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WO2002057746A2 - Specimen slide, microdissection device comprising a specimen slide and a microdissection method - Google Patents

Specimen slide, microdissection device comprising a specimen slide and a microdissection method Download PDF

Info

Publication number
WO2002057746A2
WO2002057746A2 PCT/DE2002/000056 DE0200056W WO02057746A2 WO 2002057746 A2 WO2002057746 A2 WO 2002057746A2 DE 0200056 W DE0200056 W DE 0200056W WO 02057746 A2 WO02057746 A2 WO 02057746A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
slide
thickness
total area
microdissection
interest
Prior art date
Application number
PCT/DE2002/000056
Other languages
German (de)
French (fr)
Other versions
WO2002057746A3 (en
Inventor
Albrecht Weiss
Michael Ganser
Original Assignee
Leica Microsystems Wetzlar Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Leica Microsystems Wetzlar Gmbh filed Critical Leica Microsystems Wetzlar Gmbh
Priority to AU2002233157A priority Critical patent/AU2002233157A1/en
Priority to DE10290161T priority patent/DE10290161D2/en
Publication of WO2002057746A2 publication Critical patent/WO2002057746A2/en
Publication of WO2002057746A3 publication Critical patent/WO2002057746A3/en

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Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
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    • G01N1/04—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting
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    • G01N1/04—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting
    • G01N2001/045—Laser ablation; Microwave vaporisation
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    • G01N2001/2873—Cutting or cleaving
    • G01N2001/2886—Laser cutting, e.g. tissue catapult
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/00029—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor provided with flat sample substrates, e.g. slides
    • G01N2035/00099—Characterised by type of test elements
    • G01N2035/00138—Slides

Definitions

  • the invention relates to a slide for microscopic specimens.
  • the invention relates to a microdissection device for separating a portion of a preparation of interest with a laser with a slide holder for slides, the slide defining a total area and having a first thickness.
  • the invention further relates to a method for microdissection of a portion of a microscopic preparation of interest.
  • microscopic specimens are applied to a slide, which is usually made of glass, in order to subsequently insert it into the beam path of a microscope.
  • Most microscopes have a slide holder on a microscope stage in which the slide can be inserted and attached.
  • laser microdissection refers to a method with which a small fraction is separated from a generally flat preparation (for example cells or a tissue section) with a focused laser beam. The separated part is then available for further biological or medical (e.g. histological) examinations.
  • US 5,998,129 describes such a method and an apparatus for laser microdissection.
  • the sample is placed on a solid, flat slide, which can be a laboratory slide.
  • the described procedure works in two steps.
  • a sample area of interest is created with a laser beam selected cell cluster or a histological section is cut out with a laser beam.
  • the cutting line of the laser beam describes a closed curve around the sample area of interest.
  • an additional laser shot is aimed at the sample area of interest and the sample area of interest is thereby thrown in the direction of the laser beam into a collecting vessel.
  • the air gap often remaining in some places between the film layer and the glass substrate also leads to fluctuations in distance and thus to a deterioration in the imaging quality.
  • the additional film-air and glass-air transitions cause disturbing reflections, both when observing the specimen and when cutting.
  • the object of the invention is to provide a microscope slide which avoids the problems shown.
  • the object is achieved by a specimen slide, which is characterized in that the specimen slide has a second thickness over a part of its total area, which is substantially smaller than the first thickness of the slide.
  • Another object of the invention is to provide a microdissection device for separating a portion of a preparation of interest using a laser with a slide holder for a slide, the slide defining an overall area and having a first thickness which solves the problems described.
  • the object is achieved by a microdissection device, which is characterized in that the specimen slide has a second thickness over a part of its total area, which is substantially smaller than the first thickness of the specimen slide.
  • An additional object of the invention is to provide a method for microdissection of a portion of a microscopic preparation of interest which avoids the problems shown.
  • the objective task is solved by a procedure, which is characterized by the following steps:
  • the invention has the advantage that a portion of the preparation that is of interest and can be cut off can be cut out together with the part of the slide bearing this portion, with no further elements being in the immediate vicinity of the cut-out part of the slide or the separated part of the preparation that they could cling to.
  • the focal length of the separating laser beam which is often referred to as depth of field in view of the imaging of the laser focus in the specimen, is limited.
  • the focus length of the separating laser beam is usually a few ⁇ m for common lenses or enlargements.
  • the slide has a second thickness, at least in the region of interest to be separated, which is not significantly larger than the focal length of the laser beam to be separated.
  • the second thickness is preferably less than 10 ⁇ m.
  • the specimen slide preferably consists of a frame defining an inner region and a thin film spanning the inner region, the inner region at least largely making up the part of the total area which has the second thickness.
  • the frame can be made of plastic or metal, while the film is made of, for example, polyethylene naphthalate (PEN).
  • PEN polyethylene naphthalate
  • the frame can also have a clamping device that holds the film. The clamping device is preferably designed such that the film is automatically stretched when clamped. In a special embodiment, the film is glued flat to the frame.
  • the specimen slide is designed in one piece. It is particularly advantageous if the part having the second thickness preferably absorbs UV light of a specific wavelength or a specific wavelength range, the wavelength or the wavelength range is the wavelength of the separating light beam.
  • the first thickness of the slide is preferably in the range from 0.1 to 3 mm and can therefore be used with slide receptacles provided for standard slides.
  • the total area of the slide according to the invention is preferably in the range from 10 mm 2 to 50 cm 2 and in a very particularly preferred embodiment, the external dimensions correspond to those of a standard slide, for example 25 mm ⁇ 75 mm.
  • the part having the second thickness essentially carries the microscopic preparation, this part being able to be chosen small at high magnifications in order to avoid or at least reduce annoying sagging or vibrating of this part. In the case of small enlargements, the part having the second thickness can be chosen larger, since at smaller enlargements the aberration which is due to sagging is not particularly important.
  • a microdissection device contains a slide whose part of the total area which has the second thickness is largely surrounded by the part of the total area which has the first thickness.
  • This can consist of a frame defining an inner region and a thin film spanning the inner region, the inner region at least largely making up the part of the total area which has the second thickness.
  • One embodiment of the microdissection device has a fixed laser beam and a control unit which moves a movable xy table relative to the fixed laser beam when cutting a specimen. This places very high demands on the positioning accuracy of the xy table in order to produce an exact cutting line.
  • the xy table is preferably moved by a motor.
  • the microdissection device controls the control unit a deflection device which, when cutting, the laser beam relative to one fixed sample moves.
  • the xy table with the slide and the specimen lying on it are not moved when cutting.
  • the cutting line is created exclusively by deflecting the laser beam over the specimen.
  • An embodiment of the microdissection device is particularly advantageous in which the laser is assigned a control unit which controls the operating parameters of the laser. These operating parameters are, for example, the light output of the laser beam, the degree of illumination of the lens pupil, which is responsible for the focus length and the focus diameter and thus for the cutting width and cutting depth depending on the selected lens.
  • an autofocus device can be provided which ensures safe focusing for a clean cut even with samples of different thicknesses.
  • the microdissection device is assigned a computer which is used to control the deflection device and the control unit. Automation is therefore possible.
  • means for selecting the cutting line or means for selecting the cutting line by a user are provided.
  • the user can select the correct portion of interest before cutting and at the same time protect important parts of the sample from damage. For example, by the user being able to place the cutting line on non-critical cell structures of the preparation, critical, interesting cell structures within the portion of interest are protected during cutting.
  • the slide is arranged in the microdissection device in such a way that the separated portion of interest falls down unhindered.
  • a device for collecting the separated portion of interest is provided.
  • a very special advantage of the invention is that the preparation can be applied both on the top of the slide and on the bottom. In order to achieve a good image quality, it is cheap that Apply the preparation to the side facing the microscope objective so that the preparation is not viewed through the slide.
