TW202112368A - 用於治療有關dux4表現之疾病的抑制劑組合 - Google Patents

Abstract

本發明係關於用於治療與DUX4表現相關之疾病諸如肌營養不良的化合物。其亦係關於此等化合物之用途，或此等化合物之使用方法。

Description

用於治療有關DUX4表現之疾病的抑制劑組合

本發明係關於用於治療有關DUX4表現之疾病，諸如肌營養不良的化合物組合。其亦係關於此等組合之用途，或此等組合之使用方法。

面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)係最流行的遺傳性肌營養不良之一。症狀在20歲之前開始，伴有眼睛及嘴部、肩部、上臂及小腿周圍肌肉虛弱以及萎縮。然後，虛弱可擴散至腹部肌肉並且有時擴散至臀部肌肉，並且大約20%之患者最終變得離不開輪椅。患者當前依賴於諸如疼痛及疲勞之症狀的治療，該治療涉及使用止痛藥、認知療法、及身體鍛煉，有時補充以用於保持患者之活動性的醫療裝置。此外，增加肩胛功能可藉由肩胛骨之手術治療來獲得。此等干預措施最多在性質上仍然為症狀性的並且不影響疾病進展，說明需要能夠改變疾病進展的療法。

最近幾年中在理解FSHD之分子基礎方面獲得顯著進展，導致鑑別及表徵引起FSHD的基本遺傳病變。以下致病機理模型獲得廣泛支持，其中肌肉細胞中之雙同源匣4(Double Homeobox 4；DUX4)轉錄因子之表觀遺傳去抑制藉由引發轉錄解除調控級聯而觸發病變，該轉錄解除調控級聯導致可為疾病之關鍵特徵的肌肉萎縮、發炎、及氧化應力(Lemmers等人，2010，DOI:10.1126/science.1189044；Sharma等人，2016，DOI:10.4172/2157-7412.1000303，Snider等人，2010，DOI:10.1371/journal.pgen.1001181；Tawil等人，2014，DOI:10.1186/2044-5040-4-12)。

有時將FSHD劃分成兩種亞型，即FSHD1及FSHD2。FSHD1與位於染色體4q35之亞端粒區域中之DNA串聯陣列(DNA tandem array；D4Z4)內之較大缺失相關。各D4Z4重複序列含有DUX4基因之複本。在健康個體中，DUX4在生殖系中表現，但是在體細胞組織中表觀遺傳學緘默。健康、遺傳未受影響的個體定義為在兩個4q染色體臂上具有10與100個之間的D4Z4重複序列單元，而患有FSHD1之個體在一個4q染色體臂上具有1與10之間的D4Z4重複序列單元。作為FSHD之特徵的D4Z4重複序列之缺失從此區域中移除調控性染色質之實質性部分，包括幾百種組織蛋白及大量富含CpG之DNA。此等元件在建立DNA甲基化及異染色質中係必不可少的並且其損失顯著改變D4Z4陣列之表觀遺傳狀態。D4Z4之縮短本身不為致病性的。僅當D4Z4之縮短在容許疾病之4qA等位基因(含有可影響遠側DUX4轉錄物之多腺苷酸化之多形性)中發生時，經改變之表觀遺傳情形與FSHD1患者之骨骼肌肉中之DUX4之選擇性剪接及增加表現相關。在罕見得多的形式FSHD2中，病因係突變形式之表觀遺傳因子諸如SMCHD1或DNMT3B。同樣在此形式中，D4Z4區域為低甲基化的並且肌肉細胞藉由去抑制DUX4蛋白來表徵。已經提出FSHD1及FSHD2為一系列的，而非獨立的(Van den Boogaard等人，2016，DOI:10.1016/j.ajhg.2016.03.013)。兩種形式之FSHD集中於過度DUX4表現。僅在小部分肌纖維中之猝發樣DUX4表現引起肌細胞死亡，最終導致肌肉虛弱及消耗(Lemmers等人，2010)。

最簡單而言，DUX4過度表現係FSHD潛在的主要致病損傷，並且其抑制係FSHD之有希望的治療方法。作為對於上述情況的支持，較短重複序列大小通常與嚴重FSHD表型相關。適度重複序列縮短具有更輕微並且更易變之臨床嚴重程度。另外在FSHD2中，D4Z4區域為低甲基化的並且肌肉細胞藉由去抑制DUX4蛋白來表徵。亦具有SMCHD1之突變的具有少於10個D4Z4重複序列單元之患者具有非常嚴重臨床表型，說明均造成DUX4之去抑制的重複序列大小及表觀遺傳修飾因子之活性的組合決定FSHD之最終疾病嚴重程度。DUX4充當轉錄因子，其表現引發轉錄級聯，導致進行性肌細胞功能障礙及死亡，並且最終導致明顯病變(Kowaljow等人，2007，DOI:10.1016/j.nmd.2007.04.002；Vanderplanck等人，2011，doi:10.1371/journal.pone.0026820；Geng等人，2012，DOI:10.1016/j.devcel.2011.11.013；Yao等人，2014，DOI:10.1093/hmg/ddu251；Wallace等人，2011，DOI:10.1002/ana.22275)。

因為其在FSHD中之致病作用，抑制DUX4係阻止疾病進展之主要治療方法。此方法亦可適用於治療其他疾病，諸如癌症包括急性淋巴母細胞性白血病(Yasuda等人，2016，doi:10.1038/ng.3535)及肉瘤(Oyama等人，2017 DOI:10.1038/s41598-017-04967-0；Bergerat等人，2017，DOI:10.1016/j.prp.2016.11.015)等。然而，DUX4表現潛在之機制瞭解甚少並且相應藥物靶標定義不清楚。因此，現在沒有針對FSHD之治療劑，並需要可用於抑制DUX4表現之化合物及組合物。Campbell等人(2017，DOI 10.1186/s13395-017-0134-x)篩選具有已知表觀遺傳活性之一系列化合物以及由已達到臨床測試之化合物組成的Pharmakon 1600庫，以便鑑別減少DUX4表現之分子，如藉由在永生化FSHD骨骼肌細胞培養物中之DUX4靶基因mRNA之表現水準來監測。他們鑑別多種類別之分子，包括溴區及末端外(bromodomain and extra-terminal；BET)家族之蛋白之抑制劑及β-2腎上腺素受體之促效劑。他們的研究表明此等兩種類別之化合物分別藉由阻斷含有溴區之蛋白4(bromodomain-containing protein 4；BRD4)之活性或藉由增加環腺苷單磷酸(cyclic adenosine monophosphate；cAMP)水準來抑制DUX4之表現。WO2019/071144及WO2019/071147建議在FSHD治療之情形中使用p38抑制劑諸如洛嗎莫德(losmapimod)來減少DUX4表現。

量測FSHD之嚴重程度及進展係尤其挑戰性的，因為不同於在恆定速率下對稱地進展之大多數肌營養不良，FSHD藉由肌肉萎縮、及虛弱之逐步、不對稱的進展來表徵。因此，用於將患者分級的結果量度及生物標記物對於量測疾病負荷並且測試干預措施之效果而言係必不可少的。如在其他肌營養不良中，在疾病過程期間肌肉組織藉由脂肪置換。如藉由MRI來量測之脂肪浸潤程度與作為功能狀態之通常使用量度的FSHD臨床嚴重程度評分相關(Mul等人，2017，DOI:10.1212/WNL.0000000000004647)。此外，已經提出肌肉發炎造成FSHD之病理生理學並且其先於肌肉破壞及脂肪置換，由此代表疾病活性之早期標記物。肌肉發炎可使用具有短TI反轉回復(short TI inversion recovery；STIR)之MRI序列來研究。STIR高強度(STIR+)使浮腫得以顯現。FSHD之免疫介導機制與表徵患病FSHD肌肉生檢之局灶性發炎及CD8+T細胞浸潤物一致(Wang等人，Hum Mol Genet.2019 Feb 1;28(3):476-486. doi:10.1093/hmg/ddy364，Frisullo等人，2011，DOI:10.1007/s1087 5-010-9474-6)。與發炎性肌病極其相似之顯著發炎性細胞浸潤經常在STIR+肌肉生檢中觀察到並且事實上已經提出此可代表活動疾病之早期標記物(Geng等人2012，DOI:10.1016/j.devcel.2011.11.013)。因此，已經提出具有STIR序列之MRI作為預後結果量度(Tasca等人，2016，DOI:10.1002/ana.24640；Janssen等人，2014，DOI:10.1371/journ al.pone.00854 16)。調查FSHD中之肌肉發炎及脂肪置換的研究已提示嚴重肌肉發炎預測肌肉之更快脂肪置換(Tasca等人，2016，DOI:10.1002/ana.24640；Ferguson等人，2018，DOI:10.1002/mus.26038；Wang等人，2019，supra)。已經提出，一旦肌肉達到中間脂肪分率，其朝向完全脂肪置換加速並且肌肉發炎可能充當此過程之觸發(Janssen等人，2014，DOI:10.1371/journal.pone.00854 16)。

一項最近研究在45個患者中、在14個月內藉由量化指示大腿肌肉中之發炎、及脂肪含量之STIR高強度來調查FSHD之病理生理學並且調查其關係及在14個月內之進展(Dahlqvist等人，2019，10.1007/s00415- 019-09242-y)。四十三個患者包括在肌肉發炎及脂肪含量分析中並且在每個患者中評估九個大腿肌肉。在基線有三十三個患者並且在隨訪有34個患者具有至少一個STIR+肌肉。在所有370個經分析肌肉中，在基線有83個並且在隨訪有103個為STIR+的。所有肌肉在14個月內具有脂肪含量之顯著增加。與STIR-肌肉相比，在STIR+肌肉中，脂肪置換之此進展快兩倍以上並且隨著高強度之嚴重性而增加。此說明患有活動性發炎之患者具有經歷活動性疾病進展的肌肉纖維。

引起關注地，一項最近研究檢查FSHD中之MRI變化、相應病理變化、及DUX4靶基因表現之間的相關性。橫截面資料顯示STIR+ MRI量度可能具有用於鑑別具有DUX4表現及活動性疾病之肌肉的實質性預測值。事實上，藉由使用較高STIR評級來選擇具有增加DUX4靶標表現之肌肉，在〜90%之樣品中觀察到DUX4表現(Wang等人，上述)。另外，在STIR+肌肉中獲得之生檢顯示可被指配給發炎、細胞外基質重塑及肌肉再生的基因表現變化(Tasca等人，2012，DOI: doi.org/10.1371/journal.pone.0038779)。此暗示發炎性浸潤與DUX4表現之間之因果關聯。藉由DUX4高度上調之許多基因通常在生殖系及/或早期幹細胞中起作用並且不存在於健康成人骨骼肌中。配子發生程式之活化被視為與後有絲分裂骨骼肌不相容，導致細胞凋亡或細胞功能障礙。

雖然導致減少DUX4之治療方法預期影響FSHD中之下游發炎性、脂肪浸潤及纖維變性過程，但是具有藉由DUX4表現及發炎兩者來表徵之活動性疾病之體征的患者將受益於影響此等兩種標誌的治療。WO2019/071144及WO2019/071147揭示在FSHD治療之情形中使用p38抑制劑諸如洛嗎莫德來減少DUX4表現。p38抑制劑已廣泛地處於開發中，以便治療發炎性疾病諸如慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease；COPD)及類風濕性關節炎。在先天免疫反應中，促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase；MAPK)及核因子-kB(nuclear factor-kB；NF-kB)藉由樣式辨識受體(pattern recognition receptor；PRR)在結合病原體相關分子樣式(pathogen-associated molecular pattern；PAMP)後而得以活化。在哺乳動物細胞中發現的十四種MAPK對於產生免疫反應而言係關鍵的。它們一起在細胞用於適應發炎性及壓力條件的MAPK信號轉導途徑中發揮關鍵作用。病原體或發炎性刺激引發藉由p38激酶介導之磷酸化級聯，該級聯導致編碼諸如TNF-a、IL-1b、IL-6、及IL-8之蛋白之發炎性反應相關基因的轉錄及轉譯(Xing2105，DOI:10.4081/mk.2015.5508)。因此在理論上，p38抑制劑可影響DUX4之表現以及FSHD肌肉中之局部發炎兩者，該發炎係DUX4表現及活動性再生增加之疾病的標記物(Wang等人，2019，上述；Tasca等人，2012，DOI: doi.org/10.1371/journal.pone.0038779)。

然而，已知p38α MAPK在骨骼肌生物學中發揮關鍵作用，尤其消除肌母細胞增殖直至分化及隨後融合以形成多核肌管，該等作用係治療FSHD中之不當效應。在WO2019/071144及WO2019/071147中，使用永生化肌母細胞所產生的資料用於暗示p38α及p38b激酶抑制劑不影響肌細胞生成素或其他肌原性因子之表現，並且不影響藉由在永生化FSHD肌管中之肌原性融合所展現的肌母細胞增殖或肌母細胞分化。然而，本發明人已發現p38抑制劑抑制原代源自患者FSHD肌管之肌原性融合。雖然諸如肌細胞生成素或MYH2之肌原性分化標記物之表現保持未改變，但是藉由融合原代肌管培養物之高含量影像分析偵測到肌原性融合之抑制，其中p38抑制劑損害肌管融合。

因此，明確需要抑制FSHD中之DUX4及/或發炎性反應兩者而不影響肌管形成的化合物。需要減少肌管形成之抑制的化合物。

本發明基於酪蛋白激酶1(casein kinase 1；CK1，亦稱為CSNK1)之抑制劑可防止對於肌管形成之不利效應的意外發現。CK1及p38之組合抑制導致DUX4抑制而沒有不利地影響肌管形成。此有益表型可藉由將CK1抑制劑與p38抑制劑組合來觀察到。

絲胺酸/蘇胺酸激酶(EC 2.7.11.1)係作為小分子抑制劑之有希望藥物靶標的一種類別之蛋白激酶。由於其牽涉到真核細胞中之各種信號傳導途徑，因此抑制絲胺酸/蘇胺酸激酶可能與治療疾病諸如癌症、糖尿病、及各種發炎性病症有關。

酪蛋白激酶1(casein kinase 1；CK1，亦稱為CSNK1)屬絲胺酸/蘇胺酸激酶家族。酪蛋白激酶1(casein kinase 1；CK1)係哺乳動物中之廣泛表現絲胺酸/蘇胺酸激酶家族，已知該激酶家族使廣泛範圍之蛋白磷酸化。因此，CK1同功型在不同細胞過程中發揮重要調控作用，包括增殖、DNA修復、細胞凋亡、細胞分化、晝夜節律、Wnt信號傳導、轉錄因子之胞核與胞質穿梭及DNA轉錄(Eide EJ, Virshup DM (2001) doi:10.1081/CBI-100103963)。在人類中，CK1家族由不同的同功型(α、γ1、γ2、γ3、δ、及ε)、及其各種選擇性剪接變異體組成。CK1同功型具有高度保守激酶域，但是在其N及C末端序列之長度及組成方面顯著不同。C末端域具有複數個自磷酸化位點並且被視為牽涉到自溶酶活性之調控。在哺乳動物中，該酶以七種同功型形式存在：α、β、γ1、γ2、γ3、δ、及ε，該等同功型都具有相似激酶域。經由不同受質蛋白之磷酸化，此等同功型能夠使此等基質蛋白之功能活化、穩定、失活、或去穩定，由此調控其功能。例如，均為用於控制異常細胞生長之重要蛋白的腫瘤抑制因子p53及致癌基因mdm2係CK1之受質。藉由酪蛋白激酶諸如酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε使p53磷酸化導致p53與mdm2之間之相互作用的變化。亦已知所牽涉到的酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε係與形成紡錘體作為細胞分裂期間之中心體有關的調控蛋白，並且酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε涉及藉由TRAIL(腫瘤壞死因子相關細胞凋亡誘導因子(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing factor))及Fas介導之細胞凋亡。已進一步報道藉由非選擇性CK1抑制化合物IC261對酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε之抑制在試管內及活體內減少胰腺腫瘤細胞生長(Brockschmidt等人，2008，DOI:10.1136/gut.2007.123695)。因此，已研究CK1抑制劑之各種重要表型及治療效應。

WO2011051858揭示適用於治療及/或預防與中樞神經系統相關之疾病及病症的CK1抑制劑(δ及ε兩者)。此等抑制劑形成一系列經取代咪唑化合物，更具體而言一系列4-芳基-5-雜芳基-1-雜環烷基-咪唑及相關類似物。其合成及針對CK1 δ及ε之IC₅₀ 值均予以報道，後者通常落於奈米莫耳範圍內。密切相關之CK1抑制劑家族揭示於WO2012085721中。

WO2015119579揭示亦具有唑核心之家族，亦即作為CK1抑制劑來使用之2,4,5三取代唑化合物家族。抑制劑用於經由CK1抑制來誘導或增強多能幹細胞分化成心肌細胞。揭示獲得抑制劑之合成途徑，並且證明該等抑制劑通常具有作為CK1 δ及ε抑制劑之在奈米莫耳範圍內之IC₅₀ 值。

EP2949651揭示充當CK1抑制劑之經取代苯并噻唑衍生物之家族，並且其用途涉及治療及/或預防由CK1介導之疾病，尤其發炎性、神經學、精神病學、神經退化性及/或眼科疾病及某些再生過程。提供合成方法，並且展示抑制劑對於CK1 δ及ε具有奈米莫耳抑制活性。Bischof等人，Amino Acids (2012) 43:1577-1591 DOI:10.1007/s00726-012-1234-x，García-Reyes等人，J. Med.Chem.2018, 61, 4087-4102, DOI:10.1021/acs.jmedchem.8b00095，及Richter等人，J. Med.Chem., DOI:10.1021/jm500600b描述類似CK1抑制劑。

WO2009016286揭示6-環胺基-3-(吡啶-4-基)咪唑并[l,2-b]噠嗪衍生物適用作蛋白激酶抑制劑，尤其作為CK1δ及ε抑制劑。其合成得以詳細描述，並且CK1抑制劑抑制藉由酪蛋白激酶1δ及ε對酪蛋白進行的磷酸化之能力根據US2005/0131012所描述之程序來評估，從而揭示奈米莫耳範圍內之IC₅₀ 值。

WO2015195880揭示具有類似核心之家族，即適用作蛋白激酶抑制劑之經取代雙環吡唑類。描述獲得抑制劑之合成策略，並且所得CK1抑制劑經證明對於CK1 δ及ε係有效的。表明用於治療癌症之特定相關性。

Hirota等人，PLoS Biol 8(12): e1000559. doi:10.1371/journal.pbio.1000559及Monastyrskyi等人，Bioorg Med Chem.2018 Feb 1;26(3):590-602. doi:10.1016/j.bmc.2017.12.020描述包含6-胺基嘌呤核心之CK1抑制劑，該等抑制劑對於治療晝夜節律病症或癌症而言係相關的。

Halekotte等人，Molecules 2017, DOI:10.3390/molecules22040522，Luxenburger等人，Molecules 2019, DOI:10.3390/molecules24050873，及Peifer等人，J. Med.Chem.2009, 52, 7618-7630 DOI:10.1021/jm9005127描述具有唑或雜唑核心之CK1抑制劑。其用途與治療癌症、神經退化性疾病、睡眠病症、或發炎有關。

由α、β、γ及δ同功型組成的p38 MAPK家族之成員藉由獨立基因來編碼，該等基因在適應壓力及存活所需要的細胞反應中發揮關鍵作用(在Whitmarsh 2010 DOI:10.1186/1741-7007-8-47；Krementsov等人，2013，DOI:10.1128/MCB.00688-13中評述)。在許多發炎性疾病，包括心血管及其他慢性疾病中，此等相同p38 MAPK應力誘導信號可觸發不利於適應的反應，從而加劇而非減輕疾病(在Whitmarsh 2010中評述)。事實上，在骨骼肌中，各種細胞應力包括長期鍛煉、胰島素暴露及改變內分泌狀態、肌母細胞分化成肌細胞、反應性氧物質、以及細胞凋亡，經證明皆誘導p38激酶途徑(Keren等人，2006，DOI:10.1016/j.mce.2006.03.017；Zarubin等人，2006，DOI:10.1038/sj.cr.7290257)。事實上，p38激酶途徑可藉由許多外部刺激，包括促炎症性細胞介素及細胞應力來活化，導致雙特異性MAPK激酶MKK3及MKK6之活化。MKK3及MKK6之活化進而在其活化循環中使p38磷酸化，從而觸發下游磷酸化事件。此等事件包括HSP27、MAPKAPK2(MK2)及各種轉錄因子之磷酸化，最後以細胞核中之轉錄變化而告終。已鑑別有限數目之經p38調控之轉錄物以及p38激酶之大量下游效應物(在Cuenda等人，2007，DOI:10.1016/j.bbamcr.2007.03.010及Kyriakis等人，2001，DOI:10.1152/physrev.2001.81.2.807，及Viemann等人2004，DOI:10.1182/blood-2003-09-3296中描述)。

