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TW202448482A - 磷脂質化合物及其製造及使用方法 - Google Patents

磷脂質化合物及其製造及使用方法 Download PDF

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TW202448482A
TW202448482A TW113105413A TW113105413A TW202448482A TW 202448482 A TW202448482 A TW 202448482A TW 113105413 A TW113105413 A TW 113105413A TW 113105413 A TW113105413 A TW 113105413A TW 202448482 A TW202448482 A TW 202448482A
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TW
Taiwan
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compound
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
therapeutic agent
alkyl
Prior art date
Application number
TW113105413A
Other languages
English (en)
Inventor
千炳權
迪巴 恩珊
羅歐 Ｖ 卡拉
戴文 那杜珊比
達斯汀 Ｓ 賽吉兒
Original Assignee
美商基利科學股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商基利科學股份有限公司 filed Critical 美商基利科學股份有限公司
Publication of TW202448482A publication Critical patent/TW202448482A/zh

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Abstract

揭示磷脂質化合物及其單獨或與額外藥劑組合使用之方法、及用於治療病毒感染的該等化合物之醫藥配方。

Description

磷脂質化合物及其製造及使用方法
需要用於治療病毒感染之化合物、醫藥配方、及方法，例如副黏液病毒科( Paramyxoviridae)、肺病毒科( Pneumoviridae)、小核糖核酸病毒科( Picornaviridae)、黃病毒科( Flaviviridae)、絲狀病毒科( Filoviridae)、及正黏液病毒( Orthomyxovirus)感染。本揭露之實施例可解決此等及其他需求。
在一些實施例中，本揭露提供一種式I之化合物： 式I 或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1係H、C 3-10環烷基、C 6-10芳基、或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基；R 1之環烷基、芳基、或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A及-NR 13AR 14A之基團取代； 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、C 3-6環烷基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基； 各R 13A獨立地係H或可選地經NR 13A1R 14A1取代之C 1-C 3烷基；R 13A1係H或C 1-3烷基；R 14A1係H或C 1-3烷基；及 各R 14A獨立地係H或C 1-3烷基； R 2係H或C 1-3烷基； R 3係C 1-3鹵烷基； Q係C 10-21伸烷基或C 10-21伸烯基；Q之伸烷基或伸烯基可選地經1至6個Q 1A取代；各Q 1A獨立地係鹵基； L係鍵、-O-、或-O(CR 12AR 12B) n-； 各R 12A獨立地係H或C 1-6烷基； 各R 12B獨立地係H或C 1-6烷基；及 n係1或2； X係鍵或C 1-3伸烷基； T係鍵或-O-；及 Z係C 1-6伸烷基； 前提是當X係鍵且T係-O-時，則L係鍵。
在一些實施例中，本揭露提供式I、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在一些實施例中，本揭露提供醫藥配方，其包含醫藥有效量的本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
在一些實施例中，本揭露提供治療或預防有需要之對象之病毒感染的方法，其中該方法包含向該對象投予本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在一些實施例中，本揭露提供一種治療或預防有需要之人類之病毒感染的方法，其中該方法包含向該人類投予本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療或預防有需要之對象之病毒感染的藥劑之方法，其特徵在於使用本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療或預防有需要之人類之病毒感染的藥劑之方法，其特徵在於使用本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在一些實施例中，本揭露提供一種本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽用於製造用於治療或預防有需要之人類之病毒感染的藥劑之用途。
相關申請案之交互參照
本申請案主張於2023年2月16日申請之美國臨時專利申請案第63/485,482號之優先權，其全文出於所有目的併入本文中。 序列表
本申請案含有以.XML檔案格式電子提交之序列表，且其全文特此以引用方式併入本文中。該.XML副本創建於2024年1月11日，被命名為1461-TW-NP.xml且檔案大小為3,491位元組。 I. 概述
本揭露大致上關於用於治療或預防病毒感染之方法及化合物，例如副黏液病毒科、肺病毒科、小核糖核酸病毒科、黃病毒科、絲狀病毒科、及正黏液病毒感染。以下描述闡述例示性方法、參數、及類似者。然而，應認識到，此類描述並不意欲作為對本揭露之範疇的限制，而是作為例示性實施例之描述而提供。 II. 定義
如本說明書中所使用，下列字組、片語、及符號通常意欲具有如下所闡述之含義，除非在使用彼等之上下文中另有指示的情況下。
不在兩個字母或符號之間的破折號（「-」）用於指示取代基之附接點。例如，-CONH 2透過碳原子附接。化學基團前面或末端之破折號係為了方便起見；化學基團可用或不用一或多個破折號描繪，而不失去其通常意義。透過結構中之線繪製之波浪線指示基團之附接點。除非在化學或結構上有要求，否則化學基團之書寫或命名順序不會指示或暗示方向性。
例如，如下所示，化學基團上之波浪線 指示附接點，亦即，其顯示該基團藉其連接至另一所述基團之斷鍵。
如本文中所使用，「本揭露之化合物」可意指式I至式XIIIb中之任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽。同樣地，片語「式（數字）之化合物(a compound of Formula (number))」意指該式之化合物及其醫藥上可接受之鹽。
前綴「C u-C v」或「C u-v」指示後述基團具有u至v個碳原子。例如，「C 1-C 8烷基」或「C 1-8烷基」指示烷基具有1至8個碳原子。
「烷基(alkyl)」係指非支鏈或支鏈飽和烴鏈。例如，烷基可具有1至20個碳原子（亦即C 1-C 20烷基）、1至8個碳原子（亦即C 1-C 8烷基）、1至6個碳原子（亦即C 1-C 6烷基）、或1至3個碳原子（亦即C 1-C 3烷基）。合適烷基之實例包括但不限於甲基（Me、-CH 3）、乙基（Et、-CH 2CH 3）、1-丙基（ n-Pr、正丙基、-CH 2CH 2CH 3）、2-丙基（ i-Pr、異丙基、-CH(CH 3) 2）、1-丁基（ n-Bu、正丁基、-CH 2CH 2CH 2CH 3）、2-甲基-1-丙基（ i-Bu、異丁基、-CH 2CH(CH 3) 2）、2-丁基（ s-Bu、二級丁基、-CH(CH 3)CH 2CH 3）、2-甲基-2-丙基（ t-Bu、三級丁基、-C(CH 3) 3）、1-戊基（正戊基、-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 3）、2-戊基(-CH(CH 3)CH 2CH 2CH 3)、3-戊基(-CH(CH 2CH 3) 2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH 3) 2CH 2CH 3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH 3)CH(CH 3) 2)、3-甲基-1-丁基(-CH 2CH 2CH(CH 3) 2)、2-甲基-1-丁基(-CH 2CH(CH 3)CH 2CH 3)、1-己基(-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2CH 3)、2-己基(-CH(CH 3)CH 2CH 2CH 2CH 3)、3-己基(-CH(CH 2CH 3)(CH 2CH 2CH 3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH 3) 2CH 2CH 2CH 3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH 3)CH(CH 3)CH 2CH 3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH 3)CH 2CH(CH 3) 2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH 3)(CH 2CH 3) 2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH 2CH 3)CH(CH 3) 2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH 3) 2CH(CH 3) 2)、及3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH 3)C(CH 3) 3)。其他烷基包括但不限於庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十五基、十六基、十七基、及十八基。
「伸烷基(alkylene)」係指非支鏈及支鏈二價飽和烴鏈。如本文中所使用，伸烷基具有1至20個碳原子（亦即，C 1-20伸烷基）、1至12個碳原子（亦即，C 1-12伸烷基）、1至8個碳原子（亦即，C 1-8伸烷基）、1至6個碳原子（亦即，C 1-6伸烷基）、1至4個碳原子（亦即，C 1-4伸烷基）、1至3個碳原子（亦即，C 1-3伸烷基）、或1至2個碳原子（亦即，C 1-2伸烷基）。烷基之實例包括但不限於甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、異丁基、三級丁基、戊基、2 -戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基、及3-甲基戊基。當具有特定碳數之烷基殘基被化學名稱命名或由分子式識別時，可涵蓋所有具有該碳數之位置異構物；因此，例如「丁基」包括正丁基（亦即-(CH 2) 3CH 3）、二級丁基（亦即-CH(CH 3)CH 2CH 3）、異丁基（亦即-CH 2CH(CH 3) 2）、及三級丁基（亦即-C(CH 3) 3）；且「丙基」包括正丙基（亦即-(CH 2) 2CH 3）及異丙基（亦即-CH(CH 3) 2）。
「烯基(alkenyl)」係指含有至少兩個碳原子及至少一個碳-碳雙鍵之非支鏈或支鏈烴鏈。如本文中所使用，烯基可具有2至20個碳原子（亦即C 2-20烯基）、2至8個碳原子（亦即C 2-8烯基）、2至6個碳原子（亦即C 2-6烯基）、或2至4個碳原子（亦即C 2-4烯基）。烯基可包括任何數目的碳，諸如C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、C 12、C 13、C 14、C 15、C 16、C 17、C 18、C 19、C 20、或其中任何範圍。烯基可具有任何合適數目的雙鍵，包括但不限於1、2、3、4、5、或更多。烯基之實例包括但不限於乙烯基(vinyl/ethenyl)、丙烯基、異丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、異戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,5-己二烯基、2,4-己二烯基、或1,3,5-己三烯基。烯基可經取代或未經取代。
「烷氧基(alkoxy)」意指具有式–O-烷基之基團，其中烷基（如上所定義）係經由氧原子附接至親體分子。烷氧基之烷基部分可具有1至20個碳原子（亦即C 1-C 20烷氧基）、1至12個碳原子（亦即C 1-C 12烷氧基）、1至8個碳原子（亦即C 1-C 8烷氧基）、1至6個碳原子（亦即C 1-C 6烷氧基）、或1至3個碳原子（亦即C 1-C 3烷氧基）。合適烷氧基之實例包括但不限於甲氧基（-O-CH 3或–OMe）、乙氧基（-OCH 2CH 3或-OEt）、異丙氧基(-O-CH(CH 3) 2)、三級丁氧基（-O-C(CH 3) 3或–OtBu）、及類似者。合適烷氧基之其他實例包括但不限於二級丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基、及類似者。烷氧基可經取代或未經取代。
「鹵烷基(haloalkyl)」係一種烷基（如上所定義），其中該烷基之一或多個氫原子經鹵素原子置換。鹵烷基之烷基部分可具有1至20個碳原子（亦即C 1-C 20鹵烷基）、1至12個碳原子（亦即C 1-C 12鹵烷基）、1至8個碳原子（亦即C 1-C 8鹵烷基）、1至6個碳原子（亦即C 1-C 6烷基）、或1至3個碳原子（亦即C 1-C 3烷基）。合適鹵烷基之實例包括但不限於-CF 3、-CHF 2、-CFH 2、-CH 2CF 3、氟氯甲基、二氟氯甲基、1,1,1-三氟乙基、及五氟乙基。
如本文中所使用，「鹵基(halo)」或「鹵素(halogen)」係指氟基(-F)、氯基(-Cl)、溴基(-Br)、及碘基(-I)。
「鹵烷氧基(haloalkoxy)」係一種烷氧基（如上所定義），其中該烷氧基之一或多個氫原子經鹵素原子置換。鹵烷氧基之烷氧基部分可具有1至20個碳原子（亦即C 1-C 20鹵烷氧基）、1至12個碳原子（亦即C 1-C 12鹵烷氧基）、1至8個碳原子（亦即C 1-C 8鹵烷氧基）、1至6個碳原子（亦即C 1-C 6烷氧基）、或1至3個碳原子（亦即C 1-C 3烷氧基）。合適鹵烷氧基之實例包括但不限於-OCF 3、-OCHF 2、-OCFH 2、-OCH 2CF 3、及類似者。
「羥基(hydroxy)」係指–OH。
「芳基(aryl)」意指藉由自母芳族環系統之單一碳原子移除一個氫原子衍生的芳族烴自由基。例如，芳基可具有6至20個碳原子、6至14個碳原子、或6至10個碳原子。例示性芳基包括但不限於衍生自苯（例如苯基）、萘、蒽、聯苯、及類似者之自由基。
「環烷基(cycloalkyl)」係指具有單個環或多個環之飽和或部分飽和環狀烷基，多個環包括稠合、橋聯、及螺環系統。如本文中所使用，環烷基具有3至20個環碳原子（亦即C 3-20環烷基）、3至12個環碳原子（亦即C 3-12環烷基）、3至10個環碳原子（亦即C 3-10環烷基）、3至8個環碳原子（亦即C 3-8環烷基）、或3至6個環碳原子（亦即C 3-6環烷基）。環烷基之實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、及環辛基。環烷基亦包括含有一或多個雙鍵之部分不飽和環系統，包括具有一個芳族環及一個非芳族環之稠環系統，但不包括全芳族環系統。
「雜芳基(heteroaryl)」係指芳族基團，包括具有芳族互變異構物或共振結構之基團，其具有單環、多個環、或多個稠環，環中具有至少一個雜原子，亦即一或多個獨立地選自氮、氧、及硫之環雜原子，其中氮或硫可經氧化。因此，用語包括具有一或多個環形O、N、S、S(O)、S(O) 2、及N-氧化物基團之環。該用語包括具有一或多個環形C(O)基團之環。如本文所用，雜芳基包括5至20個環原子（亦即，5至20員雜芳基）、5至12個環原子（亦即，5至12員雜芳基）、或5至10個環原子（亦即，5至10員雜芳基）、及1至5個獨立地選自氮、氧、及硫之雜原子、及雜原子之氧化形式。雜芳基之實例包括但不限於吡啶-2(1H)-酮、嗒𠯤-3(2H)-酮、嘧啶-4(3H)-酮、喹啉-2(1H)-酮、嘧啶基、嘌呤基、吡啶基、嗒𠯤基、苯并噻唑基、及吡唑基。雜芳基並未涵蓋如上所定義之芳基或與其重疊。
如本文中所使用，「雜環(heterocycle)」、「雜環基(heterocyclyl)」、或「雜環烷基(heterocycloalkyl)」係指環中具有至少一個雜原子（亦即至少一個選自氧、氮、及硫之環形雜原子）之單一飽和或部分不飽和非芳族環或多環系統，其中多環系統至少包括含有至少一個雜原子之非芳族環。多環系統亦可包括其他芳族環及非芳族環。除非另有指明，否則雜環基具有3至20個環形原子，例如3至12個環形原子，例如3至10個環形原子、或3至8個環形原子、或3至6個環形原子、或3至5個環形原子、或4至6個環形原子、或4至5個環形原子。因此，該用語包括環中具有1至6個環形碳原子及1至3個選自由氧、氮、及硫所組成之群組的環形雜原子之單一飽和或部分不飽和環（例如3、4、5、6、或7員環）。雜原子可以可選地經氧化而形成–N(-OH)-、=N(-O -)-、-S(=O)-、或–S(=O) 2-。當價數要求允許時，多縮合環（例如雙環雜環基）系統之環可經由稠合、螺環、及橋聯鍵彼此連接。雜環包括但不限於吖呾、氮丙啶、咪唑啶、 啉、氧 (oxirane)（環氧乙烷）、氧呾、硫呾、哌𠯤、哌啶、吡唑啶、哌啶、吡咯啶、吡咯啶酮、四氫呋喃、四氫噻吩、二氫吡啶、四氫吡啶、 啶(quinuclidine)、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、6-氧雜-1-氮雜螺[3.3]庚-1-基、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基、2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、2-氮雜雙環[2.1.1]己基、2-氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基、4-氮雜螺[2.4]庚基、5-氮雜螺[2.4]庚基、及類似者。
雜環烷基環亦包括具有2、3、或更多個環之9至15員稠環雜環烷基，其中至少一個環係芳基環，且至少一個環係含有至少一個雜原子之非芳族環。代表性稠合雙環雜環烷基包括但不限於吲哚啉（二氫吲哚）、異吲哚啉（二氫異吲哚）、吲唑啉(indazoline)（二氫吲唑）、苯并[d]咪唑、二氫喹啉、二氫異喹啉、二氫苯并呋喃、二氫異苯并呋喃、苯并[d][1,3]二氧呃(benzo[d][1,3]dioxol)、二氫苯并[b]二㗁𠯤(dihydrobenzo[b]dioxine)、二氫苯并[d]㗁唑、二氫苯并[b]噻吩、二氫異苯并[c]噻吩、二氫苯并[d]噻唑、二氫苯并[c]異噻唑、及苯并[b][1,4]噻𠯤，如以下結構中所示： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
用語「可選地經取代(optionally substituted)」在指稱本文所揭示之化合物之特定部份(moiety)時（例如可選地經取代之芳基）係指一種部份，其中所有取代基係氫或其中該部份之一或多個氫可被所列之取代基置換。
亦提供本文所述之化合物的醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、互變異構形式、同質多形體、及前藥。「醫藥上可接受(pharmaceutically acceptable)」或「生理上可接受(physiologically acceptable)」係指適用於動物醫藥或人類醫藥用途的化合物、鹽、配方、劑型、及其他可用於製備醫藥配方之材料。
本文所述之化合物可經製備及/或調配為醫藥上可接受之鹽或游離鹼（當適當時）。醫藥上可接受之鹽係化合物之游離鹼形式的無毒性鹽，其具備游離鹼之所欲藥理活性。此等鹽可衍生自無機或有機酸或鹼。例如，含有鹼性氮之化合物可藉由使化合物與無機或有機酸接觸而製備為醫藥上可接受之鹽。醫藥上可接受之鹽之非限制性實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸酯、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、及杏仁酸鹽。其他合適的醫藥上可接受之鹽之清單係見於Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21 stEdition, Lippincott Wiliams and Wilkins, Philadelphia, Pa., 2006。
本文所揭示之化合物的「醫藥上可接受之鹽(pharmaceutically acceptable salt)」的實例包括衍生自適當的鹼之鹽，適當的鹼諸如鹼金屬（例如鈉、鉀）、鹼土金屬（例如鎂）、銨、及NX 4 +（其中X係C 1-C 4烷基）。亦包括鹼加成鹽，諸如鈉或鉀鹽。
亦提供本文所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽、異構物、或混合物，其中附接至碳原子之1至n個氫原子可被氘原子或D置換，其中n係分子中之氫原子數。如所屬技術領域中已知，氘原子係氫原子之非放射性同位素。當投予至哺乳動物時，此類化合物可增加對代謝之抗性，並因此可用於增加本文所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽、異構物、或混合物的半衰期。參見例如Foster, 「Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism,」 Trends Pharmacol.Sci., 5(12):524-527 (1984)。此類化合物係藉由所屬技術領域中熟知的手段合成，例如藉由採用其中一或多個氫原子已被氘置換的起始材料。本文所揭示之化合物可在各種位置氘化，包括（但不限於）以下位置：
可併入所揭示化合物的同位素之實例亦包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯、及碘之同位素，諸如分別為 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 13N、 15N、 15O、 17O、 18O、 31P、 32P、 35S、 18F、 36Cl、 123I、及 125I。用發射正子的同位素（諸如 11C、 18F、 15O、及 13N）進行之取代可用於正子發射斷層造影(Positron Emission Topography, PET)研究中，以用於檢查受質受體佔有率。式I至式XIIIb之經同位素標示之化合物通常可藉由所屬技術領域中具有通常知識者已知的習知技術或藉由類似於如下所提出之實例中所述之程序，使用適當的經同位素標示之試劑代替先前所採用之未經標示試劑來製備。
本文所揭示之實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽可含有一或多個不對稱中心，並因此可產生鏡像異構物、非鏡像異構物、及其他立體異構形式，其等可依絕對立體化學定義為( R)-或( S)-、或針對胺基酸定義為(D)-或(L)-。本揭露意欲包括所有此類可能的異構物、以及其外消旋及光學純形式。光學活性(+)及(-)、( R)-及( S)-、或(D)-及(L)-異構物可使用掌性合成組元(synthon)或掌性試劑製備，或使用例如層析法及分段結晶之習知技術解析。用於製備/單離個別鏡像異構物的習知技術包括使用例如掌性高壓液相層析法(high-pressure liquid chromatography, HPLC)，由合適的光學純前驅物進行掌性合成或解析外消旋物（或鹽或衍生物的外消旋物）。當本文所述之化合物含有烯烴雙鍵或其他幾何不對稱中心時，除非另有指明，否則意指該等化合物包括E及Z幾何異構物兩者。同樣地，亦意欲包括所有互變異構形式。當化合物以其掌性形式表示時，應理解的是實施例涵蓋但不限於特定的非鏡像異構或鏡像異構富集形式。當掌性未指定但存在時，應理解的是實施例係關於特定的非鏡像異構或鏡像異構富集形式；或此種（此類）化合物之外消旋或非外消混合物。如本文中所使用，「非外消旋混合物(scalemic mixture)」係立體異構物之比例非1:1之混合物。
用語「預防(prevention/preventing)」意指造成疾病或病況之臨床症狀不發展的疾病或病況之任何治療。用語「預防」亦涵蓋在對象暴露於病毒之後但在疾病之症狀出現之前、及/或在血液中偵測到病毒之前，投予根據本文所揭示之實施例之化合物或組成物，以預防疾病之症狀出現及/或預防病毒在血液中達到可偵測的水平，並投予根據本文所揭示之實施例之化合物或組成物，以藉由在生產前向母親投予並在出生的前幾天內向小孩投予來預防病毒感染自母親至嬰兒之圍產期傳播。
「外消旋物(racemate)」係指鏡像異構物之混合物。此混合物可包含等量或不等量的各鏡像異構物。
「立體異構物(stereoisomer/stereoisomers)」係指一或多個立體中心之掌性有所不同的化合物。立體異構物包括鏡像異構物及非鏡像異構物。若化合物具備一或多個不對稱中心或具有不對稱取代之雙鍵，則其等可以立體異構形式存在，並因而可生產為個別立體異構物或混合物。除非另有指明，此描述意欲包括個別立體異構物及混合物。用於判定立體化學之方法及用於分離立體異構物之方法在所屬技術領域中係熟知的（參見例如Advanced Organic Chemistry, 4th ed., J. March, John Wiley & Sons, New York, 1992之第4章）。
「對象(subject)」或「患者(patient)」意欲描述人類或脊椎動物，包括狗、貓、口袋寵物、狨、馬、牛、豬、綿羊、山羊、大象、長頸鹿、雞、獅、猴、貓頭鷹、大鼠、松鼠、蜂猴屬(slender loris)、及小鼠。「口袋寵物(pocket pet)」係指能夠裝入寬大衣服口袋的一組脊椎動物，諸如例如倉鼠、絨鼠、雪貂、大鼠、天竺鼠、沙鼠、兔、及蜜袋鼯。
「互變異構物(tautomer)」係指質子位置有所不同之化合物交替形式，諸如烯醇-酮及亞胺-烯胺互變異構物，或者含有同時附接至環-NH-及環=N-之環原子的雜芳基，諸如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑、及四唑。
除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語具有與所屬技術領域中具有通常知識者一般理解的意義相同。化學基團前面或末端之破折號係為了方便起見；化學基團可用或不用一或多個破折號描繪，而不失去其通常意義。透過結構中之線繪製之波浪線指示基團之附接點。虛線表示可選的鍵。除非在化學或結構上有要求，否則化學基團之書寫順序或其附接至分子其餘部分之點非指示或暗示方向性。例如，基團「-SO 2CH 2-」等同於「-CH 2SO 2-」，且兩者皆可以任一方向連接。同樣地，「芳基烷基(arylalky)」例如可在基團之芳基或烷基部分附接至分子之其餘部分。諸如「C u-v」或(C u-C v)之前綴指示後述基團具有u至v個碳原子。例如，「C 1-6烷基」及「C 1-C 6烷基」皆指示烷基具有1至6個碳原子。同樣地，用語「x至y員(x-y membered)」環，其中x及y係數值範圍（諸如「3至12員雜環基」），係指含有x至y個原子（例如3至12個）之環，其中至多80%可係諸如N、O、S之雜原子，而其餘原子係碳。
除非另有指明，否則式I至式XIIIb之化合物之碳原子意欲具有四價。若在一些化學結構表示方式中，碳原子未附接有足夠數目的變項以產生四價，則提供四價所需之其餘碳取代基應假定為氫。
如本文中所使用，用語「治療(treating/treatment)」意欲意指投予根據本文所揭示之實施例之化合物或組成物，以減輕或消除病毒感染之症狀及/或減少對象之病毒負荷。
如本文中所使用，用語「治療有效量(therapeutically effective amount)」係本文所揭示之化合物存在於本文所述之配方中的量，該量係在待治療對象之呼吸道及肺的分泌物及組織中、或替代地在血流中提供所欲水平的藥物所需的，以在藉由所選投予途徑投予此配方時，給予預期的生理反應或所欲的生物效應。確切的量將取決於數個因素，例如具體的本文所揭示之化合物、配方之具體活性、所採用之遞送裝置、配方之物理特性、其預期用途、以及對象考量，諸如疾病狀態之嚴重性、對象配合度等，且可由所屬技術領域中具有通常知識者基於本文所提供之資訊輕易判定。用語「治療有效量」或「有效量(effective amount)」亦意指消除或減少對象之病毒負荷及/或病毒貯庫的量。
如本文中所使用，用語「相鄰碳(adjacent carbons)」係指彼此直接附接之連續碳原子。例如，在 中，C 1及C 2係相鄰碳，C 2及C 3係相鄰碳，C 3及C 4係相鄰碳，且C 4及C 5係相鄰碳。同樣地，在 中，C 1及C 2係相鄰碳，C 2及C 3係相鄰碳，C 3及C 4係相鄰碳，且C 4及C 5係相鄰碳，C 5及C 6係相鄰碳且C 6及C 1係相鄰碳。
如本文中所使用，「溶劑合物(solvate)」係指溶劑與化合物之交互作用的結果。亦提供本文所述之化合物的鹽之溶劑合物。亦提供本文所述之化合物的水合物。
如本文中所使用，「前藥(prodrug)」係指在投予至人體後，根據某種化學或酶途徑轉化為母體藥物的藥物之衍生物。
如本文中所使用，「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」或「醫藥上可接受之賦形劑(pharmaceutically acceptable excipient)」包括但不限於任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑、及其組合。醫藥上可接受之載劑及醫藥上可接受之賦形劑於醫藥活性物質之使用係所屬技術領域中熟知的。除非任何習知介質或劑與活性成分不相容，否則設想到其於治療配方中之使用。亦可將補充活性成分併入配方中。（多種）載劑必須是「可接受的」，其意義是與配方之其他成分相容且對其接受者無害。 III. 化合物
在一些實施例中，本揭露提供一種式(I)之化合物： 式I 或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1係H、C 3-10環烷基、C 6-10芳基、或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基；R 1之環烷基、芳基、或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A及-NR 13AR 14A之基團取代； 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、C 3-6環烷基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基； 各R 13A獨立地係H或可選地經NR 13A1R 14A1取代之C 1-C 3烷基；R 13A1係H或C 1-3烷基；R 14A1係H或C 1-3烷基；及 各R 14A獨立地係H或C 1-3烷基； R 2係H或C 1-3烷基； R 3係C 1-3鹵烷基； Q係C 10-21伸烷基或C 10-21伸烯基；Q之伸烷基或伸烯基可選地經1至6個Q 1A取代；各Q 1A獨立地係鹵基； L係鍵、-O-、或-O(CR 12AR 12B) n-； 各R 12A獨立地係H或C 1-6烷基； 各R 12B獨立地係H或C 1-6烷基；及 n係1或2； X係鍵或C 1-3伸烷基； T係鍵或-O-；及 Z係C 1-6伸烷基； 前提是當X係鍵且T係-O-時，則L係鍵。
在一些實施例中，式(I)之化合物具有式(Ia) (Ia)。
在一些實施例中，式(I)之化合物具有式(Ib) (Ib)。
在一些實施例中，式(I)之化合物具有式(Ic) (Ic)。
在一些實施例中，式(I)之化合物具有式(Id) (Id)。
在一些實施例中，式(I)之化合物具有式(Ie) (Ie)。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係其中R 2係H之化合物。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係其中Z係C 1-6伸烷基之化合物。在一些實施例中，Z係C 1-3伸烷基。在一些實施例中，Z係-(CH 2) r-，r係1至6。在一些實施例中，Z係-(CH 2) r-，r係1至3。在一些實施例中，Z係-CH 2-。在一些實施例中，Z係-C 2H 4-。在一些實施例中，Z係-C 3H 6-。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中L係-O(CR 12AR 12B) n-；  各R 12A獨立地係H或C 1-6烷基；各R 12B獨立地係H或C 1-6烷基；且n係1或2。在一些實施例中，L係-O(CR 12AR 12B)-；R 12A係H或C 1-6烷基；且R 12B係H或C 1-6烷基。在一些實施例中，L係-O(CR 12AR 12B)-；R 12A係H或C 1-3烷基；R 12B係H或C 1-3烷基。在一些實施例中，L係-OCH 2-。在一些實施例中，L係鍵。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係C 6-10芳基或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基；R 1之芳基或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A及-NR 13AR 14A之基團取代；各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基；各R 13A獨立地係H或可選地經NR 13A1R 14A1取代之C 1-3烷基；R 13A1係H或C 1-3烷基；R 14A1係H或C 1-3烷基；且各R 14A獨立地係H或C 1-3烷基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係C 6-10芳基或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基；R 1之芳基或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係C 6-10芳基或含有一或兩個N之5至10員雜芳基；R 1之芳基或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基或萘基；R 1之苯基或萘基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；R 1之苯基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；其中R 1之苯基可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；其中R 1之苯基可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；其中R 1之苯基可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷氧基、或含有一、二、或三個N之5至6員雜芳基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；其中R 1之苯基可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、C 1-3烷氧基、或-CN。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；其中R 1之苯基可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係F或-CN。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；其中R 1之苯基經F及-CN取代。在一些實施例中，R 1係 。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係苯基；其中R 1之苯基經F及-OCH 3取代。在一些實施例中，R 1係H。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係其中R 1-L-係 之化合物。在一些實施例中，R 1-L-係H。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中R 1係含有一或兩個N之5至10員雜芳基；R 1之雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、或C 1-3烷氧基。在一些實施例中，R 1係喹啉基，其可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、或C 1-3烷氧基。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Id)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係其中X係鍵之化合物。在一些實施例中，X係C 1-3伸烷基。在一些實施例中，X係-CH 2-。在一些實施例中，X係-C 2H 4-。在一些實施例中，X係-C 3H 6-。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Id)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係其中T係鍵之化合物。在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、或(Id)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係其中T係-O-之化合物。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係以下之化合物：其中Q係C 10-21伸烷基，其可選地經1至6個Q 1A取代；各Q 1A獨立地係鹵基。在一些實施例中，Q係C 10-21伸烷基。在一些實施例中，Q係C 13-21伸烷基。在一些實施例中，Q係C 15-20伸烷基。在一些實施例中，Q係-C 16H 32-。在一些實施例中，Q係-C 17H 34-。在一些實施例中，Q係-C 18H 36-。在一些實施例中，Q係-C 19H 38-。在一些實施例中，Q係-C 20H 40-。在一些實施例中，Q係-(CH 2) m-，m係10至21。在一些實施例中，m係13至20。在一些實施例中，m係15至20。在一些實施例中，m係16。在一些實施例中，m係17。在一些實施例中，m係18。在一些實施例中，m係19。在一些實施例中，m係20。
在一些實施例中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)之化合物或其醫藥上可接受之鹽係其中R 3係C 1-3氟烷基之化合物。在一些實施例中，R 3係-CF 3。在一些實施例中，R 3係– CF 2CF 3。在一些實施例中，R 3係-CHF 2。
所屬技術領域中具有通常知識者瞭解，本文所揭示之基團（例如R 1）之每一個實施例可與其餘基團（例如R 2、R 3等）之各者之任何其他實施例組合，以產生本文所述之式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)、或任何式之完整化合物或其醫藥上可接受之鹽、立體異構物、立體異構物之混合物、或互變異構物，其等之各者皆被視為在本揭露之範圍內。
在一些實施例中，本揭露提供一種如 表 1中所示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。 表1. 本文所揭示之一些化合物
化合物# 結構
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
本文所述之化合物的體內代謝產物亦落入本文之範疇內，其係在此類產物相對於先前技術係新穎且不顯而易見的情況下。此類產物可產生自例如投予的化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、酯化、及類似者，主要是由酶程序所致。因此，包括藉由包含以下之程序產生之新穎且不顯而易見的化合物：使化合物與哺乳動物接觸達一段足以產出其代謝產物的時間。此類產物一般係藉由以下方式識別：製備經放射標示（例如 14C或 3H）之化合物，將其以可偵測劑量（例如大於約0.5 mg/kg）向動物（諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴、或人類）腸胃外投予，允許足夠的時間進行代謝（一般約30秒至30小時），並自尿液、血液、或其他生物樣本中單離其轉化產物。此等產品可容易地單離，因為彼等經標示（其他者係藉由使用能夠結合代謝物中存活之表位的抗體來單離）。代謝物結構係以習知方式判定，例如藉由MS或NMR分析。通常而言，代謝物之分析係以與習知藥物代謝研究相同的方式進行。轉化產物，只要其未於體內發現，即使其本身不具有HSV抗病毒活性，仍可用於該化合物之治療劑量的診斷分析。
用於確定替代胃腸道分泌中化合物之穩定性的處方及方法係已知的。化合物在本文中係定義為在胃腸道中穩定的，其中在37℃下培養1小時後，經保護之基團在替代腸液或胃液中有小於約50莫耳百分比被去保護。僅因為化合物在胃腸道中係穩定的並不意指其無法在體內水解。前藥通常在消化系統中係穩定的，但可能在消化腔、肝臟、肺、或其他代謝器官中、或細胞中實質上水解成母藥。如本文所用，前藥係理解為經化學設計以在通過口服遞送之生物障壁後，有效地釋放母藥之化合物。 IV.                      醫藥配方
本文亦揭示醫藥配方，其包含醫藥有效量的本揭露之化合物（例如式I、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)之化合物）或其醫藥上可接受之鹽、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。本文亦提供一種醫藥配方，其包含醫藥有效量的本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本文所揭示之化合物可與習知載劑及賦形劑一起調配。錠劑可含有例如賦形劑、滑動劑、填充劑、黏合劑、或其組合。水性配方係以無菌形式製備，且當意欲藉由口服投予以外之方式遞送時通常會是等張的。例示性賦形劑包括但不限於「醫藥賦形劑手冊(Handbook of Pharmaceutical Excipients)」(1986)中所闡述之賦形劑。賦形劑可包括例如抗壞血酸及其他抗氧化劑、螯合劑（諸如EDTA）、碳水化合物（諸如右旋糖酐、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素）、硬脂酸、及其組合。在一些實施例中，配方係鹼性。在一些實施例中，配方係酸性。在一些實施例中，配方具有中性pH。在一些實施例中，配方之pH係2至11（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、2至3、2至4、2至5、2至6、2至7、2至8、2至9、2至10、3至4、3至5、3至6、3至7、3至8、3至9、3至10、4至5、4至6、4至7、4至8、4至9、4至10、4至11、5至6、5至7、5至8、5至9、5至10、5至11、6至7、6至8、6至9、6至10、6至11、7至8、7至9、7至10、7至11、8至9、8至10、8至11、9至10、或9至11）。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物具有適用於化合物之口服投予的藥物動力學性質（例如口服生體可用率）。適用於口服投予之配方可例如以下列形式呈現：離散單位，諸如膠囊、扁囊劑(cachet)、或錠劑，各含有預定量的活性成分；粉劑或粒劑；於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；或水包油液體乳液或油包水液體乳液。活性成分亦可例如以大劑量(bolus)、舐劑(electuary)、或糊劑投予。
錠劑可藉由壓製或模製、可選地與一或多種輔助成分一起製造。壓製錠劑可藉由在合適機器中壓製呈自由流動形式（諸如例如粉劑或粒劑）之活性成分來製備，其可選地與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑、分散劑、或其組合混合。模製錠劑可藉由在合適機器中將用惰性液體稀釋劑濕化之粉狀活性成分的混合物模製來製造。錠劑可以可選地進行包衣或刻痕，且可選地經調配，從而自其中提供活性成分的緩慢或控制釋放。
針對眼睛或其他外部組織（例如口腔及皮膚）之感染，配方可作為含有（多種）活性成分之局部軟膏或乳膏施用，其量例如0.075至20% w/w（包括在0.1%至20%之範圍內的（多種）活性成分，增量為0.1% w/w，諸如0.6% w/w、0.7% w/w等）、0.2至15% w/w、或0.5至10% w/w。當以軟膏調配時，活性成分在一些實施例中可與石蠟或水混溶性軟膏基底一起採用。替代地，活性成分可調配成具有水包油乳膏基底之乳膏。
在一些實施例中，乳膏基底之水相可包括例如30%至90%（例如35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%）w/w的多元醇，亦即具有二或更多個羥基之醇，諸如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露醇、山梨醇、甘油、及聚乙二醇（包括PEG 400）、及其混合物。在一些實施例中，乳膏基底可包括例如增強活性成分通過皮膚或其他受影響區域之吸收或滲透的化合物。此類皮膚滲透增強劑之實例包括但不限於二甲基亞碸及相關類似物。在一些實施例中，乳膏或乳液不包括水。
乳液之油相可以已知方式由已知成分構成。在一些實施例中，相僅包含乳化劑（亦稱為乳劑(emulgent)）。在一些實施例中，相包含至少一種乳化劑與脂肪、油、或其組合之混合物。在一些實施例中，一起包括親水性乳化劑係與作用為穩定劑之親脂性乳化劑。（多種）乳化劑（有或無（多種）穩定劑）可一起構成所謂的乳化蠟，且蠟與油及脂肪一起構成所謂的乳化軟膏基底，其可形成乳膏配方之油性分散相。
適用於配方中之乳劑及乳液穩定劑可包括但不限於TWEEN ®60、TWEEN ®80、SPAN ®80、鯨蠟硬脂醇、苄醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉、及其組合。
適用於配方之油或脂肪的選擇可基於達到所欲的妝飾性質。在一些實施例中，乳膏可係不油膩、不染色、且可清洗的產品，且具有合適稠度以避免從管子或其他容器中滲漏。在一些實施例中，可包括酯，諸如例如直鏈或支鏈、單元或二元烷基酯，諸如二異己二酸酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子脂肪酸之丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯、或稱為CRODAMOL ®CAP之支鏈酯之摻合物、或其組合。在一些實施例中，可包括高熔點脂質，諸如白軟石蠟及/或液體石蠟或其他礦物油。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物係單獨投予。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係以醫藥配方投予。在一些實施例中，醫藥配方係用於動物醫藥用途。在一些實施例中，醫藥配方係用於人類用途。在一些實施例中，本文所揭示之醫藥配方包括至少一種額外治療劑。
本文所揭示之醫藥配方可呈任何適用於預期投予方法之形式。本文所揭示之醫藥配方可以單位劑型呈現，且可藉由藥學技術領域中熟知的任何方法製備。例示性技術及配方可見於例如Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)中。此類方法可包括使本文所揭示之化合物與構成一或多種輔助成分之載劑結合之步驟。通常，配方可藉由使活性成分與液體載劑或細分固體載劑或兩者均勻密切地締合來製備，接著若需要則將產物成形。
當例如用於口服用途時，可製備錠劑、喉錠(troche)、口含錠(lozenge)、水性或油性懸浮液、分散性粉劑或粒劑、乳液、硬或軟膠囊、溶液、糖漿、或酏劑。意欲用於口服用途之配方可根據醫藥配方製造之技術領域中已知的任何方法製備，且此類配方可含有一或多種劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑、及防腐劑，以提供適口(palatable)製劑。含有與適用於製造錠劑的無毒性醫藥上可接受之賦形劑混合的活性成分之錠劑係可接受的。此等賦形劑可例如係惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或鈉、乳糖、磷酸鈣或鈉；造粒及崩解劑，諸如玉米澱粉、或藻酸；黏合劑，諸如澱粉、明膠、或阿拉伯膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸、或滑石。錠劑可未包衣或可藉由已知技術（包括微囊封）進行包衣，以延遲胃腸道中之崩解及吸收，藉以在較長期間內提供持續作用。例如，可採用時間延遲材料，諸如單獨單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或與蠟一起。
用於口服用途之配方亦可以硬明膠膠囊呈現，其中活性成分係與惰性固體稀釋劑混合，例如磷酸鈣或高嶺土，或以軟明膠膠囊呈現，其中活性成分係與水或油介質混合，諸如花生油、液體石蠟、或橄欖油。
水性懸浮液可含有與適用於製造水性懸浮液之賦形劑混合的活性材料。此類賦形劑可包括例如懸浮劑（諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠、及阿拉伯膠）及分散或潤濕劑（諸如天然存在磷脂質（例如卵磷脂）、氧化烯與脂肪酸之縮合產物（例如聚氧乙烯硬脂酸酯）、氧化乙烯與長鏈脂族醇之縮合產物（例如十七乙烯氧鯨蠟醇）、氧化乙烯與衍生自脂肪酸及己糖醇酐之部分酯之縮合產物（例如聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯））。水性懸浮液亦可含有例如一或多種防腐劑（諸如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯）、一或多種著色劑、一或多種調味劑、一或多種甜味劑（諸如蔗糖或糖精）、或其組合。懸浮劑之進一步非限制性實例包括環糊精。在一些實施例中，懸浮劑係磺丁基醚β-環糊精(SEB-β-CD)，例如CAPTISOL ®。
油性懸浮液可藉由將活性成分懸浮於植物油（例如花生油、橄欖油、芝麻油、椰子油、或其組合）、礦物油（諸如液體石蠟）、或其組合中來調配。口服懸浮液可含有例如增稠劑，諸如蜂蠟、硬石蠟、鯨蠟醇、或其組合。在一些實施例中，添加甜味劑（諸如以上所闡述者）及/或調味劑，以提供適口口服製劑。在一些實施例中，本文所揭示之配方係藉由添加抗氧化劑（諸如抗壞血酸）來保存。
適用於藉由添加水來製備水性懸浮液的分散性粉劑及粒劑可提供與分散劑或潤濕劑、懸浮劑、防腐劑、及其組合混合的活性成分。合適分散劑或潤濕劑及懸浮劑係由以上所揭示者例示。亦可存在額外賦形劑，例如甜味劑、調味劑、及著色劑。
醫藥配方亦可呈水包油乳液之形式。油相可係植物油（諸如橄欖油或花生油）、礦物油（諸如液體石蠟）、或此等之混合物。合適乳化劑包括天然存在膠（諸如阿拉伯膠及黃蓍膠）、天然存在磷脂質（諸如大豆卵磷脂）、衍生自脂肪酸及己糖醇酐之酯或部分酯（諸如山梨醇酐單油酸酯）、及此等部分酯與氧化乙烯之縮合產物（諸如聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯）。乳液亦可含有甜味劑及調味劑。糖漿及酏劑可與甜味劑（諸如例如甘油、山梨醇、或蔗糖）一起調配。此類配方亦可含有例如緩和藥、防腐劑、調味劑、著色劑、或其組合。
醫藥配方可呈無菌可注射製劑或靜脈內製劑之形式，諸如無菌可注射水性或油質懸浮液。此懸浮液可根據已知技術使用以上已提及之合適分散劑或潤濕劑及懸浮劑調配。無菌可注射製劑或靜脈內製劑亦可係於無毒性腸胃外可接受之稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液（諸如於1,3-丁二醇中之溶液）或製備為凍乾粉劑。可採用之可接受媒劑及溶劑係水、林格氏液(Ringer's solution)、及等張氯化鈉溶液。此外，可採用無菌不揮發油作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可採用任何溫和不揮發油，包括合成單酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，脂肪酸（諸如油酸）可同樣地用於製備可注射劑。可採用之可接受媒劑及溶劑包括但不限於水、林格氏液、等張氯化鈉溶液、及高張氯化鈉溶液。
可與載劑材料組合以生產單劑型的活性成分之量將取決於所治療之宿主及具體投予模式而變化。例如，意欲用於向人類口服投予之延時釋放配方可含有與適當及便利量的載劑材料混配之大約1 mg至1000 mg的活性材料，載劑材料可在佔總配方之5%至95%（重量：重量）間變化。可製備醫藥配方以提供用於投予的可容易測量之量。例如，意欲用於靜脈內輸注之水溶液可含有每毫升溶液3 µg至500 µg的活性成分，使得可進行30 mL/hr之速率的合適體積輸注。
適用於局部投予至眼睛之配方亦包括點眼劑，其中活性成分係溶於或懸浮於合適載劑（尤其是活性成分之水性溶劑）中。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係以0.5%至20%（例如0.5%至10%、1.5%w/w）之濃度包括於本文所揭示之醫藥配方中。
