WO2022004760A1

WO2022004760A1 - 抗ｃｃｒ８抗体と化学療法剤の併用

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Publication number: WO2022004760A1
Application number: PCT/JP2021/024651
Authority: WO
Inventors: 秀和田中; 渉野上; 良平永井; 祐大園田
Original assignee: 塩野義製薬株式会社
Priority date: 2020-06-30
Filing date: 2021-06-30
Publication date: 2022-01-06
Also published as: EP4173636A1; US20230256092A1; EP4173636A4; JPWO2022004760A1

Abstract

抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用が、癌の治療又は予防に有用であることを見出した。

Description

抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用

　本発明は、抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用に関する。

　腫瘍微小環境内の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）が媒介する免疫抑制をはじめとする強力な負の調節機構は、腫瘍の治療にとって大きな障害である（非特許文献１）。
　例えば、腫瘍に浸潤するＣＤ４陽性Ｔｒｅｇ細胞は、抗腫瘍免疫応答を強力に阻害している可能性があり、効果的な癌治療の大きな障害となりうる。
　ＣＤ４陽性ＦｏｘＰ３陽性Ｔｒｅｇ細胞が媒介する腫瘍免疫抑制は、動物腫瘍モデルで十分に立証されており、腫瘍内も含めた全身性のＴｒｅｇ細胞除去により抗腫瘍効果が得られるが、一方で５０％程度の腫瘍内浸潤Ｔｒｅｇ細胞除去では効果が認められないことが報告されている（非特許文献２）。

　ヒトにおいて全ＣＤ４陽性Ｔ細胞集団中のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔｒｅｇ細胞比（Ｔｒｅｇ細胞を含む細胞集団）の増大が、肺、乳房及び卵巣腫瘍をはじめとする、種々の癌患者の腫瘍内で検出され、存在比と患者生存率に負の相関があることが報告されている（非特許文献３～８）。

　ＣＣＲ８はＣＹ６、ＣＫＲ―Ｌ１又はＴＥＲ１とも呼ばれていた胸腺や脾臓等で発現しているＧ蛋白共役型７回膜貫通型のＣＣケモカイン受容体タンパク質であり、その遺伝子はヒトクロモゾームでは３ｐ２１に存在する。ヒトＣＣＲ８は３５５アミノ酸からなる（非特許文献９）。ＣＣＲ８に対する内因性リガンドとしてはＣＣＬ１が知られている（非特許文献１０）。ヒトＣＣＲ８　ｃＤＮＡはＧｅｎｂａｎｋ　ＡＣＣ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００５２０１．３に示される塩基配列で構成され、マウスＣＣＲ８　ｃＤＮＡはＧｅｎｂａｎｋ　ＡＣＣ　Ｎｏ．ＮＭ＿００７７２０．２に示される塩基配列で構成される。

　ＣＣＲ８は、腫瘍内浸潤Ｔｒｅｇ細胞にも特異的に発現しており、ＣＣＲ８欠損マウスと野生型マウスに乳癌細胞を移植したところ、ＣＣＲ８欠損マウスにおける乳癌の増殖と転移が野生型マウスと比較して抑制されていたことが示されている（特許文献１及び非特許文献１１）。さらに、抗ＣＣＲ８抗体を癌モデル動物に投与することにより抗腫瘍効果を示したことが開示されている（特許文献２、３及び９）。

　抗ＣＣＲ８抗体と他薬剤の併用に関しては、以下の報告がなされている。特許文献２及び３には、抗ＣＣＲ８抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用による抗腫瘍効果が示されている。特許文献４には、抗ＣＣＲ８抗体とリステリア癌ワクチンの併用による抗腫瘍効果が示されている。特許文献５には、ＣＣＲ８とＣＴＬＡ－４に対する二重抗体が開示されている。しかし、いずれも抗ＣＣＲ８抗体と免疫療法剤の併用に関しており、抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用は全く示されていない。

　抗ＣＣＲ８抗体以外の免疫療法剤と化学療法剤の併用に関しては、以下の報告がなされている。特許文献６には、抗ＰＤ－１抗体とＶＥＧＦ受容体阻害剤であるアキシチニブとの併用による抗腫瘍効果が示されている。特許文献７には、抗ＰＤ－１抗体とジナシクリブとの併用による抗腫瘍効果が示されている。特許文献８には、抗ＣＴＬＡ－４抗体とエトポシド等、種々の化学療法剤との併用による抗腫瘍効果が示されている。

米国特許第１００８７２５９号明細書国際公開第２０１８／１８１４２５号国際公開第２０１８／１１２０３２号国際公開第２０１９／１５７０９８号中国特許公開第１１０８３５３７４号明細書特許第６５９１４２８号公報特許第６５８６０８７号公報特許第５５８９０７７号公報国際公開第２０２０／１３８４８９号

Nat. Rev. Immunol.、２００６年、第６巻、第４号、p.295-307 Eur. J. Immunol.、２０１０年、第４０巻、p.3325-3335 J. Clin. Oncol.、２００６年、第２４巻、p.5373-5380 Nat. Med.、２００４年、第１０巻、p.942-949 J. Clin. Oncol.、２００７年、第２５巻、p.2586-2593 Cancer、２００６年、第１０７巻、p.2866-2872 Eur. J. Cancer、２００８年、第４４巻、p.1875-1882 Cell. Mol. Immunol.　２０１１年、第８巻、p.59-66 J. Immunol.、　１９９６年、第１５７巻、第７号、p.2759-63 J. Biol. Chem.、１９９７年、第２７２巻、第２８号、p.17251-4 Cancer Res.、２０１６年、第７６巻、第４号、Supp.1, P4-04-11

　本発明の課題は、抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用を提供することにある。さらには、癌治療に有用な抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用を提供することにある。

　本発明者らは、鋭意研究の結果、抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の投与により、併用効果を示すことを見出した。さらに、本発明の抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用が、癌の治療又は予防に有用であることを見出した。

　本発明は、以下に関する。
（１）抗ＣＣＲ８抗体を含有する、化学療法剤とともに用いる医薬組成物。
（２）化学療法剤を含有する、抗ＣＣＲ８抗体とともに用いる医薬組成物。
（３）癌治療用である、（１）又は（２）記載の医薬組成物。
（４）抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療が無効である癌に対する治療用である、（３）記載の医薬組成物。
（５）癌が乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌又は卵巣癌である、（１）～（４）のいずれかに記載の医薬組成物。
（６）癌が乳癌、肺癌、膀胱癌、腎癌又は大腸癌である、（５）記載の医薬組成物。
（６’）癌が乳癌、肺癌、膀胱癌又は大腸癌である、（５）記載の医薬組成物。
（７）癌が乳癌、肺癌又は大腸癌である、（５）記載の医薬組成物。
（８）化学療法剤が白金錯体、タキサン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、エトポシド又はドキソルビシンである、（１）～（７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（８’）化学療法剤が白金錯体、タキサン、ゲムシタビン又はフルオロウラシルである、（１）～（７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９）化学療法剤がゲムシタビンである、（８）記載の医薬組成物。
（１０）化学療法剤が白金錯体であり、白金錯体がカルボプラチン、シスプラチン又はオキサリプラチンである、（８）記載の医薬組成物。
（１１）白金錯体がカルボプラチンである、（１０）記載の医薬組成物。
（１２）化学療法剤がタキサンであり、タキサンがパクリタキセル又はドセタキセルである、（８）記載の医薬組成物。
（１３）化学療法剤がフルオロウラシルである、（８）記載の医薬組成物。
（１４）抗ＣＣＲ８抗体が、
１）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域
（ここで、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換
Ｄ）配列番号３のアミノ酸配列の５番目のロイシンがイソロイシンに置換
Ｅ）配列番号４のアミノ酸配列の４番目のロイシンがイソロイシンに置換
Ｆ）配列番号４のアミノ酸配列の６番目のチロシンがフェニルアラニンに置換
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１６番目のセリンがトレオニンに置換
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換）；
２）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
３）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
（ここで、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の２番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の３番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｃ）配列番号２のアミノ酸配列の５番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列の２番目のグルタミンがアスパラギンに置換、
Ｅ）配列番号８のアミノ酸配列の１番目のトレオニンがセリンに置換、
Ｆ）配列番号６のアミノ酸配列の１４番目のアラニンがバリンに置換、
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１８番目のリジンがアルギニンに置換、
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
Ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列の５番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
Ｊ）配列番号１１のアミノ酸配列の１２番目のチロシンがフェニルアラニンに置換）；
４）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
５）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；若しくは
６）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１）～（１３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（１５）抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号３のアミノ酸配列の５番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４のアミノ酸配列の４番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４のアミノ酸配列の６番目のチロシンがフェニルアラニンに置換
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１６番目のセリンがトレオニンに置換
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１４）記載の医薬組成物。
（１６）抗ＣＣＲ８抗体が、以下のいずれかの置換を１以上有するモノクローナル抗体又は抗体断片である、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
（１５）記載の医薬組成物。
（１７）抗ＣＣＲ８抗体が、配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、
さらに、以下のいずれか一つの置換を有
していても良いモノクローナル抗体又は抗体断片である、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換、
（１５）又は（１６）記載の医薬組成物。
（１８）抗ＣＣＲ８抗体が、配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、さらに、配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがアルギニンに置換されているモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１７）記載の医薬組成物。
（１８’）抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、
配列番号６のアミノ酸配列の１８番目のリジンがアルギニンに置換されているモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１４）記載の医薬組成物。
（１８’’）抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１４）記載の医薬組成物。
（１９）抗ＣＣＲ８抗体が、ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片である、（１４）～（１８）のいずれかに記載の医薬組成物。
（２０）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
１）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
２）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
３）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
４）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
５）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
６）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
７）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
８）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
９）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
１０）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
１１）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；若しくは
１２）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換；
Ｇ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｈ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
（１９）記載の医薬組成物。
（２１）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換；
Ｇ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｈ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
（２０）記載の医薬組成物。
（２２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換；
Ｇ）配列番号４１のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｈ）配列番号４１のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
（２１）記載の医薬組成物。
（２３）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
（２１）又は（２２）記載の医薬組成物。
（２４）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、
さらに、以下のいずれか一つの置換を有していても良い、
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換、
（２１）～（２３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（２５）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
配列番号４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、配列番号４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがアルギニンに置換されている、
（２４）記載の医薬組成物。
（２６）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する、（２４）記載の医薬組成物。
（２６’）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号６０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する、（１９）記載の医薬組成物。
（２７）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
さらに、配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域、及び、
配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を有し、
配列番号５３のＣ末端にリジンが付加していてもしていなくてもよい、（１９）～（２６）のいずれかに記載の医薬組成物。
（２８）抗ＣＣＲ８抗体が、中和抗体である、（１）～（２７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（２９）抗ＣＣＲ８抗体が、ＡＤＣＣ活性を有するものである、（１）～（２７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（３０）抗ＣＣＲ８抗体が、ＩｇＧ抗体である、（１）～（２７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（３１）化学療法剤とともに用いるために、抗ＣＣＲ８抗体を投与することを特徴とする、癌の治療方法。
（３２）抗ＣＣＲ８抗体とともに用いるために、化学療法剤を投与することを特徴とする、癌の治療方法。
（３３）化学療法剤とともに用いる、癌を治療するための抗ＣＣＲ８抗体。
（３４）抗ＣＣＲ８抗体とともに用いる、癌を治療するための化学療法剤。（３５）化学療法剤とともに用いる、抗ＣＣＲ８抗体の癌治療用医薬を製造するための使用。
（３６）抗ＣＣＲ８抗体とともに用いる、化学療法剤の癌治療用医薬を製造するための使用。

