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TW202116326A - 用於製備無菌眼用水性丙酸氟替卡松a型奈米晶體懸浮液之方法 - Google Patents

用於製備無菌眼用水性丙酸氟替卡松a型奈米晶體懸浮液之方法 Download PDF

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Abstract

本發明涉及製備丙酸氟替卡松A型的奈米晶體的無菌局部眼用水性奈米懸浮液的改進方法。該無菌局部眼用奈米懸浮液可用於治療眼部炎性病症諸如眼瞼炎、後眼瞼炎、瞼板腺功能不良和乾眼，通過將所述奈米懸浮液局部施用於眼瞼、睫毛和眼瞼緣來進行。

Description

用於製備無菌眼用水性丙酸氟替卡松A型奈米晶體懸浮液之方法
本發明涉及製備包含在水性載體中的丙酸氟替卡松A型的奈米晶體的無菌局部眼用奈米懸浮液的方法。該方法便利地適合於大規模生產的製備，並產生具有穩定的粒徑分佈的無菌均質水性奈米懸浮液。
包含丙酸氟替卡松A型奈米晶體的無菌局部眼用水性奈米懸浮液通過將該奈米懸浮液(或奈米晶體懸浮液)局部施用於眼瞼(例如上下眼瞼)、睫毛和眼瞼緣而用於治療眼部炎性疾病或眼部炎性病症。
丙酸氟替卡松A型的奈米晶體為具有基本垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板(nanoplates)。通過WO 2013/169647中公開的抗溶劑超音波結晶(sonocrystallization)方法，由市售丙酸氟替卡松多晶型物1製備丙酸氟替卡松A型奈米晶體。
WO 2013/169647公開了丙酸氟替卡松的形態(morphic)形式(A型)的奈米晶體的製備、它們的純化、以及包含所述奈米晶體的水性懸浮液的製備。
簡言之，根據WO 2013/169647公開的連續超音波流通式放大方法(實施例11和圖38)，在超音波處理下使用抗溶劑結晶，然後對奈米懸浮液進行熱退火，製備了丙酸氟替卡松的奈米晶體；通過連續流動離心法純化生成的奈米晶體，將奈米懸浮液的載體離心分離出來，將沉澱重新分散在洗滌溶液中，再次離心分散液。將該洗滌操作重複幾次以達到期望的純化水平。然後將沉澱分散到最終配方組成物中以獲得所需劑量規格的終產品。然而，WO 2013/169647沒有報告與奈米懸浮液的無菌測試相關的任何數據。
申請人已經發現，WO 2013/169647公開的連續超音波流通方法能夠製備大量的丙酸氟替卡松A型奈米晶體，但是不適合於大規模製備無菌眼用水性奈米懸浮液，因為將純化的奈米晶體(小丸)分散入最終的水性載體中(參見圖38)無法生產出具有無菌性要求的終產品，所述無菌性要求必須滿足眼部遞送的藥物配方的要求。此外，發現在大規模製備奈米懸浮液的過程中，在將純化的奈米晶體與最終的水性載體混合的期間，奈米晶體傾向於形成難以去黏聚的聚集物，因此難以得到均勻的奈米懸浮液。此外，即使當臨時得到一些有效的去黏聚和均相的奈米懸浮液，這些奈米懸浮液也顯示出一定的重新聚集並且不穩定的傾向。
正如眾所周知的，由於奈米粒子具有的高表面能，其導致在奈米懸浮液的製備和儲存過程中會形成聚集物，因此它們具有很高的聚集傾向。
奈米粒子的聚集不僅是懸浮液製造過程中的關鍵態樣；聚集還會導致各種問題，例如給藥劑量不一致和患者無依從性。特別是對於預期應用於眼瞼、睫毛和眼瞼緣的奈米懸浮液，聚集可能會影響患者的耐受性和潛在的安全性。
確保藥物奈米懸浮液適當的物理穩定性的幾種策略是眾所周知的。
例如，通常使用穩定劑，然而，為某種藥物選擇適合的穩定劑可能具有挑戰性。
US 2018/0117064公開了包含糖皮質激素化合物的奈米顆粒和分散穩定劑的水懸浮液的製備方法。US 2018/0117064公開了穩定劑的主要功能在於充分潤濕藥物顆粒，以防止奈米懸浮液的奧斯華熟化和聚集，並通過提供星型(asteric)或離子屏障形成物理上穩定的配方。奈米懸浮液中使用的穩定劑的典型例子是纖維素、泊洛沙姆、聚山梨酯、卵磷脂、聚油酸酯和聚維酮。
WO 2010/141834公開了丙酸氟替卡松的局部眼用配方，用於治療變應性結膜炎和/或變應性鼻結膜炎。WO 2010/141834公開了多種配方，包括具有粒徑不大於30 µm的懸浮液；載體的實例包含磷酸鹽緩衝劑、丙二醇、羥丙甲纖維素、聚山梨酯80、乙二胺四乙酸二鈉和苯紮氯銨(第14頁，第7-15行)。
然而，WO 2010/141834沒有報告任何眼用配方的製備方法以及與眼用配方的穩定性相關的任何實驗結果。
WO 2013/025696公開了高壓均化在防止在眼用配方中形成藥物聚集物的方法中的應用，所述眼用配方包含懸浮在包含至少一種潤濕劑的水性載體中的眼用藥物。特別地，當藥物顆粒已經以具有適合於局部應用的粒徑的微粉化形式存在時，高壓均化步驟可以用於防止在眼用配方中形成藥物聚集物；事實上，WO 2013/025696公開了高壓均化可以應用於在潤濕劑水溶液中包含預微粉化藥物的懸浮液中，並且高壓均化不會導致粒徑減小，而是穩定了已經微粉化的藥物，且由此防止了藥物聚集物形成。
然而，WO 2013/025696的方法暗示使用高成本的儀器，這增加了劑型的成本，此外，高壓均化的應用能夠導致奈米晶體降解。
超音波處理通常用於將奈米材料去黏聚和分散在基於水的介質中，這對於改善懸浮液的均勻性和穩定性是必不可少的。儘管其被廣泛使用，但是在本發明的奈米懸浮液的製備方法的建立過程中測試的超音波處理無法有效地使丙酸氟替卡松奈米晶體去黏聚。
因此，需要提供一種大規模方法，其用於製備在水性載體中包含丙酸氟替卡松A型奈米晶體的眼用奈米懸浮液(奈米晶體懸浮液)。
作為解決上述問題而進行的研究的結果，令人驚訝地發現，在高剪切、高速條件下將丙酸氟替卡松A型的奈米晶體與包含甘油(glycerin/glycerol)和硼酸的水性載體混合可以使奈米晶體穩定。不希望受到任何理論束縛，認為甘油和硼酸形成充當奈米晶體穩定劑的複合物；硼酸/甘油複合物在製備奈米懸浮液的過程中防止奈米晶體聚集物形成，並且還在儲存過程中穩定了奈米懸浮液。研究結果還顯示，將丙酸氟替卡松A型的奈米晶體添加到包含預先形成的硼酸/甘油複合物的最終載體中會導致殘留聚集，這在根據本發明的方法製備奈米懸浮液時未觀察到，其中在丙酸氟替卡松的奈米晶體懸浮在包含硼酸、但不含甘油的載體中並在該載體中去黏聚後添加甘油。當丙酸氟替卡松的奈米晶體直接懸浮在包含預先形成的硼酸/甘油複合物的最終載體中並在其中去黏聚時，穩定作用喪失，並且奈米晶體的去黏聚更難以在儲存過程中實現和維持。
硼酸與多羥基化合物的複合物(硼酸鹽-多元醇複合物)是眾所周知的，並且眾所周知，硼酸鹽-多元醇複合物在眼用組成物中的用途在於增強抗微生物活性。
WO 93/21903公開了硼酸鹽-多元醇複合物，例如甘露糖醇、甘油和丙二醇作為接觸鏡消毒液中的輔助消毒劑。
WO 2010/148190公開了包含兩種不同的多元醇的硼酸鹽-多元醇複合物，以改善多劑量眼用組成物的保存性。
本發明涉及一種製備包含丙酸氟替卡松A型奈米晶體的無菌局部眼用水性懸浮液的方法，該懸浮液易於適合於大規模製備以用於商業生產並產生具有均勻的可再現粒度分佈的穩定奈米懸浮液。
對於本發明，「丙酸氟替卡松A型奈米晶體」是指丙酸氟替卡松A型奈米晶體，其具有：100 nm至1000 nm的平均粒徑；X射線粉末繞射圖包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中所述奈米晶體為具有基本垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
本發明涉及用於製備無菌局部眼用水性奈米懸浮液之方法，所述奈米懸浮液包含具有100 nm至1000 nm的平均粒徑的丙酸氟替卡松A型奈米晶體，且丙酸氟替卡松濃度為0.001% w/w至1% w/w，該方法包含： a) 製備水性載體1，其包含：0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和至100% w/w的水； b) 混合一定量的具有平均粒徑100 nm至1000 nm的丙酸氟替卡松奈米晶體A型與一定量的水性載體1，得到包含濃度2% w/w的丙酸氟替卡松的漿液； c) 將高剪切高速混合施加於步驟b)的漿液至少10分鐘； d) 製備水性載體2，其包含：1.8% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和適量至100% w/w的水； e) 向步驟c)的漿液中添加水性載體2的等分部分，得到濃度約1% w/w的丙酸氟替卡松； f) 將高剪切、高速混合施加於步驟e)的漿液，直至得到目標平均粒徑； g) 通過高壓滅菌給步驟f)的奈米懸浮液滅菌； h) 製備水性載體3，其包含：0.9% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和適量至100% w/w的水；並且藉由過濾給水性載體3滅菌； i) 以無菌方式向步驟g)的經滅菌的奈米懸浮液中添加無菌水性載體3的等分部分，以製備包含目標濃度的丙酸氟替卡松奈米晶體A型的無菌局部眼用水性奈米懸浮液； 其中丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有該奈米晶體的X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
