[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

WO2024123207A1 - 5'-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидин и его применение - Google Patents

5'-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидин и его применение Download PDF

Info

Publication number
WO2024123207A1
WO2024123207A1 PCT/RU2023/000255 RU2023000255W WO2024123207A1 WO 2024123207 A1 WO2024123207 A1 WO 2024123207A1 RU 2023000255 W RU2023000255 W RU 2023000255W WO 2024123207 A1 WO2024123207 A1 WO 2024123207A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
hydroxycytidine
compound
virus
cov
sars
Prior art date
Application number
PCT/RU2023/000255
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Наталья Сергеевна ШАСТИНА
Андрей Эдуардович СИНЯВИН
Сергей Игоревич ЛУЙКСААР
Сергей Анатольевич ЗОЛОТОВ
Анна Борисовна ШЕРЕМЕТ
Тимофей Андреевич РЕМИЗОВ
Игорь Андреевич ИВАНОВ
Анастасия Андреевна ЗАХАРОВА
Александр Александрович ТЕРЕХОВ
Дарья Владимировна ВАСИНА
Леонид Иванович РУССУ
Елизавета Сергеевна ДАРНОТУК
Анна Михайловна ИНШАКОВА
Наталия Евгеньевна БОНДАРЕВА
Анна Владимировна СОЛОВЬЕВА
Елизавета Александровна ТОКАРСКАЯ
Надежда Леонидовна ЛУБЕНЕЦ
Надежда Анатольевна КУЗНЕЦОВА
Елена Владимировна ШИДЛОВСКАЯ
Евгений Валерьевич УСАЧЕВ
Артем Петрович ТКАЧУК
Наталья Михайловна Тухватулина
Денис Юрьевич ЛОГУНОВ
Наиля Ахатовна ЗИГАНГИРОВА
Владимир Алексеевич ГУЩИН
Александр Леонидович ГИНЦБУРГ
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2022132163A external-priority patent/RU2791523C1/ru
Application filed by федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Publication of WO2024123207A1 publication Critical patent/WO2024123207A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/067—Pyrimidine radicals with ribosyl as the saccharide radical

