[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

WO2024208228A1 - Novel compounds, compositions comprising the same and uses thereof - Google Patents

Novel compounds, compositions comprising the same and uses thereof Download PDF

Info

Publication number
WO2024208228A1
WO2024208228A1 PCT/CN2024/085669 CN2024085669W WO2024208228A1 WO 2024208228 A1 WO2024208228 A1 WO 2024208228A1 CN 2024085669 W CN2024085669 W CN 2024085669W WO 2024208228 A1 WO2024208228 A1 WO 2024208228A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alkyl
mmol
halogen
cycloalkyl
independently selected
Prior art date
Application number
PCT/CN2024/085669
Other languages
French (fr)
Inventor
Kun Chin Liu
Weiguo QUAN
Xiangqing JIANG
Original Assignee
Nuphase Therapeutics (Hangzhou) Limited., Co.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nuphase Therapeutics (Hangzhou) Limited., Co. filed Critical Nuphase Therapeutics (Hangzhou) Limited., Co.
Publication of WO2024208228A1 publication Critical patent/WO2024208228A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/68—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D211/70—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/18—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C07D295/182—Radicals derived from carboxylic acids
    • C07D295/185—Radicals derived from carboxylic acids from aliphatic carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to novel IL-17 inhibitors, pharmaceutical compositions comprising the compounds, and uses thereof. Methods for treating, preventing and managing inflammatory conditions using the compounds and compositions are also disclosed.
  • Interleukin-17 is a T derived cell-derived pro-inflammatory molecule that stimulates epithelial, endothelial and fibroblastic cells to produce other inflammatory cytokines and chemokines including IL-6, IL-8, G-CSF, and MCP-1.
  • Dysregulation expression of IL-17 may contribute to inflammatory and autoimmune diseases such as psoriasis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, and multiple sclerosis (Li X, Bechara R, Zhao J, et al. IL-17 receptor–based signaling and implications for disease. Nat Immunol. 2019; 20 (12) : 1594–1602) . As such, they are highly interesting new therapeutic targets for inflammatory diseases.
  • Interleukin-17A is the best-investigated IL-17 family member. It is a pro-inflammatory cytokine, which plays a pivotal role in immune and auto-immune related diseases including psoriasis, asthma, psoriatic arthritis, and rheumatoid arthritis (Tollenaere MAX, Hebsgaard J, Ewald DA, et al. Signalling of multiple interleukin (IL) -17 family cytokines via IL-17 receptor A drives psoriasis-related inflammatory pathways. Br J Dermatol. 2021; 185 (3) : 585–594; Ostling J, Geest M, Schofield JPR, et al.
  • IL-17A forms homodimers or heterodimers with IL-17A or IL-17F and is a major cytokine mainly secreted from Th17 cells. It signals through its membrane-bound receptors, IL-17RA and IL-17RC, and modulates IL-17A signaling pathway and triggers multiple inflammatory and immune responses. Thus, IL-17A has emerged as a major topic of interest for treating inflammatory-associated disease.
  • mAbs monoclonal antibodies
  • mAbs monoclonal antibodies
  • IL-17A inhibitors are in clinical practice for the treatment of multiple immune diseases.
  • the disadvantages of the mAbs such as non-oral administration, poor tissue penetration, lacking blood-brain barrier penetration, often long half-life times, narrow its application.
  • Leo Pharma A/S and Dice Alpha, Inc developed a series of small molecule IL-17A inhibitors and started Phase I clinical trials in 2021 and 2022, respectively.
  • Eli Lilly and Company developed a series of potent imidazo [1, 2-b] pyridazine derivatives to treat certain symptoms of psoriasis, rheumatoid arthritis, or multiple sclerosis.
  • Eli Lilly initiated a Phase I clinical trial of one of the compounds to study IL-17A-related diseases. But unfortunately, the clinical trial was discontinued due to hepatotoxicity.
  • IL-17A inhibitors particularly IL-17A/A or IL-17A/F inhibitors with improved properties, low toxicity and high activities.
  • the inventor of the present application surprisingly found a series of compounds as IL-17A inhibitors, especially as IL-17A/A or IL-17A/F inhibitors. These compounds have increased metabolic stability compared with the current small molecular compounds and have increased or comparable activities over the large molecules such as monoclonal antibodies.
  • the present application relates to a compound of the following formula (I) :
  • moiety A is selected from the group consisting of:
  • heteroaryl containing one or more N atoms
  • said heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, cyano, -NH 2 , C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 3-7 cycloalkyl, C 3-7 cycloalkoxy, phenyl, phenoxy, 5-6-membered heteroaryl and 4-7-membered heterocycloalkyl, said 5-6-membered heteroaryl and 4-7-membered heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
  • R 3 is selected from the group consisting of :
  • substituents are independently selected from: C 1-6 alkyloxy, C 6-12 aryl and 5-12-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, each optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -OH;
  • C 1-6 alkyl -NH (C 1-6 alkyl) , -NH (C 3-7 cycloalkyl) , -N (C 1-6 alkyl) 2 , and -N (C 1-6 alkyl) (C 3-7 cycloalkyl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkyloxy, C 3-7 cycloalkyl, halogen, -CN, -NH 2 , -OH;
  • moiety B is selected from C 6-12 aryl, 6-membered heterocyclyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from N, said C 6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocyclyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
  • moiety C is selected from the group consisting of:
  • substituents being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of deuterium, C 1-6 alkyl, halogenated C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkoxy, halogen, -CN, CF 3 , CD 3 , -oxo, -NH 2 , -COOH, -C (O) O-C 1-6 alkyl, -OH, 5-7 membered heteroaryl, 4-7 membered heterocyclyl, C 1-6 hydroxyalkyl and C 3-6 cycloalkyl;
  • substituents are independently selected from: C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -NO 2 , -CF 3 , -NH 2 , -OH; said substituents being optionally substituted with one or more halogen;
  • R 1 , R 1 ’and R 2 ’ are independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, deuterated C 1-6 alkyl, deuterated C 2-6 alkenyl, deuterated C 2-6 alkynyl, C 1-3 alkoxy, halogenated C 1-3 alkyloxy, halogen, halogenated C 1-6 alkyl, -CN, -N (C 1-6 alkyl) 2 , CF 3 , -NH 2 , -OH;
  • R 2 is selected from hydrogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, -NH 2 , -N (C 1-6 alkyl) 2 , -NH-C 1-6 alkyl, -NHC (O) -C 1-6 alkyl, -NHC (O) - (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) , -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , -NHC (O) -O-NH-C 1-6 alkyl, -NHC (O) -NH- (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C 1-6 alkyl) , -NHC (O) -N (C 1-6 alkyl) (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C 1-6 alkyl, -NHC (O) -
  • substituents independently selected from the group consisting of C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, halogenated C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 1-6 alkoxy, C 3-7 cycloalkyl, deuterium, halogen, -CN, CF 3 , -NH 2 , -OH; said heterocyclyl or heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
  • R a and R a ’ are each independently selected from hydrogen, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, halogen, -CN, CF 3 , -NH 2 , -OH, -C 1-3 alkoxy, C 3-7 cycloalkyl and C 3-7 heterocyclyl;
  • R b and R b ’ are each independently selected from hydrogen, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-7 cycloalkyl, C 5-10 aryl, C 5-10 heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-7 cycloalkyl, halogen, -CN, CF 3 , -NH 2 , -OH, and -C 1-3 alkoxy; or R b and R b ’together with the carbon atom to which they attached form a C 3-8 carbocycle, C 5-9 spirocyclic ring, C 5-10 aromatic ring or C 5-10 aromatic heterocycle, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, -C 1-3 alkoxy,
  • L is absent or selected from -O-and -NH-;
  • n 0, 1 or 2;
  • n 0 or 1
  • moiety C connected to the rest of the formula through N atoms in moiety C.
  • moiety B is selected from C 6 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from N, said C 6 aryl or 6-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
  • L is absent, m is 0, n is 1, and the compound is represented by formula (Ia) :
  • moiety A1 is defined as moiety A;
  • moiety B1 is defined as moiety B;
  • moiety C1 is defined as moiety C;
  • R b1 is defined as R b ;
  • R b1’ is defined as R b’ ;
  • R 1 , R 1’ , R 2’ and R 2 are as defined above.
  • moiety A1 is selected from the group consisting of: 5-12-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, cyano, -NH 2 , C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 3-7 cycloalkyl, and 4-7-membered heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N.
  • moiety B1 is selected from C 6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C 6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
  • moiety C1 is selected from 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, methylene and C 1-6 alkyl, said substituents being optionally substituted with one or more halogen, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms to which they attached form a C 3-7 carbocycle.
  • R 1 , R 1 ’and R 2 ’ are independently selected from the group consisting of hydrogen, CF 3 and C 1-6 alkyl.
  • R 2 is selected from -NH 2 , -NHC (O) -C 1-6 alkyl, -NHC (O) -NH- (C 1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -N (C 1-6 alkyl) (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C 3-7 cycloalkyl, and -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) and -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C 1-6 alkyl and C 1-6 alkoxy; said heterocyclyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N.
  • R b1 and R b1 ’ are each independently selected from C 3-7 cycloalkyl or C 2-6 alkenyl substituted with one or more C 3-7 cycloalkyl; or R b1 and R b1 ’together with the carbon atom to which they attached form a C 3-8 carbocycle optionally substituted with one or more C 1-6 alkyl or halogen.
  • L is absent, m is 0, n is 1, and the compound is represented by formula (Ib) :
  • moiety D is selected from the group consisting of: C 1-6 alkyl, C 3-7 cycloalkyl, -O-C 3-7 cycloalkyl, -O-CH 2 -C 3-7 cycloalkyl, -O-CH 2 -5-7-membered heteroaryl, -NH (C 1-6 alkyl) , -N (C 3-7 cycloalkyl) , -N (C 1-6 alkyl) 2 , --N (C 1-6 alkyl) (C 3-7 cycloalkyl) , C 6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, 4-7-membered heterocyclyl,
  • substituents independently selected from the group consisting of H, C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 alkoxy, C 3-7 cycloalkyl, 4-7-membered heterocycloalkyl, halogen, halogenated C 1-6 alkyl, C 1-6 cyanoalkyl, -oxo, -CN, -NH 2 , -OH, phenyl, -NH (C 1-6 alkyl) , - (CH 2 ) q -NH (CO) - (C 1-4 alkyl) , -NHS (O) 2 (C 1-6 alkyl) ; q is 0, 1, 2, 3, or 4; or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a substituted or unsubstituted C 5-7 carbocyclyl, or substituted or unsubstituted 5-7 membered heterocyclel
  • R c and R c ’ are independently selected from hydrogen, deuterium, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkyloxy, halogen, -CN, -CF 3 , -CD 3 , -NH 2 , -OH;
  • p is 0 or 1;
  • moiety B2 is defined as moiety B;
  • moiety C2 is defined as moiety C;
  • R b2 is defined as R b ;
  • R b2 ’ is defined as R b ’;
  • R 1 , R 1’ , R 2 ’ and R 2 are as defined above.
  • moiety D is selected from C 3-6 cycloalkyl, 5-6 membered heterocyclyl and 5-6 membered heteroaryl containing one or more heteroatoms selected from N, O and S; optionally substituted with one or more substitutents selected from halogen, -oxo, C 1-6 alkyl, halogenated C 1-6 alkyl, C 1-6 cyanoalkyl, -CN.
  • moiety B2 is selected from C 6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C 6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
  • p is o.
  • moiety C2 is selected from the group consisting of:
  • amino group said amino group being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C 1-6 alkyl, halogen or halogenated C 1-6 alkyl;
  • substituents being optionally substituted with one or more halogen, deuterium, CN, CF 3 , -oxo, CD 3 , -OH, -COOH, -C (O) O-C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyl, halogenated C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, 5-7 membered heteroaryl, 4-7 membered heterocyclyl and C 3-6 cycloalkyl;
  • R 2 ’ is H, and/or R 2 is selected from –NH 2 , -NHC (O) -O-C 1-6 alkyl, -NHC (O) -C 1-6 alkyl, -NHC (O) -NH- (C 1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -N (C 1-6 alkyl) (C 3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C 3-7 cycloalkyl, -NHC (O) -O-CH 2 -C 3-7 cycloalkyl, -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) , -NHC (O) -N (C 1-6 alkyl) 2 , -NHC (O) -NHC (O
  • heterocyclyl or heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N.
  • R b2 and R b2 ’ are each independently selected from C 3-7 cycloalkyl; or R b2 and R b2 ’together with the carbon atom to which they attached form a C 3-8 carbocycle or 5-7 membered heterocycle optionally substituted with one or more substituents independently selected from methylene, C 2-6 alkenyl, C 1-6 alkyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen;
  • moiety C2 is a 4-9-membered heterocyclyl containing at least one N atom and none or more heteroatoms selected from O, N and S.
  • moiety C2 connected to the rest of formula Ib through N atoms in moiety C2.
  • the compound is represented by formula Ib-1,
  • R 1 , R 1 ’, R 2 ’, R 2 , R b2 , R b2 ’, R c and R c ’, p, moiety B2 and moiety D are as defined above.
  • moiety B2 is halogenated phenyl.
  • moiety D is 5-6 membered heteroaryl, optional substituted with one or more substituents selected from C 1-6 alkyl, halogen
  • the compound is represented by formula Ib-2,
  • R 1 , R 1 ’, R 2 ’, R 2 , R c and R c ’, p, moiety B2 and moiety D are as defined above.
  • L is absent, m is 0, n is 0, and the compound is represented by formula (Ic) :
  • R b3 is defined as Rb
  • R b3 ' is defined as Rb';
  • moiety B3 is defined as moiety B;
  • moiety C3 is defined as moiety C;
  • p is 0 or 1;
  • moiety D1 is selected from the group consisting of: C 6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of H, C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, halogenated C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -NH 2 , -OH; said heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
  • R 2 and R 2 ’ are independently selected from the group consisting of hydrogen, CF 3 and C 1-6 alkyl;
  • R c and R c ’ are independently selected from hydrogen, deuterium, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkyloxy, halogen, -CN, -CF 3 , -CD 3 , -NH 2 , -OH;
  • moiety B3 is selected from C 6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C 6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
  • moiety C3 is selected from the group consisting of: amino group optionally substituted with one or more C 1-6 alkyl, said C 1-6 alkyl being optionally substituted with one or more halogen or halogenated C 1-6 alkyl; 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more halogen, methylene, C 2-6 alkenyl, said methylene and C 2-6 alkenyl being optionally substituted with one or more halogen, C 1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms to which they attached form a C 3-7 carbocycle.
  • R b3 and R b3 ’ are each independently selected from hydrogen,C 3-7 cycloalkyl or C 2-6 alkenyl substituted with one or more C 3-7 cycloalkyl; or R b3 and R b3 ’ together with the carbon atom to which they attached form a C 3-8 carbocycle optionally substituted with one or more methylene, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen.
  • moiety D1 is selected from the group consisting of: phenyl, 5-6-membered heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyloxy, halogen, -CN; said heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
  • moiety B3 is selected from phenyl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said phenyl or 6-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
  • C3 is selected from the group consisting of: -N (C 1-6 alkyl) 2 optionally substituted with one or more halogen or halogenated C 1-6 alkyl; 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more halogen, methylene, C 2-6 alkenyl, said methylene and C 2-6 alkenyl being optionally substituted with one or more halogen, C 1-6 alkyl; said 4-9-membered heterocyclyl connected to the rest of the structure through N atom.
  • said heterocyclyl and carbocyclyl can be saturated or partially unsaturated, or unsaturated, substituted or unsubstituted, aromatic or non aromatic.
  • said heterocyclyl and carbocyclyl may be in fused, bridged or spiro-connected fashion.
  • each group is the corresponding group in the specific compound in the example.
  • the compound is selected from the group consisting of:
  • the present application relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the compound of the present invention and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • compositions can be used to prepare individual, single-unit dosage forms.
  • single unit dosage forms provided herein are suitable for oral, mucosal, parenteral, topical, transdermal, or transcutaneous administration to a patient.
  • dosage forms include, but are not limited to: tablets; caplets; capsules, such as soft elastic gelatin capsules; cachets; troches; lozenges; dispersions; suppositories; powders; aerosols; gels; liquid dosage forms suitable for oral or mucosal administration to a patient, including suspensions, solutions, and elixirs; liquid dosage forms suitable for parenteral administration to a patient; eye drops or other ophthalmic preparations suitable for topical administration; and sterile solids that can be reconstituted to provide liquid dosage forms suitable for parenteral administration to a patient.
  • dosage forms comprise the compound provided herein, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof in an amount of 1 to about 1000 mg, from about 5 to about 500 mg, from about 10 to about 350 mg, or from about 50 to about 200 mg.
  • the specific amount of the compound provided herein, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof will depend on the specific agent used, the diseases or conditions being treated or prevented.
  • compositions comprise a compound provided herein, or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and optionally a second active agent used for treating inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
  • the present application relates to a method of treating a disease or condition in a subject in need thereof, wherein the method comprises administering to the subject a therapeutically effective amount of the compound of the present application, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of the present application, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
  • the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn’s disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma
  • the present application relates to the use of the compound of the present invention, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of the present invention in the manufacture of medicaments for preventing or treating a disease or condition, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
  • the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn’s disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma
  • the present application relates to a compound of the present invention, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of the present invention for use in a method of preventing or treating a disease or condition, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
  • the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn's disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma
  • a compound provided herein, or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof is administered in combination with another drug ("second active agent" ) or treatment.
  • Second active agents include small molecules and large molecules (e.g., proteins and antibodies) .
  • Other therapies that can be used in combination with the administration of compounds provided herein include, but are not limited to, surgery, immunotherapy, biological therapy, radiation therapy, and other non-drug-based therapies useful for treating or preventing various diseases described herein.
  • FIG. 1A-J shows the comparative efficacy of test compounds with the approved anti-IL-17A antibodies secukinumab in inhibiting IL-17A/A activation.
  • FIG. 1A efficacy of secukinumab;
  • FIG. 1B-1J efficacy of compounds of representative Examples.
  • FIG. 2A-H shows the comparative efficacy of test compounds with the approved anti-IL-17A antibodies secukinumab in inhibiting IL-17A/F activation.
  • FIG. 2A efficacy of secukinumab
  • FIG. 2B-2H efficacy of compounds of representative Examples.
  • alkyl refers to a saturated straight chain or branched hydrocarbon having a number of carbon atoms as specified herein.
  • Representative saturated straight chain alkyls include -methyl, -ethyl, -n-propyl, -n-butyl, -n-pentyl, and -n-hexyl; while saturated branched alkyls include -isopropyl, -sec-butyl, -isobutyl, -tert-butyl, -isopentyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-methylhexyl, 2, 3-dimethylbutyl, and the like.
  • alkyl also encompasses cycloalkyl.
  • the alkenyl is
  • alkenyl refers to a straight chain or branched hydrocarbon having a number of carbon atoms as specified herein and containing one or more double bonds. Exemplary alkenyl carbon chains contain from 2 to 20 carbons and contain 1 to 8 double bonds. Examples of alkenyl groups include, but are not limited to, ethenyl, propen-l-yl, propen-2-yl, allyl, butenyl, and 4-methylbutenyl. In certain embodiments, the alkenyl is optionally substituted as described herein elsewhere.
  • alkynyl refers to a straight chain or branched hydrocarbon having a number of carbon atoms as specified herein and containing one or more triple bonds.
  • Exemplary alkynyl groups herein include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, and butynyl.
  • lower alkyl, lower alkenyl, and lower alkynyl refer to carbon chains having from about 1 or about 2 carbons up to about 6 carbons.
  • carbocyclyl or “carbocycle” refers to a non-aromatic cyclic ring or ring system containing only carbon atoms in the ring system backbone.
  • carbocyclyl is a ring system, two or more rings may be joined together in a fused, bridged or spiro-connected fashion.
  • Carbocyclyls may have any degree of saturation provided that at least one ring in a ring system is not aromatic.
  • carbocyclyls include cycloalkyls, cycloalkenyls, and cycloalkynyls.
  • the carbocyclyl group may have 3 to 20 carbon atoms, although the present definition also covers the occurrence of the term "carbocyclyl” where no numerical range is designated.
  • the carbocyclyl group may also be a medium size carbocyclyl having 3 to 10 carbon atoms.
  • the carbocyclyl group could also be a carbocyclyl having 3 to 6 carbon atoms.
  • the carbocyclyl group may be designated as "C 3-6 carbocyclyl" or similar designations.
  • carbocyclyl rings include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, adamantyl, and spiro [2.5] octyl.
  • cycloalkyl means a specie of alkyl, which is cyclic and contains from 3 to 9, 3 to 6, or 3 to 5 carbon atoms, without alternating or resonating double bonds between carbon atoms. It may contain from 1 to 4 rings. Examples of unsubstituted cycloalkyls include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, and cyclooctyl. A cycloalkyl may be substituted with one or more substituents. In some embodiments, a cycloalkyl may be a cycloalkyl fused with aryl or heteroaryl groups. Bridged ring systems are also included in the definition of "cycloalkyl” .
  • heterocycloalkyl or “heterocyclyl” means a cycloalkyl in which one or more carbon atoms are replaced by heteroatoms such as, but not limited to, N, S, and O.
  • a heterocycloalkyl group contains from 2 to 8, 2 to 7, 2 to 5, or 2 to 4 carbon atoms.
  • the heterocycloalkyl may be attached to the main structure at a heteroatom or a carbon atom which results in the creation of a stable compound.
  • heterocycloalkyl or heterocyclyl include but not limited to morpholinyl, thiomorpholinyl, pyranyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, pyrazolidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothienyl, tetrahydrothiazolyl, piperidinyl, azetidinyl, oxetanyl, piperazinyl.
  • aromatic refers to a ring or ring system having a conjugated pi electron system and includes both carbocyclic aromatic (e.g., phenyl) and heterocyclic aromatic groups (e.g., pyridine) .
  • carbocyclic aromatic e.g., phenyl
  • heterocyclic aromatic groups e.g., pyridine
  • the term includes monocyclic or fused-ring polycyclic (i.e., rings which share adjacent pairs of atoms) groups provided that the entire ring system is aromatic.
  • aryl means a carbocyclic aromatic ring containing from 5 to 10 ring atoms.
  • the ring atoms of a carbocyclic aryl group are all carbon atoms.
  • Aryl ring structures include compounds having one or more ring structures such as mono-and bicyclic compounds.
  • Exemplary aryl groups include phenyl and naphthyl.
  • heteroaryl refers to a monocyclic or multicyclic aromatic ring system, in certain embodiments, of about 5 to about 10 members where one or more, in one embodiment 1 to 3, of the atoms in the ring system is a heteroatom, that is, an element other than carbon, including but not limited to, nitrogen, oxygen or sulfur.
  • monocyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, furanyl, imidazolyl, isothiazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, oxazolyl, pyrazinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, thiadiazolyl, thiazolyl, thienyl, tetrazolyl, triazinyl, and triazolyl.
  • bicyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, benzofuranyl, benzimidazolyl, benzoisoxazolyl, benzopyranyl, benzothiadiazolyl, benzothiazolyl, benzothienyl, benzotriazolyl, benzoxazolyl, furopyridyl, imidazopyridinyl, imidazothiazolyl, indolizinyl, indolyl, indazolyl, isobenzofuranyl, isobenzothienyl, isoindolyl, isoquinolinyl, isothiazolyl, naphthyridinyl, oxazolopyridinyl, phthalazinyl, pteridinyl, purinyl, pyridopyridyl, pyrrolopyridyl, quinolinyl, quinoxalinyl, quinazolinyl, thiadiazolopyrimi
  • alkoxyl refers to a stable straight or branched chain, or cyclic hydrocarbon radical, or combinations thereof, consisting of the stated number of carbon atoms and from one or more, in one embodiment, one to three, O atoms, wherein at least one O atom is at the position where the alkoxyl or alkoxy group is attached to the remainder of the molecule.
  • alkoxyl include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, sec-butoxy, and tert-butoxy. In one embodiment, the alkoxyl is optionally substituted as described herein elsewhere.
  • halogen refers to F, CI, Br or I.
  • a group which is “halogenated” refers to that one or more hydrogen in that group is/are replaced with halogen.
  • deuterium refers to an isotope of hydrogen that has one proton and one neutron in its nucleus and that has twice the mass of ordinary hydrogen, usually indicated by “D” .
  • a group which is “deuterated” refers to that one or more hydrogen in that group is/are replaced with deuterium (D) .
  • the term "pharmaceutically acceptable salt” refers to salts prepared from pharmaceutically acceptable non-toxic acids, including inorganic acids and organic acids.
  • suitable non-toxic acids include inorganic and organic acids such as, but not limited to, hydrobromic, hydrochloric, acetic, anthranilic, benzenesulfonic, benzoic, camphorsulfonic, citric, ethenesulfonic, formic, fumaric, furoic, gluconic, glutamic, glucuronic, galacturonic, glycidic, isethionic, lactic, maleic, malic, mandelic, methanesulfonic, mucic, nitric, pamoic, pantothenic, phenylacetic, propionic, phosphoric, salicylic, stearic, succinic, sulfanilic, sulfuric, tartaric, p-toluenesulfonic acid and the like.
  • solvate means a compound that further includes a stoichiometric or non-stoichiometric amount of solvent bound by non-covalent intermolecular forces. Where the solvent is water, the solvate is a hydrate.
  • stereoisomer encompasses all stereomerically pure and stereomerically enriched compounds provided herein.
  • enantiomer encompasses all enantiomerically pure and enantiomerically enriched compounds provided herein.
  • stereomerically pure means a composition that comprises one stereoisomer of a compound and is substantially free of other stereoisomers of that compound.
  • a stereomerically pure composition of a compound having one chiral center will be substantially free of the opposite enantiomer of the compound.
  • a stereomerically pure composition of a compound having two chiral centers will be substantially free of other diastereomers of the compound.
  • a typical stereomerically pure compound comprises greater than about 80%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 20%by weight of other stereoisomers of the compound, greater than about 90%> by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 10%by weight of the other stereoisomers of the compound, greater than about 95%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 5%by weight of the other stereoisomers of the compound, greater than about 97%) by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 3%by weight of the other stereoisomers of the compound, greater than about 98%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 2%by weight of the other stereoisomers of the compound or greater than about 99%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 1%by weight of the other stereoisomers of the compound.
  • enantiomerically pure means a stereomerically pure composition of a compound having one chiral center.
  • enantiomerically enriched means a stereomerically enriched composition of a compound having one chiral center.
  • R and S are used to denote the absolute configuration of the molecule about its chiral center (s) .
  • the term “about” or “approximately” means an acceptable error for a particular value as determined by one of ordinary skill in the art, which depends in part on how the value is measured or determined. In certain embodiments, the term “about” or “approximately” means within 1, 2, 3, or 4 standard deviations. In certain embodiments, the term “about” or “approximately” means within 50%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, or 0.05%of a given value or range.
  • pharmaceutically acceptable excipient means a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle, such as a liquid or solid filler, diluent, solvent or encapsulating material.
  • a pharmaceutically acceptable material such as a liquid or solid filler, diluent, solvent or encapsulating material.
  • Each carrier must be “acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not injurious to the patient.
  • materials which can serve as pharmaceutically acceptable carriers include: sugars, such as lactose, glucose and sucrose; starches, such as corn starch and potato starch; cellulose, and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; powdered tragacanth; malt; gelatin; talc; excipients, such as cocoa butter and suppository waxes; oils, such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil and soybean oil; glycols, such as propylene glycol; polyols, such as glycerin, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; esters, such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents, such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic saline; Ringer'
  • the terms “subject, ” “individual, ” and “patient” may be used interchangeably and refer to humans, as well as non-human mammals (e.g., non-human primates, canines, equines, felines, porcines, bovines, ungulates, lagomorphs, and the like) .
  • the subject can be a human (e.g., adult male, adult female, adolescent male, adolescent female, male child, female child) under the care of a physician or other health worker in a hospital, as an outpatient, or other clinical context.
  • the subject may not be under the care or prescription of a physician or other health worker.
  • a subject in need thereof refers to a subject, as described infra, that suffers from, or is at risk for, a pathology to be prophylactically or therapeutically treated with a compound or salt described herein.
  • administer As used herein, and unless otherwise indicated, the terms “administer” , “administered” , “administers” and “administering” are defined as providing a composition to a subject via a route known in the art, including but not limited to intravenous, intraarterial, oral, parenteral, buccal, topical, transdermal, rectal, intramuscular, subcutaneous, intraosseous, transmucosal, or intraperitoneal routes of administration. In certain embodiments, oral routes of administering a composition can be used.
  • administer should be understood to mean providing a compound of the invention or a prodrug of a compound of the invention to the individual in need.
  • the term “effective amount” or “therapeutically effective amount” refers to that amount of a compound or salt described herein that is sufficient to effect the intended application including but not limited to disease treatment, as defined below.
  • the therapeutically effective amount may vary depending upon the intended application (in vitro or in vivo) , or the subject and disease condition being treated, e.g., the weight and age of the subject, the severity of the disease condition, the manner of administration and the like, which can readily be determined by one of ordinary skill in the art.
  • the term can also apply to a dose that can induce a particular response in target cells, e.g., reduction of proliferation or down regulation of activity of a target protein.
  • the specific dose can vary depending on the particular compounds chosen, the dosing regimen to be followed, whether it is administered in combination with other compounds, timing of administration, the tissue to which it is administered, and the physical delivery system in which it is carried.
  • treatment refers to an approach for obtaining beneficial or desired results with respect to a disease, disorder, or medical condition including, but not limited to, a therapeutic benefit and/or a prophylactic benefit.
  • treatment or treating involves administering a compound or composition disclosed herein to a subject.
  • a therapeutic benefit may include the eradication or amelioration of the underlying disorder being treated.
  • a therapeutic benefit may be achieved with the eradication or amelioration of one or more of the physiological symptoms associated with the underlying disorder, such as observing an improvement in the subject, notwithstanding that the subject may still be afflicted with the underlying disorder.
  • the compositions are administered to a subject at risk of developing a particular disease, or to a subject reporting one or more of the physiological symptoms of a disease, even though a diagnosis of this disease may not have been made.
  • Treating can include, for example, reducing, delaying or alleviating the severity of one or more symptoms of the disease or condition, or it can include reducing the frequency with which symptoms of a disease, defect, disorder, or adverse condition, and the like, are experienced by a patient. Treating can be used herein to refer to a method that results in some level of treatment or amelioration of the disease or condition, and can contemplate a range of results directed to that end, including but not restricted to prevention of the condition entirely.
  • the terms “treat, “ “treating” and “treatment” refer to the eradication or amelioration of a disease or condition, or of one or more symptoms associated with the disease or condition. In certain embodiments, the terms refer to minimizing the spread or worsening of the disease or disorder resulting from the administration of one or more prophylactic or therapeutic agents to a subject with such a disease or condition.
  • the term "preventing” refers to the treatment with or administration of a compound provided herein, with or without other additional active compound, prior to the onset of symptoms, particularly to patients at risk of the disease or condition described herein.
  • prevention includes the inhibition or reduction of a symptom of the particular disease. Patients with familial history of a disease in particular are candidates for preventive regimens in certain embodiments. In addition, patients who have a history of recurring symptoms are also potential candidates for the prevention. In this regard, the term “prevention” may be interchangeably used with the term “prophylactic treatment. "
  • the disclosed compounds can generally be synthesized by the following general procedure or by an appropriate combination of generally well-known synthetic methods. Techniques useful in synthesizing these compounds are both readily apparent and accessible to those of skill in the relevant art, based on the instant disclosure. Many of the optionally substituted starting compounds and other reactants are commercially available or can be readily prepared by those skilled in the art using commonly employed synthetic method.
  • Step 1 To a solution of K 2 CO 3 (24.13 g, 175 mmol) in water (300 mL) was added a suspension of methyl (2S) -2-amino-2- (4-hydroxyphenyl) acetate hydrochloride (19 g, 87.3 mmol) in dioxane (150 mL) . Then (Boc) 2 O (21.91 g, 100.3 mmol) was added at 0°C and the reaction mixture was stirred at RT for 16 h. It was diluted with water (100 mL) and extracted with ethyl acetate (200 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-hydroxyphenyl) acetate (6.8 g, 24.2 mmol) in Acetic acid (45 mL) was added Platinum dioxide (0.82 g, 3.6 mmol) . The reaction mixture was stirred at 50 °C for 2 days under hydrogen at 0.3 Mpa.
  • Step 3 To a solution of Oxalyl chloride (2.74 g, 21.6 mmol) in DCM (20 mL) was added a solution of dimethyl sulfoxide (3.38 g, 43.2 mmol) in DCM (5 mL) at -78°C and the mixture was stirred at -78°C for 5-10 min. Then methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-hydroxycyclohexyl) acetate (3.1 g, 10.8 mmol) in DCM (5 mL) was added slowly and the final mixture was stirred at -78°C for 1 h. The reaction was quenched with Et 3 N.
  • Step 4 To a solution of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-oxocyclohexyl) acetate (2.1 g, 7.4 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (1.72 g, 8.8 mmol) in DMF (16 mL) was added a solution of t-BuOK (1.49 g, 13.3 mmol) in DMF (4 mL) at -50 °C under nitrogen. Then the mixture was stirred at rt for 2 h. It was diluted with water (200 mL) and extracted with ethyl acetate (100 mL *3) .
  • Step 6 The mixture of methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetate (150 mg, 0.49 mmol) , N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (172 mg, 0.49 mmol) , HATU (280 mg, 0.74 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (127 mg, 0.98 mmol) in THF (6 mL) was stirred at rt overnight.
  • Step 7 To a solution of tert-butyl ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (90 mg, 0.141 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (1 mL) . The mixture was stirred at rt for 2 h.
  • Step 8 The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (110 mg, 0.205 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (29 mg, 0.205 mmol) , HATU (124 mg, 0.327 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (106 mg, 0.818 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at rt for 1 h.
  • Step 2 A mixture of 1-bromo-2-chloro-3-fluoro-4-nitrobenzene (5.3 g, 20.8 mmol) , tributyl (1-ethoxyethenyl) stannane (7.89 g, 21.8 mmol) and PdCl 2 (PPh 3 ) 2 (1.46 g, 2 mmol) in dioxane (100 mL) was stirred at 100°C for 16 hrs under N 2 .
  • Step 4 To a solution of 1- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (2.1 g, 9.7 mmol) in MeOH (50 mL) was added NaBH 4 (0.4 g, 10.6 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at 0°C for 1 h. The reaction was quenched by ice-water, extracted with EA (50 mLX3) . The combined organic layers were washed with brine (50 mL) and dried over Na 2 SO 4 , then concentrated under vacuum to give 1- (2-chloro-5-fluoro -4-nitrophenyl) ethanol (2 g, 9.1 mmol, yield: 93.8%) as a yellow oil.
  • Step 6 To a solution of 1- ⁇ [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2-yl] carbonyl ⁇ -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nickelacyclononan-4-one (2.2 g, 4.4 mmol) in DMF (30 mL) was added NaOH (1.7 g, 44.2 mmol) . Then a solution of 1- (1-bromoethyl) -2-chloro-3-fluoro-4-nitrobenzene (1.87 g, 6.62 mmol) dissolved in DMF (5 mL) was added under N 2 , the mixture was stirred at rt for 20 min.
  • Step 8 The mixture of (2R, 3S) -2- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -3 - (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (550 mg, 1.46 mmol) , 1-methylpiperazine (161 mg, 1.61 mmol) , 1-Hydroxybenzotrizole (256 mg, 1.90 mmol) , N- (3-dimethylaminopropyl) -N’-ethylcarbodiimide hydrochloride (364 mg, 1.90 mmol) and NMM (295 mg, 2.92 mmol) in THF (10 mL) was stirred at rt for 16 hrs.
  • Step 9 A mixture of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (180 mg, 0.39 mmol) in 1, 4-dioxane/HCl (4 M, 4 mL) and DCM (2 mL) was stirred at rt for 3 hrs.
  • Step 10 To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (2-chloro-3-fluoro -4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (190 mg, 0.53 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (274 mg, 2.12 mmol) in DCM (6 mL) was added propanoyl chloride (49 mg, 0.53 mmol) at rt and the mixture was stirred at rt for 2 hrs.
  • Step 11 To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (160 mg, 0.38 mmol) in EtOH (3 mL) was added Raney Nickel (0.5 mL) , followed by Hydrazine hydrate (0.5 mL) . The mixture was stirred at rt for 16 hrs.
  • Step 12 To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2-chloro-3-fluorophenyl) -1- (4 -methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (130 mg, 0.34 mmol) , (S) -cycloheptyl [ (2-ethylpyrazol-3-yl) formamido] acetic acid (92 mg, 0.34 mmol) in aceonitrile (6 mL) were added pyridine (53 mg, 0.67 mmol) and T 3 P in EA (215 mg, 0.67 mmol, 50%) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 50°C for 16 hrs.
  • Step 14 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino -2-cycloheptylacetamido] -2 -chloro-3-fluorophenyl ⁇ -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (55 mg, 0.10 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (29 mg, 0.20 mmol) , HATU (78 mg, 0.20 mmol) , DIEA (106 mg, 0.82 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at rt for 16 hrs.
  • Example 2 9.1 mg, 0.013 mmol, yield: 13%) as a white solid.
  • Step 1 A mixture of 1-bromo-2-chloro-5-fluoro-4-nitrobenzene (8 g, 31.4 mmol) , tributyl (1-ethoxyethenyl) stannane (11.91 g, 32.9 mmol) and PdCl 2 (PPh 3 ) 2 (2.2 g, 3.1 mmol) in dioxane (100 mL) was stirred at 100°C for 16 hrs under N 2 .
  • Step 3 To a solution of 1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (3.5 g, 16.1 mmol) in MeOH (50 mL) was added NaBH 4 (670 mg, 17.7 mmol) and the mixture was stirred at 0 °C for 2 hrs. The mixture was quenched with ice-water and extracted with EtOAc (50 mLx3) . The combined organic layers were washed with brine, dried over Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to give 1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethanol (3.4 g, 15.5 mmol, yield: 96.2%) as a brown oil.
  • Step 5 To a solution of 1- ⁇ [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2-yl] carbonyl ⁇ -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nickelacyclononan-4-one (2 g, 4 mmol) in DMF (30 mL) was added NaOH (1.6 g, 40 mmol) . Then a solution of 1- (1-bromoethyl) -2-chloro-5-fluoro-4-nitrobenzene (3.39 g, 12 mmol) dissolved in DMF (5 mL) was added under N 2 , the mixture was stirred at 0°C for 20 mins.
  • Step 6 To a solution of 1- ⁇ [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2-yl] carbonyl ⁇ -5- [ (1S) -1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethyl] -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nickelacyclononan-4-one (600 mg, 0.85 mmol) in MeOH (10 mL) was added 3 N HCl (10 mL) and the mixture was stirred at 70°C for 1 hr. When the red color of the Ni (II) complex had disappeared, the mixture was evaporated to dryness under vacuum.
  • Step 8 The mixture of (2R, 3S) -2- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -3- (2-chloro-5-fluoro -4-nitrophenyl) butanoic acid (160 mg, 0.42 mmol) , 1-methylpiperazine (42.54 mg, 0.42 mmol) , HOBt (114.77 mg, 0.84 mmol) , EDCI (162.83 mg, 0.84 mmol) and NMM (128.88 mg, 1.27 mmol) in THF (10 mL) was stirred at rt for 3 hrs.
  • Step 9 To a solution of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (150 mg, 0.32 mmol) in DCM (5 mL) was added HCl in dioxane (4 M, 5 mL) . The mixture was stirred at rt for 4 h.
  • Step 10 To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (130 mg, 0.33 mmol) in DCM (10 mL) were added DIPEA (234 mg, 1.8 mmol) and propanoyl chloride (30.5 mg, 0.33 mmol) . The reaction mixture was stirred at rt for 0.5 h. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with DCM (20 Ml*3) .
  • Step 11 To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (100 mg, 0.24 mmol) in EtOH (5 mL) were added Raney Nickel (1.5 mL) , followed by Hydrazine hydrate (1.5 mL) . The mixture was stirred at rt for 5 hrs.
  • Step 12 To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2 -chloro-5-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (75 mg, 0.19 mmol) , (S) -cycloheptyl [ (2-ethylpyrazol-3-yl) formamido] acetic acid (106 mg, 0.39 mmol) in aceonitrile (4 mL) was added pyridine (31 mg, 0.39 mmol) and T 3 P in EA (124 mg, 0.39 mmol, 50%) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 50°C for 16 hrs.
  • Step 13 A mixture of tert-butyl N- [ (S) - ( ⁇ 5-chloro-2-fluoro-4- [ (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl ⁇ carbamoyl) (cycloheptyl) meth yl] carbamate (15 mg, 0.0235 mmol) in TFA (1 mL) and DCM (1 mL) was stirred at rt for 1 h.
  • Step 14 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino -2-cycloheptylacetamido] -2-chloro-5-fluorophenyl ⁇ -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (20 mg, 0.037 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (10 mg, 0.074 mmol) , HATU (28 mg, 0.074 mmol) , DIEA (38 mg, 0.30 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at rt for 16 hrs.
  • Step 1 The mixture of 1-bromo-2, 3-difluoro-4-nitrobenzene (4.5 g, 18.9 mmol) , tributyl (1-ethoxyvinyl) stannane (8.19 g, 22.6 mmol) and Bis (triphenylphosphine) palladium (II) chloride (0.93 g, 1.3 mmol) in dioxane (100 mL) was stirred at 100°C overnight under argon.
  • Step 3 To a solution of 1- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) ethanone (2.3 g, 11.4 mmol) in MeOH (30 mL) was added sodium borohydride (0.47 g, 12.5 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at rt for 1.5 hrs. It was quenched with ice-water (100 mL) and extracted with ethyl acetate (70 mL *3) .
  • Step 4 To a solution of 1- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) ethanol (2.2 g, 10.8 mmol) in DCM (40 mL) was added triphenylphosphine (3.4 g, 12.9 mmol) and Tetrabromomethane (4.3 g, 12.9 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at rt for 2 h.
  • Step 5 Powdered sodium hydroxide (0.8 g, 20 mmol) was added to a solution of (SP-4-4) - [N- [Phenyl [2- [ [ [ [ (1R, 2S) -1- (phenylmethyl) -2-pyrrolidinyl- ⁇ N] carbonyl] amino- ⁇ N] phen yl] methylene] glycinato (2-) - ⁇ N, ⁇ O] nickel (2.5 g, 5 mmol) in DMF (24 mL) under stirring. Then, 1- (1-bromoethyl) -2, 3-difluoro-4-nitrobenzene (2.2 g, 8.5 mmol) dissolved in DMF (6 mL) was added to the solution.
  • Step 10 To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (240 mg, 0.70 mmol) and DIEA (362 mg, 2.80 mmol) in DCM (5 mL) was added propanoyl chloride (65 mg, 0.70 mmol) at rt and the mixture was stirred at 25°C for 2 hrs.
  • Step 12 To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2, 3-difluorophenyl) -1- (4 -methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propenamide (75 mg, 0.20 mmol) , (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (cycloheptyl) acetic acid (110 mg, 0.40 mmol) in ACN (4 mL) was added pyridine (32 mg, 0.4072 mmol) and T 3 P in EA (259 mg, 0.40 mmol, 50%wt) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 50°C for 16 hrs.
  • Step 14 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -2, 3-difluorophenyl ⁇ -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (15 mg, 0.0288 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (4 mg, 0.0288 mmol) , HATU (22 mg, 0.0576 mmol) , DIEA (30 mg, 0.23 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Example 5 and Example 6 Synthesis of N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- ( (1S, 6R) -5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide and N- ( (S) -1-cyclo-heptyl-2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- ( (1R, 6S) -5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl) -4-ox o-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptane-2-carboxylate (900 mg, 4.54 mmol) and HCHO (735 mg, 9.08 mmol, 37%content) in MeOH (15 mL) was added AcOH (27 mg, 0.45 mmol) at 0°C and the mixture was stirred at 0°C for 20 min. Then Sodium cyanoborohydride (571 mg, 9.08 mmol) was added at 0°C and the final mixture was stirred at rt overnight. The reaction mixture was quenched with ice water (30 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) .
  • Step 3 The mixture of 2-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptane (357 mg, 1.93 mmol) , (2R, 3S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (330 mg, 0.96 mmol) , 1-Hydroxybenzotrizole (195 mg, 1.45 mmol) , N- (3-dimethylaminopropyl) -N’-ethylcarbodiimide hydrochloride (277 mg, 1.45 mmol) and NMM (488 mg, 4.82 mmol) in THF (12 mL) was stirred at rt for 3 hrs then concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: dichloromethane /methanol, 25/1, v/v) to afford compound tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (3-
  • Step 4 To a solution of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (350 mg, 0.80 mmol) in DCM (5 mL) was added 4 N HCl/dioxane (5 mL) . The mixture was stirred at rt overnight.
  • Step 5 To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- ⁇ 5-methyl-2, 5 -diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl ⁇ butan-1-one (350 mg, 1.04 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (672 mg, 5.20 mmol) in DCM (10 mL) was added propanoyl chloride (116 mg, 1.25 mmol) and the mixture was stirred at rt for 2 hrs then concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: dichloromethane/methanol, 25/1, v/v) to afford compound N- [ (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- ⁇ 5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl ⁇ -1-oxobu t
  • Step 7 The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- ⁇ 5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl ⁇ -1-oxobutan-2-yl] propanamide (360 mg, 0.99 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (539 mg, 1.99 mmol) , N, N, N’, N’-Tetramethyl-O- (7-azabenzotriazol-1-yl) uronium (755 mg, 1.99 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (1027 mmol, 7.95 mmol) in DMF (15 mL) was stirred at 30°Covernight.
  • Step 8 To a solution of tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( ⁇ 2-fluoro-4- [ (2S, 3R) -4- ⁇ 5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl ⁇ -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl ⁇ carba moyl) methyl] carbamate (210 mg, 0.34 mmol) in DCM (3 mL) was added TFA (2 mL) and the mixture was stirred at rt for 1.5 hrs.
  • Step 9 The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -3-fluorophenyl ⁇ -1- ⁇ 5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl ⁇ -1-oxobutan-2-yl] propanamid e (110 mg, 0.21 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (39 mg, 0.28 mmol) , N, N, N’, N’-Tetramethyl-O- (7-azabenzotriazol-1-yl) uronium (162 mg, 0.43 mmol) , N, N-Diisopropylethylamine (165 mg, 1.28 mmol) in DMF (6 mL) was stirred at rt for 2 hrs.
  • Example 5 (24.9 mg, , 0.039 mmol, yield: 18.3%) and Example 6 (46.7 mg, , 0.073 mmol, yield: 34.3%) as a white solid.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (2 g, 10 mmol) , DFMPS (1.55 g, 8 mmol) in DMF (20 mL) was added a solution of t-BuOK (1.8 g, 16 mmol) in DMF (10 mL) at -40°C under N 2 . The mixture was stirred at 25°C for 2 hrs.
  • Step 3 The mixture of (2R, 3S) -2- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (600 mg, 1.75 mmol) , 4- (difluoromethylidene) piperidine (297 mg, 1.75 mmol) , HOBt (308 mg, 2.28 mmol) , EDCI (437 mg, 2.28 mmol) and NMM (355 mg, 3.505 mmol) in THF (8 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 5 To a solution of (2R, 3S) -2-amino-1- [4- (difluoromethylidene) piperidin -1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (640 mg, 1.79 mmol) and DIEA (926 mg, 7.16 mmol) in DCM (8 mL) was added propanoyl chloride (166 mg, 1.79 mmol) at rt and the mixture was stirred at rt for 2 hrs.
  • Step 7 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethy lidene) piperidin -1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (50 mg, 0.13 mmol) , (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (cycloheptyl) acetic acid (35 mg, 0.13 mmol) , HATU (99 mg, 0.26 mmol) , DIEA (50 mg, 0.39 mmol) in DMF (3 mL) was stirred at rt for 16 hrs.
  • Step 9 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -3-fluorophenyl ⁇ -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (90 mg, 0.17 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (24 mg, 0.17 mmol) , HATU (127 mg, 0.335 mmol) , DIEA (173 mg, 1.34 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at rt for 16 hrs.
  • Step 1 To a solution of ethyl 2- (3-fluoro-4-nitrophenyl) propanoate (300 mg, 1.24 mmol) in THF (3 mL) /H 2 O (1 mL) was added LiOH . H 2 O (209 mg, 4.97 mmol) at 10 °C. The mixture was stirred at this temperature for 4 h, then at 25°C for 16 h.
  • Step 2 The mixture of 2- (3-fluoro-4-nitrophenyl) propanoic acid (250 mg, 1.17 mmol) , methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amine (351 mg, 2.35 mmol) , EDCI (674 mg, 3.52 mmol) in Pyr (5 mL) was stirred at 25°C for 16 h.
  • Step 4 To a solution of 2- (4-amino-3-fluorophenyl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propenamide (150 mg, 0.54mmol) , (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] acetic acid (164.6 mg, 0.54 mmol) and HATU (307.5 mg, 0.81 mmol) in THF (10 mL) was added DIEA (139.35 mg, 1.08 mmol) . The reaction mixture was stirred at RT for 16 h. The mixture was diluted with water, extracted with EA (50 mLx3) .
  • Step 5 To a solution of tert-butyl N- [ (S) - [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] [ (2-fluoro-4- ⁇ 1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl ⁇ phenyl) carbamoyl] methyl] carbamate (208 mg, 0.37 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (5 mL) . The reaction mixture was stirred at RT for 3 h.
  • Step 6 To a solution of (2S) -2- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2- [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] acetamido] -3-fluorophenyl ⁇ -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propenamide (122 mg, 0.26 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (40.41 mg, 0.26 mmol) and HATU (149.49 mg, 0.39 mmol) in DMF (10 mL) was added DIEA (67.75 mg, 0.52 mmol) . The reaction mixture was stirred at RT for 2 h.
  • Step 1 A mixture of 4-bromo-2-nitroaniline (3 g, 13.8 mmol) , 2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane (3.19 g, 15.1 mmol) , Pd(dppf) Cl 2 (500 mg, 0.6 mmol) and K 2 CO 3 (5.72 g, 41.4 mmol) in dioxane (30 mL) and H 2 O (5 mL)was stirred at 95°C for 16 hrs under Ar atmosphere. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EA (30mLx3) .
  • Step 2 To a solution of 4- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -2-nitroaniline (2.4 g, 10.9 mmol) in EtOAc (20 mL) and THF (20 mL) was added Pd/C (240 mg) . The reaction mixture was stirred at rt for 16 hrs under H 2 (balloon) . The mixture was filtered through celite and the filtrate was concentrated under vacuum to give the crude product (2.1 g, crude) as a yellow solid.
  • Step 6 &step 7 A mixture of cycloheptyl [5- (oxan-4-yl) -3H-1, 3-benzodiazol-2-yl] acetic acid (120 mg, 0.34 mmol) , N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propenamide (118 mg, 0.34 mmol) , HATU (155 mg, 0.4 mmol) and DIPEA (130 mg, 1 mmol) in THF (10 mL) was stirred at ambient temperature for 16 h.
  • the product was purified by SFC (CHIRALPAK AD-H column, 250 mm*20 mm, 5 ⁇ m) to afford to get the Example 12 as white solid. (3%yield) .
  • Example 28 Synthesis of N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
  • Step 1 To a solution of 1- (3-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (50 g, 273 mmol) in MeOH (600 mL) was added sodium borohydride (6.2 g, 164 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at 0°C for 1.5 hrs. The reaction was quenched by ice-water (800 mL) , extracted with EA (500 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (500 mL) and dried over Na 2 SO 4 , then concentrated under vacuum to give 1- (3-fluoro-4-nitrophenyl) ethan-1-ol (49 g, 264.6 mmol, yield: 96.9%) as a brown oil.
  • Step 3 The sodium hydroxide (12 g, 301 mmol) was added to the solution of (SP-4-4) - [N- [Phenyl [2- [ [ [ [ (1R, 2S) -1- (phenylmethyl) -2-pyrrolidinyl- ⁇ N] carbonyl] amino- ⁇ N] phen yl] methylene] glycinato (2-) - ⁇ N, ⁇ O] nickel (30 g, 60.2 mmol) in DMF (300 mL) under stirring. Then 4- (1-bromoethyl) -2-fluoro-1-nitrobenzene (20.9 g, 84.2 mmol) dissolved in DMF (30 mL) was added to the solution.
  • Step 6 To a solution of (2R, 3S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (1.0 g, 2.92 mmol) , 4- (difluoromethylene) piperidine hydrochloride (593 mg, 3.5 mmol) and HATU (1.33 g, 3.5 mmol) in DMF (15 mL) was added DIEA (1.1 g, 8.76 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 4hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 7 To a solution of tert-butyl ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) carbamate (900 mg, 1.97 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. NaHCO 3 solution and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 8 To a solution of (2R, 3S) -2-amino-1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (330 mg, 0.92 mmol) and DIEA (239 mg, 1.85 mmol) in DCM (10 mL) was added Trifluoroacetic anhydride (252 mg, 1.20 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature overnight. It was quenched with saturated NaHCO 3 (20 mL) and extracted with dichloromethane (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate.
  • Step 9 To a solution of N- ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (400 mg, 0.88 mmol) in EtOH (10 mL) Raney Ni (120 mg) and Hydrazine hydrate (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 4 hrs.
  • Step 10 The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (280 mg, 0.66 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (269 mg, 0.99 mmol) , HATU (452 mg, 1.19 mmol) and DIEA (213 mg, 1.65 mmol) in THF (8 mL) was stirred at room temperature overnight.
  • Step 11 To a solution of tert-butyl ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluoropheny l) amino) -2-oxoethyl) carbamate (270 mg, 0.40 mmol) in dichloromethane (6 mL) was added TFA (2 mL) and the mixture was stirred at rt for 2 hrs.
  • Step 12 The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetam ide (110 mg, 0.19 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (35 mg, 0.25 mmol) , HATU (116 mg, 0.30 mmol) and DIEA (49 mg, 0.38 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at room temperature for 2 hrs.
  • Step 14 To a solution of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3-amino-4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1-cycloheptyl-2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-p yrazole-5-carboxamide (70 mg, 0.116 mmol) and DIEA (60 mg, 0.464 mmol) in dichloromethane (5 mL) was added Triphosgene (16 mg, 0.052 mmol) at 0°C and the mixture was stirred at room temperature for 10 min.
  • N-methylcyclopropanamine (17 mg, 0.162 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 4 hrs. It was quenched with saturated NaHCO 3 (10 mL) and extracted with dichloromethane (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate. Then it was filtered and concentrated under vacuum to afford the crude.
  • Step 1 To a solution of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2 - ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetic acid (0.77 g, 2.84 mmol) in THF (15 mL) was added HATU (1.08 g, 2.84 mmol) and DIEA (0.37 mg, 2.84 mmol) . The mixture was stirred 25 °C for 30 mins.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) carbamate (1.5 g, 2.22 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (10 mL) . The mixture was stirred at 25 °C for 2 hrs.
  • Step 3 To a solution of 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (0.29 g, 2.09 mmol) in DMF (15 mL) was added HATU (0.79 g, 2.09 mmol) and DIEA (0.29 g, 2.09 mmol) . The mixture was stirred 25 °C for 30 mins.
  • Step 4 To a solution of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin -1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methyl cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (200 mg, 0.29 mmol) in EtOH (10 mL) was added NaBH 4 (16.5 mg, 0.43 mmol) . The mixture was stirred at 25 °C for 2 hrs.
  • Step 5 To a solution of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3-amino-4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoet hyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (30 mg, 0.05 mmol) , DIEA (12.8 mg, 0.1 mmol) and bis(trichloromethyl) carbonate (8.9 mg, 0.03 mmol) in DCM (10 mL) was added a solution of N-methylcyclopropanamine (7 mg, 0.1 mmol) in DCM (1 mL) dropwise.
  • reaction mixture was stirred at 25°C for 1 hr.
  • the reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • the organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Example 30 Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4-methoxy-4-methylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluorome thylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
  • Step 2 To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (2 g, 7.8 mmol) and DIEA (4.03 g, 31.2 mmol) in DCM (40 mL) was added triphosgene (1.39 g, 4.6 mmol) at 0°C. The mixture was stirred under nitrogen at 0°C for 10 mins. To this a solution of N-methylcyclopropanamine hydrochloride (2.52 g, 23.3 mmol) in DCM (10 mL) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at 25°C for 1h.
  • Step 3 To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (1.7 g, 4.8 mmol) in EtOAc (30 mL) was added 10%Pd/C (0.51 g, 0.48 mmol) . The reaction mixture was stirred under hydrogen atmosphere at 25°C for 4 hrs. The mixture was filtered through a pad of celite, concentrated under reduced pressure.
  • Step 4 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (1.0 g, 3.1 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetic acid (1.42 g, 4.6 mmol) and HATU (1.77 g, 4.6 mmol) in THF (40 mL) was added DIEA (0.8 g, 6.2 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • the organic layers were washed with brine (50 mL *2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Step 5 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylurei do) butanoate (1.5 g, 2.5 mmol) in DCM (15 mL) was added TFA (3 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. NaHCO 3 solution and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 6 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) bu tanoate (1 g, 2 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (0.42 g, 3 mmol) and HATU (1.14 g, 3 mmol) in DMF (20 mL) stirred was added DIEA (0.52 g, 4 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2hrs.