來自抑制p38α MAPK信號傳導途徑之不同化學支架的多種化合物已在不同(非神經肌肉)適應症中進入臨床試驗，包括類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病、疼痛、心血管疾病、及癌症。

已知p38α MAPK在骨骼肌生物學中發揮關鍵作用，尤其消除肌母細胞增殖直至分化及隨後融合以形成多核肌管。此途徑之活化被視為係表現MyoD之肌肉細胞所固有的並且用來保證肌肉程式之複雜並且及時的活化(Keren等人，2006)。使用p38抑制劑來治療FSHD揭示於WO2019103926中。使用p38α抑制劑來治療原構性經歷退化及再生過程之肌營養不良患者揭示於WO2019/071144及WO2019/071147中。p38α之完全剔除(knockout；KO)在胚期係致死的。胚胎拯救允許幼崽存活至出生後幾天及分離衛星細胞以便研究缺乏p38α之肌原性前體。缺乏p38α之肌母細胞表現顯著非關鍵分化基因並且展示融合中之嚴重缺陷。P2幼崽之組織學顯示顯著增加之循環衛星細胞及左移纖維分佈。(Perdiguero等人，2007，DOI:10.1038/sj.emboj.7601587)。在分別為杜興肌營養不良或肢帶肌營養不良之遺傳模型的mdx及Sgcd^-/- 小鼠中，顯示p38途徑活化得以增強。在mdx小鼠中，成熟肌肉(藉由Myl1啟動子驅動之cre)中之p38α之剔除(knockout；KO)在較早時間點未顯示缺陷，並且與對照相比，6個月齡之缺乏p38α之小鼠顯示顯著更大中心成核及較小纖維分佈。未觀察到其他病理性疾病指數，諸如纖維化或血清肌酸激酶增加，表明骨骼肌中之p38α之損失對於成熟纖維而言並非病理性的，但是增強野生型衛星細胞活性或另外在肌纖維成熟時影響中心核至肌纖維外周之移動(Wissing等人，2014，DOI:10.1093/hmg/ddu270)。在此研究中用於使p38缺失之Myl1-cre敲入等位基因在衛星細胞中為非活動性的，因此p38損失不能直接影響骨骼肌之再生，指示藉由p38損失所賦予之保護應替代地歸諸於例如在沒有來自衛星細胞之效應的情況下所導致的肌纖維壞死減少(Wissing等人，2014)。在原代FSHD肌肉細胞中，與細胞健康供體相比，p38未上調，表明p38抑制劑減少壞死之潛在效應不一定能普遍化至所有肌營養不良，包括FSHD。考慮到此情況，雖然藥理學p38抑制劑可用於減輕p38活性得以增加的肌營養不良之營養不良病變，但是甚至在彼等疾病中，在給出p38抑制劑對於衛星細胞以及對於肌肉再生之已知拮抗效應的情況下，此用途並非機械性地簡單明瞭的。

鑒於上述情況，需要抑制FSHD中之DUX4及/或發炎性反應而不影響肌管形成的化合物或化合物組合。需要減少肌管形成之抑制的化合物。需要減少p38抑制劑誘導的對肌管形成之損害的化合物。需要經改良之DUX4減少，較佳不影響肌管形成。需要促進肌管形成，較佳在治療FSHD期間。需要p38抑制劑在治療DUX4相關病狀中，諸如在FSHD治療中之效應得到改良。需要患有DUX4相關病狀諸如FSHD、亦患有發炎之受試者之治療得到改良。

在第一態樣中，本發明涉及用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的酪蛋白激酶1抑制劑，其中較佳，受試者患有肌肉發炎。較佳地，酪蛋白激酶1抑制劑用於促進肌原性融合及分化中之至少一者，其中較佳，受試者患有肌肉發炎。較佳地，與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良或癌症，其中肌營養不良係更佳的。最佳，與DUX4表現相關之該疾病或病狀係面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。較佳地，根據本發明使用之酪蛋白激酶1抑制劑減少DUX4表現至少20%、40%、60%、80%、或更多。較佳地，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1δ。

在第二態樣中，本發明係關於用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的酪蛋白激酶1抑制劑及p38抑制劑之組合，其中較佳，受試者患有肌肉發炎。較佳地，酪蛋白激酶1抑制劑用於促進肌原性融合及分化中之至少一者，其中較佳，受試者患有肌肉發炎。酪蛋白激酶1抑制劑及p38抑制劑可為兩種不同物質，或酪蛋白激酶1抑制劑及p38抑制劑可為同一種物質。較佳地，與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良或癌症，其中肌營養不良係更佳的。最佳，與DUX4表現相關之該疾病或病狀係面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。較佳地，p38抑制劑至少抑制p38α。較佳地，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1δ。較佳地，根據本發明使用之酪蛋白激酶1抑制劑及p38抑制劑之組合減少DUX4表現至少20%、40%、60%、80%、或更多。

在第三態樣中，本發明涉及促進肌原性融合及/或分化的活體內、試管內、或離體方法，該方法包含使細胞與如本文定義之酪蛋白激酶1抑制劑、或與如本文定義之組合接觸的步驟。

在第四態樣中，本發明係關於減少有需要之受試者之DUX4表現的方法，該方法包含投與有效量之如本文定義之酪蛋白激酶1抑制劑的步驟，或投與有效量之如本文定義之組合的步驟，其中受試者患有肌肉發炎。較佳地，受試者患有與DUX4表現相關之疾病或病狀，亦即肌營養不良或癌症，其中肌營養不良係更佳的。最佳，與DUX4表現相關之該肌營養不良係面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。實施例之描述

發明人意外地發現CK1抑制劑改良肌原性融合。此舉促進肌管形成。當投與用於治療DUX4相關病狀之其他藥物時，諸如當投與p38抑制劑時，此效應係尤其有用的，因為此等藥物損害肌管形成。為了克服此不當醫源性現象，CK1抑制劑可共同投與。例如，發現CK1抑制劑及p38抑制劑之組合減少DUX4表現，同時促進正確的肌管形成。因此，本發明提供在例如由於投與p38抑制劑而導致具有醫源性受損肌管形成之受試者中使用CK1抑制劑來改良肌原性融合。

發明人已鑑別對於纖維損傷之發炎性反應係DUX4介導之病狀諸如FSHD發生惡化之令人信服的候選機制。在肌肉細胞中之胚胎轉錄因子之表現失調誘導各種分子，該等分子可充當直接由浸潤T細胞辨識之新抗原。事實上，由DUX4調控之一些基因，諸如PRAME家族，係已知癌症睾丸抗原，因此此等基因在骨骼肌中之表現亦可誘導適應性免疫反應。另外，DEFB103藉由DUX4之誘導影響適應性及先天免疫反應兩者。DEFB103可在適應性免疫反應中具有促炎性作用並且可充當單核球、淋巴球、及樹突狀細胞之化學引誘劑。在此方面，其可增強對於在FSHD肌肉中表現之生殖系抗原之適應性免疫反應(Geng等人2012，DOI:10.1016/j.devcel.2011.11.013)。最後，由免疫細胞在肌肉組織上佈署之效應機制，諸如但不限於在疾病過程期間釋放之細胞介素及發炎性因子，促進有害信號傳導事件，該等事件直接參與肌纖維死亡，並且可充當DUX4表現之觸發。總之，發炎性標記物，諸如例如STIR MRI成像具有用於鑑別具有發炎及DUX4表現之患者的實質性預測值，兩者之標記物表徵活動性疾病。相應地，本發明提供用於治療被確診患有活動性FSHD之受試者的化合物及化合物組合。

遵循DUX4在FSHD之共識疾病假設中之中心作用，具有疾病改善潛力之治療方法預期依賴於DUX4之抑制。為了在肌肉細胞中達成DUX4抑制，並且為了在肌肉細胞中，尤其在具有受損肌原性融合之肌肉細胞中促進肌原性融合，發明人意外地將酪蛋白激酶1(Caseine kinase 1；CK1)鑑別為新穎藥物靶標。本發明使用原代FSHD源自患者之肌肉細胞來產生。由於FSHD基因座之靈長類動物特異性及重組、永生化、或致瘤性細胞或動物模型用於研究內源性DUX4調控機制之相關性值得懷疑，因此原代源自患者之肌肉細胞係可獲得之最相關疾病模型。基於永生化細胞之檢定帶有改變表觀基因組之風險，由此限制其在研究DUX4表現之內源性調控中之相關性。具體而言，D4Z4之亞端粒位置及D4Z4表觀基因組在DUX4抑制之穩定性中之重要性(Stadler等人，2013，DOI:10.1038/nsmb.2571)強調使用原代肌肉細胞來發現調控DUX4之表現之生理上相關藥物靶標的必要性。

在FSHD肌肉中偵測DUX4在歷史上被視為係挑戰性的。其在患有FSHD之患者中之原代肌母細胞中之表現已被證明係隨機的。研究已報道在增殖FSHD肌母細胞中，1000個核中僅1個係DUX4陽性的，並且在肌母細胞分化期間，200個核中僅1個係DUX4陽性的。歸因於DUX4之此尤其較低豐度，已報道DUX4蛋白之偵測係技術難題。雖然原代FSHD肌肉細胞在FSHD文獻中已廣泛使用，但是此等報道中沒有一個似乎可在實驗室規模水準以外加以應用。藉由使用原代細胞所造成的限制以及偵測較低水準之內源性DUX4之公認複雜性說明與將原代FSHD肌肉細胞應用於更高處理量方式相關的難題。雖然在增殖FSHD肌母細胞在試管內分化為多核肌管後，DUX4表現增加，但是水準仍然較低，並且對於穩健大規模篩檢方法而言，動態可變性廣泛地公認為極其挑戰性的(Campbell等人，2017)。 使用之化合物

在第一態樣中，本發明提供用於治療與(過度)DUX4表現相關之疾病或病狀的酪蛋白激酶1(Caseine kinase 1；CK1)抑制劑，其中酪蛋白激酶1抑制劑減少DUX4表現。此CK1抑制劑在本文中稱為根據本發明供使用之CK1抑制劑。CK1抑制劑在此項技術中為已知的並且在本文中稍後更詳細地描述。

本文描述之醫療用途被配製成作為用於治療指定病狀之藥物(例如藉由投與有效量之化合物)來使用之如本文定義之化合物，但是可同樣配製成i)使用如本文定義之化合物來治療指定病狀之方法，包含向受試者投與有效量之化合物的步驟，ii)用於製造治療指定病狀之藥物的如本文定義之化合物，其中較佳化合物以有效量投與，及iii)使用如本文定義之化合物來治療指定病狀，較佳藉由投與有效量。此等醫療用途全部藉由本發明設想。較佳受試者係需要治療之受試者。治療較佳導致延遲、改善、減輕、穩定化、治癒、或預防疾病或病狀。換言之，根據本發明供使用之化合物可為用於治療、延遲、改善、減輕、穩定、治癒、或預防指定疾病或病狀之化合物。具體而言，根據本發明供使用之化合物可用於改善其他藥物之有害副作用。

根據本發明供使用之CK1抑制劑減少DUX4表現。此DUX4表現較佳係所治療受試者之總體DUX4表現。DUX4表現可使用在此項技術中已知、或在實例中例示之方法來確定。例如，可使用PCR技術諸如RT-PCR，或使用免疫染色、質譜、或ELISA，例如對於較佳獲自受試者的含有細胞或細胞萃取物之樣品確定DUX4表現。在此情況下，減少較佳為如與預定值、或參考值相比的減少。較佳參考值係藉由確定含有細胞或細胞萃取物之未處理樣品中之DUX4表現所獲得的參考值。此未處理樣品可來自同一受試者或來自不同及健康受試者，更佳其為以相同的方法獲得，因而含有相同類型細胞的樣品。便利地，測試樣品及參考樣品均可為所獲得的單一更大樣品之一部分。或者，測試樣品在開始治療之前獲自受試者。高度較佳參考值係在首次投與根據本發明之酪蛋白激酶1抑制劑之前從受試者獲得的樣品中之DUX4之表現水準。另一較佳參考值係表示不存在DUX4表現之固定值。

DUX4表現之減少較佳意謂表現減少至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、或100%。若DUX4之表現減少例如100%，則其可為可能不再偵測到DUX4之表現。減少可在蛋白水準下，例如經由免疫染色、ELISA、或質譜來評定，或其可在mRNA水準下，例如經由PCR技術諸如RT-PCR來評定。在較佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之酪蛋白激酶1抑制劑，其中DUX4表現之減少使用PCR或免疫染色來確定，其中較佳PCR技術為RT-PCR。在較佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之酪蛋白激酶1抑制劑，其中DUX4表現減少至少20%、40%、60%、80%、或更多、更佳至少30%、40%、60%、80%、或更多。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少10%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少20%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少30%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少40%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少50%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少60%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少70%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少80%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少90%。在進一步較佳實施例中，DUX4表現減少至少95%。在最佳實施例中，DUX4表現減少約100%、較佳100%。

在較佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之酪蛋白激酶1抑制劑，其中酪蛋白激酶1抑制劑減少肌肉細胞、免疫細胞、或癌細胞，較佳肌肉細胞或免疫細胞，最佳肌肉細胞中之DUX4表現。較佳肌肉細胞係肌母細胞、衛星細胞、肌管、及肌纖維。較佳免疫細胞係B細胞、T細胞、樹突狀細胞、嗜中性球、自然殺手細胞、顆粒球、先天淋巴細胞、巨核細胞、骨髓衍生抑制細胞、單核球/巨噬細胞、及胸腺細胞，及視情況肥大細胞。其他較佳細胞係血小板及紅血球。在其他實施例中，DUX4表現在癌細胞中得以減少。

在較佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之CK1抑制劑，其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良或癌症，較佳其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良，最佳面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。

在此情況下，較佳肌營養不良係FSHD；較佳癌症係前列腺癌(WO2014081923)、多發性骨髓瘤(US20140221313)、肺癌(Lang等人，2014，DOI:10.14205/2310-8703.2014.02.01.1)、結腸癌(Paz等人，2003，DOI:10.1093/hmg/ddg226)肉瘤、或白血病；較佳肉瘤係小圓形細胞肉瘤(Oyama等人，2017 DOI:10.1038/s41598-017-04967-0；Bergerat等人，2017，DOI:10.1016/j.prp.2016.11.015；Chebib及Jo，2016，DOI:10.1002/cncy.21685)；較佳白血病係急性淋巴母細胞白血病(ALL)，更具體而言B細胞前體ALL (Yasuda等人，2016，doi:10.1038/ng.3535；Lilljebjorn & Fioretos，2017，DOI:10.1182/blood-2017-05-742643；Zhang等人，2017，DOI:10.1038/ng.3691)。

因此，在較佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之CK1抑制劑，其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良或癌症，較佳其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係FSHD、前列腺癌、多發性骨髓瘤、肺癌、結腸癌(較佳結直腸癌)、肉瘤(較佳小圓形細胞肉瘤)、白血病(較佳急性淋巴母細胞白血病，更佳B細胞前體急性淋巴母細胞白血病)，較佳與DUX4表現相關之該疾病或病狀係FSHD。在更佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之CK1抑制劑，其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良或癌症，較佳其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係FSHD或癌症，其中癌症較佳係前列腺癌、多發性骨髓瘤、肺癌、結腸癌(較佳結直腸癌)、肉瘤(較佳小圓形細胞肉瘤)、白血病(較佳急性淋巴母細胞白血病，更佳B-細胞前體急性淋巴母細胞白血病)，其中癌症更佳係肉瘤，最佳小圓形細胞肉瘤。

在一個較佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之CK1抑制劑，其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係癌症，其中癌症較佳係前列腺癌、多發性骨髓瘤、肺癌、結腸癌(較佳結直腸癌)、肉瘤(較佳小圓形細胞肉瘤)、白血病(較佳急性淋巴母細胞白血病，更佳B細胞前體急性淋巴母細胞白血病)，其中癌症更佳係肉瘤，最佳小圓形細胞肉瘤。

其他DUX4靶標被稱為「癌症睾丸抗原」(cancer testis antigen；CTA)，該等抗原係通常僅在睾丸中表現之基因，但是在一些癌症中得以去抑制，從而誘導免疫反應。此等觀察結果暗示癌症中之DUX4去抑制介導HSATII、CTA及/或THE1B啟動子之活化(Young等人，2013，doi:10.1371/journal.pgen.1003947)。與此一致，Dmitriev等人(2014，DOI:10.1111/jcmm.12182)證明FSHD與癌細胞表現概況之間之相似性，表明此等疾病之發病機理中之共同步驟。抑制劑組合

在一態樣中，本發明提供CK1抑制劑與已知損害肌原性融合及/或分化之試劑之組合。已知損害肌原性融合及/或損害肌原性分化之試劑通常產生上述結果作為副作用，例如受損肌原性融合可為與試劑相關之醫源性現象。此組合係有益的，因為發明人已發現CK1之抑制促進肌原性融合及分化，並且改善另一種試劑所具有的對於肌原性融合或分化之損害效應。此舉允許CK1抑制劑及另一種試劑同時有效地用於治療肌營養不良諸如較佳FSHD。此組合在本文中稱為根據本發明之組合。

較佳地，損害肌原性融合及/或分化之試劑選自由以下組成之群：p38抑制劑、β₂ 腎上腺素受體促效劑及BET抑制劑。最佳地，損害肌原性融合及/或分化之試劑係p38抑制劑；此等抑制劑稍後在本文中予以定義。在其他較佳實施例中，損害肌原性融合及/或分化之試劑係β₂ 腎上腺素受體促效劑，更佳選自由以下組成之群：阿貝地洛(abediterol)，阿利非君(alifedrine)，amibegron，阿布他明(arbutamine)，阿福特羅(arformoterol)，阿替洛爾(arotinolol)，BAAM，班布特羅(bambuterol)，倍氟洛爾(befunolol)，比妥特羅(bitolterol)，溴沙特羅(broxaterol)，布芬寧(buphenine)，卡布特羅(carbuterol)，卡莫特羅(carmoterol)，西馬特羅(cimaterol)，克侖特羅(clenbuterol)，可爾特羅(colterol)，可巴君(corbadrine)，地諾帕明(denopamine)，地匹福林(dipivefrine)，多巴酚丁胺(dobutamine)，依多巴胺(edopamine)，多培沙明(dopexamine)，屈昔多巴(droxidopa；L-DOPS)，麻黃鹼(ephedrine)，腎上腺素(epinephrine)，乙非君(etafedrine)，依替福林(etilefrine)，依替伏多巴(etilevodopa)，乙基去甲腎上腺素(ethylnorepinephrine)，非諾特羅(fenoterol)，福莫特羅(formoterol)，己腎上腺素(hexoprenaline)，去甲烏藥鹼(higenamine)，茚達特羅(indacaterol)，異他林(isoetarine)，異丙腎上腺素(isoprenaline)，異舒普林(isoxsuprine)，L-DOPA(左旋多巴(levodopa))，L-苯丙胺酸，L-酪胺酸，左旋沙丁胺醇(levosalbutamol)，馬布特羅(mabuterol)，甲左多巴(melevodopa)，甲氧基苯胺，甲基多巴，米拉貝隆(mirabegron)，去甲腎上腺素，奧西那林(orciprenaline)，奧昔非君(oxyfedrine)，PF-610355，苯丙醇胺，吡布特羅(pirbuterol)，普瑞特羅(prenalterol)，雷托巴胺(ractopamine)，丙卡特羅(procaterol)，偽麻黃鹼(pseudoephedrine)，瑞普特羅(reproterol)，利米特羅(rimiterol)，利托君(ritodrine)，沙丁胺醇(salbutamol)，沙美特羅(salmeterol)，索拉貝隆(solabegron)，特布他林(terbutaline)，曲托喹酚(tretoquinol)，妥洛特羅(tulobuterol)，vilanteroleamoterol，XP21279，齊帕特羅(zilpaterol)，及淨特羅(zinterol)，更佳沙丁胺醇，特布他林，沙美特羅，妥洛特羅，及班布特羅。

在較佳實施例中，根據本發明之組合係包含至少兩種不同化合物之組合，第一化合物係CK1抑制劑，並且第二化合物係第二試劑。此組合之較佳實例係包含CK1抑制劑並且包含作為p38抑制劑之進一步化合物的組合。此組合之另一較佳實例係包含CK1抑制劑並且包含作為β₂ 腎上腺素受體促效劑之進一步化合物的組合。此組合在下文被稱為根據本發明之雙化合物組合。