Definitions

  • the group of inventions relates to chemistry, pharmaceuticals and medicine, namely to a new chemical compound derived from M4-hydroxycytidine, which can be used to inhibit the replication of RNA and DNA-containing viruses (coronavirus, Arbovirus and Orthopoxvirus).
  • Viruses carried by arthropods such as mosquitoes, ticks and flies, mainly belong to the families Flaviviridae, Togaviridae and Bunyaviridae, and are transmitted by them to humans or other vertebrates [10.1007/3-211-29981-5 4]. These viruses are transmitted to vertebrates through saliva when an infected arthropod vector feeds on blood. There are more than 250 species of arboviruses, and at least 80 of them cause human diseases, including hemorrhagic fever, encephalitis, arthritis and meningitis [10.1099/0022-1317-82-8-1867]. Diseases caused by arboviruses account for the majority of vector-borne diseases, and 80% of the world's population lives in areas where one is endemic
  • Poxviruses are widespread in almost all countries of the world.
  • M4-hydroxycytidine derivatives are known to be used for the treatment or prevention of viral infections, in particular, eastern, western and Venezuelan equine encephalitis (EEE, WEE and VEE, respectively), Chikungunya fever (CHIK), Ebola fever, influenza, seasonal and pandemic coronaviruses (MERS). and SARS), respiratory syncytial virus (RSV) and Zika virus [WO2019113462, W02016106050, US20190022116].
  • EEE eastern, western and Venezuelan equine encephalitis
  • CHIK Chikungunya fever
  • Ebola fever influenza
  • seasonal and pandemic coronaviruses MERS
  • SARS respiratory syncytial virus
  • Zika virus WO2019113462, W02016106050, US20190022116.
  • N4-hydroxycytidine derivatives activity against new variants of SARS-CoV-2, as well as for other viruses, remains unknown.
  • the technical result of the claimed invention is the production of an ester derivative of H4-hydroxycytidine with a carboxylic acid, which has high activity against the SARS-CoV-2 coronavirus, arboviruses and exhibits an antiviral effect against Orthopoxviruses.
  • fig. 1 shows the preparation of M4-trityloxy-2',3'-O-isopropylidenecytidine (3).
  • FIG. 2 shows the preparation of 5'-O-(3-phenylpropionyl)-M4-hydroxycytidine(5).
  • FIG. 3 shows dose-dependent curves and 1C5o( ⁇ M) values of CPE inhibition of various variants of SARS-CoV-2 using the test compound.
  • FIG. 4 shows dose-dependent curves and ICso(pM) values of CPE inhibition of various Arbovirus variants using the test compound.
  • Figure 5 shows the dose-dependent curves and 1C5o( ⁇ M) values of inhibition of CPE of the smallpox vaccine strain (Lister)BHpyca using the test compound.
  • FIG. 6 presents data on the effectiveness of the resulting compound SN 9 against SARS-CoV-2 infection in vivo.
  • the dynamics of changes in the weight of animals before and after infection (A), changes in viral load (B) and virus titer (C) in lung tissues in the control group of animals and animals receiving the studied drugs are shown.
  • the vicinal 2' and 3' hydroxyl groups of P-P-4-hydroxycytidine (NHC)npn were blocked using acetonide protection.
  • the optimal reaction conditions were the use of para-toluenesulfonic acid (p-TSA) as a catalyst and the reaction in acetone at room temperature for 2 hours.
  • trityl (Tg) protecting group was chosen, the choice being due to the ease of introducing the protection, as well as its acid lability, which makes it possible to deblock all protective groups under acidic conditions.
  • the reaction was carried out in methylene chloride by the action of trityl chloride (Tr-Cl) in the presence of 4-dimethylaminopyridine (DMAP) as a catalyst, as well as triethylamine.
  • DMAP 4-dimethylaminopyridine
  • H4-dimethoxytrityloxy-2',3'-O-isopropylidenecytidine was reacted with phenylpropionic acid in the presence of 1,3-dicyclohexylcarbodiimide in methylene chloride, stirring was carried out at room temperature for 2 hours.
  • the intermediate product was purified on silica gel and subjected to acid hydrolysis by the action of an 80% aqueous solution of formic acid, stirred at room temperature for 20 hours.
  • the compound was isolated by flash chromatography on silica gel in the system chloroform:methanol (5% methanol).
  • the compound was obtained in 4 stages.
  • the synthesis scheme is presented in Fig. 1 and Fig. 2.
  • the intermediate product 2',3'-O-isopropylidene-K4-hydroxycytidine (2) was prepared (Fig. 1).
  • 3.7 g (19.69 mmol) of para-toluenesulfonic acid was added to 1.7 g (6.56 mmol) of N-hydroxycytidine (1) in dry acetone (240 ml), the resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours.
  • the reaction was neutralized by adding triethylamine, solvents distilled off, the residue was purified by flash chromatography on silica gel in the system chloroform:methanol (5% methanol).
  • the intermediate product M4-trityloxy-2',3'-O-isopropylidenecytidine (3) was obtained (Fig. 2).
  • 1.1 ml (8.06 mmol) of triethylamine and 7 mg (0.054 mmol) 4-dimethylaminopyridine the mixture was stirred for 15 minutes.
  • a solution of 1.5 g (5.37 mmol) of trityl chloride in dichloromethane (50 ml) was added dropwise to the reaction flask and stirred at room temperature overnight.
  • intermediate product (4) was exposed to an 80% aqueous solution of formic acid (5 ml), stirred at room temperature for 20 hours, evaporated and purified by flash chromatography on silica gel in a solvent mixture of chloroform:methanol (5% methanol).
  • Example 2 Study of antiviral effect against SARS-CoV-2 variants.
