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WO2007031329A2 - Use of a collagen of xenogeneic origin - Google Patents

Use of a collagen of xenogeneic origin Download PDF

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Publication number
WO2007031329A2
WO2007031329A2 PCT/EP2006/009004 EP2006009004W WO2007031329A2 WO 2007031329 A2 WO2007031329 A2 WO 2007031329A2 EP 2006009004 W EP2006009004 W EP 2006009004W WO 2007031329 A2 WO2007031329 A2 WO 2007031329A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
collagen
active substance
use according
substance complex
vascular
Prior art date
Application number
PCT/EP2006/009004
Other languages
German (de)
French (fr)
Other versions
WO2007031329A3 (en
Inventor
Arne Briest
Marco Springer
Original Assignee
Ossacur Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ossacur Ag filed Critical Ossacur Ag
Publication of WO2007031329A2 publication Critical patent/WO2007031329A2/en
Publication of WO2007031329A3 publication Critical patent/WO2007031329A3/en

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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1858—Platelet-derived growth factor [PDGF]
    • A61K38/1866—Vascular endothelial growth factor [VEGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the invention relates to uses of a collagen of xenogenic origin which comprises an active substance complex.
  • a more recent approach to the treatment of vascular disease relies on gene therapy, where genes are supplied to the patient expressing proteins with neovascularizing properties. This can be done, for example, in the form of vector constructs (vehicles). However, in some cases considerable Think against the introduction of foreign genes into the body of the recipient. Furthermore, the vehicles for introducing the desired gene are very often viral vectors.
  • vascular diseases directly with the neovascularization-stimulating proteins.
  • FGF fibroblast growth factor
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • a preparation process for such a protein mixture is known, for example, from WO 99/57146 A1 and US Pat. No. 6,211,157 B1. These methods are essentially based on removing the proteinogenic agents from their immediate natural environment. The complicated and sometimes lengthy isolation and purification processes can impair the activity of the proteins, in particular with regard to their neovascularization-stimulating properties.
  • the invention therefore has as its object to provide active substances with neovascular properties in a form which leaves the natural or native properties and activities, in particular the neovascular properties and activities, of the active substances unaffected and therefore the neovascularization after administration, for example by a physician , induces and optimally promotes.
  • Claim 14 relates to a suitable method for the prophylaxis and / or treatment of vascular Diseases. Preferred embodiments are subject of the dependent claims. The wording of all claims is hereby incorporated by reference into the content of the description.
  • a collagen of xenogeneic origin having an active substance complex is used to induce and / or enhance neovascularization, in particular angiogenesis, in tissue.
  • a collagen of bovine or equine origin, preferably of equine origin, having an active substance complex is preferably used to induce and / or enhance neovascularization, in particular angiogenesis, in tissue.
  • an active substance complex comprising collagen of bovine origin
  • it is preferably the commercially sold by the applicant under the name ® COLLOSS lyophilized collagen extract.
  • an active substance complex comprising collagen of equine origin
  • it is preferably the commercially sold by the applicant under the name ® E COLLOSS lyophilized collagen extract.
  • neovascularization is to be understood as meaning any form of neovascularization, in particular angiogenesis and / or arteriogenesis.
  • angiogenesis in the context of the present invention is intended to mean the formation of new blood vessels from an existing one Vascular system, in particular by sprouting, be understood.
  • Angiogenesis is a prerequisite for the growth of organs and tissues because it ensures the supply of nutrients and oxygen.
  • factors in particular proteins and peptides, are required, preferably in a cascade, which regulate the phases of migration. on, proliferation and differentiation of the vascular endothelial cells and the formation of a lumen effect.
  • arteriogenesis in the context of the present invention is understood to mean the in situ growth of arteries by proliferation of endothelial cells and smooth muscle cells of already existing arteriolar compounds which, for example, supply ischemic tissue or inflamed areas with blood predominantly outside the affected tissue, however, are more important for providing nutrients to the particular ischemic tissue or site of inflammation as compared to the angiogenic capillary sprouting.
  • the invention further comprises the use of an active substance complex comprising collagen xenogeneic origin, preferably of COLLOSS ® or COLLOSS ® E, for the prophylaxis and / or treatment of diseases associated with vascular abnormalities, particularly in the form of constrictions and / or occlusions, in connection ,
  • the present invention also relates to use of an active substance complex comprising collagen xenogeneic origin, preferably of COLLOSS ® or COLLOSS ® E, for the manufacture of a medicament for the prophylaxis and / or treatment of diseases which are associated with vascular anomalies, especially in the form of constrictions and / or occlusions.
  • an active substance complex comprising collagen xenogeneic origin, preferably of COLLOSS ® or COLLOSS ® E, for the manufacture of a medicament for the prophylaxis and / or treatment of diseases which are associated with vascular anomalies, especially in the form of constrictions and / or occlusions.
  • Vascular anomalies in the sense of the present invention may be caused by mechanical damage to the blood vessel lanes.
  • mechanically induced damage can occur in dialysis patients who, due to a required minimum dialysis fluid flow, can be affected to a considerable extent by such vascular damage.
  • the vascular anomalies have pathological causes.
  • the diseases associated with vascular anomalies are myocardial infarction, stroke, arteriosclerosis, vascular necrosis or diabetes.
  • the diseases are preferably diseases which lead to anemia or lack of blood (ischemia) in the affected body regions, in particular tissues.
  • the inventive use of the collagen having an active substance complex also relates to the prophylaxis and / or treatment of ischemic secondary diseases, in particular of necroses.
  • the active substance complex has so-called growth and / or differentiation factors.
  • the active substance complex preferably has active ingredients of native origin, in particular extracellular proteins and / or peptides.
  • the active substances may in particular be cytokines, ie glycated proteins and / or peptides.
  • the active substance complex of the use according to the invention preferably has Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) as a growth and / or differentiation factor.
  • VEGF Vascular Endothelial Growth Factor
  • FGF fibroblast growth factor
  • PDGF platelet-derived growth factor
  • the collagen xenogeneic origin jump comprising an active substance complex is particularly suitable for the treatment of a pathologically reduced or suspended blood circulation of a tissue, since the active substance complex has substantially all the factors which are required in particular for the cascade of blood vessel formation.
  • the active ingredients contained in the complex can advantageously have overlapping active functions, so that any loss of activity of one or more active substances can be compensated by the other active substances contained in the complex.
  • a possible loss of activity can be effectively counteracted by the fact that the active substances of the complex are present in a native and / or renatured collagen matrix, a renatured collagen matrix, in particular in the form of the applicant under the names COLLOSS ® and COLLOSS ® E commercial available collagen extracts, is particularly preferred.
  • the active substance complex comprises an antimicrobial, in particular antibiotic, active substance.
  • This active substance can be added in particular after preparation of the collagen containing an active substance complex.
  • a preferred active agent applicable complex represents the commer- by the applicant essential product marketed TARGOBONE ® represents the case of TARGOBONE ® is a an active substance complex.
  • the active substance complex is equipped with a cytostatic agent in order to destroy possibly degenerated cells, in particular cancer cells.
  • the collagen is native and / or renatured.
  • Native collagen is usually in the form of triple-helical collagen fibers (three single-helical collagen fibrils each form a triple helix).
  • the network of collagen fibers is an ideal carrier material for the active ingredients of the active substance complex, in particular with regard to their geometric arrangement.
  • the collagen is present at least partially, preferably completely, renatured, with the collagen fibrils, ie single-helical collagen chains (collagen molecules), being assembled to form a superstructure, preferably a network-like structure.
  • the products COLLOSS ® and COLLOSS ® E the applicant have such a collagenous superstructure, particularly net-like structure on.
  • the active ingredients of the active substance complex in particular the growth and / or differentiation factors, preferably VEGF, which are in particular on the network-like structure, directly to the surrounding body region, in particular to the tissue, exposed.
  • the collagen may be type I, II or III collagen, the use of Type I collagen being particularly preferred according to the invention.
  • the collagen having an active substance complex may be present as a gel, in particular as a hydrogel.
  • the collagen used according to the invention can be provided together with a gel-forming component, in particular a hydrophilic polymer.
  • the hydrophilic polymer may be a polysaccharide or polysaccharide derivative, for example hyaluronic acid, heparin, carboxymethylcellulose (CMC), hydroxyethylcellulose (HEC), hydroxypropylcellulose (HPC) and / or ethylhydroxyethylcellulose (EHEC), hyaluronic acid and / or carboxymethylcellulose (CMC) are particularly preferred.
  • the collagen (having an active ingredient complex), in particular also the active substance complex, is present in the form of an extract.
  • the collagen and the active substance complex are preferably present as a common extract.
  • the collagen and drug complex are derived from the same biological materials, preferably from the same biological material.
  • the biological material may in particular be bone and / or cartilage tissue.
  • the collagen is present as a shaped body.
  • shaped bodies of arbitrary shapes come into consideration, with three-dimensional shaped bodies, in particular bars, rings, cuboids, disks or cylinders, being particularly preferred.
  • the shaped articles can furthermore be stabilized by chemical crosslinking, in particular with a carbodiimide, preferably with N- (dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimide (EDC).
  • EDC N- (dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimide
  • the shaped bodies can additionally be stabilized.