（１－２）抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤を組み合わせてなる医薬。
（３－２）癌治療用である、（１－２）記載の医薬。
（４－２）抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療が無効である癌に対する治療用である、（３－２）記載の医薬。
（５－２）癌が乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌又は卵巣癌である、（１－２）～（４－２）のいずれかに記載の医薬。
（６－２）癌が乳癌、肺癌、膀胱癌、腎癌又は大腸癌である、（５－２）記載の医薬。
（６’－２）癌が乳癌、肺癌、膀胱癌又は大腸癌である、（５－２）記載の医薬。
（７－２）癌が乳癌、肺癌又は大腸癌である、（５－２）記載の医薬。
（８－２）化学療法剤が白金錯体、タキサン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、エトポシド又はドキソルビシンである、（１－２）～（７－２）のいずれかに記載の医薬。
（８’－２）化学療法剤が白金錯体、タキサン、ゲムシタビン又はフルオロウラシルである、（１－２）～（７－２）のいずれかに記載の医薬。
（９－２）化学療法剤がゲムシタビンである、（８－２）記載の医薬。
（１０－２）化学療法剤が白金錯体であり、白金錯体がカルボプラチン、シスプラチン又はオキサリプラチンである、（８－２）記載の医薬。
（１１－２）白金錯体がカルボプラチンである、（１０－２）記載の医薬。
（１２－２）化学療法剤がタキサンであり、タキサンがパクリタキセル又はドセタキセルである、（８－２）記載の医薬。
（１３－２）化学療法剤がフルオロウラシルである、（８－２）記載の医薬。
（１４－２）抗ＣＣＲ８抗体が、
１）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域
（ここで、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換
Ｄ）配列番号３のアミノ酸配列の５番目のロイシンがイソロイシンに置換
Ｅ）配列番号４のアミノ酸配列の４番目のロイシンがイソロイシンに置換
Ｆ）配列番号４のアミノ酸配列の６番目のチロシンがフェニルアラニンに置換
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１６番目のセリンがトレオニンに置換
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換）；
２）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
３）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
（ここで、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の２番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の３番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｃ）配列番号２のアミノ酸配列の５番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列の２番目のグルタミンがアスパラギンに置換、
Ｅ）配列番号８のアミノ酸配列の１番目のトレオニンがセリンに置換、
Ｆ）配列番号６のアミノ酸配列の１４番目のアラニンがバリンに置換、
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１８番目のリジンがアルギニンに置換、
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
Ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列の５番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
Ｊ）配列番号１１のアミノ酸配列の１２番目のチロシンがフェニルアラニンに置換）；
４）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
５）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；若しくは
６）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１－２）～（１３－２）のいずれかに記載の医薬。
（１５－２）抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号３のアミノ酸配列の５番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４のアミノ酸配列の４番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４のアミノ酸配列の６番目のチロシンがフェニルアラニンに置換
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１６番目のセリンがトレオニンに置換
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１４－２）記載の医薬。
（１６－２）抗ＣＣＲ８抗体が、以下のいずれかの置換を１以上有するモノクローナル抗体又は抗体断片である、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
（１５－２）記載の医薬。
（１７－２）抗ＣＣＲ８抗体が、配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、
さらに、以下のいずれか一つの置換を有していても良いモノクローナル抗体又は抗体断片である、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換、
（１５－２）又は（１６－２）記載の医薬。
（１８－２）抗ＣＣＲ８抗体が、配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、さらに、配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがアルギニンに置換されているモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１７－２）記載の医薬。
（１８’－２）抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、
配列番号６のアミノ酸配列の１８番目のリジンがアルギニンに置換されているモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１４－２）記載の医薬。
（１８’’－２）抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、（１４－２）記載の医薬。
（１９－２）抗ＣＣＲ８抗体が、ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片である、（１４－２）～（１８－２）のいずれかに記載の医薬。
（２０－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
１）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
２）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
３）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
４）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
５）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
６）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
７）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
８）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
９）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
１０）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
１１）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；若しくは
１２）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換；
Ｇ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｈ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
（１９－２）記載の医薬。
（２１－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換；
Ｇ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｈ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
（２０－２）記載の医薬。
（２２－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換；
Ｇ）配列番号４１のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｈ）配列番号４１のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
（２１－２）記載の医薬。
（２３－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有する、
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
（２１－２）又は（２２－２）記載の医薬。
（２４－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、
さらに、以下のいずれか一つの置換を有していても良い、
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換、
（２１－２）～（２３－２）のいずれかに記載の医薬。
（２５－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、
配列番号４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、配列番号４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがアルギニンに置換されている、
（２４－２）記載の医薬。
（２６－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する、（２４－２）記載の医薬。
（２６’－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号６０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する、（１９－２）記載の医薬。
（２７－２）ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
さらに、配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域、及び、
配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を有し、
配列番号５３のＣ末端にリジンが付加していてもしていなくてもよい、（１９－２）～（２６－２）のいずれかに記載の医薬。
（２８－２）抗ＣＣＲ８抗体が、中和抗体である、（１－２）～（２７－２）のいずれかに記載の医薬。
（２９－２）抗ＣＣＲ８抗体が、ＡＤＣＣ活性を有するものである、（１－２）～（２７－２）のいずれかに記載の医薬。
（３０－２）抗ＣＣＲ８抗体が、ＩｇＧ抗体である、（１－２）～（２７－２）のいずれかに記載の医薬。
（３１－２）抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤を投与することを特徴とする、癌の治療方法。

　本発明の抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用は、抗ＣＣＲ８抗体単独による効果及び化学療法剤単独による効果と比較して、併用による顕著な効果を有する。したがって、本発明の抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用は、医薬品、特に、癌の治療又は予防のための医薬として非常に有用である。

ヒトＣＣＲ８、ヒトＣＣＲ４及びヒトＣＣＲ８の細胞外ドメインに相当するＮ末領域、ｌｏｏｐ１領域、ｌｏｏｐ２領域又はｌｏｏｐ３領域を、それぞれ対応するヒトＣＣＲ４のＮ末領域、ｌｏｏｐ１領域、ｌｏｏｐ２領域又はｌｏｏｐ３領域に置換した各キメラ体のアミノ酸配列比較。１０Ａ１１、２７Ｇ１、１Ｈ４、１９Ｄ７、８Ｆ７及び２Ｃ７の軽鎖可変領域のＫａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果。１０Ａ１１、２７Ｇ１、１Ｈ４、１９Ｄ７、８Ｆ７及び２Ｃ７の重鎖可変領域のＫａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果。１０Ａ１１の軽鎖可変領域、ＩＧＫＶ４－１、ＩＧＫＶ３－２０、ＩＧＫＶ１－３９、ＩＧＫＶ２－４０、ＩＧＫＶ２－２８及びＩＧＫＶ１－１６のＫａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果。１０Ａ１１の重鎖可変領域、ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ及びＩＧＨＶ３－７３のＫａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果。１９Ｄ７の軽鎖可変領域、ＩＧＫＶ３－１５、ＩＧＫＶ２－１８及びＩＧＫＶ３－２０のＫａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果。１９Ｄ７の重鎖可変領域、ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ及びＩＧＨＶ３－７３のＫａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びアライメント結果。大腸癌由来ＣＴ２６細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体の抗腫瘍活性を移植後の腫瘍体積を測定することにより評価した。有意水準＊＊はＷｅｌｃｈ‘ｓ　ｔ　ｔｅｓｔによりｐ<０.０１、＊＊＊はｐ<０.００１を示す。乳癌由来４Ｔ１細胞を移植したマウスにおいて、抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチン（ＣＢＤＣＡ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。乳癌由来４Ｔ１細胞を移植したマウスにおいて、抗マウスＣＣＲ８抗体とゲムシタビン（ＧＥＭ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。乳癌由来４Ｔ１細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチン（ＣＤＤＰ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。膀胱癌由来ＭＢ４９細胞を移植したマウスにおいて、抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチン（ＣＢＤＣＡ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。膀胱癌由来ＭＢ４９細胞を移植したマウスにおいて、抗マウスＣＣＲ８抗体とシスプラチン（ＣＤＤＰ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞を移植したマウスにおいて、抗マウスＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンの併用による抗腫瘍活性を評価した。大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞を移植したマウスにおいて、抗マウスＣＣＲ８抗体とフルオロウラシル（５－ＦＵ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンの併用による抗腫瘍活性を評価した。肺癌由来ＡＳＢ－ＸＩＶ細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチン（ＣＤＤＰ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。肺癌由来ＡＳＢ－ＸＩＶ細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とパクリタキセル（ＰＴＸ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。乳癌由来４Ｔ１細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とドセタキセル（ＤＴＸ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。乳癌由来４Ｔ１細胞を移植したマウスにおいて、抗マウスＣＣＲ８抗体とドセタキセル（ＤＴＸ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンの併用による抗腫瘍活性を評価した。大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンの併用による抗腫瘍活性を評価した。大腸癌由来ＣＴ２６細胞を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウスにおいて、抗ヒトＣＣＲ８抗体とフルオロウラシル（５－ＦＵ）の併用による抗腫瘍活性を評価した。

　本明細書において使用される用語は、特に言及する場合を除いて、当該分野で通常用いられる意味で用いられる。

　本発明においては、当該分野で公知の抗体作製手法が利用可能である。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｉｎ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌｉａｔｉｏｎｓ）に記載された方法等が挙げられる。
　また、当該分野で公知の遺伝子操作的手法が利用可能である。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，　Ｆｏｒｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（２０１２）、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　（２０１２）に記載された方法等が挙げられる。

　本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体を産生するハイブリドーマは、ＣＣＲ８タンパク質、ＣＣＲ８の全長をコードする遺伝子、ＣＣＲ８発現細胞等を免疫原として作製することができる。例えば、ヒトＣＣＲ８の全長をコードする遺伝子を免疫原とする場合は、該遺伝子を抗原としてＤＮＡ免疫したマウスの脾臓細胞とマウスミエローマ細胞を融合させることにより、抗ＣＣＲ８抗体を産生するハイブリドーマを得ることができる。

　ヒトＣＣＲ８のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ５１６８５に示されている（配列番号１）。

　本発明に係るモノクローナル抗体又はその抗体断片の一つの態様としては、本明細書記載のＣＤＲ又は重鎖可変領域／軽鎖可変領域を有するモノクローナル抗体又は該抗体の断片が挙げられる。該抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ若しくはＩｇＡ。好ましくは、ＩｇＧ。）又はサブクラス由来であり得、例えば、マウス、ラット、サメ、ウサギ、ブタ、ハムスター、ラクダ、ラマ、ヤギ又はヒトを含む任意の種から取得されてもよい。該抗体又は抗体断片として、好ましくは、ヒト化モノクローナル抗体又はヒト化モノクローナル抗体の抗体断片である。

　本発明に係るモノクローナル抗体のＣＤＲ配列は、好ましくは、以下の配列を有している。
（１）軽鎖ＣＤＲ１：配列番号２、１４又は２０。
（２）軽鎖ＣＤＲ２：配列番号３、９、１５又は２１。
（３）軽鎖ＣＤＲ３：配列番号４、１０、１６又は２２。
（４）重鎖ＣＤＲ１：配列番号５、８、１２、１７又は２３。
（５）重鎖ＣＤＲ２：配列番号６、１８又は２４。
（６）重鎖ＣＤＲ３：配列番号７、１１、１３、１９又は２５。
　さらに好ましくは、以下の配列を有している。
（１）軽鎖ＣＤＲ１：配列番号２。
（２）軽鎖ＣＤＲ２：配列番号３又は９。
（３）軽鎖ＣＤＲ３：配列番号４又は１０。
（４）重鎖ＣＤＲ１：配列番号５、８又は１２。
（５）重鎖ＣＤＲ２：配列番号６。
（６）重鎖ＣＤＲ３：配列番号７、１１又は１３。
　最も好ましくは、以下の配列を有している。
（１）軽鎖ＣＤＲ１：配列番号２。
（２）軽鎖ＣＤＲ２：配列番号３。
（３）軽鎖ＣＤＲ３：配列番号４。
（４）重鎖ＣＤＲ１：配列番号５。
（５）重鎖ＣＤＲ２：配列番号６。
（６）重鎖ＣＤＲ３：配列番号７。
　また、上記の各アミノ酸配列（配列番号２～２５）において、１又は２のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよい。
　ここで、本発明のモノクローナル抗体におけるＣＤＲ配列中のアスパラギンはグルタミン又はリジンに、アスパラギン酸はグルタミン酸に、ロイシはンイソロイシンに、チロシンはフェニルアラニンに、セリンはトレオニンに、及び、グリシンはグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換されていてもよい。
　好ましくは、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換。
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換。
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換。
Ｄ）配列番号３のアミノ酸配列の５番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｅ）配列番号４のアミノ酸配列の４番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｆ）配列番号４のアミノ酸配列の６番目のチロシンがフェニルアラニンに置換。
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１６番目のセリンがトレオニンに置換。
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換。
　より好ましくは、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い。
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換。
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換。
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換。
　さらに好ましくは、配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、
さらに、以下のいずれか一つの置換を有していても良い。
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換。
　また、本発明のモノクローナル抗体が以下の配列を有している場合、
（１）軽鎖ＣＤＲ１：配列番号２。
（２）軽鎖ＣＤＲ２：配列番号９。
（３）軽鎖ＣＤＲ３：配列番号１０。
（４）重鎖ＣＤＲ１：配列番号８。
（５）重鎖ＣＤＲ２：配列番号６。
（６）重鎖ＣＤＲ３：配列番号１１。
以下のいずれかの置換を１以上有していてもよい、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の２番目のセリンがトレオニンに置換。
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の３番目のセリンがトレオニンに置換。
Ｃ）配列番号２のアミノ酸配列の５番目のセリンがトレオニンに置換。
Ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列の２番目のグルタミンがアスパラギンに置換。
Ｅ）配列番号８のアミノ酸配列の１番目のトレオニンがセリンに置換。
Ｆ）配列番号６のアミノ酸配列の１４番目のアラニンがバリンに置換。
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１８番目のリジンがアルギニンに置換。
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換。
Ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列の５番目のアスパラギンがグルタミンに置換。
Ｊ）配列番号１１のアミノ酸配列の１２番目のチロシンがフェニルアラニンに置換。

　「モノクローナル抗体の抗体断片」とは、本発明に係るモノクローナル抗体の一部であって、当該モノクローナル抗体と同様にＣＣＲ８に特異的に結合し、ＣＣＲ８を選択的に阻害する断片を意味する。

　具体的には、ＣＣＲ８に対して特異的に結合するＦａｂ（ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ）、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ　ｃｈａｉｎ　Ｆｖ；以下、ｓｃＦｖと表記する）、ジスルフィド安定化抗体（ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ　Ｆｖ；　以下、ｄｓＦｖと表記する）、２量化体Ｖ領域断片（以下、Ｄｉａｂｏｄｙと表記する）、ＣＤＲを含むペプチド等を挙げることができる（エキスパート・オピニオン・オン・テラピューティック・パテンツ、第６巻、第５号、第４４１～４５６頁、１９９６年）。

　Ｆａｂは、ＩｇＧのヒンジ領域で２本のＨ鎖を架橋している２つのジスルフィド結合（Ｓ－Ｓ結合）の上部のペプチド部分を酵素パパインで分解して得られる、Ｈ鎖のＮ末端側約半分とＬ鎖全体で構成される、分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦａｂは、本発明に係るモノクローナル抗体をパパイン処理して得ることができる。また、本発明に係るモノクローナル抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを細胞へ導入することにより発現させることによってもＦａｂを製造することができる。

