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WO2023106319A1 - 抗ｉｌ－２３抗体誘導用ワクチン組成物 - Google Patents

抗ｉｌ－２３抗体誘導用ワクチン組成物 Download PDF

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Publication number
WO2023106319A1
WO2023106319A1 PCT/JP2022/045045 JP2022045045W WO2023106319A1 WO 2023106319 A1 WO2023106319 A1 WO 2023106319A1 JP 2022045045 W JP2022045045 W JP 2022045045W WO 2023106319 A1 WO2023106319 A1 WO 2023106319A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
peptide
cell receptor
vaccine composition
receptor antigen
antigen peptide
Prior art date
Application number
PCT/JP2022/045045
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
啓徳 中神
宏樹 林
竜一 森下
誠 坂口
壮大朗 川畑
Original Assignee
国立大学法人大阪大学
株式会社ファンペップ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人大阪大学, 株式会社ファンペップ filed Critical 国立大学法人大阪大学
Priority to JP2023566334A priority Critical patent/JPWO2023106319A1/ja
Priority to EP22904247.8A priority patent/EP4445910A1/en
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Definitions

  • the present invention relates to vaccine compositions, and more particularly to vaccine compositions capable of inducing antibodies against IL-23 in vivo.
  • Non-Patent Documents 1 and 2 Chronic inflammation is known to be involved in the development of a wide variety of chronic diseases, and it has been reported that IL-23 is the starting point for chronic inflammation (Non-Patent Documents 1 and 2).
  • IL-23 is a heterodimer consisting of two subunit proteins, p19 and p40, and is classified as an inflammatory cytokine. IL-23 is involved in inducing proliferation of memory T cells and also contributes to promoting and stabilizing the differentiation of naive T cells into Th17 cells. Th17 cells differentiated and stabilized by IL-23 secrete multiple types of cytokines and inflammatory effectors to promote chronic inflammation.
  • Non-Patent Document 3 Non-Patent Document 3
  • IL-23 is involved in the development and progress of various diseases through chronic inflammation. Much knowledge is being accumulated.
  • Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease caused by Th17 cell abnormalities.
  • Th17 cells are stimulated by IL-23, and the Th17 cells release the inflammatory cytokines IL-17 and IL-22, thereby causing an inflammatory response.
  • the prevalence of psoriasis is estimated at 0.9-11.43% (WHO report, 2016).
  • Most patients with psoriasis have mild to moderate psoriasis, but patients with severe psoriasis have complications such as serious skin symptoms and psoriatic arthritis, and their QOL is extremely low.
  • Anti-TNF- ⁇ antibodies, anti-IL-17 antibodies or anti-IL-23 antibodies are administered when sufficient therapeutic effects cannot be obtained with standard treatments, especially anti-IL-23 antibody drugs have been clinically confirmed to be highly efficacious (Ustekinumab (trade name: Stelara®), which targets the p40 subunit; Risankizumab (trade name, SKYRIZI®), which targets the p19 subunit; ), Guselkumab (trade name Tremefia®) and Tildrakizumab (trade name Ilumya®), etc.).
  • Stelara® trade name: Stelara®
  • Risankizumab trade name, SKYRIZI®
  • Guselkumab trade name Tremefia®
  • Tildrakizumab trade name Ilumya®
  • a peptide vaccine containing a peptide fragment at the junction of ⁇ -loop C and ⁇ -loop D of the mouse IL-23 p19 subunit is effective in mouse models of collagen-induced arthritis (CIA) and TNBS-induced colitis. It has been reported that it showed the property (Non-Patent Documents 4 and 5). Furthermore, in Patent Document 1, various peptide fragments contained in the corresponding sites in the human IL-23 p19 subunit were examined in detail and identified as B cell epitopes capable of inducing anti-IL-23 neutralizing antibodies. are doing.
  • these peptide vaccines use proteins such as keyhole limpet hemocyanin (KLH) and virus-like particles (VLP) as carriers to enhance their immunogenicity, which results in high production costs and anti-immunity.
  • KLH keyhole limpet hemocyanin
  • VLP virus-like particles
  • Adjuvants are used in combination, and there are safety risks.
  • the present invention provides a novel anti-IL-23 antibody that has sufficient antigenicity in vivo and can efficiently induce anti-IL-23 antibodies without conjugating a carrier protein or using an adjuvant.
  • An object of the present invention is to provide a peptide vaccine.
  • a T-cell receptor antigen peptide having a specific amino acid sequence and a specific amino acid sequence in IL-23 p19 protein positions 151 to 158 of human p19; (corresponding to positions 152-159 of mouse p19) or a partially modified sequence thereof, can induce anti-IL-23 neutralizing antibodies very efficiently in vivo. rice field.
  • Patent Document 1 contains a peptide fragment consisting of the amino acid sequence of positions 152 to 159 of human p19, with the position in human p19 shifted by one amino acid to the C-terminal side (thus, 7 amino acids out of 8 amino acids are common).
  • a vaccine composition capable of inducing the production of antibodies against IL-23 comprising a complex of a T-cell receptor antigen peptide and a B-cell receptor antigen peptide, wherein the B-cell receptor antigen peptide has the following formula: (I): X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 (I)
  • X1 is S, A, G, T, K or R
  • X2 is P, A, G, S, T, K or R
  • X3 is S, A, G, T, K or R
  • X4 is Q, A, G, T or N
  • X5 is P, A, G, S, T, Q or N
  • X6 is W, A, Y or F
  • X7 is Q, A, G, T or N
  • a vaccine composition wherein X8 is R, A, G or K.
  • Item [2] The vaccine composition according to item [1], wherein the N-terminal amino acid of the conjugate is acetylated and/or the C-terminal amino acid of the conjugate is amidated.
  • Item [3] The vaccine composition according to item [1] or [2], wherein X6 is W in the B-cell receptor antigen peptide.
  • Item [4] The vaccine composition according to any one of items [1] to [3], wherein X7 is Q in the B cell receptor antigen peptide.
  • Item [5] The vaccine composition according to any one of items [1] to [4], wherein X8 is R in the B cell receptor antigen peptide.
  • Item [6] The vaccine composition according to any one of items [1] to [5], wherein the B-cell receptor antigen peptide comprises an amino acid sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 2, 6-14 and 17-26.
  • item [7] The vaccine composition according to any one of items [1] to [6], wherein the T-cell receptor antigen peptide comprises the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:38.
  • item [8] The vaccine composition according to any one of items [1] to [7], wherein the conjugate is bound between the C-terminus of the T-cell receptor antigen peptide and the N-terminus of the B-cell receptor antigen peptide. .
  • Item [9] The vaccine composition according to any one of items [1] to [8], wherein the T-cell receptor antigen peptide and the B-cell receptor antigen peptide are linked via a linker.
  • item [10] The vaccine composition according to item [9], wherein the linker is an amino acid or a peptide.
  • item [12] The vaccine composition according to any one of items [1] to [11] for treatment or prevention of IL-23-related diseases.
  • IL-23-related disease is psoriasis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, diabetes (preferably type I diabetes), atherosclerosis, inflammatory bowel disease (IBD)/Crohn's disease, multiple sclerosis , Behcet's disease, ankylosing spondylitis, Voigt-Koyanagi-Harada disease, chronic granulomatosis, hidradenitis suppurativa, antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-associated vasculitis, neurodegenerative disease, atopic dermatitis, graft
  • the vaccine composition according to item [12] which is selected from the group consisting of disease versus host and cancer.
  • Section [1A] A method of inducing the production of antibodies to IL-23 in a subject, comprising administering to the subject an effective amount of a complex of a T-cell receptor antigen peptide and a B-cell receptor antigen peptide,
  • the receptor antigen peptide has the following formula (I): X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 (I)
  • X1 is S, A, G, T, K or R
  • X2 is P, A, G, S, T, K or R
  • X3 is S, A, G, T, K or R
  • X4 is Q, A, G, T or N
  • X5 is P, A, G, S, T, Q or N
  • X6 is W, A, Y or F
  • X7 is Q, A, G, T or N
  • the method wherein X8 is R, A, G or K.
  • Section [1B] A conjugate of a T-cell receptor antigen peptide and a B-cell receptor antigen peptide for use in inducing the production of antibodies to IL-23, wherein the B-cell receptor antigen peptide has the following formula (I) : X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 (I)
  • X1 is S, A, G, T, K or R
  • X2 is P, A, G, S, T, K or R
  • X3 is S, A, G, T, K or R
  • X4 is Q, A, G, T or N
  • X5 is P, A, G, S, T, Q or N
  • X6 is W, A, Y or F
  • X7 is Q, A, G, T or N
  • a conjugate wherein X8 is R, A, G or K.
  • Section [1C] Use of a conjugate of a T-cell receptor antigen peptide and a B-cell receptor antigen peptide in the manufacture of a medicament for treating or preventing an IL-23-related disease, wherein the B-cell receptor antigen peptide comprises: Formula (I): X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 (I)
  • X1 is S, A, G, T, K or R
  • X2 is P, A, G, S, T, K or R
  • X3 is S, A, G, T, K or R
  • X4 is Q, A, G, T or N
  • X5 is P, A, G, S, T, Q or N
  • X6 is W, A, Y or F
  • X7 is Q, A, G, T or N
  • the use wherein X8 is R, A, G or K.
  • X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 (I)
  • X1 is S, A, G, T, K or R
  • X2 is P, A, G, S, T, K or R
  • X3 is S, A, G, T, K or R
  • X4 is Q, A, G, T or N
  • X5 is P, A, G, S, T, Q or N
  • X6 is W, A, Y or F
  • X7 is Q, A, G, T or N
  • a B-cell receptor antigen peptide wherein X8 is R, A, G or K.
  • the production of anti-IL-23 antibodies can be very efficiently induced in vivo without using carrier proteins or adjuvants. Therefore, inexpensive and safe treatment and/or prevention of diseases associated with IL-23 becomes possible.
  • FIG. 1(a) is a schematic diagram of each AJP001 conjugate peptide used in Example 1.
  • FIG. 1(b) is a graph showing the antibody titer of antiserum collected 5 weeks after the first administration of the peptide from mice administered with each AJP001 conjugate peptide in Example 1.
  • FIG. 1(c) is a graph showing the binding ability to rmIL-23 of the blood serum of mice administered with each AJP001 conjugate peptide in Example 1, collected 5 weeks after the first administration of the peptide.
  • FIG. 2 shows the results of a mouse immunogenicity evaluation test using the AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 2).
  • FIG. 1(b) is a graph showing the antibody titer of antiserum collected 5 weeks after the first administration of the peptide from mice administered with each AJP001 conjugate peptide in Example 1.
  • FIG. 1(c) is a graph showing the binding ability to rmIL-23 of the blood serum of mice
  • FIG. 2(a) is a graph showing antibody titers (GMT) of sera collected over time from mice to which AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 2) was administered.
  • FIG. 2(b) is a graph showing the binding ability to rmIL-23 of serum collected from mice administered with AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 2) 6 weeks after the initial administration.
  • Figures 2(c) and (d) show the results of T cell activation evaluation (number of IFN- ⁇ -positive cells and number of IL-4-positive cells) in mice administered with AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2). is.
  • FIG. 3 is a diagram showing the results of a drug efficacy evaluation test on a mouse psoriasis model using the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) in Example 3.
  • FIG. 3(a) is a graph showing antibody titers in sera collected from hairless rats to which AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) was administered 6 weeks after the first administration.
  • FIG. 3(b) shows the time course of ear inflammatory reaction (increase in ear thickness and inflammatory changes in tissue) in the group administered with the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) and in the vehicle control group.
  • FIG. 3(c) is a photograph of HE-stained specimens of auricles prepared under each condition.
  • FIG. 3(d) is a graph showing the results of microscopic observation of HE-stained specimens of auricles prepared under each condition, and scoring of inflammatory cell infiltration, edema, and hyperplasia.
  • FIG. 4 is a diagram showing the results of efficacy evaluation test for IL-23-induced mouse ear inflammation model using AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) in Example 4.
  • FIG. 4(a) is a diagram showing temporal changes in auricle thickness under each condition.
  • FIG. 4(b) is a graph showing mRNA expression of IL-17A, IL-22, IL-1 ⁇ , LCN-2 and CXCL-2 in auricle under each condition.
  • FIG. 5 shows the results of a mouse immunogenicity evaluation test using the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) in Example 6.
  • FIG. 5(a) is a graph showing antibody titers (GMT) of sera collected over time from mice to which AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 6) was administered.
  • FIG. 5(b) is a graph showing the binding ability to rhIL-23 of sera collected 6 weeks after the first administration from mice administered with the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6).
  • FIG. 5(c) and (d) show the results of T cell activation evaluation (IFN- ⁇ -positive cell count and IL-4-positive cell count) in mice administered with AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6).
  • FIG. 4 is a diagram showing;
  • FIG. 6 is a diagram showing the results of a drug efficacy evaluation test for IL-23-induced mouse ear inflammation model using AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) in Example 7.
  • FIG. FIG. 6(a) is a diagram showing changes in auricle thickness on the 3rd day and the 4th day under each condition.
  • FIG. 6(b) is a graph showing mRNA expression of IL-17A, IL-22, IL-1 ⁇ , LCN-2 and CXCL-2 in auricle under each condition.
  • 7 shows the results of a monkey immunogenicity evaluation test using the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) in Example 8.
  • FIG. 7(a) is a graph showing the antibody titers (GMT) of sera collected over time from cynomolgus monkeys to which the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) was administered.
  • FIG. 7(b) is a graph showing the binding ability to rhIL-23 and rmIL-23 of sera collected from cynomolgus monkeys administered with AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 6) 6 weeks after the first administration.
  • FIG. 7(c) is a graph evaluating the neutralizing activity of cynomolgus monkey-derived IgG to which the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) was administered.
