TWI793238B - 體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組 - Google Patents

Abstract

本發明有關於一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組，其係根據複數種免疫檢測結果，快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白，可應用於檢測生物樣品或判斷侵入式導管之置入準確性。

Description

體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法 及套組

本發明是有關於一種檢測方法及其套組，特別是有關於一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組。

胃部疾病是現代人常見的文明病。大體上，胃部疾病的檢查方式有胃鏡檢查、酸鹼測定檢查、食道機能檢查等。

胃鏡檢查是利用上消化道內視鏡直接觀察食道、胃、十二指腸。然而，胃鏡檢查並非百分百精確，檢查過程也會帶來一些不適，即使併用麻醉雖然無痛，但可能有潛在風險反應。

酸鹼測定檢查是將酸鹼測定儀連接感應器的管線一端，經由鼻腔進入食道後，將端點置於胃食道括約肌上方的定位點，透過管線將資訊傳回另一端的主機，進行24小時的監測並記錄定位點的酸鹼值。酸鹼測定儀檢查不需麻 醉，不過由於胃部疾病患者(例如胃食道逆流)在治療時常須服用抑酸劑，可能會使檢測結果出現偽陰性。

食道機能檢查是將食道機能檢測儀的細管，由鼻子放置到食道裡，可測試食道在吞嚥時將食物送到胃的運作是否正常，亦可測量下食道括約肌鬆弛的程度是否正常，以診斷食道功能是否失調或功能不良。食道機能檢查不需麻醉，不過食道機能檢查也無法百分百確認胃食道逆流。

另外，每年尚有數以千計的病人因胃部、食道、癌症等治療需求，須接受各種侵入式導管置入，以給藥或補充營養。前述侵入式導管例如鼻胃管(nasogastic tube，NGT)、鼻腸管(nasoduodenal tube，NDT；或稱nasojejunal tube，NJT)、口胃管(orogastric tube)、胃造廔口管(gastrostomy tube；亦稱胃管；或稱經皮內視鏡胃造口術，percutaneous endoscopic gastrostomy，PEG)及空腸造廔管(jejunostomy tube)等。一般侵入式導管之置入準確性的判斷方式之一是針對酸鹼值進行確認，惟如前述，目前胃腸疾病(例如胃食道逆流)患者在治療時常須服用抑酸劑，可能使檢測結果出現偽陰性。

綜上所述，現行檢測方法多針對酸鹼值進行確認，但胃部疾病患者在治療時常須服用抑酸劑，可能會使檢測結果出現偽陰性。另外，食道與氣道的位置相近，若誤將胃管插入肺部，可能會導致吸入性肺炎或其他病症。

有鑑於此，亟需發展一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組，以提供克服習知檢測方式的種種 缺點。

因此，本發明之一態樣是在提供一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其係根據複數種免疫檢測結果，快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白。

本發明之另一態樣係在提供一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組，其包含樣品導入單元、免疫檢測單元以及顯示單元，以利於快速且準確執行上述體外檢測方法。

根據本發明之上述態樣，提出一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法。在一實施例中，上述方法可包含進行第一免疫檢測步驟，以檢測生物樣品中是否存在胃蛋白酶，並獲得第一檢測結果。其次，進行第二免疫檢測步驟，以檢測該生物樣品中是否存在胃內因子，並獲得第二檢測結果。然後，根據第一免疫檢測結果及第二免疫檢測結果，判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白。當生物樣品具有胃蛋白酶及胃內因子之至少一者時，判斷生物樣品具有胃源性蛋白。

在一些實施例中，上述第一免疫檢測步驟可例如使用專一性辨識胃蛋白酶的第一抗體進行，而第二免疫檢測步驟可例如使用專一性辨識胃內因子的第二抗體進行。在上述實施例中，第一抗體或第二抗體可例如為單株抗體或多株抗體。

在一些實施例中，上述生物樣品之形式不拘， 可包括但不限於例如細胞、組織、分泌物、血液、淋巴液、組織液、體液及上述任意組合。

在一些實施例中，上述生物樣品可例如源自於口腔、食道、胃、腸道、氣管或侵入式導管。在上述實施例中，侵入式導管可包括但不限於鼻胃管、鼻腸管、口胃管、胃造廔口管以及空腸造瘻管。

