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TWI752950B - 抗tim-3抗體及組成物 - Google Patents

抗tim-3抗體及組成物 Download PDF

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TWI752950B
TWI752950B TW106112034A TW106112034A TWI752950B TW I752950 B TWI752950 B TW I752950B TW 106112034 A TW106112034 A TW 106112034A TW 106112034 A TW106112034 A TW 106112034A TW I752950 B TWI752950 B TW I752950B
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Abstract

本發明係關於抗TIM-3抗體和抗體組成物和其等在患者中增強免疫力(例如以治療癌症)的用途。

Description

抗TIM-3抗體及組成物 相關申請案之交互參照
本申請案基於美國專利申請案62/321,476(其係於2016年4月12日提申，其揭示內容以其整體以引用方式併入本文中)主張優先權。
序列表
本申請案含有序列表，其已以ASCII格式電子呈送且特此以其整體以引用方式併入。該ASCII複本(其於2017年3月28日創造)被命名為022675WO053.txt且大小係150,698數元組。
本發明係關於抗TIM-3抗體和抗體組成物和其等之用途。
TIM-3(含T細胞免疫球蛋白和黏液素功能域3)(亦以HAVCR2(A型肝炎病毒細胞受體2)或CD366為人所知)係T細胞免疫球蛋白和黏液素功能域蛋白家族之成員。TIM-3在人類中係由Havcr2基因編碼且係一個具有膜遠端IgV功能域和膜近端黏液素功能域的33kDa第I型糖 蛋白。其含有在細胞內功能域中的五個Tyr殘基之保留性區域，其等在配體結合後被磷酸化。TIM-3係由一個範圍的源自免疫系統之適應性和先天性分枝兩者的不同細胞(包括T細胞、樹突細胞、巨噬細胞、和天然殺手(NK)細胞)表現。TIM-3表現在初始T細胞上係低的但在T細胞活化後變得被高度上調。與T細胞相反，先天細胞(諸如樹突細胞、NK細胞和單核球)具有高基礎TIM-3表現。已將TIM-3與數種(大部分為雜亂的)配體(包括半乳糖凝集素-9(galectin-9)、磷脂絲胺酸、CEACAM-1和HMGB-1)連結起來，但此等配體之確切角色目前是未知的。
雖然已建議TIM-3為查核點抑制子，僅有相對稀少的證據支持以下見解：TIM-3以類似於(例如)PD-1的方式直接介導T細胞活化或細胞介素分泌之抑制。此外，且與PD-1相反，TIM-3似乎於先天系統之細胞(且特別是樹突細胞)之調節扮演某種角色。與TIM-3和其於腫瘤免疫學中之角色相關的功能性數據中之大部分係來自使用種種抗體的活體內研究。於此等研究之大多數中，由於差的抗體確認，不清楚TIM-3抗體之功效是否係由配體結合之抑制或由對目標的促效功效介導。
鑑於其免疫反應調節特性，已於作為用於免疫治療(包括用於治療癌症和自體免疫疾病)之有潛力的目標方面研究TIM-3。單一抗TIM-3抗體目前正在臨床開發中，但目前並無已核准的抗TIM-3抗體。
鑑於TIM-3作為免疫調節子的關鍵角色，存在有對於新穎且改善的靶向TIM-3以治療癌症和某些免疫系統之失調的免疫治療之需求。
本發明係針對靶向TIM-3的新穎重組抗體、以及包含此等抗體(例如透過對TIM-3的活性活化諸如專職抗原呈現細胞(例如樹突細胞和巨噬細胞)和T細胞(例如輔助性T細胞和細胞毒性T細胞)的種種免疫細胞之抗TIM-3抗體)之一或多者的醫藥組成物。本發明亦係針對該等抗體和醫藥組成物用於在患者中增強免疫力的用途、和用於治療源自諸如皮膚、肺臟、腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟的組織之癌症的用途。相較於目前可用於如此癌症的治療(包括抗體治療)，設想到本發明之抗體無論是單獨或是與另一種癌症治療(諸如靶向另一種免疫查核點蛋白的抗體)組合皆可提供優越的臨床反應。
於一些實施方式中，本發明提供抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中該抗TIM-3抗體係於本文中稱作抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144、20131、20293、15105、15107、15109、15174、15175、15260、15284、15299、15353、15354、17244、17245、19324、19416、19568、20185、20300、20362、或20621的抗體或此等之任一者之變體，其中該變體可(例如)相對於該抗體含有某些最小胺基酸改變(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個胺基酸改變，其可(例如)位於架構區域)而無喪失抗體之抗原結合專一性。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體與以下者之任一者競爭對人類TIM-3之結合、或與以下者之任一者結合至人類TIM-3之相同表位：抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144、20131、20293、15105、15107、15109、15174、15175、15260、15284、15299、15353、15354、 17244、17245、19324、19416、19568、20185、20300、20362、和20621。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含包括SEQ ID NO：9、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、或232之H-CDR3胺基酸序列的H-CDR3。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含分別包含SEQ ID NO：7-9、30-32、40-42、50-52、60-62、70-72、80-82、90-92、100-102、110-112、120-122、130-132、140-142、150-152、160-162、170-172、180-182、190-192、200-202、210-212、220-222、或230-232之H-CDR1-3序列的H-CDR1-3。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有在胺基酸序列上與SEQ ID NO：3、15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228至少90%(例如至少92%、至少95%、至少98%、或至少99%)一致的重鏈可變功能域(VH)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：3、15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228的VH。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：3、15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228之VH胺基酸序列和SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23、24或25之重鏈恆定區域(CH)胺基酸序列的重鏈(HC)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含包括SEQ ID NO：12、35、45、55、65、75、85、95、105、115、125、135、145、155、165、175、185、195、205、215、225、或235之L-CDR3胺基酸序列的L-CDR3。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含分別包含SEQ ID NO：10-12、33-35、43-45、53-55、63-65、73-75、83-85、93-95、103-105、113-115、123-125、133-135、143-145、153-155、163-165、173-175、183-185、193-195、203-205、213-215、223-225、或233-235之L-CDR1-3序列的L-CDR1-3。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有在序列上與SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之VL胺基酸序列至少90%(例如至少92%、至少95%、至少98%、或至少99%)一致的輕鏈可變功能域(VL)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之VL胺基酸序列的VL。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之VL胺基酸序列和SEQ ID NO：6之輕鏈恆定區域胺基酸序列的輕鏈(LC)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含以上重鏈序列之任一者和以上輕鏈序列之任一者。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含分別包含SEQ ID NO：9和12、32和35、42和45、52和55、62和65、72和75、82和85、92和95、102和105、112和115、122和125、132和135、142和145、152和155、162和165、172和175、182和185、192和195、202和205、212和215、222和225、及232和235之H-CDR3和L-CDR3胺基酸序列的H-CDR3 和L-CDR3。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含分別包含SEQ ID NO：7-12、30-35、40-45、50-55、60-65、70-75、80-85、90-95、100-105、110-115、120-125、130-135、140-145、150-155、160-165、170-175、180-185、190-195、200-205、210-215、220-225、或230-235之H-CDR1-3和L-CDR1-3序列的H-CDR1-3和L-CDR1-3。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有在序列上與SEQ ID NO：3、15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228之胺基酸序列至少90%(例如至少92%、至少95%、至少98%、或至少99%)一致的VH、和在序列上與SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之胺基酸序列至少90%(例如至少92%、至少95%、至少98%、或至少99%)一致的VL。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：3、15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228之胺基酸序列的VH、和包含SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之胺基酸序列的VL。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之胺基酸序列和SEQ ID NO：6之胺基酸序列的LC；和包含(i)SEQ ID NO：3、28、38、48、58、68、78、88、98、108、 118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228之胺基酸序列和SEQ ID NO：5之胺基酸序列、或(ii)SEQ ID NO：15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228之胺基酸序列和SEQ ID NO：23、24或25之胺基酸序列的HC。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分包含以下者之H-CDR1-3和L-CDR1-3胺基酸序列：a)SEQ ID NO：7-12，分別地；b)SEQ ID NO：30-35，分別地；c)SEQ ID NO：40-45，分別地；d)SEQ ID NO：50-55，分別地；e)SEQ ID NO：60-65，分別地；f) SEQ ID NO：70-75，分別地；g)SEQ ID NO：80-85，分別地；h)SEQ ID NO：90-95，分別地；i)SEQ ID NO：100-105，分別地；j)SEQ ID NO：110-115，分別地；k)SEQ ID NO：120-125，分別地；l)SEQ ID NO：130-135，分別地；m)SEQ ID NO：140-145，分別地；n)SEQ ID NO：150-155，分別地；o)SEQ ID NO：160-165，分別地； p)SEQ ID NO：170-175，分別地；q)SEQ ID NO：180-185，分別地；r)SEQ ID NO：190-195，分別地；s)SEQ ID NO：200-205，分別地；t)SEQ ID NO：210-215，分別地；u)SEQ ID NO：220-225，分別地；或v)SEQ ID NO：230-235，分別地。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分與其重鏈和輕鏈可變功能域包含以下胺基酸序列的抗體競爭對人類TIM-3之結合或與其重鏈和輕鏈可變功能域包含以下胺基酸序列的抗體結合至人類TIM-3之相同表位：a)SEQ ID NO：3和4，分別地；b)SEQ ID NO：15和4，分別地；c)SEQ ID NO：28和29，分別地；d)SEQ ID NO：38和39，分別地；e)SEQ ID NO：48和49，分別地；f)SEQ ID NO：58和59，分別地；g)SEQ ID NO：68和69，分別地；h)SEQ ID NO：78和79，分別地；i)SEQ ID NO：88和89，分別地；j)SEQ ID NO：98和99，分別地；k)SEQ ID NO：108和109，分別地； l)SEQ ID NO：118和119，分別地；m)SEQ ID NO：128和129，分別地；n)SEQ ID NO：138和139，分別地；o)SEQ ID NO：148和149，分別地；p)SEQ ID NO：158和159，分別地；q)SEQ ID NO：168和169，分別地；r)SEQ ID NO：178和179，分別地；s)SEQ ID NO：188和189，分別地；t)SEQ ID NO：198和199，分別地；u)SEQ ID NO：208和209，分別地；v)SEQ ID NO：218和219，分別地；或w)SEQ ID NO：228和229，分別地。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分包含具有與以下胺基酸序列至少90%一致的胺基酸序列的重鏈可變功能域和輕鏈可變功能域：a)SEQ ID NO：3和4，分別地；b)SEQ ID NO：15和4，分別地；c)SEQ ID NO：28和29，分別地；d)SEQ ID NO：38和39，分別地；e)SEQ ID NO：48和49，分別地；f) SEQ ID NO：58和59，分別地；g)SEQ ID NO：68和69，分別地； h)SEQ ID NO：78和79，分別地；i)SEQ ID NO：88和89，分別地；j)SEQ ID NO：98和99，分別地；k)SEQ ID NO：108和109，分別地；l)SEQ ID NO：118和119，分別地；m)SEQ ID NO：128和129，分別地；n)SEQ ID NO：138和139，分別地；o)SEQ ID NO：148和149，分別地；p)SEQ ID NO：158和159，分別地；q)SEQ ID NO：168和169，分別地；r)SEQ ID NO：178和179，分別地；s)SEQ ID NO：188和189，分別地；t)SEQ ID NO：198和199，分別地；u)SEQ ID NO：208和209，分別地；v)SEQ ID NO：218和219，分別地；或w)SEQ ID NO：228和229，分別地。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分包含其可變功能域具有以下胺基酸序列的重鏈和輕鏈：a)SEQ ID NO：3和4，分別地；b)SEQ ID NO：15和4，分別地；c)SEQ ID NO：28和29，分別地；d)SEQ ID NO：38和39，分別地； e)SEQ ID NO：48和49，分別地；f)SEQ ID NO：58和59，分別地；g)SEQ ID NO：68和69，分別地；h)SEQ ID NO：78和79，分別地；i)SEQ ID NO：88和89，分別地；j)SEQ ID NO：98和99，分別地；k)SEQ ID NO：108和109，分別地；l)SEQ ID NO：118和119，分別地；m)SEQ ID NO：128和129，分別地；n)SEQ ID NO：138和139，分別地；o)SEQ ID NO：148和149，分別地；p)SEQ ID NO：158和159，分別地；q)SEQ ID NO：168和169，分別地；r)SEQ ID NO：178和179，分別地；s)SEQ ID NO：188和189，分別地；t)SEQ ID NO：198和199，分別地；u)SEQ ID NO：208和209，分別地；v)SEQ ID NO：218和219，分別地；或w)SEQ ID NO：228和229，分別地。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體包含：a)包含SEQ ID NO：3和5之胺基酸序列的重鏈(HC)和包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的輕鏈(LC)； b)包含SEQ ID NO：28和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：29和6之胺基酸序列的LC；c)包含SEQ ID NO：38和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：39和6之胺基酸序列的LC；d)包含SEQ ID NO：48和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：49和6之胺基酸序列的LC；e)包含SEQ ID NO：58和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：59和6之胺基酸序列的LC；f)包含SEQ ID NO：68和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：69和6之胺基酸序列的LC；g)包含SEQ ID NO：78和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：79和6之胺基酸序列的LC；h)包含SEQ ID NO：88和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：89和6之胺基酸序列的LC；i)包含SEQ ID NO：98和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：99和6之胺基酸序列的LC；j)包含SEQ ID NO：108和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：109和6之胺基酸序列的LC；k)包含SEQ ID NO：118和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：119和6之胺基酸序列的LC；l)包含SEQ ID NO：128和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：129和6之胺基酸序列的LC； m)包含SEQ ID NO：138和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：139和6之胺基酸序列的LC；n)包含SEQ ID NO：148和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：149和6之胺基酸序列的LC；o)包含SEQ ID NO：158和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：159和6之胺基酸序列的LC；p)包含SEQ ID NO：168和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：169和6之胺基酸序列的LC；q)包含SEQ ID NO：178和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：179和6之胺基酸序列的LC；r)包含SEQ ID NO：188和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：189和6之胺基酸序列的LC；s)包含SEQ ID NO：198和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：199和6之胺基酸序列的LC；t)包含SEQ ID NO：208和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：209和6之胺基酸序列的LC；u)包含SEQ ID NO：218和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：219和6之胺基酸序列的LC；或v)包含SEQ ID NO：228和5之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：229和6之胺基酸序列的LC。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體包含：a)包含SEQ ID NO：15和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：4和6之 胺基酸序列的LC；b)包含SEQ ID NO：28和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：29和6之胺基酸序列的LC；c)包含SEQ ID NO：38和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：39和6之胺基酸序列的LC；d)包含SEQ ID NO：48和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：49和6之胺基酸序列的LC；e)包含SEQ ID NO：58和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：59和6之胺基酸序列的LC；f)包含SEQ ID NO：68和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：69和6之胺基酸序列的LC；g)包含SEQ ID NO：78和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：79和6之胺基酸序列的LC；h)包含SEQ ID NO：88和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：89和6之胺基酸序列的LC；i)包含SEQ ID NO：98和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：99和6之胺基酸序列的LC；j)包含SEQ ID NO：108和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：109和6之胺基酸序列的LC；k)包含SEQ ID NO：118和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：119和6之胺基酸序列的LC；l)包含SEQ ID NO：128和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：129和6 之胺基酸序列的LC；m)包含SEQ ID NO：138和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：139和6之胺基酸序列的LC；n)包含SEQ ID NO：148和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：149和6之胺基酸序列的LC；o)包含SEQ ID NO：158和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：159和6之胺基酸序列的LC；p)包含SEQ ID NO：168和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：169和6之胺基酸序列的LC；q)包含SEQ ID NO：178和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：179和6之胺基酸序列的LC；r)包含SEQ ID NO：188和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：189和6之胺基酸序列的LC；s)包含SEQ ID NO：198和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：199和6之胺基酸序列的LC；t)包含SEQ ID NO：208和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：209和6之胺基酸序列的LC；u)包含SEQ ID NO：218和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：219和6之胺基酸序列的LC；或v)包含SEQ ID NO：228和23之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：229和6之胺基酸序列的LC。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體包含： a)包含SEQ ID NO：15和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的LC；b)包含SEQ ID NO：28和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：29和6之胺基酸序列的LC；c)包含SEQ ID NO：38和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：39和6之胺基酸序列的LC；d)包含SEQ ID NO：48和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：49和6之胺基酸序列的LC；e)包含SEQ ID NO：58和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：59和6之胺基酸序列的LC；f)包含SEQ ID NO：68和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：69和6之胺基酸序列的LC；g)包含SEQ ID NO：78和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：79和6之胺基酸序列的LC；h)包含SEQ ID NO：88和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：89和6之胺基酸序列的LC；i)包含SEQ ID NO：98和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：99和6之胺基酸序列的LC；j)包含SEQ ID NO：108和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：109和6之胺基酸序列的LC；k)包含SEQ ID NO：118和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：119和6之胺基酸序列的LC； l)包含SEQ ID NO：128和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：129和6之胺基酸序列的LC；m)包含SEQ ID NO：138和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：139和6之胺基酸序列的LC；n)包含SEQ ID NO：148和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：149和6之胺基酸序列的LC；o)包含SEQ ID NO：158和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：159和6之胺基酸序列的LC；p)包含SEQ ID NO：168和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：169和6之胺基酸序列的LC；q)包含SEQ ID NO：178和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：179和6之胺基酸序列的LC；r)包含SEQ ID NO：188和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：189和6之胺基酸序列的LC；s)包含SEQ ID NO：198和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：199和6之胺基酸序列的LC；t)包含SEQ ID NO：208和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：209和6之胺基酸序列的LC；u)包含SEQ ID NO：218和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：219和6之胺基酸序列的LC；或v)包含SEQ ID NO：228和24之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：229和6之胺基酸序列的LC。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體包含：a)包含SEQ ID NO：15和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的LC；b)包含SEQ ID NO：28和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：29和6之胺基酸序列的LC；c)包含SEQ ID NO：38和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：39和6之胺基酸序列的LC；d)包含SEQ ID NO：48和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：49和6之胺基酸序列的LC；e)包含SEQ ID NO：58和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：59和6之胺基酸序列的LC；f)包含SEQ ID NO：68和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：69和6之胺基酸序列的LC；g)包含SEQ ID NO：78和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：79和6之胺基酸序列的LC；h)包含SEQ ID NO：88和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：89和6之胺基酸序列的LC；i)包含SEQ ID NO：98和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：99和6之胺基酸序列的LC；j)包含SEQ ID NO：108和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：109和6之胺基酸序列的LC；k)包含SEQ ID NO：118和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：119和 6之胺基酸序列的LC；l)包含SEQ ID NO：128和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：129和6之胺基酸序列的LC；m)包含SEQ ID NO：138和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：139和6之胺基酸序列的LC；n)包含SEQ ID NO：148和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：149和6之胺基酸序列的LC；o)包含SEQ ID NO：158和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：159和6之胺基酸序列的LC；p)包含SEQ ID NO：168和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：169和6之胺基酸序列的LC；q)包含SEQ ID NO：178和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：179和6之胺基酸序列的LC；r)包含SEQ ID NO：188和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：189和6之胺基酸序列的LC；s)包含SEQ ID NO：198和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：199和6之胺基酸序列的LC；t)包含SEQ ID NO：208和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：209和6之胺基酸序列的LC；u)包含SEQ ID NO：218和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：219和6之胺基酸序列的LC；或v)包含SEQ ID NO：228和25之胺基酸序列的HC和包含SEQ ID NO：229和 6之胺基酸序列的LC。
