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WO2020040245A1 - 抗体薬物複合体の感受性マーカー - Google Patents

抗体薬物複合体の感受性マーカー Download PDF

Info

Publication number
WO2020040245A1
WO2020040245A1 PCT/JP2019/032773 JP2019032773W WO2020040245A1 WO 2020040245 A1 WO2020040245 A1 WO 2020040245A1 JP 2019032773 W JP2019032773 W JP 2019032773W WO 2020040245 A1 WO2020040245 A1 WO 2020040245A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
gene
htrop2
log
expression level
antibody
Prior art date
Application number
PCT/JP2019/032773
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
大祐 岡嶌
哲 安田
圭 榎本
Original Assignee
第一三共株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 第一三共株式会社 filed Critical 第一三共株式会社
Priority to EP19850901.0A priority Critical patent/EP3842546A4/en
Priority to JP2020538461A priority patent/JP7481255B2/ja
Priority to CN201980055378.2A priority patent/CN112739826A/zh
Priority to US17/269,615 priority patent/US20210340628A1/en
Publication of WO2020040245A1 publication Critical patent/WO2020040245A1/ja

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Definitions

  • the present invention relates to a method for identifying a subject to be administered with a drug containing an antibody drug conjugate in a human patient suffering from cancer.
  • anticancer drugs are effective in certain human patients, but not in others. This is based on the genetic diversity of the cancer and may be observed even among cancers within the same patient. The difference in efficacy between patients is particularly significant for molecularly targeted anticancer drugs. Therefore, appropriate tests are needed to determine which anticancer drugs are effective for which patients, and anticancer drugs should be expected to be sufficiently effective without such tests. Can not.
  • Establishment of a diagnostic method based on the discovery of a sensitivity marker is a means of accelerating the development of a new anticancer drug by previously identifying patients likely to show a clinical response to the new anticancer drug . This can significantly reduce the size, duration and cost of clinical trials. Genomics, proteomics, or molecular imaging techniques would have allowed rapid and sensitive detection of sensitive markers. However, despite the availability of various technologies relating to gene profiling in cancer, it is hard to say that sensitivity markers for anticancer drugs are widely in practical use.
  • Human TROP2 trophoblast cell cell surface protein 2, TACSTD2: tumor-associated calcium calcium signal transducer 2, GA733-1, EGP-1, M1S1; hereinafter referred to as hTROP2
  • TACSTD2 tumor-associated calcium calcium signal transducer 2, GA733-1, EGP-1, M1S1; hereinafter referred to as hTROP2
  • hTROP2 tumor-associated calcium calcium signal transducer 2
  • It is a type 1 cell membrane protein.
  • hTROP2 is overexpressed in cancers derived from various epithelial cells, and in normal tissues, hTROP2 is limited to expression in some tissues of epithelial cells. It has also been shown that the expression level is lower than that of tumor tissues (Non-patent Documents 1 to 5).
  • the expression of hTROP2 is determined by colorectal cancer (Non-Patent Document 2), gastric cancer (Non-Patent Document 2), pancreatic cancer (Non-Patent Document 3), oral cancer (Non-Patent Document 4), and glioma (Non-Patent Document 5).
  • a model using colorectal cancer cells reports that hTROP2 expression is involved in anchorage-independent cell growth of cancer cells and tumor formation in immunodeficient mice (Non-Patent Document 6). .
  • An antibody-drug conjugate in which a cytotoxic drug is bound to an antibody that is expressed on the surface of a cancer cell and binds to an antigen that can be internalized into the cell (Antibody-Drug @ Conjugate; hereinafter also referred to as “ADC”) Is capable of selectively delivering a drug to cancer cells, thereby accumulating the drug in the cancer cells and killing the cancer cells.
  • ADC Antibody-Drug @ Conjugate
  • antibody-drug conjugates comprising a derivative of an antibody and a derivative of exotecan, which is a topoisomerase I inhibitor, are known (Patent Documents 9 to 15, Non-Patent Documents 8 to 16). ).
  • the antibody-drug conjugate described in Patent Document 9 contains an anti-hTROP2 antibody, and can kill cancer cells expressing the hTROP2 antibody. Similarly, there is a possibility that the antitumor activity cannot be accurately predicted only by the expression level of hTROP2.
  • Non-Patent Document 17 Human SLFN11 (Schlafen @ family @ member @ 11) is a protein consisting of 901 amino acid residues, and is suggested to have a function of binding to a replication fork in response to DNA replication stress and inhibiting DNA replication. It has also been reported that the sensitivity of cancer cell lines to DNA-impaired anticancer drugs including topoisomerase I inhibitors and SLFN11 mRNA expression levels are highly correlated (Non-patent Documents 18 to 19).
  • Non-Patent Document 20 veliparib, a poly ADP-ribose polymerase (PARP) inhibitor, and rovalpituzumab tesirine, an anti-DLL3 antibody drug conjugate (Rova-T)
  • PARP poly ADP-ribose polymerase
  • Rova-T anti-DLL3 antibody drug conjugate
  • Temozolomide and Veliparib which are alkylating agents
  • has a life-prolonging effect on small cell lung cancer patients overexpressing SLFN11 Non-Patent Document 21.
  • the relationship between the antitumor activity of ADC using a topoisomerase I inhibitor such as exatecan and the expression level of SLFN11 has not yet been clarified, and its effectiveness as a diagnostic agent for predicting the efficacy is unknown.
  • the present invention relates to a method for identifying a subject to be administered to a human patient suffering from cancer by using a gene expression level at an mRNA level as an index when administering a drug containing an anti-hTROP2 antibody.
  • the present inventors have found that, by combining the expression levels of the mRNA levels of the hTROP2 gene and the SLFN11 gene, it is possible to identify a subject to which a drug containing an anti-hTROP2 antibody is to be administered with higher accuracy, and to improve the present invention. Completed.
  • a method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient suffering from cancer comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) estimating the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level in the biological sample; 3) a step of evaluating the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level in the biological sample determined to have a high expression level of the hTROP2 gene; and 4) a step of determining the expression level of the SLFN11 gene to be high.
  • a method that includes [2] A method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient suffering from cancer, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) a step of evaluating the expression levels of the hTROP2 gene and the SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; and 3) a human patient having the sample determined to have a high expression level of the hTROP2 gene and the SLFN11 gene, Identifying as a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody; A method that includes [3] From a biological sample obtained from a human patient diagnosed as having cancer, a log 2 [RPKM + 1] value is measured by RNA sequencing, and when this value exceeds a specific value, the hTROP2 gene at the mRNA level is measured.
  • log 2 [RPKM + 1] value is 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 , 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8 .2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, and 9.0 if it exceeds any one selected from the group consisting of:
  • the method according to [3], wherein the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level is determined to be high.
  • log 2 [RPKM + 1] value is 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 , 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8.0
  • [6] log 2 [RPKM + 1] value is 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4 , 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8.0, the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level when it exceeds any one selected from the group consisting of: Is determined to be high, the method according to any one of [3] to [5].
  • [7] log 2 [RPKM + 1] value is 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 ,
  • the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level is determined to be high. The described method.
  • log 2 [RPKM + 1] value is 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.
  • log 2 [FPKM + 1] value is 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 , 7.0. Any one selected from the group consisting of 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8.0
  • log 2 [FPKM + 1] value is 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9
  • the method according to [20] or [21], wherein the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level is determined to be high when the log 2 [FPKM + 1] value exceeds 6.0 or 7.0.
  • log 2 [FPKM + 1] value is 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, Selected from the group consisting of 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, and 4.0.
  • log 2 [FPKM + 1] value is 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9
  • the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level is determined to be high when the expression level is higher than any one selected from the group consisting of SLFN11 and 3.0. the method of. [28] Any one of [22] to [26], in which when the log 2 [FPKM + 1] value exceeds 2.0 or 3.0, the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level is determined to be high. The method described in one.
  • log 2 [MNC + 1] value is 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9 , 13.0. 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, 14.0, 14.1, 14.2, 14.2.
  • the anti-hTROP2 antibody drug conjugate has the following formula:
  • A indicates the binding position to the anti-hTROP2 antibody
  • the anti-hTROP2 antibody is an antibody comprising a heavy chain having the amino acid sequence of amino acids 20 to 470 in SEQ ID NO: 1 and a light chain having the amino acid sequence of amino acids 21 to 234 in SEQ ID NO: 2. , [46].
  • Cancer is lung cancer, kidney cancer, urothelial cancer, colon cancer, prostate cancer, glioblastoma multiforme, ovarian cancer, pancreatic cancer, breast cancer, melanoma, liver cancer, Bladder, gastric, cervical, endometrial, head and neck, esophageal, biliary, thyroid, lymphoma, acute myeloid leukemia, acute lymphocytic leukemia, and / or multiple The method according to any one of [1] to [51], which is a myeloma.
  • the present invention includes the following items. Note that the elements or requirements of [3] to [52] can be applied to the following inventions.
  • a method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient suffering from cancer comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) a step of evaluating the expression level of the hTROP2 gene and / or the SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; and 3) having the sample determined to have a high expression level of the hTROP2 gene and / or the SLFN11 gene.
  • Identifying a human patient as a subject to receive a drug containing an anti-hTROP2 antibody A method that includes [54] A method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient suffering from cancer, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) a step of evaluating the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level in the sample; and 3) a human patient having the sample determined to have a high expression level of the hTROP2 gene containing the anti-hTROP2 antibody.
  • a method that includes [55] A method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient with cancer, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed with cancer Process; 2) a step of evaluating the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; and 3) a human patient having the sample determined to have a high expression level of the SLFN11 gene, containing an anti-hTROP2 antibody. Identifying as a subject to which the medicament is administered; A method that includes
  • a method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient suffering from cancer comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as suffering from cancer Process; 2) a step of evaluating the expression levels of the hTROP2 gene and the SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; and 3) a human patient having the sample determined to have a high expression level of the hTROP2 gene and the SLFN11 gene, Identifying as a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody;
  • a method that includes [57] A method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient suffering from cancer, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; Process; 2) evaluating the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level in the sample; 3) a step of evaluating the expression level of the SLFN11 gene
  • a method that includes [58] A method for identifying a subject to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody in a human patient suffering from cancer, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as suffering from cancer Process; 2) evaluating the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; 3) a step of evaluating the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level in the biological sample determined to have a high expression level of the SLFN11 gene; and 4) the step of evaluating the biological sample determined to have a high expression level of the hTROP2 gene.
  • a method that includes [59] A method for treating cancer, which comprises administering a medicament containing an anti-hTROP2 antibody, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) evaluating the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level in the biological sample; 3) evaluating the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level in the biological sample determined to have high expression level of the hTROP2 gene; and 4) having the biological sample determined to have high expression level of the SLFN11 gene.
  • a method for treating cancer which comprises administering a medicament containing an anti-hTROP2 antibody, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) evaluating the expression level of the hTROP2 gene and / or SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; and 3) having the sample determined that the expression level of the hTROP2 gene and / or SLFN11 gene was high.
  • a method for treating cancer which comprises administering a medicine containing an anti-hTROP2 antibody, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) evaluating the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; and 3) converting a human patient having the sample determined to have a high expression level of the SLFN11 gene into a drug containing an anti-hTROP2 antibody.
  • a method for treating cancer which comprises administering a medicament containing an anti-hTROP2 antibody, comprising: 1) obtaining a biological sample from a human patient diagnosed as having cancer; 2) evaluating the expression level of the SLFN11 gene at the mRNA level in the sample; 3) evaluating the expression level of the hTROP2 gene at the mRNA level in the biological sample determined to have a high expression level of the SLFN11 gene; and 4) having the biological sample determined to have a high expression level of the hTROP2 gene.
  • Selecting a human patient to be administered a drug containing an anti-hTROP2 antibody A method that includes:
  • FIG. 2 shows the amino acid sequence of the heavy chain of the humanized anti-hTROP2 antibody (SEQ ID NO: 1).
  • Figure 3 shows the amino acid sequence of the humanized anti-hTROP2 antibody light chain (SEQ ID NO: 2).
  • CDRH1 sequence of humanized anti-hTROP2 antibody heavy chain SEQ ID NO: 3
  • CDRH2 sequence SEQ ID NO: 4
  • CDRH3 sequence SEQ ID NO: 5
  • CDRL1 sequence of humanized anti-hTROP2 antibody light chain SEQ ID NO: 6
  • the CDRL2 sequence (SEQ ID NO: 7) and the CDRL3 sequence (SEQ ID NO: 8) are shown.
  • FIG. 2 is a view showing the cell growth inhibitory effect of compound (1) or antibody-drug conjugate (1) on NCI-H1781 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • FIG. 2 is a view showing the cell growth inhibitory effect of compound (1) or antibody-drug conjugate (1) on Calu-3 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • FIG. 2 is a view showing the cell growth inhibitory effect of compound (1) or antibody-drug conjugate (1) on MDA-MB-468 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • FIG. 3 is a diagram showing the cell growth inhibitory effect of compound (1) or antibody-drug conjugate (1) on HCC38 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • cancer and “tumor” are used interchangeably.
  • the term “gene” includes not only DNA but also its mRNA, cDNA, and its cRNA.
  • polynucleotide is used synonymously with nucleic acid, and also includes DNA, RNA, probes, oligonucleotides, and primers.
  • polypeptide and “protein” are used interchangeably.
  • cells include cells in animal individuals and cultured cells.
  • hTROP2 means a human protein encoded by a gene identified by an accession number of NM_002353 (NCBI), and an allelic variant thereof, and includes a protein identified by NP_002344 (NCBI).
  • SLFN11 refers to a human protein encoded by a gene identified by an accession number of NM_152270 (NCBI), and an allelic variant thereof, and includes a protein identified by NP_689483 (NCBI). .
  • the term “antigen-binding fragment of an antibody” refers to a partial fragment of an antibody having an antigen-binding activity, and includes Fab, F (ab ′) 2, Fv, scFv, diabody, and linear antibody. And multispecific antibodies formed from antibody fragments. Further, Fab 'which is a monovalent fragment of the variable region of an antibody obtained by treating F (ab') 2 under reducing conditions is also included in the antigen-binding fragment of the antibody. However, it is not limited to these molecules as long as it has an antigen binding ability. In addition, these antigen-binding fragments include not only those obtained by treating the full-length molecule of an antibody protein with an appropriate enzyme, but also those produced in an appropriate host cell using an antibody gene modified by genetic engineering. It is.
  • CDR in the present specification means a complementarity determining region (CDR: Complementarity determining region). It is known that a heavy chain and a light chain of an antibody molecule each have three CDRs. CDRs are also referred to as hypervariable domains, and are located in the variable regions of the heavy and light chains of an antibody, where the primary structure has particularly high variability, and the heavy and light polypeptide chains Are separated into three places on the primary structure.
  • the CDRs of the antibody the CDRs of the heavy chain are referred to as CDRH1, CDRH2, and CDRH3 from the amino terminal side of the heavy chain amino acid sequence
  • the CDRs of the light chain are referred to as CDRL1 from the amino terminal side of the light chain amino acid sequence.
  • response to a treatment means that, with respect to the tumor to be treated, the tumor exhibits (a) slow growth, (b) cessation of growth, or (c) regression.
  • Anti-hTROP2 antibody The antibody against hTROP2 used in the present invention is produced in vivo by immunizing an animal with hTROP2 or any polypeptide selected from the amino acid sequence of hTROP2, using a method commonly practiced in the art.
  • the antibody obtained can be obtained by collecting and purifying the antibody.
  • the biological species of TROP2 serving as an antigen is not limited to humans, and animals can be immunized with TROP2 derived from non-human animals such as mice and rats. In this case, by examining the cross-reactivity between the obtained antibody binding to the heterologous TROP2 and hTROP2, an antibody applicable to human diseases can be selected.
  • a hybridoma can be established by fusing antibody-producing cells producing an antibody against hTROP2 with myeloma cells to obtain a monoclonal antibody.
  • hTROP2 serving as an antigen can be obtained by expressing the hTROP2 gene in a host cell by genetic manipulation.
  • a vector capable of expressing the hTROP2 gene may be prepared, introduced into a host cell to express the gene, and the expressed TROP2 may be purified.
  • hTROP2-expressing cells or cell lines expressing hTROP2 by the above-described genetic manipulation can be used as hTROP2 protein.
  • the antibody of the present invention includes, in addition to the monoclonal antibody to hTROP2, a recombinant antibody artificially modified for the purpose of reducing xenoantigenicity to humans, such as a chimeric antibody, a humanized ( Humanized antibodies, human antibodies and the like. These antibodies can be produced using known methods.
  • a humanized antibody consisting of the heavy chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 and the light chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 can be mentioned, but is not limited thereto.
  • the anti-hTROP2 antibody used in the present invention also includes an antigen-binding fragment of the antibody.
  • the antigen-binding fragment of an antibody include Fab, F (ab ') 2, Fv, or a single chain Fv (scFv) in which heavy and light chain Fvs are linked by an appropriate linker, diabody (diabodies), and a linear antibody.
  • Fab ' which is a monovalent fragment of the variable region of an antibody obtained by treating F (ab') 2 under reducing conditions is also included in the antibody fragment.
  • the anti-hTROP2 antibody used in the present invention also includes a modified antibody.
  • modified product refers to a product obtained by performing a chemical or biological modification on the antibody of the present invention.
  • Chemical modifications include the attachment of a chemical moiety to the amino acid backbone, N-linked or O-linked carbohydrate chains, and the like.
  • Biological modifications include post-translational modifications (eg, glycosylation to N- or O-linkage, N- or C-terminal processing, deamidation, aspartic acid isomerization, methionine oxidation) And methionine residues added to the N-terminus by expression using prokaryotic host cells.
  • the anti-hTROP2 antibody used in the present invention includes those labeled to enable detection or isolation of the anti-hTROP2 antibody or hTROP2, for example, enzyme labels, fluorescent labels, and affinity labels. Modifications are included. Such a modified anti-hTROP2 antibody is useful for improving antibody stability and blood retention, reducing antigenicity, and detecting or isolating an anti-hTROP2 antibody or hTROP2.
  • the antibody-dependent cytotoxicity can be enhanced.
  • a technique for regulating the sugar chain modification of an antibody International Publication Nos. WO 1999/54342, WO 2000/61739, and WO 2002/31140 are known, but not limited thereto.
  • the anti-hTROP2 antibody used in the present invention also includes an antibody whose sugar chain modification is regulated.
  • the method of the present invention can also be used for a medicament containing an antibody that binds to an antigen other than the anti-hTROP2 antibody.
  • an antibody that binds to an antigen other than the anti-hTROP2 antibody There are no particular restrictions on the antibodies other than the anti-hTROP2 antibody used in the present invention.
  • Each antibody can be obtained in
  • anti-HER2 antibody refers to an activity that specifically binds to HER2 (Human ⁇ Epidermal ⁇ Growth ⁇ Factor ⁇ Receptor ⁇ Type ⁇ 2; @ ErbB-2), and preferably internalizes in HER2 expressing cells by binding to HER2. 1 shows an antibody having Examples of the anti-HER2 antibody include trastuzumab (US Pat. No. 5,821,337) and pertuzumab (WO 01/00245), and preferably trastuzumab.
  • the “anti-HER3 antibody” specifically binds to HER3 (Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 3; ErbB-3), and preferably has an activity of being internalized in HER3 expressing cells by binding to HER3.
  • HER3 Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 3
  • 1 shows an antibody having Examples of the anti-HER3 antibody include patrizumab (Patritumab; @ U3-1287), U1-59 (International Publication No. 2007/0777028), MM-121 (Seribantuab), and anti-ERBB3 antibody described in International Publication No. 2008/100624, RG. -7116 (Lumretuzumab) and LJM-716 (Elgemtumab), and preferably, patrizumab and U1-59.
  • the “anti-B7-H3 antibody” specifically binds to B7-H3 (B cell antigen # 7 homolog 3; PD-L3; CD276), and preferably binds to B7-H3. 2 shows an antibody having an activity of internalizing B7-H3 expressing cells.
  • Examples of the anti-B7-H3 antibody include M30-H1-L4 (WO 2014/057687).
  • the “anti-GPR20 antibody” refers to an antibody that specifically binds to GPR20 (G protein-coupled receptor) 20 and preferably has an activity of being internalized in GPR20-expressing cells by binding to GPR20.
  • GPR20 G protein-coupled receptor
  • Examples of the anti-GPR20 antibody include h046-H4e / L7 (WO2018 / 135501).
  • anti-CDH6 antibody refers to an antibody that specifically binds to CDH6 (Cadherin-6), and preferably has an activity of binding to CDH6 to be internalized in CDH6-expressing cells.
  • CDH6 CDH6
  • anti-CDH6 antibody for example, H01L02 (WO 2018/212136) can be mentioned.
  • the antibody drug conjugate used in the present invention has the formula
  • A indicates the binding position to the antibody
  • a partial structure comprising a linker and a drug in the antibody-drug conjugate is referred to as a “drug linker”.
  • This drug linker is a thiol group (in other words, a sulfur atom of a cysteine residue) generated at a disulfide bond site between antibody chains (at two heavy chains and heavy chains and at two heavy chains and light chains). Is bound to.
  • the drug linker of the present invention is a topoisomerase I inhibitor, exatecan (IUPAC name: (1S, 9S) -1-amino-9-ethyl-5-fluoro-1,2,3,9,12,15-hexahydro-).
  • the antibody-drug conjugate used in the present invention can be represented by the following formula.
  • n has the same meaning as the so-called average number of drug bonds (DAR; Drug-to-Antibody Ratio), and indicates the average number of drug linker bonds per antibody.
  • DAR Drug-to-Antibody Ratio
  • the average number of drug linkers bound per antibody of the antibody-drug conjugate used in the present invention can be adjusted in the range of 0 to 8, but is preferably 2 to 8.
