[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

WO2022270585A1 - アンチセンスオリゴマーの組み合わせ - Google Patents

アンチセンスオリゴマーの組み合わせ Download PDF

Info

Publication number
WO2022270585A1
WO2022270585A1 PCT/JP2022/025120 JP2022025120W WO2022270585A1 WO 2022270585 A1 WO2022270585 A1 WO 2022270585A1 JP 2022025120 W JP2022025120 W JP 2022025120W WO 2022270585 A1 WO2022270585 A1 WO 2022270585A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
seq
base sequence
base
sequence
unit
Prior art date
Application number
PCT/JP2022/025120
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
悠一郎 戸根
吉嗣 青木
紀夫 本橋
Original Assignee
日本新薬株式会社
国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to MX2023014417A priority Critical patent/MX2023014417A/es
Priority to CN202280044513.5A priority patent/CN117940564A/zh
Priority to BR112023027298A priority patent/BR112023027298A2/pt
Priority to IL309626A priority patent/IL309626A/en
Priority to AU2022298028A priority patent/AU2022298028A1/en
Priority to JP2023530119A priority patent/JPWO2022270585A1/ja
Application filed by 日本新薬株式会社, 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター filed Critical 日本新薬株式会社
Priority to CA3224782A priority patent/CA3224782A1/en
Priority to EP22828501.1A priority patent/EP4361269A1/en
Priority to KR1020247000786A priority patent/KR20240024176A/ko
Priority to US18/570,778 priority patent/US20240301416A1/en
Publication of WO2022270585A1 publication Critical patent/WO2022270585A1/ja
Priority to CONC2023/0016805A priority patent/CO2023016805A2/es

