TWI726426B

TWI726426B - 包含抗ｏｘ４０抗體的製劑、其製備方法及其用途

Info

Publication number: TWI726426B
Application number: TW108134631A
Authority: TW
Inventors: 汪音爵; 曹魏; 周凱松
Original assignee: 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司
Priority date: 2018-09-25
Filing date: 2019-09-25
Publication date: 2021-05-01
Also published as: TW202033179A; CN111683681A; CN111683681B; WO2020063668A1

Abstract

本發明涉及包含抗OX40抗體的製劑，尤其涉及包含特異性結合OX40分子的抗體和/或抗原結合片段、緩衝劑、穩定劑和表面活性劑的藥物製劑。此外，本發明還涉及這些製劑的疾病治療或預防用途。

Description

包含抗OX40抗體的製劑、其製備方法及其用途

本發明涉及抗體製劑領域。更具體而言，本發明涉及包含特異性結合OX40的抗體(下文中也稱為“抗OX40抗體”)和/或其抗原結合片段的藥物製劑，用於製備所述藥物製劑的方法，以及所述藥物製劑的治療和/或預防用途。

共刺激分子是一類除抗原受體或抗原配體之外的、淋巴細胞對抗原作出有效免疫應答所需要的細胞表面分子，其藉由與共刺激配體特異性結合，由淋巴細胞介導共刺激反應。已證實共刺激分子在體外增強T細胞的擴增、效應子功能和存活；並且在體內增進人T細胞留存和抗腫瘤活性等。

OX40(也稱為CD134、TNFRSF4和ACT35)是一種共刺激分子且已顯示OX40信號傳導能夠促進對T細胞的共刺激信號，導致增強的細胞增殖、存活、效應子功能和遷移(Gramaglia I等人，Ox-40 ligand：a potent costimulatory molecule for sustaining primary CD4 T cell responses.J Immunol.1998；161：6510-6517；Gramaglia I等人，The OX40 costimulatory receptor determines the development of CD4 memory by regulating primary clonal expansion.J Immunol.2000；165：3043-3050)。

特異性結合OX40的作為OX40激動劑的抗OX40抗體描述於例如WO 2012/027328、美國專利號7,959,925、PCT公開號WO 2006/121810和中國專利申請號201710185399.9、201710185400.8中。本領域中需要能夠用來治療、預防或延緩各種癌症、免疫相關疾病和T細胞功能障礙性疾病的抗OX40抗體製劑。

抗體製劑必須以不僅使抗體適於施用給受試者的方式調配，還要以在儲存以及後續使用期間維持其穩定性的方式來調配。例如，如果抗體沒有適當地在液體中得以調配，則液體溶液中的該抗體傾向於分解、聚集或發生不希望的化學修飾等。抗體在抗體製劑中的穩定性取決於製劑中所使用的緩衝劑、穩定劑和表面活性劑等。

針對OX40的抗體是需要合適地進行製劑，以用來治療或預防疾病的一個實例。儘管已知一些抗OX40抗體，但在本領域中對於含有足夠穩定且適於施用給受試者的抗OX40抗體的新穎藥物製劑仍存在需要。

本發明藉由提供含有特異結合至OX40的抗體的藥物製劑來滿足上述需求。

在一個方面，本發明提供了一種液體抗體製劑，其包含(i)抗OX40抗體或其抗原結合片段；(ii)緩衝劑，(iii)穩定劑，和(iv)表面活性劑。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的抗OX40抗體或其抗原結合片段的濃度為約1-150mg/mL。在另一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的抗OX40抗體或其抗原結合片段的濃度為約10mg/mL至約100mg/mL。在其他實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的抗OX40抗體或其抗原結合片段的濃度為約15、20、25、30、35、40、45、50、55、60mg/mL。

在一個實施方案中，所述抗OX40抗體為任何結合OX40分子(例如人OX40分子)的抗體，例如多株抗體、單株抗體或者兩者的組合。較佳地，在一個實施方案中，所述抗OX40抗體為單株抗體。在一個實施方案中，所述抗OX40抗體或其抗原結合片段為本文中定義的抗OX40抗體或其抗原結合片段。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的緩衝劑的濃度為約0.1-50mg/ml。在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的緩衝劑的濃度為約1-20mg/ml，例如，約1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8mg/ml。

在一個實施方案中，所述緩衝劑選自磷酸鹽、檸檬酸鹽、檸檬酸鹽溶劑合物、丁二酸、三羥甲基胺基甲烷和它們的組合，更佳為檸檬酸鹽、檸檬酸鹽水合物，例如，檸檬酸鈉、二水檸檬酸鈉。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的穩定劑的濃度為約10-200mg/ml。在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的穩定劑的濃度為約20-100mg/ml，例如約30、40、50、60、70、80、90mg/ml。

在一個實施方案中，所述穩定劑選自蔗糖、海藻糖、甘露醇和它們的組合，更佳為蔗糖。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的表面活性劑的濃度為約0.01-5mg/ml。在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的表面活性劑的濃度為約0.1-2mg/ml，例如約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mg/ml。

在一個實施方案中，所述表面活性劑是非離子型表面活性劑。在一個實施方案中，所述表面活性劑例如是普洛尼克(pluronics)、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-40、或聚山梨醇酯-20等。

在一個實施方案中，所述液體製劑的pH值為約5.0-8.0。在一個實施方案中，所述液體製劑的pH值為約5.0、6.0、7.0、8.0。

在一個實施方案中，所述液體製劑為藥物製劑，較佳為注射劑，更佳為皮下注射劑。

在一個較佳的實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含(i)約1-150mg/mL的抗OX40抗體或其抗原結合片段；(ii)約0.1-50mg/ml的檸檬酸鹽、檸檬酸鹽水合物，例如，檸檬酸鈉、二水檸檬酸鈉，作為緩衝劑；(iii)約10-200mg/ml的蔗糖作為穩定劑，和(iv)約0.01-5mg/ml的聚山梨醇酯-80作為表面活性劑；其中所述液體製劑的pH為約5.0-8.0。

在一個較佳的實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含(i)約10-100mg/mL的抗OX40抗體或其抗原結合片段；(ii)約1-20mg/ml的檸檬酸鈉或二水檸檬酸鈉作為緩衝劑；(iii)約20-100mg/ml的蔗糖作為穩定劑，和(iv)約0.1-2mg/ml的聚山梨醇酯-80作為表面活性劑；其中所述液體製劑的pH為約5.0-8.0。

在一個較佳的實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含(i)約20-30mg/mL的抗OX40抗體或其抗原結合片段；(ii)約4-6mg/ml的檸檬酸鈉或二水檸檬酸鈉作為緩衝劑；(iii)約40-60mg/ml的蔗糖作為穩定劑，和(iv)約0.6-0.8mg/ml的聚山梨醇酯-80作為表面活性劑；其中所述液體製劑的pH為約6.0-7.0。

另一方面，本發明提供了一種固體抗體製劑，其是藉由將本發明的液體抗體製劑經固化處理而獲得的。所述固化處理是藉由例如結晶法、噴霧乾燥法或冷凍乾燥法實施的。在一個較佳的實施方案中，所述固體抗體製劑例如是凍乾粉針劑形式。

固體抗體製劑可在使用前，藉由重構於適當的溶媒中，形成本發明的重構製劑。所述重構製劑也是一種本發明的液體抗體製劑。在一個實施方案中，所述適當的溶媒選自注射用水、注射用有機溶劑，包括但不限於注射用油、乙醇、丙二醇等，或其組合。

在一個實施方案中，本發明的包含抗OX40抗體的液體製劑或固體製劑在約-80℃至約45℃，例如-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約5℃、約25℃、約35℃、約38℃、約40℃、約42℃或約45℃的條件下儲存至少10天、至少20天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，至少36個月，或更長時間後，用尺寸排阻高效液相色譜法檢測，抗 OX40抗體或其抗原結合片段的純度下降不超過10%，例如不超過5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%。

在一個實施方案中，本發明的包含抗OX40抗體的液體製劑或固體製劑在約-80℃至約45℃，例如-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約5℃、約25℃、約35℃、約38℃、約40℃、約42℃或約45℃的條件下儲存至少10天、至少20天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，至少36個月，或更長時間後，用非還原型十二烷基硫酸鈉毛細管電泳(CE-SDS)法和/或還原型CE-SDS法檢測，抗OX40抗體或其抗原結合片段的純度下降不超過10%，例如不超過5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%。

在一個實施方案中，本發明的包含抗OX40抗體的液體製劑或固體製劑在約-80℃至約45℃，例如-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約5℃、約25℃、約35℃、約38℃、約40℃、約42℃或約45℃的條件下儲存至少10天、至少20天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，至少36個月，或更長時間後，用陽離子交換高效液相色譜法(CEX-HPLC)檢測，抗OX40抗體或其抗原結合片段的各電荷變異體的變化不超過10%，例如不超過5%、4%、3%、2%。

在一個實施方案中，本發明的液體製劑中的抗OX40抗體或其抗原結合片段能夠以高的親和力，例如以10^-7M或更小、較佳地以10^-8 M至10^-12M的K_D特異性結合OX40，並由此介導共刺激反應的抗OX40抗體或其抗原結合片段。