  • the moldings thus obtained retain their basic shape after moistening with liquids, especially body fluids.
  • the shaped body in particular the shaped body according to one of the embodiments described last above, is preferably a lyophilisate.
  • the formation of the shaped body as lyophilisate is particularly preferred since in this way a porous material is produced, which in particular can have interconnecting pores.
  • the pores of the shaped body preferably have pore diameters of at least 100 ⁇ m, in particular between 100 and 300 ⁇ m, preferably of about 200 ⁇ m. This is particularly advantageous for the alignment of vascular endothelial cells based in particular on chemotaxis in the course of endothelial cell proliferation and outgrowth in the direction of the shaped body.
  • a neovascularization which is directed to the implantation site. Due to the preferably open and porous structure of the molded body, the diffusion or release of the active ingredients contained in the active ingredient complex, in particular the growth and / or differentiation factors, preferably of VEGF, allows the surrounding tissue, so that a neovascularization in the peripheral areas of the affected Tissue range is achieved.
  • the collagen containing a substance complex is present in an emulsion.
  • the collagen having an active substance is preferably located in the interior of micelles, which may be formed in particular by amphiphilic substances, for example surfactants, emulsifiers or phospholipids.
  • the collagen comprises a carrier material.
  • the carrier material may in particular be fats, polysaccharides, for example mucopolysaccharides or cellulose derivatives, proteins, in particular collagen, preferably collagen of type I, in particular tendon collagen of
  • Type I 1 synthetic polymers and inorganic carriers act, with inorganic carriers, in particular sodium and / or calcium phosphates, preferably tricalcium phosphates, are particularly preferred.
  • the carrier material is the commercially sold by the applicant material OSSAPLAST ®, a bioresorbable and granulated ß-tri- calcium phosphate with high interkonnektierender porosity and a large specific surface.
  • the collagen complex having an active complex may be desirable for the collagen complex having an active complex to have load-bearing and / or dimensionally stable properties.
  • the collagen having an active ingredient complex as carrier material preferably comprises collagen, preferably collagen type I, in particular tendon collagen type I 1 , wherein the collagen is preferably pure collagen.
  • the collagen used as a carrier material is in powder form.
  • the collagen having an active substance complex is sterilized or in sterilized form.
  • sterilization the usual methods known in the art are suitable, wherein the sterilization by radioactive irradiation, preferably by gamma irradiation, and / or ethylene oxide gasification is particularly preferred.
  • the collagen used according to the invention is aseptically treated and / or prepared, in particular by Use of sterile-filtered antibiotic solutions, preferably by proliferation of a sterile-filtered gentamycin solution.
  • Such a treatment of the collagen used according to the invention is particularly advantageous, since in this way an undesired impairment of the complex active substances contained in the active ingredient, in particular growth and / or differentiation factors, preferably of VEGF, is avoided.
  • the active ingredient complex comprising collagen, in particular COLLOSS ® or COLLOSS ® E, prepared by pulverizing a bone, optionally degreasing with an organic solvent, demineralization with acid, preferably hydrochloric acid, - where appropriate incubation with a chelating agent, in particular EDTA and / or TRIS,
  • the degreasing of the bone material can be carried out before or after the demineralization and is carried out, for example, with acetone and / or ethanol.
  • Demineralization and degreasing processes effectively inactivate potentially transmissible pathogens present in xenogenic bone material.
  • the demineralization is preferably carried out with a mineral acid, in particular with hydrochloric acid, for example with 0.6 molar hydrochloric acid.
  • a chelating agent for example EDTA and / or TRIS, may be preferred.
  • guanidine in particular with guanidinium hydrochloride carried out, wherein a portion of the collagen and in particular low molecular weight proteins, in particular growth and / or differentiation factors, preferably VEGF, are extracted.
  • the extraction with guanidine, in particular guanidinium hydrochloride thus has the task of carrying out a first purification and of extracting a small part of the collagen present in the original bone material as a high molecular weight component.
  • extraction with guanidine, in particular with guanidinium hydrochloride represents the decisive step for the simultaneous isolation or provision of collagen and active substance complex, preferably in a single process step.
  • the process step of the extraction in particular with guanidine, can be repeated several times in order, in particular, to increase the amount of extracted active substances, in particular to growth and / or differentiation factors, preferably to VEGF.
  • additional active ingredients are added to the extract before or after these purification steps, in order to further increase the concentration of active ingredients in particular.
  • these agents reference is made in particular to the previous description.
  • further preferably simple purification steps of the collagen having an active substance complex in particular dialysis steps, may be carried out.
  • the extract is preferably subjected to shaping, in particular a lyophilization step.
  • the molding thus obtained, reference is also made to the previous description.
  • the collagen having an active substance complex is provided with further collagen, preferably with type I collagen, in particular with type I tendon collagen becomes.
  • the equipment may be before or after the purification of an active substance complex comprising collagen, are made in particular of COLLOSS ® or COLLOSS ® E.
  • the collagen equipped in this way and having an active substance complex is produced in the form of a sponge.
  • the use according to the invention of the collagen having an active ingredient complex for the induction and / or enhancement of neovascularization renders superfluous isolation and purification of factors, in particular of proteins and / or peptides, with neovascular properties superfluous.
  • the active ingredients in particular growth and / or differentiation factors, preferably VEGF 1 according to the use according to the invention, are provided in a collagenous form which allows an optimal action of the neovascular properties of the active substance complex.
  • the invention also includes a method for the prophylaxis and / or treatment of diseases associated with vascular anomalies, in particular in the form of constrictions and / or closures, wherein a therapeutically effective amount of an active substance complex collagen xenogene origin, in particular of COLLOSS ® or COLLOSS ® e, is administered.
  • a therapeutically effective amount of an active substance complex collagen xenogene origin in particular of COLLOSS ® or COLLOSS ® e
  • the lyophilizate to be tested is implanted in the form of a compact.
  • 49.5 to 50.5 mg of lyophilisate are weighed into a 2 ml disposable syringe and pressed using the punch of the syringe.
  • Male, about 8 weeks old SPF Wistar rats weighing between 190 and 240 g are prepared for implantation after a one-week settling-in period.
  • the animals are anesthetized with a common anesthetic.
  • the abdominal area prescribed for implantation is shaved and disinfected with 70% ethanol before the procedure. Each animal receives two implants bilaterally.
  • the rats are treated during the follow-up period at the 5 days at regular intervals and then once a day for clinical changes or deaths. For clinical abnormalities, clinical observation is more frequent.
  • the determination and recording of the body weight takes place immediately before implantation and thereafter at weekly intervals.
  • the rats (body weight at the beginning of the experiment about 190 to 240 g) receive in each case two implants ä 50 g (ie 500 ml / kg body weight).
  • ä 50 g ie 500 ml / kg body weight
  • COLLOSS ® and TARGOBONE ® one to three vials of 20 mg are generally used.
  • a maximum of 240 mg is possible according to the instructions for use.
  • Example 2 Similar results were obtained in Example 2 are at short-term implantation of COLLOSS ® E of Example 1 and subsequently performed explantation.

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Abstract

The invention relates to the use of collagen of xenogeneic origin for inducing and/or increasing neovascularization and for the prophylaxis and/or treatment of diseases associated with vascular anomalies, especially in the form of constrictions and/or obstructions, whereby the collagen comprises an active ingredient complex.

Description

Beschreibung description
Verwendung eines Kollagens xenoαenen UrsprungsUse of a collagen xenoαenen origin
Die Erfindung betrifft Verwendungen eines Kollagens xenogenen Ursprungs, das einen Wirkstoffkomplex aufweist.The invention relates to uses of a collagen of xenogenic origin which comprises an active substance complex.
In der medizinischen Patientenversorgung ist die Behandlung von vaskulären Erkrankungen von besonderer Bedeutung. Die zunehmende Prävalenz der damit einhergehenden Krankheitsbilder führt zu einem immer größer werdenden Bedarf an entsprechenden Behandlungsmöglichkeiten. Nur wenige der momentan zur Verfügung stehenden Behandlungsstrategien basieren auf ausschließlich kurativen Ansätzen. So können beispielsweise arterielle Verschlußerkrankungen mit angioplasti- sehen Verfahren, beispielsweise Ballondilatation, behandelt werden. Diese auf die Erweiterung oder Wiederöffnung von verengten oder verschlossenen Blutgefäßen, meistens Arterien, seltener auch Venen, gerichteten Verfahren implizieren jedoch ein hohes Risiko an Restenose und werden daher ausschließlich bei bestimmten arteriellen Verschlu- ßerkrankungen, beispielsweise ischämische Kordialerkrankungen, eingesetzt. Eine weitere kurative Behandlungsmöglichkeit stellt die sogenannte Bypaßoperation dar. Dabei handelt es sich um ein invasives Verfahren, das ebenfalls lediglich auf bestimmte Arten von arteriellen Verschlußerkrankungen beschränkt ist. Außerdem bedeutet ein derarti- ger Eingriff in vielen Fällen eine lange Hospitalisierungszeit sowie in den meisten Fällen eine erhebliche Traumatisierung für die Betroffenen.In medical patient care, the treatment of vascular diseases is of particular importance. The increasing prevalence of the associated clinical pictures leads to an ever-increasing need for appropriate treatment options. Only a few of the currently available treatment strategies are based on exclusively curative approaches. For example, arterial occlusive diseases can be treated with angioplasty-based methods, for example, balloon dilatation. However, these procedures aimed at the dilation or reopening of narrowed or occluded blood vessels, mostly arteries, and more rarely also veins, imply a high risk of restenosis and are therefore used exclusively in certain arterial occlusive diseases, for example, ischemic cordial diseases. Another curative treatment option is the so-called bypass surgery. This is an invasive procedure that is also limited to certain types of arterial occlusive diseases. In addition, such an intervention often means a long hospitalization time and, in most cases, considerable traumatization for those affected.
