WO2015053589A1

WO2015053589A1 - 메트포민 및 스타틴의 복합제를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: WO2015053589A1
Application number: PCT/KR2014/009538
Authority: WO
Inventors: 조미라; 박성환; 박민정; 전주연; 이성희; 변재경; 정정희; 이정아; 곽승기; 이주하; 주지현; 양철우; 나현식; 이은정; 이선영; 양은지; 손혜진
Original assignee: 가톨릭대학교 산학협력단
Priority date: 2013-10-11
Filing date: 2014-10-10
Publication date: 2015-04-16

Abstract

본 발명은 메트포민, 스타틴 및 선택적으로는 코엔자임 Q10을 포함하는 복합제를 이용한 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 메트포민, 스타틴 및 선택적으로는 코엔자임 Q10을 유효성분으로 포함하는 복합제인 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 효과적으로 억제시킬 수 있고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시킬 수 있으며, 파골세포의 분화를 억제하고 관절파괴를 억제하는 효과를 가지며 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell)의 생성 억제 효과가 뛰어나 자가면역질환을 포함하는 면역질환의 치료제로서 유용하게 활용될 수 있다.

Description

메트포민 및 스타틴의 복합제를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물

본 발명은 메트포민 및 스타틴의 복합제를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

아울러, 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 복합제를 이용한 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

전세계적으로 면역과민반응으로 인한 질환이 증가하고 있지만, 이러한 질환들의 발생에 대한 근본적인 원인 규명이 충분히 이루어지지 않은 상태이다. 현재 과도한 면역반응에 의한 질환의 치료방법으로는 면역억제제를 단독 또는 병용 투여함으로써 상기 질환에 의해 야기되는 각종 증상을 완화 내지 감소시키는 것이다.

면역억제제란 항원의 작용에 대하여 숙주가 항체를 만드는 능력(체액성 면역반응) 또는 세포성 면역반응을 일으키는 능력을 저하시키거나 차단하기 위해 사용되는 다양한 물질들을 말한다. 이러한 면역억제제는 장기이식분야 뿐만 아니라 루푸스, 류마티스 관절염 등과 같은 자가면역질환과, 아토피, 알러지 등의 피부과민 반응에도 유용하게 사용될 수 있다. 우수한 면역억제제는 면역반응의 불균형을 조절할 수 있어야 하고, 인체에 대한 안전성이 확보되어야 하며, 장기간 치료시에 질환의 재발 발생 빈도가 낮아야 한다.

현재 사용되고 있는 면역억제제로는 사이클로스포린 A와 FK506 등이 있는데, 이들은 복잡한 화학구조를 가진 천연물 유래의 화합물로서 원료 수급의 측면에서 고비용으로 인해 비경제적이고 장기투여로 인해 각종 부작용이 야기될 수 있다는 위험성을 내포하고 있다. 따라서 낮은 독성, 면역관용 유도와 함께 경제적인 생산이 가능한 새로운 면역억제제의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

한편, 각종 병원체에 대한 생체 방어 시스템으로 면역계에서 중심적 역할을 담당하는 세포군의 하나로 T 세포가 있다. T 세포는 인체의 흉선에서 생성되며 일련의 분화 과정을 거치면서 고유의 특성을 지닌 T 세포로 분화하게 되는데, 분화를 완료한 T 세포는 그 기능에 따라 크게 1형 보조 세포(Th1)와 2형 보조 세포(Th2)로 구분된다. 이 중에서 Th1 세포의 주된 기능은 세포 매개성 면역에 관여하고, Th2 세포는 체액성 면역에 관여하며, 면역계에서 이러한 두 세포 집단은 서로 과활성화되지 않도록 서로 견제를 통해 면역계의 균형을 유지하고 있다.

따라서 면역질환의 대부분은 이러한 두 면역 세포간의 불균형에 기인하는 것으로 볼 수 있는데, 예를 들어 Th1 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 자가면역질환이 발생할 수 있고, Th2 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 과민반응에 의한 면역질환이 발생하는 것으로 알려져 있다.

한편, Th1 세포의 분화에 대한 최근 연구 결과에 따르면, Th1 세포의 활성을 조절할 수 있는 새로운 그룹인 면역조절 T 세포(Treg)의 존재가 알려지면서 이를 이용한 면역질환의 치료에 대한 연구가 대두되고 있는데, Treg 세포는 비정상적으로 활성화된 면역세포의 기능을 억제하여 염증 반응을 제어하는 특성이 있어, Treg 세포의 활성을 증가시키는 작용을 통해 면역질환을 치료하는 실험들이 많이 보고되고 있다.

또한, Treg 세포 이 외에 분화 과정에서 만들어지는 또 다른 그룹으로 Th17 세포가 있는데, Th17 세포는 미분화 T세포의 분화 과정에서 Treg 세포의 분화와 유사한 과정을 거치며 형성되는 것으로 알려져 있다. 즉, Treg 세포와 Th17 세포의 분화는 공통적으로 TGF-β의 존재 하에서 이루어지지만 Treg 세포의 경우 IL-6을 필요로 하지 않는 반면, Th17 세포의 경우에는 TGF-β와 함께 IL-6가 존재하는 상황에서 분화를 한다. 또한, 분화된 Th17 세포는 IL-17을 분비하는 것을 특징으로 한다.

Th17 세포는 Treg 세포와는 달리 면역질환에서 보이는 염증반응의 최전방에서 관여하여 염증 반응의 신호를 최대화시켜 질병의 진행을 가속화시키는 것이 밝혀지고 있다. 그러므로 자가면역질환 중 Treg 세포에 의해 제어되지 않는 자가면역질환의 경우, Th17 세포 활성의 억제를 표적으로 한 자가면역질환의 치료제 개발이 크게 부각되고 있다.

현재 사용되고 있는 면역질환치료제로는 T 세포에서의 신호변환 경로를 차단하는 면역 억제제가 가장 많이 사용되고 있는데, 이러한 면역억제제들은 독성, 감염, 임파종, 당뇨병, 진전(tremor), 두통, 설사, 고혈압, 오심, 신기능 장애 등의 부작용이 발생하는 문제점이 있다.

또한, T 세포의 활성화를 억제하는 방법을 통해 면역질환을 치료하는 방법 이외에도 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인의 양을 조절하는 치료법 및 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인을 표적으로 하는 항체를 이용한 치료법이 개발 중에 있다. 그러나 이러한 방법은 실제적으로 임상실험을 거쳐 환자들에게 적용하기까지 많은 시간이 소요되어야 하고, 항체를 이용하는 방법은 항체 제작 과정에서 너무 많은 비용이 든다는 문제점이 있다.

따라서 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 새로운 면역질환 치료제 및 치료방법의 개발이 시급한 실정이다.

본 발명은 보다 효과적인 자가면역질환 치료제를 개발하기 위해 연구하던 중, 메트포민(metformin) 및 스타틴(statin)을 병용 처리할 경우, 자가면역질환의 치료 효과가 매우 우수함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공하는 것이다.

또한, 본 발명자들은 면역질환을 치료할 수 있는 효과적인 치료제로서 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 모두 포함하는 복합제가 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 포함하는 단일제에 비해 면역질환의 증상을 월등히 개선시켜 면역질환을 효과적으로 치료할 수 있다는 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 다른 목적은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공하는 것이다.

나아가서는 본 발명의 다른 목적은 코엔자임 Q10, 스타틴(statin) 및 메트포민(Metformin)을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물에는 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 억제시키고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시켜 자가면역 질환의 치료 효과를 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 파골세포의 분화를 억제하고 관절파괴를 억제하는 효과를 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell)의 생성을 억제하는 활성을 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 염증성 사이토카인은 IL-17, IFN-γ, IL-6 및 TNF-α로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 자가면역질환은 류마티스 관절염(Rheumatoid Arthritis), 천식(Asthma), 피부염(Dermititis), 건선(Psoriasis), 낭섬유증(Cystic Fibrosis), 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증(Post transplantation late and chronic solid organ rejection), 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 하시모토 갑상선(Hashimoto thyroiditis), 다발성근염(polymyositis), 경피증(scleroderma), 아디슨병(Addison disease), 백반증(vitiligo), 악성빈혈(pernicious anemia), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 폐섬유증(pulmonary fibrosis), 염증성장질환(Inflammatory Bowel Dieseses), 자가면역성 당뇨(Autoimmune Diabetes), 당뇨 망막증(Diabetic retinopathy), 비염(Rhinitis), 허혈-재관류 손상(Ischemia-reperfusion injury), 혈관성형술후 재협착(Post-angioplasty restenosis), 만성 폐색성 심장 질환(Chronic obstructive pulmonary diseases; COPD), 그레이브병(Graves disease), 위장관 알러지(Gastrointestinal allergies), 결막염(Conjunctivitis), 죽상경화증(Atherosclerosis), 관상동맥질환(Coronary artery disease), 협심증(Angina), 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민(Metformin) 및 스타틴(statin)을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 투여는 메트포민 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 복합제는 스타틴 및 메트포민이 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 자가면역질환은 류마티스 관절염, 천식, 피부염, 건선, 낭섬유증, 고형장기 이식 후 기 및 만성 거부증, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 루푸스, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선, 다발성근염, 경피증, 아디슨병, 백반증, 악성빈혈, 사구체신염 및 폐섬유증, 염증성장질환, 자가면역성 당뇨, 당뇨 망막증, 비염, 허혈-재관류 손상, 혈관성형술 후 재협착, 만성폐색성 심장 질환, 그레이브병, 위장관 알러지, 결막염, 죽상경화증, 관상동맥질환, 협심증, 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.