  • Step 7 To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3 - (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido ) -3-fluorophenyl) butanoate (1.2 g, 1.9 mmol) in THF (10 mL) was added a solution of lithium hydroxide monohydrate (160 mg, 0.38 mmol) in water (3 mL) dropwise. The reaction mixture was stirred at 25°C for 2hrs.
  • Step 8 To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.048 mmol) , 4-methoxy-4-methylpiperidine hydrochloride (12 mg, 0.072 mmol) and HATU (27.5 mg, 0.072 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (12.5 mg, 0.096 mmol) .
  • reaction mixture was stirred at 25°C for 4hrs.
  • the reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • the organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Step 1 To a sealed tube was added N-benzyl-2-chloro-N- (2 -chloroethyl) ethan-1-amine hydrochloride (300 mg, 1.12 mmol) , l- (trifluoromethyl) cyclopropanamine (140 mg, 1.12 mmol) and DIPEA (2 mL) . The mixture was heated to 120°C for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure.
  • Step 3 To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.048 mmol) , 1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (14 mg, 0.072 mmol) and HATU (27.5 mg, 0.072 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (12.5 mg, 0.096 mmol) .
  • reaction mixture was stirred at 25°C for 4hrs.
  • the reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • the organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Example 32 Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -4- (4-methoxy-4-methylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluorome thylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
  • Step 1 To a solution of tert-butyl cyclopropylamino formate (2 g, 12.6 mmol) , NaH (0.76 g, 18.9 mmol) in THF (20 mL) stirred at 0°C for 10 mins was added a solution of iodomethane-d3 (2.74 g, 18.9 mmol) in THF (10 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16hrs. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with EtOAc (50 mL*3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl cyclopropyl (methyl-d3) carbamate (1.2 g, 6.8 mmol) in EtOAc (10 mL) was added a solution of 4N HCl in dioxane (10 mL, 40 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure to afford N- (methyl-d3) cyclopropanamine hydrochloride (0.5 g, 6.7 mmol, yield: 97.1%) as a yellow gum.
  • Step 3 To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (100 mg, 0.39 mmol) and DIEA (100 mg, 0.78 mmol) in DCM (10 mL) was added triphosgene (86 mg, 0.31 mmol) at 0°C. The mixture was stirred under nitrogen at 0°C for 10 mins. To this a solution of N- (methyl-d3) cyclopropanamine hydrochloride (80 mg, 0.78 mmol) in DCM (2 mL) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at 25°C for 1 hr.
  • Step 4 To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (110 mg, 0.31 mmol) in EtOAc (10 mL) was added 10%Pd/C (65 mg, 0.06 mmol) . The reaction mixture was stirred under hydrogen atmosphere at 25°Cfor 3hrs. The mixture was filtered through a pad of celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford crude product.
  • Step 5 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) butanoate (80 mg, 0.245 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetic acid (112 mg, 0.367 mmol) and HATU (140 mg, 0.367 mmol) in THF (10 mL) was added DIEA (63 mg, 0.49 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16hrs.
  • Step 6 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3 ) ureido) butanoate (110 mg, 0.179 mmol) in DCM (6 mL) was added TFA (2 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. NaHCO 3 solution and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 7 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) butanoate (80 mg, 0.155 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (32.7 mg, 0.233 mmol) and HATU (88.8 mg, 0.233 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (40 mg, 0.31 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 4 hrs.
  • Step 8 To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (90 mg, 0.14 mmol) in THF (5 mL) was added a solution of lithium hydroxide monohydrate (12 mg, 0.28 mmol) in water (2 mL) dropwise. The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs.
  • Step 9 To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetami do) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.048 mmol) , 4-methoxy-4-methylpiperidine hydrochloride (12 mg, 0.072 mmol) and HATU (27.5 mg, 0.072 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (12.5 mg, 0.096 mmol) .
  • reaction mixture was stirred at 25°C for 4 hrs.
  • the reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • the organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Step 1 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (100 mg, 0.31 mmol) in THF (10 mL) was added (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (252.72 mg, 0.93 mmol) , DIEA (119.70 mg, 0.93 mmol) , HATU (129.29 mg, 0.34 mmol) , The mixture was stirred at 40 °C for 16 hrs.
  • Step 3 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (50 mg, 0.10 mmol) in DMF (10 mL) was added 1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (13.53 mg, 0.16 mmol) , DIEA (40.60 mg, 0.31 mmol) , HATU (43.85 mg, 0.12 mmol) , The mixture was stirred at 25 °C for 1 hr.
  • Step 4 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methy lureido) butanoate (50 mg, 0.082 mmol) in THF (10 mL) , was added LiOH (17.12 mg, 0.41 mmol) in water (5 mL) . The mixture was stirred at 25 °C for 16 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) .
  • Step 5 To a solution of (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluor ophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoic acid (30 mg, 0.050 mmol) in DMF (5 mL) was added 4- (difluoromethylene) piperidine hydrochloride (10.20 mg, 0.060 mmol) , DIEA (19.39 mg, 0.15 mmol) , HATU (20.94 mg, 0.06 mmol) . The mixture was stirred 25 °C for 2 hrs.
  • Step 1 The mixture of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3, 3-dicyclobutylpropanoic acid (65 mg, 0.22 mmol) , methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (47 mg, 0.15 mmol) , HATU (110 mg, 0.29 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (56 mg, 0.44 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at rt overnight.
  • Step 3 The mixture of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-3, 3-dicyclobutylpropanamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-m ethylureido) butanoate (33 mg, 0.066 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (12 mg, 0.085 mmol) , HATU (45 mg, 0.118 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (21 mg, 0.164 mmol) in DMF (3 mL) was stirred at rt for 2 hrs.
  • Step 5 The mixture of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -3, 3-dicyclobutyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) propanamido) -3-fluorophenyl) buta noic acid (10 mg, 0.016 mmol) , 4- (difluoromethylidene) piperidine (4 mg, 0.026 mmol) , HATU (12 mg, 0.033 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (8 mg, 0.065 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at rt for 2 hrs.
  • Step 1 To a solution of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (103.05 mg, 0.38 mmol) in THF (20 mL) , HATU (143.00 mg, 0.38 mmol) and DIEA (49.11 mg, 0.38 mmol) were added. The mixture was stirred 25 °C for 30 min. Then methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (90 mg, 0.31 mmol) was added. The mixture was stirred at 40 °C for 24 hrs.
  • Step 2 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (120 mg, 0.22 mmol) in DCM (4 mL) , TFA (2 mL) was added. The mixture was stirred at 25 °C for 1 hr.
  • Step 3 To a solution of 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (33.61 mg, 0.24 mmol) in DMF (5 mL) , HATU (91.26 mg, 0.24 mmol) and DIEA (31.02 mg, 0.24 mmol) were added. The mixture was stirred 25 °C for 30 min. Then methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (90 mg, 0.20 mmol) was added.
  • Step 5 To a solution of (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoic acid (30 mg, 0.055 mmol) in DMF (5 mL) , HATU (25.10 mg, 0.066 mmol) and DIEA (8.53 mg, 0.66 mmol) were added. The mixture was stirred 25 °C for 30 mins.
  • Step 1 A mixture of (2R, 3S) -2-amino-1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-o ne (160 mg, 0.45 mmol) , 1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxylic acid (58 mg, 0.45 mmol) , HATU (340 mg, 0.896 mmol) , DIEA (174 mg, 1.34 mmol) in THF (6 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 2 To a solution of N- [ (2R, 3S) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl] -1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxamide (150 mg, 0.32 mmol) in EtOH (5 mL) was added Raney Nickel (1 mL) , followed by Hydrazine hydrate (1 mL) . The mixture was stirred at rt for 1 hr.
  • Step 3 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] -1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxamide (22 mg, 0.05 mmol) , (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (4-methylcyclohexyl) acetic acid (14 mg, 0.05 mmol) , HATU (38 mg, 0.10 mmol) , DIEA (19 mg, 0.15 mmol) in THF (2 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 5 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2- (4-methylcyclohexyl) acetamido] -3-fluorophenyl ⁇ -1- [4- (difluo romethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] -1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxamide (12 mg, 0.020 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (4 mg, 0.024 mmol) , HATU (15 mg, 0.040 mmol) , DIEA (8 mg, 0.61 mmol) in THF (1 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 1 To a solution of compound (2R, 3S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (200 mg, 0.58 mmol) in DMF (2 mL) were added HOBT (118 mg, 0.88 mmol) , EDCI (168 mg, 0.88 mmol) and NMM (236 mg, 2.34 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (30 mL) and washed by water (20 mL *3) .
  • Step 3 To a solution of (2R, 3S) -2-amino-1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (120 mg, 0.33 mmol) in THF (2 mL) was added propionyl chloride (51.79 mg, 0.56 mmol) and DIEA (72.34 mg, 0.56 mmol) , The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs.
  • propionyl chloride 51.79 mg, 0.56 mmol
  • DIEA 72.34 mg, 0.56 mmol
  • Step 4 To a solution of N- ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin -1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (100 mg, 0.24 mmol) in EtOH (2 mL) was added N 2 H 4 . H 2 O (30 mg, 0.96 mmol) and Raney Ni. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hrs.
  • Step 5 A mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (70 mg, 0.18 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetic acid (50 mg, 0.18 mmol) , HATU (104 mg, 0.28 mmol) and DIEA (60 mg, 0.46 mmol) in THF (2 mL) was stirred at room temperature for 48 hrs.
  • Step 6 A solution of tert-butyl ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyc lohexyl) -2-oxoethyl) carbamate (70 mg, 0.11 mmol) in DCM/HCl/Dioxane was stirred at room temperature for 2 hrs.
  • Step 7 To a solution of compound N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxo butan-2-yl) propionamide (30 mg, 0.05 mmol) in THF (3 mL) were added 2- (3-cyanophenyl) -2, 2-difluoroacetic acid (10 mg, 0.05 mmol) , HATU (28 mg, 0.07 mmol) and DIEA (13 mg, 0.1 mmol) .
  • Step 1 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoate (100 mg, 0.35 mmol) in THF (5 mL) , HATU (133.08 mg, 0.42 mmol) and DIEA (54.28 mg, 0.42 mmol) were added. The mixture was stirred 25 °C for 30 min. Then, (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetic acid (111.11 mg, 0.41 mmol) was added. The mixture was stirred at 40 °C for 16 hrs.
  • Step 3 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2-propio namidobutanoate (70 mg, 0.16 mmol) in DMF (5 mL) , HATU (73.00 mg, 0.19 mmol) and DIEA (24.56 mg, 1.84 mmol) were added. The mixture was stirred 25 °C for 30 min. Then 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (26.6 mg, 0.19 mmol) was added.
  • Step 5 To a solution of (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) aceta mido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoic acid (30 mg, 0.055 mmol) in DMF (5 ml) , HATU (25.21 mg, 0.066 mmol) and DIEA (8.53 mg, 0.066 mmol) were added. The mixture was stirred 25 °C for 30 mins.
  • Step 1 The mixture of methyl N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (100 mg, 0.29 mmol) , (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] acetic acid (87 mg, 0.29 mmol) , HATU (163 mg, 0.43 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (74 mg, 0.57 mmol) in THF (6 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) am ino) -2-oxoethyl) carbamate (90 mg, 0.141 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (1.5 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs.
  • Step 3 The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionami de (100 mg, 0.186 mmol) , (3-cyanophenyl) difluoroacetic acid (37 mg, 0.186 mmol) , HATU (106 mg, 0.279 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (144 mg, 1.116 mmol) in THF (5 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs.
  • Step 1 To a solution of (methoxymethyl) triphenylphosphonium chloride (21.8 g, 63.5 mmol) in THF (150 mL) was added t-BuOK (7.13 g, 63.5 mmol) in THF (50 mL) at 0°C. The mixture was stirred at rt for 1 hr under N 2 , then dicyclopropylmethanone (5 g, 45.4 mmol) was added at this temp, further stirred at 25°C for 16 hrs. The mixture was quenched by water (50 mL) , diluted with Hexanes (600 mL) , then filtered. The filtrate was washed with water (100 mL*3) .
  • Step 2 A mixture of (1-cyclopropyl-2-methoxyethenyl) cyclopropane (2 g, 14.5 mmol) in THF (40 mL) and 3N HCl (13 mL) was stirred at 55°C for 4 hrs at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with hexanes (200 mL) , washed with water (50 mL *2) , dried over Na 2 SO 4 , concentrated under vacuum to give the crude product (1.7 g, crude) as a colorless oil.
  • Step 3 A mixture of 2, 2-dicyclopropylacetaldehyde (1 g, 8.1 mmol) , TMSCN (1.21 g, 12.1 mmol) , Ammonium carbonate (4.2 g, 43.7 mmol) in EtOH (8.5 mL) and H 2 O (8.5 mL) was stirred at 95°C for 6 hrs in sealed tube.
  • Step 5 A mixture of ethyl 2- (4-amino-3-fluorophenyl) propanoate (400 mg, 1.89 mmol) , 2- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -3, 3-dicyclopropylpropanoic acid (510 mg, 1.89 mmol) , EDCI (726 mg, 3.79 mmol) in Pyridine (10 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 9 A mixture of 2- (4- ⁇ 3, 3-dicyclopropyl-2- [ (2-isopropylpyrazol-3-yl) formamido] propanamido ⁇ -3-fluorophenyl) propanoic acid (40 mg, 0.085 mmol) , 4- (difluoromethylidene) piperidine (14 mg, 0.085 mmol) , HATU (65 mg, 0.17 mmol) , DIEA (33 mg, 0.255 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 3 The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (40 mg, 0.10 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetic acid (48 mg, 0.16 mmol) , HATU (71 mg, 0.19 mmol) and DIEA (34 mg, 0.26 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25°C for 48 hrs.
  • Step 4 To a solution of tert-butyl ( (S) -1- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-pro pionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (70 mg, 0.104 mmol) in dichloromethane (3 mL) was added TFA (1 mL) and the mixture was stirred at rt for 2hrs.
  • Step 5 The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (50 mg, 0.087 mmol) , 2-ethylpyrazole-3 -carboxylic acid (18 mg, 0.131 mmol) , HATU (60 mg, 0.157 mmol) and DIEA (28 mg, 0.218 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at room temperature for 2 hrs.
  • Step 1 To a solution of methyl (2S) -2- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -2- (4-oxocyclohexyl) acetate (500 mg, 1.75 mmol) in THF (8 mL) was added MeLi (1.48 mL, 3.85 mmol, 2.6 M) at -78°C under N 2 . The mixture was stirred at this temp for 1 hr, rt for 15 hrs. The mixture was quenched by Sat.
  • Step 4 A mixture of (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (4-fluoro-4-methylcyclohexyl) acetic acid (40 mg, 0.14 mmol) , N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamid (53 mg, 0.14 mmol) , HATU (105 mg, 0.28 mmol) , DIEA (54 mg, 0.41 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 5 A mixture of tert-butyl N- [ (S) - ( ⁇ 4- [ (2S, 3R) -4- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] -2-fluorophenyl ⁇ carbamoyl) (4-fluoro-4-methylc yclohexyl) methyl] carbamate (9 mg, 0.014 mmol) in TFA/DCM (0.5 mL/0.5 mL) was stirred at 25°C for 1 hr. The mixture was concentrated to get the product (220 mg, crude) as a yellow oil.
  • Step 6 A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2- (4-fluoro-4-methylcyclohexyl) acetamido] -3-fluorophenyl ⁇ -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxob utan-2-yl] propanamide (10 mg, 0.018 mmol) , 2-ethylpyrazole -3-carboxylic acid (5 mg, 0.036 mmol) , HATU (14 mg, 0.036 mmol) , DIEA (19 mg, 0.14 mmol) in THF (2 mL) was stirred at rt for 16 hrs.
  • Step 1 A mixture of (2R) -2- (4-amino-5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (100 mg, 0.34 mmol) and (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (4-methylcyclohexyl) acetic acid (92 mg, 0.34 mmol) in Pyridine (5 mL) was added POCl 3 (104 mg, 0.68 mmol) at -15°C. The mixture was stirred at this temperature for 4 hrs.
  • Step 3 A mixture of (2R) -2- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2- (4-methylcyclohexyl) acetamido] -5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl ⁇ -N-met hyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (40 mg, 0.089 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (16 mg, 0.11 mmol) , HATU (68 mg, 0.18 mmol) , DIEA (69 mg, 0.53 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 1 A mixture of (2R) -2- (4-amino-5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoro ethyl) propanamide (100 mg, 0.34 mmol) and (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (cycloheptyl) acetic acid (92 mg, 0.34 mmol) in pyridine (3 mL) was added POCl 3 (104 mg, 0.68 mmol) at -15°C. The mixture was stirred at -15°C for 4 hrs.
  • Step 3 A mixture of (2R) -2- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl ⁇ -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (40 mg, 0.089 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (16 mg, 0.11 mmol) , HATU (68 mg, 0.18 mmol) , DIEA (69 mg, 0.54 mmol) in THF (2 mL) was stirred at 25 °C for 16 hrs.
  • Step 1 To a solution of ethyl 2- (4-amino-3-fluorophenyl) propanoate (100 mg, 0.473 mmol) and (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (cycloheptyl) acetic acid (128.46 mg, 0.473 mmol) in pyridine (10 mL) was added EDCI (181.50 mg, 0.947 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 °C for 16 hrs.
  • Step 2 ethyl 2- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (180 mg, 0.388 mmol) in DCM (4 mL) was added TFA (1 mL) . The reaction mixture was stirred at 25 °C for 3 hrs.
  • Step 3 To a solution of ethyl 2- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (160 mg, 0.439 mmol) and 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (67.68 mg, 0.439 mmol) in THF (20 mL) was added HATU (333.84 mg, 0.878 mmol) and DIEA (170.22 mg, 1.317 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 °C for 16 hrs.
  • Step 5 To a solution of 2- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) propanoic acid (100 mg, 0.212 mmol) and 4- (difluoromethylidene) piperidine hydrochloride (35.89 mg, 0.212 mmol) in THF (10 mL) was added HATU (160.91 mg, 0.423 mmol) and DIEA (82.05 mg, 0.635 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 °C for 16 hrs.
  • Step 1 The mixture of 5-chloro-2H-pyridazin-3-one (1 g, 7.7 mmol) , methyl (2S) -2-hydroxypropanoate (1 g, 10 mmol) and PPh 3 (3 g, 11.5 mmol) in THF (20 mL) was stirred at 0°C for 10 min under N 2 , then DIAD (2.34 g, 11.5 mmol) was added to the solution and stirred at 60°C for 6 hrs under N 2 . The resulting mixture was diluted with water, extracted with EtOAc (20 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated.
  • Step 2 The mixture of BocNH 2 (1.5 g, 12.9 mmol) , methyl (2R) -2- (4-bromo -5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl) propanoate (1.4 g, 6.46 mmol) , Xantphos (308 mg, 0.65 mmol) , Pd 2 (dba) 3 (296 g, 0.3 mmol) , Cs 2 CO 3 (6.3 g, 19 mmol) in dioxane (20 mL) was stirred at 110°Cfor 5 hrs under N 2 . The resulting mixture was diluted with H 2 O (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 4 The mixture of (2R) -2- (4- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -6-oxopyridazin-1-yl) propanoic acid (500 mg, 1.76 mmol) , methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amine (316 mg, 2.12 mmol) , EDCI (676 mg, 3.53 mmol) in pyridine (10 mL) was stirred at 25°C for 2 hrs.
  • Step 5 To a solution of tert-butyl N- ⁇ 1- [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -6-oxopyridazin-4-yl ⁇ carbamate (350 mg, 0.92 mmol) in DCM (4 mL) was added HCl in dioxane (4 M, 2 mL) , the resulting mixture was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • Step 6 To a solution of compound (2R) -2- (4-amino-6-oxopyridazin-1-yl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (130 mg, 0.47 mmol) in DMF (3 mL) was added NaH (28 mg, 1.16 mmol) and stirred at 25°C for 1 hr. To another solution of compound (S) - ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ (cycloheptyl) acetic acid (353 mg, 0.93 mmol) in DMF (3 mL) was added HATU (266 mg, 0.7 mmol) and DIEA (181 mg, 1.4 mmol) .
  • Step 7 To a solution of compound tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( ⁇ 1 - [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -6-oxopyridazin-4-yl ⁇ carbamoyl) methyl] c arbamate (40 mg, 0.07 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl in dioxane (4 M, 2 mL) and stirred at 25 °C for 3 hrs.
  • Step 8 The mixture of compound (2R) -2- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino -2-cycloheptylacetamido] -6-oxopyridazin-1-yl ⁇ -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (40 mg, 0.1 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (21 mg, 0.14 mmol) , HATU (88 mg, 0.24 mmol) and DIEA (72 mg, 0.56 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25 °C for 3 hrs.
  • Step 1 The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (75 mg, 0.19 mmol) , (2S) -2- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -3, 3-dicyclopropylpropanoic acid (79 mg, 0.30 mmol) , HATU (148 mg, 0.40 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (101 mg, 0.78 mmol) in THF (5 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl N- [ (1S) -2, 2-dicyclopropyl-1- ( ⁇ 4- [ (2S, 3R) -4- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] -2-fluor ophenyl ⁇ carbamoyl) ethyl] carbamate (60 mg, 0.09 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (1 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 3 hrs.
  • Step 3 The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- ⁇ 4- [ (2S) -2-amino-3, 3-dicyclopropyl propanamido] -3-fluorophenyl ⁇ -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] prope namide (60 mg, 0.11 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (20 mg, 0.15 mmol) , HATU (64 mg, 0.17 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (58 mg, 0.45 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs.
  • Step 1 To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (50 mg, 0.081 mmol) , methyl 2- (piperidin-4-yl) acetate hydrochloride (30 mg, 0.155 mmol) and HATU (37 mg, 0.097 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (55 mg, 0.425 mmol) .
  • Step 2 To a solution of methyl 2- (1- ( (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetami do) -3-fluorophenyl) butanoyl) piperidin-4-yl) acetate (50 mg, 0.066 mmol) in THF (10 mL) and water (5 mL) was added LiOH. H 2 O (11.07 mg, 0.264 mmol) . The mixture was stirred at 25°C for 3 hrs.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (5 g, 23.5 mol) in THF (100 mL) was added methylmagnesium bromide (11.8 mL, 35.4 mmol) under N 2 at 0°C. The mixture was stirred at room temperature under N 2 for 2hrs. The mixture was quenched with NH 4 Cl (30 mL) , extracted with EA (100 mL *2) . The organic layers were combined, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo to afford crude product.
  • Step 2 To a solution of NaH (868 mg, 21.7 mmol) in DMF (10 mL) was added tert-butyl 4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (1 g, 4.34 mmol) under N 2 . The mixture was stirred at rt under N 2 for 1h. MeI (6.17 g, 43.4 mmol) and HMPA (0.5 mL) were added into the mixture and stirred at 50°C for 12hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) .
  • Step 4 To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-e thyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (40 mg, 0.065 mmol) , 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine HCl salt (18 mg, 0.10 mmol) and DIEA (25 mg, 0.19 mmol) in DMF (5 mL) was added HATU (32 mg, 0.084 mmol) .
  • Example 258 Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -4-oxo-4- (4- (1- (trifluoromethyl) cyclop ropyl) piperazin-1-yl) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl ) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
  • Step 1 To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (500 mg, 1.95 mmol) and TEA (592.39 mg, 5.85 mmol) in DCM (20 mL) was added TEAA (491.82 mg, 2.34 mmol) at 0 °C. The mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was diluted with water (40 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (420 mg, 1.19 mmol) in EA (10 mL) was added 10%Pd/C (80 mg) . The mixture was stirred at rt under H 2 atmosphere for 2 hrs.
  • Step 3 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (300 mg, 0.93 mmol) in THF (5 mL) was added (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetic acid (426.41 mg, 1.39 mmol) , DIEA (359.14 mg, 2.78 mmol) , HATU (528.96 mg, 1.39 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 48 hrs.
  • Step 4 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroaceta mido) butanoate (350 mg, 0.57 mmol) in DCM (5 mL) was added TFA (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was quenched with saturated NaHCO 3 (20 mL) and extracted with dichloromethane (20 mL *3) .
  • Step 5 To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoat e (280 mg, 0.55 mmol) in DMF (20 mL) was added 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (92.24 mg, 0.66 mmol) , DIEA (212.27 mg, 1.65 mmol) , HATU (229.27 mg, 0.60 mmol) . The reaction mixture was stirred at rt for 2 hrs.
  • Step 6 A solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (280 mg, 0.44 mmol) in HCl/MeOH (5 mL) was stirred at 50 °C for 16 hrs. The mixture was adjusted pH to 9 with saturated aq. NaHCO 3 and extracted with DCM (20 mL *3) .
  • Step 7 To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) butanoate (120 mg, 0.22 mmol) in DCM (10 mL) was added Triphosgene (53.20 mg, 0.18 mmol) and DIEA (144.54 mg, 1.12 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 10 mins.
  • N-ethylcyclopropanamine hydrochloride 54.50 mg, 0.45 mmol
  • the resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hr.
  • the mixture was diluted with water (40 mL) and extracted with DCM (20 mL *3) .
  • Step 8 To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (90 mg, 0.14 mmol) in MeOH/H2O (10 mL) was added LiOH. H2O (29.20 mg, 0.70 mmol) . The reaction mixture was stirred at rt for 2hrs.
  • Step 9 To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.047 mmol) in DMF (5 mL) was added 1- [1- (trifluoromethyl) cyclopropyl] piperazine (13.81 mg, 0.071 mmol) , DIEA (18.34 mg, 0.14 mmol) and HATU (19.81 mg, 0.052 mmol) .
  • Step 1 To a solution of (methoxymethyl) triphenylphosphonium chloride (21.8 g, 63.5 mmol) in THF (150 mL) was added t-BuOK (7.13 g, 63.5 mmol) in THF (50 mL) at 0°C. The mixture was stirred at rt for 1 hr under N 2 , then dicyclopropylmethanone (5 g, 45.4 mmol) was added at this temp, further stirred at 25°C for 16 hrs. The mixture was quenched by water (50 mL) , diluted with Hexanes (600 mL) , then filtered. The filtrate was washed with water (100 mL*3) .
  • Step 2 A mixture of (1-cyclopropyl-2-methoxyethenyl) cyclopropane (2 g, 14.5 mmol) in THF (40 mL) and 3N HCl (13 mL) was stirred at 55°C for 4 hrs, rt for 16 hrs. The mixture was diluted with Hexanes (200 mL) , washed with water (50 mL*2) , dried over Na 2 SO 4 , concentrated under vacuum to give the crude product (1.7 g, crude) as a colorless oil.
  • Step 3 A mixture of 2, 2-dicyclopropylacetaldehyde (1 g, 8.1 mmol) , TMSCN (1.21 g, 12.1 mmol) , Ammonium carbonate (4.2 g, 43.7 mmol) in EtOH (8.5 mL) and H 2 O (8.5 mL) was stirred at 95°C for 6 hrs in sealed tube.
  • Step 1 To a solution of cyclobutanecarbaldehyde (1500 mg, 17.8 mmol) in THF (50 mL) was added bromo (cyclobutyl) magnesium (42.8 mL, 21.4 mmol, 0.5 M in THF) at 0°C and the mixture was stirred at 0°C for 1.5 hrs. The reaction mixture was quenched with saturated ammonium chloride (100 mL) and extracted with ethyl acetate (60 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of dicyclobutylmethanol (730 mg, 5.2 mmol) in DCM (20 mL) was added Imidazole (425 mg, 6.2 mmol) and triphenylphosphine dibromide (2637 mg, 6.2 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at rt overnight. The reaction mixture was quenched with saturated ammonium chloride (50 mL) and extracted DCM (50 mL *3) .
  • Step 3 Powdered sodium hydroxide (381 mg, 9.5 mmol) was added to a solution of NI- (S) -BPB-GLY (950 mg, 1.9 mmol) in DMF (15 mL) under stirring. Then, (bromomethylene) dicyclobutane (988 mg, 4.9 mmol) was added to the solution. The mixture was stirred under nitrogen and the reaction progress was monitored by TLC. The reaction mixture was quenched with ice water (150 mL) and extracted with ethyl acetate (100 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of methyl 3-oxopentanoate (10 g, 76.8 mmol) in AcOH (60 mL) was added NaNO 2 (7.95 g, 115 mmol) in H 2 O (25mL) at 10°C, then stirred at 25°C for 16 hrs. The resulting mixture was quenched with Saturated sodium bicarbonate solution (100 mL) , extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated.
  • Step 2 The mixture of methyl (2E) -2- (hydroxyimino) -3-oxopentanoate (8 g, 50 mmol) , Hydroxylamine hydrochloride (10.5 g, 150 mmol) , Sodium acetate (8.2 g, 100 mmol) in EtOH (20 mL) was stirred at 80°C for 16 hrs. The resulting mixture was diluted with H 2 O (100 mL) and extracted with EtOAc (100 mL *3) .
  • Step 3 To a solution of methyl (2E, 3E) -2, 3-bis (hydroxyimino) pentanoate (2.4 g, 13.8 mmol) and PIDA (5.3 g, 16.5 mmol) was stirred in DCM (30mL) at 25°C for 2 hrs.
  • Step 1 To a solution of methyl (2S) -2- ⁇ [ (tert-butoxy) carbonyl] amino ⁇ -2 - (4-oxocyclohexyl) acetate (500 mg, 1.75 mmol) in THF (8 mL) was added MeLi (1.48 mL, 3.85 mmol, 2.6 M) at -78°C under N 2 . The mixture was stirred at this temp for 1 hr, rt for 15 hrs. The mixture was quenched by Sat.
  • Step 1 The mixture of tert-butyl 4, 7-diazaspiro [2.5] octane-7-carboxylate (500 mg, 2.36 mmol) , Sodium cyanoborohydride (222 mg, 3.53 mmol) and formaldehyde aqueous solution (70.66 mg, 2.36 mmol) in ACN (10 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (2S, 3R) -2, 3-dimethylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.93 mmol) in DMF (10 mL) was added formaldehyde (83.67 mg, 2.79 mmol) . The reaction mixture was stirred at r.t. for 1 hr. Then NaBH 3 CN (175.12 mg, 2.79 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at r.t. for further 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product.
  • tert-butyl (S) -2-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate 500 mg, 2.33 mmol
  • 2- (difluoromethyl) sulfonyl) pyridine 540.89 mg,
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (S) -2-methylpiperazine-1-carboxylate (1 g, 4.99 mmol) and acetic anhydride (765 mg, 7.49 mmol) in DCM (10 mL) stirred under nitrogen at 0°C was added DIEA (1.94 g, 14.98 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16hrs. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (10 mL) . The mixture was extracted with ethyl acetate (10 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl (S) -4-acetyl-2-methylpiperazine-1-carboxylate (1 g, 4.13 mmol) in THF (10 mL) stirred under nitrogen at -10°C was added titanium tetrachloride (4.13 mL, 4.13 mmol, 1M DCM solution) . The reaction mixture was stirred at -10°C for 30 mins. A solution of methylmagnesium bromide (8.25 mL, 24.76 mmol, 1M ethyl ether solution) was added into above mixture at -10°C. The reaction mixture was stirred at 25°C for 16 hrs.
  • reaction mixture was quenched with 10%NaHCO 3 solution (10 mL) at 0°C and filtered. The filtrate was concentrated under vacuum to afford a residue. The residue was diluted with water (10 mL) , extracted with ethyl acetate (10 mL *3) .
  • Step 3 To a solution of tert-butyl (S) -4- (tert-butyl) -2-methylpiperazine-1-carboxylate (400 mg, 1.56 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added HCl (1.95 mL, 7.80 mmol, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 1hr. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford crude (S) -1- (tert-butyl) -3-methylpiperazine hydrochloride (120 mg, 0.62 mmol, yield: 39.91%) as a yellow gum, which was used for next step without further purification.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl 4-acetylpiperazine-1-carboxylate (400 mg, 1.74 mmol) in THF (10 mL) was added Titanium tetraisopropanolate (1487.47 mg, 5.23 mmol) at -78 °C. The reaction mixture was stirred at -78 °C for 30 mins. To this was added ethylmagnesium bromide (3M in Et 2 O, 2.33 mL, 6.98 mmol) at -78 °C. The reaction mixture was stirred at -78 °C for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of (3S, 5R) -1-benzyl-3, 5-dimethylpiperidin-4-one (300 mg, 1.37 mmol in DCM (6 mL) stirred under nitrogen at 0°C was added DAST (443 mg, 2.75 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with DCM (50 mL*3) . The organic layers were washed with brine (50 mL*2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Step 2 To a solution of (3S, 5R) -1-benzyl-4, 4-difluoro-3, 5-dimethylpiperidine (150 mg, 0.62 mmol) in DCE (5 mL) stirred under nitrogen was added a solution of 1-Chloroethyl chloroformate (173 mg, 1.62 mmol) in DCE (2 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16hrs. The mixture was quenched with methanol (5 mL) and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate 1000 mg, 4.67 mmol
  • 2- (difluoromethyl) sulfonyl) pyridine 1081.79 mg, 5.60 mmol
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-hydroxy-4-methylpiperidine-1-carboxylate (500 mg, 2.32 mmol) in DMF (5 mL) stirred under nitrogen at 0°C was added NaH (140 mg, 3.5 mmol, 60%in mineral oil) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 1hr. A solution of EtI (725 mg, 4.65 mmol) in DMF (5 mL) was added to above reaction mixture. The reaction mixture was stirred at 25°C for other 16hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (5 mL) . The solvent was removed under vacuum.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl (3aR, 6aS) -5- (difluoromethylene) hexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (1200 mg, 4.63 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 °C for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (3aR, 6aS) -5-oxohexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (200 mg, 0.88 mmol) in DCM (10 mL) was added DAST (284.92 mg, 1.77 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred at r. t. for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with DCM (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl (3aR, 6aS) -5, 5-difluorohexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (100 mg, 0.40 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) , The reaction mixture was stirred at 25 °C for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (1000 mg, 4.67 mmol) in THF (30 mL) was added bromo (methyl) magnesium (3M in Et2O, 2.33 mL, 7.00 mmol) at 0 °C. The reaction mixture was stirred at r. t. for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product.
  • bromo (methyl) magnesium 3M in Et2O, 2.33 mL, 7.00 mmol
  • Step 1 To a sealed tube was added 1-aminocyclopropane-1-carbonitrile hydrochloride (200 mg, 1.69 mmol) , N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) ethan-1-amine hydrochloride (455 mg, 1.69 mmol) and DIPEA (2 mL) . The mixture was heated to 120°C for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure.
  • Step 2 To a solution of 1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropane-1-carbonitrile (200 mg, 0.83 mmol) and 1-chloroethyl carbonochloridate (178 mg, 1.25 mmol) in acetone (10 mL) was added K 2 CO 3 (344 mg, 2.49 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2hrs. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with MeOH (10 mL) and stirred at 60°C for further 1hr. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with ethyl acetate (20 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (1g, 0.005mol) in MeCN (20 mL) was added PPh 3 (3.15g, 0.012mol) . The mixture was stirred under nitrogen at 0°C for 5 min. Then was added bromotrichloromethane (1.2 g, 0.006 mol) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The reaction was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl 4- (dichloromethylene) piperidine-1-carboxyla -te (700 mg, 2.62 mmol) in DCM (10 mL) was added 1, 4-dioxane/HCl (10 mL) . The reaction was stirred at r. t. for 2hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure to afford 4- (dichloromethylene) piperidine hydrogen chloride (400 mg, 1.68 mmol, yield: 64.4%) as a yellow oil.
  • Step 1 To a solution of bromo (cyclopropyl) triphenyl-l5-phosphane (2.5 g, 0.006 mol) in THF (30 mL) was added t-BuOK (1.46 g, 0.013 mol) . The mixture was stirred under nitrogen at 50°Cfor 1 hr. The reaction was cooled to r. t., tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (1g, 0.005 mol) was added. The reaction mixture was stirred at 60°C for further 16hrs. The mixture was quenched with water (50 mL) , extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl 4-cyclopropylidenepiperid-ine-1-carbox-ylate (500 mg, 2.23 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (2 mL) . The reaction mixture was stirred at r. t. for 2hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure, adjusted pH to 8 with NaHCO 3 and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (2.5 g, 12.0 mmol) and tert-butyl 2, 2, 2-trichloroacetimidate (10.84 g, 49.0 mmol) in DCM (50 mL) stirred under nitrogen at 0°C was added Boron trifluoride diethyl etherate (880 mg, 6 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16hrs. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with DCM (100 mL*3) . The organic layers were washed with brine (100 mL*2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Step 1 To a solution of t-BuOK (893 mg, 7.95 mmol) in DMF (20 mL) was added tert-butyl 2-oxo-6-azaspiro [3.4] octane-6-carboxylate (1 g, 4.42 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (1 g, 5.30 mmol) under N 2 at -40°C. The mixture was stirred at room temperature under N 2 for 16 hrs. The mixture was concentrated and adjusted pH to 1-2 with 1N hydrochloric acid aqueous solution and diluted with H 2 O (30 mL) , then extracted with ethyl acetate (30 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of t-BuOK (956 mg, 8.52 mmol) in DMF (20 mL) was added tert-butyl 6-oxo-2-azaspiro [3.3] heptane-2-carboxylate (1 g, 4.73 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (1.1 g, 5.70 mmol) under N 2 at -40 °C. The mixture was stirred at room temperature for under N 2 16h. The mixture was concentrated and adjusted pH to 1-2 with 1N hydrochloric acid aqueous solution and diluted with H 2 O (30 mL) , then extracted with ethyl acetate (30 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (5 g, 23.5 mol) in THF (100 mL) was added methylmagnesium bromide (11.8 mL, 35.4 mmol) under N 2 at 0°C. The mixture was stirred at room temperature under N 2 for 2hrs. The mixture was quenched with NH 4 Cl (30 mL) , extracted with EtOAc (100 mL *2) . The organic layers were combined, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo to afford crude product.
  • Step 2 To a solution of NaH (868 mg, 21.7 mmol) in DMF (10 mL) was added tert-butyl 4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (1 g, 4.34 mmol) under N 2 . The mixture was stirred at rt under N 2 for 1h. MeI (6.17 g, 43.4 mmol) and HMPA (0.5 mL) were added into the mixture and stirred at 50°C for 12 hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) .
  • Step 3 To a solution of tert-butyl 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.41 mmol) in DCM (2 mL) was added hydrochloric acid solution (2 mL, 4M in dioxane) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine HCl salt (65 mg, 0.36 mmol, yield: 88.3%) , as a yellow oil. The product was used into the next step without further purification.
  • Step 1 To a solution of (3S, 5R) -1-benzyl-3, 5-dimethylpiperidin-4-one (300 mg, 1.38 mol) in THF (10 mL) was added methylmagnesium bromide (2.3 mL, 6.9 mmol) under N 2 at 0°C. The mixture was stirred at room temperature under N 2 for 2hrs. The mixture was quenched with NH 4 Cl (10 mL) , extracted with EA (20 mL *2) . The organic layers were combined, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo to afford crude product.
  • Step 3 To a solution of (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperidin-4-ol (150 mg, 1.05 mmol) in DCM (10 mL) was added triethylamine (318 mg, 3.14 mmol) and (Boc) 2 O (274 mg, 1.26 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford residue.
  • Step 4 To a solution of NaH (164 mg, 4.09 mmol) in DMF (10 mL) was added tert-butyl (3S, 5R) -4-hydroxy-3, 4, 5-trimethylpiperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.82 mmol) under N 2 . The mixture was stirred at rt under N 2 for 1h. MeI (1.16 g, 8.19 mmol) and HMPA (0.2 mL) were added into the mixture and stirred at 50°C for 12hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (4-oxopiperidin-1-yl) formate (5 g, 25 mmol) in THF 50 mL stirred under nitrogen at -40 °C was added a solution of bromo (isopropyl) magnesium (37.5 mL, 37.5 mmol) in THF dropwise. The reaction mixture was stirred at -40 °C for 4 hrs. The residue was quenched with 1N HCl (50 mL) then extracted with EtOAc (200 mL *3) . The organic layers were washed with brine (150 mL *2) , dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under vacuum to afford crude product.
  • Step 2 To a solution of tert-butyl 4-hydroxy-4-isopropylpiperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.82 mmol) in DMF (10 mL) was added NaH (163.70 mg, 4.09 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred at r. t. for 1h. To this was added MeI (1162.27 mg, 8.19 mmol) and HMPA (1 mL) at 0 °C. The reaction mixture was stirred at 50 °C for 16 hrs. The mixture was quenched with water (10 mL) and extracted with EtOAc (15 mL *3) .
  • Step 1 A mixture of 2- (benzylamino) ethan-1-ol (5 g, 0.03 mol) and 2-methyloxirane (1584.2 mg, 5.86 mmol) were stirred at 50°C for 16 hrs. The mixture was diluted with water (50 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of 1- (benzyl (2-hydroxyethyl) amino) propan-2-ol (2000 mg, 9.51 mmol) in DCE (30 mL) stirred at 0°C was added SOCl 2 (5657.4 mg, 47.5 mmol) . The reaction mixture was stirred at 70°C for 16 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was diluted with water (100 mL) , extracted with dichloromethane (100 mL *3) .
  • Step 3 To a sealed tube was placed with N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) propan-1-amine hydrochloride (500 mg, 2.02 mmol) , l- (trifluoromethyl) cyclopropanamine (326.8 mg, 2.02 mmol) and DIEA (4 mL) . The mixture was heated to 120°C for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure.
  • Step 4 4-benzyl-2-methyl-1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (100 mg, 0.334 mmol) and 10%Pd/C (22 mg, 0.1 mmol) were suspended in MeOH (8 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature under 50 psi hydrogen for 6 hrs. The mixture was filtered through a pad of celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford 2-methyl-1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (40 mg, 0.17 mmol, yield: 51.7%) as a colorless gum.
  • MS (ESI) m/z 209.1 [M+H] +
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-ethyl-4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (800 mg, 3.49 mmol) in DMF (10 mL) was added NaH (698.17 mg, 17.45 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred at rt for 1h. To this was added iodomethane-d3 (4.01 g, 34.91 mmol) at 0 °C. The reaction mixture was stirred at 50 °C for 16 hrs. The mixture was quenched with water (30 mL) and extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product.
  • Step 1 To a sealed tube was added 1- (difluoromethyl) cyclopropan-1-amine hydrochloride (200 mg, 1.39 mmol) , N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) ethan-1-a-mine hydrochloride (375 mg, 1.39 mmol) and DIPEA (2 mL) . The mixture was heated to 120°C for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure.
  • Step 1 To a solution of methyl 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (1 g, 0.0087 mol) in DIEA (30 mL) was added N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) ethan -1-amine hydrochloride (3.58 g, 0.0096 mol) . The reaction mixture was stirred at 120 °C in sealed tube for 48 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product.
  • Step 1 To a solution of benzyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (2 g, 8.57 mmol) in THF (30 mL) cooled in an ice bath was added trimethyl (trifluoromethyl) silane (1.8 g, 12.86 mol) via an addition funnel over a period of 15 minutes. A 1.0M solution of TBAF in THF (85.7 mL, 85.7 mmol) was slowly added dropwise to the mixture. The mixture was stirred at room temperature for 16 hrs. The mixture was concentrated to a volume of 20 mL, and carefully quenched with 1N hydrochloric acid aqueous solution and diluted with H 2 O (30 mL) , then extracted with DCM (50 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of NaH (330 mg, 8.24 mmol) in DMF (10 mL) was added benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 1.65 mmol) under N 2 . The mixture was stirred at rt under N 2 for 1hr. EtI (2.57 g, 16.5 mmol) was added into the mixture and stirred at 50°C for 12 hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) .
  • Step 3 To a solution of benzyl 4-ethoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (480 mg, 1.45 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%pd/C (100 mg) . The mixture was stirred at rt under H 2 for 16 hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to give 4-ethoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine (180 mg, 0.91 mmol, yield: 63.0%) , as a yellow oil.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 2-oxo-7-azaspiro [3.5] nonane-7-carboxylate (745 mg, 3.11 mmol) , DFMPS (600 mg, 3.11 mmol) in DMF (8 mL) was added t-BuOK (697 mg, 6.21 mmol) in DMF (4 mL) at -40°C under N 2 . The mixture was stirred at 25°C for 2 hrs.
  • Step 2 A mixture of tert-butyl 2- (difluoromethylene) -7-azaspiro [3.5] nonane-7-carboxylate (609 mg, 2.23 mmol) in 1, 4-dioxane/HCl (3 mL) and DCM (3 mL) was stirred at 25°C for 2 hrs. The mixture was concentrated to get the crude product 2- (difluoromethylene) -7-azaspiro [3.5] nonane hydrogen chloride salt (422 mg, 2.02 mmol, 90.6%yield) as a white solid.
  • MS (ESI) m/z 174.2 [M+H] +.
  • Step 1 To a solution of NaH (118.7 mg, 2.97 mmol) in DMF (10 mL) was added benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (300 mg, 0.99 mmol) under N 2 . The mixture was stirred at rt for 1hr. 2, 2-difluoroethyl trifluoromethanesulfonate (635.4 mg, 2.97 mmol) was added into the mixture and stirred at 50°C for 16hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (400 mg, 1.49 mmol) in MeOH (5 mL) stirred under nitrogen was added formaldehyde (112 mg, 1.49 mmol, 40%aqueous solution) and acetic acid (0.2 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 30 mins. A suspension of NaBH 3 CN (140 mg, 2.23 mmol) in MeOH (5 mL) was added to the reaction mixture. The reaction mixture was stirred at 25°C for other 2hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (5 mL) . The solvent was removed under vacuum.
  • Step 1 To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.66 mmol) in DMF (6 mL) was added sodium hydride (131.9 mg, 3.29 mmol, 60%in mineral oil) . The mixture was stirred under nitrogen at 25 °C for 15 mins. To this was added 1-iodoethane-1, 1, 2, 2, 2-d5 (212.3 mg, 1.2 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine -1-carboxylate (200 mg, 0.66 mmol) in DMF (10 mL) was added NaH (131.90 mg, 3.30 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred at r. t. for 1hrs. To this was added 3-bromoprop-1-ene (797.84 mg, 6.60 mmol) at 0 °C. The reaction mixture was stirred at 50 °C for 16 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of ethyl 2- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) acetate (200 mg, 0.78 mmol) in THF (5 mL) was added LiAlH 4 solution (1.6 mL, 1M in THF) . The mixture was stirred at rt for 2hrs. The mixture was quenched with H 2 O (10 mL) , filtered and extracted with ethyl acetate (20 mL *4) .
  • Step 1 To a solution of ethyl (R) -2- (2-methylpiperazin-1-yl) acetate (200 mg, 1.08 mmol) in THF (6 mL) was added LiAlH 4 (1.3 mL, 1.29 mmol, 1M in THF) . The reaction mixture was stirred at 25°C under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (10 mL) and extracted with EtOAc (10 mL *5) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (1000 mg, 4.97 mmol) , ethyl 2-bromoacetate (1244.5 mg, 7.45 mmol) in ACN (15 mL) was added K 2 CO 3 (1393.3 mg, 9.93 mmol) . The reaction mixture was stirred at 60°C under nitrogen atmosphere for 12 hrs. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl (R) -4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (1000 mg, 3.83 mmol) in H 2 O (10 mL) stirred under nitrogen was added hydrochloric acid solution (4 mL, 2M in H 2 O) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. Na 2 CO 3 solution and extracted with EtOAc (50 mL*3) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.99 mmol) in DCM (5 mL) was added Ac 2 O (152.15 mg, 1.49 mmol) at 0 °C. The reaction mixture was stirred at 25 °C for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with DCM (15 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl (R) -4-acetyl-3-methylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.82 mmol) in THF (10 mL) was added TiCl 4 (0.82 mL, 0.82 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 30 mins. To this was added methylmagnesium bromide (3M in Et 2 O, 1.64 mL, 4.93 mmol) . The reaction mixture was stirred at 50 °C for 16 hrs. The mixture was quenched with NaOH (1M, 5 mL) and extracted with EA (15 mL *3) .
  • Step 3 To a solution of tert-butyl (3R) -4-tert-butyl-3-methylpiperazin-1-yl formatee (80 mg, 0.31 mmol) in DCM (5 mL) was added 4M HCl in dioxane (3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 °C for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to afford (R) -1- (tert-butyl) -2-methylpiperazine hydrochloride (40 mg, 0.21 mmol, yield: 66.68%) as a yellow gum.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.99 mmol) in DCM (5 mL) was added TFAA (250.39 mg, 1.19 mmol) at 0 °C. The reaction mixture was stirred at 25 °C for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with DCM (15 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl (R) -3-methyl-4- (2, 2, 2-trifluoroacetyl) piperazine-1-carboxylate (300 mg, 1.01 mmol) in THF (5 mL) was added BH 3 -THF complex (3 mL, 3.03 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80 °C for 2 hrs. The mixture was cooled to room temperature and quenched with MeOH carefully. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (300 mg, 0.989 mmol) in DMF (5 mL) stirred under nitrogen was added NaH (60 mg, 1.50 mmol, 60%in mineral oil) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 30min. A solution of 2, 2-dimethyloxirane (214 mg, 2.97 mmol) in DMF (5 mL) was added to above reaction mixture. The reaction mixture was stirred at 90°C for other 2hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of ethyl 4-methyl-1H-pyrazole-3-carboxylate (1 g, 6.5 mmol) in DMF (10 mL) was added iodoethane (3.04 g, 19.5 mmol) and K2CO3 (2.7 g, 19.5 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80 °C for 16hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of ethyl 1-ethyl-4-methyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (360 mg, 1.8 mmol in THF (5 mL) was added a solution of LiOH. H 2 O (331.6 mg, 7.9 mmol) in water (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of ethyl 1H-pyrazole-3-carboxylate (1 g, 7.1 mmol) in DMF (10 mL) was added 2, 2, 2-trifluoroethyl trifluoromethanesulfonate (4.97 g, 21.3 mmol) and K 2 CO 3 (2.94 g, 21.3 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80 °C for 16 hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of ethyl 1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylate (350 mg, 1.4 mmol in THF (5 mL) was added a solution of LiOH. H 2 O (264.2 mg, 6.3 mmol) in water (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of ethyl 1H-pyrazole-3-carboxylate (500 mg, 3.57 mmol) , sodium 2-chloro-2, 2-difluoroacetate (1.09 g, 7.14 mmol) and 18-Crown-6 (190 mg, 0.719 mmol) in ACN (20 mL) stirred under nitrogen was added Cs 2 CO 3 (2.32 g, 7.14 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 16 hrs. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (20 mL) . The mixture was extracted with ethyl acetate (20 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of ethyl 1H-1, 2, 3-triazole-5-carboxylate (1 g, 7.1 mmol) in DMF (10 mL) and iodoethane (3.32 g, 21.3 mmol) , K 2 CO 3 (2.94 g, 21.3 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 80 °C for 16 hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of ethyl 1-ethyl-1H-1, 2, 3-triazole-5-carboxylate (400 mg, 2.1 mmol in THF (5 mL) was added a solution of LiOH. H 2 O (396.8 mg, 8.4 mmol) in water (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of benzyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (1000 mg, 4.29 mmol) , (difluoromethyl) trimethylsilane (1597.3 mg, 12.9 mmol) in DMF (15 mL) was added K 2 CO 3 (1777.5 mg, 12.9 mmol) and CsF (195.6 mg, 1.29 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (300 mL) and extracted with EtOAc (100 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of benzyl 4- (difluoromethyl) -4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (300 mg, 1.05 mmol) in DMF (10 mL) was added sodium hydride (168.3 mg, 4.251 mmol, 60%in mineral oil) . The mixture was stirred under nitrogen at 25 °C for 15 mins. Then iodoethane (492.0 mg, 3.15 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 25°C under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (400 mg, 1.49 mmol) , 1- (chloromethyl) -4-methoxybenzene (358.9 mg, 2.23 mmol) in DMF (8 mL) was added K 2 CO 3 (410.6 mg, 2.97 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (150 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl 3- (4-methoxybenzyl) -2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (600 mg, 1.54 mmol) in DMF (10 mL) was added sodium hydride (92.2 mg, 2.305 mmol, 60%in mineral oil) . The mixture was stirred under nitrogen at 25 °C for 15 mins. Then iodomethane (261.8 mg, 1.54 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 25°C under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 3 To a solution of tert-butyl 3- (4-methoxybenzyl) -1-methyl-2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (500 mg, 1.24 mmol) in ACN (20 mL) and H 2 O (10 mL) was added and Ceric ammonium nitrate (2710.8 mg, 4.94 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hrs. The reaction mixture was poured into saturated Na 2 CO 3 aqueous solution (30 mL) and extracted with EtOAc (30 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (300 mg, 1.12 mmol) and methanesulfonic anhydride (585 mg, 3.36 mmol) in DCE (10 mL) stirred under nitrogen was added 4-DMAP (40 mg, 0.327 mmol) . The reaction mixture was stirred at 60°C for 16 hrs. The reaction was quenched with saturated NH 4 Cl aqueous solution (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) .
  • Step 1 To a mixture of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 1.86 mmol) in DIEA (10 mL) was added 1, 5-dichloropentan-3-one (578 mg, 3.73 mmol) . The reaction mixture was stirred at 120 °C for 48 hrs in a sealed tube. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (50 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of tert-butyl 4-oxo-4'- (trifluoromethyl) - [1, 4'-bipiperidine] -1'-carboxylate (160 mg, 0.457 mmol) in THF (10 mL) stirred under nitrogen was added NaBH 4 (35 mg, 0.840 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 1hr. The reaction mixture was poured into water (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1 -carboxylate (100 mg, 0.33 mmol) , NaH (26 mg, 0.66 mmol) in DMF (5 mL) was added 1, 5-dioxaspiro [2.3] hexane (56.7 mg, 0.66 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80°C for 16 hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 0.33 mmol) in DMF (10 mL) was added Sodium hydride (130 mg, 3.3 mmol, Purity 60%) at room temperature, stirred at room temperature for 10min, 3-bromoprop-1-ene (300 mg, 2.47 mmol) was added. The mixture solution was stirred at room temperature for 16 hours. The reaction mixture was quenched with water (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of benzyl 4- (allyloxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.52mmol) in a mixture of THF (5mL) and water (1 mL) was added K 2 OsO 4 (3.8 mg, 0.010mmol) and 4-methyl-4- ( ⁇ 1 -oxidaneyl) -4 ⁇ 4 -morpholine (120 mg, 1.04mmol) . The mixture solution was stirred at room temperature for 16 hours. LCMS indicated completion of reaction. The reaction mixture was quenched with water (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL *3) .
  • Step 3 To a solution of benzyl 4- (2, 3-dihydroxypropoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (470 mg, 1.25 mmol) in MeOH (10 mL) was added Pd/C (47 mg) and stirred at room temperature for 16 hours under H 2 . LCMS indicated completion of reaction. The mixture was filtered and concentrated in vacuum to give 3- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) propane-1, 2-diol (320 mg, 1.32 mmol, 105.4%yield) as a colorless oil. MS (ESI, m/z) : 244.0 [M+H] +
  • Step 1 To a solution of methyl 5-bromo-1H-pyrazole-3-carboxylate (1.00 g, 4.48 mmol) and iodoethane (2.28 g, 14.6 mmol) in ACN (20 mL) was added K 2 CO 3 (2.02 g, 14.6 mmol) . The reaction mixture was stirred at 60°C for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (10 mL) and extracted with EtOAc (100 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of methyl 3-bromo-1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (500 mg, 2.15 mmol) and ZnCN 2 (678.4 mg, 6.44 mmol) in DMA (20 mL) was added DPPF (356.8 mg, 0.644 mmol) , Pd 2 (dba) 3 (196.4 mg, 0.214 mmol) and Zn powder (140.3 mg, 2.15 mmol) . The mixture was stirred under nitrogen at 120 °C for 16 hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of methyl 2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-4-carboxylate (1 g, 7.0 mmol) in ACN (10 mL) was added Boc 2 O (1.2 g, 5.5 mmol) and K 2 CO 3 (1.94 g, 13.7 mmol) at 0°C. The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hrs.
  • Step 2 To a solution of 1- (tert-butyl) 4-methyl 2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-1, 4-dicarboxylate (1.3 g, 5.3 mmol) in ACN (10 mL) was added iodoethane (2.48 g, 15.9 mmol) and K 2 CO 3 (2.2 g, 15.9 mmol) . The reaction mixture was stirred at 50 °C for 3 hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 4 To a solution of methyl 3-ethyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-4-carboxylate (150 mg, 0.88 mmol) in THF (2 mL) was added a solution of LiOH. H 2 O (148 mg, 3.52 mmol) in water (1 mL) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of (methyl 4-aminobicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylate (1.0 g, 5.46 mmol) , Na 2 CO 3 (1.73 g, 16.38 mmol) and NaI (1.63 g, 10.92 mmol) in DMAc (20 mL) were added tert-butyl bis (2-chloroethyl) carbamate (1.45 g, 6.01 mmol) . The reaction mixture was stirred at 110 °C for 30 min. The other of tert-butyl bis (2-chloroethyl) carbamate (1.45 g, 6.01 mmol) was added. The solution was stirred at 110 °C for 16 hours.
  • Step 2 To a solution of (tert-butyl 4- (4- (methoxycarbonyl) bicyclo [2.2.2] octan-1-yl) piperazine-1-carboxylate (250 mg, 0.71 mmol) in MeOH (4.0 mL) was added 2N of NaOH (3.55 ml, 71.0 mmol) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. LCMS indicated completion of reaction.
  • Step 3 To a solution of 4- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) bicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylic acid (110 mg, 0.33 mmol) in DCM (2.0 mL) was added 4N of hydrogen chloride (2.3 mL, 9.15 mmol) at room temperature. The solution was stirred at room temperature for 2 h. LCMS indicated completion of reaction. The reaction solution was concentrated in vacuum to give 4- (piperazin-1-yl) bicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylic acid (60mg, 0.252 mmol, 76.3%yield) as a yellow solid.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.373 mmol) and DIEA (240 mg, 1.86 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added triphosgene (33 mg, 0.111 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C for 5 mins. A solution of methylamine hydrochloride (78 mg, 1.12 mmol) and DIEA (145 mg, 1.12 mmol) in DCM (5 mL) was added. The reaction mixture was stirred at 25°C for 4 hrs.
  • Step 1 To a mixture of tert-butyl piperazine-1-carboxylate (5.0 g, 26.85mmol ) in acetonitrile (80mL) was added ethyl ethyl 2-bromo-2-methylpropanoate (6.28 g, 32.22mmol ) and Potassium carbonate (7.42 g, 53.7mmol ) . The mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The mixture was concentrated in vacuum, diluted with water (50 mL) and extracted with EA (40 mL *3) .
  • Step 2 To a mixture of tert-butyl 4- (1-ethoxy-2-methyl-1-oxopropan-2-yl) piperazine-1-carboxylate (6.7g, crude ) in methanol (30mL) was added sodium hydroxide (50 mL, 1 M ) , The mixture was stirred at 85 °C for 3 hours. The mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EA (50 mL) . The aqueous phase was acdified to PH ⁇ 5 and concentrated. The crude material was suspended in EtOH (15 mL) , stirred for 30 min and filtered.
  • EtOH 15 mL
  • Step 3 To a mixture of 2- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) -2-methylpropanoic acid (4.3g, 15.79mmol ) in dichloromethane (10mL) was added hydrogen chloride/dioxane (10 mL, 4 M) . The mixture was concentrated in vacuum to give 2-methyl-2- (piperazin-1-yl) propanoic acid.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (1.00 g, 4.97 mmol) , propan-2-one-d6 (3.18 g, 49.7 mmol) and Ti (iPrO) 4 (1.41 g, 4.97 mmol) in DCM (15 mL) stirred under nitrogen at 0°C for 30 mins was added STAB (624.4 mg, 9.93 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25°C under nitrogen atmosphere for 16 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (30 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of tert-butyl 3-oxopiperidine-1-carboxylate (1 g, 5 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (0.87 g, 4.5 mmol) in DMF (15 mL) was added a solution of t-BuOK (1.01 g, 9 mmol) in DMF (5 mL) at -40°C under nitrogen. Then the mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was quenched by Sat.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

