WO2021049117A1 - 細胞培養装置 - Google Patents
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Classifications
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
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- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
Definitions
- the present invention relates to a cell culture device capable of moving a cell suspension between a plurality of culture vessels.
- a work called "passage” is performed in which a cell suspension containing cells collected from a culture vessel is adjusted to a desired cell density and then transferred to a new culture vessel.
- the conventional passage first, the cells adhering to the inner surface of the culture vessel are exfoliated with a stripping solution, the stripped cells are collected in a centrifuge tube, centrifuged, and the supernatant is removed, and then the liquid medium is used. Was added to prepare a cell suspension. Then, a part of the cell suspension was taken out, the number of cells was counted by a counting device, and a medium was appropriately added according to the measurement result to adjust the cell density of the cell suspension.
- Patent Documents 1 and 2 disclose a robot arm that performs a series of operations related to such a passage.
- Patent Documents 1 and 2 have a device configuration in which an isolator for forming a sterile space is provided and a robot arm is arranged in the sterile space.
- an isolator is required in addition to the robot arm, there is a problem that the device becomes very expensive.
- the present invention has been made in view of the above-mentioned problems, and an object of the present invention is to enable good stirring of a cell suspension with an inexpensive configuration in a cell culture device that does not use a centrifuge.
- a plurality of culture containers in a sterile state are connected via a connecting tube while maintaining the sterile state, and the cell suspension is moved between the plurality of culture containers.
- It is a cell culture device capable of connecting the plurality of stirring containers which are connected to the connecting tube and whose inside is in a sterile state, and the plurality of stirring containers while maintaining the sterile state of the plurality of stirring containers. It is characterized by including a stirring connection tube for moving the cell suspension and a driving unit for moving the cell suspension between the plurality of stirring containers via the stirring connection tube.
- the cell suspension by moving the cell suspension between a plurality of stirring containers by the driving unit, the cell suspension can be greatly flowed, so that the cell suspension can be satisfactorily stirred. Further, since a so-called closed system configuration in which a plurality of culture containers and a plurality of stirring containers are connected in an aseptic state is adopted, it is not necessary to arrange the entire apparatus in an aseptic space, and an isolator is not required. Therefore, according to the present invention, the cell suspension can be satisfactorily agitated with an inexpensive structure.
- the driving unit can move the cell suspension from the stirring container to another stirring container by pressure-feeding a predetermined gas to one of the plurality of stirring containers. It should be a possible gas supply unit.
- a pump is not required to move the cell suspension, so that the cells are not crushed when the cell suspension passes through the pump.
- a counting device connected to the connecting tube and counting the number of cells contained in the cell suspension is further provided, and the driving unit is used to select the stirring container from any of the plurality of stirring containers. It is advisable to move a part of the cell suspension to the counting device.
- the cell suspension stirred by a plurality of stirring containers can be moved to the counting device without human intervention, so that the workload of the operator can be reduced.
- the cell culture device 1 is a device for automatically culturing cells, and as shown in FIG. 1, includes a refrigerating storage unit 2, a culture unit 3, and a control unit 4.
- the refrigerated storage unit 2 is a part for refrigerating and storing a medium tank and a stripping liquid tank (not shown), and the inside is maintained at a temperature lower than room temperature.
- the medium tank contains a liquid medium necessary for cell culture.
- the stripping solution tank contains a stripping solution for stripping cells adhering to the inner surface of the culture vessel.
- the medium tank is connected to the medium container 15 (see FIG. 2) by a tube (not shown), and the medium tank is replenished with the medium from the medium tank 15 as needed.
- the stripping liquid tank is connected to the stripping liquid container 16 (see FIG. 2) by a tube (not shown), and the stripping liquid tank 16 is replenished with the stripping liquid as needed.
- the culture unit 3 is a site for performing cell culture, and the inside is maintained in a predetermined state suitable for cell culture (for example, temperature 37 ° C., humidity 95%, CO 2 concentration 5%).
- Culture containers 11 and 12 are arranged inside the culture unit 3, and the cells in the culture containers 11 and 12 grow in a state of being attached to the inner surface of the container.
- a door 3a is provided on the front surface of the culture unit 3, and cells can be taken out from the culture unit 3, parts in the culture unit 3 can be replaced, and the like.
- the culture circuit 10 shown in FIG. 2 is formed in the cell culture device 1.
- the culture circuit 10 includes a first culture container 11, a second culture container 12, a first stirring container 13, a second stirring container 14, a medium container 15, a stripping solution container 16, a counting device 17, and a counting device.
- the waste liquid container 18 for the device, the waste liquid container 19, and the gas supply unit 20 are connected in a sterile state by tubes 31 to 39 to form a closed system.
- an isolator can be eliminated.
- the parts constituting the culture circuit 10 at least the first culture container 11, the second culture container 12, the first stirring container 13, the second stirring container 14, the medium container 15, and the stripping solution container 16 are contained in the culture unit 3. Is located in.
- the first culture container 11 and the second culture container 12 are containers for performing cell culture, and the inside is maintained in an aseptic state.
- a liquid medium is placed in the first culture container 11 and the second culture container 12, and the cells grow while adhering to the inner surface of the container in the medium.
- a multi-layered container in which a plurality of culture layers are formed is adopted, but a container other than the multi-layered container may be used.
- the first culture container 11 and the second culture container 12 are connected to the gas supply unit 20 by a tube 31.
- the tube 31 is provided with a valve V1 for switching between supply and non-supply of gas from the gas supply unit 20 to the first culture container 11, and also supplies gas from the gas supply unit 20 to the second culture container 12.
- a valve V2 for switching non-supply is provided.
- the first culture vessel 11 and the second culture vessel 12 are connected by a tube 32 while maintaining an aseptic state.
- the tube 32 is provided with a valve V3 for switching between supply and discharge of fluid to and from the first culture vessel 11 via the tube 32, and is provided to the second culture vessel 12 via the tube 32.
- a valve V4 for switching between supply and discharge of fluid and non-supply and discharge of fluid is provided.
- the first culture vessel 11 is provided with a degassing portion 52 having a valve V5 and a filter 51.
- the second culture vessel 12 is provided with a degassing portion 54 having a valve V6 and a filter 53.
- the first stirring container 13 and the second stirring container 14 are containers for stirring the cell suspension, as will be described in detail later.
- the bag is adopted as the first stirring container 13 and the second stirring container 14, but a container other than the bag may be used.
