TW201929850A - 醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途 - Google Patents

Abstract

本發明係有關於一種醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)。

Description

醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途

本發明係關於一種醫藥組成物於製備預防或治療不正常蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，特定而言，本發明係關於一種醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)。

阿茲海默氏症( Alzheimer’s disease；AD )是老年人中最常見因神經退化導致之失智症，由於漸進性的認知功能下降和記憶力減退，在疾病治療與病人日常生活之照顧上，需花費高額的社會成本。

目前藥物治療方面，雖無法完全治癒阿茲海默氏症，但是在改善認知方面已有藥物可以使用。目前美國FDA核准的藥物有兩類，一類是膽鹼酶抑制劑 ( cholinesterase inhibitors，包括rivastigmine、donepezil與galantamine)，另一類是N-methyl-D-aspartate ( NMDA )接受體拮抗劑(代表藥物是memantine )。除了改善認知功能的藥物之外，對於AD衍生出的其他疾病，如憂鬱與失眠，也是需要依病情選擇適合的藥物治療。

有鑒於全球罹患阿茲海默氏症之人口逐漸上升，若能找出一種能夠應用於製造不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病藥物之醫藥組成物，俾能協助治療如阿茲海默氏症之神經退化性疾病，進而有效延緩疾病惡化及使病患獲得較佳的生活品質。

本發明之主要目的係在提供一種醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)。

本發明之另一目的係在提供一種醫藥組成物於抑制不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)。

如上述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之種類並無限制，較佳為與不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集有關之神經損傷之疾病，更佳為阿茲海默氏症。

上述醫藥組成物中，青蒿素(Artemisinin)濃度並無特別限制，可依實際使用狀況(如疾病嚴重程度或併用藥物等)而加以調整；於本發明較佳實施例中，青蒿素(Artemisinin)濃度相對於該醫藥組成物之含量較佳於0.1μM至10μM之範圍內。

於本發明較佳實施例，其中，該醫藥組成物係透過脂肪酸結合蛋白3 (fatty acid binding protein 3，FABP3)以達到預防或治療乙型-澱粉樣蛋白聚集之用途。

於本發明較佳實施例，其中，該醫藥組成物係透過脂肪酸結合蛋白3 (fatty acid binding protein 3，FABP3)以達到抑制乙型-澱粉樣蛋白聚集之用途。

本發明之再另一目的係在提供一種醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)，其中，該青蒿素係與脂肪酸結合蛋白3 (fatty acid binding protein 3，FABP3)結合。

如上述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之種類並無限制，較佳為與不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集有關之神經損傷之疾病，更佳為阿茲海默氏症。

上述醫藥組成物中，青蒿素(Artemisinin)濃度並無特別限制，可依實際使用狀況(如疾病嚴重程度或併用藥物等)而加以調整；於本發明之實施例中，青蒿素(Artemisinin)濃度相對於該醫藥組成物之含量較佳於0.1μM至10μM之範圍內。

如上述之用途，其中，該醫藥組成物更包括：至少一種醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑。

於本發明較佳實施例，其中，該醫藥組成物係透過該青蒿素與該脂肪酸結合蛋白3 (fatty acid binding protein 3，FABP3)結合以達到預防或治療乙型-澱粉樣蛋白聚集之用途。

本發明之醫藥組成物可更包括：至少一種醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑，例如將化合物包埋在脂質體(liposome)中以利於運送、吸收；以水懸浮液、分散液或溶液稀釋以利注射；或製成膠囊、錠片形式以方便存放及攜帶。因此，青蒿素(Artemisinin)之有效濃度可能會根據投藥路徑、使用賦形劑、以及與其它藥劑共同使用的可能性而變化，本領域具有通常知識者可調整能夠對於目標物產生預期療效所需的劑量。

詳述之，本發明之青蒿素(Artemisinin)可調配成固體或液體形式。固體製劑形式可包括，但不限於：粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑以及栓劑。固體調配物可包括，但不限於：賦形劑、調味劑、黏合劑、防腐劑、崩解劑、助流劑以及填料。液體製劑形式可包括，但不限於：水、溶液(如：丙二醇溶液)、懸浮液、以及乳劑，且該液體製劑形式可與適合的著色劑、調味劑、穩定劑以及增稠劑混合而製備。