This invention describes novel compounds, pharmaceutical compositions comprising the compounds, and uses thereof. The compounds provided herein have increased metabolic stability and are useful for the prevention and treatment of various diseases or conditions, such as inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.

Description

Novel Compounds, compositions comprising the same and uses thereof Field of invention
The present invention relates to novel IL-17 inhibitors, pharmaceutical compositions comprising the compounds, and uses thereof. Methods for treating, preventing and managing inflammatory conditions using the compounds and compositions are also disclosed.
Background of the invention
Interleukin-17 (IL-17) is a T derived cell-derived pro-inflammatory molecule that stimulates epithelial, endothelial and fibroblastic cells to produce other inflammatory cytokines and chemokines including IL-6, IL-8, G-CSF, and MCP-1. The family of IL-17 cytokines, comprising IL-17A through IL-17 F, promotes the maintenance of both adaptive and innate immunity (Gaffen SL. Structure and signalling in the IL-17 receptor family. Nat Rev Immunol. 2009; 9 (8) : 556–567) . Dysregulation expression of IL-17 may contribute to inflammatory and autoimmune diseases such as psoriasis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, and multiple sclerosis (Li X, Bechara R, Zhao J, et al. IL-17 receptor–based signaling and implications for disease. Nat Immunol. 2019; 20 (12) : 1594–1602) . As such, they are highly interesting new therapeutic targets for inflammatory diseases.
Interleukin-17A (IL-17A) is the best-investigated IL-17 family member. It is a pro-inflammatory cytokine, which plays a pivotal role in immune and auto-immune related diseases including psoriasis, asthma, psoriatic arthritis, and rheumatoid arthritis (Tollenaere MAX, Hebsgaard J, Ewald DA, et al. Signalling of multiple interleukin (IL) -17 family cytokines via IL-17 receptor A drives psoriasis-related inflammatory pathways. Br J Dermatol. 2021; 185 (3) : 585–594; Ostling J, Geest M, Schofield JPR, et al. IL-17–high asthma with features of a psoriasis immunophenotype. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2019; 144 (5) : 1198–1213; Blauvelt A, Chiricozzi A. The immunologic role of IL-17 in psoriasis and psoriatic arthritis pathogenesis. Clin Rev Allergy Immunol. 2018; 55 (3) : 379–390; Kirkham BW, Kavanaugh A, Reich K. Interleukin-17A: a unique pathway in immune-mediated diseases psoriasis, psoriatic arthritis and rheumatoid arthritis. Immunology. 2014; 141 (2) : 133–142) . IL-17A forms homodimers or heterodimers with IL-17A or IL-17F and is a major cytokine mainly secreted from Th17 cells. It signals through its membrane-bound receptors, IL-17RA and IL-17RC, and modulates IL-17A signaling pathway and triggers multiple inflammatory and immune responses. Thus, IL-17A has emerged as a major topic of interest for treating inflammatory-associated disease.
Currently, three approved monoclonal antibodies (mAbs) (secukinumab, ixekizumab, and brodalumab) as IL-17A inhibitors are in clinical practice for the treatment of multiple immune diseases. However, the disadvantages of the mAbs, such as non-oral administration, poor tissue  penetration, lacking blood-brain barrier penetration, often long half-life times, narrow its application.
In this regard, Leo Pharma A/S and Dice Alpha, Inc developed a series of small molecule IL-17A inhibitors and started Phase I clinical trials in 2021 and 2022, respectively. Eli Lilly and Company developed a series of potent imidazo [1, 2-b] pyridazine derivatives to treat certain symptoms of psoriasis, rheumatoid arthritis, or multiple sclerosis. In 2021, Eli Lilly initiated a Phase I clinical trial of one of the compounds to study IL-17A-related diseases. But unfortunately, the clinical trial was discontinued due to hepatotoxicity.
Accordingly, there is still a need to develop small molecule IL-17A inhibitors, particularly IL-17A/A or IL-17A/F inhibitors with improved properties, low toxicity and high activities.
Summary of the description
The inventor of the present application surprisingly found a series of compounds as IL-17A inhibitors, especially as IL-17A/A or IL-17A/F inhibitors. These compounds have increased metabolic stability compared with the current small molecular compounds and have increased or comparable activities over the large molecules such as monoclonal antibodies.
In the first aspect, the present application relates to a compound of the following formula (I) :
wherein
moiety A is selected from the group consisting of:
5-12-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, cyano, -NH2, C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, C3-7 cycloalkoxy, phenyl, phenoxy, 5-6-membered heteroaryl and 4-7-membered heterocycloalkyl, said 5-6-membered heteroaryl and 4-7-membered heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
-NH-C (O) -R3, wherein R3 is selected from the group consisting of :
C3-12 cycloalkyl and 3-12-membered heterocyclyl, C5-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl,  C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, C1-6 cyanoalkyl, -oxo, -NH2, -OH; said heterocycloalkyl and heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
optionally substituted methyl, wherein one or more substituents are independently selected from: C1-6 alkyloxy, C6-12 aryl and 5-12-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, each optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -OH;
-O-C3-7 cycloalkyl and -O-CH2-C3-7 cycloalkyl, -O-CH2-5-7-membered heteroaryl, and benzyl, each benzyl, C3-7 cycloalkyl and heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, C3-7 cycloalkyl, halogen, -CN, -NH2, -OH;
-NH (C1-6 alkyl) , -NH (C3-7 cycloalkyl) , -N (C1-6 alkyl) 2, and -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, C3-7 cycloalkyl, halogen, -CN, -NH2, -OH;
C1-6 alkyl, C6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, 4-7-membered heterocyclyl, each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of H, C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, 4-7-membered heterocycloalkyl, halogen, halogenated C1-6 alkyl, -CN, -NH2, -OH, phenyl, -NH (C1-6 alkyl) , - (CH2) q-NH (CO) - (C1-4alkyl) , -NHS (O) 2 (C1-6 alkyl) ; q is 0, 1, 2, 3, or 4;
or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a substituted or unsubstituted C5-7 carbocyclyl, or substituted or unsubstituted 5-7 membered heterocyclyl;
moiety B is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocyclyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from N, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocyclyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
moiety C is selected from the group consisting of:
*4-9-membered heterocyclyl containing one or more hetero atoms selected from O, N and S, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene (=CH2) , C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C3-8 carbocyclyl, -O-C3-6 cycloalkyl, C1-6 hydroxyalkyl, halogen, -CN, CF3, -CD3, -NH2, =NH, -OH, -COOH, C1-6 alkoxy, -S-C1-6 alkyl, C1-3 carbonyl, -oxo, -N (C1-6 alkyl) 2, -NH (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C1-6 alkyl) , -NHC (O) -NH (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C3-6 cycloalkyl) , -S (O) 2- (C1-6 alkyl) , -S (O) 2- (C3-6 cycloalkyl) , -C (O) -C1-6 alkyl, 4-7 membered heterocyclyl, 5-7 membered heteroaryl;
said substituents being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of deuterium, C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkoxy, halogen, -CN, CF3, CD3, -oxo, -NH2, -COOH, -C (O) O-C1-6 alkyl, -OH, 5-7 membered heteroaryl, 4-7 membered heterocyclyl, C1-6  hydroxyalkyl and C3-6 cycloalkyl;
or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle or 3-7-membered heterocycle,
said C3-7 carbocycle or 3-7-membered heterocycle being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene (=CH2) , C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-3 alkoxy, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH, -oxo; optionally substituted amino group, wherein one or more substituents are independently selected from: C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -NO2, -CF3, -NH2, -OH; said substituents being optionally substituted with one or more halogen;
optionally substituted amino group, wherein one or more substituents are independently selected from: C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -NO2, -CF3, -NH2, -OH; said substituents being optionally substituted with one or more halogen;
R1, R1’and R2’are independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, deuterated C1-6 alkyl, deuterated C2-6 alkenyl, deuterated C2-6 alkynyl, C1-3 alkoxy, halogenated C1-3 alkyloxy, halogen, halogenated C1-6 alkyl, -CN, -N (C1-6 alkyl) 2, CF3, -NH2, -OH;
R2 is selected from hydrogen, C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -NH2, -N (C1-6 alkyl) 2, -NH-C1-6 alkyl, -NHC (O) -C1-6 alkyl, -NHC (O) - (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) , -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , -NHC (O) -O-NH-C1-6 alkyl, -NHC (O) -NH- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C1-6 alkyl) , -NHC (O) -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C1-6 alkyl, -NHC (O) -O-C3-7 cycloalkyl, -NHC (O) -N (C1-6alkyl) 2, -NHC (O) -N (C3-7 cycloalkyl) 2, -NHC (O) -O-CH2-C3-7 cycloalkyl, -NHSO2-C1-6 alkyl, -NHSO2-NH-C1-6 alkyl, -NHSO2-N (C1-6 alkyl) 2,
optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, deuterium, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH; said heterocyclyl or heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
Ra and Ra’are each independently selected from hydrogen, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH, -C1-3 alkoxy, C3-7 cycloalkyl and C3-7 heterocyclyl;
Rb and Rb’are each independently selected from hydrogen, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C5-10 aryl, C5-10 heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C3-7cycloalkyl, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH, and -C1-3 alkoxy; or Rb and Rb’together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle, C5-9 spirocyclic ring, C5-10 aromatic ring or C5-10 aromatic heterocycle, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, -C1-3 alkoxy, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH; the substituents are optionally substituted with one or more halogen;
L is absent or selected from -O-and -NH-;
m is 0, 1 or 2; and
n is 0 or 1;
or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
In some preferred embodiments, moiety C connected to the rest of the formula through N atoms in moiety C.
In some embodiments, moiety B is selected from C6 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from N, said C6 aryl or 6-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
In some embodiments, L is absent, m is 0, n is 1, and the compound is represented by formula (Ia) :
wherein
moiety A1 is defined as moiety A;
moiety B1 is defined as moiety B;
moiety C1 is defined as moiety C;
Rb1 is defined as Rb;
Rb1’ is defined as Rb’; and
R1, R1’, R2’ and R2 are as defined above.
In some embodiments, moiety A1 is selected from the group consisting of: 5-12-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, cyano, -NH2, C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, and 4-7-membered heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N.
In some embodiments, moiety B1 is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
In some embodiments, moiety C1 is selected from 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, methylene and C1-6 alkyl, said substituents being optionally substituted with one or more halogen, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms to which they attached form a  C3-7 carbocycle.
In some embodiments, R1, R1’and R2’are independently selected from the group consisting of hydrogen, CF3 and C1-6 alkyl.
In some embodiments, R2 is selected from -NH2, -NHC (O) -C1-6alkyl, -NHC (O) -NH- (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C3-7 cycloalkyl, and -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) and -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl and C1-6 alkoxy; said heterocyclyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N.
In some embodiments, Rb1 and Rb1’are each independently selected from C3-7 cycloalkyl or C2-6 alkenyl substituted with one or more C3-7 cycloalkyl; or Rb1 and Rb1’together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle optionally substituted with one or more C1-6 alkyl or halogen.
In some preferred embodiments, R2’is CF3 or C1-3 alkyl; and/or moiety B1 is selected from phenyl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said phenyl is substituted with two halogen, said 6-membered heteroaryl is non-substituted or substituted with one halogen, and said 6-membered heterocylyl is non-substituted or substituted with one halogen or oxo; and/or moiety C1 is selected from 5-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being substituted with one =CF2 and being optionally substituted with one or more halogen or C1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom together with thering atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle; and/or Rb1 and Rb1’together with the carbon atom to which they attached form a C5-8 carbocycle substituted with one =CF2.
In some embodiments, L is absent, m is 0, n is 1, and the compound is represented by formula (Ib) :
wherein
moiety D is selected from the group consisting of: C1-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, -O-C3-7 cycloalkyl, -O-CH2-C3-7 cycloalkyl, -O-CH2-5-7-membered heteroaryl, -NH (C1-6 alkyl) , -N (C3-7 cycloalkyl) , -N (C1-6 alkyl) 2, --N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , C6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, 4-7-membered heterocyclyl,
optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of H, C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, 4-7-membered heterocycloalkyl, halogen, halogenated C1-6 alkyl, C1-6 cyanoalkyl, -oxo, -CN, -NH2, -OH, phenyl, -NH (C1-6 alkyl) , - (CH2) q-NH (CO) - (C1-4alkyl) , -NHS (O) 2 (C1-6 alkyl) ; q is 0, 1, 2, 3, or 4; or two  substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a substituted or unsubstituted C5-7 carbocyclyl, or substituted or unsubstituted 5-7 membered heterocyclel; said heterocycloalkyl, heterocyclyl and heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
Rc and Rc’are independently selected from hydrogen, deuterium, C1-3 alkyl, C1-3 alkyloxy, halogen, -CN, -CF3, -CD3, -NH2, -OH;
p is 0 or 1;
moiety B2 is defined as moiety B;
moiety C2 is defined as moiety C;
Rb2 is defined as Rb;
Rb2’ is defined as Rb’; and
R1, R1’, R2’ and R2 are as defined above.
In some preferred embodiments, moiety D is selected from C3-6 cycloalkyl, 5-6 membered heterocyclyl and 5-6 membered heteroaryl containing one or more heteroatoms selected from N, O and S; optionally substituted with one or more substitutents selected from halogen, -oxo, C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C1-6 cyanoalkyl, -CN.
In some preferred embodiments, moiety B2 is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
In some preferred embodiments, p is o.
In some preferred embodiments, moiety C2 is selected from the group consisting of:
amino group, said amino group being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, halogen or halogenated C1-6 alkyl;
4-9-membered heterocyclyl containing one or more heteroatoms selected from N, O and S, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C1-6 alkoxy, -S-C1-6 alkyl, C3-8 carbocyclyl, -O-C3-6 cycloalkyl, -NH2, CF3, CD3, CN, -oxo, =NH, -N (C1-6 alkyl) 2, -NH (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C1-6 alkyl) , -NHC (O) -NH (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C3-6 cycloalkyl) , -S (O) 2- (C1-6 alkyl) , -S (O) 2- (C3-6 cycloalkyl) , C1-6 hydroxyalkyl, -C (O) -C1-6 alkyl, halogen, -OH, -COOH, 5-7 membered heterocyclyl, 5-7 membered heteroaryl;
said substituents being optionally substituted with one or more halogen, deuterium, CN, CF3, -oxo, CD3, -OH, -COOH, -C (O) O-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, 5-7 membered heteroaryl, 4-7 membered heterocyclyl and C3-6 cycloalkyl;
optionally, two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle, or 3-7 membered heterocycle containing one or more heteroatoms selected from N, O and S, 5-7 membered heteroaryl;
said C3-7 carbocycle or 3-7-membered heterocycle being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene (=CH2) , halogen, -oxo, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-3 alkoxy, -CN, -CF3, -NH2, -OH.
In some preferred embodiments, R2’ is H, and/or R2 is selected from –NH2, -NHC (O) -O-C1-6alkyl, -NHC (O) -C1-6alkyl, -NHC (O) -NH- (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C3-7 cycloalkyl, -NHC (O) -O-CH2-C3-7 cycloalkyl, -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) ,  -NHC (O) -N (C1-6alkyl) 2, -NHC (O) -N (C3-7 cycloalkyl) 2, and -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of deuterium, halogen, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C1-6 alkoxy and C3-7 cycloalkyl;
said heterocyclyl or heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N.
In some preferred embodiments, Rb2 and Rb2’are each independently selected from C3-7cycloalkyl; or Rb2 and Rb2’together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle or 5-7 membered heterocycle optionally substituted with one or more substituents independently selected from methylene, C2-6 alkenyl, C1-6 alkyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen;
or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-6 carbocycle or 4-7-membered heterocyclyl; said carbocycle and heterocyclyl optionally substituted with one or more substituents independently selected from C2-6 alkenyl, C1-6 alkyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen.
In some preferred embodiments, Rb2 and Rb2’are each independently selected from C3-5cycloalkyl; or Rb2 and Rb2’together with the carbon atom to which they attached form a C3-7 carbocycle or 5-7 membered heterocycle optionally substituted with one or more substituents independently selected from methylene (=CH2) , C2-6 alkenyl, C1-6 alkyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen.
In some preferred embodiments, moiety C2 is a 4-9-membered heterocyclyl containing at least one N atom and none or more heteroatoms selected from O, N and S.
In some preferred embodiments, moiety C2 connected to the rest of formula Ib through N atoms in moiety C2.
In some preferred embodiments, R2’is CF3 or C1-3 alkyl; and/or moiety B2 is selected from phenyl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said phenyl is substituted with two halogen, said 6-membered heteroaryl is non-substituted or substituted with one halogen, and said 6-membered heterocylyl is non-substituted or substituted with one halogen or oxo, and/or moiety C2 is selected from 5-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being substituted with one =CF2 and being optionally substituted with one or more halogen or C1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle; and/or Rb2 and Rb2’together with the carbon atom to which they attached form a C5-8 carbocycle substituted with one =CF2.
In some preferred embodiments, moiety C2 is selected from the group consisting of: 6-membered heterocyclyl containing at least one N atom, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, -COOH, -CN, -NH2, -NH-CO-NH (C1-6 alkyl) , -N (C1-6 alkyl) 2, -NH (C1-6 alkyl) , -NH-S (O) 2 (C1-6 alkyl) , -S (O) 2 (C1-6 alkyl) , =CH2, =CF2, C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkoxyl, C2-6 alkenyl, halogenated =CH2, halogenated C2-6 alkenyl, 4-7 membered heterocyclyl, C3-8 cycloalkyl; each substituents being optionally substituted with one or more groups selected from D, halogen, -CN, -OH, -COOH, C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, halogenated C1-6 alkyl, 4-6 membered heterocyclyl containing one or more heteroatoms selected  from N, O and S, 6 membered heteroaryl containing one N atom;
or two substituents on adjacent atoms or on the same atom together with the atoms to which they attached form a 4-7 membered heterocycle, C3-6 carbocycle or 5-7 membered heteroaromatic ring optionally substituted with halogen, –oxo, C1-6 alkyl, =CF2, -CF3.
In some preferred embodiments, moiety C2 is selected from the group consisting of: 6-membered heterocyclyl containing at least one N atom, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of –CH3 or =CF2; said 6-membered heterocyclyl connected to the rest of the formula through N atom.
In some preferred embodiments, the compound is represented by formula Ib-1,
wherein, R1, R1’, R2’, R2, Rb2, Rb2’, Rc and Rc’, p, moiety B2 and moiety D are as defined above.
In some preferred embodiments, Rb2 and Rb2’are each independently selected from C3-7 cycloalkyl; or Rb2 and Rb2’together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle, preferably, form a cycloheptane or cyclohexane, unsubstituted or substituted with one =CF2.
In some preferred embodiments, Rb2 and Rb2’are each independently selected fromcyclopropyl; or Rb2 and Rb2’together with the carbon atom to which they attached form a cycloheptane substituted with one =CF2 or a cyclohexane.
In some preferred embodiments, moiety B2 is halogenated phenyl.
In some preferred embodiments, moiety D is 5-6 membered heteroaryl, optional substituted with one or more substituents selected from C1-6 alkyl, halogen
In some preferred embodiments, moiety C2 is 6-membered heterocyclyl containing at leastone N atom substituted with one =CF2; and/or Rb2 and Rb2’together with the carbon atom to which they attached form a C5-8 carbocycle, preferably, form a cycloheptane or cyclohexane, unsubstituted or substituted with one =CF2.
In some preferred embodiments, the compound is represented by formula Ib-2,
wherein, R1, R1’, R2’, R2, Rc and Rc’, p, moiety B2 and moiety D are as defined above.
In some embodiments, L is absent, m is 0, n is 0, and the compound is represented by formula (Ic) :
wherein
Rb3 is defined as Rb;
Rb3' is defined as Rb';
moiety B3 is defined as moiety B;
moiety C3 is defined as moiety C;
p is 0 or 1;
moiety D1 is selected from the group consisting of: C6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of H, C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, halogenated C1-6 alkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -NH2, -OH; said heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
R2 and R2’are independently selected from the group consisting of hydrogen, CF3 and C1-6 alkyl;
Rc and Rc’are independently selected from hydrogen, deuterium, C1-3 alkyl, C1-3 alkyloxy, halogen, -CN, -CF3, -CD3, -NH2, -OH;
or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
In some preferred embodiments, moiety B3 is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo.
In some preferred embodiments, moiety C3 is selected from the group consisting of: amino group optionally substituted with one or more C1-6 alkyl, said C1-6 alkyl being optionally  substituted with one or more halogen or halogenated C1-6 alkyl; 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more halogen, methylene, C2-6 alkenyl, said methylene and C2-6 alkenyl being optionally substituted with one or more halogen, C1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle.
In some preferred embodiments, Rb3 and Rb3’are each independently selected from hydrogen,C3-7 cycloalkyl or C2-6 alkenyl substituted with one or more C3-7 cycloalkyl; or Rb3 and Rb3’ together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle optionally substituted with one or more methylene, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen.
In some preferred embodiments, moiety D1 is selected from the group consisting of: phenyl, 5-6-membered heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN; said heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
moiety B3 is selected from phenyl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said phenyl or 6-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
moiety C3 is selected from the group consisting of: -N (C1-6 alkyl) 2 optionally substituted with one or more halogen or halogenated C1-6 alkyl; 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more halogen, methylene, C2-6 alkenyl, said methylene and C2-6 alkenyl being optionally substituted with one or more halogen, C1-6 alkyl; said 4-9-membered heterocyclyl connected to the rest of the structure through N atom.
In some preferred embodiments, moiety B3 is selected from phenyl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said phenyl is substituted with two halogen, said 6-membered heteroaryl is non-substituted or substituted with one halogen, and said 6-membered heterocylyl is non-substituted or substituted with one halogen or oxo; and/or moiety C3 is selected from 5-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being substituted with one =CF2 and being optionally substituted with one or more halogen or C1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms towhich they attached form a C3-7 carbocycle; and/or Rb3 and Rb3’together with the carbon atom to which they attached form a C5-8 carbocycle substituted with one =CF2.
In another preferred embodiment, said heterocyclyl and carbocyclyl can be saturated or partially unsaturated, or unsaturated, substituted or unsubstituted, aromatic or non aromatic.
In some preferred embodiments, said heterocyclyl and carbocyclyl may be in fused, bridged or spiro-connected fashion.
In another preferred embodiment, each group is the corresponding group in the specific  compound in the example.
In some preferred embodiments, the compound is selected from the group consisting of:








