TWI448310B - Medical dressings and their coating methods for frozen freeze - dried platelets - Google Patents

Description

被覆凍乾血小板的醫療敷料及其被覆方法

本發明係有關一種被覆經保護的凍乾血小板的醫療敷料及其被覆方法。

在醫療敷料(medical dressing)上被覆血小板濃厚液(platelet-rich plasma，以下簡稱PRP)或其相關技術為習知技術，例如美國第8168230、8092837號專利、第20120076750、20120003324、20100233277公開申請案等，都揭示PRP被覆在醫療敷料的技術，但該等技術涉及的PRP或其相關組成物，都沒有經過保護步驟予以保護，因此都有效價快速衰減的問題，都必須在採血後立即使用，或低溫保存且保存期短的缺點。本發明以凍乾方法，將經保護的血小板被覆於醫療敷料上，可以使血小板細胞的效價在常溫保存一年，仍然實質上沒有顯著變化，亦及經被覆之醫療敷料，在被覆經保護的凍乾血小板後，即使是常溫保存，有效期可以高達3年以上。

本發明提供一種被覆凍乾血小板的醫療敷料，其中該凍乾血小板為經保護的凍乾血小板。

本發明提供一種在醫療敷料上被覆凍乾血小板的方法，其中該凍乾血小板為經保護的凍乾血小板。

本發明揭示一種在醫療敷料上被覆凍乾血小板的方法，其係在醫療敷料上被覆經保護的凍乾血小板，其被覆方法包括：一被覆步驟，其係將經保護的血小板溶液被覆於醫療敷料表面；及一凍乾步驟，其係將該被覆血小板溶液的醫療敷料凍乾，使被覆於醫療敷料表面的血小板溶液凍乾成凍乾的血小板。

上述該醫療敷料，可為暫時性覆蓋用的傳統敷料(例如紗布、棉墊)、薄膜式敷料(film dressing)、泡沫式敷料(foam dressing)、或生物敷料(biological dressing)等。以外型區分，上述該醫療敷料，其可為任意習知的形狀，例如纖維狀、管狀、多孔狀、薄膜狀等。

上述所謂經保護之血小板溶液，係指經保護的血小板濃稠液或其稀釋溶液、或以經保護的血小板乾粉復水製成的血小板溶液，以採用經保護的血小板乾粉復水製成的血小板溶液、或經保護的血小板稀釋溶液為較佳，以經保護的血小板稀釋溶液為更佳。

上述所謂經保護的血小板濃稠液，係指在血液或血液製劑(以採用PRP為較佳)中加入特定試劑，使血小板細胞在分離血小板程序中，實質上不致破裂，或大幅降低血小板細胞的破裂比例，而後分離血漿層即可得到血小板濃稠液。其保護方法可採用業者習知的技術(例如參見台灣第I300806、I270375公告專利案、台灣第201004659、 200526680公開專利案、第7,659,052號專利，以下簡稱參考技術)，或利用二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，以下簡稱ADP)保護技術(本發明重要技術之一，參見下述預備實施例)，以採用ADP保護程序所製得的血小板濃稠液、或由該血小板濃稠液稀釋所得的稀釋溶液、或以該血小板濃稠液或其稀釋溶液所製得的血小板乾粉復水製成的血小板溶液為較佳，因為ADP取得容易、品質穩定、而且實施方法控制比較容易。

此處所謂以ADP保護程序製得血小板濃稠液的製程為：在哺乳類動物血小板濃厚血漿中加入0.1至10 mM的ADP溶液，並攪拌均勻，以保護血小板，其中該ADP用量，以血小板濃厚血漿中每100萬個血小板細胞計，使用0.04至4奈莫爾的ADP；再將經保護的血小板濃厚血漿去除血漿層，得經保護的血小板濃稠液。