Ein neuerer Ansatz zur Behandlung von vaskulären Erkrankungen beruht auf Gentherapie, wobei dem Patienten Gene, die Proteine mit neo- vaskularisierenden Eigenschaften exprimieren, zugeführt werden. Dies kann beispielsweise in Form von Vektorkonstrukten (Vehikeln) erfolgen. Allerdings bestehen in diesem Zusammenhang zum Teil erhebliche Be- denken gegen die Einführung von Fremdgenen in den Körper des Empfängers. Weiterhin handelt es sich bei den Vehikeln zur Einführung des gewünschten Gens sehr häufig um virale Vektoren.A more recent approach to the treatment of vascular disease relies on gene therapy, where genes are supplied to the patient expressing proteins with neovascularizing properties. This can be done, for example, in the form of vector constructs (vehicles). However, in some cases considerable Think against the introduction of foreign genes into the body of the recipient. Furthermore, the vehicles for introducing the desired gene are very often viral vectors.
Alternativ dazu besteht die Möglichkeit, vaskuläre Erkrankungen direkt mit den die Neovaskularisierung stimulierenden Proteinen zu behandeln. So ist beispielsweise die Eignung der Proteine FGF (fibroblast growth factor) und VEGF (vascular endothelial growth factor) für die therapeutische Angiogenese bekannt (Kawasuji, M, Ann Thorac Cardiovasc Surg Vol. 8, No2, 2002, 59-61 ). Für die Isolierung und Aufreinigung dieser Proteine bzw. Proteinmischungen sind jedoch meistens sehr aufwendige Verfahrensschritte, insbesondere chromatographische Methoden, erforderlich. Ein Herstellungsverfahren für eine solche Proteinmischung, insbesondere auf der Basis von chromatographischen Verfahrensschritten, ist beispielsweise aus der WO 99/57146 A1 und US 6,211 ,157 B1 bekannt. Diese Verfahren beruhen im Wesentlichen darauf, daß die proteinogenen Wirkstoffe aus ihrer unmittelbaren natürlichen Umgebung entfernt werden. Die komplizierten und zum Teil langwierigen Isolationsund Aufreinigungsverfahren können die Aktivität der Proteine beein- trächtigen, insbesondere im Hinblick auf ihre die Neovaskularisierung stimulierenden Eigenschaften.Alternatively, it is possible to treat vascular diseases directly with the neovascularization-stimulating proteins. For example, the suitability of the proteins FGF (fibroblast growth factor) and VEGF (vascular endothelial growth factor) for therapeutic angiogenesis is known (Kawasuji, M, Ann Thorac Cardiovasc Surg Vol. 8, No2, 2002, 59-61). For the isolation and purification of these proteins or protein mixtures, however, very complicated process steps, in particular chromatographic methods, are usually required. A preparation process for such a protein mixture, in particular on the basis of chromatographic process steps, is known, for example, from WO 99/57146 A1 and US Pat. No. 6,211,157 B1. These methods are essentially based on removing the proteinogenic agents from their immediate natural environment. The complicated and sometimes lengthy isolation and purification processes can impair the activity of the proteins, in particular with regard to their neovascularization-stimulating properties.
Die Erfindung stellt sich daher die Aufgabe, Wirkstoffe mit neovaskulären Eigenschaften in einer Form bereitzustellen, welche die natürlichen bzw. nativen Eigenschaften und Aktivitäten, insbesondere die neovaskulären Eigenschaften und Aktivitäten, der Wirkstoffe unbeeinflußt läßt und daher die Neovaskularisierung nach erfolgter Applikation, beispielsweise durch einen Arzt, induziert und in optimaler Weise fördert.The invention therefore has as its object to provide active substances with neovascular properties in a form which leaves the natural or native properties and activities, in particular the neovascular properties and activities, of the active substances unaffected and therefore the neovascularization after administration, for example by a physician , induces and optimally promotes.
Diese Aufgabe wird gelöst durch Verwendungen, wie sie in den Ansprüchen 1 bis 3 beschrieben sind. Anspruch 14 bezieht sich auf ein geeignetes Verfahren zur Prophylaxe und/oder Behandlung von vaskulären Erkrankungen. Bevorzugte Ausführungsformen sind Gegenstand der abhängigen Ansprüche. Der Wortlaut sämtlicher Ansprüche wird hiermit durch Bezugnahme zum Inhalt der Beschreibung gemacht.This object is achieved by uses as described in claims 1 to 3. Claim 14 relates to a suitable method for the prophylaxis and / or treatment of vascular Diseases. Preferred embodiments are subject of the dependent claims. The wording of all claims is hereby incorporated by reference into the content of the description.
Erfindungsgemäß wird ein einen Wirkstoffkomplex aufweisendes Kollagen xenogenen Ursprungs zur Induktion und/oder Verstärkung der Neo- vaskularisierung, insbesondere Angiogenese, in Gewebe verwendet. Bevorzugt wird ein einen Wirkstoffkomplex aufweisendes Kollagen bovinen oder equinen Ursprungs, vorzugsweise equinen Ursprungs, zur In- duktion und/oder Verstärkung der Neovaskularisierung, insbesondere Angiogenese, in Gewebe verwendet.According to the invention, a collagen of xenogeneic origin having an active substance complex is used to induce and / or enhance neovascularization, in particular angiogenesis, in tissue. A collagen of bovine or equine origin, preferably of equine origin, having an active substance complex, is preferably used to induce and / or enhance neovascularization, in particular angiogenesis, in tissue.
Bei dem einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagen bovinen Ursprungs handelt es sich vorzugsweise um den von der Anmelderin unter der Bezeichnung COLLOSS® kommerziell vertriebenen lyophilisierten Kollagenextrakt.In which an active substance complex comprising collagen of bovine origin, it is preferably the commercially sold by the applicant under the name ® COLLOSS lyophilized collagen extract.
Bei dem einen Wirkstoff komplex aufweisenden Kollagen equinen Ursprungs handelt es sich bevorzugt um den von der Anmelderin unter der Bezeichnung COLLOSS® E kommerziell vertriebenen lyophilisierten Kollagenextrakt.In which an active substance complex comprising collagen of equine origin, it is preferably the commercially sold by the applicant under the name ® E COLLOSS lyophilized collagen extract.
Unter dem Begriff „Neovaskularisierung" im Sinne der vorliegenden Erfindung soll jede Form der Gefäßneubildung verstanden werden, insbe- sondere die Angiogenese und/oder die Arteriogenese. Unter dem Begriff der „Angiogenese" im Sinne der vorliegenden Erfindung soll die Bildung neuer Blutgefäße aus einem bestehenden Gefäßsystem, insbesondere durch Aussprossung, verstanden werden. Die Angiogenese ist eine Voraussetzung für das Wachstum von Organen und Geweben, weil sie die Versorgung mit Nährstoffen und Sauerstoff gewährleistet. Hierzu sind eine Vielzahl von Faktoren, insbesondere Proteine und Peptide, vorzugsweise in einer Kaskade erforderlich, welche die Phasen der Migrati- on, Proliferation und Differenzierung der vaskulären Endothelzellen sowie die Bildung eines Lumens bewirken. Unter dem Begriff „Arteriogene- se" im Sinne der vorliegenden Erfindung soll das in situ-Wachstum von Arterien durch Proliferation von Endothelzellen und glatten Muskelzellen von bereits bestehenden arterioleren Verbindungen verstanden werden, die beispielsweise ischämisches Gewebe oder entzündete Stellen mit Blut versorgen. Diese Gefäße wachsen überwiegend außerhalb des betroffenen Gewebes, sind jedoch im Vergleich zu der angiogenetischen Kapillarsprossung bedeutsamer für die Bereitstellung von Nährstoffen für das betreffende ischämische Gewebe oder den jeweiligen Entzündungsort.For the purposes of the present invention, the term "neovascularization" is to be understood as meaning any form of neovascularization, in particular angiogenesis and / or arteriogenesis.The term "angiogenesis" in the context of the present invention is intended to mean the formation of new blood vessels from an existing one Vascular system, in particular by sprouting, be understood. Angiogenesis is a prerequisite for the growth of organs and tissues because it ensures the supply of nutrients and oxygen. For this purpose, a large number of factors, in particular proteins and peptides, are required, preferably in a cascade, which regulate the phases of migration. on, proliferation and differentiation of the vascular endothelial cells and the formation of a lumen effect. The term "arteriogenesis" in the context of the present invention is understood to mean the in situ growth of arteries by proliferation of endothelial cells and smooth muscle cells of already existing arteriolar compounds which, for example, supply ischemic tissue or inflamed areas with blood predominantly outside the affected tissue, however, are more important for providing nutrients to the particular ischemic tissue or site of inflammation as compared to the angiogenic capillary sprouting.