or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
It should be understood that the compounds of the present invention are not limited to the above-listed compounds.
In the second aspect, the present application relates to a pharmaceutical composition comprising the compound of the present invention and a pharmaceutically acceptable excipient.
In some embodiments, pharmaceutical compositions can be used to prepare individual, single-unit dosage forms. In some embodiments, single unit dosage forms provided herein are suitable for oral, mucosal, parenteral, topical, transdermal, or transcutaneous administration to a patient. Examples of dosage forms include, but are not limited to: tablets; caplets; capsules, such as soft elastic gelatin capsules; cachets; troches; lozenges; dispersions; suppositories; powders; aerosols; gels; liquid dosage forms suitable for oral or mucosal administration to a patient, including suspensions, solutions, and elixirs; liquid dosage forms suitable for parenteral administration to a patient; eye drops or other ophthalmic preparations suitable for topical administration; and sterile solids that can be reconstituted to provide liquid dosage forms suitable for parenteral administration to a patient. In some embodiments, dosage forms comprise the compound provided herein, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof in an amount of 1 to about 1000 mg, from about 5 to about 500 mg, from about 10 to about 350 mg, or from about 50 to about 200 mg. The specific amount of the compound provided herein, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof will depend on the specific agent used, the diseases or conditions being treated or prevented.
In some embodiments, pharmaceutical compositions comprise a compound provided herein, or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and optionally a second active agent used for treating inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
In the third aspect, the present application relates to a method of treating a disease or condition in a subject in need thereof, wherein the method comprises administering to the subject a therapeutically effective amount of the compound of the present application, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of the present application, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
In some embodiments, the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn’s disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma, allograft rejection (e.g., renal) , systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, Behcet’s disease, ulcerative colitis, rheumatoid arthritis (RA) , inflammatory bowel disease, Wegener’s granulomatosis, sarcoidosis, systemic sclerosis, insulin-dependent diabetes mellitus, septic shock syndrome, Alzheimer’s disease, an inflammatory eye disease, uveitis and non-infectious uveitis.
In the fourth aspect, the present application relates to the use of the compound of the present invention, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of the present invention in the manufacture of medicaments for preventing or treating a disease or condition, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
In some embodiments, the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn’s disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma, allograft rejection (e.g., renal) , systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, Behcet’s disease, ulcerative colitis, rheumatoid arthritis (RA) , inflammatory bowel disease, Wegener’s granulomatosis, sarcoidosis, systemic sclerosis, insulin-dependent diabetes mellitus, septic shock syndrome, Alzheimer’s disease, an inflammatory eye disease, uveitis and non-infectious uveitis.
In the fifth aspect, the present application relates to a compound of the present invention, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the  pharmaceutical composition of the present invention for use in a method of preventing or treating a disease or condition, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
In some embodiments, the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn's disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma, allograft rejection (e.g., renal) , systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, Behcet's disease, ulcerative colitis, rheumatoid arthritis (RA) , inflammatory bowel disease, Wegener's granulomatosis, sarcoidosis, systemic sclerosis, insulin-dependent diabetes mellitus, septic shock syndrome, Alzheimer's disease, an inflammatory eye disease, uveitis and non-infectious uveitis.
In some embodiments, a compound provided herein, or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof, is administered in combination with another drug ("second active agent" ) or treatment. Second active agents include small molecules and large molecules (e.g., proteins and antibodies) . Other therapies that can be used in combination with the administration of compounds provided herein include, but are not limited to, surgery, immunotherapy, biological therapy, radiation therapy, and other non-drug-based therapies useful for treating or preventing various diseases described herein.
Brief description of the figures
FIG. 1A-J shows the comparative efficacy of test compounds with the approved anti-IL-17A antibodies secukinumab in inhibiting IL-17A/A activation. FIG. 1A: efficacy of secukinumab; FIG. 1B-1J: efficacy of compounds of representative Examples.
FIG. 2A-H shows the comparative efficacy of test compounds with the approved anti-IL-17A antibodies secukinumab in inhibiting IL-17A/F activation. FIG. 2A: efficacy of secukinumab; FIG. 2B-2H: efficacy of compounds of representative Examples.
Detailed description
Definition
As used herein, and unless otherwise indicated, the term "alkyl" refers to a saturated straight chain or branched hydrocarbon having a number of carbon atoms as specified herein. Representative saturated straight chain alkyls include -methyl, -ethyl, -n-propyl, -n-butyl, -n-pentyl, and -n-hexyl; while saturated branched alkyls include -isopropyl, -sec-butyl, -isobutyl, -tert-butyl, -isopentyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-methylhexyl, 2, 3-dimethylbutyl, and the like. The term "alkyl" also encompasses cycloalkyl. In certain embodiments, the alkenyl is optionally substituted as described herein elsewhere.
As used herein, and unless otherwise specified, alkenyl refers to a straight chain or branched hydrocarbon having a number of carbon atoms as specified herein and containing one or more double bonds. Exemplary alkenyl carbon chains contain from 2 to 20 carbons and contain 1 to 8 double bonds. Examples of alkenyl groups include, but are not limited to, ethenyl, propen-l-yl, propen-2-yl, allyl, butenyl, and 4-methylbutenyl. In certain embodiments, the alkenyl is optionally substituted as described herein elsewhere.
As used herein, and unless otherwise specified, alkynyl refers to a straight chain or branched hydrocarbon having a number of carbon atoms as specified herein and containing one or more triple bonds. Exemplary alkynyl carbon chains of from 2 to 20 carbons and contain 1 to 8 triple bonds. Exemplary alkynyl groups herein include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, and butynyl. As used herein, lower alkyl, lower alkenyl, and lower alkynyl refer to carbon chains having from about 1 or about 2 carbons up to about 6 carbons.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "carbocyclyl" or “carbocycle” refers to a non-aromatic cyclic ring or ring system containing only carbon atoms in the ring system backbone. When the carbocyclyl is a ring system, two or more rings may be joined together in a fused, bridged or spiro-connected fashion. Carbocyclyls may have any degree of saturation provided that at least one ring in a ring system is not aromatic. Thus, carbocyclyls include cycloalkyls, cycloalkenyls, and cycloalkynyls. The carbocyclyl group may have 3 to 20 carbon atoms, although the present definition also covers the occurrence of the term "carbocyclyl" where no numerical range is designated. The carbocyclyl group may also be a medium size carbocyclyl having 3 to 10 carbon atoms. The carbocyclyl group could also be a carbocyclyl having 3 to 6 carbon atoms. The carbocyclyl group may be designated as "C3-6 carbocyclyl" or similar designations. Examples of carbocyclyl rings include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, adamantyl, and spiro [2.5] octyl.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "cycloalkyl" means a specie of alkyl, which is cyclic and contains from 3 to 9, 3 to 6, or 3 to 5 carbon atoms, without alternating or resonating double bonds between carbon atoms. It may contain from 1 to 4 rings. Examples of unsubstituted cycloalkyls include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, and cyclooctyl. A cycloalkyl may be substituted with one or more substituents. In some embodiments, a cycloalkyl may be a cycloalkyl fused with aryl or heteroaryl groups. Bridged ring systems are also included in the definition of "cycloalkyl" .
As used herein, and unless otherwise specified, the term "heterocycloalkyl" or “heterocyclyl” means a cycloalkyl in which one or more carbon atoms are replaced by heteroatoms such as, but not limited to, N, S, and O. In some embodiments, a heterocycloalkyl group contains from 2 to 8, 2 to 7, 2 to 5, or 2 to 4 carbon atoms. The heterocycloalkyl may be attached to the main structure at a heteroatom or a carbon atom which results in the creation of a stable compound. Exemplary heterocycloalkyl or heterocyclyl include but not limited to morpholinyl, thiomorpholinyl, pyranyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, pyrazolidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothienyl, tetrahydrothiazolyl, piperidinyl, azetidinyl, oxetanyl, piperazinyl.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "aromatic" refers to a ring or ring system having a conjugated pi electron system and includes both carbocyclic aromatic (e.g., phenyl) and heterocyclic aromatic groups (e.g., pyridine) . The term includes monocyclic or  fused-ring polycyclic (i.e., rings which share adjacent pairs of atoms) groups provided that the entire ring system is aromatic.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "aryl" means a carbocyclic aromatic ring containing from 5 to 10 ring atoms. The ring atoms of a carbocyclic aryl group are all carbon atoms. Aryl ring structures include compounds having one or more ring structures such as mono-and bicyclic compounds. Exemplary aryl groups include phenyl and naphthyl.
As used herein, and unless otherwise specified, "heteroaryl" refers to a monocyclic or multicyclic aromatic ring system, in certain embodiments, of about 5 to about 10 members where one or more, in one embodiment 1 to 3, of the atoms in the ring system is a heteroatom, that is, an element other than carbon, including but not limited to, nitrogen, oxygen or sulfur. Examples of monocyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, furanyl, imidazolyl, isothiazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, oxazolyl, pyrazinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, thiadiazolyl, thiazolyl, thienyl, tetrazolyl, triazinyl, and triazolyl. Examples of bicyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, benzofuranyl, benzimidazolyl, benzoisoxazolyl, benzopyranyl, benzothiadiazolyl, benzothiazolyl, benzothienyl, benzotriazolyl, benzoxazolyl, furopyridyl, imidazopyridinyl, imidazothiazolyl, indolizinyl, indolyl, indazolyl, isobenzofuranyl, isobenzothienyl, isoindolyl, isoquinolinyl, isothiazolyl, naphthyridinyl, oxazolopyridinyl, phthalazinyl, pteridinyl, purinyl, pyridopyridyl, pyrrolopyridyl, quinolinyl, quinoxalinyl, quinazolinyl, thiadiazolopyrimidyl, and thienopyridyl. In certain embodiments, the heteroaryl is optionally substituted with one or more substituents as described herein elsewhere.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "alkoxyl" or "alkoxy" refers to a stable straight or branched chain, or cyclic hydrocarbon radical, or combinations thereof, consisting of the stated number of carbon atoms and from one or more, in one embodiment, one to three, O atoms, wherein at least one O atom is at the position where the alkoxyl or alkoxy group is attached to the remainder of the molecule. Examples of alkoxyl include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, sec-butoxy, and tert-butoxy. In one embodiment, the alkoxyl is optionally substituted as described herein elsewhere.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "halogen" refers to F, CI, Br or I. A group which is “halogenated” refers to that one or more hydrogen in that group is/are replaced with halogen.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "methylene" refers to =CH2.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "oxo" is represented by (=O) as an alternative to other common representations.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "deuterium" refers to an isotope of hydrogen that has one proton and one neutron in its nucleus and that has twice the mass of ordinary hydrogen, usually indicated by “D” . A group which is “deuterated” refers to that one or more hydrogen in that group is/are replaced with deuterium (D) .
Where the number of any given substituent is not specified, there may be one or more substituents present.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "pharmaceutically acceptable salt" refers to salts prepared from pharmaceutically acceptable non-toxic acids, including inorganic acids and organic acids. Suitable non-toxic acids include inorganic and organic acids such as, but not limited to, hydrobromic, hydrochloric, acetic, anthranilic, benzenesulfonic, benzoic, camphorsulfonic, citric, ethenesulfonic, formic, fumaric, furoic, gluconic, glutamic, glucuronic, galacturonic, glycidic, isethionic, lactic, maleic, malic, mandelic, methanesulfonic, mucic, nitric, pamoic, pantothenic, phenylacetic, propionic, phosphoric, salicylic, stearic, succinic, sulfanilic,  sulfuric, tartaric, p-toluenesulfonic acid and the like.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "solvate" means a compound that further includes a stoichiometric or non-stoichiometric amount of solvent bound by non-covalent intermolecular forces. Where the solvent is water, the solvate is a hydrate.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "stereoisomer" encompasses all stereomerically pure and stereomerically enriched compounds provided herein.
As used herein, and unless otherwise specified, the term "enantiomer" encompasses all enantiomerically pure and enantiomerically enriched compounds provided herein.
As used herein, and unless otherwise indicated, the term "stereomerically pure" means a composition that comprises one stereoisomer of a compound and is substantially free of other stereoisomers of that compound. For example, a stereomerically pure composition of a compound having one chiral center will be substantially free of the opposite enantiomer of the compound. A stereomerically pure composition of a compound having two chiral centers will be substantially free of other diastereomers of the compound. A typical stereomerically pure compound comprises greater than about 80%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 20%by weight of other stereoisomers of the compound, greater than about 90%> by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 10%by weight of the other stereoisomers of the compound, greater than about 95%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 5%by weight of the other stereoisomers of the compound, greater than about 97%) by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 3%by weight of the other stereoisomers of the compound, greater than about 98%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 2%by weight of the other stereoisomers of the compound or greater than about 99%by weight of one stereoisomer of the compound and less than about 1%by weight of the other stereoisomers of the compound.
As used herein, and unless otherwise indicated, the term "enantiomerically pure" means a stereomerically pure composition of a compound having one chiral center. Similarly, the term "enantiomerically enriched" means a stereomerically enriched composition of a compound having one chiral center.
As used herein, and unless otherwise indicated, the prefixes R and S are used to denote the absolute configuration of the molecule about its chiral center (s) .
As used herein, and unless otherwise indicated, the term "about" or "approximately" means an acceptable error for a particular value as determined by one of ordinary skill in the art, which depends in part on how the value is measured or determined. In certain embodiments, the term "about" or "approximately" means within 1, 2, 3, or 4 standard deviations. In certain embodiments, the term "about" or "approximately" means within 50%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, or 0.05%of a given value or range.
As used herein, and unless otherwise indicated, the term "pharmaceutically acceptable excipient" means a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle, such as a liquid or solid filler, diluent, solvent or encapsulating material. Each carrier must be “acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not injurious to the patient. Some examples of materials which can serve as pharmaceutically acceptable carriers include: sugars, such as lactose, glucose and sucrose; starches, such as corn starch and potato starch; cellulose, and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; powdered tragacanth; malt; gelatin; talc; excipients, such as cocoa butter and suppository waxes; oils, such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil and soybean oil; glycols, such as propylene glycol; polyols, such as  glycerin, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; esters, such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents, such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic saline; Ringer's solution; ethyl alcohol; phosphate buffer solutions; and other non-toxic compatible substances employed in pharmaceutical formulations.
As used herein, and unless otherwise indicated, the terms “subject, ” “individual, ” and “patient” may be used interchangeably and refer to humans, as well as non-human mammals (e.g., non-human primates, canines, equines, felines, porcines, bovines, ungulates, lagomorphs, and the like) . In various embodiments, the subject can be a human (e.g., adult male, adult female, adolescent male, adolescent female, male child, female child) under the care of a physician or other health worker in a hospital, as an outpatient, or other clinical context. In certain embodiments, the subject may not be under the care or prescription of a physician or other health worker.
As used herein, and unless otherwise indicated, the phrase “a subject in need thereof” refers to a subject, as described infra, that suffers from, or is at risk for, a pathology to be prophylactically or therapeutically treated with a compound or salt described herein.
As used herein, and unless otherwise indicated, the terms “administer” , “administered” , “administers” and “administering” are defined as providing a composition to a subject via a route known in the art, including but not limited to intravenous, intraarterial, oral, parenteral, buccal, topical, transdermal, rectal, intramuscular, subcutaneous, intraosseous, transmucosal, or intraperitoneal routes of administration. In certain embodiments, oral routes of administering a composition can be used. The terms “administer” , “administered” , “administers” and “administering” a compound should be understood to mean providing a compound of the invention or a prodrug of a compound of the invention to the individual in need.
As used herein, and unless otherwise indicated, the term “effective amount” or “therapeutically effective amount” refers to that amount of a compound or salt described herein that is sufficient to effect the intended application including but not limited to disease treatment, as defined below. The therapeutically effective amount may vary depending upon the intended application (in vitro or in vivo) , or the subject and disease condition being treated, e.g., the weight and age of the subject, the severity of the disease condition, the manner of administration and the like, which can readily be determined by one of ordinary skill in the art. The term can also apply to a dose that can induce a particular response in target cells, e.g., reduction of proliferation or down regulation of activity of a target protein. The specific dose can vary depending on the particular compounds chosen, the dosing regimen to be followed, whether it is administered in combination with other compounds, timing of administration, the tissue to which it is administered, and the physical delivery system in which it is carried.
As used herein, and unless otherwise indicated, the term “treatment” or “treating” refers to an approach for obtaining beneficial or desired results with respect to a disease, disorder, or medical condition including, but not limited to, a therapeutic benefit and/or a prophylactic benefit. In certain embodiments, treatment or treating involves administering a compound or composition disclosed herein to a subject. A therapeutic benefit may include the eradication or amelioration of the underlying disorder being treated. Also, a therapeutic benefit may be achieved with the eradication or amelioration of one or more of the physiological symptoms associated with the underlying disorder, such as observing an improvement in the subject, notwithstanding that the subject may still be afflicted with the underlying disorder. In certain embodiments, for prophylactic benefit, the compositions are administered to a subject at risk of developing a particular disease, or to a subject reporting one or more of the physiological  symptoms of a disease, even though a diagnosis of this disease may not have been made. Treating can include, for example, reducing, delaying or alleviating the severity of one or more symptoms of the disease or condition, or it can include reducing the frequency with which symptoms of a disease, defect, disorder, or adverse condition, and the like, are experienced by a patient. Treating can be used herein to refer to a method that results in some level of treatment or amelioration of the disease or condition, and can contemplate a range of results directed to that end, including but not restricted to prevention of the condition entirely.
As used herein, and unless otherwise specified, the terms "treat, " "treating" and "treatment" refer to the eradication or amelioration of a disease or condition, or of one or more symptoms associated with the disease or condition. In certain embodiments, the terms refer to minimizing the spread or worsening of the disease or disorder resulting from the administration of one or more prophylactic or therapeutic agents to a subject with such a disease or condition.
As used herein, unless otherwise specified, the term "preventing" refers to the treatment with or administration of a compound provided herein, with or without other additional active compound, prior to the onset of symptoms, particularly to patients at risk of the disease or condition described herein. The term "prevention" includes the inhibition or reduction of a symptom of the particular disease. Patients with familial history of a disease in particular are candidates for preventive regimens in certain embodiments. In addition, patients who have a history of recurring symptoms are also potential candidates for the prevention. In this regard, the term "prevention" may be interchangeably used with the term "prophylactic treatment. "
It should be noted that if there is a discrepancy between a depicted structure and a name given to that structure, the depicted structure is to be accorded more weight. In addition, if the stereochemistry of a structure or a portion of a structure is not indicated with, for example, bold or dashed lines, the structure or portion of the structure is to be interpreted as encompassing all stereoisomers of it.
Examples
Certain embodiments of the claimed subject matter are illustrated by the following non-limiting examples.
The disclosed compounds can generally be synthesized by the following general procedure or by an appropriate combination of generally well-known synthetic methods. Techniques useful in synthesizing these compounds are both readily apparent and accessible to those of skill in the relevant art, based on the instant disclosure. Many of the optionally substituted starting compounds and other reactants are commercially available or can be readily prepared by those skilled in the art using commonly employed synthetic method.
The example below is to illustrate certain methods for making the disclosed compounds and is not intended to limit the scope of reactions or reaction sequences that can be used in preparing the compounds provided herein.
General procedure for preparation of the claimed inhibitors is as shown below.
Scheme 1
Scheme 2
Example 1. Synthesis of N- ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxo ethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of K2CO3 (24.13 g, 175 mmol) in water (300 mL) was added a suspension of methyl (2S) -2-amino-2- (4-hydroxyphenyl) acetate hydrochloride (19 g, 87.3 mmol) in dioxane (150 mL) . Then (Boc) 2O (21.91 g, 100.3 mmol) was added at 0℃ and the reaction mixture was stirred at RT for 16 h. It was diluted with water (100 mL) and extracted with ethyl acetate (200 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (200 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 3/2, v/v) to afford methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-hydroxyphenyl) acetate (20 g, 71.1 mmol, yield: 81.4%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 304.2 [M+Na] +.
Step 2: To a solution of methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-hydroxyphenyl) acetate (6.8 g, 24.2 mmol) in Acetic acid (45 mL) was added Platinum dioxide (0.82 g, 3.6 mmol) . The reaction mixture was stirred at 50 ℃ for 2 days under hydrogen at 0.3 Mpa. Then the mixture was filtered and the filtrate was concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 2/1, v/v) to afford methyl  (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-hydroxycyclohexyl) acetate (4.4 g, 15.3 mmol, yield: 63.2%) as a light yellow solid. MS (ESI) m/z = 310.3 [M+Na] +.
Step 3: To a solution of Oxalyl chloride (2.74 g, 21.6 mmol) in DCM (20 mL) was added a solution of dimethyl sulfoxide (3.38 g, 43.2 mmol) in DCM (5 mL) at -78℃ and the mixture was stirred at -78℃ for 5-10 min. Then methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-hydroxycyclohexyl) acetate (3.1 g, 10.8 mmol) in DCM (5 mL) was added slowly and the final mixture was stirred at -78℃ for 1 h. The reaction was quenched with Et3N. Then the mixture was diluted with water (50 mL) and adjusted to pH = 3 with 1N HCl. It was extracted with DCM (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 3/2, v/v) to afford methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-oxocyclohexyl) acetate (2.1 g, 7.4 mmol, yield: 68.5%) as a light yellow oil. MS (ESI) m/z = 308.0 [M+Na] +.
Step 4: To a solution of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4-oxocyclohexyl) acetate (2.1 g, 7.4 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (1.72 g, 8.8 mmol) in DMF (16 mL) was added a solution of t-BuOK (1.49 g, 13.3 mmol) in DMF (4 mL) at -50 ℃ under nitrogen. Then the mixture was stirred at rt for 2 h. It was diluted with water (200 mL) and extracted with ethyl acetate (100 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (150 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/1, v/v) to afford methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetate (1.5 g, 4.7 mmol, yield: 63.5%) as a light yellow oil. MS (ESI) m/z = 342.1 [M+Na] +.
Step 5: To a solution of methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetate (400 mg, 1.25 mmol) in THF/water=1: 1 (10 mL) was added LiOH·H2O (79 mg, 1.88 mmol) . The mixture was stirred at rt overnight. Then the mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EA (20 mL) . Then the aqueous was adjusted to pH = 3 with 1N HCl. It was extracted with EA (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (30 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the product (400 mg, crude) as a colorless oil. It was used to next step directly. MS (ESI) m/z = 327.9 [M+Na] +.
Step 6: The mixture of methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetate (150 mg, 0.49 mmol) , N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (172 mg, 0.49 mmol) , HATU (280 mg, 0.74 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (127 mg, 0.98 mmol) in THF (6 mL) was stirred at rt overnight. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: DCM/MeOH = 8%, v/v) to afford tert-butyl ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (90 mg, 0.14 mmol, yield: 28.7%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 638.3 [M+H] +.
Step 7: To a solution of tert-butyl ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (90 mg, 0.141 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (1 mL) . The mixture was stirred at rt for 2 h. Then concentrated under vacuum to afford the crude product  N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1 - (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (110 mg, crude) . It was used to next step without further purification. MS (ESI) m/z = 538.3 [M+H] +.
Step 8: The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (110 mg, 0.205 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (29 mg, 0.205 mmol) , HATU (124 mg, 0.327 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (106 mg, 0.818 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at rt for 1 h. It was diluted with water (50 mL) and extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (30 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/1, v/v) to afford to get the Example 1 (13 mg, 0.020 mmol, yield: 9.6%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ7.80 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.47 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.14 –7.03 (m, 2H) , 6.84 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 4.91 (d, J = 10.4 Hz, 1H) , 4.56 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 4.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.53 -3.43 (m, 1H) , 3.40 (t, J = 4.9 Hz, 1H) , 3.22 -3.09 (m, 2H) , 2.55 -2.45 (m, 2H) , 2.37 –2.29 (m, 2H) , 2.28 -2.18 (m, 2H) , 2.10 (s, 3H) , 2.06 –1.93 (m, 2H) , 1.89 –1.82 (m, 3H) , 1.65 (dt, J = 10.9, 5.5 Hz, 1H) , 1.35 (t, J = 7.2 Hz, 3H) , 1.31 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 1.29 -1.14 (m, 4H) , 1.10 (t, J = 7.6 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 660.3 [M+H] +.
Example 2. Synthesis of N- ( (S) -2- ( (3-chloro-2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -1-cycloheptyl-2-oxoethyl) -1-ethyl-1H -pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of 4-bromo-3-chloro-2-fluoroaniline (12 g, 53.8 mmol) in toluene (100 mL) was added m-CPBA (43.5 g, 180 mmol) . The mixture was stirred at 50℃ for 16 hrs. After cooling, DCM (100 mL) was added and the mixture was filtered. The filtrate was washed with a 10%aqueous NaS2SO3 and purified by flash (PE: EtOAc =0～100%) to get 1-bromo-2-chloro-3-fluoro-4-nitrobenzene (5.3 g, 20.94 mmol, yield: 38.9%) as a yellow solid. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.88 (dd, J = 9.0, 7.2 Hz, 1H) , 7.62 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 1H) .
Step 2 : A mixture of 1-bromo-2-chloro-3-fluoro-4-nitrobenzene (5.3 g, 20.8 mmol) , tributyl (1-ethoxyethenyl) stannane (7.89 g, 21.8 mmol) and PdCl2 (PPh3) 2 (1.46 g, 2 mmol) in dioxane (100 mL) was stirred at 100℃ for 16 hrs under N2. The mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc=0-2%) to give 2-chloro-1- (1-ethoxyethenyl) -3-fluoro-4-nitrobenzene (3.78 g, 15.4 mmol, yield: 74%) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, ) δ7.91 (dd, J = 8.7, 6.9 Hz, 1H) , 7.36 (dd, J = 8.7, 1.8 Hz, 1H) , 4.53 (d, J = 3.0 Hz, 1H) , 4.46 (d, J = 3.0 Hz, 1H) , 3.96 –3.88 (m, 2H) , 1.38 (t, J = 7.0 Hz, 3H) .
Step 3: To a solution of 2-chloro-1- (1-ethoxyethenyl) -3-fluoro-4-nitrobenzene (3.78 g, 15.4 mmol) in THF (50 mL) was added conc. HCl (5 mL) . The mixture was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatograph (PE/EtOAc=0-8%) to give 1- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (2.1 g, 9.67 mmol, yield: 62.7%) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (dd, J = 8.6, 6.5 Hz, 1H) , 7.43 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H) , 2.68 (s, 3H) .
Step 4: To a solution of 1- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (2.1 g, 9.7 mmol) in MeOH (50 mL) was added NaBH4 (0.4 g, 10.6 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at 0℃ for 1 h. The reaction was quenched by ice-water, extracted with EA (50 mLX3) . The combined organic layers were washed with brine (50 mL) and dried over Na2SO4, then concentrated under vacuum to give 1- (2-chloro-5-fluoro -4-nitrophenyl) ethanol (2 g, 9.1 mmol, yield: 93.8%) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (dd, J = 8.7, 7.0 Hz, 1H) , 7.63 (dd, J = 8.8, 1.4 Hz, 1H) , 5.32 (q, J = 6.4 Hz, 1H) , 2.01 (s, 1H) , 1.51 (d, J = 6.4 Hz, 3H)
Step 5: To a solution of 1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethanol (2 g, 9.1 mmol) in DCM (50 mL) was added PPh3 (2.86 g, 10.9 mmol) and CBr4 (3.62 g, 10.9 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at rt for 4 hrs. The mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc=0-10%) to give 1- (1-bromoethyl) -2-chloro-3-fluoro-4-nitrobenzene (2 g, 7.1 mmol, yield: 78%) . As a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (dd, J = 8.9, 7.1 Hz, 1H) , 7.59 (dd, J = 8.9, 1.9 Hz, 1H) , 5.53 (q, J = 6.9 Hz, 1H) , 2.04 (d, J = 7.0 Hz, 3H) .
Step 6: To a solution of 1- { [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2-yl] carbonyl} -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nickelacyclononan-4-one (2.2 g, 4.4 mmol) in DMF (30 mL) was added NaOH (1.7 g, 44.2 mmol) . Then a solution of 1- (1-bromoethyl) -2-chloro-3-fluoro-4-nitrobenzene (1.87 g, 6.62 mmol) dissolved in DMF (5 mL) was added under N2, the mixture was stirred at rt for 20 min. The mixture was quenched by ice water (200 mL) , then extracted with EA (80 mL*3) , the combined organic layer was washed by brine (50 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (PE: EA=0～100%) to get the product (1.4 g, 2.0 mmol, yield: 45%) as a red solid. MS (ESI) m/z = 699.0 [M+H] +.
Step 7: A mixture of 1- { [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2 -yl] carbonyl} -5 - [ (1S) -1- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) ethyl] -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nicke lacyclononan-4-one (1.4 g, 2 mmol) in 3N HCL/MeOH=1: 1 (14 mL) was stirred at 70℃ for 30 min. Then the mixture was diluted with H2O (40 mL) , washed by DCM (10 mL*3) . The liquid layer was added Na2CO3 to adjust PH = 10, then added THF (20 mL) , Boc2O (4.37 g, 20 mmol) . The mixture was further stirred at rt for 16 h. The mixture was diluted with DCM (100 mL) , washed by water (50 mL*3) . The combined liquid layer was acidified by 1 N HCl to pH=3, washed by DCM (50 mL*3) , the combined organic layer was concentrated to get (2R, 3S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3 - (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (550 mg, 1.3 mmol, yield: 65%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 399.0 [M+Na] +.
Step 8: The mixture of (2R, 3S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3 - (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (550 mg, 1.46 mmol) , 1-methylpiperazine (161 mg, 1.61 mmol) , 1-Hydroxybenzotrizole (256 mg, 1.90 mmol) , N- (3-dimethylaminopropyl) -N’-ethylcarbodiimide hydrochloride (364 mg, 1.90 mmol) and NMM (295 mg, 2.92 mmol) in THF (10 mL) was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by flash (DCM: MA=0～5%) to get tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (580 mg, 1.2 mmol, yield: 82%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 449.0 [M+H] +.
Step 9: A mixture of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (180 mg, 0.39 mmol) in 1, 4-dioxane/HCl (4 M, 4 mL) and DCM (2 mL) was stirred at rt for 3 hrs. The mixture was concentrated to get (2R, 3S) -2-amino-3- (2-chloro-3-fluoro -4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (190 mg, 0.37 mmol, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 359.1 [M+H] +.
Step 10: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (2-chloro-3-fluoro -4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (190 mg, 0.53 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (274 mg, 2.12 mmol) in DCM (6 mL) was added propanoyl chloride (49 mg, 0.53 mmol) at rt and the mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was diluted with DCM (40 mL) , washed by water (20 mL) , brine (10 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (DCM: MA=0～10%) to get N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-3-fluoro -4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (220 mg, 0.47 mmol, yield: 90%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 415.1 [M+H] +.
Step 11: To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (160 mg, 0.38 mmol) in EtOH (3 mL) was added Raney Nickel (0.5 mL) , followed by Hydrazine hydrate (0.5 mL) . The mixture was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was filtered and the filtrate was concentrated under vacuum to give N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2-chloro-3-fluorophenyl) -1- (4 -methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (150 mg, 0.27 mmol, yield: 70%) as a brown oil. MS (ESI) m/z =385.1 [M+H] +.
Step 12: To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2-chloro-3-fluorophenyl) -1- (4 -methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (130 mg, 0.34 mmol) , (S) -cycloheptyl [ (2-ethylpyrazol-3-yl) formamido] acetic acid (92 mg, 0.34 mmol) in aceonitrile (6 mL) were added pyridine (53 mg, 0.67 mmol) and T3P in EA (215 mg, 0.67 mmol, 50%) at 0℃. The reaction mixture was stirred at 50℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with EA (30 mL) , washed by water (10 mL*3) , brine (10 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (DCM: MA=0～10%) to get of tert-butyl N- [ (S) - ( {3-chloro-2-fluoro -4- [ (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl} carbamoyl) (cycloheptyl) methyl] carbamate (60 mg, 0.056 mmol, yield: 16%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 586.4 [M+H] +.
Step 13: A mixture of tert-butyl N- [ (S) - ( {3-chloro-2-fluoro -4- [ (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl} carbamoyl) (cycloheptyl) methyl] carbamate (60 mg, 0.094 mmol) in TFA (1 mL) and DCM (1 mL) was stirred at rt for 1 h. The mixture was concentrated to get the crude product (55 mg, 0.092 mmol, crude) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 538.3 [M+H] +.
Step 14: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino -2-cycloheptylacetamido] -2 -chloro-3-fluorophenyl} -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (55 mg, 0.10 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (29 mg, 0.20 mmol) , HATU (78 mg, 0.20 mmol) , DIEA (106 mg, 0.82 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with EA (40 mL) , washed by water (15 mL*3) , brine (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by Prep-TLC (DCM: MeOH =10%) to get to get the Example 2 (9.1 mg, 0.013 mmol, yield: 13%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.72 (dd, J = 8.5, 7.6 Hz, 1H) , 7.39 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.13 (dd, J = 8.7, 1.7 Hz, 1H) , 6.75 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 5.12 (d, J = 9.3 Hz, 1H) , 4.53 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.46 –4.40 (m, 2H) , 3.72 –3.61 (m, 1H) , 3.58 –3.50 (m,  2H) , 3.45 –3.23 (m, 2H) , 2.45 –2.30 (m, 2H) , 2.18 –2.11 (m, 5H) , 2.10 –2.02 (m, 3H) , 1.78 –1.62 (m, 4H) , 1.56 –1.36 (m, 8H) , 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H) , 1.18 (d, J = 4.2 Hz, 3H) , 1.00 (t, J =7.6 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 660.8 [M+H] +.
Example 3. Synthesis of N- ( (S) -2- ( (5-chloro-2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -1-cycloheptyl-2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-p yrazole-5-carboxamide
Step 1: A mixture of 1-bromo-2-chloro-5-fluoro-4-nitrobenzene (8 g, 31.4 mmol) , tributyl (1-ethoxyethenyl) stannane (11.91 g, 32.9 mmol) and PdCl2 (PPh3) 2 (2.2 g, 3.1 mmol) in dioxane (100 mL) was stirred at 100℃ for 16 hrs under N2. The mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc=0-1%) to give 1-chloro-2- (1-ethoxyvinyl) -4-fluoro-5-nitrobenzene (4.8 g, 19.5 mmol, yield: 62.1%) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 7.42 (d, J = 11.1 Hz, 1H) , 4.58-4.54 (m, 2H) , 3.93 (q, J = 7.0 Hz, 2H) , 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H) .
Step 2 : To a solution of 1-chloro-2- (1-ethoxyethenyl) -4-fluoro-5-nitrobenzene (4.8 g, 19.5 mmol) in dioxane (25 mL) was added HCl /1, 4-dioxane (4 M, 25 mL) . The mixture was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was concentrated under vacuum, purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc=0-6.8%) to give 1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (3.5 g, 16.1 mmol, yield: 82.5%) as a yellow solid. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 10.2 Hz, 1H) , 2.68 (s, 3H) .
Step 3: To a solution of 1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (3.5 g, 16.1 mmol) in MeOH (50 mL) was added NaBH4 (670 mg, 17.7 mmol) and the mixture was stirred at 0 ℃ for 2 hrs. The mixture was quenched with ice-water and extracted with EtOAc (50 mLx3) . The combined organic layers were washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated under vacuum to give 1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethanol (3.4 g, 15.5 mmol, yield: 96.2%) as a brown oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (d, J = 6.6 Hz, 1H) , 7.64 (d, J = 11.6 Hz, 1H) , 5.36 -5.20 (m, 1H) , 2.17 (d, J = 3.6 Hz, 1H) , 1.50 (d, J = 6.4 Hz, 3H) .
Step 4: To a solution of 1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethanol (3.4 g, 15.5 mmol) in DCM (50 mL) were added PPh3 (4.88 g, 18.6 mmol) and CBr4 (6.17 g, 18.6 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc=0-2%) to give 1- (1-bromoethyl) -2-chloro-5-fluoro-4-nitrobenzene (3.3 g, 11.7 mmol, yield: 75.4%) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 7.59 (d, J = 11.4 Hz, 1H) , 5.49 (qd, J = 6.9, 1.2 Hz, 1H) , 2.03 (d, J =6.9 Hz, 3H) .
Step 5: To a solution of 1- { [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2-yl] carbonyl} -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nickelacyclononan-4-one (2 g, 4 mmol) in DMF (30 mL) was added NaOH (1.6 g, 40 mmol) . Then a solution of 1- (1-bromoethyl) -2-chloro-5-fluoro-4-nitrobenzene (3.39 g, 12 mmol) dissolved in DMF (5 mL) was added under N2, the mixture was stirred at 0℃ for 20 mins. The mixture was quenched by ice water (100 mL) , then extracted with EA (50 mL*3) , the combined organic layers were washed with brine (50 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (PE: EA=0～100%) to get 1- { [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2-yl] carbonyl} -5- [ (1S) -1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethyl] -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nickelacyclononan-4-one (0.69 g, 0.98 mmol, yield: 24.5%) as a red solid. MS (ESI) m/z = 699.0, 701.0 [M+H] +.
Step 6: To a solution of 1- { [ (2R) -1-benzylpyrrolidin-2-yl] carbonyl} -5- [ (1S) -1- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) ethyl] -7-phenyl-5H-benzo [d] 1-oxa-3, 7-diaza-2-nickelacyclononan-4-one (600 mg, 0.85 mmol) in MeOH (10 mL) was added 3 N HCl (10 mL) and the mixture was stirred at 70℃ for 1 hr. When the red color of the Ni (II) complex had disappeared, the mixture was evaporated to dryness under vacuum. H2O (10 mL) was added, and the resultant mixture was treated with an excess of NH4OH and extracted with DCM. The aqueous phase was evaporated under vacuum and purified by Prep-HPLC (20-70, 0.1%FA) to give the desired product (110 mg, 0.40 mmol, yield: 46.3%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 277.1, 279.1 [M+H] +.
Step 7: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid  (110 mg, 0.39 mmol) in dioxane/water=1: 1 (10 mL) were added NaHCO3 (334 mg, 3.9 mmol) and (Boc) 2O (434 mg, 2mmol) . The mixture was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc, washed by water (20 mL*3) . The combined aqueous larer was acided by 1 N HCl to PH=6, extracted with DCM (20 mL*3) , the combined organic layers were concentrated to get 2R, 3S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (150 mg, 0.39 mmol, yield: 100%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 399.1 [M+Na] +.
Step 8: The mixture of (2R, 3S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3- (2-chloro-5-fluoro -4-nitrophenyl) butanoic acid (160 mg, 0.42 mmol) , 1-methylpiperazine (42.54 mg, 0.42 mmol) , HOBt (114.77 mg, 0.84 mmol) , EDCI (162.83 mg, 0.84 mmol) and NMM (128.88 mg, 1.27 mmol) in THF (10 mL) was stirred at rt for 3 hrs. The mixture was concentrated and purified by flash (DCM: MeOH=0～5%) to get tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbam (150 mg, 0.33 mmol, yield: 76.9%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z =459.1 [M+H] +.
Step 9: To a solution of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (150 mg, 0.32 mmol) in DCM (5 mL) was added HCl in dioxane (4 M, 5 mL) . The mixture was stirred at rt for 4 h. The mixture was concentrated under vacuum to give 2R, 3S) -2-amino-3- (2-chloro 5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (130 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 359.0 [M+H] +.
Step 10: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (130 mg, 0.33 mmol) in DCM (10 mL) were added DIPEA (234 mg, 1.8 mmol) and propanoyl chloride (30.5 mg, 0.33 mmol) . The reaction mixture was stirred at rt for 0.5 h. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with DCM (20 Ml*3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (CH2Cl2/MeOH=0-7%) to give N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] pro panamide (110 mg, 0.27 mmol, yield: 73.2%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 415.1 [M+H] +.
Step 11: To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (2-chloro-5-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (100 mg, 0.24 mmol) in EtOH (5 mL) were added Raney Nickel (1.5 mL) , followed by Hydrazine hydrate (1.5 mL) . The mixture was stirred at rt for 5 hrs. The mixture was filtered and the filtrate was concentrated under vacuum to give N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2-chloro-5-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] pr opanamide (90 mg, 0.23 mmol, yield: 97%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z =385.1 [M+H] +.
Step 12: To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2 -chloro-5-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (75 mg, 0.19 mmol) , (S) -cycloheptyl [ (2-ethylpyrazol-3-yl) formamido] acetic acid (106 mg, 0.39 mmol) in aceonitrile (4 mL) was added pyridine (31 mg, 0.39 mmol) and T3P in EA (124 mg, 0.39 mmol, 50%) at 0℃. The reaction mixture was stirred at 50℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with EA (20 mLx3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Prep-TLC (DCM/MeOH=0-10%) to give tert-butyl N- [ (S) - ( {5-chloro-2-fluoro-4- [ (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl} carbamoyl) (cycloheptyl) methyl] carbamate (9 mg, 0.01 mmol, yield: 5%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 638.3 [M+H] +.
Step 13: A mixture of tert-butyl N- [ (S) - ( {5-chloro-2-fluoro-4- [ (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl} carbamoyl) (cycloheptyl) meth yl] carbamate (15 mg, 0.0235 mmol) in TFA (1 mL) and DCM (1 mL) was stirred at rt for 1 h. The mixture was concentrated to get N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino -2-cycloheptylacetamido] -2-chloro-5-fluorophenyl} -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] pr opanamide (20 mg, crude) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 538.2 [M+H] +.
Step 14: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino -2-cycloheptylacetamido] -2-chloro-5-fluorophenyl} -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (20 mg, 0.037 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (10 mg, 0.074 mmol) , HATU (28 mg, 0.074 mmol) , DIEA (38 mg, 0.30 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with EA (40 mL) , washed by water (15 mL*3) , brine (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by Prep-HPLC (-Gemini-C18 150 x 21.2 mm, 5um: ACN--H2O (0.1%FA) 15-45) to get to get the Example 3 (2.9 mg, 0.0038 mmol, yield: 10.4%, di formate) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.39 (s, 2H) , 7.95 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.21 (d, J = 11.8 Hz, 1H) , 6.76 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 5.11 (d, J =8.7 Hz, 1H) , 4.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 4.48 –4.40 (m, 2H) , 3.67 -3.61 (m, 1H) , 3.59 -3.53 (m, 2H) , 3.44-3.31 (m, 2H) , 2.45 –2.31 (m, 2H) , 2.17 (s, 3H) , 2.15 –2.07 (m, 5H) , 1.77 –1.62 (m, 4H) , 1.54 –1.39 (m, 8H) , 1.29 (d, J = 7.2 Hz, 3H) , 1.20 (s, 3H) , 1.00 (t, J = 7.6 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 660.2 [M+H] +.
Example 4. Synthesis of N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (2, 3-difluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide

Step 1: The mixture of 1-bromo-2, 3-difluoro-4-nitrobenzene (4.5 g, 18.9 mmol) , tributyl (1-ethoxyvinyl) stannane (8.19 g, 22.6 mmol) and Bis (triphenylphosphine) palladium (II) chloride (0.93 g, 1.3 mmol) in dioxane (100 mL) was stirred at 100℃ overnight under argon. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 10: 1, v/v) to afford the compound 1- (1-ethoxyvinyl) -2, 3-difluoro-4-nitrobenzene (3.6 g, 71.1 mmol, yield: 81.4%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 230.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of 1- (1-ethoxyethenyl) -2, 3-difluoro-4-nitrobenzene (3.6 g, 15.7 mmol) in dioxane (20 mL) was added 4 M HCl/dioxane (20 mL) . The mixture was stirred at rt overnight. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 10: 1, v/v) to afford the compound 1- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) ethan-1-one (2.3 g, 11.4 mmol, yield: 72.6%) as a yellow solid. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.94 –7.86 (m, 1H) , 7.77 (ddd, J = 8.8, 6.3, 2.2 Hz, 1H) , 2.72 (d, J = 4.7 Hz, 3H) .
Step 3: To a solution of 1- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) ethanone (2.3 g, 11.4 mmol) in MeOH (30 mL) was added sodium borohydride (0.47 g, 12.5 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at rt for 1.5 hrs. It was quenched with ice-water (100 mL) and extracted with ethyl acetate (70 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (80 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the compound 1- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) ethan-1-ol (2.2 g, 10.8 mmol, yield: 94.7%) as a brown oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.89 (ddd, J = 8.7, 6.5, 2.1 Hz, 1H) , 7.59 –7.42 (m, 1H) , 5.28 (q, J =6.5 Hz, 1H) , 1.55 (d, J = 6.5 Hz, 3H) .
Step 4: To a solution of 1- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) ethanol (2.2 g, 10.8 mmol) in DCM (40 mL) was added triphenylphosphine (3.4 g, 12.9 mmol) and Tetrabromomethane (4.3 g, 12.9 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at rt for 2 h. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 20: 1, v/v) to afford the compound 1- (1-bromoethyl) -2, 3-difluoro-4-nitrobenzene (2.4 g, 9.0 mmol, yield: 83.3%) as a pale yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.89 (ddd, J = 8.8, 6.6, 2.1 Hz, 1H) , 7.46 (ddd, J = 8.8, 6.4, 2.1 Hz, 1H) , 5.40 (q, J = 7.0 Hz, 1H) , 2.06 (d, J = 7.0 Hz, 3H) .
Step 5: Powdered sodium hydroxide (0.8 g, 20 mmol) was added to a solution of (SP-4-4) - [N- [Phenyl [2- [ [ [ (1R, 2S) -1- (phenylmethyl) -2-pyrrolidinyl-κN] carbonyl] amino-κN] phen yl] methylene] glycinato (2-) -κN, κO] nickel (2.5 g, 5 mmol) in DMF (24 mL) under stirring. Then, 1- (1-bromoethyl) -2, 3-difluoro-4-nitrobenzene (2.2 g, 8.5 mmol) dissolved in DMF (6 mL) was added to the solution. The mixture was stirred under nitrogen and the reaction progress was monitored by TLC. The mixture was diluted with 0.3 N HCl (300 mL) , extracted with EA (100 mLx3) . The combined organic layers were washed with brine (150 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum, purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 1: 2, v/v) to afford the compound 8 (1.2 g, 1.8 mmol, yield: 36.0%) as a dark-red solid. MS (ESI) m/z = 683.1 [M+H] +.
Step 6 and Step 7: To a solution of compound 8 (1200 mg, 1.76 mmol) in MeOH (15 mL) was added 3 M HCl/MeOH=1: 1 (15 mL) and the mixture was stirred at 70℃ for 15 min. The mixture was diluted with water (50 mL) , washed by DCM (30 mL*3) . The water phase was added Na2CO3 to adjust pH = 10, added THF (40 mL) , Boc2O (3833 mg, 17.56 mmol) . The mixture was further stirred at rt for 16 h. The mixture was diluted with EA (80 mL) , washed by water (50 mL*3) . The combined liquid layer was acidified by 1 N HCl to pH=3, washed by EA (20 mL*3) , the combined organic layer was concentrated to get the crude product (400 mg, 1.11 mmol, yield: 63.2%) as a colorless oil. It was used to next step without further purification. MS (ESI) m/z = 383.0 [M+Na] +.
Step 8: The mixture of (2R, 3S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3- (2, 3-difluoro -4-nitrophenyl) butanoic acid (270 mg, 0.75 mmol) , 1-methylpiperazine (83mg, 0.82 mmol) , HOBT (132 mg, 0.97 mmol) , EDCI (187 mg, 0.97 mmol) and NMM (152 mg, 1.50 mmol) in THF (8 mL) was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by flash (DCM: MeOH=0～5%) to get the product (250 mg, 0.53 mmol, yield: 71.6%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z =443.2 [M+H] +.
Step 9: A mixture of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) -1- (4 -methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (250 mg, 0.565 mmol) in DCM (5 mL) and HCl in dioxane (4 M, 5 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated to get the crude product (240 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 342.9 [M+H] +.
Step 10: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) butan-1-one (240 mg, 0.70 mmol) and DIEA (362 mg, 2.80 mmol) in DCM (5 mL) was added propanoyl chloride (65 mg, 0.70 mmol) at rt and the mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with DCM (40 mL) , washed by water (10 mL) , brine (10 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (DCM: MeOH=0～10%) to get the product (150 mg, 0.36 mmol, yield: 51.0%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 399.1 [M+H] +.
Step 11: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (2, 3-difluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (150 mg, 0.38 mmol) , Pd/C (30 mg) in THF (10 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was filtered through celite, and  concentrated, then purified by flash (DCM: MeOH=0-5%) to get the product (100 mg, 0.26 mmol, yield: 68.5%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z =369.2 [M+H] +.
Step 12: To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-2, 3-difluorophenyl) -1- (4 -methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propenamide (75 mg, 0.20 mmol) , (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (cycloheptyl) acetic acid (110 mg, 0.40 mmol) in ACN (4 mL) was added pyridine (32 mg, 0.4072 mmol) and T3P in EA (259 mg, 0.40 mmol, 50%wt) at 0℃. The reaction mixture was stirred at 50℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (50 mL) , extracted with EA (20 mL*3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Prep-TLC (DCM/MeOH=10%) to give the product. (12 mg, 0.017 mmol, yield: 8.5%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 622.3 [M+H] +.
Step 13: A mixture of tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( {2, 3-difluoro-4- [ (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl} carbamoyl) methyl] carbamate (12 mg, 0.019 mmol) in TFA (0.2 mL) /DCM (0.1 mL) was stirred at 25℃ for 1 h. The mixture was concentrated to get the product (15 mg, crude) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 522.3 [M+H] +.
Step 14: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -2, 3-difluorophenyl} -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (15 mg, 0.0288 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (4 mg, 0.0288 mmol) , HATU (22 mg, 0.0576 mmol) , DIEA (30 mg, 0.23 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by Prep-TLC (DCM: MeOH=10%) to get the to get the Example 4 (5.2 mg, 0.0073 mmol, yield: 25.3%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ –7.50 -7.45 (m, 1H) , 7.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.04 -7.00 (m, 1H) , 6.75 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 5.04 (d, J = 9.7 Hz, 1H) , 4.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.43 (q, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.56 –3.28 (m, 5H) , 2.56 –2.36 (m, 2H) , 2.23 (s, 3H) , 2.19 –2.05 (m, 5H) , 1.77 –1.60 (m, 4H) , 1.55 –1.37 (m, 8H) , 1.27 -1.22 (m, 6H) , 1.02 (t, J = 7.6 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 644.2 [M+H] +.
Example 5 and Example 6. Synthesis of N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- ( (1S, 6R) -5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide and N- ( (S) -1-cyclo-heptyl-2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- ( (1R, 6S) -5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl) -4-ox o-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of tert-butyl 2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptane-2-carboxylate (900 mg, 4.54 mmol) and HCHO (735 mg, 9.08 mmol, 37%content) in MeOH (15 mL) was added AcOH (27 mg, 0.45 mmol) at 0℃ and the mixture was stirred at 0℃ for 20 min. Then Sodium cyanoborohydride (571 mg, 9.08 mmol) was added at 0℃ and the final mixture was stirred at rt overnight. The reaction mixture was quenched with ice water (30 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford compound tert-butyl 5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptane-2-carboxylate (800 mg, 3.77 mmol, yield: 83.0%) as a colorless oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.80 –3.57 (m, 1H) , 3.07 –2.83 (m, 2H) , 2.71 –2.60 (m, 1H) , 2.57 –2.46 (m, 1H) , 2.43 (s, 3H) , 2.21 -2.12 (m, 1H) , 1.49 (s, 9 H) , 0.66 –0.48 (m, 2H) . MS (ESI) m/z = 213.2 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptane -2-carboxylate (800 mg, 3.77 mmol) in DCM (10 mL) was added 4N HCl in dioxane (6 mL) . The mixture was stirred at rt overnight. Then the mixture was concentrated under vacuum to get compound 2-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptane (750 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 113.1 [M+H] +.
Step 3: The mixture of 2-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptane (357 mg, 1.93 mmol) ,  (2R, 3S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (330 mg, 0.96 mmol) , 1-Hydroxybenzotrizole (195 mg, 1.45 mmol) , N- (3-dimethylaminopropyl) -N’-ethylcarbodiimide hydrochloride (277 mg, 1.45 mmol) and NMM (488 mg, 4.82 mmol) in THF (12 mL) was stirred at rt for 3 hrs then concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: dichloromethane /methanol, 25/1, v/v) to afford compound tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (350 mg, 0.80 mmol, yield: 83.2%) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 437.1 [M+H] +.
Step 4: To a solution of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (350 mg, 0.80 mmol) in DCM (5 mL) was added 4 N HCl/dioxane (5 mL) . The mixture was stirred at rt overnight. Then the mixture was concentrated under vacuum to afford compound (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- {5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} butan-1-one (350 mg, crude) as a pale yellow solid. It was used to next step without any further purification. MS (ESI) m/z =337.1 [M+H] +.
Step 5: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- {5-methyl-2, 5 -diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} butan-1-one (350 mg, 1.04 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (672 mg, 5.20 mmol) in DCM (10 mL) was added propanoyl chloride (116 mg, 1.25 mmol) and the mixture was stirred at rt for 2 hrs then concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: dichloromethane/methanol, 25/1, v/v) to afford compound N- [ (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- {5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -1-oxobu tan-2-yl] propanamide (350 mg, 0.89 mmol, yield: 85.7%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z =393.1 [M+H] +.
Step 6: To a solution of N- [ (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1- {5-methyl -2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -1-oxobutan-2-yl] propanamide (350 mg, 0.89 mmol) in EA/THF=1/1 (10 mL) was added Palladium/Carbon (70 mg) and the mixture was stirred at 30℃overnight. Then the mixture was filtered through celite. The filtrate was concentrated under vacuum to afford product N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- {5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -1-oxobutan-2-yl] propanamide (360 mg, crude) as a pale brown oil. MS (ESI) m/z = 363.1 [M+H] +.
Step 7: The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- {5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -1-oxobutan-2-yl] propanamide (360 mg, 0.99 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (539 mg, 1.99 mmol) , N, N, N’, N’-Tetramethyl-O- (7-azabenzotriazol-1-yl) uronium (755 mg, 1.99 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (1027 mmol, 7.95 mmol) in DMF (15 mL) was stirred at 30℃overnight. It was diluted with water (150 mL) and extracted with ethyl acetate (80 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: dichloromethane /methanol, 15/1, v/v) to afford compound tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( {2-fluoro-4- [ (2S, 3R) -4- {5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -4-oxo -3-propanamidobutan-2-yl] phenyl} carbamoyl) methyl] carbamate (210 mg, 0.34 mmol, yield: 34.3%) as a brown solid. MS (ESI) m/z = 616.3 [M+H] +.
Step 8: To a solution of tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( {2-fluoro-4- [ (2S, 3R) -4- {5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] phenyl} carba moyl) methyl] carbamate (210 mg, 0.34 mmol) in DCM (3 mL) was added TFA (2 mL) and the  mixture was stirred at rt for 1.5 hrs. then concentrated under vacuum to afford compound N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -3-fluorophenyl} -1- {5-methyl-2, 5-diaza bicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -1-oxobutan-2-yl] propanamide (240 mg, crude) as a brown solid. It was used to next step without any further purification. MS (ESI) m/z = 516.3 [M+H] +.
Step 9: The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -3-fluorophenyl} -1- {5-methyl-2, 5-diazabicyclo [4.1.0] heptan-2-yl} -1-oxobutan-2-yl] propanamid e (110 mg, 0.21 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (39 mg, 0.28 mmol) , N, N, N’, N’-Tetramethyl-O- (7-azabenzotriazol-1-yl) uronium (162 mg, 0.43 mmol) , N, N-Diisopropylethylamine (165 mg, 1.28 mmol) in DMF (6 mL) was stirred at rt for 2 hrs. It was diluted with water (60 mL) and extracted with ethyl acetate (40 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: dichloromethane /methanol, 15/1, v/v) , prep-HPLC (Mobile Phase: ACN-H2O (0.1%FA) , 35/65-60/40) and Chiral HPLC to afford product to get the Example 5 (24.9 mg, , 0.039 mmol, yield: 18.3%) and Example 6 (46.7 mg, , 0.073 mmol, yield: 34.3%) as a white solid.
Example 5 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.80 –7.72 (m, 1H) , 7.46 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.16 –7.04 (m, 2H) , 6.82 (t, J = 2.0 Hz, 1H) , 5.30 (d, J = 9.5 Hz, 0.6H) , 4.88 (d, J = 10.8 Hz,0.6H) , 4.59 (dd, J = 8.2, 3.4 Hz, 1H) , 4.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.96 –3.85 (m, 0.6H) , 3.59 –3.47 (m, 0.3H) , 3.24 –2.97 (m, 1.3H) , 2.81 (td, J = 7.5, 4.1 Hz, 0.4H) , 2.57 –2.33 (m, 5H) , 2.32 –2.18 (m, 3H) , 2.17 –2.06 (m, 3H) , 1.87 –1.78 (m, 2H) , 1.77 –1.68 (m, 2H) , 1.67 –1.39 (m, 10H) , 1.37 –1.31 (m, 6H) , 1.29 –1.14 (m, 1H) , 1.14 –1.07 (m, 3H) , 0.79 (q, J = 6.7 Hz, 0.6H) , 0.75 –0.69 (m, 0.6H) , 0.47 (q, J = 7.1 Hz, 0.4H) , -0.02 –-0.08 (dd, J = 10.2, 6.0 Hz, 0.3H) . MS (ESI) m/z = 638.3 [M+H] +.
Example 6 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.71 (t, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.12 –7.03 (m, 2H) , 6.82 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 5.07 (d, J = 10.5 Hz, 1H) , 4.62 –4.57 (m, 1H) , 4.50 (q, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.75 (dt, J = 13.2, 3.0 Hz, 1H) , 3.28 –3.22 (m, 2H) , 2.69 –2.60 (m, 1H) , 2.52 –2.41 (m, 2H) , 2.31 –2.24 (m, 2H) , 2.21 (s, 3H) , 2.18 –2.11 (m, 1H) , 1.87 –1.77 (m, 2H) , 1.77 –1.69 (m, 2H) , 1.66 –1.54 (m, 4H) , 1.53 –1.39 (m, 5H) , 1.38 –1.32 (m, 6H) , 1.14 –1.09 (m, 3H) , 0.48 (q, = 6.8 Hz, 1H) , -0.29 –-0.39 (m, 1H) . MS (ESI) m/z = 638.3 [M+H] +.
Example 7. Synthesis of N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethy l-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (2 g, 10 mmol) , DFMPS (1.55 g, 8 mmol) in DMF (20 mL) was added a solution of t-BuOK (1.8 g, 16 mmol) in DMF (10 mL) at -40℃ under N2. The mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was neutralized with 1N HCl, then diluted with EA (120 mL) , washed by water (60 mL*2) , brine (60 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (PE: EA=0～3%) to get the product (1.7 g, 6.9 mmol, yield: 69.0%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.45 –3.36 (m, 4H) , 2.16 -2.13 (m, 4H) , 1.47 (s, 9H) .
Step 2: A mixture of tert-butyl 4- (difluoromethylidene) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 2.14 mmol) in HCl-dioxane (4 M, 4 mL) /DCM (4 mL) was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated to get the crude product (280 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 134.1 [M+H] +.
MS (ESI) m/z = 134.1 [M+H] +.
Step 3: The mixture of (2R, 3S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (600 mg, 1.75 mmol) , 4- (difluoromethylidene) piperidine (297 mg, 1.75 mmol) , HOBt (308 mg, 2.28 mmol) , EDCI (437 mg, 2.28 mmol) and NMM (355 mg, 3.505 mmol) in THF (8 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified  by flash (PE: EA=0～50%) to get the product (620 mg, 1.28 mmol, yield: 73.4%) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 480.1 [M+H] +.
Step 4: A mixture of tert-butyl N- [ (2R, 3S) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl] carbamate (620 mg, 1.355 mmol) in HCl-dioxane (6 mL) /DCM (2 mL) was stirred at 25 ℃ for 3 hrs. The mixture was concentrated to get the crude product (640 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 358.0 [M+H] +.
Step 5: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-1- [4- (difluoromethylidene) piperidin -1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (640 mg, 1.79 mmol) and DIEA (926 mg, 7.16 mmol) in DCM (8 mL) was added propanoyl chloride (166 mg, 1.79 mmol) at rt and the mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was diluted with DCM (40 mL) , washed by water (20 mL) , brine (10 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (PE: EA=0～60%) to get the product (510 mg, 1.05 mmol, yield: 58.5%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 414.0 [M+H] +.
Step 6: To a solution of N- [ (2R, 3S) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin -1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (80 mg, 0.19 mmol) in EtOH (3 mL) was added Raney Nickel (0.5 mL) , followed by Hydrazine hydrate (0.5 mL) . The mixture was stirred at rt for 5 hrs. The mixture was filtered and the filtrate was concentrated under vacuum to give the crude product (50 mg, 0.12 mmol, yield: 60.7%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 384.2 [M+H] +.
Step 7: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethy lidene) piperidin -1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (50 mg, 0.13 mmol) , (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (cycloheptyl) acetic acid (35 mg, 0.13 mmol) , HATU (99 mg, 0.26 mmol) , DIEA (50 mg, 0.39 mmol) in DMF (3 mL) was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by flash (PE: EA=0～60%) to get the product (80 mg, 0.088 mmol, yield: 67.4%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 637.2 [M+H] +.
Step 8: A mixture of tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( {4- [ (2S, 3R) -4- [4- (difluoro methylidene) piperidin-1-yl] -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] -2-fluorophenyl} carbamoyl) methyl] carbamate (80 mg, 0.1256 mmol) in TFA (1 mL) /DCM (0.5 mL) was stirred at 25℃ for 1 h. The mixture was concentrated to get the crude product (90 mg, crude) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 537.2 [M+H] +.
Step 9: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -3-fluorophenyl} -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (90 mg, 0.17 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (24 mg, 0.17 mmol) , HATU (127 mg, 0.335 mmol) , DIEA (173 mg, 1.34 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with EA (40 mL) , washed by water (15 mL*3) , brine (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by Prep-TLC (DCM: MeOH=20: 1) to get the product (25 mg) , then purified by chiral HPLC (: -SP-120-10-C18-BIO-C18 250 x 50 mm, 10um (pH 8-10) : CO2-MeOH (DEA) ) to get the Example 7 (12 mg, 0.0182 mmol, yield: 10.8%) as white solid.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.81 -7.76 (m, 1H) , 7.51 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.18 –7.11 (m, 2H) , 6.87 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 4.99 (d, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.55 (q, J =7.2 Hz, 2H) , 3.52 –3.39 (m, 3H) , 3.29 –3.16 (m, 2H) , 2.37 –2.23 (m, 2H) , 2.22 –2.03 (m, 3H) , 1.86 –1.73 (m, 4H) , 1.71 –1.43 (m, 10H) , 1.40 (d, J = 7.2 Hz, 3H) , 1.36 (d, J = 7.1 Hz, 3H) , 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 659.2 [M+H] +.
Example 8. Synthesis of N- ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (S) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) -1  -isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of ethyl 2- (3-fluoro-4-nitrophenyl) propanoate (300 mg, 1.24 mmol) in THF (3 mL) /H2O (1 mL) was added LiOH. H2O (209 mg, 4.97 mmol) at 10 ℃. The mixture was stirred at this temperature for 4 h, then at 25℃ for 16 h. The mixture was acided with 2 N HCl to pH=4, diluted with EA (30 mL) , washed by water (10 mL*3) , dried over Na2SO4, concentrated to get the crude product 2- (3-fluoro-4-nitrophenyl) propanoic acid (250 mg, 1.05 mmol, yield: 84.9%) as a brown oil. MS (ESI) m/z = 214.1 [M+H] +.
Step 2: The mixture of 2- (3-fluoro-4-nitrophenyl) propanoic acid (250 mg, 1.17 mmol) , methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amine (351 mg, 2.35 mmol) , EDCI (674 mg, 3.52 mmol) in Pyr (5 mL) was stirred at 25℃ for 16 h. The mixture was diluted with EA (40 mL) , washed by 1 N HCl (15 mL*3) , brine (15 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (PE/EA=0～40%) to afford 2- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (230 mg, 0.67 mmol, yield: 57.3%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 309.0 [M+H] +.
Step 3: A mixture of 2- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (230 mg, 0.746 mmol) , Pd/C (23 mg) in THF (10 mL) was stirred at 25℃ for 16 h under H2 The micxture was filtered, concentrated and purified by flash (DCM: MA =0～3%) to afford 2- (4-amino-3-fluorophenyl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (200 mg, 0.214 mmol, yield: 91.5%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 279.0 [M+H] +.
Step 4: To a solution of 2- (4-amino-3-fluorophenyl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propenamide (150 mg, 0.54mmol) , (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] acetic acid (164.6 mg, 0.54 mmol) and HATU (307.5 mg, 0.81 mmol) in THF (10 mL) was added DIEA (139.35 mg, 1.08 mmol) . The reaction mixture was stirred at RT for 16 h. The mixture was diluted with water, extracted with EA (50 mLx3) . The combined organic layers were washed with brine (150 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum, purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc=30-50%) to afford tert-butyl  ( (1S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- (1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl ) carbamate (208 mg, 0.22 mmol, yield: 40.9%) as a light yellow solid. MS (ESI) m/z = 588.3 [M+Na] +.
Step 5: To a solution of tert-butyl N- [ (S) - [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] [ (2-fluoro-4- {1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl} phenyl) carbamoyl] methyl] carbamate (208 mg, 0.37 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (5 mL) . The reaction mixture was stirred at RT for 3 h. It was concentrated under vacuum, purified by Flash Chromatography (DCM/MeOH=30-50%) to afford (S) -2- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (122 mg, 0.26 mmol, yield: 71.3%) as a light yellow solid. MS (ESI) m/z = 466.3 [M+Na] +.
Step 6: To a solution of (2S) -2- {4- [ (2S) -2-amino-2- [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] acetamido] -3-fluorophenyl} -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propenamide (122 mg, 0.26 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (40.41 mg, 0.26 mmol) and HATU (149.49 mg, 0.39 mmol) in DMF (10 mL) was added DIEA (67.75 mg, 0.52 mmol) . The reaction mixture was stirred at RT for 2 h. The mixture was diluted with water, extracted with EA (50 mLx3) . The combined organic layers were washed with brine (150 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum, purified by Flash Chromatography (MeOH-DCM= 0-5 %) and prep-TLC (DCM/MeOH =1/20) to afford the to get the Example 8 as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.96 (s, 1H) , 8.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.76 (dd, J = 16.0, 7.8 Hz, 1H) , 7.50 (d, J =1.8 Hz, 1H) , 7.18 –7.01 (m, 2H) , 6.95 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 5.45 –5.31 (m, 1H) , 4.59 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.36 –4.23 (m, 1H) , 4.24 –4.15 (m, 1H) , 4.15 –3.99 (m, 1H) , 2.95 (d, J = 35.1 Hz, 3H) , 2.46 –2.36 (m, 2H) , 2.00 (q, J = 10.5 Hz, 1H) , 1.92 –1.71 (m, 4H) , 1.39 –1.31 (m, 6H) , 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 1.15 (ddd, J = 23.8, 12.1, 3.3 Hz, 2H) . MS (ESI) m/z = 602.3 [M+H] +.
Example 12. Synthesis of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (R) -2-cycloheptyl-2- (6- (tetrahydro-2H-pyran-4-yl) -1H-benzo [d] imidazol-2-yl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamideN- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (6- (tetrahydro-2H-pyran-4 -yl) -1H-benzo [d] imidazol-2-yl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide
Step 1: A mixture of 4-bromo-2-nitroaniline (3 g, 13.8 mmol) , 2- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolane (3.19 g, 15.1 mmol) , Pd(dppf) Cl2 (500 mg, 0.6 mmol) and K2CO3 (5.72 g, 41.4 mmol) in dioxane (30 mL) and H2O (5 mL)was stirred at 95℃ for 16 hrs under Ar atmosphere. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EA (30mLx3) . The combined organic layers were washed with brine (30 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (DCM/MeOH=0-2%) to give the product (2.2 g, 72%) as an orange solid. MS (ESI) m/z = 221.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of 4- (3, 6-dihydro-2H-pyran-4-yl) -2-nitroaniline (2.4 g, 10.9 mmol) in EtOAc (20 mL) and THF (20 mL) was added Pd/C (240 mg) . The reaction mixture was stirred at rt for 16 hrs under H2 (balloon) . The mixture was filtered through celite and the filtrate was concentrated under vacuum to give the crude product (2.1 g, crude) as a yellow solid. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 6.71 –6.63 (m, 1H) , 6.63 –6.52 (m, 2H) , 4.14 –4.02 (m, 2H) , 3.50 (td, J = 11.3, 3.3 Hz, 2H) , 3.29 (s, 4H) , 2.60 (m, 1H) , 1.83 –1.66 (m, 4H) . MS (ESI) m/z = 193.1 [M+H] +.
Step 3: A mixture of ethyl 2-cyano-2-cycloheptylacetate (979.7 mg, 4.68 mmol) and 4- (oxan-4-yl) benzene-1, 2-diamine (600 mg, 3.12 mmol) was stirred at 185℃ for 4 hrs. The reaction mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (PE /EA= 0–35%) to afford the product (456 mg, 43%yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 338.2 [M+H] +.
Step 4: A mixture of ethyl 2-cyanoacetate (4791 mg, 42.3 mmol) , bromocycloheptane (5 g, 28.2 mmol) , EtONa (3.46 g, 50.8 mmol) in EtOH (100 mL) was stirred at 90℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by flash (PE: EA=0～5%) to get the product (2.03 g, 6.79  mmol, 24%yield) as a colorless oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.27 (q, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.42 (d, J = 5.3 Hz, 1H) , 2.31 –2.18 (m, 1H) , 1.79 –1.72 (m, 4H) , 1.58 –1.46 (m, 8H) , 1.32 (t, J =7.2 Hz, 3H) .
Step 5: To a solution of 2-cycloheptyl-2- [5- (oxan-4-yl) -3H-1, 3-benzodiazol-2-yl] acetonitrile (456 mg, 1.35 mmol) in AcOH (8 mL) and HCl (8 mL) was stirred at 100 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to give the product (350 mg, 0.98 mmol, 72.9%yeild) as a brown solid. MS: (ESI) m/z = 357.1 [M+H] +.
Step 6 &step 7: A mixture of cycloheptyl [5- (oxan-4-yl) -3H-1, 3-benzodiazol-2-yl] acetic acid (120 mg, 0.34 mmol) , N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propenamide (118 mg, 0.34 mmol) , HATU (155 mg, 0.4 mmol) and DIPEA (130 mg, 1 mmol) in THF (10 mL) was stirred at ambient temperature for 16 h. The reaction mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (PE/EA= 0–20%) to afford the product as a white solid (30 mg, 0.04 mmol, 12.8%yield) . The product was purified by SFC (CHIRALPAK AD-H column, 250 mm*20 mm, 5μm) to afford to get the Example 12 as white solid. (3%yield) . 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ7.84 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.41 (d, J = 27.4 Hz, 2H) , 7.11 (t, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 4.88 (s, 1H) , 4.02 (d, J = 12.8 Hz, 2H) , 3.88 (d, J = 10.6 Hz, 1H) , 3.62 –3.46 (m, 3H) , 3.39 (d, J = 13.3 Hz, 1H) , 3.35 –3.30 (m, 1H) , 3.10 (tt, J = 17.9, 8.9 Hz, 2H) , 2.92 –2.78 (m, 1H) , 2.58 –2.44 (m, 1H) , 2.31 –2.15 (m, 4H) , 1.91 (d, J = 17.9 Hz, 4H) , 1.84 –1.67 (m, 6H) , 1.65 –1.34 (m, 11H) , 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 1.09 (dd, J = 8.1, 7.1 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 689.3 [M+H] +.
The following compounds were obtained using similar procedures for synthesis of example 1 to example 12 and are shown in Table 1.
Table 1


