TW202402324A - 用於治療輕鏈型類澱粉變性症及其他cd38-陽性血液惡性疾病之抗-cd38抗體 - Google Patents

Abstract

本發明係關於用抗-CD38抗體治療輕鏈型類澱粉變性症及其他CD38-陽性血液惡性疾病的方法。

Description

用於治療輕鏈型類澱粉變性症及其他CD38-陽性血液惡性疾病之抗-CD38抗體

【相關申請案之交互參照】

本申請案主張於2016年5月20日申請的美國專利申請案第15/160,476號及於2016年5月20日申請的國際專利申請案第PCT/US16/33544號之優先權，其全文內容係以引用方式併入本文中。

本發明係關於治療輕鏈型類澱粉變性症及其他CD38-陽性血液惡性疾病之方法。

B細胞惡性疾病包括B細胞慢性淋巴球性白血病、被套細胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤、毛細胞白血病、原發性滲出性淋巴瘤、及AIDS相關之非霍奇金氏淋巴瘤。B細胞惡性疾病構成超過85%之確診淋巴瘤。

多發性骨髓瘤(MM)之特徵在於分泌性漿細胞在骨髓中之潛在積累，該等漿細胞具有低增生率及延長的壽命。疾病最終攻擊 骨骼與骨髓，而導致遍及骨骼系統的多發性腫瘤與病變。所有癌症的大約1%及所有血液惡性疾病之略多於10%可歸因於多發性骨髓瘤。多發性骨髓瘤之發病率在老齡人口中增加，診斷時之中位數年齡係約61歲。

輕鏈型類澱粉變性症(AL)(亦稱為全身性類澱粉變性症)係純系漿細胞病症(clonal plasma cell disorder)，其中錯誤折疊之免疫球蛋白輕鏈型之片段沉積在組織中。骨髓中之單株漿細胞產生錯誤折疊之免疫球蛋白輕鏈，該等輕鏈在組織中積累並在重要器官中引起毒性，導致器官衰竭及死亡(Comenzo等人，Leukemia 26：2317-25,2012)。臨床特徵取決於所涉及的器官；類澱粉變性症常常出現在腎、心臟、皮膚、神經系統及軟組織(如舌中)(Merlini及Belotti，NEJM,349：583-596,2003)，導致白蛋白尿及腎衰竭、心衰竭、心律不整、心源性猝死、肝腫大、腹脹、早飽、感覺異常、感覺不良、直立性低血壓、便秘、或腹瀉(Chaulagain及Comenzo；Curr Hematol Malig Rep 8：291-8,2013)。

CD38係II型膜蛋白，其在受體媒介之黏附及傳訊中起作用，並且藉由其胞外酶活性來媒介鈣調動，對從NAD⁺形成環狀ADP-核糖(cADPR)進行催化，並且亦將cADPR水解成ADP-核糖(ADPR)。CD38媒介細胞介素分泌及淋巴細胞之活化及增生(Funaro等人，J Immunology 145：2390-6,1990；Guse等人，Nature 398：70-3,1999)，並且藉由其NAD糖水解酶活性來調控細胞外NAD⁺水準， 該等NAD⁺水準涉及調節調控性T細胞區室(Adriouch等人，14：1284-92,2012；Chiarugi等人，Nature Reviews 12：741-52,2012)。

CD38在多發性骨髓瘤惡性漿細胞上表現，並且涉及各種血液惡性疾病。

目前針對輕鏈型類澱粉變性症及多發性骨髓瘤之治療包括具有或不具有自體幹細胞移植的各種化療劑。然而，此兩種疾病在很大程度上仍然是不可治癒的。因此，需要用於多發性骨髓瘤及輕鏈型類澱粉變性症之額外治療劑。

本發明提供了治療患有CD38-陽性血液惡性疾病之病患的方法，包含投予有彼之需要的該病患抗-CD38抗體一段足以治療CD38-陽性血液惡性疾病的時間，其中該病患正在接受造血幹細胞移植(HSCT)。

本發明亦提供了治療患有輕鏈型類澱粉變性症(AL)之病患的方法，包括對有彼之需要的該病患投予抗-CD38抗體一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療患有輕鏈型類澱粉變性症(AL)之病患的方法，包括投予有彼之需要的該病患抗-CD38抗體一段足以治療AL之時間，其中該病患正接受造血幹細胞移植(HSCT)。

圖1顯示了新確診AL病患(n=16名具有AL之病患，GEO GSE24128)之CD138⁺純系漿細胞之轉錄譜中CD38、CD32B、IL6R、gp130、及CD16之相對表現。LnQLE：表現之定量水準之自然對數。

圖2顯示了幹細胞移植(SCT)後3週AL病患周邊血液中單核細胞之NK細胞的百分比(%)。

圖3顯示CD38在CD34⁺造血先驅細胞上表現。

圖4A顯示DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對解凍之冷凍保存之未經選擇之動員血液先驅細胞的增生沒有影響，藉由與同型對照相比，先驅細胞在500ng或1000ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))存在下形成相似數量之集落的能力來進行評估。在該測定中，在DARZALEX^TM(達拉單抗)(達拉單抗(daratumumab))、同型對照、或無抗體對照存在下在甲基纖維素中培養14天後評估集落形成單位粒細胞-巨噬細胞(granulocyte-macrophage,CFU-GM)，並將形成之集落%隨無抗體對照之變動加以作圖。* p<0.05，成對t測試。所有測定重複三次進行，並且使用來自3個不同病患之先驅細胞樣品進行3個獨立實驗。數據顯示平均值+/- SD。

圖4B顯示DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對解凍之冷凍保存之未經選擇之動員血液先驅細胞的增生沒有影響，藉由與同型對照相比，先驅細胞在500ng或1000ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))存在下形成相似數量 之集落的能力來進行評估。在該測定中，在DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))、同型對照、或無抗體對照存在下在甲基纖維素中生長14天後評估母細胞形成單位紅血球(blast forming unit erythroid,BFU-E)，並將形成之集落%隨無抗體對照之變動加以作圖。所有測定重複三次進行，並且使用來自3個不同病患之先驅細胞樣品進行3個獨立實驗。數據顯示平均值+/- SD。

圖5A顯示DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對新鮮的未經選擇之動員血液先驅細胞的增生沒有影響，藉由與同型對照相比，其在500ng或1000ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))存在下在甲基纖維素中形成相似數量之集落的能力來進行評估。在第14天測量作為CFU-GM之集落形成，並將形成之集落%隨無抗體對照之變動加以作圖。所有測定重複三次進行，並且使用來自3個不同病患之先驅細胞樣品進行3個獨立實驗。數據顯示平均值+/- SD。

圖5B顯示DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對新鮮的未經選擇之動員血液先驅細胞的增生沒有影響，藉由與同型對照相比，其在500ng或1000ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))存在下在甲基纖維素中形成相似數量之集落的能力來進行評估。在第14天測量作為BFU-E之集落的形成，並將形成之集落%隨無抗體對照之變動加以作圖。所有測定重複三次進行，並且使用來自3個不同病患之先驅細胞樣品進行3個獨立實驗。數據顯示平均值+/- SD。

圖6A顯示儘管在細胞上有高度CD38表現，但是DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))不藉由CDC來殺滅CD34經選擇之造血先驅細胞。將CD34⁺細胞與無抗體(CTL)、具有500ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))(Dara)或500ng/ml同型對照(Iso)的高補體血清一起培養1小時，之後將細胞接種在半固體培養基上。在第14天測量每500個CD34經選擇之細胞作為CFU-GM之集落形成。結果來自對於1名具有MM之病患及2名具有AL之病患的細胞之三次重複測定。

圖6B顯示儘管在細胞上有高度CD38表現，但是DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))不藉由CDC來殺滅CD34經選擇之造血先驅細胞。將CD34⁺細胞與無抗體(CTL)、具有500ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))(Dara)或500ng/ml同型對照(Iso)的高補體血清一起培養1小時，之後將細胞接種在半固體培養基上。在第14天測量每500個CD34經選擇之細胞作為BFU-E之集落形成。在具有DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))之孔盤中有更多BFU-E，其達到統計學顯著性。結果來自對於1名具有MM之病患及2名具有AL之病患的細胞之三次重複測定。(* p<0.01)。

圖7A顯示DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對新鮮CD34經選擇之粒細胞-單核細胞先驅細胞沒有不利影響。如所示，將經單離之CD34⁺細胞在不含下列的培養基中培養：抗體(CTL；對照)、DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))(Dara)、或同 型對照(Iso)，以500ng/ml或1000ng/ml，如指示。將細胞置於甲基纖維素中，並在第14天測量每500個CD34經選擇之細胞的作為CFU-GM之集落形成。結果來自對於1名具有MM之病患及2名具有AL之病患的細胞之三次重複測定。

圖7B顯示DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對新鮮CD34經選擇之紅細胞先驅細胞沒有不利影響。將經單離之CD34-細胞在不含下列的培養基中培養：抗體(CTL；對照)、含有500ng/ml或1000ng/ml之(達拉單抗(daratumumab))或同型對照(Iso)。將細胞置於甲基纖維素中，並在第14天測量每500個CD34經選擇之細胞的作為BFU-E之集落形成。結果來自對於2名具有MM之病患及1名具有AL之病患的細胞之三次重複測定。*p<0.02。

圖8顯示DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))媒介之ADCC受FCγRIIIa-158aa多形性的影響。具有158V/V(V/V)及158F/V(F/V)基因型之病患與具有158F/F(F/F)基因型之病患相比時，表現出提高的反應率(垂直線係每組之中位數，P<0.05，Mann Whitney，雙尾)。

「CD38」係指人類CD38蛋白(同義字：ADP核糖基環化酶1、cADPr水解酶1、環ADP核糖水解酶1)。人類CD38具有GenBank登錄號NP_001766及SEQ ID NO：1中顯示之胺基酸序列。眾所周知的是，CD38係單程II型膜蛋白，其具有代表胞質域之胺基 酸殘基1至21，代表跨膜域之胺基酸殘基22至42，及代表CD38之胞外域的殘基43至300。

SEQ ID NO：1

本文中使用之「抗體(Antibody)」為廣義上的用意且包括免疫球蛋白分子，其包括單株抗體(包括鼠類、人類、人類調適(human-adapted)、人化及嵌合單株抗體)、抗體片段、雙特異性或多特異性抗體、二聚體、四聚體或多聚體抗體、及單鏈抗體。

免疫球蛋白可分為五大類，即IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，取決於重鏈恆定域(constant domain)胺基酸序列。IgA及IgG係進一步次分為下列同型(isotype)：IgA₁、IgA₂、IgG₁、IgG₂、IgG₃及IgG₄。任何脊椎動物物種的抗體輕鏈可分派為兩種截然不同類型(即kappa(κ)及lambda(λ))之一者，視其等恆定域的胺基酸序列而定。

「抗體片段(Antibody fragment)」係指免疫球蛋白分子的一個部分，其保留重鏈及/或輕鏈抗原結合部位，諸如重鏈互補決定區(HCDR)1、2及3、輕鏈互補決定區(LCDR)1、2及3、重鏈可變 區(VH)、或輕鏈可變區(VL)。抗體片段包括Fab片段，即由VL、VH、CL及CHI域所組成之單價片段；F(ab)₂片段，即二價片段，包含在絞鏈區域(hinge region)藉由二硫橋連結的兩個Fab片段；Fd片段，由VH及CHI域所組成；Fv片段，由抗體單臂的VL及VH域所組成；域抗體(dAb)片段(Ward等人，Nature 341：544- 6,1989)，其係由VH域所組成。VH及VL域可經工程改造並經由合成連接子連接在一起以形成各種類型的單鏈抗體設計，其中VH/VL域會進行分子內配對，或者在VH及VL域係由分開之單鏈抗體建構體所表現之情況下則會進行分子間配對，以形成單價抗原結合部位，諸如單鏈Fv(scFv)或雙價抗體(diabody)；例如描述於下列中者：國際專利公開號WO1998/44001、WO1988/01649、WO1994/13804、及WO1992/01047。這些抗體片段係使用所屬技術領域中具有通常知識者所知悉的習知技術而獲得，且該些片段係經篩選具有如全長抗體相同方式之效用。

「經單離之抗體(isolated antibody)」係指實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的抗體或抗體片段(例如，特異性結合CD38的經單離之抗體實質上不含特異性結合人類CD38以外之抗原的抗體)。然而，特異性結合CD38的經單離之抗體可能會與其他抗原有交叉反應，諸如人類CD38的異種同源物，諸如食蟹猴(Macaca fascicularis)CD38。此外，經單離之抗體可實質上不含其他細胞材料和/或化學物。

抗體可變區係由被三個「抗原結合部位(antigen binding site)」中斷的「架構(framework)」區所組成。該等抗原結合部位係使用各種用語定義：互補決定區(CDR)(三個在VH(HCDR1,HCDR2,HCDR3)且三個在VL(LCDR1,LCDR2,LCDR3))係基於序列變異性(Wu and Kabat J Exp Med 132：211-50,1970；Kabat et al Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)；「超變異區」(Hypervariable region)、「HVR」、或「HV」(三個在VH(H1,H2,H3)且三個在VL(L1,L2,L3))係指如Chothia及Lesk所定義般在結構上係超變異(hypervariable)之抗體可變域中的區域(Chothia and Lesk,Mol Biol 196：901-17,1987)。其他用語包括「IMGT-CDR」(Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27：55-77,2003)及「特異性決定殘基用途(Specificity Determining Residue Usage,SDRU)」(Almagro,Mol Recognit 17：132-43,2004)。國際免疫遺傳學(International ImMunoGeneTics,IMGT)資料庫(http：//www_imgt_org)提供了標準化編號及抗原結合部位的定義。CDR、HV及IMGT描繪之間的對應性係描述於Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27：55-77,2003。

本文中所用之「Chothia殘基(Chothia residue)」為依據Al-Lazikani所編號的VL及VH殘基(Al-Lazikani等人，J Mol Biol 273：927-48,1997)。

「架構(framwork)」或「架構序列(framwork sequence)」為可變區中被定義為抗原結合部位以外的其餘序列。因為抗原結合部位可用如上所述之各種用語來定義，架構之確切胺基酸序列取決於如何定義抗原結合部位。

「人化抗體(humanized antibody)」係指抗原結合部位係衍生自非人類物種且可變區架構係衍生自人類免疫球蛋白序列的抗體。人化抗體可在架構區中包括取代，所以該架構可能不是所表現人類免疫球蛋白或生殖系基因序列的確切複本。

