TW202237651A

TW202237651A - 靶向ＣＤ３９及ＴＧＦβ之新穎結合物分子

Info

Publication number: TW202237651A
Application number: TW110144242A
Authority: TW
Inventors: 孫大為; 吳志浩; 孫俊; 耿亞男; 高瑞; 唐莉莉; 杜慶林; 邱陽生; 羅伯特Ｈ阿奇; 宏韜盧
Original assignee: 中國大陸商科望（蘇州）生物醫藥科技有限公司; 中國大陸商科望（上海）生物醫藥科技有限公司
Priority date: 2020-11-27
Filing date: 2021-11-26
Publication date: 2022-10-01
Also published as: KR20230113752A; US20230416394A1; CN115052894A; EP4251650A4; EP4251650A1; AU2021389989A1; WO2022111576A1; CA3202988A1; AU2021389989A9; JP2023550832A

Abstract

本發明提供包含能夠干擾CD39與其受質之間相互作用之CD39抑制部分及能夠干擾TGFβ與其受體之間相互作用之TGFβ抑制部分的結合物分子、編碼該等結合物分子之經分離多核苷酸、包含該等結合物分子之醫藥組合物及其用途。

Description

靶向CD39及TGFβ之新穎結合物分子

本發明總體上係關於靶向CD39及TGFβ之新穎結合物分子。

CD39，亦稱為外核苷三磷酸二磷酸水解酶1 (ENTPDase1)，係一種完整的膜蛋白，可將ATP或ADP轉化為AMP，然後CD73將AMP脫磷酸化為腺苷，腺苷為有效免疫抑制劑，且與位於CD4 ⁺、CD8 ⁺T細胞及自然殺傷(NK)細胞表面之腺苷受體(例如，A2A受體)結合，且抑制T細胞及NK細胞應答，從而抑制免疫系統。腺苷亦與巨噬細胞及樹突細胞上之A2A或A2B受體結合，抑制吞噬作用及抗原呈遞，且增加促癌因子(例如VEGF、TGFβ及IL-6)分泌。CD39及CD73之酶活性在校準分別藉由ADP及ATP轉化為AMP及AMP轉化為腺苷而傳遞給免疫細胞之嘌呤能信號之持續時間、強度及化學性質方面具有戰略性作用(Luca Antonioli等人， Trends Mol Med.2013年6月；19 (6):355-367)。由CD39及CD73介導之腺苷水準升高會產生免疫抑制環境，從而促進癌症之發生及發展。

轉化生長因子β (TGFβ)係一種多效細胞介素，在晚期原發性及轉移性腫瘤中高水準表現，且活化抗增殖及促腫瘤信號級聯。腫瘤基質細胞及許多類型之腫瘤，包括乳房、大腸、肺、胰臟、前列腺以及血液系統惡性腫瘤，產生高水準之TGFβ。除了促進腫瘤細胞之上皮至間質轉化(EMT)、侵襲及轉移外，TGFβ亦藉由例如抑制干擾素-γ (IFN-γ)之表現、限制Th1細胞之分化及減弱CD8 ⁺效應細胞之功能等機制使腫瘤逃避免疫監視。最重要地，TGFβ誘導調節性T細胞(Treg)分化。Treg藉由產生免疫抑制細胞介素(IL-10、TGFβ及IL-35)、表現抑制分子(CTLA-4)以及藉由CD39將ATP水解為腺苷，進一步抑制炎症。

鑒於CD39及TGFβ在調節腫瘤免疫應答中之作用，仍需要對抗CD39活性之治療劑或對抗CD39及TGFβ活性之治療劑來治療疾病，例如癌症。

本發明全文中之冠詞「一種」(a/an)、「一個」(a/an)及「該」在此用於指代一種(個)或多於一種(個) (亦即，至少一種(個))該冠詞之文法對象。舉例而言，「一種抗體」意謂一種抗體或多於一種抗體。

在一個態樣中，本發明提供一種結合物分子，其包含能夠干擾CD39與其受質之間相互作用之CD39抑制部分以及能夠干擾TGFβ與其受體之間相互作用之TGFβ抑制部分。

在某些實施例中，CD39抑制部分能夠干擾CD39及ATP/ADP之間的相互作用，及/或TGFβ抑制部分能夠干擾TGFβ及TGFβ受體之間的相互作用。在某些實施例中，CD39抑制部分為選自由以下組成之群的CD39拮抗劑：CD39結合劑、靶向CD39編碼序列之RNAi、靶向CD39編碼序列之反義核苷酸以及與CD39競爭結合其受質之試劑。在某些實施例中，TGFβ抑制部分為選自由以下組成之群的TGFβ拮抗劑：TGFβ結合劑、靶向TGFβ編碼序列之RNAi、靶向TGFβ編碼序列之反義核苷酸以及與TGFβ競爭結合其受體之試劑。在某些實施例中，CD39結合劑選自由以下組成之群：特異性識別CD39之抗體或其抗原結合片段，以及與CD39結合之小化合物分子；及/或TGFβ結合劑選自由以下組成之群：特異性識別TGFβ之抗體或其抗原結合片段，以及與TGFβ結合之小分子化合物。

在某些實施例中，結合物分子為融合蛋白，其包含與TGFβ結合域相連之CD39結合域。在某些實施例中，TGFβ結合域與人類及/或小鼠TGFβ結合。在某些實施例中，TGFβ結合域與人類TGFβ1、人類TGFβ2及/或人類TGFβ3結合。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβ受體之細胞外域(ECD)。在某些實施例中，TGFβ受體為TGFβ受體I (TGFβRI)、TGFβ受體II (TGFβRII)或TGFβ受體III (TGFβRIII)。在某些實施例中，ECD包含如SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164或SEQ ID NO: 165所示之胺基酸序列，或與其具有至少85%序列一致性但仍保持與TGFβ之結合特異性的胺基酸序列。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβ受體之兩個或更多個ECD。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD源自相同TGFβ受體，或源自至少兩個不同TGFβ受體。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD包含源自TGFβRI之第一ECD及源自TGFβRII之第二ECD。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD可操作地串接。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD藉由第一連接子連接。在某些實施例中，TGFβ結合域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 171或其任何組合。

在某些實施例中，CD39結合域與人類CD39結合。在某些實施例中，TGFβ結合域藉由第二連接子與抗CD39結合域連接。在某些實施例中，CD39結合域包含抗CD39抗體部分。在某些實施例中，抗CD39抗體部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區。在某些實施例中，抗CD39抗體部分進一步包含附加至重鏈可變區之羧基末端之重鏈恆定區。在某些實施例中，抗CD39抗體部分進一步包含附加至輕鏈可變區之羧基末端之輕鏈恆定區。在某些實施例中，TGFβ結合域在選自由以下組成之群的位置結合至抗CD39抗體部分：抗CD39抗體部分之1)重鏈可變區之胺基末端；2)輕鏈可變區之胺基末端；3)重鏈可變區之羧基末端；4)輕鏈可變區之羧基末端；5)重鏈恆定區之羧基末端；以及6)輕鏈恆定區之羧基末端。

在某些實施例中，融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，該等結合域(i)全部與抗CD39抗體部分之重鏈可變區連接或(ii)全部與抗CD39抗體部分之輕鏈可變區連接。在某些實施例中，融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其分別與抗CD39抗體部分之重鏈及輕鏈可變區連接。在某些實施例中，融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其全部與抗CD39抗體部分之重鏈恆定區連接。在某些實施例中，融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其全部與抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區連接。在某些實施例中，融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其分別與抗CD39抗體部分之重鏈及輕鏈恆定區連接。

在某些實施例中，融合蛋白包含兩個、三個、四個、五個、六個或更多個TGFβ結合域。在某些實施例中，第一及/或第二連接子選自由以下組成之群：可分解連接子、不可分解連接子、肽連接子、可撓性連接子、剛性連接子、螺旋連接子及非螺旋連接子。在某些實施例中，第一及/或第二連接子包含肽連接子。在某些實施例中，肽連接子包含GS連接子。在某些實施例中，GS連接子包含如SEQ ID NO: 177 (GGGS)或SEQ ID NO: 173 (GGGGS)所示之一或多個重複，或包含如SEQ ID NO: 182 (GGGGSGGGGSGGGGSG)所示之胺基酸序列。

在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本發明之結合物分子以及一或多種醫藥學上可接受之載劑。在另一態樣中，本發明提供一種經分離多核苷酸，其編碼本發明之結合物分子。在另一態樣中，本發明提供一種載體，其包含本發明之經分離多核苷酸。在另一態樣中，本發明提供一種宿主細胞，其包含本發明之載體。在另一態樣中，本發明提供一種套組，其包含本發明之結合物分子及/或本發明之醫藥組合物，以及第二治療劑。

在另一態樣中，本發明提供一種表現本發明之結合物分子之方法，其包含在表現本發明之載體之條件下培養本發明之宿主細胞。在另一態樣中，本發明提供一種在個體中治療、預防或減輕與CD39及/或TGFβ相關之疾病、病症或病況之方法，其包含向個體投與治療有效量之本發明之結合物分子及/或本發明之醫藥組合物。在另一態樣中，本發明提供一種在個體中治療、預防或減輕藉由降低CD39之ATP酶活性而可治療之疾病之方法，其包含向個體投與治療有效量之本發明之結合物分子及/或本發明之醫藥組合物。在另一態樣中，本發明提供一種在個體中治療、預防或減輕與腺苷介導之T細胞、單核球、巨噬細胞、樹突細胞、抗原呈遞細胞、NK及/或B細胞活性抑制相關之疾病之方法，其包含向個體投與治療有效量之本發明之結合物分子及/或本發明之醫藥組合物。在另一態樣中，本發明提供一種調節CD39陽性細胞中CD39活性之方法，其包含將該CD39陽性細胞暴露於本發明之結合物分子及/或本發明之醫藥組合物。

在另一態樣中，本發明提供一種在個體中治療、預防或減輕與增加的TGFβ水準及/或活性有關之疾病之方法，其包含向該個體投與治療有效量之本發明之結合物分子及/或本發明之醫藥組合物。在另一態樣中，本發明提供本發明之結合物分子及/或本發明之醫藥組合物在製備用於治療、預防或減輕個體中與CD39相關或與TGFβ相關之疾病、病症或病況之藥物中之用途。

本發明之以下描述僅為說明本發明之多種實施例。因此，此處討論之具體修改方式不應理解為對本發明之範疇的限制。熟習此項技術者在不偏離本發明之範疇的情況下即可容易地得出多種等同方式，變化及修改，應理解此類等同實施例包括於本發明之範疇內。在本發明中引用之所有參考文獻，包括公開案、專利及專利申請案均以全文引用之方式併入本文中。定義

本發明中使用之術語「抗體」包括任何可結合某特定抗原之免疫球蛋白、單株抗體、多株抗體、多價抗體、雙價抗體、單價抗體、多特異性抗體或雙特異性抗體。一個天然的完整抗體包含兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈。哺乳動物之重鏈可分為α、δ、ε、γ及μ，各重鏈由一個可變區(VH)以及第一、第二、第三及(視情況)第四恆定區(分別為CH1、CH2、CH3、CH4)組成；哺乳動物之輕鏈可分為λ或κ，而各輕鏈由一個可變區(VL)以及一個恆定區組成。抗體呈「Y」型，「Y」型結構之莖部由藉由二硫鍵結合之兩條重鏈的第二及第三恆定區組成。Y之各臂包括與單一輕鏈之可變區及恆定區結合之單一重鏈之可變區及第一恆定區。輕鏈及重鏈之可變區決定抗原結合。各鏈之可變區通常含有三個高變區，稱互補決定區(CDR) (輕鏈CDR包括LCDR1、LCDR2、LCDR3，且重鏈CDR包括HCDR1、HCDR2、HCDR3)。本發明中揭示之抗體及抗原結合片段之CDR邊界可藉由Kabat、IMGT、Chothia或Al-Lazikani命名法命名或識別(Al-Lazikani, B., Chothia, C., Lesk, A. M., J. Mol. Biol., 273 (4), 927 (1997)；Chothia, C.等人, J Mol Biol. 12月5日;186 (3):651-63 (1985)；Chothia, C.及Lesk, A.M., J.Mol.Biol., 196,901 (1987)；Chothia, C.等人, Nature. 12月21-28日;342 (6252):877-83 (1989)；Kabat E.A.等人, Sequences of Proteins of immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)；Marie-Paule Lefranc等人, Developmental and Comparative Immunology, 27: 55-77 (2003)；Marie-Paule Lefranc等人, Immunome Research, 1 (3), (2005)；Marie-Paule Lefranc, Molecular Biology of B cells (second edition), 第26章, 481-514, (2015))。其中，三個CDR由被稱為框架區(FR) (輕鏈FR括LFR1、LFR2、LFR3及LFR4，重鏈FR包括HFR1、HFR2、HFR3及HFR4)之側接部分間隔開，框架區比CDR更加高度保守，且形成一個支架支撐高度可變環。重鏈及輕鏈之恆定區與抗原結合無關，但具有多種效應功能。抗體依據其重鏈恆定區之胺基酸序列可分為幾類。根據是否含有α、δ、ε、γ及μ重鏈，抗體可分別分為五個主要的分類或同型：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。幾個主要的抗體分類亦可分為亞類，如IgG1 (γ1重鏈)、IgG2 (γ2重鏈)、IgG3 (γ3重鏈)、IgG4 (γ4重鏈)、IgA1 (α1重鏈)或IgA2 (α2重鏈)。

在某些實施例中，本發明提供之抗體包含其任何抗原結合片段。本發明中使用之術語「抗原結合片段」係指由含有一或多個CDR之抗體之一部分形成的抗體片段，或與抗原結合但不具有完整天然抗體結構之任何其他抗體片段。抗原結合片段之實例包括但不限於雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') ₂、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段(dsFv)、(dsFv) ₂、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定的雙抗體、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(雙價雙功能抗體)、雙特異性抗體、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體及雙價域抗體。抗原結合片段能夠與親本抗體結合相同抗原。

抗體之「Fab」係指由單一輕鏈(包含可變區及恆定區)及單一重鏈之可變區及第一恆定區經二硫鍵結合組成之抗體的一部分。

「Fab'」係指包括部分鉸鏈區之Fab片段。

「F(ab') ₂」係指Fab'之二聚體。

抗體(例如IgG、IgA或IgD同型)之「Fc」係指由第一重鏈之第二及第三恆定區經由二硫鍵與第二重鏈之第二及第三恆定區連接組成之抗體的一部分。IgM及IgE同型抗體之Fc亦包含第四恆定區。抗體之Fc部分負責多種不同的效應功能，例如，抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)，但在抗原結合中不起作用。

抗體之「Fv」係指含有完整抗原結合位點之最小抗體片段。Fv片段由單一輕鏈之可變區與單一重鏈之可變區結合組成。

「單鏈Fv抗體」或「scFv」係指由輕鏈可變區與重鏈可變區直接相互連接或藉由肽連接子序列連接而成的工程化抗體(Huston JS等人 Proc Natl Acad Sci USA, 85:5879 (1988))。

「單鏈Fv-Fc抗體」或「scFv-Fc」係指由與抗體Fc部分連接之scFv組成之工程化抗體。

「駱駝化單域抗體」、「重鏈抗體」或「HCAb」係指含有兩個V _H域且不含輕鏈之抗體(Riechmann L.及Muyldermans S., J Immunol Methods.12月10日; 231 (1-2):25-38 (1999)；Muyldermans S., J Biotechnol.6月; 74 (4):277-302 (2001)；WO94/04678；WO94/25591；美國專利第6,005,079號)。重鏈抗體最初來源於駝科(駱駝、單峰駝及美洲駝)。雖然缺失輕鏈，但駱駝化抗體有確證的抗原結合全部功能(Hamers-Casterman C.等人, Nature. 6月3日; 363 (6428):446-8 (1993)；Nguyen VK.等人 Immunogenetics. 4月; 54 (1):39-47 (2002)；Nguyen VK.等人 Immunology. 5月; 109 (1): 93-101 (2003))。重鏈抗體之可變區(VHH域)為由獲得性免疫產生之已知最小抗原結合單位(Koch-Nolte F.等人, FASEB J. 11月; 21 (13): 3490-8. 電子版2007年6月15日(2007))。

「奈米抗體」係指一種抗體片段，其由來自重鏈抗體之VHH域以及兩個恆定區CH2及CH3組成。

「雙功能抗體」或「dAb」包括帶有兩個抗原結合位點之小抗體片段，其中該等片段含有在同一條多肽鏈上相連之VH域及VL域(VH-VL或VL-VH) (參見例如Holliger P.等人, Proc Natl Acad Sci USA. 7月 1590 (14):6444-8 (1993)；EP404097；WO93/11161)。兩個域之間的連接子過短，使同一條鏈上之兩個域不能互相配對，從而迫使兩個域與另一條鏈之互補域配對，從而形成兩個抗原結合位點。該兩個抗原結合位點可靶向相同或不同抗原(或抗原決定基)。在一些實施例中，「雙特異性ds雙功能抗體」為靶向兩種不同抗原(或抗原決定基)之雙功能抗體。

「域抗體」係指僅含有重鏈可變區或輕鏈可變區之抗體片段。在某些情況下，兩個或更多個VH域由肽連接子共價連接形成雙價或多價域抗體。雙價域抗體之兩個VH域可靶向相同或不同抗原。

本發明中使用之術語「價」係指給定分子中存在特定數量之抗原結合位點。術語「單價」係指僅具有一個抗原結合位點之抗體或抗原結合片段。術語「多價」係指具有多個抗原結合位點之抗體或抗原結合片段。由此，術語「雙價」、「四價」及「六價」分別表示抗原結合分子中存在兩個結合位點、四個結合位點及六個結合位點。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段為雙價的。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段為四價的。

在本發明中使用之「雙特異性」抗體係指具有來源於兩個不同單株抗體之片段或源於一個抗體及另一個蛋白質(例如，TGFβ受體)，且能夠與兩個不同抗原決定基結合之人工抗體。該兩個抗原決定基可存在於同一抗原上，或其可存在於兩個不同抗原上。

在某些實施例中，「scFv二聚體」為雙價雙功能抗體或雙特異性scFv (BsFv)，包含二聚化的兩個VH-VL (由肽連接子連接)部分，使得一個部分之VH與另一部分之VL協作形成兩個結合位點，該兩個結合位點可靶向相同抗原(或抗原決定基)或不同抗原(或抗原決定基)。在另一些實施例中，「scFv二聚體」為雙特異性雙功能抗體，包含相互連接之VH1-VL2 (由肽連接子連接)及VL1-VH2 (由肽連接子連接)，使得VH1及VL1協作，且VH2及VL2協作，且各協作的配對具有不同抗原特異性。

「dsFv」係指二硫鍵穩定的Fv片段，其單一輕鏈之可變區與單一重鏈之可變區之間的連接為二硫鍵。在一些實施例中，「(dsFv) ₂」或「(dsFv-dsFv')」含有三條肽鏈：兩個VH部分藉由肽連接子(例如長可撓性連接子)相連，且藉由二硫鍵分別與兩個VL部分結合。在一些實施例中，dsFv-dsFv'具有雙特異性，其中每對藉由二硫鍵配對之重鏈及輕鏈具有不同抗原特異性。

本發明中使用之術語「嵌合」意謂具有來源於一個物種之重鏈及/或輕鏈之一部分，且該重鏈及/或輕鏈之其餘部分來源於另一不同物種之抗體或抗原結合片段。在一個說明性實例中，嵌合抗體可包含來源於人類之恆定區及來源於非人類動物(例如小鼠)之可變區。在一些實施例中，該非人類動物為哺乳動物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、豚鼠或倉鼠。

本發明中使用之術語「人源化」意謂包含來源於非人類動物之CDR、來源於人類之FR區、以及來源於人類之恆定區(當適用時)之抗體或抗原結合片段。

本發明中使用之術語「親和性」或「親和力」係指免疫球蛋白分子(亦即，抗體)或其片段與抗原之間非共價相互作用的強度。

本發明中使用之「特異性結合(specific binding)」或「特異性結合(specifically binds)」係指兩分子間的非隨機結合反應，例如，抗體與抗原間的反應。特異性結合之特徵可在於結合親和性，例如由K _D值表示，即，當抗原及抗原結合分子之間的結合達到平衡時解離速度與結合速度之比值(k _off/k _on)。可藉由使用此項技術中已知之任何習知方法測定K _D，包括但不限於表面電漿子共振法、Octet方法、微量熱泳法、HPLC-MS方法及FACS分析。≤10 ^-6M (例如≤5×10 ^-7M、≤2×10 ^-7M、≤10 ^-7M、≤5×10 ^-8M、≤2×10 ^-8M、≤10 ^-8M、≤5×10 ^-9M、≤4×10 ^-9M、≤3×10 ^-9M、≤2×10 ^-9M或≤10 ^-9M)之K _D值可表示抗體或其抗原結合片段與CD39 (例如人類CD39)之間的特異性結合。

本發明中使用之「競爭結合人類CD39」之能力係指第一抗體或其抗原結合片段抑制人類CD39與第二抗CD39抗體之間結合的相互作用至任何可偵測程度的能力。在一些實施例中，競爭結合人類CD39之抗體或抗原結合片段可將人類CD39與第二抗CD39抗體之間結合的相互作用抑制至少85%或至少90%。在一些實施例中，此類抑制作用可大於95%或大於99%。

本發明中使用之術語「抗原決定基」係指抗原上與抗體結合之特定原子基團或胺基酸。若兩種抗體表現出對抗原之競爭性結合，則可結合抗原上相同或密切相關的抗原決定基。抗原決定基可為線性或構形的(亦即包括間隔開的胺基酸殘基)。例如，若抗體或其抗原結合片段對參考抗體與抗原之結合阻斷達到至少85%、或至少90%或至少95%，則該抗體或其抗原結合片段可被認為與該參考抗體結合相同/密切相關的抗原決定基。

本發明中使用之術語「胺基酸」係指含有胺基(-NH ₂)及羧基(-COOH)官能基以及各胺基酸特有的側鏈之有機化合物。胺基酸名稱在本發明中亦以標準單字母或三字母代碼表示，總結如下：

名稱	三字母代碼	單字母代碼
丙胺酸	Ala	A
精胺酸	Arg	R
天冬醯胺	Asn	N
天冬胺酸	Asp	D
半胱胺酸	Cys	C
麩胺酸	Glu	E
麩醯胺酸	Gln	Q
甘胺酸	Gly	G
組胺酸	His	H
異白胺酸	Ile	I
白胺酸	Leu	L
離胺酸	Lys	K
甲硫胺酸	Met	M
苯丙胺酸	Phe	F
脯胺酸	Pro	P
絲胺酸	Ser	S
蘇胺酸	Thr	T
色胺酸	Trp	W
酪胺酸	Tyr	Y
纈胺酸	Val	V

術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」在本發明中互換使用以指胺基酸殘基之聚合物。此等術語亦適用於其中一或多個胺基酸殘基為相應天然胺基酸之人工化學模擬物之胺基酸聚合物，以及天然胺基酸聚合物及非天然胺基酸聚合物。

在本發明中當「保守取代」用於胺基酸序列時，係指將一個胺基酸殘基用另一個具有相似理化特性之側鏈之胺基酸殘基替代。例如，可在具有疏水側鏈之胺基酸殘基之間(例如Met、Ala、Val、Leu及Ile)、具有中性親水側鏈之胺基酸殘基之間(例如Cys、Ser、Thr、Asn及Gln)、具有酸性側鏈之胺基酸殘基之間(例如Asp、Glu)、具有鹼性側鏈之胺基酸殘基之間(例如His、Lys及Arg)或具有芳族側鏈之胺基酸殘基之間(例如Trp、Tyr及Phe)進行保守取代。此項技術中已知，保守取代通常不會引起蛋白構形結構之顯著變化，因此能夠保留蛋白質之生物活性。

本發明中使用之術語「同源」係指當最佳比對時核酸序列(或其互補鏈)或胺基酸序列與另一條序列具有至少60% (例如，至少65%、70%、75%、80%、85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)之序列一致性。

當「百分比(%)序列一致性」用於胺基酸序列(或核酸序列)時，係指在進行序列比對，且必要時引入間隔使相同胺基酸(或核酸)數目達到最多後，在候選序列中，與參考序列相同的胺基酸(或核酸)殘基占該候選序列之胺基酸(或核酸)殘基之百分比。換言之，可藉由用與其比較之參考序列相同的胺基酸殘基(或鹼基)數除以候選序列或參考序列(以較短者為準)中之胺基酸殘基(或鹼基)總數來計算胺基酸序列(或核酸序列)之百分比(%)序列一致性。胺基酸殘基之保守取代可視為或可不視為相同殘基。可藉由此項技術中揭示之工具，例如BLASTN、BLASTp (美國國家生物技術資訊中心網站(NCBI)，亦可參見Altschul S.F.等人, J. Mol. Biol., 215:403–410 (1990)；Stephen F.等人, Nucleic Acids Res., 25:3389–3402 (1997))、ClustalW2 (歐洲生物資訊研究所網站，亦參見Higgins D.G.等人, Methods in Enzymology, 266:383-402 (1996)；Larkin M.A.等人, Bioinformatics (Oxford, England), 23 (21): 2947-8 (2007))及ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體，對序列進行比對以確定胺基酸(或核酸)序列之百分比序列一致性。熟習此項技術者可使用該工具之預設參數或根據比對需要適當調整參數，例如藉由挑選適合之算法。

本發明中使用之「效應功能」係指抗體之Fc區與其效應子(例如，C1複合體及Fc受體)結合之生物活性。例示性效應功能包括抗體與C1複合體上之C1q相互作用介導之補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體之Fc區與效應細胞上之Fc受體結合介導之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)以及吞噬作用。可使用各種分析(例如Fc受體結合分析、C1q結合分析及細胞分解分析)評估效應功能。

「經分離」物質已經人工由自然狀態改變。若自然界中出現某種「經分離」組合物或物質，則其已被改變或脫離其原始狀態，或二者均有發生。例如，某一活體動物體內天然存在之多核苷酸或多肽並非「經分離」，但若此等多核苷酸或多肽與之在天然狀態下共存之物質足夠分離且以基本上純的狀態存在，則可視為「經分離」。「經分離核酸序列」係指經分離核酸分子之序列。在某些實施例中，「經分離抗體或其抗原結合片段」係指純度為至少60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%之抗體或其抗原結合片段，其中純度由電泳方法(例如，SDS-PAGE、等電聚焦、毛細管電泳)，或層析法(例如，離子交換層析或反相HPLC)確定。

本發明中使用之術語「載體」係指可將遺傳元件操作性地插入其中且使該遺傳元件獲得表現之媒劑，例如生產由該遺傳元件編碼之蛋白質、RNA或DNA，或複製該遺傳元件。載體可用於轉化、轉導或轉染宿主細胞，使其攜帶之遺傳元件在宿主細胞內得以表現。舉例而言，載體包括：質體、噬菌粒、黏質體、人工染色體如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或P1衍生之人工染色體(PAC)、噬菌體如λ噬菌體或M13噬菌體，以及動物病毒等。載體可含有多種控制表現之元件，包括啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、選擇元件及報告基因。另外，載體亦可含有複製起始位點。載體亦可包括協助其進入細胞之成分，包括但不限於病毒顆粒、脂質體或蛋白外殼。載體可為表現載體或選殖載體。本發明提供之載體(例如表現載體)含有本發明之編碼抗體或其抗原結合片段之核酸序列、至少一個可操作地連接至該核酸序列之啟動子(例如，SV40、CMV、EF-1α)，以及至少一個選擇標記。

本發明中使用之術語「宿主細胞」係指可導入或已導入外源多核苷酸及/或載體之細胞。

術語「個體」包括人類及非人類動物。非人類動物包括所有脊椎動物，例如，哺乳動物及非哺乳動物(例如，非人類靈長類、小鼠、大鼠、貓、兔、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物及爬行動物)。除非另有說明，否則術語「患者」或「個體」在本發明中可互換使用。

術語「抗腫瘤活性」係指腫瘤細胞增殖、生存力或轉移活性的降低。例如，抗腫瘤活性可藉由在治療期間出現之異常細胞之生長速率的下降或腫瘤尺寸之穩定或減少、或者由於與未治療對照相比由於治療引起的更長生存期來顯示。可使用可接受的活體外或活體內腫瘤模型(包括但不限於異種移植物模型、同種異體移植物模型、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)模型及此項技術中已知的研究抗腫瘤活性之其他已知模型)來評估抗腫瘤活性。

本發明中使用之對某種疾病、病症或病況之「治療」或「療法」包括預防或減輕某種疾病、病症或病況，降低某種疾病、病症或病況發生或發展之速度，降低發展出某種疾病、病症或病況之風險，預防或延遲與某種疾病、病症或病況相關之症狀發展，減少或終止與某種疾病、病症或病況相關之症狀，產生某種疾病、病症或病況之完全或部分逆轉，治癒某種疾病、病症或病況，或其某一組合。

術語「診斷(diagnosis)」、「診斷(diagnose)」或「診斷(diagnosing)」係指病理狀態、疾病或病況之鑑定，例如CD39相關疾病之鑑定，或指患有CD39相關疾病的可受益於特定治療方案之個體之鑑定。在一些實施例中，診斷包含鑑定CD39之異常含量或活性。在一些實施例中，診斷係指在個體中鑑定癌症或自體免疫性疾病。

如本文所用，術語「生物樣品」或「樣品」係指獲自或源自目標個體之生物組合物，其包含待表徵及/或待鑑定之細胞及/或其他分子實體，例如基於物理、生化、化學及/或生理特徵來表徵及/或鑑定。生物樣品包括但不限於藉由熟習此項技術者已知的任何方法獲得之個體之細胞、組織、器官及/或生物流體。在一些實施例中，生物樣品為流體樣品。在一些實施例中，流體樣品為全血、血漿、血清、黏液(包括鼻腔排泄物及痰)、腹膜液、胸膜液、胸腔液、唾液、尿液、滑液、腦脊髓液(CSF)、胸腔穿刺液、腹部流體、腹水或心包積液。在一些實施例中，生物學樣品為獲自個體之心臟、肝、脾、肺、腎、皮膚或血管之組織或細胞。

術語「可操作地連接(operably link)」或「可操作連接的(operably linked)」係指兩個或更多個所關注生物序列之並置(有或無間隔子或連接子)，其方式使其處於允許其以預期方式發揮功能之關係中。當用於多肽時，其意指多肽序列以允許連接產物具有預期生物功能之方式連接。例如，抗體可變區可操作地連接至恆定區以提供具有抗原結合活性之穩定產物。該術語亦可用於多核苷酸。例如，當編碼多肽之多核苷酸可操作地連接至調控序列(例如，啟動子、增強子、沉默子序列等)時，意指多核苷酸序列以允許來自該多核苷酸之多肽之調控表現的方式連接。

當用於胺基酸序列(例如肽、多肽或蛋白質)時，術語「融合(fusion)」或「融合的(fused)」係指兩個或更多個胺基酸序列之組合，例如藉由化學鍵或重組手段，組合為一個不天然存在的單一胺基酸序列。融合胺基酸序列可藉由兩個編碼多核苷酸序列之遺傳重組產生，且可藉由將含有重組多核苷酸之構築體引入宿主細胞之方法表現。

如本文所用，「CD39」亦稱為ENTPD1或ENTPD酶1，係指一種可將ATP轉化為AMP之完整膜蛋白。在結構上，CD39之特徵在於兩個跨膜域、一個較小胞質域及一個較大胞外疏水域。在某些實施例中，CD39為人類CD39。本發明所用之CD39可來自其他動物物種，例如小鼠及食蟹猴等。人類CD39蛋白之例示性序列揭示於NCBI Ref Seq No. NP_001767.3中。小家鼠(小鼠) CD39蛋白之例示性序列揭示於NCBI Ref Seq No. NP_033978.1中。食蟹猴( Cynomolgus) CD39蛋白之例示性序列揭示於NCBI Ref Seq No. XP_015311945.1中。

除了CD39之外，ENTPD酶家族亦包括其他幾個成員，包含ENTPD酶2、3、4、5、6、7及8 (亦稱為ENTPD2、3、4、5、6、7及8，在本發明中可互換使用)。四種ENTPD酶係典型的細胞表面定位酶，具有面向細胞外的催化位點(ENTPD酶1、2、3、8)。ENTPD酶5及6在異源表現後表現出細胞內定位且分泌。ENTPD酶4及7完全位於細胞內，面向細胞質細胞器內腔。在一些實施例中，本發明提供之抗體或其抗原結合片段特異性結合CD39 (亦即ENTPD酶1)，但不與其他家族成員結合，例如ENTPD酶2、3、5或6。

術語「抗CD39抗體部分」係指能夠與CD39 (例如，人類或猴CD39)特異性結合且形成靶向CD39及TGFβ之結合物分子部分之抗體(包括其抗原結合片段)。術語「抗人類CD39抗體部分」係指能夠與人類CD39特異性結合且形成靶向CD39及TGFβ之結合物分子部分之抗體(包括其抗原結合片段)。

本發明中使用之「CD39相關」疾病、病症或病況係指由CD39之表現或活性之增加或減少引起的、加劇的或與之相關的任何疾病或病況。在一些實施例中，CD39相關疾病、病症或病況為免疫相關病症，例如自體免疫性疾病。在一些實施例中，CD39相關疾病、病症或病況為與過度細胞增殖有關的病症，例如癌症。在某些實施例中，CD39相關疾病或病況之特徵在於表現或過表現CD39及或CD39相關基因，例如ENTPD1、2、3、4、5、6、7或8基因。

本發明中使用之術語「轉化生長因子β」及「TGFβ」係指具有來自個體(例如人類)之任何TGFβ之全長天然胺基酸序列的任何TGFβ家族蛋白質，包括前驅體及成熟TGFβ之潛在形式及相關或非相關複合物(「潛在TGFβ」)。本發明中對此類TGFβ之引用將理解為對當前識別形式中之任一者的引用，包括TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3同型及其潛在形式，以及對未來識別之人類TGFβ類型的引用，包括自任何已知TGFβ序列衍生之多肽，該等多肽至少約75%，較佳至少約80%，更佳至少約85%，更佳至少約90%，且甚至更佳至少約95%與該序列同源。特定術語「TGFβ1」、「TGFβ2」及「TGFβ3」係指文獻中定義之TGFβ，例如，Derynck等人, Nature, Cancer Res., 47: 707 (1987)；Seyedin等人, J. Biol. Chem., 261: 5693-5695 (1986)；deMartin等人, EMBO J., 6: 3673 (1987)；Kuppner等人, Int. J. Cancer, 42: 562 (1988)。術語「轉化生長因子β」、「TGFβ」、「TGFbeta」、「TGF-β」、「TGF-beta」、「TGFb」、「TGF-b」、「TGFB」及「TGF-B」在本發明中可互換使用。

如本文所用，術語「人類TGFβ1」係指人類TGFB1基因(例如，野生型人類TGFB1基因)編碼之TGFβ1蛋白。例示性野生型人類TGFβ1蛋白由GenBank寄存編號NP_000651.3提供。如本文所用，術語「人類TGFβ2」係指人類TGFB2基因(例如，野生型人類TGFB2基因)編碼之TGFβ2蛋白。例示性野生型人類TGFβ2蛋白由GenBank寄存編號NP_001129071.1及NP_003229.1提供。如本文所用，術語「人類TGFβ3」係指人類TGFB3基因(例如，野生型人類TGFB3基因)編碼之TGFβ3蛋白。例示性野生型人類TGFβ3蛋白由GenBank寄存編號NP_003230.1、NP_001316868.1及NP_001316867.1提供。

如本文所用，術語「小鼠TGFβ1」、「小鼠TGFβ2」及「小鼠TGFβ3」分別係指小鼠TGFB1基因(例如，野生型小鼠TGFB1基因)、小鼠TGFB2基因(例如，野生型小鼠TGFB2基因)及小鼠TGFB3基因(例如，野生型小鼠TGFB3基因)編碼之TGFβ1蛋白、TGFβ2蛋白及TGFβ3蛋白。例示性野生型小鼠(小家鼠) TGFβ1蛋白由GenBank寄存編號NP_035707.1及CAA08900.1提供。例示性野生型小鼠TGFβ2蛋白由GenBank寄存編號NP_033393.2提供。例示性野生型小鼠TGFβ3蛋白由GenBank寄存編號AAA40422.1提供。

本文中使用之術語「TGFβ受體」係指與至少一個TGFβ同型結合之任何受體。總體上，TGFβ受體包括TGFβ受體I (TGFβRI)、TGFβ受體II (TGFβRII)或TGFβ受體III (TGFβRIII)。

對於人類，術語「TGFβ受體I」或「TGFβRI」係指具有野生型人類TGFβ受體1同型序列(例如，GenBank寄存編號ABD46753.1之胺基酸序列)或具有與GenBank寄存編號ABD46753.1之胺基酸序列基本相同之序列的多肽。TGFβRI可保留至少0.1%、至少0.5%、至少1%、至少5%、至少10%、至少25%、至少35%、至少50%、至少75%、至少90%、至少95%或至少99%野生型序列之TGFβ結合活性。經表現TGFβRI之多肽缺少信號序列。

對於人類，術語「TGFβ受體II」或「TGFβRII」係指具有野生型人類TGFβ受體2同型序列(例如，GenBank寄存編號NP_001020018.1之胺基酸序列)或具有野生型人類TGFβ受體2同型序列(例如，GenBank寄存編號NP_003233.4之胺基酸序列)或具有與GenBank寄存編號NP_001020018.1或GenBank寄存編號NP_003233.4之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性之胺基酸序列。TGFβRII可保留至少0.1%、至少0.5%、至少1%、至少5%、至少10%、至少25%、至少35%、至少50%、至少75%、至少90%、至少95%或至少99%野生型序列之TGFβ結合活性。經表現TGFβRII之多肽缺少信號序列。

對於人類，術語「TGFβ受體III」或「TGFβRIII」係指具有野生型人類TGFβ受體3同型A序列(例如，GenBank寄存編號NP_003234.2之胺基酸序列)或具有野生型人類TGFβ受體3同型B序列(例如，GenBank寄存編號NP_001182612.1之胺基酸序列)或具有與GenBank寄存編號NP_003234.2或GenBank寄存編號NP_001182612.1之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性之胺基酸序列。TGFβRII可保留至少0.1%、至少0.5%、至少1%、至少5%、至少10%、至少25%、至少35%、至少50%、至少75%、至少90%、至少95%或至少99%野生型序列之TGFβ結合活性。經表現TGFβRIII之多肽缺少信號序列。

本文中使用之「TGFβ相關」疾病、病症或病況係指由TGFβ之表現或活性之增加或減少引起的、加劇的或與之相關的任何疾病或病況。在一些實施例中，TGFβ相關疾病、病症或病況為免疫相關病症，例如自體免疫性疾病。在一些實施例中，TGFβ相關疾病、病症或病況為與過度細胞增殖有關的病症，例如癌症。在某些實施例中，TGFβ相關疾病或病況之特徵在於表現或過表現TGFβ及或TGFβ相關基因，例如TGFB1、TGFB2、TGFB3基因。

術語「抗TGFβ抗體部分」係指能夠特異性結合TGFβ(例如，TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3)且形成靶向CD39及TGFβ之蛋白部分之抗體。術語「抗人類TGFβ抗體部分」係指能夠特異性結合人類TGFβ且形成靶向CD39及TGFβ之蛋白部分之抗體。

術語「醫藥學上可接受之」指示指定載劑、媒劑、稀釋劑、賦形劑及/或鹽，總體而言在化學上及/或在物理上與調配物中之其他成分相容，且在生理上與其接受者相容。

本發明中使用之術語「CD39陽性細胞」係指在細胞表面上表現CD39之細胞(例如，吞噬細胞)。

本發明中使用之術語「途徑」係指一組生物化學反應，該等反應能夠以逐步過程將一種化合物轉化為另一種化合物。途徑中第一步之產物可為第二步之受質，第二步之產物可為第三步之受質，依此類推。該途徑之成分包含途徑中之所有受質、輔因子、副產物、中間產物、終產物及任何酶。因此，本發明中使用之術語「腺苷途徑」係指生物化學途徑之集合，其中任一者均涉及腺苷，例如腺苷產生或腺苷轉化為其他物質。本發明中使用之術語「TGFβ信號傳導途徑」係指生物化學途徑之集合，其中任一者均涉及TGFβ，例如TGFβ之產生或TGFβ轉化為其他物質。

本發明中使用之術語「拮抗劑」係指抑制蛋白質、多肽或肽之表現量或活性，從而減少蛋白質、多肽或肽之量、形成、功能及/或下游信號之分子。例如，本發明之「CD39拮抗劑」係指抑制CD39表現量或活性，從而減少CD39之量、形成、功能及/或下游信號之分子。又例如，本發明之「TGFβ拮抗劑」係指抑制TGFβ表現量或活性，從而減少TGFβ之量、形成、功能及/或下游信號之分子。

如本文所用，術語「編碼的(encoded)」或「編碼(encoding)」係指能夠轉錄為mRNA及/或轉譯為肽或蛋白質之方法。術語「編碼序列」或「基因」係指編碼肽或蛋白質之多核苷酸序列。這兩個術語在本發明中可互換使用。在一些實施例中，編碼序列為自信使RNA (mRNA)反向轉錄之互補DNA (cDNA)序列。在一些實施例中，編碼序列為mRNA。

本發明中使用之術語「反義核苷酸」係指能夠藉由氫鍵與目標核酸雜交之寡聚化合物。例如，「靶向CD39編碼序列之反義核苷酸」係指能夠與CD39編碼序列或其一部分雜交之核苷酸。靶向 CD39 及 TGFβ 之結合物分子

當前免疫檢查點抑制劑(例如PD1及CTLA-4)之一個潛在限制為富含腺苷及TGFβ之腫瘤微環境(「TME」)。腫瘤局部微環境中之腺苷及TGFβ信號在過濾T細胞中可能使其向Treg傾斜，且減弱免疫效應細胞活化。本發明人意外地發現，藉由一種同時靶向CD39及TGFβ之新穎結合物分子，由於同時阻斷腺苷途徑(藉由抑制CD39)及TGFβ信號傳導途徑(經由TGFβ陷阱)，可能實現更免疫正常化的TME及協同抗腫瘤效應。事實上，本發明人證明，與使用TGFβ受體或抗CD39抗體之單一療法相比，同時靶向本發明之CD39及TGFβ之結合物分子顯示出協同抗腫瘤效應，特別是在T細胞存活、細胞介素產生及Treg抑制方面。

