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TWI703323B - 於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法 - Google Patents

於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法 Download PDF

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TWI703323B
TWI703323B TW107140456A TW107140456A TWI703323B TW I703323 B TWI703323 B TW I703323B TW 107140456 A TW107140456 A TW 107140456A TW 107140456 A TW107140456 A TW 107140456A TW I703323 B TWI703323 B TW I703323B
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李誠志
張仁麟
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及安生物科技股份有限公司
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Abstract

本發明提供一種檢測試片和一種於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法。所述檢測試片包含工作電極，其包含導電層和電催化層。而所述方法包含以下步驟：提供血液檢體、提供前述的檢測試片、進行檢體注入步驟、進行起始步驟、進行第一檢測步驟、進行第二檢測步驟、進行第三檢測步驟、進行第一分析步驟以及進行第二分析步驟。藉此，本發明之檢測試片和於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法可以準確且快速的同步偵測血液檢體中的葡萄糖濃度和糖化血色素百分比。

Description

於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比 的方法
本發明是有關於一種檢測試片以及方法，特別是一種葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的檢測試片以及同步檢測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法。
糖尿病(diabetes mellitus)是一種代謝性疾病，它的特徵是患者的血糖長期高於標準值。高血糖會造成多食、多飲、頻尿及體重下降的「三多一少」症狀。糖尿病可分為胰臟無法生產足夠的胰島素的第一型糖尿病，以及是細胞對胰島素不敏感的第二型糖尿病。不論是哪一種糖尿病，如果不進行治療，可能會引發許多併發症。一般病徵有視力模糊、頭痛、肌肉無力、傷口癒合緩慢及皮膚搔癢。急性併發症包括糖尿病酮酸血症與高滲透壓高血糖非酮酸性昏迷。嚴重的長期併發症則包括心血管疾病、中風、慢性腎臟病、糖尿病足、以及視網膜病變等。全世界糖尿病患人數， 1997年為1.24億人，2014年全球估計有4.22億成人患有糖尿病。
正常情況下，糖尿病的判定應先測量空腹血糖值與糖化血色素，再輔以口服葡萄糖耐受試驗來確認。空腹血糖值是測量至少空腹8小時後的血糖值，指的是剛起床、還未吃早餐的空腹狀態時，體內每100克血漿所含的葡萄糖濃度。而口服葡萄糖耐受試驗是測量空腹至少8小時以及喝下糖水後至少2小時的血糖值。空腹血糖值和口服葡萄糖耐受試驗可以反映採血當時的血糖狀態。糖化血色素(Glycated Hemoglobin,HbA1c)是血液中的葡萄糖進入紅血球，與紅血球內的血色素結合所形成，血中葡萄糖濃度愈高，糖化血色素(HbA1c)也愈高。一旦葡萄糖和血色素結合，就不容易脫落，直到紅血球細胞衰亡。一般紅血球的平均壽命為120天，因此檢測血液中糖化血色素，可以反映過去2-3個月的血糖平均值。
