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WO2022156788A1 - 苯并咪唑化合物及其用途 - Google Patents

苯并咪唑化合物及其用途 Download PDF

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WO2022156788A1
WO2022156788A1 PCT/CN2022/073320 CN2022073320W WO2022156788A1 WO 2022156788 A1 WO2022156788 A1 WO 2022156788A1 CN 2022073320 W CN2022073320 W CN 2022073320W WO 2022156788 A1 WO2022156788 A1 WO 2022156788A1
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substituted
alkyl
methyl
group
membered
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PCT/CN2022/073320
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English (en)
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张学军
臧杨
魏文军
吕剑波
杨成兵
李杨
张博
常少华
李莉娥
杨俊�
Original Assignee
武汉人福创新药物研发中心有限公司
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Publication date
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    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings

Definitions

  • the invention belongs to the field of medicinal chemistry, specifically, the invention relates to benzimidazole compounds, more specifically, the invention relates to a benzimidazole compound and a preparation method thereof, as well as its use in the preparation of medicines.
  • Interleukin-1 receptor-associated kinase 4 belongs to the IRAK family, and family members also include IRAK1, IRAK2, and IRAKM (I-RAK3).
  • the human IRAK-4 gene is located in the p11.12 region of the x chromosome, encoding a 52KDa protein.
  • IRAK4 protein contains a serine-threonine kinase domain (KD) and a conserved death domain (DD) at the N-terminus.
  • TLRs Toll-like receptor
  • IL-1Rs interleukin 1 receptor
  • TLRs are a family of transmembrane pattern recognition receptors that play a central role in innate immune signaling.
  • the IL-1Rs family can initiate immune responses in response to a variety of IL-1 cytokines.
  • myeloid differentiation factor 88 acts as an adaptor protein to bind to these receptors, and IRAK4 protein is subsequently recruited to TLRs/IL-1R complexes.
  • IRAK4 can bind to MyD88 and IRAK2 through a shared death domain to form a protein complex Myddosome, which activates the kinase activity of IRAK4, resulting in downstream phosphorylation of IRAK1 and/or IRAK2.
  • IRAK1 Phosphorylation of IRAK1 causes its own conformational change, which promotes its binding to tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6), thereby activating the serine-threonine kinase TAK1, activating downstream NF- ⁇ B, and initiating IL-1, IL-8, and The transcription and expression of pro-inflammatory factors such as IL-33 cause inflammatory responses.
  • TRAF6 tumor necrosis factor receptor-associated factor 6
  • IRAK4 knockout mouse models signaling and cellular responses to IL-1, IL-18, and most TLR ligands were severely impaired, confirming that IRAK4 is involved in IL-1R, IL-18R, and most TLR signaling pathways. important role in (Suzuki N, et al. Nature 2002, 416, 750-756.).
  • IRAK4 Due to the key role of IRAK4 in the cytokine signaling network, abnormally high expression or silencing of IRAK4 can induce abnormalities in the body's immune system. Among them, the abnormally high expression of IRAK4 will lead to excessive activation of the TRL/IL-1R pathway, resulting in the long-term secretion of high levels of pro-inflammatory factors in the body, causing persistent inflammatory responses, and ultimately inducing autoimmune diseases, including rheumatoid arthritis, silver Psoriasis, systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, etc.
  • TLR7 and TLR9 Can stimulate the production of IFN ⁇ in pDC cells, which is also considered a potential trigger of systemic lupus erythematosus (Chiang EY, et al.
  • IRAK4 has also been reported to play a key role in the occurrence and development of various malignancies, including melanoma, Waldenstrom macroglobulinemia (WM), chronic lymphocytic leukemia (CLL), acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), ABC diffuse large B-cell lymphoma (ABC-DLCBL).
  • WM Waldenstrom macroglobulinemia
  • CLL chronic lymphocytic leukemia
  • T-ALL acute lymphoblastic leukemia
  • ABC-DLCBL ABC diffuse large B-cell lymphoma
  • the up-regulation of the myddosome complex caused by the function-enhancing mutation of MyD88-L256P leads to the activation of NF- ⁇ B leading to the survival and proliferation of a series of tumor cell lines.
  • Immunohistochemical results of melanoma biopsies showed that phosphorylated IRAK4 was highly expressed in diseased tissues (Srivastava R, et al.
  • FLT3 Fms-like tyrosine kinase
  • the present invention aims to propose a new IRAK4 inhibitor, which can be used to prepare medicines for treating tumor-related diseases.
  • the present invention proposes a kind of compound, is compound shown in formula I, its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug:
  • L is absent or -O-(CH 2 ) m -, wherein m is 0, 1, 2 or 3;
  • Ring A is selected from a 5-8 membered heteroaryl group or a 6-10 membered aryl group, and in the 5-8 membered heteroaryl group, the heteroatom is selected from one or more of N, S, O and P, The number of heteroatoms is 1-3;
  • n 1 or 2;
  • R 2 is selected from halogen, hydroxy, cyano, amino, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkyl-O-, C 1 -C 6 alkyl substituted with 1-5 identical or different halogens , unsubstituted or R b substituted 5-8 membered heteroaryl, unsubstituted or R b substituted 6-10 membered aryl, unsubstituted or R b substituted 4-8 membered heterocycloalkyl, or , 4-8-membered heterocyclic alkenyl, unsubstituted or substituted by R b ; 5-8-membered heteroaryl substituted by R b , 6-10-membered aryl substituted by R b , substituted by R b
  • the substitutions each independently refer to one or more of the following
  • Ring A is a 5-8 membered heteroaryl group
  • R 1 is not an unsubstituted or R a substituted C 1 -C 6 alkyl group.
  • the C 1 -C 6 alkyl group is a C 1 -C 3 alkyl group, preferably are methyl, ethyl, n-propyl and isopropyl.
  • R 1 when R 1 is an unsubstituted or substituted 4-8-membered heterocycloalkyl group, the 4-8-membered heterocycloalkyl group is a nitrogen-containing heterocycloalkyl group, more Preferred are azetidine, azetidine, azetidine or morpholinyl.
  • R 1 when R 1 is an unsubstituted or substituted 4-8-membered heterocycloalkyl group, the 4-8-membered heterocycloalkyl group is an oxygen-containing heterocycloalkyl group, more Preferred are oxetane, oxolane or oxane.
  • R 1 is C 1 -C 6 alkyl substituted by Ra , or 4-8 membered heterocycloalkyl substituted by Ra , the number of substitutions 1-3 independently, preferably 1.
  • Ra is hydroxy
  • the halogen is F, Cl, Br, I, preferably F or Cl.
  • R a is a C 1 -C 6 alkyl group
  • the C 1 -C 6 alkyl group is a C 1 -C 3 alkyl group, preferably methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl.
  • Ring A when Ring A is selected from 5-8 membered heteroaryl, the 5-8 membered heteroaryl is pyrrole, pyrazole, triazole, furan, oxazole, thiophene, Thiazole, pyridine, pyrazine or pyrimidine, preferably oxazole or pyridine.
  • Ring A is a 6-10-membered aryl group
  • the 6-10-membered aryl group is phenyl or naphthyl, preferably phenyl.
  • the 5-8-membered heteroaryl group is pyrrole, pyrazole, triazole, furan, Oxazole, thiophene, thiazole, pyridine, pyrazine or pyrimidine, preferably pyrazole or pyridine.
  • R 2 when R 2 is an unsubstituted or substituted 6-10-membered aryl group, the 6-10-membered aryl group is phenyl or naphthyl, preferably benzene base.
  • the 4-8-membered heterocycloalkyl group is independently azetidine , oxetane, tetrahydropyrrolidinyl, tetrahydrofuranyl, hexahydropyran or tetrahydro-2H-thiopyran 1,1-dioxide, preferably azetidine or oxane Butane.
  • R 2 is a 4-8-membered heterocycloalkenyl unsubstituted or substituted by R b
  • the 4-8-membered heterocycloalkenyl is independently a dihydropyridyl, Tetrahydropyridyl, tetrahydropyrimidinyl, pyrrolinyl, imidazolinyl, pyrazolinyl, dihydroimidazolyl, dihydropyrazolyl, dihydrooxazolyl, dihydrooxadiazolyl, dihydrothiazole base, dihydroisothiazolyl, dihydrothienyl, dihydropyrrolyl, 3,4-dihydro-2H-pyranyl, dihydrofuranyl, dihydropyrazinyl, dihydropyrimidinyl, or fluorobis Hydrofuranyl, preferably 1,2,3,4-tetrahydropyridyl, 1,2-
  • R 2 is a 5-8-membered heteroaryl substituted by R b , a 6-10-membered aryl substituted by R b , a 4-8-membered heterocycle substituted by R b
  • the number of said substitutions is independently 1-3, preferably 1 or 2.
  • the halogen is F, Cl, Br, I, preferably F or Cl.
  • the C 1 -C 6 alkyl group is a C 1 -C 3 alkyl group, preferably methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl.
  • the C 1 -C 6 alkyl group is a C 1 -C 3 alkyl group , preferably methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl.
  • the halogen is F, Cl, Br, I, preferably F or Cl.
  • R 2 is C 1 -C 6 alkyl substituted with 1-5 identical or different halogens
  • the halogens are 1, 2 or 3.
  • the halogen is F, Cl, Br, I, preferably F or Cl.
  • the C 1 -C 6 alkyl group is a C 1 -C 3 alkyl group, preferably methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl.
  • R b is C 1 -C 6 alkyl substituted with 1-5 identical or different halogens
  • said C 1 -C 6 alkyl is C 1 -C 3 alkyl , preferably methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl.
  • R b is C 1 -C 6 alkyl substituted by 1-5 same or different halogens
  • the halogen is F, Cl, Br, I, preferably F or Cl.
  • R b is C 1 -C 6 alkyl substituted with 1-5 identical or different halogens
  • the halogens are 1, 2 or 3.
  • the compound represented by formula I its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug is:
  • L is absent or -O-(CH 2 ) m -, wherein m is 0, 1, 2 or 3;
  • n 1 or 2;
  • L is absent or -O-(CH 2 ) m -, and said m is 0, 1, 2 or 3;
  • R 1 is an unsubstituted or substituted 4-6-membered heterocycloalkyl group by Ra ; in the unsubstituted or substituted 4-6-membered heterocycloalkyl group by Ra , the substitutions independently refer to One or more hydroxyl substitutions; in the unsubstituted or 4-6 membered heterocycloalkyl substituted by R a , the heteroatom is selected from one or more of N, S, O and P, and the number of heteroatoms 1-3;
  • n 1 or 2;
  • R 2 is selected from 5- or 6-membered heteroaryl groups that are unsubstituted or substituted by R b , and in the 5- or 6-membered heteroaryl groups that are unsubstituted or substituted by R b , the substitutions each independently refer to a or multiple C 1 -C 3 alkyl groups; when n is not 1, R 2 is independently the same or different; in the unsubstituted or R b substituted 5- or 6-membered heteroaryl group, the heteroatom is selected from One or more of N, S, O and P, and the number of heteroatoms is 1-3.
  • the compound represented by formula I its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug is:
  • L is absent or -O-(CH 2 ) m -, wherein m is 0, 1, 2 or 3;
  • n 1 or 2;
  • R 2 is selected from halogen, hydroxy, cyano, amino, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkyl-O-, C 1 -C 6 alkyl substituted with 1-5 identical or different halogens , unsubstituted or R b substituted 5-8 membered heteroaryl, unsubstituted or R b substituted 6-10 membered aryl, unsubstituted or R b substituted 4-8 membered heterocycloalkyl, or , 4-8-membered heterocyclic alkenyl, unsubstituted or substituted by R b ; 5-8-membered heteroaryl substituted by R b , 6-10-membered aryl substituted by R b , substituted by R b
  • the substitutions each independently refer to one or more of the following
  • L is absent or -O-(CH 2 ) m -, and said m is 0, 1, 2 or 3;
  • R 1 is selected from unsubstituted or R a substituted C 1 -C 4 alkyl, among the C 1 -C 4 alkyl substituted by R a , the substitutions each independently refer to the following substituents One or more C 1 -C 3 alkyl groups or hydroxyl groups are substituted, and when there are multiple substituent groups, the substituent groups are the same or different;
  • n 1 or 2;
  • R 2 is selected from halogen, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with 1-5 identical or different halogens, and when n is not 1, R 2 is independently the same or different.
  • the compound represented by formula I its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug is:
  • L is absent or -O-(CH 2 ) m -, wherein m is 0, 1, 2 or 3;
  • n 1 or 2;
  • L is absent or -O-(CH 2 ) m -, and said m is 0, 1, 2 or 3;
  • R 1 is an unsubstituted or 4-6-membered heterocycloalkyl substituted by Ra , and in the 4-6-membered heterocycloalkyl substituted by Ra , the substitutions each independently refer to one or more A hydroxyl group is substituted, and when there are multiple substituents, the substituents are the same or different; in the unsubstituted or 4-6 membered heterocycloalkyl substituted by R a , the heteroatom is selected from N, S, One or more of O and P, the number of heteroatoms is 1-3;
  • n 1 or 2;
  • R 2 is selected from unsubstituted or R b substituted 5- or 6-membered heteroaryl, or, C 1 -C 3 alkyl substituted by 1-4 identical or different halogens; the R b substituted 5 Or in the 6-membered heteroaryl group, the substitutions independently refer to one or more C 1 -C 3 alkyl substitutions, and when n is not 1, R 2 is independently the same or different, and the unsubstituted Or in the 5- or 6-membered heteroaryl group substituted by R b , the heteroatom is selected from one or more of N, S, O and P, and the number of heteroatoms is 1-3.
  • ring A is a 5- or 6-membered heteroaryl group, and in the 5- or 6-membered heteroaryl group, the heteroatom is selected from one or more of N, O, S and P, The number of heteroatoms is 1-3;
  • R 2 is selected from 1-3 C 1 -C 3 alkyl groups substituted by the same or different halogens, or 5- or 6-membered heteroaryl substituted by Ra , said 5- or 6-membered heteroaryl substituted by Ra In the 5- or 6 - membered heteroaryl group, the heteroatoms are selected from N, O, S or P, and the number of heteroatoms is 1;
  • R 1 is selected from unsubstituted or substituted 5- or 6-membered heterocyclyl groups with R b , and among the 5- or 6-membered heterocyclyl groups substituted with R b , the substitutions are each independently Refers to one or more hydroxyl substitution, in the 5- or 6-membered heterocyclic group, the heteroatom is selected from one or more of N, O, S and P, and the number of heteroatoms is 1-3;
  • R 1 is selected from a 4- or 5-membered heterocyclic group, and in the 4- or 5-membered heterocyclic group, the heteroatom is selected from N, O, S and P One or more, the number of heteroatoms is 1-3.
  • the compound of formula I is selected from any of the following compounds :
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • the pharmaceutical composition comprises the above-mentioned compound shown in formula I, its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, A pharmaceutically acceptable salt or prodrug and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include a therapeutically effective dose of the above-mentioned compounds, their tautomers, stereoisomers, hydrates, solvates, and pharmaceutically acceptable salts
  • prodrugs and pharmaceutically acceptable pharmaceutical carriers, diluents or excipients are mixed to prepare pharmaceutical preparations suitable for oral or parenteral administration.
  • Methods of administration include, but are not limited to, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, intranasal, and oral routes.
  • the formulations may be administered by any route, such as by infusion or bolus injection, by route of absorption through the epithelium or mucocutaneous (eg, oral mucosa or rectum, etc.). Administration can be systemic or local.
  • formulations for oral administration include solid or liquid dosage forms, specifically, tablets, pills, granules, powders, capsules, syrups, emulsions, suspensions and the like.
  • the formulations can be prepared by methods known in the art and include carriers, diluents or excipients conventionally used in the art of pharmaceutical formulations.
  • the present invention proposes the above-mentioned compound represented by formula I, its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug or the above-mentioned drug Use of the composition in the preparation of a medicament for treating IRAK4-related diseases.
  • the above-mentioned compounds or their tautomers, stereoisomers, hydrates, solvates, pharmaceutically acceptable salts or prodrugs or the above-mentioned pharmaceutical compositions are used in the preparation and treatment of IRAK4-related diseases Use in a medicament useful in the treatment of autoimmune diseases and cancer.
  • autoimmune diseases include, for example, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, psoriasis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, rheumatoid arthritis, reactive arthritis, systemic juvenile idiopathic joints inflammation, Crohn's disease, ulcerative colitis, atopic dermatitis, and atopic eczema;
  • these cancers include, for example, brain cancer, kidney cancer, liver cancer, stomach cancer, vaginal cancer, ovarian cancer, gastric tumor, breast cancer, bladder colon cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lung cancer, cervical cancer, testicular cancer, skin cancer, bone cancer or thyroid cancer; sarcoma, glioblastoma, neuroblastoma, multiple myeloma, gastrointestinal, neck and Head tumor, adenoma, adenocarcinoma, keratoacanthoma, epidermoid carcinoma, large cell carcinoma, non-small cell lung cancer
  • the compound shown in formula I its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug, or pharmaceutical composition
  • IRAK4 kinase activity the compound shown in formula I, its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug, or pharmaceutical composition
  • pharmaceutical composition for inhibiting IRAK4 kinase activity
  • the compound shown in formula I is used to inhibit FLT3-WT, FLT3 -ITD or FLT3-D35Y kinase activity;
  • the compound shown in formula I, its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug, or pharmaceutical composition is used for inhibiting tumor cell proliferation, more
  • the tumor cells are selected from human B-cell lymphoma cells.
  • the present invention provides a method for treating IRAK4-related diseases.
  • the method comprises: administering to a subject the above-mentioned compound represented by formula I, its tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable A salt or prodrug, or a pharmaceutical composition of the above.
  • the IRAK4-related diseases are autoimmune diseases and cancer.
  • the autoimmune disease is multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, psoriasis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, rheumatoid arthritis, reactive arthritis , systemic juvenile idiopathic arthritis, Crohn's disease, ulcerative colitis, atopic dermatitis and atopic eczema.
  • the cancer is brain cancer, kidney cancer, liver cancer, stomach cancer, vaginal cancer, ovarian cancer, gastric cancer, breast cancer, bladder and colon cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lung cancer, cervical cancer, testicular cancer Cancer, skin cancer, bone cancer, or thyroid cancer; sarcoma, glioblastoma, neuroblastoma, multiple myeloma, gastrointestinal cancer, neck and head tumors, adenoma, adenocarcinoma, keratoacanthoma , epidermoid carcinoma, large cell carcinoma, non-small cell lung cancer, Hodgkin and non-Hodgkin lymphoma, breast cancer, follicular carcinoma, papillary carcinoma, seminoma, melanoma; acute myeloid leukemia, Chronic myeloid leukemia, diffuse large B-cell lymphoma, activated B-cell-like diffuse large B-cell lymphoma, chronic lymphocytic leukemia, chronic lympho
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms that, within the scope of sound medical judgment, are suitable for use in contact with human and animal tissue without more toxicity, irritation, allergic reactions or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salts refers to pharmaceutically acceptable salts of non-toxic acids or bases, including salts of inorganic acids and bases, organic acids and bases.