在一個態樣中，本發明提供一種結合物分子，該結合物分子包含能夠干擾CD39與其受質之間相互作用的CD39抑制部分及能夠干擾TGFβ與其受體之間相互作用的TGFβ抑制部分。該結合物分子可為小分子、化合物(天然的或合成的)、肽、多肽、蛋白質、干擾RNA、信使RNA等。在某些實施例中，該結合物分子不為兩種或更多種不同物質之混合物(亦即，兩種或更多種不同物質僅放在一起，且不化學結合)。在某些實施例中，該結合物分子為雙功能分子，能夠干擾CD39與其受質之間的相互作用，且能夠干擾TGFβ與其受體之間的相互作用。

腺苷途徑藉由調節免疫及炎症細胞(如巨噬細胞、樹突狀細胞、髓源性抑制細胞、T細胞及自然殺傷(NK)細胞)之功能，參與免疫耐受腫瘤微環境創建。腺苷途徑亦藉由分別在癌細胞及內皮細胞上表現之腺苷受體干擾癌細胞增殖、凋亡及血管生成，調節癌症生長及擴散。實體瘤表現高水準之CD39及CD73，以及低水準之核苷轉運體(NTs)、外周腺苷脫胺酶及其輔因子CD26，導致癌症環境中腺苷信號的增加。在某些實施例中，本發明之CD39抑制部分能夠干擾CD39及ATP/ADP之間的相互作用。在某些實施例中，結合物分子之CD39抑制部分在治療、預防或減輕癌症中特別有用。

在某些實施例中，結合物分子之CD39抑制部分為選自由以下組成之群的CD39拮抗劑：CD39結合劑、靶向CD39編碼序列之RNAi、靶向CD39編碼序列之反義核苷酸以及與CD39競爭結合其受質之試劑。

若分子導致CD39之表現量(在轉錄或轉譯層面)或活性顯著降低，則認為該分子抑制CD39之表現量或活性。類似地，若分子導致CD39與其受質之間的結合顯著減少，從而導致CD39介導之下游信號及功能顯著減少，則認為該分子抑制CD39與其受質(例如ATP或ADP)之間的結合。例如，若減少至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%，則認為減少顯著。

CD39結合劑(拮抗劑)能夠藉由兩種方式發揮作用。在一些實施例中，本發明之CD39結合劑能夠與CD39競爭結合其受質，從而干擾、阻斷或以其他方式阻止CD39結合其受質。此類型之拮抗劑結合受質，但不會觸發預期的信號轉導，亦稱為「競爭性拮抗劑」。在其他實施例中，本發明之CD39結合劑能夠以足夠的親和性及特異性結合且隔離CD39，以基本上干擾、阻斷或以其他方式阻止CD39結合其受質。此類型之拮抗劑亦稱為「中和拮抗劑」，且能夠包含例如針對CD39之抗體或適體，該抗體或適體特異性結合CD39。

在某些實施例中，CD39結合劑選自由以下組成之群：特異性識別CD39之抗體或其抗原結合片段，以及結合CD39之小分子化合物。

本文中使用之術語「小分子化合物」意謂可作為生物過程之酶受質或調節劑之低分子量化合物。總體上，「小分子化合物」係一種尺寸小於5千道爾頓(kD)之分子。在一些實施例中，小分子小於約4kD、3kD、約2kD或約1kD。在一些實施例中，小分子小於約800道爾頓(D)、約600 D、約500 D、約400 D、約300 D、約200 D或約100 D。在一些實施例中，小分子小於約2000 g/mol、小於約1500 g/mol、小於約1000 g/mol、小於約800 g/mol，或小於約500 g/mol。在一些實施例中，小分子為非聚合物。在一些實施例中，根據本發明，小分子不為蛋白質、多肽、寡肽、肽、多核苷酸、寡核苷酸、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖等。在一些實施例中，小分子為治療藥物。在一些實施例中，小分子為佐劑。在一些實施例中，小分子為藥物。

在某些實施例中，結合物分子之TGFβ抑制部分能夠干擾TGFβ與TGFβ受體之間的相互作用。在某些實施例中，TGFβ與TGFβ受體之間的相互作用被一種藥劑阻斷，該藥劑可破壞TGFβ信號傳導途徑內之信號轉導級聯，且破壞或阻止TGFβ或TGFβ超家族配位體與其內源性受體結合。能夠用於確定TGFβ信號傳導途徑抑制劑抑制活性之例示性分析包含但不限於電泳遷移率轉移分析、抗體超轉移分析以及TGFβ誘導基因報導分析，例如，如WO 2006/012954中所述。

在某些實施例中，結合物分子之TGFβ抑制部分為選自由以下組成之群的TGFβ拮抗劑：TGFβ結合劑、靶向TGFβ編碼序列之RNAi、靶向TGFβ編碼序列之反義核苷酸以及與TGFβ競爭結合其受體(例如TGFβRI、TGFβRII或TGFβRIII)之試劑。

若分子導致TGFβ之表現量(在轉錄或轉譯層面)或活性顯著降低，則認為該分子抑制TGFβ之表現量或活性。類似地，若分子導致TGFβ與其受體之間的結合顯著減少，從而導致TGFβ介導之下游信號及功能顯著減少，則認為該分子抑制TGFβ與其受體(例如TGFβRI、TGFβRII或TGFβRIII)之間的結合。例如，若減少至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%，則認為減少顯著。

TGFβ結合劑(拮抗劑)能夠藉由兩種方式發揮作用。在一些實施例中，本發明之TGFβ結合劑能夠與TGFβ競爭結合其受體，從而干擾、阻斷或以其他方式阻止TGFβ結合其受體。此類型之拮抗劑結合受體，但不會觸發預期的信號轉導，亦稱為「競爭性拮抗劑」。在其他實施例中，本發明之TGFβ結合劑能夠以足夠的親和性及特異性結合且隔離TGFβ，以基本上干擾、阻斷或以其他方式阻止TGFβ結合其受體。此類型之拮抗劑亦稱為「中和拮抗劑」，且能夠包含例如針對TGFβ之抗體或適體，該抗體或適體特異性結合TGFβ。

在某些實施例中，TGFβ結合劑選自由以下組成之群：特異性識別TGFβ之抗體或其抗原結合片段，以及結合TGFβ之小分子化合物。

在某些實施例中，本發明之結合物分子為融合蛋白，其包含與TGFβ結合域連接之CD39結合域。

如本文所用，術語「結合域」係指能夠特異性結合至目標分子或複合物之部分。結合域可包含小分子、肽、修飾肽(例如，具有非天然胺基酸殘基之肽)、多肽、蛋白質、抗體或其抗原結合片段、配位體、核酸或其任何組合。例如，術語「CD39結合域」係指能夠特異性結合CD39 (例如，人類及/或小鼠CD39)之部分；術語「TGFβ結合域」係指能夠特異性結合TGFβ家族之一或多個家族成員或亞型(例如TGFβ1、TGFβ2或TGFβ3)之部分。「TGFβ結合域」在本發明中亦可稱為「TGFβ陷阱(TGFβ Trap)」。因此，包含與本發明之TGFβ結合域連接之CD39結合域之蛋白質在本發明中亦可能稱為「抗CD39/TGFβ陷阱」。

在某些實施例中，本發明之結合物分子特異性結合人類TGFβ1、人類TGFβ2及/或人類TGFβ3。在某些實施例中，本發明之結合物分子以類似的親和性特異性結合人類TGFβ1及小鼠TGFβ1。在某些實施例中，本發明之結合物分子以不超過3×10 ^-11M (例如，不超過2×10 ^-11M、不超過1×10 ^-11M、不超過0.9×10 ^-11M、不超過0.8×10 ^-11M、不超過0.7×10 ^-11M、不超過0.6×10 ^-11M、不超過0.5×10 ^-11M)之EC ₅₀值與人類TGFβ1特異性結合，該EC ₅₀值藉由ELISA分析測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以不超過4×10 ^-10M (例如，不超過3×10 ^-10M、不超過2×10 ^-10M、不超過1×10 ^-10M、不超過0.5×10 ^-10M)之IC ₅₀值阻斷TGFβ1及TGFβRII結合，該IC ₅₀值如藉由阻斷分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以劑量依賴性方式與人類CD39結合，如藉由FACS分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠同時結合CD39及TGFβ，如藉由ELISA分析或FACS分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以不超過4×10 ^-11M之IC ₅₀值抑制TGFβ信號，如藉由TGF-β SMAD報導分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以不超過7×10 ^-10M (例如，不超過6×10 ^-10M、不超過5×10 ^-10M、不超過4×10 ^-10M、不超過3×10 ^-10M、不超過2×10 ^-10M、不超過1×10 ^-10M、不超過0.5×10 ^-10M)之IC ₅₀值抑制表現CD39細胞之ATP酶活性，如藉由ATP酶活性分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以不超過4×10 ^-10M (例如，不超過3×10 ^-10M、不超過2×10 ^-10M、不超過1×10 ^-10M、不超過0.5×10 ^-10M)之K _D值與人類CD39特異性結合，如藉由Octet分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以不超過4×10 ^-11M (例如，不超過3×10 ^-11M、不超過2×10 ^-11M、不超過1×10 ^-11M、不超過0.5×10 ^-11M)之K _D值與人類TGFβ1特異性結合，如藉由Octet分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠恢復T細胞功能，如藉由Treg抑制分析所測定。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以劑量依賴性方式抑制人類T細胞凋亡。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠以劑量依賴性方式藉由刺激促進人類T細胞存活及活化。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠阻斷TGFβ誘導之Foxp3在總T細胞上之表現。在某些實施例中，本發明之結合物分子能夠恢復ATP誘導之對人T細胞增殖之抑制。 TGFβ 結合域

在某些實施例中，TGFβ結合域與人類及/或小鼠TGFβ結合。在某些實施例中，TGFβ結合域能夠拮抗及/或抑制TGFβ信號傳導途徑。在某些實施例中，TGFβ結合域能夠拮抗及/或抑制TGFβ。在本發明中，TGFβ結合域可為特異性結合至TGFβ家族之一或多個家族成員或同型之任何部分。在某些實施例中，TGFβ結合域包含結合TGFβ1 (例如，人類TGFβ1)、TGFβ2 (例如，人類TGFβ2)及/或TGFβ3 (例如，人類TGFβ3)之蛋白質，或具有類似或改善的TGFβ結合親和性之其變體。在某些實施例中，TGFβ結合域與TGFβ1 (例如，人類TGFβ1)結合。在某些實施例中，TGFβ結合域與TGFβ2 (例如，人類TGFβ2)結合。在某些實施例中，TGFβ結合域與TGFβ3 (例如，人類TGFβ3)結合。在某些實施例中，TGFβ結合域與TGFβ1 (例如，人類TGFβ1)及TGFβ2 (例如，人類TGFβ2)特異性結合。在某些實施例中，TGFβ結合域與TGFβ1 (例如，人類TGFβ1)及TGFβ3 (例如，人類TGFβ3)特異性結合。在某些實施例中，TGFβ結合域與TGFβ2 (例如，人類TGFβ2)及TGFβ3 (例如，人類TGFβ3)特異性結合。在某些實施例中，TGFβ結合域與TGFβ1 (例如，人類TGFβ1)、TGFβ2 (例如，人類TGFβ2)及TGFβ3 (例如，人類TGFβ3)特異性結合。熟習此項技術者將理解，結合至TGFβ家族之一個家族成員或同型之TGFβ結合域可能能夠以類似或更高的親和性結合至TGFβ家族之一或多個其他家族成員或同型。

本發明之TGFβ結合域可為抗TGFβ抗體部分或其抗原結合片段。例示性抗TGFβ抗體部分包含非蘇木單抗(fresolimumab)及美替木單抗(metelimumab)，以及在例如US7494651B2、US8383780B2、US8012482B2、WO2017141208A1中所述之抗TGFβ抗體部分或其抗原結合片段，其各自以全文引用之方式併入本文中。

本發明之TGFβ結合域亦可為TGFβ受體(例如，TGFβRI、TGFβRII、TGFβRIII)或其片段。在某些實施例中，TGFβ結合域包含可溶性TGFβ受體(例如，可溶性人類TGFβ受體)或其片段。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβ受體(例如，人類TGFβ受體)之胞外域(ECD)。在某些實施例中， TGFβ受體選自由以下組成之群：TGFβ受體I (TGFβRI)、TGFβ受體II (TGFβRII)、TGFβ受體III (TGFβRIII)及其任何組合。在某些實施例中，TGFβ受體為TGFβRI (例如，人類TGFβRI)。在某些實施例中，TGFβ受體為TGFβRII (例如，人類TGFβRII)。在某些實施例中，TGFβ受體為TGFβRIII (例如，人類TGFβRIII)。

在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβRI (例如人類TGFβRI)之ECD、TGFβRII (例如人類TGFβRII)之ECD、TGFβRIII (例如人類TGFβRIII)之ECD或其任何組合。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβRI (例如人類TGFβRI)之ECD。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβRII (例如人類TGFβRII)之ECD。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβRIII (例如人類TGFβRIII)之ECD。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβRI (例如人類TGFβRI)之ECD及TGFβRII (例如人類TGFβRII)之ECD。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβRI (例如人類TGFβRI)之ECD及TGFβRIII (例如人類TGFβRIII)之ECD。在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβRII (例如人類TGFβRII)之ECD及TGFβRIII (例如人類TGFβRIII)之ECD。

在某些實施例中，TGFβ受體之ECD包含選自由以下組成之群的胺基酸序列或者由選自由以下組成之群的胺基酸序列組成：如SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164或SEQ ID NO: 165所示之胺基酸序列，或與其具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性但仍保持與TGFβ之結合特異性的胺基酸序列。

在某些實施例中，TGFβ結合域包含TGFβ受體之兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個等) ECD。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD源自相同TGFβ受體。例如，該兩個或更多個ECD源自TGFβRI (例如人類TGFβRI)，在本發明中亦稱為「TGFβRI ECD」或「TGFβRI ECDs」。又例如，該兩個或更多個ECD源自TGFβRII (例如人類TGFβRII)，在本發明中亦稱為「TGFβRII ECD」或「TGFβRII ECDs」。又例如，該兩個或更多個ECD源自TGFβRIII (例如人類TGFβRIII)，在本發明中亦稱為「TGFβRIII ECD」或「TGFβRIII ECDs」。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD之胺基酸序列係相同的。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD之胺基酸序列差異不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個胺基酸。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD之胺基酸序列不同但相互具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD之胺基酸序列不同但與SEQ ID NO: 163-165中之任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性但仍保持與TGFβ之結合特異性。

在某些實施例中，該兩個或更多個ECD源自至少兩個不同TGFβ受體。例如，兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個等) ECD源自至少兩個(例如，兩個、三個)不同TGFβ受體，該等受體選自TGFβRI (例如，人類TGFβRI)、TGFβRII (例如，人類TGFβRII)、TGFβRIII (例如，人類TGFβRIII)。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD包含源自TGFβRI (例如人類TGFβRI)之第一ECD及源自TGFβRII (例如人類TGFβRII)之第二ECD。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD包含源自TGFβRI (例如人類TGFβRI)之第一ECD及源自TGFβRIII (例如人類TGFβRIII)之第二ECD。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD包含源自TGFβRII (例如人類TGFβRII)之第一ECD及源自TGFβRIII (例如人類TGFβRIII)之第二ECD。

在某些實施例中，抗CD39/TGFβ陷阱阻斷TGFβ及TGFβ受體相互作用之能力隨著TGFβ受體ECD的增加而提高。例如，有四個TGFβRII ECD之抗CD39/TGFβ陷阱比有兩個TGFβRII ECD之抗CD39/TGFβ陷阱在阻斷TGFβ及TGFβRII之間的相互作用方面更有效。

在某些實施例中，該兩個或更多個ECD可操作地串接。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD共價或非共價地相互連接。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD直接相互連接或藉由連接子相互連接。在某些實施例中，該兩個或更多個ECD藉由第一連接子連接。

本發明中使用之術語「連接子」或「連接子」係指具有1、2、3、4或5個胺基酸殘基，或長度介於5及15、20、30、50或更多個胺基酸殘基之間的人工胺基酸序列，藉由肽鍵連接，且用於連接一或多個多肽。連接子可具有或可不具有二級結構。連接子序列在此項技術中係已知的，例如，參見Holliger等人 , Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:6444-6448 (1993)；Poljak 等人 , Structure2:1121-1123 (1994)。

在某些實施例中，第一連接子選自由以下組成之群：可分解連接子、非可分解連接子、肽連接子、可撓性連接子、剛性連接子、螺旋連接子及非螺旋連接子。可使用此項技術中已知的任何適合之連接子。在某些實施例中，第一連接子包含肽連接子。例如，本發明中之有用連接子可能富含甘胺酸及絲胺酸殘基。實例包含具有包含蘇胺酸/絲胺酸及甘胺酸之單個或重複序列之連接子，例如TGGGG (SEQ ID NO: 172)、GGGGS (SEQ ID NO: 173)或SGGGG (SEQ ID NO: 174)或其串聯重複(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多重複)。在某些實施例中，本發明中使用之第一連接子包含GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 175)。或者，連接子可為包含如GAPGGGGGAAAAAGGGGG (SEQ ID NO: 176)所示之胺基酸序列之一或多個順序或串聯重複之長肽鏈。在某些實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 176之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多順序或串聯重複。在某些實施例中，肽連接子包含GS連接子。在某些實施例中，GS連接子包含GGGS (SEQ ID NO: 177)或SEQ ID NO: 173之一或多個重複。在某些實施例中，肽連接子包含如GGGGSGGGGSGGGGSG (SEQ ID NO: 182)所示之胺基酸序列。在某些實施例中，第一連接子包含選自由以下組成之群的胺基酸序列或由選自由以下組成之群的胺基酸序列組成：與SEQ ID No:172-177，182中之任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性之胺基酸序列。上述第一連接子之描述適用於下述第一連接子。

在某些實施例中，TGFβ結合域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 171或其任何組合。

若干例示性TGFβ受體ECD之胺基酸序列如下表30中所示。第一連接子為加底線的。表 30 ：例示性 TGFβ 受體 ECD 之胺基酸序列

名稱	胺基酸序列	SEQ ID NO
TGFβRI ECD	LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEL	163
TGFβRII ECD	IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD	164
TGFβRIII ECD	GPEPGALCELSPVSASHPVQALMESFTVLSGCASRGTTGLPQEVHVLNLRTAGQGPGQLQREVTLHLNPISSVHIHHKSVVFLLNSPHPLVWHLKTERLATGVSRLFLVSEGSVVQFSSANFSLTAETEERNFPHGNEHLLNWARKEYGAVTSFTELKIARNIYIKVGEDQVFPPKCNIGKNFLSLNYLAEYLQPKAAEGCVMSSQPQNEEVHIIELITPNSNPYSAFQVDITIDIRPSQEDLEVVKNLILILKCKKSVNWVIKSFDVKGSLKIIAPNSIGFGKESERSMTMTKSIRDDIPSTQGNLVKWALDNGYSPITSYTMAPVANRFHLRLENNAEEMGDEEVHTIPPELRILLDPGALPALQNPPIRGGEGQNGGLPFPFPDISRRVWNEEGEDGLPRPKDPVIPSIQLFPGLREPEEVQGSVDIALSVKCDNEKMIVAVEKDSFQASGYSGMDVTLLDPTCKAKMNGTHFVLESPLNGCGTRPRWSALDGVVYYNSIVIQVPALGDSSGWPDGYEDLESGDNGFPGDMDEGDASLFTRPEIVVFNCSLQQVRNPSSFQEQPHGNITFNMELYNTDLFLVPSQGVFSVPENGHVYVEVSVTKAEQELGFAIQTCFISPYSNPDRMSHYTIIENICPKDESVKFYSPKRVHFPIPQADMDKKRFSFVFKPVFNTSLLFLQCELTLCTKMEKHPQKLPKCVPPDEACTSLDASIIWAMMQNKKTFTKPLAVIHHEAESKEKGPSMKEPNPISPPIFHGLDTLTV	165
TGFβRI-TGFβRI ECD	LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEL GGGGSGGGGSGGGGSLQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEL	166
TGFβRII-TGFβRII ECD	IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD GGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD	167
TGFβRIII-TGFβRIII ECD	GPEPGALCELSPVSASHPVQALMESFTVLSGCASRGTTGLPQEVHVLNLRTAGQGPGQLQREVTLHLNPISSVHIHHKSVVFLLNSPHPLVWHLKTERLATGVSRLFLVSEGSVVQFSSANFSLTAETEERNFPHGNEHLLNWARKEYGAVTSFTELKIARNIYIKVGEDQVFPPKCNIGKNFLSLNYLAEYLQPKAAEGCVMSSQPQNEEVHIIELITPNSNPYSAFQVDITIDIRPSQEDLEVVKNLILILKCKKSVNWVIKSFDVKGSLKIIAPNSIGFGKESERSMTMTKSIRDDIPSTQGNLVKWALDNGYSPITSYTMAPVANRFHLRLENNAEEMGDEEVHTIPPELRILLDPGALPALQNPPIRGGEGQNGGLPFPFPDISRRVWNEEGEDGLPRPKDPVIPSIQLFPGLREPEEVQGSVDIALSVKCDNEKMIVAVEKDSFQASGYSGMDVTLLDPTCKAKMNGTHFVLESPLNGCGTRPRWSALDGVVYYNSIVIQVPALGDSSGWPDGYEDLESGDNGFPGDMDEGDASLFTRPEIVVFNCSLQQVRNPSSFQEQPHGNITFNMELYNTDLFLVPSQGVFSVPENGHVYVEVSVTKAEQELGFAIQTCFISPYSNPDRMSHYTIIENICPKDESVKFYSPKRVHFPIPQADMDKKRFSFVFKPVFNTSLLFLQCELTLCTKMEKHPQKLPKCVPPDEACTSLDASIIWAMMQNKKTFTKPLAVIHHEAESKEKGPSMKEPNPISPPIFHGLDTLTV GGGGSGGGGSGGGGSGPEPGALCELSPVSASHPVQALMESFTVLSGCASRGTTGLPQEVHVLNLRTAGQGPGQLQREVTLHLNPISSVHIHHKSVVFLLNSPHPLVWHLKTERLATGVSRLFLVSEGSVVQFSSANFSLTAETEERNFPHGNEHLLNWARKEYGAVTSFTELKIARNIYIKVGEDQVFPPKCNIGKNFLSLNYLAEYLQPKAAEGCVMSSQPQNEEVHIIELITPNSNPYSAFQVDITIDIRPSQEDLEVVKNLILILKCKKSVNWVIKSFDVKGSLKIIAPNSIGFGKESERSMTMTKSIRDDIPSTQGNLVKWALDNGYSPITSYTMAPVANRFHLRLENNAEEMGDEEVHTIPPELRILLDPGALPALQNPPIRGGEGQNGGLPFPFPDISRRVWNEEGEDGLPRPKDPVIPSIQLFPGLREPEEVQGSVDIALSVKCDNEKMIVAVEKDSFQASGYSGMDVTLLDPTCKAKMNGTHFVLESPLNGCGTRPRWSALDGVVYYNSIVIQVPALGDSSGWPDGYEDLESGDNGFPGDMDEGDASLFTRPEIVVFNCSLQQVRNPSSFQEQPHGNITFNMELYNTDLFLVPSQGVFSVPENGHVYVEVSVTKAEQELGFAIQTCFISPYSNPDRMSHYTIIENICPKDESVKFYSPKRVHFPIPQADMDKKRFSFVFKPVFNTSLLFLQCELTLCTKMEKHPQKLPKCVPPDEACTSLDASIIWAMMQNKKTFTKPLAVIHHEAESKEKGPSMKEPNPISPPIFHGLDTLTV	168
TGFβRI-TGFβRII ECD	LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEL GGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD	169
TGFβRI-TGFβRIII ECD	LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEL GGGGSGGGGSGGGGSGPEPGALCELSPVSASHPVQALMESFTVLSGCASRGTTGLPQEVHVLNLRTAGQGPGQLQREVTLHLNPISSVHIHHKSVVFLLNSPHPLVWHLKTERLATGVSRLFLVSEGSVVQFSSANFSLTAETEERNFPHGNEHLLNWARKEYGAVTSFTELKIARNIYIKVGEDQVFPPKCNIGKNFLSLNYLAEYLQPKAAEGCVMSSQPQNEEVHIIELITPNSNPYSAFQVDITIDIRPSQEDLEVVKNLILILKCKKSVNWVIKSFDVKGSLKIIAPNSIGFGKESERSMTMTKSIRDDIPSTQGNLVKWALDNGYSPITSYTMAPVANRFHLRLENNAEEMGDEEVHTIPPELRILLDPGALPALQNPPIRGGEGQNGGLPFPFPDISRRVWNEEGEDGLPRPKDPVIPSIQLFPGLREPEEVQGSVDIALSVKCDNEKMIVAVEKDSFQASGYSGMDVTLLDPTCKAKMNGTHFVLESPLNGCGTRPRWSALDGVVYYNSIVIQVPALGDSSGWPDGYEDLESGDNGFPGDMDEGDASLFTRPEIVVFNCSLQQVRNPSSFQEQPHGNITFNMELYNTDLFLVPSQGVFSVPENGHVYVEVSVTKAEQELGFAIQTCFISPYSNPDRMSHYTIIENICPKDESVKFYSPKRVHFPIPQADMDKKRFSFVFKPVFNTSLLFLQCELTLCTKMEKHPQKLPKCVPPDEACTSLDASIIWAMMQNKKTFTKPLAVIHHEAESKEKGPSMKEPNPISPPIFHGLDTLTV	170
TGFβRII-TGFβRIII ECD	IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD GGGGSGGGGSGGGGSGPEPGALCELSPVSASHPVQALMESFTVLSGCASRGTTGLPQEVHVLNLRTAGQGPGQLQREVTLHLNPISSVHIHHKSVVFLLNSPHPLVWHLKTERLATGVSRLFLVSEGSVVQFSSANFSLTAETEERNFPHGNEHLLNWARKEYGAVTSFTELKIARNIYIKVGEDQVFPPKCNIGKNFLSLNYLAEYLQPKAAEGCVMSSQPQNEEVHIIELITPNSNPYSAFQVDITIDIRPSQEDLEVVKNLILILKCKKSVNWVIKSFDVKGSLKIIAPNSIGFGKESERSMTMTKSIRDDIPSTQGNLVKWALDNGYSPITSYTMAPVANRFHLRLENNAEEMGDEEVHTIPPELRILLDPGALPALQNPPIRGGEGQNGGLPFPFPDISRRVWNEEGEDGLPRPKDPVIPSIQLFPGLREPEEVQGSVDIALSVKCDNEKMIVAVEKDSFQASGYSGMDVTLLDPTCKAKMNGTHFVLESPLNGCGTRPRWSALDGVVYYNSIVIQVPALGDSSGWPDGYEDLESGDNGFPGDMDEGDASLFTRPEIVVFNCSLQQVRNPSSFQEQPHGNITFNMELYNTDLFLVPSQGVFSVPENGHVYVEVSVTKAEQELGFAIQTCFISPYSNPDRMSHYTIIENICPKDESVKFYSPKRVHFPIPQADMDKKRFSFVFKPVFNTSLLFLQCELTLCTKMEKHPQKLPKCVPPDEACTSLDASIIWAMMQNKKTFTKPLAVIHHEAESKEKGPSMKEPNPISPPIFHGLDTLTV	171

CD39 結合域

在某些實施例中，本發明之CD39結合域與CD39 (例如，人類CD39、食蟹猴CD39或小鼠CD39)結合。在某些實施例中，本發明之CD39結合域與人類CD39結合。

在某些實施例中，本發明之CD39結合域包含抗CD39抗體部分。例示性抗CD39抗體部分包含例如US10556959B2、US20200277394A1、EP3429692A1、WO2018065552A1中所述之抗CD39抗體或其抗原結合片段，其各自以全文引用之方式併入本文中。在某些實施例中，本發明之抗 CD39 抗體部分一節及 例示性抗 CD39 抗體部分一節中揭示了例示性抗CD39抗體部分。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分包含一或多個CDR。在某些實施例中，抗CD39抗體部分包含如本發明之 例示性抗 CD39 抗體部分一節中所述之一或多個CDR。在某些實施例中，抗CD39抗體部分包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)。在某些實施例中，抗CD39抗體部分包含如本發明之 例示性抗 CD39 抗體部分一節中所揭示之抗CD39抗體之VH及VL。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分進一步包含附加至重鏈可變區之羧基末端之重鏈恆定區。在某些實施例中，重鏈恆定區源自下組：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。在某些實施例中，重鏈恆定區源自人類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2或IgM。在某些實施例中，重鏈恆定區源自人類IgG1 (SEQ ID NO: 178)或IgG4 (SEQ ID NO: 179)。在某些實施例中，抗CD39抗體部分進一步包含附加至輕鏈可變區之羧基末端之輕鏈恆定區。在某些實施例中，輕鏈恆定區源自Kappa輕鏈或Lamda輕鏈。Kappa輕鏈恆定區及Lamda輕鏈恆定區之胺基酸序列分別如SEQ ID NO:180及SEQ ID NO:181所示。若干例示性恆定區之胺基酸序列如下表31所示。表 31 ：例示性恆定區之胺基酸序列

名稱	胺基酸序列	SEQ ID NO
人類IgG1恆定區	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	178
人類IgG4恆定區	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK	179
輕鏈恆定區 (kappa)	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC	180
輕鏈恆定區 (Lamda)	GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS	181

TGFβ 結合域與 CD39 結合域之間的連接

在本發明中，TGFβ結合域可連接至CD39結合域之任何部分(例如抗CD39抗體部分)。在某些實施例中，TGFβ結合域在選自由以下組成之群的位置連接至抗CD39抗體部分：抗CD39抗體部分之1)重鏈可變區之胺基末端，2)輕鏈可變區之胺基末端，3)重鏈可變區之羧基末端；4)輕鏈可變區之羧基末端；5)重鏈恆定區之羧基末端；以及6)輕鏈恆定區之羧基末端。

TGFβ結合域能夠被連接(共價地或非共價地)至抗CD39抗體部分(例如，直接或藉由第二連接子)之任何部分(例如，免疫球蛋白之胺基末端或羧基末端)。共價鍵可為化學鍵或基因連接。在某些實施例中，第二連接子選自由以下組成之群：可分解連接子、非可分解連接子、肽連接子、可撓性連接子、剛性連接子、螺旋連接子及非螺旋連接子。可使用此項技術中已知的任何適合之連接子。例如，本發明中之有用連接子可能富含甘胺酸及絲胺酸殘基。示例包含具有包含蘇胺酸/絲胺酸及甘胺酸之單個或重複序列之連接體，例如TGGGG (SEQ ID NO: 172)、GGGGS (SEQ ID NO: 173)或SGGGG (SEQ ID NO: 174)或其串聯重複(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多重複)。在某些實施例中，本發明中使用之第二連接子包含GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 175)。或者，連接子可為包含如GAPGGGGGAAAAAGGGGG (SEQ ID NO: 176)所示之胺基酸序列之一或多個順序或串聯重複之長肽鏈。在某些實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 176之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多順序或串聯重複。在某些實施例中，肽連接子包含GS連接子。在某些實施例中，GS連接子包含GGGS (SEQ ID NO: 177)或SEQ ID NO: 173之一或多個重複。在某些實施例中，肽連接子包含如GGGGSGGGGSGGGGSG (SEQ ID NO: 182)所示之胺基酸序列。在某些實施例中，第二連接子包含選自由以下組成之群的胺基酸序列或由選自由以下組成之群的胺基酸序列組成：與SEQ ID No:172-177，182中之任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性之胺基酸序列。上述第二連接子之描述適用於下述第二連接子。

在某些實施例中，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之重鏈可變區。TGFβ結合域能夠連接至重鏈可變區之任何部分，包含抗CD39抗體部分之重鏈可變區之胺基末端(N-末端)或羧基末端(C-末端)胺基酸殘基。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之胺基末端。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之羧基末端。

例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖如本發明之圖24C所示，該分子包含兩個連接至抗CD39抗體部分之各重鏈可變區之胺基末端之TGFβRII ECD。

在某些實施例中，TGFβ結合域連接抗CD39抗體部分之輕鏈可變區。TGFβ結合域能夠連接輕鏈可變區之任何部分，包含抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之胺基末端或羧基末端之胺基酸殘基。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之胺基末端。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之羧基末端。

例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖如本發明之圖24D所示，該分子包含兩個連接至抗CD39抗體部分之各輕鏈可變區之胺基末端之TGFβRII ECD。

在某些實施例中，TGFβ結合域連接抗CD39抗體部分之重鏈恆定區。TGFβ結合域能夠連接至重鏈恆定區之任何部分，包含抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之胺基末端或羧基末端之胺基酸殘基。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之胺基末端。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之羧基末端。

例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖如本發明之圖24A所示，該分子包含一個連接至抗CD39抗體部分之各重鏈恆定區之羧基末端之TGFβRII ECD。例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖如本發明之圖24B所示，該分子包含兩個連接至抗CD39抗體部分之各重鏈恆定區之羧基末端之TGFβRII ECD。

在某些實施例中，TGFβ結合域連接抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區。TGFβ結合域能夠連接輕鏈恆定區之任何部分，包含抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之胺基末端或羧基末端之胺基酸殘基。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之胺基末端。在某些實施例中，TGFβ結合域連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之羧基末端。

例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖如本發明之圖24F所示，該分子包含兩個連接至抗CD39抗體部分之各輕鏈恆定區之羧基末端之TGFβRII ECD。

在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈可變區。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之胺基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域分別連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之胺基末端及羧基末端。在某些實施例中，該兩個或更多個TGFβ結合域直接或藉由第一連接子相互連接。

在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之胺基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域分別連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之胺基末端及羧基末端。在某些實施例中，該兩個或更多個TGFβ結合域直接或藉由第一連接子相互連接。

在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域分別連接至抗CD39抗體部分之重鏈及輕鏈可變區。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之胺基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之胺基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分重鏈可變區之羧基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之胺基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之重鏈可變區之羧基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之輕鏈可變區之胺基末端。

例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖如本發明之圖24E所示，該分子包含一個連接至抗CD39抗體部分之各重鏈可變區之胺基末端之TGFβRII ECD，以及一個連接至抗CD39抗體部分之各輕鏈可變區之胺基末端之TGFβRII ECD。

在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區。在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之胺基末端。在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域分別連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之胺基末端及羧基末端。在某些實施例中，該兩個或更多個TGFβ結合域直接或藉由第一連接子相互連接。

在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區。在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之胺基末端。在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域全部連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之靶向CD39及TGFβ之蛋白質包含兩個或更多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域分別連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之胺基末端及羧基末端。在某些實施例中，該兩個或更多個TGFβ結合域直接或藉由第一連接子相互連接。

在某些實施例中，本發明之蛋白質包含兩個或更多個TGFβ結合域，TGFβ結合域分別連接(例如，直接或藉由第二連接子連接)至抗CD39抗體部分之重鏈及輕鏈恆定區。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之胺基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之胺基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之羧基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分重鏈恆定區之胺基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分輕鏈恆定區之羧基末端。在某些實施例中，本發明之蛋白質包含至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之重鏈恆定區之羧基末端，以及至少一個(例如，一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個) TGFβ結合域，TGFβ結合域連接至抗CD39抗體部分之輕鏈恆定區之胺基末端。

例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖如本發明之圖24G所示，該分子包含一個連接至抗CD39抗體部分之各重鏈恆定區之羧基末端之TGFβRII ECD，以及兩個連接至抗CD39抗體部分之各輕鏈恆定區之羧基末端之TGFβRII ECD。

在某些實施例中，包含連接至抗CD39抗體部分之重鏈(例如，重鏈可變區、重鏈恆定區)或輕鏈(例如，輕鏈可變區、輕鏈恆定區) C-末端之TGFβ結合域之抗CD39/TGFβ陷阱分子，比連接至抗CD39抗體部分之重鏈(例如，重鏈可變區、重鏈恆定區)或輕鏈(例如，輕鏈可變區、輕鏈恆定區) N-末端之TGFβ結合域之抗CD39/TGFβ陷阱分子，與CD39及/或TGFβ結合更有效力。在某些實施例中，包含連接至抗CD39抗體部分之重鏈(例如，重鏈可變區、重鏈恆定區)或輕鏈(例如，輕鏈可變區、輕鏈恆定區) N-末端之TGFβ結合域之抗CD39/TGFβ陷阱分子，比連接至抗CD39抗體部分之重鏈(例如，重鏈可變區、重鏈恆定區)或輕鏈(例如，輕鏈可變區、輕鏈恆定區) C-末端之TGFβ結合域之抗CD39/TGFβ陷阱分子，與CD39及/或TGFβ結合更有效力。抗 CD39 抗體部分

在某些實施例中，本發明提供之結合物分子之CD39結合域包含抗CD39抗體部分或其抗原結合片段。在某些實施例中，抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠與CD39特異性結合。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過10 ^-7M、不超過8×10 ^-8M、不超過5×10 ^-8M、不超過2×10 ^-8M、不超過8×10 ^-9M、不超過5×10 ^-9M、不超過2×10 ^-9M、不超過10 ^-9M、不超過8×10 ^-10M、不超過7×10 ^-10M或不超過6×10 ^-10M之K _D值與人類CD39特異性結合，如藉由Biacore分析所測定。Biacore分析基於表面電漿子共振技術(參見例如Murphy, M.等人, Current protocols in protein science, 第19章, 第19.14單元, 2006)。在某些實施例中，藉由本發明之實例5.1中所述之方法測定K _D值。在某些實施例中，K _D值係在約25℃或約37℃下量測。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段在25℃下量測之K _D值與在37℃下量測之K _D值相當，例如在25℃下量測之K _D值為在37℃下量測之K _D值之約80%至約150%、約90%至約130%、或約90%至約120%、約90%至約110%。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段以不超過10 ^-8M、不超過8×10 ^-9M、不超過5×10 ^-9M、不超過4×10 ^-9M、不超過3×10 ^-9M、不超過2×10 ^-9M、不超過1×10 ^-9M、不超過9×10 ^-10M、不超過8×10 ^-10M、不超過7×10 ^-10M或不超過6×10 ^-10M之K _D值與人類CD39特異性結合，如藉由Octet分析所測定。Octet分析基於生物層干涉技術(參見例如Abdiche, Yasmina N.,等人 Analytical biochemistry386.2 (2009): 172-180 及Sun Y S., Instrumentation Science & Technology, 2014, 42 (2): 109-127)。在某些實施例中，藉由本發明之實例5.1中所述之方法測定K _D值。

本發明提供之抗體部分或其抗原結合片段與人類CD39之結合亦可用「半最大有效濃度」(EC ₅₀)值表示，該值係指觀察到抗體之最大結合之50%時的抗體濃度。可藉由此項技術中已知的結合分析，例如直接或間接結合分析(例如酶聯免疫吸附分析(ELISA)、FACS分析及其他結合分析)來測定EC ₅₀值。在某些實施例中，本發明提供之抗體部分及其抗原結合片段以不超過10 ^-7M、不超過8×10 ^-8M、不超過5×10 ^-8M、不超過2×10 ^-8M、不超過10 ^-8M、不超過8×10 ^-9M、不超過5×10 ^-9M、不超過2×10 ^-9M、不超過10 ^-9M、不超過8×10 ^-10M、不超過7×10 ^-10M或不超過6×10-10 M之EC ₅₀(亦即50%結合濃度)與人類CD39特異性結合，如藉由FACS (流式細胞螢光分選技術)分析所測定。在某些實施例中，所述結合係藉由ELISA或FACS分析測定的。

在一些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段與人類CD39 (亦即ENTPD酶1)特異性結合。在一些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段不與ENTPD酶家族之其他成員結合。在一些實施例中，根據ELISA分析測定，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段與人類CD39特異性結合，但不與ENTPD酶2、3、5或6特異性結合。

在某些實施例中，例如，根據FACS分析測定，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段與人類CD39特異性結合，但不與小鼠CD39特異性結合。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段以不超過10 ^-7M、不超過8×10 ^-8M、不超過5×10 ^-8M、不超過2×10 ^-8M、不超過10 ^-8M、不超過8×10 ^-9M、不超過5×10 ^-9M、不超過2×10 ^-9M、不超過10 ^-9M、不超過8×10 ^-10M、不超過7×10 ^-10M或不超過6×10- ¹⁰M之EC ₅₀與食蟹猴CD39特異性結合，該EC ₅₀藉由FACS分析測定。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段以不超過50 nM、不超過40 nM、不超過30 nM、不超過20 nM、不超過10 nM、不超過8 nM、不超過5 nM、不超過3 nM、不超過1 nM、不超過0.9 nM、不超過0.8 nM、不超過0.7 nM、不超過0.6 nM、不超過0.5 nM、不超過0.4 nM、不超過0.3 nM、不超過0.2 nM、不超過0.1 nM、不超過0.09 nM、不超過0.08 nM、不超過0.07 nM、不超過0.06 nM或不超過0.05 nM之IC ₅₀抑制在表現CD39之細胞中之ATP酶活性，如藉由ATP酶活性分析所測定。可使用此項技術中已知之方法來確定ATP酶活性測定，例如藉由比色偵測作為ATP酶活性之結果而釋放之磷酸鹽。在某些實施例中，藉由本發明之實例3.3中所述之彼等方法確定ATP酶活性。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過50 nM (例如，不超過40nM、不超過30nM、不超過20nM、不超過10nM、不超過5nM、不超過3nM、不超過2nM、不超過1nM、不超過0.5nM或不超過0.2nM)之濃度增強ATP介導之單核球活化，如藉由FACS分析CD80、CD86及/或CD40之表現所測定，其中CD80、CD86及/或CD40之上調指示單核球活化。可使用此項技術中已知之方法來確定ATP介導之單核球之活性，例如本發明之實例5.5中所述之彼等方法。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過25 nM、不超過20 nM、不超過15 nM、不超過10 nM、不超過9 nM、不超過8 nM、不超過7 nM、不超過6 nM、不超過5 nM、不超過4 nM、不超過3 nM、不超過2 nM或不超過1 nM之濃度增強PBMC中ATP介導之T細胞活化，如藉由IL-2分泌、IFN-γ分泌、CD4+或CD8+T細胞增殖所測定，例如藉由本發明之實例5.5中所述之彼等方法所測定。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過25nM (或不超過10nM、或不超過5nM、或不超過1nM、或不超過0.5nM)之濃度增強ATP介導之樹突細胞(DC)活化，如藉由FACS分析分析CD83之表現所測定。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過25nM (或不超過10nM、或不超過5nM、或不超過1nM、或不超過0.5nM)之濃度增強ATP介導之DC活化，如藉由經活化DC促進T細胞增殖之能力所測定。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過25nM (或不超過10nM、或不超過5nM、或不超過1nM、或不超過0.5nM)之濃度增強ATP介導之DC活化，如藉由經活化DC促進混合淋巴細胞反應(MLR)分析中之IFN-γ產生的能力所測定。

