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TW202102529A - 用於多肽表現之多核苷酸、組合物及方法 - Google Patents

用於多肽表現之多核苷酸、組合物及方法 Download PDF

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TW202102529A
TW202102529A TW109110727A TW109110727A TW202102529A TW 202102529 A TW202102529 A TW 202102529A TW 109110727 A TW109110727 A TW 109110727A TW 109110727 A TW109110727 A TW 109110727A TW 202102529 A TW202102529 A TW 202102529A
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TW
Taiwan
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polynucleotide
orf
equal
codon pairs
less
Prior art date
Application number
TW109110727A
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English (en)
Inventor
布萊德利 安德魯 莫雷
克莉絲汀 東博思基
賽斯 Ｃ 亞歷山大
Original Assignee
美商英特利亞醫療公司
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Abstract

本發明係關於用於基因編輯之組合物及方法。在一些實施例中，提供編碼Cas9之多核苷酸，其可提供改良之編輯效率、減小之免疫原性或其他益處中之一或多者。

Description

用於多肽表現之多核苷酸、組合物及方法
本發明係關於用於多肽表現之多核苷酸、組合物及方法，該多肽表現包含自mRNA表現及自表現構築體表現。
有用多肽可由與多核苷酸(例如mRNA或表現構築體)接觸之細胞原位產生。然而，現有方式(例如在某些細胞類型或諸如哺乳動物等生物體中)可提供小於期望表現之穩健表現，或可具有不期望免疫原性(例如可激起細胞介素含量之不期望升高)。
因此，需要用於多肽表現之改良之多核苷酸、組合物及方法。本發明旨在提供用於多肽表現之組合物及方法，其提供一或多種益處(例如改良之表現含量、增加之所編碼多肽活性或減小之免疫原性(例如在投與時細胞介素之升高有所減小)中之至少一者)或至少向公眾提供有用之選擇。在一些實施例中，提供編碼多肽之多核苷酸，其中其編碼序列或密碼子對含量中之一或多者與本文所揭示方式中之現有多核苷酸不同。已發現，該等特徵可提供(例如)上述益處。在一些實施例中，改良之表現出現於哺乳動物之一定類型器官或細胞(例如肝或肝細胞)中或對其具有特異性。
本發明提供下列實施例。
實施例1係一種多核苷酸，其包括(i)編碼多肽之開放閱讀框(ORF)，其中該ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對；或(ii)編碼多肽之開放閱讀框(ORF)，其中該ORF中之至少1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對且該ORF不編碼RNA引導之DNA結合劑。
實施例2係一種包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中該ORF包括與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或132-143中之任一者具有至少95%一致性之序列，視情況其中一致性係在不考慮該ORF之起始及終止密碼子下所測定。
實施例3係一種包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中該ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係(i)表5中所列示之密碼子或(ii)表6中所列示之密碼子，且其中該多肽並非RNA引導之DNA結合劑。
實施例4係如實施例1至3中任一項之多核苷酸，其中該ORF之重複含量小於或等於23.3%。
實施例5係如實施例1至4中任一項之多核苷酸，其中該ORF之GC含量大於或等於55%。
實施例6係一種包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中該ORF之重複含量小於或等於23.3%且該ORF之GC含量大於或等於55%。
實施例7係如實施例2至6中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例8係如實施例1至7中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.9%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例9係如實施例1至8中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少60%、65%、70%或75%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例10係如實施例1至9中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於20%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例11係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.05%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例12係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例13係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例14係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例15係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例16係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例17係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例18係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例19係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例20係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例21係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例22係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例23係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例24係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例25係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例26係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例27係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例28係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例29係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例30係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例31係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例32係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例33係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例34係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例35係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例36係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例37係如實施例1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例38係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於10%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例39係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例40係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例41係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例42係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例43係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例44係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例45係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例46係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例47係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例48係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例49係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例50係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例51係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例52係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例53係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例54係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例55係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例56係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例57係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例58係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例59係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例60係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例61係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例62係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
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實施例64係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例65係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例66係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
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實施例69係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例70係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例71係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例72係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例73係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例74係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例75係如實施例1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.32%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
實施例76係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.9%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例77係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.8%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例78係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.7%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例79係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.6%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例80係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.5%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例81係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.45%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例82係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.4%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例83係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.3%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例84係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.2%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例85係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.1%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
實施例86係如實施例1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF不包括表2中所展示之密碼子對。
實施例87係如實施例1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於56%。
實施例88係如實施例1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於56.5%。
實施例89係如實施例1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於57%。
實施例90係如實施例1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於57.5%。
實施例91係如實施例1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於58%。
實施例92係如實施例1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於58.5%。
實施例93係如實施例1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於59%。
實施例94係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於63%。
實施例95係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於62.6%。
實施例96係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於62.1%。
實施例97係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於61.6%。
實施例98係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於61.1%。
實施例99係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於60.6%。
實施例100係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於60.1%。
實施例101係如實施例1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於59.6%。
實施例102係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於23.2%。
實施例103係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於23.1%。
實施例104係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於23.0%。
實施例105係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.9%。
實施例106係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.8%。
實施例107係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.7%。
實施例108係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.6%。
實施例109係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.5%。
實施例110係如實施例1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.4%。
實施例111係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於20%。
實施例112係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於20.5%。
實施例113係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21%。
實施例114係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21.5%。
實施例115係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21.7%。
實施例116係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21.9%。
實施例117係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於22.1%。
實施例118係如實施例1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於22.2%。
實施例119係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於15%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例120係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於14.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例121係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於14%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例122係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於13.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例123係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於13%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例124係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於12.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例125係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於12%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例126係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於11.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例127係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於11%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例128係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於10.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例129係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於10%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例130係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例131係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例132係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例133係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例134係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例135係如實施例1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
實施例136係如實施例1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少76%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例137係如實施例1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少77%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例138係如實施例1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少78%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例139係如實施例1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少79%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例140係如實施例1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少80%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例141係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於87%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例142係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於86%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例143係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於85%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例144係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於84%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例145係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於83%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例146係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於82%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例147係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於81%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例148係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於80%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例149係如實施例1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於79%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
實施例150係如實施例1至149中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有介於其最小尿苷含量至101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%或150%之該最小尿苷含量之間之尿苷含量。
實施例151係如實施例1至150中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有介於其最小A+U含量至101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%或150%之該最小A+U含量之間之A+U含量。
實施例152係如實施例1至151中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有在55%-65%、例如55%-57%、57%-59%、59-61%、61-63%或63-65%範圍內之GC含量。
實施例153係如實施例1至152中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有介於其最小重複含量至101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%或150%之該最小重複含量之間之重複含量。
實施例154係如實施例1至153中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有22%-27%、例如22%-23%、22.3%-23%、23%-24%、24%-25%、25%-26%或26%-27%之重複含量。
實施例155係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有30個胺基酸之長度，視情況其中該多肽具有至少50個胺基酸之長度。
實施例156係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少100個胺基酸之長度。
實施例157係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少200個胺基酸之長度。
實施例158係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少300個胺基酸之長度。
實施例159係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少400個胺基酸之長度。
實施例160係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少500個胺基酸之長度。
實施例161係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少600個胺基酸之長度。
實施例162係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少700個胺基酸之長度。
實施例163係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少800個胺基酸之長度。
實施例164係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少900個胺基酸之長度。
實施例165係如實施例1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少1000個胺基酸之長度。
實施例166係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於5000個胺基酸。
實施例167係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於4500個胺基酸。
實施例168係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於4000個胺基酸。
實施例169係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於3500個胺基酸。
實施例170係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於3000個胺基酸。
實施例171係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於2500個胺基酸。
實施例172係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於2000個胺基酸。
實施例173係如實施例1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於1500個胺基酸。
實施例174係如實施例1至173中任一項之多核苷酸，其中該多肽包括與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或134-143中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175a係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 16中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175b係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 17中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175c係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 18中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175d係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 19中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175e係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 20中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175f係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 78中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175g係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 79中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175h係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 80中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175i係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 194中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175j係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 195中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175l係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 196中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175m係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 197中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175n係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 200中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例175o係如實施例1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 201中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
實施例176係如實施例1至175o中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼RNA引導之DNA結合劑。
實施例177係如實施例176之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑具有雙鏈內核酸酶活性。
實施例178係如實施例177之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas裂解酶。
實施例179係如實施例176之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑具有切割酶活性。
實施例180係如實施例179之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas切割酶。
實施例181係如實施例176之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑包括dCas DNA結合結構域。
實施例182係如實施例178、180或181中任一項之多核苷酸，其中該Cas裂解酶、Cas切割酶或dCas DNA結合結構域係Cas9裂解酶、Cas9切割酶或dCas9 DNA結合結構域。
實施例183係如實施例1至182中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼釀膿鏈球菌(S. pyogenes ) Cas9。
實施例184係如實施例1至183中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼內核酸酶。
實施例185係如實施例1至175中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼絲胺酸蛋白酶抑制劑或Serpin家族成員。
實施例186係如實施例185之多核苷酸，其中該ORF編碼Serpin家族A成員1。
實施例187係如實施例1至175中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼羥基酶；胺甲醯基轉移酶；葡萄糖基神經醯胺酶；半乳糖苷酶；去氫酶；受體；或神經傳遞質受體。
實施例188係如實施例1至175中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼苯丙胺酸羥基酶；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶；富馬醯乙醯乙酸水解酶；葡萄糖基神經醯胺酶β；α半乳糖苷酶；轉甲狀腺素；甘油醛-3-磷酸去氫酶；γ-胺基丁酸(GABA)受體亞單元(例如GABA A型受體δ亞單元)。
實施例189係如實施例1至188中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括與SEQ ID NO: 177-181或190-192中之任一者具有至少90%一致性之5’ UTR。
實施例190係如實施例1至189中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括與SEQ ID NO: 182-186或202-204中之任一者具有至少90%一致性之3’ UTR。
實施例191係如實施例189或190之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括來自相同來源之5’ UTR及3’ UTR。
實施例192係如實施例1至191中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括選自帽0、帽1及帽2之5’帽。
實施例193係如實施例1至192中任一項之多核苷酸，其中該開放閱讀框具有增加該多核苷酸在哺乳動物中之轉譯之密碼子。
實施例194係如實施例1至193中任一項之多核苷酸，其中該所編碼多肽包括核定位信號(NLS)。
實施例195係如實施例194之多核苷酸，其中該NLS連接至該多肽之C-末端。
實施例196係如實施例194之多核苷酸，其中該NLS連接至該多肽之N-末端。
實施例197係如實施例194至196中任一項之多核苷酸，其中該NLS包括與SEQ ID NO: 163-176中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之序列。
實施例198係如實施例194至196中任一項之多核苷酸，其中該NLS包括SEQ ID NO: 163-176中之任一者之序列。
實施例199係如實施例1至198中任一項之多核苷酸，其中該多肽編碼RNA引導之DNA結合劑且該RNA引導之DNA結合劑進一步包括異源性功能結構域。
實施例200係如實施例199之多核苷酸，其中該異源性功能結構域係FokI核酸酶。
實施例201係如實施例199之多核苷酸，其中該異源性功能結構域係轉錄調控結構域。
實施例202係如實施例1至201中任一項之多核苷酸，其中至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%之該尿苷經經修飾尿苷取代。
實施例203係如實施例202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷、假尿苷、5-甲氧基尿苷或5-碘尿苷中之一或多者。
實施例204係如實施例202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷或5-甲氧基尿苷中之一或兩者。
實施例205係如實施例202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷。
實施例206係如實施例202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係5-甲氧基尿苷。
實施例207係如實施例202至206中任一項之多核苷酸，其中15%至45%、45%至55%、55%至65%、65%至75%、75%至85%、85%至95%或90%至100%之該尿苷經經修飾尿苷取代，視情況其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷。
實施例208係如實施例202至207中任一項之多核苷酸，其中至少20%或至少30%之該尿苷經經修飾尿苷取代。
實施例209係如實施例208之多核苷酸，其中至少80%或至少90%之該尿苷經經修飾尿苷取代。
實施例210係如實施例208之多核苷酸，其中100%之尿苷經經修飾尿苷取代。
實施例211係如實施例1至210中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸係mRNA。
實施例212係如實施例1至211中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸係包括可操作地連接至該ORF之啟動子之表現構築體。
實施例213係包括如實施例212之表現構築體之質體。
實施例214係包括如實施例212之表現構築體或如實施例213之質體之宿主細胞。
實施例215係一種製備mRNA之方法，其包括使如實施例212之表現構築體或如實施例213之質體與RNA聚合酶在允許轉錄該mRNA之條件下接觸。
實施例216係如實施例215之方法，其中該接觸步驟係在活體外實施。
實施例217係一種表現多肽之方法，其包括使細胞與如實施例1至212中任一項之多核苷酸接觸。
實施例218係如實施例217之方法，其中該細胞處於哺乳動物個體中，視情況其中該個體係人類。
實施例219係如實施例217之方法，其中該細胞係經培養細胞及/或該接觸係在活體外實施。
實施例220係如實施例217至219中任一項之方法，其中該細胞係人類細胞。
實施例221係一種組合物，其包括如實施例1至212中任一項之多核苷酸及至少一種嚮導RNA，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
實施例222係一種脂質奈米顆粒，其包括如實施例1至212中任一項之多核苷酸。
實施例223係一種醫藥組合物，其包括如實施例1至212中任一項之多核苷酸及醫藥上可接受之載劑。
實施例224係如實施例222之脂質奈米顆粒或如實施例223之醫藥組合物，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑且該脂質奈米顆粒或醫藥組合物進一步包括至少一種嚮導RNA。
實施例225係一種基因體編輯或修飾靶基因之方法，其包括使細胞與如實施例1至212或222至224中任一項之多核苷酸、表現構築體、組合物或脂質奈米顆粒接觸，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
實施例226係一種如實施例1至212或222至224中任一項之多核苷酸、表現構築體、組合物或脂質奈米顆粒之用途，其用於基因體編輯或修飾靶基因，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
實施例227係一種如實施例1至212或222至224中任一項之多核苷酸、表現構築體、組合物或脂質奈米顆粒之用途，其用以製造用於基因體編輯或修飾靶基因之藥劑，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
實施例228係如實施例225至227中任一項之方法或用途，其中該基因體編輯或該靶基因之修飾發生於肝臟細胞中。
實施例229係如實施例228之方法或用途，其中該肝臟細胞係肝細胞。
實施例230係如實施例225至227中任一項之方法或用途，其中該基因體編輯或該靶基因之修飾係在活體內進行。
實施例231係如實施例225至227中任一項之方法或用途，其中該基因體編輯或該靶基因之修飾係在經分離或經培養細胞中進行。
實施例232係一種生成編碼多肽之開放閱讀框(ORF)序列之方法，該方法包括： a)  提供所關注多肽序列； b)  向該多肽序列之每一胺基酸位置指派密碼子，其中若胺基酸位置係表1中所展示二肽之成員，則使用該二肽之密碼子對，但若胺基酸位置係表1中所展示一種以上二肽之成員且彼等二肽之密碼子對向該位置提供不同密碼子或該胺基酸位置並非表1中所展示二肽之成員，則實施下列各項中之一或多者： i.    若編碼天然多肽，則選擇來自編碼該多肽之野生型序列之密碼子； ii.   若該胺基酸係表1中所展示一種以上二肽之成員且彼等二肽之該等密碼子對向該位置提供不同密碼子，則消除表4中所出現及/或將導致存在表2中所展示之密碼子對之密碼子，及/或選擇表3中所出現之密碼子； iii.  使用表5、6或7之密碼子組向該胺基酸位置提供密碼子，視情況其中若實施步驟(i)及/或(ii)，則在未提供該胺基酸位置之獨特密碼子之情形中實施步驟(iii)；及/或 iv.  選擇(1)最小化尿苷含量、(2)最小化重複含量及/或(3)最大化GC含量之密碼子。
實施例233係如實施例232之方法，其中對於至少一個胺基酸而言，表1不提供既定胺基酸位置之獨特密碼子，視情況其中(1)在重疊二肽中存在衝突密碼子；(2)存在多個對應於既定二肽之可能密碼子；或(3)不存在對應於既定二肽之密碼子。
實施例234係如實施例232或233之方法，其中步驟(b)(ii)包括實施下列各項中之一或多者： a.  選擇表3中所出現之密碼子；及/或 b.  消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子及/或表4中所出現之密碼子， 其中上述步驟中之一或多者係以任一順序來實施且在提供該胺基酸之單一密碼子時終止該等步驟。
實施例235係如實施例232至234中任一項之方法，其中步驟(b)(ii)包括選擇表3中所出現之密碼子，視情況其中若實施如實施例234之一或多個步驟，則相對於選擇表3中所出現之密碼子以任一順序來實施如實施例234之該一或多個步驟。
實施例236係如實施例232至235中任一項之方法，其中步驟(b)(ii)進一步包括： a.  消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子；及 b.  若一個以上可能密碼子在步驟(a)之後得以保留，則消除表3中未出現之密碼子及/或消除表4中所出現之密碼子。
實施例237係如實施例232至236中任一項之方法，其中步驟(b)(ii)進一步包括： a.  消除表3中未出現之密碼子及/或消除表4中所出現之密碼子；及 b.  若一個以上可能密碼子在步驟(a)之後得以保留，則消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子。
實施例238係如實施例232至237中任一項之方法，其中步驟(b)包括實施下列各項中之一或多者： a.  選擇最小化尿苷含量之密碼子； b.  選擇最小化重複含量之密碼子； c.  選擇最大化GC含量之密碼子，
其中上述步驟中之一或多者係以任一順序來實施，視情況其中在提供該胺基酸之單一密碼子時終止該等步驟。
實施例239係如實施例238之方法，其中步驟(b)包括實施下列各項中之至少一者且繼續實施下列步驟，視情況其中實施下列步驟(i)至(iii)中之每一者： i.    選擇最小化尿苷含量之密碼子； ii.   若一個以上可能密碼子在步驟(a)之後得以保留，則選擇最小化重複含量之密碼子； iii.  若一個以上可能密碼子在步驟(b)之後得以保留，則選擇最大化GC含量之密碼子。
實施例240係如實施例232至239中任一項之方法，其中對於至少一個可由一個以上密碼子編碼之位置而言並無密碼子在實施步驟(b)(ii)之後得以保留，且針對編碼該位置之胺基酸之複數個密碼子實施下列步驟： i.    選擇最小化尿苷含量之密碼子； ii.   若一個以上可能密碼子在步驟(i)之後得以保留，則選擇最小化重複含量之密碼子； iii.  若一個以上可能密碼子在步驟(ii)之後得以保留，則選擇最大化GC含量之密碼子。
實施例241係如實施例232至240中任一項之方法，其中對於至少一個可由一個以上密碼子編碼之位置而言複數個密碼子在實施步驟(b)(ii)之後得以保留，且針對該複數個密碼子實施下列步驟： i.    選擇最小化尿苷含量之密碼子； ii.   若一個以上可能密碼子在步驟(i)之後得以保留，則選擇最小化重複含量之密碼子； iii.  若一個以上可能密碼子在步驟(ii)之後得以保留，則選擇最大化GC含量之密碼子。
實施例242係如實施例240或241之方法，其中該方法包括選擇在至少一個位置中最大化GC含量之密碼子。
實施例243係如實施例232至243中任一項之方法，其進一步包括選擇表5、6或7中所展示之一對一密碼子組，且向至少一個位置指派來自該組之密碼子。
實施例244係如實施例232至243中任一項之方法，其進一步包括： a.  生成擬由至少一個位置編碼之胺基酸之所有可用密碼子之組； b.  應用如實施例233至243中所列舉之該等步驟中之一或多者。
實施例245係如實施例232至244中任一項之方法，其中至少該方法之步驟(b)係電腦實施。
實施例246係如實施例232至245中任一項之方法，其進一步包括合成包括該ORF之多核苷酸，視情況其中該多核苷酸係mRNA。
實施例247係如實施例232至246中任一項之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑具有雙鏈內核酸酶活性。
實施例248係如實施例247之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas裂解酶。
實施例249係如實施例247或248之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑具有切割酶活性。
實施例250係如實施例249之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas切割酶。
實施例251係如實施例247至250中任一項之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑包括dCas DNA結合結構域。
實施例252係如實施例247至251中任一項之方法，其中該Cas裂解酶、Cas切割酶或dCas DNA結合結構域係Cas9裂解酶、Cas9切割酶或dCas9 DNA結合結構域。
實施例253係如實施例247至252中任一項之方法，其中該ORF編碼釀膿鏈球菌Cas9。
實施例254係如實施例232至253中任一項之方法，其中該ORF編碼內核酸酶。
實施例255係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼絲胺酸蛋白酶抑制劑或Serpin家族成員。
實施例256係如實施例255之方法，其中該ORF編碼Serpin家族A成員1。
實施例257係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼羥基酶；胺甲醯基轉移酶；葡萄糖基神經醯胺酶；半乳糖苷酶；去氫酶；受體；或神經傳遞質受體。
實施例258係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼苯丙胺酸羥基酶；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶；富馬醯乙醯乙酸水解酶；葡萄糖基神經醯胺酶β；α半乳糖苷酶；轉甲狀腺素；甘油醛-3-磷酸去氫酶；γ-胺基丁酸(GABA)受體亞單元(例如GABA A型受體δ亞單元)。
實施例259係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少90%一致性之多肽。
實施例260係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少95%一致性之多肽。
實施例261係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少97%一致性之多肽。
實施例262係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少98%一致性之多肽。
實施例263係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少99%一致性之多肽。
實施例264係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少99.5%一致性之多肽。
實施例265係如實施例232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有100%一致性之多肽。
本專利申請案主張2019年3月28日提出申請之美國臨時申請案62/825,656之優先權，該申請案之內容出於所有目的以全文引用方式併入本文中。
本申請案含有已用ASCII格式以電子方式提交之序列表且其全部內容以引用方式併入本文中。該ASCII拷貝創建於2020年3月25日，命名為01155-0027-00PCT_ST25.txt且大小為967 KB。
現將詳細參考本發明之某些實施例，在附圖中圖解說明該等實施例之實例。儘管將結合所闡釋實施例來闡述本發明，但應理解，該等實施例並不意欲將本發明限於彼等實施例。與之相反，本發明意欲涵蓋隨附申請專利範圍所界定之本發明內可包含之所有替代方案、修改及等效形式。
在詳細闡述本發明教示內容之前，應理解，本發明並不限於特定組合物或製程步驟，此乃因該等要素可有所變化。應注意，除非上下文另外明確指示，否則本說明書及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一(a、an)」及「該(the)」包含複數個指示物。因此，舉例而言，所提及「偶聯物」包含複數個偶聯物且所提及「細胞」包含複數個細胞，及諸如此類。
數字範圍包含界定該範圍之數字。所量測及可量測值應理解為係近似值，且考慮有效數字及與量測有關之誤差。因此，除非指示相反情況，否則下列說明書及隨附申請專利範圍中所陳述之數值參數皆為可端視尋求獲得之期望性質而變化的近似值。最低限度地且並非試圖限制申請專利範圍之等效項之準則之應用，每一數值參數應至少根據所報告有效數字之數值且藉由應用普通舍入技術來解釋。術語「約」或「大約」意指如由熟習此項技術者所測定之特定值的可接受誤差(其部分地取決於該值之量測或測定方式)或不實質上影響所闡述標的物之性質之變化程度(例如在10%、5%、2%或1%內)。同樣，「包括(comprise、comprises、comprising)」、「含有(contain、contains、containing)」、「包含(include、includes及including)」在使用時並不意欲加以限制。應理解，前述一般說明及詳細說明二者僅為實例性及解釋性且並不限制教示內容。
除非在上述說明書中明確說明，否則說明書中敘述「包括」各種組分之實施例亦涵蓋「由所敘述組分組成」或「基本上由所敘述組分組成」；說明書中敘述「由各種組分組成」之實施例亦涵蓋「包括所敘述組分」或「基本上由所敘述組分組成」；且說明書中敘述「基本上由各種組分組成」之實施例亦涵蓋「由所敘述組分組成」或「包括所敘述組分」(此可互換性並不適用於該等術語在申請專利範圍中之使用)。
本文所用之部分標題僅出於組織目的，而不能解釋為以任一方式限制期望標的物。倘若以引用方式併入之任一文獻與本說明書之表現內容(包含(但不限於)定義)衝突，則應以本說明書之表現內容為準。儘管連同各個實施例一起闡述了本發明教示內容，但並不意欲將本發明教示內容限於該等實施例。與之相反，本發明教示內容涵蓋各種替代方案、修改及等效形式，如熟習此項技術者將瞭解。
定義
除非另外陳述，否則本文所用之下列術語及片語意欲具有下列含義：
本文所用之術語「或其組合」係指在該術語前所列示之條款之所有排列及組合。舉例而言，「A、B、C或其組合」意欲包含A、B、C、AB、AC、BC或ABC中之至少一者，且若順序在特定背景中較為重要，則亦包含BA、CA、CB、ACB、CBA、BCA、BAC或CAB。繼續此實例，明確包含含有一或多個項目或條款之重複之組合，例如BB、AAA、AAB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等。熟習此項技術者應理解，除非另外自上下文顯而易見，否則通常並不限制任一組合中之該等項目或條款之數量。
如本文中所使用，術語「套組」係指相關組分(例如一或多種多核苷酸或組合物及一或多種相關材料(例如遞送裝置(例如注射器)、溶劑、溶液、緩衝液、說明書或乾燥劑))之包裝組合。
除非上下文另外需要，否則「或」係以包含性意義來使用，亦即等效於「及/或」。
「多核苷酸」及「核酸」在本文中用於係指包括具有沿主鏈連接至一起之含氮雜環鹼基或鹼基類似物之核苷或核苷類似物之多聚體化合物，包含習用RNA、DNA、混合RNA-DNA及其類似聚合物。核酸「主鏈」可由多個鍵聯構成，包含糖-磷酸二酯鍵聯、肽-核酸鍵(「肽核酸」或PNA；PCT第WO 95/32305號)、硫代磷酸酯鍵聯、甲基膦酸酯鍵聯或其組合中之一或多者。核酸之糖部分可為核糖、去氧核糖或具有取代(例如2’甲氧基或2’鹵化物取代)之類似化合物。含氮鹼基可為習用鹼基(A、G、C、T、U)、其類似物(例如經修飾尿苷，例如5-甲氧基尿苷、假尿苷或N1-甲基假尿苷，或其他)；肌苷；嘌呤或嘧啶衍生物(例如N4 -甲基去氧鳥苷、去氮雜-或氮雜-嘌呤、去氮雜-或氮雜-嘧啶、在5或6位具有取代基之嘧啶鹼基(例如5-甲基胞嘧啶)、在2、6或8位具有取代基之嘌呤鹼基、2-胺基-6-甲基胺基嘌呤、O6 -甲基鳥嘌呤、4-硫基-嘧啶、4-胺基-嘧啶、4-二甲基肼-嘧啶及O4 -烷基-嘧啶；美國專利第5,378,825號及PCT第WO 93/13121號)。關於一般論述，可參見The Biochemistry of the Nucleic Acids 5-36, Adams等人編輯，第11版，1992)。核酸可包含一或多個「無鹼基」殘基，其中主鏈在聚合物之一或多個位置不包含含氮鹼基(美國專利第5,585,481號)。核酸可僅包括習用RNA或DNA糖、鹼基及鍵聯，或可包含習用組分及取代二者(例如具有2’甲氧基鍵聯之習用鹼基或含有習用鹼基及一或多種鹼基類似物二者之聚合物)。核酸包含「鎖核酸」 (LNA)，一種含有一或多個LNA核苷酸單體以及鎖定為模擬RNA之糖構形之雙環呋喃糖單元的類似物，該等特徵增強了對互補RNA及DNA序列之雜交親和性(Vester及Wengel, 2004,Biochemistry 43(42):13233-41)。RNA及DNA具有不同糖部分且其區別可在於，在RNA中存在尿嘧啶或其類似物，而在DNA中存在胸腺嘧啶或其類似物。
本文所用之「多肽」係指可採用三維構形之包括胺基酸殘基之多聚體化合物。多肽包含(但不限於)酶、酶前體蛋白、調控蛋白、結構蛋白、受體、核酸結合蛋白、抗體等。多肽可(但未必)包括轉譯後修飾、非天然胺基酸、輔基及諸如此類。
「經修飾尿苷」在本文中用於係指除與尿苷具有相同氫鍵受體且與尿苷具有一或多種結構差異之胸苷外之核苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係經取代尿苷，亦即一或多個非質子取代基(例如烷氧基，例如甲氧基)代替質子之尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係假尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係經取代假尿苷，亦即一或多個非質子取代基(例如烷基，例如甲基)代替質子之假尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係經取代尿苷、假尿苷或經取代假尿苷中之任一者。
本文所用之「尿苷位置」係指多核苷酸中藉由尿苷或經修飾尿苷佔據之位置。因此，舉例而言，「100%之尿苷位置係經修飾尿苷」之多核苷酸在每一在具有相同序列之習用RNA (其中所有鹼基皆係標準A、U、C或G鹼基)中係尿苷之位置含有經修飾尿苷。除非另外指示，否則本發明中或伴隨本發明之序列表或序列清單之多核苷酸序列中之U可為尿苷或經修飾尿苷。
如本文中所使用，若第一序列與第二序列之比對展示整個第二序列中X%或更多之位置與第一序列匹配，則第一序列可視為「包括與第二序列具有至少X%一致性之序列」。舉例而言，序列AAGA包括與序列AAG具有100%一致性之序列，此乃因比對將得到100%一致性，其中與第二序列之所有三個位置皆匹配。RNA與DNA之間之差異(通常將尿苷交換為胸苷或反之亦然)及存在核苷類似物(例如經修飾尿苷)並不在多核苷酸中造成一致性或互補性差異，只要相關核苷酸(例如胸苷、尿苷或經修飾尿苷)具有相同補體即可(例如用於所有胸苷、尿苷或經修飾尿苷之腺苷；另一實例係胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶，二者皆使用鳥苷作為補體)。因此，舉例而言，序列5’-AXG (X係任一經修飾尿苷，例如假尿苷、N1-甲基假尿苷或5-甲氧基尿苷)可視為與AUG 100%一致，其中二者與同一序列(5’-CAU)完全互補。實例性比對算法係業內熟知之Smith-Waterman及Needleman-Wunsch算法。熟習此項技術者應理解，所選算法及參數設置應適用於擬比對之既定序列；對於通常具有類似長度及預期一致性(對於胺基酸而言＞50%或對於核苷酸而言＞75%)之序列而言，由EBI提供於www.ebi.ac.uk網路伺服器處之具有Needleman-Wunsch算法介面之預設設置之Needleman-Wunsch算法通常係適當的。
「mRNA」在本文中用於係指係RNA或經修飾RNA且包括可轉譯成多肽(亦即可用作核糖體及胺基-醯基化tRNA之轉譯受質)之開放閱讀框之多核苷酸。mRNA可包括含有核糖殘基或其類似物(例如2’-甲氧基核糖殘基)之磷酸酯-糖主鏈。在一些實施例中，mRNA磷酸酯-糖主鏈之糖基本上由核糖殘基、2’-甲氧基核糖殘基或其組合組成。一般而言，mRNA不含實質量之胸苷殘基(例如0個殘基或少於30、20、10、5、4、3或2個胸苷殘基；或小於10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.2%或0.1%之胸苷含量)。mRNA可在其尿苷位置之一些或所有位置處含有經修飾尿苷。
如本文中所使用，「RNA引導之DNA結合劑」意指具有RNA及DNA結合活性之多肽或多肽複合物或此一複合物之DNA結合亞單元，其中DNA結合活性具有序列特異性且取決於RNA序列。實例性RNA引導之DNA結合劑包含Cas裂解酶/切割酶及其不活化形式(「dCas DNA結合劑」)。本文所用之「Cas核酸酶」 (亦稱為「Cas蛋白」)涵蓋Cas裂解酶、Cas切割酶及dCas DNA結合劑。Cas裂解酶/切割酶及dCas DNA結合劑包含III型CRISPR系統之Csm或Cmr複合物、其Cas10、Csm1或Cmr2亞單元、I型CRISPR系統之級聯複合物、其Cas3亞單元及種類2 Cas核酸酶。如本文中所使用，「Class 2 Cas核酸酶」係具有RNA引導之DNA結合活性之單鏈多肽，例如Cas9核酸酶或Cpf1核酸酶。種類2 Cas核酸酶包含種類2 Cas裂解酶及種類2 Cas切割酶(例如H840A、D10A或N863A變體，其進一步具有RNA引導之DNA裂解酶或切割酶活性)以及種類2 dCas DNA結合劑(其中裂解酶/切割酶活性不活化)。種類2 Cas核酸酶包含(例如) Cas9、Cpf1、C2c1、C2c2、C2c3、HF Cas9 (例如N497A、R661A、Q695A、Q926A變體)、HypaCas9 (例如N692A、M694A、Q695A、H698A變體)、eSPCas9(1.0) (例如K810A、K1003A、R1060A變體)及eSPCas9(1.1) (例如K848A、K1003A、R1060A變體)蛋白及其修飾。Cpf1蛋白(Zetsche等人，Cell , 163: 1-13 (2015))與Cas9同源，且含有RuvC樣核酸酶結構域。Zetsche之Cpf1序列之全部內容以引用方式併入本文中。例如參見 Zetsche之表S1及S3。「Cas9」涵蓋Spy Cas9 (本文所列示Cas9之變體)及其等效形式。例如參見Makarova等人，Nat Rev Microbiol , 13(11): 722-36 (2015)；Shmakov等人，Molecular Cell, 60:385-397 (2015)。
如本文中所使用，既定開放閱讀框(ORF)之「最小尿苷含量」係(a)在每一位置使用最小尿苷密碼子且(b)與既定ORF編碼相同胺基酸序列之ORF之尿苷含量。既定胺基酸之最小尿苷密碼子係具有最少尿苷(通常為0或1，苯丙胺酸之密碼子除外(其中最小尿苷密碼子具有2個尿苷))之密碼子。出於評估最小尿苷含量之目的，經修飾尿苷殘基可視為等效於尿苷。
如本文中所使用，既定開放閱讀框(ORF)之「最小尿苷二核苷酸含量」係(a)在每一位置使用最小尿苷密碼子(如上文所論述)且(b)與既定ORF編碼相同胺基酸序列之ORF之最低可能尿苷二核苷酸(UU)含量。尿苷二核苷酸(UU)含量可在絕對意義上表示為ORF中之所列舉UU二核苷酸，或以比率計表示為由尿苷二核苷酸之尿苷佔據之位置之百分比(舉例而言，AUUAU具有40%之尿苷二核苷酸含量，此乃因5個位置中之2個由尿苷二核苷酸之尿苷佔據)。出於評估最小尿苷二核苷酸含量之目的，經修飾尿苷殘基可視為等效於尿苷。
如本文中所使用，既定開放閱讀框(ORF)之「最小腺嘌呤含量」係(a)在每一位置使用最小腺嘌呤密碼子且(b)與既定ORF編碼相同胺基酸序列之ORF之腺嘌呤含量。既定胺基酸之最小腺嘌呤密碼子係具有最少腺嘌呤之密碼子(通常為0或1，離胺酸及天門冬醯胺酸之密碼子除外(其中最小腺嘌呤密碼子具有2個腺嘌呤))。出於評估最小腺嘌呤含量之目的，經修飾腺嘌呤殘基可視為等效於腺嘌呤。
如本文中所使用，既定開放閱讀框(ORF)之「最小腺嘌呤二核苷酸含量」係(a)在每一位置使用最小腺嘌呤密碼子(如上文所論述)且(b)與既定ORF編碼相同胺基酸序列之ORF之最低可能腺嘌呤二核苷酸(AA)含量。腺嘌呤二核苷酸(AA)含量可在絕對意義上表示為ORF中之所列舉AA二核苷酸，或以比率計表示為由腺嘌呤二核苷酸之腺嘌呤佔據之位置之百分比(舉例而言，UAAUA具有40%之腺嘌呤二核苷酸含量，此乃因5個位置中之2個由腺嘌呤二核苷酸之腺嘌呤佔據)。出於評估最小腺嘌呤二核苷酸含量之目的，經修飾腺嘌呤殘基可視為等效於腺嘌呤。
如本文中所使用，既定開放閱讀框(ORF)之「最小重複含量」係與既定ORF編碼相同胺基酸序列之ORF中所出現AA、CC、GG及TT (或TU、UT或UU)二核苷酸之最小可能總和。重複含量可在絕對意義上表示為ORF中之所列舉AA、CC、GG及TT (或TU、UT或UU)二核苷酸，或以比率計表示為ORF中之所列舉AA、CC、GG及TT (或TU、UT或UU)二核苷酸除以ORF之核苷酸長度(舉例而言，UAAUA具有20%之重複含量，此乃因在5個核苷酸之序列中出現一個重複)。出於評估最小重複含量之目的，經修飾腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶及尿嘧啶殘基可視為等效於腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶及尿嘧啶殘基。
「嚮導RNA」、「gRNA」及「嚮導」在本文中可互換使用且係指crRNA (亦稱為CRISPR RNA)或crRNA及trRNA之組合(亦稱為tracrRNA)。crRNA及trRNA可締合為單一RNA分子(單嚮導RNA，sgRNA)或為兩個單獨RNA分子(雙嚮導RNA，dgRNA)。「嚮導RNA」或「gRNA」係指每一類型。trRNA可為天然序列或與天然序列相比具有修飾或變化之trRNA序列。嚮導RNA可包含如本文所闡述之經修飾RNA。
如本文中所使用，「嚮導序列」係指嚮導RNA內與靶序列互補之序列，其用於將嚮導RNA引導至靶序列以用於藉由RNA引導之DNA結合劑進行結合或修飾(例如裂解)。「嚮導序列」亦可稱為「靶向序列」或「間隔體序列」。嚮導序列之長度可為20個鹼基對，例如在釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogene ) (亦即Spy Cas9)及相關Cas9同系物/直向同源物之情形下。亦可使用較短或較長序列作為嚮導，例如長度為15-、16-、17-、18-、19-、21-、22-、23-、24-或25個核苷酸。在一些實施例中，舉例而言，靶序列位於基因中或染色體上，且與嚮導序列互補。在一些實施例中，嚮導序列與其相應靶序列之間之互補性或一致性程度可為約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，嚮導序列與靶區域可100%互補或一致。在其他實施例中，嚮導序列及靶區域可含有至少一個失配。舉例而言，嚮導序列及靶序列可含有1、2、3或4個失配，其中靶序列之總長度為至少17、18、19、20或更多個鹼基對。在一些實施例中，嚮導序列及靶區域可含有1-4個失配，其中嚮導序列包括至少17、18、19、20或更多個核苷酸。在一些實施例中，嚮導序列及靶區域可含有1、2、3或4個失配，其中嚮導序列包括20個核苷酸。
Cas蛋白之靶序列包含基因體之DNA正鏈及負鏈二者(亦即既定序列及該序列之反向補體)，此乃因Cas蛋白之核酸受質係雙鏈核酸。因此，在嚮導序列視為「與靶序列互補」之情形下，應理解，嚮導序列可引導嚮導RNA結合至靶序列之反向補體。因此，在一些實施例中，在嚮導序列結合靶序列之反向補體之情形下，嚮導序列與靶序列(例如不包含PAM之靶序列)之某些核苷酸一致，只是在嚮導序列中使用U取代T。
如本文中所使用，「插入缺失」係指由諸多插入或缺失於核酸中之雙鏈斷裂(DSB)之位點處之核苷酸組成之插入/缺失突變。
如本文中所使用，「敲低」係指降低特定基因產物(例如蛋白質、mRNA或二者)之表現。可藉由檢測由組織或細胞群體分泌之蛋白質(例如在血清或細胞培養基中)或藉由檢測來自所關注組織或細胞群體之蛋白質之總細胞量來量測蛋白質敲低。已知量測mRNA敲低之方法且包含對自所關注組織或細胞群體分離之mRNA進行測序。在一些實施例中，「敲低」可係指特定基因產物之表現之一定損失，例如所轉錄mRNA之量有所降低或由細胞群體(包含活體內群體，例如發現於組織中者)表現或分泌之蛋白質之量有所降低。
如本文中所使用，「敲除」係指特定蛋白質在細胞中之表現之損失。可藉由檢測自組織或細胞群體分泌之蛋白質之量(例如在血清或細胞培養基中)或藉由檢測組織或細胞群體中之蛋白質之總細胞量來量測敲除。在一些實施例中，本發明方法「敲除」一或多種細胞(例如細胞群體，包含活體內群體，例如發現於組織中者)中之靶蛋白。在一些實施例中，敲除並非形成突變靶蛋白(例如藉由插入缺失產生)，而是完全損失細胞中之靶蛋白表現。
如本文中所使用，「核糖核蛋白」 (RNP)或「RNP複合物」係指嚮導RNA以及RNA引導之DNA結合劑(例如Cas裂解酶、切割酶或dCas DNA結合劑(例如Cas9))。在一些實施例中，嚮導RNA將RNA引導之DNA結合劑(例如Cas9)引導至靶序列，然後嚮導RNA與靶序列雜交且該藥劑結合至靶序列；在藥劑係裂解酶或切割酶之情形下，在結合後可發生裂解或切割。
如本文中所使用，「靶序列」係指靶基因中與gRNA之嚮導序列具有互補性之核酸序列。靶序列與嚮導序列之相互作用會引導RNA引導之DNA結合劑結合且潛在地切割或裂解(取決於藥劑活性)靶序列。
如本文中所使用，「治療」係指用於個體之疾病或病症之任一治療劑投與或施加，且包含抑制疾病，阻止其發展，減輕一或多種疾病症狀，治癒疾病，或預防一或多種疾病症狀之復發。
如本文中所使用，術語「脂質奈米顆粒(LNP)」係指包括複數個(亦即一個以上)藉由分子間力彼此物理締合之脂質分子之顆粒。LNP可為(例如)微球體(包含單層及多層囊泡，例如「脂質體」-層狀相脂質雙層，其在一些實施例中實質上為球形且在更特定實施例中可包括水性核心(例如包括RNA分子之大部分))、乳液中之分散相、微胞或懸浮液中之內部相。乳液、微胞及懸浮液可為用於局域及/或局部遞送之適宜組合物。亦參見(例如) WO2017173054A1，其內容以全文引用方式併入本文中。熟習此項技術者已知能夠將核苷酸遞送至個體之任一LNP可與嚮導RNA及編碼本文所闡述之RNA引導之DNA結合劑的核酸一起利用。
如本文中所使用，術語「核定位信號」 (NLS)或「核定位序列」係指誘導包括該等序列或連接至該等序列之分子至真核細胞核之傳輸之胺基酸序列。核定位信號可形成擬傳輸分子之一部分。在一些實施例中，NLS可藉由共價鍵、氫鍵或離子化相互作用連接至分子之其餘部分。
如本文中所使用，片語「醫藥上可接受之」意指，其可用於製備通常無毒且並非生物不期望之醫藥組合物且並不另外為醫藥應用所不可接受。A. 實例性多核苷酸及組合物 1.   ORF密碼子對、密碼子及重複含量
就每mRNA分子所產生之多肽分子而言，某些ORF較其他者在活體內更有效地轉譯。假設該等有效轉譯之ORF之密碼子對利用可有助於轉譯效率。
因此，藉由比較來自人類細胞之mRNA及蛋白質豐度數據且選擇具有高蛋白質對mRNA豐度比率之基因來鑑別一組有效轉譯之ORF。作為陪襯，以類似方式鑑別一組低效地轉譯之ORF，只是選擇具有低蛋白質對mRNA比率之基因。分析該等組以測定有效及低效地轉譯之ORF中之顯著富集之密碼子對。
表1及2分別展示如此鑑別為富集於有效及低效地轉譯之ORF中之密碼子對。進一步分析相同組以測定有效及低效地轉譯之ORF中之顯著富集之個別密碼子。表3及4分別展示如此鑑別為富集於有效及低效地轉譯之ORF中之密碼子。
表1.有效轉譯之ORF中富集之密碼子對
第一 胺基酸 第二胺基酸 密碼子對 第一 胺基酸 第二胺基酸 密碼子對
A A GCUGCC L P CUUCCA
P D CCUGAC P P CCACCC
Q D CAAGAC T P ACUCCC
A E GCGGAG T Q ACUCAA
P E CCAGAG A R GCCCGC
R E AGGGAG L R CUGCGG
W E UGGGAG G S GGUAGC
C G UGUGGG L S CUCAGC
G G GGUGGC P T CCCACC
K G AAGGGG S T UCGACU
P G CCUGGC A V GCUGUG
Q G CAGGGC E V GAAGUC
V G GUUGGC Q V CAGGUG
M I AUGAUA T Y ACCUAC
表2.低效地轉譯之ORF中富集之密碼子對
第一 胺基酸 第二胺基酸 密碼子對 第一 胺基酸 第二胺基酸 密碼子對
A A GCUGCU W H UGGCAU
G A GGUGCU E L GAGCUA
K A AAGGCU Q L CAGUUG
P A CCAGCU R L CGUCUU
Q A CAGGCU V L GUGCUA
P D CCUGAU A P GCACCA
Q D CAAGAU G P GGACCA
R D CGAGAU I P AUCCCU
A E GCGGAA L P CUUCCU
A E GCAGAA T P ACUCCA
G E GGUGAA W P UGGCCU
P E CCAGAA T Q ACUCAG
Q E CAGGAA E R GAGAGA
R E AGGGAA L R CUGAGA
T E ACAGAA P R CCAAGA
W E UGGGAA P R CCCAGA
A G GCUGGA S S AGCUCU
G G GGUGGU R T CGCACU
K G AAGGGU E V GAGGUU
P G CCUGGU P V CCUGUU
P G CCAGGA Q V CAGGUU
P G CCUGGA V V GUGGUU
V G GUAGGA T Y ACCUAU
表 3. 有效轉譯之 ORF 中富集之密碼子
胺基酸 密碼子
A GCC
A GCG
C UGC
D GAC
E GAG
F UUC
G GGC
G GGG
H CAC
I AUA
I AUC
L CUC
L CUG
N AAC
P CCC
P CCG
Q CAG
R CGC
R CGG
S AGC
T ACC
T ACG
V GUC
V GUG
Y UAC
表 4. 低效地轉譯之 ORF 中富集之密碼子
胺基酸 密碼子
[終止密碼子] UAA
A GCA
A GCU
C UGU
D GAU
E GAA
F UUU
G GGA
G GGU
H CAU
I AUU
L CUA
L CUU
L UUA
L UUG
N AAU
P CCA
P CCU
Q CAA
R AGA
R CGA
R CGU
S AGU
S UCU
T ACA
T ACU
V GUA
V GUU
Y UAU
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之至少1%、至少2%、至少3%或至少4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之小於或等於1%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對，視情況另外其中ORF中之至少1%、至少2%、至少3%或至少4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之小於或等於0.9%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對，視情況另外其中ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之至少75%、至少76%、至少77%、至少78%、至少79%、至少80%之密碼子係表3中所展示之密碼子，視情況另外其中ORF中之至少1%、至少2%、至少3%或至少4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度以及密碼子及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之至少60%、65%、70%、75%或76%之密碼子係表3中所展示之密碼子，視情況另外其中ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對，或其中ORF中之至少1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對且ORF不編碼RNA引導之DNA結合劑。在一些實施例中，多肽長度以及密碼子及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之小於或等於20%、小於或等於15%、小於或等於10%、小於或等於5%之密碼子係表4中所展示之密碼子，視情況另外其中視情況另外其中ORF中之至少1%、至少2%、至少3%或至少4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度以及密碼子及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF中之小於或等於15%之密碼子係表4中所展示之密碼子，視情況另外其中ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度以及密碼子及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，ORF中之至少1.05%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少1.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少2.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之至少3.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
