[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

RU98121428A - α-Amylase Mutants - Google Patents

α-Amylase Mutants

Info

Publication number
RU98121428A
RU98121428A RU98121428/13A RU98121428A RU98121428A RU 98121428 A RU98121428 A RU 98121428A RU 98121428/13 A RU98121428/13 A RU 98121428/13A RU 98121428 A RU98121428 A RU 98121428A RU 98121428 A RU98121428 A RU 98121428A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
amylase
bacillus
variant
maternal
sequence shown
Prior art date
Application number
RU98121428/13A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Аллан Свенсен
Торбен Ведель Борхерт
Хенрик Бисгор-Франтсен
Original Assignee
Ново Нордиск А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ново Нордиск А/С filed Critical Ново Нордиск А/С
Publication of RU98121428A publication Critical patent/RU98121428A/en

Links

Claims (23)

1. Вариант материнской Termamyl-подобной α-амилазы, обладающий α-амилазной активностью и проявляющий изменение, по крайней мере, по одному из нижеследующих свойств относительно указанной материнской α-амилазы: субстратная специфичность, субстратное связывание, тип субстратного расщепления, термальная стабильность, профиль pH/активность, профиль pH/стабильность, устойчивость к окислению, Ca2+-зависимая и удельная активность; при этом указанный вариант включает одну или несколько мутаций, соответствующих одной или нескольким нижеследующим мутациям в аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID No. 2:
мутации: A181E,D,Q,N,V; 1201 (основная аминокислота), включающая I201W, F, L; Y203Q; Q9K, L, E; F11R,K,E; E12Q; D100N,L; V101H,R,K,D,E,F; V102A,T; I103H, K; N104R,K,D; H105R,K,D,E,W,F; L196R,K,D,E,F,Y; I212R,K,D,E; L230H,K, I; A232G, H, F, S,V; V233D; K234L,E; I236R,K,N,H,D,E; L241R,K,D,E,F; A260S; W263H; Q264R, D,K,E; N265K,R,D; A269R,K,D,E; L270R,K,H,D,E; V283H,D; F284H; D285N, L; V286R,K,H,D,E; Y290R,E,K; V312R,K,D,E; F323H; D325N; N326K,H,D,L; H327Q, N,E,D,F; Q330L,E; G332D; Q333R,K,H,E,L; S334A,V,T,L,I,D; L335G,A,S,T, N; E336R+R375E; T337D, K; T338D, E; T339D; Q360K,R,E; D365N; или G371D,R; замена в позициях H68, H91, H247, R305, K306, H382, K389, H405, H406, H450 или R483;
мутации: H140Y; H142Y; H159Y; H140D+H142R; H140K+H142D; или H142Y+H156Y;
деления из трех аминокислот в рамках неполной последовательности от T369 до I377, включающая следующие делеции: K370*+G371*+D372* или D372*+S373*+Q374*;
замещение неполной аминокислотной последовательности от T369 до I377 на одну из следующих последовательностей (число последовательности увеличивается слева направо): I-Р-T-H-S-V; I-P-T-H-G-V; I-P-Q-Y-N-I;
замены в позициях R169 или R173, включающие R169I,L,F,T или R173I,L,F,T;
мутации H156D; I201F; I212F; A209L,T; или V208I;
замены в позициях N172, A181, N188, N190, H205, D207, A209, A210, E211, Q264 или N265, включающие N172R,H,K; A181T; N188P; N190L,F; H205C; D207Y; A209L,T,V; A210S; E211Q; Q264A,E,L,K,S,T; N265A,S,T,Y; или Q264S+N265Y;
мутации:
H156Y+A181T+A209V;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;
A1*+N2*+L3V+M15T+R23K+S29A+A30E+Y31H+A33S+E34D+H35I+ H156Y+A181T+A209V;
A1*+N2*+L3V+M15T+R23K+S29A+A30E+Y31H+A33S+E34D+H35I+H156Y+A181T+N190F+A209V; или
A1*+N2*+L3V+M15T+R23K+S29A+A30E+Y31H+A33S+E34D+H35I+H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S.1. A variant of maternal Termamyl-like α-amylase having α-amylase activity and exhibiting a change in at least one of the following properties with respect to said maternal α-amylase: substrate specificity, substrate binding, type of substrate cleavage, thermal stability, profile pH / activity, pH profile / stability, oxidation stability, Ca 2+ -dependent and specific activity; however, this option includes one or more mutations corresponding to one or more of the following mutations in the amino acid sequence shown in SEQ ID No. 2:
mutations: A181E, D, Q, N, V; 1201 (basic amino acid) including I201W, F, L; Y203Q; Q9K, L, E; F11R, K, E; E12Q; D100N, L; V101H, R, K, D, E, F; V102A, T; I103H, K; N104R, K, D; H105R, K, D, E, W, F; L196R, K, D, E, F, Y; I212R, K, D, E; L230H, K, I; A232G, H, F, S, V; V233D; K234L, E; I236R, K, N, H, D, E; L241R, K, D, E, F; A260S; W263H; Q264R, D, K, E; N265K, R, D; A269R, K, D, E; L270R, K, H, D, E; V283H, D; F284H; D285N, L; V286R, K, H, D, E; Y290R, E, K; V312R, K, D, E; F323H; D325N; N326K, H, D, L; H327Q, N, E, D, F; Q330L, E; G332D; Q333R, K, H, E, L; S334A, V, T, L, I, D; L335G, A, S, T, N; E336R + R375E; T337D, K; T338D, E; T339D; Q360K, R, E; D365N; or G371D, R; replacement in positions H68, H91, H247, R305, K306, H382, K389, H405, H406, H450 or R483;
mutations: H140Y; H142Y; H159Y; H140D + H142R; H140K + H142D; or H142Y + H156Y;
division of three amino acids in an incomplete sequence from T369 to I377, including the following deletions: K370 * + G371 * + D372 * or D372 * + S373 * + Q374 *;
substitution of an incomplete amino acid sequence from T369 to I377 with one of the following sequences (the number of the sequence increases from left to right): I-P-THSV; IPTHGV; IPQYNI;
replacements at R169 or R173, including R169I, L, F, T or R173I, L, F, T;
mutations H156D; I201F; I212F; A209L, T; or V208I;
replacements at positions N172, A181, N188, N190, H205, D207, A209, A210, E211, Q264 or N265, including N172R, H, K; A181T; N188P; N190L, F; H205C; D207Y; A209L, T, V; A210S; E211Q; Q264A, E, L, K, S, T; N265A, S, T, Y; or Q264S + N265Y;
mutations:
