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WO2013073545A1 - 敗血症の治療及び／又は改善のための医薬 - Google Patents

敗血症の治療及び／又は改善のための医薬 Download PDF

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Publication number
WO2013073545A1
WO2013073545A1 PCT/JP2012/079449 JP2012079449W WO2013073545A1 WO 2013073545 A1 WO2013073545 A1 WO 2013073545A1 JP 2012079449 W JP2012079449 W JP 2012079449W WO 2013073545 A1 WO2013073545 A1 WO 2013073545A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
thrombomodulin
seq
amino acid
sepsis
patient
Prior art date
Application number
PCT/JP2012/079449
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
一壽 鶴田
喜和 青木
寛 大澤
インダー カウル
Original Assignee
旭化成ファーマ株式会社
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Publication date
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Priority to ES12850047T priority patent/ES2795439T3/es
Priority to AU2012337838A priority patent/AU2012337838B2/en
Priority to US14/358,115 priority patent/US9592275B2/en
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Priority to JP2013544281A priority patent/JP5902195B2/ja
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Priority to ZA2014/03494A priority patent/ZA201403494B/en
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    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology

Definitions

  • the present invention relates to a medicament for treating and / or improving sepsis in patients with severe sepsis.
  • Sepsis is a systemic inflammatory response syndrome (SIRS) caused by infection. That is, in addition to the presence of infection, SIRS items ((1) body temperature> 38 ° C or ⁇ 36 ° C, (2) heart rate> 90 / min, (3) respiratory rate> 20 / min or PaCO 2 ⁇ 32 torr, (4 ) White blood cell count> 12,000 / ⁇ L or ⁇ 4000 / ⁇ L or immature leukocyte> 10%).
  • SIRS systemic inflammatory response syndrome
  • Reduced organ perfusion or abnormal perfusion includes lactic acidosis, oliguria, consciousness turbidity, and the like.
  • septic shock those in which hypotension persists even after sufficient infusion load is called septic shock (Non-patent Document 1).
  • Circulatory insufficiency in these pathologies is thought to be caused by sympathetic nervous system dysfunction or mediators released from neutrophils, and organ damage is thought to be caused by tissue dysoxia.
  • thrombomodulin is known as a substance that specifically binds to thrombin and inhibits the blood coagulation activity of thrombin and at the same time significantly promotes the protein C activation ability of thrombin, and has a strong blood coagulation inhibitory action.
  • Protein C is a vitamin K-dependent protein that plays an important role in the blood coagulation / fibrinolysis system, and is activated by the action of thrombin to become activated protein C.
  • Non-Patent Document 2 This activated protein C is known to be involved in the production of plasminogen activator having a thrombolytic action, inactivating activated factor V and activated factor VIII of blood coagulation factor in vivo.
  • Non-Patent Document 3 thrombomodulin is said to be useful as an anticoagulant or thrombolytic agent by accelerating the activation of protein C by this thrombin, and is an animal experiment that is effective in the treatment and prevention of diseases associated with hypercoagulation.
  • Non-patent Document 3 There is also a report about
  • thrombomodulin has been discovered and acquired as a glycoprotein expressed on vascular endothelial cells of various animal species including humans, and cloning has been achieved thereafter. That is, the gene of a human thrombomodulin precursor containing a signal peptide is cloned from a human lung cDNA library using a genetic engineering technique, and the entire gene sequence of thrombomodulin is analyzed to obtain a signal peptide (usually having 18 amino acid residues). The amino acid sequence of 575 residues including (exemplified) has been clarified (Patent Document 1).
  • the mature thrombomodulin from which the signal peptide has been cleaved has an N-terminal region from the N-terminal side of the mature peptide (position 1-226: position display when the signal peptide is considered to be 18 amino acid residues, the same applies hereinafter), 5 of an EGF-like region (227-462), an O-type glycosylation region (463-498), a transmembrane region (499-521), and an intracytoplasmic region (522-557) It consists of two areas.
  • the portion having the same activity as that of the full-length thrombomodulin (that is, the smallest active unit) is a portion mainly composed of the 4th, 5th and 6th EGF-like structures from the N-terminal side in the region having 6 EGF-like structures. It is known (Non-Patent Document 4).
  • Soluble thrombomodulin may be prepared so as not to contain at least a part or all of the transmembrane region, for example, an N-terminal region, a region having six EGF-like structures, and an O-type glycosylation region.
  • Soluble thrombomodulin consisting of only amino acids (ie, consisting of amino acid sequences 19 to 516 of SEQ ID NO: 9) can be obtained by application of recombinant technology, and the recombinant soluble thrombomodulin has the activity of natural thrombomodulin.
  • Patent Document 1 There are some other reports as examples of soluble thrombomodulin (Patent Documents 2 to 9). Or as a natural type, soluble thrombomodulin derived from human urine is exemplified (Patent Documents 10 and 11).
  • thrombomodulin is effective in the treatment of disseminated (generalized) intravascular blood coagulation syndrome (hereinafter sometimes referred to as DIC) (Non-patent Document 6).
  • DIC intravascular blood coagulation syndrome
  • thrombomodulin is used in addition to the above, for example, acute coronary syndrome (ACS), thrombosis, peripheral vascular occlusion, obstructive arteriosclerosis, vasculitis, functional disorders secondary to cardiac surgery, organ transplant complications , Angina pectoris, transient cerebral ischemic attack, pregnancy toxemia, diabetes mellitus, liver VOD (Liver veno-occlusiveive disease; fulminant hepatitis or hepatic vein occlusion after bone marrow transplantation), deep vein thrombosis (DVT; Deep) (venous ⁇ ⁇ ⁇ thrombosis) and the like, and further, it is expected to be used for treatment and prevention of diseases such as sepsis and adult respiratory distress syndrome (ARDS
  • An object of the present invention is to provide a medicament for effectively treating and / or improving sepsis in patients with severe sepsis, or a method thereof.
  • INR International Normalized Ratio
  • CCM International Society for Emergency Medicine
  • the present inventors have focused on thrombomodulin among anticoagulants and have intensively studied the treatment and / or improvement effect on sepsis.
  • severe septic patients with one or more organ disorders excluding septic patients with liver or kidney-only organ disorders
  • the INR in the patient is greater than 1.4, it is possible to more effectively treat and / or improve sepsis, ie, to treat and / or improve thrombomodulin sepsis. It has been found that there is a special relationship between severe sepsis patients with organ damage and INR> 1.4 that cannot be anticipated by those skilled in the art.
  • the present invention includes the following.
  • [A1 -2] means that a term having a branch number such as is also cited. The same applies to the following.
  • thrombomodulin is a thrombomodulin having the following properties (1) to (4): (1) an action of selectively binding to thrombin, (2) the action of promoting the activation of protein C by thrombin, (3) an action of prolonging the coagulation time by thrombin, and (4) an action of suppressing platelet aggregation by thrombin.
  • thrombomodulin is a soluble thrombomodulin having the following properties (1) to (5): (1) an action of selectively binding to thrombin, (2) the action of promoting the activation of protein C by thrombin, (3) action to prolong the coagulation time by thrombin, (4) an action of suppressing thrombin-induced platelet aggregation, and (5) an anti-inflammatory action.
  • thrombomodulin is a peptide obtained from a transformed cell prepared by transfecting a host cell with a DNA encoding the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9 or 11 A5-3].
  • thrombomodulin is a peptide comprising any of the following amino acid sequences (i-1) or (i-2), and the peptide is a peptide having thrombomodulin activity:
  • a medicament according to any one of (I-1) the amino acid sequence at positions 19 to 516 in the amino acid sequence described in either SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 11, or (i-2) one or more of the amino acid sequences of (i-1) above An amino acid sequence in which the amino acids are substituted, deleted, or added.
  • the soluble thrombomodulin is (I) comprising the amino acid sequence at positions 367 to 480 in the amino acid sequence of either SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 11, and the amino acid sequence of any of the following (ii-1) or (ii-2)
  • [B1] A method for treating and / or ameliorating sepsis, comprising the step of administering thrombomodulin to a severe sepsis patient having an international standard ratio (INR) value of a plasma sample of the patient greater than 1.4.
  • Method. [B1-2] A method for treating and / or improving sepsis with abnormal coagulation, wherein thrombomodulin is administered to severe sepsis patients whose international standard ratio (INR) value of plasma samples of patients is greater than 1.4. Said method comprising the step of administering.
  • [B2] Administered to patients with severe sepsis who have an international standard ratio (INR) value of plasma samples greater than 1.4 and less than or equal to 1.6 and have one or more organ disorders
  • ILR international standard ratio
  • [B3] The method according to any one of [B1] to [B2] above, wherein the severe sepsis patient is a severe sepsis patient excluding a sepsis patient having organ damage only in the liver or kidney.
  • thrombomodulin is a peptide comprising any of the following amino acid sequences (i-1) or (i-2), and the peptide is a peptide having thrombomodulin activity: A method according to any of the above; (I-1) the amino acid sequence at positions 19 to 516 in the amino acid sequence described in either SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 11, or (i-2) one or more of the amino acid sequences of (i-1) above An amino acid sequence in which the amino acids are substituted, deleted, or added.
  • [B8] The method according to any one of [B1] to [B7] above, wherein the thrombomodulin is rapidly administered intravenously within 5 minutes at a dose of 0.005 to 1 mg / kg.
  • [B8-2] Any of the above [B1] to [B8], wherein the thrombomodulin is a thrombomodulin having the characteristics described in any one of [A5-2], [A5-3], or [A7-2] The method of crab.
  • [B9] Use of thrombomodulin as a medicament for the treatment and / or amelioration of sepsis, wherein the medicament has an international standard ratio (INR) value of a plasma sample of a patient greater than 1.4.
  • ILR international standard ratio
  • [B9-2] Use according to [B9] above, wherein the thrombomodulin is thrombomodulin having the characteristics described in any of [A5-2], [A5-3], or [A7-2].
  • [B9-3] Use according to [B9], which has the characteristics according to any one of [A1] to [A8].
  • [C1] A medicament for treating and / or improving disseminated intravascular blood coagulation syndrome containing thrombomodulin as an active ingredient, wherein the international standard ratio (INR) value of a plasma sample of a patient is greater than 1.4
  • the medicament according to [C1] which has the characteristics described in any one of [A1] to [A8].
  • the medicament containing thrombomodulin of the present invention can effectively treat and / or improve sepsis in patients with severe sepsis whose INR of the patient's plasma specimen is greater than 1.4.
  • the thrombomodulin in the present embodiment has an action of (1) selectively binding to thrombin and (2) promoting the activation of protein C by thrombin.
  • the action of these thrombomodulins is sometimes called thrombomodulin activity.
  • the thrombomodulin activity preferably has the actions (1) and (2) above, and further has the actions (1) to (4) above. Further, it is more preferable that the thrombomodulin activity has all of the actions (1) to (5).
  • thrombomodulin with thrombin The binding action of thrombomodulin with thrombin is described in, for example, Thrombosis and Haemostasis 1993 70 (3): 418-422 and The Journal of Biological Chemistry 1989 Vol. 264, no. 9 pp. This can be confirmed by the test methods described in various known documents including 4872-4876.
  • the action of accelerating the activation of protein C by thrombin is, for example, the action of accelerating the activation of protein C by a test method clearly described in various known documents such as JP-A-64-6219. The amount of activity and its presence can be easily confirmed.
  • the action of prolonging the coagulation time by thrombin and / or the action of suppressing platelet aggregation by thrombin can be easily confirmed in the same manner.
  • the anti-inflammatory action can also be confirmed by the test methods described in various known literatures including, for example, blood 2008 112: 3361-3670, The Journal of Clinical Investigation 2005 115 5: 1267-1274.
  • the thrombomodulin in the present invention is not particularly limited as long as it has thrombomodulin activity, but is preferably a soluble thrombomodulin that is soluble in water in the absence of a surfactant.
  • a preferable example of the solubility of soluble thrombomodulin is 1 mg / mL in water, for example, distilled water for injection (in the absence of a surfactant such as Triton X-100 or polidocanol, usually near neutrality). Or 10 mg / mL or more, preferably 15 mg / mL or more, or 17 mg / mL or more, more preferably 20 mg / mL or more, 25 mg / mL or more, or 30 mg / mL or more.
  • soluble thrombomodulin Preferably, 60 mg / mL or more is mentioned, and depending on the case, 80 mg / mL or more, or 100 mg / mL or more is mentioned, respectively.
  • soluble thrombomodulin it was clear and clearly recognized when dissolved, for example, directly under a white light source at a brightness of about 1000 lux. It is understood that the absence of such an insoluble material is a simple indicator. Moreover, it can also filter and can confirm the presence or absence of a residue.
  • the molecular weight of thrombomodulin is not limited as long as it has thrombomodulin activity, but the upper limit of the molecular weight is preferably 100,000 or less, more preferably 90,000 or less, and further 80,000 or less. Preferably, it is 70,000 or less, and the lower limit of the molecular weight is more preferably 50,000 or more, and particularly preferably 60,000 or more.
  • the molecular weight of soluble thrombomodulin can be easily measured by a usual method for measuring the molecular weight of a protein, but is preferably measured by mass spectrometry, and more preferably MALDI-TOF-MS method.
  • a soluble thrombomodulin obtained by culturing a transformed cell prepared by transfecting a host cell with a DNA encoding a soluble thrombomodulin. It can be obtained by fractionating thrombomodulin by column chromatography or the like.
  • the thrombomodulin in the present invention preferably includes the amino acid sequence at positions 19 to 132 of SEQ ID NO: 1, which is known as the central site of thrombomodulin activity in human thrombomodulin. It is not particularly limited as long as it includes the amino acid sequence at position 132.
  • the amino acid sequence at positions 19 to 132 of SEQ ID NO: 1 may be naturally or artificially mutated as long as it has an action of promoting the activation of protein C by thrombin, ie, thrombomodulin activity.
  • One or more amino acids in the 19th to 132nd amino acid sequences may be substituted, deleted, or added.
  • the degree of mutation allowed is not particularly limited as long as it has thrombomodulin activity.
  • homology 50% or more homology is exemplified as an amino acid sequence, 70% or more homology is preferable, and 80% or more homology is more. Preferably, a homology of 90% or more is further preferred, a homology of 95% or more is particularly preferred, and a homology of 98% or more is most preferred.
  • An amino acid sequence in which one or more amino acids in the amino acid sequence are substituted, deleted, or added in this way is called a homologous mutant sequence. As described later, these mutations can be easily obtained by using ordinary gene manipulation techniques.
  • Thrombomodulin is not particularly limited as long as it has the above-described sequence and has an action of selectively binding to thrombin as a whole and promoting the activation of protein C by thrombin, but at the same time has an anti-inflammatory action. preferable.
  • the sequence of SEQ ID NO: 3 is obtained by mutating Val, which is the amino acid at position 125 of SEQ ID NO: 1, to Ala.
  • the thrombomodulin in the present invention includes the amino acid sequence of positions 19 to 132 of SEQ ID NO: 3. It is also preferable.
  • the thrombomodulin in the present invention includes at least a sequence at positions 19 to 132 of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, or a homologous mutant sequence thereof, and includes at least a peptide sequence having thrombomodulin activity.
  • preferred examples include peptides consisting of sequences 19 to 132 or 17 to 132 in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, or peptides consisting of homologous mutant sequences of the above sequences and having at least thrombomodulin activity. More preferred is a peptide consisting of the sequence at positions 19 to 132 of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3.
  • a peptide consisting of a homologous mutant sequence at positions 19 to 132 or 17 to 132 in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 and having at least thrombomodulin activity is more preferable.
  • the thrombomodulin in the present invention preferably includes the amino acid sequence at positions 19 to 480 of SEQ ID NO: 5, and if it includes the amino acid sequence at positions 19 to 480 of SEQ ID NO: 5,
  • the amino acid sequence at positions 19 to 480 of SEQ ID NO: 5 may be a homologous mutant sequence as long as it has an action of promoting activation of protein C by thrombin, ie, thrombomodulin activity.
  • SEQ ID NO: 7 is obtained by mutating Val, which is the amino acid at position 473 of SEQ ID NO: 5, to Ala, and includes the amino acid sequences of positions 19 to 480 of SEQ ID NO: 7 as thrombomodulin in the present invention. It is also preferable.
  • the thrombomodulin in the present invention includes at least a sequence at positions 19 to 480 of SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 7, or a homologous mutant sequence thereof, and includes a peptide sequence having at least thrombomodulin activity.
  • preferred examples include a peptide consisting of the 19th to 480th position or the 17th to 480th position in SEQ ID NO: 5 or 7 or a peptide consisting of a homologous variant of the above sequence and having at least thrombomodulin activity. More preferred is a peptide consisting of the 19th to 480th positions of SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 7.
  • a peptide consisting of a homologous mutant sequence at positions 19 to 480 or positions 17 to 480 in SEQ ID NO: 5 or 7 and having at least thrombomodulin activity is more preferable.