  • the purpose of this experiment is to evaluate the ability of the resulting compound (5'-O-(3-phenylpropionyl)-N4-hydroxycytidine) to inhibit the replication of various variants of the SARS-CoV-2 virus.
  • Cells were cultured in DMEM growth medium (Gibco, USA) supplemented with 5% fetal bovine serum (FBS; HyClone, USA), lx antibiotic-antimycotic (CapricomScientificGmbH) and 1x GlutaMAX (Gibco, USA).
  • FBS HyClone
  • lx antibiotic-antimycotic CapricomScientificGmbH
  • 1x GlutaMAX Gibco, USA.
  • Vero E6 cells (2x10 4 cells/well) were seeded in 96-well plates in complete growth medium DMEM the day before the experiment. Then, various dilutions of the test compound were added to the cell monolayer and incubated for 1 hour at 37°C and 5% CO 2 .
  • TCID50 is a tissue cytopathogenic dose that causes the death of 50% of the cells of the monolayer.
  • TCID50 is a tissue cytopathogenic dose that causes the death of 50% of the cells of the monolayer.
  • the following variants of the SARS-CoV-2 virus were used: “Wuhan” V.1.1 (PMVL-4), “Omicron” VA.4.6 (PMVL-55), “Omicron” VA.5 (PMVL-52) and “ Omicron” VA.5.2 (PMVL-54).
  • CPE virus-induced cytological effect
  • the purpose of this experiment is to evaluate the ability of the resulting compound (5'-O-(3-phenylpropionyl)-N4-hydroxycytidine) to inhibit the replication of various viruses from the Arbovirus group.
  • Vero E6 cell line ATCC CRL-1586.
  • Cells were cultured in DMEM growth medium (Gibco, USA) supplemented with 5% fetal bovine serum (FBS; HyClone, USA), 1x antibiotic-antimycotic (CapricomScientificGmbH) and 1x GlutaMAX (Gibco, USA).
  • FBS fetal bovine serum
  • CapricomScientificGmbH 1x antibiotic-antimycotic
  • GlutaMAX GlutaMAX
  • Example 4 Study of the antiviral effect against the smallpox virus.
  • the purpose of this experiment is to evaluate the ability of the resulting compound (5'-O-(3-phenylpropionyl)-N4-hydroxycytidine) to inhibit the replication of the smallpox virus.
  • Vego E6 cell line ATCC CRL-1586.
  • Cells were cultured in DMEM growth medium (Gibco, USA) supplemented with 5% fetal bovine serum (FBS; HyClone, USA), lx antibiotic-antimycotic (CapricomScientificGmbH) and 1x GlutaMAX (Gibco, USA).
  • FBS fetal bovine serum
  • CapricomScientificGmbH lx antibiotic-antimycotic
  • 1x GlutaMAX GlutaMAX
  • a vaccine strain of the smallpox virus (Lister; Microgen, Russia) and VegoEb cells were used.
  • the cells were infected with the smallpox virus at 100 TCID50.
  • Inhibition of the virus-induced cytopathic effect by the compound was determined using the MTT test 72 hours after infection. The results of the experiment are presented in Fig. 5.
  • Example 5 Study of the effectiveness of the resulting compound against the SARS-CoV-2 virus in animals.
  • the resulting compound can be introduced into the body of mammals by any route. Preliminary studies have shown that the optimal route of administration is the oral route. The maximum dose of the drug was determined as 350 mg/kg.
  • mice Female Syrian hamsters were used in the experiment. The animals were divided into two groups of 5 animals, which were administered:
  • intranasal infection of animals was carried out at 10 5 TCID5oSARS-CoV-2PMVL-4. Over the course of 4 days, the animals were administered the study drugs twice a day. day. After euthanasia of the animals on the fifth day of the experiment, they are autopsied and the lungs are collected. Hamster lungs were homogenized, followed by separation of the supernatant by low-speed centrifugation. The virus titer was determined in a monolayer of Vero E6 cells grown in 48-well plates. The virus titer for each lung homogenate sample was determined after 72 hours and expressed as PFU/mg lung.
  • the reverse transcription reaction was performed using a set of reagents for the quantitative determination of RNA of the coronavirus SARS-CoV-2 “SARS-CoV-2 FRT” using a panel characterized by the number of copies of the amplified fragment of SARS-CoV-2 (N.F. Gamaleya Research Center for Epidemiology and Microbiology). .
  • the results were expressed as numbers converted to log 10 SARS-CoV-2 viral load per mg of lung tissue.
  • the technical result of the invention is confirmed by the fact that the claimed compound - 5 O - (3 - phenyl propionyl)-N4-hydroxycytidine - differs from the known prototypes of H4-hydroxycytidine derivatives and exhibits a higher antiviral effect against the smallpox virus, various variants of SARS-CoV-2 and Arboviruses.
  • this compound exhibits therapeutic activity against SARS-CoV-2 infection in vivo, and can be used for the treatment/prevention of COVID-19.
  • the resulting compound (5'-O-(3-phenylpropionyl)-H4-hydroxycytidine) can be used in healthcare as a new drug for the treatment of various viral infections.
  • the developed and studied compound has a specific antiviral and multitarget effect.
  • Multi-targeting consists of an antiviral effect against various viral infections represented by coronaviruses SARS-CoV-2, Arboviruses and Orthopoxviruses.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к химии, фармацевтике и медицине, а именно к новому химическому соединению, производному N4-гидроксицитидина, которое может применятся для ингибирования репликации РНК и ДНК-содержащих вирусов (коронавируса, Арбовируса и Ортопоксвируса). Заявленное изобретение обеспечивает получение нового химического соединения, обладающего высокой активностью против коронавируса SARS-CoV-2, арбовирусов и проявляющего противовирусный эффект против Ортопоксвирусов.

