TWI457134B

TWI457134B - Rheumatoid arthritis treatment

Info

Publication number: TWI457134B
Application number: TW099108133A
Authority: TW
Inventors: Tomoyuki Igawa; Shinya Ishii; Atsuhiko Maeda; Mika Sakurai; Tetsuo Kojima; Tatsuhiko Tachibana; Hirotake Shiraiwa; Hiroyuki Tsunoda; Yoshinobu Higuchi
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2009-03-19
Filing date: 2010-03-19
Publication date: 2014-10-21
Also published as: RU2011142183A; JPWO2010107108A1; TW201034685A; KR20110139734A; KR101314880B1; WO2010107108A1; RU2524152C2; JP2011219478A; JP4809930B2

Description

類風濕性關節炎治療劑

本發明係關於含有抗IL-6受體抗體作為有效成份之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病之治療劑。

IL-6為具有多樣功能之細胞激素，可由T細胞、B細胞、單核球、纖維母細胞、骨母細胞、角質細胞、內皮細胞、腎絲球間質(mesangium)細胞、滑膜細胞(synovial cell)之各式各樣的細胞所產生(非專利文獻1、2)。IL-6與IL-6受體結合，更藉由IL-6/IL-6受體複合物與gp130結合，於細胞內傳達訊息(非專利文獻3)。IL-6受體存在膜型與可溶型之二種類，可溶型IL-6受體亦可形成IL-6/IL-6受體複合物，與gp130結合而傳達訊息。

類風濕性關節炎(RA)以多發之關節炎與進行性關節破壞為主症狀，關節外症狀為肺、腎臟、皮下組織等病灶廣，為原因不明的全身性炎症疾患。雖存在各種各樣的全身症狀，但RA的本質為持續性地滑膜炎，成為軟骨破壞及骨糜爛的原因之滑膜炎及續發之關節機能的破壞，為病患特徵的結果。RA為關節的血管增加，淋巴球、巨噬細胞等白血球由血管內向關節滑膜組織移動。於關節局部引起免疫反應，藉由淋巴球或巨噬細胞產生細胞激素之作用而引起炎症反應，進行軟骨、硬骨的破壞。

RA被認為有紅血球沉降的亢進、CRP的上升、血小板數的增加、多株免疫球蛋白的增加或類風濕性因子，該等已被教示與IL-6相關。RA患者之血清中與關節中的IL-6濃度顯示高值，IL-6的程度與RA疾病活動已知為相關(非專利文獻4至6)。再者，已確認滑膜組織的IL-6產生亦亢進(非專利文獻7)。進一步地，已知IL-6於可溶性IL-6受體的共存下，促進破骨前驅細胞分化為破骨細胞，也與骨吸收有關(非專利文獻8)。該等建議IL-6及可溶性IL-6受體與關節破壞相關，實際上RA患者的關節液中，可溶性IL-6受體濃度也顯示高值，包括IL-6，其濃度為活體外誘導破骨細胞的充分量(非專利文獻9)。如以上所述者，IL-6於RA病理狀態中，咸信與抗體產生、淋巴球浸潤、血管翳(pannus)形成、關節破壞、急性期反應、貧血等各種作用相關(非專利文獻10)。近來，由膜型IL-6R與可溶性IL-6受體兩者之結合可抑制IL-6訊息之人型化IL-6抗體(介白質-6受體拮抗劑；TOCILIZUMAB)於RA之優異的臨床試驗結果可知，抑制IL-6受體顯示對於RA的治療為極有效果的手段(非專利文獻10)。

又，已知TOCILIZUMAB除了RA以外，亦有效於兒童慢性關節炎、卡斯托曼病(Castleman disease)的治療。

又，本發明之先前技術文獻如以下所示。

【先前技術文獻】【非專利文獻】

【非專利文獻1】Kishimoto T. The biology of interlukin-6. Blood 1989;74:1-10.

【非專利文獻2】Guerne PA,Zuraw BL,Vaughan JH,Garson DA,Lotz M. Synovium as a source of interlukin 6 in vitro. Contribution to local and systemic manifestations of arthritis. J Clin Invest 1989;83:585-92.

【非專利文獻3】Nishimoto N,Kishimoto T. Interlukin 6: from bench to beside. Nature Clinical Practice Rheumatology 2006;11:19-26.

【非專利文獻4】Hirano T,Matsuda T,Turner M,Miyasaka N,Bouchan G,Tang B,Sato K,Shimizu M,Maini R,Feldmann M,Kishimoto T: Excessive Production of interlukin 6/B cell stimulatory factor-2 in rheumatoid arthritis. European Journal of Immuniology 1988;18:1797-1801.

【非專利文獻5】Houssiau FA,Devogelaer JP,Van Damme J,De Deuxchaisnes CN,Van Snick J: Interlukin-6 in synovial fluid and serum of patients with rheumatoid arthritis and other inflammatory arthritides. Arthritis ＆ Rheumatism. 1988;31:784-788.

【非專利文獻6】Madhok R,Crilly A,Capell HA. Serum interleukin 6 levels in rheumatoid arthritis: correlations with clinical and laboratory indices of disease activity. Ann Rheum Dis 1993;52: 232-4.

【非專利文獻7】Sack U,Kinne RW,Marx T,Heppt P,Bender S,Emmrich F: Interlukin-6 in synovial fluid is closely associated with chronic synovitis in rheumatoid arthritis. Rheumatology International 1993; 13:45-51.

【非專利文獻8】Tamura T,Udagawa N,Takahashi N,Miyaura C,Tanaka S,Yamada Y,Koishihara Y,Ohsugi Y,Kumki K,Taga T,Kishimoto T,Suda T: Soluble interlukin-6 receptor triggers osteoclast formation by interlukin 6. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America USA 1993; 90: 11924-11928.

【非專利文獻9】Kotake S,Sato K,Kim KJ,Takahashi N,Udagawa N,Nakamura I,Yamaguchi A,Kishimoto T,Suda T,Kashiwazaki S: Interlukin-6 and soluble interlukin-6 receptors in the synovial fluids from rheumatoid arthritis patients are responsible for osteoclast-like cell formation. Journal of Bone ＆ Mineral Research 1996; 11: 88-95.