　Ｆａｂ’は、Ｆ（ａｂ’）_２のヒンジ間のＳ－Ｓ結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦａｂ’は、本発明に係るモノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）_２を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。また、本発明に係るモノクローナル抗体のＦａｂ’をコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることによってもＦａｂ’を製造することができる。

　Ｆ（ａｂ’）_２は、ＩｇＧのヒンジ領域の２個のＳ－Ｓ結合の下部を酵素ペプシンで分解して得られる、２つのＦａｂ’領域がヒンジ部分で結合して構成される、分子量約１０万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦ（ａｂ’）_２は、本発明に係るモノクローナル抗体をペプシン処理して得ることができる。また、本発明のモノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）_２をコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることによってもＦ（ａｂ’）_２を製造することができる。

　ｓｃＦｖは、一本のＶＨと一本のＶＬとを適当なペプチドリンカー（以下、Ｐと表記する）を用いて連結した、ＶＨ－Ｐ－ＶＬ又はＶＬ－Ｐ－ＶＨポリペプチドであり、抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるｓｃＦｖに含まれるＶＨ及びＶＬは、本発明に係るモノクローナル抗体のものであればよい。本発明で使用されるｓｃＦｖは、本発明に係るモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、ｓｃＦｖ発現ベクターを構築し、大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることによって製造することができる。

　ｄｓＦｖは、ＶＨ及びＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドをＳ－Ｓ結合を介して結合させたものをいう。システイン残基に置換するアミノ酸残基はＲｅｉｔｅｒらにより示された方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７、６９７（１９９４））に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。本発明で使用されるｄｓＦｖに含まれるＶＨ又はＶＬは、本発明に係るモノクローナル抗体のものであればよい。本発明で使用されるｄｓＦｖは、本発明に係るモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、適当な発現ベクターに挿入してｄｓＦｖ発現ベクターを構築し、該発現ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入し、発現させることによって製造することができる。

　Ｄｉａｂｏｄｙは、抗原結合特異性が同じ又は異なるｓｃＦｖが２量体を形成した抗体断片であり、同じ抗原に対する２価の抗原結合活性又は異なる抗原に対する２種類の特異的な抗原結合活性を有する抗体断片である。例えば、本発明に係るモノクローナル抗体に特異的に反応する２価のＤｉａｂｏｄｙは、本発明に係るモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、３～１０残基のペプチドリンカーを有するｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することによりＤｉａｂｏｄｙを発現させることによって製造することができる。

　ＣＤＲを含むペプチドは、ＶＨ又はＶＬのＣＤＲの少なくとも１領域以上を含んで構成される。複数のＣＤＲは、直接又は適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。本発明で使用されるＣＤＲを含むペプチドは、本発明に係るモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、ＣＤＲをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを動物細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることにより、製造することができる。また、ＣＤＲを含むペプチドは、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ－ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法によって製造することもできる。

　本発明に係るモノクローナル抗体又はその抗体断片は、ＣＣＲ８に結合することが特徴である。特に、特異的に結合するものが好ましい。

　特異的結合は、少なくとも約１×１０^－６Ｍ又はそれ未満の平衡解離定数（例えば、Ｋｄが小さいほど、より緊密な結合を表す）を特徴とすることができる。Ｋｄ値は、好ましくは１×１０^－７Ｍ以下、より好ましくは１×１０^－８Ｍ以下、さらに好ましくは１×１０^－９Ｍ以下である。２つの分子が特異的に結合するかどうかを測定する方法は、当該技術分野で周知であり、競合ＥＬＩＳＡ法、表面プラズモン共鳴及び同様のものが挙げられる。

　本発明に係るモノクローナル抗体又はその抗体断片は、ＣＣＲ８とＣＣＲ８リガンドのいずれかとの結合を阻害することが特徴である。「ＣＣＲ８リガンド」とは、ＣＣＬ１、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１８など、ＣＣＲ８に結合する物質であれば特に限られないが、好ましくは、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１８であり、特に好ましくはＣＣＬ１である。
　ＣＣＲ８とＣＣＲ８リガンドの結合阻害能については、例えば、ヒトＣＣＬ１の場合、ヒトＣＣＲ８発現２９３細胞を用い、ヒトＣＣＬ１添加によるＣａ^２＋流入を測定し、ヒトＣＣＬ１非添加時のシグナルを阻害率１００％、ヒトＣＣＬ１添加及び抗体非添加時のシグナルを阻害率０％として、ＩＣ５０値を計算することにより決定することができる。他のＣＣＲ８リガンドの結合阻害能についても、上記ヒトＣＣＬ１の場合と同様に、決定することができる。

　ヒトＣＣＬ１は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ　Ｎｏ．Ｐ２２３６２などに示されるアミノ酸配列を有する。ヒトＣＣＬ８は、ＧｅｎＢａｎｋ　Ｎｏ．ＡＡＩ２６２４３．１などに示されるアミノ酸配列を有する。ヒトＣＣＬ１８は、ＧｅｎＢａｎｋ　Ｎｏ．ＥＡＷ８０１０２．１などに示されるアミノ酸配列を有する。

　本発明に係るモノクローナル抗体は、本明細書記載のＣＤＲ又は重鎖可変領域／軽鎖可変領域を用いて当該技術分野の定法によって作製することができる。

　本発明に係るモノクローナル抗体は、キメラ、ヒト化、完全ヒト、抗体低分子複合体（ＡＤＣ）及び二重特異的抗体も含む。
ヒト化モノクローナル抗体はヒト体内における抗原性が低下しているため、治療目的等でヒトに投与する場合に有用である。ヒト化モノクローナル抗体は、ヒト以外の哺乳動物、例えばマウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ；　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ）をヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ；　ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　ｒｅｇｉｏｎ）へ移植したものである。従って、ヒト化モノクローナル抗体のＦＲは、ヒト由来のものである。適当なＦＲは、Ｋａｂａｔ　Ｅ．Ａ．らの文献を参照すれば選択できる。この場合のＦＲとしては、ＣＤＲが良好な抗原結合部位を形成することができるものが選択される。必要に応じ、再構成したヒト化モノクローナル抗体のＣＤＲが適切な抗原結合部位を形成するように、抗体の可変領域のＦＲのアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ、Ｋ．ら，　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　１９９３年、第５３巻、８５１ページ）。置換されるＦＲのアミノ酸の割合は、全ＦＲ領域の０～１５％、好ましくは０～５％である。

　本発明に係るヒト化モノクローナル抗体は、好ましくは、
配列番号４０、４２、４３、４４、４５若しくは４７のアミノ酸配列又は
配列番号４０、４２、４３、４４、４５若しくは４７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域並びに
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列又は
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む。
　より好ましくは、
１）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
２）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
３）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
４）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
５）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
６）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
７）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
８）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；　
９）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；　
１０）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；　
１１）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；若しくは
１２）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有していても良い。
Ａ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換。
Ｂ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換。
Ｃ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換。
Ｄ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｅ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｆ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換。
Ｇ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換。
Ｈ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換。
　さらに好ましくは、
１）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；若しくは
２）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有していてもよい。
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換。
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換。
Ｃ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換。
Ｄ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｅ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｆ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換。
Ｇ）配列番号４１のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換。
Ｈ）配列番号４１のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換。
　特に好ましくは、
１）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；若しくは
２）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有していてもよい。
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換。
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換。
Ｃ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換。
　最も好ましくは、
１）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；若しくは
２）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、
配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、
さらに、以下のいずれか一つの置換を有していても良い。
Ａ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換。
Ｂ）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがロイシン又はアルギニンに置換。
　配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号４２のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、配列番号４２のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがアルギニンに置換されているヒト化モノクローナル抗体、すなわち、配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体が最も好ましい。

　本発明に係るヒト化モノクローナル抗体における軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の配列としては、例えば、表１の組合せが挙げられる。

　ここで、上記表１の「置換の種類」における各記号は、それぞれ以下の置換を意味する。
（１）配列番号４０又は４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
Ａ）アミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換。
Ｂ１）アミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミンに置換。
Ｂ２）アミノ酸配列の３４番目のグリシンがトレオニンに置換。
Ｂ３）アミノ酸配列の３４番目のグリシンがアラニンに置換。
Ｂ４）アミノ酸配列の３４番目のグリシンがリジンに置換。
Ｂ５）アミノ酸配列の３４番目のグリシンがロイシンに置換。
Ｂ６）アミノ酸配列の３４番目のグリシンがアルギニンに置換。
Ｃ）アミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換。
Ｄ）アミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｅ）アミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換。
Ｆ）アミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換。
（２）配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
Ｇ）アミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換。
Ｈ）アミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換。

　本発明に係るヒト化モノクローナル抗体の別の態様としては、
配列番号４０、４２、４３、４４、４５若しくは４７のアミノ酸配列又は
配列番号４０、４２、４３、４４、４５若しくは４７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなり、当該アミノ酸配列の２６番目はセリン、２７番目はリジン、３０番目はロイシン及び９８番目はグルタミン酸である軽鎖可変領域並びに
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列又は
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなり、当該アミノ酸配列の３３番目はアラニン、３５番目はチロシン、５２番目はアルギニン、５６番目はアスパラギン、６２番目はチロシン、１０２番目はアルギニン、１０３番目はフェニルアラニン、１０４番目はチロシン、１０９番目はグリシン及び１１３番目はアスパラギン酸である重鎖可変領域を含む。
　より好ましくは、
配列番号４０若しくは４２のアミノ酸配列又は
配列番号４０若しくは４２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなり、当該アミノ酸配列の２６番目はセリン、２７番目はリジン、３０番目はロイシン及び９８番目はグルタミン酸である軽鎖可変領域並びに
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列又は
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなり、当該アミノ酸配列の３３番目はアラニン、３５番目はチロシン、５２番目はアルギニン、５６番目はアスパラギン、６２番目はチロシン、１０２番目はアルギニン、１０３番目はフェニルアラニン、１０４番目はチロシン、１０９番目はグリシン及び１１３番目はアスパラギン酸である重鎖可変領域を含む。
　さらに好ましくは、
配列番号４２のアミノ酸配列若しくは
配列番号４２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなり、当該アミノ酸配列の２６番目はセリン、２７番目はリジン、３０番目はロイシン及び９８番目はグルタミン酸である軽鎖可変領域並びに
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列若しくは
配列番号４１若しくは４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなり、当該アミノ酸配列の３３番目はアラニン、３５番目はチロシン、５２番目はアルギニン、５６番目はアスパラギン、６２番目はチロシン、１０２番目はアルギニン、１０３番目はフェニルアラニン、１０４番目はチロシン、１０９番目はグリシン及び１１３番目はアスパラギン酸である重鎖可変領域を含む。

　本発明に係るヒト化モノクローナル抗体はまた、好ましくは、
配列番号５４、５５若しくは５６のアミノ酸配列又は
配列番号５４、５５若しくは５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域並びに
配列番号５７若しくは５８のアミノ酸配列又は
配列番号５７若しくは５８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む。
　より好ましくは、
１）配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
２）配列番号５５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
３）配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
４）配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号５８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
５）配列番号５５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号５８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
６）配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号５８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、以下のいずれかの置換を１以上有していてもよい、
Ａ）配列番号５４、５５又は５６のアミノ酸配列の２５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｂ）配列番号５４、５５又は５６のアミノ酸配列の２６番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｃ）配列番号５４、５５又は５６のアミノ酸配列の２８番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｄ）配列番号５４、５５又は５６のアミノ酸配列の９５番目のグルタミンがアスパラギンに置換；
Ｅ）配列番号５７又は５８のアミノ酸配列の３１番目のトレオニンがセリンに置換；
Ｆ）配列番号５７又は５８のアミノ酸配列の６３番目のアラニンがバリンに置換；
Ｇ）配列番号５７又は５８のアミノ酸配列の６７番目のリジンがアルギニンに置換；
Ｈ）配列番号５７又は５８のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換；
Ｉ）配列番号５７又は５８のアミノ酸配列の９９番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
Ｊ）配列番号５７又は５８のアミノ酸配列の１０５番目のチロシンがフェニルアラニンに置換。
　さらに好ましくは、
配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、以下のいずれかの置換を１以上有していてもよい、
Ａ）配列番号５６のアミノ酸配列の２５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列の２６番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列の２８番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｄ）配列番号５６のアミノ酸配列の９５番目のグルタミンがアスパラギンに置換；
Ｅ）配列番号５７のアミノ酸配列の３１番目のトレオニンがセリンに置換；
Ｆ）配列番号５７のアミノ酸配列の６３番目のアラニンがバリンに置換；
Ｇ）配列番号５７のアミノ酸配列の６７番目のリジンがアルギニンに置換；
Ｈ）配列番号５７のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換；
Ｉ）配列番号５７のアミノ酸配列の９９番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
Ｊ）配列番号５７のアミノ酸配列の１０５番目のチロシンがフェニルアラニンに置換。
　配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号５７のアミノ酸配列の６７番目のリジンがアルギニンに置換されているヒト化モノクローナル抗体、すなわち、配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号６０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗体が特に好ましい。