於某些實施方式中，本發明提供抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中該抗體包含分別包含SEQ ID NO：7-12之胺基酸序列的H-CDR1-3和L-CDR1-3。
於某些實施方式中，本發明提供抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中該抗體包含包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列的VH和包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列的VL。
於特殊的實施方式中，本發明提供抗TIM-3抗體，其包含包括SEQ ID NO：15和25之胺基酸序列的重鏈和包括SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的輕鏈。
本發明亦提供抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其與包含SEQ ID NO：236之胺基酸殘基F61和I117的TIM-3之表位結合(例如抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144、20293、或20131)。於一些實施方式中，該表位進一步包含胺基酸殘基R69(例如抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144、或20293)。於其他實施方式中，該表位進一步包含P50、E62、M118、和D120(例如抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144、或20131)且可另外包含胺基酸殘基R69、V60、和G64(例如抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、或15086.17144)。
於特殊的實施方式中，該抗體或部分與包含SEQ ID NO：236之胺基酸殘基P50、V60、F61、E62、G64、R69、I117、M118、和D120的TIM-3之表位結合(例如抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、或 15086.17144)、與包含SEQ ID NO：236之胺基酸殘基F61、R69、和I117的TIM-3之表位結合(例如抗體20293)、或與包含SEQ ID NO：236之胺基酸殘基P50、F61、E62、I117、M118、和D120的TIM-3之表位結合(例如抗體20131)。
本發明亦提供單株抗體或其抗原結合部分，其與包含SEQ ID NO：236之胺基酸殘基62-67的TIM-3之表位結合(例如抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144、或20293)。此外，本發明提供單株抗體或其抗原結合部分，其與包含SEQ ID NO：236之胺基酸殘基114-117的TIM-3之表位結合(例如抗體20131)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係IgG抗體，例如人類IgG抗體。於某些實施方式中，該抗體在FC區域中包含至少一個突變。於特殊的實施方式中，該抗體包含在重鏈胺基酸位置228、233、234和235(根據IMGT編號格式編號)之一或多者中的突變。例如，位於位置234和235的胺基酸殘基之一或二者可被突變成Ala、及/或位於位置228的胺基酸殘基可被突變成Pro。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有以下特性之至少一者：a)以23nM或更低的KD與人類TIM-3結合，如由表面電漿子共振測量的；b)以22nM或更低的KD與食蟹獼猴TIM-3結合，如由表面電漿子共振測量的；c)以1.2nM或更低的EC50與人類TIM-3結合，如由ELISA測量的；d)以46nM或更低的EC50與食蟹獼猴TIM-3結合，如由ELISA測量的； e)於單向混合淋巴球反應分析中增加IFN-γ分泌；f)於雙向混合淋巴球反應分析中增加IFN-γ分泌；g)於單向混合淋巴球反應分析中增加TNF-α分泌；h)增加來自樹突細胞的TNF-α分泌；和i)抑制TIM-3與磷脂絲胺酸的交互作用。如此抗體之實例包括(不限於)抗體15086.15086(具有至少特性a、c、d、e、g、和h)；抗體15086.17145(具有至少特性a、c、d、e、g、h、和i)、抗體15086.16837或15086.17144(具有至少特性a、c、和d)、抗體20293或20131(具有至少特性a、b、c、d、e、f、和h)、抗體20362(具有至少特性c、e、f、和h)、和抗體19324、19416、19568、20185、20300、或20621(具有至少特性c、d、e、f、和h)。於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有該等特性之所有者。於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有至少特性a、c、d、e、g、和h。於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有至少特性a、c、d、e、g、h、和i。於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有至少特性a、c、和d。於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有至少特性a、b、c、d、e、f、和h。於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有至少特性c、e、f、和h。於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有至少特性c、d、e、f、和h。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分增加NK細胞之活性。於一些實施方式中，此活性可介導ADCC。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分 不與ABTIM3(來自PCT公開案WO 2015/117002)及/或mAb15(來自PCT公開案WO 2016/111947)競爭對TIM-3之結合。於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分不與ABTIM3及/或mAB15結合至相同表位；例如，本發明之抗體或部分結合至一或多個在TIM-3上不被ABTIM3及/或mAb15結合的殘基。
於其他方面，本發明提供包含以下者的醫藥組成物：至少一種如本文中描述的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分和醫藥上可接受的賦形劑、視需要地加上另外的治療劑，諸如化學治療劑、抗贅生物劑、抗血管形成劑、酪胺酸激酶抑制劑、或TIM-3途徑抑制劑。
本發明進一步提供經分離的核酸分子，其包含編碼如本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、編碼如本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或兩者。
本發明亦提供載體，其包含如此經分離的核酸分子，其中該載體視需要地進一步包含表現控制序列。
本發明亦提供宿主細胞，其包含編碼如本文中描述的抗TIM-3抗體之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、編碼如本文中描述的抗TIM-3抗體之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或兩者。
本發明亦提供用於製造如本文中描述的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分的方法，其包含提供包含編碼如本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列和編碼如本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列 的宿主細胞、在適用於該抗體或部分之表現的條件下培養該宿主細胞、和分離所得的抗體或部分。
本發明亦提供多重專一性(例如雙專一性)結合分子，其具有本文中描述的抗TIM-3抗體之抗原結合部分和另一個不同的抗體之(諸如另一個抗TIM-3抗體(例如另一個本文中描述的抗TIM-3抗體)或靶向不同蛋白質(諸如另一個免疫查核點蛋白、癌症抗原、或另一個其等之活性介導疾病狀況(諸如癌症)的細胞表面分子)的抗體之)抗原結合部分。
本發明亦提供用於在患者(例如人類患者)中增強免疫力的方法，其包含將如本文中描述的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分或多重專一性(例如雙專一性)結合分子投予至該患者。
本發明進一步提供用於在患者(例如人類患者)中治療癌症的方法，其包含將如本文中描述的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分或多重專一性(例如雙專一性)結合分子投予至該患者。於一些實施方式中，該癌症係源於選自由皮膚、肺臟、腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟所組成之群組的組織中。於一些實施方式中，該患者具有白血病(例如急性骨髓性白血病)、霍奇金氏淋巴瘤、或非霍奇金氏淋巴瘤。於一些實施方式中，該患者具有固態腫瘤(例如晚期或轉移性固態腫瘤)。於一些實施方式中，該患者具有黑色素瘤、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、或腎細胞癌。於某些實施方式中，該方法進一步包含投予化學治療劑、抗贅生物劑、抗血管形成劑、酪胺酸激酶抑制劑、及/或TIM-3途徑抑制劑。
本發明進一步提供如本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結 合部分或多重專一性(例如雙專一性)結合分子，其係用於以上提及的治療；該等抗體、抗原結合部分、或多重專一性結合分子作為用於以上提及的治療之醫藥品的用途；和該等抗體、抗原結合部分、或多重專一性結合分子用於製備用於以上提及的治療(即治療需要其的人類患者增強該患者之免疫系統、和治療患有癌症(諸如以上提及的癌症之一)的人類患者)之醫藥品的用途。本發明亦提供包含本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分或多重專一性(例如雙專一性)結合分子的製品、以及用於製造該等製品的方法。
圖1顯示抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144於單向混合淋巴球反應(MLR)分析中對於IFN-γ製造的劑量反應曲線。
圖2顯示抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144於單向MLR分析中對於TNF-α製造的劑量反應曲線。
圖3顯示抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144對經純化樹突細胞次組之功效，其係使用Meso Scale電致化學發光細胞介素分析以TNF-α水平測量。
圖4顯示在存在本發明之抗TIM-3抗體以及陽性對照組抗TIM-3抗體和兩種陰性對照組抗體下TIM-3-Fc與磷脂絲胺酸(PtdS)陽性(凋亡性)細胞的結合。A：本發明之抗TIM-3抗體[15086.17145]；B：陰性對照組非封阻性抗TIM-3抗體[15338.15338]；C：參考抗TIM-3抗體[18571.18571]； D：陰性對照組抗PD-1抗體吉舒達®(Keytruda®)(派姆單抗(pembrolizumab))。
圖5顯示九種抗TIM-3抗體於單向MLR分析中對於IFN-γ製造的劑量反應曲線。
圖6顯示十種抗TIM-3抗體於雙向MLR分析中對於IFN-γ製造的劑量反應曲線。抗體15086.17145係以「15086」顯示。
圖7顯示九種抗TIM-3抗體在來自兩個個別的供體之衍生自單核球的樹突細胞中對於TNF-α製造的劑量反應曲線。
圖8顯示由一組十八種抗TIM-3抗體之結合競爭分析鑑認的表位群組(表位倉(epitope bin))之概觀。以黑線連接的以圓圈圈起之抗體指示雙向交叉封阻活性。以正方形框起之抗體指示單向封阻(僅當該抗體係在溶液中測試時)。虛線指示單向封阻(僅當抗體被固定時)。抗體係根據與其他抗TIM-3抗體的競爭模式分組。抗體15086.17145係以「15086」顯示。
圖9顯示抗體表位在人類TIM-3 IgV功能域(PDB 5F71)之結構上的位置。人類TIM-3 IgV功能域之草圖係以三個不同的方向顯示且磷脂絲胺酸結合位置之位置被指出。對於各個抗體，被定位的表位之位置係在TIM-3空間填充模型上以暗色表示。Fab片段15086係以「15086」顯示且Fab片段20293係以「20293」顯示。
本發明提供新穎的抗人類TIM-3抗體，其可用於在人類患者(諸如癌症患者)中增強免疫系統。除非另加申明，用於本文中，「TIM-3」 係論及人類TIM-3。人類TIM-3多肽序列可以Uniprot登錄號Q8TDQ0(HAVR2_人類)獲得，於本文中以SEQ ID NO：236顯示。
用於本文中，術語「抗體」(Ab)或「免疫球蛋白」(Ig)係論及包含藉由二硫鍵彼此連接的兩個重(H)鏈(約50-70kDa)和兩個輕(L)鏈(約25kDa)的四聚體。各個重鏈係由重鏈可變功能域(VH)和重鏈恆定區域(CH)構成。各個輕鏈係由輕鏈可變功能域(VL)和輕鏈恆定區域(CL)構成。VH和VL功能域可被進一步細分成稱為「互補性決定區域」(CDR)之高度變異性區域，中間散佈著較保留的稱為「架構區域」(FR)之區域。各個VH和VL係由三個CDR(於本文中H-CDR稱呼來自重鏈的CDR；且於本文中L-CDR稱呼來自輕鏈的CDR)和四個FR構成，其等按以下順序從胺端向羧端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈或輕鏈中胺基酸編號之指定可根據IMGT®定義(Lefranc等人，Dev Comp Immunol 27(1)：55-77(2003))；或Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest(美國國家衛生研究院，貝什斯達，MD(1987和1991))；Chothia和Lcsk,J.Mol.Biol. 196：901-917(1987)；或Chothia等人，Nature 342：878-883(1989)之定義。
術語「重組抗體」係論及一種抗體，其自包含編碼該抗體的核苷酸序列之細胞或細胞系表現，其中該(等)核苷酸序列不天然與該細胞聯結。
術語「經分離的蛋白質」、「經分離的多肽」或「經分離的抗體」係論及蛋白質、多肽或抗體，其由於其衍生之根源或來源(1)不與於其天然狀態下伴隨其的天然聯結組份聯結，(2)不含來自相同物種的其他蛋白 質，(3)係由來自不同物種的細胞表現，及/或(4)不於自然中存在。因此，化學合成的或在與其所天然源自的細胞不同的細胞系統中合成的多肽會是自其天然聯結的組份「分離的」。蛋白質亦可藉由分離使用所屬技術領域中廣為人知的蛋白質純化技術而變得實質上不含天然聯結的組份。
用於本文中，術語「生殖系列」係論及抗體基因和基因節段之核苷酸和胺基酸序列，當其等係透過生殖細胞從親代傳遞給後代時。生殖系列序列與成熟B細胞中編碼抗體的核苷酸序列(其已於B細胞成熟之過程期間被重組和超突變事件改變)有區別。「利用」特殊生殖系列序列的抗體具有與該生殖系列核苷酸序列排比或相較於與任何其他生殖系列核苷酸或胺基酸序列與其所指明的胺基酸序列更密切地排比的核苷酸或胺基酸序列。
術語「親和力」係論及抗原與抗體間的吸引之度量。抗體對抗原之固有吸引力典型被表現成特定抗體-抗原交互作用之結合親和力平衡常數(KD)。當KD係
Figure 106112034-A0202-12-0028-410
1Mm(較佳係
Figure 106112034-A0202-12-0028-411
100Nm)時，抗體被認為專一性地與抗原結合。KD結合親和力常數可(例如)藉由表面電漿子共振(BIAcoreTM)或生物層干涉法(Bio-Layer Interferometry)(例如使用來自Bio-Rad的ProteOnTM XPR36 SPR系統或OctetTM系統)測量。
術語「koff」係論及特定抗體-抗原交互作用之解離速率常數。koff解離速率常數可藉由生物層干涉法(例如使用OctetTM系統)測量。
用於本文中，術語「表位」係論及與抗體或相關分子(諸如雙專一性結合分子)專一性結合的抗原之部分(決定子)。表位決定子一般由諸如胺基酸或碳水化合物或糖側鏈之分子的化學活性表面基團組成且一 般具有特殊的三度空間結構特徵，以及特殊的電荷特徵。表位可為「線性」或「構型性」。在線性表位中，所有蛋白質(例如抗原)和交互作用分子(諸如抗體)間的交互作用之點係沿著該蛋白質之一級胺基酸序列線性發生。在構型性表位中，交互作用之點橫跨在蛋白質上於一級胺基酸序列方面彼此分開的胺基酸殘基發生。一旦抗原上所欲的表位被測定出，就有可能去使用所屬技術領域中廣為人知的技術來產生針對該表位的抗體。例如，針對線性表位的抗體可(例如)藉由使用具有該線性表位之胺基酸殘基的胜肽致免疫動物來產生。針對構型性表位的抗體可(例如)藉由使用含有該構型性表位之相關胺基酸殘基的迷你功能域致免疫動物來產生。針對特定表位的抗體亦可(例如)藉由使用所關注的目標分子或其相關部分(例如TIM-3之ECD)致免疫動物、接著針對該表位的結合作篩選來產生。
咸可藉由使用所屬技術領域中已知的方法(包括(不限於)競爭分析、表位分倉(epitope binning)、和丙胺酸掃描)測定抗體是否與本發明之抗TIM-3抗體結合相同表位或競爭結合。於一些實施方式中，測試抗體和本發明之抗TIM-3抗體與TIM-3上的至少一個共同殘基(例如至少二、三、四、五、六、七、八、或九個共同殘基)結合。於進一步的實施方式中，在TIM-3上的接觸殘基於測試抗體和本發明之抗TIM-3抗體間係全然一致。於一個實施方式中，咸允許本發明之抗TIM-3抗體在飽和條件下與TIM-3結合並接著測量測試抗體與TIM-3結合的能力。若該測試抗體和參考抗TIM-3抗體能夠同時與TIM-3結合，則該測試抗體和參考抗TIM-3抗體與不同表位結合。然而，若該測試抗體無法同時與TIM-3結合，則該測試抗體與相同的表位、重疊的表位、或極接近本發明之抗TIM-3抗體所 結合的表位之表位結合。此實驗可使用(例如)ELISA、RIA、BIACORETM、生物層干涉法或流動式細胞測量術執行。為測試抗TIM-3抗體是否與另一個抗TIM-3抗體交叉競爭，咸可以雙向使用以上描述的競爭方法(即測定已知抗體是否封阻測試抗體且反之亦然)。如此交叉競爭實驗可(例如)使用IBIS MX96 SPR儀器或the OctetTM系統執行。
於某些例子中，改變一或多個CDR胺基酸殘基以改善對目標表位的結合親和力可能係所欲的。此以「親和力成熟」為人所知。種種親和力成熟方法係所屬技術領域中已知的(例如由Burks等人，Proc Natl Acad Sci USA, 94：412-417(1997)描述的試管內掃描飽和突變誘發方法、和Wu等人，Proc Natl Acad Sci USA 95：6037-6042(1998)之逐步試管內親和力成熟方法。
用於本文中，術語抗體之「抗原結合部分」(或簡稱「抗體部分」)係論及抗體之一或多個部分或片段，其保留與抗原(例如人類TIM-3、或其部分)專一性結合的能力。咸已顯示全長抗體之某些片段可執行該抗體之抗原結合功能。術語「抗原結合部分」內包含的結合片段之實例包括(i)Fab片段：由VL、VH、CL和CH1功能域所組成的單價片段；(ii)F(ab')2片段：包含二個Fab片段(其等藉由位於樞紐區域的二硫橋連接)的二價片段；(iii)由VH和CH1功能域所組成的Fd片段；(iv)由抗體之單一臂的VL和VH功能域所組成的Fv片段、(v)dAb片段，其由VH功能域組成；和(vi)能夠與抗原專一性結合之分離的互補性決定區域(CDR)。此外，雖然Fv片段之二個功能域(VL和VH)係由分開的基因編碼，其等可使用重組方法藉由合成性連接子連接在一起，該連接子使其等可以其中VL和VH功能域配 對以形成單價分子(以單鏈Fv(scFv)為人所知)的單一蛋白質鏈之形式製造。亦於本發明內者係包含VH及/或VL的抗原結合分子。於VH之例子中，該分子亦可包含CH1、樞紐、CH2、或CH3區域之一或多者。如此單鏈抗體亦意欲被術語抗體之「抗原結合部分」涵蓋。單鏈抗體之其他形式(諸如雙體(diabody))亦被涵蓋。雙體係二價雙專一性抗體，其中VH和VL功能域係在單一多肽鏈上表現，但使用過短而無法允許在相同鏈上的該二個功能域間之配對的連接子，藉此強迫該等功能域與另一個鏈之互補功能域配對並創造出二個抗原結合位置。
抗體部分(諸如Fab和F(ab')2片段)可自完整抗體使用習用技術(諸如完整抗體之木瓜酵素或胃蛋白酶消化)製備。此外，抗體、抗體部分和免疫黏附分子可使用標準重組DNA技術(例如如本文中描述者)獲得。
抗TIM-3抗體之類型(同型)和亞型可藉由任何所屬技術領域中已知的方法測定。一般而言，抗體之類型和亞型可使用對抗體之特定類型和亞型有專一性的抗體測定。如此抗體係商業上可購得的。類型和亞型可藉由ELISA、西方墨漬以及其他技術測定。供選擇地，類型和亞型可藉由定序整個該等抗體之重鏈及/或輕鏈之恆定區域或其部分、比較其等之胺基酸序列與免疫球蛋白之種種類型和亞型之已知胺基酸序列、和確定該等抗體之類型和亞型來測定。
當提及位於抗體序列之給定位置的特殊胺基酸殘基時，(例如)「35S」的指示係論及位置和殘基，即於此實例中指示絲胺酸殘基(S)係存在於該序列之位置35。類似地，(例如)「13Q+35S」之指示係論及位於 各自位置的二個殘基。
除非另加指出，本文之揭示內容中提及的所有抗體胺基酸殘基編號係該等按照IMGT®編號格式者。
抗TIM-3抗體
本發明提供針對TIM-3的抗體、和其抗原結合部分。於特殊的實施方式中，本文中揭示的抗體係自能夠產生具有人類個體遺傳型的抗體之基因轉殖大鼠產生的人類抗體。
本發明之新穎抗TIM-3抗體的優點之一係其等可有力地活化樹突細胞(參見(例如)實施例4)。雖然無意受限於任何特定理論，咸相信本發明之抗TIM-3抗體能夠透過樹突細胞之活化刺激T細胞(例如腫瘤T細胞專一性)。此外，本申請案首次展示同型IgG1或IgG2之抗TIM-3抗體具有高活性水平而同型IgG4或IgG1-LALA之抗體無功能或功能差(參見(例如)實施例3和4)。無意受限於任何特定理論，發明人之數據建議可透過Fc受體交叉連結TIM-3的抗TIM-3抗體係免疫系統之特別有力的活化劑。例如，本發明之抗TIM-3 IgG2抗體可與在樹突細胞上找到的Fc γ R2A結合，且咸相信其會藉由交叉連結樹突細胞上的TIM-3分子來活化樹突細胞。
本文中揭示的抗TIM-3抗體可以5位數編號(例如「20131」)或以10位數編號(例如「15086.16837」)來提及。具有相同首五位數的10位數編號係衍生自相同的親代抗體，如於抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144之例子中。咸預期如此抗體(其等共有相同的六 個CDR)會具有相同的或實質上相同的目標結合特性。如基於本文中提供的蛋白質和DNA序列會很明顯的，15086.16837、15086.17145、和15086.17144變體相較於親代15086抗體(「15086.15086」)僅僅具有一個在VH序列中的胺基酸差異，即在位置6為E而非Q，而其等之VL胺基酸序列係一致的。以下者亦係明顯的：此等變體差異主要在其等之抗體型式/亞型，即：15086.15086：IgG1
15086.16837：IgG1 LALA
15086.17145：IgG2
15086.17144：IgG4