- the first stirring container 13 and the second stirring container 14 are connected to the gas supply unit 20 by a tube 31.
- the tube 31 is provided with a valve V7 for switching between supply and non-supply of gas from the gas supply unit 20 to the first stirring container 13, and also supplies gas from the gas supply unit 20 to the second stirring container 14.
- a valve V8 for switching non-supply is provided.
- the first stirring container 13 and the second stirring container 14 are connected by a tube 33.
- the tube 33 is connected to the tube 32 via the tube 34. That is, the first stirring container 13 and the second stirring container 14 are connected to the tube 32 via the tubes 33 and 34.
- the tube 33 is provided with a valve V9, and the tube 34 is provided with a valve V10.
- the first stirring container 13 is provided with a degassing portion 56 having a valve V11 and a filter 55.
- the second stirring container 14 is provided with a degassing portion 58 having a valve V12 and a filter 57.
- the medium container 15 is a container in which a liquid medium is stored.
- the medium container 15 is connected to the gas supply unit 20 by a tube 31.
- the tube 31 is provided with a valve V13 for switching between supply and non-supply of gas from the gas supply unit 20 to the medium container 15.
- the medium container 15 is connected to the tube 32 via the tube 35.
- the tube 35 is provided with a valve V14 for switching between supply and non-supply of the medium from the medium container 15.
- the stripping liquid container 16 is a container in which the stripping liquid is stored.
- the stripping liquid container 16 is connected to the gas supply unit 20 by a tube 31.
- the tube 31 is provided with a valve V15 for switching between supply and non-supply of gas from the gas supply unit 20 to the stripping liquid container 16.
- the stripper container 16 is connected to the tube 32 via the tube 36.
- the tube 36 is provided with a valve V16 for switching between supply and non-supply of the release liquid from the release liquid container 16.
- the counting device 17 is a device for counting the number of cells contained in the cell suspension.
- the counting device 17 is connected to the tube 32 via the tube 37.
- the tube 37 is provided with two valves V17 and V18.
- a tube 38 is branched from a portion of the tube 37 between the valve V17 and the valve V18, and a waste liquid container 18 for a counting device is connected to the end of the tube 38.
- the tube 38 is provided with a valve V19.
- the waste liquid container 18 for the counting device is provided with a degassing portion 61.
- the waste liquid container 19 is a container for discharging unnecessary liquid in the culture circuit 10.
- the waste liquid container 19 is connected to the tube 37 via the tube 39. That is, the waste liquid container 19 is connected to the tube 32 via the tubes 39 and 37.
- the tube 39 is provided with a valve V20.
- the waste liquid container 19 is provided with a degassing portion 63 having a filter 62.
- the gas supply unit 20 is a portion that supplies a predetermined gas (for example, air having a temperature of 37 ° C., a humidity of 95%, and a CO 2 concentration of 5%) that does not interfere with cell culture.
- a predetermined gas for example, air having a temperature of 37 ° C., a humidity of 95%, and a CO 2 concentration of 5%.
- the culture circuit 10 is configured so that the liquid in each container 11 to 16 can be moved by pumping gas from the gas supply unit 20.
- the gas supply unit 20 has a CO 2 cylinder 71 and an air cylinder 72. From CO 2 cylinder 71, the pressure is adjusted by the regulator 73, and, CO 2 whose flow rate is adjusted by the mass flow controller 74 is supplied. From the air cylinder 72, air whose pressure is adjusted by the regulator 75 and whose flow rate is adjusted by the mass flow controller 76 is supplied. CO air supplied from the CO 2 and Eabonbe 72 supplied from the 2 cylinder 71 are mixed, the CO 2 concentration in the mixed gas is detected by the CO 2 sensor 77. The control unit 4 controls the mass flow controllers 74 and 76 so that the CO 2 concentration is maintained at 5% according to the output of the CO 2 sensor 77. The gas thus obtained is supplied to each of the containers 11 to 16 after bacteria and the like are removed by the filter 78.
- the control unit 4 controls the opening and closing of the valves V1 to V20 and the supply of gas from the gas supply unit 20, so that the passage is automatically performed.
- Various conditions related to culturing and subculture are input to the control unit 4 in advance by the operator.
- the valves V1 to V20 are closed and the culture circuit 10 is maintained in an aseptic state.
- the cells cultured in the first culture vessel 11 are collected, the cell suspension is adjusted to a desired cell density, and then the cells are transferred to the second culture vessel 12.
- the control unit 4 opens the valves V1, V3, and V20, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the medium M in the first culture container 11 is discharged to the waste liquid container 19 through the tubes 32, 37, 39. At this time, since the cells C are attached to the inner surface of the first culture vessel 11, they are not discharged together with the medium M.
- the control unit 4 returns the valves V1, V3, and V20 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20.
- the stripping solution L is supplied to the first culture vessel 11 (step S13, FIG. 6B). Specifically, the control unit 4 opens the valves V3, V5, V15, and V16, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the stripping liquid L in the stripping liquid container 16 is supplied to the first culture vessel 11 through the tubes 36 and 32. When a predetermined amount of the stripping liquid L is supplied to the first culture vessel 11, the control unit 4 returns the valves V3, V5, V15, and V16 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20.
- This first waiting time is the time until the cells C adhering to the inner surface of the first culture vessel 11 are in a state immediately before being exfoliated by the chemical action of the exfoliating liquid L.
- the first waiting time is appropriately determined depending on the type of cell C and the type of exfoliating solution L, and is, for example, about 2 to 3 minutes.
- the stripping solution L is discharged from the first culture vessel 11 (step S15, FIG. 6 (c)). Specifically, the control unit 4 opens the valves V1, V3, and V20, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the stripping liquid L in the first culture container 11 is discharged to the waste liquid container 19 through the tubes 32, 37, 39. At this time, since the cells C are still attached to the inner surface of the first culture vessel 11, they are not discharged together with the stripping solution L. When the stripping liquid L in the first culture vessel 11 is discharged, the control unit 4 returns the valves V1, V3, and V20 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20. By discharging the stripping solution L before the cells C are separated in this way, it is not necessary to centrifuge the stripping solution L and the cells C later, so that a centrifuge can be eliminated.
- the process waits for a predetermined second standby time in that state (step S16). Even if the stripping liquid L is discharged, the stripping liquid L actually remains slightly adhered to the inner surface of the first culture vessel 11 and the cells C due to surface tension or the like, as shown in FIG. 6D. ..