  • FIG. 7(d) is a graph showing the results of epitope mapping of anti-IL-23 antibodies induced by AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO:6).
  • FIG. 8-1 is a diagram showing a drug efficacy evaluation test for a TNBS-induced mouse colitis model using the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) in Example 9.
  • FIG. 3 shows the results of measuring antibody titer (GMT) and binding to mIL-23 by ELISA.
  • GTT antibody titer
  • FIG. 3 shows the results of measuring antibody titer (GMT) and binding to mIL-23 by ELISA.
  • (c) shows changes in body weight before and after administration of TNBS in mice administered with AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 2) and then induced with TNBS for colitis.
  • FIG. 8-2 is a diagram showing a drug efficacy evaluation test for a TNBS-induced mouse colitis model using the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) in Example 9.
  • FIG. (d) is a diagram showing the results of measuring the length (cm) of the large intestine on Day 10 of mice administered with AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) and then induced with TNBS for colitis; It is a photograph. 8-3 shows a drug efficacy evaluation test for a TNBS-induced mouse colitis model using the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) in Example 9.
  • FIG. 10 is a diagram showing the results of the experiment. 8-4 shows a drug efficacy evaluation test for a TNBS-induced mouse colitis model using the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) in Example 9.
  • the vaccine composition of the present invention is capable of inducing the production of antibodies against IL-23, including complexes of T-cell receptor antigen peptides and B-cell receptor antigen peptides (thus treating or preventing IL-23-related diseases).
  • a vaccine composition (hereinafter sometimes referred to as a "vaccine composition of the invention") is provided.
  • the left end is the N-terminus (amino terminus) and the right end is the C-terminus (carboxyl terminus) according to the convention of peptide designation.
  • the peptide complex contained as an active ingredient in the vaccine composition of the present invention has a carboxyl group (—COOH), carboxylate (—COO ⁇ ), amide (—CONH 2 ) or ester (—COOR) at the C-terminus. There may be.
  • R in the ester includes, for example, C 1-6 alkyl groups such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl and n-butyl; C 3-8 cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl; C 6-12 aryl groups such as , ⁇ -naphthyl; phenyl-C 1-2 alkyl groups such as benzyl, phenethyl; C 7- such as ⁇ -naphthyl-C 1-2 alkyl groups such as ⁇ -naphthylmethyl 14 aralkyl group; pivaloyloxymethyl group and the like are used.
  • C 1-6 alkyl groups such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl and n-butyl
  • C 3-8 cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl
  • the peptide conjugate of the present invention includes those in which the carboxyl group is amidated or esterified.
  • the ester in this case, for example, the above-described C-terminal ester or the like is used.
  • the amino group of the amino acid residue at the N-terminus is protected with a protecting group (for example, a formyl group, a C 1-6 acyl group such as a C 1-6 alkanoyl such as an acetyl group, etc.).
  • a protecting group for example, a formyl group, a C 1-6 acyl group such as a C 1-6 alkanoyl such as an acetyl group, etc.
  • substituents on the side chains of amino acids in the molecule e.g., -OH, -SH, amino group, imidazole group, indole group, guanidino group etc.
  • an appropriate protecting group e.g, a C 1-6 acyl group such as a formyl group, a C 1-6 alkanoyl group such as an acetyl group, etc.
  • the peptide conjugate is acetylated at the amino group of the N-terminal amino acid residue and/or amidated at the C-terminal carboxyl group.
  • the peptide complex contained as an active ingredient in the vaccine composition of the present invention partially contains a B-cell receptor antigen peptide.
  • the B cell receptor is a receptor expressed on the surface of B cells. B cells stimulated by an antigenic peptide proliferate and secrete the B cell receptor as an antibody against the antigenic peptide.
  • the B-cell receptor antigen peptide in the vaccine composition of the present invention is Formula (I): X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 A peptide containing the amino acid sequence shown in, or a peptide consisting of the 8 amino acids,
  • X1 is S (serine), A (alanine), G (glycine), T (threonine), K (lysine) or R (arginine);
  • X2 is P (proline), A (alanine), G (glycine), S (serine), T (threonine), K (lysine) or R (arginine);
  • X3 is S (serine), A (alanine), G (glycine), T (threonine), K (lysine) or R (arginine);
  • X4 is Q (glutamine), A (alanine), G (glycine), T (threonine) or N (asparagine);
  • X6 in formula (I) can be W.
  • X7 in formula (I) can be Q.
  • X8 in formula (I) can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R or A;
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S, X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q, X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q (provided that when X2 is S, X5 is P, A or Q); X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S, X2 is P, S or T; X3 is S, X4 is Q, X5 is P, S, T or Q (if X2 is S then X5 is P or Q); X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S, X2 is P, A, S or T; X3 is S, X4 is Q or A; X5 is P, X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • the 8 amino acids represented by formula (I) can be any of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 2, 6-14 and 17-26.
  • a part of the complex contained in the vaccine composition of the present invention is a T cell receptor antigen peptide.
  • the T-cell receptor antigen peptide is not particularly limited as long as it forms a complex with MHC class II, is recognized by the CD3/TCR complex and CD4, and transmits a signal into CD3-positive cells.
  • MHC class II includes, for example, HLA-DR, HLA-DQ and HLA-DP in humans, H-2A or H-2B in mice, and ⁇ and ⁇ chains, respectively (for example, HLA-DR It is a dimer consisting of HLA-DRA as an ⁇ chain and HLA-DRB1) as a ⁇ chain, preferably HLA-DR, HLA-DQ or HLA-DP.
  • the T cell receptor antigen peptide is not particularly limited as long as it contains an epitope sequence that can be presented on the MHC class II molecule of antigen-presenting cells to activate helper T cells.
  • UBITh peptide UITh (registered trademark) 1: ISITEIKGVIVHRIETILF (SEQ ID NO: 39), UBITh ( Registered trademark) 2: KKKIITITRIITIITTID (SEQ ID NO: 40), UBITh (registered trademark) 3: ISISEIKGVIVHKIETILF (SEQ ID NO: 41), ISITEIRTVIVTRIETILF (SEQ ID NO: 42), see US patent no.
  • Tetanous toxisoid A peptide (TTaa830-843 peptide: QYIKANSKFIGITE (SEQ ID NO: 43)) and the like can be used.
  • AJP001 induces the secretion of IL- ⁇ 1 and IL-18 through activation of the NLRP3 inflammasome, and stimulates the innate immune system by inducing the production of TNF- ⁇ and IL-6 through the NF- ⁇ B pathway. Since it can be activated, it is particularly preferred as a T-cell receptor antigen peptide in the present invention.
  • the T-cell receptor antigen peptide and the B-cell receptor antigen peptide bind to form a complex, and the binding occurs between the end of one peptide chain and the end of the other peptide chain.
  • a bond between the amino acid side chain of one peptide and the terminal of the other peptide chain, or a bond between both amino acid side chains preferably the terminal of one peptide chain and the other more preferably the C-terminus of one peptide chain and the N-terminus of the other peptide chain, more preferably the C-terminus of the T cell receptor antigen peptide and the B cell Linkage to the N-terminus of the receptor antigen peptide.
  • the two terminal amino acids may be directly linked by a peptide bond, or a linker (also referred to herein as a "spacer") may be used. may be connected via The linker can connect the T-cell receptor antigen peptide and the B-cell receptor antigen peptide, is incorporated into the antigen-presenting cell, and releases the helper T-cell epitope in the T-cell receptor antigen peptide and presents it on the MHC class II molecule. It is not particularly limited as long as it can be used.
  • amino acids other than ⁇ -amino acids such as ⁇ -aminocaproic acid, ⁇ -aminoalanine, ⁇ -aminobutyric acid, 7-aminoheptanoic acid, 12-aminolauric acid and p-aminobenzoic acid can be used.
  • L-amino acids eg, glutamic acid, cysteine, lysine
  • the amino acid linker is ⁇ -aminocaproic acid.
  • any peptide linker consisting of 2 to 15 amino acids can be used.
  • G linker which is a peptide linker composed of glycine (Gly) or methylated glycine (MeG)
  • GS linker which is a peptide linker composed of Gly or MeG and Ser.
  • PEG linkers comprising polyethylene glycol (PEG) or derivatives of polyethylene glycol can be used.
  • a PEG linker further containing one or more selected from glycine (Gly), serine (Ser), glutamic acid (Glu), arginine (Arg) and lysine (Lys) can also be used.
  • the complex in which the B-cell receptor antigen peptide and the T-cell receptor antigen peptide are linked may further comprise an additional amino acid. Addition of such amino acids is permissible as long as the desired effect of the vaccine composition of the present invention is obtained.
  • the amino acid sequence to be added is not particularly limited, but examples include tags for facilitating detection, purification, etc. of complexes. Examples of tags include Flag tag, histidine tag, c-Myc tag, HA tag, AU1 tag, GST tag, MBP tag, fluorescent protein tag (eg, GFP, YFP, RFP, CFP, BFP, etc.), immunoglobulin Fc tag, and the like. mentioned.
  • the position to which the amino acid sequence is added is not particularly limited, but is preferably the N-terminus and/or C-terminus of the complex.
  • the conjugate in the vaccine composition of the present invention can be produced by a solid phase synthesis method (Fmoc method and Boc method) or a liquid phase synthesis method according to a known general peptide synthesis protocol.
  • a solid phase synthesis method Fmoc method and Boc method
  • a liquid phase synthesis method according to a known general peptide synthesis protocol.
  • the peptide conjugate in the vaccine composition of the present invention may be conjugated with a carrier protein to enhance its immunogenicity.
  • a carrier protein is generally a substance that confers immunogenicity by binding to a molecule (hapten) that is not immunogenic due to its small molecular weight, and includes those known in the art.
  • carrier proteins include bovine serum albumin (BSA), rabbit serum albumin (RSA), ovalbumin (OVA), keyhole limpet hemocyanin (KLH), thyroglobulin (TG), and diphtheria toxin.
  • BSA bovine serum albumin
  • RSA rabbit serum albumin
  • OVA ovalbumin
  • KLH keyhole limpet hemocyanin
  • TG thyroglobulin
  • diphtheria toxin examples include detoxified diphtheria toxin (CRM197), immunoglobulins, and the like.
  • a carrier protein can be conjugated to the N-terminus or C-terminus of the conjugate in the vaccine composition of the invention.
  • a cysteine residue is introduced into the antigen peptide of the present invention, and conjugation can be performed by binding to the amino group of the carrier protein via the side chain SH group of the cysteine (MBS law).
  • Conjugation can also be achieved by bonding amino groups such as ⁇ -amino groups and ⁇ -amino groups of lysine residues of proteins (glutaraldehyde method).
  • the conjugate in the vaccine composition of the invention is not conjugated to a carrier protein.
  • helper T-cell epitopes in the T-cell receptor antigen peptide are released, presented on MHC class II molecules, recognized by T-cell receptors on helper T-cells, Activate the helper T cells.
  • Activated helper T cells also recognize B cells that present the helper T cell epitope on MHC class II molecules, secrete cytokines such as IFN- ⁇ , activate B cells, and release B cell receptor antigens. It can strongly promote the production of antibodies against the peptide (IL-23 p19). Therefore, high antibody production can be induced without using a carrier protein.
  • a carrier protein When a carrier protein is used in combination with a peptide vaccine, a specific antibody against the carrier protein may be induced, resulting in unwanted side effects. Moreover, a peptide vaccine conjugated with a carrier protein is not preferable in that the manufacturing cost increases.
  • the vaccine composition of the present invention may further contain an adjuvant that is pharmaceutically acceptable and compatible with the active ingredient.
  • adjuvants are generally substances that non-specifically enhance a host's immune response, and numerous adjuvants are known in the art.
  • the adjuvant used in the vaccine composition of the present invention is not particularly limited as long as it can non-specifically enhance the immune response. squalane, saponin and the like.
  • the vaccine composition of the present invention is not used in combination with an adjuvant.
  • an adjuvant for example, when a peptide capable of activating the innate immune system, such as AJP001, is used as the T-cell receptor antigen peptide, the vaccine composition of the present invention alone is sufficient to induce the production of antibodies. no.
  • the use of adjuvants may induce unexpected side effects, and not using them reduces safety risks.
  • the vaccine composition of the present invention can be provided as a pharmaceutical composition containing a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the complex of the T-cell receptor antigen peptide and the B-cell receptor antigen peptide.
  • a pharmaceutically acceptable carrier may be appropriately selected depending on the dosage form.
  • Lubricants, citric acid, menthol and other fragrances, sodium benzoate, sodium hydrogen sulfite and other preservatives, sodium citrate and other stabilizers, methylcellulose, polyvinylpyrrolidone and other suspending agents, surfactants and other dispersing agents examples include, but are not limited to, diluents such as water, saline, base waxes, and the like.
  • the vaccine composition of the present invention can be administered to mammals orally or parenterally.
  • a complex of a T-cell receptor antigen peptide and a B-cell receptor antigen peptide can be degraded in the stomach, so parenteral administration is preferred.
  • Formulations suitable for oral administration include liquids, capsules, sachets, tablets, suspensions, emulsions and the like.
  • Formulations suitable for parenteral administration include aqueous and non-aqueous isotonic sterile injection solutions, which contain anti-oxidants. , buffers, bacteriostatic agents, tonicity agents and the like.
  • aqueous and non-aqueous sterile suspensions which may contain suspending agents, solubilizers, thickeners, stabilizers, preservatives and the like.
  • the preparation can be enclosed in a container such as an ampoule or a vial in units of unit doses or multiple doses.
  • the active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier can be lyophilized and stored in such a manner that they can be dissolved or suspended in an appropriate sterile vehicle immediately prior to use.