舉例而言，粉末製劑的製備係將本發明之青蒿素(Artemisinin)與適合之藥學上可接受的賦形劑(如：蔗糖、澱粉以及微晶纖維素)簡單地混合。顆粒製劑的製備則是選取本發明之青蒿素(Artemisinin)、適合之藥學上可接受的賦形劑、適合之藥學上可接受的黏結劑(如：聚乙烯基吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)、以及羥丙基纖維素)，然後透過利用溶劑(如：水、酒精及異丙醇)之濕式製粒方法製造；或是透過利用壓縮力的乾式製粒方法製造。此外，片劑製劑的製備可將顆粒製劑與適合的藥學上可接受之助流劑(如：硬脂酸鎂)混合，接著使用壓片機將其壓成片劑製劑。據此，可根據需求而選用藥物形式。

為實行本發明所述之用途，取決於待治療的疾病以及該疾病的嚴重程度，上述醫藥組成物可經由口服、非口服、噴霧吸入、局部、經直腸、經鼻、舌下、陰道、或經由植入型藥盒(implanted reservoir)等方式投予。於此使用之「非口服」(parenteral)係指皮下注射、皮內注射、靜脈內注射、肌肉內注射、關節腔內注射、動脈內注射、關節液內注射、胸腔內注射、脊髓內注射、疾病部位內注射、及顱內注射或注入技術。

本說明書用語「治療」，係包含以治療之方式緩和、減輕、或改善至少一項疾病症狀或生理狀況、抑制疾病或生理狀況、阻止或減緩疾病發展、造成疾病或生理狀況之復原、減緩因疾病造成的生理狀況、停止疾病症狀或生理狀況。

[試驗例1] 利用西方墨點法進行三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠腦部中的Aβ和FABP3的分析

動物材料

在本實施例中，使用攜有人類PS1_M146V 、人類APP_Swe 、以及人類tau_P301L 基因的三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠進行實驗，該小鼠係來自於Jackson Laboratory (004807)。在本實施例中，將小鼠分為三組，每組n=3，分別在第4、6、24個月時犧牲小鼠，其係使用胺甲酸乙酯(urethane，1.5 mg/kg)麻醉小鼠，並用生理鹽水灌流心臟。之後，將左半球腦組織收集在加有cOmplete™蛋白酶抑制劑混合物(Sigma-Aldrich)的低溫RIPA緩衝液中，在冰上利用22G和26G(32mm和13mm)的針(TERUMO Needle，NEOLUS)使其均質化，然後儲存在-80℃下。

西方墨點法

本實施例使用BCA蛋白質測定試劑盒(Thermo scientific)檢測蛋白質濃度，並在12.5% SDS-PAGE上分離等量的蛋白質樣品(40 μg)。在電泳和半乾式轉漬後，用含有5% 脫脂奶粉溶液的TBST在室溫下進行阻攔(blocking)一小時或在4℃條件下進行阻攔過夜，然後用TBST洗滌三次，每次5分鐘。隨後， 將膜與抗-Aβ (6E10)、FABP3、或GAPDH一抗放置在稀釋緩衝液中，在4℃條件下放置過夜，其中， GAPDH的含量為定量控制的參考。接著，在TBST緩衝液中洗滌5分鐘三次後，將膜用HRP綴合的二抗在室溫下處理1小時。透過使用ECL檢測試劑(Millipore)使蛋白質顯影，並用ImageQuest TM LAS-4000(Fujifilm Co.，Tokyo，Japan)進行檢測。使用ImageJ(National Institute of Health，USA)進行蛋白質表現的量化。

圖1係使用西方墨點法，以分析Aβ和FABP3在不同年齡之三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠腦部中含量。如圖1所示，相較於4個月大的小鼠，24個月大的小鼠之 FABP3表現增加了163％，其與小鼠4個月至24個月間Aβ寡聚體的形成有關，這表示FABP3在阿茲海默氏症的發病機制中起作用。

