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TWI818424B - 含氮多環稠環類化合物，其藥物組合物、製備方法和用途 - Google Patents

含氮多環稠環類化合物，其藥物組合物、製備方法和用途 Download PDF

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TWI818424B
TWI818424B TW111102791A TW111102791A TWI818424B TW I818424 B TWI818424 B TW I818424B TW 111102791 A TW111102791 A TW 111102791A TW 111102791 A TW111102791 A TW 111102791A TW I818424 B TWI818424 B TW I818424B
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朱永寬
王皓
劉永波
陳肖虎
高勤
劉利彬
陳民春
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大陸商北京志健金瑞生物醫藥科技有限公司
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Abstract

本發明涉及藥物化學領域，具體涉及式I所示含氮多環稠環類化合物，其藥物組合物、製備方法和用途。本發明的化合物可以作為一種高度選擇性和非常有效的RET抑制劑，此類化合物對RET看門殘基突變體RET V804M突變、RET溶劑前沿殘基突變體G810R和其他臨床相關RET突變體以及RET-wt均有較強的抑制作用，該化合物還能顯著抑制甲狀腺癌來源的TT細胞系和各種RET突變體轉化的Ba/F3細胞的生長，且抑制作用強於選擇性RET抑制劑LOXO-292。此外，該化合物很大程度上阻斷細胞RET自磷酸化及其下游通路，並能顯著誘導TT細胞死亡。

Description

含氮多環稠環類化合物，其藥物組合物、製備方法和用途
本申請要求享有2021年2月8日向中國國家知識產權局提交的申請號為202110172167.6，名稱為“含氮多環稠環類化合物，其藥物組合物、製備方法和用途”的中國發明專利在先申請的優先權。該在先申請的全文以引用的方式併入本文。
本發明涉及藥物化學領域，具體涉及含氮多環稠環類化合物，其藥物組合物、製備方法和用途。
研究發現，多種疾病的發生與RET基因突變有密切聯繫，包括甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）（Cell, 1990, 60(4): 557-563）、甲狀腺髓樣癌（medullary thyroid carcinoma，MTC）（hyroid, 2009, 19(6): 565-612）、多發性內分泌腺瘤病2型（multiple endocrineneoplasia typeⅡ, MEN2）（Endocr Rev, 2006, 27(5): 535-560）、先天性巨結腸（Proc Natl Acad Sci USA, 2000, 97(1): 268-273）以及肺腺癌（Nat Med, 2012, 18(3): 375-377）等。目前只有KIF5B-RET、CCDC6-RET、TRIM33-RET以及NCOA4-RET這四種RET融合基因在非小細胞肺癌中被報導，而KIF5B-RET是非小細胞肺癌中最常見的RET融合基因（Cancer, 2013, 119(8): 1486-1494）。KIF5B-RET是KIF5B (kinesin family member 5B) 基因和RET基因的染色體倒置(p11；q11)形成的一種融合基因，通過全基因組和轉錄組測序，第一次在非吸煙韓國人的腺癌中被證實；KIF5B-RET在肺癌中的比例很低，在非吸煙者和腺癌患者中更常見，並與其它突變，如EGFR、KRAS、BRAF、ErbB2以及EML4-ALK相排斥（Genome Res, 2012, 22(3): 436-445）。KIF5B-RET融合蛋白包含馬達結構域和KIF5B的捲曲螺旋結構域，通過捲曲螺旋結構域的二聚化作用，該融合蛋白的RET酪胺酸激酶活性可異常活化，從而促進肺腫瘤發生（Cancer, 2011, 117(12): 2709-2718）。在Qian等的研究中（Mol Cancer, 2014, 13: 176），KIF5B-RET融合激酶被證實在體外和體內都具有顯著的致癌活性，STAT3的信號轉導途徑可能是腫瘤發生的主要下游介質。有證據顯示KIF5B-RET可調節STAT3的持續活化。KIF5B-RET融合激酶可以結合STAT3，直接磷酸化和激活STAT3-Tyr705；它也可以通過JAK/STAT3依賴性途徑，介導激活STAT3-Tyr705，並通過RAS/RAF/MEK/ERK1途徑觸發Ser727的磷酸化。
證明RET融合物在一些癌症中是驅動者，促進了已具有RET抑制活性的多激酶抑制劑（multi-kinase inhibitor）的應用，用於治療負載RET融合物蛋白質的腫瘤病人。目前尚未有批准藥劑可以用來針對性地靶向這一致癌基因，目前RET特異性癌症的治療方式僅限於多激酶抑制劑和化療，但這些非特異性治療臨床表現ORR（客觀緩釋率）不好並且有很大的脫靶毒性。再者，癌症治療的最大挑戰之一是腫瘤細胞對於治療一定階段後出現耐藥，一旦耐藥，病人的治療方式通常極為有限，且大多數例子中，癌症一直進展、不受抑制。現已發現，在甲狀腺癌等多種人類癌症中，RET激酶信號轉導具有重要作用。其中RET的看門殘基體RET 804V突變是導致腫瘤對目前批准的非選擇性RET抑制劑(如cabozantinib和vandetanib)耐藥的重要原因。分離型家族性甲狀腺髓樣癌的RET胞外或胞內結構域中的重要突變之一，即激酶ATP結合位點中的看門殘基V804M突變，導致現有藥物對ATP結合位點親和力下降。有文獻報導（RET Solvent Front Mutations Mediate Acquired Resistance to Selective RET Inhibition in RET-Driven Malignancies, Journal of Thoracic Oncology, 2020, Vol.15, No 4, 541-549）選擇性RET抑制劑LOXO-292（Selpercatinib）雖然可以避免前面提到的RET 804V突變，但在使用該選擇性RET抑制劑後，仍會出現其他突變而導致耐藥，比如在非小細胞肺癌中會導致激酶ATP結合位點中溶劑前沿的殘基G810突變：如G810R, G810S, G801C突變，導致LOXO-292對ATP結合位點下降，從而出現耐藥，癌症發生進展，因此，需要開發性能得到改善的RET突變抑制劑。
為改善上述問題，本發明提供一種如下式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽： I
其中，Q選自 或 ；
其中，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6以及X 7相同或不同，彼此獨立地選自CR 1或N；
X 8選自CR 1R 1’或NR 1；
其中每一個R 1和R 1’相同或不同，彼此獨立地選自H、鹵素、CN、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R a的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；
A選自H、鹵素、CN、OH、NH 2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R b的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；
D、E相同或不同，彼此獨立地選自H、鹵素、CN、OH、B(OH) 2、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6、OS(O) 2R 7、-O-R 21、C(O)OR 22、-P(O)R 23R 24以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R c的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基或NH 2，條件是D和E中的至少一個不為H，例如D和E中的至少一個選自-O-R 21或D和E中的至少一個選自無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R c的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基或NH 2；
R 21、R 22、R 23、R 24相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R d的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基或3-20元雜環基；
G選自鹵素以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R e的取代基取代的下列基團：至少一個雜原子選自N的5-20元雜芳基、至少一個雜原子選自N的3-20元雜環基或C 3-40環烷基-NH-；
K選自不存在、H、鹵素、CN、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基、-NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；
每一個R 2相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、-C(O)R 4或-S(O) 2R 6；
每一個R 3相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、-C(O)R 4或-S(O) 2R 6；
或者，R 2和R 3與所連的N原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：5-20元雜芳基或3-20元雜環基；
每一個R 4相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基或-NR 2R 3；
每一個R 5相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基羰基、C 2-40烯基羰基、C 2-40炔基羰基、C 3-40環烷基羰基、C 3-40環烯基羰基、C 3-40環炔基羰基、C 6-20芳基羰基、5-20元雜芳基羰基或3-20元雜環基羰基；
每一個R 6相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基或-NR 2R 3；
每一個R 7相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基或3-20元雜環基；
m為0、1、2、3、4、5、6、7或8；
每一個R 01、R 02、R 03、R 04相同或不同，彼此獨立地選自H、鹵素、CN、OH、SH、氧代（=O）、NO 2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R g的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基、-NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；
每一個R a、R b、R c、R d、R e、R f相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代（=O）、NO 2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R g的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基、-NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；
每一個R g相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代（=O）、NO 2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R h的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基、-NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；或者，當環狀基團（包括但不限於C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基以及3-20元雜環基等）的不同位置被兩個或更多個取代基取代時，所述取代基中的兩個也可以與所述環狀基團形成橋環，其中所述橋環中除橋頭原子之外的橋原子可以包含1、2、3、4或5個選自CH 2、O或NH的二價基團；
每一個R h相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代（=O）、NO 2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R i的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基、-NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；
每一個R i相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代（=O）、NO 2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個R j的取代基取代的下列基團：C 1-40烷基、C 2-40烯基、C 2-40炔基、C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、C 6-20芳基、5-20元雜芳基、3-20元雜環基、C 1-40烷基氧基、C 2-40烯基氧基、C 2-40炔基氧基、C 3-40環烷基氧基、C 3-40環烯基氧基、C 3-40環炔基氧基、C 6-20芳基氧基、5-20元雜芳基氧基、3-20元雜環基氧基、C 6-20芳基C 1-40烷基、5-20元雜芳基C 1-40烷基、3-20元雜環基C 1-40烷基、-NR 2R 3、-C(O)R 4、-OCR 5、-S(O) 2R 6或OS(O) 2R 7；
或者，當環狀基團（包括但不限於C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基以及3-20元雜環基等）的不同位置被兩個或更多個取代基取代時，所述取代基中的兩個也可以與所述環狀基團形成橋環，其中所述橋環中除橋頭原子之外的橋原子可以包含1、2、3、4或5個選自CH 2、O或NH的二價基團；
或者，當一個原子（如碳原子或氮原子）被兩個或更多個取代基取代時，所述取代基中的兩個也可以與其共同連接的原子形成無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代環狀基團（包括但不限於無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：C 3-40環烷基、C 3-40環烯基、C 3-40環炔基、5-20元雜芳基或3-20元雜環基等）。
例如，當NH 2被兩個取代基R c取代時，所述兩個取代基R c可以與它們共同鏈接的氮原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的5-20元雜芳基或3-20元雜環基，例如無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f取代的5、6或7元雜芳基或無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f取代的3、4、5、6或7元雜環基；
根據本發明的實施方案，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6以及X 7相同或不同，彼此獨立地選自CR 1或N；例如，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6以及X 7中的至少一個為N，例如1、2、3、4、5、6或7個為N；
根據本發明的實施方案，X 8選自CR 1R 1’或NR 1；
根據本發明的實施方案，每一個R 1和R 1’相同或不同，彼此獨立地選自H、鹵素、CN、OH、C 1-6烷基、C 3-10環烷基或C 1-6烷基氧基；
根據本發明的實施方案，A選自H、鹵素、CN、OH、C 1-6烷基或C 1-6烷基氧基；
根據本發明的實施方案，D、E相同或不同，彼此獨立地選自H、鹵素、CN以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R c的取代基取代的NH 2或-O-R 21，條件是D和E中的至少一個不為H，例如D和E中的至少一個選自-O-R 21或無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R c的取代基取代的NH 2；
根據本發明的實施方案，R 21選自無取代或任選被一個、兩個或更多個被R d的取代基取代的C 1-6烷基；
根據本發明的實施方案，R 2和R 3可以與所連的N原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：5-20元雜芳基或3-20元雜環基，例如5、6或7元雜芳基或3、4、5、6或7元雜環基；
根據本發明的實施方案，每一個R 01、R 02、R 03以及R 04相同或不同，彼此獨立地選自H、C 1-6烷基或C 1-6烷基氧基；
根據本發明的實施方案，每一個R a、R b、R c、R d、R e以及R f相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、NH 2、CN、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個R g的取代基取代的下列基團：C 1-6烷基、C 1-6烷基氧基、C 3-10環烷基、C 3-10環烷基氧基、C 2-6炔基氧基、3-8元雜環基或3-8元雜芳基；
根據本發明的實施方案，每一個R g相同或不同，彼此獨立地選自OH、鹵素或C 3-10環烷基；
根據本發明的實施方案，G選自鹵素、C 3-10環烷基、C 3-10環烷基-NH-、C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-12元雜環基，例如6-12元具有單環、雙環、三環或橋環結構的雜環基，其可包含1、2、3或4個獨立選自N、O或S的雜原子，條件是其中至少一個雜原子選自N，例如1、2或3個雜原子選自N。
根據本發明的實施方案，K選自-C 1-6烷基-C 3-10環烷基、-C 1-6烷基-C 6-14芳基、-C 1-6烷基-5-14元雜芳基、-C 1-6烷基-3-10元雜環基、-C(O)NH 2、-C(O)-C 3-10環烷基、-C(O)-C 6-14芳基、-C(O)-5-14元雜芳基、-C(O)-3-10元雜環基、-C(O)-C 1-6烷基-C 3-10環烷基、-C(O)-C 1-6烷基-C 6-14芳基、-C(O)-C 1-6烷基-5-14元雜芳基、-C(O)-C 1-6烷基-3-10元雜環基，其中所述C 3-10環烷基、C 6-14芳基、5-14元雜芳基、3-10元雜環基、-C(O)-C 3-10環烷基、-C(O)-C 6-14芳基、-C(O)-5-14元雜芳基、-C(O)-3-10元雜環基、-C(O)-C 1-6烷基-C 3-10環烷基、-C(O)-C 1-6烷基-C 6-14芳基、-C(O)-C 1-6烷基-5-14元雜芳基、-C(O)-C 1-6烷基-3-10元雜環基的環上或非環基團，或-C(O)NH 2還任選被一個、兩個或更多個選自OH、鹵素、CN、C 1-6烷基或C 1-6烷基氧基的基團取代；其中，所述雜環基可以為吡啶基（例如吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、吡啶-5-基或吡啶-6-基），芳基可以為苯基；
或者，K選自不存在、H、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f取代的下列基團：苯基-C(O)-、苯基-C(O)-NH-、苯基-C(O)-NH-C 1-6烷基-、苯基氧基-C(O)-NH-、苯基烷基-NH-C(O)-、苯基烷基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-、吡啶基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-NH-C 1-6烷基-、吡啶基氧基-C(O)-NH-、吡啶基烷基-NH-C(O)-、吡啶基烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基氧基-C(O)-NH-、C 1-6烷基-C(O)-、C 1-6烷基-C(O)-NH-、C 1-6烷基氧基-C(O)-NH-、C 3-8環烷基-C(O)-NH-、C 3-8環烷基氧基-C(O)-NH-、吡啶基-NH-C(O)-、C 1-6烷基-NH-C(O)-、C 3-8環烷基-NH-C(O)-、吡啶基氧基-、吡啶基烷基氧基-、吡啶基氧基烷基-、苯基氧基-、苯基烷基氧基-、苯基氧基烷基-、C 1-6烷基-S(O) 2-、C 1-6烷基-S(O) 2-NH-、C 1-6烷基-NH-S(O) 2-、吡啶基C 1-6烷基-、吡啶基-S(O) 2-、吡啶基-C 1-6烷基-S(O) 2-、吡啶基-S(O) 2-NH-、吡啶基-NH-S(O) 2-、吡啶基-C 1-6烷基-NH-、苯基C 1-6烷基-、苯基-S(O) 2-、苯基-C 1-6烷基-S(O) 2-、苯基-S(O) 2-NH-、苯基-NH-S(O) 2-、苯基-C 1-6烷基-NH-、C 1-6烷基氧基-C(O)-、 或 。
根據本發明示例性的實施方案，其中X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6以及X 7相同或不同，彼此獨立地選自CH或N；例如，X 1，X 2，X 3，X 4、X 5、X 6以及X 7中的至少一個為N，例如1、2、3、4、5、6或7個為N；
根據本發明示例性的實施方案，X 8選自NR 1；
根據本發明示例性的實施方案，R 01為甲氧基；
根據本發明示例性的實施方案，R 02為H；
根據本發明示例性的實施方案，R 03為甲基，R 04為H；
根據本發明示例性的實施方案，R 1為H；
根據本發明示例性的實施方案，A選自H、NH 2、甲基、乙基、丙基或異丙基；
根據本發明示例性的實施方案，E選自H或NH 2；
根據本發明示例性的實施方案，D選自如下基團：鹵素、BnO-、H、CN、NH 2、OCH 3、COOH、B(OH) 2、 、
根據本發明示例性的實施方案，G選自F以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R e的取代基取代的下列基團： 、
根據本發明示例性的實施方案，當基團G被R e取代時，R e可以取代構成基團G的-CH 2-或-CH=上的H，形成例如選自下列的基團： 、 、 、 或 。
根據本發明的實施方案，除非另有說明，使用波浪線標記的化學鍵表示與其他基團的連接位點。例如，當基團G中存在兩個波浪線時，其中任一個均可與X 1、X 2、X 3和X 4所在的環連接，而另一個則在基團K存在時與基團K連接。
根據本發明示例性的實施方案，當基團G的成環原子包含碳原子和氮原子時，基團G可以通過碳原子和氮原子中的一種（例如上述示例性基團中標記有波浪線的成環原子中的一個）與X 1、X 2、X 3和X 4所在的環連接，並通過碳原子和氮原子中的另一種與基團K連接。
根據本發明示例性的實施方案，K選自不存在、H、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自R f的取代基取代的下列基團：苯基-C(O)-、苯基-C(O)-NH-、苯基-C(O)-NH-C 1-6烷基-、苯基氧基-C(O)-NH-、苯基烷基-NH-C(O)-、苯基烷基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-、吡啶基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-NH-C 1-6烷基-、吡啶基氧基-C(O)-NH-、吡啶基烷基-NH-C(O)-、吡啶基烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基氧基-C(O)-NH-、C 1-6烷基-C(O)-、C 2-6烯基-C(O)-、C 1-6烷基-C(O)-NH-、C 1-6烷基氧基-C(O)-NH-、C 3-8環烷基-C(O)-NH-、C 3-8環烷基氧基-C(O)-NH-、吡啶基-NH-C(O)-、C 1-6烷基-NH-C(O)-、C 3-8環烷基-NH-C(O)-、吡啶基氧基-、吡啶基烷基氧基-、吡啶基氧基烷基-、苯基氧基-、苯基烷基氧基-、苯基氧基烷基-、C 1-6烷基-S(O) 2-、C 1-6烷基-S(O) 2-NH-、C 1-6烷基-NH-S(O) 2-、吡啶基C 1-6烷基-、吡啶基-S(O) 2-、吡啶基-C 1-6烷基-S(O) 2-、吡啶基-S(O) 2-NH-、吡啶基-NH-S(O) 2-、吡啶基-C 1-6烷基-NH-、苯基C 1-6烷基-、苯基-S(O) 2-、苯基-C 1-6烷基-S(O) 2-、苯基-S(O) 2-NH-、苯基-NH-S(O) 2-、苯基-C 1-6烷基-NH-、C 1-6烷基氧基-C(O)-、 、 、 、 、 、 、 或 。
根據本發明的實施方案，所述式I所示的化合物具有下式II或III所示的結構： ； II                                                                       III
其中，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、X 7、X 8、R 01、R 02、R 03、R 04、A、D、E、G、K以及m具有上文所述的定義。
根據本發明的實施方案，所述式I所示的化合物具有下式IV或V所示的結構： ； IV                                                           V
其中，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、R 01、R 03、R 04、A、D、E、G以及K具有上文所述的定義。
根據本發明的實施方案，所述化合物選自如下化合物：
編號 化學結構 編號 化學結構
1         134    
2         135    
3         136    
4         137    
5         138    
6         139    
7         140    
8         141    
9         142    
10     143    
11     144    
12     145    
13     146    
14     147    
15     148    
16     149    
17     150    
18     151    
19     152    
20     153    
21     154    
22     155    
23     156    
24     157    
25     158    
26     159    
27     160    
28     161    
29     162    
30     163    
31     164    
32     165    
33     166    
34     167    
35     168    
36     169    
37     170    
38     171    
39     172    
40     173    
41     174    
42     175    
43     176    
44     177    
45     178    
46     179    
47     180    
48     181    
49     182    
50     183    
51     184    
52     185    
53     186    
54     187    
55     188    
56     189    
57     190    
58     191    
59     192    
60     193    
61     194    
62     195    
63     196    
64     197    
65     198    
66     199    
67     200    
68     201    
69     202    
70     203    
71     204    
72     205    
73     206    
74     207    
75     208    
76     209    
77     210    
78     211    
79     212    
80     213    
81     214    
82     215    
83     216    
84     217    
85     218    
86     219    
87     220    
88     221    
89     222    
90     223    
91     224    
92     225    
93     226    
94     227    
95     228    
96     229    
97     230    
98     231    
99     232    
100  233    
101  234    
102  235    
103  236    
104  237    
105  238    
106  239    
107  240    
108  241    
109  242    
110  243    
111  244    
112  245    
113  246    
114  247    
115  248    
116  249    
117  250    
118  251    
119  252    
120  253    
121  254    
122  255    
123  256    
124  257    
125  258    
126  259    
127  260    
128  261    
129  262    
130  263    
131  264    
132  265    
133  266
編號 化學結構 編號 化學結構
267  283    
268  284    
269  285            
270  286            
271  287            
272  288            
273  289            
274  290            
275  291            
276  292            
277  293            
278  294            
279  295            
280  296            
281  297            
282  298            
本發明還提供式I所示化合物的製備方法，包括如下步驟： 。
其中，A、D、E、Q、G、K、X 5、X 6、X 7以及X 8具有如上所述的定義；L 1選自離去基團。
或者，所述製備方法包括如下步驟： 。
其中，A、D、E、Q、G、K、X 5、X 6、X 7以及X 8具有如上所述的定義；L 2選自離去基團。
或者，所述製備方法包括如下步驟： 。
其中，A、D、E、Q、G、K、X 5、X 6、X 7以及X 8具有如上所述的定義；L 3選自離去基團。
或者，所述製備方法包括將被保護基團取代的式I化合物在脫去所述保護基團的條件下反應，得到式I化合物。其中，根據式I化合物中取代基的不同，所述保護基團可以選自羥基保護基團以及胺基保護基團等中的至少一種。
本發明還提供式II所示化合物的製備方法，包括如下步驟： 式II-1化合物與化合物R 21-L反應得到式II化合物， 。
其中，A、E、G、K、X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、X 7、X 8以及R 21具有如上所述的定義；
D選自-O-R 21；L選自離去基團。
根據本發明的實施方案，所述離去基團選自OH、鹵素或OTf。
根據本發明的實施方案，所述反應在鹼的存在下進行，例如在碳酸鉀的存在下進行。
根據本發明的實施方案，所述反應的溫度為50~100 ℃，反應時間為1~24小時。
根據本發明的實施方案，所述反應可以在有機溶劑（如DMF）的存在下進行。
本發明還提供式II-1化合物的製備方法，包括由式II-2化合物反應製備式II-1化合物： 。
其中，A、D、E、G、K、X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、X 7以及X 8具有如上所述的定義。
根據本發明的實施方案，所述反應在水合聯胺的存在下進行，且X 7為N，X 8為NH。
根據本發明的實施方案，所述反應在有機溶劑（如DMF）的存在下進行。
根據本發明的實施方案，所述反應在加熱條件下進行。
本發明還提供上述式I-1、式I-2、式I-3、式II-1或式II-2所示的化合物。
本發明還提供式I-1、式I-2、式I-3或式II-1所示的化合物用於製備式I所示化合物的用途。
本發明還提供一種藥物組合物，其包含選自式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種，例如治療有效量的選自式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種。
根據本發明的實施方案，所述藥物組合物還包含一種、兩種或多種藥學上可接受的輔料，如載體和/或賦形劑。
根據本發明的實施方案，所述藥物組合物還進一步含有一種或多種額外的治療劑。
本發明還提供體外或體內抑制細胞增殖的方法，所述方法包括使細胞與有效量的本發明所述式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物、或藥學上可接受的鹽，或其藥物組合物接觸。
本發明還提供一種治療RET基因和/或RET激酶介導的疾病的方法，包括給予患者治療有效量的如式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種。
根據本發明的實施方案，當描述RET、RET基因或RET激酶時，其表示選自包括但不限於RET-wt、V804M、V804L、V804E、G810R、G810S、G810C、G810V和S904F的RET基因或RET激酶。
本發明還提供了在有治療需要的患者中治療RET相關疾病或病症的方法，所述方法包括向所述患者施用治療有效量的本發明式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽或其藥物組合物。
本發明還提供了在有治療需要的患者中治療癌症和/或抑制與特定癌症相關的轉移的方法，所述方法包括向所述患者施用治療有效量的本發明式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽或其藥物組合物。
本發明還提供了在有治療需要的患者中治療腸易激症候群(IBS)和/或與IBS相關的疼痛的方法，所述方法包括向所述患者施用治療有效量的本發明式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽或其藥物組合物。
本發明還提供了為癌症患者提供支持護理的方法，包括預防或最小化與治療(包括化療治療)相關的胃腸疾病（例如腹瀉），所述方法包括給予患者治療有效量的本發明式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽或其藥物組合物。
本發明還提供式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備藥物中的用途，其中所述藥物用於治療RET激酶介導的疾病、抑制RET激酶活性、治療癌症和/或抑制與特定癌症相關的轉移、治療腸易激症候群(IBS)或與IBS相關的疼痛、向癌症患者提供支持護理、治療RET相關疾病或病症、逆轉或預防對抗癌藥物的獲得性抗性、延遲和/或預防個體中抗癌藥抗藥性發展或對抗癌藥物發展抗性的可能性增加。
根據本發明的實施方案，所述RET相關疾病或病症選自RET基因和/或RET激酶介導的疾病，其中RET、RET基因或RET激酶選自包括但不限於RET-wt、V804M、V804L、V804E、G810R、G810S、G810C、G810V和S904F的RET基因或RET激酶。
本發明還提供式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備用於治療RET激酶介導的疾病的藥物中的用途。
本發明還提供式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備用於治療癌症和/或抑制與特定癌症相關的轉移的藥物中的用途。
本發明還提供式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備用於治療腸易激症候群(IBS)或與IBS相關的疼痛的藥物中的用途。
本發明還提供式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備用於向癌症患者提供支持護理的藥物中的用途，所述支持護理包括預防或最小化與治療(包括化療治療)相關的胃腸病症，例如腹瀉。
本發明還提供式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備用於抑制RET激酶活性的藥物中的用途。
本發明還提供式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備用於治療RET相關疾病或病症的藥物中的用途。
本發明還提供用於在有需要的患者中治療癌症的方法，所述方法包括(a)確定所述癌症是否與下述的失調有關：RET基因、RET激酶、或其中任何一者的表達或活性或水平（例如，RET相關的癌症）；(b)如果確定所述癌症與下述的失調有關：RET基因、RET激酶、或其中任何一者的表達或活性或水平（例如，RET相關的癌症），向患者施用治療有效量的式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物、藥學上可接受的鹽中的至少一種或其藥物組合物。
本發明還提供了用於逆轉或預防對抗癌藥物的獲得性抗性的方法，所述方法包括將治療有效量的式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種給予處於對抗癌藥物發展或具有獲得性抗性的風險的患者。
本發明還提供延遲和/或預防個體中抗癌藥抗藥性發展的方法，所述方法包括在個體中施用有效量的式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種，在此之前、期間或之後施用有效量的抗癌藥物。
本發明還提供了治療患有癌症且對抗癌藥物發展抗性的可能性增加的個體的方法，其包括對個體伴隨施用(a)有效量的式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種；和(b)有效量的抗癌藥物。
本發明還提供了治療患有RET相關癌症的個體的方法，所述癌症具有一種或多種RET抑制劑抗性突變，所述RET抑制劑抗性突變增加所述癌症對不是式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種的RET抑制劑的抗性（例如，RET-wt、在胺基酸位置804, 810, 904處的取代，例如V804M、V804L、V804E、G810R、G810S、G810C、G810V或S904F），其包括在給予另一種其他的抗癌藥物之前、期間或之後，給予式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種。
本發明還提供了治療患有RET相關癌症的個體的方法，所述方法包括在給予另一種其他的抗癌藥物之前、期間或之後，給予式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種。
本發明提供了在有需要的患者中治療癌症(例如RET相關癌症)的方法，所述方法包括向所述患者施用治療有效量的通式I的化合物或其藥學上可接受的鹽中的至少一種或其藥物組合物。
在本發明所述的任何方法或用途的一些實施方案中，癌症(例如RET相關癌症)是血液學癌症。在本發明所述的任何方法或用途的一些實施方案中，癌症(例如RET相關癌症)是實體瘤。在本發明所述的任何方法或用途的一些實施方案中，癌症(例如RET相關癌症)是肺癌(例如，小細胞肺癌或非小細胞肺癌)、乳頭狀甲狀腺癌、甲狀腺髓樣癌、分化型甲狀腺癌、復發性甲狀腺癌、難治性分化型甲狀腺癌、肺腺癌、細支氣管肺癌、2A或2B型多發性內分泌腫瘤(分別為MEN2A或MEN2B)、嗜鉻細胞瘤、甲狀旁腺增生、乳腺癌、結直腸癌(例如轉移性結腸直腸癌)、乳頭狀腎細胞癌、胃腸黏膜的神經節細胞瘤病、炎性肌纖維母細胞瘤或宮頸癌。在本發明所述的任何方法或用途的一些實施方案中，癌症(例如RET相關癌症)選自：急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、青少年癌症、腎上腺皮質癌、肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、非典型性畸胎瘤/橫紋肌樣瘤、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦幹膠質瘤、腦腫瘤、乳腺癌、支氣管腫瘤、伯基特淋巴瘤、類癌瘤、未知原發癌、心臟腫瘤、宮頸癌、兒童癌症、脊索瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓增殖性腫瘤、結腸癌、結腸直腸癌、顱咽管瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、膽管癌、原位導管癌、胚胎性腫瘤、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、成感覺神經細胞瘤、尤因肉瘤、顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞瘤、肝外膽管癌、眼癌、輸卵管癌、骨纖維組織細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸類癌瘤、胃腸道間質瘤(GIST)、生殖細胞瘤、妊娠滋養細胞疾病、神經膠質瘤、多毛細胞瘤、多毛細胞白血病、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、組織細胞增多症、霍奇金淋巴瘤、下嚥癌、眼內黑色素瘤、胰島細胞瘤、胰腺神經內分泌瘤、卡波西肉瘤、腎癌、朗格漢斯細胞組織細胞增多症、喉癌、白血病、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、骨噁性纖維組織細胞瘤、骨癌、黑色素瘤、梅克爾細胞癌、間皮瘤、轉移性鱗狀頸癌、中線狀癌、口癌、多發性內分泌瘤症候群、多發性骨髓瘤、真菌病蕈樣肉芽腫、骨髓增生異常症候群、骨髓增生異常/骨髓增殖性腫瘤、髓性白血病、骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、骨髓增殖性腫瘤、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、成神經細胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細胞肺癌、口部癌、口腔癌、唇癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳頭狀瘤病、副神經節瘤、鼻旁竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、垂體癌、漿細胞瘤、胸膜肺胚細胞瘤、妊娠和乳腺癌、原發性中樞神經系統淋巴瘤、原發腹膜癌、前列腺癌、直腸癌、腎細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞扎里症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、鱗狀頸癌、胃癌、T細胞淋巴瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌症、腎盂和輸尿管的移行細胞癌、未知原發癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌以及威爾姆氏瘤。
在一些實施方案中，血液學癌症(例如，與RET相關的癌症的血液學癌症)選自白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也稱霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤，例如，急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、急性早幼粒細胞白血病(APL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性粒細胞白血病(CML)、慢性髓單核細胞白血病(CMML)、慢性嗜中性白血病(CNL)、急性未分化型白血病(AUL)、間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴細胞白血病(PML)、幼年型單核細胞白血病(JMML)、成人T細胞ALL、三聯型骨髓發育不良的AML(AML/TMDS)、混合譜系白血病(MLL)、骨髓增生異常症候群(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)和多發性骨髓瘤(MM)。血液癌症的其它示例包括骨髓增殖性疾病(MPD)，如真性紅細胞增多症(PV)、原發性血小板減少症(ET)和特發性原發性骨髓纖維化(IMF/IPF/PMF)。在一個實施方案中，血液學癌症(例如，作為與RET相關癌症的血液學癌症)是AML或CMML。
在一些實施方案中，癌症(例如RET相關癌症)是實體瘤。實體瘤(例如，作為與RET相關癌症的實體瘤)的示例包括例如甲狀腺癌(例如乳頭狀甲狀腺癌或甲狀腺髓樣癌)、肺癌(例如肺腺癌或小細胞肺癌)、胰腺癌、胰腺導管癌、乳腺癌、結腸癌、結直腸癌、前列腺癌、腎細胞癌、頭頸腫瘤、神經母細胞瘤和黑素瘤。參見，例如，Nature Reviews Cancer, 2014, 14, 173-186。
在一些實施方案中，癌症選自肺癌、乳頭狀甲狀腺癌、甲狀腺髓樣癌、分化的甲狀腺癌、復發性甲狀腺癌、難治性分化型甲狀腺癌、2A或2B型多發性內分泌瘤(分別為MEN2A或MEN2B)、嗜鉻細胞瘤、甲狀旁腺增生、乳腺癌、結直腸癌、乳頭狀腎細胞癌、胃腸黏膜神經節細胞瘤和宮頸癌。
在一些實施方案中，所述患者是人。
式I化合物及其藥學上可接受的鹽也可用於治療RET相關的癌症。
本發明還提供用於在有需要的患者中治療腸易激症候群（IBS）的方法，所述方法包括(a)確定IBS是否與下述的失調有關：RET基因、RET激酶、或其中任何一者的表達或活性或水平；(b)如果確定IBS與下述的失調有關：RET基因、RET激酶、或其中任何一者的表達或活性或水平，向患者施用治療有效量的通式I化合物或其藥學上可接受的鹽中的至少一種或其藥物組合物。
本發明還提供了用於治療有需要的患者的腸易激症候群（IBS）的藥物組合，其包括施用(a)式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種，(b)其他治療劑，和(c)任選的至少一種藥學上可接受的運載體，用於同時、分開或依次用於治療IBS，其中式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、同位素標記物、氮氧化物或藥學上可接受的鹽中的至少一種的量和其他治療劑的量在治療IBS方面共同有效。本發明還提供了包含這種組合的藥物組合物。本發明還提供了這種組合在製備用於治療IBS的藥物中的用途。本發明還提供了商業包裝或產品，其包含這種組合作為用於同時、單獨或順序使用的組合製劑；並涉及一種治療有需要的患者的IBS的方法。
作為藥物時，可按藥物組合物的形式給予本發明化合物。可按藥劑領域中熟知的方式製備這些組合物，可通過多種途徑給予它們，這取決於是否需要局部或全身治療和所治療的區域。可局部（例如，透皮、皮膚、眼和黏膜包括鼻內、陰道和直腸遞藥）、肺（例如，通過吸入或吹入粉末或氣霧劑，包括通過噴霧器；氣管內、鼻內）、口服或腸胃外給藥。腸胃外給藥包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內或肌內注射或輸注；或顱內例如鞘內或腦室內給藥。可按單次大劑量形式腸胃外給藥，或可通過例如連續灌注泵給藥。局部給予的藥用組合物和製劑可包括透皮貼劑、軟膏、洗劑、霜劑、凝膠劑、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體劑和散劑。常規藥物載體、水、粉末或油性基質、增稠劑等可能是必須的或需要的。包衣保險套（Coated condoms）、手套等也可以是有用的。
在製備本發明的組合物時，通常將活性成分與賦形劑混合，通過賦形劑稀釋或裝入例如膠囊、小藥囊、紙或其它容器形式的這種載體內。當賦形劑用作稀釋劑時，它可以是固體、半固體或液體物質，用作溶媒、載體或活性成分的介質。因此，組合物可以是以下形式：片劑、丸劑、散劑、錠劑、小藥囊、扁囊劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑（固體或溶於液體溶媒）；含例如高達10％重量活性化合物的軟膏劑、軟和硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射溶液和無菌包裝粉末。
適宜的賦形劑的某些實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。製劑還可含有：潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；濕潤劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑例如苯甲酸甲酯和苯甲酸羥基丙酯；甜味劑和矯味劑。可通過使用本領域中已知的方法配製本發明組合物，以便在給予患者後提供速釋、緩釋或延遲釋放活性成分的作用。
可按單位劑型配製組合物，每一劑量含約5~1000 mg，更通常約100~500 mg活性成分。術語「單位劑型」是指物理上分離的適宜作為用於人患者和其它哺乳動物的單一劑量單位，各單位含有與適宜的藥物賦形劑混合的經計算可產生所需療效的預定量的活性物質。
活性化合物的有效劑量的範圍可很大，通常按藥用有效量給藥。但是，可以理解實際給予的化合物的量通常由醫師根據相關情況決定，它們包括所治療的病症、所選擇的給藥途徑、所給予的實際化合物；患者個體的年齡、重量和反應；患者症狀的嚴重程度等。
