RU2761626C2

RU2761626C2 - ПРОИЗВОДНЫЕ 5-(7Н-ПИРРОЛО[2,3-d]ПИРИМИДИН-4-ИЛ)-5-АЗАСПИРО[2.5]ОКТАН-8-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ НОВЫХ ИНГИБИТОРОВ JAK-КИНАЗЫ

Info

Publication number: RU2761626C2
Application number: RU2019126496A
Authority: RU
Inventors: Могенс Ларсен; Андреас Ритзен; Бьярнэ НОРРЕМАРК; Даниель Родригез Греве
Original assignee: Лео Фарма А/С
Priority date: 2017-02-03
Filing date: 2018-02-01
Publication date: 2021-12-13
Also published as: RU2019126496A; WO2018141842A1; EP3576743B1; JP7101176B2; EP3576743A1; RU2019126496A3; CN110248663A; US20200009147A1; US10799507B2; JP2020506168A

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, или к его фармацевтически приемлемой соли, гидрату или сольвату, которые являются ингибиторами Янус–киназы, к фармацевтической композиции, содержащей данные соединения, и к способу предотвращения, лечения или ослабления заболеваний иммунной системы.В формуле I Х представляет собой NH или О; R1и R2, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода, дейтерия, гидроксила, (C1–C3)алкила и гидрокси(C1–C3)алкила; n представляет собой целое число, выбранное из 1–3; Y представляет собой химическую связь, –C(O)O–*, –C(O)OR3–* или –C(O)NHR3–*, где * обозначает точку присоединения к W и где R3представляет собой (C1–C4)алкилен; W выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, (C3–C7)циклоалкила и 4–6–членного гетероциклоалкила, содержащего один гетероатом, выбранный из O иS, где указанный фенил, пиридил, (C3–C7)циклоалкил и 4–6–членный гетероциклоалкил, содержащий один гетероатом, выбранный из О и S, необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из гидроксила, циано, галогена, оксо, (С1–С4)алкила, гидроксил(С1–С4)алкила, циано(C1–C4)алкила, (C1–C4)алкокси и –SO2NH2. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 табл., 164 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение относится к соединениям, которые являются ингибиторами протеинтирозинкиназ, таких как Янус–киназы, к указанным соединениям для применения в терапии, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и к способам лечения заболеваний с помощью указанных соединений.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение относится к новым соединениям, которые являются ингибиторами протеинтирозинкиназ, таких как Янус–киназы, JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2.

Протеинтирозинкиназы представляют собой семейство ферментов, катализирующих перенос концевого фосфата аденозинтрифосфата в остатки тирозина в белковых субстратах. Фосфорилирование остатков тирозина на белковых субстратах приводит к трансдукции внутриклеточных сигналов, которые регулируют широкий спектр процессов, таких как дифференциация и активация клеточного роста, метаболизм, кроветворение, защита хозяина и иммунорегуляция. Поскольку выяснение молекулярных механизмов в ряде воспалительных состояний и других расстройств иммунной системы (например, аутоиммунных заболеваний), подчеркнуло критическую роль этих внутриклеточных сигнальных путей, модуляция активности протеинтирозинкиназ представляется привлекательным путем управления воспалительными заболеваниями. Было идентифицировано большое количество протеинтирозинкиназ, которые могут быть рецепторными протеинтирозинкиназами, например, рецептор инсулина или нерецепторными протеинтирозинкиназами.

Протеинтирозинкиназы JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2 избирательно ассоциируются с цитоплазматическими доменами различных цепей цитокиновых рецепторов и играют важную роль в цитокинзависимой регуляции гомеостаза ткани, инициации врожденного иммунитета, формировании адаптивных иммунных реакций и воспалительных процессах. Они имеют решающее значение в передаче сигнала в ответ на их активацию посредством фосфорилирования тирозина путем стимуляции цитокиновых рецепторов. (1) Schindler C. и др. JAK–STAT signaling: from interferons to cytokines. J. Biol. Chem 2007; 282(28):20059; (2) O’Shea J.J. Targeting the Jak/STAT pathway for immunosuppression; Ann. Rheum. Dis. 2004; 63 Suppl 2:ii67; (3) Schindler C. Series introduction. JAK–STAT signaling in human disease; J. Clin. Invest. 2002; 109(9):1133); (4) O’Shea и др. Cell, Vol. 109, S121–S131, 2002; (5) Schwartz D.M. и др. Nat. Rev. Rheumatol., 2016; 12(1): 25–36; (6) O’Shea и др. New. Eng. J. Med. 2013; 368(2): 161–170.

В то время как JAK1, JAK2 и TYK2 экспрессируются повсеместно, JAK3 преимущественно экспрессируется в гематопоэтических клетках.

JAK1 играет решающую роль в опосредовании биологических ответов, и JAK1 широко экспрессируется и ассоциируется с несколькими основными семействами цитокиновых рецепторов. Она участвует в передаче сигналов членами семейства субъединиц рецепторов IL–2 (IL–2, IL–4, IL–7R, IL–9R, IL–15R и IL–21R), семейством рецепторов IL–4 (IL–4R, IL–13R), семейством рецепторов gp130 и цитокиновыми рецепторами класса II, включающими семейство рецепторов IL–10 и семейство рецепторов IFN типа I и типа II.

JAK2 участвует в передаче сигналов несколькими одноцепочечными рецепторами (включая Epo–R, GHR, PRL–R), семейством рецепторов IL–3, семейством рецепторов gp130, семейством рецепторов IL–12 (IL–12 и IL–23) и некоторыми семействами цитокиновых рецепторов класса II. Таким образом, JAK2 играет решающую роль в передаче сигналов для Epo, IL–3, GM–CSF, IL–5 и IFNγ. Мыши, нокаутированные по JAK2, имеют эмбриональный летальный фенотип.

JAK3 участвует в передаче сигналов рецепторами, которые используют общую гамма–цепь семейства цитокиновых рецепторов типа I, также известными как семейство рецепторов IL–2 (например, IL–2, IL–4, IL–7, IL–9, IL–15 и IL–21). Популяции XSCID пациентов были идентифицированы с пониженными уровнями белка JAK3 или с генетическими дефектами в общей гамма–цепи, что позволяет предположить, что иммунная супрессия должна быть результатом блокирования передачи сигналов по пути JAK3. Исследования на животных показали, что JAK3 не только играет решающую роль в созревании В– и Т–лимфоцитов, но и что JAK3 необходима для поддержания функции Т–клеток. Модуляция иммунной активности с помощью данного нового механизма может оказаться полезной при лечении пролиферативных нарушений Т–клеток, таких как заболевания иммунной системы, в частности аутоиммунные заболевания.

