RU2816754C2

RU2816754C2 - COMPOSITION FOR PREVENTING, IMPROVING OR TREATING OBESITY OR FATTY LIVER DISEASE CONTAINING LEUCONOSTOC CITREUM WiKim0104

Info

Publication number: RU2816754C2
Application number: RU2021127036A
Authority: RU
Inventors: Хак Йонг ЧОЙ; Сеул-Ки ЛИМ
Original assignee: Корея Фуд Рисерч Институт
Priority date: 2019-02-28
Filing date: 2020-02-27
Publication date: 2024-04-04

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to a Leuconostoc citreum WiKim0104 strain and use thereof. Presented is a Leuconostoc citreum WiKim0104 strain with identification number KCCM12420P intended for preventing, relieving or treating a disease associated with accumulation of fat in hepatocytes selected from inflammation, obesity or fatty liver disease. Also disclosed is the use of said strain or its culture to prevent, relieve or treat a disease associated with accumulation of fat in hepatocytes, selected from inflammation, obesity or fatty liver disease. Also disclosed is a composition containing said strain or culture thereof, and a method for preventing, relieving or treating a disease, associated with accumulation of fat in hepatocytes, selected from inflammation, obesity or fatty liver disease, involving administering said composition to a subject in need thereof.

EFFECT: invention provides inhibitory action on development of fatty liver disease by inhibiting fat accumulation in liver cells and reducing expression of genes associated with fatty liver disease.

12 cl, 4 dwg, 4 ex

Description

[ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ][TECHNICAL FIELD]

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании корейской патентной заявки №10-2019-0024254, поданной 28 февраля 2019 г., и полное содержание, раскрытое в описании и чертежах соответствующей заявки, включено в настоящую заявку. Настоящее изобретение относится к новому штамму, выделенному из Kimchi, и композиции для предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, содержащей указанный штамм.The present application claims priority to Korean Patent Application No. 10-2019-0024254 filed on February 28, 2019, and the entire contents disclosed in the specification and drawings of the related application are incorporated herein. The present invention relates to a new strain isolated from Kimchi and a composition containing the strain for preventing, ameliorating or treating inflammation, obesity or fatty liver disease.

[УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ][BACKGROUND]

Жировая болезнь печени представляет собой заболевание, при котором нормальный метаболизм жиров не достигается из-за чрезмерного потребления жиров, увеличения накопления и синтеза в печени и снижения выведения, что приводит к накоплению триглицеридов в гепатоцитах, и когда жир составляет более 5% от общей массы печени, это классифицируется как жировая болезнь печени.Fatty liver disease is a disease in which normal fat metabolism is not achieved due to excessive fat intake, increased storage and synthesis in the liver and decreased excretion, leading to the accumulation of triglycerides in hepatocytes, and when fat constitutes more than 5% of the total liver mass , it is classified as fatty liver disease.

Кроме того, в связи с недавним распространением характерной для западного мира высококалорийной диеты с высоким содержанием жиров, а также отсутствием физических упражнений из-за развития цивилизации, количество пациентов с жировой болезнью печени быстро растет, и возраст также увеличивается с подросткового до 60 и более лет. Когда жир непрерывно накапливается в печени, состояние прогрессирует до жирового гепатита, сопровождающегося воспалением, и может возникнуть цирроз печени вследствие некроза тканей печени и фиброза печени из-за хронического воспаления. При дальнейшем ухудшении симптомов существует возможность развития рака печени. Поэтому жировая болезнь печени является основной причиной гепатита, цирроза и рака печени.In addition, due to the recent spread of the high-calorie, high-fat diet typical of the Western world, as well as the lack of exercise due to the development of civilization, the number of patients with fatty liver disease is rapidly increasing, and the age is also increasing from adolescence to 60 years or more. . When fat continuously accumulates in the liver, the condition progresses to fatty hepatitis accompanied by inflammation, and liver cirrhosis due to liver tissue necrosis and liver fibrosis due to chronic inflammation may occur. If symptoms worsen further, there is a possibility of developing liver cancer. Therefore, fatty liver disease is a leading cause of hepatitis, cirrhosis and liver cancer.

Лекарственные средства, используемые в настоящее время на рынке, включают Xenical™ (Roche), который содержит орлистат в качестве основного ингредиента, и Reductil™ (Abbott), который содержит сибутрамин в качестве основного ингредиента, и тому подобные, однако они демонстрируют побочные эффекты, такие как диарея, боль в животе и бессонница и тому подобное, а также в качестве терапевтического агента для лечения жировой болезни печени в клинической практике применяют лекарственные средства на основе фибрата, представленные клофибратом, и тому подобное, однако сообщалось о побочных эффектах, таких как дисфункция печени.Medicines currently used in the market include Xenical™ (Roche), which contains orlistat as the main ingredient, and Reductil™ (Abbott), which contains sibutramine as the main ingredient, and the like, however, they exhibit side effects, such as diarrhea, abdominal pain and insomnia and the like, and as a therapeutic agent for the treatment of fatty liver disease, fibrate-based drugs represented by clofibrate and the like are used in clinical practice, but side effects such as dysfunction have been reported liver.

С другой стороны, хотя различные молочнокислые бактерии в следующем патентном документе 1 демонстрируют эффект улучшения течения жировой болезни печени, существует насущная потребность в разработке терапевтического агента для лечения жировой болезни печени, который имеет основной эффект предотвращения или улучшения течения жировой болезни печени и не проявляет вышеупомянутых побочных эффектов.On the other hand, although various lactic acid bacteria in the following Patent Document 1 show the effect of improving fatty liver disease, there is an urgent need to develop a therapeutic agent for treating fatty liver disease that has the main effect of preventing or improving fatty liver disease and does not exhibit the above-mentioned side effects. effects.

Между тем в патентном документе 1 раскрыт эффект улучшения течения жировой болезни печени, демонстрируемый различными молочнокислыми бактериями, такими как Bifidobacterium sp. и Lactobacillus sp. и тому подобное, однако терапевтический агент, который оказывает основное терапевтическое действие на жировую болезнь печени и не проявляет вышеуказанных побочных эффектов, еще не разработан. Поэтому существует насущная потребность в разработке терапевтического средства, способного принципиально лечить жировую болезнь печени и не имеющего побочных эффектов.Meanwhile, Patent Document 1 discloses the effect of improving fatty liver disease demonstrated by various lactic acid bacteria such as Bifidobacterium sp. and Lactobacillus sp. and the like, however, a therapeutic agent that has a major therapeutic effect on fatty liver disease and does not exhibit the above side effects has not yet been developed. Therefore, there is an urgent need to develop a therapeutic agent that can fundamentally treat fatty liver disease and has no side effects.

(Патентный документ 1) Патентная заявка KR №10-1937365 (2018.08.08.)(Patent Document 1) Patent Application KR No. 10-1937365 (2018.08.08.)

[ОПИСАНИЕ][DESCRIPTION]

[ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА][TECHNICAL PROBLEM]

Настоящее изобретение относится к новой молочнокислой бактерии Leuconostoc citreum sp. с превосходной эффективностью в отношении предотвращения или улучшения течения жировой болезни печени.The present invention relates to a new lactic acid bacterium Leuconostoc citreum sp. with superior efficacy in preventing or improving fatty liver disease.

[ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ][TECHNICAL SOLUTION]

Соответственно, в результате того, что авторы настоящего изобретения попытались найти штамм молочнокислых бактерий, который демонстрирует эффект предотвращения или улучшения течения жировой болезни печени, в составе традиционных ферментированных пищевых продуктов, они выделили и идентифицировали новый штамм молочнокислых бактерий Weissella sp.[yl], Leuconostoc citreum WiKim0104, придя тем самым к настоящему изобретению.Accordingly, as a result of the inventors of the present invention attempting to find a strain of lactic acid bacteria that exhibits the effect of preventing or improving fatty liver disease in traditional fermented foods, they isolated and identified a new strain of lactic acid bacteria, Weissella sp.[yl], Leuconostoc citreum WiKim0104, thereby arriving at the present invention.