可使用此項技術中已知之方法來確定ATP介導之DC成熟，例如本發明之實例5.5中所述之彼等方法來確定。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過1nM (例如，不超過0.1nM、不超過0.01nM)之濃度阻斷由腺苷(由ATP水解)誘導之CD4 ⁺T細胞增殖之抑制，如藉由FACS分析所測定。可使用此項技術中已知之方法來確定T細胞增殖，例如本發明之實例3.4中所述之彼等方法來確定。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以NK細胞或巨噬細胞依賴性方式抑制哺乳動物中之腫瘤生長。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠逆轉被eATP抑制之人類CD8 ⁺T細胞增殖，藉由T細胞增殖、CD25 ⁺細胞及活細胞群體測定。可使用此項技術中已知之方法來確定T細胞增殖百分比(%)、CD25 ⁺細胞百分比(%)及活細胞百分比(%)，例如本發明之實例3.4中所述之彼等方法來確定。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段能夠以不超過50nM (或不超過12.5nM、或不超過3.13nM、或不超過0.78nM、或不超過0.2nM、或不超過0.049 nM、或不超過0.012nM、或不超過0.003nM、或不超過0.0008nM)之濃度增強由LPS刺激誘導之人類巨噬細胞IL1β釋放，如藉由ELISA分析所測定。可使用此項技術中已知之方法(例如本發明之實例5.5.4中所述之彼等方法)來確定巨噬細胞IL1β釋放。 例示性抗 CD39 抗體部分

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分(例如，抗人類CD39抗體部分)及其抗原結合片段包含一或多個(例如，1、2、3、4、5或6個) CDR，該一或多個CDR包含選自由以下組成之群的序列：NYGMN (SEQ ID NO: 1)、KYWMN (SEQ ID NO: 2)、NYWMN (SEQ ID NO: 3)、DTFLH (SEQ ID NO: 4)、DYNMY (SEQ ID NO: 5)、DTYVH (SEQ ID NO: 6)、LINTYTGEPTYADDFKD (SEQ ID NO: 7)、EIRLKSNKYGTHYAESVKG (SEQ ID NO: 8)、QIRLNPDNYATHX ₁AESVKG (SEQ ID NO: 9)、X ₅₈IDPAX ₅₉X ₆₀NIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 151)、FIDPYNGYTSYNQKFKG (SEQ ID NO: 11)、RIDPAIDNSKYDPKFQG (SEQ ID NO: 12)、KGIYYDYVWFFDV (SEQ ID NO: 13)、QLDLYWFFDV (SEQ ID NO: 14)、HGX ₂RGFAY (SEQ ID NO: 15)、SPYYYGSGYRIFDV (SEQ ID NO: 16)、IYGYDDAYYFDY (SEQ ID NO: 17)、YYCALYDGYNVYAMDY (SEQ ID NO: 18)、KASQDINRYIA (SEQ ID NO: 19)、RASQSISDYLH (SEQ ID NO: 20)、KSSQSLLDSDGRTHLN (SEQ ID NO: 21)、SAFSSVNYMH (SEQ ID NO: 22)、SATSSVSYMH (SEQ ID NO: 23)、RSSKNLLHSNGITYLY (SEQ ID NO: 24)、YTSTLLP(SEQ ID NO: 25)、YASQSIS (SEQ ID NO: 26)、LVSKLDS (SEQ ID NO: 27)、TTSNLAS (SEQ ID NO: 28)、STSNLAS (SEQ ID NO: 29)、RASTLAS (SEQ ID NO: 30)、LQYSNLLT (SEQ ID NO: 31)、QNGHSLPLT (SEQ ID NO: 32)、WQGTLFPWT (SEQ ID NO: 33)、QQRSTYPFT (SEQ ID NO: 34)、QQRITYPFT (SEQ ID NO: 35)及AQLLELPHT (SEQ ID NO: 36)，其中X ₁為Y或F，X ₂為S或T，X ₅₈為R或K，X ₅₉為N、G、S或Q，X ₆₀為G、A或D。在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段具有不超過一個、兩個或三個對如SEQ ID NOs: 1-9、11-36及151所示之序列中任一者之胺基酸殘基取代。

本發明中使用之抗體「mAb13」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之單株抗體，其中該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 42所示之序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 51所示之序列。

本發明中使用之抗體「mAb14」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之單株抗體，其中該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 43所示之序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 52所示之序列。

本發明中使用之抗體「mAb19」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之單株抗體，其中該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 44所示之序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 53所示之序列。

本發明中使用之抗體「mAb21」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之單株抗體，其中該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 45所示之序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 54所示之序列。

本發明中使用之抗體「mAb23」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之單株抗體，其中該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 47所示之序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 56所示之序列。

本發明中使用之抗體「mAb34」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之單株抗體，其中該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 49所示之序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 58所示之序列。

本發明中使用之抗體「mAb35」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之單株抗體，其中該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 50所示之序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 59所示之序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含抗體mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34或mAb35之一或多個(例如，1、2、3、4、5或6個) CDR序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 1-6，該HCDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 7-9、11-12及151，該HCDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 13-18，該LCDR1包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 19-24，該LCDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 25-30，該LCDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 31-36。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 1所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 7所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 13所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 19所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 25所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 31所示之序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 2所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 8所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 14所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 20所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 26所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 32所示之序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 3所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 37所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 40所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 21所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 27所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 33所示之序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 3所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 38所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 41所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 21所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 27所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 33所示之序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 10所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 22所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 28所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 34所示之序列。

本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 5所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 11所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 17所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 23所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 29所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 35所示之序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，及/或LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 6所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 12所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 18所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 24所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 30所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 36所示之序列。

下表1示出抗體部分mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35之CDR胺基酸序列。CDR邊界係根據Kabat規則定義或確定的。下表2示出抗體部分mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35之重鏈可變區及輕鏈可變區之胺基酸序列。表 1 ： 7 個單株抗體部分之 CDR 胺基酸序列

抗體部分		CDR1	CDR2	CDR3
mAb13	HCDR	SEQ ID NO: 1 NYGMN	SEQ ID NO: 7 LINTYTGEPTYADDFKD	SEQ ID NO: 13 KGIYYDYVWFFDV
LCDR	SEQ ID NO: 19 KASQDINRYIA	SEQ ID NO: 25 YTSTLLP	SEQ ID NO: 31 LQYSNLLT
mAb14	HCDR	SEQ ID NO: 2 KYWMN	SEQ ID NO: 8 EIRLKSNKYGTHYAESVKG	SEQ ID NO: 14 QLDLYWFFDV
LCDR	SEQ ID NO: 20 RASQSISDYLH	SEQ ID NO: 26 YASQSIS	SEQ ID NO: 32 QNGHSLPLT
mAb19	HCDR	SEQ ID NO: 3 NYWMN	SEQ ID NO: 37 QIRLNPDNYATHYAESVKG	SEQ ID NO: 40 HGSRGFAY
LCDR	SEQ ID NO: 21 KSSQSLLDSDGRTHLN	SEQ ID NO: 27 LVSKLDS	SEQ ID NO: 33 WQGTLFPWT
mAb21	HCDR	SEQ ID NO: 3 NYWMN	SEQ ID NO: 38 QIRLNPDNYATHFAESVKG	SEQ ID NO: 41 HGTRGFAY
LCDR	SEQ ID NO: 21 KSSQSLLDSDGRTHLN	SEQ ID NO: 27 LVSKLDS	SEQ ID NO: 33 WQGTLFPWT
mAb23	HCDR	SEQ ID NO: 4 DTFLH	SEQ ID NO: 10 RIDPANGNIKYDPKFQG	SEQ ID NO: 16 SPYYYGSGYRIFDV
LCDR	SEQ ID NO: 22 SAFSSVNYMH	SEQ ID NO: 28 TTSNLAS	SEQ ID NO: 34 QQRSTYPFT
mAb34	HCDR	SEQ ID NO: 5 DYNMY	SEQ ID NO: 11 FIDPYNGYTSYNQKFKG	SEQ ID NO: 17 IYGYDDAYYFDY
LCDR	SEQ ID NO: 23 SATSSVSYMH	SEQ ID NO: 29 STSNLAS	SEQ ID NO: 35 QQRITYPFT
mAb35	HCDR	SEQ ID NO: 6 DTYVH	SEQ ID NO: 12 RIDPAIDNSKYDPKFQG	SEQ ID NO: 18 YYCALYDGYNVYAMDY
LCDR	SEQ ID NO: 24 RSSKNLLHSNGITYLY	SEQ ID NO: 30 RASTLAS	SEQ ID NO: 36 AQLLELPHT

表 2 ： 7 個單株抗體部分之可變區胺基酸序列

抗體部分	VH	VL
mAb13	SEQ ID NO: 42 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLRWMGLINTYTGEPTYADDFKDRFAFSLETSASTAFLQINNLKDEDMATYFCARKGIYYDYVWFFDVWGAGTTVTVSS	SEQ ID NO: 51 DIQMTQSPSSLSTSLGGKVSITCKASQDINRYIAWYQHKPGKGPRLLIHYTSTLLPGIPSRFSGSGSGRDYSFSISNLEPEDIATYFCLQYSNLLTFGGGTKLEIK
mAb14	SEQ ID NO: 43 EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFSKYWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNKYGTHYAESVKGRFTISRDDSKNNVYLQMNNLRPEDTGIYYCTTQLDLYWFFDVWGAGTTVTVSS	SEQ ID NO: 52 DIVMTQSPAILSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSNFTLSINSVEPEDVGVYFCQNGHSLPLTFGAGTKLELR
mAb19	SEQ ID NO: 44 EVKLEKSGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQSPEKGLEWVAQIRLNPDNYATHYAESVKGRFTISRDDYKNSVYLQMSSLRAEDSGIYYCTQHGSRGFAYWGQGTLVTVS	SEQ ID NO: 53 DVVMTQTPHTMSITIGQPASISCKSSQSLLDSDGRTHLNWLFQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTLFPWTFGGGTKLEIK
mAb21	SEQ ID NO: 45 EVKLEKSGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQSPEKGLEWVAQIRLNPDNYATHFAESVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLRAEDTGIYYCTEHGTRGFAYWGQGTLVTVSE	SEQ ID NO: 54 DVVMTQTPLTLSITIGQPASISCKSSQSLLDSDGRTHLNWFFQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTLFPWTFGGGTKLEIK
mAb23	SEQ ID NO: 47 EVQLQQSGAELLRPGASVKLSCTASGYNLKDTFLHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANGNIKYDPKFQGKATLTADTSSNTAYLQLISLTSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGAGTTVTVSS	SEQ ID NO: 56 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSAFSSVNYMHWYQQKPGTSPKLLIYTTSNLASGVPTRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSTYPFTFGSGTKLEIQ
mAb34	SEQ ID NO: 49 EIQVQQSGPELVKPGASVKVSCKASGYSFTDYNMYWVKQSHGKSLEWIGFIDPYNGYTSYNQKFKGKATLTIDKSSSTAFMHLNSLTSEDSAVYYCAIYGYDDAYYFDYWGQGTTLTVSS	SEQ ID NO: 58 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSATSSVSYMHWFRQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMAAEDAATYYCQQRITYPFTFGSGTKLEIT
mAb35	SEQ ID NO: 50 EVRLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIEDTYVHWMKQRPEQGLEWIGRIDPAIDNSKYDPKFQGKATITAVSSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCALYDGYNVYAMDYWGQGTSVTVSS	SEQ ID NO: 59 DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKNLLHSNGITYLYWYLQRPGQSPQLLIYRASTLASGVPNRFSGSESGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQLLELPHTFGGGTKLEIK

鑒於各抗體部分mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35均可結合至CD39，且抗原結合特異性主要由CDR1、CDR2及CDR3區提供，抗體部分mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35之HCDR1、HCDR2及HCDR3序列以及LCDR1、LCDR2及LCDR3序列可經「混合且匹配」(亦即，來自不同抗體部分之CDR可經混合且匹配，但各抗體部分必須包含HCDR1、HCDR2及HCDR3以及LCDR1、LCDR2及LCDR3)，以產生本發明之抗CD39結合分子。可使用上文及實例中所述之結合測定法來測試此類「混合且匹配」抗體之CD39結合。較佳地，當VH CDR序列經混合且匹配時，來自特定VH序列之HCDR1、HCDR2及/或HCDR3序列經結構相似的CDR序列取代。同樣，當VL CDR序列經混合且匹配時，來自特定VL序列之LCDR1、LCDR2及/或LCDR3序列較佳經結構相似的CDR序列取代。例如，抗體部分mAb13及mAb19之HCDR1具有一些結構相似性，因此易於混合且匹配。對於熟習此項技術者顯而易見的是，可藉由將一或多個VH及/或VL CDR序列用本文揭示之單株抗體部分mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35之CDR序列中結構相似的序列替換來產生新穎VH及VL序列。

已知CDR負責抗原結合。然而，已發現並非所有6個CDR均為必不可少的或不可改變的。換言之，可替換或改變或修飾抗CD39抗體部分mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35中之一或多個CDR，但基本上保留與CD39之特異性結合親和性。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段包含適當的框架區(FR)序列，只要抗體部分及其抗原結合片段可與CD39特異性結合。上表1中所示之CDR序列獲取自小鼠抗體，但可使用此項技術中已知的合適方法(例如，重組技術)將其移植至任何適合物種(例如，小鼠、人類、大鼠、兔以及其他)之任何適合FR序列。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段為人源化的。預期人源化抗體部分或其抗原結合片段在人體具有降低的免疫原性。人源化抗體部分在其可變區係嵌合的，因為非人類CDR序列被移植至人類或基本上為人類之FR序列中。抗體部分或抗原結合片段之人源化基本上可藉由在人類免疫球蛋白基因上用非人類(例如，小鼠) CDR基因替換對應的人類CDR基因來完成(參見例如Jones等人 (1986) Nature321:522-525；Riechmann等人 (1988) Nature332:323-327；Verhoeyen等人 (1988) Science239:1534-1536)。

可使用此項技術中已知之方法選擇適合之人類重鏈及輕鏈可變域，以達成此目的。在一個說明性實例中，可使用「最佳擬合(best-fit)」方法，其中對非人類(例如，嚙齒動物)抗體可變域序列進行篩選，或將其與已知的人類可變域序列之資料庫進行BLAST比對，且識別出最接近非人類查詢序列之人類序列，用作用於移植非人類CDR序列之人類框架(參見例如Sims等人, (1993) J. Immunol.151:2296；Chothia等人 (1987) J. Mot. Biol.196:901)。視情況，可將源自所有人類抗體之共有序列之框架用於移植非人類CDR (參見例如Carter等人 (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; Presta等人 (1993) J. Immunol.,151:2623)。

在某些實施例中，本發明提供c14之16種人源化抗體部分，其分別被命名為hu14.H1L1、hu14.H2L1、hu14.H3L1、hu14.H4L1、hu14.H1L2、hu14.H2L2、hu14.H3L2、hu14.H4L2、hu14.H1L3、hu14.H2L3、hu14.H3L3、hu14.H4L3、hu14.H1L4、hu14.H2L4、hu14.H3L4及hu14.H4L4。c14之各人源化抗體部分之重鏈可變區及輕鏈可變區之SEQ ID NO如實施例5.1之表16所示。c14之16種人源化抗體部分中之每一者均包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3，該HCDR1包含如SEQ ID NO: 2所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 8所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 14所示之序列，該LCDR1包含如SEQ ID NO: 20所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 26所示之序列，且該LCDR3包含如SEQ ID NO: 32所示之序列。CDR邊界係根據Kabat規則定義或確定的。

在一些實施例中，本發明提供c23之31種人源化抗體部分，其分別被命名為hu23.H1L1、hu23.H2L1、hu23.H3L1、hu23.H4L1、hu23.H1L2、hu23.H2L2、hu23.H3L2、hu23.H4L2、hu23.H1L3、hu23.H2L3、hu23.H3L3、hu23.H4L3、hu23.H1L4、hu23.H2L4、hu23.H3L4、hu23.H4L4、hu23.H5L1、hu23.H6L1、hu23.H7L1、hu23.H1L5、hu23.H5L5、hu23.H6L5、hu23.H7L5、hu23.H1L6、hu23.H5L6、hu23.H6L6、hu23.H7L6、hu23.H1L7、hu23.H5L7、hu23.H6L7及hu23.H7L7。c23之各人源化抗體部分之重鏈及輕鏈可變區之SEQ ID NO如實施例5.1之表13及14所示。c23之31種人源化抗體部分中之每一者均包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3，該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 10所示之序列，該該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 22所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 28所示之序列，且該LCDR3包含如SEQ ID NO: 34所示之序列。CDR邊界係根據Kabat規則定義或鑑定的。

在一些實施例中，本發明亦提供6種人源化抗體部分，其與c23具有相同CDR，不同之處在於HCDR2之胺基酸序列不同。在一些實施例中，此等c23變體(c23')之人源化抗體部分之HCDR2之胺基酸序列包含如X ₅₈IDPAX ₅₉X ₆₀NIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 151)所示之胺基酸序列，其中X ₅₈為R或K，X ₅₉為N、G、S或Q，X ₆₀為G、A或D。在一些實施例中，此等c23變體(c23')之人源化抗體部分之HCDR2之胺基酸序列包含選自由以下組成之群的序列：RIDPAGGNIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 134)、RIDPASGNIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 135)、RIDPAQGNIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 136)、RIDPANANIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 137)、RIDPANDNIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 138)及KIDPANGNIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 139)。CDR邊界係根據Kabat規則定義或鑑定的。

在一些實施例中，本發明亦提供藉由酵母展示之c23變體之4種人源化抗體部分，其被命名為hu23.201、hu23.203、hu23.207及hu23.211。人源化抗體部分hu23.201、hu23.203、hu23.207及hu23.211之重鏈可變區及輕鏈可變區如實施例5.1之表15所示。4種人源化抗體部分hu23.201、hu23.203、hu23.207及hu23.211中之每一者均包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3，該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 10所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 22所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 28所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 34所示之序列。CDR邊界係根據Kabat規則定義或確定的。

下表3示出人源化c14重鏈可變區之4個變體(亦即hu14.VH_1、hu14.VH_2、hu14.VH_3及hu14.VH_4)及人源化c14輕鏈可變區之4個變體(亦即hu14.VL_1、hu14.VL_2、hu14.VL_3及hu14.VL_4)。下表4示出人源化c14重鏈及輕鏈可變區之FR之胺基酸序列。下表5示出嵌合抗體部分c14之16種人源化抗體部分之重鏈及輕鏈之FR胺基酸序列，16種人源化抗體部分分別被命名為hu14.H1L1、hu14.H2L1、hu14.H3L1、hu14.H4L1、hu14.H1L2、hu14.H2L2、hu14.H3L2、hu14.H4L2、hu14.H1L3、hu14.H2L3、hu14.H3L3、hu14.H4L3、hu14.H1L4、hu14.H2L4、hu14.H3L4、hu14.H4L4。此16種人源化抗體部分之重鏈可變區及輕鏈可變區如實施例5.1之表16中所示。表 3 ： c14 人源化抗體部分之人源化可變區之胺基酸序列

抗體部分	VH	VL
hu14.H1L1	hu14.VH_1; SEQ ID NO: 68 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSKYWMNWVRQAPGKGLEWVGEIRLKSNKYGTHYAESVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTQLDLYWFFDVWGQGTTVTVSS	hu14.VL_1; SEQ ID NO: 69 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISDYLHWYQQKPGQAPRLLIYYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQNGHSLPLTFGGGTKLEIK
hu14.H2L2	hu14.VH_2; SEQ ID NO: 70 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSKYWMNWVRQSPGKGLEWVGEIRLKSNKYGTHYAESVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTQLDLYWFFDVWGQGTTVTVSS	hu14.VL_2; SEQ ID NO: 71 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISDYLHWYQQKPGQSPRLLIYYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFCQNGHSLPLTFGGGTKLEIK
hu14.H3L3	hu14.VH_3; SEQ ID NO: 72 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSKYWMNWVRQSPGKGLEWVAEIRLKSNKYGTHYAESVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCTTQLDLYWFFDVWGQGTTVTVSS	hu14.VL_3; SEQ ID NO: 73 EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSISDYLHWYQQKPGQSPRLLIYYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQNGHSLPLTFGGGTKLEIK
hu14.H4L4	hu14.VH_4; SEQ ID NO: 74 EVQLVESGGGLVKPGGSMRLSCAASGFTFSKYWMNWVRQSPGKGLEWVAEIRLKSNKYGTHYAESVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCTTQLDLYWFFDVWGQGTTVTVSS	hu14.VL_4; SEQ ID NO: 75 EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKPGQSPRLLIYYASQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQNGHSLPLTFGGGTKLEIK

表 4 ： c14 人源化抗體部分之人源化 FR 之胺基酸序列

SEQ ID NO.	序列
79	WGQGTTVTVSS
98	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
104	WYQQKPGQAPRLLIY
106	GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC
119	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS
120	EVQLVESGGGLVKPGGSMRLSCAASGFTFS
121	WVRQAPGKGLEWVG
122	WVRQSPGKGLEWVG
123	WVRQSPGKGLEWVA
124	RFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTT
125	RFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCTT
127	EIVLTQSPATLSVSPGERATLSC
128	EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSC
130	WYQQKPGQSPRLLIY
132	GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC
133	GIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFC
153	FGGGTKLEIK

表 5 ： c14 人源化抗體部分之各人源化重鏈可變區及輕鏈可變區之 FR 胺基酸序列

VH 或者 VL 名稱	FR1 (SEQ ID NO.)	FR2 (SEQ ID NO.)	FR3 (SEQ ID NO.)	FR4 (SEQ ID NO.)
hu14.VH_1	119	121	124	79
hu14.VH_2	119	122	124	79
hu14.VH_3	119	123	125	79
hu14.VH_4	120	123	125	79
hu14.VL_1	98	104	106	153
hu14.VL_2	98	130	132	153
hu14.VL_3	127	130	133	153
hu14.VL_4	128	130	133	153

下表6示出人源化c23重鏈可變區之7個變體(亦即hu23.VH_1、hu23.VH_2、hu23.VH_3、hu23.VH_4、hu23.VH_5、hu23.VH_6及hu23.VH_7)及人源化c23輕鏈可變區之7個變體(亦即hu23.VL_1、hu23.VL_2、hu23.VL_3、hu23.VL_4、hu23.VL_5、hu23.VL_6及hu23.VL_7)。下表7示出藉由酵母展示獲得的用於嵌合抗體部分c23之4種人源化抗體部分之重鏈可變區及輕鏈可變區之胺基酸序列。下表8示出c23之35種人源化抗體部分之FR胺基酸序列。下表9示出c23之35種人源化抗體部分之各重鏈及輕鏈之FR胺基酸序列。表 6 ： c23 人源化抗體部分可變區之胺基酸序列

抗體部分	VH	VL
hu23.H1L1	hu23.VH_1, SEQ ID NO: 60 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYNLKDTFLHWVRQAPGQRLEWMGRIDPANGNIKYDPKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPYYYGSGYRIFDVWGQGTTVTVSS	hu23.VL_1, SEQ ID NO: 61 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.H2L2	hu23.VH_2, SEQ ID NO: 62 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYNLKDTFLHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNIKYDPKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTTVTVSS	hu23.VL_2, SEQ ID NO: 63 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.H3L3	hu23.VH_3, SEQ ID NO: 64 QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYNLKDTFLHWVRQAPGQGLEWIGRIDPANGNIKYDPKFQGRATITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTTVTVSS	hu23.VL_3, SEQ ID NO: 65 EIVLTQSPATLSASPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSMEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.H4L4	hu23.VH_4, SEQ ID NO: 66 QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYNLKDTFLHWVKQAPGQGLEWIGRIDPANGNIKYDPKFQGRATLTADTSASTAYLELSSLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTTVTVSS	hu23.VL_4, SEQ ID NO: 67 EIVLTQSPATLSASPGERVTISCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSMEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.H5L5	hu23.VH_5, SEQ ID NO: 140 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYNLKDTFLHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNIKYDPKFQGRVTITADTSANTAYMELISLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTTVTVSS	hu23.VL_5, SEQ ID NO: 143 QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPRLLIYTTSNLASGIPTRFSGSGSGTSYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.H6L6	hu23.VH_6, SEQ ID NO: 141 EVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYNLKDTFLHWVRQAPGQGLEWIGRIDPANGNIKYDPKFQGRATITADTSANTAYMELISLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTTVTVSS	hu23.VL_6, SEQ ID NO: 144 QIVLTQSPATLSASPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPKLLIYTTSNLASGVPTRFSGSGSGTSYTLTISSMEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.H7L7	hu23.VH_7, SEQ ID NO: 142 EVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYNLKDTFLHWVKQAPGQGLEWIGRIDPANGNIKYDPKFQGKATLTADTSANTAYLELISLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTTVTVSS	hu23.VL_7, SEQ ID NO: 145 QIVLTQSPATLSASPGERVTITCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPKLLIYTTSNLASGVPTRFSGSGSGTSYTLTISSMEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK

表 7 ：藉由酵母展示獲得的 c23 人源化抗體部分之人源化可變區之胺基酸序列

抗體部分	VH	VL
hu23.201	SEQ ID NO: 146 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTLKDTFLHWVRQAPGQRLEWMGRIDPANGNIKYDPKFQGRVTLTADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTLVTVSS	SEQ ID NO: 111 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQSPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.203	SEQ ID NO: 146 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTLKDTFLHWVRQAPGQRLEWMGRIDPANGNIKYDPKFQGRVTLTADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTLVTVSS	SEQ ID NO: 112 EIVLTQSPATLTLSPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.207	SEQ ID NO: 147 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTLKDTFLHWVRQAPGQRLEWMGKIDPANGNIKYDPKFQGRVTLTADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTLVTVSS	SEQ ID NO: 111 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQSPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK
hu23.211	SEQ ID NO: 39 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTLKDTFLHWVRQAPGQRLEWMGRIDPANGNIKYDPKFQGRVTITADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCANSPYYYGSGYRIFDVWGQGTLVTVSS	SEQ ID NO: 63 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAFSSVNYMHWYQQKPGQAPRLLIYTTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTYPFTFGQGTKLEIK

表 8 ： c23 人源化抗體部分之人源化 FR 之胺基酸序列

SEQ ID NO.	序列
79	WGQGTTVTVSS
83	FGQGTKLEIK
84	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYNLK
85	QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYNLK
86	EVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYNLK
87	WVRQAPGQRLEWMG
88	WVRQAPGQGLEWMG
89	WVRQAPGQGLEWIG
90	WVKQAPGQGLEWIG
91	RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
92	RVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAN
93	RATITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAN
94	RATLTADTSASTAYLELSSLRSEDTAVYYCAN
95	RVTITADTSANTAYMELISLRSEDTAVYYCAN
96	RATITADTSANTAYMELISLRSEDTAVYYCAN
97	KATLTADTSANTAYLELISLRSEDTAVYYCAN
98	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
99	EIVLTQSPATLSASPGERATLSC
100	EIVLTQSPATLSASPGERVTISC
101	QIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
102	QIVLTQSPATLSASPGERATLSC
103	QIVLTQSPATLSASPGERVTITC
104	WYQQKPGQAPRLLIY
105	WYQQKPGQAPKLLIY
106	GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC
107	GIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC
108	GIPARFSGSGSGTDYTLTISSMEPEDFAVYYC
109	GIPTRFSGSGSGTSYTLTISSLEPEDFAVYYC
110	GVPTRFSGSGSGTSYTLTISSMEPEDFAVYYC
115	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTLK
116	RVTLTADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAN
117	RVTITADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAN
118	WGQGTLVTVSS
129	EIVLTQSPATLTLSPGERATLSC
130	WYQQKPGQSPRLLIY
131	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTLK

表 9 ： c23 人源化抗體部分之各人源化重鏈可變區及輕鏈可變區之 FR 胺基酸序列

VH 或者 VL 名稱	FR1 (SEQ ID NO.)	FR2 (SEQ ID NO.)	FR3 (SEQ ID NO.)	FR4 (SEQ ID NO.)
hu23.VH_1	84	87	91	79
hu23.VH_2	84	88	92	79
hu23.VH_3	85	89	93	79
hu23.VH_4	85	90	94	79
hu23.VH_5	84	88	95	79
hu23.VH_6	86	89	96	79
hu23.VH_7	86	90	97	79
hu23.VH_201	131	87	116	118
hu23.VH_207	115	87	116	118
hu23.VH_211	115	87	117	118
hu23.VL_1	98	104	106	83
hu23.VL_2	98	104	107	83
hu23.VL_3	99	104	108	83
hu23.VL_4	100	104	108	83
hu23.VL_5	101	104	109	83
hu23.VL_6	102	105	110	83
hu23.VL_7	103	105	110	83
hu23.VL_201	98	130	107	83
hu23.VL_203	129	104	107	83
hu23.VL_211	98	104	107	83

在某些實施例中，本發明提供之人源化抗CD39抗體部分或其抗原結合片段基本上由除了非人類CDR序列以外的所有人類序列組成。在一些實施例中，可變區FR及恆定區(若存在)全部或基本上來自人類免疫球蛋白序列。人類FR序列及人類恆定區序列可源自不同的人類免疫球蛋白基因，例如，源自一種人類抗體之FR序列及源自另一種人類抗體之恆定區。在一些實施例中，人源化抗體部分或其抗原結合片段包含人類重鏈HFR1-4及/或輕鏈LFR1-4。

在一些實施例中，源自人類之FR區可包含與其所源自之人類免疫球蛋白相同的胺基酸序列。在一些實施例中，人類FR之一或多個胺基酸殘基由來自親本非人類抗體之對應殘基取代。此可在某些實施例中為所需的，以使人源化抗體或其片段密切接近非人類親本抗體結構，以最優化結合特徵(例如，增加結合親和性)。在某些實施例中，本發明之人源化抗體部分或其抗原結合片段包含在各個人類FR序列中不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸殘基取代，或在重鏈可變區或輕鏈可變區之所有FR序列中不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸殘基取代。在一些實施例中，此類胺基酸殘基變化可能僅存在於重鏈FR區、僅存在於輕鏈FR區，或在兩條鏈上均存在。在某些實施例中，人類FR序列之一或多個胺基酸被隨機突變以增加結合親和性。在某些實施例中，人類FR序列之一或多個胺基酸被反向突變為親本非人類抗體之相應胺基酸，以增加結合親和性。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含重鏈HFR1、重鏈HFR2、重鏈HFR3及重鏈HFR4，其中該重鏈HFR1包含如X ₁₉VQLVX ₂₀SGX ₂₁X ₂₂X ₂₃X ₂₄KPGX ₂₅SX ₂₆X ₂₇X ₂₈SCX ₂₉ASGX ₃₀X ₃₁X ₃₂X ₃₃(SEQ ID NO: 76)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，該重鏈HFR2包含如WVX ₃₄QX ₃₅PGX ₃₆X ₃₇LEWX ₃₈X _{39 (}SEQ ID NO: 77)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，該重鏈HFR3包含如X ₄₀X ₄₁TX ₄₂X ₄₃X ₄₄DX ₄₅SX ₄₆X ₄₇TX ₄₈YX ₄₉X ₅₀X ₅₁X ₅₂SLX ₅₃X ₅₄EDTAVYYCX ₅₅X ₅₆(SEQ ID NO: 78)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，以及該重鏈HFR4包含如WGQGTX ₅₇VTVSS (SEQ ID NO: 126)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，其中X ₁₉為Q或E；X ₂₀為E或Q；X ₂₁為G或A；X ₂₂為G或E；X ₂₃為L或V；X ₂₄為V或K；X ₂₅為G或A；X ₂₆為L, M或V；X ₂₇為R或K；X ₂₈為V或L；X ₂₉為A或K；X ₃₀為F或Y；X ₃₁為N或T；X ₃₂為F或L；X ₃₃為S或K；X ₃₄為R或K；X ₃₅為A或S；X ₃₆為K 或Q；X ₃₇為R或；X ₃₈為M、I或V；X ₃₉為G或A；X ₄₀為R或K；X ₄₁為V、A或F；X ₄₂為I或L；X ₄₃為S或T；X ₄₄為R或A；X ₄₅為D或T；X ₄₆為K、A或S；X ₄₇為S或N；X ₄₈為L、V或A；X ₄₉為M或L；X ₅₀為Q或E；X ₅₁為M或L；X ₅₂為S、I或N；X ₅₃為R或K；X ₅₄為S或T；X ₅₅為A或T；X ₅₆為R、N或T以及X ₅₇為T或L。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含輕鏈LFR1、輕鏈LFR2、輕鏈LFR3及輕鏈LFR4，其中該輕鏈LFR1包含如X ₃IVX ₄TQSPATLX ₅X ₆SPGERX ₇TX ₈X ₉C(SEQ ID NO: 80)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，該輕鏈LFR2包含如WYQQKPGQX ₁₀PX11LLIY (SEQ ID NO: 81)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，該輕鏈LFR3包含如GX ₁₂PX ₁₃RFSGSGSGTX ₁₄X ₁₅TLTISSX ₁₆EPEDFAVYX ₁₇C(SEQ ID NO: 820)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，該輕鏈LFR4包含如FGX ₁₈GTKLEIK(SEQ ID NO: 152)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，其中X ₃為E或Q；X ₄為L或M；X ₅為S或T；X ₆為L、V或A；X ₇為A或V；X ₈為L或I；X ₉為S或T；X ₁₀為A或S；X ₁₁為R或K；X ₁₂為I或V；X ₁₃為A或T；X ₁₄為D或S；X ₁₅為F或Y；X ₁₆為L、M或V；X ₁₇為Y或F；X ₁₈為G或Q。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含重鏈HFR1、重鏈HFR2、重鏈HFR3及重鏈HFR4，其中該重鏈HFR1包含如EVQLVESGGGLVKPGGSX ₆₁RLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 154)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該重鏈HFR2包含如WVRQX ₆₂PGKGLEWVX ₆₃(SEQ ID NO: 155)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該重鏈HFR3包含如RFTISRDDSKNTX ₆₄YLQMNSLKTEDTAVYYCTT (SEQ ID NO: 156)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該重鏈HFR4包含如WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 79)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，其中X ₆₁為L或M，X ₆₂為A或S，X ₆₃為G或A，X ₆₄為L或V。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含輕鏈LFR1、輕鏈LFR2、輕鏈LFR3及輕鏈LFR4，其中該輕鏈LFR1包含如EIVX ₆₅TQSPATLSX ₆₆SPGERX ₆₇TLSC(SEQ ID NO: 157)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列該輕鏈LFR2包含如WYQQKPGQX ₆₈PRLLIY (SEQ ID NO: 158)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該輕鏈LFR3包含如GIPARFSGSGSGTDFTLTISSX ₆₉EPEDFAVYX ₇₀C(SEQ ID NO: 159)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；以及該輕鏈LFR4包含如FGGGTKLEIK(SEQ ID NO: 153)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，其中X ₆₅為L或M；X ₆₆為L或V；X ₆₇為A或V；X ₆₈為A或S；X ₆₉為L或V；X ₇₀為Y或F。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含重鏈HFR1、重鏈HFR2、重鏈HFR3及重鏈HFR4，其中該重鏈HFR1包含如X ₇₁VQLVQSGAEVKKPGASVKX ₇₂SCKASGYX ₇₃LK(SEQ ID NO: 160)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該重鏈HFR2包含如WVX ₇₄QAPGQX ₇₅LEWX ₇₆G (SEQ ID NO: 161)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該重鏈HFR3包含如X ₇₇X ₇₈TX ₇₉TX ₈₀DTSX ₈₁X ₈₂TAYX ₈₃ELX ₈₄SLRSEDTAVYYCAX _{85 (}SEQ ID NO: 149)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該重鏈HFR4包含如WGQGTX ₅₇VTVSS (SEQ ID NO: 126)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；其中X ₅₇如上文所定義，X ₇₁為Q或E；X ₇₂為V或L；X ₇₃為N或T；X ₇₄為R或K；X ₇₅為R或G；X ₇₆為M或I；X ₇₇為R或K；X ₇₈為V或A；X ₇₉為I或L；X ₈₀為R或A；X ₈₁為A或S；X ₈₂為S或N；X ₈₃為M或L；X ₈₄為S或I；X ₈₅為R或N。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含輕鏈LFR1、輕鏈LFR2、輕鏈LFR3及輕鏈LFR4，其中該輕鏈LFR1包含如X ₈₆IVLTQSPATLX ₈₇X ₈₈SPGERX ₈₉TX ₉₀X ₉₁C(SEQ ID NO: 150)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該輕鏈LFR2包含如WYQQKPGQX ₁₀PX ₁₁LLIY (SEQ ID NO: 81 )所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；該輕鏈LFR3包含如GX ₉₂PX ₉₃RFSGSGSGTX ₉₄X ₉₅TLTISSX ₉₆EPEDFAVYYC(SEQ ID NO: 148)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列；以及該輕鏈LFR4包含如FGQGTKLEIK(SEQ ID NO: 83)所示之序列或與其具有至少80%序列一致性之同源序列，其中X ₁₀及X ₁₁如上文所定義，X ₈₆為E或Q；X ₈₇為S或T；X ₈₈為L或A；X ₈₉為A或V；X ₉₀為L或I；X ₉₁為S或T；X ₉₂為I或V；X ₉₃為A或T；X ₉₄為D或S；X ₉₅為F或Y；以及X ₉₆為L或M。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含重鏈HFR1、重鏈HFR2、重鏈HFR3及重鏈HFR4，及/或輕鏈LFR1、輕鏈LFR2、輕鏈LFR3及輕鏈LFR4，該重鏈HFR1包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 84-86、115、119-120及131，該重鏈HFR2包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 87-90及121-123，該重鏈HFR3包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 91-97、116-117及124-125，且該重鏈HFR4包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 79及118；該輕鏈LFR1包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 98-103及127-129，該輕鏈LFR2包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 104、105及130，該輕鏈LFR3包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 106-110及132-133，且該輕鏈LFR4包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 83及153。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含重鏈可變區內之HFR1、HFR2、HFR3及/或HFR4序列，該重鏈可變區包含選自由以下組成之群的序列：hu14.VH_1 (SEQ ID NO: 68)、hu14.VH_2 (SEQ ID NO: 70)、hu14.VH_3 (SEQ ID NO: 72)、hu14.VH_4 (SEQ ID NO: 74)、hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)、hu23.VH_2 (SEQ ID NO: 62)、hu23.VH_3 (SEQ ID NO: 64)、hu23.VH_4 (SEQ ID NO: 66)、hu23.VH_5 (SEQ ID NO: 140)、hu23.VH_6 (SEQ ID NO: 141)、hu23.VH_7 (SEQ ID NO: 142)、hu23.201H (SEQ ID NO: 146)、hu23.207H (SEQ ID NO: 147)及hu23.211H (SEQ ID NO: 39)。

在某些實施例中，本發明之人源化抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含輕鏈可變區內之LFR1、LFR2、LFR3及/或LFR4序列，該輕鏈可變區包含選自由以下組成之群的序列：hu14.VL_1 (SEQ ID NO: 69)、hu14.VL_2 (SEQ ID NO: 71)、hu14.VL_3 (SEQ ID NO: 73)、hu14.VL_4 (SEQ ID NO: 75)、hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)、hu23.VL_2 (SEQ ID NO: 63)、hu23.VL_3 (SEQ ID NO: 65)、hu23.VL_4 (SEQ ID NO: 67)、hu23.VL_5 (SEQ ID NO: 143)、hu23.VL_6 (SEQ ID NO: 144)、hu23.VL_7 (SEQ ID NO: 145)、hu23.201L(SEQ ID NO: 111)、hu23.203L(SEQ ID NO: 112)及hu23.211L(SEQ ID NO: 63)。

在某些實施例中，本發明之人源化之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段，其包含選自由以下組成之群的重鏈可變區序列：SEQ ID NO: 39、60、62、64、66、68、70、72、74、140、141、142、146、147，及/或選自由以下組成之群的輕鏈可變區序列：SEQ ID NO: 61、63、65、67、69、71、73、75、111、112、143、144及145。

本發明亦提供了嵌合抗體c14之例示性人源化抗體部分，包含： 1) 「hu14.H1L1」，其包含如hu14.VH_1 (SEQ ID NO: 68)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_1 (SEQ ID NO: 69)所示之輕鏈可變區； 2) 「hu14.H2L1」，其包含如hu14.VH_2 (SEQ ID NO: 70)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_1 (SEQ ID NO: 69)所示之輕鏈可變區； 3) 「hu14.H3L1」，其包含如hu14.VH_3 (SEQ ID NO: 72)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_1 (SEQ ID NO: 69)所示之輕鏈可變區； 4) 「hu14.H4L1」，其包含如hu14.VH_4 (SEQ ID NO: 74)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_1 (SEQ ID NO: 69)所示之輕鏈可變區； 5) 「hu14.H1L2」，其包含如hu14.VH_1 (SEQ ID NO: 68)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_2 (SEQ ID NO: 71)所示之輕鏈可變區； 6) 「hu14.H2L2」，其包含如hu14.VH_2 (SEQ ID NO: 70)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_2 (SEQ ID NO: 71)所示之輕鏈可變區； 7) 「hu14.H3L2」，其包含如hu14.VH_3 (SEQ ID NO: 72)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_2 (SEQ ID NO: 71)所示之輕鏈可變區； 8) 「hu14.H4L2」，其包含如hu14.VH_4 (SEQ ID NO: 74)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_2 (SEQ ID NO: 71)所示之輕鏈可變區； 9) 「hu14.H1L3」，其包含如hu14.VH_1 (SEQ ID NO: 68)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_3 (SEQ ID NO: 73)所示之輕鏈可變區； 10) 「hu14.H2L3」，其包含如hu14.VH_2 (SEQ ID NO: 70)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_3 (SEQ ID NO: 73)所示之輕鏈可變區； 11) 「hu14.H3L3」，其包含如hu14.VH_3 (SEQ ID NO: 72)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_3 (SEQ ID NO: 73)所示之輕鏈可變區； 12) 「hu14.H4L3」，其包含如hu14.VH_4 (SEQ ID NO: 74)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_3 (SEQ ID NO: 73)所示之輕鏈可變區； 13) 「hu14.H1L4」，其包含如hu14.VH_1 (SEQ ID NO: 68)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_4 (SEQ ID NO: 75)所示之輕鏈可變區； 14) 「hu14.H2L4」，其包含如hu14.VH_2 (SEQ ID NO: 70)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_4 (SEQ ID NO: 75)所示之輕鏈可變區； 15) 「hu14.H3L4」，其包含如hu14.VH_3 (SEQ ID NO: 72)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_4 (SEQ ID NO: 75)所示之輕鏈可變區； 16) 「hu14.H4L4」，其包含如hu14.VH_4 (SEQ ID NO: 74)所示之重鏈可變區及如hu14.VL_4 (SEQ ID NO: 75)所示之輕鏈可變區。