- the second waiting time is the time until the cells C, which are in the state immediately before exfoliation, are completely exfoliated by the chemical action of the residual liquid of the exfoliating liquid L.
- the second waiting time is appropriately determined depending on the type of cell C and the type of exfoliating solution L, and is, for example, about 2 to 3 minutes.
- the medium M is supplied to the first culture vessel 11 (step S17). Specifically, the control unit 4 opens the valves V3, V5, V13, and V14, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the medium M in the medium container 15 is supplied to the first culture container 11 through the tubes 35 and 32. As a result, as shown in FIG. 6 (e), the cells C exfoliated from the inner surface of the first culture vessel 11 are suspended in the medium M to prepare a cell suspension S. Since the residual liquid of the stripping liquid L is a small amount, it is sufficiently diluted by supplying the medium M, and there is no problem in a later step. When a predetermined amount of the medium M is supplied to the first culture vessel 11, the control unit 4 returns the valves V3, V5, V13, and V14 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20.
- the cell suspension S in the first culture vessel 11 is moved to the first stirring vessel 13 (step S18). Specifically, the control unit 4 opens the valves V1, V3, V10, and V11, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the cell suspension S in the first culture vessel 11 moves to the first stirring vessel 13 through the tubes 32 and 34. When the cell suspension S is collected in the first stirring container 13, the control unit 4 returns the valves V1, V3, V10, and V11 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20. Although the cell suspension S is collected in the first stirring container 13 here, the cell suspension S may be collected in the second stirring container 14.
- the cell suspension is stirred (step S19). Specifically, the cell suspension S is agitated by moving the cell suspension S between the first stirring container 13 and the second stirring container 14. In the present embodiment, the cell suspension S is moved between the first stirring container 13 and the second stirring container 14 three times, but the number of times can be changed as appropriate and sufficient stirring can be performed. If so, it may be done once.
- FIG. 7 is a schematic view for explaining the stirring operation of the cell suspension S, and shows only the configuration related to stirring. In FIG. 7, the valve painted in black is in the closed state, and the valve not painted in black is in the open state.
- the control unit 4 opens the valves V7, V9, and V12, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the cell suspension S in the first stirring container 13 moves to the second stirring container 14 through the tube 33. Subsequently, as shown in FIG. 7B, the control unit 4 returns the valves V7 and V12 to the closed state and opens the valves V8 and V11. Then, the cell suspension S in the second stirring container 14 moves to the first stirring container 13 through the tube 33. Further, as shown in FIG. 7A, the control unit 4 returns the valves V8 and V11 to the closed state and opens the valves V7 and V12. Then, again, the cell suspension S in the first stirring container 13 moves to the second stirring container 14 through the tube 33.
- the cell suspension S flows greatly and is appropriately stirred.
- the amount of the cell suspension S to be moved at the time of stirring may be the whole amount or a part, but finally, the whole amount of the cell suspension S is moved to either the first stirring container 13 or the second stirring container 14. Shall be made to.
- the control unit 4 when the entire amount of the cell suspension S has moved to the second stirring vessel 14, the control unit 4 returns the valves V7, V9, and V12 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20. To do.
- step S20 a part of the cell suspension S in the second stirring container 14 is moved to the counting device 17 (step S20). Specifically, the control unit 4 opens the valves V8, V9, V10, V17, and V18, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the cell suspension S in the second stirring container 14 moves to the counting device 17 through the tubes 33, 34, 32, 37. When the predetermined amount of the cell suspension S moves to the counting device 17, the control unit 4 returns the valves V8, V9, V10, V17, and V18 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20.
- the counting device 17 counts the number of cells contained in the trace amount of cell suspension S (step S21).
- the measurement result by the counting device 17 is transmitted to the control unit 4.
- the control unit 4 calculates an additional amount of medium required to bring the cell suspension S in the second stirring vessel 14 to a desired cell density. If the number of cells is too large, a part of the cell suspension S in the second stirring container 14 may be discharged before adding the medium.
- the cell suspension S used in the counting device 17 is discharged into the waste liquid container 18 for the counting device after the measurement is completed.
- the control unit 4 opens the valves V18 and V19 and operates a syringe pump (not shown) included in the counting device 17. As a result, the cell suspension S remaining in the counting device 17 is discharged to the waste liquid container 18 for the counting device through the tubes 37 and 38.
- the control unit 4 adjusts the cell density of the cell suspension S by adding the amount of the medium obtained in the above calculation to the second stirring vessel 14 (step S22). Specifically, the control unit 4 opens the valves V9, V10, V12, V13, and V14, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the medium M in the medium container 15 is supplied to the second stirring container 14 through the tubes 35, 32, 34, 33. When the required amount of medium is added to the second stirring container 14, the control unit 4 returns the valves V9, V10, V12, V13, and V14 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20.
- step S23 After adjusting the cell density of the cell suspension S, the cell suspension S is stirred again (step S23). This is because there is a possibility that the cells C in the cell suspension S have settled in the second stirring vessel 14 due to the passage of time while the counting device 17 is counting the number of cells. However, if the cells C in the cell suspension S are uniformly dispersed in the second stirring vessel 14, step S23 can be omitted. Since the stirring operation is the same as in step S19, the explanation is omitted.
- Step S24 the control unit 4 opens the valves V4, V6, V8, V9, and V10, and pumps gas from the gas supply unit 20. Then, the cell suspension S in the second stirring container 14 moves to the second culture container 12 through the tubes 33, 34, 32.
- the control unit 4 returns the valves V4, V6, V8, V9, and V10 to the closed state, and stops the gas supply from the gas supply unit 20. In this way, the passage from the first culture vessel 11 to the second culture vessel 12 is completed.
- the connected tubes may be replaced with new ones, or the inside of the tubes may be cleaned and reused.
- a welding machine such as BioWelder (manufactured by Sartorius Stedim Japan) or OPTA sterile connector (manufactured by Sartorius Stedim Japan) is used, each container or device is replaced while maintaining the sterile condition inside the tube. It is also possible.
- a plurality of culture containers 11 and 12 whose inside is sterile are connected via a tube 32 (corresponding to the connecting tube of the present invention) while maintaining the sterile state, and the plurality of culture containers 11 and 12 are connected.