TYK2 участвует в передаче сигналов интерферонов типа I, IL–6, IL–10, IL–12 и IL–23. Был описан пациент–человек с дефицитом TYK2, и у этого пациента было первичное нарушение иммунодефицита, характеризуемое как гипер–IgE–подобный синдром со многими оппортунистическими инфекциями вирусами, бактериями и грибками. Поскольку было обнаружено, что IL–23 играет важную роль во многих хронических воспалительных состояниях, ингибитор TYK2, по–видимому, может быть очень эффективным при лечении заболевших, на которые влияет IL–23.

Ожидается, что ингибиторы Янус–киназ будут полезны при лечении воспалительных и неинфекционных аутоиммунных заболеваний, в которые вовлечены эти киназы. Недавно для лечения ревматоидного артрита и миелофиброза были запущены пан–ингибиторы JAK тофацитиниб и руксолитиниб, соответственно.

Следовательно, ингибиторы JAK могут, кроме того, быть полезными при лечении заболеваний, связанных с активностью Янус–киназ, включая, например, кожные заболевания, такие как пролиферативные и воспалительные кожные заболевания, псориаз, атопический дерматит, склеродермия, розацеа, рак кожи, дерматит, герпетиформный дерматит, дерматомиозит, витилиго, очаговая алопеция, контактный дерматит, экзема, ксероз, крапивница и хронический идиопатический зуд; респираторные заболевания, такие как астма, хроническая обструктивная болезнь легких, легочный фиброз, муковисцидоз, ринит, бронхиолит, биссиноз, пневмокониоз, бронхоэктазия, гиперчувствительный пневмонит, рак легких, мезотелиома и саркоидоз; желудочно–кишечные заболевания, такие как воспалительные заболевания кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, забрюшинный фиброз, целиакия и рак; заболевания глаз, такие как тяжелая миастения, синдром Шегрена, конъюнктивит, склерит, увеит, синдром сухого глаза, кератит, ирит; системные показания, такие как волчанка, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, диабет I типа и осложнения от диабета, рак, болезнь Бехтерева и псориатический артрит; а также другие аутоиммунные заболевания и показания, при которых иммуносупрессия была бы желательна, например, при трансплантации органов.

В WO 2011/003418 описаны гетероциклические соединения в качестве ингибиторов JAK–рецепторов и протеинтирозинкиназы.

В WO 2012/093169 описаны новые сульфамидные производные пиперазина в качестве ингибиторов протеинкиназы и их фармацевтическое применение.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Исследование в наших лабораториях ингибиторов JAK–киназы 4–(4,7–диазаспиро[2.5]окт–7–ил)–7Н–пирроло[2,3–d]пиримидинового скелета, которые были описаны в документах предшествующего уровня техники, которые цитируются выше; показало, что некоторые из этих соединений в разной степени распадаются до основного метаболита 4–(4,7–диазаспиро[2.5]окт–7–ил)–7Н–пирроло[2,3–d]пиримидина (А) при введении in vivo и in vitro. Дальнейшее исследование метаболита (А); привело к открытию, что этот метаболит проявляет генотоксические свойства. Данное открытие предотвратило дальнейшую клиническую разработку указанных соединений.

Таким образом, целью данного изобретения является предложение новых соединений, которые проявляют высокую ингибирующую активность в отношении одного или более рецепторов Янус–киназы JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2 и которые не могут образовывать генотоксичный метаболит 4–(4,7–диазаспиро[2.5]окт–7–ил)–7Н–пирроло[2,3–d]пиримидин (А) при введении in vivo или in vitro.

Соединения по данному изобретению проявляют высокую ингибирующую активность в отношении одного или нескольких рецепторов Янус–киназы JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2, и, кроме того, указанные соединения обладают скелетом 5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоновой кислоты (B), которая не может образовывать метаболит (A) из–за замены азота на углерод в положении 8 и из–за присутствия углерод–углеродной связи в положении 8.

Кроме того, соединения по данному изобретению могут иметь полезные свойства, такие как улучшенные свойства метаболической стабильности и свойства метаболической элиминации, свойства кожной стабильности и свойства доставки, характеристики системного воздействия после локальной доставки, и все это может сделать их особенно подходящими для применения в качестве активных фармацевтических ингредиентов в актуальных лекарственных формах.

Особое преимущество некоторых соединений по данному изобретению состоит в том, что они проявляют стабильность в кератиноцитах, в то же время демонстрируя высокий клиренс в микросомах печени человека и/или гепатоцитах человека, что указывает как на стабильность соединений в коже, так и на высокий системный клиренс соединений, тем самым указывает на снижение риска побочных эффектов при местном применении при сохранении эффективности в коже.

Кроме того, соединения по данному изобретению могут иметь благоприятные свойства растворимости.

Кроме того, соединения по данному изобретению могут иметь полезные защитные свойства, такие как высокоселективная ингибирующая JAK активность по сравнению с другими киназами и/или полезные цитотоксические, фототоксические и генотоксические свойства.

Соответственно, данное изобретение относится к соединениям общей формулы I:

где Х представляет собой NH или О;

где R₁ и R₂, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода, дейтерия, гидроксила, циано, галогена, (C₁–C₃)алкила и гидрокси(C₁–C₃)алкила;

n представляет собой целое число, выбранное из 1–3;

Y представляет собой химическую связь, –C(O)O–*, –C(O)OR₃–* или –C(O)NHR₃–*, где * обозначает точку присоединения к W, и где R₃ представляет собой (C₁–C₄)алкилен;

W выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, (C₃–C₇)циклоалкила и 4–6–членного гетероциклоалкила, содержащего один или два гетероатома, выбранных из O, S или N, где указанный фенил, пиридил, (C₃–C₇)циклоалкил и 4–6–членный гетероциклоалкил, содержащий один или два гетероатома, выбранных из О, S или N, необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из гидроксила, циано, галогена, оксо, (С₁–С₄)алкила, гидроксил(С₁–С₄)алкила, галоген(C₁–C₄) алкила, циано(C₁–C₄)алкила, (C₁–C₄)алкокси, галоген(C₁–C₄)алкокси и –SO₂NH₂;

или их фармацевтически приемлемым солям, гидратам или сольватам.

В дополнительном аспекте данное изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, приведенной выше для применения в качестве лекарственного средства.

В другом аспекте данное изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, приведенной выше, для применения при профилактике и/или лечении заболеваний иммунной системы, таких как аутоиммунные заболевания, или заболеваний, связанных с нарушением регуляции иммунной системы.