  • the content of the active ingredient (ie, peptide complex) in the vaccine composition is generally 0.001 to 100% by weight, preferably 0.05 to 99% by weight, more preferably 0.1 to 100% by weight of the entire composition. Although it is about 90% by weight, it is not limited to this.
  • the vaccine composition of the present invention can be administered to mammals that can suffer from diseases associated with abnormally enhanced signal transduction involving IL-23 (hereinafter sometimes referred to as “IL-23-related diseases”).
  • mammals include, for example, rodents such as mice, pets such as dogs, livestock such as pigs, horses, and cows, and primates such as humans, monkeys, orangutans, and chimpanzees, with humans being particularly preferred.
  • the dosage of the vaccine composition of the present invention varies depending on the subject to be administered, the administration method, the administration form, and the like. is administered in the range of 1 ⁇ g to 300,000 ⁇ g, preferably in the range of 20 ⁇ g to 30,000 ⁇ g per dose, usually 2 to 3 times over 4 to 12 weeks, and when the antibody titer decreases One additional dose can be administered each time.
  • Diseases that can be treated or prevented by the vaccine composition of the present invention are the IL-23-related diseases described above.
  • diseases include, for example, psoriasis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, diabetes (preferably type I diabetes), atherosclerosis, inflammatory bowel disease (IBD)/Crohn's disease, multiple sclerosis.
  • Behcet's disease ankylosing spondylitis, Voigt-Koyanagi-Harada disease, chronic granulomatosis, hidradenitis suppurativa, antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-associated vasculitis, neurodegenerative diseases (preferably Alzheimer's disease or multiple sclerosis), atopic dermatitis, graft-versus-host disease or cancer (preferably esophageal carcinoma, colon cancer, lung adenocarcinoma, small cell carcinoma, or squamous cell carcinoma of the oral cavity) ), but are not limited to these.
  • ANCA antineutrophil cytoplasmic antibody
  • the vaccine compositions of the invention are used to treat or prevent psoriasis, psoriatic arthritis, neurodegenerative diseases (particularly Alzheimer's disease), diabetes (particularly type I diabetes), atherosclerosis, or IBD. can be used. Also, in particularly preferred embodiments, the vaccine compositions of the present invention can be used to treat or prevent psoriasis, psoriatic arthritis, or IBD.
  • the vaccine composition of the present invention may be used in combination with existing therapeutic agents for IL-23-related diseases.
  • existing therapeutic agents for IL-23-related diseases for example, in the treatment of psoriasis, by starting treatment with an antibody drug with a high immediate effect during the active phase of the disease and starting administration of the vaccine composition of the present invention during the remission phase, both QOL of the patient and treatment cost can be achieved. can be achieved.
  • Treatment of a disease as used herein may include not only cure of the disease, but also remission of the disease and amelioration of the degree of the disease.
  • prevention of a disease as used herein includes delaying the onset of the disease in addition to preventing the onset of the disease.
  • prevention of a disease herein can also include preventing the recurrence of the disease after treatment or delaying the recurrence of the disease after treatment.
  • vaccine composition in this specification can also be replaced with “pharmaceutical composition” or "drug”.
  • Methods for treating or preventing IL-23-related disease A method (hereinafter sometimes referred to as the "method of the present invention") is provided.
  • Vaccine composition of the present invention In the method of the present invention, subjects to be treated or prevented, conditions for administration of the vaccine composition of the present invention, specific examples of IL-23-related diseases, etc. are the same as those described in "1. Vaccine composition of the present invention”.
  • B-cell receptor antigen peptide The present invention also provides a B-cell receptor antigen peptide itself that constitutes a part of the peptide complex contained in the vaccine composition of the present invention (hereinafter referred to as the "B-cell receptor antigen peptide of the present invention"). (sometimes referred to as
  • the B-cell receptor antigen peptide of the present invention is Formula (I): X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 A peptide containing the amino acid sequence shown in, or a peptide consisting of the 8 amino acids,
  • X1 is S (serine), A (alanine), G (glycine), T (threonine), K (lysine) or R (arginine);
  • X2 is P (proline), A (alanine), G (glycine), S (serine), T (threonine), K (lysine) or R (arginine);
  • X3 is S (serine), A (alanine), G (glycine), T (threonine), K (lysine) or R (arginine);
  • X4 is Q (glutamine), A (alanine), G (glycine), T (threonine) or N (asparagine);
  • X5 is P
  • X6 in formula (I) can be W.
  • X7 in formula (I) can be Q.
  • X8 in formula (I) can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R or A;
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S, X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q, X5 is P, A, S, T or Q; X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S or A; X2 is P, A, S or T; X3 is S or A; X4 is Q or A; X5 is P, A, S, T or Q (provided that when X2 is S, X5 is P, A or Q); X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S, X2 is P, S or T; X3 is S, X4 is Q, X5 is P, S, T or Q (if X2 is S then X5 is P or Q); X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • formula (I) is X1 is S, X2 is P, A, S or T; X3 is S, X4 is Q or A; X5 is P, X6 is W or A; X7 is Q or A; X8 can be R.
  • the 8 amino acids represented by formula (I) can be any of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 2 and 6-14 and 17-26.
  • the B-cell receptor antigen peptide of the present invention can be used alone as a peptide vaccine that induces anti-IL-23 antibodies. It can be used as a more immunogenic peptide vaccine. As a particularly preferred embodiment of the B-cell antigen receptor peptide of the present invention, it can be used as a peptide vaccine capable of efficiently inducing anti-IL-23 antibodies by using the AJP001-conjugated form.
  • This crude peptide was purified using a reverse-phase HPLC column and eluted with a gradient of 0.1% TFA-H 2 O/CH 3 CN. Fractions containing the desired product were collected and lyophilized to obtain the desired peptide.
  • HPLC Analysis Method for Peptide Purity of the synthesized peptide was measured by HPLC under the following analysis conditions.
  • HPLC model Shimadzu Corporation LCLC-20ADXR Measurement wavelength: 220 nm Flow rate: 0.31 mL per minute
  • Mobile phase A 0.1% trifluoroacetic acid aqueous solution
  • Mobile phase B acetonitrile
  • Gradient conditions The concentration of mobile phase B is increased linearly from 5% to 80% over 30 minutes. (5 ⁇ 80% buffer B in 30min)
  • Mass Spectrometry of Peptide The mass of the synthesized peptide was measured by MALDI-TOF-MS under the following analysis conditions.
  • MALDI-TOF-MS Model Bruker autoflex speed Matrix: 2,5-Dihydroxybenzoic acid Dissolution solution: mixed solution of 0.1% trifluoroacetic acid aqueous solution and acetonitrile
  • Example 1 Antibody production evaluation test using AJP001 conjugate peptide (mouse IL-23) Selected as an antigen, a complex (AJP001 conjugate peptide) was prepared by conjugating the T cell antigen AJP001 (Table 2, SEQ ID NO: 38) and ⁇ -aminocaproic acid (sometimes referred to as "Ahx") as a spacer. (Manufacturing was entrusted to Peptide Institute Co., Ltd.). In the present specification, an AJP001 conjugate peptide whose B-cell epitope has the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: "X" is referred to as "AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: X)" and the like.
  • a 96-well plate immobilized with an epitope peptide dissolved at 10 ⁇ g/mL in carbonate buffer was added with serially diluted serum using 5% skim milk/PBS. and allowed to stand overnight at 4°C.
  • an HRP-labeled anti-mouse IgG antibody (GE Healthcare) diluted with 5% skimmed milk/PBS was added and shaken at room temperature for 3 hours.
  • a TMB solution SIGMA
  • Antibody titers (GMT) were measured for all collected sera, and rmIL-23 binding ability for sera at 6 weeks was measured by ELISA (same method as in Example 1).
  • Antibody titers and induced antibody binding to rmIL-23 at each time point are shown in FIGS. 2(a) and (b), respectively.
  • ELISPOT assay was performed as an evaluation of T cell activation.
  • AJP001 conjugated peptide SEQ ID NO: 2
  • saline aline
  • spleens were detected 7 weeks after the first dose. was taken.
  • the harvested spleen was triturated using a syringe and cell strainer. Then, this was washed and suspended with HBSS(-), red blood cells were removed using ACK Buffer (Thermo Fisher Scientific), and splenocytes were isolated.
  • Mouse IFN- ⁇ ELISpot assay kit and Mouse IL-4 ELISpot assay kit (R&D systems)
  • 10% FBS/1% penicillin/streptomycin/4 ng/mL was applied to a 96-well plate on which each capture antibody was immobilized.
  • the rmIL-2-containing RPMI1640 medium (culture medium) was adjusted to 2.5 ⁇ 10 ⁇ 6 cells/mL and seeded at 100 ⁇ L/well.
  • splenocytes from mice administered the AJP001 conjugated peptide showed (2) 10 ⁇ g/mL T cell antigen AJP001 (SEQ ID NO: 38) Stimulation with only and (3) 10 ⁇ g/mL AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 2) increased the number of IFN- ⁇ and IL-4 positive cells. This confirmed the activation of AJP001-conjugated peptide-specific T cells.
  • 2% imiquimod (IMQ) was intermittently applied to the auricle four times at daily intervals to prepare a psoriasis model.
  • a 2% IMQ application group was provided as a control group.
  • the drug efficacy was evaluated by measuring the thickness of the auricle with a thickness gauge (Mitutoyo) from the first day of IMQ application to the 8th day.
  • histopathological evaluation of the auricle tissue was performed on the 8th day.
  • FIG. 3 shows the antibody titer, ear thickness and histological examination results for the AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 2).
  • "*” means significant (P ⁇ 0.05) compared to "2% IMQ”.
  • “#” means significant (P ⁇ 0.05) compared to “Day 0” in (b) and “Normal (normal group)” in (d).
  • auricle was examined under the same conditions on day 3 of rmIL-23 administration. Taken.
  • a normal group was set without administration of rmIL-23.
  • the collected auricles were freeze-pulverized under liquid nitrogen, and total RNA was extracted using RNeasy Fibrous Tissue Kit (Qiagen), followed by High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biomedical Inc) cDNA was prepared from the extracted RNA.
  • FIG. 4 shows the efficacy evaluation results of the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 2) on ear thickness and mRNA expression.
  • "*” means significant (P ⁇ 0.05) compared to "rmIL-23”.
  • "#” means significant (P ⁇ 0.05) compared to "Day 0" in (a) and compared to "Normal (normal group)” in (b) .
  • mice administered with the AJP001 conjugate peptide SEQ ID NO: 2
  • the rmIL-23 group exhibited auricular inflammatory reactions (increased auricle thickness and auricular A suppressive effect on IL-17A, IL-22, IL-1 ⁇ , LCN-2, and CXCL-2 mRNA expression in cells) was confirmed.
  • Example 5 Antibody production and activity evaluation using AJP001 conjugate peptide (human IL-23) Epitope candidate peptides derived from human IL-23 (SEQ ID NOs: 6 to 37) shown in Table 1 were selected as B cell antigens. , T cell antigen AJP001 (Table 2, SEQ ID NO: 38) and ⁇ -aminocaproic acid as a spacer to synthesize a conjugate (AJP001 conjugate peptide) (synthesis was entrusted to Toray Research Center, Inc.).
  • GTT antibody titer
  • the ratio of the absorbance of wells to which antiserum derived from mice administered with each AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NOS: 6 to 37) was added to the absorbance of wells to which normal mouse serum was added was calculated. and evaluated as a binding ratio to normal serum.
  • Red blood cells were then removed using ACK Buffer (Thermo Fisher Scientific) to isolate splenocytes.
  • Splenocytes were adjusted to 2.5 ⁇ 10 ⁇ 6 cells/mL with 10% FBS/1% penicillin/streptomycin/4 ng/mL rmIL-2-containing RPMI1640 medium (culture medium), and 100 ⁇ L/ Seeded on a 96-well plate with wells.
  • mice administered with each AJP001 conjugate peptide After adding antiserum (final concentration 15-fold) and rhIL-23 (final concentration 10 ng/mL) from mice administered with each AJP001 conjugate peptide to the culture medium, reacting at 37°C for 2 hours, splenocytes was added to a 96-well plate seeded with 100 ⁇ L/well, and cultured for 3 days in a 37° C./5% CO 2 incubator. In addition, untreated wells and control wells to which normal mouse serum and rhIL-23 were added were set.
  • IL-17A/F in the culture supernatant was measured with Mouse IL-17A/F ELISA kit (R & D Systems), untreated well (A), control well (B) and mice administered with each AJP001 conjugate peptide
  • the ratio (%) of IL-17 to normal serum was calculated from each IL-17 concentration in the antiserum-added well (C) according to the following formula, and the neutralizing activity was evaluated.
  • Table 3 shows the antibody titer, rhIL-23 binding and neutralizing activity of each AJP001 conjugate peptide.
  • AJP001 conjugated peptide SEQ ID NO: 6
  • the spleen was harvested at An ELISPOT assay was performed on the collected spleens using a Mouse IFN- ⁇ ELISpot assay kit and a Mouse IL-4 ELISpot assay kit (R&D Systems). The results are shown in FIGS. 5(c) and (d).
  • FIG. 6 shows the efficacy evaluation results of the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) on ear thickness and mRNA expression.
  • “*” means significant (P ⁇ 0.05) compared to "rhIL-23”.
  • “#” means significant (P ⁇ 0.05) compared to “Normal”.
  • mice administered with the AJP001 conjugated peptide As shown in FIG. 6, in mice administered with the AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 6), the ear inflammatory response (increased ear thickness and IL-17A, IL -22, IL-1 ⁇ , LCN-2 and CXCL-2 mRNA expression) was confirmed.
  • IgG was purified from the monkey antiserum at 6 weeks after the first administration with Protein G HP spin trap (GE Healthcare), and the IL-17 production when mouse splenocytes were stimulated with rhIL-23 The action was evaluated (same method as in Example 5). The results are shown in FIG. 7(c).