  • salts are also contemplated by the present invention. They may serve as intermediates in the purification of compounds or in the preparation of other pharmaceutically acceptable salts or may be used in the identification, characterization or purification of the compounds of the present invention.
  • composition means a mixture of one or more compounds described herein, or a physiologically/pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, and other chemical components, such as a physiologically/pharmaceutically acceptable carrier and excipients.
  • the purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate the administration of a compound to an organism.
  • excipient refers to a pharmaceutically acceptable inert ingredient.
  • classes of the term “excipient” include, without limitation, binders, disintegrants, lubricants, glidants, stabilizers, fillers, diluents, and the like. Excipients can enhance the handling characteristics of a pharmaceutical formulation, ie make the formulation more suitable for direct compression by increasing flowability and/or stickiness.
  • prodrug refers to a compound of the invention that can be converted under physiological conditions or by solvolysis to a biologically active compound.
  • the prodrugs of the present invention are prepared by modifying functional groups in the compounds, which modifications can be removed by conventional procedures or in vivo to yield the parent compounds.
  • Prodrugs include compounds formed by connecting a hydroxyl or amino group in the compounds of the present invention to any group. When the prodrugs of the compounds of the present invention are administered to mammalian individuals, the prodrugs are cleaved to form free hydroxyl, free the amino group.
  • stereoisomer refers to isomers resulting from different arrangements of atoms in a molecule in space, and includes cis-trans isomers, enantiomers, diastereomers and conformers.
  • the compounds of the present invention may exist as one of the possible isomers or as a mixture thereof, for example, as pure optical isomers, or as mixtures of isomers, such as racemic and non-isomeric isomers.
  • the prefixes D and L or R and S are used to denote the absolute configuration of the molecule with respect to the chiral center (or centers) in the molecule.
  • the prefixes D and L or (+) and (–) are symbols used to designate the rotation of plane polarized light by the compound, where (–) or L indicates that the compound is levorotatory.
  • the compounds described herein contain olefinic double bonds, unless otherwise specified, such double bonds include both E and Z geometric isomers. If the compound contains a disubstituted cycloalkyl group, the cycloalkyl group may be in the cis- or trans- (cis- or trans-) configuration.
  • Optically active (R)- or (S)-isomers can be prepared using chiral synthons or chiral preparations, or resolved using conventional techniques.
  • Compounds of the present invention containing asymmetrically substituted carbon atoms can be isolated in optically active or racemic forms. Resolution of racemic mixtures of compounds can be carried out by any of a number of methods known in the art. Exemplary methods include fractional recrystallization using chiral resolving acids, which are optically active salt-forming organic acids.
  • Suitable resolving agents for the fractional recrystallization process are, for example, optically active acids such as tartaric acid, diacetyltartaric acid, dibenzoyltartaric acid, mandelic acid, malic acid, lactic acid or various optically active camphorsulfonic acids such as ⁇ - D and L forms of camphorsulfonic acid.
  • optically active acids such as tartaric acid, diacetyltartaric acid, dibenzoyltartaric acid, mandelic acid, malic acid, lactic acid or various optically active camphorsulfonic acids such as ⁇ - D and L forms of camphorsulfonic acid.
  • resolving agents suitable for fractional crystallization methods include ⁇ -methyl-benzylamine in stereoisomerically pure form (eg, S and R forms or diastereomerically pure form), 2-phenylglycinol, Norephedrine, ephedrine, N-methylephedrine, cyclohexylethylamine, 1,2-diaminocyclohexane, etc.
  • Resolution of racemic mixtures can also be performed by elution on a chromatographic column packed with an optically active resolving agent (eg, dinitrobenzoylphenylglycine). It can be carried out by high performance liquid chromatography (HPLC) or supercritical fluid chromatography (SFC).
  • tautomer refers to an isomer of a functional group resulting from the rapid movement of an atom in two positions in a molecule.
  • the compounds of the present invention may exhibit tautomerism.
  • Tautomeric compounds can exist as two or more interconvertible species.
  • Proton tautomers arise from the migration of covalently bonded hydrogen atoms between two atoms.
  • Tautomers generally exist in equilibrium, and attempts to separate individual tautomers usually result in a mixture whose physicochemical properties are consistent with a mixture of compounds. The position of equilibrium depends on the chemical properties within the molecule.
  • the ketone form predominates; in phenols, the enol form predominates.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms of the compounds.
  • the compounds of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes at one or more of the atoms that constitute the compound.
  • compounds can be labeled with radioisotopes, such as deuterium ( 2 H), tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or C-14 ( 14 C). All transformations of the isotopic composition of the compounds of the present invention, whether radioactive or not, are included within the scope of the present invention.
  • an "effective amount” or “therapeutically effective amount” with respect to a drug or pharmacologically active agent refers to a nontoxic but sufficient amount of the drug or agent to achieve the desired effect.
  • an "effective amount” of one active substance in a composition refers to the amount required to achieve the desired effect when used in combination with another active substance in the composition.
  • the determination of the effective amount varies from person to person, depends on the age and general condition of the recipient, and also depends on the specific active substance, and the appropriate effective amount in individual cases can be determined by those skilled in the art based on routine experiments.
  • active ingredient refers to a chemical entity that is effective in treating the target disorder, disease or condition.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a specified atom are replaced by a substituent, including deuterium and hydrogen variants, as long as the valence of the specified atom is normal and the substituted compound is stable .
  • Ketone substitution does not occur on aromatic groups.
  • optionally substituted means that it may or may not be substituted, and unless otherwise specified, the type and number of substituents may be arbitrary on a chemically achievable basis.
  • C 1 -C 6 alkyl is understood to mean a straight-chain or branched saturated monovalent hydrocarbon radical having 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • the alkyl group is, for example, methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, isopropyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl, 2-methylbutyl, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, neopentyl, 1,1-dimethylpropyl, 4-methylpentyl, 3-methylpentyl , 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 2-ethylbutyl, 1-ethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbut
  • C 1 -C 6 alkyl-O- is to be understood as an alkyl group attached to the rest of the molecule through an oxygen atom, wherein "C 1 -C 6 alkyl” has the above definition. Such as methyl-O-, ethyl-O-.
  • 6-10 membered aryl is to be understood as a monovalent aromatic or partially aromatic monocyclic, bicyclic or tricyclic hydrocarbon ring having 6-10 carbon atoms, especially a ring having 6 carbon atoms (" C 6 aryl"), such as phenyl; when the 6-10 membered aryl is substituted, it may be mono- or poly-substituted. Also, the substitution site is not limited, for example, it may be ortho-, para- or meta-substitution.
  • 5-8 membered heteroaryl is to be understood as a monovalent radical having 5-8 ring atoms, especially 5 or 6 carbon atoms, and comprising 1-5 heteroatoms independently selected from N, O and S Monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic ring groups. Monovalent monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic ring groups of 1 to 3 heteroatoms independently selected from N, O and S are preferred and, in addition, may be benzofused in each case.
  • heteroaryl is selected from thienyl, furyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, triazolyl, thiazolyl oxadiazolyl, etc.; or pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, triazinyl, etc.; group, carbazolyl group, acridine group, phenazinyl group, phenothiazinyl group, phenoxazinyl group and the like.
  • 4-8 membered heterocyclyl or “4-8 membered heterocycloalkyl” is understood to mean a saturated, unsaturated or partially saturated monocyclic, bicyclic or tricyclic ring having 4 to 8 atoms, wherein 1, 2, 3, 4 or 5 ring atoms are selected from N, O and S, which may be attached through carbon or nitrogen unless otherwise specified, wherein the -CH2- group is optionally replaced by -C(O)- and wherein, unless otherwise stated to the contrary, a ring nitrogen atom or a ring sulfur atom is optionally oxidized to form an N-oxide or S-oxide or a ring nitrogen atom is optionally quaternized; wherein -NH in the ring is optionally substituted with acetyl, formyl, methyl or methanesulfonyl; and the ring is optionally substituted with one or more halogens.
  • heterocyclyl group is bicyclic or tricyclic, at least one ring may optionally be a heteroaromatic ring or an aromatic ring, provided that at least one ring is non-heteroaromatic. If the heterocyclyl group is monocyclic, it must not be aromatic.
  • heterocyclyl groups include, but are not limited to, piperidinyl, N-acetylpiperidinyl, N-methylpiperidinyl, N-formylpiperazinyl, N-methanesulfonylpiperazinyl, homopiperazinyl , piperazinyl, azetidinyl, oxetanyl, morpholinyl, tetrahydroisoquinolinyl, tetrahydroquinolinyl, indoline, tetrahydropyranyl, dihydro -2H-pyranyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothiopyranyl, tetrahydrothiopyran-1-oxide, tetrahydrothiopyran-1,1-dioxide, 1H-pyridin-2-one and 2,5 -Dioximidazolidinyl.
  • halo or halogen is fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • the description method "...independently” used in the present invention should be understood in a broad sense, meaning that the described individuals are independent of each other and may be independent of each other. are the same or different specific groups.
  • the description mode "...independently” can either mean that in different groups, the specific options expressed in the same match do not affect each other, or it can mean that in the same group, the same symbols are used together. The specific options expressed between them do not affect each other.
  • the present invention provides an IRAK4 inhibitor with novel structure, excellent pharmacokinetic properties, and good efficacy or druggability, which can be used to effectively treat IRAK4-related diseases and disorders.
  • mice, rats and dogs show that the compounds of the present invention exhibit excellent pharmacokinetic properties, large exposure and good druggability.
  • the compounds of the present invention all have a good inhibitory effect on IRAK4 kinase, especially compounds I-1, I-2, I-3, I-4, I-5 and I-6, which have a significant inhibitory effect on IRAK4 kinase; secondly, this
  • the compounds of the present invention all have good inhibitory activity on the production of TNF- ⁇ , especially the compounds I-1, I-2, and I-3 have significant inhibitory activity on the production of TNF- ⁇ ; in addition, the compounds of the present invention all have a good inhibitory activity on the production of IL-6 It has a good inhibitory effect, indicating that the compound of the present invention has a good anti-inflammatory effect.
  • the compounds of the present invention all show strong inhibitory activity on the proliferation of OCI-LY10 cells, especially compounds I-2 and I-5 have significant inhibitory activities on the proliferation of OCI-LY10 cells; in addition, compounds I-1 and I-2 It also has a significant inhibitory effect on the wild type, ITD mutant type and D835Y mutant type of FLT3 kinase, indicating that the compound of the present invention has a good anti-tumor effect.
  • the structures of the compounds of the present invention are determined by nuclear magnetic resonance (NMR) and/or mass spectrometry (MS).
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectrometry
  • the units of NMR shifts are 10-6 (ppm).
  • the solvents for NMR measurement are deuterated dimethyl sulfoxide, deuterated chloroform, deuterated methanol, etc., and the internal standard is tetramethylsilane (TMS).
  • M molar concentration, such as 1M hydrochloric acid means 1mol/L hydrochloric acid solution
  • N equivalent concentration, for example, 2N hydrochloric acid means 2mol/L hydrochloric acid solution
  • DIPEA can also be written as DIEA, diisopropylethylamine, that is, N,N-diisopropylethylamine
  • HATU O-(7-azabenzotriazole-1-yl)-N,N,N,N,-tetramethylurea hexafluorophosphonium salt
  • PPTS 4-Methylbenzenesulfonic acid pyridinium salt
  • Ruphos-G3 Methanesulfonic acid (2-dicyclohexylphosphino-2',6'-diisopropoxy-1,1'-biphenyl)(2-amino-1,1'-biphenyl- 2-yl)palladium(II)
  • IC 50 the half inhibitory concentration, which refers to the concentration at which half of the maximum inhibitory effect is achieved.
  • the synthetic route of target intermediate A is as follows:
  • the first step Synthesis of 2-(2-methylpyridin-4-yl)oxazole-4-carboxylic acid ethyl ester (A-3)
  • the 4-chloro-N-methyl-2-nitroaniline crude product obtained in the first step zinc powder (27.0g, 0.415mol), ammonium chloride (36.0g, 0.679mol) were dissolved in 150ml of ethanol, raised to 50 °C reaction 2h. After the completion of the reaction was detected by TLC, filtered, the solution was concentrated under reduced pressure to remove ethanol, the obtained residue was diluted with water (200 mL), extracted three times with DCM (100 mL ⁇ 3), the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The product was purified by column chromatography to obtain the target compound 4-chloro-N 1 -methylbenzene-1,2-diamine (21.0 g, 94.3% yield for two steps).
  • the synthetic route of target product I-2 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (2B)
  • the raw material 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (10.5g, 45.4mmol) was added to 100ml of THF, 100ml of ethanol and 50ml of water were added, iron powder (10.5g, 187.5mmol) was added, chlorine Ammonium chloride (10.5 g, 196.2 mmol) was heated to 90 °C and stirred for 3 h.
  • the fifth step the synthesis of methyl 3-(5-bromo-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (2F)
  • the starting material methyl 3-(5-bromo-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (2.0 g, 5.8 mmol), was added to 30 ml of dioxygen at room temperature.
  • Xantphos 1.0 g, 1.7 mmol
  • Pd 2 (dba) 3 1.1 g, 1.2 mmol
  • cesium carbonate 3.8 g, 11.7 mmol
  • (R)-pyrrolidine- 3-ol 1.0 g, 11.7 mmol
  • the starting material (R)-3-(5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propionic acid was prepared at room temperature Methyl ester (330 mg, 0.95 mmol) was added to 3 ml of THF, 3 ml of water and 3 ml of ethanol, iron powder (213 mg, 3.8 mmol), ammonium chloride (254 mg, 4.7 mmol) were added, heated at 70°C, and stirred for 3 h.
  • the starting material (R)-methyl 3-(6-amino-5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate was prepared at room temperature Ester (1.25g, 3.9mmol) was added to 15ml DMF and 5ml DCM, HATU (2.24g, 5.9mmol) and DIPEA (6.5ml, 39.3mmol) were added, 2-(2-methylpyridin-4-yl) was added Oxazole-4-carboxylic acid (963 mg, 4.7 mmol), stirred at room temperature for 16 h.
  • the starting material (R)-3-(5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-6-(2-(2-methylpyridin-4-yl)oxazole-4 was prepared at room temperature -formamide)-1H-benzo[d]indol-2-yl)propionic acid methyl ester (1.1 g, 2.2 mmol) was added to 50 ml of dry THF, cooled to 0 °C, and lanthanum(III) chloride was added (Lithium chloride) complex solution (0.6mol/L, 35ml) and methylmagnesium bromide (1.0mol/L, 22ml) were stirred at room temperature for 16h.
  • Mobile phase A is a 1 ⁇ pure trifluoroacetic acid aqueous solution
  • mobile phase B It is an acetonitrile solution.
  • the synthetic route of the target compound I-3 is as follows:
  • the raw material 4-methoxy-N-methyl-2-nitroaniline (2g, 11.0mmol) was added to 100ml of THF, 100ml of ethanol and 50ml of water were added, and iron powder (2.5g, 44.6mmol) was added, Ammonium chloride (2.5 g, 46.7 mmol) was heated to 90 °C and stirred for 2 h.
  • Step 7 Synthesis of methyl 3-(5-hydroxy-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (3H)
  • the starting material was methyl 3-(6-amino-1-methyl-5-(epoxypropan-3-ylmethoxy)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (130 mg) at room temperature , 0.40 mmol) was added to 10 ml of DCM, HATU (187 mg, 0.49 mmol) and DIPEA (72 mg, 0.56 mmol) were added, 2-(2-methylpyridin-4-yl)oxazole-4-carboxylic acid (84 mg, 0.41 mmol) and stirred at room temperature for 16 h.
  • Step 11 N-(2-(3-Hydroxy-3-methylbutyl)-1-methyl-5-(epoxypropan-3-ylmethoxy)-1H-benzo[d] Synthesis of Imidazol-6-yl)-2-(2-methylpyridin-4-yl)oxazole-4-carboxamide (I-3)
  • the synthetic route of target product I-5 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (5B)
  • the second step the synthesis of 4-bromo-N 1 -methylbenzene-1,2-diamine (5C)
  • the raw material 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (10.5g, 45.4mmol) was added to 100ml of THF, 100ml of ethanol and 50ml of water were added, iron powder (10.5g, 187.5mmol) was added, chlorine Ammonium chloride (10.5 g, 196.2 mmol) was heated to 90 °C and stirred for 3 h.
  • the third step Synthesis of 4-((2-amino-4-bromophenyl)(methyl)amine)-4-oxobutyric acid methyl ester (5D)
  • the fifth step synthesis of methyl 3-(5-bromo-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (5F)
  • the starting material methyl 3-(5-bromo-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (2.0 g, 5.8 mmol), was added to 30 ml of dioxygen at room temperature.
  • Xantphos 1.0 g, 1.7 mmol
  • Pd 2 (dba) 3 1.1 g, 1.2 mmol
  • cesium carbonate 3.8 g, 11.7 mmol
  • (R)-pyrrolidine- 3-ol 1.0 g, 11.7 mmol
  • the starting material (R)-3-(5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propionic acid was prepared at room temperature Methyl ester (330 mg, 0.95 mmol) was added to 3 ml of THF, 3 ml of water and 3 ml of ethanol, iron powder (213 mg, 3.8 mmol), ammonium chloride (254 mg, 4.7 mmol) were added, heated at 70°C, and stirred for 3 h.
  • the starting material (R)-methyl 3-(6-amino-5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate was prepared at room temperature
  • the ester 110mg, 0.35mmol
  • HATU 200mg, 0.53mmol
  • DIPEA 135mg, 1.05mmol
  • 6-(trifluoromethyl)pyridine acid 66mg, 0.35mmol
  • the starting material (R)-3-(5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-6-(trifluoromethyl)pyridinamide)-1H-benzo[d]indone was prepared at room temperature Methyl dol-2-yl)propionate (100mg, 0.20mmol) was added to 4ml of dry THF, cooled to 0°C, added with lithium chloride (129mg, 3.0mmol) and methylmagnesium bromide (1.0mol/L, 2.1ml), stirred at room temperature for 16h.
  • the synthetic route of the target compound I-6 is as follows:
  • the raw material 4-methoxy-N-methyl-2-nitroaniline (2g, 11.0mmol) was added to 100ml of THF, 100ml of ethanol and 50ml of water were added, and iron powder (2.5g, 44.6mmol) was added, Ammonium chloride (2.5 g, 46.7 mmol) was heated to 90 °C and stirred for 2 h.
