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WO2024141616A1 - Hydrolysat obtenu à partir d'insectes et procédé de fabrication - Google Patents

Hydrolysat obtenu à partir d'insectes et procédé de fabrication Download PDF

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Publication number
WO2024141616A1
WO2024141616A1 PCT/EP2023/087946 EP2023087946W WO2024141616A1 WO 2024141616 A1 WO2024141616 A1 WO 2024141616A1 EP 2023087946 W EP2023087946 W EP 2023087946W WO 2024141616 A1 WO2024141616 A1 WO 2024141616A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
weight
hydrolyzate
insects
fraction
proteins
Prior art date
Application number
PCT/EP2023/087946
Other languages
English (en)
Inventor
Lorena SANCHEZ
Benjamin ARMENJON
Constant MOTTE
Bénédicte LORRETTE
Laura DARAI
Original Assignee
Ynsect
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ynsect filed Critical Ynsect
Publication of WO2024141616A1 publication Critical patent/WO2024141616A1/fr

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Definitions

  • insects we mean insects at any stage of development, such as an adult stage, larval stage or a nymph stage.
  • the insects used in the process according to the invention are edible.
  • the fiber rate is determined according to the AOAC 985.29 method, as detailed in Example 2.
  • the level of essential amino acids is determined according to standard ISO 13903:2005 and regulation CE152/2009 (for tryptophan).
  • essential amino acid means the following amino acids: histidine, isoleucine leucine, lysine, methionine, phenylalanine, threonine, tryptophan and valine. It should be noted that for some species other amino acids may also be essential, for example arginine for fish.
  • the 5 most abundant total amino acids are advantageously glutamic acid, aspartic acid, leucine, lysine and tyrosine.
  • amino acids are of particular interest for fish health (e.g. intestinal health and hormone secretion for glutamic acid and muscle protein synthesis for leucine).
  • the hydrolyzate according to the invention preferably comprises 40 to 60% by weight of insoluble proteins, the percentage by weight being expressed relative to the total weight of proteins.
  • the hydrolyzate according to the invention comprises 40 to 60% by weight of water-soluble proteins, the percentage by weight being expressed relative to the total weight of proteins.
  • the hydrolyzate according to the invention comprises water-soluble proteins, 75% of the water-soluble proteins having a size less than 12,400 g/mol, based on the total weight of water-soluble proteins.
  • water-soluble proteins we mean, among proteins (or crude proteins), those which are soluble in a solution consisting of 30% acetonitrile, 70% ultra-pure water and 0.1% trifluoroacetic acid ( “ACN/water/TFA solution”), the percentages being percentages by volume on the total volume of solution, as detailed in Example 2.
  • insoluble proteins we mean proteins insoluble in the ACN/water/TFA solution, as detailed in Example 2.
  • the hydrolyzate comprises a content greater than 80%, preferably between 85% and 98%, more preferably between 90% and 95% by weight. in water-soluble proteins having a size less than 12400 g/mol, on the total weight of water-soluble proteins.
  • the size of the proteins is determined by HPLC-SEC as detailed in Example 2.
  • the hydrolyzate has a peptic and/or ileal digestibility greater than or equal to 95% by weight, preferably greater than or equal to 96% and more preferably greater than or equal to 98%, and more particularly greater than or equal to 99%, in weight over total protein weight.
  • the peptic digestibility is measured according to the methods AOAC 971.09, AOAC 992.15; AOAC 990.03 and AOCS Ba 4e-93, as detailed in example 2.
  • the ash rate is determined according to a method in Regulation EC 152/2009 as detailed in example 2.
  • the preservative is chosen from sodium formate, sorbic acid, formic acid, potassium diformate, calcium formate, sodium bisulfate, potassium sorbate, acetic acid, diacetate sodium, calcium acetate and prenyl acetate.
  • the preservative is preferably introduced into the hydrolyzate at a concentration of 0.05 to 3%, preferably 0.1 to 2% by weight based on the weight of the hydrolyzate.
  • pH lowerer we mean a product capable of lowering the pH of an aqueous solution.
  • the pH lowerer is introduced in a quantity necessary and sufficient to lower the pH between 2 and 4, preferably between 2.5 and 3.5, such as for example between 2.8 and 3.2.
  • the present invention also relates to a process for preparing a hydrolyzate from insects comprising the following steps: a) Separation of the cuticles and the soft part of the insects, b) Separation of the soft part of the insects into an aqueous fraction, an oily fraction and a solid protein fraction, and c) enzymatic hydrolysis of the solid protein fraction.
  • the process according to the invention makes it possible to obtain the hydrolyzate according to the invention.
  • the hydrolyzate and the insects are as described above, with their advantageous and preferential modes.
  • the enzymatic hydrolysis is carried out on the solid protein fraction and therefore after the separation of the soft part into three fractions.
  • the inventors have demonstrated that carrying out the hydrolysis step on the solid protein fraction, after the separation of the soft part into three fractions, presented advantages in comparison with a process where the hydrolysis would be carried out before the separation step into three fractions and in particular made it possible to improve the profitability of the process and to keep the other fractions unaltered.
  • the method according to the invention further comprises a step of killing insects, prior to the step of separating the cuticles from the soft part.
  • This slaughtering step is more fully described in step 1 of the process according to the invention detailed below.
  • the cuticle is the outer layer (or exoskeleton) secreted by the epidermis of insects. It is generally made up of three layers: the epicuticle, the exocuticle and the endocuticle.
  • the separation of cuticles from the soft part of insects can be carried out using any type of suitable separator, such as a belt separator or a twin-screw separator.
  • step 2 of the process according to the invention The separation of the cuticles from the soft part of the insects is more fully described in step 2 of the process according to the invention detailed below.
  • step 3 of the process according to the invention is more fully described in step 3 of the process according to the invention detailed below.
  • the objective of the separation into three fractions is to recover three fractions from the soft part of the insects obtained in step 2 or optionally step 3, namely a solid fraction, an aqueous fraction, and an oily fraction.
  • the solid protein fraction (also called “protein cake”) is then subjected to an optional dilution step and then to enzymatic hydrolysis.
  • the enzymatic hydrolysis step is carried out only on the solid fraction resulting from the separation into 3 fractions. It preferably uses at least one proteolytic enzyme, preferably a protease, and more preferably at least two proteases, said proteases being of different natures.
  • protease a protease
  • proteases being of different natures.
  • the names or suffixes “peptidase” and “protease” are used interchangeably to designate an enzyme lysing a peptide bond of proteins.
  • it uses an aminopeptidase and a serine endopeptidase.
  • step 6 of the process according to the invention is more fully described in step 6 of the process according to the invention detailed below.
  • This slaughtering step 1 can advantageously be carried out by thermal shock, such as by scalding or by blanching.
  • This step 1 makes it possible to kill insects while lowering the microbial load (reduction of the risk of spoilage and health) and by inactivating the internal enzymes of the insects which can trigger autolysis, and thus rapid browning of them.
  • the quantity of water introduced during boiling is determined as follows: the ratio of the volume of water in ml to the weight in g of insect is preferably between 0.3 and 10, more preferably between 0 .5 and 5, even more preferably between 0.7 and 3, even more preferably of the order of 1.
  • stage 1 of slaughter the insects are directly used for the implementation of stage 2 of separation of the cuticles from the soft part of the insects, that is to say that the insects are not subjected to any processing, such as grinding, freezing or dehydration between step 1 and step 2.
  • step 2 Separation of the cuticles from the soft part of the insects
  • the separation of cuticles from the soft part of insects can be carried out using any type of suitable separator.
  • the filter press used in the insect treatment process according to the invention is a belt filter press.
  • the clamping strip allows the insects to be brought and applied against the perforated drum so as to pass, by pressure, the soft part of the insects through the perforations of the drum, while the solid part of the insects (cuticles) remains outside the drum.
  • the separation of the cuticles from the soft part is carried out using a twin-screw separator.
  • a separator has a double screw inside a perforated drum. The soft part of the insects passes through the perforations of the drum while the cuticles are routed along the two screws to the outside of the separator
  • the soft part obtained in step 2 comprises between 20 and 50% by weight of lipids, preferably between 30 and 40% by weight of lipids on the dry weight of the soft part.
  • the soft part of the insects is then, optionally, subjected to a maturation stage in a tank.
  • the maturation is carried out for a period of between 15 minutes and 3 hours, preferably for 1 hour.
  • the maturation is carried out at a temperature between 65 and 100°C, preferably between 85 and 100°C, more preferably at a temperature of approximately 90°C.
  • This step makes it easier to separate the soft part of the insects in step 4 below.
  • the method according to the invention comprises such a step.
  • the enzymatic hydrolysis can be carried out with a single protease or alternatively with a mixture of enzymes containing at least one protease, more preferably a mixture of enzymes containing several proteases.
  • the protease is chosen from the group consisting of aminopepdidases, metallocarboxypeptidases, serine endopeptidases, cysteine endopeptidases, aspartic endopeptidases, metalloendopeptidases.
  • the enzymes can be chosen from the following:
  • the enzymatic hydrolysis step is carried out with a mixture comprising or consisting of an endopetidase and an aminopeptidase, more preferably, a serine endopetidase and an aminopeptidase.
  • the enzyme or mixture of enzymes is introduced in a quantity ranging from 2.5 to 31 g/kg relative to the dry weight of the solid protein fraction, preferably from 4 to 21 relative to the dry weight of the solid fraction. protein.
  • the quantity of enzyme or mixture of enzymes introduced corresponds to an activity between 40 and 5000 lll/Kg relative to the dry weight of the solid protein fraction.
  • farmed fish are chosen from Salmondies (Salmonidae) and include in particular salmon and trout.
  • the particularly preferred species according to the invention are: Salmo salar (Atlantic salmon), Salmo trutta (Brown trout or Common trout), Oncorhynchus kisutch ( Pacific salmon), Oncorhynchus tshawytscha (King salmon), Onchorynchus mykiss (Rainbow trout ) and Salvelinus alpinus (Arctic char).
  • the hydrolyzate is introduced in the form of a coating applied under vacuum.
  • the use according to the invention is advantageously implemented for improving the consistency of feces.