В еще одном аспекте данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение, соответствующее общей формуле I, приведенной выше, вместе с фармацевтически приемлемой несущей средой или вспомогательным веществом или фармацевтически приемлемым носителем(носителями).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения

Термин «(C_a–C_b)алкил» предназначен для обозначения радикала, полученного, когда один атом водорода удален из разветвленного или линейного углеводорода. Указанный (C_a–C_b)алкил содержит 1–6, предпочтительно 1–4, например 1–3, например 2–3 или например 1–2 атома углерода. Указанный термин включает подклассы нормального алкила (н–алкила), вторичного и третичного алкила, такого как метил, этил, н–пропил, изопропил, н–бутил, изобутил, втор–бутил, трет–бутил, н–пентил, изопентил, неопентил, н–гексил и изогексил. Число атомов углерода в «(C_a–C_b)алкиле» обозначается префиксом «(C_a–C_b)», где a является минимальным числом, а b является максимальным числом атомов углерода в углеводородном радикале. Таким образом, например, (C₁–C₄)алкил предназначен для обозначения алкильного радикала, содержащего от 1 до 4 атомов углерода.

Термин «(C₁–C₄)алкилен» предназначен для обозначения двухвалентной насыщенной алифатической углеводородной группы, предпочтительно имеющей от 1 до 4 и более предпочтительно от 1 до 3 атомов углерода, например от 1 до 2 атомов углерода или например 1 атом углерода, которая является прямой или разветвленной. Этот термин иллюстрируется такими группами, как метилен (–CH₂–), этилен (–CH₂CH₂–), н–пропилен (–CH₂CH₂CH₂–), изопропилен (–CH₂CH(CH₃)–) или (–CH(CH₃)CH₂–), и тому подобное.

Термины «(C_a–C_b)алкилокси» и «(C_a–C_b)алкокси» предназначены для обозначения радикала формулы –OR', где R' представляет собой (C_a–C_b)алкил, как указано в данном документе, где (C_a–C_b)алкильная группа присоединена к исходному молекулярному фрагменту через атом кислорода, например метокси (–OCH₃), этокси (–OCH₂CH₃), н–пропокси, изопропокси, бутокси, трет–бутокси и тому подобное.

Термин «циано» предназначен для обозначения группы –CN, присоединенной к исходному молекулярному фрагменту через атом углерода.

Термин «циано(C_a–C_b)алкил» предназначен для обозначения (C_a–C_b)алкильной группы, как определено в данном документе, замещенной одним или несколькими атомами циано, как определено в данном документе, такой как цианометил или цианоэтил.

Термин «(C_a–C_b)циклоалкил» предназначен для обозначения насыщенного циклоалканового углеводородного радикала, содержащего (C_a–C_b) атомов углерода, например 3–7 атомов углерода, предпочтительно 3–6 атомов углерода, например 3–5 атомов углерода или например 3–4 атомов углерода, например циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил или циклогептил.

Термин «галоген(C_a–C_b)алкил» предназначен для обозначения (C_a–C_b)алкильной группы, как определено в данном документе, замещенной одним или более атомами галогена, как определено в данном документе, например, фтора или хлора, такой как дифторметил или трифторметил.

Термины «галоген(C_a–C_b)алкилокси» и «галоген(C_a–C_b)алкокси» предназначены для обозначения галоген(C_a–C_b)алкильной группы, как определено в данном документе, которая присоединена к исходному молекулярному фрагменту через атом кислорода, такой как дифторметокси или трифторметокси.

Термин «галоген» предназначен для обозначения заместителя из 7–й основной группы периодической таблицы, такого как фтор, хлор и бром.

Термин «4–6–членный гетероциклоалкил, содержащий один или два гетероатома, выбранных из О, S или N», предназначен для обозначения (C₄–C₆)циклоалканового радикала, как описано в данном документе, где один или два атома углерода заменены одним или двумя гетероатомами таким образом, содержащего 2–, 3–, 4 или 5 атомов углерода и дополнительно содержащего один или два гетероатома, выбранных из O, N или S, например, содержащего 3–, 4 или 5 атомов углерода и дополнительно содержащего один гетероатом, выбранный из О, N или S. Гетероциклоалкильный радикал может быть связан с исходным молекулярным фрагментом через атом углерода или атом азота, содержащийся в любой части гетероциклоалкильной группы. Типичные примеры гетероциклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, пиперазинил, морфолинил, оксетанил, тиетанил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил или пиперидинил.

Число атомов углерода в углеводородном радикале (например алкиле, циклоалкиле) обозначается префиксом «(C_a–C_b)», где a является минимальным числом, а b является максимальным числом атомов углерода в углеводородном радикале. Таким образом, например, (C₁–C₄)алкил предназначен для обозначения алкильного радикала, содержащего от 1 до 4 атомов углерода, и (С₃–С₅)циклоалкил предназначен для обозначения циклоалкильного радикала, содержащего от 3 до 5 атомов углерода в кольце.

Термин «гидрокси» или «гидроксил» предназначен для обозначения радикала –ОН.

Термин «гидрокси(C_a–C_b)алкил» или «гидроксил(C_a–C_b)алкил» предназначен для обозначения (C_a–C_b)алкильной группы, как определено выше, замещенной одной или более гидроксильными группами, например, гидроксиметил, гидроксиэтил, гидроксипропил.

Термин «оксо» предназначен для обозначения атома кислорода, который связан с исходным молекулярным фрагментом через двойную связь (=O).

Группа C(O) предназначена для обозначения карбонильной группы (C=O).

Группа S(O) предназначена для обозначения сульфоксидной группы (S=O).

Группа S(O)₂ или SO₂ предназначена для обозначения сульфоновой группы (O=S=O).

Если заместители описываются как независимо выбранные из группы, каждый заместитель выбирается независимо от другого. Следовательно, каждый заместитель может быть идентичным другому заместителю(заместителям) или может отличаться.

Термин «необязательно замещенный» означает «незамещенный или замещенный», и, следовательно, общие формулы, описанные в данном документе, охватывают соединения, содержащие указанный необязательный заместитель(заместители), а также соединения, которые не содержат указанный необязательный заместитель(заместители).

Термин «фармацевтически приемлемая соль» предназначен для обозначения солей, полученных приведением в контакт соединения формулы I, которое включает основной фрагмент, с подходящей неорганической или органической кислотой, такой как соляная, бромистоводородная, йодистоводородная, серная, азотная, фосфорная, муравьиная, уксусная, 2,2–дихлоруксусная, адипиновая, аскорбиновая, L–аспарагиновая, L–глутаминовая, слизевая, молочная, малеиновая, L–яблочная, фталевая, лимонная, пропионовая, бензойная, глутаровая, глюконовая, D–глюкуроновая, метансульфоновая, салициловая, янтарная, малоновая, винная, бензолсульфоновая, этан–1,2–дисульфоновая, 2–гидроксиэтансульфоновая кислота, толуолсульфоновая, сульфаминовая или фумаровая кислоты. Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I, содержащие кислотный фрагмент, также могут быть получены взаимодействием с подходящим основанием, таким как гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид магния, гидроксид кальция, гидроксид серебра, аммиак или тому подобное, или подходящими нетоксичными аминами такими как низшие алкиламины, низшие алкилгидроксиамины, циклоалкиламины или бензиламины, или L–аргинин, или L–лизин. Дополнительные примеры фармацевтически приемлемых солей перечислены в Berge, S.M.; J. Pharm. Sci.; (1977), 66(1), 1–19, которая включена в данный документ посредством ссылки.