  • the portion of the preparation of interest is separated off together with the fraction of the portion of the specimen slide which has the second thickness and carries the portion of interest.
  • the specimen slide preferably consists of a frame defining an inner region and a thin film spanning the inner region, the inner region at least largely making up the part of the total area which has the second thickness.
  • the method can be supplemented by the further step of collecting the portion of interest with a suitable sample vessel.
  • Fig. 3 a slide according to the invention
  • Fig. 4 a one-piece slide according to the invention
  • FIG. 7 a microdissection device according to the invention and FIG. 8: a flowchart of the method according to the invention
  • Fig. 1 shows schematically a slide 1 according to the invention with a preparation 3 in cross section.
  • the slide 1 consists of this Embodiment of a solid frame 5 is glued to the one, a second thickness 7, namely 5 microns, having film 9 made of polyethylene naphthalate (PEN).
  • the adhesive 11 is applied flatly on the frame 5 and keeps the film taut in such a way that no folds occur and the film does not sag or only sags insignificantly.
  • the frame, the adhesive and the film define the first thickness 13; it is 1 mm.
  • the sample is placed on the top of the slide.
  • FIG. 2 schematically shows a slide 15 according to the invention, produced in one piece, with a preparation 3 in cross section.
  • the thin inner region essentially carries the preparation 3.
  • FIG. 3 illustrates the slide 1 according to the invention shown in FIG. 1, but in this embodiment the preparation is applied to the underside of the film 9.
  • the preparation adheres to the film 9 through adhesive forces.
  • the preparation is better protected against external influences.
  • Fig. 4 shows the one-piece slide according to the invention shown in Fig. 2.
  • the preparation is applied to the underside of the film 9 and adheres to the specimen slide 19 by adhesive forces. In this embodiment, too, the preparation is better protected against external influences.
  • FIG. 5 shows the frame 5 of a slide 1 according to the invention.
  • This frame is made of aluminum and has external dimensions of a standard slide of 25 mm ⁇ 75 mm ⁇ 1 mm. To avoid unwanted stray light, the frame 5 is black anodized.
  • the inner region 21 can be covered with a film. Similar to double-sided adhesive tape, the film can be applied to the frame with a backing layer, after which the backing layer is carefully peeled off.
  • FIG. 6 shows a slide 1 according to the invention in three dimensions View.
  • the film 9 is glued to the frame 5 carefully stretched.
  • the microdissection device 23 comprises a microscope 25 with a movable xy table 27 which has a slide holder 29. On the upper side of the slide 1 there is a preparation 3 to be cut.
  • An illumination system 31 and a condenser 33, which illuminates the sample 3, are arranged under the xy table 27.
  • the xy table 27 is not moved horizontally during the cutting process, that is to say in the x direction and in the y direction.
  • a collecting container 35 is arranged below the preparation 3 for collecting the cut-out sample area of interest.
  • a laser beam 39 emanates from a laser 37, in this example a UV laser, and is coupled into a deflection device 41.
  • the laser beam 39 passes through the deflection device 41 and, via an optical system 43 and a beam splitter 45, arrives at an objective 47, which focuses the laser beam 39 on the sample 3.
  • the beam splitter 45 is designed as a dichromatic beam splitter which allows the light 49 emanating from the specimen 3 (shown in dashed lines) to pass, so that it reaches the video camera 51 largely unhindered.
  • the setting of the deflection device 41 and thus the guiding of the laser beam 39 through the specimen 3 takes place with a motor 53 assigned to the deflection device 41, which is controlled by a control unit 55 and via a computer 57.
  • the motor 53 is connected to the control unit 55, which supplies the control signals for driving the motor 53.
  • the control unit 55 is connected to the computer 57, to which a monitor 59 is connected.
  • the image of the specimen recorded by the camera 51 is displayed on the monitor 59.
  • a desired target cutting line can be defined on the monitor 18 in the camera image by means of a mouse (not shown) or any other cursor control device.
  • the Control unit 55 also regulates the light output of laser beam 39.
  • the deflection device 41 deflects the laser beam in such a way that it follows the preselected cutting line.
  • the specimen is in the focal plane of the objective 47.
  • the geometry of the beam path is selected such that the laser beam 41 is tilted in the pupil of the objective 47 during the deflection process.
  • the focusing takes place by manually moving the xy table 27 in the direction of the optical axis 61 with simultaneous visual control of the camera image by a user.
  • 8 shows a flow chart of the method according to the invention.
  • the application 63 of a preparation is carried out on a slide 1.
  • the specimen slide 1 which defines a total area and has a first thickness 13 and, over part of its total area, has a second thickness 7, which is significantly smaller than the first thickness 13 of the specimen slide 1, the specimen 3 essentially carries with that second thickness 7 having part.
  • the portion of interest is then selected 65 in a microscopic overview image.
  • the overview image is preferably recorded with a microscope 25 equipped with a video camera 51 and displayed on a monitor 59.
  • An area of interest can be marked in the overview screen.
  • the selected portion of interest is separated 67. This is preferably done with a focused laser beam 39 which is guided over the preparation 3 in accordance with the marking made in the overview image.
  • the separated portion 69 is collected.

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Abstract

The invention relates to a specimen slide (1) for microscopic preparations (3). The specimen slide (1) defines a total area, has a first thickness (13), and is characterized in that it has, over a portion of its total surface, a second thickness (7) that is significantly smaller than the first thickness (13).

Description

Objektträger, Mikrodissektionseinrichtung mit Objektträger und Verfahren zur Mikrodissektion Slide, microdissection device with slide and method for microdissection
Die Erfindung betrifft einen Objektträger für mikroskopische Präparate.The invention relates to a slide for microscopic specimens.
Des Weiteren betrifft die Erfindung eine Mikrodissektionseinrichtung zur Abtrennung eines interessierenden Anteils eines Präparates mit einem Laser mit einer Objektträgeraufnahme für Objektträger, wobei der Objektträger eine Gesamtfläche definiert und eine erste Dicke aufweist.Furthermore, the invention relates to a microdissection device for separating a portion of a preparation of interest with a laser with a slide holder for slides, the slide defining a total area and having a first thickness.
Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Mikrodissektion eines interessierenden Anteils eines mikroskopischen Präparats. In der Mikroskopie werden mikroskopische Präparate auf einen Objektträger, der meist aus Glas gefertigt ist aufgebracht, um diesen anschließend in den Strahlengang eines Mikroskops einzubringen. Meist weisen Mikroskope eine Objektträgeraufnahme an einem Mikroskoptisch auf in die der Objektträger eingelegt und befestigt werden kann.The invention further relates to a method for microdissection of a portion of a microscopic preparation of interest. In microscopy, microscopic specimens are applied to a slide, which is usually made of glass, in order to subsequently insert it into the beam path of a microscope. Most microscopes have a slide holder on a microscope stage in which the slide can be inserted and attached.
Mit Laser-Mikrodissektion wird im Bereich der Biologie und der Medizin ein Verfahren bezeichnet, mit dem aus einem im allgemeinen flachen Präparat (beispielsweise Zellen oder ein Gewebeschnitt) ein kleiner Anteil mit einem fokussierten Laserstrahl abgetrennt wird. Der abgetrennte Anteil steht dann für weitere biologische oder medizinische (z.B. histologische) Untersuchungen zur Verfügung.In the field of biology and medicine, laser microdissection refers to a method with which a small fraction is separated from a generally flat preparation (for example cells or a tissue section) with a focused laser beam. The separated part is then available for further biological or medical (e.g. histological) examinations.