  • the third step the synthesis of 4-((2-amino-4-methoxyphenyl)(methyl)amine)-4-oxobutyric acid methyl ester (6D)
  • the fifth step synthesis of methyl 3-(5-methoxy-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (6F)
  • Step 7 Synthesis of methyl 3-(5-hydroxy-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (6H)
  • Step 10 3-(1-Methyl-5-(epoxypropan-3-ylmethoxy)-6-(6-(trifluoromethyl)pyridineamide)-1H-benzo[d]imidazole Synthesis of -2-yl) Methyl Propionate (6K)
  • the starting material was methyl 3-(6-amino-1-methyl-5-(epoxypropan-3-ylmethoxy)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (130 mg) at room temperature , 0.40 mmol) was added to 10 ml of DCM, HATU (169 mg, 0.44 mmol) and DIPEA (72 mg, 0.56 mmol) were added, 6-(1-methyl-1H-pyrrol-3-yl)pyridine acid (78 mg, 0.41 mmol) was added mmol) and stirred at room temperature for 16 h.
  • the starting material 3-(1-methyl-5-(epoxypropan-3-ylmethoxy)-6-(6-(trifluoromethyl)pyridineamide)-1H-benzo[d]imidazole was prepared at room temperature -2-yl) methyl propionate (120 mg, 0.24 mmol) was added to 5 ml of dry THF, cooled to 0 °C, and lanthanum(III) chloride bis(lithium chloride) complex solution (0.6 mol/L, 4.0ml) and methylmagnesium bromide (1.0mol/L, 2.4ml), stirred at room temperature for 24h.
  • the synthetic route of the target product I-7 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (7B)
  • the raw material 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (10.5g, 45.4mmol) was added to 100ml of THF, 100ml of ethanol and 50ml of water were added, iron powder (10.5g, 187.5mmol) was added, chlorine Ammonium chloride (10.5 g, 196.2 mmol) was heated to 90 °C and stirred for 3 h.
  • the third step the synthesis of 4-((2-amino-4-bromophenyl)(methyl)amine)-4-oxobutyric acid methyl ester (7D)
  • the starting material methyl 3-(5-bromo-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (2.0 g, 5.8 mmol), was added to 30 ml of dioxygen at room temperature.
  • Xantphos 1.0g, 1.7mmol
  • Pd2(dba)3 1.1g, 1.2mmol
  • cesium carbonate 3.8g, 11.7mmol
  • (R)-pyrrolidine-3 was added -alcohol (1.0 g, 11.7 mmol), heated to 100 °C and stirred for 16 h.
  • the starting material (R)-3-(5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propionic acid was prepared at room temperature Methyl ester (330 mg, 0.95 mmol) was added to 3 ml of THF, 3 ml of water and 3 ml of ethanol, iron powder (213 mg, 3.8 mmol), ammonium chloride (254 mg, 4.7 mmol) were added, heated at 70°C, and stirred for 3 h.
  • the starting material (R)-methyl 3-(6-amino-5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate was prepared at room temperature
  • the ester 100 mg, 0.31 mmol
  • HATU 180 mg, 0.47 mmol
  • DIPEA 122 mg, 0.95 mmol
  • 6-(1-methyl-1H-pyrrol-3-yl)pyridine acid 64 mg, 0.31 mmol
  • the starting material (R)-3-(5-(3-hydroxypyrrolidin-1-yl)-1-methyl-6-(6-(1-methyl-1H-pyrazol-3-yl) was prepared at room temperature Methyl pyridineamide)-1H-benzo[d]indol-2-yl)propanoate (65mg, 0.13mmol) was added to 5ml of dry THF, cooled to 0°C, and lithium chloride (110mg, 2.6mmol) was added and methylmagnesium bromide (1.0mol/L, 2.6ml), stirred at room temperature for 48h.
  • the synthetic route of the target compound I-8 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (8B)
  • the raw material 4-bromo-N-methyl-2-nitroaniline (10.5g, 45.4mmol) was added to 100ml of THF, 100ml of ethanol and 50ml of water were added, iron powder (10.5g, 187.5mmol) was added, chlorine Ammonium chloride (10.5 g, 196.2 mmol) was heated to 90 °C and stirred for 3 h.
  • the third step the synthesis of 4-((2-amino-4-bromophenyl) (methyl) amino)-4-oxobutyric acid methyl ester (8D)
  • the seventh step synthesis of methyl 3-(6-amino-1-methyl-5-morpholine-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate (8H)
  • Mobile phase A 1 ⁇ of the trifluoroacetic acid pure aqueous solution
  • Mobile phase B is acetonitrile solution.
  • Gradient conditions 0 ⁇ 3 minutes, mobile phase A keeps 90%, 3 ⁇ 18 minutes gradient elution, from 90% to 5%, 18 ⁇ 22 minutes keep 5%) to get white solid N-(2-(3-Hydroxy-3-methylbutyl)-1-methyl-5-morpholine-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-6-(1-methyl- 1H-pyrazol-3-yl)pyridineamide (1-8) (25 mg, 19.2% yield).
  • the synthetic route of the target product I-9 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-(methylamino)-3-nitrobenzoic acid methyl ester (9B)
  • the raw material methyl 3-amino-4-(methylamino)benzoate (18.0 g, 100 mmol) was added to 500 ml of DCM, cooled to 0 °C, and methyl 4-chloro-4-oxobutyric acid was added ( 18.0 g, 120 mmol), add triethylamine (30.0 g, 300 mmol), and stir at room temperature for 16 h.
  • the fifth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (9F)
  • the sixth step the synthesis of 6-amino-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (9G)
  • the starting material 6-amino-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (1.8 g, 6.2 mmol) was prepared at room temperature ) was added to 50 ml of DCM, triethylamine (1.9 g, 18.6 mmol) was added, 2-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzoyl chloride (2.1 g, 10.0 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 16 h.
  • Step 8 2-Fluoro-N-(2-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d Synthesis of ]imidazol-6-yl)-3-(trifluoromethyl)benzamide (I-9)
  • the synthetic route of the target compound I-10 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-(methylamino)-3-nitrobenzoic acid methyl ester (10B)
  • the third step the synthesis of methyl 3-amino-4-(4-methoxy-N-methyl-4-oxobutanamide) benzoate (10D)
  • the raw material methyl 3-amino-4-(methylamino)benzoate (18.0 g, 100 mmol) was added to 500 ml of DCM, cooled to 0 °C, and methyl 4-chloro-4-oxobutanoate (18.0 g, 120 mmol), added triethylamine (30.0 g, 300 mmol), and stirred at room temperature for 16 h.
  • the fourth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (10E)
  • the fifth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (10F)
  • the sixth step the synthesis of 6-amino-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (10G)
  • the seventh step the synthesis of 2-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzoyl chloride (10H)
  • the starting material 6-amino-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (1.8 g, 6.2 mmol) was prepared at room temperature ) was added to 50 ml of DCM, triethylamine (1.9 g, 18.6 mmol) was added, 2-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzoyl chloride (2.1 g, 10.0 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 16 h.
  • Step 9 N-(2-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-6 -Synthesis of -2-methyl-3-(trifluoromethyl)benzamide (I-10)
  • the synthetic route of the target compound I-11 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-(methylamino)-3-nitrobenzoic acid methyl ester (11B)
  • the raw material methyl 3-amino-4-(methylamino)benzoate (18.0 g, 100 mmol) was added to 500 ml of DCM, cooled to 0 °C, and methyl 4-chloro-4-oxobutanoate (18.0 g, 120 mmol), added triethylamine (30.0 g, 300 mmol), and stirred at room temperature for 16 h.
  • the fourth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (11E)
  • Step 5 Synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (11F)
  • the sixth step the synthesis of 6-amino-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (11G)
  • Step 7 4-(6-Amino-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2-methylbutane- Synthesis of 2-ol (11H)
  • Step 8 2-Fluoro-N-(2-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d Synthesis of ]imidazol-6-yl)-3-methylbenzamide (I-11)
  • the synthetic route of the target compound I-12 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-(methylamino)-3-nitrobenzoic acid methyl ester (12B)
  • the raw material methyl 3-amino-4-(methylamino)benzoate (18.0 g, 100 mmol) was added to 500 ml of DCM, cooled to 0 °C, and methyl 4-chloro-4-oxobutyric acid was added ( 18.0 g, 120 mmol), add triethylamine (30.0 g, 300 mmol), and stir at room temperature for 16 h.
  • the fourth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (12E)
  • the fifth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (12F)
  • the sixth step the synthesis of 6-amino-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (12G)
  • Step 7 4-(6-Amino-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2-methylbutane- Synthesis of 2-ol (12H)
  • the starting material 6-(2-fluorobenzamide)-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl The ester (300mg, 1.0mmol) was added to 3ml of dry THF, cooled to 0°C, lanthanum(III) chloride bis(lithium chloride) complex solution (0.6mol/L, 1.7ml) and methyl bromide were added Magnesium (1.0mol/L, 10.3ml), stirred at room temperature for 16h.
  • the starting material 4-(6-amino-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]indol-2-yl)-2-methylbutane was prepared at room temperature -2-ol (80 mg, 0.27 mmol) was added to 1 ml DMF, DIPEA (70.9 mg, 0.55 mmol), HATU (156.7 mg, 0.41 mmol), 2-fluoro-3-chlorobenzoic acid (71.9 mg, 0.41 mmol) were added mmol) and stirred at room temperature for 16 h.
  • the synthetic route of the target compound I-13 is as follows:
  • the first step the synthesis of 4-(methylamino)-3-nitrobenzoic acid methyl ester (13B)
  • the raw material methyl 3-amino-4-(methylamino)benzoate (18.0 g, 100 mmol) was added to 500 ml of DCM, cooled to 0 °C, and methyl 4-chloro-4-oxobutyric acid was added ( 18.0 g, 120 mmol), add triethylamine (30.0 g, 300 mmol), and stir at room temperature for 16 h.
  • the fourth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]indole-5-carboxylic acid methyl ester (13E)
  • the fifth step the synthesis of 2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-6-nitro-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (13F)
  • the sixth step the synthesis of 6-amino-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid methyl ester (13G)
  • Step 7 4-(6-Amino-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2-methylbutane- Synthesis of 2-ol (13H)
  • the starting material 6-(2-fluorobenzamide)-2-(3-methoxy-3-oxopropyl)-1-methyl-1H-benzo[d]indole-5-carboxylic acid was prepared at room temperature Methyl ester (300mg, 1.0mmol) was added to 3ml of dry THF, cooled to 0°C, lanthanum(III) chloride bis(lithium chloride) complex solution (0.6mol/L, 1.7ml) and methyl bromide were added Magnesium (1.0mol/L, 10.3ml), stirred at room temperature for 16h.
  • the starting material 4-(6-amino-5-(2-hydroxypropan-2-yl)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2-methylbutane- 2-ol (150mg, 0.52mmol) was added to 5ml DMF, DIPEA (134mg, 1.0mmol), HATU (296mg, 0.78mmol), 3-(difluoromethyl)-2-methylbenzoic acid (144mg) were added , 0.77mmol), stirred at room temperature for 16h.
  • the synthetic route of the target compound I-14 is as follows:
  • the raw material 4-methoxy-N-methyl-2-nitroaniline (2g, 11.0mmol) was added to 100ml of THF, 100ml of ethanol and 50ml of water were added, and iron powder (2.5g, 44.6mmol) was added, Ammonium chloride (2.5 g, 46.7 mmol) was heated to 90 °C and stirred for 2 h.
  • the third step the synthesis of 4-((2-amino-4-methoxyphenyl)(methyl)amine)-4-oxobutyric acid methyl ester (14D)
  • methyl 3-(6-amino-5-methoxy-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)propanoate 300 mg, 1.14 mmol was added to 5 ml of DMF at room temperature , added HATU (650 mg, 1.7 mmol) and DIPEA (294 mg, 2.28 mmol), added 2-fluoro-3-(trifluoromethyl)benzoic acid (237 mg, 1.14 mmol), and stirred at room temperature for 16 h.
  • Step 8 2-Fluoro-N-(2-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-5-methoxy-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl) -Synthesis of 3-(trifluoromethyl)benzamide (I-14)
  • Mobile phase A 1 ⁇ of the trifluoroacetic acid pure aqueous solution
  • Mobile phase B is acetonitrile solution.
  • Gradient conditions 0 ⁇ 3 minutes, mobile phase A keeps 90%, 3 ⁇ 18 minutes gradient elution, from 90% to 5%, 18 ⁇ 22 minutes to keep 5%), white is prepared Solid 2-fluoro-N-(2-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-5-methoxy-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-3- (Trifluoromethyl)benzamide (I-14) (51 mg, 28.3% yield).
  • Test A Anti-inflammatory activity test
  • Test Example A-1 Inhibitory activity of compound against IRAK4 kinase
  • the compounds to be tested were dissolved in DMSO and prepared as 10 mM stock solutions, followed by 1 ⁇ kinase base buffer (50 mM HEPES, pH 7.5; 0.0015% Brij-35) and stop buffer (100 mM HEPES, pH 7.5; 0.015%) Brij-35, 0.2% Coating Reagent #3, 50 mM EDTA) for later use.
  • the compound stock solution was diluted with DMSO to 50 times the highest point of the concentration gradient, 100 ⁇ L of this dilution was transferred to the wells of a 96-well plate, and then serially diluted 4 times until 10 concentration gradients were reached.
  • IRAK4 kinase (Carna) was added to 1 ⁇ kinase base buffer to prepare 2.5 ⁇ enzyme solution, and FAM-labeled polypeptide and ATP were added to 1 ⁇ kinase base buffer to prepare 2.5 ⁇ polypeptide solution.
  • Pipette 2.5 ⁇ enzyme solution into a 384-well plate containing 5 ⁇ L of compound, 10 ⁇ L per well, and incubate at room temperature for 10 min. Pipette 2.5 ⁇ polypeptide solution into a 384-well test plate, 10 ⁇ L per well, and incubate at 28°C for one hour. After the incubation, 30 ⁇ L of stop buffer was added to each well to stop the reaction, and then the data was transferred to the Caliper instrument to collect the data of each well, and the IC50 value of each compound was calculated after fitting the curve.
  • test results show that the compounds of the present invention all have a good inhibitory effect on IRAK4 kinase, especially compounds I-1, I-2, I-3, I-4, I-5 and I-6 have significant inhibitory effect on IRAK4 kinase , indicating that the compounds of the present invention have the potential to resist inflammatory reactions.
  • Test Example A-2 Inhibitory activity of compounds on R848-stimulated PBMC production of TNF- ⁇
  • cryopreserved PBMC cells were thawed, centrifuged at 200 rpm for 5 min to take the supernatant, resuspended in 1640+10% FBS+1% P/S complete medium and counted. At a density of 8 ⁇ 104/well, 100 ⁇ l/well of cells were seeded into a 96-well plate for overnight growth.
  • the prepared R848 was added to the cells at 50 ⁇ l/well, and a control well without R848 was set at the same time. After the cells were incubated for 24 h, the supernatant was collected, and 50% of the supernatant was taken respectively and detected with Human TNF- ⁇ kit (Invitrogen, LOT: 189974010).
  • test results show that the compounds of the present invention all have good inhibitory activity on the production of TNF- ⁇ , especially compounds I-1, I-2, and I-3 have significant inhibitory activities on the production of TNF- ⁇ , indicating that the compounds of the present invention have anti-inflammatory properties. potential to react.
  • Test Example A-3 Inhibitory activity of compounds on R848-stimulated human whole blood to produce IL6
  • test results show that the compounds of the present invention all have a good inhibitory effect on the production of IL-6, indicating that the compounds of the present invention have the potential to resist inflammatory reactions.
  • Test B Anticancer activity test
  • Test Example B-1 Inhibitory activity of compounds on FLT3-WT, FLT3-ITD or FLT3-D35Y kinase
  • the compounds to be tested were dissolved in DMSO and prepared as 10 mM stock solutions, followed by 1 ⁇ kinase base buffer (50 mM HEPES, pH 7.5; 0.0015% Brij-35) and stop buffer (100 mM HEPES, pH 7.5; 0.015%) Brij-35, 0.2% Coating Reagent #3, 50 mM EDTA) for later use.
  • the compound stock solution was diluted with DMSO to 50 times the highest point of the concentration gradient, 100 ⁇ L of this dilution was transferred to the wells of a 96-well plate, and then serially diluted 4 times until 10 concentration gradients were reached.
  • test results show that the compounds I-1 and I-2 of the present invention also have significant inhibitory effects on the wild type, ITD mutant type and D835Y mutant type of FLT3 kinase, indicating that the compounds have the potential ability to deal with FLT3 mutant cancers.
  • Test Example B-2 OCI-LY10 Tumor Cell Proliferation Test by CTG Method
  • the OCI-LY10 (human B-cell lymphoma) cell line was routinely subcultured in a 37°C, 5% CO2 culture system, and cells growing in exponential phase were harvested and counted for plating.
  • Count the cells with a trypan blue-stained hemocytometer adjust the cell concentration to an appropriate density and inoculate in a 96-well plate with 90 ⁇ L of cell suspension per well, and set the wells with only medium added as a blank control.
  • the plate was placed in a 37°C, 5% CO2 culture system overnight to serve as a cell test plate.
  • V-bottom cell culture plate prepares a V-bottom cell culture plate, add 198 ⁇ L test medium and 2 ⁇ L diluted compound solution to each well, add 2 ⁇ L DMSO to the control well, and mix by pipetting up and down.
  • This V-bottom culture plate is used as a 10 ⁇ concentration Compound Plate.
  • IR inhibition rate
  • test results show that the compounds of the present invention all show strong inhibitory activity on the proliferation of OCI-LY10 cells, especially compounds I-2 and I-5 have significant inhibitory activities on the proliferation of OCI-LY10 cells, indicating that the compounds of the present invention have the ability to counteract the proliferation of OCI-LY10 cells. Cancer potential.
  • Pharmacokinetic test in rats using male SD rats, 180-240g, fasted overnight. Three rats were taken and administered by oral gavage at 10 mg/kg. Blood was collected before administration and at 15, 30 minutes and 1, 2, 4, 8, 24 hours after administration. Blood samples were centrifuged at 8000 rpm for 6 minutes at 4°C, and plasma was collected and stored at -20°C. Take the plasma at each time point, add 3-5 times the volume of acetonitrile solution containing the internal standard to mix, vortex for 1 minute, centrifuge at 13,000 rpm for 10 minutes at 4°C, take the supernatant and add 3 times the volume of water to mix, take an appropriate amount of the mixture LC-MS/MS analysis was performed. The main pharmacokinetic parameters were analyzed by non-compartmental model using WinNonlin 7.0 software.
  • mice pharmacokinetic test show that the compound of the present invention exhibits excellent pharmacokinetic properties, large exposure and good druggability.
  • the results of the rat pharmacokinetic test show that the compound of the present invention exhibits excellent pharmacokinetic properties, large exposure and good druggability.