糖尿病及其併發症，會造成患者的財務負擔和生活品質下降。因此糖尿病患者以及在還未成為糖尿病的「糖尿病前期」患者急需重視短時間的血糖控制和長時間的血糖控制，以避免後續病情加重或併發症的出現。然而現階段空腹血糖值和糖化血色素的檢測必須分開進行，且糖化血色素的檢測所需的血液檢體量較多以及反應過程複雜必須由專業人員操作，因而造成患者的不便利性，也容易疏於監控病情。
有鑒於此，本發明之一目的為提供一種檢測試片及一種於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其可以於單一檢測試片中同步偵測血液檢體中的葡萄糖濃度和糖化血色素百分比。
本發明之一態樣是在於提供一種檢測試片，包含一工作電極，所述工作電極包含一導電層以及一電催化層。所述電催化層沉積於導電層上，電催化層包含一多孔性結構，且電催化層用以於中性環境下催化長鏈態生物大分子或短鏈態生物大分子。
依據前述之檢測試片，所述電催化層的材質可為一金屬氧化物或一金屬氫氧化物。所述金屬氧化物可為RuO2、NiO、CuO或Al2O3，所述金屬氫氧化物可為Ru(OH)2、NiOOH、CuOOH、Au(OH)2或PtOH。
依據前述之檢測試片，所述多孔性結構的孔徑可為200nm至400nm。
本發明之另一態樣是在於提供一種於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，包含以下步驟：提供血液檢體、提供前述的檢測試片、進行檢體注入步驟、進行起始步驟、進行第一檢測步驟、進行第二檢測步驟、進行第三檢測步驟、進行第一分析步驟以及進行第二分析步驟。檢體注入步驟時係將血液檢體注入至電催化層。起始步驟係對檢測試片提供一起始電壓。第一檢測步驟係在第一反應時間點於第一偵測電位下取得檢測試片之一 第一電流訊號值。第二檢測步驟係在第二反應時間點於第二偵測電位下取得檢測試片之一背景電流訊號值，其中第二偵測電位小於第一偵測電位，且第二偵測電位與第一偵測電位具有0.05V至0.8V之電位差。第三檢測步驟係在第三反應時間點於第二偵測電位下計算檢測試片之一電子轉移數量值。第一分析步驟係將第一電流訊號值與葡萄糖濃度參考比對資料進行比對，以確定血液檢體中的葡萄糖濃度。第二分析步驟係將電子轉移數量值除以背景電流訊號值得到一電化學訊號值，再將電化學訊號值與一糖化血色素百分比參考比對資料進行比對，以確定血液檢體中的糖化血色素百分比。
依據前述之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中檢體注入步驟、起始步驟、第一檢測步驟、第二檢測步驟、第三檢測步驟係依序執行，且檢體注入步驟至第三檢測步驟的總反應時間可為10秒至60秒。
依據前述之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中第一反應時間點可為檢體注入步驟後百分之6至百分之17的總反應時間。
依據前述之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中第二反應時間點可為檢體注入步驟後百分之23至百分之40的總反應時間。
依據前述之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中第三反應時間點可為檢體注入步驟後百分之46至百分之66的總反應時間。
藉此，本發明之檢測試片以及於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，可以將採血後的血液檢體直接注入於單一檢測試片中，準確且快速的同步偵測血液檢體中的葡萄糖濃度和糖化血色素百分比，且血液檢體不需經由離心分離等前處理，提供糖尿病患者及糖尿病前期患者的便利性，以利監控短時間的血糖狀況和長時間的血糖狀況。
上述發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。
100‧‧‧檢測試片
110‧‧‧工作電極
111‧‧‧導電層
112‧‧‧電催化層
113‧‧‧多孔性結構
120‧‧‧輔助電極
130‧‧‧參考電極
300‧‧‧於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法
310、320、330、340、350、360、370、380、390‧‧‧步驟
500‧‧‧血液檢體