- the cell culture apparatus 1 capable of moving the cell suspension between, a plurality of stirring containers 13 and 14 connected to a tube 32 and having a sterile inside and a plurality of stirring containers 13 and 14 being sterile.
- the cell suspension is moved between the tube 33 (corresponding to the stirring connection tube of the present invention) connecting the plurality of stirring containers 13 and 14 and the plurality of stirring containers 13 and 14 via the tube 33 while maintaining the state.
- a gas supply unit 20 (corresponding to the drive unit of the present invention) is provided.
- the cell suspension can be largely flowed by moving the cell suspension between the plurality of stirring vessels 13 and 14 by the gas supply unit 20, so that the cells can be largely flowed.
- the suspension can be well stirred.
- a so-called closed system configuration is adopted in which a plurality of culture vessels 11 and 12 and a plurality of stirring vessels 13 and 14 are connected in an aseptic state, it is not necessary to arrange the entire apparatus in an aseptic space, and the isolator can be used. It becomes unnecessary. Therefore, the cell suspension can be well stirred with an inexpensive configuration.
- the driving unit moves a cell suspension from the stirring container to another stirring container by pressure-feeding a predetermined gas to any of the plurality of stirring containers 13 and 14. It is composed of a gas supply unit 20 capable of With such a configuration, a pump is not required to move the cell suspension, so that the cells are not crushed when the cell suspension passes through the pump.
- the counting device 17 which is connected to the tube 32 and counts the number of cells contained in the cell suspension is further provided, and the gas supply unit 20 stirs any one of the plurality of stirring containers 13 and 14. It is configured to move a portion of the cell suspension from the container to the counting device 17. With such a configuration, the cell suspension stirred by the plurality of stirring containers 13 and 14 can be moved to the counting device 17 without human intervention, so that the work load on the operator can be reduced. it can.
- the number of culture containers and the number of stirring containers are set to 2 each, but 3 or more may be provided.
- the gas supply unit 20 is provided as a means (driving unit) for moving the cell suspension, the medium, and the exfoliating liquid, and the liquid is moved by pumping the gas.
- the means for moving the cell suspension, the medium and the stripping solution is not limited to the gas supply unit 20, and a pump may be used, for example.
- the number of cells is automatically counted by the counting device 17.
- the agitated cell suspension may be taken out by the operator from the culture circuit 10 and the operator may count the number of cells with a counting device.
- Cell culture device 11 First culture container (culture container) 12: Second culture container (culture container) 13: First stirring container (stirring container) 14: Second stirring container (stirring container) 17: Counting device 20: Gas supply unit (drive unit) 32: Tube (connecting tube) 33: Tube (stirring connection tube)
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Abstract