適用於口中局部投予之配方包括口含錠，其可包含於調味基底（通常是蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠）中之活性成分（亦即本文所揭示之化合物及/或額外治療劑）；軟錠(pastille)，其包含於惰性基底（諸如明膠及甘油、或蔗糖及阿拉伯膠）中之活性成分；及漱口藥水，其包含於合適液體載劑中之活性成分。
用於直腸投予之配方可以具有合適基底（包含例如可可脂或水楊酸酯）之栓劑呈現。
適用於陰道投予之配方可以子宮托、棉條、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫、或噴霧配方呈現，其除了活性成分外亦含有如所屬技術領域中已知適當之載劑。
適用於腸胃外投予之配方包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝液、制菌劑、及使配方與預期接受者之血液等張的溶質；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。
配方可存在於單位劑量或多劑量容器（例如密封安瓿及小瓶）中且可儲存於冷凍乾燥(freeze-dried)（凍乾(lyophilized)）條件下，只需要在使用前立即添加無菌液體載劑（例如注射用水）。即時(extemporaneous)注射溶液及懸浮液係製備自先前所述種類之無菌粉劑、粒劑、及錠劑。較佳單位劑量配方係含有每日劑量或單位每日亞劑量（如本文於上所述）或其適當部分的活性成分者。
應理解的是，除了以上特別提及之成分外，配方可包括所屬技術領域中關於所討論配方類型之習知的其他藥劑，例如適用於口服投予者可包括調味劑。
進一步提供動物醫藥配方，其包含本文所揭示之化合物與其動物醫藥載劑一起。
動物醫藥載劑係可用於出於投予配方之目的之材料且可係固體、液體、或氣體材料，其不是惰性的就是在動物醫藥技術領域中係可接受的且與活性成分相容。此等動物醫藥配方可口服、腸胃外投予、或藉由任何其他所欲途徑投予。
本文之化合物係用以提供含有作為活性成分之一或多種化合物的控制釋放醫藥配方（「控制釋放配方」），其中活性成分之釋放可受到控制及調控，以允許較低頻率給藥或改善給定活性成分之藥物動力學或毒性概況。
活性成分之有效劑量至少取決於待治療病況之本質、毒性、化合物係用於疾病預防（較低劑量）或對抗活性病毒感染、遞送方法、及醫藥配方，且將由臨床醫師使用習知劑量增量研究判定。在一些實施例中，每天0.0001至100 mg/kg體重；例如，每天0.01至10 mg/kg體重；每天.01至5 mg/kg體重；每天.05至0.5 mg/kg體重。例如，針對體重大約70 kg成年人類之每日候選劑量可在1 mg至1000 mg（例如5 mg至500 mg）之範圍內，且可採取單次或多次劑量之形式。 V. 套組
本文亦提供包括本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽的套組。在一些實施例中，本文所述之套組可包含化合物於治療有需要之對象（例如人類）的疾病或病況中之標籤及/或使用說明。在一些實施例中，疾病或病況係病毒感染。
在一些實施例中，套組亦可包含一或多種額外治療劑及/或額外治療劑與本文所揭示之化合物之組合在治療有需要之對象（例如人類）的疾病或病況中之使用說明。
在一些實施例中，本文所提供之套組包含個別劑量單位的如本文所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽、外消旋物、鏡像異構物、非鏡像異構物、互變異構物、同質多形體、假同質多形體、非晶形式、水合物、或溶劑合物。個別劑量單位之實例可包括丸劑、錠劑、膠囊、預填充式注射器或注射器匣、IV袋、吸入器、霧化器(nebulizer)等，各包含治療有效量的所討論化合物或其醫藥上可接受之鹽、外消旋物、鏡像異構物、非鏡像異構物、互變異構物、同質多形體、假同質多形體、非晶形式、水合物、或溶劑合物。在一些實施例中，套組可含有單一劑量單位，而在其他情況下則存在多個劑量單位，諸如指定方案或期間所需的劑量單位數目。
亦提供製品，其包括本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽、立體異構物、立體異構物之混合物、或互變異構物；及容器。在一些實施例中，製品之容器係小瓶、罐子(jar)、安瓿、預載注射器、泡殼包裝、錫罐(tin)、罐頭(can)、瓶子、盒子、靜脈內袋、吸入器、或霧化器。 VI. 投予
一或多種本揭露之化合物係藉由適用於待治療之病況的任何途徑投予。合適途徑包括口服、直腸、吸入、肺部、局部（包括經頰及舌下）、陰道、及腸胃外（包括皮下、肌內、靜脈內、皮內、鞘內、及硬膜外）、及類似者。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係藉由吸入投予或靜脈內投予。將理解的是，途徑可隨例如接受者之病況而變化。
在用於治療病毒感染之本揭露之方法中，本揭露之化合物可在任何時間向可能與病毒接觸或已遭受病毒感染之對象投予。在一些實施例中，本揭露之化合物可向與遭受病毒感染之對象接觸的對象或有與遭受病毒感染之人類接觸之風險的對象（例如健康照護提供者）疾病預防性投予。在一些實施例中，本揭露之化合物之投予可向對病毒感染測試呈陽性但尚未顯示病毒感染之症狀的對象。在用於治療病毒感染之本揭露之方法中，本揭露之化合物可在任何時間向可能與病毒接觸或已遭受病毒感染之人類投予。在一些實施例中，本揭露之化合物可向與遭受病毒感染之人類接觸的人類或有與遭受病毒感染之人類接觸之風險的人類（例如健康照護提供者）疾病預防性投予。在一些實施例中，本揭露之化合物之投予可向對病毒感染測試呈陽性但尚未顯示病毒感染之症狀的人類。在一些實施例中，本揭露之化合物之投予可向開始有病毒感染之症狀的人類。
在一些實施例中，本文所揭示之方法包含本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽向對象的事件驅動投予。
如本文中所使用，用語「事件驅動(event driven)」或「事件驅動投予(event driven administration)」係指式I至式XIIIb中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽之投予(1)在會使對象暴露於病毒（或會以其他方式增加對象得到病毒感染之風險）之事件之前（例如在事件之前2小時、1天、2天、5天、或7或更多天）；及/或(2)在會使對象暴露於病毒（或會以其他方式增加對象得到病毒感染之風險）之事件（或多於一個重複事件）期間；及/或(3)在會使對象暴露於病毒（或會以其他方式增加對象得到病毒感染之風險）之事件後（或在一系列重複事件中之最終事件後）。在一些實施例中，事件驅動投予係在對象暴露於病毒前執行。在一些實施例中，事件驅動投予係在對象暴露於病毒後執行。在一些實施例中，事件驅動投予係在對象暴露於病毒前及在對象暴露於病毒後執行。
在某些實施例中，本文所揭示之方法涉及在會使對象（例如人類）暴露於病毒或會以其他方式增加對象（例如人類）得到病毒感染之風險之事件之前及/或之後投予，例如作為暴露前預防(PrEP)及/或作為暴露後預防(PEP)。在一些實施例中，本文所揭示之方法包含暴露前預防(PrEP)。在一些實施例中，本文所揭示之方法包含暴露後預防(PEP)。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽係在對象暴露於病毒前投予。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽係在對象暴露於病毒前及後投予。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽係在對象暴露於病毒後投予。
事件驅動給藥方案之實例包括在病毒前24至2小時內投予本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽，接著在暴露期期間每24小時投予本文所揭示之化合物或醫藥上可接受之鹽，接著在最後一次暴露後進一步投予本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽，及在24小時後最後一次投予本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
事件驅動給藥方案之進一步實例包括在病毒暴露之前24小時內投予式I至式XIIIb中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽，接著在暴露期期間每天投予，接著在最後一次暴露之後大約24小時後最後一次投予（其可係增加之劑量，諸如雙倍劑量）。
活性成分之有效劑量至少取決於待治療病況之本質、毒性、化合物係用於疾病預防或對抗活性病毒感染、遞送方法、及醫藥配方，且將由臨床醫師使用習知劑量增量研究判定。可預期每天0.0001 mg/kg至100 mg/kg體重（例如每天0.01 mg/kg至10 mg/kg體重；每天.01 mg/kg至5 mg/kg體重；每天.05 mg/kg至0.5 mg/kg體重）。在一些實施例中，針對體重大約70 kg成年人類之每日候選劑量係在1 mg至2000 mg（例如5 mg至500 mg、500 mg至1000 mg、1000 mg至1500 mg、1500 mg至2000 mg），且可採取單次或多次劑量（例如每天2次劑量、每天3次劑量）之形式。例如，針對體重大約70 kg成年人類之每日候選劑量可在1 mg至1000 mg（例如5 mg至500 mg）之範圍內，且可採取單次或多次劑量之形式。
已設想用於投予本揭露之化合物的任何合適時間段。例如，投予可係1天至100天，包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、或90天。投予亦可係1週至15週，包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15週。亦設想更長之投予期。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物係每天投予一次。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係每天投予兩次。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係每隔一天投予一次。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係每週投予一次。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係每週投予兩次。
在一些實施例中，一或多種本文所揭示之化合物係每天投予一次。每天一次的劑量可視需要長時間投予，例如至多5天、至多7天、至多10天、至多15天、至多20天、至多25天、至多一個月、或更長。在一些實施例中，每天一次的劑量係投予至多20天、至多15天、至多14天、至多13天、至多12天、至多10天、至多8天、至多6天、至多4天、至多3天、至多2天、或一天。
在一些實施例中，一或多種本文所揭示之化合物係每天給藥一次持續6至12天，例如持續8至10天。在一些實施例中，一或多種化合物係每天投予一次持續9天。在一些實施例中，一或多種化合物係每天投予一次持續10天。在一些實施例中，50至150 mg的一或多種本文所揭示之化合物係每天投予一次持續5至12天，例如持續5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、或12天。在一些實施例中，100 mg的一或多種本文所揭示之化合物係每天投予一次持續5至12天，例如持續5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、或12天。在一些實施例中，500至2000 mg（例如500至1000 mg、1000至1500 mg）的一或多種本文所揭示之化合物係每天投予一次持續5至12天，例如持續5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、或12天。
在一些實施例中，一或多種本文所揭示之化合物係每天投予兩次。每天兩次的劑量可視需要長時間投予，例如至多5天、至多7天、至多10天、至多15天、至多20天、至多25天、至多一個月、或更長。在一些實施例中，每天兩次的劑量係投予至多20天、至多15天、至多14天、至多13天、至多12天、至多10天、至多8天、至多6天、至多4天、至多3天、至多2天、或一天。
在一些實施例中，一或多種本文所揭示之化合物係每天給藥兩次持續6至12天，例如持續8至10天。在一些實施例中，一或多種化合物係每天投予兩次持續9天。在一些實施例中，一或多種化合物係每天投予兩次持續10天。在一些實施例中，1至1000 mg的一或多種本文所揭示之化合物係每天投予兩次持續5至12天，例如持續5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、或12天。在一些實施例中，500至1500 mg（例如500至1000 mg、1000至1500 mg）的一或多種本文所揭示之化合物係每天投予兩次持續5至12天，例如持續5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、或12天。 VII. 使用方法
本揭露亦提供一種治療或預防有需要之對象（例如人類）的病毒感染之方法，該方法包含向對象投予本文所述之化合物。
在一些實施例中，本揭露提供一種治療有需要之對象（例如人類）的病毒感染之方法，該方法包含向有需要之對象投予本文所述之化合物。
在一些實施例中，本揭露提供治療或預防有需要之對象（例如人類）的病毒感染之方法，該方法包含向對象投予本文所揭示之化合物及至少一種額外活性治療劑或疾病預防劑。
在一些實施例中，本揭露提供治療有需要之對象（例如人類）的病毒感染之方法，該方法包含向對象投予本文所揭示之化合物及至少一種額外活性治療劑。
在一些實施例中，本揭露提供抑制細胞中病毒聚合酶之方法，該方法包含使感染病毒之細胞與本文所揭示之化合物接觸，藉以抑制病毒聚合酶。
在一些實施例中，本揭露提供抑制細胞中病毒聚合酶之方法，該方法包含使感染病毒之細胞與本文所揭示之化合物及至少一種額外活性治療劑接觸，藉以抑制病毒聚合酶。
本文亦提供本文所揭示之化合物用於治療或預防有需要之對象的病毒感染之用途。例如，本文提供本文所揭示之化合物用於治療有需要之對象的病毒感染之用途。 A. 副黏液病毒科
在一些實施例中，病毒感染係副黏液病毒科病毒感染。因此，在一些實施例中，本揭露提供用於治療有需要之對象（例如人類）的副黏液病毒科感染之方法，該方法包含向對象投予本文所揭示之化合物。在一些實施例中，副黏液病毒科病毒包括BSL4病原體。副黏液病毒科病毒包括但不限於立百病毒(Nipah virus)、亨德拉病毒(Hendra virus)、麻疹、腮腺炎、及副流感病毒。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療有需要之對象（例如人類）的副黏液病毒科病毒感染之藥劑的方法，其特徵在於使用本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，本揭露提供本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療副黏液病毒科病毒感染之對象（例如人類）之藥劑。
在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療有需要之對象（例如人類）的副黏液病毒科病毒感染。 B. 肺病毒科
在一些實施例中，病毒感染係肺病毒科病毒感染。在一些實施例中，本揭露提供一種治療有需要之對象（例如人類）的肺病毒科病毒感染之方法，該方法包含向人類投予治療有效量之本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。肺病毒科病毒包括但不限於呼吸道融合病毒(respiratory syncytial virus, RSV)及人類間質肺炎病毒( metapneumovirus)。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係呼吸道融合病毒(RSV)感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療有需要之對象（例如人類）的肺病毒科病毒感染之藥劑之方法，其特徵在於使用本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療肺病毒科病毒感染之對象（例如人類）之藥劑。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係呼吸道融合病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療有需要之人類的肺病毒科病毒感染之藥劑之方法，其特徵在於使用本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療肺病毒科病毒感染之人類之藥劑。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係呼吸道融合病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療有需要之人類的肺病毒科病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係呼吸道融合病毒(RSV)感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染係人類間質肺炎病毒感染。
在某些實施例中，本揭露提供用於治療RSV感染之方法，其包含向感染呼吸道融合病毒之對象（例如人類）投予治療有效量之本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，人類遭受慢性呼吸道融合病毒感染。在一些實施例中，人類急性感染RSV。
在某些實施例中，提供一種抑制RSV複製之方法，其包含向對象（例如人類）投予本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在某些實施例中，本揭露提供一種用於減少與RSV感染相關之病毒負荷的方法，其中該方法包含向感染RSV之對象（例如人類）投予治療有效量的本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該治療有效量足以減少對象之RSV病毒負荷。
如本文更完整地描述，本揭露之化合物可與一或多種額外治療劑一起投予至感染RSV之對象（例如人類）。（多種）額外治療劑可與本揭露之化合物同時或在投予本揭露之化合物前或後向受感染對象（例如人類）投予。
在某些實施例中，提供本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽，用於治療或預防RSV感染。在某些實施例中，提供一種本揭露之化合物（例如式I、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)之化合物）或其醫藥上可接受之鹽，其用於製造用於治療或預防RSV感染之藥劑。
在一些實施例中，提供一種抑制RSV複製之方法，其中該方法包含向有需要之對象（例如人類）投予本文所揭示之化合物，其中投予係藉由吸入。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於減少與RSV感染相關聯之病毒負荷之方法，其中該方法包含向感染RSV之人類投予本文所揭示之化合物。 C. 小核糖核酸病毒科
在一些實施例中，病毒感染係小核糖核酸病毒科病毒感染。在一些實施例中，本揭露提供一種治療有需要之人類的小核糖核酸病毒科病毒感染之方法，該方法包含向對象（例如人類）投予治療有效量之本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。小核糖核酸病毒科病毒係造成一組異質性感染之腸病毒，包括疱疹性咽峽炎、無菌性腦膜炎、類普通感冒症候群(common-cold-like syndrome)（人類鼻病毒感染）、類非麻痺性脊髓灰質炎症候群、流行性肋肌痛（通常發生在流行病中之急性、發熱、傳染性疾病）、手足口症候群、兒童及成人胰臟炎、及嚴重心肌炎。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染係人類鼻病毒感染。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染係腸病毒感染。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染係選自由下列所組成之群組：克沙奇A病毒感染、克沙奇A病毒感染、腸病毒D68感染、腸病毒B69感染、腸病毒D70感染、腸病毒A71感染、及小兒麻痺病毒感染。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒係口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療有需要之對象（例如人類）的小核糖核酸病毒科病毒感染之藥劑之方法，其特徵在於使用本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療小核糖核酸病毒科病毒感染之對象（例如人類）之藥劑。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染係人類鼻病毒感染。
在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療有需要之對象（例如人類）的小核糖核酸病毒科病毒感染。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染係人類鼻病毒感染。 D. 黃病毒科
在一些實施例中，病毒感染係黃病毒科病毒感染。在一些實施例中，本揭露提供一種治療有需要之對象（例如人類）的黃病毒科病毒感染之方法，該方法包含向對象（例如人類）投予治療有效量之本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。代表性黃病毒科病毒包括但不限於登革熱、黃熱病、西尼羅、茲卡(Zika)、日本腦炎病毒、蜱傳腦炎病毒(tick-borne encephalitis virus, TBEV)、及C型肝炎(HCV)。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係日本腦炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係蜱傳腦炎病毒(TBEV)感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係C型肝炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係牛病毒性下痢病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係豬瘟病毒(swine fever virus, SFV)。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療有需要之對象（例如人類）的黃病毒科病毒感染之藥劑之方法，其特徵在於使用本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療黃病毒科病毒感染之對象（例如人類）之藥劑。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係C型肝炎病毒感染。
在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療有需要之人類的黃病毒科病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染係C型肝炎病毒感染。 E. 絲狀病毒科
在一些實施例中，病毒感染係絲狀病毒科病毒感染。在一些實施例中，本揭露提供一種治療有需要之對象（例如人類）的絲狀病毒科病毒感染之方法，該方法包含向對象（例如人類）投予治療有效量之本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。代表性絲狀病毒科病毒包括但不限於伊波拉（薩伊(Zaire)、本迪布焦(Bundibugio)、蘇丹(Sudan)、塔伊森林(Tai forest)、或雷斯頓(Reston)變種）及馬堡。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染係伊波拉病毒感染。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染係馬堡病毒感染。
在一些實施例中，本揭露提供一種用於製造用於治療有需要之人類的絲狀病毒科病毒感染之藥劑之方法，其特徵在於使用本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療絲狀病毒科病毒感染之人類之藥劑。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染係伊波拉病毒感染。
在一些實施例中，本揭露提供一種本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療有需要之對象（例如人類）的絲狀病毒科病毒感染。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染係伊波拉病毒感染。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染係馬堡病毒感染。 VIII. 組合療法
本文所述之化合物亦可與一或多種額外治療劑或疾病預防劑組合使用。因此，本文亦提供用於治療有需要之對象的病毒感染之方法，其中該方法包含向對象投予本文所揭示之化合物及治療有效量的一或多種額外治療劑或疾病預防劑。在一些實施例中，該方法包含向對象投予本文所揭示之化合物及治療有效量的一或多種額外治療劑。在一些實施例中，本文所揭示之化合物與至少一種其他活性治療劑組合，其中該組合用於治療有需要之對象的病毒感染。在一些實施例中，組合可用於治療一個對象之多種單獨的病毒感染（例如RSV及HIV）。在一些實施例中，本文所揭示之化合物與至少一種其他活性治療劑組合以在一次治療中涵蓋更廣譜的呼吸道病毒而無需診斷。
在一些實施例中，組合可用於治療一個對象之相同病毒（例如RSV）。活性治療劑包括但不限於核准藥物、目前正在進行臨床試驗中之治療劑、在動物模型中已顯示出功效之治療劑、在體外檢定中已顯示出效力之治療劑、或上述中之任一者。
在一些實施例中，額外治療劑係抗病毒劑。任何合適抗病毒劑可用於本文所述之方法中。在一些實施例中，抗病毒劑係選自由下列所組成之群組：5-經取代2’-去氧尿苷類似物、核苷類似物、焦磷酸鹽類似物、核苷反轉錄酶抑制劑、非核苷反轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶抑制劑、進入抑制劑、非環狀鳥苷類似物、非環狀核苷膦酸脂類似物、HCV NS5A/NS5B抑制劑、流感病毒抑制劑、干擾素、免疫刺激劑、寡核苷酸、抗有絲分裂抑制劑、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係5-取代2’-去氧尿苷類似物。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：碘苷、曲氟尿苷、溴夫定[BVDU]、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係核苷類似物。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：阿糖腺苷(vidarabine)、恩替卡韋(entecavir) (ETV)、替比夫定(telbivudine)、拉米夫定(lamivudine)、阿德福韋酯(adefovir dipivoxil)、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate, TDF)、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係法匹拉韋(favipiravir)、利巴韋林(ribavirin)、加利地韋(galidesivir)、β-D-N4-羥基胞苷、或其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係焦磷酸鹽類似物。例如，在一些實施例中，額外治療劑係膦甲酸(foscarnet)或膦醯基乙酸(phosphonoacetic acid)。在一些實施例中，額外治療劑係膦甲酸。
在一些實施例中，額外治療劑係核苷反轉錄酶抑制劑。在一些實施例中，抗病毒劑係齊多夫定(zidovudine)、地達諾新(didanosine)、扎西他濱(zalcitabine)、司他夫定(stavudine)、拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韋(abacavir)、恩曲他濱(emtricitabine)、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係非核苷反轉錄酶抑制劑。在一些實施例中，抗病毒劑係選自由下列所組成之群組：奈韋拉平、地拉韋啶、依法韋侖、依曲韋林、利匹韋林、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係蛋白酶抑制劑。在一些實施例中，蛋白酶抑制劑係HIV蛋白酶抑制劑。例如，在一些實施例中，抗病毒劑係選自由下列所組成之群組：沙奎那韋(saquinavir)、利托那韋(ritonavir)、茚地那韋(indinavir)、奈非那韋(nelfinavir)、安普那韋(amprenavir)、洛匹那韋(lopinavir)、阿扎那韋(atazanavir)、福沙那韋(fosamprenavir)、地瑞那韋(darunavir)、替拉那韋(tipranavir)、考比西他(cobicistat)、及其組合。在一些實施例中，抗病毒劑係選自由下列所組成之群組：沙奎那韋、利托那韋、茚地那韋、奈非那韋、安普那韋、洛匹那韋、阿扎那韋、福沙那韋、地瑞那韋、替拉那韋、及其組合。在一些實施例中，蛋白酶抑制劑係HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：沃西拉韋(voxilaprevir)、阿蘇普韋(asunaprevir)、波普瑞韋(boceprevir)、帕利瑞韋(paritaprevir)、西咪匹韋(simeprevir)、特拉匹韋(telaprevir)、瓦尼普韋(vaniprevir)、格佐普韋(grazoprevir)、利巴韋林、丹諾普韋(danoprevir)、法達瑞韋(faldaprevir)、韋若普韋(vedroprevir)、索瓦普韋(sovaprevir)、戴迪普韋(deldeprevir)、那拉匹韋(narlaprevir)、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：沃西拉韋、阿蘇普韋、波普瑞韋、帕利瑞韋、西咪匹韋、特拉匹韋、瓦尼普韋、格佐普韋、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係整合酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：雷特格韋(raltegravir)、多替拉韋(dolutegravir)、埃替格韋(elvitegravir)、阿巴卡韋、拉米夫定、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：比替拉韋(bictegravir)、雷特格韋、多替拉韋、卡博特韋(cabotegravir)、埃替格韋、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：比替拉韋、多替拉韋、及卡博特韋、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係比替拉韋。
在一些實施例中，額外治療劑係進入抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：二十二醇(docosanol)、恩夫韋地(enfuvirtide)、馬拉韋羅(maraviroc)、伊巴珠單抗(ibalizumab)、福斯特賽韋(fostemsavir)、勒隆利單抗(leronlimab)、伊巴珠單抗、福斯特賽韋、勒隆利單抗、帕利珠單抗(palivizumab)、呼吸道融合病毒免疫球蛋白（靜脈內）[RSV-IGIV]、水痘帶狀疱疹免疫球蛋白(immunoglobulin) [VariZIG]、水痘帶狀疱疹免疫球蛋白(immune globulin) [VZIG]、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係非環狀鳥苷類似物。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：阿昔洛韋(acyclovir)、更昔洛韋(ganciclovir)、伐昔洛韋(valacyclovir)（亦稱為valaciclovir）、纈更昔洛韋(valganciclovir)、噴昔洛韋(penciclovir)、泛昔洛韋(famciclovir)、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係非環狀核苷膦酸脂類似物。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：西多福韋(cidofovir)、阿德福韋(adefovir)、阿德福韋酯、替諾福韋(tenofovir)、TDF、恩曲他濱、依法韋侖、利匹韋林、埃替格韋、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：西多福韋、阿德福韋、阿德福韋酯、替諾福韋、TDF、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：西多福韋、阿德福韋酯、TDF、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係HCV NS5A/NS5B抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係NS3/4A蛋白酶抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係NS5A蛋白質抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係核苷/核苷酸類型之NS5B聚合酶抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係非核苷類型之NS5B聚合酶抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：達卡他韋(daclatasvir)、雷迪帕韋(ledipasvir)、維帕他韋(velpatasvir)、奧比他韋(ombitasvir)、艾爾巴韋(elbasvir)、索非布韋(sofosbuvir)、達薩布韋(dasabuvir)、利巴韋林、阿蘇普韋、西咪匹韋、帕利瑞韋、利托那韋、艾爾巴韋、格佐普韋、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：達卡他韋、雷迪帕韋、維帕他韋、奧比他韋、艾爾巴韋、索非布韋、達薩布韋、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係流感病毒抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係基質2抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：金剛烷胺(amantadine)、金剛乙胺(rimantadine)、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係神經胺酸酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：紮那米韋(zanamivir)、奧司他韋(oseltamivir)、帕拉米韋(peramivir)、辛酸拉尼米韋(laninamivir octanoate)、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係聚合酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：利巴韋林、法匹拉韋、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：金剛烷胺、金剛乙胺、阿比朵爾(arbidol/umifenovir)、巴洛沙韋瑪波西酯(baloxavir marboxil)、奧司他韋、帕拉米韋、英加韋林(ingavirin)、辛酸拉尼米韋、紮那米韋、法匹拉韋、利巴韋林、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：金剛烷胺、金剛乙胺、紮那米韋、奧司他韋、帕拉米韋、辛酸拉尼米韋、利巴韋林、法匹拉韋、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係干擾素。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：干擾素alfacon 1、干擾素α 1b、干擾素α 2a、干擾素α 2b、聚乙二醇化干擾素alfacon 1、聚乙二醇化干擾素α 1b、聚乙二醇化干擾素α 2a (PegIFNα-2a)、及PegIFNα-2b。e實施例，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：干擾素alfacon 1、干擾素α 1b、干擾素α 2a、干擾素α 2b、聚乙二醇化干擾素α 2a (PegIFNα-2a)、及PegIFNα-2b。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：干擾素alfacon 1、聚乙二醇化干擾素α 2a (PegIFNα-2a)、PegIFNα-2b、及利巴韋林。在一些實施例中，額外治療劑係聚乙二醇化干擾素α-2a、聚乙二醇化干擾素α-2b、或其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，額外治療劑係寡核苷酸。在一些實施例中，額外治療劑係抗有絲分裂抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：福米韋生(fomivirsen)、普達非洛(podofilox)、咪喹莫特(imiquimod)、賽兒茶素(sinecatechins)、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：拜斯福韋(besifovir)、硝唑尼特(nitazoxanide)、REGN2222、多拉韋林(doravirine)、索非布韋、維帕他韋、達卡他韋、阿蘇普韋、貝卡布韋(beclabuvir)、FV100、及萊特目韋(letermovir)、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係用於治療RSV之藥劑。例如，在一些實施例中，抗病毒劑係利巴韋林、ALS-8112、或普薩托韋(presatovir)。例如，在一些實施例中，抗病毒劑係ALS-8112或普薩托韋。
在一些實施例中，額外治療劑係用於治療小核糖核酸病毒之藥劑。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：乙內醯脲(hydantoin)、鹽酸胍、l-丁硫胺酸亞碸亞胺(buthionine sulfoximine)、Py-11、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係小核糖核酸病毒聚合酶抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係蘆平曲韋(rupintrivir)。
在一些實施例中，額外治療劑係用於治療瘧疾之藥劑。在一些實施例中，額外治療劑係氯喹(chloroquine)。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：羥氯喹、氯喹、蒿甲醚(artemether)、苯芴醇(lumefantrine)、阿托伐醌(atovaquone)、氯胍(proguanil)、他非諾喹(tafenoquine)、咯萘啶(pyronaridine)、青蒿琥酯(artesunate)、青蒿醇(artenimol)、哌喹(piperaquine)、青蒿琥酯、胺酚喹(amodiaquin)、咯萘啶(pyronaridine)、青蒿琥酯、鹵泛曲林(halofantrine)、硫酸奎寧(quinine sulfate)、甲氟喹(mefloquine)、索利黴素(solithromycin)、乙胺嘧啶(pyrimethamine)、MMV-390048、二茂鐵喹(ferroquine)、甲磺酸阿特芬酮(artefenomel mesylate)、加納帕西(ganaplacide)、DSM-265、西帕加明(cipargamin)、青蒿酮、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係用於治療冠狀病毒之藥劑。在一些實施例中，額外治療劑係用於治療COVID-19（嚴重特殊傳染性肺炎(coronavirus disease 2019)，一種由命名為SARS-CoV-2之病毒引起之疾病）之藥劑。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：IFX-1、FM-201、CYNK-001、DPP4-Fc、豹蛙酶(ranpirnase)、萘莫司他(nafamostat)、LB-2、AM-1、抗病毒孔蛋白(anti-viroporin)、瑞德西韋(remdesivir)、VV116、GS-441524、GS-5245、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係用於治療伊波拉病毒之藥劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：利巴韋林、帕利珠單抗、莫維珠單抗(motavizumab)、RSV-IGIV (RespiGam ®)、MEDI-557、A-60444、MDT-637、BMS-433771、胺碘酮(amiodarone)、決奈達隆(dronedarone)、維拉帕米(verapamil)、伊波拉康復期血漿(Ebola Convalescent Plasma, ECP)、TKM-100201、BCX4430（(2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3,4-二醇）、法匹拉韋（亦稱為T-705或Avigan）、T-705單磷酸鹽、T-705二磷酸鹽、T-705三磷酸鹽、FGI-106（1-N,7-N-雙[3-(二甲基胺基)丙基]-3,9-二甲基喹啉并[8,7-h]喹啉酮-1,7-二胺）、JK-05、TKM-伊波拉、ZMapp、rNAPc2、VRC-EBOADC076-00-VP、OS-2966、MVA-BN filo、布林西多福韋(brincidofovir)、基於Vaxart腺病毒載體5之伊波拉疫苗、Ad26-ZEBOV、FiloVax疫苗、GOVX-E301、GOVX-E302、伊波拉病毒進入抑制劑（NPC1抑制劑）、rVSV-EBOV、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係ZMapp、mAB114、REGEN-EB3、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係用於治療HCV之藥劑。在一些實施例中，額外治療劑係HCV聚合酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：索非布韋、GS-6620、PSI-938、利巴韋林、替格布韋(tegobuvir)、瑞達布韋(radalbuvir)、MK-0608、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係HCV蛋白酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由諸如下列所組成之群組：GS-9256、韋若普韋、沃西拉韋、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係NS5A抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：雷迪帕韋、維帕他韋、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係抗HBV劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯及恩曲他濱、或其組合。額外抗HBV劑之實例包括但不限於α-羥基䓬酚酮(alpha-hydroxytropolone)、安多索韋(amdoxovir)、安卓奎諾爾(antroquinonol)、β-羥基胞嘧啶核苷、ARB-199、CCC-0975、ccc-R08、艾夫他濱(elvucitabine)、依澤替米貝(ezetimibe)、環孢素A、龍膽苦苷(gentiopicrin/gentiopicroside)、HH-003、賀普拉肽(hepalatide)、JNJ-56136379、硝唑尼特、比林納潘特(birinapant)、NJK14047、NOV-205（莫里克桑(molixan)、BAM-205）、奧肝肽(oligotide)、米沃替酯(mivotilate)、分艟(feron)、GST-HG-131、左旋咪唑(levamisole)、卡舒寧(Ka Shu Ning)、阿洛菲隆(alloferon)、WS-007、Y-101（替芬泰(Ti Fen Tai)）、rSIFN-co、PEG-IIFNm、KW-3、BP-Inter-014、齊墩果酸(oleanolic acid)、HepB-nRNA、cTP-5 (rTP-5)、HSK-II-2、HEISCO-106-1、HEISCO-106、赫普巴納(Hepbarna)、IBPB-006IA、和普印芬(Hepuyinfen)、DasKloster 0014-01、ISA-204、將安泰(Jiangantai)（肝西康(Ganxikang)）、MIV-210、OB-AI-004、PF-06、胡黃連苷(picroside)、DasKloster-0039、和普蘭太(hepulantai)、IMB-2613、TCM-800B、還原麩胱甘肽、RO-6864018、RG-7834、QL-007索非布韋、雷迪帕偉、UB-551、及ZH-2N、及揭示於下列中之化合物：US20150210682 (Roche)、US 2016/0122344 (Roche)、WO2015173164、WO2016023877、US2015252057A (Roche)、WO16128335A1 (Roche)、WO16120186A1 (Roche)、US2016237090A (Roche)、WO16107833A1 (Roche)、WO16107832A1 (Roche)、US2016176899A (Roche)、WO16102438A1 (Roche)、WO16012470A1 (Roche)、US2016220586A (Roche)、及US2015031687A (Roche)。在一些實施例中，額外治療劑係HBV聚合酶抑制劑。HBV DNA聚合酶抑制劑之實例包括但不限於阿德福韋(HEPSERA ®)、恩曲他濱(EMTRIVA ®)、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯(VIREAD ®)、替諾福韋艾拉酚胺(tenofovir alafenamide)、替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯、反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、半反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、替諾福韋雙匹酯(tenofovir dipivoxil)、反丁烯二酸替諾福韋雙匹酯、替諾福韋十八基氧乙酯、CMX-157、替諾福韋埃利代(tenofovir exalidex)、拜斯福韋、恩替卡韋(BARACLUDE ®)、恩替卡韋順丁烯二酸鹽、替比夫定(TYZEKA ®)、非洛西韋(filocilovir)、帕拉德福韋(pradefovir)、克來夫定(clevudine)、利巴韋林、拉米夫定(EPIVIR-HBV ®)、疊氮膦、泛昔洛韋、弗索林(fusolin)、美他卡韋(metacavir)、SNC-019754、FMCA、AGX-1009、AR-II-04-26、HIP-1302、天冬胺酸替諾福韋二吡呋酯、乳清酸替諾福韋二吡呋酯、及HS-10234。在一些實施例中，額外治療劑係HBV殼體抑制劑。
