SU1597404A1 - Способ определени гемолитической активности BacILLUS аNтнRасIS - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике сибирской  звы. Цель изобретени  - повышение точности способа. В лунку двухслойной питательной среды, содержащей агар и физиологический раствор (нижний слой 1-1,5 мас.% агара, верхний 0,6-0,8 мас.% с 6-8% отмытых эритроцитов барана) засевают исследуемую бульонную культуру. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 ч и вы вл ют наличие зон гемолиза эритроцитов вокруг колоний микроорганизмов. При наличии зон гемолиза культуру относ т к гемолитически активной. 3 табл.

Description

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике сибирской  звы и исследовательских цел х о:

Цель изобретени  - повьшениа точности способа.

Способ осуществл ют следующим образом ,

В стерильные чашки Петри разливают расплавленный 1-1,5%-ный агар на физрастворе по 20 мл. После застывани  наслаивают 5 мп 0,6-0,8%-ного агара, содержащего 6-8% отмытых эритроцитов барана. После застывани  верхнего сло  пробойником депают лунки, дно которых запаивают 1-2 капл ми расплавленного 1%-ного агара. Оптимальное количество лунок на одной агаровой пластине 6

В лунки внос т по о,1 мл 20-24-часовой бульонной культуры. Бульон засевают из расчета 1-5 млн„ спор на 1 мл среды. После внесени  бульонной . культуры в лунки чашки Петри помещаю в т армостат при 37°С. Учет результатов производ т через 24 и 48- ч. При помощи миллиметровой линейки измер ют- от кра  лунки ширину зоны гемолиза. Учитьшают ширину зоны полной прозрач- ности, так как она соответствует зоне лизиса эритроцитов.

Пример 1, В чашку Петри кали-. вают 20 мл 1%-ного расплавленного агара на физрастворе. После застывани  вторым слоем наливают 5 мл 0,6%-ного расплавленного агара на физрастворе, содержащего 6% отмытых эритроцитов ба- рана. После застьшани  верхнего сло  пробойником делают лунки, дно котосл

со vl

4i

31597404

рых запаивают 1-2 капл ми расплавленного 1%-ного агара, В лунки внос т по 0,1 бульонных культур различных Bacillus anthracis (посевна  доза 1 млн спор на 1 мл среды). Чашки Петри помещают в термостат при 37 Со Через 48 ч в.отрину зоны лизиса эритроцитов вокруг лунок с калодым штаммом измер ют при помощи миллимет-- Q ровой линейкио Результаты измерений зон гемолиза представлены в табл 1,,

э

Т а б лиц а 1

4

Q

5

0

агара на физрастворво После застьта- ни  втОрьм слоем наливают 5 мл 0,8%- ного расплавленного агара на физрастворе , содержащего 8% отмытых эритроцитов барана. После застьшани  верхнего сло  пробойником делают лунки, дно которых запаивают 1 -2 капл ми 1,57,- ного агара. В лунки внос т по О,1 мл 24-часовой бульонной культуры различных штаммов В. anthracis (посевна  доза 5 млн. спор на 1 мл бульона). Чашки Петри помещают в термостат при . Через 48 ч ширину зоны лизиса эритроцитов вокруг лунок с каждым штаммом измер ют при помош и линейки. Результаты измерений зон гемолиза эритроцитов представлены в табл.Зо

Таблица 3

Пример 2. В чашку Петри наливают 20 мл 1,2%-ного расплавленного агара на физрастворе После застывани  вторым слоем наливают 5 мп 0,7%- ного расплавленного агара на физраст- воре, содержащего 7% отмытых эритроцитов барана о После застывани  верхнего сло  пробойником делают лунки, дно которых запаивают 1-2 капл ми расплавленного 1,2%-ного агара В Лунки внос т по О,1 МП 24-часовой бульонной культуры различных штаммов Б.anthracis (посевна  доза 2 мпн спор на бульона)о Чашки Петри помещают . в термостат при Через 48 ч щири ну зоны гемолиза вокруг лунок с каждым штаммом измер ют при помощи ли-, нейки Результаты измерени  зон гемолиза представлены в табл 2„

Т а б л:-и--ц а 2

П р е р 3„ В чащку Петри наливают 0 мл 1,5%-ного расплавленного

о п

5

5

0

5

Claims (1)

1. Предлагаемый способ позвол ет определ ть гемолитическую активность В. anthracis, тогда как по известному способу из-за плотности агара при относительно невысокой продукции гемолитических веществ агаровыми культурами В.anthracis гемолитическа  активность практически не вы вл етс . Формула изобретени 

   Способ определени  гемолитической активности Bacillus anthracis путем посева исследуемой культуры на плотную питательную среду с последующим инкубированием посевов в присутствии эритроцитов барана и учетом результатов по наличию зон гемолиза эритроцитов , отличающийс  тем, что, с целью повьшени  точности .способа , в качестве плотной питательной среды использзпот двуслойньй агар, приготовленный на физиологическом растворе, при концентрации агара в нижнем слое 1,0-1,5 мас.%, а в верх- нем слое 0,6-0,8 масо%, при этом эритроциты барана внос т в верхний слой в концентрации 6-8% от объем а ;среды, затем в агаре формируют лунки, в которые осуществл ют посев исследуемой культурыо