나아가 본 발명은 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공한다.

본 발명은 효과적인 자가면역질환의 새로운 치료제를 개발하기 위해 연구하던 중, 메트포민과 스타틴 계열의 약물을 복합처리하는 경우, 매우 효과적으로 자가면역질환을 치료할 수 있음을 규명한 점에 특징이 있다.

따라서 본 발명은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.

본 발명의 조성물에 함유된 복합제의 성분 중, 메트포민은 당뇨병 치료효과가 있다고 알려진 화합물로서 한국공개특허 제2009-0005513호에 메트포민 말론산염에 항당뇨활성이 있다는 것이 개시되어 있으나 메트포민을 자가면역질환의 예방 및 치료에 사용한다는 내용에 대해서는 전혀 언급된 바가 없다.

또한 본 발명의 복합제의 성분 중 다른 유효성분인 스타틴(statin) 계열의 약물은 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증과 같은 이상지질혈증 또는 심혈관계 질환 치료제로 사용되고 있으나, 본 발명과 같이 자가면역질환의 예방 및 치료에 사용한다는 내용에 대해서는 전혀 언급된 바가 없다.

본 발명에서 사용할 수 있는 스타틴 계열의 약물은 실라스타틴(cilastatin), 나이스타틴(nystatin), 로바스타틴(lovastatin), 소마토스타틴(somatostatin), 프라바스타틴(pravastatin), 심바스타틴(simvastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토바스타틴(atorvastatin), 세르바스타틴(cervastatin), 울리나스타틴(ulinastatin) 및 로슈바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 사용할 수 있고, 바람직하게는 로슈바스타틴을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물에 함유된 메트포민 대 스타틴의 혼합은 1:3~1:10의 농도비로 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명자들은 본 발명에서 규명한 메트포민과 스타틴의 복합제가 자가면역질환 치료에 효과적임을 실험을 통해 입증하였는데, 본 발명의 일실시예에 따르면, 이들 복합제는 이들 성분을 단독으로 사용한 경우에 비해 염증성 사이토카인의 생성을 효과적으로 억제시켰고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시키는 활성도 우수한 것으로 나타났다.

또한, 메트포민과 스타틴의 복합제는 이들 단독 처리군에 비해 파골세포 분화를 효과적으로 억제하고 관절파괴를 효과적으로 억제하는 활성이 있음을 규명하였고, 나아가 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포의 생성도 효과적으로 억제하는 활성이 있음을 알 수 있었다.

본 발명에서 상기 복합제가 억제할 수 있는 염증성 사이토카인은 이에 제한되지는 않으나, IL-17, IFN-γ 및 IL-6로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.

또한, 본 발명의 복합제가 치료할 수 있는 상기 자가면역질환은 이에 제한되지는 않으나, 류마티스 관절염, 천식, 피부염, 건선, 낭섬유증, 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 루푸스, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선, 다발성근염, 경피증, 아디슨병, 백반증, 악성빈혈, 사구체신염 및 폐섬유증, 염증성장질환, 자가면역성 당뇨, 당뇨 망막증, 비염, 허혈-재관류 손상, 혈관성형술후 재협착, 만성 폐색성 심장 질환, 그레이브병, 위장관 알러지, 결막염, 죽상경화증, 관상동맥질환, 협심증, 암 전이 및 소동맥 질환일 수 있다.

상기 치료란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 치료란 용어는 "치료하는"이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 자가면역질환의 치료 또는 치료요법은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:

(1) 자가면역질환의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,

(2) 자가면역질환의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,

(3) 자가면역질환을 경감시킴,

(4) 자가면역질환의 재발을 예방함, 및

(5) 자가면역질환의 증상을 완화함(palliating).

본 발명에 따른 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 메트포민 및 스타틴 화합물 또는 이들의 염을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 자가면역질환의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.

본 발명에 따른 메트포민 및 스타틴 화합물 또는 그의 염의 약학적으로 유효한 양은 각각 0.5 ~ 100 mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.5 ~ 5 mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 자가면역질환 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.

또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있고, 본 발명에 따른 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 자가면역질환의 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.

따라서 본 발명은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약제를 제공할 수 있으며, 나아가 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 면역억제제를 제공할 수 있다.

나아가 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공할 수 있다.

앞에서도 기술한 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 면역질환의 치료방법은 메트포민 및 스타틴을 함유하는 복합제제를 투여하는 방법 또는 이들 성분을 모두 병용 투여하는 방법을 통해 수행할 수 있는데, 즉, 메트포민 및 스타틴의 2가지 성분이 하나의 캡슐에 포함된 단일 조성물(single composition)의 형태로 사용될 수 있고 또는 각 성분이 개별적으로 포장된 개별적인 조성물(separate composition)을 함께 투여하는 형태로 사용될 수 있다.

그리고 상기 조성물이 개별적인 조성물인 경우에는, 상기 조성물을 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여할 수 있다.

또한, 적절한 투여 경로는, 예를 들어, 경구, 비강, 투과점막, 또는 장 투여 격막내, 직접 심실내, 복강내, 또는 안내 주사뿐만 아니라, 근육내, 피하, 정맥, 골수 주사를 포함한 비경구 전달을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 상기 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 염증성사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-17로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 발현을 감소 또는 억제시킬 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 파골세포 분화를 감소시키거나, 염증성세포의 침윤을 억제할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 소장의 두께 및 대장의 길이를 정상상태와 같이 유지 시키는 효과를 가질 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 베체트병, 다발성 근육염 또는 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 류마티스 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈 및 궤양성 대장염 중에서 선택될 수 있다.

또한, 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 투여는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 복합제는 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민이 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택된 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 베체트병, 다발성 근육염 또는 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 미토콘드리아 관련 증후군 및 궤양성 대장염 중에서 선택된 것일 수 있다.

나아가 본 발명은 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공한다.

본 발명자들은 면역 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 새로운 약물을 연구하던 중, 본 발명의 메트포민 화합물에 주목하였는데 메트포민은 당뇨병 치료효과가 있다고 알려진 바 있다. 또한, 한국공개특허 제2009-0005513호에 메트포민 말론산염에 항당뇨활성이 있다는 것이 개시되어 있으나 메트포민을 면역 질환의 예방 및 치료에 사용한다는 내용에 대해서는 전혀 언급된 바가 없다.

또한, 코엔자임 Q10(coenzyme Q10)은 체내에서 합성되는 지용성 비타민류 물질로 영양소의 대사에 관여하며 항산화력이 비타민 E보다 우수한 것으로 알려져 있고, 비타민 Q(vitamin Q)라고도 한다. 화학식은 C₅₉H₉₀O₄이고, 고등어, 꽁치, 정어리 등의 등푸른 생선과 현미, 계란, 두류, 시금치, 땅콩 등의 견과류에도 포함되어 있다. 코엔자임 Q10은 육류 등의 음식을 통해 소량을 얻을 수 있으나 대부분은 체내에서 만들어지며, 코엔자임 Q10은 당질을 에너지로 바꾸어 혈당을 감소시키며 비타민 E와 같이 항산화 작용을 하여 세포막의 산화를 막고 산소 이용율을 높이는 작용도 한다. 또한 정자를 활성화 시키고 활성산소의 생성을 억제하는 항산화능이 우수하여 동맥경화나 고혈압과 같은 심혈관계질환, 암, 뇌출혈, 알츠하이머병, 당뇨병 등의 질병을 예방해 주는 효과도 있다고 알려져 있다.

또한, 로수바스타틴(rosuvastatin)은 크레스토라는 상품명을 가진 고지혈증 치료제로서 해로운 콜레스테롤을 감소시키고, 유익한 콜레스테롤을 증가시키는 효과를 지닌 고지혈증 치료제로 알려진 바 있다. 로수바스타틴은 간에서 콜레스테롤 합성을 억제하는 'HMG-CoA 환원효소 저해제' 또는 '스타틴'이라 부르는 지질저하제이며, 40개국 3만 명 이상의 환자를 대상으로 한 갤럭시 프로그램이라는 대규모 임상실험을 통하여 어떤 스타틴 제제보다 유효성과 안정성에 대하여 집중적이고 엄격한 심사를 거쳐왔다. 임상시험 결과해로운 콜레스테롤인 LDL 콜레스테롤을 최고 63%까지 감소시키고, 유익한 콜레스테롤인 HDL 콜레스테롤은 최고 8.9%까지 증가시켰으며, 중성지방을 낮추는데도 효능을 보이는 것으로 나타났다.