在一些實施例中，額外治療劑係用於治療HIV之藥劑。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：HIV蛋白酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、進入抑制劑、HIV核苷反轉錄酶抑制劑、HIV非核苷反轉錄酶抑制劑、非環狀核苷膦酸脂類似物、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：HIV蛋白酶抑制劑、HIV非核苷或非核苷酸反轉錄酶抑制劑、HIV核苷或核苷酸反轉錄酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV非催化位點（或異位）整合酶抑制劑、HIV進入抑制劑、HIV成熟抑制劑、免疫調節劑、免疫治療劑、抗體藥物接合物、基因修飾劑、基因編輯器（諸如CRISPR/Cas9、鋅指核酸酶、歸巢(homing)核酸酶、合成核酸酶、TALEN）、及細胞療法（諸如嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)、及經工程改造之T細胞受體(TCR-T)、自體T細胞療法）。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：用於HIV之組合藥物、用於治療HIV之其他藥物、HIV蛋白酶抑制劑、HIV反轉錄酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV非催化位點（或異位）整合酶抑制劑、HIV進入（融合）抑制劑、HIV成熟抑制劑、潛伏期逆轉劑、殼體抑制劑、基於免疫之療法、PI3K抑制劑、HIV抗體、及雙特異性抗體、及「類抗體」治療性蛋白質、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV組合藥物。HIV組合藥物之實例包括但不限於ATRIPLA ®（依法韋侖、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、及恩曲他濱）；BIKTARVY ®（比替拉韋、恩曲他濱、及替諾福韋艾拉酚胺）；COMPLERA ®（EVIPLERA ®；利匹韋林、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、及恩曲他濱）；STRIBILD ®（埃替格韋、考比西他、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、及恩曲他濱）；TRUVADA ®（反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯及恩曲他濱；TDF+FTC）；DESCOVY ®（替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱）；ODEFSEY ®（替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、及利匹韋林）；GENVOYA ®（替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、考比西他、及埃替格韋）；SYMTUZA ®（地瑞那韋、半反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、及考比西他）；SYMFI ™（依法韋侖、拉米夫定、及反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯）；CIMDU ™（拉米夫定及反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯）；替諾福韋及拉米夫定；替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱；半反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱；半反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、及利匹韋林；半反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、考比西他、及埃替格韋；COMBIVIR ®（齊多夫定及拉米夫定；AZT+3TC）；EPZICOM ®（LIVEXA ®；硫酸阿巴卡韋及拉米夫定；ABC+3TC）；KALETRA ®（ALUVIA ®；洛匹那韋及利托那韋）；TRIUMEQ ®（多替拉韋、阿巴卡韋、及拉米夫定）；TRIZIVIR ®（硫酸阿巴卡韋(abacavir sulfate)、齊多夫定、及拉米夫定；ABC+AZT+3TC）；阿扎那韋及考比西他；硫酸阿扎那韋及考比西他；硫酸阿扎那韋及利托那韋；地瑞那韋及考比西他；多替拉韋及利匹韋林；多替拉韋及鹽酸利匹韋林；多替拉韋、硫酸阿巴卡韋、及拉米夫定；拉米夫定、奈韋拉平、及齊多夫定；雷特格韋及拉米夫定；多拉韋林、拉米夫定、及反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯；多拉韋林、拉米夫定、及替諾福韋二吡呋酯；達匹韋林(dapivirine) +左炔諾孕酮(levonorgestrel)、多替拉韋+拉米夫定、多替拉韋+恩曲他濱+替諾福韋艾拉酚胺、艾法韋林(elsulfavirine) +恩曲他濱+替諾福韋二吡呋酯、拉米夫定+阿巴卡韋+齊多夫定、拉米夫定+阿巴卡韋、拉米夫定+反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、拉米夫定+齊多夫定+奈韋拉平、洛匹那韋+利托那韋、洛匹那韋+利托那韋+阿巴卡韋+拉米夫定、洛匹那韋+利托那韋+齊多夫定+拉米夫定、替諾福韋+拉米夫定、及反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯+恩曲他濱+鹽酸利匹韋林、洛匹那韋、利托那韋、齊多夫定、及拉米夫定。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV殼體抑制劑（例如利那卡帕韋）。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV蛋白酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：沙奎那韋、利托那韋、茚地那韋、奈非那韋、安普那韋、洛匹那韋、阿扎那韋、福沙那韋、地瑞那韋、替拉那韋、考比司特、ASC-09、AEBL-2、MK‐8718、GS-9500、GS-1156、及其組合。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：沙奎那韋、利托那韋、茚地那韋、奈非那韋、安普那韋、洛匹那韋、阿扎那韋、福沙那韋、地瑞那韋、替拉那韋、考比西他。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：安普那韋、阿扎那韋、貝卡那韋(brecanavir)、地瑞那韋、福沙那韋、福沙那韋鈣、茚地那韋、硫酸茚地那韋、洛匹那韋、奈非那韋、甲磺酸奈非那韋、利托那韋、沙奎那韋、甲磺酸沙奎那韋、替拉那韋、DG-17、TMB-657(PPL-100)、T-169、BL-008、MK-8122、TMB-607、TMC-310911、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV整合酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：雷特格韋、埃替格韋、多替拉韋、阿巴卡韋、拉米夫定、比替拉韋、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係比替拉韋。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：比替拉韋、埃替格韋、薑黃素、薑黃素之衍生物、菊苣酸(chicoric acid)、菊苣酸之衍生物、3,5-二咖啡醯基奎尼酸、3,5-二咖啡醯基奎尼酸之衍生物、金精三羧酸(aurintricarboxylic acid)、金精三羧酸之衍生物、咖啡酸苯乙酯、咖啡酸苯乙酯之衍生物、泰福斯汀(tyrphostin)、泰福斯汀之衍生物、槲皮素(quercetin)、槲皮素之衍生物、雷特格韋、多替拉韋、JTK-351、比替拉韋、AVX-15567、BMS-986197、卡博特韋(cabotegravir)（長效可注射劑）、二酮基喹啉-4-1衍生物、整合酶-LEDGF抑制劑、萊金(ledgin)、M-522、M-532、NSC-310217、NSC-371056、NSC-48240、NSC-642710、NSC-699171、NSC-699172、NSC-699173、NSC-699174、二苯乙烯二磺酸、T-169、VM-3500、卡博特韋、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV進入抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：恩夫韋地、馬拉韋羅、及其組合。HIV進入抑制劑之進一步實例包括但不限於賽尼克韋羅(cenicriviroc)、CCR5抑制劑、gp41抑制劑、CD4附著抑制劑、DS-003 (BMS-599793)、gp120抑制劑、及CXCR4抑制劑。CCR5抑制劑之實例包括阿拉韋羅(aplaviroc)、維克韋羅(vicriviroc)、馬拉韋羅(maraviroc)、賽尼克韋羅、勒隆利單抗(leronlimab) (PRO-140)、阿達他韋(adaptavir) (RAP-101)、尼非韋羅(nifeviroc) (TD-0232)、抗GP120/CD4或CCR5雙特異性抗體、B-07、MB-66、多肽C25P、TD-0680、及vMIP (Haimipu)。CXCR4抑制劑之實例包括普樂沙福(plerixafor)、ALT-1188、N15肽、及vMIP（海米普）。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV核苷反轉錄酶抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係HIV非核苷反轉錄酶抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係非環狀核苷膦酸脂類似物。在一些實施例中，額外治療劑係HIV殼體抑制劑。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV核苷或核苷酸反轉錄酶抑制劑。例如，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：阿德福韋、阿德福韋酯、阿茲夫定(azvudine)、恩曲他濱、替諾福韋、替諾福韋艾拉酚胺、反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、半反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、替諾福韋二吡呋酯、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、半反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、VIDEX ®及VIDEX EC ®（地達諾新(didanosine)、ddl）、阿巴卡韋、硫酸阿巴卡韋、阿洛夫定(alovudine)、阿立他濱(apricitabine)、森沙戊定(censavudine)、地達諾新、艾夫他濱、非替那韋(festinavir)、氟沙定替酯(fosalvudine tidoxil)、CMX-157、達匹韋林、多拉韋林、依曲韋林、OCR-5753、乳清酸替諾福韋二吡呋酯、福齊夫定替酯(fozivudine tidoxil)、伊拉曲韋(islatravir)、拉米夫定、福斯非茲(phosphazid)、司他夫定(stavudine)、紮西他濱(zalcitabine)、齊多夫定、羅法福韋艾他拉酚胺(rovafovir etalafenamide) (GS-9131)、GS-9148、MK-8504、MK-8591、MK-858、VM-2500、KP-1461、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係HIV反轉錄酶的非核苷或非核苷酸抑制劑。例如，額外藥劑係選自由下列所組成之群組：達匹韋林、地拉韋啶、甲磺酸地拉韋啶、多拉韋林、依法韋侖、依曲韋林、香菇多醣(lentinan)、MK-8583、奈韋拉平、利匹韋林、TMC-278LA、ACC-007、AIC-292、KM-023、PC-1005、艾法韋林rilp (VM-1500)、其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係選自ATRIPLA ®（依法韋侖、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、及恩曲他濱）；COMPLERA ®（EVIPLERA ®；利匹韋林、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、及恩曲他濱）；STRIBILD ®（埃替格韋、考比西他、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、及恩曲他濱）；TRUVADA ®（反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯及恩曲他濱；TDF +FTC）；DESCOVY ®（替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱）；ODEFSEY ®（替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、及利匹韋林）；GENVOYA ®（替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、考比西他、及埃替格韋）；阿德福韋；阿德福韋酯；考比西他；恩曲他濱；替諾福韋；替諾福韋二吡呋酯；反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯；替諾福韋艾拉酚胺；半反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺；TRIUMEQ ®（多替拉韋、阿巴卡韋、及拉米夫定）；多替拉韋、硫酸阿巴卡韋、及拉米夫定；雷特格韋；雷特格韋及拉米夫定；馬拉韋羅；恩夫韋地；ALUVIA ®（KALETRA ®；洛匹那韋及利托那韋）；COMBIVIR ®（齊多夫定及拉米夫定；AZT+3TC）；EPZICOM ®（LIVEXA ®；硫酸阿巴卡韋及拉米夫定；ABC+3TC）；TRIZIVIR ®（硫酸阿巴卡韋(abacavir sulfate)、齊多夫定、及拉米夫定；ABC+AZT+3TC）；利匹韋林；鹽酸利匹韋林；硫酸阿扎那韋及考比西他；阿扎那韋及考比西他；地瑞那韋及考比西他；阿扎那韋；硫酸阿扎那韋；多替拉韋；埃替格韋；利托那韋；硫酸阿扎那韋及利托那韋；地瑞那韋；拉米夫定；普拉斯汀(prolastin)；福沙那韋；福沙那韋鈣依法韋侖；依曲韋林；奈非那韋；甲磺酸奈非那韋；干擾素；地達諾新；司他夫定；茚地那韋；硫酸茚地那韋；替諾福韋及拉米夫定；齊多夫定；奈韋拉平；沙奎那韋；甲磺酸沙奎那韋；阿地白介素(aldesleukin)；扎西他濱；替拉那韋；安普那韋；地拉韋啶；甲磺酸地拉韋啶；Radha-108 (Receptol)；拉米夫定及反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯；依法韋侖、拉米夫定、及反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯；疊氮磷；拉米夫定、奈韋拉平、及齊多夫定；阿巴卡韋；及硫酸阿巴卡韋。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：克痢黴素(colistin)、戊柔比星(valrubicin)、艾替班特(icatibant)、貝他斯汀(bepotastine)、泛艾黴素(epirubicin)、依前列醇(epoprosetnol)、伐普肽(vapreotide)、阿瑞匹坦(aprepitant)、卡泊芬淨(caspofungin)、奮乃靜(perphenazine)、阿扎那韋、依法韋侖、利托那韋、阿昔洛韋、更昔洛韋、噴昔洛韋、普盧利沙星(prulifloxacin)、比替拉韋、奈非那韋、替格布韋、奈非那韋、吡喹酮(praziquantel)、匹伐他汀(pitavastatin)、吡侖帕奈(perampanel)、艾司佐匹克隆(eszopiclone)、及佐匹克隆(zopiclone)。
在一些實施例中，額外治療劑係下列之抑制劑：布魯頓氏酪胺酸激酶（BTK、AGMX1、AT、ATK、BPK、IGHD3、IMD1、PSCTK1、XLA；NCBI基因ID：695）。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：(S)-6-胺基-9-(1-(丁-2-炔醯基)吡咯啶-3-基)-7-(4-苯氧基苯基)-7H-嘌呤-8(9H)-酮、阿卡替尼(acalabrutinib) (ACP-196)、BGB-3111、CB988、HM71224、依魯替尼(ibrutinib)（依布魯維卡(Imbruvica)）、M-2951（依伏替尼(evobrutinib)）、M7583、替拉替尼(tirabrutinib) (ONO-4059)、PRN-1008、司培替尼(spebrutinib) (CC-292)、TAK-020、維卡替尼(vecabrutinib)、ARQ-531、SHR-1459、DTRMWXHS-12、TAS-5315、AZD6738、卡昆司(calquence)、丹伐特生(danvatirsen)、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：替拉替尼、依魯替尼、阿卡替尼、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係選自由替拉替尼、依魯替尼、及其組合所組成之群組。在一些實施例中，額外治療劑係泰福斯汀A9 (A9)。
在一些實施例中，額外治療劑係KRAS抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：AMG-510、COTI-219、MRTX-1257、ARS-3248、ARS-853、WDB-178、BI-3406、BI-1701963、ARS-1620 (G12C)、SML-8-73-1 (G12C)、化合物3144 (G12D)、Kobe0065/2602 (Ras GTP)、室溫11、MRTX-849 (G12C)、及KRAS(G12D)-選擇性抑制性肽（包括KRpep-2、KRpep-2d、及其組合）。
在一些實施例中，額外治療劑係蛋白酶體抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：伊沙佐米(ixazomib)、卡非佐米(carfilzomib)、馬瑞佐米(marizomib)、硼替佐米(bortezomib)、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係卡非佐米(carfilzomib)。
在一些實施例中，額外治療劑係疫苗。例如，在一些實施例中，額外治療劑係DNA疫苗、RNA疫苗、減毒活疫苗(live-attenuated vaccine)、治療性疫苗、疾病預防性疫苗、基於蛋白質之疫苗、或其組合。在一些實施例中，額外治療劑係mRNA-1273。在一些實施例中，額外治療劑係INO-4800或INO-4700。在一些實施例中，額外治療劑係減毒活RSV疫苗MEDI-559、針對RSV之人類單株抗體REGN2222、帕利珠單抗、呼吸道融合病毒免疫球蛋白（靜脈內）[RSV-IGIV]、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係HBV疫苗，例如帕迪瑞斯(pediarix)、安在時-B (engerix-B)、及瑞康比沃斯HB (recombivax HB)。在一些實施例中，額外治療劑係VZV疫苗，例如zostavax及varivax。在一些實施例中，額外治療劑係HPV疫苗，例如卉妍康(cervarix)、加德西(gardasil) 9、及加德西。在一些實施例中，額外治療劑係流感病毒疫苗。例如，(i) A型流感之單價疫苗（例如A型流感[H5N1]病毒單價疫苗及A型流感[H1N1] 2009病毒單價疫苗）、(ii) A型及B型流感病毒之三價疫苗（例如Afluria、Agriflu、Fluad、Fluarix、Flublok、Flucelvax、FluLaval、Fluvirin、及Fluzone）、及(iii) A型及B型流感病毒之四價疫苗（FluMist、Fluarix、Fluzone、及FluLaval）。在一些實施例中，額外治療劑係人類腺病毒疫苗（例如4型及7型腺病毒口服活疫苗）。在一些實施例中，額外治療劑係輪狀病毒疫苗（例如針對輪狀病毒血清型G1、G3、G4、或G9之Rotarix及針對輪狀病毒血清型G1、G2、G3、或G4之RotaTeq）。在一些實施例中，額外治療劑係A型肝炎病毒疫苗（例如Havrix及Vaqta）。在一些實施例中，額外治療劑係小兒麻痺病毒疫苗（例如Kinrix、Quadracel、及Ipol）。在一些實施例中，額外治療劑係黃熱病病毒疫苗（例如YF-Vax）。在一些實施例中，額外治療劑係日本腦炎病毒疫苗（例如Ixiaro及JE-Vax）。在一些實施例中，額外治療劑係麻疹疫苗（例如M-M-R II及ProQuad）。在一些實施例中，額外治療劑係腮腺炎疫苗（例如M-M-R II及ProQuad）。在一些實施例中，額外治療劑係德國麻疹疫苗（例如M-M-R II及ProQuad）。在一些實施例中，額外治療劑係水痘疫苗（例如ProQuad）。在一些實施例中，額外治療劑係狂犬病疫苗（例如Imovax及RabAvert）。在一些實施例中，額外治療劑係天花病毒（天花(smallpox)）疫苗(ACAM2000)。在一些實施例中，額外治療劑係E型肝炎病毒(HEV)疫苗（例如HEV239）。在一些實施例中，額外治療劑係SARS-COV-2疫苗。
在一些實施例中，額外治療劑係抗體，例如單株抗體。例如，額外治療劑係針對SARS-COV-2之抗體，其係選自由下列所組成之群組：Regeneron抗體、Wuxi抗體、Vir Biotechnology抗體、靶向SARS-CoV-2棘蛋白之抗體、可中和SARS-CoV-2之抗體（SARS-CoV-2中和抗體）、及其組合。在一些實施例中，額外治療劑係抗SARS CoV抗體CR-3022。在一些實施例中，額外治療劑係PD-1抗體。
在一些實施例中，額外治療劑係重組細胞介素基因衍生之蛋白質注射劑。
在一些實施例中，額外治療劑係聚合酶抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係DNA聚合酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係西多福韋。在一些實施例中，額外治療劑係RNA聚合酶抑制劑。例如，在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：利巴韋林、法匹拉韋、拉米夫定、吡莫地韋(pimodivir)、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：洛匹那韋、利托那韋、干擾素α-2b、利托那韋、阿比朵爾、羥氯喹、地瑞那韋及考比西他、鹽酸阿比多爾(abidol hydrochloride)、奧司他韋、利頓納韋(litonavir)、恩曲他濱、反丁烯二酸替諾福韋艾拉酚胺、巴洛沙韋瑪波西酯、魯索替尼(ruxolitinib)、其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：6’-氟化芒黴素(6’-fluorinated aristeromycin)類似物、阿昔洛韋弗萊西莫(acyclovir fleximer)類似物、二硫龍(disulfiram)、硫代嘌呤類似物、ASC09F、GC376、GC813、苯基異絲胺酸衍生物、神經胺酸酶(neuroiminidase)抑制劑類似物、嘧硫草醚(pyrithiobac)衍生物、巴南寧(bananins)及5-羥色酮衍生物、SSYA10-001、格里菲斯辛(griffithsin)、HR2P-M1、HR2P-M2、P21S10、二氫丹參酮(Dihydrotanshinone) E-64-C及E-64-D、OC43-HR2P、MERS-5HB、229E-HR1P、229E-HR2P、白藜蘆醇(resveratrol)、1-硫雜-4-氮雜螺[4.5]癸-3-酮衍生物、鹽酸吉西他濱(gemcitabine hydrochloride)、洛哌丁胺(loperamide)、重組干擾素、環孢素A、阿立泊韋(alisporivir)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、達沙替尼(dasatinib)、司美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、雷帕黴素(rapamycin)、塞卡替尼(saracatinib)、氯丙嗪(chlorpromazine)、三氟普馬嗪(triflupromazine)、氟奮乃靜(fluphenazine)、硫乙拉嗪(thiethylperazine)、普魯米近(promethazine)、親環素抑制劑、K11777、卡莫司他(camostat)、k22、替考拉寧(teicoplanin)衍生物、苯并-雜環胺衍生物N30、黴酚酸(mycophenolic acid)、西維斯托爾(silvestrol)、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係抗體。在一些實施例中，額外治療劑係結合至冠狀病毒之抗體，例如結合至SARS或MERS之抗體。在一些實施例中，額外治療劑係SARS-COV-2病毒抗體。
本揭露之配方亦與其他活性成分組合使用。針對SARS-COV-2病毒感染之治療，在一些實施例中，其他活性治療劑對於冠狀病毒感染（例如SARS-COV-2病毒感染）具有活性。本揭露之化合物及配方亦意欲與提供給患有SARS-COV-2病毒感染之對象的一般護理一起使用，包括腸胃外流體（包括右旋糖鹽水及林格氏乳酸鹽）及營養物、抗生素（包括甲硝唑(metronidazole)及頭孢菌素(cephalosporin)抗生素，諸如頭孢曲松(ceftriaxone)及頭孢呋辛(cefuroxime)）、及/或抗真菌疾病預防劑、退燒藥及止痛藥、止吐劑（諸如甲氧氯普胺(metoclopramide)）及/或止瀉劑、維生素及礦物質補充劑（包括維生素K及硫酸鋅）、消炎劑（諸如布洛芬(ibuprofen)或類固醇）、皮質類固醇（諸如甲基潑尼松龍(methylprednisolone)）、免疫調節藥物（例如干擾素）、靶向SARS-COV-2之其他小分子或生物製劑抗病毒劑（諸如但不限於洛匹那韋/利托那韋、EIDD-1931、法匹拉韋、利巴韋林、中和抗體等）、疫苗、止痛藥、及用於患者群體中之其他常見疾病的藥物，諸如抗瘧疾劑（包括蒿甲醚及青蒿琥酯-苯芴醇(artesunate-lumefantrine)組合療法）、傷寒（包括喹諾酮類抗生素（諸如環丙沙星(ciprofloxacin)）、巨環內酯(macrolide)抗生素（諸如阿奇黴素(azithromycin)）、頭孢菌素抗生素（諸如頭孢曲松）、或胺基青黴素（諸如安比西林(ampicillin)））、或志賀桿菌病(shigellosis)。在一些實施例中，額外治療劑係雙氫青蒿素(dihydroartemisinin)/哌喹。
在一些實施例中，額外治療劑係免疫調節劑。基於免疫之療法之實例包括：類鐸受體調節劑，諸如tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8、tlr9、tlr10、tlr11、tlr12、及tlr13；程式性細胞死亡蛋白1 (Pd-1)調節劑；程式性死亡配體1 (Pd-L1)調節劑；IL-15調節劑；DermaVir；介白素-7；必賴克瘻(plaquenil)（羥氯奎寧）；普留淨(proleukin)（阿地介白素(aldesleukin)，IL-2）；干擾素α；干擾素α-2b；干擾素α-n3；聚乙二醇化干擾素α；干擾素γ；羥基脲；黴酚酸酯(mycophenolate mofetil, MPA)及其酯衍生物黴酚酸酯(MMF)；利巴韋林(ribavirin)；聚合物聚乙烯亞胺(PEI)；吉朋(gepon)；IL-12；WF-10；VGV-1；MOR-22；BMS-936559；CYT-107、介白素-15/Fc融合蛋白、AM-0015、ALT-803、NIZ-985、NKTR-255、NKTR-262、NKTR-214、諾弗龍(normferon)、聚乙二醇干擾素α-2a、聚乙二醇干擾素α-2b、重組介白素-15、Xmab-24306、RPI-MN、STING調節劑、RIG-I調節劑、NOD2調節劑、SB-9200、及IR-103。在一些實施例中，額外治療劑係芬戈莫德(fingolimod)、來氟米特(leflunomide)、或其組合。在一些實施例中，額外治療劑係沙利度胺(thalidomide)。
在一些實施例中，額外治療劑係IL-6抑制劑，例如托珠單抗(tocilizumab)、沙利魯單抗(sarilumab)、或其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係抗TNF抑制劑。例如，額外治療劑係阿達木單抗(adalimumab)、依那西普(etanercept)、戈利木單抗(golimumab)、英利昔單抗(infliximab)、或其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係JAK抑制劑，例如額外治療劑係巴瑞替尼(baricitinib)、費戈替尼(filgotinib)、奧盧米安特(olumiant)、或其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係發炎抑制劑，例如吡非尼酮(pirfenidone)。
在一些實施例中，額外治療劑係用於繼發性細菌性肺炎之抗生素。例如，額外治療劑係巨環內酯抗生素（例如阿奇黴素、克拉黴素(clarithromycin)、及肺炎黴漿菌( mycoplasma pneumoniae)）、氟喹諾酮(fluoroquinolone)（例如環丙沙星(ciprofloxacin)及左氧氟沙星(levofloxacin)）、四環素（例如多西環素(doxycycline)及四環素）、或其組合。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物係與肺炎標準照護組合使用（參見例如Pediatric Community Pneumonia Guidelines, CID 2011:53 (1 October)）。針對肺炎之治療通常涉及治癒感染及預防併發症。具體治療將取決於數個因素，包括肺炎之類型及嚴重程度、年齡、及對象之整體健康狀況。選項包括：(i)抗生素、(ii)咳嗽藥、及(iii)退燒藥/鎮痛劑（例如阿司匹靈、布洛芬（Advil、Motrin IB等）、及乙醯胺酚（Tylenol等））。在一些實施例中，額外治療劑係溴己新(bromhexine)止咳藥。
在一些實施例中，本文所揭示之化合物係與來自治愈COVID-19對象之免疫球蛋白組合使用。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係與血漿轉輸法組合使用。在一些實施例中，本文所揭示之化合物係與幹細胞組合使用。
在一些實施例中，額外治療劑係TLR促效劑。TLR促效劑之實例包括但不限於維沙莫德(vesatolimod) (GS-9620)、GS-986、IR-103、勒托莫德(lefitolimod)、替索莫德(tilsotolimod)、林他莫德(rintatolimod)、DSP-0509、AL-034、G-100、可比托莫德(cobitolimod)、AST-008、莫托莫德(motolimod)、GSK-1795091、GSK-2245035、VTX-1463、GS-9688、LHC-165、BDB-001、RG-7854、特拉莫德(telratolimod)、RO-7020531。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由下列所組成之群組：硼替佐米(bortezomid)、弗拉西泮(flurazepam)、普納替尼(ponatinib)、索拉非尼(sorafenib)、帕拉米松(paramethasone)、氯可托龍(clocortolone)、氟氯西林(flucloxacillin)、舍吲哚(sertindole)、氯維地平(clevidipine)、阿托伐他汀(atorvastatin)、西諾西泮(cinolazepam)、氯法齊明(clofazimine)、福沙匹坦(fosaprepitant)、及其組合。
在一些實施例中，額外治療劑係可利黴素(carrimycin)、蘇拉明(suramin)、三氮唑核苷(triazavirin)、雙嘧達莫(dipyridamole)、貝伐單抗(bevacizumab)、美普珠單抗(meplazumab)、GD31（根瘤菌屬）、NLRP炎性體抑制劑、或α-酮胺(α-ketoamine)。在一些實施例中，額外治療劑係重組人類血管收縮素轉化酶2 (rhACE2)。在一些實施例中，額外治療劑係病毒巨噬細胞炎性蛋白(viral macrophage inflammatory protein, vMIP)。
在一些實施例中，額外治療劑係抗病毒孔蛋白治療劑。例如，額外治療劑係BIT-314或BIT-225。在一些實施例中，額外治療劑係冠狀病毒E蛋白抑制劑。例如，額外治療劑係BIT-009。額外治療劑之進一步實例包括WO-2004112687、WO-2006135978、WO-2018145148、及WO-2009018609中所述者。
亦可能將本揭露之任何化合物與一或多種額外活性治療劑組合於單位劑型中以同時或依序投予至對象。組合療法可作為同時或依序方案投予。當依序投予時，組合可在二或更多次投予中投予。
本揭露之化合物與一或多種其他活性治療劑之共投予通常係指同時或依序投予本揭露之化合物及一或多種其他活性治療劑，使得治療有效量的本揭露之化合物及一或多種其他活性治療劑兩者皆存在於對象體內。
共投予包括在投予單位劑量的一或多種其他活性治療劑前或後投予單位劑量的本揭露之化合物，例如在投予一或多種其他活性治療劑之數秒、數分鐘、或數小時內投予本揭露之化合物。例如，可先投予單位劑量的本揭露之化合物，接著在數秒或數分鐘內投予單位劑量的一或多種其他活性治療劑。替代地，可先投予單位劑量的一或多種其他治療劑，接著在數秒或數分鐘內投予單位劑量的本揭露之化合物。在一些情況下，可為所欲的是先投予單位劑量的本揭露之化合物，接著在數小時（例如1至12小時）期間後，投予單位劑量的一或多種其他活性治療劑。在其他情況下，可為所欲的是先投予單位劑量的一或多種其他活性治療劑，接著在數小時（例如1至12小時）期間後，投予單位劑量的本揭露之化合物。
組合療法可提供「協同作用(synergy)」及「協同性(synergistic)」，亦即當一起使用活性成分時所達到之效應大於分開使用化合物所產生之效應的總和。當活性成分為下列者時可達到協同效應：(1)共調配且以組合配方之形式同時投予或遞送；(2)作為分開的配方交替或並行遞送；或(3)藉由一些其他方案。當以交替療法遞送時，協同效應可在依序投予或遞送化合物時達到，例如以分開的錠劑、丸劑、或膠囊，或藉由在分開注射器中的不同次注射。通常而言，在交替療法期間，依序（亦即連續）投予有效劑量的各活性成分，而在組合療法中，則一起投予有效劑量的二或更多種活性成分。協同抗病毒效應表示抗病毒效應大於組合之個別化合物的預測單純累加效應。 A. 用於治療肺病毒科病毒感染之組合療法
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之鹽可與本文中第VIII節中所論述之活性治療劑及/或與在第VIII.A節中專門論述之用於治療肺病毒科病毒感染之其他活性治療劑中之任一者組合使用。在一些實施例中，其他活性治療劑對於肺病毒科病毒感染（尤其是呼吸道融合病毒感染及/或間質肺炎病毒感染）具有活性。如本文更完整地描述，本揭露之化合物可與一或多種額外治療劑一起投予至感染RSV之對象（例如人類）。此外，在某些實施例中，當用於治療或預防RSV時，本揭露之化合物可與一或多種（例如一、二、三、四或更多種）選自下列之額外治療劑組合：RSV組合藥物、RSV疫苗、RSV RNA聚合酶抑制劑、免疫調節劑、類鐸受體(TLR)調節劑、干擾素α受體配體、玻尿酸酶抑制劑、呼吸道融合性表面抗原抑制劑、細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4 (ipi4)抑制劑、親環蛋白抑制劑、RSV病毒進入抑制劑、靶向病毒mRNA之反義寡核苷酸、短干擾RNA (siRNA)及ddRNAi核酸內切酶調節劑、核糖核苷酸還原酶抑制劑、法尼醇X受體(farnesoid X receptor)促效劑、RSV抗體、CCR2趨化因子拮抗劑、胸腺素促效劑、細胞介素、核蛋白調節劑、視黃酸誘導性基因1刺激劑、NOD2刺激劑、磷脂酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑、吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)路徑抑制劑、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、重組胸腺素α-1、布魯頓氏酪胺酸激酶(bruton's tyrosine kinase, BTK)抑制劑、KDM抑制劑、RSV複製抑制劑、精胺酸酶抑制劑、及其他RSV藥物。
對於RSV具有活性之此等其他活性治療劑之非限制性實例包括活性單株抗體及奈米抗體治療劑、對於RSV感染具有活性之藥劑、呼吸道融合病毒蛋白F抑制劑、病毒複製抑制劑、RNA聚合酶抑制劑、基於siRNA之療法、及其組合。活性單株抗體及奈米抗體治療劑之非限制性實例包括帕利珠單抗、RSV-IGIV (RESPIGAM ®)、MEDI-557（莫維珠單抗）、MEDI8897（尼西韋單抗(nirsevimab)）、MK-1654、ALX-0171、A-60444（亦稱為RSV604）、抗RSV G蛋白抗體、及其混合物。對於呼吸道融合病毒感染具有活性的其他活性治療劑之其他非限制性實例包括呼吸道融合病毒蛋白F抑制劑，諸如MDT-637、BMS-433771、AK-0529、RV-521（西舒那韋(sisunatovir)）、JNJ-53718678（利來馬韋(rilematovir)）、BTA-585、及普薩托韋；RNA聚合酶抑制劑，諸如利巴韋林、A-60444（亦稱為RSV604）、JNJ-64417184、ALS-8112（JNJ-64041575；魯西他濱(lumicitabine)）、及ALS-8112（盧米西他濱(lumicitabine)之親本核(parent nuc)）；及病毒複製抑制劑，諸如EDP-938及硝唑尼特；基於siRNA之療法，諸如ALN-RSV01；及其組合。
在一些實施例中，其他活性治療劑可係用於治療或預防RSV之疫苗，包括但不限於MVA-BN RSV、RSV-F、MEDI-8897、JNJ-64400141、DPX-RSV、SynGEM、GSK-3389245A、GSK-300389-1A、RSV-MEDI δM2-2疫苗、VRC-RSVRGP084-00VP、Ad35-RSV-FA2、Ad26-RSV-FA2、及RSV融合醣蛋白次單元疫苗。
對於間質肺炎病毒感染具有活性的其他活性治療劑之非限制性實例包括唾液酸酶調節劑，諸如DAS-181；RNA聚合酶抑制劑，諸如ALS-8112；及用於治療間質肺炎病毒感染之抗體，諸如EV-046113。
在一些實施例中，其他活性治療劑可係用於治療或預防間質肺炎病毒感染之疫苗，包括但不限於mRNA-1653及rHMPV-Pa疫苗。 B. 用於治療小核糖核酸病毒科病毒感染之組合療法
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之鹽可與本文中第VIII節中所論述之活性治療劑及/或與在第VIII.B節中專門論述之用於治療小核糖核酸病毒科病毒感染之其他活性治療劑中之任一者組合使用。在一些實施例中，其他活性治療劑係對於小核糖核酸病毒科病毒感染（特別是對於腸病毒感染）具有活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例係殼體結合抑制劑，諸如普可那利(pleconaril)、BTA-798（伐噴達韋(vapendavir)）、及由Wu等人(US 7,078,403)及Watson (US 7,166,604)所揭示之其他化合物；融合唾液酸酶蛋白，諸如DAS-181；殼體蛋白VP1抑制劑，諸如VVX-003及AZN-001；病毒蛋白酶抑制劑，諸如CW-33；磷脂醯肌醇4激酶β抑制劑，諸如GSK-480及GSK-533；抗EV71抗體。
在一些實施例中，其他活性治療劑可係用於治療或預防小核糖核酸病毒科病毒感染之疫苗，包括但不限於EV71疫苗、TAK-021、及基於EV-D68腺載劑之疫苗。 C. 用於治療呼吸道感染之組合療法
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之鹽可與本文中第VIII節中所論述之活性治療劑及/或與在第VIII.C節中專門論述之其他活性治療劑中之任一者組合使用。許多肺病毒科及小核糖核酸病毒科病毒感染係呼吸道感染。因於，用於治療呼吸道症狀及感染後遺症之額外活性治療劑可與本文所提供之化合物組合使用。額外藥劑可係口服投予或藉由直接吸入投予。例如，用於治療病毒呼吸道感染而與本文所提供之化合物組合的其他額外治療劑包括但不限於支氣管擴張劑及皮質類固醇。 糖皮質素
糖皮質素（其在1950年首度作為氣喘療法引入(Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950)）對於此疾病仍為最強效且持續有效的療法，雖然尚未完全瞭解其作用機制(Morris, J. Allergy Clin.Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985)。令人遺憾的是，口服糖皮質素療法與重度非所欲之副作用相關，諸如軀幹肥胖、高血壓、青光眼、葡萄糖耐受不良、白內障形成加速、骨礦物質流失、及心理影響，其等全部皆限制口服糖皮質素療法作為長期治療劑之使用(Goodman and Gilman, 10th edition, 2001)。對於全身性副作用的一個解決方案是將類固醇藥物直接遞送至發炎部位 。已開發出吸入型皮質類固醇(ICS)以減輕口服類固醇之嚴重不良作用。可與本文所提供之化合物組合使用的皮質類固醇之非限制性實例係地塞米松(dexamethasone)、地塞米松磷酸鈉、氟米龍(fluorometholone)、乙酸氟米龍、氯替潑諾(loteprednol)、依碳酸氯替潑諾(loteprednol etabonate)、氫化可體松(hydrocortisone)、潑尼松龍(prednisolone)、氟氫可體松(fludrocortisone)、曲安西龍(triamcinolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、倍他米松(betamethasone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone diproprionate)、甲基潑尼松龍、氟洛皮質醇(fluocinolone)、丙酮氟洛皮質醇(fluocinolone acetonide)、氟尼縮松(flunisolide)、氟可丁-21-丁酯(fluocortin-21-butylate)、氟米松(flumethasone)、新戊酸氟米松(flumetasone pivalate)、布地奈德(budesonide)、丙酸氯倍他索(halobetasol propionate)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、氟替卡松(fluticasone)、AZD-7594、環索奈德(ciclesonide)；或其醫藥上可接受之鹽。 抗發炎劑
透過抗發炎級聯機制發揮作用的其他抗發炎劑亦可用作與本文所提供之化合物組合的額外治療劑，以治療病毒性呼吸道感染。應用「抗發炎訊息傳導調節劑」（在本文中稱為AISTM）係切斷發炎的合理方法，如磷酸二酯酶抑制劑（例如具有PDE-4、PDE-5、或PDE-7特異性）、轉錄因子抑制劑（例如透過IKK抑制阻斷NFκB）、或激酶抑制劑（例如阻斷P38 MAP、JNK、PI3K、EGFR、或Syk），因為此等小分子靶向有限數目的常見胞內路徑-對於抗發炎治療性介入而言是關鍵點的訊息傳導路徑（參見綜述P.J.Barnes, 2006）。此等非限制性額外治療劑包括：5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-異丁基-1H-吲唑-6-羧酸(2-二甲基胺基-乙基)-醯胺（P38 Map激酶抑制劑ARRY-797）；3-環丙基甲氧基-N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-4-二氟甲氧基-苯甲醯胺（PDE-4抑制劑羅氟司特(Roflumilast)）；4-[2-(3-環戊基氧基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-乙基]-吡啶（PDE-4抑制劑CDP-840）；N-(3,5-二氯-4-吡啶基)-4-(二氟甲氧基)-8-[(甲基磺醯基)胺基]-1-二苯并呋喃羧醯胺（PDE-4抑制劑奧米司特(Oglemilast)）；N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羥基-1H-吲哚-3-基]-2-側氧基-乙醯胺（PDE-4抑制劑AWD 12-281）；8-甲氧基-2-三氟甲基-喹啉-5-羧酸(3,5-二氯-1-氧基-吡啶-4-基)-醯胺（PDE-4抑制劑Sch 351591）；4-[5-(4-氟苯基)-2-(4-甲亞磺醯基-苯基)-1H-咪唑-4-基]-吡啶（P38抑制劑SB-203850）；4-[4-(4-氟-苯基)-1-(3-苯基-丙基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基]-丁-3-炔-1-醇（P38抑制劑RWJ-67657）；4-氰基-4-(3-環戊基氧基-4-甲氧基-苯基)-環己烷羧酸2-二乙胺基-乙酯（西洛司特(Cilomilast)（PDE-4抑制劑）之2-二乙基-乙酯前藥）；(3-氯-4-氟苯基)-[7 -甲氧基-6-(3 啉-4 -基-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-胺（吉非替尼(Gefitinib)，EGFR抑制劑）；及4-(4-甲基-哌𠯤-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基胺基)-苯基]-苯甲醯胺（伊馬替尼(Imatinib)，EGFR抑制劑）。 β2腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑
包含吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑（諸如福莫特羅(formoterol)、沙丁胺醇(albuterol)、或沙美特羅(salmeterol)）與本文所提供之化合物的組合亦為可用於治療呼吸道病毒感染之合適（但非限制性）組合。
吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑（諸如福莫特羅或沙美特羅）與ICS的組合可被用以治療支氣管收縮及發炎（分別為SYMBICORT ®及ADVAIR ®）兩者。包含此等ICS與β2腎上腺素受體促效劑組合連同本文所提供之化合物的組合亦為合適的，但不限於可用於治療呼吸道病毒感染的組合。
β2腎上腺素受體促效劑之其他實例包括但不限於貝多拉君(bedoradrine)、維蘭特羅(vilanterol)、茚達特羅(indacaterol)、奧達特羅(olodaterol)、妥洛特羅(tulobuterol)、福莫特羅、阿貝特羅(abediterol)、沙丁胺醇、阿福特羅(arformoterol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、非諾特羅(fenoterol)、及TD-5471。 抗膽鹼劑
針對肺支氣管收縮之治療或疾病預防，抗膽鹼劑具有潛在用途，因而可用作為與本文所提供之化合物組合的額外治療劑，以治療病毒性呼吸道感染。此等抗膽鹼劑包括但不限於蕈毒鹼受體（特別是M3亞型）之拮抗劑，其在人類中顯示出控制COPD之膽鹼能基調(cholinergic tone)的治療功效(Witek, 1999)；1-{4-羥基-1-[3,3,3-參-(4-氟-苯基)-丙醯基]-吡咯啶-2-羰基}-吡咯啶-2-羧酸(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-醯胺；3-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-8-異丙基-8-甲基-8-氮陽離子-雙環[3.2.1]辛烷（異丙托銨(Ipratropium)-N,N-二乙基甘胺酸酯）；1-環己基-3,4-二氫-1H-異喹啉-2-羧酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯（索利那新(Solifenacin)）；2-羥基甲基-4-甲亞磺醯基-2-苯基-丁酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯（瑞伐托酯(Revatropate)）；2-{1-[2-(2,3-二氫-苯并呋喃-5-基)-乙基]-吡咯啶-3-基}-2,2-二苯基-乙醯胺（達非那新(Darifenacin)）；4-氮 -1-基-2,2-二苯基-丁醯胺（甲碘布卓(Buzepide)）；7-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-9-乙基-9-甲基-3-氧雜-9-氮陽離子-三環[3.3.1.02,4]壬烷（氧托銨(Oxitropium)-N,N-二乙基甘胺酸酯）；7-[2-(2-二乙胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-9,9-二甲基-3-氧雜-9-氮陽離子-三環[3.3.1.02,4]壬烷（噻托銨(Tiotropium)-N,N-二乙基甘胺酸酯）；二甲基胺基-乙酸2-(3-二異丙基胺基-1-苯基-丙基)-4-甲基-苯基酯（托特羅定(tolterodine)-N,N-二甲基甘胺酸酯）；3-[4,4-雙-(4-氟-苯基)-2-側氧基-咪唑啶-1-基]-1-甲基-1-(2-側氧基-2-吡啶-2-基-乙基)-吡咯啶鎓；1-[1-(3-氟-苄基)-哌啶-4-基]-4,4-雙-(4-氟-苯基)-咪唑啶-2-酮；1-環辛基-3-(3-甲氧基-1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基)-1-苯基-丙-2-炔-1-醇；3-[2-(2-二乙胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-1-(3-苯氧基-丙基)-1-氮陽離子-雙環[2.2.2]辛烷（阿地銨(Aclidinium)-N,N-二乙基甘胺酸酯）；或(2-二乙胺基-乙醯氧基)-二-噻吩-2-基-乙酸1-甲基-1-(2-苯氧基-乙基)-哌啶-4-基酯；瑞芬那新(revefenacin)、格隆溴銨(glycopyrronium bromide)、蕪地溴銨(umeclidinium bromide)、噻托溴銨(tiotropium bromide)、阿地溴銨(aclidinium bromide)、及苯環喹溴銨(bencycloquidium bromide)。 稀痰劑
本文所提供之化合物亦可與稀痰劑組合以治療感染及呼吸道感染症狀兩者。稀痰劑之非限制性實例係胺溴素(ambroxol)。同樣地，化合物可與祛痰劑組合以治療感染及呼吸道感染症狀兩者。祛痰劑之非限制性實例係呱芬那辛(guaifenesin)。
霧化型高張鹽水係用以改善患有肺病之對象之小呼吸道的即時及長期清除(Kuzik, J. Pediatrics2007, 266)。因此，尤其當病毒感染併發有細支氣管炎時，本文所提供之化合物亦可與霧化的高張鹽水組合。本文所提供之化合物與高張鹽水的組合亦可包含任何以上所論述之額外藥劑。在一些實施例中，使用3%高張鹽水。 D. 用於治療COPD 之組合療法
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之鹽可與本文中第VIII節中所論述之活性治療劑及/或與在第VIII.D節中專門論述之用於治療COPD之呼吸惡化之其他活性治療劑中之任一者組合使用。在一些實施例中，其他活性治療劑包括針對COPD之其他活性劑。此等其他活性治療劑之非限制性實例包括抗IL5抗體，諸如苯拉組單抗(benralizumab)、美泊珠單抗(mepolizumab)；二肽基肽酶I (DPP1)抑制劑，諸如AZD-7986 (INS-1007)；DNA旋轉酶抑制劑/拓樸異構酶IV抑制劑，諸如環丙沙星鹽酸鹽(ciprofloxacin hydrochloride)；MDR相關蛋白4/磷酸二酯酶(PDE) 3及4抑制劑，諸如RPL-554；CFTR刺激劑，諸如艾伐卡托(ivacaftor)、QBW-251；MMP-9/MMP-12抑制劑，諸如RBx-10017609；腺苷A1受體拮抗劑，諸如PBF-680；GATA 3轉錄因子抑制劑，諸如SB-010；蕈毒鹼受體調節劑/菸鹼性乙醯膽鹼受體促效劑，諸如ASM-024；MARCKS抑制劑，諸如BIO-11006；套組酪胺酸激酶/PDGF抑制劑，諸如馬賽替尼(masitinib)；磷酸二酯酶(PDE) 4抑制劑，諸如羅氟司特(roflumilast)、CHF-6001；磷酸肌醇-3激酶δ抑制劑，諸如奈米利塞(nemiralisib)；5-脂氧合酶抑制劑，諸如TA-270；蕈毒鹼受體拮抗劑/β 2腎上腺素受體促效劑，諸如琥珀酸巴芬特羅(batefenterol succinate)、AZD-887、異丙托溴銨(ipratropium bromide)；TRN-157；彈性蛋白酶抑制劑，諸如厄多司坦(erdosteine)；金屬蛋白酶-12抑制劑，諸如FP-025；介白素18配體抑制劑，諸如達克敏阿爾法(tadekinig alfa)；骨骼肌肌鈣蛋白活化劑，諸如CK-2127107；p38 MAP激酶抑制劑，諸如阿庫馬莫德(acumapimod)；IL-17受體調節劑，諸如CNTO-6785；CXCR2趨化因子拮抗劑，諸如達尼立辛(danirixin)；白血球彈性蛋白酶抑制劑，諸如POL-6014；環氧化物水解酶抑制劑，諸如GSK-2256294；HNE抑制劑，諸如CHF-6333；VIP促效劑，諸如阿肽地爾(aviptadil)；磷脂肌醇-3激酶δ/γ抑制劑，諸如RV-1729；補體C3抑制劑，諸如APL-1；及G蛋白偶聯受體-44拮抗劑，諸如AM-211。
活性治療劑之其他非限制性實例亦包括布地奈德(budesonide)、阿地普塞(adipocell)、一氧化氮、PUR-1800、YLP-001、LT-4001、阿奇黴素(azithromycin)、伽木奈克(gamunex)、QBKPN、丙酮酸鈉、MUL-1867、甘露糖醇、MV-130、MEDI-3506、BI-443651、VR-096、OPK-0018、TEV-48107、多索茶鹼(doxofylline)、TEV-46017、OligoG-COPD-5/20、STEMPEUCEL ®、ZP-051、及離胺酸乙醯水楊酸。
在一些實施例中，其他活性治療劑可係對於COPD具有活性之疫苗，包括但不限於MV-130及GSK-2838497A。 E. 用於治療黃病毒科病毒感染之組合療法
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之鹽可與本文中第VIII節中所論述之活性治療劑及/或與在第VIII.E節中專門論述之用於治療黃病毒科病毒感染之其他活性治療劑中之任一者組合使用。在一些實施例中，其他活性治療劑係對於黃病毒科病毒感染具有活性。
針對治療黃病毒科病毒感染，其他活性治療劑之非限制性實例係宿主細胞因子調節劑，諸如GBV-006；芬維A胺(fenretinide) ABX-220、BRM-211；α-葡萄糖苷酶1抑制劑，諸如西戈斯韋(celgosivir)；血小板活化因子受體(PAFR)拮抗劑，諸如莫地帕泛(modipafant)；鈣黏素-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；NS4B抑制劑，諸如JNJ-8359；病毒RNA剪接調節劑，諸如ABX-202；NS5聚合酶抑制劑；NS3蛋白酶抑制劑；及TLR調節劑。
在一些實施例中，其他活性治療劑可係用於治療或預防登革熱之疫苗，包括但不限於TETRAVAX-DV、DENGVAXIA ®、DPIV-001、TAK-003、減毒活登革熱疫苗、四價登革熱疫苗、四價DNA疫苗、rDEN2delta30-7169；及DENV-1 PIV。 F. 用於治療絲狀病毒科病毒感染之組合療法
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之鹽可與本文中第VIII節中所論述之活性治療劑及/或與在第VIII.F節中專門論述之用於治療絲狀病毒科病毒感染之其他活性治療劑中之任一者組合使用。在一些實施例中，其他活性治療劑係對於絲狀病毒科病毒感染（例如馬堡病毒、伊波拉病毒、蘇丹病毒、及奎瓦(cueva)病毒感染）具有活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例包括：MR186-YTE、瑞德西韋、利巴韋林、帕利珠單抗、莫昔珠單抗、RSV-IGIV (RESPIGAM ®)、MEDI-557、A-60444、MDT-637、BMS-433771、胺碘酮、屈奈達隆、維拉帕米、伊波拉康復者血漿(ECP)、TKM-100201、BCX4430（((2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥甲基)吡咯啶-3,4-二醇）、TKM-伊波拉、T-705單磷酸酯、T-705二磷酸酯、T-705三磷酸酯、FGI-106（1-N,7-N-雙[3-(二甲胺基)丙基]-3,9-二甲基喹啉并[8,7-h]喹啉酮-1,7-二胺）、rNAPc2、OS-2966、布林西多福韋、瑞德西韋；RNA聚合酶抑制劑，諸如加利地韋、法匹拉韋（亦稱為T-705或Avigan）、JK-05；宿主細胞因子調節劑，諸如GMV-006；鈣黏素-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；及用於治療伊波拉之抗體，諸如INMAZEB（阿托替維單抗(atoltivimab)、馬夫替維單抗(maftivimab)、及奧德昔單抗(odesivimab)）、ZMapp、及mAb114 (EBANGA)。
對於伊波拉具有活性之其他非限制性活性治療劑包括但不限於α-葡萄糖苷酶1抑制劑、組織蛋白酶B抑制劑、CD29拮抗劑、樹突狀ICAM-3撰取非整合素1抑制劑、雌激素受體拮抗劑、因子VII拮抗劑HLA II類抗原調節劑、宿主細胞因子調節劑、干擾素α配體、中性α葡萄糖苷酶AB抑制劑、尼曼-匹克C1蛋白(niemann-Pick C1 protein)抑制劑、核蛋白抑制劑、聚合酶輔因子VP35抑制劑、絲胺酸蛋白酶抑制劑、組織因子抑制劑、TLR-3促效劑、病毒套膜醣蛋白抑制劑、及伊波拉病毒進入抑制劑（NPC1抑制劑）。