  • the average binding number for the anti-hTROP2 antibody is more preferably 3 to 5, and even more preferably 3.5 to 4.5.
  • the antibody-drug conjugate used in the present invention has a linker moiety cleaved after being transferred into a cancer cell
  • the above compound is considered to be the main antitumor activity of the antibody-drug conjugate used in the present invention, and has been confirmed to have topoisomerase I inhibitory activity (Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research, 2016, Oct 15; 22 (20): 5097-5108, Epub 2016 Mar 29). If the antibody-drug conjugate releases the above compound, the method of the present invention can be applied without limiting the antigen recognized by the antibody to hTROP2.
  • Topoisomerase I is an enzyme involved in the synthesis of DNA by converting the higher order structure of DNA by cutting and rejoining a single strand of DNA. Therefore, a drug having a topoisomerase I inhibitory activity inhibits the synthesis of DNA, thereby halting cell division in the S phase (DNA synthesis phase) of the cell cycle, and inducing cell death by apoptosis. Can be suppressed.
  • the antibody-drug conjugate used in the present invention has a bystander effect (Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046). This bystander effect is that after the antibody-drug conjugate used in the present invention is internalized into a target-expressing cancer cell, the compound is also used as an anti-tumor agent even for nearby cancer cells that do not express the target. It is exerted by exerting an effect.
  • the drug linker intermediate used in the production of the antibody drug conjugate used in the present invention is represented by the following formula.
  • the above drug linker intermediate is N- [6- (2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl) hexanoyl] glycylglycyl-L-phenylalanyl-N-[(2- ⁇ [(1S, 9S) -9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H, 12H-benzo [ de] pyrano [3 ′, 4 ′: 6,7] indolizino [1,2-b] quinolin-1-yl] amino ⁇ -2-oxoethoxy) methyl] glycinamide, It can be produced with reference to the description of International Publication No. 2015/0998099 and the like.
  • the antibody-drug conjugate used in the present invention can be produced by reacting the above-mentioned drug linker intermediate with an antibody having a thiol group (also referred to as a sulfhydryl group).
  • Antibodies having a sulfhydryl group can be obtained by methods well known to those skilled in the art (Hermanson, G. T, BioconjugatejTechniques, pp.56-136, pp.456-493, AcademicdePress (1996)).
  • a reducing agent such as tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride (TCEP) is used in an amount of 0.3 to 3 molar equivalents per one intrachain disulfide in an antibody
  • TCEP tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • an antibody-drug conjugate in which 2 to 8 drugs are bound per antibody can be prepared using 2 to 20 molar equivalents of the drug linker intermediate per antibody having a sulfhydryl group. .
  • the average number of drug bonds per antibody molecule of the manufactured antibody-drug conjugate is calculated by, for example, measuring the UV absorbance of the antibody-drug conjugate and its conjugation precursor at two wavelengths of 280 nm and 370 nm (UV Method) or a method in which each fragment obtained by treating an antibody-drug conjugate with a reducing agent is quantified by HPLC measurement and calculated (HPLC method).
  • an antibody-drug conjugate described in WO2015 / 098099 can be exemplified.
  • anti-hTROP2 antibody-drug conjugate in the anti-hTROP2 antibody-drug conjugate described in the international publication, further preferred is a heavy chain amino acid sequence containing a heavy chain variable region consisting of amino acid residues 20 to 140 of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, And an antibody consisting of a light chain amino acid sequence containing a light chain variable region consisting of amino acid residues 21 to 129 of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • Particularly preferred among the anti-hTROP2 antibody drug conjugates described in the international publication include an antibody consisting of the heavy chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 and the light chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the above antibody-drug conjugate also contains an antibody in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain has been deleted.
  • the anti-hTROP2 antibody drug conjugate used in the present invention is not limited to those having the above specific drug linker.
  • Sacitizumab ⁇ Govitecan ⁇ IMMU-132
  • the anti-hTROP2 antibody drug conjugate described in WO2003 / 074566, WO2011 / 068845, WO2013 / 068946, or US Patent No. 7999083 is also used in the present invention. It is possible.
  • a biological sample taken from a subject can be used as a source of RNA to determine the level of gene expression at the RNA level in the sample.
  • the biological sample can include, for example, blood, such as whole blood or a blood-derived product, such as exosomes, tissues, cells, and / or circulating tissue cells.
  • the biological sample may be removed from a tumor.
  • Exosomes are vesicles composed of lipid bilayers secreted from cells. Numerous studies since its discovery in the 1980's have shown that they move between cells and transport a variety of molecules. Due to its morphological characteristics, it contains not only proteins but also many bioactive molecules such as nucleic acids, carbohydrates and lipids. Exosomes also include miRNAs and mRNAs, which have been shown to be transported between cells. Therefore, exosomes can be selected as a biological sample to which the present invention is applied.
  • the biological sample may be obtained by a known means such as venipuncture or using a known tumor biopsy device or procedure. Endoscopic biopsy, resection biopsy, incision biopsy, fine needle biopsy, punch biopsy, cutting biopsy and skin biopsy are recognized medical procedures that can be used by those skilled in the art to obtain tumor samples. This is an example.
  • the biological sample should be large enough to provide enough RNA, or slices, to measure gene expression.
  • the method of the present invention comprises providing an autologous tissue sample or agreeing to obtain an autologous tissue sample to assess gene expression at the mRNA level in a human subject diagnosed with cancer. Including.
  • the biological sample may be in any form that allows measurement of gene expression or amount. That is, the sample must be sufficient for RNA extraction or thin-layer preparation.
  • the sample can be stored fresh and using a suitable cryogenic technique or using a non-cryogenic technique.
  • a standard process for manipulating clinical biopsy samples is to fix a tissue sample in formalin and embed it in paraffin. This form of the sample is commonly known as formalin fixed paraffin embedded (FFPE) tissue.
  • FFPE formalin fixed paraffin embedded
  • RNA expression is performed using an appropriate method. Some such methods are well-known in the art. For example, determination of gene expression is made by measuring the level or amount of RNA, eg, mRNA, in a sample.
  • 'PCR or microarray primers and / or probes are designed on the 3' end of the mRNA. This is because high preservation (stability) is considered to be achieved during the experimental process of RNA isolation or cDNA synthesis.
  • the probes can be designed based on the desired sequence to detect a particular form of transcription variant. Examples of suitable detection methods are set forth below, but are not limited thereto.
  • RNA analysis Known microarray analysis and quantitative polymerase chain reaction (PCR) are examples of methods for determining the level of gene expression at the mRNA level.
  • RNA is extracted from cells, tumors or tissues using standard protocols.
  • RNA analysis is performed using techniques that do not require RNA isolation.
  • RNA isolated from fresh or frozen tissue samples tends to be less fragmented than RNA from FFPE samples.
  • FFPE samples of tumor material are more readily available, and FFPE samples are a suitable source of RNA for use in the methods of the invention.
  • RNA isolation products and complete kits include Qiagen (Valencia, CA), Invitrogen (Carlsbad, CA), Ambion (Austin, TX) and Exiqon (Woburn, MA).
  • RNA isolation begins with tissue / cell destruction. It is desirable to minimize RNA degradation by RNase during tissue / cell destruction.
  • One approach to limiting RNase activity during the RNA isolation process is to ensure that the denaturant is in contact with the cell contents as soon as the cells are destroyed.
  • Another common practice is to include one or more proteases in the RNA isolation process. If necessary, the fresh tissue sample is immersed in the RNA stabilization solution at room temperature as soon as it is collected. The stabilization solution rapidly penetrates the cells and stabilizes the RNA for storage at 4 ° C. and subsequent isolation.
  • One such stabilizing solution is commercially available as RNAlater® (Ambion, Austin, Tex.).
  • RNA is isolated from disrupted tumor material by cesium chloride density gradient centrifugation. Generally, mRNA makes up about 1% to 5% of total cellular RNA. Immobilized oligo (dT) (eg, oligo (dT) cellulose) is commonly used to separate mRNA from ribosomal and transfer RNA. If stored after isolation, RNA must be stored under RNase-free conditions. Methods for stable storage of isolated RNA are known in the art. A variety of commercially available products for stable storage of RNA are available.
  • Microarray mRNA expression levels can be determined (eg, measured) using conventional DNA microarray expression profiling techniques.
  • a DNA microarray is a collection of specific DNA segments or probes immobilized on a solid surface or support layer (eg, glass, plastic, or silicon), each specific DNA segment occupying a known location in the array.
  • hybridization of labeled RNA to a sample under stringent conditions allows for the detection and quantification of the RNA molecule corresponding to each probe in the array.
  • the microarray is scanned by confocal laser microscopy or other suitable detection method.
  • Modern commercial DNA microarrays typically contain tens of thousands of probes, and thus can simultaneously measure the expression of tens of thousands of genes. Such a microarray can be used in the practice of the present invention. Alternatively, custom chips containing as many probes as needed to measure expression of a particular gene and the necessary controls or standards (eg, for data normalization) can be used in the practice of the present method. Can be done.
  • a two-color microarray reader can be used to facilitate data normalization.
  • the sample is labeled with a first fluorophore that emits at a first wavelength
  • the RNA or cDNA standard is labeled with a second fluorophore that emits at a different wavelength.
  • Cy3 (570 nm) and Cy5 (670 nm) are often used together in a two-color microarray system.
  • DNA microarray technology is well developed, commercially available, and widely used. Thus, in practicing the methods of the present application, one of skill in the art can use microarray technology to measure the expression level of a gene encoding a biomarker protein without undue experimentation.
  • DNA microarray chips, reagents eg, those required for the preparation of RNA or cDNA, labeling of RNA or cDNA, hybridization solutions and washing solutions
  • instruments eg, microarray readers
  • protocols are well known in the art, It is commercially available from various commercial sources.
  • Commercial vendors of microarray systems include Agilent Technologies (Santa Clara, CA) and Affymetrix (Santa Clara, CA), although other array systems may be used.
  • Quantitative PCR mRNA levels can be measured using conventional quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR) techniques.
  • Advantages of qRT-PCR include sensitivity, flexibility, quantitative accuracy, and the ability to distinguish between mRNAs with high sequence identity.
  • Guidance on processing tissue samples for quantitative PCR is available from various sources (eg, manufacturers and suppliers of equipment and reagents for qRT-PCR) (eg, Qiagen (Valencia, Calif.) And Ambion ( Austin, TX)). Instruments and systems for automated operation of qRT-PCR are commercially available and are routinely used in many laboratories.
  • An example of a well-known commercial system is the Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA).
  • the first step in measuring gene expression by RT-PCR is to reverse transcribe the mRNA template into cDNA.
  • the cDNA is then exponentially amplified in a PCR reaction.
  • Two commonly used reverse transcriptases are avian myeloblastosis virus reverse transcriptase (AMV-RT) and Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase (MMLV-RT).
  • AMV-RT avian myeloblastosis virus reverse transcriptase
  • MMLV-RT Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase
  • the reverse transcription reaction is typically primed with a specific primer, random hexamer, or oligo (dT) primer. Suitable primers are commercially available (e.g., GeneAmp® RNA RNA PCR kit (Perkin Elmer, Waltham, MA)).
  • the resulting cDNA product can be used as a template in a subsequent polymerase chain reaction.
  • the PCR step is performed using a thermostable DNA-dependent DNA polymerase.
  • the most commonly used polymerase in PCR systems is Thermus @ aquaticus (Taq) polymerase.
  • the selectivity of PCR results from the use of primers that are complementary to the DNA region targeted for amplification (ie, the region of cDNA reverse transcribed from the gene encoding the desired protein). Therefore, when qRT-PCR is used in the present invention, primers specific to each marker gene are based on the cDNA sequence of the gene.
  • Commercial techniques such as SYBR® green or TaqMan® (Applied Biosystems, Foster City, CA) can be used according to the manufacturer's instructions.
  • mRNA levels can be normalized for differences in loading between samples by comparing levels of housekeeping genes (eg, ⁇ -actin or GAPDH).
  • the level of mRNA expression can be expressed relative to any single control sample (eg, mRNA from normal non-tumor tissues or cells). Alternatively, it can be expressed against a pool of tumor samples, or mRNA derived from a tumor cell line or from a set of commercially available control mRNAs.
  • Suitable primer sets for PCR analysis of gene expression levels can be designed and synthesized by those skilled in the art without undue experimentation.
  • PCR primer sets for practicing the present invention can be purchased from commercial sources (eg, Applied Biosystems). PCR primers are preferably about 17-25 nucleotides in length. Primers can be designed to have a particular Tm using conventional algorithms for melting temperature (Tm) estimation. Software for primer design and Tm estimation is commercially available (eg, Primer Express TM (Applied Biosystems)) and is also available on the Internet (eg, Primer 3 (Massachusetts Institute of Technology)). By applying the established principles of PCR primer design, a number of different primers can be used to measure the expression level of any given gene.
  • Tm melting temperature
  • RNA analysis is performed using techniques that do not involve RNA extraction or isolation.
  • One such technique is a quantitative nuclease protection assay, commercially available under the name qNPA® (High Throughput Genomics, Inc., Arlington, AZ). This technique may be advantageous when the tissue sample to be analyzed is in the form of FFPE material. See, for example, See, e. g. , Roberts et al, 2007, Laboratory Investigation 87: 979-997.
  • nCounter (registered trademark) is a system that directly counts molecules based on digital molecular barcode technology developed by NanoString Technologies, and can analyze up to 800 types of RNA and DNA quickly and accurately in a single tube. It is possible.
  • a probe Reporter Probe
  • Capture Probe a probe having a barcode specific to the sequence of the target molecule and a probe (Capture Probe) to be fixed to the analysis cartridge are hybridized with the target nucleic acid, and the cartridge of the cartridge is scanned by a fluorescent scanner. The sequence of color barcodes of each target sequence immobilized on the surface is counted. See, for example, Geiss G, et al. , 26: 317-25 (2008). , Nature Biotechnology.
  • HTG EdgeSeq is a sample profiling application that includes the analysis of instrumentation, consumables, and software developed by HTG Molecular Diagnostics, including tumor profiling, molecular diagnostic testing, and biomarker development. Automated molecular profiling of genes and gene activity using nuclease protection chemistry on biological samples. For example, Martel R. , Et al. Assay Drug Dev Technology. 2002 Nov; 1 (1): 61-71. As described above, the expression level of each gene is obtained as a count value. The count value is used for analysis through a process called normalization for correcting a variation in distribution between samples. As a specific normalization method, there is a Median normalization method.
  • a scaling factor is obtained for each sample by the method described below, and correction is performed by dividing the expression level of the gene by the scaling factor.
  • the geometric mean of the expression levels (count values) of all the samples was determined, and the value obtained by dividing the expression level of Gene g by the geometric mean was Sample Scaling factor (S ig ) for i 's Gene g .
  • next-generation RNA sequencing Unlike the conventional Sanger method, this is RNA sequencing analysis using next-generation sequencing technology that can acquire enormous sequence information in a short time and at low cost by performing advanced parallel processing. Expression of the entire cryptome can be analyzed with higher sensitivity and higher accuracy.
  • Typical next-generation sequencing technologies that are currently widely used include one-nucleotide synthesis reaction sequencing technology (Illumina Inc.) and sequencing by Thermo Fisher Scientific Inc. (Illumina Inc.). An ion semiconductor sequence technology (Ion Torrent technology) etc. can be mentioned. Details of each technology are described in, for example, Buermans HP. , Et al. Biochim Biophys Acta. 2014 Oct; 1842 (10): 1932-1941.
  • individual sequence information (read) obtained using the above-mentioned next-generation sequencing technology was mapped to identify each gene from which transcript was derived, and was mapped to each transcript.
  • the number of reads is used for analysis through a process called normalization for correcting the number of reads based on the length of the transcript, the total number of reads obtained in the analysis, and the like.
  • normalization for example, the length of a transcript is 1 kb, the total number of reads is 1,000,000, and the number of reads, which is the number of reads corrected by the gene length of each gene, is read per kilobase of exon per milled mapped sequence reads. (RPKM) value.
  • the fragments per kilobase of exon per million mapped sequence reads (FPKM) value, which is the number of fragments corrected by the gene length of each gene, and the number of reads of each transcript are corrected by the gene length
  • FPKM transscripts per million
  • RPKM calculates the expression level of each gene by counting the number of reads mapped to exons using a known gene model
  • FPKM calculates the expression level at the isoform level by counting the fragments for each estimated isoform. Calculate the amount. Details of each normalization method are described in, for example, Conesa A., et al. See Genome Biol. 2016 Jan 26; 17: 13.
  • Evaluation of hTROP2 gene expression hTROP2 gene expression can be evaluated in biological samples from human patients. Such an embodiment includes a step of requesting evaluation of hTROP2 gene expression at the mRNA level and receiving the evaluation result. Some embodiments include determining the value of hTROP2 gene expression at the mRNA level, and recording the value determined in any manner.
  • HTROP2 gene expression level can be interpreted in relation to a given numerical value. If equal to, greater than, or greater than a predetermined value, the hTROP2 gene expression level may predict that the subject is susceptible (responsive) to treatment with a drug containing an anti-hTROP2 antibody. Will be interpreted. In some embodiments, if the hTROP2 gene expression level is equal to, less than, or less than a predetermined value, the tumor is resistant (non-responsive) to treatment with a drug containing an anti-hTROP2 antibody. Interpreted as predictable.
  • hTROP2 gene expression can be assessed as high expression or low expression based on a number representing the level of hTROP2 gene expression in the biological sample.
  • a subject can be assessed for high or low expression, for example, based on hTROP2 expression at the mRNA level.
  • the expression level can be evaluated by any known method as described above.
  • the hTROP2 gene expression level can be evaluated based on the values of reads per kilobase of exon per million mapped sequence reads (RPKM) calculated by next-generation RNA sequencing.
  • the RPKM value is a value obtained by normalizing the number of reads obtained by the next-generation sequencer using the exon length of each gene and the total number of sequences read by the sequencer. Can be analyzed using a Log 2 [RPKM + 1] value which is a logarithmic (Log 2 ) value.
  • RPKM values and hTROP2 gene expression are correlated. Therefore, when the RPKM value is high, the hTROP2 gene expression is also high.
  • the Log 2 [RPKM + 1] value is greater than or greater than a predetermined value, high hTROP2 gene expression is assessed.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the set numerical value can be selected in the range of 6.0 to 9.0, for example, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.
  • the set numerical value can be selected in a range of 6.0 to 8.0, for example, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6. 5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, It is possible to select from the group consisting of 7.8, 7.9, and 8.0. Further, the set numerical value can be selected in a range of 6.5 to 8.0, for example, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.
  • the set numerical value can be selected in a range of 7.0 to 8.0, for example, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7. 5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8.0. Further, the set numerical value can be selected in a range of 7.5 to 8.0, for example, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8 .0 can be selected.
  • the set numerical value can be selected from the group consisting of 6.5, 7.0, 7.5, and 8.0.
  • the hTROP2 gene expression level can be evaluated based on the values of fragments per kilobase of exon per milled mapped sequence reads (FPKM) calculated by next-generation RNA sequencing.
  • the FPKM value is a value obtained by normalizing the number of reads obtained by the next-generation sequencer using the gene length of each gene and the total number of sequences read by the sequencer.
  • the expression level of the hTROP2 gene is 1 And can be analyzed using Log 2 [FPKM + 1] value which is a logarithmic (Log 2 ) value.
  • FPKM values and hTROP2 gene expression are correlated. Therefore, when the FPKM value is high, the hTROP2 gene expression is also high.
  • the Log 2 [FPKM + 1] value is greater than or greater than a predetermined value, high hTROP2 gene expression is assessed.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the set numerical value can be selected in the range of 6.0 to 8.0, for example, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.
  • the set numerical value can be selected in the range of 6.0 to 7.0, for example, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6. 5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, and 7.0. As the set numerical value, it is also possible to select 6.0 or 7.0.
  • the hTROP2 gene expression level can be evaluated based on a Median Normalized Count (MNC) value calculated by EdgeSeq Assay.
  • MNC Median Normalized Count
  • the MNC value is a value obtained by using the Median normalization method in EdgeSeq Assay
  • the expression level of the hTROP2 gene is Log 2 [MNC + 1] value, which is a logarithmic (Log 2 ) value obtained by adding 1 to the MNC value.
  • MNC values and hTROP2 gene expression are correlated. Therefore, when the MNC value is high, the hTROP2 gene expression is also high.
  • the Log 2 [MNC + 1] value is greater than or greater than a predetermined value, high hTROP2 gene expression is assessed.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the set numerical value can be selected in the range of 12.0 to 15.0. For example, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0. 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, 14.0, 14.1, 14.2, 14.2.
  • the set numerical value can be selected in the range of 12.0 to 14.0, for example, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.4. 5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0. 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, and 14.0. is there.
  • 12.0, 13.0, or 14.0 can be selected.
  • hTROP2 gene expression at the mRNA level is assessed using a regulatory approved test.
  • the regulatory approved test is a test approved by the FDA, EMA, or PMDA.
  • Assessing SLFN11 gene expression can be assessed in biological samples from human patients. Such an embodiment includes a step of requesting an evaluation of SLFN11 gene expression at the mRNA level and receiving an evaluation result. Some embodiments include determining the value of SLFN11 gene expression at the mRNA level, and recording the value determined in any manner.
  • SLFN11 gene expression level can be interpreted in relation to a given numerical value. If equal to, greater than, or greater than a predetermined number, the level of SLFN11 gene expression is interpreted as predicting that the subject is susceptible (responsive) to treatment with a drug containing an anti-hTROP2 antibody. You. In some embodiments, if the level of SLFN11 gene expression is equal to, less than, or less than a predetermined value, the tumor is resistant (non-responsive) to treatment with a drug containing an anti-hTROP2 antibody. Interpreted as predictable.