遠心分離機を使わない細胞培養装置において、安価な構成で細胞懸濁液を良好に攪拌できるようにすることを目的とする。内部が無菌状態の複数の培養容器11、12が無菌状態を維持したまま接続管32を介して接続されており、複数の培養容器11、12間で細胞懸濁液を移動させることが可能な細胞培養装置において、接続管32に接続されており、内部が無菌状態の複数の攪拌容器13、14と、複数の攪拌容器13、14の無菌状態を維持したまま、複数の攪拌容器13、14を接続する攪拌接続管33と、攪拌接続管33を介して複数の攪拌容器13、14間で細胞懸濁液を移動させる駆動部20と、を設ける。
Description
本発明は、複数の培養容器間で細胞懸濁液を移動させることが可能な細胞培養装置に関する。
細胞培養の過程では、培養容器から回収した細胞を含む細胞懸濁液を所望の細胞密度に調整してから新しい培養容器に移し替える「継代」と呼ばれる作業が行われる。従来の継代では、まず、剥離液によって培養容器の内面に付着している細胞を剥離させ、剥離した細胞を遠沈管に回収して遠心分離機にかけ、上清を除去してから液状の培地を追加することで細胞懸濁液を作製していた。そして、その細胞懸濁液の一部を取り出してカウント装置で細胞数をカウントし、測定結果に応じて培地を適宜追加することによって、細胞懸濁液の細胞密度を調整していた。例えば特許文献1、2には、このような継代に関わる一連の作業を行うロボットアームが開示されている。
ここで、細胞数を精度よくカウントするためには、細胞懸濁液をよく攪拌して細胞を均一に浮遊させてから、その一部を取り出す必要がある。遠心分離を行ってから細胞数をカウントするという従来の継代の手順の場合、遠沈管を軽く振ることで細胞懸濁液を攪拌することが可能であった。ところが、遠心分離機を用いると強い遠心力で細胞にダメージを与えるおそれがあり、また、遠心分離機を搭載することで装置のコストが高くなるといった理由から、遠心分離機を使わずに継代を行う方法が近年開発されている。この場合、細胞懸濁液を遠沈管に取り分ける必要がないため、細胞数をカウントする前にいかにして細胞懸濁液を攪拌するかが課題となっていた。
また、細胞の培養や継代は無菌状態で行う必要があるため、特許文献1、2では、無菌空間を形成するアイソレータを設け、無菌空間内にロボットアームを配置する装置構成となっている。しかしながら、ロボットアームに加えてアイソレータも必要となることから、装置が非常に高価になってしまうという問題を抱えていた。
本発明は、上述の課題を鑑みてなされたものであり、遠心分離機を使わない細胞培養装置において、安価な構成で細胞懸濁液を良好に攪拌できるようにすることを目的とする。
本発明に係る細胞培養装置は、内部が無菌状態の複数の培養容器が無菌状態を維持したまま接続管を介して接続されており、前記複数の培養容器間で細胞懸濁液を移動させることが可能な細胞培養装置であって、前記接続管に接続されており、内部が無菌状態の複数の攪拌容器と、前記複数の攪拌容器の無菌状態を維持したまま、前記複数の攪拌容器を接続する攪拌接続管と、前記攪拌接続管を介して前記複数の攪拌容器間で前記細胞懸濁液を移動させる駆動部と、を備えることを特徴とする。
本発明では、駆動部によって複数の攪拌容器間で細胞懸濁液を移動させることで、細胞懸濁液を大きく流動させることができるので、細胞懸濁液を良好に攪拌することができる。また、複数の培養容器及び複数の攪拌容器を無菌状態で接続する、いわゆる閉鎖系の構成を採用しているので、装置全体を無菌空間に配置する必要がなく、アイソレータが不要となる。したがって、本発明によれば、安価な構成で細胞懸濁液を良好に攪拌することができる。
本発明において、前記駆動部は、所定のガスを前記複数の攪拌容器のうち何れかの攪拌容器に圧送することで、当該攪拌容器から他の攪拌容器に前記細胞懸濁液を移動させることが可能なガス供給部であるとよい。
このような構成であれば、細胞懸濁液を移動させるのにポンプが不要となるため、細胞懸濁液がポンプを通過する際に細胞がつぶされるということがない。
本発明において、前記接続管に接続されており、前記細胞懸濁液に含まれる細胞数をカウントするカウント装置をさらに備え、前記駆動部によって前記複数の攪拌容器のうち何れかの攪拌容器から前記カウント装置に前記細胞懸濁液の一部を移動させるとよい。
このような構成であれば、複数の攪拌容器によって攪拌された細胞懸濁液を、人手を介さずにカウント装置に移動させることができるので、オペレータの作業負担を軽減することができる。
以下、本発明の好適な実施の形態について、図面を参照しつつ説明する。
(細胞培養装置の構成)
本実施形態に係る細胞培養装置1は、自動で細胞培養を行うための装置であり、図1に示すように、冷蔵保存部2と、培養部3と、制御部4とを備える。
本実施形態に係る細胞培養装置1は、自動で細胞培養を行うための装置であり、図1に示すように、冷蔵保存部2と、培養部3と、制御部4とを備える。
冷蔵保存部2は、不図示の培地タンク及び剥離液タンクを冷蔵保存するための部位であり、内部は常温より低い温度に維持されている。培地タンクには、細胞培養に必要な液状の培地が収容されている。剥離液タンクには、培養容器の内面に付着している細胞を剥離させるための剥離液が収容されている。培地タンクは不図示のチューブによって培地容器15(図2参照)と接続されており、必要に応じて培地タンクから培地容器15に培地が補充される。剥離液タンクは不図示のチューブによって剥離液容器16(図2参照)と接続されており、必要に応じて剥離液タンクから剥離液容器16に剥離液が補充される。
培養部3は、細胞培養を行うための部位であり、内部は細胞培養に適した所定の状態(例えば、温度37℃、湿度95%、CO2濃度5%)に維持されている。培養部3の内部には培養容器11、12(図2参照)が配置され、培養容器11、12内の細胞が容器の内面に付着した状態で成長する。培養部3の前面には扉3aが設けられており、培養部3から細胞を取り出したり、培養部3内の部品の交換等を行うことができる。
(培養回路の構成)
細胞培養装置1には、図2に示す培養回路10が形成されている。培養回路10は、第1培養容器11と、第2培養容器12と、第1攪拌容器13と、第2攪拌容器14と、培地容器15と、剥離液容器16と、カウント装置17と、カウント装置用廃液容器18と、廃液容器19と、ガス供給部20とが、各チューブ31~39によって無菌状態で接続された閉鎖系の構成となっている。このような閉鎖系の培養回路10を採用することで、培養回路10を無菌空間に配置する必要がなくなり、アイソレータを不要とすることができる。培養回路10を構成する各部品のうち、少なくとも第1培養容器11、第2培養容器12、第1攪拌容器13、第2攪拌容器14、培地容器15、剥離液容器16は、培養部3内に配置されている。
細胞培養装置1には、図2に示す培養回路10が形成されている。培養回路10は、第1培養容器11と、第2培養容器12と、第1攪拌容器13と、第2攪拌容器14と、培地容器15と、剥離液容器16と、カウント装置17と、カウント装置用廃液容器18と、廃液容器19と、ガス供給部20とが、各チューブ31~39によって無菌状態で接続された閉鎖系の構成となっている。このような閉鎖系の培養回路10を採用することで、培養回路10を無菌空間に配置する必要がなくなり、アイソレータを不要とすることができる。培養回路10を構成する各部品のうち、少なくとも第1培養容器11、第2培養容器12、第1攪拌容器13、第2攪拌容器14、培地容器15、剥離液容器16は、培養部3内に配置されている。
第1培養容器11及び第2培養容器12は、細胞培養を行うための容器であり、内部は無菌状態に維持される。第1培養容器11及び第2培養容器12には液状の培地が入れられ、細胞は培地中で容器内面に付着しながら成長する。本実施形態では、第1培養容器11及び第2培養容器12として、複数の培養層が構成された多層式容器を採用しているが、多層式容器以外の容器を用いてもよい。
