WO2004066992A1

WO2004066992A1 - 薬剤耐性黄色ブドウ球菌感染症治療のための医薬組成物

Info

Publication number: WO2004066992A1
Application number: PCT/JP2004/000751
Authority: WO
Inventors: Tomihiko Higuchi; Hirofumi Shibata; Yoichi Sato; Nobuhisa Takaishi; Kazuyoshi Kawazoe; Kotaro Murakami
Original assignee: Alps Pharmaceutical Ind. Co., Ltd.; Microbiotech Inc.
Priority date: 2003-01-29
Filing date: 2004-01-28
Publication date: 2004-08-12
Also published as: US20060235076A1; ES2316957T3; JP4693049B2; ATE413170T1; EP1604660B1; JPWO2004066992A1; EP1604660A4; EP1604660A1; DE602004017586D1

Description

明細書薬剤耐性黄色プドウ球菌感染症治療のための医薬組成物技術分野

本発明は多価フェノール誘導体および/またはタラ抽出物が J3—ラタタム系抗生物質の活性を増強させる特徴を利用した薬剤耐性菌感染症治療のための医薬糸且成物に関する。さらに、多価フエノール誘導体および/またはタラ抽出物を有効成分とする薬剤耐性菌に対する抗菌作用を有する消毒剤又は機能性食品に関する。背景技術

最初の抗生物質であるぺニシリンは ]3—ラタタム環を有し、ブドウ球菌に対して優れた効力を発揮した。しかし、ベニシリンが利用されるようになってまもなくぺニシリンを分解する酵素ぺニシリナーゼ ( β—ラクタマーゼ)を産生するぺニシリン耐性菌が出現した。その後、メチシリンなどのぺニシリナーゼ抵抗性ぺニシリンゃセフェム系の抗生物質が開発され、問題は解決されたかのように思われた。し力し、メチシリンが開発された 1年後に、メチシリンに耐性を示す;^ MR S Aが出現し、その後、全ての抗生物質に耐性を示す MR S Aが臨床レベルで分離された。すなわち、 MR S Aは、ペニシリン系だけでなく、セフエム系抗生物質、アミノ配糖体系、マクロライド系、ニューキノ口ン系抗生物質にも広く耐性をもった多剤耐性黄色ブドウ球菌として、重大な社会問題となってきた。現在用いられている MR S A感染症に対する抗生物質としてバンコマイシン（V CM)等があるが、 Y C Mの短時間殺菌作用は決して強力でなく聴毒性ゃ腎毒性等の重篤な副作用の問題がある。従ってこのような耐性菌に対し有効な新規抗菌薬の開宪が急務となっている。発明の開示

本発明者らは副作用がないかあつても弱い生薬から抗 MR S A活性を有する化合物を検索するうちに、タラ（Tara， Caesalpinia spinosa)抽出物おょぴタラ抽出物から得られた多価フエノール誘導体が i3—ラクタム剤耐性を抑制し、感受性を誘導するという興味ある事実を発見した。本宪明はこのような知見に基づいて完成されたものである。

本発明に用いられる「タラ」は、日本のタラノキとは別のペルー原産のマメ科の Tara (学名 Caesalpinia spinosa)であり、このタラには、メラニン色素をつくる酵素チロシナーゼを抑制するェラグ酸が含まれ、シミ ■ソバカスを防ぎ美白作用があることが知られている（例えば、 LION生活情報、「日やけによるシミ ■ソバカスを防ぐには」、 [平成 1 4年 1 1月 6日検索]、インターネット

<http://w . lion. co. jp/life/life3p2. htm>参照）。また、タラから抽出されたガロタンェンに脱臭作用があるとの開示もある（例えば、特開平 9一 3 2 7 5 0 4号公報参照)。

しかし、タラ抽出物が β—ラクタム系抗生物質との組み合わせによる耐性菌に対する増強活性は知られていない。

本発明の第 1の態様は、多価フエノール誘導体または医薬的に許容され得るそれらの塩を含む β—ラクタム系抗生物質の活性増強剤である。

本発明の第 2の態様は、多価フェノール誘導体または医薬的に許容され得るそれらの塩を有効成分として含むタラ抽出物を含む ]3—ラクタム系抗生物質の活性増強剤である。

本発明の「タラ」は、ペルー原産のマメ科の Tara (学名 Caesalpinia spinosa) であり、全草中に多価フェノール誘導体を約 0 . 2 5 %含む。タラ抽出物とはタラを適当な有機溶媒または水で抽出したものをいう。有機溶媒とは例えばメタノール、エタノールをいい、水との混液であってもよい。また、タラはどの部位であってもよい。多価フエノーノレ誘導体は 5 0 %エタノー/レ抽出エキス中に約 0 . 3 2 %含まれている。各種ガレート類は市販のものを用いることができる。

/3—ラタタム系抗生物質は、好ましくは、才キサシリン、セファピリン、アンピシリン、ペニシリン、セフォキシチンであり、より好ましくは、ォキサシリンおよびセファピリンである。