本發明之嵌合抗體c23之例示性人源化抗體部分包含： 1) 「hu23.H1L1」，其包含如hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)所示之輕鏈可變區； 2) 「hu23.H2L1」，其包含如hu23.VH_2 (SEQ ID NO: 62)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)所示之輕鏈可變區； 3) 「hu23.H3L1」，其包含如hu23.VH_3 (SEQ ID NO: 64)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)所示之輕鏈可變區； 4) 「hu23.H4L1」，其包含如hu23.VH_4 (SEQ ID NO: 66)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)所示之輕鏈可變區； 5) 「hu23.H1L2」，其包含如hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_2 (SEQ ID NO: 63)所示之輕鏈可變區； 6) 「hu23.H2L2」，其包含如hu23.VH_2 (SEQ ID NO: 62)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_2 (SEQ ID NO: 63)所示之輕鏈可變區； 7) 「hu23.H3L2」，其包含如hu23.VH_3 (SEQ ID NO: 64)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_2 (SEQ ID NO: 63)所示之輕鏈可變區； 8) 「hu23.H4L2」，其包含如hu23.VH_4 (SEQ ID NO: 66)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_2 (SEQ ID NO: 63)所示之輕鏈可變區； 9) 「hu23.H1L3」，其包含如hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_3 (SEQ ID NO: 65)所示之輕鏈可變區； 10) 「hu23.H2L3」，其包含如hu23.VH_2 (SEQ ID NO: 62)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_3 (SEQ ID NO: 65)所示之輕鏈可變區； 11) 「hu23.H3L3」，其包含如hu23.VH_3 (SEQ ID NO: 64)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_3 (SEQ ID NO: 65)所示之輕鏈可變區； 12) 「hu23.H4L3」，其包含如hu23.VH_4 (SEQ ID NO: 66)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_3 (SEQ ID NO: 65)所示之輕鏈可變區； 13) 「hu23.H1L4」，其包含如hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_4 (SEQ ID NO: 67)所示之輕鏈可變區； 14) 「hu23.H2L4」，其包含如hu23.VH_2 (SEQ ID NO: 62)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_4 (SEQ ID NO: 67)所示之輕鏈可變區； 15) 「hu23.H3L4」，其包含如hu23.VH_3 (SEQ ID NO: 64)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_4 (SEQ ID NO: 67)所示之輕鏈可變區； 16) 「hu23.H4L4」，其包含如hu23.VH_4 (SEQ ID NO: 66)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_4 (SEQ ID NO: 67)所示之輕鏈可變區； 17) 「hu23.H5L1」，其包含如hu23.VH_5 (SEQ ID NO: 140)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)所示之輕鏈可變區； 18) 「hu23.H6L1」，其包含如hu23.VH_6 (SEQ ID NO: 141)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)所示之輕鏈可變區； 19) 「hu23.H7L1」，其包含如hu23.VH_7 (SEQ ID NO: 142)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)所示之輕鏈可變區； 20) 「hu23.H1L5」，其包含如hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_5 (SEQ ID NO: 143)所示之輕鏈可變區； 21) 「hu23.H5L5」，其包含如hu23.VH_5 (SEQ ID NO: 140)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_5 (SEQ ID NO: 143)所示之輕鏈可變區； 22) 「hu23.H6L5」，其包含如hu23.VH_6 (SEQ ID NO: 141)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_5 (SEQ ID NO: 143)所示之輕鏈可變區； 23) 「hu23.H7L5」，其包含如hu23.VH_7 (SEQ ID NO: 142)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_5 (SEQ ID NO: 143)所示之輕鏈可變區； 24) 「hu23.H1L6」，其包含如hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_6 (SEQ ID NO: 144)所示之輕鏈可變區； 25) 「hu23.H5L6」，其包含如hu23.VH_5 (SEQ ID NO: 140)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_6 (SEQ ID NO: 144)所示之輕鏈可變區； 26) 「hu23.H6L6」，其包含如hu23.VH_6 (SEQ ID NO: 141)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_6 (SEQ ID NO: 144)所示之輕鏈可變區； 27) 「hu23.H7L6」，其包含如hu23.VH_7 (SEQ ID NO: 142)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_6 (SEQ ID NO: 144)所示之輕鏈可變區； 28) 「hu23.H1L7」，其包含如hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_7 (SEQ ID NO: 145)所示之輕鏈可變區； 29) 「hu23.H5L7」，其包含如hu23.VH_5 (SEQ ID NO: 140)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_7 (SEQ ID NO: 145)所示之輕鏈可變區； 30) 「hu23.H6L7」，其包含如hu23.VH_6 (SEQ ID NO: 141)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_7 (SEQ ID NO: 145)所示之輕鏈可變區； 31) 「hu23.H7L7」，其包含如hu23.VH_7 (SEQ ID NO: 142)所示之重鏈可變區及如hu23.VL_7 (SEQ ID NO: 145)所示之輕鏈可變區； 32) 「hu23.201」，其包含如hu23.201H (SEQ ID NO: 146)所示之重鏈可變區及如hu23.201L(SEQ ID NO: 111)所示之輕鏈可變區； 33) 「hu23.203」，其包含如hu23.201H (SEQ ID NO: 146)所示之重鏈可變區及如hu23.203L(SEQ ID NO: 112)所示之輕鏈可變區； 34) 「hu23.207」，其包含如hu23.207H (SEQ ID NO: 147)所示之重鏈可變區及如hu23.201L(SEQ ID NO: 111)所示之輕鏈可變區； 35) 「hu23.211」，其包含如hu23.211H (SEQ ID NO: 39)所示之重鏈可變區及如hu23.211L(SEQ ID NO: 63)所示之輕鏈可變區。

此等例示性人源化抗CD39抗體部分保留了對CD39之特異性結合能力或親和性，且在該方面至少與親本小鼠抗體mAb14或mAb23相當或甚至更好。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段包含重鏈可變區之全部或一部分，及/或輕鏈可變區之全部或一部分。在一個實施例中，本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為單域抗體，其由本發明之重鏈可變區之全部或一部分組成。關於單域抗體之更多資訊為此項技術中已知的(參見例如美國專利第6,248,516號)。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段進一步包含免疫球蛋白(Ig)恆定區，其視情況進一步包含重鏈及/或輕鏈恆定區。在某些實施例中，重鏈恆定區包含CH1、鉸鏈及/或CH2-CH3區(或視情況存在之CH2-CH3-CH4區)。在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體或其抗原結合片段包含人類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2或IgM之重鏈恆定區。在某些實施例中，輕鏈恆定區包含Cκ或Cλ。本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段可與野生型恆定區序列相同或在一或多個突變點上不同。

在某些實施例中，重鏈恆定區包含Fc區。已知Fc區介導效應功能，例如抗體之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。不同Ig同型之Fc區誘導效應功能之能力不同。例如，已經認識到IgG1及IgG3之Fc區比IgG2及IgG4之Fc區更有效地誘導ADCC及CDC。在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段包含IgG1或IgG3同型之Fc區，其可誘導ADCC或CDC；或包含IgG4或IgG2同型之恆定區，其具有降低的或者耗竭的效應功能。在一些實施例中，源自人類IgG1之Fc區具有降低的效應功能。在一些實施例中，源自人類IgG1之Fc區包含L234A及/或L235A突變。在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段包含野生型人類IgG4之Fc區或其他野生型人類IgG4等位基因。在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段包含人類IgG4 Fc區，該Fc區包含S228P突變及/或L235E突變及/或F234A及L235A突變。在某些實施例中，源自人類IgG4之Fc區包含S228P突變及/或F234A及L235A突變。

在某些實施例中，本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段具有足以用於診斷及/或治療用途的與人類CD39特異結合之親和性。

本發明之抗CD39抗體部分或其抗原片段可為單株抗體、多株抗體、人源化抗體、嵌合抗體、重組抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、標記抗體、二價抗體、抗獨特型抗體或融合蛋白。重組抗體為在體外使用重組方法(而非在動物體內)製備之抗體。

某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段，其與根據本發明之抗體部分或其抗原結合片段競爭結合人類CD39。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段，其與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示之序列，且該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 52所示之序列。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段，其與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 44所示之序列，且該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 53所示之序列。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段，其與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 45所示之序列，且該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 54所示之序列，或與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 47所示之序列，且該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 56所示之序列。

在某些實施例中，本發明提供與CD39之抗原決定基特異性結合之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段，其中該抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：Q96、N99、E143、R147、R138、M139、E142、K5、E100、D107、V81、E82、R111及V115。

在一些實施例中，抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：Q96、N99、E143及R147。在一些實施例中，抗原決定基包含全部殘基Q96、N99、E143及R147。

在一些實施例中，抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：R138、M139及E142。在某些實施例中，抗原決定基包含全部殘基R138、M139及E142。

在一些實施例中，抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：K5、E100及D107。在某些實施例中，抗原決定基包含全部殘基K5、E100及D107。

在一些實施例中，抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：V81、E82、R111及V115。在某些實施例中，抗原決定基包含全部殘基V81、E82、R111及V115。

在某些實施例中，CD39為人類CD39。在某些實施例中，CD39為人類CD39，其包含如SEQ ID NO: 162所示之胺基酸序列。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段不為抗體9-8B、抗體T895及抗體I394中之任一者。

本發明所使用之「9-8B」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 46所示之胺基酸序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 48所示之胺基酸序列。

本發明所使用之「T895」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 55所示之胺基酸序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 57所示之胺基酸序列。

本發明所使用之「I394」係指包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區具有如SEQ ID NO: 113所示之胺基酸序列，該輕鏈可變區具有如SEQ ID NO: 114所示之胺基酸序列。 抗體變體

本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段亦包含本發明提供之抗體序列之各種變體。

在某些實施例中，抗體變體在上表1提供之一或多個CDR序列中、上表4、5、8及9提供之重鏈可變區或輕鏈可變區序列之一或多個非CDR序列中及/或恆定區(例如，Fc區)中包含一或多個修飾或取代。此等抗體變體保持其親本與CD39特異性結合之親和性，但具有一或多種修飾或取代帶來的所需特性。例如抗體變體可能具有改善的抗原結合親和性、改善的醣基化模式、降低的醣基化風險、減少的脫胺基作用、減少的或耗竭的效應功能、改善的FcRn受體結合、提高的藥物動力學半衰期、pH敏感性，及/或對結合之相容性(例如一或多個引入之半胱胺酸殘基)。

可使用此項技術中已知之方法，例如「丙胺酸掃描突變誘發」，篩選親本抗體序列以識別適合或較佳的待修飾或取代之殘基(參見例如Cunningham及Wells (1989) Science, 244:1081-1085)。簡言之，可識別靶標殘基(例如帶電殘基，如Arg、Asp、His、Lys及Glu)且由不帶電或帶負電胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)取代，產生經修飾之抗體，且針對目標特性對其進行篩選。若在一個特定胺基酸位置上之取代表現出目標功能性改變，則該位置可識別為潛在用於修飾或取代之殘基。可藉由用另一殘基(例如半胱胺酸殘基、帶正電殘基等)取代來進一步評估潛在殘基。 親和性變體

抗體之親和性變體可在上表1提供之一或多個CDR序列、上表4、5、8及9提供之一或多個FR序列，或上表2、3、6及7提供之重鏈可變區或輕鏈可變區序列中包含修飾或取代。熟習此項技術者基於上表1中之CDR序列以及上表2、3、6及7中之可變區序列可容易地確定FR序列，因為在此項技術中眾所周知，在可變區中，CDR區之兩側為兩個FR區。親和性變體保持親本抗體與CD39特異性結合之親和性，或甚至相對於親本抗體具有改善的與CD39特異性結合之親和性。在某些實施例中，CDR序列、FR序列或可變區序列中之至少一者(或全部)取代包含保守取代。

熟習此項技術者將理解，在上表1所提供之CDR序列、在上表2、3、6及7提供之可變區序列中，一或多個胺基酸殘基可經取代，而得到的抗體或抗原結合片段仍保持與CD39之結合親和性或結合能力，或甚至具有改善的結合親和性或能力。可使用此項技術中已知之各種方法來達到此目的。例如，可生成抗體變體庫(例如，Fab或scFv變體)，且用噬菌體展示技術表現，隨後針對與人類CD39結合之親和性對其進行篩選。又例如，可使用電腦軟體虛擬抗體與人類CD39之結合，且識別抗體上形成結合界面之胺基酸殘基。在取代中可避開此等殘基以防止結合親和性的降低，或可作為取代之靶標以獲得更強結合。

在某些實施例中，本發明之人源化抗體或其抗原結合片段在一或多個CDR序列中及/或一或多個FR序列中包含一或多個胺基酸殘基取代。在某些實施例中，親和性變體在CDR序列及/或FR序列中包含總共不超過20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個取代。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段包含1、2或3個CDR序列，其與上表1中列出之序列具有至少80% (例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)序列一致性，而同時保持相對於其親本抗體水準相似或更高的與CD39特異的結合親和性。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段包含一或多個可變區序列，其與上表2、3、6及7中列出之序列具有至少80% (例如至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)序列一致性，而同時保持相對於其親本抗體水準相似或更高的與CD39特異的結合親和性。在一些實施例中，在上表2、3、6及7列出之可變區之序列中，總共有1至10個胺基酸經取代、插入或缺失。在一些實施例中，該等取代、插入或缺失發生在CDR之外的區域(例如，在FR中)。 醣基化變體

本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段亦包含醣基化變體，可獲取該醣基化變體以提高或降低抗體或其抗原結合片段之醣基化程度。

抗CD39抗體部分或其抗原結合片段可包含一或多個引入或移除醣基化位點之修飾。醣基化位點係一種帶有側鏈之胺基酸殘基，碳水化合物部分(例如，寡醣結構)可附接至該側鏈。抗體之醣基化通常為N連接的或O連接的。N連接的係指碳水化合物部分附接至天冬胺酸殘基之側鏈，例如，三肽序列中之天冬胺酸殘基，如天冬胺酸-X-絲胺酸及天冬胺酸-X-蘇胺酸，其中X為除脯胺酸以外的任何胺基酸。O連接的醣基化係指N-乙醯半乳糖胺、半乳糖或木糖之一的糖附接至羥基胺基酸，最常見的為附接至絲胺酸或蘇胺酸。可方便地移除天然醣基化位點，例如藉由改變胺基酸序列，使得存在於該序列中之上述三肽序列(對於N連接的醣基化位點)或絲胺酸或蘇胺酸殘基(對於O連接的醣基化位點)中之一者經取代。以相似的方式，可藉由引入此類三肽序列或絲胺酸或蘇胺酸殘基，產生新的醣基化位點。

某些實施例中，本發明提供抗CD39抗體部分或其抗原結合片段，在選自N55、G56及N297之位置上包含一或多個突變，以移除一或多個脫醯胺位。某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體或其抗原結合片段，包含N55之突變(例如N55G、N55S或N55Q)及/或G56之突變(例如G56A、G56D)及/或N297之突變(例如N297A、N297Q或N297G)。測試了此等突變，且認為其不會對本發明提供抗體之結合親和性有負面影響。 半胱胺酸工程化變體

本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段亦包含半胱胺酸工程化變體，其包含一或多個引入之游離半胱胺酸胺基酸殘基。

游離半胱胺酸殘基為並非二硫鍵之一部分之半胱胺酸殘基。半胱胺酸工程化變體可用於藉由例如順丁烯二醯亞胺或鹵乙醯基，在工程化半胱胺酸之位點與例如細胞毒性化合物及/或成像化合物、標籤或放射性同位素以及其他物質結合。用於工程改造抗體或其抗原結合片段以引入游離半胱胺酸殘基之方法為此項技術中已知的，參見例如WO2006/034488。 Fc 變體

本發明之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段亦包含Fc變體，其包含在Fc區及/或鉸鏈區之一或多個胺基酸殘基修飾或取代，例如，以提供改變之效應功能，例如ADCC及CDC。藉由抗體工程化改變ADCC活性之方法已描述於現有技術中，參見例如Shields RL.等人, J Biol Chem.2001. 276 (9): 6591-604；Idusogie EE.等人, J Immunol.2000.164 (8):4178-84；Steurer W.等人, J Immunol. 1995, 155 (3): 1165- 74；Idusogie EE. 等人, J Immunol.2001, 166 (4): 2571-5；Lazar GA.等人, PNAS, 2006, 103 (11): 4005-4010；Ryan MC.等人, Mol. Cancer Ther., 2007, 6: 3009-3018；Richards JO.等人, Mol Cancer Ther.2008, 7 (8): 2517-27；Shields R. L.等人, J. Biol. Chem, 2002, 277: 26733-26740；Shinkawa T.等人, J. Biol. Chem, 2003, 278: 3466-3473。

本發明提供之抗體部分或抗原結合片段之CDC活性亦可例如藉由改善或減少C1q結合及/或CDC而改變(參見例如WO99/51642；Duncan及Winter Nature 322:738-40 (1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號)；及關於Fc區變體之其他實例之WO94/29351)。可將選自Fc區之胺基酸殘基329、331及322之一或多個胺基酸替換為不同的胺基酸殘基，以改變C1q結合及/或減少或消除補體依賴性細胞毒性(CDC) (參見Idusogie等人之美國專利第6,194,551號)。亦可引入一或多個胺基酸取代，以改變抗體固定補體之能力(參見Bodmer等人之PCT公開案第WO 94/29351號)。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段具有降低的效應功能，且在IgG1選自由以下組成之群的位點中包含一或多個胺基酸取代：234、235、237、238、268、297、309、330及331。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為IgG1同型，且包含一或多個選自由以下組成之群的胺基酸取代：N297A、N297Q、N297G、L235E、L234A、L235A、L234F、L235E、P331S及其任何組合。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為IgG1同型，且包含L234A及L235A突變。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為IgG2同型，且包含一或多個選自由以下組成之群的胺基酸取代：H268Q、V309L、A330S、P331S、V234A、G237A、P238S、H268A及其任何組合(例如，H268Q/V309L/A330S/P331S、V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/ P331S)。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為IgG4同型，且包含一或多個選自由以下組成之群的胺基酸取代：S228P、N297A、N297Q、N297G、L235E、F234A、L235A及其任何組合。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為IgG2/IgG4交叉同型。IgG2/IgG4交叉同型之實例在Rother RP等人, Nat Biotechnol25:1256–1264 (2007) 中進行了描述。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及其抗原結合片段為IgG4同型，且在228、234及235之一或多個位點包含一或多個胺基酸取代。在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分及抗原結合片段為IgG4同型，且在Fc區具有S228P及/或L235E及/或F234A及L235A突變。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段包含一或多個胺基酸取代，其可改善與新生兒Fc受體(FcRn)之pH依賴性結合。此類變體可具有延長的藥物動力學半衰期，因為其在酸性pH下與FcRn結合，使其得以免於在溶酶體中降解，且隨後被轉移且釋放至細胞外。工程化抗體或其抗原結合片段以改善與FcRn之結合親和性之方法為此項技術中熟知的，參見例如Vaughn, D.等人, Structure, 6 (1): 63-73, 1998；Kontermann, R.等人, Antibody Engineering, 第1卷, 第27章: Engineering of the Fc region for improved PK, 出版商Springer, 2010；Yeung, Y.等人, Cancer Research, 70: 3269-3277 (2010)；及Hinton, P.等人, J. Immunology, 176:346-356 (2006)。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分或抗原結合片段包含位於Fc區界面之一或多個胺基酸取代，以便於及/或促進異二聚體化。此等修飾包含將突起引入至第一Fc多肽，以及將空腔引入第二Fc多肽，其中該突起可位於該空腔內，以促進第一及第二Fc多肽之相互作用，以形成異二聚體或複合體。產生具有此等修飾之抗體之方法為此項技術中已知的，例如，如美國專利第5,731,168號中所述。 抗原結合片段

本發明亦提供了抗CD39抗原結合片段。抗原結合片段之多種類型係此項技術中已知的，且可基於本發明之抗CD39抗體部分進行研發，包含例示性抗體部分，其CDR示於上表1中，其可變區序列示於上表2、3、6及7中，及其不同變體(例如，親和性變體、醣基化變體、Fc變體、半胱胺酸工程化抗體等)。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗原結合片段為雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') ₂、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段(dsFv)、(dsFv) ₂、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定的雙功能抗體、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(雙價雙功能抗體)、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體及雙價域抗體。

多種技術可用於產生此類抗原結合片段。例示性方法包含對完整抗體進行酶消化(參見例如Morimoto等人, Journal of Biochemical and Biophysical Methods24:107-117 (1992)；及Brennan等人, Science, 229:81 (1985))、由宿主細胞(如大腸桿菌)重組表現(例如對於Fab、Fv及ScFv抗體片段)、如上文論述之噬菌體展示文庫篩選(例如對於ScFv)，以及化學偶合兩個Fab'-SH片段以形成F(ab') ₂片段(Carter等人, Bio/Technology10:163-167 (1992))。生產抗體片段之其他技術對於此項技術將為顯而易見的。

在某些實施例中，抗原結合片段為scFv。scFv之生成記述於例如WO 93/16185；美國專利第5,571,894號及第5,587,458號中。scFv可在胺基末端或羧基末端與效應蛋白融合以獲得融合蛋白(參見例如Antibody Engineering, Borrebaeck編)。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為二價、四價、六價或多價的。任何大於二價之分子均被視為多價的，包含例如三價、四價、六價等。

若兩個結合位點均能特異性結合相同抗原或相同抗原決定基，則二價分子可為單特異性的。在某些實施例中，此提供比對應單價分子更強的與抗原或抗原決定基之結合。類似地，多價分子亦可為單特異性的。在某些實施例中，在二價或多價抗原結合部分中，結合位點之第一價及結合位點之第二價在結構上相同(亦即，具有相同序列)或在結構上不同(亦即，具有不同序列，但具有相同特異性)。

若兩個結合位點對不同抗原或抗原決定基具有特異性，則二價亦可為雙特異性的。此亦適用於多價分子。例如，當兩個結合位點對於第一抗原(或抗原決定基)而言為單特異性的，而第三結合位點對第二抗原(或抗原決定基)而言為特異性時，三價分子可為雙特異性的。 雙特異性抗體

在某些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段為雙特異性的。在某些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段進一步與具有不同於該抗CD39抗體或其抗原結合片段之結合特異性的第二功能部分連接。

在某些實施例中，本發明提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段能夠特異性結合至除CD39以外的第二抗原或CD39上之第二抗原決定基。在某些實施例中，第二抗原選自由以下組成之群：TGFβ、CD73、PD1、PDL1、4-1BB、CTLA4、TIGIT、GITA、VISTA、TIGIT、B7-H3、B7-H4、B7-H5、CD112R、Siglec-15、LAG3、SIRPα、CD47及TIM-3。 結合物

在一些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段亦包含一或多個結合物部分。結合物部分可連接至所述抗體部分或其抗原結合片段。結合物部分為可附接至抗體或其抗原結合片段之部分。可設想，本發明之抗體部分或其抗原結合片段可與多種結合物部分連接(參見例如「Conjugate Vaccines」, Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse及R. E. Lewis, Jr. (編), Carger Press, New York, (1989) )。此等結合物部分可藉由共價結合、親和結合、嵌入、協同結合(coordinate binding)、絡合(complexation)、結合(association)、混合(blending)或加成(addition)等其他方式與抗體部分或其抗原結合片段連接。在某些實施例中，抗體部分或其抗原結合片段經連接子與一或多個結合物連接。

在某些實施例中，本文中提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段可經工程化以在抗原決定基結合部分之外含有特定位點，該等特定位點可用於與一或多個結合物部分結合。例如，此類位點可包含一或多個反應性胺基酸殘基(例如半胱胺酸或組胺酸殘基)，以便於與結合物部分之共價連接。

在某些實施例中，抗CD39抗體部分或其抗原結合片段可間接地或藉由另一結合物部分與結合物部分連接。例如，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段可與生物素結合，然後間接地與第二結合物結合，該第二結合物與抗生物素蛋白結合。在某些實施例中，結合物部分包含清除修飾劑(例如，延長半衰期之聚合物(例如PEG))、化療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、可偵測標記(例如，發光標記、螢光標記、酶受質標記)、DNA烷化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑、純化部分或其他抗癌藥物。

「毒素」可為對細胞有害或可損害或殺死細胞之任何試劑。毒素之實例包括但不限於：紫杉醇、細胞鬆弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根鹼、絲裂黴素、依託泊苷、替尼泊甙、長春新鹼、MMAE、MMAF、DM1、長春鹼、秋水仙鹼、阿黴素、柔紅黴素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神黴素、放線菌素D、1-去氫睾酮、糖皮質激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾、嘌呤黴素及其類似物、抗代謝物(例如甲胺喋呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶達卡巴嗪)、烷化劑(例如氮芥、塞替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法侖、卡莫司汀(BSNU)及洛莫司汀(CCNU)、環磷醯胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲黴素、絲裂黴素C及二氯二胺鉑(II) (DDP)順鉑)、蒽環類抗生素(例如柔紅黴素(以前的道諾黴素)及阿黴素)、抗生素(例如更生黴素(以前稱為放線菌素)、博來黴素、光神黴素及氨茴黴素(AMC))、抗有絲分裂劑(例如長春新鹼及長春鹼)、拓樸異構酶抑制劑及微管蛋白結合劑。

可偵測標記之實例可包含螢光標記(例如螢光素、若丹明、丹磺醯、藻紅蛋白或德克薩斯紅)、酶-受質標記(例如辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、螢光素酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶或β-D-半乳糖苷酶)、放射性同位素(例如 ¹²³I、 ¹²⁴I、 ¹²⁵I、 ¹³¹I、 ³⁵S、 ³H、 ¹¹¹In、 ¹¹²In、 ¹⁴C、 ⁶⁴Cu、 ⁶⁷Cu、 ⁸⁶Y、 ⁸⁸Y、 ⁹⁰Y、 ¹⁷⁷Lu、 ²¹¹At、 ¹⁸⁶Re、 ¹⁸⁸Re、 ¹⁵³Sm、 ²¹²Bi及 ³²P、其他鑭系元素)、發光標記、發色團部分、地高辛、生物素/親和素、DNA分子或用於偵測之金。

在某些實施例中，結合物部分可為清除修飾劑，其有助於增加抗體之半衰期。說明性實例包含水溶性聚合物(例如PEG、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、乙二醇/丙二醇共聚物等)。該聚合物可具有任何分子量，且可為支鏈或非支鏈的。連接至抗體之聚合物之數量可變化，且若連接之聚合物多於一種，則其可為相同或不同分子。

在某些實施例中，結合物部分可為純化部分，例如珠粒。

在某些實施例中，本發明提供之抗CD39抗體部分或其抗原結合片段用作結合物之基礎。 多核苷酸及重組方法

本文提供編碼抗CD39/TGFβ陷阱分子之經分離多核苷酸。本發明所用之術語「核酸」或「多核苷酸」係指單鏈或雙鏈形式之脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其聚合物。除非另有說明，否則特定多核苷酸序列亦隱含地涵蓋其保守修飾之變體(例如簡併密碼子取代)、等位基因、直向同源物、SNP及互補序列以及明確指出的序列。特定言之，簡併密碼子取代可藉由產生此類序列來實現：其中一或多個選定(或全部)密碼子之第三位置被混合鹼基及/或脫氧肌苷殘基取代(參見Batzer等人, Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991)；Ohtsuka等人, J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985)以及Rossolini等人, Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994))。

使用習知步驟，可容易地對編碼該單株抗體之DNA進行分離及定序(例如藉由使用能夠與編碼該抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合之寡核苷酸探針)。編碼DNA亦可藉由合成方法獲得。

使用此項技術中已知的重組技術，可將編碼抗CD39/TGFβ陷阱分子之經分離多核苷酸插入載體，用於進一步選殖(DNA擴增)或用於表現。有多種載體可供選擇。載體組分通常包含但不限於下列之一或多種：信號序列、複製起始點、一或多種標記基因、增強子元件、啟動子(例如SV40、CMV、EF-1α)及轉錄終止序列。

本發明提供包含經分離多核苷酸之載體。在某些實施例中，本發明提供之多核苷酸編碼抗CD39/TGFβ陷阱、與核酸序列可操作連接之至少一種啟動子(例如SV40、CMV、EF-1α)及至少一種選擇標記。載體之實例包含但不限於：逆轉錄病毒(包含慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒、疱疹病毒(例如單純疱疹病毒)、痘病毒、桿狀病毒、乳頭瘤病毒、乳多空病毒(例如SV40)、λ噬菌體及M13噬菌體、質體pcDNA3.3、pMD18-T、pOptivec、pCMV、pEGFP、pIRES、pQD-Hyg-GSeu、pALTER、pBAD、pcDNA、pCal、pL、pET、pGEMEX、pGEX、pCI、pEGFT、pSV2、pFUSE、pVITRO、pVIVO、pMAL、pMONO、pSELECT、pUNO、pDUO、Psg5L、pBABE、pWPXL、pBI、p15TV-L、pPro18、pTD、pRS10、pLexA、pACT2.2、pCMV-SCRIPT.RTM.、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、PCR 2.1、pEF-1、pFB、pSG5、pXT1、pCDEF3、pSVSPORT、pEF-Bos等。

可將包含編碼抗CD39/TGFβ陷阱分子之多核苷酸序列之載體引入宿主細胞，用於選殖或基因表現。適用於選殖或表現本文之載體中之DNA之宿主細胞為上述原核、酵母或高等真核細胞。適用於本發明用途之原核細胞包含真細菌，如革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽性菌，例如，腸桿菌科( Enterobacteriaceae)，例如，埃希氏菌屬( Escherichia) (例如，大腸桿菌( E. coli))、腸桿菌屬( Enterobacter)、歐文氏菌屬( Erwinia)、克雷白氏桿菌屬( Klebsiella)、變形桿菌屬( Proteus)、沙門氏菌屬( Salmonella) (例如，鼠傷寒沙門(氏)桿菌( Salmonella typhimurium))、沙雷氏菌屬( Serratia) (例如，黏質沙雷氏菌( Serratia marcescans))、志賀氏菌屬( Shigella)、桿菌屬( Bacilli) (例如，枯草芽孢桿菌( B. subtilis)及地衣芽孢桿菌( B. licheniformis))、假單胞菌屬( Pseudomonas) (例如，綠膿桿菌( P. aeruginosa)、以及鏈黴菌屬( Streptomyces)。

除了原核細胞以外，真核微生物如絲狀真菌或酵母亦可用作編碼抗CD39/TGFβ陷阱分子之載體之適合選殖或表現宿主。釀酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)，或麵包酵母係最常用的低等真核宿主微生物。但是，許多其他屬、種及株都比較常用且在本發明中適用，例如，粟酒裂殖酵母( Schizosaccharomyces pombe)；克魯維酵母屬( Kluyveromyces)宿主，例如，乳酸克魯維酵母( K. lactis)、脆壁克魯維酵母( K. fragilis) (ATCC 12,424)、保加利亞克魯維酵母( K. bulgaricus) (ATCC 16,045)、魏氏克魯維酵母( K. wickeramii) (ATCC 24,178)、克魯雄酵母( K. waltii) (ATCC 56,500)、果蠅克魯維酵母( K. drosophilarum) (ATCC 36,906)、耐熱克魯維酵母( K. thermotolerans)及馬克斯克魯維酵母( K. marxianus)；解脂耶氏酵母( yarrowia) (EP 402,226)；巴斯德畢赤酵母( Pichia pastoris) (EP 183,070)；假絲酵母( Candida)；里氏木黴( Trichoderma reesia) (EP 244,234)；鏈孢黴( Neurospora crassa)；西方許旺酵母( Schwanniomyces)，例如，西方許旺酵母( Schwanniomyces occidentalis)；及絲狀真菌( filamentous fungi)，例如，脈孢菌( Neurospora)、青黴菌( Penicillium)、彎頸黴( Tolypocladium)及曲黴菌( Aspergillus) (例如，鉤巢麴黴( A. nidulans)及黑麴黴( A. niger))。

本文中提供的適用於表現醣基化抗體或其抗原結合片段之宿主細胞由多細胞生物衍生得到。無脊椎細胞之實例包含植物及昆蟲細胞。已發現多種桿狀病毒株(baculoviral strains)及其變體以及對應的許可性昆蟲宿主細胞(permissive insect host cells)，來自於諸如以下之宿主：草地夜蛾( Spodoptera frugiperda) (毛蟲)、埃及斑蚊(Aedes aegypti) (蚊子)、白紋伊蚊( Aedes albopictus) (蚊子)、黑腹果蠅( Drosophila melanogaster) (果蠅)及家蠶( Bombyx mori)。多種用於轉染之病毒株為公眾可得，例如苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒( Autographa californicaNPV)之L-1變種，以及家蠶核型多角體病毒( Bombyxmori NPV)之Bm-5變種，此等病毒都可在本發明中使用，特別是用於轉染草地夜蛾( Spodoptera frugiperda)細胞。棉花、玉米、土豆、大豆、矮牽牛花、西紅柿及煙草之植物細胞培養亦可用作宿主。

但是，最感興趣的為脊椎細胞，且脊椎細胞之培養(組織培養)已經成為常規操作。適用哺乳動物宿主細胞之實例有，SV40轉化之猴腎細胞CV1系(COS-7, ATCC CRL 1651)；人類胚胎腎細胞株(293或懸浮培養之293細胞次純系，Graham等人, J. Gen Virol. 36:59 (1977) )；幼地鼠腎細胞(BHK, ATCC CCL 10)；中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR (CHO, Urlaub等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)；小鼠睾丸支持細胞(TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980) )；猴腎細胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76, ATCC CRL-1587)；人類子宮頸癌細胞(HELA, ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK, ATCC CCL 34)；布法羅大鼠肝細胞(BRL 3A, ATCC CRL 1442)；人類肺細胞((W138, ATCC CCL 75)；人類肝細胞(Hep G2, HB 8065)；小鼠乳房瘤(MMT 060562, ATCC CCL51)；TRI細胞(Mather等人, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982) )；MRC 5細胞；FS4細胞；及人類肝癌細胞株(Hep G2)。在某些實施例中，宿主細胞為哺乳動物培養之細胞株，例如CHO、BHK、NS0、293及其衍生物。

用上述可產生抗CD39/TGFβ陷阱分子之表現或選殖載體轉化宿主細胞，且將其在習知營養培養基中培養，該等營養培養基經修飾後適宜於誘導啟動子、選擇轉化細胞或擴增編碼所需序列之基因。在另一實施例中，抗CD39/TGFβ陷阱分子可藉由此項技術中已知的同源重組之方法製得。在某些實施例中，宿主細胞能夠產生本發明中之抗CD39/TGFβ陷阱分子。

本發明亦提供一種表現本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子之方法，包含在表現本發明之載體之條件下培養本發明提供之宿主細胞。本文中用於產生抗CD39/TGFβ陷阱分子之宿主細胞可在多種培養基中培養。市售培養基如Ham's F10 (Sigma)、最基本培養液(MEM，(Sigma))、RPMI-1640 (Sigma)、及杜爾貝科氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) (DMEM，(Sigma)可用於培養宿主細胞。另外，任何在Ham等人, Meth. Enz. 58:44 (1979)，Barnes等人, Anal. Biochem. 102:255 (1980)，美國專利第4,767,704號；第4,657,866號；第4,927,762號；第4,560,655號或第5,122,469號；WO 90/03430；WO 87/00195或美國專利第Re. 30,985號中所述之培養基均可用作宿主細胞之培養基。此等培養基都可添加必要的激素及/或其他生長因子(如胰島素、轉鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽類(如氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂及磷酸鹽)、緩衝液(如HEPES)、核苷酸(如腺苷酸及胸腺嘧啶)、抗生素(如慶大黴素)、微量元素(定義為終濃度通常在微莫耳範圍無機化合物)，及葡萄糖或與之等同的能量源。培養基亦可含有此項技術中已知之適當濃度的任何其他必要添加劑。培養條件，如溫度、pH值等類似條件，為選擇用於表現之宿主細胞此前所使用之條件，為一般技術者所熟知。

使用重組技術時，可在壁膜間隙細胞內產生抗CD39/TGFβ陷阱分子，或者直接分泌進入基質。若在細胞內產生抗CD39/TGFβ陷阱分子，則第一步為移除顆粒碎片(宿主細胞或分解片段)，例如藉由離心或超濾。Carter等人, Bio/Technology10:163-167 (1992)描述了將分泌至大腸桿菌之壁膜間隙之抗體分離的方法。簡言之，在乙酸鈉(pH 3.5)、EDTA及苯甲基磺醯氟(PMSF)存在下將細胞漿解凍30分鐘以上。可藉由離心移除細胞碎片。抗體分泌進入基質時，通常首先使用市售蛋白濃縮過濾器，例如Amicon或Millipore Pellicon超濾裝置，將來自該表現系統之上清濃縮。任何前述步驟可包含蛋白酶抑制劑，如PMSF，以抑制蛋白水解，且可包含抗生素，以防止偶然污染物的生長。

自細胞中製得的抗CD39/TGFβ陷阱分子可採用純化方法進行純化，例如羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析、DEAE-纖維素離子交換層析管柱、硫酸銨沈澱、鹽析以及親和層析，其中親合層析為較佳純化技術。

在某些實施例中，固定於固相上之蛋白A用於抗CD39/TGFβ陷阱分子之免疫親和純化。抗體之種類以及抗體中存在任何免疫球蛋白之Fc域決定了蛋白A作為親和配位體是否適合。蛋白A可用於純化基於人類γ1、γ2或γ4重鏈之抗體(Lindmark等人, J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983))。蛋白G適用於所有鼠源同型及人類γ3 (Guss等人, EMBO J. 5:1567 1575 (1986))。瓊脂糖為最常用的親和配位體附著基質，但亦可選用其他基質。機械力穩定的基質如可控孔度玻璃或聚(苯乙烯)苯與用瓊脂糖相比可實現更快的流速及更短的處理時間。如該抗體含有CH3域，則可用Bakerbond ABX ^TM樹脂進行純化(J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.)。亦可根據需要獲得的抗體確定其他蛋白純化技術，如離子交換管柱中之分餾、乙醇沈澱、反相HPLC、矽膠層析、基於陰離子或陽離子交換樹脂之肝素瓊脂糖凝膠層析(如聚天冬胺酸管柱)、層析聚焦、SDS-PAGE、以及硫酸銨沈澱。

在任何初步純化步驟之後，可用低pH疏水相互作用層析之方法處理包含目標抗體及雜質之混合物，用pH約2.5-4.5之洗滌緩衝液，較佳在低鹽濃度下進行(例如，約0至0.25M鹽濃度)。 醫藥組合物

本發明進一步提供包含本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子之醫藥組合物，及一或多種醫藥學上可接受之載劑。

用於本文中揭示之醫藥組合物之醫藥學上可接受之載劑可包含例如醫藥學上可接受之液體、凝膠或固體載劑、水相媒劑、非水相媒劑、抗微生物物質、等滲物質、緩衝液、抗氧化劑、麻醉劑、懸浮劑/分散劑、螯合劑、稀釋劑、佐劑、輔料或無毒輔助物質，其他此項技術中已知之組分或其各種組合。

適用的組分可包含例如抗氧劑、填充劑、黏合劑、崩解劑、緩衝液、防腐劑、潤滑劑、攪味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑或穩定劑例如糖及環糊精。適用的抗氧劑可包含例如甲硫胺酸、抗壞血酸、EDTA、硫代硫酸鈉、鉑、過氧化氫酶、檸檬酸、半胱胺酸、巰基甘油、巰基乙酸、巰基山梨醇、丁基甲基茴香醚、丁基化羥基甲苯及/或沒食子酸丙酯。如本發明所揭示，在包含本文揭示之抗CD39/TGFβ陷阱分子之組合物中包含一或多種抗氧劑如甲硫胺酸，可降低抗CD39/TGFβ陷阱分子之氧化。對氧化作用的減少可防止或減少結合親和性的降低，從而提高抗體穩定性且延長保質期。因此，在某些實施例中，本發明提供之醫藥組合物中包含一或多種本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子以及一或多種抗氧化劑例如甲硫胺酸。本發明進一步提供多種防止抗CD39/TGFβ陷阱分子氧化、延長其保質期及/或提高其活性之方法，例如，藉由將本發明中提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子與一或多種抗氧劑(例如甲硫胺酸)混合來實現。

進一步地說，醫藥學上可接受之載劑可包含例如水相介質如氯化鈉注射液、林格氏液注射液、等滲葡萄糖注射液、無菌水注射液、或葡萄糖及乳酸林格注射液、非水介質例如：植物來源的不揮發性油、棉花子油、玉米油、芝麻油、或者花生油、細菌抑制或真菌抑制濃度下之抗菌物質、等滲劑如：氯化鈉或葡萄糖、緩衝液如：磷酸鹽或檸檬酸酸鹽緩衝液，抗氧化劑如：硫酸氫鈉，局部麻醉劑如：鹽酸普魯卡因，助懸劑及分散劑如：羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯啶酮，乳化劑如：聚山梨醇酯80 (TWEEN -80)、螯合試劑如EDTA (乙二胺四乙酸)或EGTA (乙二醇雙(2-胺基乙基醚)四乙酸)、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸。作為載劑之抗菌劑可加入多劑量容器中之醫藥組合物中，其包含酚類或甲酚、汞劑、苯甲醇、氯代丁醇、甲基及丙基對羥基苯甲酸酯、硫柳汞、氯苯甲烷銨及氯苯乙銨。適用的輔料可包含例如水、鹽、葡萄糖、甘油或乙醇。適用的無毒輔助物質可包含例如潤濕劑、乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑、增溶劑，或乙酸鈉、去水山梨糖醇月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或環糊精等物質。

醫藥組合物可為液體溶液、懸浮液、乳劑、丸劑、膠囊、錠劑、持續釋放調配物或粉末。口服調配物可包含標準載劑如醫藥級甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。