Überraschenderweise konnte jetzt von den Erfindern in Tierversuchen festgestellt werden, daß die Implantation eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens xenogenen Ursprungs, insbesondere von COLLOSS® oder COLLOSS® E, in ein Gewebe, welches kein Knochengewebe darstellt, d. h. nach einer sogenannten heterotopen Implantation, zu einem deutlichen Anstieg der Neovaskularisierung, d. h. der Gefäßneubildung, führt.Surprisingly, it has now been found by the inventors in animal studies that the implantation of an active substance complex comprising collagen xenogeneic origin, in particular of COLLOSS ® or COLLOSS ® E, in a fabric showing no bone tissue, ie by a so-called heterotopic implantation, a significant Increase in neovascularization, ie neovascularization, leads.
Die Erfindung umfaßt weiterhin die Verwendung eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens xenogenen Ursprungs, vorzugsweise von COLLOSS® oder COLLOSS® E, zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen, die mit vaskulären Anomalien, insbesondere in Form von Verengungen und/oder Verschlüssen, im Zusammenhang stehen.The invention further comprises the use of an active substance complex comprising collagen xenogeneic origin, preferably of COLLOSS ® or COLLOSS ® E, for the prophylaxis and / or treatment of diseases associated with vascular abnormalities, particularly in the form of constrictions and / or occlusions, in connection ,
Außerdem betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens xenogenen Ursprungs, vorzugsweise von COLLOSS® oder COLLOSS® E, zur Herstellung eines Medikaments zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen, die mit vaskulären Anomalien, insbesondere in Form von Verengungen und/oder Verschlüssen, im Zusammenhang stehen.The present invention also relates to use of an active substance complex comprising collagen xenogeneic origin, preferably of COLLOSS ® or COLLOSS ® E, for the manufacture of a medicament for the prophylaxis and / or treatment of diseases which are associated with vascular anomalies, especially in the form of constrictions and / or occlusions.
Vaskuläre Anomalien im Sinne der vorliegenden Erfindung können durch mechanische Schäden an den Blutgefäßbahnen verursacht sein. Beispielsweise können derartige mechanisch bedingte Schäden bei Dialysepatienten auftreten, die aufgrund eines erforderlichen Mindestdialy- seflusses in nicht unerheblichem Maße von derartigen Gefäßschäden betroffen sein können. Erfindungsgemäß ist es besonders bevorzugt, daß die vaskulären Anomalien pathologische Ursachen haben. Vorzugsweise handelt es sich bei den Erkrankungen, die mit vaskulären Anomalien im Zusammenhang stehen, um Herzinfarkt, Schlaganfall, Arteriosklerose, vaskuläre Nekrosen oder Diabetes. Bei den Erkrankungen im Sinne der vorliegenden Erfindung handelt es sich vorzugsweise um Er- krankungen, die zu einer Blutarmut bzw. Blutleere (Ischämie) in den betroffenen Körperregionen, insbesondere Geweben, führen. Weiterhin betrifft die erfindungsgemäße Verwendung des einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens auch die Prophylaxe und/oder Behandlung von ischämischen Folgeerkrankungen, insbesondere von Nekrosen.Vascular anomalies in the sense of the present invention may be caused by mechanical damage to the blood vessel lanes. For example, such mechanically induced damage can occur in dialysis patients who, due to a required minimum dialysis fluid flow, can be affected to a considerable extent by such vascular damage. According to the invention, it is particularly preferred that the vascular anomalies have pathological causes. Preferably, the diseases associated with vascular anomalies are myocardial infarction, stroke, arteriosclerosis, vascular necrosis or diabetes. For the purposes of the present invention, the diseases are preferably diseases which lead to anemia or lack of blood (ischemia) in the affected body regions, in particular tissues. Furthermore, the inventive use of the collagen having an active substance complex also relates to the prophylaxis and / or treatment of ischemic secondary diseases, in particular of necroses.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verwendung weist der Wirkstoffkomplex sogenannte Wachstums- und/ oder Differenzierungsfaktoren, auf. Der Wirkstoffkomplex weist vorzugsweise Wirkstoffe nativen Ursprungs, insbesondere extrazelluläre Proteine und/oder Peptide, auf. Bei den Wirkstoffen kann es sich insbesondere um Zytokine, d.h. glykolisierte Proteine und/oder Peptide handeln. Erfindungsgemäß ist es besonders vorteilhaft, wenn die soeben erwähnten Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktoren eine chemotaktische und insbesondere mitogene Wirkung, vorzugsweise spezifisch nur auf vaskuläre Endothelzellen, ausüben. Auf diese Weise wird eine Neovaskularisierung bzw. Gefäßneubildung einerseits auf der Basis der Proliferation von Endothelzellen sowie andererseits durch Aussprossung bzw. Migration von Kapillaren ausgehend von einem bereits bestehenden Gefäßsystem gewährleistet. Vorzugsweise weist der Wirkstoffkomplex der erfindungsgemäßen Verwendung VEGF (vascular endothelial growth factor) als Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktor auf. Als weitere Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktoren können in dem Wirkstoffkomplex FGF (fibroblast growth factor) und PDGF (platelet- derived growth factor) enthalten sein.According to a preferred embodiment of the use according to the invention, the active substance complex has so-called growth and / or differentiation factors. The active substance complex preferably has active ingredients of native origin, in particular extracellular proteins and / or peptides. The active substances may in particular be cytokines, ie glycated proteins and / or peptides. According to the invention, it is particularly advantageous if the just mentioned growth and / or differentiation factors exert a chemotactic and in particular mitogenic action, preferably specifically only on vascular endothelial cells. In this way, a neovascularization or neovascularization on the one hand based on the proliferation of endothelial cells and on the other hand by sprouting or migration of capillaries starting from an existing vascular system guaranteed. The active substance complex of the use according to the invention preferably has Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) as a growth and / or differentiation factor. As further growth and / or differentiation factors, FGF (fibroblast growth factor) and PDGF (platelet-derived growth factor) may be contained in the active substance complex.
Das einen Wirkstoffkomplex aufweisende Kollagen xenogenen Ur- Sprungs eignet sich in besonderer Weise zur Behandlung einer pathologisch verminderten oder aufgehobenen Durchblutung eines Gewebes, da der Wirkstoff komplex im Wesentlichen alle Faktoren, die insbesondere für die Kaskade der Blutgefäßneubildung erforderlich sind, aufweist. Dabei können die im Komplex enthaltenen Wirkstoffe mit Vorteil über- läppende Wirkfunktionen aufweisen, so daß ein etwaiger Aktivitätsverlust eines oder mehrerer Wirkstoffe durch die anderen im Komplex enthaltenen Wirkstoffe kompensiert werden kann. Einem möglichen Aktivitätsverlust kann erfindungsgemäß jedoch dadurch wirksam begegnet werden, daß die Wirkstoffe des Komplexes in einer nativen und/oder re- naturierten Kollagenmatrix vorliegen, wobei eine renaturierte Kollagenmatrix, insbesondere in Form der von der Anmelderin unter den Bezeichnungen COLLOSS® und COLLOSS® E kommerziell erhältlichen Kollagenextrakte, besonders bevorzugt ist.The collagen xenogeneic origin jump comprising an active substance complex is particularly suitable for the treatment of a pathologically reduced or suspended blood circulation of a tissue, since the active substance complex has substantially all the factors which are required in particular for the cascade of blood vessel formation. In this case, the active ingredients contained in the complex can advantageously have overlapping active functions, so that any loss of activity of one or more active substances can be compensated by the other active substances contained in the complex. However, according to the invention, a possible loss of activity can be effectively counteracted by the fact that the active substances of the complex are present in a native and / or renatured collagen matrix, a renatured collagen matrix, in particular in the form of the applicant under the names COLLOSS ® and COLLOSS ® E commercial available collagen extracts, is particularly preferred.
Weiterhin kann es bevorzugt sein, daß der Wirkstoffkomplex einen anti- mikrobiotischen, insbesondere antibiotischen, Wirkstoff umfaßt. Dieser Wirkstoff kann insbesondere nach Herstellung des einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens hinzugegeben werden. Einen bevorzugt einsetzbaren Wirkstoff komplex stellt das von der Anmelderin kommer- ziell vertriebene Produkt TARGOBONE® dar. Im Falle von TARGOBONE® handelt es sich um ein einen Wirkstoffkomplex aufwei- sendes Kollagen, insbesondere um COLLOSS® oder COLLOSS® E, welches mit dem Antibiotikum Ticoplanin dotiert ist.Furthermore, it may be preferred that the active substance complex comprises an antimicrobial, in particular antibiotic, active substance. This active substance can be added in particular after preparation of the collagen containing an active substance complex. A preferred active agent applicable complex represents the commer- by the applicant essential product marketed TARGOBONE ® represents the case of TARGOBONE ® is a an active substance complex. Aufwei- sendes collagen, in particular COLLOSS ® or COLLOSS ® E, which is doped with the antibiotic Ticoplanin.