根據本發明之較佳雙化合物組合包含如下表展示之莫耳比率之抑制劑，其中「進一步」指示第二化合物。根據本發明之較佳雙化合物組合包含如下表展示之重量比率之抑制劑。根據本發明之較佳雙化合物組合包含如下表展示之抑制劑之抑制活性比率。

條目	CK1	進一步	條目	CK1	進一步	條目	CK1	進一步
1	10%	90%	6	60%	40%	11	20-80%	80-20%
2	20%	80%	7	70%	30%	12	30-70%	70-30%
3	30%	70%	8	80%	20%	13	40-60%	60-40%
4	40%	60%	9	90%	10%	14	45-65%	65-45%
5	50%	50%	10	95%	5%	15	10-90%	90-10%

根據本發明之較佳雙化合物組合包含一定量的有效抑制受試者或樣品中之至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、或100%之CK1活性的CK1抑制劑，更佳至少40%、甚至更佳至少60%、最佳至少80%。根據本發明之較佳雙化合物組合包含一定量的有效抑制受試者或樣品中之至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、或100%之p38活性的p38抑制劑，更佳至少40%、甚至更佳至少60%、最佳至少80%。在根據本發明之較佳雙化合物組合中，進一步試劑係p38抑制劑，較佳洛嗎莫德。

在較佳實施例中，根據本發明之組合包含具有獨立地損害肌原性融合及/或分化之另外激酶抑制功能的CK1抑制劑。其較佳實例係亦作為p38抑制劑之CK1抑制劑。此組合在下文被稱為根據本發明之功能性組合。

根據本發明之較佳組合(雙化合物或功能性)抑制CK1及p38。較佳地，CK1之活性抑制至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、或100%。較佳地，p38之活性抑制至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、或100%。更佳地，CK1及p38均抑制至少5%，更佳至少10%，甚至更佳至少15%，更佳至少20%，更佳至少25%，甚至更佳至少30%，仍然更佳至少35%，更佳至少40%，甚至更佳至少45%，更佳至少50%，更佳至少55%，甚至更佳至少60%，更佳至少65%，甚至更佳至少70%，更佳至少75%，更佳至少80%，甚至更佳至少85%，甚至更佳至少90%，最佳至少95、96、97、98、99、或100%。促進肌原性融合及 / 或分化

在較佳實施例中，如本文定義之CK1抑制劑或如本文定義之組合用於促進肌原性融合及/或用於促進肌原性分化。發明人已鑑別CK1抑制劑促進健康或康復肌肉之此等重要特徵之兩者。在促進肌原性融合及/或肌原性分化中之用途藉由肌肉再生來輔助。

肌原性融合係從複數個肌母細胞來形成多核肌管。肌母細胞係分化以便產生肌肉細胞的一種類型之胚胎祖細胞。分化藉由包括MyoD、Myf5、肌細胞生成素、及MRF4之肌原性調控因子來調控。GATA4及GATA6亦在肌細胞分化中起作用。當肌母細胞融合在一起時，產生骨骼肌纖維；因此，肌肉纖維係具有多個核之細胞，該等核被稱為肌核，其中每個細胞核來源於單一肌母細胞。肌母細胞之融合對於骨骼肌(例如，肱二頭肌)而言係特異性的並且對於心肌或平滑肌而言並非特異性的。骨骼肌中之不形成肌肉纖維之肌母細胞去分化回到肌衛星細胞。此等衛星細胞保持與骨骼肌纖維相鄰，定位在肌纖維膜與肌內膜(將肌肉束劃分成個別纖維的結締組織覆蓋物)之底膜之間。為了重新啟動肌肉生成，必須對衛星細胞進行刺激以便分化成新纖維。發明人已鑑別CK1抑制劑促進衛星細胞之此分化，因而最終促進肌管形成及肌肉生成。

已知p38抑制劑損害骨骼肌生物學之正常運作，尤其損害增殖肌母細胞經歷分化及隨後融合以形成多核肌管。本發明提供用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的CK1抑制劑，其中CK1抑制劑用於促進肌原性融合及/或分化。此經促進之融合及分化有助於恢復健康骨骼肌生物學。較佳地，受試者亦患有肌肉發炎；此情況使得能夠實現如本文中別處描述之經改良之用途。

在較佳實施例中，CK1抑制劑用於促進肌原性融合。肌原性融合係肌肉形成及肌肉再生典型的，並且其可使用任何已知方法來評定。較佳地，其使用影像分析，更佳使用高含量影像分析，最佳如實例所描述來評定。在較佳實施例中，用於促進肌原性融合之CK1抑制劑增加肌原性融合至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、90、95、100%或更多，較佳至少10%或更多，更佳至少30%或更多，甚至更佳至少50%或更多。可能沒有肌原性融合存在於受試者或肌肉或樣品中。在此情況下，用於促進肌原性融合之CK1抑制劑較佳恢復肌原性融合，更佳至健康對照之至少1%、5%、10%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%或更多，甚至更佳至健康對照之至少5%，更佳至健康對照之至少15%，最佳至少25%。

在較佳實施例中，CK1抑制劑用於促進肌原性分化。在此等實施例中，細胞較佳為原代細胞。在此等實施例中，細胞較佳並非永生化細胞。肌原性分化可使用在此項技術中已知之方法來評定，諸如定量肌原性分化標記物諸如MYH2、MyoD、Myf5、肌細胞生成素、及MRF4，較佳諸如肌細胞生成素或MYH2。在較佳實施例中，用於促進肌原性分化之CK1抑制劑增加肌原性分化至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、90、95、100%或更多，較佳至少10%或更多，更佳至少30%或更多，甚至更佳至少50%或更多。可能沒有肌原性分化存在於受試者或肌肉或樣品中。在此情況下，用於促進肌原性分化之CK1抑制劑較佳恢復肌原性分化，更佳至健康對照之至少1%、5%、10%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%或更多，甚至更佳至健康對照之至少5%，更佳至健康對照之至少15%，最佳至少25%。

在較佳實施例中，根據本發明之組合用於促進肌原性融合，其中特徵及定義如在本文中別處定義。在較佳實施例中，根據本發明之組合用於促進肌原性分化，其中特徵及定義如在本文中別處定義。在較佳實施例中，根據本發明之組合用於促進肌原性融合及/或分化，其中特徵及定義如在本文中別處定義。組合之用途係尤其有益的，因為CK1抑制劑之活性減輕進一步試劑，諸如p38抑制劑之有害副作用。當用於在此部分中描述之用途時，根據本發明之組合較佳包含p38抑制劑作為進一步試劑。已知此p38抑制劑損害肌原性融合及/或分化。發明人已發現對於DUX4減少之意外協同效應，並且已鑑別CK1抑制劑適合於減少p38抑制劑對於肌肉細胞之不當副作用。治療患有肌肉發炎之營養不良患者

在較佳實施例中，如本文定義之CK1抑制劑或如本文定義之組合用於治療患有DUX4相關病狀及肌肉發炎兩者之患者。肌肉發炎造成肌營養不良諸如FSHD之病理生理學。其先於肌肉破壞及脂肪置換，由此代表疾病活性之早期標記物。肌肉發炎可使用在此項技術中已知之方法來鑑別。較佳地，肌肉發炎藉由使用生檢及使用具有短TI反轉回復(short TI inversion recovery；STIR)之MRI序列，較佳使用具有STIR之MRI中之至少一者來鑑別。STIR高強度(STIR+)使與發炎相關之浮腫得以顯現。較佳發炎肌肉係STIR+肌肉。較佳肌肉生檢係來自STIR+肌肉之生檢。較佳肌肉發炎係MAPK相關肌肉發炎，更佳與編碼蛋白諸如TNF-a、IL-1b、IL-6、及IL-8之發炎性反應相關基因之轉錄及轉譯相關之肌肉發炎。肌肉發炎預測肌肉之更快脂肪置換。p38抑制劑為已知抗發炎劑，但是減少肌原性融合並且損害肌原性分化及再生。CK1抑制劑及p38抑制劑之組合克服此等問題並且導致DUX4表現之協同減少。

患有肌肉發炎之較佳受試者具有至少一個發炎肌肉，更佳至少2個，甚至更佳至少3個，甚至更佳至少4個，甚至更佳至少5個，最佳至少6個、7個、8個、9個、10個、或11個。較佳地發炎肌肉係骨骼肌，更佳地其為面部、肩胛骨、或上臂之骨骼肌。患有肌肉發炎之較佳受試者係亦患有肌營養不良，更佳亦患有FSHD之受試者。較佳地，患有FSHD之此受試者具有至少一個發炎肌肉，更佳至少一個STIR+肌肉。

本發明提供用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的酪蛋白激酶1抑制劑，其中受試者患有肌肉發炎。在較佳實施例中，本發明提供用於治療FSHD之酪蛋白激酶1抑制劑，其中受試者患有肌肉發炎。在較佳實施例中，本發明提供用於治療FSHD之酪蛋白激酶1抑制劑，其中受試者患有至少一個發炎肌肉，較佳面部、肩胛骨、或上臂之至少一個發炎骨骼肌。此肌肉較佳為STIR+的。已知肌肉發炎先於脂肪浸潤。因此，本發明提供用於預防或延遲患有FSHD之受試者之肌肉中之脂肪浸潤的酪蛋白激酶1抑制劑。

本發明提供用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的根據本發明之組合，其中受試者患有如在本文中定義之肌肉發炎。在較佳實施例中，本發明提供用於治療FSHD之根據本發明之組合，其中受試者患有肌肉發炎。在較佳實施例中，本發明提供用於治療FSHD之根據本發明之組合，其中受試者患有至少一個發炎肌肉，較佳面部、肩胛骨、或上臂之至少一個發炎骨骼肌。此肌肉較佳為STIR+的。已知肌肉發炎先於脂肪浸潤。因此，本發明提供用於預防或延遲患有FSHD之受試者之肌肉中之脂肪浸潤的根據本發明之組合。

當用於在此部分中描述之用途時，根據本發明之組合較佳包含p38抑制劑作為進一步試劑。已知此p38抑制劑具有抗發炎活性。發明人已發現對於DUX4減少之意外協同效應，並且已鑑別CK1抑制劑適合於減少p38抑制劑對於肌肉細胞之不當副作用。 酪蛋白激酶1抑制劑

酪蛋白激酶1抑制劑(Casein kinase 1 inhibitors；CK1抑制劑)在此項技術中為已知的。較佳CK1抑制劑為小分子。較佳地，在本發明中，酪蛋白激酶1抑制劑具有一般結構式(1a)、(1b)、(2a)、(2b)、(3a)、(3b)、或(4)：