在某些實施例中，醫藥組合物被製備為可注射組合物。可注射醫藥組合物可以任何習知形式製備，例如，液體溶劑、懸浮劑、乳化劑或適用於產生液體溶劑、懸浮劑或乳化劑之固體形式。注射製劑可包括現用的無菌及/或無熱原溶液、使用前現與溶劑結合之無菌乾燥可溶物，如凍乾粉，包含皮下片、注射即用的無菌懸浮劑、使用前現與介質結合之無菌乾燥不溶產品，及無菌及/或無熱原乳劑。溶劑可為水相或非水相。

在某些實施例中，單位劑量腸胃外製劑包裝在一個安瓿、一支管或一支帶有針的針筒中。此項技術中習知，所有腸胃外投與之製劑應為無菌無熱原的。

在某些實施例中，藉由將本發明中揭示之抗體或其抗原結合片段溶解於某適當溶劑中可製備無菌凍乾粉末。溶劑可含有一種可提高粉末或由粉末製得之重組溶液之穩定性，或改善粉末或重組溶液之其他藥理組分。適用的輔料包含但不限於水、葡萄糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他適合之物質。溶劑可含有緩衝液，如檸檬酸緩衝液、磷酸鈉或磷酸鉀緩衝液或其他熟習此項技術者已知之緩衝液，在一個實施例中，緩衝液之pH為中性。在熟習此項技術者已知之標準條件下進行對溶液進行隨後的過濾除菌，然後凍乾製得所需調配物。在一個實施例中，將所得溶劑分裝至小管中凍乾。各小管可容納單次劑量或多次劑量之抗CD39/TGFβ陷阱分子或其組合物。各小管中之裝入量可略微高於每次劑量所需或多次劑量所需(例如10%過量)，從而保證取樣精確及給藥精確。凍乾粉可在適當條件下儲存，如在約4℃至室溫下。

用注射用水將凍乾粉重溶得到用於腸胃外投與之調配物。在一個實施例中，可將凍乾粉加至無菌無熱原水或其他適合之液體載劑中重溶。精確量由所選療法決定，可根據經驗值決定。套組

在某些實施例中，本發明提供一種套組，其包含本發明提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或本發明提供之醫藥組合物。在某些實施例中，本發明提供一種套組，其包含本發明提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子及第二治療劑。在某些實施例中，第二治療劑選自化療劑、抗癌藥物、放療劑、免疫治療劑、抗血管生成劑、靶向治療劑、細胞治療劑、基因治療劑、激素治療劑、抗病毒劑、抗生素、鎮痛藥、抗氧化劑、金屬螯合劑及細胞介素。

若需要，此類套組可進一步包含各種常規藥物套組組件中之一或多者，例如具有一或多種醫藥學上可接受之載體之容器、另外的容器等，如對於熟習此項技術者而言將顯而易見的。套組中亦可包含指示待投與組分之量的說明書(作為插頁或標籤)、投與指南及/或混合組分之指南。 使用方法

本發明亦提供在個體中治療、預防或減輕CD39相關及/或TGFβ相關疾病、病症或病況之方法，其包含向個體投與治療有效量之根據本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或根據本發明之醫藥組合物。在某些實施例中，個體為人類。本發明人意外地發現，藉由同時阻斷腺苷途徑(藉由抑制CD39)及阻斷TGFβ信號傳導途徑(藉由TGFβ陷阱)，可在治療、預防或減輕個體之CD39相關及/或TGFβ相關疾病、病症或病況方面實現協同效應。

在一些實施例中，CD39相關疾病、病症或病況之特徵在於表現或過表現CD39。在一些實施例中，TGFβ相關疾病、病症或病況之特徵在於表現或過表現TGFβ。

在一些實施例中，CD39相關疾病、病症或病況為癌症。在一些實施例中，該癌症為表現CD39之癌症。本發明中所用之「表現CD39之」癌症係指特徵在於在癌細胞或浸潤腫瘤之免疫細胞或免疫抑制細胞中表現CD39，且在癌細胞或浸潤腫瘤之免疫細胞或免疫抑制細胞表現CD39之水準顯著高於正常細胞所預期之水準的癌症。可使用多種方法來確定來自個體之測試生物樣品中CD39之存在或含量。例如，測試生物樣品可暴露於抗CD39抗體或其抗原結合片段，其結合至且偵測表現之CD39蛋白。或者，亦可使用諸如qPCR、逆轉錄酶PCR、微陣列、SAGE、FISH等方法在核酸表現量上偵測CD39。在一些實施例中，測試樣品來自癌細胞或組織或浸潤腫瘤之免疫細胞。參考樣品可為自健康或未患病之個體獲得的對照樣品，或為自獲得測試樣品之同一個人獲得的健康或未患病樣品。例如，參考樣品可為與測試樣品(例如腫瘤)相鄰或附近的未患病樣品。

在一些實施例中， TGFβ相關疾病、病症或病況為癌症。在一些實施例中，癌症為表現TGFβ之癌症。本發明中所用之「表現TGFβ之」癌症係指特徵在於在癌細胞或浸潤腫瘤之免疫細胞或免疫抑制細胞中表現TGFβ，且在癌細胞或浸潤腫瘤之免疫細胞或免疫抑制細胞表現TGFβ之量顯著高於正常細胞所預期之量的癌症。

本發明亦提供治療、預防或減輕與個體體內TGFβ水準及/或活性增加相關之疾病之方法，包含向個體投與治療有效量之本發明提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或本發明提供之醫藥組合物。

可使用多種方法來確定來自個體之測試生物樣品中TGFβ之存在或含量。例如，測試生物樣品可暴露於抗TGFβ抗體或其抗原結合片段，其結合至且偵測表現之TGFβ蛋白。或者，亦可使用諸如qPCR、逆轉錄酶PCR、微陣列、SAGE、FISH等方法在核酸表現量上偵測TGFβ。在一些實施例中，測試樣品來自癌細胞或組織或浸潤腫瘤之免疫細胞。參考樣品可為自健康或未患病個體獲得的對照樣品，或為自獲得測試樣品之同一個人獲得的健康或未患病樣品。例如，參考樣品可為與測試樣品(例如腫瘤)相鄰或其附近的未患病樣品。

在某些實施例中，疾病、病症或病況為癌症、胰臟萎縮或纖維化。

在某些實施例中，癌症選自由以下組成之群：肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、基底細胞癌、膽囊癌、胃癌、肺癌、支氣管癌、骨癌、肝膽管癌、胰臟癌、乳癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、腎盂及輸尿管癌、唾液腺癌、小腸癌、尿道癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、大腸癌、大腸直腸癌、直腸癌、食道癌、胃腸道癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、陰道癌、甲狀腺癌、喉癌、膠質母細胞瘤、黑素瘤、骨髓增生異常症候群、肉瘤、畸胎瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤、T或B細胞淋巴瘤、胃腸道間質瘤、軟組織腫瘤、肝細胞癌及腺癌。在某些實施例中，癌症為白血病、淋巴瘤、膀胱癌、神經膠質瘤、膠質母細胞瘤、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、食道癌或乳癌。

TGFβ為大多數(若非全部)慢性腎病(CKD)中導致纖維化之主要因素。在多種疾病模型中，抑制TGF-β同型(TGF-β1)或其下游信號傳導途徑可顯著限制腎纖維化，而TGF-β1過度表現可誘導腎纖維化。TGF-β1可藉由活化典型(基於Smad)及非典型(基於非Smad)信號傳導途徑誘導纖維化，導致肌成纖維細胞活化、細胞外基質(ECM)過度產生及ECM降解抑制。Smad蛋白在纖維化調節中之作用係複雜的，具有競爭性促纖維化及抗纖維化作用(包含調節間質轉化)，且TGF-β/Smad與其他信號傳導途徑之間存在複雜相互作用。研究已經確定調節纖維化中TGF-β1/Smad信號作用之其他機制，包含短及長非編碼RNA分子以及DNA及組蛋白之表觀遺傳修飾。儘管由於TGF-β1參與其他過程，直接靶向TGF-β1不太可能產生可行的抗纖維化治療，但對TGF-β1控制纖維化之各種途徑之更深入理解已確定開發新療法之替代靶點，以阻止CKD中之此最具破壞性的過程。

腺苷在炎症及組織重塑中具有重要作用，且藉由腺苷受體(A2AR)活化促進皮膚纖維化。胞外腺苷由外酶CD39及CD73串聯產生，促進真皮纖維化。腺苷軸參與腎缺血再灌注損傷(IRI)，CD39及CD73作用產生之腺苷具有保護作用。但是，腺苷之慢性升高與腎纖維化之發生有關。有證據表明，在博萊黴素激發後，CD39及/或CD73之缺失降低了膠原含量，且阻止了皮膚增厚及拉伸強度增加。在CD39-及/或CD73缺陷小鼠中，真皮纖維化特徵之減少與促纖維化介質、轉化生長因子-β1及結締組織生長因子之表現減少以及肌成纖維細胞數量之減少有關。

吾人假設CD39及TGF-β之抑制可能在硬皮病、肝纖維化及腎纖維化等疾病之纖維化治療中具有前景。

在某些實施例中，纖維化選自由以下組成之群：硬皮病、腎纖維化、肺纖維化(例如，囊性纖維化、特發性肺纖維化)、肝纖維化(例如，橋接纖維化、肝硬化)、腦纖維化、關節纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腎源性系統纖維化、腹膜後纖維化及心肌纖維化(例如，間質纖維化、替代性纖維化)。在一些實施例中，個體已被確定為具有癌細胞或腫瘤浸潤性免疫細胞或表現CD39及/或TGFβ之免疫抑制細胞，視情況，其水準顯著高於通常在非癌細胞或非免疫抑制細胞上發現之水準。

在一些實施例中，免疫抑制細胞為調節性T細胞。調節性T細胞(「Treg」)係一種獨特的T淋巴細胞群體，其具有在體外主要抑制應答T細胞增殖及在活體內抑制自體免疫疾病之能力。本發明之Treg可為具有抑制特性之CD4 ⁺CD25 ⁺FoxP3 ⁺T細胞。在某些實施例中，本發明之Treg為CD4 ⁺Treg，特別地，過度表現CD39之CD4 ⁺Treg。

在一些實施例中，個體已被鑑定為在腫瘤微環境中與正常在對照個體中發現之調節性T細胞之活性相比具有過度活躍的調節性T細胞。腫瘤微環境中調節性T細胞之活性可藉由此項技術中之習知方法確定，例如，T細胞上之CD25 ⁺Foxp3 ⁺上調，TGFβ及IL-10之分泌，CTL細胞毒性之抑制等。

在一些實施例中，個體預期自免疫抑制之逆轉或功能失調的耗盡T細胞之逆轉中受益。

在一些實施例中，疾病、病症或病況為自體免疫性疾病或感染。在一些實施例中，自體免疫性疾病為免疫性血小板減少症、系統性硬皮病、硬化症、成人型呼吸窘迫症候群、濕疹、哮喘、乾燥症候群、艾迪生氏病、巨細胞動脈炎、免疫複合體腎炎、免疫性血小板減少性紫癜、自體免疫性血小板減少症、乳糜瀉、牛皮癬、皮炎、大腸炎或全身性紅斑性狼瘡症。在一些實施例中，感染為病毒感染或細菌感染。在一些實施例中，感染為HIV感染、HBV感染、HCV感染、炎性腸病或克羅恩氏病。

在另一態樣中，提供在將自CD39活性及/或TGFβ活性之調節中受益之個體中治療、預防或減輕疾病、病症或病況之方法，該等方法包含向有需要之個體投與如本發明之治療有效量之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或醫藥組合物。在某些實施例中，疾病、病症或病況為以上定義的與CD39相關及/或與TGFβ相關之疾病、病症或病況。

本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子之治療有效劑量依賴於此項技術中已知之多種因素，例如體重、年齡、過往病史、現用治療、個體之健康狀況及交叉感染潛力、過敏、超敏及副作用，以及投與途徑及疾病發展程度。熟習此項技術者(例如醫師或獸醫)可根據此等或其他條件或要求按比例降低或升高劑量。

在某些實施例中，如本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子可在治療有效劑量約0.01 mg/kg至約100 mg/kg之間投與。在某些實施例中，投與劑量可隨治療進程變化。例如，在某些實施例中，初始投與劑量可比後續投與劑量高。在某些實施例中，投與劑量在治療進程中根據個體之反應進行調整。

給藥方案可藉由調整達到最優反應(如治療反應)。例如，可進行單劑量投與或在一段時間分多個分隔的劑量投與。

本文提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子可藉由此項技術中已知之任何途徑投與，例如腸胃外(如，皮下注射、腹腔注射、靜脈注射，包含靜脈滴注，肌肉注射或皮內注射)或非腸胃外(如，經口、經鼻、舌下、經直腸或局部)途徑。

在一些實施例中，本文中揭示之抗CD39/TGFβ陷阱分子可單獨投與或與治療有效量之第二治療劑組合投與。例如，本文揭示之抗CD39/TGFβ陷阱分子可與第二治療劑(例如，化療劑、抗癌藥、放療劑、免疫治療劑、抗血管生成劑、靶向治療劑、細胞治療劑、基因治療劑、激素治療劑、抗病毒劑、抗生素、鎮痛藥、抗氧化劑、金屬螯合劑或細胞介素)聯合給藥。

本文使用之術語「免疫療法」係指一種刺激免疫系統對抗疾病(例如癌症)或以一般方式增強免疫系統之療法。免疫療法之實例包含但不限於檢查點調節劑、授受性細胞轉移、細胞介素、溶瘤病毒及治療性疫苗。

「靶向療法」係一種作用於與癌症有關之特定分子之療法，例如存在於癌細胞中但不存在於正常細胞中或在癌細胞中更為豐富的特定蛋白質，或癌症微環境中有助於癌症生長及生存之靶分子。靶向療法將治療劑瞄準腫瘤，從而使正常組織免受治療劑的影響。

在某些此類實施例中，本文揭示之抗CD39/TGFβ陷阱分子與一或多種另外的治療劑聯用時，可與一或多種另外的治療劑同時投與，在某些此類實施例中，抗CD39/TGFβ陷阱分子及另外的治療劑可作為同一種醫藥組合物之一部分同時投與。但是，與其他治療劑「聯用」的抗CD39/TGFβ陷阱分子不需要同時投與或與該治療劑在同一組合物中投與。本發明中「聯用」之含義亦包含，在另一種治療劑之前或之後投與之抗CD39/TGFβ陷阱分子亦被視為與該治療劑「聯用」，即使抗CD39/TGFβ陷阱分子與第二種物質經由不同途徑給投與。在可能的情況下，與本發明中揭示之抗CD39/TGFβ陷阱分子聯用之其他治療劑可參照該其他治療劑之產品說明書之方法投與，或參照外科醫生之案頭參考書2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed; Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002))，或參照其他此項技術中熟知之方法。

在另一態樣中，本發明進一步提供調節CD39陽性細胞中CD39活性之方法，包含將CD39陽性細胞暴露於本發明提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子。在一些實施例中，CD39陽性細胞為免疫細胞。

在另一態樣中，本發明進一步提供調節TGFβ陽性細胞中TGFβ活性之方法，包含將TGFβ陽性細胞暴露於本發明提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子。

在另一態樣中，本發明提供偵測樣品中CD39及/或TGFβ之存在或含量之方法，其包含將樣品與抗CD39/TGFβ陷阱及/或本發明提供之醫藥組合物接觸，以及確定樣品中CD39及/或TGFβ之存在或含量。

在另一態樣中，本發明提供一種在個體中診斷與CD39相關及/或與TGFβ相關之疾病、病症或病況之方法，其包含：a)將獲取自個體之樣品與本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或本發明提供之醫藥組合物接觸；b)確定在樣品中CD39及/或TGFβ之存在或含量；以及c)將CD39及/或TGFβ之存在或含量與CD39相關及/或TGFβ相關疾病、病症或病況在個體中之存在情況或狀況相關聯。

在另一態樣中，本發明提供套組，該等套組包含本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或本發明提供之醫藥組合物，其視情況與可偵測部分結合，可用於偵測與CD39相關及/或與TGFβ相關之疾病、病症或病況。該等套組可進一步包含使用說明。

在另一態樣中，本發明亦提供本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或本發明提供之醫藥組合物在製備用於在個體中治療、預防或減輕CD39相關及/或TGFβ相關疾病、病症或病況之藥物中之用途、在製備用於診斷與CD39相關及/或與TGFβ相關之疾病、病症或病況之診斷試劑中之用途。

在另一態樣中，本發明提供一種在個體中治療、預防或減輕可藉由降低CD39之ATP酶活性而可治療之疾病之方法，包含向個體投與本發明提供之治療有效量之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或本發明提供之醫藥組合物。例如，可投與本發明提供之抗CD39/TGFβ陷阱分子以降低表現CD39之癌細胞或浸潤腫瘤之免疫細胞或免疫抑制細胞之ATP酶活性。在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體具有選自由以下組成之群的疾病、病症或病況：癌症、胰臟萎縮、纖維化、自體免疫性疾病及感染。

在另一態樣中，本發明提供一種在個體中治療、預防或減輕與腺苷介導之T細胞、單核球、巨噬細胞、DC、APC、NK及/或B細胞活性之抑制相關之疾病之方法，其包含向個體投與治療有效量之本發明之抗CD39/TGFβ陷阱分子及/或本發明之醫藥組合物。

以下實例旨在更好地說明本發明，且不應理解為限制本發明之範疇。所有下述特定組合物、材料及方法，其整體或部分，均在本發明之範疇內。此等特定組合物、材料及方法並非為了限制本發明，而均為說明特定實施例在本發明之範疇內。熟習此項技術者可不經過創造性勞動以及不偏離本發明之範疇而開發出等效組合物、材料及方法。應理解，對本發明之方法作出的多種改動仍可包含在本發明之範疇內。本發明人意在將此類變動包含在本發明之範疇內。實例實例 1. 製備材料

1.1 參考抗體產生

基於已揭示之序列產生抗CD39參考抗體。專利申請案WO2016/073845A1中揭示了抗體9-8B，其重鏈及輕鏈可變區序列在本申請中分別為SEQ ID NO: 46及48。抗體T895在專利申請案WO 2019/027935A1中被揭示為抗體31895，且其重鏈及輕鏈可變區序列在本申請中分別為SEQ ID NO: 55 及57。專利申請案WO 2018/167267A1中揭示了抗體I394，其重鏈及輕鏈可變區序列在本申請中分別為SEQ ID NO: 113及114。抗體9-8B、T895及I394之重鏈可變區及輕鏈可變區如下表10所示。在Expi293細胞(Invitrogen)中選殖且表現編碼參考抗體之DNA序列。收集細胞培養基且離心除去細胞沈澱。使用蛋白A親和層析管柱(Mabselect Sure，GE Healthcare)純化收穫之上清液，以獲得參考抗體製劑。表 10 ：三種參考抗體之可變區胺基酸序列

抗體	VH	VL
9-8B	SEQ ID NO: 46 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGELTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARRAYYRYDYVMDYWGQGTSVTVSS	SEQ ID NO: 48 DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASHNVGTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPGRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCHQYNNYPYTFGGGTKLEIK
T895	SEQ ID NO: 55 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGRTLEWIGYIVPLNGGSTFNQKFKGRATLTVNTSSRTAYMELRSLTSEDSAAYYCARGGTRFAYWGQGTLVTVSA	SEQ ID NO: 57 DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNFGVSFMYWFQQKPGQPPNLLIYGASNQGSGVPARFRGSGSGTDFSLNIHPMEADDTAMYFCQQTKEVPYTFGGGTKLEIK
I394	SEQ ID NO: 113 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFKSYEMHWVRQAPGQGLEWMGRINPSVGSTWYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKREGGTEYLRKWGQGTLVTVSS	SEQ ID NO: 114 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVASSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRHTGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYHNAITFGGGTKVEIK

1.2 產生人類、食蟹猴及小鼠CD39穩定表現細胞株

分別將編碼全長人類CD39 (NP_001767.3)、食蟹猴CD39 (XP_015311944.1)及小鼠CD39 (NP_033978.1)之DNA序列選殖至表現載體中，然後在HEK293細胞中轉染且表現。在選擇培養基中分別培養表現人類CD39、食蟹猴CD39及小鼠CD39之轉染細胞。藉由有限稀釋分離穩定表現人類CD39、食蟹猴CD39或小鼠CD39之單細胞純系。然後使用抗人類CD39抗體(BD, Cat#555464)、抗食蟹猴CD39抗體(9-8B)、抗小鼠CD39抗體(Biolegend, Cat#143810)藉由FACS篩選細胞。

以類似的方式，在選擇培養基中培養經人類CD39、食蟹猴CD39或小鼠CD39表現質體轉染之CHOK1細胞(Invitrogen)。藉由有限稀釋分離穩定表現人類CD39、食蟹猴CD39或小鼠CD39之單細胞純系，然後使用抗人類CD39抗體、抗食蟹猴CD39抗體或抗小鼠CD39抗體藉由FACS篩選細胞。

將穩定細胞株分別命名為HEK293-hCD39、HEK293-cynoCD39、HEK293-mCD39、CHOK1-hCD39、CHOK1-cynoCD39及CHOK1-mCD39，其均顯示出高表現及ATP酶活性。

1.3 重組蛋白產生

將編碼人類CD39之細胞外域(ECD)之DNA序列選殖至表現載體中，且轉染至HEK293細胞中，以表現ECD重組蛋白。實例 2. 抗體產生

2.1免疫及融合瘤產生與篩選

為了產生針對CD39之抗體，用重組表現之人類CD39抗原或其片段或編碼全長人類CD39之DNA及/或表現人類CD39之細胞免疫Balb/c及SJL/J小鼠(SLAC)。在免疫操作過程中，藉由尾靜脈或眼眶後取血獲得血漿及血清樣品，來監測免疫反應。將具有足夠滴度之抗CD39抗體之小鼠用於融合實驗。分離來自免疫小鼠之脾細胞及/或淋巴結細胞，且將其與小鼠骨髓瘤細胞株(SP2/0)融合。藉由用人類CD39 ECD重組蛋白進行ELISA分析，或藉由用穩定表現人類CD39之CHOK1-hCD39細胞進行Acumen分析(TTP Labtech)篩選出能產生CD39特異性抗體之融合瘤。藉由FACS及酶活性阻斷實驗證實了融合瘤純系對hCD39之特異性，且對其進行次選殖以獲得穩定的融合瘤純系。在1-2輪次選殖後，擴增單株融合瘤以產生抗體，且冷凍貯存。

藉由有限稀釋法，將分泌抗體之融合瘤進行次選殖。在體外培養穩定的次純系，以在組織培養基中產生用於表徵之抗體。在1-2輪次選殖後，擴增單株融合瘤以產生抗體。

培養約14天後，收集融合瘤細胞培養基且藉由蛋白A親和層析管柱(GE)純化。融合瘤抗體純系分別命名為mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35。實例 3. 抗體表徵

3.1 抗體

在下文所述之一系列結合及功能分析中，對融合瘤抗體純系mAb13、mAb14、mAb19、mAb21、mAb23、mAb34及mAb35進行表徵分析。

3.2 與人類CD39、食蟹猴CD39及小鼠CD39之結合親和力

使用FACS來確定抗體與天然表現CD39之細胞株(SK-MEL-28)或重組表現CD39之細胞株(CHOK1-hCD39、CHOK1-cynoCD39及CHOK1-mCD39)、或作為陰性對照之缺乏CD39表現之細胞(CHOK1-blank)的結合。

根據ATCC步驟，將CHOK1-hCD39、CHOK1-cCD39、CHOK1-mCD39及CHOK1-blank細胞培養於培養基中。收集細胞，且以3×10 ⁶個細胞/ml之密度將細胞重懸於封閉緩衝液中。將細胞以100μl/孔(3×10 ⁵個細胞/孔)之密度轉移至96孔FACS盤中，將盤離心且用FACS緩衝液(PBS、1% FBS、0.05% Tween-20)洗滌兩次。自30µg/ml開始，用FACS緩衝液製備抗CD39抗體之4倍系列稀釋液。分別使用參考抗體9-8B及小鼠/人類IgG對照作為陽性對照及陰性對照。將細胞重懸於100μL/孔稀釋之抗體中，且將盤在4℃下培養60分鐘。用FACS緩衝液洗滌盤，將Alexa Fluor®488標記之二抗(在FACS緩衝液中1:1000)添加至每個孔中，且在4℃下培養30分鐘。用FACS緩衝液洗滌盤，且將細胞重懸於100μL/孔之PBS中。然後用FACSVerse™分析細胞，且確定平均螢光強度。藉由偵測一系列抗體之濃度，生成CD39表現細胞之完整結合曲線。使用Prism軟體確定各抗體之表觀親和力。

同樣，將表現人類CD39之細胞SK-MEL-5、SK-MEL-28或MOLP-8在4℃下與梯度濃度之抗CD39抗體培養30分鐘。用FACS緩衝液洗滌細胞3次，然後與螢光標記之二抗(山羊抗小鼠IgG或山羊抗人類IgG)在4℃下培養30分鐘。將細胞洗滌3次，然後重懸於FACS緩衝液中，且在BD Celesta上藉由流式細胞術進行分析。使用GraphPad Prism 8.02繪製及分析資料。

與已知的抗CD39抗體9-8B相比，7種經純化融合瘤抗體之結合親和力如表11所示。所有融合瘤抗體均以劑量依賴性方式與人類及食蟹猴CD39結合，但在FACS分析中無融合瘤抗體識別小鼠CD39。表 11. 抗 CD 39 融合瘤抗體 之表徵總結

ES - 編號	結合親和力 EC _{5 ()}(M)	基於 SK-MEL-28 細胞之 ATP酶抑制 %	T 細胞增殖抑制實驗	Octet 結合親和力	抗原決定基
人類	食蟹猴	小鼠	SK-MEL-28	10 nM	EC ₅₀	100nM	EC ₅₀	KD	K-off
mAbl3	3.0E-08	2.1E-08	-	1.1E-08	43%	3.5E-10	n.d.	n.d.	n.d.	n. d.	n.d.
mAbl4	2.5E-09	3.4E-09	-	2.8E-08	57%	4.5E-09	++	n.d.	2.4E-10	2.2E-04	IV
mAbl9	4.5E-09	5.8E-09	-	4.6E-08	65%	4.0E-09	++	n.d.	2.6E-10	1.5E-04	I
mAb21	6.7E-09	1.1E-08	-	9.0E-08	70%	1.5E-09	++	1.4E-10	4.4E-10	2.2E-04	I
mAb23	1.7E-09	2.3E-09	-	1.6E-09	75%	6.0E-11	++	〜1.0E-10	8.2E-10	3.6E-04	II
mAb34	4.4E-09	3.1E-09	-	4.7E-09	72%	1.3E-10	n.d.	n.d.	n.d.	n.d.	n.d.
mAb35	5.2E-09	5.3E-09	-	1.8E-09	56%	1.6E-09	n.d.	n.d.	n.d.	n.d.	n.d.
9-8B	1.7E-09	1.6E-09	-	8.0E-10	21%	5.0E-11	n.d.	n.d.	n.d.	n.d.	III

-：陰性 ++：p＜0.01 n.d.：尚未確定

3.3 偵測ATP酶抑制

用PBS緩衝液洗滌表現CD39之細胞SK-MEL-5及MOLP-8，且在37℃下與梯度抗體一起培養30分鐘。向各孔中加入50 mM ATP，且與細胞一起培養16小時。收集上清液，且根據製造商之使用手冊，用孔雀綠磷酸鹽偵測套組(Malachite Green Phosphate Detection Kit, R&D systems, Catalog # DY996)偵測來自ATP降解之正磷酸鹽產物。同型及/或9-8B用作對照。使用GraphPad Prism 8.02繪製及分析資料。EC ₅₀為在該分析中達到50%信號時所示抗體之濃度。

如表11中所總結，與參考抗體9-8B相比，所有7種經純化融合瘤抗體均具有良好ATP酶抑制活性。

3.4 ATP介導之T細胞增殖抑制分析

在ATP存在下，將用CSFE標記且用抗CD3及抗CD28刺激之人類T細胞與抗CD39抗體或同型對照一起培養。藉由CSFE稀釋在FACS中分析T細胞增殖。mIgG2a用作同型對照。

所選抗CD39抗體mAb21及mAb23之T細胞增殖活性如圖1所示，且彙總於表11中。EC ₅₀為在該分析中達到50%信號時所示抗體之濃度。兩種抗體均以劑量依賴性方式增強T細胞增殖，即兩種抗體均阻斷ATP介導之T細胞增殖抑制。

3.5 抗原決定基分組

使用Alex488標記套組標記抗CD39抗體，且進行一系列濃度稀釋，然後再與CHOK1-hCD39細胞混合，以使用FACS偵測結合EC ₈₀。偵測了未標記抗體對標記抗體之阻斷功效。簡言之，將CHOK1-hCD39單核球製備至密度為2×10 ⁶/ml，且以50μl/孔接種至96孔盤中，然後與梯度抗體混合至100μl之終體積，然後以兩倍EC ₈₀濃度添加等體積之Alex488標記抗體。將96孔盤在4℃下培養1小時，離心且用200μl FACS緩衝液洗滌3次。在FACScelesta機器上進行FACS分析，且藉由Flowjo軟體分析資料。與無競爭孔(僅Alex488標記抗體)相比，計算了阻斷百分比，且將其中競爭率高於80%之彼等歸入同一抗原決定基群中。

競爭結果如表12所示。基於競爭結果，可將4種抗CD39融合瘤抗體(mAb14、mAb19、mAb21、mAb23)分為4個不同的抗原決定基群，如表11所示。特定言之，抗CD39抗體mAb19及mAb21競爭高度相似的抗原決定基，且歸為抗原決定基群I，如表11所示。mAb14不與所測試之任何其他抗體競爭，歸為抗原決定基群IV，如表11所示。mAb23顯示與mAb19及mAb21交叉競爭，且在表11中歸為抗原決定基群II。表 12. 抗 CD39 融合瘤抗體之抗原決定基分組總結

	mAb19-Alexa488	mAb21-Alexa488	mAb23-Alexa488	9-8B-Alexa488	mAb14-Alexa488
mAb19	96%	83%	91%	6%	23%
mAb21	98%	90%	97%	20%	24%
mAb23	98%	93%	100%	98%	86%
9-8B	19%	16%	100%	98%	55%
mAb14	6%	10%	-26%	-11%	98%

3.6 融合瘤定序

自單株融合瘤細胞中分離出RNA，且用商業套組反轉錄成cDNA。然後以cDNA為模板，用Mouse Ig-Primer Set (Novagen)之引子擴增出重鏈可變區及輕鏈可變區。收集且純化大小正確的PCR產物，然後用適合之質體載體連接。連接產物轉化至DH5α感受態細胞。篩選純系，且藉由DNA定序分析插入片段。

融合瘤抗體之可變區序列如下表2中所示。實例 4. 嵌合抗體之產生及表徵

4.1 嵌合抗體之產生與生產

合成編碼4種所選融合瘤抗體(mAb14、mAb19、mAb21及mAb23)可變區之DNA，且將其次選殖至預先包含人類IgG恆定基因之表現載體中。將載體轉染至哺乳動物細胞中用於重組蛋白表現，且使用蛋白A親和層析管柱純化表現之抗體。所得嵌合抗體在本申請中被稱為c14、c19、c21及c23，其中前綴「c」表示「嵌合」，數字表示融合瘤抗體純系，例如數字「14」表示其來自融合瘤抗體mAb14。

4.2 嵌合抗體之表徵

偵測4種經純化嵌合抗體阻斷ATP介導之T細胞增殖抑制之活性(與實施例3.4中描述之方法類似)。如圖2所示，抗CD39嵌合抗體c14、c19、c21及c23以劑量依賴性方式(在100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM及0.001nM之濃度範圍)阻斷CD4 ⁺T細胞增殖之抑制。CFSE-CD4 ⁺T及hIgG4分別作為ATP介導之T細胞增殖之陽性對照及陰性對照。

進一步偵測4種經純化嵌合抗體在存在ATP之情況下增強ATP誘導之樹突狀細胞(DC)活化及成熟的能力。ATP藉由刺激單核球來源之樹突狀細胞之P2Y11受體來誘導DC成熟。

簡言之，自健康人類血液中分離出人類單核球，且在存在GM-CSF及IL-4之情況下分化為MoDC，持續6天。然後用4種不同劑量之抗CD39嵌合抗體在存在ATP之情況下再將分化之MoDC處理24小時。然後，用FACS分析CD86、CD83及HLA-DR之表現來評價DC成熟。

圖3示出FACS偵測之DC表面之CD39水準。圖4A至4C分別示出抗體處理之後的CD86 (圖4A)、CD83 (圖4B)及HLA-DR (圖4C)表現。ATP誘導之DC成熟表現為，與媒劑處理相比，CD86、CD83及HLA-DR之表現增加。4種抗CD39抗體c14、c19、c21及c23均對ATP誘導之DC成熟有顯著促進作用。

亦偵測嵌合抗體之活體內抗腫瘤活性。在NOD-SCID小鼠之右後脅腹區域皮下接種0.1 ml PBS混合基質膠(1:1)中之腫瘤細胞(10×10 ⁶)，用於腫瘤發展。當腫瘤平均大小達到約80mm ³時，將小鼠隨機分組。在隨機分組之同一天開始處理，劑量為30 mg/kg，每週兩次。隨機分組後，每週用卡尺在二維層面上量測腫瘤體積兩次，且使用以下公式以mm ³表示體積：V =(L×W×W)/2，其中V為腫瘤體積，L為腫瘤長度(最長腫瘤尺寸)，W為腫瘤寬度(垂直於L之最長腫瘤尺寸)。在層流櫃(Laminar Flow Cabinet)中進行給藥，且量測腫瘤及體重。使用Graphpad Prism進行雙因素方差分析。

嵌合抗CD39抗體c23之腫瘤生長結果如圖5所示。獲得且偵測了c23之人類IgG1型及IgG4型。與媒劑組相比，c23-hIgG4及c23-hIgG1嵌合抗體均顯示出抗腫瘤作用，c23-hIgG4及c23-hIgG1之間無顯著性差異。實例 5. 抗體之人源化與親和力成熟

5.1 人源化

選擇嵌合抗體c23及c14作為人源化純系。將抗體序列與人類生殖系序列比對以確定最佳擬合模型。基於與原始小鼠抗體序列之同源性，選擇最匹配的人類生殖系序列作為人源化之模板。然後將來自小鼠抗體序列之CDR與保持抗體之上核及中心核結構之殘基一起移植至模板上。將最佳化突變引入框架區以產生人源化重鏈可變區之變體及人源化輕鏈可變區之變體，將其混合且匹配以提供多個人源化抗體純系。移植及突變後，人源化抗體對表現人類CD39之細胞保持相似的結合親和力。藉由CD39 ATP酶抑制實驗及體外免疫細胞活化實驗進一步評估人源化抗體。亦對一些人源化抗體進行了體內研究。

總共獲得了c23之31種人源化抗體純系，混合且匹配人源化c23重鏈可變區之7種變體(亦即hu23.VH_1、hu23.VH_2、hu23.VH_3、hu23.VH_4、hu23.VH_5、hu23.VH_6及hu23.VH_7)及人源化c23輕鏈可變區之7種變體(亦即hu23.VL_1、hu23.VL_2、hu23.VL_3、hu23.VL_4、hu23.VL_5、hu23.VL_6及hu23.VL_7)。31種人源化抗體純系被命名為hu23.H1L1、hu23.H1L2等，如上表9及下表13、14及15所示，其中前綴「hu」表示「人源化」，後綴例如「H1L1」表示具有hu23.VH_1可變區變體及hu23.VL_1可變區變體的編號為c23之人源化抗體純系。表 13 ： c23 之人源化抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區

	hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)	hu23.VL_2 (SEQ ID NO: 63)	hu23.VL_3 (SEQ ID NO: 65)	hu23.VL_4 (SEQ ID NO: 67)
hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)	hu23.H1L1 (SEQ ID NOs: 60/61)	hu23.H1L2 (SEQ ID NOs: 60/63)	hu23.H1L3 (SEQ ID NOs: 60/65)	hu23.H1L4 (SEQ ID NOs: 60/67)
hu23.VH_2 (SEQ ID NO: 62)	hu23.H2L1 (SEQ ID NOs: 62/61)	hu23.H2L2 (SEQ ID NOs: 62/63)	hu23.H2L3 (SEQ ID NOs: 62/65)	hu23.H2L4 (SEQ ID NOs: 62/67)
hu23.VH_3 (SEQ ID NO: 64)	hu23.H3L1 (SEQ ID NOs: 64/61)	hu23.H3L2 (SEQ ID NOs: 64/63)	hu23.H3L3 (SEQ ID NOs: 64/65)	hu23.H3L4 (SEQ ID NOs: 64/67)
hu23.VH_4 (SEQ ID NO: 66)	hu23.H4L1 (SEQ ID NOs: 66/61)	hu23.H4L2 (SEQ ID NOs: 66/63)	hu23.H4L3 (SEQ ID NOs: 66/65)	hu23.H4L4 (SEQ ID NOs: 66/67)

表 14 ： c23 之人源化抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區

	hu23.VL_1 (SEQ ID NO: 61)	hu23.VL_5 (SEQ ID NO: 143)	hu23.VL_6 (SEQ ID NO: 144)	hu23.VL_7 (SEQ ID NO: 145)
hu23.VH_1 (SEQ ID NO: 60)	hu23.H1L1 (SEQ ID NOs: 60/61)	hu23.H1L5 (SEQ ID NOs: 60/143)	hu23.H1L6 (SEQ ID NOs: 60/144)	hu23.H1L7 (SEQ ID NOs: 60/145)
hu23.VH_5 (SEQ ID NO: 140)	hu23.H5L1 (SEQ ID NOs: 140/61)	hu23.H5L5 (SEQ ID NOs: 140/143)	hu23.H5L6 (SEQ ID NOs: 140/144)	hu23.H5L7 (SEQ ID NOs: 140/145)
hu23.VH_6 (SEQ ID NO: 141)	hu23.H6L1 (SEQ ID NOs: 141/61)	hu23.H6L5 (SEQ ID NOs: 141/143)	hu23.H6L6 (SEQ ID NOs: 141/144)	hu23.H6L7 (SEQ ID NOs: 141/145)
hu23.VH_7 (SEQ ID NO: 142)	hu23.H7L1 (SEQ ID NOs: 142/61)	hu23.H7L5 (SEQ ID NOs: 142/143)	hu23.H7L6 (SEQ ID NOs: 142/144)	hu23.H7L7 (SEQ ID NOs: 142/145)

表 15 ： c23 之人源化抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區

	hu23.VL_201 (SEQ ID NO: 111)	hu23.VL_203 (SEQ ID NO: 112)	hu23.VL_211 (SEQ ID NO: 63)
hu23.VH_201 (SEQ ID NO: 146)	hu23.201 (SEQ ID NOs: 146/111)	hu23.203 (SEQ ID NOs: 146/112)	-
hu23.VH_207 (SEQ ID NO: 147)	hu23.207 (SEQ ID NOs: 147/111)	-	-
hu23.VH_211 (SEQ ID NO: 39)	-	-	hu23.211 (SEQ ID NOs: 39/63)

類似地，總共獲得c14之16種人源化抗體，混合且匹配人源化c14重鏈可變區之4種變體(亦即hu14.VH_1、hu14.VH_2、hu14.VH_3及hu14.VH_4)及人源化c14輕鏈可變區之4種變體(亦即hu14.VL_1、hu14.VL_2、hu14.VL_3及hu14.VL_4)。16種人源化抗體純系分別被命名為hu14.H1L1、hu14.H1L2等等以此類推，如下表16所示。表 16 ： c14 之 16 種人源化抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區

	hu14.VL_1 (SEQ ID NO: 69)	hu14.VL_2 (SEQ ID NO: 71)	hu14.VL_3 (SEQ ID NO: 73)	hu14.VL_4 (SEQ ID NO: 75)
hu14.VH_1 (SEQ ID NO: 68)	hu14.H1L1 (SEQ ID NOs: 68/69)	hu14.H1L2 (SEQ ID NOs: 68/71)	hu14.H1L3 (SEQ ID NOs: 68/73)	hu14.H1L4 (SEQ ID NOs: 68/75)
hu14.VH_2 (SEQ ID NO: 70)	hu14.H2L1 (SEQ ID NOs: 70/69)	hu14.H2L2 (SEQ ID NOs: 70/71)	hu14.H2L3 (SEQ ID NOs: 70/73)	hu14.H2L4 (SEQ ID NOs: 70/75)
hu14.VH_3 (SEQ ID NO: 72)	hu14.H3L1 (SEQ ID NOs: 72/69)	hu14.H3L2 (SEQ ID NOs: 72/71)	hu14.H3L3 (SEQ ID NOs: 72/73)	hu14.H3L4 (SEQ ID NOs: 72/75)
hu14.VH_4 (SEQ ID NO: 74)	hu14.H4L1 (SEQ ID NOs: 74/69)	hu14.H4L2 (SEQ ID NOs: 74/71)	hu14.H4L3 (SEQ ID NOs: 74/73)	hu14.H4L4 (SEQ ID NOs: 74/75)

亦藉由酵母展示獲得了c23之幾種人源化抗體純系。簡言之，將小鼠重鏈及輕鏈序列與人類抗體序列之內部資料庫進行比對。分別選擇同源性最高之模板IGHV1-3*01及IGKV3-11*01用於重鏈及輕鏈CDR移植。藉由使用酵母展示之高通量方法識別反向突變。特定言之，識別了有助於CDR構形之位置(游標區殘基)，且藉由在DNA合成過程中在每個位置摻入模板及小鼠殘基來創建反向突變庫。藉由定序人類CD39蛋白之主要結合物來確定最終候選物。藉由酵母展示獲得的c23之人源化抗體被命名為hu23.201 (具有SEQ ID NOs: 146/111之VH/VL)、hu23.203 (具有SEQ ID NO: 146/112之VH/VL)、hu23.207 (具有SEQ ID NO: 147/111之VH/VL)及hu23.211 (具有SEQ ID NO: 39/63之VH/VL)。

表13、14、15及16中之人源化抗體由重組產生，隨後進行結合親和力偵測，顯示其能夠保留結合人類CD39之特異性。在包含CD39阻斷實驗及體外免疫細胞活化實驗在內的功能實驗中進一步評估具有相對較高親和力之彼等抗體。