在步驟c)中，對包含丙酸氟替卡松A型奈米晶體的漿液和不含甘油的水性載體1進行高剪切、高速混合，以確保丙酸氟替卡松奈米晶體的均勻分佈，從而改善最終奈米懸浮液的均質性。
較佳地，在步驟c)和步驟f)中，高剪切、高速混合較佳在6000 RPM下進行。
較佳地，將步驟f)的高剪切、高速混合施加至少10分鐘。
較佳地，通過將奈米懸浮液在玻璃瓶中於約122°C高壓滅菌約40分鐘，對包含1% w/w丙酸氟替卡松濃度的步驟f)的奈米懸浮液進行步驟g)的滅菌。
較佳地，分別在步驟b)和步驟e)中使用之前，將水性載體1和2通過0.2 µm濾器過濾。
任選地，可以通過下列步驟製備包含甘油1.8% w/w的水性載體2：將通過向0.2 µm濾器過濾的載體1的等分部分中添加一定量的甘油，得到甘油的終濃度為1.8% w/w。
較佳地，在根據本發明方法製備的最終無菌局部眼用水性奈米懸浮液中，丙酸氟替卡松的濃度為0.001%至0.5% w/w；更佳地，丙酸氟替卡松的濃度為0.5% w/w、0.25% w/w、0.20% w/w、0.10% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w或0.005% w/w；最佳地，丙酸氟替卡松的濃度為0.20% w/w或0.10% w/w或0.05% w/w。
或者，可以在完全無菌製造條件下，使用滅菌的丙酸氟替卡松A型奈米晶體和滅菌的載體1至3實施本發明的方法，因此，本發明的另一個具體例涉及用於製備無菌局部眼用水性奈米懸浮液之方法，所述奈米懸浮液包含具有平均粒徑100 nm至1000 nm的丙酸氟替卡松A型奈米晶體，且丙酸氟替卡松濃度為0.001% w/w至1% w/w，該方法包含： a-1) 將具有平均粒徑100 nm至1000 nm的丙酸氟替卡松A型奈米晶體滅菌； b-1) 製備水性載體1，其包含：0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和適量至100% w/w的水；並且藉由過濾將所述水性載體1滅菌； c-1) 以無菌方式混合一定量的經滅菌的丙酸氟替卡松奈米晶體A型與一定量的經滅菌的水性載體1，得到包含濃度2% w/w的丙酸氟替卡松的漿液； d-1) 向步驟c-1)的漿液施加高剪切、高速混合至少10分鐘； e-1) 製備水性載體2，其包含：1.8% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和適量至100% w/w的水；並且藉由過濾將所述水性載體2滅菌； f-1) 以無菌方式向步驟d-1)的漿液中添加經滅菌的水性載體2的等分部分，得到濃度約1% w/w的丙酸氟替卡松； g-1) 向步驟f-1)的漿液施加高剪切、高速混合，直至得到目標平均粒徑； h-1) 製備水性載體3，其包含：0.9% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和至100% w/w的水；並且藉由過濾將所述水性載體3滅菌； i-1) 以無菌方式向步驟g-1)的奈米懸浮液中添加經滅菌的水性載體3的等分部分，以製備包含終濃度的丙酸氟替卡松奈米晶體A型的無菌局部眼用水性奈米懸浮液； 其中丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
較佳地，通過對丙酸氟替卡松A型奈米晶體在注射用水中的具有丙酸氟替卡松2%至20% w/w濃度的懸浮液高壓滅菌給步驟a-1)中使用的丙酸氟替卡松A型奈米晶體滅菌；較佳地，將丙酸氟替卡松A型奈米晶體在水中的懸浮液在約122°C高壓滅菌約30分鐘。
較佳地，在步驟d-1)和步驟g-1)中，以6000 RPM進行高剪切、高速混合。
較佳地，將步驟g-1)的高剪切、高速混合施加至少10分鐘。
較佳地，在根據本發明方法製備的無菌局部眼用水性奈米懸浮液中，丙酸氟替卡松的濃度為 0.001%至0.5% w/w；更佳地，丙酸氟替卡松的濃度為0.5% w/w、0.25% w/w、0.20% w/w、0.10% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w或0.005% w/w；最佳地，0.20% w/w或0.10% w/w或0.05% w/w。
較佳地，本發明方法中使用的丙酸氟替卡松A型奈米晶體根據下文報告的一般方法製備，該方法包含下列步驟： 1) 製備相I溶液，其包含：0.45% w/w丙酸氟替卡松多晶型物1、23.2% w/w聚乙二醇400 (PEG 400)、68.8% w/w聚丙二醇400 (PPG 400)和7.6% w/w聚山梨酯80 (Tween 80)；並且通過0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾相I溶液； 2) 製備相II溶液，其包含：0.01% w/w苯紮氯銨、0.40% w/w甲基纖維素15 cP、0.1% w/w聚乙二醇40硬脂酸酯(PEG-40硬脂酸酯)、至pH 3.4至3.8的檸檬酸鹽緩衝液和適量至100% w/w的水；並且通過0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾相II溶液； 3) 將經過濾的相I和相II溶液冷卻至0至4°C的溫度； 4) 在配備超音波換能器(例如QSonica Q2000超音波換能器)的反應器中混合相I和相II溶液，得到奈米晶體的相III懸浮液，其中： -相I溶液和相II溶液分別以600 ml/min (相I溶液)和2400 ml/min (相II溶液) 的流速連續泵入反應器中，得到相III懸浮液； -相I和相II體積比為1:4； -在混合過程中用60%的輸出功率施加超音波處理； -相III懸浮液的平均溫度約為11°C； 5) 以足以生成渦旋的速度、在室溫下在沒有超音波處理存在下低剪切混合步驟4)的相III懸浮液最少30分鐘； 6) 在40°C在不少於16小時時間期限內使相III懸浮液退火(annealing)； 7) 製備緩衝溶液，其包含：0.2% w/w聚乙二醇40硬脂酸酯(PEG-40硬脂酸酯)、0.2% w/w聚山梨酯80 (Tween 80)、0.001% w/w苯紮氯銨、0.05% w/w磷酸二氫鈉一水合物、0.02% w/w磷酸氫二鈉二水合物和水適量至100% w/w，具有pH 6.3 ± 0.2；並且通過0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾該緩衝溶液； 8) 用經過濾的緩衝溶液稀釋步驟6)的相III懸浮液，其中緩衝溶液與相III的體積比為1:1； 9) 離心經稀釋的相III懸浮液以回收丙酸氟替卡松奈米晶體A型並且洗滌回收的奈米晶體； 10) 用注射用水洗滌收集的奈米晶體。
當在完全無菌的製造條件下實施本發明的方法時，將步驟10)的洗滌的奈米晶體在用於製備無菌局部眼用水性奈米懸浮液之前進行滅菌；例如，將洗滌的奈米晶體懸浮於注射用水中，使得丙酸氟替卡松的濃度為2%至20% w/w，並且在約122°C高壓滅菌30分鐘。
本發明的另一個具體例涉及可局部施用在眼瞼、睫毛或眼瞼緣上的眼用水性奈米懸浮液，由如下成分組成： (a) 0.001%至1% w/w丙酸氟替卡松A型奈米晶體； (b) 0.50% w/w甲基纖維素4000 cp； (c) 0.2% w/w聚山梨酯80； (d) 0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物； (e) 1.0% w/w硼酸； (f) 0.9% w/w甘油； (g) 0.01% w/w苯紮氯銨； (f) 0.055% w/w氯化鈉； (i) 用量足以達到pH 7.3-7.5之作為調節劑的鹽酸(1N)和/或氫氧化鈉(1N)；和 (j) 水適量至100% w/w， 其中所述丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有100 nm至1000 nm的平均粒徑和X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
較佳地，在局部眼用水性奈米懸浮液中，丙酸氟替卡松的濃度為 0.001%至0.5% w/w，更佳地，丙酸氟替卡松的濃度為0.5% w/w、0.25% w/w、0.20% w/w、0.1% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w或0.005% w/w。最佳地，在局部眼用水性奈米懸浮液中，丙酸氟替卡松的濃度為0.1% w/w、0.20% w/w或0.05% w/w。