H156Y + A181T + A209V;
H156Y + A181T + N190F + A209V + Q264S;
A1 * + N2 * + L3V + M15T + R23K + S29A + A30E + Y31H + A33S + E34D + H35I + H156Y + A181T + A209V;
A1 * + N2 * + L3V + M15T + R23K + S29A + A30E + Y31H + A33S + E34D + H35I + H156Y + A181T + N190F + A209V; or
A1 * + N2 * + L3V + M15T + R23K + S29A + A30E + Y31H + A33S + E34D + H35I + H156Y + A181T + N190F + A209V + Q264S. 2. Вариант по п. 1, проявляющий повышенную стабильность при низком pH и низкой концентрации Ca2+, относительно материнской Termamyl-подобной α-амилазы, и включающий мутации, выбранные из следующих
H156Y+A181T+A209V;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;
A1*+N2*+L3V+M15T+R23K+S29A+A30E+Y31H+A33S+E34D+H35I+H156Y+A181T+A209V;
A1*+N2*+L3V+M15T+R23K+S29A+A30E+Y31H+A33S+E34D+H35I+H156Y+A181T+N190F+A209V;
A1*+N2*+L3V+M15T+R23K+S29A+A30E+Y31H+A33S+E34D+H35I+H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S.2. The variant according to claim 1, showing increased stability at low pH and low concentration of Ca 2+ , relative to the maternal Termamyl-like α-amylase, and including mutations selected from the following
H156Y + A181T + A209V;
H156Y + A181T + N190F + A209V + Q264S;
A1 * + N2 * + L3V + M15T + R23K + S29A + A30E + Y31H + A33S + E34D + H35I + H156Y + A181T + A209V;
A1 * + N2 * + L3V + M15T + R23K + S29A + A30E + Y31H + A33S + E34D + H35I + H156Y + A181T + N190F + A209V;
A1 * + N2 * + L3V + M15T + R23K + S29A + A30E + Y31H + A33S + E34D + H35I + H156Y + A181T + N190F + A209V + Q264S. 3. Вариант по п. 1 или 2, отличающийся тем, что материнская Termamyl-подобная α-амилаза выбрана из:
α-амилазы В. licheniformis, обладающей последовательностью, показанной в SEQ ID No. 2,
α-амилазы В. amyloliquefaciens, обладающей последовательностью, показанной в SEQ ID No. 4,
α-амилазы В. stearothermophilus, обладающей последовательностью, показанной в SEQ ID No 6,
α-амилазы штаммы Bacillus NCIB 12512, обладающей последовательностью, показанной на фиг. 1 и 2,
α-амилазы штамма Bacillus NCIB 12513, обладающей последовательностью, показанной на фиг. 2, и
α-амилазы штамма Bacillus sp. #707, обладающей последовательностью, показанной на фиг. 2.3. The variant according to claim 1 or 2, characterized in that the maternal Termamyl-like α-amylase is selected from:
B. licheniformis α-amylase having the sequence shown in SEQ ID No. 2
B. amyloliquefaciens α-amylases having the sequence shown in SEQ ID No. 4,
B. stearothermophilus α-amylase having the sequence shown in SEQ ID No 6,
α-amylase strains of Bacillus NCIB 12512 having the sequence shown in FIG. 1 and 2,
α-amylases of Bacillus strain NCIB 12513 having the sequence shown in FIG. 2, and
α-amylase strain of Bacillus sp. # 707 having the sequence shown in FIG. 2. 4. Конструкция ДНК, включающая последовательность ДНК, кодирующую вариант α-амилазы по любому из пп. 1-3. 4. A DNA construct comprising a DNA sequence encoding a variant of α-amylase according to any one of claims. 1-3. 5. Рекомбинантный экспрессионный вектор, который несет конструкцию ДНК по п. 4. 5. A recombinant expression vector that carries the DNA construct of claim 4. 6. Клетка, которая трансформирована конструкцией ДНК по п. 4 или вектором по п. 5. 6. A cell that is transformed with a DNA construct according to claim 4 or a vector according to claim 5. 7. Клетка по п. 6, которая представляет собой микроорганизм. 7. The cell according to claim 6, which is a microorganism. 8. Клетка по п. 6, которая представляет собой бактерию или гриб. 8. The cell according to claim 6, which is a bacterium or fungus. 9. Клетка по п. 8, которая представляет собой грамположительную бактерию, такую как Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus brevis, Bacillus stearothermophilus, Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus coagulans, Bacillus circulans, Bacillus lautus или Bacillus thuringiensis. 9. The cell according to claim. 8 which is a gram-positive bacterium such as Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus brevis, Bacillus stearothermophilus, Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus coagulans, Bacillus circulans, Bacillus lautus or Bacillus thuringiensis. 10. Применение варианта α-амилазы по любому из пп. 1-3 для стирки и/или мытья посуды. 10. The use of the variant α-amylase according to any one of paragraphs. 1-3 for washing and / or washing dishes. 11. Применение варианта α-амилазы по любому из пп. 1-3 для текстильной расшлихтовки. 11. The use of the variant α-amylase according to any one of paragraphs. 1-3 for textile desizing. 12. Применение варианта α-амилазы по любому из пп. 1-3 для ожижения крахмала. 12. The use of the variant α-amylase according to any one of paragraphs. 1-3 to liquefy starch. 13. Детергентная добавка, включающая вариант α-амилазы по любому из пп. 1-3, не обязательно в форме не гранулированного порошка, стабилизируемой жидкости или протектируемого фермента. 13. A detergent additive comprising a variant of α-amylase according to any one of paragraphs. 1-3, not necessarily in the form of an un-granulated powder, a stabilized liquid, or a protected enzyme. 14. Детергентная добавка по п. 13, которая содержит 0,02-200 мг ферментного белка/г аддитива. 14. The detergent additive according to claim 13, which contains 0.02-200 mg of enzyme protein / g additive. 15. Детергентная добавка по п. 13 или 14, которая дополнительно включает второй фермент, такой как протеаза, липаза, пероксидаза, второй амилолитический фермент и/или целлюлазу. 