  • Figure 2 which is a bar chart comparing the slaughter yield in salmon when the latter is fed with the food according to the invention comprising the hydrolyzate obtained from insects, or with the control diet;
  • Figure 3 which is a bar diagram comparing the consistency of feces in salmon when the latter is fed with the food according to the invention comprising the hydrolyzate obtained from insects, or with the control diet; with on the ordinate, the percentage distribution of feces according to their consistency (i.e., score 1 or 2).
  • Flavourzyme introduced at a concentration between 2500-5000 IU/kg expressed in relation to the dry weight of the protein cake.
  • the enzymes are then deactivated at 90°C for 30 minutes and the hydrolyzate thus obtained is cooled to 40°C before being stabilized by the addition of additives to obtain a pH lower than 2.9.
  • the additives used may include a preservative and/or a pH reducer.
  • the pH lowerer can be chosen from an organic or inorganic acid, preferably an inorganic acid, such as for example phosphoric acid, citric acid, fumaric acid, acetic acid, sorbic acid. , propionic acid.
  • an organic or inorganic acid such as for example phosphoric acid, citric acid, fumaric acid, acetic acid, sorbic acid. , propionic acid.
  • the finished product obtained is a hydrolyzate (or hydrolyzed aqueous composition) having a dry matter of between 20-25%.
  • Example 1 The hydrolyzate obtained in Example 1 was characterized as follows. 1. Analytics
  • the humidity level was determined according to the method from regulation CE 152/09.
  • the protein level was determined according to the Kjeldahl method, of regulation EC 152/2009, with an N to protein conversion factor of 6.25.
  • the ash rate was determined according to EC regulation 152/2009.
  • the fiber level (soluble and insoluble) was determined according to the AOAC 985.29 method.
  • the quantity of total and free amino acids was determined according to standard ISO 13903:2005 (for total and free amino acids except tryptophan) and EC regulation 152/2009 (for tryptophan).
  • the quantity of free amino acids was determined according to the ISO 13903:2005 standard.
  • Pepsin digestibility was determined according to methods AOAC 971.09 (0.02% pepsic digestibility (Gravimetry)) and AOAC 992.15; AOAC 990.03; AOCS Ba 4e-93 (protein combustion).
  • Ileal digestibility was determined according to the BOISEN methods (for the determination of enzymes) and according to the Dumas method (for the protein content).
  • the quantity of soluble proteins was determined by solubilizing said proteins in a solution consisting of 30% acetonitrile, 70% ultra-pure water and 0.1% trifluoroacetic acid (“ACN/water/TFA solution”), these percentages being percentages by volume on the total volume of solution, which constitutes the mobile phase before dosage by HPLC-SEC (size exclusion chromatography method known to those skilled in the art).
  • ACN/water/TFA solution trifluoroacetic acid
  • the quantity of insoluble proteins was determined by the dry residue obtained after dissolving a sample of dried hydrolyzate in the ACN/water/TFA solution, and compared to the initial dry weight.
  • Protein size was determined by HPLC-SEC.
  • the riboflavin (vitamin B2) content was determined according to the EN 14152:2014 method.
  • this is a premix of vitamins and minerals comprising the following ingredients: Butylated hydrotoluene (BHT) (E 321) 20,000 mg, Colloidal silica (E 551 b) 176,700 mg, Sepiolite (E 562) 370,600 mg, vitamin B2 3,000 mg, Vitamin B12 10 mg, Nicotinamide (3a315) 20,000 mg, Folic acid (3a316) 1,500 mg, Vitamin D3 (3a671) 200,000 Ul, Vitamin A (3a672a) 2,000,000 Ul, Vitamin E (3a700) 10,000 mg, Vitamin K3 (3a710) 2,500 mg, Vitamin B1 (3a821) 3,000 mg, Vitamin B6/pyridoxine hydrochloride (3a831) 2,000 mg, D-calcium pantothenate (3a841) 10,000 mg, Biotin (3a880) 300 mg, Inositol (3a900) 50,000 mg, Betaine anhydrous (3a920) 50,000 mg, Iron (iron (II) sulfate, monohydrate) (3b
  • the inventors have demonstrated that the use of the hydrolyzate according to the invention at a very low dosage (1% dry matter) has a significant impact on the growth of fish.
  • Example 4 Introduction of the hydrolyzate according to the invention into fish feed (salmon) a. Materials and methods
  • the tests were carried out on salmon. In total, 320 Atlantic salmon with an average weight of 17g were randomly distributed into 6 tanks with a volume of 80L (an average weight of 16.63-16.70g per tank). Each diet was given to three excess appetite tanks.

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Abstract

La présente invention est relative à un hydrolysat obtenu à partir d'insectes, comprenant au moins 50% en poids de protéines, au moins 7% en poids de lipides, au moins 10,5% en poids de cendres, les pourcentages en poids étant indiqués sur le poids sec de l'hydrolysat, et une teneur en matière sèche comprise entre 15 et 35%, le pourcentage étant donné sur le poids de l'hydrolysat. Elle vise également un procédé de préparation de l'hydrolysat, et son utilisation pour notamment améliorer la croissance des poissons.

Description

Hydrolysat obtenu à partir d’insectes et procédé de fabrication
DOMAINE TECHNIQUE DE L’INVENTION
La présente invention se rapporte à un hydrolysat obtenu à partir d’insectes ainsi qu’à son procédé de préparation et à ses utilisations dans l’alimentation animale et notamment l’alimentation des poissons.
L'aquaculture joue un rôle crucial dans la sécurité alimentaire mondiale, car c'est une activité qui connaît une croissance constante depuis des décennies. Néanmoins, elle est confrontée à plusieurs défis importants, notamment en ce qui concerne l'alimentation, avec l'intensification croissante de la production et l'importance d'exploiter des ingrédients durables ayant une empreinte carbone moindre.
Dans la fabrication des aliments pour poisson, la nécessité de réduire la dépendance à la farine de poisson a conduit à la mise au point d'ingrédients alternatifs, d'origine marine ou terrestre. Ces nouveaux aliments, y compris les suppléments fonctionnels, peuvent jouer un rôle clé dans le passage à des pratiques plus durables, réduisant ainsi l'empreinte environnementale et améliorant les revenus économiques des aquaculteurs.
Ainsi, il existe un besoin de trouver des alternatives qui permettent d’optimiser le développement et d’obtenir une croissance optimale des poissons.
Le travail des inventeurs a permis de mettre en évidence qu’il était possible de développer un hydrolysat obtenu à partir d’insectes permettant d’améliorer notablement les performances de croissance des poissons et ce, même lorsqu’il est introduit en faible quantité.
En outre, les inventeurs ont mis en évidence que ledit hydrolysat permettait également d’améliorer la consistance des fèces. Ce dernier paramètre est important à prendre en compte dans des systèmes d’aquaculture en recirculation (RAS), car il a un impact important sur la qualité de l’eau. En effet, les déchets doivent être réduits au minimum et pouvoir s’éliminer facilement mécaniquement pour éviter de détériorer les filtres.
EXPOSE DE L’INVENTION
La présente invention vise un hydrolysat obtenu à partir d’insectes, comprenant au moins 50% en poids de protéines, au moins 7% en poids de lipides, au moins 10,5% en poids de cendres, les pourcentages en poids étant indiqués sur le poids sec de l’hydrolysat, et une teneur en matière sèche comprise entre 15 et 35% en poids, le pourcentage étant donné sur le poids de l’hydrolysat. Par « hydrolysat », on désigne une composition qui comporte des protéines hydrolysées. Les protéines hydrolysées sont obtenues par hydrolyse enzymatique des protéines. L’hydrolyse enzymatique de protéines correspond à une coupure d’une liaison peptidique par une enzyme au niveau d’un site de coupure spécifique provoquant la libération de protéines de taille réduite voir d’acides aminés.
L’hydrolysat selon l’invention est plus particulièrement une composition aqueuse hydrolysée, c’est-à-dire qu’elle comporte un taux d’humidité de 65 à 85%, préférentiellement, 70 à 80%, plus préférentiellement encore 75 à 80%. Dans toute la présente demande, « composition aqueuse hydrolysée » et « hydrolysat » sont considérés comme équivalent.
On notera que dans le cadre de la présente demande, et sauf stipulation contraire, les gammes de valeurs indiquées s’entendent bornes incluses.
Comme indiqué ci-avant, la composition aqueuse hydrolysée comporte ainsi 15 à 35% de matière sèche, préférentiellement, 20 à 32%, plus préférentiellement, 20 à 25% en poids de matière sèche sur le poids de l’hydrolysat.
On notera que dans le cadre de la présente demande, les termes « pourcentage en poids » et « pourcentages en masse » sont équivalents.
De préférence, le taux d’humidité est déterminé selon la méthode issue du règlement CE152/2009, comme détaillé à l’exemple 2.
Dans toute la demande, lorsqu’aucune date n’est précisée pour un règlement, une norme ou une directive, il s’agit du règlement, de la norme ou de la directive en vigueur à la date de dépôt.
Par « insectes », on entend des insectes à n'importe quel stade de développement, tel qu'un stade adulte, larvaire ou un stade de nymphe. De préférence, les insectes mis en œuvre dans le procédé selon l'invention sont comestibles.
Plus particulièrement, les insectes peuvent être choisis parmi le groupe constitué par les coléoptères, les diptères, les lépidoptères, les isoptères, les orthoptères, les hyménoptères, les blattoptères, les hémyptères, les hétéroptères, les nevroptères, les éphéméroptères et les mécoptères, de préférence, parmi les coléoptères, les diptères, les orthoptères, les nevroptères et les lépidoptères.
Préférentiellement, les insectes sont choisis parmi le groupe constitué par Tenebrio molitor, Hermetia illucens, Galleria mellonella, Alphitobius diaperinus, Zophobas morio, Blattera fusca, Tribolium castaneum, Rhynchophorus ferrugineus, Musca domestica, Chrysomya megacephala, Locusta migratoria, Schistocerca gregaria, Acheta domesticus et Samia ricini.
Plus préférentiellement, dans l’hydrolysat selon l’invention les insectes sont des coléoptères. Les coléoptères préférentiellement utilisés appartiennent aux familles des Tenebrionidae, Melolonthidae, Dermestidae, Coccinellidae, Cerambycidae, Carabidae, Buprestidae, Cetoniidae, Dryophthoridae, ou leurs mélanges, encore plus préférentiellement les insectes appartiennent à la famille des Tenebrionidae.