510‧‧‧糖化血色素
520‧‧‧血色素
530‧‧‧葡萄糖
E1‧‧‧第一偵測電位
E2‧‧‧第二偵測電位
EC‧‧‧電化學訊號值
S1‧‧‧第一電流訊號值
S2‧‧‧背景電流訊號值
S3‧‧‧電子轉移數量值
t‧‧‧時間
t1‧‧‧第一反應時間點
t2‧‧‧第二反應時間點
t3‧‧‧第三反應時間點
為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖繪示依照本發明之一實施方式之檢測試片之示意圖；第2圖繪示依照本發明之另一實施方式之一種於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法之步驟流程圖；第3圖為本發明之實施例之檢測試片之電催化層之掃描 式電子顯微鏡圖；第4A圖為實施例之檢測試片檢測葡萄糖時的線性掃描伏安圖；第4B圖為實施例之檢測試片檢測血色素和糖化血色素時電流對時間的訊號圖譜；第5圖為本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法之作用機制示意圖；第6圖為實施例之檢測試片檢測葡萄糖濃度的校準曲線圖；第7圖為實施例之檢測試片檢測不同濃度的糖化血色素的電流時間圖譜；第8圖為電子轉移數量值與液相層析法測得的糖化血色素百分比的關係圖；第9圖為本發明之電化學訊號值比率與液相層析法測得的糖化血色素百分比的關係圖；以及第10圖為受試者血液檢體之電化學訊號值與液相層析法測得的糖化血色素百分比的關係圖。
本發明提供一種檢測試片，包含一工作電極，所述工作電極包含一導電層以及一電催化層。所述電催化層沉積於導電層上，電催化層包含一多孔性結構，且電催化層用以於中性環境下催化長鏈態生物大分子或短鏈態生物大分子。進一步地，所述檢測試片可為雙電極系統或三電極系 統，若檢測試片為雙電極系統，檢測試片包含工作電極以及輔助/參考電極；若檢測試片為三電極系統，檢測試片包含工作電極、輔助電極和參考電極。
請參照第1圖，繪示依照本發明之一實施方式之檢測試片100之示意圖。於此實施方式中檢測試片100為三電極系統，其包含工作電極110、輔助電極120和參考電極130。
工作電極110包含導電層111以及電催化層112。工作電極110在電解質環境中施予適當的電壓條件下可被視為電子提供者或者是電子接收者的角色，負責將生物辨識或作用的程度轉化為電子訊。而工作電極110在視電化學分析的需求，最好能夠具有高訊雜比及寬廣的電位窗範圍的特性，其導電層111材料成分可由現有技術所提供的導電材質所構成，例如碳、銅、石墨烯、白金、金、銀或碳/銀、石墨烯/白金等複合材料。而電催化層112經由化學修飾的方式沉積於導電層111上，其材質可為金屬氧化物或金屬氫氧化物，較佳地，所述金屬氧化物可為RuO2、NiO、CuO或Al2O3，所述金屬氫氧化物可為Ru(OH)2、NiOOH、CuOOH、Au(OH)2或PtOH。電催化層112包含一多孔性結構113，其孔徑可為200nm至400nm，且電催化層112用以於中性環境下催化長鏈態生物大分子或短鏈態生物大分子。
輔助電極120扮演與工作電極110相對應的角色，當工作電極110進行氧化反應時，輔助電極120則進行 還原反應，反之亦然。輔助電極120不參與電化學反應僅提供電荷平衡功能，其材料可為白金，以提供高穩定性與高導電性進而完成電子迴路。此外輔助電極120的電極面積理論上要大於工作電極110的10倍以上較佳，盡可能使電子迴路功能完整且快速。
參考電極130用以控制工作電極110的電位，其與工作電極110保持一定的距離以維持穩定的電壓，參考電極130具有理想非極化電極的特性，具有很大的電阻，只允許極小量的電流通過來維持電位。參考電極130可為標準氫電極(NHE,SHE-Normal Hydrogen Electrode)、飽和甘汞電極(SCE-Saturated Calomel Electrode)、銀/氯化銀電極(Ag/AgCl-Silver/Silver Chloride Electrode)或氧化銀電極(Silver oxide electrode)。