本發明的另一個具體例涉及可局部施用在眼瞼、睫毛或眼瞼緣上的眼用水性奈米懸浮液，由如下成分組成： (a) 0.1% w/w或0.5% w/w或0.25% w/w或0.20% w/w或0.05% w/w丙酸氟替卡松A型奈米晶體； (b) 0.50% w/w甲基纖維素4000 cp； (c) 0.2% w/w聚山梨酯80； (d) 0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物； (e) 1.0% w/w硼酸； (f) 0.9% w/w甘油； (g) 0.01% w/w苯紮氯銨； (h) 0.055% w/w氯化鈉； (i) 用量足以達到pH 7.3-7.5之作為調節劑的鹽酸(1N)和/或氫氧化鈉(1N)；和 (j) 水適量至100% w/w， 其中所述丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有100 nm至1000 nm的平均粒徑和X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
本發明的另一個較佳的具體例涉及可局部施用在眼瞼、睫毛或眼瞼緣上的眼用水性奈米懸浮液，並且由如下成分組成： (a) 0.1% w/w或0.20% w/w或0.05% w/w丙酸氟替卡松A型奈米晶體； (b) 0.50% w/w甲基纖維素4000 cp； (c) 0.2% w/w聚山梨酯80； (d) 0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物； (e) 1.0% w/w硼酸； (f) 0.9% w/w甘油； (g) 0.01% w/w苯紮氯銨； (h) 0.055% w/w氯化鈉； (i) 用量足以達到pH 7.3-7.5之作為調節劑的鹽酸(1N)和/或氫氧化鈉(1N)；和 (j) 水適量至100% w/w， 其中所述丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有100 nm至1000 nm的平均粒徑和X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
根據本發明的方法製備的無菌局部眼用水性奈米懸浮劑具有一些優點，例如在施用到眼瞼(例如上眼瞼和下眼瞼)、睫毛或眼瞼緣上時具有更好的耐受性，這歸因於小粒徑和維持藥物在延長的時間期限內釋放，從而減少了要施用的活性成分的量，因此減少了全身暴露於丙酸氟替卡松以及減少了其暴露於眼睛的其他結構。正如眾所周知的，皮質類固醇具有副作用，例如眼內壓(IOP)升高、角膜厚度增加、瞳孔散大、上瞼下垂、白內障、青光眼、腎上腺抑制、骨礦物質密度降低；因此對於整個眼睛的低全身性暴露是根據本發明的方法製備的眼用水性奈米懸浮液的重要優點，特別是對於需要長期或重複性皮質類固醇治療的治療應用而言。
本發明的無菌局部眼用水性奈米懸浮液具有高功效和局部耐受性，而沒有與丙酸氟替卡松活性成分的全身吸收相關的不良副作用。
在另一個具體例中，本發明的奈米懸浮液可用於通過將所述組成物局部施用於需要的受試者的眼瞼、睫毛或眼瞼緣上治療或減輕與眼部炎症疾病或眼部炎性病症(例如眼瞼炎、後眼瞼炎、瞼板腺功能不良或乾眼病)相關的症狀和/或臨床徵象的方法中。這類用於治療眼瞼炎、後眼瞼炎、瞼板腺功能不良或乾眼病的方法包含局部向受試者眼瞼、睫毛或眼瞼緣局部施用有效量的本發明的奈米懸浮液的步驟。
本發明的另一個具體例提供治療或減輕與眼瞼炎、後眼瞼炎、瞼板腺功能不良或乾眼病相關的症狀和/或臨床徵象的方法，該方法包含向有此需要的受試者施用有效量的藥物組成物，其中該藥物組成物為由如下成分組成的眼用水性奈米懸浮液：0.001%至1% w/w丙酸氟替卡松A型的奈米晶體、0.50% w/w甲基纖維素4000 cp、0.2% w/w聚山梨酯80、0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、1.0% w/w硼酸、0.9% w/w甘油、0.01% w/w苯紮氯銨、0.055% w/w氯化鈉、作為調節劑足以達到pH 7.3-7.5的用量的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和水適量至100% w/w，其中所述丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有100 nm至1000 nm的平均粒徑和X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板，其中將所述眼用水性奈米懸浮液局部施用於上和/或下眼瞼邊緣、瞼板腺導管、睫毛或眼瞼解剖結構的任意區域。較佳地，用於本發明方法中的眼用水性奈米懸浮液包含0.5% w/w、0.25% w/w、0.20% w/w、0.10% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w或0.005% w/w的丙酸氟替卡松A型奈米晶體濃度；更佳地，丙酸氟替卡松A型奈米晶體在眼用水性奈米懸浮液中的濃度為0.1% w/w、0.20% w/w、0.25% w/w、0.5% w/w、0.05% w/w或0.01% w/w；最佳地，丙酸氟替卡松A型奈米晶體的濃度為0.1% w/w、0.20% w/w或0.05% w/w。
與眼瞼炎和瞼板腺功能不良相關的典型臨床徵象包括眼瞼碎屑、瞼緣發紅、眼瞼發脹、瞼板腺阻塞和或瞼板腺分泌的定性/定量改變。
與乾眼相關的最常見症狀、也稱作乾燥性角膜結膜炎，包括眼睛乾燥、眼不適感、眼發紅、刺痛、燒灼熱或刺激感、旺水眼、對光敏感、視力模糊、疼痛或眼疲勞。
較佳地，本發明的方法涉及用於治療受試者的非感染性、炎症性眼瞼炎或瞼板腺功能不良的方法。
在另一個具體例中，給受試者施用本發明的局部眼用水性奈米懸浮液至少每日1次，較佳地，給受試者施用所述藥物配方每日1次。
在另一個具體例中，給受試者施用本發明的局部眼用水性奈米懸浮液，每日至少1次，持續至少2周、2周以上、至少3周或至少4周。
本發明的另一個具體例涉及藥盒，其包含：(a) 上述報告的局部可施用的包含丙酸氟替卡松A型奈米晶體的眼用水性奈米懸浮液；和(b) 將所述奈米懸浮液施用於眼瞼、睫毛或眼瞼緣的擦拭子或海綿擦拭物。 實施例
除非另有說明，否則本文在組成物和實施例中使用的百分比(%)是指重量百分比(w/w)。本文和實施例中的術語甘油(glycerin和glycerol)用作同義詞。 實施例1 丙酸氟替卡松A型的奈米晶體的製備 相I溶液的製備
在2 L處理容器中，在室溫加入106.26 g聚山梨酯80 (Tween 80)、963.34 g聚丙二醇400 (PPG 400)、324.10 g聚乙二醇400 (PEG 400)，共同攪拌至全部成分溶解，然後將6.3 g丙酸氟替卡松多晶型物1加入到該溶液中，攪拌至得到澄清溶液。使用0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾得到的溶液，保持在2-8°C冷藏至使用為止。 相II溶液的製備
在8 L處理容器中，加入初始量的約5276 g純水，用高架混合器攪拌，從而產生渦旋。
加入6.01 g聚乙二醇40硬脂酸酯(PEG-40硬脂酸酯)、5.98 g苯紮氯銨 (10%溶液)和24.02 g甲基纖維素15 cP，攪拌至甲基纖維素完全溶解。加入檸檬酸鹽緩衝液以便將pH調節至3.5–4.0，加入585.8 g水。相II溶液的最終pH為3.83。
然後使用0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾相II，保持在2-8°C冷藏至使用為止。 稀釋緩衝溶液的製備
在20 L處理容器中，導入12.0 g聚山梨酯80 (Tween 80)，加入5374 g純水，用高架混合器攪拌，從而產生渦旋。
加入3.24 g磷酸二氫鈉一水合物、1.14 g磷酸氫二鈉二水合物、12.00 g聚乙二醇40硬脂酸酯(PEG-40硬脂酸酯)、0.6 g苯紮氯銨(10%溶液)，攪拌至完全溶解，加入597 g水。緩衝溶液的最終pH為6.4。使用0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾，保持在2-8°C冷藏至使用為止。 丙酸氟替卡松A型的奈米晶體的製備
將480g 相II導入反應器室內。將940 g 相I和3780 g 相II在連接至冷凝器的夾套容器中冷卻至2-4°C的目標溫度。
使用蠕動校準泵，將相I和相II(相I和相II的泵流速分別為600 ml/min和2400 ml/min)通過配備其超音波換能器的反應器進行泵送，其振幅設置為60% (Q Sonica Q1375 W)。
在室溫下，將反應器的流出物(相III: 5201.7 g)收集入潔淨的容器中。相III的溫度約為11°C。