  • SLFN11 gene expression can be assessed as high or low expression based on a number representing the level of SLFN11 gene expression in the biological sample.
  • a subject can be assessed for high or low expression, for example, based on SLFN11 expression at the mRNA level.
  • the expression level can be evaluated by any known method as described above.
  • the expression level of the SLFN11 gene can be evaluated based on the RPKM value as in the case of the hTROP2 gene.
  • the expression level of the SLFN11 gene can be analyzed using a Log 2 [RPKM + 1] value, which is a value obtained by adding 1 to the RPKM value and calculating the logarithm (Log 2 ).
  • RPKM value and SLFN11 gene expression are correlated. Therefore, when the RPKM value is high, the SLFN11 gene expression is also high.
  • the Log 2 [RPKM + 1] value is above a predetermined number, it is assessed as high SLFN11 gene expression.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the set numerical value can be selected in the range of 1.0 to 4.0, for example, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.
  • the set numerical value can be selected in a range of 1.0 to 3.0, for example, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.. 5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, It is possible to select from the group consisting of 2.8, 2.9 and 3.0. Further, the set numerical value can be selected in the range of 2.0 to 3.0, for example, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.. 5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 and 3.0. The set numerical value can be selected from the group consisting of 1.0, 2.0, and 3.0, and can be set to 3.0.
  • the expression level of the SLFN11 gene can be evaluated based on the FPKM value as in the case of the hTROP2 gene.
  • the expression level of the SLFN11 gene can be analyzed using a Log 2 [FPKM + 1] value, which is a value obtained by adding 1 to the FPKM value and calculating the logarithm (Log 2 ).
  • FPKM value and SLFN11 gene expression are correlated. Therefore, when the FPKM value is high, the SLFN11 gene expression is also high.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the set numerical value can be selected in the range of 2.0 to 4.0, for example, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3. It is possible to select from the group consisting of 8, 3.9 and 4.0.
  • the set numerical value can be selected in a range of 2.0 to 3.0, for example, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.. 5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 and 3.0.
  • 2.0 or 3.0 can be selected.
  • the expression level of the SLFN11 gene can be evaluated based on the MNC value as in the case of the hTROP2 gene.
  • the expression level of the SLFN11 gene can be analyzed using a Log 2 [MNC + 1] value which is a logarithmic (Log 2 ) value obtained by adding 1 to the MNC value.
  • MNC values and SLFN11 gene expression are correlated. Therefore, when the MNC value is high, the SLFN11 gene expression is also high. In some embodiments, a high SLFN11 gene expression is assessed if the Log 2 [MNC] value is greater than a predetermined value.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the set numerical value can be selected in the range of 11.5 to 13.5, for example, 11.5, 11.6, 11.7, 11.8, 11.9, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13. It is possible to select from the group consisting of 3, 13.4, and 13.5.
  • the set numerical value can be selected in the range of 11.5 to 12.5. For example, 11.5, 11.6, 11.7, 11.8, 11.9, 12. 0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, and 12.5. As the set numerical value, 11.5, 12.0, or 12.5 can be selected.
  • SLFN11 gene expression at the mRNA level is assessed using a regulatory approved test.
  • the regulatory approved test is, for example, a test approved by the FDA, EMA, or PMDA.
  • hTROP2 gene expression can be assessed in combination with expression of the SLFN11 gene. By combining two types of sensitivity markers, more accurate evaluation is possible.
  • a human patient suffering from cancer can be treated with a medicament containing an anti-hTROP2 antibody if the expression of the hTROP2 gene and / or SLFN11 gene is assessed to be high.
  • a human patient suffering from cancer can avoid administration of a medicament containing an anti-hTROP2 antibody if the expression of the hTROP2 gene and / or SLFN11 gene is assessed as low.
  • Suitable dosages of the drug containing the anti-hTROP2 antibody include 2.0 mg / kg, 4.0 mg / kg, 6.0 mg / kg, 8.0 mg / kg, or 10.0 mg / kg. , But is not limited to these dosages.
  • a suitable interval of administration of a drug containing an anti-hTROP2 antibody may be, for example, a three-week interval, but is not limited to this interval.
  • hTROP2 and SLFN11 gene expression levels can be evaluated based on RPKM values.
  • the expression level of each gene can be analyzed by adding Log 2 [RPKM + 1], which is a value obtained by adding 1 to the RPKM value and making it logarithmic (Log 2 ).
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the Log 2 [RPKM + 1] value in the hTROP2 gene can be set in the range of 6.0 to 9.0.
  • the Log 2 [RPKM + 1] value in the SLFN11 gene can be set in a range from 1.0 to 4.0.
  • a suitable combination of Log 2 [RPKM + 1] set values for the hTROP2 and SLFN11 genes includes a group consisting of 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8.0 for the hTROP2 gene. 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, and 1. for the SLFN11 gene.
  • One numerical value selected from the group consisting of 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, and 3.0 Can be cited.
  • Log 2 [RPKM + 1] settings for the hTROP2 and SLFN11 genes is 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8.0 for the hTROP2 gene.
  • More preferred combinations of Log 2 [RPKM + 1] settings in the hTROP2 and SLFN11 genes include a combination of 7.5 in the hTROP2 gene and 1.0 in the SLFN11 gene, or 6.5 in the hTROP2 gene and 2.0 in the SLFN11 gene. Can be cited.
  • Log 2 [RPKM + 1] settings in the hTROP2 and SLFN11 genes include 7.5 in the hTROP2 gene and 2.0 in the SLFN11 gene, or 6.5 in the hTROP2 gene and 3 in the SLFN11 gene. .0 is satisfied.
  • Suitable combinations of Log 2 [RPKM + 1] settings for the hTROP2 and SLFN11 genes include 7.5 in the hTROP2 gene and 1.0 in the SLFN11 gene, 6.5 in the hTROP2 gene, and 2. in the SLFN11 gene. 0 combinations, 7.5 combinations in the hTROP2 gene and 2.0 combinations in the SLFN11 gene, and any one combination selected from the group consisting of 6.5 combinations in the hTROP2 gene and 3.0 combinations in the SLFN11 gene. be able to.
  • hTROP2 and SLFN11 gene expression levels can be evaluated based on FPKM values.
  • the expression level of each gene can be analyzed using a Log 2 [FPKM + 1] value which is a logarithmic (Log 2 ) value obtained by adding 1 to the FPKM value.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the Log 2 [FPKM + 1] value in the hTROP2 gene can be set in the range of 6.0 to 8.0.
  • the Log 2 [FPKM + 1] value in the SLFN11 gene can be set in a range of 2.0 to 4.0.
  • a human patient suffering from cancer can be treated by administering a drug containing an anti-hTROP2 antibody if both of the settings in the hTROP2 and SLFN11 genes are satisfied.
  • a drug containing an anti-hTROP2 antibody can be administered and treated.
  • Suitable combinations of Log 2 [FPKM + 1] set values in the hTROP2 and SLFN11 genes include: In the hTROP2 gene, a group consisting of 7.0, 7.1, 7.2, 7, 3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, and 8.0 And 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2. One combination of numerical values selected from the group consisting of 9, and 3.0 can be given.
  • Another preferable combination is 6.0, $ 6.1, $ 6.2, $ 6.3, $ 6.4, 6.5, $ 6.6, $ 6.7, $ 6.8, and $ 6.0 in the hTROP2 gene.
  • Yet another combination is 7.0, $ 7.1, $ 7.2, $ 7, 3, $ 7.4, $ 7.5, $ 7.6, $ 7.7, $ 7.8, $ 7.9 in the hTROP2 gene. , And 8.0, and 3.0, ⁇ ⁇ 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.0 in the SLFN11 gene. 7, $ 3.8, $ 3.9, and 4.0.
  • Another combination of more preferred Log 2 [FPKM + 1] settings in the hTROP2 and SLFN11 genes includes 7.0 in the hTROP2 gene and 2.0 in the SLFN11 gene, 6.0 in the hTROP2 gene and 3.0 in the SLFN11 gene. 0 and any one combination selected from the group consisting of 7.0 in the hTROP2 gene and 3.0 in the SLFN11 gene.
  • hTROP2 and SLFN11 gene expression levels can be evaluated based on MNC values.
  • the expression level of each gene can be analyzed using a Log 2 [MNC + 1] value which is a logarithmic (Log 2 ) value obtained by adding 1 to the MNC value.
  • the predetermined number can be set statistically to minimize the undesirable effects of false positives and false negatives.
  • the Log 2 [MNC + 1] value in the hTROP2 gene can be set in the range of 12.0 to 14.0. Further, the Log 2 [MNC + 1] value in the SLFN11 gene can be set in a range of 11.5-12.5.
  • a human patient suffering from cancer can be treated by administering a drug containing an anti-hTROP2 antibody if both of the settings in the hTROP2 and SLFN11 genes are satisfied. Further, in some embodiments, when either of the set values in the hTROP2 or SLFN11 gene is satisfied, a drug containing an anti-hTROP2 antibody can be administered and treated.
  • Suitable combinations of Log 2 [MNC + 1] set values for the hTROP2 and SLFN11 genes include 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, and 12.6 for the hTROP2 gene. , 12.7, 12.8, 12.9, 13.0. 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, 14.0, 14.1, 14.2, 14.2. 3, 14.4, 14.5, 14.6, 14.7, 14.8, 14.9, and 15.0, and a numerical value selected from the group consisting of 11.5, 11 .1, 11.7, 11.8, 11.9, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8 , 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, and 13.5.
  • Another suitable combination is 12.0, $ 12.1, $ 12.2, $ 12.3, $ 12.4, $ 12.5, $ 12.6, $ 12.7, $ 12.8, and 12.0 in the hTROP2 gene. 12.9, ⁇ 13.0.
  • One numerical combination can be cited.
  • Another suitable combination of Log 2 [MNC + 1] settings in the hTROP2 and SLFN11 genes includes 12.0 in the hTROP2 gene and 11.5 in the SLFN11 gene, 14.0 in the hTROP2 gene and 11.1 in the SLFN11 gene. 5 combinations, any one combination selected from the group consisting of 12.0 in the hTROP2 gene and 12.5 in the SLFN11 gene, and 14.0 in the hTROP2 gene and 12.5 in the SLFN11 gene. be able to.
  • the measurement and evaluation of the gene expression level may be performed simultaneously for the hTROP2 gene and the SLFN11 gene.
  • the measurement and evaluation of the expression level of the hTROP2 gene may be performed first, and the measurement and evaluation of the expression level of the SLFN11 gene may be performed for a human patient evaluated to have a high expression level of the hTROP2 gene.
  • the measurement and evaluation of the expression level of the SLFN11 gene may be performed first, and the measurement and evaluation of the expression level of the hTROP2 gene may be performed for a human patient evaluated to have a high expression level of the SLFN11 gene.
  • hTROP2 and SLFN11 gene expression at the mRNA level is assessed using a regulatory approved test.
  • the regulatory approval test is an FDA, EMA or PMDA approved test.
  • Test Kit The present invention also relates to a diagnostic test kit comprising several components for performing the method of the present invention. Diagnostic test kits enhance the convenience, speed, and reproducibility of performing diagnostic assays.
  • a basic diagnostic test kit includes PCR primers that analyze gene expression.
  • a more detailed test kit comprises, in addition to the PCR primers, buffers, reagents, and detailed instructions for measuring gene expression levels using PCR technology.
  • the kit includes a test protocol and all the consumable components required for the test, except for the RNA sample.
  • Embodiment 1 Production of Antibody Drug Conjugate A humanized anti-hTROP2 antibody (SEQ ID NO: 1 having a sequence consisting of Antibody comprising a light chain consisting of the amino acid sequence of amino acids 21 to 234 in SEQ ID NO: 2)
  • antibody-drug conjugate (1) in which a drug linker represented by and an anti-hTROP2 antibody were bound by a thioether bond (hereinafter, referred to as “antibody-drug conjugate (1)”) was produced.
  • the average number of drug bonds per antibody molecule can be adjusted in the range of 0 to 8, but this time, an antibody drug conjugate having an average number of drug bonds of 3.5 to 4.5 was prepared and used in the following examples. did.
  • Embodiment 2 FIG. Evaluation of antitumor effect of antibody drug conjugate (1) Mice: Female nu / nu mice (Envigo), 5-8 weeks of age, were acclimated for at least 3 days under SPF conditions before use in the experiment. Mice were fed a sterilized solid feed (Teklad 2919, Envigo) and fed water (containing 2 ppm chlorine) with reverse osmosis membrane treatment.
  • Tumor volume (mm 3 ) 0.52 ⁇ major axis (mm) ⁇ [minor axis (mm)] 2
  • a tumor piece shredded to about 5 ⁇ 5 ⁇ 5 mm 3 was transplanted subcutaneously to the left flank of a female nu / nu mouse.
  • PDX derived xenograft
  • TGI tumor growth inhibition rate
  • Tumor growth inhibition rate (%) 100 ⁇ (1-Tf / mean Cf)
  • Tf tumor volume 21 days after administration of antibody drug conjugate
  • mean Cf arithmetic mean value of tumor volume 21 days after administration of negative control group mice All tests described above were performed at Georgia Oncology (Champions). Carried out.
  • Embodiment 3 Relationship between hTROP2 and SLFN11 gene expression levels (RPKM values) in tumors derived from each PDX mouse model and antibody-drug conjugate (1) antitumor activity Gene expression level data in each PDX model used in Example 2 was obtained from graduates 1 was added to the RPKM value obtained and normalized by the company to obtain a log 2 [RPKM + 1] value which is a logarithmic (Log 2 ) value (Table 2), and using this, the antibody drug conjugate (1 ) was analyzed for the relationship between the antitumor activity (Table 1) and the expression levels of hTROP2 gene and SLFN11 gene in the PDX model.
  • the Log 2 [RPKM + 1] value of the hTROP2 gene is higher than 7.5 and the Log 2 [RPKM + 1] value of the SLFN11 gene is higher than 1.0, or the Log 2 [RPKM + 1] value of the hTROP2 gene is 6.5.
  • the proportion of animal models showing a TGI of 75% or more is about 80% to 100%.
  • Embodiment 4 FIG. Evaluation of antitumor effect of antibody drug conjugate (2) Mice: Female nu / nu mice (Envigo), 5-8 weeks of age, were acclimated for at least 3 days under SPF conditions before use in the experiment. Mice were fed a sterilized solid feed (Teklad 2919, Envigo) and fed water (containing 2 ppm chlorine) with reverse osmosis membrane treatment.
  • Tumor volume (mm 3 ) 0.52 ⁇ major axis (mm) ⁇ [minor axis (mm)] 2
  • a tumor piece shredded to about 5 ⁇ 5 ⁇ 5 mm 3 was transplanted subcutaneously to the left flank of a female nu / nu mouse.
  • PDX derived xenograft
  • TGI tumor growth inhibition rate
  • Embodiment 5 FIG. HTROP2 and SLFN11 gene expression levels (FPKM values) in tumors derived from each PDX mouse model, and relationship with antibody drug conjugate (1) antitumor activity
  • Gene expression level data in each PDX model used in Example 4 Using RNA extracted from a formalin-fixed paraffin-embedded specimen of the tumor, it was obtained by the next-generation RNA sequencing method. The obtained data was normalized to the FPKM value, and then 1 was added to FPKM to obtain a Log 2 [FPKM + 1] value which is a logarithmic (Log 2 ) value (Table 6).
  • the ratio of the animal model showing TGI of 75% or more remains at 43 to 50%, and the combination of the hTROP2 gene expression amount and the SLFN11 gene expression amount indicates that the antibody drug conjugate ( It was clarified that 1) can be used as a sensitivity marker for predicting the antitumor effect.
  • the Log 2 [FPKM + 1] value of the hTROP2 gene is greater than 7.0 and the Log 2 [FPKM + 1] value of the SLFN11 gene is greater than 2.0, or the Log 2 [FPKM + 1] value of the hTROP2 gene is 6.0.
  • the ratio of the animal model having a TGI of 75% or more is about 80% to 100%.
  • the proportion of the animal model having a TGI of 75% or more is 100%. Become. Even when the TGI is 70% or 80% or more, it is possible to predict the antitumor effect at the same prediction rate by each Log 2 [FPKM + 1] value set when the TGI is 75% or more. Was.
  • Embodiment 6 Production of Compound (1) According to the production methods described in WO 2014/057687 and WO 2015/115091, the compound represented by the formula
  • compound (1) (Hereinafter, referred to as “compound (1)”) was produced.
  • Embodiment 7 FIG. Cell growth inhibition test 7- (1) at the time of SLFN11 knockdown: Effect on human pharyngeal cancer cell line FaDu Human pharyngeal cancer cell line FaDu was obtained from ATCC and used for evaluation. FaDu cells suspended in 2 ⁇ 10 5 cells / mL in a MEM medium containing a non-essential amino acid solution, a pyruvate solution and 10% fetal bovine serum were seeded at 10 mL / dish in a 10 cm cell culture dish.
  • the collected cells were suspended at 5 ⁇ 10 4 cells / mL in a MEM medium containing a non-essential amino acid solution, a pyruvate solution and 10% fetal bovine serum.
  • the cells were seeded at 100 ⁇ L / well in a 96-well cell culture plate. Twenty-four hours after seeding, the medium was treated with 100 nM, 33 nM, 11 nM, 3.7 nM, 1.2 nM, 0.41 nM. 0.13 nM.
  • the medium was replaced with a medium containing 0.045 nM or 0 nM of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) at 100 ⁇ L / well.
  • the molar concentration of the antibody-drug conjugate (1) was calculated with an average molecular weight of 150,000. All cells were cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 . After 72 hours from the medium exchange, an ATPlite 1 step detection system (PerkinElmer) was added at 100 ⁇ L / well, and the luminescence intensity of each well was measured after incubation at room temperature for 10 minutes.
  • an ATPlite 1 step detection system PerkinElmer
  • the cell growth inhibition rate (%) under each condition was calculated using the following formula.
  • Cell growth inhibition rate (%) 100 ⁇ (1-T / C)
  • T Average luminescence intensity of each sample-added well
  • C Average luminescence intensity of each well to which 0 nM of each sample was added
  • FIG. 4 shows the cell growth inhibitory effect of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) on FaDu cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • Table 9 shows the calculated 50% inhibitory concentrations.
  • SLFN11 knockdown on the Fadu cell line attenuated the cell growth inhibitory effects of compound (1) and antibody drug conjugate (1).
  • NCI-H1781 Human lung cancer cell line NCI-H1781 was obtained from ATCC and used for evaluation. NCI-H1781 cells suspended at 2 ⁇ 10 5 cells / mL in RPMI-1640 medium containing 10% fetal bovine serum were seeded at 10 mL / dish in a 10 cm cell culture dish.
  • the cells were seeded at 100 ⁇ L / well in a 96-well cell culture plate. Twenty-four hours after seeding, the medium was treated with 100 nM, 33 nM, 11 nM, 3.7 nM, 1.2 nM, 0.41 nM. 0.13 nM. The medium was replaced with a medium containing 0.045 nM or 0 nM of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) at 100 ⁇ L / well. The molar concentration of the antibody-drug conjugate (1) was calculated with an average molecular weight of 150,000. All cells were cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 . After 72 hours from the medium exchange, an ATPlite 1 step detection system (PerkinElmer) was added at 100 ⁇ L / well, and the luminescence intensity of each well was measured after incubation at room temperature for 10 minutes.
  • PerkinElmer an ATPlite 1 step detection system
  • the cell growth inhibition rate (%) under each condition was calculated using the following formula.
  • Cell growth inhibition rate (%) 100 ⁇ (1-T / C)
  • T Average luminescence intensity of each sample-added well
  • C Average luminescence intensity of each well to which 0 nM of each sample was added
  • FIG. 5 shows the cell growth inhibitory effect of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) on the NCI-H1781 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • Table 10 shows the calculated 50% inhibitory concentrations. Knockdown of SLFN11 against NCI-H1781 cell line attenuated the cell growth inhibitory effects of compound (1) and antibody-drug conjugate (1).
  • the collected cells were suspended at 5 ⁇ 10 4 cells / mL in a MEM medium containing a non-essential amino acid solution, a pyruvate solution and 10% fetal bovine serum.
  • the cells were seeded at 100 ⁇ L / well in a 96-well cell culture plate. Twenty-four hours after seeding, the medium was treated with 100 nM, 33 nM, 11 nM, 3.7 nM, 1.2 nM, 0.41 nM. 0.13 nM.
  • the medium was replaced with a medium containing 0.045 nM or 0 nM of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) at 100 ⁇ L / well.
  • the molar concentration of the antibody-drug conjugate (1) was calculated with an average molecular weight of 150,000. All cells were cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 . After 72 hours from the medium exchange, an ATPlite 1 step detection system (PerkinElmer) was added at 100 ⁇ L / well, and the luminescence intensity of each well was measured after incubation at room temperature for 10 minutes.
  • an ATPlite 1 step detection system PerkinElmer
  • the cell growth inhibition rate (%) under each condition was calculated using the following formula.
  • Cell growth inhibition rate (%) 100 ⁇ (1-T / C)
  • T Average luminescence intensity of each sample-added well
  • C Average luminescence intensity of each well to which 0 nM of each sample was added
  • FIG. 6 shows the cell proliferation inhibitory effect of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) on Calu-3 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • Table 11 shows the calculated 50% inhibitory concentrations. Knockdown of SLFN11 on the Calu-3 cell line attenuated the cytostatic effect of compound (1).
  • the cells were seeded at 100 ⁇ L / well in a 96-well cell culture plate. Twenty-four hours after seeding, the medium was treated with 100 nM, 33 nM, 11 nM, 3.7 nM, 1.2 nM, 0.41 nM. 0.13 nM. The medium was replaced with a medium containing 0.045 nM or 0 nM of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) at 100 ⁇ L / well. The molar concentration of the antibody-drug conjugate (1) was calculated with an average molecular weight of 150,000. All cells were cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 . After 72 hours from the medium exchange, an ATPlite 1 step detection system (PerkinElmer) was added at 100 ⁇ L / well, and the luminescence intensity of each well was measured after incubation at room temperature for 10 minutes.