В одном варианте реализации настоящего изобретения предложена композиция для предотвращения или улучшения течения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, содержащая штамм Leuconostoc citreum WiKim0104, его культуру, его лизат или его экстракт в качестве активного ингредиента.In one embodiment, the present invention provides a composition for preventing or improving inflammation, obesity or fatty liver disease, containing the Leuconostoc citreum strain WiKim0104, a culture thereof, a lysate thereof or an extract thereof as an active ingredient.

Жировая болезнь печени может представлять собой любое одно или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из простой жировой болезни печени, неалкогольного стеатогепатита, фиброза печени и цирроза печени.Fatty liver disease can be any one or more diseases selected from the group consisting of simple fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis and cirrhosis.

Композиция может представлять собой пищевую композицию, заквасочную композицию молочнокислых бактерий для ферментации пищевых продуктов, композицию корма или кормовой добавки или фармацевтическую композицию.The composition may be a food composition, a lactic acid bacteria starter composition for food fermentation, a feed or feed additive composition, or a pharmaceutical composition.

Указанная пищевая композиция может включать оздоровительный функциональный пищевой продукт, напиток, батончик или ферментированное масло.Said food composition may include a health functional food product, drink, bar or fermented oil.

В другом варианте реализации настоящего изобретения предлагается применение для предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени штамма Leuconostoc citreum WiKim0104, его культуры, его лизата или его экстракта.In another embodiment, the present invention provides the use of Leuconostoc citreum strain WiKim0104, a culture thereof, a lysate thereof, or an extract thereof for the prevention, amelioration, or treatment of inflammation, obesity, or fatty liver disease.

Предложенный штамм может быть применен в виде пищевой композиции, композиции закваски молочнокислых бактерий для ферментации пищевых продуктов, композиции корма или кормовой добавки или фармацевтической композиции.The proposed strain can be used in the form of a food composition, a lactic acid bacteria starter composition for food fermentation, a feed or feed additive composition, or a pharmaceutical composition.

В одном варианте реализации настоящего изобретения предложен способ предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, включающий введение композиции, содержащей штамм Leuconostoc citreum WiKim 0104, его культуру, его лизат или его экстракт, субъекту, нуждающемуся в этом. Субъект может представлять собой животное, включая человека.In one embodiment, the present invention provides a method of preventing, ameliorating, or treating inflammation, obesity, or fatty liver disease, comprising administering a composition containing Leuconostoc citreum strain WiKim 0104, a culture thereof, a lysate thereof, or an extract thereof to a subject in need thereof. The subject may be an animal, including a human.

Предложен способ предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, в котором жировая болезнь печени включает любое одно или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из простой жировой болезни печени, неалкогольного стеатогепатита, фиброза печени и цирроза печени.A method is proposed for preventing, ameliorating or treating inflammation, obesity or fatty liver disease, in which fatty liver disease includes any one or more diseases selected from the group consisting of simple fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis and cirrhosis of the liver.

Настоящее изобретение относится к Leuconostoc citreum WiKim0104.The present invention relates to Leuconostoc citreum WiKim0104.

Leuconostoc citreum WiKim0104 согласно настоящему изобретению представляет собой новый штамм Leuconostoc citreum, полученный из Kimchi. Несмотря на то, что Leuconostoc citreum WiKim0104 выделен и идентифицирован из Kimchi согласно настоящему изобретению, способы получения не ограничиваются указанным способом.Leuconostoc citreum WiKim0104 according to the present invention is a new strain of Leuconostoc citreum obtained from Kimchi. Although Leuconostoc citreum WiKim0104 is isolated and identified from Kimchi according to the present invention, the production methods are not limited to this method.

Было показано, что штамм молочнокислых бактерий, выделенный в соответствии с примерами в настоящем изобретении, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, исходя из секвенирования 16S рДНК для идентификации и классификации микроорганизмов.The lactic acid bacteria strain isolated according to the examples in the present invention has been shown to have the nucleotide sequence SEQ ID NO: 1 based on 16S rDNA sequencing for identification and classification of microorganisms.

Таким образом, микроорганизм согласно настоящему изобретению, который имеет последовательность 16S рДНК SEQ ID NO: 1, назван Leuconostoc citreum WiKim0104 и депонирован в Корейском центре культур микроорганизмов 14 декабря 2018 года (идентификационный номер КССМ12420Р).Thus, the microorganism according to the present invention, which has the 16S rDNA sequence SEQ ID NO: 1, is named Leuconostoc citreum WiKim0104 and deposited in the Korean Microorganism Culture Center on December 14, 2018 (identification number KCCM12420P).

Leuconostoc citreum WiKim0104 согласно настоящему изобретению представляет собой грамположительную бактерию и факультативный анаэроб, который может расти как в аэробных, так и в анаэробных условиях, и не образует спор, не обладает подвижностью, а клетки имеют форму бацилл.Leuconostoc citreum WiKim0104 according to the present invention is a Gram-positive bacterium and a facultative anaerobe, which can grow under both aerobic and anaerobic conditions, and does not form spores, is not motile, and the cells are in the form of bacilli.

В следующих примерах было подтверждено, что штамм Leuconostoc citreum WiKim0104 согласно настоящему изобретению ингибировал экспрессию FAS (синтаза жирных кислот), SCD (ген, связанный с липогенезом), СОХ-2 (циклооксигеназа-2) и NF-K (ген, связанный с воспалением). Это подтвердило, что штамм Leuconostoc citreum WiKim0104 может предотвращать или улучшать течение жировой болезни печени, ингибируя формирование состояния жировой печени примерно на 30-35%. Следовательно, штамм Leuconostoc citreum WiKim0104 согласно настоящему изобретению может быть по-разному применен для профилактики, лечения или улучшения течения жировой болезни печени человека или животного.In the following examples, it was confirmed that the Leuconostoc citreum strain WiKim0104 according to the present invention inhibited the expression of FAS (fatty acid synthase), SCD (lipogenesis-related gene), COX-2 (cyclooxygenase-2) and NF-K (inflammation-related gene ). This confirmed that Leuconostoc citreum strain WiKim0104 can prevent or improve fatty liver disease by inhibiting the formation of the fatty liver condition by approximately 30-35%. Therefore, the Leuconostoc citreum strain WiKim0104 according to the present invention can be used in various ways for the prevention, treatment or amelioration of fatty liver disease in humans or animals.

Кроме того, как может быть подтверждено в следующих примерах, было подтверждено, что композиция, содержащая Leuconostoc citreum WiKim0104 в качестве активного ингредиента, ингибирует накопление жира в гепатоцитах (клетках HepG2) и воспаление, а также повышает эффективность снижения массы тела и показателей функции печени в крови и снижает экспрессию генов факторов, связанных с метаболизмом жиров, воспалением и фиброзом печени, в ткани печени. Следовательно, композиция может быть применена в качестве активного ингредиента композиции для предотвращения, лечения или улучшения течения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, которая представляет собой одно или более из группы, состоящей из простой жировой болезни печени, неалкогольного стеатогепатита, фиброза печени и цирроза печени.In addition, as can be confirmed in the following examples, it was confirmed that the composition containing Leuconostoc citreum WiKim0104 as an active ingredient inhibits fat accumulation in hepatocytes (HepG2 cells) and inflammation, and also improves the effectiveness of reducing body weight and liver function indicators in blood and reduces the expression of genes for factors associated with fat metabolism, inflammation and liver fibrosis in liver tissue. Therefore, the composition can be used as an active ingredient of a composition for the prevention, treatment or amelioration of inflammation, obesity or fatty liver disease, which is one or more of the group consisting of simple fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis and cirrhosis of the liver .

В настоящем изобретении предложена композиция для предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, содержащая Leuconostoc citreum WiKim0104, его культуру, его лизат или его экстракт в качестве активного ингредиента.The present invention provides a composition for the prevention, improvement or treatment of inflammation, obesity or fatty liver disease containing Leuconostoc citreum WiKim0104, its culture, its lysate or its extract as an active ingredient.