Plus préférentiellement, il s'agit des coléoptères suivants : Tenebrio molitor, Alphitobius diaperinus, Zophobas morio, Tenebrio obscurus, Tribolium castaneum et Rhynchophorus ferrugineus, ou leurs mélanges, encore plus préférentiellement Tenebrio molitor et Alphitobius diaperinus.
Les insectes sont de préférence élevés et non prélevés dans la nature.
Par exemple, les insectes sont élevés dans une ferme d'insectes. L'élevage des insectes dans une ferme spécifique permet non seulement de contrôler et d'éliminer les risques associés aux maladies véhiculées par des insectes, mais également de limiter les risques associés à la toxicité des produits alimentaires dérivés des insectes due par exemple à la présence d'insecticides. En outre, l'élevage permet de contrôler la qualité de l'approvisionnement en insectes et de limiter les coûts d'approvisionnement.
Avantageusement, l’hydrolysat selon l’invention comprend un taux de fibres compris entre 1 et 5% en poids sur le poids sec de l’hydrolysat.
De préférence, le taux de fibre est déterminé selon la méthode AOAC 985.29, comme détaillé à l’exemple 2.
De manière avantageuse, l’hydrolysat comprend entre 2% et 5%, de préférence entre 2,5% et 4,5%, plus préférentiellement entre 3% et 4% en poids de fibres sur le poids sec de l’hydrolysat.
Avantageusement, les fibres comprennent de la chitine.
Dans le cadre de la présente demande, par « protéines », on vise la quantité de protéines brutes. La quantification des protéines brutes est bien connue de l'homme du métier. A titre d'exemple, on peut citer la méthode Dumas ou la méthode Kjeldhal. De préférence, la méthode Kjeldhal est utilisée, comme détaillé à l’exemple 2. Par « protéines », sauf indication contraire, on vise non seulement les protéines mais également les peptides et les acides aminés libres.
De manière avantageuse, l’hydrolysat comprend entre 50 et 80 % en poids de protéines, de préférence entre 55 et 70%, plus préférentiellement entre 60 et 65 % en poids de protéines sur le poids sec de l’hydrolysat.
Avantageusement, l’hydrolysat comprend au moins 20% d’acides aminés essentiels, de préférence entre 20% et 55%, plus préférentiellement entre 40% et 50% en poids d’acides aminés essentiels, les pourcentages en poids étant exprimés sur le poids total de protéines dans l’hydrolysat. Par « poids total de protéines » ou « poids de protéines » sans indication supplémentaire sur la nature des protéines, on entend le poids de protéines brutes présentes dans l’hydrolysat. Ceci inclut donc les protéines hydrosolubles et insolubles.
De préférence, le taux d’acides aminés essentiels est déterminé selon la norme ISO 13903:2005 et le règlement CE152/2009 (pour le tryptophane).
On entend par « acide aminé essentiel », les acides aminés suivants : histidine, isoleucine leucine, lysine, méthionine, phénylalanine, thréonine, tryptophane et valine. Il est à noter que pour certaines espèces, d’autres acides aminés peuvent également être essentiels, par exemple l’arginine pour le poisson.
Avantageusement, l’hydrolysat comprend au moins 1 % en poids d’acides aminés libres, de préférence entre 2 et 15%, plus préférentiellement entre 3% et 11% d’acides aminés libres, les pourcentages étant indiqués sur le poids sec de l’hydrolysat.
De préférence, le taux d’acides aminés libres est déterminé suivant la méthode ISO 13903:2005, comme détaillé à l’exemple 2.
Les 5 acides aminés totaux les plus abondants sont avantageusement l’acide glutamique, l’acide aspartique, la leucine, la lysine et la tyrosine.
Ces acides aminés sont particulièrement intéressants pour la santé des poissons (par exemple, santé intestinale et sécrétion d’hormones pour l’acide glutamique et synthèse de protéines musculaires pour la leucine).
L’hydrolysat selon l’invention comporte de préférence de 40 à 60% en poids en protéines insolubles, le pourcentage en poids étant exprimé par rapport au poids total de protéines. De ce fait, l’hydrolysat selon l’invention comporte 40 à 60% en poids en protéines hydrosolubles, le pourcentage en poids étant exprimé par rapport au poids total de protéines.
Avantageusement, l’hydrolysat selon l’invention comprend des protéines hydrosolubles, 75 % des protéines hydrosolubles présentant une taille inférieure à 12400 g/mol, sur le poids total de protéines hydrosolubles.
Par « protéines hydrosolubles », on entend, parmi les protéines (ou protéines brutes), celles qui sont solubles dans une solution constituée de 30% d’acétonitrile, 70% d’eau ultra pure et 0,1 % d’acide trifluoroacétique (« solution ACN/eau/TFA »), les pourcentages étant des pourcentages en volume sur le volume total de solution, comme détaillé à l’exemple 2.
Par « protéines insolubles », on entend les protéines insolubles dans la solution ACN/eau/TFA, comme détaillé à l’exemple 2.
Avantageusement, l’hydrolysat comprend une teneur supérieure à 80%, de préférence comprise entre 85% et 98%, plus préférentiellement entre 90% et 95% en poids en protéines hydrosolubles présentant une taille inférieure à 12400 g/mol, sur le poids total de protéines hydrosolubles.
Avantageusement, l’hydrolysat comprend une teneur supérieure à 40%, de préférence comprise entre 50% et 70%, plus préférentiellement entre 55% et 60% en poids en protéines hydrosolubles présentant une taille inférieure à 555 g/mol, sur le poids total de protéines hydrosolubles.
De préférence, la taille des protéines est déterminée par HPLC-SEC comme détaillé à l’exemple 2.
La petite taille des protéines de l’hydrolysat selon l’invention, rend cet hydrolysat très digeste.
Avantageusement, l’hydrolysat présente une digestibilité pepsique et/ou iléale supérieure ou égale à 95% en poids, préférentiellement supérieure ou égale à 96% et plus préférentiellement supérieure ou égale à 98%, et plus particulièrement supérieure ou égale à 99%, en poids sur le poids total de protéines.
De préférence, la digestibilité pepsique est mesurée suivant les méthodes AOAC 971.09, AOAC 992.15; AOAC 990.03 et AOCS Ba 4e-93, comme détaillé à l’exemple 2.
La digestibilité iléale est mesurée selon les méthodes BOISEN et DUMAS, comme détaillé à l’exemple 2.
Comme indiqué ci-avant, l’hydrolysat selon l’invention comprend au moins 7% en poids de lipides, exprimés sur le poids sec de l’hydrolysat. De préférence, L’hydrolysat comprend entre 7% et 20% en poids de lipides, de préférence entre 8% et 18% en poids, plus préférentiellement entre 9% et 16% en poids de lipides sur le poids sec de l’hydrolysat.
Les méthodes de détermination de la teneur en matière grasse (lipides) sont bien connues de l'homme du métier. De préférence, la détermination de cette teneur sera effectuée en suivant la méthode du règlement CE 152/2009, comme détaillé à l’exemple 2.
Comme indiqué ci-avant, l’hydrolysat selon l’invention comprend au moins 10,5% en poids de cendres, exprimés sur le poids sec de l’hydrolysat. Avantageusement, l’hydrolysat comprend une teneur en cendres comprise entre 11% et 35% en poids, de préférence entre 12% et 30% en poids, plus préférentiellement entre 15 et 28% en poids sur le poids sec de l’hydrolysat.
De préférence, le taux de cendres est déterminé selon une méthode du règlement CE 152/2009 comme détaillé dans l’exemple 2.
Avantageusement, l’hydrolysat selon l’invention comprend un ou plusieurs additifs choisis parmi un conservateur et/ou un abaisseur de pH. Les additifs ajoutés à l’hydrolysat ont pour objectif de le stabiliser. De ce fait, l’hydrolysat peut être conservé pendant une durée supérieure à 6 mois, telle que par exemple comprise entre 6 et 12 mois à une température 30 degré Celsius.
De préférence, le conservateur est choisi parmi le formiate de sodium, l’acide sorbique, l’acide formique, le diformiate de potassium, le formiate de calcium, le bisulfate de sodium, le sorbate de potassium, l’acide acétique, le diacetate de sodium, l’acétate de calcium et l’acétate de prényle.
Le conservateur est de préférence introduit dans l’hydrolysat à une concentration de 0,05 à 3%, préférentiellement de 0,1 à 2% en poids sur le poids de l’hydrolysat.
Par « abaisseur de pH », on entend un produit susceptible d’abaisser le pH d’une solution aqueuse.
De préférence l’abaisseur de pH est choisi parmi un acide organique ou inorganique, de préférence, un acide inorganique, tel que par exemple l’acide phosphorique, l’acide citrique, l’acide fumarique, l’acide acétique, l’acide sorbique ou l’acide propionique.
Avantageusement, l’abaisseur de pH est introduit à une quantité nécessaire et suffisante pour abaisser le pH entre 2 et 4, préférentiellement, entre 2,5 et 3,5, tel que par exemple entre 2,8 et 3,2.
La présente invention vise également un procédé de préparation d’un hydrolysat à partir d’insectes comprenant les étapes suivantes : a) Séparation des cuticules et de la partie molle des insectes, b) Séparation de la partie molle des insectes en une fraction aqueuse, une fraction huileuse et une fraction solide protéique, et c) Hydrolyse enzymatique de la fraction solide protéique.
Le procédé selon l’invention permet d’obtenir l’hydrolysat selon l’invention.
L’hydrolysat et les insectes sont tels que décrits ci-avant, avec leurs modes avantageux et préférentiels.
Ainsi, dans le procédé selon l’invention, l’hydrolyse enzymatique est réalisée sur la fraction solide protéique et par conséquent après la séparation de la partie molle en trois fractions. Les inventeurs ont mis en évidence que la réalisation de l’étape d’hydrolyse sur la fraction solide protéique, après la séparation de la partie molle en trois fractions, présentait des avantages en comparaison avec un procédé où l’hydrolyse serait réalisée avant l’étape de séparation en trois fractions et notamment permettait d’améliorer la rentabilité du procédé et de conserver inaltérées les autres fractions.