其中X及Y獨立地為=N-、-NR¹ -、CR¹ 、-O-、或-S-，限制條件為X及Y中之至少一者為CR¹ ， 環A為不存在(因此事實上其為兩個H)或4至7員環烷基或雜環烷基或5至6員雜芳基，其中多達2個碳原子經選自=N-、-NR² -、-O-、-S-之雜原子置換並且任何其餘碳原子可經R³ 取代，只要化合價允許；較佳地，環A為4至7員環烷基或雜環烷基或5至6員雜芳基，其中多達2個碳原子經選自=N-、-NR² -、-O-、-S-之雜原子置換並且任何其餘碳原子可經R³ 取代，只要化合價允許； 各R¹ 獨立地為H，C_1-4 烷基，C_3-6 環烷基，-CF₃ ，-(CH₂ )_1-3 CF₃ ，4至10員芳基，4至10員雜芳基，4至10員雜環烷基，其中該芳基、雜芳基、或雜環烷基可經一個、兩個、或三個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、OH、側氧基、氰基、-SO₂ CH₃ 、視情況經甲醇或乙醇來酯化之羧酸、羧醯胺、硝基、C_1-6 烷氧基、C_1-6 烷基、或C_1-6 烷基-O-C_1-6 烷基；較佳，各R¹ 獨立地為H，C_1-6 烷基，C_3-6 環烷基，-CF₃ ，-(CH₂ )_1-3 -CF₃ ，4至10員雜環烷基，其中該雜環烷基可經多達兩個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、OH、側氧基、氰基、C_1-6 烷基、或C_1-6 烷基-O-C_1-6 烷基；其中當X為CR¹ 時，該CR¹ 部分中之R¹ 亦可為-S-(CH₂ )_0-3 CH₃ 或-(S=O)-(CH₂ )_0-3 CH₃ ； 各R² 獨立地為H、C_1-6 烷基、C_4-10 -二環烷基、-(CH₂ )_t -CN、-SO₂ -C_1-6 烷基、-SO₂ (CH₂ )_t C_3-6 環烷基、-C_1-6 烷基-O-C_1-6 烷基、-C_1-6 烷基-C(O)O-C_1-6 烷基、-C_3-6 環烷基-C(O)O-C_1-6 烷基、-C(O)-(O)_u -C_1-6 烷基、-C(O)-C_1-6 烷基-O-C_1-6 烷基、-C(O)-(O)_u -(CH₂ )_t -(C_6-10 芳基)、-(CH₂ )_t -(C_6-10 芳基)、-C(O)-(O)_u -(CH₂ )_t -(5至10員雜芳基)、-(CH₂ )_t -C(O)-NR⁵ R⁶ 、-(CH₂ )_t -(5至10員雜芳基)、-C(O)-(O)_u -(CH₂ )_t -(3至10員雜環烷基)、-(CH₂ )_t -(4至10員雜環烷基)、-C(O)-(O)_u -(CH₂ )_t -(3至10員環烷基)、或-(CH₂ )_t -(3至10員環烷基)， 其中R² 之該芳基、雜芳基、環烷基、及雜環烷基可經多達兩個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、OH、氰基、C_1-6 烷基、或C_1-6 烷基-O-C_1-6 烷基， 並且其中R² 之任何烷基、環烷基、及雜環烷基可進一步經側氧基取代，只要化合價允許； 各R³ 獨立地為不存在、C_1-3 烷基、鹵素、側氧基、-NR⁵ R⁶ 、或-OR⁵ ； 各R⁴ 獨立地為鹵素、-CF₃ 、C_1-3 烷基、-(CH₂ )_t -C_3-4 環烷基、-(CH₂ )_t -O-C_1-3 烷基、-(CH₂ )_t -氰基、或-(CH₂ )_t -羥基，其中鹵素較佳為F並且較佳處於包含X及Y之五員環之對位，其中C_1-3 烷基較佳為甲基並且較佳處於包含X及Y之五員環之間位；較佳，各R⁴ 獨立地為鹵素、-CF₃ 、C_1-3 烷基、-(CH₂ )_t -C_3-4 環烷基、-(CH₂ )_t -O-C_1-3 烷基、-(CH₂ )_t -氰基、或-(CH₂ )_t -羥基； 各R⁵ 獨立地為H或C_1-6 烷基； 各R⁶ 獨立地為H或C_1-6 烷基； 或當化合物為通式(2a)時，R⁵ 及R⁶ 可與其連接之碳原子一起形成-S-或-O-； R⁷ 為H、鹵素、或C_1-3 烷基、或-Nr⁷ r’⁷ ；其中當R⁷ 為-Nr⁷ r’⁷ 時，其較佳處於其連接之吡啶基部分中之氮的鄰位； n為0、1、或2；較佳1； 各t獨立地為0、1、或2； 各u獨立地為0或1； r⁷ 及r’⁷ 各自獨立地為H或-(C=O)_0-1 (NH)_0-1 (CH₂ )_0-4 O_0-1 r⁸ ；或r⁷ 及r’⁷ 與其連接之氮一起形成環狀結構；較佳r⁷ 及r’⁷ 中之至少一者為H；較佳由r⁷ 及r’⁷ 形成之環狀結構為5、6、或7員，更佳其為哌嗪-1-基或4-(R⁵ )哌嗪-1-基或4-苯基哌嗪-1-基；其中在較佳實施例中r⁷ 為H並且r’⁷ 為r⁸ ； r⁸ 為H、C_1-6 烷基、經取代C_1-6 烷基、C_1-6 醯基、經取代C_1-6 醯基、環己基、具有1或2個雜原子取代之環己基、苯基、經取代苯基、萘基、吡咯基、經取代吡咯基、吲哚基、經取代吲哚基、或NR⁵ R⁶ ，其中r⁸ 中之醯基或烷基部分視情況不飽和，其中r⁸ 中之取代較佳選自鹵素、三氟甲基、甲基、乙基、苯基、氟苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、及苯氧基；較佳r⁸ 為甲氧基苯基、二甲氧基苯基、乙氧基苯基、吲哚基、二甲胺、甲苯基、氯甲苯基、三氟甲基苯基、萘基、1-甲基吡咯-2-基、及4-二甲氧基苯基-1-甲基吡咯-2-基；其中更佳r⁸ 為C_1-6 烷基諸如丁-2-基，噁烷基諸如噁烷-4-基，1-苯乙-1-基，乙醯基，對氟苯乙醯基，2-苯氧丙醯基，或3-(o,p-二甲氧基苯基)-丙烯醯基，其中當r₈ 為經取代吡咯基時，其較佳為1-(r⁹ )-4-(r¹⁰ )-5-(r¹¹ )-吡咯-2-基； r⁹ 為R⁵ 或經0、1、2、或3個羥基及0或1個r’¹¹ 部分取代之-(CH₂ )_0-2 吡咯啶基，較佳r⁹ 為甲基或-CH₂ -(3,4-二羥基吡咯啶-2-基)或-CH₂ -(3,4-二羥基-5-r’¹¹ -吡咯啶-2-基)； r¹⁰ 為H或苯基或甲氧基化苯基，其中甲氧基化苯基較佳為對甲氧基苯基或o,p-二甲氧基苯基； r¹¹ 為H或經由-CH₂ -或-CH₂ CH₂ -部分，較佳經由-CH₂ -部分來連接至r’¹¹ ； r’¹¹ 為H或經由-CH₂ -或-CH₂ CH₂ -部分，較佳經由-CH₂ -部分來連接至r¹¹ ； 並且其中 A’為4至7員環烷基、含氮4至7員雜環烷基，或替代地A’可直接融合至其經由R’¹ 連接之環；較佳，A’為含氮4至7員雜環烷基，或替代地A’可直接融合至其經由R’¹ 連接之環； L為C_1-3 烷基； R’¹ 為氫、C_1-3 烷基、或C_3-4 環烷基； 各R’² 獨立地為C_1-3 烷基、氟、羥基、C_1-3 烷氧基、或氰基； R’³ 為氫、C_1-3 烷基、或C_3-4 環烷基； R’⁴ 為具有1至3個雜原子之5至10員雜芳基，視情況經1至3個R⁴ 取代基取代； R’⁵ 為氫或-N(R⁸ )₂ ； Z為N或-CR⁹ ； 各R⁸ 獨立地為氫或C_1-3 烷基； R⁹ 為氫、C_1-3 烷基；或鹵素； m為0、1或2； q為1、2、或3； 並且其中 R’’² 表示視情況經一或多個選自以下各者之取代基取代的芳基：鹵素、C_1-6 烷基、C_1-6 烷氧基、C_1-6 烷硫基、C_1-6 氟烷基、C_1-6 氟烷氧基及-CN； R’’³ 表示H、C_1-3 烷基、-NR’’⁴ R’’⁵ 、羥基、或C_1-4 烷氧基；或R’’³ 與其連接之碳一起為N；較佳R’’³ 與其連接之碳一起為N； A’’表示視情況經一或兩個R^a 取代之C_1-7 伸烷基； B表示視情況經R^b 取代之C_1-7 伸烷基； L’’表示經R^c 或R^d 取代之N，或經R^e1 及R^d 或經兩個基團R^e2 取代之C； A’’及B之碳原子視情況經一或多個基團R^f 取代，該等基團可彼此相同或不同； R^a 、R^b 及R^c 經定義以使得： 兩個基團R^a 可一起形成C_1-6 伸烷基； R^a 及R^b 可一起形成一鍵或C_1-6 伸烷基； R^a 及R^c 可一起形成一鍵或C_1-6 伸烷基； R^b 及R^c 可一起形成一鍵或C_1-6 伸烷基； R^d 表示選自以下之基團：H、C_1-6 烷基、C_3-7 環烷基、C_3-7 環烷基-C_1-6 烷基、C_1-6 烷硫基-C_1-6 烷基、C_1-6 烷氧基-C_1-6 烷基、C_1-6 氟烷基、苄基、C_1-6 醯基、及羥基-C_1-6 烷基； R^e1 表示-NR’’⁴ R’’⁵ 或視情況包含氧原子之環狀單胺，環狀單胺視情況經一或多個選自以下各者之取代基取代：F、C_1-6 烷基、C_1-6 烷氧基、及羥基； 兩個基團R^e2 與攜帶其之碳原子一起形成視情況包含氧原子之環狀單胺，此環狀單胺視情況經一或多個R^f 取代，該等基因可彼此相同或不同； R^f 表示C_1-6 烷基、C_3-7 環烷基、C_3-7 環烷基C_1-6 烷基、C_1-6 烷氧基-C_1-6 烷基、羥基-C_1-6 烷基、C_1-6 氟烷基或苄基； R’’⁴ 及R’’⁵ 各自獨立地表示H、C_1-4 烷基、C_3-7 環烷基、或C_3-7 環烷基-C_1-6 烷基； 並且其中 X¹ 選自O及NQ⁶ ；限制條件為當X¹ 為NQ⁶ 時，Q⁵ 及Q⁶ 與其分別連接之氮原子及相鄰碳原子一起形成雜環環，該雜環環包含碳原子及零至3個選自N、NQ⁸ 、O、S之額外雜原子並且經1-5個Q¹⁰ 取代； Q¹ 為視情況經鹵素、OH、CN、及NQ^a Q^a 取代之C_1-4 烷基，或Q¹ 為經0-5個Q¹¹ 取代之-(CQ^d Q^d )_r -碳環基，及包含碳原子及1至4個選自N、NQ⁹ 、O、S之雜原子，並且經0-5個Q¹¹ 取代之-(CQ^d Q^d )_r -雜環基； Q² 選自H、C_1-4 烷基、鹵素、CN、芳基、及雜芳基； Q³ 選自H及C_1-4 烷基； Q⁴ 選自H、C_1-4 烷基鹵素、及CN； Q⁵ 選自H、經0-4個Q^e 取代之C_1-4 烷基，經0-4個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -C_3-6 碳環基，及包含碳原子及1至3選自N、O、S之雜原子，並且經0-4個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -雜環基； Q⁷ 為經0-3個Q^e 取代之芳基； Q⁸ 選自H、經0-3個Q^e 取代之C_1-4 烷基、-(CH₂ )_r CN、-(CH₂ )_r OQ^b 、-(CH₂ )_r S(O)_p Q^c 、-(CH₂ )_r C(=O)Q^b 、-(CH₂ )_r NQ^a Q^a 、-(CH₂ )_r C(=O)NQ^a Q^a 、經0-3個Q^e 取代之-(CH₂ )_r C(=O)-C_1-4 烷基、-(CH₂ )_r NQ^a C(=O)Q^b 、-(CH₂ )_r NQ^a C(=O)OQ^b 、-(CH₂ )_r OC(=O)NQ^a Q^a 、-(CH₂ )_r NQ^a C(=O)NQ^a Q^a 、-(CH₂ )_r C(=O)OQ^b 、-(CH₂ )rS(O)₂ NQ^a Q^a -(CH₂ )_r NQ^a S(O)₂ NQ^a Q^a 、-(CH₂ )_r NQ^a S(O)₂ Q^c 、經0-3個Qe取代之-(CH₂ )_r -碳環基、及經0-3個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -雜環基； Q⁹ 選自H、-C(=O)Q^b 、經0-5個Q^e 取代之C_1-6 烷基、經0-5個Qe取代之-(CH₂ )_r -C_3-6 碳環基、及經0-5個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -雜環基； Q¹⁰ 選自H、經0-3個Q^e 取代之C_1-6 烷基、-(CH₂ )_r NQ^a Q^a -(CH₂ )_r C(=O)Q^b 、-(CH₂ )_r C(=O)OQ^b ,-(CH₂ )_r C(=O)NQ^a Q^a ,-S(O)_p Q^c 、經0-3個Q^e 取代之-(CH₂ )C_3-6 碳環基、及經0-3個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -雜環基； 各Q¹¹ 獨立地選自H、鹵素、=O、CN、NO₂ 、-OQ^b 、-S(O)^p Q^c 、-C(=O)Q_b 、-(CQ^d Q^d )_r NQ^a Q^a 、-(CQ^d Q^d )_r C(=O)NQ^a Q^a 、-NQ^a C(=O)Q^b 、-NQ^a C(=O)OQ^b 、-OC(=O)NQ^a Q^a 、-NQ^a C(=O)NQ^a Q^a 、-(CQ^d Q^d )_r C(=O)OQ^b 、-S(O)₂ NQ^a Q^a 、-NQ^a S(O)₂ NQ^a Q^a 、-NQ^a S(O)₂ Q^c 、經0-5個Q^e 取代之C_1-6 烷基、經0-5個Q^e 取代之-(CQ^d Q^d )_r -C_3-6 碳環基、及經0-5個Q^e 取代之-(CQ^d Q^d )_r -雜環基； 各Q^a 獨立地選自H、CN、經0-5個Q^e 取代之C_1-6 烷基、經0-5個Q^e 取代之C_2-6 烯基、經0-5個Q^e 取代之C_2-6 炔基、經0-5個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -C_3-10 碳環基、及經0-5個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -雜環基；或Q^a 之兩個實例與其均連接之氮原子一起形成雜環環，該雜環環經0-5個Q^e 取代； 各Q^b 獨立地選自H、經0-5個Q^e 取代之C_1-6 烷基、經0-5個Q^e 取代之C_2-6 烯基、經0-5個Q^e 取代之C_2-6 炔基、經0-5個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -C_3-10 碳環基、及經0-5個Q^e 取代之-(CH₂ )_r -雜環基； 各Q^c 獨立地選自經0-5個Q^e 取代之C_1-6 烷基、經0-5個Q^e 取代之C_2-6 烯基、經0-5個Q^e 取代之C_2-6 炔基、經0-5個Q^e 取代之C_3-6 碳環基、及經0-5個Q^e 取代之雜環基； 各Q^d 獨立地選自H及經0-5個Q^e 取代之C_1-4 烷基； 各Q^e 獨立地選自經0-5個Q^f 取代之C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、-(CH₂ )_r C_3-6 環烷基、鹵素、CN、NO₂ 、=O、CO₂ H、-(CH₂ )_r OQ^f 、SQ^f 、及-(CH₂ )_r NQ^f Q^f ； 各Q^f 獨立地選自H、F、C_1-5 烷基、C_3-6 環烷基、及苯基，或Q^f 之兩個實例與其均連接之氮原子一起形成雜環環，該雜環環視情況經C_1-4 烷基取代； 各p獨立地為0、1、或2；及 各r獨立地為0、1、2、3、或4， 並且其中 X² 選自-NH-、-CH₂ -、-CH(Ph)-、-CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH(Ph)-、-CH=CH-、-CH₂ OCH₂ -、-CH₂ NHC(O)-、-CH₂ NHC(O)CH(Ph)-及-CH₂ NHC(O)CH₂ -， Q’¹ 選自Q’⁶ 、鹵素、-CF₃ 、-OCF₃ 、-OQ’⁶ 、-CO₂ Q’⁶ 、-SO₂ N(Q’⁶ )₂ 、及-NO₂ ； Q’² 、Q’³ 、Q’⁴ 、及Q’⁵ 獨立地選自H、鹵素、C_1-6 烷氧基、-NH₂ 、-NHQ’6、-CN、-NO₂ 、-OCF3、及-CO₂ Q’⁶ ；其中 Q’⁶ 選自H及C_1-6 烷基；並且其中當X² 為-CH(Ph)-、-CH₂ CH(Ph)-或-CH₂ NHC(O)CH(Ph)-時，則Q‘² 、Q’³ 、Q’⁴ 、及Q’⁵ 為H， e¹ 為S、O、或NR⁵ ，較佳S、O、或NH； e² 及e’² 各自獨立地為H、鹵素、C_1-3 烷基、鹵化C_1-3 烷基、C_1-3 烷氧基、S(=O)_0-2 C_1-3 烷基、及[C(=O)O]C_1-3 烷基，或e² 及e’² 一起形成3至6員環狀結構；較佳e² 及e’² 中之至少一者不為H；更佳e² 及e’² 各自獨立地為H、三氟甲基、S(O)2CH3、C(=O)OCH3、Cl、F，或一起形成-O-CF₂ -O-； e³ 為經取代苯基、經取代吡啶基、經取代噻唑基、經取代噁唑基、或-CH₂ -S-2-((3-(e⁴ )-4-側氧基-3,4,6,7-四氫噻吩[3,2-d]嘧啶-2-基)；其中e³ 中之取代較佳為-OR⁵ 、鹵化-OR⁵ 、-NH₂ 、-NHR⁵ 、N(CH₃ )R⁵ 、四唑基、C(=O)OR⁵ 、或-NH-C(=O)-e⁵ ；其中-NH-C(=O)-e⁵ 部分較佳處於單獨經取代噻唑基之2位，更佳該經取代噻唑基為噻唑-4-基； e⁴ 為苯基、經取代苯基、苄基、或經取代苄基，其中e⁴ 中之取代較佳為C_1-3 烷基、C_1-3 烷氧基、鹵化C_1-3 烷基、或鹵化C_1-3 烷氧基，更佳甲氧基、三氟甲基、或三氟甲氧基；最佳e⁴ 為苯基、苄基、對甲氧基苄基、o,m-二甲氧基苄基、間三氟甲基苄基、對三氟甲基苄基、或對三氟甲氧基苄基； e⁵ 為苯基、經取代苯基、嘧啶基、或經取代嘧啶基、呋喃基、或經取代呋喃基，其中e⁵ 處之取代較佳為C_1-3 烷基、C_1-3 烷氧基、鹵化C_1-3 烷基、或鹵化C_1-3 烷氧基，更佳-OCF₃ ；較佳e⁵ 為2-三氟甲氧基苯基、吡啶-4-基、或呋喃-2-基、最佳2-三氟甲氧基苯基； q¹ 為H或視情況經1-5個鹵素取代之C_2-8 烴，較佳視情況經1-5個鹵素取代之C_2-8 烴，其中鹵素較佳為氟，其中C_2-8 烴較佳為乙基、異丙基、苯基、噻吩基、吡啶基、或甲苯基，其中甲苯基較佳為鄰甲苯基，其中甲苯基較佳經鹵化，更佳在其甲基部分處經三鹵化，其中苯基較佳經鹵化，更佳其為間氟苯基、對氟苯基、m,p-二氟苯基、o,m-二氟苯基、m,m-二氟苯基、o,p-二氟苯基、或2,5-二氟苯基，其中噻吩基較佳為3-噻吩基，其中吡啶基較佳經鹵化或甲基化，其中鹵化吡啶基較佳為2-氟吡啶基諸如2-氟吡啶-4-基或6-氯吡啶基諸如6-氯吡啶-3-基；其中甲基化吡啶基較佳為2-甲基吡啶基諸如2-甲基吡啶-4-基；最佳q¹ 為異丙基、間氟苯基，或吡啶-3-基； q² 為H、NH₂ 、NHq³ 、或Nq³ q⁴ ；更佳q² 為H、N-嗎啉基、4-甲基-1-哌嗪基、或1-哌嗪基，最佳H或N-嗎啉基； q³ 為-(CH₂ )_r -OH、-(CH₂ )_r -H、或-(CH₂ )_r -Nq^3’ q^4’ ；較佳q³ 為-CH₂ CH₂ OH、-CH₂ CH₂ CH₂ CH₃ 、-CH₂ CH₂ CH₂ Nq^3’ q^4’ 、-CH₂ CH₂ Nq^3’ q^4’ 、或-CH₂ Nq^3’ q^4’ ；其中q^3’ 及q^4’ 一起形成5至7員環烴，較佳6員環烴，其中環烴視情況經一或多個甲氧基、羥甲基、胺基、甲基胺基、二甲基胺基、或側氧基部分取代，其中環烴可在其環中包含除了q² 之氮以外的雜原子，較佳O或S；較佳地，當q⁴ 及q³ 一起形成環烴時，q⁴ 及q³ 表示-CH₂ CH₂ OCH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ SCH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (SO₂ )CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (SO)CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (CO)CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[NHCH₃ ])CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[NH₂ ])CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[N(CH₃ )₂ ])CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ NHCH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (NCH₃ )CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[CH₂ OH])CH₂ CH₂ -、或-CH₂ CH₂ (COCH₃ )CH₂ CH₂ -； 或當q⁴ 存在時，q³ 與q⁴ 一起形成5至7員環烴，較佳6員環烴，其中環烴視情況經一或多個甲氧基、羥甲基、胺基、甲基胺基、二甲基胺基、或側氧基部分取代，其中環烴可在其環中包含除了q² 之氮以外的雜原子，較佳O或S；較佳地，當q⁴ 及q³ 一起形成環烴時，q⁴ 及q³ 表示-CH₂ CH₂ OCH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ SCH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (SO₂ )CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (SO)CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (CO)CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[NHCH₃ ])CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[NH₂ ])CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[N(CH₃ )₂ ])CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ NHCH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (NCH₃ )CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ (C[CH₂ OH])CH₂ CH₂ -、或-CH₂ CH₂ (COCH₃ )CH₂ CH₂ -； c¹ 及c² 與其連接之碳原子一起形成視情況經取代之5至10員環狀結構，其中視情況之取代較佳為甲基、三氟甲基、鹵素、苯基、1-哌嗪基、4-甲基-1-哌嗪基、或甲氧基，更佳三氟甲基、鹵素、或甲氧基，其中5至10員環狀結構較佳為苯基，吡啶基諸如吡啶-2-基或吡啶-3-基，吲哚基諸如吲哚-2-基，苯并咪唑基諸如苯并咪唑-2-基，苯并噻唑基諸如苯并噻唑-2-基，苯并噁唑基諸如苯并噁唑-2-基，茚基諸如茚-2-基，咪唑基諸如咪唑-2-基，噻唑基諸如噻唑-2-基，或噁唑基諸如噁唑-2-基；更佳5至10員環狀結構為苯基、三氟甲基苯-3-基、氟酚-2-基、苯并咪唑-2-基、5-氯苯并咪唑-2-基、5,6-二氯苯并咪唑-2-基、5-氟苯并咪唑-2-基、5,6-二氟苯并咪唑-2-基、5-甲氧基苯并咪唑-2-基、5,6-二甲氧基苯并咪唑-2-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、6-甲基吡啶-2-基、5-甲基吡啶-2-基、咪唑-2-基、噁唑-2-基、噻唑-2-基、4-苯咪唑-2-基、4-苯噁唑-2-基、4-苯噻唑-2-基、4,5-二氟苯并咪唑-2-基、4,5-二氯苯并咪唑-2-基、4,5-二甲氧基苯并咪唑-2-基、1-(1-甲基哌嗪-4-基)苯-4-基、3-(1-甲基哌嗪-4-基)吡啶-6-基、苯并噻唑-2-基、或苯并噁唑-2-基；最佳5至10員環狀結構為苯基、間三氟甲基苯基、或4,5-二氟苯并咪唑-2-基； 或其異構物或醫藥學上可接受之鹽。

2-((3-(e⁴ )-4-側氧基-3,4,6,7-四氫噻吩[3,2-d]嘧啶-2-基)

CK1抑制劑可為SR-3029。

在較佳實施例中，CK1抑制劑具有通式(Ia)或(Ib)、或異構物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X、Y、A、R¹ 、R² 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、n、t、u、A’、L、R’¹ 、R’² 、R’³ 、R’⁴ 、R’⁵ 、Z、R⁸ 、R⁹ 、m、及q及其他變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，其具有通式(Ia)、或其異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中X、Y、A、R¹ 、R² 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、n、t、u、A’、L、R’¹ 、R’² 、R’³ 、R’⁴ 、R’⁵ 、Z、R⁸ 、R⁹ 、m、及q及其他變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，其具有通式(Ib)、或其異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中X、Y、A、R¹ 、R² 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、n、t、u、A’、L、R’¹ 、R’² 、R’³ 、R’⁴ 、R’⁵ 、Z、R⁸ 、R⁹ 、m、及q及其他變數如上文定義。此類別之CK1抑制劑本身在此項技術中為已知的並且其結構及合成在例如WO2011051858、WO2012085721、及WO2015119579，或在Halekotte等人，Molecules 2017，DOI:10.3390/molecules22040522，或在Luxenburger等人，Molecules 2019，DOI:10.3390/molecules24050873，或在Peifer等人，J. Med.Chem.2009, 52, 7618-7630 DOI:10.1021/jm9005127中更詳細地描述。

較佳地，當R⁷ 為-Nr⁷ r’⁷ 時，Y為NH，X為C(S-CH₃ )或C([S=O]-CH₃ )，R⁴ 為F及對位，n為1，A為不存在，並且r⁷ 及r’⁷ 中之一者為H。另外，較佳地，當R⁷ 為-Nr⁷ r’⁷ 時，X為-O-，Y為C(異丙基)，R⁴ 為F及對位，n為1，A為不存在，並且r⁷ 及r’⁷ 中之一者為H。

此類別之CK1抑制劑包含唑核心。在此態樣之較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑來自包含唑核心之類別。更佳，供使用之此等CK1抑制劑包含4-芳基-5-雜芳基-1-雜環烷基-咪唑部分。較佳地，對於此等抑制劑而言，單一R⁴ 處於唑核心之對位而存在；更佳此R⁴ 為F。因此，在進一步更佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑包含連接至4-鹵苯基部分，較佳4-氟苯基部分之唑核心。包含唑核心之高度較佳化合物為如表3展示之化合物D、E、F、及G；化合物D為甚至更佳的。此類別中之其他較佳化合物為Halekotte等人之表1中展示之化合物、Luxenburger等人之表1中展示之化合物、Luxenburger等人之表3中展示之化合物、Peifer等人之表3展示之化合物、及Peifer等人之表4中之化合物。

在較佳實施例中，CK1抑制劑具有通式(2a)或(2b)、或其異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中R⁵ 、R⁶ 、R’’² 、R’’³ 、A’’、B、L’’、R^a 、R^b 、R^c 、R^d 、R^e1 、R^e2 、R^f 、R’’⁴ 、R’’⁵ 、X¹ 、Q¹ 、Q² 、Q³ 、Q⁴ 、Q⁵ 、Q⁶ 、Q⁷ 、Q⁸ 、Q⁹ 、Q¹⁰ 、Q¹¹ 、Q^a 、Q^b 、Q^c 、Q^d 、Q^e 、Q^f 、r、及p如上文定義。在進一步較佳實施例中，其為通式(2a)或其異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中R⁵ 、R⁶ 、R’’² 、R’’³ 、A’’、B、L’’、R^a 、R^b 、R^c 、R^d 、R^e1 、R^e2 、R^f 、R’’⁴ 、R’’⁵ 、X¹ 、Q¹ 、Q² 、Q³ 、Q⁴ 、Q⁵ 、Q⁶ 、Q⁷ 、Q⁸ 、Q⁹ 、Q¹⁰ 、Q¹¹ 、Q^a 、Q^b 、Q^c 、Q^d 、Q^e 、Q^f 、p、及r如上文定義。在進一步較佳實施例中，其為通式(2b)或其異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中R⁵ 、R⁶ 、R’’² 、R’’³ 、A’’、B、L’’、R^a 、R^b 、R^c 、R^d 、R^e1 、R^e2 、R^f 、R’’⁴ 、R’’⁵ 、X¹ 、Q¹ 、Q² 、Q³ 、Q⁴ 、Q⁵ 、Q⁶ 、Q⁷ 、Q⁸ 、Q⁹ 、Q¹⁰ 、Q¹¹ 、Q^a 、Q^b 、Q^c 、Q^d 、Q^e 、Q^f 、p、及r如上文定義。此類別之CK1抑制劑本身在此項技術中為已知並且其結構及合成在例如WO2009016286及WO2015195880及WO2009037394及WO2010/130934中更詳細地描述。

此類別之CK1抑制劑包含咪唑并[l,2-b]噠嗪 核心。在此態樣之較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑來自包含咪唑并[l,2-b]噠嗪核心之類別。具有咪唑并[l,2-b]噠嗪核心之CK1抑制劑更佳具有3-(吡啶-4-基)咪唑并[l,2-b]噠嗪核心，甚至更佳6-環-3-(吡啶-4-基)咪唑并[l,2-b]噠嗪核心。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑包含唑核心或包含咪唑并[l,2-b]噠嗪核心。其中R’’³ 與其連接之碳一起形成N的通式(2a)之CK1抑制劑從WO2009037394為已知的。其中此等原子形成N之較佳此類化合物為以下：