Термин «сольват» предназначен для обозначения вещества, образованного взаимодействием между соединениями, например, соединением формулы I и растворителем, например спиртом, глицерином или водой, причем указанное вещество находится в кристаллической форме. В случае, когда растворителем является вода, указанное вещество называется гидратом.

Термин «лечение», как используется в данном документе, означает оказание медицинской помощи и уход за пациентом с целью борьбы с заболеванием, расстройством или состоянием. Предполагается, что данный термин включает задержку прогрессирования заболевания, расстройства или состояния, улучшение, ослабление или снятие симптомов и осложнений и/или излечение или устранение заболевания, расстройства или состояния. Данный термин включает в себя предотвращение указанного состояния, при этом предотвращение следует понимать как оказание медицинской помощи и уход за пациентом с целью борьбы с заболеванием, состоянием или расстройством и включает введение активных соединений для предотвращения появления симптомов или осложнений. Тем не менее, профилактическое(превентивное) и терапевтическое(лечебное) лечение являются двумя отдельными аспектами.

Все ссылки, включая публикации, заявки на патенты и патенты, цитированные в данном документе, включены в данное описание посредством ссылки во всей их полноте и в той же степени, как если бы каждая ссылка была индивидуально и конкретно указана для включения в качестве ссылки, независимо от любого отдельного включения конкретных документов, сделанного в другом месте в данном документе.

Варианты реализации данного изобретения

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где X представляет собой NH.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где X представляет собой O.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где n равно 1.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где n равно 2.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где Y представляет собой химическую связь

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где Y представляет собой –C(O)O–*, –C(O)OR₃–* или –C(O)NHR₃–*, где * обозначает точку присоединения к W, и где R₃ представляет собой метилен.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где R₁ и R₂ каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, метила и гидроксиметила.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где W выбран из группы, состоящей из (C₃–C₆)циклоалкила, фенила, пиридила, тетрагидропиранила и тиэтанила, где указанный (C₃–C₆)циклоалкил, фенил, пиридил, тетрагидропиранил и тиэтанил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из фтора, циано, –SO₂NH₂, гидроксила, оксо, метила, этила, гидроксиметила, цианометила и метокси.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из списка, включающего

(8S)–N–[(2S)–2–циклопентил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–(2–циклогексил–2–гидроксиэтил)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–циклогексил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–циклогексил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–(4–фторфенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–(4–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–2–гидрокси–2–тетрагидропиран–4–илэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–2–циклопентил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(4–цианофенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–(4–циано–3–фторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–2–циклогексил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(4–циано–3–фторфенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–фторфенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(4–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–(4–циано–2–фторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1S)–1–(4–цианофенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–(4–цианофенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[[3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–циклогексил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–2–циклобутил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(4–цианофенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–(4–цианофенил)–2–гидрокси–1–метил]–этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–цианофенил)–2–гидрокси–1–метил]–этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–2–(4–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(4–циано–2–фторфенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–N–[(4–сульфамоилфенил)метил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(2,4–дифторфенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[[3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–(5–циано–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–циано–2–метилфенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[2–(4–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–фтор–3–метилфенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(3,3–дифторциклобутил)метил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–цианофенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–2–(5–фтор–4–метил–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(5–циано–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–(5–циано–2–пиридил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1–гидроксициклопентил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–гидрокси–2–фенилэтил]]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[[1–(гидроксиметил)циклопентил]метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(4–фторфенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–циано–3–метилфенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–N–[(3–сульфамоилфенил)метил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(3,3–дифторциклобутил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(5–циано–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[[1–(гидроксиметил)циклопентил]метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(3–цианоциклобутил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[1–(4–фторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(3,3–дифторциклобутил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(2S)–2–гидрокси–2–фенилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–гидрокси–2–(п–толил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1S)–1–(4–метоксифенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(3–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1–гидроксициклобутил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–2–гидрокси–1–фенилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(3–цианофенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(4–циано–2–метоксифенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–гидрокси–1–метил]–2–(п–толил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1–гидроксициклогексил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–4–метил]–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(5–циано–2–пиридил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–фтор–2–метилфенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–(5–циано–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

бензил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

N–[(3–фторфенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–(циклопентилметил)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[[(1S,3S)–3–цианоциклопентил]метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–циано–3–фторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–(4–пиридилметил)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1S)–1–(3–цианофенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

циклопентилметил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

N–[(1–гидроксициклопентил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–циано–2–этил]–фенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(4–метоксифенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

циклопропилметил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

(8S)–N–[(4–циано–3–метоксифенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1S)–1–(4–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–бензил–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

циклопентил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

(8S)–N–[(1S)–1–(4–циано–2–метоксифенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

[1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

N–[(1S)–1–фенилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–[4–фтор–2–(гидроксиметил)фенил]–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–циано–2–фторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[[(1R,2R)–2–цианоциклопропил]метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(2R)–2–гидрокси–2–фенилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2R)–2–гидрокси–1–метил]–2–(2–пиридил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–(3–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–(5–циано–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–фтор–2–метоксифенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2S)–2–(5–фтор–4–метил]–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(4–цианофенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[[1–(цианометил)циклопропил]метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(3,4–дифторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–фенэтил–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–(циклобутилметил)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

[1–(гидроксиметил)циклопропил]метил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

N–[(1R)–1–(3–цианофенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–(2–гидрокси–1–метил–1–фенилэтил)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(3–метоксифенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–циано–2–метоксифенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–(4–циано–2–этилфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–2–гидрокси–1–(2–пиридил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(3–циано–4–фторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(3–фтор–4–метоксифенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(4–цианофенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1S)–2–гидрокси–1–фенилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–(3–пиридилметил)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–3–[[3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метиламино]–2–гидрокси–3–оксопропил]–5–(7Н–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(2R)–3–[(3,3–дифторциклобутил)метиламино]–2–гидрокси–3–оксопропил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(4–фтор–2–метоксифенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–циклогексил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(5–фтор–4–метил]–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(3–фторфенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–2–гидрокси–1–(2–пиридил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–фенилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–бензил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

Бензил (2S)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат,

N–[(1R)–1–(3–метоксифенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1S)–1–бензил–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8R)–N–[(2S)–2–(4–цианофенил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(4–фтор–3–метоксифенил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

N–[(1R)–1–(5–метокси–3–пиридил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8R)–N–[(4–цианофенил)метил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R,2S)–2–(4–цианофенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S)–1–циклобутил]–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1R)–1–циклобутил]–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(3,4–дифторфенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(3–фторфенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–гидрокси–1–метил]–2–(3–пиридил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(8S)–N–[(1S,2S)–2–гидрокси–1–метил]–2–фенилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид,

