SU1436875A3 - Способ получени производных силибинина - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к гетероциклическим соединени м, в частности к способу получени  производных сили- бинина формулы О ,СНг-0-СО-А 1-СООМ ОСНз о 0-СО-А1Н-СООМ где Alk - алкиленовый остаток с 1-4 атомами С. и М- Н или атом щелочного металла, которые используютс  в медицине . Получение целевого соединени  ведут взаимодействием 1 мае.ч. сили- бинина в 1-2 мае.ч. пиридина с 1- 3 мае.ч. соответствующего ангидрида дикарбоновой кислоты {перемешивание) при 40-50 С последующим добавлением этанола до образовани  гомогенно( смеси. Затем при интенсивном перемешивании постепенно добавл ют воду, ,. при этом имеющиес  сложные эфиры гид- ролизуютс  до ароматически св занных ОН-групп и после окончани  гидролиза реакционную массу разбавл ют этил- ацетатом, промьгоают подкисленной до рН 1,5-2,4 водой, насьпценной этил- ацетатом. Полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатьшают этанолом , выдел ют соединени  формулы

Description

о

Изобретение относитс  к способу получени  новьпс производных силибини- на, которые обладают фармакологической активностью и эффективны при ле- чении цирроза печени и токсическшс и метаболических поражений печени, а также оказьгоают фармакологическое действие при лечении ожоговых ранений и при отравлении грибами.

Цель изобретени  - получение но-и вых соединений с ценными биологическими активными свойствами.

Силибин, ранее известный как Silymarin 1, вл ющийс  ценным лекар- ственным препарх том дл  лечени  заболевани  печени, состоит из двух изомеров: силибинина и изосилибина.

При терапевтическом применении си- либина возншсают трудности, св зан- ные с тем, что он практически не раствор етс  в воде, и поэтому на основе его нельз  приготовить силибинсо- держащие растворы дл  инъекций или препараты, дл  которых необходимым условием  вл етс  определенна  растворимость в воде.

Описаны,производные сиЛибина, обладающие некоторой растворимостью в воде. Однако в этом случае имеет нес- то очень сложна  смесь полуэфиров  нтарной кислоты. Эта смесь  вл етс  потому такой сложной, что у силибина имеетс  п ть гидроксильных групп, которые могут этерифицироватьс . Кроме то го, силибин  вл етс  смесью двух -указанных изомеров положени , а используема  дл  этерификации  нтарна  кислота  вл етс  дикарбоновой кислотой, котора  может образовьшать как моно- так и диэфиры. Дл  фармацевтических ; целей продуЕст, состо щий из большого числа самых различных неидентифицированных соединений,  вл етс  непригодным .

Данный способ позвол ет получить подход щие дл  фармацевтических целей водорастворимые производные силибинина , которые можно было бы точно идентифицировать как индивидуаль- ные химические соединени . .

СилибининЬвые производные определенных алкановых и алкиленовых дикар боновых кислот удовлетвор ют этим . требовани м.

Д р и м е р 1. Получение силибинина , не содержащего изосилибинин. Суспензию 500 г с содержанием силимарина около 70% при соотношении изомеров силибин:силидианин:сили- кристин 3:1:1, причем силибин содержит около 1/3 изосилибинина в 2 кг метанола, что соответствует 2,53 л, нагревают при перемешивании в течение 15 мин до кипени , Из полученного таким образом раствора спуст  это врем  уже может выпадать в осадок некоторое количество силибининао После этого отгон ют в вакууме 0,75- 1,25 кг (0,96-1,58 л) метанола и остаток оставл ют сто ть при комнатной температуре в течение 10-28 дней Вьшадающий в осадок силибинин от- фильтровьшают и двалоды промьшают холодным метанолом порци ми по 50 мл. После высушивани  при 40°С в ваку- уме полученный сырой силибинин подвергают дальнейшей очистке следующим образом.