在一些實施例中，其他活性治療劑可係用於治療或預防伊波拉之疫苗，包括但不限於VRC-EBOADC076-00-VP、基於腺病毒之伊波拉疫苗、rVSV-EBOV、rVSVN4CT1-EBOVGP、MVA-BNFilo+Ad26-ZEBOV方案、INO-4212、VRC-EBODNA023-00-VP、VRC-EBOADC069-00-VP、GamEvac-combi疫苗、SRCVB載體、HPIV3/EboGP疫苗、MVA-EBOZ、伊波拉重組醣蛋白疫苗、基於Vaxart腺病毒載體5之伊波拉疫苗、FiloVax疫苗、GOVX-E301、及GOVX-E302。
本文所提供之化合物亦可與胺基磷酸酯N- 啉基寡聚物(phosphoramidate morpholino oligomer, PMO)組合使用，胺基磷酸酯N- 啉基寡聚物係經設計以藉由與特定RNA序列形成鹼基對雙鏈體來干擾轉譯過程的合成反義寡核苷酸類似物。PMO之實例包括但不限於AVI-7287、AVI-7288、AVI-7537、AVI-7539、AVI-6002、及AVI-6003。
本文所提供之化合物亦意欲與提供給患有絲狀病毒科病毒感染之對象的一般護理一起使用，包括腸胃外流體（包括右旋糖鹽水及林格氏乳酸鹽）及營養物、抗生素（包括甲硝唑及頭孢菌素抗生素，諸如頭孢曲松(ceftriaxone)及頭孢呋辛(cefuroxime)）、及/或抗真菌疾病預防劑、退燒藥及止痛藥、止吐劑（諸如甲氧氯普胺(metoclopramide)）及/或止瀉劑、維生素及礦物質補充劑（包括維生素K及硫酸鋅）、消炎劑（諸如布洛芬）、止痛藥、及用於對象群體中之其他常見疾病的藥物，諸如抗瘧疾劑（包括蒿甲醚及青蒿琥酯-苯芴醇組合療法）、傷寒（包括喹諾酮類抗生素（諸如環丙沙星）、巨環內酯抗生素（諸如阿奇黴素(azithromycin)）、頭孢菌素抗生素（諸如頭孢曲松）、或胺基青黴素（諸如安比西林(ampicillin)））、或志賀桿菌病。 G. 用於治療流感之組合療法
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之鹽可與本文中第VIII節中所論述之活性治療劑及/或與在第VIII.G節中專門論述之用於治療流感病毒感染之其他活性治療劑中之任一者組合使用。在一些實施例中，本文所提供之化合物亦與其他活性治療劑組合使用，用於治療流感病毒感染。本文所提供之化合物及組成物亦與其他活性治療劑組合使用。在一些實施例中，本文所提供之化合物亦可與流感治療組合。在一些實施例中，本文所提供之化合物在治療流感病毒時與流感治療一起使用。在一些實施例中，本文所提供之化合物與流感治療一起使用以治療更廣泛的呼吸道病毒，諸如本文所揭示者。在一些實施例中，流感治療係神經胺酸酶(NA)抑制劑。在一些實施例中，流感治療係M2抑制劑。流感治療之實例包括但不限於AB-5080、ALS-1、金剛烷胺(GOCOVRI ®)、AV-001、AV-5124、AVM-0703、巴洛沙韋瑪波西酯(XOFLUZA ®)、CB-012、CC-42344、CD-388、CT-P27、可地韋(Codivir)、DAS-181、DNK-651、ENOB-FL-01、ENOB-FL-11、法匹拉韋、GP-584、GP-681、H-015、HC-imAb、HEC-116094HCl·3H2O、HNC-042、組織胺戊二醯亞胺(histamine glutarimide)、IFV-PA、英加韋林、INI-2004、INNA-051、KYAH01-2019-121、拉尼米韋、莫納皮拉韋(molnupiravir)、氯硝柳胺(niclosamide)、硝唑尼特、諾酮替芬(norketotifen)、NX-2016、磷酸奧司他韋(TAMIFLU ®)、帕拉米韋(RAPIVAB ®)、REVTx-99、金剛乙胺、S-416、SAB-176、STP-702、T-705IV、TG-1000、TJ-27、TSR-066、7HP-349、VIR-2482、VIS-410、VIS-FLX、XC-221、扎那米韋(RELENZA ®)、扎那米韋-二硝基苯基接合物、ZSP-1273、及ZX-7101A。 IX. 化合物製備
在一些實施例中，本揭露提供可用於製備本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽的程序及中間物。
本文所揭示之化合物可藉由所屬技術領域中已知的任何手段純化，包括層析手段，包括但不限於高效液相層析法(HPLC)、製備型薄層層析法、快速管柱層析法、及離子交換層析法。可使用任何合適的固定相，包括但不限於正相及逆相以及離子樹脂。在一些實施例中，所揭示之化合物係經由矽膠及/或氧化鋁層析法純化。
在用於製備本文所提供之化合物的任何程序期間，可能必需且/或所欲的是保護任何所關注分子上的敏感性或反應性基團。此可藉由習知保護基之手段達到，如標準作業中所述，諸如T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 4 thed., Wiley, New York 2006。保護基可在便利的後續階段使用自所屬技術領域已知之方法移除。
現在將參照本文中之一般性製備的說明性合成方案及隨後的具體實例來描述可用於實施例之方法中的例示性化學實體。所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解，為了獲得本文中之各種化合物，可適當地選擇起始材料，使得透過反應方案將帶有最終所欲取代基（在有或沒有適當的保護下），以產出所欲產物。替代地，可能需要或希望採用合適的基團代替最終所欲取代基，該合適的基團可透過反應方案帶有並適當地用所欲取代基置換。此外，所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解，以下方案中所示之轉換可以與特定側接基團之官能性相容的任何順序執行。
本揭露之方法通常提供特定鏡像異構物或非鏡像異構物作為所欲產物，儘管並非在所有情況下皆已判定鏡像異構物或非鏡像異構物之立體化學。當未判定鏡像異構物或非鏡像異構物中之特定立體中心的立體化學時，將化合物繪示為不在該特定立體中心顯示任何立體化學，即使化合物可係實質上鏡像異構或非鏡像異構純的。
本揭露之化合物的代表性合成係描述於以下方案、及隨後的具體實例中。 方案1
方案1顯示化合物之一般合成，其以在酸性條件（例如PTSA、MeOH）下將內酯 S1a（其中p = C 7-23伸烷基）打開成酯醇開始，接著將其轉化成烷基碘化物 S1c（例如I 2、PPh 3、咪唑）。將酯還原（例如DIBAL-H），接著對醇進行保護（例如DHP），提供中間物 S1d，其可替代地經由將二羧酸 S1b（其中p = C 7-23伸烷基）還原（例如LAH）、轉化成烷基碘化物（例如HI、TBAI）、且對醇進行保護（例如DHP）來合成。對烷基碘化物 S1d進行取代反應（例如TMSCF 3、CsF），接著在酸性條件（例如PTSA）下對醇進行去保護，提供三氟甲基醇 S1e。將 S1e轉化成烷基溴化物 S1f（例如HBr、TBAB），且與經活化（例如DIBAL-H）之Mg屑的後續反應產生格任亞(Grignard) S1g。將 S1g添加至具有PG（例如Tr、TBDPS）之環氧化物 S1h中，提供醇 S1i。在鹼性條件（例如NaH）下進行與鹵化物 S1j（例如Br）之取代反應，並移除PG（例如PTSA或TBAF），提供醇 S1k。在鹼性條件（例如1,2,4-三唑、TEA、NMI、THF）下將醇 S1k及核苷 S1l與2-Cl-苯基二氯磷酸酯偶合，以提供 S1m。移除2-Cl-苯酚（例如syn-2-吡啶醛肟、1,1,3,3-四甲基胍）及縮丙酮化合物(acetonide)（例如HCl），提供 S1n型之最終化合物（例如表1之化合物2、3、及6）。 方案2
方案2顯示化合物之一般合成，其以在酸性條件（例如PTSA、MeOH）下將內酯 S2a（其中q = C 7-23伸烷基）打開成酯醇開始，接著將其轉化成烷基溴化物 S2b（例如NBS、PPh 3）。將酯還原（例如DIBAL-H），接著將醇氧化（例如PCC），提供中間物 S2c。使用氟化試劑（例如DAST）將醛 S2c轉換產生二氟甲基烷基溴化物 S2d。將 S2d與經活化（例如I 2、BrCH 2CH 2Br）之Mg屑反應產生格任亞 S2e。將 S2e添加至具有PG（例如Tr、TBDPS）之環氧化物 S1h中，提供醇 S2f。在鹼性條件（例如NaH）下進行與鹵化物 S1j（例如Br）之取代反應，並移除PG（例如PTSA或TBAF），提供醇 S2g。在鹼性條件（例如1,2,4-三唑、TEA、NMI、THF）下將醇 S2g及核苷 S1l與2-Cl-苯基二氯磷酸酯偶合，以提供 S2h。移除2-Cl-苯酚（例如syn-2-吡啶醛肟、1,1,3,3-四甲基胍）及縮丙酮化合物（例如HCl），提供 S2i型之最終化合物（例如表1之化合物4）。 方案3
方案3顯示化合物之一般合成，其以在鹼性條件（例如KOH）下進行之與烷基溴化物 S3a（其中r = C 8-21伸烷基）及醇 S3b之取代反應開始，接著在酸性條件（例如AcOH）下對縮丙酮化合物進行去保護，以提供二醇 S3c。 S3a係以與 S1f類似之方式製備。對二醇進行保護（例如TrCl、TEA），產生中間物 S3d，其可在鹼性條件（例如NaH）下與鹵化物 S1j（例如Br）進行取代反應，且移除PG（例如PTSA），以產生醇 S3e。在鹼性條件（例如1,2,4-三唑、TEA、NMI、THF）下將 S3e及核苷 S1l與2-Cl-苯基二氯磷酸酯偶合，以提供 S3f。移除2-Cl-苯酚（例如syn-2-吡啶醛肟、1,1,3,3-四甲基胍）及縮丙酮化合物（例如HCl），提供 S3g型之最終化合物（例如表1之化合物1）。 方案4
方案4顯示化合物之一般合成，其以在鹼性條件（例如n-BuLi）下進行烷基鹵化物 S4a（例如Br）（其中s = C 7-21伸烷基）及具有PG（例如THP）之炔烴 S4b之取代反應開始，以提供中間物 S4c。在酸性條件（例如PTSA）下對 S4c進行去保護，且在鹼性條件（例如NaH、1,3-二胺基丙烷）進行重排，產出醇 S4d。對 S4d進行保護（例如PMBCl、NaH），接著進行末端炔烴之三氟甲基化（例如TMSCF 3、CuI），產生中間物 S4e。對 S4e進行去保護（例如CAN），且將炔烴還原（例如Pd(OH) 2/C、H 2），產出三氟甲基醇 S4f。在鹼性條件（例如1,2,4-三唑、TEA、NMI、THF）下將 S4f及核苷 S1l與2-Cl-苯基二氯磷酸酯偶合，以提供 S4g。移除2-Cl-苯酚（例如syn-2-吡啶醛肟、1,1,3,3-四甲基胍）及縮丙酮化合物（例如HCl），提供 S4h型之最終化合物（例如表1之化合物5）。 方案5
方案5顯示化合物之一般合成，其以在鹼性條件（例如TsCl、TEA）下將醇 S5a（其中t = C 8-21伸烷基）與脫離基偶合開始。 S5a係以與 S1e類似之方式製備。在鹼性條件（例如NaH）下進行與 S5b及具有PG（例如TBDMS）之醇 S5c之取代反應，接著移除PG（例如TBAF），產出醇 S5d。在鹼性條件（例如1,2,4-三唑、TEA、NMI、THF）下將 S5d及核苷 S1l與2-Cl-苯基二氯磷酸酯偶合，以提供 S5e。移除2-Cl-苯酚（例如syn-2-吡啶醛肟、1,1,3,3-四甲基胍）及縮丙酮化合物（例如HCl），提供 S5f型之最終化合物。 方案6
方案6顯示化合物之一般合成，其以烷基碘化物 S6a（其中u =C 7-22伸烷基）之氟化（例如TMSCF 2CF 3、CsF）開始，在酸性條件（例如PTSA）下進行去保護，並轉化成對應的烷基溴化物（例如CBr 4、PPh 3），以產出 S6b。 S6a係以與 S1d類似之方式製備。將 S6b與經活化（例如DIBAL-H）之Mg屑反應產生格任亞 S6c。將 S6c添加至具有PG（例如Tr、TBDPS）之環氧化物 S1h中，產出醇 S6d。在鹼性條件（例如NaH）下進行與鹵化物 S1j（例如Br）之取代反應，並移除PG（例如PTSA或TBAF），提供醇 S6e。在鹼性條件（例如1,2,4-三唑、TEA、NMI、THF）下將醇 S6e及核苷 S1l與2-Cl-苯基二氯磷酸酯偶合，以給出 S6f。移除2-Cl-苯酚（例如syn-2-吡啶醛肟、1,1,3,3-四甲基胍）及縮丙酮化合物（例如HCl），提供 S6g型之最終化合物。 方案7
方案7顯示化合物之一般合成，其以在鹼性條件（例如1,2,4-三唑、TEA、NMI、THF）下將三氟甲基醇 S7a（其中v = C 10-26伸烷基）及核苷 S1l與2-Cl-苯基二氯磷酸酯偶合開始，以提供 S7b。 S7a係以與 S1e類似之方式製備。移除2-Cl-苯酚（例如syn-2-吡啶醛肟、1,1,3,3-四甲基胍）及縮丙酮化合物（例如HCl），提供 S7c型之最終化合物。 實例 A. 縮寫
在描述實驗細節中使用某些縮寫及頭字語。雖然所屬技術領域中具有通常知識者會理解其中大多數者，但表2含有許多此等縮寫及頭字語之清單。 表2. 縮寫及頭字語之清單。
縮寫 意義
Ac 乙酸鹽
ACN 乙腈
AIBN 偶氮雙異丁腈
Bn 苄基
Bu 丁基
Bz 苯甲醯基
BzCl 苯甲醯氯
CDI 1,1’-羰基二咪唑
DAST 三氟化二乙胺基硫
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N-二異丙基乙基胺
DMAP 4-二甲基胺基吡啶
DMDO 二甲基二氧環丙烷
DMSO 二甲基亞碸
DMF 二甲基甲醯胺
DMTrCl 4,4’-二甲氧基三苯甲基氯
DMTr 4,4’-二甲氧基三苯甲基
EDCI N-(3-二甲基胺基丙基)- N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽
Et 乙基
Imid 咪唑
KOtBu 三級丁醇鉀
LC 液相層析法
MCPBA 間氯過氧苯甲酸
Me 甲基
m/z 質荷比
MS或ms 質譜
NIS N-碘琥珀醯亞胺
NMI N-甲基咪唑
NMP N-甲基-2-吡咯啶酮
Ph 苯基
Ph 3P 三苯膦
PMB 對甲氧基苄基
PMBCl 對甲氧基苄基氯
PhOC(S)Cl 硫代氯甲酸苯酯
(PhO) 3PMeI 甲基三苯氧基碘化磷
Pyr 吡啶
RT 室溫
SFC 超臨界流體層析法
TBAF 四丁基氟化銨
TBS 三級丁基二甲基矽基
TBSCl 三級丁基二甲基氯矽烷
TMSN 3 三甲基矽基疊氮化物
TEA 三乙胺
TES 三乙基矽烷
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
TMS 三甲基矽基
TMSCl 三甲基矽基氯化物
Ts 4-甲苯磺醯基
TsOH 對甲苯磺酸
δ 參考殘留非氘化溶劑峰的百萬分點
B. 中間物 中間物I-1 ：(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三 𠯤-7- 基)-4-( 羥基甲基)-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 甲腈
中間物I-1a（(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(((三級丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-甲腈）係根據WO2015/069939製備。例如，WO2015/069939之第127至138頁提供一種用於製備此化合物（在WO2015/069939中鑑別為化合物14k）之方法。
向 中間物 I-1a(18.87 mmol)於THF (100 mL)中之溶液中。在環境溫度下一次性添加於THF中之TBAF 1.0 M (28.31 mmol)。允許在環境溫度下攪拌10分鐘。藉由LCMS判定反應完成。將反應混合物用水淬熄，且將有機物在減壓下移除。將粗製物分配在EtOAc與水之間。將各層分離，且將水層用EtOAc洗滌。將有機物合併並以硫酸鈉乾燥。濾出固體，並在減壓下移除溶劑。將粗製物藉由矽膠層析法120 g管柱於CH 2Cl 2中之0%至10% CH 3OH純化，以提供 中間物 I-3a。LC/MS：t R= 0.76 min，MS m/z= 332.14 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6 µ XB-C18 100A，50 x 3.00 mm。溶劑：具有0.1%甲酸之乙腈、具有0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.87-7.80 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.74 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 5.52 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 5.24 (dd, J= 6.8, 4.2 Hz, 1H), 4.92 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 3.65 (dd, J= 6.1, 1.7 Hz, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.33 (s, 3H)。 中間物I-2 ：十七烷-1,17- 二醇
在0℃下將LiAlH 4(9.4 g, 249.6 mmol, 6 eq)添加至THF (700 mL)中以製作懸浮液。接著，在0℃下將十七烷二酸(12.5 g, 41.61 mmol, 1 eq)緩慢添加至上述懸浮液中。將混合物在70℃下攪拌12 hr，接著冷卻至0℃，且將反應藉由依序添加H 2O (10 mL)、15% NaOH (10 mL)、aqNa 2SO 4溶液(20 mL)淬熄。接著，將混合物過濾，用THF (5 L)洗滌，並在減壓下濃縮。將粗產物在20℃下用石油醚(80 mL)研製30 min、過濾、用石油醚(80 mL)洗滌，且將濾餅在減壓下乾燥，以給出 十七烷 -1,17- 二醇（中間物I-2 ），其未經進一步純化即用於下一個反應中。 中間物I-3 ：17- 碘十七-1- 醇
向十七烷-1,17-二醇（ 中間物 I-2）(10 g, 36.7 mmol, 1 eq)於甲苯(180 mL)中之溶液中添加TBAI (542.2 mg, 1.4 mmol, 0.04 eq)。接著，在90℃下將HI（10.4 g，36.70 mmol，6.1 mL，45%溶液，1 eq）添加至溶液中。將混合物在90℃下攪拌12 h，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物用H 2O (80 mL)稀釋並用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取。將合併之有機層用鹽水(80 mL×3)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至20%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 17- 碘十七-1- 醇（中間物I-3 ）。 中間物I-4 ：2-((17- 碘十七基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
向17-碘十七-1-醇（ 中間物 I-3）(2.5 g, 6.5 mmol, 1 eq)於THF (40 mL)中之溶液中，添加3,4-二氫-2H-哌喃(1.3 g, 16.3 mmol, 1.4 mL, 2.5 eq)及PTSA (168.8 mg, 980.7 umol, 0.15 eq)。將混合物在20℃下攪拌12 hr並在減壓下濃縮。將殘餘物用H 2O (50 mL)稀釋並用乙酸乙酯(80 mL × 3)萃取。將合併之有機層用鹽水(50 mL × 3)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至6%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 2-((17- 碘十七基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃（中間物I-4 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 4.62 - 4.53 (m, 1H), 3.94 - 3.82 (m, 1H), 3.79 - 3.68 (m, 1H), 3.55 - 3.46 (m, 1H), 3.44 - 3.34 (m, 1H), 3.20 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 1.90 - 1.77 (m, 3H), 1.77 - 1.67 (m, 1H), 1.65 - 1.47 (m, 6H), 1.45 - 1.18 (m, 26H) 中間物I-5 ：2-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
向CsF (2.6 g, 17.1 mmol, 632.2 uL, 3.2 eq)於15-冠-5 (6.4 g, 29.2 mmol, 5.8 mL, 5.4 eq)中之溶液中，添加DME (40 mL)及4A MS (2 g)，且將混合物冷卻至-20℃。接著，將2-((17-碘十七基)氧基)四氫-2H-哌喃（ 中間物 I-4）(2.5 g, 5.3 mmol, 1 eq)及TMS-CF 3(3.2 g, 22.7 mmol, 4.2 eq)於DME (40 mL)中之溶液在15min內添加至上述混合物中。將混合物在25℃下攪拌12hr，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，用鹽水(50 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯= 100/1至100/3），以給出 2-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃（中間物I-5 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 4.58 (br s, 1H), 3.88 (br t, J= 9.2 Hz, 1H), 3.80 - 3.68 (m, 1H), 3.58 - 3.46 (m, 1H), 3.45 - 3.33 (m, 1H), 2.14 - 1.96 (m, 2H), 1.64 - 1.50 (m, 8H), 1.40 – 1.15 (m, 28H) 中間物I-6 ：18,18,18- 三氟十八-1- 醇
向2-((18,18,18-三氟十八基)氧基)四氫-2H-哌喃（ 中間物 I-5）(2.1 g, 5.1 mmol, 1 eq)於EtOH (30 mL)中之溶液中，添加TsOH (1.6 g, 9.2 mmol, 1.8 eq)。將混合物在50℃下攪拌3 hr，用乙酸乙酯(80 mL)稀釋，用NaCl (50 mL×3)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至8%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 18,18,18- 三氟十八-1- 醇（中間物I-6 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 3.65 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.14 - 1.97 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 4H), 1.41 - 1.18 (m, 26H) 中間物I-7 ：18- 溴-1,1,1- 三氟十八烷
向18,18,18-三氟十八-1-醇（ 中間物 I-6）(1.4 g, 4.3 mmol, 1 eq)於HBr（40 mL，於H 2O中）中之溶液中，添加TBAB (278.1 mg, 862.9 umol, 0.2 eq)。將混合物在100℃下攪拌12 hr，用乙酸乙酯(80 mL稀釋，用NaCl (50 mL × 3)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至8%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 18- 溴-1,1,1- 三氟十八烷（中間物I-7 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 3.42 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.14 - 1.98 (m, 2H), 1.92 - 1.80 (m, 2H), 1.61 - 1.50 (m, 2H), 1.49 - 1.40 (m, 2H), 1.39 – 1.23 (m, 24H) 中間物I-8 ：(R)-2,2- 二甲基-4-(((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 甲基)-1,3- 二氧雜環戊烷(dioxolane)
向18-溴-1,1,1-三氟-十八烷（ 中間物 I-7）(1.4 g, 3.6 mmol, 1 eq)於[(4R)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-基]甲醇(2.8 g, 21.1 mmol, 5.8 eq)中之溶液中，添加KOH (506.9 mg, 9.0 mmol, 2.5 eq)及TBAB (233.0 mg, 722.8 umol, 0.2 eq)。將混合物在40℃下攪拌12 hr，用H 2O (20 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。將合併之有機層用NaCl (20 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至8%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出 (R)-2,2- 二甲基-4-(((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 甲基)-1,3- 二氧雜環戊烷（中間物I-8 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 4.32 - 4.23 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 1H), 3.77 - 3.70 (m, 1H), 3.56 - 3.39 (m, 4H), 2.14 - 1.97 (m, 2H), 1.63 - 1.50 (m, 4H), 1.43 (s, 3H), 1.40 - 1.21 (m, 29H) 中間物I-9 ：(S)-3-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 丙烷-1,2- 二醇
將(R)-2,2-二甲基-4-(((18,18,18-三氟十八基)氧基)甲基)-1,3-二氧雜環戊烷（ 中間物 I-8）(1.3 g, 2.9 mmol, 1 eq)溶解於THF (25 mL)、H 2O (20.0 g, 1.11 mol, 20 mL, 374.5 eq)、及AcOH (31.5 g, 524.5 mmol, 30 mL, 176.9 eq)之溶液中。將混合物在50℃下攪拌12 hr並在減壓下濃縮，以給出 (S)-3-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 丙烷-1,2- 二醇（中間物I-9 ），其未經進一步純化即用於下一步驟中。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 3.90 – 3.80 (m, 1H), 3.78 - 3.62 (m, 2H), 3.60 - 3.40 (m, 4H), 2.77 - 2.51 (m, 1H), 2.34 - 2.15 (m, 1H), 2.14 - 1.99 (m, 2H), 1.66 - 1.47 (m, 4H), 1.45 – 1.20 (m, 26H) 中間物I-10 ：(R)-1-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基)-3-( 三苯甲基氧基) 丙-2- 醇
將(S)-3-((18,18,18-三氟十八基)氧基)丙烷-1,2-二醇（ 中間物 I-9）（1.3 g，2.9 mmol，90%純度，1 eq）溶解於DCM (30 mL)及TEA (534.7 mg, 5.2 mmol, 735.5 uL, 1.8 eq)之溶液中，接著在0℃下添加TrtCl (818.4 mg, 2.94 mmol, 1 eq)。將混合物在20℃下攪拌12 hr，用DCM (10 mL)稀釋，用H 2O (20 mL×3)洗滌，以Na2SO4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以出殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=100/1至100/6），以給出 (R)-1-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基)-3-( 三苯甲基氧基) 丙-2- 醇（中間物I-10 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.50 – 7.40 (m, 6H), 7.38 - 7.24 (m, 9H), 4.04 - 3.94 (m, 1H), 3.62 - 3.40 (m, 4H), 3.31 - 3.16 (m, 2H), 2.49 - 2.31 (m, 1H), 1.68 - 1.50 (m, 4H), 1.36 - 1.19 (m, 28H) 中間物I-11 ：(R)-3- 氟-5-(((1-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基)-3-( 三苯甲基氧基) 丙-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
在0℃下向(R)-1-((18,18,18-三氟十八基)氧基)-3-(三苯甲基氧基)丙-2-醇（ 中間物 I-10）(1 g, 1.56 mmol, 1 eq)於THF (30 mL)中之溶液中，添加NaH（187.2 mg，4.6 mmol，60%純度，3 eq）。將混合物在0℃下攪拌0.5 hr，接著在0℃下將3-(溴甲基)-5-氟-苯甲腈(601.1 mg, 2.8 mmol, 1.8 eq)添加至上述溶液中。將混合物在65℃下攪拌12hr。將反應藉由在0℃下添加飽和NH 4Cl溶液(50 mL)淬熄。接著，將所得混合物用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。將合併之有機層用NaCl (20 mL × 3)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/MTBE=100/0至100/5），以給出 (R)-3- 氟-5-(((1-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基)-3-( 三苯甲基氧基) 丙-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈（中間物I-11 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.50 – 7.45 (m, 6H), 7.40 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 11H), 4.71 (s, 2H), 3.81 - 3.69 (m, 1H), 3.61 (d, J= 5.1 Hz, 2H), 3.45 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.35 - 3.23 (m, 2H), 1.65 - 1.52 (m, 4H), 1.38 - 1.21 (m, 28H) 中間物I-12 ：(S)-3- 氟-5-(((1- 羥基-3-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 丙-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
向(R)-3-氟-5-(((1-((18,18,18-三氟十八基)氧基)-3-(三苯甲基氧基)丙-2-基)氧基)甲基)苯甲腈（ 中間物 I-11）(400.0 mg, 516.8 umol, 1 eq)於MTBE (15 mL)中之溶液中，添加苯甲醚(27.9 mg, 258.4 umol, 28.0 uL, 0.5 eq)、MeOH (2.4 mL)、及PTSA (44.5 mg, 258.4 umol, 0.5 eq)。將混合物在50℃下攪拌3hr並在減壓下濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，並用NaCl (10 mL × 3)洗滌，以Na 2SO4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=20/1至4/1）。將殘餘物藉由製備型HPLC進一步純化（TFA條件，管柱：Phenomenex Luna C18 200*40 mm*10um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：60%至90%，8min），以給出 (S)-3- 氟-5-(((1- 羥基-3-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 丙-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈（中間物I-12 ）。 1HNMR (400 MHz，氯仿-d) δ = 7.47 (s, 1H), 7.37 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 4.79 - 4.67 (m, 2H), 3.85 - 3.77 (m, 1H), 3.78 – 3.55 (m, 2H), 3.66 - 3.55 (m, 2H), 3.49 - 3.42 (m, 2H), 2.17 - 1.97 (m, 3H), 1.65 – 1.48 (m, 2H), 1.45 – 1.20 (m, 28H)。 19FNMR (376 MHz，氯仿-d) δ = -66.38, -109.77。MS (ESI): m/ z= 532.4 [M+H] +。 中間物I-13 ：2- 氯苯基二(1H-1,2,4- 三唑-1- 基) 次膦酸酯
將1 H-1,2,4-三唑(714 mg, 10.3 mmol)及TEA (1.44 mL, 10.3 mmol)溶解於THF (8 mL)中。在rt下向溶液中逐滴添加1-氯-2-二氯磷醯氧基-苯(0.81 mL, 4.92 mmol)。將反應混合物在rt下攪拌30 min並過濾至刻度管中，將濾餅用THF (8 mL)洗滌，且將額外的THF添加至濾液中至總體積為20 mL，產生 中間物 I-13之約0.246 M儲備溶液，將其用於下一個反應中。 31P NMR (162 MHz，乙腈- d 3) δ -16.94。 中間物I-14 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧呃 -4- 基 ) 甲基 (2- 氯苯基 ) ((R)-2-((3- 氰基 -5- 氟苄基 ) 氧基 )-3-((18,18,18- 三氟十八基 ) 氧基 ) 丙基 ) 磷酸酯
向 中間物 I-13（0.246 M於THF中，3.59 mL，0.883 mmol）之溶液中一次性添加 中間物 I-1(225 mg, 0.679 mmol)，接著添加1-甲基咪唑(0.070 mL, 0.883 mmol)。將反應混合物在rt下攪拌20 min，接著逐滴添加於THF (1 mL)中之 中間物 I-12(397 mg, 0.746 mmol)。將所得混合物攪拌1h，用EtOAc (50 mL)-水(40 mL)稀釋。將所得混合物攪拌10 min，且將各層分離，且將水層用EtOAc (20 mL x 3)萃取。將合併之有機層用硫酸鈉乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至5% MeOH），以給出 中間物 I-14。 1H NMR (400 MHz，乙腈-d3) δ 7.87 (s, 1H), 7.53 – 7.36 (m, 5H), 7.24 - 7.08 (m, 2H), 6.81 – 6.66 (m, 2H), 6.26 (s, 2H), 5.69 - 5.59 (m, 1H), 5.36 - 5.18 (m, 1H), 5.17 - 5.00 (m, 1H), 4.69 – 4.41 (m, 4H), 4.39 – 4.13 (m, 2H), 3.83 - 3.67 (m, 1H), 3.51 - 3.39 (m, 2H), 3.42 – 3.30 (m, 2H), 2.31 – 2.07 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.61 – 1.44 (m, 4H), 1.41 – 1.00 (m, 29H)。 19F NMR (376 MHz，乙腈-d3) δ -67.51, -112.80。 31P NMR (162 MHz，乙腈-d3) δ -7.32, -7.37。MS m/z[M+1] = 1035.7。 中間物I-15 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-3-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 丙基) 磷酸氫酯
向 中間物 I-14(373 mg, 0.36 mmol)於THF (4 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.271 mL, 2.16 mmol)及syn-2-吡啶醛肟(176 mg, 1.44 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌15h，用EtOAc (100 mL)稀釋，用氯化銨飽和水溶液(25 mL x 3)洗滌，用硫酸鈉乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以給出 中間物 I-15。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.85 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.49 – 4.41 (m, 1H), 7.39 – 7.31 (m, 1H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.65 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 5.28 (dd, J= 6.6, 3.6 Hz, 1H), 5.15 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.74 (d, J= 13.3 Hz, 1H), 4.65 (d, J= 13.3 Hz, 1H), 4.19 - 4.05 (m, 2H), 4.00 - 3.86 (m, 2H), 3.79 - 3.66 (m, 1H), 3.58 – 3.35 (m, 4H), 2.26 – 1.92 (m, 2H), 1.71 (s, 3H), 1.61 - 1.47 (m, 4H), 1.45 – 1.05 (m, 29H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -65.87 – -72.34, -112.99。 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -0.46。MS m/z[M+1] = 925.4。 中間物I-16 ：18- 溴-1,1,1- 三氟十八烷
在20℃下向TBAB (139.1 mg, 431.5 umol, 0.04 eq)於HBr (18 mL, H 2O)中之溶液中，添加 中間物 I-6（18,18,18-三氟十八-1-醇）(3.5 g, 10.8 mmol, 1 eq)。接著，將混合物在100℃下攪拌12 hr，並在減壓下濃縮以移除溶劑。將殘餘物用H 2O (30 mL)稀釋並用DCM (20 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (30 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；20 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為1%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 45 mL/min），以給出化合物 18- 溴-1,1,1- 三氟十八烷（中間物I-16 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.42 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.12 - 2.01 (m, 2H), 1.88 – 1.84 (m, 2H), 1.60 - 1.52 (m, 2H), 1.53 - 1.22 (m, 26H) 中間物I-17 ：(18,18,18- 三氟十八基) 溴化鎂
在N 2下向Mg (216.5 mg, 8.9 mmol, 1.2 eq)於2-Me-THF (5 ml)中之溶液中，添加I 2(19.7 mg, 77.5 umol, 15.6 uL, 0.01 eq)及BrCH 2CH 2Br (0.05 mL)。接著，逐滴添加於2-Me-THF (3 ml)中之 中間物 I-16（18-溴-1,1,1-三氟-十八烷）(0.3 g, 0.8 mmol)。將混合物攪拌直到I 2之顏色褪成無色。接著，添加剩餘的於2-Me-THF (27 ml)中之18-溴-1,1,1-三氟-十八烷(2.7 g, 7.0 mmol)，且將混合物在25℃下攪拌4 hr。反應混合物未經進一步純化即用於下一步驟中，其呈於2-Me-THF中之棕色溶液。 中間物I-18 ：(R)-21,21,21- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十一-2- 醇
在-20℃下向(2R)-2-(三苯甲基氧基甲基)氧 (1.8 g, 5.6 mmol, 1 eq)及CuI (53.4 mg, 280.3 umol, 0.05 eq)於2-Me-THF (10 mL)中之混合物中，經由套管(cannula)在10 min內添加 中間物 I-18（(18,18,18-三氟十八基)溴化鎂）(3 g, 7.3 mmol, 1.3 eq)。將反應劇烈攪拌5 min，接著在0℃下攪拌2 h。將反應藉由添加飽和NH 4Cl溶液(50 ml)淬熄，接著將混合物用乙酸乙酯(35 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (50 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；20 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至4% MTBE/石油醚梯度@ 40 mL/min），以給出化合物 (R)-21,21,21- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十一-2- 醇（中間物I-18 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.47 - 7.43 (m, 4H), 7.33 - 7.29 (m, 11H), 3.80 – 3.70 (m, 1H), 3.19 (dd, J= 3.3, 9.4 Hz, 1H), 3.04 (dd, J= 7.7, 9.3 Hz, 1H), 2.30 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 2H), 1.59 - 1.53 (m, 2H), 1.48 - 1.19 (m, 32H) 中間物I-19 ：(R)-3- 氟-5-(((21,21,21- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十一-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
在0℃下向NaH（144.0 mg，3.6 mmol，60%純度，2.5 eq）於THF (14 mL)中之溶液中，添加(2R)-21,21,21-三氟-1-(三苯甲基氧基)二十一-2-醇（ 中間物 I-18）(900 mg, 1.4 mmol, 1 eq)，且將混合物在0℃下攪拌30 min。接著，添加3-(溴甲基)-5-氟-苯甲腈(369.9 mg, 1.7 mmol, 1.2 eq)，且將混合物在65℃下攪拌12 hr。將反應藉由在20℃下添加飽和NH 4Cl溶液(20 ml)淬熄，且將混合物用乙酸乙酯(12 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (30 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；12 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至3% MTBE/石油醚梯度@45 mL/min），以給出化合物 (R)-3- 氟-5-(((21,21,21- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十一-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈（中間物I--19 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.48 - 7.41 (m, 7H), 7.31 – 7.20 (m, 11H), 4.73 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.56 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 3.57 - 3.47 (m, 1H), 3.21 (d, J= 4.5 Hz, 2H), 2.13 - 2.00 (m, 2H), 1.59 - 1.50 (m, 4H), 1.52 – 1.23 (m, 30H) 中間物I-20 ：(R)-3- 氟-5-(((21,21,21- 三氟-1- 羥基二十一-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
向3-氟-5-[[(1R)-20,20,20-三氟-1-(三苯甲基氧基甲基)二十烷氧基(icosoxy)]甲基]苯甲腈（ 中間物 I-19）(750 mg, 989.5 umol, 1 eq)於MeOH (2.2 mL)及MTBE (15 mL)中之溶液中，添加苯甲醚(53.5 mg, 494.7 umol, 53.8 uL, 0.5 eq)及PTSA (85.2 mg, 494.7 umol, 0.5 eq)。將混合物在50℃下攪拌2 hr，用飽和NaHCO 3(30 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (30 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；12 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至9%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 45 mL/min），以給出化合物 中間物 I-20。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.46 (s, 1H), 7.35 – 7.20 (m, 2H), 4.64 (s, 2H), 3.79 - 3.72 (m, 1H), 3.65 - 3.58 (m, 1H), 3.57 - 3.50 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 2H), 1.66 - 1.50 (m, 4H), 1.51 - 1.25 (m, 30H)。MS (ESI): m/ z= 538.2 [M+Na] +。 中間物I-21 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) ((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-21,21,21- 三氟二十一基) 磷酸酯
向 中間物 I-13（0.246 M於THF中，3.51 mL，0.863 mmol）之溶液中一次性添加 中間物 I-1(220 mg, 0.664 mmol)，接著添加1-甲基咪唑(0.069 mL, 0.863 mmol)。將反應混合物在rt下攪拌10 min，接著逐滴添加於THF (1 mL)中之 中間物 I-20(376 mg, 0.729 mmol)。將所得混合物攪拌1h、用EtOAc (50 mL)-水(20 mL)-鹽水(20 mL)稀釋、攪拌10 min，將各層分離，將水層用EtOAc (20 mL x 3)萃取。將合併之有機層在硫酸鈉下乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至5% MeOH），以給出 中間物 I-21。 1H NMR (400 MHz，乙腈-d3) δ 7.87 (s, 1H), 7.53 – 7.21 (m, 5H), 7.26 - 7.06 (m, 2H), 6.81 – 6.66 (m, 2H), 6.29 (s, 2H), 5.67 (dd, J= 4.9, 3.1 Hz, 1H), 5.33 - 5.22 (m, 1H), 5.17 – 4.99 (m, 1H), 4.65 – 4.39 (m, 4H), 4.34 - 3.21 (m, 1H), 4.20 - 4.03 (m, 1H), 3.64 - 3.50 (m, 1H), 2.27 – 2.02 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.60 - 1.41 (m, 2H), 1.41 – 1.11 (m, 35H)。 19F NMR (376 MHz，乙腈-d3) δ -67.52, -112.84。 31P NMR (162 MHz，乙腈-d3) δ -7.30, -7.33。MS m/z[M+1] = 1019.5。 中間物I-22 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-21,21,21- 三氟二十一基) 磷酸氫酯
向 中間物 I-21(387 mg, 0.38 mmol)於THF (4 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.286 mL, 2.28 mmol)及syn-2-吡啶醛肟(188 mg, 1.54 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌15h，用EtOAc (100 mL)稀釋，用氯化銨飽和水溶液(25 mL x 3)洗滌，用硫酸鈉乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至60% MeOH），以給出 中間物 I-22。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.84 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 2H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.65 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.28 (dd, J= 6.6, 3.6 Hz, 1H), 5.15 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.75 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.53 (d, J= 13.1 Hz, 1H), 4.20 – 4.08 (m, 2H), 3.97 - 3.84 (m, 2H), 3.63 – 3.51 (m, 1H), 2.21 – 2.04 (m, 2H), 1.71 (s, 3H), 1.61 - 1.48 (m, 2H), 1.49 – 1.20 (m, 35H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.50, -112.92。 1P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -0.36。MS m/z[M+1] = 909.3。 中間物I-23 ：16- 羥基十六酸甲酯
向氧雜環十七-2-酮(10 g, 39.3 mmol, 1 eq)於MeOH (100 mL)中之溶液中，添加PTSA (1.0 g, 5.9 mmol, 0.15 eq)。將混合物在70℃下攪拌12 hr並在減壓下濃縮。將所得殘餘物用H 2O (300 mL)稀釋並用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (300 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至15%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出化合物 16- 羥基十六酸甲酯（中間物I-23 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.72 - 3.61 (m, 5H), 2.30 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 1.64 - 1.54 (m, 4H), 1.35 - 1.24 (m, 22H)。 中間物I-24 ：16- 碘十六酸甲酯