Leuconostoc citreum WiKim0104, содержащийся в композиции согласно настоящему изобретению, может присутствовать в виде живой клетки или убитой клетки, и он также может присутствовать в высушенной или лиофилизированной форме. Форма и способ получения молочнокислых бактерий, подходящих для включения в различные композиции, хорошо известны специалистам в данной области техники. Например, штамм Leuconostoc citreum WiKim0104 может быть приготовлен в форме культуры, полученной путем культивирования в известной жидкой среде или твердой среде, или ферментированного продукта, полученного путем культивирования штамма и дополнительного компонента вместе, или экстракта, полученного путем экстракции штамма органическим растворителем, или растворенного вещества (или лизата), полученного путем растворения клеточной мембраны штамма, или дробления, или гомогенизирующей обработки, или тому подобного, но не ограничиваясь этим.Leuconostoc citreum WiKim0104 contained in the composition according to the present invention may be present in the form of a live cell or a killed cell, and it may also be present in a dried or lyophilized form. The form and method of preparing lactic acid bacteria suitable for inclusion in various compositions are well known to those skilled in the art. For example, Leuconostoc citreum strain WiKim0104 can be prepared in the form of a culture obtained by culturing in a known liquid medium or solid medium, or a fermented product obtained by culturing the strain and an additional component together, or an extract obtained by extracting the strain with an organic solvent or solute (or lysate) obtained by dissolving the cell membrane of the strain, or crushing, or homogenizing treatment, or the like, but not limited to it.

В одном конкретном примере композиция может представлять собой композицию, содержащую штамм Leuconostoc citreum WiKim0104, присутствующий в виде живой клетки или убитой клетки.In one specific example, the composition may be a composition comprising the Leuconostoc citreum strain WiKim0104 present as a live cell or a killed cell.

В настоящем изобретении жировая болезнь печени может включать простую жировую болезнь печени, неалкогольный стеатогепатит, фиброз печени и цирроз печени.In the present invention, fatty liver disease may include simple fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis and liver cirrhosis.

В настоящем изобретении жировая болезнь печени может включать как алкогольную жировую болезнь печени, так и неалкогольную жировую болезнь печени, и, например, может представлять собой неалкогольную жировую болезнь печени, индуцированную диетой с высоким содержанием жиров. Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) может включать как первичную, так и вторичную неалкогольную жировую болезнь печени, и, например, она может представлять собой неалкогольную жировую болезнь печени, возникшую в результате первичной гиперлипидемии, диабета или ожирения.In the present invention, fatty liver disease may include both alcoholic fatty liver disease and non-alcoholic fatty liver disease, and, for example, may be non-alcoholic fatty liver disease induced by a high-fat diet. Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) can include both primary and secondary non-alcoholic fatty liver disease, and, for example, it can be non-alcoholic fatty liver disease resulting from primary hyperlipidemia, diabetes or obesity.

В одном конкретном примере указанная композиция может представлять собой фармацевтическую композицию для предотвращения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, содержащую культуру, лизат, ферментированный продукт или экстракт штамма Leuconostoc citreum WiKim0104.In one specific example, the composition may be a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammation, obesity or fatty liver disease comprising a culture, lysate, fermented product or extract of Leuconostoc citreum strain WiKim0104.

Когда композицию согласно настоящему изобретению применяют в качестве фармацевтической композиции, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть получена с применением фармацевтически подходящего и физиологически приемлемого адъюванта, и в качестве адъюванта, вспомогательного вещества, разрыхляющего агента, подсластителя, связующего агента, покрывающего материала, раздувающего агента, смазывающего агента, глиданта или ароматизатора, или тому подобного.When the composition of the present invention is used as a pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared using a pharmaceutically acceptable and physiologically acceptable adjuvant, and as an adjuvant, excipient, disintegrating agent, sweetener, binding agent, coating material, blowing agent, a lubricant, glidant or flavoring agent, or the like.

Указанная фармацевтическая композиция может быть предпочтительно приготовлена для введения в виде фармацевтической композиции путем дополнительного включения одного или более фармацевтически приемлемых носителей наряду с активным ингредиентом, описанным выше.Said pharmaceutical composition may preferably be prepared for administration as a pharmaceutical composition by further including one or more pharmaceutically acceptable carriers along with the active ingredient described above.

Например, для приготовления в форме таблетки или капсулы указанный активный ингредиент может быть объединен с подходящим для перорального введения и нетоксичным фармацевтически приемлемым неактивным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и тому подобное. Кроме того, при желании или необходимости в смесь также могут быть включены подходящий связующий агент, смазывающий агент, разрыхляющий агент и красящий агент. Подходящий связующий агент включает, но не ограничивается ими, натуральные сахара, такие как крахмал, желатин, глюкоза или бета-лактоза, натуральную и синтетическую камедь, такую как кукурузный подсластитель, гуммиарабик, трагакант или олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и тому подобное. Разрыхляющий агент включает, но не ограничивается ими, крахмал, метил целлюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и тому подобное. В композиции, которая должна быть приготовлена в виде жидкого раствора, в качестве приемлемого фармацевтического носителя, который подходит для стерильных и биосовместимых растворов, могут быть применены солевой раствор, стерильная вода, раствор Рингера, буферный солевой раствор, раствор альбумина для инъекций, раствор декстрозы, раствор мальтодекстрина, глицерин, этанол и один или более их смешанных компонентов, и при необходимости могут быть добавлены другие обычные добавки, такие как антиоксидант, буферный раствор, бактериостатический агент и тому подобное. Кроме того, она может быть приготовлена в виде инъекционного состава, такого как водный раствор, суспензия, эмульсия и тому подобное, в виде пилюли, капсулы, гранулы или таблетки путем дополнительного добавления разбавителя, диспергирующего агента, поверхностно-активного вещества, связующего агента и смазывающего агента.For example, for preparation in the form of a tablet or capsule, said active ingredient may be combined with an orally suitable and non-toxic pharmaceutically acceptable inactive carrier such as ethanol, glycerin, water and the like. In addition, if desired or necessary, a suitable binding agent, lubricating agent, disintegrating agent and coloring agent may also be included in the mixture. Suitable binding agents include, but are not limited to, natural sugars such as starch, gelatin, glucose or beta-lactose, natural and synthetic gums such as corn sweetener, gum arabic, tragacanth or sodium oleate, sodium stearate, magnesium stearate, sodium benzoate , sodium acetate, sodium chloride and the like. The disintegrant includes, but is not limited to, starch, methyl cellulose, agar, bentonite, xanthan gum and the like. In the composition, which is to be prepared as a liquid solution, saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection, dextrose solution, a maltodextrin solution, glycerin, ethanol and one or more mixed components thereof, and other conventional additives such as an antioxidant, a buffer solution, a bacteriostatic agent and the like may be added as necessary. Moreover, it can be prepared as an injectable composition such as an aqueous solution, suspension, emulsion and the like, in the form of a pill, capsule, granule or tablet by further adding a diluent, dispersing agent, surfactant, binding agent and lubricant agent.

Кроме того, она предпочтительно может быть приготовлена в соответствии с каждым заболеванием или компонентом с применением способа, описанного в Remington 's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA, с применением подходящего способа в соответствующей области техники.In addition, it may preferably be prepared in accordance with each disease or component using the method described in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA, using a suitable method in the relevant art.

В одном конкретном примере в настоящем изобретении предложена пищевая композиция для предотвращения или улучшения течения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, содержащая Leuconostoc citreum WiKim0104, его культуру, его лизат, его ферментированный продукт или его экстракт в качестве активного ингредиента. Указанная пищевая композиция может включать форму оздоровительного функционального пищевого продукта или напитка, батончика или тому подобного.In one specific example, the present invention provides a nutritional composition for preventing or improving inflammation, obesity or fatty liver disease containing Leuconostoc citreum WiKim0104, a culture thereof, a lysate thereof, a fermented product thereof or an extract thereof as an active ingredient. Said food composition may include the form of a health functional food or drink, bar or the like.