第1培養容器11及び第2培養容器12は、チューブ31によってガス供給部20と接続されている。チューブ31には、ガス供給部20から第1培養容器11へのガスの供給・非供給を切り換えるためのバルブV1が設けられるとともに、ガス供給部20から第2培養容器12へのガスの供給・非供給を切り換えるためのバルブV2が設けられている。
第1培養容器11と第2培養容器12とは、チューブ32によって無菌状態を維持したまま接続されている。チューブ32には、チューブ32を介しての第1培養容器11への流体の給排・非給排を切り換えるためのバルブV3が設けられるとともに、チューブ32を介しての第2培養容器12への流体の給排・非給排を切り換えるためのバルブV4が設けられている。第1培養容器11には、バルブV5及びフィルタ51を有するガス抜き部52が設けられている。同様に、第2培養容器12には、バルブV6及びフィルタ53を有するガス抜き部54が設けられている。
第1攪拌容器13及び第2攪拌容器14は、後で詳細に説明するように、細胞懸濁液の攪拌を行うための容器である。本実施形態では、第1攪拌容器13及び第2攪拌容器14として、バッグを採用しているが、バッグ以外の容器を用いてもよい。第1攪拌容器13及び第2攪拌容器14は、チューブ31によってガス供給部20と接続されている。チューブ31には、ガス供給部20から第1攪拌容器13へのガスの供給・非供給を切り換えるためのバルブV7が設けられるとともに、ガス供給部20から第2攪拌容器14へのガスの供給・非供給を切り換えるためのバルブV8が設けられている。
第1攪拌容器13と第2攪拌容器14とは、チューブ33によって接続されている。チューブ33は、チューブ34を介してチューブ32に接続されている。つまり、第1攪拌容器13と第2攪拌容器14は、チューブ33、34を介してチューブ32に接続されている。チューブ33にはバルブV9が設けられており、チューブ34にはバルブV10が設けられている。第1攪拌容器13には、バルブV11及びフィルタ55を有するガス抜き部56が設けられている。同様に、第2攪拌容器14には、バルブV12及びフィルタ57を有するガス抜き部58が設けられている。
培地容器15は、液状の培地が収容されている容器である。培地容器15は、チューブ31によってガス供給部20と接続されている。チューブ31には、ガス供給部20から培地容器15へのガスの供給・非供給を切り換えるためのバルブV13が設けられている。培地容器15は、チューブ35を介してチューブ32に接続されている。チューブ35には、培地容器15からの培地の供給・非供給を切り換えるためのバルブV14が設けられている。
剥離液容器16は、剥離液が収容されている容器である。剥離液容器16は、チューブ31によってガス供給部20と接続されている。チューブ31には、ガス供給部20から剥離液容器16へのガスの供給・非供給を切り換えるためのバルブV15が設けられている。剥離液容器16は、チューブ36を介してチューブ32に接続されている。チューブ36には、剥離液容器16からの剥離液の供給・非供給を切り換えるためのバルブV16が設けられている。
カウント装置17は、細胞懸濁液に含まれる細胞数をカウントするための装置である。カウント装置17は、チューブ37を介してチューブ32に接続されている。チューブ37には、2つのバルブV17、V18が設けられている。チューブ37のうちバルブV17とバルブV18の間の部分からはチューブ38が分岐しており、チューブ38の末端にはカウント装置用廃液容器18が接続されている。チューブ38には、バルブV19が設けられている。カウント装置用廃液容器18には、ガス抜き部61が設けられている。
廃液容器19は、培養回路10内の不要な液体を排出するための容器である。廃液容器19は、チューブ39を介してチューブ37に接続されている。つまり、廃液容器19は、チューブ39、37を介してチューブ32に接続されている。チューブ39には、バルブV20が設けられている。廃液容器19には、フィルタ62を有するガス抜き部63が設けられている。
ガス供給部20は、細胞培養に支障のない所定のガス(例えば、温度37℃、湿度95%、CO2濃度5%のエア)を供給する部位である。培養回路10においては、ガス供給部20からガスを圧送することによって、各容器11~16内の液体を移動させることができるように構成されている。
図3に示すように、ガス供給部20は、CO2ボンベ71及びエアボンベ72を有する。CO2ボンベ71からは、レギュレータ73で圧力が調整され、且つ、マスフローコントローラ74で流量が調整されたCO2が供給される。エアボンベ72からは、レギュレータ75で圧力が調整され、且つ、マスフローコントローラ76で流量が調整されたエアが供給される。CO2ボンベ71から供給されたCO2とエアボンベ72から供給されたエアは混合され、この混合されたガスのCO2濃度がCO2センサ77で検出される。制御部4は、CO2センサ77の出力に応じて、CO2濃度が5%に維持されるようにマスフローコントローラ74、76を制御する。こうして得られたガスは、フィルタ78で細菌等が除去されたうえで各容器11~16に供給される。
(継代の流れ)
次に、細胞培養装置1によって継代を行う際の一連の流れについて、図4及び図5に示すフローチャートに沿って説明する。細胞培養装置1では、制御部4がバルブV1~V20の開閉及びガス供給部20からのガスの供給を制御することにより、自動で継代が行われる。なお、培養や継代に関する各種条件は、オペレータによって予め制御部4に入力されている。継代を始めるに当たって、全てのバルブV1~V20は閉状態とされており、培養回路10は無菌状態に維持されているものとする。ここでは、第1培養容器11で培養されている細胞を回収し、細胞懸濁液を所望の細胞密度に調整してから第2培養容器12に移し替える場合について説明する。
次に、細胞培養装置1によって継代を行う際の一連の流れについて、図4及び図5に示すフローチャートに沿って説明する。細胞培養装置1では、制御部4がバルブV1~V20の開閉及びガス供給部20からのガスの供給を制御することにより、自動で継代が行われる。なお、培養や継代に関する各種条件は、オペレータによって予め制御部4に入力されている。継代を始めるに当たって、全てのバルブV1~V20は閉状態とされており、培養回路10は無菌状態に維持されているものとする。ここでは、第1培養容器11で培養されている細胞を回収し、細胞懸濁液を所望の細胞密度に調整してから第2培養容器12に移し替える場合について説明する。
第1培養容器11における培養時間が予め決められている時間を経過したら(ステップS11でYES)、第1培養容器11から培地Mを排出する(ステップS12、図6(a))。具体的には、制御部4は、バルブV1、V3、V20を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、第1培養容器11内の培地Mが、チューブ32、37、39を通って廃液容器19に排出される。このとき、細胞Cは第1培養容器11の内面に付着しているため、培地Mと一緒には排出されない。第1培養容器11内の培地Mが排出されたら、制御部4は、バルブV1、V3、V20を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。