然後在收集容器中在室溫下將相III攪拌約30分鐘，得到均勻的丙酸氟替卡松奈米晶體的懸浮液(最終相III)。 退火方法
將最終的相III轉移到密閉容器中。將該容器置於培養箱中並在40℃下維持至少16小時。 奈米晶體的純化和分離
將5167g退火的相III轉移到處理容器中，加入等量的稀釋緩衝溶液，使得相III與稀釋緩衝溶液的比例為1:1。將得到的混合物使用低剪切混合器攪拌30分鐘，得到奈米晶體的均勻懸浮液(稀釋的相III)。
將稀釋的相III保持在2-8°C冷藏至離心為止。
首先通過不連續離心稀釋的相III收集丙酸氟替卡松A型奈米晶體。然後用注射用水將奈米晶體洗滌幾次(4次洗滌循環)。
使用雷射散射粒徑分佈分析儀(Horiba LA-950)評價分離的奈米晶體的粒徑。D50 為0.2153 µm，D90 為0.6073 µm。
通過XRPD和Rietveld精製法對所述奈米晶體進行表徵。圖1 (XRPD)中提供了結果，其顯示丙酸氟替卡松A型的典型圖案，其具有強烈傾向性的晶體習性，且c-軸基本垂直於表面，如WO 2013/169647中所定義的，其通過得自Rietveld精製法得到的極圖證實。 實施例2 丙酸氟替卡松A型的無菌局部眼用水性奈米懸浮液的製備
表1 丙酸氟替卡松奈米懸浮液組成
成分 量(% w/w)
丙酸氟替卡松A型奈米晶體 0.10
甲基纖維素4000 cP 0.50
聚山梨酯80 0.2
乙二胺四乙酸二鈉二水合物 0.10
硼酸 1.0
甘油 0.9
苯紮氯銨 0.01
氯化鈉 0.055
注射用水 適量至100%
pH 7.3–7.5
步驟1) 載體1的製備(不含甘油的載體)
在20 L處理容器中，將17600 g注射用水在80°C加熱，緩慢地加入100.0 g甲基纖維素4000 cp，將該混合物攪拌至甲基纖維素溶解。
在40°C冷卻該溶液，加入200.0 g硼酸，用氫氧化鈉(1N)調節pH至7.4。
按以下特定順序添加以下賦形劑：20.0 g乙二胺四乙酸二鈉二水合物、11.0 g氯化鈉、4.0 g苯紮氯銨 (50%溶液)、40.0 g聚山梨酯80 (Tween 80)；在加入下一種賦形劑之前，每種賦形劑都已完全溶解，溶液的製備在約40°C至室溫的溫度下進行。測試pH，任選地用鹽酸(1N)或氫氧化鈉(1N)將其調節到7.3–7.5；調節pH後，加入注射用水使最終重量達到19800 g。將得到的溶液混合至少10分鐘，得到均勻的溶液，將其儲存在2-8°C。 步驟2) 2%丙酸氟替卡松奈米晶體漿液的製備
通過PES 0.2 µm介質過濾，將4000 g載體1導入到包含攪拌棒的10 L處理容器中，放置備用。
在2 L的燒杯中，將15.04 g丙酸氟替卡松A型奈米晶體與一些載體1一起導入。將該漿液混合均勻，測定丙酸氟替卡松含量(31.6 mg/g)，然後將其用載體1進一步稀釋以達到20 mg/ml (2% w/w漿液)的丙酸氟替卡松目標濃度。將該濃縮的漿液在6000±10 RPM下進行高剪切、高速混合10分鐘，在Horiba LA-950S2 PSD分析儀上通過雷射繞射測試粒徑分佈。
結果如下：
   平均值: 0.856 µm   
   眾數(mode): 0.363 µm   
   中位值: 0.420 µm   
   D10 : 0.203 µm   
   D90 : 2.154 µm   
步驟3) 載體2的製備(包含甘油1.8% w/w的載體)
在4 L燒杯中，導入1600 g過濾的載體1，在攪拌下加入36 g甘油至溶解。
測試pH，用氫氧化鈉(1N)調節至7.3–7.5，進一步加入載體1以便將最終重量調節至2000g，產生1.8% w/w甘油溶液。 步驟4) 1% 丙酸氟替卡松奈米晶體漿液的製備
通過用載體2將步驟2)中製備的2%濃縮漿液進一步稀釋至1% w/w的丙酸氟替卡松濃度製備1%丙酸氟替卡松奈米晶體漿液。
將1% w/w丙酸氟替卡松A型奈米晶體漿液以6000±10 RPM進行高剪切、高速混合10分鐘，使用Horiba LA-950S2 PSD分析儀通過雷射繞射測試粒徑分佈。
結果如下：
   平均值: 0.428 µm   
   眾數: 0.123 µm   
   中位值: 0.162 µm   
   D10 : 0.082 µm   
   D90 : 0.678 µm   
將1%濃縮漿液的等分部分填充入包含攪拌棒的500 ml玻璃瓶，通過在121.5°C高壓滅菌40分鐘滅菌。 步驟5) 載體3的製備(包含甘油0.9% w/w的載體)
在20 L容器中，導入11200 g載體1，在攪拌下加入126 g甘油，然後用氫氧化鈉將pH調節至7.3-7.5，再加入載體1的等分部分，以便將最終重量調節至14000 g，產生0.9%w/w甘油溶液。將該溶液混合至少10分鐘，直至均勻，無菌過濾入另一個接收容器。 步驟6) 0.1% w/w丙酸氟替卡松奈米懸浮液的製備
在ISO 5環境中，以無菌方式轉入包含高壓滅菌的步驟4)的無菌1% w/w丙酸氟替卡松奈米晶體的瓶的內容物，彙集入最終的混合容器。
記錄轉入容器的1%丙酸氟替卡松奈米晶體漿液的重量(1366.3g)。
通過添加11774.2g無菌載體3得到最終0.1%無菌丙酸氟替卡松奈米晶體懸浮液。
在攪拌板上將最終無菌奈米懸浮液攪拌不超過15分鐘。
使用Horiba LA-950S2 PSD分析儀通過雷射繞射測試粒徑分佈。
結果如下：
   平均值: 0.846 µm   
   眾數: 0.362 µm   
   中位值: 0.425 µm   
   D10 : 0.202 µm   
   D90 : 2.219 µm   
通過用如步驟6)中公開的水性載體3的等分部分稀釋步驟4)的去黏聚的1%丙酸氟替卡松奈米懸浮液得到包含不同濃度例如0.5% w/w、0.25% w/w、0.20% w/w、0.1% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w和0.005% w/w的丙酸氟替卡松A型的本發明的奈米懸浮液，得到最終丙酸氟替卡松濃度。 實施例3 實施例2的奈米懸浮液的穩定性評價
通過在三種不同的溫度和濕度條件(5°C, 25°C / 40% RH；40°C / 25% RH)下儲存奈米懸浮液，對實施例2中製備的奈米懸浮液組成物進行儲存穩定性測試。在1個月和3個月時間點評價所述奈米懸浮液的再懸浮能力、丙酸氟替卡松的含量、粒徑分佈和苯紮氯銨的含量。
表2和表3中報告的結果表明，該奈米懸浮液在製造和儲存時在物理和化學上均為穩定的。儲存時未注意到奈米懸浮液的物理外觀變化。該奈米懸浮液未顯示任何化學降解跡象，因為儲存時丙酸氟替卡松的化學分析完全在標籤要求的90%-110%的限度範圍內。儲存時，相關物質和總雜質保持在不超過4%規定限度內。
表2: 1個月時間點穩定性數據
參數 T0 T = 1個月
   n/a 5°C 25°C 40%RH 40°C 25%RH
丙酸氟替卡松含量 105.6% 103.8% 98.2% 101.2%
丙酸氟替卡松相關物質(總計) 0.0% 0.25% 0.10% 0.11%
再懸浮能力 n/a 易於再懸浮 易於再懸浮 易於再懸浮
BAK含量 99.1% 98% 97% 98%
PSD結果(µm)   
平均值 0.846 0.816 0.796 0.825
中位值 0.425 0.461 0.412 0.455
眾數 0.362 0.366 0.363 0.366
D10 0.202 0.213 0.200 0.212
D90 2.219 1.731 1.991 1.866
表3: 3個月時間點穩定性數據
參數 T0 T = 3個月
   n/a 5°C 25°C 40%RH 40°C 25%RH
丙酸氟替卡松含量 105.6% 103% 104% 104%
FP相關物質(總計) 0.0% 0.11% 0.12% 0.11%
再懸浮能力 n/a 再懸浮 再懸浮 再懸浮
BAK含量 99.1% 101% 101% 97%
PSD結果(µm)   
平均值 0.846 0.830 0.830 0.770
中位值 0.425 0.460 0.480 0.330
眾數 0.362 0.370 0.420 0.320
D10 0.202 0.220 0.230 0.170
D90 2.219 1.980 1.890 2.250
實施例4 (比較例)
本研究結果表明包含硼酸、但不含甘油的丙酸氟替卡松A型奈米晶體的奈米懸浮液不穩定且聚集。
將丙酸氟替卡松A型奈米晶體混懸於包含與上述實施例2確切相同濃度的硼酸和甲基纖維素、但不含甘油的載體中。
將測試的奈米懸浮液的組成報告在表4中。
表4: 測試的奈米懸浮液
成分 濃度(% w/w)
丙酸氟替卡松 0.1 0.03 0.01 0.005 N/A
甲基纖維素4000cP 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
聚山梨酯80 (Tween 80) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