在一些實施例中，ORF中之小於或等於10%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.3%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.2%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.0%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於6.9%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於6.8%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於6.7%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於6.6%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於6.5%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於6.4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於6.32%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.8%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.7%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.6%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.5%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.45%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.4%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.3%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.2%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF中之小於或等於0.1%之密碼子對係表2中所展示之密碼子對。在一些實施例中，ORF不包括表2中所展示之密碼子對。
在一些實施例中，ORF中之小於或等於15%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於14.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於14%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於13.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於13%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於12.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於12%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於11.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於11%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於10.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於10%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於9%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於8%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7.5%之密碼子係表4中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於7%之密碼子係表4中所展示之密碼子。
在一些實施例中，ORF中之至少77%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之至少78%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之至少79%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之至少80%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於87%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於86%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於85%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於84%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於83%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於82%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於81%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於80%之密碼子係表3中所展示之密碼子。在一些實施例中，ORF中之小於或等於79%之密碼子係表3中所展示之密碼子。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF之重複含量為22%-27%、22%-23%、22.3%-23%、23%-24%、24%-25%、25%-26%或26%-27%；大於或等於20%、21%或22%；小於或等於20%、21%或22%，視情況另外其中ORF中之至少1%、至少2%、至少3%或至少4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度、重複及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF之重複含量小於或等於23.3%，視情況另外其中ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度、重複及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF之GC含量大於或等於54%、55%、56%、56%、57%、58%、59%、60%或61%；小於或等於64%、63%、62%、61%、60%或59%，視情況另外其中，ORF中之至少1%、至少2%、至少3%或至少4%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中多肽長度、重複及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，提供包括編碼長度為至少30個胺基酸之多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中ORF之GC含量大於或等於55%，視情況另外其中ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對。在一些實施例中，多肽長度、重複及密碼子對含量係如本文其他處(例如上文之前言及發明內容部分中)所陳述。
在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於20%。在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於20.5%。在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於21%。在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於21.5%。在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於21.7%。在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於21.9%。在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於22.1%。在一些實施例中，ORF之重複含量大於或等於22.2%。
在一些實施例中，ORF之GC含量大於或等於56%。在一些實施例中，ORF之GC含量大於或等於56.5%。在一些實施例中，ORF之GC含量大於或等於57%。在一些實施例中，ORF之GC含量大於或等於57.5%。在一些實施例中，ORF之GC含量大於或等於58%。在一些實施例中，ORF之GC含量大於或等於58.5%。在一些實施例中，ORF之GC含量大於或等於59%。在一些實施例中，ORF之GC含量小於或等於63%。在一些實施例中，ORF之GC含量小於或等於62.6%。在一些實施例中，ORF之GC含量小於或等於62.1%。在一些實施例中，ORF之GC含量小於或等於61.6%。在一些實施例中，ORF之GC含量小於或等於61.1%。在一些實施例中，ORF之GC含量小於或等於60.6%。在一些實施例中，ORF之GC含量小於或等於60.1%。
在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於59.6%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於23.2%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於23.1%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於23.0%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於22.9%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於22.8%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於22.7%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於22.6%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於22.5%。在一些實施例中，ORF之重複含量小於或等於22.4%。
應瞭解，第一胺基酸及第二胺基酸總共存在400個可能配對，且並未鑑別所有配對之顯著富集之密碼子對。另外，在一些情形下，在重疊二肽區段之間可存在關於在為第一二肽區段之C-末端位置及第二二肽區段之N-末端區段之位置處應使用哪個胺基酸之衝突，或可存在一種以上對應於既定二肽區段之可能富集密碼子對。因此，為設計完整ORF，通常採用一或多種其他方式來成對編碼胺基酸，該等胺基酸並無富集對或在重疊二肽之間發生衝突。提供諸多方式來確定該等情況中之適當密碼子。舉例而言，一種此類方式係使用來自其中編碼天然多肽之野生型序列之密碼子。另一方式係使用一或多個算法步驟來縮小每一胺基酸之可能密碼子。第三方式係使用向每一胺基酸提供特定密碼子之密碼子組。
對於縮小每一胺基酸之可能密碼子之算法步驟而言，可將下列步驟中之一或多者應用於一或多個(例如所有)其中表1之密碼子對不給出密碼子或給出衝突或多個密碼子之位置。
在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，消除表3中未出現之密碼子，亦即並不進一步考慮納入ORF中。在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，消除表4中所出現之密碼子。在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子。該等步驟可以任一順序進行組合。舉例而言，首先消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子，然後若仍存在一種以上可能性，則消除表3中未出現之密碼子及/或表4中所出現之密碼子。若該等方式中之任一者消除所有可能密碼子，則可繼續進行，如同並未向該位置提供密碼子一般。
在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，使用最小化尿苷含量之密碼子。在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，使用最小化重複含量之密碼子。在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，使用最大化GC含量之密碼子。倘若第一步驟未提供擬使用之單一密碼子，則可分級應用該等步驟之任一組合。舉例而言，首先基於尿苷最小化進行選擇；然後基於重複最小化進行選擇；然後基於GC含量最大化進行選擇。用以縮小每一胺基酸之可能密碼子之上述步驟通常足以確定每一位置之單一密碼子；然而，若仍存在一種以上可能性，則基本上可隨機選擇，例如使用偽亂數產生器或藉由採用一對一密碼子組(例如本文所闡述之任一者)。
在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，消除表3中未出現之密碼子且視情況消除表4中所出現之密碼子及/或消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子，且然後應用下列各項中之至少一者：使用最小化尿苷含量之密碼子；使用最小化重複含量之密碼子；及/或使用最大化GC含量之密碼子。倘若第一步驟未提供擬使用之單一密碼子，則可分級應用該等步驟之任一組合。舉例而言，首先基於尿苷最小化進行選擇；然後基於重複最小化進行選擇；然後基於GC含量最大化進行選擇。用以縮小每一胺基酸之可能密碼子之上述步驟通常足以確定每一位置之單一密碼子；然而，若仍存在一種以上可能性，則基本上可隨機選擇，例如使用偽亂數產生器或藉由採用一對一密碼子組(例如本文所闡述之任一者)。
在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，消除表4中所出現之密碼子且視情況消除表3中未出現之密碼子及/或消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子，且然後應用下列各項中之至少一者：使用最小化尿苷含量之密碼子；使用最小化重複含量之密碼子；及/或使用最大化GC含量之密碼子。倘若第一步驟未提供擬使用之單一密碼子，則可分級應用該等步驟之任一組合。舉例而言，首先基於尿苷最小化進行選擇；然後基於重複最小化進行選擇；然後基於GC含量最大化進行選擇。用以縮小每一胺基酸之可能密碼子之上述步驟通常足以確定每一位置之單一密碼子；然而，若仍存在一種以上可能性，則基本上可隨機選擇，例如使用偽亂數產生器或藉由採用一對一密碼子組(例如本文所闡述之任一者)。
在一些實施例中，在給出衝突或多個密碼子之情形下，消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子且視情況消除表3中未出現之密碼子及/或消除表4中所出現之密碼子，且然後應用下列各項中之至少一者：使用最小化尿苷含量之密碼子；使用最小化重複含量之密碼子；及/或使用最大化GC含量之密碼子。倘若第一步驟未提供擬使用之單一密碼子，則可分級應用該等步驟之任一組合。舉例而言，首先基於尿苷最小化進行選擇；然後基於重複最小化進行選擇；然後基於GC含量最大化進行選擇。用以縮小每一胺基酸之可能密碼子之上述步驟通常足以確定每一位置之單一密碼子；然而，若仍存在一種以上可能性，則基本上可隨機選擇，例如使用偽亂數產生器或藉由採用一對一密碼子組(例如本文所闡述之任一者)。
在未給出密碼子之情形下(且視情況在給出衝突或多個密碼子之情形下)，可自擬編碼胺基酸之所有可用密碼子之組開始；隨後依次係：擬編碼胺基酸之所有可用密碼子之組，表4中所出現者除外；擬編碼胺基酸之所有可用密碼子之組，將導致存在表2中之密碼子對者除外；擬編碼胺基酸之所有可用密碼子之組，表4中所出現者或將導致存在表2中之密碼子對者除外；且然後應用上述方式或其組合，例如首先基於尿苷最小化進行選擇；然後基於重複最小化進行選擇；然後基於GC含量最大化進行選擇。或者，可僅採用一對一密碼子組，例如本文所闡述之任一者。實例性密碼子組顯示於下列各表中。亦可使用該等組來實施上述第三選擇，亦即每當自表1選擇密碼子對不能在既定位置提供單一密碼子時，使用向每一胺基酸提供特定密碼子之密碼子組。
表5.與長mRNA半衰期相關之密碼子
胺基酸 密碼子
Gly GGT
Glu GAA
Asp GAC
Val GTC
Ala GCC
Arg AGA
Ser TCT
Lys AAG
Asn AAC
Met ATG
Ile ATC
Thr ACC
Trp TGG
Cys TGC
Tyr TAC
Leu TTG
Phe TTC
Gln CAA
His CAC
表6.與高肝表現及最小尿苷含量相關之密碼子
胺基酸 密碼子
Gly GGC
Glu GAG
Asp GAC
Val GTG
Ala GCC
Arg AGA
Ser AGC
Lys AAG
Asn AAC
Met ATG
Ile ATC
Thr ACC
Trp TGG
Cys TGC
Tyr TAC
Leu CTG
Phe TTC
Gln CAG
His CAC
表7.其他實例性密碼子組。
胺基酸 低 U 高 U 低 G 低 C 低 A 低 A/U
Gly GGC GGT GGC GGA GGC GGC
Glu GAG GAA GAA GAG GAG GAG
Asp GAC GAT GAC GAT GAC GAC
Val GTG GTT GTC GTG GTG GTG
Ala GCC GCT GCC GCT GCC GCC
Arg AGA CGT AGA AGA CGG CGG
Ser AGC TCT TCC AGT TCC AGC
Lys AAG AAA AAA AAG AAG AAG
Asn AAC AAT AAC AAT AAC AAC
Met ATG ATG ATG AGT ATG ATG
Ile ATC ATT ATC ATT ATC ATC
Thr ACC ACT ACC ACA ACC ACC
Trp TGG TGG TGG TGG TGG TGG
Cys TGC TGT TGC TGT TGC TGC
Tyr TAC TAT TAC TAT TAC TAC
Leu CTG TTA CTC TTG CTG CTG
Phe TTC TTT TTC TTT TTC TTC
Gln CAG CAA CAA CAG CAG CAG
His CAC CAT CAC CAT CAC CAC
在使用來自表7之組之情形下，在一些實施例中，該組係低U、低A或低A/U組。
編碼Cas9核酸酶且富集或缺乏不同組之密碼子及密碼子對之實例性ORF序列在本文中提供為SEQ ID NO: 5-14。其係根據本文所揭示之方法所生成。該組ORF序列在密碼子對中提供不同富集或缺乏，如表8中所展示。
表8.實例性ORF序列之特性。
SEQ ID NO 簡述 計數 百分比 重複含量 (%) GC 含量 (%)
I-對 E-對 I-單一 E-單一 I-對 E-對 I-單一 E-單一
5 E-單一富集 0 8 0 1196 0.000 0.581 0.000 86.792 23.5 61.8
6 E-對富集，I-對缺乏(視情況E-單一富集或I-單一缺乏) 9 51 87 1099 0.653 3.701 6.313 79.753 22.7 59.5
7 E-對及E-單一富集，I-對及I-單一缺乏 6 85 97 1086 0.435 6.168 7.039 78.810 22.4 59.0
8 I-對缺乏及/或I-單一缺乏 8 87 102 1081 0.581 6.313 7.402 78.447 23.0 59.1
9 E-對富集 8 87 102 1081 0.581 6.313 7.402 78.447 22.3 59.0
10 E-對及E-單一富集 0 26 0 1196 0.000 1.887 0.000 86.792 22.7 61.8
11 E-單一缺乏 0 19 0 1041 0.000 1.379 0.000 75.544 27.5 52.1
12 I-單一富集 0 8 0 1196 0.000 0.581 0.000 86.792 27.2 58.1
13 E-對缺乏 19 4 1024 95 1.379 0.290 74.311 6.894 34.1 23.8
14 I-對富集 13 85 809 328 0.943 6.168 58.708 23.803 31.9 32.0
29 E-對富集；表6密碼子富集 10 85 338 845 0.725 6.159 24.493 61.232 22.7 51.9
46 E-對富集；表7低A密碼子富集 6 85 97 1040 0.435 6.159 7.029 75.362 25.2 59.1
在表8中，E-對、I-對、E-單一及I-單一分別係指表1-4之密碼子對或密碼子。除簡述欄中所展示之富集或缺乏外，對SEQ ID NO: 5-10皆進一步實施最小化尿苷、最小化重複及最大化GC含量之步驟。在不使用表1之密碼子對之位置，SEQ ID NO: 29及46分別使用表6之密碼子及表7之低A組。括號中所展示之富集或缺乏可有可無，其中與使用非括號中之富集/缺乏步驟以及最小化尿苷、最小化重複及最大化GC含量之步驟所生成之序列相比，其並不進一步修飾序列。除簡述欄中所展示之富集或缺乏外，對SEQ ID NO: 11-14皆進一步實施最大化尿苷、最大化重複及最小化GC含量之步驟。在所有情形下，以下列順序實施富集/缺乏步驟(若使用)：E-對；I-對；E-單一；I-單一；尿苷；重複；GC含量。一旦既定位置已收斂至單一密碼子且不會因重疊對而產生衝突，則無需對該位置應用其他步驟。
在本文所陳述之任一實施例中，包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸可為mRNA。在本文所陳述之任一實施例中，包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸可為包括可操作地連接至ORF之啟動子的表現構築體。 2.   具有低尿苷含量之ORF
在一些實施例中，編碼多肽之ORF具有介於其最小尿苷含量至約150%之其最小尿苷含量之間的尿苷含量。在一些實施例中，ORF之尿苷含量小於或等於約145%、140%、135%、130%、125%、120%、115%、110%、105%、104%、103%、102%或101%之其最小尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有等於其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約150%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約145%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約140%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約135%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約130%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約125%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約120%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約115%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約110%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約105%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約104%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約103%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約102%之其最小尿苷含量之尿苷含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約101%之其最小尿苷含量之尿苷含量。
在一些實施例中，ORF具有介於其最小尿苷二核苷酸含量至200%之其最小尿苷二核苷酸含量之間的尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF之尿苷二核苷酸含量小於或等於約195%、190%、185%、180%、175%、170%、165%、160%、155%、150%、145%、140%、135%、130%、125%、120%、115%、110%、105%、104%、103%、102%或101%之其最小尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有等於其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約200%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約195%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約190%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約185%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約180%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約175%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約170%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約165%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約160%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約155%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有等於其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約150%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約145%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約140%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約135%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約130%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約125%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約120%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約115%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約110%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約105%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約104%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約103%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約102%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約101%之其最小尿苷二核苷酸含量之尿苷二核苷酸含量。
在一些實施例中，ORF具有介於其最小尿苷二核苷酸含量至係與所論述mRNA編碼相同蛋白質之參考序列之最大尿苷二核苷酸含量之90%或更低之尿苷二核苷酸含量之間的尿苷二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF之尿苷二核苷酸含量小於或等於與所論述mRNA編碼相同蛋白質之參考序列之最大尿苷二核苷酸含量的約85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%。
在一些實施例中，ORF具有介於0個尿苷三核苷酸至1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40或50個尿苷三核苷酸之間之尿苷三核苷酸含量(其中較長尿苷串計數為其中之獨特三尿苷區段之數量，舉例而言，尿苷四核苷酸含有兩個尿苷三核苷酸，尿苷五核苷酸含有三個尿苷三核苷酸，等等)。在一些實施例中，ORF具有介於0%尿苷三核苷酸至0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.5%或2%尿苷三核苷酸之間之尿苷三核苷酸含量，其中尿苷三核苷酸之含量百分比計算為序列中由形成尿苷三核苷酸(或較長尿苷串)之一部分之尿苷所佔據位置的百分比，從而序列UUUAAA及UUUUAAAA各自具有50%之尿苷三核苷酸含量。舉例而言，在一些實施例中，ORF具有小於或等於2%之尿苷三核苷酸含量。舉例而言，在一些實施例中，ORF具有小於或等於1.5%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於1%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.9%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.8%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.7%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.6%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.5%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.4%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.3%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.2%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.1%之尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF並無尿苷三核苷酸。
在一些實施例中，ORF具有介於其最小尿苷三核苷酸含量至係與所論述多核苷酸編碼相同蛋白質之參考序列之最大尿苷三核苷酸含量之90%或更低之尿苷三核苷酸含量之間的尿苷三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF之尿苷三核苷酸含量小於或等於與所論述多核苷酸編碼相同蛋白質之參考序列之最大尿苷三核苷酸含量的約85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%。
在一些實施例中，ORF具有最小核苷酸均聚物，例如相同核苷酸之重複串。舉例而言，在一些實施例中，在自表9中所列示之密碼子選擇最小尿苷密碼子時，藉由選擇減小核苷酸均聚物之數量及長度之最小尿苷密碼子(例如針對丙胺酸選擇GCA代替GCC或針對甘胺酸選擇GGA代替GGG或針對離胺酸選擇AAG代替AAA)來構築多核苷酸。
可(例如)藉由在足夠部分之ORF中使用最小尿苷密碼子來減小既定ORF之尿苷含量或尿苷二核苷酸含量或尿苷三核苷酸含量。舉例而言，可藉由將胺基酸轉化成密碼子來將由本文所闡述ORF編碼之多肽之胺基酸序列回譯成ORF序列，其中一些或所有ORF使用下文所展示之實例性最小尿苷密碼子。在一些實施例中，ORF中之至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係表9中所列示之密碼子。
表9.實例性最小尿苷密碼子
胺基酸 最小尿苷密碼子
A 丙胺酸 GCA或GCC或GCG
G 甘胺酸 GGA或GGC或GGG
V 纈胺酸 GUC或GUA或GUG
D 天門冬胺酸 GAC
E 麩胺酸 GAA或GAG
I 異白胺酸 AUC或AUA
T 蘇胺酸 ACA或ACC或ACG
N 天門冬醯胺酸 AAC
K 離胺酸 AAG或AAA
S 絲胺酸 AGC
R 精胺酸 AGA或AGG
L 白胺酸 CUG或CUA或CUC
P 脯胺酸 CCG或CCA或CCC
H 組胺酸 CAC
Q 麩醯胺酸 CAG或CAA
F 苯丙胺酸 UUC
Y 酪胺酸 UAC
C 半胱胺酸 UGC
W 色胺酸 UGG
M 甲硫胺酸 AUG
在一些實施例中，ORF由一組其中至少約75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係表9中所列示之密碼子的密碼子組成。 3.   具有低腺嘌呤含量之ORF
在一些實施例中，ORF具有介於其最小腺嘌呤含量至約150%之其最小腺嘌呤含量之間之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF之腺嘌呤含量小於或等於約145%、140%、135%、130%、125%、120%、115%、110%、105%、104%、103%、102%或101%之其最小腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有等於其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約150%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約145%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約140%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約135%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約130%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約125%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約120%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約115%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約110%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約105%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約104%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約103%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約102%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約101%之其最小腺嘌呤含量之腺嘌呤含量。
在一些實施例中，ORF具有介於其最小腺嘌呤二核苷酸含量至200%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之間之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF之腺嘌呤二核苷酸含量小於或等於約195%、190%、185%、180%、175%、170%、165%、160%、155%、150%、145%、140%、135%、130%、125%、120%、115%、110%、105%、104%、103%、102%或101%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有等於其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約200%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約195%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約190%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約185%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約180%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約175%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約170%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約165%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約160%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約155%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有等於其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約150%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約145%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約140%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約135%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約130%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約125%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約120%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約115%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約110%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約105%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約104%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約103%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約102%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於約101%之其最小腺嘌呤二核苷酸含量之腺嘌呤二核苷酸含量。
在一些實施例中，ORF具有介於其最小腺嘌呤二核苷酸含量至係與所論述多核苷酸編碼相同蛋白質之參考序列之最大腺嘌呤二核苷酸含量之90%或更低之腺嘌呤二核苷酸含量之間的腺嘌呤二核苷酸含量。在一些實施例中，ORF之腺嘌呤二核苷酸含量小於或等於與所論述多核苷酸編碼相同蛋白質之參考序列之最大腺嘌呤二核苷酸含量的約85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%。
在一些實施例中，ORF具有介於0個腺嘌呤三核苷酸至1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40或50個腺嘌呤三核苷酸之間之腺嘌呤三核苷酸含量(其中較長腺嘌呤串計數為其中之獨特三腺嘌呤區段之數量，舉例而言，腺嘌呤四核苷酸含有兩個腺嘌呤三核苷酸，腺嘌呤五核苷酸含有三個腺嘌呤三核苷酸，等等)。在一些實施例中，ORF具有介於0%腺嘌呤三核苷酸至0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.5%或2%腺嘌呤三核苷酸之間之腺嘌呤三核苷酸含量，其中腺嘌呤三核苷酸之含量百分比計算為序列中由形成腺嘌呤三核苷酸(或較長腺嘌呤串)之一部分之腺嘌呤所佔據位置的百分比，從而序列UUUAAA及UUUUAAAA各自具有50%之腺嘌呤三核苷酸含量。舉例而言，在一些實施例中，ORF具有小於或等於2%之腺嘌呤三核苷酸含量。舉例而言，在一些實施例中，ORF具有小於或等於1.5%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於1%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.9%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.8%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.7%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.6%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.5%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.4%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.3%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.2%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF具有小於或等於0.1%之腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF並無腺嘌呤三核苷酸。
在一些實施例中，ORF具有介於其最小腺嘌呤三核苷酸含量至係與所論述多核苷酸編碼相同蛋白質之參考序列之最大腺嘌呤三核苷酸含量之90%或更低之腺嘌呤三核苷酸含量之間的腺嘌呤三核苷酸含量。在一些實施例中，ORF之腺嘌呤三核苷酸含量小於或等於與所論述多核苷酸編碼相同蛋白質之參考序列之最大腺嘌呤三核苷酸含量的約85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%。在一些實施例中，ORF具有最小核苷酸均聚物，例如相同核苷酸之重複串。舉例而言，在一些實施例中，在自表10中所列示之密碼子選擇最小腺嘌呤密碼子時，藉由選擇減小核苷酸均聚物之數量及長度之最小腺嘌呤密碼子(例如針對丙胺酸選擇GCA代替GCC或針對甘胺酸選擇GGA代替GGG或針對離胺酸選擇AAG代替AAA)來構築多核苷酸。可(例如)藉由在足夠部分之ORF中使用最小腺嘌呤密碼子來減小既定ORF之腺嘌呤含量或腺嘌呤二核苷酸含量或腺嘌呤三核苷酸含量。舉例而言，可藉由將胺基酸轉化成密碼子來將由本文所闡述ORF編碼之多肽之胺基酸序列回譯成ORF序列，其中一些或所有ORF使用下文所展示之實例性最小腺嘌呤密碼子。在一些實施例中，ORF中之至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係表10中所列示之密碼子。
表10.實例性最小腺嘌呤密碼子
胺基酸 最小腺嘌呤密碼子
A 丙胺酸 GCU或GCC或GCG
G 甘胺酸 GGU或GGC或GGG
V 纈胺酸 GUC或GUU或GUG
D 天門冬胺酸 GAC或GAU
E 麩胺酸 GAG
I 異白胺酸 AUC或AUU
T 蘇胺酸 ACU或ACC或ACG
N 天門冬醯胺酸 AAC或AAU
K 離胺酸 AAG
S 絲胺酸 UCU或UCC或UCG
R 精胺酸 CGU或CGC或CGG
L 白胺酸 CUG或CUC或CUU
P 脯胺酸 CCG或CCU或CCC
H 組胺酸 CAC或CAU
Q 麩醯胺酸 CAG
F 苯丙胺酸 UUC或UUU
Y 酪胺酸 UAC或UAU
C 半胱胺酸 UGC或UGU
W 色胺酸 UGG
M 甲硫胺酸 AUG
在一些實施例中，ORF由一組其中至少約75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係表10中所列示之密碼子的密碼子組成。 4.   具有低腺嘌呤含量及低尿苷含量之ORF
在可行程度上，上文針對低腺嘌呤含量所闡述之任一特徵可與上文針對低尿苷含量所闡述之任一特徵進行組合。舉例而言，ORF之尿苷含量介於其最小尿苷含量至約150%之其最小尿苷含量之間(舉例而言，ORF之尿苷含量小於或等於約145%、140%、135%、130%、125%、120%、115%、110%、105%、104%、103%、102%或101%之其最小尿苷含量)且其腺嘌呤含量介於其最小腺嘌呤含量至約150%之其最小腺嘌呤含量之間(例如小於或等於約145%、140%、135%、130%、125%、120%、115%、110%、105%、104%、103%、102%或101%之其最小腺嘌呤含量)。尿苷及腺嘌呤二核苷酸亦如此。類似地，ORF中之尿苷核苷酸及腺嘌呤二核苷酸之含量可如上文所陳述。類似地，ORF中之尿苷二核苷酸及腺嘌呤核苷酸之含量可如上文所陳述。
可(例如)藉由在足夠部分之ORF中使用最小尿苷及腺嘌呤密碼子來減小既定ORF之尿苷及腺嘌呤核苷酸及/或二核苷酸含量。舉例而言，可藉由將胺基酸轉化成密碼子來將由本文所闡述ORF編碼之多肽之胺基酸序列回譯成ORF序列，其中一些或所有ORF使用下文所展示之實例性最小尿苷及腺嘌呤密碼子。在一些實施例中，ORF中之至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係表11中所列示之密碼子。
表11.實例性最小尿苷及腺嘌呤密碼子
胺基酸 最小尿苷密碼子5
A 丙胺酸 GCC或GCG
G 甘胺酸 GGC或GGG
V 纈胺酸 GUC或GUG
D 天門冬胺酸 GAC
E 麩胺酸 GAG
I 異白胺酸 AUC
T 蘇胺酸 ACC或ACG
N 天門冬醯胺酸 AAC
K 離胺酸 AAG
S 絲胺酸 AGC或UCC或UCG
R 精胺酸 CGC或CGG
L 白胺酸 CUG或CUC
P 脯胺酸 CCG或CCC
H 組胺酸 CAC
Q 麩醯胺酸 CAG
F 苯丙胺酸 UUC
Y 酪胺酸 UAC
C 半胱胺酸 UGC
W 色胺酸 UGG
M 甲硫胺酸 AUG
在一些實施例中，ORF由一組其中至少約75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係表11中所列示之密碼子的密碼子組成。如可在表11中看到，三個所列示絲胺酸密碼子中之每一者含有一個A或一個U。在一些實施例中，在尿苷最小化中優先使用絲胺酸之AGC密碼子。在一些實施例中，在腺嘌呤最小化中優先使用絲胺酸之UCC及/或UCG密碼子。 5.   增加轉譯及/或對應於高度表現之tRNA之密碼子；實例性密碼子組
在一些實施例中，ORF具有增加哺乳動物(例如人類)中之轉譯之密碼子。在其他實施例中，ORF具有增加哺乳動物(例如人類)之器官(例如肝)中之轉譯之密碼子。在其他實施例中，ORF具有增加哺乳動物(例如人類)之一定類型細胞(例如肝細胞)中之轉譯之密碼子。哺乳動物、細胞類型、哺乳動物器官、人類、人類器官等中之轉譯增加可相對於ORF野生型序列之轉譯程度來測定，或相對於其密碼子分佈匹配衍生ORF之生物體或在胺基酸層面上含有最類似ORF之生物體之密碼子分佈的ORF來測定。
在一些實施例中，由ORF編碼之多肽係衍生自下述原核生物之Cas9核酸酶，且哺乳動物、細胞類型、哺乳動物器官、人類、人類器官等中之轉譯增加可相對於ORF之野生型序列(例如序列表中所列示之野生型ORF，例如SEQ ID NO: 67 (Cas9)、68 (SerpinA1)、89 (FAH)、95 (GABRD)、101 (GAPDH)、107 (GBA1)、113 (GLA)、119 (OTC)、125 (PAH)或131 (TTR)之轉譯程度來測定，或相對於所關注ORF (例如編碼人類蛋白質或表現於人類細胞中之轉基因之ORF)來測定。舉例而言，ORF可為密碼子分佈匹配衍生ORF之生物體或在胺基酸層面上含有最類似ORF之生物體(例如釀膿鏈球菌、金黃色葡萄球菌(S. aureus )或Cas蛋白之另一原核生物)之密碼子分佈的ORF；或相對於SEQ ID NO: 2、3或67中所含Cas9 ORF之轉譯，在所有其他均等同之情形中包含任何適用點突變、異源性結構域及諸如此類之ORF。可用於增加人類(包含人類肝及人類肝細胞)中之表現之密碼子可為對應於人類肝/肝細胞中高度表現之tRNA的密碼子，如Dittmar KA,PLos Genetics 2(12): e221 (2006)中所論述。在一些實施例中，ORF中至少約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係對應於哺乳動物(例如人類)中之高度表現之tRNA (例如針對每一胺基酸之最高表現之tRNA)之密碼子。在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係對應於哺乳動物器官(例如人類器官)中之高度表現之tRNA (例如針對每一胺基酸之最高表現之tRNA)之密碼子。在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係對應於哺乳動物肝(例如人類肝)中之高度表現之tRNA (例如針對每一胺基酸之最高表現之tRNA)之密碼子。在一些實施例中，ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之密碼子係對應於哺乳動物肝細胞(例如人類肝細胞)中之高度表現之tRNA (例如針對每一胺基酸之最高表現之tRNA)之密碼子。
或者，通常可使用對應於生物體(例如人類)中之高度表現之tRNA之密碼子。
用於密碼子選擇之前述方式中之任一者可與以下各項進行組合：選擇如表1中所展示之密碼子對；及/或消除表4中所出現、將導致存在表2中所展示之密碼子對及/或有助於較高重複含量之密碼子；及/或選擇表3中所出現及/或有助於較低重複含量之密碼子；及/或使用如上文所展示之表5、6或7之密碼子組；使用上文(例如表9、10或11)所展示之最小尿苷及/或腺嘌呤密碼子，且然後在一種以上選擇可用之情形下，使用對應於通常生物體(例如人類)或所關注器官或細胞類型(例如肝或肝細胞，例如人類肝或人類肝細胞)中之較高程度表現之tRNA之密碼子。 6.   由ORF編碼之多肽；實例性序列
在一些實施例中，多核苷酸係包括編碼所關注多肽之ORF之mRNA。
在一些實施例中，多核苷酸係包括編碼上文所揭示RNA引導之DNA結合劑之ORF之mRNA。
在一些實施例中，ORF包括與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或132-143中之任一者具有至少90%一致性之序列，視情況其中一致性係在不考慮ORF之起始及終止密碼子下所測定。「在不考慮ORF之起始及終止密碼子下」藉由比對不含起始及終止密碼子之序列來測定一致性；起始及終止密碼子通常分別出現於位置1至3及N-2至N (其中N係ORF中之核苷酸數)；且起始及終止密碼子通常分別係ATG (或有時GTG)及TAA、TGA及TAG中之一者(其中起始及終止密碼子中之T可由U取代)。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或132-143之序列之一致性程度為至少95%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或132-143之序列之一致性程度為至少98%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或132-143之序列之一致性程度為至少99%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或132-143之序列之一致性程度為100%。
在一些實施例中，多核苷酸包括與SEQ ID NO: 16-20、76-80、193-197或199-201中之任一者具有至少90%一致性之序列。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、193-197或199-201之序列之一致性程度為至少95%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、193-197或199-201之序列之一致性程度為至少98%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、193-197或199-201之序列之一致性程度為至少99%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、193-197或199-201之序列之一致性程度為100%。在一些實施例中，多核苷酸包括與SEQ ID NO: 16-20、76-80、194-197或200-201中之任一者具有至少90%一致性之序列。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、194-197或200-201之序列之一致性程度為至少95%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、194-197或200-201之序列之一致性程度為至少98%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、194-197或200-201之序列之一致性程度為至少99%。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 16-20、76-80、194-197或200-201之序列之一致性程度為100%。
在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之多肽係RNA引導之DNA結合劑，其進一步闡述於下文中。在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之多肽係內核酸酶。在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之多肽係絲胺酸蛋白酶抑制劑或Serpin家族成員。在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之多肽係羥基酶；胺甲醯基轉移酶；葡萄糖基神經醯胺酶；半乳糖苷酶；去氫酶；受體；或神經傳遞質受體。在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之多肽係苯丙胺酸羥基酶；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶；富馬醯乙醯乙酸水解酶；葡萄糖基神經醯胺酶β；α半乳糖苷酶；轉甲狀腺素；甘油醛-3-磷酸去氫酶；γ-胺基丁酸(GABA)受體亞單元(例如GABA A型受體δ亞單元)。在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之多肽係Serpin家族A成員1。
實例性苯丙胺酸羥基酶胺基酸序列係SEQ ID NO: 124。編碼苯丙胺酸羥基酶之實例性序列係SEQ ID NO: 126-129及142。
實例性鳥胺酸胺甲醯基轉移酶胺基酸序列係SEQ ID NO: 118。編碼鳥胺酸胺甲醯基轉移酶之實例性序列係SEQ ID NO: 120-123及141。
實例性葡萄糖基神經醯胺酶β胺基酸序列係SEQ ID NO: 106。編碼葡萄糖基神經醯胺酶β之實例性序列係SEQ ID NO: 108-111及139。
實例性α半乳糖苷酶胺基酸序列係SEQ ID NO: 112。編碼α半乳糖苷酶之實例性序列係SEQ ID NO: 114-117及140。
實例性甘油醛-3-磷酸去氫酶胺基酸序列係SEQ ID NO: 100。編碼甘油醛-3-磷酸去氫酶之實例性序列係SEQ ID NO: 102-105及138。
實例性A型GABA受體δ亞單元胺基酸序列係SEQ ID NO: 94。編碼GABA A型受體δ亞單元之實例性序列係SEQ ID NO: 96-99及137。
實例性富馬醯乙醯乙酸水解酶胺基酸序列係SEQ ID NO: 88。編碼富馬醯乙醯乙酸水解酶之實例性序列係SEQ ID NO: 89-93及136。
實例性轉甲狀腺素胺基酸序列係SEQ ID NO: 130。編碼轉甲狀腺素之實例性序列係SEQ ID NO: 132-135及143。
實例性Serpin家族A成員1胺基酸序列係SEQ ID NO: 74。編碼Serpin家族A成員1之實例性序列係SEQ ID NO: 76-80。 a)   經編碼之RNA引導之DNA結合劑
在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之多核苷酸係RNA引導之DNA結合劑。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑係種類2 Cas核酸酶。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑具有裂解酶活性，亦可稱為雙鏈內核酸酶活性。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑包括Cas核酸酶(例如種類2 Cas核酸酶，其可為(例如) II、V或VI型Cas核酸酶)。種類2 Cas核酸酶包含(例如) Cas9、Cpf1、C2c1、C2c2及C2c3蛋白及其修飾。Cas9核酸酶之實例包含具有釀膿鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他原核生物(例如參見下一段落中之清單)之II型CRISPR系統者及其經修飾(例如改造或突變體)形式。例如參見US2016/0312198 A1；US 2016/0312199 A1。Cas核酸酶之其他實例包含III型CRISPR系統之Csm或Cmr複合物或其Cas10、Csm1或Cmr2亞單元；及I型CRISPR系統之級聯複合物或其Cas3亞單元。在一些實施例中，Cas核酸酶可來自IIA型、IIB型或IIC型系統。關於各種CRISPR系統及Cas核酸酶之論述，例如參見Makarova等人，NAT. REV. MICROBIOL. 9:467-477 (2011)；Makarova等人，NAT. REV. MICROBIOL, 13: 722-36 (2015)；Shmakov等人，MOLECULAR CELL, 60:385-397 (2015)。
可衍生Cas核酸酶之非限制性實例性物種包含釀膿鏈球菌、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、鏈球菌屬(Streptococcus sp.)、金黃色葡萄球菌、英諾克李斯特氏菌(Listeria innocua)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、新兇手弗朗西絲菌(Francisella novicida)、產琥珀酸沃林氏菌(Wolinella succinogene)、華德薩特菌(Sutterella wadsworthensis)、γ-變形菌(Gammaproteobacterium)、腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis)、空腸曲桿菌(Campylobacter jejuni)、多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)、產琥珀酸絲狀桿菌(Fibrobacter succinogene)、深紅紅螺菌(Rhodospirillum rubrum)、達松維爾擬諾卡氏菌(Nocardiopsis dassonvillei)、始旋鏈黴菌(Streptomyces pristinaespiralis)、綠色產色鏈黴菌(Streptomyces viridochromogene)、綠色產色鏈黴菌、玫瑰鏈孢囊菌(Streptosporangium roseum)、玫瑰鏈孢囊菌、酸熱脂環酸芽胞桿菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)、假真菌樣芽孢桿菌(Bacillus pseudomycoides)、還原硒酸鹽芽孢桿菌(Bacillus selenitireducens)、西伯利亞微小桿菌(Exiguobacterium sibiricum)、戴白氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)、齒垢密螺旋體(Treponema denticola)、海洋微顫菌(Microscilla marina)、伯克霍爾德氏菌(Burkholderiales bacterium)、食萘極單胞菌(Polaromonas naphthalenivorans)、極胞菌屬(Polaromonas sp.)、海洋固氮藍藻(Crocosphaera watsonii)、藍桿藻屬(Cyanothece sp.)、銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa)、聚球藻屬(Synechococcus sp.)、阿拉伯糖醋鹽桿菌(Acetohalobium arabaticum)、丹氏製胺菌(Ammonifex degensii)、熱角軍纖維素菌(Caldicelulosiruptor becscii)、礦菌(Candidatus Desulforudis)、肉毒梭狀芽孢桿菌(Clostridium botulinum)、難養芽胞梭菌(Clostridium difficile)、大芬戈爾德菌(Finegoldia magna)、嗜熱鹽鹼厭氧菌(Natranaerobius thermophilus)、嗜熱丙酸降解發酵菌(Pelotomaculum thermopropionicum)、嗜酸性喜溫硫桿菌(Acidithiobacillus caldus)、嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)、酒色別樣著色菌(Allochromatium vinosum)、海桿菌屬(Marinobacter sp.)、嗜鹽亞消化球菌(Nitrosococcus halophilus)、亞硝化球菌(Nitrosococcus watsoni)、假交替單胞菌(Pseudoalteromonas haloplanktis)、消旋纖線桿菌(Ktedonobacter racemifer)、甲烷鹽菌(Methanohalobium evestigatum)、魚腥藻(Anabaena variabilis)、泡沫節球藻(Nodularia spumigena)、念珠藻屬(Nostoc sp.)、極大螺旋藻(Arthrospira maxima)、鈍頂螺旋藻(Arthrospira platensis)、螺旋藻屬(Arthrospira sp.)、林氏藻屬(Lyngbya sp.)、原型微鞘藻(Microcoleus chthonoplastes)、顫藻屬(Oscillatoria sp.)、石袍藻(Petrotoga mobilis)、非洲棲熱腔菌(Thermosipho africanus)、巴氏鏈球菌(Streptococcus pasteurianus)、灰色奈瑟球菌(Neisseria cinerea)、紅嘴鷗彎曲桿菌(Campylobacter lari)、食清潔劑細小棒菌(Parvibaculum lavamentivorans)、白喉棒狀桿菌(Corynebacterium diphtheria)、胺基酸球菌屬(Acidaminococcus sp.)、毛螺科菌(Lachnospiraceae bacterium) ND2006及藻青菌(Acaryochloris marina)。
在一些實施例中，Cas核酸酶係來自釀膿鏈球菌之Cas9核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶係來自嗜熱鏈球菌之Cas9核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶係來自腦膜炎雙球菌之Cas9核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶係來自金黃色葡萄球菌之Cas9核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶係來自新兇手弗朗西絲菌之Cpf1核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶係來自胺基酸球菌屬之Cpf1核酸酶。在一些實施例中，Cas核酸酶係來自毛螺科菌ND2006之Cpf1核酸酶。 在其他實施例中，Cas核酸酶係來自以下物種之Cpf1核酸酶：土倫病弗朗西斯氏菌(Francisella tularensis )、毛螺科菌、解蛋白丁酸弧菌(Butyrivibrio proteoclasticus )、佩萊格裡尼菌科細菌(Peregrinibacteria bacterium )、帕庫菌科細菌(Parcubacteria bacterium )、史密斯氏菌(Smithella )、胺基酸球菌、候選白蟻甲烷枝原體(Candidatus Methanoplasma termitum )、挑剔真桿菌(Eubacterium eligens )、牛眼莫拉氏菌(Moraxella bovoculi )、稻田鉤端螺旋體(Leptospira inadai )、狗口腔卟啉單胞菌(Porphyromonas crevioricanis )、解糖腖普雷沃菌(Prevotella disiens )或獼猴卟啉單胞菌(Porphyromonas macacae )。在某些實施例中，Cas核酸酶係來自胺基酸球菌或毛螺菌科(Lachnospiraceae )之Cpf1核酸酶。
野生型Cas9具有兩個核酸酶結構域：RuvC及HNH。RuvC結構域裂解非靶DNA鏈，且HNH結構域裂解DNA之靶鏈。在一些實施例中，Cas9核酸酶包括一個以上RuvC結構域及/或一個以上HNH結構域。在一些實施例中，Cas9核酸酶係野生型Cas9。在一些實施例中，Cas9能夠誘導靶DNA中之雙鏈斷裂。在某些實施例中，Cas核酸酶可裂解dsDNA，其可裂解dsDNA之一條鏈，或其可不具有DNA裂解酶或切割酶活性。實例性Cas9胺基酸序列提供為SEQ ID NO: 1。實例性Cas9 mRNA ORF序列提供為SEQ ID NO: 5-10。
在一些實施例中，使用嵌合Cas核酸酶，其中蛋白質之一個結構域或區域由不同蛋白質之一部分代替。在一些實施例中，Cas核酸酶結構域可經來自不同核酸酶(例如Fok1)之結構域代替。在一些實施例中，Cas核酸酶可為經修飾核酸酶。
在其他實施例中，Cas核酸酶可來自I型CRISPR/Cas系統。在一些實施例中，Cas核酸酶可為I型 CRISPR/Cas系統之級聯複合物之組分。在一些實施例中，Cas核酸酶可為Cas3蛋白。在一些實施例中，Cas核酸酶可來自III型CRISPR/Cas系統。在一些實施例中，Cas核酸酶可具有RNA裂解活性。
在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑具有單鏈切割酶活性，亦即可切割一條DNA鏈以產生單鏈斷裂，亦稱為「切割」。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑包括Cas切割酶。切割酶係在dsDNA中產生切割(亦即切割一條鏈，但並不切割DNA雙螺旋之另一條鏈)之酶。在一些實施例中，Cas切割酶係Cas核酸酶(例如上述Cas核酸酶)之一種形式，其中核酸內切溶解活性位點(例如)由催化結構域中之一或多個改變(例如點突變)不活化。例如參見美國專利第8,889,356號，其論述Cas切割酶及實例性催化結構域改變。在一些實施例中，Cas切割酶(例如Cas9切割酶)具有不活化RuvC或HNH結構域。實例性Cas9切割酶胺基酸序列提供為SEQ ID NO: 161。
在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑經修飾以僅含有一個功能核酸酶結構域。舉例而言，可修飾藥劑蛋白，從而一個核酸酶結構域發生突變或完全或部分地缺失以減小其核酸裂解活性。在一些實施例中，使用RuvC結構域具有較小活性之切割酶。在一些實施例中，使用具有惰性RuvC結構域之切割酶。在一些實施例中，使用具有較小活性HNH結構域之切割酶。在一些實施例中，使用具有惰性HNH結構域之切割酶。
在一些實施例中，取代Cas蛋白核酸酶結構域內之保守胺基酸以減小或改變核酸酶活性。在一些實施例中，Cas核酸酶可在RuvC或RuvC樣核酸酶結構域中包括胺基酸取代。RuvC或RuvC樣核酸酶結構域中之實例性胺基酸取代包含D10A (基於釀膿鏈球菌Cas9蛋白)。例如參見Zetsche等人(2015)Cell Oct 22:163(3): 759-771。在一些實施例中，Cas核酸酶可在HNH或HNH樣核酸酶結構域中包括胺基酸取代。HNH或HNH樣核酸酶結構域中之實例性胺基酸取代包含E762A、H840A、N863A、H983A及D986A (基於釀膿鏈球菌Cas9蛋白)。例如參見Zetsche等人(2015)。其他實例性胺基酸取代包含D917A、E1006A及D1255A (基於新兇手弗朗西絲菌U112 Cpf1 (FnCpf1)序列 (UniProtKB - A0Q7Q2 (CPF1_FRATN))。
在一些實施例中，提供與一對嚮導RNA組合之編碼切割酶之mRNA，該等嚮導RNA分別與靶序列之有義鏈及反義鏈互補。在此實施例中，嚮導RNA將切割酶引導至靶序列且藉由在靶序列之相反鏈上生成切割(亦即雙重切割)來引入DSB。在一些實施例中，使用雙重切割可改良特異性且減小脫靶效應。在一些實施例中，使用切割酶以及兩個靶向DNA之相反鏈之單獨嚮導RNA在靶DNA中產生雙重切割。在一些實施例中，使用切割酶以及兩個經選擇以緊鄰之單獨嚮導RNA在靶DNA中產生雙重切割。
在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑缺乏裂解酶及切割酶活性。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑包括dCas DNA結合性多肽。dCas多肽具有DNA結合活性，而基本上缺乏催化(裂解酶/切割酶)活性。在一些實施例中，dCas多肽係dCas9多肽。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑缺乏裂解酶及切割酶活性或dCas DNA結合性多肽係Cas核酸酶(例如上述Cas核酸酶)之一種形式，其中其核酸內切溶解活性位點(例如)由其催化結構域中之一或多個改變(例如點突變)不活化。例如參見US 2014/0186958 A1；US 2015/0166980 A1。實例性dCas9胺基酸序列提供為SEQ ID NO: 162。 b)   異源性功能結構域；核定位信號
在一些實施例中，由本文所闡述ORF編碼之RNA引導之DNA結合劑包括一或多個異源性功能結構域(例如係或包括融合多肽)。
在一些實施例中，異源性功能結構域可促進RNA引導之DNA結合劑向細胞核之傳輸。舉例而言，異源性功能結構域可為核定位信號(NLS)。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與1-10個NLS融合。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與1-5個NLS融合。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與一個NLS融合。在使用一個NLS之情形下，NLS可連接於RNA引導之DNA結合劑序列之N-末端或C-末端處。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可在C-末端融合至至少一個NLS。NLS亦可插入RNA引導之DNA結合劑序列內。在其他實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與一個以上NLS融合。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與2、3、4或5個NLS融合。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與兩個NLS融合。在某些情況下，兩個NLS可相同(例如兩個SV40 NLS)或不同。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑融合至兩個連接於羧基末端處之SV40 NLS序列。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與兩個NLS融合，一個連接於N-末端處且一個連接於C-末端處。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可與3個NLS融合。在一些實施例中，RNA引導之DNA結合劑可不與NLS融合。在一些實施例中，NLS可為單組分序列，例如SV40 NLS、PKKKRKV (SEQ ID NO: 163)或PKKKRRV (SEQ ID NO: 175)。在一些實施例中，NLS可為二組分序列，例如核質蛋白、KRPAATKKAGQAKKKK (SEQ ID NO: 176)之NLS。在一些實施例中，NLS序列可包括LAAKRSRTT (SEQ ID NO: 164)、QAAKRSRTT (SEQ ID NO: 165)、PAPAKRERTT (SEQ ID NO: 166)、QAAKRPRTT (SEQ ID NO: 167)、RAAKRPRTT (SEQ ID NO: 168)、AAAKRSWSMAA (SEQ ID NO: 169)、AAAKRVWSMAF (SEQ ID NO: 170)、AAAKRSWSMAF (SEQ ID NO: 171)、AAAKRKYFAA (SEQ ID NO: 172)、RAAKRKAFAA (SEQ ID NO: 173)或RAAKRKYFAV (SEQ ID NO: 174)。NLS可為斯奴泡丁(snurportin)-1輸入蛋白-β (IBB結構域，例如SPN1-impβ序列。參見Huber等人，2002, J. Cell Bio., 156, 467-479。在一具體實施例中，單一PKKKRKV (SEQ ID NO: 163) NLS可連接於RNA引導之DNA結合劑之C-末端處。一或多個連接體視情況包含於融合位點處。在一些實施例中，在RNA引導之DNA結合劑中存在一或多個根據前述實施例中之任一者之NLS與一或多個其他異源性功能結構域(例如下述異源性功能結構域中之任一者)的組合。
在一些實施例中，異源性功能結構域可能能夠改良RNA引導之DNA結合劑之細胞內半衰期。在一些實施例中，可增加RNA引導之DNA結合劑之半衰期。在一些實施例中，可減小RNA引導之DNA結合劑之半衰期。在一些實施例中，異源性功能結構域可能能夠增加RNA引導之DNA結合劑之穩定性。在一些實施例中，異源性功能結構域可能能夠減小RNA引導之DNA結合劑之穩定性。在一些實施例中，異源性功能結構域可用作蛋白質降解之信號肽。在一些實施例中，蛋白質降解可由蛋白水解酶(例如蛋白酶體、溶酶體蛋白酶或鈣蛋白酶)調介。在一些實施例中，異源性功能結構域可包括PEST序列。在一些實施例中，可藉由添加泛素或聚泛素鏈來修飾RNA引導之DNA結合劑。在一些實施例中，泛素可為泛素樣蛋白(UBL)。泛素樣蛋白之非限制性實例包含小泛素樣修飾因子(SUMO)、泛素交叉反應性蛋白(UCRP，亦稱為干擾素刺激基因-15 (ISG15))、泛素相關修飾因子-1 (URM1)、神經元前體細胞表現之發育下調蛋白-8 (NEDD8，亦稱為釀酒酵母(S. cerevisiae )中之Rub1)、人類白血球抗原F締合蛋白(FAT10)、自體吞噬-8 (ATG8)及-12 (ATG12)、Fau泛素樣蛋白(FUB1)、膜錨定UBL (MUB)、泛素摺疊修飾因子-1 (UFM1)及泛素樣蛋白-5 (UBL5)。
在一些實施例中，異源性功能結構域可為標記物結構域。標記物結構域之非限制性實例包含螢光蛋白、純化標籤、表位標籤及報告基因序列。在一些實施例中，標記物結構域可為螢光蛋白。適宜螢光蛋白之非限制性實例包含綠色螢光蛋白(例如GFP、GFP-2、tagGFP、turboGFP、sfGFP、EGFP、Emerald、Azami Green、Monomeric Azami Green、CopGFP、AceGFP、ZsGreen1)、黃色螢光蛋白(例如YFP、EYFP、Citrine、Venus、YPet、PhiYFP、ZsYellow1)、藍色螢光蛋白(例如EBFP、EBFP2、Azurite、mKalamal、GFPuv、Sapphire、T-sapphire)、青色螢光蛋白(例如ECFP、Cerulean、CyPet、AmCyan1、Midoriishi-Cyan)、紅色螢光蛋白(例如mKate、mKate2、mPlum、DsRed-Monomer、mCherry、mRFP1、DsRed-Express、DsRed2、DsRed-Monomer、HcRed-Tandem、HcRed1、AsRed2、eqFP611、mRasberry、mStrawberry、Jred)及橙色螢光蛋白(mOrange、mKO、Kusabira-Orange、Monomeric Kusabira-Orange、mTangerine、tdTomato)或任一其他適宜螢光蛋白。在其他實施例中，標記物結構域可為純化標籤及/或表位標籤。非限制性實例性標籤包含麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)、殼多糖結合蛋白(CBP)、麥芽糖結合蛋白(MBP)、硫氧還蛋白(TRX)、聚(NANP)、串聯親和純化(TAP)標籤、myc、AcV5、AU1、AU5、E、ECS、E2、FLAG、HA、nus、Softag 1、Softag 3、Strep、SBP、Glu-Glu、HSV、KT3、S、S1、T7、V5、VSV-G、6xHis、8xHis、生物素羧基載體蛋白(BCCP)、聚His及鈣調蛋白。非限制性實例性報告基因包含麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)、辣根過氧化物酶(HRP)、氯黴素(chloramphenicol)乙醯基轉移酶(CAT)、β-半乳糖苷酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、螢光素酶或螢光蛋白。
在其他實施例中，異源性功能結構域可使RNA引導之DNA結合劑靶向特定細胞器、細胞類型、組織或器官。在一些實施例中，異源性功能結構域可使RNA引導之DNA結合劑靶向線粒體。
在其他實施例中，異源性功能結構域可為效應結構域。在將RNA引導之DNA結合劑引導至其靶序列時(例如在藉由gRNA將Cas核酸酶引導至靶序列時)，效應結構域可修飾或影響靶序列。在一些實施例中，效應結構域可選自核酸結合結構域、核酸酶結構域(例如非Cas核酸酶結構域)、表觀遺傳修飾結構域、轉錄活化結構域或轉錄阻抑結構域。在一些實施例中，異源性功能結構域係核酸酶(例如FokI核酸酶)。例如參見美國專利第9,023,649號。在一些實施例中，異源性功能結構域係轉錄活化因子或阻抑因子。例如參見Qi等人，「Repurposing CRISPR as an RNA-guided platform for sequence-specific control of gene expression,」Cell 152:1173-83 (2013)；Perez-Pinera等人，「RNA-guided gene activation by CRISPR-Cas9-based transcription factors,」Nat. Methods 10:973-6 (2013)；Mali等人，「CAS9 transcriptional activators for target specificity screening and paired nickases for cooperative genome engineering,」Nat. Biotechnol. 31:833-8 (2013)；Gilbert等人，「CRISPR-mediated modular RNA-guided regulation of transcription in eukaryotes,」Cell 154:442-51 (2013)。因此，RNA引導之DNA結合劑基本上變為可使用嚮導RNA引導結合期望靶序列之轉錄因子。在某些實施例中，DNA修飾結構域係甲基化結構域(例如去甲基化或甲基轉移酶結構域)。在某些實施例中，效應結構域係DNA修飾結構域(例如鹼基編輯結構域)。在特定實施例中，DNA修飾結構域係在DNA中引入特定修飾之核酸編輯結構域(例如去胺酶結構域)。例如參見WO 2015/089406；US 2016/0304846。WO 2015/089406及US 2016/0304846中所闡述之核酸編輯結構域、去胺酶結構域及Cas9變體以引用方式併入本文中。包括任一此類結構域之RNA引導之DNA結合劑可由本文所揭示(例如)具有一定量本文所闡述之表1密碼子對(視情況與本文所闡述之其他特徵進行組合)的ORF編碼。 7.     UTR；Kozak序列