15. The detergent additive according to claim 13 or 14, which further comprises a second enzyme, such as a protease, lipase, peroxidase, a second amylolytic enzyme and / or cellulase. 16. Детергентная добавка, включающая вариант α-амилазы по любому из пп. 1-3. 16. A detergent additive comprising a variant of α-amylase according to any one of paragraphs. 1-3. 17. Детергентная композиция по п. 16, которая дополнительно включает второй фермент, такой как протеаза, липаза, пероксидаза, второй амилолитический фермент и/или целлюлазу. 17. The detergent composition according to claim 16, which further comprises a second enzyme, such as a protease, lipase, peroxidase, a second amylolytic enzyme and / or cellulase. 18. Детергентная композиция для ручного или автоматизированного мытья посуды, включающая вариант α-амилазы по любому одному из пп. 1-3. 18. A detergent composition for manual or automated washing dishes, including the variant α-amylase according to any one of paragraphs. 1-3. 19. Детергентная композиция для мытья посуды по п. 18, которая дополнительно включает второй фермент, такой как протеаза, липаза, пероксидаза, второй амилолитический фермент и/или целлюлазу. 19. A detergent dishwashing composition according to claim 18, which further comprises a second enzyme, such as a protease, lipase, peroxidase, a second amylolytic enzyme and / or cellulase. 20. Композиция для ручной или автоматизированной стирки белья, включающая вариант α-амилазы по любому из пп. 1-3. 20. Composition for manual or automated washing of clothes, comprising a variant of α-amylase according to any one of paragraphs. 1-3. 21. Композиция для стирки белья по п. 20, которая дополнительно включает второй фермент, такой как протеаза, липаза, пероксидаза, амилолитический фермент и/или целлюлазу. 21. The laundry composition according to claim 20, which further comprises a second enzyme, such as a protease, lipase, peroxidase, amylolytic enzyme and / or cellulase. 22. Композиция, включающая:
(i) смесь из α-амилазы В. licheniformis, обладающей последовательностью, показанной в SEQ ID No. 2, и одним или несколькими вариантами, в соответствии с настоящим изобретением, полученными из (в качестве материнской Termamyl-подобной α-амилазы) α-амилазы В. stearothermophilus, обладающей последовательностью, показанной в SEQ ID No. 6; или
(ii) смесь из α-амилазы В. stearothermophilus, обладающей последовательностью, показанной в SEQ ID No. 6, и одним или несколькими вариантами, в соответствии с настоящим изобретением, полученными из одной или нескольких других материнских Termamyl-подобных α-амилаз; или
(iii) смесь из одного или нескольких вариантов, в соответствии с настоящим изобретением, полученными из (в качестве материнской Termamyl-подобной α-амилазы) α-амилазы В. stearothermophilus, обладающей последовательностью, показанной в SEQ ID No. 6, и одним или несколькими вариантами, в соответствии с настоящим изобретением, полученными из одной или нескольких материнских Termamyl-подобных α-амилаз.22. A composition comprising:
(i) a mixture of B. licheniformis α-amylase having the sequence shown in SEQ ID No. 2, and one or more variants, in accordance with the present invention, obtained from (as a maternal Termamyl-like α-amylase) α-amylase of B. stearothermophilus having the sequence shown in SEQ ID No. 6; or
(ii) a mixture of B. stearothermophilus α-amylase having the sequence shown in SEQ ID No. 6, and one or more variants, in accordance with the present invention, obtained from one or more other maternal Termamyl-like α-amylases; or
(iii) a mixture of one or more variants, in accordance with the present invention, obtained from (as a maternal Termamyl-like α-amylase) α-amylase of B. stearothermophilus having the sequence shown in SEQ ID No. 6, and one or more variants, in accordance with the present invention, obtained from one or more maternal Termamyl-like α-amylases. 23. Способ создания варианта материнской Termamyl-подобной α-амилазы, который проявляет повышенную стабильность при низком pH и при низкой концентрации кальция, относительно материнской, включающий: (а) случайный мутагенез последовательности ДНК, представляющей материнскую кодирующую Termamyl-подобную α-амилазу, (b) экспрессирование видоизмененной последовательности ДНК, получаемой на стадии (а) в хозяйской клетке, и (с) скринирование хозяйских клеток, экспрессирующих видоизмененную α-амилазу, которая обладает повышенной стабильностью при низком pH и низкой концентрации кальция относительно материнской α-амилазы. 23. A method of creating a variant of maternal Termamyl-like α-amylase that exhibits increased stability at low pH and low calcium concentration relative to maternal, including: (a) random mutagenesis of a DNA sequence representing the maternally coding Termamyl-like α-amylase, ( b) expression of the altered DNA sequence obtained in step (a) in the host cell, and (c) screening of host cells expressing the altered α-amylase, which has increased stability at low pH and low calcium relative to maternal α-amylase.
RU98121428/13A 1996-04-30 1997-04-30 α-Amylase Mutants RU98121428A (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK0515/96 1996-04-30
DK0712/96 1996-06-28
DK0775/96 1996-07-11
DK1263/96 1996-11-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU98121428A true RU98121428A (en) 2000-09-20