乙二胺四乙酸二鈉二水合物 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
硼酸 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
氯化鈉 0.055 0.055 0.055 0.055 0.055
甘油 0 0 0 0 0
苯紮氯銨 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01
注射用水 適量至100 適量至100 適量至100 適量至100 適量至100
丙酸氟替卡松A型奈米晶體懸浮液的製備
將一定量的丙酸氟替卡松A型奈米晶體懸浮於如下成分組成的載體等分部分中：0.50% w/w甲基纖維素4000 cp、0.2% w/w聚山梨酯80、0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、1.0% w/w硼酸；0.01% w/w苯紮氯銨和適量至100% w/w的水(參見表4)，得到目標濃度的丙酸氟替卡松(參見表4)。一旦奈米晶體懸浮，則該懸浮液傾入500mL玻璃燒杯中，使用高速、高剪切Silverson混合設備進行去黏聚。將該懸浮液以6000 RPM混合直至滿足粒徑分佈質量標準。測定該奈米懸浮液的粒徑分佈和黏度。
穩定時將該奈米懸浮液置於40°C下，在2周的時間點測定粒徑分佈(PDS)。
表5a和5b中報告的結果表明，僅在兩周的短暫期限內，平均粒徑和D90 均存在增加，這反映出奈米懸浮液中聚集物形成；相反，實施例3中報告的穩定性結果表明，根據本發明的方法製備的奈米懸浮液在加速條件下穩定至多3個月。
表5a PSD和黏度評價
時間 T0 2周
包含0.1%的丙酸氟替卡松的配方
以cP計的黏度 18.6 15.7
以µm計的粒徑分佈結果
眾數 0.212 0.183
中位值 0.245 0.261
平均值 0.382 2.575
D10 0.137 0.261
D90 0.754 7.571
包含0.03%的丙酸氟替卡松的配方
以cP計的黏度 19.7 15.6
以µm計的粒徑分佈結果
眾數 0.317 0.210
中位值 0.319 0.291
平均值 0.437 2.128
D10 0.161 0.141
D90 0.829 6.279
表5b PSD和黏度評價
時間 T0 2周
包含0.01%的丙酸氟替卡松的配方
以cP計的粘度 19.7 15.1
以µm計的粒徑分佈結果
眾數 0.319 0.317
中位 0.336 0.467
平均值 0.463 1.808
D10 0.179 0.197
D90 0.854 4.719
包含0.005%的丙酸氟替卡松的配方
以cP計的黏度 19.3 16.3
以µm計的粒徑分佈結果
眾數 0.319 0.318
中位值 0.337 0.427
平均值 0.382 1.050
D10 0.179 0.190
D90 0.931 2.619
包含0.0%的丙酸氟替卡松的配方
以cP計的黏度 18.6 16.6
實施例5 (比較例)
本研究結果證實，將丙酸氟替卡松A型奈米晶體加入到包含預先形成的硼酸/甘油複合物的載體中導致殘留聚集，當根據本發明的方法製備奈米懸浮液時，未觀察到這一現象，其中將甘油加入到高速高剪切混合去黏聚的2%丙酸氟替卡松奈米晶體漿液中(參見實施例2-步驟4)。
將丙酸氟替卡松A型奈米晶體懸浮於包含預先形成的硼酸/甘油複合物(硼酸1.0% w/w /甘油0.25% w/w和硼酸1.0% w/w /甘油1.0% w/w)的載體中，並且在其中去黏聚，得到0.25% w/w終濃度的丙酸氟替卡松。
將兩種測試的奈米懸浮液的載體組成報告在表6中。
表6: 測試的奈米懸浮液
成分 濃度(% w/w)
丙酸氟替卡松 0.25 0.25
甲基纖維素4000cP 0.5 0.5
Tween 80 0.2 0.2
EDTA二鈉二水合物 0.1 0.1
硼酸 1.0 1.0
氯化鈉 0.05 0.05
甘油 0.25 1.0
苯紮氯銨 0.01 0.01
注射用水 適量至100 適量至100
丙酸氟替卡松A型奈米晶體奈米懸浮液的製備
將丙酸氟替卡松A型奈米晶體懸浮於表6中報告的兩種包含預先形成的硼酸/甘油複合物的載體中，使用攪拌棒，在磁力攪拌板上攪拌過夜。一旦奈米晶體懸浮，則該懸浮液傾入500mL玻璃燒杯中，以便使用高速、高剪切Silverson混合設備進行去黏聚。將該懸浮液以6000 RPM混合直至滿足粒徑分佈質量標準。
將兩種配方在穩定性試驗時置於40°C，並對在1周時間點取出的樣品測定粒徑分佈。從穩定性室中取出樣品後不久對其進行分析。結果顯示樣品中的大量聚集(參見圖2和3)。
樣品冷藏時，聚集是部分可逆的，但仍有大量聚集殘留水平(參見圖4)；這種熱可逆的聚集與溫度升高時甲基纖維素的溶解度降低有關。眾所周知，即使甲基纖維素溶液在30-50°C的範圍內在視覺上清楚地顯示無可檢測到的顆粒，但隨著溫度的升高，聚合物鏈形成尺寸生長的鬆散締合的團簇。這些團簇可能導致在40°C下奈米晶體部分聚集。
如上所報告，本研究結果證實，甘油通過與防止分離的奈米晶體聚集的硼酸形成複合物而充當穩定劑。如果通過將奈米晶體懸浮在包含預先形成的複合物硼酸/甘油的載體中來製備奈米懸浮液，則該複合物的穩定作用會降低。 實施例6 體外溶出測試
評價本發明的奈米懸浮液的丙酸氟替卡松A型奈米晶體的溶出速率，並將其與標準丙酸氟替卡松形式1微粉化材料(參考樣品)的溶出速率進行比較。
使用溶出方法完成本發明的丙酸氟替卡松A型的奈米晶體和微粉化的丙酸氟替卡松形式1的兩種奈米懸浮液的溶出曲線。
丙酸氟替卡松A型奈米晶體的粒徑為0.434 µm (D50 - 中位值)，而丙酸氟替卡松形式1微粉化材料的粒徑為4.64 µm (D50 - 中位值)。
本研究使用隔室擴散分析通過透析膜和浸入條件進行。通過使用包含30mM磷酸鹽緩衝液pH 7.4和5% HPβCD環糊精的受體液，並且通過每24小時完全更換緩衝液以保持在飽和點以下，來實現浸入條件。在那些實驗條件下，將飽和點估計為5µg/g，並且所進行的測量以及緩衝液的替換顯示最大濃度為1.5µg/g。本研究在37°C的溫度下進行。溶出測試方法的詳細信息如下： 用兩種0.1% w/w丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液的配方載體(包含所有包括表面活性劑在內的配方賦形劑的安慰劑溶液)進行5倍稀釋，在透析裝置內得到0.02% w/w丙酸氟替卡松的終濃度。
將微粉化的丙酸氟替卡松形式1混懸於透析系統接收室內使用的相同磷酸鹽緩衝液中。
以1-2 RPM進行丙酸氟替卡松釋放。
以預定的時間間隔(1、3、5、20、24、48、72小時)取出1 mL的採樣等分部分，並用等體積的溶出介質替代，以維持50 ml試管中39 ml恆定的總體積。
即刻將這些等分部分離心，並通過HPLC進行測定。
表7-9中報告的結果表明，儘管兩種測試樣品和參考樣品具有不同的粒徑，但丙酸氟替卡松A型的奈米晶體和丙酸氟替卡松形式1微粉化材料的溶出特性相似。更具體地，丙酸氟替卡松A型奈米晶體的粒徑(D50 ＝0.434 µm)比微粉化丙酸氟替卡松形式1 (D50 = 4.64 µm)小10倍。
由於化合物的溶解度通常與粒徑有內在聯繫，所以隨著顆粒變小，表面積與體積之比增加，導致與溶劑的相互作用更大，從而導致溶解度增加，本研究結果表明，本發明的眼用水性丙酸氟替卡松A型奈米晶體的獨特性能，即一方面小粒徑(奈米顆粒)改善了眼用配方的舒適性和耐受性，另一方面使丙酸氟替卡松活性成分的溶出速度減慢，從而可以避免丙酸氟替卡松的快速和高吸收，這些與類固醇的全身性吸收相關的不良副作用有關。
表7: 丙酸氟替卡松A型奈米晶體的溶出測試
時間(h) %溶出
試管#1 試管#2 試管#3 平均值% St. Dev. RSD
1 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0%
3 0.2% 1.4% 0.7% 0.8% 0.6% 73.2%
5 1.3% 2.8% 2.4% 2.2% 0.8% 35.6%
19 14.5% 20.4% 18.7% 17.8% 3.0% 16.9%
24 17.5% 24.0% 22.4% 21.3% 3.4% 15.9%
48 38.7% 51.4% 48.6% 46.2% 6.7% 14.4%
72 59.6% 78.1% 74.0% 70.5% 9.7% 13.7%
表8: 丙酸氟替卡松A型奈米晶體的溶出測試
時間點(h) %溶出
試管#1 試管#2 試管#3 平均值% St. Dev. RSD
1 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0%
3 0.6% 0.5% 0.8% 0.7% 0.2% 26.7%
5 2.4% 2.0% 2.6% 2.3% 0.3% 11.2%
19 19.0% 18.2% 19.7% 19.0% 0.8% 4.1%