多価フエノール誘導体としては、式 I ：

[式中、 Rは低級アルキル、 O R¹ (ここで、 R¹は低級アルキルである）、または力テキンァユオンである]で示される多価フェノ一/レ誘導体を挙げることができる。

より具体的には、多価フエノール誘導体が、式 II：

[式中、 Rは O R¹ (ここで、 R¹は低級アルキルである）、またはカテキンァ-ォンである]で示されるガルス酸 (没食子酸)誘導体であり、例えば、メチルガレート、ェチルガレート、 n—プロピルガレート、 n—プチルガレート、 n一ペンチルガレート、 n一へキシルガレート、 n—ヘプチノレガレート、 n—オタチルガレート、 n—ノニノレガレート、 n—デシノレガレート、 n—ゥンデシノレガレート、 n ーラゥリルガレート、ィソプチルガレート、イソアミルガレート、カテキンガレート、ガロカテキンガレートおょぴェピカテキンガレートを挙げることができる。好ましくは、メチルガレート、ェチルガレート、 n—プロピルガレート、 n—ブチノレガレート、 n—ペンチノレガレート、 nーォクチノレガレート、 n—ノニノレガレート、 n—デシルガレート、イソプチルガレート、イソアミルガレート、力テキンガレート、ガロカテキンガレ一トおよぴェピカテキンガレートであり、より好ましくは、 n—プロピルガレート、 n—プチルガレート、 n—ペンチルガレート、 4 000751

4 ィソァミルガレートおよぴカテキンガレートである。

さらに、タラから O Hがガルス酸で置換されたキュン酸（1， 3， 4， 5—テトラヒドロキシシクロへキサンカルボン酸)誘導体である、 4 , 5—ジーガロイルキニン酸メチルエステル、 3 , 4 , 5—トリ一ガロイルキニン酸、 3 , 4 , 5—トリ一ガロイルキニン酸メチルエステル、 3 , 4—ジ一ガロイルキニン酸の存在が確認され、これらにもラタタム系抗生物質の活性増強作用があり、特に、 3 , 4 , 5 -トリ—ガロイルキニン酸および 4， 5—ジ一ガロイルキニン酸メチルエステルが優れている。

本発明の第 3の態様は、 β—ラクタム系抗生物質および上記の活性増強剤を含む、薬剤耐性感染症治療のための医薬組成物である。

本発明の第 4の態様は、タラ抽出物およびタラ抽出物より得られた多価フエノール誘導体と |3—ラタタム抗生物質を有効成分として含む薬剤耐性菌用消毒剤である。

本発明の第 5の態様は、抗生物質の薬剤耐性菌に対する活性を増強させる多価フエノール誘導体および/またはタラ抽出物を含む薬剤耐性菌感染症の予防または改善のための機能性食品である。発明を実施するための最良の形態

この明細書で用いられる「低級アルキル」は、飽和の直鎖または分枝状の炭素原子 1〜 1 2個を含む炭化水素残基をいう。例えば、メチル、ェチル、 η—プロピノレ、 η—プチノレ、 η—ペンチル、 η一へキシル、 η—へプチノレ、 η—オタチル、 η—ノニル、 η一デシル、 η—ゥンデシノレ、 η—ラウリル、ィソプチノレ、イソァミノレをいう。また、「力テキンァ-オン」は、例えば、カテキン、ガロカテキン、ェピカテキンのァニオンをいう。

また、本発明の多価フエノール誘導体、抗生物質または抗菌薬には製薬上許容され得るそれらの塩が含まれる。製薬上許容され得る塩とは、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム等の塩、およびプロ力イン、ジベンジルァミン等のアミン塩類や塩酸塩等の酸添加塩など、通常用いられる医薬的に許容可能な塩を意味する。また、他の医薬有効成分とともに処方することができる。薬剤耐性菌としては、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌 (MRSA)、ぺュシリナーゼ産生黄色ブドウ球菌、バンコマイシン耐性腸球菌 (VRE)、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌 (VRSA)、ペニシリン耐性肺炎球菌 (PRSP)、基質特異性拡張型 /3 -ラクタマーゼ（_ESBLSs)などを挙げることができ、好ましくは MR S Aであり、ぺニシリナーゼ産性黄色ブドウ球菌であってもよい。