【非專利文獻10】Inhibiting interlukin-6 in rheumatoid arthritis. Choy E/Curr Rheumatol Rep. 2008 Oct; 10(5): 413-7.

本發明為有鑑於該等狀況，本發明之目的係提供含有抗IL-6受體之抗體作為有效成份之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病之治療劑。更具體而言，係藉由作為類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病的治療劑之Tocilizumab的胺基酸置換，而提供抗原中和能力、藥物動態(血漿中滯留性)、免疫原性、安全性、物性均獲改良之以抗IL-6受體之抗體作為有效成份之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病之治療劑。

本發明者們藉由作為類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病的治療劑之Tocilizumab的胺基酸置換，而獲得抗原中和能力、藥物動態(血漿中滯留性)、免疫原性、安全性、物性均獲得改良之抗IL-6受體之抗體。因而發現含有該IL-6受體之抗體作為有效成份之藥劑，有用於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病的治療。

本發明更具體地提供以下之[1]至[3]者。

[1]　含有以下抗體作為有效成分之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑：

(a)包含重鏈之抗體，該重鏈包含具有序列編號：1(VH3-M73之CDR1)之胺基酸序列之CDR1、具有序列編號：2(VH3-M73之CDR2)之胺基酸序列之CDR2、具有序列編號：3(VH3-M73之CDR3)之胺基酸序列之CDR3，

(b)包含輕鏈之抗體，該輕鏈包含具有序列編號：4(VL3之CDR1)之胺基酸序列之CDR1、具有序列編號：5(VL3之CDR2)之胺基酸序列之CDR2、具有序列編號：6(VL3之CDR3)之胺基酸序列之CDR3，

(c)包含重鏈與輕鏈之抗體，該重鏈包含具有序列編號：1(VH3-M73之CDR1)之胺基酸序列之CDR1、具有序列編號：2(VH3-M73之CDR2)之胺基酸序列之CDR2、具有序列編號：3(VH3-M73之CDR3)之胺基酸序列之CDR3，該輕鏈具有序列編號：4(VL3之CDR1)之胺基酸序列之CDR1、具有序列編號：5(VL3之CDR2)之胺基酸序列之CDR2、具有序列編號：6(VL3之CDR3)之胺基酸序列之CDR3。

[2]　含有以下抗體作為有效成分之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑：

(a)包含重鏈之抗體，該重鏈包含具有序列編號：7(VH3-M73之可變區域)之胺基酸序列之重鏈可變區域，

(b)包含輕鏈之抗體，該輕鏈包含具有序列編號：8(VL3之可變區域)之胺基酸序列之輕鏈可變區域，

(c)包含重鏈與輕鏈之抗體，該重鏈包含具有序列編號：7(VH3-M73之可變區域)之胺基酸序列之重鏈可變區域，以及該輕鏈包含具有序列編號：8(VL3之可變區域)之胺基酸序列之輕鏈可變區域。

[3]　含有以下抗體作為有效成分之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑：

(a)包含重鏈之抗體，該重鏈具有序列編號：9(VH3-M73)之胺基酸序列，

(b)包含輕鏈之抗體，該輕鏈具有序列編號：10(VL3)之胺基酸序列，

(c)包含重鏈與輕鏈之抗體，該重鏈具有序列編號：9(VH3-M73)之胺基酸序列，以及該輕鏈具有序列編號：10(VL3)之胺基酸序列。

進一步地，本發明提供以下者。

[4]　包含投藥以下抗體之步驟的類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療方法：

(a)　包含重鏈之抗體，該重鏈包含具有序列編號：1(VH3-M73之CDR1)之胺基酸序列之CDR1、具有序列編號：2(VH3-M73之CDR2)之胺基酸序列之CDR2、具有序列編號：3(VH3-M73之CDR3)之胺基酸序列之CDR3，

[5]　包含投藥以下抗體之步驟之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療方法：

[6]　包含投藥以下抗體之步驟之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療方法：

[7]　以下抗體於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑製造中之使用：

[8]　以下抗體於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑製造中之使用：

(a)　包含重鏈之抗體，該重鏈包含具有序列編號：7(VH3-M73之可變區域)之胺基酸序列之重鏈可變區域，

(b)　包含輕鏈之抗體，該輕鏈包含具有序列編號：8(VL3之可變區域)之胺基酸序列之輕鏈可變區域，

(c)　包含重鏈與輕鏈之抗體，該重鏈包含具有序列編號：7(VH3-M73之可變區域)之胺基酸序列之重鏈可變區域，以及該輕鏈包含具有序列編號：8(VL3之可變區域)之胺基酸序列之輕鏈可變區域。

[9]　以下抗體於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑製造中之使用：

[10]　用於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療方法中之以下抗體：

[11]　用於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療方法中之以下抗體：

[12]　用於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療方法中使用之以下抗體：

含有根據本發明所得抗IL-6受體之抗體作為有效成分之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑，抗原中和能力、藥物動態(血漿中滯留時間)、免疫原性、安全性、物性均獲得改良且可減少投藥頻率，可發揮持續性治療效果。

本發明係關於含有以下抗體作為有效成分之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑：

進一步地，本發明係關於含有以下抗體作為有效成分之類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病之治療劑：

(a)　包含重鏈之抗體，該重鏈具有序列編號：9(VH3-M73)之胺基酸序列，

(b)　包含輕鏈之抗體，該輕鏈具有序列編號：10(VL3)之胺基酸序列，

(c)　包含重鏈與輕鏈之抗體，該重鏈具有序列編號：9(VH3-M73)之胺基酸序列，以及該輕鏈具有序列編號：10(VL3)之胺基酸序列。

進一步地本發明提供，於具有上述胺基酸序列之本發明抗體中，具有1個或複數個胺基酸(通常為30個胺基酸以內，較佳為10個胺基酸以內，再較佳為5個胺基酸以內，更較佳為3個胺基酸以內)經改變(置換、缺失、附加及/或插入等)或經修飾之胺基酸序列之抗體。該等胺基酸序列經改變或修飾之抗體較佳為具有與原抗體為同等的活性(抗原結合活性、抗原中和活性等)。