在一些實施例中，上述生物樣品可源自於哺乳類動物，例如人類。

根據本發明之另一態樣，提供一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組，其包含樣品導入單元、免疫檢測單元以及顯示單元，其中免疫檢測單元可與樣品導入單元接觸，而顯示單元可呈現免疫檢測單元的檢測結果。

應用本發明之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組，其係根據複數種免疫檢測結果，快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白，例如輔助判斷胃食道逆流或侵入式導管之置入胃部準確性。

101/501‧‧‧箭頭

201/203/301/303‧‧‧曲線

為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之詳細說明如下：

〔圖1〕係顯示根據本發明一實施例之數株抗胃蛋白酶抗體對胃蛋白酶的西方墨點分析圖。

〔圖2〕係繪示本發明一實施例之數株抗胃蛋白酶抗體利用三明治ELISA法檢測胃蛋白酶的標準曲線圖。

〔圖3〕係繪示本發明另一實施例之數株抗胃蛋白酶抗體利用三明治ELISA法檢測胃食道逆流患者之唾液檢體的曲線圖。

〔圖4A〕與〔圖4B〕係繪示根據本發明一實施例之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組檢測生物樣品的直條圖。

〔圖5〕係顯示根據本發明一實施例之數株抗胃內因子抗體對胃內因子的西方墨點法的影像。

〔圖6〕係繪示本發明一實施例之數株抗胃內因子抗體利用三明治ELISA法檢測胃內因子的標準曲線圖。

〔圖7〕係繪示利用三明治ELISA法評估本發明一實施例之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組檢測生物樣品之胃內因子的曲線圖。

承前所述，本發明提供一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組，其係根據複數種免疫檢測結果，快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白。

本發明前述所稱的胃源性蛋白，一般可包括胃部本身或由胃部細胞分泌之內生性蛋白的總稱，例如胃蛋白酶(pepsin)及/或胃內因子(gastric intrinsic factor，GIF)，但不包括胃部以外的其他外生性蛋白，惟本發明不限於此處所載。在上述實施例中，胃蛋白酶及/或胃內因子的物種來源不拘，可源自於哺乳動物，例如人類。在其他實 施例中，亦可源自於人類以外的其他哺乳動物。

胃蛋白酶是一種消化性蛋白酶，其前驅物為胃蛋白酶原(pepsinogen)，係由胃黏膜主細胞所分泌，功能是將食物中的蛋白質分解為小的胜肽片段。胃內因子係由壁細胞(又名泌酸細胞)所分泌。壁細胞可分泌鹽酸及GIF。鹽酸使胃蛋白酶原轉變為胃蛋白酶。GIF幫助小腸吸收維生素B12，以製造紅血球。

上述二種胃源性蛋白僅出現於腸胃道，不會出現於正常口腔唾液或分泌物中。本發明藉由檢測生物樣品(例如唾液或口腔分泌物檢體)是否含有上述二種胃源性蛋白，可快速且準確判斷生物樣品是否源自於胃。

本發明前述所稱的複數種免疫檢測結果係指利用複數種抗體偵測生物樣品之複數種胃源性蛋白所得的結果，藉此確認生物樣品是否為胃源性，以輔佐臨床相關應用。在上述實施例中，複數種免疫檢測結果可例如包含檢測生物樣品之胃蛋白酶及胃內因子的免疫檢測結果。

在一實施例中，上述體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法可至少包含以下步驟。首先，進行第一免疫檢測步驟，以檢測生物樣品中是否存在胃蛋白酶，並獲得第一檢測結果。其次，進行第二免疫檢測步驟，以檢測上述生物樣品中是否存在胃內因子，並獲得第二檢測結果。

在一實施例中，上述生物樣品(或稱為檢體)之形式不拘，可包括但不限於例如細胞、組織、分泌物、血液、淋巴液、組織液、體液及上述任意組合。在一些實施例中， 上述生物樣品可例如源自於口腔、食道、胃、腸道、氣管或侵入式導管。在一些具體例中，前述侵入式導管可包括但不限於鼻胃管、鼻腸管、口胃管、胃造廔口管以及空腸造瘻管等。

在一些實施例中，第一免疫檢測步驟與第二免疫檢測步驟可使用習知方式進行，其方式可包含但不限於例如直接酵素連結免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay；ELISA)法、間接ELISA法、三明治ELISA法、西方墨點分析法、競爭性ELISA、免疫組織化學染色、側層流分析法、多重免疫分析法、放射免疫分析法、免疫放射量測定分析法、螢光免疫分析法、化學發光免疫分析法及免疫濁度測定法之至少一者，惟本發明不限於上述所舉。