對於製備固體組合物例如片劑，將主要的活性成分與藥物賦形劑混合，形成含本發明化合物的均勻混合物的固體預製劑組合物。當稱這些預製劑組合物為均勻時，是指活性成分通常均勻地分佈在整個組合物中，致使該組合物可容易地劃分為同等有效的單位劑型例如片 劑、丸劑和膠囊劑。然後將該固體預製劑劃分為上述類型的含例如約0.1~1000 mg本發明活性成分的單位劑型。
可將本發明片劑或丸劑包衣或複合，得到提供長效作用優點的劑型。例如，片劑或丸劑含內劑量和外劑量組分，後者是前者的被膜形式。可通過腸溶層將兩種組分隔離，腸溶層用於在胃中阻止崩解，以使內組分完整通過十二指腸或延遲釋放。多種物質可用於此類腸溶層或包衣劑，此類物質包括多種高分子酸和高分子酸與此類物質如蟲膠、鯨蠟醇和醋酸纖維素的混合物。
其中可摻入本發明化合物和組合物，用於口服或注射給藥的液體形式包括水溶液、適當矯味的糖漿劑、水或油混懸液；和用食用油例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油矯味的乳劑；以及酏劑和類似的藥用溶媒。
用於吸入或吹入的組合物包括溶於藥學上可接受的水或有機溶劑或其混合物的溶液劑和混懸液、散劑。液體或固體組合物可含有如上所述適宜的藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，通過口服或鼻呼吸途徑給予組合物，實現局部或全身作用。可通過使用惰性氣體，使組合物成霧化。可直接由霧化裝置吸入霧化溶液，或霧化裝置可與面罩帷或間歇正壓呼吸機連接。可通過口服或由按適當方式遞送製劑的裝置通過鼻給予溶液、混懸液或粉末組合物。
給予患者的化合物或組合物的量不固定，取決於給予的藥物、給藥的目的例如預防或治療；患者的狀態、給藥的方式等。在治療應用時，可給予已患疾病的患者足夠治癒或至少部分抑制疾病及其併發症症狀的量的組合物。有效劑量應取決於所治療的疾病狀態和主治臨床 醫師的判斷，該判斷取決於例如疾病的嚴重程度、患者的年齡、體重和一般狀況等因素。
給予患者的組合物可以是上述藥用組合物形式。可通過常規滅菌 技術或可過濾滅菌，將這些組合物滅菌。可將水溶液包裝原樣使用，或凍乾，給藥前，將凍乾製劑與無菌水性載體混合。化合物製劑的pH通常為3~11，更優選5~9，最優選7~8。可以理解，使用某些前述賦形劑、載體或穩定劑會導致形成藥物鹽。
本發明化合物的治療劑量可根據例如以下而定：治療的具體用途、給予化合物的方式、患者的健康和狀態，以及簽處方醫師的判斷。本發明化合物在藥用組合物中的比例或濃度可不固定，取決於多種因素，它們包括劑量、化學特性（例如疏水性）和給藥途徑。例如可通過含約0.1~10％ w/v該化合物的生理緩衝水溶液提供本發明化合物，用於腸胃外給藥。某些典型劑量範圍為約1 μg/kg~約1 g/kg體重/日。在某些實施方案中，劑量範圍為約0.01 mg/kg~約100 mg/kg體重/日。劑量很可能取決於此類變量，如疾病或病症的種類和發展程度、具體患者的一般健康狀態、所選擇的化合物的相對生物學效力、賦形劑製劑及其給藥途徑。可通過由體外或動物模型試驗系統導出的劑量-反應曲線外推，得到有效劑量。
術語定義與說明
除非另有說明，本申請說明書和請求項中記載的基團和術語定義，包括其作為實例的定義、示例性的定義、優選的定義、表格中記載的定義、實施例中具體化合物的定義等，可以彼此之間任意組合和結合。這樣的組合和結合後的基團定義及化合物結構，應當屬本申請說明書記載的範圍內。
除非另有說明，本說明書和請求項記載的數值範圍相當於至少記載了其中每一個具體的整數數值。例如，數值範圍「1至40」相當於記載了數值範圍「1至10」中的每一個整數數值即1、2、3、4、5、6、7、8、9以及10，以及數值範圍「11至40」中的每一個整數數值即11、12、13、14、15、......、35、36、37、38、39以及40。應當理解，本文在描述取代基時使用的一個、兩個或更多個中，「更多個」應當是指≥3的整數，例如3、4、5、6、7、8、9或10。此外，當某些數值範圍被定義為「數」時，應當理解為記載了該範圍的兩個端點、該範圍內的每一個整數以及該範圍內的每一個小數。例如，「0至10的數」應當理解為不僅記載了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一個整數，還至少記載了其中每一個整數分別與0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或0.9的和。
術語「鹵素」表示氟、氯、溴和碘。
術語「C 1-40烷基」應理解為優選表示具有1~40個碳原子的直鏈或支鏈飽和一價烴基。例如，「C 1-6烷基」表示具有1、2、3、4、5或6個碳原子的直鏈和支鏈烷基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基、異戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它們的異構物。
術語「C 2-40烯基」應理解為優選表示直鏈或支鏈的一價烴基，其包含一個或多個雙鍵並且具有2~40個碳原子，優選「C 2-6烯基」。「C 2-6烯基」應理解為優選表示直鏈或支鏈的一價烴基，其包含一個或多個雙鍵並且具有2、3、4、5或6個碳原子，特別是2或3個碳原子（「C 2-3烯基」），應理解，在所述烯基包含多於一個雙鍵的情況下，所述雙鍵可相互分離或者共軛。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(E)-戊-3-烯基、(Z)-戊-3-烯基、(E)-戊-2-烯基、(Z)-戊-2-烯基、(E)-戊-1-烯基、(Z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(E)-己-4-烯基、(Z)-己-4-烯基、(E)-己-3-烯基、(Z)-己-3-烯基、(E)-己-2-烯基、(Z)-己-2-烯基、(E)-己-1-烯基、(Z)-己-1-烯基、異丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(E)-2-甲基丁-2-烯基、(Z)-2-甲基丁-2-烯基、(E)-1-甲基丁-2-烯基、(Z)-1-甲基丁-2-烯基、(E)-3-甲基丁-1-烯基、(Z)-3-甲基丁-1-烯基、(E)-2-甲基丁-1-烯基、(Z)-2-甲基丁-1-烯基、(E)-1-甲基丁-1-烯基、(Z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基或1-異丙基乙烯基。
術語「C 2- 40炔基」應理解為表示直鏈或支鏈的一價烴基，其包含一個或多個三鍵並且具有2~40個碳原子，優選「C 2-C 6-炔基」。術語「C 2-C 6-炔基」應理解為優選表示直鏈或支鏈的一價烴基，其包含一個或多個三鍵並且具有2、3、4、5或6個碳原子，特別是2或3個碳原子(「C 2-C 3-炔基」)。所述C 2-C 6-炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-異丙基丙-2-炔基、2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-炔基。特別地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。
術語「C 3-40環烷基」應理解為表示飽和的一價單環、雙環烴環或橋環烷烴，其具有3至40個碳原子，優選「C 3-10環烷基」。術語「C 3-10環烷基」應理解為表示飽和的一價單環、雙環烴環或橋環烷烴，其具有3、4、5、6、7、8、9或10個碳原子。所述C 3-10環烷基可以是單環烴基，如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基或環癸基，或者是雙環烴基如十氫化萘環。
術語「3-20元雜環基」意指飽和的一價單環、雙環烴環或橋環烷烴，其包含1至5個獨立選自N、O和S的雜原子的總成環原子數為3至20（如原子數為3、4、5、6、7、8、9或10等）的非芳族環狀基團，優選「3-10元雜環基」。術語「3-10元雜環基」意指飽和的一價單環、雙環烴環或橋環烷烴，其包含1至5個，優選1至3個獨立選自N、O和S的雜原子，例如1、2或3個獨立選自N、O和S的雜原子。所述雜環基可以通過所述碳原子中的任一個或氮原子（如果存在的話）與分子的其餘部分連接。特別地，所述雜環基可以包括但不限於：4元環，如氮雜環丁烷基或氧雜環丁烷基（如氮雜環丁烷-1-基）；5元環，如四氫呋喃基、二氧雜環戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基或吡咯啉基；6元環，如四氫吡喃基、呱啶基、嗎啉基、二噻烷基、硫代嗎啉基、呱嗪基或三噻烷基；或7元環，如二氮雜環庚烷基。任選地，所述雜環基可以是苯並稠合的。所述雜環基可以是雙環的，例如但不限於5,5元環，如六氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基環，或者5,6元雙環，如六氫吡咯並[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基環。含氮原子的環可以是部分不飽和的，即它可以包含一個或多個雙鍵，例如但不限於2,5-二氫-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氫噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯並稠合的，例如但不限於二氫異喹啉基。根據本發明，所述雜環基是無芳香性的。所述3-20元雜環基與其它基團相連構成本發明的化合物時，可以為3-20元雜環基上的碳原子與其它基團相連，也可以為3-20元雜環基環上雜環原子與其它基團相連。例如當3-20元雜環基選自呱嗪基時，可以為呱嗪基上的氮原子與其它基團相連。或當3-20元雜環基選自呱啶基時，可以為呱啶基環上的氮原子和其對位上的碳原子與其它基團相連。
術語「C 6-20芳基」應理解為優選表示具有6至20個碳原子的一價芳香性或部分芳香性的單環、雙環或三環烴環，優選「C 6-14芳基」。術語「C 6-14芳基」應理解為優選表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14個碳原子的一價芳香性或部分芳香性的單環、雙環或三環烴環（「C 6-14芳基」），特別是具有6個碳原子的環（「C 6芳基」），例如苯基；或聯苯基，或者是具有9個碳原子的環（「C 9芳基」），例如茚滿基或茚基，或者是具有10個碳原子的環（「C 10芳基」），例如四氫化萘基、二氫萘基或萘基，或者是具有13個碳原子的環（「C 13芳基」），例如芴基，或者是具有14個碳原子的環（「C 14芳基」），例如蒽基。當所述C 6-20芳基被取代時，其可以為單取代或者多取代。並且，對其取代位點沒有限制，例如可以為鄰位、對位或間位取代。
術語「5-20元雜芳基」應理解為包括這樣的一價單環、雙環或三環芳族環系：其具有5至20個環原子且包含1至5個獨立選自N、O和S的雜原子，例如「5-14元雜芳基」。術語「5-14元雜芳基」應理解為包括這樣的一價單環、雙環或三環芳族環系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個環原子，特別是5或6或9或10個碳原子，且其包含1至5個，優選1至3各獨立選自N、O和S的雜原子。並且，另外在每一種情況下可為苯並稠合的。特別地，雜芳基選自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它們的苯並衍生物，例如苯並呋喃基、苯並噻吩基、苯並噁唑基、苯並異噁唑基、苯並咪唑基、苯並三唑基、吲唑基、吲哚基以及異吲哚基等；或吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等以及它們的苯並衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基以及異喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它們的苯並衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、哢唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基以及吩噁嗪基等。當所述5-20元雜芳基與其它基團相連構成本發明的化合物時，可以為5-20元雜芳基環上的碳原子與其它基團相連，也可以為5-20元雜芳基環上的雜原子與其它基團相連。當所述5-20元雜芳基被取代時，其可以為單取代或者多取代。並且，對其取代位點沒有限制，例如可以為雜芳基環上與碳原子相連的氫被取代，或者雜芳基環上與雜原子相連的氫被取代。
除非另有說明，雜環基、雜芳基或亞雜芳基包括其所有可能的異構形式，例如其位置異構物。因此，對於一些說明性的非限制性實例，可以包括在其1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、11-、12-位等（如果存在）中的一個、兩個或更多個位置上取代或與其他基團鍵合的形式，包括吡啶-2-基、亞吡啶-2-基、吡啶-3-基、亞吡啶-3-基、吡啶-4-基和亞吡啶-4-基；噻吩基或亞噻吩基包括噻吩-2-基、亞噻吩-2-基、噻吩-3-基和亞噻吩-3-基；吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基以及吡唑-5-基。
術語「氧代」是指取代基中的碳原子、氮原子或硫原子被氧化後形成的氧基取代（=O）。
除非另有說明，本文中術語的定義同樣適用於包含該術語的基團，例如C 1-6烷基的定義也適用於C 1-6烷基氧基、-N(C 1-6烷基) 2、-NHC 1-6烷基或-S(O) 2-C 1-6烷基等。
本領域技術人員可以理解，式I所示化合物可以以各種藥學上可接受的鹽的形式存在。如果這些化合物具有鹼性中心，則其可以形成酸加成鹽；如果這些化合物具有酸性中心，則其可以形成鹼加成鹽；如果這些化合物既包含酸性中心（例如羧基）又包含鹼性中心（例如胺基），則其還可以形成內鹽。
本發明的化合物可以溶劑合物（如水合物）的形式存在，其中本發明的化合物包含作為所述化合物晶格的結構要素的極性溶劑，特別是例如水、甲醇或乙醇。極性溶劑特別是水的量可以化學計量比或非化學計量比存在。
根據其分子結構，本發明的化合物可以是手性的，因此可能存在各種鏡像異構物形式。因而這些化合物可以以消旋體形式或光學活性形式存在。本發明的化合物或其中間體可以通過本領域技術人員公知的化學或物理方法分離為鏡像異構物化合物，或者以此形式用於合成。在外消旋的胺的情況中，通過與光學活性的拆分試劑反應，從混合物製得非鏡像異構物。適當的拆分試劑的示例是光學活性的酸，例如R和S形式的酒石酸、二乙醯酒石酸、二苯甲醯酒石酸、扁桃酸、蘋果酸、乳酸、適當的N-保護的胺基酸（例如N-苯甲醯脯胺酸或N-苯磺醯基脯胺酸）或各種光學活性的樟腦磺酸。借助光學活性的拆分試劑（例如固定在矽膠上的二硝基苯甲醯基苯基甘胺酸、三乙酸纖維素或其它碳水化合物的衍生物或手性衍生化的異丁烯酸酯聚合物），也可有利地進行色譜鏡像體拆分。用於此目的的適當的洗脫劑是含水或含醇的溶劑混合物，例如，己烷、異丙醇或乙腈。
術語「互變異構物」是指因分子中某一原子在兩個位置迅速移動而產生的官能團異構物。本發明化合物可表現出互變異構現象。互變異構的化合物可以存在兩種或多種可相互轉化的種類。質子移變互變異構物來自兩個原子之間共價鍵合的氫原子的遷移。互變異構物一般以平衡形式存在，嘗試分離單一互變異構物時通常產生一種混合物，其理化性質與化合物的混合物是一致的。平衡的位置取決於分子內的化學特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型佔優勢；而在酚中，烯醇型佔優勢。本發明包含化合物的所有互變異構形式。
可以根據已知的方法，例如通過萃取、過濾或管柱層析來分離相應的穩定異構物。
術語「患者」是指包括哺乳動物在內的任何動物，優選小鼠、大鼠、其它齧齒類動物、兔、狗、貓、豬、牛、羊、馬或靈長類動物，最優選人。
本文中使用的短語「治療有效量」是指研究人員、獸醫、醫師或其它臨床醫師正在組織、系統、動物、個體或人中尋找的引起生物學或醫學反應的活性化合物或藥物的量，它包括以下一項或多項：（1）預防疾病：例如在易感染疾病、紊亂或病症但尚未經歷或出現疾病病理或症狀的個體中預防疾病、紊亂或病症。（2）抑制疾病：例如在正經歷或出現疾病、紊亂或病症的病理或症狀的個體中抑制疾病、紊亂或病症（即阻止病理和/或症狀的進一步發展）。（3）緩解疾病：例如在正經歷或出現疾病、紊亂或病症的病理或症狀的個體中緩解疾病、紊亂或病症（即逆轉病理和/或症狀）。
有益效果
本發明的化合物可以作為具有高度選擇性或抑制作用的RET抑制劑，對例如RET看門殘基突變體RET V804M、RET溶劑前沿殘基突變體G810R和其他臨床相關RET突變體以及RET-wt均有優異的抑制作用。並且，本發明的優選化合物高效抑制甲狀腺癌來源的TT細胞系和各種RET突變體轉化的Ba/F3細胞的生長，能夠阻斷細胞RET自磷酸化及其下游通路，並顯著誘導TT細胞死亡。此外，本發明的優選化合物還具有良好的藥代動力學性質，作為活性成分時可以較小的劑量給患者施用，從而降低患者的治療成本。
下文將結合具體實施例對本發明的技術方案做更進一步的詳細說明。應當理解，下列實施例僅為示例性地說明和解釋本發明，而不應被解釋為對本發明保護範圍的限制。凡基於本發明上述內容所實現的技術均涵蓋在本發明旨在保護的範圍內。
除非另有說明，以下實施例中使用的原料和試劑均為市售商品，或者可以通過已知方法製備。
實施例 1 ： 化合物 1 的製備
步驟A: N-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基呱啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲醯胺
反應瓶中加入1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽 (100 mg, 0.2 mmol)、5-氟-2-甲基苯甲酸 (37 mg, 0.24 mmol)、DIEA (129 mg, 1.0 mmol)、HATU (76 mg, 0.2 mmol)以及2 mL DMF，25 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品8.5 mg。m/z = 528.2[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.58 (d, J= 2.0Hz, 1H), 8.51 (d, J= 2.0Hz, 1H), 8.01-8.06 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.26-7.29 (m, 2H), 7.10-7.17 (m, 3H), 4.15 (q, J= 6.8Hz, 2H), 4.05-4.08 (m, 2H), 3.34-3.68 (m, 2H), 2.32-2.37 (m, 5H), 1.60-1.65 (m, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.38-1.45 (m, 3H).
實施例 2 ： 化合物 3 的製備
步驟A：2,4,6-三甲基苯磺酸1-胺基-3-溴-5-甲氧基吡啶-1-鎓
零度下，向2-[(胺基氧基)磺醯]-1,3,5-三甲基苯(6.8 g, 31.7 mmol)的二氯甲烷(50 mL)溶液中加入3-溴-5-甲氧基吡啶(6.0 g, 32.0 mmol)，並在零度下繼續攪拌3小時，析出大量白色固體；反應完畢後，零度下向反應體系中加入乙醚(50 mL)並攪拌10分鐘，減壓過濾，乙醚沖洗，真空乾燥得到產品(15 g)，無須再次純化，直接用於下一步反應。m/z=204[M+1] +。
步驟B：4-溴-2-氟-6-甲氧基吡唑[1,5-a]吡啶
室溫下，向裝有2,4,6-三甲基苯磺酸1-胺基-3-溴-5-甲氧基吡啶-1-鎓(1.0 g, 2.3 mmol)的DMF(30 mL)溶液中加入碳酸鉀(1.4 g, 10.0 mmol)；反應體系冷卻至0 ℃，分批次加入對甲苯磺酸2, 2-二氟乙烯基酯 (0.5 g, 2.3 mmol)，升至室溫下攪拌1小時，再90 ℃下攪拌1小時；反應完畢並冷卻至室溫，加水淬滅，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品80 mg，m/z=245[M+1] +， 1HNMR (400MHz, CDCl 3) δ 8.07 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.18 (d, 1H), 3.85 (s, 3H)。
步驟C：4-溴-2-氟-6-甲氧基吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲醛
零度下，向裝有4-溴-2-氟-6-甲氧基吡唑[1,5-a]吡啶(294 mg, 1.2 mmol)的DMF (10 mL)溶液中滴加入三氯氧磷(1.0 g，6.5 mmol)，滴完後自然升至室溫反應過夜。將反應液倒入100 mL冰水中，用2N NaOH溶液調節pH=7，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品240 mg。m/z=273[M+1] +。 1HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.51 (s, 1H), 8.72 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 3.87 (s, 3H).
步驟D：4-溴-6-甲氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向4-溴-2-氟-6-甲氧基吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲醛（273 mg, 1 mmol）的DMF（10.0 mL）溶液中加入水合聯胺(2.0 mL)，加熱至100 ℃反應12小時。加入水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=267 [M+1] +， 1HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.82 (s, 1H), 8.67 (d, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.62 (d, 1H), 3.89 (s, 3H)。
步驟E：4-溴-6-羥基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-溴-6-甲氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(267 mg, 1 mmol)、DCE(20 mL)以及氯化鋁(446 mg, 3.36 mmol)放於100 mL單口瓶中，氮氣保護，80 ℃加熱攪拌，顏色逐漸變深棕色，反應3小時, TLC檢測反應完，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=253 [M+1] +， 1HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.69 (brs, 1H), 10.23 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.42 (d, 1H)。
步驟F：4-溴-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向4-溴-6-羥基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(76 mg, 0.3 mmol)的DMF(10.0 mL)溶液中加入2-碘乙烷(47 mg, 0.3 mmol)以及碳酸鉀（83 mg, 0.6 mmol），加熱至60 ℃反應12小時。加入水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=281 [M+1] +， 1HNMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.79 (s, 1H), 8.64 (d, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 4.17 (t, 2H), 1.38 (t, 3H)。
步驟G：6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向4-溴-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（1.0 g, 3.6 mmol）中加入6-氟吡啶-3-硼酸（0.6 g, 4.3 mmol）、碳酸鈉（1.5 g, 14 mmol）、1,4-二氧六環20 ml、3 ml水以及四三苯基磷鈀（0.12 g, 0.1 mmol），置換氮氣，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=298 [M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.73 (s, 1H), 8.61-8.76(m, 2H), 8.28 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 4.16(q, 2H), 1.39(t, J=6.4Hz, 3H)。
步驟H：(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基呱啶-4-基）胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(500 mg, 1.7 mmol)、(4-甲基呱啶-4-基)碳酸叔丁酯（721 mg, 3.4 mmol）、DIEA（650 mg, 5.1 mmol）和10 ml DMSO，90 ℃反應4小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=492 [M+1] +。
步驟I：1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽
反應瓶中加入(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯（390 mg, 0.8 mmol）、5N甲醇鹽酸溶液（8 ml, 40 mmol）25 ℃反應2小時，減壓濃縮，得到產品，m/z=392 [M+1] +。
步驟J：3-氯-N-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基呱啶-4-基)2-吡啶甲醯胺
反應瓶中加入1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、3-氯吡啶-2-甲酸（37 mg, 0.24 mmol）、DIEA(85 mg, 0.66 mmol)以及HATU（84 mg, 0.22 mmol）和2 ml DMF，25 ℃反應2小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=531[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.53-8.57 (m, 3H), 8.32(s, 1H), 8.00-8.10 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.50 (dd, J1= 8.0Hz, J2= 2.4Hz, 1H), 7.28 (s,1H), 7.16 (d, J=8.4Hz, 1H), 4.15-4.23 (m, 2H), 4.07-4.10 (m, 2H), 3.35-3.42 (m, 2H), 2.33-2.37 (m, 2H), 1.60-1.65 (m, 2H), 1.45-1.48 (m, 6H)。
實施例 3 ： 化合物 4 的製備
製備方法同實例1步驟J，m/z= 549[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.76 (s, 1H), 8.57-8.62 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.19 (dd,1H), 8.19 (dd, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.11 (d, 1H), 4.15-4.22 (m, 2H), 4.06-4.10 (m, 2H), 3.33-3.36 (m, 2H), 2.30-2.33 (m, 2H), 1.58-1.65 (m, 2H), 1.43-1.47 (m, 6H)。
實施例 4 ： 化合物 8 的製備
向反應瓶中依次加入2 mL DMSO、0.5 ml DIEA、3-甲氧基-6-(呱啶-4-氧基)噠嗪（400 mg, 1.3 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（70 mg, 0.2 mmol）， 100 oC下反應48小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=487[M+1] +。
實施例 5 ： 化合物 11 的製備
步驟A：4-((叔丁基羰基)胺基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基) 吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (2.5 g, 8.4 mmol)、4-(叔丁基羰基)胺基呱啶-4-羧酸乙酯 (2.8 g, 9.2 mmol)、DIEA (3.2 g, 25.2 mmol)以及DMSO (50 ml)加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=550[M+1] +。
步驟B：4-(胺基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯
將4-((叔丁基羰基)胺基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基) 吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯（1 g, 1.8 mmol）加入10 ml MeOH/HCl (4 M)，25 ℃反應4小時，旋乾溶劑得產品，m/z=450[M+1] +。
步驟C：4-(2,6-二氟苯甲醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯
將4-(胺基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯 (120 mg, 0.26mmol)、2,6-二氟苯甲酸（38 mg, 0.24 mmol）、DIEA (100 mg, 0.78 mmol)、HATU (108 mg, 0.28 mmol)以及DMF (2 ml) 加入反應瓶，25 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=590[M+1] +。
步驟D：N-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羥甲基)呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
將4-(2,6-二氟苯甲醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯（30 mg, 0.05 mmol）以及2 ml THF加入反應瓶，0 ℃下加入LiAlH 4(1.9 mg, 0.05 mmol)，反應1小時。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=548[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.52 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.04 (dd, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (tt, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.22–7.08 (m, 3H), 4.87 (t, 1H), 4.28 (d, 2H), 4.18 (q, 2H), 3.63 (d, 2H), 3.19 (t, 2H), 2.24 (d, 2H), 1.68 (td, 4.3 Hz, 2H), 1.41 (t, 3H)。
實施例 6 ：化合物 12 的製備
步驟A:4-(3-氯甲基吡啶醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯
將4-((叔丁基羰基)胺基)1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯鹽酸鹽（120 mg, 0.26 mmol）、3-氯吡啶甲酸（37 mg, 0.24 mmol）、DIEA (100 mg, 0.78 mmol)、 HATU (108 mg, 0.28 mmol)以及DMF (2 ml)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, LCMS監測反應完全。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品80 mg, m/z=589.2[M+1] +。
步驟B: 3-氯-N-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羥甲基)呱啶-4-基)-吡啶甲醯胺
將4-(3-氯甲基吡啶醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯（30 mg, 0.05 mmol）以及2 ml THF加入反應瓶，0 ℃下加入LiAlH 4(1.9 mg, 0.05 mmol)，反應1小時。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品18 mg，m/z=547.2[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (s, 1H), 8.62–8.49 (m, 3H), 8.23 (s, 1H), 8.03 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.52 (m, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.11 (d, 1H), 4.90 (t, 1H), 4.27–4.07 (m, 5H), 3.66 (d, 2H), 3.18 (d, 1H), 2.29 (d, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.40 (t, 3H). m/z=547.2[M+1] +。
實施例 7 ：化合物 15 的製備
步驟A：叔丁基羰基(1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-（羥甲基)呱啶-4-基）胺基甲酸酯
將4-((叔丁基羰基)胺基)1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯 (2.7 g, 5 mmol)以及THF (100 ml)加入反應瓶，0 ℃加入LiBH 4(0.55 g, 25 mmol)，室溫反應12小時。LCMS監測反應完全。將反應液倒入200 mL水中，乙酸乙酯萃取，乾燥有機相，旋乾溶劑，得產品2.1 g，m/z=508[M+1] +。
步驟B：叔丁基羰基(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲醯基呱啶-4-基）胺基甲酸酯
將4-((叔丁基羰基)胺基)1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯（1 g, 2.0 mmol）加入40 ml DCM，0 ℃加入Dess-Martin (0.93 g, 2.2 mmol)反應，LCMS監測反應完全。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品0.8 g，m/z=506[M+1] +。
步驟C：叔丁基羰基(4-((2-甲胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)胺基甲酸酯
將叔丁基羰基(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲醯基呱啶-4-基)胺基甲酸酯(505 mg, 1 mmol)、二甲胺四氫呋喃溶液(2 M/L, 3 ml, 3 mmol), NaBH(OAc) 3(424 mg, 2 mmol)以及DCE (10 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時，LCMS監測反應完全。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品400 mg，m/z=534.2[M+1] +。
步驟D：4-((2-甲胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-胺鹽酸鹽
將叔丁基羰基(4-((2-甲胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-基）胺基甲酸酯（100 mg, 0.19 mmol）以及2 mL甲醇鹽酸氣加入反應瓶，25 ℃反應5小時。直接旋乾溶劑，得產品80 mg，m/z=435.2[M+1] +。
步驟E：3-氯-N-(4-((2甲胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)吡啶醯胺
將4-((2甲胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-胺（80 mg, 0.19 mmol）、3-氯吡啶甲酸（29.8 mg, 0.19 mmol）、 HATU (72.2 mg, 0.19 mmol)、DIEA (73.5 mg, 0.57 mmol)以及DMF (10 mL) 加入反應瓶，25 ℃反應15小時。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品60 mg，m/z=574.2[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.69 (s, 1H), 8.62-8.49 (m, 3H), 8.28 (s, 1H), 8.08-7.98 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.52 (dd, J= 8.2, 4.7 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.10 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.26-4.13 (m, 4H), 3.25 (d, J= 12.4 Hz, 2H), 2.70 (s, 2H), 2.38 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 2.31 (s, 6H), 2.30 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 1.63 (td, J= 13.0, 12.4, 4.1 Hz, 2H), 1.41 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 1.24 (s, 1H), 0.85 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 0.5 (s, 1H)。
實施例 8 ：化合物 17 的製備
步驟A: 叔丁基羰基 (1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((4-乙基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-4-基) 胺基甲酸酯
將叔丁基羰基(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲醯基呱啶-4-基)胺基甲酸酯（505 mg;1 mmol）、乙基呱嗪（342 mg, 3 mmol）、NaBH(OAc) 3(424 mg, 2 mmol)以及DCE (10 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, LCMS監測反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品800 mg，m/z = 604.4[M+1] +。
步驟B: 1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((4-乙基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-4-胺鹽酸鹽
將叔丁基羰基(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((4-乙基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-4-基)胺基甲酸酯（120 mg, 0.2 mmol）以及2 mL甲醇鹽酸氣加入反應瓶，25 ℃反應5小時。直接旋乾溶劑得產品100 mg，m/z=504.2[M+1] +。
步驟C: N-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((4-乙基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-4-基)-2,5-二氟苯甲醯胺
將4-((2甲胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-胺（100 mg, 0.2 mmol, 2,5-二氟苯甲酸（31.6 mg, 0.2 mmol）、HATU (76.0 mg, 0.2 mmol)、DIEA (77.4 mg, 0.6 mmol)以及DMF (10 mL)加入反應瓶，25 ℃反應15小時。將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取，乾燥有機相，旋乾溶劑，矽膠管柱層析純化得產品67 mg，m/z=644.2[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.65 (s, 1H), 8.59 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.04 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.41-7.29 (m, 3H), 7.26 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.10 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.19 (m, 4H), 3.32 (s, 1H), 3.27-3.15 (m, 2H), 2.73 (s, 2H), 2.61-2.55 (m, 7H), 2.34 (d, J= 13.3 Hz, 4H), 1.62 (m, 2H), 1.41 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 0.99 (m, 3H). m/z=644.2[M+1] +。
實施例 9 ：化合物 29 的製備
步驟A:叔丁基羰基 (1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(甲基嗎啉)呱啶-4-基) 胺基甲酸酯
將叔丁基羰基(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲醯基呱啶-4-基）胺基甲酸酯（505 mg,1 mmol）、嗎啉（261 mg, 3 mmol）、NaBH(OAc) 3(424 mg, 2 mmol)以及DCE (10 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時，LCMS監測反應完全。將反應液倒入20 mL水中，DCM萃取，乾燥有機溶劑，旋乾溶劑，管柱層析純化產品300 mg， m/z=576.2[M+1] +。
步驟B: 1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((4-乙基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-4-胺鹽酸鹽
將叔丁基羰基(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(甲基嗎啉)呱啶-4-基)胺基甲酸酯（120 mg, 0.2 mmol）以及2 mL甲醇鹽酸氣加入反應瓶，25 ℃反應5小時。直接旋乾溶劑，得產品90 mg，m/z=477.2[M+1] +。
步驟C：N-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-((4-乙基呱嗪-1-基)甲基)呱啶-4-基)-3-甲基丁醯胺
將1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(甲基嗎啉)呱啶-4-胺（90 mg, 0.19 mmol）、 異戊酸（20.4 mg, 0.2 mmol）、 HATU (76.0 mg, 0.2 mmol)、 DIEA (77.4 mg, 0.6 mmol)以及 DMF (10 mL)加入反應瓶，25 ℃反應15小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品71 mg，m/z=561.2[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) : δ 12.65 (s, 1H),δ 8.58 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.03 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.26 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.18 (m, 3H), 3.55 (m, 4H), 3.10 (m, 2H), 2.60 (s, 2H), 2.46 (m, 5H), 2.26 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 2.02 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 1.54 (dt, J= 12.8, 6.7 Hz, 2H), 1.40 (m, 3H), 1.24 (s, 1H), 0.90 (d, J= 6.2 Hz, 6H)。
實施例 10 ：化合物 31 的製備
步驟A：((3 S, 4 R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-4-羥基吡咯烷-3-基)胺基碳酸叔丁酯
依次加入5-溴-2-氟吡啶 (240 mg, 1.36 mmol)、DMSO (2.5 mL)、碳酸鉀 (340 mg, 2.47 mmol)以及((3 S, 4 R)-4-羥基吡咯烷-3-基)胺基碳酸叔丁酯 (250 mg, 1.24 mmol)，加完升溫至90 ℃反應16小時。反應結束後倒入水中，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥後，旋乾得到產品390 mg，m/z=358/360 [M+1] +。
步驟B：((3S,4S)-1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-3-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中依次加入THF (20 mL)、TMAD (260 mg, 1.51 mmol)以及BuP 3(305 mg, 1.51 mmol)，室溫攪拌30分鐘，滴加((3 R, 4 S)-1-(5-溴吡啶-2-基)-4-羥基吡咯烷-3-基)胺基碳酸叔丁酯 (270 mg, 0.75 mmol)的THF (10 mL)溶液，滴完後攪拌1分鐘，再加入2-羥基吡啶(143 mg, 1.51 mmol)後升溫至50 ℃反應3小時。反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析得產品140 mg，m/z=435/437[M+1] +。
步驟C：((3 S,4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-3-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中依次加入1,4-二氧六環 (1 mL)、((3 S,4 S)-1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-3-基)胺基碳酸叔丁酯 (60 mg, 0.14 mmol)、6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (47.5 mg, 0.12 mmol)、碳酸鉀 (32.8 mg, 0.23 mmol)、四三苯基磷鈀 (13.3 mg, 0.006 mmol)以及水 (0.5 mL)，升溫至90 ℃反應16小時。反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析得產品40 mg，m/z=641[M+1] +。
步驟D：(3 S,4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-3-胺
向50 mL的反應瓶中加入((3 S, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-3-基)胺基碳酸叔丁酯（40 mg, 0.06 mmol）、甲醇 (2 mL)以及氯化氫的二氧六環溶液 (4 M, 2 mL)，室溫攪拌2小時。反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析純化得產品6.9 mg，m/z=457[M+1] +。 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.63 (s, 1H), 8.55-8.54 (m, 2H), 8.23-8.21 (m, 1H), 7.80-8.02 (m, 1H), 7.71-7.75 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.21-7.22 (m, 1H), 7.00-7.04 (m, 1H), 6.81-6.85 (m, 1H), 6.69-6.71 (m, 1H), 5.28-5.29 (m, 1H), 4.14-4.19 (m, 2H),4.01-4.05 (m, 1H), 3.74-3.78 (m, 1H), 3.61-3.67 (m, 3H), 1.38-1.41 (m, 3H).