又，本發明抗體所使用之抗體，亦可為雙重特異性抗體。雙重特異性抗體意指，在同一抗體分子內具有辨識不同抗原決定基(epitope)之可變區域的抗體。本發明中，雙重特異性抗體亦可為辨識IL-6受體分子上不同抗原決定基之雙重特異性抗體，其中之一抗原結合部位辨識IL-6受體，另一抗原結合部位辨識其他物質之雙重特異性抗體。由辨識IL-6受體之本發明抗體所成之雙重特異性抗體之另一抗原結合部位所結合之抗原，可列舉例如IL-6、TNFα、TNFR1、TNFR2、CD80、CD86、CD28、CD20、CD19、IL-1α、IL-β、IL-1R、RANKL、RANK、IL-17、IL-17R、IL-23、IL-23R、IL-15、IL-15R、BlyS、淋巴毒素α、淋巴毒素β、LIGHT配體、LIGHT、VLA-4、CD25、IL-12、IL-12R、CD40、CD40L、BAFF、CD52、CD22、IL-32、IL-21、IL-21R、GM-CSF、GM-CSFR、M-CSF、M-CSFR、IFN-α、VEGF、VEGFR、EGF、EGFR、CCR5、APRIL、APRILR等。

本發明抗體所使用之FR並無特別限定，可由此項技術領域者適宜選擇。雖無特別限定，但較佳使用源自人類之FR。FR亦可為由天然序列之胺基酸經改變者。

本發明抗體所使用之恆定區域並無特別限定，可由此項技術領域者適宜選擇。雖無特別限定，但較佳使用原自人類之恆定區域。恆定區域亦可為由天然序列之胺基酸經改變者。

上述本發明抗體為抗原中和能力、藥物動態(血漿中滯留性)、免疫原性、安全性及/或物性優異之抗IL-6受體之抗體，非常有用於作為類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病之治療劑。

本發明抗體可藉由此項技術領域者所習知之方法而製造。

例如，製作編碼本發明抗體之基因，將該基因組裝至適當載體，將該載體導入至宿主，使用基因重組技術可使其產生(例如，參照Borrebaeck C. A. K. and Larrick J. W. THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES,Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD,1990)。

因此，本發明係提供製造本發明抗體之方法，包含將含有編碼本發明抗體之基因導入至載體之宿主細胞予以培養的步驟。

更具體而言，提供包含以下步驟之本發明抗體之製造方法。

(a)　含有將編碼本發明抗體之基因導入至載體之宿主細胞予以培養的步驟，

(b)　取得該基因所編碼之抗體的步驟。

具體而言，使用哺乳類細胞產生時，可藉由將常用之有用的啟動子、欲表現抗體基因、於其3’下游側功能性地結合於Poly A訊息之DNA或含有該DNA之載體予以表現。例如，作為啟動子/增強子可列舉人類巨細胞病毒迅早期啟動子/增強子(human cytomegalovirus immediate early promoter/enhancer)。

再者，其他於本發明中可使用於抗體表現之啟動子/增強子，可使用反轉錄病毒(retrovirus)、多瘤病毒(polyomavirus)、腺病毒(advenovirus)、猿猴濾過性病毒40(simian virus 40)等病毒啟動子/增強子或人類延長因子-1α(HEF1α)等源自哺乳類細胞之啟動子/增強子。

例如，使用SV40啟動子/增強子時，可容易地根據Mulligan等人之方法(Mulligan,R. C. et al.,Nature(1979) 277,108-114)實施，或者使用HEF1α啟動子/增強子時，可容易地根據Mizushima等人之方法(Mizushima,S. and Nagata,S. Nucleic Acids Res.(1990) 18,5322)實施。

使用大腸桿菌產生時，將常用的有用啟動子、用於抗體分泌之訊息序列，功能性地結合於表現抗體之基因而使其表現。例如啟動子可列舉1acZ啟動子、araB啟動子。使用1acZ啟動子時，可根據Ward等人之方法(Ward,E. S. et al.,Nature(1989) 341,544-546;Ward,E. S. et al.,FASEB J.(1992) 6,2422-2427)，使用araB啟動子時，可根據Better等人之方法(Beter,M. et al.,Science(1988) 240,1041-1043)。

用於抗體分泌之訊息序列，產生於大腸桿菌之細胞膜間區(periplasm)時，可使用pelB訊息序列(Lei,S. P. et al.,J. Bacteriol.(1987) 169,4379-4383)。產生於細胞膜間區之抗體經分離後，適當地再摺疊(refold)抗體構造而使用(例如參照WO96/30394)。

作為複製起源，可使用源自SV40、多瘤病毒、腺病毒、牛乳突病毒(bovine papilloma virus；BPV)等者，進一步地，為了於宿主細胞之基因數擴增，可含有作為表現載體選擇標記之胺基糖磷酸轉移酶(aminoglycoside phophotransferase；APH)基因、硫胺素(thiamine kinase；TK)基因；黃嘌呤-鳥糞嘌呤磷酸核糖轉移酶(xanthine-guanine phosphoribosyl transferase；Ecogpt)基因、二氫葉酸還原酶(dhfr)基因等。

用於本發明所使用抗體之製造，可使用任何產生系統。抗體製造用產生系統，有活體外及活體內之產生系統。活體外產生系統，可列舉使用真核細胞之產生系統或使用原核細胞之產生系統。

使用真核細胞時，有使用動物細胞、植物細胞或真菌細胞之產生系統。做為動物細胞已知有(1)哺乳類細胞，例如CHO、COS、骨髓瘤(myeloma)、BHK(倉鼠腎，baby hamster kidney)、HeLa、Vero等，(2)兩棲類細胞，例如非洲爪蟾(African clawed frog)卵母細胞或(3)昆蟲細胞，例如sf9、sf21、Tn5等。作為植物細胞，已知源自菸草(Nicotiana tabacum)之細胞，亦可為其癒傷組織(callus)培養物。作為真菌細胞，已知例如酵母菌屬(Saccharomyces)(例如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))、絲狀菌例如黑黴菌屬(Aspergillus)(例如黑麴菌(Aspergillus niger))等。