(3,3–дифторциклобутил)метил 5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

(3,3–дифторциклобутил)метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

(3,3–дифторциклобутил)метил (8R)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

[1–(гидроксиметил)циклопропил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

[1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

[1–(гидроксиметил)циклопентил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

[3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

[1–(гидроксиметил)циклогексил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

[3–(гидроксиметил)–1,1–диоксотиетан–3–ил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

[1–(цианометил)циклопропил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат и

[1–(цианометил)циклопропил]метил 5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат,

или их фармацевтически приемлемые соли, гидраты или сольваты.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его фармацевтически приемлемых солей, гидратов или сольватов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его фармацевтически приемлемых солей, гидратов или сольватов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из [3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилата или его фармацевтически приемлемых солей, гидратов или сольватов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его фармацевтически приемлемых солей.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его фармацевтически приемлемых солей.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из [3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилата или его фармацевтически приемлемых солей.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его гидратов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его гидратов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из [3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилата или его гидратов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его сольватов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из (8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его сольватов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где указанное соединение выбрано из [3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилата или его сольватов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где n равно 2 и по меньшей мере один из R₁ и R₂ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, метила и гидроксиметила.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где n равно 1 и по меньшей мере один из R₁ и R₂ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, метила и гидроксиметила.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I и Ia

или его фармацевтически приемлемым солям, гидратам или сольватам.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I и Ib

где R₁ ^' и R₂ ^', каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из гидроксила, циано, галогена, (C₁–C₃)алкила и гидрокси(C₁–C₃)алкила;

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I, где X представляет собой O;

n равно 1;

Y представляет собой химическую связь;

W выбран из группы, состоящей из (C₃–C₇)циклоалкила и 4–6–членного гетероциклоалкила, содержащего один или два гетероатома, выбранных из O, S или N, где указанный (C₃–C₇)циклоалкил и 4–6–членный гетероциклоалкил, содержащий один или два гетероатома, выбранных из О, S или N, необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из гидроксила, циано, галогена, оксо, (С₁–С₄)алкила, гидроксил(С₁–С₄)алкила, галоген(C₁–C₄) алкила, циано(C₁–C₄)алкила, (C₁–C₄)алкокси, галоген(C₁–C₄)алкокси и –SO₂NH₂;

где R₁ и R₂ представляют собой водород;

n равно 1;

Y представляет собой химическую связь;

W выбран из группы, состоящей из (C₃–C₇)циклоалкила и 4–6–членного гетероциклоалкила, содержащего один или два гетероатома, выбранных из O, S или N, где указанный (C₃–C₇)циклоалкил и 4–6–членный гетероциклоалкил, содержащий один или два гетероатома, выбранных из О, S или N, необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из гидроксила, циано, галогена, оксо, (С₁–С₄)алкила, гидроксил(С₁–С₄)алкила, циано(C₁–C₄)алкила;

Любая комбинация двух или более вариантов реализации изобретения, описанных в данном документе, считается находящейся в рамках объема данного изобретения.

Данное изобретение включает все варианты реализации, в которых n, R₁, R₂, R₃, R_a, R_b и R_c скомбинированы в любой комбинации, как описано в любом месте в данном документе.

Указанные соединения формулы I могут быть получены в кристаллической форме либо непосредственно путем упаривания из органического растворителя, либо путем кристаллизации или перекристаллизации из органического растворителя или смеси указанного растворителя и сорастворителя, который может быть органическим или неорганическим, таким как вода. Указанные кристаллы могут быть выделены в практически не содержащей растворителя форме или в виде сольвата, такого как гидрат. Данное изобретение охватывает все кристаллические формы, такие как полиморфы и псевдополиморфы, а также их смеси.

Соединения формулы I содержат асимметрично замещенные (хиральные) атомы углерода, которые приводят к существованию изомерных форм, например, энантиомеров и, возможно, диастереомеров. Данное изобретение относится ко всем таким изомерам, либо в оптически чистой форме, либо в виде их смесей (например, рацематов и рацемических смесей или оптически частично очищенных смесей). Чистые стереоизомерные формы указанных соединений и промежуточных соединений по данному изобретению могут быть получены путем следования методикам, известным в данной области техники. Указанные различные изомерные формы могут быть разделены физическими методами разделения, такими как селективная кристаллизация и хроматографические методы, например, высокоэффективная жидкостная хроматография с применением хиральных неподвижных фаз. Энантиомеры могут быть отделены друг от друга селективной кристаллизацией их диастереомерных солей, которые могут образовываться с оптически активными аминами или с оптически активными кислотами. Оптически очищенные соединения впоследствии могут быть выделены из указанных очищенных диастереомерных солей. Энантиомеры также могут быть разделены путем образования диастереомерных производных. В альтернативном варианте, энантиомеры могут быть разделены хроматографическими методами с применением хиральных стационарных фаз. Чистые стереоизомерные формы также могут быть получены из соответствующих чистых стереоизомерных форм соответствующих исходных материалов при условии, что реакция происходит стереоселективно или стереоспецифично. Предпочтительно, если желателен конкретный стереоизомер, указанное соединение будет синтезировано стереоселективными или стереоспецифичными способами получения. В данных способах будут преимущественно применять хиральные чистые исходные материалы.

Кроме того, когда в молекуле присутствует двойная связь или полностью или частично насыщенная кольцевая система, могут образовываться геометрические изомеры. Предполагается, что любой геометрический изомер, в виде отдельных, чистых или частично очищенных геометрических изомеров или их смесей, входит в рамки объема данного изобретения. Относительная стереохимия рацемической смеси обозначена * в названии соответствующих соединений по данному изобретению.

В указанных соединениях общей формулы I атомы могут проявлять свои естественные изотопные содержания или один или несколько атомов могут быть искусственно обогащены определенным изотопом, имеющим тот же атомный номер, но атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа встречающегося в природе. Предполагается, что данное изобретение включает все пригодные изотопные варианты соединений общей формулы I. Например, различные изотопные формы водорода включают ¹Н, ²Н и ³Н, а различные изотопные формы углерода включают ¹²С, ¹³С и ¹⁴С. Изотопно обогащенные соединения общей формулы I могут быть получены обычными способами, хорошо известными специалисту в данной области техники, или способами, аналогичными тем, которые описаны в Общих Методах и Примерах в данном документе, с применением соответствующих изотопно обогащенных реагентов и/или промежуточных соединений.