實施例 11 ：化合物 33 的製備
步驟A：6-苄基-1-氧雜-6-氮雜螺環[2.5]辛烷
向反應瓶中加入N-苄基-4-呱啶酮（5.7 g, 30 mmol）以及二甲基亞碸（75 mL），攪拌，加入NaH（1.44 g, 33 mmol），反應1小時，加入三甲基碘化亞碸（7.3 g, 33 mmol），室溫反應1小時，加水淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，得產品5.6 g， m/z=204[M+1] +。
步驟B：6-苄基-1-硫雜-6-氮雜螺環[2.5]辛烷
向反應瓶中依次加入6-苄基-1-氧雜-6-氮雜螺環[2.5]辛烷（5.6 g, 27.6 mmol）和甲醇（80 mL），攪拌，加入硫脲（2.3 g, 30.4 mmol），40 oC反應20小時。反應完全，加入水，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮乾，矽膠柱層析得產品4.63 g, m/z=220[M+1] +。
步驟C：1-苄基-4-甲基呱啶-4-硫醇
向反應瓶中依次加入6-苄基-1-硫雜-6-氮雜螺環[2.5]辛烷（4.3 g, 19.6 mmol）和四氫呋喃(50 mL)，降溫至5 oC，加入四氫鋁鋰（1.1 g, 29.4 mmol），保溫反應1小時，反應完全。慢慢加入5 mL水，加入氫氧化鈉飽和溶液調pH值為14，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮乾，矽膠管柱層析純化得產品3.8 g，m/z=222[M+1] +。
步驟D：1-苄基-4-(異丁基硫基)-4-甲基呱啶
向反應瓶中依次加入1-苄基-4-甲基呱啶-4-硫醇（1.3 g, 6 mmol）和N, N-二甲基甲醯胺30 mL，降溫至5 oC，加入1-溴-2-甲基丙烷（0.9 g, 6.6 mmol），加入碳酸鉀（2.5 g, 18 mmol），40 oC反應16小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1.0 g，m/z=278[M+1] +。
步驟E：1-苄基-4-(異丁基磺醯基)-4-甲基呱啶
向反應瓶中依次加入1-苄基-4-(異丁基硫基)-4-甲基呱啶（500 mg, 1.8 mmol）和二氯甲烷(6 mL)，降溫至5 oC，加入間氯過氧苯甲酸（930 mg, 5.4 mmol），室溫反應16小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品250 mg，m/z=310[M+1] +。
步驟F：4-(異丁基磺醯基)-4-甲基呱啶
向反應瓶中依次加入1-苄基-4-(異丁基磺醯基)-4-甲基呱啶（250 mg, 0.8 mmol）和乙醇（10 mL），加入10% Pd/C（200 mg），置換氫氣，室溫反應16小時，反應完全。過濾，減壓濃縮乾，得產品180 mg, m/z=220[M+1] +。
步驟G：6-乙氧基-4-(6-(4-(異丁基磺醯基)-4-甲基呱啶-1-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入2 mL DMSO、0.5 mL DIEA、4-(異丁基磺醯基)-4-甲基呱啶（180 mg, 0.82 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg, 0.34 mmol），100 oC下反應60小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品66 mg，m/z=497[M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.60 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.07 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.28 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.13 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 4.43 (d, J= 13.7 Hz, 2H), 4.18 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.16 (m, 2H), 2.96 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 2.25 (m, 1H), 2.01 (m, 2H), 1.72 (d, J= 13.0 Hz, 2H), 1.53 (s, 3H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 1.08 (d, J= 6.7 Hz, 6H).
實施例 12 ：化合物 34 的製備
向反應瓶中依次加入2 mL DMSO、0.5 mL DIEA、4-苄基磺酸基呱啶（140 mg, 0.51 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（50 mg, 0.17 mmol），100 ℃下反應20小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=517。
實施例 13 ：化合物 35 的製備
4-((二甲基胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2 -基)-N-異丁基呱啶-4-醯胺(化合物APS03035)。
步驟A：1-(5-溴吡啶-2-基)-4-甲醯基-N-異丁基呱啶-4-醯胺
向50 mL 反應瓶中加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(羥甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺 (170 mg, 0.46 mmol)以及二氯甲烷 (10 mL)，然後室溫下分批加入Dess-Marting (292 mg, 0.69 mmol)，室溫攪拌0.5小時後，亞硫酸鈉水溶液淬滅後，有機相旋乾，管柱層析分離得到產品210 mg，m/z = 368/370[M+1] +。
步驟B：1-(5-溴吡啶-2-基)-4-((二甲基胺基)甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺
向50 mL 反應瓶中加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-甲醯基-N-異丁基呱啶-4-醯胺 (70 mg, 0.19 mmol)、1, 2-二氯甲烷 (2 mL)、二甲胺 (25.7 mg, 0.57 mmol)以及醋酸硼氫化鈉 (80.8 mg, 0.38 mmol)，室溫下攪拌16小時後，水淬滅後，濃縮，管柱層析分離得到產品50 mg，m/z = 397/399[M+1] +。
步驟C：1-(5-溴吡啶-2-基)-4-((二甲基胺基)甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺
向反應瓶中依次加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-((二甲基胺基)甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺 (50 mg, 0.13 mmol)、6-乙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶 (56.2 mg, 0.15 mmol)、四三苯基磷鈀 (23 mg, 0.02 mmol)、碳酸鉀 (34.9 mg, 0.25 mmol)、水 (0.3 mL)以及1,4-二氧六環 (0.6 mL)，加熱至90 ℃反應16小時，反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析得到產品5 mg，m/z=519[M+1] +。 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (s, 1H), 8.50-8.56 (m, 2H), 8.00-8.03 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.25-7.25 (m, 1H), 7.03-7.05 (m, 1H), 4.15-4.20 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 3.16-3.21 (m, 2H), 2.96 (m, 2H), 2.42 (s, 1H), 2.09-2.17 (m, 8H), 1.75-1.79 (m, 1H), 1.46-1.52 (m, 2H), 1.30-1.40 (m, 3H), 1.21 (s, 1H), 0.80-0.90 (m, 6H)。
實施例 14 ：化合物 36 的製備
4-(氮雜環丁烷-1-基甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2 -基)-N-異丁基呱啶-4-醯胺(化合物APS03036)。
步驟A：1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(氮雜環丁烷-1-基甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺
向50 mL反應瓶中加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-甲醯基-N-異丁基呱啶-4-醯胺(70 mg, 0.19 mmol)、1,2-二氯甲烷 (2 mL)、氮雜環丁胺 (32.6 mg, 0.57 mmol)以及醋酸硼氫化鈉 (80.8 mg, 0.38 mmol)，室溫下攪拌16小時後，水淬滅後，有機相旋乾，管柱層析分離得到產品60 mg，m/z=409/411[M+1] +。
步驟B：4-(氮雜環丁烷-1-基甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2 -基)-N-異丁基呱啶-4-醯胺
向反應瓶中依次加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(氮雜環丁烷-1-基甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺 (60 mg, 0.15 mmol)、6-乙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (65.3 mg, 0.18 mmol)、四三苯基磷鈀 (23 mg, 0.02 mmol)、碳酸鉀 (40.6 mg, 0.29 mmol)、水 (0.35 mL)以及1,4-二氧六環 (0.7 mL)，氮氣置換三次，加熱至90 ℃反應16小時，反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析純化得產品6 mg，m/z=531[M+1] +。 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (s, 1H), 8.50-8.56 (m, 2H), 7.94-8.03 (m, 2H), 7.71-7.81 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.24-7.25 (m, 1H), 7.02-7.04 (m, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 3.15-3.20 (m, 6H), 2.93-2.96 (m, 2H), 2.04-2.17 (m, 2H), 1.88-1.96 (m, 2H), 1.74-1.80 (m, 1H), 1.34-1.44 (m, 5H), 0.85-0.88 (m, 7H)。
實施例 15 ：化合物 37 的製備
4-(吡咯烷-1-基甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-異丁基呱啶-4-醯胺(化合物APS03037)
步驟A：1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(吡咯烷-1-基甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺
向50 mL反應瓶中加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-甲醯基-N-異丁基呱啶-4-醯胺(70 mg, 0.19 mmol)、1,2-二氯甲烷 (2 mL)、吡咯烷 (40.6 mg, 0.57 mmol)以及醋酸硼氫化鈉 (80.8 mg, 0.38 mmol)，室溫下攪拌16小時後，水淬滅後，有機相旋乾，管柱層析分離產品65 mg，m/z = 423/425[M+1] +。
步驟B：4-(吡咯烷-1-基甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-異丁基呱啶-4-醯胺
向反應瓶中依次加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(吡咯烷-1-基甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺 (65 mg, 0.15 mmol)、6-乙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (68.3 mg, 0.18 mmol)、四三苯基磷鈀 (23 mg, 0.02 mmol)、碳酸鉀 (42.5 mg, 0.31 mmol)、水 (0.3 mL)以及1,4-二氧六環 (0.7 mL)，氮氣置換三次，加熱至90 ℃反應16小時，反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，反相柱層析得產品5 mg，m/z=545[M+1] +。 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.67 (s, 1H), 8.50-8.56 (m, 2H), 7.71-8.03 (m, 4H), 7.56-7.65 (m, 2H), 7.40-7.41 (m, 1H), 7.24-7.25 (m, 1H), 7.02-7.05 (m, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 3.15-3.24 (m, 2H), 2.93-2.96 (m, 2H), 2.51-2.62 (m, 2H), 2.11-2.17 (m, 2H), 1.73-1.79 (m, 1H), 1.63 (s, 4H), 1.38-1.51 (m, 5H), 0.84-0.87 (m, 6H)。
實施例 16 ： 化合物 39 的製備
將(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇 (256.5 mg, 0.51 mmol)、3-甲基丁酸 (78 mg, 0.77 mmol)、DIEA (263 mg, 2.04 mmol)、DCM（10 mL）以及HATU（292 mg, 0.77 mmol）置於50 mL的反應瓶中，室溫反應0.5小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品6.4 mg，m/z = 478[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.7 (d, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.06 (d, 1H), 5.00 (br, 1H), 4.42-4.44 (m, 1H), 4.14-4.25 (m, 3H), 3.60-3.72 (m, 1H), 3.01-3.07 (m, 1H), 2.81-2.87 (m, 1H), 1.89-1.98 (m, 4H), 1.20-1.45 (m, 5H), 0.80-0.89 (m, 6H)。
實施例 17 ： 化合物 40 的製備
步驟A: ((3 R, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（1.0 g，3.3 mmol）、((3 R, 4 S)-3-羥基呱啶-4-基）碳酸叔丁酯（720 mg，3.3 mmol）、DIEA (2.2 g，10 mmol)以及 20 mL DMSO，90 ℃反應4小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1.4 g，m/z=494[M+1] +。
步驟B: ((3 R, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基鹽酸鹽
反應瓶中加入((3 R, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁（1.4 g, 2.8 mmol）以及4N鹽酸二氧六環溶液（30 mL, 120 mmol），25 ℃反應0.5小時，直接減壓濃縮乾，得到產品1.6 g，m/z=394[M+1] +。
步驟C: N-((3 R, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-3-甲基丁醯胺
反應瓶中加入((3 R, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基鹽酸鹽（200 mg, 0.4 mmol）、3-甲基丁酸（48 mg, 0.47 mmol）、DIEA (166 mg, 1.29 mmol)、HATU（179 mg, 0.47 mmol）以及2.5 mL DMF，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品42 mg，m/z=478[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.64 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.00 (dd, 1H), 7.56-7.59 (m, 2H), 7.23 (s, 1H), 7.03 (d, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.10-4.27 (m, 4H), 3.92-3.99 (m, 1H), 3.88-3.91 (m, 1H), 3.18-3.21 (m, 1H), 3.10-3.16 (m, 1H), 1.97-2.03 (m, 3H), 1.86-1.94 (m, 1H), 1.56-1.60 (m, 1H), 1.38-1.43 (m, 3H), 0.88-0.94 (m, 6H)。
實施例 18 ： 化合物 41 的製備
將(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇 (256.5 mg, 0.51 mmol)、1-三氟甲基環丁酸 (128 mg, 0.77 mmol)、DIEA (263 mg, 2.04 mmol)、DCM（10 mL）以及HATU（292 mg, 0.77 mmol）置於50 mL的反應瓶中，室溫反應0.5小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品9.6 mg，m/z = 544[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.08 (d, 1H), 5.02 (br, 1H), 4.51-4.54 (m, 1H), 4.31-4.34 (m, 1H), 4.18 (q, 2H), 3.80-3.82 (m, 1H), 3.50-3.53 (m, 1H), 2.95-3.01 (m, 1H), 2.73-2.79 (m, 1H), 2.54-2.56 (m, 1H), 2.30-2.33 (m, 2H), 1.78-1.90 (m, 3H), 1.48-1.38 (m, 4H)。
實施例 19 ： 化合物 42 的製備
反應瓶中加入((3 R, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基鹽酸鹽（200 mg, 0.4 mmol）、3-氯-2-吡啶甲酸（74 mg, 0.47 mmol）、DIEA (166 mg, 1.29 mmol)、HATU（179 mg, 0.47 mmol）以及2.5 mL DMF，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得產品26 mg，m/z=533[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12.64 (s, 1H), 8.54-8.57 (m, 3H), 8.51 (s, 1H), 8.00-8.04 (m, 2H), 7.54-7.59 (m, 2H), 8.19 (dd, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.08 (d, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.27-4.38 (m, 2H), 4.13-4.17 (m, 3H), 3.91-3.94 (m, 1H), 3.15-3.20 (m, 1H), 1.90-1.98 (m, 1H), 1.73-1.78 (m, 1H), 1.42-1.45 (m, 3H)。
實施例 20 ： 化合物 43 的製備
將(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇 (256.5 mg, 0.51 mmol)、DIEA (263 mg, 2.04 mmol)、DCM（10 mL）以及2-氯-5-氟苯甲醯氯（98 mg, 0.51 mmol）置於50 mL的反應瓶中，0 oC下反應0.5小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品24 mg，m/z=550[M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.46 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.07 (m, 1H), 7.53-7.59 (m, 2H), 7.39-7.41 (m, 1H), 7.30-7.35 (m, 2H), 7.11-7.21 (m, 1H), 7.45-7.47 (m, 1H), 4.20-4.29 (m, 1H), 4.14-4.18 (m, 2H), 3.90-3.93 (m, 1H), 3.52-3.55 (m, 2H), 3.14-3.20 (m, 1H), 2.93-2.96 (m, 1H), 1.99-2.02 (m, 1H), 1.49-1.51 (m, 1H),  1.39 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。
實施例 21 ： 化合物 44 的製備
步驟A: ((3 S, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基甲酸酯
室溫條件下，向50 mL的反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（2 g, 6.73 mmol）、((3 S, 4 S)-3-羥基呱啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯(1.46 g, 6.73 mmol)、10 mL DMSO 以及DIEA（2.61 g, 20.2 mmol），90 oC攪拌12小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得產品2.7 g，m/z=494[M+1] +。
步驟B: (3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇
向反應瓶中依次加入叔丁基((3 S, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4] 吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基甲酸酯（2.7 g, 5.45 mmol）以及濃度為4 M鹽酸的1,4-二氧六環溶液，攪拌3小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品2.7 g，m/z=394[M+1] +。
步驟C: 2-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4] 吡唑[1,5-a]吡啶-4-基) 吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-6-氟苯甲醯胺
(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇(256.5 mg, 0.51 mmol)，DIEA (263 mg, 2.04 mmol)、DCM（10 mL）以及2-氯-6-氟苯甲醯氯（98 mg, 0.51 mmol）置於50 mL的反應瓶中，0 oC下反應0.5小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得產品26 mg，m/z=550[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.69 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.02-8.05 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.07-7.49 (m, 5H), 5.07 (br, 1H), 4.40-4.44 (m, 1H), 4.14-4.22 (m, 3H), 3.92-3.95 (m, 1H), 3.50-3.51 (m, 1H), 3.16-3.22 (m, 1H), 2.96-3.01 (m, 1H), 2.01-2.11 (m, 1H), 1.37-1.48 (m, 4H)。
實施例 22 ： 化合物 45 的製備
(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇(256.5 mg, 0.51 mmol)、DIEA (263 mg, 2.04 mmol)、DCM（10 mL）以及3-(三氟甲基)吡啶-2-甲醯氯（107 mg, 0.51 mmol）置於50 mL的反應瓶中，0 oC下反應0.5小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得產品45 mg，m/z=567[M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.85-8.86 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.62-8.64 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.29-8.31 (m, 1H), 8.04-8.07 (m, 1H), 7.72-7.75 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.09-7.11 (m, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.46-4.50 (m, 1H), 4.26-4.29 (m, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.92-3.96 (m, 1H), 3.54-3.59 (m, 1H), 3.10-3.16 (m, 1H), 2.90-2.95 (m, 1H), 2.01-2.05 (m, 1H), 1.49-1.52 (m, 1H), 1.39 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。
實施例 23 ：化合物 46 的製備
(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇(256.5 mg, 0.51 mmol)、DIEA (263 mg, 2.04 mmol)、DCM（10 mL）以及2-甲基-5-氟苯甲醯氯（78 mg, 0.51 mmol）置於50 mL的反應瓶中，0 oC下反應0.5小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得產品33 mg，m/z=530[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.04-8.06 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.09-7.28 (m, 5H), 5.15 (br, 1H), 4.50-4.54 (m, 1H), 4.31-4.35 (m, 3H), 4.17 (q, 2H), 3.91-3.93 (m, 1H), 3.50-3.54 (m, 1H), 3.04-3.10 (m, 1H), 2.82-2.88 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 1.96-1.98 (m, 1H), 1.23-1.52 (m, 4H)。
實施例 24 ：化合物 48 的製備
步驟A: ((3 S, 4 R)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-3-基)胺基碳酸叔丁酯
向反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（1.25 g，4.22 mmol）、DMSO（12 mL）、DIEA（1.63 g，12.66 mmol）以及((3 S, 4 R)-4-羥基呱啶-3-基)胺基碳酸叔丁酯 (1.0 g, 4.64 mmol)，加熱升溫至90~95 ℃攪拌24小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1.2 g，m/z=494 [M+1] +。
步驟B: ((3 S, 4 S)-4-(1,3-鄰苯二甲亞醯-2-基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3基)胺基碳酸叔丁酯
向反應瓶中加入((3 S, 4 R)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-3-基)胺基碳酸叔丁酯(1.1 g，2.22 mmol)、THF（10 mL）、鄰苯二甲亞醯胺（0.65 g，4.45 mmol）以及三苯基磷（1.2 g，4.45 mmol），0~10 ℃攪拌30分鐘，滴加入DEAD（0.77 g，4.45 mmol）的THF（1 mL）溶液，升溫至室溫反應20小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得產品300 mg，m/z=623[M+1] +。
步驟C: ((S,4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3基)胺基碳酸叔丁酯
向反應瓶中加入((3S,4S)-4-(1,3-鄰苯二甲亞醯-2-基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3基)胺基碳酸叔丁酯（300 mg，0.48 mmol）、乙醇（2 mL）以及水合聯胺（1 ml），加熱至回流1小時，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品100 mg，m/z=493[M+1] +。
步驟D: N-((3 S, 4 S)-3-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基）吡啶-2-基）呱啶-4-基)-2氯-6-甲基苯甲醯胺
反應瓶A中加入2-甲基-6-氯苯甲酸（51.7 mg, 0.3 mmol）以及二氯甲烷（2 mL），降溫至0~10 ℃，再加入二氯亞碸（36.2 mg, 0.3 mmol）以及1滴DMF，自然升溫至室溫攪拌2小時，備用。
反應瓶B中加入((3S,4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3’,4’:3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3基)胺基碳酸叔丁酯（100 mg, 0.2 mmol）、2 mL二氯甲烷以及三乙胺（41 mg, 0.4 mmol），降溫至0~10 ℃，將瓶A中反應液緩慢滴加入反應瓶B，滴完室溫攪拌2小時，反應完全。加入2 mL水分液，收集有機相，濃縮至乾後加入2 mL甲醇溶清，降溫至0~10 ℃並加入20%氯化氫甲醇溶液，自然升至室溫攪拌20小時，反應完全。濃縮乾後加入5 mL水溶清，乙酸乙酯萃取2次，收集水相，調節pH至10，二氯甲烷萃取兩次，收集有機相，經管柱層析純化得產品18 mg， 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.46-8.59 (m, 3H), 8.05-8.08 (m, 1H), 7.55-7.64 (m, 2H), 7.22-7.33 (m, 4H), 7.10-7.12 (d, 1H), 4.50-4.53 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.94 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 3.12 (m, 1H), 2.80-2.91 (m, 1H), 2.31-2.33 (m, 3H), 2.06-2.08 (m, 1H), 1.50-1.58 (m, 1H), 1.34-1.42 (m, 3H), 1.24 (s, 1H) m/z=545.2 [M+1] +。
實施例 25 ： 化合物 50 的製備
步驟A：(3 S, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1-(四氫-2氫-吡喃-2-基)-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶加入4-(5-氯吡嗪-2-基)-6-乙氧基-1-(四氫-2氫-吡喃-2-基)-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(500 mg, 1.25 mmol)、((3 S, 4 S)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯(542 mg, 2.5 mmol)、DIEA (484 mg, 3.75 mmol)以及5 mL DMSO，80 ℃反應過夜，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品670 mg，m/z=579.3[M+1] +。
步驟B：(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽
反應瓶加入(3 S, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1-(四氫-2氫-吡喃-2-基)-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯(670 mg, 1.1 mmol)以及5N甲醇鹽酸溶液(10 mL, 50 mmol)，25 ℃反應2小時，反應完全，直接減壓濃縮乾，得到產品710 mg，m/z = 395.2[M+1] +。
步驟C：3-氯-N-((3 S, 4 S)-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2-吡啶甲醯胺
反應瓶加入(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽 (80 mg, 0.16 mmol)、3-氯吡啶-2-甲酸 (38 mg, 0.24 mmol)、DIEA (103 mg, 0.8 mmol)、HATU (61 mg, 0.16 mmol)以及2 mL DMF，25 ℃反應2小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品37.6 mg，m/z = 534.1[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.45 (brs, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.74 (d, J=7.6Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.47 (dd, J 1 =8.0Hz, J 2 =6.0Hz, 1H), 7.36 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.28 (t, J=8.8Hz, 1H), 5.01-5.42 (m, 1H), 4.36-4.41 (m, 1H), 4.17-4.24 (m, 2H), 3.95-4.02 (m, 1H), 3.62-3.71 (m, 2H), 3.12-3.21 (m, 2H), 2.10-2.18 (m, 1H), 1.48-1.60 (m, 1H), 1.39-1.43 (m, 3H)。
實施例 26 ： 化合物 51 的製備
步驟A：2-氯-N-((3 S, 4 S)-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-6-氟苯甲醯胺
反應瓶加入(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽 (80 mg, 0.16 mmol)、2-氯-6氟苯甲醯氯 (46 mg, 0.24 mmol)、DIEA (103 mg, 0.8 mmol)以及2 mL DMF，25 ℃反應1小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品4.6 mg，m/z = 551.1[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.54 (brs, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.59 (d, J=8.4Hz, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.52 (dd, J 1 =8.4Hz, J 2 =4.8Hz, 1H), 5.01-5.28 (m, 1H), 4.44-4.52 (m, 1H), 4.25-4.33 (m, 1H), 4.17 (q, J=6.8Hz, 1H), 3.96-4.02 (m, 1H), 3.58-3.67 (m, 1H), 3.30-3.35 (m, 1H), 3.03-3.11 (m, 1H), 2.10-2.18 (m, 2H), 1.56-1.68 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H).
實施例 27 ： 化合物 55 的製備
步驟A: 4-溴-6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向4-溴-6-羥基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(2.0g, 7.1 mmol)的四氫呋喃20 ml溶液中加入二氫吡喃5 ml以及對甲苯磺酸（245 mg, 1.4 mmol），加熱50 ℃反應12小時，加入水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品，m/z=365[M+1] +。
步驟B: 6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
反應瓶加入4-溴-6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（5.4 g，14.8 mmol）、聯硼酸頻那醇酯（11.3 g，44.5 mmol）、醋酸鉀（5.8 g，59.3 mmol）、100 ml 1,4-二氧六環以及Pd（dppf）Cl 2（1.0 g, 1.5 mmol），氮氣置換後，80 ℃反應12小時，過濾，濾液濃縮後得到產品5.0 g，m/z=413[M+1] +。
步驟C: 4-(5-氯吡嗪-2-基)-6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
反應瓶加入6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（4.5 g, 10.9 mmol）、2, 5-二氯吡嗪（4.8 g, 32.6 mmol）、碳酸鉀（4.5 g，32.7 mmol）、1, 4-二氧六環（50 mL）、水（5 mL）以及Pd（dppf）Cl 2（1.0 g, 1.5 mmol），氮氣置換後，80 ℃反應4小時，加入水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品2.5 g，m/z=399[M+1] +。
步驟D: (1-(5-(6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基）-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4甲基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶加入4-(5-氯吡嗪-2-基)-6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（1.0 g, 2.5 mmol）、（4-甲基呱啶-4-基）碳酸叔丁酯（1.0 g，5.0 mmol）、DIEA (972 mg, 7.5 mmol)以及12 mL DMSO，80 ℃反應12小時，加入水，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得產品1.3 g，m/z=577[M+1] +。
步驟E: (1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽
反應瓶加入(1-(5-(6-乙氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4-甲基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯(1.25 g，2.2 mmol)以及5N甲醇鹽酸溶液（10 mL，50 mmol），25 ℃反應2小時，減壓濃縮乾得產品1.1 g，m/z = 393[M+1] +。
步驟F: 3-氯-N-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4-甲基呱啶-4-基)-5-氟-2-吡啶甲醯胺
反應瓶加入(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4-甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽（150 mg, 0.3 mmol）、3-氯-5-氟吡啶-2-甲酸（63 mg，0.36 mmol）、DIEA (193 mg, 1.5 mmol)、HATU（114 mg, 0.3 mmol）以及2 mL DMF，25 ℃反應2小時，加入水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品11 mg，m/z=550[M+1] +。
實施例 28 ： 化合物 56 的製備
反應瓶加入(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽（150 mg, 0.3 mmol）、3-氯-5-氟吡啶-2-甲酸（63 mg, 0.36 mmol）、DIEA (193 mg, 1.5 mmol)、HATU（114 mg, 0.3 mmol）以及2 mL DMF，25 ℃反應2小時，加入水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品13 mg，m/z=546[M+1] +。
實施例 29 ： 化合物 57 的製備
步驟A：N-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4甲基呱啶-4-基)-2,3,6-三氟苯甲醯胺
反應瓶加入(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4-甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽 (100 mg, 0.2 mmol)、2,3,6-三氟苯甲酸 (39 mg, 0.22 mmol)、DIEA (129 mg, 1.0 mmol)、HATU (76 mg, 0.2 mmol)以及2 mL DMF，25 ℃反應2小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品24.6 mg，m/z = 551.1[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.47 (brs, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.55 (d, J=2.0Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.55-7.63 (m, 1H), 7.21-7.26 (m, 1H), 4.16-4.24 (m, 4H), 3.30-3.35 (m, 2H), 1.62-1.66 (m, 2H), 1.39-1.44 (m, 6H)。
實施例 30 ： 化合物 58 的製備
步驟A: 2-氯-N-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4-甲基呱啶-4-基)-5-氟苯甲醯胺
反應瓶加入(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4-甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽 (150 mg, 0.3 mmol)、2-氯-5-氟苯甲醯氯 (63 mg, 0.36 mmol)、DIEA (193 mg, 1.5 mmol)、HATU (76 mg, 0.2 mmol)以及2 mL DMF，25 ℃反應1小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品43.6 mg，m/z=549.2[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD- d 4) δ 8.75 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.46-7.49 (m, 1H), 7.17-7.26 (m, 2H), 4.15-4.25 (m, 4H), 3.48-3.55 (m, 2H), 2.44-2.48 (m, 2H), 1.70-1.77 (m, 2H), 1.55 (s, 3H), 1.49 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 31 ： 化合物 59 的製備
步驟A: 3-氯-N-(1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4甲基呱啶-4-基)-2-吡啶甲醯胺
反應瓶加入(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-4-甲基呱啶-4-胺基鹽酸鹽 (100 mg, 0.2 mmol)、3-氯-2-吡啶苯甲酸 (39 mg, 0.22 mmol)、DIEA (129 mg, 1.0 mmol)、HATU (76 mg, 0.2 mmol)以及2 mL DMF，25 ℃反應2小時，反應完全。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品43.5mg，m/z=532.1[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.47 (brs, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.52-8.55 (m, 2H), 8.35 (s, 1H), 8.01-8.03 (m, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.50 (dd, J 1 =8.0Hz, J 2 =0.8Hz, 1H), 4.16-4.22 (m, 4H), 3.34-3.39 (m, 2H), 2.35-2.39 (m, 2H), 1.60-1.66 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H).
實施例 32 ： 化合物 87 的製備
1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羥甲基)-N-異丁基呱啶-4-醯胺(化合物APS03087)。
步驟A：1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸甲酯
向1-(叔丁氧羰基)-4-(甲氧羰基)呱啶-4-羧酸 (1.9 g, 6.6 mmol) 中，加入氯化氫的1,4-二氧六環 (4 M, 4 mL)室溫攪拌1小時後，旋乾，加入DMSO (10 mL)、碳酸鉀 (3.3 g, 23.3 mmol)以及5-溴-2-氟吡啶 (1.4 g, 7.9 mmol)，加熱至90 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1 g，m/z=298/300[M+1] +。
步驟B：4-((苄氧基)甲基)-1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸甲酯
向100 mL的反應瓶中加入1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸甲酯 (1.0 g, 3.34 mmol)以及四氫呋喃 (15 mL)，降溫至-70 ℃，控溫-70±5 ℃下滴加正丁基鋰 (2 M, 1.67 mL, 3.34 mmol)，滴完保溫攪拌10分鐘後，控溫-70±5 ℃下滴加入氯甲氧基苄醚(1.0 g, 6.68 mmol)，滴完後，自然升溫至室溫攪拌2小時，氯化銨水溶液淬滅後，加入二氯甲烷萃取，管柱層析分離得產品1.2 g。m/z=418/420[M+1] +。
步驟C：4-羥甲基-1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸甲酯
向50 mL的反應瓶中加入4-((苄氧基)甲基)-1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸甲酯(1.2 g, 2.86 mmol)、二氯甲烷 (24 mL)以及氯化鋁 (1.5 g, 11.45 mmol)，室溫攪拌3小時，氫氧化鈉調節pH值至7左右，加入二氯甲烷萃取，管柱層析分離得到產品0.71 g，m/z = 328/330[M+1] +。
步驟D：4-羥甲基-1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸
向50 mL的反應瓶中加入4-羥甲基-1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸甲酯 (0.71 g, 2.1 mmol)、四氫呋喃 (10 mL)、甲醇 (10 mL)以及氫氧化鋰 (181 mg, 4.31 mmol)的水 (10 mL)溶液，60 ℃攪拌2小時，濃縮後，鹽酸調節pH至5-6，二氯甲烷萃取，濃縮後得到產品315 mg，m/z = 314/316[M+1] +。
步驟E：1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(羥甲基)-N-異丁基呱啶-4-醯胺
向50 mL的反應瓶中加入4-羥甲基-1-(5-溴吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸 (315 mg, 1 mmol)、乙腈 (3 mL)、三乙胺 (303 mg, 3 mmol)以及異丁胺 (146 mg, 2.0 mmol)，再加入HATU (570 mg, 1.5 mmol)，室溫攪拌0.5小時，反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析得產品270 mg，m/z = 370/372[M+1] +。
步驟F：1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羥甲基) -N-異丁基呱啶-4-醯胺
向反應瓶中依次加入1-(5-溴吡啶-2-基)-4-(羥甲基)-N-異丁基呱啶-4-羧醯胺(36.7 mg, 0.13 mmol)、6-乙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶 (50 mg, 0.13 mmol)、四三苯基磷鈀 (23 mg, 0.02 mmol)、碳酸鉀 (37.3 mg, 0.27 mmol)、水 (0.25 mL)以及1,4-二氧六環 (0.5 mL)，氮氣置換三次，加熱至90 ℃反應16小時，反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析純化得產品6 mg，m/z=492[M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.57 (s, 1H), 8.43-8.49 (m, 2H), 7.93-7.96 (m, 1H), 7.51-7.60 (m, 2H), 7.18-7.18 (d, 1H), 6.96-7.02 (m, 1H), 4.83-4.85 (m, 1H), 3.99-4.19 (m, 4H), 3.36-3.37 (m, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.86-2.89 (m, 2H), 1.98-2.01 (m, 2H), 1.17-1.71 (m, 1H), 1.43 (m, 2H), 1.36-1.34 (m, 4H), 0.70-0.80 (m, 6H)。
實施例 33 ： 化合物 88 的製備
((3 S, 4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(50 mg, 0.17 mmol)、((3 S, 4 S)-3-羥基呱啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯 (40 mg, 0.17 mmol)、DIEA (65 mg, 0.5 mmol)以及DMSO (3 mL)加入反應瓶，90 ℃反應4h。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得產品12 mg，m/z=494[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.04 (d, J= 8.8Hz, 1H), 6.72 (brs, 1H), 4.98 (d, J=4.8Hz, 1H), 4.43-4.46 (m, 1H), 4.20-4.27 (m, 1H), 4.15 (q, J=6.8Hz, 2H), 3.35-3.41 (m, 2H), 2.96-3.02 (m, 1H), 2.75-2.80 (m, 1H), 1.86-1.88 (m, 1H), 1.35-1.42 (m, 13H)。
實施例 34 ： 化合物 89 的製備
(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇(256.5 mg, 0.51 mmol)、2,3-二甲基丁酸 (60 mg, 0.51 mmol)、DIEA (329 mg, 2.55 mmol)、HATU（232 mg, 0.61 mmol）以及DCM（10 mL）置於50 mL的反應瓶中，室溫反應0.5小時，加入水，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，管柱層析分離得產品40 mg，m/z=492[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.64 (s, 1H), 8.50-8.60 (m, 2H), 8.05 (m, 1H), 7.65 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 4.30-4.50 (m, 1H), 4.10-4.30 (m, 3H), 3.70-3.80 (m, 1H), 3.50-3.60 (m, 2H), 3.06-3.39 (m, 1H), 2.75-2.95 (m, 1H), 1.88-1.96 (m, 2H), 1.66-1.70 (m, 1H), 1.33-1.41 (m, 4H), 0.83-0.98 (m, 9H)。
實施例 35 ： 化合物 91 的製備
步驟A：2-氯-N-((3 S, 4 S)-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)- 5-氟苯甲醯胺
反應瓶加入(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、2-氯-5-氟苯甲醯氯 (46 mg, 0.24 mmol)、DIEA (129 mg, 1.0 mmol)以及2 mL DMF，25 ℃反應1小時，反應完全。二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品8.5 mg，m/z=551.1[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.47 (brs, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.47 (d, J=8.0Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.54 (dd, J 1 =8.8Hz, J 2 =4.0Hz, 1H), 7.40-7.43 (m, 1H), 7.31-7.36 (m, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.42-4.46 (m, 1H), 4.28-4.32 (m, 1H), 4.17 (t, J=6.8Hz, 2H), 3.89-3.99 (m, 1H), 3.51-3.57 (m, 1H), 3.25-3.27 (m, 1H), 3.02-3.10 (m, 1H), 2.01-2.08 (m, 1H), 1.48-1.54 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 36 ： 化合物 101 的製備
步驟A：4-(N-異丙基磺醯基)呱啶-1-碳酸叔丁酯
向反應瓶中加入異丙胺（97 mg, 1.7 mmol）以及二氯甲烷（10 mL），攪拌，加入三乙胺（300 mg , 3 mmol），降溫至10 oC，加入4–(氯磺醯基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（426 mg, 1.5 mmol），反應1小時。加水淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得產品400 mg直接用於下步反應，m/z=307[M+1] +。
步驟B：N-異丙基呱啶-4-磺醯胺
向反應瓶中依次加入4-(N-異丙基磺醯基)呱啶-1-碳酸叔丁酯（400 mg, 1.3 mmol）以及HCl的1.4-二氧六環溶液 (4 M, 10 mL)，室溫反應1小時，反應完全。減壓濃縮，得產品340 mg直接用於下步反應，m/z = 207[M+1] +。
步驟C：1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-異丙基呱啶-4-磺醯胺
向反應瓶中依次加入DMSO（2 mL）、DIEA（0.5 mL），N-異丙基呱啶-4-磺醯胺（340 mg , 1.3 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg , 0.3 mmol），100 oC下反應48小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品46 mg，m/z=484[M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.60 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.53 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.06 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.28 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.10 (dd, J= 19.8, 8.4 Hz, 2H), 4.56 (d, J= 13.3 Hz, 2H), 4.18 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.46 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 3.32 (s, 1H), 3.02 (t, J= 12.2 Hz, 2H), 2.06 (d, J= 11.3 Hz, 2H), 1.60 (qd, J= 12.5, 4.2 Hz, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 1.13 (d, J= 6.5 Hz, 6H).