Die US 5,998,129 beschreibt ein solches Verfahren und eine Vorrichtung zur Laser-Mikrodissektion. Die Probe ist auf einem festen, planen Träger angeordnet, der ein laborüblicher Objektträger sein kann. Das beschriebene Verfahren arbeitet in zwei Schritten. In einem ersten Schritt wird mit einem Laserstrahl ein interessierender Probenbereich, auf dem sich z.B. ein selektierter Zellverband oder ein histologischer Schnitt befindet, mit einem Laserstrahl ausgeschnitten. Die Schnittlinie des Laserstrahls beschreibt eine geschlossene Kurve um den interessierenden Probenbereich. Nach dem Schnitt haftet der ausgeschnittene, interessierende Probenbereich jedoch noch an seinem Untergrund bzw. liegt auf dem Objektträger auf. Daher wird in einem zweiten Schritt ein zusätzlicher Laserschuss auf den interessierenden Probenbereich gerichtet und dadurch der interessierende Probenbereich in Richtung des Laserstrahls in ein Auffanggefäß geschleudert.US 5,998,129 describes such a method and an apparatus for laser microdissection. The sample is placed on a solid, flat slide, which can be a laboratory slide. The described procedure works in two steps. In a first step, a sample area of interest is created with a laser beam selected cell cluster or a histological section is cut out with a laser beam. The cutting line of the laser beam describes a closed curve around the sample area of interest. After the cut, however, the sample area of interest that has been cut out still adheres to its base or lies on the slide. Therefore, in a second step, an additional laser shot is aimed at the sample area of interest and the sample area of interest is thereby thrown in the direction of the laser beam into a collecting vessel.
Das Problem des ungewollten, störenden Anhaftens des vom übrigen Präparat abgetrennten Anteils an dem Objektträger wird auch mit Hilfe eines zusätzlichen Laserschusses nicht zuverlässig und befriedigend gelöst. Aus diesem Grund ist es üblich, zwischen das Präparat und den Objektträger aus Glas eine polymere Schicht anzuordnen, die oft als Folienschicht ausgebildet ist und die entweder am Rand mit dem Objektträger verklebt ist oder allein durch Kohäsionskräfte an dem Objektträger haftet. Durch die polymere Schicht wird das Problem des störenden Anhaftens verringert, jedoch nicht gelöst.The problem of unwanted, disruptive adherence of the portion of the slide separated from the rest of the specimen is not solved reliably and satisfactorily even with the aid of an additional laser shot. For this reason, it is customary to arrange a polymer layer between the specimen and the glass slide, which is often designed as a film layer and which is either glued to the edge of the slide or adheres to the slide solely by cohesive forces. The polymer layer reduces the problem of annoying adhesion, but does not solve it.
Auch eine das Laserlicht absorbierende Folienschicht, die beimAlso a film layer that absorbs the laser light
Abtrennvorgang zusammen mit dem abzutrennenden Anteil der Probe ausgeschnitten wird, führt nur zu einer Verbesserung, nicht jedoch zur vollständigen Vermeidung des Problems des Anhaftens am Objektträger.Cutting out together with the portion of the sample to be cut off only leads to an improvement, but not to the complete avoidance of the problem of sticking to the slide.
Häufig führen Feuchtigkeitsreste zwischen der Folienschicht und demMoisture residues often lead between the film layer and the
Objektträger zu unkontrollierbarem flächigem Anhaften der Folienschicht.Slides for uncontrollable surface adherence of the film layer.
Auch mit Hilfe des Laserkatapulting wird ein Ablösen der abgetrennten Folienschicht oft nicht erreicht, darüber hinaus ist der zusätzliche Schritt desEven with the help of laser catapulting, a detachment of the separated film layer is often not achieved. In addition, the additional step of
Laserkatapultings zeitraubend und umständlich.Laser catapultings are time-consuming and cumbersome.
Der zwischen der Folienschicht und dem Glasträger häufig an einigen Stellen verbleibende Luftspalt führt darüber hinaus zu Abstandsschwankungen und somit zu einer Verschlechterung der Abbildungsqualität. Darüber hinaus verursachen die zusätzlichen Folien-Luft- und Glas-Luft-Übergänge zu störenden Reflexionen, sowohl bei der Beobachtung des Präparates, als auch beim schneiden.The air gap often remaining in some places between the film layer and the glass substrate also leads to fluctuations in distance and thus to a deterioration in the imaging quality. In addition, the additional film-air and glass-air transitions cause disturbing reflections, both when observing the specimen and when cutting.
Aufgabe der Erfindung ist es, einen Objektträger für mikroskopische Präparate anzugeben, der die aufgezeigten Probleme vermeidet. Die Aufgabe wird durch einen Objektträger gelöst, der dadurch gekennzeichnet ist, dass der Objektträger über einen Teil seiner Gesamtfläche eine zweite Dicke aufweist, die wesentlich kleiner ist, als die erste Dicke des Objektträgers.The object of the invention is to provide a microscope slide which avoids the problems shown. The object is achieved by a specimen slide, which is characterized in that the specimen slide has a second thickness over a part of its total area, which is substantially smaller than the first thickness of the slide.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist es, eine Mikrodissektionseinrichtung zur Abtrennung eines interessierenden Anteils eines Präparates mit einem Laser mit einer Objektträgeraufnahme für einen Objektträger, wobei der Objektträger eine Gesamtfläche definiert und eine erste Dicke aufweist zu schaffen, die die beschriebenen Probleme löst.Another object of the invention is to provide a microdissection device for separating a portion of a preparation of interest using a laser with a slide holder for a slide, the slide defining an overall area and having a first thickness which solves the problems described.
Die Aufgabe wird durch eine Mikrodissektionseinrichtung gelöst, die dadurch gekennzeichnet ist, dass der Objektträger über einen Teil seiner Gesamtfläche eine zweite Dicke aufweist, die wesentlich kleiner ist, als die erste Dicke des Objektträgers.The object is achieved by a microdissection device, which is characterized in that the specimen slide has a second thickness over a part of its total area, which is substantially smaller than the first thickness of the specimen slide.
Eine zusätzlich Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Mikrodissektion eines interessierenden Anteils eines mikroskopischen Präparats anzugeben, das die aufgezeigten Probleme vermeidet.An additional object of the invention is to provide a method for microdissection of a portion of a microscopic preparation of interest which avoids the problems shown.
Die objektive Aufgabe wird durch ein Verfahren gelöst, das durch die folgenden Schritte gekennzeichnet ist:The objective task is solved by a procedure, which is characterized by the following steps:
• Aufbringen eines Präparates auf einen Objektträger, wobei der Objektträger eine Gesamtfläche definiert und eine erste Dicke aufweist und über einen Teil seiner Gesamtfläche eine zweite• Applying a preparation to a slide, the slide defining a total area and having a first thickness and a second over part of its total area
Dicke aufweist, die wesentlich kleiner ist, als die erste Dicke des Objektträgers,Has a thickness which is substantially smaller than the first thickness of the slide,
• Auswählen des interessierenden Anteils in einem mikroskopischen Übersichtsbild und • Abtrennen des interessierenden Anteils Die Erfindung hat den Vorteil, daß ein interessierender, abzutrennender Anteil des Präparates zusammen mit dem diesen Anteil tragenden Teil des Objektträgers ausgeschnitten werden kann, wobei sich weder in unmittelbarer Umgebung des ausgeschnittenen Teils des Objektträgers, noch des abgetrennten Anteils des Präparates weitere Elemente befinden, an denen sie anhaften könnten.• Selection of the portion of interest in a microscopic overview image and • Separation of the portion of interest The invention has the advantage that a portion of the preparation that is of interest and can be cut off can be cut out together with the part of the slide bearing this portion, with no further elements being in the immediate vicinity of the cut-out part of the slide or the separated part of the preparation that they could cling to.