本発明に用いられる β—ラタタム系抗生物質の例としては、ベンジルぺュシリン、フエノキシメチノレぺュシリン、フエネチシリン、プロピシリン、アンピシリン、メチシリン、才キサシリン、クロキサシリン、フノレクロキサシリン、ジクロキサシリン、へタシリン、タランピシン、バカンピシリン、レナンピシリン、ァモキシシリン、シクラシリン、力ルベニシリン、スルベニシリン、チカルシリン、力リンダシリン、カルフェシリン、ピペラシリン、メズロシリン、ァスポキシシリン、セファロリジン、セファゾリン、セファピリン、セファセトリル、セフテゾ—ノレ、セファログリシン、セファレキシン、セファトリジン、セファクロノレ、セフロキサジン、セファドロキシノレ、セフアマンドーノレ、セフォチアム、セファロチン、セフラジン、セフロキシム、セフォキシチン、セフォタキシム、セフチゾキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフトリアキソン、セフゾナム、セフタジジム、セフエピム、セフピロム、セフォゾプラン、セフォセリス、セフ /レプレナム、セフオペラゾン、セフピミゾーノレ、セフピラミド、セフィキシム、セフテラムピボキシル、セフポドキシムプロキセチノレ、セフチブテン、セフエタメトビボキシル、セフジニル、セフジトレンピボキシル、セフカペンピボキシル、セフスロジン、セフォキシチン、セフメタゾーノレ、ラタモキセフ、セフォテタン、セフブペラゾン、セフミノクス、フロモキセフ、ァズトレオナム、カノレモナム、イミぺネム、パニぺネム、メロぺネム、ビアぺネム、ファロぺネム、リチぺネムァコキシル、またはこれらの混合物を挙げることができ、好ましくはァンピシリン、ベンジノレペニシリン、フエネチシリン、メチシリン、才キサシリン、カルべニシリン、セファピリン、セフラジン、セフロキシム、セフォキシチン、セフォタキシム、パニぺネムであり、より好ましくは、アンピシリン、セファピリン、ベンジルペニシリン、ォキサシリン、セフォキシチンまたはこれらの混合物である。抗生物質は製薬上許容され得る塩の形態であってもよく、製薬上許容され得る塩とは、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム等の塩、およびプロ力イン、ジベンジ/レアミン、エチレンジァミン、エタノーノレアミン、メチノレグノレカミン、タウリン等のァミン塩類や塩酸塩等の酸付加塩および塩基性ァミノ酸など、通常抗生物質の塩として用いられる医薬的に許容可能な塩を意味する。

本発明の多価フェノール誘導体および/またはタラ抽出物の投与形態としては、通常の抗生物質と同様に非経口投与、経口投与または局所投与があげられる。一般的には、注射剤による投与が好適である。この場合注射剤は常法により調製され、注射剤の形態として、適当なビヒクル、例えば滅菌した蒸留水、生理食塩水等で溶解される場合も含まれる。

また多価フエノール誘導体および/またはタラ抽出物は様々な投薬型で β—ラクタム系抗生物質と組み合わせることによつて経口投与することができる。例えば、錠剤、カプセル、糖などで被覆した錠剤、液状溶液または懸濁液の形態である。

予防■治療で用いる多価フエノール誘導体と β—ラタタム系抗生物質との併用剤の合計投与量は、組み合わせる薬剤の種類や、その併用比、または年齢、体重、患者の症状および投与経路によって変えることができ、例えば、成人 (体重 5 0 kg)に対して投与する場合は、 1回投与当たり、組み合わせた両薬剤の和で 1 0 ra_g〜2 gを 1日に 1回から 3回経口投与する。これらの投与量および投与経路を変化させることによって最良の治療効果をあげるようにする。

本発明において、多価フエノール誘導体とラクタム系抗生物質を併用あるいは混合する際の重量比についても幅広い範囲で適用することが可能である。また、感染症の種類および重篤度、併用される一ラタタム系抗生物質の種類によつて併用比は変わるので、併用比は特に限定されないが、常用量の範囲内で組み合わせれば併用効果を期待できる濃度の組み合わせが実現できる。

本発明の医薬組成物は、通常、常法に従って調製され、医薬的に適切な形態で投与される。例えば、固体経口形態は、活性化合物と共に、ラタトース、デキストロース、サッカロース、セルロース、トウモロコシ澱粉およぴジャガイモ澱粉などの希釈剤、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウムおよぴまたはポリエチレンダリコールなどの滑沢剤、澱粉、アラビアゴム、ゼラチン、メチノレセルロース、カノレポキシメチノレセルロース、ポリビュルピロリジンなどの結合剤、澱粉、アルギン酸、アルギン酸塩、グリコール酸デンプンナトリウムなどの崩壊剤、発泡剤、色素、甘味料、例えばレシチン、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩などの湿潤剤、およぴ一般に非毒'性および医薬的処方に用いられる薬学的に非活性な物質を含んでいてもよい。

上記医薬組成物は既知の方法、例えば混合、粒状化、錠剤化、糖衣、または被覆方法などにより製造される。

非経口投与の場合、直腸への適用を意図した坐剤でも可能であるが汎用剤形は注射剤である。注射剤では液体製剤、用時溶解型製剤、懸濁製剤などの^ mを異にする剤形があるが、基本的には活性成分を適当な方法により無菌化したのち、直接容器に入れ、密封する点で同一と考えられる。

最も簡単な製剤化法としては、活性成分を適当な方法により無菌化したのち、これを別々に、または物理的に混合した後、その一定量を分割製剤化する方法がある。液剤形態を選ぶ場合には活性成分を適当な媒体に溶解し、これを滅菌濾過したのち適当なアンプルまたはバイアルに充填、密封する方法をとることができる。