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/314—Phosphoramidates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3233—Morpholino-type ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/51—Physical structure in polymeric form, e.g. multimers, concatemers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/31—Combination therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition or combination drug for treating muscular dystrophy, a method for treating muscular dystrophy, and the like.
  • DMD Duchenne muscular dystrophy
  • DMD is the most common hereditary progressive muscle disease, occurring in approximately 1 in 3,500 male births. DMD patients show almost the same motor function as healthy people in infancy, but muscle weakness is observed from about 4 to 5 years old. Subsequently, muscle weakness in DMD patients progresses with age until they become unable to walk by about the age of 12, and die of heart failure or respiratory failure in their 20s. Therefore, there is a strong demand for the development of effective therapeutic agents.
  • the dystrophin gene is located on the X chromosome and is a large gene consisting of 2.2 million bases of DNA.
  • the mRNA is transcribed from DNA to pre-mRNA, and the intron is removed by splicing to combine 79 exons, resulting in 13,993 bases. This mRNA is translated into 3,685 amino acids to produce the dystrophin protein.
  • the dystrophin protein is involved in maintaining muscle cell membrane stability and is necessary to make muscle cells less fragile. Because DMD patients have mutations in the dystrophin gene, functional dystrophin protein is rarely expressed in their muscle cells. Therefore, in DMD patients, the structure of muscle cells cannot be maintained during muscle contraction, and a large amount of calcium ions flow into muscle cells. As a result, muscle cell necrosis and fibrosis progress, and muscle cell regeneration becomes increasingly difficult.
  • Becker muscular dystrophy is also caused by mutations in the dystrophin gene, but although its symptoms present with muscle weakness, it is generally milder than DMD, the progression of muscle weakness is slow, and in many cases it develops in adulthood.
  • the difference in clinical symptoms between DMD and BMD is thought to be due to whether the mutation disrupts or maintains the amino acid open reading frame during translation of dystrophin mRNA into dystrophin protein (Non-Patent Document 1). Reference 1).
  • DMD functional dystrophin protein is hardly expressed due to the mutation that shifts the amino acid open reading frame
  • BMD although part of the exon is deleted due to the mutation, the amino acid open reading frame is maintained.
  • An imperfect but functional dystrophin protein is produced.
  • the exon skipping method is expected as a treatment for DMD.
  • This method restores the amino acid reading frame of dystrophin mRNA by altering splicing, and induces the expression of dystrophin protein with partially restored function (Non-Patent Document 2).
  • the amino acid sequence portion translated from the exons targeted for exon skipping is lost.
  • the dystrophin protein expressed in this treatment is therefore shorter than normal, but partially retains its ability to stabilize muscle cells because the amino acid open reading frame is preserved. Therefore, exon skipping is expected to cause DMD to mimic symptoms of milder BMD.
  • the exon skipping method has undergone animal experiments using mice and dogs, and is now being clinically tested on human DMD patients.
  • Exon skipping can be induced by binding of antisense nucleic acids targeting either or both around the 5' or 3' splice sites, or inside exons. Exons are included in the mRNA only if both splice sites are recognized by the spliceosome complex. Therefore, exon skipping can be induced by targeting around splice sites with antisense nucleic acids. Moreover, binding of serine- and arginine-rich SR proteins to exon splicing enhancers (ESEs) is thought to be necessary for exons to be recognized by the splicing machinery, and targeting ESEs may also lead to exon skipping. can be induced.
  • ESEs exon splicing enhancers
  • exons 45-55 are known to be mutation hotspots, and by skipping these 11 exons, approximately 60% of DMD patients with deletion mutations can be treated. is reported to be possible (Non-Patent Document 3).
  • BMD occurs when exons 45 to 55 are congenitally deleted, but most of the patients are known to be asymptomatic or mild (Non-Patent Document 4). Based on these findings, agents capable of inducing exon 45-55 skipping are expected to be promising therapeutic agents for DMD.
  • Methods for inducing multi-exon skipping include, for example, methods using antisense nucleic acids that target all exons in regions targeted for exon skipping (Non-Patent Documents 5, 7, 8, and 10), and exon skipping.
  • a method using antisense nucleic acids that target two different exons on the 3' side and 5' side of the target region Non-Patent Documents 6 and 9 and Patent Documents 8, 9, and 11
  • exon skipping target A method using an antisense nucleic acid that targets only the 5′-side exon of the region that becomes the target has been reported (Patent Document 10).
  • the present invention provides the following combinations of antisense oligomers, pharmaceutically acceptable salts thereof, or hydrates thereof, pharmaceutical compositions, pharmaceutical combinations, therapeutic methods for muscular dystrophy, and the like.
  • An antisense oligomer that simultaneously skips any two or more consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA, or a pharmaceutical thereof A combination of acceptable salts or hydrates thereof, (i) a nucleotide sequence of 11 bases from the 3' end to the 5' end of the 44th intron of the human dystrophin pre-mRNA and 69 bases from the 5' end to the 3' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA; a first unit oligomer comprising a base sequence complementary to the base sequence consisting of the sequence or a base sequence of a part thereof, and 52 in the 3' end to 5' end direction of the 44th intron of the human dystrophin pre-mRNA
  • a second antisense oligomer comprising a nucleotide sequence consisting of a nucleotide sequence or a nucleotide sequence complementary to a partial nucleotide sequence thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof; a combination, including (2) the first unit oligomer comprises a nucleotide sequence of 11 bases from the 3' end to the 5' end of the 44th intron of the human dystrophin pre-mRNA and 3 bases from the 5' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA; 'Contains a base sequence complementary to 15 to 30 consecutive bases of a base sequence consisting of a base sequence of 69 bases in the terminal direction, The second unit oligomer comprises 1 to 10 continuous bases in the base sequence from the 52nd base to the 75th base in the 3'-end to 5'-end direction of the 44th intron of the human dystrophin pre-mRNA.
  • the pre-second antisense oligomer comprises a nucleotide sequence of 33 bases from the 3' end to the 5' end of the 54th intron of the human dystrophin pre-mRNA and the 5' end to the 3' end of the 55th exon of the human dystrophin pre-mRNA.
  • the combination according to (1) comprising a base sequence complementary to 15 to 30 consecutive bases of a base sequence consisting of a base sequence of 53 bases in one direction.
  • the first unit oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 211 to 906; (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 211-906; (c) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 211 to 906, and ⁇ 15 compared to the length of any one of the selected base sequences % or less, or (d) complementary to a partial base sequence of any one base sequence selected from the group consisting of (a), (b), and (c) comprising a base sequence, and/or wherein the second unit oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 105; (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide
  • the second antisense oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3507 to 4298, (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 3507 to 4298; (c) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3507 to 4298, and ⁇ 15 compared to the length of any one of the selected base sequences % or less, or (d) complementary to a partial base sequence of any one base sequence selected from the group consisting of (a), (b), and (c) containing a base sequence, A combination according to any one of (1) to (3).
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and the first unit oligomer is any one of SEQ ID NOs: 907 to 1602; sequence, wherein the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOS: 106-210, and the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOS: 4299-5090, (1) The combination according to any one of to (4).
  • the first unit oligomer comprises any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1180, 1190, 1201, 1212, 1222, 1224, and 1239, (1) to (5) A combination according to any one of (7) Any one of (1) to (6), wherein the second unit oligomer comprises any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 114, 124, 151, 201, 203, and 205. Combinations described in Crab.
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151; the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 201; the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 203; the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 205; the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1239, and the first
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 201, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • mosquito The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 203, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • mosquito The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 205, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1239
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 114
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • mosquito The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1224
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 124
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1180
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • mosquito The first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1190
  • the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1212
  • the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • contains or The first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1222
  • the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains or The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4698.
  • mosquito The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4702.
  • mosquito The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4752.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4923.
  • mosquito The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4926.
  • mosquito The first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4936.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4977.
  • mosquito contains the base sequence of SEQ ID NO: 1180
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4977.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer contains the base of SEQ ID NO: 4950 or 4880.
  • a third antisense oligomer comprising a base sequence consisting of a base sequence of 73 bases or a base sequence complementary to a partial base sequence thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof, A combination according to any one of (1) to (11).
  • the third antisense oligomer comprises a nucleotide sequence of 23 bases from the 3' end to the 5' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA and from the 5' end of the 45th intron;
  • the third antisense oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1603 to 2554, (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1603 to 2554; (c) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1603 to 2554, and ⁇ 15 compared to the length of any one base sequence selected % or less, or (d) complementary to a partial base sequence of any one base sequence selected from the group consisting of (a), (b), and (c) containing a base sequence, The combination according to (12) or (13).
  • the third antisense oligomer is (a) SEQ. Any one base sequence selected from the group consisting of ⁇ 2292, 2313-2356, 2378-2421, 2444-2487, and 2511-2554, (b) SEQ. -2292, 2313-2356, 2378-2421, 2444-2487, and a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one of the nucleotide sequences selected from the group consisting of 2511-2554 , (c) SEQ.
  • the third antisense oligomer comprises a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 3060, 3065, 3077, 3082, 3087, 3090, 3096, 3108, 3119, and 3320, (1 ) to (14).
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and the first unit oligomer is any one of SEQ ID NOs: 907 to 1602.
  • the second unit oligomer comprises a nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOs: 106-210
  • the second antisense oligomer comprises a nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOs: 4299-5090
  • the third The combination according to any one of (12) to (17), wherein the antisense oligomer of comprises any of the base sequences of SEQ ID NOS:2555-3506.
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 201, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 203, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 205, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1239, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 114, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1224, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 124, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1180, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1190, the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • said third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1212, the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • said third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1222, the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • said third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3060;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3065;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3077;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3087;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3090;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3096;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3108;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3119;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3320;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4698.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4702.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4752.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4923.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4926.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4936.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4977.
  • the third antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4977.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3096;
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1180, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4977.
  • the third antisense oligomer comprises the base sequence of SEQ ID NO: 3096; A combination according to any one of (1) to (18).
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base of SEQ ID NO: 4950 or 4880.
  • the sugar moiety of at least one nucleotide constituting the oligonucleotide and the -OH group at the 2' position are -OR, -R, -R'OR, -SH, -SR, -NH 2 , -NHR , —NR 2 , —N 3 , —CN, —F, —Cl, —Br, and —I is ribose substituted with any group selected from the group consisting of (22) or (23) 3.
  • the phosphate-binding portion of at least one nucleotide constituting the oligonucleotide is selected from the group consisting of a phosphorothioate bond, a phosphorodithioate bond, an alkylphosphonate bond, a phosphoramidate bond, and a boranophosphate bond;
  • the combination according to any one of (22) to (24), which is any one of (26) The combination according to any one of (1) to (11), wherein the first to second antisense oligomers are morpholino oligomers, or the first to third antisense oligomers are oligonucleotides. , (12) to (21).
  • a pharmaceutical composition comprising the first and second antisense oligomers of any one of (a)(1) to (28) or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof, or (b) a pharmaceutical composition comprising the first antisense oligomer of any of (i) (1) to (28) or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof; and (ii) A pharmaceutical combination of a pharmaceutical composition comprising the second antisense oligomer according to any one of (1) to (28), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof.
  • a pharmaceutical composition comprising the first to third antisense oligomers of any one of (a) (12) to (28) or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof, or (b) a pharmaceutical composition comprising the first antisense oligomer according to any one of (i) (12) to (28) or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof, (ii) ( 12) a pharmaceutical composition comprising the second antisense oligomer of any one of -(28) or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof; and (iii) (12) - (28) or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof. (31) The pharmaceutical composition or pharmaceutical combination according to (29) or (30), wherein the pharmaceutical composition further comprises a pharmaceutically acceptable carrier.
  • a method for treating muscular dystrophy comprising the step of administering the described pharmaceutical composition or pharmaceutical combination to a patient with muscular dystrophy.
  • the present invention provides a combination of antisense oligomers that simultaneously skip multiple target exons. Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition or combination for treating muscular dystrophy patients with various mutations by simultaneously skipping multiple exons of the pre-mRNA of interest. Also, according to another aspect of the present invention, exons 45 to 55 of human dystrophin pre-mRNA can be simultaneously skipped with high efficiency.
  • FIG. 10 shows the results of examining exons 45 to 55 of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR (total PMO concentration: 30 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR (total concentration of PMO added: 30 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of examining exons 45 to 55 of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • 2-2 is Mixture 2 + PMO No.3 (1:1)
  • 2-4 is Mixture2 + PMO No.3 (1:2)
  • 2-5 is PMO No.3 only
  • 2 -7 indicates the result of treatment with Mixture 2 only
  • NT means not treated (PMO total concentration: 15 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • 2-2 is Mixture 2 + PMO No.3 (1:1)
  • 2-4 is Mixture2 + PMO No.3 (1:2)
  • 2-5 is PMO No.3 only
  • 2 -7 indicates the result of treatment with Mixture 2 only
  • NT means not treated (PMO total concentration: 15 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of examining exons 45 to 55 of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • 3-2 is Mixture2 + PMO No.4 (1:1)
  • 3-4 is Mixture2 + PMO No.4 (1:2)
  • 3-5 is PMO No.4 only
  • 3- 7 indicates the result of treatment with Mixture 2
  • NT means not treated (PMO total concentration: 15 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of examining exons 45 to 55 of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • 2-1 is Mixture2 only
  • 2-2 is Mixture2 + PMO No.3 (1:1)
  • 2-3 is Mixture2 + PMO No.3 (2:1)
  • 2-4 is Mixture2 + indicates the result of treatment with PMO No.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • 2-1 is Mixture2 only
  • 2-2 is Mixture2 + PMO No.3 (1:1)
  • 2-3 is Mixture2 + PMO No.3 (2:1)
  • 2-4 is Mixture2 + indicates the result of treatment with PMO No. 3 (3:1)
  • NT means not treated (PMO total concentration: 15 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of examining exons 45 to 55 of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • NC is Endo-porter only
  • Mix2 is a mixture containing both PMO No.1 and PMO No.2 at a final concentration of 25 ⁇ M
  • Mix2 + hnRNP A1 is a mixture containing both PMO No.1 and PMO No.2.
  • the results of treatment with a mixture containing a concentration of 18.75 ⁇ M and PMO No. 3 at a final concentration of 12.5 ⁇ M are shown (total concentration of PMO added: 50 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells by RT-PCR.
  • NC is Endo-porter only
  • Mix2 is a mixture containing both PMO No.1 and PMO No.2 at a final concentration of 25 ⁇ M
  • Mix2 + hnRNP A1 is a mixture containing both PMO No.1 and PMO No.2.
  • the results of treatment with a mixture containing a concentration of 18.75 ⁇ M and PMO No. 3 at a final concentration of 12.5 ⁇ M are shown (total concentration of PMO added: 50 ⁇ M).
  • FIG. 10 shows the results of Western blotting examination of dystrophin protein expression by skipping exons 45 to 55 of mouse dystrophin pre-mRNA in H2K-mdx52 cells.
  • NC is Endo-porter only
  • Mix2 is a mixture containing both PMO No.1 and PMO No.2 at a final concentration of 25 ⁇ M
  • Mix2+hnRNP A1 is a mixture containing both PMO No.1 and PMO No.2 at a final concentration of 25 ⁇ M. 18.75 ⁇ M and the results of treatment with a mixture containing PMO No. 3 at a final concentration of 12.5 ⁇ M are shown, NT means Not treated (PMO total added concentration: 50 ⁇ M).
  • FIG. 2 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in normal human-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 1 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in normal human-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 2 shows the results of examining exon 45 skipping in normal human-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 48-50-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 48-50-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 48-50-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 48-50-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of Western blotting examination of exon 45-55 multi-exon skipping in exon 48-50-deficient DMD patient-derived myoblasts.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 46-51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 46-51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 46-51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 46-51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 2 shows the results of Western blotting studies on exon 45-55 multi-exon skipping in exon 46-51-deleted DMD patient-derived myoblasts.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 51-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 51-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 51-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 51-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 51-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 51-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of examining exon 45 skipping in exon 51-deficient DMD patient-derived myoblasts by RT-PCR.
  • FIG. 10 shows the results of Western blotting examination of exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts.
  • FIG. 10 shows the results of Western blotting examination of exon 45-55 multi-exon skipping in exon 51-deleted DMD patient-derived myoblasts.
  • the present invention is an antisense that simultaneously skips any two or more consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA.
  • a combination of oligomers or pharmaceutically acceptable salts or hydrates thereof (i) a nucleotide sequence of 11 bases from the 3' end to the 5' end of the 44th intron of the human dystrophin pre-mRNA and 69 bases from the 5' end to the 3' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA; a first unit oligomer comprising a base sequence complementary to the base sequence consisting of the sequence or a base sequence of a part thereof, and 52 in the 3' end to 5' end direction of the 44th intron of the human dystrophin pre-mRNA
  • a first antisense oligomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof comprising a second unit oligomer comprising a nucleotide sequence complementary to the base sequence from the
  • a second antisense oligomer comprising a nucleotide sequence consisting of a nucleotide sequence or a nucleotide sequence complementary to a partial nucleotide sequence thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof;
  • a combination that includes The above combination is hereinafter also referred to as the "combination of the present invention.
  • each antisense oligomer in the combination of the invention is contained in one pharmaceutical composition and administered at the same time.
  • each antisense oligomer in the combination of the invention is contained in multiple pharmaceutical compositions and administered separately (simultaneously or sequentially).
  • administering multiple pharmaceutical compositions means administering multiple pharmaceutical compositions at the same time.
  • administration of multiple pharmaceutical compositions means administration at different times. Specifically, one pharmaceutical composition can be administered before or after the other pharmaceutical composition, where the dosing interval can be, but is not limited to, minutes, hours, or days. good.
  • a third antisense oligomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof described herein is also collectively referred to as "the antisense oligomer of the present invention”.
  • Antisense oligomers of the present invention may refer to each of said antisense oligomers, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or hydrates thereof.
  • first antisense oligomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof is also referred to as “the first antisense oligomer of the present invention”
  • second antisense oligomer An oligomer, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof is also referred to as "the second antisense oligomer of the present invention”.
  • gene includes cDNA, pre-mRNA and mRNA in addition to genomic genes, and preferably the gene is pre-mRNA.
  • pre-mRNA is an RNA molecule containing exons and introns transcribed from a target gene on the genome, and is a pre-mRNA.
  • Human dystrophin pre-mRNA is an RNA molecule containing exons and introns transcribed from the human dystrophin gene on the genome, and is a pre-mRNA.
  • a person skilled in the art can obtain information on the base sequence of human dystrophin pre-mRNA by analogy with the genomic sequence of the human dystrophin gene (GenBank Accession No. NG_012232.1).
  • the human dystrophin gene exists at locus Xp21.2.
  • the human dystrophin gene has a size of approximately 3.0 Mbp, making it the largest known human gene.
  • the coding region of the human dystrophin gene is only about 14 kb, and the coding region is dispersed within the dystrophin gene as 79 exons (Roberts, RG., et al., Genomics, 16: 536-538 (1993)).
  • the human dystrophin gene transcript, pre-mRNA undergoes splicing to produce a mature mRNA of approximately 14 kb.
  • the base sequence of human wild-type dystrophin gene mature mRNA is known (GenBank Accession No. NM_004006).
  • the first antisense oligomer of the present invention comprises a first unit oligomer and a second unit oligomer or consists of a first unit oligomer and a second unit oligomer.
  • the first unit oligomer comprises a base sequence of 11 nucleotides from the 3' end to the 5' end of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA and 69 nucleotides from the 5' end to the 3' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA.
  • Targets a base sequence of bases.
  • the term “targeted” means that the base sequence of interest is a base sequence complementary to the base sequence of the target region or a partial base sequence of the target sequence.
  • the target sequence of the first unit oligomer has the boundary between the 3' end of intron 44 and the 5' end of exon 45 as the base point 0, and the base sequence region on the 5' side (upstream) of the base point on the dystrophin gene as "- ” (minus), and when the 3′ side (downstream) base sequence region is indicated by “+”, it can be expressed in the range of ⁇ 11 bases to +69 bases.
  • the region represented by the range of ⁇ 11 bases to ⁇ 1 bases belongs to intron 44
  • the region represented by the range of +1 bases to +69 bases belongs to exon 45.
  • the first unit oligomer comprises a base sequence of 11 nucleotides from the 3' end to the 5' end of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA and 69 nucleotides from the 5' end to the 3' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA. It includes a base sequence complementary to the base sequence of the base base sequence or a partial base sequence thereof.
  • the second unit oligomer targets the nucleotide sequence from the 52nd to 75th bases in the 3'-end to 5'-end direction of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA.
  • the target sequence of the second unit oligomer has a boundary between the 3' end of intron 44 and the 5' end of exon 45 as the base point 0, and the base sequence region on the 5' side (upstream) of the base point on the dystrophin gene as "- " (minus), and when the 3' side (downstream) base sequence region is indicated by "+”, it can be expressed in the range of -75 bases to -52 bases. At this time, the region represented by the range of -75 bases to -52 bases belongs to intron 44.
  • the second unit oligomer is complementary to the base sequence from the 52nd base to the 75th base in the 3'-end to 5'-end direction of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA, or a partial base sequence thereof. contains a typical base sequence.
  • the second antisense oligomer of the present invention comprises a 33 base sequence from the 3' end to the 5' end of the 54th intron of human dystrophin pre-mRNA and a 3' end from the 5' end of the 55th exon of the human dystrophin pre-mRNA.
  • a base sequence consisting of a base sequence of 53 bases in the terminal direction is targeted.
  • the target sequence of the second antisense oligomer has the boundary between the 3′ end of intron 54 and the 5′ end of exon 55 as the base point 0, and the base sequence region on the 5′ side (upstream) of the base point on the dystrophin gene as “ -" (minus), and when the 3' side (downstream) base sequence region is indicated by "+”, it can be expressed in the range of -33 bases to +53 bases.
  • the region represented by the range of ⁇ 33 bases to ⁇ 1 bases belongs to intron 54
  • the region represented by the range of +1 bases to +53 bases belongs to exon 55.
  • the antisense oligomer of No. 2 has a base sequence of 33 bases from the 3' end to the 5' end of the 54th intron of human dystrophin pre-mRNA and a 53 base sequence from the 5' end of the 55th exon to the 3' end of the human dystrophin pre-mRNA. It includes a base sequence complementary to the base sequence of bases or a partial base sequence thereof.
  • the combination of the present invention further comprises 23 bases from the 3' end to the 5' end of the 45th exon of human dystrophin pre-mRNA. and a nucleotide sequence consisting of a nucleotide sequence of 73 nucleotides from the 5' end to the 3' end of the 45th intron, or a nucleotide sequence complementary to a partial nucleotide sequence thereof, or A pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof may also be included.
  • the third antisense oligomer, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof is also referred to as "the third antisense oligomer of the present invention”.
  • the third antisense oligomer of the present invention comprises a nucleotide sequence of 23 bases from the 3' end to the 5' end of the 45th exon of human dystrophin pre-mRNA and 3' from the 5' end of the 45th intron of the human dystrophin pre-mRNA.
  • a base sequence consisting of a base sequence of 73 bases in the terminal direction is targeted.
  • the target sequence of the third antisense oligomer has the boundary between the 3′ end of exon 45 and the 5′ end of intron 46 as the base point 0, and the base sequence region on the 5′ side (upstream) of the base point on the dystrophin gene as “ -" (minus), and when the 3' side (downstream) base sequence region is indicated by "+”, it can be expressed in the range of -23 bases to +73 bases.
  • the region represented by the range of ⁇ 23 bases to ⁇ 1 bases belongs to exon 45
  • the region represented by the range of +1 base to +73 bases belongs to intron 46.
  • the third antisense oligomer comprises a 23 base sequence from the 3' end to the 5' end of the 45th exon of human dystrophin pre-mRNA and a 23 base sequence from the 5' end to the 3' end of the 45th intron of human dystrophin pre-mRNA. It contains a base sequence complementary to a base sequence consisting of a base sequence of 73 bases or a partial base sequence thereof.
  • peripheral sequences of the target sequences of the first and second unit oligomers, the second antisense oligomer, and the third antisense oligomer contained in the first antisense oligomer of the present invention are shown below. and those listed in Table 1.
  • target sequences of the first and second unit oligomers, the second antisense oligomer, and the third antisense oligomer contained in the first antisense oligomer of the present invention are shown in Table 2 below. Those described in .
  • thymine “T” and uracil “U” are interchangeable, and both "T” and “U” are inherent in the exon-skipping activity of the antisense oligomers of the invention. Since there is no effect, the same sequence numbers are used in the base sequences shown in this specification, including cases where "T” is “U”. In the table below, “U” may be represented by “T” even in the base sequence of pre-mRNA. can do.
  • “Ha” represents the a-th exon of the human dystrophin gene
  • "b” represents the 5'-terminal base of the target nucleotide sequence
  • "c” represents the 3'-terminal base of the target nucleotide sequence.
  • 'b' and 'c' are positive integers
  • 'b' and 'c' respectively represent the 3'-terminal direction when the 5'-terminal base of the a-th exon is the first base. It indicates whether it is the th base or not.
  • 'b' and 'c' are negative integers
  • 'b' and 'c' are respectively , represents the number of the base in the direction of the 5′ end.
  • the 5' end of the target base sequence is the 75th base in the 5' direction from the 3' end of the 54th intron
  • the target It means a nucleotide sequence in which the 3' end of the nucleotide sequence is the 52nd nucleotide in the direction from the 3' end of the 54th intron to the 5' end.
  • the surrounding sequences of the target regions of the antisense oligomers of the present invention or their target sequences include not only wild-type (for example, nucleotide sequences shown in SEQ ID NOs: 5021 to 5027) but also mutant-type human dystrophin pre-mRNAs. things are also included. Such mutants have, for example, any one base sequence selected from the group consisting of the following base sequences (B0) and (B1) to (B16).
  • (B0) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 5021 to 5027; (B1) having a sequence identity of 85% or more with any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 5021 to 5027, and ⁇ 15 compared to the length of any one of the selected nucleotide sequences 86% or more sequence identity with any one base sequence selected from the group consisting of base sequence (B2) SEQ ID NOS: 5021 to 5027 having a length within %, and any one selected above A nucleotide sequence (B3) having a length within ⁇ 14% of the length of one nucleotide sequence, and having a sequence identity of 87% or more with any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 5021 to 5027 and any one base sequence selected from the group consisting of a base sequence (
  • nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions means, for example, all or one of the nucleotide sequences complementary to any one selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 5021 to 5027. It refers to a base sequence obtained by colony hybridization, plaque hybridization, Southern hybridization, or the like, using the portion as a probe.
  • Hybridization methods include, for example, “Sambrook & Russel, Molecular Cloning: A Laboratory Manual Vol. 3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001”, “Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1987-1997" You can use the method described in
  • the term "complementary base sequence” is not limited to a base sequence that forms a Watson-Crick pair with the base sequence of interest, and a base that forms a wobble base pair. Also includes arrays.
  • the Watson-Crick pair means a base pair in which a hydrogen bond is formed between adenine-thymine, adenine-uracil, and guanine-cytosine
  • the fluctuation base pair means guanine-uracil, inosine-uracil
  • the "complementary base sequence” may not have 100% complementarity with the target base sequence. Non-complementary bases of bases, 4 bases, or 5 bases may be included, and base sequences that are 1 base, 2 bases, 3 bases, 4 bases, or 5 bases shorter than the target base sequence may be
  • stringent conditions may be low stringent conditions, moderately stringent conditions, or highly stringent conditions.
  • Low stringent conditions are, for example, 5x SSC, 5x Denhardt's solution, 0.5% SDS, 50% formamide, and 32°C.
  • Modely stringent conditions include, for example, 5x SSC, 5x Denhardt's solution, 0.5% SDS, 50% formamide at 42°C or 5x SSC, 1% SDS, 50 mM Tris-HCl (pH 7.0). 5), 50% formamide, 42°C.
  • “Highly stringent conditions” are, for example, 5 ⁇ SSC, 5 ⁇ Denhardt's solution, 0.5% SDS, 50% formamide, 50 ° C.
  • the membrane was washed with a primary washing buffer containing 0.1% (w/v) SDS at 55°C. After washing, hybridization can be detected.
  • a probe based on all or part of a base sequence complementary to any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 233-256, 341-369, and 385-389
  • DIG digoxigenin
  • the identity of the nucleotide sequence is determined using the algorithm BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) by Carlin and Arthur (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 872264-2268, 1990; Proc Natl Acad Sci USA 90: 5873, 1993).
  • BLAST Basic Local Alignment Search Tool
  • Programs called BLASTN and BLASTX based on the BLAST algorithm have been developed (Altschul SF, et al: J Mol Biol 215: 403, 1990).
  • BLAST and Gapped BLAST programs use the default parameters of each program.
  • the antisense oligomer of the present invention contains a nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of the target region of the present invention or a partial nucleotide sequence thereof.
  • a "part thereof” means a region excluding the entire length of the target region, ie, a partial region of the target region.
  • the length of the partial region is 10 to 60 bases, 10 to 55 bases, 10 to 50 bases, 10 to 45 bases, 10 to 40 bases, 10 to 35 bases, 10 to 30 bases, 10 ⁇ 25 base length, 15-60 base length, 15-55 base length, 15-50 base length, 15-45 base length, 15-40 base length, 15-35 base length, 15-30 base length, 15-25 base length, 16-60 base length, 16-55 base length, 16-50 base length, 16-45 base length, 16-40 base length, 16-35 base length, 16-30 base length, 16-25 base length , 17-60 base length, 17-55 base length, 17-50 base length, 17-45 base length, 17-40 base length, 17-35 base length, 17-30 base length, 17-25 base length, 18 ⁇ 60 base length, 18-55 base length, 18-50 base length, 18-45 base length, 18-40 base length, 18-35 base length, 18-30 base length, 18-25 base length, 19-60 Base length, 19-55 base length, 19-50 base length, 19-45 base length, 19-40 base length, 19-35
  • the antisense oligomer of the present invention has the activity of simultaneously skipping any two or more consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA. .
  • such skipping of two or more consecutive exons from the pre-mRNA of interest is referred to as “multi-exon skipping” or “multi-skipping”
  • this activity is referred to as “multi-exon skipping activity” or " called “multi-skipping activity”.
  • the term “simultaneously skipping” two or more consecutive exons in numerical order means not only when the timing of removal of each exon from pre-mRNA is completely the same, but also when maturation from pre-mRNA is performed. It also includes the case where each exon is removed sequentially within the period leading to mRNA. That is, "simultaneously skipping" two or more consecutive exons in numerical order means removing two or more consecutive exons in numerical order from the pre-mRNA.
  • two or more consecutive exons in numerical order means a plurality of exons whose exon numbers increase by 1 among the exons contained in the target pre-mRNA (the total number of exons is Texon). .
  • the exon number is defined as the first exon that exists on the 5' side of the pre-mRNA, and the exons that exist sequentially from the 5' side to the 3' side are assigned to the 2nd and 3rd in order. means number.
  • a general term aj of the sequence ⁇ aj ⁇ is expressed by the following equation.
  • aj m+(j-1)
  • m is an arbitrary natural number that satisfies 1 ⁇ m ⁇ (Texon-1)
  • j is a natural number that satisfies 2 ⁇ (m+j) ⁇ Texon+1.
  • Texon is 79 when the pre-mRNA of interest is human dystrophin pre-mRNA.
  • j is any natural number selected from 1-11.
  • j is 11, j is 10, j is 9, j is 8, j is 7, j is 6, j is 5, j is 4, j is 3, is j2, and j is 1.
  • any two or more consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon are the 45th exon to the 55th exon contained in the pre-mRNA. It means a plurality of exons whose exon numbers increase by 1 among the 11 exons of .
  • the exon number is defined as the first exon of the 79 exons contained in the human dystrophin pre-mRNA, and the exon present on the 5' side of the pre-mRNA is defined as the first exon, and sequentially from the 5' side to the 3' side. It means the numbers assigned to the existing exons in order of 2nd, 3rd, . . . 79th.
  • the intron has the same number as the exon existing on the 5' side.
  • the 45th intron has the 45th exon on its 5' side and the 46th exon on its 3' side.
  • the “nth” exon or intron means the nth exon or intron counted from the 5′ end to the 3′ end of the pre-mRNA.
  • Table 3 shows a combination of exons contained in any two or more consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon.
  • skipping patterns expected to exhibit higher therapeutic effects on DMD are, for example, combinations 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 18, 20 , 21, 23, 25, 27, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 41, 43, 45, 46, 50, 52, or 55. Multi-exon skipping with these combinations is expected to exert therapeutic effects on more DMD patients.
  • the combination of the invention skips all exons 45 through 55 in the human dystrophin pre-mRNA.
  • any two or more consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon may include a plurality of consecutive exon groups, and is not limited. , for example (Example 1) exons 45-46 (first exon group) and exons 48-53 (second exon group), (example 2) exons 46-47 (first exon group) and exons 49-50 (second exon group) and exons 52-54 (third exon group).
  • the "skipping activity" (that is, multi-skipping activity), taking human dystrophin pre-mRNA as an example, is selected from the group consisting of exons 45 to 55 in human dystrophin pre-mRNA. means the activity to generate human dystrophin mRNA lacking any two or more consecutive exons in numerical order. In other words, this activity is achieved by binding the antisense oligomer of the present invention to the target site on human dystrophin pre-mRNA, exon immediately upstream of the deleted exon when the pre-mRNA undergoes splicing.
  • the 3' terminal nucleotide of the exon immediately downstream of the deleted exon is ligated to the 5' terminal nucleotide of the exon, resulting in a mature mRNA in which codon frameshifting has not occurred (i.e., the exon is deleted without frameshifting). mature mRNA) is formed.
  • the antisense oligomer of the present invention exhibits multi-skipping activity under physiological conditions.
  • physiological conditions means conditions adjusted to pH, salt composition, and temperature similar to those in vivo. Examples include conditions of 25 to 40° C., preferably 37° C., pH 5 to 8, preferably pH 7.4, and sodium chloride concentration of 150 mM.
  • Whether or not multi-skipping occurs can be determined by introducing the combination of the present invention into dystrophin-expressing cells (for example, human rhabdomyosarcoma cells), exons 45 to 55 of the mRNA of the human dystrophin gene from the total RNA of the dystrophin-expressing cells. It can be confirmed by RT-PCR-amplifying the surrounding region of and performing nested PCR or sequence analysis on the PCR-amplified product. The multi-skipping efficiency was measured by recovering the mRNA of the human dystrophin gene from the test cells and measuring the amount of polynucleotide in the band where any two or more consecutive exons out of exons 45 to 55 were skipped in the numerical order of the mRNA.
  • dystrophin-expressing cells for example, human rhabdomyosarcoma cells
  • exons 45 to 55 of the mRNA of the human dystrophin gene from the total RNA of the dystrophin-expressing cells. It can be confirmed by RT-PCR-amplifying
  • the multi-skipping efficiency of exons 45 to 55 was measured using a forward primer for exon 44 and a reverse primer for exon 56, measuring the polynucleotide amount "A" of the exon 45-55 multi-skipped band, and forward for exon 44.
  • a primer and a reverse primer for exon 46 the amount of polynucleotide "B" in the exon 45 single-skipped band was measured, and a forward primer for exon 44 and a reverse primer for exon 46 were used to measure the amount of polynucleotide in the band where no skipping occurred.
  • Nucleotide content 'C' can be measured and calculated according to the above formula based on these measurements of 'A', 'B' and 'C'.
  • the number of exons deleted in the human dystrophin mRNA by the antisense oligomer of the present invention is 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, or 11. be. This is called a deletion pattern, and the results obtained in a single skipping experiment or skipping treatment may contain a mixture of various deletion patterns.
  • the antisense oligomer of the present invention is introduced into cells expressing human dystrophin pre-mRNA and the mRNA is recovered, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 A mixture of mRNAs lacking 1, 10, or 11 exons will be obtained.
  • the "skipping activity” can be defined as (C1) to (C10) below.
  • C1 5% or more, 10% or more, 15% or more of any two consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the two consecutive exons in numerical order are the 45th and 46th exons, the 46th and 47th exons, the 47th and 48th exons, the 48th and 49th exons.
  • C2 5% or more, 10% or more, 15% or more of any three consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the three consecutive exons in numerical order are the 45th to 47th exons, the 46th to 48th exons, the 47th to 49th exons, and the 48th to 50th exons. exons 49th to 51st, exons 50th to 52nd, exons 51st to 53rd, exons 52nd to 54th, or exons 53rd to 55th th exon.
  • C3 5% or more, 10% or more, 15% or more of any four consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the four exons consecutive in numerical order are the 45th to 48th exons, the 46th to 49th exons, the 47th to 50th exons, and the 48th to 51st exons. , exons 49-52, exons 50-53, exons 51-54, or exons 52-55.
  • C4 5% or more, 10% or more, 15% or more of any five consecutive exons selected from the group consisting of exons 45 to 55 in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the five consecutive exons in numerical order are the 45th to 49th exons, the 46th to 50th exons, the 47th to 51st exons, and the 48th to 52nd exons. , exons 49-53, exons 50-54, or exons 51-55.
  • C5 5% or more, 10% or more, 15% or more of any 6 consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the six exons consecutive in numerical order are the 45th to 50th exons, the 46th to 51st exons, the 47th to 52nd exons, and the 48th to 53rd exons. , exons 49-54, or exons 50-55.
  • C6 5% or more, 10% or more, 15% or more of any 7 consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the seven exons consecutive in numerical order are the 45th to 51st exons, the 46th to 52nd exons, the 47th to 53rd exons, and the 48th to 54th exons. or exons 49-55.
  • C7 5% or more, 10% or more, 15% or more of any 8 consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the 8 exons consecutive in numerical order are the 45th to 52nd exons, the 46th to 53rd exons, the 47th to 54th exons, or the 48th to 55th exons. th exon.
  • any 9 consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the nine consecutive exons in numerical order may be the 45th to 53rd exons, the 46th to 54th exons, or the 47th to 55th exons.
  • any 10 consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon in human dystrophin pre-mRNA , 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80 % or more, 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the 10 consecutive exons in numerical order may be the 45th to 54th exons or the 46th to 55th exons.
  • (C10) 11 consecutive exons selected from the group consisting of the 45th to 55th exons in human dystrophin pre-mRNA are 5% or more, 10% or more, 15% or more, 20 % or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more, 70% or more, 75% or more, 80% or more , is skipped with an efficiency of 85% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the 11 consecutive exons in numerical order are the 45th to 55th exons.
  • Antisense oligomers of the present invention are 10 to 60 bases long, 10 to 55 bases long, 10 to 50 bases long, 10 to 45 bases long, 10 to 40 bases long, 10 to 35 bases long, 10 to 30 bases long, 10 ⁇ 25 base length, 15-60 base length, 15-55 base length, 15-50 base length, 15-45 base length, 15-40 base length, 15-35 base length, 15-30 base length, 15-25 base length, 16-60 base length, 16-55 base length, 16-50 base length, 16-45 base length, 16-40 base length, 16-35 base length, 16-30 base length, 16-25 base length , 17-60 base length, 17-55 base length, 17-50 base length, 17-45 base length, 17-40 base length, 17-35 base length, 17-30 base length, 17-25 base length, 18 ⁇ 60 base length, 18-55 base length, 18-50 base length, 18-45 base length, 18-40 base length, 18-35 base length, 18-30 base length, 18-25 base length, 19-60 Base length, 19-55 base length, 19-50 base length, 19-
  • the first antisense oligomer of the present invention is a linked antisense oligomer having a configuration in which a plurality of unit oligomers are linked to each other, or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof (hereinafter referred to as "the present Also referred to as “linked antisense oligomers of the invention”).
  • a unit oligomer means each oligomer that constitutes the ligated antisense oligomer of the present invention. That is, the unit oligomer includes a base sequence that hybridizes with a target base sequence having a continuous base sequence when the ligated antisense oligomer of the present invention binds to the target base sequence on human dystrophin pre-mRNA. It means part (unit).
  • Unit oligomers may be linked via a linker that does not contribute to hybridization, or may be directly linked without a linker.
  • the 3' end of the unit located on the 5' end side and the 5' end of the unit located on the 3' end side form a phosphate bond or any of the following groups .
  • X represents -OH, -CH 2 R 1 , -O-CH 2 R 1 , -S-CH 2 R 1 , -NR 2 R 3 , or F;
  • R 1 represents H, alkyl;
  • R 2 and R 3 are the same or different and represent H, alkyl, cycloalkyl or aryl;
  • Y 1 represents O, S, CH 2 , or NR 1 ;
  • Y 2 represents O, S, or NR 1 ;
  • Z represents O or S;
  • the first unit oligomer constituting the ligated antisense oligomer of the present invention has a nucleotide sequence of 11 bases from the 3' end to the 5' end of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA and the 45th exon. , or a base sequence complementary to a base sequence consisting of a base sequence of 69 bases from the 5' end to the 3' end of or a partial base sequence thereof.
  • the second unit oligomer constituting the tethered antisense oligomer of the present invention comprises the 52nd to 75th bases in the 3'-end to 5'-end direction of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA. It may contain a base sequence complementary to the base sequence or a partial base sequence thereof.
  • part thereof means a continuous partial region excluding the entire length of the target sequence.
  • the partial region has a length of 5 to 30 bases, 5 to 29 bases, 5 to 28 bases, 5 to 27 bases, 5 to 26 bases, 5 to 25 bases, and 5 to 24 bases.
  • each unit oligomer is 5 to 30 bases long, 5 to 29 bases long, 5 to 28 bases long, 5 to 27 bases long, 5 to 26 bases long, 5 to 25 bases long, and 5 to 24 bases long.
  • the order of the first unit oligomer and the second unit oligomer is not limited.
  • the first antisense oligomer may contain the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, or the second unit oligomer and the first unit oligomer in this order from the 5' end. may be included in
  • the first unit oligomer comprises a nucleotide sequence of 11 bases from the 3' end to the 5' end of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA and 3 bases from the 5' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA.
  • ' contains or consists of a base sequence complementary to 15 to 30 consecutive bases of a base sequence consisting of a base sequence of 69 bases in the terminal direction.
  • the second unit oligomer is a continuous one of the base sequence from the 52nd base to the 75th base in the 3'-end to 5'-end direction of the 44th intron of human dystrophin pre-mRNA. It comprises or consists of a base sequence complementary to ⁇ 10 bases.
  • the second antisense oligomer comprises a nucleotide sequence of 33 bases from the 3' end to the 5' end of the 54th intron of human dystrophin pre-mRNA and from the 5' end of the 55th exon of the human dystrophin pre-mRNA. It contains a base sequence complementary to 15 to 30 consecutive bases of a base sequence consisting of 53 bases in the direction of the 3' end.
  • the third antisense oligomer comprises a nucleotide sequence of 23 bases from the 3' end to the 5' end of the 45th exon of the human dystrophin pre-mRNA and the 5' end of the 45th intron of the human dystrophin pre-mRNA. It contains or consists of a base sequence complementary to 15 to 30 consecutive bases of a base sequence consisting of a base sequence of 73 bases in the 3′ end direction.
  • target sequences of the first unit oligomer and their complementary sequences are shown in Table 4 below.
  • the first unit oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 211 to 906, (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 211 to 906; (c) having a sequence identity of 85% or more with any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 211 to 906, and ⁇ 15 compared to the length of any one of the selected nucleotide sequences %, or (d) complementary to a partial base sequence of any one base sequence selected from the group consisting of (a), (b), and (c) Contains base sequences.
  • the nucleotide sequence of (c) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (c-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 211 to 906, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (c-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 211 to 906, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (c-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 211 to 906, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (c-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base sequence selected from
  • the first unit oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 907 to 1602, or (b) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 907 to 1602 and 85% or more of the sequence It contains a nucleotide sequence that is identical and has a length within ⁇ 15% of the length of any one of the selected nucleotide sequences, or consists of the nucleotide sequence of (a) or (b).
  • the nucleotide sequence of (b) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (b-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 907 to 1602, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (b-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 907 to 1602, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (b-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 907 to 1602, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (b-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base sequence selected from
  • the first unit oligomer comprises or consists of any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 907-1602.
  • the first unit oligomer comprises or consists of any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1180, 1190, 1201, 1212, 1222, 1224, and 1239. Become.
  • target sequences for the second unit oligomer and their complementary sequences are shown in Table 5 below.
  • the second unit oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 105; (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 105; (c) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 105, and ⁇ 15 compared to the length of any one base sequence selected % or less, or (d) complementary to a partial base sequence of any one base sequence selected from the group consisting of (a), (b), and (c) Contains base sequences.
  • the nucleotide sequence of (c) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (c-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 105, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (c-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 105, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (c-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 105, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (c-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base sequence selected from
  • the second unit oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 106 to 210, or (b) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 106 to 210 and 85% or more of the sequence It contains a nucleotide sequence that has identity and has a length within ⁇ 15% of the length of any one of the selected nucleotide sequences, or consists of the nucleotide sequence of (a) or (b).
  • the nucleotide sequence of (b) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (b-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 106 to 210, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (b-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 106 to 210, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (b-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 106 to 210, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (b-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base
  • the second unit oligomer comprises or consists of any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 106-210.
  • the second unit oligomer comprises or consists of any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 114, 124, 151, 201, 203, and 205.
  • the first unit oligomer comprises or consists of any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 907-1602
  • the second unit oligomer comprises SEQ ID NO: 106 to 210 containing or consisting of any one base sequence selected from the group consisting of 106 to 210, wherein the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer at the 5' end , in this order.
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and the first unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151; the first unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 201; the first unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 203; the first unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201, and the second unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID
  • target sequences of the second antisense oligomers of the present invention and their complementary sequences (antisense sequences) are shown in Table 6 below.