在一個較佳的實施方案中，本發明的液體製劑中的抗OX40抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區VH和/或輕鏈可變區VL，其中(a)所述VH包含(i)如SEQ ID NO：86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103和104所示的VH中的3個互補決定區CDR，(ii)選自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16和17的胺基酸序列的HCDR1，選自SEQ ID NO：18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35和36的胺基酸序列的HCDR2，和選自SEQ ID NO：37、38、39、40、41、42、43和44的胺基酸序列的HCDR3的組合；或者(iii)相對於(i)或(ii)的序列，在所述三個CDR上分別包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列；和/或(b)所述VL包含(i)如SEQ ID NO：115、116、117、118、119、120、121、122、123和124所示的VL中的三個CDR，(ii)選自SEQ ID NO：45、46、47、48、49和50的胺基酸序列的LCDR1，選自SEQ ID NO：51、52、53、54、55和56的胺基酸序列的LCDR2，和選自SEQ ID NO：57、58、59、60、61、62、63、64、65和66的胺基酸序列的LCDR3的組合；或者(iii)相對於(i)或(ii)的序列，在所述三個CDR上分別包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列。

又在一個較佳的實施方案中，本發明的液體製劑中的抗OX40抗體包含重鏈可變區VH和/或輕鏈可變區VL，其中，(a)重鏈可變區VH包含與選自SEQ ID NO：86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103和104的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性或者100%同一性的胺基酸序列或由其組成；和/或(b)輕鏈可變區VL包含與選自SEQ ID NO：115、116、117、118、119、120、121、122、123和124的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性或者100%同一性的胺基酸序列或由其組成。

又在一個較佳的實施方案中，本發明的液體製劑中的抗OX40抗體包含重鏈和/或輕鏈，其中所述重鏈包含與選自SEQ ID NO：125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161和162的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%同一性或由其組成，所述輕鏈包含與選自SEQ ID NO：163、164、165、166、167、168、169、170、171和172的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性或者100%同一性的胺基酸序列或由其組成。

在一個方面，本發明提供了一種遞送裝置，其包含本說明書在各實施方案中所描述的本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑。

在一個實施方案中，本發明的遞送裝置以包含本說明書在各實施方案所描述的本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的預填裝注射器形式提供，例如用於靜脈內注射或者肌內注射。

在一個實施方案中，本發明涉及一種向受試者，例如哺乳動物遞送抗OX40抗體的方法，包括給予所述受試者，例如哺乳動物如本說明書在各實施方案所描述的本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的步驟，所述遞送是例如藉由使用預填裝注射器的遞送裝置實施的。

本發明進一步提供了本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的用途，用於製備在受試者中活化T細胞或誘導T細胞介導的抗腫瘤活性或增強機體的免疫應答的遞送裝置(如，預填裝注射器)或藥物，特別地用於治療受試者的疾病，例如癌症，例如肺癌(例如非小細胞肺癌)、肝癌、胃癌，或結腸癌。

本發明進一步提供了一種藉由向受試者施用本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑或包含該液體抗體製劑或固體抗體製劑的遞送裝置(如，預填裝注射器)或藥物，在受試者中活化T細胞或誘導T細胞介導的抗腫瘤活性或增強機體的免疫應答的方法。

本發明進一步提供了一種藉由向受試者施用本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑或包含該液體抗體製劑或固體抗體製劑的遞送裝置(如，預填裝注射器)或藥物，治療受試者的疾病，例如癌症，例如肺癌(例如非小細胞肺癌)、肝癌、胃癌，或結腸癌的方法。

本發明的其它實施方案將藉由參閱此後的詳細說明而清楚明瞭。

結合以下圖式一起閱讀時，將更好地理解以下詳細描述的本發明的較佳實施方案。出於說明本發明的目的，圖中顯示了目前較佳的實施方案。然而，應當理解本發明不限於圖中所示實施方案的精確安排和手段。

第1圖顯示了pH 5.0時抗OX40抗體在熱脅迫下放置10天的電荷變異體圖譜。

第2圖顯示了pH 6.0時抗OX40抗體在熱脅迫下放置10天的電荷變異體圖譜。

第3圖顯示了pH 7.0時抗OX40抗體在熱脅迫下放置10天的電荷變異體圖譜。

第4圖顯示了pH 8.0時抗OX40抗體在熱脅迫下放置10天的電荷變異體圖譜。

第5圖顯示了本發明的抗OX40抗體製劑在40℃±2℃的溫度條件下放置後的濁度變化圖。

第6圖顯示了本發明的抗OX40抗體製劑在40℃±2℃的溫度條件下放置後，藉由SEC-HPLC法測定的純度變化圖。

第7圖顯示了本發明的抗OX40抗體製劑在40℃±2℃的溫度條件下放置後，藉由CEX-HPLC法測定的抗OX40抗體電荷變異體的酸性組分變化圖。

第8圖顯示了本發明的抗OX40抗體製劑在40℃±2℃的溫度條件下放置後，藉由CEX-HPLC法測定的抗OX40抗體電荷變異體的主組分變化圖。

第9圖顯示了本發明的抗OX40抗體製劑在40℃±2℃的溫度條件下放置後，藉由CEX-HPLC法測定的抗OX40抗體電荷變異體的鹼性組分變化圖。

發明詳述

在詳細描述本發明前，應瞭解，本發明不受限於所述的特定方法及實驗條件，因為所述方法以及條件是可以改變的。另外，本文所用術語僅是供說明特定實施方案之用，而不意欲為限制性的。

除非另有定義，否則本文所用全部技術與科學術語和本發明所屬領域中普通技術人員一般所理解的意思相同。如本文中所用，術語“約”在與數字數值聯合使用時意為涵蓋具有比指定數字數值小5%的下限和比指定數字數值大5%的上限的範圍內的數字數值。術語“包含”或“包括”意指包括所述的要素、整數或步驟，但是不排除任意其他要素、整數或步驟。

I.抗體製劑

術語“抗體製劑”指一種製備物，所述製備物處於允許作為有效成分的抗體的生物活性有效的形式，並且不含有對於將會施用該製劑的受試者而言的不可接受地有毒的額外組分。這類抗體製劑通常是無菌的。“可藥用的”賦形劑是可以合理地施用至受試哺乳動物以提供有效劑量的所用有效成分的那些賦形劑。

如本文中所用，術語“抗OX40抗體製劑”意指至少一種作為活性成分的抗OX40抗體以及至少一種非活性成分的組合。經所述組合後，作為活性成分的抗OX40抗體適於治療性或預防性施與人類或非人類動物。根據本發明，製劑中作為活性成分的抗OX40抗體特異結合至OX40分子，產生的信號傳導促進對T細胞的共刺激信號，導致增強的細胞增殖、存活、效應子功能和遷移。

本發明的抗體製劑可以是無菌的、均質的和/或等滲的，所述抗體製劑可直接製備成水性形式的液體製劑，例如，即用式預填裝注射器，或者製備成凍乾製劑，在即將使用前藉由溶解和/或懸浮於生理可接受的溶液中進行重構(即，複溶)。在一些實施方案中，抗OX40抗體製劑是液體製劑、凍乾製劑或重構製劑的形式。

抗體作為藥物的有效成分的應用現在已經很廣泛，包括產品HERCEPTIN^TM(曲妥單抗)，RITUXAN^TM(利妥昔單抗)，SYNAGIS^TM(帕利珠單抗)等。用於將治療性抗體純化至藥用級的技術是本領域公知的。

“無菌”製劑是無菌或不含或基本上不含活微生物和它們的孢子的製劑。

術語“凍乾處理”(lyophilization process)和術語“冷凍乾燥處理”(freeze-drying process)在本文中可互換使用且應被認為是同義的。

術語“凍乾製劑”是指藉由液體製劑的冷凍乾燥處理得到或能夠得到的組合物。較佳地，其為具有少於5%、較佳少於3%水含量的固體組合物。

術語“重構製劑”是指將固體製劑(例如凍乾製劑)溶解和/或懸浮於生理可接受的溶液中得到的液體製劑。

在具體的實施方案中，本發明的抗OX40抗體製劑在製造、製備、運輸和長期儲存過程中表現出低至檢測不到的水平的抗體聚集或降解或化學修飾，從而極少甚至是沒有抗OX40抗體的生物活性損失，表現出高度穩定性。如本文所用，術語“穩定的”抗體製劑是製劑中的抗體在儲存於特定條件下之後保有可接受程度的物理穩定性和/或化學穩定性。儘管抗體製劑中所含的抗體在儲存特定時間之後並未100%維持其化學結構，但通常在儲存特定時間之後如果維持約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%的抗體結構或功能，則認為抗體製劑是“穩定的”。在一些實施方案中，本發明的抗OX40抗體製劑在儲存後，基本上保留其物理和化學穩定性。通常基於預期的製劑貨架期選擇儲存時間。

在一些實施方案中，藉由對抗體製劑進行各種脅迫測試來進行穩定性測試。這些測試可以表示調配的抗體製劑在製造、儲存或運輸期間可能遭遇到的極端條件，也可以表示在非製造、儲存或運輸期間的極端條件下，使抗體製劑中的抗體的不穩定性加速的條件。例如，將經調配的抗OX40抗體製劑充填至5mL玻璃瓶中用於振盪脅迫、冷凍/解凍循環(即，凍融循環)脅迫；將經調配的抗OX40抗體製劑充填至玻璃小瓶中以檢驗在高溫脅迫下的抗體穩定性。