В настоящем изобретении пищевая композиция, содержащая указанный штамм в качестве активного ингредиента, может включать напиток, такой как ферментированное масло, и тому подобное. Соответственно, в настоящем изобретении предложена закваска молочнокислых бактерий для ферментации, состоящая из Leuconostoc citreum WiKim0104 или его культуры.In the present invention, the food composition containing the said strain as an active ingredient may include a beverage such as fermented oil and the like. Accordingly, the present invention provides a lactic acid bacteria starter for fermentation consisting of Leuconostoc citreum WiKim0104 or a culture thereof.

Пищевая композиция согласно настоящему изобретению может быть применена в качестве функционального пищевого продукта или добавлена к различным видам пищевых продуктов, приготовленных тем же способом, что и фармацевтическая композиция. Пища, в которую добавлена композиция согласно настоящему изобретению, включает, например, напитки, витаминные комплексы, продукты питания с биологически активными пищевыми добавками и тому подобное.The food composition of the present invention can be used as a functional food product or added to various types of food products prepared by the same method as the pharmaceutical composition. Food to which the composition according to the present invention is added includes, for example, drinks, vitamin complexes, foods with dietary supplements and the like.

Пищевая композиция согласно настоящему изобретению может содержать компонент, обычно добавляемый при приготовлении пищи, и, например, она содержит белок, углевод, жир, питательные вещества, приправы и ароматизаторы. Примером углевода, описанного выше, является обычный сахар, такой как моносахариды, например, глюкоза, фруктоза и так далее; дисахариды, например, мальтоза, сахароза, олигосахарид и так далее; и полисахариды, например, декстрин, циклодекстрин и так далее, и сахарный спирт, такой как ксилит, сорбит, эритрит и тому подобное. В качестве ароматизатора может быть использован натуральный ароматизатор [тауматин, экстракт стевии (например, ребаудиозид А, глицирризин и так далее)] и синтетический ароматизатор (сахарин, аспартам и так далее). Например, когда пищевую композицию согласно настоящему изобретению готовят в виде продуктов для питья и напитков, она может дополнительно содержать лимонную кислоту, жидкую фруктозу, сахар, глюкозу, уксусную кислоту, яблочную кислоту, фруктовый сок и различные виды растительных экстрактов и тому подобное.The food composition of the present invention may contain a component commonly added during food preparation and, for example, it contains protein, carbohydrate, fat, nutrients, seasonings and flavorings. An example of a carbohydrate described above is ordinary sugar such as monosaccharides such as glucose, fructose and so on; disaccharides, for example maltose, sucrose, oligosaccharide and so on; and polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like, and sugar alcohol such as xylitol, sorbitol, erythritol and the like. As a flavoring agent, natural flavoring [thaumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)] and synthetic flavoring (saccharin, aspartame, etc.) can be used. For example, when the food composition of the present invention is formulated into drinkable and beverage products, it may further contain citric acid, liquid fructose, sugar, glucose, acetic acid, malic acid, fruit juice and various kinds of plant extracts and the like.

Композиция согласно настоящему изобретению может быть использована в качестве кормовой добавки или корма.The composition according to the present invention can be used as a feed additive or feed.

При использовании в качестве кормовой добавки указанная композиция может быть приготовлена в виде сильного (20-90%) концентрата или в форме порошка или гранул. Указанная кормовая добавка может дополнительно содержать любую или одну или более из органических кислот, таких как лимонная кислота, фумаровая кислота, адипиновая кислота, молочная кислота, яблочная кислота и так далее, или фосфатов, таких как фосфат натрия, фосфат калия, кислый пирофосфат, полифосфат и так далее, или природных антиоксидантов, таких как полифенол, катехин, альфа-токоферол, экстракт розмарина, витамин С, экстракт зеленого чая, экстракт лакрицы, хитозан, дубильная кислота, фитиновая кислота и так далее. При использовании в качестве корма указанная композиция может быть приготовлена в виде обычной кормовой формы и может содержать обычный кормовой компонент.When used as a feed additive, the specified composition can be prepared in the form of a strong (20-90%) concentrate or in the form of a powder or granules. Said feed additive may further contain any one or more of organic acids such as citric acid, fumaric acid, adipic acid, lactic acid, malic acid and so on, or phosphates such as sodium phosphate, potassium phosphate, acid pyrophosphate, polyphosphate and so on, or natural antioxidants such as polyphenol, catechin, alpha-tocopherol, rosemary extract, vitamin C, green tea extract, licorice extract, chitosan, tannic acid, phytic acid and so on. When used as feed, the composition may be formulated in a conventional feed form and may contain a conventional feed component.

Кормовая добавка и корм могут дополнительно содержать зерна, например, молотую или дробленую пшеницу, овес, ячмень, кукурузу и рис; корма с растительным белком, например, корма, содержащие рапс, фасоль и подсолнечник в качестве основного компонента; корма с животным белком, например, кровяную муку, мясную муку, костную муку и рыбную муку; сахара и молочные продукты, например, высушенные компоненты, состоящие из различных видов сухого молока и порошка сыворотки, и тому подобное, и, кроме того, могут дополнительно содержать пищевую добавку, усилитель пищеварения и всасывания, стимулятор роста и тому подобное.The feed additive and feed may additionally contain grains, such as ground or cracked wheat, oats, barley, corn and rice; feed with vegetable protein, for example feed containing rapeseed, beans and sunflower as the main component; animal protein feeds such as blood meal, meat meal, bone meal and fish meal; sugars and dairy products, for example, dried components consisting of various types of milk powder and whey powder, and the like, and may further contain a nutritional supplement, a digestion and absorption enhancer, a growth stimulant, and the like.

Указанная кормовая добавка может быть введена животному отдельно или путем объединения с другими кормовыми добавками из числа съедобных носителей. Кроме того, указанная кормовая добавка может быть легко введена животному в виде подкормки, или путем непосредственного смешивания с кормом для животных, или в виде состава для перорального применения отдельно от корма. Когда указанную кормовую добавку вводят отдельно в корм для животных путем объединения с фармацевтически приемлемым съедобным носителем, хорошо известным в соответствующей области техники, она может быть приготовлена в виде состава с немедленным или замедленным высвобождением. Указанный съедобный носитель может быть твердым или жидким, например, он может представлять собой кукурузный крахмал, лактозу, сахарозу, бобовые хлопья, арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло и пропиленгликоль. Когда применяют твердый носитель, указанная кормовая добавка может представлять собой таблетку, капсулу, порошок, троше или пастилку или подкормку в тонкодиспергируемой форме. Когда применяют жидкий носитель, указанная кормовая добавка может иметь форму мягкой желатиновой капсулы, или сиропа, или суспензии, эмульсии или раствора.The specified feed additive can be administered to the animal separately or by combining it with other feed additives from among edible carriers. In addition, said feed additive can be easily administered to the animal as a supplement, either by direct mixing with the animal feed, or as an oral formulation separately from the feed. When the feed additive is added separately to animal feed by combining with a pharmaceutically acceptable edible carrier well known in the art, it may be formulated as an immediate or sustained release formulation. Said edible carrier may be solid or liquid, for example it may be corn starch, lactose, sucrose, bean flakes, peanut oil, olive oil, sesame oil and propylene glycol. When a solid carrier is used, the feed additive may be in the form of a tablet, capsule, powder, troche or lozenge or feed in finely dispersed form. When a liquid carrier is used, said feed additive may be in the form of a soft gelatin capsule, or syrup, or suspension, emulsion or solution.

Кроме того, кормовая добавка и корм могут содержать адъювант, например, консервант, стабилизирующий агент, смачивающий агент или эмульгатор, ускоритель растворения или тому подобное. Указанная кормовая добавка может быть применена путем погружения, распыления или смешивания для добавления к корму для животных.In addition, the feed additive and feed may contain an adjuvant, such as a preservative, stabilizing agent, wetting agent or emulsifier, dissolution accelerator or the like. The feed additive can be applied by dipping, spraying or mixing to be added to animal feed.