Die Fokuslänge des abtrennenden Laserstrahles, die oft mit Hinblick auf die Abbildung des Laserfokus in das Präparat auch als Schärfentiefe bezeichnet wird, ist begrenzt. Bei gängigen Objektiven bzw. Vergrößerungen beträgt die Fokuslänge des abtrennenden Laserstrahles üblicherweise wenige μm. Aus diesem Grund weist der Objektträger zumindest im interessierenden, abzutrennenden Bereich eine zweite Dicke auf, die nicht wesentlich größer, als die Fokuslänge des abtrennenden Laserstrahles ist. Vorzugsweise ist die zweite Dicke kleiner als 10 μm. Die mechanische Stabilität wird im Wesentlichen dadurch gewährleistet, daß der die zweite Dicke aufweisende Teil der Gesamtfläche weitgehend von dem die erste Dicke aufweisenden Teil der Gesamtfläche umgeben ist. Vorzugsweise besteht der Objektträger aus einem einen Innenbereich definierenden Rahmen und einer den Innenbereich überspannenden dünnen Folie, wobei der Innenbereich zumindest weitgehend den die zweite Dicke aufweisenden Teil der Gesamtfläche ausmacht. Der Rahmen kann aus Kunststoff oder aus Metall hergestellt sein, während die Folie beispielsweise aus Polyethylennaphtalat (PEN), besteht. Die Rahmen kann ferner eine Klemmvorrichtung aufweisen, die Folie hält. Die Klemmvorrichtung ist vorzugsweise derart ausgebildet, daß die Folie beim Einklemmen automatisch gespannt wird. In einer besonderen Ausführungsform ist die Folie flächig mit dem Rahmen verklebt.The focal length of the separating laser beam, which is often referred to as depth of field in view of the imaging of the laser focus in the specimen, is limited. The focus length of the separating laser beam is usually a few μm for common lenses or enlargements. For this reason, the slide has a second thickness, at least in the region of interest to be separated, which is not significantly larger than the focal length of the laser beam to be separated. The second thickness is preferably less than 10 μm. The mechanical stability is essentially ensured in that the part of the total area which has the second thickness is largely surrounded by the part of the total area which has the first thickness. The specimen slide preferably consists of a frame defining an inner region and a thin film spanning the inner region, the inner region at least largely making up the part of the total area which has the second thickness. The frame can be made of plastic or metal, while the film is made of, for example, polyethylene naphthalate (PEN). The frame can also have a clamping device that holds the film. The clamping device is preferably designed such that the film is automatically stretched when clamped. In a special embodiment, the film is glued flat to the frame.
In einer ganz besonders bevorzugten Ausgestaltung ist der Objektträger einstückig ausgestaltet. Es ist besonders vorteilhaft, wenn der die zweite Dicke aufweisende Teil Licht einer bestimmten Wellenlänge oder eines bestimmten Wellenlängenbereichs vorzugsweise UV-Licht absorbiert, wobei es sich bei der Wellenlänge bzw. dem Wellenlängenbereich um die Wellenlänge des abtrennenden Lichtstrahles handelt.In a very particularly preferred embodiment, the specimen slide is designed in one piece. It is particularly advantageous if the part having the second thickness preferably absorbs UV light of a specific wavelength or a specific wavelength range, the wavelength or the wavelength range is the wavelength of the separating light beam.
Die erste Dicke des Objektträgers liegt vorzugsweise im Bereich von 0,1 bis 3 mm und ist damit mit für Standardobjektträger vorgesehenen Objektträgeraufnahmen verwendbar. Die Gesamtfläche des erfindungsgemäßen Objektträgers liegt vorzugsweise im Bereich von 10 mm2 bis 50 cm2 und in einer ganz besonders bevorzugten Ausführungsform entsprechen die Außenabmessungen denen eines Standardobjektträgers, beispielsweise 25 mm x 75 mm. Bevorzugter Weise trägt im Wesentlichen der die zweite Dicke aufweisende Teil das mikroskopische Präparat, wobei dieser Teil bei starken Vergrößerungen klein gewählt werden kann, um ein störendes Durchhängen oder Vibrieren dieses Teils zu vermeiden oder zumindest zu verringern. Bei kleinen Vergrößerungen kann man den die zweite Dicke aufweisende Teil größer wählen, da bei kleineren Vergrößerungen der Abbildungsfehler, der auf ein Durchhängen zurückzuführen ist nicht sonderlich ins Gewicht fällt.The first thickness of the slide is preferably in the range from 0.1 to 3 mm and can therefore be used with slide receptacles provided for standard slides. The total area of the slide according to the invention is preferably in the range from 10 mm 2 to 50 cm 2 and in a very particularly preferred embodiment, the external dimensions correspond to those of a standard slide, for example 25 mm × 75 mm. Preferably, the part having the second thickness essentially carries the microscopic preparation, this part being able to be chosen small at high magnifications in order to avoid or at least reduce annoying sagging or vibrating of this part. In the case of small enlargements, the part having the second thickness can be chosen larger, since at smaller enlargements the aberration which is due to sagging is not particularly important.
Erfindungsgemäß beinhaltet eine Mikrodissektionseinrichtung einen Objektträger, dessen die zweite Dicke aufweisende Teil der Gesamtfläche weitgehend von dem die erste Dicke aufweisenden Teil der Gesamtfläche umgeben ist. Dieser kann aus einem einen Innenbereich definierenden Rahmen und einer den Innenbereich überspannenden dünnen Folie bestehen, wobei der Innenbereich zumindest weitgehend den die zweite Dicke aufweisenden Teil der Gesamtfläche ausmacht.According to the invention, a microdissection device contains a slide whose part of the total area which has the second thickness is largely surrounded by the part of the total area which has the first thickness. This can consist of a frame defining an inner region and a thin film spanning the inner region, the inner region at least largely making up the part of the total area which has the second thickness.
Eine Ausführungsform der erfindungsgemäßen Mikrodissektionseinrichtung weist einen feststehenden Laserstrahl und eine Steuerungseinheit auf, die einen verfahrbaren xy-Tisch beim Schneiden eines Präparates relativ zu dem feststehenden Laserstrahl bewegt. Dabei werden sehr hohe Anforderungen an die Positioniergenauigkeit des xy-Tisches gestellt, um eine exakte Schnittlinie zu erzeugen. Der xy-Tisch wird vorzugsweise motorisch verfahren. In einer anderen Ausführungsform der erfindungsgemäßenOne embodiment of the microdissection device according to the invention has a fixed laser beam and a control unit which moves a movable xy table relative to the fixed laser beam when cutting a specimen. This places very high demands on the positioning accuracy of the xy table in order to produce an exact cutting line. The xy table is preferably moved by a motor. In another embodiment of the invention
Mikrodissektionseinrichtung steuert die Steuerungseinheit eine Ablenkeinrichtung, welche beim Schneiden den Laserstrahl relativ zu einer feststehenden Probe bewegt. Dazu wird beim Schneiden der xy-Tisch mit dem aufliegenden Objektträger und dem Präparat nicht verfahren. Die Schnittlinie entsteht ausschließlich durch Ablenken des Laserstrahls über das Präparat.The microdissection device controls the control unit a deflection device which, when cutting, the laser beam relative to one fixed sample moves. The xy table with the slide and the specimen lying on it are not moved when cutting. The cutting line is created exclusively by deflecting the laser beam over the specimen.
Besonders vorteilhaft ist eine Ausführungsform der Mikrodissektionseinrichtung, in welcher dem Laser eine Steuerungseinheit zugeordnet ist, welche die Betriebsparameter des Lasers steuert. Diese Betriebsparameter sind beispielsweise die Lichtleistung des Laserstrahles, das Maß der Ausleuchtung der Objektivpupille, welche in Abhängigkeit vom gewählten Objektiv für die Fokuslänge und den Fokusdurchmesser und somit für die Schnittbreite und Schnittiefe verantwortlich ist. Zusätzlich kann eine Autofokusvorrichtung vorgesehen sein, die für einen sauberen Schnitt eine sichere Fokussierung auch bei unterschiedlich dicken Proben sicherstellt.An embodiment of the microdissection device is particularly advantageous in which the laser is assigned a control unit which controls the operating parameters of the laser. These operating parameters are, for example, the light output of the laser beam, the degree of illumination of the lens pupil, which is responsible for the focus length and the focus diameter and thus for the cutting width and cutting depth depending on the selected lens. In addition, an autofocus device can be provided which ensures safe focusing for a clean cut even with samples of different thicknesses.