實施例 37 ： 化合物 102 的製備
步驟A：4-羥基-4-(苯磺醯胺亞甲基)呱啶-1-碳酸叔丁酯
向反應瓶中加入4-(醯胺基亞甲基)-4-羥基呱啶-1-碳酸叔丁酯（230 mg, 1 mmol）、二氯甲烷（10 mL）以及三乙胺（200 mg, 2 mmol），降溫至10 oC，加入苯甲醯氯（194 mg, 1.1 mmol），反應1小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品300 mg, m/z=371[M+1] +。
步驟B：N-((4-羥基呱啶-4-基)亞甲基)苯磺醯胺
向反應瓶中依次加入4-羥基-4-(苯磺醯胺亞甲基)呱啶-1-碳酸叔丁酯（300 mg , 0.8 mmol）以及HCl的1,4-二氧六環溶液(4M , 10 mL)，室溫反應1小時，反應完全。減壓濃縮，得產品320 mg直接用於下步反應, m/z=271[M+1] +。
步驟C：N-((1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-4-基) 亞甲基) 苯磺醯胺
向反應瓶中依次加入DMSO（2 mL）、DIEA（0.5 mL）, N-((4-羥基呱啶-4-基)亞甲基)苯磺醯胺（300 mg, 0.8 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg, 0.3 mmol），100 oC下反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品93 mg, m/z=548[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.58 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.03 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.86 – 7.78 (m, 2H), 7.69 – 7.53 (m, 5H), 7.26 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.08 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.23 – 4.07 (m, 4H), 3.35 – 3.24 (m, 2H), 2.72 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 1.60 (td, J= 12.8, 12.1, 4.4 Hz, 2H), 1.48 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H)。
實施例 38 ： 化合物 103 的製備
步驟A：4-(吡啶-2-氧基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
向反應瓶中加入4-羥基呱啶-1-羧酸叔丁酯（804 mg , 4 mmol）以及四氫呋喃（10 mL），攪拌，降溫至10 oC，加入NaH（含量60% , 192 mg , 4.8 mmol），反應1小時，加入2-氟吡啶（388 mg , 4 mmol）。反應24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品950 mg, m/z=279[M+1] +。
步驟B：2-(呱啶-4-氧基)吡啶
向反應瓶中依次加入4-(吡啶-2-氧基)呱啶-1-甲酸叔丁酯（950 mg , 3.4 mmol）以及HCl的1.4-二氧六環溶液(4M , 10 mL)，室溫反應1小時，反應完全。減壓濃縮乾，得產品750 mg直接用於下步反應, m/z=179[M+1] +。
步驟C：6-乙氧基-4-(6-(4-(吡啶-2-氧基)呱啶-1-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]呱啶
向反應瓶中依次加入DMSO（2 mL）、DIEA（0.5 mL）、N-((4-羥基呱啶-4-基)甲基)苯磺醯胺（150 mg , 0.7 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（60 mg , 0.2 mmol），100 oC下反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品22 mg, m/z=456[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.60 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.53 (d, J= 2.1 Hz,1H), 8.19 (dd, J= 5.1, 2.0 Hz, 1H), 8.06 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J= 8.8, 7.1, 2.1 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.13 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 6.94-7.03 (m, 1H), 6.82 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 5.31 (tt, J= 8.3, 3.9 Hz, 1H), 4.17 (dd, J= 13.4, 6.2 Hz, 4H), 3.45 (ddd, J= 13.1, 9.5, 3.2 Hz, 2H), 2.10 (dq, J= 8.1, 3.8 Hz, 2H), 1.71 (dtd, J= 12.7, 9.0, 3.7 Hz, 2H), 1.41 (t, J= 6.9 Hz, 3H)。
實施例 39 ： 化合物 104 的製備
步驟A：4-((6-甲基噠嗪-3-基)氧)呱啶-1-碳酸叔丁酯
向反應瓶中加入4-羥基呱啶-1-羧酸叔丁酯（402 mg , 2 mmol）以及四氫呋喃（10 mL），攪拌，降溫至10 oC，加入NaH（含量60% , 96 mg , 2.4 mmol），反應1小時，加入3-氯-6-甲基噠嗪（258 mg , 2 mmol）。反應24小時，加水，乙酸乙酯提取，無水硫酸鈉乾燥，過濾， 減壓濃縮乾，矽膠柱純化，得產品250 mg, m/z=294[M+1] +。
步驟B：3-甲基-6-(吡啶-4-氧基)噠嗪
向反應瓶中依次加入4-((6-甲基噠嗪-3-基)氧)呱啶-1-碳酸叔丁酯（250 mg , 0.8 mmol）以及HCl的1.4-二氧六環溶液(4M , 10 mL)，室溫反應1小時，反應完全。減壓濃縮，得產品210 mg直接用於下步反應, m/z=194[M+1] +。
步驟C：6-乙氧基-4-(6-(4-((6-甲基噠嗪-3-基)氧)呱啶-1-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入DMSO（2 mL）、DIEA（0.5 mL）、3-甲基-6-(吡啶-4-氧基)噠嗪（210 mg , 0.8 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（80 mg , 0.2 mmol），100 oC下反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品27 mg , m/z=471[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (s, 1H), 8.60 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.06 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.51 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 9.0, 7.2 Hz, 2H), 5.46 (tt, J= 8.3, 3.8 Hz, 1H), 4.17 (p, J= 8.6, 7.7 Hz, 4H), 3.49 (ddd, J= 13.0, 9.2, 3.2 Hz, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.21 – 2.11 (m, 2H), 1.76 (dtd, J= 12.7, 8.9, 3.8 Hz, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 40 ： 化合物 107 的製備
(3S,4S)-4-((2-氯-6-氟苯)胺基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇
將(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇鹽酸鹽(100 mg, 0.2 mmol)、1-氯-2-(氯甲基)-3-氟苯(50 mg, 0.2 mmol)、Cs 2CO 3(130 mg, 0.4 mmol)以及DMF(3 mL)加入反應瓶，50 ℃反應12小時。將反應液倒入30 mL水中，乙酸乙酯萃取，乾燥有機相，旋乾溶劑，管柱層析純化產品4.6 mg, m/z=535[M+1]+。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.31-7.42 (m, 2H), 7.22-7.30 (m, 2H), 7.05 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.18 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 4.42-4.48 (m, 1H), 4.29-4.35 (m, 1H), 4.14 (m, 2H), 3.81-3.98 (m, 2H), 3.20-3.28 (m, 2H), 2.88-2.98 (m, 1H), 2.66-2.74 (m, 1H), 2.41-2.47 (m, 2H), 2.10-2.20 (m, 1H), 1.37 (m, 3H)。
實施例 41 ： 化合物 118 的製備
N-((3a R, 6a S)-5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將6-乙氧基-4-(6-((3a R, 6a S)-六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（200 mg, 0.4 mmol）、2-氯-6-氟苯甲醯氯（77 mg, 0.4 mmol）、DIEA(258 mg, 2 mmol)以及DCM(10 mL)加入反應瓶，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品4.6 mg，m/z=546[M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.48-7.61 (m, 2H), 7.33-7.47 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 6.70-6.80 (m, 1H), 4.15 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 3.70-3.86 (m, 3H), 3.46-3.53 (m, 4H), 3.06-3.24 (m, 3H), 1.38 (t, J= 6.8 Hz, 3H).
實施例 42 ： 化合物 150 的製備
步驟A: 4-(2,5-二氟苯醯胺醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯
將4-((叔丁基羰基)胺基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯鹽酸鹽 (120 mg, 0.26 mmol)、2,5-二氟苯甲酸 (37.9 mg, 0.24 mmol）、DIEA (100 mg, 0.78 mmol)、HATU (108 mg, 0.28 mmol)以及DMF (2 ml)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品78 mg, m/z=590[M+1] +。
步驟B：N-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羥甲基)呱啶-4-基)-2,5-二氟苯甲醯胺
將4-(2,5-二氟苯醯胺醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸乙酯（29.4 mg, 0.05 mmol）以及2 ml THF加入反應瓶，0 ℃下加入LiAlH 4(1.9 mg, 0.05 mmol)，反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品15 mg，m/z=548[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.62 – 8.56 (m, 1H), 8.52 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.08 – 7.99 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.47 – 7.29 (m, 3H), 7.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.11 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.88 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 4.21 (m, 2H), 3.64 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.33 (s, 2H), 3.23 (t, J= 12.4 Hz, 2H), 2.29 (d, J= 13.6 Hz, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H)。
實施例 43 ： 化合物 151 的製備
步驟A：3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-6-碳酸叔丁酯
三口瓶中依次加入4-溴-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（0.28 g, 1 mmol）、1,4-二氧六環（2.8 mL）、6-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼硼烷-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-碳酸叔丁酯（0.52 g, 1.3 mmol）、碳酸鋰（148 mg, 2 mmol）、四三苯基磷鈀（23 mg, 0.02 mmol）以及水（1.4 mL），升溫至90 ℃，反應24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品230 mg，m/z=476.2 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
三口瓶中依次加入3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-6-碳酸叔丁酯（200 mg, 0.42 mmol）、甲醇（4 mL）以及間苯二甲醚（2. 9mg, 0.02 mmol），加入硫酸（98%, 168 mg, 1.68 mmol），升溫至55 ℃反應4小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品300 mg，m/z=376.2 [M+1] +。
步驟C：6-乙氧基-4-(6-(3-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-6-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
三口瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（180 mg, 0.27 mmol）、正丙醇（3.6 mL）、三乙胺（136.2 mg, 1.35 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（111 mg, 0.81 mmol）以及Pic-BH 3（86.7 mg, 0.81 mmol），保溫50 ℃攪拌24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品70 mg，m/z=497 [M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d6) δ 12.67 (s, 1H), 8.53-8.56 (m, 2H), 7.99-8.02 (m, 1H), 7.76-7.76 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.31-7.32 (m, 1H) ,7.19-7.22 (m, 1H), 6.69-6.71 (m, 1H), 6.49-6.52 (m, 1H), 4.38-4.40 (m, 2H), 4.16-4.21 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.56 (s, 2H), 3.21-3.24 (m, 2H), 2.69-2.72 (m, 2H), 2.56-2.60 (m, 1H), 1.75-1.77 (d, 1H), 1.39-1.42 (m, 3H)。
實施例 44 ： 化合物 152 的製備
步驟A：(3a R, 6a S)-5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H) -羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(700 mg, 2.4 mmol)、(3a R, 6a S)-六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(700 mg, 2.4 mmol)、DIEA(1.5 g, 11.6 mmol)以及DMSO (10 mL)加入反應瓶，90 ℃反應12h，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1 g, m/z=490[M+1] +。
步驟B：6-乙氧基-4-(6-((3a R, 6a S)-六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
向(3a R, 6a S)-5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯（1 g, 2.0 mmol）中加入HCl的甲醇溶液(4 M, 20 mL)，25 ℃反應4小時，旋乾溶劑得產品1.1 g，m/z=390[M+1] +。
6-乙氧基-4-(6-((3a R, 6a S)-5-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
步驟C：將6-乙氧基-4-(6-((3a R, 6a S)-六氫吡醇[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（200 mg, 0.4 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（165 mg, 1.2 mmol）、Et 3N (202 mg, 2.0 mmol)、Pic-BH 3(128 mg, 1.2 mmol)以及正丙醇 (10 mL) 加入反應瓶，40 ℃反應48小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品67.2 mg，m/z=511[M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.00 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.58-7.64 (m, 2H), 7.23 (s, 1H), 6.72-6.78 (m, 2H), 4.15 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.62-3.71 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.35-3.41 (m, 2H), 2.88-2.97 (m, 2H), 2.61-2.71 (m, 2H), 2.42-2.44 (m, 2H), 1.38 (t, J= 6.8 Hz, 3H).
實施例 45 ： 化合物 155 的製備
步驟A: (1 R, 5 S)-3-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(292 mg, 1.0 mmol)、3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-碳酸叔丁酯 (250 mg, 1.2 mmol)、DIEA (506 mg, 3.9 mmol)以及3mL DMSO，95 ℃反應4小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品208 mg，m/z=490[M+1] +。
步驟B: 4-(6-((1 R, 5 S)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
反應瓶加入(1 R, 5 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-碳酸叔丁酯 (200 mg, 0.4 mmol)以及5N甲醇鹽酸溶液 (3 ml, 15 mmol)，25 ℃反應4小時，直接減壓濃縮得到產品250 mg, m/z = 390 [M+1] +。
步驟C: (2-氯-6-氟)((1 R, 5 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-基)苯甲醯胺
反應瓶中加入4-(6-((1 R, 5 S)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽 (120 mg, 0.24 mmol)、3-氯-6-氟苯甲醯氯(10 mg, 0.26 mmol)、DIEA (155 mg, 1.2 mmol)以及2mL DMF，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品136 mg, m/z=546[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD- d 3 ) δ 8.58 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.49-7.55 (m, 1H), 7.39-7.42 (m, 1H), 7.24-7.30 (m, 2H), 7.00 (d, J=8.8Hz, 1H), 5.03-5.04 (m, 1H), 4.31-4.35 (m, 1H), 4.13-4.20 (m, 3H), 3.92-3.94 (m, 1H), 3.18-3.25 (m, 1H), 3.04-3.07 (m, 1H), 1.92-2.13 (m, 4H), 1.45 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 46 ： 化合物 156 的製備
步驟A: 6-乙氧基-4-(6-((1 R, 5 S)-8-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡唑
反應瓶中加入4-(6-((1 R, 5 S)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽 (100 mg, 0.2 mmol)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 (82 mg, 0.6 mmol)、TEA (121 mg, 1.2 mmol)、2-甲基吡啶硼烷 (64 mg, 0.6 mmol)以及正丙醇3 mL，45 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品37.6 mg, m/z=511[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD- d 3 ) δ 8.53 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.95 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.79 (d, J=8.4Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.89 (d, J=8.8Hz, 1H), 6.80 (d, J=8.4Hz, 1H), 4.11 (q, J=6.8Hz, 2H), 3.93-3.97 (m, 2H), 3.91(s, 3H), 3.59 (s, 2H), 3.35-3.38 (m, 2H), 3.15-3.18 (m, 2H), 2.15-2.18 (m, 2H), 1.45 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 47 ：化合物 157 的製備
步驟A: (1 R, 5 S)-8-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (292 mg, 1.0 mmol)、3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-碳酸叔丁酯 (250 mg, 1.2 mmol)、DIEA (506 mg, 3.9 mmol)以及2mL DMSO，120 ℃反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品220 mg, m/z=490[M+1] +。
步驟B: 4-(6-((1 R, 5 S)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
反應瓶加入(1R, 5S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-碳酸叔丁酯 (200 mg, 0.4 mmol)、甲醇3 mL以及5N甲醇鹽酸溶液 (3 mL, 15 mmol)，25 ℃反應4小時，反應完全，減壓濃縮得產品280 mg直接用於下步反應, m/z = 390 [M+1] +。
步驟C: (2-氯-6-氟)((1 R, 5 S)-8-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-基)苯甲醯胺
反應瓶中加入4-(6-((1 R, 5 S)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽 (100 mg, 0.2 mmol)、3-氯-6-氟苯甲醯氯 (43 mg, 0.22 mmol)、DIEA (155 mg, 1.2 mmol)以及2mL DMF，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品23.2 mg, m/z=546[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD- d 3 ) δ 8.59 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.02 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.46-7.52 (m, 1H), 7.42-7.44 (m, 1H), 7.17-7.27 (m, 2H), 7.03 (d, J=8.8Hz, 1H), 4.82-4.87 (m, 1H), 4.63-4.68 (m, 1H), 4.42 (t, J=11.2Hz, 1H), 4.12 (q, J=7.2Hz, 2H), 3.57 (t, J=13.6Hz, 1H), 3.18-2.24 (m, 1H), 1.92-2.18 (m, 4H), 1.45 (t, J=6.8Hz, 3H).
實施例 48 ： 化合物 158 的製備
步驟A: 6-乙氧基-4-(6-((1 R, 5 S)-3-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-基)吡啶-8-基)-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡唑
反應瓶中加入4-(6-((1 R, 5 S)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽 (100 mg, 0.2 mmol)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 (82 mg, 0.6 mmol)、TEA (121 mg, 1.2 mmol)、2-甲基吡啶硼烷 (64 mg, 0.6 mmol)以及正丙醇3 mL，45 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品45.5 mg, m/z=511 [M+1] +。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD- d 3 ) δ 8.55 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.00-8.10 (m, 2H), 7.68-7.72 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 6.95 (d, J=9.2Hz, 1H), 6.78 (d, J=8.8Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.17 (q, J=6.8Hz, 2H), 3.88(s, 3H), 3.42-3.45 (m, 2H), 2.68-2.72 (m, 2H), 2.42-2.48 (m, 2H), 2.02-2.11 (m, 2H), 1.95-2.00 (m, 2H), 1.46 (t, J=6.8Hz, 3H).
實施例 49 ： 化合物 159 的製備
步驟A：叔丁基 5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-羧酸酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(318 mg, 1.1 mmol)、叔丁基2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-羧酸酯 (250 mg, 1.2 mmol)、DIEA (414 mg, 3.2 mmol)以及DMSO (5 mL) 加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品500 mg，m/z=490[M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
將叔丁基5-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-羧酸酯（500 mg, 1.02 mmol）加入5 mL MeOH/HCl (4M)，25 ℃反應4小時, 旋乾溶劑得產品500 mg直接用於下步反應，m/z=390 [M+1] +。
步驟C：(2-氯-6-氟苯基)-5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-基）甲酮
將4-(6-(2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（500 mg, 1.18 mmol）、 2-氯-6-氟苯甲醯氯（250 mg, 1.29 mmol）、 Et 3N (357.5 mg, 3.54 mmol)以及 DMF (5 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品412 mg，m/z=546 [M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.59 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.07 (dd, J= 8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.63-7.58 (m, 1H), 7.58-7.51 (m, 1H), 7.51-7.46 (m, 1H), 7.45-7.36 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 6.81 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.85-3.70 (m, 4H), 3.67-3.53 (m, 2H), 2.04-1.95 (m, 2H), 1.90 (d, J= 9.3 Hz, 2H), 1.40 (m, 3H)。
實施例 50 ： 化合物 160 的製備
6-乙氧基-4-(6-(5-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,5-二氮雜二環[2.2.2]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（500 mg, 1.18 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 （176 mg, 1.29 mmol）、Et 3N (357.5 mg, 3.54 mmol)、Pic-BH 3(378.8 mg, 3.54 mmol)以及正丙醇 (5mL) 加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品351 mg，m/z=511 [M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.54 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.50 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 8.03 (m, 1H), 7.70 (m,1H), 7.60 (s, 1H), 7.23 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 4.17 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.71 (m, 2H), 3.41 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 3.33 (d, J= 9.5 Hz, 3H), 2.99 (s, 1H), 2.94-2.80 (m, 2H), 2.08 (s, 1H), 1.85 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H)。
實施例 51 ： 化合物 161 的製備
(2-氯-6-氟苯基)(6-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)亞甲基
反應瓶中依次加入4-(6-(3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-6-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶（120 mg, 0.18 mmol）、DMF（2 mL）以及三乙胺（90.5 mg, 0.9 mmol），降溫至5 ℃，滴加入2-氟-5-氯苯甲醯氯（41.5 mg, 1.25 mmol），5 ℃下攪拌2小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品50 mg, m/z=532 [M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d6) δ 12.66 (s, 1H), 8.55-8.60 (m, 2H), 8.07 (s, 1H), 7.23-7.51 (m, 5H), 6.86-6.88 (m, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 4.16-4.26 (m, 3H), 3.51-3.82 (m, 2H), 2.77-2.80 (m, 1H), 1.68-1.71 (d, 1H), 1.40-1.42 (m, 3H).
實施例 52 ： 化合物 164 的製備
步驟A：7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(700 mg, 2.4 mmol)、4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯(500 mg, 2.4 mmol)、DIEA (1.5 g, 11.6 mmol)以及DMSO (10 mL)加入反應瓶，90 ℃反應12小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品670 mg，m/z=491[M+1] +。
步驟B：4-(6-(4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯（670 mg, 1.4 mmol）加入HCl的甲醇溶液（4 M, 20 mL），25 ℃反應4小時，旋乾溶劑得產品680 mg，m/z=391[M+1] +。
步驟C：N-(7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-4-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（200 mg, 0.4 mmol）、2氯-6-氟苯甲醯氯（77 mg, 0.4 mmol）、DIEA (258 mg, 2 mmol)以及DCM (10 mL) 加入反應瓶，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品100 mg，m/z=546 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (brs, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.06 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.50-7.59 (m, 2H), 7.33-7.48 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.05 (t, J= 11.2 Hz, 1H), 4.05-4.28 (m, 3H), 3.48-3.88 (m, 4H), 3.38-3.46 (m, 1H),1.38 (t, J= 6.8 Hz, 3H), 1.02-1.28 (m, 2H), 0.76-0.82 (m, 1H), 0.68-0.75 (m, 1H).
實施例 53 ： 化合物 165 的製備
6-乙氧基-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-7-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(4,7-二氮雜螺環[2.5]辛烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（200 mg, 0.4 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（165 mg, 1.2 mmol）、Et 3N (202 mg, 2.0 mmol)、Pic-BH 3(128 mg, 1.2 mmol)以及正丙醇 (10 mL) 加入反應瓶，40 ℃反應48小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品30.8 mg，m/z=511 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.15 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.62-68 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 2.78-2.86 (m, 2H),1.38 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.60-0.71 (m, 4H).
實施例 54 ： 化合物 169 的製備
步驟A：7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (120 mg, 0.4 mmol)叔丁基3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-羧酸酯 (100 mg, 0.44 mmol)、DIEA (155 mg, 1.2 mmol)以及DMSO (2 mL)加入反應瓶，90 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品150 mg, m/z=506 [M+1] +。
步驟B：7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷鹽酸鹽
將7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-羧酸叔丁酯（150 mg, 0.3 mmol）加入HCl的甲醇溶液(4 M , 5 mL)，25 ℃反應4小時，旋乾溶劑得產品160 mg, m/z=406 [M+1] +。
步驟C：N-(7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-基) -2-氯-6-氟苯甲醯胺
將7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷（60 mg ; 0.1 mmol）、2-氯-6-氟苯甲醯氯（23 mg, 0.1 mmol）、Et 3N (50 mg, 0.5 mmol)以及DMF (2 mL)加入反應瓶，25 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品15 mg, m/z=562 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.60 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.53 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.08 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.53-7.64 (m, 1H), 7.50 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.43 (t, J= 8.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.69 (d, J= 11.5 Hz, 1H), 4.53 (t, J= 12.6 Hz, 1H), 4.18 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 4.11 (d, J= 11.5 Hz, 1H), 3.94 (dd, J= 11.1, 5.5 Hz, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.62 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 3.32 (d, J= 11.8 Hz, 2H), 3.15 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 55 ： 化合物 114 的製備
步驟A: 7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-9-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷
將7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氧雜-7,9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷（100 mg , 0.2 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（83 mg , 0.6 mmol）、Pic-BH 3（64 mg , 0.6 mmol）、Et 3N (120 mg , 1.2 mmol)以及正丙醇 (5 mL) 加入反應瓶，45 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品6.5 mg , m/z = 527 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.61 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 8.06 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.77 (dd, J= 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.26 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.95 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 4.19 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 4.05 (d, J= 13.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.83 (d, J= 14.8 Hz, 7H), 3.47-3.57 (m, 2H), 2.83 (d, J= 3.3 Hz, 2H), 1.41 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 56 ： 化合物 149 的製備
6-乙氧基-4-(6-(6-(4-(甲磺醯基)苯亞甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)-吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（300 mg, 0.8 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（165 mg, 1.2 mmol）、Et 3N (202 mg, 2.0 mmol)、Pic-BH 3(128 mg, 1.2 mmol)以及DMSO (10 mL)加入反應瓶，45 ℃反應48小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品71.4 mg, m/z=544 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.11 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.58-7.70 (m, 3H), 7.27 (s, 1H), 6.91 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.16-4.21 (m, 2H), 3.51-3.83 (m, 8H), 3.20 (s, 3H), 2.58-2.65 (m, 1H), 1.57-1.65 (m, 1H), 1.39-1.42 (m, 3H).
實施例 57 ： 化合物 170 的製備
2-氯-N-(((1 R, 5 S, 6 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己基-6-基)-6-氟苯甲醯胺。
步驟A：(1 R, 5 S, 6 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基鹽酸鹽
向反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（311 mg, 1.05 mmol）、DMSO（6 mL）、DIEA（407 mg, 3.15 mmol）以及((1 R, 5 S, 6 S)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基碳酸酯（250 mg，1.26 mmol），加熱至90 ℃反應24小時，停止反應，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，再加入甲醇（2 mL）以及1,4-二氧六環/氯化氫（4M, 1 mL），室溫攪拌1小時，直接濃縮得到產品0.4 g, m/z=376[M+1] +。
步驟B：2-氯-N-((1 R, 5 S, 6 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己基-6-基)-6-氟苯甲醯胺
反應瓶中加入(1 R, 5 S, 6 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基鹽酸鹽（200 mg, 0.41 mmol）、2 mL DMF以及三乙胺（208 mg, 2.06 mmol）降溫至5 ℃，將2-氟-5-氯苯甲醯氯緩慢滴加入反應液中，滴完室溫攪拌1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品12 mg。m/z=532 [M+1] +, 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (s, 1H), 8.94-8.95 (m, 1H), 8.46-8.56 (m, 2H), 8.01-8.04 (m, 1H), 7.52-7.58 (m, 1H), 7.47-7.51 (m, 1H), 7.38-7.40 (m, 1H), 7.29-7.34 (m, 1H), 7.23-7.24 (m, 1H), 6.73-6.75 (m, 1H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.86-3.96 (m, 2H), 3.55-3.58 (d, 2H), 2.66-2.67 (m, 1H), 1.95 (s, 1H), 1.37-1.41 (m, 3H)。
實施例 58 ： 化合物 171 的製備
(1 R, 5 S, 6 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基
反應瓶中加入(1 R, 5 S, 6 S)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基鹽酸鹽（200 mg, 0.41 mmol）、DMSO（4 mL）、三乙胺（208 mg, 2.06 mmol）以及6-甲氧基-3-吡啶甲醛（170 mg, 1.24 mmol），然後滴加2-甲基吡啶硼烷（132.4 mg, 1.24 mmol），室溫反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品3 mg，m/z=497 [M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.63 (s, 1H), 8.50-8.56 (m, 2H), 7.98-8.08 (m, 2H), 7.57-7.65 (m, 2H), 7.20-7.23 (m, 1H), 6.81-6.87 (m, 1H), 6.61-6.64 (m, 1H), 4.14-4.19 (m, 2H), 3.85-3.90 (m, 5H), 3.60-3.63 (m, 5H), 1.52-1.55 (m, 2H), 1.39-1.46 (m, 3H), 1.20 (s, 1H)。
實施例 59 ： 化合物 172 的製備
2-氯-N-(((1 R, 5 S, 6 R)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己基-6-基)-6-氟苯甲醯胺。
步驟A：(1 R, 5 S, 6 R)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基鹽酸鹽
向反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（311 mg, 1.05 mmol）、DMSO（2 mL）、DIEA（407 mg, 3.15 mmol）以及((1 R, 5 S, 6 R)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基碳酸酯（250 mg, 1.26 mmol），升溫至90 ℃反應24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，剩餘物加入甲醇（2 mL）和1,4-二氧六環/氯化氫（4M, 2 mL），室溫攪拌2小時，減壓濃縮到產品0.4 g直接用於下步反應，m/z=376 [M+1] +。
步驟B：2-氯-N-((1 R, 5 S, 6 R)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己基-6-基)-6-氟苯甲醯胺
反應瓶中加入(1 R, 5 S, 6 R)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基鹽酸鹽（200 mg, 0.41 mmol）、2 mL DMF以及三乙胺（208 mg, 2.06 mmol），降溫至5 ℃，將2-氟-5-氯苯甲醯氯緩慢滴加入反應液中，滴完室溫攪拌1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品65 mg，m/z=532 [M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d6) δ 12.64 (s, 1H), 8.63-8.64 (m, 1H), 8.49-8.49 (m, 2H), 7.95-7.97 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.35-7.41 (m, 1H), 7.16-7.23 (m, 3H), 6.58-6.60 (m, 1H), 7.23-7.24 (m, 1H), 6.73-6.75 (m, 1H), 4.14-4.19 (m, 2H), 3.70 (s, 4H), 2.92-2.96 (m, 1H), 2.08-2.13 (m, 2H), 1.35-1.45 (m, 3H)。
實施例 60 ： 化合物 173 的製備
(1 R, 5 S, 6 R)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基
反應瓶中加入(1 R, 5 S, 6 R)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]-6-己基胺基鹽酸鹽（200 mg, 0.41 mmol）、正丙醇（4 mL）、三乙胺（208 mg, 2.06 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（170 mg, 1.24 mmol）以及2-甲基吡啶硼烷（132.4 mg, 1.24mol），40 ℃反應20小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品4.8 mg，m/z=497 [M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.63 (s, 1H), 8.48-8.53 (s, 2H), 7.97-8.01 (m, 2H), 7.51-7.58 (m, 2H), 7.21-7.21 (m, 1H), 6.55-6.63 (m, 2H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.65-3.72 (m, 4H), 3.33-3.35 (m, 3H), 2.22-2.25 (m, 1H), 1.83-1.84 (m, 2H), 1.38-1.41 (t, 3H)。
實施例 61 ： 化合物 174 的製備
2-氯-N-(((3a R, 5 S, 6a S)-2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-八氫環戊基[c]吡咯基5-基)-6-氟苯甲醯胺。
步驟A：2-氯-6-氟-N-(((3a R, 5 S, 6a S)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)苯甲醯胺鹽酸鹽
向反應瓶中加入(3a R, 5 S, 6a S)-5-胺基六氫環戊基[c]吡咯-2(1H)-碳酸叔丁酯鹽酸鹽（120 mg, 0.53 mmol）、二氯甲烷（2 mL）、三乙胺（107 mg, 1.06 mmol）以及6-氟-2-氯苯甲醯氯 (113 mg, 0.58 mmol），室溫攪拌1小時。倒入水，DCM萃取兩次，濃縮至不出後，剩餘物加入甲醇（1 mL）以及1,4-二氧六環/氯化氫（4M, 2 mL）室溫攪拌2小時，減壓濃縮得到產品140 mg直接用於下步反應，m/z=283 [M+1] +。
步驟B：2-氯-N-(((3a R, 5 S, 6a S)-2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-八氫環戊基[c]吡咯基5-基)-6-氟苯甲醯胺
反應瓶中加入2-氯-6-氟-N-(((3a R, 5 S, 6a S)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)苯甲醯胺鹽酸鹽（65 mg, 0.2 mmol）、2 mL DMSO、DIEA（65.7 mg, 0.51 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（65 mg, 0.2 mmol），加熱至90 ℃反應24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品30 mg，m/z=560 [M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d6) δ 12.64 (s, 1H), 8.80-8.82 (m, 1H), 8.50-8.55 (m, 2H), 7.80-8.02 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.43-7.48 (m, 1H), 7.35-7.37 (m, 1H), 7.26-7.31 (m, 1H), 7.21-7.22 (m, 1H), 6.72-6.74 (m, 1H), 4.29-4.35 (m, 1H), 4.14-4.19 (m, 2H), 3.59-3.63 (m, 2H), 3.49-3.52 (m, 2H), 2.78-2.80 (m, 2H), 2.32-2.38 (m, 2H), 1.37-1.50 (m, 5H)。
實施例 62 ： 化合物 176 的製備
2-氯-N-(((3a R, 5 R, 6a S)-2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-八氫環戊基[c]吡咯基5-基)-6-氟苯甲醯胺。
步驟A：2-氯-6-氟-N-(((3a R, 5 R, 6a S)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)苯甲醯胺鹽酸鹽
向反應瓶中加入(3a R, 5 R, 6a S)-5-胺基六氫環戊基[c]吡咯-2(1H)-碳酸叔丁酯鹽酸鹽（120 mg, 0.53 mmol）、二氯甲烷（2 mL）、三乙胺（107 mg, 1.06 mmol）以及6-氟-2-氯苯甲醯氯 (113 mg, 0.58 mmol），室溫攪拌1小時。倒入水，DCM萃取兩次，濃縮至不出後，剩餘物加入甲醇（1 mL）以及1,4-二氧六環/氯化氫（4M, 2 mL）室溫攪拌2小時，減壓濃縮得到產品170 mg直接用於下步反應，m/z=283 [M+1] +。
步驟B：2-氯-N-(((3a R, 5 R, 6a S)-2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-八氫環戊基[c]吡咯基5-基)-6-氟苯甲醯胺
反應瓶中加入2-氯-6-氟-N-(((3a R, 5 R, 6a S)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)苯甲醯胺鹽酸鹽（74 mg, 0.23 mmol）、2 mL DMSO、DIEA（74.8 mg, 0.58 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（57.4 mg, 0.19 mmol），加熱至90 ℃反應24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品17 mg，m/z= 560 [M+1] +， 1H NMR (400MHz, DMSO- d6) δ 12.64 (s, 1H), 8.78-8.80 (m, 1H), 8.50-8.59 (m, 2H), 8.00-8.03 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.45-7.50 (m, 1H), 7.37-7.38 (m, 1H), 7.28-7.32 (m, 1H), 7.22-7.23 (m, 1H), 6.72-6.75 (m, 1H), 4.37-4.45 (m, 1H), 4.14-4.25 (m, 2H), 3.63-3.67 (m, 2H),3.40-3.43 (m, 2H), 2.91-2.95 (m, 2H), 1.86-2.01 (m, 4H), 1.38-1.41 (m, 3H).
