UA75352C2 - STRAIN OF BACTERIUM BACILLUS CIRCULANS B-65 û PRODUCER OF CYCLOMALTODEXTRINGLUKANOTRANSFERASE, METHOD FOR ISOLATION THEREOF AND USE FOR THE PREPARATION OF ?-CYCLODEXTRIN - Google Patents
STRAIN OF BACTERIUM BACILLUS CIRCULANS B-65 û PRODUCER OF CYCLOMALTODEXTRINGLUKANOTRANSFERASE, METHOD FOR ISOLATION THEREOF AND USE FOR THE PREPARATION OF ?-CYCLODEXTRIN Download PDFInfo
- Publication number
- UA75352C2 UA75352C2 UA2002108074A UA2002108074A UA75352C2 UA 75352 C2 UA75352 C2 UA 75352C2 UA 2002108074 A UA2002108074 A UA 2002108074A UA 2002108074 A UA2002108074 A UA 2002108074A UA 75352 C2 UA75352 C2 UA 75352C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- cyclodextrin
- temperature
- ase
- cht
- cyclomaltodextringlucanotransferase
- Prior art date
Links
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 title claims abstract description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 title abstract 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 41
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims abstract description 33
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims abstract description 33
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 19
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 26
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 23
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 7
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 claims 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims 1
- UBOXGVDOUJQMTN-UHFFFAOYSA-N trichloroethylene Natural products ClCC(Cl)Cl UBOXGVDOUJQMTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 abstract description 36
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 38
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 18
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 241000385736 bacterium B Species 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 208000016063 arterial thoracic outlet syndrome Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12N9/1074—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Цей винахід належить до галузі біотехнології і стосується способу одержання циклодекстрину із 2 застосуванням дії циклодекстринглюканотрансферази (рекомендована ІОРАС-ІШВ назва - цикломальтодекстринглюканотрансфераза, у подальшому ЦІГТ-аза) на крохмаль і продукування ЦгТ-ази бактерією Васіїїиз сігсшапе 8-65.This invention belongs to the field of biotechnology and relates to the method of obtaining cyclodextrin with 2 application of the action of cyclodextringlucanotransferase (recommended IORAS-ISHV name - cyclomaltodextringlucanotransferase, hereinafter referred to as CIHT-ase) on starch and production of TsgT-ase by the bacterium Vasiiiz sigsshape 8-65.
За Міжнародною Класифікацією цей винахід віднесено до таких класів: (СО8837/16; С12Р19/18;. С12М1/20;According to the International Classification, this invention is assigned to the following classes: (СО8837/16; С12Р19/18; С12М1/20;
С12М9/10). 70 Цей винахід вирішує проблему біосинтезу ЦГТ-ази, яка є придатною для одержання циклодекстрину, а також проблему одержання циклодекстрину із застосуванням дії ЦГТ-ази на крохмаль.C12M9/10). 70 This invention solves the problem of biosynthesis of CHT-ase, which is suitable for obtaining cyclodextrin, as well as the problem of obtaining cyclodextrin using the action of CHT-ase on starch.
Біосинтез ЦГТ-ази найчастіше здійснюється бактеріями, що належать до роду Васійшв5, які, переважно, продукують ЦіТ-азу, дія якої на крохмаль забезпечує одержання суміші А-, В- та Г-циклодекстринів у різних співвідношеннях, у той час як вихід одного циклодекстрину є невисоким, а їх відокремлення підвищує витрати на 12 виробництво.The biosynthesis of CHT-ase is most often carried out by bacteria belonging to the genus Vasiyshv5, which mainly produce TsiT-ase, the action of which on starch ensures the production of a mixture of A-, B- and G-cyclodextrins in different ratios, while the output of one cyclodextrin is low, and their separation increases production costs.
Біосинтез ЦГТ-ази, за цим винаходом, здійснюється новою алкаліфільною бактерією Васіїїив сігсшапе 8-65, що відрізняється продукуванням великої кількості ЦГТ-ази, яка є придатною для одержання циклодекстрину.The biosynthesis of CHT-ase, according to this invention, is carried out by a new alkaliphilic bacterium Bacillus sigsshape 8-65, which is characterized by the production of a large amount of CHT-ase, which is suitable for obtaining cyclodextrin.
Циклодекстрини одержують із застосуванням ЦгГТ-ази бактерії В. сігсцшапв, що відрізняється високим ступенем перетворення крохмалю на циклодекстрини і є специфічною щодо одержання В-циклодекстрину.Cyclodextrins are obtained with the use of TsgHT-ase of the bacterium B. sigszschapv, which is characterized by a high degree of conversion of starch into cyclodextrins and is specific for the production of B-cyclodextrin.
Циклодекстрини одержують дією ЦІГТ-ази на крохмаль. Найважливішою стадією способу одержання циклодекстринів є продукування ЦГТ-ази. ЦГТ-аза продукується деякими видами бактерій, серед яких найчастіше зустрічаються бактерії, що належать до роду ВасіШе: В. тасегапе, В. сігсшапе, В. теда(егішт, В. соадціапз, В. Іепіи5, В. опрепвіз, В. їїптпив, В. атуїюоїїдцетасіеп5, В. віеагоїпегторнії5, В. зибБіів, В. сепів. ЦГТ-аза, окрім бактерій роду Васіїйи5, продукується деякими іншими бактеріями, наприклад: КіебзіенНа с рпеитопіае, Місгососсиз Іціеив, Місгососсиз магіапе. Продуцентами ЦГТ-ази найчастіше є Васіїнв тасегапе та (3 алкаліфільні бактерії, що належать до роду ВасіПив.Cyclodextrins are obtained by the action of CIGTase on starch. The most important stage of the method of obtaining cyclodextrins is the production of CHT-ase. CHT-ase is produced by some types of bacteria, among which the most common are bacteria belonging to the genus Vasishe: V. tasegape, V. sigsshape, V. teda(egisht, V. soadtsiapz, V. Iepii5, V. oprepviz, V. ijeptpyv, B. atuiyuiidcetasiep5, B. vieagoipegtornii5, B. zybBiiv, V. sepiv. CHT-ase, in addition to bacteria of the genus Vasiiii5, is produced by some other bacteria, for example: Kiebziena s rpeitopiae, Mysgossys Icieiv, Mysgossys magiape. CGT-ase producers are most often Vasiinv tasegape and (3 alkaliphilic bacteria belonging to the genus VasiPyv.
ЦГТ-азу одержують шляхом культивування бактерій у рідкому живильному середовищі за аеробних умов у ферментері. Цей процес є доволі дорогим, а бактерії продукують певну кількість ЦГТ-ази. Дорогий спосіб одержання ЦіГТ-ази значно впливає на високу вартість кінцевого продукту, тобто циклодекстрину, що обмежує с його широке застосування у ряді промислових галузей. юCHT-az is obtained by cultivating bacteria in a liquid nutrient medium under aerobic conditions in a fermenter. This process is quite expensive, and the bacteria produce a certain amount of CHTase. The expensive method of obtaining CiHT-ase significantly affects the high cost of the final product, that is, cyclodextrin, which limits its wide application in a number of industrial sectors. yu
Оскільки циклодекстрини мають широкий діапазон можливих застосувань у великій кількості промислових галузей, а їх ціна є одним із важливих факторів, що обмежує їх застосування, вчені усього світу вишукують о шляхи підвищення економічних показників способу одержання ЦГТ-ази. З цією метою вдаються до оптимізації ою складу живильного середовища та оптимізації фізичних і хімічних факторів культивування бактерій, ведуться 3о роботи, спрямовані на підвищення продуктивності бактерій із застосуванням різних генетичних методів в (індукований мутагенез, генна інженерія), окрім того, ведуться роботи по виділенню нових мікроорганізмів, які відрізняються високим рівнем продукування Ці Т-ази.Since cyclodextrins have a wide range of possible applications in a large number of industrial fields, and their price is one of the important factors limiting their use, scientists all over the world are looking for ways to increase the economic indicators of the method of obtaining CHTase. To this end, optimization of the composition of the nutrient medium and optimization of the physical and chemical factors for the cultivation of bacteria is being carried out, work is being carried out aimed at increasing the productivity of bacteria using various genetic methods (induced mutagenesis, genetic engineering), in addition, work is being carried out to isolate new microorganisms that differ in the high level of production of this T-ase.