向16-羥基十六酸甲酯（ 中間物 I-23）(5 g, 17.5 mmol, 1 eq)於DCM (100 mL)中之溶液中，添加咪唑(3.6 g, 52.4 mmol, 3 eq)及PPh 3(9.2 g, 34.9 mmol, 2 eq)。接著，將混合物除氣，用N 2吹掃3次，接著將溫度冷卻至0℃，且添加於THF (30 mL)中之I 2(8.9 g, 34.9 mmol, 7.0 mL, 2 eq)。接著，將混合物在25℃下攪拌12 hr，將反應藉由添加10% Na 2S 2O 3300 mL淬熄，接著將混合物用DCM (200 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (300 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至3%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出化合物 16- 碘十六酸甲酯（中間物I-24 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.66 (d, J= 1.9 Hz, 3H), 3.18 (dt, J= 1.8, 7.1 Hz, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 2H), 1.86 - 1.78 (m, 2H), 1.67 - 1.57 (m, 2H), 1.50 – 1.20 (m, 22H) 中間物I-25 ：16- 碘十六-1- 醇
在-78℃下向16-碘十六酸甲酯（ 中間物 I-24）(5 g, 12.6 mmol, 1 eq)於甲苯(50 mL)中之溶液中，逐滴添加DIBAL-H (1 M, 31.5 mL, 2.5 eq)。在添加之後，將混合物在0℃下攪拌2 hr。將反應藉由在0℃下倒入飽和NH 4Cl溶液(300 ml)淬熄。將混合物攪拌30 min並用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (300 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至15%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出化合物 16- 碘十六-1- 醇（中間物I-25 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.65 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.25 - 3.15 (m, 2H), 1.88 - 1.77 (m, 2H), 1.63 – 1.52 (m, 2H), 1.41 - 1.36 (m, 2H), 1.37 – 1.20 (m, 22H) 中間物I-26 ：2-((16- 碘十六基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
向16-碘十六-1-醇（ 中間物 I-25）(10 g, 27.1 mmol, 1 eq)於THF (100 mL)中之溶液中，添加3,4-二氫-2H-哌喃(6.8 g, 81.4 mmol, 7.4 mL, 3 eq)及PTSA (701.3 mg, 4.1 mmol, 0.15 eq)。將所得混合物在20℃下攪拌12 hr並在減壓下濃縮。將殘餘物用H 2O 150 mL稀釋並用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (200 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至5%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出化合物 2-((16- 碘十六基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃（中間物I-26 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ4.61 - 4.56 (m, 1H), 3.95 – 3.87 (m, 1H), 3.80 – 3.70 (m, 1H), 3.54 - 3.47 (m, 1H), 3.41 – 3.40 (m, 1H), 3.19 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 1.85 - 1.81 (m, 2H), 1.63 - 1.51 (m, 6H), 1.42 - 1.25 (m, 26H) 中間物I-27 ：2-((17,17,17- 三氟十七基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
向CsF (6.4 g, 42.4 mmol, 1.6 mL, 3.2 eq)於15-冠-5 (15.9 g, 72.3 mmol, 14.3 mL, 5.4 eq)中之溶液中，添加DME (120 mL)及4A MS (15 g)，接著將混合物冷卻至-20℃。接著，將2-(16-碘十六烷氧基)四氫哌喃（ 中間物 I-26）(6 g, 13.3 mmol, 1 eq)及TMS-CF 3(8.0 g, 56.2 mmol, 4.2 eq)於DME (50 mL)中之溶液在30min內添加至上述溶液中。將混合物在20℃下攪拌12hr並在減壓下濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，用NaCl (50 mL × 3)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/MTBE=100/0至100/3），以給出化合物 2-((17,17,17- 三氟十七基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃（中間物I-27 ）。 中間物I-28 ：17,17,17- 三氟十七-1- 醇
向2-(17,17,17-三氟十七烷氧基)四氫哌喃（ 中間物 I-27）(5 g, 12.7 mmol, 1 eq)於EtOH (50 mL)中之溶液中，添加PTSA (2.2 g, 12.7 mmol, 1 eq)。將混合物在50℃下攪拌12 hr並在減壓下濃縮。將殘餘物用H 2O (300 mL)稀釋並用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (300 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至15%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出化合物 17,17,17- 三氟十七-1- 醇（中間物I-28 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.65 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.13 - 1.99 (m, 2H), 1.62 - 1.51 (m, 4H), 1.36 - 1.26 (m, 24H)。 中間物I-29 ：17- 溴-1,1,1- 三氟十七烷
在20℃下向17,17,17-三氟十七-1-醇（ 中間物 -28）(5 g, 16.1 mmol, 1 eq)於HBr（40 mL，30%於H 2O中）中之溶液中，添加TBAB (207.7 mg, 644.2 umol, 0.04 eq)。接著，將混合物在100℃下攪拌12 hr並在減壓下濃縮。將殘餘物用H 2O (150 mL)稀釋並用DCM (100 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (300 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為100%石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出化合物 17- 溴-1,1,1- 三氟十七烷（中間物I-29 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.42 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.13 - 2.00 (m, 2H), 1.86 (td, J= 7.1, 14.5 Hz, 2H), 1.60 - 1.51 (m, 2H), 1.47 - 1.40 (m, 2H), 1.40 – 1.25 (m, 22H) 中間物I-30 ：(17,17,17- 三氟十七基) 溴化鎂
將Mg (359.4 mg, 14.8 mmol, 1.2 eq)及THF (5 ml)之混合物在20℃在N 2下攪拌。在20℃下向上述混合物中逐滴添加於THF (0.5 ml)中之 17- 溴-1,1,1- 三氟- 十七烷（ 中間物 I-29）(0.3 g, 0.7 mmol)，接著添加DIBAL-H (1 M, 128.6 uL, 0.01 eq)。添加剩餘的於THF (10 ml)中之17-溴-1,1,1-三氟-十七烷(4.5 g, 12.1 mmol)，且將混合物在20℃下攪拌4 hr。呈棕色液體之粗產物 (17,17,17- 三氟十七基) 溴化鎂（中間物I-30 ）未經進一步純化即用於下一步驟中。 中間物I-31 ：(S)-20,20,20- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十-2- 醇
在-20℃下將(17,17,17-三氟十七基)溴化鎂（ 中間物 I-30）(4.8 g, 12.1 mmol, 1.3 eq)經由套管在10 min內添加至(2S)-2-(三苯甲基氧基甲基)氧 (2.9 g, 9.3 mmol, 1.0 eq)及CuI (88.4 mg, 464.3 umol, 0.05 eq)於THF (25 mL)中之混合物中。將混合物在20℃下劇烈攪拌5 min，溫熱至0℃，並持續攪拌2h。將反應藉由添加飽和NH 4Cl溶液(80 ml)淬熄，接著將混合物用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (100 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至3%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 45 mL/min），以給出化合物 (S)-20,20,20- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十-2- 醇（中間物I-31 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.49 - 7.40 (m, 6H), 7.34 - 7.24 (m, 9H), 3.85 – 3.70 (m, 1H), 3.19 (dd, J= 3.3, 9.4 Hz, 1H), 3.03 (dd, J= 7.6, 9.4 Hz, 1H), 2.33 - 2.26 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 2H), 1.60 – 1.40 (m, 2H), 1.41 - 1.22 (m, 30H) 中間物I-32 ：(S)-3- 氟-5-(((20,20,20- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
在0℃下向(2S)-20,20,20-三氟-1-三苯甲基氧基-二十-2-醇（ 中間物 I-31）(3.0 g, 4.9 mmol, 1.0 eq)於THF (45 mL)中之溶液中，添加NaH（491.1 mg，12.3 mmol，60%純度，2.5 eq），且將混合物在0℃下攪拌30 min。接著，添加3-(溴甲基)-5-氟-苯甲腈(1.3 g, 6.1 mmol, 1.3 eq)，且將混合物在65℃下攪拌12 hr。將反應藉由添加飽和NH 4Cl溶液(60 ml)淬熄，且將混合物用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (60 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至3%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 45 mL/min），以給出化合物 (S)-3- 氟-5-(((20,20,20- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈（中間物I-32 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.53 - 7.44 (m, 7H), 7.38 - 7.25 (m, 11H), 4.77 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 4.60 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 3.62 - 3.49 (m, 1H), 3.26 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 2.18 - 2.05 (m, 2H), 1.64 - 1.54 (m, 4H), 1.48 – 1.20 (m, 28H) 中間物I-33 ：(S)-3- 氟-5-(((20,20,20- 三氟-1- 羥基二十-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
向3-氟-5-[[(1S)-19,19,19-三氟-1-(三苯甲基氧基甲基)十九烷氧基]甲基]苯甲腈（ 中間物 I-32）(3.0 g, 4.0 mmol, 1.0 eq)於MeOH (9 mL)及MTBE (60 mL)中之溶液中，添加苯甲醚(218.0 mg, 2.0 mmol, 219.1 uL, 0.5 eq)及PTSA (347.2 mg, 2.0 mmol, 0.5 eq)。將混合物在50℃下攪拌2 hr，用飽和NaHCO 3(80 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(40 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (50 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至9%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 45 mL/min），以給出化合物 中間物 I-33。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.46 (s, 1H), 7.40 – 7.22 (m, 2H), 4.64 (s, 2H), 3.75 (dd, J= 3.3, 11.5 Hz, 1H), 3.65 - 3.59 (m, 1H), 3.56 - 3.50 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 2H), 1.81 (s, 1H), 1.65 - 1.50 (m, 4H), 1.35 - 1.25 (m, 28H)。19F NMR (376 MHz，氯仿-d) δ -109.79, -66.41。MS (ESI): m/ z= 519.2 [M+H 2O] + 中間物I-34 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) ((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸酯
向 中間物 I-13（0.246 M於THF中，2.95 mL，0.726 mmol）之儲備溶液中一次性添加 中間物 I-1(185 mg, 0.558 mmol)，接著添加1-甲基咪唑(0.060 mL, 0.726 mmol)。將反應混合物在rt下攪拌10 min，接著逐滴添加於THF (1 mL)中之 中間物 I-33(308 mg, 0.613 mmol)。將所得混合物攪拌1h並用EtOAc (50 mL)-水(20 mL)-鹽水(20 mL)稀釋。將所得混合物攪拌10 min，將各層分離，且將水層用EtOAc (20 mL x 3)萃取。將合併之有機層在硫酸鈉下乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至5% MeOH），以給出 中間物 I-34。 1H NMR (400 MHz，乙腈-d3) δ 7.90 - 7.70 (m, 1H), 7.53 – 7.30 (m, 5H), 7.28 – 7.06 (m, 2H), 6.85 – 6.61 (m, 2H), 6.26 (s, 2H), 5.71- 5.58 (m, 1H), 5.33 - 5.22 (m, 1H), 5.15 - 5.01 (m, 1H), 4.64 – 4.38 (m, 4H), 4.36- 4.21 (m, 1H), 4.17- 4.03 (m, 1H), 3.66- 3.48 (m, 1H), 2.24 - 2.08 (m, 2H，埋在溶劑峰中), 1.75 - 1.60 (m, 3H), 1.61 – 1.43 (m, 2H), 1.43 – 1.14 (m, 33H)。 19F NMR (376 MHz，乙腈-d3) δ -67.52, -112.84。 31P NMR (162 MHz，乙腈-d3) δ -7.20, -7.48。MS m/z[M+1] = 1005.6。 中間物I-35 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯
向 中間物 I-34(387 mg, 0.38 mmol)於THF (4 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.286 mL, 2.28 mmol)及syn-2-吡啶醛肟(188 mg, 1.54 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌15h，用EtOAc (100 mL)稀釋，用氯化銨飽和水溶液(25 mL x 3)洗滌，用硫酸鈉乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至60% MeOH），以給出 中間物 I-35。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.87 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.45 – 7.40 (m, 1H), 7.40 – 7.33 (m, 1H), 6.90 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.66 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.28 (dd, J= 6.6, 3.7 Hz, 1H), 5.15 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.76 (d, J= 13.1 Hz, 1H), 4.52 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.13 (d, J= 4.3 Hz, 2H), 3.89 (tt, J= 11.5, 5.8 Hz, 2H), 3.59 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 2.30 – 1.98 (m, 2H), 1.71 (s, 3H), 1.63 – 1.07 (m, 35H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d 4) δ -68.57, -113.04。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d 4) δ -0.42。MS m/z[M+1] = 894.9。 中間物I-37 ：16- 溴十六酸甲酯
向16-羥基十六酸甲酯（ 中間物 I-23）(32.6 g, 114.0 mmol, 1 eq)於CH 2Cl 2(300 mL)中之溶液中，添加PPh 3(37.3 g, 142.5 mmol, 1.2 eq)及NaHCO 3(816.5 mg, 9.7 mmol, 378.0 uL, 8.52e-2 eq)。將溶液冷卻至0℃，且將NBS (26.3 g, 148.2 mmol, 1.3 eq)添加至反應中。接著，將溶液在0℃下攪拌20 min，溫熱至20℃，並攪拌1 hr。將殘餘物用Na 2S 2O 3(500 mL)稀釋並用DCM (200 mL × 3)萃取。將合併之有機層用鹽水(200 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；20 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至10%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 16- 溴十六酸甲酯（中間物I-37 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ3.66 (s, 3H), 3.40 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.30 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 1.85 (quin, J= 7.2 Hz, 2H), 1.65 - 1.57 (m, 2H), 1.45 - 1.37 (m, 2H), 1.31 - 1.23 (m, 20H)。 中間物I-38 ：16- 溴十六-1- 醇
向16-溴十六酸甲酯、 中間物 I-37(38.6 g, 110.7 mmol, 1 eq)在Tol.(400 mL)中之溶液（冷却至-78℃）中，添加DIBAL-H (1 M, 255.2 mL, 2.3 eq)。將反應在0℃下攪拌1 hr。將殘餘物用NH 4Cl (500 mL)稀釋並用EtOAc (300 mL × 3)萃取。將合併之有機層用鹽水(200 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出 16- 溴十六-1- 醇（中間物I-38 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ3.62 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.39 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 1.84 (quin, J= 7.2 Hz, 2H), 1.55 (quin, J= 6.9 Hz, 2H), 1.46 - 1.37 (m, 2H), 1.34 - 1.20 (m, 22H)。 中間物I-39 ：16- 溴十六醛
將16-溴十六-1-醇（ 中間物 I-38）(24.0 g, 74.9 mmol, 1 eq)及PCC (32.3 g, 149.8 mmol, 2 eq)於CH 2Cl 2(200 mL)中之溶液在20℃下攪拌12 hr。將反應混合物過濾並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；120 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至10%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 16- 溴十六醛（中間物I-39 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ9.76 (t, J= 1.8 Hz, 1H), 3.41 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.42 (dt, J= 1.8, 7.3 Hz, 2H), 1.85 (td, J= 7.1, 14.5 Hz, 2H), 1.63 (quin, J= 7.0 Hz, 2H), 1.45 - 1.39 (m, 2H), 1.31 - 1.24 (m, 20H)。 中間物I-40 ：16- 溴-1,1- 二氟十六烷
將於DCM (80 mL)中之DAST (8.1 g, 50.3 mmol, 6.6 mL, 1.2 eq)添加至16-溴十六醛（ 中間物 I-39）(13.4 g, 42.0 mmol, 1 eq)於DCM (80 mL)中之溶液中，將反應在25℃下攪拌12 hr。將反應混合物在減壓下濃縮以移除溶劑。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；80 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至10%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 16- 溴-1,1- 二氟十六烷（中間物I-40 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ5.80 (tt, J= 4.6, 57.0 Hz, 1H), 3.42 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 1.91 - 1.75 (m, 4H), 1.44 (sxt, J= 7.2 Hz, 4H), 1.33 - 1.22 (m, 20H)。 中間物I-41 ：(16,16- 二氟十六基) 溴化鎂
在N 2下向Mg (818.9 mg, 33.6 mmol, 1.1 eq)於2-Me-THF (2 mL)中之混合物中，添加I 2(74.3 mg, 292.9 umol, 59.0 uL, 0.01 eq)及16-溴-1,1-二氟十六烷(124.5 mg, 662.7 umol, 0.05 mL, 2.26e-2 eq)。將反應攪拌直到I 2之顏色褪成無色溶液。接著，將於2-Me-THF (50 mL)中之16-溴-1,1-二氟十六烷(10 g, 29.3 mmol, 1 eq)逐滴添加至混合物中。將反應在25℃下攪拌2 hr。所得反應混合物未經進一步純化即用於下一步驟中。粗產物 (16,16- 二氟十六基) 溴化鎂（中間物I-41 ）（30 mmol，2-Me-THF溶液）未經進一步純化即用於下一步驟中，其呈灰色溶液。 中間物I-42 ：(R)-19,19- 二氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 醇
在-20℃下向(2R)-2-(三苯甲基氧基甲基)氧 (6.6 g, 21.0 mmol, 1 eq)及CuI (200.3 mg, 1.0 mmol, 0.05 eq)於2-Me-THF (10 mL)中之溶液中，逐滴添加(16,16-二氟十六基)溴化鎂（ 中間物 I-41）（2-Me-THF溶液，27.3 mmol，1.3 eq）。將溶液攪拌10 min，溫熱至0℃，接著在0℃下攪拌1 hr。將殘餘物用NH 4Cl (200 mL)稀釋並用EtOAc (100 mL × 3)萃取。將合併之有機層用鹽水200 mL (100 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至20%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 (R)-19,19- 二氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 醇（中間物I-42 ）。 中間物I-43 ：(R)-3-(((19,19- 二氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 基) 氧基) 甲基)-5- 氟苯甲腈
向(R)-19,19-二氟-1-(三苯甲基氧基)十九-2-醇（ 中間物 I-42）(2.6 g, 4.6 mmol, 1 eq)於THF (30 mL)中之溶液中，添加NaH（461.2 mg，11.5 mmol，60%純度，2.5 eq）及3-(溴甲基)-5-氟-苯甲腈(1.1 g, 5.5 mmol, 1.2 eq)。將反應在60℃下攪拌12 hr。將殘餘物用NH 4Cl (100 Ml)稀釋並用EtOAc (100 mL × 3)萃取。將合併之有機層用鹽水(100 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至10%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 (R)-3-(((19,19- 二氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 基) 氧基) 甲基)-5- 氟苯甲腈（中間物I-43 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ7.39 (br d, J= 7.8 Hz, 6H), 7.30 (br s, 10H), 7.20 - 7.17 (m, 2H), 5.74 (tt, J= 4.5, 57.0 Hz, 1H), 4.72 - 4.46 (m, 2H), 3.47 (quin, J= 5.3 Hz, 1H), 3.16 (d, J= 4.6 Hz, 2H), 1.85 - 1.67 (m, 2H), 1.57 - 1.33 (m, 5H), 1.24 - 1.16 (m, 25H)。 中間物I-44 ：(R)-3-(((19,19- 二氟-1- 羥基十九-2- 基) 氧基) 甲基)-5- 氟苯甲腈
向(R)-3-(((19,19-二氟-1-(三苯甲基氧基)十九-2-基)氧基)甲基)-5-氟苯甲腈（ 中間物 I-43）(1.8 g, 2.6 mmol, 1 eq)於MeOH (4.8 mL)及MTBE (36 mL)中之溶液中，添加苯甲醚(140.5 mg, 1.3 mmol, 141.2 uL, 0.5 eq)及PTSA (223.7 mg, 1.3 mmol, 0.5 eq)，且將混合物在50℃下攪拌2 hr。將殘餘物用NaHCO 3(100 mL)稀釋並用EtOAc (50 mL × 3)萃取。將合併之有機層用鹽水(50 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；40 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱，洗提液為0至50%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出 (R)-3-(((19,19- 二氟-1- 羥基十九-2- 基) 氧基) 甲基)-5- 氟苯甲腈（中間物I-44 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿- d) δ7.46 (s, 1H), 7.34 (br d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.29 (br s, 1H), 5.98 - 5.61 (m, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.78 - 3.72 (m, 1H), 3.65 - 3.58 (m, 1H), 3.56 - 3.49 (m, 1H), 1.89 - 1.74 (m, 3H), 1.68 - 1.49 (m, 2H), 1.48 - 1.40 (m, 2H), 1.35 - 1.24 (m, 25H)。MS (ESI): m/ z= 468.3 [M+H] +。 中間物I-45 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) ((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19- 二氟十九基) 磷酸酯
將1H-1,2,4-三唑(208 mg, 3.02 mmol, 5.0 equiv.)溶解於THF (10.0 mL)中。將TEA (0.34 mL, 2.44 mmol, 4.04 equiv.)添加至溶液中，接著添加2-氯苯基二氯磷酸酯(0.18 mL, 1.09 mmol, 1.80 equiv.)。將反應混合物在rt下攪拌4 min，之後一次性添加((3aS,4R,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(氟甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲醇（ 中間物 I-1）(200 mg, 0.604 mmol, 1.0 equiv.)，接著添加1-甲基咪唑(0.26 mL, 3.20 mmol, 5.31 equiv.)。將溶液再攪拌10 min，之後添加(R)-3-(((19,19-二氟-1-羥基十九-2-基)氧基)甲基)-5-氟苯甲腈， 中間物 I-44(283 mg, 0.604 mmol, 1.0 equiv.)。在室溫下攪拌過夜之後，將溶液用EtOAc (150 mL)及水(100 mL)稀釋。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮，之後藉由矽膠層析法純化（於己烷中之0至100% EtOAc），以提供 中間物 I-45。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.81 – 7.77 (m, 1H), 7.48 – 7.28 (m, 5H), 7.20 – 7.07 (m, 2H), 6.86 – 6.79 (m, 1H), 6.79 – 6.74 (m, 1H), 6.02 – 5.67 (m, 1H), 5.66 – 5.62 (m, 1H), 5.33 – 5.26 (m, 1H), 5.18 – 5.12 (m, 1H), 4.64 – 4.44 (m, 4H), 4.36 – 4.24 (m, 1H), 4.24 – 4.09 (m, 1H), 3.64 – 3.55 (m, 1H), 1.87 – 1.67 (m, 5H), 1.60 – 1.20 (m, 33H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -112.69 – -112.80 (m), -117.78 – -118.21 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -7.43 – -8.08 (m)。MS m/z[M+1] = 973.3。 中間物I-46 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19- 二氟十九基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基(2-氯苯基) ((R)-2-((3-氰基-5-氟苄基)氧基)-19,19-二氟十九基)磷酸酯（ 中間物 I-45）(330 mg, 0.339 mmol, 1.0 equiv.)於THF (10.0 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.26 mL, 2.03 mmol, 6.0 equiv.)及syn-2-吡啶醛肟(317 mg, 2.60 mmol, 7.66 equiv.)。將反應混合物攪拌過夜。將溶液在真空中濃縮並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物 中間物 I-46。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.51 – 7.47 (m, 1H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.84 (tt, J= 57.1, 4.5 Hz, 1H), 5.63 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.25 (dd, J= 6.6, 3.6 Hz, 1H), 5.13 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.73 (d, J= 13.0 Hz, 2H), 4.51 (d, J= 13.1 Hz, 1H), 4.17 – 4.06 (m, 2H), 3.95 – 3.81 (m, 2H), 3.58 – 3.50 (m, 1H), 1.87 – 1.65 (m, 5H), 1.49 – 1.19 (m, 33H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -112.90 – -113.05 (m), -117.84 – -118.13 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -0.19 – -0.80 (m)。MS m/z[M+1] = 863.2。 中間物I-47 ：2-( 十九-2- 炔-1- 基氧基) 四氫-2H- 哌喃
將2-(丙-2-炔-1-基氧基)四氫-2H-哌喃(20.0 g, 321 mmol, 1.00 equiv.)及HMPA (201 g, 3.50 equiv.)於THF (900 mL)中之溶液冷卻至-70℃。在-70℃下在N 2下歷時1 h向該溶液中逐漸添加n-BuLi（24.6 g，385 mmol，2.50 M於THF中，1.20 equiv.)。接著，在-70℃下添加溶解於THF (200 mL)中之1-溴十六烷(45.0 g, 321 mmol, 1.00 equiv.)。將反應混合物溫熱至20℃並攪拌12 h。將反應用飽和NH 4Cl (3.0 L)淬熄並用EtOAc (2 x 3.0 L)萃取。將有機物在減壓下濃縮並藉由矽膠層析法純化（石油醚/乙酸乙酯=1/0至0/1），以提供標題化合物 中間物 I-47。 1H NMR: (400 MHz, CDCl 3- d) δ= 4.82 (t, J= 3.4 Hz, 1H), 4.35 - 4.16 (m, 2H), 3.86 (ddd, J= 3.0, 8.8, 11.4 Hz, 1H), 3.59 - 3.49 (m, 1H), 2.22 (tt, J= 2.2, 7.0 Hz, 2H), 1.91 - 1.18 (m, 34H), 0.97 - 0.83 (m, 3H)。 中間物I-48 ：十九-2- 炔-1- 醇
向2-(十九-2-炔-1-基氧基)四氫-2H-哌喃（ 中間物 I-47）(30.0 g, 82.2 mmol, 1.00 equiv.)於MeOH (300 mL)中之溶液中，添加TsOH .H 2O (1.57 g, 0.10 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌12 h，之後過濾，且將濾餅單離，以提供標題化合物 中間物 I-48。 TLC 資訊（石油醚/乙酸乙酯= 10/1）R f= 0.40。 中間物I-49 ：十九-18- 炔-1- 醇
將NaH（17.8 g，445 mmol，5.00 equiv.，60質量%）添加至丙烷-1,3-二胺(325 mL)中。將溶液在70℃下攪拌3 h。將十九-2-炔-1-醇(25.0 g, 1.00 equiv.)添加至混合物中。將反應在55℃下攪拌13 h。將混合物倒入飽和NH 4Cl (2.00 L)中並用EtOAc (2.00 L)萃取。將殘餘物藉由層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/0至0/1），以提供標題化合物 中間物 I-49。 TLC 資訊（石油醚/乙酸乙酯= 5/1）R f= 0.30。 中間物I-50 ：1- 甲氧基-4-(( 十九-18- 炔-1- 基氧基) 甲基) 苯
在0℃下向十九-18-炔-1-醇（ 中間物 I-49）(20.0 g, 71.3 mmol, 1.00 equiv.)於DMF (300 mL)中之溶液中，添加NaH（7.13 g，178 mmol，60.0%純度，2.50 equiv .），接著在0℃下添加PMBCl (16.7 g, 106 mmol, 14.5 mL, 1.50 equiv.)。將反應在50℃下攪拌12 h。將混合物倒入飽和NH 4Cl (1.00 L)中，且將水層用EtOAc (1.00 L x 2)萃取。將有機層在減壓下濃縮並藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/0至0/1），以提供 中間物 I-50。 1H NMR: (400 MHz, CDCl 3- d) δ= 7.25 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 4.43 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.43 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.18 (dt, J= 2.6, 7.0 Hz, 1H), 1.93 (t, J= 2.6 Hz, 1H), 1.78 (t, J= 2.6 Hz, 1H), 1.64 - 1.15 (m, 38H)。 中間物I-51 ：1- 甲氧基-4-(((20,20,20- 三氟二十-18- 炔-1- 基) 氧基) 甲基) 苯
在0℃下向CuI (7.13 g, 37.4 mmol, 1.50 eq)、K 2CO 3(10.3 g, 74.8 mmol, 3.00 eq)、及N1,N1,N2,N2-四甲基乙烷-1,2-二胺(4.35 g, 37.4 mmol, 5.65 mL, 1.50 eq)於DMF (100 mL)中之溶液中，添加TMSCF 3(7.10 g, 49.9 mmol, 2.00 eq)。接著，在0℃下添加於DMF (100 mL)中之1-甲氧基-4-((十九-18-炔-1-基氧基)甲基)苯（ 中間物 I-50）(10.0 g, 24.9 mmol, 1.00 eq)。將反應混合物在20℃下攪拌12 h。將混合物倒入水(600 mL)中，且將水層用DCM (600 mL)萃取。將有機層在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/0至0/1），以提供標題化合物 中間物 I-51。 1H NMR: (400 MHz, CDCl 3- d) δ= 7.33 - 7.22 (m, 2H), 6.89 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 4.44 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.44 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.37 - 1.93 (m, 2H), 1.79 (t, J= 2.4 Hz, 1H), 1.67 - 1.53 (m, 3H), 1.54 - 1.18 (m, 29H) 中間物I-52 ：20,20,20- 三氟二十-18- 炔-1- 醇
在0℃下向1-甲氧基-4-(((20,20,20-三氟二十-18-炔-1-基)氧基)甲基)苯（ 中間物 I-51）(5.00 g, 10.6 mmol, 1.00 eq)於MeOH (50.0 mL)及H 2O (5.00 mL)中之溶液中，添加CAN (17.5 g, 32.0 mmol, 15.9 mL, 3.00 eq)。將反應在20 ℃下攪拌12 h。將混合物倒入H 2O (200 mL)中，且將水層用DCM (200 mL)萃取。將有機層在減壓下濃縮並藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/0至0/1），以提供標題化合物 中間物 I-52。 TLC 資訊（石油醚/乙酸乙酯= 10/1；R f= 0.20）。 中間物I-53 ：20,20,20- 三氟二十-1- 醇
在20℃下在氬氣下向Pd(OH )2(15.0 mg, 0.430 mmol, 0.100 eq)於EtOH (15.0 mL)中之溶液中，添加20,20,20-三氟二十-18-炔-1-醇（ 中間物 I-52）(1.50 g, 4.30 mmol, 1.00 eq)。將氣氛與H 2氣體交換，且將混合物在H 2(15 Psi)下在20 ℃攪拌12 h。將溶液過濾，且將濾液在減壓下濃縮，以提供標題化合物 中間物 I-53。 1H NMR: (400 MHz, CD 3OD- d 4) δ= 3.54 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.20 - 2.06 (m, 2H), 1.59 - 1.48 (m, 4H), 1.29 (s, 30H)。 中間物I-54 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) (20,20,20- 三氟二十基) 磷酸酯
將1H-1,2,4-三唑(156 mg, 2.26 mmol, 3.0 equiv.)溶解於THF (10.0 mL)中。將TEA (0.32 mL, 2.26 mmol, 3.0 equiv.)添加至溶液中，接著添加2-氯苯基二氯磷酸酯(0.16 mL, 0.981 mmol, 1.30 equiv.)。將反應混合物在rt下攪拌5 min，之後一次性添加((3aS,4R,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(氟甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲醇（ 中間物 I-1）(250 mg, 0.755 mmol, 1.00 equiv.)，接著添加1 -甲基咪唑(0.18 mL, 2.26 mmol, 3.0 equiv.)。將溶液再攪拌10 min，之後添加20,20,20-三氟二十-1-醇（ 中間物 I-53）(266 mg, 0.755 mmol, 1.0 equiv.)。在室溫下攪拌過夜之後，將溶液用EtOAc (100 mL)及水(100 mL)稀釋。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮，之後藉由矽膠層析法純化（於己烷中之0至100% EtOAc），以提供標題化合物 中間物 I-54。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.83 – 7.78 (m, 1H), 7.48 – 7.40 (m, 1H), 7.37 – 7.30 (m, 1H), 7.21 – 7.12 (m, 2H), 6.87 – 6.81 (m, 1H), 6.80 – 6.75 (m, 1H), 5.68 – 5.62 (m, 1H), 5.36 – 5.29 (m, 1H), 5.21 – 5.13 (m, 1H), 4.60 – 4.45 (m, 2H), 4.25 – 4.11 (m, 2H), 2.19 – 2.04 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.68 – 1.48 (m, 4H), 1.43 – 1.20 (m, 33H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.55 (t, J= 11.2 Hz)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -7.59 – -8.04 (m)。MS m/z[M+1] = 856.2 中間物I-55 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基(2-氯苯基) (20,20,20-三氟二十基)磷酸酯（ 中間物 I-54）(385 mg, 0.450 mmol, 1.0 equiv.)於THF (10.0 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.56 mL, 4.50 mmol, 10 equiv.)及syn-2-吡啶醛肟(549 mg, 4.50 mmol, 10 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液在真空中濃縮並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物 中間物 I-55。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.89 (s, 1H), 6.98 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.65 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.27 (dd, J= 6.6, 3.6 Hz, 1H), 5.15 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.15 – 4.05 (m, 2H), 3.87 – 3.79 (m, 2H), 2.20 – 2.04 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.59 – 1.48 (m, 4H), 1.44 – 1.21 (m, 33H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.51 – -68.60 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ 0.04 – -0.57 (m)。MS m/z[M+1] = 746.2 中間物I-56 ：15- 羥基十五酸甲酯
向氧雜環十六-2-酮(7 g, 29.1 mmol, 1 eq)於MeOH (70 mL)中之溶液中，添加PTSA (752.2 mg, 4.4 mmol, 0.15 eq)。接著，將混合物在70℃下攪拌12 hr，並在減壓下濃縮以移除溶劑。將殘餘物用H 2O (500 mL)稀釋並用乙酸乙酯(300 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (500 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至15%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出化合物 15- 羥基十五酸甲酯（中間物I-56 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.70 - 3.62 (m, 5H), 2.31 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 1.65 - 1.54 (m, 4H), 1.34 - 1.25 (m, 20H)。 中間物I-57 ：15- 碘十五酸甲酯
向15-羥基十五酸甲酯（ 中間物 I-56）(5.0 g, 18.4 mmol, 1 eq)於DCM (100 mL)中之溶液中，添加PPh 3(9.6 g, 36.7 mmol, 2.0 eq)及咪唑(3.8 g, 55.1 mmol, 3.0 eq)。接著，將混合物除氣，用N 2吹掃3次，冷卻至0℃，且添加於THF (15 mL)中之I 2(9.3 g, 36.7 mmol, 7.4 mL, 2.0 eq)。將混合物在25℃下攪拌12 h，且添加10% Na 2S 2O 3(500 mL)。將混合物攪拌5 min，將各層分離，且將水層用DCM (300 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (500 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至1%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 150 mL/min），以給出化合物 15- 碘十五酸甲酯（中間物I-57 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.67 (s, 3H), 3.20 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.31 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 1.83 (quin, J= 7.2 Hz, 2H), 1.67 - 1.58 (m, 2H), 1.42 - 1.35 (m, 2H), 1.33 - 1.24 (m, 18H)。 中間物I-58 ：15- 碘十五-1- 醇
在-78℃下向15-碘十六酸甲酯（ 中間物 I-57）(10.0 g, 26.2 mmol, 1.0 eq)於甲苯(100 mL)中之溶液中，逐滴添加DIBAL-H (1 M, 65.4 mL, 2.5 eq)。將所得混合物在0℃下攪拌2 h，並且將反應混合物藉由在0℃下倒入飽和NH 4Cl溶液(800 ml)淬熄。將混合物攪拌30 min並接著用乙酸乙酯(300 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (500 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至15%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 120 mL/min），以給出化合物 15- 碘十五-1- 醇（中間物I-58 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.64 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.19 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 1.87 - 1.79 (m, 2H), 1.57 (quin, J= 6.9 Hz, 2H), 1.34 - 1.25 (m, 22H)。 中間物I-59 ：2-((15- 碘十五基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