在一些實施例中，多核苷酸包括至少一個來自羥基類固醇17-β去氫酶4 (HSD17B4或HSD)之UTR，例如來自HSD之5’ UTR。在一些實施例中，多核苷酸包括至少一個來自球蛋白mRNA (例如人類α球蛋白(HBA) mRNA、人類β球蛋白(HBB) mRNA或光滑爪蟾β球蛋白(XBG) mRNA)之UTR。在一些實施例中，多核苷酸包括來自球蛋白mRNA (例如HBA、HBB或XBG)之5’ UTR、3’ UTR或5’及3’ UTR。在一些實施例中，多核苷酸包括來自牛生長激素、巨細胞病毒(CMV)、小鼠Hba-a1、HSD、白蛋白基因、HBA、HBB或XBG之5’ UTR。在一些實施例中，多核苷酸包括來自牛生長激素、巨細胞病毒、小鼠Hba-a1、HSD、白蛋白基因、HBA、HBB或XBG之3’ UTR。在一些實施例中，多核苷酸包括來自牛生長激素、巨細胞病毒、小鼠Hba-a1、HSD、白蛋白基因、HBA、HBB、XBG、熱休克蛋白90 (Hsp90)、甘油醛3-磷酸去氫酶(GAPDH)、β-肌動蛋白、α-微管蛋白、腫瘤蛋白(p53)或表皮生長因子受體(EGFR)之5’及3’ UTR。
在一些實施例中，多核苷酸包括來自相同來源(例如組成型表現之mRNA，例如肌動蛋白、白蛋白或球蛋白(例如HBA、HBB或XBG))之5’及3’ UTR。
在一些實施例中，本文所揭示之mRNA包括與SEQ ID NO: 177-181或190-192中之任一者具有至少90%一致性之5’ UTR。在一些實施例中，本文所揭示之mRNA包括與SEQ ID NO: 182-186或202-204中之任一者具有至少90%一致性之3’ UTR。在一些實施例中，前述一致性值中之任一者為至少95%、至少98%、至少99%或100%。在一些實施例中，本文所揭示之mRNA包括具有SEQ ID NO: 177-181或190-192中之任一者之序列的5’ UTR。在一些實施例中，本文所揭示之mRNA包括具有SEQ ID NO: 182-186或202-204中之任一者之序列的3’ UTR。
在一些實施例中，mRNA不包括5’ UTR，舉例而言，在5’帽與起始密碼子之間不存在其他核苷酸。在一些實施例中，mRNA在5’帽與起始密碼子之間包括Kozak序列(闡述於下文中)，但不具有任何其他5’ UTR。在一些實施例中，mRNA不包括3’ UTR，舉例而言，在終止密碼子與聚A尾部之間不存在其他核苷酸。
在一些實施例中，mRNA包括Kozak序列。Kozak序列可影響轉譯起始及自mRNA轉譯之多肽之整體產率。Kozak序列包含可用作起始密碼子之甲硫胺酸密碼子。最小Kozak序列係NNNRUGN，其中下列各項中之至少一者係真實的：第一N係A或G及第二N係G。在核苷酸序列之背景中，R意指嘌呤(A或G)。在一些實施例中，Kozak序列係RNNRUGN、NNNRUGG、RNNRUGG、RNNAUGN、NNNAUGG或RNNAUGG。在一些實施例中，Kozak序列係具有零失配或在小寫字母位置具有最多一或兩個失配之rccRUGg。在一些實施例中，Kozak序列係具有零失配或在小寫字母位置具有最多一或兩個失配之rccAUGg。在一些實施例中，Kozak序列係具有零失配或在小寫字母位置具有最多一個、兩個或三個失配之gccRccAUGG (SEQ ID NO: 187之核苷酸4-13)。在一些實施例中，Kozak序列係具有零失配或在小寫字母位置具有最多一個、兩個、三個或四個失配之gccAccAUG。在一些實施例中，Kozak序列係GCCACCAUG。在一些實施例中，Kozak序列係具有零失配或在小寫字母位置具有最多一個、兩個、三個或四個失配之gccgccRccAUGG (SEQ ID NO: 187)。 8.   聚A尾部
在一些實施例中，多核苷酸係包括ORF之編碼所關注多肽之mRNA，且mRNA進一步包括聚腺苷酸化(聚A)尾部。在一些情況下，聚A尾部在聚A尾部內之一或多個位置「間雜」有一或多個非腺嘌呤核苷酸「錨」。聚A尾部可包括至少8個連續腺嘌呤核苷酸，但亦包括一或多個非腺嘌呤核苷酸。如本文中所使用，「非腺嘌呤核苷酸」係指不包括腺嘌呤之任何天然或非天然核苷酸。鳥嘌呤、胸腺嘧啶及胞嘧啶核苷酸係實例性非腺嘌呤核苷酸。因此，本文所闡述mRNA上之聚A尾部可包括位於編碼所關注多肽之核苷酸之3’處的連續腺嘌呤核苷酸。在一些情況下，mRNA上之聚A尾部包括位於編碼RNA引導之DNA結合劑或所關注序列之核苷酸之3’處的非連續腺嘌呤核苷酸，其中非腺嘌呤核苷酸與腺嘌呤核苷酸以規則或不規則間隔間雜排列。
在一些實施例中，聚A尾部編碼於用於活體外轉錄mRNA之質體中且變為轉錄物之一部分。編碼於質體中之聚A序列(亦即聚A序列中之連續腺嘌呤核苷酸之數量)可為非確切的，舉例而言，質體中之100聚A序列可能並不恰好在經轉錄mRNA中產生100聚A序列。在一些實施例中，聚A尾部並不編碼於質體中，且藉由PCR加尾或酶促加尾(例如)使用大腸桿菌(E. coli )聚(A)聚合酶來添加。
在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸經定位以中斷連續腺嘌呤核苷酸，從而聚(A)結合蛋白可結合至一段連續腺嘌呤核苷酸。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於至少8、9、10、11或12個連續腺嘌呤核苷酸之後。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於至少8-50個連續腺嘌呤核苷酸之後。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於至少8-100個連續腺嘌呤核苷酸之後。在一些實施例中，非腺嘌呤核苷酸位於一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個腺嘌呤核苷酸之後且隨後係至少8個連續腺嘌呤核苷酸。
本發明之聚A尾部可包括一個序列之連續腺嘌呤核苷酸，隨後係一或多個非腺嘌呤核苷酸，視情況隨後係其他腺嘌呤核苷酸。
在一些實施例中，聚A尾部包括或含有一個非腺嘌呤核苷酸或2-10個非腺嘌呤核苷酸之一個連續區段。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於至少8、9、10、11或12個連續腺嘌呤核苷酸之後。在一些情況下，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於至少8-50個連續腺嘌呤核苷酸之後。在一些實施例中，一或多個非腺嘌呤核苷酸位於至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個連續腺嘌呤核苷酸之後。
在一些實施例中，非腺嘌呤核苷酸係鳥嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶。在一些情況下，非腺嘌呤核苷酸係鳥嘌呤核苷酸。在一些實施例中，非腺嘌呤核苷酸係胞嘧啶核苷酸。在一些實施例中，非腺嘌呤核苷酸係胸腺嘧啶核苷酸。在一些情況下，在存在一種以上非腺嘌呤核苷酸之情形下，非腺嘌呤核苷酸可選自：a)鳥嘌呤及胸腺嘧啶核苷酸；b)鳥嘌呤及胞嘧啶核苷酸；c)胸腺嘧啶及胞嘧啶核苷酸；或d)鳥嘌呤、胸腺嘧啶及胞嘧啶核苷酸。包括非腺嘌呤核苷酸之實例性聚A尾部提供為SEQ ID NO: 188。 9.   經修飾核苷酸
在一些實施例中，包括編碼所關注多肽之ORF之核酸在一些或所有尿苷位置包括經修飾尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係在5位(例如)經鹵素或C1-C3烷氧基修飾之尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係在1位(例如)經C1-C3烷基修飾之假尿苷。經修飾尿苷可為(例如)假尿苷、N1-甲基-假尿苷、5-甲氧基尿苷、5-碘尿苷或其組合。在一些實施例中，經修飾尿苷係5-甲氧基尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係5-碘尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係假尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷。在一些實施例中，經修飾尿苷係假尿苷及N1-甲基-假尿苷之組合。在一些實施例中，經修飾尿苷係假尿苷及5-甲氧基尿苷之組合。在一些實施例中，經修飾尿苷係N1-甲基假尿苷及5-甲氧基尿苷之組合。在一些實施例中，經修飾尿苷係5-碘尿苷及N1-甲基-假尿苷之組合。在一些實施例中，經修飾尿苷係假尿苷及5-碘尿苷之組合。在一些實施例中，經修飾尿苷係5-碘尿苷及5-甲氧基尿苷之組合。
在一些實施例中，本發明多核苷酸中之至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之尿苷位置係經修飾尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置係經修飾尿苷，例如5-甲氧基尿苷、5-碘尿苷、N1-甲基假尿苷、假尿苷或其組合。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置係5-甲氧基尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置係假尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置係N1-甲基假尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置係5-碘尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置係5-甲氧基尿苷，且其餘位置係N1-甲基假尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之10%-25%、15-25%、25-35%、35-45%、45-55%、55-65%、65-75%、75-85%、85-95%或90-100%之尿苷位置係5-碘尿苷，且其餘位置係N1-甲基假尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之15%至45%、45%至55%、55%至65%、65%至75%、75%至85%、85%至95%或90%至100%之尿苷位置經經修飾尿苷取代，視情況其中經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之15%至45%、45%至55%、55%至65%、65%至75%、75%至85%、85%至95%或90%至100%之尿苷位置經N1-甲基-假尿苷取代。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之85%、90%、95%或100%之尿苷位置經N1-甲基-假尿苷取代。在一些實施例中，100%之尿苷經N1-甲基-假尿苷取代。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之15%至45%、45%至55%、55%至65%、65%至75%、75%至85%、85%至95%或90%至100%之尿苷位置經經修飾尿苷取代，視情況其中經修飾尿苷係假尿苷。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之15%至45%、45%至55%、55%至65%、65%至75%、75%至85%、85%至95%或90%至100%之尿苷位置經假尿苷取代。在一些實施例中，本發明多核苷酸中之85%、90%、95%或100%之尿苷位置經假尿苷取代。在一些實施例中，100%之尿苷經假尿苷取代。 10.  5’帽
在一些實施例中，本文所揭示之核酸(例如mRNA)包括5’帽，例如帽0、帽1或帽2。5’帽通常係經由5’-三磷酸酯連接至核酸中5’至3’鏈之第一核苷酸(亦即第一帽-近端核苷酸)之5’位之7-甲基鳥嘌呤核糖核苷酸(其可進一步經修飾，如下文例如針對ARCA所論述)。在帽0中，mRNA之第一及第二帽-近端核苷酸二者之核糖皆包括2’-羥基。在帽1中，mRNA之第一及第二轉錄核苷酸之核糖分別包括2’-甲氧基及2’-羥基。在帽2中，mRNA之第一及第二帽-近端核苷酸之核糖皆包括2’-甲氧基。例如參見Katibah等人(2014)Proc Natl Acad Sci USA 111(33):12025-30；Abbas等人(2017)Proc Natl Acad Sci USA 114(11):E2106-E2115。大部分內源性高級真核核酸(包含哺乳動物核酸，例如人類核酸)包括帽1或帽2。帽0及其他不同於帽1及帽2之帽結構可在哺乳動物(例如人類)中具有免疫原性，此乃因其由先天性免疫系統之組分(例如IFIT-1及IFIT-5)識別為「非自身」，此可升高細胞介素(包含I型干擾素)之含量。先天性免疫系統之組分(例如IFIT-1及IFIT-5)亦可與eIF4E競爭結合具有除帽1或帽2外之帽之核酸，從而潛在地抑制核酸轉譯。
可共轉錄性地包含帽。舉例而言，ARCA (抗-反向帽類似物；Thermo Fisher Scientific目錄編號：AM8045)係包括連接至鳥嘌呤核糖核苷酸之5’位之7-甲基鳥嘌呤3’-甲氧基-5’-三磷酸酯之帽類似物，其可在開始時活體外納入轉錄物中。ARCA產生帽0或帽0樣帽，其中第一帽-近端核苷酸之2’位係羥基。例如參見Stepinski等人(2001) 「Synthesis and properties of mRNAs containing the novel 「anti-reverse」 cap analogs 7-methyl(3'-O-methyl)GpppG and 7-methyl(3'deoxy)GpppG,」RNA 7: 1486-1495。ARCA結構展示於下文中。
Figure 02_image001
可使用CleanCapTM AG (m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG；TriLink Biotechnologies目錄編號：N-7113)或CleanCapTM GG (m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG；TriLink Biotechnologies目錄編號：N-7133)來共轉錄性地提供帽1結構。亦可自TriLink Biotechnologies分別以目錄編號：N-7413及N-7433獲得CleanCapTM AG及CleanCapTM GG之3’-O-甲基化形式。CleanCapTM AG結構展示於下文中。CleanCapTM 結構有時在本文中使用上文所列示目錄編號之最後三個數字來提及(舉例而言，「CleanCapTM 113」係用於TriLink Biotechnologies目錄編號N-7113)。
Figure 02_image003
或者，可在轉錄後將帽添加至RNA中。舉例而言，牛痘封端酶市面有售(New England Biolabs目錄編號：M2080S)且具有RNA三磷酸酯及鳥苷醯基轉移酶活性(由其D1亞單元提供)及鳥嘌呤甲基轉移酶(由其D12亞單元提供)。因此，可在S-腺苷甲硫胺酸及GTP存在下將7-甲基鳥嘌呤添加至RNA中以得到帽0。例如參見Guo, P.及Moss, B. (1990)Proc. Natl. Acad. Sci .USA 87, 4023-4027；Mao, X.及Shuman, S. (1994)J. Biol. Chem . 269, 24472-24479。關於帽及封端方式之其他論述，例如參見WO2017/053297及Ishikawa等人，Nucl. Acids. Symp. Ser . (2009) No. 53, 129-130。 11.  嚮導RNA
在一些實施例中，提供至少一種嚮導RNA與本文所揭示之多核苷酸(例如編碼RNA引導之DNA結合劑之多核苷酸)之組合。在一些實施例中，嚮導RNA提供為相對於多核苷酸之單獨分子。在一些實施例中，嚮導RNA提供為本文所揭示多核苷酸之一部分，例如UTR之一部分。在一些實施例中，至少一種嚮導RNA靶向TTR。
在一些實施例中，嚮導RNA包括經修飾sgRNA。sgRNA可經修飾以改良其活體內穩定性。在一些實施例中，sgRNA包括SEQ ID NO: 189中所展示之修飾模式，其中N係任一天然或非天然核苷酸，且其中全部N構成嚮導序列。修飾係如SEQ ID NO: 189中所展示，儘管使用嚮導之核苷酸取代N。亦即，儘管嚮導之核苷酸代替「N’」，但前三個核苷酸係2’OMe修飾且在第一及第二核苷酸、第二及第三核苷酸以及第三及第四核苷酸之間存在硫代磷酸酯鍵聯。 12.  脂質；調配物；遞送
在一些實施例中，將本文所闡述之多核苷酸調配於脂質奈米顆粒中或經由脂質奈米顆粒來投與；例如參見2017年10月5日公開之WO2017173054A1，其內容以全文引用方式併入本文中。可利用熟習此項技術者已知能夠將核苷酸遞送至個體之任一脂質奈米顆粒(LNP)來投與本文所闡述之多核苷酸，在一些實施例中視情況伴隨投與其他核酸組分(例如嚮導RNA)。在一些實施例中，將本文所闡述之多核苷酸(單獨或視情況伴有其他核酸組分)調配於脂質體、奈米顆粒、胞外體或微囊泡或經由該等形式來投與。乳液、微胞及懸浮液可為用於局域及/或局部遞送之適宜組合物。
本文揭示LNP核酸調配物之各種實施例。該等LNP調配物可包含生物可降解之可離子化脂質。調配物可包含(例如) (i) CCD脂質，例如胺脂質，視情況包含(ii)中性脂質、(iii)輔助脂質及(iv)隱形脂質(例如PEG脂質)中之一或多者。LNP調配物之一些實施例包含「胺脂質」以及輔助脂質、中性脂質及隱形脂質(例如PEG脂質)。「脂質奈米顆粒」意指包括複數個(亦即一個以上)藉由分子間力彼此物理締合之脂質分子之顆粒。
CCD脂質
用於將多核苷酸組分遞送至肝臟細胞之脂質組合物可包括CCD脂質或(例如)另一生物可降解脂質。
在一些實施例中，CCD脂質係脂質A，其係(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯酸3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)-2-((((3-(二乙基胺基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙酯((9Z,12Z)-3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino)propoxy)carbonyl)oxy)methyl)propyl octadeca-9,12-dienoate，亦稱為3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino)propoxy)carbonyl)oxy)methyl)propyl (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoate)。脂質A可繪示如下：
Figure 02_image005
。
可根據WO2015/095340 (例如 pp.84-86)來合成脂質A。
在一些實施例中，CCD脂質係脂質B，其係((5-((二甲基胺基)甲基)-1,3-伸苯基)雙(氧基))雙(辛烷-8,1-二基)雙(癸酸酯)，亦稱為雙(癸酸)((5-((二甲基胺基)甲基)-1,3-伸苯基)雙(氧基))雙(辛烷-8,1-二基)酯。脂質B可繪示如下：
Figure 02_image007
。 可根據WO2014/136086 (例如pp.107-09)來合成脂質B。 在一些實施例中，CCD脂質係脂質C，其係(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八-9,12-二烯酸)2-((4-(((3-(二甲基胺基)丙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙烷-1,3-二基酯。 脂質C可繪示如下：
Figure 02_image009
。
在一些實施例中，CCD脂質係脂質D，其係3-辛基十一烷酸3-(((3-(二甲基胺基)丙氧基)羰基)氧基)-13-(辛醯基氧基)十三烷基酯。
脂質D可繪示如下：
Figure 02_image011
。
可根據WO2015/095340來合成脂質C及脂質D。
CCD脂質亦可等同於脂質A、脂質B、脂質C或脂質D。在某些實施例中，CCD脂質等同於脂質A、等同於脂質B、等同於脂質C或等同於脂質D。
胺脂質
在一些實施例中，用於遞送生物活性劑之LNP組合物包括「胺脂質」，胺脂質定義為脂質A或其等效物(包含脂質A之縮醛類似物)。
在一些實施例中，胺脂質係脂質A，其係(9Z,12Z)-十八-9,12-二烯酸3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)-2-((((3-(二乙基胺基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙酯((9Z,12Z)-3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino)propoxy)carbonyl)oxy)methyl)propyl octadeca-9,12-dienoate，亦稱為3-((4,4-bis(octyloxy)butanoyl)oxy)-2-((((3-(diethylamino)propoxy)carbonyl)oxy)methyl)propyl (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoate)。脂質A可繪示如下：
Figure 02_image013
。
可根據WO2015/095340 (例如 pp.84-86)來合成脂質A。在某些實施例中，胺脂質係等同於脂質A。
在某些實施例中，胺脂質係脂質A類似物。在某些實施例中，脂質A類似物係脂質A之縮醛類似物。在特定LNP組合物中，縮醛類似物係C4-C12縮醛類似物。在一些實施例中，縮醛類似物係C5-C12縮醛類似物。在其他實施例中，縮醛類似物係C5-C10縮醛類似物。在其他實施例中，縮醛類似物係選自C4、C5、C6、C7、C9、C10、C11及C12縮醛類似物。
適用於本文所闡述LNP中之胺脂質在活體內生物可降解。胺脂質具有低毒性(例如在動物模型中耐受且在大於或等於10 mg/kg之量下無不良效應)。在某些實施例中，包括胺脂質之LNP包含其中至少75%之胺脂質在8、10、12、24或48小時或3、4、5、6、7或10天內自血漿清除者。在某些實施例中，包括胺脂質之LNP包含其中至少50%之多核苷酸或其他組分在8、10、12、24或48小時或3、4、5、6、7或10天內自血漿清除者。在某些實施例中，包括胺脂質之LNP包含其中至少50%之LNP在8、10、12、24或48小時或3、4、5、6、7或10天內自血漿清除者，例如藉由量測脂質(例如胺脂質)、多核苷酸(例如mRNA)或其他組分。在某些實施例中，量測脂質囊封之多核苷酸與無脂質之多核苷酸或LNP之其他核酸組分。
可如文獻中所闡述來量測脂質清除。參見Maier, M.A.等人，Biodegradable Lipids Enabling Rapidly Eliminated Lipid Nanoparticles for Systemic Delivery of RNAi Therapeutics. Mol. Ther. 2013, 21(8), 1570-78 (「Maier」)。舉例而言，在Maier中，藉由靜脈內濃注將含有螢光素酶靶向siRNA之LNP-siRNA系統以0.3 mg/kg經由側向尾部靜脈投與6至8週齡雄性C57Bl/6小鼠。在投藥後0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24、48、96及168小時收集血液、肝及脾之試樣。在組織收集之前向小鼠灌注鹽水且處理血樣以獲得血漿。藉由LC-MS處理所有試樣且加以分析。另外，Maier闡述用於評價在投與LNP-siRNA調配物之後之毒性之程序。舉例而言，以0、1、3、5及10 mg/kg (5動物/組)經由單一靜脈內濃注在5 mL/kg之劑量體積向雄性斯普拉-道來大鼠(Sprague-Dawley rat)投與螢光素酶靶向siRNA。在24小時之後，自清醒動物之頸靜脈獲得約1 mL血液且分離血清。在投藥後72小時，對所有動物實施安樂死以供驗屍。評價臨床體徵、體重、血清化學、器官重量及組織病理學。儘管Maier闡述了評價siRNA-LNP調配物之方法，但可應用該等方法以評價投與本發明LNP組合物之清除、藥物動力學及毒性。
胺脂質可增加清除速率。在一些實施例中，清除速率係脂質清除速率，例如自血液、血清或血漿清除胺脂質之速率。在一些實施例中，清除速率係多核苷酸清除速率，例如自血液、血清或血漿清除多核苷酸之速率。在一些實施例中，清除速率係自血液、血清或血漿清除LNP之速率。在一些實施例中，清除速率係自組織(例如肝組織或脾組織)清除LNP之速率。在某些實施例中，高清除速率會產生安全性且並無實質性不良效應。胺脂質可減少循環及組織中之LNP累積。在一些實施例中，循環及組織中之LNP累積減少會產生安全性且並無實質性不良效應。
本發明胺脂質可端視其所處之介質pH發生離子化。舉例而言，在弱酸性介質中，胺脂質可發生質子化且由此具有正電荷。與之相反，在弱鹼性介質(例如pH為大約7.35之血液)中，胺脂質可不發生質子化且由此不具有電荷。在一些實施例中，本發明胺脂質可在至少約9之pH下發生質子化。在一些實施例中，本發明胺脂質可在至少約9之pH下發生質子化。在一些實施例中，本發明胺脂質可在至少約10之pH下發生質子化。
胺脂質帶電荷之能力與其固有pKa相關。舉例而言，本發明胺脂質可各自獨立地具有在約5.8至約6.2範圍內之pKa。舉例而言，本發明胺脂質可各自獨立地具有在約5.8至約6.5範圍內之pKa。此可較為有利，此乃因已發現，pKa介於約5.1至約7.4之間之陽離子脂質可在活體內將負荷有效遞送至(例如)肝。另外，已發現，pKa介於約5.3至約6.4之間之陽離子脂質可在活體內有效遞送至(例如)腫瘤。例如參見WO2014/136086。
其他脂質
適用於本發明脂質組合物中之「中性脂質」包含(例如)多種中性、不帶電或兩性離子脂質。適用於本發明中之中性磷脂之實例包含(但不限於) 5-十七烷基苯-1,3-二醇(間苯二酚)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、磷脂醯膽鹼(PLPC)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DAPC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、卵磷脂醯膽鹼(EPC)、二月桂醯基磷脂醯膽鹼(DLPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、1-肉豆蔻醯基-2-棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(MPPC)、1-棕櫚醯基-2-肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(PMPC)、1-棕櫚醯基-2-硬脂醯基磷脂醯膽鹼(PSPC)、1,2-二花生醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DBPC)、1-硬脂醯基-2-棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(SPPC)、1,2-二(二十烯醯基)-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DEPC)、棕櫚醯基油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、溶血磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二亞麻油醯氧基磷脂醯膽鹼二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(DMPE)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、棕櫚醯基油醯磷脂醯乙醇胺(POPE)、溶血磷脂醯乙醇胺及其組合。在一實施例中，中性磷脂可選自由二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)及二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(DMPE)組成之群。在另一實施例中，中性磷脂可為二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)。
「輔助脂質」包含類固醇、固醇及烷基間苯二酚。適用於本發明中之輔助脂質包含(但不限於)膽固醇、5-十七烷基間苯二酚及膽固醇半琥珀酸酯。在一實施例中，輔助脂質可為膽固醇。在一實施例中，輔助脂質可為膽固醇半琥珀酸酯。
「隱形脂質」係改變奈米顆粒可於活體內(例如在血液中)存在之時間長度之脂質。隱形脂質可因(例如)減小顆粒聚集且控制粒度而有助於調配製程。本文所用之隱形脂質可調節LNP之藥物動力學性質。適用於本發明脂質組合物中之隱形脂質包含(但不限於)具有連接至脂質部分之親水性頭基之隱形脂質。適用於本發明之脂質組合物中之隱形脂質及關於該等脂質之生物化學的資訊可參見Romberg等人，Pharmaceutical Research，第25卷，第1期，2008, pg.55-71及Hoekstra等人，Biochimica et Biophysica Acta 1660 (2004) 41-52。其他適宜PEG脂質揭示於(例如) WO 2006/007712中。
在一實施例中，隱形脂質之親水性頭基包括選自基於PEG之聚合物之聚合物部分。隱形脂質可包括脂質部分。在一些實施例中，隱形脂質係PEG脂質。
在一實施例中，隱形脂質包括選自基於PEG (有時稱為聚(環氧乙烷)、聚(噁唑啉)、聚(乙烯醇)、聚(甘油)、聚(N-乙烯基吡咯啶酮)、聚胺基酸及聚[N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺]之聚合物之聚合物部分。
在一實施例中，PEG脂質包括基於PEG (有時稱為聚(環氧乙烷))之聚合物部分。
PEG脂質進一步包括脂質部分。在一些實施例中，脂質部分可衍生自二醯基甘油或二醯基甘油醯胺(包含含有二烷基甘油或二烷基甘油醯胺基團者，該基團具有獨立地包括約C4至約C40飽和或不飽和碳原子之烷基鏈長度，其中該鏈可包括一或多個官能基(例如醯胺或酯))。在一些實施例中，烷基鏈長度包括約C10至C20。二烷基甘油或二烷基甘油醯胺基團可進一步包括一或多個經取代烷基。鏈長度可對稱或不對稱。
除非另外指示，否則本文所用之術語「PEG」意指任一聚乙二醇或其他聚伸烷基醚聚合物。在一實施例中，PEG係乙二醇或環氧乙烷之視情況經取代之直鏈或具支鏈聚合物。在一實施例中，PEG未經取代。在一實施例中，PEG (例如)經一或多個烷基、烷氧基、醯基、羥基或芳基取代。在一實施例中，該術語包含諸如PEG-聚胺基甲酸酯或PEG-聚丙烯等PEG共聚物(例如參見J. Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry: biotechnical and biomedical applications (1992))；在另一實施例中，該術語不包含PEG共聚物。在一實施例中，PEG之分子量為約130至約50,000，在子實施例中為約150至約30,000，在子實施例中為約150至約20,000，在子實施例中為約150至約15,000，在子實施例中為約150至約10,000，在子實施例中為約150至約6,000，在子實施例中為約150至約5,000，在子實施例中為約150至約4,000，在子實施例中為約150至約3,000，在子實施例中為約300至約3,000，在子實施例中為約1,000至約3,000，且在子實施例中為約1,500至約2,500。
在某些實施例中，PEG (例如偶聯至脂質部分或脂質(例如隱形脂質))係「PEG-2K」 (亦稱為「PEG 2000」)，其具有約2,000道爾頓之平均分子量。PEG-2K在本文中由下式(I)代表，其中n為45，此意味著數量平均聚合度包括約45個亞單元。然而，可使用業內已知之其他PEG實施例，包含(例如)數量平均聚合度包括約23個亞單元(n = 23)及/或68個亞單元(n = 68)者。在一些實施例中，n可介於約30至約60之間。在一些實施例中，n可介於約35至約55之間。在一些實施例中，n可介於約40至約50之間。在一些實施例中，n可介於約42至約48之間。在一些實施例中，n可為45。在一些實施例中，R可選自H、經取代烷基及未取代烷基。在一些實施例中，R可為未取代烷基。在一些實施例中，R可為甲基。
在本文所闡述實施例中之任一者中，PEG脂質可選自PEG-二月桂醯基甘油、PEG-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG) (目錄編號：GM-020，來自NOF, Tokyo，日本)、PEG-二棕櫚醯基甘油、PEG-二硬脂醯基甘油(PEG-DSPE) (目錄編號：DSPE-020CN，NOF, Tokyo，日本)、PEG-二月桂醯基甘油醯胺、PEG-二肉豆蔻醯基甘油醯胺、PEG-二棕櫚醯基甘油醯胺及PEG-二硬脂醯基甘油醯胺、PEG-膽固醇(1-[8'-(膽甾基-5-烯-3[β]-氧基)甲醯胺基-3',6'-二氧雜辛烷基]胺甲醯基-[Ω]-甲基-聚(乙二醇)、PEG-DMB (3,4-雙十四烷氧基苄基-[Ω]-甲基-聚(乙二醇)醚)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DMG)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSPE) (目錄編號：880120C，來自Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, USA)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油、甲氧基聚乙二醇(PEG2k-DSG；GS-020，NOF Tokyo，日本)、聚(乙二醇)-2000-二甲基丙烯酸酯(PEG2k-DMA)及1,2-二硬脂基氧基丙基-3-胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSA)。在一實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMG。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSG。在一實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSPE。在一實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMA。在一實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C-DMA。在一實施例中，PEG脂質可為WO2016/010840 (段落[00240]至[00244])中所揭示之化合物S027。在一實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSA。在一實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C11。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C14。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C16。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C18。
LNP調配物
LNP可含有可離子化脂質，例如適於遞送核酸負荷之生物可降解可離子化脂質。LNP可含有(i)用於囊封及用於胞內體逃逸之CCD或胺脂質。該等組分可視情況與以下中之一或多者組合包含於LNP中：(ii)用於穩定化之中性脂質；(iii)亦用於穩定化之輔助脂質；及(iv)隱形脂質，例如PEG脂質。
在一些實施例中，LNP組合物可包括一或多種包含多核苷酸之核酸組分，該多核苷酸包括編碼所關注多肽(例如本文所闡述之任一者，例如RNA引導之DNA結合劑)之開放閱讀框(ORF)。在一些實施例中，核酸組分可包含包括編碼所關注多肽(例如RNA引導之DNA結合劑，例如種類2 Cas核酸酶)之開放閱讀框(ORF)之mRNA及視情況gRNA。在某些實施例中，LNP組合物可包括核酸組分、胺脂質、輔助脂質、中性脂質及隱形脂質。在某些LNP組合物中，輔助脂質係膽固醇。在其他組合物中，中性脂質係DSPC。在其他實施例中，隱形脂質係PEG2k-DMG或PEG2k-C11。在某些實施例中，LNP組合物包括脂質A或脂質A等效物；輔助脂質；中性脂質；隱形脂質；及核酸組分。在某些組合物中，胺脂質係脂質A。在某些組合物中，胺脂質係脂質A或其縮醛類似物；輔助脂質係膽固醇；中性脂質係DSPC；且隱形脂質係PEG2k-DMG。
在某些實施例中，核酸組分包含包括編碼所關注多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸。在一些實施例中，核酸組分包含RNA引導之DNA結合劑(例如Cas核酸酶、種類2 Cas核酸酶或Cas9)。在一些實施例中，核酸組分包含gRNA或編碼gRNA之核酸。在一些實施例中，核酸組分包含mRNA及gRNA之組合。在一實施例中，LNP組合物可包括脂質A或其等效物。在一些態樣中，胺脂質係脂質A。在一些態樣中，胺脂質係脂質A等效物(例如脂質A類似物)。在某些態樣中，胺脂質係脂質A之縮醛類似物。在各個實施例中，LNP組合物包括胺脂質、中性脂質、輔助脂質及PEG脂質。在某些實施例中，輔助脂質係膽固醇。在某些實施例中，中性脂質係DSPC。在一些實施例中，PEG脂質係PEG2k-DMG。在一些實施例中，LNP組合物可包括脂質A、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。在一些實施例中，LNP組合物包括胺脂質、DSPC、膽固醇及PEG脂質。在一些實施例中，LNP組合物包括含有DMG之PEG脂質。在某些實施例中，胺脂質係選自脂質A及脂質A等效物(包含脂質A之縮醛類似物)。在其他實施例中，LNP組合物包括脂質A、膽固醇、DSPC及PEG2k-DMG。
本發明實施例亦提供根據胺脂質之帶正電胺基(N)及擬囊封核酸之帶負電磷酸基(P)之間之莫耳比率所闡述的脂質組合物。此可在數學上由方程式N/P來表示。在一些實施例中，LNP組合物可包括含有胺脂質、輔助脂質、中性脂質及輔助脂質之脂質組分；及核酸組分，其中N/P比率為約3至10。在一些實施例中，LNP組合物可包括含有胺脂質、輔助脂質、中性脂質及輔助脂質之脂質組分；及RNA組分，其中N/P比率為約3至10。在一實施例中，N/P比率可為約5-7。在一實施例中，N/P比率可為約4.5-8。在一實施例中，N/P比率可為約6。在一實施例中，N/P比率可為6 ±1。在一實施例中，N/P比率可為約6 ± 0.5。在一些實施例中，N/P比率為目標N/P比率之±30%、±25%、±20%、±15%、±10%、±5%或±2.5%。在某些實施例中，LNP批次間可變性小於15%、小於10%或小於5%。在某些實施例中，LNP組合物包含包括編碼所關注多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸及其他核酸組分(例如gRNA)。在某些實施例中，LNP組合物包含約25:1至約1:25比率之多核苷酸組分與其他核酸組分。在某些實施例中，LNP調配物包含約10:1至約1:10比率之多核苷酸組分與其他核酸組分。在某些實施例中，LNP調配物包含約8:1至約1:8比率之多核苷酸組分與其他核酸組分。如本文所量測，該等比率係以重量計。在一些實施例中，比率範圍為約5:1至約1:5、約3:1至1:3、約2:1至1:2、約5:1至1:2、約5:1至1:1、約3:1至1:2、約3:1至1:1、約3:1、約2:1至1:1。該比率可為約25:1、10:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5、1:10或1:25。
視情況，本文所揭示之LNP組合物可包含模板核酸。模板核酸可與編碼Cas核酸酶之mRNA(例如種類2 Cas核酸酶mRNA)共調配。在一些實施例中，模板核酸可與嚮導RNA共調配。在一些實施例中，模板核酸可與編碼Cas核酸酶之mRNA及嚮導RNA二者共調配。在一些實施例中，模板核酸可與編碼Cas核酸酶之mRNA或嚮導RNA單獨調配。模板核酸可與LNP組合物一起遞送，或分開遞送。在一些實施例中，端視期望修復機制，模板核酸可為單鏈或雙鏈。模板可具有與靶DNA或毗鄰靶DNA之序列同源之區域。
本文所闡述之LNP及LNP調配物中之任一者適於單獨或與其他核酸組分一起遞送本文所揭示之多核苷酸。在一些實施例中，涵蓋包括核酸組分及脂質組分之LNP組合物，其中脂質組分包括胺脂質、中性脂質、輔助脂質及隱形脂質；且其中核酸對脂質(N/P)比率為約1-10。在前述實施例中之任一者中，多核苷酸可為mRNA。
在一些實施例中，藉由混合核酸水溶液與基於有機溶劑之脂質溶液(例如100%乙醇)來形成LNP。適宜溶液或溶劑包含或可含有：水、PBS、Tris緩衝液、NaCl、檸檬酸鹽緩衝液、乙醇、氯仿、二乙醚、環己烷、四氫呋喃、甲醇、異丙醇。可使用(例如)用於活體內投與LNP之醫藥上可接受之緩衝液。在某些實施例中，使用緩衝液來將包括LNP之組合物之pH維持於pH 6.5或高於pH 6.5。在某些實施例中，使用緩衝液來將包括LNP之組合物之pH維持於pH 7.0或高於pH 7.0。在某些實施例中，組合物具有介於約7.2至約7.7之間之pH。在其他實施例中，組合物具有介於約7.3至約7.7之間或介於約7.4至約7.6之間之pH。在其他實施例中，組合物具有約7.2、7.3、7.4、7.5、7.6或7.7之pH。可使用微型pH探針量測組合物之pH。在某些實施例中，在組合物中包含冷凍保護劑。冷凍保護劑之非限制性實例包含蔗糖、海藻糖、甘油、DMSO及乙二醇。實例性組合物可包含最多10%之冷凍保護劑(例如蔗糖)。在某些實施例中，LNP組合物可包含約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%之冷凍保護劑。在某些實施例中，LNP組合物可包含約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%之蔗糖。在一些實施例中，LNP組合物可包含緩衝液。在一些實施例中，緩衝液可包括磷酸鹽緩衝液(PBS)、Tris緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及其混合物。在某些實例性實施例中，緩衝液包括NaCl。在某些實施例中，不包含NaCl。NaCl之實例性量可介於約20 mM至約45 mM之間。NaCl之實例性量可介於約40 mM至約50 mM之間。在一些實施例中，NaCl之量為約45 mM。在一些實施例中，緩衝液係Tris緩衝液。Tris之實例性量可介於約20 mM至約60 mM之間。Tris之實例性量可介於約40 mM至約60 mM之間。在一些實施例中，Tris之量為約50 mM。在一些實施例中，緩衝液包括NaCl及Tris。LNP組合物之某些實例性實施例含有於Tris緩衝液中之5%蔗糖及45 mM NaCl。在其他實例性實施例中，組合物含有約5% w/v之量之蔗糖、約45 mM NaCl及約50 mM Tris (pH 7.5)。鹽、緩衝液及冷凍保護劑之量可有所變化，從而維持整體調配物之滲透壓。舉例而言，最終滲透壓可維持於小於450 mOsm/L。在其他實施例中，滲透壓介於350 mOsm/L與250 mOsm/L之間。某些實施例具有300 +/- 20 mOsm/L之最終滲透壓。
在一些實施例中，使用微流體混合、T-混合或交叉混合。在某些態樣中，流速、接頭大小、接頭幾何結構、接頭形狀、管徑、溶液及/或核酸及脂質濃度可有所變化。可(例如)經由透析、切向流過濾或層析來濃縮或純化LNP或LNP組合物。LNP可(例如)儲存為懸浮液、乳液或凍乾粉末。在一些實施例中，將LNP組合物儲存於2-8℃下，在某些態樣中，將LNP組合物儲存於室溫下。在其他實施例中，將LNP組合物冷凍儲存於(例如) -20℃或-80℃下。在其他實施例中，將LNP組合物儲存於介於約0℃至約-80℃之間之溫度下。可於使用之前(例如)在冰上、在4℃下、在室溫下或在25℃下使冷凍LNP組合物解凍。冷凍LNP組合物可維持於各種溫度(例如在冰上、在4℃下、在室溫下、在25℃下或在37℃下)。
在一些實施例中，LNP組合物具有大於約80%之囊封率。在一些實施例中，LNP組合物具有小於約120 nm之粒度。在一些實施例中，LNP組合物具有小於約0.2之pdi。在一些實施例中，存在該等特徵中之至少兩者。在一些實施例中，存在該三個特徵中之每一者。測定該等參數之分析方法論述於下文之一般試劑及方法部分中。
在一些實施例中，與本文所揭示之多核苷酸締合之LNP係用於製備藥劑。
電穿孔亦係用於遞送核酸組分之熟知方式，且可使用任一電穿孔方法來遞送本文所揭示之任一核酸組分。在一些實施例中，可使用電穿孔來遞送多核苷酸及一或多種可選核酸組分。
在一些實施例中，提供將本文所揭示之多核苷酸遞送至離體細胞之方法，其中多核苷酸與LNP締合或不與LNP締合。在一些實施例中，多核苷酸/LNP或多核苷酸亦與一或多種可選核酸組分締合。
在一些實施例中，提供包括本發明多核苷酸之醫藥調配物。在一些實施例中，提供包括至少一種脂質之醫藥調配物，例如包括本發明多核苷酸之LNP。可使用適於遞送多核苷酸之任一LNP，例如上文所闡述者；其他實例性LNP闡述於2017年10月5日公開之WO2017173054A1中。醫藥調配物可進一步包括醫藥上可接受之載劑(例如水或緩衝液)。醫藥調配物可進一步包括一或多種醫藥上可接受之賦形劑，例如穩定劑、防腐劑、增積劑或諸如此類。醫藥調配物可進一步包括一或多種醫藥上可接受之鹽(例如氯化鈉)。在一些實施例中，醫藥調配物經調配用於靜脈內投與。在一些實施例中，醫藥調配物經調配用於遞送至肝循環中。 B.   ORF效能之測定
在多肽與靶功能或系統之其他組分一起表現時，可(例如)使用業內公認為可檢測特定多肽之存在、表現含量或活性之任一方式來測定包括編碼所關注多肽之ORF之多核苷酸的效能，例如藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)、其他免疫學方法、西方印漬(Western blot)、液相層析-質譜術(LC-MS)、FACS分析或本文所闡述之其他分析；或測定生物試樣(例如細胞溶解物或提取物、條件化培養基、全血、血清、血漿、尿或組織)中之酶促活性程度之方法，例如活體外活性分析。本文所闡述各種所編碼多肽之活性之實例性分析包含以下各項之分析：苯丙胺酸羥基酶酶促活性；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶酶促活性；富馬醯乙醯乙酸水解酶酶促活性；葡萄糖基神經醯胺酶β酶促活性；α半乳糖苷酶酶促活性；轉甲狀腺素；甘油醛-3-磷酸去氫酶酶促活性；絲胺酸蛋白酶抑制；神經傳遞質結合(例如GABA結合)。在一些實施例中，基於活體外模型來測定包括編碼所關注多肽之ORF之多核苷酸之效能。 1.   編碼RNA引導之DNA結合劑之ORF之效能的測定
在一些實施例中，在與RNP之其他組分(例如至少一種gRNA，例如靶向TTR之gRNA)一起表現時，測定mRNA之效能。
具有裂解酶活性之RNA引導之DNA結合劑可引起DNA中之雙鏈斷裂。非同源性末端接合(NHEJ)係其中經由再連接斷裂端來修復DNA中之雙鏈斷裂(DSB)之過程，其可產生呈插入/缺失(插入缺失)突變形式之誤差。DSB之DNA端通常經受酶促處理，從而在再接合末端之前在一或兩條鏈處添加或去除核苷酸。再接合前之該等添加或去除使得在DNA序列中於NHEJ修復位點處存在插入或缺失(插入缺失)突變。許多由插入缺失所致之突變改變了閱讀框或引入過早終止密碼子，且由此產生非功能蛋白。
在一些實施例中，基於活體外模型來測定編碼核酸酶之mRNA之效能。在一些實施例中，活體外模型係HEK293細胞。在一些實施例中，活體外模型係HUH7人類肝癌細胞。在一些實施例中，活體外模型係原代肝細胞，例如原代人類或小鼠肝細胞。
在一些實施例中，藉由TTR 之編輯百分比量測RNA效能。用於測定編輯百分比之實例性程序在下文實例中給出。在一些實施例中，將TTR 之編輯百分比與在mRNA包括具有未修飾尿苷之SEQ ID NO: 2或3之ORF且其他皆相同時所獲得的編輯百分比進行比較。
在一些實施例中，藉由量測蛋白質表現含量(例如藉由MSD技術)或藉由量化連接至蛋白質之可檢測標記物來測定mRNA效能。在一些實施例中，在投與包括mRNA及靶向TTR之gRNA (例如SEQ ID NO: 4)之LNP後使用小鼠中之血清TTR濃度來測定mRNA效能。血清TTR濃度可以絕對值形式或以相對於假處理對照之敲低%來表示。在一些實施例中，在投與包括mRNA及靶向TTR之gRNA (例如SEQ ID NO: 4)之LNP後使用小鼠肝中之編輯百分比來測定mRNA效能。在一些實施例中，有效量能夠達成血清TTR之至少50%編輯或50%敲低。實例性有效量在0.1 mg/kg (mpk)至10 mg/kg範圍內，例如0.1 mpk至0.3 mpk、0.3 mpk至0.5 mpk、0.5 mpk至1 mpk、1 mpk至2 mpk、2 mpk至3 mpk、3 mpk至5 mpk、5 mpk至10 mpk或0.1 mpk、0.2 mpk、0.3 mpk、0.5 mpk、1 mpk、2 mpk、3 mpk、5 mpk或10 mpk。
在一些實施例中，檢測靶DNA中之基因編輯事件(例如形成插入/缺失(「插入缺失」)突變及同源定向修復(HDR)事件)利用使用加標籤引子之線性擴增且分離加標籤擴增產物(在下文中稱為「LAM-PCR」或「線性擴增(LA)」方法，如WO2018/067447或Schmidt等人，Nature Methods 4:1051-1057 (2007)中所闡述)，或利用如下文所闡述之次世代測序(「NGS」；例如使用Illumina NGS平臺)或業內已知檢測插入缺失突變之其他方法。
舉例而言，為定量測定基因體中之靶位置之編輯效率，在NGS方法中，分離基因體DNA且利用深度測序來鑑別藉由基因編輯引入之插入及缺失之存在。在靶位點(例如TTR)附近設計PCR引子，且擴增所關注基因體區域。根據製造商方案(Illumina)實施額外PCR以添加測序所需之化學物質。在Illumina MiSeq儀器上對擴增子進行測序。在消除具有低品質評分者之後，將讀數與參考基因體(例如mm10)進行比對。將含有讀數之所得檔案映射至參考基因體(BAM檔案)，其中選擇與所關注靶區域重疊之讀數且計算野生型讀取數與含有插入、取代或缺失之讀取數。編輯百分比(例如「編輯效率」或「編輯百分數」)定義為具有插入或缺失之序列讀數之總數除以序列讀數(包含野生型)之總數。 C.   實例性用途、方法及治療
在一些實施例中，多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係用於(例如)靶基因之基因療法中。在一些實施例中，多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係用於基因體編輯(例如靶基因編輯)，其中多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。在一些實施例中，本文所揭示編碼所關注多肽之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係用於在異源性細胞(例如人類細胞或小鼠細胞)中表現所關注多肽。在一些實施例中，多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係用於修飾靶基因(例如改變其序列或表觀遺傳狀態)，其中多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。在一些實施例中，多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係用於誘導靶基因內之雙鏈斷裂(DSB)。在一些實施例中，多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係用於誘導靶基因內之插入缺失。在一些實施例中，提供本文所揭示之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物之用途，其用以製備用於基因體編輯(例如靶基因編輯)之藥劑，其中多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。在一些實施例中，提供本文所揭示編碼所關注多肽之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物之用途，其用以製備用於在異源性細胞(例如人類細胞或小鼠細胞)中表現所關注多肽或增加所關注多肽之表現之藥劑。在一些實施例中，提供本文所揭示之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物之用途，其用以製備用於修飾靶基因(例如改變其序列或表觀遺傳狀態)之藥劑。在一些實施例中，提供本文所揭示之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物之用途，其應以製備用於誘導靶基因內之雙鏈斷裂(DSB)之藥劑。在一些實施例中，提供本文所揭示之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物之用途，其用以製備用於誘導靶基因內之插入缺失之藥劑。
在一些實施例中，靶基因係轉基因。在一些實施例中，靶基因係內源性基因。靶基因可位於個體(例如哺乳動物，例如人類)中。在一些實施例中，靶基因位於器官(例如肝，例如哺乳動物肝，例如人類肝)中。在一些實施例中，靶基因位於肝臟細胞(例如哺乳動物肝臟細胞，例如人類肝臟細胞)中。在一些實施例中，靶基因位於肝細胞(例如哺乳動物肝細胞，例如人類肝細胞)中。在一些實施例中，肝臟細胞或肝細胞係原位細胞。在一些實施例中，舉例而言，在培養物中(例如在一級培養物中)分離肝臟細胞或肝細胞。
亦提供對應於本文所揭示用途之方法，其包括向個體投與本文所揭示之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物，或使細胞(例如上文所闡述者)與本文所揭示之多核苷酸、LNP或醫藥組合物接觸以(例如)表現所關注多肽或增加所關注多肽(例如)在異源性細胞(例如人類細胞或小鼠細胞)中之表現。
在一些實施例中，多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係用於療法中或用於治療諸如以下等疾病：與TTR有關之類澱粉變性(ATTR)或α-1抗胰蛋白酶病症；苯丙酮尿(PKU)或苯丙胺酸羥基酶缺陷；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶(OTC)缺陷或高血胺症；葡萄糖基神經醯胺酶缺陷或腦醣苷沉著病或高雪氏病(Gaucher disease)；α-半乳糖苷酶A (GLA)缺陷或法布裡病(Fabry disease)；富馬醯乙醯乙酸酶(FAH)缺陷或I型酪胺酸血症。在一些情況下，疾病與所關注ORF或多肽有關。在一些實施例中，提供本文所揭示之多核苷酸(例如於本文所提供之組合物中)之用途，其用以製備(例如)用於治療患有以下疾病之個體之藥劑：與TTR有關之類澱粉變性(ATTR)；α-1抗胰蛋白酶病症；苯丙酮尿(PKU)或苯丙胺酸羥基酶缺陷；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶(OTC)缺陷或高血胺症；葡萄糖基神經醯胺酶缺陷或腦醣苷沉著病或高雪氏病；α-半乳糖苷酶A (GLA)缺陷或法布裡病；富馬醯乙醯乙酸酶(FAH)缺陷或I型酪胺酸血症。
在一些實施例中，經靜脈內投與多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物以用於上文關於 生物體、器官或原位細胞所論述之任一用途。在一些實施例中，以在0.01 mg/kg (mpk)至10 mg/kg範圍內之劑量(例如0.01 mpk至0.1 mpk、0.1 mpk至0.3 mpk、0.3 mpk至0.5 mpk、0.5 mpk至1 mpk、1 mpk至2 mpk、2 mpk至3 mpk、3 mpk至5 mpk、5 mpk至10 mpk或0.1 mpk、0.2 mpk、0.3 mpk、0.5 mpk、1 mpk、2 mpk、3 mpk、5 mpk或10 mpk)投與多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物。
在涉及個體之前述實施例中之任一者中，個體可為哺乳動物。在涉及個體之前述實施例中之任一者中，個體可為人類。在涉及個體之前述實施例中之任一者中，個體可為牛、豬、猴、綿羊、狗、貓、魚或家禽。
在一些實施例中，本文所揭示之多核苷酸、表現構築體、組合物、脂質奈米顆粒(LNP)或醫藥組合物係經靜脈內投與或用於靜脈內投與。在一些實施例中，將本文所揭示之多核苷酸、LNP或醫藥組合物投與肝循環中或用於投與肝循環中。
在一些實施例中，本文所揭示之多核苷酸、LNP或醫藥組合物之單一投與足以敲低靶基因產物之表現。在一些實施例中，本文所揭示之多核苷酸、LNP或醫藥組合物之單一投與足以敲除靶基因產物之表現。在其他實施例中， 本文所揭示之多核苷酸、LNP或醫藥組合物之一個以上投與可經由累積效應有益於最大化編輯、修飾、插入缺失形成、DSB形成或諸如此類。
在一些實施例中，使用本文所揭示之多核苷酸、LNP或醫藥組合物之治療效能可見於遞送後1年、2年、3年、4年、5年或10年。
在一些實施例中，治療減緩或終止了疾病進展。
在一些實施例中，治療可改良、穩定器官(例如肝)疾病中之器官功能或症狀或減緩其變化。
在一些實施例中，藉由增加之個體存活時間來量測治療效能。 D.   實例性DNA分子、載體、表現構築體、宿主細胞及產生方法
在某些實施例中，本發明提供包括編碼ORF (編碼所關注多肽)之序列之DNA分子。在一些實施例中，除ORF序列序列外，DNA分子亦進一步包括不編碼多肽之核酸。不編碼多肽之核酸包含(但不限於)啟動子、增強子、調控序列及編碼嚮導RNA之核酸。
在一些實施例中，DNA分子進一步包括編碼crRNA、trRNA或crRNA及trRNA之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼crRNA、trRNA或crRNA及trRNA之核苷酸序列包括側接有來自天然CRISPR/Cas系統之全部或一部分重複序列之嚮導序列或由其組成。包括crRNA、trRNA或crRNA及trRNA或由其組成之核酸可進一步包括載體序列，其中該載體序列包括並非與crRNA、trRNA或crRNA及trRNA一起天然發現之核酸或由其組成。在一些實施例中，crRNA及trRNA係由一種載體內之非鄰接核酸編碼。在其他實施例中，crRNA及trRNA可由鄰接核酸編碼。在一些實施例中，crRNA及trRNA係由單一核酸之相對鏈編碼。在其他實施例中，crRNA及trRNA係由單一核酸之相同鏈編碼。
在一些實施例中，DNA分子進一步包括可操作地連接至編碼任一編碼所關注多肽之ORF之序列之啟動子。在一些實施例中，DNA分子係適於表現於哺乳動物細胞(例如人類細胞或小鼠細胞，例如人類肝細胞或齧齒類動物(例如小鼠)肝細胞)中之表現構築體。在一些實施例中，DNA分子係適於表現於哺乳動物器官(例如人類肝或齧齒類動物(例如小鼠)肝)之細胞中之表現構築體。在一些實施例中，DNA分子係質體或游離基因體。在一些實施例中，DNA分子含於宿主細胞(例如細菌或經培養真核細胞)中。實例性細菌包含變形菌門(proteobacteria) (例如大腸桿菌)。實例性經培養真核細胞包含原代肝細胞，包含齧齒類動物(例如小鼠)或人類來源之肝細胞；肝細胞細胞系，包含齧齒類動物(例如小鼠)或人類來源之肝細胞；人類細胞系；齧齒類動物(例如小鼠)細胞系；CHO細胞；微生物真菌，例如裂變或出芽酵母，例如酵母菌屬(Saccharomyce)，例如釀酒酵母(S. cerevisiae )；及昆蟲細胞。
在一些實施例中，提供產生本文所揭示之mRNA之方法。在一些實施例中，此一方法包括使本文所闡述之DNA分子與RNA聚合酶在允許轉錄之條件下接觸。在一些實施例中，接觸係在活體外(例如在無細胞系統中)實施。在一些實施例中，RNA聚合酶係噬菌體來源之RNA聚合酶，例如T7 RNA聚合酶。在一些實施例中，提供包含至少一個如上文所論述之經修飾核苷酸之NTP。在一些實施例中，NTP包含至少一個如上文所論述之經修飾核苷酸且不包括UTP。
在一些實施例中，本文所揭示之多核苷酸可包括於一或多個載體之載體系統內或由其遞送。在一些實施例中，一或多個載體或所有載體可為DNA載體。在一些實施例中，一或多個載體或所有載體可為RNA載體。在一些實施例中，一或多個載體或所有載體可為圓形。在其他實施例中，一或多個載體或所有載體可為線性。在一些實施例中，一或多個載體或所有載體可包封於脂質奈米顆粒、脂質體、非脂質奈米顆粒或病毒衣殼中。非限制性實例性載體包含質體、噬菌粒、黏粒、人工染色體、微型染色體、轉位子、病毒載體及表現載體。
非限制性實例性病毒載體包含腺相關病毒(AAV)載體、慢病毒載體、腺病毒載體、輔助病毒依賴性腺病毒載體(HDAd)、單純皰疹病毒(HSV-1)載體、噬菌體T4、桿狀病毒載體及逆轉錄病毒載體。在一些實施例中，病毒載體可為AAV載體。在其他實施例中，病毒載體可為慢病毒載體。在一些實施例中，慢病毒載體可為非整合性的。在一些實施例中，病毒載體可為腺病毒載體。在一些實施例中，腺病毒可為高選殖能力或「無病毒基因」腺病毒，其中所有編碼病毒區皆間隔5'及3'反向末端重複(ITR)且自病毒缺失包裝信號(「I」)以增加其包裝能力。在其他實施例中，病毒載體可為HSV-1載體。在一些實施例中，基於HSV-1之載體係輔助病毒依賴性，且在其他實施例中，其係輔助病毒獨立性。舉例而言，僅保留包裝序列之擴增子載體需要具有包裝用結構組分之輔助病毒，而去除非必需病毒功能之30kb缺失性HSV-1載體則無需輔助病毒。在其他實施例中，病毒載體可為噬菌體T4。在一些實施例中，在病毒之頭部變空時，噬菌體T4可能能夠包裝任何線性或圓形DNA或RNA分子。在其他實施例中，病毒載體可為桿狀病毒載體。在其他實施例中，病毒載體可為逆轉錄病毒載體。在使用具有較小選殖能力之AAV或慢病毒載體之實施例中，可能需要使用一個以上載體來遞送如本文所揭示載體系統之所有組分。舉例而言，一個AAV載體可含有編碼Cas蛋白之序列，而第二AAV載體可含有一或多個嚮導序列。
在一些實施例中，載體可能能夠驅動一或多個編碼序列(例如本文所揭示mRNA之編碼序列)在細胞中之表現。在一些實施例中，細胞可為原核細胞，例如細菌細胞。在一些實施例中，細胞可為真核細胞，例如酵母、植物、昆蟲或哺乳動物細胞。在一些實施例中，真核細胞可為哺乳動物細胞。在一些實施例中，真核細胞可為齧齒類動物細胞。在一些實施例中，真核細胞可為人類細胞。業內已知用於驅動不同類型細胞中之表現之適宜啟動子。在一些實施例中，啟動子可為野生型。在其他實施例中，啟動子可經修飾以更有效或高效地表現。在其他實施例中，可截短啟動子，但仍保留其功能。舉例而言，啟動子可具有正常大小或適於將載體適當包裝於病毒中之減小之大小。
在一些實施例中，載體系統可包括一個拷貝之編碼ORF (編碼所關注多肽)之核苷酸序列。在其他實施例中，載體系統可包括一個以上拷貝之編碼所關注多肽之核苷酸序列。在一些實施例中，編碼所關注多肽之核苷酸序列可操作地連接至至少一個轉錄或轉譯控制序列。在一些實施例中，編碼核酸酶之核苷酸序列可操作地連接至至少一個啟動子。
在一些實施例中，啟動子可為組成型、可誘導型或組織特異型。在一些實施例中，啟動子可為組成型啟動子。組成型啟動子之非限制性實例性包含巨細胞病毒立即早期啟動子(CMV)、猿病毒(SV40)啟動子、腺病毒主要晚期(MLP)啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RSV)啟動子、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子、伸長因子-α (EF1a)啟動子、泛素啟動子、肌動蛋白啟動子、微管蛋白啟動子、免疫球蛋白啟動子、其功能片段或前述各項中之任一者之組合。在一些實施例中，啟動子可為CMV啟動子。在一些實施例中，啟動子可為截短CMV啟動子。在其他實施例中，啟動子可為EF1a啟動子。在一些實施例中，啟動子可為可誘導啟動子。可誘導啟動子之非限制性實例性包含可藉由熱激、光、化學物質、肽、金屬、類固醇、抗生素或醇誘導者。在一些實施例中，可誘導啟動子可為具有低基礎(非誘導)表現含量者，例如Tet-On® 啟動子(Clontech)。
在一些實施例中，啟動子可為組織特異性啟動子，例如特異性表現於肝中之啟動子。
載體可進一步包括編碼至少一種嚮導RNA之核苷酸序列。在一些實施例中，載體包括一個拷貝之嚮導RNA。在其他實施例中，載體包括一個以上拷貝之嚮導RNA。在一種以上嚮導RNA之實施例中，嚮導RNA可不相同，從而其靶向不同靶序列，或可相同(其中其靶向相同靶序列)。在一些實施例中，在載體包括一種以上嚮導RNA之情形下，每一嚮導RNA可具有其他不同性質(例如核糖核蛋白與RNA引導之DNA結合劑之複合物內之活性或穩定性)。在一些實施例中，編碼嚮導RNA之核苷酸序列可操作地連接至至少一個轉錄或轉譯控制序列(例如啟動子、3' UTR或5' UTR)。在一實施例中，啟動子可為tRNA啟動子，例如tRNALys3 或tRNA嵌合體。參見 Mefferd等人，RNA . 2015 21:1683-9；Scherer等人，Nucleic Acids Res . 2007 35: 2620-2628。在一些實施例中，啟動子可由RNA聚合酶III (Pol III)識別。Pol III啟動子之非限制性實例包含U6及H1啟動子。在一些實施例中，編碼嚮導RNA之核苷酸序列可操作地連接至小鼠或人類U6啟動子。在其他實施例中，編碼嚮導RNA之核苷酸序列可操作地連接至小鼠或人類H1啟動子。在一種以上嚮導RNA之實施例中，用於驅動表現之啟動子可相同或不同。在一些實施例中，編碼嚮導RNA之crRNA之核苷酸及編碼嚮導RNA之trRNA之核苷酸可提供於相同載體上。在一些實施例中，編碼crRNA之核苷酸及編碼trRNA之核苷酸可由相同啟動子驅動。在一些實施例中，crRNA及trRNA可轉錄成單一轉錄物。舉例而言，可自單一轉錄物處理crRNA及trRNA以形成雙分子嚮導RNA。或者，crRNA及trRNA可轉錄成單分子嚮導RNA。在其他實施例中，crRNA及trRNA可藉由相同載體上之其相應啟動子驅動。在其他實施例中，crRNA及trRNA可由不同載體編碼。
在一些實施例中，組合物包括載體系統，其中該系統包括一種以上載體。在一些實施例中，載體系統可包括一種單一載體。在其他實施例中，載體系統可包括兩種載體。在其他實施例中，載體系統可包括三種載體。在使用不同多核苷酸進行多重分析時或在使用多個拷貝之多核苷酸時，載體系統可包括三個以上載體。
在一些實施例中，載體系統可包括可誘導啟動子以僅在其遞送至靶細胞之後開始表現。可誘導啟動子之非限制性實例性包含可藉由熱激、光、化學物質、肽、金屬、類固醇、抗生素或醇誘導者。在一些實施例中，可誘導啟動子可為具有低基礎(非誘導)表現含量者，例如Tet-On® 啟動子(Clontech)。
在其他實施例中，載體系統可包括組織特異性啟動子以僅在其遞送至特定組織中之後開始表現。 實例
提供下列實例以闡釋某些所揭示實施例且不應解釋為以任何方式限制本發明範圍。 實例1 -一般試劑及方法。LNP 調配物
將脂質組分溶於100%乙醇中，其中脂質組分之莫耳比率闡述於下文中。組合經化學修飾之sgRNA及Cas9 mRNA且溶於25 mM檸檬酸鹽、100 mM NaCl (pH 5.0)中，從而得到大約0.45 mg/mL之總RNA負荷濃度。以約6之N/P比率調配LNP，其中經化學修飾之sgRNA: Cas9 mRNA之比率為1:1或1:2 w/w比率，如下文所闡述。除非另外指示，否則使用50%脂質A、9% DSPC、38%膽固醇及3% PEG2k-DMG來調配LNP。
藉由撞擊射流混合脂質(於乙醇中)與兩體積RNA溶液及一體積水來形成LNP。經由混合十字架來混合脂質(於乙醇中)與兩體積RNA溶液。經由直插式三通混合第四水流與十字架出口流。(例如參見 WO2016010840，圖2)。在混合期間使用差異性流速維持水性溶劑對有機溶劑之2:1比率。將LNP在室溫下保持1小時，且進一步使用水稀釋(大約1:1 v/v)。使用切向流過濾在平板柱(Sartorius, 100kD MWCO)上濃縮經稀釋LNP且然後藉由滲濾緩衝液交換至50 mM Tris、45 mM NaCl、5% (w/v)蔗糖(pH 7.5，TSS)中。或者，使用PD-10去鹽管柱(GE)最終緩衝液交換至TSS中。若需要，則藉由離心使用Amicon 100 kDa離心過濾器(Millipore)來濃縮組合物。然後使用0.2 μm無菌過濾器過濾所得混合物。將最終LNP儲存於4℃或-80℃下直至進一步使用。LNP 組成分析
使用動態光散射(「DLS」)來表徵本發明LNP之多分散性指數(「pdi」)及大小。DLS量測藉由使試樣經受光源所產生之光散射。PDI (如自DLS量測所測定)代表群體中之粒度分佈(在平均粒度附近)，其中完全均勻之群體之PDI為0。
使用電泳光散射來表徵LNP在指定pH下之表面電荷。表面電荷或ζ電位係LNP懸浮液中顆粒之間之靜電排斥/吸引之大小的量度。
使用不對稱流場流分離 -多角度光散射(AF4-MALS)根據流體動力學半徑來分離組合物中之顆粒且然後量測所分離顆粒之分子量、流體動力學半徑及均方根半徑。此使得能夠評價分子量及大小分佈以及二級特性(例如Burchard-Stockmeyer圖(均方根(「rms」)半徑與流體動力學半徑隨時間之比率，其指示顆粒之內部核心密度)及rms構形圖(rms半徑之對數對分子量之對數，其中所得線性擬合之斜率給出緊湊度/伸張度之值))。
可使用奈米顆粒追蹤分析(NTA, Malvern Nanosight)來測定粒度分佈以及顆粒濃度。適當稀釋LNP試樣且注於顯微鏡載玻片上。隨著將顆粒緩慢輸注穿過視域，照相機會記錄散射光。在捕獲影片之後，奈米顆粒追蹤分析藉由追蹤像素且計算擴散係數來處理影片。此擴散係數可轉變成顆粒之流體動力學半徑。該儀器亦對分析中所計數之個別顆粒之數量進行計數以得到顆粒濃度。
可使用低溫電子顯微術(「低溫EM」)來測定LNP之粒度、形態及結構特性。
可自液相層析及隨後之電霧式檢測(LC-CAD)獲得LNP之脂質組成分析。此分析可提供實際脂質含量對理論脂質含量之對比。
分析LNP組合物之平均粒度、多分散性指數(pdi)、總RNA含量、RNA囊封效率及ζ電位。可藉由脂質分析、AF4-MALS、NTA及/或低溫EM進一步表徵LNP組合物。藉由動態光散射(DLS)使用Malvern Zetasizer DLS儀器來量測平均粒度及多分散性。在藉由DLS量測之前，使用PBS緩衝液稀釋LNP試樣。報告Z平均直徑(其係平均粒度之基於強度之量度)以及數量平均直徑及pdi。亦使用Malvern Zetasizer儀器來量測LNP之ζ電位。在量測之前，將試樣以1:17 (50 µL → 800 µL)稀釋於0.1X PBS (pH 7.4)中。
使用基於螢光之分析(Ribogreen®, ThermoFisher Scientific)來測定總RNA濃度及游離RNA。囊封效率計算為(總RNA -游離RNA)/總RNA。使用含有0.2% Triton-X 100之1 × TE緩衝液適當地稀釋LNP試樣以測定總RNA或使用1× TE緩衝液來測定游離RNA。藉由利用用於製備組合物且稀釋於1× TE緩衝液+/- 0.2% Triton-X 100中之起始RNA溶液來製作標準曲線。然後將經稀釋RiboGreen®染料(根據製造商說明書)添加至標準品及試樣中之每一者中且在室溫下於不存在光下培育大約10分鐘。使用SpectraMax M5微量板讀數儀(Molecular Devices)來讀取試樣，其中激發波長、自動截止波長及發射波長分別設定於488 nm、515 nm及525 nm。自適當標準曲線測定總RNA及游離RNA。
囊封效率計算為(總RNA -游離RNA)/總RNA。可使用相同程序來測定基於DNA之負荷組分之囊封效率。在基於螢光之分析中，對於單鏈DNA而言可使用Oligreen染料，且對於雙鏈DNA而言可使用Picogreen染料。或者，可藉由反相離子配對(RP-IP) HPLC方法來測定總RNA濃度。使用Triton X-100破壞LNP，從而釋放RNA。然後以層析方式藉由RP-IP HPLC來分離RNA與脂質組分且根據標準曲線使用260 nm下之UV吸光度進行量化。
使用AF4-MALS查看分子量及大小分佈以及來自該等計算之二級統計學。適當稀釋LNP且使用HPLC自動採樣儀注入AF4分離通道中，其中該等LNP發生聚焦且然後在通道中之交叉流中使用指數梯度進行洗脫。所有流體皆係藉由HPLC幫浦及Wyatt Eclipse儀器來驅動。自AF4通道洗脫之顆粒流經UV檢測器、多角度光散射檢測器、準彈性光散射檢測器及示差折射率檢測器。藉由使用Debeye模型來處理原始數據以自檢測器信號確定分子量及rms半徑。
藉由耦合至電霧式檢測器(CAD)之HPLC來定量分析LNP中之脂質組分。藉由反相HPLC達成4種脂質組分之層析分離。CAD係檢測所有非揮發性化合物之破壞性質量檢測器且信號係一致的(不論分析物結構如何)。mRNA 及 gRNA 產生
藉由活體外轉錄使用線性化質體DNA模板及T7 RNA聚合酶來生成封端及聚腺苷酸化mRNA。通常，藉由在37℃下與XbaI一起培育完全來線性化含有T7啟動子及介於90-100 nt之間之聚(A/T)區域之質體DNA。自酶及緩衝液鹽純化線性化質體。藉由在37℃下於下列條件中培育1.5或2小時來實施IVT反應以生成經Cas9修飾之mRNA：50 ng/µL線性化質體；5 mM GTP、ATP、CTP及N1-甲基假UTP (Trilink)中之每一者；25 mM ARCA (Trilink)；5 U/µL T7 RNA聚合酶；1 U/µL鼠類RNase抑制劑；0.004 U/µL無機大腸桿菌焦磷酸酶；及1×反應緩衝液。然後添加TURBO DNase (ThermoFisher)以去除DNA模板。
使用RNeasy Maxi套組(Qiagen)根據製造商方案自酶及核苷酸純化mRNA。或者，使用MEGAclear套組(Invitrogen)根據製造商方案來純化mRNA。或者，使用LiCl沈澱、乙酸銨沈澱及乙酸鈉沈澱來純化mRNA。或者，使用LiCl沈澱方法純化mRNA，隨後藉由切向流過濾進一步純化。或者，藉由LiCl沈澱與切向流過濾之組合來純化RNA。藉由量測260 nm下之吸光度(Nanodrop)來測定轉錄物濃度，且藉由毛細管電泳利用片段分析儀(Agilent)來分析轉錄物。
藉由已知方法使用亞磷醯胺以化學方式來合成sgRNA。Cas9 mRNA 及嚮導 RNA 至活體外原代肝細胞之遞送
將原代小鼠肝細胞(PMH)及原代食蟹猴肝細胞(PCH)解凍且再懸浮於含有補充物之肝細胞解凍培養基(Invitrogen, Cat. CM7000)中，隨後離心。丟棄上清液，且將粒化細胞再懸浮於威廉姆斯培養基E (William’s Medium E) (Gibco, Cat. A12176)、平板培養基+補充包(Gibco, Cat. A15563)及5% FBS (Gibco)中。對細胞進行計數且以50,000個細胞/孔(對於PCH)及15,000個細胞/孔(對於PMH)之密度平鋪於經Bio-coat膠原I塗覆之96孔板(ThermoFisher, Cat. 877272)上。使經平鋪細胞在37℃及5% CO2 氣氛下於組織培養培育器中沉降且黏附5小時。在培育之後，檢查細胞之單層形成且使用含有細胞維持補充物之威廉姆斯培養基E (Gibco, Cat. A15564)洗滌三次，且然後在37℃培育器中培育。
利用200ng mRNA使用0.6或0.3ul信使MAX/孔(用於分別PMH及PCH)來轉染PMH及PCH。根據製造商方案(ThermoFisher Scientific，目錄編號：LMRN003)來實施轉染。在處理後6、24及48小時收集培養基以分析hA1AT表現。
使用50 µL/孔BuccalAmp DNA提取液(Epicentre, Cat. QE09050)根據製造商方案自96孔板之每一孔提取基因體DNA。對所有DNA試樣實施如本文所闡述之PCR及後續NGS分析。活體內 LNP 遞送
在每一研究中使用介於6-10週齡之間之CD-1雌性小鼠。將動物稱重且根據體重進行分組以基於組平均體重來製備投藥溶液。經由側向尾部靜脈以0.2 mL/動物之體積(大約10 mL/公斤體重)投用LNP。在6或7天時藉由經由心臟穿刺在異氟醚麻醉下放血來對動物實施安樂死。視需要，將血液收集於血清分離管或如本文所闡述含有緩衝檸檬酸鈉之管(用於血漿)中。對於涉及活體內編輯或蛋白質含量量測之研究而言，自每一動物收集肝組織以供DNA或蛋白質提取及分析。藉由次世代測序(NGS)量測小鼠小組之肝編輯。對於Cas9蛋白分析而言，藉由珠粒磨機在使用1×完全蛋白酶抑制劑錠劑(Roche, Cat.11836170001)之RIPA緩衝液(Boston Bioproducts BP-115)中使大約30-80 mg肝組織均質化。NGS 測序
簡言之，為定量測定基因體中之靶位置之編輯效率，分離基因體DNA且利用深度測序來鑑別藉由基因編輯引入之插入及缺失之存在。
在靶位點(例如TTR)附近設計PCR引子，且擴增所關注基因體區域。引子序列提供於下文中。根據製造商方案(Illumina)實施額外PCR以添加測序所需之化學物質。在Illumina MiSeq儀器上對擴增子進行測序。在消除具有低品質評分者之後，將讀數與參考基因體(例如mm10)進行比對。將含有讀數之所得檔案映射至參考基因體(BAM檔案)，其中選擇與所關注靶區域重疊之讀數且計算野生型讀取數與含有插入、取代或缺失之讀取數。
編輯百分比(例如「編輯效率」或「編輯百分數」)定義為具有插入或缺失之序列讀數之總數除以序列讀數(包含野生型)之總數。Cas9 蛋白量測
藉由ELISA分析測定Cas9蛋白含量。簡言之，視情況藉由二喹啉甲酸分析來測定總蛋白質濃度。根據製造商方案使用Cas9小鼠抗體(Origene, Cat. CF811179)作為捕獲抗體且使用Cas9 (7A9-3A3)小鼠mAb (Cell Signaling Technology, Cat. 14697)作為檢測抗體來製備MSD GOLD 96孔鏈黴抗生物素蛋白(Streptavidin) SECTOR板(Meso Scale Diagnostics, Cat. L15SA-1)。使用重組Cas9蛋白作為含有1X Halt™無EDTA蛋白酶抑制劑混合劑(ThermoFisher, Cat. 78437)之稀釋劑39 (Meso Scale Diagnostics)中之校準標準品。使用Meso Quickplex SQ120儀器(Meso Scale Discovery)讀取ELISA板且使用Discovery Workbench 4.0軟體包裝(Meso Scale Discovery)分析數據。血清 TTR 量測
使用小鼠前白蛋白(轉甲狀腺素蛋白) ELISA套組(Aviva Systems Biology, Cat. OKIA00111)測定總小鼠TTR血清含量。簡言之，使用套組試樣稀釋劑將血清連續稀釋至最終稀釋度為10,000倍(對於0.1 mpk劑量)及2,500倍(對於0.3 mpk)。然後將此經稀釋試樣添加至ELISA板中且然後根據說明書實施分析。人類 1- 抗胰蛋白酶 (hA1AT) 量測
量測用於活體外研究之培養基中之人類hA1AT含量。使用α 1-抗胰蛋白酶ELISA套組(Human) (Aviva Biosystems，目錄編號：OKIA00048)根據製造商方案來測定總人類α 1-抗胰蛋白酶含量。使用4參數邏輯擬合自標準曲線量化血清hA1AT含量且以µg/mL血清形式表示。 實例2 - 活體外Cas9表現之表徵
設計使用如表8中所闡述之不同密碼子方案之Cas9序列以測試改良之蛋白質表現。具體而言，測試SEQ ID No: 3及分別包括SEQ ID No 5、6、7、8、9、10、11、12、13及14之ORF之SEQ ID No: 15、16、17、18、19、20、21、22、23及24。
在活體外藉由將mRNA轉染至HepG2細胞中且藉由ELISA量測Cas9蛋白表現含量來評價轉譯效率。利用800 ng每一Cas9 mRNA使用Lipofectamine™ MessengerMAX™轉染試劑(ThermoFisher)來轉染HepG2細胞。在轉染後，藉由冷凍解凍裂解細胞且藉由離心清除。
在轉染後2、6或24小時，藉由冷凍解凍裂解細胞且藉由離心清除。使用實例1中所闡述之Meso Scale Discovery ELISA分析量測該等試樣中之Cas9蛋白表現。表12及圖1展示不同密碼子方案對Cas9蛋白表現之效應。表 12. 具有不同密碼子組之 ORF 之活體外表現。
mRNA 2 hr 6 hr 24 hr
平均值 (ng Cas9/mg) SD 倍數變化 平均值 (ng Cas9/mg) SD 倍數變化 平均值 (ng Cas9/mg) SD 倍數變化
SEQ ID No. 2 75 12 0.68 214 22 0.39 103 2 0.21
SEQ ID No. 3 110 31 - 543 22 - 499 18 -
SEQ ID No. 15 14 1 0.13 19 1 0.03 5 0 0.01
SEQ ID No. 16 103 21 0.94 486 106 0.89 328 6 0.66
SEQ ID No. 17 107 39 0.97 606 72 1.12 357 12 0.72
SEQ ID No. 18 148 41 1.34 559 126 1.03 406 3 0.82
SEQ ID No. 19 69 12 0.62 274 31 0.5 282 17 0.57
SEQ ID No. 20 147 16 1.33 602 49 1.11 389 4 0.78
SEQ ID No. 21 16 1 0.14 34 3 0.06 11 0 0.02
SEQ ID No. 22 30 4 0.28 124 5 0.23 63 7 0.13
SEQ ID No. 23 5 0 0.05 4 1 0.01 1 0 0
SEQ ID No. 24 13 0 0.12 20 9 0.04 5 0 0.01
實例3 - 活體內Cas9表現之表徵
為測定密碼子方案之活體內有效性，量測在使用表8中所闡述之密碼子方案在活體內自編碼Cas9之mRNA表現時之Cas9蛋白表現。產生信使RNA且以經化學修飾之sgRNA:Cas9 mRNA之1:2 w/w比率如實例1中所闡述進行調配。LNP含有靶向TTR之嚮導RNA (G000502；SEQ ID NO: 4)。以0.3 mpk向CD-1雌性小鼠(n=5/組)經靜脈內投藥。在投藥後3小時，將動物處死，收集肝。使用實例1中所闡述之Meso Scale Discovery ELISA分析來量測肝中之Cas9蛋白表現。表13及圖2展示肝中之Cas9表現結果。Cas9 mRNA SEQ ID NO: 18及20展示所測試ORF之最高Cas9表現及與其他所測試ORF (SEQ ID NO: 3)相比之改良表現。SEQ ID NO: 23及24之ORF之Cas9蛋白表現低於量化下限(LLOQ)。
表13.肝中之Cas 9蛋白表現
mRNA 平均值 (ng Cas9/g 組織 ) SD 倍數改良
SEQ ID No. 3批次3 2972 2691 1
SEQ ID No. 3批次2 2053 718 0.6
SEQ ID No. 18 3563 2568 1.2
SEQ ID No. 20 3278 591 1.1
SEQ ID No. 23 低於LLOQ - N.D.
SEQ ID No. 24 低於LLOQ - N.D.