Корм или кормовая добавка согласно настоящему изобретению могут быть применены со многими рационами животных, включая рационы млекопитающих, домашней птицы и рыбы.The food or feed additive of the present invention can be used with many animal diets, including mammalian, poultry and fish diets.

В настоящем изобретении животное включает млекопитающих, и настоящее изобретение может быть применено для млекопитающих, не только для свиньи, коровы, овцы, козы, экспериментального грызуна, но также и для экспериментального грызуна, домашнего животного (например, собаки, кошки) и тому подобного, и может быть применено для домашней птицы, курицы, индейки, утки, гуся, фазана и перепела и тому подобного, и может быть применено для рыбы, форели и тому подобного, но не ограничивается перечисленным.In the present invention, the animal includes mammals, and the present invention can be applied to mammals, not only to a pig, a cow, a sheep, a goat, an experimental rodent, but also to an experimental rodent, a pet (for example, a dog, a cat) and the like, and can be applied to poultry, chicken, turkey, duck, goose, pheasant and quail and the like, and can be applied to fish, trout and the like, but is not limited to the above.

Количество штамма Leuconostoc citreum WiKim0104, содержащегося в композиции согласно настоящему изобретению, может составлять от примерно 10⁶ до 10¹² КОЕ/г в расчете на 1 прием, и, например, может составлять от 10⁷ до 10¹¹ КОЕ/г, от 10⁸ до 10¹⁰ КОЕ/г. При введении штамма предпочтительно вводить его в виде живой клетки, и перед приемом он может быть введен в виде убитой или ослабленной формы. Кроме того, при получении с применением супернатанта культуры и тому подобного может быть дополнительно осуществлен процесс стерилизации посредством термической обработки. Количество штамма и суточный уровень потребления, необходимый для достижения минимального эффекта, могут варьироваться в зависимости от состояния организма или здоровья принимающего, но, как правило, могут составлять от примерно 10⁶ до 10¹² КОЕ/г, например, от 10⁷ до 10¹¹ КОЕ/г, от 10⁸ до 10¹⁰ КОЕ/г.The amount of Leuconostoc citreum strain WiKim0104 contained in the composition of the present invention may be from about 10 ⁶ to 10 ¹² CFU/g per dose, and, for example, may be from 10 ⁷ to 10 ¹¹ CFU/g, from 10 ⁸ up to 10 ¹⁰ CFU/g. When administering a strain, it is preferable to administer it as a live cell, and it may be administered as a killed or weakened form before administration. In addition, when produced using culture supernatant and the like, a sterilization process by heat treatment can be further carried out. The amount of strain and daily intake required to achieve minimal effect may vary depending on the body condition or health of the recipient, but can generally range from about ¹⁰ ⁶ to 10 ¹² CFU/g, ^e.g. CFU/g, from 10 ⁸ to 10 ¹⁰ CFU/g.

Другой вариант реализации настоящего изобретения может быть предложен в качестве применения штамма Leuconostoc citreum WiKim0104 для предотвращения, лечения или улучшения течения воспаления, ожирения или жировой болезни печени человека или животного.Another embodiment of the present invention can be proposed as the use of the Leuconostoc citreum strain WiKim0104 for the prevention, treatment or amelioration of inflammation, obesity or fatty liver disease in humans or animals.

В другом варианте реализации настоящего изобретения предложено применение штамма Leuconostoc citreum WiKim0104, его культуры, его лизата или его экстракта для предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени.Another embodiment of the present invention provides the use of the Leuconostoc citreum strain WiKim0104, a culture thereof, a lysate thereof, or an extract thereof for the prevention, amelioration, or treatment of inflammation, obesity, or fatty liver disease.

В другом варианте реализации настоящего изобретения предложены штамм Leuconostoc citreum WiKim0104, его культура, его лизат или его экстракт для предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени.In another embodiment, the present invention provides the Leuconostoc citreum strain WiKim0104, a culture thereof, a lysate thereof, or an extract thereof for the prevention, amelioration, or treatment of inflammation, obesity, or fatty liver disease.

В одном варианте реализации настоящего изобретения предложен способ предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени, включающий введение композиции, содержащей штамм Leuconostoc citreum WiKim0104, его культуру, его лизат или его экстракт, субъекту, нуждающемуся в этом. Субъект представляет собой животное, включая человека, и пример животного может быть включен в объем настоящего изобретения при условии, что вышеупомянутые животные потребляют корм. Жировая болезнь печени может включать любое одно или более заболеваний из группы, состоящей из простой жировой болезни печени, неалкогольного стеатогепатита, фиброза печени и цирроза печени.In one embodiment, the present invention provides a method for preventing, ameliorating, or treating inflammation, obesity, or fatty liver disease, comprising administering a composition containing Leuconostoc citreum strain WiKim0104, a culture thereof, a lysate thereof, or an extract thereof to a subject in need thereof. The subject is an animal, including a human, and an example of an animal may be included within the scope of the present invention provided that the above-mentioned animals consume food. Fatty liver disease may include any one or more of the group consisting of simple fatty liver disease, nonalcoholic steatohepatitis, liver fibrosis, and cirrhosis.

Преимущества и признаки настоящего изобретения и способы их достижения станут очевидны из примеров, подробно описанных ниже. Однако настоящее изобретение не ограничивается примерами, раскрытыми ниже, но будет реализовано в различных формах, и примеры представлены исключительно для того, чтобы сделать описание настоящего изобретения полным и полностью проинформировать специалистов в области техники, к которой относится настоящее изобретение, объем изобретения и настоящее изобретение определяются исключительно объемом формулы изобретения.The advantages and features of the present invention and methods for achieving them will become apparent from the examples described in detail below. However, the present invention is not limited to the examples disclosed below, but will be embodied in various forms, and the examples are presented solely to make the description of the present invention complete and fully inform those skilled in the art to which the present invention relates, the scope of the invention and the present invention are defined solely by the scope of the claims.

[ПОЛЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ][BENEFITIVE EFFECTS]

Штамм Leuconostoc citreum WiKim0104 согласно настоящему изобретению представляет собой молочнокислую бактерию, выделенную из Kimchi, и демонстрирует ингибирующее действие на развитие жировой болезни печени путем ингибирования накопления внутриклеточного жира и снижения экспрессии генов, связанных с жировой болезнью печени, и, следовательно, он может по-разному применяться для предотвращения, улучшения течения и лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени. Кроме того, он может быть эффективно применен в качестве закваски.The Leuconostoc citreum strain WiKim0104 according to the present invention is a lactic acid bacterium isolated from Kimchi and exhibits an inhibitory effect on the development of fatty liver disease by inhibiting the accumulation of intracellular fat and reducing the expression of genes associated with fatty liver disease, and therefore it can used to prevent, improve and treat inflammation, obesity or fatty liver disease. In addition, it can be effectively used as a starter.

[КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ][BRIEF DESCRIPTION OF DRAWINGS]

Фиг. 1 представляет собой график определения уровня экспрессии в клетках HepG2 в зависимости от обработки штаммом WiKim0104 согласно настоящему изобретению. L-LAB1 представляет собой Leu. citreum WiKim0104, a L-LAB2 представляет собой Leu. Mesenteroides, а также L-LAB3 и L-LAB4 представляют собой выделенные в лаборатории штаммы Leu. citreum №2, №3, соответственно.Fig. 1 is a graph showing the expression level in HepG2 cells as a function of treatment with the WiKim0104 strain of the present invention. L-LAB1 is Leu. citreum WiKim0104, and L-LAB2 is Leu. Mesenteroides and L-LAB3 and L-LAB4 are laboratory-isolated Leu strains. citreum No. 2, No. 3, respectively.