In einer anderen vorteilhaften Ausführungsform ist der Mikrodissektionseinrichtung ein Rechner zugeordnet, der zur Steuerung der Ablenkeinrichtung und der Steuerungseinheit eingesetzt wird. Dadurch ist eine Automatisierung möglich.In another advantageous embodiment, the microdissection device is assigned a computer which is used to control the deflection device and the control unit. Automation is therefore possible.
In anderen Ausführungsformen der Mikrodissektionseinrichtung sind Mittel zur Auswahl der Schnittlinie oder Mittel zur Auswahl der Schnittlinie durch einen Benutzer vorgesehen. Durch diese Auswahlmöglichkeit kann der Benutzer vor dem Schneiden den richtigen interessierenden Anteils gezielt auswählen und zugleich wichtige Stellen der Probe vor Beschädigungen schützen. Indem der Benutzer beispielsweise die Schnittlinie auf unkritische Zellstrukturen des Präparates legen kann, werden kritische, interessierende Zellstrukturen innerhalb des interessierenden Anteils beim Schneiden geschützt. In einer besonderen Ausgestaltungsform ist der Objektträger derart in der Mikrodissektionseinrichtung angeordnet daß der abgetrennte interessierende Anteil ungehindert nach unten fällt. Ferner ist eine Vorrichtung zum Auffangen des abgetrennten interessierenden Anteils vorgesehen.In other embodiments of the microdissection device, means for selecting the cutting line or means for selecting the cutting line by a user are provided. With this selection option, the user can select the correct portion of interest before cutting and at the same time protect important parts of the sample from damage. For example, by the user being able to place the cutting line on non-critical cell structures of the preparation, critical, interesting cell structures within the portion of interest are protected during cutting. In a special embodiment, the slide is arranged in the microdissection device in such a way that the separated portion of interest falls down unhindered. Furthermore, a device for collecting the separated portion of interest is provided.
Ein ganz besonderer Vorteil der Erfindung ist es, daß das Präparat sowohl auf der Oberseite des Objektträgers, als auch auf die Unterseite aufgebracht werden kann. Um eine gute Abbildungsqualität zu erzielen ist es günstig, das Präparat auf der dem Mikroskopobjektiv zugewandten Seite aufzubringen, so daß das Präparat nicht durch den Objektträger hindurch betrachtet wird.A very special advantage of the invention is that the preparation can be applied both on the top of the slide and on the bottom. In order to achieve a good image quality, it is cheap that Apply the preparation to the side facing the microscope objective so that the preparation is not viewed through the slide.
Hinsichtlich des erfindungsgemäßen Verfahrens ist vorgesehen, daß der interessierende Anteil des Präparates zusammen mit dem Bruchteil des die zweite Dicke aufweisenden Teils des Objektträgers abgetrennt wird, der den interessierenden Anteil trägt. Vorzugsweise besteht auch hierbei der Objektträger aus einem einen Innenbereich definierenden Rahmen und einer den Innenbereich überspannenden dünnen Folie, wobei der Innenbereich zumindest weitgehend den die zweite Dicke aufweisenden Teil der Gesamtfläche ausmacht. Ferner kann das Verfahren durch den weiteren Schritt des Auffangen des interessierenden Anteils mit einem geeigneten Probengefäß ergänzt werden.With regard to the method according to the invention, it is provided that the portion of the preparation of interest is separated off together with the fraction of the portion of the specimen slide which has the second thickness and carries the portion of interest. Here, too, the specimen slide preferably consists of a frame defining an inner region and a thin film spanning the inner region, the inner region at least largely making up the part of the total area which has the second thickness. Furthermore, the method can be supplemented by the further step of collecting the portion of interest with a suitable sample vessel.
In der Zeichnung ist der Erfindungsgegenstand schematisch dargestellt und wird anhand der Figuren nachfolgend beschrieben. Dabei zeigen: Fig. 1 : einen erfindungsgemäßen Objektträger mit einemThe object of the invention is shown schematically in the drawing and is described below with reference to the figures. 1: a slide according to the invention with a
Präparat im Querschnitt,Preparation in cross section,
Fig. 2: einen einstückig hergestellten erfindungsgemäßen2: a one-piece manufactured according to the invention
Objektträger mit einem Präparat im QuerschnittSlides with a preparation in cross-section
Fig. 3: einen erfindungsgemäßen Objektträger Fig. 4: einen einstückigen erfindungsgemäßen ObjektträgerFig. 3: a slide according to the invention Fig. 4: a one-piece slide according to the invention
Fig. 5: den Rahmen eines erfindungsgemäßen Objektträgers5: the frame of a slide according to the invention
Fig. 6: einen erfindungsgemäßen Objektträger in dreidimensionaler Ansicht6: a slide according to the invention in a three-dimensional view
Fig. 7: eine erfindungsgemäße Mikrodissektionseinrichtung und Fig. 8: einen Ablaufplan des erfindungsgemäßen Verfahrens7: a microdissection device according to the invention and FIG. 8: a flowchart of the method according to the invention
Fig. 1 zeigt schematisch einen erfindungsgemäßen Objektträger 1 mit einem Präparat 3 im Querschnitt. Der Objektträger 1 besteht in dieser Ausgestaltungsform aus einem massiven Rahmen 5 auf den eine, eine zweite Dicke 7, nämlich 5 μm, aufweisende Folie 9 aus Polyethylennaphtalat (PEN) geklebt ist. Der Kleber 11 ist flächig auf dem Rahmen 5 aufgetragen und hält die Folie derart gespannt, daß keine Falten auftreten und die Folie nicht oder nur unwesentlich durchhängt. Der Rahmen, der Kleber und die Folie definieren die erste Dicke 13; sie beträgt 1 mm. Die Probe ist auf die Oberseite des Objektträgers aufgebracht.Fig. 1 shows schematically a slide 1 according to the invention with a preparation 3 in cross section. The slide 1 consists of this Embodiment of a solid frame 5 is glued to the one, a second thickness 7, namely 5 microns, having film 9 made of polyethylene naphthalate (PEN). The adhesive 11 is applied flatly on the frame 5 and keeps the film taut in such a way that no folds occur and the film does not sag or only sags insignificantly. The frame, the adhesive and the film define the first thickness 13; it is 1 mm. The sample is placed on the top of the slide.
Fig. 2 zeigt schematisch einen einstückig hergestellten erfindungsgemäßen Objektträger 15 mit einem Präparat 3 im Querschnitt. Der Innenbereich 17, der eine Dicke von 3 μm aufweist, verdickt sich zum Rand hin zu dem tragenden eine 1 ,5 mm dicken Rand 19, der dem Objektträger 15 die mechanische Stabilität gibt. Der dünne Innenbereich trägt im wesentlichen das Präparat 3.2 schematically shows a slide 15 according to the invention, produced in one piece, with a preparation 3 in cross section. The inner region 17, which has a thickness of 3 μm, thickens toward the edge toward the load-bearing edge, a 1.5 mm thick edge 19, which gives the slide 15 the mechanical stability. The thin inner region essentially carries the preparation 3.