實例4 -活體內Cas9蛋白表現之時程
在投與後之不同時間評價來自SEQ ID NO: 18及SEQ ID No. 20之Cas9蛋白表現之耐久性。產生信使RNA且以經化學修飾之sgRNA:Cas9 mRNA之1:2 w/w比率如實例1中所闡述進行調配。LNP含有靶向TTR之嚮導RNA (G000502；SEQ ID NO: 4)。以0.3 mpk向CD-1雌性小鼠(n=5或n=4/組，表14)經靜脈內投藥。在投藥後一小時、三小時及六小時，將動物處死，收集肝。使用實例1中所闡述之Meso Scale Discovery ELISA分析來量測肝試樣中之Cas9蛋白表現。表14及圖3展示肝中之Cas9表現結果。SEQ ID No. 20在轉染後3及6小時展示所測試ORF之最高Cas9表現及與其他所測試Cas9 ORF相比之改良表現。
表14.活體內Cas9蛋白表現之時程
mRNA 時間點 平均值 (ng Cas9/g 組織 ) SD n 劑量 (mg/kg)
SEQ ID No. 3 1 hr 1145 480 4 0.3
SEQ ID No. 18 1 hr 760 159 4 0.3
SEQ ID No. 20 1 hr 715 757 4 0.3
SEQ ID No. 2 3 hr 613 165 5 0.3
SEQ ID No.3 3 hr 1215 169 5 0.3
SEQ ID No. 18 3 hr 780 133 5 0.3
SEQ ID No. 20 3 hr 1387 532 5 0.3
SEQ ID No.3 6 hr 523 88 4 0.3
SEQ ID No. 18 6 hr 571 114 4 0.3
SEQ ID No. 20 6 hr 644 93 4 0.3
實例5 -活體內Cas9蛋白表現之劑量反應
為測定SEQ ID No. 18及SEQ ID No. 20之編輯效率，實施活體內劑量反應實驗。產生信使RNA且以經化學修飾之sgRNA:Cas9 mRNA之1:2 w/w比率如實例1中所闡述進行調配。LNP含有靶向TTR之嚮導RNA (G000502；SEQ ID NO: 4)。以0.03、0.1或0.3 mpk向CD-1雌性小鼠(n=5/組)經靜脈內投藥。在投藥後6天，將動物處死，收集血液及肝。量測血清TTR及肝編輯。表15及圖4A展示活體內編輯結果。表15及圖4B展示血清TTR含量。
表15 -活體內Cas9蛋白表現之劑量反應
mRNA 劑量 (mpk) 編輯 % 血清 TTR  (ug/ml)
平均值 SD 平均值 SD %TSS
TSS 0.2 0.2 755.9 169.6 100
SEQ ID No. 2 0.03 9.9 3.8 627.3 96.4 83
SEQ ID No. 2 0.1 48.9 7.9 244.8 78.0 32
SEQ ID No. 3 0.03 21.7 3.5 500.8 61.8 66
SEQ ID No. 3 0.1 53.6 8.3 190.4 29.4 25
SEQ ID No. 18 0.03 12.2 1.9 641.3 98.5 85
SEQ ID No. 18 0.1 48.1 7.6 214.5 55.9 28
SEQ ID No. 20 0.03 18.4 5.2 460.3 58.2 61
SEQ ID No. 20 0.1 46.1 8.3 205.1 90.8 27
SEQ ID No. 23 0.1 1.9 2.3 671.2 140.6 89
SEQ ID No. 24 0.1 4.3 1.6 654.5 127.5 87
實例6 -來自hSERPINA1 mRNA之活體外表現之表徵
藉由轉染來測試來自肝細胞中之各種密碼子最佳化hSERPINA1 mRNA之蛋白質表現含量。藉由活體外轉錄生成封端及聚腺苷酸化密碼子最佳化SERPINA1 mRNA。如實例1中所闡述使質體DNA模板線性化。藉由在37℃下於下列條件中培育4小時來實施IVT反應以生成mRNA：50 ng/µL線性化質體；5 mM GTP、ATP、CTP及N1-甲基假-UTP 中之每一者；25 mM ARCA (Trilink)；7.5 U/µL T7 RNA聚合酶(Roche)；1 U/µL鼠類RNase抑制劑(Roche)；0.004 U/µL無機大腸桿菌焦磷酸酶(Roche)；及1×反應緩衝液。添加TURBO DNase (ThermoFisher)至最終濃度為0.01 U/µL，且將反應液再培育30分鐘以去除DNA模板。
使用LiCl沈澱、乙酸銨沈澱及乙酸鈉沈澱自酶及核苷酸純化信使RNA。藉由量測260 nm下之吸光度(Nanodrop)來測定轉錄物濃度，且藉由毛細管電泳使用生物分析儀(Agilent)來分析轉錄物。
如實例1中所闡述來培養原代小鼠肝細胞(PMH)及原代食蟹猴肝細胞(PCH)。利用200 ng mRNA使用0.6或0.3 ul信使MAX/孔來轉染PMH及PCH。根據製造商方案(ThermoFisher Scientific，目錄編號：LMRN003)來實施轉染。在如表16及17中所指示之處理後時間點收集培養基以分析hA1AT表現。
此實驗中之使用密碼子最佳化hSERPINA1之hA1AT表現含量展示於圖5A及表16 (PMH)以及圖5B及表17 (PCH)中。SEQ ID NO: 76、77、78、79及80之轉錄物分別含有SEQ ID NO: 70、69、71、72及73之SERPINA1 ORF。
表16.原代小鼠肝細胞中之hA1AT表現
時間點 試樣 平均 hA1AT (ug/ml) SD
6h    SEQ ID No: 76 226 2
SEQ ID No: 77 255 2
SEQ ID No: 78 120 1
SEQ ID No: 79 225 2
SEQ ID No: 80 318 7
24h    SEQ ID No: 76 1097 5
SEQ ID No: 77 1209 8
SEQ ID No: 78 403 4
SEQ ID No: 79 1803 19
SEQ ID No: 80 1795 55
48h    SEQ ID No: 76 120 6
SEQ ID No: 77 166 0
SEQ ID No: 78 81 1
SEQ ID No: 79 210 3
SEQ ID No: 80 284 3
表17.原代食蟹猴肝細胞中之hA1AT表現
時間點 試樣 平均 hA1AT (ug/ml) STD
6h    培養基 11 1
SEQ ID No: 76 325 8
SEQ ID No: 77 335 5
SEQ ID No: 78 70 0
SEQ ID No: 79 310 12
SEQ ID No: 80 374 2
24h    培養基 15 0
SEQ ID No: 76 674 17
SEQ ID No: 77 797 83
SEQ ID No: 78 799 33
SEQ ID No: 79 1280 66
SEQ ID No: 80 2345 30
實例7 -原代人類肝細胞中之Cas9表現之表徵
設計使用如表8中所闡述之不同密碼子方案之Cas9序列以測試改良之蛋白質表現。具體而言，測試mRNA具有SEQ ID No: 193及194之序列(其含有SEQ ID No: 29及46之ORF)以與具有SEQ ID No: 3之序列之mRNA進行比較。
在活體外藉由將mRNA轉染至原代人類肝細胞中且藉由ELISA量測Cas9蛋白表現含量來評價轉譯效率。根據標準方案來培養原代人類肝肝細胞(PHH) (Thermo Fisher)。簡言之，將細胞解凍且再懸浮於肝細胞解凍培養基(Thermo Fisher, Cat. CM7000)中，隨後在100 g下離心10分鐘。棄除上清液且將粒化細胞再懸浮於肝細胞平鋪培養基+補充包(Invitrogen, Cat. A1217601及CM3000)中。對細胞進行計數且以30,000-35,000細胞/孔之密度平鋪於經Bio-coat膠原I塗覆之96孔板(Thermo Fisher, Cat. 877272)上。使經平鋪細胞在37℃及5% CO2 氣氛下於組織培養培育器中沉降且黏附4至6小時。在培育之後，檢查細胞之單層形成。然後使用肝細胞維持培養基/具有無血清補充包之培養基(Invitrogen, Cat. A1217601及CM4000)洗滌細胞且然後向細胞中添加新鮮肝細胞維持培養基。
在平鋪之後24小時，利用150 ng每一Cas9 mRNA使用Lipofectamine RNAiMAX (Fisher Scientific, Cat. 13778500)轉染PHH細胞。在轉染後6小時，藉由冷凍解凍裂解細胞且藉由離心清除。使用實例1中所闡述之Meso Scale Discovery ELISA分析來量測該等試樣中之Cas9蛋白表現。在所清除PHH細胞溶解物中稀釋重組Cas9蛋白以產生標準曲線。表18及圖6展示不同密碼子方案對Cas9蛋白表現之效應。
表18 -使用具有不同密碼子組之ORF之活體外Cas9蛋白表現
mRNA SEQ ID No. ORF SEQ ID No. 平均 Cas9 蛋白 (ng/ml) SD N
3    42.3 2.1 3
193 29 13.0 1.3 3
194 46 58.1 2.6 3
實例8 -使用不同UTR之Cas9表現之表徵
分析與不同3’ UTR組合之所選Cas9 ORF之蛋白質表現，如表19A-B中所闡述。在活體外藉由將mRNA轉染至原代人類肝細胞中(如實例7中)且藉由ELISA量測Cas9蛋白表現含量(如實例1中)來評價轉譯效率。表19A-B及圖7A-B展示Cas9蛋白表現結果。
表19A- 使用不同3’ UTR之活體外Cas9蛋白表現
mRNA SEQ ID No. ORF SEQ ID No. 3’UTR SEQ ID No. 平均 Cas9 蛋白 (ng/ml) SD N
196 * 202 69.5 13.9 3
197 * 203 51.2 3.4 3
199 46 204 34.1 2.7 3
200 46 202 46.0 4.8 3
201 46 203 40.8 10.4 3
194 46 184 51.5 8.1 3
3    184 51.1 9.3 3
*此mRNA之ORF係SEQ ID No. 3之Cas9 ORF
表19B- 使用不同3’ UTR之活體外Cas9蛋白表現
mRNA SEQ ID No. ORF SEQ ID No. 3’UTR SEQ ID No. 平均 Cas9 蛋白 (ng/ml) SD N
195 * 204 57.8 2.3 3
199 46 204 23.5 2.7 3
197 * 203 44.9 4.8 3
201 46 203 52.4 2.7 3
194 46 184 48.6 7.4 3
3    184 54.0 10.0 3
*此mRNA之ORF係SEQ ID No. 3之Cas9 ORF 序列表
下列序列表提供本文所揭示序列之列表。應理解，若DNA序列(包括T)係針對RNA提及，則T應經U (其端視背景可經修飾或未修飾)代替，且反之亦然。* = PS鍵聯；「m」 = 2'-O-Me核苷酸。對於ORF說明而言，BP = I-對缺乏；GP = E-對富集；BS = I-單一缺乏；GS = E-單一富集；GCU =實施最小化尿苷、最小化重複及最大化GC含量之步驟。E-對、I-對、E-單一及I-單一分別係指表1-4之密碼子對或密碼子。
SEQ ID NO 說明 序列
1 Cas9胺基酸序列 MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
2 含有具有低U含量之ORF之Cas9轉錄物 GGGUCCCGCAGUCGGCGUCCAGCGGCUCUGCUUGUUCGUGUGUGUGUCGUUGCAGGCCUUAUUCGGAUCCGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGACAUCGGAACAAACAGCGUCGGAUGGGCAGUCAUCACAGACGAAUACAAGGUCCCGAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGAGCACUGCUGUUCGACAGCGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGACUGAAGAGAACAGCAAGAAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAAAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCGACAAUCUACCACCUGAGAAAGAAGCUGGUCGACAGCACAGACAAGGCAGACCUGAGACUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUCAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCGGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACAUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUGAGCGCAAGACUGAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAACCUGAUCGCACAGCUGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACUGUUCGGAAACCUGAUCGCACUGAGCCUGGGACUGACACCGAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACAUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCAGCAAAGAACCUGAGCGACGCAAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGAGAGUCAACACAGAAAUCACAAAGGCACCGCUGAGCGCAAGCAUGAUCAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUGCCGGAAAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGAUACGCAGGAUACAUCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAGAGAAGACCUGCUGAGAAAGCAGAGAACAUUCGACAACGGAAGCAUCCCGCACCAGAUCCACCUGGGAGAACUGCACGCAAUCCUGAGAAGACAGGAAGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGAGAAAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCGUACUACGUCGGACCGCUGGCAAGAGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACACCGUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAACCUGCCGAACGAAAAGGUCCUGCCGAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAACUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAAGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACAUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGAGAAAUGAUCGAAGAAAGACUGAAGACAUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUGAGCAGAAAGCUGAUCAACGGAAUCAGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGAGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAACCUGGCAGGAAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGAAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAACUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCGGAAAACAUCGUCAUCGAAAUGGCAAGAGAAAACCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGAAAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAACUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACACAGCUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGAAGAGACAUGUACGUCGACCAGGAACUGGACAUCAACAGACUGAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCGCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUCCCGAGCGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACACAGAGAAAGUUCGACAACCUGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACUGAGCGAACUGGACAAGGCAGGAUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGAGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGAGAAAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCAGUCGUCGGAACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUCGCAAAGAGCGAACAGGAAAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAAAUCACACUGGCAAACGGAGAAAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAAUCGUCUGGGACAAGGGAAGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUGAGCAUGCCGCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGAGGAUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUGCCGAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCAAGAAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGACAGCCCGACAGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGAAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAACUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCAAAGGGAUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCGAAGUACAGCCUGUUCGAACUGGAAAACGGAAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCAGGAGAACUGCAGAAGGGAAACGAACUGGCACUGCCGAGCAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAACCUGGACAAGGUCCUGAGCGCAUACAACAAGCACAGAGACAAGCCGAUCAGAGAACAGGCAGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAACCUGGGAGCACCGGCAGCAUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAAGCACAAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUGAGCCAGCUGGGAGGAGACGGAGGAGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCUAGCUAGCCAUCACAUUUAAAAGCAUCUCAGCCUACCAUGAGAAUAAGAGAAAGAAAAUGAAGAUCAAUAGCUUAUUCAUCUCUUUUUCUUUUUCGUUGGUGUAAAGCCAACACCCUGUCUAAAAAACAUAAAUUUCUUUAAUCAUUUUGCCUCUUUUCUCUGUGCUUCAAUUAAUAAAAAAUGGAAAGAACCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
3 含有具有低A含量之ORF之Cas9轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
4 嚮導RNA G000502 mA*mC*mA*CAAAUACCAGUCCAGCGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
5 E-單一富集之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACGGACGAGUACAAGGUGCCCAGCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACAGCGGCGAGACGGCCGAGGCCACGCGGCUGAAGCGGACGGCCCGGCGGCGGUACACGCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACGAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACAGCACGGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACAGCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACGUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGAGCGCCCGGCUGAGCAAGAGCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGAGCCUGGGCCUGACGCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACGUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGAGCGACGCCAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACGGAGAUCACGAAGGCCCCCCUGAGCGCCAGCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACGGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACGUUCGACAACGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAGAGCGAGGAGACGAUCACGCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAGGUGAAGUACGUGACGGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACGAACCGGAAGGUGACGGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACGUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACGUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUGAGCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACGAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACGGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACGACGCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACGCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACGCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGUGCCCAGCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACGCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACGAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGAGCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACGCUGAAGAGCAAGCUGGUGAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACGGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACGGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACGGAGAUCACGCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACGAACGGCGAGACGGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACGGUGCGGAAGGUGCUGAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACGGAGGUGCAGACGGGCGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACAGCCCCACGGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCAGCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCAGCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGAGCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAGCGGUACACGAGCACGAAGGAGGUGCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUGAGCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAG
6 E-對富集、I-對缺乏之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACGGACGAGUACAAGGUUCCCAGCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUGAUCGGUGCACUGCUGUUCGACAGCGGUGAGACGGCCGAAGCCACGCGGCUGAAGCGGACGGCCCGGCGGCGGUACACGCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACGAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACGGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACAGCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGGCUCAGCAAGAGCCGGCGGCUGGAGAAUCUGAUCGCCCAGCUUCCCGGUGAGAAGAAGAAUGGCCUGUUCGGCAAUCUGAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACGAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACGUUCGACAAUGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAGAGCGAGGAGACGAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUGGUGGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAGAAUCUUCCCAACGAGAAGGUGCUUCCCAAGCACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACGAACCGGAAGGUGACGGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGCAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACGAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUGGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACGGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACGACUCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGCCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACGCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGUUCCCAGCGAGGAAGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAGCGGAAGUUCGACAAUCUGACGAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUGAAGGUGAUCACGCUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACGGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACGGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACGCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACGAAUGGUGAGACGGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGAGACUUCGCCACGGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUGCAGACGGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACGGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGCUACAAGGAAGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCCAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCACUUCCCAGCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUGGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAAUCUGGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAGCGGUACACGUCGACGAAGGAAGUGCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAG
7 E-對及E-單一富集、I-對及I-單一缺乏之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUCGACAUCGGCACCAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUCCUCGGCAACACCGACCGCCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUCUUCGACAGCGGUGAGACCGCGGAAGCCACCCGCCUCAAGCGGACCGCCCGCCGCCGCUACACCCGCCGCAAGAACCGCAUCUGCUACCUCCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACCGCCUCGAGGAGAGCUUCCUGGUCGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGCCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUCGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUCGUCGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUCAUCUACCUCGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGCGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUCAACCCUGACAACAGCGACGUCGACAAGCUCUUCAUCCAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUCGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGCCGCCUCGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUCUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUCGGCCUCACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUCGCGGAGGACGCCAAGCUCCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUCGACAAUCUCCUCGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUCCUCAGCGACAUCCUGCGGGUCAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUAAAGCGCUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAGGCACUGGUCCGCCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUCGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUCGUCAAGCUCAACAGGGAGGACCUCCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUCGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGCCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUCACCUUCCGCAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUCGCCCGCGGCAACAGCCGCUUCGCCUGGAUGACCCGCAAGAGCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUCGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGCAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUCCUUCCAAAGCACAGCCUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUGACCAAGGUCAAGUACGUCACAGAGGGCAUGCGCAAGCCAGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUCGACCUCCUCUUCAAGACCAACCGCAAGGUCACCGUCAAGCAGCUCAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUCGAGAUCAGCGGCGUCGAGGACCGCUUCAACGCCAGCCUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUCGAGGACAUCGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGCCUCAAGACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUCAAGCGCCGCCGCUACACCGGCUGGGGCCGCCUCAGCCGCAAGCUCAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUCGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGCAACUUCAUGCAGCUCAUCCACGACGACAGCCUCACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUCCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGAGCCCAGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUCCAGACCGUCAAGGUCGUCGACGAGCUGGUCAAGGUCAUGGGCCGCCACAAGCCAGAGAACAUCGUCAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGCGCAUGAAGCGCAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUCAAGGAGCACCCCGUCGAGAACACUCAACUCCAGAACGAGAAGCUCUACCUCUACUACCUCCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGCCUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUCACCCGAAGCGACAAGAACCGCGGCAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGCCAGCUCCUCAACGCCAAGCUCAUCACUCAACGCAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCGGAGCGCGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGCCAGCUCGUCGAGACCCGCCAGAUCACCAAGCACGUCGCCCAGAUCCUCGACAGCCGCAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUCAUCAGGGAAGUCAAGGUCAUCACCCUCAAGAGCAAGCUCGUCAGCGACUUCCGCAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUCGAGAGCGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAGGUCUACGACGUCCGCAAGAUGAUAGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUCGCCAAUGGUGAGAUCCGCAAGCGCCCCCUCAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUCUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUCCGCAAGGUCCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGCAACAGCGACAAGCUCAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCCUACAGCGUCCUCGUCGUCGCCAAGGUCGAGAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUCAAGAGCGUCAAGGAGCUGCUCGGCAUCACCAUCAUGGAGCGAAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUCAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUCUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGCAAGCGCAUGCUCGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUCGCCAGCCACUACGAGAAGCUCAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAGCACUACCUCGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGCGUCAUCCUCGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUCCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUCUUCACCCUCACCAAUCUCGGUGCCCCAGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGCAAGCGCUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUCGACGCCACCCUCAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUCUACGAGACCCGCAUCGACCUCAGCCAGCUCGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGCAAGGUCUAG
8 I-對缺乏及/或I-單一缺乏之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACGGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACAGCGGUGAGACGGCCGAAGCCACGCGGCUGAAGCGGACGGCCCGCCGGCGGUACACGCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACAGCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGGCGGCUGGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACGAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUAAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACGUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGCGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAGAGCGAGGAGACGAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUGGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUGCUUCCAAAGCACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACGAACCGGAAGGUGACGGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACGAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACGGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACGACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAACUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACGCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAACGGAAGUUCGACAAUCUCACGAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUGAUCACGCUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACGGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUAGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACGGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACGCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACGAAUGGUGAGACGGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACGGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUCCAGACGGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGGAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGGAAGCGGAUGCUGGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAGCUGAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAAUCUCGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAGCGGUACACGUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAG
9 E-對富集之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUCGACAUCGGCACCAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUCCUCGGCAACACCGACCGCCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUCUUCGACAGCGGUGAGACCGCGGAAGCCACCCGCCUCAAGCGCACCGCCCGCCGCCGCUACACCCGCCGCAAGAACCGCAUCUGCUACCUCCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACCGCCUCGAGGAGAGCUUCCUGGUCGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGCCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUCGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUCGUCGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUCAUCUACCUCGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGCGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUCAACCCUGACAACAGCGACGUCGACAAGCUCUUCAUCCAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUCGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGCCGCCUCGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUCUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUCGGCCUCACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUCGCGGAGGACGCCAAGCUCCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUCGACAAUCUCCUCGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUCCUCAGCGACAUCCUGCGGGUCAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUAAAGCGCUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAGGCACUGGUCCGCCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUCGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUCGUCAAGCUCAACAGGGAGGACCUCCUGCGGAAGCAGCGCACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUCGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGCCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUCACCUUCCGCAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUCGCCCGCGGCAACAGCCGCUUCGCCUGGAUGACCCGCAAGAGCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUCGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGCAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUCCUUCCAAAGCACAGCCUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUGACCAAGGUCAAGUACGUCACAGAGGGCAUGCGCAAGCCAGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUCGACCUCCUCUUCAAGACCAACCGCAAGGUCACCGUCAAGCAGCUCAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUCGAGAUCAGCGGCGUCGAGGACCGCUUCAACGCCAGCCUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUCGAGGACAUCGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGCCUCAAGACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUCAAGCGCCGCCGCUACACCGGCUGGGGCCGCCUCAGCCGCAAGCUCAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUCGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGCAACUUCAUGCAGCUCAUCCACGACGACAGCCUCACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUCCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGAGCCCAGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUCCAGACCGUCAAGGUCGUCGACGAGCUGGUCAAGGUCAUGGGCCGCCACAAGCCAGAGAACAUCGUCAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGCGCAUGAAGCGCAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUCAAGGAGCACCCCGUCGAGAACACUCAACUCCAGAACGAGAAGCUCUACCUCUACUACCUCCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGCCUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUCACCCGAAGCGACAAGAACCGCGGCAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGCCAGCUCCUCAACGCCAAGCUCAUCACUCAACGCAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCGGAGCGCGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGCCAGCUCGUCGAGACCCGCCAGAUCACCAAGCACGUCGCCCAGAUCCUCGACAGCCGCAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUCAUCAGGGAAGUCAAGGUCAUCACCCUCAAGAGCAAGCUCGUCAGCGACUUCCGCAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUCGAGAGCGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAGGUCUACGACGUCCGCAAGAUGAUAGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUCGCCAAUGGUGAGAUCCGCAAGCGCCCCCUCAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUCUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUCCGCAAGGUCCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGCAACAGCGACAAGCUCAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCCUACAGCGUCCUCGUCGUCGCCAAGGUCGAGAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUCAAGAGCGUCAAGGAGCUGCUCGGCAUCACCAUCAUGGAGCGAAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUCAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUCUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGCAAGCGCAUGCUCGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUCGCCAGCCACUACGAGAAGCUCAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAGCACUACCUCGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGCGUCAUCCUCGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUCCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUCUUCACCCUCACCAAUCUCGGUGCCCCAGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGCAAGCGCUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUCGACGCCACCCUCAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUCUACGAGACCCGCAUCGACCUCAGCCAGCUCGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGCAAGGUCUAG
10 E-對及E-單一富集之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUCGACAUCGGCACCAACAGCGUCGGCUGGGCCGUCAUCACCGACGAGUACAAGGUCCCCAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUCGGCAACACCGACCGCCACAGCAUCAAGAAGAACCUCAUCGGCGCCCUCCUCUUCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGCCUCAAGCGCACCGCCCGCCGCCGCUACACCCGCCGCAAGAACCGCAUCUGCUACCUCCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACCGCCUCGAGGAGAGCUUCCUCGUCGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGCCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUCGACGAGGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUCCGCAAGAAGCUCGUCGACAGCACCGACAAGGCCGACCUCCGCCUCAUCUACCUCGCCCUCGCCCACAUGAUCAAGUUCCGCGGCCACUUCCUCAUCGAGGGCGACCUCAACCCCGACAACAGCGACGUCGACAAGCUCUUCAUCCAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUCGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGCCGCCUCGAGAACCUCAUCGCCCAGCUCCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUCUUCGGCAACCUCAUCGCCCUCAGCCUCGGCCUCACCCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUCGCCGAGGACGCCAAGCUCCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUCGACAACCUCCUCGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUCGCCGCCAAGAACCUCAGCGACGCCAUCCUCCUCAGCGACAUCCUCCGCGUCAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUCAAGCGCUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAGGCCCUCGUCCGCCAGCAGCUCCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUCGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUCCUCGUCAAGCUCAACCGCGAGGACCUCCUCCGCAAGCAGCGCACCUUCGACAACGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUCGGCGAGCUCCACGCCAUCCUCCGCCGCCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUCAAGGACAACCGCGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUCACCUUCCGCAUCCCCUACUACGUCGGCCCCCUCGCCCGCGGCAACAGCCGCUUCGCCUGGAUGACCCGCAAGAGCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUCGUCGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGCAUGACCAACUUCGACAAGAACCUCCCCAACGAGAAGGUCCUCCCCAAGCACAGCCUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUCACCAAGGUCAAGUACGUCACCGAGGGCAUGCGCAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUCGACCUCCUCUUCAAGACCAACCGCAAGGUCACCGUCAAGCAGCUCAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUCGAGAUCAGCGGCGUCGAGGACCGCUUCAACGCCAGCCUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUCGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUCGAGGACAUCGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACCGCGAGAUGAUCGAGGAGCGCCUCAAGACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUCAAGCGCCGCCGCUACACCGGCUGGGGCCGCCUCAGCCGCAAGCUCAUCAACGGCAUCCGCGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUCGACUUCCUCAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGCAACUUCAUGCAGCUCAUCCACGACGACAGCCUCACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUCCACGAGCACAUCGCCAACCUCGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUCCAGACCGUCAAGGUCGUCGACGAGCUCGUCAAGGUCAUGGGCCGCCACAAGCCCGAGAACAUCGUCAUCGAGAUGGCCCGCGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGCGAGCGCAUGAAGCGCAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUCGGCAGCCAGAUCCUCAAGGAGCACCCCGUCGAGAACACCCAGCUCCAGAACGAGAAGCUCUACCUCUACUACCUCCAGAACGGCCGCGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUCGACAUCAACCGCCUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCCCAGAGCUUCCUCAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUCACCCGCAGCGACAAGAACCGCGGCAAGAGCGACAACGUCCCCAGCGAGGAGGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGCCAGCUCCUCAACGCCAAGCUCAUCACCCAGCGCAAGUUCGACAACCUCACCAAGGCCGAGCGCGGCGGCCUCAGCGAGCUCGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGCCAGCUCGUCGAGACCCGCCAGAUCACCAAGCACGUCGCCCAGAUCCUCGACAGCCGCAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUCAUCCGCGAGGUCAAGGUCAUCACCCUCAAGAGCAAGCUCGUCAGCGACUUCCGCAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCCGCGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCCGUCGUCGGCACCGCCCUCAUCAAGAAGUACCCCAAGCUCGAGAGCGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAGGUCUACGACGUCCGCAAGAUGAUCGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUCGCCAACGGCGAGAUCCGCAAGCGCCCCCUCAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUCUGGGACAAGGGCCGCGACUUCGCCACCGUCCGCAAGGUCCUCAGCAUGCCCCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACCGAGGUCCAGACCGGCGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUCCCCAAGCGCAACAGCGACAAGCUCAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCCUACAGCGUCCUCGUCGUCGCCAAGGUCGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCUCAAGAGCGUCAAGGAGCUCCUCGGCAUCACCAUCAUGGAGCGCAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUCGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUCAAGAAGGACCUCAUCAUCAAGCUCCCCAAGUACAGCCUCUUCGAGCUCGAGAACGGCCGCAAGCGCAUGCUCGCCAGCGCCGGCGAGCUCCAGAAGGGCAACGAGCUCGCCCUCCCCAGCAAGUACGUCAACUUCCUCUACCUCGCCAGCCACUACGAGAAGCUCAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAGCACUACCUCGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGCGUCAUCCUCGCCGACGCCAACCUCGACAAGGUCCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGCGACAAGCCCAUCCGCGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUCUUCACCCUCACCAACCUCGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGCAAGCGCUACACCAGCACCAAGGAGGUCCUCGACGCCACCCUCAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUCUACGAGACCCGCAUCGACCUCAGCCAGCUCGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGCAAGGUCUAG
11 E-單一缺乏之Cas9 ORF AUGGACAAAAAAUACUCAAUAGGCCUCGACAUAGGCACCAACUCAGUCGGCUGGGCCGUCAUAACCGACGAGUACAAAGUCCCCUCAAAAAAAUUCAAAGUCCUCGGCAACACCGACAGGCACUCAAUAAAAAAAAACCUCAUAGGCGCCCUCCUCUUCGACUCAGGCGAGACCGCCGAGGCCACCAGGCUCAAAAGGACCGCCAGGAGGAGGUACACCAGGAGGAAAAACAGGAUAUGCUACCUCCAGGAGAUAUUCUCAAACGAGAUGGCCAAAGUCGACGACUCAUUCUUCCACAGGCUCGAGGAGUCAUUCCUCGUCGAGGAGGACAAAAAACACGAGAGGCACCCCAUAUUCGGCAACAUAGUCGACGAGGUCGCCUACCACGAGAAAUACCCCACCAUAUACCACCUCAGGAAAAAACUCGUCGACUCAACCGACAAAGCCGACCUCAGGCUCAUAUACCUCGCCCUCGCCCACAUGAUAAAAUUCAGGGGCCACUUCCUCAUAGAGGGCGACCUCAACCCCGACAACUCAGACGUCGACAAACUCUUCAUACAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUAAACGCCUCAGGCGUCGACGCCAAAGCCAUACUCUCAGCCAGGCUCUCAAAAUCAAGGAGGCUCGAGAACCUCAUAGCCCAGCUCCCCGGCGAGAAAAAAAACGGCCUCUUCGGCAACCUCAUAGCCCUCUCACUCGGCCUCACCCCCAACUUCAAAUCAAACUUCGACCUCGCCGAGGACGCCAAACUCCAGCUCUCAAAAGACACCUACGACGACGACCUCGACAACCUCCUCGCCCAGAUAGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUCGCCGCCAAAAACCUCUCAGACGCCAUACUCCUCUCAGACAUACUCAGGGUCAACACCGAGAUAACCAAAGCCCCCCUCUCAGCCUCAAUGAUAAAAAGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAAGCCCUCGUCAGGCAGCAGCUCCCCGAGAAAUACAAAGAGAUAUUCUUCGACCAGUCAAAAAACGGCUACGCCGGCUACAUAGACGGCGGCGCCUCACAGGAGGAGUUCUACAAAUUCAUAAAACCCAUACUCGAGAAAAUGGACGGCACCGAGGAGCUCCUCGUCAAACUCAACAGGGAGGACCUCCUCAGGAAACAGAGGACCUUCGACAACGGCUCAAUACCCCACCAGAUACACCUCGGCGAGCUCCACGCCAUACUCAGGAGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUCAAAGACAACAGGGAGAAAAUAGAGAAAAUACUCACCUUCAGGAUACCCUACUACGUCGGCCCCCUCGCCAGGGGCAACUCAAGGUUCGCCUGGAUGACCAGGAAAUCAGAGGAGACCAUAACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUCGUCGACAAAGGCGCCUCAGCCCAGUCAUUCAUAGAGAGGAUGACCAACUUCGACAAAAACCUCCCCAACGAGAAAGUCCUCCCCAAACACUCACUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUCACCAAAGUCAAAUACGUCACCGAGGGCAUGAGGAAACCCGCCUUCCUCUCAGGCGAGCAGAAAAAAGCCAUAGUCGACCUCCUCUUCAAAACCAACAGGAAAGUCACCGUCAAACAGCUCAAAGAGGACUACUUCAAAAAAAUAGAGUGCUUCGACUCAGUCGAGAUAUCAGGCGUCGAGGACAGGUUCAACGCCUCACUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAAAUAAUAAAAGACAAAGACUUCCUCGACAACGAGGAGAACGAGGACAUACUCGAGGACAUAGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGAGGCUCAAAACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAAGUCAUGAAACAGCUCAAAAGGAGGAGGUACACCGGCUGGGGCAGGCUCUCAAGGAAACUCAUAAACGGCAUAAGGGACAAACAGUCAGGCAAAACCAUACUCGACUUCCUCAAAUCAGACGGCUUCGCCAACAGGAACUUCAUGCAGCUCAUACACGACGACUCACUCACCUUCAAAGAGGACAUACAGAAAGCCCAGGUCUCAGGCCAGGGCGACUCACUCCACGAGCACAUAGCCAACCUCGCCGGCUCACCCGCCAUAAAAAAAGGCAUACUCCAGACCGUCAAAGUCGUCGACGAGCUCGUCAAAGUCAUGGGCAGGCACAAACCCGAGAACAUAGUCAUAGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACCCAGAAAGGCCAGAAAAACUCAAGGGAGAGGAUGAAAAGGAUAGAGGAGGGCAUAAAAGAGCUCGGCUCACAGAUACUCAAAGAGCACCCCGUCGAGAACACCCAGCUCCAGAACGAGAAACUCUACCUCUACUACCUCCAGAACGGCAGGGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUCGACAUAAACAGGCUCUCAGACUACGACGUCGACCACAUAGUCCCCCAGUCAUUCCUCAAAGACGACUCAAUAGACAACAAAGUCCUCACCAGGUCAGACAAAAACAGGGGCAAAUCAGACAACGUCCCCUCAGAGGAGGUCGUCAAAAAAAUGAAAAACUACUGGAGGCAGCUCCUCAACGCCAAACUCAUAACCCAGAGGAAAUUCGACAACCUCACCAAAGCCGAGAGGGGCGGCCUCUCAGAGCUCGACAAAGCCGGCUUCAUAAAAAGGCAGCUCGUCGAGACCAGGCAGAUAACCAAACACGUCGCCCAGAUACUCGACUCAAGGAUGAACACCAAAUACGACGAGAACGACAAACUCAUAAGGGAGGUCAAAGUCAUAACCCUCAAAUCAAAACUCGUCUCAGACUUCAGGAAAGACUUCCAGUUCUACAAAGUCAGGGAGAUAAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCCGUCGUCGGCACCGCCCUCAUAAAAAAAUACCCCAAACUCGAGUCAGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAAGUCUACGACGUCAGGAAAAUGAUAGCCAAAUCAGAGCAGGAGAUAGGCAAAGCCACCGCCAAAUACUUCUUCUACUCAAACAUAAUGAACUUCUUCAAAACCGAGAUAACCCUCGCCAACGGCGAGAUAAGGAAAAGGCCCCUCAUAGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUAGUCUGGGACAAAGGCAGGGACUUCGCCACCGUCAGGAAAGUCCUCUCAAUGCCCCAGGUCAACAUAGUCAAAAAAACCGAGGUCCAGACCGGCGGCUUCUCAAAAGAGUCAAUACUCCCCAAAAGGAACUCAGACAAACUCAUAGCCAGGAAAAAAGACUGGGACCCCAAAAAAUACGGCGGCUUCGACUCACCCACCGUCGCCUACUCAGUCCUCGUCGUCGCCAAAGUCGAGAAAGGCAAAUCAAAAAAACUCAAAUCAGUCAAAGAGCUCCUCGGCAUAACCAUAAUGGAGAGGUCAUCAUUCGAGAAAAACCCCAUAGACUUCCUCGAGGCCAAAGGCUACAAAGAGGUCAAAAAAGACCUCAUAAUAAAACUCCCCAAAUACUCACUCUUCGAGCUCGAGAACGGCAGGAAAAGGAUGCUCGCCUCAGCCGGCGAGCUCCAGAAAGGCAACGAGCUCGCCCUCCCCUCAAAAUACGUCAACUUCCUCUACCUCGCCUCACACUACGAGAAACUCAAAGGCUCACCCGAGGACAACGAGCAGAAACAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAACACUACCUCGACGAGAUAAUAGAGCAGAUAUCAGAGUUCUCAAAAAGGGUCAUACUCGCCGACGCCAACCUCGACAAAGUCCUCUCAGCCUACAACAAACACAGGGACAAACCCAUAAGGGAGCAGGCCGAGAACAUAAUACACCUCUUCACCCUCACCAACCUCGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAAUACUUCGACACCACCAUAGACAGGAAAAGGUACACCUCAACCAAAGAGGUCCUCGACGCCACCCUCAUACACCAGUCAAUAACCGGCCUCUACGAGACCAGGAUAGACCUCUCACAGCUCGGCGGCGACGGCGGCGGCUCACCCAAAAAAAAAAGGAAAGUCUAG
12 I-單一富集之Cas9 ORF AUGGACAAAAAAUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACGGACGAGUACAAAGUGCCCAGCAAAAAAUUCAAAGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAAAAAAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACAGCGGCGAGACGGCCGAGGCCACGCGGCUGAAACGGACGGCCCGGCGGCGGUACACGCGGCGGAAAAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAAGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAAAAACACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAAUACCCCACGAUCUACCACCUGCGGAAAAAACUGGUGGACAGCACGGACAAAGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAAUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACAGCGACGUGGACAAACUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACGUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAAGCCAUCCUGAGCGCCCGGCUGAGCAAAAGCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAAAAAAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGAGCCUGGGCCUGACGCCCAACUUCAAAAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAACUGCAGCUGAGCAAAGACACGUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAAAACCUGAGCGACGCCAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACGGAGAUCACGAAAGCCCCCCUGAGCGCCAGCAUGAUCAAACGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAAGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAAUACAAAGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAAAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAAUUCAUCAAACCCAUCCUGGAGAAAAUGGACGGCACGGAGGAGCUGCUGGUGAAACUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAACAGCGGACGUUCGACAACGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAAGACAACCGGGAGAAAAUCGAGAAAAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAAAGCGAGGAGACGAUCACGCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAAGGCGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAAAACCUGCCCAACGAGAAAGUGCUGCCCAAACACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAAGUGAAAUACGUGACGGAGGGCAUGCGGAAACCCGCCUUCCUGAGCGGCGAGCAGAAAAAAGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAAACGAACCGGAAAGUGACGGUGAAACAGCUGAAAGAGGACUACUUCAAAAAAAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACGUACCACGACCUGCUGAAAAUCAUCAAAGACAAAGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAAACGUACGCCCACCUGUUCGACGACAAAGUGAUGAAACAGCUGAAACGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUGAGCCGGAAACUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAACAGAGCGGCAAAACGAUCCUGGACUUCCUGAAAAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAAGAGGACAUCCAGAAAGCCCAGGUGAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAAAAAGGCAUCCUGCAGACGGUGAAAGUGGUGGACGAGCUGGUGAAAGUGAUGGGCCGGCACAAACCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACGACGCAGAAAGGCCAGAAAAACAGCCGGGAGCGGAUGAAACGGAUCGAGGAGGGCAUCAAAGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAAGAGCACCCCGUGGAGAACACGCAGCUGCAGAACGAGAAACUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGAGCUUCCUGAAAGACGACAGCAUCGACAACAAAGUGCUGACGCGGAGCGACAAAAACCGGGGCAAAAGCGACAACGUGCCCAGCGAGGAGGUGGUGAAAAAAAUGAAAAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAACUGAUCACGCAGCGGAAAUUCGACAACCUGACGAAAGCCGAGCGGGGCGGCCUGAGCGAGCUGGACAAAGCCGGCUUCAUCAAACGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAACACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAAUACGACGAGAACGACAAACUGAUCCGGGAGGUGAAAGUGAUCACGCUGAAAAGCAAACUGGUGAGCGACUUCCGGAAAGACUUCCAGUUCUACAAAGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACGGCCCUGAUCAAAAAAUACCCCAAACUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAAGUGUACGACGUGCGGAAAAUGAUCGCCAAAAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAAGCCACGGCCAAAUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAAACGGAGAUCACGCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAACGGCCCCUGAUCGAGACGAACGGCGAGACGGGCGAGAUCGUGUGGGACAAAGGCCGGGACUUCGCCACGGUGCGGAAAGUGCUGAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAAAAAACGGAGGUGCAGACGGGCGGCUUCAGCAAAGAGAGCAUCCUGCCCAAACGGAACAGCGACAAACUGAUCGCCCGGAAAAAAGACUGGGACCCCAAAAAAUACGGCGGCUUCGACAGCCCCACGGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAAGUGGAGAAAGGCAAAAGCAAAAAACUGAAAAGCGUGAAAGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAAAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAAGGCUACAAAGAGGUGAAAAAAGACCUGAUCAUCAAACUGCCCAAAUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAACGGAUGCUGGCCAGCGCCGGCGAGCUGCAGAAAGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCAGCAAAUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAACUGAAAGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAACAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAACACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAACGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAAGUGCUGAGCGCCUACAACAAACACCGGGACAAACCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAAUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAACGGUACACGAGCACGAAAGAGGUGCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUGAGCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAAAAAAAACGGAAAGUGUAG
13 E-對缺乏之Cas9 ORF AUGGAUAAAAAAUAUUCAAUAGGAUUAGAUAUAGGAACAAAUUCAGUAGGAUGGGCAGUAAUAACAGAUGAAUAUAAAGUACCAUCAAAAAAAUUUAAAGUAUUAGGAAAUACAGAUAGACAUUCAAUAAAAAAAAAUUUAAUAGGAGCAUUAUUAUUUGAUUCAGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGAUUAAAAAGAACAGCAAGAAGAAGAUAUACAAGAAGAAAAAAUAGAAUAUGUUAUUUACAAGAAAUAUUUUCAAAUGAAAUGGCAAAAGUAGAUGAUUCAUUUUUUCAUAGAUUAGAAGAAUCAUUUUUAGUAGAAGAAGAUAAAAAACAUGAAAGACAUCCAAUAUUUGGAAAUAUAGUAGAUGAAGUAGCAUAUCAUGAAAAAUAUCCAACAAUAUAUCAUUUAAGAAAAAAAUUAGUAGAUUCAACAGAUAAAGCAGAUUUAAGAUUAAUAUAUUUAGCAUUAGCACAUAUGAUAAAAUUUAGAGGACAUUUUUUAAUAGAAGGAGAUUUAAAUCCAGAUAAUUCAGAUGUAGAUAAAUUAUUUAUACAAUUAGUACAAACAUAUAAUCAAUUAUUUGAAGAAAAUCCAAUAAAUGCAUCAGGAGUAGAUGCAAAAGCAAUAUUAUCAGCAAGAUUAUCAAAAUCAAGAAGAUUAGAAAAUUUAAUAGCACAAUUACCAGGAGAAAAAAAAAAUGGAUUAUUUGGAAAUUUAAUAGCAUUAUCAUUAGGAUUAACACCAAAUUUUAAAUCAAAUUUUGAUUUAGCAGAAGAUGCAAAAUUACAAUUAUCAAAAGAUACAUAUGAUGAUGAUUUAGAUAAUUUAUUAGCACAAAUAGGAGAUCAAUAUGCAGAUUUAUUUUUAGCAGCAAAAAAUUUAUCAGAUGCAAUAUUAUUAUCAGAUAUAUUAAGAGUAAAUACAGAAAUAACAAAAGCACCAUUAUCAGCAUCAAUGAUAAAAAGAUAUGAUGAACAUCAUCAGGACUUAACAUUAUUAAAAGCAUUAGUAAGACAACAAUUACCAGAAAAAUAUAAAGAAAUAUUUUUUGAUCAAUCAAAAAAUGGAUAUGCAGGAUAUAUAGAUGGAGGAGCAUCACAAGAAGAAUUUUAUAAAUUUAUAAAACCAAUAUUAGAAAAAAUGGAUGGAACAGAAGAAUUAUUAGUAAAAUUAAAUAGAGAAGAUUUAUUAAGAAAACAAAGAACAUUUGAUAAUGGAUCAAUACCACAUCAAAUACAUUUAGGAGAAUUACAUGCAAUAUUAAGAAGACAAGAAGAUUUUUAUCCAUUUUUAAAAGAUAAUAGAGAAAAAAUAGAAAAAAUAUUAACAUUUAGAAUACCAUAUUAUGUAGGACCAUUAGCAAGAGGAAAUUCAAGAUUUGCAUGGAUGACAAGAAAAUCAGAAGAAACAAUAACACCAUGGAAUUUUGAAGAAGUAGUAGAUAAAGGAGCAUCAGCACAAUCAUUUAUAGAAAGAAUGACAAAUUUUGAUAAAAAUUUACCAAAUGAAAAAGUAUUACCAAAACAUUCAUUAUUAUAUGAAUAUUUUACAGUAUAUAAUGAAUUAACAAAAGUAAAAUAUGUAACAGAAGGAAUGAGAAAACCAGCAUUUUUAUCAGGAGAACAAAAAAAAGCAAUAGUAGAUUUAUUAUUUAAAACAAAUAGAAAAGUAACAGUAAAACAAUUAAAAGAAGAUUAUUUUAAAAAAAUAGAAUGUUUUGAUUCAGUAGAAAUAUCAGGAGUAGAAGAUAGAUUUAAUGCAUCAUUAGGAACAUAUCAUGAUUUAUUAAAAAUAAUAAAAGAUAAAGAUUUUUUAGAUAAUGAAGAAAAUGAAGAUAUAUUAGAAGAUAUAGUAUUAACAUUAACAUUAUUUGAAGAUAGAGAAAUGAUAGAAGAAAGAUUAAAAACAUAUGCACAUUUAUUUGAUGAUAAAGUAAUGAAACAAUUAAAAAGAAGAAGAUAUACAGGAUGGGGAAGAUUAUCAAGAAAAUUAAUAAAUGGAAUAAGAGAUAAACAAUCAGGAAAAACAAUAUUAGAUUUUUUAAAAUCAGAUGGAUUUGCAAAUAGAAAUUUUAUGCAAUUAAUACAUGAUGAUUCAUUAACAUUUAAAGAAGAUAUACAAAAAGCACAAGUAUCAGGACAAGGAGAUUCAUUACAUGAACAUAUAGCAAAUUUAGCAGGAUCACCAGCAAUAAAAAAAGGAAUAUUACAAACAGUAAAAGUAGUAGAUGAAUUAGUAAAAGUAAUGGGAAGACAUAAACCAGAAAAUAUAGUAAUAGAAAUGGCAAGAGAAAAUCAAACAACACAAAAAGGACAAAAAAAUUCAAGAGAAAGAAUGAAAAGAAUAGAAGAAGGAAUAAAAGAAUUAGGAUCACAAAUAUUAAAAGAACAUCCAGUAGAAAAUACACAAUUACAAAAUGAAAAAUUAUAUUUAUAUUAUUUACAAAAUGGAAGAGAUAUGUAUGUAGAUCAAGAAUUAGAUAUAAAUAGAUUAUCAGAUUAUGAUGUAGAUCAUAUAGUACCACAAUCAUUUUUAAAAGAUGAUUCAAUAGAUAAUAAAGUAUUAACAAGAUCAGAUAAAAAUAGAGGAAAAUCAGAUAAUGUACCAUCAGAAGAAGUAGUAAAAAAAAUGAAAAAUUAUUGGAGACAAUUAUUAAAUGCAAAAUUAAUAACACAAAGAAAAUUUGAUAAUUUAACAAAAGCAGAAAGAGGAGGAUUAUCAGAAUUAGAUAAAGCAGGAUUUAUAAAAAGACAAUUAGUAGAAACAAGACAAAUAACAAAACAUGUAGCACAAAUAUUAGAUUCAAGAAUGAAUACAAAAUAUGAUGAAAAUGAUAAAUUAAUAAGAGAAGUAAAAGUAAUAACAUUAAAAUCAAAAUUAGUAUCAGAUUUUAGAAAAGAUUUUCAAUUUUAUAAAGUAAGAGAAAUAAAUAAUUAUCAUCAUGCACAUGAUGCAUAUUUAAAUGCAGUAGUAGGAACAGCAUUAAUAAAAAAAUAUCCAAAAUUAGAAUCAGAAUUUGUAUAUGGAGAUUAUAAAGUAUAUGAUGUAAGAAAAAUGAUAGCAAAAUCAGAACAAGAAAUAGGAAAAGCAACAGCAAAAUAUUUUUUUUAUUCAAAUAUAAUGAAUUUUUUUAAAACAGAAAUAACAUUAGCAAAUGGAGAAAUAAGAAAAAGACCAUUAAUAGAAACAAAUGGAGAAACAGGAGAAAUAGUAUGGGAUAAAGGAAGAGAUUUUGCAACAGUAAGAAAAGUAUUAUCAAUGCCACAAGUAAAUAUAGUAAAAAAAACAGAAGUACAAACAGGAGGAUUUUCAAAAGAAUCAAUAUUACCAAAAAGAAAUUCAGAUAAAUUAAUAGCAAGAAAAAAAGAUUGGGAUCCAAAAAAAUAUGGAGGAUUUGAUUCACCAACAGUAGCAUAUUCAGUAUUAGUAGUAGCAAAAGUAGAAAAAGGAAAAUCAAAAAAAUUAAAAUCAGUAAAAGAAUUAUUAGGAAUAACAAUAAUGGAAAGAUCAUCAUUUGAAAAAAAUCCAAUAGAUUUUUUAGAAGCAAAAGGAUAUAAAGAAGUAAAAAAAGAUUUAAUAAUAAAAUUACCAAAAUAUUCAUUAUUUGAAUUAGAAAAUGGAAGAAAAAGAAUGUUAGCAUCAGCAGGAGAAUUACAAAAAGGAAAUGAAUUAGCAUUACCAUCAAAAUAUGUAAAUUUUUUAUAUUUAGCAUCACAUUAUGAAAAAUUAAAAGGAUCACCAGAAGAUAAUGAACAAAAACAAUUAUUUGUAGAACAACAUAAACAUUAUUUAGAUGAAAUAAUAGAACAAAUAUCAGAAUUUUCAAAAAGAGUAAUAUUAGCAGAUGCAAAUUUAGAUAAAGUAUUAUCAGCAUAUAAUAAACAUAGAGAUAAACCAAUAAGAGAACAAGCAGAAAAUAUAAUACAUUUAUUUACAUUAACAAAUUUAGGAGCACCAGCAGCAUUUAAAUAUUUUGAUACAACAAUAGAUAGAAAAAGAUAUACAUCAACAAAAGAAGUAUUAGAUGCAACAUUAAUACAUCAAUCAAUAACAGGAUUAUAUGAAACAAGAAUAGAUUUAUCACAAUUAGGAGGAGAUGGAGGAGGAUCACCAAAAAAAAAAAGAAAAGUAUAG