この場合汎用される媒体は注射用蒸留水である力本発明においては、これに拘束されるものではない。また必要ならば、塩酸プロ力イン、塩酸キシロカイン、ベンジルアルコールぉよびフエノールなどの局所麻酔作用を有する無痛化剤、ベンジルアルコール、フエノール、メチル、またはプロピ /レバクベン、およびクロロブタノールなどの防腐剤、クェン酸、酢酸、リン酸のナトリウム塩などの緩衝剤、ェタノール、プロピレングリコール、塩酸アルギニンなどの溶解補助剤、 L 一システィン、 L一メチォニン、 L一ヒスチジンなどの安定化剤、さらには等張化剤などの添加剤を添加することも可能である。

本発明の多価フエノール誘導体および/またはタラ抽出物は β—ラクタム剤と混合して抗菌剤または殺菌剤として調製することができる。これらの抗菌剤または殺菌剤は、 0. 1〜 1 0 (重量)％程度の濃度の多価フェノール誘導体および/ またはタラ抽出物と一ラタタム剤の適量を含む。他の抗菌剤または殺菌剤をも P T/JP2004/000751

8 含むことができる。ハサミ、メス、カテーテルなどの器具、患者の排出物の消毒、皮膚、粘膜、創傷の洗浄に用いる。

また、本発明の活性増強剤は薬剤耐性菌感染症を予防するための機能性食品の形態で適用することができる。

飲食品として使用する場合の形態については特に制限はなく、例えば、ドリンク剤、固形物、ゼリー状食品等があり、固形物には製剤として粉剤、顆粒剤、錠剤及びカプセル剤のいずれかの形態に加工したものが含まれる。また、前記多価フエノーノレ誘導体および/またはタラ抽出物をうどん、そば等の麵類、クッキー、ビスケット、キャンディー、パン、ケーキ、その他の食品に、また、清涼飲料水、乳酸飲料その他種々の飲料に添加することもできる。実験例

実験例 1 ォキサシリンに対するタラ抽出物の活性増強作用 (ディスク拡散法）タラのさやの部分 1 O gを 5 0 %メタノール 1 0 O mlで抽出後、濾過し、タラ抽出物を得た。抗菌活性の測定としてディスク拡散法を用いて行った。 Base培地として、 MHA (Mueller- Hinton Agar)及びォキサシリン（Oxacillin) (10 μ g/ml) 含有 MHAを作成し、その上を前培養した MR S A菌株番号 5、 1 X 1 0 ⁵CFU/ralを添加した半流動 MHAで力パーした。直径 6隱のディスクを置き、その上にタラ抽出物 1 0 0 μ gを添加し、 3 7 °Cで培養し、 2 4時間、 4 8時間後の阻止円の大きさを測定した。

表 1からわかるように、対照の阻止円の大きさが 2 1瞧であったのに対して、ォキサシリン含有では 2 4瞧と 3 ramも阻止円の大きさが増大した。このことはタ 4 000751

9 ラの成分が抗生物質の感受性を高めていることを示している。実験例 2 ォキサシリンに対する各種ガレートの活性増強作用

(寒天平板希釈法による）

日本化学療法学会の定める寒天平板希釈法に従って M I C (minimum inhibitory concentration)を測定した。感受性測定用培地として Mueller- Hinton II Agar (MHA)に Caイオン 5 O mg/l、 Mgイオン 2 5 tng/lと 2 ⁰/₀NaC 1を添加した C AMH Aを用いた。 3 7 °C、一 B免培養した菌液を生理食塩水で 1 0⁶CFU/mlになるよう希釈しミクロプランター (佐久間製作所）を用いて感受性測定用平板に接種し、 3 7 °C、 2 4時間培養後、 M I Cを判定した。結果を表 2— 1および表 2— 2に示す。

表 2 - ォキサシリン Mに ^g/ml)

チルレートェチルがレートフロヒル力'レートフ'チルカレー卜へ °ンチルカ'レート菌株番号 25μθ/ιηΙ 50p,q/ml 25μ。,ΓΤΐΙ 50 q/ml 25 g/m(—50 g/ml— 25 g/ml— SO g/ml 12.5μα/ιτιΙ 25 g/ml