具體地，使用Biacore (GE)表徵人源化抗體hu23.H5L5、hu23.201、hu14.H1L1以及參考抗體I394及T895對人類CD39之結合親和力。簡言之，使用人類抗體捕獲套組(GE)將待測抗體捕獲至CM5晶片(GE)中。將6xHis標記之人類CD39抗原連續稀釋多次，且以30μl/ min之速度注射180秒。維持緩衝液流解離400秒。使用3M MgCl ₂進行晶片再生。將締合及解離曲線與1:1結合模型擬合，且計算各抗體之Ka/Kd/K _D值。下表17總結了所測試抗體之親和力資料。表 17 ：藉由 Biacore 測 定法量測的抗體對人類 CD39 之 結合親和力

抗體	ka (1/Ms)	kd (1/s)	K _D(M)
hu23.H5L5	8.22E+04	1.60E-03	1.95E-08
hu23.201	6.75E+04	1.62E-03	2.40E-08
hu14.H1L1	9.03E+05	4.55E-03	5.03E-09
I394	2.03E+05	1.26E-03	6.21E-09
T895	1.33E+05	1.39E-01	1.04E-06

此外，根據製造商使用說明書，使用Octet測定法(Creative Biolabs)，對人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L2以及參考抗體I394、T895及9-8B之抗人類CD39結合親和力進行表徵。簡言之，將抗體偶聯至感測器上，然後將感測器浸入CD39梯度液中(起始濃度為200nM，2倍稀釋，共8個劑量)。對其結合反應進行實時量測，且對結果進行全局擬合。下表18中總結了所測試抗體之親和力資料。表 18 ：藉由 Octet 測 定法量測的抗體對人類 CD39 之 結合親和力

抗體	K _D(M)	kon (1/Ms)	kdis (1/s)
hu23.H5L5	6.87E-10	1.36E+05	9.36E-05
hu14.H1L2	8.39E-10	3.89E+05	3.26E-04
I394	4.54E-10	2.56E+05	1.16E-04
T895	6.62E-09	6.71E+05	4.44E-03
9-8B	2.02E-08	1.20E+05	2.43E-03

另外，在c23抗體之人源化抗體純系(例如hu23.H5L5)之HCDR2中鑑定出了一個易於脫醯胺之NG模體(N55G56)。為了除去脫醯胺位點，將不同突變引入N55或G56，發現N55及G56可各自突變為多種殘基，但仍保留與人類CD39結合的特異性。例如，發現當N55被G、S或Q單點替換時，抗體結合親和力得以保留，且對其與人類CD39之結合無負面影響。類似地，當G56經A或D替換時，突變抗體亦保留其對人類CD39之特異性結合及結合親和力。預計其他突變亦起同樣作用。

5.2 結合特異性偵測

藉由ELISA測定法偵測經純化人源化抗體hu23.H5L5對ENTPDase家族成員之結合特異性。簡言之，將ENTPD1 (亦即CD39)及ENTPD 2/3/5/6蛋白包被在96孔ELISA盤上，在4℃下放置隔夜，第二天，用200μl/孔之封閉緩衝液(含1% BSA之PBS與0.05% Tween20混合液)洗滌且封閉ELISA盤2小時。然後將hu23.H5L5梯度液轉移至孔中，且用抗hIgG-HRP染色。盤洗滌後，將盤用TMB受質顯影，且用2N HCl終止反應。使用讀盤器記錄OD450，且用Graphpad Prism作圖。hu23.H5L5之結合特異性如圖6所示。自圖6A可見，人源化抗體hu23.H5L5特異性結合人類CD39，但不結合ENTPD 2/3/5/6蛋白中之任一者。圖6B顯示陰性對照hIgG4不結合ENTPD 1/2/3/5/6蛋白中之任一者。

5.3 人源化抗體之表徵

使用與實例3.2中所述類似之方法，藉由FACS偵測c23之人源化抗體之結合親和力。顯示出良好結合親和力之c23人源化抗體純系列於下表19及表20中，且亦示於圖7A、7B及圖8中。EC ₅₀為在該分析中信號指示達到50%時所示之抗體濃度。表 19 ： c23 人源化抗體與 MOLP8 細胞之結合活性

抗體	hu23.H1L1	hu23.H1L2	hu23.H1L3	hu23.H1L4	hu23.H2L1
EC _{50 (}nM)	~77.07	1.158	2.775	1.498	65.91
抗體	hu23.H2L2	hu23.H2L3	hu23.H2L4	c23
EC _{50 (}nM)	0.979	2.033	1.46	1.035
抗體	hu23.H3L1	hu23.H3L2	hu23.H3L3	hu23.H3L4	hu23.H4L1
EC _{50 (}nM)	~15.40	1.341	3.29	1.612	ND
抗體	hu23.H4L2	hu23.H4L3	hu23.H4L4	同型
EC _{50 (}nM)	1.151	1.868	1.014	ND
抗體	hu23.H1L1	hu23.H1L5	hu23.H1L6	hu23.H1L7	hu23.H5L1
EC _{50 (}nM)	~78.25	ND	ND	ND	0.262
抗體	hu23.H5L5	hu23.H5L6	hu23.H5L7	c23
EC _{50 (}nM)	0.177	0.2021	0.179	0.3973
抗體	hu23.H6L1	hu23.H6L5	hu23.H6L6	hu23.H6L7	hu23.H7L1
EC _{50 (}nM)	0.2459	0.593	0.237	0.122	0.366
抗體	hu23.H7L5	hu23.H7L6	hu23.H7L7	同型
EC _{50 (}nM)	0.25	0.271	0.25	ND

ND: 在該實驗條件下偵測不到。表 20 ： c23 之人源化抗體對 MOLP8 之結合活性

抗體	hu23.201	hu23.203	hu23.207	hu23.211	c23	hIgG4
EC _{50 (}nM)	1.289	0.429	2.246	1.557	1.279	ND

ND: 在該實驗條件下偵測不到。

在SK-MEL-28細胞上偵測所選c23人源化抗體以進行ATP酶抑制分析(如實施例3.3中所述)。圖9A及9B示出指定抗體之抑制圖，且總結在表21中。選擇hu23.H5L5及hu23.201用於進一步驗證。表 21 ： c23 之人源化抗體對 SK-MEL-28 細胞之 ATP 酶抑制活性

抗體	hu23.H7L1	hu23.H7L5	hu23.H7L6	hu23.H1L2	hu23.H1L4	hu23.H2L2	c23
IC ₅₀(nM)	0.147	0.144	0.121	0.964	0.59	0.767	0.158
抗體	hu23.H4L4	hu23.H5L5	hu23.H5L6	hu23.201	hu23.203	hu23.211	c23
IC ₅₀(nM)	0.487	0.122	0.13	0.264	0.32	0.386	0.2092

使用與實例3.2中所述類似的方法，利用表現人類CD39之MOLP-8細胞藉由FACS偵測c14之人源化抗體之結合親和力。

顯示出良好結合親和力之c14之人源化抗體純系如圖10A、10B及10C所示。表22總結了EC ₅₀值。表 22 ： c14 人源化抗體與 MOLP8 細胞之結合活性

抗體	hu14.H1L1	hu14.H2L2	hu14.H3L1	hu14.H3L3	hu14.H3L4	hu14.H4L4	c14
EC ₅₀(nM)	7.212	6.908	5.952	6.088	6.046	5.459	17.52

5.4 抗原決定基分組

偵測所選人源化抗體之競爭性結合(方法如實施例3.5所描述)。人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1與參考抗體之抗原決定基分組結果如圖19A所示。

根據競爭結果(如圖19A所示)，可將2種人源化抗CD39抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1分為2個不同的抗原決定基群(參見圖19B)。特定言之，抗CD39抗體hu23.H5L5與參考抗體I394、T895及9-8B競爭高度相似的抗原決定基，被歸為抗原決定基群I。hu14.H1L1、c34及c35除與T895部分競爭以外，未與任何其他測試抗體競爭，因此被歸為抗原決定基群II。

5.5 最佳化人源化抗體之表徵

5.5.1 hu23.H5L5 對 CD39 之阻斷增強了在存在細胞外 ATP (eATP) 之情況下的人類 T 細胞增殖。

在存在ATP之情況下，將用抗CD3抗體及抗CD28抗體刺激之人類PBMC分別與25nM人源化抗CD39抗體hu23.H5L5及媒劑一起培養。收集細胞培養上清液，分別用於偵測IL-2及IFN-γ之分泌。第5天時，在FACS中藉由Cell Trace Violet稀釋染料分析CD4 ⁺T及CD8 ⁺T細胞之增殖。

如圖11A至11D所示，hu23.H5L5在25nM之濃度下顯著增強了CD4 ⁺及CD8 ⁺T細胞之增殖，且活化了其IL-2及IFN-γ產生。如圖11A、11B及11D所示，在增強PBMC中之T細胞活化方面，hu23.H5L5顯示出比I394明顯更高的活性。

自健康供體PBMC中分離人類CD8 ⁺T細胞，然後用細胞增殖染料標記，用抗CD3抗體及抗CD28抗體活化，然後用不同劑量之人源化抗CD39抗體hu23.H5L5或參考抗體I394處理5天。在第3天，在開始CD39阻斷處理之後，向細胞中加入200μM ATP。在第5天，用流式細胞術分析CD8 ⁺T細胞增殖百分比(%)、CD25 ⁺細胞百分比(%)及活細胞百分比(%)。

如圖23A至23C所示，hu23.H5L5顯著性逆轉了由eATP抑制之人類CD8 ⁺T細胞增殖。

按照實施例3.2中所述相似的方法，藉由FACS在不同細胞上偵測了人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1之結合親和力。

圖12A至12E示出抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1分別對SK-MEL-5 (圖12A)、SK-MEL-28 (圖12B)、MOLP-8 (圖12C)、CHOK1-cynoCD39 (圖12D)及CHOK1-mCD39 (圖12E)之結合親和力。平行偵測了參考抗體T895及I394作為對照抗體。如圖12所示及表23所示，抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1均以劑量依賴性方式結合表現人類CD39及食蟹猴CD39之細胞，且在亞奈莫耳或奈莫耳水準上具有相似的EC ₅₀親和力。其均未在FACS研究中識別出小鼠CD39。每種抗體在細胞之間的最大信號(平均螢光強度，MFI)不同可能係由於其表現量不同所致。表 23 ：藉由 FACS 偵測抗體親和力 EC _{50 (} nM)

細胞	hu23.H5L5	hu14.H1L1	T895	I394
SK-MEL-5	0.69	7.88	0.21	0.49
SK-MEL-28	0.99	29.14	0.36	0.94
MOLP-8	0.14	0.35	0.11	0.11
CHO-K1/cynoCD39	3.375	ND	4.192	2.708
CHO-K1/mCD39	ND	ND	ND	ND

ND：在該實驗條件下偵測不到。

圖13顯示hu23.H5L5阻斷了SK-MEL-5細胞(圖13A)或MOLP-8細胞(圖13B)上之CD39 ATP酶活性，與參考抗體T895及I394之結果相似(方法如實例3.3所述)。結果總結在表24中。

hu23.H5L5在SK-MEL-5細胞中顯示酶促阻斷IC ₅₀值為70 pM，在MOLP-8細胞中顯示酶促阻斷IC ₅₀值為330 pM，其與參考抗體T895及I394相似或比參考抗體T895及I394稍好。在該偵測中9-8B被鑑定為非阻斷劑。表 24 ：人源化抗體之 ATP 酶活性抑制 (IC ₅₀ ) (nM)

IC ₅₀(nM)	hu23.H5L5	T895	I394	9-8B
SK-MEL-5	0.07	0.09	0.10	ND
MOLP-8	0.33	0.51	0.21	ND

ND：在該實驗條件下偵測不到。

5.5.2 hu23.H5L5 對 CD39 之阻斷增強了 ATP 介導之單核球活化。

亦在ATP介導之單核球活化測定中偵測了人源化抗體hu23.H5L5。ATP介導之促炎活性在調節多種免疫細胞類型(包含單核球)之功能中具有重要作用。為了評估CD39阻斷是否可增強ATP介導之單核球活化，自人類健康血液中純化出人類單核球，然後在存在ATP之情況下，將抗CD39抗體以0.2nM至100nM之不同濃度進行培養。顯示hu23.H5L5可在0.2nM之濃度(亦即，最低偵測濃度)下有效誘導單核球活化。藉由FACS分析分析CD80 (圖14A)、CD86 (圖14B)及CD40 (圖14C)之表現來評估單核球之活化(hu23.H5L5之濃度為50nM)。參考抗CD39抗體I394及T895用作對照，hIgG4用作同型對照。

結果顯示在圖14中。單獨刺激ATP證明了CD80及CD86之表現上調，表明單核球活化。人源化抗CD39抗體hu23.H5L5進一步增強了ATP介導之單核球活化，這由CD80、CD86及CD40之上調所證明，其水準與參考抗體I394相當。參考抗體T895對ATP誘導之活化單核球無顯著影響。

5.5.3 hu23.H5L5 對 CD39 之阻斷增強了 ATP 介導之 DC 活化。

亦在ATP介導之DC活化測定中偵測了所選人源化抗體hu23.H5L5 (按照與實例4.2中所述類似的方法)。簡言之，藉由FACS測定法分析CD83表現來評估DC成熟。ATP藉由顯示CD83之表現增加來誘導DC成熟(圖15A)。自低至0.2nM之水準開始，hu23.H5L5以劑量依賴性方式增加CD83之表現，且在抗體水準為0.6nM時，hu23.H5L5顯著增加CD83之表現。其比參考抗體T895及I394中之任一者更有效。

為了進一步評估ATP介導之DC活化對T細胞活化的影響，洗滌ATP活化之DC，然後與同種異體T細胞一起培養以進行混合淋巴細胞反應(MLR)。分析了T細胞增殖(圖15B)及由經活化T細胞產生之IFN-γ(圖15C)。

與參考抗體I394及T895相比，抗CD39抗體hu23.H5L5對促進ATP誘導之DC成熟具有劑量依賴性及顯著地影響，參考I394顯示出相似但稍弱的活性，而T895之作用非常輕微。同樣，如圖15B及15C中所示，在MLR分析中，抗CD39阻斷抗體hu23.H5L5增強了ATP介導之MoDC成熟，導致更高的T細胞增殖及IFN-γ產生。

5.5.4 hu23.H5L5 對 CD39 之阻斷促進了由 LPS 刺激誘導之人類巨噬細胞 IL1β 釋放。

自健康人類PBMC中分離人類CD14 ⁺T細胞，然後以2×10 ⁶/孔之密度將富集的CD14 ⁺單核球接種至6孔盤，且與100 ng/mL人類GM-CSF一起培養6天，產生M1樣巨噬細胞。用劑量增加的hu23.H5L5或參考抗體I394處理體外分化之巨噬細胞1小時，然後用10 ng/mL LPS刺激3小時，然後加入800 µM ATP培養2小時。用ELISA定量細胞培養上清液中之IL-1β。

結果如圖20所示。星號表示各別條件之間的顯著性差異。如圖20所示，hu23.H5L5顯著促進了由LPS刺激誘導之人類巨噬細胞IL1β釋放，且在促進由LPS刺激誘導之人類巨噬細胞IL1β釋放方面，hu23.H5L5表現出比參考抗體I394顯著更高的活性。

5.6 活體內研究

根據實例4.2中描述之方法，在MOLP-8異種移植小鼠上測定了人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1之作用。

結果顯示於圖16中，與媒劑組相比，所有抗CD39抗體均抑制腫瘤生長。I394觀察到的功效略弱於其他抗體，包含hu23.H5L5及hu14.H1L1。

根據實例4.2中描述之方法，亦在PBMC移植動物模型(NCG小鼠，接種MOLP-8細胞，5M/小鼠)中考察了不同劑量(0.03 mg/kg、0.3 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg，腹膜內給藥，每週兩次，6個劑量)之人源化抗體hu23.H5L5之抗腫瘤作用。

結果顯示於圖21中。如圖21所示，人源化抗體hu23.H5L5在測試之所有劑量下均能有效地抑制腫瘤生長。

發明人亦確定抗CD39抗體之抗腫瘤作用是否依賴於NK細胞或巨噬細胞。在第7天開始抗-脫唾液酸-GM1 NK耗竭處理，20μl/小鼠腹膜內給藥，每5天一次。在第7天及第9天亦開始氯膦酸鹽脂質體之巨噬細胞耗竭處理，200μl/小鼠靜脈內給藥，每週一次。血液樣品分析資料表明該試劑可顯著移除單核吞噬細胞或NK。

在NK細胞(圖17)或巨噬細胞(圖18)耗竭之模型中，hu23.H5L5之腫瘤生長抑制作用被消除，表明抗CD39抗體之抗腫瘤作用依賴於NK細胞及巨噬細胞。

具體地，如圖17所示，與媒劑相比，抗-脫唾液酸-GM1在晚期階段略微增強了腫瘤生長。且與hu23.H5L5處理組相比，hu23.H5L5與抗-脫唾液酸-GM1之組合完全消除了hu23.H5L5之腫瘤生長抑制作用。如圖18所示，與媒劑相比，氯膦酸鹽脂質體對腫瘤生長無影響。但是，氯膦酸鹽脂質體處理完全消除了hu23.H5L5之腫瘤生長抑制作用。實例 6. 抗原決定基作圖

為了確定抗CD39抗體之抗原決定基，發明人設計了CD39突變體且用人類CD39分子表面上暴露之胺基酸之取代來定義。將突變體選殖至融合有C末端EGFP序列之表現載體，且轉染至HEK-293F細胞，如下表25中所示。使用UniProtKB - P49961 (ENTP1_HUMAN)之編號來表示目標胺基酸突變，UniProtKB - P49961 (ENTP1_HUMAN)為人類CD39之野生型胺基酸序列，其序列如SEQ ID NO: 162所示。例如，V77G表示SEQ ID NO: 162之位置77之纈胺酸經甘胺酸替換。表 25 ：人類 CD39 突變體

突變體代號	取代
KW27-1	V77G、H79Q、Q444K、G445D
KW27-2	V81S、E82A、R111A、V115A
KW27-3	E110A、R113T、E114A
KW27-4	R118A、S119A、Q120K、Q122H、E123A
KW27-5	D150A、E153S、R154A、S157K、N158A、L278F
KW27-6	Q96A、N99A、E143A、R147E
KW27-7	K188R、190-206 (SQKTRWFSIVPYETNNQ)經KTPGGS替換
KW27-8	A273S、N275A、I277S、R279A
KW27-9	S294A、K298G、K303A、E306A、T308K、Q312A
KW27-10	K288E、K289A、V290A、E315R
KW27-11	Q354A、D356S、E435A、H436Q
KW27-12	H428A、T430A、A431D、D432A
KW27-13	N371K、L372K、E375A、K376G、V377S
KW27-14	K388N、Q392K、P393S、E396A
KW27-15	A402P、G403A、K405A、E406A
KW27-16	K5A、E100A、D107A
KW27-17	Q323A、Q324A、Q327A、E331K
KW27-18	N334A、S336A、Y337G、N346A
KW27-19	Q228A、I230S、D234A、Q238A
KW27-20	R138A、M139A、E142K
KW27	SEQ ID NO: 162 (野生型人類CD39) MEDTKESNVK TFCSKNILAI LGFSSIIAVI ALLAVGLTQN KALPENVKYG IVLDAGSSHT SLYIYKWPAE KENDTGVVHQ VEECRVKGPG ISKFVQKVNE IGIYLTDCME RAREVIPRSQ HQETPVYLGA TAGMRLLRME SEELADRVLD VVERSLSNYP FDFQGARIIT GQEEGAYGWI TINYLLGKFS QKTRWFSIVP YETNNQETFG ALDLGGASTQ VTFVPQNQTI ESPDNALQFR LYGKDYNVYT HSFLCYGKDQ ALWQKLAKDI QVASNEILRD PCFHPGYKKV VNVSDLYKTP CTKRFEMTLP FQQFEIQGIG NYQQCHQSIL ELFNTSYCPY SQCAFNGIFL PPLQGDFGAF SAFYFVMKFL NLTSEKVSQE KVTEMMKKFC AQPWEEIKTS YAGVKEKYLS EYCFSGTYIL SLLLQGYHFT ADSWEHIHFI GKIQGSDAGW TLGYMLNLTN MIPAEQPLST PLSHSTYVFL MVLFSLVLFT VAIIGLLIFH KPSYFWKDMV

簡言之，藉由基因合成產生人類CD39突變體，且選殖至表現載體pCMV3-GFPSpark。製備包含經確證的突變體序列之載體，且轉染至HEK293F細胞。轉染後3天，收集細胞且偵測EGFP以確認轉基因表現。在產生之20種突變體中藉由FACS測試一系列劑量(自100 nM開始，3倍稀釋，11個點)之抗體，且用AlexFluor647標記之抗hIgG染色。將抗體結合描述為AlexFluor647強度除以GFP強度之相對結合。結果顯示於圖22中。

如圖22中所示，人源化抗體hu23.H5L5與突變體KW27-6及KW27-20失去結合，但並未與其他突變體失去結合。突變體KW27-6在殘基Q96、N99、E143及R147處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於hu23.H5L5之核心抗原決定基係至關重要的；突變體KW27-20在殘基R138、M139及E142處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於hu23.H5L5之核心抗原決定基亦為至關重要的。

如圖22中所示，嵌合抗體c34與突變體KW27-16失去結合，但並未與其他突變體失去結合。突變體KW27-16在殘基K5、E100及D107處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於c34之核心抗原決定基係至關重要的。

如圖22中所示，嵌合抗體c35與突變體KW27-2失去結合，但並未與其他突變體失去結合。突變體KW27-2在殘基V81、E82、R111及V115處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於c35之核心抗原決定基係至關重要的。

如圖22中所示，參考抗體T895與突變體KW27-20失去結合，但並未與其他突變體失去結合。突變體KW27-20在殘基R138、M139及E142處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於T895之核心抗原決定基係至關重要的。

如圖22中所示，參考抗體I394與突變體KW27-6及KW27-20失去結合，但並未與其他突變體失去結合。突變體KW27-6在殘基Q96、N99、E143及R147處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於I394之核心抗原決定基係至關重要的；突變體KW27-20在殘基R138、M139及E142處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於I394之核心抗原決定基亦為至關重要的。

如圖22中所示，參考抗體9-8B與突變體KW27-6失去結合，但並未與其他突變體失去結合。突變體KW27-6在殘基Q96、N99、E143及R147處有胺基酸取代，表明該突變體之上述殘基中之一或多者或全部對於9-8B之核心抗原決定基係至關重要的。實例 7. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子之構築及表現

抗CD39/TGFβ陷阱分子構建為在抗CD39抗體部分之重鏈及/或輕鏈之N-末端或C-末端連接至TGFβ受體II ECD (TGFβRII ECD)之抗CD39抗體部分。可撓性(Gly ₄Ser) ₃連接子與TGFβRII ECD之N-末端基因相連。構建了幾個抗CD39/TGFβ陷阱分子，其TGFβRII ECD莫耳比及在抗CD39抗體部分上之位置不同，其示意圖分別如圖24A-G所示。可藉由類似方式產生包含與TGFβ受體I ECD (TGFβRI ECD)或TGFβ受體III ECD (TGFβRIII ECD)連接之抗CD39抗體部分之抗CD39/TGFβ陷阱分子，在本申請中未示出。

抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1包含一個抗CD39抗體部分(亦即hu23.H5L5)及兩個TGFβRII ECD (亦即SEQ ID NO: 164)，其中，抗CD39抗體部分之各重鏈恆定區之C-末端分別連接一個TGFβRII ECD (圖24A)。

抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-2包含一個抗CD39抗體部分(亦即hu23.H5L5)及四個TGFβRII ECD (亦即SEQ ID NO: 164)，其中，抗CD39抗體部分之各重鏈恆定區之C-末端分別連接兩個TGFβRII ECD (圖24B)。

抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-3包含一個抗CD39抗體部分(亦即hu23.H5L5)及四個TGFβRII ECD (亦即SEQ ID NO: 164)，其中，抗CD39抗體部分之各重鏈可變區之N-末端分別連接兩個TGFβRII ECD (圖24C)。

抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-4包含一個抗CD39抗體部分(亦即hu23.H5L5)及四個TGFβRII ECD (亦即SEQ ID NO: 164)，其中，抗CD39抗體部分之各輕鏈可變區之N-末端分別連接兩個TGFβRII ECD (圖24D)。

抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-5包含一個抗CD39抗體部分(亦即hu23.H5L5)及四個TGFβRII ECD (亦即SEQ ID NO: 164)，其中，抗CD39抗體部分之各重鏈可變區之N-末端分別連接一個TGFβRII ECD，且抗CD39抗體部分之各輕鏈可變區之N-末端分別連接一個TGFβRII ECD (圖24E)。

抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-6包含一個抗CD39抗體部分(亦即hu23.H5L5)及四個TGFβRII ECD (亦即SEQ ID NO: 164)，其中，抗CD39抗體部分之各輕鏈恆定區之C-末端分別連接兩個TGFβRII ECD (圖24F)。

抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-7包含一個抗CD39抗體部分(亦即hu23.H5L5)及六個TGFβRII ECD (亦即SEQ ID NO: 164)，其中，抗CD39抗體部分之各重鏈恆定區之C-末端分別連接一個TGFβRII ECD，且抗CD39抗體部分之各輕鏈恆定區之C-末端分別連接兩個TGFβRII ECD (圖24G)。

對於表現，使用在相同表現載體或單獨表現載體中編碼輕鏈及重鏈之DNA轉染CHO細胞進行轉染。收集培養基，用蛋白A瓊脂糖管柱純化融合蛋白。實例 8. 用 ELISA 測定抗 CD39/TGFβ 陷阱分子與 TGFβ 之結合

為確定抗CD39/TGFβ陷阱分子之結合能力及特異性，使用人類TGFβ1、人類TGFβ2、人類TGFβ3以及小鼠TGFβ1進行ELISA分析。測試抗原以1μg/ml之濃度塗覆在NUNC 96孔免疫盤上。使用PBT緩衝液中稀釋之抗人類Fc抗體-辣根過氧化物酶結合物量測濃度逐漸增加的抗CD39/TGFβ陷阱分子之結合，然後用TMB受質顯影。使用可溶性TGFβ陷阱作為對照。如圖25A-25C所示，抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2與所有三種TGFβ同系物(人類TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3)結合。其他所測試抗CD39/TGFβ陷阱分子(包含ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)之結果相似，未在本申請中示出。人類TGFβ1之EC ₅₀在下表26中列出。此外，抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1與小鼠TGFβ1之結合及與人類TGFβ1之結合親和性類似(圖25D)。表 26 ：抗 CD39/TGFβ 陷阱分子與人類 TGFβ1 之結合 EC ₅₀

抗CD39/TGFβ 陷阱	ES014-1	ES014-2	ES014-3	ES014-4
EC ₅₀(nM)	0.26	0.26	0.24	0.11
抗CD39/TGFβ 陷阱	ES014-5	ES014-6	ES014-7	TGFβRII
EC ₅₀(nM)	0.09	0.07	0.09	0.017

實例 9. TGFβ 及 TGFβR 阻斷測定實驗

對於阻斷測定實驗，將TGFβ肽(TGFβ1)塗覆在微孔盤上。純化抗體之系列稀釋液與重組TGFβRII-His蛋白(Sinobiogical)在TGFβ1塗層盤中培養1h。洗滌後，藉由抗His-HRP結合之二抗偵測剩餘之TGFβRII-His。在微量滴定盤讀取器(Molecular Devices Corp)上讀取450 nm處之吸光度值，以定量TGFβRII His與TGFβ1之結合。所有測試之抗CD39/TGFβ陷阱分子(亦即ES014-1、ES014-2、ES014-3、ES014-6)均能有效阻斷人類TGFβ1與TGFβ受體TGFβRII之結合(圖26，可溶性TGFβ陷阱(亦即TGFβRII)用作對照)。使用GraphPad Prism分析抗CD39/TGFβ陷阱分子之IC ₅₀值。含有四個TGFβRII ECD之抗CD39/TGFβ陷阱分子(如ES014-2、ES014-3及ES014-6)比含有兩個TGFβRII ECD之抗CD39/TGFβ陷阱分子(如ES014-1)更有效(表27)。表 27 ：抗 CD39/TGFβ 陷阱分子對人類 TGFβ1 及 TGFβRII 之阻斷 IC ₅₀

抗CD39/TGFβ 陷阱	ES014-1	ES014-2	ES014-3	ES014-6	TGFβRII
IC ₅₀(nM)	3.73	1.29	0.93	1.09	0.58

實例 10. 用 FACS 測定抗 CD39/TGFβ 陷阱分子與 CD39 之結合

用洗滌緩衝液洗滌過表現CD39之約100,000個MOLP-8骨髓瘤細胞，且用100μl系列稀釋之抗CD39/TGFβ陷阱分子在冰上培養30分鐘。然後用洗滌緩衝液洗滌細胞兩次，且在冰上與100μl抗人類Fc-PE培養30分鐘。然後用洗滌緩衝液洗滌細胞兩次，且在FACS Canto II分析儀(BD Biosciences)上進行分析。如圖27A所示，所有測試之抗CD39/TGFβ陷阱分子(例如ES014-1、ES014-2、ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)以劑量依賴性方式與MOLP-8細胞結合。如圖27B所示，ES014-1以劑量依賴性方式與CHOK1/hCD39細胞結合。其他測試之抗CD39/TGFβ陷阱分子(例如ES014-2、ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)與CHOK1/hCD39細胞之結合特徵相似，未在本申請中顯示。實例 11. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子與 CD39 及 TGFβ1 同時結合

CD39/His蛋白(Sino Biological)-塗層盤或CHO-K1/hCD39細胞與ES014-1、抗CD39抗體或TGFβ陷阱對照之連續稀釋液一起培養，然後與生物素化TGFβ1一起培養。使用鏈黴親和素-辣根過氧化物酶或鏈黴親和素-異硫氰酸螢光素評估結合。在450nm處讀取光密度(OD)。資料為平均值±SD，示出非線性最佳擬合(n=2個技術重複)。結果如圖28所示。如圖28所示，代表性抗CD39/TGFβ陷阱分子(ES014-1)能夠分別藉由ELISA偵測(圖28A)及FACS偵測(圖28B)偵測到同時與CD39及TGFβ結合。其他所測試抗CD39/TGFβ陷阱分子(例如ES014-2、ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)之結果相似，未在本申請中顯示。實例 12. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子抑制 TGFβ 信號

使用HEK-Blue™ TGF-β報告細胞分析(InvivoGen)來評估抗CD39/TGFβ陷阱分子對經典TGFβ信號傳導的影響。抗CD39/TGFβ陷阱分子或抗CD39之系列稀釋液與HEK-Blue ™ TGF-β報告細胞在重組人類TGF-β1 (5 ng/ml)存在下培養24小時。在轉染HEK293細胞之TGF-β SMAD報導分析中，抗CD39/TGF-β陷阱分子(但不是抗CD39)阻斷TGF-β經典信號[半最大抑制濃度(IC ₅₀)=32 pM](圖29A)。此外，用CD39蛋白預培養抗CD39/TGFβ陷阱分子不會影響抗CD39/TGFβ陷阱分子之TGF-β中和活性(圖29B)。圖29A及29B示出代表性抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1之結果。其他所測試抗CD39/TGFβ陷阱分子(例如ES014-2、ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)之結果相似，未在本申請中顯示。實例 13. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子對惡性細胞 CD39 活性之影響

使用CellTiterGlo(CTG)分析測定抗CD39/TGFβ陷阱分子抑制惡性細胞株上CD39酶活性之能力。簡言之，用抗CD39/TGFβ陷阱分子、抗CD39抗體或對照抗體及100μM ATP處理細胞60分鐘。使用CellTiterGlo螢光分析套組(Promega)量測剩餘ATP水準。本分析使用MOLP-8 (人類多發性骨髓瘤細胞株)或CHO/hCD39細胞。如圖30A-B所示，用一定濃度之抗CD39/TGFβ陷阱分子或對照抗體處理MOLP-8細胞(如圖所示)，在ATP存在之情況下導致測試分子ES014-1、ES014-2及ES014-6對CD39活性之劑量依賴性抑制。CD39活性抑制由ATP殘留程度確定，且以抑制率(%)表示。如下表28所列出之IC ₅₀，ES014-1、ES014-2及ES014-6顯示出強烈抑制活性(奈莫耳IC ₅₀)。如圖30C所示，用一系列濃度之例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1或對照抗體處理CHO/hCD39細胞(如圖所示)，在ATP存在之情況下導致所有測試抗體對CD39活性之劑量依賴性抑制。使用一定濃度範圍內之其他測試抗CD39/TGFβ陷阱分子(例如ES014-2、ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)處理CHO/hCD39細胞得到的結果相似，未在本申請中示出。表 28 ：抗 CD39/TGFβ 陷阱分子對 MOLP-8 細胞上之 CD39 ATP 酶活性之 IC ₅₀

抗CD39/TGFβ 陷阱	ES014-1	ES014-2	ES014-6	CD39
IC ₅₀(nM)	1.21	3.42	6.9	0.2641

實例 14. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子之結合親和性

根據製造商手冊使用Octet分析(ForeBio)分別對代表性抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1與人類TGFβ1或CD39之結合親和性進行表徵。簡言之，將抗體偶聯在感測器上，然後將感測器浸入TGFβ或CD39蛋白梯度中(自200nM開始，稀釋2倍，共8個劑量)。其結合反應為實時量測，且對結果進行全局擬合。測試分子ES014-1之親和性資料彙總如下表29所示。其他測試分子(例如ES014-2、ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)之親和性資料相似，且未在本文中示出。表 29 ： Octet 分析偵測之雙特異性抗體 ES014-1 對人類 TGFβ1 及 CD39 之結合親和性

結合靶點	K _D(M)	kon (1/Ms)	kdis (1/s)
TGFβ1	3.70E-11	6.32E+06	2.34E-04
CD39	3.76E-10	9.14E+04	3.44E-05

實例 15. Treg 抑制分析

由於Treg為TGFβ之主要分泌源，且CD39在Treg及DC上表現，因此使用Treg抑制分析偵測抗CD39/TGFβ陷阱分子對抗Treg介導之T細胞抑制之相對能力。簡言之，在自PBMC分離之自體CD4 ⁺/CD25 ⁺天然Tregs(NTREG)存在下，將自人類PBMC分離之CD3 ⁺總T細胞添加至用IL-4及GM-CSF刺激之同種異體DC中，且在存在IL-2、抗CD3/CD28及雷帕黴素(以1:1:10之比例)之X-vivo培養基中擴增。

使用抗CD39/TGFβ陷阱分子、抗CD39抗體、可溶性TGFβ陷阱或抗CD39抗體與TGFβ陷阱之組合培養此等混合淋巴細胞3天後，藉由使用CFSE細胞示蹤劑量測CD4+及CD8+T細胞增殖及使用HTRF(Cisbo)測定IFNγ分泌來評估T細胞之功能。正如所預期，添加自體Treg抑制了由同種DC觸發之T細胞活化(圖31A)。代表性抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1比抗CD39抗體、可溶性TGFβ陷阱或其組合更有效地對抗自體Treg存在時Treg介導之抑制及恢復T細胞活化(圖31B-D)。此等資料表明，在恢復T細胞功能方面，抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1比抗CD39抗體、可溶性TGFβ陷阱或其組合更有效。其他測試分子(例如ES014-2、ES014-3、ES014-4、ES014-5、ES014-6、ES014-7)亦顯示出類似效果(資料未示出)。實例 16. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子在無刺激時抑制人類 T 細胞凋亡

將2×10 ⁴個經純化PMBC總CD3 ⁺T細胞培養隔夜，且與抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2、TGFβR死亡突變體ES014_v2、抗CD39死亡突變體ES014_v1及雙陰性突變體ES014_v3以等莫耳濃度培養隔夜。根據製造商說明書，藉由流式細胞儀用APC標記之膜聯蛋白V及PI來量測人類T細胞凋亡。

如圖32A及圖32B所示，與TGFβR死亡突變體ES014_v2、抗CD39死亡突變體ES014_v1及雙陰性突變體ES014_v3相比，抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2以劑量依賴性方式抑制人類T細胞凋亡。實例 17. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子在有刺激時促進人類 T 細胞存活及活化

將5×10 ³個經純化總CD3 ⁺T細胞與相同莫耳之抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2、抗CD39抗體ES014_v2、TGFβ陷阱ES014_v1、組合(ES014_v2及ES014_v1)及雙突變抗體ES014_v3作為對照，在抗CD3及抗CD28珠粒刺激下共同培養4天。藉由測定live-dead染色之T存活率、celltrace標記之T細胞增殖、CD25表現之T活化及細胞介素產生來量化T細胞功能。

如圖33A所示，除抗CD39/TGFβ陷阱分子組外，所有組中均在具有抗CD3/CD28刺激之情況下出現多數死亡細胞。此外，抗CD39/TGFβ陷阱分子組中之活細胞維持較高細胞增殖及活化(圖33A)，以及IL-2及IFN-γ產生(圖33B)。此等資料表明，抗CD39/TGFβ陷阱分子比抗CD39抗體、TGFβ陷阱或其組合在T細胞過度活化中更有效。實例 18. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子阻斷 TGFβ 誘導之 Foxp3 在總 T 細胞上之表現

將5×10 ⁴個經純化T細胞用相同莫耳之抗CD39/TGFβ陷阱分子(ES014-1及ES014-2)、抗CD39抗體(ES014_v2)、TGFβ陷阱(ES014_v1)、組合(ES014_v2+ES014_v1)及對照抗體(ES014_v3)在抗CD3及抗CD28珠粒刺激下預處理30min，且添加10ng/ml TGFβ。在TGF-β處理4天後量測Treg分化。

如圖34A及34B所示，使用抗CD39/TGFβ陷阱分子(ES014-1及ES014-2)、TGFβ陷阱(ES014_v1)及組合(ES014_v2+ES014_v1)處理與使用培養基、抗CD39 (ES014_v2)及對照抗體(ES014_v3)處理相比，前者可阻斷CD4 ⁺及CD8 ⁺T細胞上TGFβ誘導之Foxp3表現。值得注意的是，經抗CD39/TGFβ陷阱分子(尤其是抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1)處理組之阻斷效果比經TGFβ陷阱(ES014_v1)及組合(ES014_v2+ES014_v1)處理組之阻斷效果顯示出更好活性。實例 19. 抗 CD39/TGFβ 陷阱分子恢復 ATP 誘導的對人類 T 細胞增殖之抑制

將5×10 ⁴個經純化T細胞用celltrace violet標記，且用抗CD39/TGFβ陷阱分子(ES014-1及ES014-2)、抗CD39抗體(ES014_v2)、TGFβ陷阱(ES014_v1)、組合(ES014_v2+ES014_v1)及對照抗體(ES014_v3)在抗CD3及抗CD28珠粒刺激下預處理隔夜。第1天，添加200μM ATP，且在用ATP處理3天後量測T增殖。如圖35A及35B所示，用抗CD39/TGFβ陷阱分子(ES014-1及ES014-2)、抗CD39抗體(ES014_v2)及組合(ES014_v2+ES014_v1)處理與用培養基、TGF-β陷阱(ES014_v1)及對照抗體(ES014_v3)處理相比，前者能逆轉ATP誘導的對CD4 ⁺及CD8 ⁺T增殖之抑制。恢復的T細胞增殖結果顯示，抗CD39/TGF-β陷阱分子具有阻斷CD39活性之作用，其與ATP酶抑制活性結果一致。

圖1示出抗CD39單株抗體mAb21及mAb23對ATP介導之T細胞增殖抑制之阻斷。mIgG2a被用作同型對照抗體。

圖2示出抗CD39嵌合抗體c14、c19、c21及c23對ATP介導之T細胞增殖抑制之阻斷。hIgG4係指人類IgG4同型對照抗體。

圖3示出樹突細胞(DC)上之CD39表現量。

圖4A至圖4C示出抗CD39嵌合抗體c14、c19、c21及c23對ATP介導之DC活化，如藉由使用FACS之CD86 (圖4A)、CD83 (圖4B)及HLA-DR (圖4C)表現所測定。

圖5示出在用MOLP-8細胞(人類多發性骨髓瘤細胞株)接種之小鼠中，用抗CD39嵌合抗體c23-hIgG4及c23-hIgG1處理之後的腫瘤生長。

圖6A分別示出人源化抗體hu23.H5L5與ENTPD1 (亦即CD39)、ENTPD2 (亦即CD39L1)、ENTPD3 (亦即CD39L3)、ENTPD5 (亦即CD39L4)及ENTPD6 (亦即CD39L2)蛋白之結合特性。圖6B分別示出陰性對照hIgG4與ENTPD1 (亦即CD39)、ENTPD2 (亦即CD39L1)、ENTPD3 (亦即CD39L3)、ENTPD5 (亦即CD39L4)及ENTPD6 (亦即CD39L2)蛋白之結合。

圖7A及圖7B示出根據FACS之c23人源化抗體與MOLP-8細胞之結合活性。

圖8示出c23人源化抗體(藉由酵母展示獲得)與MOLP-8細胞之結合活性。

圖9A及圖9B示出根據FACS之c23人源化抗體對SK-MEL-28細胞之ATP酶抑制。

圖10A至圖10C示出根據FACS之c14人源化抗體與MOLP-8細胞之結合活性。

圖11A至圖11D示出人源化抗體hu23.H5L5在PBMC中對ATP介導之T細胞之活化，如藉由IL-2 (圖11A)、IFN-γ (圖11B)、CD4 ⁺T細胞增殖(圖11C)及CD8 ⁺T細胞增殖(圖11D)所測定。

圖12A至圖12E示出根據FACS之人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1與SK-MEL-5細胞(圖12A)、SK-MEL-28細胞(圖12B)、MOLP-8細胞(圖12C)、CHOK1-cynoCD39細胞(圖12D)及CHOK1-mCD39細胞(圖12E)之結合活性。

圖13A至圖13B示出人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1對SK-MEL-5細胞(圖13A)及MOLP-8細胞(圖13B)之ATP酶抑制活性。

圖14A至圖14C示出抗CD39人源化抗體hu23.H5L5對ATP介導之單核球之活化，如藉由CD80 (圖14A)、CD86 (圖14B)及CD40 (圖14C)表現所測定。

圖15示出人源化抗體hu23.H5L5增加ATP介導之DC活化，如藉由CD83表現(圖15A)及增強之T細胞增殖(圖15B)及T細胞活化(圖15C)所測定。

圖16示出人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1在MOLP-8異種移植小鼠中對腫瘤生長之抑制。