  • AJP001 conjugated peptide SEQ ID NO:6
  • a 96-well plate on which the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) was immobilized was blocked with goat serum.
  • AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 6)-derived monkey serum was added with 100 ⁇ g/mL of AJP001 conjugated peptide (SEQ ID NO: 6-14) and allowed to react overnight at 4°C. The reaction solution was added to the solid-phased plate and allowed to stand overnight at 4°C.
  • Control wells to which only monkey serum derived from the AJP001 conjugate peptide (SEQ ID NO: 6) was added and untreated wells to which no serum was added were set. After washing the wells with PBS-T, HRP-labeled Anti-Monkey IgG antibody (Abcam) diluted with 5% skimmed milk/PBS was added and shaken at room temperature for 3 hours. After washing the wells with PBS- T , a TMB solution was added and allowed to stand in the dark for 30 minutes. Using absorbance values of control wells (A), untreated (B), and monkey serum (C) incubated with AJP001 conjugated peptides (SEQ ID NOs: 6 to 14), the binding rate was calculated by the following formula.
  • CpG Type-B/K CpG-ODN K3
  • the first administration day of TNBS was defined as Day 0, and 3 mg/body of TNBS was administered on Day 7 to induce colitis.
  • a Normal group and a 30% EtOH group without administration of TNBS, a Saline/TNBS group with administration of TNBS but no peptide, and a CpG/TNBS group with administration of adjuvant only were provided.
  • Body weights were measured on Days 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9 and 10, including the days of TNBS administration. After euthanasia by heart blood collection under deep anesthesia on Day 10, the antibody titer (GMT) and mIL-23 binding of the serum obtained were measured by ELISA (same method as in Example 1).
  • cytokine mRNA expression was measured in a 2 cm portion from the anus, and histopathological examination was performed in a 2 to 4 cm portion. Cytokine mRNA expression was obtained by crushing beads under ice-cold conditions, extracting Total RNA using RNeasy Fibrous Tissue Kit (Qiagen), and then using High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biomedical Inc). cDNA was prepared from the extracted RNA.
  • the HE-stained specimen was observed under a microscope and scored by inflammatory cell infiltration (Grade: 0-3), colonic tissue damage depth (Grade: 0-3), and colonic mucosal damage range (Grade: 0-4), and the total score was calculated. Calculated.
  • peptide vaccines for the treatment and/or prevention of various IL-23-related diseases can be produced at low cost, and are extremely useful in the field of pharmaceutical production.

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Abstract

本発明は、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体を含む、ＩＬ－２３に対する抗体の産生を誘導し得るワクチン組成物であって、該Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、以下の式（Ｉ）：　Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８（Ｉ） で表され、式中、　Ｘ１がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、　Ｘ２がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＲであり、　Ｘ３がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、　Ｘ４がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮであり、　Ｘ６がＷ、Ａ、ＹまたはＦであり、　Ｘ７がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、　Ｘ８がＲ、Ａ、ＧまたはＫである、ワクチン組成物を提供する。

Description

抗ＩＬ－２３抗体誘導用ワクチン組成物
　本発明は、ワクチン組成物に関し、詳細には、生体内においてＩＬ－２３に対する抗体を誘導することができるワクチン組成物に関する。
　慢性炎症は多岐にわたる慢性疾患の進展に関与することが知られており、慢性炎症の出発点となる因子はＩＬ－２３であることが報告されている（非特許文献１および２）。
　ＩＬ－２３はｐ１９とｐ４０の２つのサブユニットたんぱく質からなるヘテロダイマーであり、炎症性サイトカインに分類される。ＩＬ－２３はメモリーＴ細胞の増殖の誘導に関与し、また、ナイーブＴ細胞のＴｈ１７細胞への分化の促進および安定化に寄与する。ＩＬ－２３により分化および安定化されたＴｈ１７細胞は複数種のサイトカインや炎症性エフェクターを分泌し慢性炎症を亢進させる。
　かかるＴｈ１７／ＩＬ－２３経路の脱制御は多数の疾患（一例として、乾癬、がん、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、多発性硬化症、アルツハイマー病等）と関連することが報告されている（非特許文献３）。
　このようにＩＬ－２３は慢性炎症を通して様々な疾患の発生や進展に関与することから、ＩＬ－２３を治療標的とする創薬研究が鋭意進められているが、その中でも乾癬に対して比較的多くの知見が蓄積されつつある。
　乾癬はＴｈ１７細胞の異常に起因する慢性の炎症性皮膚疾患である。乾癬においては、Ｔｈ１７細胞がＩＬ－２３により刺激され、このＴｈ１７細胞が炎症性サイトカインであるＩＬ－１７やＩＬ－２２を放出することで炎症反応が引き起こされる。乾癬の有病率は０．９～１１．４３％と推定されている（ＷＨＯ報告、２０１６年）。乾癬患者の多くは軽度から中等度であるが重症患者は深刻な皮膚症状や乾癬性関節炎などの合併症を伴い、当該患者らのＱＯＬは極めて低い。
　乾癬の治療では、軽度から中等度の患者にはステロイドやビタミンＤアナログ等の局所軟膏が用いられる。標準的な治療では十分な治療効果が得られない場合は、抗ＴＮＦ－α抗体、抗ＩＬ－１７抗体または抗ＩＬ－２３抗体等の生物製剤が投与されるが、とりわけ抗ＩＬ－２３抗体薬は臨床的に高い効能が確認されている（ｐ４０サブユニットを標的とするUstekinumab（商品名「ステラーラ」（登録商標））、ｐ１９サブユニットを標的とするRisankizumab（商品名「スキリージ」（登録商標））、Guselkumab（商品名「トレムフィア」（登録商標））およびTildrakizumab（商品名「イルミヤ」（登録商標））など）。RisankizumabはUstekinumabの約２倍のＰＡＳＩ９０（ほぼ完全な乾癬の病変消失）達成率を示したことが報告されており、分子標的はｐ４０からｐ１９にシフトしつつある。
　しかしながら、抗体医薬は、バイオ製造施設への多額の投資が必要なため製造コストが高く、また、１回の治療において比較的大量の抗体を投与する必要があるため、薬価が非常に高額となり、患者のアクセスを制限するとともに、医療財政も圧迫している。そこで、かかる抗体医薬の課題を解決するために、治療対象の生体内において所望の抗体を誘導することができる「ペプチドワクチン」の開発が進められており、乾癬の治療においても抗ＩＬ－２３抗体を誘導し得るペプチドワクチンが検討されている。
　例えば、マウスＩＬ－２３　ｐ１９サブユニットのα－ループＣとα－ループＤとのジャンクション部位のペプチド断片を含むペプチドワクチンが、マウスのコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）やＴＮＢＳ誘発性大腸炎モデルにおいて有効性を示したことが報告されている（非特許文献４および５）。さらに、特許文献１では、ヒトＩＬ－２３　ｐ１９サブユニットにおける対応する部位に含まれる種々のペプチド断片を用いて詳細な検討を行い、抗ＩＬ－２３中和抗体を誘導し得るＢ細胞エピトープとして同定している。しかしながら、これらのペプチドワクチンでは、免疫原性を増強するためにキーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）やウイルス様粒子（ＶＬＰ）等のたんぱく質をキャリアとして用いているため、製造コストの面や抗キャリア抗体の誘導リスクといった問題があり、更なる改善が求められている。また、十分な抗体産生を誘導するためには、ヘルパーＴ細胞や自然免疫の活性化が必要であり、そのため従来のペプチドワクチンでは、通常フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）やアルミニウム塩（Ａｌｕｍ）などのアジュバントが併用されており、安全面のリスクがある。
ＷＯ２０１６／１９３４０５
Christina H Liu et al., Nat Immunol. 2017 Oct 18;18(11):1175-1180. Yoichiro Iwakura et al., J Clin Invest. 2006 May;116(5):1218-22. Sarah L Gaffen et al., Nat Rev Immunol. 2014 Sep;14(9):585-600. Rojo A Ratsimandresy et al., Vaccine. 2011; 29:9329-9336. Qingdong Guan et al., Immunotherapy. 2013; 5:1313-1322.
　上述した背景から、本発明は、キャリアたんぱく質をコンジュゲートさせずとも、また、アジュバントを併用せずとも、生体内において十分な抗原性を有し、効率よく抗ＩＬ－２３抗体を誘導できる新規のペプチドワクチンを提供することを課題とする。
　本発明者らは、上記課題に対して鋭意検討した結果、特定のアミノ酸配列を有するＴ細胞受容体抗原ペプチドと、ＩＬ－２３　ｐ１９たんぱく質中の特定のアミノ酸配列（ヒトｐ１９の１５１～１５８位；マウスｐ１９の１５２～１５９位に相当）もしくはその一部改変配列を有するＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体が、生体内において極めて効率よく抗ＩＬ－２３中和抗体を誘導し得ることを見出した。上記特許文献１によれば、ヒトｐ１９中の位置を１アミノ酸だけＣ末端側にずらしたヒトｐ１９の１５２～１５９位のアミノ酸配列（従って８アミノ酸中７アミノ酸が共通する）からなるペプチド断片を含むペプチドワクチンは、抗IＬ－２３機能（ＩＬ－１７分泌促進）の阻害活性を誘起しなかったことから、上記の結果は非常に驚くべきことである。
　加えて本発明者らは、当該ペプチドワクチンの投与により、マウス大腸炎モデルにおいて腸炎に伴う症状が著しく改善することをも確認した。
　本発明者らは、かかる知見に基づいてさらに研究を進めることによって本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は以下の通りである。
項［１］
　Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体を含む、ＩＬ－２３に対する抗体の産生を誘導し得るワクチン組成物であって、該Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、以下の式（Ｉ）：
　Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８（Ｉ）
で表され、式中、
　Ｘ１がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ３がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ４がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮであり、
　Ｘ６がＷ、Ａ、ＹまたはＦであり、
　Ｘ７がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ８がＲ、Ａ、ＧまたはＫである、ワクチン組成物。
項［２］
　複合体のＮ末端のアミノ酸がアセチル化されている、および／または複合体のＣ末端のアミノ酸がアミド化されている、項［１］記載のワクチン組成物。
項［３］
　前記Ｂ細胞受容体抗原ペプチドにおいてＸ６がＷである、項［１］または［２］記載のワクチン組成物。
項［４］
　前記Ｂ細胞受容体抗原ペプチドにおいてＸ７がＱである、項［１］～［３］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［５］
　前記Ｂ細胞受容体抗原ペプチドにおいてＸ８がＲである、項［１］～［４］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［６］
　Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、配列番号２、６～１４および１７～２６のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む、項［１］～［５］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［７］
　Ｔ細胞受容体抗原ペプチドが配列番号３８で表されるアミノ酸配列を含む、項［１］～［６］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［８］
　複合体が、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドのＣ末端とＢ細胞受容体抗原ペプチドのＮ末端との間で結合している、項［１］～［７］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［９］
　Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとがリンカーを介して結合されている、項［１］～［８］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［１０］
　前記リンカーがアミノ酸またはペプチドである、項［９］記載のワクチン組成物。
項［１１］
　アジュバントとしての添加物を含有しない、項［１］～［１０］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［１２］
　ＩＬ－２３関連疾患の治療または予防のための、項［１］～［１１］のいずれか一項記載のワクチン組成物。
項［１３］
　ＩＬ－２３関連疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、糖尿病（好ましくはＩ型糖尿病）、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）／クローン病、多発性硬化症、ベーチェット病、強直性脊椎炎、フォークト・小柳・原田病、慢性肉芽腫症、化膿性汗腺炎、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、神経変性疾患、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病およびがんからなる群から選択される、項［１２］記載のワクチン組成物。
項［１Ａ］
　対象においてＩＬ－２３に対する抗体の産生を誘導する方法であって、有効量のＴ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体を該対象に投与することを含み、該Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、以下の式（Ｉ）：
　Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８（Ｉ）
で表され、式中、
　Ｘ１がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ３がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ４がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮであり、