  • the thrombomodulin in the present invention preferably includes the amino acid sequence at positions 19 to 515 of SEQ ID NO: 9, and includes the amino acid sequence at positions 19 to 515 of SEQ ID NO: 9.
  • the amino acid sequence at positions 19 to 515 of SEQ ID NO: 9 may be a homologous mutant sequence as long as it has an action of promoting the activation of protein C by thrombin, ie, thrombomodulin activity.
  • the sequence of SEQ ID NO: 11 is obtained by mutating Val, which is the amino acid at position 473 of SEQ ID NO: 9, to Ala.
  • the thrombomodulin in the present invention includes the amino acid sequence of positions 19 to 515 of SEQ ID NO: 11. It is also preferable.
  • the thrombomodulin in the present invention includes at least a sequence at positions 19 to 515 of SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 11, or a homologous mutant sequence thereof, and includes a peptide sequence having at least thrombomodulin activity.
  • a peptide having at least thrombomodulin activity is mentioned as a more preferred example, and a peptide comprising the sequence at positions 19 to 516, 19 to 515, 17 to 516, or 17 to 515 in SEQ ID NO: 9 Particularly preferred.
  • Thrombomodulin preferably has an anti-inflammatory effect at the same time.
  • the peptide having a homologous mutation sequence is as described above, but one or more, that is, one or more amino acids, more preferably several (for example, 1 to 20, preferably 1) in the amino acid sequence of the peptide of interest. 1 to 10, more preferably 1 to 5, and particularly preferably 1 to 3 amino acids).
  • the degree of mutation allowed is not particularly limited as long as it has thrombomodulin activity.
  • 50% or more homology is exemplified as an amino acid sequence, 70% or more homology is preferable, and 80% or more homology is more.
  • a homology of 90% or more is further preferred, a homology of 95% or more is particularly preferred, and a homology of 98% or more is most preferred.
  • the thrombomodulin in the present invention includes a peptide consisting of SEQ ID NO: 14 (462 amino acid residues), a peptide consisting of SEQ ID NO: 8 (272 amino acid residues), or SEQ ID NO: 6 (236) in JP-A-64-6219.
  • Peptides consisting of (amino acid residues) are also preferred examples.
  • the thrombomodulin in the present invention is not particularly limited as long as it is a peptide having at least the amino acid sequence at positions 19 to 132 of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3.
  • a peptide having at least the amino acid sequence at position 480 is preferred, and a peptide having at least the amino acid sequence at positions 19 to 515 of SEQ ID NO: 9 or 11 is more preferred.
  • Examples of the peptide having at least the 19th to 515th amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 or 11 include the 19th to 516th positions, the 19th to 515th positions, and the 19th position in SEQ ID NO: 9 or 11 respectively.
  • Peptides having a sequence of positions ⁇ 514, 17-516, 17-515, or 17-514 are more preferred examples.
  • a more preferred example is a mixture of the peptides consisting of SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 11 respectively.
  • the mixing ratio of the peptide starting from the 17th position and the peptide starting from the 19th position in each of SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 11 is exemplified by (30:70) to (50:50), 35:65) to (45:55) are preferable examples.
  • Examples of the mixing ratio of peptides ending at positions 514, 515, and 516 in SEQ ID NO: 9 or 11 are (0: 0: 100) to (0:90:10). In some cases, (0:70:30) to (10: 90: 0), (10: 0: 90) to (20:10:70) are exemplified. The mixing ratio of these peptides can be determined by an ordinary method.
  • the sequence at positions 19 to 132 of SEQ ID NO: 1 corresponds to the sequence at positions 367 to 480 of SEQ ID NO: 9, and the sequence at positions 19 to 480 of SEQ ID NO: 5 is the positions 19 to It corresponds to the 480th sequence.
  • the 19th to 132nd sequence of SEQ ID NO: 3 corresponds to the 367th to 480th sequence of SEQ ID NO: 11
  • the 19th to 480th sequence of SEQ ID NO: 7 is the 19th to 19th sequence of SEQ ID NO: 11. It corresponds to the 480th sequence.
  • the sequences at positions 1 to 18 in each of SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, and 11 are all the same sequence.
  • these thrombomodulins in the present invention are DNAs encoding these peptides (specifically, nucleotides such as SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 12). Sequence) can be obtained from a transformed cell prepared by transfecting a host cell with a vector.
  • these peptides only need to have the amino acid sequence described above, and may or may not have a sugar chain, and this point is not particularly limited.
  • the type of sugar chain, the addition position, and the degree of addition differ depending on the type of host cell to be used, and any of them can be used.
  • the facts described in JP-A No. 11-341990 are known for the position and type of sugar chain, and the same sugar chain may be added to the same position for thrombomodulin in the present invention.
  • N-linked sugar chains of fucosyl biantennary type and fucosyl triantennary type are bound to the thrombomodulin of the present embodiment, and the ratio thereof is exemplified as (100: 0) to (60:40), (95: 5) to (60:40) are preferable, and (90:10) to (70:30) are more preferable examples.
  • the ratio of these sugar chains can be measured by a two-dimensional sugar chain map described in Biochemical Experimental Method 23, Glycoprotein Sugar Chain Research Method, Academic Publishing Center (1990) and the like.
  • sugar composition of the thrombomodulin of the present embodiment was examined, neutral sugars, amino sugars and sialic acid were detected, and the ratio of 1 to 30% by weight with respect to the protein content was exemplified independently. 2 to 20% is preferable, and 5 to 10% is more preferable.
  • sugar contents are determined according to the method described in Shinsei Kagaku Kogaku Koza 3 Carbohydrate I Glycoprotein (above), Tokyo Chemical Dojin (1990) (neutral sugar: phenol-sulfuric acid method, amino sugar: Elson-Morgan method, sialic acid). : Periodic acid-resorcinol method).
  • signal sequences that can be used for expression include the first to A base sequence encoding the amino acid sequence at position 18, a base sequence encoding the amino acid sequence at positions 1 to 16 of SEQ ID NO: 9, and other known signal sequences such as the signal sequence of human tissue plasminogen activator can be used. (International Publication No. 88/9811).
  • a DNA sequence encoding thrombomodulin is preferably incorporated into a vector, particularly preferably an expression vector that can be expressed in animal cells.
  • An expression vector is a DNA molecule comprising a promoter sequence, a sequence that gives a ribosome binding site to mRNA, a DNA sequence that encodes a protein to be expressed, a splicing signal, a termination terminator sequence for transcription termination, a replication origin sequence, etc.
  • animal cell expression vectors include pSV2-X reported by Mulligan RC et al. [Proc Natl Acad Sci USA 1981; 78: 2072-2076] and Howley PM et al. [Methods in Emzymology 1983; 101: 387-402. PBP69T (69-6) reported by Academic Press].
  • Examples of host cells that can be used for producing these peptides include animal cells.
  • animal cells include Chinese hamster ovary (CHO) cells, COS-1 cells, COS-7 cells, VERO (ATCC CCL-81) cells, BHK cells, canine kidney-derived MDCK cells, hamster AV-12-664 cells, and the like.
  • CHO cells are very common and preferred, and among CHO cells, dihydrofolate reductase (DHFR) deficient CHO cells are more preferred.
  • DHFR dihydrofolate reductase
  • microorganisms such as Escherichia coli are often used in the process of gene manipulation and peptide production, and it is preferable to use a host-vector system suitable for each. In the above host cells, an appropriate vector system is selected. can do.
  • the gene of thrombomodulin used in the gene recombination technique has been cloned, and an example of production using the gene recombination technique of thrombomodulin is disclosed, and further, a purification method for obtaining the purified product is also known. [Japanese Unexamined Patent Publication Nos. 64-62219, 2-255699, 5-213998, 5-310787, 7-155176, J Biol Chem 1989; 264: 10351 -10353].
  • the thrombomodulin used in the present invention can be produced by using the method described in the above report or by following the method described therein.
  • JP-A-64-6219 discloses Escherichia coli ch K-12 strain DH5 (ATCC Deposit No. 67283) containing the plasmid pSV2TMJ2 containing DNA encoding the full-length thrombomodulin.
  • the strain (Escherichia coli DH5 / pSV2TM J2) (FERM BP-5570) of Life Research Institute (currently an independent administrative agency, the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST), can be used.
  • the thrombomodulin of the present invention can be prepared by a known gene manipulation technique.
  • the thrombomodulin in the present embodiment may be prepared by a conventionally known method or a method similar thereto.
  • a human-derived thrombomodulin gene can be made into a DNA encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, for example, by genetic manipulation techniques, and further modified as necessary.
  • a codon encoding the amino acid at position 473 of SEQ ID NO: 9 to form a DNA encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 (specifically, consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 12)
  • site-specific mutagenesis is performed according to the method of Zoller MJ et al. [Methods in Enzymology 1983; 100: 468-500, Academic Prepress].
  • the base T at position 1418 of SEQ ID NO: 10 can be converted to DNA converted to base C using a synthetic DNA for mutation having the base sequence shown in SEQ ID NO: 13.
  • the DNA thus prepared is incorporated into, for example, Chinese hamster ovary (CHO) cells to be appropriately selected as transformed cells, and thrombomodulin purified by a known method from a culture solution obtained by culturing the cells. Can be manufactured. As described above, it is preferable to transfect the host cell with DNA encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 (SEQ ID NO: 10).
  • the method for producing thrombomodulin in the present embodiment is not limited to the above method, and for example, it can be extracted and purified from urine, blood, other body fluids, etc., or a tissue that produces thrombomodulin or these It can be extracted and purified from tissue culture medium or the like, and if necessary, further cleaved with a proteolytic enzyme.
  • a medium used for normal cell culture When cultivating the above-mentioned transformed cells, it is possible to use a medium used for normal cell culture, and culturing the transformed cells in advance in various media to select an optimal medium. It is preferable.
  • a known medium such as a MEM medium, a DMEM medium, or a 199 medium may be used as a basic medium, and a medium that is further improved or supplemented with various mediums may be used.
  • the culture method include serum culture that is cultured in a medium to which serum is added, or serum-free culture that is cultured in a medium to which no serum is added.
  • the culture method is not particularly limited, but serum-free culture is preferred.
  • bovine serum is preferred when serum is added to the medium.
  • bovine serum include fetal calf serum, newborn calf serum, calf serum, and adult calf serum, and any of those suitable for cell culture may be used.
  • a serum-free medium to be used can be a commercially available medium.
  • Serum-free media suitable for various cells are commercially available. For example, for CHO cells, CD-CHO, CHO-S-SFMII, and CHO-III-PFM are available from Invitrogen, and IS CHO from Irvine Scientific. IS CHO-CD medium is sold. These media may be used as they are without modification or supplements.
  • examples of the serum-free medium include a DMEM medium supplemented with insulin, transferrin, and selenious acid at 5 mg / L.
  • the medium is not particularly limited as long as it can produce the thrombomodulin of the present embodiment.
  • the culture method is not particularly limited, and any culture method such as batch culture, repeated batch culture, fed-batch culture, and perfusion culture may be used.
  • the amino acid at position 17, 18, 19, or 22 in SEQ ID NO: 9 may be the N-terminus.
  • the N-terminal amino acid may be modified so that glutamic acid at position 22 is converted to pyroglutamic acid.
  • the amino acid at position 17 or 19 is preferably N-terminal, and the amino acid at position 19 is more preferably N-terminal.
  • the amino acid at position 17 is preferably N-terminal.
  • SEQ ID NO: 11 can be given for SEQ ID NO: 11 with respect to the above modifications and diversity.
  • a soluble thrombomodulin when produced using DNA having the base sequence of SEQ ID NO: 10, diversity of the C-terminal amino acid may be observed, and a peptide having a short amino acid residue may be produced. That is, the C-terminal amino acid may be modified such that the amino acid at position 515 becomes the C-terminal and the position 515 is amidated.
  • a peptide having a short two amino acid residues may be produced. That is, the amino acid at position 514 may be the C-terminus. Therefore, a peptide rich in diversity in N-terminal amino acid and C-terminal amino acid, or a mixture thereof may be produced.
  • the amino acid at position 515 or the amino acid at position 516 is preferably C-terminal, and the amino acid at position 516 is more preferably C-terminal. There is also another embodiment in which the amino acid at position 514 is preferably C-terminal.
  • the above modifications and diversity are the same for DNA having the base sequence of SEQ ID NO: 12.
  • the thrombomodulin obtained by the above method may be a mixture of peptides in which diversity is observed at the N-terminus and C-terminus.
  • the peptide comprising the sequence of positions 19 to 516, 19 to 515, 19 to 514, 17 to 516, 17 to 515, or 17 to 514 in SEQ ID NO: 9. A mixture is mentioned.
  • the method for isolating and purifying thrombomodulin from the culture supernatant or culture obtained as described above can be performed according to a known method [edited by Takeichi Horio, Basic experiment method for proteins and enzymes, 1981].
  • ion exchange chromatography or adsorption chromatography using an interaction between a chromatographic carrier having a functional group having a charge opposite to that of thrombomodulin immobilized thereon and thrombomodulin.
  • affinity chromatography using specific affinity with thrombomodulin.
  • the adsorbent include an example using an antibody of thrombin or thrombomodulin which is a ligand of thrombomodulin.
  • an antibody of thrombomodulin that recognizes an appropriate property or an appropriate epitope can be used.
  • JP-B-5-42920, JP-A-64-45398, JP-A-6-205682 The example described in the gazette gazette etc. is mentioned.
  • gel filtration chromatography and ultrafiltration using the molecular weight size of thrombomodulin can be mentioned.
  • hydrophobic chromatography using a hydrophobic bond between a chromatographic carrier on which a hydrophobic group is immobilized and a hydrophobic site of thrombomodulin can be mentioned.
  • Hydroxyapatite can also be used as a carrier for adsorption chromatography, and examples include those described in JP-A-9-110900.
  • the degree of purification can be selected depending on the purpose of use. For example, electrophoresis, preferably SDS-PAGE results are obtained as a single band, or gel filtration HPLC or reverse phase HPLC results of isolated purified products are simple. It is desirable to purify until one peak is reached. Of course, in the case of using a plurality of types of thrombomodulin, it is preferable that a band substantially consists of only thrombomodulin, and it does not require a single band.
  • a specific example of the purification method in the present invention is a method of purification using thrombomodulin activity as an index.
  • the culture supernatant or culture is roughly purified with Q-Sepharose Fast Flow of an ion exchange column and has thrombomodulin activity. Fractions were collected, and then the main fraction was collected with an affinity column, DIP-thrombin-agarose (diisopropylphosphorbrombin agarose) column, and the fractions with strong thrombomodulin activity were collected.
  • Purification method [Gomi K et al, Blood 1990; 75: 1396-1399] obtained as a product.
  • Examples of the thrombomodulin activity used as an index include activity of promoting protein C activation by thrombin.
  • Other preferred purification methods are as follows.
  • a particularly preferred example is a method using Q-Sepharose Fast Flow equilibrated with 0.02 mol / L Tris-HCl buffer (pH 7.4) containing 0.18 mol / L NaCl. After appropriate washing, elution is performed with, for example, 0.02 mol / L Tris-HCl buffer (pH 7.4) containing 0.3 mol / L NaCl, and a crude product thrombomodulin can be obtained.
  • a substance having specific affinity for thrombomodulin can be immobilized on a resin and subjected to affinity chromatography purification.
  • Preferred examples include a DIP-thrombin-agarose column and an anti-thrombomodulin monoclonal antibody column.
  • the DIP-thrombin-agarose column is pre-equilibrated with, for example, 20 mmol / L Tris-HCl buffer (pH 7.4) containing 100 mmol / L NaCl and 0.5 mmol / L calcium chloride, and the above crude product is charged.
  • a column packed with a resin that is brought into contact with pH 8.3) and coupled with Sepharose 4FF with an anti-thrombomodulin monoclonal antibody is preliminarily treated with a 20 mmol / L phosphate buffer (pH 7.3) containing 0.3 mol / L NaCl, for example.
  • a 20 mmol / L phosphate buffer (pH 7.3) containing 0.3 mol / L NaCl for example.
  • a method of equilibrating and eluting with a 100 mmol / L glycine hydrochloride buffer (pH 3.0) containing 0.3 mol / L NaCl after appropriate washing is exemplified.
  • the eluate can be neutralized with an appropriate buffer and obtained as a purified product.
  • a cation exchanger preferably a strong cation, equilibrated with 100 mmol / L glycine hydrochloride buffer (pH 3.5) containing 0.3 mol / L NaCl.
  • SP-Sepharose FF GE Healthcare Bioscience
  • the obtained fraction can be neutralized with an appropriate buffer and obtained as a highly purified product. These are preferably concentrated by ultrafiltration.
  • buffer exchange by gel filtration.