MRSA 1 >256 >256 >256 256 >256 256 128 128 16 256 64

2 256 64 8 4 0.25 2 0.063 4 ND 8 0.063

3 128 32 8 8 8 8 2 4 0.5 8 0.25

4 256 256 64 128 <0.016 128 く 0.016 64 ND 128 2

5 256 64 16 16 8 8 1 8 く 0.016 64 2

6 >256 >256 25 256 1 256 <0.016 64 ND 32 1

7 >256 128 16 32 8 32 2 16 32 0.13

8 128 128 64 32 16 16 2 16 ND 16 0.13

9 256 128 ND 16 ND 8 ND 16 <0.016 128 0.25

10 128 2 2 1 <0.016 0.5 ND <0.5 ND 4 0.13

12 >256 256 256 64 256 16 16 64 8 128 16

16 256 256 256 128 16 128 2 128 ND 128 2

17 256 128 4 64 <0.016 32 1 32 0.25 64 0.25

18 >256 256 32 128 0.13 128 0.125 64 <0.016 128 2

20 64 4 8 2 4 2 1 1 0.5 1 0.5

21 64 16 8 4 8 2 2 2 1 16 2

22 32 16 16 8 8 2 4 2 2 8 1

24 <0.5 <0.5 1 <0.5 0.5 0.5 0.5 <0.5 0.25 0.5 0.25

COL 256 128 64 64 32 32 8 32 4 32 2

3SA 1003 0.25 <0.5 1 1 0.5 0.5 0.5 <0.5 0.5 0.25 0.031

1010 0.25 1 2 1 1 1 1 0.5 0.25 0.25

1020 1 <0.5 1 1 0.25 0.25 <0.5 0.13 0.5 0.25

1023 2 1 1 1 1 1 <0.5 0.5 1 0.5

1029 4 1 1 1 1 1 1 1 2 1

1032 0.13 <0.5 1 1 0.5 0.5 <0.5 Λ 0 O.25 0.25 0.25

FCC 6538 0.063 <0.5 0.25 <0.5 0.25 0.13 0.25 <0.5 0. •O13 0.13 0.13

RN4220 0.13 <0.5 0.25 <0.5 0.25 0.25 0.125 <0.5 ND ω 0.13 0.063

ND : 測定せず

表 2 - 2

ォキサシリン MIC (μθ/ηιΙ)

才クチルがレートノニルがレートテ'シルカ'レートゥン亍 'シルカ 'レートラウリル力'レ-トイソフ'チ菌株番号 12.5μο/ΐτΐ 25μθ/ΐη! 12.5μ§/ιτι 25μ9/ιηΙ 12.5μα/ηι 25 g/ml 12.5μ£ΐ/ηι 25 g/ml 12.5|ig/m 25 9/ηιΙ 25 g/ml

MRSA 1 256 ND 256 ND >256 ND >256 ND 256 >256 256

2 0.13 ND 0.13 ND 32 ND 16 ND 256 >256 8

3 8 ND 128 ND 128 ND 256 ND 128 256 4

4 2 ND 2 ND 16 ND >256 ND 256 256 128

5 64 ND 0.13 ND 1 ND 256 ND 256 256 16

6 64 ND 0.063

o ND 0.063 ND >256 ND 256 >256 128

7 64 ND 1•o28 ND 128 ND >256 ND 256 >256 16

8 128 ND 256 ω ND 256 ND >256 ND 128 256 16

9 1 ND 0.5 ND 128 ND 256 ND 256 256 128

10 32 ND ND ND ND ND ND ND 8 4 <0.5

12 128 ND 256 ND 256 ND 256 ND 256 >256 128

16 128 ND 1 ND 2 ND 256 ND 256 256 256

17 1 ND 0.5 ND 2 ND 256 ND 256 256 128

18 4 ND 0.13 ND 16 ND >256 ND 256 >256 . 128

20 16 ND 4 ND 4 ND 8 ND 8 64 1

21 16 ND 32 ND 16 ND 32 ND 32 64 4

22 64 ND 32 ND 64 ND 128 ND 32 128 4

24 0.13 ND 0.063 ND 0.063 ND 0.5 ND <0.5 0.5 1

COL 128 ND 0.063 ND 0.13 ND 256 ND 256 256 64 SSA 1003 0.13 ND 0.063 ND 0.13 ND 0.063 ND <0.5 0.13 <0.5

1010 0.13 ND 0.13 ND 0.13 ND 0.25 ND <0.5 2 1

1020 0.13 ND 0.063 ND 0.063 ND 0.25 ND 1 2 <0.5

1023 0.13 ND 0.063 ND 0.063 ND 0.5 ND 2 2 1

1029 0.13 ND ND 0.13 ND 0.5 ND 1 0.5 1

1032 0.13 ND 0.063 ND 0.063 ND 0.13 ND <0.5 0.5 <0.5

ATCC 6538 0.13 ND 0.063 ND 0.063 ND 0.13 ND <0.5 0.13 <0.5

RN4220 0.063 ND 0.063 ND 0.063 ND 0.13 ND <0.5 0.13 <0.5

ND：測定せず

結果

ォキサシリンとの併用効果に関しては、多価フェノールの側鎖の炭素数が多くなるにつれて併用効果が強くなり、炭素数 5個の n—ペンチルガレートは MR S A菌株番号 2に関しては 25 g/mlの濃度においてォキサシリンの M I C値を 256 g/mlから 0.06 g/mlまで高めた。また、この併用効果は炭素数をさらに多くすると減少し、側鎖の炭素数：〜 6が最も高い併用効果を示すことがわカった。これらの効果は MRS Aのみでなく、 MS S Aにおいても見られた。さらに多価フェノールの側鎖が枝別れしたィソブチルガレートや、イソアミルガレ一トにも強い併用効果が見られた。