Weiterhin kann es erfindungsgemäß vorgesehen sein, daß der Wirk- stoffkomplex mit einem Zytostatikum ausgerüstet ist, um möglicherweise entartete Zellen, insbesondere Krebszellen, zu zerstören.Furthermore, it can be provided according to the invention that the active substance complex is equipped with a cytostatic agent in order to destroy possibly degenerated cells, in particular cancer cells.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verwendung liegt das Kollagen nativ und/oder renaturiert vor. Natives Kollagen liegt gewöhnlich in Form von tripelhelikalen Kollagenfasern (drei einzelhelikale Kollagenfibrillen bilden jeweils eine Tripelhelix) vor. Dies ist besonders vorteilhaft, da das Netzwerk aus Kollagenfasern ein ideales Trägermaterial für die Wirkstoffe des Wirkstoffkomplexes darstellt, insbesondere hinsichtlich ihrer geometrischen Anordnung. Erfin- dungsgemäß ist es besonders vorteilhaft, wenn das Kollagen zumindest teilweise, vorzugsweise vollständig, renaturiert vorliegt, wobei die Kollagenfibrillen, d. h. einzelhelikale Kollagenketten (Kollagenmoleküle) zu einer Überstruktur, vorzugsweise zu einer netzähnlichen Struktur, zusammengelagert sind. Die Produkte COLLOSS® und COLLOSS® E der Anmelderin weisen eine derartige kollagene Überstruktur, insbesondere netzähnliche Struktur, auf. Auf diese Weise werden die Wirkstoffe des Wirkstoffkomplexes, insbesondere die Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktoren, vorzugsweise VEGF, die sich insbesondere auf der netzähnlichen Struktur befinden, unmittelbar zu der umliegenden Kör- perregion, insbesondere zum Gewebe, exponiert. Dies ist besonders günstig für die Induktion und/oder Verstärkung der Neovaskularisierung bzw. Gefäßneubildung in der zu behandelnden Körperregion. Bei dem Kollagen kann es sich um ein Kollagen vom Typ I, Il oder III handeln, wobei die Verwendung von Kollagen vom Typ I erfindungsgemäß be- sonders bevorzugt ist. Weiterhin kann das einen Wirkstoffkomplex aufweisende Kollagen als Gel, insbesondere als Hydrogel, vorliegen. Zu diesem Zweck kann das erfindungsgemäß verwendete Kollagen zusammen mit einer gelbildenden Komponente, insbesondere einem hydrophilen Polymer, bereitge- stellt werden. Erfindungsgemäß kann es sich bei dem hydrophilen Polymer um ein Polysaccharid oder Polysaccharidderivat, beispielsweise um Hyaluronsäure, Heparin, Carboxymethylcellulose (CMC), Hydroxye- thylcellulose (HEC), Hydroxypropylcellulose (HPC) und/oder um Ethyl- hydroxyethylcellulose (EHEC) handeln, wobei Hyaluronsäure und/oder Carboxymethylcellulose (CMC) besonders bevorzugt sind.In a further preferred embodiment of the use according to the invention, the collagen is native and / or renatured. Native collagen is usually in the form of triple-helical collagen fibers (three single-helical collagen fibrils each form a triple helix). This is particularly advantageous because the network of collagen fibers is an ideal carrier material for the active ingredients of the active substance complex, in particular with regard to their geometric arrangement. According to the invention, it is particularly advantageous if the collagen is present at least partially, preferably completely, renatured, with the collagen fibrils, ie single-helical collagen chains (collagen molecules), being assembled to form a superstructure, preferably a network-like structure. The products COLLOSS ® and COLLOSS ® E the applicant have such a collagenous superstructure, particularly net-like structure on. In this way, the active ingredients of the active substance complex, in particular the growth and / or differentiation factors, preferably VEGF, which are in particular on the network-like structure, directly to the surrounding body region, in particular to the tissue, exposed. This is particularly favorable for the induction and / or enhancement of neovascularization or neovascularization in the body region to be treated. The collagen may be type I, II or III collagen, the use of Type I collagen being particularly preferred according to the invention. Furthermore, the collagen having an active substance complex may be present as a gel, in particular as a hydrogel. For this purpose, the collagen used according to the invention can be provided together with a gel-forming component, in particular a hydrophilic polymer. According to the invention, the hydrophilic polymer may be a polysaccharide or polysaccharide derivative, for example hyaluronic acid, heparin, carboxymethylcellulose (CMC), hydroxyethylcellulose (HEC), hydroxypropylcellulose (HPC) and / or ethylhydroxyethylcellulose (EHEC), hyaluronic acid and / or carboxymethylcellulose (CMC) are particularly preferred.
In einer bevorzugten Ausführungsform liegt das (einen Wirkstoff komplex aufweisende) Kollagen, insbesondere auch der Wirkstoffkomplex, in Form eines Extraktes vor. Das Kollagen und der Wirkstoffkomplex liegen vorzugsweise als gemeinsamer Extrakt vor.In a preferred embodiment, the collagen (having an active ingredient complex), in particular also the active substance complex, is present in the form of an extract. The collagen and the active substance complex are preferably present as a common extract.
In einer weiteren Ausführungsform stammen das Kollagen und der Wirkstoffkomplex aus den gleichen biologischen Materialien, vorzugsweise aus dem selben biologischen Material. Bei dem biologischen Material kann es sich insbesondere um Knochen und/oder Knorpelgewebe handeln.In another embodiment, the collagen and drug complex are derived from the same biological materials, preferably from the same biological material. The biological material may in particular be bone and / or cartilage tissue.
Entsprechend einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Verwendung liegt das Kollagen als Formkörper vor. Grundsätzlich kommen Formkörper beliebiger Formen in Betracht, wobei dreidimensionale Formkörper, insbesondere Balken, Ringe, Quader, Scheiben oder Zylinder, besonders bevorzugt sind. Die Formkörper können weiterhin durch eine chemische Quervernetzung, insbesondere mit einem Carbodiimid, vorzugsweise mit N-(dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid (EDC), stabilisiert sein. Durch den Eintrag eines Bindemittels und/oder Salzes können die Formkörper zusätzlich stabilisiert sein. Die so erhaltenen Formkörper behalten ihre Grundform nach Befeuchten mit Flüssigkeiten, insbesondere Körperflüssigkeiten. Erfindungsgemäß ist es besonders vorteilhaft, wenn die Formkörper nach einer Kompression ihre Ursprungsform zumindest annähernd wiederfinden, d. h. also über elastische Eigenschaften verfügen.According to a further preferred embodiment of the use, the collagen is present as a shaped body. In principle, shaped bodies of arbitrary shapes come into consideration, with three-dimensional shaped bodies, in particular bars, rings, cuboids, disks or cylinders, being particularly preferred. The shaped articles can furthermore be stabilized by chemical crosslinking, in particular with a carbodiimide, preferably with N- (dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimide (EDC). By introducing a binder and / or salt, the shaped bodies can additionally be stabilized. The moldings thus obtained retain their basic shape after moistening with liquids, especially body fluids. According to the invention, it is particularly advantageous if the shaped bodies at least approximately find their original shape after compression, ie they have elastic properties.
Vorzugsweise handelt es sich bei dem Formkörper, insbesondere bei dem Formkörper nach einem der zuletzt oben beschriebenen Ausbildungsformen, um ein Lyophilisat. Die Ausbildung des Formkörpers als Lyophilisat ist besonders bevorzugt, da auf diese Weise ein poröses Ma- terial erzeugt wird, das insbesondere interkonnektierende Poren aufweisen kann. Bevorzugt besitzen die Poren des Formkörpers Porendurchmesser von mindestens 100 μm, insbesondere zwischen 100 und 300 μm, vorzugsweise von ca. 200 μm. Dies ist besonders vorteilhaft für die auf insbesondere Chemotaxis beruhende Ausrichtung von vaskulären Endothelzellen im Verlauf der Endothelzellen-Proliferation und Aus- sprossung in Richtung des Formkörpers. Die Implantation des einen Wirkstoff komplex aufweisenden Kollagens in eine zu behandelnde Körperregion, insbesondere in einen ischämischen Gewebebereich, führt mit besonderem Vorteil zu einer Neovaskularisierung, die auf die Im- plantationsstelle gerichtet ist. Durch die vorzugsweise offene und poröse Struktur des Formkörpers wird die Diffusion bzw. Abgabe der im Wirkstoffkomplex enthaltenen Wirkstoffe, insbesondere der Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktoren, vorzugsweise von VEGF, an das umliegende Gewebe ermöglicht, so daß eine Neovaskularisierung auch in den Randgebieten des betroffenen Gewebebereiches erzielt wird.The shaped body, in particular the shaped body according to one of the embodiments described last above, is preferably a lyophilisate. The formation of the shaped body as lyophilisate is particularly preferred since in this way a porous material is produced, which in particular can have interconnecting pores. The pores of the shaped body preferably have pore diameters of at least 100 μm, in particular between 100 and 300 μm, preferably of about 200 μm. This is particularly advantageous for the alignment of vascular endothelial cells based in particular on chemotaxis in the course of endothelial cell proliferation and outgrowth in the direction of the shaped body. The implantation of the collagen having an active substance complex in a body region to be treated, in particular in an ischemic tissue region, leads with particular advantage to a neovascularization, which is directed to the implantation site. Due to the preferably open and porous structure of the molded body, the diffusion or release of the active ingredients contained in the active ingredient complex, in particular the growth and / or differentiation factors, preferably of VEGF, allows the surrounding tissue, so that a neovascularization in the peripheral areas of the affected Tissue range is achieved.
