WO2006000422A1 - Method for the bulk production of a lyophilisate of a mafosfamide-lysine salt with high storage stability - Google Patents
Method for the bulk production of a lyophilisate of a mafosfamide-lysine salt with high storage stability Download PDFInfo
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Classifications
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- C07F9/65844—Cyclic amide derivatives of acids of phosphorus, in which one nitrogen atom belongs to the ring the phosphorus atom being part of a five-membered ring which may be condensed with another ring system
Definitions
- the invention relates to a novel process for the preparation of storage-stable mafosfamide-lysine salt lyophilisate bulk material and to its further processing into mafosfamide-lysine-salt lyophilisate in metered form (finished product), for example filled in vials, and those obtained by the processes according to the invention or storage-stable mafosfamide-lysine-salt lyophilisate bulk goods available as well as the mafosfamide lysine salt lyophilisate in metered form, for example bottled in vials.
- the L-lysine salt of mafosfamide is used as an agent for the treatment of tumors.
- the L-lysine ion is exchanged for the cyclohexylamine ion.
- This ion exchange is carried out on a strongly acidic cation exchanger adsorber resin in an aqueous medium.
- the cation exchanger is regenerated with 10% hydrochloric acid and then loaded with L-lysine.
- Mafosfamide cyclohexylamine salt is dissolved in water and the salt solution passed over the L-lysine loaded ion exchanger.
- the conversion to mafosfamide-L-lysine is 100%, the collected solution is diluted to the required concentration, sterile filtered, filled into vials and lyophilized in these Dissolution of the mafosfamide-cyclohexylamine salt in water initiates the hydrolysis process, as a result of which mafosfamide decomposes and a number of by-products are formed.
- the hydrolysis consists of reversible but also irreversible fractions. There is a stability island at pH 4 - 4.5. Thus, isomerization of the cis to trans mafosfamide is irreversibly preferably at pH> 5. At pH ⁇ 4, irreversible hydrolysis processes take place (see Mafosfamide-A derivatives of 4-hydroxycyclophosphamide; Ulf Niemeyer et al., Progress in Clinical Biochemistry and Medicine, Vol 9, Berlin Heidelberg 1989).
- the method known in the art has hitherto been implemented as a complicated and expensive laboratory method in glassware.
- the column is thermostated with a cooling thermostat to 4 ° C.
- the mafosfamide-cyclohexylamine salt (82.5 g) is weighed (in a beaker under a safety cabinet) and, when cooled with ice water, dissolved in pre-cooled (5 ° C) water (850 ml).
- the solution is added to the regenerated and L-lysine-loaded ion exchange resin by means of glass funnel and rinsed with water (pre-cooled as possible 0 - 1 ° C) (dropping rate: 50 ml / min).
- the first 180 ml of eluate are discarded.
- the following eluate is collected and adjusted to pH 4.1 with stirring and ice-water cooling by adding small amounts of the acidic ion exchanger. It is rinsed with an appropriate amount of water, so that assuming complete conversion in the solution, the desired Concentration for the filling results Then the solution is sterile filtered, filled into vials and lyophilized.
- both the mafosfamide-cyclohexylamine solution and the mafosfamide-L-lysine solution are adjusted to pH 4.1 according to the known method.
- acidified ion exchanger which was taken from the column after regeneration, is added to the solutions and at the same time the pH is controlled.
- the lonenSerp be later deposited when giving the batch solution to the column or during sterile filtration of the product solution.
- the Ansaiz holding is 82.4 g mafosfamide-cyclohexylarnin salt in the process described in the prior art described above. 1800 ml of solution containing 90 g of mafosfamide-L-lysine salt are obtained (5% at 100% conversion).
- mafosfamide-lysine salt-lyophilisate bulk by the application of cyclic repeated injections (a subset) of the mafosfamide starting salt, for example mafosfamide-cyclohexytarnine salt, becomes the desired ion exchange to the cycle of a batch of ion exchange .
- the technical realization makes use of the known center! and procedure from column liquid chromatography (LC) or preparative HPLC.
- LC column liquid chromatography
- the chromatographic separation column becomes a tubular reactor for ion exchange.
- the method according to the invention allows mastering of the complex problems in the ion exchange step, even with larger batches, by the use of technology and software known per se and available.
- the rapid processing of the approach and thus the prospects for its stabilization against hydrolysis is significantly improved.
- the precise detection of mafosfamide L-lysine in the eluate, the substance can surprisingly be obtained with a maximum concentration and a reproducible yield of 100% of theory, the total processing time ⁇ residence time of the hydrolysis-sensitive product in aqueous solution at about> 0 ° C. ) can be significantly reduced even at scale-up.
- the ion exchange in the chromatographic column according to the invention is characterized in that: good handleability for dissolution, stabilization by cooling, pH adjustment, application of the batch solution, automatic detection of the breakthrough and the end of the elution in collecting the eluate; a large number of theoretical plates (exchange stages) in the ion exchange column, i. minimum column size and minimum residence time can be realized; - unreacted ions are located in the direction of the flow, i.
- unreacted reaction mass is moved in the direction of unreacted counter ions on the ion exchanger, so that there is always high probability of implementation;
- the process can take place in a closed system of containers, pipes and valves; the reactants can be fed by a pump supplied to the ion exchange column and the passage can be detected in the UV, whereby the process can run in a controlled manner and at the same time all actions can be documented.
- favorable values can be set by the controlled pumping power as a function of the column geometry both for the residence time of the reaction mass in the column and for the flow in the intermediate grain area of the column packing, in order to achieve the best utilization of the column, ie. H. lowest column capacity to obtain specification product at 100% yield.
- the ion exchange according to the invention is further characterized in that the ion exchanger with sulfuric acid (about 4%) and not as usual with hydrochloric acid (about 5-10%) can be activated, so that usual Materiaiien remain stable or longer lasting (glass, stainless steel, Teflon, PP, PE).
- the erfindungsgernäfle dissolving the mafosfamide cyclohexylamine salt in water is characterized in that - it can be carried out at a higher temperature (about 5 - about 10 ° C), - a subsequent stabilization at a lower temperature (about 0 ° C to about 6 ° C), stabilization by optimum pH (about 4 to about 4.5, preferably about 4.2 to about 4.3) is possible; - Stabilization by freezing of the product after the ion exchange is possible; - A gentle drying by freeze-drying of the product is possible.
- the process of the present invention enables stabilization of the product in the reaction mixture and eluate by pH adjustment, characterized in that ion exchange resin loaded with immobilized protons resides in a solvent permeable probe, further characterized in that solvent can pass a frit of water with dissolved product However, the ion exchange particles are retained, so that - the proton addition can be done without the addition of foreign ions of a buffer; - The proton addition and pH adjustment can be done by immersion and emergence of the probe in the product solution; - The pH adjustment can optionally be buffered and accelerated by previous addition of Mesna lysine salt.
- the process according to the invention is further characterized in that filtration can be carried out to reduce the germs, characterized in that - a separation of germs to a germ load of less than about 10 cfu / 100 ml can take place; - a low-germ environment can be maintained to prevent the formation of endotoxins, pyrogens (about ⁇ 0.01 EU / mg) as a precautionary measure.
- the process according to the invention is further characterized in that, in order to obtain a storage-stable mafosfamide-lysine salt, the egguate can be lyophilized as a bulk, characterized in that - the eluate can be lyophilized in trays (LYOGUARD®, GORE), characterized that they are liquid-tight, but at the same time have a vapor-permeable membrane; - The eluate can be frozen in shock at about -35 ° C; - Which can be heated in sections from about - 35 ° C to about -5 ° C and lyophilized and then heated to about 20 ° C and can be dried; - A residual moisture content of about ⁇ 5%, preferably about ⁇ 3%, more preferably about ⁇ 0.1%, can be achieved; - A storage-stable intermediate (bulk lyophilisate) is formed, which allows the decoupling of the synthesis of active ingredients and the production of finished product This is the required by the regulatory authorities usually required spatial separation of drug synthesis
- the process according to the invention is further characterized in that the ion exchange can be carried out in a packed column HPLC plant, characterized in that a storable bulk product is obtained which generally corresponds to the hitherto known parameters of the laboratory process.
- the process according to the invention for the preparation of mafosfamide L-lysine salt lyophilisate bulk product is characterized in that - the conversion can correspond to 100% or nearly 100% of theory; the yield can be 100% or nearly 100% of theory; - The content in the eluate 97.5 - 101, 0% may be; - total impurities (total impurities) can be less than or equal to about 1, 9%; - the germ count may be approximately ⁇ 10 CFU / 100 ml and the endotoxins, pyrogens may be approximately ⁇ 0.01 EU / mg; - The residual moisture content after lyophilization is less than or equal to about 5%, preferably less than or equal to about 4.0%, more preferably less than or equal to about 3%, most preferably less
- a weighed amount of mafosfamide-cyclohexylamine salt is suspended in the transfer container with a weighed and precooled amount of water and transferred to the cooled stirred tank (6 ° C, cooling jacket, cooling thermostat). While stirring, it is dissolved at about 6 to about 10 ° C. and the pH is controlled (pH measuring probe). The pH is adjusted to a value of about pH 4.3 for stabilization by acidified ion exchangers (about 12 g), which is located in a solvent-permeable probe (glass tube with filter bottom). For this purpose, the frit is immersed several times briefly in the solution while stirring.
