalmente ácido hialurónico libre. 67. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque el ácido hialurónico tiene un peso molecular de por lo menos 100,000. 68. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de carga negativa a carga positiva mayor que 1 . 69. - La composición de conformidad con la reivindicación 56, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende un conservador oftálmico. 70. - La composición de conformidad con la reivindicación 69, caracterizada además porque el conservador oftálmico se selecciona del grupo que consiste de mercuriales orgánicos, compuestos de amonio cuaternario, ésteres de ácido parahidroxibenzoico, alcoholes y fenoles sustituidos. 71 . - La composición de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque el mercurial orgánico se selecciona del grupo que consiste de nitrato fenilmercúrico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico y timerosal. 72. - La composición de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque el compuesto de amonio cuaternario se selecciona del .grupo que consiste de cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, cloruro de cetilpiridinio y polyquaternium-1 (POLYQUAD). 73. - La composición de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque el alcohol y fenol sustituido se selecciona del grupo que consiste de clorobutanol y clorobutanol/alcohol feniletílico. 74.- La composición de conformidad con la reivindicación 69, caracterizada además porque el conservador oftálmico es un antibiótico. 75.- La composición de conformidad con la reivindicación 56, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene una osmolalidad de por lo menos 280 mOsm. 76.- La composición de conformidad con la reivindicación 56, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene un pH de por lo menos 6.5. 77. - La composición de conformidad con la reivindicación 56, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende arginina o lisozima. 78. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de peso seleccionada del grupo que consiste de por lo menos 90%, por lo menos 95% y por lo menos 99%. 79. - La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada además porque la molécula enlazadora no forma complejo. 80. - Una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, y un agente seleccionado del grupo que consiste de un agente saborizante, un agente colorante y un agente de esencias. 81. - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque el agente saborizante se selecciona del grupo que consiste de manitol, sacarina de sodio, magnasweet, extracto, polvo de hojas o aceite de menta, extracto, polvo de hojas o aceite de hierbabuena; aceite de piróla; extracto de vainilla; perejil; aceite de orégano; aceite de hoja de laurel; aceite de clavo; aceite de salvia; aceite de sasafrás; aceite de limón; aceite de naranja, aceite de anís; aceite de almendra; alcanfor; aceite de hoja de cedro; aceite de mejorana; aceite de citronela; aceite de lavanda; aceite de mostaza; aceite de pino; aceite de hojas de pino; aceite de romero; aceite de tomillo; aceite de hoja de canela; mentol; carvona, anetoi; eugenol; salicilato de metilo; limoneno; cimeno; alcohol-n-decílico; citronelol; a-terpineol; acetato de metilo; acetato de citronelilo; metil eugenol; cineol; linalol; etil Unalo!; vainillina; timol; aceite de pelira; aceite de gaulteria; aceite de eucalipto; cafeína, crema tártara, ácido láctico, ácido málico, glutamato monosódico, nitritos, sorbitol, aspartame, acensulfame, dextrosa, levulosa, ciclamato sódico, esteviósido, neo-hesperidildihidrocalcona, glicirricina, perilartina, taumatina, éster metílico de aspartilfenilalanina, y aldehido p-metoxicinámico. 82 - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque el agente colorante se selecciona del grupo que consiste de azul #1 de FD&C, amarillo #5 de FD&C, amarillo #10 de FD&C, rojo #3 de FD&C, rajo #40 de FD&C; color o polvo de caramelo (#05439), sombra de chocolate (#05349), mezcla de laca verde (#09236), dióxido de titanio kowet (#03970), color amarillo líquido (#00403), y nitritos. 83. - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque el agente de esencias se selecciona del grupo que consiste de extracto de flores, extracto de hierba, fiuoral, extracto de plantas y agente de esencias artificiales. 84. - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque la composición se formula para administración oral. 85.- La composición de conformidad con la reivindicación 84, caracterizada además porque la composición se formula como una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un gel oral y un caramelo. 86. - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque comprende adicionalmente arginina o fluoruro. 87. - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. 88. - La composición de conformidad con la reivindicación 87, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene un pH de por lo menos 6.5. 89. - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque la molécula enlazadora no forma complejo. 90. - La composición de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de peso seleccionada del grupo que consiste de por lo menos 90%, por lo menos 95% y por lo menos 99%. 91.- La composición de conformidad con la reivindicación 87, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene una osmolalidad mayor que 280 mOsm. 92. - Una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, en un vehículo que comprende fluoruro. 93. - La composición de conformidad con la reivindicación 92, caracterizada además porque comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. 94. - La composición de conformidad con la reivindicación 93, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene un pH de por lo menos 6.5. 95. - La composición de conformidad con la reivindicación 92, caracterizada además porque la molécula enlazadora no forma complejo. 96.- La composición de conformidad con la reivindicación 92, caracterizada además porque el conjugado tiene una relación de peso seleccionada del grupo que consiste de por lo menos 90%, por lo menos 95% y por lo menos 99%. 97.- La composición de conformidad con la reivindicación 93, caracterizada además porque el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene una osmolalidad mayor que 280 mOsm. 98. - La composición de conformidad con la reivindicación 92, caracterizada además porque el conjugado se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y un gel oral. 99. - Una composición que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, en forma de tableta sublingual. 100.- La composición de conformidad con la reivindicación 99, caracterizada además porque comprende adicionalmente un edulcorante seleccionado del grupo que consiste de sacarina, aspartame, sorbitol, acesulfame, dextrosa, levulosa, ciclamato de sodio, esteviósido, neo-hesperidil-dihidrocalcona, glicirrizina, perilártina, taumatina, éster metílico de aspartilfenilalanina y aldehido p-metoxicinámico. 101. - La composición de conformidad con la reivindicación 99, caracterizada además porque comprende adicionalmente una vitamina. 