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2305191A1 (en) .alpha.-amylase mutants
US5763385A (en) Modified α-amylases having altered calcium binding properties
JP2002530072A5 (en)
CA2702204C (en) Alpha-amylase mutants with altered properties
RU2001129163A (en) ALFA AMILASE OPTIONS
US7713723B1 (en) Alpha-amylase mutants with altered properties
CN100419076C (en) Method for disigning alpha-amylase mutants with predetermined properties
US6440716B1 (en) α-amylase mutants
CA2350837A1 (en) .alpha.-amylase variants
EP0867504A1 (en) Oxidation-stable alpha-amylase
DE96900894T1 (en) amylase
EP2302048A1 (en) Variants with altered properties
Endo et al. A novel alkaline endoglucanase from an alkaliphilic Bacillus isolate: enzymatic properties, and nucleotide and deduced amino acid sequences
CA2274806A1 (en) H mutant alpha-amylase enzymes
JP2001509389A (en) Mutant α-amylase having a disulfide bond
DK2184350T3 (en) CELLULASES WITH IMPROVED THERMOSTABILITY
CN1222938A (en) Modified 'alpha'-amylases having altered calcium binding properties
RU98121428A (en) α-Amylase Mutants
NZ524303A (en) Alpha amylase enzymes with increased stability
KR100770721B1 (en) ?-amylase mutants