使用原核細胞時，有使用細菌細胞之產生系統。作為細菌細胞，已知大腸桿菌(E. coli)、枯草桿菌。

於該等細胞中，藉由導入目的之抗體基因而形質轉換，藉由將經形質轉換之細胞於活體外培養可獲得抗體。培養可根據習知方法進行。例如，作為培養液可使用DMEM、MEM、RPMI1640、IMDM，亦可併用胎牛血清(FCS)等血清補充液。再者，藉由將導入有抗體基因之細胞移植至動物的腹腔，亦可於活體中產生抗體。

另一方面，作為活體內之產生系統，可列舉使用動物之產生系統或使用植物之產生系統。使用動物時，有使用哺乳類動物、昆蟲之產生系統等。

作為哺乳動物，可使用山羊、豬、綿羊、小鼠、牛等(Vicki Glaser,SPECTRUM Biotechnology Application,1993)。再者，作為昆蟲可使用蠶。使用植物時，例如可使用菸草。

於該等動物或植物中導入抗體基因，於動物或植物之體內產生抗體予以回收。例如，將抗體基因插入編碼山羊β酪蛋白乳汁中固有產生之蛋白質的基因中而調製融合基因。包含插入有抗體基因之融合基因的DNA片段，注入山羊胚胎中，將該胚胎導入至雌山羊。由接受胚胎之山羊所生成之基因轉殖山羊或其後代所產生之乳汁可獲得期望之抗體。為了由基因轉殖山羊所產生之包含期望抗體之乳汁量增加，亦可於基因轉殖山羊使用適合的激素(Ebert,K. M. et al.,Bio/Technology(1994) 12,699/702)。

再者，使用蠶時，將插入有目的抗體基因之桿狀病毒(baculovirus)感染蠶，藉由該蠶之體液可獲得期望之抗體(Maeda,S. et al.,Nature(1985) 315,592-594)。進一步地，使用菸草時，於目的抗體基因之植物表現用載體，例如插入pMON530，將該載體導入至農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)類之細菌中。該細菌感染例如Nicotiana tabacum之菸草，藉由該菸草業可獲的期望抗體(Julian,K.-C. Ma,et al.,Eur. J. Immunol.(1994) 24,131-138)。

如上所述之活體外或或活體內之產生系統進行抗體產生時，可將編碼抗體重鏈(H鏈)或輕鏈(L鏈)之DNA個別地組裝至表現載體而同時使宿主形質轉換，或者亦可將編碼H鏈及L鏈之DNA組裝至單一表現載體，而使宿主形質轉換(參照國際專利申請公開號WO 94-11523號)。

如前述方式所產生、表現之抗體，可由細胞內外、宿主予以均一地分離而精製。本發明所使用之抗體的分離、精製可藉由親和性層析(affinity chromatography)進行。使用於親和性層析之管柱，例如可列舉Protein A管柱、Protein G管柱。使用於Protein A管柱之擔體，例如可列舉HyperD、POROS、Sepharose F.F.等。此外，亦可使用一般蛋白質所使用之分離、精製方法，並無任何限定。

例如，適宜選擇、組合上述親和性層析以外之層析、過濾、超過濾、鹽析、透析等，可分離、精製本發明所使用之抗體。作為層析，例如可列舉離子交換層析、疏水性層析、凝膠過濾等。該等層析可適用於HPLC(高效液相層析，High performance liquid chromatography)。再者，亦可使用逆相HPLC(reverse phase HPLC)。

上述所得之抗體的濃度測定可藉由吸光度的測定或ELISA等而進行。亦即，藉由吸光度測定時，以PBS(-)適當稀釋後，測定280nm的吸光度，以1 mg/ml作為1.35 OD而計算。再者，藉由ELISA時可根據以下方式測定。亦即，以0.1M碳酸氫鈉緩衝液(pH9.6)稀釋為1μg/ml的山羊抗人類IgG(TAG製)100μl，添加至96孔盤(Nunc製)，於4℃培養一夜後，將抗體固相化。封阻後，添加100μl之含有經適當稀釋之本發明所使用抗體之樣品，或標準品之人類IgG(CAPPEL製)，於室溫培養1小時。

洗淨後，添加100μl之經5000倍稀釋之鹼性磷酸酶(alkaline phosphatase)標示之抗人類IgG(BIO SOURCE製)，於室溫培養1小時。洗淨後，添加基質溶液培養後，使用MICROPLATE READER Model 3550(Bio-Rad製)測定405nm之吸光度，算出目的抗體之濃度。

本發明所使用之抗體的IL-6訊息傳遞抑制活性，可根據此項技術領域者通常所使用之習知方法進行評估。例如，培養IL-6依賴性人類骨髓腫瘤株(S6B45，KPMM2)、人類Lennert氏T淋巴腫瘤細胞株KT3或IL-6依賴性細胞MH60.BSF2，對其添加IL-6，藉由同時共存之IL-6抑制劑而可測定IL-6依賴性細胞之³ H-胸腺嘧啶攝入。再者，亦可為培養IL-6受體表現細胞U266，添加¹²⁵ I標識之IL-6，藉由同時地添加IL-6抑制劑，測定結合於IL-6受體表現細胞之¹²⁵ I標識之IL-6的方法。上述分析系統中，除了有IL-6抑制劑存在組之外，設置不含抑制劑之陰性對照組，比較兩者所得結果而可評估IL-6抑制劑之IL-6抑制活性。

本發明所使用之抗體，以適合本發明使用者為限，亦可為抗體之片段或其修飾物。例如，作為抗體片段可列舉Fab、F(ab’)2、Fv或H鏈與L鏈之Fv以適當的連結子連結之單鏈Fv(scFv)、sc(Fv)2等。

進一步地，本發明所使用之抗體，亦可使用作為抗體修飾物之與聚乙二醇(PEG)等各種分子結合之抗體。本發明之「抗體」亦包含該等修飾物。欲取得該等修飾物，可藉由對所得抗體實施化學性修飾而獲得。該等方法於此項技術領域中已然確立。