上述ADP溶液的濃度以0.2~5 mM為較佳，以0.5~2 mM為更佳。

上述ADP溶液的用量以血小板濃厚血漿中每100萬個血小板細胞計，以使用0.1至2奈莫爾的ADP為較佳，以使用0.2至1奈莫爾的ADP為更佳。

上述所謂經保護的血小板稀釋溶液係指以諸如水、水溶液(例如生理食鹽水)稀釋上述經保護的血小板濃稠液所得到的溶液。

上述所謂經保護的血小板乾粉，係指以上述經保護的血小板濃稠液、或經保護的血小板稀釋溶液凍乾所得的血 小板乾粉。而所謂”以經保護的血小板乾粉復水製成的血小板溶液”，係指以諸如水或水溶液(例如生理食鹽水)，使經保護的血小板乾粉溶出所形成的溶液。其中經保護的血小板乾粉的方法，係採用業者習知的保護技術製製得的血小板濃稠液經乾燥、凍乾所製得；或利用ADP保護程序所製得的血小板濃稠液經乾燥、凍乾所製得；以採用後者為較佳。

上述經保護之血小板溶液，其濃度以50K~20M/μL(每毫升含5萬至2000萬個血小板細胞)為較佳，以100K~10M/mL為更佳，以200K~5000K/μL為最佳。熟知此項技藝人士都知道，濃度低於50K/μL也可行，但將使凍乾效率變差(必須多次被覆、凍乾，而且每次凍乾時間較長)，因此雖可行但不宜；濃度高於20M/μL也可行，但較適用於特殊狀況，例如用於浸泡被覆或塗覆程序，而塗覆程序一般而言，比較不適合量產；若用於較適合量產的噴覆程序，則將使相當多的血小板逸失於空氣中。

上述該經保護之血小板溶液可外加任意具有正面效果的有效成分(例如消炎成分、止痛成分、營養成分、及/或可增進吸收的成分)，或實質上沒有負面效果或副作用的成分(例如色料，用以使該醫療敷料具有特定顏色，做為不同產品的標示)。

上述將經保護之血小板溶液被覆於醫療敷料表面的步驟，可採用習知的方法，例如將經保護之血小板溶液噴覆於醫療敷料表面上、將經保護之血小板溶液塗覆於醫療 敷料表面、或將醫療敷料浸於經保護之血小板溶液後再取出等。一般而言，以採用噴覆或塗覆為較佳，以噴覆為更佳；惟在特殊條件下，例如醫療敷料有孔隙，而經保護之血小板又必須深入並均勻被覆於醫療敷料的內部孔隙時，以採用浸泡被覆為較佳。

部分親水性醫療敷料，尤其是吸收性醫療敷料(例如泡沫敷料，foam dressing)，為了避免浸泡、塗覆、或噴覆經保護之血小板溶液時，醫療敷料有溶出現象，可以採用低溫被覆技術，亦即將醫療敷料冷凍到攝氏0度以下的低溫，而後將事先冷卻到接近攝氏0度的經保護的血小板溶液，被覆於該經冷凍的醫療敷料，使該血小板溶液接觸該經冷凍的醫療敷料迅速結冰，避免醫療敷料有溶出現象。經過低溫被覆技術的醫療敷料，宜迅速進行凍乾步驟，或低溫冷藏，以防止”被覆層中已結冰的水分融熔成水，進一步造成醫療敷料溶出”。

上述血小板來源可為異類(heterologous)、異體(homologous)或自體(autologous)血小板，基於使用者的心理考量，該血小板以異體血小板或自體血小板為較佳，以自體血小板為更佳。但基於來源、療效等考量，以採用異類血小板或異體血小板，以異類(哺乳類動物)血小板為更佳，以牛、豬或羊的血小板為最佳。

一般而言，血小板的PDGF(platelet-derivatives growth factor)約為40~200pg/mL，其具有促進癒合的功效，參見Vogt.,et al.,Determination of endogenous growth factors in human wound healing.Wound Repair Regeneration,2004,12(4)：p.485-492.。本發明被覆凍乾血小板的醫療敷料的有效性可能和血小板的PDGF長效活性有關，但其確實相關性仍待進一步證實。