實施例 63 ： 化合物 180 的製備
(2-氯-6-氟苯基)((3a R, 7a S)-2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)八氫-1H-4,7-表亞胺基異吲哚-8-基)甲酮。
步驟A：(2-氯-6-氟苯基)(( 3a R, 7a S)-八氫-1H-4,7-表亞胺基異吲哚-8-基)甲酮鹽酸鹽
向反應瓶中加入(3a R, 7a S)-八氫-2H-4,7-表亞胺基異吲哚-2-碳酸叔丁酯（100 mg, 0.35 mmol）、二氯甲烷（2 mL）、三乙胺（70 mg, 0.69 mmol）以及6-氟-2-氯苯甲醯氯 (80.3mg, 0.42 mmol），室溫攪拌1小時。倒入水，DCM萃取兩次，濃縮至不出後，加入甲醇（1 mL）以及1,4-二氧六環/氯化氫（4M, 2 mL），室溫攪拌2小時，減壓濃縮得到產品50 mg直接用於下步反應，m/z=295 [M+1] +。
步驟B：(2-氯-6-氟苯基)((3a R, 7a S)-2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶- 4-基)吡啶-2-基)八氫-1H-4,7-表亞胺基異吲哚-8-基)甲酮
反應瓶中加入(2-氯-6-氟苯基)((3a R, 7a S)-八氫-1H-4,7-表亞胺基異吲哚-8-基)甲酮鹽酸鹽（50 mg, 0.15 mmol）、2 mL DMSO、K 2CO 3（69.5 mg, 0.5 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（37.4 mg, 0.13 mmol），加熱至90 ℃反應24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品5 mg, m/z=572[M+1] +, 1H NMR (400MHz, DMSO- d6) δ 12.64 (s, 1H), 8.51-8.57 (d, 2H), 8.04-8.07 (m, 1H), 7.37-7.58 (m, 5H), 7.25 (s, 1H), 6.83-6.85 (m, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.85-3.88 (m, 1H), 3.75-3.78 (m, 2H), 3.03-3.18 (m, 5H), 3.90 (s, 1H), 1.59-1.62 (m, 4H), 1.34-1.41 (t, 3H), 2.78-2.80 (m, 2H), 2.32-2.38 (m, 2H), 1.37-1.50 (m, 5H)。
實施例 64 ： 化合物 128 的製備
6-乙氧基-4-(6-(((3a R, 7a S)-8-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)八氫-2H-4,7-表胺基異吲哚-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶。
步驟A：(3a R, 7a S)-8-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)八氫-1H-4,7-表胺基異吲哚鹽酸鹽
向反應瓶中加入(3a R, 7a S)-八氫-2H-4,7-表胺基異吲哚-2-碳酸叔丁酯（100 mg, 0.35 mmol）、二氯甲烷（2 mL）、三乙胺（70 mg, 0.69 mmol）以及5-(氯甲基)-2-甲氧基吡啶 (80.3 mg, 0.42 mmol），50 ℃反應16小時。倒入水，DCM萃取兩次，濃縮至不出後，加入甲醇（1 mL）以及1,4-二氧六環/氯化氫（4M, 2 mL），室溫攪拌2小時，減壓濃縮得到產品30 mg直接用於下步反應，m/z=260 [M+1] +。
步驟B：6-乙氧基-4-(6-(((3a R, 7a S)-8-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)八氫-2H-4,7-表胺基異吲哚-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
反應瓶中加入(3a R, 7a S)-8-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)八氫-1H-4,7-表胺基異吲哚鹽酸鹽（30 mg, 0.10 mmol）、2 mL DMSO、K 2CO 3（69.5 mg, 0.5 mmol）以及6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（30 mg, 0.1 mmol），加熱升溫至90 ℃反應24小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品4 mg，m/z=537 [M+1] +, 1H NMR (400MHz, DMSO- d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.51-8.58 (m, 2H), 8.04-8.14 (m, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.26 (d, 1H), 6.83-6.85 (d, 2H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.80-3.85 (m, 5H), 3.09-3.18 (m, 2H), 2.89-2.93 (m, 2H), 1.40-1.46 (m, 4H), 1.21-1.29 (m, 5H), 1.18-1.98 (m, 1H), 1.09-1.10 (m, 1H).
實施例 65 ： 化合物 183 的製備
步驟A：3-苯基-6-乙基-(1 R, 5 S, 6 r)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,6-羧酸酯
反應瓶中加入2,5-二氫-1H-吡咯-1-碳酸苯酯 (5.0 g, 24.6 mmol)、Ph 2(OAc) 4(500 mg, 1.1 mmol)以及50 mL DCE，氮氣保護，加熱到80 ℃，將2-重氮乙酸乙酯(14 g, 123 mmol)溶於50 mL DCE，4小時滴加至反應液，加完後80 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品3.59 g，m/z=290 [M+1] +。
步驟B：(1 R, 5 S, 6 r)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-碳酸乙酯
反應瓶中加入3-苯基-6-乙基(1 R, 5 S, 6 r)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,6-羧酸酯 (3.5 g, 12 mmol)、無水甲醇 (30 mL)以及鈀碳 (600 mg)，氫氣置換兩次後，25 ℃反應18小時，反應完全，加矽藻土過濾，減壓濃縮得到(1 R, 5 S, 6 R)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-碳酸乙酯粗品2.0 g直接用於下一步反應，m/z = 156 [M+1] +。
步驟C：(1 R, 5 S, 6 r)-3-(5-溴吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-碳酸乙酯
反應瓶加入5-溴-2-氟吡啶（1.1 g, 6.4 mmol）、(1 R, 5 S, 6 r)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-碳酸乙酯 (2.0 g)、碳酸鉀（2.6 g, 19 mmol）以及10 mL DMSO，110 ℃反應3小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品890 mg，m/z = 311 [M+1] +。
步驟D：((1 R, 5 S, 6 r)-3-(5-溴吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲醇
應瓶加入(1 R, 5 S, 6 r)-3-(5-溴吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-碳酸乙酯(750 mg, 2.4 mmol)以及THF (20 mL)，氮氣保護，加入LiBH 4(209 mg, 9.6 mmol)，50 ℃反應5小時，補加LiBH 4(156 mg, 7.2 mmol)，50 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品340 mg，m/z = 269 [M+1] +。
步驟E：叔丁基(((1 R, 5 S, 6 r)-3-(5-溴吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲基)(叔丁氧羰基)胺基甲酸酯
應瓶加入((1 R, 5 S, 6 r)-3-(5-溴吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲醇(340 mg, 1.2 mmol)、HN(Boc) 2(412 mg, 1.9 mmol)、三苯基磷 (660 mg, 2.5 mmol）以及THF (15 mL)，氮氣保護，然後將偶氮二甲酸二乙酯 (438 mg, 2.5 mmol)滴加至反應液，50 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品505 mg，m/z = 468 [M+1] +。
步驟F：叔丁基(((1 R,5 S, 6 r)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲基) (叔丁氧羰基)胺基甲酸酯
應瓶加入6-乙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(360 mg, 1.1 mmol)、(((1 R, 5 S, 6 s)-3-(5-溴吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲基) (叔丁氧羰基)胺基甲酸酯 (500 mg, 1.1 mmol)、碳酸銫 (1.0 g, 3.3 mmol)、1,4-二氧六環 (10 mL)以及水 (2 mL)，氮氣置換，加入Pd(dppf)Cl 2(73.1 mg, 0.1 mmol)，50 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品330 mg，m/z = 589 [M+1] +。
步驟G：((1 R, 5 S, 6 s)-3-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲胺鹽酸鹽
反應瓶加入叔丁基(((1R, 5S, 6 r)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲基) (叔丁氧羰基)胺基甲酸酯 (330 mg, 0.56 mmol)、4N鹽酸-二氧六環溶液 (5 mL, 20 mmol)以及甲醇(1 mL)，25 ℃反應16小時，反應完全，減壓濃縮得產品300 mg直接用於下步反應，m/z = 389 [M+1] +。
步驟H：2-氯-N-(((1 R, 5 S, 6 s)-3-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲基)-6-氟苯甲醯胺
反應瓶中加入((1 R, 5 S, 6 s)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲胺鹽酸鹽 (120 mg, 0.3 mmol)、3-氯-6-氟苯甲醯氯 (59 mg, 0.3 mmol)、DIEA (232 mg, 1.8 mmol)以及3mL DMF，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品11.5 mg，m/z=546 [M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.63 (brs, 1H), 8.85-8.88 (m, 1H), 8.50-8.53 (m, 2H), 8.00 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.44-7.59 (m, 2H), 7.29-7.42 (m , 2H), 7.21 (s, 1H), 6.68 (d, J=8.8Hz, 1H), 4.14 (q, J=6.8Hz, 1H), 3.74-3.76 (m, 2H), 3.47-3.50 (m, 2H), 3.25-3.28 (m, 2H), 1.75-1.79 (m, 2H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H), 0.88-0.94 (m, 1H).
實施例 66 ： 化合物 184 的製備
步驟A：N-(((1 R, 5 S, 6 s)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲基)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-N-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)甲胺
反應瓶中加入((1 R, 5 S, 6 s)-3-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-基)甲胺鹽酸鹽 (170 mg, 0.44 mmol)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 (178 mg, 1.3 mmol)、TEA (212 mg, 2.1 mmol)、2-甲基吡啶硼烷 (139 mg, 1.3 mmol)以及正丙醇10 mL，45 ℃反應18小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品6.4 mg，m/z=511[M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (brs, 1H), 8.50-8.55 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 8.00 (d, J=8.4Hz, 1H), 7.67-7.71 (m, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.61 (d, J=8.8Hz, 1H), 4.14-4.18 (m, 2H), 3.74-3.76 (m, 2H), 3.52-3.61 (m, 3H), 3.37-3.42 (m, 2H), 2.32-2.45 (m, 2H), 1.41-1.48 (m, 2H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H), 0.80-0.88 (m, 1H).
實施例 67 ： 化合物 187 的製備
步驟A: 叔丁基 5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,5-二氮雜螺環[3.4]辛烷-5-羧酸酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(318 mg, 1.1 mmol)、叔丁基2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-羧酸酯 (254 mg, 1.2 mmol)、DIEA (414 mg, 3.2 mmol)以及DMSO (5mL)加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品511 mg，m/z=490 [M+1] +。
步驟B: 4-(6-(2,5-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將叔丁基5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-羧酸酯（511 mg, 1.04 mmol）加入5 mL MeOH/HCl (4M)，25 ℃反應4小時減壓濃縮得產品500 mg直接用於下步反應，m/z=390 [M+1] +。
步驟C: (2-氯-6-氟苯基)-5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,5-二氮雜螺環[3.4]辛烷-5-基)甲酮
將4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（500 mg, 1.18 mmol）、2-氯- 6-氟苯甲醯氯（250 mg, 1.29 mmol）、Et 3N (358 mg, 3.54 mmol)以及DMF (5 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品398 mg, m/z=546 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.65 (s, 1H), 8.57 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.06 (m,1H), 7.59 (s, 1H), 7.53 (m, 1H), 7.49-7.34 (m, 2H), 7.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.86 (t, J= 8.4 Hz, 2H), 4.18 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 4.05 (dd, J= 9.6, 7.8 Hz, 2H), 3.23 (td, J= 6.6, 1.9 Hz, 2H), 2.42 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H)。
實施例 68 ： 化合物 188 的製備
6-乙氧基-4-(6-(5-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2,5-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,5-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（500 mg;1.18 mmol）, 6-甲氧基-3-吡啶甲醛（176 mg, 1.29 mmol）、Et 3N (357.5 mg, 3.54 mmol)、Pic-BH 3(378.8 mg, 3.54 mmol)以及正丙醇(5 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品346 mg，m/z=511 [M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6)  12.65 (s, 1H), 8.54 (dd, J= 16.4, 2.2 Hz, 2H), 8.13-8.00 (m, 2H), 7.69 (dd, J= 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.24 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.29 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 4.18 (m, 2H), 3.95 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 2H), 2.56 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 2.14 (dd, J= 9.1, 6.4 Hz, 2H), 1.71 (t, J= 7.7 Hz, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H)。
實施例 69 ： 化合物 189 的製備
步驟A：叔丁基 5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-羧酸酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(318 mg, 1.1 mmol)、叔丁基2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-羧酸酯 (254.4 mg, 1.2 mmol)、DIEA (414 mg, 3.2 mmol)以及DMSO (5 mL) 加入反應瓶，90 ℃反應12小時加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品511 mg, m/z=490 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
將叔丁基5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-羧酸酯（511 mg, 1.04 mmol）加入5 mL MeOH/HCl (4M)，25 ℃反應4小時, 減壓濃縮得產品500 mg直接用於下步反應，m/z=390 [M+1] +。
步驟C：(2-氯-6-氟苯基)-5-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-基)甲酮
將4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（500 mg, 1.18 mmol）、2-氯-6-氟苯甲醯氯（250 mg, 1.29 mmol）、Et 3N (357.5 mg, 3.54 mmol)以及DMF (5 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品398 mg，m/z=546 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.55 (dd, J= 12.5, 2.5 Hz, 1H), 8.52 (m, 1H), 8.03 (m, 1H), 7.61-7.33 (m, 4H), 7.28-7.20 (m, 1H), 6.64 (dd, J= 21.1, 8.7 Hz, 1H), 4.18 (m, 2H), 4.13-3.91 (m, 4H), 3.89-3.73 (m, 1H), 3.71-3.54 (m, 1H), 3.43 (s, 1H), 3.25 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 2.25 (m, 2H), 1.40 (m, 3H)。
實施例 70 ： 化合物 190 的製備
6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（500 mg，1.18mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（176 mg, 1.29 mmol）、Et 3N (357.5 mg, 3.54 mmol)、Pic-BH 3(378.8 mg, 3.54 mmol)以及正丙醇 (5 mL)加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品346 mg，m/z=511 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (s, 1H), 8.52 (dd, J= 8.4, 2.3 Hz, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.01 (dd, J= 8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.22 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.17 (m, 2H), 3.97 (t, J= 6.1 Hz, 4H), 3.84 (s, 3H), 3.06 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 2.77 (s, 2H), 2.58 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.39 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 1.19 (t, J= 7.3 Hz, 1H)。
實施例 71 ： 化合物 191 的製備
步驟A：2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(250 mg , 0.8 mmol)、叔丁基2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-羧酸酯 (230 mg , 0.9 mmol)、DIEA (520 mg , 4 mmol)以及DMSO (2 mL)加入反應瓶，90 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品390 mg，m/z=504 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
將叔丁基2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-羧酸酯（390 mg, 0.7 mmol）加入HCl的甲醇溶液(4 M, 5 ml)，25 ℃反應4小時，減壓濃縮得產品370 mg直接用於下步反應, m/z=404 [M+1] +。
步驟C：N-(2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-基) -2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg , 0.2 mmol）、2-氯-6-氟苯甲醯氯（46 mg, 0.2 mmol）、Et 3N (100 mg, 1.0 mmol)以及DMF (2 mL)加入反應瓶，25 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品47 mg, m/z=560 [M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (s, 1H), 8.53 (dd, J= 10.4, 2.3 Hz, 2H), 8.03 (dd, J= 8.6, 2.5 Hz, 1H), 7.48-7.59 (m, 2H), 7.33-7.49 (m, 2H), 7.23 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.18 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 3.80-3.91 (m, 4H), 3.73 (tq, J= 13.6, 7.4, 6.9 Hz, 2H), 3.15-3.26 (m, 2H), 1.71-1.91 (m, 4H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 72 ： 化合物 192 的製備
6-乙氧基-4-(6-(7-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg, 0.2 mmol）、6-甲氧基煙醛（83 mg , 0.6 mmol）、Pic-BH 3（64 mg , 0.6 mmol）、 Et 3N (120 mg , 1.2 mmol)以及正丙醇(5 mL)加入反應瓶，45 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品37 mg, m/z=525 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (s, 1H), 8.52 (dd, J= 7.4, 2.3 Hz, 2H), 7.97-8.09 (m, 2H), 7.65 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.23 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.17 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.76 (s, 4H), 3.42 (s, 2H), 2.35 (s, 4H), 1.78 (s, 3H), 1.78 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 73 ： 化合物 193 的製備
步驟A：2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-6-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(250 mg, 0.8 mmol)、叔丁基2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-6-羧酸酯(230 mg , 0.9 mmol)、DIEA (520 mg , 4 mmol)以及DMSO (2 mL)加入反應瓶，90 ℃反應16小時加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品370 mg, m/z=504 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
將叔丁基2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-6-羧酸酯（370 mg , 0.7 mmol）加入HCl的甲醇溶液 (4M, 5 mL)，25 ℃反應4小時，減壓濃縮得產品370 mg直接用於下步反應, m/z=404 [M+1] +。
步驟C：N-(2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-6-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg; 0.2 mmol）、2-氯-6-氟苯甲醯氯（46 mg , 0.2 mmol）、Et 3N (100 mg, 1.0 mmol)以及DMF (2 mL)加入反應瓶，25 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品36 mg, m/z=560 [M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (s, 1H), 8.59-8.48 (m, 2H), 8.03 (dd, J= 21.8, 8.6, 2.5 Hz, 1H), 7.41-7.62 (m, 3H), 7.34-7.43 (m, 1H), 7.23 (dd, J= 17.9, 2.1 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.12-4.23 (m, 2H), 4.08 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 3.90 (dd, J= 11.8, 8.2 Hz, 1H), 3.79 (dq, J= 8.0, 4.1, 2.8 Hz, 3H), 3.70 (s, 1H), 3.44 (s, 1H), 3.13-3.22 (m, 1H), 1.84-1.98 (m, 2H), 1.59 (d, J= 28.4 Hz, 4H), 1.40 (td, J= 7.0, 3.5 Hz, 3H).
實施例 74 ： 化合物 194 的製備
6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg; 0.2 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（83 mg , 0.6 mmol）、Pic-BH 3（64 mg , 0.6 mmol）、Et 3N (120 mg, 1.2 mmol)以及正丙醇 (5 mL) 加入反應瓶，45 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品32 mg, m/z=525 [M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (s, 1H), 8.51 (t, J= 1.9 Hz, 2H), 8.08 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.99 (dd, J= 8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, J= 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.22 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.57 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.17 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.70 (s, 4H), 3.47 (s, 2H), 2.28-2.34 (m, 4H), 1.52-1.69 (m, 4H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 75 ： 化合物 195 的製備
步驟A：2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(250 mg , 0.8 mmol)、2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(240 mg, 1.0 mmol)、DIEA(520 mg, 4 mmol)以及DMSO (2 mL)加入反應瓶，90 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品360 mg, m/z=518 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯（360 mg, 0.7 mmol）加入HCl的甲醇溶液(4M, 5 mL)，25 ℃反應4小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品370 mg, m/z=418 [M+1] +。
步驟C：N-(2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基) 2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg, 0.2 mmol）、2-氯-6-氟苯甲醯氯（46 mg, 0.2 mmol）、Et 3N (100 mg, 1.0 mmol)以及DMF (2 mL)加入反應瓶，25 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品55 mg, m/z=574 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.53 (dd, J= 19.9, 2.3 Hz, 2H), 8.01 (dd, J= 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.52 (td, J= 8.2, 6.2 Hz, 1H), 7.45 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.37 (t, J= 8.5 Hz, 1H), 7.22 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.18 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 3.78-3.92 (m, 1H), 3.69 (dtd, J= 13.4, 8.7, 8.1, 3.8 Hz, 1H), 3.57 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.40-3.55 (m, 2H), 3.27 (q, J= 4.9 Hz, 2H), 1.97 (dddd, J= 15.5, 12.3, 9.2, 5.0 Hz, 2H), 1.46-1.74 (m, 4H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 76 ： 化合物 196 的製備
6-乙氧基-4-(6-(8-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（100 mg, 0.2 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（83 mg , 0.6 mmol）、Pic-BH 3（64 mg, 0.6 mmol）、Et3N (120 mg, 1.2 mmol)以及正丙醇 (5 mL) 加入反應瓶，45 ℃反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品15 mg, m/z=539 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (s, 1H), 8.52 (dd, J= 16.8, 2.3 Hz, 2H), 8.07 (s, 1H), 8.00 (dd, J= 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.65 (dd, J= 8.3, 2.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.22 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.17 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.53 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 3.45 (s, 3H), 3.33 (s, 2H), 3.27 (s, 1H), 2.51 (m, 2H), 2.21-2.42 (m, 3H), 1.87 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 1.60 (s, 4H), 1.40 (t, J= 7.0 Hz, 3H).
實施例 77 ： 化合物 197 的製備
步驟A：2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-7-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶(310 mg, 1.04 mmol)、 2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-7-羧酸叔丁酯(250 mg, 1.04 mmol)、DIEA (430 mg, 3.12 mmol)以及DMSO (5 mL) 加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品350 mg, m/z=518 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-7-羧酸叔丁酯（350 mg, 0.676 mmol）加入HCl的甲醇溶液 (4M, 10 mL)，25 ℃反應4小時，減壓濃縮得產品320 mg直接用於下步反應, m/z=418 [M+1] +。
步驟C：N-(2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-7-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽（160 mg, 0.3 mmol）、2-氯-6-氟苯甲醯氯（58 mg, 0.3 mmol）、DIEA (194 mg, 1.5 mmol)以及DCM (5 mL)加入反應瓶，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品48.3 mg, m/z=573[M+1] +, 1H-NMR (400MHz, DMSO- d 6) δ 12.63 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.32-7.59 (m, 4H), 7.23 (s, 1H), 6.68 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.45-3.73 (m, 4H), 3.01-3.39 (m, 4H), 1.45-2.13 (m, 6H), 1.37-1.41 (m, 3H)。
實施例 78 ： 化合物 198 的製備
6-乙氧基-4-(6-(7-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,7-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽(160 mg, 0.3 mmol)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 (124 mg, 0.9 mmol)、Et 3N (152 mg, 1.5 mmol)以及正丙醇 (10 mL)加入反應瓶，45 ℃反應48小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品16.0 mg, m/z=539 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.52 (dd, J= 17.8, 2.3 Hz, 2H), 7.95-8.07 (m, 2H), 7.62 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.22 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.68 (dd, J= 27.0, 8.6 Hz, 2H), 4.18 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.55 (d, J= 10.4 Hz, 2H), 3.29-3.50 (m, 3H), 3.25 (d, J= 10.7 Hz, 1H), 2.46 (s, 1H), 2.29 (s, 2H), 2.15 (s, 1H), 1.97 (s, 1H), 1.78 (dt, J= 12.2, 8.0 Hz, 1H), 1.56 (d, J= 14.6 Hz, 3H), 1.40 (m, 4H).
實施例 79 ： 化合物 199 的製備
步驟A：2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-6-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (125 mg, 0.4 mmol)、2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-6-羧酸叔丁酯 (100 mg, 0.4 mmol)、DIEA (1.5 g, 2.0 mmol)以及DMSO (3 mL)加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品200 mg, m/z=518[M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-6-羧酸叔丁酯 (200 mg, 0.39 mmol) 加入HCl的1,4-二氧六環溶液(4M, 9 mL)，25 ℃反應4小時。減壓濃縮得產品170 mg直接用於下步反應, m/z=418 [M+1] +。
步驟C：N-(2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-6-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽(85 mg, 0.16 mmol)、2-氯-6-氟苯甲醯氯 (32 mg, 0.16 mmol)、DIEA (125 mg, 1 mmol)以及DCM (3 mL) 加入反應瓶，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品60 mg, m/z=574 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.58 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.05 (dt, J= 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.31-7.55 (m, 3H), 7.24 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.75 (dd, J= 8.7, 4.7 Hz, 1H), 4.18 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 4.07 (dd, J= 18.3, 7.7 Hz, 2H), 3.71 (s, 1H), 3.54 (s, 1H), 2.83 -2.70 (m, 1H), 2.51-2.65 (m, 1H), 1.46-1.93 (m, 8H), 1.41 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 80 ： 化合物 200 的製備
6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,6-二氮雜螺環[4.5]辛烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽(85 mg, 0.16 mmol)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 (66 mg, 0.48 mmol)、Et 3N (81 mg, 0.8 mmol)、Pic-BH 3(52 mg, 0.48 mmol)以及DMSO (3 mL)加入反應瓶，45 ℃反應72小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品21.3 mg, m/z=539 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.56 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.99-8.10 (m, 2H), 7.67 (dd, J= 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.23 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.76 (dd, J= 12.8, 8.6 Hz, 2H), 4.18 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (m, 2H), 3.53 (dd, J= 14.8, 9.0 Hz, 4H), 3.31 (s, 2H), 2.44 (s, 2H), 1.70 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 1.56-1.62 (m, 2H), 1.45 (d, J= 11.8 Hz, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H).
實施例 81 ： 化合物 201 的製備
步驟A：7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-2-基)吡啶-2-基)-1,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-1-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (300 mg, 1 mmol)、1,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-1-羧酸叔丁酯 (226 mg, 1 mmol)、DIEA (645 mg, 5 mmol)以及DMSO (3 mL)加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品497 mg, m/z=504 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(1,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-2-基)吡啶-2-基)-1,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-1-羧酸叔丁酯 (497 mg, 1 mmol)加入HCl的1,4-二氧六環溶液 (4M, 10 mL)，25 ℃反應4小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品470 mg, m/z=404 [M+1] +。
步驟C：N-(7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-1,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-1-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(1,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽 (50 mg, 0.1 mmol)、2-氯-6-氟苯甲醯氯 (19 mg, 0.1 mmol)、DIEA (65 mg, 0.5 mmol)以及DCM (3 mL)加入反應瓶，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品5.1 mg, m/z=560 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.72 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 8.60 (dd, J= 6.1, 2.6 Hz, 1H), 8.52 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 8.11-8.02 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.57-7.41 (m, 1H), 7.46-7.24 (m, 2H), 7.02 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.18 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.83 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.41 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 12.6 Hz, 1H), 2.36-2.18 (m, 4H), 1.98 (d, J= 12.6 Hz, 1H), 1.40 (t, J= 7.0 Hz, 3H)。
實施例 82 ： 化合物 202 的製備
步驟A：7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (600 mg, 2 mmol)、2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯 (100 mg, 2 mmol)、DIEA (1.3 g, 10 mmol)以及DMSO (10 mL)加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品840 mg, m/z=504 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯 (840 mg, 1.67 mmol)加入HCl的1,4-二氧六環溶液(4M, 20 mL)，25 ℃反應4小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品730 mg, m/z=404[M+1] +。
步驟C：N-(7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-2-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽(50 mg, 0.1 mmol)、2-氯-6-氟苯甲醯氯 (19 mg, 0.1 mmol)、DIEA (65 mg, 0.5 mmol)以及DCM (3 mL)加入反應瓶，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品19.2 mg, m/z=560 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.03 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51-7.55 (m, 1H), 7.44 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.35-7.39 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.10 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.89 (s, 2H), 3.50-3.71 (m, 6H), 1.70-1.89 (m, 4H), 1.38-1.43 (m, 3H).
實施例 83 ： 化合物 203 的製備
6-乙氧基-4-(6-(2-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,7-二氮雜螺環[3.5]辛烷-7-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(2,7-二氮雜螺環[3.5]壬烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽(100 mg, 0.19 mmol)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 (80 mg, 0.58 mmol)、Et 3N (98 mg, 0.97 mmol)、Pic-BH 3(63 mg, 0.58 mmol)以及DMSO (3 mL)加入反應瓶，45 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品6.1 mg, m/z=525 [M+1] +, 1H-NMR(400MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs,1H), 8.56 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.06 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.14-4.19 (m,2H), 3.83 (s, 3H), 3.48-3.67 (m, 6H), 2.92-3.09 (m, 4H), 1.65-1.81 (m, 4H), 1.38-1.43 (m, 3H).
實施例 84 ： 化合物 206 的製備
步驟A：8-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-1,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶 (150 mg, 0.5 mmol)、1,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯 (120 mg, 0.5 mmol)、DIEA (323 mg, 2.5 mmol)以及DMSO (3 mL)加入反應瓶，90 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品181 mg, m/z=518 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(1,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
8-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-1,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯 (181 mg, 0.35 mmol)加入HCl的1,4-二氧六環溶液 (4M, 5 mL)，25 ℃反應4小時，減壓濃縮得產品150 mg直接用於下步反應, m/z=418 [M+1] +。
步驟C：N-(8-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-1,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-基)2-氯-6-氟苯甲醯胺
將4-(6-(1,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽、2-氯-6-氟苯甲醯氯 (18 mg, 0.1 mmol)、DIEA (65 mg, 0.5 mmol)以及DCM (3 mL)加入反應瓶，25 ℃反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品2.6 mg, m/z=574[M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.04 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.55-7.63 (m, 2H), 7.27-7.38 (m, 2H), 7.12 (s, J= 11.2 Hz, 1H), 4.48-4.56 (m, 2H), 4.17 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 3.16-3.24 (m, 2H), 2.89-3.08 (m, 4H), 2.12-2.20 (m, 2H), 1.80-1.87 (m, 2H), 1.52-1.58 (m, 2H), 1.38 (t, J= 6.8 Hz, 3H).
實施例 85 ： 化合物 207 的製備
6-乙氧基-4-(6-(1-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-1,8-二氮雜螺環[4.5]辛烷-8-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-(6-(1,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽 (100 mg, 0.19 mmol)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛 (80 mg, 0.57 mmol)、Et 3N (98 mg, 0.8 mmol)、Pic-BH 3(63 mg, 0.57 mmol)以及DMSO (3 mL)加入反應瓶，45 ℃反應12小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品23.8 mg, m/z=539 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.65 (brs, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.99-8.05 (m, 2H), 7.54-7.63 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.09 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.46-4.55 (m, 2H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.50 (s, 2H), 2.93-3.00 (m, 2H), 2.55-3.59 (m, 2H), 1.85-1.92 (m, 2H), 1.65-1.84 (m, 4H), 1.40-1.51 (m, 2H), 1.39-1.41 (m, 3H).
實施例 86 ： 化合物 208 的製備
步驟A: 8-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-碳酸叔丁酯
向反應瓶中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（297 mg, 1.0 mmol）、2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-羧酸叔丁酯（240 mg, 1.0 mmol）、二異丙基乙基胺（390 mg, 3.0 mmol）以及DMSO（4 mL）。升溫100 oC反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品510 mg, m/z = 518 [M+1] +。
步驟B: 4-(6-(2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶鹽酸鹽
向反應瓶中依次加入甲醇（5 mL）、9-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3, 9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-碳酸叔丁酯（510 mg, 1.0 mmol）以及6 N HCl的1,4-二氧六環溶液（4.0 mL, 24.0 mmol），室溫反應30分鐘，直接減壓濃縮得到產品320 mg, m/z = 418 [M+1] +。
步驟C: N-(8-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入4-(6-(2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑 [3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（63 mg, 0.15 mmol）、DMF（1 mL）以及二異丙基乙基胺（58 mg, 0.45 mmol），冰浴冷卻至5 oC滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（29 mg, 0.15 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品23 mg, m/z = 574 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.00-8.04 (m, 1H), 7.35-7.56 (m, 4H), 7.23-7.26 (m, 1H), 7.04-7.08 (m, 1H),  4.16-4.18 (m, 2H), 3.52-3.79 (m, 6H), 3.20-3.26 (m, 1H), 3.06-3.10 ( m, 1H), 1.50-1.71 (m, 4H), 1.38-1.43 (m, 3H).
實施例 87 ： 化合物 209 的製備
步驟A: 6-乙氧基-4-(6-(2-( (6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基) 吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入1,2-二氯乙烷（2 mL）、甲醇（1 mL）、4-(6-(2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5 -a]吡啶（63 mg, 0.15 mmol）、6-甲氧基煙醛（21 mg, 0.15 mmol）以及三乙醯氧基硼氫化鈉（96 mg, 0.45 mmol），升溫45 oC反應1小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品24 mg, m/z = 539 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.02-8.15 (m, 1H), 8.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.65-7.78 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.06 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.76-6.89 (m, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.50-3.75 (m, 6H), 3.30-3.50 (m, 3H), 1.91 (s, 3H),1.50-1.79 (m, 6H), 1.38-1.41 (m, 3H).
實施例 88 ： 化合物 210 的製備
步驟A: 7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基）吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-碳酸叔丁酯
向反應瓶中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（150 mg, 0.5 mmol）、2,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-羧酸叔丁酯半草酸鹽（250 mg, 1.0 mmol）、二異丙基乙基胺（390 mg, 3.0 mmol）以及DMSO（4 mL），升溫100 oC反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品525 mg, m/z = 518 [M+1] +。
步驟B: 4-(6-(2,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5 -a]吡啶
向反應瓶中依次加入甲醇（5 mL）、7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-碳酸叔丁酯（525 mg, 1.0 mmol）以及6N HCl的1,4-二氧六環溶液（4.0 mL, 24.0 mmol）。室溫攪拌反應30分鐘，加水攪拌淬滅，用1N NaOH 調pH = 10後用二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥後濃縮得產品301 mg直接用於下步反應，m/z = 418 [M+1] +。
步驟C: N-(7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-2-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入4-(6-(2,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑 [3',4':3,4]吡唑[1,5 -a]吡啶（63 mg, 0.15 mmol）、DMF（1 mL）以及二異丙基乙基胺（58 mg, 0.45 mmol），冰浴冷卻至5 oC滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（29 mg, 0.15 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫攪拌反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品23 mg，m/z = 574 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.50-8.55 (m, 2H), 7.97-8.04 (m, 1H), 7.30-7.61 (m, 4H), 7.25 (s, 1H), 7.01-7.12 (m, 1H), 4.16-4.18 (m, 2H), 3.33-3.70 (m, 6H), 3.22-3.28 (m, 1H), 3.12-3.19 ( m, 1H), 1.52-2.01 (m, 6H), 1.38-1.43 (m, 3H).