- the solution After complete dissolution of mafosfamide-cyclohexylamine salt, the solution is started to cool to about 1 ° C (cooling jacket, Kältethermo ⁇ tat), and immediately with further cooling, the task of the solution on the ion exchange column on the HPLC pump started after the batch solution completely on the column was abandoned, this is eluted with water (Wf), 1 ° C, condenser, cooling thermostat)
- the beginning of the breakthrough of the substance mafosfamide L-lysine is in the UV detector (200-260 nm, preferably 202 nm) from the control program registers and triggers the switching of the output valve from "waste" to "value fraction".
- the product mafosfamide-L-lysine eluate is then collected in a stirred tank (1 ° C, cooling jacket, refrigerated thermostat) until all product has been eluted from the column.
- the elution can be interrupted in a controlled manner by the detector.
- the subsequent run of the rinse is redirected to "waste".
- the eluate is stabilized by adjusting the pH by controlling it by means of a pH measuring probe and adjusting it to pH 4.3 in the manner described above (see stabilization of the batch solution by means of a solvent-permeable probe).
- the mafosfamide-L-lysine solution is filtered through a Sterile-Capsule® (0.45 / 0.2 ⁇ m) and placed in LYOGUARD® trays to reduce the germs
- the lyophilization takes place directly in the LYOGUARD® trays, so that a BuIk lyophilisate of the active ingredient mafosfamide-L-lysine is obtained. This is storage-stable and can be loosened for packing campaign-ready, filled in vials and lyophilized. By the inserted bulk lyophilization a decoupling of ion exchange and production of the dosage form is created.
- the pH is adjusted by means of an immersion probe and adjusted to pH between pH 4 and pH 4.5, preferably pH 4.3, starting from an initial value of about pH 6.0, which is the natural pH the batch or, the eluate solution corresponds.
- immobilized protons are added to the solution, so that the pH drops, without the solution being fed with other foreign ions, such as for example buffer solutions (corresponds to [1].)
- the protons are located on an acidic ion exchanger, which in turn is in a probe is solvent-permeable bottom, so that by immersing the probe, the process of proton addition can be started and terminated by pulling out the probe, leaving no ion exchange particles in the solution.
- Exemplary Embodiment 1 Souring of ion exchanger in probe for pH adjustment
- Embodiment 3 Transfer of mafosfamide-cyclohexylamine salt for dissolution
- the suspension is transferred with stirring (glass rod) to the seminal vessel (RG 1) which has been cooled to 6 ° C. Agitator switched on.
- the solid-state bottle, glass rod and glass funnel are then rinsed twice with 0.4 l each of the cooled water, and the rinsing suspension is transferred completely into the preparation vessel (RG 1).
- the batch solution is stirred until complete dissolution at 5-10 ° C and then cooled to about 6 ° C.
- Embodiment 4 Adjusting the pH in the batch solution
- the program is controlled by the HPLO pump with about 12 l Wfl water from the original container.
- VG 1 rinsed until the barium chloride test is negative and pH> 4.0 is reached. (see Fig. 1)
- Embodiment 7 Loading the column with L-lysine and washing
- L-lysine solution (0.622 kg L-lysine in 7.85 l Wfl water) is pumped from VG 2 over the HPLC pump with program LYSIN, method with a flow of 100 ml / min, over the column which is run collected in the waste tank.
- the program switches to rinsing with water. Rinsing until the detector signal has decayed to the starting value (NuIl). Rinse with water cooled to 3 ° -5 ° C (cooler to Käfte thermostat 2). In total, it is rinsed with about 7 l of Wfl water while the HPLC system is cooled to 5 ° -10 ° C. and the SF column (additional jacket cooling) to 3 ° C. (+/- 1 K) (see FIG 2)
- Embodiment 8 Ion Exchange - Preparation of Mafosfamide-L-Lysine Eluate
- the plant is switched to elution of mafosfamide after complete dosing of the mafosfamide CHA solution -L-Lysine Solution Switched to Wfl Water Using UV Detector, complete elution of mafosfamide L-lysine solution can be monitored.
- the step is terminated by switching Fraction Valve V1 from "Value Fraction” to "Waste". (see Fig. 3)
- Embodiment 9 Adjusting the pH in the eluate solution
- the eluted solution mafosfamit-L-lysine is collected in the stirred vessel (RG 2) in which the solution is cooled to about 1 ° C. It has a natural pH of about 5 (value of the probe).
- RG 2 stirred vessel
- a freshly prepared probe see Example 1 with the ion exchanger several times for a few Turn on and turn on the seconds and observe the displayed value of the probe.
- the pH drops to 4.32.
- the probe with the ion exchanger is again allowed to appear and emerge several times for a few seconds.
- the pH continues to drop to 4.28. If the pH remains constant after elution is complete, the pH adjustment is completed.
- Embodiment 10 Adjust the pH in the eluate solution by buffering with Mesna lysine
- Exemplary embodiment 11 Filtration of the eluate for the purpose of reducing the germs and filling in lyophilization containers
- the eluate from Example 8 is cooled at 3 +/- 2 ° C in RG2.
- the filtrate is filled into LYOGUARD® trays (max 21 per tray) and frozen in the pre-chilled lyophilizer (-35 ° C).
- Exemplary embodiment 12 freeze-drying of the eluate
- the freeze-drying runs according to a predetermined program (see Fig. 4) over 5 days. It is obtained a residual moisture content of 0.1%.
- Embodiment 13 Packaging of mafosfamide-L-lysine bulky lysate
- the lyophilizer is aerated after the end of the program with dry nitrogen and the Trocknungsgut removed.
- the LYOGUARD® trays can be removed without dust exposure. They are sampled under the safety cabinet and weighed including the material to be dried. Then they are packed with drying bags in PE-Foflie trou and metal-laminated foil bags and sealed.
- the mafosfamide-L-lysine salt thus packaged is storage stable at ⁇ -18 ° C.
- FIG. 1 chromatogram - regeneration with sulfuric acid
- FIG. 2 chromatogram - loading L-lysine
- FIG. 3 chromatogram - ion exchange
- FIG. 4 program - freeze-drying
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Abstract
The invention relates to a method for the bulk production of a lyophilisate of a mafosfamide-lysine salt with high storage stability and a dosed form of a lyophilisate of a mafosfamide-lysine salt obtained from the latter, for example in vials. The invention also relates to a lyophilisate of a mafosfamide-lysine salt with high storage stability that has been produced in bulk according to said method and to the dosed lyophilisate of a mafosfamide lysine salt.
Description
VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG VON LAGERSTABILER MAFOSFAMID-LYSIN-SALZ LYOPHILISAT BULKWARE PROCESS FOR PRODUCING STAINLESS MAFOSFAMID LYSINE SALT LYOPHILISATE BULKWARE
Gebiet der Erfindung Die Erfindung betrifft ein neues Verfahren zur Herstellung von lagerstabiler Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat Bulkware und zu dessen Weiterverarbeitung zu Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat in dosierter Form (Fertigware), beispielsweise abgefüllt in Vials, sowie die gemäß den erfindungsgemäßen Verfahren erhaltene bzw. erhältliche lagerstabile Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat-Bulkware sowie das Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat in dosierter Form, beispielsweise abgefüllt in Vials.FIELD OF THE INVENTION The invention relates to a novel process for the preparation of storage-stable mafosfamide-lysine salt lyophilisate bulk material and to its further processing into mafosfamide-lysine-salt lyophilisate in metered form (finished product), for example filled in vials, and those obtained by the processes according to the invention or storage-stable mafosfamide-lysine-salt lyophilisate bulk goods available as well as the mafosfamide lysine salt lyophilisate in metered form, for example bottled in vials.
Beschreibung des Standes der TechnikDescription of the Prior Art
Das L-Lysin-Salz von Mafosfamid wird als Wirkstoff zur Therapie von Tumoren eingesetzt.The L-lysine salt of mafosfamide is used as an agent for the treatment of tumors.