У способі одержання циклодекстрину дуже важливими є також характеристики ЦГТ-ази, що продукується « бактеріями. Характеристики ЦГТ-аз, що продукуються різними видами бактерій, які належать до роду Васів, З п 70 наведені у Таблиці 1. щ ;In the method of obtaining cyclodextrin, the characteristics of CHT-ase produced by "bacteria" are also very important. The characteristics of CHT-az produced by various types of bacteria belonging to the genus Vasiv, Z n 70 are given in Table 1.
Продуцент ЦГТ-ази Співвідношення одержаних |Опти-мальний |Ста-більність Опти-мальнаCHT-ase producer Ratio of obtained |Optimum |Stability Optimum
А:В:Г-циклодекстринів рн рн темпе-ратура (2С)|сть (С) йA:B:H-cyclodextrins pH pH temperature (2С)|st (С) and
Сади во шеGardens in she
Ге) (термофільна бактерія) сп Ло УНН ПИ сх У УНН ПОС ЗНН НОН я ОС Но ННGe) (thermophilic bacteria) sp Lo UNN PI shh U UNN POS ZNN NON i OS No NN
БасішеерідтостятвУ | 00очиклодеєтиу 00085000 о Васімо тасвгяив (БОЗно | Ті Ациклодеюєтиу | 0550000000200000005500003 пед 1 (алкаліфільна бактерія) он о інно НБН Б НО БА БІЙ бактерія) а 7 1 ря бактерія) т Васю зеетіетотте | 7 5055 5080 | тло 065BasicheeridtostyatvU | 00ochiklodeetiu 00085000 o Wasimo tasvgyaiv (BOZno | Ti Acyclodeiyetiu | 0550000000200000005500003 ped 1 (alkaliphilic bacterium) on o inno NBN B NO BA BIY bacterium) a 7 1 rya bacterium) t Vasyu zeetietotte | 7 5055 5080 | background 065
Басіче тесетте АМС) 0000700000010600000ваває 0000000 во Бас тасеже 01711111 вав 00300160Basic tesette AMS) 0000700000010600000 vavaye 0000000 vo Bas tasezhe 01711111 vava 00300160
Басіче тастт тою | 00027700 вв 0воло 00055000Basic tastt tou | 00027700 vv 0volo 00055000
Васю тент 01000241 во 00 толо 560056Vasyu awning 01000241 in 00 tolo 560056
БВасіювстмалє 10133156 | 60 6014) воBVasiyuvstmale 10133156 | 60 6014) in
Басйче атуоюшетеютх | веж дциклодеєтиу | 60711110 во вв бо Васіїиз вр. 1,6:4:1 5,5 6,0-9,5 65-70 65 - -Д-Basyche atuoyusheteyuth | towers dcyclodeetiu | 60711110 in vv bo Vasiiiz vr. 1.6:4:1 5.5 6.0-9.5 65-70 65 - -D-
Басов очеляв неревакно влитодеєтин| 55 | 6595 | 5Basov headed the non-revival vlytodeetin| 55 | 6595 | 5
Басйює тасееяив (ДМ 1227, (переважно Ацитедеєтин 556585 | 05000050Basyuye taseeyaiv (DM 1227, (mainly Acetideetin 556585 | 05000050
Басіюместшате0тОЗ3оє) | Воациюдеєтин | 060000005095000005500000553 бони 1201110 (термофільна бактерія)Basiyumestshate0tOZ3oye) | Voatsiudeetin | 060000005095000005500000553 bony 1201110 (thermophilic bacteria)
Басіюесетвов МсМВі.З125) 000055 00000005000000010ю план 111 (алкаліфільна бактерія)Basiyusetvov MsMVi.Z125) 000055 00000005000000010 plan 111 (alkaliphilic bacteria)
Алкаліфільнавасішезияв | 00 ол5лят 01000006 т (Алкаліфільна Басішв р. | 00000 БЛЗБА 01110111Alkalifilnavashishesiav | 00 ol5lyat 01000006 t (Alkalifilna Basishv r. | 00000 BLZBA 01110111
Наведені дані показують, що ЦГТ-ази різних мікроорганізмів демонструють схожість характеристик, але є певні різниці. ЦГТ-ази, більш над усе, різняться за специфічною кількістю утворення А-, В- абоThe given data show that CHT-ases of different microorganisms show similar characteristics, but there are certain differences. CHT-ases, above all, differ in the specific amount of formation of A-, B- or
Г-циклодекстрину. ЦГТ-ази переважно утворюють суміш А-, В- і Г-циклодекстринів у різному співвідношенні. 75 |снують, однак, ЦГТ-ази, що не утворюють А- або Г-циклодекстринів. Більшість ЦГТ-аз утворює суміш циклодекстринів, де переважає В-циклодекстрин, у той час як Г-циклодекстрин становить найменшу кількість.G-cyclodextrin. CHT-ases mainly form a mixture of A-, B- and G-cyclodextrins in different ratios. 75, however, there are CHT-ases that do not form A- or G-cyclodextrins. Most CHT-az forms a mixture of cyclodextrins, where B-cyclodextrin predominates, while G-cyclodextrin is the least abundant.
Алкаліфільні мікроорганізми продукують ЦІГТ-ази, які забезпечують одержання найбільшої кількостіAlkaliphilic microorganisms produce CIGTases, which provide the largest amount
В-циклодекстрину, порівняно з А- та Г-циклодекстринами. ЦГТ-ази алкаліфільних мікроорганізмів утворюютьB-cyclodextrin, compared to A- and G-cyclodextrins. CHT-ases of alkaliphilic microorganisms form
В-циклодекстрин, який становить більше за 7095 від загальної кількості циклодекстринів. Дані, наведені уB-cyclodextrin, which is more than 7095 of the total number of cyclodextrins. The data given in
Таблиці 1, дозволяють дійти висновку, що ЦГТ-ази, які продукуються штамами, що належать до виду Васіїїи5 тасегапз, забезпечують найвищий вихід А-циклодекстрину, порівняно з іншими циклодекстринами. Окрім В. тасегапз, ЦГТ-аза, що продукується В. атуіоїїдцегасіепз АГ 35, також забезпечує одержання А-циклодекстрину з виходом до 9595. На відміну від більшості ЦГТ-аз різних продуцентів, ЦГТ-аза, яка продукується Васійнв зМибБійЇв Мо313, утворює Г-циклодекстрин, але не утворює ні А-, ні В-циклодекстрину. Окрім того, ЦГТ-аза с 259 Васі|йє звр. А/-6 забезпечує найвищий вихід Г-циклодекстрину і В-циклодекстрину, але не утворює Ге)Tables 1 allow us to conclude that CHT-ases, which are produced by strains belonging to the species Bacillus tasegaps, provide the highest yield of A-cyclodextrin, compared to other cyclodextrins. In addition to B. tasegapz, the CHT-ase produced by B. atuioidcegasipez AG 35 also provides the production of A-cyclodextrin with a yield of up to 9595. Unlike most CHT-ases of various producers, the CHT-ase produced by Vasiinv zMibBiiYv Mo313 forms H -cyclodextrin, but does not form either A- or B-cyclodextrin. In addition, TsGT-aza p. 259 Vasi|ye zvr. A/-6 provides the highest yield of H-cyclodextrin and B-cyclodextrin, but does not form He)
А-циклодекстрину.A-cyclodextrin.