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：7-9之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：3和5之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：10-12之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：7-12之胺基酸序列的抗體； j)其VH在序列上與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：3和5之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：7-9之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：15和25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：10-12之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：7-12之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：4之胺 基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：15和25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：7-9之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列和SEQ ID NO：23或24之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：10-12之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：7-12之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列和SEQ ID NO：23或24之胺基酸 序列；且其LC包含SEQ ID NO：4和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：30-32之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：28之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：28和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：33-35之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：29之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：29和6之胺基酸序列抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：30-35之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：28之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：29之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：29和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：40-42之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：38之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：43-45之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：39之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：39和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：40-45之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：38之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：39之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：39和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成 之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：50-52之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：48之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：48和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：53-55之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：49之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：49和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：50-55之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：48之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：49之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：49和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組： a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：60-62之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：58之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：63-65之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：59之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：59和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：60-65之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：58之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：59之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：59和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：70-72之胺基酸序列的抗體； b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：68之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：68和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：73-75之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：69之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：69和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：70-75之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：68之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：69之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：69和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：80-82之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：78之胺基酸序列至少 90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：78之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：78和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：83-85之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：79之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：79和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：80-85之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：78之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：79之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：78之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：79之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：78之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：79和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：90-92之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：88之胺基酸序列至少90%一致的抗體； c)其VH包含SEQ ID NO：88之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：88和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：93-95之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：89之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：89和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：90-95之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：88之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：89之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：88之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：89之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：88之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：89和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：100-102之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：98之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：98之胺基酸序列的抗體； d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：98和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：103-105之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：99之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：99和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：100-105之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：98之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：99之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：98之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：99之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：98之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：99和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：110-112之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：108之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：108之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：108和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺 基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：113-115之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：109之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：109之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：109和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：110-115之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：108之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：109之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：108之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：109之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：108之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：109和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：120-122之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：118之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：118之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：118和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體； e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：123-125之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：119之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：119和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：120-125之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：118之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：119之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：118之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：119之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：118之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：119和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：130-132之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：128之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：128之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：128和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：133-135之胺基酸序列的抗體； f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：129之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：129之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：129和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：130-135之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：128之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：129之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：128之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：129之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：128之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：129和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：140-142之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：138之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：138之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：138和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：143-145之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：139之胺基酸序列至少 90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：139之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：139和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：140-145之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：138之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：139之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：138之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：139之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：138之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：139和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：150-152之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：148之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：148之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：148和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：153-155之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：149之胺基酸序列至少90%一致的抗體； g)其VL包含SEQ ID NO：149之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：149和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：150-155之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：148之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：149之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：148之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：149之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：148之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：149和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：160-162之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：158之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：158之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：158和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：163-165之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：159之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：159之胺基酸序列的抗體； h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：159和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：160-165之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：158之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：159之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：158之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：159之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：158之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：159和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：170-172之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：168之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：168之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：168和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：173-175之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：169之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：169之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：169和6之胺基酸序列的抗體； i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：170-175之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：168之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：169之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：168之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：169之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：168之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：169和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：180-182之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：178之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：178之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：178和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：183-185之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：179之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：179之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：179和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：180-185之胺基酸序列的抗 體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：178之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：179之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：178之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：179之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：178之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：179和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：190-192之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：188之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：188之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：188和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：193-195之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：189之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：189之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：189和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：190-195之胺基酸序列的抗體； j)其VH在序列上與SEQ ID NO：188之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：189之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：188之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：189之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：188之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：189和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：200-202之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：198之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：198之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：198和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：203-205之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：199之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：199之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：199和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：200-205之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：198之胺基酸序列至少90%一致且其VL在 序列上與SEQ ID NO：199之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：198之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：199之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：198之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：199和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：210-212之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：208之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：208之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：208和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：213-215之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：209之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：209和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：210-215之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：208之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：209之胺基酸序列至少90%一致的抗體； k)其VH包含SEQ ID NO：208之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：209之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：208之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：209和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：220-222之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：218之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：218之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：218和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：223-225之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：219之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：219和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：220-225之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：218之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：219之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：218之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：219之 胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：218之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：219和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體係選自由以下者所組成之群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：230-232之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變功能域(VH)在序列上與SEQ ID NO：228之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：228之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：228和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：233-235之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變功能域(VL)在序列上與SEQ ID NO：229之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：229之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：229和6之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：230-235之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：228之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：229之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：228之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：229之胺基酸序列的抗體；和 l)其HC包含SEQ ID NO：228之胺基酸序列和SEQ ID NO：5、23、24、或25之胺基酸序列；且其LC包含SEQ ID NO：229和6之胺基酸序列的抗體。