實施例 89 ： 化合物 211 的製備
步驟A: 6-乙氧基-4-(6-(2-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,8-二氮雜螺環[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入1,2-二氯乙烷（2 mL）、甲醇（1 mL）、4-(6-(2,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（63 mg, 0.15 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（21 mg, 0.15 mmol）以及醋酸（2滴），升溫45 oC反應1小時後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（96 mg, 0.45 mmol）繼續45 oC攪拌16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品16 mg，m/z = 539 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.02-8.15 (m, 1H), 7.98 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62-7.75 (m, 1H),  7.58 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.00 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.69-6.79 (m, 1H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.34-3.75 (m, 8H), 3.16-3.18 (m, 1H), 1.91 (s, 1H), 1.49-1.68 (m, 6H), 1.38-1.42 (m, 3H)。
實施例 90 ： 化合物 212 的製備
步驟A: 7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基）吡啶-2-基)-1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-碳酸叔丁酯
向反應瓶中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（297 mg, 1.0 mmol）、1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-羧酸叔丁酯（240 mg, 1.0 mmol）、二異丙基乙基胺（390 mg, 3.0 mmol）以及DMSO（4 mL）。反應液升溫100 oC反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品500 mg，m/z = 518 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑 [1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入甲醇（5 mL）、7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-碳酸叔丁酯（500 mg, 1.0 mmol）以及6N HCl的1,4-二氧六環溶液（4.0 mL, 24.0 mmol），室溫攪拌反應30分鐘。濃縮後加10 mL水稀釋，用1N NaOH調pH = 10後用二氯甲烷（30 mL）萃取兩次，萃取液經飽和食鹽水洗滌（10 mL），無水硫酸鈉乾燥後濃縮得產品310 mg，m/z = 418 [M+1] +。
步驟C：N-(7-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-1-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入4-(6-(1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（63 mg, 0.15 mmol）、DMF（1 mL）以及二異丙基乙基胺（58 mg, 0.45 mmol），冰浴冷卻至5 oC滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（29 mg, 0.15 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫攪拌反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品27 mg，m/z = 574 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.03 (d, J= 8.8Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.36-7.52 (m, 3H), 7.26 (s, 1H), 7.12-7.16 (m, 1H), 4.43-4.46 (m, 2H), 4.15-4.18 (m, 2H), 3.86-3.91 (m, 1H), 3.20-3.26 (m, 2H), 3.00-3.10 (m, 1H), 2.85-2.96 (m, 1H), 2.05-2.13 (m, 1H), 1.71-1.92 (m, 4H), 1.61-1.70 (m, 2H),1.38-1.42 (m, 3H)。
實施例 91 ： 化合物 213 的製備
6-乙氧基-4-(6-(1-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-7-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3 ,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入4-(6-(1,7-二氮雜螺環[4.5]癸烷-7-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑 [3',4':3,4]吡唑[1,5 -a]吡啶（42 mg, 0.1 mmol）、DMF（1 mL）、碳酸鉀（40 mg, 0.3 mmol）以及5-(氯甲基)-2-甲氧基吡啶（16 mg, 0.1 mmol），升溫60 oC攪拌反應25小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品4.1 mg，m/z = 539 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.07 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.39-4.43 (m, 1H), 4.27 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.15-4.20 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.67-3.79 (m, 2H), 2.93 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 2.58-2.83 (m, 3H), 1.50-1.91 (m, 8H), 1.38-1.41 (m, 3H)。
實施例 92 ： 化合物 214 的製備
步驟A：9-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-碳酸叔丁酯
向反應瓶中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（297 mg, 1.0 mmol）、2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-羧酸叔丁酯（254 mg, 1.0 mmol）、二異丙基乙基胺（390 mg, 3.0 mmol）以及DMSO（4 mL），反應液升溫100 oC反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品540 mg，m/z = 532 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入甲醇（5 mL）、9-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2, 9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-碳酸叔丁酯（540 mg, 1.0 mmol）以及6N HCl的1,4-二氧六環溶液（2.0 mL, 12.0 mmol），室溫攪拌反應30分鐘。濃縮後加水（3 mL）中，用1N NaOH 調pH = 10後用二氯甲烷萃取兩次（30 mLX2），萃取液經飽和食鹽水洗（10 mL），無水硫酸鈉乾燥後濃縮得產品345 mg，m/z = 432 [M+1] +。
步驟C：N-(9-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶- 2-基)-2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入4-(6-(2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑 [3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（130 mg, 0.3 mmol）、DMF（2 mL）以及二異丙基乙基胺（117 mg, 0.9 mmol），冰浴冷卻至5 oC滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（58 mg, 0.3 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫攪拌反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品45 mg，m/z = 588 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.04 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.36-7.56 (m, 3H), 7.27 (s, 1H), 7.10 (d, J= 8.8Hz, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.80-3.95 (m, 2H), 3.48-3.72 (m, 4H), 3.15-3.28 (m, 2H), 1.47-1.77 (m, 8H), 1.38-1.42 (m, 3H)。
實施例 93 ： 化合物 215 的製備
6-乙氧基-4-(6-(2-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入1,2-二氯乙烷（2mL）、甲醇（1mL）、4-(6-(2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑 [3',4':3,4]吡唑 [1,5 -a]吡啶（65 mg, 0.15 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（62 mg, 0.45 mmol）以及醋酸（2滴），升溫45 oC反應2小時後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（160 mg, 0.75 mmol）繼續45 oC攪拌16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品17 mg，m/z = 553 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.00 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.8Hz, 1H),  4.14-4.20 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.55-3.67 (m, 2H), 3.42-3.50 (m, 2H), 3.40 (s, 1H), 3.16-3.18 (m, 1H), 2.10-2.42 (m, 4H),1.30-1.60 (m, 11H)。
實施例 94 ： 化合物 216 的製備
步驟A：9-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-碳酸叔丁酯
向反應瓶中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（297 mg, 1.0 mmol）、3,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯（254 mg, 1.0 mmol）、二異丙基乙基胺（390 mg, 3.0 mmol）以及DMSO（3 mL），反應液升溫100 oC反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品540 mg，m/z = 532 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(3,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5 -a]吡啶
向反應瓶中依次加入甲醇（5 mL）、9-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3, 9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-碳酸叔丁酯（540 mg, 1.0 mmol）以及6N HCl的1,4-二氧六環溶液（4.0 mL, 24.0 mmol），室溫攪拌反應30分鐘，加入水（3 mL），用1N NaOH 調pH = 10後用二氯甲烷萃取兩次（15mL），萃取液經飽和食鹽水洗（10 mL），無水硫酸鈉乾燥後濃縮得產品355 mg，m/z = 432 [M+1] +。
步驟C：N-(9-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入4-(6-(3,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（130 mg, 0.3 mmol）、DMF（2 mL）以及二異丙基乙基胺（117 mg, 0.9 mmol），冰浴冷卻至5 oC滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（58 mg, 0.3 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫攪拌反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品62.9 mg，m/z = 588 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.98 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.48 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.33-7.36 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.13 (d, J= 8.8Hz, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.59-3.76 (m, 6H), 3.15-3.29 (m, 2H), 1.46-1.64 (m, 8H), 1.37-1.41 (m, 3H)。
實施例 95 ： 化合物 217 的製備
6-乙氧基-4-(6-(9-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入4-(6-(3,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（43 mg, 0.1 mmol）、DMF（1 mL）、碳酸鉀（35 mg, 0.3 mmol）以及5-(氯甲基)-2-甲氧基吡啶（16 mg, 0.1 mmol），室溫攪拌反應16小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品12.0 mg，m/z = 553 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.14-4.19 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.58-3.65 (m, 4H), 3.42 (s, 2H), 3.28-3.41 (m, 4H), 1.41-1.59 (m, 8H), 1.37-1.41 (m, 3H)。
實施例 96 ： 化合物 218 的製備
步驟A：2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2, 9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-碳酸叔丁酯
向反應瓶中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑 [3',4':3,4]吡唑 [1,5-a]吡啶（297 mg, 1.0 mmol）、2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯（254 mg, 1.0 mmol）、二異丙基乙基胺（390 mg, 3.0 mmol）以及DMSO（3 mL），反應液升溫100 oC反應16小時，冷卻後倒入水（20 mL）攪拌30分鐘，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品550 mg，m/z = 532 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入甲醇（5 mL）、2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2, 9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-碳酸叔丁酯（550 mg, 1.0 mmol）以及6N HCl的1,4-二氧六環溶液（4.0 mL, 24.0 mmol），室溫攪拌反應30分鐘。加入水（3 mL），用1N NaOH 調pH = 10後用二氯甲烷萃取兩次（30 mL），萃取液經飽和食鹽水洗（10 mL），無水硫酸鈉乾燥後濃縮得產品355 mg，m/z = 432 [M+1] +。
步驟C：N-(2-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入4-(6-(2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（130 mg, 0.3 mmol）、DMF（2 mL）以及二異丙基乙基胺（119 mg, 0.9 mmol），冰浴冷卻至5 oC滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（58 mg, 0.3 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫反應2小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品62.9 mg，m/z = 588 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.98-8.01 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.33-7.50 (m, 3H), 7.25 (s, 1H), 7.11-7.15 (m, 3H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.75-3.90 (m, 1H), 3.59-3.73 (m, 5H), 3.25-3.32 (m, 1H), 3.10-3.20 (m, 1H), 1.30-1.68 (m, 11H).
實施例 97 ： 化合物 219 的製備
6-乙氧基-4-(6-(9-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3 ,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入1,2-二氯乙烷（2 mL）、甲醇（1 mL）、4-(6-(2,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-2-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑 [3',4':3,4]吡唑 [1,5-a]吡啶（65 mg, 0.15 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（24 mg, 0.17 mmol）以及醋酸（2滴），升溫45 oC反應2小時後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（96 mg, 0.45 mmol）繼續45 oC攪拌16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品15.8 mg，m/z = 553 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.04-8.18 (m, 1H), 8.00 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.65-7.73 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.03-7.15 (m, 1H), 6.75-6.90 (m, 1H), 4.14-4.20 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.30-3.65 (m, 8H), 3.17 (s, 1H), 1.91 (s, 1H), 1.38-1.68 (m, 11H)。
實施例 98 ： 化合物 220 的製備
步驟A：6-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-碳酸叔丁酯
向反應瓶中依次加入6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（297 mg, 1.0 mmol）、2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-羧酸叔丁酯（212 mg, 1.0 mmol）、二異丙基乙基胺（390 mg, 3.0 mmol）以及DMSO（4 mL），反應液升溫100 oC反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品520 mg，m/z = 490 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入甲醇（4 mL）、6-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2, 6-二氮雜螺環[3.4] 辛烷-2-碳酸叔丁酯（520 mg, 1.0 mmol）以及6N HCl的1,4-二氧六環溶液（2.0 mL, 12.0 mmol），室溫攪拌反應30分鐘。加入水（10 mL），用1N NaOH調pH = 10後用二氯甲烷萃取兩次（40 mL），萃取液經無水硫酸鈉乾燥後濃縮得產品310 mg，m/z = 390[M+1] +。
步驟C：N-(6-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-2-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5 -a]吡啶（78 mg, 0.2 mmol）、DMF（2 mL）以及二異丙基乙基胺（78 mg, 0.6 mmol），冰浴冷卻至5 oC，滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（40 mg, 0.2 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫攪拌反應16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品29 mg，m/z = 546 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.50-7.56 (m, 2H), 7.44 (m, 1H), 7.35-7.39 (m, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.68 (d, J= 8.8Hz, 1H),  4.11-4.19 (m, 4H), 3.85-3.94 (m, 2H), 3.65-3.78 (m, 2H), 3.45-3.60 (m, 2H), 2.16-2.33 (m, 2H), 1.33-1.45 (m, 3H).
實施例 99 ： 化合物 221 的製備
6-乙氧基-4-(6-(2-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-2,6-二氮雜螺環[3.4]辛烷-6-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3 ,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入1,2-二氯乙烷（2 mL）、甲醇（1 mL）、4-(6-(2,6-二氮雜螺環[3.4] 辛烷-6-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（60 mg, 0.15 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（62 mg, 0.45 mmol）以及醋酸（2滴），升溫45 oC反應2小時後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（160 mg, 0.75 mmol）繼續45 oC攪拌16小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品29 mg，m/z = 511 [M+1] +， 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.00 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.78 (d, J= 8.8Hz, 1H), 6.66 (d, J= 8.8Hz, 1H), 4.14-4.19 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.40-3.68 (m, 6H), 3.15-3.30 (m, 3H), 2.15-2.19 (m, 2H), 1.91 (s, 1H), 1.37-1.44 (m, 3H).
實施例 100 ： 化合物 227 的製備
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(丙基-2-炔-1-苯氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-醇 (46.8 mg, 0.1 mmol)、炔丙基氯 (8.2 mg, 0.11 mmol)、Cs 2CO 3(48 mg, 0.15 mmol)以及DMF（2 mL）置於10mL的反應瓶中，升溫至50 oC反應5小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品9.4 mg, m/z = 507 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.69 (s, 1H), 8.60-8.66 (m, 2H), 8.1-8.13 (m, 2H), 7.60-7.78 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 6.77-6.94 (m, 2H), 5.00 (s, 2H), 3.70-3.86 (m, 7H), 3.30-3.32 (m, 7H).
實施例 101 ： 化合物 228 的製備
甲基 2-((4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-基)醚)乙酸酯
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-醇 (70 mg, 0.15 mmol)、氯乙酸甲酯 (19 mg, 0.18 mmol)、Cs 2CO 3(73 mg, 0.225 mmol) 以及DMF（5 mL）置於10 mL的反應瓶中，升溫至50 oC反應3小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品29.6 mg, m/z = 541 [M+1] +， 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.68 (s, 1H), 8.60-8.66 (m, 2H), 8.10-8.16 (m, 2H), 7.64-7.72 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 6.91-6.93 (m, 1H), 6.76-6.79 (m, 1H), 5.0 (s, 2H), 3.80-3.97 (m, 4H), 3.62-3.80 (m, 6H), 3.42-3.62 (m, 4H), 3.31-3.33 (m, 1H), 2.51-2.67 (m, 1H)。
實施例 102 ： 化合物 229 的製備
步驟A：乙基 1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)胺)呱啶-4-羧酸乙酯
將乙基4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-羧酸鹽（449 mg, 1.0 mmol）、 6-甲氧基煙醛（164 mg, 1.2 mmol）、Et 3N (303 mg, 3.0 mmol) 以及正丙醇 (5 ml) 加入反應瓶，25 ℃反應12小時, 加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品268 mg, m/z=571 [M+1] +。
步驟B：(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)胺)呱啶-4-基)甲醇
將乙基1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)胺)呱啶-4-羧酸乙酯（268 mg, 0.47 mmol）以及5 mL THF加入反應瓶，0 ℃下加入LiAlH 4(19. 6mg, 0.51 mmol)，反應1小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品101 mg, m/z= 529 [M+1] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.66 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.52 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.03 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.26 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.64 (s, 2H), 2.89 (m, 3H), 1.65 (s, 2H), 1.53 (s, 2H), 1.40 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 0.90 (d, J= 6.7 Hz, 1H)。
實施例 103 ： 化合物 232 的製備
步驟A：4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-三氟甲基磺酸酯
反應瓶中加入4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-醇（0.936 g, 2 mmol）、DIEA（0.516 g, 4 mmol）以及10 mL DMSO。冰浴下，加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺醯)甲磺醯胺 (0.714 g, 2 mmol)，然後室溫反應2小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1.0 g, m/z = 601 [M+1] +。
步驟B：4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
反應瓶中加入4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-三氟甲基磺酸酯（300 mg, 0.5 mmol）、（雙(頻那醇合)二硼（381 mg, 1.5 mmol）、Pd(dppf)Cl 2(73 mg, 0.1 mmol)、醋酸鉀（245 mg, 2.5 mmol）以及10 mL 1,4二氧六環，90 ℃ 反應4小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品178 mg, m/z = 579 [M+H] +。
步驟C：4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-基）硼酸
反應瓶中加入（4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（180 mg, 0.31 mmol）、NaIO 4（200 mg, 0.93 mmol）以及THF（8 mL）/水（2mL），25 ℃反應0.5小時；1N HCl (3 mL)加入到上述反應液中，攪拌過夜。反應液倒入100 mL水中，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到產品55 mg, m/z = 496 [M+1] +。
步驟D：6-(氮雜環丁基-1-基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
反應瓶中加入4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-基）硼酸（50 mg, 0.1 mmol）、雜氮環丁烷（114 mg, 2 mmol）、醋酸銅 (37 mg, 0.2 mmol)、吡啶（45 mg, 0.5 mmol）、4A分子篩 (2 g) 以及5 mL DMF, 50 ℃反應12小時，過濾，濾液倒入20 mL水中，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到產品20 mg, m/z = 508 [M+1] +。
實施例 104 ： 化合物 233 的製備
N-((3 R,4 S)-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇的合成
將(3 S, 4 S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、2,6-二氟苯甲酸（32 mg, 0.2 mmol）、DIEA（129 mg, 1.0 mmol）、HATU（76 mg, 0.2 mmol）以及DMF （3 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。將反應液倒入30 mL水中，EA萃取，乾燥有機相，旋乾溶劑，管柱層析純化（DCM:MeOH = 10:1）得產品5.0 mg，m/z=534[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.65 (s, 1H), 8.61 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.02-8.05 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.07-7.49 (m, 5H), 5.07 (br, 1H), 4.40-4.44 (m, 1H), 4.14-4.22 (m, 3H), 3.92-3.95 (m, 1H), 3.50-3.51 (m, 1H), 3.16-3.22 (m, 1H), 2.96-3.01 (m, 1H), 2.01-2.11 (m, 1H), 1.37-1.48 (m, 4H)。
實施例 105 ： 化合物 234 的製備
步驟A：(1-(5-溴吡啶-2-基)-4-((二甲胺基)甲基)呱啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯
向50 mL 反應瓶中加入(1-(5-溴吡啶-2-基)-4-甲醯基呱啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯（200 mg, 0.52 mmol）、1, 2-二氯甲烷 （2 mL）、二甲胺（0.78 mL, 1.56 mmol）以及醋酸硼氫化鈉 (220 mg, 1.04 mmol)，室溫下攪拌16小時後，加水淬滅後，濃縮，管柱層析分離得到產品177 mg，m/z = 413/415[M+1] +。
步驟B: 1-(5-溴吡啶-2-基)-4-((二甲基胺基)甲基)呱啶-4-胺鹽酸鹽
將(1-(5-溴吡啶-2-基)-4-((二甲胺基)甲基)呱啶-4-)胺基甲酸叔丁酯（177 mg, 0.43 mmol）以及甲醇鹽酸氣（4 M, 2 mL）加入反應瓶中，25 ℃反應5小時。直接旋乾得產品250 mg，m/z=313/315[M+1] +。
步驟C：N-(1-(1-溴吡啶-2-基)-4-((二甲基胺基)甲基)呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
將1-(5-溴吡啶-2-基)-4-((二甲基胺基)甲基)呱啶-4-胺鹽酸鹽（250 mg, 0.8 mmol）、2,6-二氟苯甲酸（152 mg, 0.96 mmol）、HATU (334 mg, 0.88 mmol)、DIEA (309mg, 2.4 mmol) 以及DMF （2 mL）加入反應瓶，25 ℃反應15小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品117 mg，m/z=453/455[M+1] +。
步驟D：N-(4-((二甲基胺基)甲基)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入N-(1-(1-溴吡啶-2-基)-4-((二甲基胺基)甲基)呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺（117 mg, 0.35 mmol）、6-乙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶 （161 mg, 0.35 mmol）、碳酸銫 （326 mg, 1.0 mmol）、水 （1 mL）、1,4-二氧六環（5 mL）以及Pd(dppf)Cl 2（25 mg, 0.035mmol），加熱至90 ℃反應16小時，反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析分離得到產品50 mg，m/z=575 [M+1] +, 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.64 (s, 1H), 8.61-8.56 (m, 1H), 8.51 (m, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.04 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.26 (m, 1H), 7.21-7.06 (m, 3H), 4.22 (m, 2H), 4.18 (m, 2H), 3.17 (m, 2H), 2.67 (s, 2H), 2.34 (m, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.57 (m, 2H), 1.40 (m, 3H)。
實施例 106 ： 化合物 237 的製備
(4-(6-(6-(((6-甲氧基吡啶-3-基）甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)二甲基氧化磷
向反應瓶中依次加入4-(6-(6-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基三氟甲磺酸鹽（30 mg, 0.05 mmol）、二甲基氧化磷 （9.7 mg, 0.125 mmol）、醋酸鈀 (0.56 mg, 0.0025 mmol)、磷酸鉀（11 mg, 0.055 mmol）、DMF（1 mL）以及XantPhos（29 mg, 0.05mmol），在氮氣保護條件下，加熱至150 ℃反應2小時，反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，管柱層析分離得到產品19 mg，m/z=529 [M+1] +。 1HNMR (400MHz, DMSO- d 6 ): 12.90 (s, 1H), 9.02 (m, 1H), 8.70 (m, 1H), 8.20–8.08 (m, 2H), 7.83–7.65 (m, 3H), 6.95 (m, 1H), 6.79 (m, 1H), 3.83 (m, 5H), 3.70 (m, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.34 (s, 1H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.60 (m, 1H)。
實施例 107 ： 化合物 238 的製備
步驟A：4-(6-(6((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-羥基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶
將6-((4-甲氧基)苄基)-4-(6-(6((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-羥基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶（1 g, 1.7 mmol）以及DCM（5 mL）加入反應瓶，0 ℃條件下滴加TFA（5 mL），室溫反應4小時。直接旋乾溶劑得產品1.55 g，m/z=469[M+1] +。
步驟B：4-(6-(6 ((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-三氟甲烷磺烷基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶
向反應瓶中依次加入4-(6-(6 ((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-羥基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶（1.5 g, 3.2 mmol）、N-苯基雙(三氟甲磺醯)亞胺（1.26 g, 3.5 mmol）、DIEA（2 g, 16 mmol）以及DMF （10 mL），25 ℃反應4小時，LCMS監測反應完全，將反應液倒入30 mL水中，EA萃取，乾燥有機溶劑，濃縮，矽膠柱純化分離（DCM : MeOH = 10 : 1）得產品810 mg，m/z=601[M+1] +。
步驟C：4-(6-(6 ((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶
依次將4-(6-(6 ((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-三氟甲烷磺烷基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶（810 mg, 0.19 mmol）、聯硼酸頻那醇酯（377 mg, 1.49 mmol）、KOAc （400 mg, 4.05 mmol）、Pd(dppf)Cl 2（100 mg, 0.14 mmol）以及1,4-二氧六環 （10 mL）加入反應瓶，N 2置換3次，95 ℃反應12小時，LCMS監測反應完全。反應液直接進行矽膠柱純化(DCM : MeOH = 10 : 1)分離得產品510 mg，m/z=579[M+1] +。
步驟D：(4-(6-(6 ((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基) -1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-6-基)硼酸
將4-(6-(6 ((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)-3,6-二氮雜環[3.1.1]庚烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶（110 mg, 0.19 mmol）以及THF（5 mL）加入反應瓶，攪拌，向反應瓶中加高碘酸鈉（41 mg, 0.19 mmol），攪拌0.5小時後，加HCl的水溶液（1N, 3 mL），25 ℃反應4小時。反應液加硫代硫酸鈉水溶液淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，矽膠柱純化分離得產品38.7 mg，m/z=497 [M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.69 (s, 1H), 9.00-9.20 (m, 1H), 8.63-8.69 (m, 1H), 8.46-8.50 (m, 1H), 8.05-8.11 (m, 2H), 7.59 (s, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.13 (m, 1H), 6.53-6.90 (m, 1H), 3.82-3.88 (m, 5H), 3.66-3.72 (m, 4H), 3.50-3.58 (m, 3H), 1.60 (m, 1H)。
實施例 108 ： 化合物 239 的製備
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-羧酸
向反應瓶中依次加入MeOH（3 mL）、NaOH水溶液（5 M, 3 mL）以及4-(6-(6-(((6-甲氧基吡啶-3-基）甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-腈（15 mg, 0.03 mmol），50 ℃下反應16小時，反應完全。加HCl水溶液（1 M）調pH=7，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品8 mg，m/z=497[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) : δ 12.79 (brs, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73-7.69 (m, 2H), 6.92 (d, J= 8.4Hz, 1H), 6.77 (d, J= 8.4Hz, 1H), 3.86-3.75 (m, 5H), 3.72-3.68 (m, 2H), 3.66-3.51 (m, 4H) , 1.60 (d, J= 8.4Hz , 1H).
實施例 109 ： 化合物 240 的製備
步驟A：2-((4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H -吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧基)乙酸乙酯
向反應瓶中加入4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H -吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-6-羥基（100 mg, 0.21 mmol）、碳酸銫（138.8 mg, 0.42 mmol）以及 N,N-二甲基甲醯胺（3 mL），攪拌均勻，然後加入氯乙酸乙酯（39.1 mg, 0.32 mmol）室溫反應10小時，加水淬滅，乙酸乙酯萃取，矽膠管柱層析分離得產品60 mg， m/z=555.2[M+1] +。
步驟B：2-((4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧基)乙酸
向反應瓶中依次加入2-((4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H -吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-6-基)氧基)乙酸乙酯（60 mg, 0.11 mmol）、甲醇（1 mL）、四氫呋喃（1 mL）、水（1 mL）以及氫氧化鋰（9 mg, 0.22 mmol），攪拌，60 ℃反應3小時。反應完全，濃縮後，加入2 mL水，鹽酸調節pH=6析出產品，過濾，乾燥得產品20 mg， m/z=527.1[M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.66 (s, 1H), 8.67 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.56 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.15 (m, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.95 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 3.85 (m, 7H), 3.56 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 2.51 (s, 1H), 1.79 (s, 1H).
實施例 110 ： 化合物 242 的製備
4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-丙烯醯酯
反應瓶中加入4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜二環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-醇（156 mg, 0.33 mmol）以及3 mL NMP。冰浴條件下，加入NaH（60%, 20 mg, 0. 49 mmol），攪拌30分鐘。然後在冰浴條件下，緩慢加入丙烯醯氯（45 mg, 0.49 mmol），反應0.5小時，反應完全。反應液倒入30 mL冰水中，二氯甲烷萃取，硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，矽膠柱純化得產品10 mg，m/z = 523 [M+1] +, 1H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.80 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.10 - 8.13 (m, 2H), 7.68 - 7.72 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 6.92-6.94 (m, 1H), 6.76-6.78 (m, 1H), 6.60-6.65 (m, 1H), 6.47-6.53 (m, 1H), 6.22-6.25 (m, 1H), 3.76-3.82 (m, 6H), 3.53-3.69 (m, 7H)。
實施例 111 ： 化合物 244 的製備
4-(5-(6-乙氧基-1-甲基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)1-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-2基)甲醇
將4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)1-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-2基)甲醇（50 mg, 0.1 mmol）、K 2CO 3（41 m g, 0.3 mmol）、CH 3I（16 mg, 0.1 mmol）以及DMF（3 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。將反應液倒入30 mL水中，EA萃取，乾燥有機相，旋乾溶劑，管柱層析純化得產品9.8 mg，m/z=529 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.74-4.77 (m, 1H), 4.10-4.20 (m, 3H), 3.99-4.00 (m, 1H), 3.84-3.90 (m, 3H), 3.79-3.84 (m, 6H), 3.53-3.54 (m, 1H), 3.16-3.38 (m, 2H), 2.67-2.68 (m, 1H), 2.26-2.33 (m, 1H), 1.40 (t, J= 7.2 Hz, 3H).
實施例 112 ： 化合物 245 的製備
步驟A：4-(6-(3-(氯甲基)-4-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-1基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶
將4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)1-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-2基)甲醇（100 mg, 0.2 mmol）、DMF（2 mg, 0.02 mmol）以及SOCl 2（1 mL）加入反應瓶，80 ℃反應4小時。LCMS監測反應完全，將反應液倒入20 mL冰水中，4M NaOH的水溶液調節pH=7，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品50 mg，m/z=533[M+1] +。
步驟B：1-4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基) 1-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-2基) –N,N-二甲基甲基甲胺
將4-(6-(3-(氯甲基)-4-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶（50 mg, 0.1 mmol）、二甲胺的四氫呋喃溶液（1M, 0.1 mL, 0.1 mmol）以及DMF（2 mL）加入反應瓶，80 ℃反應1小時。將反應液倒入20 mL水中，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品22.8 mg，m/z=542 [M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.64 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.74-4.77 (m, 1H), 4.10-4.20 (m, 3H), 3.99-4.00 (m, 1H), 3.79-3.84 (m, 6H), 3.53-3.54 (m, 1H), 3.16-3.38 (m, 2H), 2.67-2.68 (m, 1H), 2.49-2.51 (m, 6H), 2.26-2.33 (m, 1H),1.36 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。
實施例 113 ： 化合物 246 的製備
步驟A：4-(6-(6-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-基三氟甲磺酸鹽
向反應瓶中依次加入DMSO（5 mL）、DIEA（1 mL）以及4-(6-(6-(((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-醇（510 mg, 1.09 mmol），然後分批加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基）磺醯基)甲磺醯胺（389 mg, 1.09 mmol），室溫下反應2小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品500 mg，m/z=601 [M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 13.00 (brs, 1H), 9.51 (d, J= 2.0Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.14 (d, J= 8.0Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.79-7.70 (m, 3H), 6.95 (d, J= 8.8Hz, 1H), 6.77 (d, J= 8.4Hz, 1H), 3.76-3.91 (m, 5H), 3.47-3.75 (m, 6H), 3.31 (s, 2H), 1.61-1.59 (m, 1H).
實施例 114 ： 化合物 247 的製備
步驟A：7-溴-6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶
向反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶（5 g, 10.06 mmol）以及 N,N-二甲基甲醯胺（50 mL），攪拌溶解，然後加入NBS（2.15 g, 12.08 mmol），室溫反應1小時，加水淬滅，乙酸乙酯萃取，矽膠管柱層析分離得產品1.5 g，m/z = 575/577[M+1] +。
步驟B：7-胺基-6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入7-溴-6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶（200 mg, 0.35 mmol）、二甲基亞碸（3 mL）、碘化亞銅（200 mg）以及氨水（1 mL），氮氣置換，90 ℃反應13小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品5.2 mg，m/z=512.1[M+1] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.66 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.70 (m, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 6.51 (s, 2H), 4.22-4.16 (q, J= 8 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.78-3.70 (m, 5H), 3.54 (m, 4H), 1.70 (m, 1H), 1.41-1.38 (m, 3H) .
實施例 115 ： 化合物 248 的製備
步驟A：3-溴-6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶
向反應瓶中加入6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶（5 g, 10.06 mmol）以及 N,N-二甲基甲醯胺（50 mL），攪拌溶解，室溫下緩慢加入NBS（2.15 g, 12.08 mmol），反應1小時，加水淬滅，乙酸乙酯萃取，矽膠管柱層析分離得產品1 g，m/z = 575/577[M+1] +。
步驟B：3-氰基-6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶
向反應瓶中依次加入3-溴-6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶（100 mg, 0.17 mmol）、 N,N-二甲基乙醯胺（1 mL）、水（0.5 ml）、亞鐵氰化鉀（32 mg, 0.09 mmol）、XantPhos（20 mg, 0.03 mmol）以及氯化烯丙基鈀(II)二聚體（6.3 mg, 0.017 mmol），氮氣置換，90 ℃反應13小時。加水和乙酸乙酯萃取，矽膠管柱層析分離得產品2 mg，m/z = 522 [M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.85 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.15-8.10 (m, 2H), 7.71-7.57 (m, 3H), 6.98-6.92 (m, 1H), 6.79-6.77 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.38-4.33 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 3.83-3.77 (m, 5H), 3.70-3.53 (m, 7H), 1.61-1.59 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.41-1.40 (t, J= 3.2 Hz, 3H)。
實施例 116 ： 化合物 249 的製備
步驟A：4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
將6-乙氧基-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（1.4 g, 4.7 mmol）、2-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（1 g, 4.7 mmol）、DIEA（1.8 g, 14.1 mmol）以及DMSO（15 mL）加入反應瓶，90 ℃反應12小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1.6 g，m/z=494[M+1] +。
步驟B：4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪鹽酸鹽
4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（1.6 g, 3.2 mmol）加入到HCl的1,4-二氧六環溶液（4M, 20 mL），25 ℃反應4小時，直接旋乾溶劑得產品1.7 g，m/z=394[M+1] +。
步驟C：4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基) 1-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-2基)甲醇
將4-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪鹽酸鹽（100 mg, 0.19 mmol）、6-甲氧基-3-吡啶甲醛（80 mg, 0.57 mmol）、Et 3N（98 mg, 0.8 mmol）、Pic-BH 3（63 mg, 0.57 mmol）以及DMSO（3 mL）加入反應瓶，45 ℃反應12小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品10.1 mg，m/z=515 [M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.64 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.02 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.74-4.77 (m, 1H), 4.10-4.20 (m, 3H), 3.99-4.00 (m, 1H), 3.79-3.84 (m, 6H), 3.53-3.54 (m, 1H), 3.16-3.38 (m, 2H),2.67-2.68 (m, 1H), 2.26-2.33 (m, 1H),1.39 (t, J= 7.2 Hz, 3H).
實施例 117 ： 化合物 250 的製備
1-(3-(5-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3,6-氮雜二環[3.1.1]庚烷-6-基)丙-2-烯-1-酮
反應瓶中加入4-(6-(3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基-3-基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶硫酸鹽（150 mg, 0.2 mmol）、DIEA（193 mg, 1.5 mmol）以及DMF（2 mL），冰浴下加入丙烯醯氯（22 mg, 0.25 mmol），然後25 ℃反應2小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品15.2 mg，m/z=430 [M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.60 (d, J= 2.4Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.05 (dd, J 1 = 2.4Hz, J 2 = 8.8Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.83 (d, J= 8.8Hz, 1H), 6.44-6.51 (m, 1H), 6.10 (d, J= 16.8Hz, 1H), 5.67 (d, J= 10.4Hz, 1H), 4.87-4.88 (m, 1H), 4.53-4.54 (m, 1H), 4.15 (q, J= 6.8Hz, 2H), 3.98-4.04 (m, 1H), 3.75-3.78 (m, 2H), 3.59-3.68 (m, 1H), 2.71-2.77 (m, 1H), 1.65-1.68 (m, 1H), 1.39 (t, J= 6.8Hz, 3H)。
實施例 118 ： 化合物 251 的製備
6-乙氧基-4-(6-(3-(甲氧基甲基)-4-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-1基)呱啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶
將4-(6-(3-(氯甲基)-4-((6-甲氧基吡啶-3-基)亞甲基)呱嗪-1基)吡啶-3-基)-6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶（150 mg, 0.28 mmol）、甲醇鈉（17 mg, 0.31 mmol）以及MeOH（2 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品6.5 mg， m/z = 529 [M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.64 (brs, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.99-8.10 (m, 2H), 7.57-7.71 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.04 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.20-4.24 (m, 2H), 4.02-4.18 (m, 2H), 3.91-3.98 (m, 4H), 3.82-3.84 (m, 2H), 3.30-3.33 (m, 6H), 3.21-3.22 (m, 1H), 2.49-2.51 (m, 2H), 1.39 (t, J= 7.2 Hz, 3H).