60 г сырого силибинина раствор ют при нагревании в 3 л технического уксусноэтилового эфира, после чего смешивают раствор с 20 г активированного угл  и кип т т смесь при перемешивании в течение 2 ч с. обратным холодильником. Затем ее фильтруют до Ъолучени  прозрачного раствора, который упаривают при 50 С и пониженном давлении до примерно 250 мл. Концентрат перемешивают в течение 15 мин с помошью прибора ультратурракса и при перемешивании добавл ют к нему 25 мл метанола, после чего смесь оставл ют сто ть на ночь при комнатной температуре . Перед отфильтрованием на нут- че выпадающего при этом осадка силибинина смесь еще раз перемешивают в течение 5 мин с помощью ультратурракса . Полученный на нутче осадок дваж- лы промывают уксусноэтиловым эфиром порци ми по 50 мл.и высушивают в течение ночи в вакуумном сушильном шкафу при 40 G. Затем полученный продукт измельчают и продолжают сушить в вьш1еуказанных услови х в течение еще 48 ч.

П р и м е р 2. Получение силиби- нин-С-2 ,3-дигидросукцината.

50 г силибинина раствор ют при 45 С в 70 мл пиридина, добавл ют к раствору 50 г ангидрида  нтарной кислоты , перемешивают смесь в течение примерно 8 ч при , добавл ют к ней 30 мл этанола и продолжают перемешивание до образовани  гомогенной смеси. Затем при интенсивном перемешивании добавл ют к ней дл  омылени 

314368754

фениловьгх эфиров в течение примерно относитс  к карбонильной функциональ- 30 мин 60 мл воды. После перемеши- ной группе пиронового кольца при дли- вани  в течение примерно часа при фениловые эфиры количественно гидролизуютс . Полноту гидролиза контролируют с помощью высокопроизводи-: тельной жидкостной хроматографии. Гидролиз прекращают, быстро добавл   к смеси 1,7 л уксусноэтилового эфира.

Дл  отделени  избытка  нтарной кислоты и пиридина разбавленный ук- сусноэтиловым эф ром реакционный раствор дважды шэдвергают экстракции водой порци ми по 5 л, насыщенной ук- сусноэтиловым эфиром и имеющей рН 1,85 (подкисление до этого рН осуществл етс  с помощью разбавленного водного раствора сол ной кислоты). Экстракци  осуществл етс  противотоком . При этом насьщ(еннун) уксусноэти- ловьм эфиром подкисленную промывную воду подают с помощью насоса в цирне волны 1635 . Втора  лини  име- g ет дли ну волны 1730 см и OVHOCHT- с  к обоим эфирным карбонильным функ- циональньм группам.

Н-ЯМР-спектр подтверждает, что в ходе реакции произошла двукратна  эте10 рификаци . Так, полу енное путем интегрировани  соотнощение ароматических протонов и протонов метилена остатка  нтарной кислоты (м.д. в районе 5,9-7,1) равна 8:8. Отношение

15 этих протонов метиленовой группы

(м.д, 2,6) к протонам метила меток- си- группы (м.д. 3,8) равно 8:3, та-- КИМ образом, -согласуетс  с вышеприведенным значением.

20 Химические сдвиги, обнаруженные в процессе С-исследований также свидетельствуют об этерификации обеих спиртовых ОН-групп, так как химические сдвиги сильнее всего измен ютс  у

относитс  к карбонильной функциональ- ной группе пиронового кольца при дли-

не волны 1635 . Втора  лини  име- ет дли ну волны 1730 см и OVHOCHT- с  к обоим эфирным карбонильным функ- циональньм группам.

Н-ЯМР-спектр подтверждает, что в ходе реакции произошла двукратна  этерификаци . Так, полу енное путем интегрировани  соотнощение ароматических протонов и протонов метилена остатка  нтарной кислоты (м.д. в районе 5,9-7,1) равна 8:8. Отношение

этих протонов метиленовой группы

(м.д, 2,6) к протонам метила меток- си- группы (м.д. 3,8) равно 8:3, та-- КИМ образом, -согласуетс  с вышеприведенным значением.

Химические сдвиги, обнаруженные в процессе С-исследований также свидетельствуют об этерификации обеих спиртовых ОН-групп, так как химические сдвиги сильнее всего измен ютс  у

кул ционном контуре навстречу по от- 25 атома cVi и соседних атомах углеронощению к разбавленному реакционному раствору и поддерживают путем добавлени  разбавленной сол ной кислоты рН 1,85 до тех.пор, пока это значение его после пропускани  уксусноэтилового эфира не остаетс  посто нНЬ1М .