以下化合物：

係其中化合物具有通式(2a)並且R⁵ 及R⁶ 與其連接之碳原子一起形成-S-的較佳化合物；此等化合物從WO2010/130934為已知的。

在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(1a)、(1b)、(2a)、或(2b)，其中X、Y、A、R¹ 、R² 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、n、t、u、A’、L、R’¹ 、R’² 、R’³ 、R’⁴ 、R’⁵ 、Z、R⁸ 、R⁹ 、m、q、R’’² 、R’’³ 、A’’、B、L’’、R^a 、R^b 、R^c 、R^d 、R^e1 、R^e2 、R^f 、R’’⁴ 、R’’⁵ 、X¹ 、Q¹ 、Q² 、Q³ 、Q⁴ 、Q⁵ 、Q⁶ 、Q⁷ 、Q⁸ 、Q⁹ 、Q¹⁰ 、Q¹¹ 、Q^a 、Q^b 、Q^c 、Q^d 、Q^e 、Q^f 、r、及p如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(1a)、(1b)、(2a)、(2b)、(3a)、或(3b)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(1a)、(1b)、(2a)、(2b)、(3a)、(3b)、或(4)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(1a)、(1b)、(3a)、或(3b)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(1a)、(1b)、(3a)、(3b)、或(4)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑通式(2a)、(2b)、(3a)、或(3b)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑通式(2a)，(2b)，(3a)，(3b)，或(4)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(1a)、(1b)、或(4)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(2a)、(2b)、或(4)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(3a)、(3b)、或(4)，其中變數如上文定義。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑具有通式(1a)、(1b)、(2a)、(2b)、或(4)，其中變數如上文定義。

在較佳實施例中，CK1抑制劑具有通式(3a)或(3b)或其異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中X² 、Q’¹ 、Q’² 、Q’³ 、Q’⁴ 、Q’⁵ 、及Q’⁶ 及其他變數如上文定義。此類別之CK1抑制劑本身在此項技術中為已知的並且其結構及合成在例如EP2949651，Bischof等人，Amino Acids (2012) 43:1577-1591 DOI:10.1007/s00726-012-1234-x，García-Reyes等人，J. Med.Chem.2018, 61, 4087-4102, DOI:10.1021/acs.jmedchem.8b00095，及Richter等人，J. Med.Chem.，DOI:10.1021/jm500600b中更詳細地描述。當CK1抑制劑具有通式(3a)時，X² 較佳為-CH₂ -、-CH₂ CH₂ -、-CH(Ph)-、或-NH-，最佳-CH₂ -；Q’1較佳為-CF₃ 、鹵素、或C_1-6 烷基，更佳-CF₃ ；Q’² 、Q’³ 、Q’⁴ 、及Q’⁵ 較佳獨立地選自H、鹵素、及C_1-5 烷氧基。更佳地，當CK1抑制劑具有通式(3a)時，X² 為-CH₂ -並且Q’¹ 為-CF₃ 。

在進一步較佳實施例中，CK1抑制劑具有通式(3a)。在進一步較佳實施例中，CK1抑制劑具有通式(3b)。通式(3b)之較佳CK1抑制劑為García-Reyes等人之流程1中之化合物17-23、Bischof等人之表1中之化合物、及Richter等人之表1中之化合物。通式(3b)之尤其較佳CK1抑制劑為García-Reyes等人之流程1中之化合物17-23。通式(3b)之尤其較佳CK1抑制劑為Bischof等人之表1中之化合物。通式(3b)之尤其較佳CK1抑制劑為Richter等人之表1中之化合物。

此類別之CK1抑制劑包含3-異吲哚核心。在較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑來自包含3-異吲哚核心核心之類別。具有3-異吲哚核心之CK1抑制劑更佳具有苯并咪唑核心或苯并噻唑核心或苯并噁唑核心。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑包含唑核心或包含咪唑并[l,2-b]噠嗪核心或包含3-異吲哚核心。

在較佳實施例中，CK1抑制劑具有通式(4)或其異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中q¹ 、q¹ 、q³ 、q⁴ 、q^3’ 、q^4’ 、c¹ 、及c² 如上文定義。此類別之CK1抑制劑本身在此項技術中為已知的並且其結構及合成在例如Hirota等人，PLoS Biol 8(12): e1000559. doi:10.1371/journal.pbio.1000559 - 以及Monastyrskyi等人，Bioorg.Med.Chem.2018 590-602 https://doi.org/10.1016/j.bmc.2017.12.020中更詳細地描述。當CK1抑制劑具有通式(4)時，其較佳為SR-3029或longdaysin，更佳longdaysin。在其他較佳實施例中，通式(4)之CK1抑制劑並非SR-3029。

此類別之CK1抑制劑包含6-胺基嘌呤核心。在此態樣之較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑來自包含6-胺基嘌呤核心之類別。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑包含唑核心或包含咪唑并[l,2-b]噠嗪核心或包含6-胺基嘌呤核心。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑包含唑核心或包含6-胺基嘌呤核心。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑包含咪唑并[l,2-b]噠嗪核心或包含6-胺基嘌呤核心。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑包含唑核心或包含咪唑并[l,2-b]噠嗪核心或包含6-胺基嘌呤核心或包含3-異吲哚核心。

在較佳實施例中，CK1抑制劑具有通式(1a)、(2a)、(3b)、或(4)，其中 X為CR¹ 並且該CR¹ 部分中之R¹ 為-S-(CH₂ )_0-3 CH₃ 或-(S=O)-(CH₂ )_0-3 CH₃ ，或其中 R’’³ 與其連接之碳一起為N，或其中 當化合物具有通式(2a)時，R⁵ 及R⁶ 可與其連接之碳原子一起形成-S-或-O-，較佳-S-，或其中 R⁷ 為-Nr⁷ r’⁷ ，或其中 X或Y為-O-， 並且其中其他變數如上所述。

例示性CK1抑制劑之結構展示於表3中。在進一步較佳實施例中，酪蛋白激酶1抑制劑選自由以下組成之群：化合物A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、SR-3029、PF-670462、及PF-5006739。化合物O亦稱為TA-01。更佳地，酪蛋白激酶1抑制劑選自由以下組成之群：化合物A、B、C、D、E、F、G、H、O、SR-3029、PF-670462、及PF-5006739。甚至更佳地，酪蛋白激酶1抑制劑選自由以下組成之群：化合物A、D、F、G、H、O、SR-3029、PF-670462、及PF-5006739。甚至更佳地，酪蛋白激酶1抑制劑選自由以下組成之群：化合物A、D、F、G、H、SR-3029、PF-670462、及PF-5006739。最佳地，酪蛋白激酶1抑制劑選自由以下組成之群：化合物A、D、F、G、H、SR-3029、及PF-5006739。亦高度較佳地，酪蛋白激酶1抑制劑為化合物D。亦高度較佳地，酪蛋白激酶1抑制劑選自由以下組成之群：化合物A、B、及H，更佳其為化合物H。

在其他實施例中，CK1抑制劑為抑制性抗體、反義寡核苷酸、或阻止CK1之表現的寡核苷酸。

酪蛋白激酶1之各種同功型已知具有不同功能。在已知同功型之集合中，CK1δ及CK1ε為根據本發明之CK1抑制劑之較佳靶標。此等兩種同功型已知彼此密切相關。例如，CK1δ及CK1ε被視為在晝夜節律週期時間及蛋白穩定性中通常為多餘的，但是後來顯示具有稍微不同功能(Etchegaray JP等人，2009，DOI:10.1128/MCB.00338-09)。由於其生理重要性，以及CK1抑制劑之已知功效，在較佳實施例中，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε。視情況，酪蛋白激酶抑制劑具有對於酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε之特異性。此外，在更佳實施例中，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1δ，並且視情況具有對於其之特異性。在其他更佳實施例中，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1ε，並且視情況具有對於其之特異性。在其他實施例中，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1α，並且視情況具有對於其之特異性。在其他實施例中，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1β，並且視情況具有對於其之特異性。在其他實施例中，酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1γ1、1γ2、及/或1γ3，並且視情況具有對於其之特異性。在此情況下應理解當CK1抑制劑至少部分抑制特定同功型時，其具有對於該特定同功型之特異性。較佳地，其比其他同功型更有效地抑制該特定同功型。

適合用於本發明之CK1抑制劑較佳具有對於酪蛋白激酶之至多650 nM、較佳至多500 nM、更佳至多400 nM、甚至更佳至多300 nM、更佳至多250 nM、更佳至多200 nM、最佳至多100 nM之IC₅₀ 。在較佳實施例中，CK1抑制劑具有至少對於酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε之至多450 nM、更佳至多400 nM、甚至更佳至多350 nM、更佳至多200 nM、甚至更佳至多100 nM、最佳至多50 nM之IC₅₀ 。在最佳實施例中，CK1抑制劑具有對於酪蛋白激酶1δ之至多350 nM、較佳至多100 nM、更佳至多35 nM、最佳至多25 nM之IC₅₀ 。CK1之IC₅₀ 值可使用在此項技術中已知之任何方法來確定，例如如WO2011051858、WO2015119579、EP2949651、或US2005/0131012所描述。合適檢定可使用肽受質及讀出方法，例如使用Kinase-Glo檢定(Promega，產品型號V672A)。 p38抑制劑

p38促分裂原活化蛋白激酶之抑制劑，在本文中稱為p38抑制劑，通常在此項技術中為已知的。較佳p38為小分子。在本發明之情形內，較佳p38抑制劑之實例係在本文中提及之彼等。

在較佳實施例中，p38抑制劑抑制p38-α。在較佳實施例中，p38抑制劑抑制p38-β。在更佳實施例中，p38抑制劑抑制p38-α及p38-β。在尤其較佳實施例中，p38抑制劑不抑制p38-γ，或不顯著抑制p38-γ，或抑制p38-γ至多50%、較佳至多20%、最佳至多10%。

各種p38抑制劑為已知並且可獲得的，並且一些處於臨床開發中。可使用此等中之任一者。在較佳實施例中，p38抑制劑選自由以下組成之群：ARRY-797、VX-745、VX-702、RO-4402257、SCIO- 469、BIRB-796、SD-0006、PH- 797804、AMG-548、LY2228820、SB-681323及GW-856553 (洛嗎莫德)。在進一步較佳實施例中，p38抑制劑選自由以下組成之群：N-(4-(2-乙基-4-(間甲苯基)噻唑-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺；2-(2,4-二氟苯基)-6-(1-(2,6-二氟苯基)脲基) 菸醯胺；6-(2,4-二氟苯氧基)-8-甲基-2-((四氫-2H-哌喃-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；6-(2,4-二氟苯氧基)-2-((1,5-二羥基戊-3-基)胺基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；(R)-6-(2-(4-氟苯基)-6-(羥甲基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-2-(鄰甲苯基)噠嗪-3(2H)-酮；6-(5-(環丙基胺甲醯基)-3-氟-2-甲基苯基)-N-新戊基菸醯胺；5-(2-(第三丁基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-3-新戊基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺；2-(6-氯-5-((2R,5S)-4-(4-氟苄基)-2,5-二甲基哌嗪-1-羰基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-N,N-二甲基-2-側氧基乙醯胺；1-(3-(第三丁基)-1-(對甲苯基)-lH-吡唑-5-基)-3-(4-(2-嗎啉基乙氧基)萘-1-基)脲；4-((5-(環丙基胺甲醯基)-2-甲基苯基)胺基)-5-甲基-N-丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-羧醯胺；3-(3-溴-4-((2,4-二氟苄基)氧基)-6-甲基-2-側氧基吡啶-l(2H)-基)-N,4-二甲基苯甲醯胺；1-(3-(第三丁基)-1-(對甲苯基)-1H-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-((1-(2-羥乙基)-1H-吲唑-5-基)氧基)苄基)脲；8-(2,6-二氟苯基)-2-((1,3-二羥基丙-2-基)胺基)-4-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；5-(2,6-二氯苯基)-2-((2,4-二氟苯基)硫基)-6H-嘧啶[l,6-b]噠嗪-6-酮；(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-異丁基-1H-吲唑-6-基)((2-(二甲基胺基)乙基)-12-氮雜基)甲酮；及(R)-2-((2,4-二氟苯基)胺基)-7-(2,3-二羥基丙氧基)-10,11-二氫-5H-二苯并并[a,d][7]輪烯-5-酮。

合適p38抑制劑之實例為ARRY-797 (CHEMBL1088750, CAS:1036404-17-7)、LOSMAPIMOD (CHEMBL1088752, CAS:585543-15-3)、AZD-7624 (CHEMBL9960, CAS:1095004-78-6)、DORAMAPIMOD (CHEMBL103667)、NEFLAMAPIMOD (CHEMBL119385, CAS:209410-46-8)、TAK-715 (CHEMBL363648, CAS:303162-79-0)、TALMAPIMOD (CHEMBL514201, CAS:309913-83-5)、PAMAPIMOD (CHEMBL1090089, CAS:449811-01-2)、VX-702(CHEMBL1090090, CAS:745833-23-2)、PH-797804 (CHEMBL1088751, CAS:586379-66-0)、BMS-582949 (CHEMBL1230065, CAS:623152-17-0)、PF-03715455 (CHEMBL1938400, CAS:1056164-52-3)、DILMAPIMOD (CHEMBL2103838, CAS:444606-18-2)、SEMAPIMOD (CHEMBL2107779, CAS:352513-83-8)、RALIMETINIB(CHEMBL2364626, CAS:862505-00-8)、FX-005 (CHEMBL3545216, CAS:2016822-86-7)、ACUMAPIMOD (CHEMBL3545226, CAS:836683-15-9)、KC-706 (CHEMBL3545282, CAS:896462-15-0)、PG-760564 (CHEMBL3545398)、RWJ-67657 (CHEMBL190333, CAS:215303-72-3)、RO-3201195 (CHEMBL203567, CAS:249937-52-8)、AMG-548 (CHEMBL585902, CAS:864249-60-5)、SD-0006 (CHEMBL1090173)、SCIO-323 (CHEMBL1614702, CAS:309913-51-7)、R-1487 (CHEMBL1766582, CAS:449808-64-4)、AZD- 6703 (CHEMBL2031465, CAS:1083381-65-0)、SC-80036 (CHEMBL3544930)、GSK-610677 (CHEMBL3544968, CAS:2016840-17-6)、LY-3007113 (CHEMBL3544998)、LEO-15520 (CHEMBL3545074)、AVE-9940 (CHEMBL3545117, CAS:1201685-00-8)、PS-516895(CHEMBL3545139)、TA-5493 (CHEMBL3545201, CAS:1073666-93-9)、PEXMETINIB (ARRY614) (CHEMBL3545297, CAS:945614-12-0)、及SB-85635 (CHEMBL3545384)。

在較佳實施例中，p38抑制劑選自(以下描述之相應屬類之)式pI、pII、pIII、pIV、pV、pVI、pVII、pVIII、pIX、pX、pXI、pXII、及pXIII中之一或多者、或其立體異構物、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、或其醫藥學上可接受之鹽。

屬類pI之化合物可根據US 7,276,527之揭示內容來製備。屬類pI藉由式(pI)之視情況N氧化化合物或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pI 其中： R¹ 選自(i)、(ii)、(iii)、或(iv)：(i)氫，(ii)選自C1-6烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_3-6 環烷基、C_6-14 芳基、及C_7-16 芳烷基之基團；其中烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、或芳烷基視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代，(iii)-(C=O)-R⁵ -(C=O)-0R⁵ -(C=O)-NR⁵ R⁶ -(C=S)-NHR⁵ ，或-SO₂ -R⁷ ，其中： R⁵ 為氫、C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_3-6 環烷基、C_6-14 芳基、或_C7-16 芳烷基，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、或芳烷基視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代， R^e 為氫或C_1-6 烷基。 R7為C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_3-6 環烷基、C_6-14 芳基、或_C7-16 芳烷基，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、或芳烷基視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代 (iv)視情況經選自(a)、(b)、或(c)之取代基取代的胺基：(a)C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_3-6 環烷基、C_6-14 芳基、或_C7-16 芳烷基，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、或芳烷基視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代；(b)-(C=O)-R⁵ -(C=O)-0R⁵ -(C=O)-NR⁵ R⁶ -(C=S)-NHR⁵ ，或-SO₂ -R⁷ ，及(c)視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代的C_1-6 亞烷基； R² 為視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代的C_6-14 單環或稠合多環芳基； R³ 為氫或C6-14芳基，其中芳基視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代； X為-S-、S(O)-、或S(O)₂ -； Y為一鍵、-O-、-S- S(O)-、S(O)₂ -或NR^e ， 其中R⁴ 為： (a)氫；(b)C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_3-6 環烷基、C_6-14 芳基、或_C7-16 芳烷基，其中烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、或芳烷基視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代；(c)-(C=O)-R⁵ -(C=O)-0R⁵ -(C=O)-NR⁵ R⁶ -(C=S)-NHR⁵ ，或-SO₂ -R⁷ Z為一鍵、C_1-15 伸烷基、C_2-16 伸烯基、或C_2-16 伸炔基；其中伸烷基、伸烯基、或伸炔基視情況經一或多個選自取代基A之取代基取代； 並且取代基A之取代基選自：側氧基、鹵素、C_1-3 伸烷基二氧基、硝基、氰基、視情況鹵化C_1-3 烷基、視情況鹵化C_2-6 烯基、羧基C_2-6 烯基、視情況鹵化C_2-6 炔基、視情況鹵化C_3-6 環烷基、C_6-14 芳基、視情況鹵化C_1-6 烷氧基、C_1-6 烷氧基-羰基-C_1-6 烷氧基、羥基、C_6-14 芳氧基、C_7-16 芳烷氧基、巰基、視情況鹵化C_1-3 烷硫基、C_6-14 芳硫基、C_7-16 芳烷硫基、胺基、單-C_1-3 烷胺基、單-C_6-14 芳胺基、二-C_1-3 烷胺基、二-C_6-14 芳胺基、甲醯基、羧基、C_1-3 烷基-羰基、C_3-6 環烷基-羰基、C_1-3 烷氧基羰基、 C_7-14 芳基-羰基、C_7-16 芳烷基-羰基、C_6-14 芳氧基-羰基、C_7-16 芳烷氧羰基、胺甲醯基、硫基胺甲醯基、單-C_1-3 烷基-胺甲醯基、二-C_1-3 烷基-胺甲醯基、C_6-14 芳基-胺甲醯基、C_1-3 烷基磺醯基、C_6-14 芳基磺醯基、C_1-3 烷基亞磺醯基、C_6-14 芳基亞磺醯基、甲醯胺基、C_1-3 烷基-羰基胺基、C_6-14 芳基-羰基胺基、C_1-3 烷氧基羰胺基、C_1-3 烷基磺醯基胺基、C_6-14 芳基磺醯基胺基、C_1-3 烷基-羰氧基、C_6-14 芳基-羰氧基、C_1-6 烷氧基-羰氧基、單-C_1-3 烷基-胺基甲醯氧基、二-C_1-3 烷基胺基甲醯氧基、C_6-14 芳基-胺基甲醯氧基、磺基、胺磺醯基，胺亞磺醯基及胺硫基。

屬類pII之化合物可根據US 7,115,746之揭示內容來製備。屬類pII藉由式(pII)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pII 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[00397]中提供。

屬類pIII之化合物可根據US 6,696,566之揭示內容來製備。屬類pIII藉由式(pIII)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pIII 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[00397]中提供。

屬類pIV之化合物可根據US 2009/0042856之揭示內容來製備。屬類pIV藉由式(pIV)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pIV 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[00530]中提供。

屬類pV之化合物可根據US 7,125,898之揭示內容來製備。屬類pV藉由式(pV)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pV 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[00719]中提供。

屬類pVI之化合物可根據US 7,582,652之揭示內容來製備。屬類pVI藉由式(pVI)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pVI 其中： 變數之定義在WO 2019/071147之[00769]中提供。

屬類pVII之化合物可根據US 6,867,209之揭示內容來製備。屬類pVII藉由式(pVII)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pVII 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[00891]中提供。

屬類pVIII之化合物可根據US 6,319,921之揭示內容來製備。屬類pVIII藉由式(pVIII)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pVIII 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[00908]中提供。

屬類pIX之化合物可根據US 7,160,883、US 7,462,616、及US 7,759,343之揭示內容來製備。屬類pIX藉由式(pIX)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pIX 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[001071]中提供。

屬類pX之化合物可根據US 20050176775之揭示內容來製備。屬類pX藉由式(pX)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pX 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[001104]中提供。

屬類pXI之化合物可根據US 7,314,881、US 7,323,472、及US 8,058,282之揭示內容來製備。屬類pXI藉由式(pXI)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pXI 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[001608]中提供。

屬類pXII之化合物可根據US 7,521,447之揭示內容來製備。屬類pIII藉由式(pXII)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pXII 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[001661]中提供。