24 22.4% 21.5% 23.2% 22.4% 0.9% 3.8%
48 49.1% 45.6% 50.9% 48.5% 2.7% 5.6%
72 75.1% 69.1% 77.7% 73.9% 4.4% 6.0%
表9: 微粉化丙酸氟替卡松形式1的溶出測試
時間點(h) %溶出
試管#1 試管#2 試管#3 平均值% St. Dev. RSD
1 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0%
3 0.8% 0.5% 0.9% 0.7% 0.2% 31.2%
5 2.9% 1.9% 3.0% 2.6% 0.6% 23.1%
19 20.9% 17.1% 20.3% 19.4% 2.1% 10.7%
24 24.2% 20.2% 23.5% 22.6% 2.2% 9.5%
48 51.1% 44.0% 50.6% 48.6% 4.0% 8.2%
72 77.4% 66.7% 76.2% 73.4% 5.9% 8.0%
實施例7 局部眼用水性丙酸氟替卡松A型奈米晶體懸浮液在米格魯犬中的14天重複劑量研究
本研究的目的在於評價通過局部直接應用於米格魯犬雙眼的上和下瞼邊緣(緣)施用的本發明的丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液的毒物動力學(參見下表10)。
表10: 測試配方組成
成分 % (w/w) % (w/w) % (w/w) % (w/w)
丙酸氟替卡松 0.00 0.005 0.03 0.1
甲基纖維素4000cP 0.50 0.50 0.50 0.50
Tween 80 0.20 0.20 0.20 0.20
乙二胺四乙酸二鈉二水合物 0.10 0.10 0.10 0.10
硼酸 1.00 1.00 1.00 1.00
氯化鈉 0.055 0.055 0.055 0.055
甘油 0.90 0.90 0.90 0.90
苯紮氯銨 0.01 0.01 0.01 0.01
注射用水 適量至100 適量至100 適量至100 適量至100
方法
在研究開始時，將五十隻幼稚的米格魯犬(雄性25隻，雌性25隻)，年齡約5-6個月，雄性和雌性體重為5.7至8.8 kg，將其分為治療組(1-4組)和載體組。
對雄性和雌性米格魯犬通過眼瞼塗藥器分別以1.6、9.6和32 µg/天(雙側QD局部應用)或64 µg/天(雙側BID局部應用)的劑量給予丙酸氟替卡松給藥，連續14天每天1次或2次(兩次劑量之間最少間隔6小時)直接施用於雙眼的上下眼瞼。
在第1天和第14天的選定時間點，從所有動物中收集用於毒物動力學評價的血液。
在治療開始前、第一周和第二周給藥期間和最後一周恢復期間進行眼科學檢查。根據改進的Draize等級每日一次給眼睛評分。
根據14天恢復期評價丙酸氟替卡松奈米懸浮液的作用可逆性。 結果和結論
將組平均血漿毒物動力學參數概括在下表11中。
結果表明，對丙酸氟替卡松的暴露隨劑量的增加而呈劑量依賴性。沒有明顯的證據表明在雄性和雌性動物中存在蓄積。暴露沒有明顯的性別相關差異。在一項為期14天的吸入毒性研究中，與狗所接受的皮質類固醇相關發現相關的最低不良反應水平的全身暴露量(AUC)比在狗中進行為期14天的局部眼毒性研究(Advair-Diskuss-NDA-021077)中0.1%QD和BID的眼部劑量所觀察到的分別高14倍和9倍。
沒有局部或全身毒性證據。
表11: 局部眼瞼緣施用後丙酸氟替卡松的血漿毒物動力學參數
研究日 眼部治療 劑量 (µg/天) Tmax (h) Cmax (pg/mL) AUC0-24h (pg.h/mL)
1 0.005% QD 1.6 0.5 32.4±26.4 25.7±18.5
0.03% QD 9.6 0.5 79.8±70.0 101±102
0.1% QD 32 0.5 250±219 482±407
0.1% BID 64 6.5 304±178 914±413
14 0.005% QD 1.6 0.75 28.1±26.6 56.8±65.0
0.03% QD 9.6 0.5 60.8±48.7 191±335
0.1% QD 32 0.5 130±155 481±361
0.1% BID 64 0.5 126±93.6 760±188
實施例8 丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液在治療眼瞼炎急性加重中的功效和安全性評價
本研究的目的在於比較本發明的丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液與安慰劑的水性眼用配方在減輕眼瞼炎受試者的徵象和症狀方面的功效和安全性。 測試配方(下文的FP-A型-NS)
0.1% w/w丙酸氟替卡松A型奈米晶體(平均粒徑100 nm至1000 nm)、0.50% w/w甲基纖維素4000 cp、0.2% w/w聚山梨酯80、0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、1.0% w/w硼酸、0.9% w/w甘油、0.01% w/w苯紮氯銨、0.055% w/w氯化鈉、作為調節劑足以達到pH 7.3-7.5的用量的鹽酸(1N)和/或氫氧化鈉(1N)和適量至100% w/w的水。 安慰劑配方
0.50% w/w甲基纖維素4000 cp、0.2% w/w聚山梨酯80、0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、1.0% w/w硼酸、0.9% w/w甘油、0.01% w/w苯紮氯銨、0.055% w/w氯化鈉、作為調節劑足以達到pH 7.3-7.5的用量的鹽酸(1N)和/或氫氧化鈉(1N)和適量至100% w/w的水。 研究設計
這是一項2期多中心、隨機分組、雙掩蔽、安慰劑對照研究，其評價每天1次用0.1%丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液治療眼瞼炎症狀和徵象的安全性和功效。
本研究的目標人群為具有眼瞼炎病史的成年男性和女性，他們經歷了急性眼瞼炎加劇，將其定義為在篩選和基線就診時在雙眼中瞼緣發紅、眼瞼碎屑和眼瞼不適各自的最低評分為「1」(按4-分制)。本研究中總計包括15名受試者。受試者年齡在55至80歲之間，其中平均年齡為70.8歲。
在美國的三個臨床地點，將15名患者隨機分組。10名患者接受FP-A型-NS，且5名患者接受安慰劑，在晚上雙眼每天1次。
研究就診如下：篩選(第-7天至第-3天)，基線/第1天，第4天(±1天)，第8天(±1天)，第11天(±1天)，第14天(-1天；治療的最後一天)和第28天/退出(±2天；隨訪)。
在晚上每日1次施用測試奈米懸浮液(16 µg丙酸氟替卡松/眼)或安慰劑。研究藥物由受試者自我施用。 丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液的功效和安全性評價
在研究期間的每次給藥就診時，將丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液 (FP-A型-NS)與安慰劑的功效和安全性進行比較。除了眼瞼炎的徵象和症狀外，本研究還評價了乾眼病的特徵性徵象和症狀，這在具有眼瞼炎的受試者中也常常觀察到。 功效
表12和13中報告的研究結果表明，丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液治療持續改善具有眼瞼炎的患者的徵象和症狀，而用丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液治療的受試者的眼碎屑、發紅和不適感的綜合評分從基線並且與安慰劑治療的受試者相比均降低。
表12和表13中給出的結果與治療14天後評價並在每天的眼瞼擦洗過程之前進行的研究眼中眼瞼炎的徵象和症狀相關。
受試者還使用視覺模擬量表(VAS)對以下乾眼症狀進行評價：眼睛乾燥、燒灼-刺激感、異物感、瘙癢、畏光、疼痛和視力模糊。表14中報告的複合VAS評分(這些症狀的單個評分的平均值)表明，丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液治療相對於安慰劑有效緩解乾眼症狀。 安全性
用本發明的丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液治療非常充分耐受，所有患者均完成了本治療。沒有發生嚴重不良反應(SAE)，且尤其是在治療期間或治療停止後至多2周，未觀察到受試者眼內壓的臨床相關變化。
本研究結果表明，本發明的丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液能夠減輕眼瞼炎和乾眼的徵象和症狀，並且該治療和應用方法具有安全耐受性。