なお、 MRS A菌株番号 2に対するォキサシリン単独の MI Cは 256であり、 n—ペンチルガレート単独の MI Cは、下記の表 3—1に見られるように、 67.5であり、本来抗菌活性を示さない 2 S^g/ralをォキサシリンと併用することによって、ォキサシリンの MI Cが 0.063になるのであるから、 n—ぺンチルガレートには優れた増強活性があることがわかる。実験例 3 ガルス酸およぴ各種ガレート単独の抗菌活性

(寒天平板希釈法による）

ガルス酸、各種ガレートおよび多価フエノール誘導体の単独の MR S Aおよび MS S Aに対する MI Cを実験例 2と同様にして測定した。結果を表 3— 1およぴ表 3— 2に示す。

表 3— 2

名 ¾u ゥン亍。シルラウリルセチルイソチルイソァミル 2', 4', 5'-トリヒド 2', 3', 4'-トリヒ 4 -ヒト'

レ-卜 7Ϊレ-トレ-ト力 *レ-ト 1ίレ-ト口キシフ 'チ Βフエノンに Βキシァセトフ 1/ン

MRSA #1 31.3 62.5 >250 125 62.5 62.5 62.5

MRSA #2 31.3 62.5 250 62.5 62.5 125 62.5

MRSA #3 31.3 62.5 >250 125 62.5 62.5 62.5

MRSA #4 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

MRSA #5 31.3 62.5 >250 125 62.5 62.5 62.5

MRSA #6 31.3 31.3 125 62.5 62.5 62.5 31.3

MRSA #7 31.3 31.3 >250 125 62.5 62.5 62.5

MRSA #8 31.3 31.3 >250 125 62.5 125 62.5

MRSA #9 31.3 31.3 >250 62.5 62.5 62.5 62.5

MRSA #10 31.3 15.6 125 62.5 31.3 62.5 31.3

MRSA #12 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

MRSA #16 31.3 62.5 >250 125 62.5 62.5 62.5

MRSA #17 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

MRSA #18 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

MRSA #20 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

MRSA #21 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

MRSA #22 31.3 62.5 >250 125 125 125 62.5

MRSA #24 31.3 62.5 >250 125 125 125 62.5

COL 31.3 31.3 250 125 62.5 125 62.5

MSSA #1003 31.3 62.6 >250 125 125 125 62.5

MSSA #1010 31.3 62.5 >250 125 62.5 12ο b2.5

MSSA #1020 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

MSSA #1023 31.3 62.5 >250 125 62.5 62.5 31.3

MSSA #1029 31.3 62.5 250 62.5 62.5 62.5 31.3

MSSA #1032 31.3 62.5 250 125 62.5 62.5 62.5

ATCC6538 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

RN4220 31.3 62.5 250 125 62.5 125 62.5

MICgo 31.3 62.5 >250 125 62.5 125 62.5

表 3からわかるように、単独でのガルス酸および各種ガレートの MR S Aおよぴ M S S Aに対する抗菌活性は、側鎖の炭素数が多くなるにつれて、強くなり、炭素数 9から 1 0のノニルガレート、デシルガレートが最も強く、 M I C値は 1 5 . 7 g/mlだった。さらに炭素数が増えると活性は弱くなった。実験例 4 他のーラクタム剤に対するィソアミルガレートの活性増強作用

(寒天平板希釈法による）

才キサシリンと強、併用効果がみられたイソアミルガレートと他の 3—ラクタム剤との併用効果を検討するために、実験例 2と同様にして M I Cを測定した。結果を表 4に示す。

結果

04 000751

16

表 4に示したように、ペニシリン G、セフォキシチン、アンピシリンおよぴセファピリンにおいても強い併用効果がみられた。実験例 5 ォキサシリンに対するガロイノレキニン酸誘導体の活性増強作用 (寒天平板希釈法による）

タラから下記の既存物質の存在が確認されたので、ォキサシリンとの併用効果について実験例 2と同様にして、 M I Cを判定した。結果を表 5に示す。

(1) ： 4, 5 -ジ -ガ口ィルキニン酸メチルエステル H G G Me

(2) ： 3， 4, 5-トリ -ガロイルキニン酸メチルエステル G G G Me

(3) ： 3, 4, 5-トリ—ガロイノレキュン酸 G G G H

(4) ： 3, 4-ジ-ガ口ィルキエン酸 G G H H

G ：

表 5

才キサシリン IC (μθ/ΐ ΐ)

1 2 3 4

12.5 g/m 25μα/ιτιΙ δθμς/ηιΐ 12.5pg/m 25 g/ml 50μς/πιΙ 12.5 g/m 25 g/ml 5(^g/ml I2.5mg/nr 25 g/ml 5C^g/ml