圖17示出抗CD39人源化抗體hu23.H5L5在NK耗竭之MOLP-8異種移植小鼠中對腫瘤生長之抑制。

圖18示出抗CD39人源化抗體hu23.H5L5在巨噬細胞耗竭之MOLP-8異種移植小鼠中對腫瘤生長之抑制。

圖19A示出人源化抗體hu23.H5L5及hu14.H1L1與參考抗體之抗原決定基分組結果。圖19B示出所測試抗體之抗原決定基分組。

圖20示出人源化抗CD39抗體hu23.H5L5對由LPS刺激誘導之人類巨噬細胞IL1β釋放的影響。

圖21示出不同劑量(0.03 mg/kg、0.3 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg)之人源化抗體hu23.H5L5在PBMC移植小鼠中對腫瘤生長之抑制。

圖22示出人源化抗體hu23.H5L5、嵌合抗體c34及c35以及參考抗體T895、I394及9-8B之抗原決定基作圖結果。

圖23A至23C示出人源化抗體hu23.H5L5逆轉由細胞外ATP抑制之CD8 ⁺T細胞增殖，如藉由T細胞增殖(圖23A)、CD25 ⁺細胞(圖23B)及活細胞數量(圖23C)所測定。

圖24A至24G示出本發明之例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之示意圖。

圖25A至25D分別示出例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子對人類TGFβ1 (圖25A)、人類TGFβ2 (圖25B)、人類TGFβ3 (圖25C)及小鼠TGFβ1 (圖25D)之結合特性。

圖26示出例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子對人類TGFβ1及TGFβRII之阻斷分析結果。

圖27A及27B分別示出用MOLP-8細胞(圖27A)及CHOK1細胞(圖27B)根據FACS之例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子對人類CD39之結合活性。

圖28A及28B分別示出根據ELISA (圖28A)及FACS (圖28B)之例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子對人類CD39及TGFβ1之同時結合活性。

圖29A示出在轉染HEK293之細胞中例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子之TGFβ報導分析結果。圖29B示出例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子在不同CD39蛋白：抗CD39/TGFβ陷阱分子比率下預培養時之TGFβ中和活性。

圖30A至30C分別示出例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子在MOLP-8細胞(圖30A及30B)及CHO細胞(圖30C)上之ATP酶抑制活性。

圖31A示出向同種異體DC誘導之自體T細胞中添加Treg可抑制T細胞之IFN-γ分泌。圖31B至31D示出例示性抗CD39/TGFβ陷阱分子對Treg介導之人類T細胞抑制的影響，藉由CD4 ⁺T細胞增殖% (圖31B)、CD8 ⁺T細胞增殖% (圖31C)及IFN-γ分泌改變(圖31D)測定。

圖32提供了一個圖表，該圖表描繪了用相同莫耳之抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2、抗CD39抗體ES014_v2、TGFβ陷阱ES014_v1及對照抗體ES014_v3處理之人類T細胞之凋亡抑制百分比，如圖所示。圖32A示出總T細胞早期凋亡百分比，其中x軸表示抗體及濃度，y軸表示早期T細胞凋亡之百分比(%) (膜聯蛋白V ⁺PI ^-)。圖32B示出總T細胞晚期凋亡之百分比，其中x軸表示抗體及濃度，y軸表示晚期T細胞凋亡之百分比(%) (膜聯蛋白V ⁺PI ⁺)。

圖33提供一個圖表，該圖表描繪用相同莫耳之抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2、抗CD39抗體ES014_v2、TGFβ陷阱ES014_v1及對照抗體ES014_v3處理之T細胞功能，如圖所示。圖33A示出細胞活力及細胞活化之FACS，圖33B示出上清液中之IL-2及IFN-γ產生。

圖34提供一個圖表，該圖表描繪用抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2、抗CD39抗體ES014_v2、TGFβ陷阱ES014_v1及對照抗體ES014_v3處理之T細胞上之Foxp3表現，如圖所示。圖34A示出CD4 ⁺T細胞上之Foxp3表現百分比，且圖34B示出CD8 ⁺T細胞上之Foxp3表現百分比。

圖35提供一個圖表，該圖表描繪用抗CD39/TGFβ陷阱分子ES014-1及ES014-2、抗CD39抗體ES014_v2、TGFβ陷阱ES014_v1及對照抗體ES014_v3處理之總T細胞之百分比(%)，如圖所示。圖35A示出CD4 ⁺T細胞之百分比(%)，且圖35B示出CD8 ⁺T細胞之百分比(%)。


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                 中國大陸商科望（上海）生物醫藥科技有限公司(Elpiscience Biopharma, Ltd.)
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          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gln Asn Gly His Ser Leu Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Trp Gln Gly Thr Leu Phe Pro Trp Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Gln Gln Arg Ile Thr Tyr Pro Phe Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Ala Gln Leu Leu Glu Leu Pro His Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Gln Ile Arg Leu Asn Pro Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Gln Ile Arg Leu Asn Pro Asp Asn Tyr Ala Thr His Phe Ala Glu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          His Gly Ser Arg Gly Phe Ala Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          His Gly Thr Arg Gly Phe Ala Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Leu Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Lys Gly Ile Tyr Tyr Asp Tyr Val Trp Phe Phe Asp Val Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Lys Tyr Gly Thr His Tyr Ala Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Ile Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Thr Gln Leu Asp Leu Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Glu Val Lys Leu Glu Lys Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Gln Ile Arg Leu Asn Pro Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Tyr Lys Asn Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Val Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Gly Ile Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Gln His Gly Ser Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Glu Val Lys Leu Glu Lys Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Gln Ile Arg Leu Asn Pro Asp Asn Tyr Ala Thr His Phe Ala Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Glu His Gly Thr Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Glu 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Leu Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Leu Arg Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Leu Ile Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser His Asn Val Gly Thr Asn 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Thr Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys His Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Glu Ile Gln Val Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asn Met Tyr Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ile Tyr Gly Tyr Asp Asp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Glu Val Arg Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Glu Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Val His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ile Asp Asn Ser Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Val Ser Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Leu Tyr Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
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          <![CDATA[<400>  51]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Thr Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Lys Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          His Tyr Thr Ser Thr Leu Leu Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln Tyr Ser Asn Leu Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
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          <![CDATA[<400>  52]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Ser Asn Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Leu Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg 
                      100                 105         
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          <![CDATA[<400>  53]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro His Thr Met Ser Ile Thr Ile Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Arg Thr His Leu Asn Trp Leu Phe Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr Leu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Ile Thr Ile Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Arg Thr His Leu Asn Trp Phe Phe Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr Leu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Arg Thr Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Val Pro Leu Asn Gly Gly Ser Thr Phe Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asn Thr Ser Ser Arg Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ala Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Gly Thr Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ala 
                  115     
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Gln 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Ser Phe Met Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Asn Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Met Glu Ala Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Lys 
                          85                  90                  95      
          Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Phe Arg Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Ala Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Asn Leu Leu His Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asn Arg Phe Ser Gly Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Leu Glu Leu Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  60]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  61]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
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          <![CDATA[<400>  62]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
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          <![CDATA[<220>]]>
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
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          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
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          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
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          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
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          Gln Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
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          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
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          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
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          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
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          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  67]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
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          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Lys Tyr Gly Thr His Tyr Ala Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Thr Gln Leu Asp Leu Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  69]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  69]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
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          Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
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                          85                  90                  95      
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Lys Tyr Gly Thr His Tyr Ala Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 
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                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Thr Gln Leu Asp Leu Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 
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          Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile 
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          Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
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          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
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                  35                  40                  45              
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                      100                 105                 110         
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 
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          Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile 
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          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  75]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Leu Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  76]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Gln或Glu。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Glu或Gln。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(12)]]>
          <![CDATA[<223>  位置9之Xaa可為Gly或Ala，位置10之Xaa可為Gly或Glu，位置11之Xaa可為Leu或Val，位置12之Xaa可為Val或Lys。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (16)..(16)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Gly或Ala。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  位置18之Xaa可為Leu、Met或Val，位置19之Xaa可為Arg或Lys，位置20之Xaa可為Val或Leu。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (23)..(23)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Lys。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (27)..(30)]]>
          <![CDATA[<223>  位置27之Xaa可為Phe或Tyr，位置28之Xaa可為Asn或Thr，位置29之Xaa可為Phe或Leu，位置30之Xaa可為Ser或Lys。]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Xaa Val Gln Leu Val Xaa Ser Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Pro Gly Xaa 
          1               5                   10                  15      
          Ser Xaa Xaa Xaa Ser Cys Xaa Ala Ser Gly Xaa Xaa Xaa Xaa 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210>  77]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Arg或Lys。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Ser。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  位置8之Xaa可為Lys或Gln，位置9之Xaa可為Arg或Gly。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  位置13之Xaa可為Met、Ile或Val，位置14之Xaa可為Gly或Ala。]]>
          <![CDATA[<400>  77]]>
          Trp Val Xaa Gln Xaa Pro Gly Xaa Xaa Leu Glu Trp Xaa Xaa 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  78]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  位置1之Xaa可為Arg或Lys，位置2之Xaa可為Val、Ala或Phe。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  位置4之Xaa可為Ile或Leu，位置5之Xaa可為Ser或Thr，位置6之Xaa可為Arg或Ala。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Asp或Thr。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  位置10之Xaa可為Lys、Ala或Ser，位置11之Xaa可為Ser或Asn。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu, Val或Ala。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  位置15之Xaa可為Met或Leu，位置16之Xaa可為Gln或Glu，位置17之Xaa可為Met或Leu，位置18之Xaa可為Ser、Ile或Asn。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  位置21之Xaa可為Arg或Lys，位置22之Xaa可為Ser或Thr。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (31)..(32)]]>
          <![CDATA[<223>  位置31之Xaa可為Ala或Thr，位置32之Xaa可為Arg、Asn或Thr。]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Ser Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Xaa 
          1               5                   10                  15      
          Xaa Xaa Ser Leu Xaa Xaa Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Xaa 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  79]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  80]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Glu或Gln。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu或Met。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  位置12之Xaa可為Ser或Thr，位置13之Xaa可為leu、Val或Ala。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Val。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  位置21之Xaa可為Leu或Ile，位置22之Xaa可為Ser或Thr。]]>
          <![CDATA[<400>  80]]>
          Xaa Ile Val Xaa Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Xaa Xaa Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Xaa Thr Xaa Xaa Cys 
                      20              
          <![CDATA[<210>  81]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Ser。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Arg或Lys。]]>
          <![CDATA[<400>  81]]>
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Xaa Pro Xaa Leu Leu Ile Tyr 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  82]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ile或Val。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Thr。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  位置14之Xaa可為Asp或Ser，位置15之Xaa可為Phe或Tyr。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu、Met或Val。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (31)..(31)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Tyr或Phe。]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Gly Xaa Pro Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Xaa Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ile Ser Ser Xaa Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Xaa Cys 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  83]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  84]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210>  85]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  85]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210>  86]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys 
                      20                  25                  30  
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 
          1               5                   10                  
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          <![CDATA[<400>  89]]>
          Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly 
          1               5                   10                  
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          Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<400>  92]]>
          Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Asn 
                      20                  25                  30          
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          <![CDATA[<400>  93]]>
          Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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          <![CDATA[<400>  94]]>
          Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Glu 
          1               5                   10                  15      
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          Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr Met Glu 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr Met Glu 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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          <![CDATA[<211>  32]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr Leu Glu 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20              
          <![CDATA[<210>  99]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  99]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<211>  23]]>
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          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  101]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20              
          <![CDATA[<210>  102]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  102]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<210>  103]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  103]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<210>  104]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  104]]>
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
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          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  105]]>
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
          1               5                   10                  15  
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          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  106]]>
          Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  107]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  107]]>
          Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  108]]>
          Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  109]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  109]]>
          Gly Ile Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  110]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  110]]>
          Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  111]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  111]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  112]]>
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          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  112]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
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                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asn Pro Ser Val Gly Ser Thr Trp Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<210>  114]]>
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          <![CDATA[<400>  114]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Ser Ser 
                      20                  25                  30          
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              50                  55                  60                  
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                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
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          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Lys 
                      20                  25                  30  
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          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  116]]>
          Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Glu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Asn 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  117]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  117]]>
          Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Glu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Asn 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  118]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  119]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
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                      20                  25                  30  
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          <![CDATA[<211>  30]]>
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
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          Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 
                      20                  25                  30  
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          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  14]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
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          Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  123]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  123]]>
          Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  124]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  124]]>
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  125]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  125]]>
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln 
          1               5                   10                  15      
          Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  126]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Thr或Leu。]]>
          <![CDATA[<400>  126]]>
          Trp Gly Gln Gly Thr Xaa Val Thr Val Ser Ser 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  127]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  127]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 
                      20              
          <![CDATA[<210>  128]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  128]]>
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys 
                      20              
          <![CDATA[<210>  129]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  129]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 
                      20              
          <![CDATA[<210>  130]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  130]]>
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  131]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  131]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Lys 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210>  132]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  132]]>
          Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  133]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  133]]>
          Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  134]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  134]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Gly Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  135]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  135]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  136]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  136]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Gln Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  137]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  137]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Asn Ala Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  138]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  138]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  139]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  139]]>
          Lys Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  140]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  140]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ile Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  141]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  141]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ile Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  142]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  142]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Glu Leu Ile Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  143]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  143]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  144]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  144]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  145]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  145]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Phe Ser Ser Val Asn Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  146]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  146]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  147]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  147]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Phe Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Lys Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Tyr Arg Ile Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  148]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ile或Val。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Thr。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  位置14之Xaa可為Asp或Ser，位置15之Xaa可為Phe或Tyr。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu或Met。]]>
          <![CDATA[<400>  148]]>
          Gly Xaa Pro Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Xaa Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ile Ser Ser Xaa Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  149]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  位置1之Xaa可為Arg或Lys，位置2之Xaa可為Val或Ala。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ile或Leu。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Arg或Ala。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(11)]]>
          <![CDATA[<223>  位置10之Xaa可為Ala或Ser，位置11之Xaa可為Ser或Asn。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Met或Leu。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ser或Ile。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (32)..(32)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Arg或Asn。]]>
          <![CDATA[<400>  149]]>
          Xaa Xaa Thr Xaa Thr Xaa Asp Thr Ser Xaa Xaa Thr Ala Tyr Xaa Glu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Xaa Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Xaa 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  150]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Glu或Gln。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (12)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  位置12之Xaa可為Ser或Thr，位置13之Xaa可為Leu或Ala。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Val。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (21)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  位置21之Xaa可為Leu或Ile，位置22之Xaa可為Ser或Thr。]]>
          <![CDATA[<400>  150]]>
          Xaa Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Xaa Xaa Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Xaa Thr Xaa Xaa Cys 
                      20              
          <![CDATA[<210>  151]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Arg或Lys。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  位置6之Xaa可為Asn、Gly、Ser或Gln，位置7之Xaa可為Gly、Ala或Asp。]]>
          <![CDATA[<400>  151]]>
          Xaa Ile Asp Pro Ala Xaa Xaa Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  152]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Gly或Gln。]]>
          <![CDATA[<400>  152]]>
          Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  153]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  153]]>
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  154]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (18)..(18)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu或Met。]]>
          <![CDATA[<400>  154]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Xaa Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210>  155]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Ser。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Gly或Ala。]]>
          <![CDATA[<400>  155]]>
          Trp Val Arg Gln Xaa Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Xaa 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  156]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu或Val。]]>
          <![CDATA[<400>  156]]>
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Xaa Tyr Leu Gln 
          1               5                   10                  15      
          Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  157]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu或Met。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu或Val。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (19)..(19)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Val。]]>
          <![CDATA[<400>  157]]>
          Glu Ile Val Xaa Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Xaa Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Xaa Thr Leu Ser Cys 
                      20              
          <![CDATA[<210>  158]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Ala或Ser。]]>
          <![CDATA[<400>  158]]>
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Xaa Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  159]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (22)..(22)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Leu或Val。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (31)..(31)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Tyr或Phe。]]>
          <![CDATA[<400>  159]]>
          Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ile Ser Ser Xaa Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Xaa Cys 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  160]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Gln或Glu。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (20)..(20)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Val或Leu。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (28)..(28)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Asn或Thr。]]>
          <![CDATA[<400>  160]]>
          Xaa Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Xaa Leu Lys 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210>  161]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Arg或Lys。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Arg或Gly。]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (13)..(13)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa可為Met或Ile。]]>
          <![CDATA[<400>  161]]>
          Trp Val Xaa Gln Ala Pro Gly Gln Xaa Leu Glu Trp Xaa Gly 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  162]]>
          <![CDATA[<211>  510]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  162]]>
          Met Glu Asp Thr Lys Glu Ser Asn Val Lys Thr Phe Cys Ser Lys Asn 
          1               5                   10                  15      
          Ile Leu Ala Ile Leu Gly Phe Ser Ser Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Val Gly Leu Thr Gln Asn Lys Ala Leu Pro Glu Asn Val Lys 
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ile Val Leu Asp Ala Gly Ser Ser His Thr Ser Leu Tyr Ile 
              50                  55                  60                  
          Tyr Lys Trp Pro Ala Glu Lys Glu Asn Asp Thr Gly Val Val His Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Val Glu Glu Cys Arg Val Lys Gly Pro Gly Ile Ser Lys Phe Val Gln 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Asn Glu Ile Gly Ile Tyr Leu Thr Asp Cys Met Glu Arg Ala 
                      100                 105                 110         
          Arg Glu Val Ile Pro Arg Ser Gln His Gln Glu Thr Pro Val Tyr Leu 
                  115                 120                 125             
          Gly Ala Thr Ala Gly Met Arg Leu Leu Arg Met Glu Ser Glu Glu Leu 
              130                 135                 140                 
          Ala Asp Arg Val Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Leu Ser Asn Tyr Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Asp Phe Gln Gly Ala Arg Ile Ile Thr Gly Gln Glu Glu Gly Ala 
                          165                 170                 175     
          Tyr Gly Trp Ile Thr Ile Asn Tyr Leu Leu Gly Lys Phe Ser Gln Lys 
                      180                 185                 190         
          Thr Arg Trp Phe Ser Ile Val Pro Tyr Glu Thr Asn Asn Gln Glu Thr 
                  195                 200                 205             
          Phe Gly Ala Leu Asp Leu Gly Gly Ala Ser Thr Gln Val Thr Phe Val 
              210                 215                 220                 
          Pro Gln Asn Gln Thr Ile Glu Ser Pro Asp Asn Ala Leu Gln Phe Arg 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Gly Lys Asp Tyr Asn Val Tyr Thr His Ser Phe Leu Cys Tyr 
                          245                 250                 255     
          Gly Lys Asp Gln Ala Leu Trp Gln Lys Leu Ala Lys Asp Ile Gln Val 
                      260                 265                 270         
          Ala Ser Asn Glu Ile Leu Arg Asp Pro Cys Phe His Pro Gly Tyr Lys 
                  275                 280                 285             
          Lys Val Val Asn Val Ser Asp Leu Tyr Lys Thr Pro Cys Thr Lys Arg 
              290                 295                 300                 
          Phe Glu Met Thr Leu Pro Phe Gln Gln Phe Glu Ile Gln Gly Ile Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Tyr Gln Gln Cys His Gln Ser Ile Leu Glu Leu Phe Asn Thr Ser 
                          325                 330                 335     
          Tyr Cys Pro Tyr Ser Gln Cys Ala Phe Asn Gly Ile Phe Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Leu Gln Gly Asp Phe Gly Ala Phe Ser Ala Phe Tyr Phe Val Met Lys 
                  355                 360                 365             
          Phe Leu Asn Leu Thr Ser Glu Lys Val Ser Gln Glu Lys Val Thr Glu 
              370                 375                 380                 
          Met Met Lys Lys Phe Cys Ala Gln Pro Trp Glu Glu Ile Lys Thr Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Tyr Ala Gly Val Lys Glu Lys Tyr Leu Ser Glu Tyr Cys Phe Ser Gly 
                          405                 410                 415     
          Thr Tyr Ile Leu Ser Leu Leu Leu Gln Gly Tyr His Phe Thr Ala Asp 
                      420                 425                 430         
          Ser Trp Glu His Ile His Phe Ile Gly Lys Ile Gln Gly Ser Asp Ala 
                  435                 440                 445             
          Gly Trp Thr Leu Gly Tyr Met Leu Asn Leu Thr Asn Met Ile Pro Ala 
              450                 455                 460                 
          Glu Gln Pro Leu Ser Thr Pro Leu Ser His Ser Thr Tyr Val Phe Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Met Val Leu Phe Ser Leu Val Leu Phe Thr Val Ala Ile Ile Gly Leu 
                          485                 490                 495     
          Leu Ile Phe His Lys Pro Ser Tyr Phe Trp Lys Asp Met Val 
                      500                 505                 510 
          <![CDATA[<210>  163]]>
          <![CDATA[<211>  93]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  163]]>
          Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val 
          1               5                   10                  15      
          Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val 
                      20                  25                  30          
          Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp 
                  35                  40                  45              
          Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu 
                          85                  90              
          <![CDATA[<210>  164]]>
          <![CDATA[<211>  136]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  164]]>
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr 
          1               5                   10                  15      
          Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys 
                  35                  40                  45              
          Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val 
              50                  55                  60                  
          Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met 
                      100                 105                 110         
          Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu 
                  115                 120                 125             
          Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
              130                 135     
          <![CDATA[<210>  165]]>
          <![CDATA[<211>  767]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  165]]>
          Gly Pro Glu Pro Gly Ala Leu Cys Glu Leu Ser Pro Val Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          His Pro Val Gln Ala Leu Met Glu Ser Phe Thr Val Leu Ser Gly Cys 
                      20                  25                  30          
          Ala Ser Arg Gly Thr Thr Gly Leu Pro Gln Glu Val His Val Leu Asn 
                  35                  40                  45              
          Leu Arg Thr Ala Gly Gln Gly Pro Gly Gln Leu Gln Arg Glu Val Thr 
              50                  55                  60                  
          Leu His Leu Asn Pro Ile Ser Ser Val His Ile His His Lys Ser Val 
          65                  70                  75                  80  
          Val Phe Leu Leu Asn Ser Pro His Pro Leu Val Trp His Leu Lys Thr 
                          85                  90                  95      
          Glu Arg Leu Ala Thr Gly Val Ser Arg Leu Phe Leu Val Ser Glu Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Val Gln Phe Ser Ser Ala Asn Phe Ser Leu Thr Ala Glu Thr 
                  115                 120                 125             
          Glu Glu Arg Asn Phe Pro His Gly Asn Glu His Leu Leu Asn Trp Ala 
              130                 135                 140                 
          Arg Lys Glu Tyr Gly Ala Val Thr Ser Phe Thr Glu Leu Lys Ile Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Asn Ile Tyr Ile Lys Val Gly Glu Asp Gln Val Phe Pro Pro Lys 
                          165                 170                 175     
          Cys Asn Ile Gly Lys Asn Phe Leu Ser Leu Asn Tyr Leu Ala Glu Tyr 
                      180                 185                 190         
          Leu Gln Pro Lys Ala Ala Glu Gly Cys Val Met Ser Ser Gln Pro Gln 
                  195                 200                 205             
          Asn Glu Glu Val His Ile Ile Glu Leu Ile Thr Pro Asn Ser Asn Pro 
              210                 215                 220                 
          Tyr Ser Ala Phe Gln Val Asp Ile Thr Ile Asp Ile Arg Pro Ser Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Asp Leu Glu Val Val Lys Asn Leu Ile Leu Ile Leu Lys Cys Lys 
                          245                 250                 255     
          Lys Ser Val Asn Trp Val Ile Lys Ser Phe Asp Val Lys Gly Ser Leu 
                      260                 265                 270         
          Lys Ile Ile Ala Pro Asn Ser Ile Gly Phe Gly Lys Glu Ser Glu Arg 
                  275                 280                 285             
          Ser Met Thr Met Thr Lys Ser Ile Arg Asp Asp Ile Pro Ser Thr Gln 
              290                 295                 300                 
          Gly Asn Leu Val Lys Trp Ala Leu Asp Asn Gly Tyr Ser Pro Ile Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Tyr Thr Met Ala Pro Val Ala Asn Arg Phe His Leu Arg Leu Glu 
                          325                 330                 335     
          Asn Asn Ala Glu Glu Met Gly Asp Glu Glu Val His Thr Ile Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Glu Leu Arg Ile Leu Leu Asp Pro Gly Ala Leu Pro Ala Leu Gln Asn 
                  355                 360                 365             
          Pro Pro Ile Arg Gly Gly Glu Gly Gln Asn Gly Gly Leu Pro Phe Pro 
              370                 375                 380                 
          Phe Pro Asp Ile Ser Arg Arg Val Trp Asn Glu Glu Gly Glu Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Pro Arg Pro Lys Asp Pro Val Ile Pro Ser Ile Gln Leu Phe Pro 
                          405                 410                 415     
          Gly Leu Arg Glu Pro Glu Glu Val Gln Gly Ser Val Asp Ile Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Ser Val Lys Cys Asp Asn Glu Lys Met Ile Val Ala Val Glu Lys Asp 
                  435                 440                 445             
          Ser Phe Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Gly Met Asp Val Thr Leu Leu Asp 
              450                 455                 460                 
          Pro Thr Cys Lys Ala Lys Met Asn Gly Thr His Phe Val Leu Glu Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Pro Leu Asn Gly Cys Gly Thr Arg Pro Arg Trp Ser Ala Leu Asp Gly 
                          485                 490                 495     
          Val Val Tyr Tyr Asn Ser Ile Val Ile Gln Val Pro Ala Leu Gly Asp 
                      500                 505                 510         
          Ser Ser Gly Trp Pro Asp Gly Tyr Glu Asp Leu Glu Ser Gly Asp Asn 
                  515                 520                 525             
          Gly Phe Pro Gly Asp Met Asp Glu Gly Asp Ala Ser Leu Phe Thr Arg 
              530                 535                 540                 
          Pro Glu Ile Val Val Phe Asn Cys Ser Leu Gln Gln Val Arg Asn Pro 
          545                 550                 555                 560 
          Ser Ser Phe Gln Glu Gln Pro His Gly Asn Ile Thr Phe Asn Met Glu 
                          565                 570                 575     
          Leu Tyr Asn Thr Asp Leu Phe Leu Val Pro Ser Gln Gly Val Phe Ser 
                      580                 585                 590         
          Val Pro Glu Asn Gly His Val Tyr Val Glu Val Ser Val Thr Lys Ala 
                  595                 600                 605             
          Glu Gln Glu Leu Gly Phe Ala Ile Gln Thr Cys Phe Ile Ser Pro Tyr 
              610                 615                 620                 
          Ser Asn Pro Asp Arg Met Ser His Tyr Thr Ile Ile Glu Asn Ile Cys 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Lys Asp Glu Ser Val Lys Phe Tyr Ser Pro Lys Arg Val His Phe 
                          645                 650                 655     
          Pro Ile Pro Gln Ala Asp Met Asp Lys Lys Arg Phe Ser Phe Val Phe 
                      660                 665                 670         
          Lys Pro Val Phe Asn Thr Ser Leu Leu Phe Leu Gln Cys Glu Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Leu Cys Thr Lys Met Glu Lys His Pro Gln Lys Leu Pro Lys Cys Val 
              690                 695                 700                 
          Pro Pro Asp Glu Ala Cys Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Met Met Gln Asn Lys Lys Thr Phe Thr Lys Pro Leu Ala Val Ile His 
                          725                 730                 735     
          His Glu Ala Glu Ser Lys Glu Lys Gly Pro Ser Met Lys Glu Pro Asn 
                      740                 745                 750         
          Pro Ile Ser Pro Pro Ile Phe His Gly Leu Asp Thr Leu Thr Val 
                  755                 760                 765         
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  166]]>
          Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val 
          1               5                   10                  15      
          Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val 
                      20                  25                  30          
          Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp 
                  35                  40                  45              
          Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu Gly Gly Gly 
                          85                  90                  95      
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Gln Cys Phe 
                      100                 105                 110         
          Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val Thr Asp Gly Leu 
                  115                 120                 125             
          Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val Ile His Asn Ser 
              130                 135                 140                 
          Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp Arg Pro Phe Val 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr Thr Tyr Cys Cys 
                          165                 170                 175     
          Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr Thr Val Lys Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu 
                  195                 200     
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          <![CDATA[<400>  167]]>
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr 
          1               5                   10                  15      
          Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys 
                  35                  40                  45              
          Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val 
              50                  55                  60                  
          Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met 
                      100                 105                 110         
          Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu 
                  115                 120                 125             
          Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln 
                      180                 185                 190         
          Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro 
                  195                 200                 205             
          Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr 
              210                 215                 220                 
          Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys 
                          245                 250                 255     
          Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn 
                      260                 265                 270         
          Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 
                  275                 280                 285         
          <![CDATA[<210>  168]]>
          <![CDATA[<211>  1549]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  168]]>
          Gly Pro Glu Pro Gly Ala Leu Cys Glu Leu Ser Pro Val Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          His Pro Val Gln Ala Leu Met Glu Ser Phe Thr Val Leu Ser Gly Cys 
                      20                  25                  30          
          Ala Ser Arg Gly Thr Thr Gly Leu Pro Gln Glu Val His Val Leu Asn 
                  35                  40                  45              
          Leu Arg Thr Ala Gly Gln Gly Pro Gly Gln Leu Gln Arg Glu Val Thr 
              50                  55                  60                  
          Leu His Leu Asn Pro Ile Ser Ser Val His Ile His His Lys Ser Val 
          65                  70                  75                  80  
          Val Phe Leu Leu Asn Ser Pro His Pro Leu Val Trp His Leu Lys Thr 
                          85                  90                  95      
          Glu Arg Leu Ala Thr Gly Val Ser Arg Leu Phe Leu Val Ser Glu Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Val Gln Phe Ser Ser Ala Asn Phe Ser Leu Thr Ala Glu Thr 
                  115                 120                 125             
          Glu Glu Arg Asn Phe Pro His Gly Asn Glu His Leu Leu Asn Trp Ala 
              130                 135                 140                 
          Arg Lys Glu Tyr Gly Ala Val Thr Ser Phe Thr Glu Leu Lys Ile Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Asn Ile Tyr Ile Lys Val Gly Glu Asp Gln Val Phe Pro Pro Lys 
                          165                 170                 175     
          Cys Asn Ile Gly Lys Asn Phe Leu Ser Leu Asn Tyr Leu Ala Glu Tyr 
                      180                 185                 190         
          Leu Gln Pro Lys Ala Ala Glu Gly Cys Val Met Ser Ser Gln Pro Gln 
                  195                 200                 205             
          Asn Glu Glu Val His Ile Ile Glu Leu Ile Thr Pro Asn Ser Asn Pro 
              210                 215                 220                 
          Tyr Ser Ala Phe Gln Val Asp Ile Thr Ile Asp Ile Arg Pro Ser Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Asp Leu Glu Val Val Lys Asn Leu Ile Leu Ile Leu Lys Cys Lys 
                          245                 250                 255     
          Lys Ser Val Asn Trp Val Ile Lys Ser Phe Asp Val Lys Gly Ser Leu 
                      260                 265                 270         
          Lys Ile Ile Ala Pro Asn Ser Ile Gly Phe Gly Lys Glu Ser Glu Arg 
                  275                 280                 285             
          Ser Met Thr Met Thr Lys Ser Ile Arg Asp Asp Ile Pro Ser Thr Gln 
              290                 295                 300                 
          Gly Asn Leu Val Lys Trp Ala Leu Asp Asn Gly Tyr Ser Pro Ile Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Tyr Thr Met Ala Pro Val Ala Asn Arg Phe His Leu Arg Leu Glu 
                          325                 330                 335     
          Asn Asn Ala Glu Glu Met Gly Asp Glu Glu Val His Thr Ile Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Glu Leu Arg Ile Leu Leu Asp Pro Gly Ala Leu Pro Ala Leu Gln Asn 
                  355                 360                 365             
          Pro Pro Ile Arg Gly Gly Glu Gly Gln Asn Gly Gly Leu Pro Phe Pro 
              370                 375                 380                 
          Phe Pro Asp Ile Ser Arg Arg Val Trp Asn Glu Glu Gly Glu Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Pro Arg Pro Lys Asp Pro Val Ile Pro Ser Ile Gln Leu Phe Pro 
                          405                 410                 415     
          Gly Leu Arg Glu Pro Glu Glu Val Gln Gly Ser Val Asp Ile Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          Ser Val Lys Cys Asp Asn Glu Lys Met Ile Val Ala Val Glu Lys Asp 
                  435                 440                 445             
          Ser Phe Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Gly Met Asp Val Thr Leu Leu Asp 
              450                 455                 460                 
          Pro Thr Cys Lys Ala Lys Met Asn Gly Thr His Phe Val Leu Glu Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Pro Leu Asn Gly Cys Gly Thr Arg Pro Arg Trp Ser Ala Leu Asp Gly 
                          485                 490                 495     
          Val Val Tyr Tyr Asn Ser Ile Val Ile Gln Val Pro Ala Leu Gly Asp 
                      500                 505                 510         
          Ser Ser Gly Trp Pro Asp Gly Tyr Glu Asp Leu Glu Ser Gly Asp Asn 
                  515                 520                 525             
          Gly Phe Pro Gly Asp Met Asp Glu Gly Asp Ala Ser Leu Phe Thr Arg 
              530                 535                 540                 
          Pro Glu Ile Val Val Phe Asn Cys Ser Leu Gln Gln Val Arg Asn Pro 
          545                 550                 555                 560 
          Ser Ser Phe Gln Glu Gln Pro His Gly Asn Ile Thr Phe Asn Met Glu 
                          565                 570                 575     
          Leu Tyr Asn Thr Asp Leu Phe Leu Val Pro Ser Gln Gly Val Phe Ser 
                      580                 585                 590         
          Val Pro Glu Asn Gly His Val Tyr Val Glu Val Ser Val Thr Lys Ala 
                  595                 600                 605             
          Glu Gln Glu Leu Gly Phe Ala Ile Gln Thr Cys Phe Ile Ser Pro Tyr 
              610                 615                 620                 
          Ser Asn Pro Asp Arg Met Ser His Tyr Thr Ile Ile Glu Asn Ile Cys 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Lys Asp Glu Ser Val Lys Phe Tyr Ser Pro Lys Arg Val His Phe 
                          645                 650                 655     
          Pro Ile Pro Gln Ala Asp Met Asp Lys Lys Arg Phe Ser Phe Val Phe 
                      660                 665                 670         
          Lys Pro Val Phe Asn Thr Ser Leu Leu Phe Leu Gln Cys Glu Leu Thr 
                  675                 680                 685             
          Leu Cys Thr Lys Met Glu Lys His Pro Gln Lys Leu Pro Lys Cys Val 
              690                 695                 700                 
          Pro Pro Asp Glu Ala Cys Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Met Met Gln Asn Lys Lys Thr Phe Thr Lys Pro Leu Ala Val Ile His 
                          725                 730                 735     
          His Glu Ala Glu Ser Lys Glu Lys Gly Pro Ser Met Lys Glu Pro Asn 
                      740                 745                 750         
          Pro Ile Ser Pro Pro Ile Phe His Gly Leu Asp Thr Leu Thr Val Gly 
                  755                 760                 765             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Pro 
              770                 775                 780                 
          Glu Pro Gly Ala Leu Cys Glu Leu Ser Pro Val Ser Ala Ser His Pro 
          785                 790                 795                 800 
          Val Gln Ala Leu Met Glu Ser Phe Thr Val Leu Ser Gly Cys Ala Ser 
                          805                 810                 815     
          Arg Gly Thr Thr Gly Leu Pro Gln Glu Val His Val Leu Asn Leu Arg 
                      820                 825                 830         
          Thr Ala Gly Gln Gly Pro Gly Gln Leu Gln Arg Glu Val Thr Leu His 
                  835                 840                 845             
          Leu Asn Pro Ile Ser Ser Val His Ile His His Lys Ser Val Val Phe 
              850                 855                 860                 
          Leu Leu Asn Ser Pro His Pro Leu Val Trp His Leu Lys Thr Glu Arg 
          865                 870                 875                 880 
          Leu Ala Thr Gly Val Ser Arg Leu Phe Leu Val Ser Glu Gly Ser Val 
                          885                 890                 895     
          Val Gln Phe Ser Ser Ala Asn Phe Ser Leu Thr Ala Glu Thr Glu Glu 
                      900                 905                 910         
          Arg Asn Phe Pro His Gly Asn Glu His Leu Leu Asn Trp Ala Arg Lys 
                  915                 920                 925             
          Glu Tyr Gly Ala Val Thr Ser Phe Thr Glu Leu Lys Ile Ala Arg Asn 
              930                 935                 940                 
          Ile Tyr Ile Lys Val Gly Glu Asp Gln Val Phe Pro Pro Lys Cys Asn 
          945                 950                 955                 960 
          Ile Gly Lys Asn Phe Leu Ser Leu Asn Tyr Leu Ala Glu Tyr Leu Gln 
                          965                 970                 975     
          Pro Lys Ala Ala Glu Gly Cys Val Met Ser Ser Gln Pro Gln Asn Glu 
                      980                 985                 990         
          Glu Val His Ile Ile Glu Leu Ile  Thr Pro Asn Ser Asn  Pro Tyr Ser 
                  995                 1000                 1005             
          Ala Phe  Gln Val Asp Ile Thr  Ile Asp Ile Arg Pro  Ser Gln Glu 
              1010                 1015                 1020             
          Asp Leu  Glu Val Val Lys Asn  Leu Ile Leu Ile Leu  Lys Cys Lys 
              1025                 1030                 1035             
          Lys Ser  Val Asn Trp Val Ile  Lys Ser Phe Asp Val  Lys Gly Ser 
              1040                 1045                 1050             
          Leu Lys  Ile Ile Ala Pro Asn  Ser Ile Gly Phe Gly  Lys Glu Ser 
              1055                 1060                 1065             
          Glu Arg  Ser Met Thr Met Thr  Lys Ser Ile Arg Asp  Asp Ile Pro 
              1070                 1075                 1080             
          Ser Thr  Gln Gly Asn Leu Val  Lys Trp Ala Leu Asp  Asn Gly Tyr 
              1085                 1090                 1095             
          Ser Pro  Ile Thr Ser Tyr Thr  Met Ala Pro Val Ala  Asn Arg Phe 
              1100                 1105                 1110             
          His Leu  Arg Leu Glu Asn Asn  Ala Glu Glu Met Gly  Asp Glu Glu 
              1115                 1120                 1125             
          Val His  Thr Ile Pro Pro Glu  Leu Arg Ile Leu Leu  Asp Pro Gly 
              1130                 1135                 1140             
          Ala Leu  Pro Ala Leu Gln Asn  Pro Pro Ile Arg Gly  Gly Glu Gly 
              1145                 1150                 1155             
          Gln Asn  Gly Gly Leu Pro Phe  Pro Phe Pro Asp Ile  Ser Arg Arg 
              1160                 1165                 1170             
          Val Trp  Asn Glu Glu Gly Glu  Asp Gly Leu Pro Arg  Pro Lys Asp 
              1175                 1180                 1185             
          Pro Val  Ile Pro Ser Ile Gln  Leu Phe Pro Gly Leu  Arg Glu Pro 
              1190                 1195                 1200             
          Glu Glu  Val Gln Gly Ser Val  Asp Ile Ala Leu Ser  Val Lys Cys 
              1205                 1210                 1215             
          Asp Asn  Glu Lys Met Ile Val  Ala Val Glu Lys Asp  Ser Phe Gln 
              1220                 1225                 1230             
          Ala Ser  Gly Tyr Ser Gly Met  Asp Val Thr Leu Leu  Asp Pro Thr 
              1235                 1240                 1245             
          Cys Lys  Ala Lys Met Asn Gly  Thr His Phe Val Leu  Glu Ser Pro 
              1250                 1255                 1260             
          Leu Asn  Gly Cys Gly Thr Arg  Pro Arg Trp Ser Ala  Leu Asp Gly 
              1265                 1270                 1275             
          Val Val  Tyr Tyr Asn Ser Ile  Val Ile Gln Val Pro  Ala Leu Gly 
              1280                 1285                 1290             
          Asp Ser  Ser Gly Trp Pro Asp  Gly Tyr Glu Asp Leu  Glu Ser Gly 
              1295                 1300                 1305             
          Asp Asn  Gly Phe Pro Gly Asp  Met Asp Glu Gly Asp  Ala Ser Leu 
              1310                 1315                 1320             
          Phe Thr  Arg Pro Glu Ile Val  Val Phe Asn Cys Ser  Leu Gln Gln 
              1325                 1330                 1335             
          Val Arg  Asn Pro Ser Ser Phe  Gln Glu Gln Pro His  Gly Asn Ile 
              1340                 1345                 1350             
          Thr Phe  Asn Met Glu Leu Tyr  Asn Thr Asp Leu Phe  Leu Val Pro 
              1355                 1360                 1365             
          Ser Gln  Gly Val Phe Ser Val  Pro Glu Asn Gly His  Val Tyr Val 
              1370                 1375                 1380             
          Glu Val  Ser Val Thr Lys Ala  Glu Gln Glu Leu Gly  Phe Ala Ile 
              1385                 1390                 1395             
          Gln Thr  Cys Phe Ile Ser Pro  Tyr Ser Asn Pro Asp  Arg Met Ser 
              1400                 1405                 1410             
          His Tyr  Thr Ile Ile Glu Asn  Ile Cys Pro Lys Asp  Glu Ser Val 
              1415                 1420                 1425             
          Lys Phe  Tyr Ser Pro Lys Arg  Val His Phe Pro Ile  Pro Gln Ala 
              1430                 1435                 1440             
          Asp Met  Asp Lys Lys Arg Phe  Ser Phe Val Phe Lys  Pro Val Phe 
              1445                 1450                 1455             
          Asn Thr  Ser Leu Leu Phe Leu  Gln Cys Glu Leu Thr  Leu Cys Thr 
              1460                 1465                 1470             
          Lys Met  Glu Lys His Pro Gln  Lys Leu Pro Lys Cys  Val Pro Pro 
              1475                 1480                 1485             
          Asp Glu  Ala Cys Thr Ser Leu  Asp Ala Ser Ile Ile  Trp Ala Met 
              1490                 1495                 1500             
          Met Gln  Asn Lys Lys Thr Phe  Thr Lys Pro Leu Ala  Val Ile His 
              1505                 1510                 1515             
          His Glu  Ala Glu Ser Lys Glu  Lys Gly Pro Ser Met  Lys Glu Pro 
              1520                 1525                 1530             
          Asn Pro  Ile Ser Pro Pro Ile  Phe His Gly Leu Asp  Thr Leu Thr 
              1535                 1540                 1545             
          Val 
          <![CDATA[<210>  169]]>
          <![CDATA[<211>  244]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  169]]>
          Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val 
          1               5                   10                  15      
          Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val 
                      20                  25                  30          
          Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp 
                  35                  40                  45              
          Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu Gly Gly Gly 
                          85                  90                  95      
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His 
                      100                 105                 110         
          Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly 
                  115                 120                 125             
          Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser 
              130                 135                 140                 
          Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn 
                          165                 170                 175     
          Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro 
                      180                 185                 190         
          Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met 
                  195                 200                 205             
          Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Asn Pro Asp 
          <![CDATA[<210>  170]]>
          <![CDATA[<211>  875]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  170]]>
          Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val 
          1               5                   10                  15      
          Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val 
                      20                  25                  30          
          Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp 
                  35                  40                  45              
          Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu Gly Gly Gly 
                          85                  90                  95      
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Pro Glu Pro 
                      100                 105                 110         
          Gly Ala Leu Cys Glu Leu Ser Pro Val Ser Ala Ser His Pro Val Gln 
                  115                 120                 125             
          Ala Leu Met Glu Ser Phe Thr Val Leu Ser Gly Cys Ala Ser Arg Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Thr Gly Leu Pro Gln Glu Val His Val Leu Asn Leu Arg Thr Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Gln Gly Pro Gly Gln Leu Gln Arg Glu Val Thr Leu His Leu Asn 
                          165                 170                 175     
          Pro Ile Ser Ser Val His Ile His His Lys Ser Val Val Phe Leu Leu 
                      180                 185                 190         
          Asn Ser Pro His Pro Leu Val Trp His Leu Lys Thr Glu Arg Leu Ala 
                  195                 200                 205             
          Thr Gly Val Ser Arg Leu Phe Leu Val Ser Glu Gly Ser Val Val Gln 
              210                 215                 220                 
          Phe Ser Ser Ala Asn Phe Ser Leu Thr Ala Glu Thr Glu Glu Arg Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro His Gly Asn Glu His Leu Leu Asn Trp Ala Arg Lys Glu Tyr 
                          245                 250                 255     
          Gly Ala Val Thr Ser Phe Thr Glu Leu Lys Ile Ala Arg Asn Ile Tyr 
                      260                 265                 270         
          Ile Lys Val Gly Glu Asp Gln Val Phe Pro Pro Lys Cys Asn Ile Gly 
                  275                 280                 285             
          Lys Asn Phe Leu Ser Leu Asn Tyr Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Pro Lys 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Glu Gly Cys Val Met Ser Ser Gln Pro Gln Asn Glu Glu Val 
          305                 310                 315                 320 
          His Ile Ile Glu Leu Ile Thr Pro Asn Ser Asn Pro Tyr Ser Ala Phe 
                          325                 330                 335     
          Gln Val Asp Ile Thr Ile Asp Ile Arg Pro Ser Gln Glu Asp Leu Glu 
                      340                 345                 350         
          Val Val Lys Asn Leu Ile Leu Ile Leu Lys Cys Lys Lys Ser Val Asn 
                  355                 360                 365             
          Trp Val Ile Lys Ser Phe Asp Val Lys Gly Ser Leu Lys Ile Ile Ala 
              370                 375                 380                 
          Pro Asn Ser Ile Gly Phe Gly Lys Glu Ser Glu Arg Ser Met Thr Met 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Lys Ser Ile Arg Asp Asp Ile Pro Ser Thr Gln Gly Asn Leu Val 
                          405                 410                 415     
          Lys Trp Ala Leu Asp Asn Gly Tyr Ser Pro Ile Thr Ser Tyr Thr Met 
                      420                 425                 430         
          Ala Pro Val Ala Asn Arg Phe His Leu Arg Leu Glu Asn Asn Ala Glu 
                  435                 440                 445             
          Glu Met Gly Asp Glu Glu Val His Thr Ile Pro Pro Glu Leu Arg Ile 
              450                 455                 460                 
          Leu Leu Asp Pro Gly Ala Leu Pro Ala Leu Gln Asn Pro Pro Ile Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Gly Glu Gly Gln Asn Gly Gly Leu Pro Phe Pro Phe Pro Asp Ile 
                          485                 490                 495     
          Ser Arg Arg Val Trp Asn Glu Glu Gly Glu Asp Gly Leu Pro Arg Pro 
                      500                 505                 510         
          Lys Asp Pro Val Ile Pro Ser Ile Gln Leu Phe Pro Gly Leu Arg Glu 
                  515                 520                 525             
          Pro Glu Glu Val Gln Gly Ser Val Asp Ile Ala Leu Ser Val Lys Cys 
              530                 535                 540                 
          Asp Asn Glu Lys Met Ile Val Ala Val Glu Lys Asp Ser Phe Gln Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Ser Gly Tyr Ser Gly Met Asp Val Thr Leu Leu Asp Pro Thr Cys Lys 
                          565                 570                 575     
          Ala Lys Met Asn Gly Thr His Phe Val Leu Glu Ser Pro Leu Asn Gly 
                      580                 585                 590         
          Cys Gly Thr Arg Pro Arg Trp Ser Ala Leu Asp Gly Val Val Tyr Tyr 
                  595                 600                 605             
          Asn Ser Ile Val Ile Gln Val Pro Ala Leu Gly Asp Ser Ser Gly Trp 
              610                 615                 620                 
          Pro Asp Gly Tyr Glu Asp Leu Glu Ser Gly Asp Asn Gly Phe Pro Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Asp Met Asp Glu Gly Asp Ala Ser Leu Phe Thr Arg Pro Glu Ile Val 
                          645                 650                 655     
          Val Phe Asn Cys Ser Leu Gln Gln Val Arg Asn Pro Ser Ser Phe Gln 
                      660                 665                 670         
          Glu Gln Pro His Gly Asn Ile Thr Phe Asn Met Glu Leu Tyr Asn Thr 
                  675                 680                 685             
          Asp Leu Phe Leu Val Pro Ser Gln Gly Val Phe Ser Val Pro Glu Asn 
              690                 695                 700                 
          Gly His Val Tyr Val Glu Val Ser Val Thr Lys Ala Glu Gln Glu Leu 
          705                 710                 715                 720 
          Gly Phe Ala Ile Gln Thr Cys Phe Ile Ser Pro Tyr Ser Asn Pro Asp 
                          725                 730                 735     
          Arg Met Ser His Tyr Thr Ile Ile Glu Asn Ile Cys Pro Lys Asp Glu 
                      740                 745                 750         
          Ser Val Lys Phe Tyr Ser Pro Lys Arg Val His Phe Pro Ile Pro Gln 
                  755                 760                 765             
          Ala Asp Met Asp Lys Lys Arg Phe Ser Phe Val Phe Lys Pro Val Phe 
              770                 775                 780                 
          Asn Thr Ser Leu Leu Phe Leu Gln Cys Glu Leu Thr Leu Cys Thr Lys 
          785                 790                 795                 800 
          Met Glu Lys His Pro Gln Lys Leu Pro Lys Cys Val Pro Pro Asp Glu 
                          805                 810                 815     
          Ala Cys Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala Met Met Gln Asn 
                      820                 825                 830         
          Lys Lys Thr Phe Thr Lys Pro Leu Ala Val Ile His His Glu Ala Glu 
                  835                 840                 845             
          Ser Lys Glu Lys Gly Pro Ser Met Lys Glu Pro Asn Pro Ile Ser Pro 
              850                 855                 860                 
          Pro Ile Phe His Gly Leu Asp Thr Leu Thr Val 
          865                 870                 875 
          <![CDATA[<210>  171]]>
          <![CDATA[<211>  918]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  171]]>
          Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr 
          1               5                   10                  15      
          Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys 
                  35                  40                  45              
          Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val 
              50                  55                  60                  
          Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met 
                      100                 105                 110         
          Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu 
                  115                 120                 125             
          Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Pro Glu Pro Gly Ala Leu Cys Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ser Pro Val Ser Ala Ser His Pro Val Gln Ala Leu Met Glu Ser 
                          165                 170                 175     
          Phe Thr Val Leu Ser Gly Cys Ala Ser Arg Gly Thr Thr Gly Leu Pro 
                      180                 185                 190         
          Gln Glu Val His Val Leu Asn Leu Arg Thr Ala Gly Gln Gly Pro Gly 
                  195                 200                 205             
          Gln Leu Gln Arg Glu Val Thr Leu His Leu Asn Pro Ile Ser Ser Val 
              210                 215                 220                 
          His Ile His His Lys Ser Val Val Phe Leu Leu Asn Ser Pro His Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Val Trp His Leu Lys Thr Glu Arg Leu Ala Thr Gly Val Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Leu Phe Leu Val Ser Glu Gly Ser Val Val Gln Phe Ser Ser Ala Asn 
                      260                 265                 270         
          Phe Ser Leu Thr Ala Glu Thr Glu Glu Arg Asn Phe Pro His Gly Asn 
                  275                 280                 285             
          Glu His Leu Leu Asn Trp Ala Arg Lys Glu Tyr Gly Ala Val Thr Ser 
              290                 295                 300                 
          Phe Thr Glu Leu Lys Ile Ala Arg Asn Ile Tyr Ile Lys Val Gly Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Gln Val Phe Pro Pro Lys Cys Asn Ile Gly Lys Asn Phe Leu Ser 
                          325                 330                 335     
          Leu Asn Tyr Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Pro Lys Ala Ala Glu Gly Cys 
                      340                 345                 350         
          Val Met Ser Ser Gln Pro Gln Asn Glu Glu Val His Ile Ile Glu Leu 
                  355                 360                 365             
          Ile Thr Pro Asn Ser Asn Pro Tyr Ser Ala Phe Gln Val Asp Ile Thr 
              370                 375                 380                 
          Ile Asp Ile Arg Pro Ser Gln Glu Asp Leu Glu Val Val Lys Asn Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Ile Leu Ile Leu Lys Cys Lys Lys Ser Val Asn Trp Val Ile Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Phe Asp Val Lys Gly Ser Leu Lys Ile Ile Ala Pro Asn Ser Ile Gly 
                      420                 425                 430         
          Phe Gly Lys Glu Ser Glu Arg Ser Met Thr Met Thr Lys Ser Ile Arg 
                  435                 440                 445             
          Asp Asp Ile Pro Ser Thr Gln Gly Asn Leu Val Lys Trp Ala Leu Asp 
              450                 455                 460                 
          Asn Gly Tyr Ser Pro Ile Thr Ser Tyr Thr Met Ala Pro Val Ala Asn 
          465                 470                 475                 480 
          Arg Phe His Leu Arg Leu Glu Asn Asn Ala Glu Glu Met Gly Asp Glu 
                          485                 490                 495     
          Glu Val His Thr Ile Pro Pro Glu Leu Arg Ile Leu Leu Asp Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Pro Ala Leu Gln Asn Pro Pro Ile Arg Gly Gly Glu Gly Gln 
                  515                 520                 525             
          Asn Gly Gly Leu Pro Phe Pro Phe Pro Asp Ile Ser Arg Arg Val Trp 
              530                 535                 540                 
          Asn Glu Glu Gly Glu Asp Gly Leu Pro Arg Pro Lys Asp Pro Val Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Pro Ser Ile Gln Leu Phe Pro Gly Leu Arg Glu Pro Glu Glu Val Gln 
                          565                 570                 575     
          Gly Ser Val Asp Ile Ala Leu Ser Val Lys Cys Asp Asn Glu Lys Met 
                      580                 585                 590         
          Ile Val Ala Val Glu Lys Asp Ser Phe Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Gly 
                  595                 600                 605             
          Met Asp Val Thr Leu Leu Asp Pro Thr Cys Lys Ala Lys Met Asn Gly 
              610                 615                 620                 
          Thr His Phe Val Leu Glu Ser Pro Leu Asn Gly Cys Gly Thr Arg Pro 
          625                 630                 635                 640 
          Arg Trp Ser Ala Leu Asp Gly Val Val Tyr Tyr Asn Ser Ile Val Ile 
                          645                 650                 655     
          Gln Val Pro Ala Leu Gly Asp Ser Ser Gly Trp Pro Asp Gly Tyr Glu 
                      660                 665                 670         
          Asp Leu Glu Ser Gly Asp Asn Gly Phe Pro Gly Asp Met Asp Glu Gly 
                  675                 680                 685             
          Asp Ala Ser Leu Phe Thr Arg Pro Glu Ile Val Val Phe Asn Cys Ser 
              690                 695                 700                 
          Leu Gln Gln Val Arg Asn Pro Ser Ser Phe Gln Glu Gln Pro His Gly 
          705                 710                 715                 720 
          Asn Ile Thr Phe Asn Met Glu Leu Tyr Asn Thr Asp Leu Phe Leu Val 
                          725                 730                 735     
          Pro Ser Gln Gly Val Phe Ser Val Pro Glu Asn Gly His Val Tyr Val 
                      740                 745                 750         
          Glu Val Ser Val Thr Lys Ala Glu Gln Glu Leu Gly Phe Ala Ile Gln 
                  755                 760                 765             
          Thr Cys Phe Ile Ser Pro Tyr Ser Asn Pro Asp Arg Met Ser His Tyr 
              770                 775                 780                 
          Thr Ile Ile Glu Asn Ile Cys Pro Lys Asp Glu Ser Val Lys Phe Tyr 
          785                 790                 795                 800 
          Ser Pro Lys Arg Val His Phe Pro Ile Pro Gln Ala Asp Met Asp Lys 
                          805                 810                 815     
          Lys Arg Phe Ser Phe Val Phe Lys Pro Val Phe Asn Thr Ser Leu Leu 
                      820                 825                 830         
          Phe Leu Gln Cys Glu Leu Thr Leu Cys Thr Lys Met Glu Lys His Pro 
                  835                 840                 845             
          Gln Lys Leu Pro Lys Cys Val Pro Pro Asp Glu Ala Cys Thr Ser Leu 
              850                 855                 860                 
          Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala Met Met Gln Asn Lys Lys Thr Phe Thr 
          865                 870                 875                 880 
          Lys Pro Leu Ala Val Ile His His Glu Ala Glu Ser Lys Glu Lys Gly 
                          885                 890                 895     
          Pro Ser Met Lys Glu Pro Asn Pro Ile Ser Pro Pro Ile Phe His Gly 
                      900                 905                 910         
          Leu Asp Thr Leu Thr Val 
                  915             
          <![CDATA[<210>  172]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  172]]>
          Thr Gly Gly Gly Gly 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  173]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  173]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  174]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  174]]>
          Ser Gly Gly Gly Gly 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  175]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  175]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  176]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  176]]>
          Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly 
          <![CDATA[<210>  177]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  177]]>
          Gly Gly Gly Ser 
          1               
          <![CDATA[<210>  178]]>
          <![CDATA[<211>  330]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  178]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330 
          <![CDATA[<210>  179]]>
          <![CDATA[<211>  327]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  179]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
              130                 135                 140                 
          Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
                      180                 185                 190         
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
              210                 215                 220                 
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                          245                 250                 255     
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
                      260                 265                 270         
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 
              290                 295                 300                 
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                          325         
          <![CDATA[<210>  180]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  180]]>
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
                      20                  25                  30          
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  181]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  181]]>
          Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 
                  35                  40                  45              
          Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 
              50                  55                  60                  
          Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 
                          85                  90                  95      
          Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  182]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成]]>
          <![CDATA[<400>  182]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15