유럽공동지침(JEG)이 가이드라인으로 제시한 고지혈증 치료 목표치 도달률에서도 80%를 상회하였는데, 이는 기존에 시판되는 다른 스타틴제제들 보다 뛰어난 수치로서 심혈관 질환을 치료하는 대표 약물인 아스피린을 대체할 가능성도 전망된다.

한편, 앞서 배경기술에도 기재한 바와 같이, 현재 사용되고 있는 면역질환의 치료제로는 면역 억제제, 핵산 길항제, 대사 길항제 등이 사용되고 있다. 그리고 대중요법으로서 항염증제, 혈액 응고 길항제 등도 사용되고 있다. 그러나 이들 약물의 효과는 충분하지 않으며 면역 억제제에 대해서는 당뇨병, 신장 장해, 감염증의 유발 등의 부작용이 알려져 있고, 핵산 길항제, 대사 길항제의 사용은 간(肝) 장해, 골수 장해 등의 부작용이 다발하고 있다.

따라서 본 발명은 종래 개발된 치료제에 비해 부작용은 적으면서도 치료 효과가 우수한 면역질환의 새로운 치료제를 제공하기 위한 것으로, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 3가지 성분을 모두 포함하는 복합제제가 면역질환을 치료할 수 있는 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 규명하였다.

특히, 본 발명의 일실시예에 따르면, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독으로 처리한 군에 비해 이들을 병용 투여한 결과, 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-17, Th1 및/또는 Th17의 발현을 월등히 억제되는 것을 확인할 수 있었다(도 12의 A 및 도 13 참조).

또한, 본 발명의 다른 일실시예에 따르면, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 병용 투여가 관절염 치료 효과가 우수한지 확인하기 위하여 관절염 유도 동물을 제작한 후, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 각각을 단독 처리군과 이들을 복합 처리한 군으로 나누어 관절염 지수를 측정한 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독 처리한 군에 비해 이들을 병용처리한 군에서 관절염 지수가 현저히 감소되는 것으로 나타났다(도 16 참조).

또한, 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제는 파골세포 분화 억제 효과도 단독 처리한 군에 비해 우수한 것으로 나타났다(도 19a 참조).

따라서 상기의 결과를 통해 본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 모두 포함하는 복합제제가 면역질환 뿐만 아니라 파골세포 이상으로 유발되는 관절염 및 골다공증과 같은 질환도 치료할 수 있다는 것을 알 수 있었다.

나아가 본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제가 염증성 장 질환을 치료할 수 있는지를 확인하기 위하여 염증성 장 질환 유도 동물모델을 제작한 뒤 이들 성분을 단독처리한 군과 복합제제로 처리한 군 및 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용 중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군을 대상으로 치료 효과를 분석한 결과, 설파살라진을 투여한 군보다 본 발명의 복합제제를 처리한 군이 장 길이 변화 및 몸무게 변화에서도 염증성 장 질환을 현저하게 개선 및 치료하는 효과가 있는 것으로 조사되었고, 장 조직에서 조직의 손상이 적고 세포 침식 정도가 적음을 알 수 있었다(도 20a, 도 20b 및 21 참조).

따라서 상기 결과를 통해 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 복합제제는 염증성 장질환을 효과적으로 억제할 수 있으며 나아가 자가면역질환의 치료에도 사용할 수 있음을 알 수 있었다.

본 발명에서 상기 염증성 장질환은 장에 발생하는 원인 불명의 만성적인 염증을 뜻하며, 통상적으로 특발성 염증성 장질환인 궤양성 대장염과 크론병을 지칭하지만 우리나라에 비교적 흔한 장형 베체트병도 이에 속한다고 할 수 있다. 넓은 의미로는 세균성, 바이러스성, 아메바성, 결핵성 장염 등의 감염성 장염과 허혈성 장질환, 방사선 장염 등의 모든 장에 발생하는 염증성 질환을 통칭하기도 한다.

그러므로 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 조성물에 함유되는 상기 3가지 화합물인 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴은 이들 각각의 화합물 자체, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하며, 상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.

본 발명에 따른 화합물은 천연으로부터 분리되거나 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조된 것을 사용할 수 있다.

상기 본 발명에 따른 메트포민 화합물은 천연으로부터 분리되거나 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조된 것 모두를 사용할 수 있으며, 본 발명의 면역질환 치료를 위한 복합제에 함유되는 3가지 주요 성분의 함량은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴은 이를 필요로 하는 개체에 메트포민을 40~60mg/kg, 코엔자임 Q10을 4~6mg/kg 및 스타틴을 8~12mg/kg의 양으로 투여할 수 있다.

상기에서 본 발명의 복합제에 포함될 수 있는 각 성분의 함량범위는 앞서 기재된 범위 내로 포함하는 것이 바람직한데, 기재된 범위를 벗어날 경우, 복합제가 제대된 제형 및 활성을 위한 제제로 제조될 수 없으며, 치료 효과도 미비한 문제점이 있어, 상기 기술된 범위내에서 복합제를 제조하여야 한다.

또한, 본 발명에 따른 상기 조성물이 치료할 수 있는 대상 질환은 면역질환일 수 있으며, 본 발명에서 상기 면역질환은 포유류 면역계의 구성성분들이 포유류의 병리상태를 야기하거나, 매개하거나 또는 기타 공헌하는 질환을 의미한다. 또한, 면역 반응의 자극 또는 중단이 그 질병의 진행에 보상적인 효과를 갖는 질환을 모두 포함할 수 있는데, 본 발명에서는 과민성 면역반응으로 인해 야기되는 질환들을 포함할 수 있다. 이러한 면역질환의 예로는 이에 제한되지는 않으나, 자가면역질환; 염증성질환; 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환 등을 모두 포함할 수 있다.

또한, 모든 정상 개체에 있어서 가장 중요한 특성 중의 하나는 자기(self)를 구성하고 있는 항원물질에 대해서는 해롭게 반응하지 않는 반면, 비자기(non-self) 항원들에 대해서는 이를 인식하고 반응하여 제거할 수 있는 능력을 가지고 있다. 이처럼 자기항원에 대한 생체의 무반응을 면역학적 무반응성(immunologic unresponsiveness) 또는 관용(tolerance)이라고 한다.

그러나 이러한 자기관용을 유도하거나 계속 유지하는데 있어서 문제가 생기게 되면 자기항원에 대하여 면역반응이 일어나게 되고, 이로 인하여 자신의 조직을 공격하는 현상이 발생하는데 이러한 과정에 의해 발생되는 질환을 자가면역질환이라고 한다.

또한, 염증성 질환이란 염증유발인자 또는 방사선조사 등 유해한 자극으로 인해 인체 면역체계를 과도하게 항진시켜 대식세포와 같은 면역세포에서 분비되는 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1(interleukin-1), IL-6, 프로스타글란딘(prostagladin), 루코트리엔(luecotriene) 또는 산화질소(nitric oxide, NO)와 같은 염증유발물질(염증성 사이토카인)에 의해 유발되는 질환을 말한다.

한편, 성공적인 장기 이식을 위해서는 이식할 세포 및 장기에 대한 수혜자의 면역 거부반응을 극복해야 한다. 이식면역거부반응의 주요 매개체는 T 세포로서, 이식편(graft)에 발현되어져 있는 주조직적합성분자(major histocompatibility complex, MHC)를 T 세포 수용체(T cell receptor)가 인지함으로써 면역반응이 유도되어 이식거부반응이 발생되게 된다. 따라서 이러한 이식면역거부반응을 감소시키기 위해 면역억제제들이 사용되고 있는데 이러한 면역억제제들의 공통된 목적은 이식편에 대한 T 세포-매개 면역반응을 억제하는 것이며, 최근에는 조절 T 세포를 이용하여 면역반응을 억제함으로써 이식거부질환을 치료하려는 방법이 시도되고 있다.

구체적으로 본 발명에서 적용할 수 있는 상기 면역질환의 종류로는 이에 제한되지는 않으나, 베체트병, 다발성 근육염/피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 류마티스 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 궤양성 대장염 등을 포함할 수 있다.

또한 본 발명에서 상기 치료란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 치료란 용어는치료하는이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 면역질환의 치료또는 치료요법은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:

(1) 면역질환의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,

(2) 면역질환의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,

(3) 면역질환을 경감시킴,

(4) 면역질환의 재발을 예방함, 및

(5) 면역질환의 증상을 완화함(palliating).

본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서약학적으로 유효한 양이란 면역질환의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.

본 발명에 따른 복합제제에 함유된 성분 중, 메트포민은 40 ~ 60 mg/day/체중kg일 수 있으며, 코엔자임 Q10은 4 ~ 6 mg/day/체중kg, 스타틴은 8 ~ 12 mg/day/체중kg일 수 있다. 상기 약학적으로 유효한 양은 면역질환 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있고, 본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 면역질환의 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.