MRSA 1 >256 128 128 128 >256 >256 >256 128 32 64 >256 >256 >256

2 256 2 2 2 256 32 32 2 <0.5 <0.5 >256 256 256

128 <0.5 0.5 1 64 32 32 4 <0.5 1 256 256 128

4 256 128 128 32 256 256 256 32 4 2 >256 >256 >256

5 256 128 32 64 >256 256 256 64 8 8 >256 >256 >256

6 >256 2 2 4 128 32 64 4 2 4 256 256 128

7 >256 32 16 16 256 128 64 16 4 2 >256 >256 >256

8 128 0.5 16 1 64 64 64 3 4 8 256 128 128

9 256 16 16 8 >256 256 128 8 2 2 >256 >256 >256

10 123 4 8 8 64 64 64 4 2 4 128 128 128

12 >256 16 16 16 256 128 256 8 4 4 >256 >256 >256

16 256 128 128 64 >256 256 256 32 8 8 >256 >256 >256

17 256 32 32 4 128 256 256 4 8 4 256 256 256 0

18 236 123 128 32 256 128 128 32 4 . 4 >256 >256 >256

20 64 <0.5 0.25 <0.5 8 2 4 <0.5 <0.5 <0.5 32 16 16

21 64 <0.5 0.25 1 32 8 16 1 <0.5 <0.5 128 128 64

22 1 0.5 1 32 16 32 1 <0.5 1 64 64 64

COL 256 8 32 2 256 128 128 8 4 4 >256 >256 >256

MSSA 1003 0.25 <0.5 0.25 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5

1010 0.25 <0.5 0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5

1032 0.13 0.5 0.25 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5

ATCC 6538 0.063 <0.5 <0.063 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5

RN4220 0.13 <0.5 0.125 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5

(1) : 4, 5 -ジ-ガロイルキニン酸メチルエステル

(2) : 3, 4 ,5 -トリ-ガロイルキニン酸メチルエステル

(3) : 3, 4, 5-卜リ-ガロイルキニン酸

(4) : 3, 4-ジ-ガロイルキニン酸

結果

ォキサシリンとの併用効果に関しては、 3, 4， 5—トリーガロイルキニン酸が最も強く、続いて 4, 5—ジーガロイルキニン酸メチルエステルが強く、 3, 4, 5—トリーガロイノレキュン酸メチルエステル、 3， 4一ジーガロイルキニン酸の併用効果は弱かった。実験例 6 ォキサシリンに対する各種ガレ一トの活性増強作用

(MI C (微量液体希釈法による）の測定および F I C) 日本化学療法学会の定める微量液体希釈法に従つて行った。感受性測定用培地として MHB (Mueller— Hinton broth)に Caイオン 5 Orag/l、 Mgイオン 25 rag/1 と 2%NaClを添加した CAMHAを用いた。 96穴マイクロプレートに薬剤含有感受性測定用培地を 100 Ail分注し、 37°C、一晩培養した菌液を生理食塩水で希釈し、最終菌濃度 5X 10⁵CFU/wellになるように添加した。 37 °C、 2 4時間培養後、菌の発育の有無から MI Cを測定した。これらの結果から F I C (fractional inhibitory concentration)値を算出し、併用効果の強さを測定した。結果を表 6に示す。結果

表 6から分かるように供試した MR S A C0L株、菌株番号 5共に抗菌活性、ならぴにォキサシリンとの併用効果がみられた。すなわち、表 6において、 M I C は各種ガレートの M I Cであり、従って、単独での効果はォクチルガレート、ノ二ルガレート、デシルガレート、ゥンデシルガレートが最も抗菌活性が強く、ォキサシリンとの併用効果を示す F I C値ではブチルガレート、ィソプチルガレートが最も併用効果を示すことがわかった。また、力テキンガレート、ガロカテキンガレートおよびェピカテキンガレートの併用効果はさらに強く特に力テキンガレートが強い併用効果を示した。実施例

実施例 1 タラ抽出物の製造

タラ（Caesalpinia spinosa) 1 k gを 1 0倍量の 50%エタノ一ノレで 2時間、 6 0 °Cで抽出した。抽出後、濾過し、濾液を約 4分の 1まで 6 0 °Cで濃縮した。濃縮液と等量の酢酸ェチルを加え、分液し、酢酸ェチル層を濃縮乾固し、シリカゲルクロマトグラフィーにかけ、へキサン一酢酸ェチルで溶出させた。溶出した画分を濃縮乾固し、タラ抽出物約 2. 5 gを得た。実施例 2 (錠剤）

常法によりイソアミルガレート 5 O mg、ォキサシリン 5 0 mg、乳糖 l g、デンプン 3 0 O rag、メチルセルロース 5 O mg、タルク 3 Oragを 1 0錠の錠剤に調製して白糖で糖衣する。実施例 3〜1 8 (錠剤）

ィソアミルガレートに替えて、メチルガレート、ェチルガレート、 n—プロピノレガレート、 n—プチノレガレート、 n—ペンチノレガレート、 n—へキシ 7レガレート、 n—へプチルガレート、 n—ォクチノレガレート、 n—ノニノレガレート、 n— デシルガレート、 n—ゥンデシルガレート、 n—ラウリノレガレート、イソプチルガレート、カテキンガレート、ガロカテキンガレートおよびェピカテキンガレートを用いて実施例 1と同様にして錠剤を調製する。実施例 1 9 (注射剤）

メチルガレート 5 0 O mg、才キサシリン 5 0 O mgからなる無菌混合物を滅菌バイアルに入れ密封する。使用時にこの混合物を生理食塩水に溶解し、注射剤とする。実施例 2 0〜 2 7 (注射剤）