Description

5'-0-(3-фенилпропионил)-№4-гидроксицитидин и его применение.
Область техники
Группа изобретений относится к химии, фармацевтике и медицине, а именно к новому химическому соединению, производному М4-гидроксицитидина, которое может применятся для ингибирования репликации РНК и ДНК-содержащих вирусов (коронавируса, Арбовируса и Ортопоксвируса).
Уровень техники
Вирусы, переносимые членистоногими (арбовирусы), такими как комары, клещи и мухи, в основном относятся к семействам Flaviviridae, Togaviridae и Bunyaviridae,^ передаются ими человеку или другим позвоночным [10.1007/3-211-29981-5 4]. Эти вирусы передаются позвоночным через слюну, когда инфицированный членистоногий переносчик питается кровью. Существует более 250 видов арбовирусов, и не менее 80 из них вызывают заболевания человека, в том числе геморрагическую лихорадку, энцефалит, артрит и менингит [10.1099/0022-1317-82-8-1867]. Болезни, вызванные арбовирусами, составляют большую часть трансмиссивных болезней, и 80% населения мира проживает в районах, в которых один является эндемичным
[https://www.who.int/publications/i/item/9789240013155]. Вспышки, переносимых комарами вирусных заболеваний, вызывают обеспокоенность международного сообщества и продолжают оказывать серьезное влияние на глобальное здравоохранение и социально- экономические системы.
В настоящее время во всем мире происходят регулярные вспышки новой коронавирусной инфекции (COVID-19 или SARS-Cov-2). Несмотря на интенсивные контрмеры, принятые во всем мире, заболеваемость и смертность остаются высокими, и многие страны сталкиваются с новыми волнами инфекции. Вакцины являются важным инструментом в борьбе с COVID-19, но разработка противовирусных препаратов также является приоритетной задачей, особенно в связи с появлением вариантов, которые могут частично уклоняться от вакцин. Поэтому, в клинике остро необходим безопасный и эффективный препарат для профилактики и лечения новой коронавирусной инфекции. Исходя из того, что существующие противовирусные препараты имеют в большей или меньшей степени недостатки, создание противовирусных препаратов с лучшим лечебным эффектом является проблемой, требующей срочного решения в настоящее время.
Поксвирусы широко распространены почти во всех странах мира. Род ортопоксвирусов, кроме вируса оспы, включает еще 12 представителей. Некоторые представители этого рода являются зоонозами, однако, нормально циркулируя среди животных, могут вызывать заболевания у человека. Наибольшую озабоченность в последнее десятилетие вызывает рост заболеваемости обезьяньей оспой (4). Широко распространенная вакцинация была прекращена после прекращения циркуляции вируса натуральной оспы. Имеющиеся данные уже проведенных исследований указывают на существование перекрестного иммунитета у вакцинированных людей (Gilchuk I. Et al., Cross-Neutralizing and Protective Human Antibody Specificities to Poxvirus Infections. Cell. 2016 Oct 20;167(3):684-694). .e9.doi: 10.1016/j.cell.2016.09.049, PMID: 27768891; PMCID: PMC5093772). Исследования свидетельствуют о том, что перекрестный иммунитет среди ортопоксвирусов (в том числе вирусов коровьей оспы, натуральной оспы, оспы обезьян и др.) настолько силен, что позволяет рассчитывать на успешную экстраполяцию полученных данных для защиты от вируса оспы обезьян. Прекращение массовой вакцинации для профилактики оспы увеличило количество людей, проживающих на территории природного очага оспы обезьян в Африке, не имеющих иммунитета. Наибольшее беспокойство вызвала текущая вспышка оспы обезьян, начавшаяся в апреле 2022 г. Менее чем за три месяца оспа обезьян была подтверждена более чем у 30 тысяч человек (8). В России также был выявлен один случай оспы обезьян (9). В результате ВОЗ объявила вспышку оспы обезьян в 2022 году чрезвычайной ситуацией в области общественного здравоохранения. Таким образом, разработка препаратов специфического действия является крайне актуальной задачей.
Известны производные М4-гидроксицитидина, применяемые для лечения или профилактики вирусных инфекций, в частности, восточного, западного и венесуэльского энцефалита лошадей (EEE, WEE и VEE соответственно), лихорадки Чикунгунья (CHIK), лихорадки Эбола, гриппа, сезонных и пандемических коронавирусов (MERS и SARS), респираторно-синцитиального вируса (RSV) и вируса Зика [WO2019113462, W02016106050, US20190022116]. Однако, для большинства производных N4- гидроксицитидина активность против новых вариантов SARS-CoV-2, как и для других вирусов, остается неизвестной. Изучена активность некоторых пролекарств N4- гидроксицитидина против рекомбинантного SARS-CoV-2 [CN111548384A]. Известно соединение 5'-изопропиловыйэфир р-Э-Ш-гидроксицитидина (Молнупиравир), которое ингибирует репликацию SARS-CoV-2. Препарат Lagevrio на основе данного соединения применяется для лечения COVID-19 [10.1038/s41564-020-00835-2, https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04405739, 10.3389/fimmu.2022.855496,
10.1056/NEJMoa2116044]. Данное решение было выбрано за прототип. Основные недостатки Молнупиравира заключаются в невысокой антивирусной активности против SARS-CoV-2, неизвестной активности против других представителей Арбовирусных инфекций и неизученной активности против Ортопоксвирусов.
Таким образом, в области техники существует потребность в создании соединения, лишенного указанных недостатков.
Раскрытие сущности изобретения