屬類pXIII之化合物可根據US 7,521,447之揭示內容來製備。屬類pXIII藉由式(pXIII)或其立體異構體、其同位素富集化合物、其前藥、其溶劑化物、及其醫藥學上可接受之鹽來表徵。

式pXIII 其中： 變數之定義如在WO 2019/071147之[001665]中提供。

以下為較佳p38抑制劑： 1.在WO2019/071147之段落[00246]至[00294]中列出之通式pI之p38抑制劑。 2.通式pII之p38抑制劑為2-(2,4-二氟苯基)-6-(1-(2,6-二氟苯基)脲基)煙醯胺(「VX-702」)。 3.在WO2019/071147之段落[00399]至[00496]中列出之通式pIII之p38抑制劑。 4.在WO2019/071147之段落[00532]至[00618]中列出之通式pIV之p38抑制劑。 5.在WO2019/071147之段落[00721]至[00758]中列出之通式pV之p38抑制劑。 6.在WO2019/071147之段落[00771]至[00885]中列出之通式pVI之p38抑制劑。 7.在WO2019/071147之段落[00893]至[00902]中，較佳在段落[00893]至[00900]及[00902]中列出之通式pVII之p38抑制劑。 8.在WO2019/071147之段落[00910]至[001068]中，較佳在段落[001068]中列出之通式pVIII之p38抑制劑。 9.在WO2019/071147之段落[001072]至[001074]中，較佳在段落[001074]中列出之通式pIX之p38抑制劑。 10.在WO2019/071147之段落[001106]至[001409]或[001412]至[001588]中列出之通式pX之p38抑制劑。 11.在WO2019/071147之段落[001610]至[001644]中列出之通式pXI之p38抑制劑。 12.在WO2019/071147之段落[001662]至[001663]中，較佳在[001663]中列出之通式pXII之p38抑制劑。 13.在WO2019/071147之段落[001667]至[001698]中列出之通式pXIII之p38抑制劑。 14.洛嗎莫德為高度較佳p38抑制劑。 15.以上1-14中列出之任何p38抑制劑。 其他CK1抑制劑及p38抑制劑

在某些實施例中，抑制劑誘導目標多肽，例如p38蛋白或CK1蛋白之降解。例如，抑制劑包括蛋白水解靶向嵌合體(proteolysis targeting chimera；PROTAC)，該等嵌合體誘導目標蛋白之選擇性細胞內蛋白水解。PROTAC包括功能域，可為共價連接之蛋白結合分子：一個分子能夠接合E3泛素連接酶，並且另一個分子結合至意欲降解之目標蛋白。將E3連接酶募集至目標蛋白導致泛素化及隨後藉由蛋白酶體來降解目標蛋白。在尤其較佳實施例中，p38抑制劑為靶向p38蛋白(例如，p38-α及/或p38-β)之PROTAC。在尤其較佳實施例中，CK1抑制劑為靶向CK1蛋白(例如CK1δ及/或CK1ε)之PROTAC。在尤其較佳實施例中，CK1抑制劑為靶向CK1蛋白(例如CK1δ及/或CK1ε)之PROTAC並且p38抑制劑為靶向p38蛋白(例如，p38-α及/或p38-β)之PROTAC。 組合物

在另一態樣中，本發明提供根據本發明供使用之組合物，該組合物包含至少一種CK1抑制劑，及醫藥學上可接受之賦形劑。此組合物在本文中稱為根據本發明供使用之組合物。根據本發明供使用之較佳組合物為醫藥組合物。在較佳實施例中，根據本發明供使用之組合物被配製成用於經口、舌下、非經腸、血管內、靜脈內、皮下、或經皮投與，視情況藉由吸入投與；較佳用於經口投與。投與方法之更多特徵及定義提供於關於調配及投與之部分中。

較佳組合物包含至少兩種不同抑制劑，一種抑制劑為CK1抑制劑並且另一種抑制劑為抑制肌原性融合及/或分化之試劑。較佳此類試劑在本文中別處定義。

其他較佳組合物包含至少一種作為CK1抑制劑並且亦作為p38抑制劑的單一試劑。較佳此類抑制劑本文中別處描述。 調配物及投與

包含如上所述化合物的組合物可被製備成醫藥或化妝品製劑或處於各種其他介質中，諸如用於人類或動物之食品，包括醫療食品及膳食補充物。「醫療食品」係意欲對於存在獨特營養需求之疾病或病狀進行特異性膳食管理的產品。舉例而言但是非限制性地，醫療食品可包括經由飼管饋送之維生素及礦物質調配物(被稱為腸內投與)。「膳食補充物」意謂意欲補充人類膳食並且通常以丸劑、膠囊、錠劑或類似調配物形式提供的產品。舉例而言但是非限制性地，膳食補充物可包括以下成分中之一或多者：維生素、礦物質、草藥、植物藥；胺基酸、意欲藉由增加總膳食攝入來補充膳食的膳食物質、及任何前述物質之濃縮物、代謝物、成分、萃取物或組合。膳食補充物亦可併入食品中，包括但不限於壓塊食品、飲料、粉末、谷物、烹飪食品、食品添加劑及糖果；或被設計來促進健康或預防或停止與DUX4表現或活性相關之退行性疾病之進展的其他功能性食品。

因此，本發明組合物可與可攝入之其他生理上可接受之材料包括但不限於食品進行混配。另外或替代地，如本文描述之供使用之組合物可與食品之(分開)投與進行組合來經口投與。

組合物可單獨或與其他醫藥或化妝品試劑組合來投與並且可與其生理上可接受之載劑組合。具體而言，本文描述之化合物可藉由與添加劑諸如醫藥學上或生理上可接受之賦形劑、載劑、及媒介物一起調配而配製為醫藥或化妝品組合物。合適醫藥學上或生理上可接受之賦形劑、載劑及媒介物包括加工助劑及藥物遞送調節劑及增強劑，例如像磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、單醣、雙醣、澱粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、葡萄糖、羥基丙基-P-環糊精、聚乙烯吡咯啶酮、低熔點蠟、離子交換樹脂、及其類似物，以及其任何兩者或兩者以上之組合。其他合適醫藥學上可接受之賦形劑描述於「Remington’s Pharmaceutical Sciences,」 Mack Pub.Co., New Jersey (1991)、及「Remington:The Science and Practice of Pharmacy,」 Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 第20版(2003)、第21版(2005)及第22版(2012)，該等文獻以引用方式併入本文。

已知抑制CK1之許多分子亦可抑制p38。p38促分裂原活化蛋白激酶係一種類別之促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase；MAPK)，該等激酶對於應力刺激作出反應，諸如細胞介素、紫外線照射、熱休克、及滲透壓休克，並且涉及細胞分化、細胞介素分泌、細胞凋亡及自噬。在肌肉衛星細胞(肌肉幹細胞)中由於老化而導致的p38 MAPK途徑之永久性活化已知損害肌肉再生。在較佳實施例中，CK1抑制劑亦為p38抑制劑。

根據本發明供使用之組合物可藉由在此項技術中熟知之過程來製造；例如，藉助於習知混合、溶解、粒化、糖衣錠製造、細磨、乳化、囊封、包埋或凍乾過程，該等過程可產生脂質體調配物、凝聚層、水包油乳液、奈米顆粒/微粒粉末、或任何其他形狀或形式。因此，根據本發明之供使用之組合物可以習知方式使用促進活性化合物加工成可藥用製劑之一或多種生理上可接受之載劑包含賦形劑及助劑來配製。適當調配物取決於選定投與途徑。

對於注射，根據本發明供使用之CK1抑制劑及組合及組合物可在水溶液中，較佳在生理上相容緩衝液諸如漢克斯氏溶液、林格氏溶液、或生理鹽水緩衝液中配製。對於經黏膜投與，在調配物中使用適用於欲滲透之障壁的滲透劑。該等滲透劑在此項技術中一般為已知的。

可使用經口及非經腸投與，其中供使用之CK1抑制劑及組合及組合物藉由將其與在此項技術中熟知之醫藥學上可接受之載劑組合，或藉由使用其作為食品添加劑來配製。此等策略使得根據本發明供使用之CK1抑制劑及組合及組合物能夠被配製成錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、膏劑、懸浮液及其類似物，以便待治療之受試者經口攝入。用於經口使用之製劑或藥理學製劑可藉由使用固體賦形劑，視情況研磨所得混合物，並且(若需要)在添加合適助劑之後，加工顆粒混合物以獲得錠劑或糖衣錠核心來製得。合適賦形劑尤其為填充劑諸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、或山梨糖醇；纖維素製劑例如像玉米澱粉、小麥澱粉、稻澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍樹膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、及/或聚乙烯吡咯啶酮(polyvinylpyrrolidone；PVP)。若需要，可添加崩解劑，諸如交聯聚乙烯基吡咯啶酮、瓊脂、或褐藻酸或其鹽，諸如褐藻酸鈉。另外，共調配物可使用在此項技術中已知之吸收增強劑來製得。

糖衣錠芯具有合適包衣。為此目的，可使用濃縮糖溶液，該等溶液可視情況含有阿拉伯膠、滑石粉、PVP、卡波姆凝膠、聚乙二醇、及/或二氧化鈦、漆溶液、及合適有機溶劑或溶劑混合物。聚甲基丙烯酸酯可用於提供pH反應性釋放概況以便穿過胃。可將染料或顏料添加至錠劑或糖衣錠包衣以供鑑別或表徵活性CK1抑制劑劑量之不同組合。

可經口使用的CK1抑制劑及組合物包括由明膠製成的壓接式膠囊，以及由明膠及諸如甘油或山梨糖醇之增塑劑製成的軟質、密封膠囊。壓接式膠囊可含有與填充劑諸如乳糖、結合劑諸如澱粉、及/或潤滑劑諸如滑石粉或硬脂酸鎂及視情況選用之穩定劑混合的活性成分。在軟質膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮於合適液體，諸如脂肪油、液體蠟或液體聚乙二醇中。此外，可添加穩定劑。經口投與之所有調配物應呈合適於此投與之劑量。

對於口腔投與，根據本發明供使用之CK1抑制劑及組合及組合物可以按照習知方式配製之錠劑或糖錠形式投與。

根據本發明供使用之CK1抑制劑及組合及組合物可被配製成藉由注射，例如，藉由快速濃注或連續輸注來非經腸投與。以此方式亦可靶向特定器官、組織、腫瘤位點、發炎位點等。注射調配物可與所添加之防腐劑一起以單位劑型來呈現，例如，在安瓿或多劑量容器中。組合物可採用諸如油性或水性媒介物中的懸浮液、溶液或乳液的形式，並且可含有調配劑例如懸浮、穩定及/或分散劑。此調配物為較佳的，因為其使得能夠特異性靶向肌肉組織。

非經腸投與之組合物包括水溶性形式之組合物之水溶液。另外，懸浮液可被製備成合適油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或媒介物包括脂肪油(諸如芝麻油)或合成脂肪酸酯(諸如油酸乙酯或三甘油酯)或脂質體。水性注射懸浮液可含有增加懸浮液黏度之物質，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖。視情況，懸浮液亦可包含合適穩定劑或增加組合物之溶解度以便製備高濃度溶液的藥劑。

或者，組合物之一或多種組分可呈散劑形式，以便在使用之前用合適媒介物例如無菌無熱原水來重構。

根據本發明供使用之組合物或組合亦可被配製成直腸組合物諸如栓劑或保留灌腸劑，例如，含有習知栓劑基劑諸如可可脂或其他甘油酯。

除了先前描述之調配物以外，根據本發明供使用之CK1抑制劑及組合及組合物亦可被配製成積存製劑。此等長效調配物可藉由植入(例如皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射來投與。因此，例如，其可用合適聚合物或疏水性材料來配製(例如呈可接受油中之乳狀液形式)，或作為可或可不在體內自動降解之固體或半固體植入物之一部分，或與離子交換樹脂一起配製，或組合物之一或多種組分可被配製成微溶衍生物，例如，呈微溶鹽形式。合適聚合物材料之實例為熟習此項技術者已知的並且包括PLGA及聚內酯諸如聚己酸。

根據本發明供使用之組合物或組合亦可包含合適固體或凝膠相載劑或賦形劑。此等載劑或賦形劑之實例包括但不限於碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、澱粉、纖維素衍生物、明膠、及聚合物諸如聚乙二醇。

根據本發明供使用之組合物或組合亦可包含經皮貼劑。根據本發明供使用之較佳經皮貼劑選自單層膠黏分散型貼劑、或多層膠黏分散型貼劑、或儲庫型貼劑、或基質貼劑、或蒸氣貼劑。

根據本發明供使用之組合物包括CK1抑制劑及組合及組合物，其中活性成分以有效達成其規定目的之量包含在內。更具體而言，治療有效量意謂有效預防、穩定、減輕、恢復、或改善疾病之病因或症狀、或延長所治療受試者之存活、活動性、或獨立性的化合物之量。確定治療有效量在熟習此項技術者之能力範圍內，尤其鑒於本文提供之詳細揭示內容。對於用於本發明中之任何CK1抑制劑及組合及組合物，治療有效量或劑量可最初根據例如如在本文中例示之細胞培養檢定來估計。視所使用劑型及所使用投與途徑而定，劑量可在此範圍內變化。確切調配物、投與途徑及劑量可由個別醫師考慮到患者之病狀來選擇。(參見例如Fingl等人，1975，「The Pharmacological Basis of Therapeutics」 第1章 第1頁)。所投與CK1抑制劑及組合物之量當然取決於所治療受試者、受試者之體重、病痛之嚴重程度、投與方式及處方醫師之判斷。

可提供根據本發明供使用之組合物或組合以使得根據本發明供使用之CK1抑制劑及如本文定義之其他組分中之一或多者以溶液形式、懸浮液形式、或散劑形式處於同一容器中。根據本發明供使用之組合物亦可具有彼此分開地提供之所有組分，以便例如在投與之前彼此混合，或用於分開或依序投與。例如，組合物可包含含有CK1抑制劑之容器、及含有p38抑制劑之單獨容器。相反地，組合物亦可包含在同一容器中含有CK1抑制劑及p38抑制劑兩者的容器。各種封裝選項為可能的並且為熟習此項技術者已知的，尤其取決於投與途徑及機制。鑒於如上所述投與方法，本發明提供根據本發明供使用之酪蛋白激酶1抑制劑、或根據本發明供使用之組合、或根據本發明供使用之組合物，其特徵在於其經口、舌下、血管內、靜脈內、皮下、經皮、或視情況藉由吸入；較佳經口來投與。

CK1抑制劑或組合或組合物之「有效量」係在投與受試者時足以減少或消除疾病之一或多個症狀、或延遲疾病之一或多個症狀之進展、或減少疾病之一或多個症狀之嚴重程度、或抑制疾病之表現、或抑制疾病之不良症狀之表現的量。有效量可在一或多次投與中投與。

可與載劑材料組合來產生單一劑型之「有效量」取決於活性成分所投與之宿主及特定投與模式而變化。通常製成並且投與所選擇的單位劑量以便提供血液中之化合物之所需最終濃度。

較佳用於成人之有效量(亦即有效總每日劑量)在本文中定義為約0.01至2000 mg、或約0.01至1000 mg、或約0.01至500 mg、或約5至1000 mg、或約20至800 mg、或約30至800 mg或約30至700 mg、或約20至700 mg或約20至600 mg、或約30至600 mg、或約30至500 mg、約30至450 mg或約30至400 mg、或約30至350 mg或約30至300 mg或約50至600 mg、或約50至500 mg、或約50至450 mg、或約50至400 mg或約50至300 mg、或約50至250 mg、或約100至250 mg或約150至250 mg的總每日劑量。在最佳實施例中，有效量為約200 mg。在較佳實施例中，本發明提供根據本發明供使用之酪蛋白激酶1抑制劑、或根據本發明供使用之組合物，其特徵在於其以0.1至1500毫克/天、較佳0.1至1000毫克/天、更佳0.1至400毫克/天、仍然更佳0.25至150毫克/天範圍內之量投與受試者，諸如約100毫克/天。

或者，較佳用於成人之有效量之化合物較佳按照kg體重來投與。因此，較佳用於成人之總每日劑量為約0.05至約40 mg/kg、約0.1至約20 mg/kg、約0.2 mg/kg至約15 mg/kg、或約0.3 mg/kg至約15 mg/kg或約0.4 mg/kg至約15 mg/kg或約0.5 mg/kg至約14 mg/kg或約0.3 mg/kg至約14 mg/kg或約0.3 mg/kg至約13 mg/kg或約0.5 mg/kg至約13 mg/kg或約0.5 mg/kg至約11 mg/kg。

兒童之總每日劑量較佳至多200 mg。更佳地，總每日劑量為約0.1至200 mg、約1至200 mg、約5至200 mg約20至200 mg約40至200 mg、或約50至200 mg。較佳地，兒童之總每日劑量為約0.1至150 mg、約1至150 mg、約5至150 mg約10至150 mg約40至150 mg、或約50至150 mg。更佳地，總每日劑量為約5至100 mg、約10至100 mg、約20至100 mg約30至100 mg約40至100 mg、或約50至100 mg。甚至更佳地，總每日劑量為約5至75 mg、約10至75 mg、約20至75 mg約30至75 mg約40至75 mg、或約50至75 mg。

可使用之劑量之替代實例係約0.1 μg/kg至約300 mg/kg、或約1.0 μg/kg至約40 mg/kg體重、或約1.0 μg/kg至約20 mg/kg體重、或約1.0 μg/kg至約10 mg/kg體重、或約10.0 μg/kg至約10 mg/kg體重、或約100 μg/kg至約10 mg/kg體重、或約1.0 mg/kg至約10 mg/kg體重、或約10 mg/kg至約100 mg/kg體重、或約50 mg/kg至約150 mg/kg體重、或約100 mg/kg至約200 mg/kg體重、或約150 mg/kg至約250 mg/kg體重、或約200 mg/kg至約300 mg/kg體重、或約250 mg/kg至約300 mg/kg體重劑量範圍內之根據本發明供使用之化合物之有效量。可使用之其他劑量為約0.01 mg/kg體重、約0.1 mg/kg體重、約1 mg/kg體重、約10 mg/kg體重、約20 mg/kg體重、約30 mg/kg體重、約40 mg/kg體重、約50 mg/kg體重、約75 mg/kg體重、約100 mg/kg體重、約125 mg/kg體重、約150 mg/kg體重、約175 mg/kg體重、約200 mg/kg體重、約225 mg/kg體重、約250 mg/kg體重、約275 mg/kg體重、或約300 mg/kg體重。

根據本發明供使用之化合物或組合物可以單一每日劑量來投與，或總每日劑量可以每天兩次、三次或四次之劃分劑量來投與。

在本發明之一個較佳實施例中，「受試者」、「個體」、或「患者」應理解為個別生物體，較佳脊椎動物，更佳哺乳動物，甚至更佳靈長類動物及最佳人類。

在本發明之進一步較佳實施例中，人類為成人，例如18歲或更大之個人。另外，在本文中應理解成人個人之平均體重為62 kg，但是已知平均體重在國家之間變化。因此，在本發明之另一實施例中，成人個人之平均體重在約50-90 kg之間。在本文中應理解如本文定義之有效劑量不限於具有平均體重之受試者。較佳地，受試者具有18.0至40.0 kg/m² 之間之BMI(身體質量指數(Body Mass Index))，及更佳18.0至30.0 kg/m² 之間之BMI。

或者，待治療之受試者係兒童，例如17歲或更年輕之個人。另外，待治療之受試者可為出生與青春期之間或青春期與成年之間之個人。在本文中應理解女性之青春期開始於10-11歲之年齡並且男性開始於11-12年之年齡。此外，待治療之受試者可為嬰兒(出生之後的前28天)、嬰兒(0-1歲)、幼兒(1-3歲)、學齡前兒童(3-5歲)；學齡期兒童(5-12歲)或青少年(13-18歲)。

為了在治療期間維持有效範圍，CK1抑制劑或組合或組合物可每天投與一次，或每兩天、三天、四天、或五天投與一次。然而較佳，化合物可至少每天投與一次。因此在一個較佳實施例中，本發明涉及根據本發明供使用之酪蛋白激酶1抑制劑、或根據本發明供使用之組合物，其特徵在於其每天投與受試者4、3、2、或1次或更少，較佳每天1次。總每日劑量可作為單一每日劑量投與。或者，化合物至少每天投與兩次。因此，如本文定義之化合物可每天投與一次、兩次、三次、四次或五次。因此，總每日劑量可劃分為若干劑量(單位)，導致投與如本文定義之總每日劑量。在一個較佳實施例中，化合物每天投與兩次。應進一步理解術語「每天兩次」、「bid」及「每天二次 (bis in die) 」在本文中可互換使用。