本發明同時揭示一種被覆經保護的凍乾血小板的醫療敷料，其係以醫療敷料為基材，其上被覆經保護的凍乾血小板，其中該凍乾血小板的被覆量為：每克醫療敷料至少含100M~50000M的血小板數，以200~20000 M為較佳。血小板數高於每克醫療敷料含50000 M的血小板數並非不可行，但將使製程比較複雜、繁複，以醫用紗布為例，若採用10000K/μL的血小板溶液，則每克紗布必須被覆5 mL血小板溶液，造成紗布過濕，致使紗布無法完全持水(血小板溶液)，亦即血小板溶液部分流失；血小板數低於每克醫療敷料含100M的血小板數，將使PDGF的釋出量過低，導致療效不彰。

上述醫療敷料、經保護之血小板溶液、被覆、凍乾等的定義均如前述。

為進一步說明本發明技術，茲以較佳實施例說明如下：

預備實施例1：

以血細胞分離機(blood cell separator，MCS System 9000，http：//www.haemonetics.com/)對患者採血，取得36.7 mL的自體PRP。

在1.5 mL小離心管中，加入0.2 mL生理食鹽水及0.2 mL的PRP，充分混合均勻；以全自動血液分析儀(Sysmex Corporation KX-21 Automated Hematology Analyzer，參見http：//www.blockscientific.com/)測得血小板細胞數為476 K/μL(每微升含47.6萬個血小板細胞)，亦即原PRP的血小板細胞數為952 K/μL，確認符合品質要求。

以剩餘的36.5 mL的PRP，加入22 mL含1 mM的ADP(即每升含1毫莫爾ADP)的生理食鹽水溶液，亦即ADP用量為0.633 nmole/Mega(每100萬個血小板細胞0.633奈莫爾的ADP)，震盪30分鐘後，在4000 rpm的轉速下離心7分鐘，去除血漿層後，加逆滲透水稀釋至35 mL並迅速混合均勻，分裝成35瓶(每瓶1 mL)血小板溶液。將35瓶血小板溶液送入-40℃冷凍櫃內(超低溫臥式冷凍櫃，RS-CF 330LT，瑞興冷凍設備有限公司Ruey Shing Refrigeration Equipment Co.,Ltd.)，冷凍24小、時，而後以冷凍乾燥機(FD2-6P-M，金鳴實業有限公司-KINGMECH CO.,LTD)進行冷凍乾燥(-40℃，10 Pa)，36小時，得35瓶血小板乾粉，每瓶約含十億個血小板。

將其中一瓶(樣品1)即時依下述方法復水，並測定血小板數和PDGF效價；其餘34瓶即時真空封裝，並委外滅菌。分別在室溫存放一週後(樣品2)、二週後(樣品3)、四週後(樣品4)、八週後(樣品5)、十二週後(樣品6)、十六週後(樣品7)，各取一瓶滅菌後的血小板乾粉，依下述方法復 水，並測定血小板數和PDGF效價。

復水程序：分別以4 mL逆滲透水，使樣品1~7復水。

測定血小板數：分別取0.4 mL樣品1~7的復水溶液，以全自動血液分析儀，分別測得其血小板數為216、223、208、219、202、205、201 K/μL。

測定PDGF效價：分別取1 mL樣品1~7的復水溶液，並分別稀釋40倍，而後以酵素免疫分析法(Enzyme-linked immunoassay)呈色後，用濾鏡式分析儀(Thermo Fisher Scientific Multiskan FC Filter-based microplate photometer，參見http：//www.ninolab.se/fileadmin/Ninolab/pdf/thermolabsystems/MultiskanFC_Brochure_0308-01_LR.pdf)分析PDGF效價，所得效價乘40倍後，分別為5016、4985、4968、4902、4803、4852、4785 pg/mL。