  • the second antisense oligomer of the invention comprises (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3507 to 4298, (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 3507 to 4298; (c) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3507 to 4298, and ⁇ 15 compared to the length of any one of the selected base sequences % or less, or (d) complementary to a partial base sequence of any one base sequence selected from the group consisting of (a), (b), and (c) Contains base sequences.
  • the nucleotide sequence of (c) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (c-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3507 to 4298, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (c-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3507 to 4298, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (c-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3507 to 4298, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (c-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base
  • the second antisense oligomer of the invention comprises (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4299 to 5090, or (b) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4299 to 5090 and 85% or more of the sequence It contains a nucleotide sequence that has identity and has a length within ⁇ 15% of the length of any one of the selected nucleotide sequences, or consists of the nucleotide sequence of (a) or (b).
  • the nucleotide sequence of (b) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (b-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4299 to 5090, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (b-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4299 to 5090, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (b-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4299 to 5090, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (b-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base
  • the second antisense oligomer of the present invention comprises or consists of any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4299-5090.
  • the second antisense oligomer comprises or consists of a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 4698, 4702, 4752, 4923, 4926, 4936, 4950, and 4977 .
  • target sequences of the third antisense oligomers of the present invention and their complementary sequences (antisense sequences) are shown in Table 7 below.
  • the third antisense oligomer of the invention comprises (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1603 to 2554, (b) a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1603 to 2554; (c) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1603 to 2554, and ⁇ 15 compared to the length of any one base sequence selected % or less, or (d) complementary to a partial base sequence of any one base sequence selected from the group consisting of (a), (b), and (c) Contains base sequences.
  • the third antisense oligomer is (a) SEQ. Any one base sequence selected from the group consisting of ⁇ 2292, 2313-2356, 2378-2421, 2444-2487, and 2511-2554, (b) SEQ. -2292, 2313-2356, 2378-2421, 2444-2487, and a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions with a nucleotide sequence complementary to any one of the nucleotide sequences selected from the group consisting of 2511-2554 , (c) SEQ.
  • the third antisense oligomer is (a) SEQ.
  • the third antisense oligomer is (a) SEQ.
  • the nucleotide sequence of (c) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (c-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1603 to 2554, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (c-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1603 to 2554, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (c-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1603 to 2554, and compared to the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (c-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base
  • the third antisense oligomer is (a) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 2555 to 3506, or (b) any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 2555 to 3506 and 85% or more of the sequence It contains a nucleotide sequence that is identical and has a length within ⁇ 15% of the length of any one of the selected nucleotide sequences, or consists of the nucleotide sequence of (a) or (b).
  • the nucleotide sequence of (b) is a variant of the nucleotide sequence of (a).
  • (b-1) having a sequence identity of 85% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 2555 to 3506, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 15%
  • (b-2) having a sequence identity of 86% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 2555 to 3506, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 14%
  • (b-3) having a sequence identity of 87% or more with any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 2555 to 3506, and compared with the length of any one base sequence selected a nucleotide sequence having a length within ⁇ 13%
  • (b-4) having a sequence identity of 88% or more with any one base sequence selected from
  • the third antisense oligomer of the present invention comprises or consists of any one base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS:2555-3506.
  • the third antisense oligomer comprises or comprises a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 3060, 3065, 3077, 3082, 3087, 3090, 3096, 3108, 3119, and 3320 It consists of a base sequence. In one embodiment, the third antisense oligomer comprises or consists of a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:3077, 3082, 3087, 3090, 3096, 3108, and 3119. In one embodiment, the third antisense oligomer comprises or consists of a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:3082, 3087, 3090, 3096, 3108, and 3119.
  • a combination of the first unit oligomer and the second unit oligomer that constitute the first antisense oligomer of the present invention, and the second antisense oligomer of the present invention (and optionally the third antisense oligomer of the present invention) is not limited, and any combination can be used.
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950. or consists of the base sequence,
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 201
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 203, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950. or consists of the base sequence,
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 205, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1239
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 114
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950. or consists of the base sequence
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1224
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 124
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1180
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950. or consists of the base sequence
  • the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1190
  • the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1212
  • the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1222
  • the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4698. or consists of the base sequence,
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4702.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4752. or consists of the base sequence,
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4923.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4926. or consists of the base sequence,
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4936.
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1201
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4977. or consists of the base sequence
  • the first unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 1180
  • the second unit oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 151
  • the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4977. or consists of the base sequence.
  • the first antisense oligomer comprises a first unit oligomer and a second unit oligomer in this order from the 5' end, and the first unit oligomer has any one of the nucleotide sequences of SEQ ID NOS: 907-1602. wherein the second unit oligomer comprises any of the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 106-210, and the second antisense oligomer comprises any of the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 4299-5090.
  • the first antisense oligomer comprises a first unit oligomer and a second unit oligomer in this order from the 5' end, the first unit oligomer comprising the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, and the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950 or 4880 (preferably 4950).
  • the first antisense oligomer comprises the first unit oligomer and the second unit oligomer in this order from the 5' end, and
  • the first unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201
  • the second unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 151
  • 2 antisense oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950
  • the third antisense oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3082
  • the first unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1201
  • the second unit oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 201
  • 2 antisense oligomer comprises or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4950
  • the third antisense oligomer comprises
  • the first antisense oligomer comprises a first unit oligomer and a second unit oligomer in this order from the 5' end, and the first unit oligomer has a base sequence of any one of SEQ ID NOs: 907-1602. wherein the second unit oligomer comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOs: 106-210, the second antisense oligomer comprises the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOs: 4299-5090, and the third antisense oligomer contains the nucleotide sequence of any of SEQ ID NOS:2555-3506.
  • the first antisense oligomer comprises a first unit oligomer and a second unit oligomer in this order from the 5' end, the first unit oligomer comprising the base sequence of SEQ ID NO: 1201, the second contains the base sequence of SEQ ID NO: 151, the second antisense oligomer contains the base sequence of SEQ ID NO: 4950 or 4880 (preferably 4950), and the third antisense oligomer contains SEQ ID NO: 3082, 3090 or 3096 contains the nucleotide sequence of
  • Antisense oligomers of the present invention may be oligonucleotides, morpholino oligomers, or peptide nucleic acid (PNA) oligomers (hereinafter each referred to as “the present Also referred to as “antisense oligonucleotides of the invention”, “antisense morpholino oligomers of the invention”, or “antisense peptide nucleic acid oligomers of the invention”).
  • PNA peptide nucleic acid
  • the antisense oligonucleotides of the present invention are antisense oligomers whose constituent units are nucleotides, and such nucleotides may be ribonucleotides, deoxyribonucleotides, or modified nucleotides.
  • Modified nucleotides refer to those in which all or part of the nucleobases, sugar moieties, and phosphate-binding moieties that make up ribonucleotides or deoxyribonucleotides have been modified.
  • Nucleic acid bases include, for example, adenine, guanine, hypoxanthine, cytosine, thymine, uracil, or modified bases thereof.
  • modified bases include pseudouracil, 3-methyluracil, dihydrouracil, 5-alkylcytosine (eg, 5-methylcytosine), 5-alkyluracil (eg, 5-ethyluracil), 5-halouracil (eg, , 5-bromouracil), 6-azapyrimidine, 6-alkylpyrimidine (e.g., 6-methyluracil), 2-thiouracil, 4-thiouracil, 4-acetylcytosine, 5-(carboxyhydroxymethyl)uracil, 5-carboxy methylaminomethyl-2-thiouracil, 5-carboxymethylaminomethyluracil, 1-methyladenine, 1-methylhypoxanthine, 2,2-dimethylguanine, 3-methylcytosine, 2-methyladenine, 2-methylguanine, N
  • Modifications of the sugar moiety can include, for example, modifications at the 2' position of ribose and modifications at other parts of the sugar.
  • Modifications at the 2'-position of ribose include, for example, -OH group at the 2'-position of ribose with -OR, -R, -R'OR, -SH, -SR, -NH 2 , -NHR, -NR 2 , Modifications substituted for -N 3 , -CN, -F, -Cl, -Br, -I can be mentioned.
  • R represents alkyl or aryl.
  • R' represents alkylene.
  • Modifications of other portions of the sugar include, for example, those in which the 4′-position of ribose or deoxyribose is replaced with S, those in which the 2′-position and 4′-position of the sugar are crosslinked, for example, LNA (Locked Nucleic Acid ) or ENA (2′-O,4′-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids), but are not limited thereto.
  • LNA Locked Nucleic Acid
  • ENA (2′-O,4′-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids
  • Modifications of the phosphate binding moiety include, for example, phosphodiester linkages, phosphorothioate linkages, phosphorodithioate linkages, alkylphosphonate linkages, phosphoramidate linkages, boranophosphate linkages (e.g., Enya et al: Bioorganic & Medicinal Chemistry , 2008, 18, 9154-9160) (see, eg, Republished Patent Publication No. 2006/129594 and Republished Patent Publication No. 2006/038608).
  • alkyl is preferably linear or branched alkyl having 1 to 6 carbon atoms. Specific examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, tert-pentyl, n-hexyl and isohexyl. be done.
  • the alkyl may be substituted, and examples of such substituents include halogen, alkoxy, cyano, and nitro, and may be substituted with 1 to 3 of these.
  • cycloalkyl having 3 to 12 carbon atoms is preferred as cycloalkyl.
  • Specific examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclodecyl and cyclododecyl.
  • halogen includes fluorine, chlorine, bromine, and iodine.
  • alkoxy refers to linear or branched alkoxy having 1 to 6 carbon atoms, such as methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert. -butoxy, n-pentyloxy, isopentyloxy, n-hexyloxy, isohexyloxy and the like.
  • Alkoxy having 1 to 3 carbon atoms is particularly preferred.
  • aryl having 6 to 10 carbon atoms is preferred as aryl.
  • Specific examples include phenyl, ⁇ -naphthyl, and ⁇ -naphthyl. Phenyl is particularly preferred.
  • the aryl may be substituted, and examples of such substituents include alkyl, halogen, alkoxy, cyano, and nitro, which may be substituted 1-3 times.
  • alkylene is preferably linear or branched alkylene having 1 to 6 carbon atoms.
  • Specific examples include methylene, ethylene, trimethylene, tetramethylene, pentamethylene, hexamethylene, 2-(ethyl)trimethylene, and 1-(methyl)tetramethylene.
  • acyl includes linear or branched alkanoyl or aroyl.
  • Alkanoyl includes, for example, formyl, acetyl, 2-methylacetyl, 2,2-dimethylacetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, 2,2-dimethylpropionyl, hexanoyl and the like.
  • Aroyl includes, for example, benzoyl, toluoyl and naphthoyl. Such aroyl may be optionally substituted at any substitutable position or may be substituted with alkyl.
  • the antisense oligonucleotide of the present invention preferably has a group represented by the following general formula, in which the —OH group at the 2′-position of ribose is substituted with methoxy and the phosphate binding moiety is a phosphorothioate bond, as a constituent unit.
  • An antisense oligomer of the invention (In the formula, Base represents a nucleic acid base.)
  • the antisense oligonucleotides of the present invention can be easily synthesized using various automated synthesizers (eg, AKTA oligopilot plus 10/100 (GE Healthcare)), or can be synthesized by third parties (eg, Promega). or Takara) or the like.
  • automated synthesizers eg, AKTA oligopilot plus 10/100 (GE Healthcare)
  • third parties eg, Promega). or Takara
  • the antisense morpholino oligomer of the present invention is an antisense oligomer having a group represented by the following general formula as a structural unit.
  • Base is as defined above; W represents a group represented by any one of the following formulas.
  • X represents —CH 2 R 1 , —O—CH 2 R 1 , —S—CH 2 R 1 , —NR 2 R 3 , or F;
  • R 1 represents H, alkyl;
  • R 2 and R 3 are the same or different and represent H, alkyl, cycloalkyl or aryl;
  • Y 1 represents O, S, CH 2 , or NR 1 ;
  • Y 2 represents O, S, or NR 1 ;
  • Z represents O or S;
  • Examples of morpholino monomer compounds used to synthesize the antisense morpholino oligomers of the present invention include morpholino monomer compound (A), morpholino monomer compound (C), morpholino monomer compound (T), and morpholino monomer compound shown in Table 8. (G), but not limited to these.
  • the morpholino oligomer is preferably an oligomer (phosphorodiamidate morpholino oligomer (hereinafter referred to as "PMO")) having a group represented by the following formula as a constituent unit. (In the formula, Base, R 2 and R 3 are as defined above.)
  • PMO phosphorodiamidate morpholino oligomer
  • a morpholino oligomer can be produced, for example, according to the method described in International Publication No. 1991/009033 or International Publication No. 2009/064471.
  • PMO can be produced according to the method described in WO2009/064471 or WO2013/100190.
  • the antisense peptide nucleic acid oligomer of the present invention is an antisense oligomer having a group represented by the following general formula as a structural unit.
  • Peptide nucleic acid oligomers can be produced, for example, according to the following literature. 1) P. E. Nielsen, M. Egholm, R. H. Berg, O. Buchardt, Science, 254, 1497 (1991) 2) M. Egholm, O. Buchardt, P. E. Nielsen, R. H. Berg, JACS, 114, 1895 (1992) 3) K. L. Dueholm, M. Egholm, C. Behrens, L. Christensen, H. F.
  • Antisense oligomers of the invention can be in the form of pharmaceutically acceptable salts, hydrates, or hydrates of pharmaceutically acceptable salts thereof. may be in the form
  • Examples of pharmaceutically acceptable salts of the antisense oligomers of the present invention include alkali metal salts such as sodium, potassium and lithium salts; alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium salts; aluminum salts; , iron salts, zinc salts, copper salts, nickel salts, cobalt salts; ammonium salts; t-octylamine salts, dibenzylamine salts, morpholine salts, glucosamine salts, phenylglycine alkyl ester salts, ethylenediamine salts, N - methylglucamine salt, guanidine salt, diethylamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, N,N'-dibenzylethylenediamine salt, chloroprocaine salt, procaine salt, diethanolamine salt, N-benzyl-phenethylamine salt, piperazine salt, tetra organic amine salts such as methylammonium salt
  • the third antisense oligomer of the present invention can function as a suppressor antisense oligomer.
  • the suppressor antisense oligomer means an antisense oligomer that suppresses skipping of a single exon (hereinafter referred to as "single skipping").
  • a suppressor antisense oligomer can enhance the effect of multi-exon skipping by an antisense oligomer by suppressing single skipping. Therefore, combinations of the invention comprising a third antisense oligomer may have a higher multi-exon skipping effect compared to those without the third antisense oligomer.
  • the third antisense oligomer of the present invention skips any one exon selected from the group consisting of exons 45 to 55 of human dystrophin pre-mRNA. can be restrained from doing so. More specifically, the third antisense oligomer of the present invention can suppress single skipping of the 45th exon of human dystrophin pre-mRNA.
  • the third antisense oligomer of the present invention can suppress single skipping by targeting, for example, splicing silencer sequences, branch site sequences, or splice site sequences on human dystrophin pre-mRNA to inhibit splicing.
  • a third antisense oligomer of the invention may reduce the efficiency of single-skipping an exon of interest compared to a control.
  • the third antisense oligomer of the present invention targets the recognition sequence of the splicing silencer sequence, heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1 (hnRNP A1).
  • a splicing silencer sequence is a nucleotide sequence element on pre-mRNA that has the function of suppressing exon recognition.
  • Target sequences for the third antisense oligomer are as described herein.
  • Whether or not the suppressor antisense oligomer enhances the effect of multi-exon skipping can be determined by (i) an experimental system of multi-exon skipping using only the antisense oligomer of the present invention, and (ii) the antisense oligomer of the present invention and suppressor antisense.
  • a multi-exon skipping experimental system using oligomers was prepared under the same conditions, and the difference between the multi-exon skipping effect obtained in experimental system (ii) and the multi-exon skipping effect obtained in experimental system (i) was determined. It can be confirmed by observation.
  • An antisense oligomer of the invention may be a PMO.
  • PMO a compound represented by the following general formula (I) (hereinafter referred to as PMO (I)). (Wherein, each Base, R 2 and R 3 are as defined above; n is any integer within the range of 1-99, preferably any integer within the range of 18-28. )
  • PMO (I) can be produced according to known methods (see, for example, International Publication No. 2009/064471 or International Publication No. 2013/100190).
  • the antisense oligomer of the present invention may have any group represented by the following chemical formulas (1) to (3) at the 5' end. (3)-OH is preferred.
  • the groups represented by (1), (2) and (3) are referred to as “group (1)”, “group (2)” and “group (3)”, respectively.
  • Antisense oligomers of the present invention can be functional peptides for the purpose of improving efficacy (e.g., membrane-permeable peptides for the purpose of improving transport efficiency to target cells) or antibody fragments (e.g., transferrin receptors, etc.).
  • Fab of an antibody against a muscle cell-specific receptor may form a complex (International Publication No. 2008/036127, International Publication No. 2009/005793, International Publication No. 2012/150960 , WO 2016/187425, WO 2018/118662, WO 2011/013700, WO 2018/118599, WO 2018/118627, JP 2022-47613, J. D. Ramsey, N. H.
  • the binding site is not particularly limited, it is preferable that the 5' end or 3' end of the antisense oligomer is bound to the amino terminal or carboxyl terminal of the functional peptide or antibody fragment.
  • the antisense oligomer of the present invention and the functional peptide or antibody fragment may form a complex via a linker.
  • the linker is not particularly limited, but the 5′ end or 3′ end of the antisense oligomer is bound to one end of the linker, and the amino terminal or carboxyl terminal of the functional peptide or antibody fragment is bound to the other end of the linker. preferably. Also, additional amino acids may be present between the functional peptide or antibody fragment and the linker.
  • the invention comprises a first antisense oligomer and a second antisense oligomer of the invention, including pharmaceutically acceptable salts or hydrates thereof, Pharmaceutical compositions (hereinafter referred to as "pharmaceutical compositions of the present invention") are provided.
  • the pharmaceutical composition of the present invention further comprises the third antisense oligomer of the present invention (including pharmaceutically acceptable salts or hydrates thereof) and/or a pharmaceutically acceptable carrier. You can stay.
  • the present invention provides a pharmaceutical combination of a pharmaceutical composition comprising a first antisense oligomer of the present invention and a pharmaceutical composition comprising a second antisense oligomer of the present invention (hereinafter "the combination of the present invention”). (also referred to as “medicine”).
  • the pharmaceutical combination of the present invention may further contain a third antisense oligomer and/or a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutical composition of the present invention includes any combination of antisense oligomers of the present invention.
  • the pharmaceutical combination of the invention also includes any combination of the antisense oligomers of the invention. Details of antisense oligomer combinations are provided herein.
  • each antisense oligomer in the combination of the invention is contained in one pharmaceutical composition and administered simultaneously.
  • each antisense oligomer in the combination of the invention is contained in multiple pharmaceutical compositions (combination medicament of the invention) and administered separately (simultaneously or sequentially).
  • administering multiple pharmaceutical compositions means administering multiple pharmaceutical compositions at the same time.
  • administration of multiple pharmaceutical compositions means administration at different times. Specifically, one pharmaceutical composition can be administered before or after the other pharmaceutical composition, where the dosing interval can be, but is not limited to, minutes, hours, or days. good.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and the pharmaceutical combination of the present invention are, respectively, for example, Duchenne muscular dystrophy, Becker muscular dystrophy, limb girdle muscular dystrophy (LGMD), congenital muscular dystrophy, Emery-Dreifuss muscular dystrophy, facial It can be used for the treatment of scapulohumeral muscular dystrophy, cancer pharyngeal muscular dystrophy, autosomal dominant cerebral arteriopathy with subcortical infarction and leukoencephalopathy (CADASIL), Alport syndrome and the like.
  • the pharmaceutical combination of the present invention and the pharmaceutical composition of the present invention can each be administered to human patients, particularly human patients with muscular dystrophy.
  • the patient who is the subject of administration of the combination drug of the present invention or the pharmaceutical composition of the present invention is a human having a mutation subject to skipping of two or more exons selected from the group consisting of exons 45 to 55 in the dystrophin gene.
  • mutations targeted for exon skipping are not limited.
  • a method of treating muscular dystrophy comprising administering to a muscular dystrophy patient a combination of antisense oligomers of the invention.
  • a method for treating muscular dystrophy comprising the step of administering the pharmaceutical composition of the present invention or the pharmaceutical combination of the present invention to a muscular dystrophy patient.
  • the treatment method may involve skipping any two or more consecutive exons selected from the group consisting of the 45th exon to the 55th exon of human dystrophin pre-mRNA.
  • the muscular dystrophy patient may have a mutation targeted for exon 45-55 skipping in the dystrophin gene.
  • Said patient may be a human and may be a human patient having a mutation targeted for exon 45-55 skipping in the dystrophin gene.
  • the present invention further provides the use of the antisense oligomer combination of the present invention, the pharmaceutical composition of the present invention, or the combined medicament of the present invention in the manufacture of a medicament for treating muscular dystrophy.
  • the present invention provides a combination of antisense oligomers of the present invention, a pharmaceutical composition of the present invention, or a pharmaceutical combination of the present invention for use in treating muscular dystrophy.
  • the treatment may involve skipping any two or more consecutive exons selected from the group consisting of exons 45 to 55 of human dystrophin pre-mRNA.
  • the muscular dystrophy patient may be a patient having a mutation targeted for exon 45-55 skipping in the dystrophin gene.
  • Said patient may be a human and may be a human patient having a mutation targeted for exon 45-55 skipping in the dystrophin gene.
  • the dosage form of the combination of antisense oligomers of the present invention, the pharmaceutical composition of the present invention, or the combination drug of the present invention is not particularly limited as long as it is a pharmaceutically acceptable dosage form, and is selected according to the treatment method.
  • intravenous administration, intraarterial administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, oral administration, intratissue administration, transdermal administration and the like are preferred.
  • the dosage form that the composition of the present invention can take is not particularly limited, and examples thereof include various injections, oral preparations, infusions, inhalants, ointments, lotions, and the like.
  • the composition of the present invention preferably contains a carrier that facilitates delivery of the oligomer to muscle tissue.
  • a carrier that facilitates delivery of the oligomer to muscle tissue.
  • Such carriers are not particularly limited as long as they are pharmaceutically acceptable, and examples thereof include cationic carriers such as cationic liposomes and cationic polymers, and carriers utilizing virus envelopes. .
  • Cationic liposomes include, for example, liposomes formed from 2-O-(2-diethylaminoethyl)carbamoyl-1,3-O-dioleoylglycerol and phospholipids as essential constituents (hereinafter, “liposome A” ), Oligofectamine (registered trademark) (manufactured by Invitrogen), Lipofectin (registered trademark) (manufactured by Invitrogen), Lipofectamine (registered trademark) (manufactured by Invitrogen), Lipofectamine 2000 (registered trademark) (manufactured by Invitrogen ), DMRIE-C (registered trademark) (manufactured by Invitrogen), GeneSilencer (registered trademark) (manufactured by Gene Therapy Systems), TransMessenger (registered trademark) (manufactured by QIAGEN), TransIT TKO (registered trademark) (manufactured by Mir
  • Liposome A is preferred.
  • cationic polymers include JetSI (registered trademark) (manufactured by Qbiogene) and Jet-PEI (registered trademark) (polyethyleneimine, manufactured by Qbiogene).
  • Carriers using viral envelopes include, for example, GenomeOne (registered trademark) (HVJ-E liposome, manufactured by Ishihara Sangyo Co., Ltd.).
  • GenomeOne registered trademark
  • HVJ-E liposome manufactured by Ishihara Sangyo Co., Ltd.
  • the concentration of the antisense oligomer of the present invention contained in the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combination drug of the present invention varies depending on the type of carrier and the like, but is suitably within the range of 0.1 nM to 100 ⁇ M, It is preferably in the range of 10 ⁇ M, more preferably in the range of 10 nM to 1 ⁇ M.
  • the weight ratio of the antisense oligomer of the present invention to the carrier (carrier/antisense oligomer of the present invention) contained in the composition of the present invention varies depending on the properties of the oligomer and the type of the carrier, but may be 0.00. A range of 1 to 100 is appropriate, a range of 1 to 50 is preferred, and a range of 10 to 20 is more preferred.
  • each antisense oligomer in the combination of the invention is contained in one pharmaceutical composition and administered simultaneously.
  • each antisense oligomer in the combination of the invention is contained in multiple pharmaceutical compositions (combination medicament of the invention) and administered separately (simultaneously or sequentially).
  • concentrations of each antisense oligomer in the combination of the invention when included in one or more pharmaceutical compositions are as follows.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the pharmaceutical combination of the present invention may be in the form of an aqueous solution.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combination drug of the present invention contain each antisense oligomer of the present invention at 2.5-500 mg/mL, 5-450 mg/mL, 10-400 mg/mL, 15- 350 mg/mL, 20-300 mg/mL, 20-250 mg/mL, 20-200 mg/mL, 20-150 mg/mL, 20-100 mg/mL, 20-50 mg/mL, 20-40 mg/mL, 20-30 mg/mL mL, 23-27 mg/mL, 24-26 mg/mL, or 25 mg/mL.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combination drug of the present invention contain each antisense oligomer of the present invention at 10 to 100 mg/mL, 15 to 95 mg/mL, 20 to 80 mg/mL, 25 to 75 mg/mL. , 30-70 mg/mL, 35-65 mg/mL, 40-60 mg/mL, 45-55 mg/mL, 47-53 mg/mL, 48-52 mg/mL, 49-51 mg/mL, or 50 mg/mL may contain.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combined pharmaceutical of the present invention may be in dry form.
  • to prepare the pharmaceutical composition according to the invention in the form of an aqueous solution and/or the pharmaceutical combination according to the invention for example 125 mg or 250 mg of each antisense oligomer according to the invention in dry form is mixed with 0.5 mL to 100 mL of water.
  • each antisense oligomer concentration of the invention corresponding to each antisense oligomer concentration of the invention from 1.25 mg/mL to 250 mg/mL or from 2.5 mg/mL to 500 mg/mL
  • 1 mL to 50 mL of water 2.5 mg/mL to 125 mg/mL or 5 mg/mL to 250 mg/mL corresponding to each antisense oligomer concentration of the present invention
  • 5 mL to 10 mL of water (12.5 mg/mL to 25 mg/mL or corresponding to each antisense oligomer concentration of the invention from 25 mg/mL to 50 mg/mL
  • the total concentration of antisense oligomers when each antisense oligomer in the combination of the invention is included in one or more pharmaceutical compositions is as follows.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combined medicament of the present invention contains the antisense oligomer of the present invention at 2.5 to 500 mg/mL, 5-450 mg/mL, 10-400 mg/mL, 15-350 mg/mL, 20-300 mg/mL, 20-250 mg/mL, 20-200 mg/mL, 20-150 mg/mL, 20-100 mg/mL mL, 20-50 mg/mL, 20-40 mg/mL, 20-30 mg/mL, 23-27 mg/mL, 24-26 mg/mL, or 25 mg/mL, or 5-1000 mg/mL, 10-900 mg/mL , 20-800 mg/mL, 30-700 mg/mL, 40-600 mg/mL,
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the pharmaceutical combination of the present invention contain the antisense oligomer of the present invention at 10 to 100 mg/mL, 15 to 95 mg/mL, 20 to 80 mg/mL, 25 to 75 mg/mL, 30-70 mg/mL, 35-65 mg/mL, 40-60 mg/mL, 45-55 mg/mL, 47-53 mg/mL, 48-52 mg/mL, 49-51 mg/mL, or 50 mg/mL, or 20 ⁇ 200 mg/mL, 30-190 mg/mL, 40-160 mg/mL, 50-150 mg/mL, 60-140 mg/mL, 70-130 mg/mL, 80-120 mg/mL, 90-110 mg/mL, 94-106 mg /mL, 96-104 mg/mL, 98-102 mg/mL, or 100 mg/mL, or 30-300 mg/mL, 45-285 mg/mL, 60-240 mg/mL, 75-225 mg
  • composition of the invention and/or the pharmaceutical combination of the invention is in dry form, for example a total of 125 mg or 250 mg of Antisense oligomers of the invention in dry form are mixed with 0.5 mL to 100 mL of water (1.25 mg/mL to 250 mg/mL or 2.5 mg/mL to 500 mg/mL of total antisense oligomers of the invention).
  • the antisense oligomer of the invention is mixed with 1 mL to 50 mL of water (corresponding to a total antisense oligomer concentration of the invention of 2.5 mg/mL to 125 mg/mL or 5 mg/mL to 250 mg/mL), and more preferably mixed with 5 mL to 10 mL of water (corresponding to a total antisense oligomer concentration of the invention of 12.5 mg/mL to 25 mg/mL or 25 mg/mL to 50 mg/mL), or for example a total of 250 mg or 500 mg of the dry form of the antisense oligomer of the invention is mixed with 0.5 mL to 100 mL of water (to give a total antisense oligomer concentration of the invention of 2.5 mg/mL to 500 mg/mL or 5 mg/mL to 1000 mg/mL ), preferably mixed with 1 mL to 50 mL of water (corresponding to a total antisense oligomer concentration of the invention of 5 mg/mL to 250
  • Antisense oligomers of the invention are mixed with 0.5 mL to 100 mL of water (corresponding to total antisense oligomer concentrations of the invention of 3.75 mg/mL to 750 mg/mL or 7.5 mg/mL to 1500 mg/mL).
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combination drug of the present invention can optionally contain pharmaceutically acceptable additives in addition to the antisense oligomer of the present invention and the above-described carrier.
  • pharmaceutically acceptable additives include, for example, emulsifying aids (e.g. C6-22 fatty acids and pharmaceutically acceptable salts thereof, albumin, dextran), stabilizers (e.g. cholesterol, phosphatidic acid, mannitol, sorbitol). , tonicity agents (e.g. sodium chloride, glucose, maltose, lactose, sucrose, trehalose), pH adjusters (e.g.
  • hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, sodium hydroxide, potassium hydroxide, triethanolamine can be mentioned. 1 type, or 2 or more types can be used for these.
  • the content of the additive in the composition of the present invention is suitably 90% by weight or less, preferably 70% by weight or less, more preferably 50% by weight or less.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combined medicament of the present invention can be prepared by adding the antisense oligomer of the present invention to a carrier dispersion and stirring appropriately. Moreover, the additive can be added in an appropriate step before or after the addition of the antisense oligomer of the present invention.
  • the aqueous solvent that can be used when adding the antisense oligomer of the present invention is not particularly limited as long as it is pharmaceutically acceptable. Examples include water for injection, distilled water for injection, and electrolyte solutions such as physiological saline. , glucose solution, maltose solution and the like. Moreover, conditions such as pH and temperature in such a case can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the pharmaceutical combination of the present invention can be, for example, a liquid formulation or a freeze-dried formulation thereof.
  • the freeze-dried preparation can be prepared by freeze-drying the composition of the present invention in the form of a liquid formulation by a conventional method. For example, after appropriately sterilizing the composition of the present invention in the form of a liquid formulation, a predetermined amount is dispensed into vials and pre-frozen under conditions within the range of about -40°C to -20°C. for about 2 hours, primary drying under reduced pressure within the range of about 0 ° C. to 10 ° C., then secondary drying under reduced pressure within the range of about 15 ° C. to 25 ° C. It can be freeze-dried. . Then, in general, the inside of the vial is replaced with nitrogen gas and capped to obtain a freeze-dried preparation of the composition of the present invention.
  • the pharmaceutical composition of the present invention and/or the freeze-dried formulation of the combined drug of the present invention can generally be redissolved by adding any appropriate solution (redissolving solution) before use.
  • a reconstitution solution include water for injection, physiological saline, and other general infusion solutions.
  • the volume of this re-dissolution solution is not particularly limited depending on the application and the like, but it is suitable to be 0.5 to 2 times the volume of the liquid before freeze-drying or 500 mL or less.
  • the dosage for administering the pharmaceutical composition of the present invention and/or the combination drug of the present invention includes the type of antisense oligomer of the present invention contained, dosage form, patient conditions such as age and weight, route of administration, although it is desirable to adjust the amount of the antisense oligomer of the present invention in consideration of the nature and extent of the disease, the amount of the antisense oligomer of the present invention for a single administration is 0.1 mg to 1 g per 1 kg of body weight, preferably per 1 kg of body weight. It can be administered at 1 mg to 100 mg, more preferably 1 mg to 90 mg/kg body weight, more preferably 1 mg to 80 mg/kg body weight. Dosing frequency can be once every 1-3 days, once a week, or once every 2-3 weeks. This number may vary depending on the type of target disease, dosage form, and target molecule. Accordingly, a lower dose or administration frequency may be sufficient in some cases, and conversely, a higher dose or administration frequency may be required.
  • compositions of the present invention and/or the combination drug of the present invention is a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a vector capable of expressing the antisense oligomer of the present invention and the carrier described above.
  • Such expression vectors may be capable of expressing multiple antisense oligomers of the present invention.
  • Pharmaceutically acceptable additives can be added to the composition, as in the composition of the invention containing the antisense oligomer of the invention.
  • concentration of the expression vector contained in the composition varies depending on the type of carrier, etc., but is suitably in the range of 0.1 nM to 100 ⁇ M, preferably in the range of 1 nM to 10 ⁇ M, and preferably in the range of 10 nM to 1 ⁇ M. more preferred.
  • the weight ratio of the expression vector to the carrier (carrier/expression vector) contained in the composition varies depending on the properties of the expression vector, the type of carrier, etc., but is suitably in the range of 0.1 to 100. It is preferably within the range of ⁇ 50, more preferably within the range of 10-20.
  • the content of the carrier contained in the composition is the same as in the case of the composition of the present invention containing the antisense oligomer of the present invention. is similar to
  • Example 1 Production of antisense oligomer
  • Antisense oligomers (PMO Nos. 1 to 5 (SEQ ID NOS: 5098 to 5102)) shown in Table 9 were synthesized according to the method described in Example 1 of International Publication WO2013/100190. The theoretical and ESI-TOF-MS molecular weights of each antisense oligomer are also shown. The 5' end of PMO is the following group (1). The synthesized PMO was dissolved in water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Factory).
  • the target base sequences of the antisense oligomers of the present invention are described as " Ma1_b1 - c1 " and " Ma2_b2 - c2_Ma3_b3 - c3 ".
  • “Ma 1 ” represents the a-th exon of the mouse dystrophin gene
  • “b 1 ” represents the 5′-terminal base of the target nucleotide sequence
  • “c 1 ” represents the 3′-terminal base of the target nucleotide sequence.
  • 'b 1 ' and 'c 1 ' are positive integers
  • 'b 1 ' and 'c 1 ' are respectively 3' Indicates the number of the base in the terminal direction.
  • “b 1 ” and “c 1 ” are negative integers
  • “b 1 ” and “c 1 ” respectively replace the 3′ terminal base of the (a ⁇ 1)th intron with ⁇ 1st. , it represents the number of the base in the direction of the 5' end.
  • the 5' end of the target base sequence is the 4th base from the 3' end of the 54th intron in the 5' end direction
  • the target base sequence It means a base sequence whose 3' end is the 24th base in the direction from the 5' end of the 55th exon to the 3' end.
  • Ma2_b2 - c2 which is the first part of " Ma2_b2 - c2_Ma3_b3 - c3”, is the target base of the 3 ' terminal side unit oligomer constituting the antisense oligomer.
  • the target of the 3' terminal side unit oligomer constituting the antisense oligomer It means a nucleotide sequence of "M45_(-66)-(-61)” and a target nucleotide sequence of the 5'-terminal side unit oligomer of "M45_19-40".
  • Example 2 Multi-exon skipping activity test of antisense oligomer] ⁇ Test Example 1> Exon 45-55 multi-exon skipping assay in model mouse-derived cultured cells (1): Induction of multi-exon skipping (total addition concentration: 30 ⁇ M) procedure
  • H2K-mdx52 cells immortalized myoblasts established from mating individuals of Duchenne muscular dystrophy model mdx52 mice and H-2kb-tsA58 transgenic mice were added to a 0.4% gelatin-coated 48-well plate (AGC Techno).
  • the medium was changed from the growth medium to the differentiation medium (5% horse serum (Thermo Fisher Scientific). (manufactured by Gene Tools, Inc.) and DMEM supplemented with 2% L-glutamine and 1% penicillin/streptomycin) After culturing for 3 days, 30 ⁇ M PMO was transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter (manufactured by Gene Tools, hereinafter the same). The PMOs used are shown in Table 10 below.
  • Buffer RLT manufactured by Qiagen
  • 2-mercaptoethanol manufactured by Nacalai Tesque
  • the nucleotide sequences of the forward primer and reverse primer used for RT-PCR are as follows.
  • Forward primer 5'-cagttgaaaatggcgacac-3' (SEQ ID NO: 5103)
  • Reverse primer 1 5'-ttagctgctgctcatctcca-3' (SEQ ID NO: 5104)
  • Reverse primer 2 5'-ttccagggatctcaggattt-3' (SEQ ID NO: 5105)
  • a transcript (429 bp) without skipping or with exon 45 skipping (253 bp) can be detected, and with the combination of forward primer and reverse primer 2, exon A transcript (218 bp) with 45-55 multi-exon skipping can be detected.
  • the reaction product of the above PCR was analyzed using MultiNA (manufactured by Shimadzu Corporation).
  • the polyoligonucleotide amount "A” in the band where exons 45 to 55 were skipped, the polynucleotide amount "B” in the band where exon 45 was skipped, and the polyoligonucleotide amount "C” in the band where no skipping occurred were measured. .
  • Skipping efficiency (%) of exon 45-55 skipping A/(A+B+C) x 100
  • Skipping efficiency of exon 45 skipping (%) B/(A+B+C) x 100
  • Procedure H2K-mdx52 cells were seeded on a 0.4% Gelatin-coated 24-well plate at 5 ⁇ 10 4 /well, cultured in 1 mL of growth medium at 37° C., 5% CO 2 for 48 hours, and then transferred to the growth medium. The medium was replaced with a differentiation medium. After 3 days of culture, 15 ⁇ M PMO was transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter. In addition to the PMO used in Test Example 1, those listed in Table 11 below were used.
  • Procedure H2K-mdx52 cells were seeded on a 0.4% Gelatin-coated 12-well plate at 6.7 ⁇ 10 4 /well and cultured for 1 day in 2 mL of growth medium at 37° C. and 5% CO 2 . After culturing for 2 days, the medium was changed from the growth medium to the differentiation medium. After 3 days of culture, 50 ⁇ M PMO was transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter. After culturing for another 3 days, the cells were collected in the same manner as in Test Example 1, total RNA was extracted, One-Step RT-PCR was performed, and the PCR reaction products were analyzed to determine exon 45-55 skipping and exon 45 skipping. Skipping efficiency was obtained.
  • Procedure H2K-mdx52 cells were seeded on a 0.4% Gelatin-coated 12-well plate at 6.7 ⁇ 10 4 /well and cultured in 2 mL of growth medium at 37° C. and 5% CO 2 for 1 day. After culturing for 2 days, the medium was changed from the growth medium to the differentiation medium. After 3 days of culture, 50 ⁇ M PMO was transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter.
  • the medium was replaced with a differentiation medium, and after culturing for an additional day, the cells were collected using a cell lysis buffer Pierce RIPA Buffer (Thermo Fisher Scientific) supplemented with a protease inhibitor cocktail cOmplete, Mini (manufactured by Roche Diagnostics).
  • the cell lysate (30 ⁇ g in protein amount) was electrophoresed using polyacrylamide gel NuPAGE 3 to 8%, Tris-Acetate, 1.5 mm, Mini Protein Gel, 15-well (manufactured by Thermo Fisher Scientific) ( 150 V for 75 minutes).
  • HiMark Pre-Stained Protein Standard (manufactured by Thermo Fisher Scientific) was used as a molecular weight marker.
  • Immobilon-P Transfer membrane manufactured by Merck Millipore
  • transfer 4 mA/cm 2 , 30 minutes
  • Immobilon-P Transfer membrane manufactured by Merck Millipore
  • An anti-dystrophin antibody (NCL-Dys1, manufactured by Leica Biosystems Newcastl) was diluted 100-fold as a primary antibody, and a goat anti-mouse IgG (H+L)-Horseradish Peroxidase complex (manufactured by Bio-Rad Laboratories) was used as a secondary antibody.
  • a 500-fold dilution was used and Western blotting was performed.
  • luminescence was caused by ECL Prime Western Blotting Detection System (manufactured by Cytiva), luminescence was detected by a chemiluminescence/gel imaging device ChemiDoc Touch MP Imaging System (manufactured by Bio-Rad Laboratories), and an image was taken.
  • ECL Prime Western Blotting Detection System manufactured by Cytiva
  • ChemiDoc Touch MP Imaging System manufactured by Bio-Rad Laboratories
  • Example 3 Production of antisense oligomer (2)
  • Antisense oligomers (PMO Nos. 6 to 33) shown in Table 12 were synthesized in the same manner as in Example 1. The theoretical molecular weight of each antisense oligomer and the measured value by ESI-TOF-MS are also shown. The 5' end is group (1) as in Example 1. The synthesized PMO was dissolved in water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Factory).
  • the target nucleotide sequences of the antisense oligomers of the present invention are described as “ Ha1_b1 - c1 " and " Ha2_b2 - c2_Ha3_b3 - c3 ".
  • “Ha 1 ” represents the a-th exon of the human dystrophin gene
  • “b 1 ” represents the 5′-terminal base of the target nucleotide sequence
  • “c 1 ” represents the 3′-terminal base of the target nucleotide sequence.
  • 'b 1 ' and 'c 1 ' are positive integers
  • 'b 1 ' and 'c 1 ' are respectively 3' Indicates the number of the base in the terminal direction.
  • “b 1 ” and “c 1 ” are negative integers
  • “b 1 ” and “c 1 ” respectively replace the 3′ terminal base of the (a ⁇ 1)th intron with ⁇ 1st. , it represents the number of the base in the direction of the 5' end.
  • the 5' end of the target base sequence is the 18th base from the 3' end of the 54th intron in the 5' end direction
  • the target base sequence It means a base sequence whose 3' end is the 10th base in the direction from the 5' end to the 3' end of the 55th exon.
  • Ha2_b2 - c2 which is the first portion of " Ha2_b2 - c2_Ha3_b3 - c3”, is the target base of the 3 ' terminal side unit oligomer constituting the antisense oligomer.
  • the second portion, "Ha 3 — b 3 -c 3 ,” which means the sequence, means the target base sequence of the 5'-terminal side unit oligomer constituting the antisense oligomer.
  • the target of the 3' terminal side unit oligomer constituting the antisense oligomer It means a nucleotide sequence having a nucleotide sequence of "H45_(-66)-(-61)” and a target nucleotide sequence of the 5'-terminal side unit oligomer of "H45_19-40".
  • Example 4 Antisense oligomer multi-exon skipping activity test (2)] ⁇ Test Example 1> Exon 45-55 Multiexon Skipping Assay in Normal Human Myoblasts (1): Induction of Multiexon Skipping
  • DMEM high glucose, GlutaMAX TM Supplement, pyruvate
  • the PMOs used and their concentrations in the medium are shown in Table 14 below.
  • Buffer RLT manufactured by Qiagen
  • 2-mercaptoethanol manufactured by Nacalai Tesque
  • the concentration of the extracted total RNA was measured using NanoDrop One C (manufactured by Thermo Fisher Scientific).
  • One-Step RT-PCR was performed on 100 ng of the extracted total RNA using QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (manufactured by Qiagen).
  • a reaction solution was prepared according to the protocol attached to the kit.
  • the thermal cycler used was Veriti 96 Well Thermal Cycler (manufactured by Thermo Fisher Scientific).
  • the RT-PCR program used is as follows.
  • nucleotide sequences of forward and reverse primers used in RT-PCR are shown in Table 15 below.
  • a transcript (301 bp) in which exons 45-55 have undergone multi-exon skipping can be detected.
  • a combination of forward primer 2 and reverse primer 2 can detect a transcript (245 bp) in the region of exons 37-38, which is not affected by skipping.
  • the reaction product of the above PCR was analyzed by MultiNA (manufactured by Shimadzu Corporation).
  • a transcript (268 bp) with exon 45 skipping and a transcript (444 bp) without skipping can be detected.
  • the reaction product of the above PCR was analyzed by MultiNA (manufactured by Shimadzu Corporation).
  • ⁇ Test Example 2 Assay of Exon 45-55 Multiple Exon Skipping in Exon 48-50 Deletion DMD Patient-Derived Myoblasts (1): Procedure for Inducing Multiple Exon Skipping Exon 48-50 Deletion DMD Patient-Derived Myoblasts Obtained from NCNP Biobank were directly immunofluorescently stained with PE-labeled anti-human CD82 antibody and APC-labeled anti-human CD56 antibody (manufactured by Miltenyi Biotec, hereinafter the same), and sorted by Cell Sorter SH800S to remove both CD56 and CD82 positive exons 48-50. DMD patient-derived myoblasts were obtained.
  • DMD patient-derived myoblasts (CD56-positive, CD82-positive) were seeded at 5 ⁇ 10 4 /well on Corning BioCoat Collagen I 48-well clear microplates coated with Corning® Matrigel basement membrane matrix. and DMD patient-derived myoblast growth medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS) and 1% P/S: Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12) (Thermo Fisher Scientific company, hereinafter the same)) cultured in 0.25 mL under conditions of 37° C. and 5% CO 2 for 1 day.
  • DMD patient-derived myoblast growth medium Dulbecco's Modified Eagle Medium supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS) and 1% P/S: Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12) (Thermo Fisher Scientific company, hereinafter the same)
  • the medium was transferred from the growth medium to 0.5 mL DMD patient-derived myoblast differentiation medium (DMEM/F12 supplemented with 2% horse serum, 1% ITS liquid medium supplement (100X) and 1% P/S). The medium was changed. After culturing for 6 days in differentiation medium, PMOs were transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter. The same PMO as in Test Example 1 was used, and the concentration in the medium is as shown in Table 17 below.
  • DMD patient-derived myoblast differentiation medium DMEM/F12 supplemented with 2% horse serum, 1% ITS liquid medium supplement (100X) and 1% P/S.
  • the medium was changed.
  • PMOs were transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter.
  • the same PMO as in Test Example 1 was used, and the concentration in the medium is as shown in Table 17 below.
  • One-Step RT-PCR was performed using 200 ng of total RNA in the same manner as in Test Example 1, and the resulting PCR reaction.
  • the products were analyzed to determine the skipping efficiencies of exon 45-55 skipping and exon 45 skipping.
  • FIGS. 14 and 15 The results are shown in FIGS. 14 and 15.
  • FIGS. 16 and 17 Results The results are shown in FIGS. 16 and 17.
  • the skipping efficiency of exons 45-55 skipping was improved (Fig. 16).
  • PMO No. hnRNP A1 targeted.
  • the skipping efficiency of exon 45 skipping was reduced, and single skipping was suppressed (Fig. 17).
  • DMD patient-derived myoblasts (CD56-positive, CD82-positive) were coated with Corning (registered trademark) matrigel basement membrane matrix in a 24-well collagen I-coated microplate (manufactured by AGC Techno Glass, hereinafter the same) 1.0 ⁇ 10 5 /well, and cultured in 1 mL of growth medium for DMD patient-derived myoblasts at 37° C. and 5% CO 2 for 1 day. On the day after seeding, the medium was changed from the growth medium for DMD patient-derived myoblasts to the differentiation medium for DMD patient-derived myoblasts. After culturing for 6 days, PMO was transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter.
  • a cell lysate was prepared in the same manner as in Test Example 4 of Example 2, and the protein concentration in the cell lysate was determined.
  • Western electrophoresis was performed in the same manner as in Test Example 4 of Example 2, except that the cell lysate was used in an amount of 30 ⁇ g protein, the electrophoresis time was 120 minutes, and the anti-dystrophin antibody (NCL-DYS1) was diluted 250-fold and used. Blotting was performed to detect dystrophin protein.
  • the electrophoresed samples are shown in Table 19 below.
  • lysates of mouse C2C12 cells cultured for 12 days of muscle differentiation (normal dystrophin control) and lysates of exon 45-55-deficient transgenic mouse skeletal muscle (exon 45-55-deficient dystrophin expression control) were used. used.
  • RNA was extracted in the same manner as in Test Examples 2 and 3, and using 100 ng of total RNA, One-Step RT-PCR was performed in the same manner as in Test Examples 1 to 3, and the resulting PCR reaction. Products were analyzed to determine the skipping efficiency of exons 45-55 skipping.
  • One-Step RT-PCR was performed in the same manner as in Test Examples 1 to 3 except that the primers shown in Table 21 below were used, and the exon 45 skipping efficiency was determined by analyzing the PCR reaction product.
  • a combination of the forward primer and the reverse primer can detect a transcript (162 bp) in which exon 45 is skipped and a transcript (338 bp) in which exon 45 is not skipped.
  • One-Step RT-PCR was performed in the same manner as in Test Example 5, except that 80 ng of total RNA was used, and the PCR reaction products obtained were analyzed to determine the skipping efficiencies of exon 45-55 skipping and exon 45 skipping. .
  • FIGS. 21 and 22 The results are shown in FIGS. 21 and 22.
  • FIG. In exon 46-51 deleted DMD patient-derived myoblasts, PMO No. 6 alone (condition 6) and PMO No. It was confirmed that mixtures containing 6 (conditions 2, 3, 5) induced exon 45-55 skipping (FIG. 21). Also PMO No. 6 plus PMO No. 7 (Condition 5), PMO No. 6 plus PMO No. The skipping efficiency of exon 45 skipping was lower than that of the mixture containing 8 (condition 3), and single skipping was suppressed (Fig. 22).
  • DMD patient-derived myoblasts (CD56-positive, CD82-positive) were plated on a collagen I-coated microplate 24 wells coated with Corning (registered trademark) Matrigel basement membrane matrix at 8.0 ⁇ 10 4 /well.
  • the cells were seeded and cultured for 1 day in 1 mL of growth medium for DMD patient-derived myoblasts at 37°C and 5% CO2 .
  • the medium was changed from the growth medium for myoblasts derived from DMD patients to 1 mL differentiation medium for myoblasts derived from DMD patients.
  • PMO was transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter.
  • the PMOs in Table 24 below were also used.
  • PMO was added at the concentration in the medium shown in Table 25 below.
  • FIGS. 24 and 25 The results are shown in FIGS. 24 and 25.
  • PMONo. 6 and PMO No. A mixture containing 8 (condition 2) was confirmed to induce exon 45-55 skipping (FIG. 24).
  • the mixture containing 7 (condition 3) also induced exons 45-55 skipping (FIG. 24).
  • PMO No. 9 to 11 are PMO Nos. It was confirmed that exons 45-55 skipping was induced in conditions 4, 6, and 8 in addition to 8.
  • PMO no. It was confirmed that exons 45 to 55 skipping was induced under conditions 5, 7, and 9 in which 7 was also added (Fig. 24), but the skipping efficiency of exon 45 skipping was reduced, and single skipping was suppressed. (Fig. 25).
  • PMO was added at the media concentrations in Table 27 below.
  • FIGS. 26 and 27 The results are shown in FIGS. 26 and 27.
  • FIG. 12 to 17 are PMO Nos. It was confirmed that conditions 4, 6, 8, and 10 added together with 8 induced exons 45-55 skipping. Furthermore, PMO no. It was confirmed that exons 45 to 55 skipping was induced under conditions 5, 7, 9, and 11 in which 7 was also added (Fig. 26), but the skipping efficiency of exon 45 skipping was reduced, and single skipping was suppressed. (Fig. 27).
  • PMO was added at the medium concentration in Table 29 below.
  • PMO was added at the media concentrations in Table 31 below.
  • RT-PCR was performed and the resulting PCR reaction products were analyzed to determine the skipping efficiencies of exon 45-55 skipping and exon 45 skipping.
  • FIGS. 30 and 31 The results are shown in FIGS. 30 and 31.
  • exons 45-55 skipping was less efficient than when PMO No. 7 was added (condition 4)
  • PMO No. When 25 was added condition 5
  • Similar induction of exons 45-55 skipping was confirmed (FIG. 30).
  • PMO No. When 25 was added (Condition 5) exon 45 skipping efficiency was lowered, and single skipping was suppressed (FIG. 31).
  • PMO was added at the media concentrations in Table 33 below.
  • FIGS. 34 and 35 The results are shown in FIGS. 34 and 35.
  • Procedure Collagen I-coated microplate 12 well (AGC Techno Glass Co., Ltd.) at 2.0 ⁇ 10 5 /well, and cultured in 1 mL of growth medium for myoblasts derived from DMD patients under conditions of 37° C. and 5% CO 2 for 1 day. On the day after seeding, the medium was changed from the growth medium for DMD patient-derived myoblasts to the differentiation medium for DMD patient-derived myoblasts. After 7 days of culture in differentiation medium, PMOs were transfected with 6 ⁇ M Endo-Porter. The PMOs used are shown in Table 37 below.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)