人型化抗人類IL-6受體之抗體之Tocilizumab，於日本已獲承認為類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎(例如，於多關節具有活動性之青少年突發性關節炎、全身型青少年突發性關節炎)、卡斯托曼病的治療藥。

上述本發明之抗體，係藉由改變Tocilizumab的胺基酸，而為抗原中和能力、血中動態、免疫原性、安全性、物性均獲得改良之抗體。因此，上述本發明之抗體當然具有與Tocilizumab為同樣治療效果，可使用作為類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯多曼病的治療劑。

本發明之治療劑，可以醫藥品的形態投藥，可為經口或非經口之全身性或局部性投藥。例如，可選擇靜脈內注射、肌肉內注射、腹腔內注射、皮下注射、栓劑、灌腸、經口性腸溶劑等，可根據患者的年齡、症狀而選擇適宜投藥方法。有效投藥量通常於每次相對於體中1kg相當於0.01mg至100mg的範圍選擇。或者，可選擇每位患者1至1000mg，較佳為50至250mg地投藥量。較佳投藥量可由此項技術領域者適當地選擇。

本發明之治療劑，亦可添加保存劑或安定劑等製劑上容許之載劑。製劑上容許之載劑意指，其本身可為具有上述治療效果的材料，亦可為不具有該治療效果的材料，可與上述治療劑同時投藥的材料。再者，不具有治療效果的材料，亦可為藉由與抗體併用而具有相乘的或相加的安定化效果的材料。

製劑上容許之材料，例如可列舉滅菌或或生理食鹽水、安定劑、賦形劑、緩衝劑、防腐劑、界面活性劑、螯合劑(EDTA等)、結合劑等。

本發明中，界面活性既可列舉非離子性界面活性劑，例如可列舉山梨醇酐單辛酸酯、山梨醇酐單月桂酸酯、山梨醇酐單棕櫚酸酯等山梨醇酐脂肪酸酯；甘油單辛酸酯、甘油單肉豆蔻酸酯、甘油單硬脂酸酯等甘油脂肪酸酯；十聚甘油單硬脂酸酯、十聚甘油二硬脂酸酯、十聚甘油單亞麻油酸酯等聚甘油脂肪酸酯；聚氧伸乙基山梨醇酐單月桂酸酯、聚氧伸乙基山梨醇酐單油酸酯、聚氧伸乙基山梨醇酐單硬脂酸酯、聚氧伸乙基山梨醇酐單棕櫚酸酯、聚氧伸乙基山梨醇酐三油酸酯、聚氧伸乙基山梨醇酐三硬脂酸酯等聚氧伸乙基山梨醇酐脂肪酸酯；聚氧伸乙基山梨醇四硬脂酸酯、聚氧伸乙基山梨醇四油酸酯等聚氧伸乙基山梨醇脂肪酸酯；聚氧伸乙基甘油單硬脂酸酯等聚氧伸乙基甘油脂肪酸酯；聚乙二醇二硬脂酸酯等聚乙二醇脂肪酸酯；聚乙氧伸乙基月桂基酯等聚氧伸乙基烷基酯；聚氧伸乙基聚氧伸丙基二醇聚氧伸乙基聚氧伸丙基丙基醚、聚氧伸乙基聚氧伸丙基十六基醚等聚氧伸乙基聚氧伸丙基烷基醚；聚氧伸乙基壬基苯基醚等聚氧伸乙基烷基苯基醚；聚氧伸乙基蓖麻油、聚氧伸乙基硬化蓖麻油(聚氧伸乙基氫化蓖麻油)等聚氧伸乙基硬化蓖麻油；聚氧伸乙基山梨醇蜜蠟等聚氧伸乙基蜜蠟衍生物；聚氧伸乙基羊毛脂等聚氧伸乙基羊毛脂衍生物；聚氧伸乙基硬脂醯胺等具有HLB6至18者等等典型之例。

再者，界面活性劑可列舉陰離子界面活性劑，例如可列舉十六基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、油基硫酸鈉等具有碳原子數10至18之烷基之烷基硫酸鹽；聚氧伸乙基月桂基硫酸鈉等環氧乙烷之平均加成莫耳數為2至4之烷基碳原子數為10至18之聚氧伸乙基烷基醚硫酸鹽；月桂基磺酸基琥珀酸酯鈉等烷基之碳原子數為8至18之烷基磺酸基琥珀酸酯鹽；天然系的界面活性劑，例如卵磷酯、甘油磷脂；磷脂質(sphingoemylin)等磷脂質(sphingolin lipids)；碳原子數12至18之脂肪酸之蔗糖脂肪酸酯等等典型之例。

本發明之治療劑中，該等界面活性劑可添加1種或組合2種以上。本發明之製劑中所使用之較佳界面活性劑為聚山梨酸酯20、40、60或80之聚氧伸乙基山梨醇酐脂肪酸酯，特佳為聚山梨酸酯20及80。再者，POLOXAMER(PLURONIC F-68(註冊商標)等)所代表之聚氧伸乙基聚氧伸丙基二醇亦為較佳者。

界面活性劑之添加量雖根據使用之界面活性劑的種類而有所不同，於聚山梨酸酯20或聚山梨酸酯80或者POLOXAMER 188的情況中，一般而言為0.0001至10%(w/w)，較佳為0.001至5%，再較佳為0.005至3%。

本發明中作為緩衝劑，可列舉磷酸、檸檬酸緩衝液、醋酸、蘋果酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、磷酸鉀、葡萄糖酸、辛酸、膽汁酸、水楊酸、三乙醇胺、富馬酸等其他有機酸等，或碳酸緩衝液、Tris緩衝液、組胺酸緩衝液、咪唑緩衝液等。