В одном или более вариантах реализации данного изобретения указанные соединения формулы I, как определено выше, являются пригодными в терапии и, в частности, пригодны при, например, кожных заболеваниях, таких как пролиферативные и воспалительные кожные заболевания, псориаз, атопический дерматит, склеродермия, розацеа, рак кожи, дерматит, герпетиформный дерматит, дерматомиозит, витилиго, очаговая алопеция, контактный дерматит, экзема, ксероз, ихтиоз, крапивница и хронический идиопатический зуд; респираторных заболеваниях, таких как астма, хроническая обструктивная болезнь легких, легочный фиброз, муковисцидоз, ринит, бронхиолит, биссиноз, пневмокониоз, бронхоэктазия, гиперчувствительный пневмонит, рак легких, мезотелиома и саркоидоз; желудочно–кишечных заболеваниях, таких как воспалительные заболевания кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, забрюшинный фиброз, целиакия и рак; заболеваниях глаз, таких как тяжелая миастения, синдром Шегрена, конъюнктивит, склерит, увеит, синдром сухого глаза, кератит, ирит; системных показаниях, таких как волчанка, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, диабет I типа и осложнения от диабета, рак, болезнь Бехтерева и псориатический артрит; а также других аутоиммунных заболеваниях и показаниях, при которых иммуносупрессия была бы желательна, например, при трансплантации органов.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединениям формулы I как определено выше, для применения в профилактике и/или лечении псориаза или атопического дерматита.

В одном варианте реализации изобретение относится к способу предотвращения, лечения или ослабления заболеваний иммунной системы, таких как аутоиммунные заболевания, причем способ включает введение человеку, страдающему по меньшей мере от одного из указанных заболеваний, эффективного количества одного или более соединений, соответствующих общей формуле I, приведенной выше, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым носителем или одним или более вспомогательными веществами, необязательно в комбинации с другими терапевтически активными соединениями.

В одном варианте реализации изобретение относится к способу предотвращения, лечения или ослабления псориаза или атопического дерматита, причем способ включает введение человеку, страдающему по меньшей мере от одного из указанных заболеваний, эффективного количества одного или более соединений. соответствующих общей формуле I, приведенной выше, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым носителем или одним или более вспомогательными веществами, необязательно в комбинации с другими терапевтически активными соединениями.

В одном варианте реализации изобретение относится к соединению, соответствующему общей формуле I для применения в производстве лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболеваний иммунной системы, таких как аутоиммунное заболевание, такое как псориаз или атопический дерматит.

В одном или более вариантах реализации данного изобретения указанные соединения формулы I, как определено выше, пригодны в качестве противовоспалительного агента, способного модулировать активность протеинтирозинкиназы семейства JAK протеинтирозинкиназ, такой как JAK1, JAK2 , JAK3 или TYK2 протеинтирозинкиназы.

Помимо того, что они пригодны для лечения человека, указанные соединения по данному изобретению также могут быть пригодны для ветеринарного лечения животных, включая млекопитающих, таких как лошади, крупный рогатый скот, овцы, свиньи, собаки и кошки.

Фармацевтические Композиции по данному Изобретению

Для применения в терапии соединения по данному изобретению как правило находятся в форме фармацевтической композиции. Следовательно, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I, необязательно вместе с одним или более другим терапевтически активным соединением (соединениями), вместе с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, несущими средами или носителем (носителями). Эксципиент должен быть «приемлемым» в том смысле, что он совместим с другими ингредиентами указанной композиции и не вреден для реципиента.

Как правило, активный ингредиент составляет от 0,0001 до 99,9% от веса композиции.

В форме единичной дозы указанное соединение может быть введено один или более раз в день с соответствующими интервалами, всегда зависящими, однако, от состояния пациента и в соответствии с назначением врача. Как правило, единичная доза состава содержим от 0,001 мг до 1000 мг, предпочтительно от 0,1 мг до 300 мг, например от 50 мг до 200 мг соединения формулы I.

Пригодная дозировка указанного соединения по данному изобретению будет зависеть, среди прочего, от возраста и состояния пациента, тяжести заболевания, подлежащего лечению, и других факторов, хорошо известных практикующему врачу. Соединение можно вводить перорально, парентерально, местно, трансдермально или чрескожно или другими путями в соответствии с различными режимами дозирования, например ежедневно, еженедельно или с месячными интервалами. Как правило, разовая доза будет находиться в диапазоне от 0,001 до 400 мг/кг массы тела. Соединение можно вводить в виде болюса (то есть всю суточную дозу вводят сразу) или в виде разделенных доз два или более раз в день.

В контексте местного лечения может быть более уместно обратиться к «единице применения», которая обозначает одну дозу, которую можно вводить пациенту, и с которой можно легко обращаться и упаковывать, которая остается как физически, так и химически стабильной единичной дозой, содержащую либо активный материал как таковой, либо его смесь с твердыми, полутвердыми или жидкими фармацевтическими разбавителями или носителями.

Термин «единица применения» в связи с местным применением означает однократную, то есть единичную дозу, которую можно вводить пациенту местно в расчете на квадратный сантиметр площади, подвергающейся лечению от 0,001 мкг до 1 мг и предпочтительно от 0,05 мкг. до 0,5 мг активного ингредиента, который рассматривается.

Также предусматривается, что при определенных режимах лечения может быть полезным введение с более длительными интервалами, например через день, каждую неделю или с еще более длительными интервалами.

Если указанное лечение включает введение другого терапевтически активного соединения, рекомендуется обратиться к Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9–е изд., J.G. Hardman и L.E. Limbird (Eds.), McGraw–Hill 1995, для пригодных дозировок указанных соединений.

Введение соединения по данному изобретению с одним или более другими активными соединениями может осуществляться одновременно или последовательно.

Указанные составы включают, например, такие, которые находятся в форме, пригодной для перорального (включая замедленное или контролируемое высвобождение), ректального, парентерального (включая подкожное, внутрибрюшинное, внутримышечное, внутрисуставное и внутривенное), трансдермального, внутрикожного, офтальмологического, местного, назального, подъязычного или трансбуккального введения.

Указанные составы могут быть удобно представлены в единичной дозированной форме и могут быть получены, но не ограничиваясь этим, любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики, например. как описано в Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21–е изд., 2005. Все способы включают этап объединения активного ингредиента с носителем, который состоит из одного или более дополнительных ингредиентов. Как правило, составы готовят путем равномерного и тесного объединения активного ингредиента с жидким носителем, полутвердым носителем или тонкоизмельченным твердым носителем или их комбинациями, а затем, если необходимо, формования продукта в желаемый состав.

Композиции по данному изобретению, пригодные для перорального и трансбуккального введения, могут быть в форме дискретных единиц, таких как капсулы, саше, таблетки, жевательная резинка или пастилки, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного ингредиента; в форме порошка, гранул или пеллет; в форме раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, такой как этанол или глицерин; или в форме геля, нано– или микроэмульсии, эмульсии масло–в–воде, эмульсии вода–в–масле или других дозирующих систем. Указанные масла могут быть пищевыми маслами, такими как, но не ограничиваясь этим, например, хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло. Подходящие диспергирующие или суспендирующие агенты для водных суспензий включают синтетические или природные поверхностно–активные вещества и загустители. Активные ингредиенты также можно вводить в форме болюса, электуария или пасты.