請參照第2圖，繪示依照本發明之另一實施方式之一種於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法300之步驟流程圖，本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法300包含步驟310、步驟320、步驟330、步驟340、步驟350、步驟360、步驟370、步驟380和步驟390。
步驟310是提供血液檢體，所述血液檢體為人體的全血樣本，可為由採血筆或採血針由指尖所採集的新鮮全血樣本，或經由抽血檢驗所採集到的新鮮全血樣本。
步驟320是提供檢測試片，所述檢測試片包含工作電極，且工作電極包含導電層以及電催化層。所述電催 化層經由化學修飾的方式沉積於導電層上，電催化層包含多孔性結構，且電催化層用以於中性環境下催化長鏈態生物大分子或短鏈態生物大分子。
步驟330是進行檢體注入步驟，係將前述血液檢體注入至檢測試片的電催化層，且血液檢體不需經由離心分離等前處理步驟，可直接注入電催化層上。
步驟340是進行起始步驟，係將一檢測電力耦接至檢測試片以提供一起始電壓，並使檢測電力施加至血液檢體中待測的葡萄糖、血色素以及糖化血色素。
步驟350是進行第一檢測步驟，係在第一反應時間點於第一偵測電位下取得檢測試片之第一電流訊號值。其中第一偵測電位為一電化學氧化電位，可依據工作電極之電催化層材料、輔助電解質種類、分析參數之掃描速率進行調整。
步驟360是進行第二檢測步驟，係在第二反應時間點於第二偵測電位下取得檢測試片之一背景電流訊號值，其中第二偵測電位小於第一偵測電位，且第二偵測電位與第一偵測電位具有0.05V至0.8V之電位差。
步驟370是進行第三檢測步驟，係在第三反應時間點於第二偵測電位下計算檢測試片之一電子轉移數量值。
前述檢體注入步驟、起始步驟、第一檢測步驟、第二檢測步驟、第三檢測步驟係依序執行，且檢體注入步驟至第三檢測步驟的總反應時間為10秒至60秒，總反應時間 係依據電催化層的材料不同進行調整。第一反應時間點可為檢體注入步驟後百分之6至百分之17的總反應時間。第二反應時間點可為檢體注入步驟後百分之23至百分之40的總反應時間。第三反應時間點可為檢體注入步驟後百分之46至百分之66的總反應時間。
步驟380是進行第一分析步驟，第一分析步驟係將第一電流訊號值與葡萄糖濃度參考比對資料進行比對，以確定血液檢體中的葡萄糖濃度。
步驟390是進行第二分析步驟，第二分析步驟係將電子轉移數量值除以背景電流訊號值得到電化學訊號值，再將電化學訊號值與糖化血色素百分比參考比對資料進行比對，以確定血液檢體中的糖化血色素百分比。
茲以下列具體實施例進一步示範說明本發明，用以有利於本發明所屬技術領域通常知識者，可在不需過度解讀的情形下完整利用並實踐本發明，而不應將這些試驗例視為對本發明範圍的限制，但用於說明如何實施本發明的材料及方法。
[實施例]
如前文所述，本發明旨在於提供一種檢測試片以及於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法。實施例之檢測試片為三電極系統，請參照第3圖，為本發明之實施例之檢測試片之電催化層之掃描式電子顯微鏡圖，實施例之檢測試片的電催化層的材質為NiOOH，如第3圖所示，實施例之檢測試片的電催化層包含 多孔性結構，且用以於中性環境下催化長鏈態生物大分子或短鏈態生物大分子，例如於實施例中可以在中性的環境催化葡萄糖和糖化血色素。此外，實施例以維持環境為偏中性或弱鹼性的電解質作為輔助電解質。
請參照第4A圖，為實施例之檢測試片檢測葡萄糖時的線性掃描伏安圖。在第4A圖中，虛線為以實施例之檢測試片檢測不含有葡萄糖的樣本的線性掃描伏安圖，實線為以實施例之檢測試片檢測含有葡萄糖的樣本的線性掃描伏安圖，結果可見，與不含有葡萄糖的樣本相比，以實施例之檢測試片檢測含有葡萄糖的樣本時可於第一偵測電位E1偵測到第一電流訊號值S1，於此實施例中第一偵測電位E1約為0.2V。
請參照第4B圖，為實施例之檢測試片檢測血色素和糖化血色素時電流對時間的訊號圖譜。在第4B圖中分別以實施例之檢測試片於第二偵測電位E2檢測含有血色素的樣本和含有糖化血色素的樣本，於此實施例中第二偵測電位E2約為0.12V，縱軸為電流值(單位為安培，A)，橫軸為時間(單位為秒)。結果可見，以實施例之檢測試片檢測含有血色素的樣本時，所偵測到的電流值穩定，而以實施例之檢測試片檢測含有糖化血色素的樣本，可於每次加入含有糖化血色素的樣本(10ppm)時偵測到電流的變化，顯示本發明之檢測試片所感測的電流僅對於糖化血色素呈現變化，對於血色素維持穩定，是以本發明之檢測試片確實有偵測糖化血色素的效果。