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體(或其抗原結合部分)與以下者競爭對人類TIM-3之結合或與以下者結合至人類TIM-3之相同表位：具有IgG1型式的抗體15086.15086、具有IgG1 LALA型式的抗體15086.16837、具有IgG2型式的抗體15086.17145、或具有IgG4型式的抗體15086.17144。於一些實施方式中，本發明之抗體係IgG。於一些實施方式中，本發明之抗體具有IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4型式。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體(或其抗原結合部分)與以下者競爭對人類TIM-3之結合或與以下者結合至人類TIM-3之相同表位：抗體20131、20293、15105、15107、15109、15174、15175、15260、15284、15299、15353、15354、17244、17245、19324、19416、19568、20185、20300、20362、或20621。於一些實施方式中，本發明之抗體具有IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4型式。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體(或其抗原結合部分)不與以下者競爭對人類TIM-3之結合或與以下者結合至人類TIM-3之相同表位：來自表位倉1的抗體(參考抗體mAb 15)、倉2的抗體(例如抗體15105和15107)、和倉8的抗體(例如抗體15174和15175)之任一者或所有者，如於以下實施例12中定義的。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體(或其抗原結合部分)不與以下者競爭對人類TIM-3之結合或與以下者結合至人類TIM-3之相同表位：來自表位倉2的抗體(例如抗體15105和15107)和倉8的抗 體(例如抗體15174和15175)之任一者或所有者，如於以下實施例12中定義的。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體(或其抗原結合部分)不與以下者競爭對人類TIM-3之結合或與以下者結合至人類TIM-3之相同表位：來自表位倉2的抗體(例如抗體15105和15107)之任一者或所有者，如於以下實施例12中定義的。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體與其重鏈(H)CDR1-3和輕鏈(L)CDR1-3分別包含以下者的抗體競爭對人類TIM-3之結合或與其重鏈(H)CDR1-3和輕鏈(L)CDR1-3分別包含以下者的抗體結合至人類TIM-3之相同表位：SEQ ID NO：7-12、30-35、40-45、50-55、60-65、70-75、80-85、90-95、100-105、110-115、120-125、130-135、140-145、150-155、160-165、170-175、180-185、190-195、200-205、210-215、220-225、或230-235。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體或抗原結合部分具有在序列上與SEQ ID NO：3、15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228至少90%一致(例如與該序列至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)的重鏈可變功能域(VH)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有在序列上與SEQ ID NO：3、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228至少90%一致(例如與該序列至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)的重鏈可變功能域(VH)；和在序列上與SEQ ID NO：5至少90%一致(例如與SEQ ID NO：5至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)的重鏈恆定區域(CH)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：3、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228之VH胺基酸序列和SEQ ID NO：5之CH胺基酸序列的重鏈(HC)
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有在序列上與SEQ ID NO：15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228至少90%一致(例如與該序列至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)的重鏈可變功能域(VH)；和在序列上與SEQ ID NO：23、24或25至少90%一致(例如與SEQ ID NO：23、24或25至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)的重鏈恆定區域(CH)。於特殊的實施方式中，該CH在序列上與SEQ ID NO：25至少90%一致(例如與SEQ ID NO：25至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：15、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、178、188、198、208、218、或228之VH胺基酸序列和SEQ ID NO：23、24或25之CH胺基酸序列的重鏈(HC)。於特殊的實施方式中，該重鏈包含SEQ ID NO：25之CH胺基酸序列。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有在序列上與SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、 169、179、189、199、209、219、或229之VL胺基酸序列至少90%一致(例如與該序列至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)的輕鏈可變功能域(VL)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有在序列上與SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之VL胺基酸序列至少90%一致(例如與該序列至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)的輕鏈可變功能域(VL)；和在序列上與SEQ ID NO：6至少90%一致(例如與SEQ ID NO：6至少95%一致，諸如至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致)輕鏈恆定區域(CL)。
於一些實施方式中，該抗TIM-3抗體具有包含SEQ ID NO：4、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、或229之VL胺基酸序列和SEQ ID NO：6之CL胺基酸序列的輕鏈(LC)。
於某些實施方式中，該抗TIM-3抗體包含以上描述的重鏈之任一者和以上描述的輕鏈之任一者。
於一些實施方式中，本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之任一者可抑制配體(諸如半乳糖凝集素-9、CEACAM1、HMGB-1、和磷脂絲胺酸)與TIM-3之結合。
於一個實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之投予可活化樹突細胞，造成其等之成熟並從而其等刺激T細胞之能力。雖然無意受限於特定理論，咸相信本發明之抗TIM-3抗體以TIM-3樹突細 胞活化劑之形式起作用，因此其等對樹突細胞之功效可用於刺激T細胞。在與腫瘤相關的環境中，該抗TIM-3抗體因此會造成與腫瘤聯結的樹突細胞之成熟和活化，導致腫瘤專一性T細胞之活化。
於一些實施方式中，本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之任一者可以至少100、至少50、至少40、至少30、至少25、至少20、至少15、至少10、至少9、至少8、至少7、或至少6nM之KD與人類TIM-3結合。於某些實施方式中，該KD係使用表面電漿子共振測定。
於一些實施方式中，本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之任一者可以至少100、至少50、至少40、至少30、至少25、至少24、至少23、至少22、至少21、或至少20nM之KD與食蟹獼猴TIM-3結合。於某些實施方式中，該KD係使用表面電漿子共振測定。
於一些實施方式中，本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之任一者可具有EC50
Figure 106112034-A0202-12-0060-412
2、1.5、1、0.5、0.4、0.3、0.2、或0.15nM之對人類TIM-3的結合性。於一些實施方式中，本文中描述的抗TIM-3抗體或抗原結合部分之任一者可具有EC50
Figure 106112034-A0202-12-0060-413
80、70、60、50、40、30、25、20、15、10、5、4、3、2、1.5、1、0.5、0.4、0.3、0.2、或0.15nM之對食蟹獼猴TIM-3的結合性。
於一個實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之投予可直接活化T細胞。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體(或其抗原結合部分)與包括SEQ ID NO：236之以下殘基之至少一者(例如至少一者、至少二者、至少三者、至少四者、至少五者、至少六者、至少七者、至少八 者、或至少九者)的TIM-3之表位結合：P50、V60、F61、E62、G64、R69、I117、M118、和D120。設想到具有以上殘基之任何組合的表位。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體(或其抗原結合部分)與包含SEQ ID NO：236之殘基62-67及/或114-117的TIM-3之表位結合。於一些實施方式中，該抗體或部分與SEQ ID NO：236之殘基62-67(或其片段，諸如一、二、三、四、或五個殘基的片段)結合(例如抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、15086.17144、和20293)。於一些實施方式中，該抗體或部分與SEQ ID NO：236之殘基114-117(或其片段，諸如一、二、或三個殘基的片段)結合(例如抗體20131)。亦設想到具有以上殘基之任何組合的表位。
藉由本文中描述的方法獲得之抗TIM-3抗體的類型可以另一個類型或亞型改變或轉換。於本發明之一個方面，編碼VL或VH的核酸分子係使用所屬技術領域中廣為人知的方法分離，使得其不包括編碼CL或CH的核酸序列。編碼VL或VH的核酸分子接著被操作性地連結至分別編碼CL或CH的核酸序列，形成不同類型的免疫球蛋白分子。此可使用包含如以上描述的CL或CH鏈之載體或核酸分子達成。例如，原來係IgM的抗TIM-3抗體可被類型轉換成IgG。此外，可使用類型轉換以將一種IgG亞型變換成另一者，例如從IgG1變換成IgG2。κ輕鏈恆定區域可被改變成λ輕鏈恆定區域。用於製造具有所欲之Ig同型的本發明之抗體的較佳方法包含以下步驟：分離編碼抗TIM-3抗體之重鏈的核酸分子和編碼抗TIM-3抗體之輕鏈的核酸分子，獲得該重鏈之可變功能域，將該重鏈之可變功能域與所欲同型之重鏈之恆定區域連接在一起，於細胞中表現該輕鏈和該經連 接的重鏈，並收集具有所欲的同型之抗TIM-3抗體。
本發明之抗TIM-3抗體可係IgG、IgM、IgE、IgA、或IgD分子，但典型係IgG同型(例如係IgG亞型IgG1、IgG2a或IgG2b、IgG3或IgG4)。於一個實施方式中，該抗體係IgG1。於另一個實施方式中，該抗體係IgG2。
於一個實施方式中，該抗TIM-3抗體可在FC區域中包含至少一個突變。一些不同的Fc突變係已知的，其中此等突變提供經改變的效應功能。例如，於許多例子中(例如在配體/受體交互作用係非所欲的情況下或於抗體-藥物綴合物之例子中)，減少或排除效應功能會係所欲的。可能有利於突變以減低效應功能的Fc區域胺基酸位置包括位置228、233、234和235之一或多者，其中胺基酸位置係根據IMGT®編號格式編號。
於一個實施方式中，位於位置234和235的胺基酸殘基之一或二者可經突變，例如自Leu至Ala(L234A/L235A)。此等突變減低IgG1抗體之Fc區域之效應功能。另外地或供選擇地，位於位置228的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Pro。於另一個實施方式中，位於位置233的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Pro，位於位置234的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Val，及/或位於位置235的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Ala。該等胺基酸位置係根據IMGT®編號格式編號。
於另一個實施方式中，於該抗體係IgG4亞型的情況下，其可包含突變S228P(即於位置228具有脯胺酸，其中該胺基酸位置係根據Eu IMGT®編號格式編碼)。已知此突變會減少非所欲的Fab臂交換(Angal等人，Mol Immunol. 30：105-8(1993))。
於某些實施方式中，本發明之抗體或其抗原結合部分可係更大的免疫黏附分子(其藉由該抗體或抗體部分與一或多個其他蛋白質或胜肽之共價或非共價聯結形成)之部分。如此免疫黏附分子之實例包括使用鏈霉抗生物素蛋白核心區域以製造四聚體scFv分子(Kipriyanov等人，Human Antibodies and Hybridomas 6：93-101(1995))和使用半胱胺酸殘基、標誌胜肽和C端聚組胺酸標籤以製造二價與經生物素化scFv分子(Kipriyanov等人，Mol.Immunol. 31：1047-1058(1994))。其他實例包括其中來自抗體的一或多個CDR被共價或非共價地併入至分子中以使其變成專一性地與所關注的抗原結合的免疫黏著素。於如此實施方式中，該(等)CDR可被併入作為更大的多肽鏈之部分，可共價地連結至另一個多肽鏈，或可被非共價地併入。
於另一個實施方式中，可製造融合抗體或免疫黏著素，其包含連結至另一個多肽的整個本發明之抗TIM-3抗體或其一部分。於某些實施方式中，僅僅該抗TIM-3抗體之可變功能域係連結至該多肽。於某些實施方式中，抗TIM-3抗體之VH功能域係連結至第一多肽，而抗TIM-3抗體之VL功能域係連結至第二多肽，該第二多肽與該第一多肽聯結，其連結方式使得該VH和VL功能域可彼此交互作用以形成抗原結合位置。於另一個較佳的實施方式中，該VH功能域係藉由連接子與該VL功能域分開，使得該VH和VL功能域可彼此交互作用(例如單鏈抗體)。該VH-連接子-VL抗體接著係連結至所關注的多肽。此外，融合抗體可被創造成其中二個(或更多個)單鏈抗體係彼此連結。若想要在單一多肽鏈上創造二價或多價抗體或若想要創造雙專一性抗體，此係有用的。
為創造單鏈抗體(scFv)，編碼VH和VL的DNA片段係操 作性地連結至編碼彈性連接子(例如編碼胺基酸序列(Gly4-Ser)3(SEQ ID NO：240))的另一個片段，使得該VH和VL序列可以鄰接單鏈蛋白質之形式表現，其中該VL和VH功能域係藉由該彈性連接子連接。參見(例如)Bird等人，Science 242：423-426(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883(1988)；和McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)。該單鏈抗體可係單價，若僅使用單一VH和VL；二價，若使用二個VH和VL；或多價，若使用超過二個VH和VL。例如，可產生雙專一性或多價抗體，其與人類TIM-3以及與另一個分子專一性地結合。
於其他實施方式中，可使用編碼抗TIM-3抗體的核酸分子製備其他經修飾的抗體。例如，可使用標準分子生物技術根據本說明書之教示製備「κ體」(Ill等人，Protein Eng. 10：949-57(1997))、「微體(minibody)」(Martin等人，EMBO J. 13：5303-9(1994))、「雙體」(Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993))、或「Janusin」(Traunecker等人，EMBO J. 10：3655-3659(1991)和Traunecker等人，Int.J.Cancer(補充)7：51-52(1992))。
本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分可被衍生化或連結至另一個分子(例如另一個胜肽或蛋白質)。一般而言，該等抗體或其部分被衍生化，其方式使得TIM-3結合不被該衍生化或標記不利地影響。據此，本發明之抗體和抗體部分意欲包括本文中描述的人類抗TIM-3抗體之完整和經修飾形式兩者。例如，本發明之抗體或抗體部分可被功能性地連結(藉由化學偶聯、基因融合、非共價聯結或其他)至一或多個其他分子實體，諸如另一個抗體(例如雙專一性抗體或雙體)、偵測劑、醫藥劑、及/或可介導該抗體或抗體部分與另一個分子之聯結的蛋白質或胜肽(諸如鏈霉抗生 物素蛋白核心區域或聚組胺酸標籤)。
一類經衍生化抗體係藉由交聯二或更多種抗體(相同類型的或不同類型的，例如以創造雙專一性抗體)製造。適合的交聯劑包括該等係異雙官能性者，其等具有二個藉由適當的間隔子(例如間-順丁烯二亞醯胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯)分開之不同的反應性基團或同雙官能性者(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)。如此連接子可得自(例如)Pierce Chemical Company，洛克福，Il。
抗TIM-3抗體亦可以化學基團(諸如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基基團、或碳水化合物基團)衍生化。此等基團可能係有用於改善該抗體之生物特徵，例如以增加血清半生期。
亦可標記根據本發明的抗體。用於本文中，術語「標記」或「經標記」係論及該抗體中另一個分子之併入。於一個實施方式中，該標記係可偵測的標誌，例如併入經放射性標記的胺基酸或接附至可藉由經標誌抗生物素蛋白偵測的生物素基部分之多肽(例如含有可藉由光學或比色方法偵測的螢光標誌或酵素活性之鏈霉抗生物素蛋白)。於另一個實施方式中，該標記或標誌可係治療性的，例如藥物綴合物或毒素。種種標記多肽和糖蛋白的方法係所屬技術領域中已知的且可使用其等。用於多肽的標記之實例包括(但不限於)以下者：放射性同位素或放射性核種(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、螢光標記(例如FITC、玫瑰紅、鑭族元素燐光體)、酵素性標記(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酯酶)、化學發光標誌、生物素基基團、被第二報導子辨識之預決定的多肽表位(例如白胺酸拉鍊對序列、第二抗體之結合 位置、金屬結合功能域、表位標籤)、磁性劑，諸如釓螫合物、毒素，諸如百日咳毒素、紫杉醇、細胞鬆弛素B、滅革蘭菌素D、溴化乙錠、吐根鹼、絲裂黴素、伊妥普賽(etoposide)、坦尼坡賽(tenoposide)、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙素、多柔比星(doxorubicin)、道諾黴素、二羥基炭疽菌素二酮、雙羥蒽(mitoxantrone)、光輝黴素(mithramycin)、放線菌素D、1-脫氫睪固酮、醣皮質素、普羅卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普魯泛奴洛(propranolol)、和嘌呤黴素和其等之類似物或同源物。於一些實施方式中，標記係藉由種種長度的間隔子臂接附以減少潛在的立體阻礙。
於某些實施方式中，本發明之抗體可以中性形式(包括兩性離子形式)存在或呈帶正電或帶負電物種。於一些實施方式中，該等抗體可與相對離子複合以形成醫藥上可接受的鹽。
術語「醫藥上可接受的鹽」係論及包含一或多個抗體和一或多個相對離子的複合物，其中該等相對離子係衍生自醫藥上可接受的無機和有機酸和鹼。
雙專一性結合分子
於進一步的方面，本發明提供雙專一性結合分子，其具有本文中描述的抗TIM-3抗體之結合專一性和另一個抗TIM-3抗體(例如另一個本文中描述的抗TIM-3抗體)或靶向不同蛋白質的抗體(諸如另一個免疫查核點蛋白質、癌症抗原、或其活性介導諸如癌症的疾病狀況之另一個細胞表面分子)之結合專一性。如此雙專一性結合分子係所屬技術領域中 已知的，且不同類型的雙專一性結合分子之實例係於本文中他處給出。
核酸分子和載體
本發明亦提供編碼本文中描述的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之核酸分子和序列。於一些實施方式中，不同核酸分子編碼該抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈和輕鏈胺基酸序列。於其他實施方式中，相同的核酸分子編碼該抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈和輕鏈胺基酸序列。
除非另加具體指明，提及核苷酸序列時涵蓋其互補物。因此，提及具有特殊序列之核酸應被理解成涵蓋其具有其互補序列之互補股。於本文中提及時，術語「多核苷酸」意謂長度上至少10個鹼基的核苷酸之多聚形式，無論是核糖核苷酸或去氧核苷酸或任一類型的核苷酸之經修飾形式。該術語包括單股和雙股形式。
本發明亦提供與一或多個於本文中敘述的核苷酸序列(例如與編碼選自由以下者所組成之群組的胺基酸序列之核苷酸序列：SEQ ID NO：3、4、7-12、15、28-35、38-45、48-55、58-65、68-75、78-85、88-95、98-105、108-115、118-125、128-135、138-145、148-155、158-165、168-175、178-185、188-195、198-205、208-215、218-225、和228-235)至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致的核苷酸序列。於核酸序列之前後文中，術語「百分比序列一致性」係論及在二個序列中當針對最大對應排比時係相同的殘基。序列一致性比較之長度可跨越至少約九個核苷酸、通常至少約18個核苷酸、更常至少約24個核苷酸、典型至少約28個核苷酸、 更典型至少約32個核苷酸、且較佳至少約36、48或更多個核苷酸的範圍。所屬技術領域中存在有一些可用於測量核苷酸序列一致性的已知之不同演算法。例如，多核苷酸序列可使用FASTA、Gap或Bestfit比較，其等係於Wisconsin Package版本10.0,Genetics Computer Group(GCG)，麥迪遜，威斯康辛中的程式。FASTA(其包括(例如)程式FASTA2和FASTA3)提供詢問和搜尋序列間的最佳重疊區域之排比和百分比序列一致性(參見(例如)Pearson,Methods Enzymol. 183：63-98(1990)；Pearson,Methods Mol.Biol. 132：185-219(2000)；Pearson,Methods Enzymol.266：227-258(1996)；和Pearson,J.Mol. Biol.276：71-84(1998)；其等係以引用方式併入本文中)。除非另加具體指明，使用特定程式或演算法之預設參數。例如，核酸序列間的百分比序列一致性可使用FASTA以其預設參數(6之序列長度(word size)和用於計分矩陣的NOPAM因數)測定或使用Gap以其預設參數測定(如於GCG版本6.1中提供的，其係以引用方式併入本文中)。
於一個方面，本發明提供包含選自由以下者所組成之群組的核苷酸序列的核酸分子：SEQ ID NO：1、2、13、14、26、27、36、37、46、47、56、57、66、67、76、77、86、87、96、97、106、107、116、117、126、127、136、137、146、147、156、157、166、167、176、177、186、187、196、197、206、207、216、217、226、和227。本發明亦提供包含與該等核苷酸序列之任一者至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致的核苷酸序列之核酸分子。
於以上實施方式之任一者中，該等核酸分子可係經分離的。編碼本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈及/或輕鏈的核酸分子 可自任何製造如此抗體或部分的來源分離。於種種實施方式中，該等核酸分子係自表現從以人類TIM-3抗原致免疫的動物分離之抗TIM-3抗體的B細胞分離、或從自如此B細胞製造的永生化細胞分離。分離編碼抗體的核酸之方法係所屬技術領域中廣為人知的。可分離mRNA並將其用於製造cDNA，以用於抗體基因之聚合酶連鎖反應(PCR)或cDNA選殖中。於某些實施方式中，本發明之核酸分子可被合成而非分離。
於一些實施方式中，本發明之核酸分子可包含編碼來自本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分的VH功能域之核苷酸序列，其符合讀框地連接至編碼來自任何來源的重鏈恆定區域之核苷酸序列。類似地，本發明之核酸分子可包含編碼來自本發明之抗TIM-3抗體或抗原結合部分的VL功能域之核苷酸序列，其符合讀框地連接至編碼來自任何來源的輕鏈恆定區域之核苷酸序列。
於本發明之進一步方面中，編碼該重(VH)及/或輕(VL)鏈之可變功能域的核酸分子可被「變換」成全長抗體基因。於一個實施方式中，編碼該VH或VL功能域的核酸分子被變換成全長抗體基因，其係藉由插入至已分別編碼重鏈恆定(CH)或輕鏈恆定(CL)功能域的表現載體中，使得該VH節段在該載體內被操作性地連結至該(等)CH節段、及/或該VL節段在該載體內被操作性地連結至該CL節段。於另一個實施方式中，編碼該VH及/或VL功能域的核酸分子被變換成全長抗體基因，其係藉由使用標準分子生物技術將編碼VH及/或VL功能域的核酸分子連結(例如連接)至編碼CH及/或CL功能域的核酸分子。編碼全長重鏈及/或輕鏈的核酸分子可接著從至其中該等核酸分子已被導入的細胞表現且該抗TIM-3 抗體被分離。