Таблетка может быть изготовлена прессованием, формованием или лиофильной сушкой активного ингредиента, необязательно, с одним или более дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть приготовлены прессованием в пригодном аппарате активного ингредиента (ингредиентов) в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанные со связующим веществом и/или наполнителем; смазывающего вещества; дезинтегрирующего агента или диспергирующего агента. Формованные таблетки могут быть получены путем формования в пригодном аппарате смеси порошкообразного активного ингредиента и пригодного носителя, увлажненного инертным жидким разбавителем. Лиофилизированные таблетки могут быть сформированы в лиофилизаторе из раствора лекарственного вещества. Может быть включен пригодный наполнитель.

Составы для ректального введения могут быть в форме суппозиториев, в которых соединение по данному изобретению смешано с легкоплавкими, водорастворимыми или нерастворимыми в воде твердыми веществами, тогда как эликсиры могут быть приготовлены с применением миристилпальмитата.

Составы, пригодные для парентерального введения, как правило, включают стерильный масляный или водный препарат активных ингредиентов, который предпочтительно является изотоническим по отношению к крови реципиента, например изотонический солевой раствор, изотонический раствор глюкозы или буферный раствор. Кроме того, указанный состав может содержать сорастворитель, солюбилизирующий агент и/или комплексообразующие агенты. Указанный состав можно удобно стерилизовать, например, фильтрованием через задерживающий бактерии фильтр, добавлением стерилизующего агента в указанный состав, облучением указанного состава или нагреванием указанного состава. Липосомные композиции описанные, например, в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, том.9, 1994, также подходят для парентерального введения.

В альтернативном варианте, указанные соединения формулы I могут быть представлены в виде стерильного твердого препарата, например лиофилизированного порошка, который легко растворяется в стерильном растворителе непосредственно перед применением.

Трансдермальные составы могут быть в форме пластыря, повязки, микроигл, липосомных или наночастичных систем доставки, или других составов, наносимых на кожу.

Составы, пригодные для офтальмологического введения, могут быть в форме стерильного водного препарата активных ингредиентов, который может быть в микрокристаллической форме, например, в форме водной микрокристаллической суспензии. Липосомные составы или биоразлагаемые полимерные системы, например описанные в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, том.2, 1989, также можно применять для представления активного ингредиента для офтальмологического введения.

Составы, пригодные для местного введения, такого как дермальное, внутрикожное или офтальмологическое введение, включают жидкие или полутвердые препараты, такие как линименты, лосьоны, гели, аппликаторы, спреи, пены, пленкообразующие системы, микроиглы, микро– или наноэмульсии, эмульсии масло–в–воде или вода–в–масле, такие как кремы, мази или пасты; или растворы или суспензии, такие как капли.

Для местного введения соединение формулы I как правило может присутствовать в количестве от 0,001 до 20% мас. в пересчете на массу композиции, например от 0,01 до 10% мас., например 0,1–5% мас., но также может присутствовать в количество до около 100% мас. в пересчете на массу композиции.

Составы, пригодные для назального или трансбуккального введения, включают порошковые, самораспыляемые и распыляемые составы, такие как аэрозоли и атомизаторы. Такие составы описаны более подробно, например, в Modern Pharmaceutics, 2^nd изд., G.S. Banker и C.T. Rhodes (Eds.), стр. 427–432, Marcel Dekker, New York; Modern Pharmaceutics, 3^th изд., G.S. Banker и C.T. Rhodes (Eds.), стр. 618–619 и 718–721, Marcel Dekker, New York and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, том. 10, J. Swarbrick и J.C. Boylan (Eds), стр. 191–221, Marcel Dekker, New York.

В дополнение к вышеупомянутым ингредиентам указанные составы соединения формулы I могут содержать один или более дополнительных ингредиентов, таких как разбавители, буферы, ароматизаторы, красители, поверхностно–активные агенты, загустители, улучшающие проникновение агенты, консерванты, улучшающие растворимость агенты, консерванты, например метилгидроксибензоат (включая антиоксиданты), эмульгаторы и тому подобное.

Когда активный ингредиент вводят в форме солей с фармацевтически приемлемыми нетоксичными кислотами или основаниями, предпочтительные соли являются, например, легко растворимыми в воде или слабо растворимыми в воде, чтобы получить конкретную и пригодную скорость абсорбции.

СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ

Соединения по данному изобретению могут быть получены рядом способов, хорошо известных специалистам в области синтеза. Соединения формулы I могут, например, быть получены с применением реакций и методик, описанных ниже, вместе со способами, известными в области синтетической органической химии, или их вариациями, которые применяются специалистами в данной области техники. Предпочтительные способы включают, но не ограничиваются ими, методы, описанные ниже. Указанные реакции проводят в растворителях, пригодных для применяемых реагентов и материалов и подходящих для осуществляемых превращений. Кроме того, в методах синтеза, описанных ниже, следует понимать, что все предлагаемые условия реакции, включая выбор растворителя, реакционную атмосферу, температуру реакции, продолжительность эксперимента и процедуры отмывки, выбирают в качестве стандартных условий для данной реакции, что должно быть легко понято специалистом в области органического синтеза. Не все соединения, попадающие в данный класс, могут быть совместимы с некоторыми условиями реакции, необходимыми в некоторых из описанных способов. Такие ограничения для заместителей, которые совместимы с условиями реакции, будут очевидны для специалиста в данной области техники, и могут быть применены альтернативные способы.

Исходные материалы представляют собой либо известные, либо коммерчески доступные соединения, либо те, которые могут быть получены обычными способами синтеза, хорошо известными специалисту в данной области техники.

ОБЩИЕ МЕТОДИКИ, ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕРЫ

¹H спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) регистрировали при 300 МГц или 600 МГц. Значения химического сдвига (δ, в мд) приведены в указанном растворителе относительно внутреннего стандарта тетраметилсилана (δ = 0,00) или хлороформа (δ = 7,26). Дается значение мультиплета, либо определенного (дублет (d), дублет дублетов (dd), триплет (t), квартет (q)) либо не определенного (m) в приблизительной средней точке, если не указан диапазон. (br) обозначает широкий пик. Применяемые органические растворители как правило были безводными. Хроматографию осуществляли на силикагеле Merck 60 (0,040–0–063 мм). Указанные соотношения растворителей относятся к об:об, если не указано иное.