Abstract

本明細書において、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンを同時にスキッピングさせるアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の組み合わせが提供される。

Description

アンチセンスオリゴマーの組み合わせ
　本発明は、筋ジストロフィー治療用の医薬組成物又は組み合わせ医薬、筋ジストロフィーの治療方法などに関する。
　近年、疾患を引き起こす変異を有する遺伝子のエクソンをスキッピングさせることにより部分的に機能を有するタンパク質を生じさせ、これにより疾患を治療するエクソンスキッピング療法が注目されている。このようなエクソンスキッピング療法によって治療可能な疾患の例としてデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）が挙げられる。
　ＤＭＤは出生男子約３，５００人に１人が発症する最も頻度の高い遺伝性進行性筋疾患である。ＤＭＤ患者は乳幼児期には健常者とほぼ変わらない運動機能を示すが、４～５歳頃から筋力低下がみられる。その後、ＤＭＤ患者の筋力低下は年齢とともに進行し１２歳頃までに歩行不能になり、２０歳代で心不全又は呼吸不全により死に至る。このため、有効な治療薬の開発が強く求められている。
　ＤＭＤの原因はジストロフィン遺伝子の変異であることが知られている。ジストロフィン遺伝子はＸ染色体に存在し、２２０万塩基のＤＮＡから成る巨大な遺伝子である。ＤＮＡからｐｒｅ－ｍＲＮＡに転写され、さらにスプライシングによりイントロンが除かれ７９個のエクソンが結合したｍＲＮＡは１３，９９３塩基になる。このｍＲＮＡから３，６８５個のアミノ酸に翻訳され、ジストロフィンタンパク質が生成される。ジストロフィンタンパク質は筋細胞の膜安定性の維持に関与しており、筋細胞を壊れにくくするために必要である。ＤＭＤ患者はジストロフィン遺伝子に変異を有するため、患者の筋細胞においては、機能するジストロフィンタンパク質がほぼ発現しない。そのため、ＤＭＤ患者体内では、筋収縮時に筋細胞の構造を維持できなくなり、多量のカルシウムイオンが筋細胞内に流れ込む。その結果、筋細胞壊死と線維化が進み、次第に筋細胞が再生されにくくなる。
　ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）もジストロフィン遺伝子の変異が原因であるが、その症状は筋力低下を呈するものの一般にＤＭＤと比較して軽く、筋力低下の進行も遅く、多くの場合、成人期に発症する。ＤＭＤとＢＭＤとの臨床症状の違いは、変異によりジストロフィンのｍＲＮＡがジストロフィンタンパク質へと翻訳される際のアミノ酸読み取り枠が破壊されるか、あるいは維持されるかによるものと考えられている（非特許文献１）。つまり、ＤＭＤでは、アミノ酸読み取り枠がずれる変異を有することにより、機能的なジストロフィンタンパク質がほぼ発現しないが、ＢＭＤでは変異によりエクソンの一部は欠失しているが、アミノ酸読み取り枠は維持されているために不完全ながらも機能し得るジストロフィンタンパク質が産生される。
　ＤＭＤの治療法として、エクソンスキッピング法が期待されている。この方法は、スプライシングを改変することでジストロフィンのｍＲＮＡのアミノ酸読み取り枠を修復し、部分的に機能を回復したジストロフィンタンパク質の発現を誘導する方法である（非特許文献２）。エクソンスキッピングの対象となるエクソンから翻訳されるアミノ酸配列部分は失われることになる。そのためこの治療で発現されるジストロフィンタンパク質は正常のものより短くなるが、アミノ酸読み取り枠が維持されるために筋細胞を安定化する機能が部分的に保持される。したがって、エクソンスキッピングにより、ＤＭＤは、より軽症のＢＭＤと同じような症状を呈するようになると期待されている。エクソンスキッピング法は、マウスやイヌによる動物実験を経て、ヒトＤＭＤ患者に対する臨床試験が行われている。
　エクソンスキッピングは、５’又は３’スプライス部位周辺のいずれか若しくは両方、又はエクソンの内部を標的とするアンチセンス核酸の結合により誘導することができる。エクソンは両方のスプライス部位がスプライソソーム複合体によって認識された場合のみｍＲＮＡに包含される。したがって、スプライス部位周辺をアンチセンス核酸でターゲッティングすることにより、エクソンスキッピングを誘導することができる。また、エクソンがスプライシングの機構に認識されるためにはエクソンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）へのセリンとアルギニンに富むＳＲタンパク質の結合が必要であると考えられており、ＥＳＥをターゲッティングすることでもエクソンのスキッピングを誘導することができる。
　ジストロフィン遺伝子の変異はＤＭＤ患者によって異なるため、遺伝子変異の場所や種類に応じたアンチセンス核酸が必要になる。ジストロフィン遺伝子の単一エクソンに対して、一つの連続する塩基配列を標的としてエクソンスキッピングを誘導するアンチセンス核酸について複数の報告がある（特許文献１～６並びに非特許文献１及び２）。また、ジストロフィン遺伝子の同一エクソンを標的とする二種類のアンチセンス核酸を混合して作用させると（二重標的化）、各アンチセンス核酸を単独で用いた場合よりスキッピング活性が増強される場合があることが報告されている（特許文献７）。
　また、上記のように１つのエクソンをスキップさせるのではなく、複数のエクソン（エクソン群）をスキップするマルチエクソンスキッピングという方法が注目されている。当該方法によれば、ジストロフィン遺伝子の広範囲の変異をエクソンスキッピングによる治療の対象とすることが可能となる。例えば、ジストロフィン遺伝子において、エクソン４５～５５は遺伝子変異のホットスポットとして知られており、これら１１個のエクソンをスキップすることで、欠失変異を有するＤＭＤ患者の約６０％を治療対象とすることができることが報告されている（非特許文献３）。また、エクソン４５～５５を先天的に欠失しているとＢＭＤを発症するが、そのほとんどの患者は無症状又は軽症であることが知られている（非特許文献４）。これらのことから、エクソン４５～５５スキッピングを誘導しうる薬剤は、ＤＭＤ治療薬として有望であると期待されている。
　マルチエクソンスキッピングを誘導する方法としては、例えば、エクソンスキッピングの対象となる領域の全てのエクソンをそれぞれ標的とするアンチセンス核酸を用いる方法（非特許文献５、７、８、及び１０）、エクソンスキッピングさせる対象となる領域の３’側及び５’側の２つの異なるエクソンをそれぞれ標的とするアンチセンス核酸を用いる方法（非特許文献６及び９並びに特許文献８、９、１１）、エクソンスキッピングさせる対象となる領域の５’側のエクソンのみを標的とするアンチセンス核酸を用いる方法（特許文献１０）が報告されている。
国際公開公報第2004/048570号 国際公開公報第2009/139630号 国際公開公報第2010/048586号 米国特許公開公報第2010/0168212号 国際公開公報第2011/057350号 国際公開公報第2006/000057号 国際公開公報第2007/135105号 国際公開公報第2004/083446号 国際公開公報第2014/007620号 国際公開公報第2019/200185号 国際公開公報第2020/219820号
Annemieke Aartsma-Rus et al., (2002) Neuromuscular Disorders 12: S71-S77 Wilton S. D., e t al., Molecular Therapy 2007: 15: p. 1288-96 Christophe Beroud et al., Human Mutation, 28(2), 2007, 196-202 Yusuke Echigoya et al., Molecular Therapy‐Nucleic Acids, 4(2), 2015, e225 Yoshitsugu Aoki et al., PNAS, 109(34), 2012, 13763-13768 Laura van Vliet et al., BMC Medical Genetics, 9, 105, 2008 Joshua Lee et al., PLoS ONE, 13(5), e0197084, 2018 Joshua Lee et al., Methods in Molecular Biology, 1828, 141-150, 2018 Annemieke Aartsma-Rus et al, Am. J. Hum. Genet. 74(1), 83-92, 2004 Yusuke Echigoya et al., Molecular Therapy, 27(11), 1-13, 2019
　目的ｐｒｅ－ｍＲＮＡの複数のエクソン（エクソン群）を同時にスキッピングさせる薬剤は、その効果が必ずしも十分といえるものではなかった。上記のような状況において、目的ｐｒｅ－ｍＲＮＡの複数のエクソン（エクソン群）を同時にスキッピングさせることにより種々の変異を有する患者を治療するための医薬が求められていた。
　本発明は、以下のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の組み合わせ、医薬組成物、組み合わせ医薬、筋ジストロフィーの治療方法などを提供する。
（１）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンを同時にスキッピングさせるアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の組み合わせであって、
　（ｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第１のユニットオリゴマー、及び
前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第２のユニットオリゴマー
を含む、第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、
及び
　（ｉｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、
を含む、組み合わせ。
（２）前記第１のユニットオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含み、
　前記第２のユニットオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列の連続する１～１０塩基に相補的な塩基配列を含み、
　前第２のアンチセンスオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含む、（１）に記載の組み合わせ。
（３）前記第１のユニットオリゴマーが、
（ａ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含み、及び／又は
　前記第２のユニットオリゴマーが、
（ａ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む、
（１）又は（２）に記載の組み合わせ。
（４）前記第２のアンチセンスオリゴマーが、
（ａ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む、
（１）～（３）のいずれかに記載の組み合わせ。
（５）前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、前記第１のユニットオリゴマーが配列番号９０７～１６０２のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１０６～２１０のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４２９９～５０９０のいずれかの塩基配列を含む、（１）～（４）のいずれかに記載の組み合わせ。
（６）前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０、１１９０、１２０１、１２１２、１２２２、１２２４、及び１２３９からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含む、（１）～（５）のいずれかに記載の組み合わせ。
（７）前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４、１２４、１５１、２０１、２０３、及び２０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含む、（１）～（６）のいずれかに記載の組み合わせ。
（８）前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含む、
（６）又は（７）に記載の組み合わせ。
（９）前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８、４７０２、４７５２、４９２３、４９２６、４９３６、及び４９７７からなる群より選択される塩基配列を含む、（１）～（８）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１０）前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７０２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７５２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２３の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２６の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９３６の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含む、
（１）～（９）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１１）前記第１のユニットオリゴマーが配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０又は４８８０の塩基配列を含む、（５）～（１０）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１２）さらに、（ｉｉｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、を含む、
（１）～（１１）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１３）前記第３のアンチセンスオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含む、（１２）に記載の組み合わせ。
（１４）前記第３のアンチセンスオリゴマーが、
（ａ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む、
（１２）又は（１３）に記載の組み合わせ。
（１５－１）
　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、
（ａ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む、
（１４）に記載の組み合わせ。
（１５－２）
　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、
（ａ）配列番号１６１４～１６５４、１６６７～１７０７、１７２１～１７６１、１７７６～１８１６、１８３２～１８７２、１８８９～１９２９、１９４７～１９８７、２００６～２０４６、２０６６～２１０６、２１２７～２１６７、２１８９～２２２９、２２５２～２２９２、２３１６～２３５６、２３８１～２４２１、２４４７～２４８７、及び２５１４～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６１４～１６５４、１６６７～１７０７、１７２１～１７６１、１７７６～１８１６、１８３２～１８７２、１８８９～１９２９、１９４７～１９８７、２００６～２０４６、２０６６～２１０６、２１２７～２１６７、２１８９～２２２９、２２５２～２２９２、２３１６～２３５６、２３８１～２４２１、２４４７～２４８７、及び２５１４～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６１４～１６５４、１６６７～１７０７、１７２１～１７６１、１７７６～１８１６、１８３２～１８７２、１８８９～１９２９、１９４７～１９８７、２００６～２０４６、２０６６～２１０６、２１２７～２１６７、２１８９～２２２９、２２５２～２２９２、２３１６～２３５６、２３８１～２４２１、２４４７～２４８７、及び２５１４～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む、
（１４）に記載の組み合わせ。
（１６）
　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、
（ａ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む、
（１４）に記載の組み合わせ。
（１７－１）前記第３のアンチセンスオリゴマーが、配列番号３０６０、３０６５、３０７７、３０８２、３０８７、３０９０、３０９６、３１０８、３１１９、及び３３２０からなる群より選択される塩基配列を含む、（１）～（１４）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１７－２）前記第３のアンチセンスオリゴマーが、配列番号３０７７、３０８２、３０８７、３０９０、３０９６、３１０８、及び３１１９からなる群より選択される塩基配列を含む、（１）～（１４）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１７－３）前記第３のアンチセンスオリゴマーが、配列番号３０８２、３０８７、３０９０、３０９６、３１０８、及び３１１９からなる群より選択される塩基配列を含む、（１）～（１４）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１８）前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、前記第１のユニットオリゴマーが配列番号９０７～１６０２のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１０６～２１０のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４２９９～５０９０のいずれかの塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号２５５５～３５０６のいずれかの塩基配列を含む、（１２）～（１７）のいずれかに記載の組み合わせ。
（１９）前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０６０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０６５の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０７７の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８７の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３１０８の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３１１９の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３３２０の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７０２の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７５２の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２３の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２６の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９３６の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含むか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含む、
（１）～（１８）のいずれかに記載の組み合わせ。
（２０）前記第１のユニットオリゴマーが配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０又は４８８０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２、３０９０又は３０９６の塩基配列を含む、（１８）又は（１９）に記載の組み合わせ。
（２１）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンの全てをスキッピングさせる、（１）～（２０）のいずれかに記載の組み合わせ。
（２２）前記第１～第２のアンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、（１）～（１１）のいずれかに記載の組み合わせ、又は前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、（１２）～（２１）のいずれかに記載の組み合わせ。
（２３）前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分及び／又はリン酸結合部分が修飾されている、（２２）に記載の組み合わせ。
（２４）前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分が、２’位の－ＯＨ基が、－ＯＲ、－Ｒ、－Ｒ’ＯＲ、－ＳＨ、－ＳＲ、－ＮＨ２、－ＮＨＲ、－ＮＲ２、－Ｎ３、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、及び－Ｉからなる群より選択されるいずれかの基で置換されたリボースである、（２２）又は（２３）に記載の組み合わせ（前記Ｒは、アルキル又はアリールを示し、前記Ｒ’は、アルキレンを示す。）。
（２５）前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドのリン酸結合部分が、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、及びボラノフォスフェート結合からなる群より選択されるいずれか１つのものである、（２２）～（２４）のいずれかに記載の組み合わせ。
（２６）前記第１～第２のアンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、（１）～（１１）のいずれかに記載の組み合わせ、又は前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、（１２）～（２１）のいずれかに記載の組み合わせ。
（２７）前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、（２６）に記載の組み合わせ。
（２８）前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーの５’末端が、下記化学式（１）～（３）のいずれかの基である、（２６）又は（２７）に記載の組み合わせ。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
 （２９）（ａ）（１）～（２８）のいずれかに記載の第１及び第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、又は
　（ｂ）（ｉ）（１）～（２８）のいずれかに記載の第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、及び（ｉｉ）（１）～（２８）のいずれかに記載の第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物の組み合わせ医薬。
（３０）（ａ）（１２）～（２８）のいずれかに記載の第１～第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、又は
　（ｂ）（ｉ）（１２）～（２８）のいずれかに記載の第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、（ｉｉ）（１２）～（２８）のいずれかに記載の第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、及び（ｉｉｉ）（１２）～（２８）のいずれかに記載の第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物の組み合わせ医薬。
（３１）医薬組成物がさらに医薬的に許容可能な担体を含む、（２９）又は（３０）に記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬。
（３２）筋ジストロフィーの治療のための、（２９）～（３１）のいずれかに記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬。
（３３）ヒト患者に投与するための、（２９）～（３２）のいずれかに記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬。
（３４）（ｉ）（１）～（２８）のいずれかに記載の第１及び第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、（ｉｉ）（１２）～（２８）のいずれかに記載の第１～第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は（ｉｉｉ）（２９）～（３３）のいずれかに記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬を、筋ジストロフィー患者に投与する工程を含む、筋ジストロフィーの治療方法。
（３５）前記筋ジストロフィー患者が、ジストロフィン遺伝子にエクソン４５～５５スキップの対象となる変異を有する患者である、（３４）に記載の治療方法。
（３６）前記患者がヒトである、（３４）又は（３５）に記載の治療方法。
　本発明により標的の複数のエクソンを同時にスキッピングさせるアンチセンスオリゴマーの組み合わせが提供される。また、本発明の別の態様により、目的ｐｒｅ－ｍＲＮＡの複数のエクソンを同時にスキッピングさせることにより種々の変異を有する筋ジストロフィー患者を治療するための医薬組成物又は組み合わせが提供される。また、本発明の別の態様により、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５～５５を同時に高効率にスキッピングさせることが可能である。
Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５～５５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である（PMO総添加濃度：30 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である（PMO総添加濃度：30 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５～５５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、2-2はMixture 2 + PMO No.3 (1:1)で、2-4はMixture2 + PMO No.3 (1:2)で、2-5はPMO No.3のみで、2-7はMixture 2のみで処理した結果を示し、NTは処理なし（Not treated）を意味する（PMO総添加濃度：15 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、2-2はMixture 2 + PMO No.3 (1:1)で、2-4はMixture2 + PMO No.3 (1:2)で、2-5はPMO No.3のみで、2-7はMixture 2のみで処理した結果を示し、NTは処理なし（Not treated）を意味する（PMO総添加濃度：15 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５～５５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、3-2はMixture2 + PMO No.4 (1:1)で、3-4はMixture2 + PMO No.4 (1:2)で、3-5はPMO No.4のみで、3-7はMixture 2で処理した結果を示し、NTは処理なし（Not treated）を意味する（PMO総添加濃度：15 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、3-2はMixture2 + PMO No.4 (1:1)で、3-4はMixture2 + PMO No.4 (1:2)で、3-5はPMO No.4のみで、3-7はMixture 2で処理した結果を示し、NTは処理なし（Not treated）を意味する（PMO総添加濃度：15 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５～５５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、2-1はMixture2のみで、2-2はMixture2 + PMO No.3 (1:1)で、2-3はMixture2 + PMO No.3 (2:1)で、2-4はMixture2 + PMO No.3 (3:1)で処理した結果を示し、NTは処理なし（Not treated）を意味する（PMO総添加濃度：15 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、2-1はMixture2のみで、2-2はMixture2 + PMO No.3 (1:1)で、2-3はMixture2 + PMO No.3 (2:1)で、2-4はMixture2 + PMO No.3 (3:1)で処理した結果を示し、NTは処理なし（Not treated）を意味する（PMO総添加濃度：15 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５～５５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、NCはEndo-porterのみ、Mix2はPMO No.1とPMO No. 2をいずれも終濃度25μMで含む混合物で、Mix2 + hnRNP A1はPMO No. 1とPMO No. 2をいずれも終濃度18.75μM、及びPMO No.3を終濃度12.5μMで含む混合物で処理した結果を示す（PMO総添加濃度：50 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５のスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。図中、NCはEndo-porterのみ、Mix2はPMO No.1とPMO No. 2をいずれも終濃度25μMで含む混合物で、Mix2 + hnRNP A1はPMO No. 1とPMO No. 2をいずれも終濃度18.75μM、及びPMO No.3を終濃度12.5μMで含む混合物で処理した結果を示す（PMO総添加濃度：50 μM）。 Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞におけるマウスジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン４５～５５のスキッピングによるジストロフィンタンパク質発現をウェスタンブロッティングにより検討した結果を示す図である。図中、NCはEndo-porterのみ、Mix2はPMO No.1とPMO No. 2をいずれも終濃度25μMで含む混合物で、Mix2+ hnRNP A1はPMO No. 1とPMO No. 2をいずれも終濃度18.75μM、及びPMO No.3を終濃度12.5μMで含む混合物で処理した結果を示し、NTは処理なし（Not treated）を意味する（PMO総添加濃度：50 μM）。 正常ヒト由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 正常ヒト由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ウェスタンブロッティングにより検討した結果を示す図である。 エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ウェスタンブロッティングにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５スキッピングを、ＲＴ－ＰＣＲにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ウェスタンブロッティングにより検討した結果を示す図である。 エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングを、ウェスタンブロッティングにより検討した結果を示す図である。
　以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態のみに限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施をすることができる。
１．アンチセンスオリゴマーの組み合わせ
　本発明は、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンを同時にスキッピングさせるアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の組み合わせであって、
　（ｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第１のユニットオリゴマー、及び
前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第２のユニットオリゴマー
を含む、第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、
及び
　（ｉｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、
を含む、組み合わせを提供する。上記組み合わせを、以下「本発明の組み合わせ」とも記載する。
　本明細書において、「組み合わせ」は、組み合わせ物、組み合わせ医薬、組み合わせ剤などを意味する。一実施形態において、本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーは、一つの医薬組成物中に含まれ、同時に投与される。別の実施形態において、本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーは、複数の医薬組成物中に含まれ、別々に（同時に又は逐次的に）投与される。本明細書において、複数の医薬組成物を「同時に」投与するとは、複数の医薬組成物を同一の時点で投与することを意味する。本明細書において、複数の医薬組成物を「逐次的に」投与するとは、異なる時点で投与することを意味する。具体的には、一つの医薬組成物を他の医薬組成物の前又は後に投与することができ、この場合の投与間隔は、限定しないが、例えば数分間、数時間、又は数日間であってよい。
　以下、第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物（及び任意に本明細書に記載する第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物）を総じて「本発明のアンチセンスオリゴマー」ともいう。本発明のアンチセンスオリゴマーは、前記アンチセンスオリゴマー、若しくはその医薬的に許容可能な塩、又はそれらの水和物のそれぞれを指す場合もある。また、上記（ｉ）第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を「本発明の第１のアンチセンスオリゴマー」ともいい、（ｉｉ）第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を「本発明の第２のアンチセンスオリゴマー」ともいう。
　本明細書において、「遺伝子」には、ゲノム遺伝子以外に、ｃＤＮＡ、ｐｒｅ－ｍＲＮＡ及びｍＲＮＡも含まれ、好ましくは、遺伝子はｐｒｅ－ｍＲＮＡである。本明細書において、「ｐｒｅ－ｍＲＮＡ」とは、ゲノム上の標的遺伝子から転写されたエクソン及びイントロンを含むＲＮＡ分子であり、ｍＲＮＡ前駆体である。
　ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡは、ゲノム上のヒトジストロフィン遺伝子から転写されたエクソン及びイントロンを含むＲＮＡ分子であり、ｍＲＮＡ前駆体である。当業者は、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの塩基配列の情報を、ヒトジストロフィン遺伝子のゲノム配列（GenBank Accession No. NG_012232.1）からの類推により入手可能である。
　ヒトゲノムにおいて、ヒトジストロフィン遺伝子は遺伝子座Ｘｐ２１．２に存在する。ヒトジストロフィン遺伝子は、約３．０Ｍｂｐのサイズを有しており、既知のヒト遺伝子としては最大の遺伝子である。但し、ヒトジストロフィン遺伝子のコード領域はわずか約１４ｋｂに過ぎず、該コード領域は７９個のエクソンとしてジストロフィン遺伝子内に分散している（Roberts, RG., et al., Genomics, 16: 536-538 (1993)）。ヒトジストロフィン遺伝子の転写物であるｐｒｅ－ｍＲＮＡは、スプライシングを受けて約１４ｋｂの成熟ｍＲＮＡを生成する。ヒトの野生型ジストロフィン遺伝子成熟ｍＲＮＡの塩基配列は公知である（GenBank Accession No. NM_004006）。
　本発明の第１のアンチセンスオリゴマーは、第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーを含むか、又は第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーからなる。
　第１のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列を標的とする。本明細書において、「標的とする」とは、対象となる塩基配列が、標的領域の塩基配列又は標的配列の一部の塩基配列に相補的な塩基配列であることをいう。
　第１のユニットオリゴマーの標的配列は、イントロン４４の３’末端とエクソン４５の５’末端との境界を基点０とし、ジストロフィン遺伝子上で基点より５’側（上流）の塩基配列領域を「－」（マイナス）、３’側（下流）の塩基配列領域を「＋」で示した場合に、－１１塩基～＋６９塩基の範囲で表すことができる。この際、－１１塩基～－１塩基の範囲で表される領域はイントロン４４に属し、＋１塩基～＋６９塩基の範囲で表される領域はエクソン４５に属する。
　第１のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列の塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む。
　第２のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列を標的とする。
　第２のユニットオリゴマーの標的配列は、イントロン４４の３’末端とエクソン４５の５’末端との境界を基点０とし、ジストロフィン遺伝子上で基点より５’側（上流）の塩基配列領域を「－」（マイナス）、３’側（下流）の塩基配列領域を「＋」で示した場合に、－７５塩基～－５２塩基の範囲で表すことができる。この際、－７５塩基～－５２塩基の範囲で表される領域はイントロン４４に属する。
　第２のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む。
　本発明の第２のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列からなる塩基配列を標的とする。
　第２のアンチセンスオリゴマーの標的配列は、イントロン５４の３’末端とエクソン５５の５’末端との境界を基点０とし、ジストロフィン遺伝子上で基点より５’側（上流）の塩基配列領域を「－」（マイナス）、３’側（下流）の塩基配列領域を「＋」で示した場合に、－３３塩基～＋５３塩基の範囲で表すことができる。この際、－３３塩基～－１塩基の範囲で表される領域はイントロン５４に属し、＋１塩基～＋５３塩基の範囲で表される領域はエクソン５５に属する。
　２のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む。
　本発明の組み合わせは、本発明の第１のアンチセンスオリゴマー及び第２のアンチセンスオリゴマーに加えて、さらにヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、を含んでもよい。以下、上記第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を「本発明の第３のアンチセンスオリゴマー」ともいう。
　本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列を標的とする。
　第３のアンチセンスオリゴマーの標的配列は、エクソン４５の３’末端とイントロン４６の５’末端との境界を基点０とし、ジストロフィン遺伝子上で基点より５’側（上流）の塩基配列領域を「－」（マイナス）、３’側（下流）の塩基配列領域を「＋」で示した場合に、－２３塩基～＋７３塩基の範囲で表すことができる。この際、－２３塩基～－１塩基の範囲で表される領域はエクソン４５に属し、＋１塩基～＋７３塩基の範囲で表される領域はイントロン４６に属する。
　第３のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む。
　本発明の第１のアンチセンスオリゴマーに含まれる第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマー、第２のアンチセンスオリゴマー、並びに第３のアンチセンスオリゴマーの標的配列の周辺配列の具体例として、以下の表１に記載のものが挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　本発明の第１のアンチセンスオリゴマーに含まれる第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマー、第２のアンチセンスオリゴマー、並びに第３のアンチセンスオリゴマーの標的配列の具体例として、以下の表２に記載のものが挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　本明細書において、チミン「Ｔ」とウラシル「Ｕ」は相互に交換可能であり、「Ｔ」であっても「Ｕ」であっても本発明のアンチセンスオリゴマーのエクソンスキッピング活性に本質的に影響は生じないので、本明細書で示される塩基配列においては「Ｔ」が「Ｕ」である場合も含み、同一の配列番号で示すこととする。以下の表において、ｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける塩基配列であっても「Ｕ」を「Ｔ」で表記する場合があるが、当業者であれば適宜「Ｔ」を「Ｕ」に置き換えてＲＮＡ配列を理解することができる。
　なお、本明細書において、標的塩基配列は、「Ha_b-c」のように記載した。
　「Ha」はヒトジストロフィン遺伝子の第ａ番目のエクソンを表し、「b」は標的塩基配列の５’末端の塩基を表し、「c」は標的塩基配列の３’末端の塩基を表す。
　「b」、「c」が正の整数の場合、「b」、「c」はそれぞれ、第ａ番目のエクソンの５’末端塩基を１番目の塩基としたときに、３’末端方向の何番目の塩基なのかを表す。一方、「b」、「c」が負の整数である場合、「b」、「c」はそれぞれ、第（ａ－１）番目のイントロンの３’末端の塩基を－１番目としたときに、５’末端方向の何番目の塩基なのかを表す。
　例えば、「H55_(-75)-(-52)」の場合、当該標的塩基配列の５’末端が第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に７５番目の塩基であり、当該標的塩基配列の３’末端が第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基である塩基配列を意味する。
　また、本発明のアンチセンスオリゴマーの標的領域の周辺配列又はその標的配列には、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡに関して、野生型（例えば配列番号５０２１～５０２７に示される塩基配列）だけではなく、変異型のものも含まれる。かかる変異型は、例えば、以下の塩基配列（Ｂ０）及び（Ｂ１）～（Ｂ１６）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を有する。
（Ｂ０）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列；
（Ｂ１）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ２）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ３）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ４）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ５）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ６）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ７）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ８）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ９）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ１０）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ１１）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ１２）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ１３）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ１４）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ１５）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列
（Ｂ１６）配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列
　本明細書において、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列」とは、例えば配列番号５０２１～５０２７からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列の全部又は一部をプローブとして、コロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法又はサザンハイブリダイゼーション法などを用いることにより得られる塩基配列をいう。ハイブリダイゼーションの方法としては、例えば“Sambrook & Russel, Molecular Cloning: A Laboratory Manual Vol. 3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001”、“Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1987-1997”などに記載されている方法を利用することができる。
　本明細書において、「相補的な塩基配列」とは、対象となる塩基配列とワトソン・クリック対を形成する塩基配列に限定されるものではなく、揺らぎ塩基対（Wobble base pair）を形成する塩基配列も含む。ここで、ワトソン・クリック対とは、アデニン－チミン、アデニン－ウラシル、及びグアニン－シトシン間に水素結合が形成される塩基対を意味し、揺らぎ塩基対とは、グアニン－ウラシル、イノシン－ウラシル、イノシン－アデニン、及びイノシン－シトシン間に水素結合が形成される塩基対を意味する。また、「相補的な塩基配列」とは、対象となる塩基配列と１００％の相補性を有していなくてもよく、例えば、対象となる塩基配列に対して、１塩基、２塩基、３塩基、４塩基、又は５塩基の非相補的塩基が含まれていてもよく、また、対象となる塩基配列に対して、１塩基、２塩基、３塩基、４塩基、又は５塩基短い塩基配列であってもよい。
　本明細書において、「ストリンジェントな条件」とは、低ストリンジェントな条件、中ストリンジェントな条件、及び高ストリンジェントな条件のいずれでもよい。「低ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、３２℃の条件である。また、「中ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、４２℃又は５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０％ホルムアミド、４２℃の条件である。「高ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃又は０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃の条件である。これらの条件において、温度を上げるほど高い配列同一性を有する塩基配列が効率的に得られることが期待できる。ただし、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度、プローブ濃度、プローブの長さ、イオン強度、時間、塩濃度等の複数の要素が考えられ、当業者であればこれらの要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
　なお、ハイブリダイゼーションに市販のキットを用いる場合は、例えばAlkPhos Direct Labelling and Detection System（ＧＥヘルスケア社）を用いることができる。この場合は、キットに添付のプロトコールにしたがい、標識したプローブとのインキュベーションを一晩行った後、メンブレンを５５℃の条件下で０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳを含む１次洗浄バッファーで洗浄後、ハイブリダイゼーションを検出することができる。あるいは、配列番号２３３～２５６、３４１～３６９、及び３８５～３８９からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と相補的な塩基配列の全部又は一部に基づいてプローブを作製する際に、市販の試薬（例えば、ＰＣＲラベリングミックス（ロシュ・ダイアグノスティックス社）等）を用いて該プローブをジゴキシゲニン（ＤＩＧ）ラベルした場合には、ＤＩＧ核酸検出キット（ロシュ・ダイアグノスティックス社）等を用いてハイブリダイゼーションを検出することができる。
　なお、塩基配列の同一性は、カーリン及びアルチュールによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Basic Local Alignment Search Tool）（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 872264-2268, 1990; Proc Natl Acad Sci USA 90: 5873, 1993）を用いて決定できる。ＢＬＡＳＴのアルゴリズムに基づいたＢＬＡＳＴＮやＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている（Altschul SF, et al: J Mol Biol 215: 403, 1990）。ＢＬＡＳＴＮを用いて塩基配列を解析する場合は、パラメーターは、例えばｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝１２とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合は、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。
　本発明のアンチセンスオリゴマーは、本発明の標的領域の塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む。「その一部」とは、標的領域の全長を除く領域、つまり標的領域の部分領域を意味する。部分領域の長さは、１０～６０塩基長、１０～５５塩基長、１０～５０塩基長、１０～４５塩基長、１０～４０塩基長、１０～３５塩基長、１０～３０塩基長、１０～２５塩基長、１５～６０塩基長、１５～５５塩基長、１５～５０塩基長、１５～４５塩基長、１５～４０塩基長、１５～３５塩基長、１５～３０塩基長、１５～２５塩基長、１６～６０塩基長、１６～５５塩基長、１６～５０塩基長、１６～４５塩基長、１６～４０塩基長、１６～３５塩基長、１６～３０塩基長、１６～２５塩基長、１７～６０塩基長、１７～５５塩基長、１７～５０塩基長、１７～４５塩基長、１７～４０塩基長、１７～３５塩基長、１７～３０塩基長、１７～２５塩基長、１８～６０塩基長、１８～５５塩基長、１８～５０塩基長、１８～４５塩基長、１８～４０塩基長、１８～３５塩基長、１８～３０塩基長、１８～２５塩基長、１９～６０塩基長、１９～５５塩基長、１９～５０塩基長、１９～４５塩基長、１９～４０塩基長、１９～３５塩基長、１９～３０塩基長、１９～２５塩基長、２０～６０塩基長、２０～５５塩基長、２０～５０塩基長、２０～４５塩基長、２０～４０塩基長、２０～３５塩基長、２０～３０塩基長、２０～２５塩基長、１５～３０塩基長、１５～２９塩基長、１５～２８塩基長、１５～２７塩基長、１５～２６塩基長、１５～２５塩基長、１５～２４塩基長、１５～２３塩基長、１５～２２塩基長、１５～２１塩基長、１５～２０塩基長、１５～１９塩基長、１５～１８塩基長、１６～３０塩基長、１６～２９塩基長、１６～２８塩基長、１６～２７塩基長、１６～２６塩基長、１６～２５塩基長、１６～２４塩基長、１６～２３塩基長、１６～２２塩基長、１６～２１塩基長、１６～２０塩基長、１６～１９塩基長、１６～１８塩基長、１７～３０塩基長、１７～２９塩基長、１７～２８塩基長、１７～２７塩基長、１７～２６塩基長、１７～２５塩基長、１７～２４塩基長、１７～２３塩基長、１７～２２塩基長、１７～２１塩基長、１７～２０塩基長、１７～１９塩基長、１７～１８塩基長、１８～３０塩基長、１８～２９塩基長、１８～２８塩基長、１８～２７塩基長、１８～２６塩基長、１８～２５塩基長、１８～２４塩基長、１８～２３塩基長、１８～２２塩基長、１８～２１塩基長、１８～２０塩基長、１８～１９塩基長、１９～３０塩基長、１９～２９塩基長、１９～２８塩基長、１９～２７塩基長、１９～２６塩基長、１９～２５塩基長、１９～２４塩基長、１９～２３塩基長、１９～２２塩基長、１９～２１塩基長、１９～２０塩基長、２０～３０塩基長、２０～２９塩基長、２０～２８塩基長、２０～２７塩基長、２０～２６塩基長、２０～２５塩基長、２０～２４塩基長、２０～２３塩基長、２０～２２塩基長、２０～２１塩基長、５～２５塩基長、５～２４塩基長、５～２３塩基長、５～２２塩基長、５～２１塩基長、５～２０塩基長、５～１９塩基長、５～１８塩基長、５～１７塩基長、５～１６塩基長、５～１５塩基長、５～１４塩基長、５～１３塩基長、５～１２塩基長、７～２５塩基長、７～２４塩基長、７～２３塩基長、７～２２塩基長、７～２１塩基長、７～２０塩基長、７～１９塩基長、７～１８塩基長、７～１７塩基長、７～１６塩基長、７～１５塩基長、７～１４塩基長、７～１３塩基長、７～１２塩基長、９～２５塩基長、９～２４塩基長、９～２３塩基長、９～２２塩基長、９～２１塩基長、９～２０塩基長、９～１９塩基長、９～１８塩基長、９～１７塩基長、９～１６塩基長、９～１５塩基長、９～１４塩基長、９～１３塩基長、９～１２塩基長、１０～２５塩基長、１０～２４塩基長、１０～２３塩基長、１０～２２塩基長、１０～２１塩基長、１０～２０塩基長、１０～１９塩基長、１０～１８塩基長、１０～１７塩基長、１０～１６塩基長、１０～１５塩基長、１０～１４塩基長、１０～１３塩基長、１０～１２塩基長、６０塩基長、５９塩基長、５８塩基長、５７塩基長、５６塩基長、５５塩基長、５４塩基長、５３塩基長、５２塩基長、５１塩基長、５０塩基長、４９塩基長、４８塩基長、４７塩基長、４６塩基長、４５塩基長、４４塩基長、４３塩基長、４２塩基長、４１塩基長、４０塩基長、３９塩基長、３８塩基長、３７塩基長、３６塩基長、３５塩基長、３４塩基長、３３塩基長、３２塩基長、３１塩基長、３０塩基長、２９塩基長、２８塩基長、２７塩基長、２６塩基長、２５塩基長、２４塩基長、２３塩基長、２２塩基長、２１塩基長、２０塩基長、１９塩基長、１８塩基長、１７塩基長、１６塩基長、１５塩基長、１４塩基長、１３塩基長、１２塩基長、１１塩基長、１０塩基長、９塩基長、８塩基長、７塩基長、６塩基長、又は５塩基長であってもよいが、これらに限定されるものではなく、上記の長さに１、２、又は３塩基長が加えられても減らされてもよい。
　本発明のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンを同時にスキッピングさせる活性を有する。本明細書では、このような目的ｐｒｅ－ｍＲＮＡからの２つ以上の番号順に連続するエクソンのスキッピングを「マルチエクソンスキッピング」又は「マルチスキッピング」と呼び、この活性を「マルチエクソンスキッピング活性」又は「マルチスキッピング活性」と呼ぶ。
　本明細書において、２つ以上の番号順に連続するエクソンを「同時にスキッピングさせる」とは、各エクソンのｐｒｅ－ｍＲＮＡからの除去のタイミングが完全に同一である場合のみならず、ｐｒe―ｍＲＮＡから成熟ｍＲＮＡに至る期間内で各エクソンを順次除去する場合も含む。すなわち、２つ以上の番号順に連続するエクソンを「同時にスキッピングさせる」とはｐｒe―ｍＲＮＡに対して、２つ以上の番号順に連続する複数のエクソンを除去することをいう。
　本明細書において、「２つ以上の番号順に連続するエクソン」は目的ｐｒｅ－ｍＲＮＡに含まれるエクソンのうち（全エクソン数をＴｅｘｏｎとする）、エクソン番号が１ずつ増加する複数のエクソンを意味する。エクソン番号とは、ｐｒｅ－ｍＲＮＡの最も５’側に存在するエクソンを第１番目のエクソンと定め、５’側から３’側に順次存在するエクソンを順に第２番目、第３番目と振り分けられる番号を意味する。ある遺伝子の２つ以上の番号順に連続するエクソンをスキッピングする場合、そのエクソン番号ａ１，・・・，ａｊは数列｛ａｊ｝として表すことができる。数列｛ａｊ｝の一般項ａｊは以下の式で表される。
［式１］
aj=m+(j-1)　
ここでｍは１≦ｍ≦（Ｔｅｘｏｎ－１）を満たす任意の自然数であり、ｊは２≦（ｍ＋ｊ）≦Ｔｅｘｏｎ＋１を満たす自然数である。
　例えば、目的ｐｒｅ－ｍＲＮＡがヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡである場合、Ｔｅｘｏｎは７９である。