文中使用的術語“室溫”是指15℃至30℃、較佳20℃至27℃、更佳25℃的溫度。

術語“高溫脅迫”是指於室溫甚至於更高的溫度(例如40℃)經一段長的儲存時間後，對抗體製劑穩定性的影響。

經一段長的儲存時間後，如果檢查製劑的外觀、顏色和/或澄清度時，或者例如藉由UV光散射或藉由尺寸排阻色譜法測定時，製劑中的抗體不顯示聚集、沉澱和/或混濁；或顯示非常少的聚集、沉澱和/或混濁，則該抗體在製劑中“保持其物理穩定性”。由於製劑中抗體的聚集可以潛在地導致患者增加的免疫反應，從而導致安全性問題。因此，需要使在製劑中的抗體聚集最小化或防止聚集。

在一個實施方案中，藉由測定在特定溫度下儲存特定時間之後，製劑中的非聚集且非分解的抗體的百分比來測量製劑的穩定性，其中製劑中的非聚集且非分解的抗體的百分比越高，則製劑的穩定性越高。可藉由尺寸排阻色譜法(例如，尺寸排阻高效液相色譜法)來測定非聚集且非分解的抗體的百分比。

當“可接受程度的穩定性”這個詞組用於本文中時，表示於特定溫度下儲存特定時間之後，在製劑中檢測到至少約92%的非聚集且非分解的抗OX40抗體。在一些實施方案中，在特定溫度儲存至少2周、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久後，可接受程度的穩定性表示至少約92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的非聚集且非分解的抗OX40抗體。當評估穩定性時，藥物製劑儲存的特定溫度可為約-80℃至約45℃的任一溫度，例如儲存於約-80℃、約-30 ℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃、約40℃、約42℃或約45℃。例如，若儲存於約40℃ 3個月之後，檢測到至少約92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的非聚集且非分解的抗OX40抗體形式，則藥物製劑視為是穩定的。若儲存於約25℃ 3個月之後，檢測到至少約92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的非聚集且非分解的抗OX40抗體形式，則藥物製劑視為是穩定的。若儲存於約5℃ 9個月之後，檢測到至少約92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的非聚集且非分解的抗OX40抗體形式，則藥物製劑視為是穩定的。

另外，經一段長的儲存時間後，如果抗體在製劑中的化學結構完整，則該抗體在製劑中“保持其化學穩定性”。大多數化學不穩定性源自於形成了抗體的共價修飾形式(例如，抗體的電荷變異體)。在一些實施方案中，抗體製劑經儲存後，檢測到抗OX40抗體的各電荷變異體組分的改變。

在一個實施方案中，藉由陽離子交換高效液相色譜法(CEX-HPLC)測定抗體製劑中抗OX40抗體的電荷變異體。在該測定法中，以比主峰的保留時間更早從CEX-HPLC管柱洗脫出的峰被標記為“酸性峰”，而那些以比主峰的保留時間更晚從CEX-HPLC管柱洗脫出的峰被標記為“鹼性峰”。在CEX-HPLC法中，酸性組分百分比是藉由酸性峰面積與主峰、酸性峰與鹼性峰面積之和的比例來確定的；主組分百分比是藉由主峰面積與主峰、酸性峰與鹼性峰面積之和的比例來確定的；鹼性組分百分比是藉由鹼性峰面積與主峰、酸性峰與鹼性峰面積之和的比例來確定的。在不受理論束縛的情況下，認為抗體的去醯胺化可使得抗體變為更加帶負電並因而相對於非去醯胺化抗體更為酸性(參見，例如Robinson,N.,Protein Deamidation,PNAS,2002年4月16日，99(8)：5283-5288)。當術語“可接受程度的穩定性”用於本文中時，表示於特定溫度下儲存特定時間之後，在製劑中至多約25%抗體呈更為酸性的形式。在一些實施方案中，在特定溫度儲存至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久後，可接受程度的穩定性表示於特定溫度下儲存特定時間之後在製劑中至多約25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈酸性形式。當評估穩定性時，儲存藥物製劑的溫度可為約-80℃至約45℃的任一溫度，例如儲存於約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃或約45℃。例如，若在儲存於-80℃、-30℃或-20℃ 3個月之後，少於約20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則藥物製劑可被視為是穩定的。若在儲存於5℃ 9個月之後，少於約25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則藥物製劑亦可被視為是穩定的。若在儲存於25℃ 28天後，少於約25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則藥物製劑亦可被視為是穩定的。若在儲存於37℃ 28天之後，檢測到少於約25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則藥物製劑亦可被視為是穩定的。若在儲存於40℃ 28天之後，檢測到少於約25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗體呈更為酸性的形式，則藥物製劑亦可被視為是穩定的。

在一些實施方案中，本發明的穩定的抗OX40抗體製劑腸胃外施用於受試者。如本文所使用，術語“腸胃外施用”意指腸內和局部給藥以外的給藥方式，通常藉由注射，並且包括但不限於，靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下(subcuticular)、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內、硬膜外和胸骨內注射以及輸注。在一個具體的實施方案中，本發明的抗OX40抗體製劑皮下施用於受試者。

在一些實施方案中，本發明的穩定的抗OX40抗體製劑包含：(i)特異性結合至OX40分子的抗OX40抗體或其抗原結合片段；(ii)緩衝劑；(iii)穩定劑，和(iv)表面活性劑，所述抗OX40抗體製劑的pH約為5.0-8.0。

(i).特異性結合至OX40分子的抗OX40抗體或其抗原結合片段

本發明的抗體製劑可包含特異性結合至OX40分子的抗OX40抗體或其抗原結合片段。如本文所用，術語“OX40”已知是一種共刺激分子，其活化能夠導致增強的細胞增殖、存活、效應子功能和遷移。現有技術中公開了作為OX40激動劑的抗OX40抗體。例如，WO 2012/027328中公開了抗OX40抗體mAb 106-222和人源化106-222(Hu106)的重鏈可變區和輕鏈可變區的胺基酸序列；抗OX40抗體mAb 119-122和人源化119-122(Hu119)的重鏈可變區和輕鏈可變區的胺基酸序列。另外，美國專利號7,959,925、PCT公開號WO 2006/121810和中國專利申請號CN201710185399.9和CN201710185400.8中也公開了作為OX40激動劑的抗OX40抗體。所述抗OX40抗體能夠活化OX40，從而誘導效應T淋巴細胞增殖，促進針對表達腫瘤相關抗原(TAA)的腫瘤細胞的免疫應答。所述文獻全文併入本文做為參考。

術語“共刺激分子”是指T細胞上的與共刺激配體特異性結合從而介導T細胞的共刺激反應(例如但不限於增殖)的相應結合配偶體。共刺激分子是除抗原受體或其配體之外的有助於有效免疫應答的細胞表面分子。在本發明的實施方案中，所述共刺激分子是OX40分子。

術語“抗OX40抗體”、“抗OX40”、“OX40抗體”或“結合OX40的抗體”是指這樣的抗體，所述抗體能夠以足夠的親和力結合OX40分子，以致所述抗體可以用作靶向OX40分子的治療劑和/或預防劑。在一個實施方案中，抗OX40抗體與不相關的、非OX40蛋白結合的程度低於所述抗體與OX40結合的約10%，如例如藉由放射性免疫測定(RIA)測量的。在一些實施方案中，抗OX40的抗體的平衡解離常數(K_D)

1μM，

100nM，

10nM，

1nM，

0.1nM，

0.01nM，或

0.001nM。又在一些實施方案中，所述抗OX40抗體能夠以高的親和力，例如以10^-7M或更小、較佳地以10^-8M至10^-12M的K_D特異性結合OX40，並由此介導共刺激反應。在本文中，當談及“抗OX40抗體”時，也包含抗OX40抗體的抗原結合片段。

抗體的“抗原結合片段”指與完整抗體不同的分子，其包含完整抗體的一部分且結合完整抗體所結合的抗原。抗原結合片段的例子包括但不限於Fv，Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體(例如scFv)；單結構域抗體；雙價或雙特異性抗體或其片段；駱駝科抗體；和由抗原結合片段形成的雙特異性抗體或多特異性抗體。

如本文所用，術語“表位”指抗原(例如，OX40)中與抗體分子特異性相互作用的部分。

“互補決定區”或“CDR區”或“CDR”是抗體可變結構域中在序列上高變並且形成在結構上確定的環(“超變環”)和/或含有抗原接觸殘基(“抗原接觸點”)的區域。CDR主要負責與抗原表位結合。重鏈和輕鏈的CDR通常被稱作CDR1、CDR2和CDR3，從N-端開始順序編號。位於抗體重鏈可變結構域內的CDR被稱作HCDR1、HCDR2和HCDR3，而位於抗體輕鏈可變結構域內的CDR被稱作LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一個給定的輕鏈可變區或重鏈可變區胺基酸序列中，各CDR的精確胺基酸序列邊界可以使用許多公知的抗體CDR指派系統的任一種或其組合確定，所述指派系統包括例如：基於抗體的三維結構和CDR環的拓撲學的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342：877-883，Al-Lazikani等人，“Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))，基於抗體序列可變性的Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)),AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，國際ImMunoGeneTics database(IMGT)(在萬維網上imgt.cines.fr/上)，以及基於利用大量晶體結構的近鄰傳播聚類(affinity propagation clustering)的North CDR定義。