　なお、本発明に係るヒト化モノクローナル抗体には、ヒト抗体の定常領域が使用される。好ましいヒト抗体の定常領域としては、重鎖としてはＣγが挙げられ、例えば、Ｃγ１，Ｃγ２，Ｃγ３，Ｃγ４を、軽鎖としてはＣκ、Ｃλを使用することができる。また、抗体又はその産生の安定性を改善するために、ヒト抗体のＣ領域を修飾してもよい。ヒト化の際に用いられるヒト抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等いかなるアイソタイプのヒト抗体でもよいが、本発明においてはＩｇＧを用いることが好ましく、さらにＩｇＧ１又はＩｇＧ４が好ましい。

　本発明に係るヒト化モノクローナル抗体は、重鎖定常領域のＣ末端にリジンが付加していてもしていなくてもよい。好ましくは、配列番号５２のアミノ酸配列の軽鎖定常領域及び配列番号５３のアミノ酸配列の重鎖定常領域を有し、配列番号５３のＣ末端にリジンが付加していてもしていなくてもよい。

　ヒト化モノクローナル抗体は一般的な製造方法により作製することができる（例えば、ＷＯ９５／１４０４１号公報、ＷＯ９６／０２５７６号公報等参照）。具体的には、まずマウス抗体のＣＤＲとヒト抗体のＦＲを連結するように設計した可変領域をコードするＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する（ＷＯ９８／１３３８８号公報参照）。得られたＤＮＡを、ヒト抗体の定常領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込む。又は、抗体の可変領域をコードするＤＮＡを、抗体の定常領域のＤＮＡを含む発現ベクターへ組み込んでもよい。本発明で使用される抗体を製造するには、抗体遺伝子を発現制御領域、例えば、エンハンサー／プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させることができる。

　上記の形質転換体の宿主細胞としては、例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞等の脊椎動物細胞、原核細胞、酵母等が挙げられる。形質転換体は、当業者に周知の方法に従って培養することができ、該培養により、形質転換体細胞内又は細胞外に本発明のモノクローナル抗体が産生される。該培養に用いられる培地としては、採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択でき、例えば、ＣＯＳ細胞の場合、ＲＰＭＩ－１６４０培地やダルベッコ修正イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ）等の培地に、必要に応じウシ胎児血清（ＦＢＳ）等の血清成分を添加したものを使用できる。該形質転換体の培養の際の培養温度は、細胞内のタンパク質合成能を著しく低下せしめない温度であればいずれでもよいが、好適には３２～４２℃、最も好適には３７℃で培養することが好ましい。また必要に応じて、１～１０％（ｖ／ｖ）の炭酸ガスを含む空気中で培養することができる。

　上記により形質転換体の細胞内又は細胞外に生産される本発明に係るモノクローナル抗体を含む画分は、該タンパク質の物理的性質や化学的性質等を利用した各種公知の分離操作法により、分離・精製することができる。かかる方法としては、具体的には例えば通常のタンパク質沈澱剤による処理、限外濾過、分子ふるいクロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の各種クロマトグラフィー、透析法、及びこれらの組み合わせ等を採用できる。該方法により、容易に高収率、高純度で本発明に係るモノクローナル抗体を製造できる。

　本発明に係るモノクローナル抗体又はその抗体断片は、さらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、放射性物質、トキシン等の各種分子により修飾されていてもよい。抗体の修飾方法はこの分野で公知の方法を利用することができる。

　また、本発明に係るモノクローナル抗体又はその抗体断片は、そのＮ末端あるいはＣ末端に他のタンパク質を融合してもよい（Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　２００４，　１０，　１２７４－１２８１）。融合するタンパク質は当業者が適宜選択することができる。

　本発明に係るモノクローナル抗体又はその抗体断片には、抗体のＦｃ領域にＮ－グリコシド結合糖鎖が結合している抗体が含まれる。なお、該Ｎ－グリコシド結合糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していなくてもよい。抗体のＦｃ領域にＮ－グリコシド結合糖鎖が結合し、該Ｎ－グリコシド結合糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない抗体としては、例えばα１，６－フコース転移酵素遺伝子が欠損したＣＨＯ細胞（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第０２／３１１４０号）を用いて作製される抗体が挙げられる。抗体のＦｃ領域にＮ－グリコシド結合糖鎖が結合し、該Ｎ－グリコシド結合糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない本発明の抗体は、高いＡＤＣＣ活性を有する。

　本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔｒｅｇ細胞又はマクロファージ細胞を除去させる観点から、ＣＣＲ８を発現する細胞に対してＡＤＣＣ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌｌ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；抗体依存性細胞介在性細胞傷害）活性を有する抗体又はその抗体断片が好ましい。ＡＤＣＣ活性とは、生体内で、標的細胞等の細胞表面抗原などに結合した抗体が、抗体のＦｃ領域とエフェクター細胞表面上に存在するＦｃレセプターとの結合を介してエフェクター細胞を活性化し、標的細胞等を傷害する活性を意味する。エフェクター細胞としては、ナチュラルキラー細胞、活性化されたマクロファージ等があげられる。なお、本発明においては、生体内で、Ｔｒｅｇ細胞又はマクロファージ細胞等の細胞表面抗原（ＣＣＲ８）に結合した抗体が、抗体のＦｃ領域とエフェクター細胞表面上に存在するＦｃレセプターとの結合を介してエフェクター細胞を活性化し、Ｔｒｅｇ細胞又はマクロファージ細胞等を傷害し、結果として腫瘍細胞等を傷害する場合も含む。

　本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８の中和抗体や中和抗体断片が好ましい。ＣＣＲ８の中和抗体又は中和抗体断片とは、ＣＣＲ８に対する中和活性を有する抗体又は抗体断片を意味する。ＣＣＲ８に対する中和活性を有するか否かは、例えば、ＣＣＲ８リガンドのいずれか（例えば、ＣＣＬ１）のＣＣＲ８に対する生理作用を抑制するか否かを測定することにより判別できる。例としては、これらに限定されるものではないが、ＣＣＬ１のＣＣＲ８への結合、あるいはＣＣＬ１によるＣＣＲ８発現細胞の遊走又は細胞内Ｃａ^２＋増加又はＣＣＬ１刺激に感受性のある遺伝子の発現変動などを測定することが挙げられる。また、後述の試験例記載の方法にて測定することもできる。
　本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体の、ＣＣＲ８とＣＣＬ１の結合に対する中和活性は、あらかじめＣａ^２＋指示薬を取り込ませたヒトＣＣＲ８発現２９３細胞に対し、培地で希釈した抗体希釈液を添加して測定することができる。ＣＣＲ８とＣＣＲ８リガンドの親和性は、ＣＣＬ１が最も強く、ＣＣＬ１に対して高い阻害活性を有する抗体が有用である。
　本発明に係るモノクローナル抗体又はその抗体断片の中和活性は、ＩＣ５０値が１０ｎＭ以下であることが好ましい。中和活性は、より好ましくは、ＩＣ５０値が５ｎＭ以下、さらに好ましくは２ｎＭ以下、特に好ましくは１ｎＭ以下、最も好ましくは０．５ｎＭ以下である。

　本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体においては、ＣＣＲ８を強く認識する抗体又はその抗体断片が好ましい。ＣＣＲ８を強く認識する抗体又はその抗体断片を選択する際に、中和活性の強度を指標にして、抗体又はその抗体断片を選択することで、より強くＣＣＲ８を認識する抗体又はその抗体断片を選択することができる。

　本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体は、腫瘍内浸潤Ｔｒｅｇ細胞除去作用を有するものが好ましい。本発明に係るモノクローナル抗体が腫瘍内浸潤Ｔｒｅｇ細胞除去作用を有しているか否かは、例えば、特許文献２の実施例記載の方法にて測定することができる。

　本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体は、腫瘍内浸潤マクロファージ細胞除去作用を有するものが好ましい。本発明の抗体又はその抗体断片が腫瘍内浸潤マクロファージ細胞除去作用を有しているか否かは、例えば、特許文献２の実施例記載の方法にて測定することができる。

　「化学療法剤」とは、腫瘍細胞の増殖を抑える効果を有する薬剤を意味する。
　「免疫療法剤」とは、免疫を活性化することにより腫瘍細胞を傷害する薬剤を意味する。本発明に係る抗ＣＣＲ８抗体は、生体内で、マクロファージなど免疫担当細胞の細胞表面抗原（ＣＣＲ８）に結合し、抗体のＦｃ領域とエフェクター細胞表面上に存在するＦｃレセプターとの結合を介してエフェクター細胞を活性化し、Ｔｒｅｇ細胞又はマクロファージ細胞等を傷害し、結果として腫瘍細胞等を傷害することから、免疫療法剤に分類される。

　本発明に係る化学療法剤は、アルキル化剤、白金錯体、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、タキサン、分子標的薬などが挙げられる。

　アルキル化剤は、アルキル基がＤＮＡに結合することで腫瘍細胞の増殖抑制効果を示す薬剤であり、シクロフォスファミド、イホスファミド、メルファラン、ブスルファン、チオテパなどのナイトロジェンマスタード類、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、プロカルバジン、テモゾロマイド、カルムスチン、ストレプトゾトシン、ベンダムスチンなどのニトロソウレア類などが挙げられる。

　白金錯体は、薬剤の構造の中に白金を持ち、ＤＮＡに結合することで腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する薬剤であり、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチンなどが挙げられる。好ましくは、シスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチン、さらに好ましくはカルボプラチンである。

　代謝拮抗剤は、ＤＮＡ合成過程でプリンやピリミジンの取り込みを阻害することで腫瘍細胞の増殖抑制効果を示す薬剤であり、ペメトレキセド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、メソトレキセート、トリメトプリム、ピリメタミンなどの葉酸代謝拮抗剤、フルオロウラシル、フルシトシンなどのピリミジン代謝拮抗剤、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、ペントスタチンなどのプリン代謝拮抗剤、ヒドロキシウレアなどの尿素誘導体、チオグアニン、フルダラビン、クラドリビンなどのプリンアナログ、ゲムシタビン、シタラビンなどのピリミジンアナログなどが挙げられる。好ましくは、ペメトレキセド、フルオロウラシル又はゲムシタビン、さらに好ましくは、フルオロウラシル又はゲムシタビンである。

　トポイソメラーゼ阻害剤は、ＤＮＡのらせん構造を変化させるトポイソメラーゼを阻害することで腫瘍細胞の増殖抑制効果を示す薬剤であり、イリノテカン、ノギテカンなどのＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、ドキソルビシン、エトポシドなどのＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤などが挙げられる。好ましくは、イリノテカン、ドキソルビシン又はエトポシドである。

　タキサンは、細胞分裂に重要な役割を果たす微小管の脱重合を阻害し、細胞分裂を阻害して腫瘍細胞の増殖抑制効果を示す薬剤であり、パクリタキセル、ドセタキセルなどが挙げられる。

　分子標的薬は、腫瘍細胞の増殖などに関わる特定の分子の情報伝達を阻害する薬剤であり、ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、イマチニブ、ダサチニブ、ボスチニブ、バンデタニブ、スニチニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、レンバチニブ、ラパチニブ、ニンテダニブ、ニロチニブ、イブルチニブ、ギリテルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ロルラチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブなどのＲａｆキナーゼ阻害剤、トラメチニブなどのＭＥＫ阻害剤、バルボシクリブ、アベマシクリブなどのサイクリン依存性キナーゼ阻害剤、オラパリブなどのＰＡＲＰ阻害剤、セツキシマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブ、パニツムマブ、ラムシルマブなどのモノクローナル抗体などが挙げられる。

　本発明に係る化学療法剤は、好ましくは、白金錯体、タキサン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、エトポシド又はドキソルビシンであり、より好ましくは、白金錯体、タキサン、ゲムシタビン又はフルオロウラシルであり、さらに好ましくは、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、フルオロウラシル又はゲムシタビンであり、さらに好ましくは、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン又はゲムシタビンであり、さらに好ましくは、カルボプラチン又はゲムシタビンである。

　本発明の医薬組成物又は医薬は、ＣＣＲ８関連疾患の治療及び／又は予防のための医薬として非常に有用である。特に、ＣＣＲ８発現Ｔｒｅｇ細胞の腫瘍内浸潤が生じている癌を治療及び／又は予防するための医薬として非常に有用である。例えば、乳癌、子宮体癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、胃（胃腺）癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、頭頚部扁平上皮癌、食道癌、膀胱癌、メラノーマ、大腸癌、腎癌、非ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、肉腫、血球癌（白血病、リンパ腫等）、胆管癌、胆のう癌、甲状腺癌、精巣癌、胸腺癌、肝臓癌等の癌、好ましくは乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌又は卵巣癌、より好ましくは乳癌、肺癌、膀胱癌、腎癌又は大腸癌であり、さらに好ましくは、好ましくは乳癌、肺癌、膀胱癌又は大腸癌であり、さらに好ましくは乳癌、肺癌又は大腸癌、さらに好ましくは乳癌を治療及び／又は予防するための医薬として非常に有用である。
　ここで、本発明の医薬組成物又は医薬は、免疫原性の低い癌の治療及び／又は予防にも有効である。例えば、腫瘍遺伝子変異量（ＴＭＢ）値が低い癌の治療及び／又は予防にも有効である。ＴＭＢ値は、１０変異／Megabase以下が好ましく、５変異／Megabase以下がより好ましく、２変異／Megabase以下がさらに好ましく、１変異／Megabese以下が特に好ましい。
　また、本明細書の実施例１及び２において使用されている乳癌由来４Ｔ１細胞においては、抗ＰＤ－１抗体による治療が無効であることが、Grassellyらの文献（Frontiers in Immunology, (2018), 9, Article 2100）に記載されている。すなわち、本発明の医薬組成物又は医薬は、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療が無効である癌に対する治療にも有用である。抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療が無効とは、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与によって癌の増殖が抑制できないことを意味する。