再者亦可藉溶解於溶液製劑領域之習知水性緩衝液中而調製溶液製劑。緩衝液的濃度一般為1至500mM，較佳為5至100mM，再較佳為10至20mM。

再者，本發明之治療劑亦可含有其他低分子量之多肽、血清白蛋白、膠原蛋白或免疫球蛋白等蛋白質，胺基酸，多醣及單糖等糖類或碳水化合物及糖醇。

本發明中，作為胺基酸，可列舉鹼性胺基酸，例如精胺酸、離胺酸、組胺酸、鳥胺酸等，或該等胺基酸之無機鹽(較佳為鹽酸鹽、磷酸鹽之形式，亦即磷酸胺基酸)。使用游離胺基酸時，較佳pH值可藉由適當的生理容許緩衝物質，例如無機酸，特別是鹽酸、磷酸、硫酸、醋酸、蟻酸或該等之鹽的添加而予以調整。此情況中，磷酸鹽的使用特別對於可獲得安定之凍結乾燥物之點而言，特別有利。可使用調製物為實質上不含有有機酸，例如蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、富馬酸等情況中，或對應之陰離子(磷酸陰離子、酒石酸陰離子、琥珀酸陰離子、富馬酸陰離子等)不存在的情況中，特別有利。較佳胺基酸為精胺酸、離胺酸、組胺酸或鳥胺酸。進一步地，亦可使用酸性胺基酸，例如麩胺酸及天冬胺酸，及其鹽之形式(較佳為鈉鹽)或中性胺基酸，例如異白胺酸、白胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸、半胱胺酸或丙胺酸，或芳香族胺基酸，例如苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸或衍生物之N-乙醯基色胺酸。

本發明中，作為多醣及單糖等糖類或碳水化合物，例如可列舉葡聚糖、葡萄糖、果糖、乳糖、木糖、甘露糖、麥芽糖、蔗糖、海藻糖、半乳糖等。

本發明中，作為糖醇，例如可列舉甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇等。

本發明之藥劑為注射用水溶液時，例如可與生理食鹽水、葡萄糖或含有其他輔助劑(例如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露醇、氯化鈉)之等張溶液混合。再者，該水溶液亦可與適當的溶解輔助劑(例如醇(乙醇等)、多元醇(丙二醇、PEG等)、非離子性界面活性劑(聚山梨酸酯80、HCO-50)等)併用。

進一步地根據需要亦可含有稀釋劑、溶解輔助劑、pH調整劑、無痛化劑、含硫還原劑、抗氧化劑等。

本發明中，作為含硫還原劑，例如可列舉N-乙醯基半胱胺酸、N-乙醯基高半胱胺酸、硫辛酸、硫二甘醇、硫代乙醇胺、硫代甘油、硫代山梨醇、硫乙醇酸及其鹽、硫代硫酸鈉、穀胱甘肽以及碳原子數1至7之硫代烷酸等具有硫氫基者。

再者，本發明中作為抗氧化劑，例如可列舉異抗壞血酸、二丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、α-生育醇、醋酸生育醇、L-抗壞血酸及其鹽、L-抗壞血酸棕櫚酯、L-抗壞血酸硬脂酯、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、沒食子酸三戊酯、沒食子酸丙酯或伸乙二胺四醋酸二鈉(EDTA)、焦磷酸鈉、偏磷酸鈉等螯合劑。

再者於必要時，封入微膠囊(羥基甲基纖維素、明膠、聚[甲基丙烯酸甲酯]等微膠囊)，可為膠體藥物傳遞系統(微脂體、白蛋白微求、微乳化物、奈米粒子及奈米膠囊等)(參照Remington’s Pharmaceutical Science 16^th edition”,Oslo Ed. 1980等)。進一步地，將藥劑作為徐放性藥劑之方法亦為已知，且可適用於本發明(Langer et al.,J. Biomed. Mater. Res. 1981,15: 162-277;Langer,Chem. Tech. 1982,12: 98-105；美國專利第3,773,919號；歐洲專利申請公開案(EP)第58,481號；Sidman et al.,Biopolymers 1983,22: 547-556;EP第133,988號)。進一步地，本藥劑中亦可添加或混合玻尿酸酶，以增加皮下投藥的液量(例如，WO2004/078140等)。

所使用之製劑上容許之載劑，可根據劑型而由上述之中適宜地組合選擇，但不以該等為限。

本發明關於，包含將本發明治療劑投藥至對象的步驟，以治療類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎、卡斯托曼病之方法。本發明中，「對象」意指投藥本發明治療劑之生物體或該生物體內的一部分。生物體雖無特別限定，包含動物(例如人類、家畜動物種、野生動物)。上述「生物體內的一部份」並無特別限定。

本發明中，「投藥」包含經口的或非經口的投藥。經口的投藥可列舉以經口劑形態投藥，而經口劑可選擇顆粒劑、散劑、錠劑、膠囊劑、溶劑、乳劑或懸濁劑等劑型。

非經口的投藥可列舉以注射劑形態投藥，而住設計可列舉靜脈注射劑、肌肉注射劑或腹腔內注射劑等。再者，藉由投藥包含寡核苷酸之基因使用基因治療的方法而導入至活體，可達成本發明方法之效果。再者，本發明之藥劑，可於欲實施處理的區域局部地投藥。例如，亦可能為手術中的局部注入、導管(catheter)的使用或藉由將編碼本發明之肽之DNA之標的化基因的送達而投藥。

本發明治療劑對於對象的投藥，可在疾患的症狀已顯現時，亦可在症狀顯現前做預防性投藥。

進一步地，本發明之抗體係關於使用於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病之治療劑的製造。再者，亦關於用於類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡斯托曼病的治療方法使用。

又，本發明中之胺基酸序列中所包含之胺基酸亦有接受轉譯後修飾(例如，藉由N末端之麩胺醯胺的焦麩胺醯化為焦麩胺酸的修飾為此項技術領域者所熟知之修飾)情況，該等胺基酸於轉譯後經修飾之任一者當包含於本發明之胺基酸序列中。

再者，亦可為結合糖鏈構造之任何構造。EU編號第297號的糖鏈亦可為任何糖鏈構造(較佳為岩藻糖化糖鏈)，亦可不結合糖鏈(例如以大腸桿菌生產時，或EU編號第297號不結合糖鏈的方式改變)。