У способі одержання циклодекстринів із застосуванням ЦГТ-аз, які забезпечують одержання суміші, після завершення реакції одержують А-, В- і Г-диклодекстрини у різних співвідношеннях і підвищений вихід будь-якого циклодекстрину спричинює нижчий вихід інших циклодекстринів. Після завершення ферментативної реакції с одержання циклодекстринів, здійснюють їх відокремлення та очищення. Оскільки відокремлення та очищення ю циклодекстринів підвищує вартість способу їх одержання, бажаним є виділення мікроорганізмів, що продукуютьIn the method of producing cyclodextrins with the use of CHT-az, which ensure the preparation of a mixture, after the completion of the reaction, A-, B- and G-diclodextrins are obtained in different ratios, and the increased yield of any cyclodextrin causes a lower yield of other cyclodextrins. After completion of the enzymatic reaction with obtaining cyclodextrins, they are separated and purified. Since the separation and purification of cyclodextrins increases the cost of their production method, it is desirable to isolate microorganisms that produce
ЦіІП-ази, специфічні щодо утворення одного з циклодекстринів. і,CiIP-ases specific for the formation of one of the cyclodextrins. and,
Біосинтез ЦІГТ-ази, яку пізніше застосовують для одержання циклодекстрину, здійснюється алкаліфільною ю бактерією Васіїйиз сігсцшапе В-65. Біосинтез здійснюють шляхом культивування бактерії у ферментері у рідкому 32 середовищі з лужною реакцією (рНІ10) за аеробних умов. Після завершення біосинтезу бактеріальні клітини - видаляють центрифугуванням або фільтруванням, після чого позаклітинно продуковану ЦГТ-азу концентрують шляхом ультрафільтрування.The biosynthesis of CIHT-ase, which is later used to obtain cyclodextrin, is carried out by the alkaliphilic bacterium Vasiyiz sigschape B-65. Biosynthesis is carried out by culturing the bacterium in a fermenter in a liquid 32 medium with an alkaline reaction (pH10) under aerobic conditions. After completion of biosynthesis, bacterial cells are removed by centrifugation or filtration, after which the extracellularly produced CHT-ase is concentrated by ultrafiltration.
Дією одержаної таким чином ЦІГТ-ази на крохмаль (з концентрацією від 596 до 1595) одержують « циклодекстрини. Ферментативну реакцію здійснюють впродовж 24год. у живильному середовищі з лужною реакцією (рНВ,0) при температурі 602С. З с Новизна цього винаходу полягає у тому, що біосинтез ЦГТ-ази, що застосовується для одержанняBy the action of the TSIHT-ase obtained in this way on starch (with a concentration from 596 to 1595) "cyclodextrins" are obtained. The enzymatic reaction is carried out within 24 hours. in a nutrient medium with an alkaline reaction (pHB, 0) at a temperature of 602C. The novelty of this invention is that the biosynthesis of CHT-ase, which is used for obtaining
Із» циклодекстрину, здійснюється із застосуванням алкаліфільної бактерії В. сігсціапе 8-65. Згадана бактерія була виділена зі зразка грунту, який було взято у районі місцевості Лесковак (І езКомас). В. сігсшапе відібрали з-посеред приблизно 2000 бактеріальних колоній, які відрізнялись продукуванням ЦГТ-ази. Штам, який пізніше ідентифікували і позначили як В. сігсціапз 8-65, продемонстрував значно вищу активність продукування ЦГТ-ази і і за цією характеристикою він чітко відрізнявся від інших штамів. Таким чином, алкаліфільна В. сігсшапе 8-65 4! є новим штамом, який відрізняється тим, що продукує велику кількість ЦГТ-ази, яка може застосовуватись для одержання циклодекстринів. Бактерію Васіййз сігсціапе 8-65 депоновано у Національній Колекції о Сільськогосподарських та Промислових Мікроорганізмів (МСАТМ) - Будапешт, під таким номером: МСАТМ(Р) сло 20001277.From" cyclodextrin, is carried out using the alkaliphilic bacterium B. sigsciape 8-65. The mentioned bacterium was isolated from a soil sample that was taken in the area of Leskovak (I ezKomas). V. sigsshape was selected from among approximately 2,000 bacterial colonies that differed in the production of CHT-ase. The strain, which was later identified and designated as B. sigsciapz 8-65, demonstrated a significantly higher activity of CHT-ase production and, by this characteristic, it clearly differed from the other strains. Thus, alkaliphilic V. sigsshape 8-65 4! is a new strain, which is distinguished by the fact that it produces a large amount of CGTase, which can be used for the preparation of cyclodextrins. Bacterium Vasiyz sigsciape 8-65 has been deposited in the National Collection of Agricultural and Industrial Microorganisms (MSATM) - Budapest, under the following number: MSATM(R) slo 20001277.
Перевага застосування ЦГТ-ази, що продукується нашим алкаліфільним штамом В. сігсціапе В-65, полягає у о тому, що вона може застосовуватись для одержання В-циклодекстрину. ЦГТ-аза нашого штаму є специфічною щодо одержання В-циклодекстрину і відрізняється високим ступенем перетворення крохмалю наThe advantage of using CGTase produced by our alkaliphilic strain B. sigsciape B-65 is that it can be used to produce B-cyclodextrin. CHT-ase of our strain is specific for the production of B-cyclodextrin and is characterized by a high degree of conversion of starch to
В-циклодекстрин. За описаних умов реакції, при 595 концентрації крохмалю, ЦГТ-аза здійснює майже 4590 29 перетворення крохмалю на циклодекстрин. Із загальної кількості одержаних циклодекстринів, кількістьB-cyclodextrin. Under the described reaction conditions, at 595 starch concentration, CHT-ase performs almost 4590 29 conversion of starch to cyclodextrin. From the total amount of received cyclodextrins, the number
ГФ) В-циклодекстрину становить майже 9595, що є більш високим відсотком, порівняно з даними з доступної літератури. о Виділення та відбір ЦГІТ-аза-продукуючих бактерійGF) of B-cyclodextrin is almost 9595, which is a higher percentage compared to data from the available literature. o Isolation and selection of TsGIT-aza-producing bacteria
ЦіІПТ-аза-продукуючі бактерії були виділені з 54 різних зразків грунту, що відбирались у районі місцевості 60 Лесковак. Грунтову суспензію (від 0,5г до 1,0г) у 10мл стерильної дистильованої води нагрівали впродовж 10хв. при температурі 802С. Після нагрівання 0О,Тмл грунтової суспензії переносили на чашку з агаровим середовищемTsiIPT-aza-producing bacteria were isolated from 54 different soil samples collected in the area of area 60 Leskovak. The soil suspension (from 0.5 g to 1.0 g) in 10 ml of sterile distilled water was heated for 10 minutes. at a temperature of 802C. After heating to 0O, Tml of the soil suspension was transferred to a dish with agar medium
Парка (Рагк), яке містило: 1906 розчинного крохмалю, 0,595 пептону, 0,595 дріжджового екстракту, 0,196 К»НРО,, 0,0296 МаЗО,. 7Н2О, 195 Ма»СО»з, 0,0395 фенолфталеїну, 0,0195 геліантину, 1,595 агару, рН10,О0 (Парк (Рагк) та інші). Інкубування здійснювали при температурі 372С. Після 48год. інкубування відбирали та очищали колонії, б5 які були оточені найбільшими зонами жовтого кольору на чашках з агаровим середовищем, що мали червоне забарвлення.Park (Ragk), which contained: 1906 soluble starch, 0.595 peptone, 0.595 yeast extract, 0.196 K»HRO,, 0.0296 MaZO,. 7H2O, 195 Ma»CO»z, 0.0395 phenolphthalein, 0.0195 gelatin, 1.595 agar, pH 10.00 (Park (Ragk) and others). Incubation was carried out at a temperature of 372C. After 48 hours incubation, colonies were selected and purified, b5 which were surrounded by the largest yellow zones on plates with agar medium, which had a red color.
Кількість колоній, одержаних із різних зразків, також була різною і коливалась у межах від 0 до 200.The number of colonies obtained from different samples also varied and ranged from 0 to 200.
Колонії, що продукували ЦГТ-азу, були оточені зонами жовтого кольору різного розміру. Різні зразки грунту мали різний відсоток колоній, що продукували ЦГТ-азу. Вони становили від 095 до 9095 від загальної кількості колоній. Приймаючи до уваги розмір зони довкола колонії, були відібрані та очищені 85 з 2000 колоній, що продукували ЦГТ-азу. Після очищення на середовищі Парка, 45 колоній відібрали для додаткової обробки.Colonies producing CHT-az were surrounded by yellow zones of different sizes. Different soil samples had different percentages of colonies producing CHT-az. They ranged from 095 to 9095 of the total number of colonies. Taking into account the size of the zone around the colony, 85 out of 2000 colonies producing CHT-az were selected and purified. After purification on Park's medium, 45 colonies were selected for further processing.