可使用該等核酸分子以重組地表現大量的抗TIM-3抗體。亦可使用該等核酸分子以製造(例如)嵌合抗體、雙專一性抗體、單鏈抗體、免疫黏著素、雙體、突變抗體和抗體衍生物，如本文中描述的。
於另一個實施方式中，本發明之核酸分子被用作為用於特定抗體序列的探針或PCR引子。例如，該核酸可於診斷方法中被用作為探針或被用作為PCR引子以擴增可被使用的DNA區域(特別是)以分離編碼抗TIM-3抗體的可變功能域之另外的核酸分子。於一些實施方式中，該等核酸分子係寡核苷酸。於一些實施方式中，該等寡核苷酸係來自所關注的抗體之重鏈和輕鏈之高度可變功能域。於一些實施方式中，該等寡核苷酸編碼完整的如本文中描述的本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之CDR之一或多者或其部分。
於另一個實施方式中，可使用該等核酸分子和載體以製造突變抗TIM-3抗體。可於重鏈及/或輕鏈之可變功能域中突變該等抗體，例如以改變該抗體之結合特性。例如，可於CDR之一或多者中作突變以增加或減少該抗TIM-3抗體之KD、以增加或減少koff、或以改變該抗體之結合專一性。於另一個實施方式中，於本發明之單株抗體中，於已知相較於生殖系列被改變的胺基酸殘基上作一或多個突變。可於可變功能域之CDR或架構區域中、或於恆定區域中作該等突變。於較佳的實施方式中，於可變功能域中作該等突變。於一些實施方式中，於本發明之抗體或其抗原結合部分之可變功能域之CDR或架構區域中，於已知相較於生殖系列被改變的胺基酸殘基作一或多個突變。
於另一個實施方式中，突變該(等)架構區域以使得所得的架構區域具有相對應生殖系列基因之胺基酸序列。可於架構區域或恆定區域作突變以增加該抗TIM-3抗體之半生期。參見(例如)PCT公開案WO 00/09560。亦可於架構區域或恆定區域中作突變以改變該抗體之致免疫性、及/或以提供用於與另一個分子共價或非共價結合之位置。根據本發明，單一抗體可於其可變功能域之CDR或架構區域之任一或多者或於其恆定區域具有突變。
於進一步的方面，本發明提供適用於表現如本文中描述的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之鏈之一或二者的載體。用於本文中，術語「載體」意謂一種核酸分子，其能夠運送其已與之連結的另一種核酸。於一些實施方式中，該載體係質體，即另外的DNA節段可被連接至其中的DNA之環狀雙股片段。於一些實施方式中，該載體係病毒載體，其中另外的DNA節段可被連接至其病毒基因組中。於一些實施方式中，該載體能夠在其等被導入至其中的宿主細胞內自我複製(例如具有細菌複製起點的細菌載體和附加體哺乳動物載體)。於其他實施方式中，該等載體(例如非附加體哺乳動物載體)可在被導入至宿主細胞後併入至宿主細胞之基因組中，並藉此隨著宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠指揮其等所操作性連結的基因之表現。如此載體於本文中被稱作「重組表現載體」(或簡稱「表現載體」)。
本發明提供包含編碼本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈、本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之輕鏈、或本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈和輕鏈兩者的核酸分子之載體。 本發明進一步提供包含編碼融合蛋白質、經修飾抗體、其抗體片段、和探針之核酸分子的載體。
於一些實施方式中，本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分係藉由以下者表現：將編碼部分或全長輕鏈和重鏈的DNA(如以上描述地獲得的)插入至表現載體中以使得該等基因被操作性地連結至必要的表現控制序列，諸如轉錄和轉譯控制序列。表現載體包括質體、反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、植物病毒，諸如花椰菜鑲嵌病毒、菸草鑲嵌病毒、黏質體、YAC、衍生自EBV的附加體、和類似者。可將該抗體編碼序列連接至載體中以使得該載體內的轉錄和轉譯控制序列發揮其等調節該抗體編碼序列之轉錄和轉譯的所欲功能。可挑選該表現載體和表現控制序列以與所使用的表現宿主細胞相容。可將該抗體輕鏈編碼序列和該抗體重鏈編碼序列插入至分開的載體中，且其等可操作性地連結至相同的或不同表現控制序列(例如啟動子)。於一個實施方式中，將該等編碼序列兩者插入至相同的表現載體中，且其等可操作性地連結至相同的表現控制序列(例如共同啟動子)、至分開的相同之表現控制序列(例如啟動子)、或至不同表現控制序列(例如啟動子)。可藉由標準方法(例如該抗體基因片段和載體上的互補限制位之連接、或鈍端連接，如不存在限制位)將該等抗體編碼序列插入至該表現載體中。
方便的載體係以下者：編碼功能性上完全的人類CH或CL免疫球蛋白序列、加上經工程設計以使得任何VH或VL序列可被輕易地插入和表現(如以上描述的)之適當的限制位。如此載體中之編碼HC的基因和編碼LC的基因可含有內含子序列，其會藉由穩定化相關mRNA來導致 整體抗體蛋白質產量之增加。該等內含子序列兩端鄰接剪接供體和剪接受體位置，其等決定RNA剪接會於那裡發生。內含子序列之位置可位於該抗體鏈之可變或恆定區域中、或於可變和恆定區域兩者中(當使用多個內含子時)。多腺苷酸化和轉錄終止可於該等編碼區域之下游的天然染色體位置發生。該重組表現載體亦可編碼促進該抗體鏈自宿主細胞分泌的訊息胜肽。可將該抗體鏈基因選殖入該載體中以使得該訊息胜肽被符合讀框地連結至該免疫球蛋白鏈之胺端。該訊息胜肽可係免疫球蛋白訊息胜肽或異源訊息胜肽(即來自非免疫球蛋白蛋白質的訊息胜肽)。
除了該抗體鏈基因外，本發明之重組表現載體可攜帶調節序列，其控制該抗體鏈基因於宿主細胞中的表現。所屬技術領域中具有通常知識者會領會到該表現載體之設計(包括調節序列之挑選)可取決於諸如以下者之因子：欲轉形的宿主細胞的選擇、所欲的蛋白質之表現水平、等等。用於哺乳動物宿主細胞表現之較佳的調節序列包括指揮在哺乳動物細胞中的蛋白質之高水平表現的病毒元件，諸如衍生自以下者的啟動子及/或增強子：反轉錄病毒LTR、細胞巨大病毒(CMV)(諸如CMV啟動子/增強子)、猿猴病毒40(SV40)(諸如SV40啟動子/增強子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))、多瘤和強哺乳動物啟動子，諸如天然免疫球蛋白和肌動蛋白啟動子。關於病毒調節元件和其序列之進一步描述，參見(例如)US專利案5,168,062、4,510,245和4,968,615。用於在植物中表現抗體的方法(包括啟動子和載體之描述、以及植物之轉形)係所屬技術領域中已知的。參見(例如)US專利6,517,529。在細菌細胞或真菌細胞(例如酵母菌細胞)中表現多肽的方法亦係所屬技術領域中廣為人知的。
除了該抗體鏈基因和調節性序列外，本發明之重組表現載體可攜帶另外的序列(諸如調節該載體在宿主細胞中的複製之序列，例如複製起點)和可篩選標記基因。可篩選標記基因促進至其中該載體已被導入的宿主細胞之篩選(參見(例如)US專利4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，典型地，可篩選標記基因將對藥物(諸如G418、濕黴素或胺甲喋呤)的抗性授於至其中該載體已被導入的宿主細胞。例如，可篩選標記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(用於利用胺甲喋呤篩選/擴增dhfr-宿主細胞)、neo基因(用於G418篩選)、和麩胺酸合成酶基因。
用於本文中，術語「表現控制序列」意謂對於引起其等與之連接的編碼序列之表現和加工而言係必須的多核苷酸序列。表現控制序列包括適當的轉錄起始、終止、啟動子和增強子序列；有效的RNA加工訊息，諸如剪接和多腺苷酸化訊息；穩定細胞質mRNA的序列；增強轉譯效能的序列(即Kozak共通序列)；增強蛋白質穩定性的序列；和當所欲時，增強蛋白質分泌的序列。如此控制序列之性質基於宿主生物體變化；於原核生物中，如此控制序列一般包括啟動子、核醣體結合位置、和轉錄終止序列；於真核生物中，一般，如此控制序列包括啟動子和轉錄終止序列。術語「控制序列」係意欲(最少)包括其存在對於表現和加工而言係必須的所有組份，且亦可包括其存在係有利的其他組份，例如前導序列和融合伙伴序列。
宿主細胞和抗體和抗體組成物製造之方法
本發明之另外的方面係關於用於製造本發明之抗體組成物和抗體和其抗原結合部分的方法。本發明之此方面之一個實施方式係關於 用於製造如於本文中界定的抗體之方法，其包含提供能夠表現該抗體的重組宿主細胞、在適用於該抗體之表現的條件下培養該宿主細胞、和分離所得的抗體。藉由於如此重組宿主細胞中的如此表現製造的抗體於本文中被稱作「重組抗體」。本發明亦提供如此宿主細胞之子代細胞、和由其製造的抗體。
用於本文中，術語「重組宿主細胞」(或簡稱「宿主細胞」)意謂重組表現載體已被導入至其中的細胞。本發明提供可包含(例如)以上描述之根據本發明的載體之宿主細胞。本發明亦提供包含(例如)編碼本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、編碼本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或兩者之宿主細胞。應理解「重組宿主細胞」和「宿主細胞」不止意謂特別的主題細胞但亦意謂如此細胞之子代。因為某些修飾可由於突變或環境影響而在隨後的世代中發生，如此子代可能(實際上)與親代細胞不完全相同，但仍被包括在用於本文中的術語「宿主細胞」之範圍內。
可將編碼抗TIM-3抗體的核酸分子和包含此等核酸分子的載體用於適合的哺乳動物、植物、細菌或酵母菌宿主細胞之轉染。轉形可藉由任何已知用於將多核苷酸導入至宿主細胞中的方法。將異源性多核苷酸導入至哺乳動物細胞中的方法係所屬技術領域中廣為人知的且包括右旋糖聚糖介導的轉染、磷酸鈣沈澱、Polybrene介導的轉染、原生質體融合、電穿孔、將多核苷酸封膠囊於脂質體中、和將DNA直接微注射至細胞核中。此外，可藉由病毒載體將核酸分子導入至哺乳動物細胞中。轉形細胞的方 法係所屬技術領域中廣為人知的。參見(例如)US專利4,399,216、4,912,040、4,740,461、和4,959,455。轉形植物細胞的方法係所屬技術領域中廣為人知的，包括(例如)農桿菌介導的轉形、生物彈道學轉形(biolistic transformation)、直接注射、電穿孔和病毒轉形。轉形細菌和酵母菌細胞的方法亦係所屬技術領域中廣為人知的。
可作為表現宿主得到的哺乳動物細胞系係所屬技術領域中廣為人知的且包括許多可得自美國菌種保存中心(ATCC)的永生細胞系。此等包括(特別是)中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NS0細胞、SP2細胞、HEK-293T細胞、293 Freestyle細胞(Invitrogen)、NIH-3T3細胞、HeLa細胞、嬰兒倉鼠腎臟(BHK)細胞、非洲綠猴腎臟細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞(例如Hep G2)、A549細胞、和一些其他細胞系。特別偏好的細胞系係藉由測定哪個細胞系具有高表現水平來挑選。可使用的其他細胞系係昆蟲細胞系(諸如Sf9或Sf21細胞)。當將編碼抗體基因的重組表現載體導入至哺乳動物宿主細胞中時，該等抗體係藉由以下者製造：培養該宿主細胞一段足以允許該抗體於該等宿主細胞中的表現或(更佳地)將該抗體分泌至該宿主細胞於其中生長的培養基之時間。可自該培養基使用標準蛋白質純化方法回收抗體。植物宿主細胞包括(例如)菸草屬、擬南芥屬(Arabidopsis)、浮萍、玉米、小麥、馬鈴薯、等等。細菌宿主細胞包括大腸桿菌和鏈黴菌屬物種。酵母菌宿主細胞包括粟酒裂殖酵母菌、啤酒釀母菌和巴斯德畢赤酵母菌(Pichia pastoris)。
此外，可使用一些已知技術增強本發明之抗體或其抗原結合部分自製造細胞系之表現。例如，麩醯胺酸合成酶基因表現系統(GS系統) 係用於在某些條件下增強表現的常見方法。GS系統係連結EP專利0 216 846、0 256 055、0 323 997和0 338 841完整或部分討論。
有可能由不同細胞系或於基因轉殖動物中表現的抗體會具有彼此不同的醣化模式。然而，由本文提供之核酸分子編碼或包含本文提供之胺基酸序列的所有抗體皆係本發明之部分，無論該等抗體之醣化狀態，且更一般而言，無論轉譯後修飾存在或不存在。
醫藥組成物
本發明之另一個方面係醫藥組成物，其包含作為一個活性成分(或作為唯一的活性成分)的本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、雙專一性結合分子、或抗TIM-3抗體組成物。該醫藥組成物可包含任何如本文中描述的抗TIM-3抗體組成物、雙專一性結合分子、或抗體或其抗原結合部分。於一些實施方式中，該組成物係意欲用於改善、預防、及/或治療與TIM-3相關的失調(例如特徵在於TIM-3或其配體之任一者的過度表現或過度活性之失調)及/或癌症。於一些實施方式中，該組成物係意欲用於活化免疫系統。於某些實施方式中，該組成物係意欲用於改善、預防、及/或治療源於諸如皮膚、肺臟、腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟的組織之癌症。
一般而言，本發明之抗體或其抗原結合部分或本發明之雙專一性結合分子係適用於以調配物的形式結合一或多個醫藥上可接受的賦形劑(例如如以下描述者)投予。
本發明之醫藥組成物會包含一或多種本發明之抗TIM-3抗 體或結合部分、或雙專一性結合分子，例如一或二種抗TIM-3抗體或結合部分或雙專一性結合分子。於一個實施方式中，該組成物包含單一種本發明之抗TIM-3抗體或其結合部分。
於另一個實施方式中，該醫藥組成物可包含至少一種抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，例如一種抗TIM-3抗體或部分、或一種雙專一性結合分子、和一或多種靶向一或多種相關細胞表面受體(例如一或多種與癌症相關的受體)之另外的抗體。
用於本文中，術語「賦形劑」係描述本發明之化合物以外的任何成分。賦形劑之選擇在很大程度上會取決於諸如以下者之因子：特殊的投予模式、賦形劑對溶解度和穩定性的效果、和劑量形式之特性。用於本文中，「醫藥上可接受的賦形劑」包括任何及所有溶劑、分散基質、塗層、抗細菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑、和生理上相容的類似者。醫藥上可接受的賦形劑之一些實例係水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇和類似者、以及其等之組合。於許多例子中，於該組成物中包括等張劑，例如糖、多元醇，諸如甘露醇、山梨醇、或氯化鈉會係較佳的。醫藥上可接受的物質之另外的實例係潤濕劑或微量的輔助物質，諸如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩衝劑，其等增加該抗體之保存期限或有效性。
本發明之醫藥組成物和用於其等之製備的方法對所屬技術領域中具有通常知識者而言會輕易地係明顯的。如此組成物和用於其等之製備的方法可於(例如)Remington’e Pharmaceutical Sciences，第19版(Mack Publishing Companv,1995)中找到。醫藥組成物較佳係在GMP(良好作業規範)條件下製造。
可以散裝、呈單一單位劑量、或呈複數個單一單位劑量製備、包裝、或販售本發明之醫藥組成物。用於本文中，「單位劑量」係個別量的該醫藥組成物，其包含預決定量的活性成分。活性成分之量一般等於會被投予至一對象的活性成分之劑量或如此劑量之方便的部分(諸如(例如)如此劑量之一半或三分之一)。
所屬技術領域中所接受的任何用於投予胜肽、蛋白質或抗體之方法可被合適地利用於本發明之抗體和抗原結合部分。
本發明之醫藥組成物典型係適用於非經腸投予。用於本文中，醫藥組成物之「非經腸投予」包括任何特徵在於以下者之投予途徑：物理突破一對象之組織並透過該組織中的突破口投予該醫藥組成物，因此一般造成直接投予至血流中、至肌肉中、或至內部器官中。非經腸投予因此包括(但不限於)藉由注射該組成物、藉由透過手術切口施用該組成物、藉由透過穿透組織的非手術傷口施用該組成物、和類似者來投予醫藥組成物。特別地，設想到非經腸投予包括(但不限於)皮下、腹膜內、肌肉內、胸骨內、靜脈內、動脈內、鞘內、室內、尿道內、顱內、和滑液膜內注射或輸注；和腎臟透析輸注技術。亦設想到區域性灌注。特別的實施方式包括靜脈內和皮下途徑。
適用於非經腸投予的醫藥組成物之調配物典型包含活性成分組合醫藥上可接受的載劑(諸如無菌水或無菌等張鹽水)。可以適用於大劑量投予(bolus administration)或連續投予的形式製備、包裝、或販售如此調配物。可以單位劑量形式(諸如在含有防腐劑的安瓿或多劑容器中)製備、包裝、或販售可注射調配物。用於非經腸投予的調配物包括(但不限 於)懸浮液、溶液、在油性或水性媒劑中的乳劑、糊劑、和類似者。如此調配物可進一步包含一或多種另外的成分，包括(但不限於)懸浮劑、穩定劑、或分散劑。在用於非經腸投予的調配物之一個實施方式中，該活性成分係以乾燥(即粉末或粒狀)形式提供以用於在非經腸投予經復水組成物前以適合的媒劑(例如無菌無熱原水)復水。非經腸調配物亦包括水溶液，其可含有賦形劑，諸如鹽、碳水化合物和緩衝劑(較佳至3至9的pH)，但(於一些應用中)可能更適合將其等調配成無菌非水溶液或成乾燥形式以結合適合的媒劑(諸如無菌、無熱原水)使用。例示性非經腸投予形式包括在無菌水溶液(例如丙二醇或右旋糖水溶液)中的溶液或懸浮液。若所欲，可適當地緩衝如此劑量形式。其他有用之可親代投予的調配物包括該等包含呈微晶質形式、或呈脂質體製劑的活性成分者。可調配用於非經腸投予的調配物以使其等被立即及/或修飾釋放。修飾釋放調配物包括延遲、持續、脈衝、控制、靶向和程式化釋放。
例如，於一個方面，可藉由以下者製備無菌可注射溶液：將所需量的該抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、雙專一性結合分子、或抗TIM-3抗體組成物及一種以上列舉的成分或其等之組合(按需要)併入適當的溶劑中，接著過濾滅菌。一般而言，分散劑係藉由以下者製備：將活性化合物併入至含有基礎分散介質和所需的來自該等以上列舉者之其他成分的無菌媒劑中。於用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末之例子中，較佳的製備方法係真空乾燥和冷凍乾燥，其產生來自其先前經無菌過濾的溶液之活性成分加上任何其他所欲成分之粉末。可藉由例如以下者維持溶液之適當的流動性：使用塗層，諸如卵燐脂、維持所需的粒子大小(於分散劑之例子 中)及使用介面活性劑。可藉由以下者得到可注射組成物之延長吸收：在該組成物中包括延遲吸收的劑，例如硬脂酸鹽和明膠、及/或使用修飾釋放塗層(例如緩釋塗層)。
本發明之抗體亦可被鼻內地投予或藉由吸入投予，典型係以來自乾燥粉末吸入器的乾燥粉末(單獨、呈混合物、或呈混合的組份粒子，例如與適合之醫藥上可接受的賦形劑混合)的形式、呈有或無使用適合的推進劑之來自加壓容器、泵甫、噴霧、霧化器(較佳為使用電流體力學以製造細霧的霧化器)、或噴霧器的氣溶膠噴霧、或呈鼻滴劑。
加壓容器、泵甫、噴霧、霧化器、或噴霧器一般含有本發明之抗體之溶液或懸浮液，其包含例如適用於分散、溶解、或延長釋放活性物的劑、推進劑，作為溶劑。
於以乾燥粉末或懸浮液調配物使用之前，該藥物產品一般被微粉化至適用於藉由吸入遞送的大小(典型係小於5微米)。此可藉由任何適當的粉碎方法(諸如螺旋噴流碾磨、流體床噴射碾磨、超臨界流體加工以形成奈米粒子、高壓均質化、或噴霧乾燥)達成。
可將用於吸入器或吹入器的膠囊、泡殼(blister)和藥筒調配成含有本發明之化合物之粉末混合物、適合的粉末基底和性能修飾劑。
用於霧化器使用電流體力學以製造細霧之適合的溶液調配物可於每次致動含有適合劑量的本發明之抗體且致動體積可例如於1μL至100μL變化。
可將適合的風味(諸如薄荷腦和左薄荷腦)或甜味劑(諸如糖精或糖精鈉)加至意欲用於吸入/鼻內投予的本發明之調配物。
可將用於吸入/鼻內投予的調配物調配成立即及/或修飾釋放。修飾釋放調配物包括延遲、持續、脈衝、控制、靶向和程式化釋放。
於乾燥粉末吸入器和氣溶膠之例子中，劑量單位係通過遞送計量量的閥決定。典型會安排根據本發明的單位以投予定量劑量或「噴煙(puff)」的本發明之抗體。每日總劑量典型會以單劑投予或(更常)於一整天以分開的劑投予。
亦可調配本發明之抗體和抗體部分以用於口服途徑投予。口服投予可涉及吞嚥，使得該化合物進入胃腸道、及/或頰部、舌部、或舌下投予，藉其該化合物直接自口部進入血流。
適用於口服投予的調配物包括固體、半固體和液體系統，諸如錠劑；含有多微粒(multiple-particulate)或奈米微粒、液體、或粉末的軟或硬膠囊；菱形錠(包括填充液體的)；咀嚼物；凝膠；快速分散劑量形式；薄膜；卵形劑(ovule)；噴霧；和頰部/黏膜黏著貼片。
液體調配物包括懸浮液、溶液、糖漿和酏劑。可利用如此調配物作為軟或硬膠囊(例如從明膠或羥丙甲基纖維素製造)中的填料且其典型包含載劑，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纖維素、或適合的油、和一或多種乳化劑及/或懸浮劑。亦可藉由復水固體(例如從藥包(sachet))製備液體調配物。
本發明之抗體和組成物的治療用途
於一個方面，本發明之抗TIM-3抗體和其抗原結合部分、抗TIM-3組成物、和雙專一性結合分子可用於在需要其的人類中增強或活化免 疫系統。於一些實施方式中，該患者具有特徵在於TIM-3或其配體之任一者之過度表現或過度活性的病況。於一些實施方式中，該患者之免疫受抑制。於某些實施方式中，該抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子其係用於治療癌症，例如源於諸如皮膚、肺臟、腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟之組織的癌症、和任何依賴TIM-3活性及/或其中患者表現或過度表現半乳糖凝集素-9、磷脂絲胺酸、CEACAM-1及/或HMGB-1的癌症或其他病況。藉由本發明之抗TIM-3抗體、其抗原結合部分、抗TIM-3抗體組成物、及/或雙專一性結合分子治療的癌症可包括(例如)黑色素瘤、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、腎細胞癌、白血病(例如急性骨髓性白血病)、和固態腫瘤(例如晚期或轉移性固態腫瘤)。
於一些實施方式中，藉由本發明之抗TIM-3抗體、抗原結合部分、抗TIM-3組成物、及/或雙專一性結合分子治療的癌症可包括(例如)黑色素瘤(例如晚期或轉移性黑色素瘤)、非小細胞肺癌、頭和頸鱗狀細胞癌、腎細胞癌、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠母細胞瘤、神經膠瘤、鱗狀細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、膀胱癌、上尿路癌、食道癌、胃食道連接部癌、胃癌、肝癌、結腸癌、結腸直腸癌、多發性骨髓瘤、肉瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓化生不良症候群、鼻咽癌、慢性淋巴球性白血病、急性淋巴胚細胞性白血病、小淋巴球性淋巴瘤、卵巢癌、胃腸癌、原發性腹膜癌、輸卵管癌、泌尿上皮癌、與HTLV有關的T細胞白血病/淋巴瘤、前列腺癌、生殖泌尿癌、腦脊髓膜瘤、腎上腺皮質癌、神經膠肉瘤、纖維肉瘤、腎臟癌、乳房癌、胰臟癌、子宮 內膜癌、皮膚基底細胞癌、闌尾之癌症、膽道癌、唾腺癌、晚期Merkel氏細胞癌、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、間皮瘤、和固態腫瘤。
於一些實施方式中，該抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子係用於治療病毒及/或寄生生物感染，例如在病原體抑制宿主免疫反應的情況下。
「治療(treat)」、「治療(treating)」和「治療(treatment)」係論及減輕或消除生物失調及/或其伴隨症狀之至少一者的方法。用於本文中，「減輕」疾病、失調或病況意謂減少該疾病、失調、或病況之症狀之嚴重性及/或發生頻率。此外，本文中提及「治療」時包括提及治癒性、緩和性和預防性治療。
「治療有效量」係論及所投予的治療劑之量，其會將所治療的失調之症狀之一或多者減輕至某種程度。抗癌症治療之治療有效量(例如)可導致腫瘤縮小、增加的生存、癌細胞之排除、減少疾病進展、轉移之逆轉、或其他保健專家所欲的臨床終點。
本發明之抗體組成物或抗體或其抗原結合部分可單獨投予或組合一或多種其他藥物或抗體(或呈其等之任何組合)投予。本發明之醫藥組成物、方法和用途因此亦涵蓋與其他活性劑之組合(共投予)的實施方式，如以下詳細敘述的。
用於本文中，當提及本發明之抗體組成物、抗體和其抗原結合部分、和雙專一性結合分子以及一或多種其他治療劑時，術語「共投予」、「被共投予」和「組合」意欲意謂且係論及並包括以下者：-將本發明之抗體組成物/抗體/抗原結合部分/雙專一性結合分子及治療劑的 如此組合同時投予至需要治療的患者，當如此組份被一起調配成實質上同時將該等組份釋放至該患者的單一劑量形式時，-將本發明之抗體組成物/抗體/抗原結合部分/雙專一性結合分子及治療劑的如此組合實質上同時投予至需要治療的患者，當如此組份被彼此分開地調配成實質上同時被該患者攝取之分開的劑量形式故於是該等組份被實質上同時釋放至該患者時，-將本發明之抗體組成物/抗體/抗原結合部分/雙專一性結合分子及治療劑的如此組合相繼投予至需要治療的患者，當如此組份被彼此分開地調配成被該患者在連續的時間攝取且在各投予間有實質上的時間間隔之分開的劑量形式故於是該等組份於實質上不同的時間被釋放至該患者時；和-將本發明之抗體組成物/抗體/抗原結合部分/雙專一性結合分子及治療劑的如此組合相繼投予至需要治療的患者，當如此組份被一起調配成以控制方式釋放該等組份的單一劑量形式故於是其等於相同及/或不同的時間被同時、連續、及/或重疊地釋放至該患者時，其中各部分可藉由相同或不同的途徑投予。
本發明之抗體組成物、抗體和其抗原結合部分、和雙專一性結合分子可在無另外的治療性治療下(即作為單獨的治療)投予。供選擇地，使用本發明之抗體組成物和抗體和其抗原結合部分的治療可包括至少一種另外的治療性治療(組合治療)。於一些實施方式中，該抗體組成物或抗體或其抗原結合部分可與另一種療法/藥物共投予或調配以用於治療癌症。該另外的治療性治療可包含(例如)化學治療劑、抗贅生物劑、或抗血管形成劑、不同抗癌症抗體、及/或放射性治療。
藉由組合本發明之抗體組成物、抗體或抗原結合部分、或雙專一性結合分子與已知會誘發癌細胞之最後分化的劑，可進一步改善功效。如此化合物可(例如)選自由以下者所組成之群組：視黃酸、反式-視黃酸、順式-視黃酸、苯丁酸鹽、神經生長因子、二甲亞碸、活性形式維生素D3、過氧化體增殖物活化性受體γ、12-O-十四醯基佛波醇13-醋酸酯、六亞甲基-雙-乙醯胺、轉形生長因子β、丁酸、環AMP、和維司力農(vesnarinone)。於一些實施方式中，該化合物係選自由視黃酸、苯丁酸鹽、全反式-視黃酸和活性形式維生素D所組成之群組。
包含本發明之抗TIM-3抗體組成物、抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、或雙專一性結合分子與至少一種其他劑(例如化學治療劑、抗贅生物劑、或抗血管形成劑)的醫藥製品可呈供於癌症治療中同時、分開或相繼投予的組合治療的形式使用。該其他劑可藉由任何適用於治療所提及的特殊癌症之劑，例如選自由以下者所組成之群組的劑：烷化劑，例如鉑衍生物，諸如順鉑、卡鉑及/或奧沙利鉑(oxaliplatin)；植物生物鹼，例如太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇及/或愛萊諾迪肯(irinotecan)；抗腫瘤抗生素，例如多柔比星(阿德力黴素)、道諾黴素、表阿黴素(epirubicin)、艾達黴素(idarubicin)雙羥蒽、放線菌素D、博萊黴素、放線菌素、藤黄黴素(luteomycin)、及/或絲裂黴素；拓樸異構酶抑制劑，諸如拓普替康(topotecan)；及/或抗代謝物，例如氟尿嘧啶及/或其他氟嘧啶。
本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、雙專一性結合分子、或抗TIM-3抗體組成物亦與諸如疫苗、細胞介素、酵素抑制劑和T細胞治療的其他抗癌症治療組合使用。於疫苗之例子中，其可(例如)係含 有一或多種與所治療的癌症相關之抗原的蛋白質、胜肽或DNA疫苗、或包含樹突細胞加上抗原的疫苗。適合的細胞介素包括(例如)IL-2、IFN-γ和GM-CSF。一類具有抗癌症活性的酵素抑制劑之實例係吲哚胺-2,3-二氧酶(IDO)抑制劑，例如1-甲基-D-色胺酸(1-D-MT)。授受性T細胞治療係論及種種涉及擴展或工程設計患者自身之T細胞以辨識並攻擊其等之腫瘤的免疫治療技術。
亦設想到本發明之抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、雙專一性結合分子、或抗TIM-3抗體組成物可用於連結酪胺酸激酶抑制劑的輔助治療中。此等係合成性且主要衍生自喹唑啉的低分子量分子，其等與受體之細胞內酪胺酸激酶功能域交互作用並藉由競爭細胞內Mg-ATP結合位置而抑制配體誘發性受體磷酸化。
於一些實施方式中，該抗體組成物、雙專一性結合分子、或抗體或其抗原結合部分可與包括(但不限於)介導以下者之表現或活性的劑之另一種介導免疫系統活化的療法/藥物組合使用：A2AR、BLTA、B7-H3、B7-H4、CTLA-4、CD27、CD28、CD39、CD40、CD55、CD73、CD122、CD137、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、CTLA-3、CEACAM(例如CEACAM-1及/或CEACAM-5)、半乳糖凝集素-9、GITR、HVEM、ICOS、IDO、KIR、LAIR1、LAG-3、NKG2A、OX40、PD-1/PD-L1/PD-L2、TIGIT、TGFR-β、TNFR2、VISTA及/或2B4。於某些實施方式中，該劑係與以上分子之一結合的抗體或其抗原結合片段。
於某些方面，本發明之抗體和抗原結合部分、組成物、和雙專一性結合分子可組合另一種TIM-3途徑之抑制劑投予，該抑制劑可靶向 TIM-3或其配體之一或多者。如此抑制劑之實例包括其他抗TIM-3抗體和靶向TIM-3配體及/或共受體(諸如半乳糖凝集素-9、HMGB-1、磷脂絲胺酸脂質、CEACAM1、LILRA1-6、或LILRB1-5)之抗體。
應瞭解本發明之抗體組成物、雙專一性結合分子、和抗體和其抗原結合部分可用於如本文中描述的治療方法、可用於如本文中描述的治療、及/或可用於製造用於如本文中描述的治療之醫藥品。
劑量和投予途徑
本發明之抗體組成物會以對於治療所提及的病況有效的量(即以達成所欲的結果所需之劑量和時段)投予。治療有效量可根據諸如以下者之因子變化：所治療的特殊病況、患者之年齡、性別和重量、和該等抗體是否係作為單獨的治療投予或與一或多種另外的抗癌症治療組合投予。
可調整劑量攝生法以提供最適宜的所欲反應。例如，可投予單一食團，可隨時間投予數個分開的劑或可按治療狀況之急迫性所指示的成比例地減少或增加該劑。以下者係特別地有利的：為了投予之容易性和劑量之一致性以劑量單位形式調配非經腸組成物。用於本文中，劑量單位形式係論及物理上分開的單位，其適合作為用於欲治療的患者/對象之單個劑量；各單位含有經計算以產生所欲治療功效之預決定量的活性化合物加上所需的醫藥載劑。本發明之劑量單位形式之規格一般係由以下者支配且直接取決於以下者：(a)化學治療劑之獨特特徵和欲達成的特殊治療或預防功效、和(b)複合如此活性化合物以用於治療的技術領域中個體敏感性之固 有限制。
因此，基於本文中提供之揭示內容，具有通常知識者會領會到劑量和給藥攝生法係根據治療技術領域中廣為人知的方法作調整。即可輕易地建立最大可容忍劑量，且亦可測定對患者提供可偵測的治療效益之有效量，且亦可測定對患者提供可偵測的治療效益所需的投予各劑之時序需求。因此，雖然本文中例示了某些劑量和投予攝生法、此等實例並不以任何方式限制於實現本發明中可提供給患者的劑量和投予攝生法。