實驗數據顯示：該血小板乾粉中的血小板數和PDGF效價都相當穩定，第16週的血小板數為原血小板數的93%(201/216)；第16週的PDGF效價為原PDGF效價的95.4%(4785/5016)。

實施例1：

將重量如表1所示的醫療用紗布A、B、C，分別噴覆預備實施例1的復水溶液1、4、5使紗布微濕。送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，取出後稱重，紗布A、B、C重量如表1所示。而後再送入冷凍乾燥機進行冷凍乾燥36小 時，製得被覆凍乾血小板的醫用紗布A、B、C。

在製成當天，以逆滲透水5 mL浸泡紗布A約30分鐘，濾乾；再重複浸泡和濾乾步驟6次；將7次的過濾所得浸泡液集中，加水至稀釋至40 mL。以酵素免疫分析法該稀釋液(不再稀釋)呈色後，用濾鏡式分析儀分析PDGF效價如表1。

室溫保存四週後，以同法處理紗布B，並測得PDGF效價如表1。室溫保存八週後，以同法處理紗布C，並測得PDGF效價如表1。

對紗布A、B、C的實測血小板數和PDGF效價進行正規化(normalization)，正規化公式如下式，結果如表1：N=N_j * 40/W_j

其中N值為正規化後的PDGF效價；N_j 分別代表紗布A、B、C的PDGF效價實測值，參見表1；W_j 為紗布A、B、C所被覆的血小板溶液重量，參見表1；40是因為40 mL的重量為40 g。

實驗數據顯示：紗布A(0週)、B(4週)、C(8週)的PDGF效價，相對於預備實施例相同時期(0、4、8週)的PDGF效價相當符合，其比值分別為0.981(4920/5016)、1.007(4938/4902)、0.952(4572/4803)。

預備實施例2：

從血庫取得PRP(25 mL)，先依預備實施例1的方法，在1.5 mL小離心管中，加入0.2 mL生理食鹽水及0.2 mL的PRP，充分混合均勻後，以全自動血液分析儀測得血小板細胞數為693 K/μL(每微升69.3萬個血小板細胞)，亦即原PRP的血小板細胞數為1386 K/μL。

取14.5 mL上述的PRP，以表2的ADP濃度和用量進行類同實施例1的ADP保護程序。震盪30分鐘後，離心並去除血漿層，得到血小板層(以下簡稱PLT)。加逆滲透水稀釋至20 mL並迅速混合均勻，形成血小板溶液，將該血小板溶液分裝成10瓶(每瓶2 mL)，而後送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，再以冷凍乾燥機進行冷凍乾燥(-40℃，10Pa)，36小時，得10瓶的血小板乾粉，每瓶約含二十億個血小板。

取一瓶血小板乾粉，即時依預備實施例1所述方法復水，取0.5 mL復水溶液，稀釋80倍，而後以酵素免疫分析法呈色，再用濾鏡式分析儀分析PDGF效價，所得效價乘80倍後，其值為11.16 ng/mL。

預備實施例3~8：

以類同預備實施例2的製程製造血小板乾粉，但ADP濃度和用量不同，參見表2。依類同預備實施例2的方法測定PDGF效價，結果參見表2。

實施例2~8：

分別以4 mL逆滲透水使其預備實施例2~8的乾粉復水，形成復水溶液2~8(分別為預備實施例2~8的復水溶液)。

分別將復水溶液2~8，噴覆於醫療用紗布2~8(重量如表3)使紗布微濕。送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，取出後稱重，重量如表3。而後再送入冷凍乾燥機進行冷凍乾燥36小時，製得被覆凍乾血小板的醫用紗布2~8。

在製成當天，分別以逆滲透水5 mL浸泡紗布2~8約30分鐘，濾乾；再重複浸泡和濾乾步驟6次；將7次的過濾所得浸泡液集中，加水至稀釋至40 mL。以酵素免疫分 析法該稀釋液(不再稀釋)呈色後，用濾鏡式分析儀分析PDGF效價如表3。