Відібрані колонії перенесли на косячки агару із середовищем Хорікоші (НогіковзПї) ІІ, і після інкубування їх зберігали при температурі 1496. 70 Продукування ЦГТ-ази, для додаткового відбирання штамів, здійснювали шляхом культивування 45 відібраних алкаліфільних штамів у рідкому середовищі у колбах Ерленмейєра з переміїпуванням. Інкубування здійснювали при температурі 372 впродовж 48год. із постійним перемішуванням (200об/хв). На третій та четвертий день відбирали зразки і, після видалення бактеріальних клітин шляхом центрифугування (10000ха, 10хв, 42С), визначали амілолітичну та циклодекстриногенну активність супернатанту.Selected colonies were transferred to shoals of agar with Horikoshi (NogikovzPi) II medium, and after incubation they were stored at a temperature of 1496. 70 CHT-ase production, for additional selection of strains, was carried out by cultivating 45 selected alkaliphilic strains in a liquid medium in Erlenmeyer flasks with recirculation. Incubation was carried out at a temperature of 372 for 48 hours. with constant stirring (200 rpm). On the third and fourth day, samples were taken and, after removal of bacterial cells by centrifugation (10,000 x, 10 min, 42C), the amylolytic and cyclodextrinogenic activity of the supernatant was determined.
Амілолітична активність штаму знаходилась у межах від 0,4Од/мл до 12,17Од/мл. Найбільша кількість штамів демонструвала амілолітичну активність у межах від ТОд/мл до 2Од/мл. Кількість штамів, що демонстрували підвищену амілолітичну активність, поступово зменшувалась, завдяки чому амілолітична активність, що перевищувала 5Од/мл, була продемонстрована лише З штамами. Циклодекстриногенна активність знаходилась у межах від 0,019Од/мл до 0,530Од/мл. Циклодекстриногенна активність найбільшої кількості штамів досягала рівня 0,100Од/мл. Циклодекстриногенна активність, що перевищувала 0,200Од/мл, була продемонстрована лише одним штамом. Штам 8-65 продемонстрував амілолітичну активність на рівні 12,17Од/мл і циклодекстриногенну активність на рівні 0,530Од/мл. Ці показники були значно вищими, порівняно з показниками інших штамів.The amylolytic activity of the strain ranged from 0.4 U/ml to 12.17 U/ml. The largest number of strains demonstrated amylolytic activity in the range from TOU/ml to 2U/ml. The number of strains showing increased amylolytic activity gradually decreased, whereby amylolytic activity exceeding 5 U/ml was demonstrated only by Z strains. Cyclodextrinogenic activity ranged from 0.019 U/ml to 0.530 U/ml. The cyclodextrinogenic activity of the largest number of strains reached the level of 0.100 Units/ml. Cyclodextrinogenic activity exceeding 0.200 U/ml was demonstrated by only one strain. Strain 8-65 demonstrated amylolytic activity at the level of 12.17U/ml and cyclodextrinogenic activity at the level of 0.530U/ml. These indicators were significantly higher compared to the indicators of other strains.
Морфологічні та таксономічні характеристики бактерії ГеMorphological and taxonomic characteristics of bacteria Ge
З метою ідентифікування були встановлені морфологічні та фізіологічно-біохімічні характеристики бактерії. оFor the purpose of identification, the morphological and physiological-biochemical characteristics of the bacterium were established. at
Результати дослідження були проаналізовані за допомогою (|довідника "Вегдеуз Мапиаі ої ЗузіетаїйсThe results of the study were analyzed with the help of the guide "Vegdeuz Mapiai oi Zuzietaiys
Васіегіоїюду" (Снід (Зпеайй), 1968)). Васіїйив сігсшапе (АТОС (Американська колекція типових культур) 4513) використовувалась як еталонний штам.Wasiegioiyudu" (Snead (Zpeay, 1968)). Wasieiyv sigsshape (ATOS (American Type Culture Collection) 4513) was used as a reference strain.
Результати цих досліджень показали, що бактерія має форму палички, розмір 0,6-0,7 х 2-4мкм, є рухливою, С грампозитивною, утворює еліптичні ендоспори, росте за здаеробних та анаеробних умов і продукує каталазу. Ці ю характеристики показали, що згадана бактерія належить до роду Васійй5. Результати цих досліджень показали, що бактерія має негативну реакцію Фогес-Проскауера, продукує кислоти з глюкози, арабінози, ксилози і маніту, (зе) не продукує газу з глюкози, гідролізує желатину і крохмаль, не використовує цитратів, не продукує індолу, не ю росте на живильних середовищах з рНб,8 і 5,7 і демонструє хороший ріст на середовищах з 295, 590, 7905 і 1090 Масі. і -The results of these studies showed that the bacterium is rod-shaped, 0.6-0.7 x 2-4μm in size, motile, C gram-positive, forms elliptical endospores, grows under artificial and anaerobic conditions and produces catalase. These characteristics showed that the mentioned bacterium belongs to the genus Vasiy5. The results of these studies showed that the bacterium has a negative Voges-Proskauer reaction, produces acids from glucose, arabinose, xylose and mannitol, (ze) does not produce gas from glucose, hydrolyzes gelatin and starch, does not use citrates, does not produce indole, does not grow on nutrient media with pHb.8 and 5.7 and shows good growth on media with 295, 590, 7905 and 1090 Mass. and -
Морфологічні і фізіологічно-хімічні характеристики штаму 8-65 найбільшою мірою співпадають із характеристиками виду Васіїїиз сігсшапев. Суттєвою характеристикою штаму В-65, однак, є те, що він демонструє добрий ріст на живильному середовищі з лужною реакцією (рНІ10) і не росте на живильному середовищі з « нейтральною реакцією, наприклад, на живильному бульйоні (рнб,8), що відрізняє його від описаних членів виду Васійив сігсцапе. Штам 8-65 також відрізняється від членів виду Васіїйи5 сігсціапе тим, що росте на - с живильному середовищі з 10905 Масі. и На основі показаних характеристик штам 8-65 ідентифікували як член виду Васійшз сігсшапе. Завдяки його є» здатності до хорошого росту на живильному середовищі з лужною реакцією (рНІ0) і відсутністю росту на живильному середовищі з нейтральною реакцією, штам В-65 було позначено як алкаліфільна Васіїїив сігсшШапе В-65. Характеристики штаму В-65 наведені у Таблиці 2. -І еThe morphological and physiological-chemical characteristics of the 8-65 strain coincide to the greatest extent with the characteristics of the Vasiyiz sigsshapev species. An essential characteristic of strain B-65, however, is that it shows good growth on a nutrient medium with an alkaline reaction (pH10) and does not grow on a nutrient medium with a neutral reaction, for example, on nutrient broth (rnb,8), which distinguishes it is from the described members of the Vasiyiv sigscape species. Strain 8-65 also differs from members of the Wassii5 sigsciape species in that it grows on 10905 Masi medium. и Based on the shown characteristics, strain 8-65 was identified as a member of the species Vasiyshz sigsshape. Due to its ability to grow well on nutrient medium with an alkaline reaction (pNI0) and the absence of growth on nutrient medium with a neutral reaction, strain B-65 was designated as alkaliphilic Vasiliiv sigsshShape B-65. The characteristics of strain B-65 are shown in Table 2. -I e
Ге) Васіив сігсшапе (АТС 4513) та штаму 8-65 я. с з ов о ю Реакця Фотвслрожеуєтя 11111111 воGe) Wasiiv sigsshape (ATS 4513) and strain 8-65 ya. s z ov o yu Reaktsia Fotvslrozheuetya 11111111 vo
Продукуваннятазузтююви 111111 ов крохмалю Ки КиProduction and use of 111111 ov starch Ky Ky
Видритня цитат 11111101 продування ну 11111111 и ПО В 6,8 (живильний бульйон) й в 296 ді 22000001 зоExtraction of quotations 11111101 blowing well 11111111 and PO In 6.8 (food broth) and in 296 di 22000001 zo
Біосинтез ЦІТ-ази В. сігсшапе 8-65Biosynthesis of CIT-ase V. sigsshape 8-65
Біосинтез ЦГТ-ази В. сігсшапз В-65 здійснюють шляхом культивування на рідкому живильному середовищі з лужною реакцією (рНІ10). Живильний бульйон містить 195 розчинного крохмалю, 0,595 пептону-1, 0,595 дріжджового екстракту, 0,195 КоНРО,, 0,029060 МазОдх 7Н2О, 1956 МаоСОз.Biosynthesis of CHT-ase of B. sigsshapz B-65 is carried out by cultivation on a liquid nutrient medium with an alkaline reaction (pНИ10). The nutrient broth contains 195 soluble starch, 0.595 peptone-1, 0.595 yeast extract, 0.195 KoHRO,, 0.029060 MazOdh 7H2O, 1956 MaoSOz.