De préférence, le procédé selon l’invention comprend en outre une étape d’abattage des insectes, préalablement à l’étape de séparation des cuticules de la partie molle. Cette étape d’abattage est plus amplement décrite dans l’étape 1 du procédé selon l’invention détaillé ci-après.
La cuticule est la couche externe (ou exosquelette) sécrétée par l'épiderme des insectes. Elle est en général formée de trois couches : l’épicuticule, l’exocuticule et l’endocuticule.
Par « partie molle », on vise la chair (comportant notamment les muscles et les viscères) et le jus (comportant notamment les liquides biologiques, l’eau et l’hémolymphe) des insectes. En particulier, la partie molle ne consiste pas en le jus des insectes.
La séparation des cuticules de la partie molle des insectes peut être effectuée à l’aide de tout type de séparateur adapté, tel qu’un séparateur à bande ou une séparatrice bi-vis.
La séparation des cuticules de la partie molle des insectes est plus amplement décrite dans l’étape 2 du procédé selon l’invention détaillé ci-après.
Avantageusement, le procédé selon l’invention comprend en outre une étape de maturation de la partie molle des insectes, entre l’étape de séparation des cuticules de la partie molle et l’étape de séparation de la partie molle des insectes en une fraction huileuse, une fraction solide et une fraction aqueuse.
Par « étape de maturation de la partie molle des insectes », on vise plus particulièrement une étape pendant laquelle la partie molle des insectes est soumise à un chauffage et/ou une agitation.
Cette étape est plus amplement décrite dans l’étape 3 du procédé selon l’invention détaillé ci-après.
La séparation en trois fractions a pour objectif de récupérer trois fractions à partir de la partie molle des insectes obtenue à l’étape 2 ou optionnellement l’étape 3, à savoir une fraction solide, une fraction aqueuse, et une fraction huileuse.
Cette étape de séparation en trois fractions est plus amplement décrite dans l’étape 4 du procédé selon l’invention détaillé ci-après.
La fraction solide protéique (également appelée « gâteau protéique ») est ensuite soumise à une étape de dilution optionnelle puis à une hydrolyse enzymatique.
L’étape de dilution a pour objectif de diminuer la matière sèche, de préférence à une teneur comprise entre 15 et 35% en poids.
L’étape d’hydrolyse enzymatique est effectuée uniquement sur la fraction solide issue de la séparation en 3 fractions. Elle met en œuvre de préférence au moins une enzyme protéolytique, de préférence une protéase, et plus préférentiellement au moins deux protéases, lesdites protéases étant de natures différentes. Dans la présente demande, les noms ou suffixes « peptidase » et « protéase » sont utilisés indifféremment pour désigner une enzyme lysant une liaison peptidique des protéines. Avantageusement, elle met en œuvre une aminopeptidase et une endopeptidase à sérine.
Cette étape d’hydrolyse enzymatique de la fraction solide protéique (gâteau protéique) est plus amplement décrite dans l’étape 6 du procédé selon l’invention détaillé ci-après.
Le procédé selon l’invention est plus amplement détaillé ci-après.
Procédé détaillé de traitement d’insectes selon l’invention
• Etape 1 : Abattage des insectes
Cette étape 1 d’abattage peut avantageusement s’effectuer par choc thermique, tel que par ébouillantage ou par blanchiment. Cette étape 1 permet d’abattre les insectes tout en abaissant la charge microbienne (réduction du risque d’altération et sanitaire) et en inactivant les enzymes internes des insectes pouvant déclencher une autolyse, et ainsi un brunissement rapide de ceux-ci.
Pour l’ébouillantage, les insectes, de préférence des larves, sont ainsi ébouillantés à l’eau pendant 2 à 20 min, préférentiellement, 5 à 15 min. De préférence, l’eau est à une température comprise entre 87 à 100°C, préférentiellement 92 à 95°C.
La quantité d’eau introduite lors de l’ébouillantage est déterminée de la façon suivante : le ratio du volume d’eau en ml sur le poids en g d’insecte est de préférence compris entre 0,3 et 10, plus préférentiellement entre 0,5 et 5, encore plus préférentiellement entre 0,7 et 3, encore plus préférentiellement de l’ordre de 1 .
Pour le blanchiment, les insectes, de préférence des larves, sont blanchis à l’eau ou à la vapeur (buses ou lit de vapeur) à une température comprise entre 80 et 105°C, de préférence entre 87 et 105°C, plus préférentiellement entre 95 et 100°C, encore plus préférentiellement 98°C ou bien à l’eau à une température comprise entre 90 et 100°C, préférentiellement entre 92 et 95°C (par buses d’aspersion) ou en mode mixte (eau + vapeur) à une température comprise entre 80 et 130°C, de préférence entre 90 et 120°C, plus préférentiellement entre 95 et 105°C, encore plus préférentiellement 98°C. Lorsque les insectes sont blanchis uniquement à la vapeur, le blanchiment est avantageusement réalisé dans des blancheurs à vapeur à circulation forcée (« forced steaming »). Le temps de séjour dans la chambre de blanchiment est compris entre 5 secondes et 15 minutes, préférentiellement entre 1 et 7 min.
Avantageusement, suite à l’étape 1 d’abattage, les insectes sont directement utilisés pour la mise en œuvre de l’étape 2 de séparation des cuticules de la partie molle des insectes, c’est-à-dire que les insectes ne sont soumis à aucun traitement, tel qu’un broyage, une congélation ou une déshydratation entre l’étape 1 et l’étape 2. • Etape 2 : Séparation des cuticules de la partie molle des insectes
L’étape 2 a pour objectif de séparer les cuticules de la partie molle des insectes.
La séparation des cuticules de la partie molle des insectes peut être effectuée à l’aide de tout type de séparateur adapté.
Selon un premier mode de réalisation, la séparation des cuticules de la partie molle est réalisée à l’aide d’un filtre presse.
Avantageusement, le filtre presse utilisé dans le procédé de traitement d’insectes selon l’invention est un filtre presse à bandes.
Un filtre presse à bandes comporte deux bandes de serrage perforées (également appelées « toiles filtrantes »). Les insectes sont placés entre les deux bandes de serrage perforées de sorte à faire passer, par pression, la partie molle des insectes à travers les perforations des bandes de serrage, tandis que la partie solide des insectes restent entre les 2 bandes de serrage perforées.
L’homme du métier est à même de déterminer le diamètre des perforations des bandes de serrage ainsi que la pression à exercer, permettant la séparation des cuticules de la partie molle des insectes.
Selon un second mode de réalisation, la séparation des cuticules de la partie molle est réalisée à l’aide d’un séparateur à bande.
A titre d’exemple, un séparateur à bande peut comprendre une bande de serrage et un tambour perforé, la bande de serrage entourant au moins une partie du tambour perforé.
La bande de serrage permet l’apport et l’application des insectes contre le tambour perforé de sorte à faire passer, par pression, la partie molle des insectes à travers les perforations du tambour, tandis que la partie solide des insectes (cuticules) reste à l'extérieur du tambour.
Les cuticules peuvent ensuite être récupérées à l’aide d’un couteau racleur.
Concernant la pression, l’homme du métier est à même de déterminer la pression à exercer permettant la séparation des cuticules de la partie molle des insectes.
Selon un troisième mode de réalisation, la séparation des cuticules de la partie molle est réalisée à l’aide d’une séparatrice bi-vis. Une telle séparatrice comporte une double-vis à l’intérieur d’un tambour perforé. La partie molle des insectes passe à travers les perforations du tambour tandis que les cuticules sont acheminées le long des deux vis jusqu' à l'extérieur de la séparatrice
Avantageusement, le diamètre des perforations des tambours est compris entre 0,5 et 3 mm, de préférence entre 1 et 2 mm. Cette étape de séparation des insectes se distingue d’un pressage classique en ce qu’elle permet une séparation (nette) de la partie molle et des cuticules des insectes et non une séparation d’un jus d’une fraction solide.
La partie molle obtenue dans l’étape 2 comporte entre 20 et 50% en poids de lipides, de préférence entre 30 et 40% en poids de lipides sur le poids sec de la partie molle.
En outre, la partie molle comporte au moins 45%, de préférence au moins 48%, plus préférentiellement au moins 50% en poids de protéines sur le poids sec de la partie molle.
• Etape 3 (optionnelle) : Maturation de la partie molle des insectes
La partie molle des insectes est ensuite, optionnellement, soumise à une étape de maturation dans une cuve.
Avantageusement, la maturation est réalisée pendant une durée comprise entre 15 minutes et 3 heures, de préférence pendant 1h.
Avantageusement, la maturation est réalisée à une température comprise entre 65 et 100°C, de préférence entre 85 et 100°C, plus préférentiellement à une température d’environ 90°C.
Cette étape peut également être soumise à une agitation.
Cette étape permet de faciliter la séparation de la partie molle des insectes dans l’étape 4 ci-après.
De préférence, le procédé selon l’invention comprend une telle étape.
En particulier, aucune dilution de la partie molle des insectes dans un solvant tel que l’eau n’est nécessaire dans cette étape.
• Etape 4 : Séparation de la partie molle en une fraction solide, une fraction aqueuse et une fraction huileuse
Cette étape a pour objectif de récupérer trois fractions à partir de la partie molle des insectes obtenue à l’étape 2 ou 3, à savoir une fraction solide, une fraction aqueuse, et une fraction huileuse.
Selon un premier mode de réalisation, cette étape de séparation de la partie molle est réalisée en deux sous-étapes.
Dans la première sous-étape, la partie molle des insectes est soumise à une décantation à l’aide d’un décanteur 2 phases, de sorte à obtenir une fraction solide et une fraction liquide.
Dans la deuxième sous-étape, la fraction liquide est soumise à une centrifugation, de sorte à récupérer une fraction huileuse et une fraction aqueuse.
Avantageusement, dans cette deuxième sous-étape, une centrifugeuse à assiettes est utilisée. Selon un second mode de réalisation de l’étape 4, la partie molle des insectes est soumise à une décantation à l’aide d’un décanteur 3 phases, de sorte à obtenir directement une fraction aqueuse, une fraction huileuse et une fraction solide.