Gemäß der im Stand der Technik beschriebenen Synthese (siehe U.S. Patent Nr. 4,716,424, Engel, et al., erteilt am 29. Dezember 1987) wird das L-Lysin-Ion gegen das Cyclohexylamin-lon ausgetauscht. Dieser lonenaustausch wird an einem stark sauren Kationenaustauscher-Adsorberharz im wässrigen Millieu vorgenommen. Dazu wird der Kationenaustauscher mit 10% Salzsäure regeneriert und anschließend mit L-Lysin beladen. Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salz wird in Wasser gelöst und die Salzlösung über den mit L-Lysin beladenen Ionenaustauscher geleitet. Der Umsatz zu Mafosfamid-L-Lysin erfolgt zu 100%, die gesammelte Lösung wird auf die erforderliche Konzentration verdünnt, steril filtriert, in Vials abgefüllt und in diesen lyophilisiert
Mit dem Lösen des Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salzes in Wasser setzt der Hydrolyseprozeß ein, in dessen Folge sich Mafosfamid zersetzt und eine Reihe Nebenprodukte gebildet werden. Die Hydrolyse besteht aus reversiblen aber auch irreversiblen Anteilen. Es existiert hierfür eine Stabilitätsinsel bei pH 4 - 4,5. So erfolgt die Isomerisierung vom cis- zum trans-Mafosfamid irreversibel vorzugsweise bei pH > 5. Bei pH < 4 laufen irreversible Hydrolyseprozesse ab (siehe Mafosfamide - A Derivate of 4-Hydroxycyclophosphamide; Ulf Niemeyer et al; Progress in Clinical Biochemistry and Medicine, VoI, 9; Berlin Heidelberg 1989).According to the synthesis described in the prior art (see US Patent No. 4,716,424, Engel, et al., Issued December 29, 1987), the L-lysine ion is exchanged for the cyclohexylamine ion. This ion exchange is carried out on a strongly acidic cation exchanger adsorber resin in an aqueous medium. For this purpose, the cation exchanger is regenerated with 10% hydrochloric acid and then loaded with L-lysine. Mafosfamide cyclohexylamine salt is dissolved in water and the salt solution passed over the L-lysine loaded ion exchanger. The conversion to mafosfamide-L-lysine is 100%, the collected solution is diluted to the required concentration, sterile filtered, filled into vials and lyophilized in these Dissolution of the mafosfamide-cyclohexylamine salt in water initiates the hydrolysis process, as a result of which mafosfamide decomposes and a number of by-products are formed. The hydrolysis consists of reversible but also irreversible fractions. There is a stability island at pH 4 - 4.5. Thus, isomerization of the cis to trans mafosfamide is irreversibly preferably at pH> 5. At pH <4, irreversible hydrolysis processes take place (see Mafosfamide-A derivatives of 4-hydroxycyclophosphamide; Ulf Niemeyer et al., Progress in Clinical Biochemistry and Medicine, Vol 9, Berlin Heidelberg 1989).
Neben der Stabilisierung durch Einstellen des pH-Wertes besteht die Möglichkeit, das gesamte Verfahren bei möglichst niedrigen Temperaturen zu führen. Eingegrenzt wird diese Vorgehensweise jedoch einerseits durch die Gefahr des Einfrierens bei 0°C und andererseits verläuft der Löseprozeß, bei höheren Temperaturen schneller. Bei dem im Stand der Technik bekannten Verfahren wurde ein dahingehender Kompromiß gefunden, daß. bei 5°C gelöst wird, um hierdurch Prozeßzeit zu sparen, und bei ca. 5°C die übrigen Prozeßschritte des lonenaustausches bis hin zur Lyophilisation vorgenommen werden.In addition to the stabilization by adjusting the pH, it is possible to run the entire process at the lowest possible temperatures. However, this approach is limited on the one hand by the risk of freezing at 0 ° C and on the other hand, the dissolving process runs faster at higher temperatures. In the method known in the prior art, a compromise has been found that. is dissolved at 5 ° C, thereby saving process time, and at about 5 ° C, the other process steps of the ion exchange are made to lyophilization.
Realisiert wurde das im Stand der Technik bekannte Verfahren bisher als umständliches und aufwendiges Laborverfahren in Glasgeräten. Dazu wird der Ionenaustauscher (800 ml = 1,4 mol Festionen) in eine Glassäule (iD= 40 mm, L= 1000 mm) gefüllt, die oben offen ist und unten durch eine Keramikfritte und einen Glashahn verschlossen ist. Die Säule wird mit einem Kältethermostat auf 4°C thermostatiert. Das Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salz (82,5 g) wird (in einem Becherglas unter einer Sicherheitswerkbank) abgewogen und bei Kühlung mittels Eiswasser in vorgekühltem (5°C) Wasser gelöst (850 ml). Die Lösung wird mittels Glastrichter auf das regenerierte und mit L-Lysin beladenen lonenaustauscherharz gegeben und mit Wasser (vorgekühlt möglichst 0 - 1 °C) nachgespült (Tropfgeschwindigkeit: 50 ml/min). Die ersten 180 ml Eluat werden verworfen. Das folgende Eluat wird gesammelt und unter Rühren und Eiswasserkühlung auf pH 4,1 durch Zugabe geringer Mengen des sauren Ionenaustauschers eingestellt. Es wird mit einer entsprechenden Menge Wasser gespült, so daß bei angenommenem vollständigen Umsatz sich in der Lösung die gewünschte
Konzentration für die Abfüllung ergibt Anschließend wird die Lösung steril filtriert, in Vials abgefüllt und lyophilisiert.The method known in the art has hitherto been implemented as a complicated and expensive laboratory method in glassware. For this purpose, the ion exchanger (800 ml = 1.4 mol Festionen) in a glass column (iD = 40 mm, L = 1000 mm) filled, which is open at the top and closed at the bottom by a ceramic frit and a glass stopcock. The column is thermostated with a cooling thermostat to 4 ° C. The mafosfamide-cyclohexylamine salt (82.5 g) is weighed (in a beaker under a safety cabinet) and, when cooled with ice water, dissolved in pre-cooled (5 ° C) water (850 ml). The solution is added to the regenerated and L-lysine-loaded ion exchange resin by means of glass funnel and rinsed with water (pre-cooled as possible 0 - 1 ° C) (dropping rate: 50 ml / min). The first 180 ml of eluate are discarded. The following eluate is collected and adjusted to pH 4.1 with stirring and ice-water cooling by adding small amounts of the acidic ion exchanger. It is rinsed with an appropriate amount of water, so that assuming complete conversion in the solution, the desired Concentration for the filling results Then the solution is sterile filtered, filled into vials and lyophilized.
Zur Stabilisierung der Lösungen wird gemäß dem bekannten Verfahren sowohl die Mafosfamid-Cyclohexylamin-Lösung als auch die Mafosfamid-L-Lysin-Lösung auf pH 4,1 eingestellt. Dazu wird sauer gestellter Ionenaustauscher, der der Säule nach der Regenerierung entnommen wurde, den Lösungen zugegeben und gleichzeitig der pH kontrolliert. Die lonenaustauscherpartikel werden später beim Aufgeben der Ansatzlösung auf die Säule bzw. beim Sterilfiltrieren der Produktlösung wieder abgeschieden. Durch die Zugabe von sauren lonenaustauscherpartikeln werden Protonen, die somit immobilisiert vorliegen, den jeweiligen Lösungen zugeführt, ohne daß weitere Fremdionen beteiligt sind und das Produkt verunreinigen.To stabilize the solutions, both the mafosfamide-cyclohexylamine solution and the mafosfamide-L-lysine solution are adjusted to pH 4.1 according to the known method. For this purpose, acidified ion exchanger, which was taken from the column after regeneration, is added to the solutions and at the same time the pH is controlled. The lonenaustauscherpartikel be later deposited when giving the batch solution to the column or during sterile filtration of the product solution. By the addition of acidic ion exchange particles protons, which are thus immobilized, fed to the respective solutions, without further foreign ions are involved and contaminate the product.
Die Ansaizgröße beträgt bei dem vorstehend beschriebenen im Stand der Technik bekannten Verfahren 82,4 g Mafosfamid-Cyclohexylarnin-Salz. Es werden 1800 ml Lösung mit 90 g Mafosfamid-L-Lysin-Salz erhalten (5%ig bei 100 % Umsatz).The Ansaizgröße is 82.4 g mafosfamide-cyclohexylarnin salt in the process described in the prior art described above. 1800 ml of solution containing 90 g of mafosfamide-L-lysine salt are obtained (5% at 100% conversion).
Beschreibung der ErfindungDescription of the invention
Das vorstehend beschriebene im Stand der Technik bekannte Verfahren hat den großen Nachteil, daß es sich in seinem Maßstab, d.h. in seiner Ansatzgröße, nicht weiter vergrößern läßt. Die Durchführung des lonenaustausches erfordert insbesondere ein hohes Maß an Reproduzierbarkeit sowie an Zuverlässigkeit der zeitkritischen Schritte, bei denen gegen die fortschreitende Hydrolyse gearbeitet wird. Das betrifft:The process described in the prior art described above has the great disadvantage of being in its scale, i. in its batch size, can not be further enlarged. In particular, carrying out the ion exchange requires a high degree of reproducibility and reliability of the time-critical steps in which work is carried out against the progressive hydrolysis. This concerns:
- die Sicherung eines 100 %igen Umsatzes durch Vermeidung von Kurzschlüssen, Randgängigkeit bei Maßstabsvergrößerung der Austausch-Säule- The assurance of a 100% conversion by avoiding short circuits, Randgängigkeit scaled up the exchange column
- die genaue Einstellung der Konzentration des Eluates als Basis für die exakte Füllmenge der Vials
- die direkte Weiterverarbeitung des hergestellten Eluates durch Gefriertrocknung in Vials bei Vermeidung von Standzeiten zwischen Herstellung, Sterilfiltration und Aufgabe in die ViaIs- The exact adjustment of the concentration of the eluate as a basis for the exact filling amount of the vials - The direct further processing of the prepared eluate by freeze-drying in vials while avoiding downtime between production, sterile filtration and task in the ViaIs
- die direkte Zugabe von saurem Ionenaustauscher in die Lösung von Mafos- Cyclohexylamin aber auch besonders von Mafosfamid-L-Lysin-Salz bringt die Gefahr einer Übersäuerung und damit verstärkter Hydrolyse mit sich.- The direct addition of acidic ion exchanger in the solution of mafos-cyclohexylamine but especially of mafosfamide L-lysine salt brings the risk of hyperacidity and thus increased hydrolysis with it.