Example 28. Synthesis of N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide

Step 1: To a solution of 1- (3-fluoro-4-nitrophenyl) ethanone (50 g, 273 mmol) in MeOH (600 mL) was added sodium borohydride (6.2 g, 164 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at 0℃ for 1.5 hrs. The reaction was quenched by ice-water (800 mL) , extracted with EA (500 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (500 mL) and dried over Na2SO4, then concentrated under vacuum to give 1- (3-fluoro-4-nitrophenyl) ethan-1-ol (49 g, 264.6 mmol, yield: 96.9%) as a brown oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (dd, J = 8.3, 7.7 Hz, 1H) , 7.35 –7.27 (m, 2H) , 4.99 (q, J = 6.5 Hz, 1H) , 2.07 (s, 1H) , 1.52 (d, J = 6.5 Hz, 3H) .
Step 2: To a solution of 1- (3-fluoro-4-nitrophenyl) ethanol (49 g, 265 mmol) in DCM (600 mL) was added PPh3 (83.28 g, 317.5 mmol) and Tetrabromomethane (105.30 g, 317.5 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 1.5 hrs. The mixture was concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (EtOAc/hexanes=0～10%) to give 4- (1-bromoethyl) -2-fluoro-1-nitrobenzene (53 g, 213.7 mmol, yield: 80.8%) as a pale yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 -8.02 (m, 1H) , 7.42 -7.32 (m, 2H) , 5.13 (q, J = 6.9 Hz, 1H) , 2.04 (d, J = 6.9 Hz, 3H) .
Step 3: The sodium hydroxide (12 g, 301 mmol) was added to the solution of (SP-4-4) - [N- [Phenyl [2- [ [ [ (1R, 2S) -1- (phenylmethyl) -2-pyrrolidinyl-κN] carbonyl] amino-κN] phen yl] methylene] glycinato (2-) -κN, κO] nickel (30 g, 60.2 mmol) in DMF (300 mL) under stirring. Then 4- (1-bromoethyl) -2-fluoro-1-nitrobenzene (20.9 g, 84.2 mmol) dissolved in DMF (30 mL) was added to the solution. The mixture was stirred under nitrogen and the reaction progress was monitored by TLC. The reaction mixture was quenched with ice water (1200 mL) and extracted with ethyl acetate (600 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (600 mL *2) , dried over Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: EtOAc/hexanes=0-55%) to afford compound example 28-1 (12 g, 18 mmol, yield: 29.9%) as a dark-red solid. MS (ESI) m/z =665.2 [M+H] +.
Step 4-5: To a solution of compound example 28-1 (31 g, 46.6 mmol) in MeOH (300 mL) was added 3 N HCl/MeOH=1: 1 (400 mL) and the mixture was stirred at 70 ℃ for 10 min. The mixture was diluted with water (100 mL) , washed by DCM (400 mL *3) . The water was added Na2CO3 to adjust pH = 10, added THF (500 mL) , Boc2O (108 g, 466 mmol) . The mixture was further stirred at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with EA (1000 mL) , washed by water (600 mL*3) . The combined liquid layer was acided by 4 M HCl to PH=3, washed by EtOAc (600 mL *3) , the combined organic layer was comcentrated to get the crude product (2R, 3S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3 - (2-chloro-3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (11  g, 32.1 mmol, yield: 68.9%) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 365.0 [M+Na] +.
Step 6: To a solution of (2R, 3S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (1.0 g, 2.92 mmol) , 4- (difluoromethylene) piperidine hydrochloride (593 mg, 3.5 mmol) and HATU (1.33 g, 3.5 mmol) in DMF (15 mL) was added DIEA (1.1 g, 8.76 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 4hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The organic layers were washed with brine (50 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: EtOAc/hexanes = 1/1, v/v) to afford tert-butyl ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) carbamate (1.1 g, 2.4 mmol, yield: 82.2%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 479.8 [M+Na] +.
Step 7: To a solution of tert-butyl ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) carbamate (900 mg, 1.97 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. NaHCO3 solution and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford (2R, 3S) -2-amino-1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (700 mg, 1.96 mmol, 99.5 %yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 358.1 [M+H] +.
Step 8: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (330 mg, 0.92 mmol) and DIEA (239 mg, 1.85 mmol) in DCM (10 mL) was added Trifluoroacetic anhydride (252 mg, 1.20 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at room temperature overnight. It was quenched with saturated NaHCO3 (20 mL) and extracted with dichloromethane (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate. Then it was filtered and concentrated under vacuum to afford the crude. which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate/hexane, 0-20%) to afford the compound N- ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (400 mg, 0.88 mmol, yield: 95.3%) as a white solid. MS (ESI) m/z =454.0 [M+H] +.
Step 9: To a solution of N- ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (400 mg, 0.88 mmol) in EtOH (10 mL) Raney Ni (120 mg) and Hydrazine hydrate (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 4 hrs. The mixture was filtered through celite and concentrated under vacuum to get crude, which was purified by flash chromatography (elution gradient: methanol /dichloromethane, 0-2%) to afford the compound N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (260 mg, 0.61 mmol, yield: 69.6%) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 424.1 [M+H] +.
Step 10: The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (280 mg, 0.66 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (269 mg, 0.99 mmol) , HATU (452 mg, 1.19 mmol) and DIEA (213 mg, 1.65 mmol) in THF (8 mL) was stirred at room temperature overnight. Then concentrated under vacuum to afford the crude, which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate /hexane, 0-40%) to afford the compound tert-butyl ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl)  -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (270 mg, 0.40 mmol, yield: 60.4%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 699.2 [M+Na] +.
Step 11: To a solution of tert-butyl ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluoropheny l) amino) -2-oxoethyl) carbamate (270 mg, 0.40 mmol) in dichloromethane (6 mL) was added TFA (2 mL) and the mixture was stirred at rt for 2 hrs. It was quenched with saturated NaHCO3 (20 mL) and extracted with dichloromethane (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude, which was purified by flash chromatography (elution gradient: methanol /dichloromethane, 0-2%) to afford the compound N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (110 mg, 0.19 mmol, yield: 47.8%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 577.2 [M+H] +.
Step 12: The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetam ide (110 mg, 0.19 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (35 mg, 0.25 mmol) , HATU (116 mg, 0.30 mmol) and DIEA (49 mg, 0.38 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at room temperature for 2 hrs. Then it was diluted with water (40 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate /hexane, 0-50%) to afford the compound N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifl uoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxam ide (110 mg, 0.16 mmol, yield: 82.6%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 699.2 [M+H] +.
Step 13: N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-p yrazole-5-carboxamide (110 mg, 0.157 mmol) in THF/water=1: 1 (4 mL) was added Lithium hydroxide monohydrate (16 mg, 0.393 mmol) and the mixture was stirred at room temperature overnight. Then it was diluted with water (15 mL) and extracted with ethyl acetate (10 *3 mL) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the compound N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3-amino-4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1-cycloheptyl-2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (70 mg, 0.116 mmol, yield: 73.8%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 603.4 [M+H] +.
Step 14: To a solution of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3-amino-4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1-cycloheptyl-2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-p yrazole-5-carboxamide (70 mg, 0.116 mmol) and DIEA (60 mg, 0.464 mmol) in dichloromethane (5 mL) was added Triphosgene (16 mg, 0.052 mmol) at 0℃ and the mixture was stirred at room temperature for 10 min. Then N-methylcyclopropanamine (17 mg, 0.162 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 4 hrs. It was quenched with saturated NaHCO3 (10 mL) and extracted with dichloromethane (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate. Then it was filtered and concentrated under vacuum to afford the crude. which was purified by prep-HPLC (HPLC (Mobile Phase: ACN-H2O (0.1%FA) , 35/65-75/25) ) to afford the compound  N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carb oxamide (41 mg, 0.059 mmol, yield: 50.5%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 700.5 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.88 (s, 1H) , 8.45 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.67 (t, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.47 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.15 (dd, J = 12.0, 1.4 Hz, 1H) , 7.09 –7.03 (m, 1H) , 6.99 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 6.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 4.79 (t, J = 8.9 Hz, 1H) , 4.60 (t, J = 8.5 Hz, 1H) , 4.47 (q, J = 7.1 Hz, 2H) , 3.50 –3.39 (m, 2H) , 3.34 (s, 1H) , 3.21 -3.08 (m, 2H) , 2.74 (s, 3H) , 2.56 –2.51 (m, 1H) , 2.14 -1.94 (m, 3H) , 1.77 –1.59 (m, 5H) , 1.59 –1.32 (m, 9H) , 1.31 -1.21 (m, 6H) , 0.91 –0.75 (m, 2H) , 0.68 -0.55 (m, 2H) .
Example 29. Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-me thylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2 - ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetic acid (0.77 g, 2.84 mmol) in THF (15 mL) was added HATU (1.08 g, 2.84 mmol) and DIEA (0.37 mg, 2.84 mmol) . The mixture was stirred 25 ℃ for 30 mins. Then N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamide (1 g, 2.36 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 24 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 3/2, v/v) to afford tert-butyl ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2 -trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoeth yl)carbamate (1.5 g, 2.22 mmol, yield: 94.1%) as a white solid. MS (ESI) m/z =699.0 [M+Na] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) carbamate (1.5 g, 2.22 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (10 mL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) and adjusted pH = 8 with NaHCO3, then extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifluoroacetamid  e (1 g, 1.74 mmol, yield: 78.4%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 577.3 [M+H] +.
Step 3: To a solution of 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (0.29 g, 2.09 mmol) in DMF (15 mL) was added HATU (0.79 g, 2.09 mmol) and DIEA (0.29 g, 2.09 mmol) . The mixture was stirred 25 ℃ for 30 mins. Then N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) -2, 2, 2-trifl uoroacetamide (1 g, 1.74 mmol) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 3/1, v/v) to afford N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (1.2 g, 1.72 mmol, yield: 98.9%) as a white solid. MS (ESI) m/z =699.0 [M+H] +.
Step 4: To a solution of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin -1-yl) -4-oxo-3- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methyl cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (200 mg, 0.29 mmol) in EtOH (10 mL) was added NaBH4 (16.5 mg, 0.43 mmol) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: DCM/MeOH, 10/1, v/v) to afford N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3-amino-4- (4- (difluoromethylene) piperidin -1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-et hyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (100 mg, 0.17 mmol, yield: 58.6%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 603.1 [M+H] +.
Step 5: To a solution of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3-amino-4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoet hyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (30 mg, 0.05 mmol) , DIEA (12.8 mg, 0.1 mmol) and bis(trichloromethyl) carbonate (8.9 mg, 0.03 mmol) in DCM (10 mL) was added a solution of N-methylcyclopropanamine (7 mg, 0.1 mmol) in DCM (1 mL) dropwise. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1 hr. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by preparative HPLC (Gemini-C18 column, 5um silica, 21 mm diameter, 150 mm length) , using decreasingly polar mixtures of water (containing 0.05 %FA) and MeCN as eluents (30-70) to afford the title compound N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methyl cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (11.3 mg, 0.016 mmol, yield: 32.33%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 700.4 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 7.72 –7.67 (m, 1H) , 7.38 (s, 1H) , 7.00 –6.96 (m, 2H) , 6.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 6.19 –6.17 (m, 1H) , 4.81 –4.73 (m, 1H) , 4.43 –4.39 (m, 3H) , 3.40 –3.35 (m, 1H) , 3.25 –3.20 (m, 1H) , 3.15 –3.04 (m, 2H) , 2.78 (s, 3H) , 2.48 –2.46 (m, 1H) , 2.01 –1.98 (m, 1H) , 1.85 –1.65 (m, 6H) , 1.45 –1.35 (m, 1H) , 1.27 –0.92 (m, 9H) , 0.85 –0.71 (m, 7H) , 0.66 –0.63 (m, 2H) .
Example 30. Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4-methoxy-4-methylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluorome thylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of (2R, 3S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (4 g, 11.7 mmol) in MeOH (20 mL) was added 3N HCl in MeOH (40 mL, 120 mmol) . The reaction mixture was stirred at 60℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure to afford crude methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (3.0 g, 11.7 mmol, yield: 100.0%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 256.9 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (2 g, 7.8 mmol) and DIEA (4.03 g, 31.2 mmol) in DCM (40 mL) was added triphosgene (1.39 g, 4.6 mmol) at 0℃. The mixture was stirred under nitrogen at 0℃ for 10 mins. To this a solution of N-methylcyclopropanamine hydrochloride (2.52 g, 23.3 mmol) in DCM (10 mL) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1h. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with DCM (50 mL *3) . The organic layers were washed with brine (100 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 50%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (1.7 g, 4.8 mmol, yield: 61.54%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 353.9 [M+H] +.
Step 3: To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (1.7 g, 4.8 mmol) in EtOAc (30 mL) was added 10%Pd/C (0.51 g, 0.48 mmol) . The reaction mixture was stirred under hydrogen atmosphere at 25℃ for 4 hrs. The mixture was filtered through a pad of celite, concentrated under reduced pressure. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 60%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (1.4 g, 4.3 mmol, yield: 89.58%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 323.9 [M+H] +.
Step 4: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (1.0 g, 3.1 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetic acid (1.42 g, 4.6 mmol) and HATU (1.77 g, 4.6 mmol) in THF (40 mL) was added DIEA (0.8 g, 6.2 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16 hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The organic layers were washed with brine (50 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 70%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (1.5 g, 2.5 mmol, yield: 80.65%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 610.8 [M+H] +.
Step 5: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylurei do) butanoate (1.5 g, 2.5 mmol) in DCM (15 mL) was added TFA (3 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. NaHCO3 solution and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (1.25 g, 2.4 mmol, 96.00 %yield) as a white solid. MS (ESI) m/z = 511.3 [M+H] +.
Step 6: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) bu tanoate (1 g, 2 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (0.42 g, 3 mmol) and HATU (1.14 g, 3 mmol) in DMF (20 mL) stirred was added DIEA (0.52 g, 4 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2hrs. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The organic layers were washed with brine (50 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 80%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (1.2 g, 1.9 mmol, yield: 95.0%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 633.3 [M+H] +.
Step 7: To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3 - (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido ) -3-fluorophenyl) butanoate (1.2 g, 1.9 mmol) in THF (10 mL) was added a solution of lithium hydroxide monohydrate (160 mg, 0.38 mmol) in water (3 mL) dropwise. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , acidified with 1N HCl and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (50 mL) dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (1.05 g, 1.7 mmol, yield: 89.47%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 619.2 [M+H] +.
Step 8: To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.048 mmol) , 4-methoxy-4-methylpiperidine hydrochloride (12 mg, 0.072 mmol) and HATU (27.5 mg, 0.072 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (12.5  mg, 0.096 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 4hrs. The reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by preparative HPLC (Gemini-C18 column, 5u silica, 21 mm diameter, 150 mm length) , using decreasingly polar mixtures of water (containing 0.1 %FA) and MeCN as eluents (20%-40%) to afford the title compound N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4-methoxy-4-methylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-eth yl-1H-pyrazole-5-carboxamide (11 mg, 0.015 mmol, yield: 31.06%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 729.8 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.93 -7.82 (m, 1H) , 7.51 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.19 –7.08 (m, 2H) , 6.89 –6.88 (m, 1H) , 4.95 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 4.63 –4.53 (m, 3H) , 4.10 –3.90 (m, 1H) , 3.63 (d, J = 13.2 Hz, 1H) , 3.18 –3.09 (m, 5H) , 2.90 –2.74 (m, 5H) , 2.61 –2.53 (m, 3H) , 2.10 –1.95 (m, 2H) , 1.92 –1.85 (m, 3H) , 1.63 –1.59 (m, 2H) , 1.39 –1.36 (m, 6H) , 1.28 –1.22 (m, 2H) , 1.11 (s, 1H) , 0.99 –0.81 (m, 5H) , 0.75 (d, J = 3.6Hz, 2H) .
Example 31. Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4-oxo-4- (4- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazin-1-yl) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a sealed tube was added N-benzyl-2-chloro-N- (2 -chloroethyl) ethan-1-amine hydrochloride (300 mg, 1.12 mmol) , l- (trifluoromethyl) cyclopropanamine (140 mg, 1.12 mmol) and DIPEA (2 mL) . The mixture was heated to 120℃ for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (0 -60%EtOAc/hexanes) to afford 1-benzyl-4- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (150 mg, 0.53 mmol, yield: 47.1%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 285.0 [M+H] +.
Step 2: l-Benzyl-4- (l- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (102 mg, 0.359 mmol) and 10%Pd/C (11 mg, 0.1 mmol) were suspended in MeOH (7 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature under 50 psi hydrogen for 6 hrs. The mixture was filtered through a pad of celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford 1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (50 mg, 0.26 mmol, yield: 71.7%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 195.2 [M+H] +.
Step 3: To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.048 mmol) , 1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (14 mg, 0.072 mmol) and HATU (27.5 mg, 0.072 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (12.5 mg, 0.096 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 4hrs. The reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were  washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by preparative HPLC (Gemini-C18 column, 5u silica, 21 mm diameter, 150 mm length) , using decreasingly polar mixtures of water (containing 0.1 %FA) and MeCN as eluents (20-40) to afford the title compound N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4-oxo-4- (4- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazin-1-yl) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (diflu oromethylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (18.9 mg, 0.024 mmol, yield: 50.0%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 795.0 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.93 (t, J = 8 Hz, 1H) , 7.50 (d, J = 2 Hz, 1H) , 7.18 –7.08 (m, 2H) , 6.88 (d, J = 2 Hz, 1H) , 4.95 –4.88 (m, 1H) , 4.67 –4.51 (m, 3H) , 3.47 (br. s, 1H) , 3.29 (br. s, 2H) , 3.20 –3.09 (m, 2H) , 2.90 (s, 3H) , 2.77 –2.66 (m, 2H) , 2.64 –2.50 (m, 3H) , 2.45 –2.37 (m, 1H) , 2.21 –1.85 (m, 6H) , 1.42 –1.36 (m, 6H) , 1.34 –1.24 (m, 2H) , 0.97 –0.92 (m, 4H) , 0.84 (s, 2H) , 0.78 –0.73 (m, 2H) .
Example 32. Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -4- (4-methoxy-4-methylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluorome thylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of tert-butyl cyclopropylamino formate (2 g, 12.6 mmol) , NaH (0.76 g, 18.9 mmol) in THF (20 mL) stirred at 0℃ for 10 mins was added a solution of iodomethane-d3 (2.74 g, 18.9 mmol) in THF (10 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16hrs. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with EtOAc (50 mL*3) . The organic layers were washed with brine (50 mL*2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford tert-butyl cyclopropyl (methyl-d3) carbamate (1.2 g, 6.8 mmol, yield: 53.97%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 175.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl cyclopropyl (methyl-d3) carbamate (1.2 g, 6.8 mmol) in EtOAc (10 mL) was added a solution of 4N HCl in dioxane (10 mL, 40 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure to afford N- (methyl-d3) cyclopropanamine hydrochloride (0.5 g, 6.7 mmol, yield: 97.1%) as a  yellow gum. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.18 (s, 2H) , 2.66 –2.63 (m, 1H) , 0.85 –0.83 (m, 2H) , 0.73 –0.70 (m, 2H) .
Step 3: To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (100 mg, 0.39 mmol) and DIEA (100 mg, 0.78 mmol) in DCM (10 mL) was added triphosgene (86 mg, 0.31 mmol) at 0℃. The mixture was stirred under nitrogen at 0℃ for 10 mins. To this a solution of N- (methyl-d3) cyclopropanamine hydrochloride (80 mg, 0.78 mmol) in DCM (2 mL) was added dropwise. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1 hr. The reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with DCM (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 50%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (110 mg, 0.31 mmol, yield: 79.5%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 356.9 [M+H] +.
Step 4: To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (110 mg, 0.31 mmol) in EtOAc (10 mL) was added 10%Pd/C (65 mg, 0.06 mmol) . The reaction mixture was stirred under hydrogen atmosphere at 25℃for 3hrs. The mixture was filtered through a pad of celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 60%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) butanoate (80 mg, 0.245 mmol, yield: 79.4%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 326.9 [M+H] +.
Step 5: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) butanoate (80 mg, 0.245 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetic acid (112 mg, 0.367 mmol) and HATU (140 mg, 0.367 mmol) in THF (10 mL) was added DIEA (63 mg, 0.49 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16hrs. The reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 70%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3 ) ureido) butanoate (110 mg, 0.179 mmol, yield: 90.24%) as a white solid. MS (ESI) m/z =614.3 [M+H] +.
Step 6: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3 ) ureido) butanoate (110 mg, 0.179 mmol) in DCM (6 mL) was added TFA (2 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. NaHCO3 solution and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) butanoate (80 mg, 0.156 mmol, 87.04 %yield) as a white solid. MS (ESI) m/z = 514.2 [M+H] +.
Step 7: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) butanoate (80 mg, 0.155 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (32.7 mg, 0.233 mmol) and HATU (88.8 mg, 0.233 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (40 mg, 0.31 mmol) . The reaction mixture  was stirred at 25℃ for 4 hrs. The reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 80%EtOAc in Hexane) to afford methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (90 mg, 0.14 mmol, yield: 90.89%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 636.3 [M+H] +.
Step 8: To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (90 mg, 0.14 mmol) in THF (5 mL) was added a solution of lithium hydroxide monohydrate (12 mg, 0.28 mmol) in water (2 mL) dropwise. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , acidified with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (75 mg, 0.12 mmol, yield: 85.17%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 621.8 [M+H] +.
Step 9: To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetami do) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.048 mmol) , 4-methoxy-4-methylpiperidine hydrochloride (12 mg, 0.072 mmol) and HATU (27.5 mg, 0.072 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (12.5 mg, 0.096 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 4 hrs. The reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by preparative HPLC (Gemini-C18 column, 5u silica, 21 mm diameter, 150 mm length) , using decreasingly polar mixtures of water (containing 0.1 %FA) and MeCN as eluents (20-40) to afford the title compound N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3- (methyl-d3) ureido) -4- (4-methoxy-4-methylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethyl ene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (11 mg, 0.015 mmol, yield: 31.06%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 732.8 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 7.77 –7.69 (m, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 7.04 –6.95 (m, 2H) , 6.78 –6.76 (m, 1H) , 4.83 –4.80 (m, 1H) , 4.47 –4.41 (m, 3H) , 3.92 –3.80 (m, 1H) , 3.49 –3.48 (m, 1H) , 3.05 –2.98 (m, 4H) , 2.65 –2.55 (m, 2H) , 2.51 –2.41 (m, 3H) , 1.92 –1.77 (m, 5H) , 1.53 –1.38 (m, 2H) , 1.33 –0.98 (m, 10H) , 0.74 –0.68 (m, 4H) , 0.64 –0.54 (m, 2H) , 0.25 –0.17 (m, 1H) .
The following compounds were obtained using similar procedures for synthesis of example 1 to example 12 and example 28 to example 32. The compounds are shown in Table 2.
Table 2






