14 I-對富集之Cas9 ORF AUGGAUAAAAAGUACAGCAUCGGAUUAGAUAUAGGAACAAAUUCAGUUGGCUGGGCUGUGAUAACAGAUGAAUAUAAAGUUCCCUCAAAAAAAUUUAAAGUAUUAGGAAAUACAGAUAGACAUAGCAUCAAAAAAAAUCUCAUAGGUGCACUGUUAUUUGAUUCAGGUGAGACAGCAGAAGCCACAAGAUUAAAAAGAACAGCCCGCAGAAGAUAUACAAGAAGAAAAAAUAGAAUAUGUUAUUUACAGGAGAUAUUUUCAAAUGAAAUGGCAAAAGUAGAUGAUUCAUUUUUUCAUAGAUUAGAAGAAUCAUUCCUGGUAGAAGAAGAUAAAAAACAUGAAAGACAUCCAAUAUUUGGAAAUAUAGUAGAUGAAGUCGCAUAUCAUGAAAAGUACCCCACCAUAUAUCAUCUGCGGAAAAAAUUAGUAGAUUCGACUGAUAAAGCAGAUCUGCGGUUAAUAUAUUUAGCACUGGCACAUAUGAUAAAAUUUAGAGGACAUUUCCUGAUAGAAGGAGAUUUAAAUCCUGACAAUUCAGAUGUAGAUAAAUUAUUUAUACAAUUAGUACAAACCUACAAUCAAUUAUUUGAAGAAAAUCCAAUAAAUGCAUCAGGAGUAGAUGCAAAAGCAAUACUCAGCGCCCGCCUCAGCAAAUCAAGAAGAUUAGAAAAUCUCAUAGCACAACUUCCAGGUGAGAAAAAAAAUGGGUUAUUUGGAAAUCUCAUAGCACUCAGCUUAGGAUUAACUCCCAAUUUUAAAUCAAAUUUUGAUUUAGCAGAAGAUGCAAAAUUACAACUCAGCAAAGAUACCUACGAUGAUGAUUUAGAUAAUCUCUUAGCACAAAUAGGAGAUCAAUAUGCAGAUUUAUUCCUGGCUGCCAAAAAUCUCAGCGAUGCAAUAUUACUCAGCGAUAUACUGCGGGUAAAUACAGAGAUAACAAAAGCACCACUCAGCGCAUCAAUGAUAAAAAGAUAUGAUGAACAUCAUCAAGAUUUAACAUUAUUAAAAGCACUGGUAAGACAACAACUUCCAGAGAAGUACAAAGAAAUAUUUUUUGAUCAGAGCAAAAAUGGGUAUGCCGGGUAUAUAGAUGGUGGUGCCUCACAGGAGGAAUUUUAUAAAUUUAUAAAACCAAUAUUAGAAAAAAUGGAUGGAACAGAGGAGCUGUUAGUAAAAUUAAAUAGGGAGGAUUUACUGCGGAAACAAAGAACAUUUGAUAAUGGGAGCAUCCCCCAUCAAAUACAUUUAGGUGAGCUGCAUGCAAUACUGCGGAGACAGGAGGAUUUUUAUCCAUUCCUGAAAGAUAAUAGGGAGAAAAUAGAAAAAAUAUUAACAUUUAGAAUCCCCUAUUAUGUUGGCCCAUUAGCCCGCGGAAAUUCAAGAUUUGCAUGGAUGACAAGAAAAUCAGAAGAAACAAUAACUCCCUGGAAUUUUGAAGAAGUCGUAGAUAAGGGUGCCUCAGCACAGAGCUUUAUAGAAAGAAUGACAAAUUUUGAUAAAAAUCUUCCAAAUGAAAAAGUACUUCCAAAACAUUCAUUAUUAUAUGAAUAUUUUACAGUAUAUAAUGAGCUGACAAAAGUAAAGUACGUAACAGAGGGAAUGAGAAAACCAGCAUUCCUCAGCGGUGAGCAAAAAAAAGCAAUAGUAGAUUUAUUAUUUAAAACAAAUAGAAAAGUAACAGUAAAACAAUUAAAAGAAGAUUAUUUUAAAAAAAUAGAAUGUUUUGAUUCAGUAGAAAUAUCAGGAGUAGAAGAUAGAUUUAAUGCAUCAUUAGGAACCUACCAUGAUUUAUUAAAAAUAAUAAAAGAUAAAGAUUUCCUGGAUAAUGAAGAAAAUGAAGAUAUAUUAGAAGAUAUAGUAUUAACAUUAACAUUAUUUGAAGAUAGGGAGAUGAUAGAAGAAAGAUUAAAAACCUACGCACAUUUAUUUGAUGAUAAAGUAAUGAAACAAUUAAAAAGAAGAAGAUAUACAGGAUGGGGAAGACUCAGCAGAAAAUUAAUAAAUGGGAUACGAGACAAACAGAGCGGAAAAACAAUAUUAGAUUUCCUGAAAUCAGAUGGAUUUGCAAAUAGAAAUUUUAUGCAAUUAAUACAUGAUGAUUCAUUAACAUUUAAAGAAGAUAUACAAAAAGCACAGGUCAGCGGACAGGGCGAUUCAUUACAUGAACAUAUAGCAAAUCUCGCCGGGUCACCAGCAAUAAAAAAGGGGAUAUUACAAACAGUAAAAGUAGUAGAUGAGCUGGUAAAAGUAAUGGGAAGACAUAAACCAGAGAAUAUAGUAAUAGAAAUGGCCAGGGAGAAUCAAACAACUCAAAAGGGGCAAAAAAAUUCAAGGGAGAGAAUGAAAAGAAUAGAAGAAGGAAUAAAAGAGCUGGGAUCACAAAUAUUAAAAGAACAUCCAGUAGAAAAUACUCAAUUACAAAAUGAAAAAUUAUAUUUAUAUUAUUUACAAAAUGGGCGAGACAUGUAUGUAGAUCAGGAGCUGGAUAUAAAUAGACUCAGCGAUUAUGAUGUAGAUCAUAUAGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAAGAUGAUAGCAUCGAUAAUAAAGUAUUAACAAGAUCAGAUAAAAAUAGAGGAAAAUCAGAUAAUGUUCCCUCAGAAGAAGUCGUAAAAAAAAUGAAAAAUUAUUGGAGACAAUUAUUAAAUGCAAAAUUAAUAACUCAAAGAAAAUUUGAUAAUCUCACAAAAGCAGAAAGAGGUGGCCUCAGCGAGCUGGAUAAAGCCGGGUUUAUAAAAAGACAAUUAGUAGAAACAAGACAAAUAACAAAACAUGUAGCACAAAUAUUAGAUUCAAGAAUGAAUACAAAGUACGAUGAAAAUGAUAAAUUAAUAAGGGAAGUCAAAGUAAUAACAUUAAAAUCAAAAUUAGUCAGCGAUUUUAGAAAAGAUUUUCAAUUUUAUAAAGUAAGGGAGAUAAAUAAUUAUCAUCAUGCACAUGAUGCAUAUUUAAAUGCUGUGGUUGGCACAGCACUGAUAAAAAAGUACCCAAAAUUAGAAUCAGAAUUUGUAUAUGGAGAUUAUAAAGUAUAUGAUGUAAGAAAAAUGAUAGCAAAAUCAGAACAGGAGAUAGGAAAAGCAACAGCAAAGUACUUUUUUUAUUCAAAUAUAAUGAAUUUUUUUAAAACAGAGAUAACAUUAGCAAAUGGUGAGAUAAGAAAAAGACCAUUAAUAGAAACAAAUGGUGAGACAGGUGAGAUAGUAUGGGAUAAGGGGCGAGACUUUGCAACAGUAAGAAAAGUACUCAGCAUGCCACAGGUGAAUAUAGUAAAAAAAACAGAAGUCCAAACAGGUGGCUUUUCAAAAGAAAGCAUCCUUCCAAAAAGAAAUUCAGAUAAAUUAAUAGCCCGCAAAAAAGAUUGGGAUCCAAAAAAGUACGGUGGCUUUGAUUCACCCACCGUAGCAUAUUCAGUAUUAGUAGUAGCAAAAGUAGAAAAGGGGAAAUCAAAAAAAUUAAAAUCAGUAAAAGAGCUGUUAGGAAUAACAAUAAUGGAAAGAUCAUCAUUUGAAAAAAAUCCAAUAGAUUUCCUGGAAGCCAAGGGGUAUAAAGAAGUCAAAAAAGAUUUAAUAAUAAAACUUCCAAAGUACUCAUUAUUUGAGCUGGAAAAUGGGAGAAAAAGAAUGUUAGCAUCAGCCGGUGAGCUGCAAAAGGGGAAUGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUAAAUUUCCUGUAUUUAGCAUCACAUUAUGAAAAAUUAAAGGGGUCACCAGAGGAUAAUGAACAAAAACAAUUAUUUGUAGAACAACAUAAACAUUAUUUAGAUGAAAUAAUAGAACAAAUAUCAGAAUUUUCAAAAAGAGUAAUAUUAGCAGAUGCAAAUCUCGAUAAAGUACUCAGCGCAUAUAAUAAACAUCGAGACAAACCAAUAAGGGAGCAGGCCGAAAAUAUAAUACAUUUAUUUACAUUAACAAAUCUCGGUGCCCCAGCUGCCUUUAAGUACUUUGAUACAACAAUAGAUAGAAAAAGAUAUACAUCGACUAAAGAAGUCUUAGAUGCAACAUUAAUACAUCAGAGCAUCACAGGAUUAUAUGAAACAAGAAUAGAUCUCAGCCAAUUAGGUGGCGAUGGUGGUGGCUCACCAAAAAAAAAAAGAAAAGUAUAG
15 包括SEQ 5之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACGGACGAGUACAAGGUGCCCAGCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACAGCGGCGAGACGGCCGAGGCCACGCGGCUGAAGCGGACGGCCCGGCGGCGGUACACGCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACGAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACAGCACGGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACAGCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACGUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGAGCGCCCGGCUGAGCAAGAGCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGAGCCUGGGCCUGACGCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACGUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGAGCGACGCCAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACGGAGAUCACGAAGGCCCCCCUGAGCGCCAGCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACGGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACGUUCGACAACGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAGAGCGAGGAGACGAUCACGCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAGGUGAAGUACGUGACGGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACGAACCGGAAGGUGACGGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACGUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACGUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUGAGCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACGAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACGGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACGACGCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACGCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACGCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGUGCCCAGCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACGCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACGAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGAGCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACGCUGAAGAGCAAGCUGGUGAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACGGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACGGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACGGAGAUCACGCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACGAACGGCGAGACGGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACGGUGCGGAAGGUGCUGAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACGGAGGUGCAGACGGGCGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUGCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACAGCCCCACGGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCAGCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCAGCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGAGCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAGCGGUACACGAGCACGAAGGAGGUGCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUGAGCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
16 包括SEQ 7之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUCGACAUCGGCACCAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUCCUCGGCAACACCGACCGCCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUCUUCGACAGCGGUGAGACCGCGGAAGCCACCCGCCUCAAGCGGACCGCCCGCCGCCGCUACACCCGCCGCAAGAACCGCAUCUGCUACCUCCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACCGCCUCGAGGAGAGCUUCCUGGUCGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGCCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUCGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUCGUCGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUCAUCUACCUCGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGCGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUCAACCCUGACAACAGCGACGUCGACAAGCUCUUCAUCCAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUCGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGCCGCCUCGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUCUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUCGGCCUCACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUCGCGGAGGACGCCAAGCUCCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUCGACAAUCUCCUCGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUCCUCAGCGACAUCCUGCGGGUCAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUAAAGCGCUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAGGCACUGGUCCGCCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUCGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUCGUCAAGCUCAACAGGGAGGACCUCCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUCGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGCCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUCACCUUCCGCAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUCGCCCGCGGCAACAGCCGCUUCGCCUGGAUGACCCGCAAGAGCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUCGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGCAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUCCUUCCAAAGCACAGCCUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUGACCAAGGUCAAGUACGUCACAGAGGGCAUGCGCAAGCCAGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUCGACCUCCUCUUCAAGACCAACCGCAAGGUCACCGUCAAGCAGCUCAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUCGAGAUCAGCGGCGUCGAGGACCGCUUCAACGCCAGCCUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUCGAGGACAUCGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGCCUCAAGACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUCAAGCGCCGCCGCUACACCGGCUGGGGCCGCCUCAGCCGCAAGCUCAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUCGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGCAACUUCAUGCAGCUCAUCCACGACGACAGCCUCACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUCCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGAGCCCAGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUCCAGACCGUCAAGGUCGUCGACGAGCUGGUCAAGGUCAUGGGCCGCCACAAGCCAGAGAACAUCGUCAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGCGCAUGAAGCGCAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUCAAGGAGCACCCCGUCGAGAACACUCAACUCCAGAACGAGAAGCUCUACCUCUACUACCUCCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGCCUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUCACCCGAAGCGACAAGAACCGCGGCAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGCCAGCUCCUCAACGCCAAGCUCAUCACUCAACGCAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCGGAGCGCGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGCCAGCUCGUCGAGACCCGCCAGAUCACCAAGCACGUCGCCCAGAUCCUCGACAGCCGCAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUCAUCAGGGAAGUCAAGGUCAUCACCCUCAAGAGCAAGCUCGUCAGCGACUUCCGCAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUCGAGAGCGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAGGUCUACGACGUCCGCAAGAUGAUAGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUCGCCAAUGGUGAGAUCCGCAAGCGCCCCCUCAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUCUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUCCGCAAGGUCCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGCAACAGCGACAAGCUCAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCCUACAGCGUCCUCGUCGUCGCCAAGGUCGAGAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUCAAGAGCGUCAAGGAGCUGCUCGGCAUCACCAUCAUGGAGCGAAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUCAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUCUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGCAAGCGCAUGCUCGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUCGCCAGCCACUACGAGAAGCUCAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAGCACUACCUCGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGCGUCAUCCUCGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUCCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUCUUCACCCUCACCAAUCUCGGUGCCCCAGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGCAAGCGCUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUCGACGCCACCCUCAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUCUACGAGACCCGCAUCGACCUCAGCCAGCUCGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGCAAGGUCUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
17 包括SEQ 9之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUCGACAUCGGCACCAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUCCUCGGCAACACCGACCGCCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUCUUCGACAGCGGUGAGACCGCGGAAGCCACCCGCCUCAAGCGCACCGCCCGCCGCCGCUACACCCGCCGCAAGAACCGCAUCUGCUACCUCCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACCGCCUCGAGGAGAGCUUCCUGGUCGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGCCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUCGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUCGUCGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUCAUCUACCUCGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGCGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUCAACCCUGACAACAGCGACGUCGACAAGCUCUUCAUCCAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUCGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGCCGCCUCGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUCUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUCGGCCUCACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUCGCGGAGGACGCCAAGCUCCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUCGACAAUCUCCUCGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUCCUCAGCGACAUCCUGCGGGUCAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUAAAGCGCUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAGGCACUGGUCCGCCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUCGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUCGUCAAGCUCAACAGGGAGGACCUCCUGCGGAAGCAGCGCACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUCGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGCCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUCACCUUCCGCAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUCGCCCGCGGCAACAGCCGCUUCGCCUGGAUGACCCGCAAGAGCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUCGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGCAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUCCUUCCAAAGCACAGCCUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUGACCAAGGUCAAGUACGUCACAGAGGGCAUGCGCAAGCCAGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUCGACCUCCUCUUCAAGACCAACCGCAAGGUCACCGUCAAGCAGCUCAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUCGAGAUCAGCGGCGUCGAGGACCGCUUCAACGCCAGCCUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUCGAGGACAUCGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGCCUCAAGACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUCAAGCGCCGCCGCUACACCGGCUGGGGCCGCCUCAGCCGCAAGCUCAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUCGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGCAACUUCAUGCAGCUCAUCCACGACGACAGCCUCACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUCCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGAGCCCAGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUCCAGACCGUCAAGGUCGUCGACGAGCUGGUCAAGGUCAUGGGCCGCCACAAGCCAGAGAACAUCGUCAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGCGCAUGAAGCGCAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUCAAGGAGCACCCCGUCGAGAACACUCAACUCCAGAACGAGAAGCUCUACCUCUACUACCUCCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGCCUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUCACCCGAAGCGACAAGAACCGCGGCAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGCCAGCUCCUCAACGCCAAGCUCAUCACUCAACGCAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCGGAGCGCGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGCCAGCUCGUCGAGACCCGCCAGAUCACCAAGCACGUCGCCCAGAUCCUCGACAGCCGCAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUCAUCAGGGAAGUCAAGGUCAUCACCCUCAAGAGCAAGCUCGUCAGCGACUUCCGCAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUCGAGAGCGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAGGUCUACGACGUCCGCAAGAUGAUAGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUCGCCAAUGGUGAGAUCCGCAAGCGCCCCCUCAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUCUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUCCGCAAGGUCCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGCAACAGCGACAAGCUCAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCCUACAGCGUCCUCGUCGUCGCCAAGGUCGAGAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUCAAGAGCGUCAAGGAGCUGCUCGGCAUCACCAUCAUGGAGCGAAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUCAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUCUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGCAAGCGCAUGCUCGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUCGCCAGCCACUACGAGAAGCUCAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAGCACUACCUCGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGCGUCAUCCUCGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUCCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUCUUCACCCUCACCAAUCUCGGUGCCCCAGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGCAAGCGCUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUCGACGCCACCCUCAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUCUACGAGACCCGCAUCGACCUCAGCCAGCUCGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGCAAGGUCUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
18 包括SEQ 8之Cas9轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACGGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACAGCGGUGAGACGGCCGAAGCCACGCGGCUGAAGCGGACGGCCCGCCGGCGGUACACGCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACAGCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGGCGGCUGGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACGAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUAAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACGUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGCGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAGAGCGAGGAGACGAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUGGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUGCUUCCAAAGCACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACGAACCGGAAGGUGACGGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACGAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACGGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACGACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAACUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACGCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAACGGAAGUUCGACAAUCUCACGAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUGAUCACGCUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACGGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUAGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACGGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACGCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACGAAUGGUGAGACGGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACGGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUCCAGACGGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGGAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGGAAGCGGAUGCUGGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAGCUGAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAAUCUCGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAGCGGUACACGUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
19 包括SEQ 10之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUCGACAUCGGCACCAACAGCGUCGGCUGGGCCGUCAUCACCGACGAGUACAAGGUCCCCAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUCGGCAACACCGACCGCCACAGCAUCAAGAAGAACCUCAUCGGCGCCCUCCUCUUCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGCCUCAAGCGCACCGCCCGCCGCCGCUACACCCGCCGCAAGAACCGCAUCUGCUACCUCCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACCGCCUCGAGGAGAGCUUCCUCGUCGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGCCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUCGACGAGGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUCCGCAAGAAGCUCGUCGACAGCACCGACAAGGCCGACCUCCGCCUCAUCUACCUCGCCCUCGCCCACAUGAUCAAGUUCCGCGGCCACUUCCUCAUCGAGGGCGACCUCAACCCCGACAACAGCGACGUCGACAAGCUCUUCAUCCAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUCGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCCGCCGCCUCGAGAACCUCAUCGCCCAGCUCCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUCUUCGGCAACCUCAUCGCCCUCAGCCUCGGCCUCACCCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUCGCCGAGGACGCCAAGCUCCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUCGACAACCUCCUCGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUCGCCGCCAAGAACCUCAGCGACGCCAUCCUCCUCAGCGACAUCCUCCGCGUCAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUCAAGCGCUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAGGCCCUCGUCCGCCAGCAGCUCCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUCGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUCCUCGUCAAGCUCAACCGCGAGGACCUCCUCCGCAAGCAGCGCACCUUCGACAACGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUCGGCGAGCUCCACGCCAUCCUCCGCCGCCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUCAAGGACAACCGCGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUCACCUUCCGCAUCCCCUACUACGUCGGCCCCCUCGCCCGCGGCAACAGCCGCUUCGCCUGGAUGACCCGCAAGAGCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUCGUCGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGCAUGACCAACUUCGACAAGAACCUCCCCAACGAGAAGGUCCUCCCCAAGCACAGCCUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUCACCAAGGUCAAGUACGUCACCGAGGGCAUGCGCAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUCGACCUCCUCUUCAAGACCAACCGCAAGGUCACCGUCAAGCAGCUCAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUCGAGAUCAGCGGCGUCGAGGACCGCUUCAACGCCAGCCUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUCGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUCGAGGACAUCGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACCGCGAGAUGAUCGAGGAGCGCCUCAAGACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUCAAGCGCCGCCGCUACACCGGCUGGGGCCGCCUCAGCCGCAAGCUCAUCAACGGCAUCCGCGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUCGACUUCCUCAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGCAACUUCAUGCAGCUCAUCCACGACGACAGCCUCACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUCCACGAGCACAUCGCCAACCUCGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUCCAGACCGUCAAGGUCGUCGACGAGCUCGUCAAGGUCAUGGGCCGCCACAAGCCCGAGAACAUCGUCAUCGAGAUGGCCCGCGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCCGCGAGCGCAUGAAGCGCAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUCGGCAGCCAGAUCCUCAAGGAGCACCCCGUCGAGAACACCCAGCUCCAGAACGAGAAGCUCUACCUCUACUACCUCCAGAACGGCCGCGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUCGACAUCAACCGCCUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCCCAGAGCUUCCUCAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUCACCCGCAGCGACAAGAACCGCGGCAAGAGCGACAACGUCCCCAGCGAGGAGGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGCCAGCUCCUCAACGCCAAGCUCAUCACCCAGCGCAAGUUCGACAACCUCACCAAGGCCGAGCGCGGCGGCCUCAGCGAGCUCGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGCCAGCUCGUCGAGACCCGCCAGAUCACCAAGCACGUCGCCCAGAUCCUCGACAGCCGCAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUCAUCCGCGAGGUCAAGGUCAUCACCCUCAAGAGCAAGCUCGUCAGCGACUUCCGCAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCCGCGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCCGUCGUCGGCACCGCCCUCAUCAAGAAGUACCCCAAGCUCGAGAGCGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAGGUCUACGACGUCCGCAAGAUGAUCGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUCGCCAACGGCGAGAUCCGCAAGCGCCCCCUCAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUCUGGGACAAGGGCCGCGACUUCGCCACCGUCCGCAAGGUCCUCAGCAUGCCCCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACCGAGGUCCAGACCGGCGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUCCCCAAGCGCAACAGCGACAAGCUCAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCCUACAGCGUCCUCGUCGUCGCCAAGGUCGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCUCAAGAGCGUCAAGGAGCUCCUCGGCAUCACCAUCAUGGAGCGCAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUCGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUCAAGAAGGACCUCAUCAUCAAGCUCCCCAAGUACAGCCUCUUCGAGCUCGAGAACGGCCGCAAGCGCAUGCUCGCCAGCGCCGGCGAGCUCCAGAAGGGCAACGAGCUCGCCCUCCCCAGCAAGUACGUCAACUUCCUCUACCUCGCCAGCCACUACGAGAAGCUCAAGGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAGCACUACCUCGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGCGUCAUCCUCGCCGACGCCAACCUCGACAAGGUCCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGCGACAAGCCCAUCCGCGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUCUUCACCCUCACCAACCUCGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGCAAGCGCUACACCAGCACCAAGGAGGUCCUCGACGCCACCCUCAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUCUACGAGACCCGCAUCGACCUCAGCCAGCUCGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGCAAGGUCUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
20 包括SEQ 6之Cas9轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACGGACGAGUACAAGGUUCCCAGCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUGAUCGGUGCACUGCUGUUCGACAGCGGUGAGACGGCCGAAGCCACGCGGCUGAAGCGGACGGCCCGGCGGCGGUACACGCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACGAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACGGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACAGCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGGCUCAGCAAGAGCCGGCGGCUGGAGAAUCUGAUCGCCCAGCUUCCCGGUGAGAAGAAGAAUGGCCUGUUCGGCAAUCUGAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACGAAGGCCCCCCUCAGCGCCAGCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACGUUCGACAAUGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAGAGCGAGGAGACGAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUGGUGGACAAGGGUGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAGAAUCUUCCCAACGAGAAGGUGCUUCCCAAGCACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACGAACCGGAAGGUGACGGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGCAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACGAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUGGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACGGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACGACUCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGCCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACGCGGAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGUUCCCAGCGAGGAAGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAGCGGAAGUUCGACAAUCUGACGAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUGAAGGUGAUCACGCUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACGGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACGGCCAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACGCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACGAAUGGUGAGACGGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGAGACUUCGCCACGGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUGCAGACGGGUGGCUUCAGCAAGGAGAGCAUCCUUCCCAAGCGGAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACGGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGCUACAAGGAAGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCCAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCACUUCCCAGCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCAGCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUGGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAAUCUGGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAGCGGUACACGUCGACGAAGGAAGUGCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
21 包括SEQ 11之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAAAAAUACUCAAUAGGCCUCGACAUAGGCACCAACUCAGUCGGCUGGGCCGUCAUAACCGACGAGUACAAAGUCCCCUCAAAAAAAUUCAAAGUCCUCGGCAACACCGACAGGCACUCAAUAAAAAAAAACCUCAUAGGCGCCCUCCUCUUCGACUCAGGCGAGACCGCCGAGGCCACCAGGCUCAAAAGGACCGCCAGGAGGAGGUACACCAGGAGGAAAAACAGGAUAUGCUACCUCCAGGAGAUAUUCUCAAACGAGAUGGCCAAAGUCGACGACUCAUUCUUCCACAGGCUCGAGGAGUCAUUCCUCGUCGAGGAGGACAAAAAACACGAGAGGCACCCCAUAUUCGGCAACAUAGUCGACGAGGUCGCCUACCACGAGAAAUACCCCACCAUAUACCACCUCAGGAAAAAACUCGUCGACUCAACCGACAAAGCCGACCUCAGGCUCAUAUACCUCGCCCUCGCCCACAUGAUAAAAUUCAGGGGCCACUUCCUCAUAGAGGGCGACCUCAACCCCGACAACUCAGACGUCGACAAACUCUUCAUACAGCUCGUCCAGACCUACAACCAGCUCUUCGAGGAGAACCCCAUAAACGCCUCAGGCGUCGACGCCAAAGCCAUACUCUCAGCCAGGCUCUCAAAAUCAAGGAGGCUCGAGAACCUCAUAGCCCAGCUCCCCGGCGAGAAAAAAAACGGCCUCUUCGGCAACCUCAUAGCCCUCUCACUCGGCCUCACCCCCAACUUCAAAUCAAACUUCGACCUCGCCGAGGACGCCAAACUCCAGCUCUCAAAAGACACCUACGACGACGACCUCGACAACCUCCUCGCCCAGAUAGGCGACCAGUACGCCGACCUCUUCCUCGCCGCCAAAAACCUCUCAGACGCCAUACUCCUCUCAGACAUACUCAGGGUCAACACCGAGAUAACCAAAGCCCCCCUCUCAGCCUCAAUGAUAAAAAGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUCACCCUCCUCAAAGCCCUCGUCAGGCAGCAGCUCCCCGAGAAAUACAAAGAGAUAUUCUUCGACCAGUCAAAAAACGGCUACGCCGGCUACAUAGACGGCGGCGCCUCACAGGAGGAGUUCUACAAAUUCAUAAAACCCAUACUCGAGAAAAUGGACGGCACCGAGGAGCUCCUCGUCAAACUCAACAGGGAGGACCUCCUCAGGAAACAGAGGACCUUCGACAACGGCUCAAUACCCCACCAGAUACACCUCGGCGAGCUCCACGCCAUACUCAGGAGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUCAAAGACAACAGGGAGAAAAUAGAGAAAAUACUCACCUUCAGGAUACCCUACUACGUCGGCCCCCUCGCCAGGGGCAACUCAAGGUUCGCCUGGAUGACCAGGAAAUCAGAGGAGACCAUAACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUCGUCGACAAAGGCGCCUCAGCCCAGUCAUUCAUAGAGAGGAUGACCAACUUCGACAAAAACCUCCCCAACGAGAAAGUCCUCCCCAAACACUCACUCCUCUACGAGUACUUCACCGUCUACAACGAGCUCACCAAAGUCAAAUACGUCACCGAGGGCAUGAGGAAACCCGCCUUCCUCUCAGGCGAGCAGAAAAAAGCCAUAGUCGACCUCCUCUUCAAAACCAACAGGAAAGUCACCGUCAAACAGCUCAAAGAGGACUACUUCAAAAAAAUAGAGUGCUUCGACUCAGUCGAGAUAUCAGGCGUCGAGGACAGGUUCAACGCCUCACUCGGCACCUACCACGACCUCCUCAAAAUAAUAAAAGACAAAGACUUCCUCGACAACGAGGAGAACGAGGACAUACUCGAGGACAUAGUCCUCACCCUCACCCUCUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGAGGCUCAAAACCUACGCCCACCUCUUCGACGACAAAGUCAUGAAACAGCUCAAAAGGAGGAGGUACACCGGCUGGGGCAGGCUCUCAAGGAAACUCAUAAACGGCAUAAGGGACAAACAGUCAGGCAAAACCAUACUCGACUUCCUCAAAUCAGACGGCUUCGCCAACAGGAACUUCAUGCAGCUCAUACACGACGACUCACUCACCUUCAAAGAGGACAUACAGAAAGCCCAGGUCUCAGGCCAGGGCGACUCACUCCACGAGCACAUAGCCAACCUCGCCGGCUCACCCGCCAUAAAAAAAGGCAUACUCCAGACCGUCAAAGUCGUCGACGAGCUCGUCAAAGUCAUGGGCAGGCACAAACCCGAGAACAUAGUCAUAGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACCCAGAAAGGCCAGAAAAACUCAAGGGAGAGGAUGAAAAGGAUAGAGGAGGGCAUAAAAGAGCUCGGCUCACAGAUACUCAAAGAGCACCCCGUCGAGAACACCCAGCUCCAGAACGAGAAACUCUACCUCUACUACCUCCAGAACGGCAGGGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUCGACAUAAACAGGCUCUCAGACUACGACGUCGACCACAUAGUCCCCCAGUCAUUCCUCAAAGACGACUCAAUAGACAACAAAGUCCUCACCAGGUCAGACAAAAACAGGGGCAAAUCAGACAACGUCCCCUCAGAGGAGGUCGUCAAAAAAAUGAAAAACUACUGGAGGCAGCUCCUCAACGCCAAACUCAUAACCCAGAGGAAAUUCGACAACCUCACCAAAGCCGAGAGGGGCGGCCUCUCAGAGCUCGACAAAGCCGGCUUCAUAAAAAGGCAGCUCGUCGAGACCAGGCAGAUAACCAAACACGUCGCCCAGAUACUCGACUCAAGGAUGAACACCAAAUACGACGAGAACGACAAACUCAUAAGGGAGGUCAAAGUCAUAACCCUCAAAUCAAAACUCGUCUCAGACUUCAGGAAAGACUUCCAGUUCUACAAAGUCAGGGAGAUAAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUCAACGCCGUCGUCGGCACCGCCCUCAUAAAAAAAUACCCCAAACUCGAGUCAGAGUUCGUCUACGGCGACUACAAAGUCUACGACGUCAGGAAAAUGAUAGCCAAAUCAGAGCAGGAGAUAGGCAAAGCCACCGCCAAAUACUUCUUCUACUCAAACAUAAUGAACUUCUUCAAAACCGAGAUAACCCUCGCCAACGGCGAGAUAAGGAAAAGGCCCCUCAUAGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUAGUCUGGGACAAAGGCAGGGACUUCGCCACCGUCAGGAAAGUCCUCUCAAUGCCCCAGGUCAACAUAGUCAAAAAAACCGAGGUCCAGACCGGCGGCUUCUCAAAAGAGUCAAUACUCCCCAAAAGGAACUCAGACAAACUCAUAGCCAGGAAAAAAGACUGGGACCCCAAAAAAUACGGCGGCUUCGACUCACCCACCGUCGCCUACUCAGUCCUCGUCGUCGCCAAAGUCGAGAAAGGCAAAUCAAAAAAACUCAAAUCAGUCAAAGAGCUCCUCGGCAUAACCAUAAUGGAGAGGUCAUCAUUCGAGAAAAACCCCAUAGACUUCCUCGAGGCCAAAGGCUACAAAGAGGUCAAAAAAGACCUCAUAAUAAAACUCCCCAAAUACUCACUCUUCGAGCUCGAGAACGGCAGGAAAAGGAUGCUCGCCUCAGCCGGCGAGCUCCAGAAAGGCAACGAGCUCGCCCUCCCCUCAAAAUACGUCAACUUCCUCUACCUCGCCUCACACUACGAGAAACUCAAAGGCUCACCCGAGGACAACGAGCAGAAACAGCUCUUCGUCGAGCAGCACAAACACUACCUCGACGAGAUAAUAGAGCAGAUAUCAGAGUUCUCAAAAAGGGUCAUACUCGCCGACGCCAACCUCGACAAAGUCCUCUCAGCCUACAACAAACACAGGGACAAACCCAUAAGGGAGCAGGCCGAGAACAUAAUACACCUCUUCACCCUCACCAACCUCGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAAUACUUCGACACCACCAUAGACAGGAAAAGGUACACCUCAACCAAAGAGGUCCUCGACGCCACCCUCAUACACCAGUCAAUAACCGGCCUCUACGAGACCAGGAUAGACCUCUCACAGCUCGGCGGCGACGGCGGCGGCUCACCCAAAAAAAAAAGGAAAGUCUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
22 包括SEQ 12之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAAAAAUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACGAACAGCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACGGACGAGUACAAAGUGCCCAGCAAAAAAUUCAAAGUGCUGGGCAACACGGACCGGCACAGCAUCAAAAAAAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACAGCGGCGAGACGGCCGAGGCCACGCGGCUGAAACGGACGGCCCGGCGGCGGUACACGCGGCGGAAAAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAGAUGGCCAAAGUGGACGACAGCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGAGCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAAAAACACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAAUACCCCACGAUCUACCACCUGCGGAAAAAACUGGUGGACAGCACGGACAAAGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAAUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACAGCGACGUGGACAAACUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACGUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCAGCGGCGUGGACGCCAAAGCCAUCCUGAGCGCCCGGCUGAGCAAAAGCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAAAAAAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGAGCCUGGGCCUGACGCCCAACUUCAAAAGCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAACUGCAGCUGAGCAAAGACACGUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAAAACCUGAGCGACGCCAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACGGAGAUCACGAAAGCCCCCCUGAGCGCCAGCAUGAUCAAACGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACGCUGCUGAAAGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAAUACAAAGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAAAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGUUCUACAAAUUCAUCAAACCCAUCCUGGAGAAAAUGGACGGCACGGAGGAGCUGCUGGUGAAACUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAACAGCGGACGUUCGACAACGGCAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAAGACAACCGGGAGAAAAUCGAGAAAAUCCUGACGUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACAGCCGGUUCGCCUGGAUGACGCGGAAAAGCGAGGAGACGAUCACGCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAAGGCGCCAGCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACGAACUUCGACAAAAACCUGCCCAACGAGAAAGUGCUGCCCAAACACAGCCUGCUGUACGAGUACUUCACGGUGUACAACGAGCUGACGAAAGUGAAAUACGUGACGGAGGGCAUGCGGAAACCCGCCUUCCUGAGCGGCGAGCAGAAAAAAGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAAACGAACCGGAAAGUGACGGUGAAACAGCUGAAAGAGGACUACUUCAAAAAAAUCGAGUGCUUCGACAGCGUGGAGAUCAGCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCAGCCUGGGCACGUACCACGACCUGCUGAAAAUCAUCAAAGACAAAGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACGCUGACGCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAAACGUACGCCCACCUGUUCGACGACAAAGUGAUGAAACAGCUGAAACGGCGGCGGUACACGGGCUGGGGCCGGCUGAGCCGGAAACUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAACAGAGCGGCAAAACGAUCCUGGACUUCCUGAAAAGCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACGUUCAAAGAGGACAUCCAGAAAGCCCAGGUGAGCGGCCAGGGCGACAGCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCAGCCCCGCCAUCAAAAAAGGCAUCCUGCAGACGGUGAAAGUGGUGGACGAGCUGGUGAAAGUGAUGGGCCGGCACAAACCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACGACGCAGAAAGGCCAGAAAAACAGCCGGGAGCGGAUGAAACGGAUCGAGGAGGGCAUCAAAGAGCUGGGCAGCCAGAUCCUGAAAGAGCACCCCGUGGAGAACACGCAGCUGCAGAACGAGAAACUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGAGCUUCCUGAAAGACGACAGCAUCGACAACAAAGUGCUGACGCGGAGCGACAAAAACCGGGGCAAAAGCGACAACGUGCCCAGCGAGGAGGUGGUGAAAAAAAUGAAAAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAACUGAUCACGCAGCGGAAAUUCGACAACCUGACGAAAGCCGAGCGGGGCGGCCUGAGCGAGCUGGACAAAGCCGGCUUCAUCAAACGGCAGCUGGUGGAGACGCGGCAGAUCACGAAACACGUGGCCCAGAUCCUGGACAGCCGGAUGAACACGAAAUACGACGAGAACGACAAACUGAUCCGGGAGGUGAAAGUGAUCACGCUGAAAAGCAAACUGGUGAGCGACUUCCGGAAAGACUUCCAGUUCUACAAAGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACGGCCCUGAUCAAAAAAUACCCCAAACUGGAGAGCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAAGUGUACGACGUGCGGAAAAUGAUCGCCAAAAGCGAGCAGGAGAUCGGCAAAGCCACGGCCAAAUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAAACGGAGAUCACGCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAACGGCCCCUGAUCGAGACGAACGGCGAGACGGGCGAGAUCGUGUGGGACAAAGGCCGGGACUUCGCCACGGUGCGGAAAGUGCUGAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAAAAAACGGAGGUGCAGACGGGCGGCUUCAGCAAAGAGAGCAUCCUGCCCAAACGGAACAGCGACAAACUGAUCGCCCGGAAAAAAGACUGGGACCCCAAAAAAUACGGCGGCUUCGACAGCCCCACGGUGGCCUACAGCGUGCUGGUGGUGGCCAAAGUGGAGAAAGGCAAAAGCAAAAAACUGAAAAGCGUGAAAGAGCUGCUGGGCAUCACGAUCAUGGAGCGGAGCAGCUUCGAGAAAAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAAGGCUACAAAGAGGUGAAAAAAGACCUGAUCAUCAAACUGCCCAAAUACAGCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAACGGAUGCUGGCCAGCGCCGGCGAGCUGCAGAAAGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCAGCAAAUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCAGCCACUACGAGAAACUGAAAGGCAGCCCCGAGGACAACGAGCAGAAACAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAACACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCAGCGAGUUCAGCAAACGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAAGUGCUGAGCGCCUACAACAAACACCGGGACAAACCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACGCUGACGAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAAUACUUCGACACGACGAUCGACCGGAAACGGUACACGAGCACGAAAGAGGUGCUGGACGCCACGCUGAUCCACCAGAGCAUCACGGGCCUGUACGAGACGCGGAUCGACCUGAGCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCAGCCCCAAAAAAAAACGGAAAGUGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
23 包括SEQ 13之Cas9轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGAUAAAAAAUAUUCAAUAGGAUUAGAUAUAGGAACAAAUUCAGUAGGAUGGGCAGUAAUAACAGAUGAAUAUAAAGUACCAUCAAAAAAAUUUAAAGUAUUAGGAAAUACAGAUAGACAUUCAAUAAAAAAAAAUUUAAUAGGAGCAUUAUUAUUUGAUUCAGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGAUUAAAAAGAACAGCAAGAAGAAGAUAUACAAGAAGAAAAAAUAGAAUAUGUUAUUUACAAGAAAUAUUUUCAAAUGAAAUGGCAAAAGUAGAUGAUUCAUUUUUUCAUAGAUUAGAAGAAUCAUUUUUAGUAGAAGAAGAUAAAAAACAUGAAAGACAUCCAAUAUUUGGAAAUAUAGUAGAUGAAGUAGCAUAUCAUGAAAAAUAUCCAACAAUAUAUCAUUUAAGAAAAAAAUUAGUAGAUUCAACAGAUAAAGCAGAUUUAAGAUUAAUAUAUUUAGCAUUAGCACAUAUGAUAAAAUUUAGAGGACAUUUUUUAAUAGAAGGAGAUUUAAAUCCAGAUAAUUCAGAUGUAGAUAAAUUAUUUAUACAAUUAGUACAAACAUAUAAUCAAUUAUUUGAAGAAAAUCCAAUAAAUGCAUCAGGAGUAGAUGCAAAAGCAAUAUUAUCAGCAAGAUUAUCAAAAUCAAGAAGAUUAGAAAAUUUAAUAGCACAAUUACCAGGAGAAAAAAAAAAUGGAUUAUUUGGAAAUUUAAUAGCAUUAUCAUUAGGAUUAACACCAAAUUUUAAAUCAAAUUUUGAUUUAGCAGAAGAUGCAAAAUUACAAUUAUCAAAAGAUACAUAUGAUGAUGAUUUAGAUAAUUUAUUAGCACAAAUAGGAGAUCAAUAUGCAGAUUUAUUUUUAGCAGCAAAAAAUUUAUCAGAUGCAAUAUUAUUAUCAGAUAUAUUAAGAGUAAAUACAGAAAUAACAAAAGCACCAUUAUCAGCAUCAAUGAUAAAAAGAUAUGAUGAACAUCAUCAGGACUUAACAUUAUUAAAAGCAUUAGUAAGACAACAAUUACCAGAAAAAUAUAAAGAAAUAUUUUUUGAUCAAUCAAAAAAUGGAUAUGCAGGAUAUAUAGAUGGAGGAGCAUCACAAGAAGAAUUUUAUAAAUUUAUAAAACCAAUAUUAGAAAAAAUGGAUGGAACAGAAGAAUUAUUAGUAAAAUUAAAUAGAGAAGAUUUAUUAAGAAAACAAAGAACAUUUGAUAAUGGAUCAAUACCACAUCAAAUACAUUUAGGAGAAUUACAUGCAAUAUUAAGAAGACAAGAAGAUUUUUAUCCAUUUUUAAAAGAUAAUAGAGAAAAAAUAGAAAAAAUAUUAACAUUUAGAAUACCAUAUUAUGUAGGACCAUUAGCAAGAGGAAAUUCAAGAUUUGCAUGGAUGACAAGAAAAUCAGAAGAAACAAUAACACCAUGGAAUUUUGAAGAAGUAGUAGAUAAAGGAGCAUCAGCACAAUCAUUUAUAGAAAGAAUGACAAAUUUUGAUAAAAAUUUACCAAAUGAAAAAGUAUUACCAAAACAUUCAUUAUUAUAUGAAUAUUUUACAGUAUAUAAUGAAUUAACAAAAGUAAAAUAUGUAACAGAAGGAAUGAGAAAACCAGCAUUUUUAUCAGGAGAACAAAAAAAAGCAAUAGUAGAUUUAUUAUUUAAAACAAAUAGAAAAGUAACAGUAAAACAAUUAAAAGAAGAUUAUUUUAAAAAAAUAGAAUGUUUUGAUUCAGUAGAAAUAUCAGGAGUAGAAGAUAGAUUUAAUGCAUCAUUAGGAACAUAUCAUGAUUUAUUAAAAAUAAUAAAAGAUAAAGAUUUUUUAGAUAAUGAAGAAAAUGAAGAUAUAUUAGAAGAUAUAGUAUUAACAUUAACAUUAUUUGAAGAUAGAGAAAUGAUAGAAGAAAGAUUAAAAACAUAUGCACAUUUAUUUGAUGAUAAAGUAAUGAAACAAUUAAAAAGAAGAAGAUAUACAGGAUGGGGAAGAUUAUCAAGAAAAUUAAUAAAUGGAAUAAGAGAUAAACAAUCAGGAAAAACAAUAUUAGAUUUUUUAAAAUCAGAUGGAUUUGCAAAUAGAAAUUUUAUGCAAUUAAUACAUGAUGAUUCAUUAACAUUUAAAGAAGAUAUACAAAAAGCACAAGUAUCAGGACAAGGAGAUUCAUUACAUGAACAUAUAGCAAAUUUAGCAGGAUCACCAGCAAUAAAAAAAGGAAUAUUACAAACAGUAAAAGUAGUAGAUGAAUUAGUAAAAGUAAUGGGAAGACAUAAACCAGAAAAUAUAGUAAUAGAAAUGGCAAGAGAAAAUCAAACAACACAAAAAGGACAAAAAAAUUCAAGAGAAAGAAUGAAAAGAAUAGAAGAAGGAAUAAAAGAAUUAGGAUCACAAAUAUUAAAAGAACAUCCAGUAGAAAAUACACAAUUACAAAAUGAAAAAUUAUAUUUAUAUUAUUUACAAAAUGGAAGAGAUAUGUAUGUAGAUCAAGAAUUAGAUAUAAAUAGAUUAUCAGAUUAUGAUGUAGAUCAUAUAGUACCACAAUCAUUUUUAAAAGAUGAUUCAAUAGAUAAUAAAGUAUUAACAAGAUCAGAUAAAAAUAGAGGAAAAUCAGAUAAUGUACCAUCAGAAGAAGUAGUAAAAAAAAUGAAAAAUUAUUGGAGACAAUUAUUAAAUGCAAAAUUAAUAACACAAAGAAAAUUUGAUAAUUUAACAAAAGCAGAAAGAGGAGGAUUAUCAGAAUUAGAUAAAGCAGGAUUUAUAAAAAGACAAUUAGUAGAAACAAGACAAAUAACAAAACAUGUAGCACAAAUAUUAGAUUCAAGAAUGAAUACAAAAUAUGAUGAAAAUGAUAAAUUAAUAAGAGAAGUAAAAGUAAUAACAUUAAAAUCAAAAUUAGUAUCAGAUUUUAGAAAAGAUUUUCAAUUUUAUAAAGUAAGAGAAAUAAAUAAUUAUCAUCAUGCACAUGAUGCAUAUUUAAAUGCAGUAGUAGGAACAGCAUUAAUAAAAAAAUAUCCAAAAUUAGAAUCAGAAUUUGUAUAUGGAGAUUAUAAAGUAUAUGAUGUAAGAAAAAUGAUAGCAAAAUCAGAACAAGAAAUAGGAAAAGCAACAGCAAAAUAUUUUUUUUAUUCAAAUAUAAUGAAUUUUUUUAAAACAGAAAUAACAUUAGCAAAUGGAGAAAUAAGAAAAAGACCAUUAAUAGAAACAAAUGGAGAAACAGGAGAAAUAGUAUGGGAUAAAGGAAGAGAUUUUGCAACAGUAAGAAAAGUAUUAUCAAUGCCACAAGUAAAUAUAGUAAAAAAAACAGAAGUACAAACAGGAGGAUUUUCAAAAGAAUCAAUAUUACCAAAAAGAAAUUCAGAUAAAUUAAUAGCAAGAAAAAAAGAUUGGGAUCCAAAAAAAUAUGGAGGAUUUGAUUCACCAACAGUAGCAUAUUCAGUAUUAGUAGUAGCAAAAGUAGAAAAAGGAAAAUCAAAAAAAUUAAAAUCAGUAAAAGAAUUAUUAGGAAUAACAAUAAUGGAAAGAUCAUCAUUUGAAAAAAAUCCAAUAGAUUUUUUAGAAGCAAAAGGAUAUAAAGAAGUAAAAAAAGAUUUAAUAAUAAAAUUACCAAAAUAUUCAUUAUUUGAAUUAGAAAAUGGAAGAAAAAGAAUGUUAGCAUCAGCAGGAGAAUUACAAAAAGGAAAUGAAUUAGCAUUACCAUCAAAAUAUGUAAAUUUUUUAUAUUUAGCAUCACAUUAUGAAAAAUUAAAAGGAUCACCAGAAGAUAAUGAACAAAAACAAUUAUUUGUAGAACAACAUAAACAUUAUUUAGAUGAAAUAAUAGAACAAAUAUCAGAAUUUUCAAAAAGAGUAAUAUUAGCAGAUGCAAAUUUAGAUAAAGUAUUAUCAGCAUAUAAUAAACAUAGAGAUAAACCAAUAAGAGAACAAGCAGAAAAUAUAAUACAUUUAUUUACAUUAACAAAUUUAGGAGCACCAGCAGCAUUUAAAUAUUUUGAUACAACAAUAGAUAGAAAAAGAUAUACAUCAACAAAAGAAGUAUUAGAUGCAACAUUAAUACAUCAAUCAAUAACAGGAUUAUAUGAAACAAGAAUAGAUUUAUCACAAUUAGGAGGAGAUGGAGGAGGAUCACCAAAAAAAAAAAGAAAAGUAUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