實驗數據顯示：紗布2~8的PDGF效價，相對於預備實施例2~8的PDGF效價相當符合，其比值分別為0.934、0.981、0.958、0.981、0.952、0.963、0.951。

預備實施例9：

以類同預備實施例2的製程製造血小板乾粉，以表4的ADP濃度和用量進行類同實施例1的ADP保護程序。震盪30分鐘後，離心並去除血漿層，得到PLT。加逆滲透水稀釋至20 mL並迅速混合均勻，形成血小板溶液，將該血小板溶液分裝成5瓶(每瓶4 mL)，而後送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，再以冷凍乾燥機進行冷凍乾燥(-40℃，10 Pa)，36小時，得5瓶的血小板乾粉，每瓶約含四十億個血小板。

取一瓶血小板乾粉，即時依預備實施例1所述方法復水，取0.5mL復水溶液，稀釋160倍，而後以酵素免疫分析法呈色，再用濾鏡式分析儀分析PDGF效價，所得效價乘160倍後，其值為21.05ng/mL。

預備實施例10~15：

以類同預備實施例9的製程製造血小板乾粉，但ADP濃度和用量不同，參見表4。依類同預備實施例2的方法測定PDGF效價，結果參見表4。

實施例9~15：

分別以4 mL逆滲透水使其預備實施例9~15的乾粉復水，形成復水溶液9~15(分別為預備實施例9~15的復水溶液)。

分別將復水溶液9~15，噴覆於醫療用紗布9~15(重量如表5)使紗布微濕。送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，取出後稱重，重量如表5。而後再送入冷凍乾燥機進行冷凍乾燥36小時，製得被覆凍乾血小板的醫用紗布9~15。

在製成當天，分別以逆滲透水10 mL浸泡紗布9~15約30分鐘，濾乾；再重複浸泡和濾乾步驟6次；將7次的過濾所得浸泡液集中，加水至稀釋至80 mL。以酵素免疫分析法該稀釋液(不再稀釋)呈色後，用濾鏡式分析儀分析PDGF效價如表5，正規化公式如下式：N=N_j * 80/W_j

其中N值為正規化後的PDGF效價；N_j 分別代表紗布的PDGF效價實測值，參見表5；W_j 為紗布所噴覆的血小 板溶液重量，參見表5；80是因為80 mL的重量為80 g。

實驗數據顯示：紗布9~15的PDGF效價，相對於預備實施例9~15相同時期的PDGF效價相當符合，其比值分別為0.952、0.956、0.961、0.986、0.969、0.932、0.972。

預備實施例16：

以血細胞分離機，從約7公升的豬血，分離出620 mL的異類(豬)PRP。在1.5 mL小離心管中，加入0.8 mL生理食鹽水及0.2 mL的PRP，充分混合均勻後，以全自動血液分析儀測得其血小板數為574 K/μL，亦即原PRP的血小板數為2.87 M/μL(每微升含287萬個血小板)。

取21 mL豬的PRP，加30 mL含1 mM的ADP的生理食鹽水溶液(相當於0.50 nmoleADP/Mega血小板)。震盪30分鐘後，離心並去除血漿層，得到PLT。加逆滲透水稀釋至20 ml，並迅速混合均勻，形成血小板溶液，分裝成20瓶血小板溶液(每瓶1 mL)。將血小板溶液送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，而後以冷凍乾燥機進行冷凍乾燥(-40℃，10 Pa)，36小時，得20瓶血小板乾粉，每瓶約含30億個血小板。

取一瓶血小板乾粉，即時依實施例1所述方法復水，並測定血小板數，結果如表6。其餘各瓶即時真空封裝，並委外滅菌。

預備實施例17：

製程類同預備實施例16，但30 mL含1 mM的ADP的生理食鹽水溶液，改用30 mL含1 mM的ADP的逆滲透水溶液。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