[試驗例2] 利用西方墨點法分析FABP3與Aβ₄₂ 寡聚化之關係以及青蒿素抑制Aβ₄₂ 寡聚化之功效

Aβ₄₂ 寡聚物的製備

將合成的Aβ₄₂ 胜肽(AnaSpec)溶解在六氟異丙醇(hexafluoroisopropanol，HFIP)中，然後在氮氣氣流下使HFIP完全蒸發。使用磷酸鹽緩衝液(PBS)將Aβ₄₂ 胜肽再懸浮使其濃度達到65mM，並且在使用前24小時放置於室溫培養以組成寡聚物。通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)檢驗Aβ的寡聚狀態。

圖2A係使用西方墨點法以分析FABP3與Aβ₄₂ 寡聚物形成的關係，以及青蒿素(Sigma-Aldrich)抑制Aβ₄₂ 寡聚化形成的功效。如圖2A所示，中線左邊之實驗組係將Aβ₄₂ 寡聚體(2.5 μΜ)在加入或不加入青蒿素(4 μM)的狀況下於室溫放置培養24小時；中線右邊係為將人類重組FABP3(Cayman Chemical)(2.5 μΜ)在加入或不加入青蒿素(4 μM)的狀況下於室溫預先放置培養4小時，然後加入Aβ₄₂ 寡聚體(2.5 μM)放置培養24小時。之後分別透過西方墨點法分析並且使用6E10抗體檢測Aβ₄₂ 寡聚體的形成。

圖2B係使用ImageJ(National Institute of Health，USA)，將圖2A所得之實驗結果進行蛋白質表現的量化。如圖2B所示，使用6E10抗體所檢測到的Aβ₄₂ 三聚體和四聚體含量在有FABP3的狀況下，分別顯著增加了129%和96% (p ＜ 0.05)。此外，如圖2B所示，Aβ₄₂ 三聚體和四聚體含量在預先加入青蒿素(4 μM)與FABP3(2.5 μM)放置培養4小時的狀況下，分別顯著減少了144%和156%(p ＜ 0.05)。

在本實施例中，研究了從中藥青蒿中分離出的青蒿素是否可藉由針對FABP3，成為一種抗AD藥物，而實驗結果證明FABP3會增加Aβ₄₂ 的寡聚化，並且青蒿素可以降低或減緩FAPB3誘導的Aβ₄₂ 寡聚化，故其可用於製備一種抗AD之藥物。

[試驗例3] 建立穩定轉染人類FABP3-SH-SY5Y細胞模型以及細胞存活率分析

細胞材料

人類神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞株係來自美國菌種中心(ATCC^® CRL-2266^™ )，並且將其培養於含有FBS(10%)、盤尼西林(100 U/mL)、和鏈黴素 (100 μg/mL) 的具有營養混合物F-12的DMEM (DMEM/F12；Invitrogen)中，放置於設定為37℃、5% CO₂ 的培養箱中培養。

FABP3 cDNA的建構以及穩定轉染的細胞株的建立

藉由使用引子(5’-CACCATGGTGGACGCTTTCCTG和5’-TGCCTCTTTCTCATAAGTG)的聚合酶連鎖反應(PCR)，放大從SH-SY5Y細胞株的總核醣核酸(total RNA)逆轉錄而得的人類FABP3 cDNA，然後將其轉殖到pcDNA^™ 3.1D/V5-His-TOPO載體(Invitrogen)。使用lipofectamine轉染，並且透過培養在含有500 μg/ mL的G418(Sigma-Aldrich)的DMEM/F12培養基(Gibco)中，進行篩選以獲得穩定表現人類FABP3的SH-SY5Y細胞。