應注意劑量值可隨著欲減輕的病況之類型和嚴重性變化，且可包括單個或多個劑。應進一步瞭解到對於特殊對象，應根據個體之需求和投予或監督該組成物之投予者的專業判斷隨時間調整特殊劑量攝生法，且本文中提出的劑量範圍僅係例示性且非意欲限制具體實例組成物之範圍或實現。此外，使用本發明之組成物的劑量攝生法可基於各種各樣的因子(包括疾病之類型、患者之年齡、重量、性別、醫療狀況、病況之嚴重性、投予途徑、和所利用的特殊抗體)變化。因此，該劑量攝生法可廣大地變化，但可使用標準方法例行地測定。例如，可基於藥動學或藥效學參數調整劑量，該等參數可包括臨床功效，諸如毒性效果及/或實驗室值。因此，本發明涵蓋如由具有通常知識者測定的患者內劑量升高。測定適當的劑量和攝生法於相關技術領域中係廣為人知的且一旦提供本文中揭示的教示後具有通常知識者會瞭解其被涵蓋。
設想到本發明之抗體組成物之適合劑量會於以下範圍內：0.1-100mg/kg，諸如約0.5-50mg/kg，例如約1-20mg/kg。該抗體組成物可例如以以下劑量投予：至少0.25mg/kg，例如至少0.5mg/kg，諸如至少1mg/kg， 例如至少1.5mg/kg，諸如至少2mg/kg，例如至少3mg/kg，諸如至少4mg/kg，例如至少5mg/kg；和例如至多達50mg/kg，諸如至多達30mg/kg，例如至多達20mg/kg，諸如至多達15mg/kg。投予正常會以適合的間隔重複，例如每週一次、每二週一次、每三週一次、或每四週一次，且會持續負責的醫師認為適當的時間，該醫師必要時可視需要增加或減少劑量。
用於腫瘤治療之有效量可藉由其在患者中穩定化疾病進展及/或改善症狀(且較佳係逆轉疾病進展，例如藉由減小腫瘤大小)的能力測量。本發明之抗體、抗原結合部分、雙專一性結合分子、或組成物抑制癌症的能力可藉由試管內分析(例如如於實例中描述者)以及對人類腫瘤中的效力有預測性之適合的動物模型評估。會挑選適合的劑量攝生法以於各個特殊狀況提供最適宜的治療的反應，例如以單一食團或以連續輸注投予，且可能調整劑量，如由各個例子之急迫性指示的。
診斷用途和組成物
本發明之抗體和抗原結合部分亦有用於診斷程序(例如試管內、活體內)。例如，該等抗體和部分可用於偵測及/或測量來自患者的樣本(例如組織樣本、或體液樣本，諸如發炎滲出物、血液、血清、腸液、唾液、或尿液)中之TIM-3水平。適合的偵測和測量方法包括免疫學方法，諸如流動式細胞測量術、酵素連結免疫吸附分析(ELISA)、化學發光分析、放射性免疫分析、和免疫組織學。本發明進一步涵蓋套組(例如診斷套組)，其包含本文中描述的抗體和抗原結合部分。
除非於本文中另加界定，連結本發明使用的科學和技術術語應具有所屬技術領域中具有通常知識者所一般瞭解的意義。以下描述例示性方法和材料，雖然於實現或測試本發明時亦可使用與該等本文中描述者類似或等同的方法和材料。若有矛盾，應以本說明書(包括定義)為準。
一般而言，連結本文中描述的細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學、分析化學、合成有機化學、醫療和醫藥化學、及蛋白質和核酸化學和雜合使用的命名法和其等之技術係該等於所屬技術領域中廣為人知且一般使用者。酵素反應和純化技術係根據製造商之說明書執行，如所屬技術領域中或如本文中描述地一般完成的。
此外，除非前後文另外要求，單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。在本說明書和實施方式通篇中，字詞「具有(have)」和「包含(comprise)」、或變體(諸如「具有(has)」、「具有(having)」、「包含(comprises)」、或「包含(comprising)」)應被理解成意指含有所陳述的整數或整數之群組但不排除任何其他整數或整數之群組。
本文中提及的所有出版品和其他文獻係以其等之整體以引用方式併入。雖然本文中引用一些文件，此引用並不構成和承認此等文件之任一者形成所屬技術領域中的一般通常知識。
為了使本發明可被更好地瞭解，提出以下實施例。此等實施例僅係用於闡明之目的且不應被解釋成以任何方式限制本發明之範圍。
實施例 實施例1：自大鼠B細胞選殖抗TIM-3抗體。
此實施例描述用於產生本發明之抗人類TIM-3抗體的方法。亦提供該等抗體之DNA和胺基酸序列。
材料和方法
本發明之抗TIM-3抗體係自衍生自OmniRat®大鼠(Osborn等人，J Immunol. 190(4)：1481-90(2013))(一種來自OMT(Open Monoclonal技術，Inc.)之大鼠品系，其製造具有完全人類個體遺傳型之抗體)的抗體庫(antibody repertoire)分離。來自經單細胞分選的分泌抗體之B細胞(ASC)的衍生自大鼠的抗體基因之選殖係通過SymplexTM抗體發現技術執行(Meijer等人，J Mol Biol 358(3)：764-72(2006))。
SymplexTM抗體文庫係從來自經致免疫Omni大鼠®大鼠(含有各個經分選的B細胞之同族VH和VL編碼對的文庫)的經單細胞分選的B細胞製備。將編碼呈IgG1或IgG2型式的完全人類免疫球蛋白之抗體庫構築體轉染至Expi293細胞中，並以高通量形式針對結合特性篩選細胞上清液。藉由DNA定序分析篩選吻合並萃取編碼抗體的DNA序列。表現所挑選之抗體殖系並如以下描述地測試功能。表1顯示抗體殖系15086.15086之重鏈和輕鏈可變功能域核酸序列。表2顯示該抗體殖系之重鏈和輕鏈胺基酸序列，且表4顯示重鏈和輕鏈CDR胺基酸序列。表3顯示其IgG1重鏈恆定區域和κ輕鏈恆定區域之胺基酸序列。
由於在編碼抗體的cDNA片段之SymplexTM選殖中使用簡併引子，對某些抗體(例如抗體15086.16837、15086.17145、和15086.17144)修正重鏈和輕鏈之胺端中的誤義突變之數目。表5顯示來自被命名為 15086.16837、15086.17145、或15086.17144的經最佳化抗體(此三個變體於同型子類型上不同但具有一致的重鏈和輕鏈可變功能域序列)的DNA水平上之重鏈和輕鏈可變功能域序列。最佳化程序包括匹配胺端修正與生殖系列以及密碼子使用最佳化。用於與人類生殖系列序列匹配之目標係用於重鏈可變功能域的IGHV4-31和用於輕鏈可變功能域的IGKV3-11。
鑑認出界定不同表位倉之另外的抗體。此等抗體之重鏈和輕鏈可變功能域序列係於表9和表10中顯示。鑑認出另外的功能性抗體且其等之重鏈和輕鏈可變功能域序列係於表12和表13中顯示。
結果
表1顯示編碼SymplexTM-選殖的抗體15086.15086之DNA序列。
Figure 106112034-A0202-12-0094-1
表2顯示原本之SymplexTM-選殖的抗體15086.15086之推演的蛋白質序列。CDR係以粗體和斜體顯示。
Figure 106112034-A0202-12-0094-2
表3顯示重鏈和輕鏈恆定區域。
Figure 106112034-A0202-12-0095-3
表4顯示抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144所共有的重鏈和輕鏈互補性決定區域(CDR)。此處的CDR序列係根據針對CDR1和CDR2的IMGT®定義測定。對於重鏈和輕鏈CDR3，此處的定義包括一個IMGT-CDR3上游之額外的胺基酸殘基(Cys)和一個下游之額外的胺基酸殘基(對於VH CDR3係Trp，對於VL CDR3係Phe)。
Figure 106112034-A0202-12-0096-4
表5顯示編碼抗體15086.16837、15086.17145、和15086.17144所共有的重鏈和輕鏈可變功能域之經最佳化DNA序列。
Figure 106112034-A0202-12-0097-5
表6顯示所推演之抗體15086.16837、15086.17145、和15086.17144所共有的重鏈和輕鏈可變功能域蛋白質序列。CDR係以粗體和斜體顯示。注意VL蛋白質序列與未經最佳化VL蛋白質序列相同。
Figure 106112034-A0202-12-0098-6
表7顯示編碼不同同型型式的抗體恆定區域之DNA序列。
Figure 106112034-A0202-12-0098-7
Figure 106112034-A0202-12-0099-8
Figure 106112034-A0202-12-0100-9
Figure 106112034-A0202-12-0101-10
Figure 106112034-A0202-12-0102-11
Figure 106112034-A0202-12-0103-12
表8顯示不同同型型式的抗體恆定區域之蛋白質序列。
Figure 106112034-A0202-12-0104-13
表9顯示編碼用於表位分倉的抗TIM-3抗體之重鏈和輕鏈可變功能域的DNA序列。
Figure 106112034-A0202-12-0105-14
Figure 106112034-A0202-12-0106-15
Figure 106112034-A0202-12-0107-16
Figure 106112034-A0202-12-0108-17
Figure 106112034-A0202-12-0109-18
Figure 106112034-A0202-12-0110-19
Figure 106112034-A0202-12-0111-20
表10顯示所推演的用於表位分倉的抗TIM-3抗體之重鏈和輕鏈可變功能域蛋白質序列。CDR係以粗體和斜體顯示。
Figure 106112034-A0202-12-0112-21
Figure 106112034-A0202-12-0113-22
Figure 106112034-A0202-12-0114-23
表11顯示抗TIM-3分倉抗體之CDR。CDR之SEQ ID NO係於各個序列下顯示。此處的CDR序列係根據針對CDR1和CDR2的IMGT®定義測定。對於重鏈和輕鏈CDR3，此處的定義包括一個IMGT-CDR3上游之額外的胺基酸殘基(Cys)和一個下游之額外的胺基酸殘基(對於VH CDR3係Trp，對於VL CDR3係Phe)。
Figure 106112034-A0202-12-0115-24
表12顯示編碼被鑑認為功能性抗體之另外的抗TIM-3抗體之重鏈和輕鏈可變功能域的DNA序列。功能性抗體20131和20293的序列係於以上表9中顯示。
Figure 106112034-A0202-12-0116-25
Figure 106112034-A0202-12-0117-26
Figure 106112034-A0202-12-0118-27
Figure 106112034-A0202-12-0119-28
表13顯示所推演的被鑑認為功能性抗體之另外的抗TIM-3抗體之重鏈和輕鏈可變功能域之蛋白質序列。CDR係以粗體和斜體顯示。功能性抗體20131和20293之序列係於以上表10中顯示。
Figure 106112034-A0202-12-0120-29
Figure 106112034-A0202-12-0121-30
表14顯示另外的功能性抗TIM-3抗體之CDR。CDR之SEQ ID NO係於各個序列下顯示。此處的CDR序列係根據針對CDR1和CDR2的IMGT®定義測定。對於重鏈和輕鏈CDR3，此處的定義包括一個IMGT-CDR3上游之額外的胺基酸殘基(Cys)和一個下游之額外的胺基酸殘基(對於VH CDR3係Trp，對於VL CDR3係Phe)。功能性抗體20131和20293之序列係於以上表11中顯示。
Figure 106112034-A0202-12-0122-31
實施例2：抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144之動力學結合分析
此實施例展示抗體15086.15086(IgG1)、15086.16837(IgG1 LALA)、15086.17145(IgG2)、和15086.17144(IgG4(S228P))之結合親和力顯示非常類似的結合親和力，其等之KD值大約19-23nM。「IgG1 LALA」係 論及在重鏈中「LALA」突變(L234A/L235A，根據Eu編號格式編號(Edelman等人，Proc.Natl.Acad.USA 63：78-85(1969))之存在，且已知其會減低IgG1抗體之Fc區域之效應功能(Armour等人，Eur J Immunol. 29(8)：2613-24(1999)；Hezareh等人，J Virol. 75(24)：12161-68(2001)；和Hessel等人，Nature 449(7158)：101-104(2007))。
材料和方法
藉由表面電漿子共振(SPR)使用與Ibis MX96 SPR儀器(IBIS Technologies，荷蘭)組合的連續流動式微點樣器(CFM,Wasatch Microfluidics，鹽湖城，US)執行動力學結合分析。在G-a-hu-IgG Fc SensEye® SPR感應器(Ssens BV，荷蘭)上執行表面電漿子共振成像分析。在PBS-T(1x PBS加上0.05% Tween 20，pH 7.4)中將抗TIM-3抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144稀釋至0.15μg/ml。使用連續流動式微點樣器將抗體點樣至G-a-hu-IgG Fc SensEye®上共15分鐘。於點樣後，將SensEye®放置在IBIS MX96生物感應器中，並藉由施加所謂的動力學滴定系列執行動力學分析(Karlsson等人，Anal Biochem. 349(1)：136-47(2006))，其中以2nM至100nM的漸增濃度注射單體人類TIM-3 ECD抗原(Acro Bio Systems)而於各個抗原注射後無施加表面再生步驟。執行抗原連結共5分鐘並執行抗原解離共45分鐘。使用Scrubber 2軟體將所記錄的結合反應擬合至簡單Langmuir 1：1結合模式以計算結合速率(kon或ka)、解離速率(koff或kd)和親和力(KD)常數。
結果
在IBIS系統上執行的動力學測量顯示抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144(於四種不同的同型型式)皆具有非常類似的結合動力學，其等之KD值範圍在19-23nM(表15)。
Figure 106112034-A0202-12-0124-32
實施例3：抗TIM-3抗體之試管內功能評估
如以上(實施例1)描述地選殖一組呈IgG1亞型的獨特mAb並於單向混合淋巴球反應(MLR)分析中以單一濃度(25ug/ml)針對功能活性作篩選。將功能最強的抗TIM-3抗體(15086.15086)之型式轉換成IgG1 LALA(15086.16837)、IgG2(15086.17145)和IgG4(15086.17144)亞型。
此實施例藉由於單向MLR分析中誘發劑量依賴性細胞介素分泌來展示該抗TIM-3抗體之種種IgG亞型之試管內功能活性。
材料和方法
於單向MLR分析中，共培養自二個不同的健康供體分離的樹突細胞(DC)和CD4-陽性(CD4+)T細胞以誘發同種異體抗原專一性反應，造成細胞介素製造和T細胞活化/增殖。樹突細胞係藉由以20ng/ml顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和20ng/ml介白素4(IL-4)培養6日來從CD14+單核球分化並以1：10比率與從來自健康供體材料的周邊血液單核細胞(PBMC)分離的CD4+ T細胞混合。於培養5日後，收穫上清液，並使用Meso Scale電致化學發光細胞介素分析測定IFN-γ和TNF-α水平。此分析使用與偵測抗體綴合的電致化學發光標記(SULFO-TAG)。當將電流施加至盤電極時，SULFO-TAG標記放光，並測量光強度以定量樣本中的細胞介素。
結果
於抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144之單向MLR分析中的劑量反應曲線係於圖1和2中顯示。該等劑量反應曲線係藉由起始濃度為50ug/ml的該等抗體之二倍滴定產生。圖上的各個點代表三個重複之平均，而誤差槓代表SEM。
抗體15086.15086和15086.17145(IgG1和IgG2變體)於單向MLR分析中顯示類似的功能性且對IFN-γ和TNF-α之兩者皆誘發劑量依賴性增加。抗體15086.17144(IgG4變體)僅於二個最高的濃度誘發反應，且未觀察到抗體15086.16837(IgG1 LALA變體)之功能性。
實施例4：抗TIM-3抗體對經純化細胞次組的功效
TIM-3最初被報導係由IFN-γ製造性CD4+ T輔助細胞和CD8+(CD8-陽性)T細胞毒性細胞選擇性表現，且被展示為T細胞反應之負性調節子。之後，發現TIM-3在樹突細胞、單核球和天然殺手(NK)細胞上被內源性地高度表現(Freeman等人，Immunol Rev 235：172-89(2010)；Kuchroo等人，Nat Rev Immunol 8：577-580(2008)；Anderson等人，Science 318：1141-1143(2007)；和Da Silva等人，Cancer Immunol Res 2：410-422(2014))。此實施例顯示TIM-3與抗TIM-3抗體之連接如何對樹突細胞有直接功效，導致TNF-α分泌增加。
材料和方法
自健康的供體材料分離PBMC、初始(naive)CD4+ T細胞和初始CD8+細胞。如先前於實施例3中描述地產生來自三個個別健康供體的樹突細胞。將所分離的細胞次組以10ug/ml的所指出之抗體培養共5日，並使用Meso Scale電致化學發光細胞介素分析測定TNF-α水平。
結果
抗體15086.15086、15086.16837、15086.17145、和15086.17144對經純化細胞次組的直接功效係於圖3中陳列，其中各長條代表五個重複之平均且誤差槓代表SEM。結果展示抗TIM-3抗體之IgG1變體(15086.15086)或IgG2變體(15086.17145)之存在造成從來自三個供體的 樹突細胞之TNF-α分泌增加。於含有多個TIM-3表現細胞次組(例如單核球和NK細胞)的PBMC族群中觀察到類似的功效。IgG1 LALA變體(15086.16837)和IgG4變體(15086.17144)對TNF-α分泌僅具有最小的功效。所測試的抗體無一對初始CD4+ T細胞或初始CD8+ T細胞具有功效。
實施例5：針對磷脂絲胺酸封阻活性的抗TIM-3抗體之流動式細胞測量分析
此實施例闡明如何藉由執行使用表面磷脂絲胺酸陽性凋亡細胞和經螢光染料標記的可溶性TIM-3的流動式細胞測量競爭分析針對磷脂絲胺酸(PtdS)封阻活性測試本發明之抗TIM-3抗體[15086.17145]。
材料和方法
於基於細胞的分析中研究磷脂絲胺酸封阻活性，於該分析中藉由Staurosporine(來自鏈黴菌屬物種，Sigma-Aldrich,USA)處理誘發Jurkat T細胞使其經歷凋亡。在凋亡期間，PtdS係自細胞膜之細胞質面轉位至細胞表面並允許經R-PE-標記的人類TIM-3-Fc嵌合蛋白質之結合藉由流動式細胞測量術分析。使用Lightning-Link® R-藻紅素綴合套組(Innova Biosciences,UK)綴合商業上可購得的重組TIM-3-Fc嵌合蛋白質(R&D Systems,USA)與R-PE。對於各個欲測試的抗體濃度，混合25μl TIM-3-PE稀釋(對應於約0.33μg TIM-3-Fc)與25μl在Annexin V結合緩衝劑(BD PharmingenTM,USA)中的抗體(以最終20μg/ml起始)並於室溫(RT)下培養20分鐘，之後加至細胞。在存在1μM Staurosporine下培養Jurkat T細胞共2h，在RT結合緩衝劑中洗滌一次，且對於各個測試，結合在50μl結合緩衝劑中的 2x105個細胞與該抗體/TIM-3-PE混合物。在於RT下培養15分鐘後，添加100μl結合緩衝劑，藉由離心將細胞旋下，並將沈澱小丸再懸浮在100μl結合緩衝劑中以供獲取。藉由偵測PE螢光(MFI)的流動式細胞測量術定量TIM-3-PE與凋亡細胞之結合。平行地，藉由Annexin V-PE染色(PE Annexin V凋亡偵測套組I，BD PharmingenTM)確認在經Staurosporine處理的細胞上之PtdS之表面暴露。使用抗PD-1抗體吉舒達®(派姆單抗；Merck & Co.,Inc.)作為TIM-3結合/PtdS封阻之陰性對照組，並使用抗TIM-3參考抗體ABTIM3[18571.18571](WO 2015/117002 A1；Novartis AG)作為TIM-3結合/PtdS封阻之陽性對照組。此外，亦使用一種不同的抗TIM-3抗體[15338.15338](其先前已被鑑認為非封阻性抗體)作為PtdS封阻之陰性對照組。
結果
競爭實驗之結果係於圖4中呈現。抗TIM-3抗體[15086.17145]能夠以劑量依賴性方式抑制可溶性TIM-3-Fc與被細胞呈現的PtdS之交互作用(圖4A)。於3.125μg/ml下，其封阻TIM-3-Fc與PtdS-陽性細胞之結合向下至在存在非封阻性抗TIM-3抗體[15338.15338]下偵測到的結合之2%(圖4B)。參考抗TIM-3抗體[18571.18571]於相同的濃度下能夠封阻結合向下至3.2%(圖4C)。陰性對照組抗PD-1抗體吉舒達®之結果係於圖4D中顯示。
實施例6：抗TIM-3參考抗體類似物之選殖
於本文之數個實施例中使用抗TIM-3抗體ABTIM3和mAb15之參考類似物。該等參考類似物係如以下描述地產生。
ABTIM3和mAb15之重鏈和輕鏈可變功能域胺基酸序列係自以下表16中顯示的專利申請案獲得。使用人類密碼子將可變重鏈(VH)和可變輕鏈(VL)片段之胺基酸序列反轉錄成DNA序列。接著合成相對應DNA片段並將其選殖入含有恆定人類重鏈恆定區域(四種不同同型型式之任一者：IgG1、IgG1-LALA、IgG2、或IgG4)或人類κ輕鏈恆定區域的表現載體中，產生全長抗體重鏈和輕鏈序列。為預防於IgG4變體中的Fab臂交換，以脯胺酸取代位於位置228(EU編號)的絲胺酸殘基(Angal等人，Mol.Immunol. 30：105-108(1993))。使用標準蛋白質表現系統以所得的表現質體轉染CHO細胞。於抗體表現後，使用標準蛋白A純化管柱層析術純化相對應抗體上清液。
Figure 106112034-A0202-12-0129-33
實施例7：於單向MLR分析中的另外的抗TIM-3抗體之試管內功能評估
此實施例藉由於單向混合淋巴球反應(MLR)分析中誘發IFN-γ之劑量依賴性分泌來展示九種另外的抗TIM-3抗體之試管內功能活性。
材料和方法
如以上於實施例3中描述地設置此單向MLR分析。簡言之，在存在所指出的抗體下共培養樹突細胞(DC)和CD4+ T細胞共5日。於培養5日後，收穫上清液並使用Meso Scale電致化學發光IFN-γ分析測定IFN-γ水平。
結果
該九種另外的抗TIM-3抗體之劑量反應曲線係於圖5中顯示。該九種抗體之所有者於此分析中皆誘發IFN-γ水平之劑量依賴性增加。值得注意的是，未觀察到參考抗體ABTIM3和mAb15有功效。該等劑量反應曲線係藉由起始濃度為100μg/ml的該等抗體之二倍滴定產生。圖中各點代表三個重複之平均且誤差槓代表SEM。
實施例8：於雙向MLR分析中的另外的抗TIM-3抗體之試管內功能評估
此實施例藉由於雙向混合淋巴球反應(MLR)分析中誘發IFN-γ之劑量依賴性分泌展示十種抗TIM-3抗體之試管內功能活性。
材料和方法
於此雙向MLR分析中，共培養來自二個不同的健康供體的周邊血液單核細胞(PBMC)以誘發同種異體抗原專一性反應，其造成細胞介素製造和T細胞活化/增殖。以1：1比率混合來自該二個不同的供體之PBMC。於培養5日後，收穫上清液並使用Meso Scale電致化學發光細胞介素分析測定IFN-γ水平。
結果
該十種抗TIM-3抗體之劑量反應曲線係於圖6中針對一個供體對顯示。該等抗TIM-3抗體之所有者於此分析中皆誘發IFN-γ水平之劑量依賴性增加。值得注意的是，未觀察到參考抗體ABTIM3和mAb15有功效。劑量反應曲線係藉由起始濃度為100μg/ml的該等抗體之二倍滴定產生。圖中各點代表三個重複之平均且誤差槓代表SEM。
實施例9：於樹突細胞分析中的另外的抗TIM-3抗體之試管內功能評估
此實施例藉由誘發來自衍生自單核球的樹突細胞的TNF-α之劑量依賴性分泌展示九種抗TIM-3抗體之試管內功能活性。
材料和方法
從自來健康供體材料的周邊血液單核細胞(PBMC)分離CD14+單核球。藉由以20ng/ml顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF) 和20ng/ml介白素-4(IL-4)培養6日來從CD14+單核球分化樹突細胞(DC)。收穫衍生自單核球的樹突細胞並在存在所指出的抗體下培養該等細胞共5日。於培養5日後，收穫上清液並使用Meso Scale電致化學發光TNF-α分析測定TNF-α水平。
結果
該九種另外的抗TIM-3抗體之劑量反應曲線係於圖7中顯示。該九種抗TIM-3抗體之每一者於二個獨立的供體中皆誘發來自衍生自單核球的樹突細胞的TNF-α水平之劑量依賴性增加。值得注意的是，未觀察到參考抗體ABTIM3和mAb15有功效。該等劑量反應曲線係藉由起始濃度為100μg/ml的該等抗體之二倍滴定產生。圖中各點代表三個重複之平均且誤差槓代表SEM。
實施例10：對於人類和食蟹獼猴TIM-3的抗體親和力之測量
此實施例展示抗TIM-3 Fab片段對於人類和食蟹獼猴TIM-3細胞外功能域的結合親和力，如由表面電漿子共振(SPR)測量的。
材料和方法
藉由表面電漿子共振(SPR)使用與IBIS MX96 SPR儀器(IBIS Technologies，荷蘭)組合的連續流動式微點樣器(CFM,Wasatch Microfluidics，鹽湖城，US)執行動力學結合分析。
使用標準酵素剪切套組(Genovis,Sweden)自IgG1 LALA型 式的所選抗體之經修正序列變體產生抗TIM-3 Fab片段。將Fab片段標記成Fab[抗體編號]。用於Fab 15086的重鏈可變功能域胺基酸序列係SEQ ID NO：7中顯示的經修正序列。合成編碼人類和食蟹獼猴TIM-3之細胞外功能域的TIM-3 cDNA並將其選殖入含有CMV啟動子和人類IgG1 Fc序列(AA P101-K330)的載體中，使IgG1 Fc C端融合至所選殖的TIM-3 ECD。藉由標準PCR和工程設計技術產生TIM-3 Fc融合構築體並使用ExpiCHOTM表現系統在2ml培養中暫時表現蛋白質。於9日後收穫人類TIM-3 Fc融合構築體並藉由SPR針對對抗TIM-3 Fab片段的結合親和力測試上清液。使用標準程序純化抗原並使用連續流動式微點樣器(CFM,Wasatch Microfluidics，鹽湖城，US)使其被捕捉至G-a-hu-IgG Fc SensEye®(Ssens BV，荷蘭)上共15分鐘。於點樣後，將SensEye®放置在IBIS MX96生物感應器中，封阻剩下的位置，並使用FixIT套組(Ssens BV，荷蘭)將被捕捉的蛋白質固定至表面。藉由施用所謂的動力學滴定系列執行動力學分析(Karlsson R.2006)，其中以1nM至100nM的漸增濃度注射本發明之抗體之單體Fab片段而於各個Fab注射後無施加表面再生步驟。執行Fab連結共15分鐘並執行抗原解離共15分鐘。使用Scrubber 2軟體將所記錄的結合反應擬合至簡單Langmuir 1：1結合模式以計算結合速率(kon或ka)、解離速率(koff或kd)和親和力(KD)常數。
結果
親和力測量之結果展示Fab 15086、Fab 20293、和Fab 20131和二種參考抗體以不同的親和力與人類和食蟹獼猴TIM-3結合。詳細結合 動力學係於以下表17中顯示。
Figure 106112034-A0202-12-0134-34
實施例11：抗體對人類和食蟹獼猴TIM-3 ECD的結合之ELISA測定
此實施例展示抗TIM-3抗體對於人類和食蟹獼猴TIM-3 ECD的結合性，如由ELISA測量的。
材料和方法
藉由使用1μg/ml的經塗覆TIM-3 Fc融合抗原的ELISA測量抗體-抗原結合。人類和食蟹獼猴抗原系自Sino Biologys獲得。以2倍序列滴定以從150μg/ml(1000nM)開始的不同濃度使用該經塗覆抗原培養抗TIM-3抗體。於洗滌後，藉由綴合HRP(辣根過氧化酶)的第二抗體偵測結 合的抗體。
結果
ELISA展示所評估的抗體之每一者皆能夠與人類和食蟹獼猴TIM-3 ECD兩者結合。記錄產生半最大結合(EC50)的抗TIM-3抗體之濃度。所有所測試的抗體皆以大約1nM或更低的EC50值結合人類TIM-3，而在對食蟹獼猴TIM-3的結合方面觀察到遠較大的變化(表18)。一些抗體(諸如20131、20185、20293和ABTIM3)對人類和食蟹獼猴TIM-3兩者顯示完全相同的結合。其他抗體(諸如19324、19416、19568、和20300)對食蟹獼猴TIM-3顯示中等的結合，而抗體20362、20621和15086.17145對食蟹獼猴TIM-3顯示弱交叉反應性(EC50減少超過100倍)。顯現最低的食蟹獼猴TIM-3交叉反應性的抗體之結合曲線於ELISA評估中當以最高濃度測試時明顯對該抗原顯示飽和的結合。
Figure 106112034-A0202-12-0136-35
實施例12：抗TIM-3抗體之表位分倉
此實施例闡明抗TIM-3本發明之抗體如何可基於成對競爭模式分成數個表位倉之群組。屬於不同表位倉的抗體辨識TIM-3細胞外功能域(ECD)上的不同表位。
材料和方法
藉由使用與IBIS MX96 SPR儀器(IBIS Technologies，荷蘭)組合的連續流動式微點樣器(CFM)(Wasatch Microfluidics，US)的表面電漿子共振(SPR)分析執行成對抗體競爭之研究。在G-a-hu-IgG Fc SensEye® SPR感應器(Ssens BV，荷蘭)上執行表面電漿子共振成像分析。於含有 0.05%Tween 20的PBS緩衝劑(PBS-T)，pH 7.0中將總共十六種人類抗TIM-3 IgG2抗體和二種IgG4參考抗體(ABTIM3和mAb15)稀釋至15μg/ml。藉由使用連續流動式微點樣器點樣共15分鐘使抗體被捕捉至抗Fc感應器表面上。於點樣後，將SensEye®放置在IBIS MX96生物感應器中並藉由注射30μg/ml非專一性人類IgG1來封阻剩下的抗Fc位置。使用FixIt套組(Ssens BV，荷蘭)使被捕捉的抗體與表面結合。於感應器製備後，使用典型的三明治分析執行抗體競爭分析，其中被固定的抗體結合200nM可溶性單價TIM-3抗原(Acro Biosystems，中國)，接著探測與另一種抗TIM-3抗體的結合。接著，執行於PBS-T緩衝劑將該十八種抗TIM-3抗體之每一者之個別注射稀釋至15μg/ml以建立抗體競爭模式。於每個競爭循環後，以100mM H3PO4緩衝劑，pH 3.0再生感應器表面。
結果
該十八種抗TIM-3抗體之競爭模式係於圖8中呈現。抗體mAb15(倉1)、15105和15107(倉2)、15260和ABTIM3(倉3)、17244(倉7)、和15174和15175(倉8)於本文中描述之基於細胞的MLR分析中並不顯現功能活性，但由於其等辨識不同的表位而被包括。倉8抗體僅於溶液中測試，因為TIM-3結合在此等抗體被捕捉到感應器表面上時顯著地減低(單向封阻)。因此此等抗體係由正方形表示。發現到功能性抗TIM-3抗體結合三種交叉競爭表位倉(倉4、5和6)。屬於表位倉4的功能性抗體包括抗體20621、20293、19568、20362、15086.17145、和19416。此等抗體交叉封阻彼此和來自表位倉3、5、6和7的抗體。屬於表位倉5的功能性抗體包 括抗體20131和20185。此等抗體交叉封阻彼此和來自表位倉3、4、6和7的抗體。另外，20131和20185僅在其等被捕捉到感應器表面上時亦預防mAb15結合(單向封阻，虛線)。最後，屬於表位倉6的功能性抗體包括抗體19324和20300。此等抗體交叉封阻彼此和除了來自倉2的抗體外之所有其他抗體。
可自以上呈現的結果推演出來自表位倉4、5和6的功能性抗體係與參考抗體ABTIM3(倉3)和mAb15(倉1)不同的結合表位(圖1)，因為各個分倉組相較於整群中的其他抗TIM-3抗體具有獨特的競爭模式。