第1培養容器11からの培地Mの排出が終わったら、第1培養容器11に剥離液Lを供給する(ステップS13、図6(b))。具体的には、制御部4は、バルブV3、V5、V15、V16を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、剥離液容器16内の剥離液Lが、チューブ36、32を通って第1培養容器11に供給される。第1培養容器11に剥離液Lが所定量供給されたら、制御部4は、バルブV3、V5、V15、V16を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。
第1培養容器11への剥離液Lの供給が終わったら、その状態で所定の第1待機時間待機する(ステップS14)。この第1待機時間は、第1培養容器11の内面に付着している細胞Cが、剥離液Lの化学的作用によって剥離する直前の状態となるまでの時間である。第1待機時間は、細胞Cの種類や剥離液Lの種類によって適宜決められるが、例えば2~3分程度である。
第1待機時間が経過したら(ステップS14でYES)、第1培養容器11から剥離液Lを排出する(ステップS15、図6(c))。具体的には、制御部4は、バルブV1、V3、V20を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、第1培養容器11内の剥離液Lが、チューブ32、37、39を通って廃液容器19に排出される。このとき、細胞Cは第1培養容器11の内面にまだ付着しているため、剥離液Lと一緒には排出されない。第1培養容器11内の剥離液Lが排出されたら、制御部4は、バルブV1、V3、V20を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。このように、細胞Cが剥離する前に剥離液Lを排出することで、後で剥離液Lと細胞Cとを遠心分離する必要がなくなるため、遠心分離機を不要とすることができる。
第1培養容器11からの剥離液Lの排出が終わったら、その状態で所定の第2待機時間待機する(ステップS16)。剥離液Lを排出しても、実際には、図6(d)に示すように、表面張力等によって第1培養容器11の内面や細胞Cに剥離液Lがわずかに付着して残っている。第2待機時間は、剥離直前の状態となっている細胞Cが、剥離液Lの残液の化学的作用によって完全に剥離するまでの時間である。第2待機時間は、細胞Cの種類や剥離液Lの種類によって適宜決められるが、例えば2~3分程度である。
第2待機時間が経過したら(ステップS16でYES)、第1培養容器11に培地Mを供給する(ステップS17)。具体的には、制御部4は、バルブV3、V5、V13、V14を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、培地容器15内の培地Mが、チューブ35、32を通って第1培養容器11に供給される。これによって、図6(e)に示すように、第1培養容器11の内面から剥離した細胞Cが培地M中に浮遊し、細胞懸濁液Sが作製される。なお、剥離液Lの残液はわずかな量なので、培地Mを供給することによって十分に薄められ、後の工程で問題になることはない。第1培養容器11に培地Mが所定量供給されたら、制御部4は、バルブV3、V5、V13、V14を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。
続けて、第1培養容器11内の細胞懸濁液Sを第1攪拌容器13に移動させる(ステップS18)。具体的には、制御部4は、バルブV1、V3、V10、V11を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、第1培養容器11内の細胞懸濁液Sが、チューブ32、34を通って第1攪拌容器13に移動する。第1攪拌容器13に細胞懸濁液Sが回収されたら、制御部4は、バルブV1、V3、V10、V11を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。なお、ここでは第1攪拌容器13に細胞懸濁液Sを回収するものとしたが、第2攪拌容器14に細胞懸濁液Sを回収してもよい。
次に、細胞懸濁液の攪拌を行う(ステップS19)。具体的には、細胞懸濁液Sを第1攪拌容器13と第2攪拌容器14との間で移動させることにより、細胞懸濁液Sを攪拌する。本実施形態では、細胞懸濁液Sを第1攪拌容器13と第2攪拌容器14との間で3回移動させるものとするが、この回数は適宜変更が可能であり、十分に攪拌ができるなら1回でもよい。図7は、細胞懸濁液Sの攪拌動作を説明するための模式図であり、攪拌に関わる構成のみを図示している。図7において、黒く塗りつぶされているバルブは閉状態、塗りつぶされていないバルブは開状態であることを示す。
図7(a)に示すように、制御部4は、バルブV7、V9、V12を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、第1攪拌容器13内の細胞懸濁液Sが、チューブ33を通って第2攪拌容器14に移動する。続けて、図7(b)に示すように、制御部4は、バルブV7、V12を閉状態に戻し、バルブV8、V11を開状態にする。すると、第2攪拌容器14内の細胞懸濁液Sが、チューブ33を通って第1攪拌容器13に移動する。さらに続けて、図7(a)に示すように、制御部4は、バルブV8、V11を閉状態に戻し、バルブV7、V12を開状態にする。すると再び、第1攪拌容器13内の細胞懸濁液Sが、チューブ33を通って第2攪拌容器14に移動する。
このように、第1攪拌容器13と第2攪拌容器14との間で細胞懸濁液Sを繰り返し移動させる過程で、細胞懸濁液Sが大きく流動し適切に攪拌される。なお、攪拌時に細胞懸濁液Sを移動させる量は全量でもよいし一部でもよいが、最後は第1攪拌容器13及び第2攪拌容器14の何れかに細胞懸濁液Sの全量を移動させるものとする。本実施形態では、第2攪拌容器14に細胞懸濁液Sの全量が移動したら、制御部4は、バルブV7、V9、V12を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。
細胞懸濁液Sの攪拌が終わると、第2攪拌容器14内の細胞懸濁液Sの一部をカウント装置17に移動させる(ステップS20)。具体的には、制御部4は、バルブV8、V9、V10、V17、V18を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、第2攪拌容器14内の細胞懸濁液Sが、チューブ33、34、32、37を通ってカウント装置17に移動する。所定量の細胞懸濁液Sがカウント装置17に移動したら、制御部4は、バルブV8、V9、V10、V17、V18を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。
続けて、カウント装置17によって微量の細胞懸濁液Sに含まれる細胞数をカウントする(ステップS21)。カウント装置17による測定結果は、制御部4に送信される。制御部4は、この測定結果に基づいて、第2攪拌容器14内の細胞懸濁液Sを所望の細胞密度にするために必要な培地の追加量を計算する。なお、細胞数が多すぎる場合には、第2攪拌容器14内の細胞懸濁液Sの一部を排出してから培地を追加してもよい。カウント装置17で使用された細胞懸濁液Sは、測定終了後、カウント装置用廃液容器18に排出される。具体的には、制御部4は、バルブV18、V19を開状態にし、カウント装置17に含まれる不図示のシリンジポンプを作動させる。これによって、カウント装置17に残留している細胞懸濁液Sが、チューブ37、38を通ってカウント装置用廃液容器18に排出される。