實施例 119 ： 化合物 258 和化合物 259 的製備
化合物258：( 1S, 4R)-4-(6-乙氧基-1氫-吡唑並[3’,4’:3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)-N-(( S)-1-(6-(4 –氟-1氫-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲氧基環己烷-1-羧醯胺
化合物259：( 1R, 4S)-4-(6-乙氧基-1氫-吡唑並[3',4':3,4]吡唑並[1,5-a]吡啶-4-基)-N-(( S)-1-(6-(4 -氟-1氫-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲氧基環己烷-1-羧醯胺
步驟A：叔丁基- (S)-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)胺基甲酸酯
向反應瓶中加入( S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙-1-胺（210 mg, 1.05 mmol），Boc酸酐 （273 mg, 1.25 mmol），TEA（318 mg, 3.15 mmol），乙腈（10 mL），室溫反應4小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品300 mg，m/z = 301[M+1] +。
步驟B： (S)-(1-(6-(4-(4-氟-1氫-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯
向反應瓶中加入叔丁基- (S)-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)胺基甲酸酯（290 mg, 0.96 mmol）、4-氟-1氫-吡唑（249 mg, 29.3 mmol）、 N 1,N 2- 二甲基環己烷-1,2-二胺（341 mg, 2.4 mmol）、碘化亞銅（183 mg, 0.96 mmol）以及乙腈（5 mL），108 ℃反應4小時，然後降至室溫，加入50 mL水以及50 mL乙酸乙酯，萃取分液，有機相用50 mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，管柱層析分離（EA/PE = 20%）得到產品245 mg，m/z = 307[M+1] +。
步驟C： (S)-(1-(6-(4-(4-氟-1氫-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-胺鹽酸鹽
向反應瓶中加入 (S)-(1-(6-(4-(4-氟-1氫-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)胺基甲酸叔丁酯（240 mg, 0.78 mmol）以及4M鹽酸/二氧六環溶液（10 mL），室溫反應2小時，反應完全，減壓濃縮得到產品180 mg，m/z = 207[M+1] +。
步驟D：1-甲氧基-4-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-3-烯-1-羧酸甲酯
反應瓶中加入1-甲氧基-4-氧代環己烷-1-甲酸甲酯（680 mg, 3.6 mmol）以及THF （15 mL），然後在-70 ℃到-80 ℃內溫下，將LDA（2N, 2.7 mL）滴加入反應液，保持該溫度區間反應1小時。將1,1,1-三氟- N-苯基- N-((三氟甲基)磺醯基)甲磺醯胺（1.5 g, 4.3 mmol）溶於10 mL四氫呋喃，然後滴加入上述反應液，滴加完後，反應液自然升到室溫反應2小時，加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品820 mg。
步驟E：4-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3'.4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-1-甲氧基環己-3-烯-1-羧酸甲酯
反應瓶中加入6-乙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5- a]吡啶（938 mg, 2.9 mmol）、1-甲氧基-4-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-3-烯-1-羧酸甲酯（1.0 g, 3.1 mmol）、碳酸銫（1.8 g, 5.7 mmol）、Pd(dppf)Cl 2（21 mg, 0.28 mmol）、1,4-二氧六環（25 mL）以及水（5 mL），氮氣置換2分鐘，加熱100 ℃反應6小時。加水攪拌淬滅，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品700 mg，m/z = 371[M+1] +。
步驟F：4-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-1-甲氧基環己烷-1-甲酸甲酯
反應瓶中加入4-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3'.4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-1-甲氧基環己-3-烯-1-羧酸甲酯（420 mg, 1.1 mmol）以及無水乙醇（30 mL），氮氣置換，加入Pd(OH) 2（100 mg），再用氫氣置換，保持氫氣環境80 ℃反應48小時，反應完全。降溫，過濾，用20 mL乙醇淋洗，濃縮，管柱層析純化得到產品330 mg，m/z = 373[M+1] +。
步驟G：4-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-1-甲氧基環己烷-1-甲酸
反應瓶中加入4-(6-乙氧基-1氫-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-1-甲氧基環己烷-1-甲酸甲酯（320 mg, 0.8 mmol）、THF（10 mL）以及甲醇（2 mL），將氫氧化鋰（81 mg, 3.4 mmol）溶於1 mL水中，加入上述反應體系，60 ℃反應18小時，反應完全。減壓濃縮得到產品280 mg，m/z = 359[M+1] +。
步驟H：(S)-4-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-N-(1-(6-(4 -氟-1氫-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲氧基環己烷-1-羧醯胺
反應瓶中加入4-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-1-甲氧基環己烷-1-甲酸（250 mg, 0.7 mmol）、 (S)-(1-(6-(4-(4-氟-1氫-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-胺鹽酸鹽（180 mg, 0.7 mmol）、PyBop（400 mg, 0.77 mmol）、DIEA（271 mg, 2.1 mmol）以及DMF（10 mL），室溫反應12小時，反應完全。10 mL飽和碳酸氫鈉淬滅，50 mL水稀釋，乙酸乙酯（3 x 30 mL）萃取，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，管柱層析分離得產品340 mg，經過SFC掌性分離，得到化合物258（104.2 mg），m/z = 547 [M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.55 (brs, 1H), 8.68 (d, J= 4.4Hz, 1H), 8.55 (d, J= 8.4Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.00 (d, J= 8.4Hz, 1H), 7.94-7.88 (m, 3H), 6.99 (s, 1H), 5.06 (t, J= 7.2Hz, 1H), 4.08 (q, J= 7.2Hz, 2H), 3.21 (s, 3H), 3.07-2.96 (m, 1H), 2.09-1.86 (m, 5H), 1.84-1.72 (m, 3H), 1.48 (d, J= 7.2Hz, 3H), 1.34 (t, J= 7.2Hz, 3H). 和化合物259(75.8 mg)，m/z = 547 [M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 12.50 (brs, 1H), 8.65 (d, J= 4.4Hz, 1H), 8.59 (d, J= 8.4Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.00 (d, J= 8.4Hz, 1H), 7.92-7.86 (m, 3H), 6.83 (s, 1H), 5.15 (t, J= 7.6Hz, 1H), 4.04 (q, J= 7.2Hz, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.05-2.93 (m, 1H), 2.37-2.32 (m, 1H), 1.94-1.72 (m, 5H), 1.70-1.62 (m, 2H), 1.48 (d, J= 7.2Hz, 3H), 1.32 (t, J= 7.2Hz, 3H)。
實施例 120 ： 化合物 267 的製備
N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
步驟A：4-溴-6-(2-氟乙氧基)-2-氟吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲醛
將4-溴-6-羥基-2-氟吡啶[1,5-a]吡啶-3-甲醛（5 g, 19.3 mmol）、K 2CO 3（5.3 g, 38.6 mmol）、1-氟-2-溴乙烷（2.7 g, 21.2 mmol）以及DMF（50 mL）加入反應瓶，65 ℃條件下反應2小時。LCMS監測反應完全，將反應液倒入冰水中，二氯甲烷萃取，管柱層析純化得到產品2.65 g，m/z=305, 307[M+1] +。
步驟B：4-溴-6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-溴-6-(2-氟乙氧基)-2-氟吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲醛（2.55 g, 13.6 mmol）、水合聯胺（85%, 4.0 g, 68.1 mmol）以及DMSO（50 mL）加入反應瓶，130 ℃反應12小時。LCMS監測反應完全，將反應液倒入水中，EA萃取，乾燥有機相，過濾，減壓旋乾溶劑，管柱層析純化得到產品1.6 g，m/z=299, 301[M+1] +。
步驟C：6-(2-氟乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-溴-6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（1.6 g, 5.3 mmol）、6-氟吡啶-3-硼酸（0.75 g, 5.9 mmol）、Cs 2CO 3（3.49 g, 10.7 mmol）、Pd(dppf)Cl 2（390 mg, 0.5 mmol）、二氧六環（20 mL）以及水（5 mL）加入反應瓶，氮氣置換3次，90 ℃反應16小時。LCMS監測反應完全，將反應液倒入水中，EA萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品837 mg，m/z=316[M+1] +。
步驟D：(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-(2-氟乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（410 mg, 1.3 mmol），(( 3R,4S)-3-羥基呱啶-4-基)碳酸叔丁酯（309 mg, 1.4 mmol）、DIEA（840 mg, 6.5 mmol）以及DMSO（5 mL），90 ℃反應40小時。冷卻到室溫，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品420 mg，m/z = 512[M+1] +。
步驟E：( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽
反應瓶中加入(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯（420 mg, 0.8 mmol）以及4N鹽酸-二氧六環溶液（8 mL），25 ℃反應1小時，反應完全，減壓濃縮乾，得到產品400 mg，m/z = 412[M+1] +。
步驟F：N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（400 mg, 0.9 mmol）、2,6-二氟苯甲酸（151 mg, 1.0 mmol）、DIEA（512 mg, 4.3 mmol）、HATU（363 mg, 1.0 mmol）以及DMF（5 mL），25 ℃反應2小時，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品161.5 mg，m/z=552[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.68 (s, 1H), 8.57-8.63 (m, 3H), 8.02-8.05 (m, 1H), 7.70 (m, 1H), 7.48-7.61 (m, 1H), 7.32-7.33 (m, 1H), 7.11-7.15 (m, 3H), 5.01-5.01 (m, 1H), 4.87-4.89 (m, 1H), 4.75-4.77 (m, 1H), 4.38-4.46 (m, 2H), 4.17-4.21 (m, 3H), 3.94-3.94 (m, 1H), 3.36-3.41 (m, 1H), 3.11-3.14 (m, 1H), 1.93-1.96 (m, 1H), 1.69-1.72 (m, 1H)。
實施例 121 ： 化合物 268 的製備
N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
步驟A：4-溴-6-(2,2-二氟乙氧基)-2-氟吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲醛
將4-溴-6-羥基-2-氟吡啶[1,5-a]吡啶-3-甲醛（15 g, 54 mmol）、K 2CO 3（14.9 g, 108 mmol）、1,1-二氟-2-碘乙烷（11.4 g, 60 mmol）以及DMF（140 mL）加入反應瓶，65 ℃反應24小時。LCMS監測反應完全，將反應液倒入水中，EA萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品4.4 g，m/z=323, 325[M+1] +。
步驟B：4-溴-6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-溴-6-(2,2-二氟乙氧基)-2-氟吡唑[1,5-a]吡啶-3-甲醛（4.4 g, 13.6 mmol）、水合聯胺（85%, 4.0 g, 68.1 mmol) 以及DMSO（50 mL）加入反應瓶，130 ℃反應12小時。LCMS監測反應完全，將反應液倒入水中，EA萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品3.4g，m/z=317, 319[M+1] +。
步驟C：6-(2,2-二氟乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
將4-溴-6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（2.9 g, 9.1 mmol）、6-氟吡啶-3-硼酸（1.4 g, 10.0 mmol）、Cs 2CO 3（6.0 g, 18.3 mmol）、Pd(dppf)Cl 2（670 mg, 0.9 mmol）、二氧六環（34 mL）以及水（7 mL）加入反應瓶，氮氣置換3次，90 ℃反應2小時。LCMS監測反應完全，將反應液倒入水中，EA萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品1.6 g，m/z=334[M+1] +。
步驟D：(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-(2,2-二氟乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（1 g, 3.0 mmol）、(( 3R,4S)-3-羥基呱啶-4-基)碳酸叔丁酯（700 mg, 3.3 mmol）、DIEA（1900 mg, 15.0 mmol）以及DMSO（10 mL），90 ℃反應40小時。冷卻到室溫，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品1 g，m/z = 530[M+1] +。
步驟E：( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽
反應瓶中加入(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基) 胺基碳酸叔丁酯（1 g, 1.9 mmol) 以及4N鹽酸-二氧六環溶液（20 mL)，25 ℃反應1小時，反應完全，減壓濃縮乾，得到產品1.1 g，m/z = 430[M+1] +。
步驟F：N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（400 mg, 0.9 mmol）、2,6-二氟苯甲酸（163 mg, 1.0 mmol）、DIEA（553 mg, 4.3 mmol）、HATU（392 mg, 1.0 mmol）以及DMF（5 mL），25 ℃反應2小時，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品115.4 mg，m/z=570[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.71 (s, 1H), 8.57-8.69 (m, 3H), 8.01-8.04 (m, 1H), 7.50-7.62 (m, 1H), 7.34-7.35 (m, 1H), 7.12-7.17 (m, 1H), 7.06-7.08 (m, 3H), 6.35-6.62 (m, 1H), 5.00-5.00 (m, 1H), 4.47-4.56 (m, 2H), 4.20-4.20 (m, 3H), 3.94-3.94 (m, 1H), 3.36-3.44 (m, 1H), 3.24-3.29 (m, 1H), 1.93-1.96 (m, 1H), 1.71-1.72 (m, 1H)。
實施例 122 ： 化合物 269 的製備
N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯磺醯胺
反應瓶加入( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、2,6-二氟苯甲醯氯（43 mg, 0.2 mmol）、DIEA（129 mg, 1.0 mmol）以及DCM（10 mL），25 ℃反應1小時，反應完全。倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品15.5 mg，m/z=570.2[M+1]+。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.64 (brs, 1H), 8.54-8.50 (m, 2H), 8.02-7.96 (m, 2H), 7.70 (t, J=6.4Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.36-7.22 (m, 3H), 7.00 (d, J=9.2Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.28-4.08 (m, 4H), 3.72-3.70 (m, 1H), 3.68-3.59 (m, 1H), 3.45-3.41 (m, 1H), 3.20-3.14 (m, 1H), 1.90-1.85 (m, 1H), 1.52-1.48 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 123 ： 化合物 273 的製備
N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,5-二氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入2,5-二氟苯甲酸（158 mg, 1.0 mmol）以及二氯甲烷（3 mL），冰浴冷卻至5 ℃，依次滴加草醯氯（139 mg, 1.1 mmol）和催化量的DMF（4 mg, 0.05 mmol）。加畢，反應液室溫攪拌2小時。反應液濃縮後用DMF（5 mL）稀釋後，取1 mL溶液於冰浴下，滴加到( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）以及二異丙基乙基胺（129 mg, 1.0 mmol）的DMF（4 mL）溶液中。反應液室溫攪拌反應2小時。反應液經LCMS監測基本反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品45 mg，m/z = 534 [M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.99-8.07 (m, 2H), 7.59 (s, 1H), 7.49-7.53 (m, 1H), 7.36-7.42 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.07 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 5.11 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 4.15-4.38 (m, 5H), 3.90-3.99 (m, 1H), 3.28-3.35 (m, 1H), 3.11-3.21 ( m, 1H), 1.89-2.01 (m, 1H), 1.67-1.79 (m, 1H), 1.36-1.48 (m, 3H)。
實施例 124 ： 化合物 274 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)- 2,3,6-三氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入2,3,6-三氟苯甲酸（176 mg, 1.0 mmol）以及二氯甲烷（3 mL），冰浴冷卻至5 ℃，然後依次滴加草醯氯（139 mg, 1.1 mmol）以及催化量的DMF（4 mg, 0.05 mmol）。加畢，反應液室溫攪拌2小時。反應液濃縮後，用DMF（5 mL）稀釋後，取1 mL溶液於冰浴下，滴加到( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）以及二異丙基乙基胺（129 mg, 1.0 mmol）的DMF（4 mL）溶液中。反應液室溫攪拌反應2小時。反應液經LCMS監測基本反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品35 mg，m/z = 552 [M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.75 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.02 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.50-7.61 (m, 2H), 7.15-7.26 (m, 2H), 7.07 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.11 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 4.15-4.38 (m, 5H), 3.90-3.99 (m, 1H), 3.21-3.41(m, 2H) , 1.89-2.01 (m, 1H), 1.67-1.79 (m, 1H), 1.38-1.42 (m, 3H)。
實施例 125 ： 化合物 275 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
向反應瓶中依次加入( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、DMF（2 mL）以及二異丙基乙基胺（129 mg, 1.0 mmol）。冰浴冷卻至5 ℃，滴加2-氯-6-氟苯甲醯氯（39 mg, 0.2 mmol）的DMF（0.2 mL）溶液，室溫攪拌反應2小時。反應液經 LCMS監測基本反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品47 mg，m/z = 550 [M+1] +。 1H-NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.60 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.60 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.45-7.48 (m, 1H), 7.36 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.21-7.28 (m, 2H), 7.07 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 5.11 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 4.15-4.38 (m, 5H), 3.90-3.99 (m, 1H), 3.21-3.35(m, 1H), 3.31-3.47 ( m, 1H), 1.89-2.01 (m, 1H), 1.67-1.79 (m, 1H), 1.36-1.48 (m, 3H)。
實施例 126 ： 化合物 276 的製備
2-氯-N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-5-氟苯甲醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑並[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.25 mmol）、5-氯-2-氟苯甲醯氯（52 mg, 0.25 mmol）、DIEA（194 mg, 1.80 mmol）以及DMF（3 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品18 mg，m/z=550[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.65 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.33 (d, J=7.6Hz, 1H), 8.00 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.58-7.53 (m, 2H), 7.42-7.30 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.06 (d, J=8.0Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.33-4.13 (m, 5H), 3.97-3.93 (m, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 3.24-3.18 (m, 1H), 1.99-1.89 (m, 1H), 1.75-1.66 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 127 ： 化合物 277 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)-吡啶-2 –基)-3-羥基呱啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.25 mmol）、5-氟-2-甲基苯甲醯氯（44 mg, 0.25 mmol）、DIEA（194 mg, 1.80 mmol）以及DMF（3 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品30 mg，m/z=530[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.09 (d, J=7.6Hz, 1H), 7.99 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.30-7.15 (m, 4H), 7.06 (d, J=9.2Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.34-4.14 (m, 5H), 3.97-3.93 (m, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 3.24-3.18 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.75-1.66 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 128 ： 化合物 278 的製備
2-氯-N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基) )吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-6-甲基苯甲醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基) -3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.25 mmol）、2-氯-6-甲基苯甲酸（42 mg, 0.25 mmol）、DIEA（194 mg, 1.80 mmol）、HATU（95 mg, 0.25 mmol）以及DMF（3 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品28 mg，m/z=546[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.32 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.99 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.30-7.20 (m, 4H), 7.05 (d, J=9.2Hz, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.24-4.13 (m, 5H), 3.97-3.93 (m, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 3.24-3.18 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.75-1.68 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 129 ： 化合物 279 的製備
N-(( 3R, 4S)-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)- 2-三氟甲基苯甲醯胺
反應瓶加入( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、2-三氟甲基苯甲醯氯（41 mg, 0.2 mmol）、DIEA（129 mg, 1.0 mmol）以及10 mL DCM，25 ℃反應1小時，反應完全。倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品28.2 mg，淡黃色固體，m/z=566.2[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.27 (d, J=8.0Hz, 1H), 8.01 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.79-7.41 (m, 2H), 7.66-7.56 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 7.06 (d, J=8.0Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.42-4.12 (m, 5H), 4.97-4.93 (m, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 3.28-3.19 (m, 1H), 1.98-1.89 (m, 1H), 1.75-1.68 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 130 ： 化合物 280 的製備
2-氰基-N-(( 3R, 4S)-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-苯甲醯胺
反應瓶加入( 3R, 4S)-4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、2-氰基苯甲醯氯（33 mg, 0.2 mmol）、DIEA（129 mg, 1.0 mmol）以及10 mL DCM，25 ℃反應1小時，反應完全。倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品12.4 mg，淡黃色固體，m/z=523.2[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 10.27 (s, 1H), 8.58-8.51 (m, 2H), 8.20 (d, J=6.8Hz, 1H), 8.01 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.85-7.72 (m, 3H), 7.59 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.09 (d, J=8.4Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 4.85-4.51 (m, 2H), 4.27-4.15 (m, 4H), 3.22-3.20 (m, 1H), 3.08-2.98 (m, 2H), 1.75-1.68 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8Hz, 3H)。
實施例 131 ： 化合物 281 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-1-(三氟甲基)環丁烷-1-甲醯胺
將 ( 3R, 4S)-4-胺基-1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（120.6 mg, 0.24 mmol）、DMF（2 mL）、DIEA（154.8 mg, 1.2 mmol）以及1-三氟環丁烷-1-羧酸（33.6 mg, 0.2 mmol），依次加入反應瓶，室溫下加入HATU（114 mg, 0.3 mmol），室溫反應1小時。LCMS監測反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品55 mg，m/z=544.1[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (s, 1H), 8.55-8.50 (m, 2H), 8.01-7.98 (m, 1H), 7.58 (s, 1H),7.50-7.48 (d, 1H), 7.24-7.23 (m, 1H), 7.07-7.05 (m,1H), 5.01 (s, 1H), 4.42-4.32 (m, 2H), 4.20-4.15 (m, 3H), 4.01-3.98 (m, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.35-3.05 (m, 2H), 2.37-2.34 (m, 2H), 1.96-1.83 (m, 4H), 1.61-1.58 (m , 1H), 1.43-1.38 (t, 3H)。
實施例 132 ： 化合物 282 的製備
N-(( 3R, 4S)- 1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-1-氟環丙烷-1-甲醯胺
將 ( 3R, 4S)-4-胺基-1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（120.6 mg, 0.24 mmol）、DMF（2 mL）、DIEA（154.8 mg, 1.2 mmol）以及1-氟環丙烷-1-羧酸（20.8 mg, 0.2 mmol），依次加入反應瓶，室溫下加入HATU (114 mg, 0.3 mmol)，室溫反應1小時。LCMS監測反應完全。將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品6 mg，m/z=480.1[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (s, 1H), 8.55-8.50 (m, 2H), 8.01-7.98 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.50-7.48 (d, 1H), 7.24-7.23 (m, 1H), 7.07-7.05 (m,1H), 5.01 (s, 1H), 4.20-4.15 (m, 3H), 3.60-3.58 (m, 1H), 3.37-3.04 (m, 4H), 1.70-1.85 (m, 2H), 1.43-1.38 (t, 3H)，1.00-1.25(m, 4H)。
實施例 133 ： 化合物 283 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,3-二甲基丁醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（238 mg, 0.51 mmol）、2,3-二甲基丁酸（60 mg, 0.51 mmol）、DIEA（329 mg, 2.55 mmol）、HATU（232 mg, 0.61 mmol）以及DMF（5 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。LCMS監測反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品25 mg，m/z=492.3[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (brs, 1H), 8.50-8.54 (m, 2H), 7.98-8.01 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.48-7.49 (m, 1H), 7.24 (m, 1H), 7.00-7.02 (m, 1H), 4.87-4.93 (m, 1H), 4.16-4.18 (m, 4H), 3.80-3.94 (m, 2H), 3.10-3.20 (m, 1H), 2.00-2.10 (m, 1H), 1.50-1.90 (m, 3H), 1.40 (t, J=6.8Hz, 3H), 0.84-0.98 (m, 10H)。
實施例 134 ： 化合物 284 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲醯胺
將 ( 3R, 4S)-4-胺基-1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（150 mg, 0.30 mmol）、DMF（2 mL）、DIEA（154.8 mg, 1.2 mmol）以及3-三氟甲基-2-羧酸吡啶（38 mg, 0.2 mmol），依次加入反應瓶，室溫下加入HATU (114 mg, 0.3 mmol)，室溫反應1小時。LCMS監測反應完全。將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品6 mg，m/z=567[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (s, 1H), 8.55-8.50 (m, 3H), 8.01-7.98 (m, 2H), 7.58 (s, 1H),7.50-7.48 (d, 2H), 7.24-7.23 (m, 1H), 7.07-7.05 (m,1H), 5.01 (s, 1H), 4.20-4.15 (m, 3H), 4.01-3.98 (m, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.35-3.05 (m, 2H), 2.37-2.34 (m, 2H), 1.61-1.58 (m, 1H), 1.43-1.38 (t, 3H)。
實施例 135 ： 化合物 285 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-羥基呱啶-4-基)-3-氯-5-氟吡啶甲醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、3-氯-5-氟吡啶甲酸（32 mg, 0.2 mmol）、DIEA（129 mg, 1.0 mmol）、HATU（76 mg, 0.2 mmol）以及DMF （3 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。LCMS監測反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品41.6 mg，m/z=551[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51-8.49 (m, 2H), 8.32 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.92-7.87 (m, 1H), 7.73-7.69 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.07 (d, J=9.2 Hz, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.45-4.36 (m, 2H), 4.20-4.14 (m, 3H), 3.95-3.93 (m, 1H), 3.33-3.30 (m, 1H), 3.15-3.10 (m, 1H), 1.95-1.92 (m, 1H), 1.78-1.74 (m, 1H), 1.38 (t, J=6.8 Hz, 3H)。
實施例 136 ： 化合物 286 的製備
N-(( 3R, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-羥基呱啶-4-基)-3-氟吡啶甲醯胺
將( 3R, 4S)-4-胺基-1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、3-氟吡啶甲酸（32 mg, 0.2 mmol）、DIEA（129 mg, 1.0 mmol）、HATU（76 mg, 0.2 mmol）以及DMF（3 mL）加入反應瓶，25 ℃反應1小時。LCMS監測反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品39.9 mg，m/z=517[M+1] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.65 (brs, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.35 (d, J=8.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.00 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.07 (d, J=9.2 Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.34-4.27 (m, 2H), 4.20-4.15 (m, 2H), 3.95-3.93 (m, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 3.20-3.15 (m, 1H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.78-1.70 (m, 1H), 1.39 (t, J=6.8 Hz, 3H)。
實施例 137 ： 化合物 291 的製備
N-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羥甲基)呱啶-4-基)-2,5-二氟苯甲醯胺
步驟A：4-(2,5-二氟苯甲醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-甲酸乙酯
將乙基4-胺基-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-甲酸乙酯（120 mg, 0.26 mmol）、2,5-二氟苯甲酸（38 mg, 0.24 mmol）、DIEA（100 mg, 0.78 mmol）、HATU（108 mg, 0.28 mmol）以及DMF（2 mL）加入反應瓶，25 ℃反應12小時，LCMS監測反應完全。加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品100 mg，m/z=590[M+1] +。
步驟B：N-(1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(羥甲基)呱啶-4-基)-2,5-二氟苯甲醯胺
將4-(2,5-二氟苯甲醯胺)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-4-甲酸乙酯（30 mg, 0.05 mmol）以及2 mL THF加入反應瓶，0 ℃下加入LiAlH 4（1.9 mg, 0.05 mmol），反應1小時。LCMS監測反應完全，加水攪拌淬滅，乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品20 mg，m/z=548[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.61 (s, 1H), 8.55 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.48 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.04 (dd, J= 8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.27 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.25-7.18 (m, 3H), 4.85 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.20 (d, J= 13.4 Hz, 2H), 4.15 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 3.58 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 3.15 (t, J= 12.4 Hz, 2H), 2.20 (d, J= 13.4 Hz, 2H), 1.68 (td, J= 13.4, 4.4 Hz, 2H), 1.38 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。
實施例 138 ： 化合物 292 的製備
N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-羥基呱啶-4-基)-2-氯-6-氟苯甲醯胺
將( 3R,4S)-4-胺基-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、DCM（3 mL）、DIEA（138 mg, 1.0 mmol）以及2-氯-6-氟苯甲醯氯（41 mg, 0.2 mmol）加入反應瓶，0 ℃反應15分鐘，LCMS監測反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品43.5 mg，m/z=586[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.70 (s, 1H), 8.57-8.69 (m, 3H), 8.01-8.02 (m, 1H), 7.61-7.61 (m, 1H), 7.45-7.47 (m, 1H), 7.28-7.37 (m, 3H), 7.06-7.06 (m, 1H), 6.34-6.62 (m, 1H), 4.94-4.95 (m, 1H), 4.48-4.52 (m, 2H), 4.19-4.20 (m, 3H), 3.93-3.93 (m, 1H), 3.42-3.45 (m, 1H), 3.27-3.34 (m, 1H), 1.94-1.97 (m, 1H), 1.70-7.73 (m, 1H)。
實施例 139 ： 化合物 293 的製備
N-(( 3R,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-羥基呱啶-4-基)-2-氯-5-氟苯甲醯胺
將( 3R,4S)-4-胺基-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇鹽酸鹽（100 mg, 0.2 mmol）、DCM（3 mL）、DIEA（138 mg, 1.0 mmol）以及2-氯-5-氟苯甲醯氯（41 mg, 0.2 mmol）加入反應瓶，0 ℃反應15分鐘，LCMS監測反應完全，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品11.0 mg，m/z=586[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.70 (s, 1H), 8.68-8.69 (m, 1H), 8.57-8.58 (m, 1H), 8.34-8.36 (m, 1H), 8.01-8.04 (m, 1H), 7.53-7.61 (m, 1H), 7.39-7.41 (m, 1H), 7.33-7.35 (m, 3H), 7.07-7.09 (m, 1H), 6.35-6.62 (m, 1H), 4.97-4.98 (m, 1H), 4.47-4.56 (m, 2H), 4.14-4.25 (m, 3H), 3.96-3.96 (m, 1H), 3.40-3.40 (m, 1H), 3.22-3.37 (m, 1H), 1.94-1.94 (m, 1H), 1.67-1.71 (m, 1H)。
實施例 140 ： 化合物 294 的製備
N-(( 3S, 4S)-1-(5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
將( 3S, 4S)-4-胺基-1-5-(6-乙氧基-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶鹽酸鹽（200 mg, 0.51 mmol）、DMF（2 mL）、DIEA（197 mg, 1.5 mmol）以及2,6-二氟苯甲酸（88.4 mg, 0.56 mmol），依次加入反應瓶，室溫下加入HATU（290 mg, 0.76 mmol），室溫反應1小時。LCMS監測反應完全。將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品7 mg，m/z=534[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.64 (s, 1H), 8.61-8.50 (m, 3H), 8.02-7.99 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.52-7.47 (m, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 7.07-7.05 (d, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.24-4.15 (m, 5H), 3.93 (s, 1H), 3.44-3.43 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 3.28-3.26 (d, 1H), 1.95-1.93 (m, 1H), 1.71-1.68 (m, 1H), 1.43 (t, 3H)。
實施例 141 ： 化合物 295 的製備
N-(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
步驟A：(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-(2-氟乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（410 mg, 1.3 mmol）、(( 3S,4S)-3-羥基呱啶-4-基)碳酸叔丁酯（309 mg, 1.4 mmol）、DIEA（840 mg, 6.5 mmol）以及DMSO（5 mL）， 90 ℃反應40小時。反應液冷卻到室溫，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品430 mg，m/z = 512[M+1] +。
步驟B： (( 3S,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基鹽酸鹽
反應瓶中加入(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯（430 mg, 0.8 mmol）以及4N鹽酸-二氧六環溶液（8 mL），25 ℃反應0.5小時，反應完全，減壓濃縮乾，得到產品320 mg，m/z = 412[M+1] +。
步驟C：N-(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
將(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2-氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基鹽酸鹽（320 mg, 0.8 mmol）、2,6-二氟苯甲酸（110 mg, 0.8 mmol）、DIEA（502 mg, 4.0 mmol）、HATU（325 mg, 0.9 mmol）以及DMF（5 mL），25 ℃反應2小時，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品144.2 mg，m/z=552[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.68 (s, 1H), 8.60-9.00 (m, 3H), 8.05-8.07 (m, 1H), 7.61 (m, 1H), 7.50-7.50 (m, 1H), 7.32-7.33 (m, 1H), 7.09-7.16 (m, 3H), 5.11-5.11 (m, 1H), 4.76-4.88 (m, 1H), 4.76-4.46 (m, 1H), 4.38-4.39 (m, 3H), 4.24-4.27 (m, 1H), 3.94-3.95 (m, 1H), 3.49-3.50 (m, 1H), 3.16-3.36 (m, 1H), 2.91-2.97 (m, 1H), 2.04-2.07 (m, 1H), 1.45-1.48 (m, 1H)。
實施例 142 ： 化合物 296 的製備
N-(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
步驟A：(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯
反應瓶中加入6-(2,2-二氟乙氧基)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（600 mg, 1.8 mmol）、((3S,4S)-3-羥基呱啶-4-基)碳酸叔丁酯（430 mg, 2.0 mmol）、DIEA（1160 mg, 9.0 mmol）以及DMSO（6 mL），90 ℃反應40小時。冷卻到室溫，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品600 mg，m/z = 530[M+1] +。
步驟B：(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基鹽酸鹽