　ある態様ではｊは１～１１から選択される任意の自然数である。また、別の態様ではｊは１１であり、ｊは１０であり、ｊは９であり、ｊは８であり、ｊは７であり、ｊは６であり、ｊは５であり、ｊは４であり、ｊは３であり、はｊ２であり、ｊは１である。
　ここで、第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンとは、ｐｒｅ－ｍＲＮＡに含まれる第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンの１１個のエクソンのうち、エクソン番号が１ずつ増加する複数のエクソンを意味する。エクソン番号とは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡに含まれる７９個のエクソンのうち、ｐｒｅ－ｍＲＮＡの最も５’側に存在するエクソンを第１番目のエクソンと定め、５’側から３’側に順次存在するエクソンを順に第２番目、第３番目・・・第７９番目と振り分けられる番号を意味する。なお、イントロンについては、その５’側に存在するエクソンと同じ番号となる。つまり、第４５番目のイントロンは、その５’側に第４５番目のエクソンが存在し、その３’側に第４６番目のエクソンが存在する。また、本明細書において、「第ｎ番目」のエクソン又はイントロンとは、ｐｒｅ－ｍＲＮＡにおいて５’末端から３’末端に向けて数えてｎ番目のエクソン又はイントロンを意味する。
　第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンに含まれるエクソンの組み合わせを表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　表３に記載したエクソンの組み合わせの中、ＤＭＤへのより高い治療効果を発揮することが期待されるスキッピングパターンは、例えば、組み合わせ１、２、３、４、６、８、１０、１８、２０、２１、２３、２５、２７、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４１、４３、４５、４６、５０、５２、又は５５である。これらの組み合わせでマルチエクソンスキッピングさせることにより、より多くのＤＭＤ患者に治療効果を発揮することが期待される。一実施形態において、本発明の組み合わせは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンの全てをスキッピングさせる。
　また、第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンは、連続するエクソン群を複数含んでもよく、限定されるものではないが、例えば（例１）エクソン４５～４６（第１のエクソン群）とエクソン４８～５３（第２のエクソン群）、（例２）エクソン４６～４７（第１のエクソン群）とエクソン４９～５０（第２のエクソン群）とエクソン５２～５４（第３のエクソン群）であってもよい。
　本発明において「スキッピングさせる活性」（つまりマルチスキッピング活性）とは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡを例に挙げると、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンが欠失したヒトジストロフィンｍＲＮＡを生じさせる活性を意味する。
　この活性は、言い換えれば、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡ上の標的部位に本発明のアンチセンスオリゴマーが結合することにより、該ｐｒｅ－ｍＲＮＡがスプライシングを受けた際に、欠失するエクソンのすぐ上流のエクソンの３’末端のヌクレオチドに、欠失するエクソンのすぐ下流のエクソンの５’末端のヌクレオチドが連結し、コドンのフレームシフトが起こっていない成熟ｍＲＮＡ（すなわち、フレームシフトを起こさずにエクソンが欠失した成熟ｍＲＮＡ）が形成されることを意味する。
　本発明のアンチセンスオリゴマーは生理的条件下でマルチスキッピング活性を示す。上記「生理的条件下」とは、生体内と類似のｐＨ、塩組成、温度に調節された条件を意味する。例えば、２５～４０℃、好ましくは３７℃、ｐＨ５～８、好ましくは、ｐＨ７．４であって、塩化ナトリウム濃度が１５０ｍＭの条件が挙げられる。
　マルチスキッピングが生じたか否かは、ジストロフィン発現細胞（例えば、ヒト横紋筋肉腫細胞）に本発明の組み合わせを導入し、前記ジストロフィン発現細胞の全ＲＮＡから、ヒトジストロフィン遺伝子のｍＲＮＡのエクソン４５～５５の周辺領域をＲＴ－ＰＣＲ増幅し、該ＰＣＲ増幅産物に対してｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ又はシークエンス解析を行うことにより確認することができる。マルチスキッピング効率は、ヒトジストロフィン遺伝子のｍＲＮＡを被検細胞から回収し、該ｍＲＮＡのうち、エクソン４５～５５のうちいずれか２つ以上の番号順に連続したエクソンがスキップしたバンドのポリヌクレオチド量「Ａ」と、エクソン４５～５５のうちいずれか１つのエクソンがスキッピングしたバンドのポリヌクレオチド量「Ｂ」と、スキッピングが生じていないバンドのポリオリゴヌクレオチド量「Ｃ」とを測定し、これら「Ａ」、「Ｂ」、及び「Ｃ」の測定値に基づき、以下の式に従って計算することができる。
　スキッピング効率（％）＝Ａ／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）×１００
　例えば、エクソン４５～５５のマルチスキッピング効率は、エクソン４４に対するフォワードプライマーとエクソン５６に対するリバースプライマーを用いて、エクソン４５～５５マルチスキップしたバンドのポリヌクレオチド量「Ａ」を測定し、エクソン４４に対するフォワードプライマーとエクソン４６に対するリバースプライマーを用いて、エクソン４５シングルスキップしたバンドのポリヌクレオチド量「Ｂ」を測定し、エクソン４４に対するフォワードプライマーとエクソン４６に対するリバースプライマーを用いてスキッピングが生じていないバンドのポリヌクレオチド量「Ｃ」を測定し、これら「Ａ」、「Ｂ」、及び「Ｃ」の測定値に基づき、上記の式に従って計算することができる。
　本発明のアンチセンスオリゴマーによりヒトジストロフィンｍＲＮＡにおいて欠失するエクソンの数は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又は１１個である。これを欠失パターンと称するが、１回のスキッピング実験又はスキッピング治療で得られる結果で種々の欠失パターンが混在することもある。たとえば、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡを発現する細胞に本発明のアンチセンスオリゴマーを導入し、そのｍＲＮＡを回収すると、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又は１１個のエクソンが欠失したｍＲＮＡが混在して得られることになる。
　ある実施態様では「スキッピングさせる活性」は、以下の（Ｃ１）～（Ｃ１０）として定義することができる。
（Ｃ１）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記２個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目及び第４６番目のエクソン、第４６番目及び第４７番目のエクソン、第４７番目及び第４８番目のエクソン、第４８番目及び第４９番目のエクソン、第４９番目及び第５０番目のエクソン、第５０番目及び第５１番目のエクソン、第５１番目及び第５２番目のエクソン、第５２番目及び第５３番目のエクソン、第５３番目及び第５４番目のエクソン、又は第５４番目及び第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ２）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか３個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記３個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第４７番目のエクソン、第４６番目～第４８番目のエクソン、第４７番目～第４９番目のエクソン、第４８番目～第５０番目のエクソン、第４９番目～第５１番目のエクソン、第５０番目～第５２番目のエクソン、第５１番目～第５３番目のエクソン、第５２番目～第５４番目のエクソン、又は第５３番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ３）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか４個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記４個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第４８番目のエクソン、第４６番目～第４９番目のエクソン、第４７番目～第５０番目のエクソン、第４８番目～第５１番目のエクソン、第４９番目～第５２番目のエクソン、第５０番目～第５３番目のエクソン、第５１番目～第５４番目のエクソン、又は第５２番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ４）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか５個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記５個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第４９番目のエクソン、第４６番目～第５０番目のエクソン、第４７番目～第５１番目のエクソン、第４８番目～第５２番目のエクソン、第４９番目～第５３番目のエクソン、第５０番目～第５４番目のエクソン、又は第５１番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ５）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか６個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記６個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第５０番目のエクソン、第４６番目～第５１番目のエクソン、第４７番目～第５２番目のエクソン、第４８番目～第５３番目のエクソン、第４９番目～第５４番目のエクソン、又は第５０番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ６）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか７個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記７個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第５１番目のエクソン、第４６番目～第５２番目のエクソン、第４７番目～第５３番目のエクソン、第４８番目～第５４番目のエクソン、又は第４９番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ７）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか８個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記８個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第５２番目のエクソン、第４６番目～第５３番目のエクソン、第４７番目～第５４番目のエクソン、又は第４８番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ８）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか９個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記９個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第５３番目のエクソン、第４６番目～第５４番目のエクソン、又は第４７番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ９）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか１０個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記１０個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第５４番目のエクソン、又は第４６番目～第５５番目のエクソンであってよい。
（Ｃ１０）ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択される１１個の番号順に連続するエクソンが、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の効率でスキッピングされる。
　ここで前記１１個の番号順に連続するエクソンは、第４５番目～第５５番目のエクソンである。
　本発明のアンチセンスオリゴマーは１０～６０塩基長、１０～５５塩基長、１０～５０塩基長、１０～４５塩基長、１０～４０塩基長、１０～３５塩基長、１０～３０塩基長、１０～２５塩基長、１５～６０塩基長、１５～５５塩基長、１５～５０塩基長、１５～４５塩基長、１５～４０塩基長、１５～３５塩基長、１５～３０塩基長、１５～２５塩基長、１６～６０塩基長、１６～５５塩基長、１６～５０塩基長、１６～４５塩基長、１６～４０塩基長、１６～３５塩基長、１６～３０塩基長、１６～２５塩基長、１７～６０塩基長、１７～５５塩基長、１７～５０塩基長、１７～４５塩基長、１７～４０塩基長、１７～３５塩基長、１７～３０塩基長、１７～２５塩基長、１８～６０塩基長、１８～５５塩基長、１８～５０塩基長、１８～４５塩基長、１８～４０塩基長、１８～３５塩基長、１８～３０塩基長、１８～２５塩基長、１９～６０塩基長、１９～５５塩基長、１９～５０塩基長、１９～４５塩基長、１９～４０塩基長、１９～３５塩基長、１９～３０塩基長、１９～２５塩基長、２０～６０塩基長、２０～５５塩基長、２０～５０塩基長、２０～４５塩基長、２０～４０塩基長、２０～３５塩基長、２０～３０塩基長、２０～２５塩基長、１５～３０塩基長、１５～２９塩基長、１５～２８塩基長、１５～２７塩基長、１５～２６塩基長、１５～２５塩基長、１５～２４塩基長、１５～２３塩基長、１５～２２塩基長、１５～２１塩基長、１５～２０塩基長、１５～１９塩基長、１５～１８塩基長、１６～３０塩基長、１６～２９塩基長、１６～２８塩基長、１６～２７塩基長、１６～２６塩基長、１６～２５塩基長、１６～２４塩基長、１６～２３塩基長、１６～２２塩基長、１６～２１塩基長、１６～２０塩基長、１６～１９塩基長、１６～１８塩基長、１７～３０塩基長、１７～２９塩基長、１７～２８塩基長、１７～２７塩基長、１７～２６塩基長、１７～２５塩基長、１７～２４塩基長、１７～２３塩基長、１７～２２塩基長、１７～２１塩基長、１７～２０塩基長、１７～１９塩基長、１７～１８塩基長、１８～３０塩基長、１８～２９塩基長、１８～２８塩基長、１８～２７塩基長、１８～２６塩基長、１８～２５塩基長、１８～２４塩基長、１８～２３塩基長、１８～２２塩基長、１８～２１塩基長、１８～２０塩基長、１８～１９塩基長、１９～３０塩基長、１９～２９塩基長、１９～２８塩基長、１９～２７塩基長、１９～２６塩基長、１９～２５塩基長、１９～２４塩基長、１９～２３塩基長、１９～２２塩基長、１９～２１塩基長、１９～２０塩基長、２０～３０塩基長、２０～２９塩基長、２０～２８塩基長、２０～２７塩基長、２０～２６塩基長、２０～２５塩基長、２０～２４塩基長、２０～２３塩基長、２０～２２塩基長、２０～２１塩基長、６０塩基長、５９塩基長、５８塩基長、５７塩基長、５６塩基長、５５塩基長、５４塩基長、５３塩基長、５２塩基長、５１塩基長、５０塩基長、４９塩基長、４８塩基長、４７塩基長、４６塩基長、４５塩基長、４４塩基長、４３塩基長、４２塩基長、４１塩基長、４０塩基長、３９塩基長、３８塩基長、３７塩基長、３６塩基長、３５塩基長、３４塩基長、３３塩基長、３２塩基長、３１塩基長、３０塩基長、２９塩基長、２８塩基長、２７塩基長、２６塩基長、２５塩基長、２４塩基長、２３塩基長、２２塩基長、２１塩基長、２０塩基長、１９塩基長、１８塩基長、１７塩基長、１６塩基長、１５塩基長、１４塩基長、１３塩基長、１２塩基長、１１塩基長、又は１０塩基長であってもよいが、これらに限定されるものではなく、上記の長さに１、２、又は３塩基長が加えられても減らされてもよい。
　本発明の第１のアンチセンスオリゴマーは、複数のユニットオリゴマーが相互に連結した構成を有する連結型アンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物である（以下、「本発明の連結型アンチセンスオリゴマー」ともいう）。ユニットオリゴマーとは、本発明の連結型アンチセンスオリゴマーを構成する各オリゴマーを意味する。つまり、ユニットオリゴマーとは、本発明の連結型アンチセンスオリゴマーがヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡ上の標的塩基配列に結合する際に、連続する塩基配列を有する標的塩基配列とハイブリダイゼーションを生じる塩基配列を含む部分（ユニット）を意味する。
　ユニットオリゴマーは、ハイブリダイゼーションに寄与しないリンカーを介して連結していてもよく、あるいはリンカーを介さずに直接連結していてもよい。ユニットオリゴマー同士が直接連結する場合、５’末端側に位置するユニットの３’末端と、３’末端側に位置するユニットの５’末端とがリン酸結合又は以下のいずれかの基を形成する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 （式中、Ｘは、－ＯＨ、－ＣＨ２Ｒ１、－Ｏ－ＣＨ２Ｒ１、－Ｓ－ＣＨ２Ｒ１、－ＮＲ２Ｒ３、又はＦを表し；
　Ｒ１は、Ｈ、アルキルを表し；
　Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、又はアリールを表し；
　Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ１を表し；
　Ｙ２は、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１を表し；
　Ｚは、Ｏ又はＳを表す。）
　本発明の連結型アンチセンスオリゴマーを構成する第１のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含みうる。本発明の連結型アンチセンスオリゴマーを構成する第２のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含みうる。
　また、ユニットオリゴマーの標的配列に関し、「その一部」とは、標的配列の全長を除く、連続する部分領域を意味する。部分領域の長さは、５～３０塩基長であり、５～２９塩基長、５～２８塩基長、５～２７塩基長、５～２６塩基長、５～２５塩基長、５～２４塩基長、５～２３塩基長、５～２２塩基長、５～２１塩基長、５～２０塩基長、５～１９塩基長、５～１８塩基長、５～１７塩基長、５～１６塩基長、５～１５塩基長、５～１４塩基長、５～１３塩基長、５～１２塩基長、７～３０塩基長、７～２９塩基長、７～２８塩基長、７～２７塩基長、７～２６塩基長、７～２５塩基長、７～２４塩基長、７～２３塩基長、７～２２塩基長、７～２１塩基長、７～２０塩基長、７～１９塩基長、７～１８塩基長、７～１７塩基長、７～１６塩基長、７～１５塩基長、７～１４塩基長、７～１３塩基長、７～１２塩基長、９～３０塩基長、９～２９塩基長、９～２８塩基長、９～２７塩基長、９～２６塩基長、９～２５塩基長、９～２４塩基長、９～２３塩基長、９～２２塩基長、９～２１塩基長、９～２０塩基長、９～１９塩基長、９～１８塩基長、９～１７塩基長、９～１６塩基長、９～１５塩基長、９～１４塩基長、９～１３塩基長、９～１２塩基長、１０～３０塩基長、１０～２９塩基長、１０～２８塩基長、１０～２７塩基長、１０～２６塩基長、１０～２５塩基長、１０～２４塩基長、１０～２３塩基長、１０～２２塩基長、１０～２１塩基長、１０～２０塩基長、１０～１９塩基長、１０～１８塩基長、１０～１７塩基長、１０～１６塩基長、１０～１５塩基長、１０～１４塩基長、１０～１３塩基長、１０～１２塩基長、３０塩基長、２９塩基長、２８塩基長、２７塩基長、２６塩基長、２５塩基長、２４塩基長、２３塩基長、２２塩基長、２１塩基長、２０塩基長、１９塩基長、１８塩基長、１７塩基長、１６塩基長、１５塩基長、１４塩基長、１３塩基長、１２塩基長、１１塩基長、１０塩基長、９塩基長、８塩基長、７塩基長、６塩基長、５塩基長であってもよいが、これらに限定されるものではなく、上記の長さに１、２、又は３塩基長が加えられても減らされてもよい。
　各ユニットオリゴマーのサイズは、５～３０塩基長であり、５～２９塩基長、５～２８塩基長、５～２７塩基長、５～２６塩基長、５～２５塩基長、５～２４塩基長、５～２３塩基長、５～２２塩基長、５～２１塩基長、５～２０塩基長、５～１９塩基長、５～１８塩基長、５～１７塩基長、５～１６塩基長、５～１５塩基長、５～１４塩基長、５～１３塩基長、５～１２塩基長、７～３０塩基長、７～２９塩基長、７～２８塩基長、７～２７塩基長、７～２６塩基長、７～２５塩基長、７～２４塩基長、７～２３塩基長、７～２２塩基長、７～２１塩基長、７～２０塩基長、７～１９塩基長、７～１８塩基長、７～１７塩基長、７～１６塩基長、７～１５塩基長、７～１４塩基長、７～１３塩基長、７～１２塩基長、９～３０塩基長、９～２９塩基長、９～２８塩基長、９～２７塩基長、９～２６塩基長、９～２５塩基長、９～２４塩基長、９～２３塩基長、９～２２塩基長、９～２１塩基長、９～２０塩基長、９～１９塩基長、９～１８塩基長、９～１７塩基長、９～１６塩基長、９～１５塩基長、９～１４塩基長、９～１３塩基長、９～１２塩基長、１０～３０塩基長、１０～２９塩基長、１０～２８塩基長、１０～２７塩基長、１０～２６塩基長、１０～２５塩基長、１０～２４塩基長、１０～２３塩基長、１０～２２塩基長、１０～２１塩基長、１０～２０塩基長、１０～１９塩基長、１０～１８塩基長、１０～１７塩基長、１０～１６塩基長、１０～１５塩基長、１０～１４塩基長、１０～１３塩基長、１０～１２塩基長、３０塩基長、２９塩基長、２８塩基長、２７塩基長、２６塩基長、２５塩基長、２４塩基長、２３塩基長、２２塩基長、２１塩基長、２０塩基長、１９塩基長、１８塩基長、１７塩基長、１６塩基長、１５塩基長、１４塩基長、１３塩基長、１２塩基長、１１塩基長、１０塩基長、９塩基長、８塩基長、７塩基長、６塩基長、５塩基長であってもよいが、これらに限定されるものではなく、上記の長さに１、２、又は３塩基長が加えられても減らされてもよい。各ユニットオリゴマーのサイズは同じであってもよく、異なっていてもよい。
　第１のアンチセンスオリゴマーにおいて、第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーの順番は限定しない。第１のアンチセンスオリゴマーは、第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含んでもよいし、第２のユニットオリゴマー及び第１のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含んでもよい。
　一実施形態において、第１のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる。一実施形態において、第２のユニットオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列の連続する１～１０塩基に相補的な塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる。一実施形態において、第２のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含む。一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含む、又は当該塩基配列からなる。
　第１のユニットオリゴマーの標的配列、及びその相補的な配列（アンチセンス配列）の例を以下の表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000030
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000031
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000032
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000033
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000034
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000035
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000036
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000037
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000038
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000039
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000040
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000041
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000042
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000043
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000044
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000045
　一実施形態において、第１のユニットオリゴマーは、
（ａ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む。
　ここで、（ｃ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｃ－１）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－２）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－３）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－４）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－５）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－６）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－７）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－８）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－９）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１０）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１１）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１２）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１３）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１４）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１５）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｃ－１６）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、第１のユニットオリゴマーは、
（ａ）配列番９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、若しくは
（ｂ）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列を含むか、又は（ａ）若しくは（ｂ）の塩基配列からなる。
　ここで、（ｂ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｂ－１）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－２）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－３）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－４）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－５）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－６）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－７）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－８）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－９）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１０）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１１）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１２）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１３）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１４）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１５）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｂ－１６）配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、第１のユニットオリゴマーは、配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第１のユニットオリゴマーは、配列番号１１８０、１１９０、１２０１、１２１２、１２２２、１２２４、及び１２３９からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　第２のユニットオリゴマーの標的配列、及びその相補的な配列（アンチセンス配列）の例を以下の表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000046
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000047
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000048
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000049
　一実施形態において、第２のユニットオリゴマーは、
（ａ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む。
　ここで、（ｃ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｃ－１）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－２）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－３）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－４）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－５）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－６）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－７）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－８）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－９）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１０）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１１）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１２）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１３）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１４）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１５）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｃ－１６）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、第２のユニットオリゴマーは、
（ａ）配列番１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、若しくは
（ｂ）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列を含むか、又は（ａ）若しくは（ｂ）の塩基配列からなる。
　ここで、（ｂ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｂ－１）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－２）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－３）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－４）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－５）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－６）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－７）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－８）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－９）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１０）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１１）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１２）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１３）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１４）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１５）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｂ－１６）配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、第２のユニットオリゴマーは、配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第２のユニットオリゴマーは、配列番号１１４、１２４、１５１、２０１、２０３、及び２０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第１のユニットオリゴマーは、配列番号９０７～１６０２からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなり、第２のユニットオリゴマーは、配列番号１０６～２１０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなり、第１のアンチセンスオリゴマーは第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含む。
　一実施形態において、前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなる。
　本発明の第２のアンチセンスオリゴマーの標的配列、及びその相補的な配列（アンチセンス配列）の例を以下の表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000050
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000051
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000052
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000053
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000054
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000055
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000056
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000057
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000058
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000059
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000060
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000061
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000062
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000063
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000064
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000065
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000066
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000067
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000068
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000069
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000070
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000071
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000072
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000073
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000074
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000075
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000076
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000077
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000078
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000079
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000080
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000081
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000082
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000083
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000084
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000085
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000086
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000087
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000088
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000089
　一実施形態において、本発明の第２のアンチセンスオリゴマーは、
（ａ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む。
　ここで、（ｃ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｃ－１）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－２）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－３）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－４）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－５）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－６）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－７）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－８）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－９）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１０）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１１）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１２）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１３）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１４）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１５）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｃ－１６）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、本発明の第２のアンチセンスオリゴマーは、
（ａ）配列番４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、若しくは
（ｂ）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列を含むか、又は（ａ）若しくは（ｂ）の塩基配列からなる。
　ここで、（ｂ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｂ－１）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－２）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－３）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－４）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－５）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－６）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－７）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－８）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－９）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１０）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１１）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１２）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１３）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１４）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１５）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｂ－１６）配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、本発明の第２のアンチセンスオリゴマーは、配列番号４２９９～５０９０からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第２のアンチセンスオリゴマーは、配列番号４６９８、４７０２、４７５２、４９２３、４９２６、４９３６、４９５０、及び４９７７からなる群より選択される塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　本発明の第３のアンチセンスオリゴマーの標的配列、及びその相補的な配列（アンチセンス配列）の例を以下の表７に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000090
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000091
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000092
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000093
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000094
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000095
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000096
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000097
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000098
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000099
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000100
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000101
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000102
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000103
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000104
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000105
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000106
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000107
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000108
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000109
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000110
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000111
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000112
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000113
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000114
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000115
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000116
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000117
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000118
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000119
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000120
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000121
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000122
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000123
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000124
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000125
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000126
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000127
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000128
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000129
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000130
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000131
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000132
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000133
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000134
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000135
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000136
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000137
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000138
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000139
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000140
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000141
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000142
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000143
　一実施形態において、本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、
（ａ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含む。
　一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、
（ａ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、
（ａ）配列番号１６１４～１６５４、１６６７～１７０７、１７２１～１７６１、１７７６～１８１６、１８３２～１８７２、１８８９～１９２９、１９４７～１９８７、２００６～２０４６、２０６６～２１０６、２１２７～２１６７、２１８９～２２２９、２２５２～２２９２、２３１６～２３５６、２３８１～２４２１、２４４７～２４８７、及び２５１４～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６１４～１６５４、１６６７～１７０７、１７２１～１７６１、１７７６～１８１６、１８３２～１８７２、１８８９～１９２９、１９４７～１９８７、２００６～２０４６、２０６６～２１０６、２１２７～２１６７、２１８９～２２２９、２２５２～２２９２、２３１６～２３５６、２３８１～２４２１、２４４７～２４８７、及び２５１４～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６１４～１６５４、１６６７～１７０７、１７２１～１７６１、１７７６～１８１６、１８３２～１８７２、１８８９～１９２９、１９４７～１９８７、２００６～２０４６、２０６６～２１０６、２１２７～２１６７、２１８９～２２２９、２２５２～２２９２、２３１６～２３５６、２３８１～２４２１、２４４７～２４８７、及び２５１４～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、
（ａ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
（ｂ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
（ｃ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
（ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
に相補的な塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　ここで、（ｃ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｃ－１）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－２）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－３）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－４）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－５）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－６）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－７）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－８）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－９）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１０）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１１）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１２）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１３）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１４）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｃ－１５）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｃ－１６）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、