In einer anderen Ausführungsform kann es erfindungsgemäß vorgesehen sein, daß das einen Wjrkstoffkomplex aufweisende Kollagen in einer Emulsion vorliegt. Bevorzugt befindet sich das einen Wirkstoff komplex aufweisende Kollagen im Inneren von Micellen, die insbesondere durch amphiphile Stoffe, beispielsweise Tenside, Emulgatoren oder Phospho- lipide, gebildet sein können. In einer weiteren Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verwendung weist das Kollagen ein Trägermaterial auf. Bei dem Trägermaterial kann es sich insbesondere um Fette, Polysaccharide, beispielsweise Mucopo- lysaccharide oder Cellulosederivate, Proteine, insbesondere Kollagen, vorzugsweise Kollagen vom Typ I, insbesondere Sehnenkollagen vomIn another embodiment, it may be provided according to the invention that the collagen containing a substance complex is present in an emulsion. The collagen having an active substance is preferably located in the interior of micelles, which may be formed in particular by amphiphilic substances, for example surfactants, emulsifiers or phospholipids. In a further embodiment of the use according to the invention, the collagen comprises a carrier material. The carrier material may in particular be fats, polysaccharides, for example mucopolysaccharides or cellulose derivatives, proteins, in particular collagen, preferably collagen of type I, in particular tendon collagen of
Typ I1 synthetische Polymere sowie anorganische Träger handeln, wobei anorganische Träger, insbesondere Natrium- und/oder Calciumphospha- te, vorzugsweise Tricalciumphosphate, in besonderem Maße bevorzugt sind.Type I 1 synthetic polymers and inorganic carriers act, with inorganic carriers, in particular sodium and / or calcium phosphates, preferably tricalcium phosphates, are particularly preferred.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei dem Trägermaterial um das von der Anmelderin kommerziell vertriebene Material OSSAPLAST®, ein bioresorbierbares und granuliertes ß-Tri- calciumphosphat mit hoher interkonnektierender Porosität und großer spezifischer Oberfläche.In a particularly preferred embodiment, the carrier material is the commercially sold by the applicant material OSSAPLAST ®, a bioresorbable and granulated ß-tri- calcium phosphate with high interkonnektierender porosity and a large specific surface.
In einigen Fällen kann es wünschenswert sein, daß das einen Wirkstoffkomplex aufweisende Kollagen über lasttragende und/oder formstabile Eigenschaften verfügt. Bevorzugt weist das einen Wirkstoff komplex aufweisende Kollagen als Trägermaterial Kollagen, vorzugsweise Kollagen vom Typ I, insbesondere Sehnenkollagen vom Typ I1 auf, wobei es sich bei dem Kollagen vorzugsweise um reines Kollagen handelt. Mit Vorteil liegt das als Trägermaterial verwendete Kollagen in Pulverform vor.In some cases, it may be desirable for the collagen complex having an active complex to have load-bearing and / or dimensionally stable properties. The collagen having an active ingredient complex as carrier material preferably comprises collagen, preferably collagen type I, in particular tendon collagen type I 1 , wherein the collagen is preferably pure collagen. Advantageously, the collagen used as a carrier material is in powder form.
Mit Vorteil liegt das einen Wirkstoffkomplex aufweisende Kollagen sterilisiert bzw. in sterilisierter Form vor. Für die Sterilisation eignen sich die üblichen dem Fachmann bekannten Verfahren, wobei die Sterilisation durch radioaktive Bestrahlung, vorzugsweise durch Gamma-Bestrah- lung, und/oder Ethylenoxidbegasung besonders bevorzugt ist. Weiterhin kann es vorgesehen sein, daß das erfindungsgemäß verwendete Kollagen aseptisch behandelt und/oder hergestellt ist, insbesondere durch Verwendung von steril filtrierten Antibiotikalösungen, vorzugsweise durch Verwucherung einer steril filtrierten Gentamycinlösung. Eine derartige Behandlung des erfindungsgemäß verwendeten Kollagens ist besonders vorteilhaft, da auf diese Weise eine unerwünschte Beeinträchti- gung der im Wirkstoff komplex enthaltenen Wirkstoffe, insbesondere Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktoren, vorzugsweise von VEGF, vermieden wird.Advantageously, the collagen having an active substance complex is sterilized or in sterilized form. For sterilization, the usual methods known in the art are suitable, wherein the sterilization by radioactive irradiation, preferably by gamma irradiation, and / or ethylene oxide gasification is particularly preferred. Furthermore, it may be provided that the collagen used according to the invention is aseptically treated and / or prepared, in particular by Use of sterile-filtered antibiotic solutions, preferably by proliferation of a sterile-filtered gentamycin solution. Such a treatment of the collagen used according to the invention is particularly advantageous, since in this way an undesired impairment of the complex active substances contained in the active ingredient, in particular growth and / or differentiation factors, preferably of VEGF, is avoided.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das den Wirkstoff- komplex aufweisende Kollagen, insbesondere COLLOSS® oder COLLOSS® E, herstellbar durch Pulverisierung von Knochen, gegebenenfalls Entfettung mit einem organischen Lösungsmittel, Demineralisierung mit Säure, vorzugsweise Salzsäure, - gegebenenfalls Inkubation mit einem Chelatbildner, insbesondere EDTA und/oder TRIS,In a particularly preferred embodiment which is the active ingredient complex comprising collagen, in particular COLLOSS ® or COLLOSS ® E, prepared by pulverizing a bone, optionally degreasing with an organic solvent, demineralization with acid, preferably hydrochloric acid, - where appropriate incubation with a chelating agent, in particular EDTA and / or TRIS,
Extraktion mit Guanidin, insbesondere Guanidiniumhydrochlorid, Aufreinigung des Extrakts und gegebenenfalls Formgebung des Extrakts.Extraction with guanidine, in particular guanidinium hydrochloride, purification of the extract and, if appropriate, shaping of the extract.
Die Entfettung des Knochenmaterials kann vor oder nach der Demineralisierung erfolgen und wird beispielsweise mit Aceton und/oder Ethanol durchgeführt. Durch die Prozesse der Demineralisierung und Entfettung werden die möglicherweise im xenogenen Knochenmaterial enthaltenen und möglicherweise transmissiblen Krankheitserreger effektiv inaktiviert. Die Demineralisierung wird vorzugsweise mit einer Mineralsäure, insbesondere mit Salzsäure, beispielsweise mit 0,6 molarer Salzsäure, durchgeführt. Zur Komplexierung von physiologisch im Knochengewebe vorkommenden zweiwertigen Kationen, insbesondere Magnesium- und Calciumionen, kann eine Inkubation mit einem Chelatbildner, beispielsweise EDTA und/oder TRIS, bevorzugt sein. Vor einer weiteren Aufarbeitung, insbesondere Aufreinigung, wird vorzugsweise eine Extraktion mit Guanidin, insbesondere mit Guanidiniumhydrochlorid, durchgeführt, wobei ein Teil des Kollagens und insbesondere niedermolekulare Proteine, insbesondere Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktoren, vorzugsweise VEGF, extrahiert werden. Die Extraktion mit Guanidin, insbe- sondere Guanidiniumhydrochlorid, hat somit die Aufgabe, eine erste Aufreinigung vorzunehmen und einen geringen Teil des im ursprünglichen Knochenmaterial vorhandenen Kollagens als hochmolekulare Komponente mit zu extrahieren. Gleichzeitig stellt die Extraktion mit Guanidin, insbesondere mit Guanidiniumhydrochlorid, den entscheiden- den Schritt zur gleichzeitigen Isolation bzw. Bereitstellung von Kollagen und Wirkstoffkomplex, vorzugsweise in einem einzigen Verfahrensschritt dar.The degreasing of the bone material can be carried out before or after the demineralization and is carried out, for example, with acetone and / or ethanol. Demineralization and degreasing processes effectively inactivate potentially transmissible pathogens present in xenogenic bone material. The demineralization is preferably carried out with a mineral acid, in particular with hydrochloric acid, for example with 0.6 molar hydrochloric acid. For the complexation of physiologically occurring bony tissue divalent cations, in particular magnesium and calcium ions, an incubation with a chelating agent, for example EDTA and / or TRIS, may be preferred. Before a further work-up, in particular purification, is preferably an extraction with guanidine, in particular with guanidinium hydrochloride carried out, wherein a portion of the collagen and in particular low molecular weight proteins, in particular growth and / or differentiation factors, preferably VEGF, are extracted. The extraction with guanidine, in particular guanidinium hydrochloride, thus has the task of carrying out a first purification and of extracting a small part of the collagen present in the original bone material as a high molecular weight component. At the same time, extraction with guanidine, in particular with guanidinium hydrochloride, represents the decisive step for the simultaneous isolation or provision of collagen and active substance complex, preferably in a single process step.