Затем уксусноэтиловую фазу дл  извлечение из нее избытка сол ной .. кислоты дважды подвергают экстракции противотоком водой порци ми по 3,4 л насыщенной уксусноэтиловым эфиром. Как только рН промьшной воды становитс  больше 4,5, органическую фазу .

количественно отдел ют, упаривают при до Р в количеству, соответствующему

40-50 С в вакууме до 1/12 первоначального объема (0,2 л) и разбавл ют в 125 мл этанола.

Целевое соединение получают путем переосаждени  из смеси этанола и во- 45 пературе, отсасывают вьтадающий осаопределенному аналитически содержанию твердого вещества в указанном растворе, перемешивают суспензию в . течение еще часа при комнатной темды и высушивани  при 50 С в вакумме в течение 15ч.

Дл  получени  пробы дл  анализа целевое соединение трижды переосаждают из смеси этанола и воды и высушивают при 50°С в вакууме в течение 15ч.

На FD-масс-спектре имеетс  пик, соответствующий ожидаемой молекул р ной массе 682.

На ИК-спектре в области СО-валентной частоты имеютс  две перекрьшающиес  линии, причем одна из них, как это имеет место в случае cилибининaJ

0

5

да С,-2, (14 а также у атома С.

Рассчитано,%: С 58,07; Н 4,43; О 37,50.

Cj,,o.s

Найдено,%; С 58,05; Н 4,57;

О 37,311 .

П р и м е р 3. Получение динатрие- вой соли силибинин-С-2 З-дигидро- сукцината.

К полученному в соответствии с примером 2 -этанольному раствору добавл ют по капл м при перемешивании и внещнем охлаждении до 5-9 С 6%-ный этанольный раствор едкого натпературе , отсасывают вьтадающий осаопределенному аналитически содержанию твердого вещества в указанном растворе, перемешивают суспензию в . течение еще часа при комнатной тем0

док бежевого цвета, суспендирзтот его дважды (каждый раз в течение 5- 10 мин) с помощью турракса в 150 мл этанола и снова отсасьшают. Дл  удалени  остатков уксусноэтилового эфира продукт затем суспендируют в течение 14 ч при комнатной температуре в 280 мл этанола, снова отсасьшают, промьшают 70 мл этанола и высушива- g ют в течение 15 ч при 40-45 С в вакуумном сушильном шкафу. После этого предварительно высутпенный продукт измельчают, проссеивают до размера зерна менее 0,2 мм и сушат в течение

еще 48 ч при 40-45 С в вакууме. В результате получают 52 г целевого соединени  (выход 69%) .

Полученное целевое соединение не имеет определенной температуры плавлени . Оно начинает спекатьс  при температуре около 80 с, а при температуре около 100 С плавитс  с образованием лузырей.

УФ-спектр в метаноле: д,с,с

288 нм; . е 1,73-10

и

О

0 СН2-0-СО-СН2-

.

. ои.

- - ч -соон

со-сн -сно-с

50 г ci-шибннина при 45°С раствор ют в 100 мл пиридина, добавл ют 150 г ангидрида  нтарной кислоты, смесь перемешивают примерно 8 ч при 5 добавл ют 40 мл этанола и перемешивают до тех .пор, пока не об- разуетс  гомогенна  смесь. Затем, при интенсивном перемешивании дл  омылени  сложных фениловых эфиров в течение примерно 30 мин добавл ют 60 мл воды. Спуст  примерно 2 ч перемешивани  при 30 С сложные фениловые эфиры .количественно п-вдролизуютс . Полноту пздролиза определ ют с помощью тех высокого давлени . Гидролиз прекращают быстрым добавлением к полученной реакционной смеси 1,7 л этилацетата.

Дальнейшую обработку осуществл ют как описано в примере 2.

Физико-химические свойства этого соедине ни  щ;ентичны соединени м примера 2.

Соединени  формулы (I) , в частности динатриева  соль силибинин-С-2 , 3- дигидросукцината, оказывают  вно выраженное фармакологическое действие при лечении ожоговых ранений. Кроме того, несмотр  на то, что в результате описанной обработки эти соединени   вл ютс  производными сштб,ини- на, они полностью сохран ют фармакологическую активность силибинина,  вл ющегос  известнь1м средством дл  лечени  заболеваний печени. Особенно эффективны они при лечении цирроза , печени и токсических и метаболи- тических поражений печени.