在一些實施例中，上述第一抗體或第二抗體並無特別限制，可例如為單株抗體或多株抗體。在間接ELISA法檢測的例子中，上述第一抗體或第二抗體可為初級抗體。在三明治ELISA法檢測的例子中，上述第一抗體或第二抗體可為捕捉及檢測抗體(capture and detection antibody)。補充說明的是，本發明所屬技術領域中具有通常知識者應可理解，抗胃蛋白酶及胃內因子的抗體已為熟知且普遍的技術，上述第一抗體或第二抗體可自行篩選獲得或使用市售商品，故不另贅述。

在一些實施例中，上述第一免疫檢測步驟與第二免疫檢測步驟可為同步或不同步進行。在上述實施例中， 進行第一免疫檢測步驟之前，亦可先進行第二免疫檢測步驟。在另一些實施例中，第一免疫檢測步驟及/或第二免疫檢測步驟之分析靈敏度(analytical sensitivity)，亦可稱為檢測下限值(lower limit of detection；LOD)，一般而言不低於62.5ng/mL。在其他例示中，第一免疫檢測步驟及/或第二免疫檢測步驟之分析靈敏度可不低於125ng/mL。

然後，根據第一免疫檢測結果及第二免疫檢測結果，判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白。當生物樣品(例如胃食道逆流患者的口腔分泌物)具有胃蛋白酶及胃內因子之至少一者時，判斷生物樣品具有胃源性蛋白。在其他實施例中，由侵入式導管之生物樣品(黏附於臨床鼻胃插管患者的導管上的分泌物)檢測結果，可快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白，以輔助判斷例如胃食道逆流或侵入式導管之置入胃部準確性。

在應用時，本發明另提供一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組，以利於快速且準確執行上述體外檢測方法。在一實施例中，體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組可包括樣品導入單元、與樣品導入單元接觸之免疫檢測單元以及顯示單元。樣品導入單元可於體外導入生物樣品。免疫檢測單元可包含但不限於專一性辨識胃蛋白酶的第一抗體以及專一性辨識胃內因子的第二抗體，第一抗體與第二抗體的標定方式及/或固定的位置可為不同，以利於檢測生物樣品。顯示單元可呈現免疫檢測單元的檢測結果。

上述體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組，其產品形式不拘，可為習知的產品形式。舉例而言，當套組為免疫層析試片時，樣品導入單元可為樣品墊，顯示單元可為顯示觀測窗，直接呈現檢測結果為陽性或陰性。另外，上述體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組亦可結合其他習知檢測用的元件/設備，例如流式細胞儀、生物晶片等，以利於進行其他檢測。

以下利用數個實施例以說明本發明之應用，然其並非用以限定本發明，本發明技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾。

實施例一、建立及評估體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組(I)一檢測胃蛋白酶

1.1評估抗胃蛋白酶單株抗體的親和力

此實施例利用間接ELISA法評估抗胃蛋白酶單株抗體的親和力。首先，將100μL之胃食道逆流患者之唾液〔溶於磷酸鹽緩衝溶液(PBS)中〕塗佈在96孔細胞培養盤之各孔內，4℃反應至隔夜。接著，將阻隔溶液〔含1%牛血清白蛋白(BSA)之PBS〕加入孔內，於37℃進行阻隔反應達1小時。在去除阻隔溶液後，利用PBS潤洗各孔，再於每孔加入100μL之初級抗體於37℃反應達1小時，其中初級抗體為經序列稀釋之抗胃蛋白酶抗體株85-5、抗體株90-1以及抗體株HP-1。然後，利用PBS洗去各孔未結合的 初級抗體，於每孔加入100μL之結合辣根過氧化氫酶(horse radish peroxidase；HRP)之抗小鼠IgG(IgG-HRP，以1：5000的稀釋比例溶於PBST中，偉喬生醫，台灣)作為二級抗體，於37℃反應達1小時。之後，各孔加入100μL之四甲基聯苯胺(tetramethyl benzidine，TMB)於37℃反應達10分鐘後，再於每孔加入50μL之0.1N硫酸(H₂SO₄)反應達10分鐘，以終止反應。接下來，利用市售酵素免疫分析儀(ELISA reader)讀取450nm的吸光值，其結果如表1所示，藉此確認上述抗體是否可辨識唾液檢體中的胃蛋白酶。每個數值為三重複。上述二級抗體的操作方式係參照製造商之操作手冊進行，此應為本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者所熟知，故不另贅述。