Інокулят для продукування ЦГТ-ази одержували шляхом введення культури, що відбиралась з косячка агару, до рідкого живильного середовища. Інкубування здійснювали при температурі 37 С при постійному перемішуванні (200об./хв..) впродовж 48год. До ферментера зі свіжим живильним середовищем вводили 590 інокуляту. Біосинтез ЦГТ-ази здійснювали впродовж Обгод. при температурі 37 «С із потоком стерильного сч ов повітря (0,5 об'єму повітря на 1 об'єм середовища/хв.) при швидкості обертання мішалки З00хв 7, Після Обгод. культивування бактеріальні клітини видаляють шляхом центрифугування (10000х9, лОхв, 4 25) або о відфільтровують, після чого ультрафільтванням концентрують позаклітинно продуковану ЦГТ-азу. Подібним чином продуковану ЦіПТ-азу пізніше застосовували для одержання циклодекстрину. Під час згаданого процесу визначали амілолітичну та циклодекстриногенну активність ЦГТ-ази, позаклітинно продукованої В. сігошапе су зо В-65. Ріст клітин та продукування ЦІ Т-ази В. сігсшапз В-65 у разі культивування за описаних умов наведені уThe inoculum for the production of CHT-ase was obtained by introducing the culture, which was selected from a bed of agar, into a liquid nutrient medium. Incubation was carried out at a temperature of 37 C with constant stirring (200 rpm) for 48 hours. 590 inoculum was introduced into the fermenter with fresh nutrient medium. Biosynthesis of CHT-ase was carried out during Obd. at a temperature of 37 "C with a flow of sterile air (0.5 volume of air per 1 volume of medium/min.) at a speed of rotation of the stirrer 300 min. 7, After after cultivation, bacterial cells are removed by centrifugation (10,000 x 9, lOhv, 4 25) or filtered, after which the extracellularly produced CHT-ase is concentrated by ultrafiltration. CiPT-ase produced in a similar way was later used to produce cyclodextrin. During the mentioned process, the amylolytic and cyclodextrinogenic activity of CHT-ase produced extracellularly by B. sigoshapes suzo B-65 was determined. Cell growth and production of CY T-ases of B. sigsshapz B-65 in the case of cultivation under the described conditions are shown in
Таблиці 3. юю со й зміни рН під час культивування В. сігсшапе В-65 зв чаеітед| 0000 Акивнстьцгтамоодмт 0000 (ет клин (тоню) т ния нина он По ПО НН « й - с "з ЦГТ-аза продукується під час росту клітин. До завершення фази росту рівень циклодекстриногенної активності досягає 0,20Од/мл, що дещо перевищує 30905, порівняно зі значенням активності, яке реєструється після 9бгод. культивування. Після завершення фази росту продукування ЦГТ-ази продовжується, завдяки чому 49 дісля 9бгод. культивування циклодекстриногенна активність досягає значення 0,6б0Од/мл, а рівень амілолітичної 7 активності становить 23,37Од/мл. Підвищення циклодекстриногенної та амілолітичної активності після с завершення фази росту становить майже 7095 від загального значення. Таким чином, рівень продукуванняTable 3. Water temperature and pH changes during the cultivation of B. sigsshape B-65 z chaeited| 0000 Akivnstsgtamoodmt 0000 (et klin (tonyu) tnia nina on According to PO NN "y - s" from CGT-ase is produced during cell growth. Before the end of the growth phase, the level of cyclodextrinogenic activity reaches 0.20U/ml, which is slightly higher than 30905, compared to the activity value recorded after 9 h of cultivation. After the end of the growth phase, the production of CHT-ase continues, thanks to which, after 9 h of cultivation, the cyclodextrinogenic activity reaches 0.6 b0 U/ml, and the level of amylolytic 7 activity is 23.37 U/ml The increase in cyclodextrinogenic and amylolytic activity after the end of the growth phase is almost 7095 of the total value. Thus, the level of production
ЦіІПТ-ази штамом 8-65 є значно вищим після завершення фази клітинного росту.CiIPT-ase of strain 8-65 is significantly higher after the end of the cell growth phase.
Мамі Під час культивування В. сігсцапз 8-65 відбувається пропорційне зростання амілолітичної та с 20 циклодекстриногенної активності, що дозволяє дійти висновку про те, що В. сігсшапе В-65 продукує ЦГТ-азу і не продукує жодних інших амілолітичних ферментів. ї» Цей висновок підтверджується результатами визначення вмісту циклодекстринів та відновлюваних цукрів під час інкубування ЦГТ-ази В. сігсшапз 8-65 із крохмалем. Згадані результати показали, що утворення циклодекстрину відбувається під час реакції, у той час як кількість відновлюваних цукрів не збільшується, що відбувалося б у разі присутності інших амілолітичних ферментів.Mami During the cultivation of B. sigscapz 8-65, there is a proportional increase in amylolytic and c 20 cyclodextrinogenic activity, which allows us to conclude that B. sigscapz B-65 produces CGT-ase and does not produce any other amylolytic enzymes. This conclusion is confirmed by the results of determining the content of cyclodextrins and reducing sugars during the incubation of CHT-ase of B. sigsshapz 8-65 with starch. The mentioned results showed that the formation of cyclodextrin occurs during the reaction, while the number of reducing sugars does not increase, which would happen in the presence of other amylolytic enzymes.
ГФ) Перевага згаданого способу продукування ЦіТ-ази, яка показана наведеними результатами, полягає у тому, юю що біосинтез ЦГТ-ази здійснюється новою алкаліфільною бактерією В. сігсціапз В-65, яка відрізняється позаклітинним продукуванням великої кількості ЦГТ-ази. Окрім того, інша важлива характеристика В. сігсшапвGF) The advantage of the mentioned method of producing CiT-ase, which is shown by the above results, is that the biosynthesis of CHT-ase is carried out by the new alkaliphilic bacterium B. sigstiaps B-65, which is distinguished by the extracellular production of a large amount of CHT-ase. In addition, another important characteristic of V. sigsshapv
В-65 полягає у тому, що вона, окрім ЦГТ-ази, не продукує жодних інших амілолітичних ферментів. Присутність 60 цих ферментів у препараті ЦГТ-ази у процесі одержання циклодекстрину спричинила 6 гідроліз крохмалю, тобто вона б викликала зменшення концентрації субстрату для одержання циклодекстрину, що мало б негативний вплив на кінцевий вихід.B-65 consists in the fact that, apart from CHT-ase, it does not produce any other amylolytic enzymes. The presence of 60 of these enzymes in the preparation of CHT-ase in the process of obtaining cyclodextrin caused 6 hydrolysis of starch, that is, it would cause a decrease in the concentration of the substrate for obtaining cyclodextrin, which would have a negative effect on the final yield.
Перевага біосинтезу ЦГТ-ази В. сігсшапе В-65, порівняно з деякими іншими продуцентами цього ферменту, полягає у тому, що біосинтез ЦГТ-ази В. сігсшапе В-65 відбувається у живильному середовищі з дуже високою бо лужною реакцією (рНІ10), завдяки чому зменшується ризик інфікування деякими іншими мікроорганізмами, що є дуже важливим фактором для умов промислового виробництва.The advantage of the biosynthesis of CHT-ase of B. sigsshape B-65, compared to some other producers of this enzyme, is that the biosynthesis of CHT-ase of B. sigsshape B-65 takes place in a nutrient medium with a very high alkaline reaction (pNI10), thanks to why the risk of infection with some other microorganisms is reduced, which is a very important factor for industrial production conditions.
Характеристики Ці -ази В. сігсшапе В-65Characteristics of these -ases of V. sigsshape B-65
Окрім того, що В. сігсшапз В-65 продукує велику кількість ЦГТ-ази, дуже важливим є те, що ця ЦГТ-аза відрізняється добрими властивостями щодо термостабільності та оптимальної температури її активності, а також щодо стабільності рН та оптимального рН.In addition to the fact that B. sigscapz B-65 produces a large amount of CHTase, it is very important that this CHTase has good properties in terms of thermal stability and optimal temperature of its activity, as well as in terms of pH stability and optimal pH.