Молекул рный вес целевого соединени  равен 726,56. Оно представл ет собой микрокристаллический порогаок светло-бежевого цвета без специфического запаха и с солоноватым вкусом. Оно легко растворимо в воде и плохо раствор етс  в этаноле и ацетоне. В диэтиловом эфире и хлороформе оно практически нерастворимо.

П р и м е р 4. Получение силиби- ннн-С-2 ,3-дигидросукцината

5

0

5

0

5

0

5

Соединени  формулы (I) обладают, кроме того, необьпсновенно высокой активностью при лечении отравлений грибами , в особенности очень опасного отравлени  бледной поганкой (Amanita phalloides). С их помощью можно также с успехом лечить отравлени  гало- генированными органическими растворител ми , такими как четыреххлористый углерод, трихлорэтилен, хлороформ и т.п. В случае профилактического применени  соединени  формулы (I) предупреждают перечисленные заболевани  .

Лекарственные препараты, содержащие указанные соединени , в большинстве случаев примен ютс  систематически , например, в виде пилюль, капсул,

растворов, в композиции с ОбЬЕЧНЫМИ

носител ми и, при желании, с обычными вспомогательными добавками. Днев- нал доза дл  взрослого человека составл ет примерно 50-500 мг в зависимости от состо ни  пациента и т жести заболевани .

Опыты с динатриевой солью силибинин-С-2 , 3-дигидросукцината (сили- сук-на).

По вл ющиес  при ожогах симптомы вызьшаютс , в частности, интоксикацией организма продуктами термического некроза тканей. То, что за это ответственны аутоинтоксикативные процессы после т желых ожогов кожи, было доказано многочисленными способами . Особенно убедительными  вл ютс  опыты по перекрестной трансплантации обожженной и необожженной

кожи здоровым животным и соответственно животным с ожогами. При этом установлено, что здоровые животные с пересаженной им обожженной кожей гибли, тогда как на животных с ожогами пересаженна  здорова  кожа не оказывала, никаког о вредного действи 

При ожогах кожи вьщел ютс  в свобод- ном виде или вновь образуютс  цельй р д различных химических соединений. Несмотр  на их большое число, удалось установить структуру некоторых их этих соединений..

В частности, удалось показать, чтО образующиес  при ожогах кожи соединени  аналогичны соединени м, образующимс  при переокислении ли- :. пидов. Имеет место также аналоги  Е о тношении токсического действи  , этих соединений. Особенно поразительным  вл етс  факт образовани  обладающих токсическими свойствами насыщенных и ненасьаценных альдегидов с различной длиной цепи вследствие пер- окислени  липидов и термического поражени  кожи. Поэтому можно предполо- i жит1, что ожоги привод т к окислительному повреждению клеточных структур .

Поэтому были исследованы аутоокси- дативные изменени  мембранных липидов ,  вл ющиес  следствием аутоинтоксикации после т желых ожогов. Исследовались, в частности, изменени  состава жирных кислот мембранных липидов. Кроме того, определ лось, в какой степени предлагаемые производные силибина оказывают вли ние на указанные изменени  состава жирных кислот мембранных липидов.

Изменени  состава жирных кислот мембранных липидов в результате т желых ожогов.

Самцы крыс Wistar со средним ве- сом 360 г,, разделенные на три группы , получали достаточное количество воды и сухого . До начала опытов комнатна  температура равн лась 22 С. После начала опытов животные содержались при 30 С.

Ожоги кожи наносились с помощью

л

медного штемпел  поверхностью 20 см при посто нном давлении и температуре 250с. Дл  того, чтобы предотвратить термическое поражение расположенных глубже органов, кожу животных нат гивали на охлаждаемый воздухом шпа

10

|5 20 25 30

68758

тель. Таким образом можно очень точно наносить ожоговые травмы, врем  извлечени  от которых оказьшаетс  , строго посто нным.

Перед началом проведени  опытов животным,давали наркоз (50 мг/ке нембутала).После нанесени  ожога дл  предупрежд.ени  шока им внутрипарен- терально вводили 20 мл раствора лак- тата Рингера.