Example 241: Synthesis of
N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluorome thylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H -pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (100 mg, 0.31 mmol) in THF (10 mL) was added (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (252.72 mg, 0.93 mmol) , DIEA (119.70 mg, 0.93 mmol) , HATU (129.29 mg, 0.34 mmol) , The mixture was stirred at 40 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/1, v/v) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-met hylureido) butanoate (80 mg, 0.14 mmol, yield: 44.86%) as a white solid. MS (ESI) m/z =576.9 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (80 mg, 0.14 mmol) in DCM (5 mL) was added TFA (2 mL) , The mixture was stirred at 25 ℃  for 1 hr. The mixture was diluted with water (10 mL) . The mixture was adjusted to pH = 8 with NaHCO3, extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (50 mg, 0.10 mmol, yield: 75.63%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 477.0 [M+H] +.
Step 3: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (50 mg, 0.10 mmol) in DMF (10 mL) was added 1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (13.53 mg, 0.16 mmol) , DIEA (40.60 mg, 0.31 mmol) , HATU (43.85 mg, 0.12 mmol) , The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was diluted with water (50 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/10, v/v) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluor ophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (50 mg, 0.082 mmol, yield: 77.78%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 612.8 [M+H] +.
Step 4: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methy lureido) butanoate (50 mg, 0.082 mmol) in THF (10 mL) , was added LiOH (17.12 mg, 0.41 mmol) in water (5 mL) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) . The mixture was adjusted to pH = 3 with 1N HCl, extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluor ophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoic acid (35 mg, 0.058 mmol, yield: 71.63%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 599.3 [M+H] +.
Step 5: To a solution of (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluor ophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoic acid (30 mg, 0.050 mmol) in DMF (5 mL) was added 4- (difluoromethylene) piperidine hydrochloride (10.20 mg, 0.060 mmol) , DIEA (19.39 mg, 0.15 mmol) , HATU (20.94 mg, 0.06 mmol) . The mixture was stirred 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Genal-Prep-HPLC (elution gradient: acetonitrile/water (0.1%FA) ) to afford the title compound N- ( (S) -1-cycloheptyl -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (6 mg, 8.4 mmol, yield: 16.8%) . MS (ESI) m/z = 714.3 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δppm 7.68 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.06-7.00 (m, 2H) , 6.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 5.33 –5.19 (m, 1H) , 4.79 (s, 1H) , 4.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 3.45-3.36 (m, 1H) , 3.32 –3.23 (m, 2H) , 3.21-3.16 (m, 1H) , 3.10-3.04 (m, 1H) , 2.78 (s, 3H) , 2.54 –2.46 (m, 1H) , 2.06-1.97 (m, 3H) , 1.79 –1.59 (m, 5H) , 1.59 –1.39 (m, 7H) , 1.38-1.27 (m, 7H) , 1.28 (d, J = 7.2 Hz, 3H) , 1.19 (s, 1H) , 0.85-0.80 (m, 2H) , 0.68 –0.59 (m, 2H) .
Example 242: Synthesis of
N- ( (S) -1, 1-dicyclobutyl-3- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoro methylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -3-oxopropan-2-yl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: The mixture of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3, 3-dicyclobutylpropanoic acid (65 mg, 0.22 mmol) , methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (47 mg, 0.15 mmol) , HATU (110 mg, 0.29 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (56 mg, 0.44 mmol) in DMF (4 mL) was stirred at rt overnight. It was diluted with water (40 mL) and extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: PE /EA, 1/1, v/v) to afford compound methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3, 3-dicyclobutylpropanamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (40 mg, 0.066 mmol, yield: 45.7%) as a brown solid. MS (ESI) m/z = 603.3 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl compound (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3, 3-dicyclobutylpropanamido) -3-fluorophenyl ) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) butanoate (40 mg, 0.066 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (0.5 mL) and the mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was adjusted pH = 8-9 with sodium bicarbonate and then extracted with DCM (10 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford product methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-3, 3-dicyclobutylpropanamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-m ethylureido) butanoate (33 mg, 0.0657 mmol, yield: 99.0%) as a pale brown solid. MS (ESI) m/z = 503.2 [M+H] +.
Step 3: The mixture of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-3, 3-dicyclobutylpropanamido) -3-fluorophenyl) -2- (3-cyclopropyl-3-m ethylureido) butanoate (33 mg, 0.066 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (12 mg, 0.085 mmol) , HATU (45 mg, 0.118 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (21 mg, 0.164 mmol) in DMF (3 mL) was stirred at rt for 2 hrs. Then it was diluted with water (30 mL) and the mixture was extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to get crude, which was purified by flash chromatography (elution gradient: PE /EA, 1/1, v/v) and to afford the compound methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) - 3, 3-dicyclobutyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) propanamido) -3-fluorophenyl) butanoat e (22 mg, 0.035 mmol, yield: 53.6%) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 625.2 [M+H] +.
Step 4: To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -3, 3-dicyclobutyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) propanamido) -3-fluorophenyl) butanoat e (22 mg, 0.035 mmol) in THF/water=1: 1 (3 mL) was added LiOH. H2O (3 mg, 0.070 mmol) and the mixture was stirred at rt overnight. It was diluted with water (10 mL) and washed with EtOAc (5 mL) . The aqueous phase was adjusted pH = 3-4 with 1 N HCl and then extracted with EtOAc (10 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to get compound (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -3, 3-dicyclobutyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) propanamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (20 mg, 0.033 mmol, yield: 94.3%) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 611.3 [M+H] +.
Step 5: The mixture of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -3, 3-dicyclobutyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) propanamido) -3-fluorophenyl) buta noic acid (10 mg, 0.016 mmol) , 4- (difluoromethylidene) piperidine (4 mg, 0.026 mmol) , HATU (12 mg, 0.033 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (8 mg, 0.065 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at rt for 2 hrs. Then Then it was diluted with water (20 mL) and the mixture was extracted with ethyl acetate (15 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to get crude, which was purified by Prep-HPLC (HPLC (Mobile Phase: ACN-H2O (0.1%FA) , 40/60-80/20) ) to afford the compound N- ( (S) -1, 1-dicyclobutyl-3- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -3-oxopropan-2-yl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (2.2 mg, 0.003 mmol, yield: 18.3%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 726.3 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.86 –7.77 (m, 1H) , 7.55 –7.49 (m, 1H) , 7.21 –7.08 (m, 2H) , 6.86 (s, 1H) , 6.29 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 4.69 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 4.62 –4.49 (m, 3H) , 3.52 –3.45 (m, 1H) , 3.43 –3.36 (m, 2H) , 3.22 –3.13 (m, 1H) , 2.90 (s, 3H) , 2.65 –2.57 (m, 1H) , 2.32 –2.24 (m, 1H) , 2.16 –2.06 (m, 3H) , 2.01 –1.91 (m, 3H) , 1.84 –1.75 (m, 4H) , 1.72 –1.53 (m, 8H) , 1.44 –1.38 (m, 6H) , 0.97 –0.91 (m, 2H) , 0.79 –0.71 (m, 2H) .
Example 243a and 243b: Synthesis of
N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetic acid (103.05 mg, 0.38 mmol) in THF (20 mL) , HATU (143.00 mg, 0.38 mmol) and DIEA (49.11 mg, 0.38 mmol) were added. The mixture was stirred 25 ℃ for 30 min. Then methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (90 mg, 0.31 mmol) was added. The mixture was stirred at 40 ℃ for 24 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: PE/EA = 3/2, v/v) to afford methyl  (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (p ropanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (120 mg, 0.22 mmol, yield: 71.0%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 541.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (120 mg, 0.22 mmol) in DCM (4 mL) , TFA (2 mL) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was concentrated under vacuum to afford crude product methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (90 mg, 0.20 mmol, yield: 90.9%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 441.1 [M+H] +.
Step 3: To a solution of 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (33.61 mg, 0.24 mmol) in DMF (5 mL) , HATU (91.26 mg, 0.24 mmol) and DIEA (31.02 mg, 0.24 mmol) were added. The mixture was stirred 25 ℃ for 30 min. Then methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (90 mg, 0.20 mmol) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: DCM/MeOH = 10/1, v/v) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (90 mg, 0.16 mmol, yield: 80.0%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 563.0 [M+H] +.
Step 4: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoate (90 mg, 0.16 mmol) in THF (4 mL) , LiOH (7.68 mg, 0.32 mmol) in H2O (2 mL) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was adjusted to pH= 4 with 1M HCl. The mixture was extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoic acid (60 mg, 0.11 mmol, yield: 68.8%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 549.0 [M+H] +.
Step 5: To a solution of (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) -2- (propanamido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butanoic acid (30 mg, 0.055 mmol) in DMF (5 mL) , HATU (25.10 mg, 0.066 mmol) and DIEA (8.53 mg, 0.66 mmol) were added. The mixture was stirred 25 ℃ for 30 mins. Then 4- (difluoromethylidene) piperidine hydrochloride (8.78 mg, 0.066 mmol) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product which was purified by SFC to afford the title compounds
Compound 243a : N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (propana mido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carbox amide (4 mg, 0.006 mmol, yield: 10.9%) as a white solid
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.74 (t, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 7.09  (t, J = 9.1 Hz, 2H) , 6.81 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 5.02 –4.89 (m, 1H) , 4.58 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.50 (q, J = 7.1 Hz, 2H) , 3.29 –3.36 (m, 3H) , 3.23 –3.14 (m, 2H) , 2.19 –1.98 (m, 4H) , 1.82–1.79 (m, 1H) , 1.75 –1.70 (m, 3H) , 1.58 –1.43 (m, 7H) , 1.35 –1.30 (m, 6H) , 1.26 (s, 2H) .
MS (ESI) m/z = 663.9 [M+H] +.
Compound 243b : N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3- (propana mido-2, 2, 3, 3, 3-d5) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carbox amide (4 mg, 0.006 mmol, yield: 10.9%) as a solid.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.71 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.11 (dd, J = 11.9, 1.7 Hz, 1H) , 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 6.82 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 5.07 (d, J = 9.9 Hz, 1H) , 4.59 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.50 (q, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.91 –3.78 (m, 2H) , 3.63 –3.54 (m, 1H) , 3.43 –3.37 (m, 1H) , 3.25 –3.21 (m, 1H) , 2.27 –2.13 (m, 4H) , 1.85 –1.66 (m, 4H) , 1.60 –1.42 (m, 7H) , 1.35 (t, J = 7.2 Hz, 3H) , 1.26 (s, 2H) , 1.21 (d, J = 7.0 Hz, 3H) .
MS (ESI) m/z = 663.9 [M+H] +.
Example 244: Synthesis of
N- ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4- ( (S) -2- (1-isopropyl-1 H-pyrazole-5-carboxamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) phenyl) -1-oxobutan-2-yl) -1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxamide
Step 1: A mixture of (2R, 3S) -2-amino-1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-o ne (160 mg, 0.45 mmol) , 1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxylic acid (58 mg, 0.45 mmol) , HATU (340 mg, 0.896 mmol) , DIEA (174 mg, 1.34 mmol) in THF (6 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (60 mL) , washed by water (20 mL*3) , brine (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (MeOH : DCM = 0～3%) to get the product (120 mg, 0.20 mmol, 45.6%yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 470.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of N- [ (2R, 3S) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl] -1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxamide (150 mg, 0.32 mmol) in EtOH (5 mL) was added Raney Nickel (1 mL) , followed by Hydrazine hydrate (1 mL) . The mixture was stirred at rt for 1 hr. The mixture was filtered and the filtrate was concentrated under vacuum, then purified by Prep-TLC (MeOH : DCM =3%) to give the product (22 mg, 0.047 mmol, 14.9%yield) as a yellow oil. MS (ESI) m/z =440.1 [M+H] +.
Step 3: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] -1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxamide (22 mg, 0.05 mmol) , (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (4-methylcyclohexyl) acetic acid (14 mg, 0.05 mmol) , HATU (38 mg, 0.10  mmol) , DIEA (19 mg, 0.15 mmol) in THF (2 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by Prep-TLC (EtOAc: Hexanes = 60%) to get the product (15 mg, 0.011 mmol, 21.5 %yield) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 593.2 [M+H-Boc] +.
Step 4: A mixture of tert-butyl N- [ (S) - ( {4- [ (2S, 3R) -4- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -4-oxo-3- (1, 2, 3-thiadiazol-5-ylfor mamido) butan-2-yl] -2-fluorophenyl} carbamoyl) (4-methyl cyclohexyl) methyl] carbamate (15 mg, 0.022 mmol) in TFA (0.2 mL) /DCM (0.2 mL) was stirred at 25℃ for 1 hr. The mixture was concentrated to get the product (12 mg, crude) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 593.3 [M+H] +.
Step 5: A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-2- (4-methylcyclohexyl) acetamido] -3-fluorophenyl} -1- [4- (difluo romethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] -1, 2, 3-thiadiazole-5-carboxamide (12 mg, 0.020 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (4 mg, 0.024 mmol) , HATU (15 mg, 0.040 mmol) , DIEA (8 mg, 0.61 mmol) in THF (1 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by Prep-HPLC (Gemini-C18 150 *21.2 mm 5um: ACN--H2O (0.1%FA) : 55-85) to get the product (5.1 mg, 0.0069 mmol, 34.1 %yield) as a white solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD ) δ 9.26 (s, 1H) , 7.83 -7.79 (m, 1H) , 7.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.19 -7.14 (m, 2H) , 6.78 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 5.40 -5.33 (m, 1H) , 5.13 (d, J = 10.5 Hz, 1H) , 4.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 3.52 –3.32 (m, 4H) , 3.26 –3.18 (m, 1H) , 2.18 –2.03 (m, 2H) , 1.93 –1.72 (m, 5H) , 1.61 –1.52 (m, 1H) , 1.47 -1.39 (m, 8H) , 1.34 –1.29 (m, 2H) , 1.25 –1.11 (m, 2H) , 1.03 –0.82 (m, 6H) . MS (ESI) m/z = 729.3 [M+H] +.
Example 245: Synthesis of
N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (2- (3-cyanophenyl) -2, 2-difluoroacetamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylc yclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide
Step 1: To a solution of compound (2R, 3S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoic acid (200 mg, 0.58 mmol) in DMF (2 mL) were added HOBT (118 mg, 0.88 mmol) , EDCI (168 mg, 0.88 mmol) and NMM (236 mg, 2.34 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (30 mL) and washed by water (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, concentrated under vacuum and purified by flash chromatography (elution gradient: EtOAc-hexanes, 0-20%) to afford tert-butyl ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) carbamate (200 mg, 0.44 mmol, yield: 75.9%) as a yellow solid. MS: (ESI) m/z = 402.0 [M+H-56] +.
Step 2: To a solution of compound ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) carbamate (200 mg, 0.44 mmol) in DCM (1 mL) were added TFA (2 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was adjusted to pH = 7 with NaOH (10w%) . The mixture was diluted with DCM  (20 mL) and washed by water (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, concentrated under vacuum and purified by flash chromatography (elution gradient: EtOAc-hexanes = 0-20%) to afford (2R, 3S) -2-amino-1- (4- (difluoro methylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (120 mg, 0.33 mmol, yield: 76.3%) as a yellow solid. MS: (ESI) m/z = 358.2 [M+H] +.
Step 3: To a solution of (2R, 3S) -2-amino-1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butan-1-one (120 mg, 0.33 mmol) in THF (2 mL) was added propionyl chloride (51.79 mg, 0.56 mmol) and DIEA (72.34 mg, 0.56 mmol) , The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was concentrated to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: EtOAc-hexanes, 0-50%) to afford N- ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (100 mg, 0.24 mmol, yield: 72.7%) as a white solid. MS: (ESI) m/z = 414.1 [M+H] +.
Step 4: To a solution of N- ( (2R, 3S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin -1-yl) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (100 mg, 0.24 mmol) in EtOH (2 mL) was added N2H4 . H2O (30 mg, 0.96 mmol) and Raney Ni. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was filtered, concentrated under vacuum and purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl EtOAc-hexanes, 0-20%) to afford N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl ) propionamide (70 mg, 0.18 mmol, 75.0 %yield) as a yrllow oil. MS: (ESI) m/z = 384.3 [M+H] +.
Step 5: A mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (70 mg, 0.18 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetic acid (50 mg, 0.18 mmol) , HATU (104 mg, 0.28 mmol) and DIEA (60 mg, 0.46 mmol) in THF (2 mL) was stirred at room temperature for 48 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with EA (20 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (elution gradient: EtOAc/hexanes = 0-50%) to afford compound tert-butyl ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) carbamate (70 mg, 0.11 mmol, yield: 61.1%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 637.1 [M+H] +.
Step 6: A solution of tert-butyl ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyc lohexyl) -2-oxoethyl) carbamate (70 mg, 0.11 mmol) in DCM/HCl/Dioxane was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford compound N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (40 mg, 0.07 mmol, yield: 63.6%) . MS (ESI) m/z = 537.1 [M+H] +.
Step 7: To a solution of compound N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxo butan-2-yl) propionamide (30 mg, 0.05 mmol) in THF (3 mL) were added 2- (3-cyanophenyl) -2, 2-difluoroacetic acid (10 mg, 0.05 mmol) , HATU (28 mg, 0.07 mmol) and DIEA (13 mg, 0.1 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 16 hrs. The mixture was diluted with DCM (20 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford  crude product, which was purified by prep-TLC EtOAc/hexanes = 1/1, v/v) to get N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (2- (3-cyanophenyl) -2, 2-difluoroacetamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohex yl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propion amide (3.2 mg, 0.004 mmol, yield: 8.0%) as white solid. MS (ESI) m/z = 716.4 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.05 (s, 1H) , 7.95 (dd, J = 17.2, 7.8 Hz, 2H) , 7.73 (m, 2H) , 7.16-7.08 (m, 2H) , 4.98 (d, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.41 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 3.44 (m, 4H) , 3.20 (m, 1H) , 2.28 (m, 4H) , 2.09 (s, 3H) , 1.75 (m, 5H) , 1.61 (s, 1H) , 1.36 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 1.15 (t, J =7.6 Hz, 3H) , 0.93 (m, 6H) .
Example 246a and 246b: Synthesis of
N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobu tan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyr azole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoate (100 mg, 0.35 mmol) in THF (5 mL) , HATU (133.08 mg, 0.42 mmol) and DIEA (54.28 mg, 0.42 mmol) were added. The mixture was stirred 25 ℃ for 30 min. Then, (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetic acid (111.11 mg, 0.41 mmol) was added. The mixture was stirred at 40 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 3/2, v/v) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoate (140 mg, 0.26 mmol, yield: 74.8%) as a white solid.
MS (ESI) m/z = 535.9 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoate (100 mg, 0.19 mmol) in DCM (1 mL) , TFA (1 mL) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was adjusted to pH = 8 with NaHCO3, extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoate (70 mg, 0.16 mmol, yield: 84.2%) as a yellow gum.
MS (ESI) m/z = 436.0 [M+H] +.
Step 3: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2-propio namidobutanoate (70 mg, 0.16 mmol) in DMF (5 mL) , HATU (73.00 mg, 0.19 mmol) and DIEA  (24.56 mg, 1.84 mmol) were added. The mixture was stirred 25 ℃ for 30 min. Then 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (26.6 mg, 0.19 mmol) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 h. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: DCM/MeOH = 10/1, v/v) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) aceta mido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoate (83.5 mg, 0.15 mmol, yield: 97.7%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 558.0 [M+H] +.
Step 4: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) aceta mido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoate (80 mg, 0.14 mmol) in THF (2 mL) , LiOH (6.88 mg, 0.29 mmol) in H2O (1 ml) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was adjusted to pH = 4 with 1N HCl, extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) aceta mido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoic acid (70.6 mg, 0.13 mmol, yield: 92.9%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 544.1 [M+H] +.
Step 5: To a solution of (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) -2- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) aceta mido) -3-fluorophenyl) -2-propionamidobutanoic acid (30 mg, 0.055 mmol) in DMF (5 ml) , HATU (25.21 mg, 0.066 mmol) and DIEA (8.53 mg, 0.066 mmol) were added. The mixture was stirred 25 ℃ for 30 mins. Then 4- (difluoromethylene) piperidine (8.78 mg, 0.066 mmol) was added. The mixture was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by SFC to afford the title compounds.
Compound 246a : N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carb oxamide (P1, 10 mg, 0.015 mmol, yield: 27.3%) as a white solid
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.76 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.46 (s, 1H) , 7.12 –7.07 (m, 2H) , 6.83 (s, 1H) , 4.94 (d, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.53 –4.67 (m, 3H) , 3.48 –3.40 (m, 1H) , 3.37 (t, J = 5.1 Hz, 2H) , 3.23 –3.13 (m, 2H) , 2.32 –2.14 (m, 2H) , 2.09 –2.01 (m, 2H) , 1.90 –1.81 (m, 2H) , 1.77 –1.68 (m, 4H) , 1.61 –1.48 (m, 1H) , 1.36 –1.31 (m, 7H) , 1.27 –1.14 (m, 2H) , 1.10 (t, J = 7.6 Hz, 3H) , 0.99 –0.91 (m, 2H) , 0.88 (d, J = 6.3 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 658.9 [M+H] +.
Compound 246b : N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carb oxamide (P2, 10 mg, 0.015 mmol, yield: 27.3%) as a white solid.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.73 (t, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.46 (s, 1H) , 7.13 –7.04 (m, 2H) , 6.83 (s, 1H) , 5.07 (d, J = 9.9 Hz, 1H) , 4.53 –4.47 (m, 3H) , 3.90 –3.81 (m, 2H) , 3.61 –3.56 (m, 1H) , 3.43 –3.35 (m, 1H) , 3.25 –3.19 (m, 1H) , 2.32 –2.07 (m, 4H) , 2.03 –1.81 (m, 4H) , 1.79 –1.71 (m, 3H) , 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 4H) , 1.28 –1.25 (m, 1H) , 1.21 (d, J = 6.9 Hz, 3H) , 1.19 –1.08 (m, 1H) , 0.99 –0.91 (m, 2H) , 0.88 (d, J = 6.3 Hz, 3H) , 0.83 (t, J = 7.6 Hz, 3H) . MS (ESI)  m/z = 658.9 [M+H] +.
Example 247: Synthesis of
N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2- [2- (3-cyanophenyl) -2, 2-difluoroacetamido] -2- [4- (difluorometh ylidene) cyclohexyl] acetamido] -3-fluorophenyl} -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propenamide
Step 1: The mixture of methyl N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanamide (100 mg, 0.29 mmol) , (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] acetic acid (87 mg, 0.29 mmol) , HATU (163 mg, 0.43 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (74 mg, 0.57 mmol) in THF (6 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by Flash Chromatography (MeOH/DCM = 0-5%) to give the product tert-butyl ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-pro pionamidobutan-2-yl) phenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (90 mg, 0.14 mmol, yield: 48.7%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 638.2 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- ( (2-fluoro-4- ( (2S, 3R) -4- (4-methylpiperazin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) phenyl) am ino) -2-oxoethyl) carbamate (90 mg, 0.141 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (1.5 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. Then concentrated under vacuum to afford the crude product N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpip erazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (110 mg) . It was used to next step without further purification. MS (ESI) m/z = 538.2 [M+H] +.
Step 3: The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionami de (100 mg, 0.186 mmol) , (3-cyanophenyl) difluoroacetic acid (37 mg, 0.186 mmol) , HATU (106 mg, 0.279 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (144 mg, 1.116 mmol) in THF (5 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs. It was diluted with water (50 mL) and extracted with EtOAc (30 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (30 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (MeOH/DCM=0-5%) to give the product N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2- [2- (3-cyanophenyl) -2, 2-difluoroacetamido] -2- [4- (difluoromethylidene) cyclohexyl] acetamido] -3-fluorophenyl} -1- (4-methylpiperazin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl] propanami de (12 mg, 0.017 mmol, yield: 9.0 %) as white solid. MS (ESI) m/z = 717.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.00 (s, 1H) , 7.92 (dd, J = 13.1, 7.9 Hz, 2H) , 7.68 (dd, J =16.4, 8.2 Hz, 2H) , 7.19 –7.02 (m, 2H) , 4.85 (s, 1H) , 4.41 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 3.68 –3.41 (m, 3H) , 3.13 (dt, J = 13.7, 6.8 Hz, 1H) , 2.77 –2.59 (m, 2H) , 2.48 (t, J = 12.6 Hz, 2H) , 2.38 (d, J =19.3 Hz, 3H) , 2.23 (td, J = 15.1, 7.4 Hz, 3H) , 2.10 –1.69 (m, 7H) , 1.33 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 1.21 –1.07 (m, 5H) .
Example 248: Synthesis of
N- (1, 1-dicyclopropyl-3- ( (4- (1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxopropan-2-yl) - 2-fluorophenyl) amino) -3-oxopropan-2-yl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of (methoxymethyl) triphenylphosphonium chloride (21.8 g, 63.5 mmol) in THF (150 mL) was added t-BuOK (7.13 g, 63.5 mmol) in THF (50 mL) at 0℃. The mixture was stirred at rt for 1 hr under N2, then dicyclopropylmethanone (5 g, 45.4 mmol) was added at this temp, further stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was quenched by water (50 mL) , diluted with Hexanes (600 mL) , then filtered. The filtrate was washed with water (100 mL*3) . brine (100 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (EtOAc: Hexanes = 0～3%) to give the product (6.1g, 41.9 mmol, 92.3%yield) as a colorless oil. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.87 (s, 1H) , 3.58 (s, 3H) , 1.85 -1.78 (m, 1H) , 0.88 –0.79 (m, 1H) , 0.76 –0.65 (m, 2H) , 0.66 –0.56 (m, 2H) , 0.50 –0.42 (m, 2H) , 0.27 –0.18 (m, 2H) .
Step 2: A mixture of (1-cyclopropyl-2-methoxyethenyl) cyclopropane (2 g, 14.5 mmol) in THF (40 mL) and 3N HCl (13 mL) was stirred at 55℃ for 4 hrs at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with hexanes (200 mL) , washed with water (50 mL *2) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum to give the crude product (1.7 g, crude) as a colorless oil. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.74 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 1.08 -1.03 (m, 1H) , 0.88 –0.86 (m, 2H) , 0.61 –0.51 (m, 4H) , 0.31 –0.23 (m, 4H) .
Step 3: A mixture of 2, 2-dicyclopropylacetaldehyde (1 g, 8.1 mmol) , TMSCN (1.21 g, 12.1 mmol) , Ammonium carbonate (4.2 g, 43.7 mmol) in EtOH (8.5 mL) and H2O (8.5 mL) was stirred at 95℃ for 6 hrs in sealed tube. The mixture was acided with HCl to pH=5, diluted with DCM (100 mL) , washed with water (30 mL*3) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (MeOH : DCM =0～5%) to give the product (0.49 g, 2.0 mmol, 24.6 %yield) as a white solid. MS (ESI) m/z = 195.2 [M+H] +.
Step 4: A mixture of 5- (dicyclopropylmethyl) imidazolidine-2, 4-dione (490 mg, 2.52 mmol) in Sat. NaOH (7N) (15 mL) was stirred at 105℃ for 72 hrs . The added Boc2O (1.1 g, 5 mmol) in THF (5 mL) at 25℃. The mixture was further stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (80 mL) , washed with water (30 mL *2) . The combined water was adjusted with HCl to pH=4, then extracted with DCM (30 mL *3) . The combiend organic layer was washed by water (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated to give the product (330 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 292.1 [M+Na] +.
Step 5: A mixture of ethyl 2- (4-amino-3-fluorophenyl) propanoate (400 mg, 1.89 mmol) , 2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3, 3-dicyclopropylpropanoic acid (510 mg, 1.89 mmol) , EDCI (726 mg, 3.79 mmol) in Pyridine (10 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (100 mL) , washed by 1N HCl (20 mL *3) , brine (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by Flash Chromatography (EtOAc: Hexanes = 0～30%) to get the product (570 mg, 1.17 mmol, 61.8 %yield) as a white solid. MS (ESI) m/z = 407.0  [M+H-56] +. 1HNMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.29 –8.20 (m, 1H) , 8.12 (s, 1H) , 7.13 –7.03 (m, 2H) , 5.52 –5.33 (m, 1H) , 4.43 -4.33 (m , 1H) , 4.19 –4.05 (m, 2H) , 3.66 (q, J = 7.1 Hz, 1H) , 1.54 –1.35 (m, 12H) , 1.22 (t, J = 7.1 Hz, 3H) , 0.91 (dd, J = 10.5, 6.6 Hz, 1H) , 0.76 -0.68 (m, 2H) , 0.61 –0.43 (m, 4H) , 0.32 –0.20 (m, 4H) .
Step 6: A mixture of ethyl 2- {4- [2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3, 3-dicyclopropyl propanamido] -3-fluorophenyl} propanoate (50 mg, 0.108 mmol) in 2N HCl in MeOH (4 mL) was stirred at 25℃ for 4 hrs. The mixture was diluted with DCM (30 mL) , washed by Sat. NaHCO3 (15 mL*2) , water (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated to get the product (40 mg, crude) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 349.1 [M+H] +.
Step 7: A mixture of methyl 2- [4- (2-amino-3, 3-dicyclopropylpropanamido) -3-fluorophenyl] propanoate (40 mg, 0.115 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (18 mg, 0.115 mmol) , HATU (87 mg, 0.230 mmol) , DIEA (45 mg, 0.344 mmol) in THF (4 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by flash (EtOAc: Hexanes =0～30%) to get the product (45 mg, 0.088 mmol, 76.8 %yield) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 484.9 [M+H] +.
Step 8: A mixture of methyl 2- (4- {3, 3-dicyclopropyl-2- [ (2-isopropylpyrazol-3-yl) formamido] propanamido} -3-fluorophenyl) propanoate (45 mg, 0.093 mmol) , LiOH. H2O (10 mg, 0.23 mmol) in THF/H2O = 1: 1 (3 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was acide by 1N HCl to pH=4, diluted with DCM (50 mL) , washed by water (20 mL) , brine (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated to get the crude product (40 mg, crude) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 471.1 [M+H] +.
Step 9: A mixture of 2- (4- {3, 3-dicyclopropyl-2- [ (2-isopropylpyrazol-3-yl) formamido] propanamido} -3-fluorophenyl) propanoic acid (40 mg, 0.085 mmol) , 4- (difluoromethylidene) piperidine (14 mg, 0.085 mmol) , HATU (65 mg, 0.17 mmol) , DIEA (33 mg, 0.255 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with EA (50 mL) , washed by water (15 mL*3) , brine (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by Prep-TLC (MeOH : DCM=3%) to get the product (10.7 mg, 0.017 mmol, 20.4 %yield) as a white solid. 1HNMR (400 MHz, CD3OD ) δ 7.92 -7.88 (m, 1H) , 7.54 (s, 1H) , 7.16 -7.11 (m, 2H) , 6.80 (s, 1H) , 5.45 -5.36 (m, 1H) , 4.98 (d, J = 7.1 Hz, 1H) , 4.19 -4.13 (m, 1H) , 3.84 –3.74 (m, 1H) , 3.58 –3.41 (m, 3H) , 2.25 –2.04 (m, 3H) , 1.69 -1.65 (m, 1H) , 1.47 (t, J = 6.1 Hz, 6H) , 1.41 (d, J =6.8 Hz, 3H) , 0.95 –0.79 (m, 3H) , 0.57 –0.23 (m, 8H) . MS (ESI) m/z = 586.2 [M+H] +.
Example 249: Synthesis of
N- ( (S) -1- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetate (200 mg, 0.626 mmol) in methanol (5 mL) was added  Palladium/Carbon (40 mg) and the mixture was stirred at rt overnight under H2. The mixture was filtered through celite and concentrated under vacuum to afford the compound methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetate (200 mg, 0.622 mmol, yield: 99.4%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 222.1 [M+H-Boc] +.
Step 2: To a solution of methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetate (200 mg, 0.62 mmol) in THF/water=1: 1 (6 mL) was added LiOH. H2O (65 mg, 1.56 mmol) . The mixture was stirred at rt overnight. It was diluted with water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL) . Then the aqueous phase was adjusted pH=3 with 1 N HCl extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (30 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the compound (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetic acid (160 mg, 0.52 mmol, yield: 83.6%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 306.2 [M-H] -.
Step 3: The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (40 mg, 0.10 mmol) , (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetic acid (48 mg, 0.16 mmol) , HATU (71 mg, 0.19 mmol) and DIEA (34 mg, 0.26 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25℃ for 48 hrs. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate /petroleum ethe = 0-50%) to afford the compound tert-butyl ( (S) -1- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (70 mg, not pure) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 673.3 [M+H] +.
Step 4: To a solution of tert-butyl ( (S) -1- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-pro pionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) carbamate (70 mg, 0.104 mmol) in dichloromethane (3 mL) was added TFA (1 mL) and the mixture was stirred at rt for 2hrs. It was quenched with saturated NaHCO3 (10 mL) and extracted with dichloromethane (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophen yl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (50 mg, 0.087 mmol, yield: 83.6%) as a pale yellow solid. MS (ESI) m/z = 573.3 [M+H] +.
Step 5: The mixture of N- ( (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxobutan-2-yl) propionamide (50 mg, 0.087 mmol) , 2-ethylpyrazole-3 -carboxylic acid (18 mg, 0.131 mmol) , HATU (60 mg, 0.157 mmol) and DIEA (28 mg, 0.218 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at room temperature for 2 hrs. Then it was diluted with water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (15 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by prep-HPLC (HPLC (Mobile Phase: ACN-H2O (0.1%FA) , 35/65-75/25) ) to afford the compound N- ( (S) -1- ( (1r, 4S) -4- (difluoromethyl) cyclohexyl) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidi n-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyraz ole-5-carboxamide (8 mg, 0.012 mmol, yield: 13.2%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 695.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.80 –7.71 (m, 1H) , 7.46 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.16 -7.05 (m, 2H) , 6.86 -6.81 (m, 1H) , 5.95 –5.45 (m, 1H) , 4.95 (d, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.75 (d, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.57 –4.44 (m, 2H) , 3.49 -3.34 (m, 3H) , 3.25 –3.11 (m, 2H) , 2.32 –2.18 (m, 2H) , 2.17 –1.95 (m, 3H) , 1.93 –1.52 (m, 10H) , 1.38 -1.25 (m, 7H) , 1.10 (t, J = 7.6 Hz, 3H) .
Example 250: Synthesis of
N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1s, 4R) -4-fluoro-4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of methyl (2S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -2- (4-oxocyclohexyl) acetate (500 mg, 1.75 mmol) in THF (8 mL) was added MeLi (1.48 mL, 3.85 mmol, 2.6 M) at -78℃ under N2. The mixture was stirred at this temp for 1 hr, rt for 15 hrs. The mixture was quenched by Sat. NH4Cl (0.5 mL) , diluted with DCM (30 mL) , washed by water (10 mL) , brine (10 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (EtOAc: Hexanes=0～50%) to get the product (160 mg, 0.32 mmol, yield: 1.82%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 324.1 [M+Na] +.
Step 2: To a solution of methyl (2S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -2- (4-hydroxy-4-methylcyclohexyl) acetate (160 mg, 0.53 mmol) in DCM (4 mL) was added BAST (352 mg, 1.59 mmol) at 0 ℃ and the mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with DCM (30 mL) , washed by water (15 mL *2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (EtOAc: Hexanes=0～30%) to get the product (130 mg, 0.21 mmol, yield: 40.4%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 326.1 [M+Na] +.
Step 3: A mixture of methyl (2S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -2- (4-fluoro-4 -methylcyclohexyl) acetate (130 mg, 0.43 mmol) , LiOH. H2O (54 mg, 1.28 mmol) in THF/MeOH/H2O (1mL/1mL/1 mL) was stirred at 25℃ for 3 hrs. The mixture was concentrated and purified by Prep-HPLC (Gemini-C18 150 *21.2 mm, 5um: ACN---H2O (0.1%TFA) : 35-60) to get the product (45 mg, 0.078 mmol, yield: 18.2%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 312.0 [M+Na] +.
Step 4: A mixture of (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (4-fluoro-4-methylcyclohexyl) acetic acid (40 mg, 0.14 mmol) , N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamid (53 mg, 0.14 mmol) , HATU (105 mg, 0.28 mmol) , DIEA (54 mg, 0.41 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by flash (MeOH: DCM = 0～5%) to get the product, then purified by SFC (SP-120-10-C18 -BIO-C18 250 *50 mm, 10um (pH8-10) : CO2-MEOH (DEA) ) to get the product (9 mg, 0.013 mmol, yield: 9.48%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 655.1 [M+H] +.
Step 5: A mixture of tert-butyl N- [ (S) - ( {4- [ (2S, 3R) -4- [4- (difluoromethylidene)  piperidin-1-yl] -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] -2-fluorophenyl} carbamoyl) (4-fluoro-4-methylc yclohexyl) methyl] carbamate (9 mg, 0.014 mmol) in TFA/DCM (0.5 mL/0.5 mL) was stirred at 25℃ for 1 hr. The mixture was concentrated to get the product (220 mg, crude) as a yellow oil.
MS (ESI) m/z = 555.0 [M+H] +.
Step 6 : A mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-2- (4-fluoro-4-methylcyclohexyl) acetamido] -3-fluorophenyl} -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxob utan-2-yl] propanamide (10 mg, 0.018 mmol) , 2-ethylpyrazole -3-carboxylic acid (5 mg, 0.036 mmol) , HATU (14 mg, 0.036 mmol) , DIEA (19 mg, 0.14 mmol) in THF (2 mL) was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with DCM (40 mL) , washed by water (15 mL *3) , brine (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by Prep-TLC (MeOH/DCM = 5%) to get the product N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -4- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -4-oxo-3-propionamidobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- ( (1s, 4R) -4-fluoro-4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyraz ole-5-carboxamide (7.7 mg, 0.011 mmol, yield: 60%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 677.1 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.78 (t, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.49 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.17 –7.08 (m, 2H) , 6.89 –6.85 (m, 1H) , 4.97 (d, J = 10.3 Hz, 1H) , 4.68 –4.48 (m, 3H) , 3.51 –3.37 (m, 3H) , 3.25 -3.17 (m, 2H) , 2.31 -2.17 (m, 4H) , 2.1 -1.90 (m, 5H) , 1.86 –1.72 (m, 2H) , 1.68 –1.50 (m, 4H) , 1.39 -1.33 (m, 9H) , 1.13 (t, J = 7.6 Hz, 3H) .
Example 251a and 251b: Synthesis of
N- ( (S) -2- ( (5-fluoro-1- ( (R) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -2-oxo-1, 2-dihydropyridin-4-yl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole -5-carboxamide and
N- ( (S) -2- ( (5-fluoro-1- ( (S) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -2-oxo-1, 2-dihydropyridin-4-yl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole -5-carboxamide
Step 1: A mixture of (2R) -2- (4-amino-5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (100 mg, 0.34 mmol) and (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (4-methylcyclohexyl) acetic acid (92 mg, 0.34 mmol) in Pyridine (5 mL) was added POCl3 (104 mg, 0.68 mmol) at -15℃. The mixture was stirred at this temperature for 4 hrs. The mixture was concentrated under vacuum, purified by Flash Chromatography (EtOAc: Hexanes = 0-26%) to give the product (35 mg, 0.048 mmol, 14.1%yield) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 549.0 [M+H] +.
Step 2: A mixture of tert-butyl N- [ (S) - ( {5-fluoro-1- [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -2-oxopyridin-4-yl} car bamoyl) (4-methylcyclohexyl) methyl] carbamate (35 mg, 0.064 mmol) in TFA/DCM (0.5 mL /0.5 mL) was stirred at 25 ℃ for 1 hr. The mixture was concentrated to give the product (40 mg, crude) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 449.1 [M+H] +.
Step 3: A mixture of  (2R) -2- {4- [ (2S) -2-amino-2- (4-methylcyclohexyl) acetamido] -5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl} -N-met hyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (40 mg, 0.089 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (16 mg, 0.11 mmol) , HATU (68 mg, 0.18 mmol) , DIEA (69 mg, 0.53 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by Prep-HPLC (Gemini-C18 150 *21.2 mm, 5um: ACN--H2O (0.1%FA) : 50-80) to get the product P1 and P2: N- ( (S) -2- ( (5-fluoro-1- ( (R) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -2-oxo-1, 2-d ihydropyridin-4-yl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole -5-carboxamide and N- ( (S) -2- ( (5-fluoro-1- ( (S) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -2-oxo-1, 2-di hydropyridin-4-yl) amino) -1- ( (1r, 4S) -4-methylcyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Compound 251a: (35 mg, 0.0062 mmol, 6.95%yield) as a white solid
1HNMR (400 MHz, CD3OD ) δ 7.91 -7.87 (m, 1H) , 7.77 -7.73 (m, 1H) , 7.51 (d, J = 1.8 Hz, 1 H) , 6.80 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 5.58 (q, J = 6.7 Hz, 1H) , 5.369 -5.32 (m, 1H) , 4.59 (d, J = 8.2 Hz, 1 H) , 4.27 –3.99 (m, 2H) , 3.33 (s, 3H) , 1.91 -1.70 (m, 5H) , 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 1.44 (t, J = 7.2 Hz, 6H) , 1.31 –1.12 (m, 3H) , 1.02 -0.89 (m, 2H) , 0.90 (d, J = 6.5 Hz, 3H) .
MS (ESI) m/z = 585.0 [M+H] +.
Compound 251b: (6.3 mg, 0.011 mmol, 12.0%yield) as a white solid
1HNMR (400 MHz, CD3OD ) δ 7.93 -7.88 (m, 1H) , 7.76 -7.73 (m, 1H) , 7.51 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 6.79 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 5.59 (q, J = 6.7 Hz, 1H) , 5.41 –5.30 (m, 1H) , 4.58 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.25 –4.01 (m, 2H) , 3.33 (s, 3H) , 1.92 -1.70 (m, 5H) , 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 1.45 (d, J = 6.7 Hz, 3H) , 1.43 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 1.31 –1.12 (m, 3H) , 1.03 -0.96 (m, 2H) , 0.90 (d, J =6.5 Hz, 3H) .
MS (ESI) m/z = 585.0 [M+H] +.
Example 252a and 252b: Synthesis of
N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (5-fluoro-1- ( (R) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopr opan-2-yl) -2-oxo-1, 2-dihydropyridin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-ca rboxamide and N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (5-fluoro-1- ( (S) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -2-oxo-1, 2-dihydropyridin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxa mide
Step 1: A mixture of (2R) -2- (4-amino-5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoro ethyl) propanamide (100 mg, 0.34 mmol) and (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (cycloheptyl) acetic acid (92 mg, 0.34 mmol) in pyridine (3 mL) was added POCl3 (104 mg, 0.68 mmol) at -15℃. The mixture was stirred at -15℃ for 4 hrs. The mixture was concentrated under vacuum, purified by Flash Chromatography (EtOAc: Hexanes = 0-26%) to give the product (35 mg, 0.051 mmol, 15.1%yield) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 549.0 [M+H] +.
Step 2: A mixture of tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( {5-fluoro-1- [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -2-oxopyri din-4-yl} carbamoyl) methyl] carbamate (35 mg, 0.064 mmol) in TFA/DCM (0.5 mL /0.5 mL) was stirred at 25℃ for 1 hr. The mixture was concentrated to give the product (40 mg, crude) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 449.0 [M+H] +.
Step 3: A mixture of (2R) -2- {4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl} -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (40 mg, 0.089 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (16 mg, 0.11 mmol) , HATU (68 mg, 0.18 mmol) , DIEA (69 mg, 0.54 mmol) in THF (2 mL) was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated and purified by Prep-HPLC (Gemini-C18 150 *21.2 mm, 5um: ACN--H2O (0.1%FA) : 55-75) to get the product N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (5-fluoro-1- ( (R) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -2-oxo-1, 2-dihydropyridin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide and N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (5-fluoro-1- ( (S) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -2-oxo-1, 2-dihydropyridin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide.
Compound 252a: P1 (6.6 mg, 0.011 mmol, 12.3%yield) as a white solid
1HNMR (400 MHz, CD3OD ) δ 7.94 -7.89 (m, 1H) , 7.78 -7.75 (m, 1H) , 7.53 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 6.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 5.64 –5.55 (m, 1H) , 5.41 -5.32 (m, 1H) , 4.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.28 –4.01 (m, 2H) , 3.35 (s, 3H) , 2.22 -2.18 (m, 1H) , 1.89 -1.72 (m, 4H) , 1.69 –1.55 (m, 4H) , 1.54 –1.43 (m, 13H) . MS (ESI) m/z = 585.0 [M+H] +.
Compound 252b: (2.7 mg, 0.0041 mmol, 7.36%yield) as a white solid
1HNMR (400 MHz, CD3OD ) δ 7.94 -7.90 (m, 1H) , 7.77 (d, J = 5.3 Hz, 1H) , 7.53 (d, J =1.9 Hz, 1H) , 6.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 5.63 -5.58 (m, 1H) , 5.40 -5.33 (m, 1H) , 4.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.24 -4.05 (m, 2H) , 3.35 (s, 3H) , 2.24 –2.18 (m, 1H) , 1.87 -1.72 (m, 4H) , 1.70 –1.58 (m, 4H) , 1.55 –1.43 (m, 13H) . MS (ESI) m/z = 585.0 [M+H] +.
Example 253a and 253b: Synthesis of
N- (1, 1-dicyclopropyl-3- ( (4- (1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxopropan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -3-oxopropan-2-yl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of ethyl 2- (4-amino-3-fluorophenyl) propanoate (100 mg, 0.473 mmol) and (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (cycloheptyl) acetic acid (128.46 mg, 0.473 mmol) in pyridine (10 mL) was added EDCI (181.50 mg, 0.947 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (50 mL) , washed by 1N HCl (20 mL *3) , brine (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated in vacuo and purified by Flash Chromatography (EtOAc/hexanes = 0～30%) to get the product ethyl 2- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (180 mg, 0.388 mmol, 81.9 %yield) as a light yellow oil. MS (ESI) m/z = 409.3 [M+H-56] +.
Step 2: ethyl  2- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (180 mg, 0.388 mmol) in DCM (4 mL) was added TFA (1 mL) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 3 hrs. The mixture was diluted with DCM (30 mL) , washed by saturated NaHCO3 solution (15 mL*2) , water (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated to get the product ethyl 2- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (160 mg, crude) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 365.3 [M+H] +.
Step 3: To a solution of ethyl 2- (4- ( (S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (160 mg, 0.439 mmol) and 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (67.68 mg, 0.439 mmol) in THF (20 mL) was added HATU (333.84 mg, 0.878 mmol) and DIEA (170.22 mg, 1.317 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated in vacuo and purified by Flash Chromatography (EtOAc/hexanes =0～20%) to get the product ethyl 2- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (180 mg, 0.360 mmol, 81.9 %yield) as a light yellow solid. MS (ESI) m/z = 501.4 [M+H] +.
Step 4: To a solution of ethyl 2- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) propanoate (180 mg, 0.360 mmol) in THF/H2O = 1: 1 (6 mL) was added LiOH. H2O (37.72 mg, 0.899 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was adjusted by 1N HCl to pH=4, diluted with DCM (50 mL) , washed by water (20 mL) , brine (20 mL) , dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to get the product 2- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) propanoic acid (100 mg, crude) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 473.3 [M+H] +.
Step 5: To a solution of 2- (4- ( (S) -2-cycloheptyl-2- (1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) propanoic acid (100 mg, 0.212 mmol) and 4- (difluoromethylidene) piperidine hydrochloride (35.89 mg, 0.212 mmol) in THF (10 mL) was added HATU (160.91 mg, 0.423 mmol) and DIEA (82.05 mg, 0.635 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (50 mL) , washed by water (15 mL *3) , brine (15 mL) , dried over Na2SO4, concentrated in vacuo and purified by Flash Chromatography (MeOH/DCM = 0～3%) and Chiral HPLC to afford product N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (S) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxopropan-2-yl) -2-flu orophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide and N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (4- ( (R) -1- (4- (difluoromethylene) piperidin-1-yl) -1-oxopropan-2-yl) -2-flu orophenyl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide.
Compound 253a: (33.2 mg, , 0.056 mmol, yield: 26.7%)
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.89 (s, 1H) , 8.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.71 (t, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.49 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.18 (d, J = 11.9 Hz, 1H) , 7.06 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 6.91 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 5.38 (dt, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H) , 4.58 (t, J = 8.3 Hz, 1H) , 4.15 (q, J = 6.7 Hz, 1H) , 3.62 –3.38 (m, 4H) , 2.02 (dt, J = 15.2, 12.0 Hz, 4H) , 1.81 –1.47 (m, 8H) , 1.46 –1.31 (m, 10H) , 1.26 (t, J = 9.3 Hz, 4H) . MS (ESI) m/z = 588.4 [M+H] +.
Compound 253b: (30.7 mg, 0.052 mmol, yield: 24.7%)
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.90 (s, 1H) , 8.46 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.70 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.49 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 7.16 (dd, J = 11.8, 1.6 Hz, 1H) , 7.07 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 6.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 5.38 (dt, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H) , 4.58 (t, J = 8.3 Hz, 1H) , 4.15 (q, J = 6.8 Hz, 1H) , 3.61 –3.36 (m, 4H) , 2.19 –1.92 (m, 4H) , 1.80 –1.46 (m, 8H) , 1.46 –1.29 (m, 10H) , 1.26 (t, J =9.4 Hz, 4H) . MS (ESI) m/z = 588.4 [M+H] +.
Example 254a and 254b: Synthesis of
N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (1- ( (R) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl ) -6-oxo-1, 6-dihydropyridazin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxa mide and N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (1- ( (S) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -6-oxo-1, 6-dihydropyridazin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: The mixture of 5-chloro-2H-pyridazin-3-one (1 g, 7.7 mmol) , methyl (2S) -2-hydroxypropanoate (1 g, 10 mmol) and PPh3 (3 g, 11.5 mmol) in THF (20 mL) was stirred at 0℃ for 10 min under N2, then DIAD (2.34 g, 11.5 mmol) was added to the solution and stirred at 60℃ for 6 hrs under N2. The resulting mixture was diluted with water, extracted with EtOAc (20 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated. The residue purified by Flash Chromatography (EtOAc/Hexanes = 0-10%) to give the product methyl (2R) -2- (4-chloro-6-oxopyridazin-1-yl) propanoate (1.4 g, 6.4 mmol, 83%yield) as a yellow solid.
MS (ESI) m/z = 217.0 [M+H] +.
Step 2: The mixture of BocNH2 (1.5 g, 12.9 mmol) , methyl (2R) -2- (4-bromo -5-fluoro-2-oxopyridin-1-yl) propanoate (1.4 g, 6.46 mmol) , Xantphos (308 mg, 0.65 mmol) , Pd2 (dba) 3 (296 g, 0.3 mmol) , Cs2CO3 (6.3 g, 19 mmol) in dioxane (20 mL) was stirred at 110℃for 5 hrs under N2. The resulting mixture was diluted with H2O (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (EtOAc/Hexanes = 0-50%) to give the product methyl (2R) -2- (4- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -6-oxopyridazin-1-yl) propanoate (650 mg, 2.1 mmol, 33.7%yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 298.1 [M+H] +.
Step 3: To a solution of methyl (2R) -2- (4- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -6-oxopyridazin-1-yl) propanoate (650 mg, 2.19 mmol) in MeOH/THF/H2O = 1: 1: 1 (3 mL) was added LiOH·H2O (275 mg, 6.56 mmol) and stirred at 25℃ for 2 hrs. The resulting mixture was diluted with Saturated sodium carbonate solution (20 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc = 0-50%) to give the product (2R) -2- (4- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -6-oxopyridazin-1-yl) propanoic acid (500 mg, 1.76 mmol, 80%yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 284.0 [M+H] +
Step 4: The mixture of (2R) -2- (4- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -6-oxopyridazin-1-yl) propanoic acid (500 mg, 1.76 mmol) , methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amine (316 mg, 2.12 mmol) , EDCI (676 mg, 3.53 mmol) in pyridine (10  mL) was stirred at 25℃ for 2 hrs. The resulting mixture was diluted with 1N HCl (20 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) , concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc = 0-50%) to give the product tert-butyl N- {1- [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -6-oxopyridazin-4-yl} carbamate (400 mg, 1.0 mmol, 60%yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 379.1 [M+H] +.
Step 5: To a solution of tert-butyl N- {1- [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -6-oxopyridazin-4-yl} carbamate (350 mg, 0.92 mmol) in DCM (4 mL) was added HCl in dioxane (4 M, 2 mL) , the resulting mixture was stirred at 25℃ for 16 hrs. The resulting mixture was concentrated under vacuum to afford crude product (2R) -2- (4-amino-6-oxopyridazin-1-yl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (140 mg, 0.50 mmol , 54.3%yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 279.0 [M+H] +.
Step 6: To a solution of compound (2R) -2- (4-amino-6-oxopyridazin-1-yl) -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (130 mg, 0.47 mmol) in DMF (3 mL) was added NaH (28 mg, 1.16 mmol) and stirred at 25℃ for 1 hr. To another solution of compound (S) - { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} (cycloheptyl) acetic acid (353 mg, 0.93 mmol) in DMF (3 mL) was added HATU (266 mg, 0.7 mmol) and DIEA (181 mg, 1.4 mmol) . The mixture was stirred at 25℃ for 1 hr. Then the mixture was added into above reaction solution. The resulting mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with EtOAc (40 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Chromatography (MeOH/DCM = 0-10%) to afford product tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( {1- [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -6-oxopyridazin-4-y l} carbamoyl) methyl] carbamate (40 mg, 0.08mmol, 17%yield) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 532.2 [M+H] +.
Step 7: To a solution of compound tert-butyl N- [ (S) -cycloheptyl ( {1 - [ (1R) -1- [methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) carbamoyl] ethyl] -6-oxopyridazin-4-yl} carbamoyl) methyl] c arbamate (40 mg, 0.07 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl in dioxane (4 M, 2 mL) and stirred at 25 ℃ for 3 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford crude product (2R) -2- {4- [ (2S) -2-amino-2-cycloheptylacetamido] -6-oxopyridazin-1-yl} -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifl uoroethyl) propanamide (40 mg) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 432.1 [M+H] +.
Step 8: The mixture of compound (2R) -2- {4- [ (2S) -2-amino -2-cycloheptylacetamido] -6-oxopyridazin-1-yl} -N-methyl-N- (2, 2, 2-trifluoroethyl) propanamide (40 mg, 0.1 mmol) , 2-isopropylpyrazole-3-carboxylic acid (21 mg, 0.14 mmol) , HATU (88 mg, 0.24 mmol) and DIEA (72 mg, 0.56 mmol) in THF (3 mL) was stirred at 25 ℃ for 3 hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (MeOH/DCM = 0-5%) and Chiral HPLC to afford product N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (1- ( (R) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -6-oxo-1, 6-dihydropyridazin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide and N- ( (S) -1-cycloheptyl-2- ( (1- ( (S) -1- (methyl (2, 2, 2-trifluoroethyl) amino) -1-oxopropan-2-yl) -6-oxo-1, 6-dihydropyridazin-4-yl) amino) -2-oxoethyl) -1-isopropyl-1H-pyrazole-5-carboxamide as a white solid.
Compound 254a: (2.9 mg, 0.056 mmol, yield: 26.7%)
1H NMR (400 MHz, CD3ODδ 8.05 (d, J = 2.5 Hz, 1H) , 7.50 (d, J = 2.1 Hz, 2H) , 6.78 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 5.75 (q, J = 7.0 Hz, 1H) , 5.39 –5.25 (m, 1H) , 4.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.32 – 4.15 (m, 1H) , 4.13 –3.91 (m, 1H) , 3.23 (s, 3H) , 2.21 –2.08 (m, 1H) , 1.80 (d, J = 11.7 Hz, 1H) , 1.73 (d, J = 6.1 Hz, 3H) , 1.58 (d, J = 6.9 Hz, 4H) , 1.53 (d, J = 10.0 Hz, 3H) , 1.43 (dd, J = 6.6, 4.3 Hz, 9H) , 1.28 (s, 1H) . MS (ESI) m/z = 568.2 [M+H] +.
Compound 254b: (3.6 mg, 0.052 mmol, yield: 24.7%)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 7.50 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 6.77 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 5.75 (t, J = 6.9 Hz, 1H) , 5.42 –5.27 (m, 1H) , 4.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.20 (dt, J = 18.6, 7.7 Hz, 1H) , 4.06 (dt, J = 9.1, 7.6 Hz, 1H) , 3.20 (s, 3H) , 2.15 (dd, J = 8.2, 3.3 Hz, 1H) , 1.80 (d, J = 12.1 Hz, 1H) , 1.78 –1.68 (m, 3H) , 1.57 (d, J = 6.9 Hz, 4H) , 1.55 –1.48 (m, 3H) , 1.42 (dt, J = 10.9, 5.5 Hz, 9H) , 1.28 (s, 1H) . MS (ESI) m/z = 568.2 [M+H] +.
Example 255: Synthesis of
N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -3, 3-dicyclopropyl-2- [ (2-ethylpyrazol-3-yl) formamido] propanamido] -3-fluorophenyl} -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide
Step 1: The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (75 mg, 0.19 mmol) , (2S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -3, 3-dicyclopropylpropanoic acid (79 mg, 0.30 mmol) , HATU (148 mg, 0.40 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (101 mg, 0.78 mmol) in THF (5 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by Flash Chromatography (MeOH/DCM = 0-5%) to give the product tert-butyl N- [ (1S) -2, 2-dicyclopropyl-1- ( {4- [ (2S, 3R) -4- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] -2-fluorophenyl} carbamoyl) ethyl] carbamate (80 mg, 12.6 mmol, 66%yield) as yellow solid. MS (ESI) m/z = 635.3 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl N- [ (1S) -2, 2-dicyclopropyl-1- ( {4- [ (2S, 3R) -4- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -4-oxo-3-propanamidobutan-2-yl] -2-fluor ophenyl} carbamoyl) ethyl] carbamate (60 mg, 0.09 mmol) in DCM (2 mL) was added TFA (1 mL) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 3 hrs. Then concentrated under vacuum to afford the crude product N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-3, 3-dicyclopropylpropanamido] -3-fluorophenyl} -1- [4- (difluoro methylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (60 mg) . It was used to next step without further purification. MS (ESI) m/z = 535.2 [M+H] +.
Step 3: The mixture of N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -2-amino-3, 3-dicyclopropyl propanamido] -3-fluorophenyl} -1- [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] prope namide (60 mg, 0.11 mmol) , 2-ethylpyrazole-3-carboxylic acid (20 mg, 0.15 mmol) , HATU (64 mg, 0.17 mmol) and N, N-Diisopropylethylamine (58 mg, 0.45 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs. It was diluted with water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (30 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (MeOH/DCM = 0-5%) to give the product N- [ (2R, 3S) -3- {4- [ (2S) -3, 3-dicyclopropyl-2- [ (2-ethylpyrazol-3-yl) formamido] propanamido] -3-fluorophenyl} -1  - [4- (difluoromethylidene) piperidin-1-yl] -1-oxobutan-2-yl] propanamide (12.6 mg, 0.018 mmol, 16.9%yield) as white solid. MS (ESI) m/z = 657.3 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ7.83 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.48 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.15 (dd, J = 12.0, 1.4 Hz, 1H) , 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 6.83 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 4.94 (dd, J = 8.9, 4.4 Hz, 2H) , 4.51 (q, J = 7.1 Hz, 2H) , 3.48 (dd, J = 11.9, 5.6 Hz, 1H) , 3.44 –3.31 (m, 2H) , 3.22 –3.08 (m, 2H) , 2.33 –2.17 (m, 2H) , 2.05 (t, J = 12.4 Hz, 2H) , 1.76 –1.60 (m, 1H) , 1.55 –1.41 (m, 1H) , 1.36 (t, J = 7.2 Hz, 3H) , 1.32 (d, J =7.0 Hz, 3H) , 1.10 (t, J = 7.6 Hz, 3H) , 0.83 (ddd, J = 14.9, 9.2, 4.8 Hz, 2H) , 0.77 –0.70 (m, 1H) , 0.57 –0.36 (m, 3H) , 0.34 –0.13 (m, 5H) .
Example 256: Synthesis of
2- (1- ( (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoyl) piperidin-4-yl) acetic acid
Step 1: To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (50 mg, 0.081 mmol) , methyl 2- (piperidin-4-yl) acetate hydrochloride (30 mg, 0.155 mmol) and HATU (37 mg, 0.097 mmol) in DMF (5 mL) was added DIEA (55 mg, 0.425 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 4hrs. The reaction mixture was poured into water (20 mL) and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by column chromatography (90 -100%EtOAc/hexanes) to afford methyl 2- (1- ( (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoro methylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butan oyl) piperidin-4-yl) acetate (50 mg, 0.066 mmol, yield: 81.63%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 758.3 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl 2- (1- ( (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetami do) -3-fluorophenyl) butanoyl) piperidin-4-yl) acetate (50 mg, 0.066 mmol) in THF (10 mL) and water (5 mL) was added LiOH. H2O (11.07 mg, 0.264 mmol) . The mixture was stirred at 25℃ for 3 hrs. The mixture was adjusted pH = 3 with 1N HCl then extracted with EA (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by Genal-Prep-HPLC (elution gradient: 18%-21%acetonitrile/water (0.1%FA) ) to afford the title compound 2- (1- ( (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoyl) piperidin-4-yl) aceti c acid (16.2 mg, 0.022 mmol, yield: 33.01%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 744.3 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.85 –7.71 (m, 1H) , 7.51 –7.46 (m, 1H) , 7.19 –7.04 (m, 2H) , 6.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 4.98 –4.88 (m, 1H) , 4.61 (t, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.56 –4.48 (m, 2H) , 4.38 –4.26 (m, 1H) , 3.95 –3.88 (m, 1H) , 3.19 –3.09 (m, 1H) , 2.98 –2.82 (m, 4H) , 2.62 –2.51 (m, 3H) , 2.48 –2.35 (m, 1H) , 2.19 –1.77 (m, 8H) , 1.65 –1.48 (m, 2H) , 1.40 –1.33 (m, 6H) , 1.31 –1.04 (m, 3H) , 0.95 –0.88 (m, 2H) , 0.80 –0.65 (m, 2H) , 0.60 –0.49 (m, 0.5H) , 0.16 –0.05 (m, 0.5H) .
Example 257a and 257b: Synthesis of
N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- ( (3R, 4R) -4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide and
N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- ( (3R, 4S) -4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (5 g, 23.5 mol) in THF (100 mL) was added methylmagnesium bromide (11.8 mL, 35.4 mmol) under N2 at 0℃. The mixture was stirred at room temperature under N2 for 2hrs. The mixture was quenched with NH4Cl (30 mL) , extracted with EA (100 mL *2) . The organic layers were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo to afford crude product. The crude product was purified by flash chromatography (silica, solvent gradient: 0-50%EA in PE) to give tert-butyl 4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (2 g, 8.73 mmol, yield: 37.2%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 156.0 [M-56-18] +.
Step 2: To a solution of NaH (868 mg, 21.7 mmol) in DMF (10 mL) was added tert-butyl 4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (1 g, 4.34 mmol) under N2. The mixture was stirred at rt under N2 for 1h. MeI (6.17 g, 43.4 mmol) and HMPA (0.5 mL) were added into the mixture and stirred at 50℃ for 12hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) . The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 5/1, v/v) to afford tert-butyl 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (500 mg, 2.06 mmol, yield: 47.1%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 266.2 [M+Na] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.41 mmol) in DCM (2 mL) was added hydrochloric acid solution (2 mL, 4M in dioxane) . The mixture was stirred at room temperature for 2hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine HCl salt (65 mg, 0.36 mmol, yield: 88.3%) , as a yellow oil. The product was used into the next step without further purification. MS (ESI) m/z = 144.2 [M+H] +.
Step 4: To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-e thyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (40 mg, 0.065 mmol) , 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine HCl salt (18 mg, 0.10 mmol) and DIEA (25 mg, 0.19 mmol)  in DMF (5 mL) was added HATU (32 mg, 0.084 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 2hrs. The mixture was dissolved with EtOAc (50 mL) and washed with H2O (20 mL) and brine (20 mL) , dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo to afford crude product, which was purified by preparative HPLC (Gemini-C18 column, 5μ silica, 21.2 mm diameter, 150 mm length) , using decreasingly polar mixtures of water (containing 0.05%FA) and MeCN as eluents 20-50%) followed by SFC to afford the title compound N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- ( (3R, 4R) -4-methoxy-3, 4-dimethylpip eridin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2-ox oethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide and N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-methylureido) -4- ( (3R, 4S) -4-methoxy-3, 4-dimethylpip eridin-1-yl) -4-oxobutan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2-ox oethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide.
Compound 257a: (14.4 mg, 0.019 mmol, yield: 29.23%) as a white solid.
MS (ESI) m/z = 744.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) : δ ppm 7.96 –7.80 (m, 1H) , 7.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.18 –7.06 (m, 2H) , 6.88 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 6.29 –6.26 (m, 1H) , 4.95 –4.91 (m, 1H) , 4.61 –4.51 (m, 3H) , 4.15 –3.34 (m, 3H) , 3.17 –3.04 (m, 4H) , 2.95 –2.88 (m, 3H) , 2.61 –2.44 (m, 4H) , 2.06 –1.99 (m, 2H) , 1.87 –1.79 (m, 4H) , 1.40 –1.30 (m, 7H) , 1.29 –1.17 (m, 2H) , 1.09 (s, 1H) , 0.94 –0.85 (m, 4H) , 0.78 –0.66 (m, 5.5H) , 0.10 –0.02 (m, 0.5H) .
Compound 257b: (18.9 mg, 0.025 mmol, yield: 38.46%) as a white solid.
MS (ESI) m/z = 744.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) : δ ppm 7.91 –7.79 (m, 1H) , 7.50 –7.49 (m, 1H) , 7.17 –7.05 (m, 2H) , 6.88 –6.87 (m, 1H) , 6.29 –6.25 (m, 1H) , 4.97 –4.90 (m, 1H) , 4.62 –4.51 (m, 3H) , 4.14 –3.87 (m, 1H) , 3.64 –3.48 (m, 1H) , 3.22 –2.99 (m, 5H) , 2.90 –2.89 (m, 3H) , 2.61 –2.45 (m, 4H) , 2.06 –1.99 (m, 2H) , 1.94 –1.87 (m, 3H) , 1.70 –1.67 (m, 1H) , 1.40 –1.33 (m, 7H) , 1.27 –1.16 (m, 2H) , 1.11 –1.04 (m, 1H) , 0.93 –0.87 (m, 4H) , 0.82 –0.74 (m, 5.5 H) , 0.15 –0.07 (m, 0.5H) .
Example 258 : Synthesis of N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -4-oxo-4- (4- (1- (trifluoromethyl) cyclop ropyl) piperazin-1-yl) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl ) -2-oxoethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide
Step 1: To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) butanoate (500 mg, 1.95 mmol) and TEA (592.39 mg, 5.85 mmol) in DCM (20 mL) was added TEAA (491.82  mg, 2.34 mmol) at 0 ℃. The mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was diluted with water (40 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate/hexane, 0-20%) to afford methyl (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (420 mg, 1.19 mmol, yield: 61.10%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 352.8 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (3-fluoro-4-nitrophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (420 mg, 1.19 mmol) in EA (10 mL) was added 10%Pd/C (80 mg) . The mixture was stirred at rt under H2 atmosphere for 2 hrs. The mixture was filtered through celite and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: elution gradient: ethyl acetate/hexane, 0-50%) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (300 mg, 0.93 mmol, yield: 78.08%) as a pale-yellow solid. MS (ESI) m/z = 323.1 [M+H] +.
Step 3: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4-amino-3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (300 mg, 0.93 mmol) in THF (5 mL) was added (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetic acid (426.41 mg, 1.39 mmol) , DIEA (359.14 mg, 2.78 mmol) , HATU (528.96 mg, 1.39 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 48 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate /hexane = 0-40%) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamid o) -3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (350 mg, 0.57 mmol, yield: 61.68%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 632.1 [M+Na] +.
Step 4: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroaceta mido) butanoate (350 mg, 0.57 mmol) in DCM (5 mL) was added TFA (3 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was quenched with saturated NaHCO3 (20 mL) and extracted with dichloromethane (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: methanol /dichloromethane, 0-2%) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (2 , 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (280 mg, 0.55 mmol, yield: 95.72%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 510.1 [M+H] +.
Step 5: To a solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2-amino-2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetamido) -3-fluorophenyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoat e (280 mg, 0.55 mmol) in DMF (20 mL) was added 1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (92.24 mg, 0.66 mmol) , DIEA (212.27 mg, 1.65 mmol) , HATU (229.27 mg, 0.60 mmol) . The reaction mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was diluted with water (40 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate /hexane, 0-50%) to afford methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe  nyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (290 mg, 0.46 mmol, yield: 83.54%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 632.2 [M+H] +.
Step 6: A solution of methyl (2R, 3S) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) -2- (2, 2, 2-trifluoroacetamido) butanoate (280 mg, 0.44 mmol) in HCl/MeOH (5 mL) was stirred at 50 ℃ for 16 hrs. The mixture was adjusted pH to 9 with saturated aq. NaHCO3 and extracted with DCM (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carbo xamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (150 mg, 0.28 mmol, yield: 63.18%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 536.2 [M+H] +.
Step 7: To a solution of methyl (2R, 3S) -2-amino-3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophe nyl) butanoate (120 mg, 0.22 mmol) in DCM (10 mL) was added Triphosgene (53.20 mg, 0.18 mmol) and DIEA (144.54 mg, 1.12 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 10 mins. To this was added N-ethylcyclopropanamine hydrochloride (54.50 mg, 0.45 mmol) . The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hr. The mixture was diluted with water (40 mL) and extracted with DCM (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: ethyl acetate /hexane, 0-50%) to afford methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-eth yl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (90 mg, 0.14 mmol, yield: 62.11%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 647.2 [M+H] +.
Step 8: To a solution of methyl (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoate (90 mg, 0.14 mmol) in MeOH/H2O (10 mL) was added LiOH. H2O (29.20 mg, 0.70 mmol) . The reaction mixture was stirred at rt for 2hrs. The mixture was diluted with water (20 mL) and adjusted pH to 3 with 1N HCl, then extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-eth yl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (60 mg, 0.095 mmol, yield: 68.14%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 633.3 [M+H] +.
Step 9: To a solution of (2R, 3S) -2- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -3- (4- ( (S) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamido) acetamido) -3-fluorophenyl) butanoic acid (30 mg, 0.047 mmol) in DMF (5 mL) was added 1- [1- (trifluoromethyl) cyclopropyl] piperazine (13.81 mg, 0.071 mmol) , DIEA (18.34 mg, 0.14 mmol) and HATU (19.81 mg, 0.052 mmol) . The mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Genal-Prep-HPLC (elution gradient: acetonitrile/water (0.1%FA) ) to afford the title compound N- ( (S) -2- ( (4- ( (2S, 3R) -3- (3-cyclopropyl-3-ethylureido) -4-oxo-4- (4- (1- (trifluoromethyl) cycloprop yl) piperazin-1-yl) butan-2-yl) -2-fluorophenyl) amino) -1- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) -2-oxo ethyl) -1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxamide (21.2 mg, 0.026 mmol, yield: 55.27%) as a white  solid. MS (ESI) m/z = 809.3 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.81 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.39 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.10 –6.93 (m, 2H) , 6.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 6.16 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 4.81 (t, J = 9.6 Hz, 1H) , 4.54 –4.40 (m, 3H) , 3.41 –3.23 (m, 3H) , 3.10 –2.99 (m, 2H) , 2.67 –2.26 (m, 6.5H) , 2.15 –1.71 (m, 6.5H) , 1.31 –1.09 (m, 9H) , 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H) , 0.87 –0.80 (m, 4H) , 0.73 (s, 2H) , 0.67 –0.60 (m, 2H) .
The following compounds were obtained using similar procedures for synthesis of examples. The compounds are shown in Table 3.