Фиг. 2а - 2с представляют собой графики, демонстрирующие массу тела и значения показателей функции печени (GPT, GOT) в крови в модели жировой болезни печени у мышей в зависимости от получения штамма WiKim0104 согласно настоящему изобретению. *Р<0,05, по сравнению с ND; #Р<0,05, по сравнению с HFD. L-LAB1 представляет собой Leu. citreum WiKim0104.Fig. 2a to 2c are graphs showing body weight and blood liver function test values (GPT, GOT) in a mouse model of fatty liver disease depending on the production of the WiKim0104 strain of the present invention. *P<0.05, compared with ND; #P<0.05, compared with HFD. L-LAB1 is Leu. citreum WiKim0104.

Фиг. 3а - 3с представляют собой графики определения уровня экспрессии генов, связанных с тканями печени, в модели жировой болезни печени у мышей в зависимости от получения штамма WiKim0104 согласно настоящему изобретению. *Р<0,05, по сравнению с ND; #Р<0,05, по сравнению с HFD. L-LAB1 представляет собой Leu. citreum WiKim0104.Fig. 3a to 3c are graphs of the expression level of liver tissue-related genes in a mouse model of fatty liver disease as a function of production of the WiKim0104 strain of the present invention. *P<0.05, compared with ND; #P<0.05, compared with HFD. L-LAB1 is Leu. citreum WiKim0104.

На фиг. 4 показана SEQ ID NO: 1 согласно настоящей заявке.In fig. 4 shows SEQ ID NO: 1 according to the present application.

[ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ][IMPLEMENTATION OF THE INVENTION]

Далее настоящее изобретение будет подробно описано с помощью примеров. Следующие примеры предназначены исключительно для иллюстрации настоящего изобретения, но объем настоящего изобретения не ограничивается следующими примерами.Hereinafter, the present invention will be described in detail with the help of examples. The following examples are intended solely to illustrate the present invention, but the scope of the present invention is not limited to the following examples.

Пример 1: Идентификация Leuconostoc citreum WiKim0104Example 1: Identification of Leuconostoc citreum WiKim0104

Одиночную бактериальную колонию, полученную путем нанесения неразбавленного раствора экстракта Kimchi на среду MRS, собирали с помощью петли и культивировали в бульоне MRS. Экстракцию ДНК проводили с использованием QIAamp DNA Mini Kit (QIAgen, Германия). Экстрагирование ДНК подтверждали с использованием 1% агарозного геля, и для амплификации гена 16S рДНК проводили полимеразную цепную реакцию (ПЦР) с использованием экстрагированной геномной ДНК в качестве матрицы, и выполняли 30 циклов в условиях ПЦР, включающих денатурацию при 95°С в течение 1 минуты, отжиг при 45°С в течение 1 минуты и элонгацию при 72°С в течение 1 минуты и 30 секунд. Для полученных продуктов ПЦР последовательность анализировали путем запроса в Macrogen (Сеул, Корея). Идентификацию бактерий проводили с помощью индуктивного анализа поисковой системы Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) Национального центра биотехнологической информации (NCBI, www.ncbi.nlm.nih.gov) для последовательности 16S рДНК.A single bacterial colony obtained by applying undiluted Kimchi extract solution to MRS medium was collected using a loop and cultured in MRS broth. DNA extraction was performed using a QIAamp DNA Mini Kit (QIAgen, Germany). DNA extraction was confirmed using a 1% agarose gel, and polymerase chain reaction (PCR) was performed to amplify the 16S rDNA gene using the extracted genomic DNA as a template, and 30 cycles were performed under PCR conditions including denaturation at 95°C for 1 minute , annealing at 45°C for 1 minute and elongation at 72°C for 1 minute and 30 seconds. For the resulting PCR products, the sequence was analyzed by querying Macrogen (Seoul, Korea). Bacterial identification was performed using inductive analysis of the National Center for Biotechnology Information (NCBI, www.ncbi.nlm.nih.gov) Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) search engine for the 16S rDNA sequence.

Было показано, что штамм, выделенный в соответствии с примером настоящего изобретения, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, исходя из анализа последовательности 16S рДНК для идентификации микроорганизмов.The strain isolated in accordance with an example of the present invention has been shown to have the nucleotide sequence SEQ ID NO: 1 based on 16S rDNA sequence analysis for microbial identification.

Соответственно, микроорганизм согласно настоящему изобретению был назван Leuconostoc citreum WiKim0104 и депонирован в Корейском центре культур микроорганизмов 14 декабря 2018 года (КССМ12420Р).Accordingly, the microorganism according to the present invention was named Leuconostoc citreum WiKim0104 and deposited in the Korean Microbial Culture Center on December 14, 2018 (KSCM12420P).

Пример 2: Подтверждение эффективности ингибирования накопления жира и воспаления в гепатоцитах (клетках HepG2) штаммом Leuconostoc citreum WiKim0104Example 2: Confirmation of the effectiveness of inhibition of fat accumulation and inflammation in hepatocytes (HepG2 cells) by Leuconostoc citreum strain WiKim0104

Экспериментальный метод in vitro был разработан с использованием системы Transwell для имитации оси кишечник-печень организма человека.An in vitro experimental method was developed using the Transwell system to mimic the gut-liver axis of the human body.

Молочнокислую бактерию Leuconostoc citreum WiKim0104 культивировали в среде MRS при 30°С в течение 24 часов. В конце культивирования для выделения микробных клеток культуру подготавливали путем центрифугирования при 6000 об/мин в течение 5 минут и промывания ФСБ для удаления всех оставшихся компонентов среды.The lactic acid bacterium Leuconostoc citreum WiKim0104 was cultured in MRS medium at 30°C for 24 hours. At the end of the culture to isolate microbial cells, the culture was prepared by centrifugation at 6000 rpm for 5 minutes and washing with PBS to remove all remaining components of the medium.

Для культивирования энтероцитов (клетки НТ-29) и гепатоцитов (клетки HepG2) использовали среду RPMI-1640, в которую добавляли пенициллин/стрептомицин и 10% фетальной бычьей сыворотки, и совместную культуру получали с использованием 6-луночного планшета системы Transwell. Перед совместным культивированием энтероциты разделяли на аликвоты в мембране Transwell, а гепатоциты разделяли на аликвоты в 6-луночном планшете, и их подготавливали путем культивирования в условиях 37°С, 5% СО₂, соответственно.Enterocytes (HT-29 cells) and hepatocytes (HepG2 cells) were cultured using RPMI-1640 medium supplemented with penicillin/streptomycin and 10% fetal bovine serum, and a co-culture was obtained using a 6-well Transwell plate. Before co-culture, enterocytes were aliquoted in a Transwell membrane and hepatocytes were aliquoted in a 6-well plate and prepared by culturing at 37°C, 5% CO ₂ , respectively.

Когда энтероциты (клетки НТ-29) и гепатоциты (клетки HepG2) вырастали примерно на 80% в культуральной чашке, культуральный раствор заменяли средой без ФБС и культивировали в течение 16 часов. После культивирования полученные молочнокислые бактерии в количестве 1Х10⁷ КОЕ переносили к энтероцитам, а совместное культивирование молочнокислых бактерий и энтероцитов с гепатоцитами проводили путем сборки системы Transwell, и продукцию жира в гепатоцитах индуцировали обработкой 0,1 мМ пальмитиновой кислоты в течение 48 часов. После культивирования с 0,1 мМ пальмитиновой кислоты продолжительностью 48 часов для выяснения уровня экспрессии генов, связанных с метаболизмом жиров и воспалением, в гепатоцитах в зависимости от обработки штаммом Leuconostoc citreum WiKim0104 проводили количественную полимеразную цепную реакцию (кПЦР) в реальном времени. В результате, как показано на фиг. 1, можно было подтвердить, что экспрессия генов синтазы жирных кислот (FAS) и фермента биосинтеза ненасыщенных жирных кислот (стеароил-КоА-десатураза, SCD), а также факторов, связанных с воспалением, СОХ-2 (циклооксигеназа-2) и NF-κВ (ядерный фактор каппа-В), была значительно снижена в гепатоцитах (клетки HepG2), которые культивировали с 0,1 мМ пальмитиновой кислоты совместно с Leuconostoc citreum WiKim0104, по сравнению с гепатоцитами (контроль), которые обрабатывали 0,1 мМ пальмитиновой кислоты.When enterocytes (HT-29 cells) and hepatocytes (HepG2 cells) had grown to approximately 80% in the culture dish, the culture solution was replaced with medium without PBS and cultured for 16 hours. After cultivation, the resulting lactic acid bacteria in the amount of 1X10 ⁷ CFU were transferred to enterocytes, and co-cultivation of lactic acid bacteria and enterocytes with hepatocytes was carried out by assembling the Transwell system, and fat production in hepatocytes was induced by treatment with 0.1 mM palmitic acid for 48 hours. After culture with 0.1 mM palmitic acid for 48 hours, quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) was performed to elucidate the expression levels of genes associated with fat metabolism and inflammation in hepatocytes depending on treatment with Leuconostoc citreum strain WiKim0104. As a result, as shown in FIG. 1, it could be confirmed that the expression of fatty acid synthase (FAS) and unsaturated fatty acid biosynthesis enzyme (stearoyl-CoA desaturase, SCD) genes, as well as inflammation-related factors COX-2 (cyclooxygenase-2) and NF- κB (nuclear factor kappa B) was significantly reduced in hepatocytes (HepG2 cells) that were cultured with 0.1 mM palmitic acid along with Leuconostoc citreum WiKim0104, compared to hepatocytes (control) that were treated with 0.1 mM palmitic acid .