24 包括SEQ 14之Cas9轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGAUAAAAAGUACAGCAUCGGAUUAGAUAUAGGAACAAAUUCAGUUGGCUGGGCUGUGAUAACAGAUGAAUAUAAAGUUCCCUCAAAAAAAUUUAAAGUAUUAGGAAAUACAGAUAGACAUAGCAUCAAAAAAAAUCUCAUAGGUGCACUGUUAUUUGAUUCAGGUGAGACAGCAGAAGCCACAAGAUUAAAAAGAACAGCCCGCAGAAGAUAUACAAGAAGAAAAAAUAGAAUAUGUUAUUUACAGGAGAUAUUUUCAAAUGAAAUGGCAAAAGUAGAUGAUUCAUUUUUUCAUAGAUUAGAAGAAUCAUUCCUGGUAGAAGAAGAUAAAAAACAUGAAAGACAUCCAAUAUUUGGAAAUAUAGUAGAUGAAGUCGCAUAUCAUGAAAAGUACCCCACCAUAUAUCAUCUGCGGAAAAAAUUAGUAGAUUCGACUGAUAAAGCAGAUCUGCGGUUAAUAUAUUUAGCACUGGCACAUAUGAUAAAAUUUAGAGGACAUUUCCUGAUAGAAGGAGAUUUAAAUCCUGACAAUUCAGAUGUAGAUAAAUUAUUUAUACAAUUAGUACAAACCUACAAUCAAUUAUUUGAAGAAAAUCCAAUAAAUGCAUCAGGAGUAGAUGCAAAAGCAAUACUCAGCGCCCGCCUCAGCAAAUCAAGAAGAUUAGAAAAUCUCAUAGCACAACUUCCAGGUGAGAAAAAAAAUGGGUUAUUUGGAAAUCUCAUAGCACUCAGCUUAGGAUUAACUCCCAAUUUUAAAUCAAAUUUUGAUUUAGCAGAAGAUGCAAAAUUACAACUCAGCAAAGAUACCUACGAUGAUGAUUUAGAUAAUCUCUUAGCACAAAUAGGAGAUCAAUAUGCAGAUUUAUUCCUGGCUGCCAAAAAUCUCAGCGAUGCAAUAUUACUCAGCGAUAUACUGCGGGUAAAUACAGAGAUAACAAAAGCACCACUCAGCGCAUCAAUGAUAAAAAGAUAUGAUGAACAUCAUCAAGAUUUAACAUUAUUAAAAGCACUGGUAAGACAACAACUUCCAGAGAAGUACAAAGAAAUAUUUUUUGAUCAGAGCAAAAAUGGGUAUGCCGGGUAUAUAGAUGGUGGUGCCUCACAGGAGGAAUUUUAUAAAUUUAUAAAACCAAUAUUAGAAAAAAUGGAUGGAACAGAGGAGCUGUUAGUAAAAUUAAAUAGGGAGGAUUUACUGCGGAAACAAAGAACAUUUGAUAAUGGGAGCAUCCCCCAUCAAAUACAUUUAGGUGAGCUGCAUGCAAUACUGCGGAGACAGGAGGAUUUUUAUCCAUUCCUGAAAGAUAAUAGGGAGAAAAUAGAAAAAAUAUUAACAUUUAGAAUCCCCUAUUAUGUUGGCCCAUUAGCCCGCGGAAAUUCAAGAUUUGCAUGGAUGACAAGAAAAUCAGAAGAAACAAUAACUCCCUGGAAUUUUGAAGAAGUCGUAGAUAAGGGUGCCUCAGCACAGAGCUUUAUAGAAAGAAUGACAAAUUUUGAUAAAAAUCUUCCAAAUGAAAAAGUACUUCCAAAACAUUCAUUAUUAUAUGAAUAUUUUACAGUAUAUAAUGAGCUGACAAAAGUAAAGUACGUAACAGAGGGAAUGAGAAAACCAGCAUUCCUCAGCGGUGAGCAAAAAAAAGCAAUAGUAGAUUUAUUAUUUAAAACAAAUAGAAAAGUAACAGUAAAACAAUUAAAAGAAGAUUAUUUUAAAAAAAUAGAAUGUUUUGAUUCAGUAGAAAUAUCAGGAGUAGAAGAUAGAUUUAAUGCAUCAUUAGGAACCUACCAUGAUUUAUUAAAAAUAAUAAAAGAUAAAGAUUUCCUGGAUAAUGAAGAAAAUGAAGAUAUAUUAGAAGAUAUAGUAUUAACAUUAACAUUAUUUGAAGAUAGGGAGAUGAUAGAAGAAAGAUUAAAAACCUACGCACAUUUAUUUGAUGAUAAAGUAAUGAAACAAUUAAAAAGAAGAAGAUAUACAGGAUGGGGAAGACUCAGCAGAAAAUUAAUAAAUGGGAUACGAGACAAACAGAGCGGAAAAACAAUAUUAGAUUUCCUGAAAUCAGAUGGAUUUGCAAAUAGAAAUUUUAUGCAAUUAAUACAUGAUGAUUCAUUAACAUUUAAAGAAGAUAUACAAAAAGCACAGGUCAGCGGACAGGGCGAUUCAUUACAUGAACAUAUAGCAAAUCUCGCCGGGUCACCAGCAAUAAAAAAGGGGAUAUUACAAACAGUAAAAGUAGUAGAUGAGCUGGUAAAAGUAAUGGGAAGACAUAAACCAGAGAAUAUAGUAAUAGAAAUGGCCAGGGAGAAUCAAACAACUCAAAAGGGGCAAAAAAAUUCAAGGGAGAGAAUGAAAAGAAUAGAAGAAGGAAUAAAAGAGCUGGGAUCACAAAUAUUAAAAGAACAUCCAGUAGAAAAUACUCAAUUACAAAAUGAAAAAUUAUAUUUAUAUUAUUUACAAAAUGGGCGAGACAUGUAUGUAGAUCAGGAGCUGGAUAUAAAUAGACUCAGCGAUUAUGAUGUAGAUCAUAUAGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAAGAUGAUAGCAUCGAUAAUAAAGUAUUAACAAGAUCAGAUAAAAAUAGAGGAAAAUCAGAUAAUGUUCCCUCAGAAGAAGUCGUAAAAAAAAUGAAAAAUUAUUGGAGACAAUUAUUAAAUGCAAAAUUAAUAACUCAAAGAAAAUUUGAUAAUCUCACAAAAGCAGAAAGAGGUGGCCUCAGCGAGCUGGAUAAAGCCGGGUUUAUAAAAAGACAAUUAGUAGAAACAAGACAAAUAACAAAACAUGUAGCACAAAUAUUAGAUUCAAGAAUGAAUACAAAGUACGAUGAAAAUGAUAAAUUAAUAAGGGAAGUCAAAGUAAUAACAUUAAAAUCAAAAUUAGUCAGCGAUUUUAGAAAAGAUUUUCAAUUUUAUAAAGUAAGGGAGAUAAAUAAUUAUCAUCAUGCACAUGAUGCAUAUUUAAAUGCUGUGGUUGGCACAGCACUGAUAAAAAAGUACCCAAAAUUAGAAUCAGAAUUUGUAUAUGGAGAUUAUAAAGUAUAUGAUGUAAGAAAAAUGAUAGCAAAAUCAGAACAGGAGAUAGGAAAAGCAACAGCAAAGUACUUUUUUUAUUCAAAUAUAAUGAAUUUUUUUAAAACAGAGAUAACAUUAGCAAAUGGUGAGAUAAGAAAAAGACCAUUAAUAGAAACAAAUGGUGAGACAGGUGAGAUAGUAUGGGAUAAGGGGCGAGACUUUGCAACAGUAAGAAAAGUACUCAGCAUGCCACAGGUGAAUAUAGUAAAAAAAACAGAAGUCCAAACAGGUGGCUUUUCAAAAGAAAGCAUCCUUCCAAAAAGAAAUUCAGAUAAAUUAAUAGCCCGCAAAAAAGAUUGGGAUCCAAAAAAGUACGGUGGCUUUGAUUCACCCACCGUAGCAUAUUCAGUAUUAGUAGUAGCAAAAGUAGAAAAGGGGAAAUCAAAAAAAUUAAAAUCAGUAAAAGAGCUGUUAGGAAUAACAAUAAUGGAAAGAUCAUCAUUUGAAAAAAAUCCAAUAGAUUUCCUGGAAGCCAAGGGGUAUAAAGAAGUCAAAAAAGAUUUAAUAAUAAAACUUCCAAAGUACUCAUUAUUUGAGCUGGAAAAUGGGAGAAAAAGAAUGUUAGCAUCAGCCGGUGAGCUGCAAAAGGGGAAUGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUAAAUUUCCUGUAUUUAGCAUCACAUUAUGAAAAAUUAAAGGGGUCACCAGAGGAUAAUGAACAAAAACAAUUAUUUGUAGAACAACAUAAACAUUAUUUAGAUGAAAUAAUAGAACAAAUAUCAGAAUUUUCAAAAAGAGUAAUAUUAGCAGAUGCAAAUCUCGAUAAAGUACUCAGCGCAUAUAAUAAACAUCGAGACAAACCAAUAAGGGAGCAGGCCGAAAAUAUAAUACAUUUAUUUACAUUAACAAAUCUCGGUGCCCCAGCUGCCUUUAAGUACUUUGAUACAACAAUAGAUAGAAAAAGAUAUACAUCGACUAAAGAAGUCUUAGAUGCAACAUUAAUACAUCAGAGCAUCACAGGAUUAUAUGAAACAAGAAUAGAUCUCAGCCAAUUAGGUGGCGAUGGUGGUGGCUCACCAAAAAAAAAAAGAAAAGUAUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
25-28 不使用
29 E-對富集、表6密碼子富集之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGACAUCGGAACAAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACAGACGAAUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACAGCGGUGAGACAGCAGAAGCCACAAGACUGAAGAGAACAGCCCGCAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUCGACUCGACUGACAAGGCAGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUAAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCUGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAAUCUCAUCGCACAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGAAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGACUGACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCAAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUCAACACAGAGAUCACAAAGGCACCGCUCAGCGCAAGCAUGAUAAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAGGAGCUGCUGGUCAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGAGAACAUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCAAUCCUGCGGAGACAGGAGGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCCUACUACGUUGGCCCGCUGGCCCGCGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACUCCCUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGUGCCAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAAAAGGUCCUUCCAAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAGCUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAGGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGGGAGAUGAUAGAAGAAAGACUGAAGACCUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUCAGCAGAAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGCGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAAUCUCGCCGGGAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAGCUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCAGAGAACAUCGUCAUCGAAAUGGCCAGGGAGAACCAGACAACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAGCUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACUCAACUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUGGACAUCAACAGACUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACUCAAAGAAAGUUCGACAAUCUCACAAAGGCAGAAAGAGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUAGCAAAGAGCGAACAGGAGAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACACUGGCAAAUGGUGAGAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAAUGGUGAGACAGGUGAGAUCGUCUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUCAGCAUGCCGCAGGUGAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGUGGCUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUUCCAAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAGCUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAAAAUGGGAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAAUCUCGACAAGGUCCUCAGCGCAUACAACAAGCACCGAGACAAGCCGAUCAGGGAGCAGGCCGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAAUCUCGGUGCCCCGGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCUAG
30-45 不使用
46 E-對富集、表7低A密碼子富集之Cas9 ORF AUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACUCCGGUGAGACCGCCGAAGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGCCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCUCCAUGAUAAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGCGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUGGACAAGGGUGCCUCCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUGCUUCCAAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACUCCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAACUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAACGGAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUAGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCUCCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGGAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGGUCCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAAUCUCGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAG
47-66 不使用
67 WT Cas9 ORF ATGGATAAGAAGTACTCAATCGGGCTGGATATCGGAACTAATTCCGTGGGTTGGGCAGTGATCACGGATGAATACAAAGTGCCGTCCAAGAAGTTCAAGGTCCTGGGGAACACCGATAGACACAGCATCAAGAAAAATCTCATCGGAGCCCTGCTGTTTGACTCCGGCGAAACCGCAGAAGCGACCCGGCTCAAACGTACCGCGAGGCGACGCTACACCCGGCGGAAGAATCGCATCTGCTATCTGCAAGAGATCTTTTCGAACGAAATGGCAAAGGTCGACGACAGCTTCTTCCACCGCCTGGAAGAATCTTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCATGAACGGCATCCTATCTTTGGAAACATCGTCGACGAAGTGGCGTACCACGAAAAGTACCCGACCATCTACCATCTGCGGAAGAAGTTGGTTGACTCAACTGACAAGGCCGACCTCAGATTGATCTACTTGGCCCTCGCCCATATGATCAAATTCCGCGGACACTTCCTGATCGAAGGCGATCTGAACCCTGATAACTCCGACGTGGATAAGCTTTTCATTCAACTGGTGCAGACCTACAACCAACTGTTCGAAGAAAACCCAATCAATGCTAGCGGCGTCGATGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCGAAGTCGCGGCGCCTCGAAAACCTGATCGCACAGCTGCCGGGAGAGAAAAAGAACGGACTTTTCGGCAACTTGATCGCTCTCTCACTGGGACTCACTCCCAATTTCAAGTCCAATTTTGACCTGGCCGAGGACGCGAAGCTGCAACTCTCAAAGGACACCTACGACGACGACTTGGACAATTTGCTGGCACAAATTGGCGATCAGTACGCGGATCTGTTCCTTGCCGCTAAGAACCTTTCGGACGCAATCTTGCTGTCCGATATCCTGCGCGTGAACACCGAAATAACCAAAGCGCCGCTTAGCGCCTCGATGATTAAGCGGTACGACGAGCATCACCAGGATCTCACGCTGCTCAAAGCGCTCGTGAGACAGCAACTGCCTGAAAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAATGGGTACGCAGGGTACATCGATGGAGGCGCTAGCCAGGAAGAGTTCTATAAGTTCATCAAGCCAATCCTGGAAAAGATGGACGGAACCGAAGAACTGCTGGTCAAGCTGAACAGGGAGGATCTGCTCCGGAAACAGAGAACCTTTGACAACGGATCCATTCCCCACCAGATCCATCTGGGTGAGCTGCACGCCATCTTGCGGCGCCAGGAGGACTTTTACCCATTCCTCAAGGACAACCGGGAAAAGATCGAGAAAATTCTGACGTTCCGCATCCCGTATTACGTGGGCCCACTGGCGCGCGGCAATTCGCGCTTCGCGTGGATGACTAGAAAATCAGAGGAAACCATCACTCCTTGGAATTTCGAGGAAGTTGTGGATAAGGGAGCTTCGGCACAAAGCTTCATCGAACGAATGACCAACTTCGACAAGAATCTCCCAAACGAGAAGGTGCTTCCTAAGCACAGCCTCCTTTACGAATACTTCACTGTCTACAACGAACTGACTAAAGTGAAATACGTTACTGAAGGAATGAGGAAGCCGGCCTTTCTGTCCGGAGAACAGAAGAAAGCAATTGTCGATCTGCTGTTCAAGACCAACCGCAAGGTGACCGTCAAGCAGCTTAAAGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGTTTCGACTCAGTGGAAATCAGCGGGGTGGAGGACAGATTCAACGCTTCGCTGGGAACCTATCATGATCTCCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTTGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAAGATATCGTCCTGACCTTGACCCTTTTCGAGGATCGCGAGATGATCGAGGAGAGGCTTAAGACCTACGCTCATCTCTTCGACGATAAGGTCATGAAACAACTCAAGCGCCGCCGGTACACTGGTTGGGGCCGCCTCTCCCGCAAGCTGATCAACGGTATTCGCGATAAACAGAGCGGTAAAACTATCCTGGATTTCCTCAAATCGGATGGCTTCGCTAATCGTAACTTCATGCAATTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTTAAGGAGGACATCCAAAAAGCACAAGTGTCCGGACAGGGAGACTCACTCCATGAACACATCGCGAATCTGGCCGGTTCGCCGGCGATTAAGAAGGGAATTCTGCAAACTGTGAAGGTGGTCGACGAGCTGGTGAAGGTCATGGGACGGCACAAACCGGAGAATATCGTGATTGAAATGGCCCGAGAAAACCAGACTACCCAGAAGGGCCAGAAAAACTCCCGCGAAAGGATGAAGCGGATCGAAGAAGGAATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAAGAGCACCCGGTGGAAAACACGCAGCTGCAGAACGAGAAGCTCTACCTGTACTATTTGCAAAATGGACGGGACATGTACGTGGACCAAGAGCTGGACATCAATCGGTTGTCTGATTACGACGTGGACCACATCGTTCCACAGTCCTTTCTGAAGGATGACTCGATCGATAACAAGGTGTTGACTCGCAGCGACAAGAACAGAGGGAAGTCAGATAATGTGCCATCGGAGGAGGTCGTGAAGAAGATGAAGAATTACTGGCGGCAGCTCCTGAATGCGAAGCTGATTACCCAGAGAAAGTTTGACAATCTCACTAAAGCCGAGCGCGGCGGACTCTCAGAGCTGGATAAGGCTGGATTCATCAAACGGCAGCTGGTCGAGACTCGGCAGATTACCAAGCACGTGGCGCAGATCTTGGACTCCCGCATGAACACTAAATACGACGAGAACGATAAGCTCATCCGGGAAGTGAAGGTGATTACCCTGAAAAGCAAACTTGTGTCGGACTTTCGGAAGGACTTTCAGTTTTACAAAGTGAGAGAAATCAACAACTACCATCACGCGCATGACGCATACCTCAACGCTGTGGTCGGTACCGCCCTGATCAAAAAGTACCCTAAACTTGAATCGGAGTTTGTGTACGGAGACTACAAGGTCTACGACGTGAGGAAGATGATAGCCAAGTCCGAACAGGAAATCGGGAAAGCAACTGCGAAATACTTCTTTTACTCAAACATCATGAACTTTTTCAAGACTGAAATTACGCTGGCCAATGGAGAAATCAGGAAGAGGCCACTGATCGAAACTAACGGAGAAACGGGCGAAATCGTGTGGGACAAGGGCAGGGACTTCGCAACTGTTCGCAAAGTGCTCTCTATGCCGCAAGTCAATATTGTGAAGAAAACCGAAGTGCAAACCGGCGGATTTTCAAAGGAATCGATCCTCCCAAAGAGAAATAGCGACAAGCTCATTGCACGCAAGAAAGACTGGGACCCGAAGAAGTACGGAGGATTCGATTCGCCGACTGTCGCATACTCCGTCCTCGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGAAAGAGCAAAAAGCTCAAATCCGTCAAAGAGCTGCTGGGGATTACCATCATGGAACGATCCTCGTTCGAGAAGAACCCGATTGATTTCCTCGAGGCGAAGGGTTACAAGGAGGTGAAGAAGGATCTGATCATCAAACTCCCCAAGTACTCACTGTTCGAACTGGAAAATGGTCGGAAGCGCATGCTGGCTTCGGCCGGAGAACTCCAAAAAGGAAATGAGCTGGCCTTGCCTAGCAAGTACGTCAACTTCCTCTATCTTGCTTCGCACTACGAAAAACTCAAAGGGTCACCGGAAGATAACGAACAGAAGCAGCTTTTCGTGGAGCAGCACAAGCATTATCTGGATGAAATCATCGAACAAATCTCCGAGTTTTCAAAGCGCGTGATCCTCGCCGACGCCAACCTCGACAAAGTCCTGTCGGCCTACAATAAGCATAGAGATAAGCCGATCAGAGAACAGGCCGAGAACATTATCCACTTGTTCACCCTGACTAACCTGGGAGCCCCAGCCGCCTTCAAGTACTTCGATACTACTATCGATCGCAAAAGATACACGTCCACCAAGGAAGTTCTGGACGCGACCCTGATCCACCAAAGCATCACTGGACTCTACGAAACTAGGATCGATCTGTCGCAGCTGGGTGGCGAT
68 WT SERPINA1 ORF ATGCCGTCTTCTGTCTCGTGGGGCATCCTCCTGCTGGCAGGCCTGTGCTGCCTGGTCCCTGTCTCCCTGGCTGAGGATCCCCAGGGAGATGCTGCCCAGAAGACAGATACATCCCACCATGATCAGGATCACCCAACCTTCAACAAGATCACCCCCAACCTGGCTGAGTTCGCCTTCAGCCTATACCGCCAGCTGGCACACCAGTCCAACAGCACCAATATCTTCTTCTCCCCAGTGAGCATCGCTACAGCCTTTGCAATGCTCTCCCTGGGGACCAAGGCTGACACTCACGATGAAATCCTGGAGGGCCTGAATTTCAACCTCACGGAGATTCCGGAGGCTCAGATCCATGAAGGCTTCCAGGAACTCCTCCGTACCCTCAACCAGCCAGACAGCCAGCTCCAGCTGACCACCGGCAATGGCCTGTTCCTCAGCGAGGGCCTGAAGCTAGTGGATAAGTTTTTGGAGGATGTTAAAAAGTTGTACCACTCAGAAGCCTTCACTGTCAACTTCGGGGACACCGAAGAGGCCAAGAAACAGATCAACGATTACGTGGAGAAGGGTACTCAAGGGAAAATTGTGGATTTGGTCAAGGAGCTTGACAGAGACACAGTTTTTGCTCTGGTGAATTACATCTTCTTTAAAGGCAAATGGGAGAGACCCTTTGAAGTCAAGGACACCGAGGAAGAGGACTTCCACGTGGACCAGGTGACCACCGTGAAGGTGCCTATGATGAAGCGTTTAGGCATGTTTAACATCCAGCACTGTAAGAAGCTGTCCAGCTGGGTGCTGCTGATGAAATACCTGGGCAATGCCACCGCCATCTTCTTCCTGCCTGATGAGGGGAAACTACAGCACCTGGAAAATGAACTCACCCACGATATCATCACCAAGTTCCTGGAAAATGAAGACAGAAGGTCTGCCAGCTTACATTTACCCAAACTGTCCATTACTGGAACCTATGATCTGAAGAGCGTCCTGGGTCAACTGGGCATCACTAAGGTCTTCAGCAATGGGGCTGACCTCTCCGGGGTCACAGAGGAGGCACCCCTGAAGCTCTCCAAGGCCGTGCATAAGGCTGTGCTGACCATCGACGAGAAAGGGACTGAAGCTGCTGGGGCCATGTTTTTAGAGGCCATACCCATGTCTATCCCCCCCGAGGTCAAGTTCAACAAACCCTTTGTCTTCTTAATGATTGAACAAAATACCAAGTCTCCCCTCTTCATGGGAAAAGTGGTGAATCCCACCCAAAAATAA
69 使用表5之密碼子之SERPINA1 ORF ATGCCATCTTCTGTCTCTTGGGGTATCTTGTTGTTGGCCGGTTTGTGCTGCTTGGTCCCAGTCTCTTTGGCCGAAGACCCACAAGGTGACGCCGCCCAAAAGACCGACACCTCTCACCACGACCAAGACCACCCAACCTTCAACAAGATCACCCCAAACTTGGCCGAATTCGCCTTCTCTTTGTACAGACAATTGGCCCACCAATCTAACTCTACCAACATCTTCTTCTCTCCAGTCTCTATCGCCACCGCCTTCGCCATGTTGTCTTTGGGTACCAAGGCCGACACCCACGACGAAATCTTGGAAGGTTTGAACTTCAACTTGACCGAAATCCCAGAAGCCCAAATCCACGAAGGTTTCCAAGAATTGTTGAGAACCTTGAACCAACCAGACTCTCAATTGCAATTGACCACCGGTAACGGTTTGTTCTTGTCTGAAGGTTTGAAGTTGGTCGACAAGTTCTTGGAAGACGTCAAGAAGTTGTACCACTCTGAAGCCTTCACCGTCAACTTCGGTGACACCGAAGAAGCCAAGAAGCAAATCAACGACTACGTCGAAAAGGGTACCCAAGGTAAGATCGTCGACTTGGTCAAGGAATTGGACAGAGACACCGTCTTCGCCTTGGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGTAAGTGGGAAAGACCATTCGAAGTCAAGGACACCGAAGAAGAAGACTTCCACGTCGACCAAGTCACCACCGTCAAGGTCCCAATGATGAAGAGATTGGGTATGTTCAACATCCAACACTGCAAGAAGTTGTCTTCTTGGGTCTTGTTGATGAAGTACTTGGGTAACGCCACCGCCATCTTCTTCTTGCCAGACGAAGGTAAGTTGCAACACTTGGAAAACGAATTGACCCACGACATCATCACCAAGTTCTTGGAAAACGAAGACAGAAGATCTGCCTCTTTGCACTTGCCAAAGTTGTCTATCACCGGTACCTACGACTTGAAGTCTGTCTTGGGTCAATTGGGTATCACCAAGGTCTTCTCTAACGGTGCCGACTTGTCTGGTGTCACCGAAGAAGCCCCATTGAAGTTGTCTAAGGCCGTCCACAAGGCCGTCTTGACCATCGACGAAAAGGGTACCGAAGCCGCCGGTGCCATGTTCTTGGAAGCCATCCCAATGTCTATCCCACCAGAAGTCAAGTTCAACAAGCCATTCGTCTTCTTGATGATCGAACAAAACACCAAGTCTCCATTGTTCATGGGTAAGGTCGTCAACCCAACCCAAAAGTAA
70 使用表6之密碼子之SERPINA1 ORF ATGCCGTCGTCGGTCTCGTGGGGAATCCTGCTGCTGGCAGGACTGTGCTGCCTGGTCCCGGTCTCGCTGGCAGAAGACCCGCAGGGAGACGCAGCACAGAAGACAGACACATCGCACCACGACCAGGACCACCCGACATTCAACAAGATCACACCGAACCTGGCAGAATTCGCATTCTCGCTGTACAGACAGCTGGCACACCAGTCGAACTCGACAAACATCTTCTTCTCGCCGGTCTCGATCGCAACAGCATTCGCAATGCTGTCGCTGGGAACAAAGGCAGACACACACGACGAAATCCTGGAAGGACTGAACTTCAACCTGACAGAAATCCCGGAAGCACAGATCCACGAAGGATTCCAGGAACTGCTGAGAACACTGAACCAGCCGGACTCGCAGCTGCAGCTGACAACAGGAAACGGACTGTTCCTGTCGGAAGGACTGAAGCTGGTCGACAAGTTCCTGGAAGACGTCAAGAAGCTGTACCACTCGGAAGCATTCACAGTCAACTTCGGAGACACAGAAGAAGCAAAGAAGCAGATCAACGACTACGTCGAAAAGGGAACACAGGGAAAGATCGTCGACCTGGTCAAGGAACTGGACAGAGACACAGTCTTCGCACTGGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGAAAGTGGGAAAGACCGTTCGAAGTCAAGGACACAGAAGAAGAAGACTTCCACGTCGACCAGGTCACAACAGTCAAGGTCCCGATGATGAAGAGACTGGGAATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTGTCGTCGTGGGTCCTGCTGATGAAGTACCTGGGAAACGCAACAGCAATCTTCTTCCTGCCGGACGAAGGAAAGCTGCAGCACCTGGAAAACGAACTGACACACGACATCATCACAAAGTTCCTGGAAAACGAAGACAGAAGATCGGCATCGCTGCACCTGCCGAAGCTGTCGATCACAGGAACATACGACCTGAAGTCGGTCCTGGGACAGCTGGGAATCACAAAGGTCTTCTCGAACGGAGCAGACCTGTCGGGAGTCACAGAAGAAGCACCGCTGAAGCTGTCGAAGGCAGTCCACAAGGCAGTCCTGACAATCGACGAAAAGGGAACAGAAGCAGCAGGAGCAATGTTCCTGGAAGCAATCCCGATGTCGATCCCGCCGGAAGTCAAGTTCAACAAGCCGTTCGTCTTCCTGATGATCGAACAGAACACAAAGTCGCCGCTGTTCATGGGAAAGGTCGTCAACCCGACACAGAAGTGA
71 SERPINA1 ORF 1.1 ATGCCCAGCAGCGTGAGCTGGGGCATCCTGCTGCTGGCCGGCCTGTGCTGCCTGGTGCCCGTGAGCCTGGCCGAGGACCCCCAGGGCGACGCCGCCCAGAAGACGGACACGAGCCACCACGACCAGGACCACCCCACGTTCAACAAGATCACGCCCAACCTGGCCGAGTTCGCCTTCAGCCTGTACCGGCAGCTGGCCCACCAGAGCAACAGCACGAACATCTTCTTCAGCCCCGTGAGCATCGCCACGGCCTTCGCCATGCTGAGCCTGGGCACGAAGGCCGACACGCACGACGAGATCCTGGAGGGCCTGAACTTCAACCTGACGGAGATCCCCGAGGCCCAGATCCACGAGGGCTTCCAGGAGCTGCTGCGGACGCTGAACCAGCCCGACAGCCAGCTGCAGCTGACGACGGGCAACGGCCTGTTCCTGAGCGAGGGCCTGAAGCTGGTGGACAAGTTCCTGGAGGACGTGAAGAAGCTGTACCACAGCGAGGCCTTCACGGTGAACTTCGGCGACACGGAGGAGGCCAAGAAGCAGATCAACGACTACGTGGAGAAGGGCACGCAGGGCAAGATCGTGGACCTGGTGAAGGAGCTGGACCGGGACACGGTGTTCGCCCTGGTGAACTACATCTTCTTCAAGGGCAAGTGGGAGCGGCCCTTCGAGGTGAAGGACACGGAGGAGGAGGACTTCCACGTGGACCAGGTGACGACGGTGAAGGTGCCCATGATGAAGCGGCTGGGCATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTGAGCAGCTGGGTGCTGCTGATGAAGTACCTGGGCAACGCCACGGCCATCTTCTTCCTGCCCGACGAGGGCAAGCTGCAGCACCTGGAGAACGAGCTGACGCACGACATCATCACGAAGTTCCTGGAGAACGAGGACCGGCGGAGCGCCAGCCTGCACCTGCCCAAGCTGAGCATCACGGGCACGTACGACCTGAAGAGCGTGCTGGGCCAGCTGGGCATCACGAAGGTGTTCAGCAACGGCGCCGACCTGAGCGGCGTGACGGAGGAGGCCCCCCTGAAGCTGAGCAAGGCCGTGCACAAGGCCGTGCTGACGATCGACGAGAAGGGCACGGAGGCCGCCGGCGCCATGTTCCTGGAGGCCATCCCCATGAGCATCCCCCCCGAGGTGAAGTTCAACAAGCCCTTCGTGTTCCTGATGATCGAGCAGAACACGAAGAGCCCCCTGTTCATGGGCAAGGTGGTGAACCCCACGCAGAAGTAG
72 SERPINA1 ORF 1.2 ATGCCCTCGTCGGTCTCGTGGGGCATCCTCCTCCTCGCGGGCCTCTGCTGCCTCGTCCCCGTCTCGCTCGCGGAGGACCCCCAGGGCGACGCGGCGCAGAAGACGGACACGTCGCACCACGACCAGGACCACCCCACGTTCAACAAGATCACGCCCAACCTCGCGGAGTTCGCGTTCTCGCTCTACCGCCAGCTCGCGCACCAGTCGAACTCGACGAACATCTTCTTCTCGCCCGTCTCGATCGCGACGGCGTTCGCGATGCTCTCGCTCGGCACGAAGGCGGACACGCACGACGAGATCCTCGAGGGCCTCAACTTCAACCTCACGGAGATCCCCGAGGCGCAGATCCACGAGGGCTTCCAGGAGCTCCTCCGCACGCTCAACCAGCCCGACTCGCAGCTCCAGCTCACGACGGGCAACGGCCTCTTCCTCTCGGAGGGCCTCAAGCTCGTCGACAAGTTCCTCGAGGACGTCAAGAAGCTCTACCACTCGGAGGCGTTCACGGTCAACTTCGGCGACACGGAGGAGGCGAAGAAGCAGATCAACGACTACGTCGAGAAGGGCACGCAGGGCAAGATCGTCGACCTCGTCAAGGAGCTCGACCGCGACACGGTCTTCGCGCTCGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGCAAGTGGGAGCGCCCCTTCGAGGTCAAGGACACGGAGGAGGAGGACTTCCACGTCGACCAGGTCACGACGGTCAAGGTCCCCATGATGAAGCGCCTCGGCATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTCTCGTCGTGGGTCCTCCTCATGAAGTACCTCGGCAACGCGACGGCGATCTTCTTCCTCCCCGACGAGGGCAAGCTCCAGCACCTCGAGAACGAGCTCACGCACGACATCATCACGAAGTTCCTCGAGAACGAGGACCGCCGCTCGGCGTCGCTCCACCTCCCCAAGCTCTCGATCACGGGCACGTACGACCTCAAGTCGGTCCTCGGCCAGCTCGGCATCACGAAGGTCTTCTCGAACGGCGCGGACCTCTCGGGCGTCACGGAGGAGGCGCCCCTCAAGCTCTCGAAGGCGGTCCACAAGGCGGTCCTCACGATCGACGAGAAGGGCACGGAGGCGGCGGGCGCGATGTTCCTCGAGGCGATCCCCATGTCGATCCCCCCCGAGGTCAAGTTCAACAAGCCCTTCGTCTTCCTCATGATCGAGCAGAACACGAAGTCGCCCCTCTTCATGGGCAAGGTCGTCAACCCCACGCAGAAGTAG
73 SERPINA1 ORF 1.3 ATGCCCTCATCGGTCAGCTGGGGCATCCTCCTCCTCGCCGGGCTCTGCTGCCTCGTTCCCGTCAGCCTCGCGGAGGACCCCCAGGGCGACGCTGCCCAGAAGACGGACACGTCGCACCACGACCAGGACCACCCCACCTTCAACAAGATCACTCCCAATCTCGCGGAGTTCGCGTTCTCGCTCTACCGCCAGCTCGCGCACCAGAGCAACTCGACTAACATCTTCTTCTCGCCCGTCAGCATCGCGACGGCGTTCGCGATGCTCAGCCTCGGCACGAAGGCGGACACGCACGACGAGATCCTCGAGGGCCTCAACTTCAATCTCACAGAGATCCCAGAAGCCCAGATCCACGAGGGCTTCCAGGAGCTGCTGCGGACGCTCAACCAGCCTGACTCGCAGCTCCAGCTCACGACGGGCAATGGGCTCTTCCTCAGCGAGGGCCTCAAGCTCGTCGACAAGTTCCTGGAGGACGTCAAGAAGCTCTACCACTCGGAAGCCTTCACGGTCAACTTCGGCGACACAGAGGAAGCCAAGAAGCAGATCAACGACTACGTCGAGAAGGGGACTCAGGGCAAGATCGTCGACCTCGTCAAGGAGCTGGACCGAGACACGGTCTTCGCACTGGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGGAAGTGGGAGCGCCCCTTCGAAGTCAAGGACACAGAGGAGGAGGACTTCCACGTCGACCAGGTGACGACGGTCAAGGTTCCCATGATGAAGCGCCTCGGCATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTCAGCTCGTGGGTCCTCCTCATGAAGTACCTCGGCAACGCGACGGCGATCTTCTTCCTTCCTGACGAGGGCAAGCTCCAGCACCTCGAGAACGAGCTGACGCACGACATCATCACGAAGTTCCTGGAGAACGAGGACCGCCGATCGGCGTCGCTCCACCTTCCAAAGCTCAGCATCACGGGCACCTACGACCTCAAGTCGGTCCTCGGCCAGCTCGGCATCACGAAGGTCTTCTCGAATGGTGCCGACCTCAGCGGCGTCACAGAGGAAGCCCCCCTCAAGCTCAGCAAGGCTGTGCACAAGGCTGTGCTCACGATCGACGAGAAGGGGACAGAAGCTGCCGGTGCCATGTTCCTGGAAGCCATCCCCATGAGCATCCCACCAGAAGTCAAGTTCAACAAGCCCTTCGTCTTCCTGATGATAGAGCAGAACACGAAGTCGCCCCTCTTCATGGGCAAGGTCGTCAACCCCACTCAAAAGTAG
74 SERPINA1 WT胺基酸序列 MPSSVSWGILLLAGLCCLVPVSLAEDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFAFSLYRQLAHQSNSTNIFFSPVSIATAFAMLSLGTKADTHDEILEGLNFNLTEIPEAQIHEGFQELLRTLNQPDSQLQLTTGNGLFLSEGLKLVDKFLEDVKKLYHSEAFTVNFGDTEEAKKQINDYVEKGTQGKIVDLVKELDRDTVFALVNYIFFKGKWERPFEVKDTEEEDFHVDQVTTVKVPMMKRLGMFNIQHCKKLSSWVLLMKYLGNATAIFFLPDEGKLQHLENELTHDIITKFLENEDRRSASLHLPKLSITGTYDLKSVLGQLGITKVFSNGADLSGVTEEAPLKLSKAVHKAVLTIDEKGTEAAGAMFLEAIPMSIPPEVKFNKPFVFLMIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK
75 不使用
76 包括SEQ 70之SERPINA1轉錄物 GGGTCCCGCAGTCGGCGTCCAGCGGCTCTGCTTGTTCGTGTGTGTGTCGTTGCAGGCCTTATTCGGATCaGCCACCATGCCGTCGTCGGTCTCGTGGGGAATCCTGCTGCTGGCAGGACTGTGCTGCCTGGTCCCGGTCTCGCTGGCAGAAGACCCGCAGGGAGACGCAGCACAGAAGACAGACACATCGCACCACGACCAGGACCACCCGACATTCAACAAGATCACACCGAACCTGGCAGAATTCGCATTCTCGCTGTACAGACAGCTGGCACACCAGTCGAACTCGACAAACATCTTCTTCTCGCCGGTCTCGATCGCAACAGCATTCGCAATGCTGTCGCTGGGAACAAAGGCAGACACACACGACGAAATCCTGGAAGGACTGAACTTCAACCTGACAGAAATCCCGGAAGCACAGATCCACGAAGGATTCCAGGAACTGCTGAGAACACTGAACCAGCCGGACTCGCAGCTGCAGCTGACAACAGGAAACGGACTGTTCCTGTCGGAAGGACTGAAGCTGGTCGACAAGTTCCTGGAAGACGTCAAGAAGCTGTACCACTCGGAAGCATTCACAGTCAACTTCGGAGACACAGAAGAAGCAAAGAAGCAGATCAACGACTACGTCGAAAAGGGAACACAGGGAAAGATCGTCGACCTGGTCAAGGAACTGGACAGAGACACAGTCTTCGCACTGGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGAAAGTGGGAAAGACCGTTCGAAGTCAAGGACACAGAAGAAGAAGACTTCCACGTCGACCAGGTCACAACAGTCAAGGTCCCGATGATGAAGAGACTGGGAATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTGTCGTCGTGGGTCCTGCTGATGAAGTACCTGGGAAACGCAACAGCAATCTTCTTCCTGCCGGACGAAGGAAAGCTGCAGCACCTGGAAAACGAACTGACACACGACATCATCACAAAGTTCCTGGAAAACGAAGACAGAAGATCGGCATCGCTGCACCTGCCGAAGCTGTCGATCACAGGAACATACGACCTGAAGTCGGTCCTGGGACAGCTGGGAATCACAAAGGTCTTCTCGAACGGAGCAGACCTGTCGGGAGTCACAGAAGAAGCACCGCTGAAGCTGTCGAAGGCAGTCCACAAGGCAGTCCTGACAATCGACGAAAAGGGAACAGAAGCAGCAGGAGCAATGTTCCTGGAAGCAATCCCGATGTCGATCCCGCCGGAAGTCAAGTTCAACAAGCCGTTCGTCTTCCTGATGATCGAACAGAACACAAAGTCGCCGCTGTTCATGGGAAAGGTCGTCAACCCGACACAGAAGTagCTAGCCATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCTCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATCTAG
77 包括SEQ 69之SERPINA1轉錄物 GGGTCCCGCAGTCGGCGTCCAGCGGCTCTGCTTGTTCGTGTGTGTGTCGTTGCAGGCCTTATTCGGATCaGCCACCATGCCATCTTCTGTCTCTTGGGGTATCTTGTTGTTGGCCGGTTTGTGCTGCTTGGTCCCAGTCTCTTTGGCCGAAGACCCACAAGGTGACGCCGCCCAAAAGACCGACACCTCTCACCACGACCAAGACCACCCAACCTTCAACAAGATCACCCCAAACTTGGCCGAATTCGCCTTCTCTTTGTACAGACAATTGGCCCACCAATCTAACTCTACCAACATCTTCTTCTCTCCAGTCTCTATCGCCACCGCCTTCGCCATGTTGTCTTTGGGTACCAAGGCCGACACCCACGACGAAATCTTGGAAGGTTTGAACTTCAACTTGACCGAAATCCCAGAAGCCCAAATCCACGAAGGTTTCCAAGAATTGTTGAGAACCTTGAACCAACCAGACTCTCAATTGCAATTGACCACCGGTAACGGTTTGTTCTTGTCTGAAGGTTTGAAGTTGGTCGACAAGTTCTTGGAAGACGTCAAGAAGTTGTACCACTCTGAAGCCTTCACCGTCAACTTCGGTGACACCGAAGAAGCCAAGAAGCAAATCAACGACTACGTCGAAAAGGGTACCCAAGGTAAGATCGTCGACTTGGTCAAGGAATTGGACAGAGACACCGTCTTCGCCTTGGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGTAAGTGGGAAAGACCATTCGAAGTCAAGGACACCGAAGAAGAAGACTTCCACGTCGACCAAGTCACCACCGTCAAGGTCCCAATGATGAAGAGATTGGGTATGTTCAACATCCAACACTGCAAGAAGTTGTCTTCTTGGGTCTTGTTGATGAAGTACTTGGGTAACGCCACCGCCATCTTCTTCTTGCCAGACGAAGGTAAGTTGCAACACTTGGAAAACGAATTGACCCACGACATCATCACCAAGTTCTTGGAAAACGAAGACAGAAGATCTGCCTCTTTGCACTTGCCAAAGTTGTCTATCACCGGTACCTACGACTTGAAGTCTGTCTTGGGTCAATTGGGTATCACCAAGGTCTTCTCTAACGGTGCCGACTTGTCTGGTGTCACCGAAGAAGCCCCATTGAAGTTGTCTAAGGCCGTCCACAAGGCCGTCTTGACCATCGACGAAAAGGGTACCGAAGCCGCCGGTGCCATGTTCTTGGAAGCCATCCCAATGTCTATCCCACCAGAAGTCAAGTTCAACAAGCCATTCGTCTTCTTGATGATCGAACAAAACACCAAGTCTCCATTGTTCATGGGTAAGGTCGTCAACCCAACCCAAAAGTAgCTAGCCATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCTCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATCTAG
78 包括SEQ 71之SERPINA1轉錄物 GGGTCCCGCAGTCGGCGTCCAGCGGCTCTGCTTGTTCGTGTGTGTGTCGTTGCAGGCCTTATTCCGCCACCATGCCCAGCAGCGTGAGCTGGGGCATCCTGCTGCTGGCCGGCCTGTGCTGCCTGGTGCCCGTGAGCCTGGCCGAGGACCCCCAGGGCGACGCCGCCCAGAAGACGGACACGAGCCACCACGACCAGGACCACCCCACGTTCAACAAGATCACGCCCAACCTGGCCGAGTTCGCCTTCAGCCTGTACCGGCAGCTGGCCCACCAGAGCAACAGCACGAACATCTTCTTCAGCCCCGTGAGCATCGCCACGGCCTTCGCCATGCTGAGCCTGGGCACGAAGGCCGACACGCACGACGAGATCCTGGAGGGCCTGAACTTCAACCTGACGGAGATCCCCGAGGCCCAGATCCACGAGGGCTTCCAGGAGCTGCTGCGGACGCTGAACCAGCCCGACAGCCAGCTGCAGCTGACGACGGGCAACGGCCTGTTCCTGAGCGAGGGCCTGAAGCTGGTGGACAAGTTCCTGGAGGACGTGAAGAAGCTGTACCACAGCGAGGCCTTCACGGTGAACTTCGGCGACACGGAGGAGGCCAAGAAGCAGATCAACGACTACGTGGAGAAGGGCACGCAGGGCAAGATCGTGGACCTGGTGAAGGAGCTGGACCGGGACACGGTGTTCGCCCTGGTGAACTACATCTTCTTCAAGGGCAAGTGGGAGCGGCCCTTCGAGGTGAAGGACACGGAGGAGGAGGACTTCCACGTGGACCAGGTGACGACGGTGAAGGTGCCCATGATGAAGCGGCTGGGCATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTGAGCAGCTGGGTGCTGCTGATGAAGTACCTGGGCAACGCCACGGCCATCTTCTTCCTGCCCGACGAGGGCAAGCTGCAGCACCTGGAGAACGAGCTGACGCACGACATCATCACGAAGTTCCTGGAGAACGAGGACCGGCGGAGCGCCAGCCTGCACCTGCCCAAGCTGAGCATCACGGGCACGTACGACCTGAAGAGCGTGCTGGGCCAGCTGGGCATCACGAAGGTGTTCAGCAACGGCGCCGACCTGAGCGGCGTGACGGAGGAGGCCCCCCTGAAGCTGAGCAAGGCCGTGCACAAGGCCGTGCTGACGATCGACGAGAAGGGCACGGAGGCCGCCGGCGCCATGTTCCTGGAGGCCATCCCCATGAGCATCCCCCCCGAGGTGAAGTTCAACAAGCCCTTCGTGTTCCTGATGATCGAGCAGAACACGAAGAGCCCCCTGTTCATGGGCAAGGTGGTGAACCCCACGCAGAAGTAGTAGTGAAGCTTCTAGCCATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCTCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAT
79 包括SEQ 72之SERPINA1轉錄物 GGGTCCCGCAGTCGGCGTCCAGCGGCTCTGCTTGTTCGTGTGTGTGTCGTTGCAGGCCTTATTCCGCCACCATGCCCTCGTCGGTCTCGTGGGGCATCCTCCTCCTCGCGGGCCTCTGCTGCCTCGTCCCCGTCTCGCTCGCGGAGGACCCCCAGGGCGACGCGGCGCAGAAGACGGACACGTCGCACCACGACCAGGACCACCCCACGTTCAACAAGATCACGCCCAACCTCGCGGAGTTCGCGTTCTCGCTCTACCGCCAGCTCGCGCACCAGTCGAACTCGACGAACATCTTCTTCTCGCCCGTCTCGATCGCGACGGCGTTCGCGATGCTCTCGCTCGGCACGAAGGCGGACACGCACGACGAGATCCTCGAGGGCCTCAACTTCAACCTCACGGAGATCCCCGAGGCGCAGATCCACGAGGGCTTCCAGGAGCTCCTCCGCACGCTCAACCAGCCCGACTCGCAGCTCCAGCTCACGACGGGCAACGGCCTCTTCCTCTCGGAGGGCCTCAAGCTCGTCGACAAGTTCCTCGAGGACGTCAAGAAGCTCTACCACTCGGAGGCGTTCACGGTCAACTTCGGCGACACGGAGGAGGCGAAGAAGCAGATCAACGACTACGTCGAGAAGGGCACGCAGGGCAAGATCGTCGACCTCGTCAAGGAGCTCGACCGCGACACGGTCTTCGCGCTCGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGCAAGTGGGAGCGCCCCTTCGAGGTCAAGGACACGGAGGAGGAGGACTTCCACGTCGACCAGGTCACGACGGTCAAGGTCCCCATGATGAAGCGCCTCGGCATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTCTCGTCGTGGGTCCTCCTCATGAAGTACCTCGGCAACGCGACGGCGATCTTCTTCCTCCCCGACGAGGGCAAGCTCCAGCACCTCGAGAACGAGCTCACGCACGACATCATCACGAAGTTCCTCGAGAACGAGGACCGCCGCTCGGCGTCGCTCCACCTCCCCAAGCTCTCGATCACGGGCACGTACGACCTCAAGTCGGTCCTCGGCCAGCTCGGCATCACGAAGGTCTTCTCGAACGGCGCGGACCTCTCGGGCGTCACGGAGGAGGCGCCCCTCAAGCTCTCGAAGGCGGTCCACAAGGCGGTCCTCACGATCGACGAGAAGGGCACGGAGGCGGCGGGCGCGATGTTCCTCGAGGCGATCCCCATGTCGATCCCCCCCGAGGTCAAGTTCAACAAGCCCTTCGTCTTCCTCATGATCGAGCAGAACACGAAGTCGCCCCTCTTCATGGGCAAGGTCGTCAACCCCACGCAGAAGTAGTAGTAGAGCTTCTAGCCATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCTCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAT
80 包括SEQ 73之SERPINA1轉錄物 GGGTCCCGCAGTCGGCGTCCAGCGGCTCTGCTTGTTCGTGTGTGTGTCGTTGCAGGCCTTATTCCGCCACCATGCCCTCATCGGTCAGCTGGGGCATCCTCCTCCTCGCCGGGCTCTGCTGCCTCGTTCCCGTCAGCCTCGCGGAGGACCCCCAGGGCGACGCTGCCCAGAAGACGGACACGTCGCACCACGACCAGGACCACCCCACCTTCAACAAGATCACTCCCAATCTCGCGGAGTTCGCGTTCTCGCTCTACCGCCAGCTCGCGCACCAGAGCAACTCGACTAACATCTTCTTCTCGCCCGTCAGCATCGCGACGGCGTTCGCGATGCTCAGCCTCGGCACGAAGGCGGACACGCACGACGAGATCCTCGAGGGCCTCAACTTCAATCTCACAGAGATCCCAGAAGCCCAGATCCACGAGGGCTTCCAGGAGCTGCTGCGGACGCTCAACCAGCCTGACTCGCAGCTCCAGCTCACGACGGGCAATGGGCTCTTCCTCAGCGAGGGCCTCAAGCTCGTCGACAAGTTCCTGGAGGACGTCAAGAAGCTCTACCACTCGGAAGCCTTCACGGTCAACTTCGGCGACACAGAGGAAGCCAAGAAGCAGATCAACGACTACGTCGAGAAGGGGACTCAGGGCAAGATCGTCGACCTCGTCAAGGAGCTGGACCGAGACACGGTCTTCGCACTGGTCAACTACATCTTCTTCAAGGGGAAGTGGGAGCGCCCCTTCGAAGTCAAGGACACAGAGGAGGAGGACTTCCACGTCGACCAGGTGACGACGGTCAAGGTTCCCATGATGAAGCGCCTCGGCATGTTCAACATCCAGCACTGCAAGAAGCTCAGCTCGTGGGTCCTCCTCATGAAGTACCTCGGCAACGCGACGGCGATCTTCTTCCTTCCTGACGAGGGCAAGCTCCAGCACCTCGAGAACGAGCTGACGCACGACATCATCACGAAGTTCCTGGAGAACGAGGACCGCCGATCGGCGTCGCTCCACCTTCCAAAGCTCAGCATCACGGGCACCTACGACCTCAAGTCGGTCCTCGGCCAGCTCGGCATCACGAAGGTCTTCTCGAATGGTGCCGACCTCAGCGGCGTCACAGAGGAAGCCCCCCTCAAGCTCAGCAAGGCTGTGCACAAGGCTGTGCTCACGATCGACGAGAAGGGGACAGAAGCTGCCGGTGCCATGTTCCTGGAAGCCATCCCCATGAGCATCCCACCAGAAGTCAAGTTCAACAAGCCCTTCGTCTTCCTGATGATAGAGCAGAACACGAAGTCGCCCCTCTTCATGGGCAAGGTCGTCAACCCCACTCAAAAGTAGTGATAGAGCTTCTAGCCATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCTCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAT
81-87 不使用
88 FAH胺基酸序列 MSFIPVAEDSDFPIHNLPYGVFSTRGDPRPRIGVAIGDQILDLSIIKHLFTGPVLSKHQDVFNQPTLNSFMGLGQAAWKEARVFLQNLLSVSQARLRDDTELRKCAFISQASATMHLPATIGDYTDFYSSRQHATNVGIMFRDKENALMPNWLHLPVGYHGRASSVVVSGTPIRRPMGQMKPDDSKPPVYGACKLLDMELEMAFFVGPGNRLGEPIPISKAHEHIFGMVLMNDWSARDIQKWEYVPLGPFLGKSFGTTVSPWVVPMDALMPFAVPNPKQDPRPLPYLCHDEPYTFDINLSVNLKGEGMSQAATICKSNFKYMYWTMLQQLTHHSVNGCNLRPGDLLASGTISGPEPENFGSMLELSWKGTKPIDLGNGQTRKFLLDGDEVIITGYCQGDGYRIGFGQCAGKVLPALLP
89 FAH WT ORF AUGUCUUUUAUUCCUGUUGCUGAAGAUUCUGAUUUUCCUAUUCAUAAUUUACCUUAUGGUGUUUUUUCUACUCGUGGUGAUCCUCGUCCUCGUAUUGGUGUUGCUAUUGGUGAUCAAAUUUUAGAUUUAUCUAUUAUUAAACAUUUAUUUACUGGUCCUGUUUUAUCUAAACAUCAAGAUGUUUUUAAUCAACCUACUUUAAAUUCUUUUAUGGGUUUAGGUCAAGCUGCUUGGAAAGAAGCUCGUGUUUUUUUACAAAAUUUAUUAUCUGUUUCUCAAGCUCGUUUACGUGAUGAUACUGAAUUACGUAAAUGUGCUUUUAUUUCUCAAGCUUCUGCUACUAUGCAUUUACCUGCUACUAUUGGUGAUUAUACUGAUUUUUAUUCUUCUCGUCAACAUGCUACUAAUGUUGGUAUUAUGUUUCGUGAUAAAGAAAAUGCUUUAAUGCCUAAUUGGUUACAUUUACCUGUUGGUUAUCAUGGUCGUGCUUCUUCUGUUGUUGUUUCUGGUACUCCUAUUCGUCGUCCUAUGGGUCAAAUGAAACCUGAUGAUUCUAAACCUCCUGUUUAUGGUGCUUGUAAAUUAUUAGAUAUGGAAUUAGAAAUGGCUUUUUUUGUUGGUCCUGGUAAUCGUUUAGGUGAACCUAUUCCUAUUUCUAAAGCUCAUGAACAUAUUUUUGGUAUGGUUUUAAUGAAUGAUUGGUCUGCUCGUGAUAUUCAAAAAUGGGAAUAUGUUCCUUUAGGUCCUUUUUUAGGUAAAUCUUUUGGUACUACUGUUUCUCCUUGGGUUGUUCCUAUGGAUGCUUUAAUGCCUUUUGCUGUUCCUAAUCCUAAACAAGAUCCUCGUCCUUUACCUUAUUUAUGUCAUGAUGAACCUUAUACUUUUGAUAUUAAUUUAUCUGUUAAUUUAAAAGGUGAAGGUAUGUCUCAAGCUGCUACUAUUUGUAAAUCUAAUUUUAAAUAUAUGUAUUGGACUAUGUUACAACAAUUAACUCAUCAUUCUGUUAAUGGUUGUAAUUUACGUCCUGGUGAUUUAUUAGCUUCUGGUACUAUUUCUGGUCCUGAACCUGAAAAUUUUGGUUCUAUGUUAGAAUUAUCUUGGAAAGGUACUAAACCUAUUGAUUUAGGUAAUGGUCAAACUCGUAAAUUUUUAUUAGAUGGUGAUGAAGUUAUUAUUACUGGUUAUUGUCAAGGUGAUGGUUAUCGUAUUGGUUUUGGUCAAUGUGCUGGUAAAGUUUUACCUGCUUUAUUACCUUAG
90 FAH BP_GCU ORF ATGTCGTTCATCCCCGTCGCGGAGGACTCGGACTTCCCCATCCACAACCTCCCCTACGGCGTCTTCTCGACGCGCGGCGACCCCCGCCCCCGCATCGGCGTCGCGATCGGCGACCAGATCCTCGACCTCTCGATCATCAAGCACCTCTTCACGGGCCCCGTCCTCTCGAAGCACCAGGACGTCTTCAACCAGCCCACGCTCAACTCGTTCATGGGCCTCGGCCAGGCGGCGTGGAAGGAGGCGCGCGTCTTCCTCCAGAACCTCCTCTCGGTCTCGCAGGCGCGCCTCCGCGACGACACGGAGCTCCGCAAGTGCGCGTTCATCTCGCAGGCGTCGGCGACGATGCACCTCCCCGCGACGATCGGCGACTACACGGACTTCTACTCGTCGCGCCAGCACGCGACGAACGTCGGCATCATGTTCCGCGACAAGGAGAACGCGCTCATGCCCAACTGGCTCCACCTCCCCGTCGGCTACCACGGCCGCGCGTCGTCGGTCGTCGTCTCGGGCACGCCCATCCGCCGCCCCATGGGCCAGATGAAGCCCGACGACTCGAAGCCCCCCGTCTACGGCGCGTGCAAGCTCCTCGACATGGAGCTCGAGATGGCGTTCTTCGTCGGCCCCGGCAACCGCCTCGGCGAGCCCATCCCCATCTCGAAGGCGCACGAGCACATCTTCGGCATGGTCCTCATGAACGACTGGTCGGCGCGCGACATCCAGAAGTGGGAGTACGTCCCCCTCGGCCCCTTCCTCGGCAAGTCGTTCGGCACGACGGTCTCGCCCTGGGTCGTCCCCATGGACGCGCTCATGCCCTTCGCGGTCCCCAACCCCAAGCAGGACCCCCGCCCCCTCCCCTACCTCTGCCACGACGAGCCCTACACGTTCGACATCAACCTCTCGGTCAACCTCAAGGGCGAGGGCATGTCGCAGGCGGCGACGATCTGCAAGTCGAACTTCAAGTACATGTACTGGACGATGCTCCAGCAGCTCACGCACCACTCGGTCAACGGCTGCAACCTCCGCCCCGGCGACCTCCTCGCGTCGGGCACGATCTCGGGCCCCGAGCCCGAGAACTTCGGCTCGATGCTCGAGCTCTCGTGGAAGGGCACGAAGCCCATCGACCTCGGCAACGGCCAGACGCGCAAGTTCCTCCTCGACGGCGACGAGGTCATCATCACGGGCTACTGCCAGGGCGACGGCTACCGCATCGGCTTCGGCCAGTGCGCGGGCAAGGTCCTCCCCGCGCTCCTCCCCTAG
91 FAH GP_BP_BS_GCU ORF ATGTCGTTCATCCCCGTCGCGGAGGACTCGGACTTCCCCATCCACAATCTTCCATACGGCGTCTTCTCGACTCGCGGCGACCCCCGCCCCCGCATCGGCGTCGCGATCGGCGACCAGATCCTCGACCTCAGCATCATCAAGCACCTCTTCACGGGCCCCGTCCTCAGCAAGCACCAGGACGTCTTCAACCAGCCCACCCTCAACTCGTTCATGGGCCTCGGCCAGGCTGCCTGGAAGGAAGCCCGCGTCTTCCTGCAGAATCTCCTCAGCGTCAGCCAGGCCCGCCTGCGAGACGACACAGAGCTGCGGAAGTGCGCGTTCATCTCGCAGGCCTCGGCGACGATGCACCTTCCAGCGACGATCGGCGACTACACGGACTTCTACTCGTCGCGCCAGCACGCGACGAACGTTGGCATCATGTTCCGAGACAAGGAGAACGCACTGATGCCCAACTGGCTCCACCTTCCAGTTGGCTACCACGGCCGCGCGTCGTCGGTCGTCGTCAGCGGCACTCCCATCCGCCGCCCCATGGGCCAGATGAAGCCTGACGACTCGAAGCCACCCGTCTACGGTGCCTGCAAGCTCCTCGACATGGAGCTGGAGATGGCGTTCTTCGTTGGCCCTGGCAACCGCCTCGGTGAGCCCATCCCCATCTCGAAGGCGCACGAGCACATCTTCGGCATGGTCCTCATGAACGACTGGTCGGCCCGAGACATCCAGAAGTGGGAGTACGTTCCCCTCGGCCCCTTCCTGGGCAAGTCGTTCGGCACGACGGTCAGCCCCTGGGTCGTTCCCATGGACGCACTGATGCCCTTCGCTGTTCCCAACCCCAAGCAGGACCCCCGCCCCCTTCCATACCTCTGCCACGACGAGCCCTACACGTTCGACATCAATCTCAGCGTCAATCTCAAGGGTGAGGGCATGTCGCAGGCTGCCACGATCTGCAAGTCGAACTTCAAGTACATGTACTGGACGATGCTCCAGCAGCTCACGCACCACTCGGTCAATGGGTGCAATCTGCGGCCTGGCGACCTCCTCGCGTCGGGCACGATCTCGGGCCCAGAGCCAGAGAACTTCGGCTCGATGCTCGAGCTCAGCTGGAAGGGGACGAAGCCCATCGACCTCGGCAATGGGCAGACGCGCAAGTTCCTGCTCGACGGCGACGAAGTCATCATCACGGGCTACTGCCAGGGCGACGGCTACCGCATCGGCTTCGGCCAGTGCGCCGGGAAGGTCCTTCCAGCACTGCTTCCCTCATAG
92 FAH GS_BS_GCU ORF ATGAGCTTCATCCCCGTCGCGGAGGACAGCGACTTCCCCATCCACAATCTTCCATACGGCGTCTTCTCGACTCGCGGCGACCCCCGCCCCCGCATCGGCGTCGCGATCGGCGACCAGATCCTCGACCTCAGCATCATCAAGCACCTCTTCACGGGCCCCGTCCTCAGCAAGCACCAGGACGTCTTCAACCAGCCCACCCTCAACAGCTTCATGGGCCTCGGCCAGGCTGCCTGGAAGGAAGCCCGCGTCTTCCTGCAGAATCTCCTCAGCGTCAGCCAGGCCCGCCTGCGAGACGACACAGAGCTGCGGAAGTGCGCGTTCATCAGCCAGGCCAGCGCGACGATGCACCTTCCAGCGACGATCGGCGACTACACGGACTTCTACAGCAGCCGCCAGCACGCGACGAACGTTGGCATCATGTTCCGAGACAAGGAGAACGCACTGATGCCCAACTGGCTCCACCTTCCAGTTGGCTACCACGGCCGCGCGAGCAGCGTCGTCGTCAGCGGCACTCCCATCCGCCGCCCCATGGGCCAGATGAAGCCTGACGACAGCAAGCCACCCGTCTACGGTGCCTGCAAGCTCCTCGACATGGAGCTGGAGATGGCGTTCTTCGTTGGCCCTGGCAACCGCCTCGGTGAGCCCATCCCCATCAGCAAGGCGCACGAGCACATCTTCGGCATGGTCCTCATGAACGACTGGAGCGCCCGAGACATCCAGAAGTGGGAGTACGTTCCCCTCGGCCCCTTCCTGGGCAAGAGCTTCGGCACGACGGTCAGCCCCTGGGTCGTTCCCATGGACGCACTGATGCCCTTCGCTGTTCCCAACCCCAAGCAGGACCCCCGCCCCCTTCCATACCTCTGCCACGACGAGCCCTACACGTTCGACATCAATCTCAGCGTCAATCTCAAGGGTGAGGGCATGAGCCAGGCTGCCACGATCTGCAAGAGCAACTTCAAGTACATGTACTGGACGATGCTCCAGCAGCTCACGCACCACAGCGTCAATGGGTGCAATCTGCGGCCTGGCGACCTCCTCGCGAGCGGCACGATCAGCGGCCCAGAGCCAGAGAACTTCGGCAGCATGCTCGAGCTCAGCTGGAAGGGGACGAAGCCCATCGACCTCGGCAATGGGCAGACGCGCAAGTTCCTGCTCGACGGCGACGAAGTCATCATCACGGGCTACTGCCAGGGCGACGGCTACCGCATCGGCTTCGGCCAGTGCGCCGGGAAGGTCCTTCCAGCACTGCTTCCCTCATAG
93 FAH GS_GCU ORF ATGAGCTTCATCCCCGTGGCGGAGGACAGCGACTTCCCGATCCACAATCTTCCATACGGCGTGTTCTCGACTCGCGGCGACCCGCGCCCGCGCATCGGCGTGGCGATCGGCGACCAGATCCTGGACCTCAGCATCATCAAGCACCTGTTCACGGGCCCGGTGCTCAGCAAGCACCAGGACGTGTTCAACCAGCCCACCCTGAACAGCTTCATGGGCCTGGGCCAGGCTGCCTGGAAGGAAGCCCGCGTGTTCCTGCAGAATCTCCTCAGCGTCAGCCAGGCCCGCCTGCGAGACGACACAGAGCTGCGGAAGTGCGCGTTCATCAGCCAGGCCAGCGCGACGATGCACCTTCCAGCGACGATCGGCGACTACACGGACTTCTACAGCAGCCGCCAGCACGCGACGAACGTTGGCATCATGTTCCGAGACAAGGAGAACGCACTGATGCCGAACTGGCTGCACCTTCCAGTTGGCTACCACGGCCGCGCGAGCAGCGTGGTGGTCAGCGGCACTCCCATCCGCCGCCCGATGGGCCAGATGAAGCCTGACGACAGCAAGCCACCCGTGTACGGTGCCTGCAAGCTGCTGGACATGGAGCTGGAGATGGCGTTCTTCGTTGGCCCGGGCAACCGCCTGGGTGAGCCGATCCCCATCAGCAAGGCGCACGAGCACATCTTCGGCATGGTGCTGATGAACGACTGGAGCGCCCGAGACATCCAGAAGTGGGAGTACGTTCCCCTGGGCCCGTTCCTGGGCAAGAGCTTCGGCACGACGGTCAGCCCGTGGGTGGTTCCCATGGACGCACTGATGCCGTTCGCTGTTCCCAACCCGAAGCAGGACCCGCGCCCGCTTCCATACCTGTGCCACGACGAGCCGTACACGTTCGACATCAATCTCAGCGTGAATCTCAAGGGTGAGGGCATGAGCCAGGCTGCCACGATCTGCAAGAGCAACTTCAAGTACATGTACTGGACGATGCTGCAGCAGCTGACGCACCACAGCGTGAATGGGTGCAATCTGCGGCCGGGCGACCTGCTGGCGAGCGGCACGATCAGCGGCCCAGAGCCAGAGAACTTCGGCAGCATGCTGGAGCTCAGCTGGAAGGGGACGAAGCCGATCGACCTGGGCAATGGGCAGACGCGCAAGTTCCTGCTGGACGGCGACGAAGTCATCATCACGGGCTACTGCCAGGGCGACGGCTACCGCATCGGCTTCGGCCAGTGCGCCGGGAAGGTGCTTCCAGCACTGCTTCCCTCATAG
94 GABRD胺基酸序列 MSEATPLDRNDSENTGGLISRPHPWDQSPSCVQEDRAMNDIGDYVGSNLEISWLPNLDGLIAGYARNFRPGIGGPPVNVALALEVASIDHISEANMEYTMTVFLHQSWRDSRLSYNHTNETLGLDSRFVDKLWLPDTFIVNAKSAWFHDVTVENKLIRLQPDGVILYSIRITSTVACDMDLAKYPMDEQECMLDLESYGYSSEDIVYYWSESQEHIHGLDKLQLAQFTITSYRFTTELMNFKSAGQFPRLSLHFHLRRNRGVYIIQSYMPSVLLVAMSWVSFWISQAAVPARVSLGITTVLTMTTLMVSARSSLPRASAIKALDVYFWICYVFVFAALVEYAFAHFNADYRKKQKAKVKVSRPRAEMDVRNAIVLFSLSAAGVTQELAISRRQRRVPGNLMGSYRSVGVETGETKKEGAARSGGQGGIRARLRPIDADTIDIYARAVFPAAFAAVNVIYWAAYA
95 GABRD WT ORF AUGUCUGAAGCUACUCCUUUAGAUCGUAAUGAUUCUGAAAAUACUGGUGGUUUAAUUUCUCGUCCUCAUCCUUGGGAUCAAUCUCCUUCUUGUGUUCAAGAAGAUCGUGCUAUGAAUGAUAUUGGUGAUUAUGUUGGUUCUAAUUUAGAAAUUUCUUGGUUACCUAAUUUAGAUGGUUUAAUUGCUGGUUAUGCUCGUAAUUUUCGUCCUGGUAUUGGUGGUCCUCCUGUUAAUGUUGCUUUAGCUUUAGAAGUUGCUUCUAUUGAUCAUAUUUCUGAAGCUAAUAUGGAAUAUACUAUGACUGUUUUUUUACAUCAAUCUUGGCGUGAUUCUCGUUUAUCUUAUAAUCAUACUAAUGAAACUUUAGGUUUAGAUUCUCGUUUUGUUGAUAAAUUAUGGUUACCUGAUACUUUUAUUGUUAAUGCUAAAUCUGCUUGGUUUCAUGAUGUUACUGUUGAAAAUAAAUUAAUUCGUUUACAACCUGAUGGUGUUAUUUUAUAUUCUAUUCGUAUUACUUCUACUGUUGCUUGUGAUAUGGAUUUAGCUAAAUAUCCUAUGGAUGAACAAGAAUGUAUGUUAGAUUUAGAAUCUUAUGGUUAUUCUUCUGAAGAUAUUGUUUAUUAUUGGUCUGAAUCUCAAGAACAUAUUCAUGGUUUAGAUAAAUUACAAUUAGCUCAAUUUACUAUUACUUCUUAUCGUUUUACUACUGAAUUAAUGAAUUUUAAAUCUGCUGGUCAAUUUCCUCGUUUAUCUUUACAUUUUCAUUUACGUCGUAAUCGUGGUGUUUAUAUUAUUCAAUCUUAUAUGCCUUCUGUUUUAUUAGUUGCUAUGUCUUGGGUUUCUUUUUGGAUUUCUCAAGCUGCUGUUCCUGCUCGUGUUUCUUUAGGUAUUACUACUGUUUUAACUAUGACUACUUUAAUGGUUUCUGCUCGUUCUUCUUUACCUCGUGCUUCUGCUAUUAAAGCUUUAGAUGUUUAUUUUUGGAUUUGUUAUGUUUUUGUUUUUGCUGCUUUAGUUGAAUAUGCUUUUGCUCAUUUUAAUGCUGAUUAUCGUAAAAAACAAAAAGCUAAAGUUAAAGUUUCUCGUCCUCGUGCUGAAAUGGAUGUUCGUAAUGCUAUUGUUUUAUUUUCUUUAUCUGCUGCUGGUGUUACUCAAGAAUUAGCUAUUUCUCGUCGUCAACGUCGUGUUCCUGGUAAUUUAAUGGGUUCUUAUCGUUCUGUUGGUGUUGAAACUGGUGAAACUAAAAAAGAAGGUGCUGCUCGUUCUGGUGGUCAAGGUGGUAUUCGUGCUCGUUUACGUCCUAUUGAUGCUGAUACUAUUGAUAUUUAUGCUCGUGCUGUUUUUCCUGCUGCUUUUGCUGCUGUUAAUGUUAUUUAUUGGGCUGCUUAUGCUUAG
96 GABRD BP_GCU ORF ATGTCGGAGGCGACGCCCCTCGACCGCAACGACTCGGAGAACACGGGCGGCCTCATCTCGCGCCCCCACCCCTGGGACCAGTCGCCCTCGTGCGTCCAGGAGGACCGCGCGATGAACGACATCGGCGACTACGTCGGCTCGAACCTCGAGATCTCGTGGCTCCCCAACCTCGACGGCCTCATCGCGGGCTACGCGCGCAACTTCCGCCCCGGCATCGGCGGCCCCCCCGTCAACGTCGCGCTCGCGCTCGAGGTCGCGTCGATCGACCACATCTCGGAGGCGAACATGGAGTACACGATGACGGTCTTCCTCCACCAGTCGTGGCGCGACTCGCGCCTCTCGTACAACCACACGAACGAGACGCTCGGCCTCGACTCGCGCTTCGTCGACAAGCTCTGGCTCCCCGACACGTTCATCGTCAACGCGAAGTCGGCGTGGTTCCACGACGTCACGGTCGAGAACAAGCTCATCCGCCTCCAGCCCGACGGCGTCATCCTCTACTCGATCCGCATCACGTCGACGGTCGCGTGCGACATGGACCTCGCGAAGTACCCCATGGACGAGCAGGAGTGCATGCTCGACCTCGAGTCGTACGGCTACTCGTCGGAGGACATCGTCTACTACTGGTCGGAGTCGCAGGAGCACATCCACGGCCTCGACAAGCTCCAGCTCGCGCAGTTCACGATCACGTCGTACCGCTTCACGACGGAGCTCATGAACTTCAAGTCGGCGGGCCAGTTCCCCCGCCTCTCGCTCCACTTCCACCTCCGCCGCAACCGCGGCGTCTACATCATCCAGTCGTACATGCCCTCGGTCCTCCTCGTCGCGATGTCGTGGGTCTCGTTCTGGATCTCGCAGGCGGCGGTCCCCGCGCGCGTCTCGCTCGGCATCACGACGGTCCTCACGATGACGACGCTCATGGTCTCGGCGCGCTCGTCGCTCCCCCGCGCGTCGGCGATCAAGGCGCTCGACGTCTACTTCTGGATCTGCTACGTCTTCGTCTTCGCGGCGCTCGTCGAGTACGCGTTCGCGCACTTCAACGCGGACTACCGCAAGAAGCAGAAGGCGAAGGTCAAGGTCTCGCGCCCCCGCGCGGAGATGGACGTCCGCAACGCGATCGTCCTCTTCTCGCTCTCGGCGGCGGGCGTCACGCAGGAGCTCGCGATCTCGCGCCGCCAGCGCCGCGTCCCCGGCAACCTCATGGGCTCGTACCGCTCGGTCGGCGTCGAGACGGGCGAGACGAAGAAGGAGGGCGCGGCGCGCTCGGGCGGCCAGGGCGGCATCCGCGCGCGCCTCCGCCCCATCGACGCGGACACGATCGACATCTACGCGCGCGCGGTCTTCCCCGCGGCGTTCGCGGCGGTCAACGTCATCTACTGGGCGGCGTACGCGTAG
97 GABRD GP_BP_BS_GCU ORF ATGTCGGAAGCCACTCCCCTCGACCGCAACGACTCGGAGAACACGGGTGGCCTCATCTCGCGCCCCCACCCCTGGGACCAGAGCCCCTCATGCGTCCAGGAGGACCGCGCGATGAACGACATCGGCGACTACGTTGGCTCGAATCTCGAGATCTCGTGGCTTCCAAATCTCGACGGCCTCATCGCCGGGTACGCCCGCAACTTCCGCCCTGGCATCGGTGGCCCACCCGTCAACGTCGCACTGGCACTGGAAGTCGCGAGCATCGACCACATCTCGGAAGCCAACATGGAGTACACGATGACGGTCTTCCTGCACCAGAGCTGGCGAGACTCGCGCCTCAGCTACAACCACACGAACGAGACGCTCGGCCTCGACTCGCGCTTCGTCGACAAGCTCTGGCTTCCTGACACGTTCATCGTCAACGCGAAGTCGGCGTGGTTCCACGACGTCACGGTCGAGAACAAGCTCATCCGCCTCCAGCCTGACGGCGTCATCCTCTACAGCATCCGCATCACGTCGACTGTCGCGTGCGACATGGACCTCGCGAAGTACCCCATGGACGAGCAGGAGTGCATGCTCGACCTCGAGTCGTACGGCTACTCGTCGGAGGACATCGTCTACTACTGGTCGGAGTCGCAGGAGCACATCCACGGCCTCGACAAGCTCCAGCTCGCGCAGTTCACGATCACGTCGTACCGCTTCACGACAGAGCTGATGAACTTCAAGTCGGCCGGGCAGTTCCCCCGCCTCAGCCTCCACTTCCACCTGCGGCGCAACCGCGGCGTCTACATCATCCAGAGCTACATGCCCTCAGTCCTCCTCGTCGCGATGTCGTGGGTCAGCTTCTGGATCTCGCAGGCTGCTGTTCCCGCCCGCGTCAGCCTCGGCATCACGACGGTCCTCACGATGACGACGCTCATGGTCAGCGCCCGCTCGTCGCTTCCACGCGCGTCGGCGATCAAGGCACTGGACGTCTACTTCTGGATCTGCTACGTCTTCGTCTTCGCTGCACTGGTCGAGTACGCGTTCGCGCACTTCAACGCGGACTACCGCAAGAAGCAGAAGGCGAAGGTCAAGGTCAGCCGCCCCCGCGCGGAGATGGACGTCCGCAACGCGATCGTCCTCTTCTCGCTCAGCGCTGCCGGGGTCACTCAGGAGCTGGCGATCTCGCGCCGCCAGCGCCGCGTTCCCGGCAATCTCATGGGCTCGTACCGATCGGTTGGCGTCGAGACGGGTGAGACGAAGAAGGAGGGTGCTGCCCGCTCGGGTGGCCAGGGTGGCATCCGCGCCCGCCTGCGGCCCATCGACGCGGACACGATCGACATCTACGCCCGCGCTGTGTTCCCTGCTGCCTTCGCTGCTGTGAACGTCATCTACTGGGCTGCCTACGCGTAG
98 GABRD GS_BS_GCU ORF ATGAGCGAAGCCACTCCCCTCGACCGCAACGACAGCGAGAACACGGGTGGCCTCATCAGCCGCCCCCACCCCTGGGACCAGAGCCCCTCATGCGTCCAGGAGGACCGCGCGATGAACGACATCGGCGACTACGTTGGCAGCAATCTCGAGATCAGCTGGCTTCCAAATCTCGACGGCCTCATCGCCGGGTACGCCCGCAACTTCCGCCCTGGCATCGGTGGCCCACCCGTCAACGTCGCACTGGCACTGGAAGTCGCGAGCATCGACCACATCAGCGAAGCCAACATGGAGTACACGATGACGGTCTTCCTGCACCAGAGCTGGCGAGACAGCCGCCTCAGCTACAACCACACGAACGAGACGCTCGGCCTCGACAGCCGCTTCGTCGACAAGCTCTGGCTTCCTGACACGTTCATCGTCAACGCGAAGAGCGCGTGGTTCCACGACGTCACGGTCGAGAACAAGCTCATCCGCCTCCAGCCTGACGGCGTCATCCTCTACAGCATCCGCATCACGTCGACTGTCGCGTGCGACATGGACCTCGCGAAGTACCCCATGGACGAGCAGGAGTGCATGCTCGACCTCGAGAGCTACGGCTACAGCAGCGAGGACATCGTCTACTACTGGAGCGAGAGCCAGGAGCACATCCACGGCCTCGACAAGCTCCAGCTCGCGCAGTTCACGATCACGAGCTACCGCTTCACGACAGAGCTGATGAACTTCAAGAGCGCCGGGCAGTTCCCCCGCCTCAGCCTCCACTTCCACCTGCGGCGCAACCGCGGCGTCTACATCATCCAGAGCTACATGCCCTCAGTCCTCCTCGTCGCGATGAGCTGGGTCAGCTTCTGGATCAGCCAGGCTGCTGTTCCCGCCCGCGTCAGCCTCGGCATCACGACGGTCCTCACGATGACGACGCTCATGGTCAGCGCCCGCAGCAGCCTTCCACGCGCGAGCGCGATCAAGGCACTGGACGTCTACTTCTGGATCTGCTACGTCTTCGTCTTCGCTGCACTGGTCGAGTACGCGTTCGCGCACTTCAACGCGGACTACCGCAAGAAGCAGAAGGCGAAGGTCAAGGTCAGCCGCCCCCGCGCGGAGATGGACGTCCGCAACGCGATCGTCCTCTTCAGCCTCAGCGCTGCCGGGGTCACTCAGGAGCTGGCGATCAGCCGCCGCCAGCGCCGCGTTCCCGGCAATCTCATGGGCAGCTACAGGAGCGTTGGCGTCGAGACGGGTGAGACGAAGAAGGAGGGTGCTGCCCGCAGCGGTGGCCAGGGTGGCATCCGCGCCCGCCTGCGGCCCATCGACGCGGACACGATCGACATCTACGCCCGCGCTGTGTTCCCTGCTGCCTTCGCTGCTGTGAACGTCATCTACTGGGCTGCCTACGCGTAG
99 GABRD GS_GCU ORF ATGAGCGAAGCCACTCCCCTGGACCGCAACGACAGCGAGAACACGGGTGGCCTGATCAGCCGCCCGCACCCGTGGGACCAGAGCCCCTCATGCGTGCAGGAGGACCGCGCGATGAACGACATCGGCGACTACGTTGGCAGCAATCTCGAGATCAGCTGGCTTCCAAATCTCGACGGCCTGATCGCCGGGTACGCCCGCAACTTCCGCCCGGGCATCGGTGGCCCACCCGTGAACGTGGCACTGGCACTGGAAGTCGCGAGCATCGACCACATCAGCGAAGCCAACATGGAGTACACGATGACGGTGTTCCTGCACCAGAGCTGGCGAGACAGCCGCCTCAGCTACAACCACACGAACGAGACGCTGGGCCTGGACAGCCGCTTCGTGGACAAGCTGTGGCTTCCTGACACGTTCATCGTGAACGCGAAGAGCGCGTGGTTCCACGACGTGACGGTGGAGAACAAGCTGATCCGCCTGCAGCCTGACGGCGTGATCCTGTACAGCATCCGCATCACGTCGACTGTGGCGTGCGACATGGACCTGGCGAAGTACCCGATGGACGAGCAGGAGTGCATGCTGGACCTGGAGAGCTACGGCTACAGCAGCGAGGACATCGTGTACTACTGGAGCGAGAGCCAGGAGCACATCCACGGCCTGGACAAGCTGCAGCTGGCGCAGTTCACGATCACGAGCTACCGCTTCACGACAGAGCTGATGAACTTCAAGAGCGCCGGGCAGTTCCCGCGCCTCAGCCTGCACTTCCACCTGCGGCGCAACCGCGGCGTGTACATCATCCAGAGCTACATGCCCTCAGTGCTGCTGGTGGCGATGAGCTGGGTCAGCTTCTGGATCAGCCAGGCTGCTGTTCCCGCCCGCGTCAGCCTGGGCATCACGACGGTGCTGACGATGACGACGCTGATGGTCAGCGCCCGCAGCAGCCTTCCACGCGCGAGCGCGATCAAGGCACTGGACGTGTACTTCTGGATCTGCTACGTGTTCGTGTTCGCTGCACTGGTGGAGTACGCGTTCGCGCACTTCAACGCGGACTACCGCAAGAAGCAGAAGGCGAAGGTGAAGGTCAGCCGCCCGCGCGCGGAGATGGACGTGCGCAACGCGATCGTGCTGTTCAGCCTCAGCGCTGCCGGGGTGACTCAGGAGCTGGCGATCAGCCGCCGCCAGCGCCGCGTTCCCGGCAATCTCATGGGCAGCTACCGCAGCGTTGGCGTGGAGACGGGTGAGACGAAGAAGGAGGGTGCTGCCCGCAGCGGTGGCCAGGGTGGCATCCGCGCCCGCCTGCGGCCGATCGACGCGGACACGATCGACATCTACGCCCGCGCTGTGTTCCCGGCTGCCTTCGCTGCTGTGAACGTGATCTACTGGGCTGCCTACGCGTAG
100 GAPDH胺基酸序列 MGKVKVGVNGFGRIGRLVTRAAFNSGKVDIVAINDPFIDLNYMAENGKLVINGNPITIFQERDPSKIKWGDAGAEYVVESTGVFTTMEKAGAHLQGGAKRVIISAPSADAPMFVMGVNHEKYDNSLKIISNASCTTNCLAPLAKVIHDNFGIVEGLMTTVHAITATQKTVDGPSGKLWRDGRGALQNIIPASTGAAKAVGKVIPELNGKLTGMAFRVPTANVSVVDLTCRLEKPAKYDDIKKVVKQASEGPLKGILGYTEHQVVSSDFNSDTHSSTFDAGAGIALNDHFVKLISWYDNEFGYSNRVVDLMAHMASK
101 GAPDH WT ORF AUGGGUAAAGUUAAAGUUGGUGUUAAUGGUUUUGGUCGUAUUGGUCGUUUAGUUACUCGUGCUGCUUUUAAUUCUGGUAAAGUUGAUAUUGUUGCUAUUAAUGAUCCUUUUAUUGAUUUAAAUUAUAUGGCUGAAAAUGGUAAAUUAGUUAUUAAUGGUAAUCCUAUUACUAUUUUUCAAGAACGUGAUCCUUCUAAAAUUAAAUGGGGUGAUGCUGGUGCUGAAUAUGUUGUUGAAUCUACUGGUGUUUUUACUACUAUGGAAAAAGCUGGUGCUCAUUUACAAGGUGGUGCUAAACGUGUUAUUAUUUCUGCUCCUUCUGCUGAUGCUCCUAUGUUUGUUAUGGGUGUUAAUCAUGAAAAAUAUGAUAAUUCUUUAAAAAUUAUUUCUAAUGCUUCUUGUACUACUAAUUGUUUAGCUCCUUUAGCUAAAGUUAUUCAUGAUAAUUUUGGUAUUGUUGAAGGUUUAAUGACUACUGUUCAUGCUAUUACUGCUACUCAAAAAACUGUUGAUGGUCCUUCUGGUAAAUUAUGGCGUGAUGGUCGUGGUGCUUUACAAAAUAUUAUUCCUGCUUCUACUGGUGCUGCUAAAGCUGUUGGUAAAGUUAUUCCUGAAUUAAAUGGUAAAUUAACUGGUAUGGCUUUUCGUGUUCCUACUGCUAAUGUUUCUGUUGUUGAUUUAACUUGUCGUUUAGAAAAACCUGCUAAAUAUGAUGAUAUUAAAAAAGUUGUUAAACAAGCUUCUGAAGGUCCUUUAAAAGGUAUUUUAGGUUAUACUGAACAUCAAGUUGUUUCUUCUGAUUUUAAUUCUGAUACUCAUUCUUCUACUUUUGAUGCUGGUGCUGGUAUUGCUUUAAAUGAUCAUUUUGUUAAAUUAAUUUCUUGGUAUGAUAAUGAAUUUGGUUAUUCUAAUCGUGUUGUUGAUUUAAUGGCUCAUAUGGCUUCUAAAUAG
102 GAPDH BP_GCU ORF ATGGGCAAGGTCAAGGTCGGCGTCAACGGCTTCGGCCGCATCGGCCGCCTCGTCACGCGCGCGGCGTTCAACTCGGGCAAGGTCGACATCGTCGCGATCAACGACCCCTTCATCGACCTCAACTACATGGCGGAGAACGGCAAGCTCGTCATCAACGGCAACCCCATCACGATCTTCCAGGAGCGCGACCCCTCGAAGATCAAGTGGGGCGACGCGGGCGCGGAGTACGTCGTCGAGTCGACGGGCGTCTTCACGACGATGGAGAAGGCGGGCGCGCACCTCCAGGGCGGCGCGAAGCGCGTCATCATCTCGGCGCCCTCGGCGGACGCGCCCATGTTCGTCATGGGCGTCAACCACGAGAAGTACGACAACTCGCTCAAGATCATCTCGAACGCGTCGTGCACGACGAACTGCCTCGCGCCCCTCGCGAAGGTCATCCACGACAACTTCGGCATCGTCGAGGGCCTCATGACGACGGTCCACGCGATCACGGCGACGCAGAAGACGGTCGACGGCCCCTCGGGCAAGCTCTGGCGCGACGGCCGCGGCGCGCTCCAGAACATCATCCCCGCGTCGACGGGCGCGGCGAAGGCGGTCGGCAAGGTCATCCCCGAGCTCAACGGCAAGCTCACGGGCATGGCGTTCCGCGTCCCCACGGCGAACGTCTCGGTCGTCGACCTCACGTGCCGCCTCGAGAAGCCCGCGAAGTACGACGACATCAAGAAGGTCGTCAAGCAGGCGTCGGAGGGCCCCCTCAAGGGCATCCTCGGCTACACGGAGCACCAGGTCGTCTCGTCGGACTTCAACTCGGACACGCACTCGTCGACGTTCGACGCGGGCGCGGGCATCGCGCTCAACGACCACTTCGTCAAGCTCATCTCGTGGTACGACAACGAGTTCGGCTACTCGAACCGCGTCGTCGACCTCATGGCGCACATGGCGTCGAAGTAG
103 GAPDH GP_BP_BS_GCU ORF ATGGGCAAGGTCAAGGTTGGCGTCAATGGGTTCGGCCGCATCGGCCGCCTCGTCACGCGCGCTGCCTTCAACTCGGGCAAGGTCGACATCGTCGCGATCAACGACCCCTTCATCGACCTCAACTACATGGCGGAGAATGGGAAGCTCGTCATCAATGGGAACCCCATCACGATCTTCCAGGAGCGAGACCCCTCAAAGATCAAGTGGGGCGACGCCGGTGCCGAGTACGTCGTCGAGTCGACTGGCGTCTTCACGACGATGGAGAAGGCCGGTGCCCACCTCCAGGGTGGTGCCAAGCGCGTCATCATCTCGGCGCCCTCAGCGGACGCGCCCATGTTCGTCATGGGCGTCAACCACGAGAAGTACGACAACTCGCTCAAGATCATCTCGAACGCGTCGTGCACGACGAACTGCCTCGCGCCCCTCGCGAAGGTCATCCACGACAACTTCGGCATCGTCGAGGGCCTCATGACGACGGTCCACGCGATCACGGCGACTCAAAAGACGGTCGACGGCCCCTCAGGCAAGCTCTGGCGAGACGGCCGCGGTGCACTGCAGAACATCATCCCCGCGTCGACTGGTGCTGCCAAGGCTGTTGGCAAGGTCATCCCAGAGCTGAATGGGAAGCTCACGGGCATGGCGTTCCGCGTTCCCACCGCGAACGTCAGCGTCGTCGACCTCACGTGCCGCCTCGAGAAGCCTGCGAAGTACGACGACATCAAGAAGGTCGTCAAGCAGGCCTCGGAGGGCCCCCTCAAGGGGATCCTCGGCTACACAGAGCACCAGGTGGTCAGCTCGGACTTCAACTCGGACACGCACTCGTCGACTTTCGACGCCGGTGCCGGGATCGCACTGAACGACCACTTCGTCAAGCTCATCTCGTGGTACGACAACGAGTTCGGCTACTCGAACCGCGTCGTCGACCTCATGGCGCACATGGCGTCGAAGTAG