然而，應該注意，基於不同的指派系統獲得的同一抗體的可變區的CDR的邊界可能有所差異。即不同指派系統下定義的同一抗體可變區的CDR序列有所不同。因此，在涉及用本發明定義的具體CDR序列限定抗體時，所述抗體的範圍還涵蓋了這樣的抗體，其可變區序列包含所述的具體CDR序列，但是由於應用了不同的方案(例如不同的指派系統規則或組合)而導致其所聲稱的CDR邊界與本發明所定義的具體CDR邊界不同。

具有不同特異性(即，針對不同抗原的不同結合位點)的抗體具有不同的CDR。然而，儘管CDR在抗體與抗體之間是不同的，但是CDR內只有有限數量的胺基酸位置直接參與抗原結合。使用Kabat,Chothia,AbM、Contact和North方法中的至少兩種，可以確定最小重疊區域，從而提供用於抗原結合的“最小結合單位”。最小結合單位可以是CDR的一個子部分。正如本領域技術人員明瞭，藉由抗體的結構和蛋白折疊，可以確定CDR序列其餘部分的殘基。因此，本發明也考慮本文所給出的任何CDR的變體。例如，在一個CDR的變體中，最小結合單位的胺基酸殘基可以保持不變，而根據Kabat或Chothia定義的其餘CDR殘基可以被保守胺基酸殘基替代。

術語“保守胺基酸殘基替代”是胺基酸殘基被具有相似側鏈的胺基酸殘基替換的那些。在本領域中已經定義了具有相似側鏈的胺基酸殘基家族。這些家族包括具有鹼性側鏈(例如，賴胺酸、精胺酸、組胺酸)，酸性側鏈(例如，天冬胺酸、谷胺酸)，不帶電荷的極性側鏈(例如，甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)，非極性側鏈(例如，丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)，β-分支側鏈(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)和芳香族側鏈(例如，酪胺酸，苯丙胺酸，色胺酸，組胺酸)的胺基酸。因此，抗OX40抗體的一個或多個胺基酸殘基可以被來自相同側鏈家族的其它胺基酸殘基替換，並且可以測試改變的抗體的功能，特別是與OX40分子相同的結合特性。CDR表面的電荷表現變化預期影響抗體與溶劑的交界處，因此，非保守胺基酸殘基替代對於維持或增進抗體在溶液中的穩定性來說產生不可預測的影響。

適用於本發明的“抗體或其抗原結合片段”包括但不限於多株、單株、單價、雙特異性、異綴合物、多特異性、重組、異源、異源雜合、嵌合、人源化(特別是嫁接有CDR的)、去免疫的、或人的抗體、Fab片段、Fab'片段、F(ab')₂片段、由Fab表達庫產生的片段、Fd、Fv、二硫化物連接的Fv(dsFv)、單鏈抗體(例如scFv)、雙抗體或四抗體(Holliger P.等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90(14),6444-6448)、奈米抗體(nanobody)(也稱為單域抗體)、抗獨特型(抗Id)抗體(包括例如針對本發明抗體的抗Id抗體)和上述任一種的表位結合片段。

“人共有框架”是指這樣的框架，即在選擇人免疫球蛋白VL或VH框架序列中，其代表最常出現的胺基酸殘基。一般而言，對人免疫球蛋白VL或VH序列的選擇是從可變結構域序列的亞型中選擇。

“IgG形式的抗體”是指抗體的重鏈恆定區所屬於的IgG形式。所有同一型的抗體的重鏈恆定區都是相同的，不同型的抗體之間的重鏈恆定區不同。例如，IgG1形式的抗體是指其重鏈恆定區Ig結構域為IgG1的Ig結構域。

“人抗體”指具有這樣的胺基酸序列的抗體，所述胺基酸序列對應於下述抗體的胺基酸序列，所述抗體由人或人細胞生成或來源於非人來源，其利用人抗體庫或其它人抗體編碼序列。人抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結合殘基的人源化抗體。

“人源化”抗體是指包含來自非人CDR的胺基酸殘基和來自人FR的胺基酸殘基的嵌合抗體。在一些實施方案中，人源化抗體將包含基本上所有的至少一個、通常兩個可變結構域，其中所有或基本上所有的CDR對應於非人抗體的那些，並且所有或基本上所有的FR對應於人抗體的那些。人源化抗體任選可以包含至少一部分的來源於人抗體的抗體恆定區。抗體(例如非人抗體)的“人源化形式”是指已經進行了人源化的抗體。

術語“經分離抗體”，如本文所用，欲意指基本上不含具有不同抗原特異性的其它抗體的抗體，例如，特異結合OX40的經分離抗體基本上不含特異結合OX40以外的抗原的抗體。

術語“特異結合”或類似術語，意指抗體或其抗原結合片段與抗原形成在生理條件下相對穩定的複合物。特異結合的特徵在於解離常數為至少約10^-7M或更小、較佳地以10^-8M至10^-12M的K_D特異性結合OX40，並由此介導共刺激反應。

相對於參比多肽序列的“百分比(%)胺基酸序列同一性”定義為在將所述序列進行比對(並在必要時導入空位)以獲取最大百分比序列同一性，且不將任何保守置換視為序列同一性的部分之後，候選序列中的胺基酸殘基與參比多肽序列中的相同胺基酸殘基的百分比。可使用本領域各種方法進行序列比對以便測定百分比胺基酸序列同一性，例如，使用公眾可得到的計算機軟件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN(DNASTAR)軟件。本領域技術人員可以決定測量比對的適宜參數，包括對所比較的序列全長獲得最大比對所需的任何算法。

額外地或備選地，可以進一步使用本文所述的核酸序列和蛋白質序列作為“查詢序列”以針對公共數據庫執行檢索，以例如鑒定其他家族成員序列或相關序列。

本發明的抗體製劑中所包含的抗體或其抗原結合片段的量可隨著製劑的特定目的特性、特定環境、和使用製劑的特定目的而改變。在一些實施方案中，抗體製劑為液體製劑，其可含有約1-150mg/mL，較佳地為約10-100mg/mL，例如，約15、20、25、30、35、40、45、50、55、60mg/mL抗OX40抗體或其抗原結合片段。

在一個實施方案中，本發明涉及具有高濃度的抗OX40抗體的製劑，例如，含有40-150mg/mL的抗OX40抗體。本領域已知這樣的高濃度抗體製劑可以在注射前進行稀釋，例如，如果特定的治療性或預防性干預需要較低的抗體濃度或者當治療包括兒童的較小體重患者時。適合的濃度可以是25mg/mL或10mg/mL。備選地，可以以這樣的低濃度生產原始製劑。

此外，本文在各實施方案所描述的本發明的抗OX40抗體製劑均是穩定的。在一個實施方案中，於約-80℃、-30℃、-20℃、5℃、25℃、37℃、40℃、或45℃儲存6個月後，本發明的抗體製劑中的抗OX40抗體純度是至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%以上，如藉由尺寸排阻色譜法所測定。在一個實施方案中，於約-80℃、-30℃、-20℃、5℃、25℃、37℃、40℃、或45℃儲存6個月後，本發明的抗體製劑中的抗OX40抗體的至少50%是非鹼性及非酸性形式(亦即，主峰或主要電荷形式)，如藉由陽離子交換色譜法所測定。

可包含在本發明的抗體製劑中的例示性抗OX40抗體是例如CN201710185399.9和CN201710185400.8所公開的抗OX40抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507、ADI-23509、ADI-20112、ADI-25650、 ADI-25651、ADI-25652、ADI-25653、ADI-25654、ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518、ADI-23519、ADI-20048、ADI-20096、ADI-20051、ADI-20065、ADI-20066、ADI-20118或ADI-20113，它們分別包含下表中所示的序列。

在一個較佳的實施方案中，本發明的抗體製劑中的抗OX40抗體包含重鏈可變區VH和/或輕鏈可變區VL，其中(a)所述VH包含(i)如SEQ ID NO：86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103和104所示的VH中的3個互補決定區CDR，(ii)選自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16和17的胺基酸序列的HCDR1，選自SEQ ID NO：18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35和36的胺基酸序列的HCDR2，和選自SEQ ID NO：37、38、39、40、41、42、43和44的胺基酸序列的HCDR3的組合；或者(iii)相對於(i)或(ii)的序列，在所述三個CDR上分別包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列；和/或(b)所述VL包含(i)如SEQ ID NO：115、116、117、118、119、120、121、122、123和124所示的VL中的三個CDR，(ii)選自SEQ ID NO：45、46、47、48、49和50的胺基酸序列的LCDR1，選自SEQ ID NO：51、52、53、54、55和56的胺基酸序列的LCDR2，和選自SEQ ID NO：57、58、59、60、61、62、63、64、65和66的胺基酸序列的LCDR3的組合；或者 (iii)相對於(i)或(ii)的序列，在所述三個CDR上分別包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列。

又在一個較佳的實施方案中，本發明的抗體製劑中的抗OX40抗體包含重鏈可變區VH和/或輕鏈可變區VL，其中，(a)重鏈可變區VH包含與選自SEQ ID NO：86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103和104的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性或者100%同一性的胺基酸序列或由其組成；和/或(b)輕鏈可變區VL包含與選自SEQ ID NO：115、116、117、118、119、120、121、122、123和124的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性或者100%同一性的胺基酸序列或由其組成。