　Ｘ６がＷ、Ａ、ＹまたはＦであり、
　Ｘ７がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ８がＲ、Ａ、ＧまたはＫである、方法。
項［１Ｂ］
　ＩＬ－２３に対する抗体の産生誘導における使用のための、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体であって、該Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、以下の式（Ｉ）：
　Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８（Ｉ）
で表され、式中、
　Ｘ１がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ３がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ４がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮであり、
　Ｘ６がＷ、Ａ、ＹまたはＦであり、
　Ｘ７がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ８がＲ、Ａ、ＧまたはＫである、複合体。
項［１Ｃ］
　ＩＬ－２３関連疾患の治療または予防用の医薬の製造における、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体の使用であって、該Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、以下の式（Ｉ）：
　Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８（Ｉ）
で表され、式中、
　Ｘ１がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ３がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ４がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮであり、
　Ｘ６がＷ、Ａ、ＹまたはＦであり、
　Ｘ７がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ８がＲ、Ａ、ＧまたはＫである、使用。
項［１４］
　以下の式（Ｉ）：
　Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８（Ｉ）
で表され、式中、
　Ｘ１がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ３がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
　Ｘ４がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮであり、
　Ｘ６がＷ、Ａ、ＹまたはＦであり、
　Ｘ７がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
　Ｘ８がＲ、Ａ、ＧまたはＫである、Ｂ細胞受容体抗原ペプチド。
項［１５］
　前記式（Ｉ）中、Ｘ６がＷである、項［１４］記載のＢ細胞受容体抗原ペプチド。
項［１６］
　前記式（Ｉ）中、Ｘ７がＱである、項［１４］または［１５］記載のＢ細胞受容体抗原ペプチド。
項［１７］
　前記式（Ｉ）中、Ｘ８がＲである、項［１４］～［１６］のいずれか一項記載のＢ細胞受容体抗原ペプチド。
　本発明によれば、キャリアたんぱく質やアジュバントを用いることなく、生体内において非常に効率よく抗ＩＬ－２３抗体の産生を誘導できる。従って、ＩＬ－２３が関連する疾患の安価かつ安全な治療および／または予防が可能となる。
図１（ａ）は、実施例１で用いた各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドの模式図である。図１（ｂ）は、実施例１において、各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを投与したマウスの、ペプチドの初回投与後５週の時点において採血した抗血清の抗体価を示すグラフである。図１（ｃ）は、実施例１において、各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを投与したマウスの、ペプチドの初回投与後５週の時点において採血した血清のｒｍＩＬ－２３への結合能を示すグラフである。 図２はＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたマウス免疫原性評価試験の結果を示す図である。図２（ａ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したマウスから経時的に採血した血清の抗体価（ＧＭＴ）を示すグラフである。図２（ｂ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したマウスから、初回投与後６週の時点で採血した血清のｒｍＩＬ－２３への結合能を示すグラフである。図２（ｃ）および（ｄ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したマウスにおけるＴ細胞活性化評価（ＩＦＮ－γ陽性細胞数およびＩＬ－４陽性細胞数）の結果を示す図である。 図３は、実施例３における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたマウス乾癬モデルに対する薬効評価試験の結果を示す図である。図３（ａ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したヘアレスラットから初回投与後６週の時点で採血した血清の抗体価を示すグラフである。図３（ｂ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与した群と、媒体対照群における、耳介炎症反応（耳介厚の増加および組織の炎症性変化）を経時的に示したグラフである。図３（ｃ）は、各条件で作製した耳介のＨＥ染色標本の写真である。図３（ｄ）は、各条件で作製した耳介のＨＥ染色標本を顕微鏡で観察し、炎症細胞浸潤、浮腫および肥厚についてスコア化した結果を示すグラフである。 図４は、実施例４における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたＩＬ－２３誘発マウス耳介炎症モデルに対する薬効評価試験の結果を示す図である。図４（ａ）は、各条件における、経時的な耳介厚の変化を示す図である。図４（ｂ）は、各条件における、耳介中のＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＩＬ－１β、ＬＣＮ－２およびＣＸＣＬ－２のｍＲＮＡ発現を示すグラフである。 図５は、実施例６における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を用いたマウス免疫原性評価試験の結果を示す図である。図５（ａ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したマウスから経時的に採血した血清の抗体価（ＧＭＴ）を示すグラフである。図５（ｂ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したマウスから、初回投与後６週の時点で採血した血清のｒｈＩＬ－２３への結合能を示すグラフである。また、図５（ｃ）および（ｄ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したマウスにおけるＴ細胞活性化評価（ＩＦＮ－γ陽性細胞数およびＩＬ－４陽性細胞数）の結果を示す図である。 図６は、実施例７における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を用いたＩＬ－２３誘発マウス耳介炎症モデルに対する薬効評価試験の結果を示す図である。図６（ａ）は、各条件における、３日目および４日目の耳介厚の変化を示す図である。図６（ｂ）は、各条件における、耳介中のＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＩＬ－１β、ＬＣＮ－２およびＣＸＣＬ－２のｍＲＮＡ発現を示すグラフである。 図７は、実施例８における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を用いたサル免疫原性評価試験の結果を示す図である。図７（ａ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したカニクイザルから経時的に採血した血清の抗体価（ＧＭＴ）を示すグラフである。図７（ｂ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したカニクイザルから、初回投与後６週の時点で採血した血清のｒｈＩＬ－２３およびｒｍＩＬ－２３への結合能を示すグラフである。図７（ｃ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したカニクイザル由来ＩｇＧの中和活性を評価したグラフである。図７（ｄ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）により誘導された抗ＩＬ－２３抗体のエピトープマッピングの結果を示すグラフである。 図８－１は、実施例９における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたＴＮＢＳ誘発マウス大腸炎モデルに対する薬効評価試験を示す図である。（ａ）および（ｂ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与し、次いで、ＴＮＢＳで大腸炎を誘発させたマウス（ＴＮＢＳ投与を基準としてＤａｙ１０の時点）から得られた血清について、抗体価（ＧＭＴ）およびｍＩＬ－２３への結合をＥＬＩＳＡ法で測定した結果を示す図である。（ｃ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与し、次いで、ＴＮＢＳで大腸炎を誘発させたマウスの、ＴＮＢＳ投与前および投与後の体重変化を示す図である。 図８－２は、実施例９における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたＴＮＢＳ誘発マウス大腸炎モデルに対する薬効評価試験を示す図である。（ｄ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与し、次いで、ＴＮＢＳで大腸炎を誘発させたマウスのＤａｙ１０の時点での大腸の長さ（ｃｍ）を測定した結果を示す図および写真である。 図８－３は、実施例９における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたＴＮＢＳ誘発マウス大腸炎モデルに対する薬効評価試験を示す図である。（ｅ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与し、次いで、ＴＮＢＳで大腸炎を誘発させたマウスのＤａｙ１０の時点での、肛門から２ｃｍの大腸組織における各種サイトカインのｍＲＮＡ発現を測定した結果を示す図である。 図８－４は、実施例９における、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたＴＮＢＳ誘発マウス大腸炎モデルに対する薬効評価試験を示す図である。（ｆ）は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与し、次いで、ＴＮＢＳで大腸炎を誘発させたマウスのＤａｙ１０の時点での、肛門から２から４ｃｍの大腸組織における病理学的検査の結果を示す図および写真である。
　以下、本発明を詳細に説明する。
１．ワクチン組成物
　本発明は、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体を含む、ＩＬ－２３に対する抗体の産生を誘導し得る（従って、ＩＬ－２３関連疾患を治療または予防するのに適した）ワクチン組成物（以下、「本発明のワクチン組成物」と称することがある）を提供する。
　本明細書に記載されるペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。本発明のワクチン組成物において有効成分として含まれるペプチド複合体は、Ｃ末端がカルボキシル基（－ＣＯＯＨ）、カルボキシレート(－ＣＯＯ－）、アミド（－ＣＯＮＨ２）またはエステル（－ＣＯＯＲ）の何れであってもよい。
　ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチルなどのＣ１－６アルキル基；例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３－８シクロアルキル基；例えば、フェニル、α－ナフチルなどのＣ６－１２アリール基；例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル－Ｃ１－２アルキル基；α－ナフチルメチルなどのα－ナフチル－Ｃ１－２アルキル基などのＣ７－１４アラルキル基；ピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
　該ペプチド複合体がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明におけるペプチド複合体に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
　さらに、該ペプチド複合体には、Ｎ末端のアミノ酸残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ１－６アルカノイルなどのＣ１－６アシル基など）で保護されているもの、Ｎ末端のアミノ酸残基のアミノ基がアセチル化されているもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば－ＯＨ、－ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ１－６アルカノイル基などのＣ１－６アシル基など）で保護されているものなども含まれる。一実施態様においては、該ペプチド複合体は、Ｎ末端のアミノ酸残基のアミノ基がアセチル化され、および／または、Ｃ末端のカルボキシル基がアミド化されている。
　本発明のワクチン組成物において有効成分として含まれるペプチド複合体は、その一部にＢ細胞受容体抗原ペプチドを含む。ここで、Ｂ細胞受容体とは、Ｂ細胞表面に発現する受容体である。抗原ペプチドによって刺激を受けたＢ細胞は増殖し、当該Ｂ細胞受容体を抗原ペプチドに対する抗体として分泌する。
　本発明のワクチン組成物におけるＢ細胞受容体抗原ペプチドは、
式（Ｉ）：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドであるか、または当該８アミノ酸からなるペプチドであって、
式中、
　Ｘ１がＳ（セリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）、Ｋ（リジン）またはＲ（アルギニン）であり、
　Ｘ２がＰ（プロリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｓ（セリン）、Ｔ（トレオニン）、Ｋ（リジン）またはＲ（アルギニン）であり、
　Ｘ３がＳ（セリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）、Ｋ（リジン）またはＲ（アルギニン）であり、
　Ｘ４がＱ（グルタミン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）またはＮ（アスパラギン）であり、
　Ｘ５がＰ（プロリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｓ（セリン）、Ｔ（トレオニン）、Ｑ（グルタミン）またはＮ（アスパラギン）であり、
　Ｘ６がＷ（トリプトファン）、Ａ（アラニン）、Ｙ（チロシン）またはＦ（フェニルアラニン）であり、
　Ｘ７がＱ（グルタミン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）またはＮ（アスパラギン）であり、
　Ｘ８がＲ（アルギニン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）またはＫ（リジン）であり得る。
　一態様において、式（Ｉ）におけるＸ６はＷであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）におけるＸ７はＱであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）におけるＸ８はＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲまたはＡであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり（但し、Ｘ２がＳの場合、Ｘ５はＰ、ＡまたはＱである）、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳであり、
　Ｘ２がＰ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳであり、
　Ｘ４がＱであり、
　Ｘ５がＰ、Ｓ、ＴまたはＱであり（但し、Ｘ２がＳの場合、Ｘ５はＰまたはＱである）、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）で示される８アミノ酸は、配列番号２、６～１４および１７～２６で表されるアミノ酸配列のいずれかであり得る。
　本発明のワクチン組成物に含まれる複合体の一部はＴ細胞受容体抗原ペプチドである。Ｔ細胞受容体抗原ペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩと複合体を形成し、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体とＣＤ４によって認識され、ＣＤ３陽性細胞内へシグナルを伝達する抗原ペプチドであれば特に制限されない。ＭＨＣクラスＩＩは、例えば、ヒトの場合ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱおよびＨＬＡ－ＤＰ、マウスの場合、Ｈ－２ＡまたはＨ－２Ｂが挙げられ、それぞれα鎖とβ鎖（例えばＨＬＡ－ＤＲは、α鎖であるＨＬＡ－ＤＲＡとβ鎖であるＨＬＡ－ＤＲＢ１）からなる二量体であり、好ましくは、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱまたはＨＬＡ－ＤＰである。