  • a highly purified product concentrated by ultrafiltration is charged onto a Sephacryl® S-300 column or S-200 column equilibrated with 20 mmol / L phosphate buffer (pH 7.3) containing 50 mmol / L NaCl. And developed with a 20 mmol / L phosphate buffer solution (pH 7.3) containing 50 mmol / L NaCl, and confirmed the activity of promoting protein C activation by thrombin to collect the active fraction. Exchanged high-purity products can be obtained.
  • the purified high-purity product thus obtained is preferably filtered using a suitable virus-removing membrane, for example, Planova 15N (Asahi Kasei Medical Co., Ltd.) in order to enhance safety, and then subjected to ultrafiltration for the desired concentration. Can be concentrated. Finally, it is preferable to filter through a sterile filtration membrane.
  • a suitable virus-removing membrane for example, Planova 15N (Asahi Kasei Medical Co., Ltd.) in order to enhance safety, and then subjected to ultrafiltration for the desired concentration. Can be concentrated.
  • a severe sepsis patient having a value of an international standard ratio (INR) of a plasma sample of a patient greater than 1.4 which is a medicament for treating and / or improving sepsis containing thrombomodulin as an active ingredient
  • the medicament is provided for administration to a severe sepsis patient having one or more organ disorders.
  • the medicament for treatment and / or improvement of sepsis in the present embodiment is a severe sepsis patient whose INR value of the patient's plasma specimen is greater than 1.4, and has one or more organ disorders. It is a medicament for treating and / or improving sepsis in patients with severe sepsis.
  • Drugs are provided.
  • preventing the death of a patient due to sepsis is one of preferable effects. Further, “preventing deterioration of the patient's general condition due to sepsis” is also a preferable effect.
  • Sepsis in this embodiment is caused by treatment for diseases such as infectious diseases, malignant tumors, cirrhosis, renal failure, diabetes, abnormal delivery, and injuries and diseases such as indwelling catheters, infusion devices, dialysis, and tracheostomy.
  • diseases such as infectious diseases, malignant tumors, cirrhosis, renal failure, diabetes, abnormal delivery, and injuries and diseases such as indwelling catheters, infusion devices, dialysis, and tracheostomy.
  • diseases such as infectious diseases, malignant tumors, cirrhosis, renal failure, diabetes, abnormal delivery, and injuries and diseases such as indwelling catheters, infusion devices, dialysis, and tracheostomy.
  • ARDS lung parenchyma Syndrome
  • the sepsis in the present embodiment is a systemic inflammatory response syndrome (SIRS) caused by infection. That is, in addition to the presence of infection, SIRS items ((1) body temperature> 38 ° C. or ⁇ 36 ° C., (2) heart rate> 90 / min, (3) respiratory rate> 20 / min or PaCO 2 ⁇ 32 torr, (4) Pathological conditions satisfying two or more items of white blood cell count> 12,000 / ⁇ L or ⁇ 4000 / ⁇ L or immature leukocytes> 10%). Basically, the pathological condition can diagnose sepsis.
  • SIRS systemic inflammatory response syndrome
  • Sepsis states include, for example, bacteremia, septicemia, systemic inflammatory response syndrome (SIRS), sepsis (SIRS where the microbe has been proven or suspected), severe sepsis, septic shock Refractory septic shock or multi-organ dysfunction (hereinafter sometimes referred to as MODS) (Harrison Internal Medicine, 15th edition, 124, P828-833, Medical Science International, Inc.).
  • SIRS systemic inflammatory response syndrome
  • MIRS systemic inflammatory response syndrome
  • Sepsis is not particularly limited as long as it satisfies the above diagnostic criteria, but sepsis with coagulopathy (sepsis with coagulopathy) is preferable.
  • the coagulation abnormality is not particularly limited as long as the INR of the patient's plasma specimen is greater than 1.2, but is preferably greater than 1.3, and more preferably greater than 1.4.
  • Examples of bacteremia include a state in which the presence of bacteria in blood that is proven to be positive in blood culture is confirmed.
  • Examples of septicemia include conditions in which the presence of microorganisms or other toxins in the blood is confirmed.
  • Examples of systemic inflammatory response syndrome (SIRS) include a state in the DIC preparation stage as described above.
  • Severe sepsis is exemplified by sepsis with one or more symptoms of organ damage such as metabolic acidosis, decreased organ perfusion, acute encephalopathy, oliguria, hypoxemia or disseminated intravascular coagulation, or hypotension.
  • organ damage such as metabolic acidosis, decreased organ perfusion, acute encephalopathy, oliguria, hypoxemia or disseminated intravascular coagulation, or hypotension.
  • severe sepsis a condition that causes organ damage, decreased organ perfusion, or hypotension.
  • Reduced organ perfusion or abnormal perfusion includes lactic acidosis, oliguria, consciousness turbidity, and the like. Severe sepsis in which hypotension persists even after sufficient fluid load is called septic shock.
  • septic shock examples include hypotension (blood pressure of 90 mmHg or less or 40 mmHg or less than normal blood pressure), which does not respond to resuscitation with a replacement fluid and is accompanied by organ failure.
  • refractory septic shock examples include those in which septic shock persists for 1 hour or longer and does not respond to fluid replacement vasopressors.
  • MODS multi-organ dysfunction
  • the INR in the present embodiment is a test index that defines abnormal blood coagulation.
  • INR means prothrombin time (hereinafter sometimes abbreviated as PT) that standardizes differences between production lots of thromboplastin preparations, and INR is defined as follows.
  • INR value (coagulation time of test sample (seconds) / coagulation time of control sample (seconds)) ⁇ (ISI value)
  • the clotting time (seconds) of the test sample indicates the PT of the plasma test sample to be measured.
  • ISI indicates an international sensitivity index.
  • Severe sepsis in the present embodiment is exemplified by sepsis accompanied by one or more organ disorders such as metabolic acidosis, acute encephalopathy, oliguria, hypoxemia or disseminated intravascular coagulation, or hypotension. Is done. Severe refers to a serious medical condition related to life. In particular, severe sepsis includes sepsis having one or more organ disorders.
  • the organ disorder is not particularly limited as long as it is an organ disorder caused by sepsis, but an organ disorder essential for the maintenance of life is preferable.
  • the one or more organ disorders include one or more organ disorders selected from the group consisting of cardiovascular disorders, respiratory disorders, renal disorders, and liver disorders.
  • Respiratory disorders, cardiovascular disorders, and renal disorders It is preferably one or more organ disorders selected from the group consisting of, and more preferably one or more organ disorders selected from the group consisting of respiratory disorders and cardiovascular disorders.
  • the number of organ disorders is not particularly limited as long as it is 1 or more, but 2 or more may be preferable. In particular, it is preferable to have two organ disorders, respiratory disorder and circulatory disorder at the same time.
  • the circulatory disorder is not particularly limited as long as it is generally known as a circulatory disorder, and examples thereof include blood pressure reduction or shock.
  • the respiratory disorder is not particularly limited as long as it is generally known as a respiratory disorder, and examples thereof include hypoxemia, acute lung disorder, and dyspnea.
  • the renal disorder is not particularly limited as long as it is generally known as renal disorder, and examples thereof include renal dysfunction, oliguria, or renal failure.
  • the liver disorder is not particularly limited as long as it is generally known as liver disorder, and examples thereof include liver dysfunction, jaundice, or liver failure.
  • the number of platelets in the patient to which the medicament in this embodiment is administered is not particularly limited as long as it is less than 300,000 / ⁇ L, but is preferably less than 200,000 / ⁇ L, and more preferably less than 150,000 / ⁇ L.
  • the INR value of the plasma specimen of a sepsis patient in the present embodiment is not particularly limited as long as it is larger than 1.4, and when INR is larger than 1.4, sepsis having one or more organ disorders Thrombomodulin is more effective for patients.
  • DIC means that a large amount of vascular coagulation promoting substance flows out due to tissue damage due to various diseases, the function of the coagulation system is extremely enhanced, and small thrombi are generated in blood vessels throughout the body (microthrombus formation) This is a disease or syndrome that causes abnormal hemostasis as a result of clogging of small blood vessels and consumption and lack of platelets and coagulation factors necessary for bleeding control. Specifically, due to intravascular fibrin formation, bleeding symptoms due to consumable coagulation-fibrinolysis and organ failure symptoms due to microthrombus formation are observed. DIC is sometimes referred to as disseminated intravascular coagulation syndrome or generalized intravascular coagulation syndrome.
  • DIC The clinical symptoms of DIC vary depending on the type of the underlying pathology, but as a diagnostic method of DIC, in addition to observing bleeding symptoms and organ symptoms, a DIC score is assigned according to the following test values, and a certain level or more It is preferable that a DIC is diagnosed when the score is reached.
  • test values include blood platelet count, fibrin degraded by plasmin and fibrinogen degradation product (hereinafter abbreviated as FDP) concentration, D-dimer concentration, fibrinogen concentration, or prothrombin time. .
  • preDIC can be diagnosed from thrombocytopenia, D-dimer, or increased FDP concentration without attaching a DIC score
  • DIC Dissao Nakagawa
  • Deguchi Katsumi. “Draft on DIC early treatment initiation criteria” Ministry of Health and Welfare specific disease blood coagulation disorder research group, 1999 Research Report 1999: 73-77, Katsura Nakagawa, Jun. “Current Status of DIC Diagnosis—Questionnaire Survey Report” Clinical Blood. 1999; 40: 362-364
  • a septic patient whose INR value of a patient plasma sample is greater than 1.2, preferably greater than 1.3, more preferably greater than 1.4 can be referred to as a DIC patient in a broad sense.
  • the medicament for treating and / or improving sepsis in this embodiment may be used as a medicament for treating and / or improving DIC.
  • the medicine in the present embodiment may be used for DIC.
  • Sepsis is also positioned as SIRS caused by infectious and serious clinical invasion, and is closely related to DIC that causes infection. DIC often occurs concurrently in sepsis, and the medicament according to the present embodiment may be used even for a septic patient who suffers from such DIC. That is, the medicine in this embodiment may be used for a patient suffering from DIC or sepsis, or both, or a patient suspected of suffering.
  • the INR in this embodiment can be measured as follows, for example. That is, the time (PT) until the addition of tissue thromboplastin and Ca 2+ to the plasma obtained by adding sodium citrate (test specimen) and coagulation (fibrin deposition) is measured, and determined by the number of seconds, Evaluation is performed based on the relative ratio (activity ratio) to the control sample.
  • the activity rate is determined by “the clotting time of the test sample (second) / the clotting time of the control sample (second)”.
  • the difference in the test value varies depending on the test execution organization depending on the sensitivity of the tissue thromboplastin used.
  • the INR value was devised to eliminate such disparity, and the PT between the facilities was eliminated by evaluating the PT with the INR value corrected by the International Sensitivity Index (hereinafter referred to as ISI). Standard results can be obtained.
  • the ISI indicates how much it differs from the international standard sample.
  • the ISI is determined for each tissue thromboplastin reagent and attached to the reagent. Examples of the thromboplastin reagent include, but are not limited to, thromborel S (registered trademark: manufactured by Sysmex Corporation) and thromboplastin C + (registered trademark: manufactured by Sysmex Corporation).
  • thromboplastin C + Human placental thromboplastin (ISI value is close to 1.0) is used in thromborel S (registered trademark), and rabbit brain thromboplastin (ISI value is about 1.8) is used in thromboplastin C + (registered trademark).
  • the tissue thromboplastin reagent is given ISI, and the INR value can be obtained by the above formula 1.
  • the control sample is not particularly limited as long as it is a commercially available normal human pool plasma.
  • a commercially available normal human pooled sodium citrate plasma that can be purchased from Kojin Bio Inc. or International Bio Inc. may be used. it can.
  • thrombomodulin may be used in combination with another drug, but the combination is not limited to these drugs.
  • dopamine may be administered to raise the mean blood pressure to at least 60 mmHg.
  • Other vasoconstrictors usually norepinephrine may be added if the dopamine dose exceeds 20 ⁇ g / kg / min.
  • Antibiotics are commonly used to treat sepsis-causing bacteria. Antibiotic selection requires evidence based on suspicious causes, clinical status, knowledge of microorganisms and knowledge of susceptibility patterns common to that particular hospital ward, and the results of prior culture tests. Thorough normalization of blood glucose levels in septic patients improves outcomes in severely ill patients. When using antibiotics, it is possible to examine a sample such as blood, body fluid, or wound part and select a drug effective for the causative bacteria. For example, for septic shock of unknown cause, gentamicin or tobramycin and third generation cephalosporin may be administered in combination. Vancomycin is added if resistant staphylococci or enterococci are suspected.
  • the dose is adjusted to maintain blood glucose level at 80 to 110 mg / dL (4.4 to 6.1 mmol / L) by continuous intravenous injection of insulin.
  • Corticosteroid therapy may be administered at a replacement dose because it is effective in treating sepsis.
  • rhAPC recombinant activated protein C
  • drotrecogin ⁇ recombinant activated protein C
  • erythropoietin In a septic patient, erythropoietin (EPO) may be administered when erythropoiesis is impaired due to renal failure. In severe sepsis, prophylactic administration of DVT by low-dose heparin or low-molecular-weight heparin may be performed.
  • the medicament of the present invention can contain a carrier.
  • the carrier that can be used in the present invention is preferably a water-soluble carrier, and is usually an isotonic agent, buffering agent, thickening agent, surfactant, preservative, preservative, which is acceptable as a pharmaceutical additive.
  • Agents, soothing agents, pH adjusters and the like are preferred.
  • it can be prepared by adding sucrose, glycerin and the like, pH adjusters of other inorganic salts, and the like as additives.
  • amino acids, salts, carbohydrates, surfactants, albumin, gelatin and the like may be added as disclosed in JP-A-1-6219 and JP-A-6-321805.
  • these addition methods are not particularly limited, in the case of freeze-drying, as usual, for example, a solution containing at least one selected from an immunosuppressant and a hematopoietic malignant tumor therapeutic agent and a thrombomodulin-containing solution After mixing, or at least one selected from an immunosuppressant or hematopoietic malignant tumor therapeutic agent in which the additive is added and mixed, or the additive is previously dissolved in water, distilled water for injection or an appropriate buffer. After mixing, a method of preparing a solution by a method of adding and mixing a thrombomodulin-containing solution and freeze-drying can be mentioned.
  • each medicament is preferably produced by adding a carrier by an appropriate production method.
  • the medicament of the present invention may be provided in the form of an injection solution, or may be provided in a form in which a freeze-dried preparation is dissolved at the time of use.
  • an ampule or vial can be filled with 0.1 to 10 mg of thrombomodulin, water for injection, and a solution containing an additive, for example, 0.5 to 10 mL to prepare an aqueous solution for injection.
  • a method of freezing and drying under reduced pressure to prepare a freeze-dried preparation is exemplified.
  • the medicament of the present invention is desirably administered by a parenteral administration method such as intravenous administration, intramuscular administration, or subcutaneous administration. Oral administration, rectal administration, intranasal administration, sublingual administration and the like are also possible.
  • a parenteral administration method such as intravenous administration, intramuscular administration, or subcutaneous administration.
  • Oral administration, rectal administration, intranasal administration, sublingual administration and the like are also possible.
  • the medicament of the present invention is a medicament formed by combining each pharmaceutical ingredient, it is preferable to administer each pharmaceutical ingredient by an appropriate administration method.
  • intravenous administration a method of administering a desired amount at a time (rapid intravenous administration) or intravenous drip intravenous administration can be mentioned.
  • the method of administering a desired amount at a time is preferable in that the administration time is short.
  • the time required for administration with a syringe usually varies, but the time required for administration is exemplified by 5 minutes or less, preferably 3 minutes or less, depending on the amount of liquid to be administered. It is more preferably 2 minutes or less, further preferably 1 minute or less, and particularly preferably 30 seconds or less.
  • the lower limit is not particularly limited, but is preferably 1 second or longer, more preferably 5 seconds or longer, and even more preferably 10 seconds or longer.
  • the dose is not particularly limited as long as it is the above-mentioned preferable dose. Intravenous administration is preferred because it is easy to keep the blood concentration of thrombomodulin constant.
  • the daily dose of the medicament in the present invention varies depending on the age, weight, disease level, route of administration, etc. of the patient, but generally, the upper limit of the amount of thrombomodulin is preferably 20 mg / kg or less, preferably 10 mg / kg. kg or less is more preferred, 5 mg / kg or less is more preferred, 2 mg / kg or less is particularly preferred, 1 mg / kg or less is most preferred, and the lower limit is preferably 0.001 mg / kg or more, more preferably 0.005 mg / kg or more.
  • 0.01 mg / kg or more is more preferable, 0.02 mg / kg or more is particularly preferable, and 0.05 mg / kg or more is most preferable.
  • the upper limit of the daily dose is preferably 1 mg / kg or less, more preferably 0.5 mg / kg or less, and 0.1 mg / kg. kg or less is more preferred, 0.08 mg / kg or less is particularly preferred, 0.06 mg / kg or less is most preferred, the lower limit is preferably 0.005 mg / kg or more, more preferably 0.01 mg / kg or more, and 02 mg / kg or more is more preferable, and 0.04 mg / kg or more is particularly preferable.