實施例13：透過TIM-3突變誘發的抗TIM-3抗體之表位定位
抗體表位一般可被示性為線性表位(亦稱為連續表位)或構型性表位(亦稱為不連續表位)。雖然線性表位係由單一的連續胺基酸序列界定，構型性表位可由許多較小的不連續線性序列或單一接觸殘基組成。聚集在抗體和抗原間的分子間蛋白質介面的接觸殘基之集合亦稱為熱點(Moreira等人，Proteins 68(4)：803-12(2007))。咸現已廣泛地認可大多數B細胞表位本質上係不連續的(Sivalingam和Shepherd,Mol Immunol. 51(3-4)：304-9(2012))、Kringelum等人，Mol Immunol. 53(1-2)：24-34(2013))，其平均表位跨越15-22個胺基酸殘基，其中2-5個胺基酸對結合出力最大(Sivalingam和Shepherd，如上)。
藉由排序對129種不同的TIM-3突變體之結合親和力，此實施例闡明Fab 15086、Fab 20293、和Fab 20131之結合表位如何可被分成與被 參考抗體ABTIM3和mAb15辨識的表位不同的線性表位和熱點。
材料和方法
人類TIM-3受體由181個胺基酸的細胞外功能域(ECD)(殘基22-202)接著是跨膜功能域(殘基203-223)和細胞質功能域(殘基224-301)所組成。TIM-3屬於免疫球蛋白超家族且其ECD係由以下二功能域構成：黏液素功能域和IgV功能域。IgV功能域含有一個雙層β-三明治，其由排列成二個β-褶板的7個反向平行的β-股(其中GFCC’β-股在一側且BED β-股在相反側)之交互作用形成。該二個β-褶板係由在殘基C54-C123間的二硫鍵穩定化。人類TIM-3 IgV之結晶結構係可得的(PDB 5F71)。TIM-3 IgV功能域不像其他IgV功能域具有A股，但具有二個另外的二硫鍵(C58-C63和C52-C110)，其等將CC’和FG環置於很近的位置，形成對於磷脂絲胺酸(PS)配體結合而言獨特的裂口。與PS配體複合的鼠類TIM-3之結晶結構係存在的(3KAA)，其展示與CC’和FG環的配體結合接觸。
已鑑認出數種TIM-3之配體及/或共受體，包括HMGB-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、和磷脂絲胺酸(Chiba等人，Nat.Immunology 13(9)：832-42(2012)、Li等人，Hepatology 56(4)：1342-51(2012)、DeKruyff等人，J Immunology 184(4)：1918-30(2010)、Das等人，Immunol Rev. 276(1)：97-111(2017))。
人類TIM-3和異種同源物之蛋白質序列係下載自UniProt；人類(Q8TDQ0；SEQ ID NO：236)、食蟹獼猴(Macaca fascicularis)(G7P6Q7；SEQ ID NO：237)、小鼠(Mus musculus)(Q8VIM0；SEQ ID NO：238)和大 鼠(挪威大鼠(Ratus norvegicus))(P0C0K5；SEQ ID NO：239)。此等序列係於表23中顯示。不同的細胞外TIM-3胺基酸序列間之序列一致性係於以下表19中顯示。
Figure 106112034-A0202-12-0140-36
基於結晶結構和胺基酸序列，鑑認出暴露於表面的胺基酸殘基並在人類TIM-3 ECD上設計了82個獨立的丙胺酸取代(丙胺酸掃描)。
為於天然人類TIM-3結構之背景下定位線性表位，產生47種嵌合蛋白質，其中在人類TIM-3 ECD序列中的10個胺基酸被以重疊5個胺基酸的節段相繼交換成小鼠序列，並在關鍵環中以大鼠和食蟹獼猴版本補充。在跨越胺基酸22-199的人類TIM-3之細胞外功能域中執行序列交換。
合成編碼人類TIM-3之細胞外功能域的cDNA並將其選殖入含有CMV啟動子和人類IgG1 Fc序列(AA P101-K330)的載體中，使IgG1 Fc C端融合至所選殖的TIM-3 ECD。藉由標準PCR和工程設計技術產生突變人類TIM-3 Fc融合構築體並使用ExpiCHOTM表現系統在2ml培養中暫時表現蛋白質。收穫人類TIM-3 Fc融合構築體，純化並藉由表面電漿子共振(SPR)測試對抗TIM-3 Fab片段的結合親和力。使用連續流動式微點樣器(CFM,Wasatch Microfluidics，鹽湖城，US)將TIM-3 Fc融合蛋白質固定至 G-a-hu-IgG Fc SensEye®(Ssens BV，荷蘭)上共15分鐘。於點樣後，將SensEye®放置在IBIS MX96生物感應器中並使用FixIT套組(Ssens BV，荷蘭)將被捕捉的蛋白質固定至表面。藉由施加所謂的動力學滴定系列執行動力學分析(Karlsson R.2006)，其中以1nM至100nM的漸增濃度注射本發明之抗體之單體Fab片段而於各個Fab注射後無施加表面再生步驟。執行Fab連結共15分鐘並執行抗原解離共15分鐘。使用Scrubber 2軟體將所記錄的結合反應擬合至簡單Langmuir 1：1結合模式以計算結合速率(kon或ka)、解離速率(koff或kd)和親和力(KD)常數。
結果
就與TIM-3突變體構築體的結合之改變的方面評估抗TIM-3 Fab 15086、20293、20131和參考類似物ABTIM3和mAb15之結合親和力。
該等Fab片段對於突變TIM-3構築體的結合親和力係以KD突變體/KD野生型間的比率(經標準化結合親和力)表現。表20和21顯示給出有區別的結果之嵌合蛋白質和丙胺酸突變體。將至少5倍的親和力減低用作為偵測到對突變TIM-3構築體之結合親和力減低的門檻基準。於一些實例中，無法偵測到與特定Fab的結合。此等構築體被列成NB(未結合)。
此分析顯示抗TIM-3 Fab 15086、20293和20131之結合表位相較於參考抗體ABTIM3和mAb15明顯係不同的。15086和20293不結合具有插入於位置62-67(靠近配體結合環CC′和FG)的小鼠序列之嵌合蛋白質，而參考ABTIM3確實結合之(表20)。15086在TIM-3上的表位延伸超過此胺基酸串，包括P50、V60、F61、E62、G64、R69和FG環殘基I117、M118、 D120，如由丙胺酸掃描證明的(表21)。Fab 20293與15086具有非常類似的表位，除了殘基M118和D120在被突變成丙胺酸時僅影響與15086的結合。發現到Fab 20131於殘基114-117結合FG環上出現的不同表位，且此被丙胺酸掃描延伸至包括殘基118、120以及CC′殘基F61和E62。對15086、20293、和20131而言共通者係對於位置F61的丙胺酸突變之敏感性，而二種參考抗體皆未顯示對該位置的丙胺酸突變之敏感性。雖然參考抗體mAb15不結合位於位置62-67的突變序列，與15086和20293類似，mAb15之表位係明顯不同的，因為此抗體不與二種其中位置74-85的序列被交換成小鼠的另外的構築體結合。抗體ABTIM3明顯顯現由在位置22-28、107-144和123-128有突變的線性構築體界定的不同的表位，如由對此等蛋白質之結合親和力的改變證明的(表20)。此表位定位發現之總結係於以下表22中顯示且該等表位在TIM-3 IgV功能域之表面上位於何處的分子模型係於圖9中呈現。
總結，吾人已藉由分析與一組129種TIM-3突變體的結合在分子水平上顯示了三種Fab 15086、20293、和20131辨識位於TIM-3 IgV功能域之頂部的獨特但部分重疊的表位。此發現與表位分倉分析(實施例12)一致，顯示三種抗體皆結合一起構成TIM-3 IgV功能域上的功能性表面之重疊的交叉競爭表位。此等表位明顯與磷脂絲胺酸結合位置以及對於HMGB-1和CEACAM1結合而言係必要的胺基酸E62重疊(Chiba等人，Nat.Immunology 13(9)：832-42(2012)、Das等人，Immunol Rev. 276(1)：97-111(2017))，而二種參考抗體具有較位於IgV功能域之中心部分(mAb15)和IgV功能域之其他側(ABTIM3)的表位。該等結果與表位分倉數據一致，其顯示mAb15和ABTIM3可同時結合TIM-3(實施例12)。基於15086、20293、 和20131之表位位置，預期到各個抗體能夠封阻TIM3配體(磷脂絲胺酸、CEACAM-1和HMGB-1)之結合。
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<110> 賽門弗鎮公司(SYMPHOGEN A/S)
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 37
Figure 106112034-A0305-02-0180-57
<210> 38
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 38
Figure 106112034-A0305-02-0180-58
Figure 106112034-A0305-02-0181-59
<210> 39
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 39
Figure 106112034-A0305-02-0181-60
Figure 106112034-A0305-02-0182-61
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 40
Figure 106112034-A0305-02-0182-62
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 41
Figure 106112034-A0305-02-0182-63
<210> 42
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 42
Figure 106112034-A0305-02-0183-64
<210> 43
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 43
Figure 106112034-A0305-02-0183-65
<210> 44
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 44
Figure 106112034-A0305-02-0183-66
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 45
Figure 106112034-A0305-02-0183-67
<210> 46
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 46
Figure 106112034-A0305-02-0184-68
<210> 47
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 47
Figure 106112034-A0305-02-0184-69
<210> 48
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 48
Figure 106112034-A0305-02-0185-70
<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 49
Figure 106112034-A0305-02-0186-71
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 50
Figure 106112034-A0305-02-0186-72
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 51
Figure 106112034-A0305-02-0187-73
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 52
Figure 106112034-A0305-02-0187-74
<210> 53
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 53
Figure 106112034-A0305-02-0187-75
<210> 54
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 54
Figure 106112034-A0305-02-0188-76
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 55
Figure 106112034-A0305-02-0188-77
<210> 56
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 56
Figure 106112034-A0305-02-0188-78
<210> 57
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 57
Figure 106112034-A0305-02-0189-79
<210> 58
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 58
Figure 106112034-A0305-02-0189-80
Figure 106112034-A0305-02-0190-81
<210> 59
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 59
Figure 106112034-A0305-02-0190-82
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 60
Figure 106112034-A0305-02-0191-83
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 61
Figure 106112034-A0305-02-0191-84
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 62
Figure 106112034-A0305-02-0191-85
<210> 63
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 63
Figure 106112034-A0305-02-0192-86
<210> 64
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 64
Figure 106112034-A0305-02-0192-88
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 65
Figure 106112034-A0305-02-0192-89
<210> 66
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 66
Figure 106112034-A0305-02-0193-90
<210> 67
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 67
Figure 106112034-A0305-02-0193-91
<210> 68
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 68
Figure 106112034-A0305-02-0193-92
Figure 106112034-A0305-02-0194-93
<210> 69
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 69
Figure 106112034-A0305-02-0194-94
Figure 106112034-A0305-02-0195-95
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 70
Figure 106112034-A0305-02-0195-96
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 71
Figure 106112034-A0305-02-0195-97
<210> 72
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 72
Figure 106112034-A0305-02-0196-98
<210> 73
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 73
Figure 106112034-A0305-02-0196-99
<210> 74
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 74
Figure 106112034-A0305-02-0196-100
<210> 75
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 75
Figure 106112034-A0305-02-0197-101
<210> 76
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 76
Figure 106112034-A0305-02-0197-102
<210> 77
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 77
Figure 106112034-A0305-02-0197-103
Figure 106112034-A0305-02-0198-104
<210> 78
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 78
Figure 106112034-A0305-02-0198-105
<210> 79
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 79
Figure 106112034-A0305-02-0199-106
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 80
Figure 106112034-A0305-02-0200-107
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 81
Figure 106112034-A0305-02-0200-108
<210> 82
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 82
Figure 106112034-A0305-02-0200-109
<210> 83
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 83
Figure 106112034-A0305-02-0200-110
<210> 84
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 84
Figure 106112034-A0305-02-0201-111
<210> 85
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 85
Figure 106112034-A0305-02-0201-112
<210> 86
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 86
Figure 106112034-A0305-02-0201-113
Figure 106112034-A0305-02-0202-114
<210> 87
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 87
Figure 106112034-A0305-02-0202-115
<210> 88
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 88
Figure 106112034-A0305-02-0202-116
Figure 106112034-A0305-02-0203-117
<210> 89
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 89
Figure 106112034-A0305-02-0203-118
Figure 106112034-A0305-02-0204-119
<210> 90
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 90
Figure 106112034-A0305-02-0204-120
<210> 91
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 91
Figure 106112034-A0305-02-0204-121
<210> 92
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成 胜肽」
<400> 92
Figure 106112034-A0305-02-0205-122
<210> 93
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 93
Figure 106112034-A0305-02-0205-123
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 94
Figure 106112034-A0305-02-0205-124
<210> 95
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 95
Figure 106112034-A0305-02-0206-125
<210> 96
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 96
Figure 106112034-A0305-02-0206-126
<210> 97
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 97
Figure 106112034-A0305-02-0206-127
Figure 106112034-A0305-02-0207-128
<210> 98
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 98
Figure 106112034-A0305-02-0207-129
<210> 99
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 99
Figure 106112034-A0305-02-0208-130
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 100
Figure 106112034-A0305-02-0208-131
Figure 106112034-A0305-02-0209-132
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 101
Figure 106112034-A0305-02-0209-133
<210> 102
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 102
Figure 106112034-A0305-02-0209-134
<210> 103
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 103
Figure 106112034-A0305-02-0209-135
<210> 104
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 104
Figure 106112034-A0305-02-0210-136
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 105
Figure 106112034-A0305-02-0210-137
<210> 106
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 106
Figure 106112034-A0305-02-0210-138
Figure 106112034-A0305-02-0211-139
<210> 107
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 107
Figure 106112034-A0305-02-0211-140
<210> 108
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 108
Figure 106112034-A0305-02-0211-141
Figure 106112034-A0305-02-0212-142
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 109
Figure 106112034-A0305-02-0212-143
Figure 106112034-A0305-02-0213-144
<210> 110
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 110
Figure 106112034-A0305-02-0213-145
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 111
Figure 106112034-A0305-02-0213-146
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 112
Figure 106112034-A0305-02-0214-147
<210> 113
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 113
Figure 106112034-A0305-02-0214-148
<210> 114
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 114
Figure 106112034-A0305-02-0214-149
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 115
Figure 106112034-A0305-02-0215-150
<210> 116
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 116
Figure 106112034-A0305-02-0215-151
<210> 117
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 117
Figure 106112034-A0305-02-0215-152
<210> 118
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 118
Figure 106112034-A0305-02-0216-153
<210> 119
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 119
Figure 106112034-A0305-02-0217-154
<210> 120
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 120
Figure 106112034-A0305-02-0217-155
<210> 121
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 121
Figure 106112034-A0305-02-0218-156
<210> 122
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 122
Figure 106112034-A0305-02-0218-157
<210> 123
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 123
Figure 106112034-A0305-02-0218-158
<210> 124
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 124
Figure 106112034-A0305-02-0219-159
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 125
Figure 106112034-A0305-02-0219-160
<210> 126
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 126
Figure 106112034-A0305-02-0219-161
<210> 127
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 127
Figure 106112034-A0305-02-0220-162
<210> 128
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 128
Figure 106112034-A0305-02-0220-163
Figure 106112034-A0305-02-0221-164
<210> 129
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 129
Figure 106112034-A0305-02-0221-165
Figure 106112034-A0305-02-0222-166
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 130
Figure 106112034-A0305-02-0222-167
<210> 131
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 131
Figure 106112034-A0305-02-0222-168
<210> 132
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 132
Figure 106112034-A0305-02-0222-169
<210> 133
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 133
Figure 106112034-A0305-02-0223-170
<210> 134
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 134
Figure 106112034-A0305-02-0223-171
<210> 135
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 135
Figure 106112034-A0305-02-0223-172
<210> 136
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 136