圖3A係細胞毒性測定，如圖3A所示，其實驗組係將2×10⁴ 個轉染空白載體的SH-SY5Y細胞(即pcDNA3組)以及2×10⁴ 個轉染人類FABP3的SH-SY5Y細胞(即pcDNA3/FABP3組)分別接種在96孔盤中，並且用青蒿素(0-4μM) (Sigma-Aldrich)預先處理4小時，然後用Aβ₄₂ (2.5 μM) 處理24小時，並且在加入MTT溶液(5 mg/ml，Sigma-Aldrich)之前使用PBS洗滌，接著，用含有10%的SDS以及0.01N的HCl的溶液(100 μl)，溶解由活細胞粒線體還原MTT形成的紫色甲臢(formazan)結晶。再利用ELISA測讀機(μQuant；BioTek Instruments, Inc)測量在570 nm的吸光值。而控制組並沒有加入Aβ₄₂ 和青蒿素。

如圖3A所示，FABP3的過度表現會顯著減少細胞存活率，使其從75% (此時只受Aβ₄₂ (2.5 μM)的影響)降至65% (p ＜ 0.01)。此外，細胞存活率分析顯示，預先用青蒿素(4 μM)處理可顯著增加細胞存活率，使存活率從65%提升至85% (p ＜ 0.01)，如圖3A所示。

本實施例建立了穩定轉染人類FABP3-SH-SY5Y細胞模型，並且對於青蒿素是否能抑制由FABP3所引起的Aβ₄₂ 細胞毒性進行了測試。其實驗結果證實青蒿素可有效減少FABP3所引起的Aβ₄₂ 細胞毒性。

[試驗例4] 利用西方墨點法分析穩定轉染的人類FABP3-SH-SY5Y細胞與正常人類FABP3-SH-SY5Y細胞中FABP3與Aβ₄₂ 寡聚化之關係以及青蒿素抑制Aβ₄₂ 寡聚化之功效

細胞材料

人類神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞株係來自美國菌種中心(ATCC^® CRL-2266^™ )，並且將其培養於含有FBS(10%)、盤尼西林(100 U/mL)、和鏈黴素 (100 μg/mL) 的具有營養混合物F-12的DMEM (DMEM/F12；Invitrogen)中，放置於設定為37℃、5% CO₂ 的培養箱中培養。

FABP3 cDNA的建構以及穩定轉染的細胞株的建立

藉由使用引子(5’-CACCATGGTGGACGCTTTCCTG和5’-TGCCTCTTTCTCATAAGTG)的聚合酶連鎖反應(PCR)，放大從SH-SY5Y細胞株的總核醣核酸(total RNA)逆轉錄而得的人類FABP3 cDNA，然後將其轉殖到pcDNA^™ 3.1D/V5-His-TOPO載體(Invitrogen)。使用lipofectamine轉染，並且透過培養在含有500 μg/ mL的G418(Sigma-Aldrich)的DMEM/F12培養基(Gibco)中，進行篩選以獲得穩定表現人類FABP3的SH-SY5Y細胞。

圖3B係使用西方墨點法分析青蒿素(4 μM)是否可抑制由FABP3引起的Aβ₄₂ 寡聚體形成。將10⁶ 個轉染空白載體的SH-SY5Y細胞(即pcDNA3組)以及10⁶ 個轉染人類FABP3-SH-SY5Y細胞分別接種在6公分培養盤中，並且用青蒿素(0μM或4μM)預先處理4小時，然後用Aβ₄₂ (2.5 μM) 處理24小時。然後用PBS分別洗滌轉染空白載體的SH-SY5Y細胞以及穩定轉染的人類FABP3-SH-SY5Y細胞，並用具有cOmplete^™ 蛋白酶抑製劑混合物(Sigma-Aldrich)的RIPA緩衝液裂解細胞。透過SDS–PAGE分離等量的總蛋白(50 μg)，然後電性轉印至聚偏氟乙烯(polyvinylidene difluoride，PVDF)膜(Millipore)。之後，用含有10%脫脂奶粉溶液的TBST緩衝液(20 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、和0.1% Tween 20)在室溫下進行阻攔(blocking)1小時；然後將PVDF膜與6E10抗體(BioLegend)、FABP3抗體 (Santa Cruz)、或GAPDH抗體(Santa Cruz)一起培養。在與一抗結合後，加入適合的與辣根過氧化酵素(horseradish peroxidase)綴合的二抗，在室溫下放置培養一小時。使用增強的化學發光系統(ECL；Millipore)使訊號顯影。FABP3和GAPDH的含量為定量控制的參考。