「人類調適(Human-adapted)」抗體或「人類架構調適(human framework adapted,HFA)」抗體係指依據U.S.Pat.Publ.No.US2009/0118127中所描述之方法所調適的人化抗體。人類調適抗體係藉由選擇受體人類架構(acceptor human framework)來人化，其選擇係根據最大CDR及FR相似性、長度相容性以及CDR1與CDR2環圈與一部分之輕鏈CDR3環圈的序列相似性。

「人類抗體(human antibody)」係指具有重鏈及輕鏈可變區的抗體，其中架構及抗原結合部位兩者皆衍生自人源序列。若該抗體含有恆定區，則該恆定區亦衍生自人源序列。

人類抗體包含「衍生自(derived from)」人源序列的重及/或輕鏈可變區，其中該抗體的可變區係得自使用人類生殖系免疫球蛋白或重排(rearranged)免疫球蛋白基因的系統。該等系統包括經展示在噬菌體上的人類免疫球蛋白基因庫(gene library)、及基因轉殖非人類動物(諸如帶有人類免疫球蛋白基因位點的小鼠或大鼠)，如本文中 所述。「人類抗體」在與人類生殖系或重排免疫球蛋白序列比較時可能含有胺基酸差異，此係例如由於天然發生之體細胞突變或在架構或抗原結合部位中刻意引入取代所致。一般而言，人類抗體係在胺基酸序列上與由人類生殖系或重排免疫球蛋白基因所編碼的胺基酸序列具有至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性。在一些情況下，「人類抗體」可能含有自人類架構序列分析導出的共有架構序列，例如Knappik等人所述(J Mol Biol 296：57-86,2000)，或合併至經展示在噬菌體上的人類免疫球蛋白基因庫的合成HCDR3，例如Shi等人(J Mol Biol 397：385-96,2010)及國際專利公開號WO2009/085462中所述。抗原結合部位衍生自非人類物種的抗體不包括在人類抗體的定義中。

經單離之人化抗體可為合成的。人類抗體若衍生自人類免疫球蛋白序列，則可使用諸如合併有合成CDR之噬菌體呈現(phage display)及/或合併有合成架構的系統來產生，或者可在體外進行基因突變以改良抗體性質，從而得到在體內(in vivo)人類抗體生殖系貯庫(repertoire)內不會天然存在的抗體。

「重組抗體(recombinant antibody)」包括所有藉由重組手段製備、表現、創建、或單離之抗體，諸如自基因轉殖或染色體轉殖有人類免疫球蛋白基因的動物(例如小鼠或大鼠)或由其製備的融合瘤單離之抗體；自經轉形(transform)以表現抗體之宿主細胞單離之抗體；自重組、組合抗體庫單離之抗體；及藉由涉及將人類免疫球蛋 白基因序列剪接到其他免疫球蛋白基因序列的任何其他手段製備、表現、創建或單離之抗體；或在體外使用例如Fab臂交換所產生的雙特異性抗體。

「單株抗體(monoclonal antibody)」係指由單一分子組成之抗體分子的製劑。單株抗體組成物對特定表位展示出單一結合特異性及親和力，或者在雙特異性單株抗體的情況下，對兩個不同的表位有雙結合特異性。「單株抗體」因此係指在各重鏈及各輕鏈中具有單一胺基酸組成之抗體群，除了可能熟知的變更，諸如自抗體重鏈移除C端離胺酸。在抗體群內，單株抗體可具有異質性醣基化。單株抗體可係單特異性或多特異性，或單價、二價、或多價。雙特異性抗體係包括在用語單株抗體中。

「表位(epitope)」係指與抗體特異性結合的抗原部分。表位通常由分子部分(諸如胺基酸或多醣側鏈)之化學活性(諸如極性、非極性或疏水性)表面分群(grouping)所組成，並且可具有特定三維結構特性以及特定電荷特性。表位可包含形成構形空間單元之鄰接(contiguous)及/或不鄰接(noncontiguous)胺基酸。針對非鄰接表位，來自抗原線性序列之相異部分的胺基酸會透過蛋白質分子的摺疊而在3維空間中緊密靠近。

「變異體(variant)」係指藉由一或多個修改(例如取代、插入、或刪除)而不同於參考多肽或參考多核苷酸的多肽或多核苷酸。

「組合(in combination with)」意指二或更多種治療劑可一起以混合物形式投予至對象、可同時以單劑投予或以任何順序以單劑依序投予。

「治療(treat或treatment)」係指治療性處理，其中目的係在於減緩(減輕)非所欲的生理變化或疾病，或在治療過程中提供有益或所欲的臨床結果。有益或所欲之臨床結果包括症狀的減輕、疾病程度的減小、疾病狀態的穩定化(即不惡化)、疾病進程的延緩或減慢、疾病狀態的改善或緩和、及緩解(無論部分或完全)，無論是可偵測或不可偵測的。「治療」亦可意指相較於未接受治療之對象之預期存活而延長存活。那些需要治療的對象包括那些已經患有不想要的生理變化或疾病的對象，以及那些易患有該生理變化或疾病的對象。

「抑制生長(inhibit growth)」(例如提及細胞(諸如腫瘤細胞)時)係指當細胞與治療劑或治療劑或藥物的組合接觸時，在體外或體內的細胞生長相較於在所屬技術領域中具有通常知識者習知的適當控制條件下生長的相同細胞的生長有可測量的減少。在體外或體內的細胞生長的抑制可為至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、99%、或100%。細胞生長的抑制可透過各種機制發生，例如透過抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity(ADCC))、抗體依賴性細胞吞噬作用(antibody-dependent cellular phagocytosis(ADCP))、補體依賴性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity(CDC))、細胞凋亡、壞死、或透過細胞增生的抑制。

「治療有效量(therapeutically effective amount)」係指達到所欲治療成果所需之劑量及時間量的有效量。治療有效量可依不同因素而異，諸如對象之疾病狀態、年齡、性別、及體重、以及治療劑或治療劑的組合在對象中引發所欲反應的能力。有效量的治療劑或治療劑組合的例示性指標包括例如病患幸福感的提高、腫瘤負荷的減少、腫瘤生長的減緩或停止、及/或癌細胞未轉移至身體的其他位置。

「病患(Patient)」包括任何人類或非人類動物(nonhuman animal)。「非人類動物」包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，例如非人類靈長類動物、綿羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬行動物等。用語「病患」及「對象」在本文中可互換使用。

本發明提供了用抗-CD38抗體來治療正接受造血幹細胞移植的患有CD38-陽性血液惡性疾病之病患的方法，該抗-CD38抗體不會殺滅(例如媒介殺滅)移植物內之CD34⁺造血幹細胞，該等CD34⁺造血幹細胞亦為CD38-陽性的。本發明亦提供了用於治療患有輕鏈型類澱粉變性症之病患的方法。本發明至少部分基於以下發現：抗-CD38抗體DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))可有效地殺滅AL漿細胞，但不殺滅從患有輕鏈型類澱粉變性症或多發性骨髓瘤之病患中單離的CD38⁺CD34⁺造血幹細胞，從而允許使用DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))及造血幹細胞移植的組合治療。

本發明之方法可用來治療屬於任何分類之動物病患。此等動物之實例包括哺乳動物，諸如人、鼠、犬、貓及農畜(farm animal)。

本發明提供了治療患有CD38-陽性血液惡性疾病之病患的方法，包含投予有彼之需要的該病患抗-CD38抗體一段足以治療CD38-陽性血液惡性疾病的時間，其中該病患正在接受造血幹細胞移植(HSCT)。

「CD38-陽性血液惡性疾病」係指一種血液惡性疾病，其特徵在於存在表現CD38之腫瘤細胞，包括白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、及漿細胞病症。CD38陽性血液惡性疾病之實例包括前體B細胞淋巴母細胞性白血病/淋巴瘤與B細胞非霍奇金氏淋巴瘤、急性前骨髓細胞性白血病、急性淋巴母細胞性白血病與成熟B細胞腫瘤，諸如B細胞慢性淋巴球性白血病(CLL)/小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、B細胞急性淋巴球性白血病、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴球漿細胞性淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)(包括低級別、中級別、及高級別FL)、皮膚濾泡中心淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤(MALT型、結型、及脾型)、髮樣細胞白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯奇氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma,BL)、漿細胞瘤、多發性骨髓瘤(MM)、漿細胞白血病、移植後淋巴增生性病症、瓦登斯特隆巨球蛋白血症(Waldenstrom‘s macroglobulinemia)、漿細胞白血病、退行性大細胞淋巴瘤(ALCL)、及輕鏈型類澱粉變性症(AL)。

本文所用之「漿細胞病症」係指特徵為純系漿細胞之病症，包括多發性骨髓瘤、輕鏈型類澱粉變性症、及瓦登斯特隆巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia)。輕鏈型類澱粉變性症及瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症可獨立地於多發性骨髓瘤而發生。其等亦可以與多發性骨髓瘤同時存在，並且在發展多發性骨髓瘤之前或之後發展。

因此，「CD-38陽性血液惡性疾病」及「漿細胞病症」之定義可為部分重疊的。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係輕鏈型類澱粉變性症(AL)。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係多發性骨髓瘤(MM)。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係瓦登斯特隆巨球蛋白血症。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係非霍奇金氏淋巴瘤。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係急性淋巴母細胞性白血病(ALL)。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係濾泡性淋巴瘤(FL)。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係伯奇氏淋巴瘤(BL)。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係被套細胞淋巴瘤(MCL)。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係漿細胞病症。

在一些實施例中，CD38陽性血液惡性疾病係輕鏈型類澱粉變性症(AL)、多發性骨髓瘤(MM)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、非霍奇金氏淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯奇氏淋巴瘤(BL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、或被套細胞淋巴瘤(MCL)。

例示性B細胞非霍奇金氏淋巴瘤係淋巴瘤樣肉芽腫病、原發性滲出性淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、縱膈大B細胞淋巴瘤、重鏈疾病(包括γ、μ、及α疾病)、經由具免疫抑制劑之療法誘導的淋巴瘤(諸如經環孢靈素(cyclosporine)誘導之淋巴瘤及經胺甲喋呤(methotrexate)誘導之淋巴瘤)。

在一些實施例中，涉及表現CD38之細胞的病症係霍奇金氏淋巴瘤。

其他涉及表現CD38之細胞的病症實例包括衍生自T細胞與NK細胞的惡性疾病，該等惡性疾病包括成熟T細胞與NK細胞腫瘤，該等腫瘤包括T細胞前淋巴球性白血病、T細胞大顆粒淋巴球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人T細胞白血病/淋巴瘤、結外NK/T細胞淋巴瘤(鼻型)、78腸病型T細胞淋巴瘤、肝脾性T细胞淋 巴瘤、皮下脂膜炎樣T細胞淋巴瘤、胚母NK細胞淋巴瘤、蕈狀肉芽腫/Sezary症候群、原發性皮膚CD30陽性T細胞淋巴增生性病症(原發性皮膚退行性大細胞淋巴瘤(C-ALCL)、淋巴瘤樣丘疹病、臨界病變)、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤、周邊T細胞淋巴瘤非特指型、及退行性大細胞淋巴瘤。

衍生自骨髓細胞的惡性疾病之實例包括急性骨髓性白血病(包括急性前骨髓細胞性白血病)、及慢性骨髓增生性疾病(包括慢性骨髓性白血病)。

本發明亦提供了治療患有輕鏈型類澱粉變性症(AL)之病患的方法，包含對有彼之需要的該病患投予抗-CD38抗體一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療患有輕鏈型類澱粉變性症之病患的方法，包含對有彼之需要的該病患投予抗-CD38抗體一段足以治療輕鏈型類澱粉變性症之時間，其中該病患正接受造血幹細胞移植(HSCT)。

本發明亦提供了治療患有多發性骨髓瘤之病患的方法，包括對有彼之需要的該病患投予抗-CD38抗體一段足以治療多發性骨髓瘤之時間，其中該病患正接受造血幹細胞移植(HSCT)。

在一些實施例中，抗-CD38抗體與包含SEQ ID NO：4的重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5的輕鏈可變區(VL)的抗體競爭結合至CD38。

在一些實施例中，抗-CD38抗體至少結合至人類CD38(SEQ ID NO：1)的區域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)及區域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)。

在一些實施例中，抗-CD38抗體分別包含SEQ ID NO：6、7、及8的重鏈互補決定區(HCDR)1、HCDR2、及HCDR3。

在一些實施例中，抗-CD38抗體分別包含SEQ ID NO：9、10、及11的輕鏈互補決定區(LCDR)1、LCDR2、及LCDR3。

在一些實施例中，抗-CD38抗體分別包含SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR2、及LCDR3。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含與SEQ ID NO：4之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性的重鏈可變區(VH)胺基酸序列及與SEQ ID NO：5之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性的輕鏈可變區(VL)胺基酸序列。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL。

在一些實施例中，抗-CD38抗體含有包含與SEQ ID NO：12之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性之胺基酸序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：13之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性之胺基酸序列的輕鏈。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含SEQ ID NO：12之重鏈及SEQ ID NO：13之輕鏈。

抗體之表位包括具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3中所示序列的一些或全部殘基。在一些實施例中，抗體表位包含人類CD38(SEQ ID NO：1)之SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)區中至少一個胺基酸及EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)區中至少一個胺基酸。在一些實施例中，抗體表位包含人類CD38(SEQ ID NO：1)之SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)區中至少兩個胺基酸及EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)區中至少兩個胺基酸。在一些實施例中，抗體表位包含人類CD38(SEQ ID NO：1)之SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)區中至少三個胺基酸及EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)區中至少三個胺基酸。

一種結合至人類CD38(SEQ ID NO：1)的SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)區及EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)區的例示性抗體係DARZALEX^TM(達拉單抗)。

可用於本發明方法的例示性抗-CD38抗體係DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))。DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))包含分別示於SEQ ID NO：4及5中的重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)胺基酸序列，分別為SEQ ID NO：6、7、及8的重鏈CDR：HCDR1、HCDR2、及HCDR3，以及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的輕鏈CDR：LCDR1、LCDR2、及LCDR3，且係IgG1/κ亞型並描述於美國專利第7,829,693號中。DARZALEX^TM(達 拉單抗(daratumumab))的重鏈胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：12中，且輕鏈胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：13中。