Пример 3: Подтверждение эффективности снижения массы тела и улучшения показателей функции печени в кровиExample 3: Confirmation of the effectiveness of weight loss and improvement of liver function tests in the blood

Пятинедельных самцов мышей (C57BL/6J) адаптировали к кормовой диете (CD; Пурина, Корея) в среде помещения для разведения в условиях температуры 20±2°С, влажности 50±5% и свето-темнового цикла, составляющего 12 часов, в течение 1 недели. Экспериментальные животные получали нормальную диету (D12450B, Research Diets, Нью-Брансуик, Нью-Джерси) или диету с высоким содержанием жиров (D12451, Research Diets, Нью-Брансуик, Нью-Джерси), в которой 45% от общего количества калорий составляли жиры, и были адаптированы к указанной диете в течение 1 недели, после чего был проведен эксперимент. Экспериментальные группы состояли в общей сложности из 3 групп, которые представляли собой группу приема нормальной диеты (ND), группу приема диеты с высоким содержанием жиров (HFD), группу приема, получавшую ежедневное пероральное введение Leuconostoc citreum WiKim0104 в концентрации 2×10⁹ КОЕ/200 мкл совместно с диетой с высоким содержанием жиров (HFD+L-LAB1), и жировую болезнь печени индуцировали посредством диеты в течение 20 недель. Группе приема нормальной диеты (ND) и группе приема диеты с высоким содержанием жиров (HFD) перорально вводили равное количество фосфатно-солевого буфера (ФСБ) ежедневно. Через 20 недель после проведения эксперимента измеряли массу тела в каждой экспериментальной группе. Кроме того, для определения показателей функции печени (GOT в сыворотке, GPT в сыворотке) в крови экспериментальных групп животные не получали пищи в течение 16 часов до окончания эксперимента, кровь собирали из полой вены брюшной полости, сыворотку отделяли и использовали в эксперименте.Five-week-old male mice (C57BL/6J) were acclimated to a chow diet (CD; Purina, Korea) in a breeding room environment at 20 ± 2°C, 50 ± 5% humidity, and a 12-h light-dark cycle for 1 week. Experimental animals received a normal diet (D12450B, Research Diets, New Brunswick, NJ) or a high-fat diet (D12451, Research Diets, New Brunswick, NJ) in which 45% of total calories came from fat , and were adapted to the specified diet for 1 week, after which the experiment was carried out. The experimental groups consisted of a total of 3 groups, which were a normal diet (ND) group, a high-fat diet (HFD) group, a daily oral administration of Leuconostoc citreum WiKim0104 at a concentration of 2×10 ⁹ CFU/ 200 μl together with a high fat diet (HFD+L-LAB1), and fatty liver disease was induced by diet for 20 weeks. The normal diet (ND) group and the high-fat diet (HFD) group were orally administered equal amounts of phosphate-buffered saline (PBS) daily. 20 weeks after the experiment, body weight was measured in each experimental group. In addition, to determine liver function parameters (serum GOT, serum GPT) in the blood of the experimental groups, the animals did not receive food for 16 hours before the end of the experiment, blood was collected from the abdominal vena cava, the serum was separated and used in the experiment.

GOT и GPT в крови определяли с помощью автоматического биохимического измерительного устройства (FUJI DRI-CHEM 7000i, Fujifilm, Токио, Япония), и на фиг. 2а - фиг. 2с ГЛУТАМАТ-ОКСАЛОАЦЕТАТ-ТРАНСАМИНАЗА (GOT) и ГЛУТАМАТ-ПИРУВАТ-ТРАНСАМИНАЗА (GPT) в крови показаны в виде графиков.GOT and GPT in blood were determined using an automatic biochemical measuring device (FUJI DRI-CHEM 7000i, Fujifilm, Tokyo, Japan), and FIG. 2a - fig. 2c GLUTAMATE OXALACETATE TRANSAMINASE (GOT) and GLUTAMATE PYRUVATE TRANSAMINASE (GPT) in blood are shown as graphs.

В результате, как показано на фиг. 2а - фиг. 2с, можно было подтвердить, что значения массы тела и показателей функции печени в крови были значительно снижены, когда диета с высоким содержанием жиров и Leuconostoc citreum WiKim0104 были получены совместно (HFD+L-LAB1), по сравнению с таковыми у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров (HFD).As a result, as shown in FIG. 2a - fig. 2c, it could be confirmed that the values of body weight and blood liver function tests were significantly reduced when the high-fat diet and Leuconostoc citreum WiKim0104 were co-fed (HFD+L-LAB1), compared with those of mice fed the diet high fat (HFD).

Пример 4: Подтверждение уровня экспрессии генов, связанных с метаболизмом жиров, воспалением и фиброзом печени, в ткани печениExample 4: Confirmation of the expression level of genes associated with fat metabolism, inflammation and liver fibrosis in liver tissue

Для выяснения уровня экспрессии генов, связанных с метаболизмом жиров, воспалением и фиброзом печени, в ткани печени в зависимости от приема штамма Leuconostoc citreum WiKim0104 проводили кПЦР (количественную цепную полимеразную реакцию в реальном времени) с использованием ткани печени, выделенной после окончания эксперимента.To determine the level of expression of genes associated with fat metabolism, inflammation and liver fibrosis in liver tissue depending on the intake of the Leuconostoc citreum strain WiKim0104, qPCR (quantitative real-time polymerase chain reaction) was performed using liver tissue isolated after the end of the experiment.

В результате, как показано на фиг. 3а - фиг. 3с, можно было подтвердить, что экспрессия генов фактора, связанного с метаболизмом жиров, CD36 (кластер дифференцировки 36), фактора, связанного с воспалением, NF-κВ (ядерный фактор каппа-В), и фактора, связанного с фиброзом печени, Collal (коллаген типа I альфа 1), была снижена в соответствии с приемом штамма Leuconostoc citreum WiKim0104.As a result, as shown in FIG. 3a - fig. 3c, it could be confirmed that the gene expression of fat metabolism-related factor CD36 (cluster of differentiation 36), inflammation-related factor NF-κB (nuclear factor kappa B), and liver fibrosis-related factor Collal ( collagen type I alpha 1) was reduced in accordance with the intake of Leuconostoc citreum strain WiKim0104.

[ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ][INDUSTRIAL APPLICABILITY]

В настоящем изобретении предложен новый штамм. Кроме того, штамм согласно настоящему изобретению может быть применен в качестве пищевого продукта, корма или кормовой добавки, фармацевтической композиции для предотвращения, улучшения течения или лечения воспаления, ожирения или жировой болезни печени или тому подобного.The present invention proposes a new strain. In addition, the strain of the present invention can be used as a food product, feed or feed additive, pharmaceutical composition for preventing, ameliorating or treating inflammation, obesity or fatty liver disease or the like.