Все животные были разделены на 5 групп:

а)нормальна  группа: животные, которым не наносили ожогов;

б)контрольна  группа I: животные , которых лечили только силибини- ном (в течение 6 дней вводилось 75,5 мг сили-сук-на);

в)контрольна  группа .II; мнимо оперированные животные;

г)животные которым были нанесе5 0 25 0

5

ны ожоги: 25%, 250 С, 20 с, 0,5 ат;

е) группа испытуемых животных: животные, которым в течение 6 дней интрапарентерально вводили 75,5 мг сили-сук-на, начина  за день до нанесени  ожогов.

Дл  выделени  микросом животных после окончани  проведени  опытов обескровливали под наркозом. Затем у них извлекали печень, взвешивали- ее и сразу погружали в охлаждаемую льдом изолирующую среду (0,25 моль сахарозы, 1 ммоль ЭДТА, 10 ммоль Трис НС, рН 7,2). Печень разрезали на кусочки и гомогенизировали в указанной среде. С помощью дифференциального центрифугировани  микросом- Q нук) фракцию гралулировали. Микросомы вновь суспендировали и подвергали центрифугированию, после чего готовили суспензию, 1 мл которой соответствовал 1 г ткани печени. 5 Липиды определ ли по методу J.Folch (простой метод выделени  и очистки суммарного содержани  липидов из животных тканей, модифицированному Bligh и Dyer (Ускоренный ме- - тод экстракции и очистки суммарного количества липидов).

Экстрагированные микросомные липит дь1 омьш ли едким натром. Свободные жирные кислоты этерифицировали путем добавки к смеси метанольного раствора BFj. После отгонки метанола и удалени  гидрофильных побочных продуктов количественно определ ли эфи- ры жирных кислот.

У животных,которым ожоги не наносились , не было обнаружено никаких заметных изменений состава жирных кислот. Таким образом, наркоз и незначительное оперативное вмешательство не привод т к изменению микро- coMHbiX липидов. Поэтому дл  дальнейшего сравнени  данные по нормальной и контрольной группам животных объедин ли в одну контрольную группу .

Сравнение здоровых животных и животных , которым были нанесены ожоги, относительно состава микррсомных жирных кислот показало значительныйсдвиг от ненасыщенных к насьпцейным - жирным кислотам.

При распределении жирных кислот в микросомных липидах печени по изменени м , вызванным термическим поражением, видно, что содержание пальмитиновой кислоты (С1 6) возрастает после нанесени  ожогов с 25,1 до 34,4% от общего содержани  жирных кислот. В случае стеариновой кислоты (С18) содержание ее у животных, кото pbw были нанесены ожоп.-составл ет 46,8% по сравнению с 13,2% у животных из контрольной группы. В случае олеиновой кислоты (С18:1) наблюдалось незначительное снижение содержани . Содержание линолевой кислоты (018:2) После нанесени : ожо- гов снизилось до примерно 1/3 по сравнению с исходным количеством , И в случае арахидоновой кис лоты (С20:4) после нанесени  ожогов было обнаружено только 31% ее по сранению с исходным количеством.

Вли ние сили-сук-на на содержание жирных кислот у з оровых животных и жив отньгх, которым наносились ожоги, показано в таблице.

Как видно из таблицы 1, лечение производным силибинина формы (1) в случае здоровых (контрольных) животных: не приводит к существенньм изменени  по сравнению с животными, не получавшими препарата. В случае же животных которым были нанесены ожоги, лечение приводит к полному прекращению снижени  ненасыщенных жирных кислот.

Следовательно, ожоговые травмы : привод т к изменению состава 5кирных кислот в микросомных липидах. Можно предположить, что это св зано с окислительным поражением мембран.

0

5

0

5

Это следует, в частности, из резкого снижени  содержани  ненасыщенных жирных кислот с несколькими двойными св з ми.

Используемые производные силибини- нз формулы (I) могут ингибировать ок- сидативное разрушение клеток, и они таким образом,с успехом могут использоватьс  дл  нарушени  механизма о. - сидативного разрушени  после т желых ожогов.

Аутотоксические реакции после т желых ожогов могут привести в частности , к оксидативному поражению клеток. Поэтому были поставлены опыты , в которых изучалось, какое действие оказьюают стандартизированные термические травмы на индуцировац- ный РИА бластогенез Т-лимфоцитов селезенки и периферийной крови крыс. Изучалось также то действие, которое оказывает предлагаемые производные силибинина такого рода лимфоцитные функциональные поражени  после т желых ожогов.