ЦІТ-аза В. сігсшапзе В-65 відрізняється тим, що вона є стабільною при температурах до 55 еС, а за присутності іону Са?" її стабільність зростає до температури 602С. Окрім того, оптимальною температурою для її дії є 602С. Завдяки високій оптимальній температурі дії та високій термостабільності ЦГТ-ази В. сігсшШапе 70 В-65, спосіб одержання циклодекстрину може здійснюватись при температурі 60 С. Перевага одержання циклодекстринів при високій температурі полягає у тому, що за цих умов реакції зменшується ризик інфікування мікроорганізмами. Окрім того, при високих температурах швидкість ферментативної реакції є більшою, що скорочує тривалість процесу одержання циклодекстрину.CIT-ase of V. sigsshapze B-65 is distinguished by the fact that it is stable at temperatures up to 55 °C, and in the presence of the Ca ion, its stability increases to a temperature of 602 °C. In addition, the optimal temperature for its action is 602 °C. Due to the high optimal temperature of action and high thermal stability of CHT-ase B. sigsshShape 70 B-65, the method of obtaining cyclodextrin can be carried out at a temperature of 60 C. The advantage of obtaining cyclodextrins at a high temperature is that under these reaction conditions the risk of infection by microorganisms is reduced. at high temperatures, the speed of the enzymatic reaction is greater, which shortens the duration of the cyclodextrin production process.
ЦіПТ-аза В. сігсшапе В-65 відрізняється тим, що оптимальний для Її активності показник рН знаходиться у 72 межах від рН5,О до рнНб,0, однак ЦГТ-аза зберігає свою активність у доволі широкому діапазоні значень рН у живильному середовищі з лужною реакцією. ЦГТ-аза В. сігсцапе В-65 є стійкою у діапазоні рНб,5-10,0. Завдяки цим властивостям ЦГТ-ази, одержання циклодекстрину може здійснюватись у широкому діапазоні значень рН.CiPT-ase of B. sigsshape B-65 is distinguished by the fact that the optimal pH indicator for its activity is in the range of 72 from рН5.О to рННб.0, however, CHT-ase retains its activity in a fairly wide range of pH values in an alkaline nutrient medium reaction CHT-ase of B. sigscape B-65 is stable in the pH range of 5-10.0. Thanks to these properties of CHT-ase, cyclodextrin production can be carried out in a wide range of pH values.
Результати дослідження характеристик Ці Т-ази В. сігсшапе В-65 подані у наведеному нижче тексті.The results of the study of the characteristics of these T-ases of V. sigsshape B-65 are presented in the text below.
Вплив рН на активність ЦІГТ-азиEffect of pH on CIGTase activity
Вплив рН на активність ЦГТ-ази досліджували у діапазоні рН від 4,0 до 10,0 при температурі 4020. Для регулювання рН застосовували буфери наведеного нижче складу: 50ММ оцтовий буфер (рнН4а-5), 50мМмМ фосфатний буфер (рно-8), ХОММ карбонатний буфер (рНаВ-10). Результати цих досліджень, наведені у Таблиці 4, показують, що оптимальне для активності ЦГТ-ази значення рН знаходиться у межах від рН5,О до рНб,О, однакThe effect of pH on the activity of CHT-ase was studied in the pH range from 4.0 to 10.0 at a temperature of 4020. To adjust the pH, buffers of the following composition were used: 50 mM acetic buffer (pH4a-5), 50 mM phosphate buffer (pH-8), HOMM carbonate buffer (pNaB-10). The results of these studies, shown in Table 4, show that the optimal pH value for CHT-ase activity is in the range from pH5.0 to pHb.0, however
Цгт-аза зберігає свою активність у доволі широкому діапазоні значень рН у живильному середовищі з лужною /-/ ЄМ 29 реакцією. о активність ЦГТ-ази при різних значеннях рн се зо о (Б Фосратий ю зв в м вп в « з 5 ГЕ-А---- - -е - я с ;»Tsgt-ase retains its activity in a fairly wide range of pH values in a nutrient medium with an alkaline /-/ EM 29 reaction. o activity of CHT-ase at different values of рн se зо o (B Fosratey yu zv v m vp v " z 5 GE-A---- - -e - i s;"
Вплив рН на стабільність ЦГТ-азиThe effect of pH on the stability of CHT-ase
Вплив рН на стабільність ЦГТ-ази досліджували у діапазоні значень рН від 4,0 до 12,0. Для регулювання рн застосовували такі буфери: 5ОММ оцтовий буфер (рНА-5), Х0ММ фосфатний буфер (рнНе-7), ХОММ трис-НСІThe effect of pH on the stability of CHT-ase was studied in the range of pH values from 4.0 to 12.0. The following buffers were used to adjust the pH: 50 mM acetic buffer (pH-5), 00 mM phosphate buffer (pHNe-7), HOMM tris-HCI
Ше буфер (рНе-10) і 5О0ММ гліциновий-Масон буфер (рнН11-12). ЦГТ-азу інкубували при різних значеннях рн с впродовж год. при температурі 4092С, після чого рН доводили до 6,0 і визначали залишкову активність ферменту. Результати цих досліджень, наведені у Таблиці 5, показали, що ЦГТ-аза зберігала стійкість у о широкому діапазоні значень рН від 6,5 до 10,0. с 50 й після інкубування при різних значеннях рН о е 59 врвєна 1000006 в б5Che buffer (pH-10) and 5O0MM glycine-Mason buffer (pH11-12). CHT-az was incubated at different pH values for hours. at a temperature of 4092C, after which the pH was adjusted to 6.0 and the residual activity of the enzyme was determined. The results of these studies, shown in Table 5, showed that CHTase remained stable over a wide range of pH values from 6.5 to 10.0. c 50 and after incubation at different pH values o e 59 vrvyena 1000006 in b5
Вплив температури на активність ЦГТ-азиEffect of temperature on CHT-ase activity
Вплив температури на активність ЦГТ-ази визначали у діапазоні температур від 302С до 759С при рнНб,О.The effect of temperature on the activity of CHT-ase was determined in the temperature range from 302C to 759C at pHNb,O.
Результати цих досліджень показали, що оптимальною температурою для активності ЦГТ-ази є температура 602С (Таблиця 6). ю сю 171116 іThe results of these studies showed that the optimal temperature for CHT-ase activity is 602C (Table 6). Yu Xiu 171116 and
Вплив температури на стійкість ЦГТ-азиThe influence of temperature on the stability of CHT-ase
Вплив температури на стійкість ЦГТ-ази визначали у діапазоні температур від 302С до 802С. Дослідження термостабільності ЦГТ-ази здійснювали з/без іона Са?" з концентрацією 10мМ. ЦГТ-азу інкубували впродовжThe effect of temperature on the stability of CHT-ase was determined in the temperature range from 302C to 802C. The study of thermal stability of CHT-ase was carried out with/without Ca" ion with a concentration of 10 mM. CHT-ase was incubated for
ЗОхв. при різних температурах при рНе,5, після чого рН доводили до 6,0 і визначали залишкову активність ферменту.REFERENCE at different temperatures at pHe.5, after which the pH was adjusted to 6.0 and the residual activity of the enzyme was determined.
Результати досліджень (Таблиця 7) показали, що ЦГТ-аза залишалась стабільною у діапазоні температурдо ЄМThe results of the studies (Table 7) showed that CHT-ase remained stable in the temperature range up to EM
ББосі що у присутності іона Са?" її стабільність підвищувалась до температури 602С. Го) після інкубування при різних температурах с » ю о ни ни нн п ю зв нин нн нн м ни нн а ПО « в 111110 - с Одержання циклодекстрину "» Циклодекстрин одержували шляхом дії ЦГТ-ази В. сігсціапз В-65 на крохмаль із концентрацією у межах від " 595 до 1595. Завдяки високій оптимальній температурі під час дії та високій термостабільності ЦГТ-ази В. сігсшапа 8-65, спосіб одержання циклодекстрину можна було здійснювати при температурі до 602. Щодо значень рН, одержання циклодекстрину можна було здійснювати у широкому діапазоні від рНб,5 до рН10,0.In the presence of the Ca ion, its stability was increased to a temperature of 602C. After incubation at different temperatures, the preparation of cyclodextrin is cyclodextrin. was obtained by the action of CHT-ase of B. sigschapz B-65 on starch with a concentration ranging from "595 to 1595. Due to the high optimal temperature during the action and high thermal stability of CHT-ase of B. sigschapz 8-65, the method of obtaining cyclodextrin could be carried out at a temperature of up to 602. Regarding pH values, cyclodextrin production could be carried out in a wide range from pHb.5 to pH10.0.