Des décanteurs 3 phases adaptés sont, par exemple, le Tricanter® de la société Flottweg, ou les décanteurs 3 phases de la société GEA, tel que le décanteur CA 225-03- 33.
Avantageusement, la séparation de la partie molle est réalisée selon le second mode de réalisation.
En effet, l’utilisation d’un décanteur 3 phases permet d’obtenir une séparation des phases particulièrement efficace. Plus particulièrement, la fraction solide obtenue présente une haute teneur en matière sèche, la fraction aqueuse comporte peu de sédiments insolubles (provenant de la fraction solide) et d’huile, et la fraction huileuse comporte peu de sédiments insolubles (provenant de la fraction solide) et d’eau.
• Etape 5 (optionnelle) : Dilution
La fraction solide obtenue à l’issue de l’étape 4 (gâteau protéique) est ensuite optionnellement diluée par ajout d’eau afin de réduire le taux de matière sèche de ladite fraction. Plus particulièrement, l’étape de dilution est réalisée par ajout d’eau, telle que de l’eau du robinet ou de l’eau douce. Cette étape est réalisée de préférence sous agitation. En outre, un chauffage peut également être appliqué, par exemple un chauffage de 30 à 80°C, de préférence de 40 à 70°C, plus préférentiellement de 50 à 70°C.
A la fin de l’étape de dilution, la fraction solide diluée comporte un taux de matière sèche compris entre 15 et 35% en poids, de préférence, entre 20 et 25% en poids.
• Etape 6 : Hydrolyse enzymatique
L’hydrolyse enzymatique a pour objectif de diminuer la taille des protéines du gâteau protéique pour les rendre plus solubles et plus digestes.
L’hydrolyse enzymatique est effectuée par au moins une enzyme protéolytique, de préférence une protéase. Dans la présente demande, les noms ou suffixes « peptidase » et « protéase » sont utilisés indifféremment pour désigner une enzyme lysant une liaison peptidique des protéines.
Avantageusement, l’hydrolyse est effectuée pendant une durée de 1 à 6h, préférentiellement, pendant 2 à 4h, à une température de 45 à 75°C, préférentiellement, 50 à 65°C et à un pH compris entre 6 et 8, préférentiellement entre 7 et 7.5.
L’hydrolyse enzymatique peut être réalisée avec une seule protéase ou alternativement avec un mélange d’enzymes contenant au moins une protéase, plus préférentiellement un mélange d’enzymes contenant plusieurs protéases. De préférence, la protéase est choisie parmi le groupe constitué par les aminopepdidases, les métallocarboxypeptidases, les endopeptidases sérine, les endopeptidases cystéine, les endopeptidases aspartiques, les métalloendopeptidases. Avantageusement, les enzymes peuvent être choisies parmi les suivantes :
[Table 1]
Figure imgf000013_0001
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*n.a. : non applicable
Avantageusement, l’étape d’hydrolyse enzymatique est effectuée avec mélange comportant ou consistant en une endopetidase et une aminopeptidase, plus préférentiellement, une endopetidase à sérine et une aminopeptidase. L’enzyme ou le mélange d’enzymes est introduit(e) à une quantité allant de 2.5 à 31 g/kg par rapport au poids sec de la fraction solide protéique, préférentiellement de 4 à 21 par rapport au poids sec de la fraction solide protéique.
En termes d’activité enzymatique, la quantité d’enzyme ou de mélange d’enzymes introduite correspond à une activité comprise entre 40 et 5000 lll/Kg par rapport au poids sec de la fraction solide protéique.
Plus particulièrement, la quantité d’endopeptidase à sérine introduite correspond à une activité comprise entre 40 et 60 lll/Kg par rapport au poids sec de la fraction solide protéique. De même, la quantité d’aminopeptidase introduite correspond à une activité comprise entre 2500 et 5000 lll/Kg par rapport au poids sec de la fraction solide protéique.
Préférentiellement, le procédé selon l’invention comprend en outre une étape de stabilisation de la fraction solide protéique hydrolysée obtenue à l’étape c), par ajout d’un ou plusieurs additifs choisis parmi un conservateur et/ou un abaisseur de pH.
Les additifs sont tels que décrits ci-avant, avec leurs modes avantageux et préférentiels.
La présente invention vise également l’utilisation de l’hydrolysat selon l’invention dans un aliment pour animaux.
De préférence, les animaux sont choisis parmi les animaux domestiques, les animaux de pacage, les animaux de basse-cour ou encore les animaux aquatiques.
Avantageusement, les animaux domestiques sont choisis parmi les chiens, les chats, les oiseaux, les rongeurs, les reptiles terrestres, et les poissons.
Avantageusement, les animaux de pacage sont choisis parmi les bovins, les ovins, les caprins, les porcins, les équidés, les camélidés et les cervidés.
Avantageusement, les animaux de basse-cour sont choisis parmi la poule, la dinde, le canard, l’oie, le pigeon, la caille, le faisan et l’autruche.
Avantageusement, les animaux aquatiques sont choisis parmi les oiseaux marins, les cétacés, les reptiles marins, les crustacés (par exemple, la crevette), les poissons, de préférence des poissons d’élevage.
Les poissons d’élevage sont de préférence le bar, la daurade, la daurade royale, l’esturgeon, le maigre, le panga, le saumon, le tilapia, le turbot ou la truite.
De préférence, les poissons d’élevage sont choisis parmi les Salmondiés (Salmonidae) et comprend notamment les saumons et les truites.
De préférence, les poissons appartiennent au genre Salmo, Salvelinus, Onchorynchus, et/ou Hucho, plus préférentiellement Salmo.
Les espèces particulièrement préférées selon l’invention sont : Salmo salar (Saumon atlantique), Salmo trutta (Truite brune ou Truite commune), Oncorhynchus kisutch (Saumon pacifique), Oncorhynchus tshawytscha (Saumon royal), Onchorynchus mykiss (Truite arc-en-ciel) et Salvelinus alpinus (Omble chevalier).
Le poisson d'élevage est un poisson élevé dans des bassins ou des cages d'eau douce ou d'eau salée. L'environnement, la qualité de l'eau et l'alimentation sont contrôlés.
Par exemple, des systèmes d’élevages en circuit fermé « Recirculating Aquaculture System » peuvent être mis en œuvre dans l’élevage de poissons. Préférentiellement, dans l’utilisation selon l’invention, l’aliment est sous forme de granulés, de paillettes, de pâté, de croquettes ou de friandises.
Avantageusement, l’aliment est sous forme de granulés ou de paillettes. Cette forme est particulièrement adaptée à l’alimentation des animaux aquatiques tels que les poissons.
Un tel aliment comprend en plus de l’hydrolysat d’autres ingrédients adaptés à l’alimentation des poissons. Ces ingrédients peuvent comprendre des huiles de poisson, de la farine animale telle que de la farine de krill, la farine de poisson ou de la farine de calmar ; des farines de céréales telles que la farine de blé; des farines d’oléagineux telle que la farine de soja, la farine de pois ; des huiles végétales telles que l’huile de colza ; des gélifiants tels que la gomme de guar ; des concentrés protéiques ; du gluten de blé ou de maïs ; des pré-mélanges de vitamines et minéraux ou tout autres ingrédients adaptés à l’alimentation des poissons.
L’aliment sous forme de pâté ou de croquettes est particulièrement adapté à l’alimentation des animaux domestiques tels que les chiens ou les chats.
Avantageusement, dans l’utilisation selon l’invention, l’aliment comporte de 1 % à 20% en poids de l’hydrolysat, le pourcentage en poids étant indiqué sur le poids de l’aliment.
Avantageusement l’aliment comprend entre 1 % et 10% en poids, de l’hydrolysat de préférence entre 1 % et 8% en poids, plus préférentiellement entre 1 % et 5% en poids de l’hydrolysat, le pourcentage étant indiqué sur le poids de l’aliment.
Les aliments pour poissons sont le plus souvent préparés sous la forme de granulés.
La fabrication des granulés est bien connue de l’homme du métier. Les granulés peuvent notamment être obtenus par extrusion.
Selon un premier mode de réalisation, l’hydrolysat est mélangé aux autres ingrédients constituant l’aliment tels qu’illustrés ci-avant, avant extrusion ou mise ou forme.
Selon un second mode de réalisation, dans un premier temps les autres ingrédients de l’aliment sont extrudés puis l’hydrolysat est introduit sous la forme d’un revêtement appliqué sous vide.
Les techniques de revêtement de granulés et les conditions à mettre en œuvre sont bien connues de l’homme du métier.
L’utilisation selon l’invention est avantageusement mise en œuvre pour améliorer la croissance des poissons d’élevage.
L’ajout de l’hydrolysat selon l’invention dans l’alimentation des poissons permet d’améliorer significativement la prise de poids corporel et/ou la taille (longueur) desdits poissons, de préférence la prise de poids corporel et la taille desdits poissons comme cela est démontré à l’exemple 3 et en figure 1 .
Plus particulièrement, l’utilisation de l’hydrolysat selon l’invention permet : d’augmenter le gain de poids, d’augmenter le taux de croissance spécifique, de diminuer le ratio de conversion alimentaire, et/ou d’augmenter le rendement d’abattage, des poissons d’élevage, et notamment des salmonidés.
De préférence, l’utilisation de l’hydrolysat selon l’invention permet d’augmenter le gain de poids, d’augmenter le taux de croissance spécifique, et de diminuer le ratio de conversion alimentaire des poissons d’élevage, et notamment des salmonidés.
L’hydrolysat selon l’invention, les poissons d’élevage et les salmonidés sont plus particulièrement ceux décrits ci-avant, y inclus leur mode de réalisation avantageux et préférentiels.
L’utilisation selon l’invention est avantageusement mise en œuvre pour l’amélioration de la consistance des fèces.
Par « consistance des fèces », on entend le degré de cohésion des matériaux constituant les fèces. Cette consistance peut être mesurée selon une échelle allant de 1 à 4 comme indiqué dans l’exemple 4.
Par « amélioration de la consistance », on vise une augmentation de la cohésion des matériaux constituant les fèces, notamment une augmentation du taux de fèces solides et fermes (tels que de score 1 ) et une diminution du taux de fèces liquides (diarhée, digestat coulant, scores 3-4).
Une consistance élevée des fèces est intéressante pour une application en aquaculture, qui nécessite d’avoir une qualité d'eau élevée pour éviter de détériorer les biofiltres.