102. - La composición de conformidad con la reivindicación 99, caracterizada además porque comprende adicionalmente fluoruro. 103.- El uso de la composición de la reivindicación 1, 28, 55, 80, 92 ó 99, para preparar un medicamento para tratar un trastorno caracterizado por resequedad en un sujeto. 104.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 03, en donde el trastorno es resequedad de los ojos. 105. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 104, en donde la resequedad de los ojos está asociada con un trastorno seleccionado del grupo que consiste de cicatrización de conjuntiva no progresiva (síndrome de Stevens-Johnson), síndrome de Sjórgen, tracoma y penfigoide cicatricial. 06. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 103, en donde el trastorno es resequedad de la boca. 107. - Una composición farmacéutica que comprende un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa y una cantidad efectiva de ácido hialurónico libre, en donde el ácido hialurónico libre y el conjugado están presentes en una relación molar de por lo menos 2. 108 - El uso de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, para preparar un medicamento para tratar a un sujeto, que tiene o está en riesgo de tener resequedad del ojo. 109.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, en donde el conjugado se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de un gotero para los ojos, una solución para lentes de contacto, una pomada oftálmica, un paquete para los ojos y un lente de contacto. 110. - El uso de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, para preparar un medicamento para tratar a un sujeto, que tiene o está en riesgo de tener resequedad de una cavidad oral. 111. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 110, en donde el conjugado se provee en una forma seleccionada del grupo que consiste de una tableta sublingual, un enjuague bucal, una pasta de dientes, un caramelo y un gel oral. 112. - El uso de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, para preparar un medicamento para tratar a un sujeto, que tiene o está en riesgo de tener malestar de articulaciones. 113.- El uso de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, para preparar un medicamento para tratar a un sujeto, que tiene o está en riesgo de tener coagulación sanguínea excesiva o que tiene un riesgo elevado de coagulación sanguínea. 114.- El uso de un conjugado de ácido hialurónico y una molécula enlazadora que es un sustrato de transglutaminasa, para preparar un medicamento para tratar a un sujeto, que tiene o está en riesgo de tener arrugas. 115. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde el medicamento es administrable en una cantidad que corresponde a menos de 0.05 µg¡kg por día del congujado. 116. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora tiene por lo menos dos aminas alifáticas contiguas, por lo menos tres aminas alifáticas contiguas, por lo menos cuatro aminas alifáticas contiguas, por lo menos cinco aminas alifáticas o por lo menos seis aminas alifáticas, 117. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora es polilisina nativa. 118. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora se selecciona del grupo que consiste de poli-L-lisina, poli-D-lisina y poli-DL-lisina. 119. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora es un derivado de polilisina. 120. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora tiene por lo menos dos carboxamidas continuas, por lo menos tres carboxamidas contiguas, por lo menos cuatro carboxamidas contiguas, por lo menos cinco carboxamidas o por lo menos tres carboxamidas. 121. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora es poliglutamina nativa. 122. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 1 10, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora se selecciona del grupo que consiste de poli-L-glutamina, poli-D-glutamina y poli-DL-glutamina. 123. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 1 10, 112, 113 ó 114, en donde la molécula enlazadora es un derivado de poliglutamina. 124. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 10, 1 12, 113 ó 114, en donde el ácido hialurónico es ácido hialurónico nativo. 125. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 1 12, 113 ó 114, en donde el ácido hialurónico es un derivado de ácido hialurónico seleccionado del grupo que consiste de una sal farmacéuticamente aceptable de ácido hialurónico, un éster de ácido hialurónico y un ácido hialurónico sulfatado. 126. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 1 12, 1 13 ó 114, en donde el ácido hialurónico tiene un peso molecular de por lo menos 100,000. 127. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde el conjugado tiene una relación de carga negativa a carga positiva mayor que 1.0. 128.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde el conjugado se administra en un vehículo farmacéuticamente aceptable. 129.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, en donde el conjugado es administrable en un vehículo farmacéuticamente aceptable que comprende un conservador oftálmico. 130. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 129, en donde el conservador oftálmico se selecciona del grupo que consiste de mercuriales orgánicos, compuestos de amonio cuaternario, ésteres de ácido parahidroxibenzoico, alcoholes y fenoles sustituidos. 131. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 130, en donde el mercurial orgánico se selecciona del grupo que consiste de nitrato fenilmercúrico, acetato fenilmercúrico, borato fenilmercúrico y timerosal. 132.- El uso como el que se redama en la reivindicación 130, en donde el compuesto de amonio cuaternario se selecciona del grupo que consiste de cloruro de benzalconio, cloruro de benzetónio, cloruro de cetilpiridinio y polyquaternium-1 (POLYQUAD). 133. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 130, en donde el alcohol y fenol sustituido se selecciona del grupo que consiste de clorobutanol y clorobutanol/alcohol feniletílico. 134. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 129, en donde el conservador oftálmico es un antibiótico. 135. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 110, en donde el conjugado es administrable en un vehículo farmacéuticamente aceptable que comprende un agente seleccionado del grupo que consiste de un agente savorizante, un agente colorante y un agente de esencias. 136. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 108, 110, 112, 113 ó 114, en donde el conjugado tiene una relación de peso seleccionada del grupo que consiste de por lo menos 90%, por lo menos 95% y por lo menos 99%. 137. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 128, en donde el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende arginina. 138. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 128, en donde el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene un pH de por lo menos 6.5. 139. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 128, en donde el vehículo farmacéuticamente aceptable tiene una osmolalidad de por lo menos 280 mOsm.