  • the results of the canine pharmacokinetic test show that the compound of the present invention exhibits excellent pharmacokinetic properties, large exposure and good druggability.

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Abstract

提供一种有效抑制IRAK4 活性的新化合物，其为式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其制备方法，以及其在制备药物中的用途。

Description

苯并咪唑化合物及其用途
优先权信息
本申请请求2021年01月22日向中国国家知识产权局提交的、专利申请号为202110090538.6的专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入此处。
技术领域
本发明属于医药化学领域，具体的，本发明涉及苯并咪唑类化合物，更具体的，本发明涉及一种苯并咪唑类化合物及其制备方法，以及其在制备药物中的用途。
背景技术
白细胞介素-1受体相关激酶4(IRAK4)属于IRAK家族，家族成员还包括IRAK1、IRAK2、IRAKM(I-RAK3)等。人类的IRAK-4基因位于x染色体p11.12区，编码52KDa蛋白质。IRAK4蛋白与其他家族成员一样，都含有丝氨酸-苏氨酸激酶结构域(KD)和位于N端保守的死亡结构域(DD)，是Toll样受体(Toll like receptor，TLRs)、白细胞介素1受体(inteleukin-1，IL-1Rs)信号通路中的关键分子，参与调控细胞内信号级联及炎症反应。TLRs是跨膜模式识别受体家族，在先天性免疫信号传递中发挥核心功能。IL-1Rs家族可在多种IL-1细胞因子刺激下启动免疫反应。
在IL-1R、IL-18R和大多数TLR受到刺激后，髓系分化因子88(MyD88)作为接头蛋白与这些受体结合，随后IRAK4蛋白被招募到TLRs/IL-1R复合物。IRAK4可与MyD88及IRAK2通过共有的死亡结构域相互结合，形成蛋白质复合体Myddosome，活化IRAK4的激酶活性，导致下游IRAK1和/或IRAK2的磷酸化。IRAK1磷酸化引起了自身构象改变，促使其与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)结合，从而活化丝氨酸-苏氨酸激酶TAK1，激活下游NF-κB，启动IL-1、IL-8以及IL-33等促炎性因子的转录和表达，引起炎症反应。此外，JNK信号通路也被TRAF6激活，调控炎症、细胞凋亡及细胞增殖相关基因的转录。敲除IRAK4的小鼠模型中，IL-1、IL-18和大多数TLR配体的信号转导和细胞应答均严重受损，验证了IRAK4在IL-1R、IL-18R和多数TLR信号通路中的重要作用(Suzuki N,et al.Nature 2002,416,750-756.)。
由于IRAK4在细胞因子信号网络中的关键角色，IRAK4的异常高表达或沉默都会诱使机体的免疫系统异常。其中，IRAK4异常高表达会导致TRL/IL-1R通路过度激活，使体内长期分泌高水平的促炎性因子，引起持续性的炎症反应，最终诱发自身免疫疾病，包括类风湿性关节炎、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症等。有研究者发现类风湿性关节炎患者的 关节滑液中存在的IL-1明显高于健康者(Nouri AM,et al.Clin Exp Immunol 1984；55(2):295–302.)，而进一步研究证明拮抗TLR4可降低IL-1的分泌，并在小鼠模型上有预防关节炎症的作用(Abdollahi-Roodsaz S,et al.2007；56(9):2957–67.)TLR7和TLR9的激活可刺激pDC细胞中IFNα的产生，这也被认为是系统性红斑狼疮的潜在诱因(Chiang EY,et al.J Immunol 2011；186(2):1279–88.)。许多其他自身免疫性疾病，包括炎性肠病(Coccia M,et al.J Exp Med 2012；209(9):1595–609.)、干燥综合征(Low HZ,et al.Arthritis Res Ther 2011；13(3):1–7.)等都与TLR信号增强有关，进一步提示了抑制IRAK4对自身免疫疾病的潜在药效。
IRAK4也被报道在多种恶性肿瘤的发生发展中起着关键作用，包括黑色素瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症(WM)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、ABC性弥漫大B细胞淋巴瘤(ABC-DLCBL)等。MyD88-L256P的功能增强型突变造成的myddosome复合体上调，导致NF-κB的激活引起一系列肿瘤细胞系的存活及增殖。黑色素瘤活检的免疫组化结果显示磷酸化的IRAK4在病变组织中高度表达(Srivastava R,et al.Cancer Res 2012；72(23):6209–16.)。在T-ALL细胞中也观察到了IRAK1和IRAK4的mRNA表达水平的增加，以及IRAK1和IRAK4的磷酸化水平的升高(Li Z,et al.J Clin Invest 2015；125(3):1081–97.)。用shRNA沉默IRAK4或小分子抑制其酶活性会削弱来自T-ALL患者的样本中的细胞增殖，表明介由IRAK4的信号转导是疾病进展中的关键因素。还有报道称，IRAK4抑制剂与Ibrutinib(一种BTK抑制剂)联合应用，可协同抑制MyD88-L256P突变的ABC-DLBCL细胞系的增殖(Kelly PN,et al.J ExpMed 2015；212(13):2189–201.)。以上研究结果均证实了IRAK4靶点在肿瘤治疗领域的潜在价值。
此外，Fms样酪氨酸激酶(FLT3)的激活突变会导致其自身磷酸化和细胞内信号通路的启动，从而促进白血病细胞的存活和增殖，是AML产生对FLT3抑制剂适应性耐药的因素之一。有研究者已经证实，FLT3抑制剂引起FLT3-ITD突变耐药的机制，与IRAK1/4代偿性激活有关。IRAK1/4信号引起TLR通路的激活导致了自身免疫应激活化，敲低IRAK4或抑制IRAK4活性的试验证实了IRAK1/4在FLT3-ITD突变体产生适应性抵抗过程中的必需性(Melgar K,et al.Sci Transl Med 2019；508(11))，提示了同时抑制FLT3信号转导和IRAK1/4代偿性激活有治疗FLT3突变AML患者的潜力。
发明内容
本发明旨在提出一种新的IRAK4抑制剂，可用于制备治疗肿瘤相关疾病的药物。
本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物，为式I所示化合物、其互变异构体、立体 异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
Figure PCTCN2022073320-appb-000001
其中，
L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
R 1选自未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基、或、未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的被R a取代的C 1-C 6烷基中、或、所述的被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
环A选自5-8元杂芳基或6-10元芳基，所述的5-8元杂芳基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
n为1或2；
R 2选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基、未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、未取代或被R b取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被R b取代的4-8元杂环烯基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、被R b取代的6-10元芳基、被R b取代的4-8元杂环烷基、或、被R b取代的4-8元杂环烯基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同；
当环A为5-8元杂芳基时，R 1不为未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基。
在本发明一优选实施方案中，当R 1为未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基，较佳地为甲基、乙基、正丙基、异丙基。
在本发明一优选实施方案中，当R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为含氮杂环烷基，较佳地为氮杂环丁烷、氮杂环戊烷、氮杂环己烷或吗啉基。
在本发明一优选实施方案中，当R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述4-8 元杂环烷基为含氧杂环烷基，较佳地为氧杂环丁烷、氧杂环戊烷或氧杂环己烷。
在本发明一优选实施方案中，当R 1为被R a取代的C 1-C 6烷基、或、被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述的取代的个数独立地为1-3个，较佳地为1个。
在本发明一优选实施方案中，R a为羟基。
在本发明一优选实施方案中，当R a为卤素时，所述卤素为F、Cl、Br、I，较佳地为F或Cl。
在本发明一优选实施方案中，当R a为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基，较佳地为甲基、乙基、正丙基、异丙基。
在本发明一优选实施方案中，当环A为选自5-8元杂芳基时，所述5-8元杂芳基为吡咯、吡唑、三氮唑、呋喃、噁唑、噻吩、噻唑、吡啶、吡嗪或嘧啶，较佳地为噁唑或吡啶。
在本发明一优选实施方案中，当环A为6-10元芳基时，所述的6-10元芳基为苯基或萘基，较佳地为苯基。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为未取代或被R b取代的5-8元杂芳基，所述5-8元杂芳基为吡咯、吡唑、三氮唑、呋喃、噁唑、噻吩、噻唑、吡啶、吡嗪或嘧啶，较佳地为吡唑或吡啶。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为未取代或被R b取代的6-10元芳基时，所述的6-10元芳基为苯基或萘基，较佳地为苯基。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为未取代或被R b取代的4-8元杂环烷基时，所述的4-8元杂环烷基独立地为氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、四氢吡咯烷基、四氢呋喃基、六氢吡喃或四氢-2H-硫吡喃1,1-二氧化物，较佳地为氮杂环丁烷或氧杂环丁烷。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为未取代或被R b取代的4-8元杂环烯基时，所述的4-8元杂环烯基独立地为二氢吡啶基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、吡咯啉基、咪唑啉基、吡唑啉基、二氢咪唑基、二氢吡唑基、二氢噁唑基、二氢噁二唑基、二氢噻唑基、二氢异噻唑基、二氢噻吩基、二氢吡咯基、3,4-二氢-2H-吡喃基、二氢呋喃基、二氢吡嗪基、二氢嘧啶基或氟代二氢呋喃基，较佳地为1,2,3,4-四氢吡啶基、1,2-二氢吡啶基、1,4-二氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、3,4-二氢-2H-吡喃基或二氢呋喃基。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为被R b取代的5-8元杂芳基、被R b取代的6-10元芳基时、被R b取代的4-8元杂环烷基、或、被R b取代的4-8元杂环烯基时，所述的取代的个数独立地为1-3个，较佳地为1或2个。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为卤素时，所述卤素为F、Cl、Br、I，较佳地为F或Cl。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基，较佳地为甲基、乙基、正丙基、异丙基。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基，较佳地为甲基、乙基、正丙基、异丙基。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为F、Cl、Br、I，较佳地为F或Cl。
在本发明一优选实施方案中，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为1、2或3个。
在本发明一优选实施方案中，当R b为卤素时，所述卤素为F、Cl、Br、I，较佳地为F或Cl。
在本发明一优选实施方案中，当R b为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基，较佳地为甲基、乙基、正丙基、异丙基。
在本发明一优选实施方案中，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基，较佳地为甲基、乙基、正丙基、异丙基。
在本发明一优选实施方案中，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为F、Cl、Br、I，较佳地为F或Cl。
在本发明一优选实施方案中，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为1、2或3个。
在本发明一优选实施方案中，
Figure PCTCN2022073320-appb-000002
为
Figure PCTCN2022073320-appb-000003
在本发明一优选实施方案中，
Figure PCTCN2022073320-appb-000004
为
Figure PCTCN2022073320-appb-000005
Figure PCTCN2022073320-appb-000006
在本发明一优选实施方案中，如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药为：
Figure PCTCN2022073320-appb-000007
L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
n为1或2；
R 2选自未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、或、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、或、被R b取代的6-10元芳基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同。
在本发明一优选实施方案中，L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
R 1为未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基；所述的未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个羟基取代；所述的未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
n为1或2；
R 2选自未取代或被R b取代的5或6元杂芳基，所述的未取代或被R b取代的5或6元杂芳基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个C 1-C 3烷基取代；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同；所述未取代或被R b取代的5或6元杂芳基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个。
在本发明一优选实施方案中，如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药为：
Figure PCTCN2022073320-appb-000008
L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
R 1选自未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基、或、未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的被R a取代的C 1-C 6烷基中、或、所述的被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
n为1或2；
R 2选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基、未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、未取代或被R b取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被R b取代的4-8元杂环烯基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、被R b取代的6-10元芳基、被R b取代的4-8元杂环烷基、或、被R b取代的4-8元杂环烯基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同。
在本发明一优选实施方案中，L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
R 1选自未取代或被R a取代的C 1-C 4烷基，所述被R a取代的C 1-C 4烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个C 1-C 3烷基或羟基取代，当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
n为1或2；
R 2选自卤素、C 1-C 3烷基、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 3烷基，当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同。
在本发明一优选实施方案中，如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药为：
Figure PCTCN2022073320-appb-000009
L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
n为1或2；
R 2选自未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、或、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、或、被R b取代的6-10元芳基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同。
在本发明一优选实施方案中，L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
R 1为未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基，所述的被R a取代的4-6元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个羟基取代，当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
n为1或2；
R 2选自未取代或被R b取代的5或6元杂芳基、或、被1-4个相同或不同卤素取代的C 1-C 3烷基；所述的被R b取代的5或6元杂芳基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个C 1-C 3烷基取代，当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同，所述未取代或被R b取代的5或6元杂芳基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个。
在本发明一优选实施方案中，环A为5或6元杂芳基，所述5或6元杂芳基中，杂原子 选自N、O、S和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
R 2选自1-3个相同或不同卤素取代的C 1-C 3烷基、或被R a取代的5或6元杂芳基，所述被R a取代的5或6元杂芳基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个C 1-C 3烷基取代，所述5或6元杂芳基中，杂原子选自N、O、S或P，杂原子数为1个；
当L为不存在时，R 1选自未取代或被R b取代的5或6元杂环基，所述被R b取代的5或6元杂环基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个羟基取代，所述5或6元杂环基中，杂原子选自N、O、S和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
当L为-O-(CH 2) m-时，R 1选自4或5元杂环基，所述4或5元杂环基中，杂原子选自N、O、S和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个。
在本发明一优选实施方案中，如式I所述的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药选自下列任一化合物：
Figure PCTCN2022073320-appb-000010
Figure PCTCN2022073320-appb-000011
本发明的第二方面，本发明提出了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药以及药学上可接受的赋形剂。
根据本发明的具体实施例，可以将本发明的所述药物组合物包括治疗有效剂量的上述化合物，其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药以及药学上可接受的药用载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的第三方面，本发明提出了上述如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药或上述药物组合物在制备用于治疗与IRAK4相关疾病药物中的用途。
根据本发明的具体实施例，上述化合物或其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药或上述药物组合物在制备治疗与IRAK4相关疾病药物中的用途，所述药物可用于治疗自身免疫性疾病以及癌症。这些自身免疫性疾病包括例如多发性硬化、系统性红斑狼疮、银屑病、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、类风湿性关节炎、反应性关节炎、全身型幼年特发性关节炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和过敏性湿疹；这些癌症包括例如脑癌、肾癌、肝癌、胃癌、阴道癌、卵巢癌、胃肿瘤、乳腺癌、膀胱结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、宫颈癌、睾丸癌、皮肤癌、骨癌或甲状腺癌；肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、颈部和头部肿瘤、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、乳房癌、滤泡癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤；急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性淋巴 瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞瘤和多发性骨髓瘤的血液恶性肿瘤。
根据本发明的具体实施例，所述如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药、或药物组合物用于抑制IRAK4激酶活性；
所述如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药、或药物组合物用于抑制TNF-α活性；
所述如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药、或药物组合物用于抑制FLT3-WT、FLT3-ITD或FLT3-D35Y激酶活性；
所述如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药、或药物组合物用于抑制肿瘤细胞增殖，较佳地，所述肿瘤细胞选自人B细胞淋巴瘤细胞。
本发明的第四方面，本发明提出了一种治疗与IRAK4相关疾病的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：向受试者施用上述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药、或上述的药物组合物。
根据本发明的具体实施例，所述IRAK4相关疾病为自身免疫性疾病、癌症。
根据本发明的具体实施例，所述自身免疫性疾病为多发性硬化、系统性红斑狼疮、银屑病、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、类风湿性关节炎、反应性关节炎、全身型幼年特发性关节炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和过敏性湿疹。
根据本发明的具体实施例，所述癌症为脑癌、肾癌、肝癌、胃癌、阴道癌、卵巢癌、胃肿瘤、乳腺癌、膀胱结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、宫颈癌、睾丸癌、皮肤癌、骨癌或甲状腺癌；肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、颈部和头部肿瘤、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、乳房癌、滤泡癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤；急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞瘤和多发性骨髓瘤的血液恶性肿瘤。
术语和定义
除非另有说明，用于本发明申请，包括本申请说明书和权利要求书中记载的术语和定义如下。
本领域技术人员可以理解，根据本领域中使用的惯例，在本申请的结构式中，
Figure PCTCN2022073320-appb-000012
用于描绘化学键，所述化学键为部分或取代基与核心结构或骨架结构相连的点。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。
除了药学可接受的盐外，本发明还考虑其他盐。它们可以在化合物纯化中或在制备其它药学上课接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。
术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。
术语“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基或者氨基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀D和L或(+)和(–)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(–)或L表示化合物是左旋的。前缀为(+)或D的化合物是右旋的。就给定的化学结构而言，除了这些立体异构体互为镜像外，这 些立体异构体是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体，并且所述异构体的混合物通常称作对映异构体的混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或方法中没有立体选择性或立体特异性时，可出现所述外消旋混合物或外消旋体。烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可以存在于本文所述的化合物中，且所有这种稳定的异构体在本发明中均被考虑。当本文所描述化合物含有烯双键时，除非另外说明，否则，这种双键包括E和Z几何异构体。如果化合物中含有二取代的环烷基，环烷基的取代基可能为顺式或反式(cis-或trans-)构型。
当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(R)和(S)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。
旋光性的(R)-或(S)-异构体可使用手性合成子或手性制剂制备，或使用常规技术拆分。含有不对称取代的碳原子的本发明化合物能够以旋光活性形式或外消旋形式分离。化合物的外消旋混合物的拆分可以通过本领域已知的许多方法中的任一种来进行。示例性方法包括使用手性拆分酸的分级重结晶，该手性拆分酸是旋光活性的成盐有机酸。用于分级重结晶方法的适合的拆分剂例如是旋光活性酸，例如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或各种旋光活性樟脑磺酸如β-樟脑磺酸的D和L形式。适合于分级结晶方法的其它的拆分剂包括立体异构纯形式的α-甲基-苄胺(例如，S和R形式或者非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、降麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1，2-二氨基环己烷等。外消旋混合物的拆分还可以通过在填充有旋光活性拆分剂(例如，二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的色谱柱上洗脱来进行。可以采用高效液相色谱(HPLC)法也可以采用超临界流体色谱法(SFC)进行。具体方法的选择以及洗脱条件、色谱柱的选择可以由本领域技术人员根据化合物的结构以及试验结果选择。进一步的，还可以使用已知构型的光学纯的起始原料或试剂，通过立体有机合成，获得本发明所描述化合物的任何对映体或非对映体。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位 素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘( 2H)，氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
术语“C 1-C 6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C 1-C 3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
术语“C 1-C 6烷基-O-”应理解为烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中“C 1-C 6烷基”具有上述定义。如甲基-O-、乙基-O-。
术语“6-10元芳基”应理解为具有6-10个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环，特别是具有6个碳原子的环(“C 6芳基”)，例如苯基；当所述6-10元芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为邻位、对位或间位取代。
术语“5-8元杂芳基”应理解为具有5-8个环原子，特别是5或6个碳原子，且包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子的一价单环、双环或三环芳族环基团。优选1-3个且独立选自N、O和S的杂原子的一价单环、双环或三环芳族环基团，并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、 吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
术语“4-8元杂环基”或“4-8元杂环烷基”应理解为表示具有4至8个原子的饱和、不饱和或部分饱和的单环、二环或三环，其中1、2、3、4或5个环原子选自N、O和S，除非另有说明，其可通过碳或氮连接，其中-CH 2-基团任选被-C(O)-代替；及其中除非另有相反说明，环氮原子或环硫原子任选被氧化以形成N-氧化物或S-氧化物或环氮原子任选被季铵化；其中环中的-NH任选被乙酰基、甲酰基、甲基或甲磺酰基取代；及环任选被一个或多个卤素取代。应该理解的是，当杂环基中S原子和O原子的总数超过1时，这些杂原子不彼此相邻。若所述杂环基为二环或三环，则至少一个环可任选为杂芳族环或芳族环，条件是至少一个环是非杂芳族的。若所述杂环基为单环，则其一定不是芳族的。杂环基的实例包括但不限于哌啶基、N-乙酰基哌啶基、N-甲基哌啶基、N-甲酰基哌嗪基、N-甲磺酰基哌嗪基、高哌嗪基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吗啉基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、二氢吲哚基、四氢吡喃基、二氢-2H-吡喃基、四氢呋喃基、四氢噻喃基、四氢噻喃-1-氧化物、四氢噻喃-1,1-二氧化物、1H-吡啶-2-酮和2,5-二氧代咪唑烷基。
术语“卤代基”或“卤素”为氟、氯、溴和碘。
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“……独立地”应作广义理解，是指所描述的各个个体之间是相互独立的，可以独立地为相同或不同的具体基团。更详细地，描述方式“……独立地”既可以是指在不同基团中，相同符合之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
有益效果
根据本发明的实施例，本发明提供了结构新颖、药代动力学性质优良、药效或成药性好的IRAK4抑制剂，可以用于有效治疗IRAK4相关的疾病、病症。
小鼠、大鼠以及犬药代动力学试验结果表明，本发明化合物表现出优良的药代动力学性质，暴露量大，成药性好。
本发明化合物均对IRAK4激酶具有良好的抑制作用，特别是化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5以及I-6，对IRAK4激酶抑制作用显著；其次，本发明化合物均对TNF-α产生具有良好的抑制活性，尤其是化合物I-1、I-2、I-3对TNF-α产生的抑制活性显著；此外，本发明化合物均对IL-6的产生具有良好的抑制作用，表明本发明化合物具有良好的抗炎作用。
本发明化合物均对OCI-LY10细胞增殖表现出较强的抑制活性，尤其是化合物I-2以及I-5，对OCI-LY10细胞增殖的抑制活性显著；此外，化合物I-1和I-2还对FLT3激酶的野生型、ITD突变型以及D835Y突变型均有显著的抑制作用；表明本发明化合物具有良好的抗肿瘤作用。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
如无特别说明，本发明的化合物均是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定其结构的。NMR位移的单位为10 -6(ppm)。NMR测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(TMS)。
本发明的缩写定义如下：
M：摩尔浓度，如1M盐酸表示1mol/L盐酸溶液
N：当量浓度，例如2N盐酸表示2mol/L盐酸溶液
DAST：二乙氨基三氟化硫
DCM：二氯甲烷
DEAD：偶氮二甲酸二乙酯
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMP：戴斯-马丁氧化剂
DMSO：二甲基亚砜
DIPEA：也可写为DIEA，二异丙基乙胺，亦即N,N-二异丙基乙胺
EA：乙酸乙酯
HATU：O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N,-四甲基脲六氟膦盐
PPTS：4-甲基苯磺酸吡啶盐
Pd 2(dba) 3：三(二亚苄基丙酮)二钯
Ruphos-G3：甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)
THF：四氢呋喃
Xantphos：4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽
Pd(dppf)Cl 2：[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯
TLC：薄层色谱
LC-MS：液质联用色谱
IC 50：半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
制备1：中间体A的制备
2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-羧酸
Figure PCTCN2022073320-appb-000013
目标中间体A的合成路线如下：
Figure PCTCN2022073320-appb-000014
第一步：2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-羧酸乙酯(A-3)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000015
室温下将原料(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(3.0g,21.9mmol)加入到10ml DMF中，氮气保护下加入2-溴噁唑-4-甲酸乙酯(3.0g,13.6mmol)和Pd(dppf)Cl 2(2.2g,2.7mmol)，加入碳酸钾(3.8g,11.7mmol)，加热至150℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(100ml)，用EA(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得白色固体2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酸乙酯(1.13g,产率35.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):233.2[M+H] +
第二步：2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-羧酸(A)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000016
室温下将原料2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酸乙酯(1.13g,0.43mmol)加入到THF(10ml) 中，加入水(5ml)和甲醇(5ml)，一水合氢氧化锂(585mg,24.3mmol)，搅拌18h。反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得标题化合物白色固体2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酸(1.0g,产率100％)
LC-MS,M/Z(ESI):205.2[M+H] +。
实施例1：目标化合物I-1的制备
N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉-1氢-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(目标化合物I-1)
Figure PCTCN2022073320-appb-000017
目标化合物I-1的合成路线如下：
Figure PCTCN2022073320-appb-000018
第一步：4-氯-N-甲基-2-硝基苯胺(1A)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000019
冰浴下，往甲胺醇溶液(250ml)中缓慢加入4-氯-1-氟-2-硝基苯(50.0g，0.286mol)，之后移去冰浴，升至室温反应1h，TLC检测反应完全之后，过滤掉溶液，减压蒸馏得到粗产物，所得粗产物不经纯化直接用于下一步反应。
第二步：4-氯-N 1-甲基苯-1,2-二胺(1B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000020
将第一步所得4-氯-N-甲基-2-硝基苯胺粗产物和锌粉(27.0g，0.415mol)、氯化铵(36.0g，0.679mol)溶于150ml乙醇中，升至50℃反应2h。TLC检测反应完全之后，过滤，溶液减压浓缩除去乙醇，所得残留物用水(200mL)稀释，用DCM(100mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得残留物经柱层析纯化得到目标化合物4-氯-N 1-甲基苯-1,2-二胺(21.0g，两步产率94.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):157.1[M+H] +
第三步：3-(5-氯-1-甲基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000021
将4-氯-N 1-甲基苯-1,2-二胺(9.0g，0.058mol)和4-氧丁酸甲酯(9.0g，0.063mol)溶于90ml醋酸中，升温至70℃反应过夜，TLC检测反应完全之后减压蒸馏，所得残留物用水(200mL)稀释，用DCM(100mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，所得残留物经柱层析纯化得到目标化合物3-(5-氯-1-甲基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7.0g，产率48.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):253.2[M+H] +