（ａ）配列番２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、若しくは
（ｂ）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列を含むか、又は（ａ）若しくは（ｂ）の塩基配列からなる。
　ここで、（ｂ）の塩基配列は、（ａ）の塩基配列の変異型であるが、変異型としては、
　（ｂ－１）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－２）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－３）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－４）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－５）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１１％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－６）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１０％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－７）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９１％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±９％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－８）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９２％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±８％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－９）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９３％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±７％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１０）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９４％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±６％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１１）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±５％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１２）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９６％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±４％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１３）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９７％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±３％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１４）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９８％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±２％以内の長さを有する塩基配列、
（ｂ－１５）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１％以内の長さを有する塩基配列、及び
（ｂ－１６）配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と９９．５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±０．５％以内の長さを有する塩基配列、も挙げられる。
　一実施形態において、本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、配列番号２５５５～３５０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、配列番号３０６０、３０６５、３０７７、３０８２、３０８７、３０９０、３０９６、３１０８、３１１９、及び３３２０からなる群より選択される塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、配列番号３０７７、３０８２、３０８７、３０９０、３０９６、３１０８、及び３１１９からなる群より選択される塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。一実施形態において、第３のアンチセンスオリゴマーは、配列番号３０８２、３０８７、３０９０、３０９６、３１０８、及び３１１９からなる群より選択される塩基配列を含むか、又は当該塩基配列からなる。
　本発明の第１のアンチセンスオリゴマーを構成する第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマー、及び本発明の第２のアンチセンスオリゴマー（及び任意に本発明の第３のアンチセンスオリゴマー）の組み合わせは限定されず、任意の組み合わせを用いることができる。
　一実施形態において、第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７０２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７５２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２３の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２６の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９３６の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、第１のユニットオリゴマーが配列番号９０７～１６０２のいずれかの塩基配列を含み、第２のユニットオリゴマーが配列番号１０６～２１０のいずれかの塩基配列を含み、第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４２９９～５０９０のいずれかの塩基配列を含む。一実施形態において、第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、第１のユニットオリゴマーが配列番号１２０１の塩基配列を含み、第２のユニットオリゴマーが配列番号１５１の塩基配列を含み、第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０又は４８８０（好ましくは４９５０）の塩基配列を含む。
　一実施形態において前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０６０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０６５の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０７７の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８７の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３１０８の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３１１９の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３３２０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７０２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７５２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２３の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２６の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９３６の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなるか、
　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなり、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含むか又は当該塩基配列からなる。
　一実施形態において、第１のアンチセンスオリゴマーは第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、第１のユニットオリゴマーが配列番号９０７～１６０２のいずれかの塩基配列を含み、第２のユニットオリゴマーが配列番号１０６～２１０のいずれかの塩基配列を含み、第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４２９９～５０９０のいずれかの塩基配列を含み、第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号２５５５～３５０６いずれかの塩基配列を含む。一実施形態において、第１のアンチセンスオリゴマーは第１のユニットオリゴマー及び第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、第１のユニットオリゴマーが配列番号１２０１の塩基配列を含み、第２のユニットオリゴマーが配列番号１５１の塩基配列を含み、第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０又は４８８０（好ましくは４９５０）の塩基配列を含み、第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２、３０９０又は３０９６の塩基配列を含む。
　本発明のアンチセンスオリゴマー（本発明の連結型アンチセンスオリゴマーを含む）は、オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー、又はペプチド核酸（Peptide Nucleic Acid：ＰＮＡ）オリゴマーであってもよい（以下、それぞれを、「本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド」、「本発明のアンチセンスモルホリノオリゴマー」、又は「本発明のアンチセンスペプチド核酸オリゴマー」ともいう。）。
　本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドを構成単位とするアンチセンスオリゴマーであり、かかるヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又は修飾ヌクレオチドのいずれであってもよい。
　修飾ヌクレオチドとは、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを構成する核酸塩基、糖部分、及びリン酸結合部分の全部又は一部が修飾されているものをいう。
　核酸塩基としては、例えば、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、シトシン、チミン、ウラシル、又はそれらの修飾塩基を挙げることができる。かかる修飾塩基としては、例えば、シュードウラシル、３－メチルウラシル，ジヒドロウラシル、５－アルキルシトシン（例えば、５－メチルシトシン）、５－アルキルウラシル（例えば、５－エチルウラシル）、５－ハロウラシル（例えば、５－ブロモウラシル）、６－アザピリミジン、６－アルキルピリミジン（例えば、６－メチルウラシル）、２－チオウラシル、４－チオウラシル、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、１－メチルアデニン、１－メチルヒポキサンチン、２，２－ジメチルグアニン、３－メチルシトシン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、Ｎ６－メチルアデニン、７－メチルグアニン、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メチルカルボニルメチルウラシル、５－メチルオキシウラシル、５－メチル－２－チオウラシル、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸、２－チオシトシン、プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノプリン、イソグアニン、インドール、イミダゾール、キサンチン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　糖部分の修飾としては、例えば、リボースの２’位の修飾及び糖のその他の部分の修飾を挙げることができる。リボースの２’位の修飾としては、例えば、リボースの２’位の－ＯＨ基を－ＯＲ、－Ｒ、－Ｒ’ＯＲ、－ＳＨ、－ＳＲ、－ＮＨ２、－ＮＨＲ、－ＮＲ２、－Ｎ３、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉに置換する修飾を挙げることができる。ここで、Ｒはアルキル又はアリールを表す。Ｒ’はアルキレンを表す。
　糖のその他の部分の修飾としては、例えば、リボース又はデオキシリボースの４’位のＯをＳに置換したもの、糖の２’位と４’位を架橋したもの、例えば、ＬＮＡ（Locked Nucleic Acid）又はＥＮＡ（2'-O,4'-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　リン酸結合部分の修飾としては、例えば、ホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、ボラノフォスフェート結合（例えば、Enya et al: Bioorganic & Medicinal Chemistry,2008, 18, 9154-9160を参照）に置換する修飾を挙げることができる（例えば、再公表特許公報第２００６／１２９５９４号及び再公表特許公報第２００６／０３８６０８号を参照）。
　本明細書において、アルキルとしては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１～６のアルキルが好ましい。具体的には、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシルが挙げられる。当該アルキルは置換されていてもよく、かかる置換基としては、例えば、ハロゲン、アルコキシ、シアノ、ニトロを挙げることができ、これらで１～３個置換されていてもよい。
　本明細書において、シクロアルキルとしては、炭素数３～１２のシクロアルキルが好ましい。具体的には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシルが挙げられる。
　本明細書において、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素を挙げることができる。
　本明細書において、アルコキシとしては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１～６のアルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ－ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ｎ－ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｎ－ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ等を挙げることができる。とりわけ、炭素数１～３のアルコキシが好ましい。
　本明細書において、アリールとしては、炭素数６～１０のアリールが好ましい。具体的には、例えば、フェニル、α－ナフチル、β－ナフチルを挙げることができる。とりわけフェニルが好ましい。当該アリールは置換されていてもよく、かかる置換基としては、例えば、アルキル、ハロゲン、アルコキシ、シアノ、ニトロを挙げることができ、これらが１～３個置換されていてもよい。
　本明細書において、アルキレンとしては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１～６のアルキレンが好ましい。具体的には、例えば、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、２－（エチル）トリメチレン、１－（メチル）テトラメチレンを挙げることができる。
　本明細書において、アシルとしては、直鎖状若しくは分枝鎖状のアルカノイル又はアロイルを挙げることができる。アルカノイルとしては、例えば、ホルミル、アセチル、２－メチルアセチル、２，２－ジメチルアセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、２，２－ジメチルプロピオニル、ヘキサノイル等が挙げられる。アロイルとしては、例えば、ベンゾイル、トルオイル、ナフトイルを挙げることができる。かかるアロイルは置換可能な位置において置換されていてもよく、アルキルで置換されていてもよい。
　本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、好ましくは、リボースの２’位の－ＯＨ基がメトキシで置換され、リン酸結合部分がホスホロチオエート結合である、下記一般式で表される基を構成単位とする本発明のアンチセンスオリゴマーである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000144
 （式中、Baseは、核酸塩基を表す。）
　本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、各種自動合成装置（例えば、AKTA oligopilot plus 10 / 100（GE Healthcare））を用いて容易に合成することが可能であり、あるいは、第三者機関（例えば、Promega社又はTakara社）等に委託して作製することもできる。
　本発明のアンチセンスモルホリノオリゴマーは、下記一般式で表される基を構成単位とするアンチセンスオリゴマーである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000145
 （式中、Baseは、前記と同義であり；
　Ｗは、以下のいずれかの式で表わされる基を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000146
 （式中、Ｘは、－ＣＨ２Ｒ１、－Ｏ－ＣＨ２Ｒ１、－Ｓ－ＣＨ２Ｒ１、－ＮＲ２Ｒ３、又はＦを表し；
　Ｒ１は、Ｈ、アルキルを表し；
　Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、又はアリールを表し；
　Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ１を表し；
　Ｙ２は、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１を表し；
　Ｚは、Ｏ又はＳを表す。））
　本発明のアンチセンスモルホリノオリゴマーを合成するのに用いるモルホリノモノマー化合物の例としては、表８に示すモルホリノモノマー化合物（Ａ）、モルホリノモノマー化合物（Ｃ）、モルホリノモノマー化合物（Ｔ）、及びモルホリノモノマー化合物（Ｇ）が挙げられるがこれらに限定されるものではない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000147
　本発明において、モルホリノオリゴマーは、好ましくは、以下の式で表わされる基を構成単位とするオリゴマー（ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（以下、「ＰＭＯ」という））である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000148
 （式中、Base、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同義である。）
　モルホリノオリゴマーは、例えば、国際公開公報第１９９１／００９０３３号、又は国際公開公報第２００９／０６４４７１号に記載の方法に従って製造することができる。特に、ＰＭＯは、国際公開公報第２００９／０６４４７１号、又は国際公開公報第２０１３／１００１９０号に記載の方法に従って製造することができる。
　本発明のアンチセンスペプチド核酸オリゴマーは、下記一般式で表される基を構成単位とするアンチセンスオリゴマーである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000149
 （式中、Baseは、前記と同義である。）
　ペプチド核酸オリゴマーは、例えば、以下の文献に従って製造することができる。
１）P. E. Nielsen, M. Egholm, R. H. Berg, O. Buchardt，Science, 254, 1497 (1991)２）M. Egholm, O. Buchardt, P. E. Nielsen, R. H. Berg，JACS, 114, 1895 (1992)３）K. L. Dueholm, M. Egholm, C. Behrens, L. Christensen, H. F. Hansen, T. Vulpius, K. H. Petersen, R. H. Berg, P. E. Nielsen, O. Buchardt，J. Org. Chem., 59, 5767 (1994)
４）L. Christensen, R. Fitzpatrick, B. Gildea, K. H. Petersen, H. F. Hansen, T. Koch, M. Egholm，O. Buchardt, P. E. Nielsen, J. Coull, R. H. Berg, J. Pept. Sci., 1, 175 (1995)5）T. Koch, H. F. Hansen, P. Andersen, T. Larsen, H. G. Batz, K. Otteson, H. Orum, J. Pept. Res., 49, 80 (1997)
　本発明のアンチセンスオリゴマー（本発明の連結型アンチセンスオリゴマーを含む）は、その医薬的に許容可能な塩の形態、水和物の形態、又は医薬的に許容可能な塩の水和物の形態であってもよい。
　本発明のアンチセンスオリゴマーの医薬的に許容可能な塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩などの金属塩；アンモニウム塩；ｔ－オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ－ベンジル－フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機アミン塩；弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩のようなハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩；酢酸塩、りんご酸塩、フマール酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩などが挙げられる。これらの塩は、公知の方法で製造することができる。あるいは、本発明のアンチセンスオリゴマーは、その水和物の形態にあってもよい。
　本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、サプレッサーアンチセンスオリゴマーとしての機能を有し得る。本発明において、サプレッサーアンチセンスオリゴマーとは、エクソンが単一でスキッピングすること（以下、「シングルスキッピング」という）を抑制するアンチセンスオリゴマーを意味する。サプレッサーアンチセンスオリゴマーは、シングルスキッピングを抑制することにより、アンチセンスオリゴマーによるマルチエクソンスキッピングの効果を高めることができる。したがって、第３のアンチセンスオリゴマーを含む本発明の組み合わせは、第３のアンチセンスオリゴマーを含まないものと比較して、高いマルチエクソンスキッピング効果を有し得る。
　具体的には、本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか１つのエクソンが単一でスキッピングすることを抑制し得る。より具体的には、本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンが単一でスキッピングすることを抑制し得る。
　本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、例えばヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡ上のスプライシングサイレンサー配列、ブランチ部位配列、又はスプライス部位配列の部位を標的としてスプライシングを阻害することで、シングルスキッピングを抑制し得る。本発明の第３のアンチセンスオリゴマーにより、対照と比較して、対象となるエクソンのシングルスキッピングの効率が低下し得る。
　一実施形態において、本発明の第３のアンチセンスオリゴマーは、スプライシングサイレンサー配列であるｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ１（ｈｎＲＮＰ　Ａ１）の認識配列を標的とする。スプライシングサイレンサー配列とは、エクソンの認識を抑制する働きを有するｐｒｅ－ｍＲＮＡ上の塩基配列要素である。第３のアンチセンスオリゴマーの標的配列については、本明細書に記載するとおりである。
　サプレッサーアンチセンスオリゴマーがマルチエクソンスキッピングの効果を高めたかどうかは、（ｉ）本発明のアンチセンスオリゴマーだけを用いたマルチエクソンスキッピングの実験系と、（ｉｉ）本発明のアンチセンスオリゴマーとサプレッサーアンチセンスオリゴマーを用いたマルチエクソンスキッピングの実験系、を他の条件をそろえて準備し、実験系（ｉｉ）で得られるマルチエクソンスキッピング効果と実験系（ｉ）で得られるマルチエクソンスキッピング効果との差を観察することにより、確認することができる。
［ＰＭＯの製法］
　本発明のアンチセンスオリゴマーは、ＰＭＯであってもよい。ＰＭＯの１つの態様として、例えば、次の一般式（Ｉ）で表される化合物（以下、ＰＭＯ（Ｉ）という。）を挙げることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000150
 （式中、各Base、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同義であり；
　ｎは、１～９９の範囲内にある任意の整数であり、好ましくは、１８～２８の範囲内にある任意の整数である。）
　ＰＭＯ（Ｉ）は、公知の方法（例えば、国際公開公報第２００９／０６４４７１号、又は国際公開公報第２０１３／１００１９０号を参照）に従い製造することができる。
　また、本発明のアンチセンスオリゴマーは、５’末端が、下記化学式（１）～（３）のいずれかの基であってもよい。好ましくは（３）－ＯＨである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000151
 　以下、上記（１）、（２）、及び（３）で示される基を、それぞれ「基（１）」、「基（２）」、及び「基（３）」と呼ぶ。
　本発明のアンチセンスオリゴマーは、有効性の向上を目的とした機能性ペプチド（例えば、標的細胞への輸送効率の向上を目的とした膜透過性ペプチド）や抗体断片（例えば、トランスフェリン受容体などの筋細胞特異的受容体に対する抗体のFab）との複合体を形成しているものであってもよい（国際公開第２００８／０３６１２７号、国際公開第２００９／００５７９３号、国際公開第２０１２／１５０９６０号、国際公開第２０１６／１８７４２５号、国際公開第２０１８／１１８６６２号、国際公開２０１１／０１３７００号、国際公開第２０１８／１１８５９９号、国際公開第２０１８／１１８６２７号、特開２０２２－４７６１３号、J. D. Ramsey, N. H. Flynn, Pharmacology & Therapeutics 154, 78-86 (2015)、M. K. Tsoumpra et al., EBioMedicine, 45, 630-645 (2019)、国際公開２０２０／０２８８３２号、国際公開２０２１／１４２３０７号、国際公開２０２１／１４２３１３号、国際公開２０２２／０２０１０７号、国際公開第２０２２／０２０１０８号）。結合部位は特に限定されないが、アンチセンスオリゴマーの５’端または３’端と機能性ペプチドや抗体断片のアミノ末端またはカルボキシル末端が結合していることが好ましい。
　また、別の態様として、本発明のアンチセンスオリゴマーと機能性ペプチドや抗体断片は、リンカーを介して複合体を形成していてもよい。リンカーは特に限定されないが、アンチセンスオリゴマーの５’端または３’端とリンカーの一方の端が結合し、機能性ペプチドや抗体断片のアミノ末端またはカルボキシル末端とリンカーのもう一方の端が結合していることが好ましい。また、機能性ペプチドや抗体断片とリンカーの間には、付加的なアミノ酸が存在していてもよい。
医薬用途
　一実施形態において、本発明は、本発明の第１のアンチセンスオリゴマー及び第２のアンチセンスオリゴマー（それらの医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物も含まれる）を含む、医薬組成物（以下、「本発明の医薬組成物」という）を提供する。本発明の医薬組成物は、本発明の第３のアンチセンスオリゴマー（その医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物も含まれる）、及び／又は医薬的に許容可能な担体をさらに含んでいてもよい。
　一実施形態において、本発明は、本発明の第１のアンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物と、本発明の第２のアンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物の組み合わせ医薬（以下、「本発明の組み合わせ医薬」とも記載する。）を提供する。本発明の組み合わせ医薬は、第３のアンチセンスオリゴマー及び／又は医薬的に許容可能な担体をさらに含んでいてもよい。
　本発明の医薬組成物には、本発明のアンチセンスオリゴマーのいずれの組み合わせも含まれる。また、本発明の組み合わせ医薬にも、本発明のアンチセンスオリゴマーのいずれの組み合わせも含まれる。アンチセンスオリゴマーの組み合わせの詳細については、本明細書に記載するとおりである。
　一実施形態において、本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーは、一つの医薬組成物中に含まれ、同時に投与される。別の実施形態において、本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーは、複数の医薬組成物（本発明の組み合わせ医薬）中に含まれ、別々に（同時に又は逐次的に）投与される。本明細書において、複数の医薬組成物を「同時に」投与するとは、複数の医薬組成物を同一の時点で投与することを意味する。本明細書において、複数の医薬組成物を「逐次的に」投与するとは、異なる時点で投与することを意味する。具体的には、一つの医薬組成物を他の医薬組成物の前又は後に投与することができ、この場合の投与間隔は、限定しないが、例えば数分間、数時間、又は数日間であってよい。
　本発明の医薬組成物及び本発明の組み合わせ医薬は、それぞれ、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ）、先天性筋ジストロフィー、エメリ・ドレフュス（Emery-Dreifuss）型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、がん咽頭型筋ジストロフィー、皮質下梗塞と白質脳症を伴う常染色体優性脳動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）、アルポート症候群等の治療のために用いることができる。また、本発明の組み合わせ医薬及び本発明の医薬組成物は、それぞれヒト患者、特に筋ジストロフィーのヒト患者に投与することができる。本発明の組み合わせ医薬又は本発明の医薬組成物の投与の対象となる患者は、ジストロフィン遺伝子にエクソン４５～５５からなる群より選択される２つ以上のエクソンのスキッピングの対象となる変異を有するヒト患者であってもよい。本明細書において、エクソンのスキッピングの対象となる変異は限定しないが、例えばジストロフィン遺伝子のエクソンに欠失（例えば、エクソン４６欠失、エクソン４６～４７欠失、エクソン４６～４８欠失、エクソン４６～５０欠失、エクソン４６～５１欠失、エクソン４６～５２欠失、エクソン４６～５３欠失、エクソン４６～５５欠失、エクソン４７～５０欠失、エクソン４７～５２欠失、エクソン４８～５０欠失、エクソン４８～５２欠失、エクソン４８～５４欠失、エクソン４９～５０欠失、エクソン４９～５２欠失、エクソン４９～５４欠失、エクソン５０欠失、エクソン５０～５２欠失、エクソン５１欠失、エクソン５１～５３欠失、エクソン５２欠失、エクソン５３欠失、又はエクソン５３～５４欠失）を有する患者が挙げられる。
　本発明の一態様において、本発明のアンチセンスオリゴマーの組み合わせを筋ジストロフィー患者に投与する工程を含む、筋ジストロフィーの治療方法を提供する。本発明の別の態様において、本発明の医薬組成物又は本発明の組み合わせ医薬を筋ジストロフィー患者に投与する工程を含む、筋ジストロフィーの治療方法を提供する。
　前記治療方法は、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンのスキッピングを行うことを伴ってもよい。前記治療方法において、前記筋ジストロフィー患者は、ジストロフィン遺伝子にエクソン４５～５５スキップの対象となる変異を有する患者であってもよい。前記患者はヒトであってもよく、ジストロフィン遺伝子にエクソン４５～５５スキップの対象となる変異を有するヒト患者であってもよい。
　本発明は、さらに筋ジストロフィー治療用医薬の製造における本発明のアンチセンスオリゴマーの組み合わせ、又は本発明の医薬組成物、若しくは本発明の組み合わせ医薬の使用を提供する。
　さらに本発明は、筋ジストロフィー治療に使用するための本発明のアンチセンスオリゴマーの組み合わせ、又は本発明の医薬組成物、若しくは本発明の組み合わせ医薬を提供する。前記治療は、ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンのスキッピングを行うことを伴ってもよい。前記治療において、前記筋ジストロフィー患者は、ジストロフィン遺伝子にエクソン４５～５５スキップの対象となる変異を有する患者であってもよい。前記患者はヒトであってもよく、ジストロフィン遺伝子にエクソン４５～５５スキップの対象となる変異を有するヒト患者であってもよい。
　本発明のアンチセンスオリゴマーの組み合わせ、又は本発明の医薬組成物、若しくは本発明の組み合わせ医薬の投与形態は、医薬的に許容可能な投与形態であれば特に制限されず、治療方法に応じて選択することができるが、筋組織への送達容易性の観点から、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、組織内投与、経皮投与等が好ましい。また、本発明の組成物が取り得る剤型としては、特に制限されないが、例えば、各種の注射剤、経口剤、点滴剤、吸入剤、軟膏剤、ローション剤等を挙げることができる。
　本発明のアンチセンスオリゴマーを筋ジストロフィー患者に投与する場合、本発明の組成物は、該オリゴマーの筋組織への送達を促進する担体を含むことが好ましい。このような担体は、医薬的に許容可能なものであれば特に制限されず、その例として、カチオン性リポソーム、カチオン性ポリマー等のカチオン性担体、又はウイルスエンベロープを利用した担体を挙げることができる。カチオン性リポソームとしては、例えば、２－Ｏ－（２－ジエチルアミノエチル）カルバモイル－１，３－Ｏ－ジオレオイルグリセロールとリン脂質とを必須構成成分として形成されるリポソーム（以下、「リポソームＡ」という）、オリゴフェクトアミン（登録商標）（Invitrogen社製）、リポフェクチン（登録商標）（Invitrogen社製）、リポフェクトアミン（登録商標）（Invitrogen社製）、Lipofectamine 2000（登録商標）（Invitrogen社製）、DMRIE-C（登録商標）（Invitrogen社製）、GeneSilencer（登録商標）（Gene Therapy Systems社製）、TransMessenger（登録商標）（QIAGEN社製）、TransIT TKO（登録商標）（Mirus社製）、Nucleofector II（Lonza）を挙げることができる。それらの中で、リポソームＡが好ましい。カチオン性ポリマーとしては、例えば、JetSI（登録商標）（Qbiogene社製）、Jet-PEI（登録商標）（ポリエチレンイミン、Qbiogene社製）を挙げることができる。ウイルスエンベロープを利用した担体としては、例えば、GenomeOne（登録商標）（HVJ-Eリポソーム、石原産業社製）を挙げることができる。あるいは、特許２９２４１７９号に記載の医薬デバイス、再公表特許公報第２００６／１２９５９４号及び再公表特許公報第２００８／０９６６９０号に記載のカチオン性担体を用いることもできる。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬に含まれる本発明のアンチセンスオリゴマーの濃度は、担体の種類等によって異なるが、０．１ｎＭ～１００μＭの範囲内が適当であり、１ｎＭ～１０μＭの範囲内が好ましく、１０ｎＭ～１μＭの範囲内がより好ましい。また、本発明の組成物に含まれる本発明のアンチセンスオリゴマーと担体との重量比（担体／本発明のアンチセンスオリゴマー）は、該オリゴマーの性質及び該担体の種類等によって異なるが、０．１～１００の範囲内が適当であり、１～５０の範囲内が好ましく、１０～２０の範囲内がより好ましい。
　一実施形態において、本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーは、一つの医薬組成物中に含まれ、同時に投与される。別の実施形態において、本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーは、複数の医薬組成物（本発明の組み合わせ医薬）中に含まれ、別々に（同時に又は逐次的に）投与される。本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーが一つ又は複数の医薬組成物中に含まれる場合の各アンチセンスオリゴマーの濃度は以下のとおりである。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、水溶液の形態であってもよい。その場合、本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、本発明の各アンチセンスオリゴマーを、２．５～５００ｍｇ／ｍＬ、５～４５０ｍｇ／ｍＬ、１０～４００ｍｇ／ｍＬ、１５～３５０ｍｇ／ｍＬ、２０～３００ｍｇ／ｍＬ、２０～２５０ｍｇ／ｍＬ、２０～２００ｍｇ／ｍＬ、２０～１５０ｍｇ／ｍＬ、２０～１００ｍｇ／ｍＬ、２０～５０ｍｇ／ｍＬ、２０～４０ｍｇ／ｍＬ、２０～３０ｍｇ／ｍＬ、２３～２７ｍｇ／ｍＬ、２４～２６ｍｇ／ｍＬ、又は２５ｍｇ／ｍＬの濃度で含んでいてもよい。または、本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、本発明の各アンチセンスオリゴマーを、１０～１００ｍｇ／ｍＬ、１５～９５ｍｇ／ｍＬ、２０～８０ｍｇ／ｍＬ、２５～７５ｍｇ／ｍＬ、３０～７０ｍｇ／ｍＬ、３５～６５ｍｇ／ｍＬ、４０～６０ｍｇ／ｍＬ、４５～５５ｍｇ／ｍＬ、４７～５３ｍｇ／ｍＬ、４８～５２ｍｇ／ｍＬ、４９～５１ｍｇ／ｍＬ、又は５０ｍｇ／ｍＬの濃度で含んでいてもよい。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、乾燥形態であってもよい。その場合、水溶液形態の本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬を調製するために、例えば１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの乾燥形態の本発明の各アンチセンスオリゴマーを、０．５ｍＬ～１００ｍＬの水と混合して（１．２５ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ又は２．５ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬの本発明の各アンチセンスオリゴマー濃度に相当する）、好ましくは１ｍＬ～５０ｍＬの水と混合して（２．５ｍｇ／ｍＬ～１２５ｍｇ／ｍＬ又は５ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬの本発明の各アンチセンスオリゴマー濃度に相当する）、より好ましくは５ｍＬ～１０ｍＬの水と混合して（１２．５ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの本発明の各アンチセンスオリゴマー濃度に相当する）用いてもよい。
　本発明の組み合わせにおける各アンチセンスオリゴマーが一つ又は複数の医薬組成物中に含まれる場合のアンチセンスオリゴマーの合計濃度は以下のとおりである。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬が水溶液の形態である場合、本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、本発明のアンチセンスオリゴマーを、２．５～５００ｍｇ／ｍＬ、５～４５０ｍｇ／ｍＬ、１０～４００ｍｇ／ｍＬ、１５～３５０ｍｇ／ｍＬ、２０～３００ｍｇ／ｍＬ、２０～２５０ｍｇ／ｍＬ、２０～２００ｍｇ／ｍＬ、２０～１５０ｍｇ／ｍＬ、２０～１００ｍｇ／ｍＬ、２０～５０ｍｇ／ｍＬ、２０～４０ｍｇ／ｍＬ、２０～３０ｍｇ／ｍＬ、２３～２７ｍｇ／ｍＬ、２４～２６ｍｇ／ｍＬ、若しくは２５ｍｇ／ｍＬ、又は、５～１０００ｍｇ／ｍＬ、１０～９００ｍｇ／ｍＬ、２０～８００ｍｇ／ｍＬ、３０～７００ｍｇ／ｍＬ、４０～６００ｍｇ／ｍＬ、４０～５００ｍｇ／ｍＬ、４０～４００ｍｇ／ｍＬ、４０～３００ｍｇ／ｍＬ、４０～２００ｍｇ／ｍＬ、４０～１００ｍｇ／ｍＬ、４０～８０ｍｇ／ｍＬ、４０～６０ｍｇ／ｍＬ、４６～５４ｍｇ／ｍＬ、４８～５２ｍｇ／ｍＬ、若しくは５０ｍｇ／ｍＬ、又は、７．５～１５００ｍｇ／ｍＬ、１５～１３５０ｍｇ／ｍＬ、３０～１２００ｍｇ／ｍＬ、４５～１１５０ｍｇ／ｍＬ、６０～９００ｍｇ／ｍＬ、６０～７５０ｍｇ／ｍＬ、６０～６００ｍｇ／ｍＬ、６０～４５０ｍｇ／ｍＬ、６０～３００ｍｇ／ｍＬ、６０～１５０ｍｇ／ｍＬ、６０～１２０ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、６９～８１ｍｇ／ｍＬ、７２～７８ｍｇ／ｍＬ、若しくは７５ｍｇ／ｍＬの合計濃度で含んでいてもよい。または、本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、本発明のアンチセンスオリゴマーを、１０～１００ｍｇ／ｍＬ、１５～９５ｍｇ／ｍＬ、２０～８０ｍｇ／ｍＬ、２５～７５ｍｇ／ｍＬ、３０～７０ｍｇ／ｍＬ、３５～６５ｍｇ／ｍＬ、４０～６０ｍｇ／ｍＬ、４５～５５ｍｇ／ｍＬ、４７～５３ｍｇ／ｍＬ、４８～５２ｍｇ／ｍＬ、４９～５１ｍｇ／ｍＬ、若しくは５０ｍｇ／ｍＬ、又は、２０～２００ｍｇ／ｍＬ、３０～１９０ｍｇ／ｍＬ、４０～１６０ｍｇ／ｍＬ、５０～１５０ｍｇ／ｍＬ、６０～１４０ｍｇ／ｍＬ、７０～１３０ｍｇ／ｍＬ、８０～１２０ｍｇ／ｍＬ、９０～１１０ｍｇ／ｍＬ、９４～１０６ｍｇ／ｍＬ、９６～１０４ｍｇ／ｍＬ、９８～１０２ｍｇ／ｍＬ、若しくは１００ｍｇ／ｍＬ、又は、３０～３００ｍｇ／ｍＬ、４５～２８５ｍｇ／ｍＬ、６０～２４０ｍｇ／ｍＬ、７５～２２５ｍｇ／ｍＬ、９０～２１０ｍｇ／ｍＬ、１０５～１９５ｍｇ／ｍＬ、１２０～１８０ｍｇ／ｍＬ、１３０～１６５ｍｇ／ｍＬ、１４１～１５９ｍｇ／ｍＬ、１４４～１５６ｍｇ／ｍＬ、１４７～１５３ｍｇ／ｍＬ、又は、１５０ｍｇ／ｍＬの合計濃度で含んでいてもよい。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬が乾燥形態である場合、水溶液形態の本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬を調製するために、例えば合計１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの乾燥形態の本発明のアンチセンスオリゴマーを、０．５ｍＬ～１００ｍＬの水と混合して（１．２５ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ又は２．５ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、好ましくは１ｍＬ～５０ｍＬの水と混合して（２．５ｍｇ／ｍＬ～１２５ｍｇ／ｍＬ又は５ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、より好ましくは５ｍＬ～１０ｍＬの水と混合して（１２．５ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、又は、例えば合計２５０ｍｇ又は５００ｍｇの乾燥形態の本発明のアンチセンスオリゴマーを、０．５ｍＬ～１００ｍＬの水と混合して（２．５ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬ又は５ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、好ましくは１ｍＬ～５０ｍＬの水と混合して（５ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ又は１０ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、より好ましくは５ｍＬ～１０ｍＬの水と混合して（２５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ又は５０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、又は、例えば合計３７５ｍｇ又は７５０ｍｇの乾燥形態の本発明のアンチセンスオリゴマーを、０．５ｍＬ～１００ｍＬの水と混合して（３．７５ｍｇ／ｍＬ～７５０ｍｇ／ｍＬ又は７．５ｍｇ／ｍＬ～１５００ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、好ましくは１ｍＬ～５０ｍＬの水と混合して（７．５ｍｇ／ｍＬ～３７５ｍｇ／ｍＬ又は１５ｍｇ／ｍＬ～７５０ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）、より好ましくは５ｍＬ～１０ｍＬの水と混合して（３７．５ｍｇ／ｍＬ～７５ｍｇ／ｍＬ又は７５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの本発明のアンチセンスオリゴマー合計濃度に相当する）用いてもよい。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬には、本発明のアンチセンスオリゴマーと上述した担体以外に、任意に医薬的に許容可能な添加剤を配合することができる。かかる添加剤として、例えば、乳化補助剤（例えば、炭素数６～２２の脂肪酸やその医薬的に許容可能な塩、アルブミン、デキストラン）、安定化剤（例えば、コレステロール、ホスファチジン酸、マンニトール、ソルビトール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、グルコース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース）、ｐＨ調整剤（例えば、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン）を挙げることができる。これらを一種又は二種以上使用することができる。本発明の組成物中の当該添加剤の含有量は、９０重量％以下が適当であり、７０重量％以下が好ましく、５０重量％以下がより好ましい。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、担体の分散液に本発明のアンチセンスオリゴマーを加え、適当に攪拌することにより調製することができる。また、添加剤は、本発明のアンチセンスオリゴマーの添加前でも添加後でも適当な工程で添加することができる。本発明のアンチセンスオリゴマーを添加させる際に用い得る水性溶媒としては、医薬的に許容可能なものであれば特に制限されず、例えば、注射用水、注射用蒸留水、生理食塩水等の電解質液、ブドウ糖液、マルトース液等の糖液を挙げることができる。また、かかる場合のｐＨ及び温度等の条件は、当業者が適宜選択することができる。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬は、例えば、液剤やその凍結乾燥製剤とすることができる。当該凍結乾燥製剤は、常法により、液剤の形態を有している本発明の組成物を凍結乾燥処理することにより調製することができる。例えば、液剤の形態を有している本発明の組成物を適当な滅菌を行った後、所定量をバイアル瓶に分注し、約－４０℃～－２０℃の範囲内の条件で予備凍結を２時間程度行い、約０℃～１０℃の範囲内で減圧下に一次乾燥を行い、次いで、約１５℃～２５℃の範囲内で減圧下に二次乾燥して凍結乾燥することができる。そして、一般的にはバイアル内部を窒素ガスで置換し、打栓して本発明の組成物の凍結乾燥製剤を得ることができる。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬の凍結乾燥製剤は、一般には任意の適当な溶液（再溶解液）の添加によって再溶解し使用することができる。このような再溶解液としては、注射用水、生理食塩水、その他一般輸液を挙げることができる。この再溶解液の液量は、用途等によって異なり特に制限されないが、凍結乾燥前の液量の０．５倍量～２倍量又は５００ｍＬ以下が適当である。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬を投与する際の用量としては、含有される本発明のアンチセンスオリゴマーの種類、剤形、年齢や体重等の患者の状態、投与経路、疾患の性質と程度を考慮した上で調節することが望ましいが、成人に対して本発明のアンチセンスオリゴマーの量として、１回の投与に体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ～１ｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり１ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは体重１ｋｇあたり１ｍｇ～９０ｍｇ、より好ましくは体重１ｋｇあたり１ｍｇ～８０ｍｇで投与することができる。投与頻度は、１～３日に１回、１週間に１回、又は２～３週に１回であってもよい。この数値は標的とする疾患の種類、投与形態、標的分子によっても異なる場合がある。したがって、場合によってはこれ以下の用量又は投与頻度でも十分であるし、また逆にこれ以上の用量又は投与頻度を必要とするときもある。
　本発明の医薬組成物及び／又は本発明の組み合わせ医薬の別の態様として、本発明のアンチセンスオリゴマーを発現し得るベクターと上述した担体とを含む医薬組成物を挙げることができる。かかる発現ベクターは、複数の本発明のアンチセンスオリゴマーを発現し得るものであってもよい。当該組成物には、本発明のアンチセンスオリゴマーを含有する本発明の組成物と同様に、医薬的に許容可能な添加剤を添加することができる。当該組成物中に含まれる発現ベクターの濃度は、担体の種類等によって異なるが、０．１ｎＭ～１００μＭの範囲内が適当であり、１ｎＭ～１０μＭの範囲内が好ましく、１０ｎＭ～１μＭの範囲内がより好ましい。当該組成物中に含まれる発現ベクターと担体との重量比（担体／発現ベクター）は、発現ベクターの性質、担体の種類等によって異なるが、０．１～１００の範囲内が適当であり、１～５０の範囲内が好ましく、１０～２０の範囲内がより好ましい。また、当該組成物中に含まれる担体の含有量は、本発明のアンチセンスオリゴマーを含有する本発明の組成物の場合と同様であり、その調製方法等に関しても、本発明の組成物の場合と同様である。
　以下に、実施例及び試験例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は実施例に示される範囲に限定されるものではない。
［実施例１：アンチセンスオリゴマーの製造］
　国際公開公報WO2013/100190の実施例1に記載の方法に従い、表９に示すアンチセンスオリゴマー（ＰＭＯ　Ｎｏ．１～５（配列番号５０９８～５１０２））を合成した。各アンチセンスオリゴマーの分子量の理論値及びＥＳＩ－ＴＯＦ－ＭＳによる実測値も示す。ＰＭＯの５’末端は下記基（１）である。合成したＰＭＯを注射用水（大塚製薬工場社製）で溶解した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000152
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000153
　なお、本発明のアンチセンスオリゴマーの標的塩基配列は、「Ma1_b1-c1」、「Ma2_b2-c2_Ma3_b3-c3」のように記載した。
　「Ma1」はマウスジストロフィン遺伝子の第ａ番目のエクソンを表し、「b1」は標的塩基配列の５’末端の塩基を表し、「c1」は標的塩基配列の３’末端の塩基を表す。
　「b1」、「c1」が正の整数の場合、「b1」、「c1」はそれぞれ、第ａ番目のエクソンの５’末端塩基を１番目の塩基としたときに、３’末端方向の何番目の塩基なのかを表す。一方、「b1」、「c1」が負の整数である場合、「b1」、「c1」はそれぞれ、第（ａ－１）番目のイントロンの３’末端の塩基を－１番目としたときに、５’末端方向の何番目の塩基なのかを表す。
　例えば、「M55_(-4)-24」の場合、当該標的塩基配列の５’末端が第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に４番目の塩基であり、当該標的塩基配列の３’末端が第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に２４番目の塩基である塩基配列を意味する。
　「Ma2_b2-c2_Ma3_b3-c3」の第１の部分である「Ma2_b2-c2」は、該アンチセンスオリゴマーを構成する３’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列を意味し、第２の部分である「Ma3_b3-c3」は、該アンチセンスオリゴマーを構成する５’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列を意味する。
　なお、「Ma2」と「Ma3」が同じである場合には、「_Ma3」部分を省略することもできる。
　例えば、「M45_(-66)-(-61)_19-40」又は「M45_(-66)-(-61)_M45_19-40」の場合、アンチセンスオリゴマーを構成する３’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列が「M45_(-66)-(-61)」であり、５’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列が「M45_19-40」である塩基配列を意味する。
［実施例２：アンチセンスオリゴマーのマルチエクソンスキッピング活性試験］
＜試験例１＞
モデルマウス由来培養細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（１）：マルチエクソンスキッピングの誘導（総添加濃度：３０μＭ）
手順
　Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞（デュシェンヌ型筋ジストロフィーモデルであるｍｄｘ５２マウスとＨ-2ｋｂ-ｔｓＡ58トランスジェニックマウスとの交配個体から樹立した不死化筋芽細胞）を０．４% Ｇｅｌａｔｉｎｅ－ｃｏａｔｅｄ ４８-ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ （ＡＧＣテクノグラス社製）に１×１０４ ／ ｗｅｌｌで播種、増殖培地（２０％ＦＢＳ（シグマアルドリッチ社製）、２％ ｃｈｉｃｋ ｅｍｂｒｙｏ ｅｘｔｒａｃｔ（ＵＳ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製、以下同じ）、２％ Ｌ-ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（シグマアルドリッチ社製、以下同じ）、１％ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（シグマアルドリッチ社製、以下同じ）及び２０Ｕ／ｍＬ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｍｕｒｉｎｅ ＩＦＮ－γ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ社製）を添加したＨｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ‘ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ （ＤＭＥＭ）（ＧｌｕｔａＭａｘ含有） （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）０．５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で３日間培養した。４８時間後に培地を増殖培地から分化培地（５% ウマ血清（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、２％ Ｌ－ｇｌｕｔａｍｉｎｅ及び１％ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ/ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎを添加したＤＭＥＭ）に培地交換した。3日間培養後に、３０μＭのＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒ（ジーンツールズ社製、以下同じ）によりトランスフェクションした。使用したＰＭＯは以下の表１０の通りである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000154
