SU1140462A1

SU1140462A1 - Method of breaking bacillus for producing cell elements

Info

Publication number: SU1140462A1
Application number: SU833581612A
Authority: SU
Inventors: А.Г. Сабельников; Б.Н. Ильяшенко
Priority date: 1983-01-12
Filing date: 1983-01-12
Publication date: 1986-05-07

Abstract

СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ БАЦИЛЛ ДНЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЕМЕНТОВ КЛЕТОК путёН обработки биомассы химическими веществами с последук цим выделением элементов клеток, отличаю- : щ и и с тем, что, с целью упрощени способа и максимального сохранени структуры клеточной оболочки, обработку биомассы осуществл ют солевой средой а, сконцентрированной в 4-10 раз.A METHOD OF DESTRUCTION OF BACILLS OF THE DAY OF OBTAINING CELL ELEMENTS by treating biomass with chemicals with subsequent extraction of cell elements, distinguished by: 4-10 times.

Description

1 1 Изобретение относитс к микробиологии . Целью изобретени вл етс упроще ние способа и максимальное сокращение структуры клеточной оболочки. Способ осуществл етс следующим образом. Ночную (18 ч роста) культуру бацилл рного штамма засевают в свежий м сопептонный бульон (МПВ) и выращивают при до конца логариф мической фазы роста (3-3,5 ч). Клетки осаждают центрифугированием, отмьтаютоднократно 0,85%-ным раствором NaCl и ресуспендируют в растворе, по составу соответствующем среде а, сконцентрированной в 4 раза. Инкубируют 3 ч при или ночь (18 ч) при комнатной температуре. О степени разрушени клеток суд т по нескольКИМ критери м: по визуально наблюдаемому лизису; исследованию клеточной массы под микроскопом; определению количества жизнеспособных клеток в лизатах путем высева на м сопептонный агар (выражают в % по отношению к исходному количеству); спектро метрическому анализу супернатантов после осаждени клеток. Пример 1. 2мл 17-часовой культуры Bacillus cereus. штамма GP7, перенос т в 40 мл свежего МПБ. Выращивают со встр хиванием (150 об/мин) 3 ч при . Клетки осаждают центри фугированием при 5000 g, однократно отмьшают 0,85%-ным раствором NaCl и ресуспендируют в 1 мл среды а, имеющей состав на 1 л, г: 2 K,. 10,5 . ,5 ( NH) Цитрат натри 2Н О 0,5 Смесь инкубируют 1 ч при 37°С. По всем исследованным параметрам лизис клеток не наблюдаетс , П р и м е р 2. 2 мл 20-часовой культуры штамм GP7 перенос т в 40 мл свежего МПБ, затем выращивают и отмывают , как в примере 1. Клеточную массу ресуспендируют в 1 мЛ среды а (см. пример 1), сконцентрированной в 4 раза (обозначение а х 4) « инкубируют 1 ч при 37°С. После инкубации визуально наблюдают по вление значительной в зкости, что свидетельствует о лизисе клеток. Исследование лизатов под микроскопом показывает наличие пустых клеточных оболочек, что говорит о выходе в среду клеточного содержимого. Определение количества жизнеспособных клеток в лизатах показьшает, что после инкубации в среде а х 4 степень выживаемости бацилл значительно снижена по сравнению с исходной . Количество разрушенных клеток составл ет 83%. Дополнительным свидетельством лизиса клеток вл ютс данные спектрофотометрического анализа супернатантов после Осажденй : клеток. Анализ спектров поглощени указывает на наличие в лизатах материала нуклеотидного и белкового происхождени и, возможно, полисахаридов.1 1 The invention relates to microbiology. The aim of the invention is to simplify the method and maximally reduce the structure of the cell membrane. The method is carried out as follows. Overnight (18 h of growth) culture of the bacillary strain is seeded in fresh septon broth (MPV) and grown at the end of the logarithmic growth phase (3-3.5 h). The cells are precipitated by centrifugation, washed off once with a 0.85% NaCl solution and resuspended in a solution that is in composition corresponding to the medium a concentrated 4 times. Incubate for 3 hours at night or (18 hours) at room temperature. The degree of cell destruction is judged according to several criteria: according to the visually observed lysis; examination of cell mass under a microscope; determining the number of viable cells in lysates by seeding on m no-septone agar (expressed in% relative to the initial amount); spectrometric analysis of supernatants after cell precipitation. Example 1. 2 ml of a 17-hour culture of Bacillus cereus. strain GP7, transferred to 40 ml of fresh BCH. Grown with shaking (150 rpm) for 3 hours at. The cells are pelleted by centrifugation at 5000 g, washed once with a 0.85% NaCl solution and resuspended in 1 ml of medium a, having a composition of 1 liter, g: 2 K ,. 10.5. , 5 (NH) Sodium citrate 2H O 0.5 The mixture is incubated for 1 hour at 37 ° C. No cell lysis was observed for all parameters studied. EXAMPLE 2. A strain of GP7 strain of 2 h of 20 h culture was transferred to 40 ml of fresh BCH, then grown and washed as in Example 1. The cell mass was resuspended in 1 ml of medium. a (see example 1), concentrated 4 times (the designation a x 4) "incubated for 1 h at 37 ° C. After incubation, significant viscosity is observed visually, which indicates cell lysis. The study of lysates under a microscope shows the presence of empty cell membranes, which indicates the release of cellular contents into the medium. Determining the number of viable cells in lysates shows that after incubation in medium a x 4 the degree of survival of bacilli is significantly reduced compared with the original. The number of cells destroyed is 83%. Additional evidence of cell lysis is the spectrophotometric analysis of supernatants after precipitated: cells. An analysis of the absorption spectra indicates the presence in the lysates of material of nucleotide and protein origin, and possibly polysaccharides.

Claims

METHOD FOR BACILLA DESTRUCTION FOR PRODUCING CELL ELEMENTS by treating biomass with chemicals and then isolating cell elements, characterized in that, in order to simplify the method and maximize the preservation of the cell wall structure, the biomass is treated with salt medium a concentrated 4-10 times.

I