由表1結果可知，相較於陰性控制組，抗胃蛋白酶抗體株85-5、抗體株90-1及抗體株HP-1於62.5ng/mL之序列稀釋濃度的450nm吸光值仍高於陰性控制組，確認三株抗胃蛋白酶抗體株皆可辨識唾液檢體中的胃蛋白酶。

1.2西方墨點分析法評估抗胃蛋白酶單株抗體檢測生物樣品的效果

此實施例利用西方墨點分析法評估抗胃蛋白酶單株抗體檢測生物樣品的效果。

西方墨點分析法可使用習知方式進行。首先，利用修改配方的放射免疫沉澱測定緩衝溶液(RIPA buffer)抽取上述胃食道逆流患者唾液的蛋白質。

上述所得之細胞溶解產物〔每道(lane)取10μL之細胞溶解產物〕於SDS-PAGE進行電泳後，將細胞蛋白質由SDS-PAGE膠體轉漬至聚偏氟乙烯膜(polyvinylidene difluoride membrane，PVDF)，利用一級抗體於4℃作用至隔夜，其中一級抗體包括抗胃蛋白醇抗體株85-5、抗體株90-1以及抗體株HP-1。然後，利用結合過氧化酶(peroxidase)之二級抗體於室溫感作1.5小時。之後，利用市售呈色套組(例如ECL kit，PerkinElmer,Inc.)檢測蛋白質的表現量，其結果如圖1所示。關於抽取蛋白質及西方墨點分析法誠屬本發明所屬技術領域具有通常知識者所熟知，在此不另贅述細節。

請參閱圖1，其顯示根據本發明一實施例之數株抗胃蛋白酶抗體對胃蛋白酶的西方墨點分析圖，其中箭頭101所指處為胃蛋白酶的色帶。

由圖1的結果可知，抗胃蛋白酶抗體株85-5、抗體株90-1以及抗體株HP-1皆可檢測到唾液檢體中的胃蛋白酶。

1.3建立抗胃蛋白酶單株抗體檢測胃蛋白酶的標準曲線

此實施例利用三明治ELISA法評估抗胃蛋白酶單株抗體檢測胃蛋白酶的效果。

前述之三明治ELISA法可使用習知方式進行。首先，將捕獲抗體(capture antibody)加入96孔細胞培養盤之各孔內，於4℃作用至隔夜，以固著於孔內，其中捕獲抗體包括抗胃蛋白酶抗體株85-5以及抗體株90-1(2μg/mL，溶於PBST，每孔50μL)。接著，將300μL之阻隔溶液〔含1% BSA之PBST〕加入孔內，於37℃進行阻隔反應達1小時。然後，將50μL經序列稀釋之胃蛋白酶〔溶於磷酸鹽緩衝溶液(PBS)中〕加入各孔內，於37℃進行反應達1小時。之後，將偵測抗體(detection antibody)加入各孔內，於37℃進行反應達1小時，其中偵測抗體包括結合生物素(biotin)的抗體株HP-1(2μg/mL，溶於1×PBST，每孔50μL)。

接著，加入鏈黴親和素(streptavidin)-HRP(溶於PBST中)作為二級抗體，於室溫(4℃至40℃)反應達30分鐘。然後，各孔加入50μL之TMB於37℃反應達10分鐘後，每孔加入50μL之1N硫酸(H₂SO₄)反應達10分鐘，以終止反應。之後，利用市售酵素免疫分析儀讀取450nm的吸光值，其結果如圖2及圖3所示，藉此驗證上述抗體辨識唾液檢體中的胃蛋白酶之標準曲線。在圖2及圖3中，每個數值為三重複。上述二級抗體的操作方式係參照製造商之操作手冊進行，此應為本發明所屬技術領域中任何具有通常知 識者所熟知，故不另贅述。

請參閱圖2，其係繪示本發明一實施例之數株抗胃蛋白酶抗體利用三明治ELISA法檢測胃蛋白酶的標準曲線圖，其中曲線201代表抗體株85-5與不同濃度之胃蛋白酶的標準曲線，曲線203代表抗體株90-1與不同濃度之胃蛋白酶的標準曲線。