따라서 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약제를 제공할 수 있으며, 나아가 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 면역억제제를 제공할 수 있다.

나아가 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공할 수 있다.

앞에서도 기술한 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 면역질환의 치료방법은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 함유하는 복합제제를 투여하는 방법 또는 이들 성분을 모두 병용 투여하는 방법을 통해 수행할 수 있는데, 즉, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 3가지 성분이 하나의 캡슐에 포함된 단일 조성물(single composition)의 형태로 사용될 수 있고 또는 각 성분이 개별적으로 포장된 개별적인 조성물(separate composition)을 함께 투여하는 형태로 사용될 수 있다.

본 발명은 메트포민 및 스타틴의 복합제를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 복합제인 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 효과적으로 억제시킬 수 있고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시킬 수 있으며, 파골세포의 분화를 억제하고 관절파괴를 억제하는 효과를 가지며 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell)의 생성 억제 효과가 뛰어나 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 하는 복합제는 자가면역질환의 치료제로서 매우 유용하게 활용될 수 있다.

아울러, 본 발명에 따른 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 병용투여에 의한 면역질환의 치료는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독으로 처리한 군에 비해 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-17, Th1 또는 Th17의 발현을 월등히 억제시키고, 관절염 유도 동물 모델 및 염증성 장질환 유도 동물모델에서 이들 면역질환을 효과적으로 치료할 수 있는 효과가 있다.

도 1a 및 도 1b는 Th17 세포 분화 조건 하에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 세포내에서 IL-17과 IFN-γ의 생성정도를 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

도 2는 TCR 자극 조건 하에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 세포내에서 IL-17, IL-6 및 IFN-γ의 생성정도를 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

도 3은 TCR 자극 조건 하에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 세포내에서 TNF-α 생성정도를 ELISA로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

도 4는 관절염 유발 마우스 모델을 대상으로 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 관절염 지수 분석 및 혈청 내 IgG, IgG2a 의 수준을 측정한 결과를 나타낸 것이다.

도 5는 메트포민 및 로수바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 비만관절염 치료 효과를 확인한 결과이다.

도 6a 및 도 6b는 관절염 유발 마우스 모델을 대상으로 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 마우스의 혈액을 분리하고 혈액세포 CD4+T 세포를 분리한 후, 상기 세포내에서 IFN-γ와 IL-17의 발현정도를 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

도 7은 LPS를 처리하여 B 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 다음, plasma B 세포수를 측정한 결과와 배양액에서의 IgG, IgG1, IgG3의 항체분비 정도를 ELISA로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

도 8은 LPS를 처리하여 B 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 다음, 배양액에서의 IgG2a의 항체분비 정도를 ELISA로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

도 9는 RANKL 처리에 따른 파골세포 분화 조건에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 파골세포 마커인 TRAP, MMP9, β3 intergrin을 PCR로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

도 10은 인간 대식세포주인 THP-1 세포에 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민과 로슈바스타틴의 단독 처리에 따른 거품 세포 생성 억제 정도를 Oil Red O 용액 염색방법을 수행하여 관찰한 결과를 나타낸 것이다.

도 11은 인간 대식세포주인 THP-1 세포에 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민과 로슈바스타틴의 병용 처리에 따른 거품 세포 생성 억제 정도를 Oil Red O 용액 염색방법을 수행하여 관찰한 결과를 나타낸 것이다.

도 12의 A는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 TNF-α 억제 정도를 확인한 결과이다.

도 12의 B는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 세포독성 정도를 알아보기 위하여 MTT assay 분석을 한 결과이다.

도 13은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 IL-17 억제 정도를 확인한 결과이다.

도 14는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 염증성사이토카인인 TNF-α 및 IL-6 억제 정도를 확인한 결과이다.

도 15는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 IgG, IgG1, IgG2a 항체 분비 감소 정도를 확인한 결과이다.

도 16은 자가면역질환이 유발된 동물모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 각각의 단독 처리군 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합 처리군에서의 관절염지수를 나타낸 결과이다.

도 17은 자가면역질환이 유발된 동물모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 복합 처리한 후 염증성 사이토카인 조절 효과가 있는지를 확인한 결과이다.

도 18은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 비만관절염 치료 효과를 확인한 결과이다.

도 19a는 정상 마우스의 골수세포를 분리하여 M-CSF와 RANKL을 처리하고 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 및 병용 처리한 후 파골세포 분화 정도를 나타낸 사진이다.

도 19b는 정상 마우스의 골수세포를 분리하여 M-CSF와 RANKL을 처리하고 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 및 병용 처리한 후 파골세포 분화와 관련되어 있는 유전자들의 발현 정도를 확인한 결과이다.

도 20a 내지 20c는 정상 동물군, 염증성 장질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 처리한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 설파살라진을 투여한 군으로 실험동물을 구분하여 실험동물의 무게, 소장의 두께, 대장의 길이 및 염증성 장 질환 지수를 측정한 결과이다.

도 21은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제에 장 조직에서의 조직 파괴 억제 효과가 있는지를 조직 염색을 통해 확인한 결과이다.

도 22는 염증성 장질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 처리한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 설파살라진을 투여한 군으로 실험동물을 구분하여 염증성 사이토카인 발현 정도를 측정한 결과이다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

<실시예 1> 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 Th1/Th17 조절 효과

본 발명자들은 메트포민과 스타틴의 병용처리가 자가면역질환을 효과적으로 치료할 수 있는지 확인하기 위해 이들 성분을 병용 처리하였을 때, 세포내에서 Th1/Th17 조절효과를 분석하였다. 즉, 이를 위해 Th17 조건(CD3 1㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖, anti-IL-4 2㎍/㎖, anti-IFN-γ 2㎍/㎖, TGF-beta 2ng/㎖, IL-6 20ng/㎖)하에서 C57BL/6 정상마우스로부터 분리한 CD4+T 세포를 3일간 배양한 후, 세포들을 대상으로 메트포민 1mM, 로슈바스타틴(Rosuvastatin) 20μM을 각각 단독 및 복합처리한 후, 세포내에서 IL-17과 IFN-γ양을 FACS로 분석하였다.

분석 결과, 도 1a 및 도b에 나타낸 바와 같이, 아무것도 자극하지 않은 Th17 분화 조건에서는 염증성 사이토카인인 IFN-γ와 IL-17의 양이 증가되어 있는 것으로 나타난 반면, 메트포민이나 스타틴을 단독처리한 군의 경우, 아무것도 처리하지 않은 군에 비해 IFN-γ와 IL-17의 양이 감소된 것으로 나타났으나, 메트포민이나 스타틴을 병용처리한 군의 경우, 이들을 단독 처리한 군에 비해 더 우수한 효율로 IFN-γ와 IL-17의 양이 감소되어 있는 것으로 나타났으며, 특히, 병용처리 했을때는 IFN-γ는 메트포민 또는 스타틴 단독 처리군에 비해 4-20배 이상 더 의미있게 생성이 억제되었고, IL-17은 단독 대비 2.5-6배 더 감소되는 것으로 나타났다.

또한, 본 발명자들은 TCR 자극 조건(CD3 1㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖) 또는 LPS(100ng/㎖)조건 하에서 메트포민 1mM, 로슈바스타틴 20uM로 단독 또는 복합 처리를 하여 3일간 배양한 후 배양액을 얻어 IFN-γ와 IL-17, IL-6양을 ELISA로 측정하여 이들 사이토카인의 발현양을 분석하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 스타틴을 단독처리한 군에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 염증성 사이토카인인 IFN-γ(2-3배)와 IL-17(3-10배), IL-6(1.5배)의 수준이 감소되는 것을 확인할 수 있었다.

<실시예 2> 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 TNF-α조절효과

본 발명자들은 메트포민과 스타틴의 병용처리가 자가면역질환을 효과적으로 치료할 수 있는지 확인하기 위해 이들 성분을 병용 처리하였을 때, 세포내에서 염증성사이토카인 중 하나인 TNF-α의 조절효과를 분석하였다.

즉, 이를 위해 TCR 자극 조건(CD3 1㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖) 또는 LPS(100ng/㎖)조건 하에서 메트포민 1mM, 로슈바스타틴 20μM로 단독 또는 복합 처리를 하여 3일간 배양한 후 배양액을 얻어 TNF-α양을 ELISA로 측정하여 이들 사이토카인의 발현양을 분석하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 스타틴을 단독처리한 군에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 TNF-α양이 감소되는 것을 확인할 수 있었다.

<실시예 3> 동물모델을 대상으로 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 자가면역질환 치료효과 분석

메트포민과 스타틴의 병용처리가 실제로 자가면역질환이 유발된 마우스 동물에게 투여할 경우, 효과적인 치료 효능이 있는지 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다. 먼저 관절염이 유발된 마우스를 제조하기 위해 CIA로 유도하여 관절염 발병 마우스를 제조한 후, 1주일에 3회 복강 내 메트포민(50mg/kg)과 스타틴(10mg/kg)을 투여한 후, 2주일이 지난 시점에 관절염 지수를 측정하였다.