Fig. 3 illustriert den in Fig. 1 dargestellten erfindungsgemäßen Objektträger 1 , wobei in dieser Ausgestaltung das Präparat jedoch auf die Unterseite der Folie 9 aufgebracht ist. Das Präparat haftet durch Adhäsionskräfte an der Folie 9. In dieser Ausführung ist das Präparat besser vor äußeren Einflüssen geschützt.FIG. 3 illustrates the slide 1 according to the invention shown in FIG. 1, but in this embodiment the preparation is applied to the underside of the film 9. The preparation adheres to the film 9 through adhesive forces. In this version, the preparation is better protected against external influences.
Fig. 4 zeigt den in Fig. 2 dargestellten, einstückigen, erfindungsgemäßen Objektträger. In der hier gezeigten Ausführungsform ist das Präparat auf die Unterseite der Folie 9 aufgebracht und haftet durch Adhäsionskräfte an dem Objektträger 19. Auch in dieser Ausführung ist das Präparat besser vor äußeren Einflüssen geschützt.Fig. 4 shows the one-piece slide according to the invention shown in Fig. 2. In the embodiment shown here, the preparation is applied to the underside of the film 9 and adheres to the specimen slide 19 by adhesive forces. In this embodiment, too, the preparation is better protected against external influences.
Fig. 5 stellt den Rahmen 5 eines erfindungsgemäßen Objektträgers 1 dar. Dieser Rahmen ist aus Aluminium gefertigt und weist Außenabmessungen eines Standard-Objktträgers von 25mm x 75 mm x 1 mm auf. Um ungewolltes Streulicht zu vermeiden, ist der Rahmen 5 schwarz eloxiert. Der Innenbereich 21 mit einer Folie überspannbar. Die Folie kann, ähnlich wie bei doppelseitig klebendem Klebeband, mit einer Trägerschicht versehen auf den Rahmen aufgebracht werden, wobei anschließend die Trägerschicht vorsichtig abgezogen wird.5 shows the frame 5 of a slide 1 according to the invention. This frame is made of aluminum and has external dimensions of a standard slide of 25 mm × 75 mm × 1 mm. To avoid unwanted stray light, the frame 5 is black anodized. The inner region 21 can be covered with a film. Similar to double-sided adhesive tape, the film can be applied to the frame with a backing layer, after which the backing layer is carefully peeled off.
Fig. 6 zeigt einen erfindungsgemäßen Objektträger 1 in dreidimensionaler Ansicht. Auf dem Rahmen 5 ist die Folie 9 sorgfältig gespannt aufgeklebt.6 shows a slide 1 according to the invention in three dimensions View. The film 9 is glued to the frame 5 carefully stretched.
Fig. 7 zeigt eine erfindungsgemäße Mikrodissektionseinrichtung 23, die zum Abtrennen eines interessierenden Anteils eines Präparates einen Laserstrahl 39 über ein Präparat bewegt. Das Mikrodissektionseinrichtung 23 umfaßt ein Mikroskop 25 mit einem verfahrbaren xy-Tisch 27, der eine Objektträgeraufnahme 29 aufweist. An der Oberseite des Objektträgers 1 befindet sich eine zu schneidendes Präparat 3. Unter dem xy-Tisch 27 sind ein Beleuchtungssystem 31 und ein Kondensor 33 angeordnet, der die Probe 3 beleuchtet. Der xy-Tisch 27 wird während des Schneidvorgangs horizontal, also in x-Richtung und in y-Richtung, nicht verfahren. Unterhalb des Präparats 3 ist ein Auffangbehältnis 35 zum Auffangen des ausgeschnittenen, interessierenden Probenbereichs angeordnet.7 shows a microdissection device 23 according to the invention, which moves a laser beam 39 over a preparation in order to separate off a portion of a preparation of interest. The microdissection device 23 comprises a microscope 25 with a movable xy table 27 which has a slide holder 29. On the upper side of the slide 1 there is a preparation 3 to be cut. An illumination system 31 and a condenser 33, which illuminates the sample 3, are arranged under the xy table 27. The xy table 27 is not moved horizontally during the cutting process, that is to say in the x direction and in the y direction. A collecting container 35 is arranged below the preparation 3 for collecting the cut-out sample area of interest.
Von einem Laser 37, in diesem Beispiel ein UV-Laser, geht ein Laserstrahl 39 aus, der in eine Ablenkeinrichtung 41 eingekoppelt wird. Der Laserstrahl 39 durchläuft die Ablenkeinrichtung 41 und gelangt über ein optisches System 43 und einen Strahlteiler 45 zu einem Objektiv 47, das den Laserstrahl 39 auf die Probe 3 fokussiert.' Der Strahlteiler 45 ist als dichromatischer Strahlteiler ausgeführt, der das von dem Präparat 3 ausgehende Licht 49 (gestrichelt dargestellt) passieren läßt, so daß dieses weitgehend ungehindert zur Videokamera 51 gelangt.A laser beam 39 emanates from a laser 37, in this example a UV laser, and is coupled into a deflection device 41. The laser beam 39 passes through the deflection device 41 and, via an optical system 43 and a beam splitter 45, arrives at an objective 47, which focuses the laser beam 39 on the sample 3. The beam splitter 45 is designed as a dichromatic beam splitter which allows the light 49 emanating from the specimen 3 (shown in dashed lines) to pass, so that it reaches the video camera 51 largely unhindered.
Die Einstellung der Ablenkeinrichtung 41 und damit die Führung des Laserstrahls 39 durch das Präparat 3 erfolgt in dieser Ausführungsform mit einem der Ablenkeinrichtung 41 zugeordneten Motor 53, der von einer Steuerungseinheit 55 und über einem Rechner 57 angesteuert wird. Der Motor 53 ist mit der Steuerungseinheit 55 verbundenen, welche die Steuersignale zur Ansteuerung des Motors 53 liefert. Die Steuerungseinheit 55 ist mit dem Rechner 57 verbunden, an den ein Monitor 59 angeschlossen ist. Auf dem Monitor 59 wird das von der Kamera 51 aufgenommene Bild des Präparats dargestellt. Mittels einer nicht dargestellten Maus oder einer anderen beliebigen Cursorsteuerungseinrichtung kann auf dem Monitor 18 in dem Kamerabild eine gewünschte Soll-Schnittlinie definiert werden. Die Steuereinheit 55 regelt außerdem die Lichtleistung des Laserstrahles 39.In this embodiment, the setting of the deflection device 41 and thus the guiding of the laser beam 39 through the specimen 3 takes place with a motor 53 assigned to the deflection device 41, which is controlled by a control unit 55 and via a computer 57. The motor 53 is connected to the control unit 55, which supplies the control signals for driving the motor 53. The control unit 55 is connected to the computer 57, to which a monitor 59 is connected. The image of the specimen recorded by the camera 51 is displayed on the monitor 59. A desired target cutting line can be defined on the monitor 18 in the camera image by means of a mouse (not shown) or any other cursor control device. The Control unit 55 also regulates the light output of laser beam 39.
Die Ablenkeinrichtung 41 lenkt den Laserstrahl derart ab, daß dieser der vorgewählten Schnittlinie folgt. Das Präparat befindet sich in der Fokusebene des Objektivs 47 . Die Geometrie des Strahlenganges ist derart gewählt, daß der Laserstrahl 41 während des Ablenkvorganges in der Pupille des Objektivs 47 gekippt wird.The deflection device 41 deflects the laser beam in such a way that it follows the preselected cutting line. The specimen is in the focal plane of the objective 47. The geometry of the beam path is selected such that the laser beam 41 is tilted in the pupil of the objective 47 during the deflection process.