又在一個較佳的實施方案中，本發明的抗體製劑中的抗OX40抗體包含重鏈和/或輕鏈，其中所述重鏈包含與選自SEQ ID NO：125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161和162的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性或由其組成，所述輕鏈包含與選自SEQ ID NO：163、164、165、166、167、168、169、170、171和172的胺基酸序列具有至少90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性或者100%同一性的胺基酸序列或由其組成。

(ii)．緩衝劑

用於本發明的合適的緩衝劑包括但不限於有機酸鹽，如檸檬酸，抗壞血酸，葡糖酸，丁二酸，酒石酸，琥珀酸，乙酸或苯二甲酸的鹽；三羥甲基胺基甲烷，或磷酸鹽緩衝液，或它們的組合。

在一個實施方案中，本發明的抗體製劑包含這樣的緩衝劑或pH調節劑以提供改進的pH控制。本發明的液體製劑具有在5.0和8.0之間、5.0和7.0之間、5.5和7.0之間，或6.5和7.0之間的pH。在一個具體的實施方案中，本發明的抗體具有約5.0、6.0、7.0、8.0的pH。

在一個實施方案中，本發明的抗體製劑中包含的緩衝劑的濃度為約0.1-50mg/ml，較佳地為約1-20mg/ml，例如，約1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8mg/ml。

(iii).穩定劑

用於本發明的合適的穩定劑可以作為例如黏度增強劑、填充劑、增溶劑等發揮作用。該穩定劑可以是離子型或非離子型的。例如，該穩定劑可以是非離子型的穩定劑，例如，糖。

對於作為穩定劑的糖，其包括但不限於，單糖，例如果糖，麥芽糖，半乳糖，葡萄糖，D-甘露糖，山梨糖等；二糖，例如乳糖，蔗糖，海藻糖，纖維二糖等；多糖，如棉子糖，松三糖，麥芽糖糊精，葡聚糖，澱粉等；和糖醇，如甘露醇，木糖醇，麥芽糖醇，乳糖醇，木糖醇山梨糖醇 (葡萄糖醇)等，以及它們的組合。例如，所述糖可以是蔗糖、海藻糖、棉子糖、麥芽糖、山梨糖醇或甘露醇。較佳地，所述糖是蔗糖。

對於離子型穩定劑，其包括鹽，例如，NaCl。

(iv).表面活性劑

如本文所使用的，術語“表面活性劑”是指具有兩親結構的有機物質；即，它們由相反的溶解性傾向的基團所組成，通常是油溶性的烴鏈和水溶性的離子基團。

在一個實施方案中，本發明的液體製劑中的表面活性劑是非離子型表面活性劑，例如，烷基聚(環氧乙烯)。可包括在本發明製劑中的特定非離子型表面活性劑包括，例如聚山梨醇酯，諸如聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-40、或聚山梨醇酯-20；普洛尼克等。

本發明抗體製劑中所含的非離子型表面活性劑的量可隨製劑的特定目的特性、特定環境、和使用製劑的特定目的而改變。在某些實施方案中，製劑可含有濃度為約0.01-5mg/ml，較佳地為約0.1-2mg/ml，例如約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mg/ml的聚山梨醇酯-80或普洛尼克。

其他考慮的可在本發明的抗體液體製劑中利用的賦形劑包括，例如，調味劑、抗微生物劑、甜味劑、抗氧化劑、抗靜電劑、明膠等等。這些和另外已知的藥物賦形劑和/或適用於本發明製劑的添加劑是本領域公知的，例如，列出於“The Handbook of Pharmaceutical Excipients，第4版，Rowe等人編，American Pharmaceuticals Association(2003)；和Remington：the Science and Practice of Pharmacy，第21版，Gennaro編，Lippincott Williams & Wilkins(2005)”。

此外，根據如本文在各實施方案所描述的本發明的抗體製劑是穩定的，從而即使在25℃或40℃儲存4周、1個月或3個月後，藉由SEC-HPLC測量，抗OX40抗體的純度大於90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。

II．靶疾病和病症

本發明的包含抗OX40抗體的本發明的抗體製劑可以用於治療、改善或預防多種疾病或病症。包含抗OX40抗體的製劑尤其可用於治療、改善或預防癌症、免疫相關疾病和T細胞功能障礙性疾病。

例如，包含抗OX40抗體的本發明的抗體製劑可以用於治療、改善或預防癌症。所述癌症包括但不限於B細胞淋巴瘤(包括低級/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)，小淋巴細胞性(SL)NHL，中級/濾泡性NHL，中級彌漫性NHL，高級成免疫細胞性NHL，高級成淋巴細胞性NHL，高級小無核裂細胞性NHL，貯積病(bulky disease)NHL，套細胞淋巴瘤，AIDS相關淋巴瘤，和瓦爾登斯特倫氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症)，慢性淋巴細胞性白血病(CLL)，急性成淋巴細胞性白血病(ALL)，毛細胞性白血病，慢性成髓細胞性白血病，和移植後淋巴增殖性病症(PTLD)，以及與瘢痣病(phakomatoses)，水腫(諸如與腦瘤有關的)，B細胞增殖性病症，和梅格斯氏(Meigs)綜合症有關的異常血管增殖。更具體例子包括但不限於復發性或頑固性NHL，前線(front line)低級NHL，階段III/IV NHL，化療耐受性NHL，前體B成淋巴細胞性白血病和/或淋巴瘤，小淋巴細胞性淋巴瘤，B 細胞慢性淋巴細胞性白血病和/或前淋巴細胞性白血病和/或小淋巴細胞性淋巴瘤，B細胞前淋巴細胞性淋巴瘤，免疫細胞瘤和/或淋巴漿細胞性(lymphoplasmacytic)淋巴瘤，淋巴漿細胞性淋巴瘤，邊緣區B細胞淋巴瘤，脾邊緣區淋巴瘤，節外邊緣區(extranodal marginal zone)-MALT淋巴瘤，節邊緣區(nodal marginal zone)淋巴瘤，毛細胞性白血病，漿細胞瘤和/或漿細胞骨髓瘤，低級/濾泡淋巴瘤，中級/濾泡NHL，套細胞淋巴瘤，濾泡中心淋巴瘤(濾泡的)，中級彌漫性NHL，彌漫性大B細胞淋巴瘤，攻擊性(agressive)NHL(包括攻擊性前線NHL和攻擊性復發性NHL)，自體乾細胞移植後復發性或頑固性NHL，原發性縱隔大B細胞淋巴瘤，原發性滲出性淋巴瘤，高級成免疫細胞NHL，高級成淋巴細胞NHL，高級小無核裂細胞NHL，貯積病(bulky disease)NHL，伯基特氏(Burkitt)淋巴瘤，前體(外周)大粒狀淋巴細胞白血病，蕈樣肉芽腫病和/或塞紮裡(Sezary)綜合症，皮膚淋巴瘤，間變性大細胞淋巴瘤，血管中心性淋巴瘤。

在一些實施方案中，本發明的抗體製劑用於治療、改善或預防肺癌(例如非小細胞肺癌)、肝癌、胃癌，或結腸癌。

III．抗體製劑施用於受試者或患者

本發明的抗體製劑可以施用於受試者或患者。施用通常是藉由輸注或藉由注射器。因此，本發明提供了一種遞送裝置(例如注射器)，其包括本發明的抗體製劑(例如，預填裝注射器)。患者將接受有效量的抗OX40抗體作為主要活性成分，即足以治療、改善或預防目的疾病或病症的量。

治療效果也可包括減少生理症狀。用於任何特定受試者的抗體的最佳有效量和濃度將取決於多種因素，包括患者的年齡、體重、健康狀況和/或性別、疾病的性質和程度、特定抗體的活性，身體對其清除率，並且也包括與所述抗體製劑組合施用的任何可能的其它治療。對於具體的情況，所遞送的有效量可以在臨床醫師的判斷範圍內來確定。對於本發明的目的來說，有效劑量可為約0.005mg/kg體重至約50mg/kg體重，或約0.05mg/kg體重至約10mg/kg體重。已知的基於抗體的藥物在這方面提供了指導，例如HERCEPTIN^TM以4mg/kg體重的初始負荷劑量施用以及2mg/kg體重的每週維持劑量；RITUXAN^TM每週以375mg/m²施用；SYNAGIS^TM以15mg/kg體重肌內施用；等等。

本發明還提供了如本文在各實施方案所描述的本發明的製劑用作藥物，例如，用於向哺乳動物遞送抗OX40抗體，或用於治療、預防或改善上述疾病和病症中的一種或多種。

哺乳動物較佳是人，但也可以是例如馬或牛或狗或貓。這些抗體理想地是使用與目標物種相匹配的抗體，例如，對人使用人抗OX40抗體，對馬使用馬抗OX40抗體，對狗使用狗抗OX40抗體等。如果天然宿主抗體是不可獲得的，則可以藉由來自供體抗體的CDR殘基(通常，還有一個或多個框架殘基)向來自宿主物種的接受者框架的轉移來實現從一個物種到另一個的抗體特異性轉移，例如以人源化。馬的、牛的、犬科動物的和貓科動物的抗體是本領域已知的。抗體將結合目標物種的OX40，但它也可與來自其他物種的OX40交叉反應。