可使用習知的體外方法來評估抗體與具有VH為SEQ ID NO：4及VL為SEQ ID NO：5的DARZALEX^TM(DARZALEX^TM達拉單抗(daratumumab))對CD38的競爭結合。在一例示性方法中，可將重組表現CD38的CHO細胞與未標記的參考抗體於4℃培養15分鐘，然後與過量的螢光標記測試抗體於4℃培養45分鐘。於PBS/BSA中清洗後，可藉由流動式細胞測量術(flow cytometry)使用標準方法來測量螢光。在另一例示性方法中，CD38的細胞外域可經包覆於ELISA盤之表面上。可將過量的未標記參考抗體加入約15分鐘，且隨後可加入經生物素化的測試抗體。在PBS/Tween中清洗後，可使用共軛辣根過氧化酶(horseradish peroxidase(HRP))的鏈親和素(streptavidine)來偵測該生物素化測試抗體的結合並使用標準方法來偵測信號。在該等競爭性測定(competition assay)中，顯而易見的是參考抗體可係標記的且該測試抗體可係未標記的。當參考抗體抑止測試抗體結合至CD38，或測試抗體抑止參考抗體結合至CD38達至少80%，例如81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%時，測試抗體與參考抗體競爭。該測試抗體的表位可進一步藉由例如胜肽圖譜技術(peptide mapping)或氫/氘保護測定使用習知方法來定義，或者藉由晶體結構測定來定義。

結合至人類CD38(SEQ ID NO：1)的SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)區及EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)區的抗體可例如藉由以下方式產生：使用標準方法且如本文中所述以具有SEQ ID NO：2及3中所示之胺基酸序列的胜肽免疫小鼠，且使用例如ELISA或突變誘發研究以表徵用於結合至胜肽的所得抗體。

SEQ ID NO：2

SKRNIQFSCKNIYR

SEQ ID NO：3

EKVQTLEAWVIHGG

SEQ ID NO：4

SEQ ID NO：5

SEQ ID NO：6

SFAMS

SEQ ID NO：7

AISGSGGGTYYADSVKG

SEQ ID NO：8

DKILWFGEPVFDY

SEQ ID NO：9

RASQSVSSYLA

SEQ ID NO：10

DASNRAT

SEQ ID NO：11

QQRSNWPPTF

SEQ ID NO：12

SEQ ID NO：13

可用於本發明方法的其他例示性抗-CD38抗體係：mAb003，其包含分別為SEQ ID NO：14及15的VH及VL序列並被描述於美國專利第7,829,693號中。mAb003的該VH及該VL可被表示為IgG1/κ。

SEQ ID NO：14

SEQ ID NO：15

mAb024，其包含分別為SEQ ID NO：16及17的VH及VL序列並被描述於美國專利第7,829,693號中。mAb024的該VH及該VL可被表示為IgG1/κ。

SEQ ID NO：16

SEQ ID NO：17

MOR-202(MOR-03087)，其包含分別為SEQ ID NO：18及19的VH及VL序列並被描述於美國專利第8,088,896號中。MOR-202的該VH及該VL可被表示為IgG1/κ。

SEQ ID NO：18

SEQ ID NO：19

伊沙妥昔單抗(Isatuximab)；其包含分別為SEQ ID NO：X及X的VH及VL序列並被描述於美國專利第8,153,765號中。伊沙妥昔單抗之VH及VL可被表示為IgG1/κ。

SEQ ID NO 20：

SEQ ID NO：21：

其他可在本發明之方法中使用的例示性抗-CD38抗體包括那些在國際專利公開號WO05/103083、國際專利公開號WO06/125640、國際專利公開號WO07/042309、國際專利公開號WO08/047242或國際專利公開號WO14/178820中所描述者。

在一些實施例中，AL係心臟I期、心臟II期、或心臟III期。

在一些實施例中，AL係復發性或難治性的。

AL診斷係由醫生根據例如國家綜合癌症網絡(http：//_www_nccn.org/_professionals/_physician_gls/_f_guidelines_asp#site)可獲得的指導進行。AL病患由於輕鏈及該等輕鏈錯誤折疊之中間體以澱粉樣纖維形式在重要器官中積累而在各種器官系統中而存在損傷，導致了器官功能障礙及死亡。病患可能在診斷時具有多個器官系統受影響；約三分之一的病患在診斷時具有超過3個器官受影響(Chaulagain及Comenzo Curr Hematol Malig Rep 8：291-8,2013)。AL預後涉及心臟分期，因為即使病患是無症狀的，心臟損傷似乎存在 於所有確診AL病患中(Palladini等人，Blood 116：3426-30,2010；Kristen等人，Blood 116：2455-61,2010)。基於心臟生物標誌物N終端腦利鈉肽前激素(N-terminal prohormone of brain natriuretic peptide,NT-proBNP)及肌鈣蛋白T中之一個、兩個或兩者的存在，AL病患可以分類為心臟I、II、或III期，參見例如Comenzo等人，Leukemia 26：2317-25,2012。

AL之目前治療選項係殺滅輕鏈免疫球蛋白分泌性漿細胞，並且包括藥劑之組合，例如Velcade®(硼替佐米(bortezomib))，環磷醯胺例如Cytoxan®或Neosar®，Alkeran®(黴法蘭(melphalan))，Thalomid®(沙利度胺(thalidomide))，Revlimid®(來那度胺(lenalidomide))或Pomalyst®(泊馬度胺(pomalidomide))以及類固醇(迪皮質醇(dexamethasone))，干擾素α(IFN-α)及幹細胞移植。高劑量Alkeran®(黴法蘭(melphalan))可與幹細胞移植一起使用(參見例如Anderson等人，Systemic light chain amyloidosis,NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Version I.2015,NCCN.org.2014)。NINLARO^®(伊紮珠單抗(ixazomib))，一種蛋白酶體抑制劑，正在針對治療AL來進行評估。NEOD001，一種針對AL澱粉樣蛋白之單株抗體，正在針對治療AL來進行評估。

在一些實施例中，MM係復發性或難治性的。

目前可用的MM治療包括化療、幹細胞移植、Thalomid®(沙利度胺(thalidomide))、Revlimid®(來那度胺(lenalidomide))、Velcade®(硼替佐米(bortezomib))、Kyprolis®(卡 非佐米(carfilzomib))、Farydak®(帕比司他(panobinostat))、Aredia®(帕米膦酸鹽(pamidronate))、及Zometa®(唑來膦酸)。當前治療方案包括化療劑如Oncovin®(長春新鹼)、BiCNU®(BCNU，卡莫司汀(carmustine))、Alkeran®(黴法蘭(melphalan))、環磷醯胺、Adriamycin®(多柔比星(doxorubicin))及潑尼松或迪皮質醇(dexamethasone)的組合產生僅約5%之完全緩解率，並且中位數存活期為從診斷時起約36至48個月。此外，研究藥物伊紮珠單抗(ixazomib)已經從復發性多發性骨髓瘤病患之關鍵臨床試驗中獲得了正面的結果。使用高劑量化療繼之以自體骨髓或周邊血液單核細胞移植的最近進展已增加完全緩解率及緩解期，但總體存活只有輕微延長，並且沒有獲得治癒之證據。最終，即使是在單獨使用干擾素α(IFN-α)或在其與類固醇組合的維持療法下，所有MM病患皆會復發。

可使用各種定性及/或定量方法來判定疾病之復發或難治性質。可能與復發或抵抗相關之症狀係例如病患之健康狀況的下降或停滯，或與血液惡性疾病相關之各種症狀的回復或惡化，及/或癌細胞在身體中從一個位置擴散到其他器官、組織、或細胞。與血液惡性疾病有關的症狀可能根據癌症類型而變化。例如，與AL相關之症狀可包括疲勞增加、紫癜、舌增大、腹瀉或水腫、蛋白尿、或增加的血漿游離輕鏈。

在一些實施例中，HSCT係同種異體的、自體的或同基因的，即供體係雙胞胎。自體HSCT包含自該對象抽出HSC並將所獲之HSC冷凍。在骨髓清除(myeloablation)後，將該對象儲存的HSC 移植入該對象中。同種異體HSCT涉及取自同種異體的HSC供體的HSC，該供體具有與該對象相配之HLA分型。

如本文中所使用，「造血幹細胞移植(hematopoietic stem cell transplantation)」係源自骨髓(在這種情況下被稱為骨髓移植)、血液(諸如周邊血液及臍帶血)、或羊水的血液幹細胞的移植。

本文中使用之「正在接受造血幹細胞移植(undergoing hematopoietic stem cell transplantation)」意指該病患已接受、正在接受、或將會接受HSCT。

在一些實施例中，病患在HSCT之前已經完成化療及/或放射療法。

可在HSCT前先將病患以化學療法及/或放射療法來處理(所謂的移植前準備)以在移植前消除該病患的一些或全部造血細胞。在同種異體HSCT的情況下也可將病患以免疫抑制劑處理。例示性的移植前準備治療係高劑量黴法蘭(melphalan)(參見例如Skinner等人，Ann Intern Med 140：85-93,2004；Gertz等人，Bone Marrow Transplant 34：1025-31,2004；Perfetti等人，Haematologica 91：1635-43,2006)。在移植前治療中可採用的放射療法可根據該領域中通常習知的作業準則(protocol)來進行。放射療法亦可與該抗-CD38抗體同時、依序、或分開提供。

DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))不能媒介殺滅移植物內之CD38⁺CD34⁺幹細胞，因此係與HSCT組合的合適療法。與(達拉單抗(daratumumab))競爭的抗體，及/或與DARZALEX^TM (達拉單抗(daratumumab))結合相同表位的抗體亦不能殺滅CD38+ CD34+幹細胞。

可用於本文中揭露之本發明方法中的其他例示性抗體不能殺滅移植物內之CD38⁺ CD34⁺幹細胞，因此係與HSCT組合的合適療法。可使用本文中所述之方法來評估抗體無殺滅移植物內之CD38⁺ CD34⁺幹細胞能力之情況。

本發明方法中使用的抗-CD38抗體亦可從例如噬菌體呈現庫重新選擇，其中噬菌體係經工程改造以表現人類免疫球蛋白或其部分，例如Fab、單鏈抗體(scFv)、或未配對或配對抗體可變區(Knappik等人，J Mol Biol 296：57-86,2000；Krebs等人，J Immunol Meth 254：67-84,2001；Vaughan等人，Nature Biotechnology 14：309-314,1996；Sheets等人，PITAS(USA)95：6157-6162,1998；Hoogenboom and Winter,J Mol Biol 227：381,1991；Marks等人，J Mol Biol 222：581,1991)。CD38結合可變域可從例如表現抗體重鏈及輕鏈可變區的噬菌體呈現庫單離為具有噬菌體pIX外殼蛋白的融合蛋白，如Shi等人，J.Mol.Biol.397：385-96,2010及國際專利公開號WO09/085462中所述。可針對結合至人類CD38細胞外域之情況對抗體庫進行篩選，所獲得之陽性殖株經進一步表徵，Fab自殖株溶解物(lysate)單離出來，並且隨後選殖為全長抗體。此種用於單離人類抗體之噬菌體呈現法已於本領域中建立。參見例如：美國專利第5,223,409號；美國專利第5,403,484號；及美國專利第5,571,698號，美國專利第5,427,908號、美國專利第5,580,717 號、美國專利第5,969,108號、美國專利第6,172,197號、美國專利第5,885,793號；美國專利第6,521,404號；美國專利第6,544,731號；美國專利第6,555,313號；美國專利第6,582,915號；及美國專利第6,593,081號。

在本文中所述的一些實施例中，抗-CD38抗體不藉由補體依賴性細胞毒性(CDC)來媒介殺滅CD34陽性造血先驅細胞。

「不殺滅」或「不媒介殺滅」係指當與合適對照例如同型對照相比時，抗-CD38抗體不能誘導細胞殺滅。當在DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))存在下測得的細胞殺滅與在同型對照存在下的細胞殺滅相比不具有統計學顯著性時，抗-CD38抗體「不殺滅」。同型對照係廣為周知之用語。

可在新鮮或冷凍單離之CD34⁺細胞中測量藉由CDC的CD34陽性造血先驅細胞殺滅，該測量藉由將細胞在具有補體及500ng/ml抗-CD38抗體之10%血清中培養，隨後根據已知方法測定在半固體培養基中接種之細胞的集落形成程度進行。例如，BFU-E及CFU-GM形成可在培養14天後使用商業試劑例如Stem Cell Technologies之MethoCult^TM進行評估。

該抗體的Fc部份可媒介抗體的效應功能(effector function)，諸如抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。該功能可藉由Fc效應域(effector domain)與具有吞噬或裂解活性的免疫細胞上Fc受體的結合來媒介，或藉由Fc效應域與補體系統成分的結合來媒介。一 般而言，由與Fc結合的細胞或補體成分所媒介的效應會造成目標細胞(例如CD38表現細胞)的抑制或損耗(depletion)。人類IgG同型IgG1、IgG2、IgG3及IgG4在效應功能上顯示出差別能力。ADCC可由IgG1及IgG3媒介，ADCP可由IgG1、IgG2、IgG3及IgG4媒介，及CDC可由IgG1及IgG3媒介。

在一些實施例中，抗-CD38抗體係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型。

在一些實施例中，抗-CD38抗體在體外藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞凋亡、或CD38酶活性的體外調節來誘導殺滅表現CD38之漿細胞。

在一些實施例中，抗-CD38抗體在體外藉由ADCC、ADCP、或CDC誘導殺滅表現CD38之細胞。

在一些實施例中，抗-CD38抗體在體外藉由ADCC誘導殺滅表現CD38之細胞。

在一些實施例中，抗-CD38抗體在體外藉由ADCP誘導殺滅表現CD38之細胞。

在一些實施例中，抗-CD38抗體在體外藉由CDC誘導殺滅表現CD38之細胞。

「抗體依賴性細胞毒性」、「抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性」或「ADCC」是一種誘導細胞死亡的機制，其取決於抗體包覆的目標細胞與具有裂解活性的效應細胞(諸如自然殺手細胞、單核球、 巨噬細胞及嗜中性球)之間透過效應細胞上表現的Fcγ受體(FcγR)的相互作用。例如，NK細胞表現FcγRIIIa，而單核球表現FcγRI、FcγRII、及FcγRIIIa。抗體包覆的目標細胞(諸如CD38表現細胞)的死亡會發生是由於效應細胞分泌膜孔形成蛋白(membrane pore-forming protein)及蛋白酶的活性。為了評估抗-CD38抗體的ADCC活性，可將該抗體加入至CD38表現細胞與免疫效應細胞的組合，該免疫效應細胞可被抗原抗體複合物活化而造成目標細胞的細胞裂解。細胞裂解通常是透過從裂解細胞中釋放的標記(例如放射性基質、螢光染料或天然的細胞內蛋白)來檢測。用於該等測定之例示性效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及NK細胞。例示性目標細胞包括道迪(Daudi)細胞(ATCC^® CCL-213^TM)或表現CD38的B細胞白血病或淋巴瘤腫瘤細胞。在一例示性測定中，將目標細胞以20μCi的⁵¹Cr標記2小時並徹底清洗。可將該等目標細胞的細胞濃度調整至1×10⁶個細胞/ml，並加入各種不同濃度的抗-CD38抗體。以效應：目標細胞比為40：1的比率加入道迪(Daudi)細胞以開始測定。於37℃培養3小時後，以離心停止測定，並在閃爍計數器中測量從裂解細胞中釋放出的⁵¹Cr。細胞毒性百分比可計算為加入3%過氯酸至目標細胞中可誘導的最大裂解的百分比。在本發明之方法中使用的抗-CD38抗體所誘導之ADCC可達對照組(3%過氯酸所誘導之細胞裂解)的約20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。