  • PerkinElmer an ATPlite 1 step detection system
  • the cell growth inhibition rate (%) under each condition was calculated using the following formula.
  • Cell growth inhibition rate (%) 100 ⁇ (1-T / C)
  • T Average luminescence intensity of each sample-added well
  • C Average luminescence intensity of each well to which 0 nM of each sample was added
  • FIG. 7 shows the cell growth inhibitory effect of compound (1) or antibody-drug conjugate (1) on MDA-MB-468 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • Table 12 shows the calculated 50% inhibitory concentrations. Knockdown of SLFN11 on the MDA-MB-468 cell line attenuated the cytostatic effect of compound (1).
  • HCC38 Human breast cancer cell line HCC38 was obtained from the ATCC and used for evaluation. HCC38 cells suspended at 2 ⁇ 10 5 cells / mL in RPMI-1640 medium containing 10% fetal bovine serum were seeded on a 10 cm cell culture dish at 10 mL / dish. After 24 hours from the seeding, it was suspended ON-TARGETplus SLFN11 siRNA of 100pmol (Dharamcon) or ON-TARGETplus Non-targeting Control Pool (Dharamcon) and 30 ⁇ L of Lipofectamine TM RNAiMAX Transfection Reagent to (ThermoFisher) in Opti-MEM medium 1mL The whole amount was added to the medium.
  • the medium was removed and the cells were washed with PBS, and then the cells were dissociated from the dish using 1 mL of TrypLE TM Express and collected.
  • the collected cells were suspended in RPMI-1640 medium containing 10% fetal bovine serum at 5 ⁇ 10 4 cells / mL.
  • the cells were seeded at 100 ⁇ L / well in a 96-well cell culture plate. Twenty-four hours after seeding, the medium was treated with 100 nM, 33 nM, 11 nM, 3.7 nM, 1.2 nM, 0.41 nM. 0.13 nM.
  • the medium was replaced with a medium containing 0.045 nM or 0 nM of the compound (1) or the antibody-drug conjugate (1) a at 100 ⁇ L / well.
  • the molar concentration of the antibody-drug conjugate (1) was calculated with an average molecular weight of 150,000. All cells were cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 . After 72 hours from the medium exchange, an ATPlite 1 step detection system (PerkinElmer) was added at 100 ⁇ L / well, and the luminescence intensity of each well was measured after incubation at room temperature for 10 minutes.
  • the cell growth inhibition rate (%) under each condition was calculated using the following formula.
  • Cell growth inhibition rate (%) 100 ⁇ (1-T / C)
  • T Average luminescence intensity of each sample-added well
  • C Average luminescence intensity of each well to which 0 nM of each sample was added
  • FIG. 8 shows the cell growth inhibitory effect of compound (1) or antibody-drug conjugate (1) on HCC38 cells at the time of SLFN11 knockdown.
  • Table 13 shows the calculated 50% inhibitory concentrations.
  • SLFN11 knockdown on the HCC38 cell line attenuated the cell growth inhibitory effects of compound (1) and antibody drug conjugate (1).
  • Embodiment 8 FIG. HTROP2 and SLFN11 gene expression levels (Median Normalized Count value) in tumors derived from patients in clinical trials, and antibody drug conjugates (1) Antitumor activity 8- (1) Test plan and drug effects Relapse / progression In a phase 1 dose escalation study of patients with non-small cell lung cancer, the antibody-drug conjugate (1) was administered intravenously once every three weeks until unacceptable toxicity or exacerbation of the condition. Dose limiting toxicity is determined in Cycle 1 (Day 1-21). Tumor collection was performed by the first dose after entry into the clinical trial. Table 14 shows the administered dose and the maximum tumor change rate (%) in each patient. When the value of the maximum tumor change rate is negative, it means that the tumor was reduced by the administration of the antibody-drug conjugate (1).
  • a Log 2 [MNC + 1] value which is a logarithm (Log 2 ) value obtained by adding 1 to the Median Normalized Count (MNC) value obtained and normalized by HTG Molecular Diagnostics, was obtained (Table 15).
  • the relationship between the antitumor activity (Table 14) of the antibody-drug conjugate (1) in patients and the expression levels of the hTROP2 gene and the SLFN11 gene was analyzed. When all the evaluated patients were divided into groups in which the hTROP2 gene and the SLFN11 gene showed a certain level of expression or more (Table 16), the proportion of patients showing a certain degree of efficacy (maximum tumor change rate of 0% or less) was hTROP2 gene.
  • SEQ ID NO: 1 amino acid sequence of humanized anti-hTROP2 antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 2 amino acid sequence of humanized anti-hTROP2 antibody light chain
  • SEQ ID NO: 3 CDRH1 sequence of humanized anti-hTROP2 antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 4 humanized anti-hTROP2 CDRH2 sequence of antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 5 CDRH3 sequence of humanized anti-hTROP2 antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 7 CDRL2 sequence of humanized anti-hTROP2 antibody light chain
  • SEQ ID NO: 8 CDRL3 sequence of humanized anti-hTROP2 antibody light chain

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Abstract

本発明は、がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する際に、ｍＲＮＡレベルでの遺伝子発現量を指標として投与対象を同定する方法を提供する。　本発明は、がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法に関し、当該方法は、がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価する工程；ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現得量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程を含む。又、当該方法は、がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；及びｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程を含む。

Description

抗体薬物複合体の感受性マーカー
　本発明は、がんに罹患したヒト患者において、抗体薬物複合体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法に係わる。
　ほとんどの抗がん剤は、特定のヒト患者には効果があるが、その他のヒト患者には効果がない。これは、がんの遺伝的多様性に基づくものであり、同じ患者内のがんの間でさえ観察されることがある。患者ごとの薬効の隔たりは、分子標的型抗がん剤において特に顕著である。従って、いずれの抗がん剤がいずれの患者に対して有効であるかを決定するための適切な検査が必要であり、このような検査なくして抗がん剤の十分な薬効を期待することはできない。感受性マーカーの発見に基づく診断法の確立は、新たな抗がん剤に対して臨床応答を示す可能性が高い患者を予め特定することによって、該抗がん剤の開発を加速する手段となる。これによって、臨床試験の規模、期間及び費用を著しく低減させることが可能となる。ゲノミクス、プロテオミクス、又は分子イメージングの技術は、感受性マーカーの迅速且つ高感度での検出を可能とするはずであった。しかし、がんにおける遺伝子プロファイリングに係わる様々な技術が利用可能となったにも関わらず、抗がん剤の感受性マーカーが広く実用化の域にあるとは言いがたい。
　上述の分子標的型抗がん剤の標的として、例えばヒトＴＲＯＰ２を挙げることができる。ヒトＴＲＯＰ２（ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　２，　ＴＡＣＳＴＤ２：ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　２，ＧＡ７３３－１，ＥＧＰ－１，Ｍ１Ｓ１；以下、ｈＴＲＯＰ２と表記する）は、３２３アミノ酸残基からなる１回膜貫通型の１型細胞膜蛋白質である。
　臨床検体を用いた免疫組織化学解析により、ｈＴＲＯＰ２は種々の上皮細胞由来のがんにおいて過剰発現していること、且つ、正常組織においてはいくつかの組織の上皮細胞での発現に限られ、その発現量も腫瘍組織と比較して低いことが示されている（非特許文献１～５）。またｈＴＲＯＰ２の発現は大腸がん（非特許文献１）、胃がん（非特許文献２）、膵臓がん（非特許文献３）、口腔がん（非特許文献４）、グリオーマ（非特許文献５）において予後不良と相関することも報告されている。さらに大腸がん細胞を用いたモデルから、ｈＴＲＯＰ２の発現ががん細胞の足場非依存的細胞増殖及び免疫不全マウスでの腫瘍形成に関与していることが報告されている（非特許文献６）。
　この様ながんとの関連性を示唆する情報から、これまでに複数の抗ｈＴＲＯＰ２抗体が樹立され、その抗腫瘍効果が検討されている。この中には抗体単独でｎｕ／ｎｕマウス異種移植モデルにおける抗腫瘍活性を示すもの（特許文献１～４）の他、抗体薬物複合体として抗腫瘍活性を示すもの（特許文献５～７）等が開示されている。しかしながら、それらの活性の強さや適用範囲はまだ十分ではなく、ｈＴＲＯＰ２を治療標的とする未充足医療ニーズが存在している。既存の抗体又は抗体薬物複合体が医療ニーズを満していない原因としては、医薬としての効果が十分でないことに加え、適切な感受性マーカーが見出されていない点を挙げることができる。例えば、小細胞肺がんにおいてｈＴＲＯＰ２を標的とする抗体薬物複合体の示す抗腫瘍活性が、ｈＴＲＯＰ２の発現量によって予測できないことが知られている（非特許文献７）。
　がん細胞表面に発現し、且つ、細胞に内在化できる抗原に結合する抗体に、細胞毒性のある薬物を結合させた抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ；以下、「ＡＤＣ」と呼ぶこともある）は、がん細胞に選択的に薬物を送達できることによって、がん細胞内に薬物を蓄積させ、がん細胞を死滅させることが期待できる。このような抗体薬物複合体の一つとして、抗体とトポイソメラーゼＩ阻害剤であるエキサテカンの誘導体を構成要素とする抗体薬物複合体が知られている（特許文献９～１５、非特許文献８～１６）。特許文献９に記載の抗体薬物複合体は抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有し、ｈＴＲＯＰ２抗体を発現するがん細胞を死滅させることが可能であるが、既存のｈＴＲＯＰ２を標的とする抗体又は抗体薬物複合体と同様に、ｈＴＲＯＰ２の発現量のみによって抗腫瘍活性を正確に予測できない可能性がある。
　ヒトＳＬＦＮ１１（Ｓｃｈｌａｆｅｎ　ｆａｍｉｌｙ　ｍｅｍｂｅｒ　１１）は９０１アミノ酸残基からなる蛋白質で、ＤＮＡ複製ストレスに応答して複製フォークに結合し、ＤＮＡ複製を阻害する機能を有することが示唆されている（非特許文献１７）。またがん細胞株のトポイソメラーゼＩ阻害剤を含むＤＮＡ障害型抗がん剤に対する感受性と、ＳＬＦＮ１１のｍＲＮＡ発現量が高く相関することも報告されている（非特許文献１８～１９）。また、ポリ　ＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤であるｖｅｌｉｐａｒｉｂ及び抗ＤＬＬ３抗体薬物複合体であるｒｏｖａｌｐｉｔｕｚｕｍａｂ　ｔｅｓｉｒｉｎｅ　（Ｒｏｖａ－Ｔ）の併用が、ＳＬＦＮ１１を高発現している小細胞肺がん患者に対する延命効果を有することが知られている（非特許文献２０）。さらに、アルキル化剤であるＴｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ及びｖｅｌｉｐａｒｉｂの併用が、ＳＬＦＮ１１を高発現している小細胞肺がん患者に対する延命効果を有することも知られている（非特許文献２１）。しかしながら、エキサテカン等のトポイソメラーゼＩ阻害剤を用いたＡＤＣによる抗腫瘍活性とＳＬＦＮ１１の発現量との関係は未だ明らかにされておらず、薬効を予測する診断薬としての有効性も不明である。
国際公開第２００８／１４４８９１号 国際公開第２０１１／１４５７４４号 国際公開第２０１１／１５５５７９号 国際公開第２０１３／０７７４５８号 国際公開第２００３／０７４５６６号 国際公開第２０１１／０６８８４５号 国際公開第２０１３／０６８９４６号 米国特許第７９９９０８３号明細書 国際公開第２０１４／０５７６８７号 国際公開第２０１４／０６１２７７号 国際公開第２０１５／０９８０９９号 国際公開第２０１５／１１５０９１号 国際公開第２０１５／１４６１３２号 国際公開第２０１５／１５５９７６号 国際公開第２０１５／１５５９９８号
Ohmachi T, et al., Clin. Cancer Res., 12(10), 3057-3063 (2006). Muhlmann G, et al., J. Clin. Pathol., 62(2), 152-158 (2009). Fong D, et al., Br. J. Cancer, 99(8), 1290-1295 (2008). Fong D, et al., Mod. Pathol., 21(2), 186-191 (2008). Ning S, et al., Neurol. Sci., 34(10), 1745-1750 (2013). Wang J, et al., Mol. Cancer Ther., 7(2), 280-285 (2008). Gray J. E., et al. Clin. Cancer Res. 23(19), 5711-5719 (2017) Ducry, L., et al., Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13. Alley, S. C., et al., Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537. Damle N. K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452. Senter P. D., et al., Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637. Howard A. et al., J Clin Oncol 29: 398-405. Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research (2016) 22(20), 5097-5108. Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046. Doi T, et al., Lancet Oncol 2017; 18: 1512-22. Takegawa N, et al., Int. J. Cancer: 141, 1682-1689 (2017) Murai J, et al., Mol. Cell 69(3), 371-384 (2018) Zoppoli G, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 109(37):15030-15035 (2012) Barretina J, et al., Nature 483(7391), 603-607 (2012) Van Den Borg R, et al., Expert Rev. Anticancer Ther., 19 (6), 461-471 (2019) Pietanza MC, et al., J, Clin. Oncol. 36 (23), 2386-2394 (2018)
　本発明は、がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する際に、ｍＲＮＡレベルでの遺伝子発現量を指標として投与対象を同定する方法に係わる。
本発明者らは、ｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子のｍＲＮＡレベルの発現量を組み合わせることによって、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を、より精度高く同定可能であることを見出して、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は、以下の各項目を含むが、これらに限定されない。
［１］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価する工程；
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
４）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［２］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［３］がんに罹患したと診断されたヒト患者から取得した生体試料から、ＲＮＡシーケンシングによってｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が測定され、これが特定の値を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［１］又は［２］に記載の方法。
［４］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，　８．０，　８．１，　８．２，　８．３，　８．４，　８．５，　８．６，　８．７，　８．８，　８．９，及び９．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］に記載の方法。
［５］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］又は［４］に記載の方法。
［６］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［５］のいずれか一つに記載の方法。
［７］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［６］のいずれか一つに記載の方法。
［８］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［７］のいずれか一つに記載の方法。
［９］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、７．０，　７．５，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［７］のいずれか一つに記載の方法。
［１０］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が７．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［９］に記載の方法。
［１１］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が７．５を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［９］に記載の方法。
［１２］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が８．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［９］に記載の方法。
［１３］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０，　１．１，　１．２，　１．３，　１．４，　１．５，　１．６，　１．７，　１．８，　１．９，　２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，　３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［１２］のいずれか一つに記載の方法。
［１４］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０，　１．１，　１．２，　１．３，　１．４，　１．５，　１．６，　１．７，　１．８，　１．９，　２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［１３］のいずれか一つに記載の方法。
［１５］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［１４］のいずれか一つに記載の方法。
［１６］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０、２．０及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［３］乃至［１４］のいずれか一つに記載の方法。
［１７］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［１６］に記載の方法。
［１８］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［１６］に記載の方法。
［１９］ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［１６］に記載の方法。
［２０］がんに罹患したと診断されたヒト患者から取得した生体試料から、ＲＮＡシーケンシングによってｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が測定され、これが特定の値を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［１］又は［２］に記載の方法。
［２１］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０．　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［２０］に記載の方法。
［２２］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，及び７．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［２０］又は［２１］に記載の方法。
［２３］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が、６．０，又は７．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［２０］又は［２１］に記載の方法。
［２４］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が６．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［２２］に記載の方法。
［２５］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が７．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［２２］に記載の方法。
［２６］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，　３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［２０］乃至［２５］のいずれか一つに記載の方法。
［２７］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［２０］乃至［２６］のいずれか一つに記載の方法。
［２８］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０，又は３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［２２］乃至［２６］のいずれか一つに記載の方法。
［２９］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［２８］に記載の方法。
［３０］ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［２８］に記載の方法。
［３１］がんに罹患したと診断されたヒト患者から取得した生体試料から、ＥｄｇｅＳｅｑ　Ａｓｓａｙによってｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が測定され、これが特定の値を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［１］又は［２］に記載の方法。
［３２］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が、１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，　１４．０，　１４．１，　１４．２，　１４．３，　１４．４，　１４．５，　１４．６，　１４．７，　１４．８，　１４．９，及び１５．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３１］に記載の方法。
［３３］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が、１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，及び１４．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３１］又は［３２］に記載の方法。
［３４］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が、１２．０，　１３．０，　又は１４．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３１］又は［３２］に記載の方法。
［３５］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３４］に記載の方法。
［３６］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３４］に記載の方法。
［３７］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１４．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、［３４］に記載の方法。
［３８］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０，　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，及び１３．５からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［３１］乃至［３７］のいずれか一つに記載の方法。
［３９］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　及び１２．５からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［３１］乃至［３８］のいずれか一つに記載の方法。
［４０］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５，　１２．０，　及び１２．５からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［３１］乃至［３８］のいずれか一つに記載の方法。
［４１］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［４０］に記載の方法。
［４２］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［４０］に記載の方法。
［４３］ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１２．５を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、［４０］に記載の方法。
［４４］生体試料が腫瘍試料を含む、［１］乃至［４３］のいずれか一つに記載の方法。
［４５］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬が抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体である、［１］乃至［４４］のいずれか一つに記載の方法。
［４６］抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体が、次式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
（式中、Ａは抗ｈＴＲＯＰ２抗体との結合位置を示す）
で示される薬物リンカーと、抗ｈＴＲＯＰ２抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体薬物複合体である、［４５］に記載の方法。
［４７］抗ｈＴＲＯＰ２抗体が、配列番号１においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖からなる抗体である、［４６］に記載の方法。
［４８］抗ｈＴＲＯＰ２抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、［４７］に記載の方法。
［４９］薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２から８個の範囲である［４６］乃至［４８］のいずれか一つに記載の方法。
［５０］薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が３．５から４．５個の範囲である［４６］乃至［４９］のいずれか一つに記載の方法。
［５１］抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体が、Ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ　Ｇｏｖｉｔｅｃａｎ　（ＩＭＭＵ－１３２）である、［４５］に記載の方法。
［５２］がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、子宮頸がん、子宮体がん、頭頸部がん、食道がん、胆道がん、甲状腺がん、リンパ腫、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、及び／又は多発性骨髄腫である［１］乃至［５１］に記載の方法。