表12:用本發明的丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液(FP-A型-NS)與安慰劑治療相比在第14天時眼瞼炎的徵象和症狀
瞼緣發紅
   安慰劑 FP-A型-NS
基線(SD) 1.6 (0.89) 1.5 (0.53)
第14天(SD) 1.2 (0.45) 0.9 (0.74)
從基線的改變(SD) -0.4 (0.55) -0.6 (0.52)
p值 0.1778 0.0051
FP-A型-NS與安慰劑 (95% CI) -0.2 (-0.8、0.4) p = 0.5000
眼瞼碎屑
   安慰劑 FP-A型-NS
基線(SD) 1.8 (0.45) 1.6 (0.70)
第14天(SD) 1.2 (0.45) 0.7 (0.67)
從基線的改變(SD) -0.6 (0.55) -0.9 (0.88)
p值 0.0705 0.0100
FP-A型-NS與安慰劑 (95% CI) -0.3 (-1.2, -0.3) p = 0.5000
眼瞼不適
   安慰劑 FP-A型-NS
基線(SD) 1.8 (0.45) 1.6 (0.52)
第14天(SD) 1.4 (1.14) 0.9 (0.88)
從基線的改變(SD) -0.4 (0.89) -0.7 (1.16)
p值 0.3739 0.0886
FP-A型-NS與安慰劑(95% CI) -0.3 (-1.6、1.0) p = 0.6221
表13: 用本發明的丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液(FP-A型-NS)與安慰劑治療相比在第14天時的瞼緣發紅、眼瞼碎屑和眼瞼不適複合評分
複合眼瞼碎屑、發紅和不適感 安慰劑 FP-A型-NS
基線(SD) 5.2 (1.30) 4.7 (0.82)
第14天(SD) 3.8 (1.48) 2.5 (1.90)
從基線的改變(SD) -1.4 (0.55) -2.2 (1.62)
p值 0.0046 0.0020
FP-A型-NS與安慰劑(95%CI) -0.8 (-2.4、0.8) p = 0.3095
表14：乾眼症狀的複合VAS評分：用本發明的丙酸氟替卡松A型奈米懸浮液(FP-A型-NS)與安慰劑治療相比在第14天時的眼乾、燒灼-刺激感、異物感、瘙癢、畏光、疼痛和視力模糊
複合VAS評分 安慰劑 FP-A型-NS
基線(SD) 41.8 (29.72) 44.8 (17.81)
第14天(SD) 32.9 (27.17) 26.1 (18.05)
從基線的改變(SD) -8.9 (9.37) -18.8 (19.73)
p值 0.1005 0.0147
FP-A型-NS與安慰劑 (95% CI) -9.9 (-30.2, 10.5) p = 0.3142
實施例9 實施例2的奈米懸浮液的穩定性評價
通過在三種不同的溫度和濕度條件(5°C, 25°C / 40% RH；40°C / 25% RH)下儲存奈米懸浮液，對實施例2中製備的奈米懸浮液組成物進行儲存穩定性測試。在1個月和3個月時間點，在40°C下5個月時間點(表15)，在5°C和25°C(表16)下至多12個月的時間點(表16)評價奈米懸浮液的再懸浮能力、丙酸氟替卡松含量、粒徑分佈和苯紮氯銨含量(見實施例3和表2和3中報告的結果)。
表15和16中報告的結果表明，所述奈米懸浮液在儲存時在物理和化學上均穩定。儲存時未注意到該奈米懸浮液的物理外觀變化。該奈米懸浮液未顯示任何化學降解跡象，因為丙酸氟替卡松的化學分析結果完全在儲存時標籤要求的90%-110%的限度範圍內。儲存時相關物質和總雜質保持在不超過4%的規定限度內。
使用Horiba LA-950儀器分析粒度分佈。
表15: 5個月時間點穩定性數據
參數 T0 T = 5個月
   n/a 40°C 25%RH
丙酸氟替卡松含量 105.6% 104%
FP相關物質(總計) 0.0% 0.11%
再懸浮能力 n/a 再懸浮
BAK含量 99.1% 103%
PSD結果(µm)   
平均值 0.846 0.82
中位值 0.425 0.50
眾數 0.362 0.42
D10 0.202 0.23
D90 2.219 1.84
表16: 12個月時間點穩定性數據
參數 T0 T = 12個月
   n/a 5°C 25°C 40% RH
丙酸氟替卡松含量 105.6% 105% 107%
FP相關物質(總計) 0.0% 0.61% 0.48%
再懸浮能力 n/a 再懸浮 再懸浮
BAK含量 99.1% 101% 96%
PSD結果(µm)   
平均值 0.846 0.90 0.86
中位值 0.425 0.45 0.45
眾數 0.362 0.36 0.36
D10 0.202 0.21 0.21
D90 2.219 2.16 2.08
圖1: 丙酸氟替卡松A型奈米晶體的XRPD圖案。 圖2: 在40°C在T = 1周時的粒徑分佈示意圖；包含預先形成的1% w/w硼酸 / 0.25% w/w甘油複合物(比較例)的載體中0.25%的丙酸氟替卡松A型奈米晶體。 圖3: 在40°C在T = 1周時的粒徑分佈示意圖；包含預先形成的1% w/w硼酸1% w/w甘油(比較例)的載體中0.25%的丙酸氟替卡松A型奈米晶體。 圖4: 在40°C在T = 1周時的粒徑分佈示意圖；在40°C下初步分析後在5°C冷藏20小時儲存；在具有0.25% w/w甘油(比較例)的載體中0.25% w/w的丙酸氟替卡松A型奈米晶體。

Claims (23)

  1. 一種用於製備無菌局部眼用水性奈米懸浮液之方法，所述奈米懸浮液包含具有100 nm至1000 nm的平均粒徑的丙酸氟替卡松A型奈米晶體，且丙酸氟替卡松濃度為0.001% w/w至1% w/w，該方法包含： a) 製備水性載體1，其包含：0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和至100% w/w的水； b) 混合一定量的具有平均粒徑100 nm至1000 nm的丙酸氟替卡松A型奈米晶體與一定量的水性載體1，得到包含濃度2% w/w的丙酸氟替卡松的漿液； c) 將高剪切、高速混合施加於步驟b)的漿液至少10分鐘； d) 製備水性載體2，其包含：1.8% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和適量至100% w/w的水； e) 向步驟c)的漿液中添加水性載體2的等分部分，得到濃度約1% w/w的丙酸氟替卡松； f) 將高剪切、高速混合施加於步驟e)的漿液，直至得到目標平均粒徑； g) 通過高壓滅菌給步驟f)的奈米懸浮液滅菌； h) 製備水性載體3，其包含：0.9% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和至100% w/w的水；並且藉由過濾給水性載體3滅菌； i) 以無菌方式向步驟g)的經滅菌的奈米懸浮液中添加無菌水性載體3的等分部分，以製備包含目標濃度的丙酸氟替卡松奈米晶體A型的無菌局部眼用水性奈米懸浮液； 其中丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有該奈米晶體的X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
  2. 如請求項1之方法，其中，丙酸氟替卡松在最終無菌局部眼用水性奈米懸浮液中的濃度為0.001%至0.5% w/w。
  3. 如請求項1之方法，其中，丙酸氟替卡松在最終無菌局部眼用水性奈米懸浮液中的濃度為0.5% w/w、0.25% w/w、0.2% w/w、0.1% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w或0.005% w/w。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中，步驟c)和f)的高剪切、高速混合以6000 RPM進行。
  5. 如請求項4之方法，其中，在步驟f)中，將高剪切、高速混合施加至少10分鐘。
  6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中，將水性載體1和2在其應用前通過0.2 µm濾器過濾。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中，步驟g)的滅菌通過在約122°C下對步驟f)的奈米懸浮液高壓滅菌約40分鐘進行。