在一個較佳實施例中，總每日劑量劃分為每天若干劑量。此等單獨劑量可在數量方面為不同的。例如對於各總每日劑量，第一劑量可具有比第二劑量更大量之化合物或反之亦然。然而較佳，化合物以相似或相等劑量投與。因此在最佳實施例中，化合物以兩個相似或相等劑量每天投與兩次。

在本發明之進一步較佳實施例中，如本文以上定義之化合物之總每日劑量在至少兩個單獨劑量中投與。至少兩個單獨劑量之投與之間的時間間隔為至少約0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時，較佳至少兩個單獨劑量之間之時間間隔為至少約4、5、6、7、8、9、10、11或12小時並且更佳至少兩個單獨劑量之間之時間間隔為至少約8、9、10、11或12小時。 用途

在本發明之一態樣中，提供根據本發明之CK1抑制劑、或根據本發明之組合物、或根據本發明之組合的用途。該用途係用於治療有需要之受試者的與DUX4表現相關之疾病或病狀，並且包括向受試者投與有效劑量之根據本發明之CK1抑制劑或組合或組合物，其中CK1抑制劑或組合或組合物如在本文中先前所定義。

在此態樣之一個實施例中，提供根據本發明之CK1抑制劑、或根據本發明之組合物、或根據本發明之組合的用途。該用途係用於治療有需要之受試者之肌營養不良或癌症，並且包括向受試者投與有效劑量之根據本發明之CK1抑制劑或組合物或組合，其中CK1抑制劑或組合物或組合如在本文中先前所定義。進一步特徵及定義較佳如在本文中別處定義，尤其對於待治療之疾病或病狀。 方法

本發明之一態樣提供減少DUX4表現之活體內、試管內、或離體方法，該方法包含使細胞與如在本文中先前所定義之CK1抑制劑、或與如在本文中先前所定義之組合物或組合接觸的步驟。本發明之一相關態樣提供促進肌原性融合及/或分化之活體內、試管內、或離體方法，該方法包含使細胞與如在本文中先前所定義之CK1抑制劑、或與如在本文中先前所定義之組合物或組合接觸的步驟。較佳地，該方法用於治療與DUX4表現相關之疾病或病狀，諸如肌營養不良或癌症，最佳地該疾病或病狀為面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。該方法較佳包含如在本文中先前所定義之用途。較佳方法包含使細胞與如在本文中先前所定義之CK1抑制劑組合物接觸。在本發明之情形中，使細胞與CK1抑制劑或組合或組合物接觸可包含將此CK1抑制劑或組合或組合物添加至細胞得以在其中培養之培養基。使細胞與CK1抑制劑或組合或組合物接觸亦可包含將此CK1抑制劑、組合、或組合物添加至細胞得以懸浮在其中，或覆蓋細胞之培養基、緩衝液、或溶液。接觸細胞之其他較佳方法包含用CK1抑制劑、組合、或組合物來注射細胞，或使細胞暴露於包含根據本發明之CK1抑制劑、組合、或組合物之材料。進一步投與方法在本文中別處定義。較佳細胞係已知表現DUX4之細胞、疑似表現DUX4之細胞、或已知受如在本文中先前所定義之疾病或病狀影響的細胞。

在此態樣之一實施例中，該方法為試管內方法。在此態樣之另一實施例中，該方法為離體方法。在此態樣之另一實施例中，該方法為活體內方法。在此態樣之一個較佳實施例中，該方法係試管內或離體方法。

在此態樣之實施例內，細胞可為來自從受試者獲得之樣品的細胞。此樣品可為先前從受試者獲得之樣品。在此態樣之實施例內，樣品可先前從人類受試者獲得。在此態樣之實施例內，樣品可從非人類受試者獲得。在此態樣之一個較佳實施例中，獲得樣品並非根據本發明之方法之一部分。

在較佳實施例中，根據本發明之方法係減少有需要之受試者中之DUX4表現的方法，該方法包含投與有效量之如在本文中先前所定義之CK1抑制劑、或如在本文中先前所定義之組合物、或如在本文中先前所定義之組合的步驟。在更佳實施例中，該方法用於治療與DUX4表現相關之疾病或病狀，較佳肌營養不良或癌症，最佳地該疾病或病狀係面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。進一步特徵及定義較佳如在本文中別處定義。 一般定義

在此文件及其請求項中，動詞「包含」及其變形以其非限制性含義使用以便意味著包含措詞之後之項目，但是不排除未具體提及之項目。另外，動詞「由…組成」可藉由「基本上由…組成」來替換，意味著如本文定義之組合或組合物可包含不同於具體鑑別組分的一或多個額外組分，該(等)額外組分不改變本發明之獨特特徵。另外，藉由不定冠詞「一(個)」來提及一元件不排除存在一個以上該元件的可能性，除非上下文明確要求僅存在一個元件。因此不定冠詞「一(個)」通常意謂「至少一個」。

當結構式或化學名稱被熟習此項技術者理解具有對掌性中心，但是未指示對掌性時，對於各對掌性中心而言，個別提及外消旋混合物、純R鏡像異構物、及純S鏡像異構物中之所有三者。較佳異構物為互變異構物及立體異構物。

每當在本發明中論述物質之參數時，假定除非另外規定，否則在生理條件下確定、量測、或表現參數。生理條件為熟習此項技術者已知的，並且包含水性溶劑系統、大氣壓、6與8之間之pH值、室溫至約37℃(約20℃至約40℃)範圍內之溫度、及合適濃度之緩衝鹽或其他組分。

物質作為如在此文件中描述之藥物之用途亦可理解為該物質在製造藥物中之用途。類似地，每當物質用於治療或作為藥物時，其亦可用於製造供治療之藥物。作為本文所述藥物來使用之產品可用於治療方法中，其中此等治療方法包含投與供使用之產品。根據本發明之CK1抑制劑或組合物較佳用於根據本發明之方法或用途中。

遍及本申請案，表現被視為將基因轉錄成功能性mRNA，從而產生多肽諸如酶或轉錄因子或例如DUX4多肽。多肽可顯露效應或具有活性。在此情況下，多肽之表現增加或減少可被視為編碼該多肽之mRNA之水準增加或減少、多肽分子之水準或量增加或減少、或該等多肽分子之總活性增加或減少。較佳地，多肽之表現增加或減少分別導致可能由於多肽分子之水準或量增加或減少所造成的該多肽之活性增加或減少。更佳地，DUX4表現之減少係DUX4基因之轉錄減少、DUX4 mRNA之去穩定或降解、DUX4多肽分子之量減少、DUX4多肽分子活性減少、DUX4多肽之去穩定或降解、或其組合。去穩定mRNA導致其編碼多肽之表現更低，有可能其不能產生此表現。降解mRNA被破壞並且不能導致其編碼多肽之表現。與未去穩定之相同多肽相比，去穩定多肽顯露更少效應或具有更低活性，可能其不顯露效應或不具有活性。去穩定多肽可變性或錯誤折疊。降解多肽被破壞並且不顯露效應或具有活性。

在本發明中，待評定之參數之減少或增加意謂對應於該參數之值之至少5%之變化。更佳地，值之減少或增加意謂至少10%、甚至更佳至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少70%、至少90%、或100%之變化。在此後者情況下，可能不再具有與參數相關之可偵測值。

措詞「約」或「近似」在與數值(例如約10)相關聯使用時較佳意謂該值可為比給定值(10)多或少1%之值。

除非另外指示，否則如在本文中鑑別之各實施例可組合在一起。本發明如上參考許多實施例來描述。熟習此項技術者可想像實施例之一些要素之不重要的變化。此等變化包含在如隨附請求項中所定義之保護範圍中。所引用之所有專利及參考文獻以其全文以引用形式併入本文。

實例 1- 小部分肌核中之表現 DUX4 之原代 FSHD 肌肉細胞

發明人成功確立原代肌管中之靈敏DUX4偵測方法並且使用此方法來建立內源性DUX4表現之定量評定的高含量檢定。將該方法開發成用於自動偵測及定量內源性DUX4表現之經驗證表型篩檢平台。DUX4抑制之潛在機制可涉及許多相互作用蛋白，從而有利於此表型方法。此外，其與途徑/靶標無關(並且因此並非假設驅動的)並且提供關於細胞毒性或干擾肌肉分化之額外資訊。

獲自不同供體之細胞之間的DUX4表現水準之顯著差異已予以報道。因此，源自不同供體之肌肉細胞株得以充分地表徵並且選擇最佳細胞株用於初級篩檢。肌母細胞之MyoD染色證實所有細胞株之可靠肌原性(Rudnicki等人，1993; cell 75(7):1351-9)。優化參數之後，確立可應用於篩檢檢定中之DUX4偵測程序，該程序在FSHD細胞中產生預期DUX4樣式，但是在健康供體之肌管中沒有此效果。如第1圖展示，此包含僅藉由一些陽性細胞之核DUX4定位，及貫穿DUX4陽性核集群之強度梯度，如亦藉由Rickard等人，(2015，DOI:10.1093/hmg/ddv315)所描述。 實例 2 - 鑑別 DUX4 抑制之篩檢檢定

根據基於腳本之影像分析來開發定量檢定讀數。根據實例1來將細胞染色，亦使用DAPI來偵測肌核及針對肌球蛋白重鏈(myosin heavy chain；MHC)之抗體來觀測肌管之形成。為了分析影像，開發自動腳本，使得能夠偵測核、肌管邊界及DUX4信號，並且腳本亦偵測矯作物以便減少假陽性信號。腳本實現多種驗證讀數，包括DUX4陽性核及核集群之數目、融合指數、肌管面積、肌管寬度及肌管骨架長度(參見第2圖)。另外，總核計數作為細胞損失或化合物毒性之量度包含在內。藉由評估原代肌管中之內源性DUX4表現來驗證腳本，並且結果與文獻值一致，其中DUX4表現核之數目＜0.5%。

檢定進一步成熟以使得其適合於篩檢目的。檢定品質取決於供體細胞株。DUX4陽性核之數目為各供體細胞株所特有的，並且在實驗之間為一致的。選擇在DUX4表現核之數目、可重現性及Z因子方面表現最好的細胞株以便將檢定微型化為384孔格式，由此使得較大化合物庫之自動篩檢。具有2個D4Z4重複序列之細胞株被選擇來進行原代篩檢，同時具有6個D4Z4重複序列之細胞株被選擇來稍後進行驗證。初級篩檢檢定具有0.6之Z因子，表示極好檢定(Zhang等人，1999，doi:10.1177/108705719900400206；參見第3圖)。

含有大約5000種標注化合物之化合物庫在高含量檢定中予以篩檢。為此目的，將原代肌母細胞接種於384孔板中，然後將生長培養基更換成分化培養基。分化3天之後，細胞用庫化合物治療(在不同篩檢板上重複兩次)持續15h，然後將其固定並且用針對DUX4之抗體、針對肌球蛋白重鏈(myosin heavy chain；MHC)之抗體、及DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole))來染色。基於腳本之分析提供DUX4表現(DUX4陽性核之計數或DUX4強度)及潛在毒性(融合指數及核計數)之讀數。結果展示於第4圖中。大部分約200個選中物在使用相同檢定及5次重複實驗之實驗中予以證實。選擇此等化合物以便進一步濃度反應概況分析。

此等選中物之一半使用RT-PCR來驗證。基於DUX4及下游目標基因Trim43 & ZScan4之mRNA表現，使用持家基因hGUSB、GAPDH、hRPL27作為參考，觀察到免疫細胞化學檢定(蛋白水準)及RT-PCR檢定(mRNA水準)中之DUX4抑制之間的很好相關性。此暗示絕大多數選中物具有上游作用模式，亦即其藉由抑制DUX4之表現(而非加速DUX4之降解)來起作用。

使用可能作為檢定套組(對於hGAPDH (app)：AssayID Hs02758991_g1；對於hTRIM43(app)：檢定ID Hs00299174_m1；hMYH2_tv1-2(app)：AssayID Hs00430042_m1)之一部分的從Applied Biosystems (Foster City, USA)定購之寡核苷酸，如Lemmers等人(2010, DOI: 10.1126/science.1189044)所描述，執行RT-PCR。其他寡核苷酸展示於表1中。

名稱	序列	SEQ ID NO:
hDUX4正向	CCCGGCTGACGTGCAA	1
hDUX4反向	AGCCAGAAIIICACGGAAGAAC	2
hDUX4探針	AGCTCGCTGGCCTCTCTGTGCC	3
hGUSB正向	TTCCCTCCAGCTTCAATGACA	4
hGUSB反向	CCACACCCAGCCGACAA	5
hGUSB探針	AGGACTGGCGTCTGCGGCA	6
hRPL27正向	TGTCCTGGCTGGACGCTACT	7
hRPL27反向	GAGGTGCCATCATCAATGTTCTT	8
hRPL27探針	CGGACGCAAAGCTGTCATCGT	9
hZSCAN4正向	AGGCAGGAATTGCAAAGACTTT	10
hZSCAN4反向	AATTTCATCCTTGCTGTGCTTTT	11
hZSCAN4探針	TAGGATCmCACTCATGGCTGCAACCA	12
hMYOG正向	GCTCACGGCTGACCCTACA	13
hMYOG反向	CACTGTGATGCTGTCCACGAT	14
hMYOG探針	CCCACAACCTGCACTCCCTCACCT	15

表 1 - 用於 PCR 中之引子及探針 實例 3 - CK1 抑制劑充當 DUX4 抑制物

驗證檢定用於篩檢含有大約5000種化合物之標注化合物庫，以便鑑別DUX4抑制之新穎作用機制。此庫包含具有標注藥理學之化合物，不僅要求化合物之初級藥理學而且潛在已知多元藥理學。初級篩檢達成多個選中物，從而鑑別減少DUX4陽性核數目之化合物。藉由建立濃度反應曲線來對選中物進行進一步概況分析。藉由對於篩檢及概況分析資料集應用生物資訊學方法，發明人意外地發現具有CK1標注之化合物在表型活性化合物群體中，亦即在誘導抑制DUX4之化合物群組中得以顯著富集。引起關注地，具有CK1標注之原始化合物中沒有一個以CK1作為其主要藥理學靶標，每一種化合物具有來自其他蛋白家族之其他高效力靶標。因此，生物資訊學分析在鑑別CK1與DUX4抑制之間之關聯方面係必不可少的。

當所剖析化合物顯示對於DUX4之濃度依賴性效應(抑制或活化)時，其被標注為表型活性的。在此等化合物中，顯示融合指數或核總數之抑制大於10%之化合物予以排除，除非與對於DUX4之效應相比，對於此等讀數之效應之有效性低至少5倍。因此，在4790種獨特化合物中，188種化合物被歸類為表型活性的，其中162種為DUX4抑制劑。

對於表型活性化合物，原始靶標標注用公開地可獲得之額外資訊(文獻、專利申請、供應商資料庫等)來補充。其中可建立與人類蛋白質體之映射的所有人類蛋白、及非人類異種同源物予以考量。然後，4790種化合物中之各者針對此等靶標標注來予以評估，從而將靶標針對給定化合物來分類為活性或非活性。對於表型活性化合物，若化合物對於靶標之效力≦10倍表型效力，則將標注靶標分類為活性，否則將靶標分類為非活性。此分析揭示在0.05之偽發現率下，大約201種靶標與表型活性相關。標注為CK1抑制劑之化合物之富集在表型活性化合物之群組中予以偵測。 實例 4 - CK1 同功型在 FSHD 原代肌肉細胞中表現

為了證實健康及FSHD肌肉細胞兩者中之靶標表現，遵循RNA測序方法以便確定來自4個不同FSHD供體及4個不同健康供體之原代肌管中之不同CK1同功型之表現。結果示出FSHD及健康肌肉細胞兩者處之所有CK1同功型之表現。最高表現為CK1 α、CK1 δ及CK1 ε (參見表2)。

	CSNK1A1	CSNK1D	CSNK1E	CSNK1G1	CSNK1G2	CSNK1G3
FSHD	134	159.1	160.1	49.9	81.8	37.9
FSHD	122.5	138.4	136.8	4.2	79.1	32.7
FSHD	176.7	170.6	120.5	69.8	65.8	41.3
FSHD	118.2	134	105.6	41.8	63.5	38.1
健康	138.9	168.5	188	45.8	75.9	35.8
健康	143.3	174.1	200.7	49.6	81.8	36.3
健康	139.2	192.8	176.1	51.9	71.4	33.2
健康	119.1	132.4	122.4	40.6	65.9	40.1

表 2- 如藉由分化肌管之 RNA 測序所確定的 4 個健康原代細胞株、及 4 個 FSHD 原代細胞株中之酪蛋白激酶 1 同功型之表現 實例 5 - CK1 之抑制使 DUX4 得以抑制

遵循第4A圖示出之實例2之方案，分析CK1抑制劑之DUX4抑制。表3示出用於第5圖中之CK1抑制劑之結構。化合物與原代FSHD細胞一起孵育15小時，如第4A圖中之箭頭指示。結果展示於第5圖中，同時表3示出半最大有效濃度(half maximal effective concentration；EC₅₀ )值。表3亦示出CK1α、CK1δ、CK1ε、及p38α之以nM為單位之確定IC₅₀ 值，該等值分別指示為CK1 a、d、e、及p38a。

表 3- 根據本發明供使用之示例性 CK1 抑制劑，與在 15h 治療方案中獲得之 DUX4 抑制之半最大有效濃度 (half maximal effective concentration ； EC₅₀ ) 。

選定先導化合物亦在異種移植物小鼠模型中活體內測試。為此目的，將人類原代FSHD肌母細胞注射至小鼠脛骨前肌肉中。然後，此等人類細胞分化成肌管，在此期間DUX4得以去抑制。確保高於試管內觀察到EC50之暴露度的具有良好藥代動力學性質之選定化合物造成此異種移植物動物模型中之DUX4 mRNA表現之抑制，如藉由RT-PCR及組織學檢查來證實。 實例 6 - 減少肌管融合指數與減少 DUX4 信號相關

在檢定驗證實驗中，發明人鑑別引起關注地，此直接反映來自檢定之DUX4計數讀數，說明對於融合之較小效應可對於在檢定中偵測到之DUX4之量具有直接效應(第6圖)。 實例 7 - CK1 抑制劑不抑制肌管融合

因為增殖FSHD肌母細胞在試管內分化成多核肌管後，DUX4表現增加(Balog等人，2015 Epigenetics.2015; 10(12):1133-42)，所以抑制分化可能導致對於DUX4抑制之假陽性效應。

溴區及末端外區(Bromo- and Extra-Terminal domain；BET)抑制劑諸如非選擇性抑制劑(+)JQ1或BRD4選擇性抑制劑RVX-208可抑制永生分化肌管培養物中之DUX4之表現(參見US2015087636A1)。其中展示在分化過程開始時，亦即從生長培養基更換成分化培養基之時刻起，當分化肌管暴露於(+)JQ1時，肌球蛋白重鏈(MYH2，分化標記物)之表現減少，表明抑制劑亦影響分化過程。(+)JQ1及RVX-208兩者在此申請案中描述之表型檢定中予以評估。亦報道β2腎上腺素受體之促效劑抑制分化肌管中之DUX4表現(Campbell等人，2017)並且最近已被證明抑制肌管融合(Chen等人，2019，doi.org/10.1186/s13287-019-1160-x；Kim等人，2019，doi.org/10.1080/19768354.2018.1561516)。我們評估BET抑制劑及β2腎上腺素受體促效劑兩者對於融合過程之效應並且與CK1抑制劑之效應相比較。

第7A圖示出實例2之實驗裝置。類似於原始篩檢方案，在固定之前15h，或在固定之前72h(灰色箭頭)，投與化合物。在後者情況下，化合物在整個分化過程期間存在。發明人發現早期投與BET抑制劑(+)JQ1(第7B圖)及β2腎上腺素受體之促效劑(第7C圖、第7D圖、第7E圖)抑制融合過程及肌母細胞分化成肌管。第7F圖示出在用β2腎上腺素受體促效劑(福莫特羅)治療之後，不可觀察到肌管形成。此可在評估DUX4信號時導致假陽性讀數。BET抑制劑RVX-208不顯示對於DUX4表現之任何效應，不論治療時間為何(未展示)。雖然融合指數似乎不在15h時間點處受到影響，但是亦對於此治療時間，肌管融合過程受此等化合物影響，如藉由展示晚期分化標記物肌球蛋白重鏈(Myh；未展示；引子來自如上所述之hMYH2套組)之表現受到抑制的RT-PCR來確定。