Figure 106112034-A0305-02-0224-173
<210> 137
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 137
Figure 106112034-A0305-02-0224-174
<210> 138
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 138
Figure 106112034-A0305-02-0225-175
<210> 139
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 139
Figure 106112034-A0305-02-0226-176
<210> 140
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 140
Figure 106112034-A0305-02-0226-177
<210> 141
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 141
Figure 106112034-A0305-02-0227-178
<210> 142
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 142
Figure 106112034-A0305-02-0227-179
<210> 143
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 143
Figure 106112034-A0305-02-0227-180
<210> 144
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成 胜肽」
<400> 144
Figure 106112034-A0305-02-0228-181
<210> 145
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 145
Figure 106112034-A0305-02-0228-182
<210> 146
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 146
Figure 106112034-A0305-02-0228-183
<210> 147
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 147
Figure 106112034-A0305-02-0229-184
<210> 148
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 148
Figure 106112034-A0305-02-0229-185
Figure 106112034-A0305-02-0230-186
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 149
Figure 106112034-A0305-02-0230-187
<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 150
Figure 106112034-A0305-02-0231-188
<210> 151
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 151
Figure 106112034-A0305-02-0231-189
<210> 152
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 152
Figure 106112034-A0305-02-0231-190
<210> 153
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 153
Figure 106112034-A0305-02-0232-191
<210> 154
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 154
Figure 106112034-A0305-02-0232-192
<210> 155
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 155
Figure 106112034-A0305-02-0232-193
<210> 156
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成 多核苷酸」
<400> 156
Figure 106112034-A0305-02-0233-194
<210> 157
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 157
Figure 106112034-A0305-02-0233-195
<210> 158
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 158
Figure 106112034-A0305-02-0234-196
<210> 159
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 159
Figure 106112034-A0305-02-0234-197
Figure 106112034-A0305-02-0235-198
<210> 160
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 160
Figure 106112034-A0305-02-0235-199
<210> 161
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 161
Figure 106112034-A0305-02-0235-200
<210> 162
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 162
Figure 106112034-A0305-02-0236-201
<210> 163
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 163
Figure 106112034-A0305-02-0236-202
<210> 164
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 164
Figure 106112034-A0305-02-0236-203
<210> 165
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 165
Figure 106112034-A0305-02-0237-204
<210> 166
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 166
Figure 106112034-A0305-02-0237-205
<210> 167
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 167
Figure 106112034-A0305-02-0237-206
Figure 106112034-A0305-02-0238-207
<210> 168
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 168
Figure 106112034-A0305-02-0238-208
Figure 106112034-A0305-02-0239-209
<210> 169
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 169
Figure 106112034-A0305-02-0239-210
<210> 170
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 170
Figure 106112034-A0305-02-0240-211
<210> 171
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 171
Figure 106112034-A0305-02-0240-212
<210> 172
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 172
Figure 106112034-A0305-02-0240-213
<210> 173
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 173
Figure 106112034-A0305-02-0241-214
<210> 174
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 174
Figure 106112034-A0305-02-0241-215
<210> 175
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 175
Figure 106112034-A0305-02-0241-216
<210> 176
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 176
Figure 106112034-A0305-02-0241-217
Figure 106112034-A0305-02-0242-218
<210> 177
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 177
Figure 106112034-A0305-02-0242-219
<210> 178
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 178
Figure 106112034-A0305-02-0242-220
Figure 106112034-A0305-02-0243-221
<210> 179
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 179
Figure 106112034-A0305-02-0243-222
Figure 106112034-A0305-02-0244-223
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 180
Figure 106112034-A0305-02-0244-224
<210> 181
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 181
Figure 106112034-A0305-02-0244-225
<210> 182
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 182
Figure 106112034-A0305-02-0245-226
<210> 183
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 183
Figure 106112034-A0305-02-0245-227
<210> 184
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 184
Figure 106112034-A0305-02-0245-228
<210> 185
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 185
Figure 106112034-A0305-02-0246-229
<210> 186
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 186
Figure 106112034-A0305-02-0246-230
<210> 187
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 187
Figure 106112034-A0305-02-0246-231
Figure 106112034-A0305-02-0247-232
<210> 188
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 188
Figure 106112034-A0305-02-0247-233
<210> 189
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 189
Figure 106112034-A0305-02-0248-234
<210> 190
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 190
Figure 106112034-A0305-02-0249-235
<210> 191
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 191
Figure 106112034-A0305-02-0249-236
<210> 192
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 192
Figure 106112034-A0305-02-0249-237
<210> 193
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 193
Figure 106112034-A0305-02-0249-238
<210> 194
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 194
Figure 106112034-A0305-02-0250-239
<210> 195
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 195
Figure 106112034-A0305-02-0250-240
<210> 196
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 196
Figure 106112034-A0305-02-0250-241
Figure 106112034-A0305-02-0251-242
<210> 197
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 197
Figure 106112034-A0305-02-0251-243
<210> 198
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 198
Figure 106112034-A0305-02-0251-244
Figure 106112034-A0305-02-0252-245
<210> 199
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 199
Figure 106112034-A0305-02-0252-246
Figure 106112034-A0305-02-0253-247
<210> 200
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 200
Figure 106112034-A0305-02-0253-248
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 201
Figure 106112034-A0305-02-0253-249
<210> 202
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 202
Figure 106112034-A0305-02-0254-250
<210> 203
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 203
Figure 106112034-A0305-02-0254-251
<210> 204
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 204
Figure 106112034-A0305-02-0254-252
<210> 205
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 205
Figure 106112034-A0305-02-0255-253
<210> 206
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 206
Figure 106112034-A0305-02-0255-254
<210> 207
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 207
Figure 106112034-A0305-02-0255-255
<210> 208
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 208
Figure 106112034-A0305-02-0256-256
<210> 209
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 209
Figure 106112034-A0305-02-0257-257
<210> 210
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 210
Figure 106112034-A0305-02-0257-258
Figure 106112034-A0305-02-0258-259
<210> 211
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 211
Figure 106112034-A0305-02-0258-260
<210> 212
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 212
Figure 106112034-A0305-02-0258-261
<210> 213
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 213
Figure 106112034-A0305-02-0258-262
<210> 214
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 214
Figure 106112034-A0305-02-0259-263
<210> 215
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 215
Figure 106112034-A0305-02-0259-264
<210> 216
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 216
Figure 106112034-A0305-02-0259-265
Figure 106112034-A0305-02-0260-266
<210> 217
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 217
Figure 106112034-A0305-02-0260-267
<210> 218
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 218
Figure 106112034-A0305-02-0260-268
Figure 106112034-A0305-02-0261-269
<210> 219
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 219
Figure 106112034-A0305-02-0261-270
Figure 106112034-A0305-02-0262-271
<210> 220
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 220
Figure 106112034-A0305-02-0262-272
<210> 221
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 221
Figure 106112034-A0305-02-0262-273
<210> 222
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 222
Figure 106112034-A0305-02-0263-274
<210> 223
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 223
Figure 106112034-A0305-02-0263-275
<210> 224
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 224
Figure 106112034-A0305-02-0263-276
<210> 225
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 225
Figure 106112034-A0305-02-0264-277
<210> 226
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 226
Figure 106112034-A0305-02-0264-278
<210> 227
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多核苷酸」
<400> 227
Figure 106112034-A0305-02-0264-279
Figure 106112034-A0305-02-0265-280
<210> 228
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 228
Figure 106112034-A0305-02-0265-282
<210> 229
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 229
Figure 106112034-A0305-02-0266-283
<210> 230
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 230
Figure 106112034-A0305-02-0266-284
<210> 231
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 231
Figure 106112034-A0305-02-0267-285
<210> 232
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 232
Figure 106112034-A0305-02-0267-286
<210> 233
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 233
Figure 106112034-A0305-02-0267-287
<210> 234
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 234
Figure 106112034-A0305-02-0268-288
<210> 235
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 235
Figure 106112034-A0305-02-0268-289
<210> 236
<211> 301
<212> PRT
<213> 智人
<400> 236
Figure 106112034-A0305-02-0268-290
Figure 106112034-A0305-02-0269-291
Figure 106112034-A0305-02-0270-292
<210> 237
<211> 302
<212> PRT
<213> 食蟹獼猴
<400> 237
Figure 106112034-A0305-02-0270-293
Figure 106112034-A0305-02-0271-294
<210> 238
<211> 281
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 238
Figure 106112034-A0305-02-0272-295
Figure 106112034-A0305-02-0273-296
<210> 239
<211> 282
<212> PRT
<213> 挪威大鼠
<400> 239
Figure 106112034-A0305-02-0273-297
Figure 106112034-A0305-02-0274-298
<210> 240
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=「人工序列之描述：合成胜肽」
<400> 240
Figure 106112034-A0305-02-0275-299

Claims (19)

  1. 一種抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中該抗體包含分別為SEQ ID NO：7-12之H-CDR1-3和L-CDR1-3胺基酸序列。
  2. 根據申請專利範圍第1項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中該抗體包含重鏈和輕鏈，其可變功能域分別具有SEQ ID NO：15和4之胺基酸序列。
  3. 根據申請專利範圍第2項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中所述抗體是IgG1，且位置234及235處的胺基酸殘基被突變成Ala，其中所述胺基酸位置是依照Eu編號格式編號。
  4. 根據申請專利範圍第2項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中所述重鏈及所述輕鏈進一步分別包含SEQ ID NO：5及6的重鏈及輕鏈恆定區域胺基酸序列。
  5. 一種抗TIM-3抗體，其包含：a)SEQ ID NO：15之重鏈可變功能域胺基酸序列和SEQ ID NO：25之重鏈恆定區域胺基酸序列；和b)SEQ ID NO：4之輕鏈可變功能域胺基酸序列和SEQ ID NO：6之輕鏈恆定區域胺基酸序列。
  6. 根據申請專利範圍第1-5項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或部分具有以下特性之至少一者：a)由表面電漿子共振測量，以23nM或更低的KD與人類TIM-3結合；b)由表面電漿子共振測量，以22nM或更低的KD與食蟹獼猴TIM-3結合；c)由ELISA測量，以1.2nM或更低的EC50與人類TIM-3結合； d)由ELISA測量，以46nM或更低的EC50與食蟹獼猴TIM-3結合；e)於單向混合淋巴球反應分析中增加IFN-γ分泌；f)於雙向混合淋巴球反應分析中增加IFN-γ分泌；g)於單向混合淋巴球反應分析中增加TNF-α分泌；h)增加來自樹突細胞的TNF-α分泌；和i)抑制TIM-3與磷脂絲胺酸的交互作用。
  7. 一種醫藥組成物，其包含根據申請專利範圍第1-6項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分及醫藥上可接受的載劑。
  8. 一種經分離的核酸分子，其包含i)編碼根據申請專利範圍第1-6項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈的核苷酸序列；及ii)編碼根據申請專利範圍第1-6項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之輕鏈的核苷酸序列。
  9. 一種載體，其包含根據申請專利範圍第8項的經分離的核酸分子，其中該載體進一步包含表現控制序列。
  10. 一種宿主細胞，其包含：i)編碼根據申請專利範圍第1-6項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之重鏈的核苷酸序列；和ii)編碼根據申請專利範圍第1-6項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分之輕鏈的核苷酸序列。
  11. 一種用於製造抗TIM-3抗體或其抗原結合部分的方法，其包含提供根據申請專利範圍第10項的宿主細胞，在適用於該抗體或部分之表現的條 件下培養該宿主細胞，和分離所得的抗體或部分。
  12. 一種根據申請專利範圍第1-6項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分的用途，其係用於製備在患有與TIM-3活性相關之病狀的患者中增強免疫力的醫藥品。
  13. 一種根據申請專利範圍第1-6項中之任一項的抗TIM-3抗體或其抗原結合部分的用途，其係用於製備在需要治療與TIM-3活性相關之癌症的患者中治療與TIM-3活性相關之癌症的醫藥品。
  14. 一種根據申請專利範圍第7項的醫藥組成物的用途，其係用於製備在患有與TIM-3活性相關之病狀的患者中增強免疫力的醫藥品。
  15. 一種根據申請專利範圍第7項的醫藥組成物的用途，其係用於製備在需要治療與TIM-3活性相關之癌症的患者中治療與TIM-3活性相關之癌症的醫藥品。
  16. 根據申請專利範圍第12-15項中任一項的用途，其中該醫藥品進一步包含化學治療劑、抗贅生物劑、抗血管形成劑、酪胺酸激酶抑制劑、或TIM-3途徑抑制劑。
  17. 根據申請專利範圍第16項的用途，其中所述化學治療劑是愛萊諾迪肯(irinotecan)。
  18. 根據申請專利範圍第12-15項中任一項的用途，其中a)該患者患有發源於皮膚、肺臟、腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮、或胰臟的癌症；b)該患者患有白血病、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、或非霍奇金氏淋巴瘤； c)該患者患有固態腫瘤；或d)該患者患有黑色素瘤、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、膽道癌、或腎細胞癌。
  19. 根據申請專利範圍第17項的用途，其中a)該患者患有發源於皮膚、肺臟、腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮、或胰臟的癌症；b)該患者患有白血病、霍奇金氏淋巴瘤、或非霍奇金氏淋巴瘤；c)該患者患有固態腫瘤；或d)該患者患有黑色素瘤、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、膽道癌、或腎細胞癌。
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