  8. 一種用於製備無菌局部眼用水性奈米懸浮液之方法，所述奈米懸浮液包含具有平均粒徑100 nm至1000 nm的丙酸氟替卡松A型奈米晶體，且丙酸氟替卡松濃度為0.001% w/w至1% w/w，該方法包含： a-1) 將具有平均粒徑100 nm至1000 nm的丙酸氟替卡松A型奈米晶體滅菌； b-1) 製備水性載體1，其包含：0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和適量至100% w/w的水；並且藉由過濾將所述水性載體1滅菌； c-1) 以無菌方式混合一定量的經滅菌的丙酸氟替卡松奈米晶體A型與一定量的經滅菌的水性載體1，得到包含濃度2% w/w的丙酸氟替卡松的漿液； d-1) 向步驟c-1)的漿液施加高剪切、高速混合至少10分鐘； e-1) 製備水性載體2，其包含：1.8% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和適量至100% w/w的水；並且藉由過濾將所述水性載體2滅菌； f-1) 以無菌方式向步驟d-1)的漿液中添加經滅菌的水性載體2的等分部分，得到濃度約1% w/w的丙酸氟替卡松； g-1) 向步驟f-1)的漿液施加高剪切、高速混合，直至得到目標平均粒徑； h-1) 製備水性載體3，其包含：0.9% w/w甘油、0.5% w/w甲基纖維素4000 cp、1.0% w/w硼酸、0.1% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物、0.055% w/w氯化鈉、0.01% w/w苯紮氯銨、0.2% w/w聚山梨酯80、調節pH在7.3–7.5的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉和至100% w/w的水；並且藉由過濾將所述水性載體3滅菌； i-1) 以無菌方式向步驟g-1)的奈米懸浮液中添加經滅菌的水性載體3的等分部分，以製備包含終濃度的丙酸氟替卡松奈米晶體A型的無菌局部眼用水性奈米懸浮液； 其中丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
  9. 如請求項8之方法，其中，丙酸氟替卡松在最終無菌局部眼用水性奈米懸浮液中的濃度為0.001%至0.5% w/w。
  10. 如請求項8之方法，其中，丙酸氟替卡松在最終無菌局部眼用水性奈米懸浮液中的濃度為0.5% w/w、0.25% w/w、0.2% w/w、0.1% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w或0.005% w/w。
  11. 如請求項8至10中任一項之方法，其中，在步驟a-1)中，通過對丙酸氟替卡松A型奈米晶體在注射用水中的具有2%至20% w/w濃度的丙酸氟替卡松的懸浮液高壓滅菌而對丙酸氟替卡松A型奈米晶體進行滅菌。
  12. 如請求項11之方法，其中，將丙酸氟替卡松A型奈米晶體在水中的懸浮液在約122°C高壓滅菌約30分鐘。
  13. 如請求項8至12中任一項之方法，其中，在步驟d-1)和步驟g-1)中以6000 RPM進行高剪切、高速混合。
  14. 如請求項13之方法，其中，在步驟g-1)中，將高剪切、高速混合施加至少10分鐘。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中，根據下列步驟製備丙酸氟替卡松奈米晶體A型： 1) 製備相I溶液，其包含：0.45% w/w丙酸氟替卡松多晶型物1、23.2% w/w聚乙二醇400 (PEG 400)、68.8% w/w聚丙二醇400 (PPG 400)、7.6% w/w聚山梨酯80 (Tween 80)；並且通過0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾相I溶液； 2) 製備相II溶液，其包含：0.01% w/w苯紮氯銨、0.40% (w/w)甲基纖維素15 cP、0.1% w/w聚乙二醇40硬脂酸酯(PEG-40硬脂酸酯)、至pH 3.4至3.8的檸檬酸鹽緩衝液和適量至100% w/w的水；並且通過0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾相II溶液； 3) 將經過濾的相I和相II溶液冷卻至0至4°C的溫度； 4) 在配備超音波換能器(QSonica Q2000超音波換能器)的反應器中混合相I和相II溶液，得到奈米晶體的相III懸浮液，其中： -相I溶液和相II溶液分別以600 ml/min (相I溶液)和2400 ml/min (相II溶液) 的流速連續泵入反應器中，得到相III懸浮液； -相I和相II體積比為1:4； -在混合過程中用60%的輸出功率施加超音波處理； -相III懸浮液的平均溫度約為11°C；和 5) 以足以生成渦旋的速度、在室溫下在沒有超音波處理存在下低剪切混合步驟4)的相III懸浮液最少30分鐘； 6) 在40°C在不少於16小時時間期限內使相III懸浮液退火； 7) 製備緩衝溶液，其包含：0.2% w/w聚乙二醇40硬脂酸酯(PEG-40硬脂酸酯)、0.2% w/w聚山梨酯80 (Tween 80)、0.001% w/w苯紮氯銨、0.05% w/w磷酸二氫鈉一水合物、0.02% w/w磷酸氫二鈉二水合物和水適量至100% w/w，具有pH 6.3 ± 0.2；並且通過0.8/0.2 µm聚醚碸(PES)濾器過濾該緩衝溶液； 8) 用經過濾的緩衝溶液稀釋步驟6)的相III懸浮液，其中緩衝溶液與相III的體積比為1:1； 9) 離心經稀釋的相III懸浮液以回收丙酸氟替卡松奈米晶體A型並且洗滌回收的奈米晶體； 10) 用注射用水洗滌收集的奈米晶體。
  16. 一種可局部施用在眼瞼、睫毛或眼瞼緣上的眼用水性奈米懸浮液，由如下成分組成： (a) 0.001%至1% w/w丙酸氟替卡松A型奈米晶體； (b) 0.50% w/w甲基纖維素4000 cp； (c) 0.2% w/w聚山梨酯80； (d) 0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物； (e) 1.0% w/w硼酸； (f) 0.9% w/w甘油； (g) 0.01% w/w苯紮氯銨； (h) 0.055% w/w氯化鈉； (i) 用量足以達到pH 7.3-7.5之作為調節劑的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉；和 (j) 水適量至100% w/w， 其中所述丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有100 nm至1000 nm的平均粒徑和X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
  17. 如請求項16之眼用水性奈米懸浮液，其中，丙酸氟替卡松的濃度為0.001%至0.5% w/w。
  18. 如請求項16之眼用水性奈米懸浮液，其中，丙酸氟替卡松的濃度為0.5% w/w、0.25% w/w、0.2% w/w、0.1% w/w、0.05% w/w、0.03% w/w、0.01% w/w或0.005% w/w。
  19. 如請求項16之眼用水性奈米懸浮液，其中，丙酸氟替卡松的濃度為0.2% w/w或0.1% w/w或0.05% w/w。
  20. 一種請求項16至19中任一項之眼用水性奈米懸浮液用於製造治療眼瞼炎、後眼瞼炎、瞼板腺功能不良或乾眼病之藥物的用途，其中，該藥物係向眼瞼、睫毛或眼瞼緣局部施用有效量的所述眼用水性奈米懸浮液。
  21. 一種請求項16至19中任一項之眼用水性奈米懸浮液用於製造減輕與眼瞼炎、後眼瞼炎、瞼板腺功能不良或乾眼病相關的症狀和/或臨床徵象之藥物的用途，其中，該藥物係向眼瞼、睫毛或眼瞼緣局部施用有效量的所述眼用水性奈米懸浮液。
  22. 如請求項20或21的用途，其中，該眼用水性奈米懸浮液由如下成分組成： (a) 0.1% w/w丙酸氟替卡松A型奈米晶體； (b) 0.50% w/w甲基纖維素4000 cp； (c) 0.2% w/w聚山梨酯80； (d) 0.10% w/w乙二胺四乙酸二鈉二水合物； (e) 1.0% w/w硼酸； (f) 0.9% w/w甘油； (g) 0.01% w/w苯紮氯銨； (h) 0.055% w/w氯化鈉； (i) 用量足以達到pH 7.3-7.5之作為調節劑的1N鹽酸和/或1N氫氧化鈉；和 (j) 水適量至100% w/w， 其中所述丙酸氟替卡松A型的奈米晶體具有100 nm至1000 nm的平均粒徑和X-射線粉末繞射圖，包括在約7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2ϴ的峰，進一步包括在約9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2ϴ的峰，並且其中該奈米晶體為具有基本上垂直於限定奈米板厚度的表面的[001]晶軸的奈米板。
  23. 如請求項20至22中任一項的用途，其中，該藥物係將所述眼用水性奈米懸浮液局部施用於眼瞼、睫毛或眼瞼緣，每日至少1次，持續至少2周。
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