Claims

一種結合物分子，其包含能夠干擾CD39與其受質之間相互作用的CD39抑制部分以及能夠干擾TGFβ與其受體之間相互作用的TGFβ抑制部分。
如請求項1之結合物分子，其中該CD39抑制部分能夠干擾CD39與ATP/ADP之間的相互作用，及/或該TGFβ抑制部分能夠干擾TGFβ與TGFβ受體之間的相互作用。
如請求項1或2之結合物分子，其中該CD39抑制部分為選自由以下組成之群的CD39拮抗劑：CD39結合劑、靶向CD39編碼序列之RNAi、靶向CD39編碼序列之反義核苷酸以及與CD39競爭結合其受質之試劑。
如請求項1至3中任一項之結合物分子，其中該TGFβ抑制部分為選自由以下組成之群的TGFβ拮抗劑：TGFβ結合劑、靶向TGFβ編碼序列之RNAi、靶向TGFβ編碼序列之反義核苷酸以及與TGFβ競爭結合其受體之試劑。
如請求項1至4中任一項之結合物分子，其中該CD39結合劑選自由以下組成之群：特異性識別CD39之抗體或其抗原結合片段，以及與CD39結合之小分子化合物；及/或該TGFβ結合劑選自由以下組成之群：特異性識別TGFβ之抗體或其抗原結合片段，以及與TGFβ結合之小分子化合物。
如請求項1至5中任一項之結合物分子，其中該結合物分子為融合蛋白，其包含與TGFβ結合域相連之CD39結合域。
如請求項6之結合物分子，其中該TGFβ結合域與人類及/或小鼠TGFβ結合。
如請求項6之結合物分子，其中該TGFβ結合域與人類TGFβ1、人類TGFβ2及/或人類TGFβ3結合。
如請求項6至8中任一項之結合物分子，其中該TGFβ結合域包含TGFβ受體之胞外域(ECD)。
如請求項9之結合物分子，其中該TGFβ受體為TGFβ受體I (TGFβRI)、TGFβ受體II (TGFβRII)或TGFβ受體III (TGFβRIII)。
如請求項9或10之結合物分子，其中該ECD包含如SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164或SEQ ID NO: 165所示之胺基酸序列，或與其具有至少85%序列一致性但仍保持與TGFβ之結合特異性的胺基酸序列。
如請求項6至11中任一項之結合物分子，其中該TGFβ結合域包含TGFβ受體之兩個或更多個ECD。
如請求項12之結合物分子，其中該兩個或更多個ECD源自相同TGFβ受體或源自至少兩個不同TGFβ受體。
如請求項12之結合物分子，其中該兩個或更多個ECD包含源自TGFβRI之第一ECD及源自TGFβRII之第二ECD。
如請求項12至14中任一項之結合物分子，其中該兩個或更多個ECD可操作地串接。
如請求項15之結合物分子，其中該兩個或更多個ECD經由第一連接子連接。
如請求項16之結合物分子，其中該TGFβ結合域包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 171或其任何組合。
如請求項6至17中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域與人類CD39結合。
如請求項6至18中任一項之結合物分子，其中該TGFβ結合域經由第二連接子與CD39結合域連接。
如請求項6至19中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域包含抗CD39抗體部分。
如請求項20之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區。
如請求項21之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分進一步包含附加至該重鏈可變區之羧基末端之重鏈恆定區。
如請求項21或22之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分進一步包含附加至該輕鏈可變區之羧基末端之輕鏈恆定區。
如請求項21至23中任一項之結合物分子，其中該TGFβ結合域在選自由以下組成之群的位置結合至該抗CD39抗體部分：該抗CD39抗體部分之1)該重鏈可變區之胺基末端；2)該輕鏈可變區之胺基末端；3)該重鏈可變區之羧基末端；4)該輕鏈可變區之羧基末端；5)該重鏈恆定區之羧基末端；以及6)該輕鏈恆定區之羧基末端。
如請求項21至24中任一項之結合物分子，其中該融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，該等結合域(i)全部與該抗CD39抗體部分之該重鏈可變區連接，或(ii)全部與該抗CD39抗體部分之該輕鏈可變區連接。
如請求項21至24中任一項之結合物分子，其中該融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其分別與該抗CD39抗體部分之該重鏈可變區及該輕鏈可變區連接。
如請求項21至24中任一項之結合物分子，其中該融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其全部與該抗CD39抗體部分之該重鏈恆定區連接。
如請求項21至24中任一項之結合物分子，其中該融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其全部與該抗CD39抗體部分之該輕鏈恆定區連接。
如請求項21至24中任一項之結合物分子，其中該融合蛋白包含兩個或更多個TGFβ結合域，其分別與該抗CD39抗體部分之該重鏈可變區及該輕鏈恆定區連接。
如請求項6至29中任一項之結合物分子，其中該融合蛋白包含兩個、三個、四個、五個、六個或更多個TGFβ結合域。
如請求項16至30中任一項之結合物分子，其中該第一及/或第二連接子選自由以下組成之群：可分解連接子、不可分解連接子、肽連接子、可撓性連接子、剛性連接子、螺旋連接子及非螺旋連接子。
如請求項31之結合物分子，其中該第一及/或第二連接子包含肽連接子。
如請求項32之結合物分子，其中該肽連接子包含GS連接子。
如請求項33之結合物分子，其中該GS連接子包含如SEQ ID NO: 177 (GGGS)或SEQ ID NO: 173 (GGGGS)所示之一或多個重複，或包含如SEQ ID NO: 182 (GGGGSGGGGSGGGGSG)所示之胺基酸序列。
如請求項20至34中任一項之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分包含重鏈可變區及/或輕鏈可變區，該重鏈可變區包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，該輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： a) 該HCDR1包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：NYGMN (SEQ ID NO: 1)、KYWMN (SEQ ID NO: 2)、NYWMN (SEQ ID NO: 3)、DTFLH (SEQ ID NO: 4)、DYNMY (SEQ ID NO: 5)及DTYVH (SEQ ID NO: 6)；且 b) 該HCDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：LINTYTGEPTYADDFKD (SEQ ID NO: 7)、EIRLKSNKYGTHYAESVKG (SEQ ID NO: 8)、QIRLNPDNYATHX ₁AESVKG (SEQ ID NO: 9)、X ₅₈IDPAX ₅₉X ₆₀NIKYDPKFQG (SEQ ID NO: 151)、FIDPYNGYTSYNQKFKG (SEQ ID NO: 11)及RIDPAIDNSKYDPKFQG (SEQ ID NO: 12)；且 c) 該HCDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：KGIYYDYVWFFDV (SEQ ID NO: 13)、QLDLYWFFDV (SEQ ID NO: 14)、HGX ₂RGFAY (SEQ ID NO: 15)、SPYYYGSGYRIFDV (SEQ ID NO: 16)、IYGYDDAYYFDY (SEQ ID NO: 17)及YYCALYDGYNVYAMDY (SEQ ID NO: 18)；且 d) 該LCDR1包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：KASQDINRYIA (SEQ ID NO: 19)、RASQSISDYLH (SEQ ID NO: 20)、KSSQSLLDSDGRTHLN (SEQ ID NO: 21)、SAFSSVNYMH (SEQ ID NO: 22)、SATSSVSYMH (SEQ ID NO: 23)及RSSKNLLHSNGITYLY (SEQ ID NO: 24)；且 e) 該LCDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：YTSTLLP (SEQ ID NO: 25)、YASQSIS (SEQ ID NO: 26)、LVSKLDS (SEQ ID NO: 27)、TTSNLAS (SEQ ID NO: 28)、STSNLAS (SEQ ID NO: 29)及RASTLAS (SEQ ID NO: 30)；且 f) 該LCDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：LQYSNLLT (SEQ ID NO: 31)、QNGHSLPLT (SEQ ID NO: 32)、WQGTLFPWT (SEQ ID NO: 33)、QQRSTYPFT (SEQ ID NO: 34)、QQRITYPFT (SEQ ID NO: 35)及AQLLELPHT (SEQ ID NO: 36)；其中X ₁為Y或F，X ₂為S或T，X ₅₈為R或K，X ₅₉為N、G、S或Q，X ₆₀為G、A或D。
如請求項35之結合物分子，其中： a) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 3所示之胺基酸序列，及/或 b) 該HCDR2包含如SEQ ID NO: 9所示之胺基酸序列，及/或 c) 該HCDR3包含如SEQ ID NO: 15所示之胺基酸序列，及/或 d) 該LCDR1包含如SEQ ID NO: 21所示之胺基酸序列，及/或 e) 該LCDR2包含如SEQ ID NO: 27所示之胺基酸序列，及/或 f) 該LCDR3包含如SEQ ID NO: 33所示之胺基酸序列，其中X ₁及X ₂如請求項35中所定義。
如請求項36之結合物分子，其中：該HCDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 37及SEQ ID NO: 38，及/或該HCDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 40及SEQ ID NO: 41。
如請求項35之結合物分子，其中： a) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之胺基酸序列，及/或 b) 該HCDR2包含如SEQ ID NO: 151所示之胺基酸序列，及/或 c) 該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之胺基酸序列，及/或 d) 該LCDR1包含如SEQ ID NO: 22所示之胺基酸序列，及/或 e) 該LCDR2包含如SEQ ID NO: 28所示之胺基酸序列，及/或 f) 該LCDR3包含如SEQ ID NO: 34所示之胺基酸序列，其中X ₅₈、X ₅₉及X ₆₀如請求項35中所定義。
如請求項35至38中任一項之結合物分子，其中該重鏈可變區包含： a) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 1所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 7所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 13所示之序列；或 b) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 2所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 8所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 14所示之序列；或 c) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 3所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 37所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 40所示之序列；或 d) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 3所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 38所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 41所示之序列；或 e) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 10所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之序列；或 f) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之序列，該HCDR2包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 134、135、136、137、138及139，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之序列；或 g) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 5所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 11所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 17所示之序列；或 h) HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1包含如SEQ ID NO: 6所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 12所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 18所示之序列。
如請求項35至39中任一項之結合物分子，其中該輕鏈可變區包含： a) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該LCDR1包含如SEQ ID NO: 19所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 25所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 31所示之序列；或 b) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該LCDR1包含如SEQ ID NO: 20所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 26所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 32所示之序列；或 c) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該LCDR1包含如SEQ ID NO: 21所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 27所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 33所示之序列；或 d) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該LCDR1包含如SEQ ID NO: 22所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 28所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 34所示之序列；或 e) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該LCDR1包含如SEQ ID NO: 23所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 29所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 35所示之序列；或 f) LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該LCDR1包含如SEQ ID NO: 24所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 30所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 36所示之序列。
如請求項35至40中任一項之結合物分子，其中： a) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 1所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 7所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 13所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 19所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 25所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 31所示之序列；或 b) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 2所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 8所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 14所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 20所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 26所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 32所示之序列；或 c) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 3所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 37所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 40所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 21所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 27所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 33所示之序列；或 d) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 3所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 38所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 41所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 21所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 27所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 33所示之序列；或 e) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 10所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 22所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 28所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 34所示之序列；或 f) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 4所示之序列，該HCDR2包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 134、135、136、137、138及139，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 16所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 22所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 28所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 34所示之序列；或 g) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 5所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 11所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 17所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 23所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 29所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 35所示之序列；或 h) 該HCDR1包含如SEQ ID NO: 6所示之序列，該HCDR2包含如SEQ ID NO: 12所示之序列，該HCDR3包含如SEQ ID NO: 18所示之序列；該LCDR1包含如SEQ ID NO: 24所示之序列，該LCDR2包含如SEQ ID NO: 30所示之序列，該LCDR3包含如SEQ ID NO: 36所示之序列。
如請求項35至41中任一項之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分進一步包含一或多個重鏈框架區HFR1、HFR2、HFR3及HFR4及/或一或多個輕鏈框架區LFR1、LFR2、LFR3及LFR4，其中：該HFR1包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 84-86、115、119-120及131；該HFR2包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 87-90及121-123；該HFR3包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 91-97、116-117及124-125；該HFR4包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 79及118；該LFR1包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 98-103及127-129；該LFR2包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 104、105及130；該LFR3包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 106-110及132-133，及該LFR4包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 83及153。
如請求項35至42中任一項之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 60、62、64、66、140、141、142、146、147及39，或與其具有至少80%序列一致性，但仍保持與人類CD39之特異性結合的特異性的胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 61、63、65、67、143、144、145、111、112及63，或與其具有至少80%序列一致性，但仍保持與人類CD39之特異性結合的特異性的胺基酸序列。
如請求項35至43中任一項之結合物分子，其中該抗CD39部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 68、70、72及74，或與其具有至少80%序列一致性，但仍保持與人類CD39之特異性結合的特異性的胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 69、71、73及75，或與其具有至少80%序列一致性，但仍保持與人類CD39之特異性結合的特異性的胺基酸序列。
如請求項35至44中任一項之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分包含： a) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 42所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 51所示之序列，或 b) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 52所示之序列，或 c) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 44所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 53所示之序列，或 d) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 45所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 54所示之序列，或 e) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 47所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 56所示之序列，或 f) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 49所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 58所示之序列，或 g) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 50所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 59所示之序列，或 h) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 60所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 63所示之序列，或 i) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 62所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 63所示之序列，或 j) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 64所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 63所示之序列，或 k) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 66所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 63所示之序列，或 l) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 60所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 65所示之序列，或 m) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 62所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 65所示之序列，或 n) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 64所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 65所示之序列，或 o) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 66所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 65所示之序列，或 p) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 60所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 67所示之序列，或 q) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 62所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 67所示之序列，或 r) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 64所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 67所示之序列，或 s) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 66所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 67所示之序列，或 t) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 140所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 61所示之序列，或 u) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 141所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 61所示之序列，或 v) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 142所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 61所示之序列，或 w) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 140所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 143所示之序列，或 x) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 141所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 143所示之序列，或 y) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 142所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 143所示之序列，或 z) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 140所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 144所示之序列，或 aa) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 141所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 144所示之序列，或 bb) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 142所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 144所示之序列，或 cc) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 140所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 145所示之序列，或 dd) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 141所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 145所示之序列，或 ee) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 142所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 145所示之序列，或 ff) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 146所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 111所示之序列，或 gg) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 146所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 112所示之序列，或 hh) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 147所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 111所示之序列，或 ii) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 39所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 63所示之序列，或 jj) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 68所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 69所示之序列，或 kk) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 70所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 69所示之序列，或 ll) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 72所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 69所示之序列，或 mm) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 74所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 69所示之序列，或 nn) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 68所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 71所示之序列，或 oo) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 70所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 71所示之序列，或 pp) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 72所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 71所示之序列，或 qq) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 74所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 71所示之序列，或 rr) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 68所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 73所示之序列，或 ss) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如 SEQ ID NO: 70所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 73所示之序列，或 tt) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 72所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 73所示之序列，或 uu) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 74所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 73所示之序列，或 vv) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 68所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 75所示之序列，或 ww) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 70所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 75所示之序列，或 xx) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 72所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 75所示之序列，或 yy) 重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 74所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 75所示之序列。
如請求項35至45中任一項之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分進一步包含一或多個胺基酸殘基取代或修飾，但仍保持與人類CD39之特異性結合的特異性。
如請求項46之結合物分子，其中該等取代或修飾中之至少一者在該重鏈可變區或輕鏈可變區中之一或多個CDR序列及/或一或多個非CDR序列中。
如請求項21至47中任一項之結合物分子，其中該恆定區源自人類免疫球蛋白(Ig)，或視情況人類IgG。
如請求項48之結合物分子，其中該恆定區源自人類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2或IgM。
如請求項35至49中任一項之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分為人源化的。
如請求項19至50中任一項之結合物分子，其中該抗CD39抗體部分為雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') ₂、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段(dsFv)、(dsFv) ₂、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定的雙抗體、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(雙價雙功能抗體)、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體或雙價域抗體。
如前述請求項中任一項之結合物分子，其中該結合物分子能夠以不超過10 ^-8M之EC ₅₀與人類CD39特異性結合，該EC ₅₀藉由FACS分析測定。
如前述請求項中任一項之結合物分子，其中該結合物分子具有選自由以下組成之群的一或多種特性： a) 如藉由FACS分析所測定，與人類CD39特異性結合，但不與小鼠CD39特異性結合； b) 以不超過10 ^-8M之EC ₅₀與食蟹猴CD39特異性結合，該EC ₅₀如藉由FACS分析所測定； c) 以不超過10 ^-7M (例如，不超過5×10 ^-8M、不超過3×10 ^-8M、不超過2×10 ^-8M、不超過1×10 ^-8M、或不超過8×10 ^-9M)之K _D值與人類CD39特異性結合，該K _D值如藉由Biacore分析所測定； d) 以不超過10 ^-8M (例如，不超過8×10 ^-9M、不超過5×10 ^-9M、不超過4×10 ^-9M、不超過3×10 ^-9M、不超過1×10 ^-9M、或不超過9×10 ^-10M)之K _D值與人類CD39特異性結合，該K _D值如藉由Octet分析所測定； e) 以不超過50nM (例如，不超過1nM、不超過5nM、不超過10nM、或不超過30nM)之IC ₅₀抑制在表現CD39之細胞中之ATP酶活性，該IC ₅₀如藉由ATP酶活性分析所測定； f) 能夠以不超過10nM (例如，不超過5nM、不超過3nM、不超過2nM、不超過1nM、不超過0.5nM、或不超過0.2nM)之濃度增強ATP介導之單核球活化，該濃度如藉由用FACS分析來分析CD80、CD86及/或CD40之表現所測定； g) 能夠以不超過25nM之濃度增強PBMC中ATP介導之T細胞活化，該濃度如藉由IL-2分泌、IFN-γ分泌、CD4 ⁺或CD8 ⁺T細胞增殖所測定； h) 能夠以不超過25nM (或不超過10nM、或不超過5nM、或不超過1nM、或不超過0.5nM)之濃度增強ATP介導之樹突細胞(DC)活化，該濃度如藉由FACS分析、或藉由活化DC促進T細胞增殖之能力、或藉由活化DC促進混合淋巴細胞反應(MLR)分析中之IFN-γ產生的能力來分析CD83之表現所測定； i) 能夠以不超過1nM (例如，不超過0.1nM、不超過0.01nM)之濃度阻斷由腺苷(由ATP水解)誘導之CD4 ⁺T細胞增殖抑制，該濃度如藉由FACS分析所測定； j) 能夠以NK細胞或巨噬細胞依賴性方式抑制哺乳動物中之腫瘤生長； k) 能夠逆轉被eATP抑制之人類CD8 ⁺T細胞增殖，如藉由T細胞增殖、CD25 ⁺細胞及活細胞群體所測定；以及 l) 能夠以不超過50nM (或不超過12.5nM、或不超過3.13nM、或不超過0.78nM、或不超過0.2nM、或不超過0.049nM、或不超過0.012nM、或不超過0.003nM、或不超過0.0008nM)之濃度增強由LPS刺激誘導之人類巨噬細胞IL1β釋放，該濃度如藉由ELISA分析所測定。
如請求項1至34中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 43所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 52所示之序列。
如請求項1至34中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 44所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 53所示之序列；或與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 45所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 54所示之序列。
如請求項1至34中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域與包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體競爭結合人類CD39，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 47所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 56所示之序列。
如前述請求項中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域與CD39抗原決定基特異性結合，其中該抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：Q96、N99、E143、R147、R138、M139、E142、K5、E100、D107、V81、E82、R111及V115。
如請求項57之結合物分子，其中該抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：Q96、N99、E143及R147。
如請求項57之結合物分子，其中該抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：R138、M139及E142。
如請求項57之結合物分子，其中該抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：K5、E100及D107。
如請求項57之結合物分子，其中該抗原決定基包含選自由以下組成之群的一或多個殘基：V81、E82、R111及V115。
如前述請求項中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域與包含如SEQ ID NO: 162所示之胺基酸序列之人類CD39特異性結合。
如請求項56至62中任一項之結合物分子，其中該CD39結合域並非源自抗體9-8B、抗體T895及抗體I394中之任一者，其中：抗體9-8B包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 46所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 48所示之序列；抗體T895包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 55所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 57所示之序列；以及抗體I394包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含如SEQ ID NO: 113所示之序列，該輕鏈可變區包含如SEQ ID NO: 114所示之序列。
如前述請求項中任一項之結合物分子，其中該結合物分子具有選自由以下組成之群的一或多種特性： a) 與人類TGFβ1、人類TGFβ2及/或人類TGFβ3特異性結合； b) 以相似的親和性與人類TGFβ1及小鼠TGFβ1特異性結合； c) 以不超過3×10 ^-11M (例如，不超過2×10 ^-11M、不超過1×10 ^-11M、不超過0.9×10 ^-11M、不超過0.8×10 ^-11M、不超過0.7×10 ^-11M、不超過0.6×10 ^-11M、不超過0.5×10 ^-11M)之EC ₅₀值與人類TGFβ1特異性結合，該EC ₅₀如藉由ELISA分析所測定； d) 能夠以不超過4×10 ^-10M (例如，不超過3×10 ^-10M、不超過2×10 ^-10M、不超過1×10 ^-10M、不超過0.5×10 ^-10M)之IC ₅₀值阻斷人類TGFβ1及TGFβRII結合，該IC ₅₀值如藉由阻斷分析所測定； e) 能夠以劑量依賴性方式與人類CD39結合，該劑量依賴性方式如藉由FACS分析所測定； f) 能夠同時與CD39及TGFβ結合，如藉由ELISA分析或FACS分析所測定； g) 能夠以不超過4×10 ^-11M之值IC ₅₀抑制TGFβ信號，該IC ₅₀如藉由TGF-β SMAD報導分析所測定； h) 能夠以不超過7×10 ^-10M (例如，不超過6×10 ^-10M、不超過5×10 ^-10M、不超過4×10 ^-10M、不超過3×10 ^-10M、不超過2×10 ^-10M、不超過1×10 ^-10M、不超過0.5×10 ^-10M)之IC ₅₀值抑制在表現CD39細胞中之ATP酶活性，該IC ₅₀如藉由ATP酶活性分析所測定； i) 能夠以不超過4×10 ^-10M (例如，不超過3×10 ^-10M、不超過2×10 ^-10M、不超過1×10 ^-10M或不超過0.5×10 ^-10M)之K _D值與人類CD39特異性結合，該K _D值如藉由Octet分析所測定； j) 能夠以不超過4×10 ^-11M (例如，不超過3×10 ^-11M、不超過2×10 ^-11M、不超過1×10 ^-11M、不超過0.5×10 ^-11M)之K _D值與人類TGFβ1特異性結合，該K _D值如藉由Octet分析所測定； k) 能夠恢復T細胞功能，如藉由Treg抑制分析所測定； l) 能夠以劑量依賴性方式抑制人類T細胞凋亡； m) 能夠藉由刺激促進人類T細胞存活及活化； n) 能夠阻斷TGFβ誘導的Foxp3在總T細胞中之表現；且 o) 能夠恢復ATP誘導的對人類T細胞增殖之抑制。
如前述請求項中任一項之結合物分子，其進一步包含一或多個結合物部分。
如請求項65之結合物分子，其中該結合物部分包含清理修飾劑、化療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶受質標記、DNA烷化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑、純化部分或其他抗癌藥物。
一種醫藥組合物，其包含如前述請求項中任一項之結合物分子以及一或多種醫藥學上可接受之載劑。
一種經分離多核苷酸，其編碼如請求項1至67中任一項之結合物分子。
一種載體，其包含如請求項68之經分離多核苷酸。
一種宿主細胞，其包含如請求項69之載體。
一種套組，其包含如請求項1至66中任一項之結合物分子及/或如請求項67之醫藥組合物，以及第二治療劑。
一種表現如請求項1至66中任一項之結合物分子之方法，其包含在表現如請求項70之載體的條件下培養如請求項69之宿主細胞。
一種在個體中治療、預防或減輕與CD39及/或TGFβ相關之疾病、病症或病況之方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至66中任一項之結合物分子及/或如請求項67之醫藥組合物。
一種在個體中治療、預防或減輕可藉由降低CD39之ATP酶活性而可治療之疾病之方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至66中任一項之結合物分子及/或如請求項67之醫藥組合物。
一種在個體中治療、預防或減輕與腺苷介導之T細胞、單核球、巨噬細胞、DC、APC、NK及/或B細胞活性抑制相關之疾病之方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至66中任一項之結合物分子及/或如請求項67之醫藥組合物。
一種在個體中治療、預防或減輕與增加的TGFβ水準及/或活性相關之疾病之方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至66中任一項之結合物分子及/或如請求項67之醫藥組合物。
如請求項73至76中任一項之方法，其中該疾病、病症或病況為癌症、胰臟萎縮或纖維化。
如請求項77之方法，其中該癌症為肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、基底細胞癌、膽囊癌、胃癌、肺癌、支氣管癌、骨癌、肝膽管癌、胰臟癌、乳癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、腎盂及輸尿管癌、唾液腺癌、小腸癌、尿道癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、大腸癌、大腸直腸癌、直腸癌、食道癌、胃腸道癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、陰道癌、甲狀腺癌、喉癌、膠質母細胞瘤、黑素瘤、骨髓增生異常綜合症、肉瘤、畸胎瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤、T或B細胞淋巴瘤、胃腸道間質瘤、軟組織腫瘤、肝細胞癌或腺癌。
如請求項77之方法，其中該癌症為白血病、淋巴瘤、膀胱癌、神經膠質瘤、膠質母細胞瘤、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、食道癌或乳癌。
如請求項73至76中任一項之方法，其中該個體已被鑑定為具有表現CD39及/或TGFβ之癌細胞或浸潤腫瘤之免疫細胞或免疫抑制細胞，視情況其水準顯著高於非癌細胞或非免疫抑制細胞上正常發現之水準。
如請求項80之方法，其中該等免疫抑制細胞為調節性T細胞。
如請求項81之方法，其中該個體已被鑑定為在腫瘤環境中具有與對照個體通常具有之調節性T細胞活性相比過度活躍的調節性T細胞。
如請求項81或82之方法，其中預期該個體自免疫抑制之逆轉或功能失調之耗盡T細胞之逆轉中受益。
如請求項73至76中任一項之方法，其中該疾病、病症或病況為自體免疫性疾病或感染。
如請求項84之方法，其中該自體免疫性疾病為免疫性血小板減少症、系統性硬皮病、硬化症、成人型呼吸窘迫症候群、濕疹、哮喘、乾燥症候群、艾迪生氏病、巨細胞動脈炎、免疫複合體腎炎、免疫性血小板減少性紫癜、自體免疫性血小板減少症、乳糜瀉、牛皮癬、皮炎、大腸炎或全身性紅斑性狼瘡症。
如請求項84之方法，其中該感染為HIV感染、HBV感染、HCV感染、炎性腸病或克羅恩氏病。
如請求項73至86中任一項之方法，其中該個體為人類。
如請求項73至87中任一項之方法，其中該投與係經由口服、鼻內、靜脈內、皮下、舌下或肌內投與。
如請求項73至88中任一項之方法，其進一步包含投與治療有效量之第二治療劑。
如請求項89之方法，其中該第二治療劑選自由以下組成之群：化療劑、抗癌藥、放射治療劑、免疫治療劑、抗血管生成劑、靶向治療劑、細胞治療劑、基因治療劑、激素治療劑、抗病毒劑、抗生素、鎮痛藥、抗氧化劑、金屬螯合劑及細胞介素。
一種調節CD39陽性細胞中CD39活性之方法，其包含將該CD39陽性細胞暴露於如請求項1至66中任一項之結合物分子及/或如請求項67之醫藥組合物。
如請求項91之方法，其中該CD39陽性細胞為免疫細胞。
一種如請求項1至66中任一項之結合物分子及/或如請求項67之醫藥組合物之用途，其用於製備供治療、預防或減輕個體中與CD39或TGFβ相關之疾病、病症或病況用的藥物。