　本発明の「癌治療用」における「癌」には、すべての固形癌及び血液癌が含まれる。具体的には、乳癌、子宮体癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、胃（胃腺）癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、頭頚部扁平上皮癌、食道癌、膀胱癌、メラノーマ、大腸癌、腎癌、非ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、肉腫、血球癌（白血病、リンパ腫等）、胆管癌、胆のう癌、甲状腺癌、精巣癌、胸腺癌、肝臓癌等が挙げられる。好ましくは乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌又は卵巣癌、より好ましくは乳癌、肺癌、膀胱癌、腎癌又は大腸癌であり、さらに好ましくは、好ましくは乳癌、肺癌、膀胱癌又は大腸癌であり、さらに好ましくは乳癌、肺癌又は大腸癌、さらに好ましくは乳癌である。
　また、本発明の「癌治療用」における「癌」は、腫瘍特異抗原を発現する癌が好ましい。

　なお、本明細書記載の「癌」は、卵巣癌、胃癌等の上皮性の悪性腫瘍のみならず、慢性リンパ性白血病やホジキンリンパ腫等の造血器がんを含む非上皮性の悪性腫瘍も意味するものとし、本明細書において、「がん（ｃａｎｃｅｒ）」、「癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）」、「腫瘍（ｔｕｍｏｒ）」、「新生物（ｎｅｏｐｌａｓｍ）」等の用語は互いに区別されず、相互に交換可能である。

　本発明の「抗ＣＣＲ８抗体を含有する、化学療法剤とともに用いる医薬組成物」は、二以上の本発明に係る化学療法剤をともに用いてもよい。

　本発明の「化学療法剤を含有する、抗ＣＣＲ８抗体とともに用いる医薬組成物」又は「抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤を組み合わせてなる医薬」は、二以上の本発明に係る化学療法剤を含有していてもよい。

　本発明の抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用は、抗ＣＣＲ８抗体単独による効果及び化学療法剤単独による効果と比較して、併用による顕著な効果を有する。具体的には、抗ＣＣＲ８抗体単独による抗腫瘍効果及び化学療法剤単独による抗腫瘍効果と比較して、抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用による抗腫瘍効果は相乗以上の効果を示す。

　本発明の抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用は、抗ＣＣＲ８抗体単独による効果及び化学療法剤単独による効果と比較して併用による顕著な効果を有するため、抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の投与量が、それぞれ単独投与の場合の投与量と比較して、より低い投与量で抗腫瘍効果を示す。したがって、本発明の抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用は、抗ＣＣＲ８抗体及び／又は化学療法剤による副作用の減弱効果が期待できる。

　本発明の医薬組成物又は医薬は、経口的又は非経口的に全身あるいは局所的に投与することができる。非経口的投与としては、例えば、点滴などの静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、鼻腔内投与、吸入などを選択することができる。

　本発明の「抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤を組み合わせてなる医薬」は、抗ＣＣＲ８抗体を含有する医薬組成物と化学療法剤を含有する医薬組成物の併用剤であってもよく、抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤の配合剤であってもよい。
　「配合剤」とは、一つの製剤中に二つ以上の有効成分が配合されたものを意味する。例えば、抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤の配合剤は、抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤が一つの製剤に含まれている。

　本発明の「抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤を組み合わせてなる医薬」を、併用剤として抗ＣＣＲ８抗体を含有する医薬組成物及び化学療法剤を含有する医薬組成物を別々の製剤にして投与する場合には、同時投与および時間差による投与が含まれる。また、時間差による投与は、化学療法剤を含有する医薬組成物を先に投与し、抗ＣＣＲ８抗体を含有する医薬組成物を後に投与してもよいし、抗ＣＣＲ８抗体を含有する医薬組成物を先に投与し、化学療法剤を含有する医薬組成物を後に投与してもかまわず、それぞれの投与方法は同じでも異なっていてもよい。
　該併用剤における抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の比率は任意の値をとりうる。該併用剤における抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の重量比は、例えば、１０００：１～１：１０００であり、好ましくは１００：１～１：１００であり、より好ましくは１０：１～１：１０であり、さらに好ましくは５：１～１：５である。

　本発明の「抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤を組み合わせてなる医薬」を、抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤の配合剤とする場合は、該配合剤における抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の比率は任意の値をとりうる。該配合剤における抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤は、例えば、１０００：１～１：１０００であり、好ましくは１００：１～１：１００であり、より好ましくは１０：１～１：１０であり、さらに好ましくは５：１～１：５である。

　本発明に係る医薬組成物又は配合剤は、その剤型に適した賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等の各種医薬用添加剤を必要に応じて混合することができる。

　本発明に係る医薬組成物又は配合剤の治療有効量とは、投与していない個体と比較して、適応疾患の症状を抑制する量のことである。具体的な有効量としては、投与形態、投与方法、使用目的及び個体の年齢、体重、症状等によって適宜設定され一定ではない。

　以下に本発明の実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。

試験例１：抗ヒトＣＣＲ８抗体産生マウスハイブリドーマの作製
　ヒトＣＣＲ８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ５１６８５、配列番号１）の全長をコードする遺伝子を抗原とし、Ａ／Ｊ　Ｊｍｓ　Ｓｌｃ雌性マウスにＤＮＡ免疫した。ＤＮＡ免疫は、２週間隔で２回又は３回繰り返し、最終免疫１週間後にヒトＣＣＲ８発現Ｅｘｐｉ２９３細胞を腹腔内投与することでブーストした。その３日後に脾臓を摘出し、脾臓細胞とマウスミエローマ細胞（ｐ３×６３６３－Ａｇ８．、東京腫瘤研究所）をＰＥＧ法を用いて融合させ、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培地で選択した。抗ヒトＣＣＲ８抗体及び抗ヒトＣＣＲ８中和抗体はこの培養上清を用い、下記の方法により選抜した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体は、培養上清をヒトＣＣＲ８発現Ｅｘｐｉ２９３細胞及びヒトＣＣＲ４発現Ｅｘｐｉ２９３細胞とそれぞれ反応させ、Ａｌｅｘａ４８８標識抗マウスＩｇＧ抗体（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で検出することにより、ヒトＣＣＲ８に対してのみ特異的に結合するクローンを選抜した。
　抗ヒトＣＣＲ８中和抗体は、あらかじめＣａ^２＋指示薬を取り込ませたヒトＣＣＲ８発現２９３細胞に対して培養上清を十分に反応させたのちに、ＦＬＩＰＲにより２００ｎＭ　ｈＣＣＬ１（バイオレジェンド社製）添加によるＣａ^２＋流入を測定し、ｈＣＣＬ１刺激によるＣａ^２＋流入を阻害するクローンを選抜した。
　特に強い中和活性を示すクローン（％　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ＞８０％）と、中和活性をもたないクローンをそれぞれクローニングし、ハイブリドーマを樹立した。

試験例２：抗ヒトＣＣＲ８抗体産生ラットハイブリドーマの作製
　免疫原であるヒトＣＣＲ８発現Ｒａｔ－１細胞は、ｐＱＣＸＩＰ（クロンテック社）に
ヒトＣＣＲ８遺伝子をクローニングした発現ベクターをＲａｔ－１細胞にトランスフェクションしたのちに、ピューロマイシン（１ｕｇ／ｍｌ）で一ヶ月間薬剤選択することにより作製した。
　ヒトＣＣＲ８発現Ｒａｔ－１細胞をラットに一回免疫し、約２週間後にリンパ節を回収して常法によりハイブリドーマを作製した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体は、ハイブリドーマ培養上清をヒトＣＣＲ８発現２９３細胞と２９３細胞にそれぞれ反応させ、Ａｌｅｘａ６４７標識抗ラットＩｇＧ抗体（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で検出することで、ヒトＣＣＲ８に特異的に結合可能なクローンを選抜した。

試験例３：抗ヒトＣＣＲ８中和抗体及び非中和抗体のエピトープ解析
　試験例１で樹立した抗ヒトＣＣＲ８抗体産生ハイブリドーマについて、無血清培地培養上清からＰｒｏｔｅｉｎＧ精製及び、ゲル濾過精製により、４０種類のクローンの精製抗体を得た。得られた４０種類のクローンのうち、２７種類の中和抗体及び１３種類の非中和抗体の精製抗体を用い、下記の方法で抗原結合試験を実施することにより、中和活性に重要なエピトープを同定した。各クローンの中和活性は試験例１記載の方法で１００ｎＭ　ｈＣＣＬ１（バイオレジェンド社製）添加によるＣａ^２＋流入に対する阻害活性をＦＬＩＰＲにより測定した。各中和抗体は、１００ｎＭ　ｈＣＣＬ１刺激によるＣａ^２＋流入阻害活性のＩＣ５０値が２ｎＭ以下であった。
　ヒトＣＣＲ８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ５１６８５　配列番号１）の全長をコードする遺伝子及びヒトＣＣＲ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ５１６７９　配列番号４８）の全長をコードする遺伝子、マウスＣＣＲ８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ５６４８４　配列番号３９）の全長をコードする遺伝子をそれぞれｐｃＤＮＡ３．４ベクターにクローニングした。これをトランスフェクションすることで一過性にヒトＣＣＲ８、ヒトＣＣＲ４、マウスＣＣＲ８を発現させたＥｘｐｉ２９３細胞を作製した。この細胞に各クローンの精製抗体の希釈系列を反応させ、Ａｌｅｘａ４８８標識抗マウスＩｇＧ抗体（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で検出することにより、その結合性を評価した。その結果、いずれの抗体もヒトＣＣＲ８には結合するが、ヒトＣＣＲ４、マウスＣＣＲ８には全く結合しなかった。
　そこで、ヒトＣＣＲ８の細胞外ドメインに相当するＮ末領域（配列番号１の１－３５位アミノ酸）、ｌｏｏｐ１領域（配列番号１の９４－１０７位アミノ酸）、ｌｏｏｐ２領域（配列番号１の１７２－２０２位アミノ酸）、ｌｏｏｐ３領域（配列番号１の２６４－２８０位アミノ酸）をそれに対応するヒトＣＣＲ４のＮ末領域（配列番号４８の１－３９位アミノ酸）、ｌｏｏｐ１領域（配列番号４８の９８－１１１位アミノ酸）、ｌｏｏｐ２領域（配列番号４８の１７６－２０６位アミノ酸）、ｌｏｏｐ３領域（配列番号４８の２６８－２８４位アミノ酸）に置換したキメラ体（図１）を作製し、上述の方法と同様の方法により、各抗体の結合性を評価した。
　５ｕｇ／ｍＬ、０．５ｕｇ／ｍＬ、０．０５ｕｇ／ｍＬでの結合を評価し、野生型のヒトＣＣＲ８（ｈＣＣＲ８）と比較して、結合活性が顕著に低下しているものを△、結合が検出限界以下まで低下しているものを×で示した。空欄は、野生型のヒトＣＣＲ８（ｈＣＣＲ８）と同程度の結合活性を示すことを意味する。
その結果、表２に示すとおり、中和活性を有する抗体はいずれもＮ末領域をヒトＣＣＲ４（Ｎ－ｔｅｒ　ｈＣＣＲ４－ｈＣＣＲ８）に置換することでその結合活性は検出限界以下となり、Ｎ末領域が中和活性発揮に重要なエピトープであることが明らかになった。さらに、ｌｏｏｐ１ヒトＣＣＲ４置換ヒトＣＣＲ８、及びｌｏｏｐ２ヒトＣＣＲ４置換ヒトＣＣＲ８に対しても結合活性が低下した。以上のことから、強い中和活性を有する抗ＣＣＲ８抗体はＮ末領域を強く認識し、かつｌｏｏｐ１及びｌｏｏｐ２にも結合するような立体構造認識をしていると考えられる。
　なお、ヒトＣＣＲ８、ヒトＣＣＲ４及びマウスＣＣＲ８のいずれも認識しない抗体をコントロールとして使用したが、コントロール抗体は各抗原とは結合しなかった。また、各抗原のＮ末にタグを付与し、抗タグ抗体により検出することで、変異によりｈＣＣＲ８の発現が低下しないことを確認した。
　さらに、強い中和を有するすべてのクローンについて共通するエピトープ領域であるＮ末領域についてより詳細に解析すべく、表２に示すヒトＣＣＲ８点変異体を作製した。上述の方法と同様の方法で、この変異体に対する各クローンの結合活性を評価した結果、上記の２７種類の中和抗体は、いずれもヒトＣＣＲ８の１７位のＹをＡに置換した変異体（ｈＣＣＲ８（Ｙ１７Ａ））に対する結合活性が著しく低下し検出限界以下となったことから、１７位のＹを認識していると考えられる。また、表２にはclone No. 8F7しか示していないが、ヒトＣＣＲ８の２０位のＩをＡに置換した変異体（ｈＣＣＲ８（Ｉ２０Ａ））に対する結合活性が低下している中和抗体も複数存在し、２０位のイソロイシンにも結合するような立体構造認識をしている中和抗体も存在すると考えられる。
一方、上記の１３種類の非中和抗体は、ｈＣＣＲ８（Ｙ１７Ａ）に対する結合活性が低下しなかったことから、同じＮ末領域を認識しているが、１７位のＹは認識していないと考えられる。このことから、１７位のＹが中和活性発揮に極めて重要なアミノ酸であると考えられる。代表的な中和抗体（clone No. 10A11, 27G1, 1H4, 8F7, 2C7）及び非中和抗体（clone No. 5B5）についての結果を表２に示す。