「抗體依賴性細胞吞噬作用」(「ADCP」)係指一種透過吞噬細胞(諸如巨噬細胞或樹突細胞)內化(internalization)以消滅抗體包覆的目標細胞的機制。ADCP可藉由使用衍生自單核球的巨噬細胞作為效應細胞以及使用道迪(Daudi)細胞(ATCC^® CCL-213^TM)或表現CD38的B細胞白血病或淋巴瘤腫瘤細胞作為目標細胞來評估，該等目標細胞係經工程改造以表現GFP或其他標記分子。效應：目標細胞比可為例如4：1。可將效應細胞與目標細胞在存在或不存在抗-CD38抗體的情況下一起培養4小時。培養後，可使用細胞剝離液(accutase)將細胞分離。巨噬細胞可用偶接螢光標記的抗CD11b及抗CD14抗體來鑑定，且吞噬作用百分比可根據在該等CD11⁺CD14⁺巨噬細胞中的GFP螢光百分比使用標準方法測定。在本發明之方法中使用的抗-CD38抗體可誘導ADCP達約20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。

「補體依賴性細胞毒性(complement-dependent cytotoxicity)」或「CDC」係指一種誘導細胞死亡的機制，其中與目標結合的抗體的Fc效應域結合並活化補體成分C1q，其轉而再活化補體級聯反應而導致目標細胞死亡。補體的活化亦可造成補體成分沉積在該目標細胞表面上，藉由結合白血球上的補體受體(例如CR3)而促進ADCC。CD38表現細胞的CDC可藉由例如以下步驟來測量：將道迪(Daudi)細胞以每孔1×10⁵個細胞(50μl/孔)種於RPMI-B(添加有1% BSA的RPMI)中、在該等孔中加入50μl抗-CD38抗體使最終濃 度在0至100μg/ml之間、將該反應於室溫培養15分鐘、在該等孔中加入11μl的匯集人血清、及將該反應於37℃培養45分鐘。裂解細胞百分比(%)可使用標準方法以FACS測定中碘化丙錠染色的細胞百分比來偵測。在本發明之方法中使用的抗-CD38抗體可誘導CDC達約20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。

單株抗體誘導ADCC之能力可藉由工程改造其寡醣組分來增強。人類IgG1或IgG3係在Asn297處經N-醣基化並且大部分聚醣係呈廣為周知之雙觸角(biantennary)G0、G0F、G1、G1F、G2或G2F形式。由未經工程改造之CHO細胞所生產之抗體典型具有約至少85%之聚醣海藻糖(glycan fucose)含量。自附接至Fc區之雙觸角複合型寡醣移除核心海藻糖經由改善FcγRIIIa結合且不改變抗原結合或CDC活性來增強抗體之ADCC。此類mAb可使用已報導會導致成功表現相對高量去海藻糖基化(defucosylated)抗體(帶有雙觸角複合型之Fc寡醣)的不同方法來達成，諸如控制培養滲透壓(Konno等人，Cytotechnology 64：249-65,2012)、應用變異體CHO株Lec13作為宿主細胞系(Shields等人，J Biol Chem 277：26733-40,2002)、應用變異體CHO株EB66作為宿主細胞系(Olivier等人，MAbs；2(4),2010；紙本發行前之電子發行版本；PMID：20562582)、應用大鼠融合瘤細胞系YB2/0作為宿主細胞系(Shinkawa等人，J Biol Chem 278：3466-73,2003)、引入專門針對α1,6-岩藻糖基轉移酶(1,6-fucosyltrasferase,FUT8)基因之短小干擾RNA(Mori等人，Biotechnol Bioeng 88：901- 8,2004)、或共表現β-1,4-N-乙醯葡糖胺基轉移酶III(β-1,4-N-acetylglucosaminyltransferase III)及高基氏α-甘露糖苷酶II(Golgi α-mannosidase II)或基夫鹼(kifunensine)(一種強效α-甘露糖苷酶I抑制劑)(Ferrara等人，J Biol Chem 281：5032-6,2006；Ferrara等人，Biotechnol Bioeng 93：851-61,2006；Xhou等人，Biotechnol Bioeng 99：652-65,2008)。由在本文所述之方法中，以及在下列每一個編號實施例的一些實施例中所使用的抗-CD38抗體所引起的ADCC亦可透過在抗體Fc中的某些取代來增強。例示性取代係例如在胺基酸位置256,290,298,312,356,330,333,334,360,378或430處之取代(殘基編號依據EU索引)，如美國專利第6,737,056號中所述。由在本發明之方法中，以及在下列每一個編號實施例的一些實施例中所使用的抗-CD38抗體所引起的CDC亦可透過在抗體Fc中的某些取代來增強。例示性取代係例如在胺基酸位置423、268、267、及/或113處的取代(殘基編號依據EU索引)，如在Moore等人，Mabs 2：181-9,2010中描述。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含抗體Fc中的取代。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含抗體Fc中在胺基酸位置256,290,298,312,356,330,333,334,360,378及/或430處的取代(殘基編號依據EU索引)。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含抗體Fc中在胺基酸位置113、267、268、及/或423處的取代(殘基編號依據EU索引)。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含具有海藻糖含量為約0%至約15%、例如15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、或0%的雙觸角聚醣結構。

在一些實施例中，抗-CD38抗體包含具有海藻糖含量為約50%、40%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、或0%的雙觸角聚醣結構。

Fc中的取代及減少的海藻糖含量可增強該抗-CD38抗體的ADCC活性。

「海藻糖含量(Fucose content)」意指Asn297處糖鏈中海藻糖單醣的量。海藻糖的相對量係含海藻糖的結構相對於所有醣類結構的百分比。這些可藉由多種方法來定性及定量，例如：1)使用經N-醣苷酶F處理過的樣本(例如複合、雜合及低聚及高甘露糖(oligo-and high-mannose)結構)的MALDI-TOF，如在國際專利公開號WO2008/077546中所述；2)酶促釋放Asn297聚醣，隨後衍生化並藉由HPLC(UPLC)以螢光檢測及/或HPLC-MS(UPLC-MS)來檢測/定量；3)天然或還原mAb的完整蛋白質分析，將Asn297聚醣以Endo S或其他會在第一與第二GlcNAc單醣之間切割而留下連接至第一GlcNAc的海藻糖的酵素處理或不經處理；4)以酶消化法(enzymatic digestion)(例如胰蛋白酶或內肽酶Lys-C)將mAb消化成構成分(constituent)肽，隨後以HPLC-MS(UPLC-MS)分離、檢測及定量；或5)用PNGase F在Asn 297進行特異性酶促去醣基化(specific enzymatic deglycosylation)以將mAb寡醣從mAb蛋白分離。該等釋放出的寡醣可用螢光團標記，藉由各種互補的技術分離和鑑定，該等技術允許：藉由基質輔助雷射脫附游離(MALDI)質譜術比較實驗質量與理論質量以精細定性聚醣結構、藉由離子交換HPLC(GlycoSep C)測定唾液酸化(sialylation)程度、藉由正相HPLC(GlycoSep N)根據親水性標準(hydrophilicity criteria)分離及定量寡醣形式、及藉由高效毛細管電泳-雷射誘導螢光(HPCE-LIF)分離及定量寡醣。

本申請案中使用之「低海藻糖(Low fucose)」或「低海藻糖含量(low fucose content)」係指抗體的海藻糖含量為約0%至15%。

本文中使用之「正常海藻糖(Normal fucose)」或「正常海藻糖含量(normal fucose content)」係指抗體的海藻糖含量約超過50%，通常約超過60%、70%、80%、或超過85%。

用於本發明方法中的抗-CD38抗體可藉由體外細胞凋亡來誘導殺滅表現CD38的細胞。評估細胞凋亡的方法為習知，且包括例如使用標準方法進行膜聯蛋白IV(annexin IV)染色。在本發明之方法中的抗-CD38抗體可在約20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或100%的細胞中誘導細胞凋亡。

用於本發明之方法中的抗-CD38抗體可藉由調節CD38酶活性來誘導體外殺滅表現CD38的細胞。CD38係具有ADP-核糖基環化酶1活性的多功能外切酶，其催化了自NAD⁺之環狀ADP-核糖(cADPR)及ADPR形成，並且亦具有將NAD⁺及cADPR水解為 ADPR的功能。CD38亦在酸性條件下催化NADP⁺的菸鹼醯胺基與菸鹼酸交換以產出NAADP⁺(菸鹼酸腺嘌呤二核苷酸磷酸)。本發明之方法中使用的抗-CD38抗體對人類CD38酶活性的調節可於以下文獻中描述之測定中測量：Graeff等人(J.Biol.Chem.269：30260-7,1994)。例如，可將受質NGD⁺與CD38一起培養，且可在加入各種濃度的抗體後的不同時間點透過分光光度法(激發波長為340nM且發射波長為410nM)監測環GDP核糖(cGDPR)生產的調節。cADPR合成的抑制可根據Munshi等人，J.Biol.Chem.275：21566-71,2000中描述之HPLC方法來判定。在本發明之方法中使用的抗-CD38抗體可抑制CD38酶活性達至少約20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或100%。

與包含SEQ ID NO：4之VH及SEQ ID NO：5之VL的抗體實質上同一的抗體可在本發明之方法中使用。用語「實質上同一(substantially identical)」係指所比較的抗體VH或VL胺基酸序列係同一的或具有「無實質性差異(insubstantial difference)」。無實質差異係在抗體VL及/或VL中的1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12、13、14、或15個不會對抗體性能造成不利影響的胺基酸取代。同一性百分比可例如藉由使用Vector NTI v.9.0.0(Invitrogen,Carlsbad,CA)之AlignX模組的預設設定進行成對比對來判定。本發明的蛋白質序列可被用作查詢序列(query sequence)來執行針對公開或專利數據庫的檢索以(例如)鑑定相關序列。用來執行該等檢索之例示性程式係XBLAST或BLASTP程式(http_//www_ncbi_nlm/nih_gov)，或使用預 設設定的GenomeQuest^TM(GenomeQuest,Westborough,MA)套件。可在本發明方法中使用之特異性結合CD38之抗體上進行的例示性取代係例如以具有相似電荷、疏水性、或立體化學特徵的胺基酸進行的保守型取代(conservative substitution)。亦可進行保守型取代以改良抗體性質(例如穩定性或親和力)，或改良抗體的效應功能。1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11，例如可對抗-CD38的VH及/或VL進行12、13、14、或15個胺基酸取代。此外，該重鏈或輕鏈中的任何天然殘基亦可經丙胺酸取代，如先前已針對丙胺酸掃描式突變誘發(alanine scanning mutagenesis)所描述者(MacLennan等人，Acta Physiol Scand Suppl 643：55-67,1998；Sasaki等人，Adv Biophys 35：1-24,1998)。所欲之胺基酸取代可在此等取代係所欲時由所屬領域中具有通常知識者決定。胺基酸取代可例如藉由PCR突變誘發(美國專利第4,683,195號)來進行。變異體庫可使用習知方法來產生，例如使用隨機(NNK)或非隨機密碼子(例如DVK密碼子)，其編碼11種胺基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、Lys、Asn、Arg、Ser、Tyr、Trp)，然後篩選變異體庫以找出具有所欲性質之變異體。所產生的變異體可使用本文所述之方法體外測試其等與CD38的結合、其等誘導ADCC、ADCP、或細胞凋亡、或調節CD38酶活性的能力。

「保守性修飾(conservative modification)」係指對含有胺基酸序列之抗體不會顯著影響或改變其結合特徵的胺基酸修飾。保守性修飾包括胺基酸取代、加成及刪除。保守型取代係其中胺基酸經具有相似側鏈之胺基酸殘基取代的取代。具有相似側鏈之胺基酸殘基 的家族已有明確界定，且包括具有以下者之胺基酸：酸性側鏈(如天冬胺酸、麩胺酸)、鹼性側鏈(如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、非極性側鏈(如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、不帶電極性側鏈(如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、色胺酸)、芳族側鏈(如苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸、酪胺酸)、脂族側鏈(如甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸)、醯胺(如天冬醯胺酸、麩醯胺酸)、β分支側鏈(如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)、及含硫側鏈(半胱胺酸、甲硫胺酸)。此外，多肽中的任何天然殘基亦可經丙胺酸取代，如先前已針對丙胺酸掃描式突變誘發(alanine scanning mutagenesis)所描述者(MacLennan等人，(1988)Acta Physiol Scand Suppl 643：55-67；Sasaki等人，(1988)Adv Biophys 35：1-24)。本發明對於抗體的胺基酸取代可藉由例如PCR突變誘發的已知方法進行(美國專利第4,683,195號)。替代地，可產生變異體庫，例如使用隨機(NNK)或非隨機密碼子(例如DVK密碼子)，其編碼11種胺基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、Lys、Asn、Arg、Ser、Tyr、Trp)。所得抗體變異體可使用本文中所述之檢定來測試其特性。

在一些實施例中，抗體可以小於約1×10^-7M、1×10^-8M、1×10^-9M、1×10^-10M、1×10^-11M、1×10^-12M、1×10^-13M、1×10^-14M、或1×10^-15之解離常數(K_D)來結合CD38，如藉由所屬技術領域中具有通常知識者所實踐的表面電漿共振或Kinexa方法所判定。在一 些實施例中，抗體以小於約1×10^-8M的K_D結合人類CD38。在一些實施例中，抗體以小於約1×10^-9M的K_D結合人類CD38。