劑量可以是單劑量方案或多劑量方案。

描述以下實施例以輔助對本發明的理解。不意在且不應當以任何方式將實施例解釋成限制本發明的保護範圍。

實施例

材料和方法

1.1.凍乾製劑的研究中使用的化學品

1.2.使用的儀器設備

1.3.製劑穩定性的檢測項目、檢測方法

對抗體製劑檢測了以下項目：(1)檢測外觀以及是否存在可見異物；(2)藉由紫外法(UV法)測定製劑中的蛋白質含量；(3)使用pH計測定pH值；(4)檢測製劑的濁度；(5)藉由尺寸排阻色譜法，例如，尺寸排阻高效液相色譜法(size-exclusion chromatography-HPLC；SEC-HPLC)測定抗體製劑中非聚集且非分解的抗OX40抗體百分數；(6)藉由陽離子交換色譜法，例如，陽離子交換高效液相色譜法(cation-exchange chromatography-HPLC；CEX-HPLC)測定抗體製劑中抗OX40抗體的電荷變異體；(7)藉由十二烷基硫酸鈉毛細管電泳(CE-SDS)測定抗體製劑的純度。

尺寸排阻高效液相色譜法(SEC-HPLC)法

在用於分析抗體製劑的SEC-HPLC法中，使用以下參數：

色譜管柱：TSK-gel SuperSW mAb HR(7.8×300mm，4μm)型分析管柱，TSK-gel SuperSW(6.0×40mm，4μm)保護管柱

流動相：20mmol/L磷酸鹽(PB)+150mmol/L NaCl+200mmol/L Arg，pH 6.8

流速：0.5ml/min

管柱溫度：25℃

檢測波長：280nm

進樣體積：50μl

進樣盤溫度：約10℃

運行時間：30分鐘

陽離子交換高效液相色譜法(CEX-HPLC)法

在用於分析抗體製劑的CEX-HPLC法中，使用以下參數：

色譜管柱：Thermo Scientific ProPacTM WCX-10弱陽離子分析管柱

流動相A：10mmol/L PB

流動相B：10mmol/L PB,200mmol/L NaCl

梯度：25min從100%A降到60%A

管柱溫度：35℃

進樣體積：50μl

檢測波長：280nm

十二烷基硫酸鈉毛細管電泳(CE-SDS)法

將抗體製劑樣品用超純水稀釋至10.0mg/ml，取10μl稀釋後的樣品，依次向其中加入pH 6.5樣品緩衝液(所述樣品緩衝液藉由吸取200μl pH6.5檸檬酸-磷酸鹽緩衝液，加入47μl 10% SDS，加超純水到1000μl配製而成)85μl、10kDa內標(美國Beckman，貨號390953)2μl、 250mmol/L N-乙基順丁烯二醯亞胺(NEM)5μl，充分混勻後於70℃條件下加熱10分鐘，待冷卻後轉移至樣品管。使用Beckman PA800 Plus毛細管電泳儀實施CE-SDS分析，取樣電壓均為-5kV，取樣時間均20秒，分離電壓分別為-15kV和-16.5kV，分析時間分別為35分鐘和36分鐘。

製劑穩定性的判斷標準

實施例1.製備和純化抗OX40抗體

根據CN201710185399.9和CN201710185400.8所述製備和純化了特異性結合OX40的新型抗OX40抗體，分別具有下表6中所示的抗體名稱，其序列特徵總結於上文的表1-表5中。

實施例2.緩衝液的pH值對於抗OX40抗體穩定性的影響

本實施例評估了緩衝液的pH值對於抗OX40抗體穩定性的影響。按照下表7配製在不同pH值下的緩衝液。在各pH值的緩衝液中上述各抗OX40抗體的濃度為15mg/ml。過濾後分裝，並進行以下測定。

A.熱脅迫(40℃±2℃)實驗

在40℃±2℃恆溫恆濕箱中放置含有15mg/ml抗OX40抗體的上述各樣品，於0天、1天、5天、10天取樣。觀察了在所述取樣時間，各樣品的外觀、是否存在可見異物；使用紫外線可視分光光度計(日本島津生產，型號UV-1800)測定了各樣品中的蛋白質含量；藉由尺寸排阻高效液相色譜(SEC-HPLC)法測定了各樣品的純度(%)；藉由陽離子交換高效液相色譜法(CEX HPLC)測定了各樣品的電荷變異體(%)。結果分別如下所示。

(1)外觀、是否存在可見異物

在40℃±2℃ pH約為5.0、6.0、7.0、8.0的條件下放置1天或5天後，各組樣品的外觀、可見異物的檢測均合格。

在40℃±2℃ pH約為5.0、6.0、7.0的條件下放置10天後，各組樣品的外觀、可見異物的檢測均合格。

在40℃±2℃ pH約為8.0的條件下放置10天後，各組樣品略現混濁。

(2)蛋白含量

在40℃±2℃條件下，各組樣品的蛋白含量均未發生變化，表8列舉了其中的抗體ADI-20112(IgG1型)的樣品中蛋白含量測定結果。

N/A表示未設置該項。

(3)純度

40±2℃條件下加速10天各樣品的純度(SEC-HPLC法)僅發生了輕微下降。

在pH5.0條件下，樣品純度變化的原因主要是在高溫加速後，抗體蛋白發生降解；在pH7.0條件下，樣品純度變化的原因主要是在高溫加速後，抗體蛋白發生聚集；在pH8.0條件下，樣品中抗體蛋白的初始純度略低，原因主要是蛋白發生聚集。

表9列舉了其中的抗體ADI-20112(IgG1型)的樣品的蛋白含量測定結果。當抗OX40抗體ADI-20112以pH 6.0或pH 7.0調配於緩衝液中時，觀察到更高的純度，表明抗OX40抗體在pH 6.0或pH 7.0的緩衝液中的穩定性更好。

(4)電荷變異體

高溫(40±2℃)條件下各抗OX40抗體樣品的電荷變異體發生變化，其中，對於抗體的酸性變異體，在pH8.0時，抗OX40抗體ADI-20112(IgG1型)樣品酸性組分顯著增加，pH7.0的樣品次之，pH5.0、pH6.0的樣品變化最小；對於抗體的主組分，pH7.0的樣品主組分變化最小；對於抗體的鹼性變異體，各pH條件下樣品的鹼性組分相對於第0天時的鹼性組分而言一致下降，結果參見說明書第1圖至第4圖。

B．振盪脅迫實驗

將含有15mg/ml抗OX40抗體的上述各樣品，25℃避光下，650轉/分鐘振搖，於第0天、1天、3天、5天取樣。觀察了在所述取樣時間，各樣品的外觀、是否存在可見異物；使用紫外線可視分光光度計(日本島津生產，型號UV-1800)測定了各樣品中的蛋白質含量；藉由SEC-HPLC法測定了各樣品的純度(%)。

結果分別如下所示。

(1)外觀、是否存在可見異物

在pH約為5.0、6.0、7.0、8.0的條件下振盪高達5天時，各組樣品的外觀、可見異物的檢測均合格。

(2)蛋白含量

在振盪條件下，各組樣品的蛋白含量均未受到明顯影響，表10列舉了其中的抗體ADI-20112(IgG1型)的樣品的蛋白含量測定結果。

N/A表示未設置該項。

(3)純度

在pH約為5.0、6.0、7.0、8.0的條件下振盪5天時，測定了各組樣品的純度。結果表明，在振盪條件下，各組樣品的純度均未受到明顯影響。

表11列舉了其中的抗體ADI-20112(IgG1型)樣品的純度測定結果。

N/A表示未設置該項。

C．凍融脅迫實驗

將含有15mg/ml抗OX40抗體的上述各樣品進行冷凍(-30℃以下)和融化(使用25℃溫度的水浴)循環，於第0、3、6次循環取樣。觀察了在所述取樣時間，各樣品的外觀、是否存在可見異物；使用紫外線可視分光光度計(日本島津生產，型號UV-1800)測定了各樣品中的蛋白質含量；藉由SEC-HPLC法測定了各樣品的純度(%)。

結果分別如下所示。

(1)外觀、是否存在可見異物

在pH約為5.0、6.0、7.0的條件下凍融高達6次循環後，各組樣品的外觀、可見異物的檢測均合格。

在pH約為8.0的條件下凍融3次循環後，各組樣品的外觀、可見異物的檢測均合格。在pH8.0條件凍融6次循環後，樣品開始出現混濁。

(2)蛋白含量

在凍融條件下，各組樣品的蛋白含量均未受到明顯影響，表12列舉了其中的抗體ADI-20112(IgG1型)樣品的蛋白含量測定結果。

N/A表示未設置該項。

(3)純度

在pH約為5.0、6.0、7.0、8.0的條件下進行凍融循環，測定了各組樣品的純度。結果表明，在凍融條件下，各組樣品的純度均未受到明顯影響。

表13列舉了其中的抗體ADI-20112(IgG1型)樣品的純度測定結果。

N/A表示未設置該項。

從上述實驗結果可見，抗OX40抗體樣品在pH約為5.0、6.0、7.0、8.0的緩衝液中，當經歷各種脅迫條件後沒有觀察到明顯的外觀、蛋白含量和純度的變化，也不存在可見異物，因此，能夠選取pH約為5.0至8.0範圍內的任一個pH值，調配抗OX40抗體製劑。