  • the upper limit of the daily dose is preferably 1 mg / kg or less, more preferably 0.5 mg / kg or less, and 0.1 mg / kg. kg or less is more preferred, 0.08 mg / kg or less is particularly preferred, 0.06 mg / kg or less is most preferred, the lower limit is preferably 0.005 mg / kg or more, more preferably 0.01 mg / kg or more, and 02 mg / kg or more is more preferable, and 0.04 mg / kg or more is particularly preferable.
  • the dosing interval can be once every 2 to 14 days, preferably once every 2 to 7 days, more preferably once every 3 to 5 days.
  • SEQ ID NO: 1 amino acid sequence encoded by the gene used for the production of TME456
  • SEQ ID NO: 2 nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1
  • SEQ ID NO: 3 amino acid sequence encoded by the gene used for the production of TME456M
  • SEQ ID NO: 5 amino acid sequence encoded by the gene used for the production of TMD12
  • SEQ ID NO: 6 base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5: production of TMD12M
  • Amino acid sequence encoded by the gene used in SEQ ID NO: 8 nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • SEQ ID NO: 9 amino acid sequence encoded by the gene used for production of TMD123
  • SEQ ID NO: 10 amino acid sequence of SEQ ID NO: 9
  • SEQ ID NO: 11 encoding the gene used for the production of TMD123M Am
  • the thrombomodulin in the present invention used in the test examples was produced according to the method of Yamamoto et al. (Method described in JP-A-64-6219). The production example is shown below. The thrombomodulin obtained in this production example was tested for safety through single and repeated intravenous administration tests using mice and monkeys, mouse reproduction tests, local irritation tests, safety pharmacology tests, virus inactivation tests, etc. Sex has been confirmed.
  • DNA encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 (specifically, consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 12) was transfected into Chinese hamster ovary (CHO) cells, and the above-mentioned culture medium of the transformed cells was used.
  • a thrombomodulin (may be abbreviated as TMD123M in this specification) solution purified by a conventional purification method is obtained, and a TMD123M preparation is obtained by the same method as described above.
  • a DNA encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 (specifically, consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 2) was transfected into Chinese hamster ovary (CHO) cells, and the above-mentioned culture medium of the transformed cells was used.
  • Thrombomodulin (which may be abbreviated as TME456 in the present specification) purified by a conventional purification method is obtained, and a TME456 preparation is obtained by the same method as described above.
  • TME456M Thrombomodulin purified by a conventional purification method is obtained, and a TME456M preparation is obtained by the same method as described above.
  • DNA encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 was transfected into Chinese hamster ovary (CHO) cells, and the above-mentioned culture solution of the transformed cells was used.
  • Thrombomodulin (which may be abbreviated as TMD12 in the present specification) purified by a conventional purification method is obtained, and a TMD12 preparation is obtained by the same method as described above.
  • TMD12M Thrombomodulin purified by a conventional purification method is obtained, and a TMD12M preparation is obtained by the same method as described above.
  • ⁇ Chemical solution preparation and filling> 2000 mL of water for injection was put into a 5 L stainless steel container. Furthermore, the polysorbate solution obtained above was added. Further, water for injection was added to make the total amount 4000 g, and the mixture was uniformly mixed and stirred. This chemical solution was sterilized by filtration through a filter (MCGL10S manufactured by Millipore) having a pore size of 0.22 ⁇ m. An ampule was filled with 1.1 g of the filtrate to obtain a placebo preparation.
  • Example 1 ⁇ Test method> Using TMD-123 produced according to Production Example 1 as thrombomodulin, a randomized double-blind placebo subject study was conducted in patients who developed sepsis and DIC. The total number of target patients was 750, of which 741 patients (370 patients receiving TMD-123 and 371 patients receiving placebo) were administered the study drug. TMD-123 was administered rapidly intravenously once a day for 6 consecutive days at a dose of 0.06 mg / kg. A placebo manufactured according to Production Example 7 was used. In addition, for patients over 100 kg in weight, rapid intravenous administration was performed once a day for 6 days continuously at a fixed dose of 6 mg for the purpose of suppressing the occurrence of side effects due to overdose.
  • the plasma INR value of the patient before administration of the study drug was measured by the method described in Formula 1 above.
  • patients with organ damage only in the liver or kidney were excluded from the target patients. This is because it is assumed that a patient having an organ disorder of only the liver or kidney may develop an organ disorder from a factor not limited to sepsis, such as a drug-induced organ disorder.
  • the outcome on the 28th day from the start of administration was confirmed, and the mortality (Mortality) of each patient group was calculated.
  • the difference in mortality between TMD-123 and placebo was calculated as the difference.
  • INR> 1.4 instead of INR> 1.5.
  • the difference in mortality was the maximum (9.7%) in the patients with the above, showing a high difference in mortality, both absolute and relative to other INR lower limits (Table 2).
  • patients with severe sepsis who have at least one organ disorder selected from the group consisting of cardiovascular disorder, respiratory disorder, kidney disorder, and liver disorder are compared to those with sepsis without organ disorder.
  • the difference in mortality between TMD-123 and placebo was large. (The former: 5.4%, the latter: -1.1%)
  • the medicament containing the thrombomodulin of the present invention is useful as a medicament capable of effectively treating and / or improving sepsis in a severe sepsis patient whose INR of a patient's plasma specimen is greater than 1.4.

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Abstract

　トロンボモジュリンを有効成分として含み、血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者における敗血症を効果的に治療及び／又は改善するための医薬。

Description

敗血症の治療及び／又は改善のための医薬
　本発明は、重症敗血症患者における敗血症を治療及び／又は改善するための医薬に関する。
　敗血症は、感染によって惹起された全身性炎症反応症候群（systemic inflammatory response syndrome:ＳＩＲＳ）である。すなわち感染の存在に加え，ＳＩＲＳ項目（（１）体温＞３８℃または＜３６℃、（２）心拍数＞９０／分、（３）呼吸数＞２０／分またはＰａＣＯ２＜３２ ｔｏｒｒ、（４）白血球数＞１２，０００／μＬ又は＜４０００／μＬまたは未熟型白血球＞１０％）の２項目以上をみたす病態と定義される。従来は、血液中の菌体の存在（bacteremia）が強調されてきたが、この定義では必ずしも血液培養陽性を必要としない。敗血症の中で、臓器障害，臓器灌流低下または低血圧を呈する状態は重症敗血症（severe sepsis）と呼ばれる。臓器灌流低下または灌流異常には、乳酸アシドーシス、乏尿、意識混濁などが含まれる。重症敗血症の中で、十分な輸液負荷をおこなっても低血圧が持続するものは敗血症性ショック（septic shock）と呼ばれる（非特許文献１）。これらの病態にみられる循環不全は、交感神経系の機能失調あるいは好中球などから放出されるメディエータによっておこり、また臓器障害は組織酸素代謝失調（dysoxia）によっておこると考えられている。
　一方、トロンボモジュリンは、トロンビンと特異的に結合しトロンビンの血液凝固活性を阻害すると同時にトロンビンのプロテインＣ活性化能を著しく促進する作用を有する物質として知られ、強力な血液凝固阻害作用を有することが知られている。トロンビンによる凝固時間を延長することや、トロンビンによる血小板凝集を抑制することが知られている。プロテインＣは、血液凝固線溶系において重要な役割を演じているビタミンＫ依存性の蛋白質であり、トロンビンの作用により活性化され、活性化プロテインＣとなる。この活性化プロテインＣは、生体内で血液凝固系因子の活性型第Ｖ因子、および活性型第ＶＩＩＩ因子を失活させ、また血栓溶解作用を有するプラスミノゲンアクチベータの産生に関与していることが知られている（非特許文献２）。したがって、トロンボモジュリンは、このトロンビンによるプロテインＣの活性化を促進して抗血液凝固剤または血栓溶解剤として有用であるとされており、凝固亢進を伴う疾患の治療、予防に有効であるという動物実験についての報告もある（非特許文献３）。
　従来、トロンボモジュリンは、ヒトをはじめとする種々の動物種の血管内皮細胞上に発現している糖蛋白質として発見取得され、その後、クローニングが達成されている。即ち、遺伝子工学的手法を用いてヒト肺ｃＤＮＡライブラリーからシグナルペプチドを含むヒトトロンボモジュリン前駆体の遺伝子をクローニングし、そしてトロンボモジュリンの全遺伝子配列を解析し、シグナルペプチド（通常は、１８アミノ酸残基が例示される）を含む５７５残基のアミノ酸配列が明らかにされている（特許文献１）。シグナルペプチドが切断されたマチュアなトロンボモジュリンは、そのマチュアなペプチドのＮ末端側よりＮ末端領域（１－２２６番目：シグナルペプチドが１８アミノ酸残基であると考えた場合の位置表示、以下同じ）、６つのＥＧＦ様構造をもつ領域（２２７－４６２番目）、Ｏ型糖鎖付加領域（４６３－４９８番目）、膜貫通領域（４９９－５２１番目）、そして細胞質内領域（５２２－５５７番目）の５つの領域から構成されている。全長のトロンボモジュリンと同じ活性を有する部分（すなわち、最小活性単位）は、６つのＥＧＦ様構造を持つ領域のうち、主としてＮ末端側から４，５，及び６番目のＥＧＦ様構造からなる部分であることが知られている（非特許文献４）。
　全長のトロンボモジュリンは界面活性剤の存在下でないと溶解し難く、製剤としては界面活性剤の添加が必須であるのに対して、界面活性剤の非存在下でもきれいに溶解することができる可溶性トロンボモジュリンの存在が知られている。可溶性トロンボモジュリンは、少なくとも、膜貫通領域の一部または全部を含有せしめないように調製すればよく、例えば、Ｎ末端領域と６つのＥＧＦ様構造をもつ領域とＯ型糖鎖付加領域の３つの領域のみからなる（即ち、配列番号９の第１９～５１６位のアミノ酸配列からなる）可溶性トロンボモジュリンは、組換え技術の応用により取得できること、そしてその組換え体可溶性トロンボモジュリンは、天然のトロンボモジュリンの活性を有していることが確認されている（特許文献１）。他に可溶性トロンボモジュリンの例としていくつかの報告がある（特許文献２～９）。あるいは天然型としてヒト尿由来の可溶性トロンボモジュリン等も例示される（特許文献１０、１１）。
　因みに、遺伝子においては、自然の変異または取得時の変異により、多くのケースで認められる通り、ヒトにおいても多形性の変異が見つけられており、上述の５７５残基のアミノ酸配列からなるヒトトロンボモジュリン前駆体の第４７３位のアミノ酸においてＶａｌであるものと、Ａｌａであるものが現在確認されている。このアミノ酸をコードする塩基配列においては、第１４１８位において、それぞれＴとＣとの変異に相当する（非特許文献５）。しかし、活性および物性においては、全く相違なく、両者は実質的に同一と考えることができる。
　トロンボモジュリンは播種性（汎発性）血管内血液凝固症候群（以下、ＤＩＣと呼ぶことがある）の治療において効果があることが報告されている（非特許文献６）。トロンボモジュリンの用途としては上述の他に、例えば、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、血栓症、末梢血管閉塞症、閉塞性動脈硬化症、血管炎、心臓手術に続発する機能性障害、臓器移植の合併症、狭心症、一過性脳虚血発作、妊娠中毒症、糖尿病、肝ＶＯＤ（Ｌｉｖｅｒ ｖｅｎｏ－ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ；劇症肝炎や骨髄移植後の肝静脈閉塞症）、深部静脈血栓症（ＤＶＴ；Ｄｅｅｐ ｖｅｎｏｕｓ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）等や、さらには敗血症や成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の疾患の治療および予防に用いられることが期待されている（特許文献１２）。
特開昭６４－６２１９号公報 特開平５－２１３９９８号公報 特開平２－２５５６９９号公報 特開平３－１３３３８０号公報 特開平３－２５９０８４号公報 特開平４－２１０７００号公報 国際公開ＷＯ９２／００３２５号 国際公開ＷＯ９２／０３１４９号 国際公開ＷＯ９３／１５７５５号 特開平３－８６９００号公報 特開平３－２１８３９９号公報 国際公開ＷＯ２００３／０６１６８７号
Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｏｌｌｅｄｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｓｔ　Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ，ＣＨＥＳＴ／１０１／６／ＪＵＮＥ，　１９９２：１４８１－１４８３ 鈴木宏治、医学のあゆみ　１９８３；１２５：９０１ Ｇｏｍｉ　Ｋ　ｅｔ　ａｌ．、 Ｂｌｏｏｄ １９９０；７５：１３９６－１３９９ Ｚｕｓｈｉ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ．、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　１９８９；２４６：１０３５１－１０３５３ Ｗｅｎ　ＤＺ　ｅｔ　ａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９８７；２６：４３５０－４３５７ Ｓ．Ｍ．Ｂａｔｅｓ　ｅｔ　ａｌ．、Ｂｒ．　Ｊ．  ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００５；１４４：１０１７－１０２８
　本発明の課題は、重症敗血症患者における敗血症を効果的に治療及び／又は改善するための医薬、またはそれらの方法を提供することにある。
　敗血症患者における血漿検体の国際標準比（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ　Ｒａｔｉｏ、以下、「ＩＮＲ」と略すことがある）は、凝固異常（Ｃｏａｇｕｌｏｐａｔｈｙ）を意味するものとして公知である。例えば、２００３年の国際救急治療医学会（ＣＣＭ）で報告されているＣｏａｇｕｌｏｐａｔｈｙの指標としては、ａＰＰＴ＞６０秒と共に、ＩＮＲ＞１．５が提示されている（Ｃｒｉｔ．　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ．， ２００３；３１：１２５０-１２５６）。しかしながら、このＩＮＲ値は臨床試験などによって検証されたものではなく、いまだ明確な結果として確定しているわけではない。実際に、抗凝固剤であるＴｉｓｓｕｅ Ｆａｃｔｏｒ Ｐａｔｈｗａｙ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒのティファコジン（Ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）の重症敗血症患者を対象とした第３相臨床試験において、ＩＮＲ＞１．２の患者を主要な対象として実施した結果として、ＩＮＲ≦１．２の患者群の方がＩＮＲ＞１．２の患者群よりも効果が良好であった旨報告している（JAMA, July 9, 2003, Vol.290. No.2, P238-247）。一方で本臨床試験の結果の中で、ＩＮＲ＞１．２の患者集団の中では、ＩＮＲ＞１．５の患者の方がＩＮＲ＞１．２の患者よりも効果が高い傾向にあったことが報告されている。また唯一敗血症の臨床試験において有効性が示されたザイグリス（Ｘｉｇｒｉｓ）においても、対象患者の多く（９３．４％）でプロトロンビン時間（ＰＴ）の延長が確認されている。
　このように、敗血症に対する抗凝固剤の治療の際には、Ｃｏａｇｕｌｏｐａｔｈｙを伴う患者を対象とすることにより、高い効果が一部の試験結果から期待されるものの、その反対の結果も得られているなど、Ｃｏａｇｕｌｏｐａｔｈｙの定義はいまだ確定しているとは言い難い。即ち、ＩＮＲ値を用いて対象患者をどのように規定すれば良好な結果が得られるのかという命題についてはいまだ明確になっておらず、どのようなＩＮＲ値を有する敗血症患者に薬剤が特に有効であるかについての技術常識も存在しない。ＩＮＲ値と治療効果との関係については、その一部がせいぜい各薬剤毎の個別のケースとして知られているに過ぎないと考えられる。
　こうした中、本発明者らは抗凝固薬の中でもトロンボモジュリンに着目し、敗血症に対する治療及び／又は改善効果について鋭意検討を行った。その結果、敗血症患者の中でも１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者（但し、肝臓又は腎臓のみの臓器障害を有する敗血症患者を除く）を対象とした場合には、臓器障害が無い患者に比して、意外にも患者におけるＩＮＲが１．４より大きい場合に、より効果的に敗血症を治療及び／又は改善できること、すなわちトロンボモジュリンの敗血症治療及び／又は改善に関し、敗血症患者の中でも１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者とＩＮＲ＞１．４との間に当業者には予想し得ない特別な関係があることを見出した。さらに、驚くべきことにＩＮＲが１．４より大きく１．６以下の値である重症敗血症患者においては、トロンボモジュリン－プラセボ間の死亡率差が１５％を超えるという特に顕著な効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。死亡率差が１５％というこの数値は、現在唯一の敗血症治療剤として欧州で販売されているザイグリス（Ｘｉｇｒｉｓ）の持つ薬剤－プラセボ間の死亡率差が６％程度である（N.Engl.J.Med., Vol.344, No.10, March 8, 2001, P699-709）ことを考えれば約２．５倍程度の大きさという顕著な数値であり、本発明の一態様は非常に驚くべき効果を有していることがわかる。
　すなわち、本発明として具体的には以下のものが挙げられる。
〔Ａ１〕トロンボモジュリンを有効成分として含む敗血症の治療及び／又は改善のための医薬であって、患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための該医薬。
〔Ａ１－２〕トロンボモジュリンを有効成分として含む凝固異常を伴う敗血症の治療及び／又は改善のための医薬であって、患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための該医薬。
〔Ａ２〕患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きく１．６以下の値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための、前記〔Ａ１〕又は〔Ａ１－２〕に記載の医薬。
〔Ａ３〕重症敗血症患者が、肝臓又は腎臓のみの臓器障害を有する敗血症患者を除く重症敗血症患者である前記〔Ａ１〕～〔Ａ２〕のいずれかに記載の医薬。
　なお、上記〔Ａ１〕～〔Ａ２〕のように引用する項番号が範囲で示され、その範囲内に〔Ａ１－２〕等の枝番号を有する項が配置されている場合には、〔Ａ１－２〕等の枝番号を有する項も引用されることを意味する。以下においても同様である。
〔Ａ４〕肝臓、腎臓、呼吸器、及び循環器からなる群より選択される１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための、前記〔Ａ１〕～〔Ａ３〕のいずれかに記載の医薬。
〔Ａ５〕該トロンボモジュリンが可溶性トロンボモジュリンである前記〔Ａ１〕～〔Ａ４〕のいずれかに記載の医薬。
〔Ａ５－２〕該トロンボモジュリンが、下記の（１）～（４）の性質を有するトロンボモジュリンである前記〔Ａ１〕～〔Ａ５〕のいずれかに記載の医薬；
（１）トロンビンと選択的に結合する作用、
（２）トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、
（３）トロンビンによる凝固時間を延長する作用、及び
（４）トロンビンによる血小板凝集を抑制する作用。
〔Ａ５－３〕該トロンボモジュリンが、下記の（１）～（５）の性質を有する可溶性トロンボモジュリンである前記〔Ａ１〕～〔Ａ５〕のいずれかに記載の医薬；
（１）トロンビンと選択的に結合する作用、
（２）トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、
（３）トロンビンによる凝固時間を延長する作用、
（４）トロンビンによる血小板凝集を抑制する作用、及び
（５）抗炎症作用。
〔Ａ６〕該トロンボモジュリンが、配列番号９または配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞より取得されるペプチドである前記〔Ａ１〕～〔Ａ５－３〕のいずれかに記載の医薬。
〔Ａ７〕該トロンボモジュリンが、下記（ｉ－１）又は（ｉ－２）のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドであって、該ペプチドがトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔Ａ１〕～〔Ａ６〕のいずれかに記載の医薬；
（ｉ－１）配列番号９又は配列番号１１のいずれかに記載のアミノ酸配列における第１９～５１６位のアミノ酸配列、又は
（ｉ－２）上記（ｉ－１）のアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列。
〔Ａ７－２〕該可溶性トロンボモジュリンが、
（ｉ）配列番号９又は配列番号１１のいずれかに記載のアミノ酸配列における第３６７～４８０位のアミノ酸配列を含み、かつ下記（ii－１）又は（ii－２）のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドであって、該ペプチドがトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔Ａ１〕～〔Ａ６〕のいずれかに記載の医薬；
（ii－１）配列番号９又は配列番号１１のいずれかに記載のアミノ酸配列における第１９～２４４位のアミノ酸配列、又は
（ii－２）上記（ii－１）のアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列。
〔Ａ８〕該トロンボモジュリンが、０．００５～１ｍｇ／ｋｇの投与量で５分以内で静脈内急速投与される、前記〔Ａ１〕～〔Ａ７－２〕のいずれかに記載の医薬。
〔Ｂ１〕敗血症を治療及び／又は改善する方法であって、患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である重症敗血症患者にトロンボモジュリンを投与する工程を含む該方法。
〔Ｂ１－２〕凝固異常を伴う敗血症を治療及び／又は改善する方法であって、患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である重症敗血症患者にトロンボモジュリンを投与する工程を含む該方法。
〔Ｂ２〕患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きく１．６以下の値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与する工程を含む、前記〔Ｂ１〕又は〔Ｂ１－２〕に記載の方法。
〔Ｂ３〕重症敗血症患者が、肝臓又は腎臓のみの臓器障害を有する敗血症患者を除く重症敗血症患者である前記〔Ｂ１〕～〔Ｂ２〕のいずれかに記載の方法。
〔Ｂ４〕肝臓、腎臓、呼吸器、及び循環器からなる群より選択される１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与する工程を含む、前記〔Ｂ１〕～〔Ｂ３〕のいずれかに記載の方法。
〔Ｂ５〕該トロンボモジュリンが可溶性トロンボモジュリンである前記〔Ｂ１〕～〔Ｂ４〕のいずれかに記載の方法。
〔Ｂ６〕該トロンボモジュリンが、配列番号９または配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞より取得されるペプチドである前記〔Ｂ１〕～〔Ｂ５〕のいずれかに記載の方法。
〔Ｂ７〕該トロンボモジュリンが、下記（ｉ－１）又は（ｉ－２）のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドであって、該ペプチドがトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔Ｂ１〕～〔Ｂ６〕のいずれかに記載の方法；
（ｉ－１）配列番号９又は配列番号１１のいずれかに記載のアミノ酸配列における第１９～５１６位のアミノ酸配列、又は
（ｉ－２）上記（ｉ－１）のアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列。
〔Ｂ８〕該トロンボモジュリンが、０．００５～１ｍｇ／ｋｇの投与量で５分以内で静脈内急速投与される、前記〔Ｂ１〕～〔Ｂ７〕のいずれかに記載の方法。
〔Ｂ８－２〕該トロンボモジュリンが前記〔Ａ５－２〕、〔Ａ５－３〕、又は〔Ａ７－２〕のいずれかに記載の特徴を有するトロンボモジュリンである、前記〔Ｂ１〕～〔Ｂ８〕のいずれかに記載の方法。
〔Ｂ９〕敗血症の治療及び／又は改善のための医薬としてのトロンボモジュリンの使用であって、該医薬が患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための医薬である上記の使用。
〔Ｂ９－２〕該トロンボモジュリンが前記〔Ａ５－２〕、〔Ａ５－３〕、又は〔Ａ７－２〕のいずれかに記載の特徴を有するトロンボモジュリンである、前記〔Ｂ９〕に記載の使用。
〔Ｂ９－３〕前記〔Ａ１〕～〔Ａ８〕のいずれかに記載の特徴を有する、前記〔Ｂ９〕に記載の使用。
〔Ｃ１〕トロンボモジュリンを有効成分として含む播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善のための医薬であって、患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である播種性血管内血液凝固症候群患者であって１つ以上の臓器障害を有する播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための該医薬。
〔Ｃ２〕前記〔Ａ１〕～〔Ａ８〕のいずれかに記載の特徴を有する、前記〔Ｃ１〕に記載の医薬。
　本発明のトロンボモジュリンを含有する医薬により、患者の血漿検体のＩＮＲが１．４より大きい値である重症敗血症患者における敗血症を効果的に治療及び／又は改善することができる。
　以下、本発明をいくつかの好ましい態様（本発明を実施するための好ましい形態：以下、本明細書において「実施の形態」と略すことがある）について具体的に説明するが、本発明の範囲は下記に説明する特定の態様に限定されることはない。
　本実施の形態におけるトロンボモジュリンは、（１）トロンビンと選択的に結合して（２）トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用を有することが知られている。また、（３）トロンビンによる凝固時間を延長する作用、（４）トロンビンによる血小板凝集を抑制する作用、及び／又は（５）抗炎症作用が通常認められることが好ましい。これらトロンボモジュリンの持つ作用をトロンボモジュリン活性と呼ぶことがある。
　トロンボモジュリン活性としては、上記（１）及び（２）の作用を有し、さらに上記（１）～（４）の作用を有していることが好ましい。また、トロンボモジュリン活性としては、（１）～（５）の作用を全て備えていることがより好ましい。
　トロンボモジュリンのトロンビンとの結合作用は、例えば、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　１９９３　７０（３）：４１８－４２２やＴｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９８９　Ｖｏｌ．２６４，Ｎｏ．９　ｐｐ．４８７２－４８７６を初めとする各種の公知文献に記載の試験方法により確認できる。トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用は、例えば、特開昭６４－６２１９号公報を初めとする各種の公知文献に明確に記載された試験方法によりプロテインＣの活性化を促進する作用の活性量やその有無を容易に確認できるものである。また、トロンビンによる凝固時間を延長する作用、及び／又はトロンビンによる血小板凝集を抑制する作用についても同様に容易に確認できる。さらには、抗炎症作用についても、例えばｂｌｏｏｄ　２００８　１１２：３３６１－３６７０、Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　２００５　１１５　５：１２６７－１２７４を初めとする各種の公知文献に記載の試験方法により確認できる。
　本発明におけるトロンボモジュリンとしては、トロンボモジュリン活性を有していれば特に限定されないが、界面活性剤の非存在下で水に可溶な可溶性トロンボモジュリンであることが好ましい。可溶性トロンボモジュリンの溶解性の好ましい例示としては、水、例えば注射用蒸留水に対して（トリトンＸ－１００やポリドカノール等の界面活性剤の非存在下、通常は中性付近にて）、１ｍｇ／ｍＬ以上、または１０ｍｇ／ｍＬ以上が挙げられ、好ましくは１５ｍｇ／ｍＬ以上、または１７ｍｇ／ｍＬ以上が挙げられ、さらに好ましくは２０ｍｇ／ｍＬ以上、２５ｍｇ／ｍＬ以上、または３０ｍｇ／ｍＬ以上が例示され、特に好ましくは６０ｍｇ／ｍＬ以上が挙げられ、場合によっては、８０ｍｇ／ｍＬ以上、または１００ｍｇ／ｍＬ以上がそれぞれ挙げられる。可溶性トロンボモジュリンが溶解し得たか否かを判断するに当たっては、溶解した後に、例えば白色光源の直下、約１０００ルクスの明るさの位置で、肉眼で観察した場合に、澄明であって、明らかに認められるような程度の不溶性物質を含まないことが端的な指標となるものと理解される。また、濾過して残渣の有無を確認することもできる。
　トロンボモジュリンは上記に示した通り、トロンボモジュリン活性を有していれば、その分子量は限定されないが、分子量の上限としては１００，０００以下が好ましく、９０，０００以下がより好ましく、８０，０００以下がさらに好ましく、７０，０００以下が特に好ましく、分子量の下限としては、５０，０００以上がさらに好ましく、６０，０００以上が特に好ましい。可溶性トロンボモジュリンの分子量は、たん白質の分子量を測定する通常の方法で容易に測定が可能であるが、質量分析法にて測定することが好ましく、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ法がより好ましい。目的の範囲の分子量の可溶性トロンボモジュリンを取得するためには、後述の通り、可溶性トロンボモジュリンをコードするＤＮＡをベクターにより宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞を培養することにより取得される可溶性トロンボモジュリンをカラムクロマトグラフィー等により分画することで取得することができる。
　本発明におけるトロンボモジュリンとしては、ヒト型のトロンボモジュリンにおいてトロンボモジュリン活性の中心部位として知られている配列番号１の第１９～１３２位のアミノ酸配列を包含していることが好ましく、配列番号１の第１９～１３２位のアミノ酸配列を包含していれば特に限定されない。該配列番号１の第１９～１３２位のアミノ酸配列は、トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、すなわちトロンボモジュリン活性を有する限り自然または人工的に変異していてもよく、すなわち配列番号１の第１９～１３２位のアミノ酸配列において１つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、付加していても良い。許容される変異の程度は、トロンボモジュリン活性を有すれば特に限定されないが、例えばアミノ酸配列として５０％以上の相同性が例示され、７０％以上の相同性が好ましく、８０％以上の相同性がより好ましく、９０％以上の相同性がさらに好ましく、９５％以上の相同性が特に好ましく、９８％以上の相同性が最も好ましい。このようにアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加しているアミノ酸配列を相同変異配列という。これらの変異については後述の通り、通常の遺伝子操作技術を用いれば容易に取得可能である。トロンボモジュリンは上記配列を有し、少なくともトロンボモジュリン全体としてトロンビンと選択的に結合してトロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用を有していれば特に限定されないが、同時に抗炎症作用を有することが好ましい。
　配列番号３の配列は、配列番号１の第１２５位のアミノ酸であるＶａｌがＡｌａに変異したものであるが、本発明におけるトロンボモジュリンとして、配列番号３の第１９～１３２位のアミノ酸配列を包含していることも好ましい。
　このように本発明におけるトロンボモジュリンとしては、配列番号１もしくは配列番号３の第１９～１３２位の配列、またはそれらの相同変異配列を少なくとも有し、少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチド配列を包含していれば特に限定されないが、配列番号１もしくは配列番号３における第１９～１３２位もしくは第１７～１３２位の配列からなるペプチド、または上記配列の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドが好ましい例として挙げられ、配列番号１もしくは配列番号３の第１９～１３２位の配列からなるペプチドがより好ましい。また、配列番号１もしくは配列番号３における第１９～１３２位もしくは第１７～１３２位の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドがより好ましい別の態様もある。
　また本発明におけるトロンボモジュリンの別の態様として、配列番号５の第１９～４８０位のアミノ酸配列を包含していることが好ましく、配列番号５の第１９～４８０位のアミノ酸配列を包含していれば特に限定されない。該配列番号５の第１９～４８０位のアミノ酸配列は、トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、すなわちトロンボモジュリン活性を有する限りその相同変異配列であってもよい。