　本発明のワクチン組成物において、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとしては、抗原提示細胞のＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示されてヘルパーＴ細胞を活性化し得るエピトープ配列を含むものであれば特に制限はないが、例えば、本発明者らが開発したＡＪＰ００１ペプチド（ＥＬＫＬＩＦＬＨＲＬＫＲＬＲＫＲＬＫＲＫ（配列番号３８）、詳細はＷＯ２０１６／０４７７６３を参照）のほか、ＵＢＩＴｈペプチド（ＵＢＩＴｈ（登録商標）1：ＩＳＩＴＥＩＫＧＶＩＶＨＲＩＥＴＩＬＦ（配列番号３９）、ＵＢＩＴｈ（登録商標）2：ＫＫＫＩＩＴＩＴＲＩＩＴＩＩＴＴＩＤ（配列番号４０）、ＵＢＩＴｈ（登録商標）3：ＩＳＩＳＥＩＫＧＶＩＶＨＫＩＥＴＩＬＦ（配列番号４１）、ＩＳＩＴＥＩＲＴＶＩＶＴＲＩＥＴＩＬＦ（配列番号４２）、詳細はＵＳ ｐａｔｅｎｔ ｎｏ．９，１０２，７５２を参照）、Tetanous　toxisoidペプチド（ＴＴａａ830-843 ｐｅｐｔｉｄｅ:ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥ（配列番号４３））等を使用することができる。ＡＪＰ００１は、ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化を介してＩＬ－β１やＩＬ－１８の分泌を誘導し、ＮＦ－κＢ経路を通じてＴＮＦ－αやＩＬ－６の産生を誘導することにより自然免疫系をも活性化することができるので、本発明におけるＴ細胞受容体抗原ペプチドとして特に好ましい。
　本発明のワクチン組成物において、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとは結合して複合体を形成するが、当該結合は一方のペプチド鎖の末端と他方のペプチド鎖の末端との連結であっても、一方のペプチドのアミノ酸側鎖と他方のペプチド鎖の末端との結合や両方のアミノ酸側鎖同士の結合であってもよいが、好ましくは一方のペプチド鎖の末端と他方のペプチド鎖の末端との連結であり、より好ましくは一方のペプチド鎖のＣ末端と他方のペプチド鎖のＮ末端との連結であり、さらに好ましくはＴ細胞受容体抗原ペプチドのＣ末端とＢ細胞受容体抗原ペプチドのＮ末端との連結である。一方のペプチド鎖の末端と他方のペプチド鎖の末端とが連結される場合、両者は末端アミノ酸同士がペプチド結合により直接連結されていてもよく、あるいはリンカー（本明細書において「スペーサー」ともいう）を介して連結されていてもよい。リンカーは、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドを連結でき、抗原提示細胞内に取り込まれてＴ細胞受容体抗原ペプチド中のヘルパーＴ細胞エピトープを遊離・ＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示できるものであれば特に限定されない。例えば、ε－アミノカプロン酸、β－アミノアラニン、γ－アミノ酪酸、７－アミノヘプタン酸、１２－アミノラウリン酸、ｐ－アミノ安息香酸等のα－アミノ酸以外のアミノ酸を用いることができる。また、天然のタンパク質に存在するＬ－アミノ酸（例、グルタミン酸、システイン、リジン）やそれらのＤ－アミノ酸も用いることができる。好ましい一態様において、アミノ酸リンカーは、ε－アミノカプロン酸である。あるいは任意の２～１５アミノ酸からなるペプチドリンカーを用いることもできる。例えば、グリシン（Ｇｌｙ）又はメチル化グリシン（ＭｅＧ）からなるペプチドリンカーであるＧリンカー、Ｇｌｙ又はＭｅＧとＳｅｒからなるペプチドリンカーであるＧＳリンカー等を挙げることができるが、それらに限定されない。別の実施態様においては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレングリコールの誘導体を含むＰＥＧリンカーを用いることもできる。ＰＥＧリンカーにグリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）及びリジン（Ｌｙｓ）から選ばれる１つ以上をさらに含ませたものも用いることができる。
　一態様において、Ｂ細胞受容体抗原ペプチドとＴ細胞受容体抗原ペプチドが連結された複合体は付加的なアミノ酸をさらに含んでいてもよい。このようなアミノ酸の付加は、本発明のワクチン組成物の所望の効果が得られる限り許容される。付加されるアミノ酸配列は、特に限定されないが、例えば複合体の検出や精製等を容易にならしめるためのタグを挙げることができる。タグとしては、Ｆｌａｇタグ、ヒスチジンタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＡＵ１タグ、ＧＳＴタグ、ＭＢＰタグ、蛍光タンパク質タグ（例えばＧＦＰ、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ＣＦＰ、ＢＦＰ等）、イムノグロブリンＦｃタグ等が挙げられる。アミノ酸配列が付加される位置は、特に限定されないが、好ましくは複合体のＮ末端および／またはＣ末端である。
　本発明のワクチン組成物における複合体は、公知の一般的なペプチド合成のプロトコールに従って、固相合成法（Ｆｍｏｃ法およびＢｏｃ法）または液相合成法により製造することができる。Ｂ細胞受容体抗原ペプチドとＴ細胞受容体抗原ペプチドが直接またはアミノ酸もしくはペプチドリンカーを介して連結された複合体である場合は、当該複合体全体を一度に合成することができる。また、Ｂ細胞受容体抗原ペプチドとＴ細胞受容体抗原ペプチドを別々に合成し、その後に２つのペプチドを直接またはリンカーを介して連結させてもよい。
　一態様において、本発明のワクチン組成物におけるペプチド複合体はその免疫原性を高めるためにキャリアたんぱく質とコンジュゲートさせたものでもよい。キャリアたんぱく質は、一般には、分子量が小さいために免疫原性を有さない分子（ハプテン）に結合して免疫原性を付与する物質であり、当技術分野で公知であるものがある。キャリアたんぱく質の例としては、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、ウサギ血清アルブミン（ＲＳＡ）、オボアルブミン（ＯＶＡ）、スカシ貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）、チログロブリン（ＴＧ）、ジフテリア毒素のアミノ酸の一部を置き換えて無毒化したジフテリア毒素（ＣＲＭ１９７）、免疫グロブリン等などが挙げられる。キャリアたんぱく質は本発明のワクチン組成物における複合体のＮ末端またはＣ末端にコンジュゲートすることができる。コンジュゲートする方法としては、本発明の抗原ペプチドにシステイン残基を導入し、当該システインの側鎖であるＳＨ基を介してキャリアたんぱく質のアミノ基と結合させることによってコンジュゲートすることができる（ＭＢＳ法）。また、たんぱく質のリジン残基のεアミノ基や、αアミノ基などのアミノ基同士を結合させることによってもコンジュゲートすることができる（グルタルアルデヒド法）。
　好ましい一態様において、本発明のワクチン組成物における複合体はキャリアたんぱく質とはコンジュゲートされない。当該複合体が抗原提示細胞に取り込まれると、Ｔ細胞受容体抗原ペプチド中のヘルパーＴ細胞エピトープが遊離し、ＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示され、ヘルパーＴ細胞上のＴ細胞受容体に認識され、該ヘルパーＴ細胞を活性化する。活性化したヘルパーＴ細胞は、同じくＭＨＣクラスＩＩ分子上に該ヘルパーＴ細胞エピトープを提示したＢ細胞を認識してＩＦＮ－γ等のサイトカインを分泌し、Ｂ細胞を活性化してＢ細胞受容体抗原ペプチド（ＩＬ－２３　ｐ１９）に対する抗体の産生を強力に促進することができる。そのため、キャリアたんぱく質を用いなくとも高い抗体産生を誘導することができる。ペプチドワクチンにおいてキャリアたんぱく質を併用する場合、当該キャリアたんぱく質に対する特異的な抗体が誘導され、望まない副作用を生じる可能性がある。また、キャリアたんぱく質をコンジュゲートさせたペプチドワクチンは製造コストが高まる点においても好ましくない。
　一態様において、本発明のワクチン組成物は、製薬上許容可能で且つ活性成分と相溶性であるアジュバントをさらに含有してもよい。アジュバントは、一般には、宿主の免疫応答を非特異的に増強する物質であり、多数のアジュバントが当技術分野で公知である。本発明のワクチン組成物に使用されるアジュバントは、免疫応答を非特異的に増強することができる限り特に限定されないが、例えば、アルミニウム塩（Ａｌｕｍ）、ミョウバン、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、ｄｓＲＮＡ、モンタナイド、スクワラン、サポニン等が挙げられる。
　好ましい一態様において、本発明のワクチン組成物はアジュバントが併用されない。例えば、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとしてＡＪＰ００１等の自然免疫系を活性化し得るペプチドを使用する場合、本発明のワクチン組成物のみで十分な抗体の産生誘導が可能であるので、アジュバントを併用する必要はない。アジュバントの使用は予期せぬ副反応を誘起する場合があり、これを用いないことにより安全面でのリスクが低減する。
　本発明のワクチン組成物は、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドの複合体に加えて医薬上許容される担体を含む医薬組成物として提供され得る。
　医薬上許容される担体は、剤形によって適宜選択されてよく、例えば、ショ糖、デンプン等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑剤、クエン酸、メントール等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム等の保存剤、クエン酸ナトリウム等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水等の希釈剤、ベースワックス等が挙げられるが、それらに限定されない。
　本発明のワクチン組成物は、経口または非経口的に哺乳動物に対して投与することができる。Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドの複合体は胃の中で分解され得るので非経口的に投与することが好ましい。経口投与に好適な製剤としては、液剤、カプセル剤、サシェ剤、錠剤、懸濁液剤、乳剤等を挙げることができる。非経口的な投与（例えば、皮下注射、筋肉注射、局所注入、腹腔内投与など）に好適な製剤としては、水性および非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。また、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよい。当該製剤は、アンプルやバイアルのように単位投与量あるいは複数回投与量ずつ容器に封入することができる。また、有効成分および医薬上許容される担体を凍結乾燥し、使用直前に適当な無菌のビヒクルに溶解または懸濁すればよい状態で保存することもできる。
　ワクチン組成物中の有効成分（即ち、ペプチド複合体）の含有量は、通常、組成物全体の０．００１～１００重量％、好ましくは０．０５～９９重量％、さらに好ましくは０.１～９０重量％程度であるが、これらに限定されない。
　本発明のワクチン組成物の投与対象は、ＩＬ－２３が関与するシグナル伝達の異常亢進に関連した疾患（以下、「ＩＬ－２３関連疾患」と称することがある）に罹患し得る哺乳動物であれば特に制限されない。かかる哺乳動物としては、例えば、マウス等のげっ歯類、イヌ等のペット、ブタ、ウマ、ウシ等の家畜、ヒト、サル、オランウータン、チンパンジー等の霊長類等が挙げられ、特にヒトが好ましい。
　本発明のワクチン組成物の投与量は、投与する対象、投与方法、投与形態等によって異なるが、通常成人１人当たり、有効成分であるＴ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドの複合体を、一回当たり１μｇ～３００，０００μｇの範囲、好ましくは２０μｇ～３０，０００μｇの範囲で、通常４週間から１２週間に亘って、２回から３回投与し、抗体価が低下した場合にはその都度１回追加投与することができる。
　本発明のワクチン組成物により治療または予防され得る疾患は、上述したＩＬ－２３関連疾患である。かかる疾患としては、例えば、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、糖尿病（好ましくはＩ型糖尿病）、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）／クローン病、多発性硬化症、ベーチェット病、強直性脊椎炎、フォークト・小柳・原田病、慢性肉芽腫症、化膿性汗腺炎、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、神経変性疾患（好ましくはアルツハイマー病または多発性硬化症）、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病またはがん（好ましくは、食道がん(oesophagal carcinoma)、大腸がん、肺腺がん、小細胞がん、または口腔の扁平上皮がん）が挙げられるが、これらに限定されない。
　一態様において、本発明のワクチン組成物は、乾癬、乾癬性関節炎、神経変性疾患（特にアルツハイマー病）、糖尿病（特にＩ型糖尿病）、アテローム性動脈硬化症、またはＩＢＤを治療または予防するために用いられ得る。また、特に好ましい態様において、本発明のワクチン組成物は、乾癬、乾癬性関節炎、またはＩＢＤを治療または予防するために用いられ得る。
　一態様において、本発明のワクチン組成物は、既存のＩＬ－２３関連疾患用治療剤と併用して使用してもよい。例えば、乾癬の治療において、疾患の活動期には即効性の高い抗体医薬で治療を開始し、寛解期に本発明のワクチン組成物の投与を開始することで、患者のＱＯＬと治療コストの両立を図ることができる。
　なお、本明細書における疾患の「治療」には、疾患の治癒のみならず、疾患の寛解および疾患の程度の改善も含まれ得る。
　また、本明細書における疾患の「予防」には、疾患の発症を防ぐことに加えて、疾患の発症を遅らせることが含まれる。加えて、本明細書における疾患の「予防」には、治療後の該疾患の再発を防ぐこと、または治療後の該疾患の再発を遅らせることも含まれ得る。
　また、本明細書における「ワクチン組成物」との用語は、「医薬組成物」または「薬剤」とも言い換えることができる。
２．ＩＬ－２３関連疾患を治療または予防するための方法
　本発明はまた、ＩＬ－２３関連疾患に罹患する対象に本発明のワクチン組成物を投与することを含む、ＩＬ－２３関連疾患を治療または予防するための方法（以下、「本発明の方法」と称することがある）を提供する。
　本発明の方法における、治療または予防対象、本発明のワクチン組成物の投与条件、ＩＬ－２３関連疾患の具体例等は「１．本発明のワクチン組成物」において説明したものと同様である。
３．Ｂ細胞受容体抗原ペプチド
　本発明はまた、本発明のワクチン組成物に含まれるペプチド複合体の一部を構成するＢ細胞受容体抗原ペプチドそのもの（以下、「本発明のＢ細胞受容体抗原ペプチド」と称することがある）を提供する。
　本発明のＢ細胞受容体抗原ペプチドは、
式（Ｉ）：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドであるか、または当該８アミノ酸からなるペプチドであって、
式中、
　Ｘ１がＳ（セリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）、Ｋ（リジン）またはＲ（アルギニン）であり、
　Ｘ２がＰ（プロリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｓ（セリン）、Ｔ（トレオニン）、Ｋ（リジン）またはＲ（アルギニン）であり、
　Ｘ３がＳ（セリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）、Ｋ（リジン）またはＲ（アルギニン）であり、
　Ｘ４がＱ（グルタミン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）またはＮ（アスパラギン）であり、
　Ｘ５がＰ（プロリン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｓ（セリン）、Ｔ（トレオニン）、Ｑ（グルタミン）またはＮ（アスパラギン）であり、
　Ｘ６がＷ（トリプトファン）、Ａ（アラニン）、Ｙ（チロシン）またはＦ（フェニルアラニン）であり、
　Ｘ７がＱ（グルタミン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）、Ｔ（トレオニン）またはＮ（アスパラギン）であり、
　Ｘ８がＲ（アルギニン）、Ａ（アラニン）、Ｇ（グリシン）またはＫ（リジン）であり得る。
　一態様において、式（Ｉ）におけるＸ６はＷであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）におけるＸ７はＱであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）におけるＸ８はＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲまたはＡであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳまたはＡであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳまたはＡであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＱであり（但し、Ｘ２がＳの場合、Ｘ５はＰ、ＡまたはＱである）、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳであり、
　Ｘ２がＰ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳであり、
　Ｘ４がＱであり、
　Ｘ５がＰ、Ｓ、ＴまたはＱであり（但し、Ｘ２がＳの場合、Ｘ５はＰまたはＱである）、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）は、
　Ｘ１がＳであり、
　Ｘ２がＰ、Ａ、ＳまたはＴであり、
　Ｘ３がＳであり、
　Ｘ４がＱまたはＡであり、
　Ｘ５がＰであり、
　Ｘ６がＷまたはＡであり、
　Ｘ７がＱまたはＡであり、
　Ｘ８がＲであり得る。
　一態様において、式（Ｉ）で示される８アミノ酸は、配列番号２および６～１４および１７～２６で表されるアミノ酸配列のいずれかであり得る。
　本発明のＢ細胞受容体抗原ペプチドは、単独で抗ＩＬ－２３抗体を誘導するペプチドワクチンとして使用することができ、また、より好ましい一態様において、Ｔ細胞抗原受容体ペプチドと結合させることで、より免疫原性の高いペプチドワクチンとして使用し得る。本発明のＢ細胞抗原受容体ペプチドの特に好ましい実施形態としては、ＡＪＰ００１をコンジュゲートさせた形態で使用することで、抗ＩＬ－２３抗体を効率的に誘導できるペプチドワクチンとして使用できる。
　以下の実施例において本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
ペプチドの合成（Ｆｍｏｃ法）
　第５版　実験化学講座１６有機化合物の合成ＩＶ等に記載の方法に従い、全自動固相合成機を用いて、保護ペプチド樹脂をＦｍｏｃ法で合成した。得られた保護ペプチド樹脂にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とスカベンジャー（チオアニソール、２，２’－（エチレンジオキシ）ジエタンチオール、ｍ－クレゾール、トリイソプロピルシラン、および、水等の混合物）を加えて、樹脂から切り出すとともに脱保護して、粗ペプチドを得た。この粗ペプチドを、逆相ＨＰＬＣカラムを用いて、０．１％ＴＦＡ－Ｈ２０／ＣＨ３ＣＮの系でグラジエント溶出し、精製を行った。目的物を含む画分を集め凍結乾燥して、目的のペプチドを得た。