試験例４：抗体配列の決定
　樹立したクローンのうち、表３に示すマウス抗体及び表４に示すラット抗体について、ハイブリドーマ細胞より、常法に従って抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域のアミノ酸配列を決定した。

試験例５：抗体配列のアライメント
　試験例４に記載したマウスハイブリドーマ由来、抗ヒトＣＣＲ８中和抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列について抗体配列解析ソフトウェアａｂＹｓｉｓを用いたＫａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇと、アライメントを実施した（図２、図３）。その結果、１０Ａ１１、２７Ｇ１、１Ｈ４、１９Ｄ７，８Ｆ７のアミノ酸配列は以下に述べるとおりＣＤＲに類似した配列を含むものであった。
　軽鎖のＣＤＲ１は、配列番号２の１６アミノ酸から構成されていた。
　軽鎖のＣＤＲ２は、Ｒ－Ｘａａ１－Ｓ－Ｎ－Ｌ－Ａ－Ｓ（ここで、Ｘａａ１は、Ｍ又はＶである：配列番号４９）の７アミノ酸から構成されていた（配列番号３又は９）。
　軽鎖のＣＤＲ３は、Ｍ－Ｑ－Ｈ－Ｌ－Ｅ－Ｙ－Ｐ－Ｘａａ１－Ｔ（ここで、Ｘａａ１は、Ｌ又はＦである：配列番号５０）の９アミノ酸から構成されていた（配列番号４又は１０）。
　重鎖のＣＤＲ１は、Ｘａａ１－Ｙ－Ａ－Ｘａａ２－Ｙ（ここで、Ｘａａ１は、Ｔ又はＰであり、Ｘａａ２はＬ又はＭである：配列番号５１）の５アミノ酸から構成されていた（配列番号５、８又は１２）。
　重鎖のＣＤＲ２は、配列番号６の１９アミノ酸から構成されていた。
　重鎖のＣＤＲ３は１０Ａ１１、２７Ｇ１、１Ｈ４が共通した配列を有し、配列番号７の１４アミノ酸から構成されていた。

試験例６：中和活性評価
　樹立したハイブリドーマを無血清培地で培養し、その培養上清をＰｒｏｔｅｉｎＧアフィニティー精製及びゲル濾過精製を行うことで、精製抗体を得た。この精製抗体について下記の方法で中和活性を測定した。
　あらかじめＣａ^２＋指示薬を取り込ませたヒトＣＣＲ８発現２９３細胞に対して培地で希釈した抗体希釈液を添加し、ＦＬＩＰＲにより２００ｎＭ　ｈＣＣＬ１（バイオレジェンド社製）添加によるＣａ^２＋流入を測定した。ｈＣＣＬ１非添加時のシグナルを阻害率１００％、ｈＣＣＬ１添加及び抗体非添加時のシグナルを阻害率０％として阻害率を計算し、５０％の阻害率を示す抗体濃度をＩＣ５０とした。少なくとも３回評価を行い、ＩＣ５０をＡｖｅｒａｇｅ±ＳＤとして表記した。（表５）

試験例７：抗体のヒト化（１０Ａ１１、２Ｃ７）
　１０Ａ１１、２Ｃ７について、下記の方法でヒト化を実施した。
抗体配列解析ソフトａｂＹｓｉｓを用いてＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びＣＤＲの定義を実施した。マウス抗体アミノ酸配列の重鎖及び軽鎖のＶ遺伝子領域配列に類似したヒト生殖系アクセプター配列を配列解析ソフトＡｂｓｉｓで検索し、選択した。またＪ鎖領域については、マウス抗体ＤＮＡ配列と相同性の高い配列をＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）で検索しヒトフレームワーク配列とした。このヒトフレームワーク配列に対し、Ｋａｂａｔ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ（Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．ａｎｄ　Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｊ　Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ａｕｇ１；１３２（２）：２１１－５０．（１９７０））によって定義されたマウス抗体重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３及びマウス抗体軽鎖ＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３を移植することでヒト化モノクローナル抗体配列を設計した（軽鎖；図４、重鎖；図５）。試験例６に示す方法により中和活性を測定した結果、表６に示すヒト化モノクローナル抗体が、マウス抗体と同等以上の親和性を示した。

試験例７－２：抗体のヒト化（１９Ｄ７）
　１９Ｄ７について、試験例７と同様の方法でヒト化を実施した（軽鎖；図６、重鎖；図７）。試験例６に示す方法により中和活性を測定した結果、表７に示すヒト化モノクローナル抗体が、マウス抗体と同等以上の親和性を示した。

試験例８：ヒト化１０Ａ１１の活性に重要なアミノ酸の特定
　図４及び図５に示すヒト化１０Ａ１１について、ＣＤＲに相当するアミノ酸に点変異を導入した変異体を作製し、試験例６に示した方法により、各変異体の中和活性を算出した。各変異体について複数回中和活性評価を行い、そのＩＣ５０値をＷＴのＩＣ５０値との比として、ＩＣ５０　ｒａｔｉｏ　（ＷＴ　ＩＣ５０／　変異体ＩＣ５０）で表記した。
　結果を表８及び表９に示す。ｎ．ｄ．（＝ｎｏｔ　ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ）は、変異体のＩＣ５０値が測定系の限界値である１０ｎＭ以上であり、検出限界以下まで活性が低下していることを示す。中和活性評価の結果、軽鎖については、ＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇによるＬ２６、Ｌ２７、Ｌ２７ｃ、Ｌ９３アミノ酸部位において変異を有するＳ２６Ｔ、Ｋ２７Ｒ、Ｌ２７ｃＩ、Ｅ９３Ｄの各変異体は１０倍以上活性が低下した（表８）。また重鎖については、ＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇによるＨ３３、Ｈ３５、Ｈ５２、Ｈ５３、Ｈ５９、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１００ｃ、Ｈ１０１アミノ酸部位において変異を有するＡ３３Ｖ、Ｙ３５Ｆ、Ｒ５２Ｋ、Ｎ５３Ｑ、Ｙ５９Ｆ、Ｒ９６Ｋ、Ｆ９７Ｌ、Ｙ９８Ｆ、Ｇ１００ｃＡ、Ｄ１０１Ｅの各変異体で１０倍以上活性が低下した（表９）。これらのアミノ酸は活性に極めて重要なアミノ酸である。

※アミノ酸部位はＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇによる部位。

試験例８－２：ヒト化１９Ｄ７の活性に重要なアミノ酸の特定
　図６及び図７に示すヒト化１９Ｄ７について、ＣＤＲに相当するアミノ酸に点変異を導入した変異体を作製し、試験例６に示した方法により、各変異体の中和活性を算出した。各変異体について複数回中和活性評価を行い、そのＩＣ５０値をＷＴのＩＣ５０値との比として、ＩＣ５０　ｒａｔｉｏ　（ＷＴ　ＩＣ５０／　変異体ＩＣ５０）で表記した。
　結果を表１０及び表１１に示す。ｎ．ｄ．（＝ｎｏｔ　ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ）は、変異体のＩＣ５０値が測定系の限界値である１０ｎＭ以上であり、検出限界以下まで活性が低下していることを示す。

試験例９：ヒト化１０Ａ１１の活性向上
　試験例７により見出されたヒト化フレームワークに、試験例８により見出された活性向上変異と、脱アミド化リスク配列に相当する、ＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇによるＬ２８アミノ酸部位のＮとＬ２９アミノ酸部位のＧに対する変異を組み合わせることで、ヒト化１０Ａ１１の最適化を行った。その結果、表１２に示すヒト化１０Ａ１１変異体を見出した。

試験例９－２：ヒト化１９Ｄ７の活性向上
　試験例７－２により見出されたヒト化フレームワークに点変異を導入し、ヒト化１９Ｄ７の最適化を行った。その結果、表１３に示すヒト化１９Ｄ７変異体を見出した。

試験例１０：腫瘍移植ヒトＣＣＲ８ノックインマウス（以下、ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス）における抗ヒトＣＣＲ８抗体の抗腫瘍活性
（１）ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスの作製
　マウスＣＣＲ８（配列番号３９）をコードする遺伝子のＯＲＦの全長を取り除くと同時にヒトＣＣＲ８（配列番号１）をコードする遺伝子のＯＲＦの全長を挿入することで、発現するＣＣＲ８タンパク質を完全にヒト化したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスを作製した。
　相同組換えアームとして使用するＤＮＡ断片は、マウスＣＣＲ８遺伝子のＯＲＦの上流下流それぞれ約２ｋｂ（キロベース）のマウスゲノム配列をＰＣＲ増幅することにより取得し、マウス由来のゲノム配列はＯＲＦのみが取り除かれるように設計した。先のヒトＣＣＲ８遺伝子のＯＲＦ全長配列の前後に相同組換えアームをそれぞれ継ぎ目なく接続することでターゲティングベクターを作製し、相同組換えに供し、ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／＋）Ｂａｌｂ／ｃマウスを作製した。作製したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／＋）Ｂａｌｂ／ｃマウスについては、マウスＣＣＲ８遺伝子のＯＲＦ全長とヒトＣＣＲ８遺伝子のＯＲＦ全長が正しく置き換わっており、かつ、余計な配列の挿入や欠失がないことをＰＣＲ及びＤＮＡ塩基配列解析により確認した。ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／＋）Ｂａｌｂ／ｃマウスを通常交配で掛け合わせることでｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスを作製した。

（２）ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける大腸癌ＣＴ２６細胞株腫瘍内浸潤細胞のヒトＣＣＲ８発現確認
　ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（６週齢、メス）の背部皮内に３．５×１０^５個（５０μＬ）のＣＴ２６細胞を移植し、移植１７日後に、５例の個体より腫瘍を回収した(Ｎ=５)。ＣＴ２６細胞の腫瘍塊を、ハサミで細かく切断し、市販キット（ＴｕｍｏｒＤｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎＫｉｔ, ｍｏｕｓｅ, Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社及びＴｈｅｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（ＴＭ）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ, Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社)を用いて添付キットプロトコルに従い、腫瘍浸潤細胞を調製した。
　調製された細胞は７０ｕｍのセルストレイナーに通した後、２回１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ／ＨＢＳＳ／２％ＦＢＳで洗浄した。その後、赤血球溶解液（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で５分間処理し、赤血球を除去し、さらに２％ＦＢＳ／１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ／ＨＢＳＳバッファーで２回洗浄した。腫瘍浸潤細胞は以下の方法及び抗体により染色した。
　浸潤細胞をＺｏｍｂｉｅ　ＮＩＲ　Ｆｉｘａｂｌｅ　Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　Ｋｉｔ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）試薬を用いて、３０分間氷中で染色した。２％ＦＢＳ／１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ／ＨＢＳＳで１回洗浄後、Ｂｖ５１０標識抗マウスＣＤ４５（３０－Ｆ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、　ＦＩＴＣ標識抗マウスＣＤ４（ＲＭ４－４、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＰＥ／Ｃｙ７標識抗マウスＣＤ８（５３－６．７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５標識抗マウスＴＣＲβ（Ｈ５７－５９７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＰＥ標識抗マウスＣＤ２５（ＰＣ６１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＢＶ４２１標識抗ヒトＣＣＲ８抗体（４３３Ｈ、ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（又はＢＶ４２１標識アイソタイプコントロール抗体）で染色した。染色は３０分間氷中で実施した。２％ＦＢＳ／ＨＥＰＥＳ／ＨＢＳＳで２回洗浄後、フローサイトメーターを用いて細胞を解析した。
　ＣＤ４５＋ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞中のヒトＣＣＲ８発現を解析した。アイソタイプコントロール抗体での染色により陰性細胞領域を決定し、抗ヒトＣＣＲ８抗体で陽性となる細胞をヒトＣＣＲ８＋細胞として移植１７日後に存在頻度を算出した。その結果、マウス腫瘍内のＣＤ４５＋ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞中の約４７％にヒトＣＣＲ８が検出された。

（３）大腸癌由来ＣＴ２６細胞移植マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体投与による抗腫瘍効果の評価
　ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（８週齢、メス）の背部皮内に４×１０^５個の大腸癌由来ＣＴ２６細胞(５０ｕＬ)を移植した。腫瘍移植４日後及び１１日後にヒト化１０Ａ１１抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ４－１　Ｎ５３Ｑ＋Ｇ２９Ｒ（配列番号５９）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ（配列番号４１））を静脈内に１００μｇ（１００μＬ）又は２００μｇ（１００μＬ）投与した（Ｎ＝１０）。コントロールは媒体（りん酸緩衝生理食塩水）１００μＬを投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植４、７、１０、１１、１４、１６、１８、２１、２４日後に腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２で計量した。
　その結果、移植１１日後、１４日後、１６日後、１８日後、２１日後、２４日後においていずれの用量の抗ヒトＣＣＲ８抗体投与群の腫瘍体積が有意に小さかった（図８、有意水準はＷｅｌｃｈ‘ｓ　ｔ　ｔｅｓｔを用い、いずれの用量においても１０日後が＊＊；ｐ<０.０１、１１日後以降が、＊＊＊；ｐ<０.００１）。また抗ヒトＣＣＲ８抗体投与群では、完全退縮を示す個体が出現し、２４日後には１００μｇ抗ヒトＣＣＲ８抗体投与群で１０匹中５匹、２００μｇ抗ヒトＣＣＲ８抗体投与群で１０匹中６匹のマウスの腫瘍がほぼ完全に消失した。