Die Fokussierung erfolgt durch manuelles Verfahren des xy-Tisches 27 in der Richtung der optischen Achse 61 bei gleichzeitiger visueller Kontrolle des Kamerabildes durch einen Benutzer. Fig. 8 zeigt einen Ablaufplan des erfindungsgemäßen Verfahrens. Im ersten Schritt wird das Aufbringen 63 eines Präparates auf einen Objektträger 1 ausgeführt. Der Objektträger 1 , der eine Gesamtfläche definiert und eine erste Dicke 13 aufweist und über einen Teil seiner Gesamtfläche eine zweite Dicke 7 aufweist, die wesentlich kleiner ist, als die erste Dicke 13 des Objektträgers 1 trägt das Präparat 3 im Wesentlichen mit dem die, die zweite Dicke 7 aufweisenden Teil. Anschließend erfolgt das Auswählen 65 des interessierenden Anteils in einem mikroskopischen Übersichtsbild. Das Übersichtsbild wird vorzugsweise mit einem Mikroskop 25, das mit einer Videokamera 51 ausgerüstet ist, aufgenommen und auf einem Monitor 59 dargestellt. In dem Übersichtsbild kann ein interessierender Bereich markiert werden. Im folgenden Schritt erfolgt das Abtrennen 67 des ausgewählten interessierenden Anteils. Dies wird vorzugsweise mit einem fokussierten Laserstrahl 39, der entsprechend der im Übersichtsbild gemachten Markierung der über das Präparat 3 geführt wird. In einem Letzten Schritt erfolgt das Auffangen 69 des abgetrennten Anteils.The focusing takes place by manually moving the xy table 27 in the direction of the optical axis 61 with simultaneous visual control of the camera image by a user. 8 shows a flow chart of the method according to the invention. In the first step, the application 63 of a preparation is carried out on a slide 1. The specimen slide 1, which defines a total area and has a first thickness 13 and, over part of its total area, has a second thickness 7, which is significantly smaller than the first thickness 13 of the specimen slide 1, the specimen 3 essentially carries with that second thickness 7 having part. The portion of interest is then selected 65 in a microscopic overview image. The overview image is preferably recorded with a microscope 25 equipped with a video camera 51 and displayed on a monitor 59. An area of interest can be marked in the overview screen. In the following step, the selected portion of interest is separated 67. This is preferably done with a focused laser beam 39 which is guided over the preparation 3 in accordance with the marking made in the overview image. In a final step, the separated portion 69 is collected.
Die Erfindung wurde in Bezug auf eine besondere Ausführungsform beschrieben. Es ist jedoch selbstverständlich, dass Änderungen und Abwandlungen durchgeführt werden können, ohne dabei den Schutzbereich der nachstehenden Ansprüche zu verlassen. Bezugszeichenliste:The invention has been described in relation to a particular embodiment. However, it is understood that changes and modifications can be made without departing from the scope of the following claims. LIST OF REFERENCE NUMBERS
1 Objektträger1 slide
3 Präparat3 preparation
5 Rahmen5 frames
7 zweite Dicke7 second thickness
9 Folie9 slide
11 Kleber11 glue
13 erste Dicke13 first thickness
15 Objektträger15 slides
17 Innenbereich17 interior
19 Rand19 edge
21 Innenbereich21 interior
23 Mikrodissektionseinrichtung23 microdissection device
25 Mikroskop25 microscope
27 xy-Tisch27 xy table
29 Objektträgeraufnahme29 slide holder
31 Beleuchtungssystem31 lighting system
33 Kondensor33 condenser
35 Auffang behältnis35 Collection ratio
37 Laser37 lasers
39 Laserstrahl39 laser beam
41 Ablenkeinrichtung41 deflection device
43 optisches System43 optical system
45 Strahlteiler Objektiv von dem Präparat ausgehendes Licht45 beam splitters Objective light from the specimen
Kameracamera
Motorengine
Steuerungseinheitcontrol unit
Rechnercomputer
Monitor optische AchseOptical axis monitor
Aufbringenapply
AuswählenChoose
AbtrennenSplit off
Auffangen catch

Claims

Patentansprüche claims
1. Objektträger (1 , 15) für mikroskopische Präparate (3), wobei der Objektträger (1 , 15) eine Gesamtfläche definiert und eine erste Dicke (13) aufweist, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1 , 15) über einen Teil seiner Gesamtfläche eine zweite Dicke (7) aufweist, die wesentlich kleiner ist, als die erste Dicke (13) des Objektträgers (1).1. slide (1, 15) for microscopic preparations (3), the slide (1, 15) defining a total area and having a first thickness (13), characterized in that the slide (1, 15) over part of it Total area has a second thickness (7) which is significantly smaller than the first thickness (13) of the specimen slide (1).
2. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der die zweite Dicke (7) aufweisende Teil der Gesamtfläche weitgehend von dem die erste Dicke (13) aufweisenden Teil der Gesamtfläche umgeben ist.2. Slide (1, 15) according to claim 1, characterized in that the part of the total area which has the second thickness (7) is largely surrounded by the part of the total area which has the first thickness (13).
3. Objektträger (1, 15) nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1 , 15) aus einem einen Innenbereich definierenden Rahmen (5) und einer den Innenbereich (17, 21) überspannenden dünnen Folie (9) besteht, wobei der Innenbereich (17, 21) zumindest weitgehend den die zweite Dicke (7) aufweisenden Teil der Gesamtfläche ausmacht.3. slide (1, 15) according to one of claims 1 or 2, characterized in that the slide (1, 15) from a frame defining an inner region (5) and a thin film spanning the inner region (17, 21) (9 ), the inner region (17, 21) at least largely constituting the part of the total area which has the second thickness (7).
4. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass der Rahmen (5) aus Kunststoff oder aus Metall hergestellt ist.4. slide (1, 15) according to claim 3, characterized in that the frame (5) is made of plastic or metal.
5. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Folie (9) aus Polyethylennaphtalat (PEN) besteht.5. slide (1, 15) according to claim 3, characterized in that the film (9) consists of polyethylene naphthalate (PEN).
6. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Folie (9) flächig mit dem Rahmen (5) verklebt ist. 6. slide (1, 15) according to claim 3, characterized in that the film (9) is glued flat to the frame (5).
7. Objektträger (1 , 15) nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1 , 15) einstückig ausgestaltet ist.7. slide (1, 15) according to one of claims 1 or 2, characterized in that the slide (1, 15) is designed in one piece.
8. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass der die zweite Dicke (7) aufweisende Teil Licht einer bestimmten Wellenlänge oder eines bestimmten Wellenlängenbereichs absorbiert.8. slide (1, 15) according to claim 1, characterized in that the part having the second thickness (7) absorbs light of a certain wavelength or a certain wavelength range.
9. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die erste Dicke (13) im Bereich von 0,1 bis 3 mm liegt. 9. slide (1, 15) according to claim 1, characterized in that the first thickness (13) is in the range of 0.1 to 3 mm.
10. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass zweite Dicke (7) kleiner als 10 μm ist.10. slide (1, 15) according to claim 1, characterized in that the second thickness (7) is less than 10 microns.
11. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Gesamtfläche im Bereich von 10 mm2 bis 50 cm2 liegt. 11. slide (1, 15) according to claim 1, characterized in that the total area is in the range of 10 mm 2 to 50 cm 2 .
12. Objektträger (1 , 15) nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Gesamtfläche Abmessungen von 25 mm x 75 mm aufweist.12. slide (1, 15) according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the total area has dimensions of 25 mm x 75 mm.
13. Objektträger (1 , 15) nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass im Wesentlichen der die zweite Dicke (7) aufweisende Teil das mikroskopische Präparat (3) trägt.13. Object slide (1, 15) according to claim 1, characterized in that essentially the part having the second thickness (7) carries the microscopic preparation (3).
14. Mikrodissektionseinrichtung (23) zur Abtrennung eines interessierenden Anteils eines Präparates (3) mit einem Laser (37) mit einer Objektträgeraufnahme (29) für einen Objektträger (1 , 15), wobei der Objektträger (1 , 15) eine Gesamtfläche definiert und eine erste Dicke (13) aufweist, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1 , 15) über einen Teil seiner Gesamtfläche eine zweite Dicke (7) aufweist, die wesentlich kleiner ist, als die erste Dicke (13) des Objektträgers (1).14. Microdissection device (23) for separating a portion of a preparation (3) of interest with a laser (37) with a slide holder (29) for a slide (1, 15), the slide (1, 15) defining a total area and one has a first thickness (13), characterized in that the specimen slide (1, 15) has a second thickness (7) over part of its total area, which is substantially smaller than the first thickness (13) of the specimen slide (1).
15. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass der die zweite Dicke (7) aufweisende Teil der Gesamtfläche weitgehend von dem die erste Dicke (13) aufweisenden Teil der Gesamtfläche umgeben ist. 15. Microdissection device (23) according to claim 14, characterized in that the part of the total area which has the second thickness (7) is largely surrounded by the part of the total area which has the first thickness (13).
16. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach einem der Ansprüche 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1 , 15) aus einem einen Innenbereich definierenden Rahmen (5) und einer den Innenbereich (17, 21) überspannenden dünnen Folie (9) besteht, wobei der Innenbereich (17, 21) zumindest weitgehend den die zweite Dicke (7) aufweisenden Teil der Gesamtfläche ausmacht.16. Microdissection device (23) according to one of claims 14 or 15, characterized in that the specimen slide (1, 15) consists of a frame (5) defining an inner region and a thin film (9) spanning the inner region (17, 21) , The inner region (17, 21) at least largely constitutes the part of the total area which has the second thickness (7).
17. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass der Rahmen (5) aus Kunststoff oder aus Metall hergestellt ist. 17. Microdissection device (23) according to claim 16, characterized in that the frame (5) is made of plastic or metal.
18. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Folie (9) aus Polyethylennaphtalat (PEN) besteht.18. Microdissection device (23) according to claim 16, characterized in that the film (9) consists of polyethylene naphthalate (PEN).
19. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Folie (9) flächig mit dem Rahmen (5) verklebt ist.19. Microdissection device (23) according to claim 16, characterized in that the film (9) is glued flat to the frame (5).
20. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach einem der Ansprüche 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1, 15) einstückig ausgestaltet ist.20. Microdissection device (23) according to one of claims 14 or 15, characterized in that the slide (1, 15) is designed in one piece.
21. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass der die zweite Dicke (7) aufweisende Teil Licht einer bestimmten Wellenlänge oder eines bestimmten Wellenlängenbereichs absorbiert.21. Microdissection device (23) according to claim 14, characterized in that the part having the second thickness (7) absorbs light of a certain wavelength or a certain wavelength range.
22. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die erste Dicke (13) im Bereich von 0,1 bis 3 mm liegt.22. A microdissection device (23) according to claim 14, characterized in that the first thickness (13) is in the range from 0.1 to 3 mm.
23. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass zweite Dicke (7) kleiner als 10 μm ist.23. The microdissection device (23) according to claim 14, characterized in that the second thickness (7) is less than 10 μm.
24. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Gesamtfläche im Bereich von 10 mm2 bis 50 cm2 liegt. 24. Microdissection device (23) according to claim 14, characterized in that the total area is in the range from 10 mm 2 to 50 cm 2 .
25. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach einem der Ansprüche 14 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Gesamtfläche Abmessungen von 25 mm x 75 mm aufweist.25. Microdissection device (23) according to one of claims 14 to 16, characterized in that the total area has dimensions of 25 mm x 75 mm.
26. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass im Wesentlichen der die zweite Dicke (7) aufweisende Teil das mikroskopische Präparat (3) trägt.26. The microdissection device (23) according to claim 14, characterized in that essentially the part having the second thickness (7) carries the microscopic preparation (3).
27. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach einem der Ansprüche 14 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass der interessierende Anteil des Präparates (3) zusammen mit dem Bruchteil des die zweite Dicke (7) aufweisenden Teils des Objektträgers (1) abtrennbar ist, der den Anteil trägt.27. Microdissection device (23) according to any one of claims 14 to 16, characterized in that the portion of the preparation (3) of interest can be separated together with the fraction of the part of the specimen slide (1) having the second thickness (7), which portion wearing.
28. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach einem der Ansprüche 14 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1 , 15) derart angeordnet ist, daß der abgetrennte interessierende Anteil ungehindert nach unten fällt.28. Microdissection device (23) according to one of claims 14 to 16, characterized in that the slide (1, 15) is arranged in such a way that the separated portion of interest falls down unhindered.
29. Mikrodissektionseinrichtung (23) nach Anspruch 28, dadurch gekennzeichnet, dass ein Auffangbehältnis (35) zum Auffangen des abgetrennten interessierenden Anteils vorgesehen ist.29. Microdissection device (23) according to claim 28, characterized in that a collecting container (35) is provided for collecting the separated portion of interest.
30. Verfahren zur Mikrodissektion eines interessierenden Anteils eines mikroskopischen Präparats (3) gekennzeichnet durch folgende30. A method for microdissection of a portion of a microscopic preparation (3) of interest characterized by the following
Schritte:Steps:
• Aufbringen (63) eines Präparates (3) auf einen Objektträger (1 , 15), wobei der Objektträger (1 , 15) eine Gesamtfläche definiert und eine erste Dicke (13) aufweist und über einen Teil seiner Gesamtfläche eine zweite Dicke (7) aufweist, die wesentlich kleiner ist, als die erste Dicke (13) des Objektträgers (1 , 15),• Application (63) of a preparation (3) to a specimen slide (1, 15), the specimen slide (1, 15) defining a total area and having a first thickness (13) and a second thickness (7) over part of its total area which is substantially smaller than the first thickness (13) of the specimen slide (1, 15),
• Auswählen (65) des interessierenden Anteils in einem mikroskopischen Übersichtsbild und• Select (65) the portion of interest in a microscopic overview image and
Abtrennen (67) des interessierenden Anteils Detach (67) the portion of interest
31. Verfahren zur Mikrodissektion nach Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, dass der interessierende Anteil des Präparates (3) zusammen mit dem Bruchteil des die zweite Dicke (7) aufweisenden Teils des Objektträgers (1 , 15) abgetrennt wird, der den interessierenden Anteil trägt. 31. The method for microdissection according to claim 30, characterized in that the portion of the preparation (3) of interest is separated off together with the fraction of the part of the specimen slide (1, 15) which has the second thickness (7) and which carries the portion of interest.
32. Verfahren zur Mikrodissektion nach einem der Ansprüche32. Method for microdissection according to one of the claims
30 oder 31 , dadurch gekennzeichnet, dass der die zweite Dicke (7) aufweisende Teil der Gesamtfläche weitgehend von dem die erste Dicke (13) aufweisenden Teil der Gesamtfläche umgeben ist.30 or 31, characterized in that the part of the total area which has the second thickness (7) is largely surrounded by the part of the total area which has the first thickness (13).
33. Verfahren zur Mikrodissektion nach einem der Ansprüche 30 oder 31, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger (1) aus einem einen Innenbereich definierenden Rahmen (5) und einer den Innenbereich (17, 21) überspannenden dünnen Folie besteht, wobei der Innenbereich (17, 21) zumindest weitgehend den die zweite Dicke (7) aufweisenden Teil der Gesamtfläche ausmacht. 33. Method for microdissection according to one of claims 30 or 31, characterized in that the specimen slide (1) consists of a frame (5) defining an inner region and a thin film spanning the inner region (17, 21), the inner region (17 , 21) at least largely make up the part of the total area which has the second thickness (7).
34. Verfahren zur Mikrodissektion nach einem der Ansprüche34. Method for microdissection according to one of the claims
30 oder 31 , gekennzeichnet durch folgenden weiteren Schritt:30 or 31, characterized by the following further step:
• Auffangen des interessierenden Anteils mit einem geeigneten Probengefäß. • Collect the part of interest with a suitable sample vessel.
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