ペプチドのＨＰＬＣ分析方法
　合成したペプチドの純度をＨＰＬＣ装置により以下の分析条件で測定した。
ＨＰＬＣ機種：島津製作所　ＬＣＬＣ－２０ＡＤＸＲ
測定波長：２２０　ｎｍ
流量：毎分０．３１　ｍＬ
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ－３，２．１ｍ×２５０ｍｍ，５ｍｉｃｒｏｎ
カラム温度：室温
移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
移動相Ｂ：アセトニトリル
グラジエント条件：３０分間で移動相Ｂの濃度を直線的勾配で５％から８０％にする。（５→８０％　ｂｕｆｆｅｒ　Ｂ　ｉｎ　３０ｍｉｎ）
ペプチドの質量分析
　合成したペプチドの質量をＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳにより以下の分析条件で測定した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ機種：Ｂｒｕｋｅｒ　ａｕｔｏｆｌｅｘ　ｓｐｅｅｄマトリックス：２，５－Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ　ａｃｉｄ
溶解溶液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液とアセトニトリルの混合溶液
［実施例１］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（マウスＩＬ－２３）を用いた抗体産生評価試験
　表１に示すマウスＩＬ－２３由来のエピトープペプチド（配列番号１～５、図１（ａ））をＢ細胞抗原として選択し、Ｔ細胞抗原ＡＪＰ００１（表２、配列番号３８）とε－アミノカプロン酸（「Ａｈｘ」と称することがある）をスペーサーとし、コンジュゲートした複合体（ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド）を作製した（製造は株式会社ペプチド研究所に委託した）。なお、本明細書では、Ｂ細胞エピトープが配列番号「Ｘ」で表されるアミノ酸配列を有するＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを、「ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号Ｘ）」等と称することとする。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　配列番号１～５のいずれかのＢ細胞エピトープ配列を有するＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを生理食塩水に溶解し、０．５　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔で２回、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝５～６）に皮内投与した。投与前および初回投与後５週の時点で採血し、各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドに対する抗体価および組換えマウスＩＬ－２３タンパク質（ｒｍＩＬ－２３）への結合能をＥＬＩＳＡ法で測定した。具体的には、炭酸バッファーで１０　μｇ／ｍＬに溶解したエピトープペプチドを固相化した９６ウェルプレートを５％スキムミルク／ＰＢＳにてブロッキング後、５％スキムミルク／ＰＢＳを用いて段階希釈した血清を添加し、４℃で一晩静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄後、５％スキムミルク／ＰＢＳにて希釈したＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ抗体（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を添加し、室温で３時間振とうした。ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄後、ＴＭＢ溶液（ＳＩＧＭＡ）を添加して遮光で３０分間静置し、０．５Ｍ　Ｈ２ＳＯ４を加えて反応を停止し、プレートリーダーで４５０　ｎｍの吸光度を測定した。吸光度の最大値の１／２（ＯＤ＝１．７５）となる血清希釈倍率を抗体価と定義し、個体値から幾何平均抗体価（Ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ　ｍｅａｎ　ｔｉｔｅｒ：ＧＭＴ）を算出した。ＩＬ－２３タンパク質への結合は、固相化抗原としてｒｍＩＬ－２３（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－ｏｎｌｉｎｅ　ＧｍｂＨ）、ブロッキングにヤギ血清を使用し、抗体価と同様にＥＬＩＳＡ法で測定した。各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドの抗体価およびｒｍＩＬ－２３への結合活性を図１（ｂ）および（ｃ）に示した。その結果、配列番号２のＢ細胞エピトープ配列を有するＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２））を投与したマウスの抗血清において、顕著な抗体価の増加およびｒｍＩＬ－２３への結合が確認された。
［実施例２］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたマウス免疫原性評価試験
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を生理食塩水に溶解し、１　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔で３回、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝６）に皮内投与し、２週毎に８週まで採血した。回収した全ての血清について抗体価（ＧＭＴ）を、６週の時点の血清についてｒｍＩＬ－２３への結合能を、ＥＬＩＳＡ法で測定した（実施例１と同方法）。各時点での抗体価および誘導された抗体のｒｍＩＬ－２３への結合を図２（ａ）および（ｂ）にそれぞれ示した。
　図２（ａ）および（ｂ）に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したマウスの抗血清において、抗体価は２週目から増加し、８週目まで持続した。また、６週後の時点における抗血清には、ｒｍＩＬ－２３へ結合する抗体が含まれることが確認された。
　また、Ｔ細胞活性化評価として、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを実施した。ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝３～４）にＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）または生理食塩水を２週間隔で３回投与し、初回投与後７週の時点で脾臓を採取した。採取した脾臓を注射筒およびセルストレイナーを用いて摩砕した。次いで、ＨＢＳＳ（－）でこれを洗浄および懸濁し、ＡＣＫ　Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ　ｆｉｓｈｅｒ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて赤血球を除去し、脾細胞を単離した。Ｍｏｕｓｅ　ＩＦＮ－γ　ＥＬＩＳｐｏｔ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ　およびＭｏｕｓｅ　ＩＬ－４　ＥＬＩＳｐｏｔ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、各キャプチャー抗体を固相化した９６　ｗｅｌｌ　プレートに１０％ＦＢＳ／１％ペニシリン／ストレプトマイシン／４　ｎｇ／ｍＬ　ｒｍＩＬ－２含有ＲＰＭＩ１６４０培地（培養用培地）で２．５　×　１０＾６　ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように調製して、１００　μＬ／ｗｅｌｌで播種した。各ｗｅｌｌに、（１）培地のみ、（２）１０　μｇ／ｍＬのＴ細胞抗原ＡＪＰ００１（配列番号３８）のみ、（３）１０　μｇ／ｍＬのＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）、または（４）１００　ｎｇ／ｍＬのＰＭＡ／ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ（ＰＭＡ／ＩＭ、Ｓｉｇｍａ社）を添加して脾細胞を刺激した。刺激は、２日間、ＣＯ２インキュベータ内で行った。次いで、検出抗体を添加し、洗浄後、比色反応を行った。染色された細胞を顕微鏡で計測した。ＩＦＮ－γおよびＩＬ－４陽性細胞数は、１０＾６細胞数あたりの細胞数（ＳＦＣ／１０＾６　ｃｅｌｌｓ）として算出した。結果を図２（ｃ）および（ｄ）に示す。なお、図２中、「＊」は有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。
　図２（ｃ）および（ｄ）に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したマウスの脾細胞においては、（２）１０　μｇ／ｍＬのＴ細胞抗原ＡＪＰ００１（配列番号３８）のみ、および、（３）１０　μｇ／ｍＬのＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）、の刺激によって、ＩＦＮ－γおよびＩＬ－４陽性細胞数の増加が確認された。これにより、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド特異的なＴ細胞の活性化が確認された。
［実施例３］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いた乾癬モデルに対する薬効評価試験
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を生理食塩水に溶解し、１　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔で３回、ヘアレスラット（雌、６週齢、Ｎ＝６）に皮内投与した。初回投与後６週の時点から、１日間隔で計４回、２％イミキモド（ＩＭＱ）を耳介に間歇塗布し、乾癬モデルを作製した。なお、対照群として、２％ＩＭＱ塗布群を設けた。薬効は、ＩＭＱ塗布初日から８日目までシックネスゲージ（ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ　ｇａｕｇｅ、ミツトヨ）で耳介厚を測定することで評価した。また、８日目に耳介組織の病理組織学的評価を行った。具体的には、採取した耳介を１０％中性ホルマリンで固定後、定法に従って標本を作製し、ＨＥ染色した。ＨＥ染色標本を顕微鏡で観察し、炎症細胞浸潤、浮腫、肥厚について、４段階（０：正常、１：軽度、２：中等度、３：重度）でスコア化し、スコア総和を算出した。また、６週の時点の血清について抗体価（ＧＭＴ）をＥＬＩＳＡ法で測定した（実施例１と同方法。２次抗体はａｎｔｉ－Ｒａｔ　ＩｇＧ（ＧＥヘルスケア）を使用した）。ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）の抗体価、耳介厚および組織学的検査の結果を図３に示す。なお、図３中、「＊」は、「２％　ＩＭＱ」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。「♯」は、（ｂ）においては「Ｄａｙ　０」、（ｄ）においては「Ｎｏｒｍａｌ（正常群）」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。
　図３に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したヘアレスラットにおいて抗体価の上昇が確認された（図３（ａ））。また、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与した群では、媒体対照群で認められた耳介炎症反応（耳介厚の増加および組織の炎症性変化）に対する抑制作用が確認された（図３（ｂ）、（ｃ）および（ｄ））。
［実施例４］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いたＩＬ－２３誘発マウス耳介炎症モデルに対する薬効評価試験
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を生理食塩水に溶解し、１　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔で、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝８）に３回皮内投与した。初回投与後６週の時点でｒｍＩＬ－２３を耳介皮内投与し、炎症を誘発させた。ｒｍＩＬ－２３の初回投与日をＤａｙ　０とし、Ｄａｙ　２、４、および７の計４回投与した。なお、対照群として、ペプチドを投与しないｒｍＩＬ－２３群を設けた。ｒｍＩＬ－２３の各投与日およびＤａｙ　９にシックネスゲージで耳介厚を測定した。また、耳介中のＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＩＬ－１β、ＬＣＮ－２、およびＣＸＣＬ－２のｍＲＮＡ発現を測定するため、同条件でｒｍＩＬ－２３投与３日目の時点で耳介を採取した。なお、ｍＲＮＡ評価のため、ｒｍＩＬ－２３を投与しない正常群を設定した。採取した耳介は、液体窒素下で凍結粉砕後、ＲＮｅａｓｙ　Ｆｉｂｒｏｕｓ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡを抽出し、次いで、Ｈｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ　ｃＤＮＡ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｃ）を用いて、抽出したＲＮＡのｃＤＮＡを調製した。ＴａｑＭａｎ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｓｓａｙｓ　（Ｓ１８：　Ｍｍ０２６０１７７７＿ｇ１；　ＣＸＣＬ－２：　Ｍｍ００４３６４５０＿ｍ１；　ＩＬ－１７Ａ：　Ｍｍ００４３９６１８＿ｍ１；　ＩＬ－２２：　Ｍｍ０１２２６７２２＿ｍ１；　ＩＬ－１β：　Ｍｍ００４３４２２８＿ｍ１；　ＬＣＮ－２：　Ｍｍ０１３２４４７０＿ｍ１）を使用し、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　７９００ＨＴ　Ｆａｓｔ　Ｒｅａｌ　Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ　でＣｔ値を計測した。ｍＲＮＡ発現量は、ΔΔＣｔ法で算出し、正常群に対する相対値で評価した。ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）の耳介厚およびｍＲＮＡ発現に対する薬効評価の結果を図４に示す。なお、図４中、「＊」は、「ｒｍＩＬ－２３」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。「＃」は、(ａ)においては「Ｄａｙ　０」と比較して、（ｂ）においては「Ｎｏｒｍａｌ（正常群）」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。
　図４（ａ）および（ｂ）に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したマウスにおいて、ｒｍＩＬ－２３群で認められた耳介炎症反応（耳介厚の増加および耳介中のＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＩＬ－１β、ＬＣＮ－２、およびＣＸＣＬ－２のｍＲＮＡ発現）に対する抑制作用が確認された。
［実施例５］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（ヒトＩＬ－２３）を用いた抗体産生および活性評価
　表１に示すヒトＩＬ－２３由来のエピトープ候補ペプチド（配列番号６～３７）をＢ細胞抗原として選択し、Ｔ細胞抗原ＡＪＰ００１（表２、配列番号３８）とε－アミノカプロン酸をスペーサーとし、コンジュゲートした複合体（ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド）を合成した（合成は株式会社東レリサーチセンターに委託した）。
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６～３７）を生理食塩水に溶解し、２％　Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）と等量混合し、これを０．５　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔でＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝５～６）に３回皮内投与した。投与前および初回投与後６週の時点で採血し、各エピトープ配列に対する抗体価（ＧＭＴ）および組換えヒトＩＬ－２３タンパク質（ｒｈＩＬ－２３）（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）への結合能をＥＬＩＳＡ法（実施例１と同方法）で測定した。なお、ｒｈＩＬ－２３への結合は、正常マウス血清を添加したｗｅｌｌの吸光度に対する各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６～３７）を投与したマウス由来の抗血清を添加したｗｅｌｌの吸光度の比を算出し、正常血清に対する結合比として評価した。また、マウス抗血清の中和活性を、ｒｈＩＬ－２３刺激マウス脾細胞におけるＩＬ－１７の産生に対する作用を指標として評価した。正常ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、５週齢、Ｎ＝３）の脾臓を注射筒およびセルストレイナーを用いて摩砕し、次いで、ＨＢＳＳ（－）で洗浄および懸濁した。次いで、ＡＣＫ　Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ　ｆｉｓｈｅｒ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて赤血球を除去し、脾細胞を単離した。脾細胞は、１０％ＦＢＳ／１％ペニシリン／ストレプトマイシン／４　ｎｇ／ｍＬ　ｒｍＩＬ－２含有ＲＰＭＩ１６４０培地（培養用培地）で２．５　×　１０＾６　ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように調製し、１００　μＬ／ｗｅｌｌで９６　ｗｅｌｌ　ｐｌａｔｅに播種した。各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを投与したマウスの抗血清（終濃度　１５倍）およびｒｈＩＬ－２３（終濃度　１０　ｎｇ／ｍＬ）を培養用培地に添加後、３７℃で２時間反応させた後、脾細胞を播種した９６　ｗｅｌｌ　ｐｌａｔｅに１００　μＬ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃／５％ＣＯ２インキュベータ内で３日間培養した。なお、無処置のｗｅｌｌ、正常マウス血清およびｒｈＩＬ－２３を添加した対照ｗｅｌｌを設定した。培養上清中のＩＬ－１７Ａ／ＦをＭｏｕｓｅ　ＩＬ－１７Ａ／Ｆ　ＥＬＩＳＡ　ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ）で測定し、無処置ｗｅｌｌ（Ａ）、対照ｗｅｌｌ（Ｂ）および各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを投与したマウスの抗血清を添加したｗｅｌｌ（Ｃ）の各ＩＬ－１７濃度から以下の式で正常血清に対するＩＬ－１７の割合（％）を算出し、中和活性を評価した。