Es bestand daher ein Bedarf nach einem Verfahren, das die Hestellung von Mafösfamid-Lysin-Salz in größeren Mengen pro Ansatz ermöglicht.There was therefore a need for a method that allows the production of mafosfamide-lysine salt in larger quantities per batch.
Ansatzgrößen von mUm den Problemkomplex dieser Stufe auch im größeren Maßstab zu beherrschen, wurde eine technische Lösung zum Einsatz gebracht, die bisher nur bei der Säulenflüssigchromatographie (LC) bzw. präparativen HPLC angewendet wird. Der bei diesen Anwendungen zyklisch repetierte Trennschritt einer Injektion (einer Teilmenge) wird für den lonenaustausch zum Zyklus einer Charge des lonenaustausches. Damit wird die chrornatographische Trennsäule zum Rohrreaktor für den lonenaustausch.In order to master the problem complex of this stage on a larger scale, a technical solution was used which has hitherto been used only in column liquid chromatography (LC) or preparative HPLC. The cyclic repetitive separation step of an injection (a subset) in these applications becomes the cycle of a batch of ion exchange for ion exchange. Thus, the chromatographic separation column becomes a tube reactor for ion exchange.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß die Herstellung von Mafosfamid- Lysin-Salz-Lyophilisat Bulkware durch die Anwendungen von zyklisch repetierten Injektionen (einer Teilmenge) des Mafosfamid-Ausgangssalzes, beispielsweise Mafosfamid-Cyclohexytarnin-Salz, der gewünschte lonenaustausch zum Zyklus einer Charge des lonenaustausches wird. Die technische Realisierung bedient sich dabei der an sich bekannten Mitte! und Verfahrensweise aus der Säulenflüssigchromatographie (LC) bzw. präparativen HPLC. Damit wird die chromatographische Trennsäule zum Rohrreaktor für den lonenaustausch.Surprisingly, it has now been found that the production of mafosfamide-lysine salt-lyophilisate bulk by the application of cyclic repeated injections (a subset) of the mafosfamide starting salt, for example mafosfamide-cyclohexytarnine salt, becomes the desired ion exchange to the cycle of a batch of ion exchange , The technical realization makes use of the known center! and procedure from column liquid chromatography (LC) or preparative HPLC. Thus, the chromatographic separation column becomes a tubular reactor for ion exchange.
Das erfindungsgemäße Verfahren erlaubt durch den Einsatz von an sich bekannter und verfügbarer Technik und Software eine Beherrschung der komplexen Probleme bei dem lonenaustauschschritt auch bei größeren Ansätzen. Insbesondere die schnelle Verarbeitung des Ansatzes und damit die Aussichten für seine Stabilisierung gegen Hydrolyse wird entscheidend verbessert.
Durch die präzise Detektion des Mafosfamid-L-Lysins im Eluat kann die Substanz überraschenderweise mit einer maximalen Konzentration und einer reproduzierbaren Ausbeute von 100% der Theorie gewonnen werden, wobei die gesamte Verarbeitungszeit {Verweilzeit des hydrolyseempfindlichen Produktes in wässriger Lösung bei etwa >0°C) auch bei Maßstabsvergrößerung entscheidend verringert werden kann.The method according to the invention allows mastering of the complex problems in the ion exchange step, even with larger batches, by the use of technology and software known per se and available. In particular, the rapid processing of the approach and thus the prospects for its stabilization against hydrolysis is significantly improved. The precise detection of mafosfamide L-lysine in the eluate, the substance can surprisingly be obtained with a maximum concentration and a reproducible yield of 100% of theory, the total processing time {residence time of the hydrolysis-sensitive product in aqueous solution at about> 0 ° C. ) can be significantly reduced even at scale-up.
Überraschenderweise konnte auch die Durchführung des Löseprozesses bei höheren Temperaturen (etwa 5 - etwa 10°C) mit anschließender schneller Abkühlung und Verarbeitung bei dem optimalen Temperaturbereich etwa < 5 °C eine geringere Hydrolyse als bei durchgängiger Einhaltung von etwa < 5° C erreicht werden.Surprisingly, the implementation of the dissolution process at higher temperatures (about 5 - about 10 ° C) with subsequent rapid cooling and processing at the optimum temperature range about <5 ° C lower hydrolysis than with continuous maintenance of about <5 ° C could be achieved.
Die Probleme einer unkontrollierten pH -Unterschreitung (zu lange Verweilzeit) durch direkte Zugabe von saurem Ionenaustauscher in die Lösung konnten überraschenderweise sehr einfach durch Anwendung einer flüssigkeitsdurchgängigen Tauchsonde (gefüllt mit Ionenaustauscher) und deren Handhabung beseitigt werden.The problems of an uncontrolled pH (too long residence time) by direct addition of acidic ion exchanger in the solution could be surprisingly very easily eliminated by using a liquid-immersion probe (filled with ion exchanger) and their handling.
Die Auftrennung des Herstellungsprozesses in Herstellung von lagerstabilier Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat Bulkware einerseits und dessen abgekoppelter Weiterverarbeitung zum pharmazeutischen Endprodukt in Vials (Lösen der BuIk- Ware in Wasser und Gefriertrocknung in Vials) andererseits bringt bedeutende Vorteile in der Produktionsdurchführung. Es ist aus regulatorischer Sicht ohnehin eine Trennung von Synthese des Wirkstoffes von dessen Verarbeitung zur Darreichungsform gefordert. Diese wird durch die zwischengeschaltete Mafosfamid- Lysin-Salz-Bulkware-Lyophilisation erreicht, die ein lagerfähiges Zwischenprodukt (Bulk-Lyophilisat) zum Ergebnis hat, womit sogar eine Entkopplung der Stufen erreicht wird. Überraschenderweise wirkt sich die dazu notwendige nochmalige . Auflösung des hydrolyseempfindlichen Salzes in Wasser nicht negativ auf die Produktqualität aus.
Das erfindungsgemäße Verfahren zeichnet sich beispielsweise durch die nachstehend genannten Vorteile aus:The separation of the manufacturing process in the production of storage-stable mafosfamide-lysine salt lyophilisate bulk on the one hand and its decoupled further processing to the final pharmaceutical product in vials (dissolving the BuIk- goods in water and freeze-drying in vials) on the other hand brings significant benefits in the production implementation. From a regulatory point of view, a separation of synthesis of the active ingredient from its processing into a dosage form is required anyway. This is achieved by the intervening mafosfamide lysine salt bulk lyophilization, which results in a shelf-stable intermediate (bulk lyophilizate), which even achieves decoupling of the steps. Surprisingly, the necessary for this again. Dissolution of the hydrolysis-sensitive salt in water does not negatively affect the product quality. The method according to the invention is distinguished, for example, by the following advantages:
Der erfϊndungsgemäße lonenaustausch in der Chromatographiesäule ist dadurch charakterisiert, daß: - eine gute Handhabbarkeit beim Lösen, Stabilisieren durch Kühlen, pH-Einstellen, Aufgeben der Ansatzlösung, Automatisches Erkennen des Durchbruchs und des Endes der Elution beim Sammeln des Eluates gegeben ist; - eine große Zahl theoretischer Böden (Austauschstufen) in der lonenaustauschsäule, d.h. minimale Säulengröße und minimale Verweilzeit realisiert werden können; - nicht umgesetzte Ionen in Richtung der Strömung lokalisiert sind, d.h. nicht umgesetzte Reaktionsmasse wird in Richtung nicht umgesetzter Gegenionen auf dem Ionenaustauscher bewegt, so daß immer hohe Wahrscheinlichkeit der Umsetzung gegeben ist; - der Prozeß in einem geschlossenen System von Behältern, Leitungen und Ventilen ablaufen kann; die Reaktionspartner können von einer Pumpe gefördert der lonenaustauschersäule zugeführt werden und der Durchlauf im UV detektiert werden, wodurch der Prozeß kontrolliert ablaufen kann und gleichzeitig alle Aktionen dokumentiert werden können. - durch die kontrollierte Pumpleistung in Abhängigkeit von der Säulengeometrie sowohl für die Verweilzeit der Reaktionsmasse in der Säule als auch für die Strömung im Zwischenkornbereich der Säulenpackung günstige Werte eingestellt werden können, um bei bester Auslastung der Säule, d. h. geringste Säulenkapazität, spezifikationsgerechtes Produkt bei 100% Ausbeute zu erhalten.The ion exchange in the chromatographic column according to the invention is characterized in that: good handleability for dissolution, stabilization by cooling, pH adjustment, application of the batch solution, automatic detection of the breakthrough and the end of the elution in collecting the eluate; a large number of theoretical plates (exchange stages) in the ion exchange column, i. minimum column size and minimum residence time can be realized; - unreacted ions are located in the direction of the flow, i. unreacted reaction mass is moved in the direction of unreacted counter ions on the ion exchanger, so that there is always high probability of implementation; - The process can take place in a closed system of containers, pipes and valves; the reactants can be fed by a pump supplied to the ion exchange column and the passage can be detected in the UV, whereby the process can run in a controlled manner and at the same time all actions can be documented. favorable values can be set by the controlled pumping power as a function of the column geometry both for the residence time of the reaction mass in the column and for the flow in the intermediate grain area of the column packing, in order to achieve the best utilization of the column, ie. H. lowest column capacity to obtain specification product at 100% yield.