如實例5示出，CK1之抑制使DUX4得以抑制。此效應在不抑制肌管融合的情況下發生，在15h或72h化合物治療之後皆如此(第7G圖)。表4示出在72h化合物治療方案中多種CK1抑制劑對於DUX4抑制之半最大有效濃度(half maximal effective concentration；EC₅₀ )值。表4亦示出CK1α、CK1δ、CK1ε、及p38α之以nM為單位之確定IC₅₀ 值，該等值分別指示為CK1 a、d、e、及p38a。

表 4 - 根據本發明供使用之示例性 CK1 抑制劑，與半最大有效濃度 (half maximal effective concentration ； EC₅₀ ) 。在 72h 治療方案中獲得 DUX4 EC₅₀ 值 實例 8 -CK1 抑制劑抑制概況

分析化合物PF-670462、PF-5006739、化合物E、化合物F、化合物D、化合物H、化合物A、及SR3029對於CK1α、CK1δ、CK1ε、及p38之抑制，及其對於DUX4之同時抑制。表5及6示出抑制結果。

IC50 EC50	PF- 670462	PF- 5006739	5	6	4	8	1	SR- 3029
CK1α	320	123	592	561	644	33	30	＞10k
CK1δ	29	20	31	18	33.1	22	19	346
CK1ε	100	27	84	72	51.6	16	12	381
p38	32	74	1110	677	569	25	13	＞10k
DUX4	470	820	1890	2590	1410	10	50	50
(n=4)	(n=12)	(n=4)	(n=2)	(n=2)	(n=2)	(n=2)

表 5 - 藉由 CK1 抑制劑之以 nM 為單位之對於 CK1 及 p38 之抑制。在 15h 治療方案中獲得 DUX4 EC₅₀ 值

IC50 EC50	CK1α	CK1δ	CK1ε	p38α	DUX4
PF-670462	320	29	100	32	760
PF-5006739	123	20	27	74	620
1	29	18	12	13	40
2	65	29		23	340
4	644	33	52	569	4800
5	592	31	84	1110	6700
6	561	18	72	677	8100
7	2590	42	92	712	5000
8	22	16	9	15	10
9	1760	58	89	3070	6400
10	Na	Na	Na	Na	10
11	Na	Na	Na	Na	250
12	Na	Na	Na	Na	50
13	Na	Na	Na	Na	310
14	270	45	Na	42	390
15	1830	115	Na	16	780
16	196	17	Na	18	1200
17	873	36	Na	63	2900
18	636	46	Na	312	8200
19	4020	81	Na	449	4900
20	186	55	Na	50	2200
21	61	58	Na	29	100
22	194	58	Na	411	1100
23	＞10000	2090	Na	1250	2400
24	331	58	Na	22	480

表 6 - 藉由 CK1 抑制劑之以 nM 為單位之對於 CK1 及 p38 之抑制。在 72h 治療方案中獲得 DUX4 EC50 值 實例 9 - p38 抑制劑抑制來自 FSHD 供體之原代肌母細胞之融合

因為增殖FSHD肌母細胞在試管內分化成多核肌管後，DUX4表現增加(Balog等人，2015 Epigenetics.2015; 10(12):1133-42)，所以抑制分化可能導致對於DUX4抑制之假陽性效應。最近，已描述p38抑制DUX4 mRNA表現而不影響肌原性分化標記物MYOG及MYH2(WO2019/071144及WO2019/071147)。由於此等標記物之表現不一定與融合相關，我們在高含量檢定中分析一系列p38抑制劑並且定量其對於DUX4表現及肌管融合之效應。由於洛嗎莫德不示出對於DUX4或融合指數之任何效應，當其在固定之前的最後15h分化期間添加時(未展示)，在固定細胞之前72h，將生長培養基更換成分化培養基時，藉由投與化合物來執行所有實驗。如第8圖示出，所有經測試之p38抑制劑(洛嗎莫德、BMS-582949、培美替尼或ARRY-614、BIRB796、SCIO469、PH797804、帕吡莫德、LY2228820、R1487、SB-681323、VX-745、阿可匹莫、VX702)抑制融合指數，很大程度上遮掩對於DUX4之效應(若有任何效應)。使用洛嗎莫德，對於融合指數之此抑制效應在來自不同供體之原代FSHD肌細胞中得到證實(未展示)。

化合物	p38 (nM)	CK1a / CK1d (nM)
阿可匹莫	22	＞10,000 / ＞10,0000
AMG548	7	＞10,000 / 452
BIRB795	99	＞10,000 / ＞10,0000
BMS-582949	65	＞10,000 / ＞10,0000
洛嗎莫德	26	＞10,000 / ＞10,0000
LY2228820	14	＞10,000 / 2780
帕吡莫德	16	＞10,000 / ＞10,0000
培美替尼	17	＞10,000 / ＞10,0000
PH797804	7	＞10,000 / ＞10,0000
R1487	13	＞10,000 / 9430
SB-681323	11	＞10,000 / ＞10,0000
SCIO469	16	＞10,000 / ＞10,0000
VX702	25	＞10,000 / ＞10,0000
VX745	29	＞10,000 / ＞10,0000

表7.不同p38化合物對於p38α、CK1a及CK1d之IC50值 實例 10 - P38 抑制劑抑制來自健康供體之原代肌母細胞之融合

如第9圖示出，p38抑制劑之抑制效應不限於FSHD細胞株。來自健康供體之原代肌細胞如實例2所描述來予以治療，不同之處在於允許其分化五天而非3天以便考慮到較慢分化時間(達到最大融合指數之時間)。當生長培養基更換成分化培養基時，添加洛嗎莫德。在此等條件下，洛嗎莫德明顯地抑制融合指數，反映多核肌管之形成得到抑制。 實例 11.CK1 抑制劑防止原代肌管中之由 p38 抑制劑導致之融合抑制

如實例9及10、及第10A圖展示，用p38抑制劑來治療分化原代肌管(72h方案)防止其形成多核融合肌管。發明人發現當在自身不抑制肌管融合之CK1抑制劑存在下，用p38抑制劑治療細胞時(第10A圖、第10B圖、第10D圖、第10F圖)，可至少部分地防止對於融合之有害影響。第10A圖示出洛嗎莫德及不同CK1抑制劑在不同濃度下對於融合之效應的比較。當單獨或在化合物編號4、編號5或編號8存在下，在遞增濃度之洛嗎莫德存在下，肌管分化時，從微觀影像明顯看出又在更高洛嗎莫德濃度下，在化合物編號4、編號5或編號8存在下，肌管形成仍然完整(第10C圖、第10F圖、第10I圖)。類似地，第10圖(D、G、J)示出洛嗎莫德具有肌管融合之濃度依賴性抑制。然而，在CK1抑制劑存在下，肌管融合藉由洛嗎莫德之抑制至少部分地得以防止。在p38抑制劑洛嗎莫德與遞增濃度之CK1抑制劑組合之單一組合之實驗中，此情況亦為明顯的(第10K圖、第10L圖、第10M圖)。洛嗎莫德之融合抑制係濃度依賴性地藉由CK1抑制劑來抑制。 實例 12.CK1 抑制劑對於 DUX4 之抑制潛力在 p38 抑制劑存在下得以保持

當CK1抑制劑與遞增濃度之洛嗎莫德組合時，其不僅防止抑制肌管融合，而且保留其抑制DUX4之能力(第11A圖、第11B圖、第11C圖)。與單獨CK1抑制劑相比，用CK1抑制劑及p38抑制劑之組合來治療原代FSHD肌管甚至誘導DUX4之更強減少(第11A圖、第11B圖)。此情況對於化合物編號8而言係不太明顯的，因為其在不存在p38抑制劑的情況下誘導接近最大DUX4抑制(第11C圖)。 實例 13. 雙重 CK1/p38 抑制劑抑制 DUX4 表現而不影響肌管形成

根據亦抑制p38之CK1抑制劑之概況，亦明顯地展示CK1抑制對於肌管融合之保護效應(表6)。如在第7G2圖中對於PF-670462所示出，此等雙重抑制劑阻遏DUX4而不抑制融合指數，說明其不影響肌管形成。參考文獻 Balog等人，2015 Epigenetics.2015; 10(12):1133-42；Bergerat等人，2017，DOI:10.1016/j.prp.2016.11.015；Van den Boogaard等人，2016，DOI:10.1016/j.ajhg.2016.03.013；Brockschmidt等人，2008，DOI:10.1136/gut.2007.123695；Campbell等人，2017，DOI:10.1186/s13395-017-0134-x；Chebiband Jo，2016，DOI:10.1002/cncy.21685；Eide EJ, VirshupDM，2001，DOI:10.1081/CBI-100103963；Etchegaray JP等人，2009，DOI:10.1128/MCB.00338-09；Geng等人，2012，DOI:10.1016/j.devcel.2011.11.013；Kowaljow等人，2007，DOI:10.1016/j.nmd.2007.04.002；Lang等人，2014，DOI:10.14205/2310-8703.2014.02.01.1；Lemmers等人，2010，DOI:10.1126/science.1189044；Lilljebjörn & Fioretos，2017，DOI:10.1182/blood-2017-05-742643；Oyama等人，2017 DOI:10.1038/s41598-017-04967-0；Paz等人，2003，DOI:10.1093/hmg/ddg226；Rickard等人，2015，DOI:10.1093/hmg/ddv315；Rudnicki等人，1993; cell 75(7):1351-9；Sharma等人，2016，DOI:10.4172/2157-7412.1000303；Snider等人，2010，DOI:10.1371/journal.pgen.1001181；Stadler等人，2013，DOI:10.1038/nsmb.2571；Tawil等人，2014，DOI:10.1186/2044-5040-4-12；Vanderplanck等人，2011，doi:10.1371/journal.pone.0026820；Wallace等人，2011，DOI:10.1002/ana.22275；Yao等人，2014，DOI:10.1093/hmg/ddu251；Yasuda等人，2016，doi:10.1038/ng.3535；Young等人，2013，doi:10.1371/journal.pgen.1003947；Zhang等人，1999，doi:10.1177/108705719900400206；Zhang等人，2017，DOI:10.1038/ng.3691 WO2011051858 / WO2012085721 / WO2015119579 / EP2949651 / WO2009016286 / US2005/0131012 / WO2015195880 / WO2014081923 / US20140221313/ US2015087636A1

無

第 1 圖 - (A):分化3天之後的2個不同供體之FSHD肌管中之DUX4免疫細胞化學染色之圖示。DUX4陽性核集群得以明顯地染色，同時DUX4陰性核未染色。直方圖顯示在用DUX4及二級抗體(頂部)或單獨二級抗體(底部)染色之後的免疫螢光信號之強度(X軸上之遞增強度)；頂部箭頭顯示背景信號(向左箭頭)或特異性DUX4信號(向右箭頭)；(B):分化3天之後的DUX4染色FSHD肌管之圖示。點線圖案由耗盡來自二級抗體對照之背景的所應用過濾器設置產生。注意臨界值設置阻止對於離前哨核更遠之核中之較弱DUX4信號之偵測。

第 2 圖 -基於腳本之影像分析包含核鑑別、肌管鑑別、偵測肌管邊界內部或外部之核(用於計算融合指數)、DUX4陽性核及集群、肌管面積、肌管寬度、及肌管骨架長度。

第 3 圖 -以384孔形式來驗證初級篩檢檢定形式。展示三個獨立實驗，示出在分化培養基中3天之後、使用在分化原代肌管中之DUX4表現核之數目的基於腳本之定量所獲得的檢定窗口。檢定窗口藉由DUX4信號及二級抗體之背景信號(代表完全不存在DUX4時之信號)來定義。

第 4 圖 - (A)：篩檢檢定方案之示意圖。肌母細胞在第-1天接種並且在第零天，將培養基更換成分化培養基。允許細胞分化3天。在固定之前15h，添加化合物。(B)：使用關於DUX4表現之2種不同讀數(DUX4陽性核之數目及DUX4強度)及監測潛在毒性之2種不同讀數(融合指數、核計數)，由標注化合物庫之初級篩檢產生之重複結果之相關性。選中物調用臨界值(高嚴格性)由虛線指示，並且右上象限含有不同讀數之選中化合物。散佈圖之軸為對稱的。

第 5 圖 -不同讀數之各種CK1抑制劑之濃度反應曲線。DUX4核計數、DUX4強度、融合指數、及總核計數在15小時化合物暴露之後量測。(A)：PF-670462之結果；(B)：PF-5006739之結果；(C)：化合物3之結果；(D)：化合物4之結果；(E)：化合物5之結果；(F)：化合物6之結果；(G)：化合物7之結果；結構式展示於實例5中。

第 6 圖 -DUX4核計數(左)、DUX4強度(中間)及融合指數(右)讀數之一個檢定驗證實驗之散佈圖。原代FSHD肌管在增殖培養基中生長，然後將培養基更換成分化培養基並且允許細胞分化3天。讀數如實例2中所解釋來評定。最外部孔由白色菱形指示，次外部孔具有灰色圓圈並且所有內部孔具有黑色星號。從圖表中明顯看出與內部孔相比，最外部孔中之融合指數較低。另外在外部孔中，DUX4讀數較低，示出融合指數之減少意味著獲得假陽性讀數之風險。

第 7 圖 - (A):檢定方案之示意圖。肌母細胞在第-1天接種並且在第零天，將培養基更換成分化培養基。允許細胞分化3天。在固定之前15h或72h，添加化合物。對於15h治療，當分化已經進展顯著時，投與化合物。在72h治療的情況下，化合物在完全分化階段期間孵育。其他圖示出不同讀數之BET抑制劑(B)或β2腎上腺素受體促效劑(C、D、E、F)之濃度反應曲線。在治療15h之後或72h之後評定DUX4核計數、DUX4強度、融合指數、及總核計數。(B)：(+)JQ1；(C)：福莫特羅；(D)：沙丁胺醇；(E)：沙美特羅；(F)：在暴露於β2腎上腺素受體促效劑(福莫特羅)的同時，在分化培養基中72小時之後之肌管之顯微照片；(G)：15小時及72小時暴露於CK1抑制劑(PF-670462)兩者之結果。

第 8 圖 -原代FSHD細胞株中之不同讀數之各種p38抑制劑之濃度反應曲線(n=3)。DUX4核計數、DUX4強度、融合指數、及總核計數在72小時化合物暴露之後量測。(A)：阿可匹莫(Acumapimod)之結果；(B)：AMG548之結果；(C)：BIRB795之結果；(D)：BMS-582949之結果；(E)：洛嗎莫德之結果；(F)：LY2228820之結果；(G)：帕吡莫德之結果；(H)：培美替尼之結果；(I)：PH797804之結果；(J)：R1487之結果；(K)：SB-681323之結果；(L)：SCIO469之結果；(M)：VX702之結果；(N)：VX745之結果。

第 9 圖 -健康供體之原代細胞中之融合及細胞計數讀數之p38抑制劑洛嗎莫德之濃度反應曲線。融合指數藉由洛嗎莫德強烈抑制。

第 10 圖 - 伴以72h化合物治療，在原代FSHD細胞中以標準檢定來執行實驗。(A)：藉由遞增濃度之p38抑制劑洛嗎莫德或CK1抑制劑編號4、編號5或編號8，對於融合指數之濃度依賴性效應；(B)：用溶劑或CK1抑制劑編號4治療72h之後，標準檢定中之原代FSHD細胞之顯微影像；(C)：在不存在(頂部)或存在(底部) CK1抑制劑編號4的情況下，用不同濃度之洛嗎莫德治療72h之後，標準檢定中之原代FSHD細胞之顯微影像；(D)：在不存在或存在CK1抑制劑編號4的情況下，藉由遞增濃度之p38抑制劑洛嗎莫德，對於融合指數之濃度依賴性效應。展示單獨CK1抑制劑之效應以供比較；(E)：用溶劑或CK1抑制劑編號5治療72h之後，標準檢定中之原代FSHD細胞之顯微影像；(F)：在不存在(頂部)或存在(底部) CK1抑制劑編號5的情況下，用不同濃度之洛嗎莫德治療72h之後，標準檢定中之原代FSHD細胞之顯微影像；(G)：在不存在或存在CK1抑制劑編號5的情況下，藉由遞增濃度之p38抑制劑洛嗎莫德，對於融合指數之濃度依賴性效應。展示單獨CK1抑制劑之效應以供比較；(H)：用溶劑或CK1抑制劑編號8治療72h之後，標準檢定中之原代FSHD細胞之顯微影像；(I)：在不存在(頂部)或存在(底部) CK1抑制劑編號8的情況下，用不同濃度之洛嗎莫德治療72h之後，標準檢定中之原代FSHD細胞之顯微影像；(J)：在不存在或存在CK1抑制劑編號8的情況下，藉由遞增濃度之p38抑制劑洛嗎莫德，對於融合指數之濃度依賴性效應。展示單獨CK1抑制劑之效應以供比較；(K)：在不存在或存在遞增濃度之CK1抑制劑編號4的情況下，固定濃度之洛嗎莫德 (1.25uM)之效應；(L)：在不存在或存在遞增濃度之CK1抑制劑編號5的情況下，固定濃度之洛嗎莫德 (1.25uM)之效應；(M)：在不存在或存在遞增濃度之CK1抑制劑編號8的情況下，固定濃度之洛嗎莫德 (1.25uM)之效應；

第 11 圖 - 伴以72h化合物治療，在原代FSHD細胞中以標準檢定來執行實驗。(A)：在不存在或存在CK1抑制劑編號4的情況下，藉由遞增濃度之p38抑制劑洛嗎莫德，對於DUX4讀數之濃度依賴性效應；(B)：在不存在或存在CK1抑制劑編號5的情況下，藉由遞增濃度之p38抑制劑洛嗎莫德，對於DUX4讀數之濃度依賴性效應；(C)：在不存在或存在CK1抑制劑編號8的情況下，藉由遞增濃度之p38抑制劑洛嗎莫德，對於DUX4讀數之濃度依賴性效應。

國內寄存資訊(請依寄存機構、日期、號碼順序註記) 無 國外寄存資訊(請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記) 無

Claims (15)

1. 一種用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的酪蛋白激酶1抑制劑，其中該受試者患有肌肉發炎。
2. 一種用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的酪蛋白激酶1抑制劑，其中該酪蛋白激酶1抑制劑用於促進肌原性融合及/或分化，較佳其中該受試者患有肌肉發炎。
3. 如請求項1或2所述之供使用之酪蛋白激酶1抑制劑，其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良或癌症，較佳其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良，最佳面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。
4. 如請求項1或2所述之供使用之酪蛋白激酶1抑制劑，其中該酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1δ。
5. 一種用於治療受試者之與DUX4表現相關之疾病或病狀的酪蛋白激酶1抑制劑及p38抑制劑之組合。
6. 如請求項5所述之供使用之組合，其中該受試者患有肌肉發炎。
7. 如請求項5所述之供使用之組合，其中該酪蛋白激酶1抑制劑用於促進肌原性融合及/或分化，較佳其中該受試者患有肌肉發炎。
8. 如請求項5所述之供使用之組合，其中該酪蛋白激酶1抑制劑及該p38抑制劑為兩種不同物質。
9. 如請求項5所述之供使用之組合，其中該酪蛋白激酶1抑制劑及該p38抑制劑為同一種物質。
10. 如請求項5至9中任一項所述之供使用之組合，其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良或癌症，較佳其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀係肌營養不良，最佳面肩臂肌營養不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy；FSHD)。
11. 如請求項10所述之供使用之組合，其中與DUX4表現相關之該疾病或病狀為FSHD。
12. 如請求項5至9中任一項所述之供使用之組合，其中： a)該p38抑制劑至少抑制p38α，且/或 b)該酪蛋白激酶抑制劑至少抑制酪蛋白激酶1δ。
13. 如請求項1至2中任一項所述之供使用之酪蛋白激酶1抑制劑、或如請求項5至9中任一項所述之供使用之組合，其中DUX4表現減少至少20%、40%、60%、80%、或更多。
14. 一種用於促進肌原性融合及/或分化之活體內、試管內、或離體方法，該方法包含使細胞與如請求項1至2中任一項所定義之酪蛋白激酶1抑制劑或與如請求項5至9中任一項所定義之組合接觸的步驟。
15. 一種用於減少有需要之受試者之DUX4表現的方法，該方法包含投與有效量之如請求項1至2中任一項所定義之酪蛋白激酶1抑制劑、或如請求項5至9中任一項所定義之組合的步驟，其中該受試者患有肌肉發炎，並且其中較佳該受試者患有與DUX4表現相關之肌營養不良，其中最佳該肌營養不良為FSHD。

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