如圖3B所示，在穩定轉染的人類FABP3-SH-SY5Y細胞中，Aβ₄₂ 三聚體和四聚體的含量分別顯著增加200%和304%；值得注意的是，青蒿素(4 μM)有效降低了由於FABP3過表現所引起的Aβ₄₂ 三聚體和四聚體，其分別減少了78%和87%。

由試驗例3及試驗例4之實驗結果可知，青蒿素能有效減弱由FABP3引起的Aβ₄₂ 細胞毒性以及減少Aβ₄₂ 三聚體和四聚體。

[試驗例5] 分子嵌合分析FABP3與青蒿素之間的相互作用

配體嵌合實驗

從PDB資料庫分別下載FABP3與6-氯-2-甲基-4-苯基-喹啉-3-羧酸(5M8，來自PDBID：5HZ9)、油酸(OLA，來自PDBID：5CE4)、和8-苯胺基萘-1-磺酸(2AN，來自PDBID：3WBG)的複合物的配位。將配體與水分子從嵌合中移除。將FABP3配位分別上傳到SwissDock的網絡伺服器，並且上傳從ZINC資料庫獲得的青蒿素的配體配位，其編號為8143788。在嵌合之後，從伺服器獲得包含青蒿素分子的資料，其具有不同空間方向。使用UCSF Chimera軟體對結果進行檢查，最後的嵌合結果如圖所示。為了確定嵌合實驗的可行性，還分別使用5M8、OLA和2AN的配位進行嵌合。

表面靜電電位和分子圖形的產生

如前述使用UCSF Chimera軟體得到分子圖形圖像。為了產生表面靜電電位，將FABP3的模型上傳到網頁伺服器中，以透過使用PDB2PQR工具產生PQR檔案，隨後使用APBS工具來生成DX檔案，如在Chimera Image Tutorial使用。利用所得到的靜電電位地圖為從UCSF Chimera軟體得到的分子表面上色；並且使用Chimera軟體進行分子的疊加。

圖4係人類FABP3與青蒿素之結構示意圖，其中，圖4a係與青蒿素嵌合的人類FABP3晶體結構的疊加圖，將從PDB：5CE4、PDB：5HZ9、和PDB：3WBG所得之FABP3分子結構使用UCSF Chimera軟體疊加，其分別以粉紅色、藍色和綠色表示，嵌合的青蒿素以紅色、藍色和綠色表示。圖中亦顯示了受質結合位中一些殘基的側鏈。

此外，使用SwissDock網頁伺服器預測人類FABP3和青蒿素分子間的相互作用。在每個嵌合實驗中，許多結合模式已經生成和聚集。如圖4a所示，聚集結果顯示青蒿素分子在最偏好的聚集係嵌合在FABP3的受質結合位中，其類似於其他實驗的空間方向，表示其最偏好的結合模式具有一致性。

圖4b係被截取和透明表面的FABP3(PDB：5CE4，粉紅色絲帶)結構，其展示了在受質結合位中的油酸分子(以粉紅色棍狀表示)和嵌合的青蒿素(以紅色棍狀表示)。綠色箭頭和虛線圓圈分別表示受質結合位的兩個入口。被截取的表面覆上青色的網格。 FABP3受質結合位的被截取和透明的表面係用APBS計算的靜電電位著色，並繪製在±10 kT/e(紅色：負，藍色：正)。螺旋和一些β摺疊股亦被標示。青蒿素分子偏向位於物質結合位的底部，遠離兩個入口，並且預測之吉布斯自由能(Gibbs free energy，ΔG)為-7.51至-7.63 kcal/mol，適配值(Full Fitness value)為-774.94到-895.10 kcal/mol。

圖4c係為圖4b之受質結合位以及青蒿素的放大圖。為了清楚起見，並未用網格覆蓋被截取的表面，以顯示受質結合位周圍的殘基。一些青蒿素的原子被標為紅色，而紅點代表晶體結構中的水分子。