Synthesis of intermediate:
Intermediate 1. Synthesis of 2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3, 3-dicyclopropylpropanoic acid
Step 1: To a solution of (methoxymethyl) triphenylphosphonium chloride (21.8 g, 63.5  mmol) in THF (150 mL) was added t-BuOK (7.13 g, 63.5 mmol) in THF (50 mL) at 0℃. The mixture was stirred at rt for 1 hr under N2, then dicyclopropylmethanone (5 g, 45.4 mmol) was added at this temp, further stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was quenched by water (50 mL) , diluted with Hexanes (600 mL) , then filtered. The filtrate was washed with water (100 mL*3) . brine (100 mL) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (EtOAc: Hexanes=0～3%) to give the product. (6.1g, 41.9 mmol, 92.3%yield) as a colorless oil. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.87 (s, 1H) , 3.58 (s, 3H) , 1.85 -1.78 (m, 1H) , 0.88 –0.79 (m, 1H) , 0.76 –0.65 (m, 2H) , 0.66 –0.56 (m, 2H) , 0.50 –0.42 (m, 2H) , 0.27 –0.18 (m, 2H) .
Step 2: A mixture of (1-cyclopropyl-2-methoxyethenyl) cyclopropane (2 g, 14.5 mmol) in THF (40 mL) and 3N HCl (13 mL) was stirred at 55℃ for 4 hrs, rt for 16 hrs. The mixture was diluted with Hexanes (200 mL) , washed with water (50 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum to give the crude product (1.7 g, crude) as a colorless oil. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.74 (d, J = 2.9 Hz, 1H) , 1.08 -1.03 (m, 1H) , 0.88 –0.86 (m, 2H) , 0.61 –0.51 (m, 4H) , 0.31 –0.23 (m, 4H) .
Step 3: A mixture of 2, 2-dicyclopropylacetaldehyde (1 g, 8.1 mmol) , TMSCN (1.21 g, 12.1 mmol) , Ammonium carbonate (4.2 g, 43.7 mmol) in EtOH (8.5 mL) and H2O (8.5 mL) was stirred at 95℃ for 6 hrs in sealed tube. The mixture was acided with HCl to pH=5, diluted with DCM (100 mL) , washed with water (30 mL*3) , dried over Na2SO4, concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (MeOH : DCM =0～5%) to give the product (0.49 g, 2.0 mmol, 24.6 %yield) as a white solid. MS (ESI) m/z = 195.2 [M+H] +.
Step 4: A mixture of 5- (dicyclopropylmethyl) imidazolidine-2, 4-dione (490 mg, 2.52 mmol) in Sat. NaOH (7N) (15 mL) was stirred at 105℃ for 72 hrs . The added Boc2O (1.1 g, 5 mmol) in THF (5 mL) at 25℃. The mixture was further stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (80 mL) , washed with water (30 mL*2) . The combined water was acided with HCl to pH=4, then extracted with DCM (30 mL*3) . The combiend organic layer was washed by water (20 mL) , dried over Na2SO4, concentrated to give the product (330 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 292.1 [M+Na] +.
Intermediate 2. Synthesis of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3, 3-dicyclobutylpropanoic acid
Step 1: To a solution of cyclobutanecarbaldehyde (1500 mg, 17.8 mmol) in THF (50 mL) was added bromo (cyclobutyl) magnesium (42.8 mL, 21.4 mmol, 0.5 M in THF) at 0℃ and the mixture was stirred at 0℃ for 1.5 hrs. The reaction mixture was quenched with saturated ammonium chloride (100 mL) and extracted with ethyl acetate (60 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (60 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford compound dicyclobutylmethanol (750 mg, 5.4 mmol,  yield: 30.0%) as a colorless oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.39 (t, J = 6.9 Hz, 1H) , 2.36 –2.23 (m, 2H) , 1.95 –1.72 (m, 12H) .
Step 2: To a solution of dicyclobutylmethanol (730 mg, 5.2 mmol) in DCM (20 mL) was added Imidazole (425 mg, 6.2 mmol) and triphenylphosphine dibromide (2637 mg, 6.2 mmol) at 0℃.The mixture was stirred at rt overnight. The reaction mixture was quenched with saturated ammonium chloride (50 mL) and extracted DCM (50 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (50 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to get crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether) to afford compound (bromomethylene) dicyclobutane (540 mg, 2.7 mmol, crude) as a colorless oil. It was used to next step without further purification.
Step 3: Powdered sodium hydroxide (381 mg, 9.5 mmol) was added to a solution of NI- (S) -BPB-GLY (950 mg, 1.9 mmol) in DMF (15 mL) under stirring. Then, (bromomethylene) dicyclobutane (988 mg, 4.9 mmol) was added to the solution. The mixture was stirred under nitrogen and the reaction progress was monitored by TLC. The reaction mixture was quenched with ice water (150 mL) and extracted with ethyl acetate (100 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (100 mL *2) , dried over anhydrous sodium sulphate and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/1, v/v) to afford the compound (280 mg, 0.45 mmol, yield: 10.1%) as a sorrel solid. MS (ESI) m/z = 620.2 [M+H] +.
Step 4: A mixture of compound 6 (280 mg, 0.45 mmol) in 3M HCL/MeOH=1: 1 (15 mL) was stirred at 70℃ for 1 h and concentrated. The residue was diluted with water (10 mL) , washed by DCM (10 mL*2) . The combined liquid layer was added Na2CO3 to adjust PH = 10, added THF (20 mL) , Boc2O (492 mg, 2.26 mmol) . The mixture was further stirred at rt for 16 hrs. The mixture was diluted with EA (50 mL) , washed by water (50 mL*2) . The combined liquid layer was added 4 M HCl to adjusted PH=3. Then it washed by EA (50 mL*3) , the combined organic layer was concentrated to get product (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -3, 3-dicyclobutylpropanoic acid (65 mg, 0.22 mmol, yield: 48.4%) as a yellow solid. MS (ESI) m/z = 320.2 [M+Na] +.
Intermediate 3. Synthesis of 4-ethyl-1, 2, 5-oxadiazole-3-carboxylic acid
Step 1: To a solution of methyl 3-oxopentanoate (10 g, 76.8 mmol) in AcOH (60 mL) was added NaNO2 (7.95 g, 115 mmol) in H2O (25mL) at 10℃, then stirred at 25℃ for 16 hrs. The resulting mixture was quenched with Saturated sodium bicarbonate solution (100 mL) , extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous Na2SO4, filtered and concentrated. The residue purified by Flash Chromatography (EtOAc/Hexanes=0-10%) to give the product methyl  (2E) -2- (hydroxyimino) -3-oxopentanoate (8 g, 50 mmol, 65%yield) as a yellow oli. MS (ESI) m/z = 160.1 [M+H] +.
Step 2: The mixture of methyl (2E) -2- (hydroxyimino) -3-oxopentanoate (8 g, 50 mmol) , Hydroxylamine hydrochloride (10.5 g, 150 mmol) , Sodium acetate (8.2 g, 100 mmol) in EtOH (20 mL) was stirred at 80℃ for 16 hrs. The resulting mixture was diluted with H2O (100 mL) and extracted with EtOAc (100 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (50 mL) , dried over anhydrous sodium, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (EtOAc/Hexanes =0-30%) to give the product methyl (2E, 3E) -2, 3-bis (hydroxyimino) pentanoate (2.4 g, 13.7 mmol, 27.6%yield) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.10 (s, 1H) , 11.93 (s, 1H) , 3.73 (s, 3H) , 2.47 (d, J =7.5 Hz, 1H) , 1.33 –1.07 (m, 1H) , 1.01 (t, J = 7.5 Hz, 3H) .
Step 3: To a solution of methyl (2E, 3E) -2, 3-bis (hydroxyimino) pentanoate (2.4 g, 13.8 mmol) and PIDA (5.3 g, 16.5 mmol) was stirred in DCM (30mL) at 25℃ for 2 hrs. The resulting mixture was concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (EtOAc/Hexanes =0-10%) to give the mixture product of 4-ethyl-3- (methoxycarbonyl) -1, 2, 5-oxadiazol-2-ium-2-olate and 3-ethyl-4- (methoxycarbonyl) -1, 2, 5-oxadiazole 2-oxide (1.1 g, 6.39 mmol, 46%yield) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.04 (s, 5H) , 3.98 (s, 3H) , 2.95 (q, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.83 (q, J = 7.5 Hz, 4H) , 1.36 (t, J = 7.5 Hz, 3H) , 1.24 (t, J = 7.5 Hz, 6H) .
Step 4: The 4-ethyl-3- (methoxycarbonyl) -1, 2, 5-oxadiazol-2-ium-2-olate (1.1 g, 6.4 mmol) in trimethyl phosphite (10 mL) was stirred at 100℃ for 16 hrs. The resulting mixture was concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by Flash Chromatography (EtOAc/Hexanes =0-10%) to give the mixture product methyl 4-ethyl-1, 2, 5-oxadiazole-3-carboxylate (200 mg, 1.28 mmol, 20%yield) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.90 (s, 3H) , 2.92 (q, J = 7.4 Hz, 2H) , 1.24 (t, J = 7.5 Hz, 3H) .
Step 5: To a solution of methyl 4-ethyl-1, 2, 5-oxadiazole-3-carboxylate (200 mg, 1.28 mmol) in MeOH/THF/H2O =1: 1: 1 (3 mL) was added LiOH·H2O (107 mg, 2.56 mmol) and stirred at 25℃ for 2 hrs. The resulting mixture was diluted with Saturated sodium carbonate solution (10 mL) , extracted with DCM/MeOH=10/1 (22 mL *5) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product 4-ethyl-1, 2, 5-oxadiazole -3-carboxylic acid (40 mg, 28 mmol, 22%yield) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.03 (q, J = 7.5 Hz, 2H) , 1.37 (t, J = 7.5 Hz, 3H) .
Intermediate 4. Synthesis of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetic acid
Step 1: To a solution methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethylene) cyclohexyl) acetate (200 mg, 0.626 mmol) in methanol (5 mL) was added Palladium/Carbon (40 mg) and the mixture was stirred at rt overnight under H2. The mixture was filtered through celite and concentrated under vacuum to afford the compound methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetate (200 mg, 0.622 mmol, yield: 99.4%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 222.1 [M+H-Boc] +.
Step 2: To a solution of methyl (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl)  cyclohexyl) acetate (200 mg, 0.62 mmol) in THF/water=1: 1 (6 mL) was added LiOH. H2O (65 mg, 1.56 mmol) . The mixture was stirred at rt overnight. It was diluted with water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL) . Then the aqueous phase was adjusted pH=3 with 1 N HCl extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (30 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the compound (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- (4- (difluoromethyl) cyclohexyl) acetic acid (160 mg, 0.52 mmol, yield: 83.6%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 306.2 [M-H] -.
Intermediate 5. Synthesis of (S) -2- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -2- ( (1s, 4R) -4-fluoro-4-methylcyclohexyl) acetic acid
Step 1: To a solution of methyl (2S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -2 - (4-oxocyclohexyl) acetate (500 mg, 1.75 mmol) in THF (8 mL) was added MeLi (1.48 mL, 3.85 mmol, 2.6 M) at -78℃ under N2. The mixture was stirred at this temp for 1 hr, rt for 15 hrs. The mixture was quenched by Sat. NH4Cl (0.5 mL) , diluted with DCM (30 mL) , washed by water (10 mL) , brine (10 mL) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (EtOAc: Hexanes=0～50%) to get the product (160 mg, 0.32 mmol, yield: 1.82%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 324.1 [M+Na] +.
Step 2: To a solution of methyl (2S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -2- (4-hydroxy-4-methylcyclohexyl) acetate (160 mg, 0.53 mmol) in DCM (4 mL) was added BAST (352 mg, 1.59 mmol) at 0℃ and the mixture was stirred at 25℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with DCM (30 mL) , washed by water (15 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (EtOAc: Hexanes=0～30%) to get the product (130 mg, 0.21 mmol, yield: 40.4%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 326.1 [M+Na] +.
Step 3: A mixture of methyl (2S) -2- { [ (tert-butoxy) carbonyl] amino} -2- (4-fluoro-4 -methylcyclohexyl) acetate (130 mg, 0.43 mmol) , LiOH. H2O (54 mg, 1.28 mmol) in THF/MeOH/H2O (1mL/1mL/1 mL) was stirred at 25℃ for 3 hrs. The mixture was concentrated and purified by Prep-HPLC (Gemini-C18 150 *21.2 mm, 5um: ACN---H2O (0.1%TFA) : 35-60) to get the product (45 mg, 0.078 mmol, yield: 18.2%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 312.0 [M+Na] +.
Intermediate 6. Synthesis of 4-methyl-4, 7-diazaspiro [2.5] octane
Step 1: The mixture of tert-butyl 4, 7-diazaspiro [2.5] octane-7-carboxylate (500 mg, 2.36 mmol) , Sodium cyanoborohydride (222 mg, 3.53 mmol) and formaldehyde aqueous solution (70.66 mg, 2.36 mmol) in ACN (10 mL) was stirred at room temperature for 16 hrs. Then concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by Flash Chromatography (MeOH/DCM=0-5%) to give the product tert-butyl 4-methyl-4, 7-diazaspiro [2.5] octane-7-carboxylate (280 mg, 1.2 mmol, 52.4%yield) as an yellow solid. MS (ESI) m/z = 227.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-methyl-4, 7-diazaspiro [2.5] octane-7-carboxylate (280  mg, 0.204 mmol) in DCM (2 mL) was added HCl in dioxane (1.5 mL) , the resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. Then concentrated under vacuum to afford the crude product 4-methyl-4, 7-diazaspiro [2.5] octane (230 mg, crude) . It was used to next step without further purification. MS (ESI) m/z = 127.2 [M+H] +.
Intermediate 7. Synthesis of (2R, 3S) -1, 2, 3-trimethylpiperazine hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl (2S, 3R) -2, 3-dimethylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.93 mmol) in DMF (10 mL) was added formaldehyde (83.67 mg, 2.79 mmol) . The reaction mixture was stirred at r.t. for 1 hr. Then NaBH3CN (175.12 mg, 2.79 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at r.t. for further 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl (2S, 3R) -2, 3, 4-trimethylpiperazine-1-carboxylate (140 mg, 0.61 mmol, yield: 65.70%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 229.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (2S, 3R) -2, 3, 4-trimethylpiperazine-1-carboxylat (140 mg, 0.61 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product, The mixture was diluted with Et2O. The mixture was filtered and the filter cake was dried under air to afford (2R, 3S) -1, 2, 3-trimethylpiperazine hydrochloride (70 mg, 0.43 mmol, yield: 69.52%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 129.2 [M+H] +.
Intermediate 8. Synthesis of (S) -4- (difluoromethylene) -2-methylpiperidine hydrochloride
Step 1: To a solution of t-BuOK (471.3 mg, 4.20 mmol) in DMF (50 mL) was added tert-butyl (S) -2-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (500 mg, 2.33 mmol) and 2- ( (difluoromethyl) sulfonyl) pyridine (540.89 mg, 2.80 mmol) under N2 at -45 ℃. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was added 1N HCl to adjust pH = 3 and extracted with EA (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl (S) -4- (difluoromethylene) -2-methyl piperidine -1-carboxylate (350 mg, 1.42 mmol, yield: 60.37%) as a pay yellow oil. MS (ESI) m/z = 191.9 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (S) -4- (difluoromethylene) -2-methyl piperidine -1-carboxylate (350 mg, 1.42 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) , The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product, The mixture was diluted with Et2O. The mixture was filtered and the filter cake was dried in air to afford product (S) -4- (difluoromethylene) -2-methylpiperidine HCl salt (220 mg, 1.20 mmol, yield: 84.86%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 148.1 [M+H] +.
Intermediate 9. Synthesis of (S) -1- (tert-butyl) -3-methylpiperazine
Step 1: To a solution of tert-butyl (S) -2-methylpiperazine-1-carboxylate (1 g, 4.99 mmol) and acetic anhydride (765 mg, 7.49 mmol) in DCM (10 mL) stirred under nitrogen at 0℃ was added DIEA (1.94 g, 14.98 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16hrs. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (10 mL) . The mixture was extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed by brine (10 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 3/1, v/v) to afford tert-butyl (S) -4-acetyl-2-methylpiperazine-1-carboxylate (1.1 g, 4.54 mmol, yield: 90.92%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 187.1 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (S) -4-acetyl-2-methylpiperazine-1-carboxylate (1 g, 4.13 mmol) in THF (10 mL) stirred under nitrogen at -10℃ was added titanium tetrachloride (4.13 mL, 4.13 mmol, 1M DCM solution) . The reaction mixture was stirred at -10℃ for 30 mins. A solution of methylmagnesium bromide (8.25 mL, 24.76 mmol, 1M ethyl ether solution) was added into above mixture at -10℃. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16 hrs. The reaction mixture was quenched with 10%NaHCO3 solution (10 mL) at 0℃ and filtered. The filtrate was concentrated under vacuum to afford a residue. The residue was diluted with water (10 mL) , extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (10 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 20/1, v/v) to afford tert-butyl (S) -4- (tert-butyl) -2-methylpiperazine-1-carboxylate (400 mg, 1.56 mmol, yield: 37.80%) as a light yellow gum. MS (ESI) m/z = 257.2 [M+H] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl (S) -4- (tert-butyl) -2-methylpiperazine-1-carboxylate (400 mg, 1.56 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added HCl (1.95 mL, 7.80 mmol, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1hr. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford crude (S) -1- (tert-butyl) -3-methylpiperazine hydrochloride (120 mg, 0.62 mmol, yield: 39.91%) as a yellow gum, which was used for next step without further purification. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.71 (br. s, 1H) , 9.93 (br. s, 1H) , 9.74 (br. s, 1H) , 3.69 –3.12 (m, 7H) , 1.38 (s, 9H) , 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 3H) . MS (ESI) m/z = 157.3 [M+H] +.
Intermediate 10. Synthesis of 1- (1-methylcyclopropyl) piperazine hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl piperazine-1-carboxylate (500 mg, 2.67 mmol) in DCM (20 mL) was added Ac2O (299.85 mg, 2.94 mmol) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred at 0 ℃for 1 hr. The mixture was added NaHCO3 to adjust pH= 9 and extracted with DCM (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford tert-butyl 4-acetylpiperazine-1-carboxylate (600 mg, 2.63  mmol, yield: 96.95%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 173.1 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-acetylpiperazine-1-carboxylate (400 mg, 1.74 mmol) in THF (10 mL) was added Titanium tetraisopropanolate (1487.47 mg, 5.23 mmol) at -78 ℃. The reaction mixture was stirred at -78 ℃ for 30 mins. To this was added ethylmagnesium bromide (3M in Et2O, 2.33 mL, 6.98 mmol) at -78 ℃. The reaction mixture was stirred at -78 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -50%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl 4- (1-methylcyclopropyl) piperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.83 mmol, yield: 47.50%) as a pay yellow oil. MS (ESI) m/z = 241.0 [M+H] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl 4- (1-methylcyclopropyl) piperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.83 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product, The mixture was diluted with Et2O, filtered and the filter cake was dried in air to afford 1- (1-methylcyclopropyl) piperazine hydrochloride (100 mg, 0.57 mmol, yield: 68.19%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 141.1 [M+H] +.
Intermediate 11. Synthesis of (3S, 5R) -4, 4-difluoro-3, 5-dimethylpiperidine hydrochloride
Step 1: To a solution of (3S, 5R) -1-benzyl-3, 5-dimethylpiperidin-4-one (300 mg, 1.37 mmol in DCM (6 mL) stirred under nitrogen at 0℃ was added DAST (443 mg, 2.75 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with DCM (50 mL*3) . The organic layers were washed with brine (50 mL*2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 20%EtOAc in Hexane) to (3S, 5R) -1-benzyl-4, 4-difluoro-3, 5-dimethylpiperidine (150 mg, 0.62 mmol, yield: 45.42%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 240.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of (3S, 5R) -1-benzyl-4, 4-difluoro-3, 5-dimethylpiperidine (150 mg, 0.62 mmol) in DCE (5 mL) stirred under nitrogen was added a solution of 1-Chloroethyl chloroformate (173 mg, 1.62 mmol) in DCE (2 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16hrs. The mixture was quenched with methanol (5 mL) and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 20%MeOH in DCM) to afford (3S, 5R) -4, 4-difluoro-3, 5-dimethylpiperidine hydrochloride (50 mg, 0.33 mmol, yield: 61.96%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 150.0 [M+H] +.
Intermediate 12. Synthesis of 4- (difluoromethylene) -3-methylpiperidine hydrochloride
Step 1: To a solution of t-BuOK (942.59 mg, 8.40 mmol) in DMF (50 mL) was added tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (1000 mg, 4.67 mmol) and  2- ( (difluoromethyl) sulfonyl) pyridine (1081.79 mg, 5.60 mmol) under N2 at -45 ℃. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was added 1N HCl to adjust pH= 3 and extracted with EA (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl 4- (difluoromethylene) -3-methylpiperidine-1-carboxylate (800 mg, 3.24 mmol, yield: 68.99%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 192.2 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 4- (difluoromethylene) -3-methylpiperidine-1-carboxylate (800 mg, 3.22 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product. The mixture was diluted with Et2O, filtered and the filter cake was dried in air to afford 4- (difluoromethylene) -3-methylpiperidine hydrochloride (500 mg, 2.73 mmol, yield: 84.38%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 148.2 [M+H] +.
Intermediate 13. Synthesis of 4-ethoxy-4-methylpiperidine hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-hydroxy-4-methylpiperidine-1-carboxylate (500 mg, 2.32 mmol) in DMF (5 mL) stirred under nitrogen at 0℃ was added NaH (140 mg, 3.5 mmol, 60%in mineral oil) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1hr. A solution of EtI (725 mg, 4.65 mmol) in DMF (5 mL) was added to above reaction mixture. The reaction mixture was stirred at 25℃ for other 16hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (5 mL) . The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (10 mL) , extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (10 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 4/1, v/v) to afford tert-butyl 4-ethoxy-4-methylpiperidine-1-carboxylate (120 mg, 0.49 mmol, yield: 21.23%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 266.2 [M+Na] + .
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-ethoxy-4-methylpiperidine-1-carboxylate (120 mg, 0.49 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added HCl (0.49 mL, 1.97 mmol, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1hr. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford crude 4-ethoxy-4-methylpiperidine hydrochloride (60 mg, 0.33 mmol, yield: 67.71%) as a colorless gum, which was used for next step without further purification. MS (ESI) m/z = 144.1 [M+H] +.
Intermediate 14. Synthesis of (3aR, 6aS) -5- (difluoromethylene) octahydrocyclopenta [c] pyrrole hydrochloride
Step 1: To a solution of t-BuOK (1785.10 mg, 15.91 mmol) in DMF (50 mL) was added tert-butyl (3aR, 6aS) -5-oxohexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (2000 mg, 8.84  mmol) and 2- ( (difluoromethyl) sulfonyl) pyridine (2048.72 mg, 10.61 mmol) under N2 at -45 ℃. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 16 hrs. The mixture was added 1N HCl to adjust pH= 3 and extracted with EA (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl (3aR, 6aS) -5- (difluoromethylene) hexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (1200 mg, 4.63 mmol, yield: 51.72%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 204.1 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (3aR, 6aS) -5- (difluoromethylene) hexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (1200 mg, 4.63 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product. The mixture was diluted with Et2O, filtered and the filter cake was dried in air to afford (3aR, 6aS) -5- (difluoromethylene) octahydrocyclopenta [c] pyrrole hydrochloride (800 mg, 4.10 mmol, yield: 88.57%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 160.1 [M+H] +.
Intermediate 15. Synthesis of (3aR, 6aS) -5, 5-difluorooctahydrocyclopenta [c] pyrrole hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl (3aR, 6aS) -5-oxohexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (200 mg, 0.88 mmol) in DCM (10 mL) was added DAST (284.92 mg, 1.77 mmol) at 0℃. The reaction mixture was stirred at r. t. for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with DCM (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl (3aR, 6aS) -5, 5-difluorohexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (100 mg, 0.40 mmol, yield: 45.55%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 192.1 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (3aR, 6aS) -5, 5-difluorohexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -carboxylate (100 mg, 0.40 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) , The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product. The mixture was diluted with Et2O, filtered and the filter cake was dried in air to afford (3aR, 6aS) -5, 5-difluorooctahydrocyclopenta [c] pyrrole hydrochloride (40 mg, 0.22 mmol, yield: 54.00%) as a white solid.
Intermediate 16. Synthesis of 3, 4-dimethylpiperidin-4-ol hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (1000 mg, 4.67 mmol) in THF (30 mL) was added bromo (methyl) magnesium (3M in Et2O, 2.33 mL, 7.00 mmol) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred at r. t. for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -20%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl  4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (800 mg, 3.49 mmol, yield: 74.40%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 156.0 [M-18-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine -1-carboxylate (100 mg, 0.44 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (4M, 3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to give the crude product. The mixture was diluted with Et2O, filtered and the filter cake was dried in air to afford 3, 4-dimethylpiperidin-4-ol hydrochloride (30 mg, 0.18 mmol, yield: 41.64%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 130.2 [M+H] +.
Intermediate 17. Synthesis of 1- (piperazin-1-yl) cyclopropane-1-carbonitrile
Step 1: To a sealed tube was added 1-aminocyclopropane-1-carbonitrile hydrochloride (200 mg, 1.69 mmol) , N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) ethan-1-amine hydrochloride (455 mg, 1.69 mmol) and DIPEA (2 mL) . The mixture was heated to 120℃ for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (0 -60%EtOAc/hexanes) to afford 1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropane-1-carbonitrile (200 mg, 0.83 mmol, yield: 49.1%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 242.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of 1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropane-1-carbonitrile (200 mg, 0.83 mmol) and 1-chloroethyl carbonochloridate (178 mg, 1.25 mmol) in acetone (10 mL) was added K2CO3 (344 mg, 2.49 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2hrs. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with MeOH (10 mL) and stirred at 60℃ for further 1hr. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford crude 1- (piperazin-1-yl) cyclopropane -1-carbonitrile (50 mg, 0.33 mmol, yield: 39.9%) as a colorless gum, which was used for next step without further purification. MS (ESI) m/z = 152.3 [M+H] +.
Intermediate 18. Synthesis of 4- (dichloromethylene) piperidine hydrogen chloride
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (1g, 0.005mol) in MeCN (20 mL) was added PPh3 (3.15g, 0.012mol) . The mixture was stirred under nitrogen at 0℃ for 5 min. Then was added bromotrichloromethane (1.2 g, 0.006 mol) at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The reaction was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (0 -30%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl 4- (dichloromethylene) piperidine-1-carboxylate (700 mg, 1.8 mmol, yield: 36.0%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 263.2 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 4- (dichloromethylene) piperidine-1-carboxyla -te (700 mg, 2.62 mmol) in DCM (10 mL) was added 1, 4-dioxane/HCl (10 mL) . The reaction was stirred at r. t. for 2hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure to afford 4- (dichloromethylene) piperidine hydrogen chloride (400 mg, 1.68 mmol, yield: 64.4%) as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 7.64 –7.55 (m, 1H) , 3.08 (t, J = 5.6 Hz, 4H) , 2.68 –2.65 (t, J = 6.4 Hz, 4H) .
Intermediate 19. Synthesis of 4-cyclopropylidenepiperidine
Step 1: To a solution of bromo (cyclopropyl) triphenyl-l5-phosphane (2.5 g, 0.006 mol) in THF (30 mL) was added t-BuOK (1.46 g, 0.013 mol) . The mixture was stirred under nitrogen at 50℃for 1 hr. The reaction was cooled to r. t., tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (1g, 0.005 mol) was added. The reaction mixture was stirred at 60℃ for further 16hrs. The mixture was quenched with water (50 mL) , extracted with EtOAc (50 mL *3) . The organic layers were washed with brine (30 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 10%EtOAc in Hexane) to afford tert-butyl 4-cyclopropylidenepiperid-ine-1-carboxylate. (500 mg, 1.8 mmol, yield: 36.0%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 3.35 (t, J = 5.6 Hz, 4H) , 2.23 (t, J = 5.6 Hz, 4H) , 1.41 (s, 9H) , 1.02 (s, 4H) .
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-cyclopropylidenepiperid-ine-1-carbox-ylate (500 mg, 2.23 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (2 mL) . The reaction mixture was stirred at r. t. for 2hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure, adjusted pH to 8 with NaHCO3 and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The organic layers were washed with brine (50 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product, which purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 30%EtOAc in Hexane) to afford 4-cyclopropylidenepiperidine (250 mg, 1.826 mmol, yield: 74.5%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 124.2 [M+H] +.
Intermediate 20. Synthesis of 4- (tert-butoxy) piperidine
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (2.5 g, 12.0 mmol) and tert-butyl 2, 2, 2-trichloroacetimidate (10.84 g, 49.0 mmol) in DCM (50 mL) stirred under nitrogen at 0℃ was added Boron trifluoride diethyl etherate (880 mg, 6 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16hrs. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with DCM (100 mL*3) . The organic layers were washed with brine (100 mL*2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 20%EtOAc in Hexane) to afford tert-butyl 4- (tert-butoxy) piperidine-1-carboxylate (350 mg, 1.2 mmol, yield: 9.68%) as a colorless oil. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 3.68 –3.60 (m, 3H) , 2.95 (s, 2H) , 1.64 –1.59 (m, 2H) , 1.38 (s, 9H) , 1.23 –1.19 (m, 2H) , 1.13 (s, 9H) .
Step 2: To a solution of tert-butyl 4- (tert-butoxy) piperidine-1-carboxylate (50 mg, 0.19 mmol) in DCM (3 mL) stirred under nitrogen was added TFA (0.5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 3hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford 4- (tert-butoxy) piperidine (25 mg, 0.16 mmol, yield: 82.17%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z =158.1 [M+H] +.
Intermediate 21. Synthesis of 2- (difluoromethylene) -6-azaspiro [3.4] octane 2, 2, 2-trifluoroacetate
Step 1: To a solution of t-BuOK (893 mg, 7.95 mmol) in DMF (20 mL) was added tert-butyl 2-oxo-6-azaspiro [3.4] octane-6-carboxylate (1 g, 4.42 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (1 g, 5.30 mmol) under N2 at -40℃. The mixture was stirred at room temperature under N2 for 16 hrs. The mixture was concentrated and adjusted pH to 1-2 with 1N hydrochloric acid aqueous solution and diluted with H2O (30 mL) , then extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic phases were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash chromatography (silica, solvent gradient: 0-10%PE in EA) to give tert-butyl 2- (difluoromethylene) -6-azaspiro [3.4] octane-6-carboxylate (310 mg, 1.20 mmol, yield: 26.9%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 204.0 [M-56+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 2- (difluoromethylene) -6-azaspiro [3.4] octane-6-carboxylate (310 mg, 1.19 mmol) in DCM (5 mL) was added TFA (1 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2h. The mixture was concentrated under vacuum to afford crude 2- (difluoromethylene) -6-azaspiro [3.4] octane TFA salt (320 mg) , as a yellow oil. The crude product was used into the next step without further purification. MS (ESI) m/z = 160.2 [M+H] +.
Intermediate 22. Synthesis of 6- (difluoromethylene) -2-azaspiro [3.3] heptane 2, 2, 2-trifluoroacetate
Step 1: To a solution of t-BuOK (956 mg, 8.52 mmol) in DMF (20 mL) was added tert-butyl 6-oxo-2-azaspiro [3.3] heptane-2-carboxylate (1 g, 4.73 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (1.1 g, 5.70 mmol) under N2 at -40 ℃. The mixture was stirred at room temperature for under N2 16h. The mixture was concentrated and adjusted pH to 1-2 with 1N hydrochloric acid aqueous solution and diluted with H2O (30 mL) , then extracted with ethyl acetate (30 mL *3) . The organic phases were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash chromatography (silica, solvent gradient: 0-10%PE in EA) to give tert-butyl 6- (difluoromethylene) -2-azaspiro [3.3] heptane-2-carboxylate (610 mg, 2.49 mmol, yield: 52.5%) ,  as a yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CD3Cl3) : δ ppm 3.94 (s, 4H) , 2.84 (t, J = 3.8 Hz, 4H) , 1.43 (s, 9H) . MS (ESI) m/z = 190.1 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 6- (difluoromethylene) -2-azaspiro [3.3] heptane-2-carboxylate (610 mg, 2.47 mmol) in DCM (5 mL) was added TFA (1 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford crude 6- (difluoromethylene) -2-azaspiro [3.3] heptane TFA salt (400 mg) , as a yellow oil. The crude product was used into the next step without further purification. MS (ESI) m/z = 146.0 [M+H] +.
Intermediate 23. Synthesis of 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl 3-methyl-4-oxopiperidine-1-carboxylate (5 g, 23.5 mol) in THF (100 mL) was added methylmagnesium bromide (11.8 mL, 35.4 mmol) under N2 at 0℃. The mixture was stirred at room temperature under N2 for 2hrs. The mixture was quenched with NH4Cl (30 mL) , extracted with EtOAc (100 mL *2) . The organic layers were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo to afford crude product. The crude product was purified by flash chromatography (silica, solvent gradient: 0-50%EtOAc in PE) to give tert-butyl 4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (2 g, 8.73 mmol, yield: 37.2%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 156.0 [M-56-18] +.
Step 2: To a solution of NaH (868 mg, 21.7 mmol) in DMF (10 mL) was added tert-butyl 4-hydroxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (1 g, 4.34 mmol) under N2. The mixture was stirred at rt under N2 for 1h. MeI (6.17 g, 43.4 mmol) and HMPA (0.5 mL) were added into the mixture and stirred at 50℃ for 12 hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) . The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 5/1, v/v) to afford tert-butyl 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (500 mg, 2.06 mmol, yield: 47.1%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 266.2 [M+Na] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.41 mmol) in DCM (2 mL) was added hydrochloric acid solution (2 mL, 4M in dioxane) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford 4-methoxy-3, 4-dimethylpiperidine HCl salt (65 mg, 0.36 mmol, yield: 88.3%) , as a yellow oil. The product was used into the next step without further purification.
MS (ESI) m/z = 144.2 [M+H] +.
Intermediate 24. Synthesis of (3S, 5R) -4-methoxy-3, 4, 5-trimethylpiperidine hydrochloride
Step 1: To a solution of (3S, 5R) -1-benzyl-3, 5-dimethylpiperidin-4-one (300 mg, 1.38 mol) in THF (10 mL) was added methylmagnesium bromide (2.3 mL, 6.9 mmol) under N2 at 0℃. The mixture was stirred at room temperature under N2 for 2hrs. The mixture was quenched with NH4Cl (10 mL) , extracted with EA (20 mL *2) . The organic layers were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo to afford crude product. The crude product was purified by flash chromatography (silica, solvent gradient: 0-50%EA in PE) to give (3S, 5R) -1-benzyl-3, 4, 5-trimethylpiperidin-4-ol (300 mg, 1.29 mmol, yield: 93.2%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 234.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of (3S, 5R) -1-benzyl-3, 4, 5-trimethylpiperidin-4-ol (300 mg, 1.29 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%Pd/C (100 mg) . The mixture was stirred at room temperature under H2 for 16hrs. The mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to give (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperidin-4-ol (170 mg, 1.19 mmol, yield: 92.4%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 144.1 [M+H] +.
Step 3: To a solution of (3S, 5R) -3, 4, 5-trimethylpiperidin-4-ol (150 mg, 1.05 mmol) in DCM (10 mL) was added triethylamine (318 mg, 3.14 mmol) and (Boc) 2O (274 mg, 1.26 mmol) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford residue. The residue was purified by flash chromatography (silica, solvent gradient: 0-30%PE in EtOAc) to give tert-butyl (3S, 5R) -4-hydroxy-3, 4, 5-trimethylpiperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.82 mmol, yield: 78.4%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 170.2 [M-56-18] +.
Step 4: To a solution of NaH (164 mg, 4.09 mmol) in DMF (10 mL) was added tert-butyl (3S, 5R) -4-hydroxy-3, 4, 5-trimethylpiperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.82 mmol) under N2. The mixture was stirred at rt under N2 for 1h. MeI (1.16 g, 8.19 mmol) and HMPA (0.2 mL) were added into the mixture and stirred at 50℃ for 12hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) . The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 5/1, v/v) to afford tert-butyl (3S, 5R) -4-methoxy-3, 4, 5-trimethylpiperidine-1-carboxylate (160 mg, 0.62 mmol, yield: 75.8%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 280.2 [M+Na] +.
Step 5: To a solution of tert-butyl (3S, 5R) -4-methoxy-3, 4, 5-trimethylpiperidine-1-carboxylate (160 mg, 0.62 mmol) in DCM (2 mL) was added hydrochloric acid solution (2 mL, 4M in dioxane) . The mixture was stirred at room temperature for 2hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford (3S, 5R) -4-methoxy-3, 4, 5-trimethylpiperidine HCl salt (110 mg, 0.57 mmol, yield: 91.7%) as a yellow oil. The product was used into the next step without further purification. MS (ESI) m/z = 158.2 [M+H] +.
Intermediate 25. Synthesis of 4-isopropyl-4-methoxypiperidine
Step 1: To a solution of tert-butyl (4-oxopiperidin-1-yl) formate (5 g, 25 mmol) in THF 50 mL stirred under nitrogen at -40 ℃ was added a solution of bromo (isopropyl) magnesium (37.5 mL, 37.5 mmol) in THF dropwise. The reaction mixture was stirred at -40 ℃ for 4 hrs. The residue was quenched with 1N HCl (50 mL) then extracted with EtOAc (200 mL *3) . The organic layers were washed with brine (150 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash silica chromatography (elution gradient: 0 to 30%EtOAc in Hexane) to afford tert-butyl 4-hydroxy-4-isopropylpiperidine-1-carboxylate (600 mg, 2.5 mmol, yield: 10.00%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 170.0 [M-18-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-hydroxy-4-isopropylpiperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.82 mmol) in DMF (10 mL) was added NaH (163.70 mg, 4.09 mmol) at 0℃. The reaction mixture was stirred at r. t. for 1h. To this was added MeI (1162.27 mg, 8.19 mmol) and HMPA (1 mL) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred at 50 ℃ for 16 hrs. The mixture was quenched with water (10 mL) and extracted with EtOAc (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl 4-isopropyl-4-methoxypiperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.70 mmol, yield: 85.09%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 280.1 [M+Na] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl 4-isopropyl-4-methoxypiperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.70 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2hrs. The reaction was concentrated under vacuum to afford 4-isopropyl-4-methoxypiperidine HCl salt (100 mg, 0.64 mmol, yield: 90.93 %) as a white solid. MS (ESI) m/z = 158.1 [M+H] +.
Intermediate 26. Synthesis of 2-methyl-1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine
Step 1: A mixture of 2- (benzylamino) ethan-1-ol (5 g, 0.03 mol) and 2-methyloxirane (1584.2 mg, 5.86 mmol) were stirred at 50℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (50 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 50/1, v/v) to afford 1- (benzyl (2-hydroxyethyl) amino) propan-2-ol (5.5 g, 0.023 mol, yield: 71.65%) as yellow oil. MS (ESI) m/z = 210.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of 1- (benzyl (2-hydroxyethyl) amino) propan-2-ol (2000 mg, 9.51 mmol) in DCE (30 mL) stirred at 0℃ was added SOCl2 (5657.4 mg, 47.5 mmol) . The reaction mixture was stirred at 70℃ for 16 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was diluted with water (100 mL) , extracted with dichloromethane (100 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) propan-1-amine hydrochloride (2200 mg, 6.98 mmol, yield: 73.40%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 245.9 [M+H] +.
Step 3: To a sealed tube was placed with N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) propan-1-amine hydrochloride (500 mg, 2.02 mmol) , l- (trifluoromethyl) cyclopropanamine (326.8 mg, 2.02 mmol) and DIEA (4 mL) . The mixture was heated to 120℃ for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (0 -60%EtOAc/hexanes) to afford 4-benzyl-2-methyl-1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (100 mg, 0.53 mmol, yield: 14.9%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 298.9 [M+H] +.
Step 4: 4-benzyl-2-methyl-1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (100 mg, 0.334 mmol) and 10%Pd/C (22 mg, 0.1 mmol) were suspended in MeOH (8 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature under 50 psi hydrogen for 6 hrs. The mixture was filtered through a pad of celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford 2-methyl-1- (1- (trifluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (40 mg, 0.17 mmol, yield: 51.7%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 209.1 [M+H] +
Intermediate 27. Synthesis of 4-ethyl-4- (methoxy-d3) piperidine
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-ethyl-4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (800 mg, 3.49 mmol) in DMF (10 mL) was added NaH (698.17 mg, 17.45 mmol) at 0℃. The reaction mixture was stirred at rt for 1h. To this was added iodomethane-d3 (4.01 g, 34.91 mmol) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred at 50 ℃ for 16 hrs. The mixture was quenched with water (30 mL) and extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford tert-butyl 4-ethyl-4- (methoxy-d3) piperidine-1-carboxylate (700 mg, 2.84 mmol, yield: 81.45%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 269.0 [M+Na] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-ethyl-4- (methoxy-d3) piperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.40 mmol) in DCM (3 mL) was added HCl-dioxane (3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to afford 4-ethyl-4- (methoxy-d3) piperidine HCl salt (40 mg, 0.27 mmol, yield: 67.93%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 147.2 [M+H] +.
Intermediate 28. Synthesis of 1- (1- (difluoromethyl) cyclopropyl) piperazine
Step 1: To a sealed tube was added 1- (difluoromethyl) cyclopropan-1-amine hydrochloride (200 mg, 1.39 mmol) , N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) ethan-1-a-mine hydrochloride (375 mg, 1.39 mmol) and DIPEA (2 mL) . The mixture was heated to 120℃ for 2 days. The reaction was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc (30 mL) , washed with water (20 mL *2) and brine (20 mL) . The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (0 -60%EtOAc/hexanes) to afford 1-benzyl-4- (1- (difluoromethyl) -cyclopropyl) piperazine (300 mg, 1.12 mmol, yield: 80.55%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 267.2 [M+H] +.
Step 2: 1-benzyl-4- (1- (difluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (300 mg, 1.12 mmol) and 10%Pd/C (477 mg, 4.48 mmol) were suspended in MeOH (10 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature under 50 psi of hydrogen for 6 hrs. The mixture was filtered through a pad of celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford 1- (1- (difluoromethyl) cyclopropyl) piperazine (80 mg, 0.45 mmol, yield: 40.46%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 177.2 [M+H] +.
Intermediate 29. Synthesis of methyl 1- (piperazin-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate
Step 1: To a solution of methyl 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (1 g, 0.0087 mol) in DIEA (30 mL) was added N-benzyl-2-chloro-N- (2-chloroethyl) ethan -1-amine hydrochloride (3.58 g, 0.0096 mol) . The reaction mixture was stirred at 120 ℃ in sealed tube for 48 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product. The residue was purified by column chromatography (0 -10%EtOAc/hexanes) to afford methyl 1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (400 mg, 1.46 mmol, yield: 16.79%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 275.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl 1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (150 mg, 0.54 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%Pd/C (50 mg) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to afford methyl 1- (piperazin-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (70 mg, 0.38 mmol, yield: 69.49%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 185.2 [M+H] +.
Intermediate 30. Synthesis of (1- (piperazin-1-yl) cyclopropyl) methanol
Step 1: To a solution of methyl 1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (150 mg, 0.54 mmol) in THF (10 mL) was added LiAlH4 (1.09 mL, 1.09 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford (1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropyl) methanol (100 mg, 0.41 mmol, yield: 74.25%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 247.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of (1- (4-benzylpiperazin-1-yl) cyclopropyl) methanol (100 mg, 0.41 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%Pd/C (30 mg) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to afford (1- (piperazin-1-yl) cyclopropyl) methanol (60 mg, 0.38 mmol, yield: 94.61%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 157.1 [M+H] +.
Intermediate 31. Synthesis of 4-ethoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine
Step 1: To a solution of benzyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (2 g, 8.57 mmol) in THF (30 mL) cooled in an ice bath was added trimethyl (trifluoromethyl) silane (1.8 g, 12.86 mol) via an addition funnel over a period of 15 minutes. A 1.0M solution of TBAF in THF (85.7 mL, 85.7 mmol) was slowly added dropwise to the mixture. The mixture was stirred at room temperature for 16 hrs. The mixture was concentrated to a volume of 20 mL, and carefully quenched with 1N hydrochloric acid aqueous solution and diluted with H2O (30 mL) , then extracted with DCM (50 mL *3) . The organic phases were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated under vacuum to afford crude product. The crude product was purified by flash chromatography (silica, solvent gradient: 0-30%PE in EA) to give benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (1.6 g, 5.28 mmol, yield: 61.5%) , as a white solid. MS (ESI) m/z = 304.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of NaH (330 mg, 8.24 mmol) in DMF (10 mL) was added benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 1.65 mmol) under N2. The mixture was stirred at rt under N2 for 1hr. EtI (2.57 g, 16.5 mmol) was added into the mixture and stirred at 50℃ for 12 hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) . The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 5/1, v/v) to give benzyl 4-ethoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (480 mg, 1.45 mmol, yield: 87.9%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 332.2 [M+H] +.
Step 3: To a solution of benzyl 4-ethoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (480 mg, 1.45 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%pd/C (100 mg) . The mixture was stirred at rt under H2 for 16 hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to give 4-ethoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine (180 mg, 0.91 mmol, yield: 63.0%) , as a yellow oil.
Intermediate 32. Synthesis of 4- (trifluoromethyl) piperidin-4-ol
Step 1: To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 1.65 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%pd/C (100 mg) . The mixture was stirred at rt under H2 for 16 hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to give 4- (trifluoromethyl) piperidin-4-ol (160 mg, 0.95 mmol, yield: 57.3%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 170.1 [M+H] +.
Intermediate 33. Synthesis of 2- (difluoromethylene) -7-azaspiro [3.5] nonane hydrogen chloride
Step 1: To a solution of tert-butyl 2-oxo-7-azaspiro [3.5] nonane-7-carboxylate (745 mg, 3.11 mmol) , DFMPS (600 mg, 3.11 mmol) in DMF (8 mL) was added t-BuOK (697 mg, 6.21 mmol) in DMF (4 mL) at -40℃ under N2. The mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was neutralized with 1N HCl, then diluted with Hexanes (80 mL) , washed by water (30 mL*2) , brine (30 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (EtOAc: Hexanes=0～10%) to get the product tert-butyl 2- (difluoromethylene) -7-azaspiro [3.5] nonane-7-carboxylate (609 mg, 2.23 mmol, 71.9 %yield) as a colorless oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.40-3.25 (m, 4H) , 2.45-2.35 (m, 4H) , 1.57 (dd, J = 7.4, 3.6 Hz, 4H) , 1.45 (s, 9H) .
Step 2: A mixture of tert-butyl 2- (difluoromethylene) -7-azaspiro [3.5] nonane-7-carboxylate (609 mg, 2.23 mmol) in 1, 4-dioxane/HCl (3 mL) and DCM (3 mL) was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated to get the crude product 2- (difluoromethylene) -7-azaspiro [3.5] nonane hydrogen chloride salt (422 mg, 2.02 mmol, 90.6%yield) as a white solid. MS (ESI) m/z = 174.2 [M+H] +.
Intermediate 34. Synthesis of 4- (2, 2-difluoroethoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine
Step 1: To a solution of NaH (118.7 mg, 2.97 mmol) in DMF (10 mL) was added benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (300 mg, 0.99 mmol) under N2. The mixture was stirred at rt for 1hr. 2, 2-difluoroethyl trifluoromethanesulfonate (635.4 mg, 2.97 mmol) was added into the mixture and stirred at 50℃ for 16hrs. The mixture was quenched with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *2) . The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under vacuum to afford crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 5/1, v/v) to give benzyl 4- (2, 2-difluoroethoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (310 mg, 0.84 mmol, yield: 85.3%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 368.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of benzyl 4- (2, 2-difluoroethoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (310 mg, 0.84 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%Pd/C (50 mg) . The mixture was stirred at rt under H2 for 4hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to give 4- (2, 2-difluoroethoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine (120 mg, 0.51 mmol, yield: 61.0%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 234.1 [M+H] +.
Intermediate 35. Synthesis of N-methyl-4- (trifluoromethyl) piperidin-4-amine
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (400 mg, 1.49 mmol) in MeOH (5 mL) stirred under nitrogen was added formaldehyde (112 mg, 1.49 mmol, 40%aqueous solution) and acetic acid (0.2 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 30 mins. A suspension of NaBH3CN (140 mg, 2.23 mmol) in MeOH (5 mL) was added to the reaction mixture. The reaction mixture was stirred at 25℃ for other 2hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (5 mL) . The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (10 mL) . The mixture was extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed by saturated brine (10 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/5, v/v) to afford tert-butyl 4- (methylamino) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (80 mg, 0.283 mmol, yield: 19.01%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 227.2 [M-56] + .
Step 2: To a solution of tert-butyl 4- (methylamino) -4- (trifluoromethyl) piperidine -1-carboxylate (80 mg, 0.283 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added HCl (0.28 mL, 1.13 mmol, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1hr. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford N-methyl-4- (trifluoromethyl) piperidin-4-amine dihydrochloride (50 mg, 0.196 mmol, yield: 69.16%) as a colorless gum, which was used for next step without further purification. MS (ESI) m/z = 183.1 [M+H] +.
Intermediate 36. Synthesis of 4- (ethoxy-d5) -4- (trifluoromethyl) piperidine
Step 1: To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.66 mmol) in DMF (6 mL) was added sodium hydride (131.9 mg, 3.29 mmol, 60%in mineral oil) . The mixture was stirred under nitrogen at 25 ℃ for 15 mins. To this was added 1-iodoethane-1, 1, 2, 2, 2-d5 (212.3 mg, 1.2 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product benzyl 4- (ethoxy-d5) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (150 mg, 0.44 mmol, yield: 67.48%)  as a colorless gum.
Step 2: To a solution of benzyl 4- (ethoxy-d5) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (150 mg, 0.44 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%Pd/C (10 mg) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to afford 4- (ethoxy-d5) -4- (trifluoromethyl) piperidine (80 mg, 0.39 mmol, yield: 88.64%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 203.1 [M+H] +.
Intermediate 37. Synthesis of 4-propoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine
Step 1: To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine -1-carboxylate (200 mg, 0.66 mmol) in DMF (10 mL) was added NaH (131.90 mg, 3.30 mmol) at 0℃. The reaction mixture was stirred at r. t. for 1hrs. To this was added 3-bromoprop-1-ene (797.84 mg, 6.60 mmol) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred at 50 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA=1: 1) to afford benzyl 4- (allyloxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.52 mmol, yield: 79.50%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 344.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of benzyl 4- (allyloxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.52 mmol) in MeOH (10 mL) was added 10%Pd/C (10 mg) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was filtered and concentrated under vacuum to afford 4-propoxy-4- (trifluoromethyl) piperidine (80 mg, 0.38 mmol, yield: 72.23%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 212.1 [M+H] +.
Intermediate 38. 2- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) ethan-1-ol
Step 1: To a solution of ethyl 2- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) acetate (200 mg, 0.78 mmol) in THF (5 mL) was added LiAlH4 solution (1.6 mL, 1M in THF) . The mixture was stirred at rt for 2hrs. The mixture was quenched with H2O (10 mL) , filtered and extracted with ethyl acetate (20 mL *4) . The organic layers were combined, dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo to give 2- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) ethan-1-ol (120 mg, 0.56 mmol, yield: 71.9%) , as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 214.1 [M+H] +.
Intermediate 39. (R) -2- (2-methylpiperazin-1-yl) ethan-1-ol
Step 1: To a solution of ethyl (R) -2- (2-methylpiperazin-1-yl) acetate (200 mg, 1.08 mmol) in THF (6 mL) was added LiAlH4 (1.3 mL, 1.29 mmol, 1M in THF) . The reaction mixture was stirred at 25℃ under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (10 mL) and extracted with EtOAc (10 mL *5) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product (R) -2- (2-methylpiperazin-1-yl) ethan-1-ol (110 mg, 3.44 mmol, yield: 69.34%) as colorless oil. MS (ESI) m/z = 145.2 [M+H] +.
Intermediate 40. ethyl (R) -2- (2-methylpiperazin-1-yl) acetate
Step 1: To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (1000 mg, 4.97 mmol) , ethyl 2-bromoacetate (1244.5 mg, 7.45 mmol) in ACN (15 mL) was added K2CO3 (1393.3 mg, 9.93 mmol) . The reaction mixture was stirred at 60℃ under nitrogen atmosphere for 12 hrs. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/10, v/v) to afford tert-butyl (R) -4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (1100 mg, 3.44 mmol, yield: 69.34%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 287.2 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (R) -4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (1000 mg, 3.83 mmol) in H2O (10 mL) stirred under nitrogen was added hydrochloric acid solution (4 mL, 2M in H2O) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was basified with saturated aq. Na2CO3 solution and extracted with EtOAc (50 mL*3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/1 to 1/100, v/v) to afford ethyl (R) -2- (2-methylpiperazin-1-yl) acetate (500 mg, 2.42 mmol, yield: 63.12%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 187.1 [M+H] +.
Intermediate 41. 4- (trifluoromethyl) piperidin-4-amine dihydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.372 mmol) in DCM (2.5 mL) was added HCl (2.5 mL, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2hrs. The solvent was removed under vacuum to afford crude 4- (trifluoromethyl) piperidin-4-amine dihydrochloride (50 mg, 0.207 mmol, yield: 55.64%) as a light yellow gum, which was used for next step without further purification. MS (ESI) m/z =169.1 [M+H] +.
Intermediate 42. (R) -1- (tert-butyl) -2-methylpiperazine hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.99 mmol) in DCM (5 mL) was added Ac2O (152.15 mg, 1.49 mmol) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with DCM (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 5: 1, v/v) to afford tert-butyl (R) -4-acetyl-3-methylpiperazine-1-carboxylate (240 mg, 0.99 mmol, yield: 99.18%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 187.1 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (R) -4-acetyl-3-methylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.82 mmol) in THF (10 mL) was added TiCl4 (0.82 mL, 0.82 mmol) at 0℃. The reaction mixture was stirred at 0℃ for 30 mins. To this was added methylmagnesium bromide (3M in Et2O, 1.64 mL, 4.93 mmol) . The reaction mixture was stirred at 50 ℃ for 16 hrs. The mixture was quenched with NaOH (1M, 5 mL) and extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 1: 1, v/v) to afford tert-butyl (R) -4- (tert-butyl) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (80 mg, 0.31 mmol, yield: 37.81%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 257.3. [M+H] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl (3R) -4-tert-butyl-3-methylpiperazin-1-yl formatee (80 mg, 0.31 mmol) in DCM (5 mL) was added 4M HCl in dioxane (3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction was concentrated under vacuum to afford (R) -1- (tert-butyl) -2-methylpiperazine hydrochloride (40 mg, 0.21 mmol, yield: 66.68%) as a yellow gum.
Intermediate 43. (R) -2-methyl-1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) piperazine hydrochloride
Step 1: To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (200 mg, 0.99 mmol) in DCM (5 mL) was added TFAA (250.39 mg, 1.19 mmol) at 0 ℃. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with DCM (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE : EA = 5: 1, v/v) to afford tert-butyl (R) -3-methyl-4- (2, 2, 2-trifluoroacetyl) piperazine -1-carboxylate (300 mg, 1.01 mmol, yield: 100%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 241.0 [M-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (R) -3-methyl-4- (2, 2, 2-trifluoroacetyl) piperazine-1-carboxylate (300 mg, 1.01 mmol) in THF (5 mL) was added BH3-THF complex (3 mL, 3.03 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 2 hrs. The mixture was cooled to  room temperature and quenched with MeOH carefully. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with EA (15 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 1: 1, v/v) to afford tert-butyl (R) -3-methyl-4- (2, 2, 2-trifluoroethyl) piperazine-1-carboxylate (260 mg, 0.92 mmol, yield: 90.96%) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 227.1 [M-56] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl (R) -3-methyl-4- (2, 2, 2-trifluoroethyl) piperazine-1-carboxylate (260 mg, 0.92 mmol) in DCM (5 mL) was added 4M HCl in dioxane (3 mL, 12 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford (R) -2-methyl-1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) piperazine hydrochloride (130 mg, 0.60 mmol, yield: 64.69%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z =183.1 [M+H] +.
Intermediate 44. 2-methyl-1- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) propan-2-ol
Step 1: To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (300 mg, 0.989 mmol) in DMF (5 mL) stirred under nitrogen was added NaH (60 mg, 1.50 mmol, 60%in mineral oil) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 30min. A solution of 2, 2-dimethyloxirane (214 mg, 2.97 mmol) in DMF (5 mL) was added to above reaction mixture. The reaction mixture was stirred at 90℃ for other 2hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with saturated brine (10 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/20, v/v) to afford benzyl 4- (2-hydroxy-2-methylpropoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.26 mmol, yield: 26.94%) as a colorless gum.
MS (ESI) m/z = 398.2 [M-56] + .
Step 2: Benzyl 4- (2-hydroxy-2-methylpropoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.266 mmol) and Pd/C catalyst (15 mg) were suspended in MeOH (10 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ under 50 psi hydrogen for 2 hrs. The mixture was filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford curde 2-methyl-1- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) propan-2-ol (60 mg, 0.25 mmol, yield: 93.36%) as a colorless gum. The crude product was used for next step directly without further purification. MS (ESI) m/z = 242.2 [M+H] +.
Intermediate 45. 1-ethyl-4-methyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid
Step 1: To a solution of ethyl 4-methyl-1H-pyrazole-3-carboxylate (1 g, 6.5 mmol) in DMF (10 mL) was added iodoethane (3.04 g, 19.5 mmol) and K2CO3 (2.7 g, 19.5 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 16hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 3: 1) to afford ethyl 1-ethyl-4-methyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (360 mg, 1.8 mmol, yield: 27.69%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 183.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of ethyl 1-ethyl-4-methyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (360 mg, 1.8 mmol in THF (5 mL) was added a solution of LiOH. H2O (331.6 mg, 7.9 mmol) in water (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 1: 10) to afford 1-ethyl-4-methyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (290 mg, 1.7 mmol, yield: 85.70%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 155.1 [M+H] +.
Intermediate 46. 1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylic acid
Step 1: To a solution of ethyl 1H-pyrazole-3-carboxylate (1 g, 7.1 mmol) in DMF (10 mL) was added 2, 2, 2-trifluoroethyl trifluoromethanesulfonate (4.97 g, 21.3 mmol) and K2CO3 (2.94 g, 21.3 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 3: 1) to afford ethyl 1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylate (350 mg, 1.4 mmol, yield: 19.72%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 223.0 [M+H] +.
Step 2: To a solution of ethyl 1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylate (350 mg, 1.4 mmol in THF (5 mL) was added a solution of LiOH. H2O (264.2 mg, 6.3 mmol) in water (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 1: 10) to afford 1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylic acid (250 mg, 1.16 mmol, yield: 73.57%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 195.1 [M+H] +.
Intermediate 47. 1- (difluoromethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylic acid
Step 1: To a solution of ethyl 1H-pyrazole-3-carboxylate (500 mg, 3.57 mmol) , sodium 2-chloro-2, 2-difluoroacetate (1.09 g, 7.14 mmol) and 18-Crown-6 (190 mg, 0.719 mmol) in ACN (20 mL) stirred under nitrogen was added Cs2CO3 (2.32 g, 7.14 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 16 hrs. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (20 mL) . The mixture was extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, washed by saturated brine (20 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/8, v/v) to afford ethyl 1- (difluoromethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylate (200 mg, 1.05 mmol, yield: 29.48%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 191.1 [M+1] + .
Step 2: To a solution of ethyl 1- (difluoromethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylate (200 mg, 1.05 mmol) in THF (2.5 mL) and MeOH (2.5 mL) was added a solution of NaOH (2.10 mL, 4.20 mmol, 2N aqueous solution) . The mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was adjusted pH = 3 with 1N HCl then extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to  afford 1- (difluoromethyl) -1H-pyrazole-5-carboxylic acid (150 mg, 0.925 mmol, yield: 87.98%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 163.1 [M+H] +.
Intermediate 48. 1-ethyl-1H-1, 2, 3-triazole-5-carboxylic acid
Step 1: To a solution of ethyl 1H-1, 2, 3-triazole-5-carboxylate (1 g, 7.1 mmol) in DMF (10 mL) and iodoethane (3.32 g, 21.3 mmol) , K2CO3 (2.94 g, 21.3 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 16 hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 3: 1) to afford ethyl 1-ethyl-1H-1, 2, 3-triazole-5-carboxylate (400 mg, 2.1 mmol, yield: 29.58%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 170.2 [M+H] +.
Step 2: To a solution of ethyl 1-ethyl-1H-1, 2, 3-triazole-5-carboxylate (400 mg, 2.1 mmol in THF (5 mL) was added a solution of LiOH. H2O (396.8 mg, 8.4 mmol) in water (5 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 1: 10) to afford 1-ethyl-1H-1, 2, 3-triazole-5-carboxylic acid (200 mg, 1.14 mmol, yield: 47.95%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 142.1 [M+H] +.
Intermediate 49. 4- (difluoromethyl) -4-ethoxypiperidine
Step 1: To a solution of benzyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (1000 mg, 4.29 mmol) , (difluoromethyl) trimethylsilane (1597.3 mg, 12.9 mmol) in DMF (15 mL) was added K2CO3 (1777.5 mg, 12.9 mmol) and CsF (195.6 mg, 1.29 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (300 mL) and extracted with EtOAc (100 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 1/99, v/v) to afford benzyl 4- (difluoromethyl) -4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (900 mg, 2.84 mmol, yield: 66.23%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 286.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of benzyl 4- (difluoromethyl) -4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (300 mg, 1.05 mmol) in DMF (10 mL) was added sodium hydride (168.3 mg, 4.251 mmol, 60%in mineral oil) . The mixture was stirred under nitrogen at 25 ℃ for 15 mins. Then iodoethane (492.0 mg, 3.15 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 25℃ under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 1/10, v/v) to afford benzyl 4- (difluoromethyl) -4-ethoxypiperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.57 mmol, yield: 54.63%) as a colorless oil. MS (ESI) m/z = 314.2 [M+H] +.
Step 3: A mixture of benzyl 4- (difluoromethyl) -4-ethoxypiperidine-1-carboxylate (200 mg, 0.64 mmol) and 10%Pd/C (203.8 mg, 1.91 mmol) were suspended in MeOH (15 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature under 50 psi of hydrogen for 6 hrs. The mixture  was filtered through a pad of celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to afford 4- (difluoromethyl) -4-ethoxypiperidine (100 mg, 0.50 mmol, yield: 78.68%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 180.1 [M+H] +.
Intermediate 50. 1-methyl-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-2, 4-dione
Step 1: To a solution of tert-butyl 2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (400 mg, 1.49 mmol) , 1- (chloromethyl) -4-methoxybenzene (358.9 mg, 2.23 mmol) in DMF (8 mL) was added K2CO3 (410.6 mg, 2.97 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (150 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 1/10, v/v) to tert-butyl 3- (4-methoxybenzyl) -2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (500 mg, 1.28 mmol, yield: 86.44%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 334.1 [M+H-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 3- (4-methoxybenzyl) -2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (600 mg, 1.54 mmol) in DMF (10 mL) was added sodium hydride (92.2 mg, 2.305 mmol, 60%in mineral oil) . The mixture was stirred under nitrogen at 25 ℃ for 15 mins. Then iodomethane (261.8 mg, 1.54 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 25℃ under nitrogen atmosphere for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate = 1/10, v/v) to afford tert-butyl 3- (4-methoxybenzyl) -1-methyl-2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (500 mg, 0.57 mmol, yield: 72.4%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 348.1 [M+H-56] +.
Step 3: To a solution of tert-butyl 3- (4-methoxybenzyl) -1-methyl-2, 4-dioxo-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-8-carboxylate (500 mg, 1.24 mmol) in ACN (20 mL) and H2O (10 mL) was added and Ceric ammonium nitrate (2710.8 mg, 4.94 mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hrs. The reaction mixture was poured into saturated Na2CO3 aqueous solution (30 mL) and extracted with EtOAc (30 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product 1-methyl-1, 3, 8-triazaspiro [4.5] decane-2, 4-dione (30 mg, 0.15 mmol, yield: 11.92%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 184.1 [M+H] +.
Intermediate 51. N- (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) methanesulfonamide
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (300 mg, 1.12 mmol) and methanesulfonic anhydride (585 mg, 3.36 mmol) in DCE (10 mL) stirred under nitrogen was added 4-DMAP (40 mg, 0.327 mmol) . The reaction mixture was stirred at 60℃ for 16 hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (10 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 4/1, v/v) to afford crude product tert-butyl  4- (methylsulfonamido) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (100 mg) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 291.1 [M+1-56] + .
Step 2: To a solution of tert-butyl 4- (methylsulfonamido) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (100 mg crude) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added HCl (1 mL, 4 mmol, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1hr. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford crude product N- (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) methanesulfonamide (50 mg) as a colorless gum, which was used for next step without further purification. MS (ESI) m/z = 247.1 [M+H] +.
Intermediate 52. 4'- (trifluoromethyl) - [1, 4'-bipiperidin] -4-ol
Step 1: To a mixture of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 1.86 mmol) in DIEA (10 mL) was added 1, 5-dichloropentan-3-one (578 mg, 3.73 mmol) . The reaction mixture was stirred at 120 ℃ for 48 hrs in a sealed tube. The solvent was removed under vacuum. The residue was diluted with water (50 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined, washed with brine (50 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate =2/1, v/v) to afford tert-butyl 4-oxo-4'- (trifluoromethyl) - [1, 4'-bipiperidine] -1'-carboxylate (160 mg, 0.457 mmol, yield: 24.5%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 295.1 [M+1-56] +
Step 2: To a solution of tert-butyl 4-oxo-4'- (trifluoromethyl) - [1, 4'-bipiperidine] -1'-carboxylate (160 mg, 0.457 mmol) in THF (10 mL) stirred under nitrogen was added NaBH4 (35 mg, 0.840 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1hr. The reaction mixture was poured into water (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were washed with brine (10 mL *2) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate =2/1, v/v) to afford tert-butyl 4-hydroxy-4'- (trifluoromethyl) - [1, 4'-bipiperidine] -1'-carboxylate (50 mg, 0.142 mmol, yield: 31.07%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 297.2 [M+1-56] +
Step 3: To a solution of tert-butyl 4-hydroxy-4'- (trifluoromethyl) - [1, 4'-bipiperidine] -1'-carboxylate (50 mg, 0.142 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added HCl (0.18 mL, 0.720 mmol, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 1hr. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford 4'- (trifluoromethyl) - [1, 4'-bipiperidin] -4-ol hydrochloride (25 mg, 0.0866 mmol, yield: 61.02%) as a white solid, which was used for next step without further purification. MS (ESI) m/z = 253.1 [M+H] +.
Intermediate 53. 3- ( ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) methyl) oxetan-3-ol
Step 1: To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1 -carboxylate (100 mg, 0.33 mmol) , NaH (26 mg, 0.66 mmol) in DMF (5 mL) was added 1, 5-dioxaspiro [2.3] hexane (56.7 mg, 0.66 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80℃ for 16 hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The organic layers were washed with brine (50 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford benzyl 4- ( (3-hydroxyoxetan-3-yl) methoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (40 mg, 0.10  mmol, yield: 31.15%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 390.1 [M+H] +.
Step 2: To a solution of benzyl 4- ( (3-hydroxyoxetan-3-yl) methoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (40 mg, 0.1 mmol) in MeOH (5 mL) was added Pd/C (22 mg, 0.2 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 3 hrs under hydrogen atmosphere. The reaction mixture was filtered and concentrated under vacuum to afford 3- ( ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) methyl) oxetan-3-ol (20 mg, 0.078 mmol, yield: 76.34%) as a yellow gum. MS (ESI) m/z = 256.2 [M+H] +.
Intermediate 54. 3- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) propane-1, 2-diol
Step 1: To a solution of benzyl 4-hydroxy-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 0.33 mmol) in DMF (10 mL) was added Sodium hydride (130 mg, 3.3 mmol, Purity 60%) at room temperature, stirred at room temperature for 10min, 3-bromoprop-1-ene (300 mg, 2.47 mmol) was added. The mixture solution was stirred at room temperature for 16 hours. The reaction mixture was quenched with water (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (100 mL *2) , dried over Na2SO4 and concentrated in vacuum and purified by silica gel column chromatography (PE/EtOAc = 5: 1) to afford benzyl 4- (allyloxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (470mg, 1.37 mmol, 83.03%yield) as a colorless oil. MS (ESI, m/z) : 344.0 [M+H] +
Step 2: To a solution of benzyl 4- (allyloxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.52mmol) in a mixture of THF (5mL) and water (1 mL) was added K2OsO4 (3.8 mg, 0.010mmol) and 4-methyl-4- (λ1-oxidaneyl) -4λ4-morpholine (120 mg, 1.04mmol) . The mixture solution was stirred at room temperature for 16 hours. LCMS indicated completion of reaction. The reaction mixture was quenched with water (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL *3) . The organic layers were combined and then washed with brine (100 mL *2) , dried over Na2SO4 and concentrated in vacuum and purified by silica gel column chromatography (PE/EtOAc = 10: 1) to afford benzyl 4- (2, 3-dihydroxypropoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (180 mg, 0.47 mmol, 90.9%yield) as a colorless oil. MS (ESI, m/z) : 378.2 [M+H] +
Step 3 : To a solution of benzyl 4- (2, 3-dihydroxypropoxy) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (470 mg, 1.25 mmol) in MeOH (10 mL) was added Pd/C (47 mg) and stirred at room temperature for 16 hours under H2. LCMS indicated completion of reaction. The mixture was filtered and concentrated in vacuum to give 3- ( (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) oxy) propane-1, 2-diol (320 mg, 1.32 mmol, 105.4%yield) as a colorless oil. MS (ESI, m/z) : 244.0 [M+H] +
Intermediate 55. 3-cyano-1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid
Step 1: To a solution of methyl 5-bromo-1H-pyrazole-3-carboxylate (1.00 g, 4.48 mmol) and iodoethane (2.28 g, 14.6 mmol) in ACN (20 mL) was added K2CO3 (2.02 g, 14.6 mmol) . The reaction mixture was stirred at 60℃ for 3 hrs. The reaction mixture was poured into water (10 mL) and extracted with EtOAc (100 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate =5/1, v/v) to give methyl 3-bromo-1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (1.00 g, 4.29 mmol, yield: 87.96%) as a white solid.
MS (ESI) m/z = 232.9 [M+H] +.
Step 2: To a solution of methyl 3-bromo-1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (500 mg, 2.15 mmol) and ZnCN2 (678.4 mg, 6.44 mmol) in DMA (20 mL) was added DPPF (356.8 mg, 0.644 mmol) , Pd2 (dba) 3 (196.4 mg, 0.214 mmol) and Zn powder (140.3 mg, 2.15 mmol) . The mixture was stirred under nitrogen at 120 ℃ for 16 hrs. The reaction mixture was poured into water (50 mL) and extracted with EtOAc (50 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/20, v/v) to give methyl 3-cyano-1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (330 mg, 1.84 mmol, yield: 85.5%) as brown oil. MS (ESI) m/z = 180.1 [M+H] +.
Step 3: To a solution of methyl 3-cyano-1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylate (300 mg, 1.24 mmol) in MeOH (10 mL) and THF (1 mL) stirred was added 2N LiOH aqueous solution (2.1 mL) . The reaction mixture was stirred at 0℃ for 30 mins. The mixture was acidified with 1N HCl and extracted with EtOAc (50 mL*3) . The organic layer was dried over Na2SO4 and evaporated to give 3-cyano-1-ethyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid (240 mg, 1.45 mmol, yield: 86.8%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 166.1 [M+H] +.
Intermediate 56. 3-ethyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-4-carboxylic acid
Step 1: To a solution of methyl 2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-4-carboxylate (1 g, 7.0 mmol) in ACN (10 mL) was added Boc2O (1.2 g, 5.5 mmol) and K2CO3 (1.94 g, 13.7 mmol) at 0℃.The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hrs. The mixture was diluted with EtOAc (100 mL) , washed with water (30 mL *3) and brine (30 mL) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford 1- (tert-butyl) 4-methyl 2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-1, 4-dicarboxylate (1.3 g, 5.3 mmol, yield: 75.7%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 187.1 [M-56] +.
Step 2: To a solution of 1- (tert-butyl) 4-methyl 2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-1, 4-dicarboxylate (1.3 g, 5.3 mmol) in ACN (10 mL) was added iodoethane (2.48 g, 15.9 mmol) and K2CO3 (2.2 g, 15.9 mmol) . The reaction mixture was stirred at 50 ℃ for 3 hrs. The mixture was diluted with water (30 mL) , extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product which was purified by silica gel chromatography (elution gradient: PE: EA = 3: 1) to afford 1- (tert-butyl) 4-methyl 3-ethyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-1, 4-dicarboxylate (660 mg, 2.44 mmol, yield: 46.03%) as a yellow solid MS (ESI) m/z = 215.0 [M-56] +.
Step 3: To a solution of 1- (tert-butyl) 4-methyl 3-ethyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-1, 4-dicarboxylate (660 mg, 2.44 mmol) in DCM (10 mL) was added TFA (2 mL) dropwise at 0℃. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to afford methyl 3-ethyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-4-carboxylate (360 mg, 2.12mmol, yield: 86.88%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 171.2 [M+H] +.
Step 4: To a solution of methyl 3-ethyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-4-carboxylate (150 mg, 0.88 mmol) in THF (2 mL) was added a solution of LiOH. H2O (148 mg, 3.52 mmol) in water (1 mL) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The reaction mixture was adjusted pH to 5 with 1N HCl and extracted with EtOAc (20 mL *3) . The organic layers were washed with brine (20 mL *2) , dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under vacuum to afford 3-ethyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-imidazole-4-carboxylic acid (100 mg, 0.64 mmol, yield: 72.73%) as a white solid. MS (ESI) m/z = 157.0 [M+H] +
Intermediate 57. 4- (piperazin-1-yl) bicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylic acid
Step 1: To a solution of (methyl 4-aminobicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylate (1.0 g, 5.46 mmol) , Na2CO3 (1.73 g, 16.38 mmol) and NaI (1.63 g, 10.92 mmol) in DMAc (20 mL) were added tert-butyl bis (2-chloroethyl) carbamate (1.45 g, 6.01 mmol) . The reaction mixture was stirred at 110 ℃ for 30 min. The other of tert-butyl bis (2-chloroethyl) carbamate (1.45 g, 6.01 mmol) was added. The solution was stirred at 110 ℃ for 16 hours. LCMS indicated completion of reaction. H2O (50 mL) was added, extracted with EA (30 mL *3) , washed with LiCl (aq) , concentrated in vacuum. The residue was purified by gel chromatography (PE: EA = 1: 1) to give tert-butyl 4- (4- (methoxycarbonyl) bicyclo [2.2.2] octan-1-yl) piperazine-1-carboxylate (250 mg, 0.71 mmol, 13.0%yield) as a yellow solid.
MS (ESI, m/z) : 353.3 [ (M+H) ] +
Step 2 : To a solution of (tert-butyl 4- (4- (methoxycarbonyl) bicyclo [2.2.2] octan-1-yl) piperazine-1-carboxylate (250 mg, 0.71 mmol) in MeOH (4.0 mL) was added 2N of NaOH (3.55 ml, 71.0 mmol) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. LCMS indicated completion of reaction. Adjust PH=3-4 with HCl (2N) , extracted with EA (10 mL *3) , washed with NaCl (aq) , concentrated in vacuum to give 4- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) bicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylic acid (110 mg, 0.33 mmol, 45.8%yield) as a yellow solid.
MS (ESI, m/z) : 339.3 [M+H] +
Step 3 : To a solution of 4- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) bicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylic acid (110 mg, 0.33 mmol) in DCM (2.0 mL) was added 4N of hydrogen chloride (2.3 mL, 9.15 mmol) at room temperature. The solution was stirred at room temperature for 2 h. LCMS indicated completion of reaction. The reaction solution was concentrated in vacuum to give 4- (piperazin-1-yl) bicyclo [2.2.2] octane-1-carboxylic acid (60mg, 0.252 mmol, 76.3%yield) as a yellow solid.
MS (ESI, m/z) : 239.3 [M+H] +
Intermediate 58. 1-methyl-3- (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) urea
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-amino-4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (100 mg, 0.373 mmol) and DIEA (240 mg, 1.86 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added triphosgene (33 mg, 0.111 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ for 5 mins. A solution of methylamine hydrochloride (78 mg, 1.12 mmol) and DIEA (145 mg, 1.12 mmol) in DCM (5 mL) was added. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 4 hrs. The reaction was quenched with saturated NH4Cl aqueous solution (5 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The organic layers were combined, washed with saturated brine (10 mL) , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under vacuum to afford the crude product, which was purified by flash chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/5, v/v) to afford tert-butyl 4- (3-methylureido) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (60 mg, 0.184 mmol, yield: 49.48%) as a colorless gum. MS (ESI) m/z = 270.1 [M+1-56] + .
Step 2: To a solution of tert-butyl 4- (3-methylureido) -4- (trifluoromethyl) piperidine-1-carboxylate (60 mg, 0.184 mmol) in DCM (5 mL) stirred under nitrogen was added  HCl (0.28 mL, 1.13 mmol, 4M 1, 4-dioxane solution) . The reaction mixture was stirred at 25℃for 1hr. The reaction mixture was concentrated under vacuum to afford 1-methyl-3- (4- (trifluoromethyl) piperidin-4-yl) urea hydrochloride (40 mg, 0.153 mmol, yield: 82.89%) as a colorless gum, which was used for next step without further purification. MS (ESI) m/z = 226.1 [M+H] +.
Intermediate 59. 2-methyl-2- (piperazin-1-yl) propanoic acid
Step 1 : To a mixture of tert-butyl piperazine-1-carboxylate (5.0 g, 26.85mmol ) in acetonitrile (80mL) was added ethyl ethyl 2-bromo-2-methylpropanoate (6.28 g, 32.22mmol ) and Potassium carbonate (7.42 g, 53.7mmol ) . The mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The mixture was concentrated in vacuum, diluted with water (50 mL) and extracted with EA (40 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine (40 mL *3) , dried over Na2SO4 and concentrated in vacuum to give tert-butyl 4- (1-ethoxy-2-methyl-1-oxopropan-2-yl) piperazine-1-carboxylate (6.7 g, crude) as a yellow oil. LC/MS (ESI, m/z) : [ (M +H) ] + = 301.2.
Step 2 : To a mixture of tert-butyl 4- (1-ethoxy-2-methyl-1-oxopropan-2-yl) piperazine-1-carboxylate (6.7g, crude ) in methanol (30mL) was added sodium hydroxide (50 mL, 1 M ) , The mixture was stirred at 85 ℃ for 3 hours. The mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EA (50 mL) . The aqueous phase was acdified to PH～ 5 and concentrated. The crude material was suspended in EtOH (15 mL) , stirred for 30 min and filtered. The filtrate was concentrated in vacuum to give 2- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) -2-methylpropanoic acid (4.3g, 15.8 mmol, 59 %yield) as a white solid. LC/MS (ESI, m/z) : [ (M +H) ] + = 273.1.
Step 3: To a mixture of 2- (4- (tert-butoxycarbonyl) piperazin-1-yl) -2-methylpropanoic acid (4.3g, 15.79mmol ) in dichloromethane (10mL) was added hydrogen chloride/dioxane (10 mL, 4 M) . The mixture was concentrated in vacuum to give 2-methyl-2- (piperazin-1-yl) propanoic acid. LC/MS (ESI, m/z) : [ (M +H) ] + = 173.0.
Intermediate 60. (R) -2-methyl-1- (propan-2-yl-1, 1, 1, 3, 3, 3-d6) piperazine
Step 1: To a solution of tert-butyl (R) -3-methylpiperazine-1-carboxylate (1.00 g, 4.97 mmol) , propan-2-one-d6 (3.18 g, 49.7 mmol) and Ti (iPrO) 4 (1.41 g, 4.97 mmol) in DCM (15 mL) stirred under nitrogen at 0℃ for 30 mins was added STAB (624.4 mg, 9.93 mmol) . The reaction mixture was stirred at 25℃ under nitrogen atmosphere for 16 hrs. The reaction mixture was poured into water (30 mL) and extracted with EtOAc (30 mL *3) . The combined organic layers were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to afford a crude product, which was purified by flash silica chromatography (elution gradient: petroleum ether/ethyl acetate, 1/1, v/v) to afford tert-butyl (R) -3-methyl-4- (propan-2-yl-1, 1, 1, 3, 3, 3-d6) piperazine-1-carboxylate (700 mg, 2.53 mmol, yield: 50.84%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z = 249.2 [M+H] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl (R) -3-methyl-4- (propan-2-yl-1, 1, 1, 3, 3, 3-d6) piperazine-1-carboxylate (300 mg, 1.20 mmol) in H2O (5 mL) stirred under nitrogen was added hydrochloric acid solution (1 mL, 2M in H2O) . The  reaction mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated under reduced pressure to afford (R) -2-methyl-1- (propan-2-yl-1, 1, 1, 3, 3, 3-d6) piperazine HCl salt (150 mg, 0.73 mmol, yield: 60.75%) as an off-white solid. MS (ESI) m/z = 149.2 [M+H] +.
Intermediate 61. 3- (difluoromethylene) piperidine
Step 1: To a solution of tert-butyl 3-oxopiperidine-1-carboxylate (1 g, 5 mmol) and 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (0.87 g, 4.5 mmol) in DMF (15 mL) was added a solution of t-BuOK (1.01 g, 9 mmol) in DMF (5 mL) at -40℃ under nitrogen. Then the mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was quenched by Sat. NH4Cl, neutralized with 1N HCl, then diluted with EA (50 mL) , washed by water (25 mL*2) , brine (25 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (PE: EA=0～10%) to get the product (0.45 g, 1.9 mmol, yield: 38.0%) as a pale yellow oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (t, J = 2.0 Hz, 2H) , 3.45 –3.37 (m, 2H) , 2.20 (tt, J = 6.4, 2.0 Hz, 2H) , 1.61 -1.55 (m, 2H) , 1.44 (s, 9H) . MS (ESI) m/z = 178.1 [M+H-56] +.
Step 2: To a solution of tert-butyl 3- (difluoromethylidene) piperidine-1-carboxylate (450 mg, 1.93 mmol) in DCM (6 mL) was added 4N HCl/dioxane (3 mL) . The mixture was stirred at rt for 16 hrs. The mixture was concentrated to get the crude product (450 mg, crude) as a pale yellow oil. MS (ESI) m/z = 134.1 [M+H] +.
Intermediate 62. 4- (difluoromethylene) piperidine
Step 1: To a solution of tert-butyl 4-oxopiperidine-1-carboxylate (2 g, 10 mmol) , DFMPS (1.55 g, 8 mmol) in DMF (20 mL) was added a solution of t-BuOK (1.8 g, 16 mmol) in DMF (10 mL) at -40℃ under N2. The mixture was stirred at 25℃ for 2 hrs. The mixture was neutralized with 1N HCl, then diluted with EA (120 mL) , washed by water (60 mL*2) , brine (60 mL*2) , dried over Na2SO4, concentrated and purified by flash (PE: EA=0～3%) to get the product (1.7 g, 6.9 mmol, yield: 69.0%) as a white solid. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.45 –3.36 (m, 4H) , 2.16 -2.13 (m, 4H) , 1.47 (s, 9H) .
Step 2: A mixture of tert-butyl 4- (difluoromethylidene) piperidine-1-carboxylate (500 mg, 2.14 mmol) in HCl -dioxane (4 mL, 4 M) /DCM (4 mL) was stirred at 25 ℃ for 2 hrs. The mixture was concentrated to get the crude product (280 mg, crude) as a white solid. MS (ESI) m/z = 134.1 [M+H] +.
Intermediate 63. 3- (difluoromethylene) pyrrolidine
Step 1: To a solution of tert-butyl 3-oxopyrrolidine-1-carboxylate (1 g, 5.4 mmol) , 2- (difluoromethane) sulfonylpyridine (940 mg, 4.8 mmol) in DMF (10 mL) was added t-BuOK (1.09 g, 9.7 mmol) in DMF (5 mL) at -40℃ under N2. The mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was nuetralized with 1N HCl, then diluted with water (30 mL) , extracted with EA (30 mL*3) , The combined organic layers were washed with brine (30 mL) , dried over Na2SO4,  concentrated under vacuum and purified by Flash Chromatography (PE/EtOAc=0-10%) to give the product (457 mg, 38%) as a yellow oil. MS (ESI) m/z =164.1 [M-16+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (s, 2H) , 3.50 (t, J = 7.1 Hz, 2H) , 2.63 –2.50 (m, 2H) , 1.47 (s, 9H) .
Step 2: To a solution of tert-butyl 3- (difluoromethylidene) pyrrolidine-1-carboxylate (457 mg, 2.08 mmol) in DCM (5 mL) was added HCl in dioxane (2 mL) . The mixture was stirred at rt for 2 hrs. The mixture was concentrated under vacuum to give the crude product (310 mg, crude) as a brown oil. MS (ESI) m/z =120.2 [M+H] +.
Test Example 1: IL-17A/A HEK Reporter Cell Assay
The ability of compounds to neutralize the activity of IL-17A/A was assessed with a cell-based human IL-17 neutralization assay conducted essentially as follows. Human IL17A reporter 293 cell line (H_IL17A Reporter 293, Genomeditech, cat no. GM-C06721) used in this assay consist of HEK 293 cells stably expressing human IL-17RA, IL-17RC, and the adapter protein ActI, which are combined to drive the expression of luciferase reporter when stimulated by IL-17A/A. The luciferase signals from cell lysates represent the signaling pathways activation profiles, and are measured by ONE-GloTM Luciferase Assay System (Promega, cat no. E6120) .
H_IL17A Reporter 293 cells were seeded at 15,000 cells/well in white CulturPlate-96 (PerkinElmer, cat no. 6005680) in DMEM medium (Gibco, cat no. 10566016) supplemented with 10%Fetal Bovine Serum (ThermoFisher, cat no. 10091148) , 1%Penicillin-Streptomycin (ThermoFisher, cat no. 15140122 ) , 100 μg/mL Zeomycin (Genomeditech, cat no. GM-040407) , 150 μg/mL Hygromycin (Genomeditech, cat no. GM-040403-1) , 1.5 μg/mL Puromycin (Genomeditech, cat no. GM-040401-1) , 3 μg/mL Blasticidin (Genomeditech, cat no. GM-040404-1) , and incubated in a humid incubator at 37℃, 5%CO2, overnight.
The following day growth medium was removed and 100 μL fresh medium added. 100 nL test compound with titrated concentrations in 100%DMSO was added into each well reserved for test cpds, by the use of acoustic pipetting. The remaining wells received an equal volume of DMSO only, as vehicle control, or Secukinumab, as a reference for IL-17A/A inhibitor. A dose range of 0.001 nM to 10,000 nM was evaluated. After the addition of human IL-17A/A protein  (Novoprotein, cat no. C774) with a final concentration of 8.32 ng/mL, the system was then incubated for 18 hours (18±2 hours) for ONE-Glo detection. Percent inhibition is calculated using the following equation:
Where PC (positive control) is obtained from cells treated with IL-17A/A protein and DMSO only; NC (negative control) is obtained from cells only.
The resulting inhibition curve was analyzed using XLFit, and IC50 values were determined using a 4-parameter nonlinear fit, to illustrate neutralization human IL-17 mediated signaling, and the activity of inhibitors of IL-17A/A (FIG. 1A-J) .
Test Example 2: IL-17A/F HEK Reporter Cell Assay
The ability of compounds to neutralize the activity of IL-17A/F may be assessed with a cell-based human IL-17 neutralization assay conducted essentially as follows. Human IL17A reporter 293 cell line (H_IL17A Reporter 293, Genomeditech, cat no. GM-C06721) used in this  assay consist of HEK 293 cells stably expressing human IL-17RA, IL-17RC, and the adapter protein ActI, which are combined to drive the expression of luciferase reporter when stimulated by IL-17A/A. The luciferase signals from cell lysates represent the signaling pathways activation profiles, and are measured by ONE-GloTM Luciferase Assay System (Promega, cat no. E6120) .
H_IL17A Reporter 293 cells were seeded at 15,000 cells/well in white CulturPlate-96 (PerkinElmer, cat no. 6005680) in DMEM medium (Gibco, cat no. 10566016) supplemented with 10%Fetal Bovine Serum (ThermoFisher, cat no. 10091148) , 1%Penicillin-Streptomycin (ThermoFisher, cat no. 15140122 ) , 100 μg/mL Zeomycin (Genomeditech, cat no. GM-040407) , 150 μg/mL Hygromycin (Genomeditech, cat no. GM-040403-1) , 1.5 μg/mL Puromycin (Genomeditech, cat no. GM-040401-1) , 3 μg/mL Blasticidin (Genomeditech, cat no. GM-040404-1) , and incubated in a humid incubator at 37℃, 5%CO2, overnight.
The following day growth medium was removed and 100 μL fresh medium added. 100 nL test compound with titrated concentrations in 100%DMSO was added into each well reserved for test cpds, by the use of acoustic pipetting. The remaining wells received an equal volume of DMSO only, as vehicle control, or Secukinumab, as a reference for IL-17A/F inhibitor. A dose range of 0.001 nM to 10,000 nM was evaluated. After the addition of human IL-17A&17F  (Novoprotein, cat no. CI60) with a final concentration of 30 ng/mL, the system was then incubated for 18 hours (18±2 hours) for ONE-Glo detection. Percent inhibition is calculated using the following equation:
(Where PC (positive control) is obtained from cells treated with IL-17A/F only; NC (negative control) is obtained from cells only. )
The resulting inhibition curve was analyzed using XLFit, and IC50 values were determined using a 4-parameter nonlinear fit, to illustrate neutralization human IL-17 mediated signaling, and the activity of inhibitors of IL-17A/F (FIG. 2A-H) .
The summary of results for cell assay is shown in table 4.
Table 4: IL-17 A/A and IL-17 A/F inhibition data for selected compounds