104 GAPDH GS_BS_GCU ORF ATGGGCAAGGTCAAGGTTGGCGTCAATGGGTTCGGCCGCATCGGCCGCCTCGTCACGCGCGCTGCCTTCAACAGCGGCAAGGTCGACATCGTCGCGATCAACGACCCCTTCATCGACCTCAACTACATGGCGGAGAATGGGAAGCTCGTCATCAATGGGAACCCCATCACGATCTTCCAGGAGCGAGACCCCTCAAAGATCAAGTGGGGCGACGCCGGTGCCGAGTACGTCGTCGAGTCGACTGGCGTCTTCACGACGATGGAGAAGGCCGGTGCCCACCTCCAGGGTGGTGCCAAGCGCGTCATCATCAGCGCGCCCTCAGCGGACGCGCCCATGTTCGTCATGGGCGTCAACCACGAGAAGTACGACAACAGCCTCAAGATCATCAGCAACGCGAGCTGCACGACGAACTGCCTCGCGCCCCTCGCGAAGGTCATCCACGACAACTTCGGCATCGTCGAGGGCCTCATGACGACGGTCCACGCGATCACGGCGACTCAAAAGACGGTCGACGGCCCCTCAGGCAAGCTCTGGCGAGACGGCCGCGGTGCACTGCAGAACATCATCCCCGCGTCGACTGGTGCTGCCAAGGCTGTTGGCAAGGTCATCCCAGAGCTGAATGGGAAGCTCACGGGCATGGCGTTCCGCGTTCCCACCGCGAACGTCAGCGTCGTCGACCTCACGTGCCGCCTCGAGAAGCCTGCGAAGTACGACGACATCAAGAAGGTCGTCAAGCAGGCCAGCGAGGGCCCCCTCAAGGGGATCCTCGGCTACACAGAGCACCAGGTGGTCAGCAGCGACTTCAACAGCGACACGCACAGCTCGACTTTCGACGCCGGTGCCGGGATCGCACTGAACGACCACTTCGTCAAGCTCATCAGCTGGTACGACAACGAGTTCGGCTACAGCAACCGCGTCGTCGACCTCATGGCGCACATGGCGAGCAAGTAG
105 GAPDH GS_GCU ORF ATGGGCAAGGTGAAGGTTGGCGTGAATGGGTTCGGCCGCATCGGCCGCCTGGTGACGCGCGCTGCCTTCAACAGCGGCAAGGTGGACATCGTGGCGATCAACGACCCGTTCATCGACCTGAACTACATGGCGGAGAATGGGAAGCTGGTGATCAATGGGAACCCGATCACGATCTTCCAGGAGCGAGACCCCTCAAAGATCAAGTGGGGCGACGCCGGTGCCGAGTACGTGGTGGAGTCGACTGGCGTGTTCACGACGATGGAGAAGGCCGGTGCCCACCTGCAGGGTGGTGCCAAGCGCGTGATCATCAGCGCGCCCTCAGCGGACGCGCCGATGTTCGTGATGGGCGTGAACCACGAGAAGTACGACAACAGCCTGAAGATCATCAGCAACGCGAGCTGCACGACGAACTGCCTGGCGCCGCTGGCGAAGGTGATCCACGACAACTTCGGCATCGTGGAGGGCCTGATGACGACGGTGCACGCGATCACGGCGACTCAAAAGACGGTGGACGGCCCCTCAGGCAAGCTGTGGCGAGACGGCCGCGGTGCACTGCAGAACATCATCCCCGCGTCGACTGGTGCTGCCAAGGCTGTTGGCAAGGTGATCCCAGAGCTGAATGGGAAGCTGACGGGCATGGCGTTCCGCGTTCCCACCGCGAACGTCAGCGTGGTGGACCTGACGTGCCGCCTGGAGAAGCCGGCGAAGTACGACGACATCAAGAAGGTGGTGAAGCAGGCCAGCGAGGGCCCGCTGAAGGGGATCCTGGGCTACACAGAGCACCAGGTGGTCAGCAGCGACTTCAACAGCGACACGCACAGCTCGACTTTCGACGCCGGTGCCGGGATCGCACTGAACGACCACTTCGTGAAGCTGATCAGCTGGTACGACAACGAGTTCGGCTACAGCAACCGCGTGGTGGACCTGATGGCGCACATGGCGAGCAAGTAG
106 GBA1胺基酸序列 MEFSSPSREECPKPLSRVSIMAGSLTGLLLLQAVSWASGARPCIPKSFGYSSVVCVCNATYCDSFDPPTFPALGTFSRYESTRSGRRMELSMGPIQANHTGTGLLLTLQPEQKFQKVKGFGGAMTDAAALNILALSPPAQNLLLKSYFSEEGIGYNIIRVPMASCDFSIRTYTYADTPDDFQLHNFSLPEEDTKLKIPLIHRALQLAQRPVSLLASPWTSPTWLKTNGAVNGKGSLKGQPGDIYHQTWARYFVKFLDAYAEHKLQFWAVTAENEPSAGLLSGYPFQCLGFTPEHQRDFIARDLGPTLANSTHHNVRLLMLDDQRLLLPHWAKVVLTDPEAAKYVHGIAVHWYLDFLAPAKATLGETHRLFPNTMLFASEACVGSKFWEQSVRLGSWDRGMQYSHSIITNLLYHVVGWTDWNLALNPEGGPNWVRNFVDSPIIVDITKDTFYKQPMFYHLGHFSKFIPEGSQRVGLVASQKNDLDAVALMHPDGSAVVVVLNRSSKDVPLTIKDPAVGFLETISPGYSIHTYLWRR
107 GBA1 WT ORF AUGGAAUUUUCUUCUCCUUCUCGUGAAGAAUGUCCUAAACCUUUAUCUCGUGUUUCUAUUAUGGCUGGUUCUUUAACUGGUUUAUUAUUAUUACAAGCUGUUUCUUGGGCUUCUGGUGCUCGUCCUUGUAUUCCUAAAUCUUUUGGUUAUUCUUCUGUUGUUUGUGUUUGUAAUGCUACUUAUUGUGAUUCUUUUGAUCCUCCUACUUUUCCUGCUUUAGGUACUUUUUCUCGUUAUGAAUCUACUCGUUCUGGUCGUCGUAUGGAAUUAUCUAUGGGUCCUAUUCAAGCUAAUCAUACUGGUACUGGUUUAUUAUUAACUUUACAACCUGAACAAAAAUUUCAAAAAGUUAAAGGUUUUGGUGGUGCUAUGACUGAUGCUGCUGCUUUAAAUAUUUUAGCUUUAUCUCCUCCUGCUCAAAAUUUAUUAUUAAAAUCUUAUUUUUCUGAAGAAGGUAUUGGUUAUAAUAUUAUUCGUGUUCCUAUGGCUUCUUGUGAUUUUUCUAUUCGUACUUAUACUUAUGCUGAUACUCCUGAUGAUUUUCAAUUACAUAAUUUUUCUUUACCUGAAGAAGAUACUAAAUUAAAAAUUCCUUUAAUUCAUCGUGCUUUACAAUUAGCUCAACGUCCUGUUUCUUUAUUAGCUUCUCCUUGGACUUCUCCUACUUGGUUAAAAACUAAUGGUGCUGUUAAUGGUAAAGGUUCUUUAAAAGGUCAACCUGGUGAUAUUUAUCAUCAAACUUGGGCUCGUUAUUUUGUUAAAUUUUUAGAUGCUUAUGCUGAACAUAAAUUACAAUUUUGGGCUGUUACUGCUGAAAAUGAACCUUCUGCUGGUUUAUUAUCUGGUUAUCCUUUUCAAUGUUUAGGUUUUACUCCUGAACAUCAACGUGAUUUUAUUGCUCGUGAUUUAGGUCCUACUUUAGCUAAUUCUACUCAUCAUAAUGUUCGUUUAUUAAUGUUAGAUGAUCAACGUUUAUUAUUACCUCAUUGGGCUAAAGUUGUUUUAACUGAUCCUGAAGCUGCUAAAUAUGUUCAUGGUAUUGCUGUUCAUUGGUAUUUAGAUUUUUUAGCUCCUGCUAAAGCUACUUUAGGUGAAACUCAUCGUUUAUUUCCUAAUACUAUGUUAUUUGCUUCUGAAGCUUGUGUUGGUUCUAAAUUUUGGGAACAAUCUGUUCGUUUAGGUUCUUGGGAUCGUGGUAUGCAAUAUUCUCAUUCUAUUAUUACUAAUUUAUUAUAUCAUGUUGUUGGUUGGACUGAUUGGAAUUUAGCUUUAAAUCCUGAAGGUGGUCCUAAUUGGGUUCGUAAUUUUGUUGAUUCUCCUAUUAUUGUUGAUAUUACUAAAGAUACUUUUUAUAAACAACCUAUGUUUUAUCAUUUAGGUCAUUUUUCUAAAUUUAUUCCUGAAGGUUCUCAACGUGUUGGUUUAGUUGCUUCUCAAAAAAAUGAUUUAGAUGCUGUUGCUUUAAUGCAUCCUGAUGGUUCUGCUGUUGUUGUUGUUUUAAAUCGUUCUUCUAAAGAUGUUCCUUUAACUAUUAAAGAUCCUGCUGUUGGUUUUUUAGAAACUAUUUCUCCUGGUUAUUCUAUUCAUACUUAUUUAUGGCGUCGUUAG
108 GBA1 BP_GCU ORF ATGGAGTTCTCGTCGCCCTCGCGCGAGGAGTGCCCCAAGCCCCTCTCGCGCGTCTCGATCATGGCGGGCTCGCTCACGGGCCTCCTCCTCCTCCAGGCGGTCTCGTGGGCGTCGGGCGCGCGCCCCTGCATCCCCAAGTCGTTCGGCTACTCGTCGGTCGTCTGCGTCTGCAACGCGACGTACTGCGACTCGTTCGACCCCCCCACGTTCCCCGCGCTCGGCACGTTCTCGCGCTACGAGTCGACGCGCTCGGGCCGCCGCATGGAGCTCTCGATGGGCCCCATCCAGGCGAACCACACGGGCACGGGCCTCCTCCTCACGCTCCAGCCCGAGCAGAAGTTCCAGAAGGTCAAGGGCTTCGGCGGCGCGATGACGGACGCGGCGGCGCTCAACATCCTCGCGCTCTCGCCCCCCGCGCAGAACCTCCTCCTCAAGTCGTACTTCTCGGAGGAGGGCATCGGCTACAACATCATCCGCGTCCCCATGGCGTCGTGCGACTTCTCGATCCGCACGTACACGTACGCGGACACGCCCGACGACTTCCAGCTCCACAACTTCTCGCTCCCCGAGGAGGACACGAAGCTCAAGATCCCCCTCATCCACCGCGCGCTCCAGCTCGCGCAGCGCCCCGTCTCGCTCCTCGCGTCGCCCTGGACGTCGCCCACGTGGCTCAAGACGAACGGCGCGGTCAACGGCAAGGGCTCGCTCAAGGGCCAGCCCGGCGACATCTACCACCAGACGTGGGCGCGCTACTTCGTCAAGTTCCTCGACGCGTACGCGGAGCACAAGCTCCAGTTCTGGGCGGTCACGGCGGAGAACGAGCCCTCGGCGGGCCTCCTCTCGGGCTACCCCTTCCAGTGCCTCGGCTTCACGCCCGAGCACCAGCGCGACTTCATCGCGCGCGACCTCGGCCCCACGCTCGCGAACTCGACGCACCACAACGTCCGCCTCCTCATGCTCGACGACCAGCGCCTCCTCCTCCCCCACTGGGCGAAGGTCGTCCTCACGGACCCCGAGGCGGCGAAGTACGTCCACGGCATCGCGGTCCACTGGTACCTCGACTTCCTCGCGCCCGCGAAGGCGACGCTCGGCGAGACGCACCGCCTCTTCCCCAACACGATGCTCTTCGCGTCGGAGGCGTGCGTCGGCTCGAAGTTCTGGGAGCAGTCGGTCCGCCTCGGCTCGTGGGACCGCGGCATGCAGTACTCGCACTCGATCATCACGAACCTCCTCTACCACGTCGTCGGCTGGACGGACTGGAACCTCGCGCTCAACCCCGAGGGCGGCCCCAACTGGGTCCGCAACTTCGTCGACTCGCCCATCATCGTCGACATCACGAAGGACACGTTCTACAAGCAGCCCATGTTCTACCACCTCGGCCACTTCTCGAAGTTCATCCCCGAGGGCTCGCAGCGCGTCGGCCTCGTCGCGTCGCAGAAGAACGACCTCGACGCGGTCGCGCTCATGCACCCCGACGGCTCGGCGGTCGTCGTCGTCCTCAACCGCTCGTCGAAGGACGTCCCCCTCACGATCAAGGACCCCGCGGTCGGCTTCCTCGAGACGATCTCGCCCGGCTACTCGATCCACACGTACCTCTGGCGCCGCTAG
109 GBA1 GP_BP_BS_GCU ORF ATGGAGTTCTCGTCGCCCTCAAGGGAGGAGTGCCCCAAGCCCCTCAGCCGCGTCAGCATCATGGCCGGGTCGCTCACGGGCCTCCTCCTCCTCCAGGCTGTCAGCTGGGCGTCGGGTGCCCGCCCCTGCATCCCCAAGTCGTTCGGCTACTCGTCGGTCGTCTGCGTCTGCAACGCGACCTACTGCGACTCGTTCGACCCACCCACCTTCCCTGCACTGGGCACGTTCTCGCGCTACGAGTCGACTCGATCGGGCCGCCGCATGGAGCTCAGCATGGGCCCCATCCAGGCCAACCACACGGGCACGGGCCTCCTCCTCACGCTCCAGCCAGAGCAGAAGTTCCAGAAGGTCAAGGGGTTCGGTGGTGCCATGACGGACGCTGCTGCACTGAACATCCTCGCACTCAGCCCACCCGCGCAGAATCTCCTCCTCAAGTCGTACTTCTCGGAGGAGGGCATCGGCTACAACATCATCCGCGTTCCCATGGCGTCGTGCGACTTCAGCATCCGCACCTACACCTACGCGGACACTCCTGACGACTTCCAGCTCCACAACTTCTCGCTTCCAGAGGAGGACACGAAGCTCAAGATCCCCCTCATCCACCGCGCACTGCAGCTCGCGCAGCGCCCCGTCAGCCTCCTCGCGTCGCCCTGGACGTCGCCCACCTGGCTCAAGACGAATGGTGCTGTGAATGGGAAGGGGTCGCTCAAGGGGCAGCCCGGCGACATCTACCACCAGACGTGGGCCCGCTACTTCGTCAAGTTCCTGGACGCGTACGCGGAGCACAAGCTCCAGTTCTGGGCTGTGACGGCGGAGAACGAGCCCTCAGCCGGGCTCCTCAGCGGCTACCCCTTCCAGTGCCTCGGCTTCACTCCAGAGCACCAGCGAGACTTCATCGCCCGAGACCTCGGCCCCACCCTCGCGAACTCGACTCACCACAACGTCCGCCTCCTCATGCTCGACGACCAGCGCCTCCTCCTTCCACACTGGGCGAAGGTCGTCCTCACGGACCCAGAAGCTGCCAAGTACGTCCACGGCATCGCTGTGCACTGGTACCTCGACTTCCTGGCGCCTGCGAAGGCGACGCTCGGTGAGACGCACCGCCTCTTCCCCAACACGATGCTCTTCGCGTCGGAAGCCTGCGTTGGCTCGAAGTTCTGGGAGCAGAGCGTCCGCCTCGGCTCGTGGGACCGCGGCATGCAGTACTCGCACAGCATCATCACGAATCTCCTCTACCACGTCGTTGGCTGGACGGACTGGAATCTCGCACTGAACCCAGAGGGTGGCCCCAACTGGGTCCGCAACTTCGTCGACTCGCCCATCATCGTCGACATCACGAAGGACACGTTCTACAAGCAGCCCATGTTCTACCACCTCGGCCACTTCTCGAAGTTCATCCCAGAGGGCTCGCAGCGCGTTGGCCTCGTCGCGTCGCAGAAGAACGACCTCGACGCTGTGGCACTGATGCACCCTGACGGCTCGGCTGTGGTCGTCGTCCTCAACCGATCGTCGAAGGACGTTCCCCTCACGATCAAGGACCCTGCTGTTGGCTTCCTGGAGACGATCTCGCCTGGCTACAGCATCCACACCTACCTCTGGCGCCGCTAG
110 GBA1 GS_BS_GCU ORF ATGGAGTTCAGCAGCCCCTCAAGGGAGGAGTGCCCCAAGCCCCTCAGCCGCGTCAGCATCATGGCCGGGAGCCTCACGGGCCTCCTCCTCCTCCAGGCTGTCAGCTGGGCGAGCGGTGCCCGCCCCTGCATCCCCAAGAGCTTCGGCTACAGCAGCGTCGTCTGCGTCTGCAACGCGACCTACTGCGACAGCTTCGACCCACCCACCTTCCCTGCACTGGGCACGTTCAGCCGCTACGAGTCGACTAGGAGCGGCCGCCGCATGGAGCTCAGCATGGGCCCCATCCAGGCCAACCACACGGGCACGGGCCTCCTCCTCACGCTCCAGCCAGAGCAGAAGTTCCAGAAGGTCAAGGGGTTCGGTGGTGCCATGACGGACGCTGCTGCACTGAACATCCTCGCACTCAGCCCACCCGCGCAGAATCTCCTCCTCAAGAGCTACTTCAGCGAGGAGGGCATCGGCTACAACATCATCCGCGTTCCCATGGCGAGCTGCGACTTCAGCATCCGCACCTACACCTACGCGGACACTCCTGACGACTTCCAGCTCCACAACTTCAGCCTTCCAGAGGAGGACACGAAGCTCAAGATCCCCCTCATCCACCGCGCACTGCAGCTCGCGCAGCGCCCCGTCAGCCTCCTCGCGAGCCCCTGGACGAGCCCCACCTGGCTCAAGACGAATGGTGCTGTGAATGGGAAGGGGAGCCTCAAGGGGCAGCCCGGCGACATCTACCACCAGACGTGGGCCCGCTACTTCGTCAAGTTCCTGGACGCGTACGCGGAGCACAAGCTCCAGTTCTGGGCTGTGACGGCGGAGAACGAGCCCTCAGCCGGGCTCCTCAGCGGCTACCCCTTCCAGTGCCTCGGCTTCACTCCAGAGCACCAGCGAGACTTCATCGCCCGAGACCTCGGCCCCACCCTCGCGAACTCGACTCACCACAACGTCCGCCTCCTCATGCTCGACGACCAGCGCCTCCTCCTTCCACACTGGGCGAAGGTCGTCCTCACGGACCCAGAAGCTGCCAAGTACGTCCACGGCATCGCTGTGCACTGGTACCTCGACTTCCTGGCGCCTGCGAAGGCGACGCTCGGTGAGACGCACCGCCTCTTCCCCAACACGATGCTCTTCGCGAGCGAAGCCTGCGTTGGCAGCAAGTTCTGGGAGCAGAGCGTCCGCCTCGGCAGCTGGGACCGCGGCATGCAGTACAGCCACAGCATCATCACGAATCTCCTCTACCACGTCGTTGGCTGGACGGACTGGAATCTCGCACTGAACCCAGAGGGTGGCCCCAACTGGGTCCGCAACTTCGTCGACAGCCCCATCATCGTCGACATCACGAAGGACACGTTCTACAAGCAGCCCATGTTCTACCACCTCGGCCACTTCAGCAAGTTCATCCCAGAGGGCAGCCAGCGCGTTGGCCTCGTCGCGAGCCAGAAGAACGACCTCGACGCTGTGGCACTGATGCACCCTGACGGCAGCGCTGTGGTCGTCGTCCTCAACAGGAGCAGCAAGGACGTTCCCCTCACGATCAAGGACCCTGCTGTTGGCTTCCTGGAGACGATCAGCCCTGGCTACAGCATCCACACCTACCTCTGGCGCCGCTAG
111 GBA1 GS_GCU ORF ATGGAGTTCAGCAGCCCCTCAAGGGAGGAGTGCCCGAAGCCGCTCAGCCGCGTCAGCATCATGGCCGGGAGCCTGACGGGCCTGCTGCTGCTGCAGGCTGTCAGCTGGGCGAGCGGTGCCCGCCCGTGCATCCCCAAGAGCTTCGGCTACAGCAGCGTGGTGTGCGTGTGCAACGCGACCTACTGCGACAGCTTCGACCCACCCACCTTCCCGGCACTGGGCACGTTCAGCCGCTACGAGTCGACTCGCAGCGGCCGCCGCATGGAGCTCAGCATGGGCCCGATCCAGGCCAACCACACGGGCACGGGCCTGCTGCTGACGCTGCAGCCAGAGCAGAAGTTCCAGAAGGTGAAGGGGTTCGGTGGTGCCATGACGGACGCTGCTGCACTGAACATCCTGGCACTCAGCCCACCCGCGCAGAATCTCCTGCTGAAGAGCTACTTCAGCGAGGAGGGCATCGGCTACAACATCATCCGCGTTCCCATGGCGAGCTGCGACTTCAGCATCCGCACCTACACCTACGCGGACACTCCTGACGACTTCCAGCTGCACAACTTCAGCCTTCCAGAGGAGGACACGAAGCTGAAGATCCCCCTGATCCACCGCGCACTGCAGCTGGCGCAGCGCCCGGTCAGCCTGCTGGCGAGCCCGTGGACGAGCCCCACCTGGCTGAAGACGAATGGTGCTGTGAATGGGAAGGGGAGCCTGAAGGGGCAGCCCGGCGACATCTACCACCAGACGTGGGCCCGCTACTTCGTGAAGTTCCTGGACGCGTACGCGGAGCACAAGCTGCAGTTCTGGGCTGTGACGGCGGAGAACGAGCCCTCAGCCGGGCTGCTCAGCGGCTACCCGTTCCAGTGCCTGGGCTTCACTCCAGAGCACCAGCGAGACTTCATCGCCCGAGACCTGGGCCCCACCCTGGCGAACTCGACTCACCACAACGTGCGCCTGCTGATGCTGGACGACCAGCGCCTGCTGCTTCCACACTGGGCGAAGGTGGTGCTGACGGACCCAGAAGCTGCCAAGTACGTGCACGGCATCGCTGTGCACTGGTACCTGGACTTCCTGGCGCCGGCGAAGGCGACGCTGGGTGAGACGCACCGCCTGTTCCCGAACACGATGCTGTTCGCGAGCGAAGCCTGCGTTGGCAGCAAGTTCTGGGAGCAGAGCGTGCGCCTGGGCAGCTGGGACCGCGGCATGCAGTACAGCCACAGCATCATCACGAATCTCCTGTACCACGTGGTTGGCTGGACGGACTGGAATCTCGCACTGAACCCAGAGGGTGGCCCGAACTGGGTGCGCAACTTCGTGGACAGCCCGATCATCGTGGACATCACGAAGGACACGTTCTACAAGCAGCCCATGTTCTACCACCTGGGCCACTTCAGCAAGTTCATCCCAGAGGGCAGCCAGCGCGTTGGCCTGGTGGCGAGCCAGAAGAACGACCTGGACGCTGTGGCACTGATGCACCCTGACGGCAGCGCTGTGGTGGTGGTGCTGAACCGCAGCAGCAAGGACGTTCCCCTGACGATCAAGGACCCGGCTGTTGGCTTCCTGGAGACGATCAGCCCGGGCTACAGCATCCACACCTACCTGTGGCGCCGCTAG
112 GLA胺基酸序列 MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWKSIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDL
113 GLA WT ORF AUGCAAUUACGUAAUCCUGAAUUACAUUUAGGUUGUGCUUUAGCUUUACGUUUUUUAGCUUUAGUUUCUUGGGAUAUUCCUGGUGCUCGUGCUUUAGAUAAUGGUUUAGCUCGUACUCCUACUAUGGGUUGGUUACAUUGGGAACGUUUUAUGUGUAAUUUAGAUUGUCAAGAAGAACCUGAUUCUUGUAUUUCUGAAAAAUUAUUUAUGGAAAUGGCUGAAUUAAUGGUUUCUGAAGGUUGGAAAGAUGCUGGUUAUGAAUAUUUAUGUAUUGAUGAUUGUUGGAUGGCUCCUCAACGUGAUUCUGAAGGUCGUUUACAAGCUGAUCCUCAACGUUUUCCUCAUGGUAUUCGUCAAUUAGCUAAUUAUGUUCAUUCUAAAGGUUUAAAAUUAGGUAUUUAUGCUGAUGUUGGUAAUAAAACUUGUGCUGGUUUUCCUGGUUCUUUUGGUUAUUAUGAUAUUGAUGCUCAAACUUUUGCUGAUUGGGGUGUUGAUUUAUUAAAAUUUGAUGGUUGUUAUUGUGAUUCUUUAGAAAAUUUAGCUGAUGGUUAUAAACAUAUGUCUUUAGCUUUAAAUCGUACUGGUCGUUCUAUUGUUUAUUCUUGUGAAUGGCCUUUAUAUAUGUGGCCUUUUCAAAAACCUAAUUAUACUGAAAUUCGUCAAUAUUGUAAUCAUUGGCGUAAUUUUGCUGAUAUUGAUGAUUCUUGGAAAUCUAUUAAAUCUAUUUUAGAUUGGACUUCUUUUAAUCAAGAACGUAUUGUUGAUGUUGCUGGUCCUGGUGGUUGGAAUGAUCCUGAUAUGUUAGUUAUUGGUAAUUUUGGUUUAUCUUGGAAUCAACAAGUUACUCAAAUGGCUUUAUGGGCUAUUAUGGCUGCUCCUUUAUUUAUGUCUAAUGAUUUACGUCAUAUUUCUCCUCAAGCUAAAGCUUUAUUACAAGAUAAAGAUGUUAUUGCUAUUAAUCAAGAUCCUUUAGGUAAACAAGGUUAUCAAUUACGUCAAGGUGAUAAUUUUGAAGUUUGGGAACGUCCUUUAUCUGGUUUAGCUUGGGCUGUUGCUAUGAUUAAUCGUCAAGAAAUUGGUGGUCCUCGUUCUUAUACUAUUGCUGUUGCUUCUUUAGGUAAAGGUGUUGCUUGUAAUCCUGCUUGUUUUAUUACUCAAUUAUUACCUGUUAAACGUAAAUUAGGUUUUUAUGAAUGGACUUCUCGUUUACGUUCUCAUAUUAAUCCUACUGGUACUGUUUUAUUACAAUUAGAAAAUACUAUGCAAAUGUCUUUAAAAGAUUUAUAG
114 GLA BP_GCU ORF ATGCAGCTCCGCAACCCCGAGCTCCACCTCGGCTGCGCGCTCGCGCTCCGCTTCCTCGCGCTCGTCTCGTGGGACATCCCCGGCGCGCGCGCGCTCGACAACGGCCTCGCGCGCACGCCCACGATGGGCTGGCTCCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTCGACTGCCAGGAGGAGCCCGACTCGTGCATCTCGGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCGGAGCTCATGGTCTCGGAGGGCTGGAAGGACGCGGGCTACGAGTACCTCTGCATCGACGACTGCTGGATGGCGCCCCAGCGCGACTCGGAGGGCCGCCTCCAGGCGGACCCCCAGCGCTTCCCCCACGGCATCCGCCAGCTCGCGAACTACGTCCACTCGAAGGGCCTCAAGCTCGGCATCTACGCGGACGTCGGCAACAAGACGTGCGCGGGCTTCCCCGGCTCGTTCGGCTACTACGACATCGACGCGCAGACGTTCGCGGACTGGGGCGTCGACCTCCTCAAGTTCGACGGCTGCTACTGCGACTCGCTCGAGAACCTCGCGGACGGCTACAAGCACATGTCGCTCGCGCTCAACCGCACGGGCCGCTCGATCGTCTACTCGTGCGAGTGGCCCCTCTACATGTGGCCCTTCCAGAAGCCCAACTACACGGAGATCCGCCAGTACTGCAACCACTGGCGCAACTTCGCGGACATCGACGACTCGTGGAAGTCGATCAAGTCGATCCTCGACTGGACGTCGTTCAACCAGGAGCGCATCGTCGACGTCGCGGGCCCCGGCGGCTGGAACGACCCCGACATGCTCGTCATCGGCAACTTCGGCCTCTCGTGGAACCAGCAGGTCACGCAGATGGCGCTCTGGGCGATCATGGCGGCGCCCCTCTTCATGTCGAACGACCTCCGCCACATCTCGCCCCAGGCGAAGGCGCTCCTCCAGGACAAGGACGTCATCGCGATCAACCAGGACCCCCTCGGCAAGCAGGGCTACCAGCTCCGCCAGGGCGACAACTTCGAGGTCTGGGAGCGCCCCCTCTCGGGCCTCGCGTGGGCGGTCGCGATGATCAACCGCCAGGAGATCGGCGGCCCCCGCTCGTACACGATCGCGGTCGCGTCGCTCGGCAAGGGCGTCGCGTGCAACCCCGCGTGCTTCATCACGCAGCTCCTCCCCGTCAAGCGCAAGCTCGGCTTCTACGAGTGGACGTCGCGCCTCCGCTCGCACATCAACCCCACGGGCACGGTCCTCCTCCAGCTCGAGAACACGATGCAGATGTCGCTCAAGGACCTCTAG
115 GLA GP_BP_BS_GCU ORF ATGCAGCTGCGGAACCCAGAGCTGCACCTCGGCTGCGCACTGGCACTGCGGTTCCTGGCACTGGTCAGCTGGGACATCCCCGGTGCCCGCGCACTGGACAATGGGCTCGCCCGCACTCCCACCATGGGCTGGCTCCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAATCTCGACTGCCAGGAGGAGCCTGACTCGTGCATCTCGGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCGGAGCTGATGGTCAGCGAGGGCTGGAAGGACGCCGGGTACGAGTACCTCTGCATCGACGACTGCTGGATGGCGCCCCAGCGAGACTCGGAGGGCCGCCTCCAGGCCGACCCCCAGCGCTTCCCCCACGGCATCCGCCAGCTCGCGAACTACGTCCACTCGAAGGGGCTCAAGCTCGGCATCTACGCGGACGTTGGCAACAAGACGTGCGCCGGGTTCCCTGGCTCGTTCGGCTACTACGACATCGACGCGCAGACGTTCGCGGACTGGGGCGTCGACCTCCTCAAGTTCGACGGCTGCTACTGCGACTCGCTCGAGAATCTCGCGGACGGCTACAAGCACATGTCGCTCGCACTGAACCGCACGGGCCGAAGCATCGTCTACTCGTGCGAGTGGCCCCTCTACATGTGGCCCTTCCAGAAGCCCAACTACACAGAGATCCGCCAGTACTGCAACCACTGGCGCAACTTCGCGGACATCGACGACTCGTGGAAGAGCATCAAGAGCATCCTCGACTGGACGTCGTTCAACCAGGAGCGCATCGTCGACGTCGCCGGGCCTGGTGGCTGGAACGACCCTGACATGCTCGTCATCGGCAACTTCGGCCTCAGCTGGAACCAGCAGGTGACTCAAATGGCACTGTGGGCGATCATGGCTGCCCCCCTCTTCATGTCGAACGACCTGCGGCACATCTCGCCCCAGGCCAAGGCACTGCTCCAGGACAAGGACGTCATCGCGATCAACCAGGACCCCCTCGGCAAGCAGGGCTACCAGCTGCGGCAGGGCGACAACTTCGAAGTCTGGGAGCGCCCCCTCAGCGGCCTCGCGTGGGCTGTGGCGATGATAAACCGCCAGGAGATCGGTGGCCCCCGATCGTACACGATCGCTGTGGCGTCGCTCGGCAAGGGGGTCGCGTGCAACCCTGCGTGCTTCATCACTCAACTCCTTCCAGTCAAGCGCAAGCTCGGCTTCTACGAGTGGACGTCGCGCCTGCGGTCGCACATCAACCCCACCGGCACGGTCCTCCTCCAGCTCGAGAACACGATGCAGATGTCGCTCAAGGACCTCTAG
116 GLA GS_BS_GCU ORF ATGCAGCTGCGGAACCCAGAGCTGCACCTCGGCTGCGCACTGGCACTGCGGTTCCTGGCACTGGTCAGCTGGGACATCCCCGGTGCCCGCGCACTGGACAATGGGCTCGCCCGCACTCCCACCATGGGCTGGCTCCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAATCTCGACTGCCAGGAGGAGCCTGACAGCTGCATCAGCGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCGGAGCTGATGGTCAGCGAGGGCTGGAAGGACGCCGGGTACGAGTACCTCTGCATCGACGACTGCTGGATGGCGCCCCAGCGAGACAGCGAGGGCCGCCTCCAGGCCGACCCCCAGCGCTTCCCCCACGGCATCCGCCAGCTCGCGAACTACGTCCACAGCAAGGGGCTCAAGCTCGGCATCTACGCGGACGTTGGCAACAAGACGTGCGCCGGGTTCCCTGGCAGCTTCGGCTACTACGACATCGACGCGCAGACGTTCGCGGACTGGGGCGTCGACCTCCTCAAGTTCGACGGCTGCTACTGCGACAGCCTCGAGAATCTCGCGGACGGCTACAAGCACATGAGCCTCGCACTGAACCGCACGGGCAGGAGCATCGTCTACAGCTGCGAGTGGCCCCTCTACATGTGGCCCTTCCAGAAGCCCAACTACACAGAGATCCGCCAGTACTGCAACCACTGGCGCAACTTCGCGGACATCGACGACAGCTGGAAGAGCATCAAGAGCATCCTCGACTGGACGAGCTTCAACCAGGAGCGCATCGTCGACGTCGCCGGGCCTGGTGGCTGGAACGACCCTGACATGCTCGTCATCGGCAACTTCGGCCTCAGCTGGAACCAGCAGGTGACTCAAATGGCACTGTGGGCGATCATGGCTGCCCCCCTCTTCATGAGCAACGACCTGCGGCACATCAGCCCCCAGGCCAAGGCACTGCTCCAGGACAAGGACGTCATCGCGATCAACCAGGACCCCCTCGGCAAGCAGGGCTACCAGCTGCGGCAGGGCGACAACTTCGAAGTCTGGGAGCGCCCCCTCAGCGGCCTCGCGTGGGCTGTGGCGATGATAAACCGCCAGGAGATCGGTGGCCCCAGGAGCTACACGATCGCTGTGGCGAGCCTCGGCAAGGGGGTCGCGTGCAACCCTGCGTGCTTCATCACTCAACTCCTTCCAGTCAAGCGCAAGCTCGGCTTCTACGAGTGGACGAGCCGCCTGCGGAGCCACATCAACCCCACCGGCACGGTCCTCCTCCAGCTCGAGAACACGATGCAGATGAGCCTCAAGGACCTCTAG
117 GLA GS_GCU ORF ATGCAGCTGCGGAACCCAGAGCTGCACCTGGGCTGCGCACTGGCACTGCGGTTCCTGGCACTGGTCAGCTGGGACATCCCCGGTGCCCGCGCACTGGACAATGGGCTGGCCCGCACTCCCACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAATCTCGACTGCCAGGAGGAGCCTGACAGCTGCATCAGCGAGAAGCTGTTCATGGAGATGGCGGAGCTGATGGTCAGCGAGGGCTGGAAGGACGCCGGGTACGAGTACCTGTGCATCGACGACTGCTGGATGGCGCCGCAGCGAGACAGCGAGGGCCGCCTGCAGGCCGACCCGCAGCGCTTCCCGCACGGCATCCGCCAGCTGGCGAACTACGTGCACAGCAAGGGGCTGAAGCTGGGCATCTACGCGGACGTTGGCAACAAGACGTGCGCCGGGTTCCCGGGCAGCTTCGGCTACTACGACATCGACGCGCAGACGTTCGCGGACTGGGGCGTGGACCTGCTGAAGTTCGACGGCTGCTACTGCGACAGCCTGGAGAATCTCGCGGACGGCTACAAGCACATGAGCCTGGCACTGAACCGCACGGGCCGCAGCATCGTGTACAGCTGCGAGTGGCCGCTGTACATGTGGCCGTTCCAGAAGCCGAACTACACAGAGATCCGCCAGTACTGCAACCACTGGCGCAACTTCGCGGACATCGACGACAGCTGGAAGAGCATCAAGAGCATCCTGGACTGGACGAGCTTCAACCAGGAGCGCATCGTGGACGTGGCCGGGCCGGGTGGCTGGAACGACCCTGACATGCTGGTGATCGGCAACTTCGGCCTCAGCTGGAACCAGCAGGTGACTCAAATGGCACTGTGGGCGATCATGGCTGCCCCGCTGTTCATGAGCAACGACCTGCGGCACATCAGCCCGCAGGCCAAGGCACTGCTGCAGGACAAGGACGTGATCGCGATCAACCAGGACCCGCTGGGCAAGCAGGGCTACCAGCTGCGGCAGGGCGACAACTTCGAAGTCTGGGAGCGCCCGCTCAGCGGCCTGGCGTGGGCTGTGGCGATGATAAACCGCCAGGAGATCGGTGGCCCGCGCAGCTACACGATCGCTGTGGCGAGCCTGGGCAAGGGGGTGGCGTGCAACCCGGCGTGCTTCATCACTCAACTGCTTCCAGTGAAGCGCAAGCTGGGCTTCTACGAGTGGACGAGCCGCCTGCGGAGCCACATCAACCCCACCGGCACGGTGCTGCTGCAGCTGGAGAACACGATGCAGATGAGCCTGAAGGACCTGTAG
118 OTC胺基酸序列 MLFNLRILLNNAAFRNGHNFMVRNFRCGQPLQNKVQLKGRDLLTLKNFTGEEIKYMLWLSADLKFRIKQKGEYLPLLQGKSLGMIFEKRSTRTRLSTETGFALLGGHPCFLTTQDIHLGVNESLTDTARVLSSMADAVLARVYKQSDLDTLAKEASIPIINGLSDLYHPIQILADYLTLQEHYSSLKGLTLSWIGDGNNILHSIMMSAAKFGMHLQAATPKGYEPDASVTKLAEQYAKENGTKLLLTNDPLEAAHGGNVLITDTWISMGQEEEKKKRLQAFQGYQVTMKTAKVAASDWTFLHCLPRKPEEVDDEVFYSPRSLVFPEAENRKWTIMAVMVSLLTDYSPQLQKPK
119 OTC WT ORF AUGUUAUUUAAUUUACGUAUUUUAUUAAAUAAUGCUGCUUUUCGUAAUGGUCAUAAUUUUAUGGUUCGUAAUUUUCGUUGUGGUCAACCUUUACAAAAUAAAGUUCAAUUAAAAGGUCGUGAUUUAUUAACUUUAAAAAAUUUUACUGGUGAAGAAAUUAAAUAUAUGUUAUGGUUAUCUGCUGAUUUAAAAUUUCGUAUUAAACAAAAAGGUGAAUAUUUACCUUUAUUACAAGGUAAAUCUUUAGGUAUGAUUUUUGAAAAACGUUCUACUCGUACUCGUUUAUCUACUGAAACUGGUUUUGCUUUAUUAGGUGGUCAUCCUUGUUUUUUAACUACUCAAGAUAUUCAUUUAGGUGUUAAUGAAUCUUUAACUGAUACUGCUCGUGUUUUAUCUUCUAUGGCUGAUGCUGUUUUAGCUCGUGUUUAUAAACAAUCUGAUUUAGAUACUUUAGCUAAAGAAGCUUCUAUUCCUAUUAUUAAUGGUUUAUCUGAUUUAUAUCAUCCUAUUCAAAUUUUAGCUGAUUAUUUAACUUUACAAGAACAUUAUUCUUCUUUAAAAGGUUUAACUUUAUCUUGGAUUGGUGAUGGUAAUAAUAUUUUACAUUCUAUUAUGAUGUCUGCUGCUAAAUUUGGUAUGCAUUUACAAGCUGCUACUCCUAAAGGUUAUGAACCUGAUGCUUCUGUUACUAAAUUAGCUGAACAAUAUGCUAAAGAAAAUGGUACUAAAUUAUUAUUAACUAAUGAUCCUUUAGAAGCUGCUCAUGGUGGUAAUGUUUUAAUUACUGAUACUUGGAUUUCUAUGGGUCAAGAAGAAGAAAAAAAAAAACGUUUACAAGCUUUUCAAGGUUAUCAAGUUACUAUGAAAACUGCUAAAGUUGCUGCUUCUGAUUGGACUUUUUUACAUUGUUUACCUCGUAAACCUGAAGAAGUUGAUGAUGAAGUUUUUUAUUCUCCUCGUUCUUUAGUUUUUCCUGAAGCUGAAAAUCGUAAAUGGACUAUUAUGGCUGUUAUGGUUUCUUUAUUAACUGAUUAUUCUCCUCAAUUACAAAAACCUAAAUAG
120 OTC BP_GCU ORF ATGCTCTTCAACCTCCGCATCCTCCTCAACAACGCGGCGTTCCGCAACGGCCACAACTTCATGGTCCGCAACTTCCGCTGCGGCCAGCCCCTCCAGAACAAGGTCCAGCTCAAGGGCCGCGACCTCCTCACGCTCAAGAACTTCACGGGCGAGGAGATCAAGTACATGCTCTGGCTCTCGGCGGACCTCAAGTTCCGCATCAAGCAGAAGGGCGAGTACCTCCCCCTCCTCCAGGGCAAGTCGCTCGGCATGATCTTCGAGAAGCGCTCGACGCGCACGCGCCTCTCGACGGAGACGGGCTTCGCGCTCCTCGGCGGCCACCCCTGCTTCCTCACGACGCAGGACATCCACCTCGGCGTCAACGAGTCGCTCACGGACACGGCGCGCGTCCTCTCGTCGATGGCGGACGCGGTCCTCGCGCGCGTCTACAAGCAGTCGGACCTCGACACGCTCGCGAAGGAGGCGTCGATCCCCATCATCAACGGCCTCTCGGACCTCTACCACCCCATCCAGATCCTCGCGGACTACCTCACGCTCCAGGAGCACTACTCGTCGCTCAAGGGCCTCACGCTCTCGTGGATCGGCGACGGCAACAACATCCTCCACTCGATCATGATGTCGGCGGCGAAGTTCGGCATGCACCTCCAGGCGGCGACGCCCAAGGGCTACGAGCCCGACGCGTCGGTCACGAAGCTCGCGGAGCAGTACGCGAAGGAGAACGGCACGAAGCTCCTCCTCACGAACGACCCCCTCGAGGCGGCGCACGGCGGCAACGTCCTCATCACGGACACGTGGATCTCGATGGGCCAGGAGGAGGAGAAGAAGAAGCGCCTCCAGGCGTTCCAGGGCTACCAGGTCACGATGAAGACGGCGAAGGTCGCGGCGTCGGACTGGACGTTCCTCCACTGCCTCCCCCGCAAGCCCGAGGAGGTCGACGACGAGGTCTTCTACTCGCCCCGCTCGCTCGTCTTCCCCGAGGCGGAGAACCGCAAGTGGACGATCATGGCGGTCATGGTCTCGCTCCTCACGGACTACTCGCCCCAGCTCCAGAAGCCCAAGTAG
121 OTC GP_BP_BS_GCU ORF ATGCTCTTCAATCTGCGGATCCTCCTCAACAACGCTGCCTTCCGCAATGGGCACAACTTCATGGTCCGCAACTTCCGCTGTGGGCAGCCCCTCCAGAACAAGGTCCAGCTCAAGGGGCGAGACCTCCTCACGCTCAAGAACTTCACGGGTGAGGAGATCAAGTACATGCTCTGGCTCAGCGCGGACCTCAAGTTCCGCATCAAGCAGAAGGGTGAGTACCTTCCACTCCTCCAGGGCAAGTCGCTCGGCATGATATTCGAGAAGCGATCGACTCGCACGCGCCTCTCGACAGAGACGGGCTTCGCACTGCTCGGTGGCCACCCCTGCTTCCTGACGACTCAAGACATCCACCTCGGCGTCAACGAGTCGCTCACGGACACGGCCCGCGTCCTCAGCTCGATGGCGGACGCTGTGCTCGCCCGCGTCTACAAGCAGAGCGACCTCGACACGCTCGCGAAGGAAGCCAGCATCCCCATCATCAATGGGCTCAGCGACCTCTACCACCCCATCCAGATCCTCGCGGACTACCTCACGCTCCAGGAGCACTACTCGTCGCTCAAGGGGCTCACGCTCAGCTGGATCGGCGACGGCAACAACATCCTCCACAGCATCATGATGTCGGCTGCCAAGTTCGGCATGCACCTCCAGGCTGCCACTCCCAAGGGGTACGAGCCTGACGCGTCGGTCACGAAGCTCGCGGAGCAGTACGCGAAGGAGAATGGGACGAAGCTCCTCCTCACGAACGACCCCCTCGAAGCTGCCCACGGTGGCAACGTCCTCATCACGGACACGTGGATCTCGATGGGCCAGGAGGAGGAGAAGAAGAAGCGCCTCCAGGCCTTCCAGGGCTACCAGGTGACGATGAAGACGGCGAAGGTCGCTGCCTCGGACTGGACGTTCCTGCACTGCCTTCCACGCAAGCCAGAGGAAGTCGACGACGAAGTCTTCTACTCGCCCCGATCGCTCGTCTTCCCAGAAGCCGAGAACCGCAAGTGGACGATCATGGCTGTGATGGTCAGCCTCCTCACGGACTACTCGCCCCAGCTCCAGAAGCCCAAGTAG
122 OTC GS_BS_GCU ORF ATGCTCTTCAATCTGCGGATCCTCCTCAACAACGCTGCCTTCCGCAATGGGCACAACTTCATGGTCCGCAACTTCCGCTGTGGGCAGCCCCTCCAGAACAAGGTCCAGCTCAAGGGGCGAGACCTCCTCACGCTCAAGAACTTCACGGGTGAGGAGATCAAGTACATGCTCTGGCTCAGCGCGGACCTCAAGTTCCGCATCAAGCAGAAGGGTGAGTACCTTCCACTCCTCCAGGGCAAGAGCCTCGGCATGATATTCGAGAAGAGGTCGACTCGCACGCGCCTCTCGACAGAGACGGGCTTCGCACTGCTCGGTGGCCACCCCTGCTTCCTGACGACTCAAGACATCCACCTCGGCGTCAACGAGAGCCTCACGGACACGGCCCGCGTCCTCAGCAGCATGGCGGACGCTGTGCTCGCCCGCGTCTACAAGCAGAGCGACCTCGACACGCTCGCGAAGGAAGCCAGCATCCCCATCATCAATGGGCTCAGCGACCTCTACCACCCCATCCAGATCCTCGCGGACTACCTCACGCTCCAGGAGCACTACAGCAGCCTCAAGGGGCTCACGCTCAGCTGGATCGGCGACGGCAACAACATCCTCCACAGCATCATGATGAGCGCTGCCAAGTTCGGCATGCACCTCCAGGCTGCCACTCCCAAGGGGTACGAGCCTGACGCGAGCGTCACGAAGCTCGCGGAGCAGTACGCGAAGGAGAATGGGACGAAGCTCCTCCTCACGAACGACCCCCTCGAAGCTGCCCACGGTGGCAACGTCCTCATCACGGACACGTGGATCAGCATGGGCCAGGAGGAGGAGAAGAAGAAGCGCCTCCAGGCCTTCCAGGGCTACCAGGTGACGATGAAGACGGCGAAGGTCGCTGCCAGCGACTGGACGTTCCTGCACTGCCTTCCACGCAAGCCAGAGGAAGTCGACGACGAAGTCTTCTACAGCCCCAGGAGCCTCGTCTTCCCAGAAGCCGAGAACCGCAAGTGGACGATCATGGCTGTGATGGTCAGCCTCCTCACGGACTACAGCCCCCAGCTCCAGAAGCCCAAGTAG
123 OTC GS_GCU ORF ATGCTGTTCAATCTGCGGATCCTGCTGAACAACGCTGCCTTCCGCAATGGGCACAACTTCATGGTGCGCAACTTCCGCTGTGGGCAGCCCCTGCAGAACAAGGTGCAGCTGAAGGGGCGAGACCTGCTGACGCTGAAGAACTTCACGGGTGAGGAGATCAAGTACATGCTGTGGCTCAGCGCGGACCTGAAGTTCCGCATCAAGCAGAAGGGTGAGTACCTTCCACTGCTGCAGGGCAAGAGCCTGGGCATGATATTCGAGAAGCGCTCGACTCGCACGCGCCTCTCGACAGAGACGGGCTTCGCACTGCTGGGTGGCCACCCGTGCTTCCTGACGACTCAAGACATCCACCTGGGCGTGAACGAGAGCCTGACGGACACGGCCCGCGTGCTCAGCAGCATGGCGGACGCTGTGCTGGCCCGCGTGTACAAGCAGAGCGACCTGGACACGCTGGCGAAGGAAGCCAGCATCCCCATCATCAATGGGCTCAGCGACCTGTACCACCCGATCCAGATCCTGGCGGACTACCTGACGCTGCAGGAGCACTACAGCAGCCTGAAGGGGCTGACGCTCAGCTGGATCGGCGACGGCAACAACATCCTGCACAGCATCATGATGAGCGCTGCCAAGTTCGGCATGCACCTGCAGGCTGCCACTCCCAAGGGGTACGAGCCTGACGCGAGCGTGACGAAGCTGGCGGAGCAGTACGCGAAGGAGAATGGGACGAAGCTGCTGCTGACGAACGACCCGCTGGAAGCTGCCCACGGTGGCAACGTGCTGATCACGGACACGTGGATCAGCATGGGCCAGGAGGAGGAGAAGAAGAAGCGCCTGCAGGCCTTCCAGGGCTACCAGGTGACGATGAAGACGGCGAAGGTGGCTGCCAGCGACTGGACGTTCCTGCACTGCCTTCCACGCAAGCCAGAGGAAGTCGACGACGAAGTCTTCTACAGCCCGCGCAGCCTGGTGTTCCCAGAAGCCGAGAACCGCAAGTGGACGATCATGGCTGTGATGGTCAGCCTGCTGACGGACTACAGCCCGCAGCTGCAGAAGCCGAAGTAG
124 PAH胺基酸序列 MSTAVLENPGLGRKLSDFGQETSYIEDNCNQNGAISLIFSLKEEVGALAKVLRLFEENDVNLTHIESRPSRLKKDEYEFFTHLDKRSLPALTNIIKILRHDIGATVHELSRDKKKDTVPWFPRTIQELDRFANQILSYGAELDADHPGFKDPVYRARRKQFADIAYNYRHGQPIPRVEYMEEEKKTWGTVFKTLKSLYKTHACYEYNHIFPLLEKYCGFHEDNIPQLEDVSQFLQTCTGFRLRPVAGLLSSRDFLGGLAFRVFHCTQYIRHGSKPMYTPEPDICHELLGHVPLFSDRSFAQFSQEIGLASLGAPDEYIEKLATIYWFTVEFGLCKQGDSIKAYGAGLLSSFGELQYCLSEKPKLLPLELEKTAIQNYTVTEFQPLYYVAESFNDAKEKVRNFAATIPRPFSVRYDPYTQRIEVLDNTQQLKILADSINSEIGILCSALQKI
125 PAH WT ORF AUGUCUACUGCUGUUUUAGAAAAUCCUGGUUUAGGUCGUAAAUUAUCUGAUUUUGGUCAAGAAACUUCUUAUAUUGAAGAUAAUUGUAAUCAAAAUGGUGCUAUUUCUUUAAUUUUUUCUUUAAAAGAAGAAGUUGGUGCUUUAGCUAAAGUUUUACGUUUAUUUGAAGAAAAUGAUGUUAAUUUAACUCAUAUUGAAUCUCGUCCUUCUCGUUUAAAAAAAGAUGAAUAUGAAUUUUUUACUCAUUUAGAUAAACGUUCUUUACCUGCUUUAACUAAUAUUAUUAAAAUUUUACGUCAUGAUAUUGGUGCUACUGUUCAUGAAUUAUCUCGUGAUAAAAAAAAAGAUACUGUUCCUUGGUUUCCUCGUACUAUUCAAGAAUUAGAUCGUUUUGCUAAUCAAAUUUUAUCUUAUGGUGCUGAAUUAGAUGCUGAUCAUCCUGGUUUUAAAGAUCCUGUUUAUCGUGCUCGUCGUAAACAAUUUGCUGAUAUUGCUUAUAAUUAUCGUCAUGGUCAACCUAUUCCUCGUGUUGAAUAUAUGGAAGAAGAAAAAAAAACUUGGGGUACUGUUUUUAAAACUUUAAAAUCUUUAUAUAAAACUCAUGCUUGUUAUGAAUAUAAUCAUAUUUUUCCUUUAUUAGAAAAAUAUUGUGGUUUUCAUGAAGAUAAUAUUCCUCAAUUAGAAGAUGUUUCUCAAUUUUUACAAACUUGUACUGGUUUUCGUUUACGUCCUGUUGCUGGUUUAUUAUCUUCUCGUGAUUUUUUAGGUGGUUUAGCUUUUCGUGUUUUUCAUUGUACUCAAUAUAUUCGUCAUGGUUCUAAACCUAUGUAUACUCCUGAACCUGAUAUUUGUCAUGAAUUAUUAGGUCAUGUUCCUUUAUUUUCUGAUCGUUCUUUUGCUCAAUUUUCUCAAGAAAUUGGUUUAGCUUCUUUAGGUGCUCCUGAUGAAUAUAUUGAAAAAUUAGCUACUAUUUAUUGGUUUACUGUUGAAUUUGGUUUAUGUAAACAAGGUGAUUCUAUUAAAGCUUAUGGUGCUGGUUUAUUAUCUUCUUUUGGUGAAUUACAAUAUUGUUUAUCUGAAAAACCUAAAUUAUUACCUUUAGAAUUAGAAAAAACUGCUAUUCAAAAUUAUACUGUUACUGAAUUUCAACCUUUAUAUUAUGUUGCUGAAUCUUUUAAUGAUGCUAAAGAAAAAGUUCGUAAUUUUGCUGCUACUAUUCCUCGUCCUUUUUCUGUUCGUUAUGAUCCUUAUACUCAACGUAUUGAAGUUUUAGAUAAUACUCAACAAUUAAAAAUUUUAGCUGAUUCUAUUAAUUCUGAAAUUGGUAUUUUAUGUUCUGCUUUACAAAAAAUUUAG
126 PAH BP_GCU ORF ATGTCGACGGCGGTCCTCGAGAACCCCGGCCTCGGCCGCAAGCTCTCGGACTTCGGCCAGGAGACGTCGTACATCGAGGACAACTGCAACCAGAACGGCGCGATCTCGCTCATCTTCTCGCTCAAGGAGGAGGTCGGCGCGCTCGCGAAGGTCCTCCGCCTCTTCGAGGAGAACGACGTCAACCTCACGCACATCGAGTCGCGCCCCTCGCGCCTCAAGAAGGACGAGTACGAGTTCTTCACGCACCTCGACAAGCGCTCGCTCCCCGCGCTCACGAACATCATCAAGATCCTCCGCCACGACATCGGCGCGACGGTCCACGAGCTCTCGCGCGACAAGAAGAAGGACACGGTCCCCTGGTTCCCCCGCACGATCCAGGAGCTCGACCGCTTCGCGAACCAGATCCTCTCGTACGGCGCGGAGCTCGACGCGGACCACCCCGGCTTCAAGGACCCCGTCTACCGCGCGCGCCGCAAGCAGTTCGCGGACATCGCGTACAACTACCGCCACGGCCAGCCCATCCCCCGCGTCGAGTACATGGAGGAGGAGAAGAAGACGTGGGGCACGGTCTTCAAGACGCTCAAGTCGCTCTACAAGACGCACGCGTGCTACGAGTACAACCACATCTTCCCCCTCCTCGAGAAGTACTGCGGCTTCCACGAGGACAACATCCCCCAGCTCGAGGACGTCTCGCAGTTCCTCCAGACGTGCACGGGCTTCCGCCTCCGCCCCGTCGCGGGCCTCCTCTCGTCGCGCGACTTCCTCGGCGGCCTCGCGTTCCGCGTCTTCCACTGCACGCAGTACATCCGCCACGGCTCGAAGCCCATGTACACGCCCGAGCCCGACATCTGCCACGAGCTCCTCGGCCACGTCCCCCTCTTCTCGGACCGCTCGTTCGCGCAGTTCTCGCAGGAGATCGGCCTCGCGTCGCTCGGCGCGCCCGACGAGTACATCGAGAAGCTCGCGACGATCTACTGGTTCACGGTCGAGTTCGGCCTCTGCAAGCAGGGCGACTCGATCAAGGCGTACGGCGCGGGCCTCCTCTCGTCGTTCGGCGAGCTCCAGTACTGCCTCTCGGAGAAGCCCAAGCTCCTCCCCCTCGAGCTCGAGAAGACGGCGATCCAGAACTACACGGTCACGGAGTTCCAGCCCCTCTACTACGTCGCGGAGTCGTTCAACGACGCGAAGGAGAAGGTCCGCAACTTCGCGGCGACGATCCCCCGCCCCTTCTCGGTCCGCTACGACCCCTACACGCAGCGCATCGAGGTCCTCGACAACACGCAGCAGCTCAAGATCCTCGCGGACTCGATCAACTCGGAGATCGGCATCCTCTGCTCGGCGCTCCAGAAGATCTAG
127 PAH GP_BP_BS_GCU ORF ATGTCGACTGCTGTGCTCGAGAACCCTGGCCTCGGCCGCAAGCTCAGCGACTTCGGCCAGGAGACGTCGTACATCGAGGACAACTGCAACCAGAATGGTGCCATCTCGCTCATCTTCTCGCTCAAGGAGGAAGTTGGTGCACTGGCGAAGGTCCTGCGGCTCTTCGAGGAGAACGACGTCAATCTCACGCACATCGAGTCGCGCCCCTCACGCCTCAAGAAGGACGAGTACGAGTTCTTCACGCACCTCGACAAGCGATCGCTTCCAGCACTGACGAACATCATCAAGATCCTGCGGCACGACATCGGTGCCACGGTCCACGAGCTCAGCCGAGACAAGAAGAAGGACACGGTTCCCTGGTTCCCCCGCACGATCCAGGAGCTGGACCGCTTCGCGAACCAGATCCTCAGCTACGGTGCCGAGCTGGACGCGGACCACCCTGGCTTCAAGGACCCCGTCTACCGCGCCCGCCGCAAGCAGTTCGCGGACATCGCGTACAACTACCGCCACGGCCAGCCCATCCCCCGCGTCGAGTACATGGAGGAGGAGAAGAAGACGTGGGGCACGGTCTTCAAGACGCTCAAGTCGCTCTACAAGACGCACGCGTGCTACGAGTACAACCACATCTTCCCCCTCCTCGAGAAGTACTGTGGGTTCCACGAGGACAACATCCCCCAGCTCGAGGACGTCAGCCAGTTCCTGCAGACGTGCACGGGCTTCCGCCTGCGGCCCGTCGCCGGGCTCCTCAGCTCGCGAGACTTCCTGGGTGGCCTCGCGTTCCGCGTCTTCCACTGCACTCAATACATCCGCCACGGCTCGAAGCCCATGTACACTCCAGAGCCTGACATCTGCCACGAGCTGCTCGGCCACGTTCCCCTCTTCTCGGACCGATCGTTCGCGCAGTTCTCGCAGGAGATCGGCCTCGCGTCGCTCGGTGCCCCTGACGAGTACATCGAGAAGCTCGCGACGATCTACTGGTTCACGGTCGAGTTCGGCCTCTGCAAGCAGGGCGACAGCATCAAGGCGTACGGTGCCGGGCTCCTCAGCTCGTTCGGTGAGCTGCAGTACTGCCTCAGCGAGAAGCCCAAGCTCCTTCCACTCGAGCTGGAGAAGACGGCGATCCAGAACTACACGGTCACAGAGTTCCAGCCCCTCTACTACGTCGCGGAGTCGTTCAACGACGCGAAGGAGAAGGTCCGCAACTTCGCTGCCACGATCCCCCGCCCCTTCTCGGTCCGCTACGACCCCTACACTCAACGCATCGAAGTCCTCGACAACACTCAACAGCTCAAGATCCTCGCGGACAGCATCAACTCGGAGATCGGCATCCTCTGCTCGGCACTGCAGAAGATCTAG
128 PAH GS_BS_GCU ORF ATGTCGACTGCTGTGCTCGAGAACCCTGGCCTCGGCCGCAAGCTCAGCGACTTCGGCCAGGAGACGAGCTACATCGAGGACAACTGCAACCAGAATGGTGCCATCAGCCTCATCTTCAGCCTCAAGGAGGAAGTTGGTGCACTGGCGAAGGTCCTGCGGCTCTTCGAGGAGAACGACGTCAATCTCACGCACATCGAGAGCCGCCCCTCACGCCTCAAGAAGGACGAGTACGAGTTCTTCACGCACCTCGACAAGAGGAGCCTTCCAGCACTGACGAACATCATCAAGATCCTGCGGCACGACATCGGTGCCACGGTCCACGAGCTCAGCCGAGACAAGAAGAAGGACACGGTTCCCTGGTTCCCCCGCACGATCCAGGAGCTGGACCGCTTCGCGAACCAGATCCTCAGCTACGGTGCCGAGCTGGACGCGGACCACCCTGGCTTCAAGGACCCCGTCTACCGCGCCCGCCGCAAGCAGTTCGCGGACATCGCGTACAACTACCGCCACGGCCAGCCCATCCCCCGCGTCGAGTACATGGAGGAGGAGAAGAAGACGTGGGGCACGGTCTTCAAGACGCTCAAGAGCCTCTACAAGACGCACGCGTGCTACGAGTACAACCACATCTTCCCCCTCCTCGAGAAGTACTGTGGGTTCCACGAGGACAACATCCCCCAGCTCGAGGACGTCAGCCAGTTCCTGCAGACGTGCACGGGCTTCCGCCTGCGGCCCGTCGCCGGGCTCCTCAGCAGCCGAGACTTCCTGGGTGGCCTCGCGTTCCGCGTCTTCCACTGCACTCAATACATCCGCCACGGCAGCAAGCCCATGTACACTCCAGAGCCTGACATCTGCCACGAGCTGCTCGGCCACGTTCCCCTCTTCAGCGACAGGAGCTTCGCGCAGTTCAGCCAGGAGATCGGCCTCGCGAGCCTCGGTGCCCCTGACGAGTACATCGAGAAGCTCGCGACGATCTACTGGTTCACGGTCGAGTTCGGCCTCTGCAAGCAGGGCGACAGCATCAAGGCGTACGGTGCCGGGCTCCTCAGCAGCTTCGGTGAGCTGCAGTACTGCCTCAGCGAGAAGCCCAAGCTCCTTCCACTCGAGCTGGAGAAGACGGCGATCCAGAACTACACGGTCACAGAGTTCCAGCCCCTCTACTACGTCGCGGAGAGCTTCAACGACGCGAAGGAGAAGGTCCGCAACTTCGCTGCCACGATCCCCCGCCCCTTCAGCGTCCGCTACGACCCCTACACTCAACGCATCGAAGTCCTCGACAACACTCAACAGCTCAAGATCCTCGCGGACAGCATCAACAGCGAGATCGGCATCCTCTGCAGCGCACTGCAGAAGATCTAG
129 PAH GS_GCU ORF ATGTCGACTGCTGTGCTGGAGAACCCGGGCCTGGGCCGCAAGCTCAGCGACTTCGGCCAGGAGACGAGCTACATCGAGGACAACTGCAACCAGAATGGTGCCATCAGCCTGATCTTCAGCCTGAAGGAGGAAGTTGGTGCACTGGCGAAGGTGCTGCGGCTGTTCGAGGAGAACGACGTGAATCTCACGCACATCGAGAGCCGCCCCTCACGCCTGAAGAAGGACGAGTACGAGTTCTTCACGCACCTGGACAAGCGCAGCCTTCCAGCACTGACGAACATCATCAAGATCCTGCGGCACGACATCGGTGCCACGGTGCACGAGCTCAGCCGAGACAAGAAGAAGGACACGGTTCCCTGGTTCCCGCGCACGATCCAGGAGCTGGACCGCTTCGCGAACCAGATCCTCAGCTACGGTGCCGAGCTGGACGCGGACCACCCGGGCTTCAAGGACCCGGTGTACCGCGCCCGCCGCAAGCAGTTCGCGGACATCGCGTACAACTACCGCCACGGCCAGCCCATCCCCCGCGTGGAGTACATGGAGGAGGAGAAGAAGACGTGGGGCACGGTGTTCAAGACGCTGAAGAGCCTGTACAAGACGCACGCGTGCTACGAGTACAACCACATCTTCCCGCTGCTGGAGAAGTACTGTGGGTTCCACGAGGACAACATCCCCCAGCTGGAGGACGTCAGCCAGTTCCTGCAGACGTGCACGGGCTTCCGCCTGCGGCCGGTGGCCGGGCTGCTCAGCAGCCGAGACTTCCTGGGTGGCCTGGCGTTCCGCGTGTTCCACTGCACTCAATACATCCGCCACGGCAGCAAGCCGATGTACACTCCAGAGCCTGACATCTGCCACGAGCTGCTGGGCCACGTTCCCCTGTTCAGCGACCGCAGCTTCGCGCAGTTCAGCCAGGAGATCGGCCTGGCGAGCCTGGGTGCCCCTGACGAGTACATCGAGAAGCTGGCGACGATCTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGCCTGTGCAAGCAGGGCGACAGCATCAAGGCGTACGGTGCCGGGCTGCTCAGCAGCTTCGGTGAGCTGCAGTACTGCCTCAGCGAGAAGCCGAAGCTGCTTCCACTGGAGCTGGAGAAGACGGCGATCCAGAACTACACGGTGACAGAGTTCCAGCCCCTGTACTACGTGGCGGAGAGCTTCAACGACGCGAAGGAGAAGGTGCGCAACTTCGCTGCCACGATCCCCCGCCCGTTCAGCGTGCGCTACGACCCGTACACTCAACGCATCGAAGTCCTGGACAACACTCAACAGCTGAAGATCCTGGCGGACAGCATCAACAGCGAGATCGGCATCCTGTGCAGCGCACTGCAGAAGATCTAG
130 TTR胺基酸序列 MASHRLLLLCLAGLVFVSEAGPTGTGESKCPLMVKVLDAVRGSPAINVAVHVFRKAADDTWEPFASGKTSESGELHGLTTEEEFVEGIYKVEIDTKSYWKALGISPFHEHAEVVFTANDSGPRRYTIAALLSPYSYSTTAVVTNPK
131 TTR WT ORF AUGGCUUCUCAUCGUUUAUUAUUAUUAUGUUUAGCUGGUUUAGUUUUUGUUUCUGAAGCUGGUCCUACUGGUACUGGUGAAUCUAAAUGUCCUUUAAUGGUUAAAGUUUUAGAUGCUGUUCGUGGUUCUCCUGCUAUUAAUGUUGCUGUUCAUGUUUUUCGUAAAGCUGCUGAUGAUACUUGGGAACCUUUUGCUUCUGGUAAAACUUCUGAAUCUGGUGAAUUACAUGGUUUAACUACUGAAGAAGAAUUUGUUGAAGGUAUUUAUAAAGUUGAAAUUGAUACUAAAUCUUAUUGGAAAGCUUUAGGUAUUUCUCCUUUUCAUGAACAUGCUGAAGUUGUUUUUACUGCUAAUGAUUCUGGUCCUCGUCGUUAUACUAUUGCUGCUUUAUUAUCUCCUUAUUCUUAUUCUACUACUGCUGUUGUUACUAAUCCUAAAUAG
132 TTR BP_GCU ORF ATGGCGTCGCACCGCCTCCTCCTCCTCTGCCTCGCGGGCCTCGTCTTCGTCTCGGAGGCGGGCCCCACGGGCACGGGCGAGTCGAAGTGCCCCCTCATGGTCAAGGTCCTCGACGCGGTCCGCGGCTCGCCCGCGATCAACGTCGCGGTCCACGTCTTCCGCAAGGCGGCGGACGACACGTGGGAGCCCTTCGCGTCGGGCAAGACGTCGGAGTCGGGCGAGCTCCACGGCCTCACGACGGAGGAGGAGTTCGTCGAGGGCATCTACAAGGTCGAGATCGACACGAAGTCGTACTGGAAGGCGCTCGGCATCTCGCCCTTCCACGAGCACGCGGAGGTCGTCTTCACGGCGAACGACTCGGGCCCCCGCCGCTACACGATCGCGGCGCTCCTCTCGCCCTACTCGTACTCGACGACGGCGGTCGTCACGAACCCCAAGTAG
133 TTR GP_BP_BS_GCU ORF ATGGCGTCGCACCGCCTCCTCCTCCTCTGCCTCGCCGGGCTCGTCTTCGTCAGCGAAGCCGGGCCCACCGGCACGGGTGAGTCGAAGTGCCCCCTCATGGTCAAGGTCCTCGACGCTGTGCGCGGCTCGCCTGCGATCAACGTCGCTGTGCACGTCTTCCGCAAGGCTGCCGACGACACGTGGGAGCCCTTCGCGTCGGGCAAGACGTCGGAGTCGGGTGAGCTGCACGGCCTCACGACAGAGGAGGAGTTCGTCGAGGGCATCTACAAGGTCGAGATCGACACGAAGTCGTACTGGAAGGCACTGGGCATCTCGCCCTTCCACGAGCACGCGGAAGTCGTCTTCACGGCGAACGACTCGGGCCCCCGCCGCTACACGATCGCTGCACTGCTCAGCCCCTACTCGTACTCGACTACGGCTGTGGTCACGAACCCCAAGTAG
134 TTR GS_BS_GCU ORF ATGGCGAGCCACCGCCTCCTCCTCCTCTGCCTCGCCGGGCTCGTCTTCGTCAGCGAAGCCGGGCCCACCGGCACGGGTGAGAGCAAGTGCCCCCTCATGGTCAAGGTCCTCGACGCTGTGCGCGGCAGCCCTGCGATCAACGTCGCTGTGCACGTCTTCCGCAAGGCTGCCGACGACACGTGGGAGCCCTTCGCGAGCGGCAAGACGAGCGAGAGCGGTGAGCTGCACGGCCTCACGACAGAGGAGGAGTTCGTCGAGGGCATCTACAAGGTCGAGATCGACACGAAGAGCTACTGGAAGGCACTGGGCATCAGCCCCTTCCACGAGCACGCGGAAGTCGTCTTCACGGCGAACGACAGCGGCCCCCGCCGCTACACGATCGCTGCACTGCTCAGCCCCTACAGCTACTCGACTACGGCTGTGGTCACGAACCCCAAGTAG
135 TTR GS_GCU ORF ATGGCGAGCCACCGCCTGCTGCTGCTGTGCCTGGCCGGGCTGGTGTTCGTCAGCGAAGCCGGGCCCACCGGCACGGGTGAGAGCAAGTGCCCGCTGATGGTGAAGGTGCTGGACGCTGTGCGCGGCAGCCCGGCGATCAACGTGGCTGTGCACGTGTTCCGCAAGGCTGCCGACGACACGTGGGAGCCGTTCGCGAGCGGCAAGACGAGCGAGAGCGGTGAGCTGCACGGCCTGACGACAGAGGAGGAGTTCGTGGAGGGCATCTACAAGGTGGAGATCGACACGAAGAGCTACTGGAAGGCACTGGGCATCAGCCCGTTCCACGAGCACGCGGAAGTCGTGTTCACGGCGAACGACAGCGGCCCGCGCCGCTACACGATCGCTGCACTGCTCAGCCCGTACAGCTACTCGACTACGGCTGTGGTGACGAACCCGAAGTAG
136 FAH BS_GCU AUGAGCUUCAUCCCCGUCGCGGAGGACAGCGACUUCCCCAUCCACAACCUCCCCUACGGCGUCUUCAGCACGCGCGGCGACCCCCGCCCCCGCAUCGGCGUCGCGAUCGGCGACCAGAUCCUCGACCUCAGCAUCAUCAAGCACCUCUUCACGGGCCCCGUCCUCAGCAAGCACCAGGACGUCUUCAACCAGCCCACGCUCAACAGCUUCAUGGGCCUCGGCCAGGCGGCGUGGAAGGAGGCGCGCGUCUUCCUCCAGAACCUCCUCAGCGUCAGCCAGGCGCGCCUCCGCGACGACACGGAGCUCCGCAAGUGCGCGUUCAUCAGCCAGGCGAGCGCGACGAUGCACCUCCCCGCGACGAUCGGCGACUACACGGACUUCUACAGCAGCCGCCAGCACGCGACGAACGUCGGCAUCAUGUUCCGCGACAAGGAGAACGCGCUCAUGCCCAACUGGCUCCACCUCCCCGUCGGCUACCACGGCCGCGCGAGCAGCGUCGUCGUCAGCGGCACGCCCAUCCGCCGCCCCAUGGGCCAGAUGAAGCCCGACGACAGCAAGCCCCCCGUCUACGGCGCGUGCAAGCUCCUCGACAUGGAGCUCGAGAUGGCGUUCUUCGUCGGCCCCGGCAACCGCCUCGGCGAGCCCAUCCCCAUCAGCAAGGCGCACGAGCACAUCUUCGGCAUGGUCCUCAUGAACGACUGGAGCGCGCGCGACAUCCAGAAGUGGGAGUACGUCCCCCUCGGCCCCUUCCUCGGCAAGAGCUUCGGCACGACGGUCAGCCCCUGGGUCGUCCCCAUGGACGCGCUCAUGCCCUUCGCGGUCCCCAACCCCAAGCAGGACCCCCGCCCCCUCCCCUACCUCUGCCACGACGAGCCCUACACGUUCGACAUCAACCUCAGCGUCAACCUCAAGGGCGAGGGCAUGAGCCAGGCGGCGACGAUCUGCAAGAGCAACUUCAAGUACAUGUACUGGACGAUGCUCCAGCAGCUCACGCACCACAGCGUCAACGGCUGCAACCUCCGCCCCGGCGACCUCCUCGCGAGCGGCACGAUCAGCGGCCCCGAGCCCGAGAACUUCGGCAGCAUGCUCGAGCUCAGCUGGAAGGGCACGAAGCCCAUCGACCUCGGCAACGGCCAGACGCGCAAGUUCCUCCUCGACGGCGACGAGGUCAUCAUCACGGGCUACUGCCAGGGCGACGGCUACCGCAUCGGCUUCGGCCAGUGCGCGGGCAAGGUCCUCCCCGCGCUCCUCCCCUAG
137 GABRD BS_GCU AUGAGCGAGGCGACGCCCCUCGACCGCAACGACAGCGAGAACACGGGCGGCCUCAUCAGCCGCCCCCACCCCUGGGACCAGAGCCCCAGCUGCGUCCAGGAGGACCGCGCGAUGAACGACAUCGGCGACUACGUCGGCAGCAACCUCGAGAUCAGCUGGCUCCCCAACCUCGACGGCCUCAUCGCGGGCUACGCGCGCAACUUCCGCCCCGGCAUCGGCGGCCCCCCCGUCAACGUCGCGCUCGCGCUCGAGGUCGCGAGCAUCGACCACAUCAGCGAGGCGAACAUGGAGUACACGAUGACGGUCUUCCUCCACCAGAGCUGGCGCGACAGCCGCCUCAGCUACAACCACACGAACGAGACGCUCGGCCUCGACAGCCGCUUCGUCGACAAGCUCUGGCUCCCCGACACGUUCAUCGUCAACGCGAAGAGCGCGUGGUUCCACGACGUCACGGUCGAGAACAAGCUCAUCCGCCUCCAGCCCGACGGCGUCAUCCUCUACAGCAUCCGCAUCACGAGCACGGUCGCGUGCGACAUGGACCUCGCGAAGUACCCCAUGGACGAGCAGGAGUGCAUGCUCGACCUCGAGAGCUACGGCUACAGCAGCGAGGACAUCGUCUACUACUGGAGCGAGAGCCAGGAGCACAUCCACGGCCUCGACAAGCUCCAGCUCGCGCAGUUCACGAUCACGAGCUACCGCUUCACGACGGAGCUCAUGAACUUCAAGAGCGCGGGCCAGUUCCCCCGCCUCAGCCUCCACUUCCACCUCCGCCGCAACCGCGGCGUCUACAUCAUCCAGAGCUACAUGCCCAGCGUCCUCCUCGUCGCGAUGAGCUGGGUCAGCUUCUGGAUCAGCCAGGCGGCGGUCCCCGCGCGCGUCAGCCUCGGCAUCACGACGGUCCUCACGAUGACGACGCUCAUGGUCAGCGCGCGCAGCAGCCUCCCCCGCGCGAGCGCGAUCAAGGCGCUCGACGUCUACUUCUGGAUCUGCUACGUCUUCGUCUUCGCGGCGCUCGUCGAGUACGCGUUCGCGCACUUCAACGCGGACUACCGCAAGAAGCAGAAGGCGAAGGUCAAGGUCAGCCGCCCCCGCGCGGAGAUGGACGUCCGCAACGCGAUCGUCCUCUUCAGCCUCAGCGCGGCGGGCGUCACGCAGGAGCUCGCGAUCAGCCGCCGCCAGCGCCGCGUCCCCGGCAACCUCAUGGGCAGCUACCGCAGCGUCGGCGUCGAGACGGGCGAGACGAAGAAGGAGGGCGCGGCGCGCAGCGGCGGCCAGGGCGGCAUCCGCGCGCGCCUCCGCCCCAUCGACGCGGACACGAUCGACAUCUACGCGCGCGCGGUCUUCCCCGCGGCGUUCGCGGCGGUCAACGUCAUCUACUGGGCGGCGUACGCGUAG
138 GAPDH BS_GCU AUGGGCAAGGUCAAGGUCGGCGUCAACGGCUUCGGCCGCAUCGGCCGCCUCGUCACGCGCGCGGCGUUCAACAGCGGCAAGGUCGACAUCGUCGCGAUCAACGACCCCUUCAUCGACCUCAACUACAUGGCGGAGAACGGCAAGCUCGUCAUCAACGGCAACCCCAUCACGAUCUUCCAGGAGCGCGACCCCAGCAAGAUCAAGUGGGGCGACGCGGGCGCGGAGUACGUCGUCGAGAGCACGGGCGUCUUCACGACGAUGGAGAAGGCGGGCGCGCACCUCCAGGGCGGCGCGAAGCGCGUCAUCAUCAGCGCGCCCAGCGCGGACGCGCCCAUGUUCGUCAUGGGCGUCAACCACGAGAAGUACGACAACAGCCUCAAGAUCAUCAGCAACGCGAGCUGCACGACGAACUGCCUCGCGCCCCUCGCGAAGGUCAUCCACGACAACUUCGGCAUCGUCGAGGGCCUCAUGACGACGGUCCACGCGAUCACGGCGACGCAGAAGACGGUCGACGGCCCCAGCGGCAAGCUCUGGCGCGACGGCCGCGGCGCGCUCCAGAACAUCAUCCCCGCGAGCACGGGCGCGGCGAAGGCGGUCGGCAAGGUCAUCCCCGAGCUCAACGGCAAGCUCACGGGCAUGGCGUUCCGCGUCCCCACGGCGAACGUCAGCGUCGUCGACCUCACGUGCCGCCUCGAGAAGCCCGCGAAGUACGACGACAUCAAGAAGGUCGUCAAGCAGGCGAGCGAGGGCCCCCUCAAGGGCAUCCUCGGCUACACGGAGCACCAGGUCGUCAGCAGCGACUUCAACAGCGACACGCACAGCAGCACGUUCGACGCGGGCGCGGGCAUCGCGCUCAACGACCACUUCGUCAAGCUCAUCAGCUGGUACGACAACGAGUUCGGCUACAGCAACCGCGUCGUCGACCUCAUGGCGCACAUGGCGAGCAAGUAG
139 GBA1 BS_GCU AUGGAGUUCAGCAGCCCCAGCCGCGAGGAGUGCCCCAAGCCCCUCAGCCGCGUCAGCAUCAUGGCGGGCAGCCUCACGGGCCUCCUCCUCCUCCAGGCGGUCAGCUGGGCGAGCGGCGCGCGCCCCUGCAUCCCCAAGAGCUUCGGCUACAGCAGCGUCGUCUGCGUCUGCAACGCGACGUACUGCGACAGCUUCGACCCCCCCACGUUCCCCGCGCUCGGCACGUUCAGCCGCUACGAGAGCACGCGCAGCGGCCGCCGCAUGGAGCUCAGCAUGGGCCCCAUCCAGGCGAACCACACGGGCACGGGCCUCCUCCUCACGCUCCAGCCCGAGCAGAAGUUCCAGAAGGUCAAGGGCUUCGGCGGCGCGAUGACGGACGCGGCGGCGCUCAACAUCCUCGCGCUCAGCCCCCCCGCGCAGAACCUCCUCCUCAAGAGCUACUUCAGCGAGGAGGGCAUCGGCUACAACAUCAUCCGCGUCCCCAUGGCGAGCUGCGACUUCAGCAUCCGCACGUACACGUACGCGGACACGCCCGACGACUUCCAGCUCCACAACUUCAGCCUCCCCGAGGAGGACACGAAGCUCAAGAUCCCCCUCAUCCACCGCGCGCUCCAGCUCGCGCAGCGCCCCGUCAGCCUCCUCGCGAGCCCCUGGACGAGCCCCACGUGGCUCAAGACGAACGGCGCGGUCAACGGCAAGGGCAGCCUCAAGGGCCAGCCCGGCGACAUCUACCACCAGACGUGGGCGCGCUACUUCGUCAAGUUCCUCGACGCGUACGCGGAGCACAAGCUCCAGUUCUGGGCGGUCACGGCGGAGAACGAGCCCAGCGCGGGCCUCCUCAGCGGCUACCCCUUCCAGUGCCUCGGCUUCACGCCCGAGCACCAGCGCGACUUCAUCGCGCGCGACCUCGGCCCCACGCUCGCGAACAGCACGCACCACAACGUCCGCCUCCUCAUGCUCGACGACCAGCGCCUCCUCCUCCCCCACUGGGCGAAGGUCGUCCUCACGGACCCCGAGGCGGCGAAGUACGUCCACGGCAUCGCGGUCCACUGGUACCUCGACUUCCUCGCGCCCGCGAAGGCGACGCUCGGCGAGACGCACCGCCUCUUCCCCAACACGAUGCUCUUCGCGAGCGAGGCGUGCGUCGGCAGCAAGUUCUGGGAGCAGAGCGUCCGCCUCGGCAGCUGGGACCGCGGCAUGCAGUACAGCCACAGCAUCAUCACGAACCUCCUCUACCACGUCGUCGGCUGGACGGACUGGAACCUCGCGCUCAACCCCGAGGGCGGCCCCAACUGGGUCCGCAACUUCGUCGACAGCCCCAUCAUCGUCGACAUCACGAAGGACACGUUCUACAAGCAGCCCAUGUUCUACCACCUCGGCCACUUCAGCAAGUUCAUCCCCGAGGGCAGCCAGCGCGUCGGCCUCGUCGCGAGCCAGAAGAACGACCUCGACGCGGUCGCGCUCAUGCACCCCGACGGCAGCGCGGUCGUCGUCGUCCUCAACCGCAGCAGCAAGGACGUCCCCCUCACGAUCAAGGACCCCGCGGUCGGCUUCCUCGAGACGAUCAGCCCCGGCUACAGCAUCCACACGUACCUCUGGCGCCGCUAG
140 GLA BS_GCU AUGCAGCUCCGCAACCCCGAGCUCCACCUCGGCUGCGCGCUCGCGCUCCGCUUCCUCGCGCUCGUCAGCUGGGACAUCCCCGGCGCGCGCGCGCUCGACAACGGCCUCGCGCGCACGCCCACGAUGGGCUGGCUCCACUGGGAGCGCUUCAUGUGCAACCUCGACUGCCAGGAGGAGCCCGACAGCUGCAUCAGCGAGAAGCUCUUCAUGGAGAUGGCGGAGCUCAUGGUCAGCGAGGGCUGGAAGGACGCGGGCUACGAGUACCUCUGCAUCGACGACUGCUGGAUGGCGCCCCAGCGCGACAGCGAGGGCCGCCUCCAGGCGGACCCCCAGCGCUUCCCCCACGGCAUCCGCCAGCUCGCGAACUACGUCCACAGCAAGGGCCUCAAGCUCGGCAUCUACGCGGACGUCGGCAACAAGACGUGCGCGGGCUUCCCCGGCAGCUUCGGCUACUACGACAUCGACGCGCAGACGUUCGCGGACUGGGGCGUCGACCUCCUCAAGUUCGACGGCUGCUACUGCGACAGCCUCGAGAACCUCGCGGACGGCUACAAGCACAUGAGCCUCGCGCUCAACCGCACGGGCCGCAGCAUCGUCUACAGCUGCGAGUGGCCCCUCUACAUGUGGCCCUUCCAGAAGCCCAACUACACGGAGAUCCGCCAGUACUGCAACCACUGGCGCAACUUCGCGGACAUCGACGACAGCUGGAAGAGCAUCAAGAGCAUCCUCGACUGGACGAGCUUCAACCAGGAGCGCAUCGUCGACGUCGCGGGCCCCGGCGGCUGGAACGACCCCGACAUGCUCGUCAUCGGCAACUUCGGCCUCAGCUGGAACCAGCAGGUCACGCAGAUGGCGCUCUGGGCGAUCAUGGCGGCGCCCCUCUUCAUGAGCAACGACCUCCGCCACAUCAGCCCCCAGGCGAAGGCGCUCCUCCAGGACAAGGACGUCAUCGCGAUCAACCAGGACCCCCUCGGCAAGCAGGGCUACCAGCUCCGCCAGGGCGACAACUUCGAGGUCUGGGAGCGCCCCCUCAGCGGCCUCGCGUGGGCGGUCGCGAUGAUCAACCGCCAGGAGAUCGGCGGCCCCCGCAGCUACACGAUCGCGGUCGCGAGCCUCGGCAAGGGCGUCGCGUGCAACCCCGCGUGCUUCAUCACGCAGCUCCUCCCCGUCAAGCGCAAGCUCGGCUUCUACGAGUGGACGAGCCGCCUCCGCAGCCACAUCAACCCCACGGGCACGGUCCUCCUCCAGCUCGAGAACACGAUGCAGAUGAGCCUCAAGGACCUCUAG
141 OTC BS_GCU AUGCUCUUCAACCUCCGCAUCCUCCUCAACAACGCGGCGUUCCGCAACGGCCACAACUUCAUGGUCCGCAACUUCCGCUGCGGCCAGCCCCUCCAGAACAAGGUCCAGCUCAAGGGCCGCGACCUCCUCACGCUCAAGAACUUCACGGGCGAGGAGAUCAAGUACAUGCUCUGGCUCAGCGCGGACCUCAAGUUCCGCAUCAAGCAGAAGGGCGAGUACCUCCCCCUCCUCCAGGGCAAGAGCCUCGGCAUGAUCUUCGAGAAGCGCAGCACGCGCACGCGCCUCAGCACGGAGACGGGCUUCGCGCUCCUCGGCGGCCACCCCUGCUUCCUCACGACGCAGGACAUCCACCUCGGCGUCAACGAGAGCCUCACGGACACGGCGCGCGUCCUCAGCAGCAUGGCGGACGCGGUCCUCGCGCGCGUCUACAAGCAGAGCGACCUCGACACGCUCGCGAAGGAGGCGAGCAUCCCCAUCAUCAACGGCCUCAGCGACCUCUACCACCCCAUCCAGAUCCUCGCGGACUACCUCACGCUCCAGGAGCACUACAGCAGCCUCAAGGGCCUCACGCUCAGCUGGAUCGGCGACGGCAACAACAUCCUCCACAGCAUCAUGAUGAGCGCGGCGAAGUUCGGCAUGCACCUCCAGGCGGCGACGCCCAAGGGCUACGAGCCCGACGCGAGCGUCACGAAGCUCGCGGAGCAGUACGCGAAGGAGAACGGCACGAAGCUCCUCCUCACGAACGACCCCCUCGAGGCGGCGCACGGCGGCAACGUCCUCAUCACGGACACGUGGAUCAGCAUGGGCCAGGAGGAGGAGAAGAAGAAGCGCCUCCAGGCGUUCCAGGGCUACCAGGUCACGAUGAAGACGGCGAAGGUCGCGGCGAGCGACUGGACGUUCCUCCACUGCCUCCCCCGCAAGCCCGAGGAGGUCGACGACGAGGUCUUCUACAGCCCCCGCAGCCUCGUCUUCCCCGAGGCGGAGAACCGCAAGUGGACGAUCAUGGCGGUCAUGGUCAGCCUCCUCACGGACUACAGCCCCCAGCUCCAGAAGCCCAAGUAG
142 PAH BS_GCU AUGAGCACGGCGGUCCUCGAGAACCCCGGCCUCGGCCGCAAGCUCAGCGACUUCGGCCAGGAGACGAGCUACAUCGAGGACAACUGCAACCAGAACGGCGCGAUCAGCCUCAUCUUCAGCCUCAAGGAGGAGGUCGGCGCGCUCGCGAAGGUCCUCCGCCUCUUCGAGGAGAACGACGUCAACCUCACGCACAUCGAGAGCCGCCCCAGCCGCCUCAAGAAGGACGAGUACGAGUUCUUCACGCACCUCGACAAGCGCAGCCUCCCCGCGCUCACGAACAUCAUCAAGAUCCUCCGCCACGACAUCGGCGCGACGGUCCACGAGCUCAGCCGCGACAAGAAGAAGGACACGGUCCCCUGGUUCCCCCGCACGAUCCAGGAGCUCGACCGCUUCGCGAACCAGAUCCUCAGCUACGGCGCGGAGCUCGACGCGGACCACCCCGGCUUCAAGGACCCCGUCUACCGCGCGCGCCGCAAGCAGUUCGCGGACAUCGCGUACAACUACCGCCACGGCCAGCCCAUCCCCCGCGUCGAGUACAUGGAGGAGGAGAAGAAGACGUGGGGCACGGUCUUCAAGACGCUCAAGAGCCUCUACAAGACGCACGCGUGCUACGAGUACAACCACAUCUUCCCCCUCCUCGAGAAGUACUGCGGCUUCCACGAGGACAACAUCCCCCAGCUCGAGGACGUCAGCCAGUUCCUCCAGACGUGCACGGGCUUCCGCCUCCGCCCCGUCGCGGGCCUCCUCAGCAGCCGCGACUUCCUCGGCGGCCUCGCGUUCCGCGUCUUCCACUGCACGCAGUACAUCCGCCACGGCAGCAAGCCCAUGUACACGCCCGAGCCCGACAUCUGCCACGAGCUCCUCGGCCACGUCCCCCUCUUCAGCGACCGCAGCUUCGCGCAGUUCAGCCAGGAGAUCGGCCUCGCGAGCCUCGGCGCGCCCGACGAGUACAUCGAGAAGCUCGCGACGAUCUACUGGUUCACGGUCGAGUUCGGCCUCUGCAAGCAGGGCGACAGCAUCAAGGCGUACGGCGCGGGCCUCCUCAGCAGCUUCGGCGAGCUCCAGUACUGCCUCAGCGAGAAGCCCAAGCUCCUCCCCCUCGAGCUCGAGAAGACGGCGAUCCAGAACUACACGGUCACGGAGUUCCAGCCCCUCUACUACGUCGCGGAGAGCUUCAACGACGCGAAGGAGAAGGUCCGCAACUUCGCGGCGACGAUCCCCCGCCCCUUCAGCGUCCGCUACGACCCCUACACGCAGCGCAUCGAGGUCCUCGACAACACGCAGCAGCUCAAGAUCCUCGCGGACAGCAUCAACAGCGAGAUCGGCAUCCUCUGCAGCGCGCUCCAGAAGAUCUAG
143 TTR BS_GCU AUGGCGAGCCACCGCCUCCUCCUCCUCUGCCUCGCGGGCCUCGUCUUCGUCAGCGAGGCGGGCCCCACGGGCACGGGCGAGAGCAAGUGCCCCCUCAUGGUCAAGGUCCUCGACGCGGUCCGCGGCAGCCCCGCGAUCAACGUCGCGGUCCACGUCUUCCGCAAGGCGGCGGACGACACGUGGGAGCCCUUCGCGAGCGGCAAGACGAGCGAGAGCGGCGAGCUCCACGGCCUCACGACGGAGGAGGAGUUCGUCGAGGGCAUCUACAAGGUCGAGAUCGACACGAAGAGCUACUGGAAGGCGCUCGGCAUCAGCCCCUUCCACGAGCACGCGGAGGUCGUCUUCACGGCGAACGACAGCGGCCCCCGCCGCUACACGAUCGCGGCGCUCCUCAGCCCCUACAGCUACAGCACGACGGCGGUCGUCACGAACCCCAAGUAG
144-160 不使用
161 Cas9切割酶胺基酸序列 MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
162 dCas9胺基酸序列 MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGGSPKKKRKV
163 實例性NLS胺基酸序列 PKKKRKV
164 實例性NLS胺基酸序列 LAAKRSRTT
165 實例性NLS胺基酸序列 QAAKRSRTT
166 實例性NLS胺基酸序列 PAPAKRERTT
167 實例性NLS胺基酸序列 QAAKRPRTT
168 實例性NLS胺基酸序列 RAAKRPRTT
169 實例性NLS胺基酸序列 AAAKRSWSMAA
170 實例性NLS胺基酸序列 AAAKRVWSMAF
171 實例性NLS胺基酸序列 AAAKRSWSMAF
172 實例性NLS胺基酸序列 AAAKRKYFAA
173 實例性NLS胺基酸序列 RAAKRKAFAA
174 實例性NLS胺基酸序列 RAAKRKYFAV
175 實例性NLS胺基酸序列 PKKKRRV
176 實例性NLS胺基酸序列 KRPAATKKAGQAKKKK
177 實例性5’ UTR ACATTTGCTTCTGACACAACTGTGTTCACTAGCAACCTCAAACAGACACC
178 實例性5’ UTR CATAAACCCTGGCGCGCTCGCGGCCCGGCACTCTTCTGGTCCCCACAGACTCAGAGAGAACCCACC
179 實例性5’ UTR AAGCTCAGAATAAACGCTCAACTTTGGCC
180 實例性5’ UTR CAGGGTCCTGTGGACAGCTCACCAGCT
181 實例性5’ UTR TCCCGCAGTCGGCGTCCAGCGGCTCTGCTTGTTCGTGTGTGTGTCGTTGCAGGCCTTATTC
182 實例性3’ UTR GCTCGCTTTCTTGCTGTCCAATTTCTATTAAAGGTTCCTTTGTTCCCTAAGTCCAACTACTAAACTGGGGGATATTATGAAGGGCCTTGAGCATCTGGATTCTGCCTAATAAAAAACATTTATTTTCATTGC
183 實例性3’ UTR GCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC
184 實例性3’ UTR ACCAGCCTCAAGAACACCCGAATGGAGTCTCTAAGCTACATAATACCAACTTACACTTTACAAAATGTTGTCCCCCAAAATGTAGCCATTCGTATCTGCTCCTAATAAAAAGAAAGTTTCTTCACATTCT
185 實例性3’ UTR TTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCA
186 實例性3’ UTR GCTGCCTTCTGCGGGGCTTGCCTTCTGGCCATGCCCTTCTTCTCTCCCTTGCACCTGTACCTCTTGGTCTTTGAATAAAGCCTGAGTAGGAAG
187 實例性Kozak序列 gccgccRccAUGG