向15-碘十五-1-醇（ 中間物 I-58）(6.0 g, 16.9 mmol, 1 eq)於THF (130 mL)中之溶液中，添加3,4-二氫-2H-哌喃(4.3 g, 50.8 mmol, 4.6 mL, 3.0 eq)及PTSA (437.4 mg, 2.5 mmol, 0.2 eq)。將所得混合物在20℃下攪拌12h，並在減壓下濃縮以移除溶劑。將殘餘物用H 2O (300 mL)稀釋並用乙酸乙酯(150 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (200 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至2%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 80 mL/min），以給出化合物 2-((15- 碘十五基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃（中間物I-59 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ4.61 - 4.55 (m, 1H), 3.88 (ddd, J= 3.4, 7.5, 11.1 Hz, 1H), 3.74 (td, J= 6.9, 9.5 Hz, 1H), 3.51 (td, J= 5.2, 10.9 Hz, 1H), 3.39 (td, J= 6.7, 9.5 Hz, 1H), 3.20 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 1.85 - 1.80 (m, 2H), 1.62 - 1.51 (m, 6H), 1.44 - 1.19 (m, 24H)。 中間物I-60 ：2-((16,16,16- 三氟十六基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
向CsF (11.1 g, 73.0 mmol, 2.7 mL, 3.2 eq)於15-冠-5 (27.4 g, 124.3 mmol, 24.7 mL, 5.5 eq)中之溶液中，添加DME (150 mL)及4A MS (10.0 g)，接著將混合物冷卻至-20℃。接著，將於DME (80 mL)中之TMS-CF3 (13.8 g, 96.7 mmol, 4.2 eq)及2-(15-碘十五烷氧基)四氫哌喃（ 中間物 I-59）(10.0 g, 22.8 mmol, 1.0eq)在15 min內添加至上述溶液中。將混合物在25℃下攪拌12h，在減壓下濃縮，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，用NaCl (80 mL× 3)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=100/1至100/3），以給出化合物 2-((16,16,16- 三氟十六基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃（中間物I-60 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ4.58 (br s, 1H), 3.94 - 3.83 (m, 1H), 3.80 - 3.68 (m, 1H), 3.57 - 3.46 (m, 1H), 3.44 - 3.33 (m, 1H), 2.15 - 1.98 (m, 2H), 1.90 - 1.67 (m, 2H), 1.65 - 1.48 (m, 8H), 1.38 - 1.24 (m, 22H)； 19F NMR (376 MHz，氯仿-d) δ -66.49 (t, J= 11.66 Hz)。 中間物I-61 ：16,16,16- 三氟十六-1- 醇
向2-(16,16,16-三氟十六烷氧基)四氫哌喃（ 中間物 I-60）(5.0 g, 13.1 mmol, 1.0 eq)於EtOH (50 mL)中之溶液中，添加PTSA (2.3 g, 13.1 mmol, 1.0 eq)。將混合物在50℃下攪拌12h，在減壓下濃縮，用H 2O (300 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (300 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（二氧化矽快速管柱，洗提液為0至10%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出化合物 16,16,16- 三氟十六-1- 醇（中間物I-61 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.65 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.14 - 1.99 (m, 2H), 1.61 - 1.50 (m, 4H), 1.37 - 1.25 (m, 22H)。 中間物I-62 ：16- 溴-1,1,1- 三氟十六烷
在20℃下向16,16,16-三氟十六-1-醇（ 中間物 I-61）(5 g, 16.9 mmol, 1 eq)於HBr（40 mL，30%於H 2O中）中之溶液中，添加TBAB (217.5 mg, 674.7 umol, 0.04 eq)。接著，將混合物在100℃下攪拌12h，並在減壓下濃縮以移除溶劑。將殘餘物用H 2O (150 mL)稀釋並用DCM (100 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (300 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（50 g二氧化矽快速管柱，洗提液為100%石油醚梯度@ 100 mL/min），以給出化合物 16- 溴-1,1,1- 三氟十六烷（中間物I-62 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ3.42 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.14 - 2.00 (m, 2H), 1.91 - 1.81 (m, 2H), 1.61 - 1.51 (m, 2H), 1.47 - 1.40 (m, 2H), 1.27 (br s, 20H)。 中間物I-63 ：(16,16,16- 三氟十六基) 溴化鎂
將Mg (661.2 mg, 27.2 mmol, 1.2 eq)於2-Me THF (25 ml)中之溶液中在20℃下在N 2下攪拌。接著，逐滴添加於2-Me THF (1 ml)中之16-溴-1,1,1-三氟-十六烷(0.5 g, 1.4 mmol)。在20℃下透過添加DIBAL-H (1 M, 272.1 uL, 0.12 eq)執行反應的起始。接著，添加剩餘的於2-Me THF (16 ml)中之16-溴-1,1,1-三氟-十六烷(8.0 g, 22.3 mmol)，且將混合物在20℃下攪拌4h。呈棕色液體之粗產物 (16,16,16- 三氟十六基) 溴化鎂（於2-Me THF中）未經進一步純化即用於下一步驟中。 中間物I-64 ：(S)-19,19,19- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 醇
在-20℃下向(2S)-2-(三苯甲基氧基甲基)氧 （ 中間物 I-63）(5.4 g, 17.0 mmol, 1 eq)、CuI (162.3 mg, 852.2 umol, 0.05 eq)於2-Me THF (30 mL)中之混合物中，經由套管在10 min內添加(16,16,16-三氟十六基)溴化鎂(8.5 g, 22.2 mmol, 1.3 eq)。將所得混合物劇烈攪拌5 min，溫熱至0℃，攪拌2 h，將反應藉由添加飽和NH 4Cl溶液(60 ml)淬熄，且接著將混合物用乙酸乙酯(40 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (80 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（40 g二氧化矽快速管柱，洗提液為0至3%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 80 mL/min），以給出化合物 (S)-19,19,19- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 醇（中間物I-64 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.38 (d, J= 7.5 Hz, 6H), 7.26 - 7.16 (m, 9H), 3.76 - 3.66 (m, 1H), 3.12 (dd, J= 3.2, 9.3 Hz, 1H), 2.97 (dd, J= 7.8, 9.1 Hz, 1H), 2.24 (br s, 1H), 2.10- -1.75 (m, 2H), 1.52 - 1.46 (m, 2H), 1.19 (br d, J= 9.9 Hz, 28H)。 中間物I-65 ：(S)-3- 氟-5-(((19,19,19- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
在0℃下向(2S)-19,19,19-三氟-1-三苯甲基氧基-十九-2-醇（ 中間物 I-64）(5.0 g, 8.4 mmol, 1.0 eq)於THF (70 mL)中之溶液中，添加NaH（837.8 mg，21.0 mmol，60%純度，2.5 eq），接著將混合物在0℃下攪拌30 min。接著，添加3-(溴甲基)-5-氟-苯甲腈(2.2 g, 10.1 mmol, 1.2 eq)，且將混合物在65℃下攪拌12h。將反應藉由在20℃下添加飽和NH 4Cl溶液(100 ml)淬熄，且將混合物用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (120 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（20 g二氧化矽快速管柱，洗提液為0至3%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 45 mL/min），以給出化合物 (S)-3- 氟-5-(((19,19,19- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 十九-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈（中間物I-65 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.48 (br d, J= 7.2 Hz, 6H), 7.37 - 7.25 (m, 12H), 4.80 - 4.71 (m, 1H), 4.59 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 3.56 (quin, J= 5.3 Hz, 1H), 3.24 (br d, J= 4.8 Hz, 2H), 2.15 – 2.01 (m, 2H), 1.61 - 1.53 (m, 2H), 1.35 - 1.25 (m, 28H)。 中間物I-66 ：(S)-3- 氟-5-(((19,19,19- 三氟-1- 羥基十九-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
向3-氟-5-[[(1S)-18,18,18-三氟-1-(三苯甲基氧基甲基)十八烷氧基]甲基]苯甲腈（ 中間物 I-65）(2.3 g, 3.2 mmol, 1 eq)於MTBE (46 mL)及MeOH (7 mL)中之溶液中，添加苯甲醚(170.4 mg, 1.6 mmol, 171.2 uL, 0.5 eq)及PTSA (271.3 mg, 1.6 mmol, 0.5 eq)。將所得混合物在50℃下攪拌2 h，用飽和NaHCO 3(80 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(40 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (50 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（20g二氧化矽快速管柱，洗提液為0至7%乙酸乙酯/石油醚梯度@ 45 mL/min），以給出 (S)-3- 氟-5-(((19,19,19- 三氟-1- 羥基十九-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈（中間物I-66 ）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ7.46 (s, 1H), 7.35 (br d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.30 - 7.27 (m, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.75 (br dd, J= 2.4, 11.4 Hz, 1H), 3.65 - 3.58 (m, 1H), 3.53 (dq, J= 3.3, 6.1 Hz, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 2H), 1.79 (br s, 1H), 1.67 - 1.49 (m, 4H), 1.39 - 1.24 (m, 26H)；MS (ESI): m/ z= 510.2 [M+Na] +。 中間物I-67 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) ((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19,19- 三氟十九基) 磷酸酯
向 中間物 I-13(1.62 mL, 0.303 M, 0.49 mmol)之溶液中一次性添加 中間物 I-1(125 mg, 0.377 mmol)，接著添加1-甲基咪唑(0.0391 mL, 0.49 mmol)。將反應混合物在rt下攪拌10 min，且接著一次性添加 中間物 I-66(202 mg, 0.415 mmol)。將所得混合物攪拌1h、用EtOAc (100 mL)稀釋、用水(50 mL)洗滌，且將水層用EtOAc (50 mL x 3)萃取。將合併之有機層在硫酸鈉下乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至5% MeOH），以給出 中間物 I-67。 1H NMR (400 MHz，乙腈-d3) δ 7.90 - 7.80 (m, 1H), 7.51 – 7.29 (m, 5H), 7.29 – 7.10 (m, 2H), 6.80 - 6.75 (m, 1H), 6.74 - 6.70 (m, 1H), 6.25 (s, 2H), 5.69 - 5.60 (m, 1H), 5.33 - 5.25 (m, 1H), 5.15 - 5.00 (m, 1H), 4.77 – 4.39 (m, 4H), 4.36 - 4.22 (m, 1H), 4.17 - 4.01 (m, 1H), 3.66 - 3.56 (m, 1H), 2.24 - 2.05 (m, 2H), 1.74 - 1.65 (m, 3H), 1.59 – 1.45 (m, 2H), 1.41 – 1.19 (m, 31H)； 19F NMR (376 MHz，乙腈-d3) δ -67.52, -112.83, -112.87； 31P NMR (162 MHz，乙腈-d3) δ -7.19, -7.47；MS m/z[M+1] = 991.48。 中間物I-68 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19,19- 三氟十九基) 磷酸氫酯
向 中間物 67(232 mg, 0.234 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.176 mL, 1.40 mmol)及syn-2-吡啶醛肟(116 mg, 0.95 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌15h，用EtOAc (100 mL)稀釋，用NH4Cl溶液(30 mL x 2)洗滌，（添加一些iPrOH以更好分離）用硫酸鈉乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠純化（於DCM中之0至60% MeOH），以給出 中間物 68。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.88 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.43 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.66 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.28 (dd, J= 6.6, 3.7 Hz, 1H), 5.15 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.76 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.52 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.24 – 4.04 (m, 2H), 4.02 – 3.82 (m, 2H), 3.65 - 3.54 (m, 1H), 2.29 – 1.99 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.60 - 1.50 (m, 2H), 1.51 - 1.20 (m, 31H)； 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.57, -113.05； 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -0.42；MS m/z[M+1] = 881.4。 中間物I-69 ：(S) -2-(((20,20,20- 三氟 -1-( 三苯甲基氧基 ) 二十 -2- 基 ) 氧基 ) 甲基 ) 喹啉
在0℃下向(2S)-20,20,20-三氟-1-三苯甲基氧基-二十-2-醇500 mg, 0.82 mmol, 1 eq)於THF (5 mL)中之溶液中，添加NaH（78.0 mg，2 mmol，60%純度，2.5 eq），且將混合物在0℃下攪拌30 min。接著，添加2-(溴甲基)喹啉(236 mg, 1.1 mmol, 1.2 eq)，且將混合物在65℃下攪拌12 hr。TLC指示反應物完全耗盡，且形成許多新點。將反應混合物藉由在20℃下添加飽和NH 4Cl溶液(60 ml)淬熄，且用乙酸乙酯(40 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (60 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；20 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.13 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.76 – 7.66 (m, 2H), 7.51 (ddd, J = 8.1, 6.8, 1.2 Hz, 1H), 7.49 – 7.43 (m, 5H), 7.31 – 7.16 (m, 10H), 4.95 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.85 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.62 (qd, J = 5.9, 4.1 Hz, 1H), 3.33 – 3.12 (m, 2H), 2.14 – 1.94 (m, 2H), 1.56 (dddd, J = 23.8, 15.7, 6.8, 4.3 Hz, 4H), 1.23 (dd, J = 16.8, 6.4 Hz, 28H)。). 19F NMR (376 MHz，氯仿-d) δ -66.95 (t, J= 11.0 Hz)。MS m/z[M+1] = 752.2。 中間物I-70 ：(S)-20,20,20- 三氟-2-( 喹啉-2- 基甲氧基) 二十-1- 醇
向(S)-2-(((20,20,20-三氟-1-(三苯甲基氧基)二十-2-基)氧基)甲基)喹啉(600 mg, 0.8 mmol, 1 eq)於IPA (5 mL)及MeOH (5 mL)中之溶液中，添加HCl (12 M, 15 mL, 57.11 eq)，且將混合物在20℃下攪拌2 hr。TLC指示反應物耗盡，且形成兩個新點。將反應混合物藉由添加飽和NaHCO 3240 mL淬熄，並接著用乙酸乙酯(120 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (180 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化，以產出標題化合物。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.16 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 8.1, 1.4 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J = 8.5, 6.8, 1.5 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.1, 6.8, 1.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.09 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.85 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.78 – 3.62 (m, 3H), 2.13 – 1.99 (m, 2H), 1.71 – 1.62 (m, 1H), 1.55 (ddt, J = 11.6, 5.8, 2.8 Hz, 3H), 1.26 (d, J = 3.9 Hz, 28H)。 19F NMR (376 MHz，氯仿-d) δ -66.95 (t, J = 11.0 Hz)。MS m/z[M+1] = 510.2。 中間物I-71 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) ((S)-20,20,20- 三氟-2-( 喹啉-2- 基甲氧基) 二十基) 磷酸酯
將1H-1,2,4-三唑(106 mg, 1.54 mmol, 3.0 equiv.)溶解於THF (10.0 mL)中。向該溶液中添加TEA (0.22 mL, 1.54 mmol, 3.0 equiv.)，接著添加2-氯苯基二氯磷酸酯(0.12 mL, 0.72 mmol, 1.40 equiv.)。將反應混合物在rt下攪拌6 min，之後一次性添加((3aS,4R,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(氟甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲醇(170 mg, 0.513 mmol, 1.00 equiv.)，接著添加1-甲基咪唑(0.12 mL, 1.54 mmol, 3.0 equiv.)。將溶液再攪拌10 min，之後添加(S)-20,20,20-三氟-2-(喹啉-2-基甲氧基)二十-1-醇(260 mg, 0.510 mmol, 1.00 equiv.)。在室溫下攪拌過夜之後，將溶液用EtOAc (100 mL)及水(100 mL)稀釋。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮，之後藉由矽膠層析法純化（於己烷中之0至100% EtOAc），以提供標題化合物中間物I-54。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 8.28 – 8.21 (m, 1H), 8.00 – 7.94 (m, 1H), 7.90 – 7.84 (m, 1H), 7.80 – 7.70 (m, 2H), 7.68 – 7.62 (m, 1H), 7.60 – 7.53 (m, 1H), 7.43 – 7.28 (m, 2H), 7.15 – 7.00 (m, 2H), 6.87 – 6.70 (m, 2H), 5.66 – 5.60 (m, 1H), 5.30 – 5.23 (m, 1H), 5.16 – 5.08 (m, 1H), 4.84 – 4.78 (m, 2H), 4.61 – 4.48 (m, 2H), 4.41 – 4.32 (m, 1H), 4.28 – 4.14 (m, 1H), 3.78 – 3.67 (m, 1H), 2.19 – 2.03 (m, 2H), 1.74 – 1.66 (m, 3H), 1.65 – 1.15 (m, 35H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.54 (t, J= 11.3 Hz)。MS m/z[M+1] = 1013.8。 中間物I-72 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((S)-20,20,20- 三氟-2-( 喹啉-2- 基甲氧基) 二十基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基(2-氯苯基) ((S)-20,20,20-三氟-2-(喹啉-2-基甲氧基)二十基)磷酸酯(233 mg, 0.230 mmol, 1.0 equiv.)於THF (10.0 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.29 mL, 2.30 mmol, 10.0 equiv.)及syn-2-吡啶醛肟(281 mg, 2.30 mmol, 10.0 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液在真空中濃縮並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物，其立即用於下一反應中。MS m/z[M+1] = 903.4。 中間物I-73 ：十八烷-1,18- 二醇
反應之兩個批次並行運行。在20℃下將LAH (2.50 M, 254 mL, 2.00 eq.)添加至THF (1.00 L)中。在70℃下向該溶液中添加十八烷二酸(100 g, 318.01 mmol, 1.00 eq.)。將反應混合物在70℃下攪拌12 hr。將該兩個反應組合用於後處理。在0℃下添加Na 2SO 4 .10 H 2O (100 g)。將混合物藉由矽藻土或矽膠墊過濾，並且將墊或濾餅用THF (3.00 L x 2)洗滌。將濾液濃縮至乾燥，以給出白色固體狀產物（80.0 g，279 mmol，43.9%產率）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3- d) : δ3.70 - 3.60 (m, 4 H), 1.65 - 1.51 (m, 5 H), 1.39 - 1.24 (m, 28 H)。 中間物I-74 ：18- 碘十八-1- 醇
反應之兩個批次並行運行。將十八烷-1,18-二醇(50.0 g, 174 mmol, 1.00 eq.)添加至甲苯(500 mL)中。隨後添加HI（49.6 g，174 mmol，29.1 mL，45%純度，1.00 eq.）及TBAI (2.58 g, 6.98 mmol, 0.04 eq.)。將反應混合物在90 ℃下攪拌12 h。將該兩個反應組合用於後處理。將混合物過濾且將濾液溶解於EtOAc (1.00 L)中並用水(1.00 L x 2).洗滌。將有機相藉由真空濃縮並藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=100/1至0/1），以提供淺黃色固體狀標題化合物（40.0 g，100 mmol，28.9%產率）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3- d) δ3.65 (t, J= 6.6 Hz, 2 H), 3.19 (t, J= 7.0 Hz, 2 H), 1.82 (quin, J= 7.2 Hz, 2 H), 1.57 (quin, J= 6.8 Hz, 2 H), 1.41 - 1.21 (m, 32 H)。 中間物I-75 ：2-((18- 碘十五基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
反應之兩個批次並行運行。將18-碘十八-1-醇(20.0 g, 50.4 mmol, 1.00 eq.)添加至THF (200 mL)中。隨後添加DHP (10.6 g, 126 mmol, 11.5 mL, 2.50 eq.)及TsOH .H 2O (1.44 g, 7.57 mmol, 0.15 eq.)。將反應混合物在20 ℃下攪拌12 h。將該兩個反應組合用於後處理。將混合物濃縮，用EtOAc (200 mL)稀釋，並藉由水(200 mL)洗滌。將有機層濃縮，藉由MeOH (200 mL)在0℃下研製0.5 hr並接著過濾，以獲得白色固體狀標題化合物（40.0 g，83.2 mmol，82.4%產率）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3- d) δ 4.61 - 4.56 (m, 1 H), 3.88 (ddd, J= 12.0, 7.6, 3.4 Hz, 1 H), 3.74 (dt, J= 9.6, 6.8 Hz, 1 H), 3.54 - 3.50 (m, 1 H), 3.39 (dt, J= 9.6, 6.6 Hz, 1 H), 3.20 (t, J= 7.0 Hz, 2 H), 1.90 - 1.77 (m, 3 H), 1.76 - 1.68 (m, 1 H), 1.64- 1.49 (m, 7 H), 1.43 - 1.23 (m, 30 H)。 中間物I-76 ：2-((19,19,19- 三氟十六基) 氧基) 四氫-2H- 哌喃
反應之兩個批次並行運行。將CsF (20.2 g, 133 mmol, 4.92 mL, 3.20 eq.)、4A MS (20.0 g)及18-冠-6 (59.4 g, 224 mmol, 5.40 eq.)添加至DME (150 mL)中。隨後添加TMSCF 3(24.8 g, 174 mmol, 4.20 eq.)及2-((18-碘十八基)氧基)四氫-2H-哌喃(20.0 g, 41.6 mmol, 1 eq.)於DME (50.0 mL)中之溶液。將反應混合物在25 ℃下攪拌12 h。將該兩個反應組合用於後處理。將混合物過濾且將濾液倒入水(300 mL)中，並用EtOAc (300 mL x 2)萃取。將有機相藉由真空濃縮並藉由MeOH (150 mL)在0℃下研製1 hr，以獲得黃色固體狀標題化合物（30.0 g，70.9 mmol，85.2%產率）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3- d) δ4.62 - 4.55 (m, 1 H), 3.92 - 3.84 (m, 1 H), 3.74 (dt, J= 9.6, 6.8 Hz, 1 H), 3.55 - 3.47 (m, 1 H), 3.39 (dt, J= 9.6, 6.6 Hz, 1 H), 2.14 – 1.99 (m, 2 H), 1.91 - 1.78 (m, 1 H), 1.77 - 1.67 (m, 1 H), 1.65 - 1.48 (m, 9 H), 1.43 - 1.20 (m, 30 H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3- d) δ= -66.418 ppm。 中間物I-77 ：19,19,19- 三氟十六-1- 醇
反應之兩個批次並行運行。將2-((19,19,19-三氟十九基)氧基)四氫-2H-哌喃(15.0 g, 35.4 mmol, 1.00 eq.)添加至EtOH (225 mL)中。隨後添加TsOH .H 2O (12.1 g, 63.8 mmol, 1.80 eq.)。將混合物在50℃下攪拌3 hr。將該兩個反應組合用於後處理。將混合物藉由真空濃縮且倒入H 2O (200 mL)中。將水層用EtOAc (200 mL x 2)萃取。將有機層在減壓下濃縮並藉由MeOH (150 mL)在0℃下研製30 min，以提供白色固體狀標題化合物（20.0 g，59.0 mmol，83.2%產率）。 TLC 資訊（洗提液：石油醚/乙酸乙酯= 3/1）R f= 0.40。 中間物I-78 ：19- 溴-1,1,1- 三氟十六烷
反應之兩個批次並行運行。將TBAB (285 mg, 886 µmol, 0.04 eq)添加至HBr（111 g，552 mmol，75.0 mL，40.0%純度，24.9 eq.)。隨後添加19,19,19-三氟十九-1-醇(7.50 g, 22.1 mmol, 1.00 eq.)。將反應混合物在100 ℃下攪拌12 h。將該兩個反應組合用於後處理。將混合物倒入EtOAc (50.0 mL)中，且將有機層在減壓下濃縮並用MeOH (50.0 mL)在15℃下研製0.5 hr，以提供白色固體狀標題化合物（10.0 g，24.9 mmol，56.2%產率）。 TLC 資訊（洗提液：石油醚/乙酸乙酯= 5/1）R f= 0.65。 中間物I-79 ：(19,19,19- 三氟十九基) 溴化鎂
在N 2下在20℃下將Mg (726 mg, 29.9 mmol, 1.20 eq.)添加至2-MeTHF (60.0 mL)中。隨後添加I 2(63.2 mg, 249 µmol, 50.1 µL, 0.01 eq.)及(CH 2Br) 2(41.3 g, 220 mmol, 16.6 mL, 8.83 eq.)。在N 2下在20℃下添加19-溴-1,1,1-三氟十九烷(10.0 g, 24.9 mmol, 1.00 eq.)在2-MeTHF (40.0 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌1 h且立即用於下一步驟。获得棕色液体狀标题化合物（10.0 g於2-MeTHF中，23.4 mmol，94.29%產率）。 中間物I-80 ：(R)-22,22,22- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十二-2- 醇
在20℃下在N 2下降(R)-2-((三苯甲基氧基)甲基)氧 (5.20 g, 16.4 mmol, 0.70 eq.)及CuI (223 mg, 1.17 mmol, 0.05 eq.)添加至2-MeTHF (100 mL)中。隨後在-20℃下添加(19,19,19-三氟十九基)溴化鎂(10.0 g, 23.4 mmol, 1.00 eq.)。將反應混合物在20℃下攪拌12 hr。將混合物用冰水(200 mL)淬熄並用EtOAc (200 mL x 2)萃取。將有機層在減壓下濃縮並用MeOH (20.0 mL)在20℃下研製1 hr，以提供白色固體狀標題化合物（8.00 g，12.5 mmol，53.3%產率）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3- d) δ7.48 (br d, J= 7.8 Hz, 5 H), 7.39 - 7.27 (m, 8 H), 3.80 (br d, J= 3.2 Hz, 1 H), 3.53 (br s, 1 H), 3.21 (dd, J= 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 3.11 – 2.99 (m, 1 H), 2.35 (d, J= 3.2 Hz, 1 H), 2.18 - 2.00 (m, 2 H), 1.58 (dt, J= 15.0, 7.6 Hz, 2 H), 1.51 - 1.17 (m, 30 H)。 中間物I-81 ：(R)-3- 氟-5-(((22,22,22- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十一-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
反應之兩個批次並行運行。將(R)-22,22,22-三氟-1-(三苯甲基氧基)二十二-2-醇(4.00 g, 6.26 mmol, 1.00 eq.)在20℃下溶解於THF (40.0 mL)中。在0℃下添加NaH（626 mg，15.6 mmol，60.0%純度，2.50 eq.）。隨後在0℃下添加3-(溴甲基)-5-氟苯甲腈(1.34 g, 6.26 mmol, 1.00 eq.)。將反應混合物在65℃下攪拌12 hr。將反應藉由NH 4Cl (30.0 mL, 100%)淬熄，並用EtOAc (30.0 mL x 2)萃取。將有機層濃縮並藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/0至10/1），以提供白色固體狀標題化合物（5.00 g，6.48 mmol，51.7%產率）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3- d) δ7.48 - 7.38 (m, 7 H), 7.36 - 7.20 (m, 12 H), 4.71 (d, J= 12 Hz, 1 H), 4.55 (d, J= 12 Hz, 1 H), 3.57 - 3.46 (m, 1 H), 3.20 (d, J= 4.8 Hz, 2 H), 2.12 – 1.96 (m, 2 H), 1.60 - 1.46 (m, 5 H), 1.39 - 1.11 (m, 32 H)。 中間物I-82 ：(R)-3- 氟-5-(((22,22,22- 三氟-1- 羥基二十一-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
反應之兩個批次並行運行。在20℃下將(R)-3-氟-5-(((22,22,22-三氟-1-(三苯甲基氧基)二十二-2-基)氧基)甲基)苯甲腈(2.50 g, 3.24 mmol, 1.00 eq.)、TsOH .H 2O (307 mg, 1.62 mmol, 0.500 eq.)及苯甲醚(175 mg, 1.62 mmol, 175 µL, 0.500 eq.)添加至MeOH (5.00 mL)及MTBE (50.0 mL)中。將溶液在50℃下攪拌2 hr。將該兩個批次組合用於後處理。將反應混合物倒入NaHCO 3(100 mL, 100%)中。將有機層濃縮並藉由管柱層析法純化（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯=1/0至10/1），以提供白色固體狀標題化合物（2.00 g，3.61 mmol，55.7%產率，95.7%純度）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3- d) δ7.46 (s, 1 H), 7.35 (br d, J= 9.0 Hz, 1 H), 7.31 - 7.27 (m, 1 H), 4.64 (s, 2 H), 3.81 - 3.70 (m, 1 H), 3.62 (dt, J= 12, 5.6 Hz, 1 H), 3.57 - 3.46 (m, 1 H), 2.15 – 1.98 (m, 2 H), 1.79 (br t, J= 5.8 Hz, 1 H), 1.67 - 1.48 (m, 5 H), 1.40 - 1.23 (m, 33 H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3- d) δ= -66.4, -109 ppm。 中間物I-83 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) ((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-22,22,22- 三氟二十一基) 磷酸酯
將1H-1,2,4-三唑(149 mg, 2.16 mmol, 4.2 equiv.)溶解於THF (10.0 mL)中。向該溶液中添加TEA (0.22 mL, 1.54 mmol, 3.0 equiv.)，接著添加2-氯苯基二氯磷酸酯(0.12 mL, 0.72 mmol, 1.40 equiv.)。將反應混合物在rt下攪拌6 min，之後一次性添加((3aS,4R,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(氟甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲醇(170 mg, 0.513 mmol, 1.00 equiv.)，接著添加1-甲基咪唑(0.12 mL, 1.54 mmol, 3.0 equiv.)。將溶液再攪拌10 min，之後添加(R)-3-氟-5-(((22,22,22-三氟-1-羥基二十二-2-基)氧基)甲基)苯甲腈(270 mg, 0.510 mmol, 1.0 equiv.)。在室溫下攪拌過夜之後，將溶液用EtOAc (100 mL)及水(100 mL)稀釋。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮，之後藉由矽膠層析法純化（於己烷中之0至100% EtOAc），以提供標題化合物（290 mg，0.280 mmol，55%產率）。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.81 – 7.77 (m, 1H), 7.47 – 7.29 (m, 5H), 7.20 – 7.07 (m, 2H), 6.85 – 6.79 (m, 1H), 6.78 – 6.74 (m, 1H), 5.68 – 5.62 (m, 1H), 5.33 – 5.27 (m, 1H), 5.18 – 5.11 (m, 1H), 4.64 – 4.43 (m, 4H), 4.37 – 4.24 (m, 1H), 4.24 – 4.07 (m, 1H), 3.64 – 3.55 (m, 1H), 2.20 – 2.04 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.60 – 1.20 (m, 39H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.55 (t, J= 11.6 Hz), -112.69 – -112.79 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -7.50 – -8.00 (m)。MS m/z[M+1] = 1033.5。 中間物I-84 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-22,22,22- 三氟二十一基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基(2-氯苯基) ((R)-2-((3-氰基-5-氟苄基)氧基)-22,22,22-三氟二十二基)磷酸酯(285 mg, 0.276 mmol, 1.0 equiv.)於THF (10.0 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.35 mL, 2.76 mmol, 10.0 equiv.)及syn-2-吡啶醛肟(337 mg, 2.76 mmol, 10.0 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液在真空中濃縮並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物（239 mg，94%產率）。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.43 - 7.33 (m, 2H), 6.83 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.63 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 5.26 (dd, J= 6.6, 3.6 Hz, 1H), 5.13 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.73 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.51 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.17 – 4.06 (m, 2H), 3.95 - 3.81 (m, 2H), 3.58 – 3.50 (m, 1H), 2.20 – 2.04 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.59 - 1.48 (m, 2H), 1.48 – 1.20 (m, 37H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.56 (t, J= 11.3 Hz), -113.00 (t, J= 9.2 Hz)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ 0.05 – -0.91 (m)。MS m/z[M+1] = 923.3。 中間物I-85 ：(S)-3- 氟-4-(((20,20,20- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
在0℃下向(2S)-20,20,20-三氟-1-三苯甲基氧基-二十-2-醇；500 mg, 0.82 mmol, 1 eq)於THF (5 mL)中之溶液中，添加NaH（78.0 mg，2 mmol，60%純度，2.5 eq），且將混合物在0℃下攪拌30 min。接著，添加4-(溴甲基)-3-甲氧基-苯甲腈(241 mg, 1.1 mmol, 1.3 eq)，且將混合物在65℃下攪拌12 hr。TLC指示反應物完全耗盡，且形成許多新點。將反應混合物藉由在20℃下添加飽和NH4Cl溶液(60 ml)淬熄，且用乙酸乙酯(40 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H2O (60 mL × 2)洗滌，以Na2SO4乾燥，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；20 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.61 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.44 (tt, J = 6.0, 1.4 Hz, 7H), 7.36 – 7.21 (m, 14H), 7.05 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.63 – 3.48 (m, 1H), 3.25 – 3.11 (m, 2H), 2.13 – 1.98 (m, 3H), 1.24 (q, J = 6.8, 6.0 Hz, 32H)。 19F NMR (376 MHz，氯仿-d) δ -66.95 (t, J = 11.0 Hz)。MS m/z[M+1] = 756.2。 中間物I-86 ：(S)-3- 氟-4-(((20,20,20- 三氟-1- 羥基二十-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈
向 (S)-3- 甲氧基-4-(((20,20,20- 三氟-1-( 三苯甲基氧基) 二十-2- 基) 氧基) 甲基) 苯甲腈(600 mg, 0.8 mmol, 1 eq)於IPA (5 mL)及MeOH (5 mL)中之溶液中添加HCl (12 M, 15 mL, 57.11 eq)且將混合物在20℃下搅拌2 hr。TLC指示反應物耗盡，且形成兩個新點。將反應混合物藉由添加飽和NaHCO 3240 mL淬熄，並接著用乙酸乙酯(120 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (180 mL × 2)洗滌，以Na2SO4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化，以產出標題化合物。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.63 (q, J = 12.8 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 3.72 (q, J = 7.2, 6.2 Hz, 1H), 3.54 (q, J = 4.5 Hz, 2H), 2.16 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 1H), 2.13 – 1.98 (m, 2H), 1.56 (tt, J = 15.9, 6.4 Hz, 4H), 1.26 (d, J = 4.9 Hz, 27H)。 19F NMR (376 MHz，氯仿-d) δ -66.95 (t, J = 11.0 Hz)。MS m/z[M+1] = 513.9。 中間物I-87 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基(2- 氯苯基) ((S)-2-((4- 氰基-2- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸酯
將1H-1,2,4-三唑(69 mg, 0.996 mmol, 3.0 equiv.)溶解於THF (10.0 mL)中。向該溶液中添加TEA (0.14 mL, 0.996 mmol, 3.0 equiv.)，接著添加2-氯苯基二氯磷酸酯(0.08 mL, 0.465 mmol, 1.40 equiv.)。將反應混合物在rt下攪拌6 min，之後一次性添加((3aS,4R,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(氟甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲醇(110 mg, 0.332 mmol, 1.00 equiv.)，接著添加1-甲基咪唑(0.08 mL, 0.996 mmol, 3.0 equiv.)。將溶液再攪拌10 min，之後添加(S)-3-甲氧基-4-(((20,20,20-三氟-1-羥基二十-2-基)氧基)甲基)苯甲腈(171 mg, 0.332 mmol, 1.00 equiv.)。在室溫下攪拌過夜之後，將溶液用EtOAc (100 mL)及水(100 mL)稀釋。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮，之後藉由矽膠層析法純化（於己烷中之0至100% EtOAc），以提供標題化合物（123 mg，0.121 mmol，36%產率）。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.83 – 7.74 (m, 1H), 7.54 – 7.46 (m, 1H), 7.46 – 7.37 (m, 1H), 7.36 – 7.28 (m, 1H), 7.26 – 7.19 (m, 2H), 7.19 – 7.03 (m, 2H), 6.86 – 6.79 (m, 1H), 6.78 – 6.73 (m, 1H), 5.66 – 5.60 (m, 1H), 5.33 – 5.24 (m, 1H), 5.17 – 5.05 (m, 1H), 4.67 – 4.45 (m, 4H), 4.36 – 4.25 (m, 1H), 4.21 – 4.06 (m, 1H), 3.88 – 3.79 (m, 3H), 3.69 – 3.56 (m, 1H), 2.19 – 2.04 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.60 – 1.16 (m, 35H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.55 (t, J= 11.2 Hz)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -7.49 – -8.33 (m)。MS m/z[M+1] = 1017.4。 中間物I-88 ：((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基) 甲基((S)-2-((4- 氰基-2- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基(2-氯苯基) ((S)-2-((4-氰基-2-甲氧基苄基)氧基)-20,20,20-三氟二十基)磷酸酯(120 mg, 0.118 mmol, 1.0 equiv.)於THF (10.0 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.15 mL, 1.18 mmol, 10.0 equiv.)及syn-2-吡啶醛肟(144 mg, 1.18 mmol, 10.0 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液在真空中濃縮並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物（85 mg，79%產率）。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.82 (s, 1H), 7.54 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.27 – 7.16 (m, 2H), 6.85 – 6.77 (m, 2H), 5.63 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.24 (dd, J= 6.6, 3.7 Hz, 1H), 5.13 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.69 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 4.52 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 4.16 – 4.06 (m, 2H), 3.93 – 3.86 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.61 – 3.52 (m, 1H), 2.20 – 2.04 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.59 – 1.18 (m, 35H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.56 (t, J= 11.2 Hz)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -0.04 – -0.81 (m)。MS m/z[M+1] = 907.3。 中間物I-89 ：[(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基-6,6a- 二氫-3aH- 氟[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基] 甲基(2- 氯苯基) [(2R)-2-[(3- 氰基-5- 氟- 苯基) 甲氧基]-20,20,20- 三氟- 二十基] 磷酸酯