Der erfindungsgemäße lonenaustausch ist weiter dadurch charakterisiert, daß der Ionenaustauscher mit Schwefelsäure (etwa 4%) und nicht wie üblich mit Salzsäure (etwa 5-10%) aktiviert werden kann, so daß übliche Materiaiien beständig bzw. länger beständig bleiben (Glas, Edelstahl, Teflon, PP, PE).
Das erfindungsgernäfle Lösen des Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salz in Wasser ist dadurch charakterisiert, daß - es bei höherer Temperatur (etwa 5 - etwa 10°C) durchgeführt werden kann, - eine anschließende Stabilisierung bei tieferer Temperatur (etwa 0°C bis etwa 6 °C) möglich ist, - eine Stabilisierung durch optimalen pH (etwa 4 bis etwa 4,5; vorzugsweise etwa 4,2 bis etwa 4,3) möglich ist; - eine Stabilisierung durch Einfrieren des Produktes nach dem lonenaustausch möglich ist; - eine schonende Trocknung durch Gefriertrocknen des Produktes möglich ist.The ion exchange according to the invention is further characterized in that the ion exchanger with sulfuric acid (about 4%) and not as usual with hydrochloric acid (about 5-10%) can be activated, so that usual Materiaiien remain stable or longer lasting (glass, stainless steel, Teflon, PP, PE). The erfindungsgernäfle dissolving the mafosfamide cyclohexylamine salt in water is characterized in that - it can be carried out at a higher temperature (about 5 - about 10 ° C), - a subsequent stabilization at a lower temperature (about 0 ° C to about 6 ° C), stabilization by optimum pH (about 4 to about 4.5, preferably about 4.2 to about 4.3) is possible; - Stabilization by freezing of the product after the ion exchange is possible; - A gentle drying by freeze-drying of the product is possible.
Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht die Stabilisierung des Produktes im Ansatz und dem Eluat durch pH-Einstellung, welcher dadurch charakterisiert ist, daß ionenaustauscherharz beladen mit immobilisierten Protonen sich in einer lösungsmitteldurchlässigen Sonde befindet, weiter dadurch charakterisiert, daß Lösungsmittel Wasser mit gelöstem Produkt eine Fritte passieren kann, die lonenaustauscherpartikel jedoch zurückgehalten werden, so daß - die Protonenzugabe ohne Zugabe von Fremdionen eines Puffers erfolgen kann; - die Protonenzugabe und pH-Einstellung durch Ein- und Auftauchen der Sonde in die Produktlösung erfolgen kann; - die pH-Einstellung wahlweise durch vorherige Zugabe von Mesna-Lysin-Salz gepuffert und beschleunigt werden kann.The process of the present invention enables stabilization of the product in the reaction mixture and eluate by pH adjustment, characterized in that ion exchange resin loaded with immobilized protons resides in a solvent permeable probe, further characterized in that solvent can pass a frit of water with dissolved product However, the ion exchange particles are retained, so that - the proton addition can be done without the addition of foreign ions of a buffer; - The proton addition and pH adjustment can be done by immersion and emergence of the probe in the product solution; - The pH adjustment can optionally be buffered and accelerated by previous addition of Mesna lysine salt.
Das erflndungsgemäße Verfahren ist weiter dadurch charakterisiert, daß eine Filtration zur Keimminderung vorgenommen werden kann, dadurch charakterisiert, daß - eine Abtrennung von Keimen zu einer Keimbelastung von weniger als etwa 10 KBE/ 100 ml erfolgen kann; - ein keimarmes Milieu eingehalten werden kann, um vorbeugend die Bildung von Endotoxinen, Pyrogenen ( etwa < 0,01 EU/mg) zu verhindern.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist weiter dadurch charakterisiert, daß zum Erhalt eines lagerstabilen Mafosfamid-Lysin-Salzes das Eiuat als Bulk lyophilisiert werden kann, dadurch charakterisiert, daß - das Eluat in Trays (LYOGUARD®, Fa. GORE) lyophilisiert werden kann, dadurch charakterisiert, daß diese flüssigkeitsdicht sind, gleichzeitig jedoch eine dampfpermeable Membran aufweisen; - das Eluat schockartig bei etwa -35°C eingefroren werden kann; - das abschnittweise von etwa - 35°C bis etwa -5°C erwärmt und lyophilisiert werden kann und anschließend bis etwa 20°C erwärmt und nachgetrocknet werden kann; - eine Restfeuchte von etwa < 5%, vorzugsweise etwa < 3%, besonders bevorzugt etwa < 0,1%, erreicht werden kann; - ein lagerstabiles Zwischenprodukt (Bulk-Lyophilisat) entsteht, welches die Entkopplung der Wirkstoffsynthese und der Herstellung der Fertigware ermöglicht Dadurch wird die von den Zulassungsbehörden üblicherweise geforderte räumliche Trennung von Wirkstoffsynthese und Herstellung der Fertigware überhaupt erst möglich.The process according to the invention is further characterized in that filtration can be carried out to reduce the germs, characterized in that - a separation of germs to a germ load of less than about 10 cfu / 100 ml can take place; - a low-germ environment can be maintained to prevent the formation of endotoxins, pyrogens (about <0.01 EU / mg) as a precautionary measure. The process according to the invention is further characterized in that, in order to obtain a storage-stable mafosfamide-lysine salt, the egguate can be lyophilized as a bulk, characterized in that - the eluate can be lyophilized in trays (LYOGUARD®, GORE), characterized that they are liquid-tight, but at the same time have a vapor-permeable membrane; - The eluate can be frozen in shock at about -35 ° C; - Which can be heated in sections from about - 35 ° C to about -5 ° C and lyophilized and then heated to about 20 ° C and can be dried; - A residual moisture content of about <5%, preferably about <3%, more preferably about <0.1%, can be achieved; - A storage-stable intermediate (bulk lyophilisate) is formed, which allows the decoupling of the synthesis of active ingredients and the production of finished product This is the required by the regulatory authorities usually required spatial separation of drug synthesis and production of finished goods in the first place.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist weiter dadurch charakterisiert, daß der lonenaustausch in einer HPLC-Anlage mit gepackter Säule durchgeführt werden kann, dadurch charakterisiert, daß eine lagerfähige Bulkware erhalten wird, die generell den bisher bekannten Parametern des Laborverfahrens entspricht Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung von Mafosfamid-L-Lysin-Salz Lyophilisat Bulkware ist im einzelnen dadurch gekennzeichnet, daß - der Umsatz 100% oder nahezu 100% der Theorie entsprechen kann; - die Ausbeute 100% oder nahezu 100% der Theorie entsprechen kann; - der Gehalt im Eluat 97,5 - 101 ,0% betragen kann; - die Gesamtverunreinigungen (Total lmpurities) kleiner oder gleich etwa 1 ,9% betragen können; - die Keimzahl etwa < 10 KBE/ 100ml betragen kann und die Endotoxine, Pyrogene etwa < 0,01 EU/mg betragen können;
- die Restfeuchte nach der Lyophilisation kleiner oder gleich etwa 5%, vorzugsweise kleiner oder gleich etwa 4,0%, besonders bevorzugt kleiner oder gleich etwa 3%, ganz besonders bevorzugt kleiner oder gleich etwa 0,1% beträgt.The process according to the invention is further characterized in that the ion exchange can be carried out in a packed column HPLC plant, characterized in that a storable bulk product is obtained which generally corresponds to the hitherto known parameters of the laboratory process. The process according to the invention for the preparation of mafosfamide L-lysine salt lyophilisate bulk product is characterized in that - the conversion can correspond to 100% or nearly 100% of theory; the yield can be 100% or nearly 100% of theory; - The content in the eluate 97.5 - 101, 0% may be; - total impurities (total impurities) can be less than or equal to about 1, 9%; - the germ count may be approximately <10 CFU / 100 ml and the endotoxins, pyrogens may be approximately <0.01 EU / mg; - The residual moisture content after lyophilization is less than or equal to about 5%, preferably less than or equal to about 4.0%, more preferably less than or equal to about 3%, most preferably less than or equal to about 0.1%.
Detailierte Beschreibung der ErfindungDetailed description of the invention
Die Erfindung ist nachstehend an Hand von Ausführungsbeispielen näher erläutert ohne auf die Ausführungsbeispiele beschränkt zu sein.The invention is explained below with reference to exemplary embodiments without being limited to the exemplary embodiments.
Eine abgewogene Menge Mafosfamid-Cyclohexylarnin-Salz wird mit einer abgewogenen und vorgekühlten Menge Wasser im Überführungsgebinde suspendiert und in den gekühlten Rührbehälter (6°C, Kühlmantel, Kältethermostat) überführt. Unter Rühren wird bei etwa 6 - etwa 10°C gelöst und der pH kontrolliert (pH-Meßsonde). Der pH wird zur Stabilisierung durch sauer gestellten Ionenaustauscher (ca. 12 g), der sich in einer lösungsmitteldurchlässigen Sonde (Glasrohr mit Filterboden) befindet, auf einen Wert von etwa pH 4,3 nachgestellt. Dazu wird unter Rühren die Fritte mehrfach kurzzeitig in die Lösung getaucht. Nach vollständiger Lösung des Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salzes wird begonnen, die Lösung auf etwa 1 °C zu kühlen (Kühlmantel, Kältethermoεtat), und sofort bei weiterem Kühlen die Aufgabe der Lösung auf die lonenaustauschsäule über die HPLC-Pumpe gestartet Nachdem die Ansatzlösung vollständig auf die Säule aufgegeben wurde, wird diese mit Wasser (Wf), 1°C, Kühler, Kältethermostat) eluiert Der Beginn des Durchbruchs der Substanz Mafosfamid-L-Lysin wird im UV-Detektor (200-260 nm, vorzugsweise 202 nm) vom Steuerprogramm registriert und löst das Umschalten des Ausgangsventils von „waste" auf „Wertfraktion" aus. Das Produkt Mafosfarnid-L-Lysin-Eluat wird nun in einem Rührbehälter (1 °C, Kühlmantel, Kältethermostat) gesammelt, bis sämtliches Produkt von der Säule eluiert worden ist. Dabei kann je nach Vorgabe der gewünschten Konzentration und Ausbeute die Elution durch den Detektor kontrolliert abgebrochen werden. Der anschließende Durchlauf vom Spülen wird wieder in „waste" geleitet.