La présente invention vise également un aliment pour animaux comportant 1 à 20% en poids de l’hydrolysat selon l’invention le pourcentage en poids étant donné sur le poids de l’aliment.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES
D’autres caractéristiques et avantages de l’invention apparaîtront dans les exemples qui suivent, donnés à titre illustratif, avec référence à :
- La figure 1 qui représente six diagrammes (Figures 1a) à 1f)) comparant les performances globales de croissance des truites arc-en-ciel nourries pendant 84 jours avec le régime témoin (CTRL) avec celles des truites arc-en-ciel nourries avec le régime expérimental selon l’invention (Hydrolysat). Les régimes et les paramètres mesurés sont plus amplement détaillés dans l’exemple 3 ci-après. o La figure 1 a) compare le poids final des truites exprimé en gramme obtenu selon les deux régimes testés ; o La figure 1 b) compare la longueur finale des truites, exprimée en centimètre, obtenue selon les deux régimes testés ; o La figure 1 c) compare le gain de poids des truites exprimé en pourcentage déterminé selon les deux régimes testés ; o La figure 1 d) compare le taux de croissance spécifique des truites exprimé en pourcentage par jour déterminé selon les deux régimes testés ; o La figure 1e) compare la prise alimentaire journalière des truites déterminée (en pourcentage du poids corporel par jour, en ordonnée) selon les deux régimes testés ; o La figure 1f) compare le ratio de conversion alimentaire des truites déterminé selon les deux régimes testés.
La figure 2, qui est un diagramme en bâton comparant le rendement d’abattage chez le saumon lorsque ce dernier est nourri avec l’aliment selon l’invention comprenant l’hydrolysat obtenu à partir d’insectes, ou avec le régime contrôle ;
La figure 3, qui est un diagramme en bâton comparant la consistance de fèces chez le saumon lorsque ce dernier est nourri avec l’aliment selon l’invention comprenant l’hydrolysat obtenu à partir d’insectes, ou avec le régime contrôle ; avec en ordonnée, la répartition en pourcentage des fèces selon leur consistance (à savoir, le score 1 ou 2).
La figure 4 représente quatre diagrammes (Figures 4a) à 4d)) comparant les performances globales de croissance des saumons d’Atlantique nourris pendant 58 jours avec le régime témoin (CTRL2) avec celles des saumons d’Atlantique nourris avec le régime expérimental selon l’invention (Hydrolysat). Les régimes et les paramètres mesurés sont plus amplement détaillés dans l’exemple 5 ci- après. o La figure 4a) compare le poids final des saumons exprimé en gramme obtenu selon les deux régimes testés ; o La figure 4b) compare la longueur finale des saumons, exprimée en centimètre, obtenue selon les deux régimes testés ; o La figure 4c) compare le taux de croissance spécifique des saumons exprimé en pourcentage par jour déterminé selon les deux régimes testés ; o La figure 4d) compare le ratio de conversion alimentaire des saumons déterminé selon les deux régimes testés.
1 : Procédé de préparation de l’hydrolysat selon l’invention
Dans un premier temps, 1 kg de larves de T. molitor sont étuvées puis décutilées au travers d’une séparatrice bi-vis permettant ainsi la séparation des cuticules et de la pulpe (chair).
La pulpe ainsi obtenue est placée dans une cuve de maturation pendant 1 heure à 90°C sous agitation. La pulpe chauffée est ensuite séparée via un tricanteur (décanteur 3 phases) permettant ainsi l’obtention d’une fraction huileuse, d’une fraction aqueuse et d’une fraction solide protéique correspondant à un gâteau protéique.
Le gâteau protéique est alors dilué par ajout d’eau pour diminuer la matière sèche de 42% à 22%.
Puis l’étape d’hydrolyse est réalisée à 60°C pendant 2 heures à l’aide des enzymes suivantes :
- Alcalase : introduite à une concentration comprise entre 40-60 Ul/Kg exprimée par rapport au poids sec du gâteau protéique ;
Flavourzyme : introduite à une concentration comprise entre 2500-5000 Ul/kg exprimée par rapport au poids sec du gâteau protéique.
Les enzymes sont ensuite désactivées à 90°C pendant 30 minutes et l’hydrolysat ainsi obtenu est refroidi jusqu’à 40°C avant d’être stabilisé par l’ajout d’additifs permettant d’obtenir un pH inférieur à 2,9. Les additifs utilisés peuvent comprendre un conservateur et/ou un abaisseur de pH.
Le conservateur peut être choisi parmi le formiate de sodium, l’acide sorbique, l’acide formique, le diformiate de potassium, le formiate de calcium, le bisulfate de sodium, le sorbate de potassium, l’acide acétique, le diacetate de sodium, l’acétate de calcium et l’acétate de prényle.
L’abaisseur de pH peut être choisi parmi un acide organique ou inorganique, de préférence, un acide inorganique, tel que par exemple l’acide phosphorique, l’acide citrique, l’acide fumarique, l’acide acétique, l’acide sorbique, l’acide propionique.
Pour terminer, une étape de filtration est réalisée afin de retirer les particules résiduelles de cuticules.
Le produit fini obtenu est un hydrolysat (ou composition aqueuse hydrolysée) présentant une matière sèche comprise entre 20-25%.
Figure imgf000019_0001
selon l’invention
L’hydrolysat obtenu à l’Exemple 1 a été caractérisé comme suit. 1. Analyses
1.1 Détermination du taux d’humidité
Le taux d’humidité a été déterminé selon la méthode issue du règlement CE 152/09.
• 1 .2 Détermination de la quantité de protéines
Le taux de protéines a été déterminé selon la méthode Kjeldahl, du règlement CE 152/2009, avec un facteur de conversion N en protéines de 6,25.
• 1.3 Détermination de la quantité de lipides
La quantité de lipides a été déterminée selon le règlement CE 152/2009.
• 1 .4 Détermination de la quantité de cendres
Le taux de cendres a été déterminé selon le règlement CE 152/2009.
• 1.5 Détermination de la quantité de fibres
Le taux de fibres (solubles et insolubles) a été déterminé selon la méthode AOAC 985.29.
• 1.6 Détermination de la quantité en acides aminés
La quantité en acides aminés totaux et libres a été déterminée selon la norme ISO 13903:2005 (pour les acides aminés totaux et libres sauf le tryptophane) et le règlement CE 152/2009 (pour le tryptophane).
La quantité en acides aminés libres a été déterminée selon la norme ISO 13903:2005.
• 1.7 Détermination de la digestibilité pepsique
La digestibilité pepsique a été déterminée selon les méthodes AOAC 971.09 (digestibilité pepsique à 0.02% (Gravimétrie)) et AOAC 992.15; AOAC 990.03; AOCS Ba 4e-93 (combustion des protéines).
• 1.8 Détermination de la digestibilité iléale
La digestibilité iléale a été déterminée selon les méthodes BOISEN (pour le dosage des enzymes) et selon la méthode Dumas (pour la teneur en protéines).
• 1.9 Détermination de la quantité de protéines solubles et insolubles
La quantité de protéines solubles a été déterminée par solubilisation desdites protéines dans une solution constituée de 30% d’acétonitrile, 70% d’eau ultra pure et 0,1 % d’acide trifluoroacétique (« solution ACN/eau/TFA »), ces pourcentages étant des pourcentages en volume sur le volume total de solution, qui constitue la phase mobile avant dosage par HPLC-SEC (méthode de chromatographie d’exclusion stérique connue de l’homme du métier). La quantité de protéines insolubles a été déterminée par le résidu sec obtenu après dissolution d’un échantillon d’hydrolysat séché dans la solution ACN/eau/TFA, et rapporté au poids sec initial.
• 1.10 Détermination de la taille des protéines
La taille des protéines a été déterminée par HPLC-SEC.
• 1.11 Détermination de la quantité en minéraux
La teneur en chacun des minéraux listés dans le tableau 8 ci-dessous, a été déterminée par ICP/AES (spectrométrie d’émission atomique - plasma à couplage inductif).
• 1.12 Détermination de la quantité des vitamines
La teneur en chlorhydrate de thiamine (vitamine B1-HCI) a été déterminée selon la méthode BS EN 14122-2014.
La teneur en vitamine B12 (cyanocobalamine) a été déterminée selon la méthode AOAC 952.20.
La teneur en riboflavine (vitamine B2) a été déterminée selon la méthode EN 14152:2014.
La teneur en niacine (vitamine B3) a été déterminée selon la méthode EN 15652:2009.
La teneur en acide pantothénique (vitamine B5) a été déterminée selon la méthode AOAC 2012.16.
La teneur en pyridoxine (vitamine B6) a été déterminée selon la méthode EN 14164:2014.
La teneur en phylloquinone (vitamine K1) a été déterminée selon la méthode EN 14148:2003.
2. Résultats
Les caractéristiques de l’hydrolysat selon l’invention sont présentées dans les tableaux 2 à 8 dessous.
[Table 2]
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Résultats moyens calculés sur 20 hydrolysats, sauf pour les fibres où une unique mesure a été faite.