由圖2的結果可知，抗胃蛋白酶抗體株85-5以及抗體株90-1分別與抗體株HP-1配對，皆可檢測到胃蛋白酶，且其分析靈敏度(或LOD)不低於62.5ng/mL。

1.4評估抗胃蛋白酶單株抗體檢測生物樣品的效果(I)

此實施例利用數個抗胃蛋白酶抗體株檢測胃食道逆流患者之唾液檢體的效果，其可使用與第1.3點或習知方式進行，不同之處在於抗原是用胃食道逆流患者之唾液檢體，其結果如圖3所示。

請參閱圖3，其係繪示本發明另一實施例之數株抗胃蛋白酶抗體利用三明治ELISA法檢測胃食道逆流患者之唾液檢體的曲線圖，其中曲線301代表抗體株85-5與不同序列稀釋倍率之胃蛋白酶的標準曲線，曲線303代表抗體株90-1與不同序列稀釋倍率之胃蛋白酶的標準曲線。

由圖3的結果可知，抗胃蛋白酶抗體株85-5以及抗體株90-1確實可檢測到唾液檢體中的胃蛋白酶，且於序列稀釋倍率高達400倍時，仍能檢測得到。

1.5評估抗胃蛋白酶單株抗體檢測生物樣品的效果(II)

此實施例利用數個抗胃蛋白酶抗體株檢測胃食道逆流患者或正常人之唾液檢體的效果，其可使用與第1.3點或習知方式進行，不同之處在於抗原是用胃食道逆流患者或正常人之唾液〔溶於磷酸鹽緩衝溶液(PBS)中〕，捕獲抗體包括抗胃蛋白酶抗體株85-5，偵測抗體包括結合生物素的抗體株HP-1(2μg/mL溶於含有1%BSA的PBST中)，並根據圖3之標準曲線回推檢體中的胃蛋白酶濃度，其結果如圖4A及圖4B所示。

請參閱圖4A及圖4B，其係繪示本發明一實施例之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組檢測生物樣品之胃蛋白酶的直條圖，其中圖4A是利用抗胃蛋白酶抗體株85-5與抗體株HP-1配對的檢測結果，而圖4B是利用抗體株90-1與抗體株HP-1配對的檢測結果。

由圖4A及圖4B的結果可知，抗胃蛋白酶抗體株85-5以及抗體株90-1分別與抗體株HP-1配對，皆可檢測到胃食道逆流患者之唾液檢體中的胃蛋白酶，且其含量皆高於4000ng/mL。相較之下，正常人的唾液檢體未檢出胃蛋白酶，確實可以快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白。

實施例二、建立及評估體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組(II)-檢測胃內因子(GIF)

2.1西方墨點分析法評估抗GIF單株抗體檢測生物樣品的 效果

此實施例利用上述第1.2點之西方墨點分析法評估抗GIF單株抗體檢測生物樣品的效果，不同之處在於一級抗體包括抗GIF抗體株50-1、抗體株16-1、抗體株15-3以及抗體株6-2，其結果如圖5所示。

請參閱圖5，其係顯示根據本發明一實施例之數株抗胃內因子抗體對胃內因子的西方墨點法的影像，其中箭頭501所指處為GIF的色帶。

由圖5的結果可知，抗GIF抗體株50-1、抗體株16-1、抗體株15-3以及抗體株6-2皆可檢測到唾液檢體中的GIF。

2.2建立抗GIF單株抗體檢測GIF的標準曲線

此實施例利用上述第1.3點之三明治ELISA法評估抗GIF單株抗體檢測生物樣品的效果，不同之處在於100μL經序列稀釋之GIF(溶於PBS中)加入各孔內，捕獲抗體包括抗GIF抗體株50-1，偵測抗體包括結合HRP的抗體株16-1(1μg/mL溶於含有1%BSA的PBST中)，其結果如圖6所示。

請參閱圖6，其係繪示本發明一實施例之數株抗胃內因子抗體利用三明治ELISA法檢測胃內因子的標準曲線圖。

由圖6的結果可知，抗GIF抗體株50-1與抗體株16-1配對，可檢測到GIF，且其分析靈敏度(或LOD)不低於 125ng/mL。

2.3評估抗GIF單株抗體檢測生物樣品的效果

此實施例利用數個抗GIF單株抗體檢測生物樣品的效果，其可使用與第1.3點或習知方式進行，不同之處在於抗原是用胃食道逆流患者或正常人之唾液〔溶於磷酸鹽緩衝溶液(PBS)中〕，捕獲抗體包括抗GIF抗體株50-1，偵測抗體包括結合HRP的抗體株16-1(1μg/mL溶於含有1%BSA的PBST中)，並根據圖6之標準曲線回推檢體中的GIF濃度，其結果如圖7所示。