Ше Вихід циклодекстрину під час інкубування 595 розчину крохмалю з різними концентраціями ЦГТ-ази при «сл температурі 402 і рНб,5 наведено у Таблиці 8. с при різних концентраціях ЦгГтТ-ази 7The yield of cyclodextrin during the incubation of 595 starch solution with different concentrations of CHT-ase at a temperature of 402 °C and pHb.5 is given in Table 8. c at different concentrations of CHT-ase 7
І» Час інку-бування (год.) | Цикло-декстрин (г/л) | Вихід цикло-декстрину2 (96) (Од/г крохмалю) вве111вм111111м11юв 1111111 о о бо вва 111 ви 111 вам 1мі |в п ПИ ПО НЯ ПОН Я ПО У т бо 7,5 293 2А 21 422I" Incubation time (hours) | Cyclo-dextrin (g/l) | Yield of cyclo-dextrin2 (96) (U/g of starch) vve111vm111111m11yuv 1111111 o o bo vva 111 vi 111 vam 1mi |v p PI PO NIA PON I PO U t bo 7.5 293 2A 21 422
11113 | 1111 юв 111113 | 1111 juv 1
ТРеакційну суміш, що містила крохмаль (595) і відповідну концентрацію ферменту, інкубували впродовж 48год. при температурі 4026.The reaction mixture containing starch (595) and the appropriate concentration of the enzyme was incubated for 48 hours. at a temperature of 4026.
Найкращі результати одержали при концентрації ЦГТ-ази б,0Од (циклодекстриногенна активність)/г крохмалю. При цій концентрації ЦГТ-аза перетворювала на циклодекстрини майже 4595 крохмалю.The best results were obtained at the concentration of CHT-ase b, 0 Units (cyclodextrinogenic activity)/g of starch. At this concentration, CHT-ase converted almost 4595 starch into cyclodextrins.
Після завершення ферментативної реакції для одержання циклодекстринів, вони можуть видалятись із реакційної суміші, наприклад, осадженням, за допомогою трихлоретилену або толуолу. З осаджених 70 циклодекстринів В-диклодекстрин може видалятись шляхом кристалізації завдяки тому, що він є значно менше розчинним порівняно з іншими циклодекстринами. Циклодекстрини, одержані шляхом осадження, розчиняють у дистильованій воді з нагріванням при температурі 10023 з подальшою кристалізацією В-циклодекстрину шляхом повільного зниження температурі до 20-25 «Сб з обережним перемішуванням. Після цього кристалиAfter completion of the enzymatic reaction to produce cyclodextrins, they can be removed from the reaction mixture, for example, by precipitation using trichlorethylene or toluene. Of the precipitated 70 cyclodextrins, B-diclodextrin can be removed by crystallization due to the fact that it is much less soluble compared to other cyclodextrins. Cyclodextrins obtained by precipitation are dissolved in distilled water with heating at a temperature of 10023 with subsequent crystallization of B-cyclodextrin by slowly lowering the temperature to 20-25 °С with careful stirring. After that, the crystals
В-циклодекстрину відфільтровують, промивають невеликою кількістю холодної води і сушать при температурі 7096.B-cyclodextrin is filtered, washed with a small amount of cold water and dried at a temperature of 7096.
Шляхом аналізу одержаних у кінці процесу циклодекстринів спектрофотометричними методами та засобами високоефективної рідинної хроматографії було встановлено, що ЦіГТ-аза В. сігсціапе В-65, за умов, опис яких було наведено вище, перетворює на циклодекстрини (головним чином, на В-циклодекстрин) до 4595 крохмалю.By analyzing the cyclodextrins obtained at the end of the process by spectrophotometric methods and high-performance liquid chromatography, it was established that CiHT-ase of B. sigsciape B-65, under the conditions described above, converts into cyclodextrins (mainly B-cyclodextrin) to 4595 starch.
Кількість В-цдиклодекстрину серед одержаних циклодекстринів становить близько 9595, у той час як кількістьThe number of B-ccyclodextrin among the cyclodextrins obtained is about 9595, while the number
А-циклодекстрину становить 2-3905, а кількість Г-диклодекстрину становить 0,6-390.A-cyclodextrin is 2-3905, and the amount of H-diclodextrin is 0.6-390.
ЦіІПТ-аза В. сігсшапе В-65 відрізняється тим, що вона є специфічною щодо утворення В-циклодекстрину і перетворює на В-циклодекстрин високий відсоток крохмалю. Унаслідок цього, застосування ЦГТ-ази нашого штаму має значні переваги для одержання В-циклодекстрину, порівняно з ЦГТ-азами інших відомих бактерій.CiIPT-ase of B. sigsshape B-65 differs in that it is specific for the formation of B-cyclodextrin and converts a high percentage of starch into B-cyclodextrin. As a result, the use of CHT-ase of our strain has significant advantages for obtaining B-cyclodextrin, compared to CHT-ases of other known bacteria.
Наведені нижче приклади ілюструють цей винахід без його обмеження. сThe following examples illustrate this invention without limiting it. with
Приклад 1Example 1
Продукування ЦІГТ-ази оProduction of CIGT-ase by
ЦіІПТ-азу одержували шляхом культивування В. сігсшапе В-65 у рідкому живильному середовищі, що містило: 196 розчинного крохмалю, 0,595 пептону, 0,595 дріжджового екстракту, 0,196 КоНРО,, 0,0296 МаЗОдх7Н2О, 190CiIPT-az was obtained by cultivating B. sigsshape B-65 in a liquid nutrient medium containing: 196 soluble starch, 0.595 peptone, 0.595 yeast extract, 0.196 CoHRO,, 0.0296 MaZOx7H2O, 190
Ма»СоО». Інокулят для продукування ЦГТ-ази одержували шляхом введення культури, що відбиралась з косячка се агару, до 450мл рідкого живильного середовища Хорікоші ІІ. Інксубування здійснювали впродовж 48год. при температурі 372С при постійному перемішуванні (200об6./хв.). юMa»SoO». The inoculum for the production of CHT-ase was obtained by introducing the culture, which was selected from a swath of se agar, into 450 ml of Horikoshi II liquid nutrient medium. Incubation was carried out for 48 hours. at a temperature of 372C with constant stirring (200 rpm). yu
До ферментера, що містив Ул живильного середовища Хорікоші ІІ, вводили 450мл інокуляту. Культивування со здійснювали впродовж Убгод. при температурі 372С із потоком стерильного повітря (0,5 об'єму повітря на 1 ю об'єм середовища/хв.) при швидкості обертання мішалки ЗбОхв 7. Під час культивування відбирали зразки і визначали амілолітичну і циклодекстриногенну активність супернатанту. Після 9бгод. культивування бактеріальні - клітини видаляли шляхом центрифугування (10000ха, 1Охв., н42С) з подальшим концентруванням позаклітинно продукованої ЦГТ-ази шляхом ультрафільтрування.450 ml of inoculum was introduced into the fermenter containing Ul of Horikoshi II nutrient medium. Cultivation of corn was carried out during the Ubgod. at a temperature of 372C with a flow of sterile air (0.5 volume of air per 1 volume of medium/min.) at a speed of rotation of the stirrer ZbOkhv 7. During cultivation, samples were taken and the amylolytic and cyclodextrinogenic activity of the supernatant was determined. After 9 p.m. bacterial cultivation - cells were removed by centrifugation (10,000 x, 100 g, n42C) followed by concentration of extracellularly produced CHT-ase by ultrafiltration.