분석 결과, 관절염이 유발된 마우스를 대상으로 메트포민과 스타틴을 단독 투여한 군에 비해 이들을 병용투여한 군의 경우, 관절염 유도가 거의 억제되어 관절염이 발병되지 않는 것으로 나타났다(도 4 참조). 또한, 2주간 약물을 투여 후 마우스로부터 채혈하고 혈청을 수득한 후, IgG, IgG2a의 양을 ELISA로 측정하였다.

측정결과, 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 투여한 관절염 유발 마우스에서는 IgG 및 IgG2a의 수준이 유의하게 감소되는 것으로 나타났다(도 4 참조).

나아가 관절염 유도 마우스에 각각의 약물투여를 2주간 진행한 후 마우스의 혈액을 분리하여 혈액세포 CD4+T cell에서 IFN-γ와 IL-17의 양을 FACS로 분석한 결과, 이전의 in vitro 결과와 마찬가지로 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 염증성 사이토카인 레벨이 감소되는 것으로 나타났다(도 6a 및 6b 참조).

<실시예 4> 동물모델을 대상으로 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 난치성 비만관절염 치료효과 분석

비만은 당뇨병이나 동맥경화 등 각종 성인병의 원인이 될 뿐만 아니라 관절염에도 악영향을 미친다는 것은 이미 널리 알려져 있는 사실이다. 본 발명자들은 메트포민 및 로수바스타틴 병용처리가 비만에서 유발된 난치성 비만관절염에도 효과가 있는지를 확인하기 위하여 5주령의 DBA/1J마우스에 60kcal 고지방 식이를 유도하여 비만을 유도하였다.

또한, 비만 유도와 함께 관절염을 유도하기 위하여, 제 2형 콜라겐(CⅡ) 을 2㎎/㎖이 되도록 0.1N 아세트산 용액에 녹인 후 투석 완충액(dialysis buffer, 50mM Tris, 0.2N NaCl)으로 투석하여 M. 투베르쿨로시스(tuberculosis) 를 함유하는 complete Freund's adjuvant(CFA, Chondrex)와 동량으로 섞은 후 상기 마우스의 꼬리 기저부에 피하 주사하여 면역원을 마리당 100㎕(즉 100㎕/100㎍)로 주사하였다(1차 주사). 이로부터 2주 후 동일한 CⅡ를 동량의 incomplete Freud's adjuvant(IFA, Chondrex) 와 섞은 후 100㎕(즉 100㎕/100㎍)를 꼬리에 주사하였다(2차 주사).

2차 주사를 통한 2차 면역 후 매일 3주동안 메트포민(20mg/kg)과 스타틴(10mg/kg)을 각각 주입하였고, 각 군은 5마리씩을 대상으로 진행하여 관절염 평가를 진행하였다. 첫 번째 접종을 시작점으로 하여 3주 후부터 실험의 내용을 알고 있지 않은 관찰자 세 명이 일주일에 두 번씩 관절 염증의 위중도를 평가하여 61일까지 관찰하였다. 이 때 관절염 평가는 마리당 2차 접종 때 CⅡ/CFA 를 투여한 다리를 제외한 나머지 세 다리에서 아래의 척도에 따라 매긴 점수를 합하여 3 으로 나눈 평균치를 얻고, 다시 각 동물 모델에서 3명의 관찰자가 얻은 수치를 합산하여 나눈 평균치를 사용하였다. 관절염 평가에 따른 점수와 기준은 다음과 같다.

-평가 기준-

0점: 부종이나 종창이 없다.

1점: 발 또는 발목관절에 국한된 경한 부종과 발적

2점: 발목관절에서 족근골(metatarsal)에 걸친 경한 부종과 발적

3점: 발목관절에서 족근골에 걸친 중등도의 부종과 발적

4점: 발목에서 다리 전체에 걸쳐 부종과 발적이 있는 경우

각각의 처리군을 대상으로 난치성 비만관절염에 대한 관절염 평가점수를 확인한 결과, 아무것도 처리되지 않은 대조군에서는 관절염지수가 높게 나타났으나, 메트포민 또는 로수바스타틴을 각각 처리한 군에서는 관절염 평가 지수가 낮아졌으며, 본 발명의 메트포민과 로수바스타틴을 병용 처리한 군에서는 메트포민 또는 로수바스타틴을 각각 처리한 군보다 더 월등한 비만관절염 치료 효과가 있음을 알 수 있었다(도 5 참조).

<실시예 5> 메트포민과 스타틴 병용처리에 의한 B 세포 활성 및 자가항체 생산 조절 효과

메트포민과 스타틴의 병용투여가 B 세포의 항체 분비에 어떠한 영향을 미치는지 조사하기 위해, LPS를 처리하여 B 세포를 활성화 시키는 조건을 만든 후, 상기 활성화된 B 세포에 메트포민과 스타틴을 단독처리 또는 병용처리 하여 3일간 배양한 다음, plasma B cell(B220-CD138+ cell)의 활성을 FACS로 관찰하였다.

분석 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 plasma B cell(%)가 감소되는 것으로 나타났고, 또한 배양조건에서 얻은 배양액에서 항체 양을 ELISA로 측정한 결과에서도 IgG, IgG1, IgG3, IgG2a의 항체분비가 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 현저히 감소되는 것으로 나타났다(도 7 및 8 참조).

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 메트포민과 스타틴을 병용처리 할 경우, B 세포에 의한 자가항체 생산을 억제하여 면역반응을 효과적으로 조절할 수 있다는 것을 알 수 있었다.

<실시예 6> 메트포민과 스타틴 병용처리에 의한 파골세포 분화 및 관절파괴 제어 효과분석

메트포민과 로슈바스타틴의 복합처리에 따른 파골세포 조절에 미치는 영향을 조사하기 위해 RAW 264.7 세포주를 대상으로 파골세포로 분화 시킬 수 있는 RANKL을 50ng을 처리하고 이와 동시에 메트포민 1μM과 로슈바스타틴 5uM을 각각 단독 및 메트포민 0.2μM과 로슈바스타틴 1μM을 병용 처리하여 Osterocast의 마커를 확인 하였다. 구체적으로는, 24-웰에 48시간 배양시킨 세포로부터 추출한 RNA로부터 cDNA를 합성한 후 파골세포 마커인 TRAP, MMP9, β3 intergrin을 PCR로 조사하였다. RT-PCR은 Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 형광 염료로 ABI PCR 장치를 이용하여 수행하였고, 이를 위한 반응 화합물은 1㎍으로 합성한 cDNA를 1/3로 희석한 것 1㎕, Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 10㎕, Taqman probe(Applied biossystems) 1㎕를 혼합한 후 증류수로 최종 부피를 20㎕로 만들어 사용하였다. 반응 조건은 TRAP은 57℃ 30초, MMP9 64℃ 30초, β3 intergrin 60℃ 30초를 40회 반응시켰다. Cycle thereshold(Ct) 값을 분석 하여 TRAP, MMP9, β3 intergrin의 mRNA의 발현양을 house keeping gene인 β-actin의 mRNA 발현양과의 상대정량으로 나타내었다. 상기 RT-PCR에서 사용한 프라이머는 MMP9(Forward : 5-CTG TCC AGA CCA AGG GTA CAG CCT-3(서열번호 1)/ Reverse : 5-GAG GTA TAG TGG GAC ACA TAG TGG-3(서열번호 2)), TRAP(Forward : 5-TCC TGG CTC AAA AAG CAG TT-3(서열번호 3)/ Reverse : 5-ACA TAG CCC ACA CCG TTC TC-3(서열번호 4)), beta3 intergrin(Forward :5-CCA CAC GAG GCG TGA ACT-3(서열번호 5)/ Reverse : 5-CTT CAG GTT ACA TCG GGG TGA-3(서열번호 6))을 사용하였다.

분석 결과, 도 9에 나타낸 바와 같이, 파골세포 분화인자들의 생성을 메트포민과 로슈바스타틴을 단독 처리한 군에 비해 병용처리한 군에서 보다 효과적으로 억제하고 있는 것으로 나타났다.

<실시예 7> 메트포민 및 스타틴 단독처리에 의한 거품 세포(Foam cell) 제어 효과 조사

나아가 본 발명자들은 인간 대식세포주인 THP-1 세포에 160nM 농도의 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성 시킨 후 PAF(platelet-activating factor)를 10㎍/㎖ 처리함과 동시에 메트포민(0.2, 1μM)과 로슈바스타틴(1, 5, 20μM)을 각각 또는 병용 처리한 후, 동맥경화를 유발시키는 것으로 알려진 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell) 생성 정도를 Oil Red O 용액(시그마 알드리치) 염색을 통해 측정하였다.

그 결과 도 10에 나타낸 바와 같이, 메트포민과 로슈바스타틴을 처리함에 따라 거품세포의 생성은 억제되는 것으로 나타났다.