第四步：3-(5-氯-1-甲基-6-硝基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000022
冰浴下，将3-(5-氯-1-甲基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2.0g，7.94mmol)溶于16ml浓硫酸中，之后再缓慢滴加浓硝酸和浓硫酸的混合物(HNO 3/H 2SO 4＝1:1.4),然后升至室温反应3h，TLC检测反应完全之后，加入饱和NaHCO 3溶液调节PH至中性，之后用DCM(10mL×3)萃取三遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，残留物经柱层析纯化得到目标化合物3-(5-氯-1-甲基-6-硝基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1.9g，产率80.5％)。
LC-MS,M/Z(ESI):298.2[M+H] +
第五步：3-(1-甲基-5-吗啉基-6-硝基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000023
将3-(5-氯-1-甲基-6-硝基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1.09g，3.67mmol)、吗啉(1.28g，14.7mmol)、氯(2-二环己基膦基-2',6'-二-异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(566mg，0.73mmol)和碳酸铯(2.3g，7.08mmol)溶于11ml无水1,4-二氧六环中，用氮气排尽反应瓶内空气后密闭，于110℃反应4h，TLC检测反应完全之后加入水(30mL)稀释，用DCM(10mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，所得残留物经柱层析纯化得到目标化合物3-(1-甲基-5-吗啉基-6-硝基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(820mg，产率64.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):349.3[M+H] +
第六步：3-(6-氨基-1-甲基-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000024
将3-(1-甲基-5-吗啉基-6-硝基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(820mg，2.36mmol)、铁粉(526mg，9.40mmol)和氯化铵(498mg，9.40mmol)加入到乙醇/水＝4ml/4ml的混合溶剂中，90℃回流反应2h，TLC检测反应完全之后，过滤，液相用加入水(30mL)稀释，用DCM(10mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，残留物经柱层析纯化得到目标化合物3-(6-氨基-1-甲基-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(480mg，产率64.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):319.3[M+H] +
第七步：3-(1-甲基-6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺基)-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000025
将3-(6-氨基-1-甲基-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(240mg，0.75mmol)，2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-羧酸(168mg，0.82mmol)，HATU(428mg，1.13mmol)和三乙胺(228mg，2.25mmol)溶于2.5ml DMF中，室温反应6h，TLC检测反应完全之后，减压蒸馏除去DMF，残留物加入水(30mL)稀释，用DCM(10mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏， 所得残留物经柱层析纯化得到目标化合物3-(1-甲基-6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺基)-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(310mg，产率81.6％)
LC-MS,M/Z(ESI):505.3[M+H] +
第八步：N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉-1氢-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(I-1)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000026
冰浴下，将3-(1-甲基-6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺基)-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(50mg，0.099mmol)溶于1ml无水THF中，缓慢加入甲基溴化镁(3mol/L的2-甲基四氢呋喃溶液)(0.25ml，0.75mmol)，之后升至室温反应过夜，TLC检测反应完全之后加入饱和氯化铵溶液淬灭，加入水(30mL)稀释，用DCM(10mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，残留物用硅胶板(DCM:MeOH＝10:1)分离纯化得到目标化合物N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉-1氢-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(1.2mg，产率2.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ10.61(s,1H),8.73(d,J＝4.0Hz,1H),8.60(s,1H),8.40(s,1H),7.83(s,1H),7.76(d,J＝4.0Hz,1H),7.57(s,1H),4.07(t,J＝4.0Hz,4H),3.76(s,3H),3.03(t,J＝6.0Hz,4H),2.69(s,3H),2.12(t,J＝8.0Hz,2H),1.33(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):505.3[M+H] +。
实施例2：目标化合物I-2的制备
(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺
Figure PCTCN2022073320-appb-000027
目标产物I-2的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000028
第一步：4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(2B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000029
室温下将原料4-溴-1-氟-2-硝基苯(10.0g,45.4mmol)加入到100ml THF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,20ml)，加热至50℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝8:1)得淡黄色液体粗品4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(2B)(10.5g,产率100％)。
LC-MS,M/Z(ESI):231.2[M+H] +
第二步：4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(2C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000030
室温下将原料4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(10.5g,45.4mmol)加入到100ml THF中，加入100ml乙醇和50ml水，加入铁粉(10.5g,187.5mmol)，氯化铵(10.5g,196.2mmol)，加热至90℃，搅拌3h。冷却至室温，用DCM(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色液体4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(2C)(8.8g,产率96.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):201.2[M+H] +
第三步：4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(2D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000031
室温下将原料4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(8.8g,43.7mmol)加入到100ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(7.3g,48.5mmol)，加入三乙胺(13.2g,131mmol)，室温搅拌16h。加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色液体粗品4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(2D)(9.2g,产率66.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):315.2[M+H] +
第四步：3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000032
室温下将原料4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(9.2g,29.3mmol)加入到200ml二甲苯中，加入PPTS(735mg,2.9mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2E)(6.5g,产率74.9％)
LC-MS,M/Z(ESI):297.2[M+H] +
第五步：3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000033
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(10.0g,34mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(3.6g,35mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2F)(3.0g,产率26.0％)
LC-MS,M/Z(ESI):342.2[M+H] +
第六步：(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000034
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2.0g,5.8mmol)加入 到30ml二氧六环中，氮气保护下加入Xantphos(1.0g,1.7mmol)和Pd 2(dba) 3(1.1g,1.2mmol)，加入碳酸铯(3.8g,11.7mmol)，加入(R)-吡咯烷-3-醇(1.0g,11.7mmol)，加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(100ml)，用EA(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2G)(300mg,产率14.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):349.6[M+H] +
第七步：(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000035
室温下将原料(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(330mg,0.95mmol)加入到3ml THF，3ml水和3ml乙醇中，加入铁粉(213mg,3.8mmol)，氯化铵(254mg,4.7mmol)，加热,70℃，搅拌3h。冷却至室温，加入水(10ml)，用乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2H)(200mg,产率72.9％)。
LC-MS,M/Z(ESI):319.6[M+H] +
第八步：(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2I)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000036
室温下将原料(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1.25g,3.9mmol)加入到15ml DMF和5ml DCM中，加入HATU(2.24g,5.9mmol)和DIPEA(6.5ml,39.3mmol)，加入2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酸(963mg,4.7mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2I)(1.2g,产率60.4％)
LC-MS,M/Z(ESI):505.5[M+H] +
第九步：(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(I-2)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000037
室温下将原料(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺)-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(1.1g,2.2mmol)加入到50ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化镧(III)双(氯化锂)络合物溶液(0.6mol/L,35ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,22ml)，室温下搅拌16h。加入5ml水，用1mol/L盐酸调节pH＝6，浓缩，制备(制备条件：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相A为1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)得白色固体(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(I-2)(800mg,产率72.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.1(s,1H),9.08(s,1H),8.72(d,1H),8.35(s,1H),7.95(s,1H),7.85(d,1H),7.36(s,1H),5.33(t,1H),4.46(d,2H),3.92(s,3H),3.45(t,2H),3.19(t,3H),3.10(d,1H),2.62(s,3H),2.20(t,1H),2.00(t,1H),1.90(t,2H),1.20(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):505.5[M+H] +
实施例3：目标化合物I-3的制备
N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(目标化合物I-3)
Figure PCTCN2022073320-appb-000038
目标化合物I-3的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000039
第一步：4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(3B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000040
室温下将原料4-甲氧基-1-氟-2-硝基苯(10.0g,58.5mmol)加入到50ml甲胺甲醇溶液中(含甲胺7.3g,233.9mmol)，加热至70℃，搅拌32h。冷却至室温，加入水(100ml)，用EA(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，淡黄色固体粗品4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(3B)(10.0g,产率93.9％)
LC-MS,M/Z(ESI):183.4[M+H] +
第二步：4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(3C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000041
室温下将原料4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(2g,11.0mmol)加入到100ml THF中，加入100ml乙醇和50ml水，加入铁粉(2.5g,44.6mmol)，氯化铵(2.5g,46.7mmol)，加热至90℃，搅拌2h。冷却至室温，用DCM(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(3C)(1.5g,产率89.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):153.4[M+H] +。
第三步：4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(3D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000042
室温下将原料4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(19.5g,128mmol)加入到1000ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(21g,139.5mmol)，加入三乙胺(39.0g,386.1mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色固体粗品4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(3D)(18.0g,产率52.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):267.5[M+H] +。
第四步：3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000043
室温下将原料4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,67.6mmol)加入到600ml二甲苯中，加入PPTS(1.7g,6.8mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(1000ml)，用EA(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3E)(10.5g,产率62.5％)
LC-MS,M/Z(ESI):249.4[M+H] +。
第五步：3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000044
室温下将原料3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(9.8g,39.5mmol)加入到50ml醋酸中，冷却至0℃，加入硝酸50ml，低温下搅拌1h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3F)(3.8g,产率32.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):294.5[M+H] +。
第六步：3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(3G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000045
室温下将原料3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1.5g,5.1mmol)加入到30ml吡啶中，氮气保护下加入碘化锂(10.2g,76.1mmol)，加热至150℃，搅拌35h。冷却至室温，浓缩，加入1N盐酸(100ml)，用EA(100ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(3G)(1.1g,产率80.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):266.6[M+H] +。
第七步：3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000046
0℃下将5ml氯化亚砜加入到20ml甲醇中，搅拌0.5h，加入原料3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(1.1g,4.1mmol)，室温下搅拌3h。浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3H)(900mg,产率77.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):280.6[M+H] +。
第八步：3-(1-甲基-6-硝基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3I)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000047
室温下将原料3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(900mg,3.2mmol)加入到THF(10ml)中，加入三苯基膦(1.26g,4.8mmol)和DEAD(840mg,4.8mmol)，室温下搅拌16h。浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体3-(1-甲基-6-硝基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3I)(870mg,产率77.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):350.6[M+H] +
第九步：3-(6-氨基-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3J)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000048
室温下将原料3-(1-甲基-6-硝基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(400mg,1.2mmol)加入到10ml甲醇中，加入钯碳(40mg)，通入H 2，室温搅拌6h。过滤，浓缩，得粗品白色固体3-(6-氨基-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3J)(300mg,产率82.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):320.6[M+H] +。
第十步：3-(1-甲基6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺)-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3K)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000049
室温下将原料3-(6-氨基-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(130mg,0.40mmol)加入到10ml DCM中，加入HATU(187mg,0.49mmol)和DIPEA(72mg,0.56mmol)，加入2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酸(84mg,0.41mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(1-甲基6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺)-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(3K)(85mg,产率41.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):506.5[M+H] +。
第十一步：N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(I-3)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000050
室温下将原料3-(1-甲基6-(2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺)-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(85mg,0.17mmol)加入到5ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化镧(III)双(氯化锂)络合物溶液(0.6mol/L,1ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,1.7ml)，室温 下搅拌20h。加入5ml水，用1mol/L盐酸调节pH＝6，浓缩，制备分离方法为(色谱柱：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相A：1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)，得标题化合物白色固体N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)噁唑-4-甲酰胺(I-3)(8.0mg,产率9.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.74(s,1H),9.05(s,1H),8.70(d,1H),8.48(s,1H),7.91(s,1H),7.79(d,1H),7.36(s,1H),4.85-4.77(m,4H),4.47(s,1H),4.34(d,2H),3.73(s,3H),3.64(t,1H),2.91(q,2H),2.59(s,3H),1.88(t,2H),1.19(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):506.5[M+H] +。
实施例4：目标化合物I-4的制备
N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酰胺(目标化合物I-4)
Figure PCTCN2022073320-appb-000051
目标化合物I-4的合成路线如下，
Figure PCTCN2022073320-appb-000052
其中化合物4A的合成参考实施例1；
第一步：3-(1-甲基-5-吗啉基-6-(6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(4B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000053
将3-(6-氨基-1-甲基-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(240mg，0.75mmol)，6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(158mg，0.83mmol)，HATU(428mg，1.13mmol)和三乙胺(228mg，2.25mmol)溶于2.5ml DMF中，室温反应6h，TLC检测反应完全之后，减压蒸馏除去DMF，残留物用水(20mL)稀释，用DCM(10mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，所得残留物经柱层析纯化得到目标化合物3-(1-甲基-5-吗啉基-6-(6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(62mg，产率16.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):492.2[M+H] +
第二步，N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酰胺(I-4)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000054
冰浴下，将3-(1-甲基-5-吗啉基-6-(6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(62mg，0.126mmol)溶于1ml无水THF中，缓慢加入甲基溴化镁(3mol/L的2-甲基四氢呋喃溶液)(0.4ml，1.2mmol)，之后升至室温反映过夜，TLC检测反应完全之后加入饱和氯化铵溶液淬灭，用水(20mL)稀释，用DCM(10mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，残留物用硅胶板(DCM:MeOH＝10:1)分离纯化得到目标化合物N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉基-1氢-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酰胺(1.5mg，产率2.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ11.48(s,1H),8.73(s,1H),8.53(d,J＝4.0Hz,1H),8.15(t,J＝8.0Hz,1H),7.90(d,J＝4.0Hz,1H),7.61(s,1H),3.99(d,J＝4.0Hz,4H),3.78(s,3H),3.04(d,J＝8.0Hz,2H),2.92-2.95(m,4H),2.13(t,J＝8.0Hz,2H),1.33(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):492.3[M+H] +。
实施例5：目标化合物I-5的制备
(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三 氟甲基)吡啶甲酰胺(目标化合物I-5)
Figure PCTCN2022073320-appb-000055
目标产物I-5的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000056
第一步：4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(5B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000057
室温下将原料4-溴-1-氟-2-硝基苯(10.0g,45.4mmol)加入到100ml THF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,20ml)，加热至50℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝8:1)得淡黄色液体粗品4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(5B)(10.5g,产率100％)
LC-MS,M/Z(ESI):231.2[M+H] +
第二步：4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(5C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000058
室温下将原料4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(10.5g,45.4mmol)加入到100ml THF中，加入100ml乙醇和50ml水，加入铁粉(10.5g,187.5mmol)，氯化铵(10.5g,196.2mmol)，加热至90℃，搅拌3h。冷却至室温，用DCM(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色液体4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺 (5C)(8.8g,产率96.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):201.2[M+H] +
第三步：4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(5D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000059
室温下将原料4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(8.8g,43.7mmol)加入到100ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(7.3g,48.5mmol)，加入三乙胺(13.2g,131mmol)，室温搅拌16h。加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色液体粗品4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(5D)(9.2g,产率66.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):315.2[M+H] +
第四步：3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(5E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000060
室温下将原料4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(9.2g,29.3mmol)加入到200ml二甲苯中，加入PPTS(735mg,2.9mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5E)(6.5g,产率74.9％)
LC-MS,M/Z(ESI):297.2[M+H] +
第五步：3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000061
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(10.0g,34mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(3.6g,35mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5F)(3.0g,产率26.0％)
LC-MS,M/Z(ESI):342.2[M+H] +
第六步：(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000062
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2.0g,5.8mmol)加入到30ml二氧六环中，氮气保护下加入Xantphos(1.0g,1.7mmol)和Pd 2(dba) 3(1.1g,1.2mmol)，加入碳酸铯(3.8g,11.7mmol)，加入(R)-吡咯烷-3-醇(1.0g,11.7mmol)，加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(100ml)，用EA(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5G)(300mg,产率14.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):349.6[M+H] +
第七步：(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000063
室温下将原料(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(330mg,0.95mmol)加入到3ml THF，3ml水和3ml乙醇中，加入铁粉(213mg,3.8mmol)，氯化铵(254mg,4.7mmol)，加热,70℃，搅拌3h。冷却至室温，加入水(10ml)，用乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5H)(200mg,产率72.9％)。
LC-MS,M/Z(ESI):319.6[M+H] +
第八步：(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(三氟甲基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5I)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000064
室温下将原料(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲 酯(110mg,0.35mmol)加入到5ml DMF中，加入HATU(200mg,0.53mmol)和DIPEA(135mg,1.05mmol)，加入6-(三氟甲基)吡啶酸(66mg,0.35mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(三氟甲基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(5I)(100mg,产率58.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):492.2[M+H] +
第九步：(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶酰胺(I-5)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000065
室温下将原料(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(三氟甲基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(100mg,0.20mmol)加入到4ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化锂(129mg,3.0mmol)和甲基溴化镁(1.0mol/L,2.1ml)，室温下搅拌16h。加入5ml水，用1mol/L盐酸调节pH＝6，浓缩，制备(制备条件A：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相为1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)得白色固体(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶甲酰胺(I-5)(33mg,产率33.0％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.0(s,1H),8.52(s,1H),8.47(d,1H),8.42(t,1H),8.19(s,1H),7.50(s,1H),4.98(d,1H),4.48(d,2H),3.72(s,3H),3.48(t,1H),3.29(t,1H),3.08(t,1H),2.91(q,2H),2.80(t,1H),2.22-2.17(m,1H),1.86(t,3H),1.17(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):492.2[M+H] +。
实施例6：目标化合物I-6的制备
N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶酰胺(目标化合物I-6)
Figure PCTCN2022073320-appb-000066
目标化合物I-6的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000067