Tableau 2 : Composition de l’hydrolysat
• Protéines et acides aminés
[Table 3]
Figure imgf000022_0002
*g/100g : g/100g d’hydrolysat en poids sec **résultats moyens calculés sur plusieurs hydrolysats Tableau 3 : Teneur en acides aminés dans l’hydrolysat
[Table 4]
Figure imgf000022_0003
Figure imgf000023_0001
*g/100g : g/100g d’hydrolysat en poids sec **résultats moyens calculés sur plusieurs hydrolysats Tableau 4 : Teneur en acides aminés libres [Table 5]
Figure imgf000023_0002
Figure imgf000024_0001
Tableau 5 : Taille des protéines hydrosolubles
[Table 6]
Figure imgf000024_0002
Figure imgf000025_0001
^résultats moyens calculés sur plusieurs hydrolysats
Tableau 7 : Teneur en vitamines
[Table 8]
Figure imgf000025_0002
^résultats moyens calculés sur plusieurs hydrolysats
Tableau 8 : Teneur en minéraux
Exemple 3 : Introduction de l’hydrolysat selon l’invention dans l’alimentation des poissons (truites arc-en-ciel) a. Matériels et Méthodes
Un régime à base de farine de poisson (CTRL) a été formulé avec des ingrédients répondant aux besoins nutritionnels connus des truites arc-en-ciel. Sur la base de ce régime, un autre régime comprenant l’hydrolysat obtenu selon l’exemple 1 a été réalisé (voir le tableau 9 ci- dessous). [Table 9]
Figure imgf000026_0001
*% de matière sèche par rapport au poids total de la composition
1 Prémix : il s’agit d’un prémélange de vitamines et minéraux comprenant les ingrédients suivants : Hydrotoluène butylé (BHT) (E 321) 20.000 mg, Silice colloïdale (E 551 b) 176,700 mg, Sépiolite (E 562) 370,600 mg, vitamine B2 3,000 mg, Vitamine B12 10 mg, Nicotinamide (3a315) 20,000 mg , Acide folique (3a316) 1 ,500 mg, Vitamine D3 (3a671) 200,000 Ul, Vitamine A (3a672a) 2 000 000 Ul , Vitamine E (3a700) 10,000 mg, Vitamine K3 (3a710) 2,500 mg, Vitamine B1 (3a821) 3,000 mg, Vitamine B6/ chlorhydrate de pyridoxine (3a831) 2,000 mg, Pantothénate de D-calcium (3a841) 10,000 mg, Biotine (3a880) 300 mg, Inositol (3a900) 50,000 mg, Bétaïne anhydre (3a920) 50,000 mg, Fer (sulfate de fer (II), monohydraté) (3b103) 600 mg, Iode (iodure de potassium) (3b201) 50 mg, Manganèse (oxyde de manganèse (II)) (3b502) 960 mg, Zinc (sulfate de zinc, monohydrate) (3b605) 750 mg, Cuivre (sulfate de cuivre, pentahydrate) (E 4) 900 mg, Sélénium (sélénite de sodium) (E 8) 1 mg.
Tableau 9 : Composition des régimes expérimentaux
Ces deux régimes ont été fabriqués par extrusion selon des techniques usuelles connues de l’homme du métier de sorte à obtenir des granulés ayant une taille de 2 à 4 mm.
Lors de l’extrusion, les aliments sont séchés puis refroidis.
Pour les granulés selon le régime CTRL, les granulés sont obtenus par extrusion d’une composition préparée à partir de la farine de poisson LT, du gluten de blé, du concentré de soja, de la lécithine de soja, de la farine de blé, du prémix, de la gomme de guar et de l’hémoglobine selon les quantités indiquées dans le tableau 8, qui sont mélangés en vue de l’extrusion. Puis, à l’issue de l’extrusion, après refroidissement des granulés extrudés, 7% en poids supplémentaire d’huile de poisson est ajoutée par revêtement sous vide.
Pour les granulés selon l’invention, les granulés sont obtenus par extrusion d’une composition préparée à partir de la farine de poisson LT, du gluten de blé, du concentré de soja, de la lécithine de soja, de la farine de blé, du prémix, de la gomme de guar et de l’hémoglobine selon les quantités indiquées dans le tableau 8, qui sont mélangés en vue de l’extrusion. Puis, à l’issue de l’extrusion, après refroidissement des granulés extrudés, deux revêtements successifs sont réalisés selon les étapes suivantes :
1ère étape : ajout de l’hydrolysat (4% en poids de la composition à une teneur de 25% en matière sèche soit 1% de matière sèche par rapport au poids total de la composition des granulés) sur les granulés extrudés par revêtement sous vide, 2ème étape : séchage à faible température du granulé revêtu par l’hydrolysat, 3ème étape : ajout de 7% en poids supplémentaire d’huile de poisson par revêtement sous vide. b. Essai sur la performance de croissance
Chaque régime alimentaire a été testé en quatre exemplaires (4 réservoirs par régime).
Les truites arc-en-ciel ont été acclimatées pendant 15 jours avant le début de l'essai de croissance, après quoi 25 truites d'un poids moyen de 20 à 30 g ont été répartis au hasard dans chaque réservoir (20 réservoirs au total). Les réservoirs utilisés sont cylindriques en fibre de verre (volume : 500 L) reliés à un système d'aquaculture en recirculation (RAS).
Les réservoirs sont alimentés en eau douce à des températures comprises entre 15 ± 1 °C, présentant des niveaux d’oxygène dissous supérieur à 7 ± 1 mg/L. Les concentrations d'ammonium et de nitrite dans l'eau ont été contrôlées quotidiennement pour les maintenir en dessous des valeurs toxiques. Les poissons sont soumis à un cycle de photopériode lumière/obscurité de 12 heures.
Les poissons ont été nourris à la main jusqu'à satiété apparente une fois par jour pendant 84 jours (entre 8h00 et 9h00) jusqu'à un maximum de 3 % de l'apport alimentaire en biomasse journalier.
Après 84 jours d’alimentation expérimentale, tous les poissons de chaque réservoir ont été échantillonnés, anesthésiés au MS222 et la performance de croissance a été évaluée.
Paramètres mesurés pour l’évaluation de la croissance :
PCI (g) : Poids corporel initial
PCF (g) : Poids corporel final
TCS (%/jour) : Taux de croissance spécifique = [(In PCF-ln PCI)/jours] x 100 LTI (cm) : Longueur totale initiale Tl
LTF (cm) : Longueur totale finale
GP (%) : Gain de poids = [(PCF-PCI)/PCI] x 100
RCA : Ratio de conversion alimentaire = [apport alimentaire total (g)/GP (g)]
PAJ (%poids corporel/jour) : Prise alimentaire journalière = (prise alimentaire brute / (PCI +PCF) / 2 / jours) x 100
Résultats :
[Table 10]
Figure imgf000028_0001
*Par « Hydrolysat » on désigne le régime alimentaire comprenant l’hydrolysat selon l’invention. Tableau 10 : Résultats sur la performance de croissance des poissons
Les valeurs sont exprimées en moyenne ± l'écart-type (n=4).
Les astérisques indiquent des différences significatives entre les groupes expérimentaux et le groupe témoin CTRL (test t de Student, P < 0,05 ; n = 4).
Conclusion :
Au bout de 84 jours d’alimentation expérimentale, on constate que pour une prise journalière équivalente, le poids corporel ainsi que la longueur corporelle des poissons alimentés par les granulés selon l’invention ont significativement augmenté par rapport aux poissons alimentés par les granulés CTRL (voir figure 1).
Ainsi, les inventeurs ont démontré que l’utilisation de l’hydrolysat selon l’invention à un dosage très faible (1% en matière sèche) a un impact significatif sur la croissance des poissons.
Exemple 4 : Introduction de l’hydrolysat selon l’invention dans l’alimentation des poissons (saumon) a. Matériels et méthodes
L’hydrolysat décrit aux exemples 1 et 2 est utilisé. Des granulés alimentaires d’une taille de 2 mm disponibles dans le commerce et provenant de Skretting AS (RCX) ont été utilisés comme base pour la production de deux régimes alimentaires, détaillés ci-dessous. Ces granulés comprennent notamment 49% en poids de protéines, 22% en poids de lipides et 9% en poids de cendres. Sur la base de cette formulation, un régime test a été formulé, dans lequel 1% d’hydrolysat a été ajoutée par enrobage.
Enfin, les deux régimes alimentaires ont été préparés en enrobant les granulés d'eau afin d'équilibrer la teneur en eau moyenne à environ 13 % en poids sur le poids total de granulés.
Les essais ont été réalisés sur des saumons. Au total, 320 saumons de l'Atlantique d'un poids moyen de 17g ont été répartis au hasard dans 6 réservoirs d'un volume de 80L (un poids moyen de 16,63-16,70g par réservoir). Chaque régime alimentaire a été donné à trois réservoirs en excès d'appétit.
L'expérience a été menée pendant 3 semaines.
Evaluation de la croissance
Tous les poissons ont été pesés individuellement au début de l'expérience et à la récolte (fin de l’expérience).
Évaluation des fèces
À la fin de l'expérience, 10 poissons par réservoir ont été choisis au hasard pour l’apparence des fèces.
La consistance des fèces a été analysée visuellement et évaluée selon une échelle allant de 1 à 4, où le score 1 : solide et ferme, le score 2 : semi-solide, digestat mou, le score 3 : diarrhée, digestat coulant, le score 4 : plâtres jaunes ou non blancs de matières non alimentaires/pas de digestat.
Le digestat correspond à la matière résiduelle issue de la méthanisation (digestion anaérobie). b. Résultats
Evaluation de la croissance
Le poids corporel a augmenté de 2,2 fois au cours de la période expérimentale, passant de 17 g à 38,5 - 39,5 g, correspondant à un taux de croissance (SGR) de 3,48 - 3,58. Corne mis en évidence par la Figure 2, le rendement à l'abattage était significativement inférieur pour le contrôle (82,7 %) par rapport au régime comportant l’hydrolysat (83,7 %).
Évaluation des fèces
La consistance la plus molle est observée pour le groupe CTRL (Tableau 11 , figure 3, bâton de gauche).
[Table 11]
Figure imgf000030_0001
*Par « Hydrolysat », on désigne le régime alimentaire comprenant l’hydrolysat selon l’invention.
Tableau 11 : Score moyen des fèces.
Comme cela peut être constaté sur la figure 3 et le Tableau 11 , l'inclusion dans le régime alimentaire de saumons, d’un hydrolysat a amélioré significativement la consistance des matières fécales par rapport au régime alimentaire de contrôle. En effet, par rapport au régime alimentaire de contrôle, le régime alimentaire comportant l’hydrolysat de T. molitora amélioré la proportion de fèces solides (score 1), comprise entre 70% et 80% respectivement, contre 40% pour le régime alimentaire de contrôle.
L'incidence plus faible des selles semi-solides rend l’hydrolysat selon l’invention intéressant dans la supplémentation en alimentation animale, notamment pour une application dans l’aquaculture, qui nécessite d’avoir une qualité d'eau élevée pour éviter de détériorer les biofiltres.
Les données expérimentales générées dans cet exemple permettent d’affirmer que la supplémentation dans l’alimentation animale avec l’hydrolysat selon l’invention améliore significativement la consistance des fèces.