Test Example 3: IL-17F/F HEK Reporter Cell Assay
The ability of compounds to neutralize the activity of IL-17F/F may be assessed with a cell-based human IL-17 neutralization assay conducted essentially as follows. Human IL17A reporter 293 cell line (H_IL17A Reporter 293, Genomeditech, cat no. GM-C06721) used in this assay consist of HEK 293 cells stably expressing human IL-17RA, IL-17RC, and the adapter protein ActI, which are combined to drive the expression of luciferase reporter when stimulated by IL-17F/F. The luciferase signals from cell lysates represent the signaling pathways activation profiles, and are measured by ONE-GloTM Luciferase Assay System (Promega, cat no. E6120) .
H_IL17A Reporter 293 cells were seeded at 15,000 cells/well in white CulturPlate-96 (PerkinElmer, cat no. 6005680) in DMEM medium (Gibco, cat no. 10566016) supplemented with 10%Fetal Bovine Serum (ThermoFisher, cat no. 10091148) , 1%Penicillin-Streptomycin (ThermoFisher, cat no. 15140122 ) , 100 μg/mL Zeomycin (Genomeditech, cat no. GM-040407) , 150 μg/mL Hygromycin (Genomeditech, cat no. GM-040403-1) , 1.5 μg/mL Puromycin (Genomeditech, cat no. GM-040401-1) , 3 μg/mL Blasticidin (Genomeditech, cat no. GM-040404-1) , and incubated in a humid incubator at 37℃, 5%CO2, overnight.
The following day growth medium was removed and 100 μL fresh medium added. 100 nL test compound with titrated concentrations in 100%DMSO was added into each well reserved for test cpds, by the use of acoustic pipetting. A dose range of 0.001 nM to 10,000 nM was evaluated. After the addition of human IL-17F/F protein (Novoprotein, cat no. CA22) with a  final concentration of 0.14 μg/mL, the system was then incubated for 18 hours (18±2 hours) for ONE-Glo detection. Percent inhibition is calculated using the following equation:
Where PC (positive control) is obtained from cells treated with IL-17F/F protein and DMSO only; NC (negative control) is obtained from cells only.
The resulting inhibition curve was analyzed using XLFit, and IC50 values were determined using a 4-parameter nonlinear fit, to illustrate neutralization human IL-17 mediated signaling, and the activity of inhibitors of IL-17F/F.
IL-17 is an immune-cell derived cytokine that is produced in response to infection by certain microorganisms. Upon binding to its receptor on various cell types found in tissues (e.g. keratinocytes, fibroblasts, and epithelial cells) , it elicits downstream signals that orchestrate sustained tissue inflammation, with the aim of clearing the invading pathogen.
We have developed a series of potentially Best-in-Class oral IL-17 inhibitors, initially for the treatment of psoriasis with the objective of achieving therapeutic benefit similar to that of the U.S. FDA approved injectable biologics, secukinumab. To compare the efficacy of small molecule inhibitors in an in vitro neutralization assay against anti-IL-17A-specific antibody secukinumab, the relative inhibition of IL-17A/A and IL-17A/F signaling was examined. This  assay utilized IL-17A/A or IL-17A/F-stimulated reporter activities as a surrogate marker of inflammatory activation. The potency curves were calculated relative to the reporter cells activated with IL-17A/A or IL-17A/F alone. Example 7 and secukinumab showed more potent IC50 values for IL-17A/A at 0.0006 μM and 0.0011 μM respectively, and for similar IL-17A/F at 0.027 μM and 0.0211 μM, respectively. In contrast, Example 1 was relatively less potent against IL-17A/A at 0.0039 μM, and against IL-17A/F at 0.36 μM. The data are consistent with the reported those for secukinumab. Collectively, the example emphasizes the comparable blockage effect of small molecule inhibitors against the same biochemical step as the anti-IL-17 antibody.
Test example 4: In Vivo Pharmacokinetic (PK) evaluation of IL-17A/A, IL-17A/F Compounds in Mouse
The pharmacokinetics of test compounds were evaluated following a single oral administration (PO) of solution/suspension at doses of 10 mg/kg in male balb/c mice using a parallel study design. Blood samples for PO dose groups were collected at 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, and 24 hours post dose. Plasma concentrations were quantitated using a LC/MS/MS method. Treatment with Example 184 and Example 31 at 10 mg/kg PO is shown in Table 5.
Table 5

*Compound A from patent WO2020163554A1(#228)

Claims (10)

  1. A compound of the following formula (I) :
    wherein
    moiety A is selected from the group consisting of:
    5-12-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, cyano, -NH2, C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, C3-7 cycloalkoxy, phenyl, phenoxy, 5-6-membered heteroaryl and 4-7-membered heterocycloalkyl, said 5-6-membered heteroaryl and 4-7-membered heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    -NH-C (O) -R3, wherein R3 is selected from the group consisting of :
    C3-12 cycloalkyl and 3-12-membered heterocyclyl, C5-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, C1-6 cyanoalkyl, -oxo, -NH2, -OH; said heterocycloalkyl and heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    optionally substituted methyl, wherein one or more substituents are independently selected from: C1-6 alkyloxy, C6-12 aryl and 5-12-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, each optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -OH;
    -O-C3-7 cycloalkyl and -O-CH2-C3-7 cycloalkyl, -O-CH2-5-7-membered heteroaryl, and benzyl, each benzyl, C3-7 cycloalkyl and heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, C3-7 cycloalkyl, halogen, -CN, -NH2, -OH;
    -NH (C1-6 alkyl) , -NH (C3-7 cycloalkyl) , -N (C1-6 alkyl) 2, and -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, C3-7 cycloalkyl, halogen, -CN, -NH2, -OH;
    C1-6 alkyl, C6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, 4-7-membered heterocyclyl, `each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of H, C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, 4-7-membered  heterocycloalkyl, halogen, halogenated C1-6 alkyl, -CN, -NH2, -OH, phenyl, -NH (C1-6 alkyl) , - (CH2) q-NH (CO) - (C1-4alkyl) , -NHS (O) 2 (C1-6 alkyl) ; q is 0, 1, 2, 3, or 4;
    or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a substituted or unsubstituted C5-7 carbocyclyl, or substituted or unsubstituted 5-7 membered heterocyclyl;
    moiety B is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocyclyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from N, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocyclyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
    moiety C is selected from the group consisting of:
    *4-9-membered heterocyclyl containing one or more hetero atoms selected from O, N and S, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C3-8 carbocyclyl, -O-C3-6 cycloalkyl, C1-6 hydroxyalkyl, halogen, -CN, CF3, -CD3, -NH2, =NH, -OH, -COOH, C1-6 alkoxy, -S-C1-6 alkyl, C1-3 carbonyl, -oxo, -N (C1-6 alkyl) 2, -NH (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C1-6 alkyl) , -NHC (O) -NH (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C3-6 cycloalkyl) , -S (O) 2- (C1-6 alkyl) , -S (O) 2- (C3-6 cycloalkyl) , -C (O) -C1-6 alkyl, 4-7 membered heterocyclyl, 5-7 membered heteroaryl;
    said substituents being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of deuterium, C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkoxy, halogen, -CN, CF3, CD3, -oxo, -NH2, -COOH, -C (O) O-C1-6 alkyl, -OH, 5-7 membered heteroaryl, 4-7 membered heterocyclyl and C3-6 cycloalkyl; or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle or 3-7-membered heterocycle, said C3-7 carbocycle or 3-7-membered heterocycle being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene (=CH2) , C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-3 alkoxy, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH, -oxo;
    *optionally substituted amino group, wherein one or more substituents are independently selected from: C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -NO2, -CF3, -NH2, -OH; said substituents being optionally substituted with one or more halogen;
    R1, R1’ and R2’ are independently selected from the group consisting of hydrogen, deuterium, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, deuterated C1-6 alkyl, deuterated C2-6 alkenyl, deuterated C2-6 alkynyl, C1-3 alkoxy, halogenated C1-3 alkyloxy, halogen, halogenated C1-6 alkyl, -CN, -N (C1-6 alkyl) 2, CF3, -NH2, -OH;
    R2 is selected from hydrogen, -NH2, C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, -N (C1-6 alkyl) 2, -NH-C1-6 alkyl, -NHC (O) -C1-6 alkyl, -NHC (O) - (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) , -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , -NHC (O) -O-NH-C1-6 alkyl, -NHC (O) -NH- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C1-6 alkyl) , -NHC (O) -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C1-6 alkyl, -NHC (O) -O-C3-7 cycloalkyl, -NHC (O) -N (C1-6alkyl) 2, -NHC (O) -N (C3-7 cycloalkyl) 2,  -NHC (O) -O-CH2-C3-7 cycloalkyl, -NHSO2-C1-6 alkyl, -NHSO2-NH-C1-6 alkyl, -NHSO2-N (C1-6 alkyl) 2, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, deuterium, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH; said heterocyclyl or heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    Ra and Ra’ are each independently selected from hydrogen, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH, -C1-3 alkoxy, C3-7 cycloalkyl and C3-7 heterocyclyl;
    Rb and Rb’ are each independently selected from hydrogen, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C5-10 aryl, C5-10 heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C3-7cycloalkyl, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH, and -C1-3 alkoxy; or Rb and Rb’ together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle, C5-9 spirocyclic ring, C5-10 aromatic ring or C5-10 aromatic heterocycle, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, -C1-3 alkoxy, halogen, -CN, CF3, -NH2, -OH; the substituents are optionally substituted with one or more halogen;
    L is absent or selected from -O-and -NH-;
    m is 0, 1 or 2; and
    n is 0 or 1;
    or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  2. The compound according to claim 1, wherein L is absent, m is 0, n is 1, and the compound is represented by formula (Ia) :
    wherein
    moiety A1 is selected from the group consisting of: 5-12-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said heteroaryl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, cyano, -NH2, C1-6 alkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, and 4-7-membered heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    moiety B1 is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
    moiety C1 is selected from 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, methylene and C1-6 alkyl, said substituents being optionally substituted with one or more halogen, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle;
    R1, R1’ and R2’ are independently selected from the group consisting of hydrogen, CF3 and C1-6 alkyl;
    R2 is selected from -NH2, -NHC (O) -C1-6alkyl, -NHC (O) -NH- (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-C3-7 cycloalkyl, -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) and -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl and C1-6 alkoxy; said heterocyclyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    Rb1 and Rb1’ are each independently selected from C3-7 cycloalkyl or C2-6 alkenyl substitutedwith one or more C3-7 cycloalkyl; or Rb1 and Rb1’ together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle optionally substituted with one or more C1-6 alkyl or halogen;
    or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  3. The compound according to claim 1, wherein L is absent, m is 0, n is 1, and the compound is represented by formula (Ib) :
    wherein
    moiety D is selected from the group consisting of: C1-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, -O-C3-7 cycloalkyl, -O-CH2-C3-7 cycloalkyl, -O-CH2-5-7-membered heteroaryl, -NH (C1-6 alkyl) , -N (C3-7 cycloalkyl) , -N (C1-6 alkyl) 2, -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , C6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, 4-7-membered heterocyclyl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of H, C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkoxy, C3-7 cycloalkyl, 4-7-membered heterocycloalkyl, halogen, halogenated C1-6 alkyl, C1-6 cyanoalkyl, -oxo, -CN, -NH2, -OH; , phenyl, -NH (C1-6 alkyl) , - (CH2) q-NH (CO) - (C1-4alkyl) , -NHS (O) 2 (C1-6 alkyl) ; q is 0, 1, 2, 3, or 4; or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a substituted or unsubstituted C5-7 carbocyclyl, or substituted or unsubstituted 5-7 membered heterocyclel; said heterocycloalkyl, heterocyclyl and heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    moiety B2 is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12-membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen, said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
    moiety C2 is selected from the group consisting of:
    amino group, said amino group being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, halogen or halogenated C1-6 alkyl;
    4-9-membered heterocyclyl containing one or more heteroatoms selected from N, O and S, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of methylene, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C1-6 alkoxy, -S-C1-6 alkyl, C3-6 carbocyclyl, -O-C3-6 cycloalkyl, -NH2, CF3, CD3, CN, -oxo, =NH, -N (C1-6 alkyl) 2, -NH (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C1-6 alkyl) , -NHS (O) 2- (C3-6 cycloalkyl) , C1-3 hydroxyalkyl, -C (O) -C1-6 alkyl, halogen, -OH, -COOH, 5-7 membered heterocyclyl, 5-7 membered heteroaryl; said substituents being optionally substituted with one or more halogen, deuterium, CN, CF3, -oxo, CD3, -OH, -COOH, -C (O) O-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, halogenated C1-6 alkyl, C1-3 alkoxy, 5-7 membered heteroaryl and C3-6 cycloalkyl; optionally, two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle, or 3-7 membered heterocycle containing one or more heteroatoms selected from N, O and S, 5-7 membered heteroaryl;
    said C3-7 carbocycle or 3-7-membered heterocycle being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of halogen, -oxo, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C2-6 alkynyl, C1-3 alkoxy, -CN, -CF3, -NH2, -OH;
    R1, R1’ and R2’ are independently selected from the group consisting of hydrogen, CF3 and C1-6 alkyl;
    R2 is selected from -NHC (O) -O-C1-6alkyl, -NHC (O) -C1-6alkyl, -NHC (O) -NH- (C1-6 alkyl) , -NHC (O) - (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -NH- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -N (C1-6alkyl) (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) -O-CH2- (C3-7 cycloalkyl) , -NHC (O) - (4-7 membered heterocyclyl) , -NHC (O) -N (C1-6alkyl) 2, -NHC (O) -N (C3-7 cycloalkyl) 2, and -NHC (O) - (4-7 membered heteroaryl) , each being optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of deuterium, halogen, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, halogenated C2-6 alkenyl, C1-6 alkoxy and C3-7 cycloalkyl; said heterocyclyl or heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    Rb2 and Rb2’ are each independently selected from C3-7 cycloalkyl; or Rb2 and Rb2’ together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle or 5-7 membered heterocyclyl optionally substituted with one or more substituents independently selected from methylene, C2-6 alkenyl, C1-6 alkyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen; or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-6 carbocycle or 4-7-membered heterocyclyl; said carbocycle and heterocyclyl optionally substituted with one or more substituents independently selected from C2-6 alkenyl, C1-6 alkyl or halogen; said substituents being optionally  substituted with one or more halogen;
    Rc and Rc’ are independently selected from hydrogen, deuterium, C1-3 alkyl, C1-3 alkyloxy, halogen, -CN, -CF3, -CD3, -NH2, -OH;
    p is 0 or 1;
    or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
    preferably,
    R2’ is CF3 or C1-3 alkyl; and/or
    moiety B2 is selected from phenyl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said phenyl is substituted with two halogen, said 6-membered heteroaryl is non-substituted or substituted with one halogen, and said 6-membered heterocylyl is non-substituted or substituted with one halogen or oxo; and/or
    moiety C2 is selected from 5-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being substituted with one =CF2 and being optionally substituted with one or more halogen or C1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom or adjacent ring atoms together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle; and/or
    Rb2 and Rb2’ together with the carbon atom to which they attached form a C5-8 carbocycle substituted with one =CF2.
  4. The compound according to claim 1, wherein L is absent, m is 0, n is 0, and the compound is represented by formula (Ic) :
    wherein
    moiety D1 is selected from the group consisting of: C6-12 aryl, 5-12-membered heteroaryl, optionally substituted with one or more substituents independently selected from the group consisting of C1-6 alkyl, C1-6 hydroxyalkyl, C1-6 alkyloxy, halogen, -CN, -NH2, -OH; said heterocycloalkyl and heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N;
    moiety B3 is selected from C6-12 aryl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-12membered heteroaryl containing one or more N heteroatoms, said C6-12 aryl or 6-12-membered heteroaryl is optionally substituted with one or more halogen; said 6-membered heterocylyl is optionally substituted with one or more halogen or oxo;
    moiety C3 is selected from the group consisting of: amino group optionally substituted with one or more C1-6 alkyl, said C1-6 alkyl being optionally substituted with one or more -CF3; 4-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being optionally substituted with one or more halogen, methylene, C2-6 alkenyl, said methylene and C2-6 alkenyl being optionally substituted with one or more halogen, C1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle;
    R2 and R2’ are independently selected from the group consisting of hydrogen, CF3 and C1-6 alkyl;
    Rb3 and Rb3’ are each independently selected from hydrogen, C3-7 cycloalkyl or C2-6 alkenylsubstituted with one or more C3-7 cycloalkyl; or Rb3 and Rb3’ together with the carbon atom to which they attached form a C3-8 carbocycle optionally substituted with one or more methylene, C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl or halogen; said substituents being optionally substituted with one or more halogen;
    Rc and Rc’ are independently selected from hydrogen, deuterium, C1-3 alkyl, C1-3 alkyloxy, halogen, -CN, -CF3, -CD3, -NH2, -OH;
    p is 0 or 1;
    or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
    preferably,
    moiety B3 is selected from phenyl, 6-membered heterocylyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, S and N, or 6-membered heteroaryl containing one or more N atoms, said phenyl is substituted with two halogen, said 6-membered heteroaryl is non-substituted or substituted with one halogen, and said 6-membered heterocylyl is non-substituted or substituted with one halogen or oxo; and/or
    moiety C3 is selected from 5-9-membered heterocyclyl containing one or more N atoms, said heterocyclyl being substituted with one =CF2 and being optionally substituted with one or more halogen or C1-6 alkyl, or two substituents on the same ring atom together with the ring atoms to which they attached form a C3-7 carbocycle; and/or
    Rb3 and Rb3’ together with the carbon atom to which they attached form a C5-8 carbocycle substituted with one =CF2.
  5. The compound according to any one of claims 1-4, wherein the compound is selected from the group consisting of:








    or an enantiomer, a stereoisomer, a solvate or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  6. A pharmaceutical composition comprising the compound of any one of claims 1-5 and a pharmaceutically acceptable excipient.
  7. A method of treating a disease or condition in a subject in need thereof, wherein the method comprises administering to the subject a therapeutically effective amount of the compound of any one of claims 1-5, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of claim 6, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
  8. The method according to claim 7, wherein the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn's disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma, allograft rejection (e.g., renal) , systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, Behcet's disease, ulcerative colitis, rheumatoid arthritis (RA) , inflammatory bowel disease, Wegener's granulomatosis, sarcoidosis, systemic sclerosis, insulin-dependent diabetes mellitus, septic shock syndrome, Alzheimer's disease, an inflammatory eye disease, uveitis and non-infectious uveitis.
  9. Use of the compound of any one of claims 1-5, or the enantiomer, stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition of claim 6 in the manufacture of medicaments for preventing or treating a disease or condition, wherein the disease or condition is selected from the group consisting of inflammatory diseases, proliferative diseases and autoimmune diseases.
  10. The use according to claim 9, wherein the disease or condition is selected from one or more of plaque psoriasis, guttate psoriasis, inverse psoriasis, pustular psoriasis, erythrodermic psoriasis, aspsoriatic arthritis, ankyslosing spondylitis, hidradenitis suppurutiva, palmoplantar psoriasis, airway inflammation, ankylosing spondylitis, asthma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, spondyloarthritis, bone erosion, intraperitoneal abscesses and adhesions, IBD, Crohn's disease, allograft rejection, psoriasis, psoriatic arthritis, certain types of cancer, angiogenesis, atherosclerosis and multiple sclerosis, erythematosus, response to allergen exposure, Helicobacter pylori associated gastritis, bronchial asthma, asthma, allograft rejection (e.g., renal) , systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, Behcet's disease, ulcerative colitis, rheumatoid arthritis (RA) , inflammatory bowel disease, Wegener's granulomatosis, sarcoidosis, systemic sclerosis, insulin-dependent diabetes mellitus, septic shock syndrome, Alzheimer's disease, an inflammatory eye disease, uveitis and non-infectious uveitis.
PCT/CN2024/085669 2023-04-03 2024-04-02 Novel compounds, compositions comprising the same and uses thereof WO2024208228A1 (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2023085932 2023-04-03
CNPCT/CN2023/085932 2023-04-03
CNPCT/CN2023/120819 2023-09-22
CN2023120819 2023-09-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2024208228A1 true WO2024208228A1 (en) 2024-10-10

Family

ID=92971142

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2024/085669 WO2024208228A1 (en) 2023-04-03 2024-04-02 Novel compounds, compositions comprising the same and uses thereof

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2024208228A1 (en)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014066726A2 (en) * 2012-10-26 2014-05-01 Ensemble Therapeutics Corporation Compounds for modulating il-17
WO2020163554A1 (en) * 2019-02-06 2020-08-13 Dice Alpha, Inc. Il-17a modulators and uses thereof
WO2021055376A1 (en) * 2019-09-16 2021-03-25 Dice Alpha, Inc. Il-17a modulators and uses thereof
WO2023164057A1 (en) * 2022-02-25 2023-08-31 Dice Alpha, Inc. Di-cyclopropyl based il-17a modulators and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014066726A2 (en) * 2012-10-26 2014-05-01 Ensemble Therapeutics Corporation Compounds for modulating il-17
WO2020163554A1 (en) * 2019-02-06 2020-08-13 Dice Alpha, Inc. Il-17a modulators and uses thereof
WO2021055376A1 (en) * 2019-09-16 2021-03-25 Dice Alpha, Inc. Il-17a modulators and uses thereof
WO2023164057A1 (en) * 2022-02-25 2023-08-31 Dice Alpha, Inc. Di-cyclopropyl based il-17a modulators and uses thereof

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2022200385B2 (en) Antibacterial compounds
ES2943510T3 (en) GLP-1 receptor agonists and uses thereof
NZ757606A (en) Compounds that inhibit mcl-1 protein
KR102638151B1 (en) Kinase inhibitors and uses thereof
US20100113502A1 (en) Novel Tetrahydro-1H-Pyrido[4,3-b] Indole Derivatives as CB1 Receptor Ligands
WO2017009806A1 (en) Substituted aza compounds as irak-4 inhibitors
AU2298699A (en) N-acyl cyclic amine derivatives
ES2730942T3 (en) Triazolopyridine derivatives as modulators of TNF activity
US20110046130A1 (en) Tetrahydronaphthyridines and aza derivatives thereof as histamine h3 receptor antagonists
BRPI0707870A2 (en) Amino Alcohol-Substituted Arylthienopyrimidinones, Process for Preparation and Use as Medicines
JP2008531659A (en) Substituted oxa-diaza-spiro- [5.5] -undecanone derivatives and their use as neurokinin antagonists
SA00210113B1 (en) Spiro compounds are antihistaminic
AU2021353722A1 (en) Benzamide compound and use thereof
ES2307169T3 (en) 4-ALQUIL AND 4-ALCANOIL PIPERIDINE SUBSTITUTED DERIVATIVES AND THEIR USE AS AN ANTHOGONISTS OF NEUROQUININE.
WO2024208228A1 (en) Novel compounds, compositions comprising the same and uses thereof
CA3037766C (en) Dextrorphan-derivatives with suppressed central nervous activity
JP2008532976A (en) Diaza-spiro- [4.4] -nonane derivatives as neurokinin (NK1) antagonists
KR20240157067A (en) Medium- or macro-cyclic benzyl-substituted heterocycle derivatives and related uses
CA3219490A1 (en) Substituted carbamate macrocyclic compounds and related methods of treatment
PL217918B1 (en) Chemokine receptor antagonists and methods of use thereof
US20050004189A1 (en) Thiazole compounds as integrin receptor antagonists derivatives
JPH05213957A (en) New spiropyrrolidineimdazoline derivative and new aminopyrrolidine carboxylic acid derivative and anticonvulsant containing the compound as active ingredient
SG178319A1 (en) Process for the preparation of cathepsin s inhibitors
JP5070207B2 (en) 2-substituted benzimidazoles
US6479486B2 (en) Azabicyclic spiroether derivatives and their use as therapeutic agents