第一步：4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(6B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000068
室温下将原料4-甲氧基-1-氟-2-硝基苯(10.0g,58.5mmol)加入到50ml甲胺甲醇溶液中(含甲胺7.3g,233.9mmol)，加热至70℃，搅拌32h。冷却至室温，加入水(100ml)，用EA(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得淡黄色固体粗品4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(6B)(10.0g,产率93.9％)
LC-MS,M/Z(ESI):183.4[M+H] +。
第二步：4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(6C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000069
室温下将原料4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(2g,11.0mmol)加入到100ml THF中，加入100ml乙醇和50ml水，加入铁粉(2.5g,44.6mmol)，氯化铵(2.5g,46.7mmol)，加热至90℃，搅拌2h。冷却至室温，用DCM(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(6C)(1.5g,产率89.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):153.4[M+H] +。
第三步：4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(6D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000070
室温下将原料4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(19.5g,128mmol)加入到1000ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(21g,139.5mmol)，加入三乙胺(39.0g,386.1mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色固体粗品4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(6D)(18.0g,产率52.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):267.5[M+H] +。
第四步：3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000071
室温下将原料4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,67.6mmol)加入到600ml二甲苯中，加入PPTS(1.7g,6.8mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(1000ml)，用EA(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6E)(10.5g,产率62.5％)
LC-MS,M/Z(ESI):249.4[M+H] +。
第五步：3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000072
室温下将原料3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(9.8g,39.5mmol)加入到50ml醋酸中，冷却至0℃，加入硝酸50ml，低温下搅拌1h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6F)(3.8g,产率32.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):294.5[M+H] +。
第六步：3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(6G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000073
室温下将原料3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1.5g,5.1mmol)加入到30ml吡啶中，氮气保护下加入碘化锂(10.2g,76.1mmol)，加热至150℃，搅拌35h。冷却至室温，浓缩，加入1N盐酸(100ml)，用EA(100ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(6G)(1.1g,产率80.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):266.6[M+H] +。
第七步：3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000074
0℃下将5ml氯化亚砜加入到20ml甲醇中，搅拌0.5h，加入原料3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(1.1g,4.1mmol)，室温下搅拌3h。浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6H)(900mg,产率77.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):280.6[M+H] +。
第八步：3-(1-甲基-6-硝基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6I)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000075
室温下将原料3-(5-羟基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(900mg,3.2mmol)加入到THF(10ml)中，加入三苯基膦(1.26g,4.8mmol)和DEAD(840mg,4.8mmol)，室温下搅拌16h。浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体3-(1-甲基-6-硝基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6I)(870mg,产率77.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):350.6[M+H] +
第九步：3-(6-氨基-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6J)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000076
室温下将原料3-(1-甲基-6-硝基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(400mg,1.2mmol)加入到10mL甲醇中，加入钯碳(40mg，含量10％)，通入H 2，室温搅拌6h。过滤，浓缩，粗品白色固体3-(6-氨基-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6J)(300mg,产率82.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):320.6[M+H] +
第十步：3-(1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6K)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000077
室温下将原料3-(6-氨基-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(130mg,0.40mmol)加入到10ml DCM中，加入HATU(169mg,0.44mmol)和DIPEA(72mg,0.56mmol)，加入6-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)吡啶酸(78mg,0.41mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(6K)(120mg,产率59.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):493.4[M+H] +
第十一步：N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶酰胺(I-6)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000078
室温下将原料3-(1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(120mg,0.24mmol)加入到5ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化镧(III)双(氯化锂)络合物溶液(0.6mol/L,4.0ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,2.4ml)，室温下搅拌24h。加入5ml水，用1mol/L盐酸调节pH＝6，浓缩，制备分离方法为(色谱柱：Welch，Ultimate C18 柱，10μm，21.2mm×250mm；流动相A：1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液；梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)，得白色固体N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-(环氧丙烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(三氟甲基)吡啶酰胺(I-6)(28.5mg,产率23.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.4(s,1H),8.57(s,1H),8.48(t,1H),8.41(d,1H),8.23(d,1H),7.36(s,1H),4.79(q,2H),4.52(t,2H),4.46(s,1H),4.42(d,2H),3.73(s,3H),3.50(t,1H),2.92(q,2H),1.87(q,2H),1.18(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):493.4[M+H] +。
实施例7：目标化合物I-7的制备
(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶甲酰胺(目标化合物I-7)
Figure PCTCN2022073320-appb-000079
目标产物I-7的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000080
第一步：4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(7B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000081
室温下将原料4-溴-1-氟-2-硝基苯(10.0g,45.4mmol)加入到100mlTHF中，加入甲胺的乙 醇溶液(29％,20ml)，加热至50℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝8:1)得淡黄色液体粗品4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(7B)(10.5g,产率100％)
LC-MS,M/Z(ESI):231.2[M+H] +
第二步：4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(7C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000082
室温下将原料4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(10.5g,45.4mmol)加入到100ml THF中，加入100ml乙醇和50ml水，加入铁粉(10.5g,187.5mmol)，氯化铵(10.5g,196.2mmol)，加热至90℃，搅拌3h。冷却至室温，用DCM(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色液体4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(7C)(8.8g,产率96.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):201.2[M+H] +
第三步：4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(7D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000083
室温下将原料4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(8.8g,43.7mmol)加入到100mlDCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(7.3g,48.5mmol)，加入三乙胺(13.2g,131mmol)，室温搅拌16h。加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色液体粗品4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(7D)(9.2g,产率66.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):315.2[M+H] +
第四步：3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000084
室温下将原料4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(9.2g,29.3mmol)加入到200ml二甲苯中，加入PPTS(735mg,2.9mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸 甲酯(7E)(6.5g,产率74.9％)
LC-MS,M/Z(ESI):297.2[M+H] +
第五步：3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000085
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(10.0g,34mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(3.6g,35mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(7F)(3.0g,产率26.0％)
LC-MS,M/Z(ESI):342.2[M+H] +
第六步：(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000086
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(2.0g,5.8mmol)加入到30ml二氧六环中，氮气保护下加入Xantphos(1.0g,1.7mmol)和Pd2(dba)3(1.1g,1.2mmol)，加入碳酸铯(3.8g,11.7mmol)，加入(R)-吡咯烷-3-醇(1.0g,11.7mmol)，加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(100ml)，用EA(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7G)(300mg,产率14.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):349.6[M+H] +
第七步：(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(7H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000087
室温下将原料(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(330mg,0.95mmol)加入到3ml THF，3ml水和3ml乙醇中，加入铁粉(213mg,3.8mmol)，氯化铵(254mg,4.7mmol)，加热,70℃，搅拌3h。冷却至室温，加入水(10ml)，用乙酸乙酯(10ml×3) 萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得白色固体(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7H)(200mg,产率72.9％)。
LC-MS,M/Z(ESI):319.6[M+H] +
第八步：(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7I)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000088
室温下将原料(R)-3-(6-氨基-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(100mg,0.31mmol)加入到5ml DMF中，加入HATU(180mg,0.47mmol)和DIPEA(122mg,0.95mmol)，加入6-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)吡啶酸(64mg,0.31mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(7I)(65mg,产率41.0％)
LC-MS,M/Z(ESI):504.4[M+H] +
第九步：(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺(I-7)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000089
室温下将原料(R)-3-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-6-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺)-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(65mg,0.13mmol)加入到5ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化锂(110mg,2.6mmol)和甲基溴化镁(1.0mol/L,2.6ml)，室温下搅拌48h。加入5ml水，用1mol/L盐酸调节pH＝6，浓缩，制备(制备条件A：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相A为1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)得白色固体(R)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6- 基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶甲酰胺(I-7)(15mg,产率23.0％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.1(s,1H),8.57(s,1H),8.13(t,3H),7.87(d,1H),7.50(s,1H),7.07(d,1H),5.02(d,1H),4.50(d,1H),4.47(s,1H),3.97(s,3H),3.72(s,3H),3.49(t,1H),3.25(t,1H),3.11(t,1H),2.91(q,3H),2.26-2.24(m,1H),1.87(t,3H),1.18(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):504.4[M+H] +
实施例8：目标化合物I-8的制备
N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶甲酰胺(目标化合物I-8)
Figure PCTCN2022073320-appb-000090
目标化合物I-8的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000091
第一步：4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(8B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000092
室温下将原料4-溴-1-氟-2-硝基苯(10.0g,45.4mmol)加入到100ml THF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,20ml)，加热至50℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝8:1)得淡黄色液体粗品4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(8B)(10.5g,产率100％)
LC-MS,M/Z(ESI):231.2[M+H] +。
第二步：4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(8C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000093
室温下将原料4-溴-N-甲基-2-硝基苯胺(10.5g,45.4mmol)加入到100ml THF中，加入100ml乙醇和50ml水，加入铁粉(10.5g,187.5mmol)，氯化铵(10.5g,196.2mmol)，加热至90℃，搅拌3h。冷却至室温，用DCM(150ml×3)萃取，合并有机相，浓缩，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色液体4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(8C)(8.8g,产率96.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):201.2[M+H] +
第三步：4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(8D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000094
室温下将原料4-溴-N 1-甲基苯-1,2-二胺(8.8g,43.7mmol)加入到100ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(7.3g,48.5mmol)，加入三乙胺(13.2g,131mmol)，室温搅拌16h。加入水(500ml)，用DCM(200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色液体粗品4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(8D)(9.2g,产率66.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):315.2[M+H] +
第四步：3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000095
室温下将原料4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(9.2g,29.3mmol)加入到200ml二甲苯中，加入PPTS(735mg,2.9mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8E)(6.5g,产率74.9％)
LC-MS,M/Z(ESI):297.2[M+H] +
第五步：3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000096
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(10.0g,34mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(3.6g,35mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8F)(3.0g,产率26.0％)
LC-MS,M/Z(ESI):342.2[M+H] +
第六步：3-(1-甲基-5-吗啉-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000097
室温下将原料3-(5-溴-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(4.0g,11.7mmol)加入到120ml二氧六环中，氮气保护下加入Ruphos-G3(963mg,1.17mmol)和Pd 2(dba) 3(667mg,1.17mmol)，加入碳酸铯(11.2g,34.4mmol)，加入吗啉(2.0g,23.0mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(400ml)，用EA(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(1-甲基-5-吗啉-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8G)(3.15g,产率77.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):349.6[M+H] +
第七步：3-(6-氨基-1-甲基-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000098
室温下将原料3-(1-甲基-5-吗啉-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(350mg,1.0mmol)加入到10ml甲醇中，加入钯碳(35mg)，通入H2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，得粗品白色固体3-(6-氨基-1-甲基-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8H)(270mg,产率84.4％)。
LC-MS,M/Z(ESI):319.6[M+H] +
第八步：3-(1-甲基-6-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-yl)吡啶甲酰胺)-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8I)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000099
室温下将原料3-(6-氨基-1-甲基-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(140mg,0.44mmol)加入到5ml DMF中，加入HATU(250mg,0.66mmol)和DIPEA(130mg,0.90mmol)，加入6-(1-甲基-1H-吡唑-3-yl)吡啶甲酸(90mg,0.45mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(1-甲基-6-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-yl)吡啶甲酰胺)-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(8I)(130mg,产率58.5％)
LC-MS,M/Z(ESI):504.3[M+H] +
第九步：N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶甲酰胺(I-8)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000100
室温下将原料3-(1-甲基-6-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺)-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(130mg,0.26mmol)加入到2ml干燥THF中，冷却至0℃，加入甲基溴化镁(1.0mol/L,3ml)，室温下搅拌16h。加入5ml水，用1mol/L盐酸调节pH＝6，浓缩，制备分离方法为(色谱柱：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相A：1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)，得白色固体N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-1-甲基-5-吗啉-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺(I-8)(25mg,产率19.2％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.2(s,1H),8.62(s,1H),8.13(d,3H),7.93(d,1H),7.52(s,1H),7.10(d,1H),4.47(s,1H),3.99(s,3H),3.92(d,4H),3.74(s,3H),2.81-2.72(m,6H),1.88(t,2H),1.18(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):504.3[M+H] +。
实施例9：目标化合物I-9的制备
2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-(三 氟甲基)苯甲酰胺(目标化合物I-9)
Figure PCTCN2022073320-appb-000101
目标产物I-9的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000102
第一步：4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(9B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000103
室温下将原料4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(40.0g,200mmol)加入到600ml THF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,150ml)，加热至70℃，搅拌72h。冷却至室温，加入水(1500ml)，用DCM(1200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体粗品4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(9B)(30.0g,产率71.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):211.2[M+H] +
第二步：3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(9C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000104
室温下将原料4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(25.0g,119mmol)加入到300ml甲醇中，加 入10％Pd/C(2.5g)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(9C)(18.0g,产率84.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):181.2[M+H] +
第三步：3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(9D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000105
室温下将原料3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(18.0g,100mmol)加入到500ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,120mmol)，加入三乙胺(30.0g,300mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色固体粗品3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(9D)(13.0g,产率66.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):295.6[M+H] +
第四步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000106
室温下将原料3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(9D)(7.0g,23.8mmol)加入到300ml二甲苯中，加入PPTS(1.8g,7.1mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(300ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9E)(4.0g,产率60.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):277.4[M+H] +
第五步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000107
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(4.0g,14.5mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(2.9g,29mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙 基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9F)(1.4g,产率30.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):322.4[M+H] +
第六步：6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000108
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(2.0g,6.2mmol)加入到50ml甲醇中，加入10％Pd/C(200mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体粗品6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9G)(1.8g,产率99.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +
第七步：6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000109
室温下将原料6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(1.8g,6.2mmol)加入到50ml DCM中，加入三乙胺(1.9g,18.6mmol)，加入2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰氯(2.1g,10.0mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(9H)(2.1g,产率70.5％)。
LC-MS,M/Z(ESI):482.6[M+H] +
第八步：2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-9)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000110
室温下将原料6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d] 吲哚-5-甲酸甲酯(2.0g,4.1mmol)加入到40ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化镧(III)双(氯化锂)络合物溶液(0.6mol/L,44ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,44ml)，室温下搅拌16h。加入50ml饱和氯化铵溶液，用EA(80ml×3)萃取，干燥，过滤浓缩，制备(制备条件：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相A为1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)得白色固体2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-9)(780mg,产率33.0％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.6(s,1H),8.39(s,1H),8.19(t,1H),8.01(t,1H),7.60(t,1H),7.50(s,1H),6.18(s,1H),4.46(d,1H),3.72(s,3H),2.92(t,2H),1.87(t,2H),1.59(t,6H),1.17(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):482.5[M+H] +。
实施例10：目标化合物I-10的制备
N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(目标化合物I-10)
Figure PCTCN2022073320-appb-000111
目标化合物I-10的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000112
第一步：4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(10B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000113
室温下将原料4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(40.0g,200mmol)加入到600mlTHF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,150ml)，加热至70℃，搅拌72h。冷却至室温，加入水(1500ml)，用DCM(1200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得标题化合物淡黄色固体粗品4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(30.0g,产率71.0％)
LC-MS,M/Z(ESI):211.2[M+H] +
第二步：3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(10C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000114
室温下将原料4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(25.0g,119mmol)加入到300ml甲醇中，加入10％Pd/C(2.5g)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得标题化合物淡黄色固体3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(18.0g,产率84.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):181.2[M+H] +
第三步：3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(10D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000115