Действие стандартизированной термической травмы на индуцированный РИА бластогенез Т-лимфоцитов селе- 0 зенки и периферийной крови крыс.

На кожу слины крыс Wistar с помощью медного штемпел  наносили ожоги описанным способом. В качестве . контрольной группы служили животные с мнимыми ожогами, с которыми проводили те же манипул ции, но без нанесени  ожогов. Через 2,4,7 и 9 дней у животных с нанесенными ожогами, а также у контрольных животных под эфирным наркозом извлек.ли селезенку и обескровливали их.

Гепаринизированную кровь дл  вьще- лени  из нее лимфоцитов наносили сло ми на раствор Ficoll-Hypaque (плот- 5 ность 1,077). Затем осуществл ли центрифугирование и полученные лимфоциты испытьшали на жизненность с помощью трипана голубого. Дл  выделени  лимфоцитов из селезенки последнюю измельчали, протирали Через сито и с помощью лизисного раствора отдел ли от сопутствующих эритроцитов по G-ay.

После этого в цел х уменьшени  содержани  в суспензии одно дерных кле- ток в результате адгезии на стенках сосуда (5%) клеточную смесь инкубировали в течение 30 мин в сосуде ; в присутствии 5%-ной инактивирован- /

5

0

0

5

11

ной термическим способом сыворотки эмбрионального теленка. Дл  культивй ровани  клетки помещали в плоскодонные пластины дл  микротитровани  и добавл ли к ним 20%-ную сьшоротку эмбрионального теленка. Таким образом , путем измерени  внедрени  н-тимидина (2 Ci .(микромоль) в DNA клеток определ лс  спонтанный блас- тогенез.

В ходе предварительных опытов было установлено, что оптимальна  ми- тогенна  стимул ци  наблюдаетс  при РИА-концентрации (митоген-фитемаглю- тинин) 5 мкг/мл. В ходе этих опытов по оптимизации клеточной тестовой системы бьшо также установлено, что максимальна  стимул ци  повторного синтеза DNA происходит через 72 ч. Кроме того, бьшо установлено, что оптимальна  концентраци  сыворотки эмбрионального теленка, при которой наблюдаетс  наивысша  стимул ци , равна 20%.

Спонтанный бластогенез определ ли путем измерени  внедрени  Н-ти- мидина в DNA клеток. Клетки отбирались через 18 ч после добавлени  Н-тимидина, причем -нулева  точка дл  18 ч совпадает с моментом максимальной стимул ции.

Дл  определени  вли ни  предлагаемых производных силибинина группу крыс подвергали лечению производным силибинина. С этой целью животным раз в день впрыскивали 75,5 мг сили- сук-на. Лечение продолжалось, начина  с дн  нанесени  ожога и до дн  извлечени  органа (максимум до дев того дн ) .

Дл  оценки результатов, полученных в опытах с контрольными животными , тем из них, которым не были нанесены ожоги, и подвергавшихс  лечению сили-сук-на, был рассчитан индекс с стимул ции. Е-го численное значение, представл ет собой частное от делени  средних значений стимулированных и контрольных проб. Из полученного таким образом индекса стимул ции дл  каждого подопытного животного рассчитывалс  средний индекс стимул ции дл  группы животных.

Полученные результаты выражены через этот индекс S1 .

При изучении вли ни  использовавшегос  сили-сук-на на бластогенез лимфоцитов видно, что в случае жи3687512

вотных с нанесенными ожогами пониженна  стимулируемость клеток  вно увеличивалась в результате воздействи  с силибинина.

Уже на второй день у животных, которым вводилс  сили-сук-на, наблюдалось в 10 раз более высока  чзшстви- тельность лимфоцитов крови по отно10 шению к РИА. На четвертый день после нанесени  травмы у животных,подвергав- шихс  лечению, величина индекса стимул ции дл  лимфоцитов крови равн лась 8, тогда как соответствующа  величина

15 дл  животных, не подвергавшихс  лечению ,- равн лась 1,5.

В случае клеток из селезенки все индексы стимул ции у животных с нанесенными ожогами и не подвергав20 шихс  лечению значительно меньше 1. Введение животным силибинина приводит к существенному улучшению во все дни, причем максимум наблюдаетс  на седьмой день после нанесени 

25 травмы.