[Идентификационный номер][An identification number]

Наименование органа по депонированию: Корейский центр культур микроорганизмов (за рубежом)Name of depositing authority: Korea Microbial Culture Center (overseas)

Идентификационный номер: КССМ12420РIdentification number: KSSM12420R

Дата регистрации: 2018.12.14.Registration date: 2018.12.14.

--->--->

Перечень последовательностей List of sequences

<110> Korea Food Research Institute<110> Korea Food Research Institute

<120> Композиция для предотвращения, улучшения течения или лечения<120> Composition for prevention, improvement or treatment

ожирения или жировой болезни печени, содержащая Leuconostoc obesity or fatty liver disease containing Leuconostoc

citreum WiKim0104 citreum WiKim0104

<130> PCT20-008<130> PCT20-008

<160> 1<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1<210> 1

<211> 1430<211> 1430

<212> ДНК<212> DNA

<213> Неизвестно<213> Unknown

<220><220>

<223> Leuconostoc citreum WiKim0104<223> Leuconostoc citreum WiKim0104

<400> 1<400> 1

gatgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gcgcagcgag aggtgcttgc gatgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gcgcagcgag aggtgcttgc

60 60

acctttcaag cgagtggcga acgggtgagt aacacgtgga taacctgcct caaggctggg acctttcaag cgagtggcga acgggtgagt aacacgtgga taacctgcct caaggctggg

120 120

gataacattt ggaaacagat gctaataccg aataaaactt agtatcgcat gatatcaagt gataacattt ggaaacagat gctaataccg aataaaactt agtatcgcat gatatcaagt

180 180

taaaaggcgc tacggcgtca cctagagatg gatccgcggt gcattagtta gttggtgggg taaaaggcgc tacggcgtca cctagagatg gatccgcggt gcattagtta gttggtgggg

240 240

taaaggctta ccaagacgat gatgcatagc cgagttgaga gactgatcgg ccacattggg taaaggctta ccaagacgat gatgcatagc cgagttgaga gactgatcgg ccacattggg

300 300

actgagacac ggcccaaact cctacgggag gctgcagtag ggaatcttcc acaatgggcg actgagacac ggcccaaact cctacgggag gctgcagtag ggaatcttcc acaatgggcg

360 360

caagcctgat ggagcaacgc cgcgtgtgtg atgaaggctt tcgggtcgta aagcactgtt caagcctgat ggagcaacgc cgcgtgtgtg atgaaggctt tcgggtcgta aagcactgtt

420 420

gtatgggaag aaatgctaaa atagggaatg attttagttt gacggtacca taccagaaag gtatgggaag aaatgctaaa atagggaatg attttagttt gacggtacca taccagaaag

480 480

ggacggctaa atacgtgcca gcagccgcgg taatacgtat gtcccgagcg ttatccggat ggacggctaa atacgtgcca gcagccgcgg taatacgtat gtcccgagcg ttatccggat

540 540

ttattgggcg taaagcgagc gcagacggtt gattaagtct gatgtgaaag cccggagctc ttattgggcg taaagcgagc gcagacggtt gattaagtct gatgtgaaag cccggagctc

600 600

aactccggaa tggcattgga aactggttaa cttgagtgtt gtagaggtaa gtggaactcc aactccggaa tggcattgga aactggttaa cttgagtgtt gtagaggtaa gtggaactcc

660 660

atgtgtagcg gtggaatgcg tagatatatg gaagaacacc agtggcgaag gcggcttact atgtgtagcg gtggaatgcg tagatatatg gaagaacacc agtggcgaag gcggcttact

720 720

ggacaacaac tgacgttgag gctcgaaagt gtgggtagca aacaggatta gataccctgg ggacaacaac tgacgttgag gctcgaaagt gtgggtagca aacaggatta gataccctgg

780 780

tagtccacac cgtaaacgat gaatactagg tgttaggagg tttccgcctc ttagtgccga tagtccacac cgtaaacgat gaatactagg tgttaggagg tttccgcctc ttagtgccga

840 840

agctaacgca ttaagtattc cgcctgggga gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa agctaacgca ttaagtattc cgcctgggga gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa

900 900

ttgacgggga cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac ttgacgggga cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac

960 960

cttaccaggt cttgacatcc tttgaagctt ttagagatag aagtgttctc ttcggagaca cttaccaggt cttgacatcc tttgaagctt ttagagatag aagtgttctc ttcggagaca

1020 1020

aagtgacagg tggtgcatgg tcgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc aagtgacagg tggtgcatgg tcgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc

1080 1080

gcaacgagcg caacccttat tgttagttgc cagcattcag ttgggcactc tagcgagact gcaacgagcg caacccttat tgttagttgc cagcattcag ttgggcactc tagcgagact

1140 1140

gccggtgaca aaccggagga aggcggggac gacgtcagat catcatgccc cttatgacct gccggtgaca aaccggagga aggcggggac gacgtcagat catcatgccc cttatgacct

1200 1200

gggctacaca cgtgctacaa tggcgtatac aacgagttgc caacctgcga aggtgagcta gggctacaca cgtgctacaa tggcgtatac aacgagttgc caacctgcga aggtgagcta

1260 1260

atctcttaaa gtacgtctca gttcggactg cagtctgcaa ctcgactgca cgaagtcgga atctcttaaa gtacgtctca gttcggactg cagtctgcaa ctcgactgca cgaagtcgga

1320 1320

atcgctagta atcgcggatc agcacgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac atcgctagta atcgcggatc agcacgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac

1380 1380

cgcccgtcac accatgggag tttgtaatgc ccaaagccgg tggcctaacc cgcccgtcac accatgggag tttgtaatgc ccaaagccgg tggcctaacc

1430 1430

<---<---

Claims

1. Leuconostoc citreum strain WiKim0104 with identification number KCCM12420P for the prevention, relief or treatment of a disease associated with the accumulation of fat in hepatocytes, selected from inflammation, obesity or fatty liver disease.

2. A composition for preventing or alleviating a disease associated with the accumulation of fat in hepatocytes, selected from inflammation, obesity or fatty liver disease, containing an effective amount of Leuconostoc citreum strain WiKim0104 with identification number KCCM12420P or a culture thereof as an active ingredient and one or more pharmaceuticals acceptable media.

3. The composition of claim 2, wherein fatty liver disease includes any one or more diseases selected from the group consisting of simple fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis and cirrhosis of the liver.

4. The composition according to claim 2, wherein said composition is a food composition, a lactic acid bacteria starter composition for food fermentation, a feed or feed additive composition, or a pharmaceutical composition.

5. The composition according to claim 4, where the food composition is a health functional food product, drink, bar or fermented oil.

6. Use of Leuconostoc citreum strain WiKim0104 with identification number KCCM12420P or a culture thereof for the prevention, amelioration or treatment of a disease associated with the accumulation of fat in hepatocytes, selected from inflammation, obesity or fatty liver disease.

7. Use according to claim 6, wherein fatty liver disease includes any one or more diseases selected from the group consisting of simple fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis and cirrhosis of the liver.

8. The use according to claim 6, carried out in the form of the use of a food composition, a lactic acid bacteria starter composition for food fermentation, a feed composition or feed additive or a pharmaceutical composition.

9. Use according to claim 8, wherein the food composition is a health functional food product, drink, bar or fermented oil.

10. A method of preventing, alleviating or treating a disease associated with the accumulation of fat in hepatocytes, selected from inflammation, obesity or fatty liver disease, comprising administering a composition containing the Leuconostoc citreum strain WiKim0104 with identification number KCCM12420P or a culture thereof to a subject in need thereof .

11. The method of claim 10, wherein the subject is an animal, including a human.

12. The method of claim 10, wherein fatty liver disease includes any one or more diseases selected from the group consisting of simple fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis and cirrhosis of the liver.