反應瓶中加入(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基碳酸叔丁酯（600 mg, 1.1 mmol）以及4N鹽酸-二氧六環溶液（10 mL），25 ℃反應0.5小時，反應完全，減壓濃縮乾，得到產品600 mg，m/z = 430[M+1] +。
步驟C：N-(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)-2,6-二氟苯甲醯胺
將(( 3S,4S)-1-(5-(6-(2,2-二氟乙氧基)-1H-吡唑[3',4':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-4-基)胺基鹽酸鹽（400 mg, 0.9 mmol）、2,6-二氟苯甲酸（163 mg, 1.0 mmol）、DIEA（553 mg, 4.3 mmol）、HATU（392 mg, 1.0 mmol）以及DMF（5 mL），25 ℃反應2小時，倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮，管柱層析純化得到產品111.2 mg，m/z=570[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.71 (s, 1H), 8.60-8.70 (m, 3H), 8.05-8.08 (m, 1H), 7.61-7.61 (m, 1H), 7.50-7.50 (m, 1H), 7.36-7.37 (m, 1H), 7.11-7.18 (m, 3H), 6.34-6.62 (m, 1H), 5.11-5.12 (m, 1H), 4.48-4.52 (m, 3H), 4.24-4.27 (m, 1H), 3.94-3.95 (m, 1H), 3.48-3.51 (m, 1H), 3.13-3.18 (m, 1H), 2.94-2.97 (m, 1H), 2.04-2.08 (m, 1H), 1.45-1.47 (m, 1H)。
實施例 143 ： 化合物 297 的製備
6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-1H-吡咯 [2',3':3,4]吡唑 [1,5-a]吡啶
步驟A：2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2-氰基乙酸乙酯
反應瓶中加入5-溴-2,3-二氯吡啶（45.4 g, 0.2 mol）、氰基乙酸乙酯（45.2 g, 0.4 mol）、碳酸銫（195 g, 0.6 mol）以及DMSO（500 mL），90 ℃反應15小時，LCMS監控反應完全。將反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮得到產品50 g直接用於下步反應，m/z = 303[M+1] +。
步驟B：2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)乙腈
反應瓶中加入2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)-2-氰基乙酸乙酯（60 g, 0.2 mol）、氯化鈉（3.5 g, 0.06 mol）以及DMSO（500 mL），160 ℃反應2小時，LCMS監控反應完全。將反應液倒入水中，二氯甲烷萃取，乾燥有機相，減壓濃縮得到產品40 g直接用於下步反應，m/z = 231[M+1] +。
步驟C：2,4,6-三甲基苯磺酸1-胺基-5-溴-3-氯-2-(氰甲基)吡啶-1-鎓鹽
零度下，向2-[(胺基氧基)磺醯]-1,3,5-三甲基苯（6.8 g, 31.7 mmol）的二氯甲烷（50 mL）溶液中加入2-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)乙腈（7.4 g, 32.0 mmol），並在零度下繼續攪拌3小時，析出大量白色固體。反應完畢後，零度下向反應體系中加入乙醚（50 mL）並攪拌10分鐘，減壓過濾，乙醚沖洗，真空乾燥得到產品15 g，無須再次純化，直接用於下一步反應。m/z=246[M+1] +。
步驟D：6-溴-4-氯吡唑[1,5-a]吡啶-2-胺
零度下，向裝有2,4,6-三甲基苯磺酸1-胺基-5-溴-3-氯-2-(氰甲基)吡啶-1-鎓鹽（1.0 g, 2.2 mmol）的DMF（30 mL）溶液中加入三乙胺（1.1 g, 11.0 mmol），升至室溫下攪拌12小時，反應完畢，加食鹽水淬滅，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用食鹽水洗滌，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品350 mg，m/z=246[M+1] +。
步驟E：1-(2-胺基-6-溴-4-氯吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)-2-氯乙基-1-酮
向反應瓶中加入6-溴-4-氯吡唑[1,5-a]吡啶-2-胺（2.5 g, 10.0 mmol）、氯乙腈（1.5 g, 20.0 mmol）、三氯化硼（12 mL, 12.0 mmol）、三氯化鋁（2.7 g, 20.0 mmol）以及 氯苯（20 mL），120 ℃反應12小時，加入稀鹽酸（1N, 30 mL），100 ℃反應1小時，反應完畢，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1.5 g，m/z=322[M+1] +。
步驟F：1-(2-胺基-6-溴-4-氯吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)-2-氯乙基-1-醇
反應瓶中加入1-(2-胺基-6-溴-4-氯吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)-2-氯乙基-1-酮（2.0 g, 6.2 mmol）、二氧六環（20 mL）以及水（2 mL），反應體系冷卻至0 ℃，分批次加入硼氫化鈉（0.3 g, 7.9 mmol），升至室溫，反應5小時。反應完畢，加水淬滅，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品1.0 g，m/z=324[M+1] +。
步驟G：6-溴-4-氯-1H-吡咯[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中加入1-(2-胺基-6-溴-4-氯吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)-2-氯乙基-1-醇（323 mg, 1.0 mmol）以及四氫呋喃（10 mL），反應體系冷卻至0 ℃，緩慢滴加異丙基氯化鎂（1.5 mL, 3.0 mmol），80 ℃反應1小時，反應完畢，加飽和氯化銨水溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品178 mg，m/z=270[M+1] +。
步驟H：4-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二惡硼烷-2-基)-1H-吡咯[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向6-溴-4-氯-1H-吡咯並[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（650 mg, 2.4 mmol）中加入聯硼酸頻那醇酯（736 mg，2.9 mmol），醋酸鉀（705 mg，7.2 mmol）、1,4-二氧六環（10 mL）以及Pd(dppf)Cl 2（175 mg, 0.24 mmol），氮氣置換後，80 ℃反應12小時，過濾，濾液濃縮後管柱層析分離得到產品523 mg，m/z=318[M+1] +。
步驟I：4-氯-1H-吡唑[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-羥基
向反應瓶中加入4-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二惡硼烷-2-基)-1H-吡咯[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（634 mg, 2.0 mmol）以及四氫呋喃（10 mL），然後反應體系冷卻至0 ℃，緩慢滴加雙氧水（340 mg, 10.0 mmol），0 ℃反應1小時，反應完畢，加飽和偏重亞硫酸鈉水溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品500 mg，m/z=208[M+1] +。
步驟J：4-氯-6-乙氧基-1H-吡咯[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶中加入4-氯-1H-吡唑[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶-6-羥基（416 mg, 2.0 mmol）、碘乙烷（374 mg, 2.4 mmol）、碳酸鉀（552 mg, 4.0 mmol）以及DMF（5 mL），反應體系升溫至50 ℃，反應5小時，反應完畢，加水淬滅，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用水洗滌，減壓濃縮，管柱層析分離得到產品400 mg，m/z=236[M+1] +。
步驟J：6-乙氧基-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-1H- 吡咯[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶
向反應瓶加入4-氯-6-乙氧基-1H-吡咯[2',3':3,4]吡唑[1,5-a]吡啶（235 mg, 1.0 mmol）、6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊烷-2-基)吡啶-2-基)- 3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚烷（422 mg, 1.0 mmol）、Xphos（95.2 mg, 0.2 mmol）、醋酸鈀（22.4 mg, 0.1 mmol）、磷酸鉀（424 mg, 2.0 mmol）、1,4-二氧六環（10 mL）以及水（2 mL），氮氣置換後，100 ℃反應12小時，過濾，濾液濃縮後管柱層析分離得到產品250 mg，m/z=496[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.81 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.11-7.99 (m, 2H), 7.69 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.01-6.92 (m, 2H), 6.86 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.10 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.81 (m, 5H), 3.68 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.31 (s, 2H), 1.58 (s, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H)。
通過上述方法或參考上述方法，共製備得到化合物1至化合物265，其化學結構式和質譜數據匯總於表1。
表1：實施例化合物1至實施例化合物265的化學結構和質譜數據
編號 化學結構 m/z [M+1]
1       528
2       599
3       531
4       549
5       579
6       616
7       616
8       487
9       568
10    499
11    548
12    547
13    613
14    615
15    574
16    519
17    644
18    586
19    588
20    660
21    533
22    558
23    608
24    661
25    657
26    670
27    518
28    545
29    561
30    457
31    457
32    487
33    497
34    517
35    519
36    531
37    545
38    588
39    478
40    448
41    544
42    533
43    550
44    550
45    567
46    530
47    532
48    545
49    529
50    534
51    551
52    526
53    554
54    556
55    550
56    546
57    551
58    549
59    532
60    548
61    496
62    476
63    497
64    542
65    488
66    478
67    505
68    510
69    571
70    517
71    559
72    561
73    575
74    602
75    643
76    576
77    590
78    629
79    613
80    544
81    531
82    505
83    574
84    575
85    574
86    572
87    492
88    494
89    492
90    545
91    551
92    540
93    510
94    487
95    557
96    540
97    579
98    569
99    567
100  581
101  484
102  548
103  456
104  471
105  586
106  586
107  536
108  454
109  466
110  480
111  404
112  490
113  511
114  527
115  530
116  418
117  499
118  546
119  582
120  528
121  568
122  557
123  529
124  569
125  472
126  431
127  543
128  537
129  525
130  531
131  513
132  486
133  468
134  512
135  526
136  471
137  416
138  471
139  528
140  499
141  499
142  486
143  504
144  503
145  507
146  533
147  544
148  496
149  544
150  548
151  497
152  511
153  532
154  497
155  546
156  511
157  546
158  511
159  546
160  511
161  532
162  562
163  527
164  546
165  511
166  548
167  513
168  548
169  562
170  532
171  497
172  532
173  497
174  560
175  525
176  560
177  525
178  574
179  539
180  572
181  600
182  565
183  546
184  632
185  546
186  511
187  546
188  511
189  546
190  511
191  560
192  525
193  560
194  525
195  574
196  539
197  574
198  539
199  574
200  539
201  560
202  560
203  525
204  560
205  525
206  574
207  539
208  574
209  539
210  574
211  539
212  574
213  539
214  588
215  553
216  588
217  553
218  588
219  553
220  546
221  511
222  546
223  511
224  508
225  565   
226  515
227  507
228  541
229  529
230  611
231  575
232  508
233  534
234  575
235  483
236  545
237  529
238  497
239  497
240  527
241  495
242  523
243  478
244  529
245  542
246  601
247  512
248  522
249  515
250  430
251  529
252  447
253  463
254  468
255  470
256  454
257  510
258  547
259  547
260  511
261  525
262  535
263  551
264  533
265  563
編號 化學結構 m/z [M+1]
266 551
267 552
268 570
269 570
270 584
271 533
272 572
273 534
274 552
275 550
276 550
277 530
278 546
279 566
280 523
281 544
282 480
283 492
284 567
285 551
286 517
287 557
288 557
289 543
290 586
291 548
292 586
293 586
294 534
295 552
296 570
297 496
生物活性測試例
測試例 1
轉染重組基因（RET）是一個已經確認的原癌基因。它編碼的單次跨膜受體酪胺酸激酶，是許多組織和細胞類型的發育，成熟和維持所必需的。在正常條件下，神經膠質細胞系衍生的神經營養因子（GDNF）家族配體與細胞表面上的RET的結合導致細胞內酪胺酸殘基的二聚化和自磷酸化。這反過來導致下游RAS-MAPK，PI3K-AKT和磷脂酶Cγ（PLCγ）通路的激活，並增加細胞存活和增殖。激活RET突變的實例包括C634W、M918T、關守突變、V804L、V804M以及G810R。
該試驗將肽底物和單一專有單克隆抗體與HTRF技術相結合，HTRF技術是一種高靈敏度和穩定的技術，用於檢測蛋白質的分子相互作用。酶將底物磷酸化，然後Eu標記的抗體結合磷酸化底物，鏈黴抗生物素蛋白-XL665結合所有底物。TR-FRET信號由HTRF原理產生。一旦添加抑制劑（受試化合物），就獲得較弱的TR-FRET信號。據此，評估抑制效果。
激酶活性測試試劑和耗材
材料和試劑 供應商 型號
HTRF KinEASE-TK 試劑盒 Cisbio 62TK0PEC
Ret-wt Carna 08-159
RET (V804M)，活化 Signalchem R02-12GG
RET G810R Proqinase 1724-0000-1
DMSO Sigma D8418-1L
ATP Promega A769
DTT Sigma D0632
MgCl 2 Sigma M1028
Cabozantinib MCE HY-13016
星形孢菌素（Staurosporine） MCE HY-15141
平板振盪器 Thermo 4625-1CECN/THZ Q
離心機 Eppendorf 5810R
Envision 2104多標記讀板儀 PerkinElmer 2104-0010
Echo Labcyte 550
384 polystyrene Shallow flat white Greiner 784075
微孔板低速離心機 湘智 TD5B
Biotek酶標儀 Biotek Synergy 4
1.2 配製溶液
將所有的化合物都溶解在DMSO中的配製成10 mM的儲液。
用DMSO將卡博替尼（Cabozantinib）從10 mM 和1 mM分別梯度稀釋3倍，共10個濃度。
其他化合物從10 mM 的原液用DMSO梯度稀釋3倍，共10個濃度。
製備1000×陽性對照（1 mM Cabozantinib和0.2 mM Staurosporine）和1000×陰性對照（100％DMSO）。
在平板振盪器上振盪5分鐘。
1.3 製備1x激酶緩衝液
將4體積蒸餾水加入1體積酶緩衝液5X；5 mM MgCl 2；1 mM DTT。
1.4 篩選方法
a）將10 nl化合物稀釋液轉移到測試板的每個孔中；
b）在1000 g下將化合物板離心1分鐘。
c）密封測試板。
d）製備1x激酶緩衝液中的5X Ret-wt（0.2 ng /μl）和5X Ret V804M（0.5 ng /μl）和2.5X RET G810R（2.5 ng/μl）。
e）加入2 μl的5X Ret-wt或2 μl的Ret V804L或2 μl的RET G810R至384孔測試板。
f）將4 μl的1x激酶緩衝液加入測試板的每個孔中，在1000 g下離心樣品板30秒，在室溫放置10分鐘。
g）製備激酶緩衝液中的5x TK-底物-生物素（5 μM）和激酶緩衝液中的5x ATP（50 μM）的溶液。
h）通過加入2 μl STK-底物-生物素和2 μlATP（步驟g中製備的）開始反應。
i）在1000 g下離心樣品板30秒。密封測試板，室溫放置30分鐘。
j）製備在HTRF檢測緩衝液中的4X Sa-XL 665（250nM）。
k）將5 μl的Sa-XL 665和5 μl的TK-antibody-Cryptate（在步驟i中製備的）加入到測試板的每個孔中。
l）在1000 g下離心30秒，室溫放置1小時。
m）在Envision 2104讀板儀或BioTek酶標儀上讀取615 nm/620 nm(G810R)（Cryptate）和665 nm（XL665）的螢光信號值。
1.5 數據分析
計算每個孔的比率（665 nm/615 nm）。
抑制率%通過如下方式計算：
抑制率%=[1-（受試化合物螢光信號值—陽性對照螢光信號值）/（陰性對照平均比率—陽性對照平均比率）]*100%；
比率：由測得的螢光信號值產生；
陽性對照平均比率為樣品板中陽性對照（20 μM Cabozantinib）的平均比率；
陰性對照平均比率為樣品板中陰性對照（0.1% DMSO）的平均比率。
利用一些非線性擬合公式來得到化合物的IC50（半數抑制濃度）：用GraphPad 6.0軟件進行數據分析。
Y=Bottom +(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*Hill Slope)) 。
X: 化合物濃度Log值      Y: 抑制率（% inhibition）。
Z’ 因子技術方程式：
Z’=1-3(SDmin+SDmax)/(AVEmax-AVEmin) 。
Min為陽性對照藥20 μM Cabozantinib Ratio(665/620 nM*10000)，Max為陰性對照藥DMSO Ration(665/620 nM*10000)。
SD為標準誤差，AVE為Ration(665/620 nM*10000)平均值。
實施例化合物的激酶結果如表2、表3和表4所示：
表2
化合物編號 RET-wt IC 50(nM)
化合物3 0.1
化合物4 0.1
化合物11 0.1
化合物39 0.1
化合物40 0.1
化合物41 0.1
化合物42 0.1
化合物44 0.1
化合物46 0.1
化合物88 0.1
Cabozantinib 20.2
表3
化合物編號 RET V804M IC 50(nM)
化合物3 0.1
化合物4 0.03
化合物11 0.1
化合物39 0.1
化合物40 0.1
化合物41 0.1
化合物42 0.05
化合物44 0.1
化合物46 0.06
化合物88 0.2
Cabozantinib 89.3
表4
化合物編號 RET G810R IC 50(nM)
化合物1 6.5
化合物3 2.9
化合物4 2.3
化合物8 8.7
化合物11 0.36
化合物12 2.1
化合物15 1.5
化合物17 2.1
化合物29 8.8
化合物31 2.6
化合物33 2.5
化合物34 4.9
化合物35 5.1
化合物36 5.7
化合物37 6.3
化合物39 4.2
化合物40 2.2
化合物41 2.8
化合物42 1.4
化合物43 1.9
化合物44 0.8
化合物45 5.2
化合物46 1.6
化合物48 2.9
化合物50 17.9
化合物51 4.3
化合物55 4.5
化合物56 23.6
化合物57 6.9
化合物58 5.6
化合物59 4.6
化合物87 9.4
化合物88 7.8
化合物89 2.0
化合物91 2.2
化合物101 6.6
化合物102 3.6
化合物103 11.1
化合物104 6.4
化合物107 14.5
化合物114 3.6
化合物118 7.7
化合物149 4.7
化合物150 4.4
化合物152 4.1
化合物155 14.2
化合物156 11.4
化合物157 8.6
化合物158 18.7
化合物159 16.1
化合物160 8.2
化合物165 38.3
化合物169 4.8
化合物170 27.3
化合物172 8.2
化合物173 12.5
化合物174 3.5
化合物176 12.1
化合物180 9.7
化合物183 8.0
化合物188 16.9
化合物189 15.3
化合物193 33.7
化合物201 4.1
化合物207 49.0
化合物208 24.1
化合物214 47.3
化合物219 66.4
化合物220 26.2
化合物227 4.01
化合物228 5.7
化合物229 38.1
化合物233 0.96
化合物234 1.6
化合物235 2.2
化合物237 112.1
化合物239 33.7
化合物240 4.0
化合物242 4.7
化合物243 89.0
化合物245 20.8
化合物248 15.5
化合物249 13.5
化合物250 40.8
化合物258 9.9
化合物267 3.0
化合物268 2.8
化合物269 6.2
化合物273 1.8
化合物274 1.3
化合物275 0.8
化合物276 0.7
化合物277 1.2
化合物278 0.9
化合物279 2.2
化合物280 2.1
化合物281 1.5
化合物282 3.5
化合物283 9.9
化合物284 4.2
化合物285 5.0
化合物286 10.3
化合物291 1.6
化合物292 1.8
化合物293 1.6
化合物294 4.1
化合物295 2.1
化合物296 2.1
化合物297 9.6
Selpercatinib(LOXO-292) 43.2
Cabozantinib 325.5
上述激酶和細胞測試結果表明，本發明化合物，尤其是上述實施例化合物對於RET-wt、RET V804M和RET G810R均具有優異的抑制活性。其中，化合物3、化合物4、化合物11、化合物39、化合物40、化合物41、化合物42、化合物44、化合物46和化合物88對RET-wt和RET V804M的抑制活性均顯著優於Cabozantinib（卡博替尼）。化合物3、化合物4、化合物11、化合物12、化合物15、化合物17、化合物31、化合物33、化合物34、化合物39、化合物40、化合物41、化合物42、化合物43、化合物44、化合物46、化合物48、化合物51、化合物55、化合物59、化合物88、化合物89、化合物91、化合物101、化合物102、化合物103、化合物104、化合物107、化合物114、化合物118、化合物149、化合物150、化合物152、化合物155、化合物156、化合物157、化合物158、化合物159、化合物160、化合物165、化合物169、化合物170、化合物172、化合物173、化合物174、化合物176、化合物180、化合物183、化合物188、化合物189、化合物193、化合物201、化合物208、化合物220、化合物227、化合物228、化合物229、化合物233、化合物234、化合物235、化合物239、化合物240、化合物242、化合物245、化合物248、化合物249、化合物258、化合物267、化合物268、化合物269、化合物273、化合物274、化合物275、化合物276、化合物277、化合物278、化合物279、化合物280, 化合物281、化合物282、化合物283、化合物284、化合物285、化合物286、化合物291、化合物292、化合物293、化合物294、化合物295、化合物296以及化合物297對RET G810R的抑制活性還顯著優於Cabozantinib（卡博替尼）和Selpercatinib（塞爾帕替尼，LOXO-292）。
尤其是化合物3、化合物4、化合物11、化合物12、化合物15、化合物17、化合物31、化合物33、化合物40、化合物41、化合物42、化合物43、化合物44、化合物46、化合物48、化合物89、化合物91、化合物102、化合物114、化合物174、化合物233、化合物234、化合物235、化合物267、化合物268、化合物269、化合物273、化合物274、化合物275、化合物276、化合物277、化合物278、化合物279、化合物280, 化合物281、化合物282、化合物291、化合物292、化合物293、化合物295、化合物296以及化合物297對RET G810R的抑制活性比Selpercatinib（塞爾帕替尼，LOXO-292）活性高10倍以上。因此本發明的化合物對選擇性RET抑制劑如Selpercatinib（塞爾帕替尼，LOXO-292）治療後產生的溶劑前沿G810耐藥突變有顯著效果，有望用於治療選擇性RET抑制劑發生耐藥後的患者。
上文對本發明示例性的實施方案進行了說明。但是應當理解，本發明的保護範圍不拘囿於上述示例性的實施方案。在本發明的精神和原則之內，所作出的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。

Claims (24)

  1. 一種如下式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽：
    Figure 111102791-A0305-02-0336-1
     其中，Q選自
    Figure 111102791-A0305-02-0336-2
    或
    Figure 111102791-A0305-02-0336-3
    X1、X2、X3、X4、X5、X6以及X7相同或不同，彼此獨立地選自CR1或N；X8選自CR1R1’或NR1；其中每一個R1和R1’相同或不同，彼此獨立地選自H或C1-8烷基；A選自H、鹵素、CN、OH、NH2或C1-8烷基或C1-8烷基氧基；D選自B(OH)2、-C(O)R4、-S(O)2R6、OS(O)2R7、-O-R21、-C(O)OR22、-P(O)R23R24以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rc的取代基取代的下列基團：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、C3-8環烯基、C3-8環炔基、C6-10芳基、5-8元雜芳基、3-8元雜環基或NH2；E選自H、鹵素、CN、OH以及C1-8烷基； R21、R22、R23、R24相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rd的取代基取代的下列基團：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、C3-8環烯基、C3-8環炔基、C6-10芳基、5-8元雜芳基或3-8元雜環基；G選自鹵素以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Re的取代基取代的下列基團：至少一個雜原子選自N的5-12元雜芳基、至少一個雜原子選自N的3-12元雜環基或C3-10環烷基-NH-；K選自不存在、H、鹵素、CN、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C3-10環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、C1-10烷基氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基、C3-10環烷基氧基、C3-10環烯基氧基、C3-10環炔基氧基、C6-10芳基氧基、5-10元雜芳基氧基、3-10元雜環基氧基、C6-10芳基C1-10烷基、5-10元雜芳基C1-10烷基、3-10元雜環基C1-10烷基、-NR2R3、-C(O)R4、-S(O)2R6或OS(O)2R7；每一個R2相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C3-10環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、-C(O)R4或-S(O)2R6；每一個R3相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：C1-10烷基、C2-10 烯基、C2-10炔基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C3-10環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、-C(O)R4或-S(O)2R6；或者，R2和R3與所連的N原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：5-10元雜芳基或3-10元雜環基；每一個R4相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C3-10環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、C1-10烷基氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基、C3-10環烷基氧基、C3-10環烯基氧基、C3-10環炔基氧基、C6-10芳基氧基、5-10元雜芳基氧基、3-10元雜環基氧基、C6-10芳基C1-10烷基、5-10元雜芳基C1-10烷基、3-10元雜環基C1-10烷基或-NR2R3；每一個R6相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C3-10環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、C1-10烷基氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基、C3-10環烷基氧基、C3-10環烯基氧基、C3-10環炔基氧基、C6-10芳基氧基、5-10元雜芳基氧基、3-10元雜環基氧基、C6-10芳基C1-10烷基、5-10元雜芳基C1-10烷基、3-10元雜環基C1-10烷基或-NR2R3；每一個R7相同或不同，彼此獨立地選自H以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：C1-10烷基、C2-10 烯基、C2-10炔基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C3-10環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基或3-10元雜環基；m為0、1、2、3或4；每一個R01、R02、R03以及R04相同或不同，彼此獨立地選自H、鹵素、CN、OH、SH、氧代(=O)以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rg的取代基取代的下列基團：C1-8烷基、C1-8烷基氧基；每一個Ra、Rb、Rc、Rd、Re以及Rf相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代(=O)、NO2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rg的取代基取代的下列基團：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、C3-8環烯基、C3-8環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、C1-8烷基氧基、C2-8烯基氧基、C2-8炔基氧基、C3-8環烷基氧基、C3-8環烯基氧基、C3-8環炔基氧基、C6-10芳基氧基、5-8元雜芳基氧基、3-8元雜環基氧基、C6-10芳基C1-8烷基、5-10元雜芳基C1-8烷基、3-10元雜環基C1-8烷基、-NR2R3、-C(O)R4、-S(O)2R6或OS(O)2R7；每一個Rg相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代(=O)、NO2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rh的取代基取代的下列基團：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、C3-8環烯基、C3-8環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、C1-8烷基氧基、C2-8烯基氧基、C2-8炔基氧基、C3-8環烷基氧基、C3-8環烯基氧基、C3-8環炔基氧基、C6-10芳基氧基、5-10元雜芳基氧基、3-10元雜環基氧基、C6-10芳基C1-8烷基、5-10元雜芳基C1-8烷基、3-10元雜 環基C1-8烷基、-NR2R3、-C(O)R4、-S(O)2R6或OS(O)2R7；或者，當環狀基團的不同位置被兩個或更多個取代基取代時，所述取代基中的兩個與所述環狀基團形成橋環，其中所述橋環中除橋頭原子之外的橋原子包含1、2、3、4或5個選自CH2、O或NH的二價基團；每一個Rh相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代(=O)、NO2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Ri的取代基取代的下列基團：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、C3-8環烯基、C3-8環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、C1-8烷基氧基、C2-8烯基氧基、C2-8炔基氧基、C3-8環烷基氧基、C3-8環烯基氧基、C3-8環炔基氧基、C6-10芳基氧基、5-10元雜芳基氧基、3-10元雜環基氧基、C6-10芳基C1-8烷基、5-10元雜芳基C1-8烷基、3-20元雜環基C1-8烷基、-NR2R3、-C(O)R4、-S(O)2R6或OS(O)2R7；每一個Ri相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、CN、OH、SH、氧代(=O)、NO2以及無取代或任選被一個、兩個或更多個Rj的取代基取代的下列基團：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、C3-8環烯基、C3-8環炔基、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、C1-8烷基氧基、C2-8烯基氧基、C2-8炔基氧基、C3-8環烷基氧基、C3-8環烯基氧基、C3-8環炔基氧基、C6-10芳基氧基、5-10元雜芳基氧基、3-10元雜環基氧基、C6-10芳基C1-8烷基、5-10元雜芳基C1-8烷基、3-10元雜環基C1-8烷基、-NR2R3、-C(O)R4、-S(O)2R6或OS(O)2R7； 或者，當環狀基團的不同位置被兩個或更多個取代基取代時，所述取代基中的兩個與所述環狀基團形成橋環，其中所述橋環中除橋頭原子之外的橋原子包含1、2、3、4或5個選自CH2、O或NH的二價基團；或者，當碳原子或氮原子被兩個或更多個取代基取代時，所述取代基中的兩個與其共同連接的原子形成無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：C3-8環烷基、C3-8環烯基、C3-8環炔基、5-10元雜芳基或3-10元雜環基。
  2. 如請求項1所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中，X1、X2、X3、X4、X5、X6以及X7相同或不同，彼此獨立地選自CR1或N，並且X1，X2，X3，X4、X5、X6以及X7中的至少一個為N；X8選自CR1R1’或NR1；每一個R1和R1’相同或不同，彼此獨立地選自H或C1-6烷基；A選自H、鹵素、CN、OH、C1-6烷基或C1-6烷基氧基；D選自無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rc的取代基取代的NH2或-O-R21；E選自H、鹵素、CN、OH以及C1-8烷基；R21選自無取代或任選被一個、兩個或更多個被Rd的取代基取代的C1-6烷基； R2和R3與所連的N原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：5、6或7元雜芳基或3、4、5、6或7元雜環基；每一個R01、R02、R03以及R04相同或不同，彼此獨立地選自H、C1-6烷基或C1-6烷基氧基；每一個Ra、Rb、Rc、Rd、Re以及Rf相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、NH2、CN、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個Rg的取代基取代的下列基團：C1-6烷基、C1-6烷基氧基、C3-6環烷基、C3-6環烷基氧基、C2-6炔基氧基、3-8元雜環基或3-8元雜芳基；每一個Rg相同或不同，彼此獨立地選自OH、鹵素或C3-6環烷基；G選自鹵素、C3-6環烷基、C3-6環烷基-NH-、C6-10芳基、5-14元雜芳基、6-10元具有單環、雙環、三環或橋環結構的雜環基，其包含1、2、3或4個獨立選自N、O和S的雜原子，條件是其中至少一個雜原子選自N；K選自-C1-6烷基-C3-6環烷基、-C1-6烷基-C6芳基、-C1-6烷基-5-6元雜芳基、-C1-6烷基-3-6元雜環基、-C(O)NH2、-C(O)-C3-6環烷基、-C(O)-C6芳基、-C(O)-5-6元雜芳基、-C(O)-3-6元雜環基、-C(O)-C1-6烷基-C3-6環烷基、-C(O)-C1-6烷基-C6芳基、-C(O)-C1-6烷基-5-6元雜芳基或-C(O)-C1-6烷基-3-6元雜環基，其中該C3-6環烷基、C6芳基、5-6元雜芳基、3-6元雜環基、-C(O)-C3-6環烷基、-C(O)-C6芳基、-C(O)-5-6元雜芳基、-C(O)-3-6元雜環基、-C(O)-C1-6烷基-C3-6環烷基、-C(O)-C1-6烷基-C6芳基、-C(O)-C1-6烷基-5-6元雜芳基或-C(O)-C1-6烷 基-3-6元雜環基的環上或非環基團，或-C(O)NH2還任選被一個、兩個或更多個選自OH、鹵素、CN、C1-6烷基或C1-6烷基氧基的基團取代。
  3. 如請求項2所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中G選自鹵素、C3-6環烷基、C3-6環烷基-NH-、C6-10芳基、5-14元雜芳基、6-10元具有單環、雙環、三環或橋環結構的雜環基，其包含1、2、3或4個獨立選自N、O和S的雜原子，條件是其中1、2或3個雜原子選自N；K選自-C1-6烷基-C3-6環烷基、-C1-6烷基-苯基、-C1-6烷基-吡啶基、-C1-6烷基-3-6元雜環基、-C(O)NH2、-C(O)-C3-6環烷基、-C(O)-苯基、-C(O)-吡啶基、-C(O)-3-6元雜環基、-C(O)-C1-6烷基-C3-6環烷基、-C(O)-C1-6烷基-苯基、-C(O)-C1-6烷基-吡啶基或-C(O)-C1-6烷基-3-6元雜環基，其中該C3-6環烷基、苯基、吡啶基、3-6元雜環基、-C(O)-C3-6環烷基、-C(O)-苯基、-C(O)-吡啶基、-C(O)-3-6元雜環基、-C(O)-C1-6烷基-C3-6環烷基、-C(O)-C1-6烷基-苯基、-C(O)-C1-6烷基-吡啶基或-C(O)-C1-6烷基-3-6元雜環基的環上或非環基團，或-C(O)NH2還任選被一個、兩個或更多個選自OH、鹵素、CN、C1-6烷基或C1-6烷基氧基的基團取代；其中，該吡啶基選自吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、吡啶-5-基以及吡啶-6-基。
  4. 如請求項2所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中G選自鹵素、C3-6環烷基、C3-6環烷基-NH-、C6-10芳基、5-14元雜芳基、6-10元具有單環、雙環、三環或橋 環結構的雜環基，其包含1、2、3或4個獨立選自N、O和S的雜原子，條件是其中1、2或3個雜原子選自N；K選自不存在、H、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf取代的下列基團：苯基-C(O)-、苯基-C(O)-NH-、苯基-C(O)-NH-C1-6烷基-、苯基氧基-C(O)-NH-、苯基C1-6烷基-NH-C(O)-、苯基C1-6烷基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-、吡啶基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-NH-C1-6烷基-、吡啶基氧基-C(O)-NH-、吡啶基C1-6烷基-NH-C(O)-、吡啶基C1-6烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基氧基-C(O)-NH-、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)-NH-、C1-6烷基氧基-C(O)-NH-、C3-8環烷基-C(O)-NH-、C3-8環烷基氧基-C(O)-NH-、吡啶基-NH-C(O)-、C1-6烷基-NH-C(O)-、C3-8環烷基-NH-C(O)-、吡啶基氧基-、吡啶基C1-6烷基氧基-、吡啶基氧基C1-6烷基-、苯基氧基-、苯基C1-6烷基氧基-、苯基氧基C1-6烷基-、C1-6烷基-S(O)2-、C1-6烷基-S(O)2-NH-、C1-6烷基-NH-S(O)2-、吡啶基C1-6烷基-、吡啶基-S(O)2-、吡啶基-C1-6烷基-S(O)2-、吡啶基-S(O)2-NH-、吡啶基-NH-S(O)2-、吡啶基-C1-6烷基-NH-、苯基C1-6烷基-、苯基-S(O)2-、苯基-C1-6烷基-S(O)2-、苯基-S(O)2-NH-、苯基-NH-S(O)2-、苯基-C1-6烷基-NH-、C1-6烷基氧基-C(O)-、
    Figure 111102791-A0305-02-0344-4
    或
    Figure 111102791-A0305-02-0344-5
  5. 如請求項2所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6以及X7相同 或不同，彼此獨立地選自CH或N，並且X1、X2、X3、X4、X5、X6以及X7中的至少一個為N；X8選自NR1；R01為甲氧基；R02為H；R03為甲基；R04為H；R1為H；A選自H、NH2、甲基、乙基、丙基或異丙基；E選自H或NH2；D選自如下基團：鹵素、BnO-、H、CN、NH2、OCH3、COOH、B(OH)2、
    Figure 111102791-A0305-02-0345-6
    Figure 111102791-A0305-02-0345-7
    Figure 111102791-A0305-02-0346-10
     G選自F以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Re的取代基取代的下列基團：
    Figure 111102791-A0305-02-0346-11
    Figure 111102791-A0305-02-0346-12
     K選自不存在、H、OH以及無取代或任選被一個、兩個或更多個獨立選自Rf的取代基取代的下列基團：苯基-C(O)-、苯基-C(O)-NH-、苯基-C(O)-NH-C1-6烷基-、苯基氧基-C(O)-NH-、苯基C1-6烷基-NH-C(O)-、苯基C1-6烷基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-、吡啶基-C(O)-NH-、吡啶基-C(O)-NH-C1-6烷基-、吡啶基氧基-C(O)-NH-、吡啶基C1-6烷基-NH-C(O)-、吡啶基C1-6烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基-C(O)-NH-、吡咯烷基氧基-C(O)-NH-、C1-6烷基-C(O)-、C2-6烯基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)-NH-、C1-6烷基氧基-C(O)-NH-、C3-8環烷基-C(O)-NH-、C3-8環烷基氧基-C(O)-NH-、吡啶基-NH-C(O)-、C1-6烷基-NH-C(O)-、C3-8環烷基-NH-C(O)-、吡啶基氧基-、吡啶基C1-6烷基氧基-、吡啶基氧基C1-6烷基-、苯基氧基-、苯基C1-6烷基氧基-、苯基氧基C1-6烷基-、C1-6烷基-S(O)2-、C1-6烷基-S(O)2-NH-、C1-6烷基-NH-S(O)2-、吡啶基C1-6烷基-、吡啶基-S(O)2-、吡啶基-C1-6烷基-S(O)2-、吡啶基-S(O)2-NH-、吡啶基-NH-S(O)2-、吡啶基-C1-6烷基-NH-、苯基C1-6烷基-、苯基-S(O)2-、苯基-C1-6烷基-S(O)2-、苯基-S(O)2-NH-、苯基-NH-S(O)2-、苯基-C1-6烷基-NH-、C1-6烷基氧基-C(O)-、
    Figure 111102791-A0305-02-0347-13
    Figure 111102791-A0305-02-0347-14
  6. 如請求項5所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中當基團G被Re取代時，Re取代構成基 團G的-CH2-或-CH=上的H，形成選自下列的基團：
    Figure 111102791-A0305-02-0348-18
    Figure 111102791-A0305-02-0348-19
  7. 如請求項1至6中任一項所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中該式I所示的化合物具有下式II或III所示的結構：
    Figure 111102791-A0305-02-0348-20
     其中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、R01、R02、R03、R04、A、D、E、G、K以及m具有請求項1至6中任一項所述的定義。
  8. 如請求項1至6中任一項所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中該式I所示的化合物具有下式IV或V所示的結構：
    Figure 111102791-A0305-02-0349-21
     其中，X1、X2、X3、X4、X5、R01、R03、R04、A、D、E、G、K以及m具有請求項1至6中任一項所述的定義。
  9. 如請求項8所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中X1和X3選自CH，X2選自N，X4選自CH或N。
  10. 如請求項1所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽，其中，式I化合物選自如下化合物：
    Figure 111102791-A0305-02-0349-22
    Figure 111102791-A0305-02-0350-23
    Figure 111102791-A0305-02-0351-24
    Figure 111102791-A0305-02-0352-25
    Figure 111102791-A0305-02-0353-26
    Figure 111102791-A0305-02-0354-28
    Figure 111102791-A0305-02-0355-29
    Figure 111102791-A0305-02-0356-30
    Figure 111102791-A0305-02-0357-31
    Figure 111102791-A0305-02-0358-32
    Figure 111102791-A0305-02-0359-33
    Figure 111102791-A0305-02-0360-34
    Figure 111102791-A0305-02-0361-35
    Figure 111102791-A0305-02-0362-36
    Figure 111102791-A0305-02-0363-37
    Figure 111102791-A0305-02-0364-38
    Figure 111102791-A0305-02-0365-39
    Figure 111102791-A0305-02-0366-40
    Figure 111102791-A0305-02-0367-41
    Figure 111102791-A0305-02-0368-42
    Figure 111102791-A0305-02-0369-43
    Figure 111102791-A0305-02-0370-44
    Figure 111102791-A0305-02-0371-45
    Figure 111102791-A0305-02-0372-46
    Figure 111102791-A0305-02-0373-47
    Figure 111102791-A0305-02-0374-55
    Figure 111102791-A0305-02-0375-56
     。
  11. 一種如請求項1至10中任一項所述的式I化合物的製備方法，包括使式I-1化合物與化合物K-L1反應得到式I化合物：
    Figure 111102791-A0305-02-0375-50
     其中，A、D、E、Q、G、K、X5、X6、X7以及X8具有如請求項1至10中任一項所述的定義；L1選自離去基團；或者，該製備方法包括使式I-2化合物與化合物G-K-L2反應得到式I化合物：
    Figure 111102791-A0305-02-0375-51
     其中，A、D、E、Q、G、K、X5、X6、X7以及X8具有如請求項1至10中任一項所述的定義；L2選自離去基團；或者，該製備方法包括使式I-3化合物與化合物G-K-H反應得到式I化合物：
    Figure 111102791-A0305-02-0376-52
     其中，A、D、E、Q、G、K、X5、X6、X7以及X8具有如請求項1至10中任一項所述的定義；L3選自離去基團；或者，該製備方法包括將被保護基團取代的式I化合物在脫去該保護基團的條件下反應，得到式I化合物。
  12. 一種式II化合物的製備方法，其中該製備方法包括如下步驟：式II-1化合物與化合物R21-L反應得到式II化合物：
    Figure 111102791-A0305-02-0376-53
     其中，A、E、G、K、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8以及R21具有如請求項1至10中任一項所述的定義；D選自-O-R21；L選自離去基團；或者，該製備方法包括由式II-2化合物反應製備式II-1化合物：
    Figure 111102791-A0305-02-0376-54
     其中，A、D、E、G、K、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7以及X8具有如請求項1至10中任一項所述的定義。
  13. 一種化合物，其選自如請求項11所述的式I-1、式I-2、式I-3所示的化合物，或如請求項12所述的式II-1或式II-2所示的化合物。
  14. 一種如請求項13所述的化合物用於製備如請求項1至9中任一項所述的式I所示化合物的用途。
  15. 一種藥物組合物，其包含治療有效量的選自如請求項1至10中任一項所述的式I所示的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物或藥學上可接受的鹽中的至少一種。
  16. 如請求項15所述的藥物組合物，其中該藥物組合物還包含一種、兩種或多種藥學上可接受的輔料。
  17. 一種如請求項1至10中任一項所述的化合物、其立體異構物、消旋體、互變異構物、或藥學上可接受的鹽中的至少一種在製備藥物中的用途，其中該藥物用於治療RET激酶介導的疾病或抑制RET激酶活性。
  18. 如請求項17所述的用途，其中該藥物更用於治療RET相關疾病或病症。
  19. 如請求項17所述的用途，其中該藥物更用於治療癌症和/或抑制與特定癌症相關的轉移、治療腸易激症候群(IBS)或與IBS相關的疼痛、向癌症患者提供支持護理、逆轉或預防對抗癌藥物的獲得性抗性、 延遲和/或預防個體中抗癌藥抗藥性發展或對抗癌藥物發展抗性的可能性增加。
  20. 如請求項19所述的用途，其中該支持護理包括預防或最小化與治療相關的胃腸病症。
  21. 如請求項20所述的用途，其中該與治療相關的胃腸病症選自與化療治療相關的胃腸病症。
  22. 如請求項20所述的用途，其中該胃腸病症選自腹瀉。
  23. 如請求項18所述的用途，其中該RET相關疾病或病症選自RET基因和/或RET激酶介導的疾病，其中RET、RET基因或RET激酶選自RET-wt、V804M、V804L、V804E、G810R、G810S、G810C、G810V和S904F的RET基因或RET激酶。
  24. 如請求項19至22中任一項所述的用途，其中該癌症選自血液學癌症或實體瘤。
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