預備實施例18：

製程類同實施例16，但30 mL含1 mM的ADP的生理食鹽水溶液，改用15 mL含1 mM的ADP的生理食鹽水溶液和15 mL含1 mM的ADP的逆滲透水溶液的混合溶液。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

預備實施例19：

製程類同實施例16，但離心並去除血漿層的PLT，改用生理食鹽水稀釋至20 ml。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

預備實施例20：

製程類同實施例16，但離心並去除血漿層的PLT，改加10 mL生理食鹽水後，再加逆滲透水稀釋至20 ml。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

預備實施例21：

製程類同實施例17，但離心並去除血漿層的PLT，改用生理食鹽水稀釋至20 ml。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

預備實施例22：

製程類同實施例17，但離心並去除血漿層的PLT，改加10 mL生理食鹽水後，再加逆滲透水稀釋至20 ml。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

預備實施例23：

製程類同實施例18，但離心並去除血漿層的PLT，改用生理食鹽水稀釋至20 ml。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

預備實施例24：

製程類同實施例18，但離心並去除血漿層的PLT，改加10 mL生理食鹽水後，再加逆滲透水稀釋至20 ml。

依類同實施例16的方法測定血小板數，測試結果參見表6。

實施例16~24：

分別以4 mL逆滲透水使其預備實施例16~24的乾粉復水，形成復水溶液16~24。

分別將醫療用紗布16~24(重量如表8)浸泡於復水溶液16~24約20分鐘，瀝乾，再送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，取出後稱重，重量如表8。而後再送入冷凍乾燥機進行冷凍乾燥36小時，製得被覆凍乾血小板的醫用紗布16~24。

在製成當天，分別以逆滲透水5 mL浸泡紗布16~24約30分鐘，濾乾；再重複浸泡和濾乾步驟6次；分別將7次的過濾所得浸泡液集中，並加水至稀釋至40 mL(萃出液16~24)。

分別依實施例1所述方法，測定萃出液16~24的血小板數，結果如表6，正規化公式如下式，結果如表6：N=N_j * 40/W_j

其中N值為正規化後的PDGF效價；N_j 分別代表紗布的PDGF效價實測值，參見表6；W_j 為紗布所噴覆的血小板溶液重量，參見表6；40是因為40 mL的重量為40 g。

實驗數據顯示：紗布16~24正規化後的血小板數，相對於預備實施例16~24的血小板數相當符合，其比值分別為0.962、0.952、0.983、0.958、0.987、0.943、0.968、0.970。0.963。

預備實施例25~31：

取140 mL預備實施例16的PRP，加30 mL含1 mM的ADP的生理食鹽水溶液(相當於0.50 nmoleADP/Mega血小板)。震盪30分鐘後，離心並去除血漿層，得到豬的PLT。

加逆滲透水稀釋至40 ml，並迅速混合均勻，形成豬的血小板溶液25(預備實施例25，10 M/μL，20 mL)。

取20 mL豬的血小板溶液25，加逆滲透水稀釋成40 mL豬的血小板溶液26(預備實施例26，5 M/μL，20 mL)。

取20 mL豬的血小板溶液26，加逆滲透水稀釋成50 mL豬的血小板溶液27(預備實施例27，2 M/μL，30 mL)。

取20 mL豬的血小板溶液27，加逆滲透水稀釋成40 mL豬的血小板溶液28(預備實施例28，1 M/μL，18 mL)。

取20 mL豬的血小板溶液28，加逆滲透水稀釋成40 mL豬的血小板溶液29(預備實施例29，500 K/μL，20 mL)。

取20 mL豬的血小板溶液29，加逆滲透水稀釋成50 mL豬的血小板溶液30(預備實施例30，200 K/μL，30 mL)。

取20 mL豬的血小板溶液30，加逆滲透水稀釋成40 mL豬的血小板溶液31(預備實施例31，100 K/μL，40 mL)