制御部4は、上述の計算で得られた量の培地を第2攪拌容器14に追加することで、細胞懸濁液Sの細胞密度を調整する(ステップS22)。具体的には、制御部4は、バルブV9、V10、V12、V13、V14を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、培地容器15内の培地Mが、チューブ35、32、34、33を通って第2攪拌容器14に供給される。第2攪拌容器14に必要な量の培地が追加されたら、制御部4は、バルブV9、V10、V12、V13、V14を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。
細胞懸濁液Sの細胞密度の調整が済んだら、細胞懸濁液Sを再度攪拌する(ステップS23)。カウント装置17で細胞数をカウントしている間に時間が経過し、第2攪拌容器14において細胞懸濁液S内の細胞Cが沈殿している可能性があるからである。ただし、第2攪拌容器14において細胞懸濁液S内の細胞Cが均一に分散しているのであれば、ステップS23を省略することも可能である。攪拌動作はステップS19と同じなので説明は割愛する。
最後に、第2攪拌容器14内(ステップS23で第1攪拌容器13に細胞培養液Sを回収した場合は第1攪拌容器13内)の細胞懸濁液Sを第2培養容器12に移動させる(ステップS24)。具体的には、制御部4は、バルブV4、V6、V8、V9、V10を開状態にし、ガス供給部20からガスを圧送する。すると、第2攪拌容器14内の細胞懸濁液Sが、チューブ33、34、32を通って第2培養容器12に移動する。第2培養容器12に細胞懸濁液Sが回収されたら、制御部4は、バルブV4、V6、V8、V9、V10を閉状態に戻し、ガス供給部20からのガスの供給を停止する。こうして、第1培養容器11から第2培養容器12への継代が完了する。
この後、第2培養容器12での細胞培養が行われるが、その後に再度継代を行う場合は、第1培養容器11、第1攪拌容器13、第2攪拌容器14を新しいものに交換すればよい。これらの容器を交換する際、つながっているチューブを新しいものに交換してもよいし、チューブの内部を洗浄し再利用してもよい。あるいは、BioWelder(ザルトリウス・ステディム・ジャパン社製)、OPTA無菌コネクタ―(ザルトリウス・ステディム・ジャパン社製)等の溶着機を用いれば、チューブ内の無菌状態を維持したまま各容器や装置を交換することも可能である。
(効果)
本実施形態では、内部が無菌状態の複数の培養容器11、12が無菌状態を維持したままチューブ32(本発明の接続管に相当)を介して接続されており、複数の培養容器11、12間で細胞懸濁液を移動させることが可能な細胞培養装置1において、チューブ32に接続されており、内部が無菌状態の複数の攪拌容器13、14と、複数の攪拌容器13、14の無菌状態を維持したまま、複数の攪拌容器13、14を接続するチューブ33(本発明の攪拌接続管に相当)と、チューブ33を介して複数の攪拌容器13、14間で細胞懸濁液を移動させるガス供給部20(本発明の駆動部に相当)とを設けている。
本実施形態では、内部が無菌状態の複数の培養容器11、12が無菌状態を維持したままチューブ32(本発明の接続管に相当)を介して接続されており、複数の培養容器11、12間で細胞懸濁液を移動させることが可能な細胞培養装置1において、チューブ32に接続されており、内部が無菌状態の複数の攪拌容器13、14と、複数の攪拌容器13、14の無菌状態を維持したまま、複数の攪拌容器13、14を接続するチューブ33(本発明の攪拌接続管に相当)と、チューブ33を介して複数の攪拌容器13、14間で細胞懸濁液を移動させるガス供給部20(本発明の駆動部に相当)とを設けている。
本実施形態の細胞培養装置1によれば、ガス供給部20によって複数の攪拌容器13、14間で細胞懸濁液を移動させることで、細胞懸濁液を大きく流動させることができるので、細胞懸濁液を良好に攪拌することができる。また、複数の培養容器11、12及び複数の攪拌容器13、14を無菌状態で接続する、いわゆる閉鎖系の構成を採用しているので、装置全体を無菌空間に配置する必要がなく、アイソレータが不要となる。したがって、安価な構成で細胞懸濁液を良好に攪拌することができる。
本実施形態では、駆動部が、所定のガスを複数の攪拌容器13、14のうち何れかの攪拌容器に圧送することで、当該攪拌容器から他の攪拌容器に細胞懸濁液を移動させることが可能なガス供給部20で構成されている。このような構成であれば、細胞懸濁液を移動させるのにポンプが不要となるため、細胞懸濁液がポンプを通過する際に細胞がつぶされるということがない。
本実施形態では、チューブ32に接続されており、細胞懸濁液に含まれる細胞数をカウントするカウント装置17をさらに備え、ガス供給部20によって複数の攪拌容器13、14のうち何れかの攪拌容器からカウント装置17に細胞懸濁液の一部を移動させるように構成されている。このような構成であれば、複数の攪拌容器13、14によって攪拌された細胞懸濁液を、人手を介さずにカウント装置17に移動させることができるので、オペレータの作業負担を軽減することができる。
(他の実施形態)
上記実施形態に種々の変更を加えた変形例について説明する。
上記実施形態に種々の変更を加えた変形例について説明する。
上記実施形態では、培養容器及び攪拌容器の数をそれぞれ2つずつ設けるものとしたが、3つ以上設けてもよい。
上記実施形態では、細胞懸濁液、培地及び剥離液を移動させる手段(駆動部)としてガス供給部20を設け、ガスを圧送することによって液体を移動させるものとした。しかしながら、細胞懸濁液、培地及び剥離液を移動させる手段はガス供給部20に限定されず、例えばポンプを用いてもよい。
上記実施形態では、カウント装置17による細胞数のカウントも自動で行われるものとした。しかしながら、攪拌された細胞懸濁液を培養回路10からオペレータが取り出し、オペレータがカウント装置で細胞数をカウントするようにしてもよい。
1:細胞培養装置
11:第1培養容器(培養容器)
12:第2培養容器(培養容器)
13:第1攪拌容器(攪拌容器)
14:第2攪拌容器(攪拌容器)
17:カウント装置
20:ガス供給部(駆動部)
32:チューブ(接続管)
33:チューブ(攪拌接続管)
11:第1培養容器(培養容器)
12:第2培養容器(培養容器)
13:第1攪拌容器(攪拌容器)
14:第2攪拌容器(攪拌容器)
17:カウント装置
20:ガス供給部(駆動部)
32:チューブ(接続管)
33:チューブ(攪拌接続管)
Claims (3)
- 内部が無菌状態の複数の培養容器が無菌状態を維持したまま接続管を介して接続されており、前記複数の培養容器間で細胞懸濁液を移動させることが可能な細胞培養装置であって、
前記接続管に接続されており、内部が無菌状態の複数の攪拌容器と、
前記複数の攪拌容器の無菌状態を維持したまま、前記複数の攪拌容器を接続する攪拌接続管と、
前記攪拌接続管を介して前記複数の攪拌容器間で前記細胞懸濁液を移動させる駆動部と、
を備えることを特徴とする細胞培養装置。 - 前記駆動部は、所定のガスを前記複数の攪拌容器のうち何れかの攪拌容器に圧送することで、当該攪拌容器から他の攪拌容器に前記細胞懸濁液を移動させることが可能なガス供給部であることを特徴とする請求項1に記載の細胞培養装置。
- 前記接続管に接続されており、前記細胞懸濁液に含まれる細胞数をカウントするカウント装置をさらに備え、
前記駆動部によって前記複数の攪拌容器のうち何れかの攪拌容器から前記カウント装置に前記細胞懸濁液の一部を移動させることを特徴とする請求項1又は2に記載の細胞培養装置。
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---|---|
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