請參閱圖7，其係繪示本發明一實施例之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組檢測生物樣品之胃內因子的直條圖，其中「N.D.」代表未檢出。

由圖7的結果可知，正常人的唾液檢體未檢出有GIF，而抗GIF抗體株50-1與抗體株16-1配對，可檢測到胃食道逆流患者之唾液檢體中的GIF，且其含量高於20000ng/mL，確實可以快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白。

補充說明的是，本發明數個實施例之抗胃蛋白酶抗體株及抗GIF抗體株具有良好的親和力及靈敏度，可應用於檢測胃源性蛋白的套組及方法，以於體外快速且準確檢測生物樣本中的胃源性蛋白含量。舉例而言，可同時使用上述同一種多個抗體株或不同種的抗胃蛋白酶抗體株及/或抗GIF抗體株，於體外檢測生物樣品，藉此獲得複數種免疫檢 測結果。關於適用的生物樣本、適用於檢測胃源性蛋白的方法、套組、元件/設備等已悉如前述，不再贅述。

綜言之，本發明雖以特定的單株抗體、特定的分析模式或特定的評估方式作為例示，說明本發明之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組，惟本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者可知，本發明並不限於此，在不脫離本發明之精神和範圍內，本發明之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組，亦可使用其他的分析模式或其他的評估方式進行。

由上述實施例可知，本發明之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法及套組，其優點在於根據複數種免疫檢測結果，快速且準確判斷生物樣品是否具有胃源性蛋白，可應用於判斷生物樣品或侵入式導管之置入胃部準確性。

雖然本發明已以數個實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，在本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (10)

1. 一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，包含：進行一第一免疫檢測步驟，以檢測一生物樣品中是否存在一胃蛋白酶，並獲得一第一檢測結果；進行一第二免疫檢測步驟，以檢測該生物樣品中是否存在一胃內因子，並獲得一第二檢測結果；以及根據該第一免疫檢測結果及該第二免疫檢測結果，判斷該生物樣品是否具有該胃源性蛋白，其中當該生物樣品具有該胃蛋白酶及該胃內因子之至少一者時，判斷該生物樣品具有該胃源性蛋白。
2. 根據申請專利範圍第1項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該第一免疫檢測步驟是使用專一性辨識該胃蛋白酶的一第一抗體進行，且該第一抗體為一單株抗體或一多株抗體。
3. 根據申請專利範圍第1項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該第二免疫檢測步驟是使用專一性辨識該胃內因子的一第二抗體進行，且該第二抗體為一單株抗體或一多株抗體。
4. 根據申請專利範圍第1項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該生物樣品包括一分泌物、一生物組織、一血液及上述任意組合。
5. 根據申請專利範圍第4項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該生物樣品係源自於口腔、食道、胃、腸道、氣管或一侵入式導管。
6. 根據申請專利範圍第5項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該侵入式導管包括一鼻胃管、一鼻腸管、一口胃管、一胃造屢口管或一空腸造瘻管。
7. 根據申請專利範圍第1項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該生物樣品係源自於一哺乳類動物。
8. 根據申請專利範圍第7項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該哺乳動物為人類。
9. 根據申請專利範圍第1項所述之體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的方法，其中該第一免疫檢測步驟與該第二免疫檢測步驟包含利用直接酵素連結免疫吸附分析(ELISA)法、間接ELISA法、三明治ELISA法、西方墨點分析法、競爭性ELISA、免疫組織化學染色、側層流分析法、多重免疫分析法、放射免疫分析法、免疫放射量測定分析法、螢光免疫分析法、化學發光免疫分析法及免疫濁度測定法之至少一者進行。
10. 一種體外檢測生物樣品之胃源性蛋白的套組，包括：一樣品導入單元，以於體外導入一生物樣品；一免疫檢測單元與該樣品導入單元接觸，其中該免疫檢測單元包含專一性辨識胃蛋白酶的一第一抗體以及專一性辨識胃內因子的一第二抗體；以及一顯示單元，以呈現該免疫檢測單元的一檢測結果。

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