Exemple 5 : Introduction de l’hydrolysat selon l’invention dans l’alimentation des poissons (saumon) a. Matériel et méthode
Le procédé décrit dans l’exemple 1 a été reproduit et a permis d’obtenir un hydrolysat présentant les caractéristiques suivantes :
Figure imgf000030_0002
Tableau 12: Composition de l’hydrolysat Un régime contrôle (CTRL2) a été formulé avec des ingrédients répondant aux besoins nutritionnels connus des saumons. Sur la base de ce régime, un autre régime comprenant l’hydrolysat décrit au tableau 12 été réalisé (voir le tableau 13 ci-dessous).
Figure imgf000031_0001
*% de matière sèche par rapport au poids total de la composition
1 Farine de poisson : de la société Pelagia Norvège, référence : PA/ES/21/003, comprenant 70,5% de protéines brutes et 9,4% de matière grasse brute.
2 Prémix : il s’agit d’un prémélange de vitamines et minéraux comprenant les ingrédients suivants :
Vitamine A 500 000 Ul ; Vitamine D3 300 000 Ul ;Vitamine E 40 000 Ul ;Vitamine K3 2 000 mg ;Vitamine B1 3 000 mg ; Vitamine B2 5 000 mg ; Calcium D- pantothenate 8 OOOmg ; Niacinamide 15 000 mg ; Vitamine B6 3 000 mg ;Acide folique 1 000 mg ; Vitamine B12 5 000 mg ; Vitamine C 25 000 mg ; Biotine 55 000 mg ;iodate de calcium, anhydre, iode 600.0 mg ; oxyde de manganèse, manganèse 3 000.0 mg ; oxyde de zinc, zinc 21000.0 mg.
Tableau 13 : Composition des régimes expérimentaux
Figure imgf000031_0002
Figure imgf000032_0001
Les régimes détaillés au tableau 12 ont été fabriqués par extrusion selon des techniques usuelles connues de l’homme du métier de sorte à obtenir des granulés ayant une taille de 2 mm.
Les granulés sont obtenus en mélangeant dans un premier temps du concentré de protéines de soja, de la farine de poisson, du gluten de blé, de la fécule de pomme de terre, du pémix, de la lysine, de la méthionine, du phosphate monocalcique, de l’oxyde d’ytrium, du chlorure de choline selon les teneurs indiquées dans le tableau 13, dans un mélangeur de pâte Spiry 25. Dans un second temps, l’huile de poisson et l’hydrolysat (pour le régime selon l’invention) ont été ajoutées au mélange. Dans un troisième temps de la gélatine activée à 60°C a également été ajoutée au mélange. La pâte ainsi obtenue a été transformée en granulés, à froid, à l’aide d’une extrudeuse. Les granulés ont été séchés à 45°C jusqu’à obtenir une teneur en matière sèche d’environ 93%.
Ainsi, dans ce mode de réalisation, l’hydrolysat est mélangé aux autres ingrédients constituant l’aliment (granulé) avant extrusion.
Chaque régime alimentaire a été testé en trois exemplaires (3 réservoirs par régime).180 saumons d’Atlantique d’un poids moyen de 20,3 ± 0,3 g ont été répartis au hasard dans chaque réservoir (6 réservoirs ayant un volume de 80L chacun). Les réservoirs sont reliés à un système d'aquaculture en recirculation (RAS). Les réservoirs sont alimentés en eau douce à une température d’eau comprise entre 13,3 et 15,3 °C (avec une température moyenne de 14,1°C).
Chaque régime a été donné en excès d'appétit et les aliments non consommés ont été collectés pour calculer avec précision le ratio de conversion alimentaire (RCA ou Feed Conversion Rate).
10 saumons par réservoir ont été sélectionnés afin d’évaluer leur performance de croissance. Après 58 jours d’alimentation expérimentale, ces 10 saumons ont été euthanasiés par overdose d’anesthésiant. b. Résultats
Evaluation de la croissance
Les 10 saumons sélectionnés ont été pesés au début de l’expérience puis à la récolte (fin de l’expérience). Leur taille a été mesurée à la récolte.
Figure imgf000033_0001
*Par « Hydrolysat » on désigne le régime a imentaire comprenant l’hydrolysat selon l’invention Tableau 15 : Résultats sur la performance de croissance des saumons
Les valeurs sont exprimées en moyenne ± l'écart-type (n=3). En l’espèce, l’écart type est égal à l’erreur standard.
Les astérisques indiquent des différences significatives entre les groupes expérimentaux et le groupe témoin CTRL2 (test t de Student, P < 0,05 ; n = 3).
D’après les résultats présentés ci-dessus, on constate que le poids corporel des saumons nourris avec les granulés comprenant l’hydrolysat a été multiplié par 5. En outre, on observe que pour une prise alimentaire journalière équivalente (RCA de 0,67 pour le groupe CTRL2 et pour le groupe nourris avec le régime comprenant l’hydrolysat), le poids et la longueur des saumons nourris avec les granulés selon l’invention ont significativement augmentés par rapport aux saumons nourris avec les granulés CLTRL2. En effet, une différence significative en poids corporel de 14,3% a été obtenue (voir tableau 15 et Figure 4a).
Score graisse autour des viscères et poids éviscérés
A la fin de l’expérience, la quantité de graisse autour des viscères des saumons testés a été déterminée en application d’une méthode de détermination visuelle telle que détaillée ci- dessous :
La quantité de graisse viscérale a été notée de 1 à 5 en fonction de la visibilité des caeca pyloriques (figure 5)).
- un score de 1 : caeca pyloriques clairement visible,
- un score de 2 : caeca pyloriques visible,
- un score de 3 : caeca pyloriques visible sous forme de fissures dans la graisse viscérale,
- un score de 4 : caeca pyloriques visible à travers la graisse viscérale,
- un score de 5 : caeca pyloriques non visible.
Ainsi, plus le score est faible et moins il y a de graisse autour des viscères.
En outre, le poids éviscéré des saumons a également été mesuré. Les résultats sont présentés dans le tableau 16 ci-dessous.
Figure imgf000034_0001
*Par « Hydrolysat » on désigne le régime alimentaire comprenant l’hydrolysat selon l’invention
Tableau 16 : Résultats sur le dépôt de graisse autour des viscères
D’après ces résultats, on constate que bien qu’il n’y ait pas de différence significative entre les saumons nourris avec les granulés du groupe CTRL2 et ceux nourris avec les granulés selon l’invention, ces derniers ont tendance à avoir un poids éviscéré plus élevé.
En outre, on observe qu’il n’y a pas de différence significative en ce qui concerne le dépôt de graisse autour des viscères.
On peut donc conclure de l’ensemble de ces résultats que les saumons nourris avec les granulés selon l’invention présentent une croissance significativement plus importante en terme de poids et de longueur sans devenir gras. Ainsi, un régime alimentaire pour poisson comprenant l’hydrolysat selon l’invention augmente spécifiquement la croissance de la masse musculaire corporelle en plus de la longueur corporelle sans entrainer d’accumulation de graisse autour des viscères. De ce fait, l’hydrolysat selon l’invention permet d’accroitre considérablement la croissance des poissons tout en les maintenant dans de bonnes conditions physiques, et améliore ainsi la valeur nutritionnelle des poissons nourris avec des granulés comprenant l’hydrolysat selon l’invention.

Claims

Revendications
1 . Hydrolysat obtenu à partir d’insectes, comprenant au moins 50% en poids de protéines, au moins 7% en poids de lipides, au moins 10,5% en poids de cendres, les pourcentages en poids étant indiqués sur le poids sec de l’hydrolysat, et une teneur en matière sèche comprise entre 15 et 35% en poids, le pourcentage étant donné sur le poids de l’hydrolysat.
2. Hydrolysat selon la revendication 1 , dans laquelle les insectes sont des coléoptères.
3. Hydrolysat selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant un taux de fibres compris entre 1 et 5% en poids sur le poids sec de l’hydrolysat.
4. Hydrolysat selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant des protéines hydrosolubles, 75 % des protéines hydrosolubles présentant une taille inférieure à 12400 g/mol, sur le poids total de protéines hydrosolubles.
5. Hydrolysat selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant un ou plusieurs additifs choisis parmi un conservateur et/ou un abaisseur de pH.
6. Hydrolysat selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant 40 à 60% en poids de protéines insolubles, le pourcentage en poids étant exprimé par rapport au poids total de protéines.
7. Procédé de préparation d’un hydrolysat à partir d’insectes comprenant les étapes suivantes : a) Séparation des cuticules et de la partie molle des insectes, b) Séparation de la partie molle des insectes en une fraction aqueuse, une fraction huileuse et une fraction solide protéique, et c) Hydrolyse enzymatique de la fraction solide protéique.
8. Procédé selon la revendication 7, comprenant en outre une étape d’abattage des insectes, préalablement à l’étape de séparation des cuticules de la partie molle.
9. Procédé selon la revendication 7 ou 8, comprenant en outre une étape de maturation de la partie molle des insectes, entre l’étape de séparation des cuticules de la partie molle et l’étape de séparation de la partie molle des insectes en une fraction huileuse, une fraction solide et une fraction aqueuse.
10. Procédé selon l’une des revendications 7 à 9, comprenant en outre une étape de stabilisation de la fraction solide protéique hydrolysée obtenue à l’étape c), par ajout d’un ou plusieurs additifs choisis parmi un conservateur et/ou un abaisseur de pH.
11 . Utilisation de l’hydrolysat selon les revendications 1 à 6, dans un aliment pour animaux.
12. Utilisation selon la revendication 11 , dans laquelle l’aliment est sous forme de granulés, de paillettes, de pâté, de croquettes ou de friandises.
13. Utilisation selon l’une des revendications 11 ou 12, dans laquelle l’aliment comporte de 1 % à 20% en poids de l’hydrolysat, le pourcentage en poids étant indiqué sur le poids de l’aliment.
14. Utilisation selon l’une des revendications 11 à 13, pour améliorer la croissance des poissons d’élevage.
15. Utilisation selon l’une des revendications 11 à 13, pour l’amélioration de la consistance des fèces.
16. Aliment pour animaux comportant 1 à 20% en poids de l’hydrolysat selon les revendications 1 à 6, le pourcentage en poids étant donné sur le poids de l’aliment.
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