<실시예 8> 메트포민 및 스타틴 병용처리에 의한 거품 세포 제어 효과 조사

인간 대식세포주인 THP-1 세포에 160nM 농도의 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성 시킨 후 PAF(platelet-activating factor)를 10㎍/㎖ 처리와 동시에 메트포민(1, 5, 20μM)과 로슈바스타틴(5, 20μM)과 병용투여(Metformin 1μM + Rosuvastatin 5μM),(Metformin 1μM + Rosuvastatin 20μM)로 처리하여 동맥경화를 유발하는 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포 생성 정도를 Oil Red O 용액(시그마 알드리치) 염색을 통해 측정하였다.

그 결과, 도 11에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 로슈바스타틴 단독 처리 군에 비해 병용 처리 했을 때 거품 세포의 생성이 2~2.5배 정도로 효과적으로 억제되는 것으로 나타났다.

<실시예 9> 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제의 제조

메트포민 5mM, 코엔자임 Q10 1μM, 로수바스타틴 10μM을 균일하게 혼합한 후 20 메쉬의 체를 사용하여 체과한 후 유동층 과립기에 넣고 60℃에서 10 분간 열을 가했다. 히드록시프로필셀룰로오즈 6 g을 물 120 ㎖에 녹여 결합액을 제조한 후 제조한 결합액을 분당 7 ㎖의 속도로 분무하여 1차 과립을 제조하고 20 메쉬의 체로 체과하였다. 보글리보스 0.18 g과 히드록시프로필셀룰로오즈 6 g을 물 120 ㎖에 잘 교반하여 용해한 후 이를 상기 제조한 과립에 분무하여 2차 과립을 제조하였다. 20 메쉬의 체로 체과한 다음 건조하여 완성하였다.

<실시예 10> 본 발명의 면역질환 치료용 복합제제를 이용한 면역질환 치료 효과분석

<10-1> TNF-α 사이토카인 측정

메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제가 염증 조절 효과가 있는지 여부를 알아보기 위하여, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 단독 처리한 군 및 이들을 함유한 복합제제를 처리한 군을 대상으로 염증성 자극 인자인 TNF-α의 생성정도를 분석하였는데, LPS(10㎎/㎖)를 3일간 자극하는 조건에 메트포민, 코엔자임Q10, 로수바스타틴을 단독 또는 복합제제를 함께 투여하여 비장세포를 자극하였다.

배양된 상층액을 모아 mouse TNF-α, sandwich ELISA를 이용하여 TNF-α 발현 정도를 확인하였는데, 구체적으로 먼저, 96웰 플레이트(well plate)에 단클론성 anti-TNF-α 2㎍/㎖으로 4℃에서 밤새 반응시켰으며, 반응 후 차단용액(1% BSA/PBST)으로 비 특이적 결합을 차단시켰다. TNF-α recombinant를 1/2씩 연속 희석하여 스탠다드(standard)로 사용하였고, 세포배양 상층액을 넣고 실온에서 2시간 반응시켰다. 그리고 나서 바이오티닐(biotinylated) anti-TNF-α를 2시간 동안 실온 반응 시키고 4회 세척 후 ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate를 희석하여 첨가하고 실온에서 2시간 반응시켰으며, 이후 PNPP/DEA 용액을 넣고 발색하였고, 발색 후 405 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군보다 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제를 처리한 군에서 염증성사이토카인인 TNF-α의 생성이 더 효과적으로 억제되었음을 알 수 있었다(도 12의 A 참조).

<10-2> MTT 분석

본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 세포에 독성을 유발시키는지 확인하기 위해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각과 본 발명의 복합제를 상기 실시예 <10-1>에서 사용한 세포에 3일 동안 처리한 후, 수확 4시간 전에 3-(4,5 dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide 화합물을 첨가하여 4시간 동안 반응 후 DMSO를 각 웰에 처리하여 650nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 처리한 군 및 복합제 처리 군 모두에서 세포독성이 관찰되지 않았다(도 12의 B 참조). 따라서 본 발명의 복합제가 세포에 특별히 독성을 유발시키지 않아 안정성이 있음을 알 수 있었다.

<실시예 11> 본 발명의 복합제제에 의한 IL-17 생성억제 활성 분석

메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제가 염증성 사이토카인인 IL-17의 생성을 억제하는 활성이 있는지를 다음과 같은 방법으로 조사하였다.

먼저, DBA1/J 정상 마우스군의 CD4 T 세포를 분리하였으며 분리된 세포에 CD3 0.5㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖, IL-6 20ng/㎖, TGF-b 2ng/㎖, anti-IFNr mAb, anti-IL-4 mAb 의 조건으로 Th17 세포로 분화시켰다. 이후 분화된 세포에 메트포민 1mM, 코엔자임 Q10 10μM 및 로수바스타틴 1μM을 각각 단독으로 처리하고 동시에 이들 성분을 모두 포함하는 복합제제를 상기 세포에 처리한 후, 단클론성 anti-TNF-α 2㎍/㎖으로 4℃에서 밤새 반응시키고, 반응 후 차단용액(1% BSA/PBST)으로 비 특이적 결합을 차단하였다. IL-17 recombinant를 1/2씩 연속 희석하여 스탠다드(standard)로 사용하였고, 세포배양 상층 액을 넣고 실온에서 2시간 동안 반응시킨 다음 biotinylated anti-IL-17-a로 2시간 실온 반응시키며 반응 후 4회 세척 하고 ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate를 희석하여 넣고 실온에서 2시간 반응시켰다. 또한, 반응 후 PNPP/DEA 용액을 넣고 발색시켰으며, 405 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.

메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각의 단독 조건 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리 조건 시료로 3일 자극 후, 배양된 상층액을 모아 mouse TNF-α, sandwich ELISA를 이용하여 IL-17 발현 정도를 조사한 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군보다 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 복합제제를 처리한 군에서 염증성사이토카인인 IL-17 의 생성이 더 유의적으로 억제되었음을 알 수 있었다(도 13 참조).

<실시예 12> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성 사이토카인 분비 조절능 효과 분석

메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제가 염증을 조절하는 효과가 있는지를 알아보기 위하여 메트포민 및 로수바스타틴을 단독 처리한 군, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 투여한 군 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 모두 함유한 복합제제 처리군을 대상으로 염증성 사이토카인인 TNF-α와 IL-6 생성 정도를 분석하였다.

상기의 처리군에 LPS(10㎎/㎖)를 3일간 자극하여 비장세포를 자극하였으며, 배양된 상층액을 모아 mouse TNF-α, sandwich ELISA를 이용하여 TNF-α 및 IL-6 발현 정도를 확인하였는데, 구체적으로 먼저, 96 웰 플레이트(well plate)에 단클론성 anti-TNF-α 또는 anti-IL-6 2㎍/㎖으로 4℃에서 밤새 반응시키고, 반응 후 차단용액(1% BSA/PBST)으로 비 특이적 결합을 차단하였다. TNF-α 또는 IL-6 recombinant를 1/2씩 연속 희석하여 스탠다드(standard)로 사용하며, 세포배양 상층액을 넣고 실온 2시간 반응하였다. 그리고 나서 바이오티닐(biotinylated) anti-TNF-α 또는 anti-IL-6을 2시간 실온 반응 시키고 4회 세척 후 ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate를 희석하여 첨가하고 실온에서 2시간 반응시켰으며, 이후 PNPP/DEA 용액을 넣고 발색하였고, 발색 후 405 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 메트포민 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 투여한 군 보다 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제를 처리한 군에서 염증성사이토카인인 TNF-α 및 IL-6의 생성이 더 효과적으로 억제되었음을 알 수 있었다(도 14 참조).

<실시예 13> 본 발명의 복합제제에 의한 항체 조절 효과 분석

메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제에 항체를 조절할 수 있는 효과가 있는지를 알아보기 위하여 하기와 같이 실험을 하였다.

먼저, anti-IgG, IgG1,IgG2a 항체를 상온에서 2시간 동안 96-웰 마이크로필터 플레이트(well microtitier plate)에 도포한 다음 희석해 둔 혈청 샘플을 well당 50㎕씩 넣고 실온에서 1시간 반응시켰다. 반응이 끝나면 0.05% Tween 20(Amresco)이 포함된 TBS(pH 8.0)용액으로 3번씩 세척 후, anti-IgG, IgG1, IgG2a HRP 항체를 1시간 동안 반응시키고, 위의 용액으로 세척한 후 TMB +H₂O₂ system(KPL, Gaithersburg, MD)으로 발색하였다. 이는 450nm에서 흡광도로 읽었으며, 항체 측정 결과는 흡광도 자체로 표시하였다.

그 결과, 메트포민 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 투여한 군 보다 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제를 처리한 군에서 IgG, IgG1, IgG2a의 항체 분비가 현저히 감소하였음을 알 수 있었다(도 15 참조).