分別取V₀ 毫升(參見表7)的豬血小板溶液25、26、27、 28、29、30、31送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，而後以冷凍乾燥機進行冷凍乾燥(-40℃，10 Pa)，36小時，得豬的血小板乾粉25~31。

分別以V₁ 毫升(參見表7)的逆滲透水，使豬的血小板乾粉25~31復水，形成復水溶液25~31。

分別在1.5 mL小離心管中，加入0.4 mL的復水溶液25~31，而後以全自動血液分析儀測得血小板細胞數N₀ (參見表7)。

實施例25~31：

分別將豬的血小板溶液25~31，噴覆於醫療用紗布25~31(重量W₁ 參見表8)使紗布微濕。送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，取出後稱重(W₂ ，參見表8)。而後再送入冷凍乾燥機進行冷凍乾燥36小時，製得被覆凍乾血小板的醫 用紗布25~31。

在製成當天，分別以逆滲透水5 mL浸泡紗布25~31約30分鐘，濾乾；再重複浸泡和濾乾步驟6次；分別將7次的過濾所得浸泡液集中，並送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，而後以冷凍乾燥機進行冷凍乾燥(-40℃，10 Pa)，36小時，得萃出的血小板乾粉25~31。

分別以V₂ 毫升(參見表8)的逆滲透水，使萃出的血小板乾粉25~31復水，形成萃出溶液25~31。

分別在1.5 mL小離心管中，加入0.4 mL的萃出溶液25~31，而後以全自動血液分析儀測得血小板細胞數N₂ (參見表8)。

正規化計算值依下式計算，其中V₀ 、V₁ 參見表7，N₂ 、V₂ 、W₀ 參見表8：N₀ =N₂ x (V₂ /V₁ ) x (V₀ /W₀ )

實施例32~34：

取三片Aegis Lifesciences公司的三片SSP705001產品(泡沫敷料-foam dressing，參見http：//aegis-lifesciences.com/products.html)，其重量分別為0.37、0.37、0.37克(為避免泡沫敷料溶出，採取粗秤，下同)；送入-40℃冷凍櫃內冷卻至送入-40℃。

分別取預備實施例25、28、31的血小板溶液25、28、31，冷卻至4℃，分別噴覆於已冷卻至送入-40℃的三片SSP705001產品上，再送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時，取出後稱重，其重量分別為：0.69、0.72、0.64克。而後再送入冷凍乾燥機進行冷凍乾燥36小時，製得被覆凍乾血小板的醫用泡沫敷料32~34。

若泡沫敷料或血小板溶液未事先冷卻，噴覆血小板溶液時，會有泡沫敷料溶出的現象。

實施例35~37：

取三片Aegis Lifesciences公司的三片SSP705001產品(泡沫敷料-foam dressing，參見http：//aegis-lifesciences.com/products.html)，其重量分別為0.37、0.37、0.37克(為避免泡沫敷料溶出，採取粗秤，下同)；送入-40℃冷凍櫃內冷卻至送入-40℃。

分別取預備實施例25、28、31的血小板溶液25、28、31，冷卻至4℃，分別噴覆於已冷卻至送入-40℃的三片SSP705001產品上，再送入-40℃冷凍櫃內，冷凍24小時， 取出後稱重，其重量分別為：0.69、0.72、0.64克。而後再送入冷凍乾燥機進行冷凍乾燥36小時，製得被覆凍乾血小板的醫用泡沫敷料35~37。

若泡沫敷料或血小板溶液未事先冷卻，噴覆血小板溶液時，會有泡沫敷料溶出的現象。

Claims (18)