實施例3.穩定的抗OX40抗體製劑的調配

調配了抗OX40抗體的4種液體製劑，pH約7.0，所述液體製劑的組分見表14。用調配的這4種製劑的緩衝液超濾置換之前配製的抗OX40抗體樣品溶液，然後使得樣品溶液中抗OX40抗體為約25mg/ml，加入聚山梨醇酯80後除菌過濾，無菌分裝至15 R的西林瓶中，4ml/瓶，對樣品進行凍乾，壓塞、軋蓋後進行高溫試驗，並檢測穩定性。

將所述凍乾製劑於40℃±2℃和25℃±2℃條件下放置，於0天、2週、4週和3個月取樣。將凍乾製劑樣品用無菌水複溶至接近凍乾前的體積，並測定了凍乾製劑複溶後的蛋白含量為約26.0mg/ml。觀察了在所述取樣時間點，複溶後的各樣品的外觀、是否存在可見異物；使用紫外線可視分光光度計(日本島津生產，型號UV-1800)測定了各樣品中的蛋白質含量；濁度；藉由尺寸排阻高效液相色譜(SEC-HPLC)法測定了各樣品的純度(%)；藉由陽離子交換層析(CEX HPLC)法測定了各樣品中抗OX40抗體的電荷變異體(%)。對各不同的抗體製備的製劑獲得了類似的結果。下面列舉了其中的抗體ADI-20112(IgG1型)製劑的結果如下。

(1)外觀、是否存在可見異物

在40℃±2℃和25℃±2℃的溫度條件下觀察了4種製劑長達3個月。

結果表明，4種製劑的外觀、可見異物的檢測均合格。

(2)蛋白含量

在40℃±2℃和25℃±2℃的溫度條件下，4種製劑的蛋白含量均未發生變化，詳見表15。

(3)濁度

在40℃±2℃和25℃±2℃的溫度條件下，4種製劑的濁度結果見表16和第5圖，相對於第0天時的濁度，均沒有發生顯著性變化。

(4)純度

純度(SEC-HPLC法)：結果見表17和第6圖。

純度(非還原型CE-SDS法)：40℃±2℃和25℃±2℃條件下，各製劑純度均未發生明顯變化。詳見表18。

純度(還原型CE-SDS法)：40℃±2℃和25℃±2℃條件下，各製劑純度均未發生明顯變化。詳見表19。

(5)電荷變異體

40℃±2℃條件下，製劑1的樣品在第3個月時抗OX40抗體的各電荷變異體相對於第0天時未發生明顯變化；製劑2和製劑3的樣品的酸性組分相對於第0天時的變化分別為4.1%、2.3%；製劑4的樣品在3個月時，相對於第0天而言主組分的變化為2.6%。具體結果見表20和第7圖至第9圖。

25℃±2℃條件下，各製劑的樣品在3個月時相對於第0天而言抗OX40抗體的各電荷變異體均未發生明顯變化。

藉由上述實驗結果可見，製劑1-4均具有可接受程度的穩定性。製劑2在濁度、純度(SEC-HPLC法)和電荷變異體(CEX-HPLC法)檢測指標上略遜於製劑1；製劑3和製劑4的各電荷變異體(CEX-HPLC法)的穩定性略低於製劑1。製劑1的各項穩定性指標均優於其他製劑。

以上描述了本發明的示例性實施方案，本領域技術人員應當理解的是，這些公開內容僅是示例性的，在本發明的範圍內可以進行各種其它替換、適應和修改。因此，本發明不限於文中列舉的具體實施方案。

<110> 信達生物製藥(蘇州)有限公司(INNOVENT BIOLOGICS(SUZHOU)CO.,LTD.)

<120> 包含抗OX40抗體的製劑、其製備方法及其用途

<160> 172

<170> PatentIn版本3.3

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057的VH CDR1

<400> 1

<210> 2

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23504的VH CDR1

<400> 2

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23509的VH CDR1

<400> 3

<210> 4

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112和ADI-20113的VH CDR1

<400> 4

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25650的VH CDR1

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25651的VH CDR1

<400> 6

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25652和ADI-25653的VH CDR1

<400> 7

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25654的VH CDR1

<400> 8

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078的VH CDR1

<400> 9

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23515的VH CDR1

<400> 10

<210> 11

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23518的VH CDR1

<400> 11

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23519的VH CDR1

<400> 12

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VH CDR1

<400> 13

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VH CDR1

<400> 14

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VH CDR1

<400> 15

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065和ADI-20066的VH CDR1

<400> 16

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VH CDR1

<400> 17

<210> 18

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057的VH CDR2

<400> 18

<210> 19

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23504的VH CDR2

<400> 19

<210> 20

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23507的VH CDR2

<400> 20

<210> 21

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23509的VH CDR2

<400> 21

<210> 22

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112和ADI-20113的VH CDR2

<400> 22

<210> 23

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25650的VH CDR2

<400> 23

<210> 24

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25651的VH CDR2

<400> 24

<210> 25

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25652的VH CDR2

<400> 25

<210> 26

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25653的VH CDR2

<400> 26

<210> 27

<211> 17

<212> PRT

<212> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25654的VH CDR2

<400> 27

<210> 28

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078的VH CDR2

<400> 28

<210> 29

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23515的VH CDR2

<400> 29

<210> 30

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23518的VH CDR2

<400> 30

<210> 31

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23519的VH CDR2

<400> 31

<210> 32

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VH CDR2

<400> 32

<210> 33

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VH CDR2

<400> 33

<210> 34

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VH CDR2

<400> 34

<210> 35

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065和ADI-20066的VH CDR2

<400> 35

<210> 36

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VH CDR2

<400> 36

<210> 37

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507和ADI-23509的VH CDR3

<400> 37

<210> 38

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112、ADI-20113、ADI-25650、ADI-25651、ADI-25652、ADI-25653和ADI-25654

的VH CDR3

<400> 38

<210> 39

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518和ADI-23519的VH CDR3

<400> 39

<210> 40

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VH CDR3

<400> 40

<210> 41

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VH CDR3

<400> 41

<210> 42

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VH CDR3

<400> 42

<210> 43

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065和ADI-20066的VH CDR3

<400> 43

<210> 44

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VH CDR3

<400> 44

<210> 45

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507、ADI-23509、ADI-20112、ADI-25650、ADI- 25651、ADI-25652、 ADI-25653、ADI-25654和ADI-20118的VL CDR1

<400> 45

<210> 46

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20113和ADI-20051的VL CDR1

<400> 46

<210> 47

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518、ADI-23519和ADI-20065的VL CDR1

<400> 47

<210> 48

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VL CDR1

<400> 48

<210> 49

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VL CDR1

<400> 49

<210> 50

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20066的VL CDR1

<400> 50

<210> 51

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507、ADI-23509、ADI-20112、ADI-25650、ADI- 25651、ADI-25652、 ADI-25653、ADI-25654、ADI-20118的VL CDR2

<400> 51

<210> 52

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20113的VL CDR2

<400> 52

<210> 53

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518、ADI-23519、ADI-20065、ADI-20066的VL CDR2

<400> 53

<210> 54

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VL CDR2

<400> 54

<210> 55

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VL CDR2

<400> 55

<210> 56

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VL CDR2

<400> 56

<210> 57

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507、ADI-23509的VL CDR3

<400> 57

<210> 58

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112、ADI-25650、ADI-25651、ADI-25652、ADI-25653、ADI-25654的VL CDR3

<400> 58

<210> 59

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20113的VL CDR3

<400> 59

<210> 60

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518、ADI-23519的VL CDR3

<400> 60

<210> 61

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VL CDR3

<400> 61

<210> 62

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VL CDR3

<400> 62

<210> 63

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VL CDR3

<400> 63

<210> 64

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065的VL CDR3

<400> 64

<210> 65

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20066的VL CDR3

<400> 65

<210> 66

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VL CDR3

<400> 66

<210> 67

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057的VH

<400> 67

<210> 68

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23504的VH

<400> 68

<210> 69

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23507的VH

<400> 69

<210> 70

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23509的VH

<400> 70

<210> 71

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112、ADI-20113的VH

<400> 71

<210> 72

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25650的VH

<400> 72

<210> 73

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25651的VH

<400> 73

<210> 74

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25652的VH

<400> 74

<210> 75

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25653的VH

<400> 75

<210> 76

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25654的VH

<400> 76

<210> 77

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078的VH

<400> 77

<210> 78

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23515的VH

<400> 78

<210> 79

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23518的VH

<400> 79

<210> 80

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23519的VH

<400> 80

<210> 81

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VH

<400> 81

<210> 82

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VH

<400> 82

<210> 83

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VH

<400> 83

<210> 84

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065、ADI-20066的VH

<400> 84

<210> 85

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VH

<400> 85

<210> 86

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057的VH

<400> 86

<210> 87

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23504的VH

<400> 87

<210> 88

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23507的VH

<400> 88

<210> 89

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23509的VH

<400> 89

<210> 90

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112、ADI-20113的VH

<400> 90

<210> 91

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25650的VH

<400> 91

<210> 92

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25651的VH

<400> 92

<210> 93

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25652的VH

<400> 93

<210> 94

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25653的VH

<400> 94

<210> 95

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-25654的VH

<400> 95

<210> 96

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078的VH

<400> 96

<210> 97

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23515的VH

<400> 97

<210> 98

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23518的VH

<400> 98

<210> 99

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-23519的VH

<400> 99

<210> 100

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VH

<400> 100

<210> 101

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VH

<400> 101

<210> 102

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VH

<400> 102

<210> 103

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065、ADI-20066的VH

<400> 103

<210> 104

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VH

<400> 104

<210> 105

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507、ADI-23509的VL

<400> 105

<210> 106

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112、ADI-25650、ADI-25651、ADI-25652、ADI-25653、ADI-25654的VL