<실시예 14> 본 발명의 복합제제에 의한 관절염 치료 효과

<14-1> 관절염 지수 측정

본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제제가 실제로 관절염을 효과적으로 치료할 수 있는지 확인하기 위하여 먼저 DBA1/J 마우스에 type Ⅱ collagen 100㎍/CFA(Complete Freund's Adjuvant)를 마우스 꼬리 피하에 주입하고, 유도 2주 후 type Ⅱ collagen 100㎍/IFA(incomplete Freund's Adjuvant)을 꼬리 피하에 재 주입하여 관절염이 유도된 마우스를 제조하였다. 이후 관절염이 유도된 마우스에 메트포민 50mg/kg, 코엔자임 Q10 5mg/kg 및 로수바스타틴 10mg/kg을 각각 매일 경구투여 하였고, 본 발명의 복합제제 역시 매일 경구투여 한 뒤, 25일째에 각각의 실험군을 대상으로 관절염 지수를 측정하였다.

그 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 단독 투여한 군에 비해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제제를 처리한 군이 관절염 지수가 현저히 감소되는 것으로 나타났다(도 16 참조).

<14-2> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성 사이토카인 조절 효과

본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 관절염 질환 동물모델에서 염증성 사이토카인을 조절할 수 있는지를 확인하기 위해, 관절염 유발 마우스의 비장세포 1×10⁶의 세포에 anti-CD4 PerCP, anti-CD25 PerCP Ab를 처리하고 surface 항체 염색 후 세포 내 사이토카인 IL-17, IFN-γ과 Foxp3 Ab로 염색하여 Th17세포, Th1 및 Treg세포의 population을 유세포분석기를 이용하여 분석하였다.

그 결과, 관절염 유발 마우스 모델에 비해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴이 각각 처리된 관절명 유발 마우스의 비장세포에서 병인세포인 Th1 및 Th17 세포는 감소되어 있었으며, Treg 세포는 다소 증가한 것으로 나타났으나, 본 발명의 복합제제를 처리한 군에서는 상기 3가지 성분을 단독 처리한 군에 비해 Th1 및 Th17 세포 감소는 더 우수하였고, Treg 세포의 증가도 더 높은 것으로 나타났다(도 17 참조).

<14-3> 본 발명의 복합제제에 의한 파골세포 분화 억제 효과

본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 파골세포 분화 억제 효과가 있는지를 확인하기 위하여, 관절염 동물모델의 경골(tibia)과 비골(femur)로부터 골수 세포를 분리한 다음, 분리된 세포는 2×10⁵의 세포로 플레이팅하였으며, M-CSF(macrophage-colony stimulating factor) 10 ng/㎖을 처리하여 각 웰의 세포를 3일간 배양 후 상층액을 제거하고, 인산완충액으로 세척한 후, 새로운 배지로 교환하였다. 각각의 웰에 M-CSF 10ng/㎖, RANKL(receptor activator of NF-κB ligand) 50ng/㎖을 처리하고, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각의 단독 처리 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리하여 2일간 배양하였다. 2일간의 배양 완료 후, 새로운 α-MEM 배지로 교환하고 M-CSF, RANKL, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각의 단독 처리 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리하여 한 번 더 자극한 후, TRAP 염색하여 파골세포 분화를 관찰하였다.

메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 주입 동물모델에서의 파골세포의 분화도를 확인하기 위하여 대조군으로 M-CSF와 RANKL 을 처리한 동물모델과 비교한 결과 M-CSF와 RANKL 을 처리한 동물모델은 파골세포가 분화되었으며 반면에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 단독 처리한 경우, 파골세포 분화가 덜 분화되어 분화 억제되었으며, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리한 경우는 이들을 단독으로 처리한 경우보다 파골세포의 분화가 확연하게 억제되었음을 알 수 있었다(도 19a 및 19b 참조).

<14-4> 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제에 의한 파골세포 분화와 관련되어 있는 유전자 발현 억제 효과

상기 실시예 <14-3>의 파골세포 분화조건에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리하여 배양한 세포로부터 RNA를 분리하고 cDNA를 합성한 후 파골세포 마커인 TRAP, MMP9, β3 intergrin을 PCR로 조사하였다.

RT-PCR은 Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 형광 염료로 ABI PCR 장치를 이용하여 수행하였고, 이를 위한 반응 화합물은 1㎍으로 합성한 cDNA를 1/3로 희석한 것 1㎕, Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 10㎕, Taqman probe(Applied biossystems) 1㎕를 혼합한 후 증류수로 최종 부피를 20㎕로 만들어 사용하였다.

반응 조건은 TRAP은 57℃ 30초, MMP9 64℃ 30초, β3 intergrin 60℃ 30초, Cathepsin K 60℃ 30초를 40회 반응시켰다. Cycle thereshold(Ct) 값을 분석 하여 TRAP, MMP9, β3 intergrin, Cathepsin K 의 mRNA의 발현양을 하우스 키핑 유전자(house keeping gene)인 β-actin의 mRNA 발현양과의 상대정량으로 나타내었다.

표 1

사용한 프라이머의 서열

MMP9	정방향	5'-CTG TCC AGA CCA AGG GTA CAG CCT-3'	서열번호 1
MMP9	역방향	5'-GAG GTA TAG TGG GAC ACA TAG TGG-3'	서열번호 2
TRAP	정방향	5'-TCC TGG CTC AAA AAG CAG TT-3'	서열번호 3
TRAP	역방향	5'-ACA TAG CCC ACA CCG TTC TC-3'	서열번호 4
beta3 intergrin	정방향	5'-CCA CAC GAG GCG TGA ACT-3'	서열번호 5
beta3 intergrin	역방향	5'-CTT CAG GTT ACA TCG GGG TGA-3'	서열번호 6
Cathepsin K	정방향	5'-CAG CAG AGG TGT GTA CTA TG-3'	서열번호 7
Cathepsin K	역방향	5'-GCG TTG TTC TTA TTC CGA GC-3'	서열번호 8

따라서 본 발명자들은 상기의 결과를 통해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴(rosuvastatin, 상품명: 크레스토)의 복합체가 파골세포와 관련된 유전자의 발현 억제를 통해 파골세포 분화를 억제할 수 있으며 따라서 관절염을 효과적으로 치료할 수 있음을 알 수 있었다.

<14-5> 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제에 의한 난치성 비만관절염 치료 효과

비만은 당뇨병이나 동맥경화 등 각종 성인병의 원인이 될 뿐만 아니라 관절염에도 악영향을 미친다는 것은 이미 널리 알려져 있는 사실이다. 본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 비만에서 유발된 난치성 비만관절염에도 효과가 있는지를 확인하기 위하여 5주령의 DBA/1J마우스에 60Kcal 고지방 식이를 유도하여 비만을 유도하였다.

또한, 비만 유도와 함께 관절염을 유도하기 위하여, 제 2형 콜라겐(CⅡ)을 2㎎/㎖이 되도록 0.1N 아세트산 용액에 녹인 후 투석 완충액(dialysis buffer, 50mM Tris, 0.2N NaCl)으로 투석하여 M. 투베르쿨로시스(tuberculosis) 를 함유하는 complete Freund's adjuvant(CFA, Chondrex)와 동량으로 섞은 후 상기 마우스의 꼬리 기저부에 피하 주사하여 면역원을 마리당 100㎕(즉 100㎕/100㎍) 으로 주사하였다(1차 주사). 이로부터 2주 후 동일한 CⅡ를 동량의 incomplete Freud's adjuvant(IFA, Chondrex) 와 섞은 후 100㎕(즉 100㎕/100㎍) 를 꼬리에 주사하였다(2차 주사).

2차 주사를 통한 2차 면역 후 매일 3주동안 메트포민(20mg/kg)과 스타틴(10mg/kg) COQ10(5mg/kg)를 각각 주입하였고, 각 군은 5마리씩을 대상으로 진행하였고 관절염 평가를 진행하였다. 첫 번째 접종을 시작점으로 하여 3주 후부터 실험의 내용을 알고 있지 않은 관찰자 세 명이 일주일에 두 번씩 관절 염증의 위중도를 평가하여 61일까지 관찰하였다. 이 때 관절염 평가는 마리당 2차 접종 때 CII/CFA 를 투여한 다리를 제외한 나머지 세 다리에서 아래의 척도에 따라 매긴 점수를 합하여 3 으로 나눈 평균치를 얻고, 다시 각 동물 모델에서 3명의 관찰자가 얻은 수치를 합산하여 나눈 평균치를 사용하였다. 관절염 평가에 따른 점수와 기준은 다음과 같다.

-평가 기준-

0점: 부종이나 종창이 없다.

1점: 발 또는 발목관절에 국한된 경한 부종과 발적

3점: 발목관절에서 족근골에 걸친 중등도의 부종과 발적

4점: 발목에서 다리 전체에 걸쳐 부종과 발적이 있는 경우

각각의 처리군을 대상으로 난치성 비만관절염에 대한 관절염 평가점수를 확인한 결과, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 처리한 군에서 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비해 관절염 평가 지수가 낮아져 비만관절염의 치료에 효과가 있음을 알 수 있었으나, 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 처리한 경우 메트포민과 로수바스타틴을 병용 처리한 군보다 더 월등한 비만관절염 치료 효과가 있음을 알 수 있었다(도 18 참조).