又本說明書中所引用之全部先前技術文獻，係以參照方式併入本文。

【實施例】

以下藉由實施例更具體說明本發明，但本發明不侷限於該等實施例。

[實施例1]抗人類IL-6受體-抗體之猴PK/PD試驗

TOCILIZUMAB(H鏈WT-IgG1/序列編號：13，L鏈WT-κ/序列編號：14)、以及目的在於改良TOCILIZUMAB之抗原中和能力、血中動態、免疫原性、安全性及物性而於TOCILIZUMAB中導入胺基酸置換等的Fv4-M73(H鏈VH3-M73/序列編號：9，L鏈VL3-κ/序列編號：10)，以此技術領域中習知方法，進行表現、精製(方法請參照參考例)，作為類風濕性關節炎之治療藥，進行如下所述之檢討。

TOCILIZUMAB及Fv4-M73以1mg/kg於靜脈內單次投藥於食蟹猴，評估血漿中濃度變化(方法參照參考例)。TOCILIZUMAB及Fv4-M73之靜脈內投藥後之血漿中濃度變化圖示於第1圖。其結果，Fv4-M73與TOCILIZUMAB相比較，Fv4-M73於食蟹猴中大幅地改善藥物動態。

為了評估食蟹猴之膜型IL-6受體受到何種中和程度之藥效，由投藥第6日至第18日(關於TOCILIZUMAB為第3日至第10日)為止，於腰背部連續地皮下投藥食蟹猴5μg/kg的IL-6，測定24小時後各個體之CRP濃度(方法請參照參考例)。各抗體投藥時之CRP濃度變化示於第2圖。為了評估食蟹猴之可溶型IL-6受體受到何種中和程度之藥效，測定食蟹猴血漿中之非結合型食蟹猴可溶型IL-6受體濃度，計算非結合型之可溶型IL-6受體比率(方法請參照參考例)。各抗體投藥時非結合性之可溶型IL-6受體比率之變化示於第3圖。

Fv4-M73與TOCILIZUMAB相比較，更為持續地中和食蟹猴之膜型IL-6受體。再者，Fv4-M73與TOCILIZUMAB相比較，更為持續地中和食蟹猴之可溶型IL-6受體，長時間抑制非結合型之食蟹猴可溶型IL-6受體的增加。關於該等膜型IL-6受體及可溶型IL-6受體之中和的持續性，發現Fv4-M73係比TOCILIZUMAB更為優異。

[實施例2]

單核細胞趨化蛋白(monocyte chemoattractant protein;MCP)-1，已知相關於單核球-T細胞-NK細胞-嗜鹼性顆粒(basophil)的細胞浸潤。已有報告MCP-1於RA患者之滑膜組織、滑液中為高表現(J Clin Invest. 1992 Sep;90(3): 722-9)，咸信相關於RA的病理狀態(Inflamm Allergy Drug Targets. 2008 Mar;7(1): 53-66)。

再者，VEGF為強力的血管新生因子，已知由RA患者滑膜中的巨噬細胞-纖維母細胞-滑膜細胞等所產生(J Rheumatol. 1995 Sep;22(9): 1624-30)。再者，RA患者血清中的VEGF濃度與疾患活動性或放射線進展(radiographic progression)相關(Arthritis Rheum. 2003 Jun;48(6): 1521-9，Arthritis Rheum. 2001 Sep;44(9): 2055-64)，由於藉由以抗IL-6之抗體TOCILIZUMAB治療RA患者，血清中的VEGF濃度降低，咸信VEGF亦於RA的病理狀態中扮演要角(Mod Rheumatol. 2009;19(1): 12-9，Mediators Inflamm. 2008;2008: 129873)。

因此，TOCILIZUMAB及Fv4-M73藉由sIL-6R及IL-6刺激是否能抑制源自人類RA患者之滑膜細胞的MCP-1及VEGF的產生，依以下的方法進行檢討。

源自人類RA患者之滑膜細胞(TOYOBO)以2×10⁴ /0.05mL/孔播種於含有5%FCS之IMDM培養基的96孔盤，於CO₂ 培養箱(37℃，5%CO₂ )中靜置90分鐘。添加0.05mL之適宜稀釋濃度的TOCILIZUMAB及Fv4-M73，靜置15分鐘後添加0.05mL之可溶型IL-6受體(SR344：根據參考例的方法調製)再靜置30分鐘，再添加0.05mL之IL-6(TORAY)(可溶型IL-6受體及IL-6之最終濃度各為50ng/mL)。培養2日後，回收培養上清液，培養上清液中的MCP-1及VEGF濃度使用ELISA套組(Biosource及Pierce Biotechnology)測定。結果示於第4圖及第5圖。TOCILIZUMAB及Fv4-M73藉由可溶型IL-6受體及IL-6而濃度依賴性地抑制源自人類RA患者之滑膜細胞之MCP-1及VEGF的產生。

由上述可知，Fv4-M73作為抗IL-6受體中和抗體的作用(阻斷結合於IL-6受體之膜型IL-6受體及可溶型IL-6受體之訊息)的持續性，與TOCILIZUMAB相比較極為優異，相較於TOCILIZUMAB可大幅降低投藥頻率與投藥量，進一步地，由於Fv4-M73抑制源自人類RA患者之滑膜細胞之MCP-1及VEGF的產生，顯示Fv4-M73為RA之極為有用的治療藥。

<參考例>

重組可溶型IL-6受體的調製

抗原之人類IL-6受體的重組可溶型IL-6受體係如以下方式調製。J. Biochem. 108,673-676(1990)已報告由N末端側第1號至第344號之胺基酸序列所成之人類IL-6受體(Yamasaki等人,Science 1988;241: 825-828(GenBank # X12830))之CHO細胞穩定表現株的製作。由SR344表現CHO細胞所獲得之培養上清液，經由以Blue Sepharose 6 FF管柱層析、藉由固定有對SR344特異抗體之管柱親和性層析、凝膠過濾管柱層析之3個管柱層析，精製可溶型IL-6受體。以主峰之溶出分液作為最終精製品。