さらに、本発明は以下の項目も含む。なお、［３］乃至［５２］の要素又は要件は、以下の発明についても適用することが可能である。
［５３］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［５４］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［５５］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
３）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［５６］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［５７］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価する工程；
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現得量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
４）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［５８］がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；
３）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現得量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
４）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
を含む方法。
［５９］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価し；
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価し；　さらに
４）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
［６０］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価し；　さらに
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
［６１］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価し、；　さらに
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
［６２］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価し；　さらに
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
［６３］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価し；　及び
３）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
［６４］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価し；　さらに
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
［６５］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価し；
３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現得量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価し；　さらに
４）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
［６６］抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与することを含むがんの治療方法であって：
１）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得し；
２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価し；
３）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現得量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価し；　さらに
４）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として選択する；
ことを含む方法。
本発明の効果
　抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定することによって、薬効の期待できる患者を選択して医薬を投与することができる。
ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号１）を示す。 ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号２）を示す。 ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体重鎖のＣＤＲＨ１配列（配列番号３）、ＣＤＲＨ２配列（配列番号４）、及びＣＤＲＨ３配列（配列番号５）、並びにヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体軽鎖のＣＤＲＬ１配列（配列番号６）、ＣＤＲＬ２配列（配列番号７）、及びＣＤＲＬ３配列（配列番号８）を示す。 ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＦａＤｕ細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を示した図である。 ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＮＣＩ－Ｈ１７８１細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を示した図である。 ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＣａｌｕ－３細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を示した図である。 ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を示した図である。 ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＨＣＣ３８細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を示した図である。
定義
　本明細書において、他に言及の無い限り、数値について言及するとき、「約」は、示された数値の±１０％を意味する。
　本明細書において、「がん」と「腫瘍」は、相互置換可能に用いられる。
　本明細書において、「遺伝子」という語には、ＤＮＡのみならずそのｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、及びそのｃＲＮＡも含まれる。
　本明細書において、「ポリヌクレオチド」という語は核酸と同じ意味で用いており、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プローブ、オリゴヌクレオチド、及びプライマーも含まれる。
　本明細書においては、「ポリペプチド」と「蛋白質」は区別せずに用いている。
　本明細書において、「細胞」には、動物個体内の細胞、培養細胞も含んでいる。
　本明細書において、「ｈＴＲＯＰ２」はＮＭ＿００２３５３（ＮＣＢＩ）のアクセション番号で同定された遺伝子にコードされたヒト蛋白質、及びそのアレル変異体を意味し、ＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）で同定された蛋白質を含む。
　本明細書において、「ＳＬＦＮ１１」は、ＮＭ＿１５２２７０（ＮＣＢＩ）のアクセション番号で同定された遺伝子にコードされたヒト蛋白質、及びそのアレル変異体を意味し、ＮＰ＿６８９４８３（ＮＣＢＩ）で同定された蛋白質を含む。
　本明細書中、「抗体の抗原結合断片」とは、抗原との結合活性を有する抗体の部分断片を意味しており、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｉａｂｏｄｙ、線状抗体及び抗体断片より形成された多特異性抗体等を含む。また、Ｆ（ａｂ’）２を還元条件下で処理した抗体の可変領域の一価の断片であるＦａｂ’も抗体の抗原結合断片に含まれる。但し、抗原との結合能を有している限りこれらの分子に限定されない。また、これらの抗原結合断片には、抗体蛋白質の全長分子を適当な酵素で処理したもののみならず、遺伝子工学的に改変された抗体遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された蛋白質も含まれる。
　本明細書における「ＣＤＲ」とは、相補性決定領域（ＣＤＲ：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｔａｒｉｔｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ）を意味する。抗体分子の重鎖及び軽鎖にはそれぞれ３箇所のＣＤＲがあることが知られている。ＣＤＲは、超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ　ｄｏｍａｉｎ）とも呼ばれ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域内にあって、一次構造の変異性が特に高い部位であり、重鎖及び軽鎖のポリペプチド鎖の一次構造上において、それぞれ３ヶ所に分離している。本明細書中においては、抗体のＣＤＲについて、重鎖のＣＤＲを重鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３と表記し、軽鎖のＣＤＲを軽鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３と表記する。これらの部位は立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。
　本明細書において、治療に対する「応答」は、治療される腫瘍に関して、当該腫瘍が、（ａ）増殖の遅延、（ｂ）増殖の停止又は（ｃ）退縮を示すことを意味する。
抗ｈＴＲＯＰ２抗体
　本発明において使用されるｈＴＲＯＰ２に対する抗体は、この分野で通常実施される方法を用いて、ｈＴＲＯＰ２又はｈＴＲＯＰ２のアミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドを動物に免疫し、生体内に産生される抗体を採取、精製することによって得ることができる。抗原となるＴＲＯＰ２の生物種はヒトに限定されず、マウス、ラット等のヒト以外の動物に由来するＴＲＯＰ２を動物に免疫することもできる。この場合には、取得された異種ＴＲＯＰ２に結合する抗体とｈＴＲＯＰ２との交差性を試験することによって、ヒトの疾患に適用可能な抗体を選別できる。
　また、公知の方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６，ｐ．４９５－４９７；Ｋｅｎｎｅｔ，Ｒ．ｅｄ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｐ．３６５－３６７，Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８０））に従って、ｈＴＲＯＰ２に対する抗体を産生する抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合させることによってハイブリドーマを樹立し、モノクローナル抗体を得ることもできる。
　なお、抗原となるｈＴＲＯＰ２はｈＴＲＯＰ２遺伝子を遺伝子操作によって宿主細胞に発現させることによって得ることができる。具体的には、ｈＴＲＯＰ２遺伝子を発現可能なベクターを作製し、これを宿主細胞に導入して該遺伝子を発現させ、発現したＴＲＯＰ２を精製すればよい。また、上記の遺伝子操作によるｈＴＲＯＰ２発現細胞、或はｈＴＲＯＰ２を発現している細胞株をｈＴＲＯＰ２蛋白質として使用することも可能である。
　本発明の抗体には、上記ｈＴＲＯＰ２に対するモノクローナル抗体に加え、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ）抗体、ヒト化（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）抗体、ヒト抗体等も含まれる。これらの抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。
　ヒト化抗体の一例として、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列及び配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列からなるヒト化抗体を挙げることができるが、これに限定されるものではない。
　例えば、国際公開第２００８/１４４８９１号、国際公開第２０１１/１４５７４４号、国際公開第２０１１/１５５５７９号、国際公開第２０１３/０７７４５８号、国際公開第２００３/０７４５６６号、国際公開第２０１１/０６８８４５号、国際公開第２０１３/０６８９４６号、米国特許第７９９９０８３号明細書、又は国際公開第２０１５／０９８０９９号に記載の各種の抗ｈＴＲＯＰ２抗体が、本発明において使用可能である。
　なお、哺乳類培養細胞で生産される抗体の重鎖のカルボキシル末端のリシン残基が欠失することが知られている（Ｔｓｕｂａｋｉ　ｅｔ．ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ，１３９－１４７，２０１３）。しかし、この重鎖配列の欠失は、抗体の抗原結合能及びエフェクター機能（補体の活性化や抗体依存性細胞障害作用など）には影響を及ぼさない。従って、本発明においては、上記の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失した抗体も使用可能である。
　本発明において使用される抗ｈＴＲＯＰ２抗体には、該抗体の抗原結合断片も含まれる。抗体の抗原結合断片としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は重鎖及び軽鎖のＦｖを適当なリンカーで連結させたシングルチェインＦｖ（ｓｃＦｖ）、ｄｉａｂｏｄｙ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、線状抗体、及び抗体断片より形成された多特異性抗体などを挙げることができる。また、Ｆ（ａｂ’）２を還元条件下で処理した抗体の可変領域の一価の断片であるＦａｂ’も抗体の断片に含まれる。
　本発明において使用される抗ｈＴＲＯＰ２抗体には、抗体の修飾体も含まれる。当該修飾体とは、本発明の抗体に化学的又は生物学的な修飾が施されてなるものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ－結合又はＯ－結合炭水化物鎖の化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、Ｎ－結合又はＯ－結合への糖鎖付加、Ｎ末又はＣ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによってＮ末にメチオニン残基が付加したもの等が含まれる。また、本発明において使用される抗ｈＴＲＯＰ２抗体には、抗ｈＴＲＯＰ２抗体又はｈＴＲＯＰ２の検出又は単離を可能にするために標識されたもの、例えば、酵素標識体、蛍光標識体、アフィニティ標識体もかかる修飾物が含まれる。この様な抗ｈＴＲＯＰ２抗体の修飾物は、抗体の安定性及び血中滞留性の改善、抗原性の低減、抗ｈＴＲＯＰ２抗体又はｈＴＲＯＰ２の検出又は単離等に有用である。
　また、本発明において使用される抗ｈＴＲＯＰ２抗体に結合している糖鎖修飾を調節すること（グリコシル化、脱フコース化等）によって、抗体依存性細胞傷害活性を増強することが可能である。抗体の糖鎖修飾の調節技術としては、国際公開第１９９９／５４３４２号、同２０００／６１７３９号、同２００２／３１１４０号等が知られているが、これらに限定されるものではない。本発明において使用される抗ｈＴＲＯＰ２抗体には当該糖鎖修飾を調節された抗体も含まれる。
その他の抗体
　本発明の方法は、抗ｈＴＲＯＰ２抗体以外の抗原に結合する抗体を含有する医薬にも使用することが可能である。本発明で使用される抗ｈＴＲＯＰ２抗体以外の抗体に特に制限はないが、例えば、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ９８抗体、抗ＤＲ５抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＰＨＡ２抗体、抗ＦＧＦＲ２抗体、抗ＦＧＦＲ４抗体、抗ＦＯＬＲ１抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、及び抗Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ抗体、抗Ａ３３抗体、抗ＣａｎＡｇ抗体、抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体、抗Ｇ２５０抗体、抗ＭＵＣ１抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎ抗体、抗Ｔｅｎａｓｃｉｎ－Ｃ抗体、抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体、抗ＧＰＲ２０抗体、及び抗ＣＤＨ６抗体を挙げることができ、好適には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＧＰＲ２０抗体、及び抗ＣＤＨ６抗体を挙げることができ、より好適には、抗ＨＥＲ２抗体を挙げることができる。各抗体は、抗ｈＴＲＯＰ２抗体と同様の方法で取得することが可能である。また、各抗体は、抗ｈＴＲＯＰ２抗体と同様に、抗体が通常有する普遍的な性質を有している。
　本発明において、「抗ＨＥＲ２抗体」とは、ＨＥＲ２（Ｈｕｍａｎ　Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｔｙｐｅ　２；　ＥｒｂＢ－２）に特異的に結合し、好ましくは、ＨＥＲ２と結合することによってＨＥＲ２発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。抗ＨＥＲ２抗体としては、例えば、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（米国特許第５８２１３３７号）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（国際公開第０１／００２４５号）を挙げることができ、好適にはトラスツズマブを挙げることができる。本発明において、「抗ＨＥＲ３抗体」とは、ＨＥＲ３（Ｈｕｍａｎ　Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｔｙｐｅ　３；　ＥｒｂＢ－３）に特異的に結合し、好ましくは、ＨＥＲ３と結合することによってＨＥＲ３発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。抗ＨＥＲ３抗体としては、例えば、パトリツマブ（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ；　Ｕ３－１２８７）、Ｕ１－５９（国際公開第２００７／０７７０２８号）、ＭＭ－１２１（Ｓｅｒｉｂａｎｔｕｍａｂ）、国際公開２００８／１００６２４号記載の抗ＥＲＢＢ３抗体、ＲＧ－７１１６（Ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）、及びＬＪＭ－７１６（Ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）を挙げることができ、好適には、パトリツマブ、及びＵ１－５９を挙げることができる。
　本発明において、「抗Ｂ７－Ｈ３抗体」とは、Ｂ７－Ｈ３（Ｂ　ｃｅｌｌ　ａｎｔｉｇｅｎ　＃７　ｈｏｍｏｌｏｇ　３；　ＰＤ－Ｌ３；　ＣＤ２７６）に特異的に結合し、好ましくは、Ｂ７－Ｈ３と結合することによってＢ７－Ｈ３発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。抗Ｂ７－Ｈ３抗体としては、例えば、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４（国際公開第２０１４／０５７６８７号）を挙げることができる。
　本発明において、「抗ＧＰＲ２０抗体」とは、ＧＰＲ２０（Ｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　２０）に特異的に結合し、好ましくは、ＧＰＲ２０と結合することによってＧＰＲ２０発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。抗ＧＰＲ２０抗体としては、例えば、ｈ０４６－Ｈ４ｅ／Ｌ７（国際公開第２０１８／１３５５０１号）を挙げることができる。
　本発明において、「抗ＣＤＨ６抗体」とは、ＣＤＨ６（Ｃａｄｈｅｒｉｎ－６）に特異的に結合し、好ましくは、ＣＤＨ６と結合することによってＣＤＨ６発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。抗ＣＤＨ６抗体としては、例えば、Ｈ０１Ｌ０２（国際公開第２０１８／２１２１３６号）を挙げることができる。
抗体薬物複合体
　本発明において使用される抗体薬物複合体は、式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
（式中、Ａは抗体との結合位置を示す）
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体薬物複合体である。
　本発明においては、抗体薬物複合体のうち、リンカー及び薬物からなる部分構造を「薬物リンカー」と称する。この薬物リンカーは抗体の鎖間のジスルフィド結合部位（２箇所の重鎖－重鎖間、及び２箇所の重鎖－軽鎖間）において生じたチオール基（言い換えれば、システイン残基の硫黄原子）に結合している。
　本発明の薬物リンカーは、トポイソメラーゼＩ阻害剤であるエキサテカン（ＩＵＰＡＣ名：（１Ｓ，９Ｓ）－１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－１，２，３，９，１２，１５－ヘキサヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０Ｈ，１３Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１０，１３－ジオン、（化学名：（１Ｓ，９Ｓ）－１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）－ジオンとして表すこともできる））を構成要素としている。エキサテカンは、式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
で示される、抗腫瘍効果を有するカンプトテシン誘導体である。
　本発明において使用される抗体薬物複合体は、次式で示すこともできる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
　ここで、薬物リンカーは抗体とチオエーテル結合によって結合している。また、ｎはいわゆる平均薬物結合数（ＤＡＲ；　Ｄｒｕｇ－ｔｏ－Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｒａｔｉｏ）と同義であり、１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数を示す。本発明において使用される抗体薬物複合体の１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数は、０～８の範囲で調節可能であるが、好適には２から８である。抗ｈＴＲＯＰ２抗体の場合の平均結合数は、より好適には３から５であり、さらにより好適には３．５から４．５である。
　本発明で使用される抗体薬物複合体は、がん細胞内に移行した後にリンカー部分が切断され、式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
で表される化合物を遊離する。
　上記化合物は、本発明で使用される抗体薬物複合体の抗腫瘍活性の本体であると考えられ、トポイソメラーゼＩ阻害作用を有することが確認されている（Ｏｇｉｔａｎｉ　Ｙ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　２０１６，　Ｏｃｔ　１５；２２（２０）：５０９７－５１０８，　Ｅｐｕｂ　２０１６　Ｍａｒ　２９）。上記化合物を遊離する抗体薬物複合体であれば、抗体の認識する抗原をｈＴＲＯＰ２に限定することなく、本発明の方法を適用することが可能である。
　トポイソメラーゼＩは、ＤＮＡの単鎖の切断と再結合を行うことによりＤＮＡの高次構造を変換しＤＮＡの合成に関与する酵素である。従って、トポイソメラーゼＩ阻害作用を有する薬剤は、ＤＮＡの合成を阻害することにより、細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成期）で細胞分裂を停止させ、アポトーシスによる細胞死を誘導することにより、がん細胞の増殖を抑制することができる。
　なお、本発明で使用される抗体薬物複合体は、バイスタンダー効果を有することも知られている（Ｏｇｉｔａｎｉ　Ｙ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　（２０１６）　１０７，　１０３９－１０４６）。このバイスタンダー効果は、本発明で使用される抗体薬物複合体が、標的発現がん細胞に内在化した後、上記化合物が、標的を発現していない近傍のがん細胞に対しても抗腫瘍効果を及ぼすことにより発揮される。
　本発明において使用される抗体薬物複合体の製造に使用される薬物リンカー中間体は、次式で示される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　上記の薬物リンカー中間体は、Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミド、という化学名で表すことができ、国際公開第２０１５／０９８０９９号等の記載を参考に製造することができる。
　本発明において使用される抗体薬物複合体は、前述の薬物リンカー中間体と、チオール基（又はスルフヒドリル基とも言う）を有する抗体を反応させることによって製造することができる。
　スルフヒドリル基を有する抗体は、当業者周知の方法で得ることができる（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，　Ｇ．　Ｔ，　Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，　ｐｐ．５６－１３６，　ｐｐ．４５６－４９３，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ（１９９６））。例えば、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）等の還元剤を、抗体内鎖間ジスルフィド１個当たりに対して０．３乃至３モル当量用い、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤を含む緩衝液中で、抗体と反応させることで、抗体内鎖間ジスルフィドが部分的又は完全に還元されたスルフヒドリル基を有する抗体を得ることができる。
　さらに、スルフヒドリル基を有する抗体１個あたり、２乃至２０モル当量の薬物リンカー中間体を使用して、抗体１個当たり２個乃至８個の薬物が結合した抗体薬物複合体を製造することができる。
　製造した抗体薬物複合体の抗体一分子あたりの平均薬物結合数は、例えば、２８０ｎｍ及び３７０ｎｍの二波長における抗体薬物複合体とそのコンジュゲーション前駆体のＵＶ吸光度を測定することにより算出する方法（ＵＶ法）や、抗体薬物複合体を還元剤で処理し得られた各フラグメントをＨＰＬＣ測定により定量し算出する方法（ＨＰＬＣ法）により行うことができる。
　抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーション、及び抗体薬物複合体の抗体一分子あたりの平均薬物結合数の算出は、国際公開第２０１５／０９８０９９号、及び国際公開第２０１７／００２７７６号等の記載を参考に実施することができる。
　本発明で使用される、上記の薬物リンカーを有する抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体としては、国際公開第２０１５／０９８０９９号に記載の抗体薬物複合体を挙げることができる。なお、該国際公開に記載の抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体において好ましいものは、配列表の配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１（ＴＡＧＭＱ）、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２（ＷＩＮＴＨＳＧＶＰＫＹＡＥＤＦＫＧ）、及び配列番号２５に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３（ＳＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ）を重鎖可変領域に含有する重鎖アミノ酸配列、並びに配列表の配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１（ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ）、配列番号７に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２（ＳＡＳＹＲＹＴ）、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３（ＱＱＨＹＩＴＰＬＴ）を軽鎖可変領域に含有する軽鎖アミノ酸配列からなる抗体を含有している。該国際公開に記載の抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体において、さらに好ましいものは、配列番号１に示されるアミノ酸配列の２０乃至１４０番目のアミノ酸残基からなる重鎖可変領域を含有する重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２に示されるアミノ酸配列の２１乃至１２９番目のアミノ酸残基からなる軽鎖可変領域を含有する軽鎖アミノ酸配列からなる抗体を含有している。該国際公開に記載の抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体において特に好ましいものは、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列及び配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列からなる抗体を含有している。
　なお、哺乳類培養細胞で生産される抗体の重鎖のカルボキシル末端のリシン残基が欠失することが知られている。従って、上記の抗体薬物複合体は、重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失した抗体も含有している。
　但し、含有される抗体がｈＴＲＯＰ２を認識できる限り、本発明で使用される抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、上記の特定の薬物リンカーを有するものに限定されない。このような抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体の実例としては、Ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ　Ｇｏｖｉｔｅｃａｎ　（ＩＭＭＵ－１３２）を挙げることが可能である。また、国際公開第２００３/０７４５６６号、国際公開第２０１１/０６８８４５号、国際公開第２０１３/０６８９４６号、又は米国特許第７９９９０８３号明細書に記載の抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体も、本発明で使用することが可能である。
生体試料
　対象、例えばがんと診断された対象から採取した生体試料がＲＮＡの供給源として使用され、当該試料中のＲＮＡレベルでの遺伝子発現のレベルが決定され得る。当該生体試料は、例えば、血液、例えば全血又は血液由来物、例えばエキソソーム、組織、細胞及び又は循環系組織細胞を含み得る。幾つかの態様において、当該生体試料は、腫瘍から取り出されても良い。
　エキソソームは細胞から分泌される脂質二重膜からなる小胞である。１９８０年代に発見されてから現在までの多くの研究により、細胞のあいだを移動しさまざまな分子を輸送することがわかってきた。その形態的な特徴により、タンパク質ばかりでなく、核酸、糖質、脂質など、多くの生理活性分子を含む。また、エキソソームはｍｉＲＮＡ及びｍＲＮＡを含み、それらは細胞のあいだを輸送されることが明らかにされた。従って、本発明が適用される生体試料として、エキソソームを選択することも可能である。
　生体試料は、静脈穿刺等の公知の手段により、又は公知の腫瘍生検装置や手順を用いて、取得されてもよい。内視鏡生検、切除生検、切開生検、微細針生検、パンチ生検、切削生検及び皮膚生検が、腫瘍試料を取得するために当業者が使用し得る認識される医学的手順の例である。生体試料は、遺伝子発現を測定するための十分なＲＮＡ、又は薄片を提供するのに十分な大きさを有するべきである。
　幾つかの態様において、本願方法は、自家組織試料を提供する、又は自家組織試料を採取することに同意して、がんと診断されたヒト対象におけるｍＲＮＡレベルでの遺伝子発現を評価する工程を含む。
　前記生体試料は、遺伝子発現又は量の測定を可能とする任意の形態であってもよい。即ち、当該試料は、ＲＮＡ抽出又は薄層調製に充分でなければならない。従って、当該試料は、新鮮で、適切な低温技術を用いて保存され、又は非低温技術を用いて保存され得る。例えば、臨床生検試料を操作する標準的なプロセスは、組織試料をホルマリン中で固定し、それをパラフィン中に包埋する。この形態の試料は、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織として通常知られている。その後の解析のための組織調製の適切な技術は、当業者に周知である。
遺伝子発現
　本願において、生体試料中の遺伝子発現レベルの決定又は測定は、適切な方法を用いて実施される。幾つかのそのような方法は、当該技術分野で周知である。例えば、遺伝子発現の決定は、試料中のＲＮＡ、例えばｍＲＮＡのレベル又は量を測定することによってなされる。
　ＰＣＲ又はマイクロアレイのプライマー及び／又はプローブは、ｍＲＮＡの３’末端上に設計される。ＲＮＡ単離又はｃＤＮＡ合成の実験プロセスの過程で高い保存性（安定性）をもたらすと考えられるからである。前記プローブは、特定の形態の転写バリアントを検出するように、所望の配列に基づいて設計され得る。適切な検出方法の例を以下に示すが、これらに限定されるものではない。
ＲＮＡ解析
　公知のマイクロアレイ解析や、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、ｍＲＮＡレベルでの遺伝子発現のレベルを決定する方法の例である。幾つかの態様において、ＲＮＡは、細胞、腫瘍又は組織から、標準的なプロトコールを使用して抽出される。他の態様において、ＲＮＡ解析は、ＲＮＡ単離を要しない技術を使用して実施される。