KinExA儀器設備、ELISA或所屬技術領域中具有通常知識者已知的競爭結合試驗。特定抗體/CD38交互作用所測量而得的親和力可能會因在不同條件(如，滲透性、pH值)下測量而發生改變。因此，親和力和其他結合參數(如K_D、K_on、K_off)之測量一般而言是以標準化條件及標準化緩衝液進行，諸如本文中所述之緩衝液。所屬領域中具有通常知識者會理解到，在典型檢測極限內，親和力測量(例如使用Biacore 3000或ProteOn進行)的內部誤差(測量為標準差，SD)一般可在測量結果的5至33%內。因此，在K_D的內容脈絡中，用語「約」反映了試驗中的一般標準差。例如，1×10^-9M之K_D的一般SD係多至+0.33×10^-9M。

在一些實施例中，抗-CD38抗體係雙特異性抗體。現有的抗-CD38抗體的VL及/或VH區或如以上所述重新鑑定之VL及VH區可被工程改造成雙特異性全長抗體。該等雙特異性抗體可藉由調節介於單特異性抗體重鏈間的CH3相互作用來製造以形成雙特異性抗體，其係使用諸如在以下文獻中所述之技術：美國專利第7,695,936號；國際專利公開號WO04/111233；美國專利公開號US2010/0015133；美國專利公開號US2007/0287170；國際專利公開號WO2008/119353；美國專利公開號US2009/0182127；美國專利公開號US2010/0286374；美國專利公開號US2011/0123532；國際專利公開號WO2011/131746；國際專利公開號WO2011/143545；或美國 專利公開號US2012/0149876。可合併本發明之抗體之VL及/或VH區的另外雙特異性結構係例如雙可變域免疫球蛋白(國際專利公開號WO2009/134776)、或包括各種二聚化域以連接具有不同特異性的兩個抗體臂的結構，諸如白胺酸拉鍊(leucine zipper)或膠原蛋白二聚化域(國際專利公開號WO2012/022811、美國專利第5,932,448號；美國專利第6,833,441號)。

舉例而言，雙特異性抗體可在無細胞環境中體外產生，此係藉由在兩個單特異性同二聚體抗體之CH3區中引入非對稱突變，且在還原條件中(以讓雙硫鍵異構化)自兩個親體單特異性同二聚體抗體形成該雙特異性異二聚體抗體，其係根據描述於以下文獻中之方法：國際專利公開號WO2011/131746。在該等方法中，第一單特異性雙價抗體(例如，抗-CD38抗體)及第二單特異性雙價抗體係經工程改造以在CH3域具有某些促進異二聚體穩定性之取代；該等抗體係在足以讓絞鏈區中之半胱胺酸進行雙硫鍵異構化的還原條件下一起培養；從而藉由Fab臂交換來產生該雙特異性抗體。培養條件可最佳地被回復為非還原性(non-reducing)。可使用之例示性還原劑係2-巰基乙胺(2-MEA)、二硫蘇糖醇(dithiothreitol,DTT)、二硫赤蘚醇(dithioerythritol,DTE)、麩胱甘肽、參(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱胺酸及β-巰基乙醇，還原劑較佳係選自由下列所組成之群組：2-巰基乙胺、二硫蘇糖醇及參(2-羧乙基)膦。舉例而言，可使用在至少20℃之溫度且有至少25mM之2-MEA存在下或於至少0.5mM之二硫蘇 糖醇存在且在5至8之pH下(例如在7.0之pH下或在7.4之pH下)培養至少90min。

可在該雙特異性抗體之第一重鏈中及在第二重鏈中使用的例示性CH3突變係K409R及/或F405L。

在一些實施例中，抗-CD38抗體係與毒素共軛。共軛方法及合適的毒素為習知。

在一些實施例中，患有AL的對象在CD16的158位置處係苯丙胺酸同型合子(homozygous)(FcγRIIIa-158F/F基因型)或在CD16的158位置處係纈胺酸與苯丙胺酸異型合子(heterozygous)(FcγRIIIa-158F/V基因型)。CD16也被稱為Fcγ受體IIIa(FcγRIIIa)或低親和力免疫球蛋白γFc區受體III-A異型體。在FcγRIIIa蛋白殘基位置158的纈胺酸/苯丙胺酸(V/F)多形性已被顯示出會影響FcγRIIIa對人類IgG的親和力。具FcγRIIIa-158F/F或FcγRIIIa-158F/V多形性的受體當與FcγRIIIa-158V/V相比時顯示出減少的Fc接合並因此有減少的ADCC。人類N-連結寡醣上海藻糖的低量或缺乏會增強抗體誘導ADCC的能力，其係由於抗體與人類FcγRIIIa(CD16)結合的提昇(Shields等人，J Biol Chem 277：26733-40,2002)。可使用常規方法來分析病患的FcγRIIIa多形性。

本發明亦提供了治療患有AL的對象的方法，包含對有彼之需要的病患投予結合人類CD38(SEQ ID NO：1)的區域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)及區域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體藉由抗體依賴 性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞凋亡、或CD38酶活性的體外調節來誘導體外殺滅表現CD38的致病性漿細胞，其中該對象對於CD16的158位置處的纈胺酸係同型合子(homozygous)。

本發明亦提供了治療患有AL的對象的方法，包含對有彼之需要的病患投予結合人類CD38(SEQ ID NO：1)的區域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)及區域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞凋亡、或CD38酶活性的體外調節來誘導體外殺滅表現CD38的致病性漿細胞，其中該對象對於CD16的158位置處的苯丙胺酸係同型合子(homozygous)，或對於CD16的位置158處的纈胺酸及苯丙胺酸係雜合的。

本發明亦提供了治療患有AL之病患的方法，包含對有彼之需要的該病患投予抗-CD38抗體，該抗體與包含SEQ ID NO：4的重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5的輕鏈可變區(VL)的抗體競爭結合至CD38，其中該抗-CD38抗體藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞凋亡、或CD38酶活性的體外調節來誘導體外殺滅CD38陽性致病性漿細胞，其中該對象對於CD16的位置158處的纈胺酸係同型合子(homozygous)。

本發明亦提供了治療患有AL之病患的方法，包含對有彼之需要的病患投予抗-CD38抗體，該抗體與包含SEQ ID NO：4的重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5的輕鏈可變區(VL)的抗體競爭結合至CD38，其中該抗-CD38抗體藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞凋亡、或CD38酶活性的體外調節來誘導體外殺滅CD38陽性致病性漿細胞，其中該病患對於在CD 16的158位置處的苯丙胺酸係同型合子(homozygous)，或對於在CD 16的158位置處的纈胺酸及苯丙胺酸係異型合子(heterozygous)。

本發明亦提供了治療患有AL之病患的方法，其包含：判定該病患對於CD16的158位置處的纈胺酸係同型合子(homozygous)或異型合子(heterozygous)；及

對病患投予抗-CD38抗體，

其與包含SEQ ID NO：4的重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5的輕鏈可變區(VL)的抗體競爭結合至CD38；

包含分別係SEQ ID NO：6、7、及8之重鏈互補決定區(HCDR)：1(HCDR1)、2(HCDR2)、及3(HCDR3)序列，以及分別係SEQ ID NO：9、10、及11之輕鏈互補決定區(LCDR)：1(LCDR1)、2(LCDR2)、及3(LCDR3)序列；或包含SEQ ID NO：4的重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5的輕鏈可變區(VL)持續一段足以治療病患的時間。

在一些實施例中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)及測序來判定病患對CD16的158位置處的纈胺酸係同型合子(homozygous)或異型合子(heterozygous)。

投予/醫藥組成物

在本發明的方法中，可在包含抗-CD38抗體及醫藥上可接受之載劑的合適醫藥組成物中提供抗-CD38抗體。該載劑可為與該抗-CD38抗體一起投予之稀釋劑、佐劑、賦形劑、或媒劑。此等媒劑可為液體如水及油，包括來自石油、動物、蔬菜或合成來源者，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及類似者。舉例而言，可使用0.4%鹽水及0.3%甘胺酸。這些溶液係無菌且通常不含顆粒物質。它們可藉由習用、廣為人知的滅菌技術(例如過濾)來滅菌。該等組成物可含有如用以接近生理條件所需之醫藥上可接受輔助物質，該接近生理條件諸如pH調整及緩衝劑、穩定、增稠、潤滑、及著色劑等。在此類醫藥配方中的抗-CD38抗體之濃度可有廣泛變化，即從小於約0.5重量%，通常達以重量計至少約1%至多達15或20重量%、25重量%、30重量%、35重量%、40重量%、45重量%、或50重量%，並且將主要根據所需劑量、流體體積、黏度等，依據所選擇之特定投予模式來選擇。合適的媒劑及調配物(包含其他的人類蛋白質，例如人類血清白蛋白)，舉例而言，係被描述於例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy,21^st Edition,Troy,D.B.ed.,Lipincott Williams and Wilkins,Philadelphia,PA 2006,Part 5,Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092中，請特別參見pp.958-989。

抗-CD38抗體之投予模式可為任何合適之途徑，諸如非經腸道(parenteral)投予，例如皮內、肌肉內、腹膜內(intraperitoneal)、靜脈內或皮下、肺臟、經黏膜(口腔、鼻腔、陰道內、直腸)或所屬領域中具有通常知識者所理解以及在所屬技術領域中習知之其他手段。

本發明方法中抗-CD38抗體可經由任何合適的途徑來對病患投予，例如非經腸道(藉由靜脈(i.v.)輸液或高劑量注射(bolus injection))、肌肉內或皮下或腹膜內。可在例如15,30,60,90,120,180，或240分鐘、或者1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12小時內給予i.v.輸注。

給予病患之抗-CD38抗體之劑量係足以減輕或至少部分遏止所要治療之疾病(「治療有效量」)並且有時可為0.005mg至約100mg/kg，例如約0.05mg至約30mg/kg、或約5mg至約25mg/kg、或約4mg/kg、約8mg/kg、約16mg/kg、或約24mg/kg，或者例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg，且甚至可以更高，例如約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70、80、90或100mg/kg。

亦可給予固定單位劑量，例如50、100、200、500或1000mg，或者劑量可基於病患之表面積，例如500、400、300、250、200、或100mg/m²。通常可投予1至8個劑量(例如，1、2、3、4、 5、6、7或8)以治療AL，但亦可給予9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多劑量。

本發明方法中之抗-CD38抗體，其投予可在一天、兩天、三天、四天、五天、六天、一週、兩週、三週、一個月、五週、六週、七週、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、或更久之後重覆進行。重覆治療過程亦為可能者，如為慢性投予。重覆投予可在相同劑量或在不同劑量下。例如，抗-CD38抗體可以8mg/kg或以16mg/kg以每週間隔投予持續8週，接著以8mg/kg或以16mg/kg每兩週投予持續另外16週，接著以8mg/kg或以16mg/kg藉由靜脈輸液每四週投予。

在一些實施例中，抗-CD38抗體以16mg/kg每週投予一次持續8週，然後以16mg/kg每兩週投予一次持續16週，隨後以16mg/kg每四週投予一次至停藥。

在一些實施例中，抗-CD38抗體以8mg/kg每週投予一次持續8週，然後以8mg/kg每兩週投予一次持續16週，隨後以8mg/kg每四週投予一次至停藥。

在一些實施例中，抗-CD38抗體以16mg/kg每週投予一次持續4週，然後以16mg/kg每兩週投予一次持續16週，隨後以16mg/kg每四週投予一次至停藥。

在一些實施例中，抗-CD38抗體以8mg/kg每週投予一次持續4週，然後以8mg/kg每兩週投予一次持續16週，隨後以8mg/kg每四週投予一次至停藥。

抗-CD38抗體可作為維持治療投予，例如，每週一次，持續6個月或更長的時間。

例如，在開始治療後的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40天中的至少一天、或第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20週中的至少一週、或其任何組合，抗-CD38抗體可每天以約0.1至100mg/kg的量的日劑量提供，例如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90、或100mg/kg，使用每24、12、8、6、4、或2小時的單一或分次劑量，或其任何組合。

抗-CD38抗體亦可預防性投予以降低發展癌症之風險、延緩癌症進展事件之開始發生、及/或當癌症處於緩解時降低復發之風險。這可能在已知存在有腫瘤但因其他生物因素而很難定位腫瘤的病患中特別有用。

抗-CD38抗體可凍乾用於儲存，並在使用前在合適的載劑中重構。此技術已顯示對於習用蛋白質製劑為有效者並且可使用廣為人知之凍乾及重構技術。

包含特異性結合CD38之抗體及玻尿酸酶的醫藥組成物之皮下投予

抗-CD38抗體可以醫藥組成物之形式經皮下投予，該組成物包含抗-CD38抗體及玻尿酸酶。

經皮下投予之醫藥組成物中抗-CD38抗體之濃度可係約20mg/ml。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,200mg至1,800mg之間的抗-CD38抗體。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,200mg的抗-CD38抗體。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,600mg的抗-CD38抗體。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,800mg的抗-CD38抗體。

皮下投予之醫藥組成物可包含介於約30,000U至45,000U之間的玻尿酸酶。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,200mg的抗-CD38抗體及約30,000U的玻尿酸酶。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,800mg的抗-CD38抗體及約45,000U的玻尿酸酶。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,600mg的抗-CD38抗體及約30,000U的玻尿酸酶。

經皮下投予之醫藥組成物可包含約1,600mg的抗-CD38抗體及約45,000U的玻尿酸酶。

皮下投予之醫藥組成物可包含玻尿酸酶rHuPH20，其具有SEQ ID NO：22之胺基酸序列。

rHuPH20係重組玻尿酸酶(HYLENEX®重組體)，且描述於國際專利公開號WO2004/078140中。

玻尿酸酶係降解玻尿酸(EC 3.2.1.35)的酶，並減低在細胞外基質中玻尿酸之黏度，從而增加組織滲透性。

SEQ ID NO：22

包含抗-CD38抗體及玻尿酸酶之醫藥組成物的投予可在一天、兩天、三天、四天、五天、六天、一週、兩週、三週、四週、五週、六週、七週、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、或 更久之後重覆進行。重覆治療過程亦為可能者，如為慢性投予。重覆投予可在相同劑量或在不同劑量下。例如，包含抗-CD38抗體及玻尿酸酶之醫藥組成物的投予可每週一次持續八週，接著兩週一次持續16週，接著四週一次。要投予的醫藥組成物可包含約1,200mg的抗-CD38抗體及約30,000U的玻尿酸酶，其中在醫藥組成物中與CD38特異性結合的抗體濃度係約20mg/ml。要投予的醫藥組成物可包含約1,800mg的抗-CD38抗體及約45,000U的玻尿酸酶。要投予的醫藥組成物可包含約1,600mg的抗-CD38抗體及約30,000U的玻尿酸酶。要投予的醫藥組成物可包含約1,600mg的抗-CD38抗體及約45,000U的玻尿酸酶。