Техническим результатом заявленного изобретения является получение сложноэфирного производного Н4-гидроксицитидина с карбоновой кислотой, обладающего высокой активностью против коронавируса SARS-CoV-2, арбовирусов и проявляющего противовирусный эффект против Ортопоксвирусов.
Указанный технический результат достигается тем, что создано соединение, представляющее собой производное Ы4-гидроксицитидина, и соответствующее формуле:
Figure imgf000005_0001
5'-О-(3-фенилпропионил)-Н4-гидроксицитидин, или его фармацевтически приемлемая соль.
Также технический результат достигается тем, что предложено применение разработанного соединения для ингибирования репликации РНК и ДНК-содержащих вирусов.
В частном случае применения разработанного соединения происходит ингибирование репликации вируса SARS-CoV-2, ингибирование репликации Арбовируса, ингибирование репликации Ортопоксвируса.
Также предложен частный случай применения, при котором ингибирование репликации РНК-содержащих вирусов происходит в организме млекопитающих.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлено получение М4-тритилокси-2',3'-О-изопропилиденцитидина (3).
На фиг. 2 представлено получение 5'-О-(3-фенилпропионил)-М4- гидроксицитидина(5). На фиг. 3 представлены дозозависимые кривые и значения 1С5о(цМ) ингибирования СРЕ различных вариантов SARS-CoV-2 с помощью исследуемого соединения.
На фиг. 4 представлены дозозависимые кривые и значения ICso(pM) ингибирования СРЕ различных вариантов Арбовирусов с помощью исследуемого соединения.
На фиг. 5 представлены дозозависимые кривые и значения 1С5о(цМ) ингибирования СРЕ вакцинного штамма (Lister)BHpyca оспы с помощью исследуемого соединения.
На фиг. 6 представлены данные по эффективности полученного соединения SN 9 против SARS-CoV-2 инфекции invivo. Показана динамика изменения веса животных до и после заражения (А), изменения вирусной нагрузки (Б) и титра вируса (В) в тканях легких в контрольной группе животных и животных получавших изучаемые препараты. Kruskal- WallisTecT: *р< 0.05 - статистически достоверно.
Осуществление изобретения
Получение 5'-О-(3-фенилпропионил)- 4-гидроксицитидинасостоит из нескольких этапов.
На первом этапе проводили блокирование вицинальных 2' и 3' гидроксильных групп Р-П- 4-гидроксицитидина (NHC)npn помощи ацетонидной защиты. При этом оптимальными условиями реакции являлись использование пара-толуолсульфокислоты (p-TSA) в качестве катализатора, проведение реакции в ацетоне при комнатной температуре в течение 2 ч.
На втором этапе проводили блокирование гидроксильной группы в 4 положении Н4-гидроксицитидина. Для этих целей была выбрана тритильная (Тг) защитная группа, выбор обусловлен легкостью введения защиты, а также ее кислотолабильностью, что делает возможным деблокирование всех защитных групп в кислых условиях. Реакцию проводили в хлористом метилене действием тритилхлорида (Тг-С1) в присутствии 4- диметиламинопиридина (DMAP) в качестве катализатора, а также триэтиламина.
На следующем этапе проводили реакцию Н4-диметокситритилокси-2’,3'-О- изопропилиденцитидина с фенилпропионовой кислотой в присутствии 1,3- дициклогексилкарбодиимида в хлористом метилене, перемешивание осуществляли при комнатной температуре в течение 2 ч. Промежуточный продукт очищали на силикагеле и подвергали кислотному гидролизу действием 80%-ного водного раствора муравьиной кислоты, перемешивали при комнатной температуре 20 ч. Соединение выделяли флэш- хроматографией на силикагеле в системе хлороформ:метанол (5% метанола). В результате выполнения работы было получено новое соединение - 5'-О-(3-фенилпропионил)-Н4- гидроксицитидин. Было показано, что полученное соединение способно ингибировать репликацию коронавируса SARS-CoV-2, а также вирусов из группы Арбовирус с эффективностью, значительно превышающей эффективность прототипа. Кроме того, данное соединение обладает принципиально новым свойством в сравнении с прототипом - противовирусной активностью против вирусов рода Orthopoxvirus. Данное свойство 5'-О-(3- фенилпропионил)- N4- гидроксицитидинане следует явным образом из уровня техники и не является очевидным для среднего специалиста в данной области.
Осуществление изобретения подтверждается следующими примерами.
Пример 1. Синтез 5'-О-(3-фенилпропионил)- N4- гидроксицитидина.
Соединение получали в 4 стадии. Схема синтеза представлена на Фиг.1 и Фиг. 2. На первом этапе проводили получение промежуточного продукта 2',3'-О-изопропилиден- К4-гидроксицитидина (2) (Фиг. 1). Для этого к 1.7 г (6.56 ммоль) №-гидроксицитидина (1) в сухом ацетоне (240 мл) добавляли 3.7 г (19.69 ммоль) пара-толуолсульфокислоты, полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакцию нейтрализовывали добавлением триэтиламина, растворители отгоняли, остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле в системе хлороформ:метанол (5% метанола).
Выход соединения (2) 1.6 г (85%), Rf 0.42, Т пл. = 195-196 °C.
*Н-ЯМР-спектр (CDC13), 5, м.д.): 1.32 (2с, 6Н, 2СН3), 2.00 (с, 1Н, NHOH), 3.65-3.94 (м, 2Н, 5’-СН2), 4.14-4.27 (м, Ш, 4’-СН), 4.87-5.08 (м, 2Н, 2' и З'-СН), 5.38 (д, J=2.6 Гц, 1Н, Г-СН), 5.62 (д, J=7.8 Гц, Ш, Н-5 Cyt), 6.65 (д, J=8.1 Гц, 1Н, Н-6 Cyt), 8.13 (с, 1Н, NHOH)