<실시예 15> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성장질환 치료 효과

<15-1> 염증성 장 질환 동물모델 제작

본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 염증성 장 질환을 치료할 수 있는지를 확인하기 위하여, 먼저 염증성 장 질환 유도 동물모델을 제작하였다. 시험동물은 C57BL/6(H-2kb) 마우스를 사용하였으며, 염증성 장질환 유도 동물모델을 제조하기 위해, 마우스에 3.5% 덱스트란 설페이트 소듐(dextran sulfate sodium, DSS) 물을 4일간 음용하게 하여 염증성 장 질환 유도 동물 모델을 제작였다.

<15-2> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성장질환 치료 효과

본 발명자들은 실험동물을 염증성 장 질환이 유도되지 않은 정상 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물에 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용중인 설파살라진(sulfasalazine) 50mg/kg을 투여한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물에 본 발명의 메트포민 50mg/kg, 코엔자임 Q10 5mg/kg 및 로수바스타틴 10mg/kg을 투여한 복합제제를 투여한 군으로 4개의 그룹으로 나누고, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 투여한 군 및 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군은 질환 유도 3일 후부터 각각의 약물을 5mg의 농도로 경구 투여하였다.

각각의 동물 군을 대상으로 실험동물의 무게 변화, 장 길이 및 염증성 장 질환 지수를 측정한 결과, 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제는 염증성 장 질환 지수에서 대조군인 염증성 장 질환 유도 동물 모델 및 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용 중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군보다 염증성 장 질환을 억제하는 효과가 컸고, 장 길이 변화 및 몸무게 변화에서도 염증성 장 질환을 현저하게 억제하는 효과가 있음을 알 수 있었다(도 20a 내지 20c 참조).

<15-3> 본 발명의 복합제제에 의한 장 조직에서의 조직 파괴 억제 효과

본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 장 조직에서의 조직 파괴 억제 효과가 있는지를 확인하기 위하여, 염증성 장 질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물에 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물에 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 투여한 군으로 3개의 그룹으로 나누고, 각 마우스군의 대장 조직을 분리하여 파라핀에 포매한 후 조직을 7㎛ 두께의 절편을 만들어 슬라이드에 부착하였다. 기본 염색을 진행하기 전에 자일렌을 이용하여 탈 파라핀 과정을 수행하였으며, 염색약은 대부분 수용액이므로 조직이 붙은 슬라이드를 고농도의 알코올에서 저농도의 알코올 수용액으로 처리하여 함수(hydration)시켰고, 헤마톡실린(hematoxylin) 수용액으로 일차염색을 한 후 에오신(eosin)으로 이차염색을 하는데 처음에는 진하게 염색한 후 알코올 용액으로 과도하게 염색된 표본의 염색정도를 적당하게 맞추는 분별(differentiation) 과정을 거쳐 염색했다.

조직학적 검사 결과, 염증성 장 질환 동물의 장 조직은 조직 손실이 많고, 많은 면역 세포들이 침식(infiltration)된 것을 확인할 수 있었으나 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 주입 동물모델에서는 조직의 손상이 적고 세포 침식 정도가 적음을 알 수 있었다(도 21 참조).

<15-4> 본 발명의 복합제제에 의한 장 조직에서의 염증성사이토카인 억제 효과 분석

본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 장 조직에서의 염증성사이토카인 억제 효과가 있는지를 확인하기 위하여, 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용 중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군과 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 투여한 군으로 나누어 이들의 대장조직을 분리하였으며, 파라핀에 포매한 후 조직을 7㎛ 두께의 절편을 만들어 슬라이드에 부착하였다. 면역화학염색법을 이용하여 TNF-α, VEGF, IL-8, IL-6, IL-17 로 염색하여 광학현미경으로 분석하였다.

그 결과, 대조군인 염증성장질환 동물군에서는 대장 조직에서 염증성 사이토카인이 증가되어 있으나, 설파살라진을 투여한 군 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제 처리군에서는 염증성 사이토카인의 발현이 현저하게 억제되어 있음을 알 수 있었다(도 22 참조).

이제까지 본 발명에 대하여 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

본 발명은 하기 국가연구개발사업 프로그램의 지원에 의해 수행되었다.

1. 과제고유번호: HI09C1555

2. 연구사업명: 보건의료연구개발사업

3. 연구과제명: 고형장기 이식에서 Th17세포군 조절을 통한 항체생산 면역반응 제어와 면역 관용법 개발

4. 주관기관명: 가톨릭대학교 산학협력단

5. 부처명: 보건복지부

6. 연구관리전문기관: 한국보건산업진흥원

7. 연구기간: 2013-12-01~2014-11-30

본 발명에 따른 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 복합제인 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 효과적으로 억제시킬 수 있고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시킬 수 있으며, 파골세포의 분화를 억제하고 관절 파괴를 억제하는 효과를 가지며 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품 세포의 생성 억제 효과가 뛰어나므로, 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 하는 복합제는 자가면역질환 치료분야에서 매우 유용하게 활용될 수 있다.

아울러, 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 병용투여에 의한 면역질환의 치료는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독으로 처리한 군에 비해 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-17, Th1 및/또는 Th17의 발현을 월등히 억제시키고, 관절염 유도 동물 모델 및 염증성 장질환 유도 동물모델에서 이들 면역질환을 효과적으로 치료할 수 있으므로, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 조성물을 면역질환 치료 분야에서 유용하게 사용할 수 있다.

Claims

메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 조성물에는 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 억제시키고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시켜 자가면역 질환의 치료 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 조성물은 파골세포의 분화를 억제하고 관절파괴를 억제하는 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 조성물은 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell)의 생성을 억제하는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 3에 있어서,

상기 염증성 사이토카인은 IL-17, IFN-γ, IL-6 및 TNF-α로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 스타틴은 실라스타틴(cilastatin), 나이스타틴(nystatin), 로바스타틴(lovastatin), 소마토스타틴(somatostatin), 프라바스타틴(pravastatin), 심바스타틴(simvastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토바스타틴(atorvastatin), 세르바스타틴(cervastatin), 울리나스타틴(ulinastatin) 및 로슈바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 자가면역질환은 류마티스 관절염(Rheumatoid Arthritis), 천식(Asthma), 피부염(Dermititis), 건선(Psoriasis), 낭섬유증(Cystic Fibrosis), 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증(Post transplantation late and chronic solid organ rejection), 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 하시모토 갑상선(Hashimoto thyroiditis), 다발성근염(polymyositis), 경피증(scleroderma), 아디슨병(Addison disease), 백반증(vitiligo), 악성빈혈(pernicious anemia), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 폐섬유증(pulmonary fibrosis), 염증성장질환(Inflammatory Bowel Dieseses), 자가면역성 당뇨(Autoimmune Diabetes), 당뇨 망막증(Diabetic retinopathy), 비염(Rhinitis), 허혈-재관류 손상(Ischemia-reperfusion injury), 혈관성형술후 재협착(Post-angioplasty restenosis), 만성 폐색성 심장 질환(Chronic obstructive pulmonary diseases; COPD), 그레이브병(Graves disease), 위장관 알러지(Gastrointestinal allergies), 결막염(Conjunctivitis), 죽상경화증(Atherosclerosis), 관상동맥질환(Coronary artery disease), 협심증(Angina), 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
면역질환이 유발된 개체에 메트포민 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료 방법.
청구항 9에 있어서,

상기 투여는 메트포민 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 방법.
청구항 10에 있어서,

상기 복합제는 스타틴 및 메트포민이 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함되어 있는 방법.
청구항 9에 있어서,

상기 자가면역질환은 류마티스 관절염, 천식, 피부염, 건선, 낭섬유증, 고형장기 이식 후 기 및 만성 거부증, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 루푸스, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선, 다발성근염, 경피증, 아디슨병, 백반증, 악성빈혈, 사구체신염 및 폐섬유증, 염증성장질환, 자가면역성 당뇨, 당뇨 망막증, 비염, 허혈-재관류 손상, 혈관성형술 후 재협착, 만성폐색성 심장 질환, 그레이브병, 위장관 알러지, 결막염, 죽상경화증, 관상동맥질환, 협심증, 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제.
메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 14에 있어서,

상기 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 14에 있어서,

상기 조성물은 염증성사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-17로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 발현을 감소 또는 억제시키는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 14에 있어서,

상기 조성물은 파골세포 분화를 감소시키거나, 염증성세포의 침윤을 억제하는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 14에 있어서,

상기 조성물은 소장의 두께 및 대장의 길이를 정상상태와 같이 유지 시키는 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 14에 있어서,

상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 19에 있어서,

상기 면역질환은 베체트병, 다발성 근육염 또는 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 미토콘드리아 관련 증후군 및 궤양성 대장염 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법.
청구항 21에 있어서,

상기 투여는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 방법.
청구항 21에 있어서,

상기 복합제는 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민이 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함되어 있는 방법.
청구항 21에 있어서,

상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 방법.
코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제.