圖4d係用LigPlot+軟體所產生的圖表，其顯示了預測的FABP3和青蒿素分子間相互作用。綠色的虛線表示FABP3和青蒿素之間的氫鍵或鹽橋。紅色虛線表示FABP3和青蒿素之間的疏水性接觸或凡得瓦交互作用。

如圖4b至4d所示，在三種嵌合模型中，發現有10個和青蒿素相互作用的FABP3殘基，包括α1上的F16和Y19、β5上的E72、迴圈β5-β6上的D76和R78、在β上的Q95、β9上的L115和L117、以及β10上的R126和Y128。此外，儘管在三種嵌合模型中都沒有發現它們與青蒿素相互作用，L23、T53、A75和L104也可能與青蒿素相互作用。在嵌合模型中，發現FABP3的殘基R126和Y128與青蒿素氧原子O1形成氫鍵。 F16、Y19、L115、L117和R126通過凡得瓦交互作用與青蒿素氧原子O1、O2和O3相互作用。T53、E72、A75、D76、R78、Q95和Y128也通過凡得瓦交互作用與青蒿素碳原子相互作用。此外，推測Y19、L23、T53、A75和L106與青蒿素建立疏水交互作用。

[試驗例6] 利用動物行為實驗檢測青蒿素改善阿茲海默氏症小鼠的記憶障礙和認知喪失之功效

動物材料

在本實施例中，三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠係來自Jackson Laboratory (004807)，野生型C57BL/6小鼠係購買自國家實驗動物中心。如圖5a所示，從第12週到第36週，每八週測量一次動物的體重，並且每隔一天腹腔注射純水或是青蒿素(1 mg/kg)，其中，WT-W組為注射純水之野生型C57BL/6小鼠；AD-W為注射純水之三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠；AD-R為注射青蒿素(1 mg/kg)之三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠。在動物滿36週後分別進行以下三種行為測試： Morris水迷宮測試、自發交替行為Y型迷宮測試、以及新事物辨識測試。

Morris水迷宮測試

為了評估青蒿素是否改善空間學習和記憶缺陷，進行了Morris水迷宮測試。在Morris水迷宮測試中，實驗前在沒有平台的情況下，將經過上述處理的36週齡的小鼠(每組n = 6)放在白色圓形泳池(直徑為100cm、高度為35cm)中進行60秒的游泳訓練，然後連續四天每天進行四次游泳訓練，每次訓練間隔15分鐘。在最後的訓練結束之後，將平台移除，對小鼠進行探索測試(probe test)，並且透過電腦控制系統記錄在象限中花費的時間。

如圖5b所示，經過青蒿素處理的三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠花費在尋找隱藏平台的時間明顯較未經由青蒿素處理的三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠少(p ＜ 0.05)。

Y型迷宮測試

為了評估青蒿素是否改善短期記憶，進行了自發交替行為Y型迷宮測試。所用之Y型迷宮具有三臂，每臂間隔120°，每臂長30公分、寬5公分、高12公分，每個臂分別標記為A、B和C。經過上述處理的36週齡的小鼠(每組n = 6)最初被放置在其中的一個臂內，之後在8分鐘內記錄每隻小鼠進入臂內的次數和交替次數(連續進入三個不同臂的次數)。在每次試驗之間，用70%的乙醇清潔Y型迷宮的每個臂，以除去氣味和殘留物。交替率= [(交替次數)/(總進臂次數-2)]×100。

如圖5c所示，Y型迷宮測試評估的空間運作記憶能力顯示三轉殖基因阿茲海默小鼠的自發交替率有顯著降低的現象(p ＜0.05)，而青蒿素的投予恢復了空間運作記憶能力，使其水準恢復到與野生型小鼠組別相似(p ＜0.05)。