На втором этапе проводили получение промежуточного продукта М4-тритилокси- 2',3'-О-изопропилиденцитидина (3) (Фиг. 2). Для этого к суспензии 1.6 г (5.37 ммоль) 2',3'- О-изопропилиден-М4-гидроксицитидина (2) в дихлорметане (100 мл) при перемешивании при комнатной температуре добавляли 1.1 мл (8.06 ммоль) триэтиламина и 7 мг (0.054 ммоль) 4-диметиламинопиридина, смесь перемешивали в течение 15 мин. Затем в реакционную колбу по каплям добавляли раствор 1.5 г (5.37 ммоль) тритилхлорида в дихлорметане (50 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель отгоняли на роторном испарителе, остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле в градиенте систем - гексан:этилацетат:триэтиламин (7:3:0.25) с последующим элюированием системой хлороформ:триэтиламин (2.5% триэтиламина).
Выход соединения (3) 2.1 г (72 %), Rf 0.47, Т пл. = 132-133 °C.
‘Н-ЯМР-спектр (CDCh, 5, м.д.): 1.29 (с, ЗН, СНз), 1.47 (с, ЗН, СН3), 3.66-3.99 (м, 2Н, 5’-СН2), 4.12-4.25 (м, 1Н, 4’-СН), 4.89-5.11 (м, 2Н, 2’ и З’-СН), 5.34 (д, J=3.1 Гц, 1Н, Г- CH), 5.51 (д, J=8.1 Гц, 1H, H-5 Cyt), 6.46 (д, J=8.2 Гц, 1H, H-6 Cyt), 6.79-6.86, 7.16-7.25 , 7.28-7.33 (Зм, 15H в Tr), 9.97 (с, 1H, NHOH).
На следующем этапе раствор 145.2 мг (0.268 ммоль) №-тритилокси-2',3'-О- изопропилиденцитидина (3), 60.3 мг (0.402 ммоль) 3 -фенилпропановой кислоты и 99.4 мг (0.482 ммоль) 1,3 -дицикл огексилкарбодиимида в хлористом метилене (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную массу предочищали на силикагеле в системе хлороформ:гексан:триэтиламин (7:3:0.25).
На последнем этапе промежуточный продукт (4) подвергали действию 80%-ного водного раствора муравьиной кислоты (5 мл), перемешивали при комнатной температуре 20 ч, упаривали и очищали флэш-хроматографией на силикагеле в смеси растворителей хлороформ :метанол (5% метанола).
Выход соединения (5) 58 мг (52 %), Rf 0.33, Т пл. = 144-146 °C.
’Н-ЯМР-спектр (DMSO-d6, 5, м.д.): 2.67 (т, J=7.4 Гц, 2Н, СНг-СО), 2.85 (т, J=7.5 Гц, 2Н, СНг-Ph), 3.92-4.03 (м, 2Н, 5'-СН2), 4.08-4.22 (м, 1Н, 4'-СН), 5.21-5.35 (м, 2Н, 2' и 3'- СН), 5.56 (д, J=8.2 Гц, 1Н, Г-СН), 5.70 (д, J=5.5 Гц, 1Н, H-5 Cyt), 6.82 (д, J=8.2 Гц, 1Н, Н-6 Cyt), 7.16-7.28 (м, 5Н, Ph), 9.56 (с, 1Н, NHOH), 10.01 (с, 1Н, NHOH),.
Таким образом, в результате проведенной работы было получено новое соединение 5'-О-(3-фенилпропионил)- N4- гидроксицитидин.
Пример 2. Исследование антивирусного эффекта против вариантов SARS-CoV-2.
Целью данного эксперимента является оценка способности полученного соединения (5'-О-(3-фенилпропионил)- N4- гидроксицитидина) ингибировать репликацию различных вариантов вируса SARS-CoV-2.
Эксперимент проводили на клеточной линииУего Е6 (АТСС CRL-1586). Клетки культивировали в ростовой среде DMEM (Gibco, USA), дополненной 5% эмбриональной бычьей сывороткой (FBS; HyClone, USA), lx антибиотик-антимикотик (CapricomScientificGmbH) и 1 х GlutaMAX (Gibco, USA). Для исследования антивирусного эффекта, клетки Vero Е6 (2x104 клеток/лунка) высевали в 96-луночные планшеты в полной ростовой среде DMEM за день до эксперимента. Затем, к монослою клеток добавляли различные разведения исследуемого соединения и инкубировали в течение 1 ч при 37°С и 5% СО2. После этого, производили заражение вирусом8АВ8-СоУ-2при lOOTCIDso (TCID50- тканевая цитопатогенная доза, вызывающая гибель 50% клеток монослоя). В данном эксперименте использовали следующие варианты вируса SARS- CoV-2: «Ухань» В.1.1 (PMVL-4), «Омикрон» ВА.4.6 (PMVL-55), «Омикрон» ВА.5 (PMVL- 52) и «Омикрон» ВА.5.2 (PMVL-54). Ингибирование вирус-индуцированного цитологического эффекта (CPE) под действием соединения определяли с помощью МТТ- теста [10.1007/s00018-021-03985-6]. Через 72 ч после добавления коронавируса в каждую лунку добавляли раствор 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-тетразолиум бромида (МТТ) в фосфатно-солевом буфере до конечной концентрации 0,5 мг/мл. Метод основан на способности МТТ восстанавливаться до окрашенного формазана в присутствии митохондриальных ферментов живых клеток. После 2-часовой инкубации из лунок удаляли среду и добавляли 150 мкл диметил сульфоксида. Далее измеряли оптическую плотность раствора формазана, при длине волны 590нм, с помощью планшетного спектрофотометра. Результаты эксперимента представлены на Фиг.З.
Анализ антивирусного действия 5'-О-(3-фенилпропионил)-Н4- гидроксицитидина против четырех вариантов вируса SARS-CoV-2 показал, что данное соединение обладает активностью в ~ 2 раза большей (Фиг. 3), чем прототип, который одобрен для лечения COVID-19.
Пример 3. Исследование антивирусного эффекта против Арбовирусов.
Целью данного эксперимента является оценка способности полученного соединения (5'-О-(3-фенилпропионил)- N4- гидроксицитидина) ингибировать репликацию различных вирусов из группы Арбовирусы.
Эксперимент проводили на клеточной линии Vero Е6 (АТСС CRL-1586). Клетки культивировали в ростовой среде DMEM (Gibco, USA), дополненной 5% эмбриональной бычьей сывороткой (FBS; HyClone, USA), 1х антибиотик-антимикотик (CapricomScientificGmbH) и 1 х GlutaMAX (Gibco, USA). Для исследования антивирусного эффекта, клетки Vero Е6 (2x104 клеток/лунка) высевали в 96- луночные планшеты в полной ростовой среде DMEM за день до эксперимента. К клеткам УегоЕб добавляли различные концентрации исследуемого соединения, после чего производили заражение арбовирусом в дозе 100 БОЕ (бляшкообразующие единицы) на лунку. В данном исследовании использовали следующие Арбовирусы: Синдбис (штамм Аз 16), Москитная лихорадка Сицилия (SFS 1943), Баткен (штамм Аст. 247), Инко (штамм KN3641), Батаи (штамм ВЛГ 42) и Тягиня (штамм 92). Ингибирование вирус-индуцированного цитопатического эффекта (СРЕ) под действием соединения определяли с помощью МТТ- теста через 72 часа после инфекции. Результаты эксперимента представлены на Фиг. 4.