Gegebenenfalls kann der Verfahrensschritt der Extraktion, insbesondere mit Guanidin, mehrmals wiederholt werden, um insbesondere die Menge an extrahierten Wirkstoffen, insbesondere an Wachstums- und/ oder Differenzierungsfaktoren, vorzugsweise an VEGF, zu erhöhen. Weiterhin ist es denkbar, daß vor oder nach diesen Aufreinigungsschritten zusätzliche Wirkstoffe zu dem Extrakt hinzugegeben werden, um insbesondere die Konzentration an Wirkstoffen weiter zu erhöhen. Bezüglich dieser Wirkstoffe wird insbesondere auf die bisherige Beschreibung verwiesen. Gegebenenfalls können weitere vorzugsweise einfache Reinigungsschritte des einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens, insbesondere Dialyseschritte, vorgenommen werden. Vorzugsweise wird der Ex- trakt nach seiner Aufreinigung einer Formgebung, insbesondere einem Lyophilisierungsschritt, unterworfen. Bezüglich des so erhaltenen Formkörpers wird ebenfalls auf die bisherige Beschreibung verwiesen. Bezüglich weiterer Einzelheiten zur Zusammensetzung und Herstellung des Extraktes wird auf die internationalen Patentanmeldungen WO 91/06324 und WO 93/20857 verwiesen, deren Offenbarungen insoweit von der vorliegenden Erfindung miterfaßt sein sollen. Zur Erhöhung der lasttragenden und/oder formstabilen Eigenschaften des in der vorhergehenden Ausführungsform beschriebenen Formkörpers kann es erfindungsgemäß weiter bevorzugt sein, daß das einen Wirkstoffkomplex aufweisende Kollagen mit weiterem Kollagen, vor- zugsweise mit Kollagen vom Typ I, insbesondere mit Sehnenkollagen vom Typ I, ausgestattet wird. Die Ausstattung kann vor oder nach der Aufreinigung des einen Wirkstoff komplex aufweisenden Kollagens, insbesondere von COLLOSS® oder COLLOSS® E, vorgenommen werden. Vorzugsweise wird das auf diese Weise ausgestattete und einen Wirk- stoffkomplex aufweisende Kollagen in Form eines Schwammes hergestellt. Bezüglich weiterer Einzelheiten wird auf die bisherige Beschreibung verwiesen.If appropriate, the process step of the extraction, in particular with guanidine, can be repeated several times in order, in particular, to increase the amount of extracted active substances, in particular to growth and / or differentiation factors, preferably to VEGF. Furthermore, it is conceivable that additional active ingredients are added to the extract before or after these purification steps, in order to further increase the concentration of active ingredients in particular. With regard to these agents, reference is made in particular to the previous description. Optionally, further preferably simple purification steps of the collagen having an active substance complex, in particular dialysis steps, may be carried out. After its purification, the extract is preferably subjected to shaping, in particular a lyophilization step. With regard to the molding thus obtained, reference is also made to the previous description. For further details on the composition and preparation of the extract, reference is made to international patent applications WO 91/06324 and WO 93/20857, the disclosures of which are to be included in the scope of the present invention. In order to increase the load-bearing and / or dimensionally stable properties of the shaped body described in the preceding embodiment, it may be further preferred according to the invention that the collagen having an active substance complex is provided with further collagen, preferably with type I collagen, in particular with type I tendon collagen becomes. The equipment may be before or after the purification of an active substance complex comprising collagen, are made in particular of COLLOSS ® or COLLOSS ® E. Preferably, the collagen equipped in this way and having an active substance complex is produced in the form of a sponge. For further details, reference is made to the previous description.
Die erfindungsgemäße Verwendung des einen Wirkstoff komplex aufwei- senden Kollagens zur Induktion und/oder Verstärkung der Neovaskulari- sierung macht eine aufwendige Isolierung und Aufreinigung von Faktoren, insbesondere von Proteinen und/oder Peptiden, mit neovaskulären Eigenschaften überflüssig. Gleichzeitig werden die Wirkstoffe, insbesondere Wachstums- und/oder Differenzierungsfaktoren, vorzugsweise VEGF1 entsprechend der erfindungsgemäßen Verwendung in einer kol- lagenen Form bereitgestellt, die eine optimale Wirkung der neovaskulären Eigenschaften des Wirkstoffkomplexes erlaubt.The use according to the invention of the collagen having an active ingredient complex for the induction and / or enhancement of neovascularization renders superfluous isolation and purification of factors, in particular of proteins and / or peptides, with neovascular properties superfluous. At the same time, the active ingredients, in particular growth and / or differentiation factors, preferably VEGF 1 according to the use according to the invention, are provided in a collagenous form which allows an optimal action of the neovascular properties of the active substance complex.
Schließlich umfaßt die Erfindung auch ein Verfahren zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen, die mit vaskulären Anomalien, insbesondere in Form von Verengungen und/oder Verschlüssen, im Zusammenhang stehen, wobei eine therapeutisch wirksame Menge eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens xenogenen Ursprungs, insbesondere von COLLOSS® oder COLLOSS® E, verabreicht wird. Be- züglich weiterer Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verfahrens wird auf die obige Beschreibung verwiesen. Weitere Merkmale und Einzelheiten der Erfindung ergeben sich aus der nachfolgenden Beschreibung von bevorzugten Ausführungsformen in Form von Beispielen. Dabei können die einzelnen Merkmale jeweils für sich alleine oder zu mehreren in Kombination miteinander verwirklicht sein. Die Beispiele dienen lediglich der Erläuterung der vorliegenden Erfindung, die in keiner Weise darauf beschränkt sein soll.Finally, the invention also includes a method for the prophylaxis and / or treatment of diseases associated with vascular anomalies, in particular in the form of constrictions and / or closures, wherein a therapeutically effective amount of an active substance complex collagen xenogene origin, in particular of COLLOSS ® or COLLOSS ® e, is administered. With regard to further embodiments of the method according to the invention, reference is made to the above description. Further features and details of the invention will become apparent from the following description of preferred embodiments in the form of examples. In this case, the individual features can be realized individually or in combination with each other alone. The examples are merely illustrative of the present invention, which is in no way intended to be limited thereto.
Beispiel 1 Implantation eines COLLOSS® oder TARGOBON E® LyophilisatsExample 1 Implantation of COLLOSS ® or TARGOBON E ® lyophilisate
Das zu prüfende Lyophilisat wird in Form eines Presslings implantiert. Dazu werden 49,5 bis 50,5 mg Lyophilisat in eine 2 ml Einwegspritze eingewogen und mit Hilfe des Stempels der Spritze gepreßt. Männliche, ca. 8 Wochen alte SPF-Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht zwischen 190 bis 240 g werden nach einer einwöchigen Eingewöhnungszeit für die Implantation vorbereitet. Dazu werden die Tiere mit einem gängigen Narkosemittel anästhesiert. Der für die Implantation vorgegebene Bauchbereich wird rasiert und vor dem Eingriff mit 70 %igem E- thanol desinfiziert. Jedes Tier erhält bilateral zwei Implantate. Nach Durchtrennung der Haut (parallel zur Linea alba) wird mit einem Skalpell ca. 1 cm von der Mittellinie (Linea alba) entfernt ein ca. 1 bis 2 cm langer Schnitt gesetzt, der nur den M. obliquus extemus durchtrennt. Zwischen diesem und dem darunterliegenden M. obliquus internus wird dann mit- tels stumpfer Präparation (mit einer Schere) eine Muskeltasche von ca. 1 cm3 erzeugt. In die Muskeltasche wird der Pressung mit Hilfe einer Pipette eingebracht. Zuerst wird die Muskeltasche mit farbigem Nahtmaterial, anschließend der Hautschnitt mit Nahtmaterial durch chirurgische Nähte verschlossen. Nach Beendigung der Implantation erfolgt eine Be- handlung der beiden Wundnähte mit lod-PVP-Spray. Bei jedem Tier wird sowohl auf der rechten als auch auf der linken Bauchseite ein Implantat gesetzt. Die Ratten werden während der Nachbeobachtungszeit am ers- ten Tage des Testes fünf Mal in regelmäßigen Abständen und dann ein Mal täglich auf klinische Veränderungen bzw. Todesfälle hin untersucht. Bei klinischen Auffälligkeiten erfolgt die klinische Beobachtung häufiger. Zusätzlich erfolgt die Bestimmung und Aufzeichnung der Körpergewich- te unmittelbar vor der Implantation und danach in wöchentlichen Abständen. Die Ratten (Körpergewicht zu Versuchsbeginn ca. 190 bis 240 g) erhalten dabei jeweils zwei Implantate ä 50 g (d. h. 500 ml/kg Körpergewicht). In der humanen Anwendung von COLLOSS® und TARGOBONE® werden in der Regel ein bis drei Vials mit 20 mg einge- setzt. Maximal sind nach Gebrauchsanweisung 240 mg möglich. Somit kommen maximal ca. 3,4 mg/kg Körpergewicht zur klinischen Anwendung.The lyophilizate to be tested is implanted in the form of a compact. For this purpose, 49.5 to 50.5 mg of lyophilisate are weighed into a 2 ml disposable syringe and pressed using the punch of the syringe. Male, about 8 weeks old SPF Wistar rats weighing between 190 and 240 g are prepared for implantation after a one-week settling-in period. For this purpose, the animals are anesthetized with a common anesthetic. The abdominal area prescribed for implantation is shaved and disinfected with 70% ethanol before the procedure. Each animal receives two implants bilaterally. After cutting through the skin (parallel to the linea alba), a 1 to 2 cm long incision is made with a scalpel approx. 1 cm away from the midline (linea alba), which cuts through only the M. obliquus extemus. Between this and the underlying internal oblique muscle is then with- means of blunt dissection (with scissors) a muscle pouch of approximately 1 cm 3 generated. In the muscle bag, the pressure is introduced by means of a pipette. First, the muscle bag with colored suture, then the incision with suture material is closed by surgical sutures. After completion of the implantation, the two sutures are treated with iodine-PVP spray. For each animal, an implant is placed on both the right and the left side of the abdomen. The rats are treated during the follow-up period at the 5 days at regular intervals and then once a day for clinical changes or deaths. For clinical abnormalities, clinical observation is more frequent. In addition, the determination and recording of the body weight takes place immediately before implantation and thereafter at weekly intervals. The rats (body weight at the beginning of the experiment about 190 to 240 g) receive in each case two implants ä 50 g (ie 500 ml / kg body weight). In the human application of COLLOSS ® and TARGOBONE ® one to three vials of 20 mg are generally used. A maximum of 240 mg is possible according to the instructions for use. Thus, a maximum of about 3.4 mg / kg body weight for clinical use.