新事物辨識測試

為了檢驗青蒿素是否能恢復包括前額葉、內嗅皮質和海馬迴在內的辨識記憶，進行了新事物辨識測試；新事物辨識測試係用來評估囓齒動物的天生偏好，其偏好探索新的事物而不是熟悉的東西。在剛開始的兩天，為了使經過上述處理的36週齡的小鼠(每組n = 6)熟悉該設備，每天將其放置於開闊場地(面積50×40公分，高度22公分)兩次，每次10分鐘。在第三天，每隻小鼠進行五分鐘的訓練期，將兩個相同的物體A放置在開闊場地的相對角落，距離牆壁10公分。經過五分鐘後，小鼠被移走，且用一個新的物體B在同個位置代替一個原先熟悉的物體A。在測試階段，老鼠被放回到具有兩個物體的場地中。探索物體的時間(分別為T_A 和T_B )被定義為鼻子與物體的距離為1至2公分或/及以鼻子或前爪碰觸物體。在每個階段結束後，用70%乙醇清洗該場地及物體，以除去氣味和殘留物。辨識指數依照T_B /(T_A +T_B )×100的百分比計算。高於50％的辨識指數代表辨識表現良好。

如圖5d所示，與野生型組別相比，三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠組的辨識指數顯示了顯著的損傷(p ＜0.05)。相較之下，用青蒿素處理的三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠組顯著恢復了辨識記憶，辨識指數增加了56％(p ＜0.05)。

綜上所述，這些數據顯示青蒿素能夠有效改善AD小鼠的記憶障礙和認知喪失。

於本說明書較佳實施例揭示之內容，本發明所屬領域具有通常知識者可明顯得知前述實施例僅為例示；具本發明所屬技術領域通常知識者可藉由諸多變換、替換而實施，而不與本發明之技術特徵有所差異。依據說明書實施例，本發明可有多種變換仍無礙於實施。本說明書提供之請求項界定本發明之範圍，該範圍涵蓋前述方法與結構及與其相等之發明。

無

圖1係本發明一較佳實施例使用西方墨點法分析Aβ和FABP3在不同年齡之三轉殖基因阿茲海默氏症小鼠腦部中含量。 圖2A係本發明一較佳實施例使用西方墨點法以分析FABP3與Aβ₄₂ 寡聚物間的關係，以及分析青蒿素抑制Aβ₄₂ 寡聚化形成的功效。 圖2B係利用ImageJ進行圖2A的量化。 圖3A係本發明一較佳實施例之經青蒿素處理之細胞毒性測定結果圖。 圖3B係本發明一較佳實施例使用西方墨點法分析青蒿素抑制由FABP3引起的Aβ₄₂ 寡聚體形成之結果圖。 圖4係本發明一較佳實施例之人類FABP3與青蒿素結構示意圖。 圖5係本發明一較佳實施例之經青蒿素處理後進行動物行為實驗結果圖。

無

Claims (18)

1. 一種醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病係與不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集有關之神經損傷之疾病。
3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病係為阿茲海默氏症。
4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該青蒿素之濃度係為0.1μM至10μM。
5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該醫藥組成物更包括：至少一種醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑。
6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該醫藥組成物係透過脂肪酸結合蛋白3以達到預防或治療乙型-澱粉樣蛋白聚集之用途。
7. 一種醫藥組成物於抑制不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)。
8. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病係與不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集有關之神經損傷之疾病。
9. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病係為阿茲海默氏症。
10. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中，該青蒿素之濃度係為0.1μM至10μM。
11. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中，該醫藥組成物更包括：至少一種醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑。
12. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中，該醫藥組成物係透過脂肪酸結合蛋白3以達到抑制乙型-澱粉樣蛋白聚集之用途。
13. 一種醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括青蒿素(Artemisinin)，其中，該青蒿素係與脂肪酸結合蛋白3結合。
14. 如申請專利範圍第13項所述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病係與不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集有關之神經損傷之疾病。
15. 如申請專利範圍第13項所述之用途，其中，該不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病係為阿茲海默氏症。
16. 如申請專利範圍第13項所述之用途，其中，該青蒿素之濃度係為0.1μM至10μM。
17. 如申請專利範圍第13項所述之用途，其中，該醫藥組成物更包括：至少一種醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑。
18. 如申請專利範圍第13項所述之用途，其中，該醫藥組成物係透過該青蒿素與該脂肪酸結合蛋白3結合以達到預防或治療乙型-澱粉樣蛋白聚集之用途。