重組可溶型食蟹猴IL-6受體(cIL-6R)的調製

以公開之食蟹獼猴(Macaca mulatta)IL-6受體基因序列(Birney et al,Ensembl 2006,Nucleic Acids Res. 2006 Jan 1;34(Database issue): D556-61)製作原始寡DNA引子，由食蟹猴(Macaca fascicularis)胰臟所調製之cDNA作為模板，使用引子，藉由PCR調製編碼全長食蟹猴IL-6受體基因之DNA片段。所得DNA片段插入至動物細胞表現載體，使用其製作CHO穩定表現株(cyno. sIL-6R產生CHO細胞)。將cyno. sIL-6R產生CHO細胞的培養液以HisTrap管柱(GE Healthcare Biosciences)精製後，使用Amicon Ultra-15 Ultracel-10k(Millipore)濃縮，再以Superdex200 pg16/60凝膠過濾(GE Healthcare Biosciences)進行精製，作為可溶型食蟹猴IL-6受體(以下稱為cIL-6R)的最終精製品。

重組食蟹猴IL-6(cIL-6)的調製

食蟹猴IL-6係如以下方式調製。作成登錄為SWOISSPROT Accession No. P79341之編碼212個胺基酸之鹼基序列，選殖至動物表現載體，導入至CHO細胞製作穩定表現細胞株(cyno. IL-6產生CHO細胞)。將cyno. IL-6產生CHO細胞的培養液以SP-S/FF管柱(GE Healthcare Biosciences)精製後，使用Amicon Ultra-15 Ultracel-5k(Millipore)濃縮，再以Superdex 75pg26/60凝膠過濾管柱(GE Healthcare Biosciences)進行精製，使用Amicon Ultra-15 Ultracel-5k(Millipore)濃縮，作為食蟹猴IL-6(以下稱為cIL-6)的最終精製品。

TOCILIZUMAB之突變體的製作、表現、精製

編碼目的抗體序列之質體片段插入動物細胞表現載體，製作編碼目的H鏈表現載體及L鏈表現載體。所得表現載體之鹼基序列可由此性技術領域者習知方法測定。抗體的表現係使用以下的方法進行。源自人類胎兒腎癌細胞之HEK293H細胞株(Invitrogen)，懸浮於含有10%胎牛血清(Invitrogen)之DMEM培養基(Invitrogen)，以5~6×10⁵ 個/mL的細胞密度，各10mL接種於附著細胞用培養皿(直徑10cm，CORNING)的各皿中，於CO₂ 培養箱(37℃，5%CO₂ )內培養一晝夜後，吸取去除培養基，添加CHO-S-SFM-II(Invitrogen)培養基6.9mL。藉由Lipofection法將所調製之質體導入至細胞。回收所得上清培養液後，離心分離(約2000g，5分鐘，室溫)去除細胞，再通過0.22μm過濾器-MILLEX(R)-GV(Millipore)滅菌獲得培養上清液。所獲得之培養上清液使用Protein A Sepharose TM Fast Flow(Amersham Biosciences)，以此項技術領域習知方法精製抗體。精製抗體濃度係使用分光光度計測定280nm的吸光度。由所得數值藉由PACE法算出而使用吸光係數算出抗體濃度(Protein Science 1995;4: 2411-2423)。

藉由猴PK/PD試驗之抗體血漿中濃度、CRP濃度、非結合型可溶型IL-6受體的測定

食蟹猴血漿中濃度測定係以ELISA法藉由此項技術領域者習知方法測定。CRP濃度係以SCIAS R CRP(關東化學股份有限公司)，使用自動分析裝置(TBA-120FR，TOSHIBA Medical Systems Corporation)測定。食蟹猴血漿中之非結合型之可溶型食蟹猴IL-6受體濃度係如以下方式測定。將食蟹猴血漿30μL，於0.22μm過濾杯(Millipore)中添加經乾燥之適量rProtein A Sepharose Fast Flow(GE Healthcare)樹脂，使血漿中所存在之全部IgG型抗體(食蟹猴IgG、抗人類IL-6受體之抗體及抗人類IL-6受體之抗體-可溶型食蟹猴IL-6受體之複合體)吸附於Protein A。之後，以高速離心機向下自旋，回收通過的溶液。由於通過的溶液中不含有結合至Protein A之抗人類IL-6受體之抗體-可溶型食蟹猴IL-6之複合體，藉由測定protein A通過溶液中之可溶型食蟹猴IL-6受體濃度，可測定非結合性之可溶型IL-6受體濃度。可溶型食蟹IL-6受體濃度係使用上述所製作之可溶型食蟹猴IL-6受體(cIL-6R)為標準，以此項技術領域者習知方法測定人類IL-6受體而測定。非結合型之可溶型IL-6受體比率係依以下之計算式而計算。

(抗體投藥後之非結合型之可溶型IL-6受體濃度÷抗體投藥前之可溶型IL-6受體濃度)×100

第1圖為顯示TOCILIZUMAB與Fv4-M73以1mg/kg投藥於食蟹猴時，抗體之血漿中濃度的變化圖。

第2圖為顯示TOCILIZUMAB與Fv4-M73以1mg/kg投藥於食蟹猴時，CRP之血漿中濃度的變化圖。

第3圖為顯示TOCILIZUMAB與Fv4-M73以1mg/kg投藥於食蟹猴時，非結合型可溶型IL-6受體率之血漿中濃度的變化圖。

第4圖為顯示藉由TOCILIZUMAB與Fv4-M73之源自人類RA患者之滑膜細胞所致之MCP-1產生抑制作用圖。

第5圖為顯示藉由TOCILIZUMAB與Fv4-M73之源自人類RA患者之滑膜細胞所致之VEGF產生抑制作用圖。

Claims

一種抗體在製備治療類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病(Castleman desease)之藥物的用途，其中該抗體包含重鏈與輕鏈，該重鏈包含具有序列編號：7(VH3-M73之可變區域)之胺基酸序列之重鏈可變區域，以及該輕鏈包含具有序列編號：8(VL3之可變區域)之胺基酸序列之輕鏈可變區域。
一種抗體在製備治療類風濕性關節炎、兒童慢性關節炎或卡托斯曼病(Castleman desease)之藥物的用途，其中該抗體包含重鏈與輕鏈，該重鏈具有序列編號：9(VH3-M73)之胺基酸序列，以及該輕鏈具有序列編號：10(VL3)之胺基酸序列。