　配列番号７の配列は、配列番号５の第４７３位のアミノ酸であるＶａｌがＡｌａに変異したものであるが、本発明におけるトロンボモジュリンとして、配列番号７の第１９～４８０位のアミノ酸配列を包含していることも好ましい。
　このように本発明におけるトロンボモジュリンとしては、配列番号５もしくは配列番号７の第１９～４８０位の配列、またはそれらの相同変異配列を少なくとも有し、少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチド配列を包含していれば特に限定されないが、配列番号５もしくは配列番号７における第１９～４８０位もしくは第１７～４８０位の配列からなるペプチド、または上記配列の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドが好ましい例として挙げられ、配列番号５もしくは配列番号７の第１９～４８０位の配列からなるペプチドがより好ましい。また、配列番号５もしくは配列番号７における第１９～４８０位もしくは第１７～４８０位の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドがより好ましい別の態様もある。
　また本発明におけるトロンボモジュリンの別の態様として、配列番号９の第１９～５１５位のアミノ酸配列を包含していることが好ましく、配列番号９の第１９～５１５位のアミノ酸配列を包含していれば特に限定されない。該配列番号９の第１９～５１５位のアミノ酸配列は、トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、すなわちトロンボモジュリン活性を有する限りその相同変異配列であってもよい。
　配列番号１１の配列は、配列番号９の第４７３位のアミノ酸であるＶａｌがＡｌａに変異したものであるが、本発明におけるトロンボモジュリンとして、配列番号１１の第１９～５１５位のアミノ酸配列を包含していることも好ましい。
　このように本発明におけるトロンボモジュリンとしては、配列番号９もしくは配列番号１１の第１９～５１５位の配列、またはそれらの相同変異配列を少なくとも有し、少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチド配列を包含していれば特に限定されないが、配列番号９もしくは配列番号１１における第１９～５１６位、第１９～５１５位、第１７～５１６位、もしくは第１７～５１５位の配列からなるペプチド、または上記配列の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドがより好ましい例として挙げられ、配列番号９における第１９～５１６位、第１９～５１５位、第１７～５１６位、もしくは第１７～５１５位の配列からなるペプチドが特に好ましい。これらの混合物も好ましい例として挙げられる。また、配列番号１１における第１９～５１６位、第１９～５１５位、第１７～５１６位、もしくは第１７～５１５位の配列からなるペプチドが特に好ましい別の態様もある。これらの混合物も好ましい例として挙げられる。さらにそれらの相同変異配列からなり、少なくともトロンボモジュリン活性を有するぺプチドも好ましい例として挙げられる。トロンボモジュリンは、同時に抗炎症作用を有することが好ましい。
　相同変異配列を有するペプチドとは、上述した通りであるが、対象とするペプチドのアミノ酸配列中１つ以上、すなわち１つまたは複数のアミノ酸、さらに好ましくは数個（例えば１から２０個、好ましくは１から１０個、より好ましくは１から５個、特に好ましくは１から３個）のアミノ酸が置換、欠失、付加していてもよいペプチドをも意味する。許容される変異の程度は、トロンボモジュリン活性を有すれば特に限定されないが、例えばアミノ酸配列として５０％以上の相同性が例示され、７０％以上の相同性が好ましく、８０％以上の相同性がより好ましく、９０％以上の相同性がさらに好ましく、９５％以上の相同性が特に好ましく、９８％以上の相同性が最も好ましい。
　さらに、本発明におけるトロンボモジュリンとしては、特開昭６４－６２１９号公報における配列番号１４（４６２アミノ酸残基）からなるペプチド、配列番号８（２７２アミノ酸残基）からなるペプチド、または配列番号６（２３６アミノ酸残基）からなるペプチドも好ましい例として挙げられる。
　本発明におけるトロンボモジュリンとしては配列番号１または配列番号３の第１９～１３２位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドであれば特に限定されないが、その中でも配列番号５または配列番号７の第１９～４８０位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドであることが好ましく、配列番号９もしくは配列番号１１の第１９～５１５位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドであることがより好ましい。配列番号９もしくは配列番号１１の第１９～５１５位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドとしては、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９～５１６位、第１９～５１５位、第１９～５１４位、第１７～５１６位、第１７～５１５位、もしくは第１７～５１４位の配列からなるペプチドがより好ましい例として挙げられる。また、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９～５１６位、第１９～５１５位、第１９～５１４位、第１７～５１６位、第１７～５１５位、もしくは第１７～５１４位の配列からなるペプチドの、配列番号９もしくは配列番号１１それぞれについての混合物もより好ましい例として挙げられる。
　上記混合物の場合、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１７位から始まるペプチドと第１９位から始まるペプチドの混合割合としては、（３０：７０）～（５０：５０）が例示され、（３５：６５）～（４５：５５）が好ましい例として挙げられる。
　また、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第５１４位、第５１５位、及び第５１６位で終わるペプチドの混合割合としては、（０：０：１００）～（０：９０：１０）が例示され、場合によっては、（０：７０：３０）～（１０：９０：０）、（１０：０：９０）～（２０：１０：７０）が例示される。
　これらペプチドの混合割合は、通常の方法により求めることができる。
　なお、配列番号１の第１９～１３２位の配列は、配列番号９の第３６７～４８０位の配列に相当し、配列番号５の第１９～４８０位の配列は、配列番号９の第１９～４８０位の配列に相当する。また、配列番号３の第１９～１３２位の配列は、配列番号１１の第３６７～４８０位の配列に相当し、配列番号７の第１９～４８０位の配列は、配列番号１１の第１９～４８０位の配列に相当する。さらに、配列番号１、３、５、７、９、および１１のそれぞれにおける第１～１８位の配列は、全て同一の配列である。
　これら本発明におけるトロンボモジュリンは後述の通り、これらのペプチドをコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１２等の塩基配列）をベクターにより宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞より取得することができる。
　さらに、これらのペプチドは、前記のアミノ酸配列を有すればよく、糖鎖が付いていても、また付いていなくともよく、この点は特に限定されるものではない。また遺伝子操作においては、使用する宿主細胞の種類により、糖鎖の種類や、付加位置や付加の程度は相違するものであり、いずれも用いることができる。糖鎖の結合位置および種類については、特開平１１－３４１９９０号公報に記載の事実が知られており、本発明におけるトロンボモジュリンについても同様の位置に同様の糖鎖が付加する場合がある。本実施の形態のトロンボモジュリンにはフコシルバイアンテナリー型とフコシルトリアンテナリー型の２種類のＮ結合型糖鎖が結合し、その比率は（１００：０）～（６０：４０）が例示され、（９５：５）～（６０：４０）が好ましく、（９０：１０）～（７０：３０）がより好ましい例として挙げられる。これらの糖鎖の比率は、生物化学実験法２３　糖蛋白質糖鎖研究法、学会出版センター（１９９０年）などに記載の２次元糖鎖マップによって測定できる。さらに、本実施の形態のトロンボモジュリンの糖組成を調べると、中性糖、アミノ糖及びシアル酸が検出され、たん白質含量に対し、それぞれ独立に重量比で１～３０％の比率が例示され、２～２０％が好ましく、５～１０％がより好ましい。これら糖含量は、新生化学実験講座３　糖質Ｉ糖タンパク質（上）、東京化学同人（１９９０年）に記載の方法（中性糖：フェノール－硫酸法、アミノ糖：エルソン－モルガン法、シアル酸：過ヨウ素酸－レゾルシノール法）によって測定できる。
　後述の通り、トロンボモジュリンの取得は遺伝子操作により取得することに限定されるものではないが、遺伝子操作により取得する場合には、発現に際して用いることができるシグナル配列としては、配列番号９の第１～１８位のアミノ酸配列をコードする塩基配列、配列番号９の第１～１６位のアミノ酸配列をコードする塩基配列、その他公知のシグナル配列、例えば、ヒト組織プラスミノゲンアクチベータのシグナル配列を利用することができる（国際公開８８／９８１１号公報）。
　トロンボモジュリンをコードするＤＮＡ配列を宿主細胞へ導入する場合には、好ましくはトロンボモジュリンをコードするＤＮＡ配列を、ベクター、特に好ましくは、動物細胞において発現可能な発現ベクターに組み込んで導入する方法が挙げられる。発現ベクターとは、プロモーター配列、ｍＲＮＡにリボソーム結合部位を付与する配列、発現したい蛋白をコードするＤＮＡ配列、スプライシングシグナル、転写終結のターミネーター配列、複製起源配列などで構成されるＤＮＡ分子であり、好ましい動物細胞発現ベクターの例としては、Ｍｕｌｌｉｇａｎ　ＲＣら［Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　１９８１；７８：２０７２－２０７６］が報告しているｐＳＶ２－Ｘや、Ｈｏｗｌｅｙ　ＰＭら［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｍｚｙｍｏｌｏｇｙ　１９８３；１０１：３８７－４０２、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ］が報告しているｐＢＰ６９Ｔ（６９－６）などが挙げられる。また、微生物において発現可能な発現ベクターに組み込む別の好ましい態様もある。
　これらのペプチドを製造するに際して用いることのできる宿主細胞としては、動物細胞が挙げられる。動物細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ－１細胞、ＣＯＳ－７細胞、ＶＥＲＯ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－８１）細胞、ＢＨＫ細胞、イヌ腎由来ＭＤＣＫ細胞、ハムスターＡＶ－１２－６６４細胞等が、またヒト由来細胞としてＨｅＬａ細胞、ＷＩ３８細胞、ヒト２９３細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞が挙げられる。ＣＨＯ細胞が極めて一般的であり好ましく、ＣＨＯ細胞においては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）欠損ＣＨＯ細胞がさらに好ましい。
　また、遺伝子操作の過程やペプチドの製造過程において、大腸菌等の微生物も多く使われ、それぞれに適した宿主－ベクター系を使用することが好ましく、上述の宿主細胞においても、適宜のベクター系を選択することができる。遺伝子組換え技術に用いるトロンボモジュリンの遺伝子は、クローニングされており、そしてトロンボモジュリンの遺伝子組換え技術を用いた製造例が開示されており、さらにはその精製品を得るための精製方法も知られている［特開昭６４－６２１９号公報、特開平２－２５５６９９号公報、特開平５－２１３９９８号公報、特開平５－３１０７８７号公報、特開平７－１５５１７６号公報、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　１９８９；２６４：１０３５１－１０３５３］。したがって本発明で用いるトロンボモジュリンは、上記の報告に記載されている方法を用いることにより、あるいはそれらに記載の方法に準じることにより製造することができる。例えば特開昭６４－６２１９号公報では、全長のトロンボモジュリンをコードするＤＮＡを含むプラスミドｐＳＶ２ＴＭＪ２を含む、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ－１２ ｓｔｒａｉｎ ＤＨ５（ＡＴＣＣ寄託番号６７２８３号）が開示されている。また、この菌株を生命研（現独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター）の菌株（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５／ｐＳＶ２ＴＭ Ｊ２）（ＦＥＲＭ　ＢＰ－５５７０）を用いることもできる。この全長のトロンボモジュリンをコードするＤＮＡを原料として、公知の遺伝子操作技術によって、本発明のトロンボモジュリンを調製することができる。
　本実施の形態におけるトロンボモジュリンは、従来公知の方法またはそれに準じて調製すればよいが、例えば、前記山本らの方法［特開昭６４－６２１９号公報］、または特開平５－２１３９９８号公報を参考にすることができる。すなわちヒト由来のトロンボモジュリン遺伝子を遺伝子操作技術により、例えば、配列番号９のアミノ酸配列をコードするＤＮＡとなし、さらに必要に応じた改変を行うことも可能である。この改変としては、例えば、配列番号１１のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号１２の塩基配列よりなる）となすために、配列番号９の第４７３位のアミノ酸をコードするコドン（特に、配列番号１０の第１４１８位の塩基）に、Ｚｏｌｌｅｒ　ＭＪら［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　１９８３；１００：４６８－５００、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ］の方法に従って、部位特異的変異を行う。例えば、配列番号１０の第１４１８位の塩基Ｔは、配列番号１３に示された塩基配列を有する変異用合成ＤＮＡを用いて塩基Ｃに変換したＤＮＡとなすことができる。
　このようにして調製したＤＮＡを、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に組み込んで、形質転換細胞とし、適宜選択し、この細胞を培養して得た培養液から、公知の方法により精製されたトロンボモジュリンが製造できる。前述の通り配列番号９のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（配列番号１０）を前記宿主細胞にトランスフェクトすることが好ましい。
　本実施の形態におけるトロンボモジュリンの生産方法は、上記の方法に限定されるものではなく、例えば、尿や血液、その他体液等から抽出精製することでも可能であるし、またトロンボモジュリンを生産する組織またはこれら組織培養液等から抽出精製することも、また必要によりさらに蛋白分解酵素により切断処理することも可能である。
　上記の形質転換細胞を培養するにあたっては、通常の細胞培養に用いられる培地を使用することが可能であり、その形質転換細胞を各種の培地にて事前に培養して、最適の培地を選択することが好ましい。例えば、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地、１９９培地などの公知の培地を基本培地とし、さらに改良あるいは各種培地用のサプリメントを添加した培地を使用すればよい。培養方法としては、血清を添加した培地で培養する血清培養、又は血清を添加しない培地で培養する無血清培養が挙げられる。培養方法は特に限定されることはないが、無血清培養が好ましい。
　血清培養において、培地に血清を添加する場合はウシ血清が好ましい。ウシ血清には、ウシ胎児血清、新生仔ウシ血清、仔ウシ血清、成牛血清などがあるが、細胞培養に適したものであれば、どれを使用してもよい。一方、無血清培養において、使用する無血清培地は、市販の培地を使用することが可能である。各種細胞に適した無血清培地が市販されており、例えばＣＨＯ細胞に対しては、インビトロジェン社からＣＤ－ＣＨＯ、ＣＨＯ－Ｓ－ＳＦＭＩＩ、ＣＨＯ－ＩＩＩ－ＰＦＭが、アーバイン　サイエンティフィック社からＩＳ　ＣＨＯ、ＩＳ　ＣＨＯ－ＣＤ培地などが販売されている。これらの培地をそのまま、改良あるいはサプリメントを添加して使用してもよい。さらに、無血清培地としては、インスリン、トランスフェリン、及び亜セレン酸をそれぞれ５ｍｇ／Ｌとなるように添加したＤＭＥＭ培地が例示される。このように、本実施の形態のトロンボモジュリンを産生できる培地であれば、特に限定されない。培養方法は特に限定されず、バッチ培養、繰り返しバッチ培養、フェドバッチ培養、灌流培養等どのような培養法でもよい。
　上記細胞培養方法により本発明におけるトロンボモジュリンを製造する場合、タンパク質の翻訳後修飾により、Ｎ末端アミノ酸に多様性が認められる場合がある。例えば、配列番号９における第１７位、１８位、１９位、もしくは２２位のアミノ酸がＮ末端となる場合がある。また、例えば第２２位のグルタミン酸がピログルタミン酸に変換されるように、Ｎ末端アミノ酸が修飾される場合もある。第１７位または１９位のアミノ酸がＮ末端となることが好ましく、第１９位のアミノ酸がＮ末端となることがより好ましい。また、第１７位のアミノ酸がＮ末端となることが好ましい別の態様もある。以上の修飾や多様性等については配列番号１１についても同様な例が挙げられる。
　さらに、配列番号１０の塩基配列を有するＤＮＡを用いて可溶性トロンボモジュリンを製造する場合、Ｃ末端アミノ酸の多様性が認められることがあり、１アミノ酸残基短いペプチドが製造される場合がある。すなわち、第５１５位のアミノ酸がＣ末端となり、さらに該第５１５位がアミド化されるといったように、Ｃ末端アミノ酸が修飾される場合がある。また、２アミノ酸残基短いペプチドが製造される場合もある。すなわち、第５１４位のアミノ酸がＣ末端となる場合がある。したがって、Ｎ末端アミノ酸とＣ末端アミノ酸が多様性に富んだペプチド、又はそれらの混合物が製造されることがある。第５１５位のアミノ酸又は第５１６位のアミノ酸がＣ末端となることが好ましく、第５１６位のアミノ酸がＣ末端となることがより好ましい。また、第５１４位のアミノ酸がＣ末端になることが好ましい別の態様もある。以上の修飾や多様性等については配列番号１２の塩基配列を有するＤＮＡについても同様である。
　上記方法で得られるトロンボモジュリンは、Ｎ末端及びＣ末端に多様性が認められるペプチドの混合物である場合がある。具体的は、配列番号９における第１９～５１６位、第１９～５１５位、第１９～５１４位、第１７～５１６位、第１７～５１５位、もしくは第１７～５１４位の配列からなるペプチドの混合物が挙げられる。
　次いで上記により取得された培養上清、または培養物からのトロンボモジュリンの単離精製方法は、公知の手法［堀尾武一編集、蛋白質・酵素の基礎実験法、１９８１］に準じて行うことができる。例えば、トロンボモジュリンと逆の電荷を持つ官能基を固定化したクロマトグラフィー担体と、トロンボモジュリンの間の相互作用を利用したイオン交換クロマトグラフィーや吸着クロマトグラフィーの使用も好ましい。また、トロンボモジュリンとの特異的親和性を利用したアフィニティークロマトグラフィーも好ましい例として挙げられる。吸着体の好ましい例として、トロンボモジュリンのリガンドであるトロンビンやトロンボモジュリンの抗体を利用する例が挙げられる。この抗体としては、適宜の性質、あるいは適宜のエピトープを認識するトロンボモジュリンの抗体を利用することができ、例えば、特公平５－４２９２０号公報、特開昭６４－４５３９８号公報、特開平６－２０５６９２号公報などに記載された例が挙げられる。また、トロンボモジュリンの分子量サイズを利用した、ゲル濾過クロマトグラフィーや限外濾過が挙げられる。そしてまた、疎水性基を固定化したクロマトグラフィー担体と、トロンボモジュリンのもつ疎水性部位との間の疎水結合を利用した疎水性クロマトグラフィーが挙げられる。また、吸着クロマトグラフィーとしてハイドロキシアパタイトを担体として用いることも可能であり、例えば、特開平９－１１０９００号公報に記載した例が挙げられる。これらの手法は適宜組み合わせることができる。精製の程度は、使用目的等により選択できるが、例えば電気泳動、好ましくはＳＤＳ－ＰＡＧＥの結果が単一バンドとして得られるか、もしくは単離精製品のゲル濾過ＨＰＬＣまたは逆相ＨＰＬＣの結果が単一のピークになるまで純粋化することが望ましい。もちろん、複数種のトロンボモジュリンを用いる場合には、実質的にトロンボモジュリンのみのバンドになることが好ましいのであり、単一のバンドになることを求めるものではない。