室温下将原料3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(18.0g,100mmol)加入到500mlDCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,120mmol)，加入三乙胺(30.0g,300mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得标题化合物无色固体粗品3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(13.0g,产率66.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):295.6[M+H] +
第四步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(10E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000116
室温下将原料3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(7.0g,23.8mmol)加入到300ml二甲苯中，加入对甲基苯磺酸吡啶盐(1.8g,7.1mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(300ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得标题化合物白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-5-甲酸甲酯(4.0g,产率60.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):277.4[M+H] +
第五步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(10F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000117
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(4.0g,14.5mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(2.9g,29mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得标题化合物白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(1.4g,产率30.1％)
LC-MS,M/Z(ESI):322.4[M+H] +
第六步：6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(10G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000118
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(2.0g,6.2mmol)加入到50ml甲醇中，加入10％Pd/C(200mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得标题化合物白色固体粗品6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(1.8g,产率99.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +
第七步：2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰氯(10H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000119
室温下将原料2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸(2.0g,9.6mmol)加入到50ml干燥THF中，加入3滴DMF，冷却至0℃，加入草酰氯(1.9g,15mmol)，室温下搅拌2h。将反应液浓缩，得标题化合物白色固体粗品2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酰氯(2.1g)，直接用于下一步反应。
第八步：6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(10I)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000120
室温下将原料6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(1.8g,6.2mmol)加入到50mlDCM中，加入三乙胺(1.9g,18.6mmol)，加入2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰氯(2.1g,10.0mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得标题化合物白色固体6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(2.1g,产率70.5％)
LC-MS,M/Z(ESI):482.6[M+H] +
第九步：N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-10)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000121
室温下将原料6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(2.0g,1.0mmol)加入到40ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化锂氯化镧溶液(0.6mol/L,72ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,44ml)，室温下搅拌16h。加入100ml饱和氯化铵溶液，用EA(80ml×3)萃取，干燥，过滤浓缩，经酸性制备方法A纯化得标题化合物白色固体N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-10)(15mg,产率0.75％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.24(s,1H),8.45(s,1H),7.84(d,1H),7.79(d,1H),7.56 (t,1H),7.49(s,1H),6.14(s,1H),4.45(s,1H),3.72(s,3H),2.92(t,2H),2.53(d,3H),1.87(t,2H),1.58(s,6H),1.17(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):478.5[M+H] +。
实施例11：目标化合物I-11的制备
2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-甲基苯酰胺(目标化合物I-11)
Figure PCTCN2022073320-appb-000122
目标化合物I-11的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000123
第一步：4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(11B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000124
室温下将原料4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(40.0g,200mmol)加入到600ml THF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,150ml)，加热至70℃，搅拌72h。冷却至室温，加入水(1500ml)，用DCM(1200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体粗品4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(11B)(30.0g,产率71.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):211.2[M+H] +
第二步：3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(11C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000125
室温下将原料4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(25.0g,119mmol)加入到300ml甲醇中，加入10％Pd/C(2.5g)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(11C)(18.0g,产率84.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):181.2[M+H] +。
第三步：3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(11D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000126
室温下将原料3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(18.0g,100mmol)加入到500mlDCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,120mmol)，加入三乙胺(30.0g,300mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色固体粗品3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(11D)(13.0g,产率66.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):295.6[M+H] +。
第四步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(11E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000127
室温下将原料4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(7.0g,23.8mmol)加入到300ml二甲苯中，加入PPTS(1.8g,7.1mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(300ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(11E)(4.0g,产率60.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):277.4[M+H] +
第五步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(11F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000128
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(4.0g,14.5mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(2.9g,29mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(11F)(1.4g,产率30.1％)
LC-MS,M/Z(ESI):322.4[M+H] +
第六步：6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(11G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000129
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(2.0g,6.2mmol)加入到50ml甲醇中，加入10％Pd/C(200mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体粗品6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(11G)(1.8g,产率99.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +。
第七步：4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(11H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000130
室温下将原料6-(2-氟-3-甲基苯酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(300mg,1.0mmol)加入到3ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化镧(III)双(氯化锂)络合物溶液(0.6mol/L,1.7ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,10.3ml)，室温下搅拌16h。加入50ml饱和氯化铵溶液，用EA(80ml×3)萃取，干燥，过滤浓缩，通过薄层层析板纯化得白色固体4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(11H)(80mg,产率26.6％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +。
第八步：2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6- 基)-3-甲基苯酰胺(I-11)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000131
室温下将原料4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(80mg,0.27mmol)加入到1m DMF中，加入DIPEA(70.9mg,0.55mmol)，HATU(156.7mg,0.41mmol)，加入2-氟-3-甲基苯甲酸(63.5mg,0.41mmol)，室温下搅拌16h。加入水(10ml)，用DCM(10ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，经薄层层析板(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-甲基苯酰胺(I-11)(33mg,产率28.1％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.4(s,1H),8.47(s,1H),7.70(t,1H),7.52(d,1H),7.50(s,1H),7.28(t,1H),6.15(s,1H),4.51(s,1H),3.75(s,3H),2.97(t,2H),2.33(d,3H),1.88(t,2H),1.60(t,6H),1.18(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):428.6[M+H] +。
实施例12：目标化合物I-12的制备
3-氯-2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺(目标化合物I-12)
Figure PCTCN2022073320-appb-000132
目标化合物I-12的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000133
第一步：4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(12B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000134
室温下将原料4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(40.0g,200mmol)加入到600mlTHF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,150ml)，加热至70℃，搅拌72h。冷却至室温，加入水(1500ml)，用DCM(1200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体粗品4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(12B)(30.0g,产率71.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):211.2[M+H] +。
第二步：3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(12C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000135
室温下将原料4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(25.0g,119mmol)加入到300ml甲醇中，加入10％Pd/C(2.5g)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(12C)(18.0g,产率84.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):181.2[M+H] +。
第三步：3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(12D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000136
室温下将原料3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(18.0g,100mmol)加入到500ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,120mmol)，加入三乙胺(30.0g,300mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色固体粗品3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(12D)(13.0g,产率66.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):295.6[M+H] +。
第四步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(12E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000137
室温下将原料4-((2-氨基-4-溴苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(7.0g,23.8mmol)加入到300ml二甲苯中，加入PPTS(1.8g,7.1mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(300ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(12E)(4.0g,产率60.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):277.4[M+H] +。
第五步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(12F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000138
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(4.0g,14.5mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(2.9g,29mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(12F)(1.4g,产率30.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):322.4[M+H] +。
第六步：6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(12G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000139
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(2.0g,6.2mmol)加入到50ml甲醇中，加入10％Pd/C(200mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体粗品6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(12G)(1.8g,产率99.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +。
第七步：4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(12H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000140
室温下将原料6-(2-氟苯甲酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(300mg,1.0mmol)加入到3ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化镧(III)双(氯化锂)络合物溶液(0.6mol/L,1.7ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,10.3ml)，室温下搅拌16h。加入50ml饱和氯化铵溶液，用EA(80ml×3)萃取，干燥，过滤浓缩，通过薄层层析板纯化得白色固体4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(12H)(80mg,产率26.6％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +。
第八步：3-氯-2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺(I-12)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000141
室温下将原料4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(80mg,0.27mmol)加入到1ml DMF中，加入DIPEA(70.9mg,0.55mmol)，HATU(156.7mg,0.41mmol)，加入2-氟-3-氯苯甲酸(71.9mg,0.41mmol)，室温下搅拌16h。加入水(10ml)，用DCM(10ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，通过薄层层析板(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-氯-2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺(I-12)(35mg,产率28.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.5(s,1H),8.41(s,1H),7.84(d,1H),7.80(d,1H),7.50(s,1H),7.44(t,1H),6.19(s,1H),4.46(s,1H),3.72(s,3H),2.92(t,2H),1.87(t,2H),1.60(t,6H), 1.18(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):448.2[M+H] +。
实施例13：目标化合物I-13的制备
3-(二氟甲基)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-甲基苯甲酰胺(目标化合物I-13)
Figure PCTCN2022073320-appb-000142
目标化合物I-13的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000143
第一步：4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(13B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000144
室温下将原料4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(40.0g,200mmol)加入到600ml THF中，加入甲胺的乙醇溶液(29％,150ml)，加热至70℃，搅拌72h。冷却至室温，加入水(1500ml)，用DCM(1200ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体粗品4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(13B)(30.0g,产率71.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):211.2[M+H] +。
第二步：3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(13C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000145
室温下将原料4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(25.0g,119mmol)加入到300ml甲醇中，加入10％Pd/C(2.5g)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(13C)(18.0g,产率84.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):181.2[M+H] +
第三步：3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(13D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000146
室温下将原料3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(18.0g,100mmol)加入到500ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,120mmol)，加入三乙胺(30.0g,300mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色固体粗品3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(13D)(13.0g,产率66.7％)。
LC-MS,M/Z(ESI):295.6[M+H] +。
第四步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-5-甲酸甲酯(13E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000147
室温下将原料3-氨基-4-(4-甲氧基-N-甲基-4-氧代丁酰胺)苯甲酸甲酯(7.0g,23.8mmol)加入到300ml二甲苯中，加入PPTS(1.8g,7.1mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500ml)，用EA(300ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(13E)(4.0g,产率60.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):277.4[M+H] +。
第五步：2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(13F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000148
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(4.0g,14.5mmol)加入到100ml浓硫酸中，冷却至0℃，加入硝酸钾(2.9g,29mmol)，低温下搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(13F)(1.4g,产率30.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):322.4[M+H] +。
第六步：6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(13G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000149
室温下将原料2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(2.0g,6.2mmol)加入到50ml甲醇中，加入10％Pd/C(200mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体粗品6-氨基-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(13G)(1.8g,产率99.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +。
第七步：4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(13H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000150
室温下将原料6-(2-氟苯甲酰胺)-2-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-5-甲酸甲酯(300mg,1.0mmol)加入到3ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化镧(III)双(氯化锂)络合物溶液(0.6mol/L,1.7ml)和甲基溴化镁(1.0mol/L,10.3ml)，室温下搅拌16h。加入50ml饱和氯化铵溶液，用EA(80ml×3)萃取，干燥，过滤浓缩，通过薄层层析板纯化得白色固体4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(13H)(80mg,产率26.6％)。
LC-MS,M/Z(ESI):292.6[M+H] +。
第八步：3-(二氟甲基)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-甲基苯甲酰胺(I-13)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000151
室温下将原料4-(6-氨基-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基丁烷-2-醇(150mg,0.52mmol)加入到5ml DMF中，加入DIPEA(134mg,1.0mmol)，HATU(296mg,0.78mmol)，加入3-(二氟甲基)-2-甲基苯甲酸(144mg,0.77mmol)，室温下搅拌16h。加入水(10ml)，用EA(10ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，通过薄层层析板(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)制备得白色固体3-(二氟甲基)-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-甲基苯甲酰胺(I-13)(30mg,产率12.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.3(s,1H),8.75(s,1H),7.71(t,2H),7.65(s,1H),7.53(d,1H),7.42(t,1H),6.44(s,1H),4.50(s,1H),3.94(s,3H),3.20(t,2H),2.50(s,3H),1.91(t,2H),1.61(t,6H),1.20(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):460.6[M+H] +。
实施例14：目标化合物I-14的制备
2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(目标化合物I-14)
Figure PCTCN2022073320-appb-000152
目标化合物I-14的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2022073320-appb-000153
第一步：4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(14B)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000154
室温下将原料4-甲氧基-1-氟-2-硝基苯(10.0g,58.5mmol)加入到50ml甲胺甲醇溶液中(含甲胺7.3g,233.9mmol)，加热至70℃，搅拌32h。冷却至室温，加入水(100ml)，用EA(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得淡黄色固体粗品4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(14B)(10.0g,产率93.9％)。
第二步：4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(14C)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000155
室温下将原料4-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯胺(2g,11.0mmol)加入到100ml THF中，加入100ml乙醇和50ml水，加入铁粉(2.5g,44.6mmol)，氯化铵(2.5g,46.7mmol)，加热至90℃，搅拌2h。冷却至室温，用DCM(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色固体4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(14C)(1.5g,产率89.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):153.4[M+H] +。
第三步：4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(14D)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000156
室温下将原料4-甲氧基-N 1-甲基苯-1,2-二胺(19.5g,128mmol)加入到1000ml DCM中，冷却至0℃，加入4-氯-4-氧代丁酸甲酯(21g,139.5mmol)，加入三乙胺(39.0g,386.1mmol)，室温搅拌16h。加入水(1500ml)，用DCM(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色固体粗品4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(14D)(18.0g,产率52.7％)
LC-MS,M/Z(ESI):267.5[M+H] +
第四步：3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14E)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000157
室温下将原料4-((2-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)胺)-4-氧代丁酸甲酯(18.0g,67.6mmol)加入到600ml二甲苯中，加入PPTS(1.7g,6.8mmol)，加热至140℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(1000ml)，用EA(500ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14E)(10.5g,产率62.5％)
LC-MS,M/Z(ESI):249.4[M+H] +
第五步：3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14F)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000158
室温下将原料3-(5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(9.8g,39.5mmol)加入到50ml醋酸中，冷却至0℃，加入硝酸50ml，低温下搅拌1h。加入饱和碳酸氢钠溶液(500ml)，用EA(150ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14F)(3.8g,产率32.8％)
LC-MS,M/Z(ESI):294.5[M+H] +
第六步：3-(6-氨基-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14G)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000159
室温下将原料3-(5-甲氧基-1-甲基-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(1.2g,4.1mmol)加入到10ml甲醇中，加入钯碳(120mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤，浓缩，得粗品白色固体3-(6-氨基-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14G)(960mg,产率89.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):264.6[M+H] +。
第七步：3-(6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺)-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14H)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000160
室温下将原料3-(6-氨基-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(300mg, 1.14mmol)加入到5ml DMF中，加入HATU(650mg,1.7mmol)和DIPEA(294mg,2.28mmol)，加入2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸(237mg,1.14mmol)，室温下搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体3-(6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺)-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(14H)(380mg,产率73.5％)。
LC-MS,M/Z(ESI):454.3[M+H] +。
第八步：2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-14)的合成
Figure PCTCN2022073320-appb-000161
室温下将原料3-(6-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺)-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]吲哚-2-基)丙酸甲酯(180mg,0.39mmol)加入到5ml干燥THF中，冷却至0℃，加入氯化锂(334mg,7.9mol)和甲基溴化镁(1.0mol/L,4ml)，室温下搅拌24h。加入5ml水，用1mol/L盐酸调节pH＝6，浓缩，制备分离方法为(色谱柱：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相A：1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)，制备得白色固体2-氟-N-(2-(3-羟基-3-甲基丁基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-14)(51mg,产率28.3％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.85(d,1H),8.17(s,1H),8.09(t,1H),7.98(t,1H),7.57(t,1H),7.33(s,1H),4.51(s,1H),3.87(s,3H),3.74(s,3H),2.96(t,2H),1.85(t,2H),1.17(s,6H).