188 實例性聚A序列 AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
189 實例性嚮導模式 mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAG AmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAA AUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAm AmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmC mGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU
190 實例性5’ UTR CAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCAT
191 實例性5’ UTR AGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCGCGGCCGGGAACGG
192 實例性5’ UTR TGCATTGGAACGCGGATTCCCCGTGCCAAGAGTGACTCACCG
193 包括SEQ 29之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGACAUCGGAACAAACAGCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACAGACGAAUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACAGCGGUGAGACAGCAGAAGCCACAAGACUGAAGAGAACAGCCCGCAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUCGACUCGACUGACAAGGCAGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUAAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCUGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAAUCUCAUCGCACAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGAAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGACUGACUCCCAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCAAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUCAACACAGAGAUCACAAAGGCACCGCUCAGCGCAAGCAUGAUAAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCAGCCAGGAGGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAGGAGCUGCUGGUCAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGAGAACAUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCAAUCCUGCGGAGACAGGAGGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCCUACUACGUUGGCCCGCUGGCCCGCGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACUCCCUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGUGCCAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAAAAGGUCCUUCCAAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAGCUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAGGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGGGAGAUGAUAGAAGAAAGACUGAAGACCUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUCAGCAGAAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGCGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAAUCUCGCCGGGAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAGCUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCAGAGAACAUCGUCAUCGAAAUGGCCAGGGAGAACCAGACAACUCAAAAGGGGCAGAAGAACAGCAGGGAGAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAGCUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACUCAACUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUCGACCAGGAGCUGGACAUCAACAGACUCAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUUCCCUCAGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACUCAAAGAAAGUUCGACAAUCUCACAAAGGCAGAAAGAGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUAGCAAAGAGCGAACAGGAGAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACACUGGCAAAUGGUGAGAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAAUGGUGAGACAGGUGAGAUCGUCUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUCAGCAUGCCGCAGGUGAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGUGGCUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUUCCAAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGUGGCUUCGACAGCCCCACCGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGGAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAGCUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACAGCCUGUUCGAGCUGGAAAAUGGGAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGGAGCCCAGAGGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAAUCUCGACAAGGUCCUCAGCGCAUACAACAAGCACCGAGACAAGCCGAUCAGGGAGCAGGCCGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAAUCUCGGUGCCCCGGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
194 包括SEQ 46之Cas9 mRNA轉錄物    GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACUCCGGUGAGACCGCCGAAGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGCCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCUCCAUGAUAAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGCGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUGGACAAGGGUGCCUCCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUGCUUCCAAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACUCCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAACUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAACGGAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUAGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCUCCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGGAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGGUCCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAAUCUCGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
195 包括SEQ ID No. 3及SEQ ID No: 204之Cas9 ORF之Cas9 mRNA轉錄物    GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGACUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
196 包括SEQ ID No. 3及SEQ ID No: 202之Cas9 ORF之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGACUGGUACUGCAUGCACGCAAUGCUAGCUGCCCCUUUCCCGUCCUGGGUACCCCGAGUCUCCCCCGACCUCGGGUCCCAGGUAUGCUCCCACCUCCACCUGCCCCACUCACCACCUCUGCUAGUUCCAGACACCUCCCAAGCACGCAGCAAUGCAGCUCAAAACGCUUAGCCUAGCCACACCCCCACGGGAAACAGCAGUGAUUAACCUUUAGCAAUAAACGAAAGUUUAACUAAGCUAUACUAACCCCAGGGUUGGUCAAUUUCGUGCCAGCCACACCCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
197 包括SEQ ID No. 3及SEQ ID No: 203之Cas9 ORF之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACUCCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUGGGCUGGGCCGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUGCCCUCCAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACUCCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGCGCCCUGCUGUUCGACUCCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGGCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAGGUGGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCCACCGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCCCUGGCCCACAUGAUCAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCCGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUGUCCGCCCGGCUGUCCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAACCUGAUCGCCCAGCUGCCCGGCGAGAAGAAGAACGGCCUGUUCGGCAACCUGAUCGCCCUGUCCCUGGGCCUGACCCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUGUCCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCCGCCAAGAACCUGUCCGACGCCAUCCUGCUGUCCGACAUCCUGCGGGUGAACACCGAGAUCACCAAGGCCCCCCUGUCCGCCUCCAUGAUCAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCCCUGGUGCGGCAGCAGCUGCCCGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGUCCAAGAACGGCUACGCCGGCUACAUCGACGGCGGCGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACCGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACCGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAACGGCUCCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGCGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACCGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUGGGCCCCCUGGCCCGGGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACCCCCUGGAACUUCGAGGAGGUGGUGGACAAGGGCGCCUCCGCCCAGUCCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAACCUGCCCAACGAGAAGGUGCUGCCCAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACCGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUGUCCGGCGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACCGGGAGAUGAUCGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUGUCCCGGAAGCUGAUCAACGGCAUCCGGGACAAGCAGUCCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUGUCCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAACCUGGCCGGCUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGCAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCCGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACUCCCGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACCCAGCUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGCCGGGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUGUCCGACUACGACGUGGACCACAUCGUGCCCCAGUCCUUCCUGAAGGACGACUCCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUGCCCUCCGAGGAGGUGGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACCCAGCGGAAGUUCGACAACCUGACCAAGGCCGAGCGGGGCGGCCUGUCCGAGCUGGACAAGGCCGGCUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCCGGGAGGUGAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUGUCCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGCGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCCGUGGUGGGCACCGCCCUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUCGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACCGAGAUCACCCUGGCCAACGGCGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGAUCGUGUGGGACAAGGGCCGGGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUGUCCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACCGAGGUGCAGACCGGCGGCUUCUCCAAGGAGUCCAUCCUGCCCAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGGAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGCGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGCAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAGGCCAAGGGCUACAAGGAGGUGAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCCAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAACGGCCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGCGAGCUGCAGAAGGGCAACGAGCUGGCCCUGCCCUCCAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGCUCCCCCGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAACCUGGACAAGGUGCUGUCCGCCUACAACAAGCACCGGGACAAGCCCAUCCGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAACCUGGGCGCCCCCGCCGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCCACCAAGGAGGUGCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGUCCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUGUCCCAGCUGGGCGGCGACGGCGGCGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUGACAAGCACGCAGCAAUGCAGCUCAAAACGCUUAGCCUAGCCACACCCCCACGGGAAACAGCAGUGAUUAACCUUUAGCAAUAAACGAAAGUUUAACUAAGCUAUACUAACCCCAGGGUUGGUCAAUUUCGUGCCAGCCACACCCUGGUACUGCAUGCACGCAAUGCUAGCUGCCCCUUUCCCGUCCUGGGUACCCCGAGUCUCCCCCGACCUCGGGUCCCAGGUAUGCUCCCACCUCCACCUGCCCCACUCACCACCUCUGCUAGUUCCAGACACCUCCCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
198    不使用
199 包括SEQ ID No: 46及SEQ ID No: 204之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACUCCGGUGAGACCGCCGAAGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGCCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCUCCAUGAUAAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGCGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUGGACAAGGGUGCCUCCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUGCUUCCAAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACUCCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAACUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAACGGAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUAGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCUCCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGGAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGGUCCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAAUCUCGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAGCUAGCACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUACCAGCCUCAAGAACACCCGAAUGGAGUCUCUAAGCUACAUAAUACCAACUUACACUUUACAAAAUGUUGUCCCCCAAAAUGUAGCCAUUCGUAUCUGCUCCUAAUAAAAAGAAAGUUUCUUCACAUUCUCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
200 包括SEQ ID No: 46及SEQ ID No: 202之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACUCCGGUGAGACCGCCGAAGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGCCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCUCCAUGAUAAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGCGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUGGACAAGGGUGCCUCCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUGCUUCCAAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACUCCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAACUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAACGGAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUAGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCUCCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGGAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGGUCCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAAUCUCGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAGCUGGUACUGCAUGCACGCAAUGCUAGCUGCCCCUUUCCCGUCCUGGGUACCCCGAGUCUCCCCCGACCUCGGGUCCCAGGUAUGCUCCCACCUCCACCUGCCCCACUCACCACCUCUGCUAGUUCCAGACACCUCCCAAGCACGCAGCAAUGCAGCUCAAAACGCUUAGCCUAGCCACACCCCCACGGGAAACAGCAGUGAUUAACCUUUAGCAAUAAACGAAAGUUUAACUAAGCUAUACUAACCCCAGGGUUGGUCAAUUUCGUGCCAGCCACACCCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
201 包括SEQ ID No: 46且包括SEQ ID No: 203之Cas9 mRNA轉錄物 GGGAAGCUCAGAAUAAACGCUCAACUUUGGCCGGAUCUGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGCCUGGACAUCGGCACCAACUCCGUUGGCUGGGCUGUGAUCACCGACGAGUACAAGGUUCCCUCAAAGAAGUUCAAGGUGCUGGGCAACACCGACCGGCACAGCAUCAAGAAGAAUCUCAUCGGUGCACUGCUGUUCGACUCCGGUGAGACCGCCGAAGCCACCCGGCUGAAGCGGACCGCCCGCCGGCGGUACACCCGGCGGAAGAACCGGAUCUGCUACCUGCAGGAGAUCUUCUCCAACGAGAUGGCCAAGGUGGACGACUCCUUCUUCCACCGGCUGGAGGAGUCCUUCCUGGUGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGCGGCACCCCAUCUUCGGCAACAUCGUGGACGAAGUCGCCUACCACGAGAAGUACCCCACCAUCUACCACCUGCGGAAGAAGCUGGUGGACUCGACUGACAAGGCCGACCUGCGGCUGAUCUACCUGGCACUGGCCCACAUGAUAAAGUUCCGGGGCCACUUCCUGAUCGAGGGCGACCUGAACCCUGACAACUCCGACGUGGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUGCAGACCUACAACCAGCUGUUCGAGGAGAACCCCAUCAACGCCUCCGGCGUGGACGCCAAGGCCAUCCUCAGCGCCCGCCUCAGCAAGUCCCGGCGGCUGGAGAAUCUCAUCGCCCAGCUUCCAGGUGAGAAGAAGAAUGGGCUGUUCGGCAAUCUCAUCGCACUCAGCCUGGGCCUGACUCCCAACUUCAAGUCCAACUUCGACCUGGCCGAGGACGCCAAGCUGCAGCUCAGCAAGGACACCUACGACGACGACCUGGACAAUCUCCUGGCCCAGAUCGGCGACCAGUACGCCGACCUGUUCCUGGCUGCCAAGAAUCUCAGCGACGCCAUCCUGCUCAGCGACAUCCUGCGGGUGAACACAGAGAUCACCAAGGCCCCCCUCAGCGCCUCCAUGAUAAAGCGGUACGACGAGCACCACCAGGACCUGACCCUGCUGAAGGCACUGGUGCGGCAGCAGCUUCCAGAGAAGUACAAGGAGAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAAUGGGUACGCCGGGUACAUCGACGGUGGUGCCUCCCAGGAGGAGUUCUACAAGUUCAUCAAGCCCAUCCUGGAGAAGAUGGACGGCACAGAGGAGCUGCUGGUGAAGCUGAACAGGGAGGACCUGCUGCGGAAGCAGCGGACCUUCGACAAUGGGAGCAUCCCCCACCAGAUCCACCUGGGUGAGCUGCACGCCAUCCUGCGGCGGCAGGAGGACUUCUACCCCUUCCUGAAGGACAACAGGGAGAAGAUCGAGAAGAUCCUGACCUUCCGGAUCCCCUACUACGUUGGCCCCCUGGCCCGCGGCAACUCCCGGUUCGCCUGGAUGACCCGGAAGUCCGAGGAGACCAUCACUCCCUGGAACUUCGAGGAAGUCGUGGACAAGGGUGCCUCCGCCCAGAGCUUCAUCGAGCGGAUGACCAACUUCGACAAGAAUCUUCCAAACGAGAAGGUGCUUCCAAAGCACUCCCUGCUGUACGAGUACUUCACCGUGUACAACGAGCUGACCAAGGUGAAGUACGUGACAGAGGGCAUGCGGAAGCCCGCCUUCCUCAGCGGUGAGCAGAAGAAGGCCAUCGUGGACCUGCUGUUCAAGACCAACCGGAAGGUGACCGUGAAGCAGCUGAAGGAGGACUACUUCAAGAAGAUCGAGUGCUUCGACUCCGUGGAGAUCUCCGGCGUGGAGGACCGGUUCAACGCCUCCCUGGGCACCUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAGGAGAACGAGGACAUCCUGGAGGACAUCGUGCUGACCCUGACCCUGUUCGAGGACAGGGAGAUGAUAGAGGAGCGGCUGAAGACCUACGCCCACCUGUUCGACGACAAGGUGAUGAAGCAGCUGAAGCGGCGGCGGUACACCGGCUGGGGCCGGCUCAGCCGGAAGCUGAUCAAUGGGAUCCGAGACAAGCAGAGCGGCAAGACCAUCCUGGACUUCCUGAAGUCCGACGGCUUCGCCAACCGGAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACUCCCUGACCUUCAAGGAGGACAUCCAGAAGGCCCAGGUCAGCGGCCAGGGCGACUCCCUGCACGAGCACAUCGCCAAUCUCGCCGGGUCCCCCGCCAUCAAGAAGGGGAUCCUGCAGACCGUGAAGGUGGUGGACGAGCUGGUGAAGGUGAUGGGCCGGCACAAGCCAGAGAACAUCGUGAUCGAGAUGGCCAGGGAGAACCAGACCACUCAAAAGGGGCAGAAGAACUCCAGGGAGCGGAUGAAGCGGAUCGAGGAGGGCAUCAAGGAGCUGGGCUCCCAGAUCCUGAAGGAGCACCCCGUGGAGAACACUCAACUGCAGAACGAGAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAAUGGGCGAGACAUGUACGUGGACCAGGAGCUGGACAUCAACCGGCUCAGCGACUACGACGUGGACCACAUCGUUCCCCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUGCUGACCCGGUCCGACAAGAACCGGGGCAAGUCCGACAACGUUCCCUCAGAGGAAGUCGUGAAGAAGAUGAAGAACUACUGGCGGCAGCUGCUGAACGCCAAGCUGAUCACUCAACGGAAGUUCGACAAUCUCACCAAGGCCGAGCGGGGUGGCCUCAGCGAGCUGGACAAGGCCGGGUUCAUCAAGCGGCAGCUGGUGGAGACCCGGCAGAUCACCAAGCACGUGGCCCAGAUCCUGGACUCCCGGAUGAACACCAAGUACGACGAGAACGACAAGCUGAUCAGGGAAGUCAAGGUGAUCACCCUGAAGUCCAAGCUGGUCAGCGACUUCCGGAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUGAGGGAGAUCAACAACUACCACCACGCCCACGACGCCUACCUGAACGCUGUGGUUGGCACCGCACUGAUCAAGAAGUACCCCAAGCUGGAGUCCGAGUUCGUGUACGGCGACUACAAGGUGUACGACGUGCGGAAGAUGAUAGCCAAGUCCGAGCAGGAGAUCGGCAAGGCCACCGCCAAGUACUUCUUCUACUCCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAGAUCACCCUGGCCAAUGGUGAGAUCCGGAAGCGGCCCCUGAUCGAGACCAAUGGUGAGACCGGUGAGAUCGUGUGGGACAAGGGGCGAGACUUCGCCACCGUGCGGAAGGUGCUCAGCAUGCCCCAGGUGAACAUCGUGAAGAAGACAGAAGUCCAGACCGGUGGCUUCUCCAAGGAGAGCAUCCUUCCAAAGCGGAACUCCGACAAGCUGAUCGCCCGCAAGAAGGACUGGGACCCCAAGAAGUACGGUGGCUUCGACUCCCCCACCGUGGCCUACUCCGUGCUGGUGGUGGCCAAGGUGGAGAAGGGGAAGUCCAAGAAGCUGAAGUCCGUGAAGGAGCUGCUGGGCAUCACCAUCAUGGAGCGGUCCUCCUUCGAGAAGAACCCCAUCGACUUCCUGGAAGCCAAGGGGUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUUCCAAAGUACUCCCUGUUCGAGCUGGAGAAUGGGCGGAAGCGGAUGCUGGCCUCCGCCGGUGAGCUGCAGAAGGGGAACGAGCUGGCACUUCCCUCAAAGUACGUGAACUUCCUGUACCUGGCCUCCCACUACGAGAAGCUGAAGGGGUCCCCAGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCUGUUCGUGGAGCAGCACAAGCACUACCUGGACGAGAUCAUCGAGCAGAUCUCCGAGUUCUCCAAGCGGGUGAUCCUGGCCGACGCCAAUCUCGACAAGGUGCUCAGCGCCUACAACAAGCACCGAGACAAGCCCAUCAGGGAGCAGGCCGAGAACAUCAUCCACCUGUUCACCCUGACCAAUCUCGGUGCCCCCGCUGCCUUCAAGUACUUCGACACCACCAUCGACCGGAAGCGGUACACCUCGACUAAGGAAGUCCUGGACGCCACCCUGAUCCACCAGAGCAUCACCGGCCUGUACGAGACCCGGAUCGACCUCAGCCAGCUGGGUGGCGACGGUGGUGGCUCCCCCAAGAAGAAGCGGAAGGUGUAGCAAGCACGCAGCAAUGCAGCUCAAAACGCUUAGCCUAGCCACACCCCCACGGGAAACAGCAGUGAUUAACCUUUAGCAAUAAACGAAAGUUUAACUAAGCUAUACUAACCCCAGGGUUGGUCAAUUUCGUGCCAGCCACACCCUGGUACUGCAUGCACGCAAUGCUAGCUGCCCCUUUCCCGUCCUGGGUACCCCGAGUCUCCCCCGACCUCGGGUCCCAGGUAUGCUCCCACCUCCACCUGCCCCACUCACCACCUCUGCUAGUUCCAGACACCUCCCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG
202 實例性3’ UTR CTGGTACTGCATGCACGCAATGCTAGCTGCCCCTTTCCCGTCCTGGGTACCCCGAGTCTCCCCCGACCTCGGGTCCCAGGTATGCTCCCACCTCCACCTGCCCCACTCACCACCTCTGCTAGTTCCAGACACCTCCCAAGCACGCAGCAATGCAGCTCAAAACGCTTAGCCTAGCCACACCCCCACGGGAAACAGCAGTGATTAACCTTTAGCAATAAACGAAAGTTTAACTAAGCTATACTAACCCCAGGGTTGGTCAATTTCGTGCCAGCCACACC
203 實例性3’ UTR CAAGCACGCAGCAATGCAGCTCAAAACGCTTAGCCTAGCCACACCCCCACGGGAAACAGCAGTGATTAACCTTTAGCAATAAACGAAAGTTTAACTAAGCTATACTAACCCCAGGGTTGGTCAATTTCGTGCCAGCCACACCCTGGTACTGCATGCACGCAATGCTAGCTGCCCCTTTCCCGTCCTGGGTACCCCGAGTCTCCCCCGACCTCGGGTCCCAGGTATGCTCCCACCTCCACCTGCCCCACTCACCACCTCTGCTAGTTCCAGACACCTCC
204 實例性3’ UTR ACCAGCCTCAAGAACACCCGAATGGAGTCTCTAAGCTACATAATACCAACTTACACTTTACAAAATGTTGTCCCCCAAAATGTAGCCATTCGTATCTGCTCCTAATAAAAAGAAAGTTTCTTCACATTCTACCAGCCTCAAGAACACCCGAATGGAGTCTCTAAGCTACATAATACCAACTTACACTTTACAAAATGTTGTCCCCCAAAATGTAGCCATTCGTATCTGCTCCTAATAAAAAGAAAGTTTCTTCACATTCT
圖1展示在HepG2細胞與包括指示序列之mRNA接觸之後2、6及24小時該等細胞中之Cas9表現。
圖2展示在使用包括指示序列之mRNA時之活體內Cas9表現。
圖3展示在使用包括指示序列之mRNA時於投與之後1、3及6小時之活體內Cas9表現。
圖4A-4B展示在以指示劑量投與包括指示序列之mRNA後之活體內TTR基因編輯%及血清TTR含量。
圖5A-5B展示在使用指示 hSERPINA1 mRNA序列時於轉染後6小時及24小時原代小鼠肝細胞(PMH) (圖5A)及原代食蟹猴肝細胞(PCH) (圖5B)中之hA1AT表現之對比。
圖6展示在使用包括指示序列之mRNA時於轉染後 6 小時 原代人類肝細胞中之Cas9表現。
圖7A-7B展示在使用包括指示序列之mRNA時於轉染後 6 小時 原代人類肝細胞中之Cas9表現。
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Claims (265)

  1. 一種多核苷酸，其包括(i)編碼多肽之開放閱讀框(ORF)，其中該ORF中之至少1.03%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對；或(ii)編碼多肽之開放閱讀框(ORF)，其中該ORF中之至少1%之密碼子對係表1中所展示之密碼子對且該ORF不編碼RNA引導之DNA結合劑。
  2. 一種包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中該ORF包括與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或132-143中之任一者具有至少95%一致性之序列，視情況其中一致性係在不考慮該ORF之起始及終止密碼子下所測定。
  3. 一種包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中該ORF中至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%之密碼子係(i)表5中所列示之密碼子或(ii)表6中所列示之密碼子，且其中該多肽並非RNA引導之DNA結合劑。
  4. 如請求項1至3中任一項之多核苷酸，其中該ORF之重複含量小於或等於23.3%。
  5. 如請求項1至4中任一項之多核苷酸，其中該ORF之GC含量大於或等於55%。
  6. 一種包括編碼多肽之開放閱讀框(ORF)之多核苷酸，其中該ORF之重複含量小於或等於23.3%且該ORF之GC含量大於或等於55%。
  7. 如請求項2至6中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.03%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  8. 如請求項1至7中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.9%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  9. 如請求項1至8中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少60%、65%、70%或75%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  10. 如請求項1至9中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於20%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  11. 如請求項1至20中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.05%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  12. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.1%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  13. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.2%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  14. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.3%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  15. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.4%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  16. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.5%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  17. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.6%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  18. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.7%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  19. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.8%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  20. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少1.9%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  21. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.0%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  22. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.1%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  23. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.3%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  24. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.4%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  25. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.5%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  26. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.6%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  27. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.7%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  28. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.8%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  29. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少2.9%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  30. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.0%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  31. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.1%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  32. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.2%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  33. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.3%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  34. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.4%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  35. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.5%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  36. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.6%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  37. 如請求項1至10中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少3.7%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  38. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於10%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  39. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.9%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  40. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.8%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  41. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.7%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  42. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.6%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  43. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.5%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  44. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.4%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  45. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.3%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  46. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.2%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  47. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.1%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  48. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.0%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  49. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.9%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  50. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.8%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  51. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.7%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  52. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.6%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  53. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.5%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  54. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.4%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  55. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.3%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  56. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.2%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  57. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.1%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  58. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.0%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  59. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.9%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  60. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.8%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  61. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.7%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  62. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.6%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  63. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.5%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  64. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.4%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  65. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.3%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  66. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.2%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  67. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.1%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  68. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.0%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  69. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.9%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  70. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.8%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  71. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.7%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  72. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.6%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  73. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.5%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  74. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.4%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  75. 如請求項1至37中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於6.32%之該等密碼子對係表1中所展示之密碼子對。
  76. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.9%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  77. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.8%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  78. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.7%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  79. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.6%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  80. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.5%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  81. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.45%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  82. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.4%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  83. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.3%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  84. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.2%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  85. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於0.1%之該等密碼子對係表2中所展示之密碼子對。
  86. 如請求項1至75中任一項之多核苷酸，其中該ORF不包括表2中所展示之密碼子對。
  87. 如請求項1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於56%。
  88. 如請求項1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於56.5%。
  89. 如請求項1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於57%。
  90. 如請求項1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於57.5%。
  91. 如請求項1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於58%。
  92. 如請求項1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於58.5%。
  93. 如請求項1至86中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量大於或等於59%。
  94. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於63%。
  95. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於62.6%。
  96. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於62.1%。
  97. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於61.6%。
  98. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於61.1%。
  99. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於60.6%。
  100. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於60.1%。
  101. 如請求項1至93中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該GC含量小於或等於59.6%。
  102. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於23.2%。
  103. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於23.1%。
  104. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於23.0%。
  105. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.9%。
  106. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.8%。
  107. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.7%。
  108. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.6%。
  109. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.5%。
  110. 如請求項1至101中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量小於或等於22.4%。
  111. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於20%。
  112. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於20.5%。
  113. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21%。
  114. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21.5%。
  115. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21.7%。
  116. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於21.9%。
  117. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於22.1%。
  118. 如請求項1至110中任一項之多核苷酸，其中該ORF之該重複含量大於或等於22.2%。
  119. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於15%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  120. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於14.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  121. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於14%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  122. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於13.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  123. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於13%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  124. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於12.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  125. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於12%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  126. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於11.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  127. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於11%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  128. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於10.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  129. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於10%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  130. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  131. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於9%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  132. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  133. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於8%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  134. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7.5%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  135. 如請求項1至118中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於7%之該等密碼子係表4中所展示之密碼子。
  136. 如請求項1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少76%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  137. 如請求項1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少77%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  138. 如請求項1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少78%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  139. 如請求項1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少79%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  140. 如請求項1至135中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之至少80%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  141. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於87%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  142. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於86%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  143. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於85%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  144. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於84%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  145. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於83%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  146. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於82%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  147. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於81%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  148. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於80%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  149. 如請求項1至140中任一項之多核苷酸，其中該ORF中之小於或等於79%之該等密碼子係表3中所展示之密碼子。
  150. 如請求項1至149中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有介於其最小尿苷含量至該最小尿苷含量之101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%或150%之間之尿苷含量。
  151. 如請求項1至150中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有介於其最小A+U含量至該最小A+U含量之101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%或150%之間之A+U含量。
  152. 如請求項1至151中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有在55%至65%、例如55%至57%、57%至59%、59%至61%、61%至63%或63%至65%範圍內之GC含量。
  153. 如請求項1至152中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有介於其最小重複含量至該最小重複含量之101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%或150%之間之重複含量。
  154. 如請求項1至153中任一項之多核苷酸，其中該ORF具有22%至27%、例如22%至23%、22.3%至23%、23%至24%、24%至25%、25%至26%或26%至27%之重複含量。
  155. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有30個胺基酸之長度，視情況其中該多肽具有至少50個胺基酸之長度。
  156. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少100個胺基酸之長度。
  157. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少200個胺基酸之長度。
  158. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少300個胺基酸之長度。
  159. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少400個胺基酸之長度。
  160. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少500個胺基酸之長度。
  161. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少600個胺基酸之長度。
  162. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少700個胺基酸之長度。
  163. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少800個胺基酸之長度。
  164. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少900個胺基酸之長度。
  165. 如請求項1至154中任一項之多核苷酸，其中該多肽具有至少1000個胺基酸之長度。
  166. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於5000個胺基酸。
  167. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於4500個胺基酸。
  168. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於4000個胺基酸。
  169. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於3500個胺基酸。
  170. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於3000個胺基酸。
  171. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於2500個胺基酸。
  172. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於2000個胺基酸。
  173. 如請求項1至165中任一項之多核苷酸，其中該多肽之該長度小於或等於1500個胺基酸。
  174. 如請求項1至173中任一項之多核苷酸，其中該多肽包括與SEQ ID NO: 6-10、29、46、69-73、90-93、96-99、102-105、108-111、114-117、120-123、126-129或134-143中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
  175. 如請求項1至174中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸包括與SEQ ID NO: 16-20、78-80、194-197或200-201中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或100%一致性之序列。
  176. 如請求項1至175中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼RNA引導之DNA結合劑。
  177. 如請求項176之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑具有雙鏈內核酸酶活性。
  178. 如請求項177之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas裂解酶。
  179. 如請求項176之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑具有切割酶活性。
  180. 如請求項179之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas切割酶。
  181. 如請求項176之多核苷酸，其中該RNA引導之DNA結合劑包括dCas DNA結合結構域。
  182. 如請求項178、180或181中任一項之多核苷酸，其中該Cas裂解酶、Cas切割酶或dCas DNA結合結構域係Cas9裂解酶、Cas9切割酶或dCas9 DNA結合結構域。
  183. 如請求項1至182中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼釀膿鏈球菌(S. pyogenes ) Cas9。
  184. 如請求項1至183中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼內核酸酶。
  185. 如請求項1至175中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼絲胺酸蛋白酶抑制劑或Serpin家族成員。
  186. 如請求項185之多核苷酸，其中該ORF編碼Serpin家族A成員1。
  187. 如請求項1至175中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼羥基酶；胺甲醯基轉移酶；葡萄糖基神經醯胺酶；半乳糖苷酶；去氫酶；受體；或神經傳遞質受體。
  188. 如請求項1至175中任一項之多核苷酸，其中該ORF編碼苯丙胺酸羥基酶；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶；富馬醯乙醯乙酸水解酶；葡萄糖基神經醯胺酶β；α半乳糖苷酶；轉甲狀腺素；甘油醛-3-磷酸去氫酶；γ-胺基丁酸(GABA)受體亞單元(例如GABA A型受體δ亞單元)。
  189. 如請求項1至188中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括與SEQ ID NO: 177-181或190-192中之任一者具有至少90%一致性之5’ UTR。
  190. 如請求項1至189中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括與SEQ ID NO: 182-186或202-204中之任一者具有至少90%一致性之3’ UTR。
  191. 如請求項189或190之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括來自相同來源之5’ UTR及3’ UTR。
  192. 如請求項1至191中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸進一步包括選自帽0、帽1及帽2之5’帽。
  193. 如請求項1至192中任一項之多核苷酸，其中該開放閱讀框具有增加該多核苷酸在哺乳動物中之轉譯之密碼子。
  194. 如請求項1至193中任一項之多核苷酸，其中該所編碼多肽包括核定位信號(NLS)。
  195. 如請求項194之多核苷酸，其中該NLS連接至該多肽之C-末端。
  196. 如請求項194之多核苷酸，其中該NLS連接至該多肽之N-末端。
  197. 如請求項194至196中任一項之多核苷酸，其中該NLS包括與SEQ ID NO: 163-176中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之序列。
  198. 如請求項194至196中任一項之多核苷酸，其中該NLS包括SEQ ID NO: 163-176中之任一者之序列。
  199. 如請求項1至198中任一項之多核苷酸，其中該多肽編碼RNA引導之DNA結合劑且該RNA引導之DNA結合劑進一步包括異源性功能結構域。
  200. 如請求項199之多核苷酸，其中該異源性功能結構域係FokI核酸酶。
  201. 如請求項199之多核苷酸，其中該異源性功能結構域係轉錄調控結構域。
  202. 如請求項1至201中任一項之多核苷酸，其中至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%之該尿苷經經修飾尿苷取代。
  203. 如請求項202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷、假尿苷、5-甲氧基尿苷或5-碘尿苷中之一或多者。
  204. 如請求項202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷或5-甲氧基尿苷中之一或兩者。
  205. 如請求項202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷。
  206. 如請求項202之多核苷酸，其中該經修飾尿苷係5-甲氧基尿苷。
  207. 如請求項202至206中任一項之多核苷酸，其中15%至45%、45%至55%、55%至65%、65%至75%、75%至85%、85%至95%或90%至100%之該尿苷經該經修飾尿苷取代，視情況其中該經修飾尿苷係N1-甲基-假尿苷。
  208. 如請求項202至207中任一項之多核苷酸，其中至少20%或至少30%之該尿苷經該經修飾尿苷取代。
  209. 如請求項208之多核苷酸，其中至少80%或至少90%之該尿苷經該經修飾尿苷取代。
  210. 如請求項208之多核苷酸，其中100%之尿苷經該經修飾尿苷取代。
  211. 如請求項1至210中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸係mRNA。
  212. 如請求項1至211中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸係包括可操作地連接至該ORF之啟動子之表現構築體。
  213. 一種質體，其包括請求項212之表現構築體。
  214. 一種宿主細胞，其包括請求項212之表現構築體或如請求項213之質體。
  215. 一種製備mRNA之方法，其包括使請求項212之表現構築體或如請求項213之質體與RNA聚合酶在允許轉錄該mRNA之條件下接觸。
  216. 如請求項215之方法，其中該接觸步驟係在活體外實施。
  217. 一種表現多肽之方法，其包括使細胞與如請求項1至212中任一項之多核苷酸接觸。
  218. 如請求項217之方法，其中該細胞於哺乳動物個體中，視情況其中該個體係人類。
  219. 如請求項217之方法，其中該細胞係經培養細胞及/或該接觸係在活體外實施。
  220. 如請求項217至219中任一項之方法，其中該細胞係人類細胞。
  221. 一種組合物，其包括如請求項1至212中任一項之多核苷酸及至少一種嚮導RNA，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
  222. 一種脂質奈米顆粒，其包括如請求項1至212中任一項之多核苷酸。
  223. 一種醫藥組合物，其包括如請求項1至212中任一項之多核苷酸及醫藥上可接受之載劑。
  224. 如請求項222之脂質奈米顆粒或如請求項223之醫藥組合物，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑且該脂質奈米顆粒或醫藥組合物進一步包括至少一種嚮導RNA。
  225. 一種基因體編輯或修飾靶基因之方法，其包括使細胞與如請求項1至212或222至224中任一項之多核苷酸、表現構築體、組合物或脂質奈米顆粒接觸，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
  226. 一種如請求項1至212或222至224中任一項之多核苷酸、表現構築體、組合物或脂質奈米顆粒之用途，其用於基因體編輯或修飾靶基因，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
  227. 一種如請求項1至212或222至224中任一項之多核苷酸、表現構築體、組合物或脂質奈米顆粒之用途，其用以製造用於基因體編輯或修飾靶基因之藥劑，其中該多核苷酸編碼RNA引導之DNA結合劑。
  228. 如請求項225至227中任一項之方法或用途，其中該基因體編輯或該靶基因之修飾發生於肝臟細胞中。
  229. 如請求項228之方法或用途，其中該肝臟細胞係肝細胞。
  230. 如請求項225至227中任一項之方法或用途，其中該基因體編輯或該靶基因之修飾係在活體內進行。
  231. 如請求項225至227中任一項之方法或用途，其中該基因體編輯或該靶基因之修飾係在經分離或經培養細胞中進行。
  232. 一種生成編碼多肽之開放閱讀框(ORF)序列之方法，該方法包括： a)     提供所關注多肽序列； b)     向該多肽序列之每一胺基酸位置指派密碼子，其中若該胺基酸位置係表1中所展示二肽之成員，則使用該二肽之密碼子對，但若該胺基酸位置係表1中所展示一種以上二肽之成員且彼等二肽之該等密碼子對向該位置提供不同密碼子或該胺基酸位置並非表1中所展示二肽之成員，則實施下列各項中之一或多者： i.  若編碼天然多肽，則選擇來自編碼該多肽之野生型序列之密碼子； ii. 若該胺基酸係表1中所展示一種以上二肽之成員且彼等二肽之該等密碼子對向該位置提供不同密碼子，則消除表4中所出現及/或將導致存在表2中所展示密碼子對之密碼子，及/或選擇表3中所出現之密碼子； iii. 使用表5、6或7之密碼子組向該胺基酸位置提供密碼子，視情況其中若實施步驟(i)及/或(ii)，則在未提供該胺基酸位置之獨特密碼子之情形中實施步驟(iii)；及/或 iv. 選擇(1)最小化尿苷含量、(2)最小化重複含量及/或(3)最大化GC含量之密碼子。
  233. 如請求項232之方法，其中對於至少一個胺基酸而言，表1不提供既定胺基酸位置之獨特密碼子，視情況其中(1)在重疊二肽中存在衝突密碼子；(2)存在多個對應於既定二肽之可能密碼子；或(3)不存在對應於既定二肽之密碼子。
  234. 如請求項232或233之方法，其中步驟(b)(ii)包括實施下列各項中之一或多者： a.選擇表3中所出現之密碼子；及/或 b.消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子及/或表4中所出現之密碼子， 其中上述步驟中之一或多者係以任一順序來實施且在提供該胺基酸之單一密碼子時終止該等步驟。
  235. 如請求項232至234中任一項之方法，其中步驟(b)(ii)包括選擇表3中所出現之密碼子，視情況其中若實施請求項234之一或多個步驟，則相對於選擇表3中所出現之密碼子以任一順序來實施請求項234之該一或多個步驟。
  236. 如請求項232至235中任一項之方法，其中步驟(b)(ii)進一步包括： a. 消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子；及 b.     若一個以上可能密碼子在步驟(a)之後得以保留，則消除表3中未出現之密碼子及/或消除表4中所出現之密碼子。
  237. 如請求項232至236中任一項之方法，其中步驟(b)(ii)進一步包括： a. 消除表3中未出現之密碼子及/或消除表4中所出現之密碼子；及 b.     若一個以上可能密碼子在步驟(a)之後得以保留，則消除將導致存在表2中之密碼子對之密碼子。
  238. 如請求項232至237中任一項之方法，其中步驟(b)包括實施下列各項中之一或多者： a. 選擇最小化尿苷含量之密碼子； b.     選擇最小化重複含量之密碼子； c. 選擇最大化GC含量之密碼子， 其中上述步驟中之一或多者係以任一順序來實施，視情況其中在提供該胺基酸之單一密碼子時終止該等步驟。
  239. 如請求項238之方法，其中步驟(b)包括實施下列各項中之至少一者且繼續實施下列步驟，視情況其中實施下列步驟(i)至(iii)中之每一者： i.   選擇最小化尿苷含量之該密碼子； ii.  若一個以上可能密碼子在步驟(a)之後得以保留，則選擇最小化重複含量之該密碼子； iii. 若一個以上可能密碼子在步驟(b)之後得以保留，則選擇最大化GC含量之該密碼子。
  240. 如請求項232至239中任一項之方法，其中對於至少一個可由一個以上密碼子編碼之位置，沒有密碼子在實施步驟(b)(ii)之後得以保留，且針對編碼該位置之胺基酸之複數個密碼子實施下列步驟： i.   選擇最小化尿苷含量之該密碼子； ii.  若一個以上可能密碼子在步驟(i)之後得以保留，則選擇最小化重複含量之該密碼子； iii. 若一個以上可能密碼子在步驟(ii)之後得以保留，則選擇最大化GC含量之該密碼子。
  241. 如請求項232至240中任一項之方法，其中對於至少一個可由一個以上密碼子編碼之位置，複數個密碼子在實施步驟(b)(ii)之後得以保留，且針對該複數個密碼子實施下列步驟： i.   選擇最小化尿苷含量之該密碼子； ii.  若一個以上可能密碼子在步驟(i)之後得以保留，則選擇最小化重複含量之該密碼子； iii. 若一個以上可能密碼子在步驟(ii)之後得以保留，則選擇最大化GC含量之該密碼子。
  242. 如請求項240或241之方法，其中該方法包括選擇在至少一個位置中最大化GC含量之該密碼子。
  243. 如請求項232至243中任一項之方法，其進一步包括選擇表5、6或7中所展示之一對一密碼子組，且向至少一個位置指派來自該組之密碼子。
  244. 如請求項232至243中任一項之方法，其進一步包括： a. 生成擬由至少一個位置編碼之胺基酸之所有可用密碼子之組； b.     應用請求項233至243中所列舉之該等步驟中之一或多者。
  245. 如請求項232至244中任一項之方法，其中至少該方法之步驟(b)係電腦實施。
  246. 如請求項232至245中任一項之方法，其進一步包括合成包括該ORF之多核苷酸，視情況其中該多核苷酸係mRNA。
  247. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑具有雙鏈內核酸酶活性。
  248. 如請求項247之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas裂解酶。
  249. 如請求項247或248之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑具有切割酶活性。
  250. 如請求項249之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑包括Cas切割酶。
  251. 如請求項247至250中任一項之方法，其中該RNA引導之DNA結合劑包括dCas DNA結合結構域。
  252. 如請求項247至251中任一項之方法，其中該Cas裂解酶、Cas切割酶或dCas DNA結合結構域係Cas9裂解酶、Cas9切割酶或dCas9 DNA結合結構域。
  253. 如請求項247至252中任一項之方法，其中該ORF編碼釀膿鏈球菌Cas9。
  254. 如請求項232至253中任一項之方法，其中該ORF編碼內核酸酶。
  255. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼絲胺酸蛋白酶抑制劑或Serpin家族成員。
  256. 如請求項255之方法，其中該ORF編碼Serpin家族A成員1。
  257. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼羥基酶；胺甲醯基轉移酶；葡萄糖基神經醯胺酶；半乳糖苷酶；去氫酶；受體；或神經傳遞質受體。
  258. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼苯丙胺酸羥基酶；鳥胺酸胺甲醯基轉移酶；富馬醯乙醯乙酸水解酶；葡萄糖基神經醯胺酶β；α半乳糖苷酶；轉甲狀腺素；甘油醛-3-磷酸去氫酶；γ-胺基丁酸(GABA)受體亞單元(例如GABA A型受體δ亞單元)。
  259. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少90%一致性之多肽。
  260. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少95%一致性之多肽。
  261. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少97%一致性之多肽。
  262. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少98%一致性之多肽。
  263. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少99%一致性之多肽。
  264. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有至少99.5%一致性之多肽。
  265. 如請求項232至246中任一項之方法，其中該ORF編碼與SEQ ID NO: 1、74、88、94、100、106、112、118、124、130、161或162中之任一者之胺基酸序列具有100%一致性之多肽。
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