　本発明における精製法を具体的に例示すれば、トロンボモジュリン活性を指標に精製する法が挙げられ、例えばイオン交換カラムのＱ－セファロースＦａｓｔ Ｆｌｏｗで培養上清または培養物を粗精製しトロンボモジュリン活性を有する画分を回収し、ついでアフィニティーカラムのＤＩＰ－トロンビン－アガロース（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｇａｒｏｓｅ）カラムで主精製しトロンボモジュリン活性が強い画分を回収し、回収画分を濃縮し、ゲル濾過にかけトロンボモジュリン活性画分を純品として取得する精製方法［Ｇｏｍｉ Ｋ　ｅｔ　ａｌ、Ｂｌｏｏｄ　１９９０；７５：１３９６－１３９９］が挙げられる。指標とするトロンボモジュリン活性としては、例えばトロンビンによるプロテインＣ活性化の促進活性が挙げられる。その他に、好ましい精製法を例示すると以下の通りである。
　トロンボモジュリンと良好な吸着条件を有する適当なイオン交換樹脂を選定し、イオン交換クロマト精製を行う。特に好ましい例としては、０．１８ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む０．０２ｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化したＱ－セファロースＦａｓｔ Ｆｌｏｗを用いる方法である。適宜洗浄後、例えば０．３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ含む０．０２ｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶出し粗精製品のトロンボモジュリンを得ることができる。
　次に、例えばトロンボモジュリンと特異的親和性を持つ物質を樹脂に固定化しアフィニティークロマト精製を行うことができる。好ましい例としてＤＩＰ－トロンビン－アガロースカラムの例と、抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体カラムの例が挙げられる。ＤＩＰ－トロンビン－アガロースカラムは、予め、例えば、１００ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌおよび０．５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カルシウムを含む２０ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化せしめ、上記の粗精製品をチャージして、適宜の洗浄を行い、例えば、１．０ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌおよび０．５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カルシウムを含む２０ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶出し精製品のトロンボモジュリンを取得することができる。また抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体カラムにおいては、予めＣＮＢｒにより活性化したセファロース４ＦＦ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社）に、抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体を溶解した０．５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ含有０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨＣＯ３緩衝液（ｐＨ８．３）に接触させ、セファロース４ＦＦに抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体をカップリングさせた樹脂を充填したカラムを、予め例えば０．３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ含む２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で平衡化し、適宜の洗浄の後、例えば、０．３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ含む１００ｍｍｏｌ／Ｌグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）にて溶出せしめる方法が例示される。溶出液は適当な緩衝液で中和し、精製品として取得することもできる。
　次に得られた精製品をｐＨ３．５に調整した後に、０．３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む１００ｍｍｏｌ／Ｌグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．５）で平衡化した陽イオン交換体、好ましくは強陽イオン交換体であるＳＰ－セファロースＦＦ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社）にチャージし、同緩衝液で洗浄して得られた非吸着画分を得る。得られた画分は適当な緩衝液で中和し、高純度精製品として取得することができる。これらは、限外濾過により濃縮することが好ましい。
　さらに、ゲル濾過による緩衝液交換を行うことも好ましい。例えば、５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で平衡化せしめたＳｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００カラムもしくはＳ－２００カラムに、限外濾過により濃縮した高純度精製品をチャージし、５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で展開分画し、トロンビンによるプロテインＣ活性化の促進活性の確認を行って活性画分を回収し、緩衝液交換した高純度精製品を取得することができる。このようにして得られた高純度精製品は安全性を高めるために適当なウイルス除去膜、例えばプラノバ１５Ｎ（旭化成メディカル株式会社）を用いて濾過することが好ましく、その後限外濾過により目的の濃度まで濃縮することができる。最後に無菌濾過膜により濾過することが好ましい。
　本発明により、トロンボモジュリンを有効成分として含む敗血症の治療及び／又は改善のための医薬であって、患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための該医薬が提供される。
　すなわち、本実施の形態における敗血症の治療及び／又は改善のための医薬は、患者の血漿検体のＩＮＲの値が１．４より大きい値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者における敗血症の治療及び／又は改善のための医薬である。
　また同様に、患者の血漿検体のＩＮＲの値が１．４より大きい値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症を患うヒト患者の死亡の可能性を減少させるための薬剤が提供される。
　敗血症の治療の及び／又は改善としては、例えば「敗血症による患者の死亡を防ぐこと」が好ましい効果のひとつとして挙げられる。また「敗血症により患者の全身状態が悪化するのを防ぐこと」も好ましい効果として挙げられる。
　本実施の形態における敗血症は、感染症、悪性腫瘍、肝硬変、腎不全、糖尿病、異常分娩といったような疾病や、留置カテーテル、輸液器具、透析、気管切開といったようなケガや病気に対する治療が原因となって、感染巣から絶えずまたは断続的に微生物が血液に侵入してくる重症全身性感染症として知られている。症状が進行すると、敗血性ショック、すなわち急激な血圧降下、末梢循環不全によって全身性のショックが誘発され、肺、腎臓、肝臓、心臓、消化管、さらには中枢神経系など重要臓器の障害により死亡する。また、敗血症に伴う合併症として、ＤＩＣや、好中球の活性化と肺実質への遊走集積に伴う肺毛細障害により、肺間質の浮腫、出血や急性呼吸不全を特徴とする成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）が誘発され、予後は非常に悪くなる。
　本実施の形態における敗血症としては、感染によって惹起された全身性炎症反応症候群（systemic inflammatory response syndrome:ＳＩＲＳ）である。すなわち感染の存在に加え，ＳＩＲＳ項目（（１）体温＞３８℃又は＜３６℃、（２）心拍数＞９０／分，（３）呼吸数＞２０／分又はＰａＣＯ２＜３２ ｔｏｒｒ、（４）白血球数＞１２，０００／μＬ又は＜４０００／μＬまたは未熟型白血球＞１０％）の２項目以上をみたす病態が挙げられ、基本的には当該病態をもって敗血症と診断することができる。
　敗血症の診断方法としてはいくつかの方法がある。それらはＬｅｖｙ　Ｍ．ら、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ．Ｍｅｄ．、３１：１２５０－１２５６にまとめられている。例えば、医師によりその診断を行う方法、あるいは検査値等を用いる方法がある。後者の例として、１）体温＞３８℃又は＜３６℃、２）心拍数＞９０／分、３）呼吸数＞２０／分又は人工呼吸を必要とする、４）白血球数＞１２，０００／μＬまたは＜４，０００／μＬ、又は幼弱球＞１０％、の４項目の内、２項目を満たす場合ＳＩＲＳと診断し、微生物が病因に証明されたかまたは疑われたＳＩＲＳを敗血症と診断する方法がある［ＬａＲｏｓａ　Ｓ．、Ｔｈｅ　Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ　Ｃｌｉｎｉｃのホームページ］。これに近い方法がＭｅｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｓｔ　Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ／Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｃｒｉｔｉｃａｌ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：　Ｃｒｉｔ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ、２０、８６４－８７４（１９９２）に記載されている。
　敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）の状態としては、例えば菌血症、敗血症（septicemia）、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症（微生物が病因に証明されたか又は疑われたＳＩＲＳ）、重症敗血症、敗血症性ショック、難治性敗血症性ショック、又は多臓器機能障害（以下、ＭＯＤＳと呼ばれることがある）が例示される（ハリソン内科学　原著第１５版　１２４項　Ｐ８２８－８３３　株式会社メディカル・サイエンス・インターナショナル）。上記各状態は、本発明の治療及び／又は改善剤が効果的な症状として例示される。
　敗血症としては、上記の診断基準を満たす敗血症であれば特に限定されないが、凝固異常を伴う敗血症（sepsis with coagulopathy）が好ましい。凝固異常としては、患者の血漿検体のＩＮＲが１．２より大きい状態であれば特に限定されないが、１．３より大きいことが好ましく、１．４より大きいことがより好ましい。
　菌血症としては、血液培養陽性で証明される血液中の細菌の存在が確認される状態が例示される。
　敗血症（septicemia）としては、血液中の微生物又は他の毒素の存在が確認される状態が例示される。
　全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）としては、上記の通りＤＩＣ準備段階にある状態が例示される。
　重症敗血症としては、代謝性アシドーシス、臓器灌流低下、急性脳症、乏尿、低酸素血症又は播種性血管内凝固などの臓器障害または低血圧の症状を１つ又は複数伴う敗血症が例示される。敗血症の中で、臓器障害、臓器灌流低下または低血圧を呈する状態を重症敗血症（severe sepsis）という。臓器灌流低下または灌流異常には、乳酸アシドーシス、乏尿、意識混濁などが含まれる。重症敗血症の中で、十分な輸液負荷をおこなっても低血圧が持続するものを敗血症性ショック（septic shock）という。
　本実施の形態における重症敗血症としては、より具体的には以下に示す通りである。
　敗血症性ショックとしては、低血圧（血圧９０ｍｍＨｇ以下又は通常の血圧より４０ｍｍＨｇ以下）で、補液による蘇生法にも反応せず、臓器不全を伴うものが例示される。
　難治性敗血症性ショックとしては、敗血症性ショックが１時間以上持続し、補液昇圧剤に反応しないものが例示される。
　多臓器機能障害（ＭＯＤＳ）としては、１臓器以上の機能不全があり、恒常性を保つため医学的介入を要するものが例示される。
　本実施の形態におけるＩＮＲとは、血液凝固異常を定義する検査指標である。ＩＮＲは、トロンボプラスチン製剤の製造ロット間の差異を標準化したプロトロンビン時間（ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ、以下、ＰＴと略すことがある）を意味し、ＩＮＲは以下の通り定義される。
　ＩＮＲ値
＝(被検検体の凝固時間（秒）／コントロール検体の凝固時間（秒）)＾(ＩＳＩ値)
　式中、被検検体の凝固時間（秒）とは、測定対象の血漿被検検体のＰＴを示す。
　また、ＩＳＩは国際感度指数を示す。
　本実施の形態における重症敗血症は、上記の通り代謝性アシドーシス、急性脳症、乏尿、低酸素血症又は播種性血管内凝固などの臓器障害または低血圧の症状を１つ又は複数伴う敗血症が例示される。重症とは、生命に関わる重い病態にあることをいう。特に重症敗血症としては１つ以上の臓器障害を有する敗血症が挙げられる。臓器障害とは、敗血症により障害が生じる臓器の障害であれば特に限定されないが、生命の維持に必須とされる臓器の障害が好ましい。１つ以上の臓器障害としては、循環器障害、呼吸器障害、腎障害、及び肝障害からなる群より選ばれる１つ以上の臓器障害が挙げられ、呼吸器障害、循環器障害、及び腎障害からなる群より選ばれる１つ以上の臓器障害であることが好ましく、呼吸器障害及び循環器障害からなる群より選ばれる１つ以上の臓器障害であることがより好ましい。臓器障害の数は１つ以上であれば特に限定されないが、２つ以上が好ましい場合がある。特に、呼吸器障害及び循環器障害の２つの臓器障害を同時に有することが好ましい。
　循環器障害としては、循環器障害として一般的に知られているものであれば特に限定されないが、例えば、血圧低下又はショックが挙げられる。
　呼吸器障害としては、呼吸器障害として一般的に知られているものであれば特に限定されないが、例えば、低酸素血症、急性肺障害、又は呼吸困難が挙げられる。
　腎障害としては、腎障害として一般的に知られているものであれば特に限定されないが、例えば、腎機能障害、乏尿、又は腎不全が挙げられる。
　肝障害としては、肝障害として一般的に知られているものであれば特に限定されないが、例えば、肝機能障害、黄疸、又は肝不全等が挙げられる。
　これらの各臓器障害は、出願前公知刊行物である「敗血症の解明と治療戦略」（舟田久　2006　医薬ジャーナル社，p38～）、又は「Surviving Sepsis Campaign: international guidelines for management of severe sepsis and septic shock 2008.」(Crit Care Med. 2008 Jan;36(1):296-327)等に記載の通り、一般的に知られているものである。
　なお、重症敗血症患者としては、薬剤性臓器障害など敗血症に限定されない要因から発現する可能性が想定されることから、肝臓又は腎臓のみの臓器障害を有する患者は除かれることが好ましい。また臓器障害の結果として血小板数減少症（Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）が発症することが知られている。本実施の形態における医薬が投与される患者における血小板数は３０万／μＬ未満であれば特に限定されないが、２０万／μＬ未満が好ましく、また１５万／μＬ未満が好ましい。
　本実施の形態における敗血症患者の血漿検体のＩＮＲの値としては、１．４より大きければ特に限定されることはなく、ＩＮＲが１．４より大きい場合に、１つ以上の臓器障害を有する敗血症患者に対してトロンボモジュリンがより効果的となる。ＩＮＲの上限としては、２．０以下が例示され、１．９以下であることが好ましく、１．８以下であることがより好ましく、１．７以下であることがさらに好ましく、１．６以下であることが特に好ましい。１．５以下が好ましい場合もある。また、ＩＮＲ＝１．７は除かれることが好ましい場合がある。
　なお、「ＩＮＲが１．４より大きい」は「ＩＮＲ＞１．４」と表記されることもある。
　本実施の形態において、ＤＩＣとは、様々な疾患での組織障害によって血管凝固促進物質が大量に流出して凝固系の働きが極度に亢進し、小さな血栓が全身の血管に発生（微小血栓形成）して、小さな血管を詰まらせると共に、それにより出血の制御に必要な血小板や凝固因子が消費されて不足する結果、止血異常を起こす疾患あるいは症候群である。具体的には血管内フィブリン形成により、消費性凝固線溶障害による出血症状や微小血栓形成による臓器不全症状が認められる。ＤＩＣは、播種性血管内凝固症候群又は汎発性血管内凝固症候群と呼ばれることもある。
　ＤＩＣの臨床症状は基礎病態の種類に応じて様々であるが、ＤＩＣの診断方法としては出血症状、臓器症状の観察に加え、次に示すいくつかの検査値によりＤＩＣスコアをつけ、ある一定以上のスコアに達した場合にＤＩＣであると診断することが好ましい。検査値としては、例えば、血中の血小板数、プラスミンにより分解されたフィブリン並びにフィブリノゲン分解産物（以下、ＦＤＰと略すことがある）濃度、Ｄ－ダイマー濃度、フィブリノゲン濃度、又はプロトロンビン時間等が挙げられる。また、ＤＩＣスコアをつけず、血小板低下、Ｄ－ダイマー、あるいはＦＤＰ濃度上昇等からｐｒｅＤＩＣと診断することもできる（中川雅夫．「播種性血管内凝固（ＤＩＣ）診断基準の利用に関する調査報告」厚生省特定疾患血液凝固異常症調査研究班, 平成１１年度研究報告書．１９９９： ６５－７２、出口克巳．「ＤＩＣ早期治療開始基準に関する試案について」厚生省特定疾患血液凝固異常症調査研究班, 平成１１年度研究報告書．１９９９：７３－７７、中川克、辻肇．「ＤＩＣ診断の現状－アンケート調査結果報告」臨床血液．１９９９；４０：３６２－３６４）。
　また、本実施の形態において、患者血漿検体のＩＮＲの値が１．２より大きい、好ましくは１．３より大きい、より好ましくは１．４より大きい敗血症患者を広義のＤＩＣ患者と呼ぶことでき、本実施の形態における敗血症の治療及び／又は改善のための医薬は、ＤＩＣの治療及び／又は改善のための医薬として使用できる場合がある。
　本実施の形態における医薬はＤＩＣに対しても使用できる場合がある。敗血症は、感染性の重篤な臨床的侵襲によって起こるＳＩＲＳとも位置付けられ、感染症を原因疾患とするＤＩＣと密接な関係にある。敗血症においてＤＩＣを併発することはしばしばあり、そのようなＤＩＣを併発した敗血症患者に対しても本実施の形態における医薬が使用できる場合がある。すなわち、本実施の形態における医薬は、ＤＩＣ又は敗血症のいずれか一方、又は両方を患った患者、又は患っていることが疑われる患者に対して使用することができる場合がある。
　本実施の形態におけるＩＮＲは、例えば以下のように測定することができる。すなわち、クエン酸ナトリウムを添加して得られた血漿（被検検体）に組織トロンボプラスチン、Ｃａ２＋を添加し凝固（フィブリン析出）するまでの時間（ＰＴ）を測定し、その秒数で判定し、コントロール検体との相対比（活性率）で評価を行う。活性率は、「被検検体の凝固時間（秒）／コントロール検体の凝固時間（秒）」により求められるが、使用する組織トロンボプラスチンの感度が異なることにより検査実施機関により検査値の格差が生じる。ＩＮＲ値はこのような格差を解消するために考案され、国際感度指数（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ、以下、ＩＳＩと略すことがある）で補正したＩＮＲ値でＰＴを評価することにより、施設間差をなくし標準的な結果を得ることが出来る。ＩＳＩは国際標準試料とどれだけ異なっているかを表示したものである。ＩＳＩは各組織トロンボプラスチン試薬ごとに決められ、試薬に添付されている。トロンボプラスチン試薬としては、トロンボレルＳ（登録商標：シスメックス社製）やトロンボプラスチンＣ＋（登録商標：シスメックス社製）などが例示されるがこれらに限定されるものではない。トロンボレルＳ（登録商標）ではヒト胎盤トロンボプラスチン（ＩＳＩ値は１．０に近い）が、トロンボプラスチンＣ＋（登録商標）ではウサギ脳トロンボプラスチン（ＩＳＩ値は約１．８）が使用されている。
　組織トロンボプラスチン試薬にはＩＳＩが付与されており、ＩＮＲ値は上記式１の計算式により求められる。
　コントロール検体としては、市販の正常ヒトプール血漿であれば特に限定されないが、例えばコージンバイオ（株）社や国際バイオ（株）社から購入可能な市販正常人プールクエン酸Ｎａ血漿などを使用することができる。
　敗血症の治療は一般に公知文献（Surviving Sepsis Campaign: International guidelines for management of severe sepsis and septic shock: Crit Care Med.2008 36 296-327.、Crit Care Med. 2003 32(3) 1250-56）に基づき、以下のような基礎治療が行われ、トロンボモジュリンと別の薬剤が併用される場合があるが、併用はこれらの薬剤に制限されるものではない。