Beispie! 2Step Example! 2
Explantation und Auswertung der ErgebnisseExplantation and evaluation of the results
Nach 21 Tagen (d. h. am 22. Versuchstag) erfolgt die Tötung der Tiere. Die Implantatbereiche werden entfernt, makroskopisch beurteilt und in 4 bis 8 %iger Aldehydlösung fixiert. Die Implantatbereiche werden nach histologischer Aufarbeitung (ca. 5 μm dicke Schnitte) mit Hämatoxylen/ Eosin gefärbt bzw. der Reaktion nach von Kossa unterworfen. Im Rahmen der Routineimplantation wird die Neovaskularisierung histopatholo- gisch im Implantatbereich mit einer Graduierung von 0 bis 5 (d. h. ohne Befund bis sehr groß/ausgedehnt) bewertet. In allen Fällen der durchgeführten Implantationen mit COLLOSS®-Lyophilisat und TARGOBONE®- Lyophilisat wurde eine Neovaskularisierung im Implantatbereich nach 21 Tagen Beobachtungszeitraum festgestellt. Die Graduierung der beo- bachteten Neovaskularisierung wurde in den meisten Fällen mit Grad 2 bis 3 beurteilt. Beispiel 3After 21 days (ie on the 22nd experimental day), the animals are killed. The implant areas are removed, assessed macroscopically and fixed in 4 to 8% aldehyde solution. After histological work-up (approximately 5 μm thick sections), the implant areas are stained with hematoxylin / eosin or subjected to reaction by Kossa. In routine implantation, neovascularization is assessed histopathologically in the implant area with a graduation of 0 to 5 (ie no findings to very large / extensive). In all cases of implants with COLLOSS ® lyophilisate and TARGOBONE ® lyophilizate, implant neovascularization was observed after 21 days observation period. The grading of the observed neovascularization was assessed in most cases at grade 2 to 3. Example 3
Ergebnisse der histopathologischen AuswertungResults of histopathological evaluation
Bei Kurzzeitimplantationen von COLLOSS® oder TARGOBONE® in allen durchgeführten Implantationen konnte eine Neovaskularisierung im Implantatbereich nach 2, 4 und 7 Tagen Beobachtungszeitraum festgestellt werden, wobei die Graduierung der beobachteten Neovaskularisierung mit Grad 2 bis 3 beurteilt werden konnte.Short - term implantations of COLLOSS ® or TARGOBONE ® in all implantations revealed neovascularization in the implant area after 2, 4 and 7 days observation period, whereby the grading of the observed neovascularization with grade 2 to 3 could be assessed.
Entsprechende Ergebnisse konnten bei Kurzzeitimplantationen von COLLOSS® E gemäß Beispiel 1 und anschließend durchgeführten Explantationen gemäß Beispiel 2 erzielt werden. Similar results were obtained in Example 2 are at short-term implantation of COLLOSS ® E of Example 1 and subsequently performed explantation.

Claims

Patentansprüche claims
1. Verwendung eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden KoIIa- gens xenogenen Ursprungs zur Induktion und/oder Verstärkung der Neovaskularisierung, insbesondere Angiogenese, in Gewebe.1. The use of a xenogeneic antigen gene containing an active substance complex for the induction and / or enhancement of neovascularization, in particular angiogenesis, in tissue.
2. Verwendung eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens xenogenen Ursprungs zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen, die mit vaskulären Anomalien, insbesondere in2. Use of an active substance complex collagen of xenogenic origin for the prophylaxis and / or treatment of diseases associated with vascular anomalies, in particular in
Form von Verengungen und/oder Verschlüssen, in Zusammenhang stehen.Form of constrictions and / or closures, related.
3. Verwendung eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden KoIIa- gens xenogenen Ursprungs zur Herstellung eines Medikaments zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen, die mit vaskulären Anomalien, insbesondere in Form von Verengungen und/oder Verschlüssen, in Zusammenhang stehen.3. The use of a xenogeneic antigen gene containing an active substance complex for the manufacture of a medicament for the prophylaxis and / or treatment of diseases associated with vascular anomalies, in particular in the form of constrictions and / or occlusions.
4. Verwendung nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Anomalien pathologisch bedingt sind.4. Use according to claim 2 or 3, characterized in that the anomalies are pathological.
5. Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei den Erkrankungen um Herzinfarkt, Schlaganfall, Arteriosklerose, vaskuläre Nekrosen oder Diabetes handelt.5. Use according to one of claims 2 to 4, characterized in that it is in the diseases of heart attack, stroke, arteriosclerosis, vascular necrosis or diabetes.
6. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Wirkstoffkomplex Wirkstoffe nati- ven Ursprungs, insbesondere extrazelluläre Proteine und/oder6. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the active substance complex active ingredients of natural origin, in particular extracellular proteins and / or
Peptide, vorzugsweise VEGF (vascular endothelial growth factor), enthält. Peptides, preferably VEGF (vascular endothelial growth factor) contains.
7. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Wirkstoffkomplex einen antimikro- biotischen, insbesondere antibiotischen, Wirkstoff umfaßt.7. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the active substance complex comprises an antimicrobial, in particular antibiotic, active substance.
8. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das Kollagen nativ und/oder renaturiert vorliegt, insbesondere renaturiert.8. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the collagen is native and / or renatured, in particular renatured.
9. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei dem Kollagen um Kollagen vom Typ I handelt.Use according to any one of the preceding claims, characterized in that the collagen is Type I collagen.
10. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, da- durch gekennzeichnet, daß das Kollagen als Gel, insbesondere als Hydrogel, vorliegt.10. Use according to one of the preceding claims, character- ized in that the collagen is present as a gel, in particular as a hydrogel.
11. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Kollagen, insbesondere auch der Wirkstoffkomplex, in Form eines Extraktes vorliegt.11. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the collagen, in particular also the active substance complex, is present in the form of an extract.
12. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das Kollagen als Formkörper, insbesondere als Lyophilisat, vorliegt.12. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the collagen is in the form of a shaped body, in particular a lyophilisate.
13. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das Kollagen ein Trägermaterial aufweist.13. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the collagen comprises a carrier material.
14. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das den Wirkstoffkomplex aufweisende Kollagen herstellbar ist durch14. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the collagen containing the active substance complex can be produced by
- Pulverisierung von Knochen, - gegebenenfalls Entfettung mit einem organischen Lösungsmittel,- pulverization of bones, - optionally degreasing with an organic solvent,
- Demineralisierung mit Säure, vorzugsweise Salzsäure, - gegebenenfalls Inkubation mit einem Chelatbildner, insbesondere EDTA und/oder TRIS,Demineralization with acid, preferably hydrochloric acid, optionally incubation with a chelating agent, in particular EDTA and / or TRIS,
- Extraktion mit Guanidin, insbesondere Guanidinium- hydrochlorid,Extraction with guanidine, in particular guanidinium hydrochloride,
- Aufreinigung des Extrakts und - gegebenenfalls Formgebung des Extrakts.- Purification of the extract and - optionally shaping the extract.
15. Verfahren zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen, die mit vaskulären Anomalien, insbesondere in Form von Verengungen und/oder Verschlüssen, im Zusammenhang stehen, dadurch gekennzeichnet, daß eine therapeutisch wirksame Menge eines einen Wirkstoffkomplex aufweisenden Kollagens xenogenen Ursprungs verabreicht wird.15. A method for the prophylaxis and / or treatment of diseases associated with vascular anomalies, in particular in the form of constrictions and / or closures, characterized in that a therapeutically effective amount of an active substance complex having collagen xenogene origin is administered.
16. Verfahren nach Anspruch 15, weiter gekennzeichnet durch min- destens eines der Merkmale des kennzeichnenden Teils der Ansprüche 4 bis 14. 16. The method according to claim 15, further characterized by at least one of the features of the characterizing part of claims 4 to 14.
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