向1-[(2-氯苯氧基)-(1,2,4-三唑-1-基)磷醯基]-1,2,4-三唑(460 mg, 1.48 mmol)之溶液中添加中間物I-1 (35 mg, 1.06 mmol, 1 eq)，接著添加1-甲基咪唑(113 mg, 1.37 mmol, 1.3 eq)，並在室溫下攪拌10 min。向反應混合物中，緩慢添加脂質醇、3-氟-5-[[(1R)-19,19,19-三氟-1-(羥基甲基)十九烷氧基]甲基]苯甲腈(530 mg, 1.06 mmol, 1 eq)於THF (5 mL)中之溶液，並在室溫下攪拌18h。將反應混合物在與乙酸乙酯(100 mL)完成反應後稀釋，且用水(10 mL)淬熄並攪拌2h。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮，之後藉由矽膠層析法純化（於己烷中之0至100% EtOAc），以提供標題化合物。MS m/z[M+1] = 1005.4。 中間物I-90 ：[(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基-6,6a- 二氫-3aH- 氟[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基] 甲基[(2R)-2-[(3- 氰基-5- 氟- 苯基) 甲氧基]-20,20,20- 三氟- 二十基] 磷酸氫酯
向[(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基-6,6a-二氫-3aH-氟[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基]甲基(2-氯苯基) [(2R)-2-[(3-氰基-5-氟-苯基)甲氧基]-20,20,20-三氟-二十基)磷酸酯(910 mg, 0.9 mmol, 1.0 equiv.)於THF (10.0 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.68 mL, 5.43 mmol, 6.0 equiv.)及syn-2-吡啶醛肟(448 mg, 3.67 mmol, 4 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液在真空中濃縮並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物。MS m/z[M+1] = 895.3。 中間物I-91 ：1- 溴-3-[[(1S)-19,19,19- 三氟-1-( 三苯甲基氧基甲基) 十九烷氧基] 甲基] 苯
在0℃下向(2S)-20,20,20-三氟-1-三苯甲基氧基-二十-2-醇(2000 mg, 3.3 mmol, 1 eq)於THF (5 mL)中之溶液中，添加NaH（314 mg，8.2 mmol，60%純度，2.5 eq），且將混合物在0℃下攪拌30 min。接著，添加1-溴-3-(溴甲基)苯(1064 mg, 4.3 mmol, 1.3 eq)，且將混合物在65℃下攪拌12 hr。TLC指示反應物完全耗盡，且形成許多新點。將反應混合物藉由在20℃下添加飽和NH 4Cl溶液(60 ml)淬熄，且用乙酸乙酯(40 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (60 mL × 2)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化（ISCO ®；20 g SepaFlash ®二氧化矽快速管柱）。 1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.54 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.51 – 7.48 (m, 6H), 7.43 (dt, J = 7.9, 1.6 Hz, 1H), 7.35 – 7.27 (m, 9H), 7.24 (dd, J = 3.1, 1.7 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.59 – 4.49 (m, 1H), 3.59 – 3.48 (m, 1H), 3.29 – 3.11 (m, 2H), 2.18 – 1.99 (m, 2H), 1.64 – 1.46 (m, 4H), 1.43 – 1.19 (m, 31H)。 19F NMR (376 MHz，氯仿-d) δ -66.94 (t, J = 10.9 Hz)。 中間物I-92 ：N',N'- 二甲基-N-[3-[[(1S)-19,19,19- 三氟-1-( 三苯甲基氧基甲基) 十九烷氧基] 甲基] 苯基] 乙烷-1,2- 二胺
向微波小瓶中的1-溴-3-[[(1S)-19,19,19-三氟-1-(三苯甲基氧基甲基)十九烷氧基]甲基]苯(1100 mg, 1.4 mmol, 1 eq)於二㗁烷(10 mL)中之溶液中，添加Pd2(dba)3 (65 mg, 0.07 mmol)、9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基膦基)呫噸、Xantphos (98 mg, 0.17 mmol)及三級丁醇鈉(271 mg, 2.8 mmol)且在140℃下輻照45 min。藉由矽藻土過濾，濃縮，且藉由快速層析法使用二氯甲烷及甲醇(20%)作為洗提液純化，以得到標題化合物。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.55 – 7.41 (m, 6H), 7.38 – 7.19 (m, 9H), 7.10 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.72 – 6.55 (m, 3H), 4.58 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.60 – 3.48 (m, 1H), 3.25 – 3.10 (m, 4H), 2.56 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.27 (s, 6H), 2.22 – 2.04 (m, 2H), 1.54 (q, J = 7.5 Hz, 4H), 1.27 (d, J = 22.0 Hz, 34H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.54 (t, J = 11.1 Hz)。 中間物I-93 ：(2S)-2-[[3-[2-( 二甲基胺基) 乙基胺基] 苯基] 甲氧基]-20,20,20- 三氟- 二十-1- 醇
向N',N'-二甲基-N-[3-[[(1S)-19,19,19-三氟-1-(三苯甲基氧基甲基)十九烷氧基]甲基]苯基]乙烷-1,2-二胺(810 mg, 1 mmol, 1 eq)於IPA (5 mL)及MeOH (5 mL)中之溶液中添加HCl (12 M, 1 mL, 10 eq)，且將混合物在20℃下攪拌2 hr。TLC指示反應物耗盡，且形成兩個新點。將反應混合物藉由添加飽和NaHCO 3淬熄並接著用乙酸乙酯(120 mL × 3)萃取。將合併之有機層用H 2O (180 mL × 2)洗滌，以Na2SO4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速矽膠層析法純化，以產出標題化合物。
1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.10 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.70 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 6.66 (dt, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 6.59 (ddd, J = 8.1, 2.4, 1.0 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.66 – 3.52 (m, 2H), 3.50 – 3.41 (m, 1H), 3.26 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.34 (s, 6H), 2.21 – 2.06 (m, 2H), 1.62 – 1.47 (m, 4H), 1.44 – 1.24 (m, 29H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -66.79 – -71.50 (m)。MS m/z[M+1] = 545.4。 中間物I-94 ：[(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基-6,6a- 二氫-3aH- 氟[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基] 甲基(2- 氯苯基) [(2S)-2-[[3-[2-( 二甲基胺基) 乙基胺基] 苯基] 甲氧基]-20,20,20- 三氟- 二十基] 磷酸酯
向1-[(2-氯苯氧基)-(1,2,4-三唑-1-基)磷醯基]-1,2,4-三唑(352 mg, 1.13 mmol, 1.5 eq)之溶液中添加中間物I-1 (250 mg, 0.8 mmol, 1 eq)，接著添加1-甲基咪唑(80 mg, 1 mmol, 1.3 eq)，並在室溫下攪拌10 min。向反應混合物中，緩慢添加脂質醇、(2S)-2-[[3-[2-(二甲基胺基)乙基胺基]-苯基]甲氧基]-20,20,20-三氟-二十-1-醇(411 mg, 0.75 mmol, 1 eq)於THF (5 mL)中之溶液，並在室溫下攪拌18 h。將反應混合物在與乙酸乙酯(100 mL)完成反應後稀釋，且用水(10 mL)淬熄並攪拌2h。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮，之後藉由矽膠層析法純化（0至40% DCM/甲醇），以提供標題化合物。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.96 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.46 (tdd, J = 7.5, 3.1, 1.1 Hz, 1H), 7.41 – 7.27 (m, 1H), 7.28 – 7.06 (m, 4H), 6.94 (dd, J = 4.7, 2.3 Hz, 1H), 6.78 – 6.55 (m, 4H), 5.69 (dd, J = 3.2, 2.1 Hz, 1H), 5.49 (s, 0H), 5.27 (ddd, J = 8.1, 6.6, 3.2 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 24.0, 6.6 Hz, 1H), 4.64 – 4.45 (m, 4H), 4.34 (tdd, J = 10.7, 7.1, 3.4 Hz, 1H), 4.18 (dddd, J = 21.0, 11.0, 8.2, 5.5 Hz, 1H), 3.50 (td, J = 6.0, 3.9 Hz, 2H), 3.34 (dt, J = 6.0, 2.6 Hz, 3H), 2.91 (d, J = 1.1 Hz, 6H), 2.24 – 2.04 (m, 2H), 1.52 (tdd, J = 14.2, 9.9, 6.2 Hz, 4H), 1.28 (q, J = 6.4, 4.9 Hz, 28H)。). 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -66.95 (t, J = 11.2 Hz). 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -7.65 (p, J = 6.48 Hz)。MS m/z[M+1] = 1048.3。 中間物I-95 ：(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-4- 氰基-2,2- 二甲基-6,6a- 二氫-3aH- 氟[3,4-d][1,3] 二氧呃-4- 基] 甲基[(2S)-2-[[3-[2-( 二甲基胺基) 乙基胺基] 苯基] 甲氧基]-20,20,20- 三氟- 二十基] 磷酸氫酯
向[(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基-6,6a-二氫-3aH-氟[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基]甲基(2-氯苯基) [(2S)-2-[[3-[2-(二甲基胺基)乙基胺基]苯基]甲氧基]-20,20,20-三氟-二十基)磷酸酯(400 mg, 0.38 mmol, 1.0 equiv.)於THF (10.0 mL)中之溶液中，添加1,1,3,3-四甲基胍(0.3 mL, 2.3 mmol, 6.0 equiv.)及syn-2-吡啶醛肟(190 mg, 1.55 mmol, 4 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液在真空中濃縮並藉由矽膠純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物。MS m/z[M+1] = 938.4。 C. 化合物 實例1 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-3-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 丙基) 磷酸氫酯
在rt下向 中間物 I-15(327 mg, 0.354 mmol)於ACN (4 ml) -DCM (4 mL)中之溶液中，添加25% HCl (0.3 mL)。將溶液在rt下攪拌3h，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法純化（於DCM中之0至100% MeOH），以給出標題化合物 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-3-((18,18,18- 三氟十八基) 氧基) 丙基) 磷酸氫酯（化合物1 ）。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 8.05 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.47 (d, J= 9.5 Hz, 1H), 7.41 – 7.24 (m, 2H), 7.04 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.55 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.83 - 4.65 (m, 2H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 4.45 - 4.37 (m, 1H), 4.35 – 4.00 (m, 4H), 3.94 - 3.72 (m, 1H), 3.65 - 3.51 (m, 2H), 3.51 - 3.37 (m, 2H), 2.24 – 2.00 (m, 2H), 1.63 - 1.46 (m, 4H), 1.46 – 0.96 (m, 26H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.53, -112.82。 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -1.08。MS m/z[M+1] = 884.8。 實例2 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-21,21,21- 三氟二十一基) 磷酸氫酯
在rt下向 中間物 I-22(302 mg, 0.332 mmol)於ACN (4 ml) -THF (4 mL)中之溶液中，添加25% HCl (0.3 mL)。將溶液在rt下攪拌4h，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法純化（於DCM中之0至100% MeOH），以給出標題化合物 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-21,21,21- 三氟二十一基) 磷酸氫酯（化合物2 ）。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 8.05 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.46 – 7.25 (m, 3H), 7.06 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.55 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.79 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.61 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 4.43 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.33 – 4.16 (m, 2H), 4.14 – 4.05 (m, 1H), 4.05 - 3.90 (m, 1H), 3.73 - 3.60 (m, 1H), 2.25 – 2.01 (m, 2H), 1.63 – 1.47 (m, 4H), 1.47 - 1.17 (m, 30H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.55, -112.88。 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -0.89。MS m/z[M+1] = 869.4。 實例3 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯
在rt下向 中間物 I-35(237 mg, 0.265 mmol)於ACN (2 ml) -DCM (2 mL)中之溶液中，添加25% HCl (1 mL)。將溶液在rt下攪拌4h，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法純化（於DCM中之0至100% MeOH），以給出標題化合物 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯（化合物3 ）。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 8.04 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.45 (dd, J= 9.5, 2.3 Hz, 1H), 7.39 – 7.34 (m, 2H), 7.07 (dd, J= 4.8, 2.0 Hz, 1H), 5.56 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.79 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.62 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 4.44 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.13 (m, 2H), 4.14 -4.04 (m, 1H), 4.03 - 3.91 (m, 1H), 3.73 - 3.59 (m, 1H), 2.21 – 2.04 (m, 2H), 1.69 – 1.12 (m, 32H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.55, -112.87。 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -0.80。MS m/z[M+1] = 854.8。 實例4 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19- 二氟十九基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基((R)-2-((3-氰基-5-氟苄基)氧基)-19,19-二氟十九基)磷酸氫酯（ 中間物 I-46）(307 mg, 0.356 mmol, 1.0 equiv)於THF (4.0 mL)中之溶液中，添加濃HCl (0.50 mL, 12.0 M, 16.9 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌5 h。將溶液用4:1 DCM:IPA (100 mL)及水(75 mL)稀釋。使用20 wt% KOH將水層之pH調整至大約3至4。將各層分離。將有機層用額外75 mL的水洗滌，之後以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗製殘餘物藉由矽膠層析法純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19- 二氟十九基) 磷酸氫酯（化合物4 ）。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.49 – 7.44 (m, 1H), 7.41 – 7.31 (m, 2H), 6.87 – 6.77 (m, 2H), 5.84 (tt, J= 57.1, 4.5 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.69 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.59 – 4.43 (m, 3H), 4.20 – 4.08 (m, 2H), 3.93 – 3.80 (m, 2H), 3.57 – 3.49 (m, 1H), 1.88 – 1.68 (m, 2H), 1.51 – 1.15 (m, 30H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -112.90 – -113.01 (m), -117.83 – -118.14 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -0.02 – -0.55 (m)。MS m/z[M+1] = 823.2。 實例5 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基(20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基(20,20,20-三氟二十基)磷酸氫酯（ 中間物 I-55）(339 mg, 0.455 mmol, 1.0 equiv)於THF (5.0 mL)中之溶液中，添加濃HCl (1.0 mL, 12.0 M, 26.4 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液用4:1 DCM:IPA (100 mL)及水(75 mL)稀釋。使用20 wt% KOH及1M HCl將水層之pH調整至4與5之間並進一步用鹽水(50 mL)稀釋。將各層分離。將有機層用額外75 mL的水及50 mL的鹽水洗滌，之後以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗製殘餘物裝載至矽膠上並藉由矽膠層析法純化（於DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三 𠯤-7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基(20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯（化合物5 ）。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.84 (s, 1H), 6.98 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.58 – 4.48 (m, 2H), 4.20 – 4.07 (m, 2H), 3.87 – 3.80 (m, 2H), 2.19 – 2.04 (m, 2H), 1.60 – 1.48 (m, 4H), 1.44 – 1.18 (m, 30H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.49 – -68.62 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ 0.20 – -0.55 (m)。MS m/z[M+1] = 706.1。 實例6 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19,19- 三氟十九基) 磷酸氫酯
在rt下向((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基((S)-2-((3-氰基-5-氟苄基)氧基)-19,19,19-三氟十九基)磷酸氫酯（ 中間物 I-68）(206 mg, 0.34 mmol)於ACN (2 ml) -DCM (2 mL)中之溶液中，添加25% HCl (1 mL)。將溶液在rt下攪拌4h，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法純化（於DCM中之0至100% MeOH），以給出標題化合物 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-19,19,19- 三氟十九基) 磷酸氫酯（化合物6 ）(123 mg, 63%)。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 8.06 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.45 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 7.42 – 7.30 (m, 2H), 7.08 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.56 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.85 – 4.72 (m, 1H), 4.61 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.50 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.44 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.31 – 4.12 (m, 2H), 4.12 – 3.92 (m, 2H), 3.72 - 3.60 (m, 1H), 2.25 – 2.05 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 2H), 1.48 - 1.16 (m, 28H)； 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.56, -112.90； 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -0.81；MS m/z[M+1] = 841.4。 實例7 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-20,20,20- 三氟-2-( 喹啉-2- 基甲氧基) 二十基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基((S)-20,20,20-三氟-2-(喹啉-2-基甲氧基)二十基)磷酸氫酯(208 mg, 0.230 mmol, 1.0 equiv)於THF (6.0 mL)中之溶液中，添加濃HCl (1.0 mL, 12.0 M, 52.1 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液用4:1 DCM:IPA (100 mL)及水(75 mL)稀釋。使用20 wt% KOH將水層之pH調整至大約2至3。添加鹽水以減少乳液。將各層分離。將有機層用額外的水及鹽水洗滌。將有機流份以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗殘餘物裝載至矽膠上且藉由矽膠層析法純化（DCM中之0至40% MeOH），以提供HCl鹽狀標題化合物。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 8.25 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.89 – 7.82 (m, 1H), 7.78 – 7.66 (m, 3H), 7.59 – 7.51 (m, 1H), 6.84 – 6.77 (m, 2H), 5.53 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.91 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 4.77 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 4.61 – 4.47 (m, 2H), 4.23 – 4.11 (m, 2H), 4.02 – 3.90 (m, 2H), 3.73 – 3.64 (m, 1H), 2.20 – 2.02 (m, 2H), 1.60 – 1.11 (m, 32H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.54 (t, J= 11.2 Hz)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ 0.07 – -1.00 (m)。MS m/z[M+1] = 863.4。 實例8 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((R)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-22,22,22- 三氟二十一基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基((R)-2-((3-氰基-5-氟苄基)氧基)-22,22,22-三氟二十二基)磷酸氫酯(234 mg, 0.254 mmol, 1.0 equiv)於THF (6.0 mL)中之溶液中，添加濃HCl (1.0 mL, 12.0 M, 47.3 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液用4:1 DCM:IPA (100 mL)及水(75 mL)稀釋。使用20 wt% KOH及1M HCl將水層之pH調整至約3。將有機層用額外水(75 mL)洗滌。將有機流份以Na2SO4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗殘餘物裝載至矽膠上且藉由矽膠層析法純化（DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.85 (s, 1H), 7.50 – 7.45 (m, 1H), 7.41 – 7.32 (m, 2H), 6.99 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.73 (d, J= 13.1 Hz, 1H), 4.56 – 4.47 (m, 3H), 4.22 – 4.09 (m, 2H), 3.98 – 3.84 (m, 2H), 3.62 – 3.53 (m, 1H), 2.20 – 2.04 (m, 2H), 1.59 – 1.18 (m, 36H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.37 – -68.76 (m), -112.85 – -113.03 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -0.12 – -0.48 (m)。MS m/z[M+1] = 883.4。 實例9 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-2-((4- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯
向((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基)甲基((S)-2-((4-氰基-2-甲氧基苄基)氧基)-20,20,20-三氟-二十基)磷酸氫酯(79 mg, 0.0871 mmol, 1.0 equiv)於THF (6.0 mL)中之溶液中，添加濃HCl (1.0 mL, 12.0 M, 138 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液用4:1 DCM:IPA (100 mL)及水(75 mL)稀釋。使用20 wt% KOH及1M HCl將水層之pH調整至約3。將各層分離。將有機層用額外水洗滌。將有機流份以Na2SO4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗殘餘物裝載至矽膠上且藉由矽膠層析法純化（DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物。 1H NMR (400 MHz，甲醇- d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.52 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.25 – 7.16 (m, 2H), 6.85 – 6.79 (m, 2H), 5.54 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.68 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 4.60 – 4.45 (m, 3H), 4.19 – 4.07 (m, 2H), 3.94 – 3.85 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.60 – 3.52 (m, 1H), 2.20 – 2.05 (m, 2H), 1.60 – 1.13 (m, 32H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇- d4) δ -68.56 (t, J= 11.2 Hz)。 31P NMR (162 MHz，甲醇- d4) δ -0.15 – -0.65 (m)。MS m/z[M+1] = 867.2。 實例10 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-2-((3- 氰基-5- 氟苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟二十基) 磷酸氫酯
向[(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基-6,6a-二氫-3aH-氟[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基]甲基[(2R)-2-[(3-氰基-5-氟-苯基)甲氧基]-20,20,20-三氟-二十基]磷酸氫酯(810 mg, 0.9 mmol, 1.0 equiv)於THF (6.0 mL)中之溶液中，添加濃HCl (2.9 mL, 12.0 M, 38 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液用4:1 DCM:IPA (100 mL)及水(75 mL)稀釋。使用20 wt% KOH及1M HCl將水層之pH調整至約3。將有機層用額外水(75 mL)洗滌。將有機流份以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗殘餘物裝載至矽膠上且藉由矽膠層析法純化（DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.48 (t, J = 1.3 Hz, 1H), 7.43 – 7.30 (m, 2H), 6.88 – 6.78 (m, 2H), 5.55 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.62 – 4.43 (m, 3H), 4.15 (qd, J = 10.9, 4.8 Hz, 2H), 3.99 – 3.79 (m, 2H), 3.62 – 3.47 (m, 1H), 3.00 (s, 2H), 2.25 – 2.01 (m, 2H), 1.63 – 1.49 (m, 2H), 1.29 (dd, J = 15.8, 7.8 Hz, 30H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.56 (t, J = 11.3 Hz), -112.71 – -113.31 (m)。 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ 1.70 – -3.29 (m)。MS m/z[M+1] = 855.2。 實例11 ：((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4] 三𠯤 -7- 基)-2- 氰基-3,4- 二羥基四氫呋喃-2- 基) 甲基((S)-2-((3-((2-( 二甲基胺基) 乙基) 胺基) 苄基) 氧基)-20,20,20- 三氟- 二十基) 磷酸氫酯
向(3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基-6,6a-二氫-3aH-氟[3,4-d][1,3]二氧呃-4-基]甲基[(2S)-2-[[3-[2-(二甲基胺基)乙基胺基]苯基]甲氧基]-20,20,20-三氟-二十基]磷酸氫酯(350 mg, 0.37 mmol, 1.0 equiv)於THF (6.0 mL)中之溶液中，添加濃HCl (1.2 mL, 12.0 M, 38 equiv.)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液用4:1 DCM:IPA (100 mL)及水(75 mL)稀釋。使用20 wt% KOH及1M HCl將水層之pH調整至約3。將有機層用額外水(75 mL)洗滌。將有機流份以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗殘餘物裝載至矽膠上且藉由矽膠層析法純化（DCM中之0至40% MeOH），以提供標題化合物。 1H NMR (400 MHz，甲醇-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.06 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.62 – 6.53 (m, 2H), 5.55 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 4.22 – 4.08 (m, 2H), 3.97 – 3.80 (m, 2H), 3.54 (dt, J = 19.2, 6.1 Hz, 3H), 3.18 (td, J = 6.4, 2.3 Hz, 2H), 2.81 (s, 6H), 2.22 – 2.04 (m, 2H), 1.55 (p, J = 7.8, 7.3 Hz, 2H), 1.40 – 1.21 (m, 32H)。 19F NMR (376 MHz，甲醇-d4) δ -68.53 (t, J = 11.2 Hz)。 31P NMR (162 MHz，甲醇-d4) δ -0.42 (p, J = 5.4 Hz)。MS m/z[M+1] = 898.3。 D. 生物實例 實例A. DENV-2 moDC EC 50
人類單核衍生之樹突細胞(moDC)係衍生自含有GM-CSF及IL-4 (Miltenyi Biotec)之人類Mo-DC分化培養基中培養之CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破壞採集moDC，將其洗滌並懸浮於無血清RPMI中。將moDC在37℃下在溫和攪動下在無血清RPMI中以MOI = 0.1用Vero衍生之登革熱2型新幾內亞株(NGC)感染兩個小時。將細胞洗滌並再懸浮於10%含血清之RPMI（Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素）中。將10^5個細胞以三重複接種於96孔盤中，其中化合物依分級劑量分配（Hewlett-Packard D300數位分配器）。所有孔皆標準化至0.25% DMSO。在48小時，用1x PBS洗滌細胞並移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)萃取總RNA，並使用XLT cDNA 5x Supermix (QuantaBio)將其用以產生第一股cDNA。cDNA係用作為特異於DENV2病毒及GAPDH基因表現之Taqman qPCR雙重反應中的模板。EC 50值係使用Prism Graphpad軟體判定，其中標準化至陽性對照及無化合物陰性對照孔。 實例B. moDC CC 50
人類單核衍生之樹突細胞(moDC)係衍生自含有GM-CSF及IL-4 (Miltenyi Biotec)之人類Mo-DC分化培養基中培養之CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破壞採集moDC，將其洗滌並在96孔盤中以1x10^5至5x10^4個細胞/孔以三重複培養，其中化合物依分級劑量分配（Hewlett-Packard D300數位分配器）。所有孔皆標準化至0.25% DMSO。在48小時之後，添加CellTiter Glo (Promega)並在室溫下培養10分鐘，之後在光度計上讀取。相對於無化合物且無細胞對照孔來計算活力%曲線。CC 50值係使用Prism Graphpad軟體判定。 實例C. DENV-2 Huh-7 EC 50
將Huh7（人類肝癌7型）細胞維持在含有10% FCS之DMEM完全培養基中。在檢定當天，將細胞胰蛋白酶化(trypsinized)（0.1%胰蛋白酶-EDTA），洗滌，並在37℃下在溫和攪動下在無血清DMEM中以MOI = 0.1用登革熱血清型2新幾內亞C (NGC)株感染2小時。2小時後，將細胞用無血清培養基洗滌並懸浮於10%含FCS之DMEM（Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素）中。將10^5個細胞以三重複接種於96孔盤中，其中化合物依分級劑量分配（Hewlett-Packard D300數位分配器）。所有孔皆標準化至0.25% DMSO。在48小時，用1x PBS洗滌細胞並移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)萃取總RNA，並使用XLT cDNA 5x Supermix (QuantaBio)將其用以產生第一股cDNA。cDNA係用作為特異於DENV2病毒及GAPDH基因表現之Taqman qPCR雙重反應中的模板。EC 50值係使用Prism Graphpad軟體判定，其中標準化至陽性對照及無化合物陰性對照孔。 實例D. Huh-7 CC 50
將人類肝癌7型(Huh7)細胞維持在含有10% FCS之完整DMEM中。在檢定當天，將細胞用0.1%胰蛋白酶-EDTA胰蛋白酶化，洗滌，並在96孔盤中以1至2 x10^4個細胞/孔以三重複培養，其中化合物依分級劑量分配（Hewlett-Packard D300數位分配器）。所有孔皆標準化至0.25% DMSO。在48小時之後，添加CellTiter Glo (Promega)並在室溫下培養10分鐘，之後在光度計上讀取。相對於無化合物且無細胞對照孔來計算活力%曲線。CC 50值係使用Prism Graphpad軟體判定。 實例E. RSV HEp-2 EC 50
使用HEp-2細胞中之感染性細胞病變細胞保護檢定來判定針對RSV之抗病毒活性。在此檢定中，抑制病毒感染及/或複製之化合物針對病毒誘導之細胞殺傷產生細胞保護效應，其可使用細胞活力試劑進行定量。此處所使用之技術係於公開文獻中所描述之方法的新穎適應性(Chapman et al., Antimicrob Agents Chemother.2007, 51(9):3346-53)。
HEp-2細胞自ATCC (Manassas, VI)獲得，並維持在補充有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之MEM培養基中。將細胞每週繼代兩次並保持在次長滿(subconfluent)階段。在化合物測試之前，將RSV A2株之商業儲備液(Advanced Biotechnologies, Columbia, MD)進行滴定，以判定在HEp-2細胞中產生所欲細胞病變效應之病毒儲備液的適當稀釋。
對於抗病毒測試，在大細胞培養瓶中生長HEp-2細胞，以接近融合但不完全融合。待測試之化合物在384孔化合物稀釋盤中用DMSO預稀釋，以每盤8或40個樣本標準化劑量反應格式製備。在盤中製備各測試化合物之3倍連續稀釋增量，並經由聲學轉移設備(Echo, Labcyte)以每孔100 nL將測試樣本轉移至細胞培養檢定384孔盤中。將各化合物稀釋液以單一或四重複樣本轉移至乾燥檢定盤中，將其儲存直到準備進行檢定。陽性及陰性對照以垂直區塊（1欄）相對放置在盤之末端。
隨後，使用適當稀釋的病毒儲備液製備感染性混合物，該病毒儲備液先前藉由滴定判定細胞密度為50,000/ml，並經由自動化(uFlow, Biotek)將20δµL/孔添加至具有化合物之測試盤中。各盤包括陰性及陽性對照（各重複16次）以分別產生0%及100%病毒抑制標準。在用RSV感染之後，將測試盤在37℃細胞培養箱中培養4天。在培養之後，將細胞活力試劑Cell TiterGlo (Promega, Madison, WI)添加至檢定盤中，將其短暫地培養，且測量所有檢定盤中之發光讀數(Envision, Perkin Elmer)。RSV誘導之細胞病變效應（抑制百分比）係由剩餘細胞活力之水平判定。計算相對於0%及100%抑制對照之各測試濃度的此等數字，且各化合物之EC 50值係藉由非線性迴歸判定為抑制RSV誘導之細胞病變效應50%的濃度。各種強效抗RSV工具化合物用作抗病毒活性之陽性對照。 實例F. HEp-2 CC 50
測試化合物之細胞毒性係在未感染之HEp-2細胞中判定，與抗病毒活性同時使用細胞活力試劑以與之前描述的其他細胞類型類似的方式進行(Cihlar et al., Antimicrob Agents Chemother.2008,52(2):655-65)。除了細胞未感染RSV外，使用與判定抗病毒活性相同的規程以測量化合物細胞毒性。相反地，將相同密度的未感染之細胞混合物以20 ul/孔添加至含有預稀釋化合物之盤中，亦以100 nL/樣本添加。接著將檢定盤培養4天，接著使用相同的CellTiter Glo試劑添加及發光讀數測量進行細胞活力測試。未經處理之細胞及以2 µM嘌呤黴素(Sigma, St. Louis, MO)處理之細胞分別作為100%及0%細胞活力對照。計算相對於0%及100%對照之各測試化合物濃度的細胞活力百分比，且CC 50值係藉由非線性迴歸判定為降低細胞活力50%的化合物濃度。 實例G. HEp-2 及MT4 CC 50
化合物之細胞毒性係在未受感染之細胞中使用細胞活力試劑以與之前針對其他細胞類型所述類似的方式來判定(Cihlar et al., Antimicrob Agents Chemother.2008,52(2):655-65)。將HEp-2（1.5 × 103個細胞/孔）及MT-4（2 × 103個細胞/孔）細胞接種於384孔盤中並與含有範圍在15 nM至100,000 nM的3倍連續稀釋化合物之適當培養基一起培養。將細胞在37℃下培養4至5天，在培養後，使細胞平衡至25℃，且藉由添加Cell-Titer Glo活力試劑判定細胞活力。將混合物培養10 min，且使用Envision盤讀取儀定量發光信號。未經處理之細胞及以2 µM嘌呤黴素(Sigma, St. Louis, MO)處理之細胞分別作為100%及0%細胞活力對照。計算相對於0%及100%對照之各測試化合物濃度的細胞活力百分比，且CC 50值係藉由非線性迴歸判定為降低細胞活力50%的化合物濃度。 實例H. RSV NHBE EC 50
正常人類支氣管上皮(NHBE)細胞係購自Lonza（Walkersville, MD，目錄號CC-2540），並在支氣管上皮細胞生長培養基(BEGM)（Lonza, Walkersville, MD，目錄號CC-3170）中培養。將細胞每週繼代1至2次以維持＜ 80%融合。在培養6次繼代後，丟棄NHBE細胞。
為了進行RSV A2抗病毒檢定，將NHBE細胞以每孔7,500個細胞之密度接種於96孔盤中於BEGM中，並使其在37℃下附著過夜。在附著後，移除100 µL的細胞培養基，且使用Hewlett-Packard D300數位分配器添加經3倍連續稀釋之化合物。將DMSO之最終濃度標準化至0.05%。在添加化合物後，藉由以1 × 10 4.5組織培養感染劑量/mL之力價(titer)添加100 µL的RSV A2（於BEGM中）來感染NHBE細胞，接著在37℃下培養4天。接著使NHBE細胞平衡至25℃，並藉由移除100 µL的培養基且添加100 µL的Cell-Titer Glo活力試劑來判定細胞活力。將混合物在25℃下培養10分鐘，並在Envision盤讀取儀上定量發光信號。 實例I. RSV NHBE FLuc EC 50
正常人類支氣管上皮(NHBE)細胞係購自Lonza（Walkersville, MD，目錄號CC-2540）並維持在支氣管上皮細胞生長培養基(BEGM)（Lonza, Walkersville, MD，目錄號CC-3170）中，培養基具有BulletKit中所提供之所有補充劑。將細胞每週繼代2至3次以維持次長滿密度並在第2至4代時用於實驗。
在P與M基因之間含有螢火蟲螢光素酶報導子的重組呼吸道融合病毒株A2 (RSV-Fluc, 6.3 x 10 6TCID 50/mL)係購自Viratree（Durham, NC，目錄號R145）。