　敗血症性ショックの患者が，中心静脈圧（ＣＶＰ）が目標値まで上昇した後も低血圧が持続する場合，平均血圧を少なくとも６０ｍｍＨｇまで上昇させるためにドパミンが投与される場合がある。またドパミン用量が２０μｇ／ｋｇ／分を超える場合，他の血管収縮薬（通常はノルエピネフリン）が加えられる場合がある。
　敗血症の原因菌の治療のため、一般に抗生物質が使用される。抗生物質の選択には，疑わしい原因、臨床状況、微生物の知識とその特定の入院病棟に共通する感受性のパターンに関する知識、および事前の培養検査の結果などに基づいた根拠ある推測が必要である。
敗血症患者での血糖値の徹底した正常化は，重篤な状態の患者において転帰を改善する。
　抗生物質の使用にあたっては、血液、体液もしくは創傷部などの検体を調べ、起因菌に有効な薬剤を選択することができる。例えば、原因不明の敗血症ショックなどでは、ゲンタマイシン又はトブラマイシンと第３世代セファロスポリンの併用投与がなされる場合がある。また耐性ブドウ球菌または腸球菌が疑われる場合には、バンコマイシンが追加される。
　一般にインスリンの持続静注により、血糖値を８０～１１０ｍｇ／ｄＬ（４．４～６．１ｍｍｏｌ／Ｌ）に保つために投与量を調節される。
　コルチコステロイド療法は敗血症の治療に効果を示すことから、補充用量にて投与される場合がある。
　死亡リスクが高い患者（ＡＰＡＣＨＥ II ｓｃｏｒｅ≧２５、ｓｅｐｓｉｓによる多臓器不全、ｓｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ、ｓｅｐｓｉｓによるＡＲＤＳ）では、禁忌（出血など）のない場合に、組替型活性化プロテインＣ（ｒｈＡＰＣ；ドロトレコギンα）が投与される場合がある。
　対象患者は限定されるものの、濃厚赤血球をＨｂ ７．０～９．０ｇ／ｄＬを目標として輸血される場合がある。
　敗血症患者で腎不全による赤血球産生障害時には、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＥＰＯ））が投与される場合がある。
　重症敗血症では低用量ヘパリンあるいは低分子ヘパリン投与によるＤＶＴの予防投与が行われる場合がある。
　本発明の医薬は、担体を含有することができる。本発明で用いることのできる担体としては、水溶性の担体が好ましく、通常は、医薬品の添加剤として許容できる、等張化剤、緩衝化剤、増粘剤、界面活性剤、保存剤、防腐剤、無痛化剤、ｐＨ調整剤などが好ましい。例えば、ショ糖、グリセリン等や、その他の無機塩のｐＨ調整剤等を添加剤として加えて調製することができる。さらに必要に応じて、特開平１－６２１９号公報および特開平６－３２１８０５号公報に開示される通り、アミノ酸、塩類、糖質、界面活性剤、アルブミン、ゼラチン等を添加しても良い。これらの添加方法は特に限定されないが、凍結乾燥とする場合には、通常行われるように、例えば、免疫抑制剤、造血器悪性腫瘍治療薬から選ばれる少なくとも１つを含有する溶液とトロンボモジュリン含有溶液を混合した後、添加物を添加混合する方法や、またはあらかじめ添加物を水、注射用蒸留水あるいは適当な緩衝液に溶解した免疫抑制剤、造血器悪性腫瘍治療薬から選ばれる少なくとも１つに混合した後、トロンボモジュリン含有溶液を添加混合にする方法にて溶液を調製し、凍結乾燥する方法が挙げられる。本発明の医薬が各医薬成分を組み合わせてなる医薬である場合には、各医薬は、適宜の製造方法により担体を添加して製造することが好ましい。本発明の医薬としては、注射液の形態で提供されても、また凍結乾燥製剤を使用時に溶解して使用する形態で提供されてもよい。
　製剤化工程においては、アンプルまたはバイアルに、０．１～１０ｍｇのトロンボモジュリン、注射用水、さらには、添加剤を含有する溶液を、例えば０．５～１０ｍＬ充填して水溶液注射用製剤として調製できる。また、凍結し減圧下のもとで乾燥して凍結乾燥製剤として調製する方法が例示される。
　本発明の医薬は、非経口投与法、例えば静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与などによって投与することが望ましい。また経口投与、直腸内投与、鼻内投与、舌下投与なども可能である。本発明の医薬が各医薬成分を組み合わせてなる医薬である場合には、それぞれの医薬成分は、適宜の投与方法により投与することが好ましい。
　静脈内投与の場合、一度に所望の量を投与する方法（静脈内急速投与）または点滴静脈内投与が挙げられる。
　一度に所望の量を投与する方法（静脈内急速投与）は投与時間が短い点で好ましい。特に敗血症の患者では急を要している場合も多く、短時間で投与することが好ましい場合がある。一度に投与する場合には、注射器での投与に要する時間に通常幅があるが、投与に要する時間としては、投与する液量にもよるが、５分以下が例示され、３分以下が好ましく、２分以下がより好ましく、１分以下がさらに好ましく、３０秒以下が特に好ましい。また下限としては特に限定されないが、１秒以上が好ましく、５秒以上がより好ましく、１０秒以上がさらに好ましい。投与量は上記の好ましい投与量であれば特に限定されない。また、点滴静脈内投与はトロンボモジュリンの血中濃度を一定に保つことが容易な点で好ましい。
　本発明における医薬の１日の投与量は、患者の年齢、体重、疾患の程度、投与経路などによっても異なるが、一般的にトロンボモジュリンの量として、上限としては２０ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、１０ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましく、５ｍｇ／ｋｇ以下がさらに好ましく、２ｍｇ／ｋｇ以下が特に好ましく、１ｍｇ／ｋｇ以下が最も好ましく、下限としては０．００１ｍｇ／ｋｇ以上が好ましく、０．００５ｍｇ／ｋｇ以上がより好ましく、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上がさらに好ましく、０．０２ｍｇ／ｋｇ以上が特に好ましく、０．０５ｍｇ／ｋｇ以上が最も好ましい。
　静脈内急速投与の場合、上記の好ましい投与量であれば特に限定されないが、１日の投与量の上限としては１ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、０．５ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましく、０．１ｍｇ／ｋｇ以下がさらに好ましく、０．０８ｍｇ／ｋｇ以下が特に好ましく、０．０６ｍｇ／ｋｇ以下が最も好ましく、下限としては０．００５ｍｇ／ｋｇ以上が好ましく、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上がより好ましく、０．０２ｍｇ／ｋｇ以上がさらに好ましく、０．０４ｍｇ／ｋｇ以上が特に好ましい。
　体重が１００ｋｇを超える患者に投与する場合には、血液量が体重とは比例せず、体重に対する血液量が相対的に低下するという観点から、６ｍｇの固定用量で投与することが好ましい場合がある。
　点滴静脈内投与の場合、上記の好ましい投与量であれば特に限定されないが、１日の投与量の上限としては１ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、０．５ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましく、０．１ｍｇ／ｋｇ以下がさらに好ましく、０．０８ｍｇ／ｋｇ以下が特に好ましく、０．０６ｍｇ／ｋｇ以下が最も好ましく、下限としては０．００５ｍｇ／ｋｇ以上が好ましく、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上がより好ましく、０．０２ｍｇ／ｋｇ以上がさらに好ましく、０．０４ｍｇ／ｋｇ以上が特に好ましい。
　体重が１００ｋｇを超える患者に投与する場合には、血液量が体重とは比例せず、体重に対する血液量が相対的に低下するという観点から、６ｍｇの固定用量で投与することが好ましい場合がある。
　１日あたり１回または必要に応じて数回投与する。投与間隔は、２日から１４日に１回、好ましくは２日から７日に１回、さらに好ましくは３日から５日に１回にとすることも可能である。
［配列表の説明］
配列番号１：ＴＭＥ４５６の生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号２：配列番号１のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号３：ＴＭＥ４５６Ｍの生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号４：配列番号３のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号５：ＴＭＤ１２の生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号６：配列番号５のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号７：ＴＭＤ１２Ｍの生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号８：配列番号７のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号９：ＴＭＤ１２３の生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号１０：配列番号９のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号１１：ＴＭＤ１２３Ｍの生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号１２：配列番号１１のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号１３：部位特異的変異を行う際に使用する変異用合成ＤＮＡ
　以下、実施例および試験例により本発明を具体的に説明するが、本発明は何らこれらによって限定されるものではない。
　試験例に用いる本発明におけるトロンボモジュリンは、前記山本らの方法（特開昭６４－６２１９号に記載の方法）に従って製造した。以下にその製造例を示す。なお、今回の製造例で得られたトロンボモジュリンは、ラットおよびサルを用いた単回および反復静脈内投与試験、マウス生殖試験、局所刺激性試験、安全性薬理試験、ウイルス不活化試験などによりその安全性が確認されている。
［製造例１］
＜トロンボモジュリンの取得＞
　上記の方法、すなわち、配列番号９のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号１０の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて、５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌを含む２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で活性画分を回収した高純度精製品を取得した。さらに限外濾過膜を用いて濃縮し、１１．０ｍｇ／ｍＬのトロンボモジュリン（本明細書においてＴＭＤ１２３と略すことがある）溶液を取得した。
＜ポリソルベート溶液調製＞
　ガラスビーカーにポリソルベート８０を０．３９ｇ量り、注射用水を３０ｍＬ加えて溶解した。
＜薬液調製・充填＞
　５Ｌのステンレス製容器に、上記得られたＴＭＤ１２３溶液２２３９ｍＬ（可溶性トロンボモジュリンのたん白質量として２４．６３ｇに相当。ただし５％過量仕込み。）を入れた。さらに、上記で得られたポリソルベート溶液を加え、塩化ナトリウム２７．９ｇを加えた。注射用水を６００ｍＬ加え撹拌した。１ｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液を添加して、ｐＨを６．０に調整した。さらに注射用水を加えて全量を３９４０ｇとして均一に混合撹拌した。この薬液を、孔径が０．２２μｍのフィルター（ミリポア製ＭＣＧＬ１０Ｓ）で濾過滅菌した。濾過液を１．１ｇずつアンプルに充填して、ＴＭＤ１２３製剤を得た。
［製造例２］
　配列番号１１のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号１２の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（本明細書においてＴＭＤ１２３Ｍと略すことがある）溶液を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＤ１２３Ｍ製剤を取得する。
［製造例３］
　配列番号１のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号２の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（本明細書においてＴＭＥ４５６と略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＥ４５６製剤を取得する。
［製造例４］
　配列番号３のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号４の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（以下、ＴＭＥ４５６Ｍと略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＥ４５６Ｍ製剤を取得する。
［製造例５］
　配列番号５のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号６の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（本明細書においてＴＭＤ１２と略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＤ１２製剤を取得する。
［製造例６］
　配列番号７のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号８の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（以下、ＴＭＤ１２Ｍと略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＤ１２Ｍ製剤を取得する。
［製造例７］プラセボ製剤の調製
＜ポリソルベート溶液調製＞
　ガラスビーカーにポリソルベート８０を０．４ｇ量り、注射用水を３０ｍＬ加えて溶解した。
＜薬液調製・充填 ＞
　５Ｌのステンレス製容器に、注射用水を２０００ｍＬを入れた。さらに、上記で得られたポリソルベート溶液を加えた。さらに注射用水を加えて全量を４０００ｇとして均一に混合撹拌した。この薬液を、孔径が０．２２μｍのフィルター（ミリポア製ＭＣＧＬ１０Ｓ）で濾過滅菌した。濾過液を１．１ｇずつアンプルに充填して、プラセボ製剤を得た。
［実施例１］
＜試験方法＞
　製造例１に準じて製造したＴＭＤ－１２３をトロンボモジュリンとして使用し、敗血症並びにＤＩＣを発症した患者を対象とした無作為二重盲検プラセボ（Ｐｌａｃｅｂｏ）対象の試験を行った。対象患者数は総数７５０例であり、うち治験薬が投与された患者が７４１例（ＴＭＤ－１２３投与群３７０例、プラセボ投与群３７１例）として試験を実施した。ＴＭＤ－１２３は、０．０６ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回、６日間連続静脈内急速投与された。プラセボとしては製造例７に準じて製造されたものを用いた。
　なお、体重１００ｋｇを超える患者に対しては、過量投与による副作用発現を抑える目的で、一律６ｍｇの固定用量にて１日１回、６日間連続静脈内急速投与された。
　治験薬投与前の患者の血漿中ＩＮＲ値は、上記式１に記載の方法により測定した。
　また、対象患者からは、肝臓又は腎臓のみの臓器障害を有する患者を除いた。肝臓又は腎臓のみの臓器障害を有する患者では、薬剤性臓器障害等、敗血症に限定されない要因から臓器障害が発現している可能性が想定されるためである。
　投与開始から２８日目の転帰を確認し、各患者群の死亡率（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）を算出した。
　また、ＴＭＤ－１２３とプラセボ間の死亡率差をＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅとして算出した。
＜試験結果＞
　臓器障害を有さない敗血症患者においては、治験薬投与前の血漿中ＩＮＲ値が、ＩＮＲ＞１．５の患者で、ＴＭＤ－１２３を投与した際の死亡率とプラセボを投与した際の死亡率との差（死亡率差：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）が最大（６．１％）となり、ＩＮＲ＞１．６の患者における死亡率差がそれに次いだ（４．５％）。ＩＮＲ＞１．４の患者では死亡率差１．７％程度と、絶対的にも相対的にもそれほど高い死亡率差を示さなかった（表１）。
　すなわち、表１より、ＩＮＲ下限値の極大は１．５～１．６の間にあり、ＩＮＲの下限値が１．５～１．６の外にある場合には、死亡率差が極端に下がることがわかった。
　これに対し、循環器障害、呼吸器障害、腎障害、及び肝障害からなる群より選ばれる臓器障害を１つ以上有する重症敗血症患者においては、ＩＮＲ＞１．５ではなく、ＩＮＲ＞１．４の患者で死亡率差が最大（９．７％）となり、他のＩＮＲ下限値に比して絶対的にも相対的にも高い死亡率差を示した（表２）。また、全体的に見ても循環器障害、呼吸器障害、腎障害、及び肝障害からなる群より選ばれる臓器障害を１つ以上有する重症敗血症患者では、臓器障害を有さない敗血症患者に比して、ＴＭＤ－１２３とプラセボ間の死亡率差が大きかった。（前者：５．４％、後者：－１．１％）
　また、循環器障害、呼吸器障害、腎障害、及び肝障害からなる群より選ばれる臓器障害を１つ以上有する重症敗血症患者においては、１．４＜ＩＮＲ≦１．６の患者で死亡率差が１６．０％と絶対的に顕著な値を示した（表３）。表３からわかるように、他のいずれのＩＮＲ上限値では、死亡率差が全て１０～１２％の間であり、相対的にも突出して大きな死亡率差を示していることがわかる。
　一方、臓器障害を有さない患者においては、ある部分だけが相対的に突出しているという傾向は見られず、得られた死亡率差もせいぜい７．１％（１．４＜ＩＮＲ≦１．７の患者群）であった（表４）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
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Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　本発明のトロンボモジュリンを含有する医薬は、患者の血漿検体のＩＮＲが１．４より大きい値である重症敗血症患者における敗血症を効果的に治療及び／又は改善することができる医薬として有用である。

Claims (9)

  1. トロンボモジュリンを有効成分として含む敗血症の治療及び／又は改善のための医薬であって、患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きい値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための該医薬。
  2. 患者の血漿検体の国際標準比（ＩＮＲ）の値が１．４より大きく１．６以下の値である重症敗血症患者であって１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための、請求項１に記載の医薬。
  3. 重症敗血症患者が、肝臓又は腎臓のみの臓器障害を有する敗血症患者を除く重症敗血症患者である請求項１又は２に記載の医薬。
  4. 肝臓、腎臓、呼吸器、及び循環器からなる群より選択される１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための、請求項１～３のいずれかに記載の医薬。
  5. 呼吸器及び循環器からなる群より選択される１つ以上の臓器障害を有する重症敗血症患者に投与されるための、請求項１～３のいずれかに記載の医薬。
  6. 該トロンボモジュリンが可溶性トロンボモジュリンである請求項１～５のいずれかに記載の医薬。
  7. 該トロンボモジュリンが、配列番号９または配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞より取得されるペプチドである請求項１～６のいずれかに記載の医薬。
  8. 該トロンボモジュリンが、下記（ｉ－１）又は（ｉ－２）のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドであって、該ペプチドがトロンボモジュリン活性を有するペプチドである請求項１～７のいずれかに記載の医薬；
    （ｉ－１）配列番号９又は配列番号１１のいずれかに記載のアミノ酸配列における第１９～５１６位のアミノ酸配列、又は
    （ｉ－２）上記（ｉ－１）のアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列。
  9. 該トロンボモジュリンが、０．００５～１ｍｇ／ｋｇの投与量で５分以内で静脈内急速投与される、請求項１～８のいずれかに記載の医薬。
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