実施例１　乳癌由来４Ｔ１細胞移植マウスにおける抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチン投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　Ｂａｌｂ／ｃマウス（６週齢、メス）の背部皮内に２×１０^５個の乳癌由来４Ｔ１細胞（５０μＬ）を移植した。
　抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇ（２００μＬ）（クローンＳＡ２１４Ｇ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後に生理食塩水を１１．４ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。カルボプラチン単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇ（２００μＬ）（クローンＬＴＦ－２、Ｂｉｏ　X　Ｃｅｌｌ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にカルボプラチン（品名：パラプラチン、ブリストル・マイヤーズスクイブ社）１１４ｍｇ／ｋｇ体重を１１．４ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。カルボプラチンと抗マウスＣＣＲ８抗体との併用投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にカルボプラチン１１４ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は、腫瘍移植５日後及び８日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植５日後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植５日後より３～４日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）
　結果を図９に示す。腫瘍移植８、１２、１５、１８、２２日後において、コントロール群と抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群、さらにコントロール群とカルボプラチン単独投与群との間に平均腫瘍体積の有意な差は見られなかった。一方、抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチンとの併用投与群では、腫瘍移植８日後からコントロール群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められた。さらに、抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群、カルボプラチン単独投与群と比べても８日後から有意に腫瘍体積が小さくなった。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチンを併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例２　乳癌由来４Ｔ１細胞移植マウスにおける抗マウスＣＣＲ８抗体とゲムシタビン投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　Ｂａｌｂ／ｃマウス（６週齢、メス）の背部皮内に２×１０^５個の乳癌由来４Ｔ１細胞（５０μＬ）を移植した。
　抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇ（２００μＬ）（クローンＳＡ２１４Ｇ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後に生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。ゲムシタビン単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇ（２００μＬ）（クローンＬＴＦ－２、Ｂｉｏ　X　Ｃｅｌｌ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にゲムシタビン（品名：ジェムザール、イーライリリー社）５０ｍｇ／ｋｇ体重を１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。ゲムシタビンと抗マウスＣＣＲ８抗体との併用投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は、腫瘍移植５日後及び８日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植５日後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植５日後より３～４日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）
　結果を図１０に示す。腫瘍移植８、１２、１５、１８、２２日後において、ゲムシタビン単独投与群では、コントロール群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められた。抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群とコントロール群との間に、腫瘍体積の有意な差は見られなかった。一方、抗マウスＣＣＲ８抗体とゲムシタビンとの併用投与群では、コントロール群あるいは抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して腫瘍移植８日後から有意な腫瘍体積の減少が認められ、１２日後からはゲムシタビン単独投与群と比べても、有意に腫瘍体積が小さくなった。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗マウスＣＣＲ８抗体をゲムシタビンと併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例３　乳癌由来４Ｔ１細胞移植ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチン投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　試験例１０で作製したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（１４週齢、メス）の背部皮内に２×１０^５個の乳癌由来４Ｔ１細胞（５０μＬ）を移植した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体４００μｇ（２００μＬ）（ヒト化１０Ａ１１抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ４－１　Ｎ５３Ｑ＋Ｇ２９Ｒ（配列番号５９）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ（配列番号４１）））を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後に生理食塩水を１６ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。シスプラチン単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後にコントロール溶液（抗体に用いた緩衝液を抗体希釈率に合わせて生理食塩水で希釈）２００μＬを静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にシスプラチン（品名：ランダ、日本化薬）８ｍｇ／ｋｇ体重を１６ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチンの併用投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体４００μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にシスプラチン８ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は腫瘍移植５日後及び８日後にコントロール溶液２００μＬを静脈内に投与し、腫瘍移植５日後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植５日後より２～４日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）
　結果を図１１に示す。腫瘍移植８、１１、１３、１５、１８、２１、２５、２９日後において、シスプラチン単独投与群では、コントロール群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められた。抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群では、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチンとの併用投与群では、コントロール群あるいは抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して腫瘍移植８日後から有意な腫瘍体積の減少が認められ、１８日後からはシスプラチン単独投与群と比べても、有意に腫瘍体積が減少した。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗ヒトＣＣＲ８抗体をシスプラチンと併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例４　膀胱癌由来ＭＢ４９細胞移植マウスにおける抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチン又はシスプラチン投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６週齢、オス）の背部皮内に２×１０^５個の膀胱癌由来ＭＢ４９（５０μＬ）を移植した。
　抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植４日後及び７日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇ（２００μＬ）（クローンＳＡ２１４Ｇ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植４日後に生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　カルボプラチン単独投与群は、腫瘍移植４日後及び７日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇ（２００μＬ）（クローンＬＴＦ－２、Ｂｉｏ　X　Ｃｅｌｌ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植４日後にカルボプラチン（品名：パラプラチン、ブリストル・マイヤーズスクイブ社）４０ｍｇ／ｋｇ体重を１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチンの併用投与群は、腫瘍移植４日後及び７日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植４日後にカルボプラチン４０ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　シスプラチン単独投与群は、腫瘍移植４日後及び７日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇ（２００μＬ）を静脈内に投与し、腫瘍移植４日後にシスプラチン（品名：ランダ、日本化薬）３ｍｇ／ｋｇ体重を１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。シスプラチンと抗マウスＣＣＲ８抗体との併用投与群は、腫瘍移植４日後及び７日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植４日後にシスプラチン３ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　コントロール群は腫瘍移植４日後及び７日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇを静脈内に投与し、腫瘍移植４日後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　腫瘍移植４日後より１～４日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）
　結果を図１２（カルボプラチン）及び図１３（シスプラチン）に示す。腫瘍移植７、１０、１４、１７、１８日後において、コントロール群と抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群、コントロール群とカルボプラチン単独投与群，コントロール群とシスプラチン単独投与群との間に平均腫瘍体積の有意な差は見られなかった。一方、抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチンとの併用投与群では、腫瘍移植１０日後からコントロール群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められた。さらに、抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群、カルボプラチン単独投与群と比べても腫瘍移植１０日後から有意に腫瘍体積が減少した。抗マウスＣＣＲ８抗体とシスプラチンとの併用投与群についても、腫瘍移植１４日後からコントロール群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められた。さらに、抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群、シスプラチン単独投与群と比べても腫瘍移植１０日後から有意に腫瘍体積が減少した。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗マウスＣＣＲ８抗体とカルボプラチン又はシスプラチンを併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例５　大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞移植マウスにおける抗マウスＣＣＲ８抗体とオキサリプラチン又はフルオロウラシル（５－ＦＵ）投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　Ｂａｌｂ／ｃマウス（５週齢、メス）の背部皮内に３．５×１０^５個の大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６（５０μＬ）を移植した。
　抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇ（２００μＬ）（クローンＳＡ２１４Ｇ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を静脈内に投与し、抗マウスＣＣＲ８抗体投与から１時間後に生理食塩水を１０ｍｇ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　オキサリプラチン単独投与群は、腫瘍移植５日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇ（２００μＬ）を静脈内に投与し、アイソタイプコントロール抗体投与から１時間後にオキサリプラチン（品名：エルプラット、ヤクルト本社）５ｍｇ／ｋｇ体重を１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗マウスＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンの併用投与群は、腫瘍移植５日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇを静脈内に投与し、抗マウスＣＣＲ８抗体投与から１時間後にオキサリプラチン５ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　５－ＦＵ単独投与群は、腫瘍移植５日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇ（２００μＬ）を静脈内に投与し、アイソタイプコントロール抗体投与から１時間後に５－ＦＵ（品名：５－ＦＵ注２５０協和、協和発酵キリン）を３０ｍｇ／ｋｇ体重の用量、１０ｍＬ／ｋｇの容量で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗マウスＣＣＲ８抗体と５－ＦＵとの併用投与群は、腫瘍移植５日後に抗マウスＣＣＲ８抗体５０μｇを静脈内に投与し、抗マウスＣＣＲ８抗体投与から１時間後に５－ＦＵを３０ｍｇ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　コントロール群は腫瘍移植５日後にアイソタイプコントロール抗体５０μｇを静脈内に投与し、アイソタイプコントロール抗体投与から１時間後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。
　腫瘍移植４日後（抗体投与前日）より２～３日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図１４（オキサリプラチン）及び図１５（５－ＦＵ）に示す。
　腫瘍移植４、７、１０、１２、１４、１７日後において、オキサリプラチン単独投与群、及び抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群では、コントロール群と比較し、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗マウスＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンとの併用投与群では、コントロール群と比較して腫瘍移植１０日後から、また、オキサリプラチン単独投与群と比較して腫瘍移植１０日後から、抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して腫瘍移植１２日後から有意な腫瘍体積の減少が認められた。５－ＦＵ単独投与群では、腫瘍移植７日後においてのみ、コントロール群と比較して腫瘍体積の有意な減少が認められた。一方、抗マウスＣＣＲ８抗体と５－ＦＵとの併用投与群では、コントロール群と比較して腫瘍移植１０日後から、また、５－ＦＵ単独投与群と比較して腫瘍移植１２日後から、さらに抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して腫瘍移植１４日後から有意な腫瘍体積の減少が認められた。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗マウスＣＣＲ８抗体とオキサリプラチン又は５－ＦＵを併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例６　大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞移植ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチン投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　試験例１０で作製したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（１２週齢、メス）の背部皮内に３．５×１０^５個の大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６（５０μＬ）を移植した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体１５ｍｇ／ｋｇ体重（ヒト化１０Ａ１１抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ４－１　Ｎ５３Ｑ＋Ｇ２９Ｒ（配列番号５９）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ（配列番号４１）））を静脈内に投与し、抗ヒトＣＣＲ８抗体投与から３時間後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。オキサリプラチン単独投与群は、腫瘍移植５日後に生理食塩水を静脈内に投与し、生理食塩水投与から３時間後にオキサリプラチン（品名：エルプラット、ヤクルト本社）５ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンの併用投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体１５ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与し、抗ヒトＣＣＲ８抗体投与から３時間後にオキサリプラチン５ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は腫瘍移植５日後に生理食塩水を静脈内に投与し、生理食塩水投与から３時間後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。いずれの検体についても、尾静脈内投与は全て１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で行った。腫瘍移植４日後（抗体投与前日）より１～３日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図１６に示す。腫瘍移植４、７、１０、１２、１４、１７、１８日後において、オキサリプラチン単独投与群、また、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群では、コントロール群と比較し、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンとの併用投与群では、コントロール群と比較して腫瘍移植７日後から、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して腫瘍移植１０日後から、さらに、オキサリプラチン単独投与群と比較して腫瘍移植１２日後から有意な腫瘍体積の減少が認められた。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチンを併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例７　肺癌由来ＡＳＢ－ＸＩＶ細胞移植ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチン投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　試験例１０で作製したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（８週齢、メス）の背部皮内に５×１０^５個の肺癌由来ＡＳＢ－ＸＩＶ細胞（５０μＬ）を移植した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を１ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重（ヒト化１０Ａ１１抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ４－１　Ｎ５３Ｑ＋Ｇ２９Ｒ（配列番号５９）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ（配列番号４１）））及び生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。シスプラチン単独投与群は、腫瘍移植５日後にコントロール溶液を１０ｍＬ／ｋｇ体重及びシスプラチン（品名：ランダ、日本化薬）を３ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチンの併用投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を１ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重及びシスプラチンを３ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は腫瘍移植５日後にコントロール溶液を１０ｍＬ／ｋｇ体重及び生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植５日後より２～５日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図１７に示す。腫瘍移植１４、１７、１９日後において、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群及びシスプラチン単独投与群では、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチンとの併用投与群では、コントロール群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められ、１４日後においてシスプラチン単独投与群あるいは抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群と比べても、有意に腫瘍体積が減少した。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗ヒトＣＣＲ８抗体及びシスプラチンを併用投与することで、有意な抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例８　肺癌由来ＡＳＢ－ＸＩＶ細胞移植ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体とパクリタキセル投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　試験例１０で作製したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（９週齢、メス）の背部皮内に５×１０^５個の肺癌由来ＡＳＢ－ＸＩＶ細胞（５０μＬ）を移植した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を０．５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重（ヒト化１０Ａ１１抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ４－１　Ｎ５３Ｑ＋Ｇ２９Ｒ（配列番号５９）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ（配列番号４１）））及び生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。パクリタキセル単独投与群は、腫瘍移植５日後に生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重及びパクリタキセル（品名：タキソール、ブリストルマイヤーズスクイプ）を８ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗ヒトＣＣＲ８抗体とパクリタキセルの併用投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を０．５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重及びパクリタキセルを８ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は腫瘍移植５日後に生理食塩水を２０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植５日後より２～５日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｓｔｕｄｅｎｔ´s Ｔ：ｏｎｅ－ｓｉｄｅｄｔｅｓｔ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図１８に示す。腫瘍移植１０、１２、１４、１８日後において、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群では、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。パクリタキセル単独投与群では腫瘍移植１０、１２日後に有意な腫瘍体積の減少が認められたが、１４、１７日後には有意差は消失した。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体とパクリタキセルとの併用投与群では、コントロール群と比較して１０日後から有意な腫瘍体積の減少が認められ、１８日後ではパクリタキセル単独投与群あるいは抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群と比べても、有意に腫瘍体積が減少した。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗ヒトＣＣＲ８抗体をパクリタキセルと併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例９　乳癌由来４Ｔ１細胞移植ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体とドセタキセル投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　試験例１０で作製したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（９週齢、メス）の背部皮内に２×１０^５個の乳癌由来４Ｔ１細胞（５０μＬ）を移植した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を１５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重（ヒト化１０Ａ１１抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ４－１　Ｎ５３Ｑ＋Ｇ２９Ｒ（配列番号５９）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ（配列番号４１）））及び生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。ドセタキセル単独投与群は、腫瘍移植５日後に生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重及びドセタキセル（品名：ワンタキソテール、サノフィ）を３０ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗ヒトＣＣＲ８抗体とドセタキセルの併用投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を１５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重及びドセタキセルを３０ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は腫瘍移植５日後に生理食塩水を２０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植５日後より３～４日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図１９に示す。腫瘍移植８、１２、１５、１８、２１日後において、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群では、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体とドセタキセルとの併用投与群では、コントロール群あるいは抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められ、１２日後からはドセタキセル単独投与群と比べても、有意に腫瘍体積が減少した。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗ヒトＣＣＲ８抗体をドセタキセルと併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例１０　乳癌由来４Ｔ１細胞移植マウスにおける抗マウスＣＣＲ８抗体とドセタキセル投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　Ｂａｌｂ／ｃマウス（６週齢、メス）の背部皮内に２×１０^５個の乳癌由来４Ｔ１細胞（５０μＬ）を移植した。
　抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を２．５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重（クローンＳＡ２１４Ｇ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後に生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。ドセタキセル単独投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後にアイソタイプコントロール抗体を２．５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重（クローンＬＴＦ－２、Ｂｉｏ X Ｃｅｌｌ社）を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にドセタキセル（品名：ワンタキソテール、サノフィ）を３０ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。抗マウスＣＣＲ８抗体とドセタキセルの併用投与群は、腫瘍移植５日後及び８日後に抗マウスＣＣＲ８抗体を２．５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重を静脈内に投与し、腫瘍移植５日後にドセタキセルを３０ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。コントロール群は腫瘍移植５日後にアイソタイプコントロール抗体を２．５ｍｇ／１０ｍL／ｋｇ体重及び生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝１０）。腫瘍移植５日後より３～４日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図２０に示す。腫瘍移植８、１１、１５、１８、２１日後において、抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群では、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗マウスＣＣＲ８抗体とドセタキセルとの併用投与群では、コントロール群あるいは抗マウスＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して有意な腫瘍体積の減少が認められ、１５日後からはドセタキセル単独投与群と比べても、有意に腫瘍体積が減少した。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗マウスＣＣＲ８抗体をドセタキセルと併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例１１　大腸癌由来Ｃｏｌｏｎ２６細胞移植ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチン投与の併用による抗腫瘍効果の評価（その２）
　実施例６と同様の方法で、抗ヒトＣＣＲ８抗体のみ別の二抗体（２－７Ｂ抗体（軽鎖可変領域：配列番号３７／重鎖可変領域：配列番号３８）、ヒト化１９Ｄ７抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ３－２０（配列番号５６）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｋ６４Ｒ＋Ｔ９４Ｒ（配列番号６０）））を用いて評価を行った。なお、有意差検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ´s Ｔ：ｏｎｅ－ｓｉｄｅｄｔｅｓｔ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図２１（２－７Ｂ抗体）及び図２２（ヒト化１９Ｄ７抗体）に示す。
１）２－７Ｂ抗体
　腫瘍移植１０、１４、１７日後において、オキサリプラチン単独投与群では、また、腫瘍移植１４、１７日後において、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群では、コントロール群と比較し、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンとの併用投与群では、コントロール群及び抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して腫瘍移植１０日後から、さらに、オキサリプラチン単独投与群と比較して腫瘍移植１４日後から有意な腫瘍体積の減少が認められた。
２）ヒト化１９Ｄ７抗体
　腫瘍移植１０、１４日後において、オキサリプラチン単独投与群では、また、腫瘍移植１４日後において、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群では、コントロール群と比較し、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体とオキサリプラチンとの併用投与群では、コントロール群及び抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群と比較して腫瘍移植１０日後から、さらに、オキサリプラチン単独投与群と比較して腫瘍移植１４日後から有意な腫瘍体積の減少が認められた。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗ヒトＣＣＲ８抗体とシスプラチンを併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例１２　大腸癌由来ＣＴ２６細胞移植ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスにおける抗ヒトＣＣＲ８抗体とフルオロウラシル（５－ＦＵ）投与の併用による抗腫瘍効果の評価
　試験例１０で作製したｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス（１４週齢、メス）の背部皮内に３．５×１０^５個の大腸癌由来ＣＴ２６（５０μＬ）を移植した。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を０．１ｍｇ／ｋｇ体重（ヒト化１０Ａ１１抗体（軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ４－１　Ｎ５３Ｑ＋Ｇ２９Ｒ（配列番号５９）／重鎖可変領域：ＩＧＨＶ３－１５　Ｔ９４Ｒ（配列番号４１）））で静脈内に投与し、抗ヒトＣＣＲ８抗体投与から３時間後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝８）。５－ＦＵ単独投与群は、腫瘍移植５日後に生理食塩水を静脈内に投与し、生理食塩水投与から３時間後に５－ＦＵ（品名：５－ＦＵ注２５０協和、協和発酵キリン）を３０ｍｇ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝８）。抗ヒトＣＣＲ８抗体と５－ＦＵの併用投与群は、腫瘍移植５日後に抗ヒトＣＣＲ８抗体を０．１ｍｇ／ｋｇ体重で静脈内に投与し、抗ヒトＣＣＲ８抗体投与から３時間後に５－ＦＵを３０ｍｇ／ｋｇ体重で静脈内に投与した（Ｎ＝８）。コントロール群は腫瘍移植５日後に生理食塩水を静脈内に投与し、生理食塩水投与から３時間後に生理食塩水を静脈内に投与した（Ｎ＝８）。いずれの検体についても、尾静脈内投与は全て１０ｍＬ／ｋｇ体重の容量で行った。腫瘍移植５日後（抗体投与前日）より３～４日ごとに腫瘍体積を測定した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）ｘ短径（ｍｍ）／２で計量し、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ法による有意差検定を行った（有意水準：Ｐ＜０．０５）。
　結果を図２３に示す。腫瘍移植８、１２、１５日後において、５－ＦＵ単独投与群、また、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群では、コントロール群と比較し、腫瘍体積の有意な減少は見られなかった。一方、抗ヒトＣＣＲ８抗体と５－ＦＵとの併用投与群では、コントロール群、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独投与群、さらに、５－ＦＵ単独投与群と比較して腫瘍移植８日後から有意な腫瘍体積の減少が認められた。
　以上の結果より、単独投与では腫瘍体積に有意に影響しない抗ヒトＣＣＲ８抗体と５－ＦＵを併用投与することで、各単独投与群と比較して相乗以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。