Das Eluat wird durch Nachstellen des pH stabilisiert, indem dieser durch eine pH- Meßsonde kontrolliert und in der oben beschriebenen Weise auf pH 4,3 nachgestellt wird (s. Stabilisierung der Ansatzlösung durch lösungsmitteldurchlässige Sonde). Nach beendeter Elution und pH-Stabilisierung wird die Mafosfamid-L-Lysin-Lösung zur Keimminderung über eine Steril-Capsule® (0,45 / 0,2μrn) filtriert und in LYOGUARD® Trays abgefülltA weighed amount of mafosfamide-cyclohexylamine salt is suspended in the transfer container with a weighed and precooled amount of water and transferred to the cooled stirred tank (6 ° C, cooling jacket, cooling thermostat). While stirring, it is dissolved at about 6 to about 10 ° C. and the pH is controlled (pH measuring probe). The pH is adjusted to a value of about pH 4.3 for stabilization by acidified ion exchangers (about 12 g), which is located in a solvent-permeable probe (glass tube with filter bottom). For this purpose, the frit is immersed several times briefly in the solution while stirring. After complete dissolution of mafosfamide-cyclohexylamine salt, the solution is started to cool to about 1 ° C (cooling jacket, Kältethermoεtat), and immediately with further cooling, the task of the solution on the ion exchange column on the HPLC pump started after the batch solution completely on the column was abandoned, this is eluted with water (Wf), 1 ° C, condenser, cooling thermostat) The beginning of the breakthrough of the substance mafosfamide L-lysine is in the UV detector (200-260 nm, preferably 202 nm) from the control program registers and triggers the switching of the output valve from "waste" to "value fraction". The product mafosfamide-L-lysine eluate is then collected in a stirred tank (1 ° C, cooling jacket, refrigerated thermostat) until all product has been eluted from the column. Depending on the specification of the desired concentration and yield, the elution can be interrupted in a controlled manner by the detector. The subsequent run of the rinse is redirected to "waste". The eluate is stabilized by adjusting the pH by controlling it by means of a pH measuring probe and adjusting it to pH 4.3 in the manner described above (see stabilization of the batch solution by means of a solvent-permeable probe). After elution and pH stabilization is complete, the mafosfamide-L-lysine solution is filtered through a Sterile-Capsule® (0.45 / 0.2μm) and placed in LYOGUARD® trays to reduce the germs
Die Lyophilisation erfolgt direkt in den LYOGUARD® Trays, so daß ein BuIk- Lyophilisat vom Wirkstoff Mafosfamid-L-Lysin erhalten wird. Dieses ist lagerstabil und kann zur Konfektionierung kampagneweise gelöst, in Vials abgefüllt und lyophilisiert werden. Durch die eingeschobene Bulk-Lyophilisation wird eine Entkopplung von lonenaustausch und Herstellung der Darreichungsform geschaffen.The lyophilization takes place directly in the LYOGUARD® trays, so that a BuIk lyophilisate of the active ingredient mafosfamide-L-lysine is obtained. This is storage-stable and can be loosened for packing campaign-ready, filled in vials and lyophilized. By the inserted bulk lyophilization a decoupling of ion exchange and production of the dosage form is created.
Stabilisierung der Ansatzlösung durch lösungsmitteldurchlässige Sonde: Das Einstellen des pH erfolgt durch Messung mittels eintauchenden Meßsonde und Einstellen auf pH zwischen pH 4 und pH 4,5, vorzugsweise pH 4,3 beginnend von einem Anfangswert von etwa pH 6,0, der dem natürlichen pH der Ansatz- bzw, der Eluatlösung entspricht. Hierzu werden der Lösung immobilisierte Protonen zugeführt, so daß der pH sinkt, ohne daß der Lösung sonstige Fremdionen, wie etwa durch Pufferlösungen, zugeführt werden (entspricht [1]. Die Protonen befinden sich auf sauer gestelltem Ionenaustauscher, der sich seinerseits in einer Sonde mit lösungsmitteldurchlässigem Boden befindet, so daß durch Eintauchen der Sonde der Prozeß der Protonenzugabe begonnen und durch Herausziehen der Sonde beendet werden kann. Es verbleiben dabei keine lonenaustauεcherpartikel in der Lösung.Stabilization of the formulation solution by solvent-permeable probe: The pH is adjusted by means of an immersion probe and adjusted to pH between pH 4 and pH 4.5, preferably pH 4.3, starting from an initial value of about pH 6.0, which is the natural pH the batch or, the eluate solution corresponds. For this purpose, immobilized protons are added to the solution, so that the pH drops, without the solution being fed with other foreign ions, such as for example buffer solutions (corresponds to [1].) The protons are located on an acidic ion exchanger, which in turn is in a probe is solvent-permeable bottom, so that by immersing the probe, the process of proton addition can be started and terminated by pulling out the probe, leaving no ion exchange particles in the solution.
Ausführungsbeispiel 1: Sauer stellen von Ionenaustauscher in Sonde zur pH- EinstellungExemplary Embodiment 1: Souring of ion exchanger in probe for pH adjustment
12 g Ionenaustauscher werden in ein Glasrohr mit Glasfrittenboden gefüllt und durch Ein- und Auftauchen in einem Becherglas mit destilliertem Wasser gespült. Die Sonde wird anschließend für eine Stunde in ein Becherglas mit 4% Schwefelsäure getaucht. Anschließend spült man die Sonde in einem Becherglas mit destilliertem
Wasser durch Ein- und Auftauchen, wobei sich kurze Spülperioden mit längeren Standzeiten abwechseln (ca. 3 -4 Std.). Es wird nach Bedarf (i, allg. 3 - 4 mal) das Spülwasser gewechselt bis der Test mit Bariumchlorid keine Sulfationen im Spülwasser mehr anzeigt.
Ausführungsbeispiel 2: Einstellen des pH in der Mafosfamid CHA-Lösung12 g of ion exchanger are filled into a glass tube with glass frit bottom and rinsed by immersion in a beaker with distilled water. The probe is then immersed in a 4% sulfuric acid beaker for one hour. Then rinse the probe in a beaker with distilled Water by immersion and emergence, alternating with short rinsing periods with longer lifetimes (about 3 -4 hours). The rinse water is changed as needed (i, generally 3 to 4 times) until the test with barium chloride no longer indicates sulfate ions in the rinse water. Embodiment 2: Adjusting the pH in the mafosfamide CHA solution
Zum Auflösen von 100 g Mafosfamid-Cyclohexylaninsalz wird eine auf ca, 3°C gekühlte Lösung verwendet, die 127,0 mg Mesna-Lysin (dies entspricht 0,1 Gewichtsprozent Mesna-Cyciohexylaminsalz) enthält. Der pH-Wert dieser frisch hergestellten Mesna-Lysin-Lösung wird mit Hilfe eines Tauchkorbes mit saurem Ionenaustauscher auf pH 3,9 bis 4,1 eingestellt (s. Ausführungsbeispiel 1).To dissolve 100 g of mafosfamide cyclohexylanine salt, a cooled to ca, 3 ° C solution containing 127.0 mg mesna-lysine (this corresponds to 0.1 weight percent Mesna-Cyciohexylaminsalz) contains. The pH of this freshly prepared mesna-lysine solution is adjusted to pH 3.9 to 4.1 with the aid of a dipping basket with an acidic ion exchanger (see Embodiment 1).