將NHBE細胞（5 x 10 3/孔）接種於具有培養基之100 µL白色壁/透明底96孔盤(Corning)中，並在37℃及5% CO 2下培養24小時。隔天，使用HP D300e數位分配器將在DMSO中製備之化合物的三倍連續稀釋液添加至孔中，並針對所有孔中之DMSO最高濃度進行標準化。接著將細胞用RSV-Fluc感染，RSV-Fluc係用BEGM培養基以0.1之MOI稀釋，最終體積為200 µl培養基/孔。包括未感染及未治療之孔作為對照組以判定化合物對RSV-Fluc之功效。在37℃及5% CO 2下用化合物及病毒培養三天後，將100 µL的培養物上清液自各孔中移出，並置換為100 µL之ONE-Glo螢光素酶試劑（Promega, Madison, WI，目錄號E6110）。將盤藉由在21℃下搖動10分鐘來溫和混合，且使用Envision盤讀取儀(PerkinElmer)測量發光信號。將值標準化至未感染及受感染DMSO對照組（分別為0%及100%感染）。應用非線性迴歸分析判定發光信號降低50%的化合物濃度(EC 50)，其使用MICROSOFT ®EXCEL ®之XLfit4增益集。所有實驗皆以二重複執行，各兩次技術性重複。 實例J. RSV NHBE CC 50
將NHBE細胞以2x10 3個細胞/孔以最終體積為20 µL BEBM+補充劑(Lonza)接種於黑色384-TC-經處理之盤(Corning)中。第二天，使用Echo聲學分配器將0.1 µL的化合物添加至檢定盤中。將盤在37℃及5% CO 2下再培養3天。在處理的第3天，使用Biotek分配器將20 µL的CellTiter Glo (Promega)添加至各孔中。在10分鐘培養之後，使用EnVision (Perkin-Elmer)盤讀取儀以0.1秒積分時間測量發光信號。將值標準化至DMSO及經嘌呤黴素處理之對照（分別為0%及100%細胞死亡）。使用非線性迴歸分析將數據擬合，接著將CC 50值判定為使螢光素酶信號降低50%的濃度。經編譯之數據係基於至少兩個獨立實驗重複產生的，各濃度各自含有技術性四重複。 實例K. RSV HAE EC 50
HAE細胞在空氣-液體界面處培養，並具有暴露於空氣之頂側及與培養基接觸之底側。在實驗前，將HAE自其基於瓊脂之運輸包裝中取出，並使其在1 ml的HAE檢定培養基(AIR-100-MM, Mattek Corp)中適應37℃/5% CO 2過夜。HAE係藉由用400 µL PBS洗滌頂部表面兩次（採用直接吸液管方法或藉由透過含有PBS之槽中運行各轉孔）以移除黏液層，來製備HAE以供感染。將頂室中的PBS排出並輕輕拍打在吸收性材料上以盡可能多地移除PBS。在洗滌之後，將細胞轉移至含有4倍連續稀釋化合物之新鮮HAE維持培養基，遞送至細胞單層的基底側，並在頂部用100 µL的RSV A A2株1000x儲備液（ABI, Columbia, MD，目錄號10-124-000）於HAE檢定培養基中之1:600稀釋液在37℃下在5% CO 2感染3小時。移除病毒接種物，並使用先前所述之任一種方法用PBS洗滌細胞之頂部表面3次。接著，將細胞在37℃下在化合物存在下培養3天。在培養後，使用MagMAX-96病毒RNA單離套組（Applied Biosystems, Foster City, CA，目錄號AM1836）自HAE細胞萃取總RNA，且藉由即時PCR定量細胞內RSV RNA。將大約25 ng的純化RNA添加至PCR反應混合物中，其含有0.9 µM RSV N正向及RSV N反向引子、0.2 µM RSV N探針及1x Taqman RNA-to-Ct 1步套組（Applied Biosystems, Foster City, CA，目錄號4392938）。使用Taqman GAPDH對照引子組（Applied Biosystems, Foster City, CA，目錄號402869）將RNA水平標準化。RSV A2 HAE抗病毒檢定中所用的即時PCR引子及探針：RSV N正向CATCCAGCAAATACACCATCCA (SEQ ID NO:1)、RSV N反向TTCTGCACATCATAATTAGGAGTATCAA (SEQ ID NO:2)、RSV N探針FAM-CGGAGCACAGGAGAT-BHQ (SEQ ID NO:3)。 實例L. HRV16 HELA EC 50
在化合物給藥及感染前一天，將H1-HeLa細胞在含有10%熱去活化FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全DMEM培養基中培養，以3000個細胞/孔接種在96孔盤中。各化合物之抗病毒活性係以三重複測量。在感染之前立即使用HP300數位分配器(Hewlett Packard, Palo Alto, CA)，將化合物以連續3倍稀釋液直接添加至細胞培養物中。將盤轉移至BSL-2容器中，並將先前藉由滴定判定且在細胞培養基中製備之病毒儲備液之適當稀釋液添加至含有細胞及連續稀釋之化合物的測試盤中。各盤包括6孔感染未經處理之細胞及6孔未感染之細胞，其分別用作為0%及100%病毒抑制對照。在感染後，將測試盤在設定為33℃/5% CO 2之組織培養箱中培養96 h。在培養後，將H1-HeLa細胞自培養中取出並使其平衡至25℃。藉由移除100 µL的培養基並添加100 µL的Cell-Titer Glo活力試劑來判定細胞活力。將混合物在25℃下在振盪器上培養10分鐘，並在Envision螢光盤讀取儀上定量發光信號。計算相對於0%及100%抑制對照之各測試濃度的病毒感染抑制百分比，且各化合物之EC 50值係藉由4參數非線性迴歸判定為抑制細胞病變效應50%的化合物之有效濃度。 實例M. HRV1A HELA EC 50
在化合物給藥及感染前一天，將H1-HeLa細胞在含有10%熱去活化FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全RPMI 1640培養基中培養，以5000個細胞/孔接種在96孔盤中。各化合物之抗病毒活性係以三重複測量。在感染之前立即使用HP300數位分配器(Hewlett Packard, Palo Alto, CA)，將化合物以連續3倍稀釋液直接添加至細胞培養物中。將盤轉移至BSL-2容器中，並將100 µL之HRV1a病毒儲備液之1/4000稀釋液添加至含有細胞及連續稀釋化合物之各孔中。各盤包括6孔感染未經處理之細胞及6孔含有5 µM蘆平曲韋之細胞，其分別用作為0%及100%病毒抑制對照。在感染後，將測試盤在設定為37℃/5% CO 2之組織培養箱中培養96 h。在培養後，將H1-HeLa細胞自培養中取出並使其平衡至25℃。藉由移除100 µL的培養基並添加100 µL的Cell-Titer Glo活力試劑來判定細胞活力。將混合物在25℃下在振盪器上培養10分鐘，並在Envision螢光盤讀取儀上定量發光信號。計算相對於0%及100%抑制對照之各測試濃度的病毒感染抑制百分比，且各化合物之EC 50值係藉由4參數非線性迴歸判定為抑制細胞病變效應50%的化合物之有效濃度。 實例N. HRV14 HELA EC 50
在化合物給藥及感染前一天，將H1-HeLa細胞在含有10%熱去活化FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全RPMI 1640培養基中培養，以5000個細胞/孔接種在96孔盤中。各化合物之抗病毒活性係以三重複測量。在感染之前立即使用HP300數位分配器(Hewlett Packard, Palo Alto, CA)，將化合物以連續3倍稀釋液直接添加至細胞培養物中。將盤轉移至BSL-2容器中，並將100 µL之HRV14病毒儲備液之1/4000稀釋液添加至含有細胞及連續稀釋化合物之各孔中。各盤包括6孔感染未經處理之細胞及6孔含有5 µM蘆平曲韋之細胞，其分別用作為0%及100%病毒抑制對照。在感染後，將測試盤在設定為37℃/5% CO 2之組織培養箱中培養96 h。在培養後，將H1-HeLa細胞自培養中取出並使其平衡至25℃。藉由移除100 µL的培養基並添加100 µL的Cell-Titer Glo活力試劑來判定細胞活力。將混合物在25℃下在振盪器上培養10分鐘，並在Envision螢光盤讀取儀上定量發光信號。計算相對於0%及100%抑制對照之各測試濃度的病毒感染抑制百分比，且各化合物之EC 50值係藉由4參數非線性迴歸判定為抑制細胞病變效應50%的化合物之有效濃度。 實例O. HRVc15 及HRVc25 EC 50
首先，製備HRV複製子RNA。將5ug的DNA模板（HRVc15或HRVc25）在NEB緩衝液-3中用2 µL的MluI酶在37℃下線性化3小時，最終體積為25 µL。在培養後，在PCR純化管柱上純化線性化DNA，且使用下列條件執行下列體外轉錄：10 µL的RiboMAX Express T7 2x緩衝液、1至8 µL的線性DNA模板(1 µg)、0至7 µL無核酸酶水、2 µL酶混合物T7 Express。將20 µL之最終體積混合並在37℃下培養30分鐘。在培養後，添加1 µL的RQ1無RNase之DNase，且將混合物在37℃下培養15min。然後將所得RNA用MegaClear套組（Gibco Life Technologies目錄號11835-030）純化，並在95℃下用50 µL的洗提緩衝液洗提兩次。在轉染前一天，將在含有10%熱去活化FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全RPMI 1640培養基中培養之H1-HeLa細胞，以2E6個細胞/燒瓶之濃度接種於T-225燒瓶中，並在37℃/5% CO 2下培養過夜。在轉染當天，將細胞依照標準細胞培養規程胰蛋白酶化並用PBS洗滌兩次。洗滌後，將細胞以1E7個細胞/mL之濃度再懸浮於PBS中，並將懸浮液儲存於濕冰上。電穿孔係用於將複製子RNA引入H1-HeLa細胞中。將最終體積為10 µL之含有10 µg的複製子c15或1 µg的c25複製子RNA分別吸量至4 mm電穿孔比色管中。H1-HeLa細胞儲備液藉由輕輕旋轉混合並將先前製備之0.5 mL細胞儲備液轉移至含有複製子RNA之比色管中。將合併之溶液輕彈混合。在混合之後，使用下列設定立即對細胞進行電穿孔：900V、25uF、無限電阻、1脈衝。將比色管在冰上靜置10分鐘。在10分鐘培養之後，每個電穿孔添加19 mL含有10%熱去活化的FBS之環境溫度、無酚紅及無抗生素之RPMI 1640。將150 µL（4E4個細胞）之電穿孔細胞懸浮液接種至96孔透明底部之白細胞培養盤每孔中，並在25℃下培養30分鐘。使用HP300數位分配器(Hewlett Packard, Palo Alto, CA)，將化合物以連續3倍稀釋液直接添加至細胞培養物中並以三重複進行測試。在添加化合物之後，將盤在33℃下培養48小時。然後藉由Renill-Glo螢光素酶檢定系統測量複製子活性。在信號定量之前，將盤自培養箱中移出，並從各孔中移出50uL之後使其平衡至25℃。在製造商之規程後，製備Renilla-Glo受質於緩衝液中之1:100稀釋液，且將100uL的Renill-Glo螢光素酶混合物添加至各孔中。然後在25℃下在輕緩攪拌下將盤培養20分鐘，並使用EnVision螢光素酶定量讀取器用0.1秒偵測設定判定螢光素酶信號。計算相對於實驗中包括的0%及100%抑制對照之各測試濃度的複製子抑制百分比，且各化合物之EC 50值係藉由4參數非線性迴歸判定為抑制螢光素酶信號50%的化合物之有效濃度。 實例P. DENV-2 Huh-7 Rep EC 50
在384孔盤中（Greiner，目錄號781091），將化合物係以每孔200 nl以8種化合物（4重複）或40種化合物劑量反應格式（3重複）聲學轉移。對於所有測試盤，將巴拉匹韋(Balapiravir)、GS-5734、及NITD008作為陽性抑制對照連同0%抑制、僅含DMSO之陰性對照孔一起包括在內。在添加化合物之後，按照標準細胞培養程序採集含有DENV2複製子建構體之Huh-7細胞，並將其在由不含遺傳黴素之cDMEM構成之細胞培養基中調整至濃度為1.25E5個細胞/mL。接著將40 µL細胞儲備液添加至各孔中，達5,000個細胞/孔之最終細胞密度。細胞及化合物混合物在37℃/5% CO 2下培養48小時。在採集細胞前，EnduRen活細胞受質（Promega，目錄號E6481）係藉由將3.4 mg懸浮至100uL的DMSO中製備，以產生60 mM儲備溶液。接著，將儲備溶液1:200稀釋於預溫熱cDMEM中，且將10uL的此稀釋溶液添加至384孔盤之各孔中。接著，將盤以500 rpm短暫離心並置於盤振盪器上2 min。在混合後，將盤在7℃/5% CO 2下培養1.5小時，之後在Envision光度計上測量發光。計算相對於0%及100%抑制對照之各測試濃度的複製子信號抑制百分比，且各化合物之EC 50值係藉由4參數非線性迴歸判定為抑制複製子信號50%的化合物之有效濃度。 實例Q. HCV Rep 1B 及2A EC 50
在384孔盤中，將化合物以十個步驟之1:3稀釋液中連續稀釋。所有連續稀釋係在相同384孔盤中對每種化合物執行四次重複。添加100 µM之HCV蛋白酶抑制劑ITMN-191作為100%抑制HCV複製之對照，同時添加10 mM的嘌呤黴素作為100%細胞毒性之對照。向黑色聚苯乙烯384孔盤(Greiner Bio-one, Monroe, NC)之各孔中，用Biotek µFlow工作站添加含有2000個懸浮HCV複製子細胞之90 µL細胞培養基（不含遺傳黴素）。為了將化合物轉移至細胞培養盤中，將來自化合物連續稀釋盤之0.4 µL化合物溶液轉移至Biomek FX工作站上之細胞培養盤中。最終檢定孔中之DMSO濃度係0.44%。將盤在37℃及5% CO 2及85%濕度下培養3天。HCV複製子檢定係一種多重檢定，能夠從同一孔評估細胞毒性及抗複製子活性兩者。首先執行CC 50檢定。抽吸384孔細胞培養盤中之培養基，並使用Biotek ELX405盤洗滌機將孔各自用100 µL的PBS洗滌四次。用Biotek µFlow工作站將體積為50 µL含有400 nM鈣黃綠素之AM (Anaspec, Fremont, CA)於1 × PBS中之溶液添加至盤之各孔中。將盤在室溫下培養30分鐘，之後用Perkin-Elmer Envision盤讀取儀測量螢光信號（激發490 nm，發射520 nm）。EC 50檢定係在與CC 50檢定相同的孔中進行。將384孔細胞培養盤中之鈣黃綠素-PBS溶液用Biotek ELX405盤洗滌機抽吸。用Biotek µFlow工作站將體積為20 µL之Dual-Glo螢光素酶緩衝液(Promega, Madison, WI)添加至盤之各孔中。將盤在室溫下培養10分鐘。用Biotek µFlow工作站將體積為20 µL含有1:100之Dual-Glo Stop & Glo受質(Promega, Madison, WI)與Dual-Glo Stop & Glo緩衝液(Promega, Madison, WI)之混合物之溶液添加至盤之各孔中。接著將盤在室溫下培養10分鐘，之後用Perkin-Elmer Envision盤讀取儀測量發光信號。 實例R. HEp-2 RSV-Luc5 384 孔檢定 (EC50_RSVFLUC_Hep2-384)
HEp-2細胞系係購自 ATCC（ Manassas, VA目錄號 CCL-23），並維持在補充有 10%胎牛血清 (FBS)（ Hyclone, Logan, UT，目錄號 SH30071-03）及 1X青黴素-鏈黴素-L-麩醯胺酸（ Corning, New York, NY，目錄號 30-009-CI）之達爾伯克氏最低必需培養基 (Dulbecco’s Minimum Essential Medium, DMEM)（ Corning, New York, NY，目錄號 15-018CM）中。將細胞每週繼代 2次以維持次長滿 (sub-confluent)密度並在第 5至 20代時用於實驗。具有螢光素酶之呼吸道融合病毒重組體 (RSV-Luc5)直接沉澱病毒 (＞ 1 x107 TCID50/ml)係購自 Microbiologics (Saint Cloud, MN)。病毒複製係以下列方式在 HEp-2細胞中判定。
化合物在384孔聚丙烯盤（ Greiner, Monroe, NC，目錄號784201）中製備，其中每盤有8種化合物，且以10個連續稀釋濃度(1:3)分組重複4次。
將 HEp-2細胞懸浮在 DMEM（補充有 10% FBS及 1X青黴素 -鏈黴素 -L-麩醯胺酸）中，並使用 Biotek MultiFlo分配器將每孔 60uL的 4,000個細胞接種至 384孔盤（ Greiner, Monroe, NC，目錄號 781080）中。在 37 ⁰C及 5% CO 2 下培養過夜之後，使用 Biomek FX吸液管工作站將 0.4uL的化合物之三倍連續稀釋液添加至各孔中。將 RSV-Luc5病毒稀釋於 DMEM中（補充有 10% FBS及 1X青黴素 -鏈黴素 -L-麩醯胺酸）， MOI=0.5。使用 Biotek MultiFlo分配器將病毒懸浮液以每孔20uL添加至各384孔化合物盤中。將檢定盤在 37 ℃及 5% CO 2 下培養 3天。在培養結束時，製備 One-Glo試劑（ Promega, Madison, WI，目錄號 E6120）。將檢定盤及試劑平衡至室溫持續30分鐘。從檢定盤中移除每孔50uL的培養基並且藉由Biomek FX將每孔40 uL的One-Glo試劑添加至各盤中。將盤在室溫下靜置 15分鐘。然後藉由使用 Envision盤讀取儀測量發光信號來評估病毒複製。將瑞德西韋用作陽性對照，且將 DMSO用作陰性對照。將值標準化至陽性及陰性對照（分別為 0%及 100%複製），且使用 Gilead劑量反應工具之非線性迴歸分析將數據擬合。接著各化合物之 EC 50 值係判定為使病毒複製減少 50%的濃度。 實例S. HEp-2 及MT4 CC 50
化合物之細胞毒性係在未感染之細胞中判定，使用細胞活力試劑以與之前描述的其他細胞類型類似的方式進行(Cihlar et al., Antimicrob Agents Chemother.2008,52(2):655-65)。將HEp-2（1.5 × 103個細胞/孔）及MT-4（2 × 103個細胞/孔）細胞接種於384孔盤中並與含有範圍在15 nM至100,000 nM的3倍連續稀釋化合物之適當培養基一起培養。將細胞在37℃下培養4至5天，在培養後，使細胞平衡至25℃，且藉由添加Cell-Titer Glo活力試劑判定細胞活力。將混合物培養10 min，且使用Envision盤讀取儀定量發光信號。未經處理之細胞及以2 µM嘌呤黴素(Sigma, St. Louis, MO)處理之細胞分別作為100%及0%細胞活力對照。計算相對於0%及100%對照之各測試化合物濃度的細胞活力百分比，且CC 50值係藉由非線性迴歸判定為降低細胞活力50%的化合物濃度。 實例T. H1-Hela 抗HRV 檢定
H1-HeLa細胞及人類鼻病毒16 (HRV-16)皆購自ATCC。
H1-HeLa維持培養基係由補充有10% FBS及1% Penn/Strep之DMEM構成。病毒感染介質(virus infection medium, VIM)係由DMEM +2% FBS構成。
將H1-HeLa細胞接種至96孔黑色/透明底盤中，5,000個細胞/孔，100 µL/孔於H1-HeLa維持培養基中，並在37℃及5% CO 2下培養24小時。隔天，抽吸出培養基並用100 µL VIM替換，接著使用HP D300e數位分配器將在DMSO中製備之化合物的三倍連續稀釋液添加至孔中，並針對所有孔中之DMSO最高濃度進行標準化。將HRV-16用VIM稀釋至MOI = 0.05，並以100 µL/孔添加至細胞中。在各盤上，包括未感染及感染之DMSO對照以判定針對HRV之化合物功效。當在37℃及5% CO 2下培養後，在陽性對照中觀察到廣泛的細胞病變效應（通常係感染後3至6天）時，將培養盤冷卻至室溫。移除培養基並將200 µL的CellTiter Glo（於PBS中之1:2稀釋液）添加至各孔中。將盤在室溫下在振盪器上攪拌盤10分鐘，並使用EnVision盤讀取儀(PerkinElmer)測量發光信號。將值標準化至未感染及受感染DMSO對照組（分別為0%及100%感染）。應用非線性迴歸分析判定發光信號降低50%的化合物濃度(EC 50)，其使用MICROSOFT ®EXCEL ®之XLfit4增益集。所有實驗皆以二重複執行，並進行兩次技術性重複。 實例U. NHBE RSV-Luc5 384 孔檢定 (EC50_RSVFLUC_NHBE-384)
正常人類支氣管上皮 (NHBE)細胞係購自 Lonza（Walkersville, MD，目錄號CC2540），並維持在BEGM支氣管上皮細胞生長培養基BulletKit (Lonza CC-3170)中。
將細胞解凍，擴增，且在 2代時用於實驗。具有螢光素酶之呼吸道融合病毒重組體 (RSV-Luc5)（ ＞ 1 x10 7 個感染單位 /ml (IU/ml)，藉由 TCID 50 判定）係購自 Microbiologics (Saint Cloud, MN)。病毒複製係以下列方式在 NHBE細胞中判定。
化合物係在384孔聚丙烯盤（ Greiner, Monroe, NC，目錄號784201）中於100% DMSO中製備，其中每盤有8種化合物，且以10個連續稀釋濃度(1:3)分組重複4次。將連續稀釋之化合物轉移至低死體積(low dead volume) Echo盤（Labcyte, Sunnyvale, CA，目錄號LP-0200）中。
將測試化合物以每孔200nL點樣至384孔檢定盤（Greiner, Monroe, NC，目錄號781091）。採集NHBE細胞並懸浮於BEGM支氣管上皮細胞生長培養基BulletKit中，並以30 µL的每孔5,000個細胞接種至預點樣檢定盤。將RSV-Luc5病毒以每mL 500,000個感染單位(IU)稀釋於BEGM支氣管上皮細胞生長培養基BulletKit中，且將每孔10 µL添加至含有細胞及化合物之檢定盤中，MOI為1。將檢定盤在37℃及5% CO 2下培養3天。在培養結束時，製備One-Glo試劑（Promega, Madison, WI，目錄號E6120）。將檢定盤及One-Glo試劑平衡至室溫至少15分鐘。每孔添加40 µL的One-Glo試劑，且將盤在室溫下培養15分鐘，之後在EnVision多模式盤讀取儀(Perkin Elmer, Waltham, MA)上讀取發光信號。將瑞德西韋用作陽性對照，且將DMSO用作陰性對照。將值標準化至陽性及陰性對照（分別為0%及100%複製），且使用Gilead劑量反應工具之非線性迴歸分析將數據擬合。各化合物之EC 50值係定義為使病毒複製減少50%的濃度。 實例V ： HEp-2 RSV-Luc5 384 孔檢定 (EC50_RSVFLUC_Hep2-384_v2)
HEp-2細胞系係購自 ATCC（ Manassas, VA目錄號 CCL-23），並維持在補充有 10%胎牛血清 (FBS)（ Hyclone, Logan, UT，目錄號 SH30071-03）及 1X青黴素-鏈黴素-L-麩醯胺酸（ Corning, New York, NY，目錄號 30-009-CI）之達爾伯克氏最低必需培養基 (Dulbecco’s Minimum Essential Medium, DMEM)（ Corning, New York, NY，目錄號 15-018CM）中。將細胞每週繼代 2次以維持次長滿 (sub-confluent)密度並在第 5至 20代時用於實驗。具有螢光素酶之呼吸道融合病毒重組體 (RSV-Luc5) (＞ 1 x107 TCID50/ml)係購自 Microbiologics (Saint Cloud, MN)。病毒複製係以下列方式在 HEp-2細胞中判定。
化合物係在384孔聚丙烯盤（ Greiner, Monroe, NC，目錄號784201）中於100% DMSO中製備，其中每盤有8種化合物，且以10個連續稀釋濃度(1:3)分組重複4次。將連續稀釋之化合物轉移至低死體積(low dead volume) Echo盤（Labcyte, Sunnyvale, CA，目錄號LP-0200）中。
將測試化合物以每孔 200nL點樣至 384孔檢定盤（ Greiner, Monroe, NC，目錄號 781091）。採集 HEp-2細胞並懸浮於 DMEM（補充有 10% FBS及 1X青黴素 -鏈黴素 -L-麩醯胺酸）中，並以 30 µL每孔 4,000個細胞接種至預點樣檢定盤。將 RSV-Luc5病毒以每 mL 200,000個感染單位 (IU)稀釋於 DMEM（補充有 10% FBS及 1X青黴素 -鏈黴素 -L-麩醯胺酸）中，並將每孔 10 µL添加至含有細胞及化合物之檢定盤中， MOI=0.5。將檢定盤在 37 ℃及 5% CO 2 下培養 3天。在培養結束時，製備 One-Glo試劑（ Promega, Madison, WI，目錄號 E6120）。將檢定盤及One-Glo試劑平衡至室溫至少15分鐘。每孔添加40 µL的One-Glo試劑，並將盤在室溫下培養 15分鐘，之後在 EnVision多模式盤讀取儀 (Perkin Elmer, Waltham, MA)上讀取發光信號。將瑞德西韋用作陽性對照，且將 DMSO用作陰性對照。將值標準化至陽性及陰性對照（分別為 0%及 100%複製），且使用 Gilead劑量反應工具之非線性迴歸分析將數據擬合。接著各化合物之 EC 50 值係判定為使病毒複製減少 50%的濃度。 實例W ：登革熱病毒-2 Huh-7 EC 50
將Huh7肝母細胞瘤細胞接種至96孔盤上並在37℃及5% CO 2下培養過夜。將盤以在過夜培養之後在各孔中將產出＞70%長滿(confluent)單層的細胞濃度接種。將八個化合物之3倍連續稀釋液稀釋於測試培養基（補充有2% FBS及50 µg/mL見大黴素(gentamicin)之MEM）中。最高測試化合物濃度係50 µg/mL。將各濃度100 µL添加至96孔盤上之5個測試孔中。在此等5個測試孔中，將各稀釋液之3個孔用稀釋於測試培養基中之第2型登革熱病毒感染（每孔大約2000 CCID 50，MOI為0.07）。將無病毒之測試培養基(100 µL)添加至2個孔中以代表未感染之細胞毒性對照。六個額外經感染孔接受單獨100 µL培養基作為未經處理之病毒對照。此外，將單獨100 µL的培養基添加至6個未感染孔中以作為未感染且未經處理之對照。將培養物在37℃+ 5% CO 2下培養，直到觀察到＞80% CPE。在顯微鏡下觀察到細胞病變效應(cytopathic effect, CPE)之後，添加0.011%中性紅色染料達大約2小時。移除中性紅色染料，且將孔用PBS潤洗一次以移除殘餘的未滲入染料。添加50:50 Sorensen檸檬酸鹽緩衝液/乙醇溶液，並在室溫下在攪動下培養＞30分鐘，接著使用分光光度計在540 nm下測量中性紅色染料。將所得光學密度測量值轉換成標準化至病毒對照的經感染且未經處理之細胞對照的信號百分比。EC 50及CC 50值係藉由線性迴歸分析判定。 實例X ：hMPV H1-Hela EC 50
人類間質肺炎病毒(hMPV)抗病毒檢定係在經感染H1-HeLa細胞中執行之抗核蛋白ELISA。將H1-HeLa細胞維持在具有高葡萄糖之達爾伯克改良伊格爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)（Gibco，目錄號：11995073）中，其補充有10% FBS（HyClone，目錄號：SH303396.03）、100個單位/mL青黴素、及100 µg/mL鏈黴素（Gibco，目錄號：15140122).感染前一天，將H1-HeLa細胞以0.1 mL/孔、以1.5x10 5個細胞/mL接種至補充有2% FBS之Opti-MEM（Gibco，目錄號：31985070）中之96孔板（Corning，目錄號：3903）中，且在37℃下在含有5% (v/v) CO 2之100%潮濕氣氛中孵育整夜。在第二天，將CAN97-83-GFP1 (A2a) hMPV稀釋於含有200 µg/mL CaCl 2及2 µg/mL的經TPCK處理之胰蛋白酶之Opti-MEM培養基中，並以0.1 mL/孔分配至96孔盤中以達到MOI =0.1。使用HP D300e數位分配器以200 µL/孔之最終體積將測試化合物分配至各孔中。在將盤在室溫下以700 g離心一小時之後，將其維持於在37◦C及5% (v/v) CO 2下之加濕室中96小時。在培養之後，移除培養基，且將盤在室溫下用0.1 mL/孔的1%甲醛固定15 min。移除固定劑，將盤風乾30至60分鐘，接著在室溫下用0.1 mL/孔的於PBS中之0.5% Triton X-100透化五分鐘。在透化後，將板用0.1 mL/孔阻斷緩衝液洗滌一次，其由PBS中之10% FBS（HyClone，目錄號：SH303396.03）、5%乾乳（AmericanBio，目錄號：AB10109-01000）及0.1% Tween 20（EMD Millipore，目錄號655204）組成。之後將盤用0.1 mL/孔的阻斷緩衝液在37℃下阻斷60分鐘。移除阻斷緩衝液，且添加0.05 mL/孔的以1:500稀釋於阻斷緩衝液中之人類間質肺炎病毒核殼蛋白抗體（Sigma，目錄號MAB80121），並在37◦C下培養兩小時。接著，將盤用0.2 mL/孔的0.1% Tween 20/PBS洗滌五次，接著添加0.05 mL/孔的辣根過氧化酶(HRP)接合山羊抗小鼠IgG抗體（Fisher Scientific，目錄號501077607）（以1:2000稀釋於阻斷緩衝液中）。在37◦C下培養一小時之後，將盤用0.2 mL/孔的於PBS中之0.1% tween 20洗滌五次。藉由添加0.1 mL/孔的TMB試劑（Thermo Scientific，目錄號：ENN301）及在室溫下孵育直至陽性對照顯而易見，從而產生HRP信號。在此時，將反應藉由添加0.1 mL/孔的TMB停止溶液（SeraCare，目錄號：5150-0021）停止。吸光度係用EnVision盤讀取儀在450 nm下測量。相對吸光度係藉由將化合物治療組之吸光度標準化至DMSO治療組之吸光度（設為100%）來計算。EC 50值係使用非線性四參數可變斜率迴歸模型計算。 實例Y ：hMPV H1-Hela CC 50
H1-HeLa細胞活力係使用CellTiter-Glo ®發光細胞活力檢定套組（Promega，目錄號G7573）根據製造商之規程測量。將H1-HeLa細胞維持在具有高葡萄糖之達爾伯克改良伊格爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)（Gibco，目錄號：11995073）中，其補充有10% FBS（HyClone，目錄號：SH303396.03）、100個單位/mL青黴素、及100 µg/mL鏈黴素（Gibco，目錄號：15140122）。在化合物處理前一天，將H1-HeLa細胞以每孔1.5x10 5個細胞接種至96孔盤（Corning，目錄號3904）中於補充有2% FBS之Opti-MEM（Gibco，目錄號：31985070）中，並在37◦C下於含有5% (v/v) CO 2之100%潮濕氣氛中培養。在過夜培養之後，將細胞用化合物之三倍連續稀釋液處理。在處理後96小時，將CellTiter-Glo試劑添加至各孔中，且藉由EnVision盤讀取儀記錄發光信號。相對細胞活力係藉由將化合物處理組之吸光度標準化至DMSO處理組（設為100%活力）及10 µM嘌呤黴素處理組（設為0%活力）之吸光度來計算。CC 50（降低細胞活力50%的化合物濃度）係使用非線性迴歸模型（四參數）計算。 實例 Z： H1-HeLa HRV-CTG EC 50
將 H1-Hela細胞系（ ATCC, Manassas, VA，目錄號 CRL-1958）維持於補充有 10%胎牛血清 (FBS)（ Hyclone, Logan, UT，目錄號SH30071-03）及 1X青黴素-鏈黴素-L-麩醯胺酸（ Corning, New York, NY，目錄號30-009-CI）之達爾伯克氏最低必需培養基 (Dulbecco’s Minimum Essential Medium, DMEM)（ Corning, New York, NY，目錄號 15-018CM）中。將細胞每週繼代 2次以維持次長滿 (sub-confluent)密度並在第 5至 30代時用於實驗。透過 ATCC獲得人類鼻病毒 1B (HRV1B)（ ATCC, Manassas, VA，目錄號 VR-1645）、人類鼻病毒 14 (HRV14)（ ATCC, Manassas, VA，目錄號 VR-284）、及人類鼻病毒 16 (HRV16)（ ATCC, Manassas, VA，目錄號 BR-283）。如下所述，藉由判定 H1-HeLa細胞活力來監測病毒感染。
測試分子係在384孔聚丙烯盤（ Greiner, Monroe, NC，目錄號784201）中於100% DMSO中製備，其中每盤有8種化合物，且以10個連續稀釋濃度(1:3)分組重複4次。將連續稀釋之化合物轉移至低死體積(low dead volume) Echo盤（Labcyte, Sunnyvale, CA，目錄號LP-0200）中。
將測試化合物以每孔 200nL使用 Echo聲學分配器 (Labcyte, Sunnyvale, CA)點樣至 384孔檢定盤（ Greiner, Monroe, NC，目錄號 781091）。採集 H1-HeLa細胞並懸浮於 DMEM（補充有 2% FBS及 1X青黴素 -鏈黴素 -L-麩醯胺酸）中，並以 30 µL每孔 5,000個細胞接種至預點樣檢定盤。將 HRV1B、 HRV14、及 HRV16分別以每 ml 9710萬個感染單位 (IU)、每 mL 1.51億個 IU、及每 ml 2.21億個 IU稀釋於 DMEM（補充有 2% FBS及 1X青黴素 -鏈黴素 -L-麩醯胺酸）中。將每孔 10 µL的病毒添加至含有細胞及化合物之檢定盤中， MOI分別為 0.5、 1.0、及 0.25。將檢定盤在 37 ℃及 5% CO 2 下培養 4天。在培養結束時，製備 Celltiter-Glo試劑（ Promega, Madison, WI，目錄號G7573）。將檢定盤及 Celltiter-Glo試劑平衡至室溫至少 15分鐘。每孔添加 40 µL的 Celltiter-Glo試劑，且將盤在室溫下培養 15分鐘，之後在 EnVision多模式盤讀取儀 (Perkin Elmer, Waltham, MA)上讀取發光信號。將蘆平曲韋用作陽性對照，且將 DMSO用作陰性對照。將值標準化至陽性及陰性對照（分別為 0%及 100%複製），且使用 Gilead劑量反應工具之非線性迴歸分析將數據擬合。各化合物之 EC 50 值係定義為使病毒複製減少 50%的濃度。 實例B1 ：RSV A2 抗病毒活性之RSV 細胞組學測定（EC 50-RSV-Hep2-96- 細胞組學）
將8 x 10 3個Hep2細胞接種至100 µL培養基（補充有GlutaMAX、10% FBS及Pen/Strep之DMEM）中的96孔板中，並以50 x g短暫旋轉1分鐘以附著細胞。在37℃+5% CO 2下過夜孵育，使細胞進一步附著。第二天，吸出培養基並且添加含2% FBS的100 µL新鮮DMEM培養基。接著，使用Tecan D300e分配器將感興趣化合物的三倍稀釋系列添加至板中，並且將板歸一化至具有最高DMSO體積的孔中。接下來藉由添加含有RSV株A2的100 µL培養基（MOI=0.05）感染細胞，並且將板在37℃+5% CO 2下孵育3天。孵育後，移除培養基，並且將細胞用250 µL PBS洗滌一次，並用250 µL冰冷的100%甲醇在4C固定10分鐘。然後移除甲醇，並且將板風乾5分鐘，並且接著用250 µL PBS洗滌一次以移除任何殘留的甲醇。接著將孔用60 µL/孔的BlockAid（b 10710，Thermo-Fisher）在RT下在搖杆上封閉1小時，此時小心地吸出封閉緩衝液。接著在SuperBlock（37515，Thermo Fisher）中以1:2000稀釋抗RSV F蛋白的一級抗體(MAB 858-1)，並且將50 µL一級抗體溶液添加至每個孔中。將板在室溫下在溫和攪拌情況下孵育1小時，然後用250 µL PBS-Tween洗滌3次。接著將山羊抗小鼠AlexaFluor 647接合的二級抗體(Sigma, A21235)以1:2000稀釋，並且將Hoescht 33342 (H3570)以1:1000稀釋於SuperBlock中，並且在37℃下將50 µL添加至孔中持續1小時。孵育後吸出抗體溶液，並且接著將孔用250 µL PBS-Tween洗滌3次。為了防止細胞乾燥，向每個孔中添加100 µL PBS，並且用黑板密封件來密封板。使用Cellomics CellInsight CX7機器測量647 nm波長的螢光。化合物活性被判定為在減去未感染對照後，與DMSO治療的RSV感染的孔對照相比的陽性細胞%（或平均強度）的百分比。接著在GraphPad Prism中使用非線性回歸分析來計算EC 50值。 E. 生物數據
下表3提供與本文所揭示之化合物相關的數據。 表3. 本文所揭示之化合物之生物數據
化合物# EC50 RSV FLUC NHBE 384 V2 （依據實例U）nM EC50 H1-HeLa_HRV14_ HRV-CTG 384孔檢定 （依據實例Z）nM EC50 H1-HeLa_HRV16_ HRV-CTG 384孔檢定 （依據實例Z）nM EC50 H1-HeLa_HRV1B_ HRV-CTG 384孔檢定 （依據實例Z）nM EC50-RSV-HEp2-96-細胞組學(nM) 實例 B1
1 26 34 34 12 76
2 30 87 91 62 241
3 44 - - - 421
4 107 - - - 170
5 4457 - - - 3418
6 86 - - - 293
7 714 - - - 1405
8 134 - - - 237
9 265 - - - 215
10 117 - - - 127
11 4594 - - - 12587
本揭露提供對各種實施例及技術的參考。然而，應理解的是，在保持在本揭露之精神及範疇內的同時，可進行許多變化及修改。本說明書係在理解其被視為所請標的之示例下做出的，且不意欲將隨附申請專利範圍限制於所說明之具體實施例。
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Claims (75)

  1. 一種式I之化合物： 式I 或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1係H、C 3-10環烷基、C 6-10芳基、或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基；R 1之環烷基、芳基、或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A及-NR 13AR 14A之基團取代； 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、C 3-6環烷基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基； 各R 13A獨立地係H或可選地經NR 13A1R 14A1取代之C 1-C 3烷基；R 13A1係H或C 1-3烷基；R 14A1係H或C 1-3烷基；及 各R 14A獨立地係H或C 1-3烷基； R 2係H或C 1-3烷基； R 3係C 1-3鹵烷基； Q係C 10-21伸烷基或C 10-21伸烯基；Q之伸烷基或伸烯基可選地經1至6個Q 1A取代；各Q 1A獨立地係鹵基； L係鍵、-O-、或-O(CR 12AR 12B) n-； 各R 12A獨立地係H或C 1-6烷基； 各R 12B獨立地係H或C 1-6烷基；及 n係1或2； X係鍵或C 1-3伸烷基； T係鍵或-O-；及 Z係C 1-6伸烷基； 前提是當X係鍵且T係-O-時，則L係鍵。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該化合物具有式Ia (Ia)。
  3. 如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該化合物具有式Ib (Ib)。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 2係H。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Z係-(CH 2) r-，r係1至6。
  6. 如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Z係-(CH 2) r-，r係1至3。
  7. 如請求項1至6中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Z係-(CH 2) 2-。
  8. 如請求項1至6中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Z係-(CH 2) 2-。
  9. 如請求項1至6中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Z係-CH 2-。
  10. 如請求項1至6及9中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該化合物具有式Ic： (Ic)。
  11. 如請求項1至10中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 L係-O(CR 12AR 12B) n-； 各R 12A獨立地係H或C 1-6烷基； 各R 12B獨立地係H或C 1-6烷基；及 n係1或2。
  12. 如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L係-O(CR 12AR 12B)-；R 12A係H或C 1-6烷基；且R 12B係H或C 1-6烷基。
  13. 如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L係-O(CR 12AR 12B)-；R 12A係H或C 1-3烷基；且R 12B係H或C 1-3烷基。
  14. 如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L係-OCH 2-。
  15. 如請求項1至10中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中L係鍵。
  16. 如請求項1至15中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係C 6-10芳基或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基；R 1之芳基或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A及-NR 13AR 14A之基團取代； 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基； 各R 13A獨立地係H或可選地經NR 13A1R 14A1取代之C 1-3烷基；R 13A1係H或C 1-3烷基；R 14A1係H或C 1-3烷基；及 各R 14A獨立地係H或C 1-3烷基。
  17. 如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係C 6-10芳基或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基；R 1之芳基或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
  18. 如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係C 6-10芳基或含有一或兩個N之5至10員雜芳基；R 1之芳基或雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
  19. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係苯基或萘基；R 1之苯基或萘基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
  20. 如請求項1至19中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係苯基，其可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
  21. 如請求項1至20中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係苯基，其可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3鹵烷氧基、或含有一、二、或三個選自N及O之雜原子的5至10員雜芳基。
  22. 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係苯基，其可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基、C 1-3烷氧基、或含有一、二、或三個N之5至10員雜芳基。
  23. 如請求項1至22中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係苯基，其可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、C 1-3烷氧基、或含有一、二、或三個N之5至6員雜芳基。
  24. 如請求項1至23中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係苯基，其可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、C 1-3烷氧基、或-CN。
  25. 如請求項1至24中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係苯基，其可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係F或-CN。
  26. 如請求項1至25中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1係經F及-CN取代之苯基。
  27. 如請求項1至26中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1係 。
  28. 如請求項1至24中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1係經F及-OCH 3取代之苯基。
  29. 如請求項1至15中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1係H。
  30. 如請求項1至26中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1-L-係 。
  31. 如請求項1至10中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1-L-係H。
  32. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R 1係含有一或兩個N之5至10員雜芳基；R 1之雜芳基可選地經一、二、或三個獨立地選自R 1A之基團取代；及 各R 1A獨立地係鹵基、-CN、或C 1-3烷氧基。
  33. 如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1係喹啉基，其可選地經一或兩個獨立地選自R 1A之基團取代；且各R 1A獨立地係鹵基、-CN、或C 1-3烷氧基。
  34. 如請求項1至6、9、及10中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該化合物具有式Id： (Id)。
  35. 如請求項1至34中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係鍵。
  36. 如請求項1至35中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係C 1-3伸烷基。
  37. 如請求項1至34及36中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係-CH 2-。
  38. 如請求項1至34及36中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係-C 2H 4-。
  39. 如請求項1至38中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中T係鍵。
  40. 如請求項1至38中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中T係-O-。
  41. 如請求項1至33中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該化合物具有式Ie： (Ie)。
  42. 如請求項1至41中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係C 10-21伸烷基，其可選地經1至6個Q 1A取代；各Q 1A獨立地係鹵基。
  43. 如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係C 10-21伸烷基，可選地Q係–(CH 2) m-，m係10至21。
  44. 如請求項1至43中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係C 13-21伸烷基，可選地Q係–(CH 2) m-，m係13至21。
  45. 如請求項1至44中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係C 15-20伸烷基，可選地Q係–(CH 2) m-，m係15至20。
  46. 如請求項1至45中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係-C 16H 32-，可選地Q係–(CH 2) 16-。
  47. 如請求項1至45中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係-C 17H 34-，可選地Q係–(CH 2) 17-。
  48. 如請求項1至45中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係-C 18H 36-，可選地Q係–(CH 2) 18-。
  49. 如請求項1至45中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係-C 19H 38-，可選地Q係–(CH 2) 19-。
  50. 如請求項1至45中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Q係-C 20H 40-，可選地Q係–(CH 2) 20-。
  51. 如請求項1至50中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 3係C 1-3氟烷基。
  52. 如請求項1至51中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 3係-CF 3。
  53. 如請求項1至51中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 3係– CF 2CF 3。
  54. 如請求項1至51中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R 3係-CHF 2。
  55. 一種如表1中所示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
  56. 一種醫藥組成物，其包含醫藥有效量的如請求項1至55中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
  57. 如請求項56之醫藥組成物，其中該醫藥組成物係用於口服投予。
  58. 一種治療或預防有需要之對象之病毒感染的方法，其中該方法包含向該對象投予治療有效量的如請求項1至55中任一項之化合物或治療有效量的如請求項56之醫藥組成物。
  59. 如請求項58之方法，其中該化合物或該醫藥組成物係經由口服、靜脈內、皮下、或吸入投予而投予至該對象。
  60. 如請求項58或59之方法，其中該化合物或該醫藥組成物係經由口服投予而投予至該對象。
  61. 如請求項58至60中任一項之方法，其中該方法包含向該人類投予至少一種額外治療劑或疾病預防劑。
  62. 如請求項61之方法，其中該至少一種額外治療劑包含A型流感治療劑、B型流感治療劑、冠狀病毒治療劑、或COVID-19治療劑。
  63. 如請求項58至62中任一項之方法，其中該病毒感染係副黏液病毒科( Paramyxoviridae)、肺病毒科( Pneumoviridae)、小核糖核酸病毒科( Picornaviridae)、黃病毒科( Flaviviridae)、絲狀病毒科( Filoviridae)、或正黏液病毒( Orthomyxovirus)病毒感染。
  64. 如請求項58至63中任一項之方法，其中該病毒感染係肺病毒科病毒感染。
  65. 如請求項58至64中任一項之方法，其中該病毒感染係人類間質肺炎病毒(hMPV)。
  66. 如請求項58至64中任一項之方法，其中該病毒感染係呼吸道融合病毒感染。
  67. 如請求項58至63中任一項之方法，其中該病毒感染係小核糖核酸病毒科。
  68. 如請求項58至63及67中任一項之方法，其中該病毒感染係人類鼻病毒(HRV)。
  69. 如請求項58至63及67中任一項之方法，其中該病毒感染係腸病毒。
  70. 一種如請求項1至55中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽用於製造用於治療或預防有需要之人類之病毒感染的藥劑之用途。
  71. 如請求項70之用途，其中該藥劑係與至少一種額外治療劑一起使用。
  72. 如請求項71之用途，其中該至少一種額外治療劑包含A型流感治療劑。
  73. 如請求項71之用途，其中該至少一種額外治療劑包含B型流感治療劑。
  74. 如請求項71之用途，其中該至少一種額外治療劑包含用於治療冠狀病毒之藥劑。
  75. 如請求項71之用途，其中該至少一種額外治療劑包含用於治療COVID-19之藥劑。
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