請參考第5圖，為本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法之作用機制示意圖。如第5圖所示，在進行本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法時，先於時間t=0時將血液檢體500注入檢測試片100的電催化層112中，其中血液檢體500中含有糖化血色素510、血色素520和葡萄糖530。施加電力於實施例之檢測試片以提供起始電壓。經過一段時間，血液檢體500中的葡萄糖530會先快速擴散到電催化層112的表面，因此可在第一反應時間點t1於第一偵測電位E1偵測到第一電流訊號值S1，於此實施例中第一反應時間t1為血液檢體注入至電催化層後2秒至10秒，第一偵測電位E1為0.2V至0.3V。而再經過一段時間，血液檢體500中的血色素520會貼附到電催化層112的表面，血色素520會使電催化層112表面的阻抗增加，使可增測到的電流訊號值縮小，因此可在第二反應時間點t2於第二偵測電位E2偵測到背景電流訊號值S2，於此實施例中第二反應時間t2為血液檢體注入至電催化層後12秒至20秒，第二偵測電位E2為0.12V至0.18V。再經過一段時間，糖化血色素510會吸附至電催化層112的多孔性結構113中，並在第三反應時間點t3於第二偵測電位E2下計算實施例之檢測試片之電子轉移數量值S3，其中第三反應時間點t3為血液檢體注入至電催化層後22秒至30秒，第二偵測電位E2為0.12V至0.18V，而電子轉移數量值S3為以偵測到的氧化 還原訊號值，帶入以下由電流公式和法拉第定律所推導出的方程式I中進行計算：I×t=nFN 方程式I；其中：I：電流；t：時間；n：電子轉移數；F：法拉第常數；N：莫耳數。此外，糖化血色素510於血液檢體500的濃度很低，藉由將糖化血色素510吸附至多孔性結構113中的機制可達到預濃縮糖化血色素510的效果，以提高偵測靈敏度。
將所得到的第一電流訊號值S1與葡萄糖濃度參考比對資料進行比對，可以確定血液檢體500中的葡萄糖濃度。請參照第6圖，為實施例之檢測試片檢測葡萄糖濃度的校準曲線圖，第6圖的結果可見，實施例之檢測試片檢測濃度為0mM至20mM的葡萄糖時，所得到的電流訊號值與不同濃度的葡萄糖呈現良好的線性關係，因此可作為葡萄糖濃度參考比對資料。將前述所得到的第一電流訊號值S1與其比對即可確定血液檢體500中的葡萄糖濃度。
將所得到的電子轉移數量值S3除以背景電流訊號值S2可進一步得到電化學訊號值EC，再將電化學訊號值EC與糖化血色素百分比參考比對資料進行比對，可以確定血液檢體中的糖化血色素百分比。
請參照第7圖，為實施例之檢測試片檢測不同濃度的糖化血色素的電流時間圖譜，其中HbA1c代表糖化血色素。第7圖的結果可見，實施例之檢測試片檢測濃度為1ppm至20ppm的糖化血色素時，所得到的電流訊號值與不同濃度的糖化血色素呈現良好的線性關係，因此可作為糖化血色素濃度參考比對資料。將前述於第三反應時間點t3偵測到的氧化還原訊號值與其比對即可確定血液檢體500中的糖化血色素濃度。並在利用方程式I計算電子轉移數量值S3。將所得到的電子轉移數量值S3除以背景電流訊號值S2可進一步得到電化學訊號值EC。
請參照第8圖和第9圖，第8圖為電子轉移數量值S3與液相層析法測得的糖化血色素百分比的關係圖，第9圖為本發明之電化學訊號值EC比率與液相層析法測得的糖化血色素百分比的關係圖，其中液相層析法為習知最常用以偵測血液檢體中糖化血色素含量的方法，HbA1c代表糖化血色素。由第8圖的結果可見，前述所得到的電子轉移數量值S3與液相層析法測得的糖化血色素百分比不具有正相關性，然而將電子轉移數量值S3除以背景電流訊號值S2所得到電化學訊號值EC則與液相層析法測得的糖化血色素百分比呈現良好的線性關係，因此可作為糖化血色素百分比參考比對資料。將前述所得到的電化學訊號值EC與其比對即可確定血液檢體500中的糖化血色素百分比。
進一步的將117位受試者的血液檢體以本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分 比的方法進行檢測，請參照第10圖和表一，第10圖為受試者血液檢體之電化學訊號值與液相層析法測得的糖化血色素百分比的關係圖，中HbA1c代表糖化血色素，表一為本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法的分析性能。