Ausführungsbeispiel 3: Überführen von Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salz zum LösenEmbodiment 3: Transfer of mafosfamide-cyclohexylamine salt for dissolution
200 g Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salz werden unter einer Sicherheitswerkbank in eine 11-PE-Fesstoffflasche eingewogen und mit dem Schraubverschluß verschlossen. Die Zwischenlagerung erfolgt bei 4 - 8°C, Zur Überführung wird das Mafosfarnid-Cyclohexylamin-Salz in der Feststoffflasche suspendiert. Dazu wurden ca, 12 h vorher 1,8 I destilliertes Wasser (WfI) abgewogen und im Kühlschrank bei 1 - 4°C vorgekühlt. Unter der Sicherheitswerkbank wird von der vorgekühlten Wassermenge ca. 1 I in die Flasche mit dem Mafosfamid- Cyclohexylamϊn-Salz gegeben und das Salz suspendiert Die Suspension wird unter Rühren (Glasstab) in das auf 6°C gekühlte Ansategefäß (RG 1) überführt und dessen Rührwerk eingeschaltet. Anschließend wird zweimal mit je 0,4 I des gekühlten Wassers die Feststoffflasche, Glasstab und Glastrichter gespült und die Spülsuspension vollständig in das Ansatzgefäß (RG 1) überführt. Die Ansatzlösung wird bis zum vollständigen Lösen bei 5 — 10°C gerührt und dann auf etwa 6°C gekühlt.200 g of mafosfamide-cyclohexylamine salt are weighed under a safety workbench in an 11-PE-Fesstoffflasche and sealed with the screw cap. The intermediate storage is carried out at 4 - 8 ° C, For transfer, the Mafosfarnid-cyclohexylamine salt is suspended in the solids bottle. To this end, approx. 12 hours before 1.8 l of distilled water (WfI) were weighed and pre-cooled in the refrigerator at 1-4 ° C. Under the safety workbench, about 1 l of the precooled amount of water is added to the bottle containing the mafosfamide-cyclohexylamine salt and the salt is suspended. The suspension is transferred with stirring (glass rod) to the seminal vessel (RG 1) which has been cooled to 6 ° C. Agitator switched on. The solid-state bottle, glass rod and glass funnel are then rinsed twice with 0.4 l each of the cooled water, and the rinsing suspension is transferred completely into the preparation vessel (RG 1). The batch solution is stirred until complete dissolution at 5-10 ° C and then cooled to about 6 ° C.
Ausführungsbeispiel 4: Einstellen des pH in der AnsatzlösungEmbodiment 4: Adjusting the pH in the batch solution
Beim Lösen von 200 g Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salz in 2 1 Wasser (s. Beispiel 3) stellt sich ein natürlicher pH von 6,0 ein (Wert der Meßsonde). Unter fortgesetztem Rühren Iäßt man die vorbereitete Sonde (s. Beispiel 1 ) mit dem Ionenaustauscher mehrfach für einige Sekunden ein- und auftauchen und
beobachtet den angezeigten Wert der Meßsonde. Der pH sinkt auf 4,37. Nach 1 min läßt man erneut die Sonde mit dem Ionenaustauscher mehrfach für einige Sekunden ein- und auftauchen. Der pH sinkt weiter auf 4,31. Bleibt der pH nach einer weiteren 1 - 2 Minuten konstant, so ist die pH-Einstellung beendet.When dissolving 200 g of mafosfamide-cyclohexylamine salt in 2 l of water (see Example 3), a natural pH of 6.0 is established (value of the measuring probe). With continued stirring, the prepared probe (see Example 1) with the ion exchanger is left to appear and emerge several times for several seconds, and observes the displayed value of the probe. The pH drops to 4.37. After 1 min, the probe with the ion exchanger is again allowed to appear and emerge several times for a few seconds. The pH continues to drop to 4.31. If the pH remains constant after a further 1 to 2 minutes, the pH adjustment is completed.
Ausführungsbeispiel 5: Herstellung der Ionenaustauscher-SäuleExemplary Embodiment 5: Production of the Ion Exchange Column
1,57 I Ionenaustauscher werden in einem Becherglas mit 3,0 I Wfl-Wasser überschichtet und 12 h bei 20-30 °C stehen gelassen. Die Suspension wird in die Superformance-Säule (i.d.=100 mm; L= 300 mrn eingefüllt, mittels der Handspindel wird die Säulenhöhe auf die markierte Höhe eingestellt. Anschließend wird die Säule mit der HPLC-Anlage verbunden.1.57 l of ion exchanger are covered in a beaker with 3.0 l of Wfl-water and allowed to stand at 20-30 ° C. for 12 h. The suspension is filled into the Superformance column (i.d. = 100 mm, L = 300 mm), the column height is adjusted to the marked height by means of the manual spindle and then the column is connected to the HPLC system.
Ausfuhrungsbeispiel 6: Regenerleren (Sauer stellen) des IonenaustauschersExemplary Embodiment 6: Regenerators (acidifying) of the ion exchanger
Entsprechend dem eingestellten Programm SCHWEFELSÄURE.method erfolgt die Dosierung von 5,34 I Schwefelsäure (4%) mit einem Fluß von 100 ml/min aus Vorlagegefäß VG 3. Anschließend wird vom Programm gesteuert über die HPLO Pumpe mit ca. 12 I Wfl-Wasser aus Vorlagegefäß. VG 1 gespült, bis der Bariumchloridtest negativ ist und pH > 4,0 erreicht ist. (s. Fig. 1)According to the set program SCHWEFELSÄURE.method, the dosage of 5.34 l sulfuric acid (4%) with a flow rate of 100 ml / min from the receiver VG 3. Then the program is controlled by the HPLO pump with about 12 l Wfl water from the original container. VG 1 rinsed until the barium chloride test is negative and pH> 4.0 is reached. (see Fig. 1)
Ausführungsbeispiel 7: Beladen der Säule mit L-Lysin und WaschenEmbodiment 7: Loading the column with L-lysine and washing
L-Lysin-Lösung (0,622 kg L-Lysin in 7,85 I Wfl-Wasser) wird aus VG 2 über die HPLC- Pumpe mit Programm LYSIN, method mit einem Fluß von 100 ml/min über die Säule gepumpt, der Durchlauf wird im Abfalltank gesammelt.
Nach vollständiger Beladung (Detektorsignal zeigt Sättigung an) wird vom Programm auf Spülen mit Wfl-Wasser umgeschaltet. Gespült wird, bis das Detektorsignal wieder auf den Startwert (NuIl) abgeklungen ist. Das Spülen erfolgt mit auf 3 °-5° C gekühltem Wfl-Wasser (Kühler an Käfte- Thermostat 2). Insgesamt wird mit ca. 7 I Wfl-Wasser gespült und dabei gleichzeitig die HPLC- Anlage auf 5 -10 °C und die SF-Säule (zusätzliche Mantelkühlung) auf 3 °C (+/-1 K) gekühlt, (s. Fig. 2)L-lysine solution (0.622 kg L-lysine in 7.85 l Wfl water) is pumped from VG 2 over the HPLC pump with program LYSIN, method with a flow of 100 ml / min, over the column which is run collected in the waste tank. After complete loading (detector signal indicates saturation), the program switches to rinsing with water. Rinsing until the detector signal has decayed to the starting value (NuIl). Rinse with water cooled to 3 ° -5 ° C (cooler to Käfte thermostat 2). In total, it is rinsed with about 7 l of Wfl water while the HPLC system is cooled to 5 ° -10 ° C. and the SF column (additional jacket cooling) to 3 ° C. (+/- 1 K) (see FIG 2)
Ausführungsbeispiel 8: lonenaustausch - Herstellen des Mafosfamid-L-Lysin-EluatsEmbodiment 8: Ion Exchange - Preparation of Mafosfamide-L-Lysine Eluate
Der nach Ausführungsbeispiel 2 und 3 vorbereitete Ansatz von ca. 2 1 Mafosfamid- Cyclohexylamin-Losung wird mit Programm lONENAUSTAUSCH.method bei 1 - 3 °C (+/- 1 °C) durch die HPLC-Anlage auf die Säule (auf 1 - 3°C gekühlt) dosiert. Mit Beginn des Durchbruchs der MafOsfamϊd-L-Lysin-Lösung wird die eluierte Lösung über Fraktionierventil V1 im Auffanggefäß RG2 (eingeschalteter Rührer) gesammelt („Wertfraktion").. Die Anlage wird nach vollständiger Dosierung der Mafosfamid-CHA-Lösung auf Elution der Mafosfamid-L-Lysin-Lösung mit Wfl-Wasser umgeschaltet Mittels UV-Detektor kann die vollständige Elution der Mafosfamid-L-Lysin-Lösung verfolgt werden. Der Schritt wird beendet durch- Umschalten Fraktionierventil V1 von „Wertfraktion auf „Waste". (s. Fig. 3)The preparation of about 2 l of mafosfamide-cyclohexylamine solution prepared according to working examples 2 and 3 is applied to the column by means of the program LONENUS EXCHANGEmethod at 1 to 3 ° C. (+/- 1 ° C.). 3 ° C cooled) dosed. When the MafOsfamϊd-L-lysine solution has started to break down, the eluted solution is collected via fractionating valve V1 in collecting vessel RG2 (switched-on stirrer) ("value fraction"). The plant is switched to elution of mafosfamide after complete dosing of the mafosfamide CHA solution -L-Lysine Solution Switched to Wfl Water Using UV Detector, complete elution of mafosfamide L-lysine solution can be monitored. The step is terminated by switching Fraction Valve V1 from "Value Fraction" to "Waste". (see Fig. 3)
Ausführungsbeispiel 9: Einstellen des pH in der EluatlösungEmbodiment 9: Adjusting the pH in the eluate solution
Die eluierte Lösung Mafosfamit-L-Lysin wird in dem Rührgefäß (RG 2) aufgefangen, in welchem die Lösung auf etwa 1°C gekühlt wird. Sie hat einen natürlichen pH von etwa 5 (Wert der der Meßsonde). Unter fortgesetztem Rühren und Kühlen auf 1°C läßt man eine frisch vorbereitete Sonde (s. Ausführungsbeispiel 1) mit dem Ionenaustauscher mehrfach für einige
Sekunden ein- und auftauchen und beobachtet den angezeigten Wert der Meßsonde. Der pH sinkt auf 4,32. Nach 1 min läßt man erneut die Sonde mit dem Ionenaustauscher mehrfach für einige Sekunden ein- und auftauchen. Der pH sinkt weiter auf 4,28. Bleibt der pH nach abgeschlossener Elution konstant, so ist die pH- Einstellung beendet.The eluted solution mafosfamit-L-lysine is collected in the stirred vessel (RG 2) in which the solution is cooled to about 1 ° C. It has a natural pH of about 5 (value of the probe). With continued stirring and cooling to 1 ° C, a freshly prepared probe (see Example 1) with the ion exchanger several times for a few Turn on and turn on the seconds and observe the displayed value of the probe. The pH drops to 4.32. After 1 min, the probe with the ion exchanger is again allowed to appear and emerge several times for a few seconds. The pH continues to drop to 4.28. If the pH remains constant after elution is complete, the pH adjustment is completed.