　さらに3日間培養後に細胞をＰＢＳ（タカラバイオ社製）で１回洗浄した後、ＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。１％の２－メルカプトエタノール（ナカライテスク社製）を含むＢｕｆｆｅｒ ＲＬＴ（キアゲン社製）を３５０μＬ細胞に添加し、数分間室温に放置して細胞を溶解させ、ＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒホモジナイザー（キアゲン社製）に回収した。１５，０００ｒｐｍで２分間遠心し、ホモジネートを作製した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（キアゲン社製）に添付のプロトコールに従って全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡの濃度はＮａｎｏＤｒｏｐ Ｏｎｅ Ｃ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて測定した。抽出した全ＲＮＡ４００ｎｇに対し、ＱＩＡＧＥＮ ＯｎｅＳｔｅｐ ＲＴ-ＰＣＲ Ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いてＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行った。キットに添付のプロトコールに従って、反応液を調製した。サーマルサイクラーはＶｅｒｉｔｉ ９６ Ｗｅｌｌ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いた。用いたＲＴ－ＰＣＲのプログラムは、以下のとおりである。
　　５０℃、３０分間：逆転写反応
　　９５℃、１５分間：ポリメラーゼ活性化、逆転写酵素不活性化、ｃＤＮＡ熱変性
　　［９４℃、１０秒間；５７℃、３０秒間；７２℃、１分間］×３３サイクル：ＰＣＲ増幅
　　７２℃、１０分間：最終伸長反応
　ＲＴ－ＰＣＲに使用したフォワードプライマーとリバースプライマーの塩基配列は以下のとおりである。
　　フォワードプライマー：5'-cagttgaaaaatggcgacac-3'（配列番号5103）
　　リバースプライマー１：5'-ttagctgctgctcatctcca-3'（配列番号5104）
　　リバースプライマー２：5'-ttccagggatctcaggattt-3'（配列番号5105）
　フォワードプライマーとリバースプライマー１の組合せで、スキッピングが生じていない転写産物（４２９ｂｐ）またはエクソン４５スキッピングが生じた転写産物（２５３ｂｐ）を検出することができ、フォワードプライマーとリバースプライマー２の組合せで、エクソン４５～５５のマルチエクソンスキッピングが生じた転写産物（２１８ｂｐ）を検出することができる。
　上記ＰＣＲの反応産物をＭｕｌｔｉＮＡ（島津製作所社製）を用いて解析した。
　エクソン４５～５５がスキップしたバンドのポリオリゴヌクレオチド量「Ａ」と、エクソン４５がスキッピングしたバンドのポリヌクレオチド量「Ｂ」と、スキッピングが生じていないバンドのポリオリゴヌクレオチド量「Ｃ」を測定した。これら「Ａ」、「Ｂ」、及び「Ｃ」の測定値に基づき、以下の式に従って、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
　エクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率（％）＝Ａ／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）×１００
　エクソン４５スキッピングのスキッピング効率（％）＝Ｂ／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）×１００
結果
　結果を図１～２に示す。
　ＰＭＯ　Ｎｏ．１とＰＭＯ　Ｎｏ．２の混合物（各１５μＭ、Ｍｉｘｔｕｒｅ２）のみと比較して、ｈｎＲＮＰ Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．３を加えた混合物（各１０μＭ、Ｍｉｘｔｕｒｅ２＋ＰＭＯ　Ｎｏ．３）でエクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率が上昇し（図１）、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下した（図２）。
＜試験例２＞
モデルマウス由来培養細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（２）：マルチエクソンスキッピングの誘導（総添加濃度：１５μＭ、混合比率の変更）
手順
　Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞を０．４％ Ｇｅｌａｔｉｎｅ－ ｃｏａｔｅｄ ２４－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ に５×１０４／ ｗｅｌｌで播種、増殖培地１ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４８時間培養した後に増殖培地から分化培地に培地交換した。３日間培養後に、１５μＭのＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。
　使用したＰＭＯは試験例1に加えて以下の表１１に記載のものを使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000155
 　さらに３日間培養後に試験例１と同様に細胞を回収し、全ＲＮＡを抽出し、Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、ＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
（結果）
　結果を図３～８に示す。
　ＰＭＯ　Ｎｏ．１とＰＭＯ　Ｎｏ．２の混合物（Ｍｉｘｔｕｒｅ２）のみと比較して、ｈｎＲＮＰ Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．３を加えた混合物（Ｍｉｘｔｕｒｅ２＋ｈｎＲＮＰ Ａ１）でエクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率が上昇し（図３）、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下した（図４）。
　Ｍｉｘｔｕｒｅ２とｈｎＲＮＰ Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．４を加えた混合物（Ｍｉｘｔｕｒｅ２＋ＰＭＯ　Ｎｏ．４）でエクソン４５～５５スキッピングを示し（図５）、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下した（図６）。
　Ｍｉｘｔｕｒｅ２とｈｎＲＮＰ Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．３の比率を変更した場合について検討した結果、それぞれ３：１で配合した時がエクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率が最も良く、（図７）、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は最も抑えられた（図８）。
＜試験例３＞
モデルマウス由来培養細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（３）：マルチエクソンスキッピングの誘導（総添加濃度：５０μＭ）
手順
　Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞を０．４％ Ｇｅｌａｔｉｎ－ ｃｏａｔｅｄ １２ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ に６．７×１０４ / ｗｅｌｌで播種、増殖培地２ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日培養した。２日間培養後に培地を増殖培地から分化培地に培地交換した。３日間培養後に、５０μＭのＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。さらに3日間培養後に試験例１と同様に細胞を回収し、全ＲＮＡを抽出し、Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、ＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
（結果）
　結果を図９、１０に示す。
　ＰＭＯ　Ｎｏ．１とＰＭＯ　Ｎｏ．２の混合物（Ｍｉｘ２）のみと比較して、ｈｎＲＮＰ Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．３を加えた混合物（Ｍｉｘ２＋ｈｎＲＮＰ Ａ１）でエクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率が上昇し（図９）、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下した（図１０）。なお、Ｍｉｘ２は試験例１および試験例２におけるＭｉｘｔｕｒｅ２と同義である。
＜試験例４＞
モデルマウス由来培養細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（４）：マルチエクソンスキッピングによるジストロフィンタンパク発現の回復
手順
　Ｈ２Ｋ－ｍｄｘ５２細胞を０．４％ Ｇｅｌａｔｉｎ － ｃｏａｔｅｄ １２ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ に６．７×１０４ / ｗｅｌｌで播種、増殖培地２ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日培養した。２日間培養後に培地を増殖培地から分化培地に培地交換した。３日間培養後に、５０μＭのＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。さらに３日間培養後に分化培地で培地交換後、さらに１日培養後にプロテアーゼインヒビターカクテルｃＯｍｐｌｅｔｅ, Ｍｉｎｉ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社製）を添加した細胞溶解バッファーＰｉｅｒｃｅ ＲＩＰＡ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により細胞を回収した。超音波破砕機Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ ＵＣＤ－２５０（ソニックバイオ社製）により細胞を破砕（出力：Ｈ、３０秒間を３回）し、冷却遠心機（ＴＯＭＹ　ＭＸ－３０５、ロータ：ＡＲ０１５－２４、トミー精工社製）にて遠心（１５，０００ ｒｐｍ、４℃、１５分間）した上清を細胞溶解液とした。Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、プレートリーダーＳｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）により５６２ ｎｍの吸光度を測定し、データ解析ソフトウェアＧｅｎ５ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０９.２（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）により細胞溶解液中のタンパク質濃度を求めた。細胞溶解液（タンパク質量で３０ μg分）をポリアクリルアミドゲルＮｕＰＡＧＥ ３ ｔｏ ８％, Ｔｒｉｓ－Ａｃｅｔａｔｅ, １．５ ｍｍ, Ｍｉｎｉ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇｅｌ, １５－ｗｅｌｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて電気泳動（１５０ Ｖ、７５分間）した。分子量マーカーとしてＨｉＭａｒｋ Ｐｒｅ－Ｓｔａｉｎｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｎｄａｒｄ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を使用した。
　電気泳動終了後、セミドライブロット法によりＩｍｍｏｂｉｌｏｎ－Ｐ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）へ転写（４ ｍＡ/ｃｍ２、３０分間）した。一次抗体として抗ジストロフィン抗体（ＮＣＬ－Ｄｙｓ１、Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｎｅｗｃａｓｔｌ社製）を１００倍希釈で、二次抗体としてヤギ抗マウスＩｇＧ （Ｈ＋Ｌ）－Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ複合体（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を２，５００倍希釈して使用し、ウェスタンブロッティングを行った。抗体反応終了後、ＥＣＬ Ｐｒｉｍｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｙｔｉｖａ社製）により発光させ、化学発光・ゲル撮影装置 ＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈ ＭＰ イメージングシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）により発光を検出し、画像を撮影した。
（結果）
　結果を図１１に示す。
　陰性対照やＰＭＯ　Ｎｏ．１とＰＭＯ　Ｎｏ．２の混合物（Ｍｉｘ２）では、ジストロフィンタンパク質は発現していないが、ｈｎＲＮＰ Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．３を加えた混合物（Ｍｉｘ２＋ｈｎＲＮＰ Ａ１）でエクソン４５～５５スキッピングに対応するジストロフィンタンパク質の発現が確認された（図１１）。なお、Ｍｉｘ２は試験例１および試験例２におけるＭｉｘｔｕｒｅ２と同義である。
［実施例３：アンチセンスオリゴマーの製造（２）］
　実施例1と同様の方法で、表１２に示すアンチセンスオリゴマー（ＰＭＯ　Ｎｏ．６～３３を合成した。各アンチセンスオリゴマーの分子量の理論値及びＥＳＩ－ＴＯＦ－ＭＳによる実測値も示す。ＰＭＯの５’末端は実施例１と同様に基（１）である。合成したＰＭＯを注射用水（大塚製薬工場社製）で溶解した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000156
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000157
　なお、本発明のアンチセンスオリゴマーの標的塩基配列は、「Ha1_b1-c1」、「Ha2_b2-c2_Ha3_b3-c3」のように記載した。
　「Ha1」はヒトジストロフィン遺伝子の第ａ番目のエクソンを表し、「b1」は標的塩基配列の５’末端の塩基を表し、「c1」は標的塩基配列の３’末端の塩基を表す。
　「b1」、「c1」が正の整数の場合、「b1」、「c1」はそれぞれ、第ａ番目のエクソンの５’末端塩基を１番目の塩基としたときに、３’末端方向の何番目の塩基なのかを表す。一方、「b1」、「c1」が負の整数である場合、「b1」、「c1」はそれぞれ、第（ａ－１）番目のイントロンの３’末端の塩基を－１番目としたときに、５’末端方向の何番目の塩基なのかを表す。
　例えば、「H55_(-18)-10」の場合、当該標的塩基配列の５’末端が第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１８番目の塩基であり、当該標的塩基配列の３’末端が第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に１０番目の塩基である塩基配列を意味する。
　「Ha2_b2-c2_Ha3_b3-c3」の第１の部分である「Ha2_b2-c2」は、該アンチセンスオリゴマーを構成する３’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列を意味し、第２の部分である「Ha3_b3-c3」は、該アンチセンスオリゴマーを構成する５’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列を意味する。
　なお、「Ha2」と「Ha3」が同じである場合には、「_Ha3」部分を省略することもできる。
　例えば、「H45_(-66)-(-61)_19-40」又は「H45_(-66)-(-61)_H45_19-40」の場合、アンチセンスオリゴマーを構成する３’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列が「H45_(-66)-(-61)」であり、５’末端側ユニットオリゴマーの標的塩基配列が「H45_19-40」である塩基配列を意味する。
［実施例４：アンチセンスオリゴマーのマルチエクソンスキッピング活性試験（２）］
＜試験例１＞
正常ヒト由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（１）：マルチエクソンスキッピングの誘導
手順
　正常ヒト由来筋芽細胞（ＬＯＮＺＡ社製）をＰＥ標識抗ヒトＣＤ８２抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社製、以下同じ）により直接蛍光免疫染色し、Ｃｅｌｌ　Ｓｏｒｔｅｒ　ＳＨ８００Ｓ（ソニー社製、以下同じ）によってソーティングすることでＣＤ８２陽性正常ヒト由来筋芽細胞を得た。ＣＤ８２陽性正常ヒト由来筋芽細胞をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックス（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、以下同じ）でコートしたコラーゲンＩコートマイクロプレート　９６　ｗｅｌｌ（ＡＧＣテクノグラス社製）に５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、正常ヒト筋芽細胞用増殖培地（２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、以下同じ）、０．１％　ｈＢＦＧＦ（シグマアルドリッチ社製）及び１％　ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（Ｐ／Ｓ）（シグマアルドリッチ社製、以下同じ）を添加したＤＭＥＭ，ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ，ＧｌｕｔａＭＡＸＴＭ　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，ｐｙｒｕｖａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、以下同じ）０．１ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．２ｍＬ　正常ヒト筋芽細胞用分化培地（２％ウマ血清（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、１％ＩＴＳ液体培地サプリメント（１００×）（シグマアルドリッチ社製）及びＰ／Ｓを添加したＤＭＥＭ，ｈｉｇｈ　ｇｌｕｃｏｓｅ，ＧｌｕｔａＭＡＸＴＭ　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，ｐｙｒｕｖａｔｅ）に培地交換した。７日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒ（ジーンツールズ社製）によりトランスフェクションした。使用したＰＭＯを以下の表１３に示す。マウスジストロフィン遺伝子を標的とするＰＭＯ　Ｎｏ．１～３とヒトジストロフィン遺伝子上で同じ位置を標的配列とするＰＭＯを使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000158
　使用したＰＭＯとその培地中濃度は以下の表１４のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000159
　さらに３日間培養後に０．２５ｍＬ　正常ヒト筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に細胞をＰＢＳ（タカラバイオ社製）で１回洗浄した後、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｃｒｏ　Ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。１％の２－メルカプトエタノール（ナカライテスク社製）を含むＢｕｆｆｅｒ　ＲＬＴ（キアゲン社製）７５μＬを細胞に添加し、数分間室温に放置して細胞を溶解させ、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｃｒｏ　Ｋｉｔ（キアゲン社製）に添付のプロトコールに従って全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡの濃度はＮａｎｏＤｒｏｐ　Ｏｎｅ　Ｃ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて測定した。抽出した全ＲＮＡ１００ｎｇに対し、ＱＩＡＧＥＮ　ＯｎｅＳｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲ　Ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いてＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行った。キットに添付のプロトコールに従って、反応液を調製した。サーマルサイクラーはＶｅｒｉｔｉ　９６　Ｗｅｌｌ　Ｔｈｅｒｍａｌ　Ｃｙｃｌｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いた。用いたＲＴ－ＰＣＲのプログラムは、以下のとおりである。
　　５０℃、３０分間：逆転写反応
　　９５℃、１５分間：ポリメラーゼ活性化、逆転写酵素不活性化、ｃＤＮＡ熱変性
　　［９４℃、３０秒間；５７℃、３０秒間；７２℃、１分間］×３３サイクル：ＰＣＲ増幅
　　７２℃、１０分間：最終伸長反応
　ＲＴ－ＰＣＲに使用したフォワードプライマーとリバースプライマーの塩基配列は以下の表１５のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000160
　フォワードプライマー１とリバースプライマー１の組合せで、エクソン４５～５５のマルチエクソンスキッピングが生じた転写産物（３０１ｂｐ）を検出することができる。フォワードプライマー２とリバースプライマー２の組合せで、スキッピングの影響のないエクソン３７～３８の領域の転写産物（２４５ｂｐ）を検出することができる。
　上記ＰＣＲの反応産物をＭｕｌｔｉＮＡ（島津製作所社製）により解析した。エクソン４５～５５がスキップしたバンドのポリオリゴヌクレオチド量「Ａ」と、スキッピングが生じない領域のバンドのポリオリゴヌクレオチド量「Ｂ」を測定した。これら「Ａ」及び「Ｂ」の測定値に基づき、以下の式に従って、エクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
　エクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
　エクソン４５のスキッピングについては以下の表１６のプライマーを使用してエクソン４５～５５のスキッピングの検出と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000161
　フォワードプライマーとリバースプライマーの組合せで、エクソン４５のスキッピングが生じた転写産物（２６８ｂｐ）とスキッピングが生じていない転写産物（４４４ｂｐ）を検出することができる。
　上記ＰＣＲの反応産物をＭｕｌｔｉＮＡ（島津製作所社製）により解析した。エクソン４５がスキップしたバンドのポリオリゴヌクレオチド量「Ａ」と、スキッピングの生じていないバンドのポリヌクレオチド量「Ｂ」を測定した。これら「Ａ」及び「Ｂ」の測定値に基づき、以下の式に従って、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
　エクソン４５スキッピングのスキッピング効率（％）＝Ａ／（Ａ＋Ｂ）×１００
結果
　結果を図１２及び図１３に示す。　正常ヒト培養細胞において、ＰＭＯ　Ｎｏ．６単独（条件８）及びＰＭＯ　Ｎｏ．６を含む混合物（条件２～６）で、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された（図１２）。一方、ＰＭＯ　Ｎｏ．６に加えてｈｎＲＮＰ　Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．７を含む混合物（条件２～４、６）では、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図１３）。
＜試験例２＞
エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（１）：マルチエクソンスキッピングの誘導
手順
　ＮＣＮＰバイオバンクより入手したエクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞をＰＥ標識抗ヒトＣＤ８２抗体及びＡＰＣ標識抗ヒトＣＤ５６抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ　Ｂｉｏｔｅｃ社製、以下同じ）により直接蛍光免疫染色し、Ｃｅｌｌ　Ｓｏｒｔｅｒ　ＳＨ８００ＳによってソーティングすることでＣＤ５６及びＣＤ８２両陽性のエクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞を得た。エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地（２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％Ｐ／Ｓを添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　Ｍｉｘｔｕｒｅ　Ｆ－１２（ＤＭＥＭ／Ｆ１２）（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、以下同じ））０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地（２％ウマ血清、１％ＩＴＳ液体培地サプリメント（１００×）及び１％Ｐ／Ｓを添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２）に培地交換した。分化培地中で６日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１と同じＰＭＯを使用し、その培地中濃度は以下の表１７のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000162
　さらに３日間培養後に０．５ｍＬ　分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に実施例２の試験例１と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００ｎｇを用いて試験例１と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図１４及び図１５に示す。
エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞においてＰＭＯ　Ｎｏ．６とＰＭＯ　Ｎｏ．８を含む混合物（条件４）によるエクソン４５～５５スキッピングが確認された。さらにｈｎＲＮＰ　Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．７も含む混合物（条件２及び３）でもエクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された（図１４）が、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図１５）。
＜試験例３＞
エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（２）：マルチエクソンスキッピングの誘導
手順
　試験例２と同様に調製したエクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに２×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で３日間培養した。播種３日後に培地を増殖培地から０．５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。分化培地中で８日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１～２と同じＰＭＯを使用し、その培地中濃度は以下の表１８のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000163
さらに３日間培養後に０．５ｍＬ　分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から６日後に試験例２と同様に抽出した全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００ｎｇを用いて試験例１～２と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図１６及び図１７に示す。
ＰＭＯ　Ｎｏ．６のみ（条件４）と比べて、ＰＭＯ　Ｎｏ．６に加えてＰＭＯ　Ｎｏ．８またはＰＭＯ　Ｎｏ．７及びＰＭＯ　Ｎｏ．８を含む混合物（条件２、３）において、エクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率が向上した（図１６）。一方、ｈｎＲＮＰ　Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．７を加えた混合物（条件２）ではエクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図１７）。
＜試験例４＞
エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（３）：マルチエクソンスキッピングによるジストロフィンタンパク発現の回復
手順
　エクソン４８－５０欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたコラーゲンＩコートマイクロプレート　２４　ｗｅｌｌ（ＡＧＣテクノグラス社製、以下同じ）に１．０×１０５／ｗｅｌｌで播種、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地１ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日培養した。播種翌日に培地をＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地からＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。６日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。さらに３日間培養後に分化培地で培地交換後、さらにＰＭＯ添加から７日間培養後に実施例２の試験例４と同様に細胞溶解液を調製し、細胞溶解液中のタンパク質濃度を求めた。細胞溶解液をタンパク質量で３０μｇ分使用し、電気泳動時間を１２０分間とし、抗ジストロフィン抗体（ＮＣＬ－ＤＹＳ１）を２５０倍希釈して使用した以外は、実施例２の試験例４と同様にウェスタンブロッティングを実施し、ジストロフィンタンパク質を検出した。泳動したサンプルは以下の表１９のとおりである。ジストロフィン発現の陽性対照として１２日間筋分化培養したマウスＣ２Ｃ１２細胞の溶解液（正常ジストロフィンコントロール）及びエクソン４５－５５欠失トランスジェニックマウス骨格筋の溶解液（エクソン４５－５５欠失ジストロフィン発現コントロール）を使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000164
（結果）
　結果を図１８に示す。
　陰性対照（条件３）では、ジストロフィンタンパク質は発現していないが、ＰＭＯ　Ｎｏ．６とＰＭＯ　Ｎｏ．８の混合物（条件５）及びＰＭＯ　Ｎｏ．６～８の混合物（条件４、６）によってエクソン４５～５５スキッピングに対応するジストロフィンタンパク質の発現が確認された（図１８：矢印の頭）。
＜試験例５＞
エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（１）：マルチエクソンスキッピングの誘導
手順
　ＮＣＮＰバイオバンクより入手したエクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞を試験例２と同様にソーティングすることで得られたエクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。分化培地中で６日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１～４と同じＰＭＯを使用し、その培地中濃度は以下の表２０のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000165
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から５日後に試験例２～３と同様に抽出した全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ１００ｎｇを用いて試験例１～３と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピングのスキッピング効率を求めた。また以下の表２１のプライマーを使用した以外は、試験例１～３と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを実施し、ＰＣＲの反応産物を解析することでエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。フォワードプライマーとリバースプライマーの組合せで、エクソン４５のスキッピングが生じた転写産物（１６２ｂｐ）とスキッピングが生じていない転写産物（３３８ｂｐ）を検出することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000166
結果
　結果を図１９及び図２０に示す。
エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞において、ＰＭＯ　Ｎｏ．６単独（条件３）及びＰＭＯ　Ｎｏ．６～８を含む混合物（条件２）により、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された（図１９）。またＰＭＯ　Ｎｏ．６～８を含む混合物（条件２）ではＰＭＯ　Ｎｏ．６単独（条件３）と比べてエクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図２０）。
＜試験例６＞
エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（２）：マルチエクソンスキッピングの誘導
手順
　試験例５と同様に調製したエクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに６．３×１０３／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４日間培養した。播種４日後に培地を増殖培地から０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。分化培地中で７日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１～５と同じＰＭＯを使用し、その培地中濃度は以下の表２２のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000167
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２～３、５と同様に抽出した全ＲＮＡを抽出した。全ＲＮＡ８０ｎｇを用いた以外は、試験例５と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行って得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図２１及び図２２に示す。エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞において、ＰＭＯ　Ｎｏ．６単独（条件６）及びＰＭＯ　Ｎｏ．６を含む混合物（条件２、３、５）により、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された（図２１）。またＰＭＯ　Ｎｏ．６に加えてＰＭＯ　Ｎｏ．７を含む混合物（条件５）では、ＰＭＯ　Ｎｏ．６に加えてＰＭＯ　Ｎｏ．８を含む混合物（条件３）よりもエクソン４５スキッピングのスキッピング効率が低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図２２）。
＜試験例７＞
エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（４）：マルチエクソンスキッピングによるジストロフィンタンパク発現の回復
手順
　エクソン４６－５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたコラーゲンＩコートマイクロプレート　２４　ｗｅｌｌに８．０×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地１ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日培養した。播種翌日に培地をＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地から１ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。４日間培養後に培地を交換し、７日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。さらに３日間培養後に分化培地で培地交換後、さらにＰＭＯ添加から７日間培養後に実施例２の試験例４、本実施例の試験例４と同様に細胞溶解液を調製し、細胞溶解液をタンパク質量で２４μｇ分使用した以外は、実施例２の試験例４、本実施例の試験例４と同様にウェスタンブロッティングを実施し、ジストロフィンタンパク質を検出した。泳動したサンプルは以下の表２３のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000168
（結果）
　結果を図２３に示す。
　陰性対照（条件３）では、ジストロフィンタンパク質は発現していないが、ＰＭＯ　Ｎｏ．６とＰＭＯ　Ｎｏ．８の混合物（条件５）及びＰＭＯ　Ｎｏ．６～８の混合物（条件４）によってエクソン４５～５５スキッピングに対応するジストロフィンタンパク質の発現が確認された（図２３：矢印の頭）。
＜試験例８＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（１）：第１のアンチセンスオリゴマーの検討（１）
手順
　ＮＣＮＰバイオバンクより入手したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞を実施例３、６と同様にソーティングすることで得られたエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたコラーゲンＩコートマイクロプレート　２４　ｗｅｌｌ（ＡＧＣテクノグラス社製）に２．５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で３日間培養した。播種３日後に培地を増殖培地から０．５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地中で４日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１～７で使用したＰＭＯに加えて以下の表２４のＰＭＯも使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000169
　以下の表２５の培地中濃度でＰＭＯを添加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000170
さらに３日間培養後に０．５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２、３、５、６と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００　ｎｇを用いて試験例１～３と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図２４及び図２５に示す。エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞においてＰＭＯＮｏ．６とＰＭＯＮｏ．８を含む混合物（条件２）により、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された（図２４）。ＰＭＯＮｏ．６とＰＭＯＮｏ．８に加えてｈｎＲＮＰＡ１を標的としたＰＭＯＮｏ．７を含む混合物（条件３）でも、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された（図２４）。また、第１のアンチセンスオリゴマーとしてＰＭＯ　Ｎｏ．９～１１をＰＭＯ　Ｎｏ．　８と加えた条件４、６、８において、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された。さらにｈｎＲＮＰ　Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．７も加えた条件５、７、９でもエクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認され（図２４）たが、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図２５）。
＜試験例９＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（２）：第１のアンチセンスオリゴマーの検討（２）
手順
　試験例８と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．２５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地中で７日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１～７で使用したＰＭＯに加えて以下の表２６のＰＭＯを使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000171
　以下の表２７の培地中濃度でＰＭＯを添加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000172
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２、３、５、６、８と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００ｎｇを用いて試験例１～３、８と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図２６及び図２７に示す。第１のアンチセンスオリゴマーとしてＰＭＯ　Ｎｏ．１２～１７をＰＭＯ　Ｎｏ．　８と共に加えた条件４、６、８、１０においても、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認された。さらにｈｎＲＮＰ　Ａ１を標的としたＰＭＯ　Ｎｏ．７も加えた条件５、７、９、１１でも、エクソン４５～５５スキッピングが誘導されることが確認され（図２６）たが、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率は低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図２７）。
＜試験例１０＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（３）：第３のアンチセンスオリゴマーの検討（１）
手順
　試験例８、９と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．２５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地中で７日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。
試験例１～７で使用したＰＭＯに加えて以下の表２８のＰＭＯを使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000173
　以下の表２９の培地中濃度でＰＭＯを添加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000174
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２、３、５、６、８、９と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００　ｎｇを用いて試験例１～３、８、９と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図２８及び図２９に示す。ＰＭＯ　Ｎｏ．　６及びＰＭＯ　Ｎｏ．　８に第３のアンチセンスオリゴマーとしてＰＭＯ　Ｎｏ．２０～２３を加えた結果（条件６～９）、ＰＭＯ　Ｎｏ．　７を加えた場合（条件５）と同程度のエクソン４５～５５スキッピングの誘導が確認された（図２８）。またエクソン４５スキッピングが低下しており、シングルスキッピングが抑制されている傾向にあった（図２９）。一方、ＰＭＯ　Ｎｏ．１８及び１９を加えた混合物（条件３、４）ではＰＭＯ　Ｎｏ．　７を加えた混合物（条件５）と比べてエクソン４５スキッピング効率は低下しなかったものの、陰性対照（条件１）と比べて高いエクソン４５～５５スキッピングの誘導が確認された。
＜試験例１１＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（４）：第３のアンチセンスオリゴマーの検討（２）
手順
　試験例８～１０と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．２５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地中で３日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。
試験例１～７で使用したＰＭＯに加えて以下の表３０の
ＰＭＯを使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000175
　以下の表３１の培地中濃度でＰＭＯを添加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000176
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２、３、５、６、８～１０と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００ｎｇを用いて試験例１～３、８～１０と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図３０及び図３１に示す。ＰＭＯ　Ｎｏ．　６及びＰＭＯ　Ｎｏ．　８に第３のアンチセンスオリゴマーとしてＰＭＯ　Ｎｏ．２４～２６を加えた結果（条件２、５、８）、ＰＭＯ　Ｎｏ．２４、２６を加えた場合（条件２、８）ではＰＭＯ　Ｎｏ．　７を加えた場合（条件４）と比べてエクソン４５～５５スキッピングの効率が低下したが、ＰＭＯ　Ｎｏ．２５を加えた場合（条件５）では同程度のエクソン４５～５５スキッピングの誘導が確認された（図３０）。またＰＭＯ　Ｎｏ．２５を加えた場合（条件５）ではエクソン４５スキッピング効率が低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図３１）。
＜試験例１２＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（５）：第２のアンチセンスオリゴマーの検討（１）
手順
　試験例８～１１と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．２５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地中で７日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。
　試験例１～７で使用したＰＭＯに加えて以下の表３２のＰＭＯを使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000177
　以下の表３３の培地中濃度でＰＭＯを添加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000178
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２、３、５、６、８～１１と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００ｎｇを用いて試験例１～３、８～１１と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図３２及び図３３に示す。
第２のアンチセンスオリゴマーとしてＰＭＯ　Ｎｏ．２７～３３をＰＭＯ　Ｎｏ．　６と共に加えた結果（条件２～７、９）、ＰＭＯ　Ｎｏ．　８を加えた場合（条件８）と同程度のエクソン４５～５５スキッピングの誘導が確認された（図３２）。第２のアンチセンスオリゴマーを変えてもエクソン４５スキッピング効率が低下することはなく、シングルスキッピングは抑制されていなかった（図３３）。
＜試験例１３＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（６）：第２のアンチセンスオリゴマーの検討（２）
手順
　試験例８～１２と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．２５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地中で３日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１２で使用したＰＭＯを以下の表３４の培地中濃度で添加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000179
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２、３、５、６、８～１２と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００ｎｇを用いて試験例１～３、８～１２と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図３４及び図３５に示す。ＰＭＯ　Ｎｏ．　６及びＰＭＯ　Ｎｏ．　７と共にＰＭＯ　Ｎｏ．２７～２９、３２をそれぞれ加えた結果（条件２～５）、ＰＭＯ　Ｎｏ．　８を加えた場合（条件６）と同程度のエクソン４５～５５スキッピングの誘導が確認された（図３４）。またＰＭＯ　Ｎｏ．３２を加えた場合（条件５）を除き、エクソン４５スキッピングの誘導はほとんど確認されず、シングルスキッピングが抑制されていた（図３５）。
＜試験例１４＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（７）：第２のアンチセンスオリゴマーの検討（３）
手順
　試験例８～１３と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたＣｏｒｎｉｎｇ　ＢｉｏＣｏａｔ　コラーゲン　Ｉ　４８ウェル透明マイクロプレートに５×１０４／ｗｅｌｌで播種し、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地０．２５ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日間培養した。播種翌日に培地を増殖培地から０．２５ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地中で７日間培養後にＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。試験例１２で使用したＰＭＯを以下の表３５の培地中濃度で添加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000180
さらに３日間培養後に０．３ｍＬ　ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に交換した。ＰＭＯ添加から７日後に試験例２、３、５、６、８～１３と同様に細胞から全ＲＮＡを抽出し、全ＲＮＡ２００ｎｇを用いて１～３、８～１３と同様にＯｎｅ－Ｓｔｅｐ　ＲＴ－ＰＣＲを行い、得られたＰＣＲの反応産物を解析して、エクソン４５～５５スキッピング及びエクソン４５スキッピングのスキッピング効率を求めた。
結果
　結果を図３６及び図３７に示す。
ＰＭＯ　Ｎｏ．　６及びＰＭＯ　Ｎｏ．　７と共に第２のアンチセンスオリゴマーとしてＰＭＯ　Ｎｏ．３０、３１または３３をそれぞれ加えた結果（条件３、４、６）、ＰＭＯ　Ｎｏ．　８を加えた場合（条件５）と同程度のエクソン４５～５５スキッピングが確認された（図３６）。またＰＭＯ　Ｎｏ．　６及びＰＭＯ　Ｎｏ．　８のみを加えた場合（条件２）に比べて、エクソン４５スキッピングのスキッピング効率がいずれも低下しており、シングルスキッピングが抑制されていた（図３７）。
＜試験例１５＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（８）：マルチエクソンスキッピングによるジストロフィンタンパク発現の回復
手順
　試験例８～１４と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたコラーゲンＩコートマイクロプレート　１２　ｗｅｌｌ（ＡＧＣテクノグラス社製）に２．０×１０５／ｗｅｌｌで播種、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地１ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日培養した。播種翌日に培地をＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地からＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。分化培地中で３日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。さらに３日間培養後に分化培地で培地交換した。ＰＭＯ添加から７日間培養後及び１１日間培養後、実施例２の試験例２、本実施例の試験例４、試験例７と同様にウェスタンブロッティングを実施し、ジストロフィンタンパク質を検出した。泳動したサンプルは以下の表３６のとおりである。ジストロフィン発現の陽性対照として１２日間筋分化培養したマウスＣ２Ｃ１２細胞の溶解液（正常ジストロフィンコントロール）及びエクソン４５－５５欠失トランスジェニックマウス骨格筋の溶解液（エクソン４５－５５欠失ジストロフィン発現コントロール）を使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000181
（結果）
　結果を図３８に示す。陰性対照（条件３、６）ではエクソン４５－５５欠失ジストロフィンの陽性対照（条件２）のバンドと同じ位置（図３８：矢印の頭）にバンドは確認されないが、ＰＭＯをカクテルでトランスフェクションしたサンプル（条件４、５、７，８）ではエクソン４５～５５スキッピングに対応するジストロフィンタンパク質の発現が確認された（図３８：矢印の頭）。
＜試験例１６＞
エクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞におけるエクソン４５－５５マルチエクソンスキッピングのアッセイ（９）：マルチエクソンスキッピングによるジストロフィンタンパク発現の回復（２）
手順
　試験例８～１５と同様に調製したエクソン５１欠失ＤＭＤ患者由来筋芽細胞（ＣＤ５６陽性、ＣＤ８２陽性）をＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル基底膜マトリックスでコートしたコラーゲンＩコートマイクロプレート　１２　ｗｅｌｌ（ＡＧＣテクノグラス社製）に２．０×１０５／ｗｅｌｌで播種、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地１ｍＬ中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１日培養した。播種翌日に培地をＤＭＤ患者由来筋芽細胞用増殖培地からＤＭＤ患者由来筋芽細胞用分化培地に培地交換した。分化培地中で７日間培養後に、ＰＭＯを６μＭのＥｎｄｏ－Ｐｏｒｔｅｒによりトランスフェクションした。使用したＰＭＯを以下に表３７に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000182
さらに３日間培養後に分化培地で培地交換した。ＰＭＯ添加から７日間培養後、実施例２の試験例２、本実施例の試験例４、７、１５と同様にウェスタンブロッティングを実施し、ジストロフィンタンパク質を検出した。泳動したサンプルは以下の表３８のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000183
（結果）
　結果を図３９に示す。
　陰性対照（条件３）ではエクソン４５－５５欠失ジストロフィンの陽性対照（条件２）のバンドと同じ位置にバンドは確認されないが、ＰＭＯをカクテルでトランスフェクションしたサンプル（条件４、５、６）ではエクソン４５～５５スキッピングに対応するジストロフィンタンパク質の発現が確認された（図３９：矢印の頭）。