В. сієсшапв 8-65, культивована таким чином, Через Обгод. позаклітинно продукувала ЦІГТ-азу з « амілолітичною активністю 23,4Од/мл і циклодекстриногенною активністю 0,бОд/мл. Після концентрації ферменту - шляхом ультрафільтрування, амілолітична активність становила 450Од/мл і циклодекстриногенна активність с становила 12Од/мл. з» Приклад 2V. siesshapv 8-65, cultivated in this way, through Obgod. extracellularly produced CIGT-ase with an amylolytic activity of 23.4 U/ml and a cyclodextrinogenic activity of 0.bU/ml. After concentration of the enzyme - by ultrafiltration, the amylolytic activity was 450 units/ml and the cyclodextrinogenic activity was 12 units/ml. with" Example 2
Одержання циклодекстринуProduction of cyclodextrin
Розчинний крохмаль (З00г) розводили у бл води з нагріванням. Температуру доводили до 402С, рН до 6,5. 75 До розчину крохмалю додавали ЦГТ-азу з концентрацією бОд (циклодекстриногенна активність)/г крохмалю. ї Інкубування здійснювали впродовж ЗОгод. при температурі 4096. 1 Після ЗОгод. інкубування реакцію припиняли шляхом нагрівання реакційної суміші впродовж 1Охв. при сю температурі 10092. Після цього реакційну суміш знебарвлювали активованим деревним вугіллям. Після відфільтровування активованого деревного вугілля, циклодекстрини осаджували з реакційної суміші (бл) за о допомогою трихлеретилену (1,2л). Осаджені циклодекстрини після цього відфільтровували, потім сушили приSoluble starch (300 g) was dissolved in 100 ml of heated water. The temperature was adjusted to 402C, pH to 6.5. 75 CGT-ase was added to the starch solution with a concentration of BOD (cyclodextrinogenic activity)/g of starch. Incubation was carried out during ZOh. at a temperature of 4096. 1 After ZOhr. incubation, the reaction was stopped by heating the reaction mixture for 1 hour. at this temperature of 10092. After that, the reaction mixture was decolorized with activated charcoal. After filtering activated charcoal, cyclodextrins were precipitated from the reaction mixture (bl) with the help of trichlorethylene (1.2 l). Precipitated cyclodextrins were then filtered, then dried at
Кз температурі 702С. Кінцевий вихід становив 107г циклодекстринів із ЗО0г крохмалю.With a temperature of 702C. The final yield was 107g of cyclodextrins from 300g of starch.
Одержані циклодекстрини розчиняли у 500мл дистильованої води з нагріванням при температурі 100 б.The obtained cyclodextrins were dissolved in 500 ml of distilled water with heating at a temperature of 100 °C.
Після цього здійснювали кристалізацію В-циклодекстрину шляхом поступового зниження температури до 5Б 220-259 з обережним перемішуванням. Після відстоювання впродовж ночі при температурі 4 С кристали відфільтровували, промивали невеликою кількістю холодної дистильованої води і сушили при температурі о 702С. Подібним чином одержали 75,2г В-циклодекстрину у формі кристалів білого кольору. іме) воAfter that, crystallization of B-cyclodextrin was carried out by gradually lowering the temperature to 5B 220-259 with careful mixing. After settling overnight at a temperature of 4 C, the crystals were filtered, washed with a small amount of cold distilled water and dried at a temperature of 702 C. Similarly, 75.2 g of B-cyclodextrin in the form of white crystals were obtained. name) in
Claims (13)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| YUP015300 | 2000-03-14 | ||
| PCT/YU2000/000010 WO2001068809A1 (en) | 2000-03-14 | 2000-04-06 | Bacillus circulans b-65, cyclodextrin glucanotransferase obtained therefrom and use to produce cyclodextrin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA75352C2 true UA75352C2 (en) | 2006-04-17 |
Family
ID=25548580
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002108074A UA75352C2 (en) | 2000-03-14 | 2000-06-04 | STRAIN OF BACTERIUM BACILLUS CIRCULANS B-65 û PRODUCER OF CYCLOMALTODEXTRINGLUKANOTRANSFERASE, METHOD FOR ISOLATION THEREOF AND USE FOR THE PREPARATION OF ?-CYCLODEXTRIN |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU3633400A (en) |
| RU (1) | RU2244742C2 (en) |
| UA (1) | UA75352C2 (en) |
| WO (1) | WO2001068809A1 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100374555C (en) * | 2006-01-19 | 2008-03-12 | 山东大学 | Method for preparing beta-cyclodextrin by yeast |
| RU2556117C2 (en) * | 2013-12-05 | 2015-07-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт крахмалопродуктов" (ФГБНУ ВНИИК) | METHOD OF PRODUCING β-CYCLODEXTRIN |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8104410A (en) * | 1981-09-24 | 1983-04-18 | Proefstation Voor Aardappelver | PROCESS FOR PREPARING CYCLODEXTRINE. |
| WO1989001044A1 (en) * | 1987-08-03 | 1989-02-09 | Genetics Institute, Inc. | Process for preparing cyclodextrins |
| EP0338057B1 (en) * | 1987-10-15 | 1993-12-15 | Novo Nordisk A/S | Thermostable cyclodextrin glycosyl transferase, its production and use |
| US5658390A (en) * | 1994-06-29 | 1997-08-19 | American Maize-Products Company | Purification of beta cyclodextrin |
-
2000
- 2000-04-06 WO PCT/YU2000/000010 patent/WO2001068809A1/en active Application Filing
- 2000-04-06 RU RU2002127421/13A patent/RU2244742C2/en not_active IP Right Cessation
- 2000-04-06 AU AU36334/00A patent/AU3633400A/en not_active Abandoned
- 2000-06-04 UA UA2002108074A patent/UA75352C2/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU3633400A (en) | 2001-09-24 |
| WO2001068809A1 (en) | 2001-09-20 |
| RU2244742C2 (en) | 2005-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4323651A (en) | Thermostable lactase derived from bacillus | |
| US3979261A (en) | Production of glucose isomerase by bacillus coagulans | |
| US8460897B1 (en) | Methods of culturing fungi and producing cellulases and chitin | |
| US4179335A (en) | Thermostable lactase derived from Bacillus coagulans | |
| UA75352C2 (en) | STRAIN OF BACTERIUM BACILLUS CIRCULANS B-65 û PRODUCER OF CYCLOMALTODEXTRINGLUKANOTRANSFERASE, METHOD FOR ISOLATION THEREOF AND USE FOR THE PREPARATION OF ?-CYCLODEXTRIN | |
| JP5022044B2 (en) | Method for producing new uricase | |
| FI110518B (en) | Levan sucrose enzyme, process for its preparation, microorganisms producing it and compositions containing it | |
| EP0258038B1 (en) | Use of cellulase preparations in the cultivation and use of cellulose-producing micro-organisms | |
| CN113717876B (en) | Broussonetia papyrifera leaf endophytic bacterium with lignocellulose degradation function | |
| FI89077B (en) | FOERFARANDE FOER ERHAOLLANDE AV THERMOSTABLE -AMYLASER GENOM ODLING AV SUPERPRODUCTIVE MICROORGANISM VID HOEG TEMPERATUR | |
| KR101267314B1 (en) | Novel cellulose degrading thermophile and its use | |
| Ahlawat et al. | Dye decolorization potential of spent substrates from Agaricus bisporus and Pleurotus sp. –a laboratory study | |
| RU2026348C1 (en) | Strain of bacterium serratia marcencsens - a producer of chitinase | |
| JP3433300B2 (en) | Highly producing yeast cell wall lytic enzyme and method for lysing yeast cell wall using the same | |
| JP2530998B2 (en) | A new strain belonging to the genus Thermus | |
| SU933704A1 (en) | Strain of mold aspergullum oryzae-3 alpha-amylase producer | |
| JPH0248231B2 (en) | SHINKIKISHIRANAAZEOYOBISONOSEIZOHO | |
| CN117721042A (en) | Strain for producing tunicamycin complex and application thereof | |
| EP0528612A2 (en) | Amylase capable of digesting raw starch | |
| CN117402793A (en) | Salt-tolerant alkalophilic surfactant-producing enzyme-producing bacterium and application thereof | |
| US5604128A (en) | Isolated cultures of Pestalotiopsis funerea IFO 5427 and Pestalotiopsis negleta FERM BP-3501 | |
| JPH0763364B2 (en) | Method for producing raw starch degrading enzyme | |
| JPH08275776A (en) | New chitinase and its production | |
| DK148360B (en) | PROCEDURE FOR URICASE PREPARATION | |
| JPS5811195B2 (en) | Cellulase produced by thermophilic bacterium Thielavia terrestris and its production method |