<400> 106

<210> 107

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20113的VL

<400> 107

<210> 108

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518、ADI-23519的VL

<400> 108

<210> 109

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VL

<400> 109

<210> 110

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VL

<400> 110

<210> 111

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VL

<400> 111

<210> 112

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065的VL

<400> 112

<210> 113

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20066的VL

<400> 113

<210> 114

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VL

<400> 114

<210> 115

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507、ADI-23509的VL

<400> 115

<210> 116

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<400> 116

<210> 117

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20113的VL

<400> 117

<210> 118

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518、ADI-23519的VL

<400> 118

<210> 119

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的VL

<400> 119

<210> 120

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的VL

<400> 120

<210> 121

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的VL

<400> 121

<210> 122

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065的VL

<400> 122

<210> 123

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20066的VL

<400> 123

<210> 124

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的VL

<400> 124

<210> 125

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20057的重鏈胺基酸序列

<400> 125

<210> 126

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20057的重鏈胺基酸序列

<400> 126

<210> 127

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-23504的重鏈胺基酸序列

<400> 127

<210> 128

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-23504的重鏈胺基酸序列

<400> 128

<210> 129

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-23507的重鏈胺基酸序列

<400> 129

<210> 130

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-23507的重鏈胺基酸序列

<400> 130

<210> 131

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-23509的重鏈胺基酸序列

<400> 131

<210> 132

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-23509的重鏈胺基酸序列

<400> 132

<210> 133

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20112、ADI-20113的重鏈胺基酸序列

<400> 133

<210> 134

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20112、ADI-20113的重鏈胺基酸序列

<400> 134

<210> 135

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-25650的重鏈胺基酸序列

<400> 135

<210> 136

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-25650的重鏈胺基酸序列

<400> 136

<210> 137

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-25651的重鏈胺基酸序列

<400> 137

<210> 138

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-25651的重鏈胺基酸序列

<400> 138

<210> 139

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-25652的重鏈胺基酸序列

<400> 139

<210> 140

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-25652的重鏈胺基酸序列

<400> 140

<210> 141

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-25653的重鏈胺基酸序列

<400>141

<210> 142

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-25653的重鏈胺基酸序列

<400> 142

<210> 143

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-25654的重鏈胺基酸序列

<400> 143

<210> 144

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-25654的重鏈胺基酸序列

<400> 144

<210> 145

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20078的重鏈胺基酸序列

<400> 145

<210> 146

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20078的重鏈胺基酸序列

<400> 146

<210> 147

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-23515的重鏈胺基酸序列

<400> 147

<210> 148

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-23515的重鏈胺基酸序列

<400> 148

<210> 149

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-23518的重鏈胺基酸序列

<400> 149

<210> 150

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-23518的重鏈胺基酸序列

<400> 150

<210> 151

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-23519的重鏈胺基酸序列

<400> 151

<210> 152

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-23519的重鏈胺基酸序列

<400> 152

<210> 153

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20048的重鏈胺基酸序列

<400> 153

<210> 154

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20048的重鏈胺基酸序列

<400> 154

<210> 155

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20096的重鏈胺基酸序列

<400> 155

<210> 156

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20096的重鏈胺基酸序列

<400> 156

<210> 157

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20051的重鏈胺基酸序列

<400> 157

<210> 158

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20051的重鏈胺基酸序列

<400> 158

<210> 159

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20065、ADI-20066的重鏈胺基酸序列

<400> 159

<210> 160

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20065、ADI-20066的重鏈胺基酸序列

<400> 160

<210> 161

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG1形式的抗體ADI-20118的重鏈胺基酸序列

<400> 161

<210> 162

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG2形式的抗體ADI-20118的重鏈胺基酸序列

<400> 162

<210> 163

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20057、ADI-23504、ADI-23507、ADI-23509的輕鏈胺基酸序列

<400> 163

<210> 164

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20112、ADI-25650、ADI-25651、ADI-25652、ADI-25653、ADI-25654的輕鏈胺基酸序列

<400> 164

<210> 165

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20078、ADI-23515、ADI-23518、ADI-23519的輕鏈胺基酸序列

<400> 165

<210> 166

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20048的輕鏈胺基酸序列

<400> 166

<210> 167

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20096的輕鏈胺基酸序列

<400> 167

<210> 168

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20051的輕鏈胺基酸序列

<400> 168

<210> 169

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20065的輕鏈胺基酸序列

<400> 169

<210> 170

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20066的輕鏈胺基酸序列

<400> 170

<210> 171

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20118的輕鏈胺基酸序列

<400> 171

<210> 172

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體ADI-20113的輕鏈胺基酸序列

<400> 172

Claims

一種具有pH為5.0-8.0的液體抗體製劑，包含(i)抗OX40抗體或其抗原結合片段，該抗OX40抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的HCDR1，SEQ ID NO：22的胺基酸序列的HCDR2，和SEQ ID NO：38的胺基酸序列的HCDR3的組合，以及SEQ ID NO：45的胺基酸序列的LCDR1，SEQ ID NO：51的胺基酸序列的LCDR2，和SEQ ID NO：58的胺基酸序列的LCDR3的組合；(ii)緩衝劑，該緩衝劑選自磷酸鹽、檸檬酸鹽、檸檬酸鹽溶劑合物、丁二酸、三羥甲基胺基甲烷和它們的組合；(iii)穩定劑，該穩定劑選自蔗糖、海藻糖、甘露醇和它們的組合；和(iv)表面活性劑，該表面活性劑選自普洛尼克、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-40、或聚山梨醇酯-20。
如申請專利範圍第1項所述的液體抗體製劑，其中所述液體抗體製劑中的抗OX40抗體或其抗原結合片段的濃度為10-100mg/mL。
如申請專利範圍第1項所述的液體抗體製劑，其中所述液體抗體製劑中的緩衝劑的濃度為1-20mg/ml。
如申請專利範圍第1項所述的液體抗體製劑，其中所述緩衝劑為檸檬酸鈉或二水檸檬酸鈉。
如申請專利範圍第1項所述的液體抗體製劑，其中所述液體抗體製劑中的穩定劑的濃度為20-100mg/ml。
如申請專利範圍第1項所述的液體抗體製劑，其中所述液體抗體製劑中的表面活性劑的濃度為0.1-2mg/ml。
如申請專利範圍第1項所述的液體抗體製劑，其中所述抗OX40抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區VH和/或輕鏈可變區VL，其中，(a)重鏈可變區VH包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列；和/或(b)輕鏈可變區VL包含SEQ ID NO：116的胺基酸序列。
如申請專利範圍第7項所述的液體抗體製劑，其中所述抗OX40抗體或其抗原結合片段包含重鏈和/或輕鏈，其中所述重鏈包含SEQ ID NO：133或134，所述輕鏈包含SEQ ID NO：164。
如申請專利範圍第1至8項中任一項所述的液體抗體製劑，其包含20-30mg/ml抗OX40單株抗體、4-6mg/ml檸檬酸鈉或二水檸檬酸鈉、40-60mg/ml蔗糖、0.6-0.8mg/ml聚山梨醇酯80，pH為6.0-7.0。
如申請專利範圍第9項所述的液體抗體製劑，其包含25mg/ml抗OX40單株抗體、5.88mg/ml二水檸檬酸鈉、50.00mg/ml蔗糖、0.7mg/ml聚山梨醇酯80，pH為7.0。
如申請專利範圍第1至8項中任一項所述的液體抗體製劑，其包含25mg/ml抗OX40單株抗體、2.36mg/ml丁二酸、50.00mg/ml甘露醇、0.7mg/ml聚山梨醇酯80，pH為7.0。
如申請專利範圍第1至8項中任一項所述的液體抗體製劑，其包含25mg/ml抗OX40單株抗體、20mmol/L磷酸鹽、50.00mg/ml蔗糖、0.7mg/ml聚山梨醇酯80，pH為7.0。
如申請專利範圍第1至8項中任一項所述的液體抗體製劑，其包含25mg/ml抗OX40單株抗體、2.42mg/mlTris、50.00mg/ml海藻糖、0.7mg/ml聚山梨醇酯80，pH為7.0。
一種固體抗體製劑，其藉由固化如申請專利範圍第1至13項中任何一項所述的液體抗體製劑而獲得。
一種申請專利範圍第1至13項中任何一項的液體抗體製劑或申請專利範圍第14項所述的固體抗體製劑的用途，用於製備在受試者中活化T細胞或誘導T細胞介導的抗腫瘤活性或增強機體的免疫應答的遞送裝置或預填裝注射器或藥物。
一種申請專利範圍第1至13項中任何一項的液體抗體製劑或申請專利範圍第14項所述的固體抗體製劑的用途，用於製備治療受試者癌症的遞送裝置或預填裝注射器或藥物。
如申請專利範圍第16項所述的用途，其中所述癌症是肺癌、肝癌、胃癌，或結腸癌。