包含抗-CD38抗體及玻尿酸酶之醫藥組成物可經皮下投予至腹部區域。

包含抗-CD38抗體及玻尿酸酶之醫藥組成物可以約80ml、90ml、100ml、110ml、或120ml之總量投予。

投予時，可將20mg/ml之抗-CD38抗體(於25mM醋酸鈉、60mM氯化鈉、140mM D-甘露醇、0.04%聚山梨醇酯20，pH 5.5)與rHuPH20(1.0mg/mL(75-150kU/mL)，於10mM L-組胺酸、130mM NaCl、10mM L-甲硫胺酸、0.02%聚山梨醇酯80，pH 6.5)混合，然後將該混合物投予至對象。

組合療法

抗-CD38抗體可以與第二治療劑組合投予。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包括對有彼之需要的病患投予抗-CD38抗體與蛋白酶體抑制劑之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包括對有彼之需要的病患投予抗-CD38抗體與蛋白酶體抑制劑及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包括對有彼之需要的病患投予抗-CD38抗體與蛋白酶體抑制劑、皮質類固醇及環磷醯胺之組合一段足以治療AL之時間。

在一些實施例中，第二治療劑係蛋白酶體抑制劑。

在一些實施例中，蛋白酶體抑制劑係Velcade®(硼替佐米(bortezomib))；或長春花生物鹼(vinca alkaloid)，例如長春新鹼(vincristine)；或蒽環黴素(anthracycline)，例如多柔比星(doxorubicin)。

在一些實施例中，第二治療劑係皮質類固醇。

在一些實施例中，皮質類固醇係迪皮質醇(dexamethasone)。

在一些實施例中，皮質類固醇係潑尼松(prednisone)。

在一些實施例中，第二治療劑係環磷醯胺。

在一些實施例中，第二治療劑係麩胺酸衍生物。

在一些實施例中，麩胺酸衍生物係Thalomid®(沙利度胺(thalidomide))、Revlimid®(來那度胺(lenalidomide))、Actimid®(CC4047)。

在一些實施例中，第二治療劑係Velcade®(硼替佐米(bortezomib))，環磷醯胺例如Cytoxan®或Neosar®，Alkeran®(黴法蘭(melphalan))，Thalomid®(沙利度胺(thalidomide))，Revlimid®(來那度胺(lenalidomide))或Pomalyst®(泊馬度胺(pomalidomide))，皮質類固醇(迪皮質醇(dexamethasone))，干擾素α(IFN-α)，幹細胞移植，Ninlaro^®(伊紮珠單抗(ixazomib))或NEOD001。

硼替佐米(bortezomib)可每週兩次或每週一次以1.3mg/m² SQ投予

環磷醯胺可以在2至5天內分次IV投予(間歇治療)40至50mg/kg(400至1800mg/m²)；可以2至4週的間隔重複；IV(連續每日治療)：60至120mg/m²/天(1至2.5mg/kg/天)；PO(間歇治療)：400至1000mg/m²在4至5天內分次或PO(連續每日治療)：50至100mg/m²/天或1至5mg/kg/天。

迪皮質醇(dexamethasone)可以40mg/週投予，或在抗-CD38抗體給藥前及給藥後投予20mg。

黴法蘭(melphalan)可在每個週期的第1至4天以9mg/m²每天一次經口投予，直到第9週期。

沙利度胺(thalidomide)可以每天一次經口投予200mg。

來那度胺(lenalidomide)可以在每個週期的第1至21天經口投予25mg/天。

泊馬度胺(pomalidomide)可以在重複的28天週期的第1至21天經口投予4mg。

伊紮珠單抗(ixazomib)可以每28天以24mg/kg IV投予。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)及環磷醯胺之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的 HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺、及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與黴法蘭(melphalan)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的 HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)及黴法蘭(melphalan)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、黴法蘭(melphalan)、及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、黴法蘭(melphalan)、及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與IFN-α之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的 HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與IFN-α及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與IFN-α及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與來那度胺(lenalinomide)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與來那度胺(lenalinomide)及環磷醯胺之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與來那度胺 (lenalinomide)、環磷醯胺、及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與來那度胺、環磷醯胺、及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與泊馬度胺(pomalinomide)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與泊馬度胺(pomalinomide)及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與泊馬度胺 (pomalinomide)及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與沙利度胺(thalidomide)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與沙利度胺(thalidomide)及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與沙利度胺(thalidomide)及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的 LCDR1、LCDR3、及LCDR3的抗-CD38抗體與伊紮珠單抗(ixazomib)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)之組合一段足以治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)之時間一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)及環磷醯胺之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺、及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺、及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與黴法蘭(melphalan)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)及黴法蘭(melphalan)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、黴法蘭(melphalan)、及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與硼替佐米(bortezomib)、黴法蘭(melphalan)、及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與IFN-α之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與IFN-α及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與IFN-α及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與來那度胺(lenalinomide)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與來那度胺(lenalinomide)及環磷醯胺之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與來那度胺(lenalinomide)、環磷醯胺、及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與來那度胺、環磷醯胺、及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與泊馬度胺(pomalinomide)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與泊馬度胺(pomalinomide)及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與泊馬度胺(pomalinomide)及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，包含對有彼之需要的病患投予包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的HCDR1、HCDR2、及HCDR3以及SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與沙利度胺(thalidomide)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與沙利度胺(thalidomide)及皮質類固醇之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與沙利度胺(thalidomide)及迪皮質醇(dexamethasone)之組合一段足以治療AL之時間。

本發明亦提供了治療輕鏈型類澱粉變性症(AL)的方法，其包含對有彼之需要的病患投予包含SEQ ID NO：4的VH及SEQ ID NO：5的VL的抗-CD38抗體與伊紮珠單抗(ixazomib)之組合一段足以治療AL之時間。

在一些實施例中，病患對用蛋白酶體抑制劑治療有抗性。

在一些實施例中，病患對用環磷醯胺治療有抗性。

在一些實施例中，病患對用皮質類固醇治療有抗性。

在一些實施例中，病患對用蛋白酶體抑制劑、環磷醯胺、及皮質類固醇的治療有抗性。

在一些實施例中，病患對用Velcade®(硼替佐米(bortezomib))、環磷醯胺、及迪皮質醇(dexamethasone)的治療有抗性。

在一些實施例中，抗-CD38抗體及第二治療劑的組合可以在任何方便的時間範圍內投予。例如，抗-CD38抗體及第二治療劑可以在同一天，甚至在同一靜脈內輸注中投予病患。然而，抗-CD38抗體及第二治療劑亦可以在交替的天或交替的週或月等等投予。在一些實施例中，抗-CD38抗體及第二治療劑可以足夠接近的時間投予，使得其等在被治療的病患中以可偵測的水準同時存在(例如在血清中)。在一些實施例中，在一段時間內由多個劑量組成的整個用抗-CD38抗體治療過程之後或之前，進行由多個劑量組成的第二治療劑的治療過程。在投予抗-CD38抗體與第二治療劑之間可以使用1天、2天、或幾天、或幾週的恢復期。

抗-CD38抗體或抗-CD38抗體與第二治療劑之組合可與任何形式的放射療法(包括體外放射(external beam radiation)；強度調控放射療法(IMRT)；及任何形式的放射手術(包括γ刀(Gamma Knife)、射波刀(Cyberknife)、直線加速器(Linac)、及間質放射(例如植入的放射性種粒、GliaSite氣球)))及/或與手術一起施用。

雖然已用一般術語描述了本發明，本發明之實施例將進一步揭露於下列實例中，但其不應被解釋為限制權利要求的範圍。

本發明之進一步實施例

以下所提出根據本文中他處揭示的本發明之某些進一步實施例。經描述為與本文中所揭露之本發明相關的來自以上提出之本發明之實施例的特徵亦與這些進一步編號實施例之每一者有關。

1.一種抗-CD38抗體，其與包含SEQ ID NO：4之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5之輕鏈可變區(VL)的抗體競爭結合至CD38而用於治療患有CD38陽性血液惡性疾病之病患，其中該病患正在接受造血幹細胞移植(HSCT)。

2.用於如實施例1所述之用途的抗-CD38抗體，其中該CD38陽性血液惡性疾病係

a.輕鏈型類澱粉變性症(AL)、多發性骨髓瘤(MM)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯奇氏淋巴瘤(BL)、濾泡淋巴瘤(FL)、或被套細胞淋巴瘤(MCL)；

b.漿細胞疾病；

c.輕鏈型類澱粉變性症(AL)；

d.多發性骨髓瘤(MM)；或

e.瓦登斯特隆巨球蛋白血症。

3.用於如實施例2所述之用途的抗-CD38抗體，其中AL係心臟I期(cardiac stage I)、心臟II期(cardiac stage II)、心臟III期(cardiac stage III)、復發性、或難治性。

4.用於如實施例1至3中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該HSCT

a.係同種異體的、自體的、或同基因的；或

b.包括移植源自骨髓、血液、或羊水的血液幹細胞。

5.用於如實施例1至4中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係在HSCT之前、之期間、或之後投予。

6.用於如實施例1至5中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該病患在HSCT之前已經完成化療及/或放射療法。

7.用於如實施例1至6中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體結合至人類CD38(SEQ ID NO：1)的SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)區及EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)區。

8.用於如實施例1至7中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的重鏈互補決定區(HCDR)1、HCDR2、及HCDR3序列；及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的輕鏈互補決定區(LCDR)1、LCDR2、及LCDR3序列。

9.用於如實施例1至8中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含SEQ ID NO：4的重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5的輕鏈可變區(VL)。

10.用於如實施例1至9中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包括包含與SEQ ID NO：12之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、或99%同一性之胺基酸序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：13之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、或99%同一性之胺基酸序列的輕鏈。

11.用於如實施例1至10中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含SEQ ID NO：12的重鏈及SEQ ID NO：13的輕鏈。

12.一種抗-CD38抗體，其與包含SEQ ID NO：4的重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5的輕鏈可變區(VL)的抗體競爭結合至CD38而用於治療患有輕鏈型類澱粉變性症之病患。

13.用於如實施例12所述之用途的抗-CD38抗體，其中該病患對用蛋白酶體抑制劑、環磷醯胺、及/或皮質類固醇的治療有抗性。

14.用於如實施例13所述之用途的抗-CD38抗體，其中該蛋白酶體抑制劑係Velcade®(硼替佐米(bortezomib))。

15.用於如實施例13至14中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該皮質類固醇係迪皮質醇(dexamethasone)。

16.用於如實施例12至15中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係與第二治療劑組合投予。

17.用於如實施例16所述之用途的抗-CD38抗體，其中該第二治療劑係蛋白酶體抑制劑、環磷醯胺、或皮質類固醇。

18.用於如實施例16至17中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該蛋白酶體抑制劑係Velcade®(硼替佐米(bortezomib))或NINLARO®(伊紮珠單抗(ixazomib))。

19.用於如實施例16至18中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該皮質類固醇係迪皮質醇(dexamethasone)。

20.用於如實施例16至19中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該第二治療劑係Velcade®(硼替佐米(bortezomib))、NINLARO®(伊紮珠單抗(ixazomib))、Kyprolis®(卡非佐米(carfilzomib))、Farydak®(帕比司他(panobinostat))、環磷醯胺、Alkeran®(黴法蘭(melphalan))、Thalomid®(沙利度胺(thalidomide))、Revlimid®(來那度胺(lenalidomide))、Pomalyst®(泊馬度胺(pomalidomide))、迪皮質醇(dexamethasone)、或干擾素α。

21.用於如實施例12至20中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係與蛋白酶體抑制劑、環磷醯胺、及皮質類固醇組合投予。

22.用於如實施例21所述之用途的抗-CD38抗體，其中該蛋白酶體抑制劑係Velcade®(硼替佐米(bortezomib))。

23.用於如實施例21至22中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該蛋白酶體抑制劑係NINLARO®(伊紮珠單抗(ixazomib))。

24.用於如實施例21至23中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該皮質類固醇係迪皮質醇(dexamethasone)。

25.用於如實施例21至24中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該蛋白酶體抑制劑係Velcade®(硼替佐米(bortezomib))，並且該皮質類固醇係迪皮質醇(dexamethasone)。

26.用於如實施例21至25中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該蛋白酶體抑制劑係NINLARO®(伊紮珠單抗(ixazomib))，並且該皮質類固醇係迪皮質醇(dexamethasone)。

27.用於如實施例16至26中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體與該第二治療劑係同時、依序、或分開投予。

28.用於如實施例16至27中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體與該第二治療劑係同時、依序、或分開投予。

29.用於如實施例21至28中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該等抗-CD38抗體、蛋白酶體抑制劑、環磷醯胺、及該皮質類固醇係同時、依序、或分開投予。

30.用於如實施例12至29中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中AL係心臟I期、心臟II期、心臟III期、復發性、或難治性。

31.用於如實施例12至30中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該病患正在接受造血幹細胞移植(HSCT)。

32.用於如實施例12至31中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該HSCT係同種異體的、自體的、或同基因的。

33.用於如實施例12至32中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該HSCT包括移植源自骨髓、血液、或羊水的血液幹細胞。

34.用於如實施例12至33中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係在HSCT之前、之期間、或之後投予。

35.用於如實施例12至34中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該病患在HSCT之前已經完成化療及/或放射療法。

36.用於如實施例12至35中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該病患進一步經放射療法治療。

37.用於如實施例12至36中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體不藉由補體依賴性細胞毒性(CDC)來媒介殺滅CD34陽性造血先驅細胞。

38.用於如實施例12至37中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、抗體依賴性細胞吞噬作用、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞凋亡、或CD38酶活性的調節來誘導殺滅CD38陽性漿細胞。

39.用於如實施例12至38中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體與包含SEQ ID NO：4之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：5之輕鏈可變區(VL)的抗體競爭結合至CD38。

40.用於如實施例12至39中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體至少結合至人類CD38(SEQ ID NO：1)的SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)區及EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)區。

41.用於如實施例12至40中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含分別為SEQ ID NO：6、7、及8的重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列，以及分別為SEQ ID NO：9、10、及11的輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列。

42.用於如實施例12至41中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包括包含與SEQ ID NO：4之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性之胺基酸序列的VH及包含與SEQ ID NO：5之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性之胺基酸序列的VL。

43.用於如實施例12至42中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含SEQ ID NO：4的該VH及SEQ ID NO：5的該VL。