実施例１３　マウス乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌由来細胞株を用いた抗ｍＣＣＲ８抗体と化学療法との併用による抗腫瘍効果の評価
　Ｂａｌｂ／ｃマウスあるいはＣ５７ＢＬ／６マウスの背部皮内にマウス乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌、卵巣癌由来細胞株をそれぞれ移植する。腫瘍移植後にラット抗マウスＣＤ１９８（ＣＣＲ８）抗体（クローンＳＡ２１４Ｇ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）と化学療法を併用する。化学療法剤としては、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ペメトレキセド、ゲムシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、エトポシド又はドキソルビシンを静脈内に併用投与する。コントロールはアイソタイプコントロール抗体を投与する。腫瘍移植後より３～４日ごとに腫瘍体積を測定し、腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２で計量する。
　その結果、抗マウスＣＣＲ８抗体単独あるいは化学療法単独で投与した際と比較し、両者を併用投与した際に相乗効果が認められるかを検証する。

実施例１４　癌由来細胞株を移植したヒトＣＣＲ８ノックインマウス（以下、ｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウス）における抗ヒトＣＣＲ８抗体と化学療法との併用による抗腫瘍効果の評価
　試験例１０のｈＣＣＲ８－ＫＩ（ＫＩ／ＫＩ）マウスの背部皮内に乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌又は卵巣癌由来細胞株をそれぞれ移植する。腫瘍移植後に抗ヒトＣＣＲ８抗体投与と化学療法を併用する。
　化学療法剤としては、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ペメトレキセド、ゲムシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、エトポシド又はドキソルビシンを静脈内に併用投与する。コントロールは媒体（りん酸緩衝生理食塩水）を投与する。腫瘍移植後より３～４日ごとに腫瘍体積を測定し、腫瘍体積（ｍｍ^３）は長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２で計量する。
　抗ヒトＣＣＲ８抗体としては、（１４）～（１８）のいずれかに記載の抗ＣＣＲ８抗体、（１９）～（２７）のいずれかに記載のヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片を用いる。たとえば、（２６）記載の抗体を用いる。
　その結果、抗ヒトＣＣＲ８抗体単独あるいは化学療法単独で投与した際と比較し、両者を併用投与した際に相乗効果が認められるかを検証する。

　本発明の抗ＣＣＲ８抗体と化学療法剤の併用は、癌の治療又は予防に非常に有用である。

Claims

抗ＣＣＲ８抗体を含有する、化学療法剤とともに用いる医薬組成物。
化学療法剤を含有する、抗ＣＣＲ８抗体とともに用いる医薬組成物。
癌治療用である、請求項１又は２記載の医薬組成物。
抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療が無効である癌に対する治療用である、請求項３記載の医薬組成物。
癌が乳癌、肺癌、大腸癌、腎癌、肉腫、肝臓癌、膀胱癌又は卵巣癌である、請求項１～４のいずれかに記載の医薬組成物。
癌が乳癌、肺癌、膀胱癌又は大腸癌である、請求項５記載の医薬組成物。
化学療法剤が白金錯体、タキサン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、エトポシド又はドキソルビシンである、請求項１～６のいずれかに記載の医薬組成物。
化学療法剤が白金錯体、タキサン、ゲムシタビン又はフルオロウラシルである、請求項７のいずれかに記載の医薬組成物。
化学療法剤がゲムシタビンである、請求項８記載の医薬組成物。
化学療法剤が白金錯体であり、白金錯体がカルボプラチン、シスプラチン又はオキサリプラチンである、請求項８記載の医薬組成物。
白金錯体がカルボプラチンである、請求項１０記載の医薬組成物。
化学療法剤がタキサンであり、タキサンがパクリタキセル又はドセタキセルである、請求項８記載の医薬組成物。
化学療法剤がフルオロウラシルである、請求項８記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、
１）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域
（ここで、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の１０番目のアスパラギンがリジンに置換
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換
Ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換
Ｄ）配列番号３のアミノ酸配列の５番目のロイシンがイソロイシンに置換
Ｅ）配列番号４のアミノ酸配列の４番目のロイシンがイソロイシンに置換
Ｆ）配列番号４のアミノ酸配列の６番目のチロシンがフェニルアラニンに置換
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１６番目のセリンがトレオニンに置換
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換）；
２）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
３）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
（ここで、以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号２のアミノ酸配列の２番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｂ）配列番号２のアミノ酸配列の３番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｃ）配列番号２のアミノ酸配列の５番目のセリンがトレオニンに置換、
Ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列の２番目のグルタミンがアスパラギンに置換、
Ｅ）配列番号８のアミノ酸配列の１番目のトレオニンがセリンに置換、
Ｆ）配列番号６のアミノ酸配列の１４番目のアラニンがバリンに置換、
Ｇ）配列番号６のアミノ酸配列の１８番目のリジンがアルギニンに置換、
Ｈ）配列番号６のアミノ酸配列の１９番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
Ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列の５番目のアスパラギンがグルタミンに置換、
Ｊ）配列番号１１のアミノ酸配列の１２番目のチロシンがフェニルアラニンに置換）；
４）配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
５）配列番号１４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号１８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
６）配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域）
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、請求項１～１３のいずれかに記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、
配列番号３のアミノ酸配列の４番目のアスパラギンがグルタミンに置換されており、さらに、配列番号２のアミノ酸配列の１１番目のグリシンがアルギニンに置換されているモノクローナル抗体又は抗体断片である、請求項１４記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、
配列番号６のアミノ酸配列の１８番目のリジンがアルギニンに置換されているモノクローナル抗体又は抗体断片である、請求項１４記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、
配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域並びに
配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；
を含むモノクローナル抗体又は抗体断片である、請求項１４記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片である、請求項１４～１７のいずれかに記載の医薬組成物。
ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
１）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
２）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
３）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
４）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
５）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
６）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
７）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
８）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
９）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
１０）配列番号４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；
１１）配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；若しくは
１２）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、
配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含み、
以下のいずれかの置換を１以上有していても良い、
Ａ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３３番目のアスパラギンがリジンに置換；
Ｂ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の３４番目のグリシンがグルタミン、トレオニン、アラニン、リジン、ロイシン又はアルギニンに置換；
Ｃ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５８番目のアスパラギンがグルタミンに置換；
Ｄ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の５９番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｅ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９７番目のロイシンがイソロイシンに置換；
Ｆ）配列番号４０、４２、４３、４４、４５又は４７のアミノ酸配列の９９番目のチロシンがフェニルアラニンに置換；
Ｇ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６５番目のセリンがトレオニンに置換；
Ｈ）配列番号４１又は４６のアミノ酸配列の６８番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換、
請求項１８記載の医薬組成物。
ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、配列番号５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び、配列番号６０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する、請求項１８記載の医薬組成物。
ヒト化モノクローナル抗体又はその抗体断片が、
さらに、配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域、及び、
配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を有し、
配列番号５３のＣ末端にリジンが付加していてもしていなくてもよい、請求項１８～２１のいずれかに記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、中和抗体である、請求項１～２２
のいずれかに記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、ＡＤＣＣ活性を有するものである、請求項１～２２のいずれかに記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項１～２２のいずれかに記載の医薬組成物。
抗ＣＣＲ８抗体及び化学療法剤を組み合わせてなる医薬。
癌治療用である、請求項２６記載の医薬。