正常血清に対するＩＬ－１７の割合（％）＝１００　×（Ｃ－Ａ／Ｂ－Ａ）
　各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドの抗体価、ｒｈＩＬ－２３への結合および中和活性を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　表３に示される通り、各ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを投与したマウスの抗血清において、抗体価の増加およびＩＬ－２３への結合が確認された。また、各配列を投与した抗血清について、ＩＬ－１７産生阻害（中和活性）が確認された。
［実施例６］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を用いたマウス免疫原性評価試験
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を生理食塩水に溶解し、１　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔でＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝６）に３回皮内投与し、２週毎に８週まで採血した。回収した全ての血清について抗体価（ＧＭＴ）を、６週の血清についてはｒｈＩＬ－２３への結合能を、ＥＬＩＳＡ法で測定した。ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）の抗体価およびｒｈＩＬ－２３への結合の結果を図５（ａ）および（ｂ）に示す。なお、図５中「＊」はＰ＜０．０５を意味する。
　図５（ａ）および（ｂ）に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したマウスの抗血清において、抗体価は２週から増加し、８週目まで持続した。また、６週後の抗血清においてｒｈＩＬ－２３への結合が確認された。
　また、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）または生理食塩水を２週間隔でＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝３～４）に３回投与し、初回投与後７週の時点で脾臓を採取した。採取した脾臓に対して、Ｍｏｕｓｅ　ＩＦＮ－γ　ＥＬＩＳｐｏｔ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ　およびＭｏｕｓｅ　ＩＬ－４　ＥＬＩＳｐｏｔ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを実施した。結果を図５（ｃ）および（ｄ）に示す。
　図５（ｃ）および（ｄ）に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したマウス由来の脾細胞において、１０　μｇ／ｍＬのＴ細胞抗原ＡＪＰ００１（配列番号３８）、および、１０　μｇ／ｍＬのＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）での刺激により、ＩＦＮ－γおよびＩＬ－４陽性細胞数の増加が確認された。これにより、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド特異的なＴ細胞の活性化が確認された。
［実施例７］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を用いたＩＬ－２３誘発マウス耳介炎症モデルに対する薬効評価試験
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を生理食塩水に溶解し、１　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔でＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝８）に３回投与した。初回投与後６週の時点でｒｈＩＬ－２３を耳介皮内に投与し、炎症を誘発させた。ｒｈＩＬ－２３は、毎日計４回投与した。なお、対照群として、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチドを投与しないｒｈＩＬ－２３群を設けた。ｒｈＩＬ－２３投与後３日および４日の時点でシックネスゲージを用いて耳介厚を測定した。また、耳介中のＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＩＬ－１β、ＬＣＮ－２およびＣＸＣＬ－２のｍＲＮＡ発現を測定した。耳介厚およびｍＲＮＡ発現に対するＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）の薬効評価の結果を図６に示す。なお、図６中、「＊」は、「ｒｈＩＬ－２３」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。「＃」は、「Ｎｏｒｍａｌ（正常群）」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。
　図６に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を投与したマウスにおいて、ｒｈＩＬ－２３群で認められた耳介炎症反応（耳介厚の増加および耳介中のＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＩＬ－１β、ＬＣＮ－２およびＣＸＣＬ－２のｍＲＮＡ発現）に対する抑制作用が確認された。
［実施例８］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を用いたサル免疫原性評価試験
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を生理食塩水に溶解し、５　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔でカニクイザル（雌、４－５歳、Ｎ＝４）に３回皮下投与した。投与初日から２週毎に１６週まで採血し、各時点の血清について抗体価（ＧＭＴ）およびＩＬ－２３への結合をＥＬＩＳＡ法で測定した（実施例１と同方法。２次抗体はＡｎｔｉ－Ｍｏｎｋｅｙ　ＩｇＧ（アブカム）を使用した）。結果を図７に示す。なお、図７中「＊」はＰ＜０．０５を意味する。
　図７（ａ）に示される通り、抗体価は、初回投与後２週から増加し１６週まで持続した。また、初回投与後６週のサル抗血清は、ｒｈＩＬ－２３への結合能を示したが、ｒｍＩＬ－２３への結合は認められなかった（図７（ｂ））。
　次に、初回投与後６週の時点でのサル抗血清からＰｒｏｔｅｉｎ　Ｇ　ＨＰ　ｓｐｉｎ　Ｔｒａｐ（ＧＥヘルスケア）でＩｇＧを精製し、マウス脾細胞をｒｈＩＬ－２３で刺激した際のＩＬ－１７の産生に対する作用について評価した（実施例５と同方法）。結果を図７（ｃ）に示す。
　図７（ｃ）に示される通り、３００　μｇ／ｍＬのサル抗血清由来のＩｇＧを添加することにより、ＩＬ－１７の産生が抑制された。
　さらに、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）で得られたサル抗血清を用いてエピトープ解析を実施した。ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）を固相化した９６ウェルプレートをヤギ血清にてブロッキングした。ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）由来のサル血清にＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６～１４）を１００　μｇ／ｍＬで添加し、４℃で一晩反応させた。反応液を固相化したプレートに添加し、４℃で一晩静置した。なお、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）由来のサル血清のみを添加する対照ｗｅｌｌ、血清を添加しない無処置ｗｅｌｌを設定した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄後、５％スキムミルク／ＰＢＳにて希釈したＨＲＰ標識Ａｎｔｉ－Ｍｏｎｋｅｙ　ＩｇＧ抗体（アブカム）を添加し、室温で３時間振とうした。ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄後、ＴＭＢ溶液を添加して遮光で３０分間静置し、０．５Ｍ　Ｈ２ＳＯ４を加えて反応を停止し、プレートリーダーで４５０　ｎｍの吸光度を測定した。対照ｗｅｌｌ（Ａ）、無処置（Ｂ）、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６～１４）とインキュベーションしたサル血清（Ｃ）の各吸光度値を用い、以下の式で結合率を算出した。
結合率（％）＝１００　－　［１００　×（Ｃ－Ｂ／Ａ－Ｂ）］
　結果を図７（ｄ）に示す。図７（ｄ）に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）の抗血清は、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６～１１）へ結合したが、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号１２～１４）に対する結合率は低下した。この結果から、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号６）で誘導される抗体は、Ｂ細胞抗原配列中のＣ末領域を認識することが示唆された。
［実施例９］ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を用いた２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘発マウス大腸炎モデルに対する薬効評価試験
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を生理食塩水に溶解し、１　ｍｇ／ｍＬのＴｙｐｅ－Ｂ／Ｋ　ＣｐＧ―ＯＤＮ　Ｋ３（株式会社ジーンデザイン、以下「ＣｐＧ」と記載することがある）と等量混合し、１　ｍｇ／ｂｏｄｙ、２週間隔で、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢、Ｎ＝１０）に３回皮下投与した。初回投与後６週の時点で３０％エタノールに溶解したＴＮＢＳを２　ｍｇ／ｂｏｄｙで注腸した。ＴＮＢＳの初回投与日をＤａｙ　０とし、Ｄａｙ　７にＴＮＢＳを３　ｍｇ／ｂｏｄｙで注腸し、大腸炎を誘発した。なお、ＴＮＢＳを投与しないＮｏｒｍａｌ群および３０％ＥｔＯＨ群、ＴＮＢＳを投与するがペプチドを投与しないＳａｌｉｎｅ／ＴＮＢＳ群およびアジュバントのみを投与したＣｐＧ/ＴＮＢＳ群を設けた。ＴＮＢＳ投与日を含め、Ｄａｙ　１、２、３、４、７、８、９及び１０に体重を測定した。Ｄａｙ１０に深麻酔下で心臓採血による安楽死後、得られた血清について抗体価（ＧＭＴ）およびｍＩＬ―２３への結合をＥＬＩＳＡ法で測定した（実施例１と同方法）。また、大腸組織を採取し、大腸の長さ（ｃｍ）を測定後、肛門から２ｃｍ部分についてサイトカインｍＲＮＡ発現の測定、２から４ｃｍ部分については病理組織学的検査を実施した。サイトカインのｍＲＮＡ発現は、氷冷下でビーズ破砕後、ＲＮｅａｓｙ　Ｆｉｂｒｏｕｓ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡを抽出し、次いで、Ｈｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ　ｃＤＮＡ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｃ）を用いて、抽出したＲＮＡのｃＤＮＡを調製した。ＴａｑＭａｎ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｓｓａｙｓ（ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１；ＩＬ－１７Ａ：Ｍｍ００４３９６１８＿ｍ１；ＩＬ－１７Ｆ：Ｍｍ００５２１４２３＿ｍ１；ＩＬ－２２：Ｍｍ０１２２６７２２＿ｍ１；ＩＬ－２３：Ｍｍ００５１８９８４＿ｍ１；ＩＬ－１β：Ｍｍ００４３４２２８＿ｍ１）を使用し、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　７９００ＨＴ　Ｆａｓｔ　Ｒｅａｌ　Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ＳｙｓｔｅｍでＣｔ値を計測した。ｍＲＮＡ発現量は、ΔΔＣｔ法で算出し、正常群に対する相対値で評価した。病理組織学的検査は、採取した大腸を１０％中性ホルマリンで固定後、定法に従って標本を作製し、ＨＥ染色した。ＨＥ染色標本を顕微鏡で観察し、炎症細胞浸潤（Ｇｒａｄｅ：０－３）、大腸組織障害深度（Ｇｒａｄｅ：０－３）及び大腸粘膜障害範囲（Ｇｒａｄｅ：０－４）でスコア化し、スコア総和を算出した。
　ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）の抗体価、ｒｍＩＬ－２３への結合、体重推移（Ｄａｙ　０からの変化率）、大腸の長さ、大腸組織中ｍＲＮＡ発現および病理組織学的検査における薬効評価の結果を図８－１、図８－２、図８－３および図８－４に示す。なお、図中、「♯」は、「０ｗ」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。「＊」は、「Ｓａｌｉｎｅ/ＴＮＢＳ」あるいは「ＣｐＧ／ＴＮＢＳ」と比較して、有意である（Ｐ＜０．０５）ことを意味する。
　図に示される通り、ＡＪＰ００１コンジュゲートペプチド（配列番号２）を投与したマウスにおいて、Ｓａｌｉｎｅ／ＴＮＢＳあるいはＣｐＧ／ＴＮＢＳ群で認められた大腸炎（体重減少、大腸長の短縮、大腸組織の炎症性変化および組織中のＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２およびＩＬ－１βのｍＲＮＡ発現）に対する抑制作用が確認された。
　本発明によれば、ＩＬ－２３が関連する様々な疾患の治療および／または予防のためのペプチドワクチンを低コストで製造できるため、医薬品の製造分野において極めて有用である。
　本出願は、日本で出願された特願２０２１－１９９５６１（出願日：２０２１年１２月８日）および特願２０２２－１６２７９５（出願日：２０２２年１０月７日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (11)

  1. 　Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとの複合体を含む、ＩＬ－２３に対する抗体の産生を誘導し得るワクチン組成物であって、該Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、以下の式（Ｉ）：
    　Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８（Ｉ）
    で表され、式中、
    　Ｘ１がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
    　Ｘ２がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
    　Ｘ３がＳ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＫまたはＲであり、
    　Ｘ４がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
    　Ｘ５がＰ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＱまたはＮであり、
    　Ｘ６がＷ、Ａ、ＹまたはＦであり、
    　Ｘ７がＱ、Ａ、Ｇ、ＴまたはＮであり、
    　Ｘ８がＲ、Ａ、ＧまたはＫである、ワクチン組成物。
  2. 　前記Ｂ細胞受容体抗原ペプチドにおいてＸ６がＷである、請求項１記載のワクチン組成物。
  3. 　前記Ｂ細胞受容体抗原ペプチドにおいてＸ７がＱである、請求項１または２記載のワクチン組成物。
  4. 　前記Ｂ細胞受容体抗原ペプチドにおいてＸ８がＲである、請求項１～３のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  5. 　Ｂ細胞受容体抗原ペプチドが、配列番号２、６～１４および１７～２６のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  6. 　Ｔ細胞受容体抗原ペプチドが配列番号３８で表されるアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  7. 　複合体が、Ｔ細胞受容体抗原ペプチドのＣ末端とＢ細胞受容体抗原ペプチドのＮ末端との間で結合している、請求項１～６のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  8. 　Ｔ細胞受容体抗原ペプチドとＢ細胞受容体抗原ペプチドとがリンカーを介して結合されている、請求項１～７のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  9. 　アジュバントとしての添加物を含有しない、請求項１～８のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  10. 　ＩＬ－２３関連疾患の治療または予防のための、請求項１～９のいずれか一項記載のワクチン組成物。
  11. 　ＩＬ－２３関連疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、糖尿病（好ましくはＩ型糖尿病）、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）／クローン病、多発性硬化症、ベーチェット病、強直性脊椎炎、フォークト・小柳・原田病、慢性肉芽腫症、化膿性汗腺炎、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、神経変性疾患、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病およびがんからなる群から選択される、請求項１０記載のワクチン組成物。
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