　組織サンプルから真核生物ｍＲＮＡ（すなわち、ポリ（ａ）ＲＮＡ）を迅速且つ効率的に抽出するための方法は、十分に確立されており、当業者に公知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，１９９７，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｏｆ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓを参照のこと。上記組織サンプルは、新鮮、凍結、又は固定されパラフィン包埋された（ＦＦＰＥ）、臨床研究腫瘍標本であり得る。一般に、新鮮な組織サンプル又は凍結組織サンプルから単離されたＲＮＡは、ＦＦＰＥサンプル由来のＲＮＡよりフラグメント化が少ない傾向にある。しかし、腫瘍材料のＦＦＰＥサンプルは、より容易に入手可能であり、ＦＦＰＥサンプルは、本発明の方法における使用のためのＲＮＡの適切な供給源である。ＲＴ－ＰＣＲによる遺伝子発現プロファイリングのためのＲＮＡ供給源としてのＦＦＰＥサンプルの考察については、例えば、Ｃｌａｒｋ－Ｌａｎｇｏｎｅら，２００７，ＢＭＣ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ　８：２７９を参照されたい。また、Ｄｅ　Ａｎｄｒｅｕｓら，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１８：４２０４４；及びＢａｋｅｒら，米国特許出願公開第２００５／００９５６３４号を参照されたい。
　ＲＮＡ抽出及び調製についての業者の説明書付きの市販キットの使用は、一般的である。種々のＲＮＡ単離製品及び完全なキットの商業的業者としては、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）及びＥｘｉｑｏｎ（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）を挙げることができる。
　一般に、ＲＮＡ単離は、組織／細胞破壊で始まる。組織／細胞破壊の間に、ＲＮａｓｅによるＲＮＡ分解を最小限にすることが望ましい。ＲＮＡ単離プロセスの間にＲＮａｓｅ活性を制限する１つのアプローチは、上記細胞が破壊されたら直ぐに、変性剤を、細胞内容物と接触した状態におくことを確実にすることである。別の一般的な慣行は、ＲＮＡ単離プロセスにおいて１種以上のプロテアーゼを含めることである。必要に応じて、新鮮な組織サンプルは、集められたら直ぐに、室温でＲＮＡ安定化溶液中に浸漬される。上記安定化溶液は、上記細胞に迅速に浸透し、４℃での貯蔵、その後の単離のために、上記ＲＮＡを安定化する。１つのこのような安定化溶液は、ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）として市販されている。
　いくつかのプロトコールにおいて、全ＲＮＡは、塩化セシウム密度勾配遠心分離によって、破壊された腫瘍材料から単離される。一般に、ｍＲＮＡは、全細胞ＲＮＡのうちの約１％～５％を構成する。固定化オリゴ（ｄＴ）（例えば、オリゴ（ｄＴ）セルロース）は、ｍＲＮＡを、リボソームＲＮＡ及びトランスファーＲＮＡから分離するために一般に使用される。単離後に貯蔵される場合、ＲＮＡは、ＲＮａｓｅを含まない条件下で貯蔵されなければならない。単離されたＲＮＡの安定な貯蔵のための方法は、当該分野で公知である。ＲＮＡを安定に貯蔵するための種々の市販の製品が、利用可能である。
マイクロアレイ
　ｍＲＮＡ発現レベルは、従来のＤＮＡマイクロアレイ発現プロファイリング技術を使用して決定（例えば、測定）され得る。ＤＮＡマイクロアレイは、固体表面又は支持層（例えば、ガラス、プラスチック又はシリコン）に固定化した特定のＤＮＡセグメント又はプローブの集まりであり、各特定のＤＮＡセグメントは、アレイにおいて既知の位置を占有する。通常は、ストリンジェントな条件下での標識されたＲＮＡのサンプルとのハイブリダイゼーションは、上記アレイにおける各プローブに対応するＲＮＡ分子の検出及び定量を可能にする。非特異的に結合したサンプル材料を除去するためのストリンジェントな洗浄後、上記マイクロアレイは、共焦点レーザー顕微鏡又は他の適切な検出法によって、スキャンされる。現代の市販のＤＮＡマイクロアレイ（しばしば、ＤＮＡチップとして公知）は、代表的には、数万のプローブを含み、従って、数万の遺伝子の発現を同時に測定し得る。このようなマイクロアレイは、本発明の実施において使用され得る。あるいは、特定の遺伝子の発現を測定するために必要とされる程度の数のプローブと、必要なコントロール又は標準（例えば、データ正規化のため）とを含む特注チップが、本願方法の実施において使用され得る。
　データ正規化を促進するために、２色のマイクロアレイリーダーが使用され得る。２色（２チャネル）システムにおいて、サンプルは、第１の波長で発光する第１のフルオロフォアで標識される一方で、ＲＮＡ又はｃＤＮＡ標準は、異なる波長で発光する第２のフルオロフォアで標識される。例えば、Ｃｙ３（５７０ｎｍ）及びＣｙ５（６７０ｎｍ）は、しばしば、２色のマイクロアレイシステムにおいて一緒に使用される。
　ＤＮＡマイクロアレイ技術は、十分に発展されており、市販され、広く使用されている。従って、本願方法を実施するにおいて、当業者は、過度の実験なくして、生体マーカータンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定するために、マイクロアレイ技術を使用し得る。ＤＮＡマイクロアレイチップ、試薬（例えば、ＲＮＡ若しくはｃＤＮＡの調製、ＲＮＡ若しくはｃＤＮＡの標識に必要なもの、ハイブリダイゼーション溶液及び洗浄溶液）、機器（例えば、マイクロアレイリーダー）及びプロトコールは、当該分野で周知であり、種々の商業的供給元から市販される。マイクロアレイシステムの商業的業者としては、Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓａｎｔａ　Ｃｌａｒａ，ＣＡ）及びＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（Ｓａｎｔａ　Ｃｌａｒａ，ＣＡ）が挙げることができるが、他のアレイシステムも使用され得る。
定量的ＰＣＲ
　ｍＲＮＡのレベルは、従来の定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ－ＰＣＲ）技術を使用して測定され得る。ｑＲＴ－ＰＣＲの利点としては、感度、柔軟性、定量的正確性、配列の同一性の高いｍＲＮＡ間を識別する能力を挙げることができる。定量的ＰＣＲのために組織サンプルを加工処理することに関するガイダンスは、種々の供給元（例えば、ｑＲＴ－ＰＣＲについての装置及び試薬の製造業者及び業者）（例えば、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）及びＡｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ））から入手可能である。ｑＲＴ－ＰＣＲの自動運転のための機器及びシステムは、市販されており、多くの研究室において慣用的に使用されている。周知の商業的システムの例は、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　７９００ＨＴ　Ｆａｓｔ　Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃｉｔｙ，ＣＡ）である。
　いったん単離されたｍＲＮＡを手にしたら、ＲＴ－ＰＣＲによる遺伝子発現測定の第１の工程は、上記ｍＲＮＡテンプレートをｃＤＮＡへと逆転写することである。次いで、ｃＤＮＡは、ＰＣＲ反応において指数関数的に増幅させられる。２つの一般的に使用される逆転写酵素は、トリ骨髄芽球症ウイルス（ａｖｉｌｏ　ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ）逆転写酵素（ＡＭＶ－ＲＴ）及びモロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素（ＭＭＬＶ－ＲＴ）である。上記逆転写反応は、代表的には、特定のプライマー、ランダムヘキサマー、又はオリゴ（ｄＴ）プライマーで開始される（ｐｒｉｍｅｄ）。適切なプライマーは、市販されている（例えば、ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標）　ＲＮＡ　ＰＣＲキット（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ））。得られたｃＤＮＡ生成物は、その後のポリメラーゼ連鎖反応においてテンプレートとして使用され得る。
　上記ＰＣＲ工程は、熱安定性ＤＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼを使用して行われる。ＰＣＲシステムにおいて最も一般的に使用されるポリメラーゼは、Ｔｈｅｒｍｕｓ　ａｑｕａｔｉｃｕｓ（Ｔａｑ）ポリメラーゼである。ＰＣＲの選択性は、増幅について標的とされたＤＮＡ領域（すなわち、所望のタンパク質をコードする遺伝子から逆転写されたｃＤＮＡの領域）に相補的であるプライマーの使用から生じる。従って、本発明においてｑＲＴ－ＰＣＲが使用される場合、各マーカー遺伝子に特異的なプライマーは、上記遺伝子のｃＤＮＡ配列に基づく。商業的技術（例えば、ＳＹＢＲ（登録商標）ｇｒｅｅｎ又はＴａｑＭａｎ（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃｉｔｙ，ＣＡ））は、業者の説明書に従って使用され得る。ｍＲＮＡレベルは、ハウスキーピング遺伝子（例えば、β－アクチン又はＧＡＰＤＨ）のレベルを比較することによって、サンプル間でのローディングの差異について正規化され得る。ｍＲＮＡ発現のレベルは、任意の単一のコントロールサンプル（例えば、通常の非腫瘍組織又は細胞に由来するｍＲＮＡ）と比較して表され得る。あるいは、腫瘍サンプルのプール、若しくは腫瘍細胞株に由来するか、又は市販のコントロールｍＲＮＡのセットに由来するｍＲＮＡに対して表され得る。
　遺伝子の発現レベルのＰＣＲ分析に適切なプライマーセットは、過度の実験なくして、当業者によって設計及び合成され得る。
　あるいは、本発明を実施するためのＰＣＲプライマーセットは、商業的供給元（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）から購入され得る。ＰＣＲプライマーは、好ましくは、長さが約１７～２５ヌクレオチドである。プライマーは、融解温度（Ｔｍ）概算のための従来のアルゴリズムを使用して、特定のＴｍを有するように設計され得る。プライマー設計及びＴｍ概算のためのソフトウェアは、市販されており（例えば、Ｐｒｉｍｅｒ　ＥｘｐｒｅｓｓＴＭ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ））、インターネット上でも利用可能である（例えば、Ｐｒｉｍｅｒ３（Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ））。ＰＣＲプライマー設計の確立された原理を適用することによって、多数の異なるプライマーが、任意の所定の遺伝子の発現レベルを測定するために使用され得る。
ｑＮＰＡ
　幾つかの態様において、ＲＮＡ解析は、ＲＮＡ抽出又は単離を含まない技術を使用して実施される。そのような技術の一つは、ｑＮＰＡ（登録商標）の名称で市販されている（Ｈｉｇｈ　Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　Ｉｎｃ．，　Ｔｕｃｓｏｎ，　ＡＺ）、定量ヌクレアーゼ保護アッセイである。この技術は、解析する組織試料がＦＦＰＥ材料の形態である場合に有利であり得る。例えばＳｅｅ，　ｅ．ｇ．，　Ｒｏｂｅｒｔｓ　ｅｔ　ａｌ，　２００７，　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　８７：９７９－９９７を参照されたい。
ｎＣｏｕｎｔｅｒ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｓｙｓｔｅｍ
　ｎＣｏｕｎｔｅｒ（登録商標）は　ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社が開発したデジタル分子バーコード技術に基づいた分子をダイレクトにカウントするシステムであり、最大８００種類のＲＮＡやＤＮＡをシングルチューブで迅速且つ高精度に解析することが可能である。　ｎＣｏｕｎｔｅｒの解析では、標的分子の配列に特異的なバーコードを有するプローブ（Ｒｅｐｏｒｔｅｒ　Ｐｒｏｂｅ）と解析用カートリッジに固定するためのプローブ（Ｃａｐｔｕｒｅ　Ｐｒｏｂｅ）を標的の核酸とハイブリダイズさせ、蛍光スキャナーによりカートリッジの表面に固定化された各標的配列のカラーバーコードの並びをカウントする。例えば、Ｇｅｉｓｓ　Ｇ，　ｅｔ　ａｌ．，　２６：　３１７－２５　（２００８）．，　Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙを参照されたい。
ＨＴＧ　ＥｄｇｅＳｅｑ　Ａｓｓａｙｓ
　ＥｄｇｅＳｅｑ　は、ＨＴＧ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社が開発した計測機器、消耗品、ソフトウェアの分析からなる、腫瘍プロファイリング、分子診断テスト及びバイオマーカーの開発を含むサンプルプロファイリングアプリケーションである。生物学的サンプルにヌクレアーゼ保護化学を用いて遺伝子及び遺伝子活性の分子プロファイリングを自動化する。例えば、Ｍａｒｔｅｌ　Ｒ．，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｓｓａｙ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ　Ｔｅｃｈｎｏｌ．　２００２　Ｎｏｖ；１（１）：６１－７１を参照されたい。上記により個々の遺伝子の発現量がカウント値として得られる。カウント値はサンプル間での分布のバラツキを補正する正規化と呼ばれる作業を経て、解析に使用される。具体的な正規化の手法としては、Ｍｅｄｉａｎ　ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ法を挙げることができる。Ｍｅｄｉａｎ　ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ法では、下記に示す方法で各サンプルについてＳｃａｌｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒを求め、遺伝子の発現量をＳｃａｌｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒで割り返すことで補正を行う。i番目のサンプル（Ｓａｍｐｌｅｉ）のｇ番目の遺伝子（Ｇｅｎｅｇ）について、全てのサンプルの発現量（カウント値）の幾何平均を求め、Ｇｅｎｅｇの発現量をその幾何平均で割った値をＳａｍｐｌｅｉのＧｅｎｅｇに対するＳｃａｌｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ（Ｓｉｇ）とする。Ｓｃａｌｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒを全ての遺伝子について求めた後に、Ｓａｍｐｌｅｉ内でのＳｉｇの中央値をＳａｍｐｌｅｉのＳｃａｌｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ（Ｓｉ）とする。最後に、Ｓａｍｐｌｅｉの全ての遺伝子発現量をＳｉで割り返した値をＭｅｄｉａｎ　Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ　Ｃｏｕｎｔ　（ＭＮＣ）として得る。本手法の詳細については、例えば（Ａｎｄｒｅｓ，　Ｓ．　ａｎｄ　Ｈｕｂｅｒ　Ｗ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｂｉｏｌ．　２０１０；１１（１０）：Ｒ１０６）を参照されたい。
次世代ＲＮＡシーケンシング
　従来のサンガー法とは異なり、高度な並列化処理を行うことで短時間且つ低コストで莫大な配列情報を取得できる次世代シーケンス技術を用いたＲＮＡシーケンシング解析であり、トランスクリプトーム全体の発現をより高感度且つ高精度に解析することができる。現在汎用されている代表的な次世代シーケンス技術としては、イルミナ社（Ｉｌｌｕｍｉｎａ　Ｉｎｃ．）の１塩基合成反応シーケンス技術（Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｂｙ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）や、サーモフィッシャーサイエンティフィック社（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｉｎｃ．）のイオン半導体シーケンス技術（Ｉｏｎ　Ｔｏｒｒｅｎｔ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）等を挙げることができる。各技術の詳細は、例えばＢｕｅｒｍａｎｓ　ＨＰ．，　ｅｔ　ａｌ．　Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ．　２０１４　Ｏｃｔ；１８４２（１０）：１９３２－１９４１を参照されたい。また、上記の次世代シーケンス技術を用いて得られた個々の配列情報（リード）は、それぞれどの遺伝子の転写物に由来しているものかを同定するマッピング作業や、各転写物にマッピングされたリード数を、転写物の長さや当該解析で得られた総リード数等により補正する正規化と呼ばれる作業を経て、解析に使用される。具体的な正規化の手法としては、例えば転写物の長さを１ｋｂ、総リード数を１００万とし、各遺伝子の遺伝子長で補正されたリード数であるｒｅａｄｓ　ｐｅｒ　ｋｉｌｏｂａｓｅ　ｏｆ　ｅｘｏｎ　ｐｅｒ　ｍｉｌｌｉｏｎ　ｍａｐｐｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅａｄｓ　（ＲＰＫＭ）値を挙げることができる。同様に総リード数を１００万とし、各遺伝子の遺伝子長で補正されたフラグメント数であるｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｐｅｒ　ｋｉｌｏｂａｓｅ　ｏｆ　ｅｘｏｎ　ｐｅｒ　ｍｉｌｌｉｏｎ　ｍａｐｐｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅａｄｓ　（ＦＰＫＭ）値や、各転写産物のリード数を遺伝子長で補正し、総リード数を１００万とした場合の転写産物数を表すｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ　ｐｅｒ　ｍｉｌｌｉｏｎ（ＴＰＭ）値等も汎用される。ＲＰＫＭ は既知の遺伝子モデルを用いてエキソンにマップされたリードを数え上げて遺伝子ごとの発現量を計算するのに対して、ＦＰＫＭは推定されたアイソフォームごとにフラグメントを数え上げることでアイソフォームレベルの発現量を計算する。各正規化の手法の詳細は、例えばＣｏｎｅｓａ　Ａ.,　ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ　Ｂｉｏｌ.　２０１６　Ｊａｎ　２６;１７:１３を参照されたい。
ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現の評価
　ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現は、ヒト患者由来の生体試料において評価され得る。そのような態様は、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子発現の評価を依頼し、評価結果を受け取る工程を含む。幾つかの態様は、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子発現の数値を決定する工程、及び任意の方法で決定された数値を記録する工程を含む。
　ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現レベルは、所定の数値に関連して解釈され得る。所定の数値と等しい場合、数値以上である場合、又は数値を上回る場合に、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現レベルは、対象が、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬による治療に感受性（応答性）であると予測できると解釈される。幾つかの態様において、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現レベルが、所定の数値と等しい場合、数値以下である場合、又は数値を下回る場合、腫瘍が抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬による治療に耐性（非応答性）であると予測できると解釈される。
　幾つかの態様において、生体試料中のｈＴＲＯＰ２遺伝子発現のレベルを表す数値に基づいて、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現は、高発現又は低発現と評価され得る。対象は、例えば、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２発現に基づいて、高発現又は低発現と評価され得る。
　前記発現レベルは、上記のような任意の公知の方法により評価され得る。例えば、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現量は、次世代ＲＮＡシーケンシングによって算出されるｒｅａｄｓ　ｐｅｒ　ｋｉｌｏｂａｓｅ　ｏｆ　ｅｘｏｎ　ｐｅｒ　ｍｉｌｌｉｏｎ　ｍａｐｐｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅａｄｓ　（ＲＰＫＭ）値に基づいて評価され得る。ＲＰＫＭ値は、次世代シーケンサにて得られたリードの数を各遺伝子のエキソンの長さ及びシーケンサで読まれた配列の総数を用いて正規化した値であり、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量はＲＰＫＭ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値を使用して解析することができる。
　ＲＰＫＭ値とｈＴＲＯＰ２遺伝子発現は、相関している。従って、ＲＰＫＭ値が高い場合、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現も高い。幾つかの態様において、Ｌｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が所定の数値以上であるか、又は上回る場合、高ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現と評価される。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。設定された数値は、６．０～９．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，　８．０，　８．１，　８．２，　８．３，　８．４，　８．５，　８．６，　８．７，　８．８，　８．９，及び９．０からなる群から選択することが可能である。また、設定された数値は、６．０～８．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択することが可能である。さらに、設定された数値は、６．５～８．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択することが可能である。さらに、設定された数値は、７．０～８．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択することが可能である。さらに、設定された数値は、７．５～８．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択することが可能である。設定された数値は、６．５，　７．０，　７．５，及び８．０からなる群から選択することも可能である。
　ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現量は、次世代ＲＮＡシーケンシングによって算出されるｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｐｅｒ　ｋｉｌｏｂａｓｅ　ｏｆ　ｅｘｏｎ　ｐｅｒ　ｍｉｌｌｉｏｎ　ｍａｐｐｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅａｄｓ　（ＦＰＫＭ）値に基づいて評価され得る。ＦＰＫＭ値は、次世代シーケンサにて得られたリードの数を各遺伝子の遺伝子長及びシーケンサで読まれた配列の総数を用いて正規化した値であり、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量はＦＰＫＭ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値を使用して解析することができる。
　ＦＰＫＭ値とｈＴＲＯＰ２遺伝子発現は、相関している。従って、ＦＰＫＭ値が高い場合、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現も高い。幾つかの態様において、Ｌｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値が所定の数値以上であるか、又は上回る場合、高ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現と評価される。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。設定された数値は、６．０～８．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択することが可能である。また、設定された数値は、６．０～７．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，及び７．０からなる群から選択することが可能である。設定された数値は、６．０，又は７．０を選択することも可能である。
　ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現量は、ＥｄｇｅＳｅｑ　Ａｓｓａｙによって算出されるＭｅｄｉａｎ　Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ　Ｃｏｕｎｔ　（ＭＮＣ）値に基づいて評価され得る。ＭＮＣ値は、ＥｄｇｅＳｅｑ　ＡｓｓａｙにてＭｅｄｉａｎ　ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ法を用いて得られた値であり、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量はＭＮＣ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値を使用して解析することができる。
　ＭＮＣ値とｈＴＲＯＰ２遺伝子発現は、相関している。従って、ＭＮＣ値が高い場合、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現も高い。幾つかの態様において、Ｌｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値が所定の数値以上であるか、又は上回る場合、高ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現と評価される。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。設定された数値は、１２．０～１５．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，　１４．０，　１４．１，　１４．２，　１４．３，　１４．４，　１４．５，　１４．６，　１４．７，　１４．８，　１４．９，及び１５．０からなる群から選択することが可能である。また、設定された数値は、１２．０～１４．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，及び１４．０からなる群から選択することが可能である。設定された数値は、１２．０，　１３．０，　又は１４．０を選択することも可能である。
　幾つかの態様において、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子発現は、規制当局に認可された試験を使用して評価される。幾つかの態様において、前記規制当局に認可された試験は、ＦＤＡ、ＥＭＡ又はＰＭＤＡによって認可された試験である。
ＳＬＦＮ１１遺伝子発現の評価
　ＳＬＦＮ１１遺伝子発現は、ヒト患者由来の生体試料において評価され得る。そのような態様は、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子発現の評価を依頼し、評価結果を受け取る工程を含む。幾つかの態様は、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子発現の数値を決定する工程、及び任意の方法で決定された数値を記録する工程を含む。
　ＳＬＦＮ１１遺伝子発現レベルは、所定の数値に関連して解釈され得る。所定の数値と等しい場合、数値以上である場合、又は上回る場合に、ＳＬＦＮ１１遺伝子発現レベルは、対象が、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬による治療に感受性（応答性）であると予測できると解釈される。幾つかの態様において、ＳＬＦＮ１１遺伝子発現レベルが、所定の数値と等しい場合、数値以下である場合、又は数値を下回る場合、腫瘍が抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬による治療に耐性（非応答性）であると予測できると解釈される。
　幾つかの態様において、生体試料中のＳＬＦＮ１１遺伝子発現のレベルを表す数値に基づいて、ＳＬＦＮ１１遺伝子発現は、高発現又は低発現と評価され得る。対象は、例えば、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１発現に基づいて、高発現又は低発現と評価され得る。
　前記発現レベルは、上記のような任意の公知の方法により評価され得る。例えば、ＳＬＦＮ１１遺伝子発現量は、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の場合と同じくＲＰＫＭ値に基づいて評価され得る。ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量はＲＰＫＭ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値を使用して解析することができる。
　ＲＰＫＭ値とＳＬＦＮ１１遺伝子発現は、相関している。従って、ＲＰＫＭ値が高い場合、ＳＬＦＮ１１遺伝子発現も高い。幾つかの態様において、Ｌｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が所定の数値を上回る場合、高ＳＬＦＮ１１遺伝子発現と評価される。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。設定された数値は、１．０～４．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、１．０，　１．１，　１．２，　１．３，　１．４，　１．５，　１．６，　１．７，　１．８，　１．９，　２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，　３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択することが可能である。また、設定された数値は、１．０～３．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、１．０，　１．１，　１．２，　１．３，　１．４，　１．５，　１．６，　１．７，　１．８，　１．９，　２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９及び３．０からなる群から選択することが可能である。さらに、設定された数値は、２．０～３．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９及び３．０からなる群から選択することが可能である。設定された数値は、１．０，　２．０及び３．０からなる群から選択することが可能であり、３．０と設定することも可能である。
　ＳＬＦＮ１１遺伝子発現量は、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の場合と同じくＦＰＫＭ値に基づいて評価され得る。ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量はＦＰＫＭ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値を使用して解析することができる。
　ＦＰＫＭ値とＳＬＦＮ１１遺伝子発現は、相関している。従って、ＦＰＫＭ値が高い場合、ＳＬＦＮ１１遺伝子発現も高い。幾つかの態様において、Ｌｏｇ２[ＦＰＫＭ]値が所定の数値を上回る場合、高ＳＬＦＮ１１遺伝子発現と評価される。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。設定された数値は、２．０～４．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，　３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択することが可能である。また、設定された数値は、２．０～３．０の範囲で選択することが可能であり、例えば、２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９及び３．０からなる群から選択することが可能である。設定された数値は、２．０又は３．０を選択することが可能である。
　ＳＬＦＮ１１遺伝子発現量は、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の場合と同じくＭＮＣ値に基づいて評価され得る。ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量はＭＮＣ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値を使用して解析することができる。
　ＭＮＣ値とＳＬＦＮ１１遺伝子発現は、相関している。従って、ＭＮＣ値が高い場合、ＳＬＦＮ１１遺伝子発現も高い。幾つかの態様において、Ｌｏｇ２[ＭＮＣ]値が所定の数値を上回る場合、高ＳＬＦＮ１１遺伝子発現と評価される。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。設定された数値は、１１．５～１３．５の範囲で選択することが可能であり、例えば、１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０，　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，及び１３．５からなる群から選択することが可能である。また、設定された数値は、１１．５～１２．５の範囲で選択することが可能であり、例えば、１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　及び１２．５からなる群から選択することが可能である。設定された数値は、１１．５，　１２．０，　又は１２．５を選択することが可能である。
　幾つかの態様において、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子発現は、規制当局に認可された試験を使用して評価される。幾つかの態様において、前記規制当局に認可された試験は、例えばＦＤＡ、ＥＭＡ又はＰＭＤＡによって認可された試験である。
投与と治療
　幾つかの態様において、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現の評価は、ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現と組み合わせて評価され得る。２種類の感受性マーカーを組み合わせることによって、より精度の高い評価が可能となる。幾つかの態様において、がんに罹患しているヒト患者は、ｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現が高いと評価された場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与されて治療され得る。幾つかの態様において、がんに罹患しているヒト患者は、ｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現が低いと評価された場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬の投与を回避され得る。
　抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬の好適な投与量として、２．０ｍｇ/ｋｇ、４．０ｍｇ/ｋｇ、６．０ｍｇ/ｋｇ、８．０ｍｇ/ｋｇ、又は１０．０ｍｇ/ｋｇの各投与量を挙げることができるが、これらの投与量に限定されるものではない。また、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬の好適な投与間隔としては、３週間間隔を挙げることができるが、この投与間隔に限定されるものではない。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量は、ＲＰＫＭ値に基づいて評価され得る。各遺伝子の発現量はＲＰＫＭ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値を使用して解析することができる。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。
　前記のようにｈＴＲＯＰ２遺伝子におけるＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値は、６．０～９．０の範囲で設定することが可能である。また、ＳＬＦＮ１１遺伝子におけるＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値は、１．０～４．０の範囲で設定することが可能である。設定された数値を組み合わせる場合、がんに罹患しているヒト患者は、ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子における設定値の双方を満たす場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与されて治療され得る。また、幾つかの態様において、ｈＴＲＯＰ２又はＳＬＦＮ１１遺伝子における設定値のいずれか一方を満たす場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与されて治療され得る。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子における好適なＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]設定値の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては１．０，　１．１，　１．２，　１．３，　１．４，　１．５，　１．６，　１．７，　１．８，　１．９，及び２．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，及び７．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせ、並びにｈＴＲＯＰ２遺伝子においては７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，及び７．５からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせを挙げることができる。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子における好適なＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]設定値のさらに別の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，　及び８．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　及び７．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，及び７．５からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせ、並びにｈＴＲＯＰ２遺伝子においては７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせ、を挙げることができる。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子におけるさらに好適なＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]設定値の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における７．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における１．０の組み合わせ、又はｈＴＲＯＰ２遺伝子における６．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における２．０の組み合わせのいずれか一つ満たす場合を挙げることができる。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子におけるさらに好適なＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]設定値の別の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における７．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における２．０の組み合わせ、又はｈＴＲＯＰ２遺伝子における６．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における３．０の組み合わせのいずれか一つを満たす場合を挙げることができる。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子におけるさらに好適なＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]設定値の別の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における７．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における１．０の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における６．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における２．０の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における７．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における２．０の組み合わせ、並びにｈＴＲＯＰ２遺伝子における６．５及びＳＬＦＮ１１遺伝子における３．０の組み合わせからなる群から選択されるいずれか一つの組み合わせを挙げることができる。
　また、ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量は、ＦＰＫＭ値に基づいて評価され得る。各遺伝子の発現量はＦＰＫＭ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値を使用して解析することができる。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。
　前記のようにｈＴＲＯＰ２遺伝子におけるＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値は、６．０～８．０の範囲で設定することが可能である。また、ＳＬＦＮ１１遺伝子におけるＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値は、２．０～４．０の範囲で設定することが可能である。設定された数値を組み合わせる場合、がんに罹患しているヒト患者は、ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子における設定値の双方を満たす場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与されて治療され得る。また、幾つかの態様において、ｈＴＲＯＰ２又はＳＬＦＮ１１遺伝子における設定値のいずれか一方を満たす場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与されて治療され得る。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子における好適なＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]設定値の組み合わせとしては、
ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては７．０，　７．１，　７．２，　７，３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，　８．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせを挙げることができる。
　また、別の好適な組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　及び７．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせを挙げることができる。
　さらに別の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては７．０，　７．１，　７．２，　７，３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，　及び８．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択される一つの数値の組み合わせを挙げることができる。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子におけるさらに好適なＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]設定値の別の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における７．０及びＳＬＦＮ１１遺伝子における２．０の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における６．０及びＳＬＦＮ１１遺伝子における３．０の組み合わせ、並びにｈＴＲＯＰ２遺伝子における７．０及びＳＬＦＮ１１遺伝子における３．０の組み合わせからなる群から選択されるいずれか一つの組み合わせを挙げることができる。
　さらに、ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量は、ＭＮＣ値に基づいて評価され得る。各遺伝子の発現量はＭＮＣ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値を使用して解析することができる。所定の数値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に設定され得る。
　前記のようにｈＴＲＯＰ２遺伝子におけるＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値は、１２．０～１４．０の範囲で設定することが可能である。また、ＳＬＦＮ１１遺伝子におけるＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値は、１１．５～１２．５の範囲で設定することが可能である。設定された数値を組み合わせる場合、がんに罹患しているヒト患者は、ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子における設定値の双方を満たす場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与されて治療され得る。また、幾つかの態様において、ｈＴＲＯＰ２又はＳＬＦＮ１１遺伝子における設定値のいずれか一方を満たす場合に、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与されて治療され得る。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子における好適なＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]設定値の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，　１４．０，　１４．１，　１４．２，　１４．３，　１４．４，　１４．５，　１４．６，　１４．７，　１４．８，　１４．９，及び１５．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０，　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，及び１３．５からなる群から選択される一つの数値の組み合わせを挙げることができる。
　また、別の好適な組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，及び１４．０からなる群から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　及び１２．５からなる群から選択される一つの数値の組み合わせを挙げることができる。
　さらに別の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子においては１２．０，　１３．０，　又は１４．０から選択される一つの数値及びＳＬＦＮ１１遺伝子においては１１．５，　１２．０，　又は１２．５から選択される一つの数値の組み合わせを挙げることができる。
　ｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子におけるさらに好適なＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]設定値の別の組み合わせとしては、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における１２．０及びＳＬＦＮ１１遺伝子における１１．５の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における１４．０及びＳＬＦＮ１１遺伝子における１１．５の組み合わせ、ｈＴＲＯＰ２遺伝子における１２．０及びＳＬＦＮ１１遺伝子における１２．５の組み合わせ、並びにｈＴＲＯＰ２遺伝子における１４．０及びＳＬＦＮ１１遺伝子における１２．５の組み合わせからなる群から選択されるいずれか一つの組み合わせを挙げることができる。
　遺伝子発現量の測定及び評価は、ｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子について同時に行っても良い。
　あるいは、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量の測定及び評価を最初に行い、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと評価されたヒト患者について、ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量の測定及び評価を行っても良い。
　あるいは、ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量の測定及び評価を最初に行い、ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと評価されたヒト患者について、ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量の測定及び評価を行っても良い。
　幾つかの態様において、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現は、規制当局に認可された試験を使用して評価される。幾つかの態様において、前記規制当局に認可された試験は、ＦＤＡ、ＥＭＡ又はＰＭＤＡに認可された試験である。
試験キット
　本発明は、本発明の方法を実施するための幾つかの構成を備える診断試験キットにも関する。診断試験キットは、診断アッセイの実施における、利便性、迅速性、及び再現性を向上させる。例えば、ｑＲＴ－ＰＣＲベースの態様において、基本的な診断試験キットは、遺伝子の発現を解析するＰＣＲプライマーを含む。他の態様において、より詳細な試験キットは、ＰＣＲプライマーに加え、ＰＣＲ技術を用いて遺伝子発現レベルを測定するための、緩衝剤、試薬、及び詳細な説明書を備える。幾つかの態様において、当該キットは、試験プロトコール、及びＲＮＡ試料以外の、試験に必要な全ての消費成分を備えている。
　本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
実施例１．抗体薬物複合体の製造
　国際公開第２０１５／０９８０９９号及び国際公報第２０１７／００２７７６に記載の製造方法に従って、ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体（配列番号１においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体）を用いて、式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
（式中、Ａは抗ｈＴＲＯＰ２抗体との結合位置を示す）
で示される薬物リンカーと、抗ｈＴＲＯＰ２抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体薬物複合体（以下、「抗体薬物複合体（１）」と称する）を製造した。抗体一分子当たりの平均薬物結合数は０～８の範囲で調節可能であるが、今回は平均薬物結合数３．５～４．５の抗体薬物複合体を製造し、以下の実施例において使用した。
実施例２．抗体薬物複合体の抗腫瘍効果の評価（１）
　マウス：５－８週齢の雌ｎｕ／ｎｕマウス（Ｅｎｖｉｇｏ）を実験使用前にＳＰＦ条件化で3日間以上馴化した。マウスには滅菌した固形飼料（Ｔｅｋｌａｄ２９１９，Ｅｎｖｉｇｏ）を給餌し、逆浸透膜処理した水（２ｐｐｍ塩素を含む）を与えた。
　測定、計算式：腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルキャリパー（ＣＤ－６ＰＭＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ　Ｃｏｒｐ．）で１週間に２回測定し、以下の計算式を用いて腫瘍体積（ｍｍ３）を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝０．５２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２
　各がん患者由来腫瘍片をマウス皮下に移植・継代して得られた腫瘍を用いて、約５ｘ５ｘ５ｍｍ３に細断した腫瘍片を雌ｎｕ／ｎｕマウスの左側腹部に皮下移植し、各ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｘｅｎｏｇｒａｆｔ（ＰＤＸ）モデルを作成した。移植した腫瘍体積の平均値が１５０－３００ｍｍ３に達した時点で無作為に群分けを実施した（Ｄａｙ０）。群分けと同日に、抗体薬物複合体（１）を１０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。陰性対照としてＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒを１０ｍＬ／ｋｇの液量で同様に投与した。投与２１日後の各腫瘍体積を用いて、以下の計算式に従い腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ（％））を算出した（表１）。
腫瘍増殖抑制率（％）＝１００×（１－Ｔｆ／ｍｅａｎ　Ｃｆ）
Ｔｆ：抗体薬物複合体（１）の投与２１日後の腫瘍体積
ｍｅａｎ　Ｃｆ：陰性対照群マウスの投与２１日後の腫瘍体積の相加平均値
上記の全ての試験は、Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ社（Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ社）において実施した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
実施例３．各ＰＤＸマウスモデル由来腫瘍におけるｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量（ＲＰＫＭ値）、並びに抗体薬物複合体（１）抗腫瘍活性との関連
　実施例２において使用された各ＰＤＸモデルにおける遺伝子発現量データは、Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ社にて取得及び正規化されたＲＰＫＭ値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値を入手し（表２）、これを用いて抗体薬物複合体（１）のＰＤＸモデルにおける抗腫瘍活性（表１）とｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量の関連を解析した。評価した全モデルをｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子が一定以上の発現量を示す群に分けた場合（表３）、一定以上の薬効（今回は一例としてＴＧＩが７５％以上との基準を採用）を示す動物モデルの割合はｈＴＲＯＰ２遺伝子発現が増加且つＳＬＦＮ１１遺伝子発現が増加するほど高まることが示された（表４）。ＳＬＦＮ１１遺伝子発現による群分けを行わない場合、ＴＧＩが７５％以上を示す動物モデルの割合は４７～６３％に止まっており、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現量及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量の組み合わせが、抗体薬物複合体（１）の抗腫瘍効果を予測する感受性マーカーとして使用可能であることが明らかとなった。例えば、ｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が７．５を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が１．０を上回る場合、又はｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が６．５を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]が２．０を上回る場合、ＴＧＩが７５％以上を示す動物モデルの割合は約８０％乃至１００％となる。また、ｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が７．５を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が２．０を上回る場合、又はｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が６．５を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]が３．０を上回る場合、ＴＧＩが７５％以上を示す動物モデルの割合は１００％となる。なお、ＴＧＩが６０％以上又は７０％以上の場合でも、ＴＧＩが７５％以上の場合に設定された各Ｌｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値により、同等の予測率で抗腫瘍効果の予測することが可能であった。ＴＧＩが８０％以上の場合は、Ｌｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が７．５を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＲＰＫＭ＋１]値が１．０を上回り２以下である場合のみ、予測率が６０％台に低下した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
実施例４．抗体薬物複合体の抗腫瘍効果の評価（２）
　マウス：５－８週齢の雌ｎｕ／ｎｕマウス（Ｅｎｖｉｇｏ）を実験使用前にＳＰＦ条件化で3日間以上馴化した。マウスには滅菌した固形飼料（Ｔｅｋｌａｄ２９１９，Ｅｎｖｉｇｏ）を給餌し、逆浸透膜処理した水（２ｐｐｍ塩素を含む）を与えた。
　測定、計算式：腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルキャリパー（ＣＤ－６ＰＭＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ　Ｃｏｒｐ．）で１週間に２回測定し、以下の計算式を用いて腫瘍体積（ｍｍ３）を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝０．５２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２
　各がん患者由来腫瘍片をマウス皮下に移植・継代して得られた腫瘍を用いて、約５ｘ５ｘ５ｍｍ３に細断した腫瘍片を雌ｎｕ／ｎｕマウスの左側腹部に皮下移植し、各ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｘｅｎｏｇｒａｆｔ（ＰＤＸ）モデルを作成した。移植した腫瘍体積の平均値が１５０－３００ｍｍ３に達した時点で無作為に群分けを実施した（Ｄａｙ０）。群分けと同日に、抗体薬物複合体（１）を１０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。陰性対照としてＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒを１０ｍＬ／ｋｇの液量で同様に投与した。
実施例２及び本実施例で評価したＰＤＸモデルについて、投与１０－１５日後の各腫瘍体積を用いて、以下の計算式に従い腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ（％））を算出した（表５）。
腫瘍増殖抑制率（％）＝１００×（１－Ｔｆ／ｍｅａｎ　Ｃｆ）
Ｔｆ：抗体薬物複合体（１）の投与１０－１５日後の腫瘍体積
ｍｅａｎ　Ｃｆ：陰性対照群マウスの投与１０－１５日後の腫瘍体積の相加平均値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
実施例５．各ＰＤＸマウスモデル由来腫瘍におけるｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量（ＦＰＫＭ値）、並びに抗体薬物複合体（１）抗腫瘍活性との関連
　実施例４において使用された各ＰＤＸモデルにおける遺伝子発現量データは、各腫瘍のホルマリン固定パラフィン包埋標本より抽出されたＲＮＡを用いて、次世代ＲＮＡシーケンス法にて取得した。取得されたデータはＦＰＫＭ値に正規化した後、ＦＰＫＭに１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値とし（表６）、これを用いて抗体薬物複合体（１）のＰＤＸモデルにおける抗腫瘍活性（表５）とｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量の関連を解析した。評価した全モデルをｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子が一定以上の発現量を示す群に分けた場合（表７）、一定以上の薬効（今回は一例としてＴＧＩが７５％以上との基準を採用）を示す動物モデルの割合はｈＴＲＯＰ２遺伝子発現が増加且つＳＬＦＮ１１遺伝子発現が増加するほど高まることが示された（表８）。ＳＬＦＮ１１遺伝子発現による群分けを行わない場合、ＴＧＩが７５％以上を示す動物モデルの割合は４３～５０％に止まっており、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現量及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量の組み合わせが、抗体薬物複合体（１）の抗腫瘍効果を予測する感受性マーカーとして使用可能であることが明らかとなった。例えば、ｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値が７．０を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値が２．０を上回る場合、又はｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値が６．０を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]が３．０を上回る場合、ＴＧＩが７５％以上を示す動物モデルの割合は約８０％乃至１００％となる。また、ｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値が７．０を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値が３．０を上回る場合、ＴＧＩが７５％以上を示す動物モデルの割合は１００％となる。なお、ＴＧＩが７０％又は８０％以上の場合でも、ＴＧＩが７５％以上の場合に設定された各Ｌｏｇ２[ＦＰＫＭ＋１]値により、同等の予測率で抗腫瘍効果の予測することが可能であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
実施例６．化合物（１）の製造
　国際公開第２０１４／０５７６８７号及び国際公報第２０１５／１１５０９１に記載の製造方法に従って、式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
で示される化合物（以下、「化合物（１）」と称する）を製造した。
実施例７．ＳＬＦＮ１１ノックダウン時における細胞増殖抑制試験
７－（１）：ヒト咽頭がん細胞株ＦａＤｕに対する効果
　ヒト咽頭がん細胞株ＦａＤｕをＡＴＣＣより入手し、評価に使用した。１０ｃｍ細胞培養ディッシュに、非必須アミノ酸溶液、ピルビン酸溶液及び１０％ウシ胎児血清を含むＭＥＭ培地にて２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁したＦａＤｕ細胞を１０ｍＬ／ディッシュにて播種した。播種から２４時間経過後、１００ｐｍｏｌのＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　ＳＬＦＮ１１　ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）又はＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　Ｎｏｎ-ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｐｏｏｌ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）及び３０μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ　ＲＮＡｉＭＡＸ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を1ｍＬのＯｐｔｉ-ＭＥＭ培地に懸濁し全量を培地に添加した。７２時間経過後、培地を除去しＰＢＳにて洗浄した後、１ｍＬのＴｒｙｐＬＥＴＭ　Ｅｘｐｒｅｓｓを用いて細胞をディッシュより解離し回収した。回収された細胞は非必須アミノ酸溶液、ピルビン酸溶液及び１０％ウシ胎児血清を含むＭＥＭ培地にて５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁し。９６ウェル細胞培養プレートに１００μＬ/ウェルにて播種した。播種から２４時間後、培地を１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．７ｎＭ、１．２ｎＭ、０．４１ｎＭ．０．１３ｎＭ．０．０４５ｎＭ、又は０ｎＭの化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）を含む培地に１００μＬ／ウェルで交換した。抗体薬物複合体（１）のモル濃度は、平均分子量を１５０，０００として算出した。細胞はいずれも３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。培地交換から７２時間経過後、ＡＴＰｌｉｔｅ　１ｓｔｅｐ検出システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を１００μＬ／ウェルにて添加し、室温で１０分間インキュベーション後に各ｗｅｌｌの発光強度を測定した。
各条件における細胞増殖抑制率（％）は、以下の計算式を用いて算出した。
細胞増殖抑制率（％）＝１００×（１－Ｔ／Ｃ）
Ｔ：各検体添加ウェルの平均発光強度
Ｃ：各検体０ ｎＭを添加したウェルの平均発光強度
各条件における５０％阻害濃度は以下の計算式にフィッティングし算出した。
細胞生存率（％）＝（Ｅｍａｘ－Ｅｍｉｎ）×検体濃度γ／
（（Ｅｍａｘ－５０）／（５０－Ｅｍｉｎ）× ＩＣ５０γ＋検体濃度γ）
＋　Ｅｍｉｎ
Ｅｍａｘ：最大細胞増殖抑制率（％）
Ｅｍｉｎ：最小細胞増殖抑制率（％）
ＩＣ５０：５０％阻害濃度
γ：Ｈｉｌｌ係数
計算式へのフィッティングはＳＡＳ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｒｅｌｅａｓｅ　９．２（ＳＡＳ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｉｎｃ．）を使用した。
ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＦａＤｕ細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を図４に示す。また、算出された各５０％阻害濃度を表９に示す。Ｆａｄｕ細胞株に対するＳＬＦＮ１１ノックダウンによって、化合物（１）及び抗体薬物複合体（１）の細胞増殖抑制効果は減弱した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
７－（２）：ヒト肺がん細胞株ＮＣＩ－Ｈ１７８１に対する効果
　ヒト肺がん細胞株ＮＣＩ－Ｈ１７８１をＡＴＣＣより入手し、評価に使用した。１０ｃｍ細胞培養ディッシュに、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０培地にて２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁したＮＣＩ－Ｈ１７８１細胞を１０ｍＬ／ディッシュにて播種した。播種から２４時間経過後、１００ｐｍｏｌのＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　ＳＬＦＮ１１　ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）又はＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　Ｎｏｎ-ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐｏｏｌ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）及び３０μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ　ＲＮＡｉＭＡＸ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を1ｍＬのＯｐｔｉ-ＭＥＭ培地に懸濁し全量を培地に添加した。７２時間経過後、培地を除去しＰＢＳにて洗浄した後、１ｍＬのＴｒｙｐＬＥＴＭ　Ｅｘｐｒｅｓｓを用いて細胞をディッシュより解離し回収した。回収された細胞は１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０培地にて５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁し。９６ウェル細胞培養プレートに１００μＬ/ウェルにて播種した。播種から２４時間後、培地を１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．７ｎＭ、１．２ｎＭ、０．４１ｎＭ．０．１３ｎＭ．０．０４５ｎＭ、又は０ｎＭの化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）を含む培地に１００μＬ/ウェルで交換した。抗体薬物複合体（１）のモル濃度は、平均分子量を１５０，０００として算出した。細胞はいずれも３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。培地交換から７２時間経過後、ＡＴＰｌｉｔｅ　１ｓｔｅｐ検出システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を１００μＬ／ウェルにて添加し、室温で１０分間インキュベーション後に各ｗｅｌｌの発光強度を測定した。