Были проведены также сравнительные опыты, которые показали, что у здоровых животных сили-сук-на не приводит к каким-либо существенным из30 менени м стимулируемости при индуцированном РИА бластогенезе Т-лимфоци- тов из селезенки и периферийной крови .

Таким образом, использовавшийс  в соответствии с изобретением силибинин существенно стимулирует бластогенез лимфоцитов животных с нанесенными ожогами.

Кроме того, было установлено, что

0 у животных, получавших лечение произ водными силибинина, общий катаболизм был меньше,так как животные после нанесенной термической травмы снова быстро прибавл ли в весе.

5 Отравление грибами.

Отравлени , вызьшаемые бледной поганкой, относ тс  к т желейшим отравлени м , известным в медицине. Хот  отравлени , вызьшаемые бледной поган-

л кой, составл ют всего 10-30% от всех отравлений грибами, отравление именно этим грибом вследствие его опасности уже издавна вызывает наибольший интерес медиков. В ранних публикаци х

приведены даннь1е по смертельному исходу от этого отравлени , который составл ет 30-50%. Благодар  современной интенсивной медицине, по дан

- ным статистических исследований

5

он о

он

0-СО-А1К-СООМ

где Alk - йГлкиленовый остаток с 14 атомами углерода; М - водород или щелочный металл , отличающийс  тем, что

1 мае.4. силибинина формулы

Q

-ОСНз

(II)

ип -ин

он О

раствор ют в 1-2 мае.ч. пиридина и подвергают взаимодействию с I- 3 мае.ч. ангидрида дикарбоновой кислоты формулы

0 С-А1К-СЮ 0

где Alk имеет указанные значени ,

40 при перемешивании при -40-50 С с .последующим добавлением этанола до образовани  гомогенной смеси, в которую при интенсивном перемешивании постепенно добавл ют воду, при этом

45 имеющиес  сложные эфиры гидролизу- ютс  до ароматически св занных ОН- групп, и после окончани  гидролиза реакционную массу разбавл ют этил- ацетатом, промьшают подкисленной до

50 РН 1,5-2,5 водой, насыщенной этил- ацетатом, полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатьшают этанолом, выдел ют соединени  .формулы (I), где М - водород, и/или дейет55 вием спиртового раствора гидроокиси (III) щелочного металла перевод т в соль. ,

сн -о-со-лш-соои

ОСНз

(I)

ЖивотныеС16I CISC18:lC18:2C20:4.

Здоровые (KOHT-29,8% 37,2%8,9%9,6%16,2%

рольна  группа I)6,2 ±12,3±1,1±3,3±4,9

С нанесенными25,4% 37,5%7,8%11,4% 18,0%

ожогами±6,0 ±8,6±1,0±5,3±9,1

Claims (1)

1. Формула из обретения

   Способ получения производных силибинина общей формулы (I) где Aik - алкиленовый остаток с 1-

   4 атомами углерода; 40

   М - водород или щелочный металл, отличающийся тем, что

   1 мае.ч. силибинина формулы

   ОН о растворяют в 1-2 мас.ч. пиридина и подвергают взаимодействию с I3 мас.ч. ангидрида дикарбоновой кислоты формулы (III) где Aik имеет указанные значения, при перемешивании при 40-50 С с последующим добавлением этанола до образования гомогенной смеси, в которую при интенсивном перемешивании постепенно добавляют воду, при этом имеющиеся сложные эфиры гидролизуются до ароматически связанных 0Нгрупп, и после окончания гидролиза реакционную массу разбавляют этилацетатом, промывают подкисленной до pH 1,5-2,5 водой, насыщенной этилацетатом, полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатывают этанолом, выделяют соединения .формулы (I), где М - водород, и/или действием спиртового раствора гидроокией щелочного металла переводят в соль. ,

   1 5 1436875 16 Животные ] С16 С18 | С18: 1 | С18.-2 С20:4 . Здоровые (конт- 29,8% 37,2% 8,9% 9,6% 16,2% рольная группа I) 6,2 ±12,3 ±1,1 ±3,3 ±4,9 С нанесенными 25,4% 37,5% 7,8% 1 1 ,4% 18,0% ожогами ±6,0 ±8,6 ±1,0 ±5,3 ±9,1