Таким образом, противовирусный эффект 5 '-О-(3 -фенил пропионил )-N4- гидроксицитидина был изучен с использованием шести представителей группы Арбовирусы. При этом было определено, что полученное соединение ингибировало репликацию всех вирусов из данной группы с более низкими значениями IC50 (концентрация полумакимального ингибирования), по сравнению с прототипом (Фиг. 4).
Пример 4. Исследование антивирусного эффекта против вируса оспы.
Целью данного эксперимента является оценка способности полученного соединения (5'-О-(3-фенилпропионил)- N4- гидроксицитидина) ингибировать репликацию вируса оспы.
Эксперимент проводили на клеточной линииУего Е6 (АТСС CRL-1586). Клетки культивировали в ростовой среде DMEM (Gibco, USA), дополненной 5% эмбриональной бычьей сывороткой (FBS; HyClone, USA), lx антибиотик-антимикотик (CapricomScientificGmbH) и 1 х GlutaMAX (Gibco, USA). Для исследования антивирусного эффекта, клетки Veto Е6 (2x104 клеток/лунка) высевали в 96-луночные планшеты в полной ростовой среде DMEM за день до эксперимента.Двукратные разведения исследуемых соединений готовили в 96-луночных планшетах, после чего переносили их к монослою клеток УегоЕб. Для экспериментов использовали вакцинный штамм вируса оспы (Lister; Микроген, Россия) и клетки УегоЕб.Клетки заражали вирусом оспы при 100TCID50. Ингибирование вирус-индуцированного цитопатического эффекта под действием соединенияопределялис помощью МТТ-тестачерез 72 часа после инфекции. Результаты эксперимента представлены на Фиг. 5.
При исследовании антивирусной активности против вируса оспы было установлено, что разработанное производное 4-гидроксицитидина SN 9, ингибирует вирус-индуцированный цитопатический эффект (СРЕ) со значением 1С5049.3цМ (Фиг. 5), тогда как прототип не проявлял выраженного ингибирующего эффекта.
Пример 5. Исследование эффективности полученного соединения против вируса SARS- CoV-2 на животных.
Полученное соединение может вводиться в организм млекопитающих любым путем. Предварительные исследования показали, что оптимальным путем введения является пероральный путь. Максимальная доза препарата была определена как 350 мг/кг.
В эксперименте использовали самок сирийских хомячков. Животные были разделены на две группы по 5 голов, которым вводили:
1) 5'-О-(3-фенилпропионил)- 4- гидроксицитидин, 200 мг/кг;
2) Фосфатно-солевой буфер (отрицательный контроль).
Затем, производили интраназальное заражение животных при 105TCID5oSARS-CoV- 2PMVL-4. В течение 4 дней животным вводили исследуемые препараты два раза в день.После эвтаназии животных на пятый день эксперимента, производится их вскрытие и забор легких. Легкие хомяков подвергали гомогенизации с последующим отделением супернатанта низкоскоростным центрифугированием. Титр вирусаопределяли в монослое клеток Vero Е6, выращенных в 48-луночных планшетах. Титр вируса для каждого образца гомогената легких определялиспустя 72 часа, и выражалив виде БОЕ/мг легкого. Тотальная РНК из гомогенатов легких выделяласьс помощью реагента ExtractRNA (Евроген, Россия) согласно инструкции производителя. Реакцию обратной транскрипции выполняли с помощью набора реагентов для количественного определения РНК коронавируса SARS-CoV-2 «SARS-CoV-2 FRT» с использованием панели охарактеризованных по количеству копий амплифицируемого фрагмента SARS-CoV-2 (НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи). Результаты выразилив виде чисел, преобразованных в log 10 вирусной нагрузки SARS-CoV-2 на мг ткани легкого.
В ходе исследования эффективности препаратов было установлено, что животные из группы отрицательного контроля в значительной степени потеряли вес. Животные, которые получали лечение полученным соединением набрали вес в ходе инфекции (Фиг. 6А), что указывает на наличие эффективности исследуемого препарата и отсутствие токсичности для животных.
Также было определено, что у животных, которым вводили полученное соединение, наблюдалось снижение количества РНК SARS-CoV-2 в тканях легких (Фиг. 6Б).
При определении титра инфекционного вируса в легких у животных было обнаружено, что лечение животных с помощью полученного соединения снижает титр жизнеспособного вируса в легких на ~ 1.5 Lg (Фиг. 6В).
Таким образом, технический результат изобретения подтверждается тем, что заявляемое соединение - 5 О - (3 - ф ени л про пиони л )-N4- гидроксицитидин- отличается от известных прототипов производных Н4-гидроксицитидина и проявляет более высокий антивирусный эффект против вируса оспы, различных вариантов SARS-CoV-2 и Арбовирусов. Кроме того, данное соединение проявляет терапевтическую активность против SARS-CoV-2 инфекции in vivo, и может быть использовано для лечения/профилактики COVID-19.
Промышленная применимость.
Полученное соединение (5'-О-(3-фенилпропионил)-Н4-гидроксицитидин) может быть использовано в здравоохранении как новый лекарственный препарат для лечения различных вирусных инфекций. Разработанное и исследованное соединение обладает специфическим противовирусным и политаргетным действием. Политаргетность заключается в антивирусном эффекте против различных вирусных инфекций, представленных коронавирусами SARS-CoV-2, Арбовирусами и Ортопоксвирусами.