各条件における細胞増殖抑制率（％）は、以下の計算式を用いて算出した。
細胞増殖抑制率（％）＝１００×（１－Ｔ／Ｃ）
Ｔ：各検体添加ウェルの平均発光強度
Ｃ：各検体０ ｎＭを添加したウェルの平均発光強度
各条件における５０％阻害濃度は以下の計算式にフィッティングし算出した。
細胞生存率（％）＝（Ｅｍａｘ－Ｅｍｉｎ）×検体濃度γ／
（（Ｅｍａｘ－５０）／（５０－Ｅｍｉｎ）× ＩＣ５０γ＋検体濃度γ）
＋　Ｅｍｉｎ
Ｅｍａｘ：最大細胞増殖抑制率（％）
Ｅｍｉｎ：最小細胞増殖抑制率（％）
ＩＣ５０：５０％阻害濃度
γ：Ｈｉｌｌ係数
計算式へのフィッティングはＳＡＳ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｒｅｌｅａｓｅ　９．２（ＳＡＳ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｉｎｃ．）を使用した。
ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＮＣＩ－Ｈ１７８１細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を図５に示す。また、算出された各５０％阻害濃度を表１０に示す。ＮＣＩ－Ｈ１７８１細胞株に対するＳＬＦＮ１１ノックダウンによって、化合物（１）及び抗体薬物複合体（１）の細胞増殖抑制効果は減弱した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
７－（３）：ヒト肺がん細胞株Ｃａｌｕ－３に対する効果
　ヒト肺がん細胞株Ｃａｌｕ－３をＡＴＣＣより入手し、評価に使用した。１０ｃｍ細胞培養ディッシュに、非必須アミノ酸溶液、ピルビン酸溶液及び１０％ウシ胎児血清を含むＭＥＭ培地にて２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁したＣａｌｕ－３細胞を１０ｍＬ／ディッシュにて播種した。播種から２４時間経過後、１００ｐｍｏｌのＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　ＳＬＦＮ１１　ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）又はＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　Ｎｏｎ-ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｐｏｏｌ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）及び３０μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ　ＲＮＡｉＭＡＸ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を1ｍＬのＯｐｔｉ-ＭＥＭ培地に懸濁し全量を培地に添加した。７２時間経過後、培地を除去しＰＢＳにて洗浄した後、１ｍＬのＴｒｙｐＬＥＴＭ　Ｅｘｐｒｅｓｓを用いて細胞をディッシュより解離し回収した。回収された細胞は非必須アミノ酸溶液、ピルビン酸溶液及び１０％ウシ胎児血清を含むＭＥＭ培地にて５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁し。９６ウェル細胞培養プレートに１００μＬ/ウェルにて播種した。播種から２４時間後、培地を１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．７ｎＭ、１．２ｎＭ、０．４１ｎＭ．０．１３ｎＭ．０．０４５ｎＭ、又は０ｎＭの化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）を含む培地に１００μＬ/ウェルで交換した。抗体薬物複合体（１）のモル濃度は、平均分子量を１５０，０００として算出した。細胞はいずれも３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。培地交換から７２時間経過後、ＡＴＰｌｉｔｅ　１ｓｔｅｐ検出システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を１００μＬ／ウェルにて添加し、室温で１０分間インキュベーション後に各ｗｅｌｌの発光強度を測定した。
各条件における細胞増殖抑制率（％）は、以下の計算式を用いて算出した。
細胞増殖抑制率（％）＝１００×（１－Ｔ／Ｃ）
Ｔ：各検体添加ウェルの平均発光強度
Ｃ：各検体０ ｎＭを添加したウェルの平均発光強度
各条件における５０％阻害濃度は以下の計算式にフィッティングし算出した。
細胞生存率（％）＝（Ｅｍａｘ－Ｅｍｉｎ）×検体濃度γ／
（（Ｅｍａｘ－５０）／（５０－Ｅｍｉｎ）× ＩＣ５０γ＋検体濃度γ）
＋　Ｅｍｉｎ
Ｅｍａｘ：最大細胞増殖抑制率（％）
Ｅｍｉｎ：最小細胞増殖抑制率（％）
ＩＣ５０：５０％阻害濃度
γ：Ｈｉｌｌ係数
計算式へのフィッティングはＳＡＳ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｒｅｌｅａｓｅ　９．２（ＳＡＳ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｉｎｃ．）を使用した。
ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＣａｌｕ－３細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を図６に示す。また、算出された各５０％阻害濃度を表１１に示す。Ｃａｌｕ－３細胞株に対するＳＬＦＮ１１ノックダウンによって、化合物（１）の細胞増殖抑制効果は減弱した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
７－（４）：ヒト乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８に対する効果
　ヒト乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８をＡＴＣＣより入手し、評価に使用した。１０ｃｍ細胞培養ディッシュに、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０培地にて２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁したＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞を１０ｍＬ／ディッシュにて播種した。播種から２４時間経過後、１００ｐｍｏｌのＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　ＳＬＦＮ１１　ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）又はＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　Ｎｏｎ-ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｐｏｏｌ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）及び３０μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ　ＲＮＡｉＭＡＸ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を1ｍＬのＯｐｔｉ-ＭＥＭ培地に懸濁し全量を培地に添加した。７２時間経過後、培地を除去しＰＢＳにて洗浄した後、１ｍＬのＴｒｙｐＬＥＴＭ　Ｅｘｐｒｅｓｓを用いて細胞をディッシュより解離し回収した。回収された細胞は１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０培地にて５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁し。９６ウェル細胞培養プレートに１００μＬ/ウェルにて播種した。播種から２４時間後、培地を１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．７ｎＭ、１．２ｎＭ、０．４１ｎＭ．０．１３ｎＭ．０．０４５ｎＭ、又は０ｎＭの化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）を含む培地に１００μＬ/ウェルで交換した。抗体薬物複合体（１）のモル濃度は、平均分子量を１５０，０００として算出した。細胞はいずれも３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。培地交換から７２時間経過後、ＡＴＰｌｉｔｅ　１ｓｔｅｐ検出システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を１００μＬ／ウェルにて添加し、室温で１０分間インキュベーション後に各ｗｅｌｌの発光強度を測定した。
各条件における細胞増殖抑制率（％）は、以下の計算式を用いて算出した。
細胞増殖抑制率（％）＝１００×（１－Ｔ／Ｃ）
Ｔ：各検体添加ウェルの平均発光強度
Ｃ：各検体０ ｎＭを添加したウェルの平均発光強度
各条件における５０％阻害濃度は以下の計算式にフィッティングし算出した。
細胞生存率（％）＝（Ｅｍａｘ－Ｅｍｉｎ）×検体濃度γ／
（（Ｅｍａｘ－５０）／（５０－Ｅｍｉｎ）× ＩＣ５０γ＋検体濃度γ）
＋　Ｅｍｉｎ
Ｅｍａｘ：最大細胞増殖抑制率（％）
Ｅｍｉｎ：最小細胞増殖抑制率（％）
ＩＣ５０：５０％阻害濃度
γ：Ｈｉｌｌ係数
計算式へのフィッティングはＳＡＳ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｒｅｌｅａｓｅ　９．２（ＳＡＳ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｉｎｃ．）を使用した。
ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を図７に示す。算出された各５０％阻害濃度を表１２に示す。ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞株に対するＳＬＦＮ１１ノックダウンによって、化合物（１）の細胞増殖抑制効果は減弱した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
７－（５）：ヒト乳がん細胞株ＨＣＣ３８に対する効果
　ヒト乳がん細胞株ＨＣＣ３８をＡＴＣＣより入手し、評価に使用した。１０ｃｍ細胞培養ディッシュに、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０培地にて２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁したＨＣＣ３８細胞を１０ｍＬ／ディッシュにて播種した。播種から２４時間経過後、１００ｐｍｏｌのＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　ＳＬＦＮ１１　ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）又はＯＮ-ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ　Ｎｏｎ-ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｐｏｏｌ（Ｄｈａｒａｍｃｏｎ）及び３０μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ　ＲＮＡｉＭＡＸ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を1ｍＬのＯｐｔｉ-ＭＥＭ培地に懸濁し全量を培地に添加した。７２時間経過後、培地を除去しＰＢＳにて洗浄した後、１ｍＬのＴｒｙｐＬＥＴＭ　Ｅｘｐｒｅｓｓを用いて細胞をディッシュより解離し回収した。回収された細胞は１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０培地にて５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに懸濁し。９６ウェル細胞培養プレートに１００μＬ/ウェルにて播種した。播種から２４時間後、培地を１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．７ｎＭ、１．２ｎＭ、０．４１ｎＭ．０．１３ｎＭ．０．０４５ｎＭ、又は０ｎＭの化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）aを含む培地に１００μＬ/ウェルで交換した。抗体薬物複合体（１）のモル濃度は、平均分子量を１５０，０００として算出した。細胞はいずれも３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。培地交換から７２時間経過後、ＡＴＰｌｉｔｅ　１ｓｔｅｐ検出システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を１００μＬ／ウェルにて添加し、室温で１０分間インキュベーション後に各ｗｅｌｌの発光強度を測定した。
各条件における細胞増殖抑制率（％）は、以下の計算式を用いて算出した。
細胞増殖抑制率（％）＝１００×（１－Ｔ／Ｃ）
Ｔ：各検体添加ウェルの平均発光強度
Ｃ：各検体０ ｎＭを添加したウェルの平均発光強度
各条件における５０％阻害濃度は以下の計算式にフィッティングし算出した。
細胞生存率（％）＝（Ｅｍａｘ－Ｅｍｉｎ）×検体濃度γ／
（（Ｅｍａｘ－５０）／（５０－Ｅｍｉｎ）× ＩＣ５０γ＋検体濃度γ）
＋　Ｅｍｉｎ
Ｅｍａｘ：最大細胞増殖抑制率（％）
Ｅｍｉｎ：最小細胞増殖抑制率（％）
ＩＣ５０：５０％阻害濃度
γ：Ｈｉｌｌ係数
計算式へのフィッティングはＳＡＳ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｒｅｌｅａｓｅ　９．２（ＳＡＳ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｉｎｃ．）を使用した。
ＳＬＦＮ１１ノックダウン時のＨＣＣ３８細胞における、化合物（１）又は抗体薬物複合体（１）による細胞増殖抑制効果を図８に示す。また、算出された各５０％阻害濃度を表１３に示す。ＨＣＣ３８細胞株に対するＳＬＦＮ１１ノックダウンによって、化合物（１）及び抗体薬物複合体（１）の細胞増殖抑制効果は減弱した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
実施例８．臨床試験における各患者由来腫瘍のｈＴＲＯＰ２及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量（Ｍｅｄｉａｎ　Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ　Ｃｏｕｎｔ値）、並びに抗体薬物複合体（１）抗腫瘍活性との関連
８－（１）試験計画及び薬剤の効果
　再発・進行性の非小細胞肺がん患者を対象とした第1相臨床試験用量漸増パートにおいて、抗体薬物複合体（１）は認容できない毒性又は病態の増悪が認められるまで３週に１度静脈内投与された。用量制限毒性は、Ｃｙｃｌｅ　１　(Ｄａｙ　１－２１)において求める。腫瘍採取は臨床試験にエントリー後、１度目の投薬までに実施した。各患者における投与用量及び最大腫瘍変化率（％）を表１４に示す。なお、最大腫瘍変化率の値がマイナスの場合は、抗体薬物複合体（１）の投与により腫瘍が縮小したことを意味している。
８－（２）腫瘍におけるＳＬＦＮ１１、ＴＲＯＰ２　ｍＲＮＡ　ｌｅｖｅｌｓの測定
　各患者における遺伝子発現データは、抗体薬物複合体（１）投薬前の各患者の腫瘍組織のホルマリン固定パラフィン包埋標本より切片作成し、レーザーマイクロダイセクションによる腫瘍部位の切り出しを行った後にＥｄｇｅＳｅｑにて取得した。取得されたカウントデータはＭｅｄｉａｎ　Ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ法により正規化し、各遺伝子の発現量とした。上記の全ての試験は、ＨＴＧ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社において実施した。
　ＨＴＧ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社にて取得及び正規化されたＭｅｄｉａｎ　Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ　Ｃｏｕｎｔ（ＭＮＣ）値に１を加え、対数（Ｌｏｇ２）とした値であるＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値を入手し（表１５）、これを用いて抗体薬物複合体（１）の患者における抗腫瘍活性（表１４）とｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量の関連を解析した。評価した全患者をｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子が一定以上の発現量を示す群に分けた場合（表１６）、一定以上の薬効（最大腫瘍変化率が０％以下）を示す患者の割合はｈＴＲＯＰ２遺伝子発現が増加且つＳＬＦＮ１１遺伝子発現が増加するほど高まることが示された（表１７）。ＳＬＦＮ１１遺伝子発現による群分けを行わない場合、最大腫瘍変化率が０％以下を示す患者の割合は７５～８０％に止まっており、ｈＴＲＯＰ２遺伝子発現量及びＳＬＦＮ１１遺伝子発現量の組み合わせが、抗体薬物複合体（１）の抗腫瘍効果を予測する感受性マーカーとして使用可能であることが明らかとなった。例えば、ｈＴＲＯＰ２遺伝子のＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値が１２を上回り且つＳＬＦＮ１１遺伝子のＬｏｇ２[ＭＮＣ＋１]値が１１．５を上回る場合、最大腫瘍変化率が０％以下を示す患者の割合は約８０％乃至１００％となる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
配列番号１：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号２：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号３：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体重鎖のＣＤＲＨ１配列
配列番号４：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体重鎖のＣＤＲＨ２配列
配列番号５：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体重鎖のＣＤＲＨ３配列
配列番号６：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体軽鎖のＣＤＲＬ１配列
配列番号７：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体軽鎖のＣＤＲＬ２配列
配列番号８：ヒト化抗ｈＴＲＯＰ２抗体軽鎖のＣＤＲＬ３配列

Claims (52)

  1. 　がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：
    １）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
    ２）該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量を評価する工程；
    ３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料においてｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
    ４）ＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された該生体試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
    を含む方法。
  2. 　がんに罹患したヒト患者において、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象を同定する方法であって：
    １）がんに罹患したと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
    ２）当該試料においてｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量を評価する工程；　及び
    ３）ｈＴＲＯＰ２遺伝子及びＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断された当該試料を有していたヒト患者を、抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬を投与する対象として同定する工程；
    を含む方法。
  3. 　がんに罹患したと診断されたヒト患者から取得した生体試料から、ＲＮＡシーケンシングによってｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が測定され、これが特定の値を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，　８．０，　８．１，　８．２，　８．３，　８．４，　８．５，　８．６，　８．７，　８．８，　８．９，及び９．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３に記載の方法。
  5. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３又は４に記載の方法。
  6. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至５のいずれか一つに記載の方法。
  7. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、７．０，　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至６のいずれか一つに記載の方法。
  8. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至７のいずれか一つに記載の方法。
  9. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が、７．０，　７．５，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至７のいずれか一つに記載の方法。
  10. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が７．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項９に記載の方法。
  11. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が７．５を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項９に記載の方法。
  12. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が８．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項９に記載の方法。
  13. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０，　１．１，　１．２，　１．３，　１．４，　１．５，　１．６，　１．７，　１．８，　１．９，　２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，　３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至１２のいずれか一つに記載の方法。
  14. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０，　１．１，　１．２，　１．３，　１．４，　１．５，　１．６，　１．７，　１．８，　１．９，　２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至１３のいずれか一つに記載の方法。
  15. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至１４のいずれか一つに記載の方法。
  16. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０、２．０及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３乃至１４のいずれか一つに記載の方法。
  17. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が１．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項１６に記載の方法。
  18. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項１６に記載の方法。
  19. 　ｌｏｇ２［ＲＰＫＭ＋１］値が３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項１６に記載の方法。
  20. 　がんに罹患したと診断されたヒト患者から取得した生体試料から、ＲＮＡシーケンシングによってｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が測定され、これが特定の値を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項１又は２に記載の方法。
  21. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，　７．０．　７．１，　７．２，　７．３，　７．４，　７．５，　７．６，　７．７，　７．８，　７．９，及び８．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２０に記載の方法。
  22. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が、６．０，　６．１，　６．２，　６．３，　６．４，　６．５，　６．６，　６．７，　６．８，　６．９，及び７．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２０又は２１に記載の方法。
  23. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が、６．０，又は７．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２０又は２１に記載の方法。
  24. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が６．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２２に記載の方法。
  25. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が７．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２２に記載の方法。
  26. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，　３．０，　３．１，　３．２，　３．３，　３．４，　３．５，　３．６，　３．７，　３．８，　３．９，及び４．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２０乃至２５のいずれか一つに記載の方法。
  27. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０，　２．１，　２．２，　２．３，　２．４，　２．５，　２．６，　２．７，　２．８，　２．９，及び３．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２０乃至２６のいずれか一つに記載の方法。
  28. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０，又は３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２０乃至２６のいずれか一つに記載の方法。
  29. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２８に記載の方法。
  30. 　ｌｏｇ２［ＦＰＫＭ＋１］値が３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項２８に記載の方法。
  31. 　がんに罹患したと診断されたヒト患者から取得した生体試料から、ＥｄｇｅＳｅｑ　Ａｓｓａｙによってｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が測定され、これが特定の値を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子及び／又はＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項１又は２に記載の方法。
  32. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が、１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，　１４．０，　１４．１，　１４．２，　１４．３，　１４．４，　１４．５，　１４．６，　１４．７，　１４．８，　１４．９，及び１５．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３１に記載の方法。
  33. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が、１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０．　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，　１３．５，　１３．６，　１３．７，　１３．８，　１３．９，及び１４．０からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３１又は３２に記載の方法。
  34. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が、１２．０，　１３．０，　又は１４．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３１又は３２に記載の方法。
  35. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３４に記載の方法。
  36. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１３．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３４に記載の方法。
  37. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１４．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのｈＴＲＯＰ２遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３４に記載の方法。
  38. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　１２．５，　１２．６，　１２．７，　１２．８，　１２．９，　１３．０，　１３．１，　１３．２，　１３．３，　１３．４，及び１３．５からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３１乃至３７のいずれか一つに記載の方法。
  39. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５，　１１．６，　１１．７，　１１．８，　１１．９，　１２．０，　１２．１，　１２．２，　１２．３，　１２．４，　及び１２．５からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３１乃至３８のいずれか一つに記載の方法。
  40. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５，　１２．０，　及び１２．５からなる群から選択されるいずれか一つを上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項３１乃至３８のいずれか一つに記載の方法。
  41. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１１．５を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項４０に記載の方法。
  42. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１２．０を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項４０に記載の方法。
  43. 　ｌｏｇ２［ＭＮＣ＋１］値が１２．５を上回る場合に、ｍＲＮＡレベルでのＳＬＦＮ１１遺伝子の発現量が高いと判断される、請求項４０に記載の方法。
  44. 　生体試料が腫瘍試料を含む、請求項１乃至４３のいずれか一つに記載の方法。
  45. 　抗ｈＴＲＯＰ２抗体を含有する医薬が抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体である、請求項１乃至４４のいずれか一つに記載の方法。
  46. 抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体が、次式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、Ａは抗ｈＴＲＯＰ２抗体との結合位置を示す）
    で示される薬物リンカーと、抗ｈＴＲＯＰ２抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体薬物複合体である、請求項４５に記載の方法。
  47. 　抗ｈＴＲＯＰ２抗体が、配列番号１においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖からなる抗体である、請求項４６に記載の方法。
  48. 　抗ｈＴＲＯＰ２抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項４７に記載の方法。
  49. 　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２から８個の範囲である請求項４６乃至４８のいずれか一つに記載の方法。
  50. 　薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が３．５から４．５個の範囲である請求項４６乃至４９のいずれか一つに記載の方法。
  51. 　抗ｈＴＲＯＰ２抗体薬物複合体が、Ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ　Ｇｏｖｉｔｅｃａｎ　（ＩＭＭＵ－１３２）である、請求項４５に記載の方法。
  52. 　がんが、肺がん、腎がん、尿路上皮がん、大腸がん、前立腺がん、多形神経膠芽腫、卵巣がん、膵がん、乳がん、メラノーマ、肝がん、膀胱がん、胃がん、子宮頸がん、子宮体がん、頭頸部がん、食道がん、胆道がん、甲状腺がん、リンパ腫、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、及び／又は多発性骨髄腫である請求項１乃至５１に記載の方法。
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