Ausführungsbeispiel 10: Einstellen des pH in der Eluatlösung durch Puffern mit Mesna-LysinEmbodiment 10: Adjust the pH in the eluate solution by buffering with Mesna lysine
In das Auffanggefäß für das Eluat werden 100 ml einer wässrigen Lösung von 127,0 mg Mesna-Lysin vorgelegt, deren pH mit der Tauchkorbmethode (s. Beispiel 1) auf 3,9 bis 4,1 eingestellt wurde.Into the collecting vessel for the eluate, 100 ml of an aqueous solution of 127.0 mg mesna-lysine are introduced, the pH of which was adjusted to 3.9 to 4.1 by the immersion basket method (see Example 1).
Ausführungsbeispiel 11 : Filtration des Eluates zur Keimminderung und Abfüllung in LyophilisationsgebindeExemplary embodiment 11: Filtration of the eluate for the purpose of reducing the germs and filling in lyophilization containers
Das Eluat aus Beispiel 8 wird bei 3 +/- 2° C im RG2 gekühlt. Zur Keimminderung wird über eine Capsule® 0,45/0,2 μm; 300 cm2 in vorgekühlte 2 I -Glas-Flaschen filtriert, Das erhaltene Filtrat wird ausgewogen. Zur Lyophilisation wird das Filtrat in LYOGUARD® Trays abgefüllt (max. 21 je Tray) und im vorgekühlten Lyophilisator (- 35°C) eingefroren.The eluate from Example 8 is cooled at 3 +/- 2 ° C in RG2. To reduce the germs, a Capsule® 0.45 / 0.2 μm; 300 cm 2 filtered in pre-cooled 2 I glass bottles, the resulting filtrate is weighed. For lyophilization, the filtrate is filled into LYOGUARD® trays (max 21 per tray) and frozen in the pre-chilled lyophilizer (-35 ° C).
Ausführungsbeispiel 12: Gefriertrockung des EluatesExemplary embodiment 12: freeze-drying of the eluate
Die Gefriertrocknung verläuft nach vorgegebenen Programm (s. Fig. 4) über 5 Tage. Es wird eine Restfeuchte von 0,1% erhalten.The freeze-drying runs according to a predetermined program (see Fig. 4) over 5 days. It is obtained a residual moisture content of 0.1%.
Ausführungsbeispiel 13: Verpackung des Mafosfamid-L-Lysin-Bulklyophlisates
Der Lyophilisator wird nach dem Programmende mit trockenem Stickstoff belüftet und das Trocknungsgut entnommen. Die LYOGUARD® Trays können ohne Staubexposition entnommen werden. Sie werden unter der Sicherheitswerkbank beprobt und einschließlich des Trocknungsgutes gewogen. Anschließend werden sie mit Trocknungsbeuteln in PE-Fofliebeutel und metallkaschierte Foliebeutel verpackt und eingeschweißt. Das so verpackte Mafosfamid-L-Lysin-Salz ist bei <-18°C lagerstabil.Embodiment 13: Packaging of mafosfamide-L-lysine bulky lysate The lyophilizer is aerated after the end of the program with dry nitrogen and the Trocknungsgut removed. The LYOGUARD® trays can be removed without dust exposure. They are sampled under the safety cabinet and weighed including the material to be dried. Then they are packed with drying bags in PE-Fofliebeutel and metal-laminated foil bags and sealed. The mafosfamide-L-lysine salt thus packaged is storage stable at <-18 ° C.
Erläuterungen der Fig. 1 bis 4: Fig. 1: Chromatogramm - Regenerieren mit Schwefelsäure Fig. 2: Chromatogramm - Beladen L-Lysin Fig. 3: Chromatogramm - lonenaustausch Fig. 4: Programm - Gefriertrocknung
Explanations of FIGS. 1 to 4: FIG. 1: chromatogram - regeneration with sulfuric acid FIG. 2: chromatogram - loading L-lysine FIG. 3: chromatogram - ion exchange FIG. 4: program - freeze-drying
Claims
1, Verfahren zur Herstellung von lagerstabiler Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat Bulkware, gekennzeichnet durch die Schritte (A) Umsetzung von Mafosfamid- Salz X, wobei X ungleich Lysin ist, auf einer mit Lysin beladenen, gepackten lonenaustauschsaule innerhalb von maximal etwa 70. min, (B) Sammeln des Mafosfamid-Lysin-Salz enthaltenden Eluats, (C) Lyophilisieren des Mafosfamid-Lysin-Salz enthaltenden Eluats unter Verwendung einer Wasserdampf-durchlässigen Membran bis zu einem Restwassergehalt von kleiner oder gleich etwa 5%, vorzugsweise Kleiner oder gleich etwa 4,0%, besonders bevorzugt kleiner oder gleich etwa 3%, ganz besonders bevorzugt kleiner oder gleich etwa 1 %, ganz besonders bevorzugt kleiner oder gleich etwa 0,1% beträgt.1, A process for preparing storage-stable mafosfamide-lysine salt lyophilisate bulk, characterized by the steps of (A) reacting mafosfamide salt X, wherein X is other than lysine, on a lysine-loaded, packed ion exchange column within a maximum of about 70 min , (B) collecting the mafosfamide-lysine salt-containing eluate, (C) lyophilizing the mafosfamide-lysine salt-containing eluate using a water vapor permeable membrane to a residual water content of less than or equal to about 5%, preferably less than or equal to about 4.0%, more preferably less than or equal to about 3%, most preferably less than or equal to about 1%, most preferably less than or equal to about 0.1%.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die lonenaustauschsäule mit L-Lysin beladen worden ist und Mafosfamid-L-Lysin- SaIz Lyophilisat erhalten wird.2. The method according to claim 1, characterized in that the ion exchange column has been loaded with L-lysine and mafosfamide L-lysine salt is obtained lyophilisate.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das eingesetzte Mafosfamid-Salz X Mafosfamid-Cyclohexylamin-Salz ist.3. Process according to Claim 1 or 2, characterized in that the mafosfamide salt X used is mafosfamide-cyclohexylamine salt.
4. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens etwa 100 g Mafosfamid-Lysin-Salz pro Ansäte hergestellt werden können.4. The method according to any one of the preceding claims, characterized in that at least about 100 g mafosfamide lysine salt per Ansäten can be produced.
5. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Wasserdampf-durchlässige Membran eine GoreTex®-Membran ist.5. The method according to any one of the preceding claims, characterized in that the water vapor permeable membrane is a GoreTex® membrane.
6. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die erhaltene Mafosfamid-Lysin-Salz: Lyophilisat Bulkware bei Temperaturen von unterhalb etwa -18 °C eine Lagerstabilität von mindestens etwa einem Jahr autweist. 6. The method according to any one of the preceding claims, characterized in that the obtained mafosfamide lysine salt: lyophilisate bulkware at temperatures below about -18 ° C exhibits a shelf life of at least about one year autweist.
7. Verfahren zur Herstellung von Behältnissen enthaltend Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat, gekennzeichnet durch die Schritte (A) Lösen von Mafosfamid- Lysin-Salz-Lyophilisat Bullware hergestellt gemäß dem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5 in Wasser für Injektionszwecke, (B) Sterilfiltrieren der Lösung, (C) Abfüllen einer gewünschten Menge der Lösung in Behältnisse und (D) Lyophilisieren der abgefüllten Lösungsmenge, wobei die Mafosfamid- Lysin-Salz-Lyophilisat Bulkware zwischengelagert worden sein kann.7. A process for producing containers containing mafosfamide lysine salt lyophilisate, characterized by the steps (A) dissolving mafosfamide lysine salt lyophilisate Bullware prepared according to the method of any one of claims 1 to 5 in water for injections, (B ) Sterile filtration of the solution, (C) filling a desired amount of the solution in containers and (D) lyophilizing the amount of solution filled, wherein the mafosfamide-lysine-salt-lyophilisate bulk material may have been intermediately stored.
8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Behältnis ein ViaI aus Glas oder Kunststoff ist8. The method according to claim 7, characterized in that the container is a ViaI made of glass or plastic
9. Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat Bulkware, erhalten gemäß dem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6.9. mafosfamide lysine salt lyophilisate bulk product obtained according to the method of any one of claims 1 to 6.
10. Mafosfamid-Lysin-Salz Lyophilisat dosiert abgefüllt in Vials, erhalten gemäß dem Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 8. 10. mafosfamide lysine salt lyophilisate metered filled in vials, obtained according to the method of any one of claims 7 to 8.
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