LC-MS,M/Z(ESI):454.3[M+H] +。
测试A：抗炎活性测试
测试例A-1：化合物对IRAK4激酶的抑制活性
首先，将待测化合物溶解于DMSO并配制成10mM的母液，随后配制1×激酶base缓冲液(50mM HEPES,pH 7.5；0.0015％Brij-35)及终止缓冲液(100mM HEPES,pH 7.5；0.015％Brij-35，0.2％Coating Reagent#3，50mM EDTA)备用。
接着，用DMSO将化合物母液稀释至浓度梯度最高点的50倍，转移100μL此稀释液至96孔板的孔中，随后连续稀释4倍直至达到10个浓度梯度。加100μL DMSO至同一96孔板的2个空孔中，设为无化合物对照以及无酶对照，作为源板。转移10μL化合物至一块新的 96孔板，作为中间板。
在中间板的每孔中加入90μL的1×激酶缓冲液，放置于摇床10min以混合均匀。每孔分别吸取5μL，转移至384孔板的两个复孔，作为测试板。
在1×激酶base缓冲液中加入IRAK4激酶(Carna)配制成2.5×酶溶液，在1×激酶base缓冲液中加入FAM标记的多肽和ATP配制成2.5×多肽溶液。吸取2.5×酶溶液加入已含有5μL化合物的384孔板中，每孔10μL，室温孵育10min。吸取2.5×多肽溶液加入384孔测试板中，每孔10μL，于28℃孵育一小时。孵育结束后，每孔加入30μL终止缓冲液以停止反应，随后转移至Caliper仪器采集每孔的数据，拟合曲线后计算每个化合物的IC50值。
表1：测试化合物对IRAK4激酶的抑制活性
化合物 IRAK4(IC50)(nM)
I-1 1.1
I-2 0.90
I-3 1.1
I-4 3.8
I-5 1.9
I-6 3.6
I-7 44
I-8 66
I-9 19.6
I-10 >500
I-11 138
I-12 199
I-13 >500
I-14 312
试验结果表明，本发明化合物均对IRAK4激酶具有良好的抑制作用，特别是化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5以及I-6，对IRAK4激酶抑制作用显著，表明本发明化合物具有抵抗炎症反应的潜力。
测试例A-2：化合物对R848刺激PBMC产生TNF-α的抑制活性
首先，复苏冻存的PBMC细胞，200rpm，5min离心取上清，用1640+10％FBS+1％P/S完全培养基重悬后计数。按照8×104/孔的密度，100μl/孔接种细胞至96孔板生长过夜。
接着，配制10mM化合物母液并用DMSO依次3倍稀释，然后用1640+10％FBS+1％P/S完全培养基将一系列浓度稀释500倍，达到4倍终浓度(20μM)。将配制的化合物，按照50μl/孔加入到细胞中，同时设定不加化合物的对照孔，预孵育30min。孵育的同时，配制浓度为10mg/ml的R848母液，用1640+10％FBS+1％P/S培养基先稀释100倍再稀释31.25倍，达到4倍终浓度(3.2μg/ml)。将配制好的R848按照50μl/孔加入到细胞中，同时设定不加R848的对照孔。细胞继续孵育24h后收集上清，分别取50％上清，用Human TNF-α试剂盒(Invitrogen， LOT:189974010)进行检测。
表2：测试化合物对R848刺激PBMC产生TNF-α的抑制活性
化合物 IC50(nM)
I-1 13
I-2 10
I-3 8.6
I-4 220
I-5 127
I-6 66.3
I-9 121.9
试验结果表明，本发明化合物均对TNF-α产生具有良好的抑制活性，尤其是化合物I-1、I-2、I-3对TNF-α产生的抑制活性显著，表明本发明化合物具有抵抗炎症反应的潜力。
测试例A-3：化合物对R848刺激人全血产生IL6的抑制活性
抽取30ml健康志愿者静脉血至肝素抗凝管。
配制100×化合物DMSO溶液，起始浓度500μM，3倍稀释至12个浓度梯度(含两个0点)；
在96孔圆底板中分别加入2μl不同浓度梯度的100×阳性化合物DMSO溶液，再分别加入200μl肝素抗凝全血，混匀至阳性化合物终浓度为1×工作浓度，每个化合物设置三个复孔，DMSO终浓度为1％。盖上板盖，37℃孵育30min。
取适量10mg/ml R848母液(DMSO)加纯水稀释至5μg/ml(20×)，每孔加入10μl R848水溶液(5μg/ml)，使得R848终浓度为0.25μg/ml。其中一个0点浓度孔中仅加入10μl纯水，作为不刺激孔。混匀后盖上板盖，37℃孵育4h。
孵育结束后，1500rpm离心10min，收集25μl血浆，用ELISA试剂盒(Biolegend,Cat:430504)检测human IL6浓度。
试验结果表明，本发明化合物均对IL-6的产生具有良好的抑制作用，表明本发明化合物具有抵抗炎症反应的潜力。
测试B：抗癌活性测试
测试例B-1：化合物对FLT3-WT、FLT3-ITD或FLT3-D35Y激酶的抑制活性
首先，将待测化合物溶解于DMSO并配制成10mM的母液，随后配制1×激酶base缓冲液(50mM HEPES,pH 7.5；0.0015％Brij-35)及终止缓冲液(100mM HEPES,pH 7.5；0.015％Brij-35，0.2％Coating Reagent#3，50mM EDTA)备用。
接着，用DMSO将化合物母液稀释至浓度梯度最高点的50倍，转移100μL此稀释液至96孔板的孔中，随后连续稀释4倍直至达到10个浓度梯度。加100μL DMSO至同一96孔板的2个空孔中，设为无化合物对照以及无酶对照，作为源板。转移10μL化合物至一块新的 96孔板，作为中间板。
在中间板的每孔中加入90μL的1×激酶缓冲液，放置于摇床10min以混合均匀。每孔分别吸取5μL，转移至384孔板的两个复孔，作为测试板。
在1×激酶base缓冲液中加入对应的激酶(FLT3-WT/FLT3-ITD/FLT3-835Y,Carna)配制成2.5×酶溶液，在1×激酶base缓冲液中加入FAM标记的多肽和ATP配制成2.5×多肽溶液。吸取2.5×酶溶液加入已含有5μL化合物的384孔板中，每孔10μL，室温孵育10min。吸取2.5×多肽溶液加入384孔测试板中，每孔10μL，于28℃孵育0.5小时。孵育结束后，每孔加入30μL终止缓冲液以停止反应，随后转移至Caliper仪器采集每孔的数据，拟合曲线后计算每个化合物的IC50值。
表3：FLT3-WT、FLT3-ITD或FLT3-D35Y激酶的抑制活性
Figure PCTCN2022073320-appb-000162
试验结果表明，本发明化合物I-1和I-2还对FLT3激酶的野生型、ITD突变型以及D835Y突变型均有显著的抑制作用，表明该化合物具有应对FLT3突变型癌症的潜在能力。
测试例B-2：CTG法测OCI-LY10肿瘤细胞增殖试验
将OCI-LY10(人B细胞淋巴瘤)细胞系在37℃，5％CO 2培养体系中常规传代培养，收获在指数生长期生长的细胞并计数以进行平板接种。
用台盼蓝染色的血细胞计数器计数细胞，调整细胞浓度至适当的密度并接种于96孔板，每孔90μL细胞悬液，同时设定仅加入培养基的孔作为空白对照。将平板放置于在37℃，5％CO2培养体系中过夜，作为细胞测试板。
在96孔板中用DMSO稀释化合物，直至不同梯度浓度。
接下来，准备V底细胞培养板，每孔加入198μL测试培养基以及2μL稀释好的化合物溶液，对照孔加入2μL DMSO，用移液枪上下吹打混匀，此V底培养板作为10×浓度的化合物平板。
从化合物平板的每个单孔中，各吸取10μL化合物-培养基混合物或对照孔中的混合物，转移至细胞测试板，DMSO的终浓度为0.1％。将细胞测试板放回培养体系中静置3天，待细胞生长。
用Promega的CellTiter-Glo试剂盒(Promega-G7573)对细胞样品进行处理，在2104 EnVision plate reader上记录发光信号。计算待测化合物不同剂量下的抑制率(IR)： IR(％)＝(1–(RLU化合物–RLU空白)/(RLU对照–RLU空白))×100％，再计算IC50值。
表4：肿瘤细胞抑制活性
化合物 IC50(μM)
I-2 0.29
I-5 5.1
I-9 89
试验结果表明，本发明化合物均对OCI-LY10细胞增殖表现出较强的抑制活性，尤其是化合物I-2以及I-5，对OCI-LY10细胞增殖的抑制活性显著，表明本发明化合物具有应对癌症的潜在能力。
测试C：药代动力学试验
小鼠药代动力学试验，使用雄性ICR小鼠，20-25g，禁食过夜。取3只小鼠，口服灌胃给药10mg/kg。在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血。血液样品6800g，2-8℃离心6分钟，收集血浆，于-80℃保存。取各时间点血浆，加入3-5倍量含内标的乙腈溶液混合，涡旋混合1分钟，13000转/分钟4℃离心10分钟，取上清液加入3倍量水混合，取适量混合液进行LC-MS/MS分析。主要药代动力学参数用WinNonlin 7.0软件非房室模型分析
大鼠药代动力学试验，采用雄性SD大鼠，180-240g，禁食过夜。取3只大鼠，口服灌胃给药10mg/kg。在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血。血液样品于4℃以8000转/分钟离心6分钟，收集血浆，于-20℃保存。取各时间点血浆，加入3-5倍量含内标的乙腈溶液混合，涡旋混合1分钟，13000转/分钟4℃离心10分钟，取上清液加入3倍量水混合，取适量混合液进行LC-MS/MS分析。主要药代动力学参数用WinNonlin 7.0软件非房室模型分析。
犬药代动力学试验，使用雄性比格犬，8-10kg，禁食过夜。取3只比格犬，口服灌胃给药5mg/kg。在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血。血液样品于4℃以8000转/分钟离心6分钟，收集血浆，于-20℃保存。取各时间点血浆，加入3-5倍量含内标的乙腈溶液混合，涡旋混合1分钟，13000转/分钟4℃离心10分钟，取上清液加入3倍量水混合，取适量混合液进行LC-MS/MS分析。主要药代动力学参数用WinNonlin 7.0软件非房室模型分析。
表5：小鼠药代动力学试验结果
Figure PCTCN2022073320-appb-000163
Figure PCTCN2022073320-appb-000164
小鼠药代动力学试验结果表明，本发明化合物表现出优良的药代动力学性质，暴露量大，成药性好。
表6：大鼠药代动力学试验结果
Figure PCTCN2022073320-appb-000165
大鼠药代动力学试验结果表明，本发明化合物表现出优良的药代动力学性质，暴露量大，成药性好。
表7：犬药代动力学试验结果
Figure PCTCN2022073320-appb-000166
犬药代动力学试验结果表明，本发明化合物表现出优良的药代动力学性质，暴露量大，成药性好。

Claims (19)

  1. 式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
    Figure PCTCN2022073320-appb-100001
    其中，
    L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
    R 1选自未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基、或、未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的被R a取代的C 1-C 6烷基中、或、所述的被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
    环A选自5-8元杂芳基或6-10元芳基，所述的5-8元杂芳基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    n为1或2；
    R 2选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基、未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、未取代或被R b取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被R b取代的4-8元杂环烯基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、被R b取代的6-10元芳基、被R b取代的4-8元杂环烷基、或、被R b取代的4-8元杂环烯基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同；
    当环A为5-8元杂芳基时，R 1不为未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基。
  2. 根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，
    当R 1为未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基；
    和/或，当R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为含氮杂环烷基；
    和/或，当R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为含氧杂环烷基；
    和/或，当R 1为被R a取代的C 1-C 6烷基、或、被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述的取代的个数独立地为1-3个；
    和/或，R a为羟基；
    和/或，当R a为卤素时，所述卤素为F、Cl、Br、I；
    和/或，当R a为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基。
  3. 根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，当R 1为未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基；
    和/或，当R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为氮杂环丁烷、氮杂环戊烷、氮杂环己烷或吗啉基；
    和/或，当R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为氧杂环丁烷、氧杂环戊烷或氧杂环己烷；
    和/或，当R 1为被R a取代的C 1-C 6烷基、或、被R a取代的4-8元杂环烷基时，所述的取代的个数独立地为1个；
    和/或，当R a为卤素时，所述卤素为F或Cl；
    和/或，当R a为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基。
  4. 根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，
    当环A为选自5-8元杂芳基时，所述5-8元杂芳基为吡咯、吡唑、三氮唑、呋喃、噁唑、噻吩、噻唑、吡啶、吡嗪或嘧啶；
    和/或，当环A为6-10元芳基时，所述的6-10元芳基为苯基或萘基；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的5-8元杂芳基，所述5-8元杂芳基为吡咯、吡唑、三氮唑、呋喃、噁唑、噻吩、噻唑、吡啶、吡嗪或嘧啶；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的6-10元芳基时，所述的6-10元芳基为苯基或萘基；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的4-8元杂环烷基时，所述的4-8元杂环烷基独立地为氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、四氢吡咯烷基、四氢呋喃基、六氢吡喃或四氢-2H-硫吡喃1,1-二氧化物；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的4-8元杂环烯基时，所述的4-8元杂环烯基独立地为二氢吡啶基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、吡咯啉基、咪唑啉基、吡唑啉基、二氢咪唑基、二氢吡唑基、二氢噁唑基、二氢噁二唑基、二氢噻唑基、二氢异噻唑基、二氢噻吩基、二氢吡咯基、3,4-二氢-2H-吡喃基、二氢呋喃基、二氢吡嗪基、二氢嘧啶基或氟代二氢呋喃基；
    和/或，当R 2为被R b取代的5-8元杂芳基、被R b取代的6-10元芳基时、被R b取代的4-8元杂环烷基、或、被R b取代的4-8元杂环烯基时，所述的取代的个数独立地为1-3个；
    和/或，当R 2为卤素时，所述卤素为F、Cl、Br、I；
    和/或，当R 2为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基；
    和/或，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基；
    和/或，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为F、Cl、Br、I；
    和/或，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为1、2或3个；
    和/或，当R b为卤素时，所述卤素为F、Cl、Br、I；
    和/或，当R b为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基；
    和/或，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为C 1-C 3烷基；
    和/或，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为F、Cl、Br、I；
    和/或，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为1、2或3个。
  5. 根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，当环A为选自5-8元杂芳基时，所述5-8元杂芳基为噁唑或吡啶；
    和/或，当环A为6-10元芳基时，所述的6-10元芳基为苯基；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的5-8元杂芳基，所述5-8元杂芳基为吡唑或吡啶；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的6-10元芳基时，所述的6-10元芳基为苯基；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的4-8元杂环烷基时，所述的4-8元杂环烷基独立地为 氮杂环丁烷或氧杂环丁烷；
    和/或，当R 2为未取代或被R b取代的4-8元杂环烯基时，所述的4-8元杂环烯基独立地为1,2,3,4-四氢吡啶基、1,2-二氢吡啶基、1,4-二氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、3,4-二氢-2H-吡喃基或二氢呋喃基；
    和/或，当R 2为被R b取代的5-8元杂芳基、被R b取代的6-10元芳基时、被R b取代的4-8元杂环烷基、或、被R b取代的4-8元杂环烯基时，所述的取代的个数独立地为1或2个；
    和/或，当R 2为卤素时，所述卤素为F或Cl；
    和/或，当R 2为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基；
    和/或，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基；
    和/或，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为F或Cl；
    和/或，当R 2为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为1、2或3个；
    和/或，当R b为卤素时，所述卤素为F或Cl；
    和/或，当R b为C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基；
    和/或，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述C 1-C 6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基；
    和/或，当R b为被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基时，所述卤素为F或Cl。
  6. 根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，
    Figure PCTCN2022073320-appb-100002
    为
    Figure PCTCN2022073320-appb-100003
    和/或，
    Figure PCTCN2022073320-appb-100004
    为
    Figure PCTCN2022073320-appb-100005
    Figure PCTCN2022073320-appb-100006
  7. 根据权利要求1所述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，其为方案1、方案2或方案3；其中，
    方案1、
    Figure PCTCN2022073320-appb-100007
    L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
    R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
    n为1或2；
    R 2选自未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、或、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、或、被R b取代的6-10元芳基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同；
    方案2、
    Figure PCTCN2022073320-appb-100008
    L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
    R 1选自未取代或被R a取代的C 1-C 6烷基、或、未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的被R a取代的C 1-C 6烷基中、或、所述的被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选 自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
    n为1或2；
    R 2选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基、未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、未取代或被R b取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被R b取代的4-8元杂环烯基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、被R b取代的6-10元芳基、被R b取代的4-8元杂环烷基、或、被R b取代的4-8元杂环烯基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同；
    方案3、
    Figure PCTCN2022073320-appb-100009
    L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
    R 1为未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基；所述的被R a取代的4-8元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-8元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    当L为-O-(CH 2) m-时，-L-R 1为-O-(CH 2) m-R 1；
    n为1或2；
    R 2选自未取代或被R b取代的5-8元杂芳基、未取代或被R b取代的6-10元芳基、卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、或、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；所述的被R b取代的5-8元杂芳基、或、被R b取代的6-10元芳基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基-O-、-COOH、-C(＝O)NH 2、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 6烷基；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同。
  8. 根据权利要求7所述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，
    所述方案1中，L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
    R 1为未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基；所述的未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个羟基取代；所述的未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    n为1或2；
    R 2选自未取代或被R b取代的5或6元杂芳基，所述的未取代或被R b取代的5或6元杂芳基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个C 1-C 3烷基取代；当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同；所述未取代或被R b取代的5或6元杂芳基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    所述方案2中，L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
    R 1选自未取代或被R a取代的C 1-C 4烷基，所述被R a取代的C 1-C 4烷基中，所述的取代各自独立地是指下列取代基中的一个或多个C 1-C 3烷基或羟基取代，当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
    n为1或2；
    R 2选自卤素、C 1-C 3烷基、被1-5个相同或不同卤素取代的C 1-C 3烷基，当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同；
    所述方案3中，L为不存在或-O-(CH 2) m-，所述m为0、1、2或者3；
    R 1为未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基，所述的被R a取代的4-6元杂环烷基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个羟基取代，当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述的未取代或被R a取代的4-6元杂环烷基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    n为1或2；
    R 2选自未取代或被R b取代的5或6元杂芳基、或、被1-4个相同或不同卤素取代的C 1-C 3烷基；所述的被R b取代的5或6元杂芳基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个C 1-C 3烷基取代，当n不为1时，R 2独立地为相同或者不同，所述未取代或被R b取代的5或6元杂芳基中，杂原子选自N、S、O和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个。
  9. 根据权利要求1所述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、 溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，环A为5或6元杂芳基，所述5或6元杂芳基中，杂原子选自N、O、S和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    R 2选自1-3个相同或不同卤素取代的C 1-C 3烷基、或被R a取代的5或6元杂芳基，所述被R a取代的5或6元杂芳基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个C 1-C 3烷基取代，所述5或6元杂芳基中，杂原子选自N、O、S或P，杂原子数为1个；
    当L为不存在时，R 1选自未取代或被R b取代的5或6元杂环基，所述被R b取代的5或6元杂环基中，所述的取代各自独立地是指一个或多个羟基取代，所述5或6元杂环基中，杂原子选自N、O、S和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个；
    当L为-O-(CH 2) m-时，R 1选自4或5元杂环基，所述4或5元杂环基中，杂原子选自N、O、S和P中的一种或多种，杂原子数为1-3个。
  10. 根据权利要求1所述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述的如式I所示的化合物选自下列任一化合物：
    Figure PCTCN2022073320-appb-100010
  11. 一种药物组合物，其特征在于，其包含如权利要求1-10中任一项所述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，和药学上可接受的赋形剂。
  12. 根据权利要求1-10中任一项所述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药、或如权利要求11所述的药物组合物在制备用于治疗与IRAK4相关疾病药物中的用途。
  13. 根据权利要求12所述的用途，其特征在于所述IRAK4相关疾病为自身免疫性疾病、癌症。
  14. 根据权利要求13所述的用途，其特征在于所述自身免疫性疾病为多发性硬化、系统性红斑狼疮、银屑病、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、类风湿性关节炎、反应性关节炎、全身型幼年特发性关节炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和过敏性湿疹。
  15. 根据权利要求13所述的用途，其特征在于所述癌症为脑癌、肾癌、肝癌、胃癌、阴道癌、卵巢癌、胃肿瘤、乳腺癌、膀胱结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、宫颈癌、睾丸癌、皮肤癌、骨癌或甲状腺癌；肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、颈部和头部肿瘤、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、乳房癌、滤泡癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤；急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞瘤和多发性骨髓瘤的血液恶性肿瘤。
  16. 一种治疗与IRAK4相关疾病的方法，其特征在于，包括：
    向受试者施用根据权利要求1-10中任一项所述的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药、或如权利要求11所述的药物组合物。
  17. 根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述IRAK4相关疾病为自身免疫性疾病、癌症。
  18. 根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述自身免疫性疾病为多发性硬化、系统性红斑狼疮、银屑病、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、类风湿性关节炎、反应性关节炎、全身型幼年特发性关节炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和过敏性湿疹。
  19. 根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述癌症为脑癌、肾癌、肝癌、胃癌、阴道癌、卵巢癌、胃肿瘤、乳腺癌、膀胱结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、宫颈癌、睾丸癌、皮肤癌、骨癌或甲状腺癌；肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、颈部和头部肿瘤、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、乳房癌、滤泡癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤；急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞瘤和多发性骨髓瘤的血液恶性肿瘤。
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