1. 一種在醫療敷料上被覆凍乾血小板的方法，其係在醫療敷料上被覆經保護的凍乾血小板，其被覆方法包括：一保護步驟，其係在血液或血液製劑中加入保護劑；一分離血漿步驟，其係將加入保護劑的血液或血液製劑離心，並去除血漿層，形成血小板濃稠液；一稀釋步驟，其係在血小板濃稠液中，加入適量之水或水溶液，形成經保護的血小板溶液；一被覆步驟，其係將經保護的血小板溶液被覆於醫療敷料表面；及一凍乾步驟，其係將該被覆血小板溶液的醫療敷料凍乾，使被覆於醫療敷料表面的血小板溶液凍乾成凍乾的血小板。
2. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該經保護的血小板溶液，進一步經凍乾形成血小板乾粉後，再加入適量之水或水溶液，形成經保護的血小板溶液。
3. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該經保護的血小板溶液，其血小板濃度為50K~20M/μL。
4. 如申請專利範圍第3項所述之方法，其中該經保護的血小板溶液，其血小板濃度為100K~10M/μL。
5. 如申請專利範圍第4項所述之方法，其中該經保護的血小板溶液，其血小板濃度為200K~5M/μL。
6. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該經保護的血小板溶液係採用二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，以下簡稱ADP)保護。
7. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該經保護的血小板溶液為採用ADP保護程序所製成的血小板溶液，其中該ADP保護程序製得血小板濃稠液的製程為：在哺乳類動物血小板濃厚血漿中加入0.1至10mM的ADP溶液，並攪拌均勻，以保護血小板，其中該ADP用量，以血小板濃厚血漿中每100萬個血小板細胞計，使用0.05至5奈莫爾的ADP；再將經保護的血小板濃厚血漿去除血漿層，得經保護的血小板濃稠液。
8. 如申請專利範圍第7項所述之方法，其中該ADP溶液濃度為0.2~5mM，該ADP用量，以血小板濃厚血漿中每100萬個血小板細胞計，使用0.1至2奈莫爾的ADP。
9. 如申請專利範圍第8項所述之方法，其中該ADP溶液濃度為0.5~2mM，該ADP用量，以血小板濃厚血漿中每100萬個血小板細胞計，使用0.2至1奈莫爾的ADP。
10. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該被覆步驟係採用浸泡被覆、噴覆或刷覆方式。
11. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該血小板為自體血小板、異體血小板、或取自牛、豬或羊的異類血小板。
12. 一種被覆凍乾血小板的醫療敷料，其主體為一醫療敷料，其特徵在該醫療敷料表面被覆一經保護的凍乾血小板層。
13. 如申請專利範圍第12項所述之醫療敷料，其中該醫療敷料所含的凍乾血小板量為：每克醫療敷料含100M~50000M的血小板數。
14. 如申請專利範圍第13項所述之醫療敷料，其中該醫療敷料所含的凍乾血小板量為：每克醫療敷料含200M~20000M的血小板數。
15. 如申請專利範圍第14項所述之醫療敷料，其中該血小板為自體血小板、異體血小板、或取自牛、豬或羊的異類血小板。
16. 如申請專利範圍第12項所述之醫療敷料，其中該經 保護的凍乾血小板，係以ADP溶液使血小板微凝結後凍乾者。
17. 如申請專利範圍第12項所述之醫療敷料，其中該經保護的凍乾血小板層，係由披覆經保護的血小板濃稠液或其稀釋溶液、或以經保護的血小板乾粉復水製成的血小板溶液，凍乾所形成者。
18. 如申請專利範圍第17項所述之醫療敷料，其中該經保護的凍乾血小板層，係由披覆經保護的血小板濃稠液或其稀釋溶液、或以經保護的血小板乾粉復水製成的血小板溶液係採用ADP保護程序所製得；其中該ADP保護程序製得血小板濃稠液的製程為：在哺乳類動物血小板濃厚血漿中加入0.1至10mM的ADP溶液，並攪拌均勻，以保護血小板，其中該ADP用量，以血小板濃厚血漿中每100萬個血小板細胞計，使用0.05至5奈莫爾的ADP；再將經保護的血小板濃厚血漿去除血漿層，得經保護的血小板濃稠液。