44.用於如實施例12至43中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包括包含與SEQ ID NO：12之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性之胺基酸序列的重鏈及包含與SEQ ID NO：13之胺基酸序列具有95%、96%、97%、98%、99%、或100%同一性之胺基酸序列的輕鏈。

45.用於如實施例12至44中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含SEQ ID NO：12的重鏈及SEQ ID NO：13的輕鏈。

46.用於如實施例12至46中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含下列者之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3：

a.SEQ ID NO：14的VH及SEQ ID NO：15的VL；

b.SEQ ID NO：16的VH及SEQ ID NO：17的VL；

c.SEQ ID NO：18的VH及SEQ ID NO：19的VL；或

d.SEQ ID NO：20的VH及SEQ ID NO：21的VL，其中該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3係由Kabat、Chothia、或IMGT定義。

47.用於如實施例46所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體包含

e.SEQ ID NO：14的VH及SEQ ID NO：15的VL；

f.SEQ ID NO：16的VH及SEQ ID NO：17的VL；

g.SEQ ID NO：18的VH及SEQ ID NO：19的VL；或

h.SEQ ID NO：20的VH及SEQ ID NO：21的VL。

48.用於如實施例12至47中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係人化抗體或人類抗體。

49.用於如實施例12至48中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型。

50.用於如實施例12至49中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係IgG1同型。

51.用於如實施例12至50中任一項所述之用途的抗-CD38抗體，其中該抗-CD38抗體係經靜脈內投予。

52.用於如實施例12至51中任一項所述之用途的抗-CD38抗體， 其中該抗-CD38抗體係以醫藥組成物經皮下投予，該醫藥組成物包含該抗-CD38抗體及玻尿酸酶。

53.用於如實施例42所述之用途的抗-CD38抗體，其中該玻尿酸酶係SEQ ID NO：22之rHuPH20。

實例1。材料和方法

將來自在需要書面知情同意之IRB批准臨床研究(Tufts Medical Center IRB #10680，DARZALEX ^TM(達拉單抗(daratumumab))在用於同源漿細胞疾病之病患的幹細胞動員及移植中的臨床前研究(Pre-Clinical Studies of DARZALEX ^TM (daratumumab)in Stem-Cell Mobilization and Transplant for Patients with Clonal Plasma cell Diseases))中進行血液幹細胞動員及收集的MM及AL病患的動員血液幹細胞及先驅細胞用於研究DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對體外CD34⁺細胞生長的影響。使用來自患有MM及AL之病患的未經選擇及CD34經選擇的動員血液先驅細胞。在半固體測定中評估DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或同型對 照抗體對於體外先驅細胞集落生長的作用來作為DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對CD34⁺人類造血先驅細胞增生的影響之指標。

根據製造商的說明使用來自第1天白細胞單離(leukapheresis)產物的幾種濃度的未選擇及CD34經選擇的動員血液幹細胞進行含有重組細胞介素(Stem Cell Technologies，Vancouver，CA；目錄號04435)的甲基纖維素先驅細胞測定。用Miltenyi MiniMacs裝置進行CD34選擇。使用濃度為0.5×10⁴/ml的CD34未經選擇細胞及濃度為500個細胞/ml的CD34經選擇細胞。用不同濃度的DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或對照抗體進行測定；在一些測定中，將細胞接種在含有DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或對照抗體的培養基中，而在其他測定中，在37℃下，在5% CO₂中，在具有DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或對照抗體的富含補體之人類血清中培養一小時之後接種細胞。在第14天計數集落(CFU-GM、BFU-E、CFU-Mix)。

實例2. CD38在純系AL漿細胞上表現

基於之FACS分選之CD138⁺骨髓漿細胞的轉錄譜，具有AL之病患之純系漿細胞顯示高水準的CD38 mRNA(n=16，GEO GSE24128；Zhou等人，Clin Lymphoma Myeloma Leuk 12：49-58,2012)(圖1)。此外，在對來自新確診AL病患的CD138⁺骨髓漿細胞的免疫表型之分析中，在所有情況下均在細胞表面上發現CD38(Paiva等人，Blood 117：3613-6,2011)。

實例3。來自具有AL之病患之NK細胞係功能性的，並且在幹細胞移植(SCT)3週後誘導針對CD38表現細胞的DARZALEX ^TM (達拉單抗(daratumumab))媒介的ADCC

使用實例1中描述的需要書面知情同意之IRB批准研究方案，評估在SCT之後三週從AL病患獲得的NK細胞(CD3-/CD56+/CD16+)，評估周邊血液樣品中NK細胞的百分比及數量及這些NK細胞效應子與DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))在以人類漿細胞(MM1S細胞)為目標的ADCC測定中的體外活性。MM1S細胞表現高水準的CD38，使其成為DARA的合適目標。使用FlowCellect^TM人類自然殺手細胞表徵套組(Millipore，Billerica，MA；目錄號FCIM025164)進行流動式細胞測量術。根據製造商的說明進行生物發光細胞毒性測定(Cell Technology；Mountain View,CA)。目標細胞濃度以每孔5000個MM1S細胞來優化。將目標細胞與DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或對照抗體(人類IgG1κ，Sigma-Aldrich，St Louis MO)以100ng/ml在37℃5% CO₂培養箱中培養15分鐘。然後，將其等以10：1的效應物：目標細胞濃度加入含有病患NK細胞的孔中。基於新鮮病患樣品的流動式細胞測量術表徵來計算每個樣本中NK細胞的數量。藉由使用標準對照根據製造商的說明計算每種反應條件的發光值來判定ADCC。每種情況的裂解量(%ADCC)藉由以下計算來判定：

%ADCC=(樣本)-(對照1)-(對照2)X100(對照3)-(對照1)

樣本：使用DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))之樣本

對照1：使用同型對照(目標自發釋放)之測定

對照2：無抗體，無效應細胞

對照3：在裂解試劑存在下的最大裂解

藉由從使用DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))之%ADCC中減去使用同型對照之%ADCC來計算DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))特異性裂解的量。

如圖2中所示，在SCT之後3週的AL病患(n=9)之周邊血液中，NK細胞幾乎佔所有單核細胞的三分之一。在生物發光ADCC測定中，來自具有AL的病患(n=6)的NK細胞與DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))組合具有32%(範圍，-3至73%)的中位數特異性裂解。

實例4。即便在CD34+造血先驅細胞上發現到高CD38表現，但DARZALEX ^TM (達拉單抗(daratumumab))並不誘導CD34+造血先驅細胞殺滅。

使用流動式細胞測量術，使用APC共軛的抗人類CD38(HIT2，Biolegend，San Diego CA)分析CD34⁺細胞上的CD38表現。CD34⁺細胞具有骨髓母細胞的外觀，並表現高水準的CD38(圖3)。

如實例1中所述，使用來自在需要知情同意之IRB批准臨床研究中進行血液幹細胞動員及收集的MM及AL病患的動員血液幹細胞及先驅細胞，研究DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對體外CD34⁺細胞生長的作用。使用來自患有MM及AL的病患的未經選擇及CD34經選擇的動員血液先驅細胞，並且在半固體測定中評估達拉單抗(daratumumab)或同型對照抗體對於體外先驅細胞集落生長的作用作為DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對CD34⁺人類造血先驅細胞增生的影響的指標。

根據製造商的說明使用來自第1天白細胞單離(leukapheresis)產物的幾種濃度的未選擇或CD34經選擇的動員血液幹細胞進行含有重組細胞介素(Stem Cell Technologies，Vaneouver，CA；目錄號04435)的甲基纖維素先驅細胞測定。用Miltenyi MiniMacs裝置進行CD34選擇。使用濃度為0.5×10⁴/ml的CD34未經選擇細胞及濃度為500個細胞/ml的CD34經選擇細胞。用不同濃度的DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或對照抗體進行測定；在一些測定中，將細胞接種在含有DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或對照抗體的培養基中，而在其他測定中，在37℃下，在5% CO₂中，在具有DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或對照抗體的富含補體之人類血清中培養一小時之後接種細胞。在第14天計數集落(CFU-GM、BFU-E、CFU-Mix)。

與無抗體對照相比，解凍的冷凍保存的未經選擇動員血液先驅細胞在具有DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或同型 對照(500或1000ng/ml)的培養物中生長相似數量的CFU-GM(圖4A)及BFU-E(圖4B)。在這些實驗中，在500ng/ml或1000ng/ml的DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或同型對照的存在下，將解凍的未經選擇的動員人類血液先驅細胞以每ml半固體培養基(甲基纖維素)有5×10⁴個細胞的濃度接種。CFU-GM及GFU-E在兩週後計數，作為與無抗體對照相比時的CFU-GM百分比。值得注意的是，在具有1000ng/ml同型對照抗體的孔盤中，由於不明原因，存在顯著更多的CFU-GM。

亦評估了DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對新鮮未經選擇的動員血液先驅細胞的作用。DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))不減少CFU-GM(圖5A)或BFU-E(圖5B)。當與無抗體對照相比時，DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))及同型對照都以相似水準增加了CFU-GM之形成。

評估DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))在新鮮CD34經選擇的造血先驅細胞上誘導CDC的能力。將CD34⁺細胞在沒有抗體、具有500ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))或500ng/ml同型對照的10%富含補體人類血清中培養1小時，然後直接接種在半固體培養基中。評估每500個CD34經選擇細胞的集落形成。DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))不會減少CFU-GM(圖6A)或BFU-E(圖6B)，表明抗體在初使的CD34經選擇的先驅細胞上不誘導CDC，儘管這些細胞上有CD38表現。由於不明原因，在DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))處理的樣本中有更多的 BFU-E。DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))增加了形成的BFU-E的數量。

亦藉由將細胞直接接種到含有500ng/ml或1000ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))、或同型對照、或無抗體的甲基纖維素中來測試DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))對新鮮CD34經選擇的造血先驅細胞的作用。在第14天，對於每500個CD34經選擇細胞的CFU-GM(圖7A)或每500個CD34經選擇細胞的BFU-E(圖7B)評估集落形成。任何濃度的DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))都不使得集落形成減少，表明DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))在該測定系統中對CD34⁺細胞集落形成沒有毒性。圖6A、6B、及7A中的結果顯示來自1名具有MM之病患及2名具有AL之病患的動員血液先驅細胞的結果。圖7B中的結果顯示來自2名具有MM之病患及1名具有AL之病患的動員血液先驅細胞的結果。由於不明原因，在500ng/ml DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))存在下，BFU-E的測定包含了顯著更多的BFU-E。

實例5。藉由病患NK細胞的DARZALEX ^TM (達拉單抗(daratumumab))媒介的ADCC取決於FcγRIIIA基因型。

來自病患細胞的基因組DNA用於使用前述方法及引子的基於PCR的分析(Hatjiharissi等，Blood 110：2561-2564,2007)。對擴增子進行定序並分析FcγRIIIA-158多形性。將具有編碼V/F及V/V的FcγRIIIA-158aa等位基因的病患之ADCC測定中的 DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))特異性裂解與F/F同型合子進行比較。

基於PCR的分析顯示，在本研究中分析的10個病患中，6個病患具有V/F或V/V多形性，並且具有60%中位數裂解活性(31至98)，而4個病患具有F/F等位基因並且具有17%中位數裂解(0至32)(圖8；P<0.05，Mann Whitney，雙尾)。

在未來的臨床試驗中可以檢查Fc受體多形性與DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))ADCC的初始相關性。

實例6。用於在新確診全身性AL類澱粉變性症中與單獨CyBorD相比，評估DARZALEX ^TM (達拉單抗(daratumumab))與環磷醯胺、硼替佐米(bortezomib)及迪皮質醇(dexamethasone)(CyBorD)之組合的功效及安全性的隨機化第3期研究。

在新確診AL類澱粉變性症的對象中對於DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))與CyBorD(環磷醯胺、硼替佐米(bortezomib)及迪皮質醇(dexamethasone))的組合與單獨CyBorD進行第3期、兩群組、開放標籤研究之比較。

目前沒有批准用於AL類澱粉變性症的藥物。在沒有批准治療的情況下，規定將針對多發性骨髓瘤而開發的藥物用於治療。CyBorD的組合係在歐盟及美國最常用於AL類澱粉變性症的初始治療(Venner等人，Blood 119：4387-4390,2012；Mikhael等人，Blood 119：4391-4394,2012；Jaggard等人，Hematologica 99：1479-1485,2014；Palladini等人，Blood 126：612-615,2015)。

主要目的

主要目的係評估在AL病患中與單獨的CyBorD相比，使用DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))與CyBorD的組合治療後的完全血液學反應。

次要目的

●基於全因(all-cause)死亡率及進展疾病(PD，包括根據共識指南的血液學PD及器官PD)評估PFS。

●評估器官反應率(OrRR)(Comenzo 2012)。

○腎臟

○心臟

○肝臟

●評估血液學反應率(ORR)及血液學VGPR或更佳(即CR+VGPR)反應率。

●評估心臟、腎臟、肝臟的器官進展率。

●分別評估血液CR及VGPR或更佳反應率的持續時間及實現時間。

●評估器官反應的持續時間及實現時間。

●評估與CyBorD組合投予時DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))的安全性及耐受性。

●評估DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))藥物動力學。

●評估DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))的免疫原性。

●評估對包括SF-36健康問卷、EuroQol-5維度(EQ-5D-5L)及歐洲癌症研究與治療組織(EORTC)QLQ-C30在內的病患報告結果(PRO)的治療效果。

探索目的

●評估包括高靈敏度(HS)肌鈣蛋白T在內的反應的生物標誌物。

●探索預測對治療之反應或抗性的生物標誌物。

●探索類澱粉變性症病患的最小殘留疾病狀態。

終點

主要終點

主要終點係完全血液反應率。

次要終點

次要功效終點包括：

●基於全因死亡率的無進展存活期(PFS)。

●腎臟、心臟、肝臟的器官反應率(OrRR)。

●整體存活(OS)。

●接受下一次治療的時間(TNT)。

●疾病進展的實現時間(TTP)。

●血液疾病進展的實現時間。

●總體血液學反應。

●血液VGPR或更佳速率。

●完全血液反應(或VGPR或更佳反應)的實現時間。

●完全血液反應的持續時間(或VGPR或更佳反應)。

●器官反應的實現時間

●器官反應的持續時間

●評估對包括EORTC QLQ-C30、36項簡易健康調查[SF-36]及歐洲生活質量五維調查問卷[EQ-5D-5L])在內的病患報告結果的治療效果。

探索終點

探索終點係評估在骨髓及血液中達到完全血液學反應的病患之最小殘留疾病狀態。

假設

本研究的主要假設係在新確診AL類澱粉變性症的對象中，與單獨的CyBorD相比，DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))與CyBorD的組合將改善完全血液學反應率。