メチルガレ一トに替えて、ェチルガレート、 n—プロピルガレート、 n—プチルガレート、 n—ペンチルガレート、イソプチルガレート、力テキンガレート、ガロカテキンガレートおよびェピカテキンガレートを用いて実施例 1 8と同様にして注射剤を調製する。実施例 2 8 (消毒剤）

イソアミルガレート、ォキサシリン、エタノールおよび滅菌蒸留水を原料とする消毒剤である。これらの消毒剤は以下のような比率で調製する。

ィソァミルガレート 2 5 m g

ォキサシリン 1 0 m g

エタノーノレ 5 0 0 m l

滅菌蒸留水 5 0 O m 1 実施例 2 9 (機能性食品）

タラのさやの部分 1 k gに対し 5 0 %エタノール 1 0 1を入れ、加熱抽出し、濾過した液を適当な量まで濃縮し、スプレードライで粉末乾燥しエキスとする。このエキスに砂糖、密、液糖等の糖質を加えたものを用いて、クッキー等を作製する。また、このエキスを粉剤、錠剤にして機能性食品とすることができる。産業上の利用の可能性

本発明の多価フェノール誘導体および Zまたはタラ抽出物と、ーラタタム系抗生物質または抗菌薬を併用することにより、薬剤耐性菌に対する β—ラクタム系抗生物質または抗菌薬の活性を増強する効果があると共に、使用する β—ラクタム系抗生物質または抗菌薬の量を減らすことができ、未然に β—ラクタム系抗生物質に対する耐性獲得の機会を減少させることが可能である。従って、本発明は多価フエノール誘導体おょぴ ζまたはタラ抽出物が β—ラクタム系抗生物質の活性を増強させる特徴を利用した薬剤耐性菌感染症治療のための医薬組成物として、また、多価フエノール誘導体および Ζまたはタラ抽出物を有効成分とする薬剤耐性菌に対する抗菌作用を有する消毒剤又は機能性食品にとして用いることができる。

Claims

請求の範囲

1 . 多価フエノール誘導体または医薬的に許容され得るそれらの塩を含む ]3— ラクタム系抗生物質の活性増強剤。

2 . さらにタラ抽出物を含む、請求項 1記載の —ラタタム系抗生物質の活性増強剤。

3 . 有効成分として多価フエノール誘導体または医薬的に許容され得るそれらの塩を含むタラ抽出物を含む β—ラクタム系抗生物質の活性増強剤。

4 . 上記 jS—ラタタム系抗生物質が、才キサシリン、セファピリン、アンピシリン、ベンジルペニシリン、セフォキシチンである、請求項 1〜 3のいずれか 1 項記載の活性増強剤。：

5 . 上記多価フエノール誘導体が、式 I ：

[式中、 Rは低級アルキル、 O R¹ (ここで、 R¹は低級アルキルである）、または力テキンァニオンである]で示される多価フエノール誘導体である、請求項 1〜 4のいずれか 1項記载の活性増強剤。

6 . 上記多価フエノール誘導体が、式 II：

[式中、 Rは O R¹ (ここで、 R¹は低級アルキルである）、またはカテキンァニォンである]で示される多価フエノール誘導体である、請求項 5記載の活性増強剤。

7 . 上記多価フエノール誘導体が、メチルガレート、ェチルガレート、 n—プ口ピノレガレート、 n—プチノレガレート、 n—ペンチノレガレート、 n—へキシノレガレート、 n—へプチルガレート、 n—ォクチルガレート、 n—ノニノレガレート、 n—デシルガレート、 n—ゥンデシルガレート、 n—ラウリルガレート、イソプチルガレート、ィソァミルガレート、力テキンガレート、ガロカテキンガレートまたはェピカテキンガレートである、請求項 6記載の活性増強剤。

8 . 上記多価フエノール誘導体が、 4， 5—ジーガロイルキニン酸メチルエステルまたは 3， 4， 5—トリ一ガロイルキニン酸メチルエステルである、請求項 1

〜 4のいずれか 1項記載の活性増強剤。

9 . β—ラクタム系抗生物質および請求項 1〜8のレ、ずれか 1項に記載の活性増強剤を含む、薬剤耐性感染症治療のための医薬組成物。

1 0 . 有効成分として医薬的有効量の )3—ラタタム系抗生物質および請求項 1 〜 8のいずれか 1項に記載の活性増強剤を投与することを特徴とする薬剤耐性感染症の治療方法。

1 1 . 薬剤耐性感染症の治療のための医薬組成物の製造のための ]3—ラタタム系抗生物質、請求項 1〜 8のいずれか 1項に記載の活性増強剤および適当な医薬添加物の使用。

1 2 . ]3—ラタタム系抗生物質および請求項 1〜 8のいずれか 1項に記載の活性増強剤を含む薬剤耐性菌用消毒剤。

1 3 . 請求項 1〜8のいずれか 1項に記載の活性増強剤を含む機能性食品。