Figure 107140456-A0101-12-0015-2
由第10圖和表一的結果顯示，117位受試者血液檢體由本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法所得到的電化學訊號值EC皆與液相層析法測得的糖化血色素百分比呈現良好的線性關係，且本發明之於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法在血液檢體量小於1.5μL的條件下，在糖化血色素百分比為4%-15%具有良好的準確性，分析時間亦僅需小於30秒。
綜上所述，本發明之檢測試片以及於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，可以將採血後的血液檢體直接注入於單一檢測試片中，準確且快速的同步偵測血液檢體中的葡萄糖濃度和糖化血色素百分比，分析時間更壓縮至30秒以內，且血液檢體不需經由離 心分離等前處理，提供糖尿病患者及糖尿病前期患者的便利性，以利監控短時間的血糖狀況和長時間的血糖狀況。
然本發明已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明的精神和範圍內，當可作各種的更動與潤飾，因此本發明的保護範圍當視後附的申請專利範圍所界定者為準。
300‧‧‧於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法
310、320、330、340、350、360、370、380、390‧‧‧步驟

Claims (5)

  1. 一種於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，包含：提供一血液檢體；提供檢測試片，該檢測試片包含一工作電極，該工作電極包含一導電層和一電催化層，其中該電催化層沉積於該導電層上，該電催化層包含一多孔性結構，且該電催化層用以於中性環境下催化長鏈態生物大分子或短鏈態生物大分子；進行一檢體注入步驟，係將該血液檢體注入至該電催化層；進行一起始步驟，係對該檢測試片提供一起始電壓；進行一第一檢測步驟，係在第一反應時間點於一第一偵測電位下取得該檢測試片之一第一電流訊號值；進行一第二檢測步驟，係在第二反應時間點於一第二偵測電位下取得該檢測試片之一背景電流訊號值，其中該第二偵測電位小於該第一偵測電位，且該第二偵測電位與該第一偵測電位具有0.05V至0.8V之一電位差；進行一第三檢測步驟，係在第三反應時間點於該第二偵測電位下計算該檢測試片之一電子轉移數量值； 進行一第一分析步驟，係將該第一電流訊號值與一葡萄糖濃度參考比對資料進行比對，以確定該血液檢體中的葡萄糖濃度；以及進行一第二分析步驟，係將該電子轉移數量值除以該背景電流訊號值得到一電化學訊號值，再將該電化學訊號值與一糖化血色素百分比參考比對資料進行比對，以確定該血液檢體中的糖化血色素百分比。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中該檢體注入步驟、該起始步驟、該第一檢測步驟、該第二檢測步驟、該第三檢測步驟係依序執行，且該檢體注入步驟至該第三檢測步驟的總反應時間為10秒至60秒。
  3. 如申請專利範圍第1項所述的於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中該第一反應時間點為該檢體注入步驟後百分之6至百分之17的總反應時間。
  4. 如申請專利範圍第1項所述的於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中 該第二反應時間點為該檢體注入步驟後百分之23至百分之40的總反應時間。
  5. 如申請專利範圍第1項所述的於單一檢測試片同步偵測葡萄糖濃度和糖化血色素百分比的方法，其中該第三反應時間點為該檢體注入步驟後百分之46至百分之66的總反應時間。
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