研究設計：

此係在新確診AL類澱粉變性症的對象中對於DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))與CyBorD的組合與單獨CyBorD的多中心、第3期、兩群組、開放標籤研究之比較。大約360名對象被隨機分至兩個群組中以最初接受CyBorD或CyBorD與DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))之組合，該等對象按照心臟風險(第I、II、及IIIa期)來分級。每個週期為4週。在前2個治療週期(8週)中，每週以16mg/kg投予DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))，然後每2週投予持續4個治療週期(16週)，然後每4週投予最多持續到6個治療週期(24週)，以CyBorD為基礎(兩個群組)。隨機分入DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))組的對象可以在6個週期後，繼續每4週投予DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))，最長到疾病進展2年。對象每週接受環磷醯胺300mg/m² po或IV、硼替佐米(bortezomib)1.3mg/m² SQ、及迪皮質醇(dexamethasone)40mg。週期係每4週重複。給定最多6個週期的數量。

在隨機化之前，在用DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))加上CyBorD治療的6個對象中進行安全性試驗至少1個週期，以確立組合方案的安全性。該6個對象的給藥係交錯的，使得對象接受第一劑量與先前登記的對象相距不少於48小時。安全性評估由贊助者及外部專家在方案的隨機部分開始之前對6名對象完成至少1個週期之後進行。安全性試驗中的對象繼續進行T＆E中規定 的所有計劃評估，並有助於DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))+CyBorD方案的整體安全性評估。然而，這些對象不包括在總體功效評估中。

對象選擇

入選標準

1.對象必須至少年滿18歲。

2.類澱粉變性症或輕鏈型變性疾病的組織病理學診斷係基於在剛果紅染色組織樣品中的綠色雙折射材料的偏振顯微鏡偵測或特徵電子顯微鏡外觀。

3.可測量的澱粉樣輕鏈型類澱粉變性症疾病由以下至少一者來定義：藉由蛋白電泳分析、血清單株蛋白>=0.5g/dL、24小時電泳後、尿中之單株蛋白>200mg、血清游離輕鏈>=5.0mg/dL、具有異常的κ/λ比、或所涉及與未涉及之游離輕鏈間的差異(dFLC)

5mg/dL。

4.病患必須患有新確診AL類澱粉變性症，並且先前沒有全身治療。唯一的例外係，若對象需要緊急治療，則在緊急情況下在隨機化之前，對象可以使用硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺、及/或迪皮質醇(dexamethasone)(或等效類固醇)治療長達4週。

5.東部腫瘤協作組(ECOG)表現狀態(PS)0、1、或2

6.對象在篩選階段必須具有符合以下標準的治療前臨床實驗室數值：

i)絕對嗜中性球計數

1.0×10⁹/L；

ii)血紅蛋白水準

7.5g/dL(

5mmol/L)；(輸血來維持Hb>7.5係可接受的)；

iii)血小板計數>50×10⁹/L；血小板輸注係可接受的

iv)丙胺酸胺基轉移酶水準(ALT)

正常上限(ULN)的2.5倍；

v)天門冬胺酸胺基轉移酶(AST)

正常上限(ULN)的2.5倍；

vi)總膽紅素水準

1.5×ULN，(Gilbert症候群除外：直接膽紅素<2×ULN)；

vii)肌酸酐清除率

20mL/min；請注意，肌酸酐清除率可以藉由24小時尿液研究測量，或使用經驗證的方程式估計，例如MDRD、CKD-epi、或Cockcroft Gault(詳情請見附件3)

viii)TSH及游離T4在正常限度內。若需要，病患可以接受甲狀腺激素治療以矯正潛在的甲狀腺功能低下症(hypothyroidism)

7.育齡婦女必須在開始治療之前4週、在治療之期間、在劑量中斷之期間、以及在停止研究藥物之後持續4週，實施高效的節育方法。對於參與臨床研究的對象，節育符合關於使用節育方法的地方法規：例如，經口、注射、或植入激素避孕方法的既定使用；宮內節育器或子宮內系統的放置；阻隔方 法：具有殺精泡沫/凝膠/膜/霜/栓劑的保險套、或具有殺精泡沫/凝膠/膜/霜/栓劑的封閉蓋(隔膜或子宮頸/穹頂蓋)(若激素或IUD避孕係醫學上禁忌的，則可以使用2種或其他有效或高效方法)；男性伴侶絕育(輸精管切除的伴侶應為該對象的唯一伴侶)；在研究之期間及之後(對於婦女，DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))的最後一次劑量後3個月)真實禁欲(當此與對象的較佳及通常生活方式一致時)。

8.與育齡婦女性行為活躍且未進行輸精管切除術的男性必須同意使用阻隔方法進行節育，例如，具有殺精泡沫/凝膠/膜/霜/栓劑的保險套、或伴侶使用具有殺精泡沫/凝膠/膜/霜/栓劑的封閉蓋(隔膜或子宮頸/穹頂蓋)。所有男性在研究之期間及在接受最後一劑研究藥物後3個月內亦不能捐精。

9.育齡婦女在篩選時必須進行2次陰性血清或尿液妊娠試驗，第一次在給藥前10至14天內，第二次在給藥前24小時內。

10.每個對象必須簽署知情同意書(ICF)，表明他或她瞭解研究的目的及研究所需的程序，並願意參加研究。對象必須願意並能夠遵守如ICF中提及的本方案中規定的禁止事項及限制。

排除標準

1.對於AL類澱粉變性症或多發性骨髓瘤的先前治療，例外者係在隨機化之前的單個週期(最多4週)的硼替佐米 (bortezomib)、環磷醯胺、及/或迪皮質醇(dexamethasone)(或等效類固醇)。

2.先前或當前確診由CRAB標準定義的症狀性多發性骨髓瘤，包括裂解性骨病、漿細胞瘤、及/或高鈣血症的存在。

3.重大心血管疾病的證據如下：

a.NT-ProBNP>8500ng/L。

b.紐約心臟協會(NYHA)分類IIIB或IV型心衰竭。

c.在第一次給藥前6個月內的不穩定心絞痛或心肌梗塞。

d.2級或3級房室(AV)阻滯或病態竇症候群，除非對象有起搏器(允許任何級別的Mobitz I型AV阻滯)。

e.持續(>30秒)室性心博過速或心臟性暈厥的已知病史。儘管有抗心律失常治療，但仍有復發性非持續性室性心博過速(>3次)的已知病史。

f.篩選12導聯ECG，顯示校正的基線QT間期(QTcF)>470毫秒。

g.儘管有藥物治療(例如米多君(midodrine)、氟氫可的松)，仍有下列症狀：仰臥位收縮壓<90mm Hg、或症狀性直立性低血壓、或靜止時收縮壓降低>20mm Hg。

h.藉由經胸超聲心動圖、MUGA掃描、心臟MRI或心臟導管術分析，左心室射血分數(LVEF)<40%。篩選期間需要評估。

4.在方案治療的前六個週期之期間計劃進行幹細胞移植的對象應予以排除。允許在方案治療的前六個週期之期間收集幹細胞。

5.確診或治療除AL以外的惡性腫瘤，以下情況除外：

a.惡性腫瘤以根治性目的進行過治療，並且在隨機化之前沒有已知的活動性疾病存在

5年。

b.非黑色素瘤皮膚癌或惡性雀斑經充分治療，而無疾病之證據。

c.原位癌(例如子宮頸癌、乳腺癌)經充分治療，而無疾病之證據

6.對象已知患有慢性阻塞性肺疾病(COPD)，其中1秒內的強制呼氣量(FEV1)<預測正常值的50%。注意，對於懷疑患有COPD的病患必需進行FEV1測試，若FEV1<預測正常值的50%，則必須排除對象。

7.對象在過去2年內已知患有中度或重度持續性氣喘(見附件5)，或目前患有任何分類之不受控制的氣喘。(注意，目前患有受控間歇性氣喘或受控輕度持續性氣喘的對象允許參加研究)。

8.已知對象對人類免疫缺陷病毒(HIV)的血清反應呈陽性、已知具有B型肝炎表面抗原陽性、或已知具有C型肝炎病史。

9.3級感覺性或1級疼痛性周邊神經病變。

10.已知對硼替佐米(bortezomib)、硼、或甘露糖醇的過敏反應

11.對象患有任何併發的醫學病症或疾病(例如，活動性全身感染)，該病症或疾病可能干擾研究程序或結果，或者研究者認為其將對於參與本研究構成危險。

12.任何形式的繼發性或家族性(ATTR)類澱粉變性症。

13.對象已知對於單株抗體、或人類蛋白質、或其賦形劑過敏、過敏反應、或不耐受(參見研究者手冊)或已知對於哺乳動物衍生製品具有敏感性。

14.已知或懷疑對象不能遵守研究方案(例如，因為酗酒、藥物依賴、或心理病症)，或在研究者看來對象患有任何會導致參與研究而對於對象不是最有利(例如，損害他們的健康)；或者可能妨礙、限制、或混淆方案規定的評估之病症。

15.對象係在登記參與本研究時或在最後一劑研究藥物後6個月內懷孕、或哺乳、或計劃懷孕的女性。

16.對象在第1週期第1天之前4週內接受研究性藥物(包括研究性疫苗)或使用侵入性研究性醫療裝置(除了研究性抗骨髓瘤藥物以外，其不能在第1週期第1天之前的2週內服用，如排除標準第3中所述)。

17.對象在第1週期第1天之前的2週內進行過大手術，或者將不會完全從手術中恢復，或者在對象預期參與研究的時間期間或在最後一次投予研究藥物之後的2週內計劃進行手術。注意：在局部麻醉下進行計劃手術的對象可以參與。

安全性評估

安全性將藉由不良事件、實驗室測試結果、ECG、生命徵象測量、身體檢查發現、及ECOG表現狀態來測量。研究期間發生的任何臨床相關變化將記錄在eCRF的不良事件部分。在研究結束/提前退出時持續存在的任何臨床上顯著的異常將由研究者追蹤，直到解決或直到達到臨床上穩定的終點為止。

功效

反應類別

疾病評估將每28天在計劃評估日(±3天)進行。若治療由於任何原因而被延遲，則將根據時間表進行疾病評估，而不管給藥方案的任何變化。

疾病評估將由中央實驗室(除非另有規定)根據時間及事件計劃表進行，直到疾病進展。本研究將使用下面給出的AL類澱粉變性症治療反應標準的一致建議(Comenzo等人，Leukema 26：2317-2325,2012)。對於游離輕鏈評估、定量免疫球蛋白、M蛋白、及血清及24小時尿液中的免疫固定測量，研究者將使用中央實驗室提供的結果。具有陽性血清IFE及經證實DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))IFE干擾，滿足完全反應的所有其他臨床標準的對象將被視為CR。

國際統一反應標準一致建議

實例7。評估DARZALEX ^TM (達拉單抗(daratumumab))作為治療全身性AL類澱粉變性症對象的單一藥劑的療效及安全性的隨機第2期研究

進行對於DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))作為單一藥劑在先前已接受治療的患有全身性AL類澱粉變性症的對象中的安全性及功效加以評估的第2期開放標籤研究。

大約40名對象被隨機分至兩個群組中，一個群組接受DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))，另一個群組接受安慰劑。

在初始治療後不在CR或VGPR中的患有經生檢證實全身性AL類澱粉變性症的18歲或以上之成年病患，梅奧診所(Mayo Clinic)的心臟I期和II期病患包括在內，而III期病患僅包括具有NT-proBNP

5000ng/l(或BNP

1000ng/l)者。

給藥方案

考慮兩種給藥方案。

方案1：

DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))以16mg/kg每週IV×8個劑量給藥、每隔一週×8個劑量給藥、然後每4週給藥直到6個週期。6個週期後，病患將以每4週之頻率繼續使用DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))，直到進展或選擇性停藥為止。

方案2：

將達拉單抗(daratumumab)給藥六個28天週期，藉由IV途徑投予16mg/kg。

對於第一週期，每週，在第1、8、15、及22天投予DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))

對於第2及第3週期，每隔一週，即在第1天及第15天投予DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))

從第4週期至第6週期，每4週，即在第1天投予DARZALEX^TM(達拉單抗(daratumumab))

主要目的、次要目的、關鍵入選標準、及關鍵排除標準與實例6中所述的類似。

Claims (19)

1. 一種抗-CD38抗體用於製造治療患有輕鏈型類澱粉變性症(AL)之病患的藥物之用途，其中該抗-CD38抗體係達拉單抗(daratumumab)，且其中該抗-CD38抗體係與環磷醯胺、硼替佐米(bortezomib)及迪皮質醇(dexamethasone)(CyBorD)組合投予。
2. 如請求項1所述之用途，其中該抗-CD38抗體與CyBorD係同時投予。
3. 如請求項1所述之用途，其中該抗-CD38抗體與CyBorD係依序投予。
4. 如請求項1所述之用途，其中該抗-CD38抗體與CyBorD係分開投予。
5. 如請求項1所述之用途，其中硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺及皮質類固醇係同時投予。
6. 如請求項1所述之用途，其中硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺及皮質類固醇係依序投予。
7. 如請求項1所述之用途，其中硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺及皮質類固醇係分開投予。
8. 如請求項1所述之用途，其中該病患正在接受造血幹細胞移植(HSCT)。
9. 如請求項8所述之用途，其中該HSCT係同種異體的。
10. 如請求項8所述之用途，其中該HSCT係自體的或同基因的。
11. 如請求項8所述之用途，其中該HSCT包含移植源自骨髓、血液、或羊水的血液幹細胞。
12. 如請求項8所述之用途，其中該抗-CD38抗體係在HSCT之前投予。
13. 如請求項8所述之用途，其中該抗-CD38抗體係在HSCT之期間或之後投予。
14. 如請求項8所述之用途，其中該病患在HSCT之前已經完成化療及/或放射療法。
15. 如請求項1所述之用途，其中該病患進一步用放射療法治療。
16. 如請求項1所述之用途，其中該抗-CD38抗體不藉由補體依賴性細胞毒性(CDC)來媒介殺滅CD34陽性造血先驅細胞。
17. 如請求項1所述之用途，其中該抗-CD38抗體藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞凋亡、或調節CD38酶活性來誘導殺滅CD38陽性漿細胞。
18. 如請求項1至17中任一項所述之用途，其中該醫藥組成物包含該抗-CD38抗體及玻尿酸酶。
19. 如請求項18所述之用途，其中該玻尿酸酶係rHuPH20重組玻尿酸酶。

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