Claims

Формула изобретения
1. Соединение, представляющее собой производное 4-гидроксицитидина, и соответствующее формуле:
Figure imgf000013_0001
или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли для ингибирования репликации РНК или ДНК-содержащего вируса.
3. Применение по п.2, при котором РНК-содержащий вирус является вирусом SARS- CoV-2.
4. Применение по п.2, при котором РНК-содержащий вирус относится к группе Арбовирус.
5. Применение по п.2, при котором ДНК-содержащий вирус относится к роду Ортопоксвирус.
6. Применение по п.2, при котором ингибирование репликации РНК-содержащих вирусов происходит в организме млекопитающих.
PCT/RU2023/000255 2022-12-08 2023-08-22 5'-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидин и его применение WO2024123207A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2022132163A RU2791523C1 (ru) 2022-12-08 5'-О-(3-фенилпропионил)-N4-гидроксицитидин и его применение
RU2022132163 2022-12-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2024123207A1 true WO2024123207A1 (ru) 2024-06-13

Family

ID=91379871

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2023/000255 WO2024123207A1 (ru) 2022-12-08 2023-08-22 5'-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидин и его применение

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2024123207A1 (ru)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016106050A1 (en) * 2014-12-26 2016-06-30 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
RU2015119999A (ru) * 2012-10-29 2016-12-20 Кокристал Фарма, Инк. Пиримидиновые нуклеозиды и их монофосфатные пролекарства для лечения вырусных инфекций и рака
WO2021137913A2 (en) * 2019-10-08 2021-07-08 Emory University 4'-halogen containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
WO2021159044A1 (en) * 2020-02-07 2021-08-12 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
CN113321694A (zh) * 2021-06-22 2021-08-31 药康众拓(江苏)医药科技有限公司 N4-羟基胞苷衍生物及其制备方法和用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2015119999A (ru) * 2012-10-29 2016-12-20 Кокристал Фарма, Инк. Пиримидиновые нуклеозиды и их монофосфатные пролекарства для лечения вырусных инфекций и рака
WO2016106050A1 (en) * 2014-12-26 2016-06-30 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
WO2021137913A2 (en) * 2019-10-08 2021-07-08 Emory University 4'-halogen containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
WO2021159044A1 (en) * 2020-02-07 2021-08-12 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
CN113321694A (zh) * 2021-06-22 2021-08-31 药康众拓(江苏)医药科技有限公司 N4-羟基胞苷衍生物及其制备方法和用途

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Serkedjieva et al. Anti-influenza virus effect of some propolis constituents and their analogues (esters of substituted cinnamic acids)
JPH069680A (ja) ２’−フルオロ−２’，３’−ジデオキシピリミジンヌクレオシド
AU2009204574B2 (en) Use of an acetylsalicylic acid salt for the treatment of viral infections
CN110354248A (zh) 拟肽醛类化合物在制备治疗猪瘟病毒(asfv)感染疾病药物的应用
WO2024123207A1 (ru) 5&#39;-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидин и его применение
RU2791916C1 (ru) Способ получения 5&#39;-О-(3-фенилпропионил)-N4-гидроксицитидина
RU2791523C1 (ru) 5&#39;-О-(3-фенилпропионил)-N4-гидроксицитидин и его применение
WO2024123206A1 (ru) Способ получения 5&#39;,-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидина
US9284292B2 (en) Sialochimeric compounds
RU2791806C1 (ru) Применение 5&#39;-О-(3-фенилпропионил)-N4-гидроксицитидина для ингибирования репликации вируса гриппа in vitro и in vivo
WO2024144420A1 (ru) Применение 5&#39;-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидина для ингибирования репликации вируса гриппа in vitro и in vivo
Khyatti et al. The effect of indometacin, prostaglandin E2 and interferon on the multiplication of herpes simplex virus type 1 in human lymphoid cells
Siniavin et al. New conjugates based on N4-hydroxycytidine with more potent antiviral efficacy in vitro than EIDD-2801 against SARS-CoV-2 and other human coronaviruses
RU2211843C1 (ru) N&#39;-{n-[3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропио новая кислота, обладающая иммуностимулирующей и противовирусной активностью
Tilley et al. Adamantylthiourea derivatives as antiviral agents
CN107226810B (zh) 吲哚衍生物及其制备方法和其抗流感病毒作用
RU2817609C1 (ru) 5&#39;-О-(4-хлорфеноксиацетил)-N4-гидроксицитидин и его применение
CN114053394B (zh) 新型化合物在制备预防和/或治疗冠状病毒感染的药物中的应用
RU2817201C1 (ru) 5&#39;-О-(4-фенилбутаноил)-N4- гидроксицитидин и его применение
RU2118163C1 (ru) Лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний
RU2572102C1 (ru) Производные 1-(1-адамантил)этиламин-n-ациламинокислот и их противогриппозная активность
RU2580305C1 (ru) ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИШАЙНИКА Cetraria islandica
RU2800448C1 (ru) N-борнил- и n-фенхилкарбоксамиды, используемые в качестве ингибиторов репликации ортопоксвирусов
RU2580304C1 (ru) ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ ИЗ Alchemilla vulgaris L.
RU2472496C2 (ru) Применение фуллеренолов с60(oh)18-24 и с60(oh)30-38 в качестве противовирусных препаратов

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 23901194

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1