Claims (36)

  1. 　ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンからなる群より選択されるいずれか２つ以上の番号順に連続するエクソンを同時にスキッピングさせるアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物の組み合わせであって、
    　（ｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第１のユニットオリゴマー、及び
    前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第２のユニットオリゴマー
    を含む、第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、
    及び
    　（ｉｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、
    を含む、組み合わせ。
  2. 　前記第１のユニットオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に１１塩基の塩基配列及び第４５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に６９塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含み、
    　前記第２のユニットオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に５２番目の塩基から７５番目の塩基までの塩基配列の連続する１～１０塩基に相補的な塩基配列を含み、
    　前第２のアンチセンスオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第５４番目のイントロンの３’末端から５’末端方向に３３塩基の塩基配列及び第５５番目のエクソンの５’末端から３’末端方向に５３塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含む、請求項１に記載の組み合わせ。
  3. 　前記第１のユニットオリゴマーが、
    （ａ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
    （ｂ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
    （ｃ）配列番号２１１～９０６からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
    （ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
    に相補的な塩基配列を含み、及び／又は
    　前記第２のユニットオリゴマーが、
    （ａ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
    （ｂ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
    （ｃ）配列番号１～１０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
    （ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
    に相補的な塩基配列を含む、
    請求項１又は２に記載の組み合わせ。
  4. 　前記第２のアンチセンスオリゴマーが、
    （ａ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
    （ｂ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
    （ｃ）配列番号３５０７～４２９８からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
    （ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
    に相補的な塩基配列を含む、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  5. 　前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、前記第１のユニットオリゴマーが配列番号９０７～１６０２のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１０６～２１０のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４２９９～５０９０のいずれかの塩基配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  6. 　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０、１１９０、１２０１、１２１２、１２２２、１２２４、及び１２３９からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  7. 　前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４、１２４、１５１、２０１、２０３、及び２０５からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  8. 　前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含む、
    請求項６又は７に記載の組み合わせ。
  9. 　前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８、４７０２、４７５２、４９２３、４９２６、４９３６、４９５０、及び４９７７からなる群より選択される塩基配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  10. 　前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７０２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７５２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２３の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２６の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９３６の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含む、
    請求項１～９のいずれか一項に記載の組み合わせ。　
  11. 　前記第１のユニットオリゴマーが配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含む、請求項５～１０のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  12. 　さらに、（ｉｉｉ）前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列又はその一部の塩基配列に相補的な塩基配列を含む第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、を含む、
    請求項１～１１のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  13. 　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、前記ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡの第４５番目のエクソンの３’末端から５’末端方向に２３塩基の塩基配列及び第４５番目のイントロンの５’末端から３’末端方向に７３塩基の塩基配列からなる塩基配列の連続する１５～３０塩基に相補的な塩基配列を含む、請求項１２に記載の組み合わせ。
  14. 　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、
    （ａ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
    （ｂ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
    （ｃ）配列番号１６０３～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
    （ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
    に相補的な塩基配列を含む、
    請求項１２又は１３に記載の組み合わせ。
  15. 　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、
    （ａ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
    （ｂ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
    （ｃ）配列番号１６１１～１６５４、１６６４～１７０７、１７１８～１７６１、１７７３～１８１６、１８２９～１８７２、１８８６～１９２９、１９４４～１９８７、２００３～２０４６、２０６３～２１０６、２１２４～２１６７、２１８６～２２２９、２２４９～２２９２、２３１３～２３５６、２３７８～２４２１、２４４４～２４８７、及び２５１１～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
    （ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
    に相補的な塩基配列を含む、
    （１４）に記載の組み合わせ。
  16. 　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、
    （ａ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列、
    （ｂ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列、
    （ｃ）配列番号１６１７～１６５４、１６７０～１７０７、１７２４～１７６１、１７７９～１８１６、１８３５～１８７２、１８９２～１９２９、１９５０～１９８７、２００９～２０４６、２０６９～２１０６、２１３０～２１６７、２１９２～２２２９、２２５５～２２９２、２３１９～２３５６、２３８４～２４２１、２４５０～２４８７、及び２５１７～２５５４からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列と８５％以上の配列同一性を有し、かつ前記選択されるいずれか１つの塩基配列の長さと比べ±１５％以内の長さを有する塩基配列、又は
    （ｄ）前記（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の一部の塩基配列
    に相補的な塩基配列を含む、
    請求項１５に記載の組み合わせ。
  17. 　前記第３のアンチセンスオリゴマーが、配列番号３０６０、３０６５、３０７７、３０８２、３０８７、３０９０、３０９６、３１０８、３１１９、及び３３２０からなる群より選択される塩基配列を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  18. 　前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２の
    ユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、前記第１のユニットオリゴマーが配列番号９０７～１６０２のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１０６～２１０のいずれかの塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４２９９～５０９０のいずれかの塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号２５５５～３５０６のいずれかの塩基配列を含む、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  19. 　前記第１のアンチセンスオリゴマーが第１のユニットオリゴマー及び前記第２のユニットオリゴマーを５’末端からこの順で含み、かつ、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０３の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号２０５の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２３９の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１１４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２４の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１２４の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１９０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２１２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２２２の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０６０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０６５の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０７７の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８７の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３１０８の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３１１９の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３３２０の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４６９８の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７０２の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４７５２の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２３の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９２６の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９３６の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含むか、
    　前記第１のユニットオリゴマーが、配列番号１１８０の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが、配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９７７の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０９６の塩基配列を含む、
    請求項１～１８のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  20. 　前記第１のユニットオリゴマーが配列番号１２０１の塩基配列を含み、前記第２のユニットオリゴマーが配列番号１５１の塩基配列を含み、前記第２のアンチセンスオリゴマーが配列番号４９５０の塩基配列を含み、前記第３のアンチセンスオリゴマーが配列番号３０８２、３０９０又は３０９６の塩基配列を含む、請求項１８又は１９に記載の組み合わせ。
  21. 　ヒトジストロフィンｐｒｅ－ｍＲＮＡにおける第４５番目のエクソンから第５５番目のエクソンの全てをスキッピングさせる、請求項１～２０のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  22. 　前記第１～第２のアンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組み合わせ、又は前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、請求項１２～２１のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  23. 　前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分及び／又はリン酸結合部分が修飾されている、請求項２２に記載の組み合わせ。
  24. 　前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分が、２’位の－ＯＨ基が、－ＯＲ、－Ｒ、－Ｒ’ＯＲ、－ＳＨ、－ＳＲ、－ＮＨ２、－ＮＨＲ、－ＮＲ２、－Ｎ３、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、及び－Ｉからなる群より選択されるいずれかの基で置換されたリボースである、請求項２２又は２３に記載の組み合わせ（前記Ｒは、アルキル又はアリールを示し、前記Ｒ’は、アルキレンを示す。）。
  25. 　前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドのリン酸結合部分が、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、及びボラノフォスフェート結合からなる群より選択されるいずれか１つのものである、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  26. 　前記第１～第２のアンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組み合わせ、又は前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、請求項１２～２１のいずれか一項に記載の組み合わせ。
  27. 　前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、請求項２６に記載の組み合わせ。
  28. 　前記第１～第３のアンチセンスオリゴマーの５’末端が、下記化学式（１）～（３）のいずれかの基である、請求項２６又は２７に記載の組み合わせ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
  29. 　（ａ）請求項１～２８のいずれか一項に記載の第１及び第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、又は
    　（ｂ）（ｉ）請求項１～２８のいずれか一項に記載の第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、及び（ｉｉ）請求項１～２８のいずれか一項に記載の第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物の組み合わせ医薬。
  30. 　（ａ）請求項１２～２８のいずれか一項に記載の第１～第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、又は
    　（ｂ）（ｉ）請求項１２～２８のいずれか一項に記載の第１のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、（ｉｉ）請求項１２～２８のいずれか一項に記載の第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物、及び（ｉｉｉ）請求項１２～２８のいずれか一項に記載の第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物を含む医薬組成物の組み合わせ医薬。
  31. 　医薬組成物がさらに医薬的に許容可能な担体を含む、請求項２９又は３０に記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬。
  32. 　筋ジストロフィーの治療のための、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬。
  33. 　ヒト患者に投与するための、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬。
  34. 　（ｉ）請求項１～２８のいずれか一項に記載の第１及び第２のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、（ｉｉ）請求項１２～２８のいずれか一項に記載の第１～第３のアンチセンスオリゴマー若しくはその医薬的に許容可能な塩又はそれらの水和物、又は（ｉｉｉ）請求項２９～３３のいずれか一項に記載の医薬組成物又は組み合わせ医薬を、筋ジストロフィー患者に投与する工程を含む、筋ジストロフィーの治療方法。
  35. 　前記筋ジストロフィー患者が、ジストロフィン遺伝子にエクソン４５～５５スキップの対象となる変異を有する患者である、請求項３４に記載の治療方法。
  36. 　前記患者がヒトである、請求項３４又は３５に記載の治療方法。
PCT/JP2022/025120 2021-06-23 2022-06-23 アンチセンスオリゴマーの組み合わせ WO2022270585A1 (ja)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202280044513.5A CN117940564A (zh) 2021-06-23 2022-06-23 反义低聚物的组合
BR112023027298A BR112023027298A2 (pt) 2021-06-23 2022-06-23 Combinação de oligômeros antissenso
IL309626A IL309626A (en) 2021-06-23 2022-06-23 A combination of antisense oligomers
AU2022298028A AU2022298028A1 (en) 2021-06-23 2022-06-23 Combination of antisense oligomers
JP2023530119A JPWO2022270585A1 (ja) 2021-06-23 2022-06-23
MX2023014417A MX2023014417A (es) 2021-06-23 2022-06-23 Combinacion de oligomeros antisentido.
CA3224782A CA3224782A1 (en) 2021-06-23 2022-06-23 Combination of antisense oligomers
EP22828501.1A EP4361269A1 (en) 2021-06-23 2022-06-23 Combination of antisense oligomers
KR1020247000786A KR20240024176A (ko) 2021-06-23 2022-06-23 안티센스 올리고머의 조합
US18/570,778 US20240301416A1 (en) 2021-06-23 2022-06-23 Combination of Antisense Oligomers
CONC2023/0016805A CO2023016805A2 (es) 2021-06-23 2023-12-04 Combinación de oligómeros antisentido

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021-104145 2021-06-23
JP2021104145 2021-06-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022270585A1 true WO2022270585A1 (ja) 2022-12-29

Family

ID=84544436

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2022/025120 WO2022270585A1 (ja) 2021-06-23 2022-06-23 アンチセンスオリゴマーの組み合わせ

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20240301416A1 (ja)
EP (1) EP4361269A1 (ja)
JP (1) JPWO2022270585A1 (ja)
KR (1) KR20240024176A (ja)
CN (1) CN117940564A (ja)
AU (1) AU2022298028A1 (ja)
BR (1) BR112023027298A2 (ja)
CA (1) CA3224782A1 (ja)
CO (1) CO2023016805A2 (ja)
IL (1) IL309626A (ja)
MX (1) MX2023014417A (ja)
TW (1) TW202307208A (ja)
WO (1) WO2022270585A1 (ja)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12239716B2 (en) 2021-07-09 2025-03-04 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US20250121085A1 (en) * 2023-10-02 2025-04-17 Avidity Biosciences, Inc. Antibody-oligonucleotide conjugate compositions and methods of inducing dmd exon 45 skipping
US12280122B2 (en) 2018-08-02 2025-04-22 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US12319743B2 (en) 2018-08-02 2025-06-03 Dyne Therapeutics, Inc. Complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of delivering oligonucleotide to a subject
US12325753B2 (en) 2018-08-02 2025-06-10 Dyne Therapeutics, Inc. Method of using an anti-transferrin receptor antibody to deliver an oligonucleotide to a subject having facioscapulohumeral muscular dystrophy
US12329825B1 (en) 2018-08-02 2025-06-17 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of use thereof to induce exon skipping of exon 44 of dystrophin in a subject
US12357703B2 (en) 2025-02-06 2025-07-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of use thereof to induce exon skipping

Citations (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991009033A1 (en) 1989-12-20 1991-06-27 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having phosphorous-containing chiral intersubunit linkages
JP2924179B2 (ja) 1993-02-19 1999-07-26 日本新薬株式会社 グリセロール誘導体，デバイス及び医薬組成物
WO2004048570A1 (ja) 2002-11-25 2004-06-10 Nonprofit Organization Translational Research Organization Of Duchenne Muscular Dystrophy ｍＲＮＡ前駆体のスプライシングを修飾するＥＮＡ核酸医薬
WO2004083446A2 (en) 2003-03-21 2004-09-30 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
JP2005535318A (ja) * 2002-08-12 2005-11-24 ユニヴェルシテ ドゥ シェルブルック プレメッセンジャーｒｎａのスプライス部位選択の再プログラミング方法
WO2006000057A1 (en) 2004-06-28 2006-01-05 SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION, doing business as GLAXOSMITHKLINE Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
WO2007135105A1 (en) 2006-05-19 2007-11-29 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and method for inducing exon-skipping
WO2008036127A2 (en) 2006-05-10 2008-03-27 Avi Biopharma, Inc. Oligonucleotide analogs having cationic intersubunit linkages
WO2009005793A2 (en) 2007-06-29 2009-01-08 Avi Biopharma, Inc. Tissue specific peptide conjugates and methods
WO2009064471A1 (en) 2007-11-15 2009-05-22 Avi Biopharma, Inc. Method of synthesis of morpholino oligomers
WO2009139630A2 (en) 2008-05-14 2009-11-19 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in duchenne muscular dystrophy and associated means
WO2010048586A1 (en) 2008-10-24 2010-04-29 Avi Biopharma, Inc. Multiple exon skipping compositions for dmd
US20100168212A1 (en) 2008-09-11 2010-07-01 Royal Holloway, University Of London Oligomers
WO2011013700A1 (ja) 2009-07-29 2011-02-03 東亞合成株式会社 キャリアペプチドフラグメント及びその利用
WO2011057350A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 The University Of Western Australia Antisense molecules and methods for treating pathologies
WO2012150960A1 (en) 2011-05-05 2012-11-08 Avi Biopharma, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
WO2013100190A1 (ja) 2011-12-28 2013-07-04 日本新薬株式会社 アンチセンス核酸
WO2014007620A2 (en) 2012-07-03 2014-01-09 Prosensa Technologies B.V. Oligonucleotide for the treatment of muscular dystrophy patients
WO2016187425A1 (en) 2015-05-19 2016-11-24 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
WO2017047707A1 (ja) * 2015-09-15 2017-03-23 日本新薬株式会社 アンチセンス核酸
WO2018118599A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
WO2018118662A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
WO2018118627A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
JP2019525742A (ja) * 2016-06-30 2019-09-12 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィーに対するエクソンスキッピングオリゴマー
WO2019200185A1 (en) 2018-04-12 2019-10-17 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
WO2020028832A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2020219820A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Avidity Biosciences, Inc. Nucleic acid compositions and methods of multi-exon skipping
WO2021142313A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes and uses thereof
WO2021142307A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2022020108A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes and uses thereof
WO2022020107A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
JP2022047613A (ja) 2020-09-14 2022-03-25 東亞合成株式会社 キャリアペプチドフラグメントおよびその利用

Patent Citations (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991009033A1 (en) 1989-12-20 1991-06-27 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having phosphorous-containing chiral intersubunit linkages
JP2924179B2 (ja) 1993-02-19 1999-07-26 日本新薬株式会社 グリセロール誘導体，デバイス及び医薬組成物
JP2005535318A (ja) * 2002-08-12 2005-11-24 ユニヴェルシテ ドゥ シェルブルック プレメッセンジャーｒｎａのスプライス部位選択の再プログラミング方法
WO2004048570A1 (ja) 2002-11-25 2004-06-10 Nonprofit Organization Translational Research Organization Of Duchenne Muscular Dystrophy ｍＲＮＡ前駆体のスプライシングを修飾するＥＮＡ核酸医薬
WO2004083446A2 (en) 2003-03-21 2004-09-30 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
JP2006523101A (ja) * 2003-03-21 2006-10-12 アカデミス ツィーケンホイス ライデン ＲＮＡ二次構造の干渉による、ｍＲＮＡ前駆体におけるエクソン認識の調節
WO2006000057A1 (en) 2004-06-28 2006-01-05 SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION, doing business as GLAXOSMITHKLINE Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
WO2008036127A2 (en) 2006-05-10 2008-03-27 Avi Biopharma, Inc. Oligonucleotide analogs having cationic intersubunit linkages
WO2007135105A1 (en) 2006-05-19 2007-11-29 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and method for inducing exon-skipping
WO2009005793A2 (en) 2007-06-29 2009-01-08 Avi Biopharma, Inc. Tissue specific peptide conjugates and methods
WO2009064471A1 (en) 2007-11-15 2009-05-22 Avi Biopharma, Inc. Method of synthesis of morpholino oligomers
WO2009139630A2 (en) 2008-05-14 2009-11-19 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in duchenne muscular dystrophy and associated means
US20100168212A1 (en) 2008-09-11 2010-07-01 Royal Holloway, University Of London Oligomers
WO2010048586A1 (en) 2008-10-24 2010-04-29 Avi Biopharma, Inc. Multiple exon skipping compositions for dmd
WO2011013700A1 (ja) 2009-07-29 2011-02-03 東亞合成株式会社 キャリアペプチドフラグメント及びその利用
WO2011057350A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 The University Of Western Australia Antisense molecules and methods for treating pathologies
WO2012150960A1 (en) 2011-05-05 2012-11-08 Avi Biopharma, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
WO2013100190A1 (ja) 2011-12-28 2013-07-04 日本新薬株式会社 アンチセンス核酸
WO2014007620A2 (en) 2012-07-03 2014-01-09 Prosensa Technologies B.V. Oligonucleotide for the treatment of muscular dystrophy patients
WO2016187425A1 (en) 2015-05-19 2016-11-24 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
WO2017047707A1 (ja) * 2015-09-15 2017-03-23 日本新薬株式会社 アンチセンス核酸
JP2019525742A (ja) * 2016-06-30 2019-09-12 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィーに対するエクソンスキッピングオリゴマー
WO2018118599A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
WO2018118662A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
WO2018118627A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
WO2019200185A1 (en) 2018-04-12 2019-10-17 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
WO2020028832A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2020219820A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Avidity Biosciences, Inc. Nucleic acid compositions and methods of multi-exon skipping
WO2021142313A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes and uses thereof
WO2021142307A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2022020108A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes and uses thereof
WO2022020107A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
JP2022047613A (ja) 2020-09-14 2022-03-25 東亞合成株式会社 キャリアペプチドフラグメントおよびその利用

Non-Patent Citations (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALTSCHUL SF ET AL., J. MOL. BIOL., vol. 215, 1990, pages 403
ANNEMIEKE AARTSMA-RUS ET AL., NEUROMUSCULAR DISORDERS, vol. 12, 2002, pages S71 - S77
ANNEMIEKE AARTSMA-RUS, J. HUM. GENET., vol. 74, no. 1, 2004, pages 83 - 92
AUSUBEL: "Current Protocols in Molecular Biology", 1987, JOHN WILEY & SONS
CHRISTOPHE BEROUD ET AL., HUMAN MUTATION, vol. 28, no. 2, 2007, pages 196 - 202
ENYA ET AL., BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 18, 2008, pages 9154 - 9160
HUA Y, VICKERS T A, OKUNOLA H L, BENNETT C F, KRAINER A R.: "Antisense masking of an hnRNP A1/A2 intronic splicing silencer corrects SMN2 splicing in transgenic mice.", THE AMERICAN JOURNAL OF HUMAN GENETICS, AMERICAN SOCIETY OF HUMAN GENETICS , CHICAGO , IL, US, vol. 82, no. 4, 1 April 2008 (2008-04-01), US , pages 834 - 848, XP002691241, ISSN: 0002-9297, DOI: 10.1016/j.ajhg.2008.01.014 *
J. D. RAMSEYN. H. FLYNN, PHARMACOLOGY & THERAPEUTICS, vol. 154, 2015, pages 78 - 86
JOSHUA LEE ET AL., METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, vol. 1828, 2018, pages 141 - 150
JOSHUA LEE ET AL., PLOS ONE, vol. 13, no. 5, 2018, pages e0197084
K. L. DUEHOLMM. EGHOLMC. BEHRENSL. CHRISTENSENH. F. HANSENT. VULPIUSK. H. PETERSENR. H. BERGP. E. NIELSENO. BUCHARDT, J. ORG. CHEM., vol. 59, 1994, pages 5767
KARLINALTSCHUL, PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, 1990, pages 872264 - 2268
LARSENH. G. BATZK. OTTESONH. ORUM, J. PEPT. RES., vol. 49, 1997, pages 80
LAURA VAN VLIET ET AL., BMC MEDICAL GENETICS, vol. 9, 2008, pages 105
M. EGHOLMO. BUCHARDTP. E. NIELSENR. H. BERG, JACS, vol. 114, 1992, pages 1895
M. K. TSOUMPRA ET AL., EBIOMEDICINE, vol. 45, 2019, pages 630 - 645
P. E. NIELSENJ. COULLR. H. BERG, J. PEPT. SCI., vol. 1, 1995, pages 175
P. E. NIELSENM. EGHOLMR. H. BERG0. BUCHARDT, SCIENCE, vol. 254, 1991, pages 1497
PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 90, 1993, pages 5873
ROBERTS, RG ET AL., GENOMICS, vol. 16, 1993, pages 536 - 538
SAMBROOKRUSSELL: "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", vol. 3, 2001, COLD SPRING HARBOR, LABORATORY PRESS
VAN VLIET LAURA; DE WINTER CHRISTA L; VAN DEUTEKOM JUDITH CT; VAN OMMEN GERT-JAN B; AARTSMA-RUS ANNEMIEKE: "Assessment of the feasibility of exon 45–55 multiexon skipping for duchenne muscular dystrophy", BMC MEDICAL GENETICS, BIOMED CENTRAL, LONDON, GB, vol. 9, no. 1, 1 December 2008 (2008-12-01), GB , pages 105, XP021042784, ISSN: 1471-2350, DOI: 10.1186/1471-2350-9-105 *
WILTON S. D., MOLECULAR THERAPY, vol. 15, 2007, pages 1288 - 96
YOSHITSUGU AOKI ET AL., PNAS, vol. 109, no. 34, 2012, pages 13763 - 13768
YUSUKE ECHIGOYA ET AL., MOLECULAR THERAPY, vol. 27, no. 11, 2019, pages 1 - 13
YUSUKE ECHIGOYA ET AL., MOLECULAR THERAPY-NUCLEIC ACIDS, vol. 4, no. 2, 2015, pages e225

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12280122B2 (en) 2018-08-02 2025-04-22 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US12319743B2 (en) 2018-08-02 2025-06-03 Dyne Therapeutics, Inc. Complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of delivering oligonucleotide to a subject
US12325753B2 (en) 2018-08-02 2025-06-10 Dyne Therapeutics, Inc. Method of using an anti-transferrin receptor antibody to deliver an oligonucleotide to a subject having facioscapulohumeral muscular dystrophy
US12329825B1 (en) 2018-08-02 2025-06-17 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of use thereof to induce exon skipping of exon 44 of dystrophin in a subject
US12239716B2 (en) 2021-07-09 2025-03-04 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US12239717B2 (en) 2021-07-09 2025-03-04 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US12329824B1 (en) 2021-07-09 2025-06-17 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US20250121085A1 (en) * 2023-10-02 2025-04-17 Avidity Biosciences, Inc. Antibody-oligonucleotide conjugate compositions and methods of inducing dmd exon 45 skipping
WO2025076006A3 (en) * 2023-10-02 2025-05-15 Avidity Biosciences, Inc. Antibody-oligonucleotide conjugate compositions and methods of inducing dmd exon 45 skipping
US12357703B2 (en) 2025-02-06 2025-07-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of use thereof to induce exon skipping

Also Published As

Publication number Publication date
BR112023027298A2 (pt) 2024-03-12
AU2022298028A1 (en) 2023-12-21
KR20240024176A (ko) 2024-02-23
TW202307208A (zh) 2023-02-16
MX2023014417A (es) 2023-12-15
IL309626A (en) 2024-02-01
EP4361269A1 (en) 2024-05-01
CN117940564A (zh) 2024-04-26
JPWO2022270585A1 (ja) 2022-12-29
CA3224782A1 (en) 2022-12-29
US20240301416A1 (en) 2024-09-12
CO2023016805A2 (es) 2023-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2022270585A1 (ja) アンチセンスオリゴマーの組み合わせ
EP3004352B1 (en) Oligonucleotide modulators of b-cell cll/lymphoma 11a (bcl11a) and uses thereof
AU2014312196B2 (en) Modulation of prekallikrein (PKK) expression
JP7696466B2 (ja) Ｓｍｎ２を調節するための化合物及び方法
JP2019525918A (ja) Ｓｍｎ２の調節のための化合物及び方法
JP2025079347A (ja) キャリアペプチドが連結された核酸
RU2742300C2 (ru) Способы лечения поликистозной болезни почек
JP2019527549A (ja) 転写プロセシングの調節のための化合物及び方法
JP7292636B2 (ja) エクソン５１のスキッピングを誘導するアンチセンス核酸
JP7201192B2 (ja) エクソン５０のスキッピングを誘導するアンチセンス核酸
EP4183879A1 (en) Double-stranded oligonucleotide and composition for treating covid-19 containing same
WO2021125311A1 (ja) エクソンスキッピングを可能にするアンチセンス核酸
WO2023074748A1 (ja) 抗ウイルスアンチセンスオリゴヌクレオチド
US12263205B2 (en) Methods of improving anemias by combining agents
WO2022026648A1 (en) Inhibition of incexact1 to treat heart disease
WO2021193965A1 (ja) Ａｐｏｃ３を標的としたアンチセンス核酸
JP2025520199A (ja) 発現を調節するための薬剤
TW202346589A (zh) 抗病毒反義寡聚物
WO2023112931A1 (ja) ＡＴＮ１ ｍＲＮＡ又はｐｒｅ－ｍＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド
HK40084771A (en) Rnai agents for inhibiting expression of pnpla3, pharmaceutical compositions thereof, and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22828501

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2023530119

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2023/014417

Country of ref document: MX

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: NC2023/0016805

Country of ref document: CO

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 806217

Country of ref document: NZ

Ref document number: 2022298028

Country of ref document: AU

Ref document number: AU2022298028

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202317085164

Country of ref document: IN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 18570778

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3224782

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2301008311

Country of ref document: TH

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022298028

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20220623

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12023553494

Country of ref document: PH

Ref document number: 202280044513.5

Country of ref document: CN

Ref document number: 523451992

Country of ref document: SA

Ref document number: P6003326/2023

Country of ref document: AE

Ref document number: 309626

Country of ref document: IL

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202393546

Country of ref document: EA

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: NC2023/0016805

Country of ref document: CO

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112023027298

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20247000786

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020247000786

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2022828501

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022828501

Country of ref document: EP

Effective date: 20240123

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112023027298

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20231222

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 523451992

Country of ref document: SA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 523451992

Country of ref document: SA