В данном документе были применены следующие сокращения:

AcOH уксусная кислота

BINAP 2,2'–бис(дифенилфосфино)–1,1'–бинафтил

BOC трет–бутоксикарбонил

Bz бензил

Cbz карбоксибензил

DABCO 1,4–диазабицикло[2.2.2]октан

ДХМ дихлорметан

DIPEA N–этил–N–(пропан–2–ил)пропан–2–амин

DMAP N,N–диметилпиридин–4–амин

ДМФА N,N’–диметилформамид

ДМСО диметилсульфоксид

EDCI 1–этил–3–(3–диметиламинопропил)карбодиимид

Et этил

EtOAc этилацетат

EtOH этиловый спирт

HATU 1–[бис(диметиламино)метилен]–1H–1,2,3–триазоло[4,5– b]пиридиния 3–оксида гексафторфосфат

HOBt N–гидроксибензотриазол

л литр

LG уходящая группа

м мили

MBTE метил трет–бутиловый эфир

Me метил

MeCN ацетонитрил

ЯМР ядерный магнитный резонанс

Ms мезилат

PG защитная группа

Ph фенил

Pr н–пропил

кт комнатная температура

SEM 2–(триметилсилил)этоксиметил

S_NAr нуклеофильное ароматическое замещение

TBDMS трет–бутилдиметилсилил

ТФА трифторуксусная кислота

ТГФ тетрагидрофуран

ТСХ тонкослойная хроматография

Ts тозил

об объем

Препаративная ВЭЖХ–МС

Препаративную ВЭЖХ–МС проводили на Dionex APS–системе с двумя преп. насосами Shimadzu PP150 и масс–спектрометром Thermo MSQ Plus. Колонка: Waters XTerra C–18, 150 мм x 19 мм, 5 мкм; система растворителей: A=вода (0,1% муравьиной кислоты) и B=ацетонитрил (0,1% муравьиной кислоты); скорость потока=18 мл/мин; метод (10 мин): Метод линейного градиента: от 10% B до 100% B за 6 минут и выдерживание при 100% B в течение еще 2 минут. Фракции собирали на основе следов ионов соответствующих ионов и сигнала PDA (240–400 нм).

УЭЖХ–МС

Колонка: Waters Aquity UPLC HSS T3 1,8 мкм, 2,1×50 мм.

Температура колонки: 60 градусов по Цельсию.

УФ: PDA 210–400 нм.

Объем впрыска: 2 мкл.

Элюенты: A: 10 мМ Ацетат аммония с добавкой 0,1% HCOOH.

B: 100% Ацетонитрил с добавкой 0,1% HCOOH.

МС: Электрораспылительная, переключающаяся между положительной и отрицательной ионизацией.

Инструмент: Waters Aquity UPLC

Waters SQD

УЭЖХ–МС способ 7

Колонка: Aquity UPLC HSS T3 1,8 мкм, 2,1×50 мм.

Поток: 0,7 мл/мин

Температура колонки: 30 °C

Подвижные фазы: A: 10 мМ Ацетат аммония с добавкой 0,1% HCOOH

B: CH3CN с добавкой 0,1% HCOOH.

УФ: 240–400нм

Объем впрыска: 2 мкл

УЭЖХ (метод ввода): XE Metode 7 CM

MS – метод: PosNeg_50_1000

Инструменты: Waters Acquity UPLC

Waters LCT Premier XE

Хиральное SFC разделение

Колонка/размеры: Chiral pak AD–H(250 X 30)мм

% CO2: 75,0%

% Сорастворителя: 15,0% (MeOH)

Общий поток: 90,0 г/мин

Обратное давление: 100 бар

УФ: 285 нм

Время стека: 5,8 мин

Загрузка/инъекц.: 26 мг

Растворитель: Этанол

Возможная загрузка/инъекц.: 80.0 мг/инъекц. Всего No инъекций 900

Описание инструмента: Производитель/Модель: Thar SFC 200 new

Абсолютная конфигурация

Конечные тестируемые соединения, см. Таблица 1, полученные из промежуточной (S)–SEM–кислоты или промежуточной (S)–кислоты, давали более сильные ингибиторы JAK, чем аналогичные соединения, полученные из промежуточной рац–кислоты, промежуточной (R)–SEM–кислоты или промежуточной (R)–кислоты, см. пример 154 (рацемический) по сравнению с примером 155 (полученным из промежуточной (S)–SEM–кислоты) по сравнению с примером 156 (полученным из (R)–SEM–кислоты).

Абсолютная конфигурация была определена для Примера 41 и Примера 163 с применением рентгеновской кристаллографии, показывающей, что она является (S) в положении C4 пиперидинового кольца. Данные два примера были получены с применением промежуточной (S)–SEM–кислоты, и, следовательно, все другие примеры, полученные из промежуточной (S)–SEM–кислоты, будут иметь такую же абсолютную конфигурацию. Аналогично, примеры, полученные из противоположного энантиомера, а именно промежуточной (R)–SEM–кислоты, будут иметь противоположную абсолютную конфигурацию, а именно (R).

Пример 41 и Пример 163 оба были сокристаллизованы с каталитическим доменом JAK2, и были решены рентгеновские структуры этих комплексов лиганд–белок. Абсолютные конфигурации лигандов были соотнесены на основе этих кристаллических структур, и, таким образом, также может быть соотнесена абсолютная конфигурация промежуточной SEM–кислоты и промежуточной кислоты, применяемой для получения примеров 41 и 163.

Общая методика получения

Соединения по данному изобретению (I) могут, например, быть получены общими способами, описанными на Схеме 1, где R, R₁, R₂, Y, W, X и n определены, как описано в данном документе.

Схема 1

R представляет собой либо –H, либо PG, где PG представляет собой пригодную защитную группу (см., например, «Greene's Protective Groups in Organic Synthesis», 5–е изд., Wuts P.G.M., John Wiley & Sons Inc.), такую как, но не ограничиваясь ими, Bz, BOC, SEM и Ts.

LG представляет собой пригодную уходящую группу, такую как, но не ограничиваясь ими: фтор, хлор, бром, йод, метокси, N–имидазолил–, –OMs или –OTs.

Соединения общей формулы I (где X представляет собой NH) могут быть получены путем сочетания соединений общей формулы II с аминами общей формулы IV–N в условиях образования амидной связи с применением, например, HATU или EDCI в качестве реагента для сочетания в растворителях, таких как ДМФА или ДХМ с применением алкиламинного основания, такого как DIPEA. В случаях, когда II защищено (R=PG), защитную группу селективно снимают, чтобы получить I.

Соединения общей формулы I (где Х представляет собой О) могут быть получены путем сочетания соединений общей формулы II со спиртами общей формулы IV–O в условиях образования сложноэфирной связи, с применением, например, EDCI в качестве реагента для сочетания в растворителях, таких как ДМФА или ДХМ, с применением DMAP. В случаях, когда II защищено (R=PG), защитную группу селективно снимают, чтобы получить I.

В альтернативном варианте, соединения общей формулы I могут быть получены путем сочетания соединений общей формулы III с соединениями общей формулы V в условиях SnAr, например, с применением растворителя, такого как ДМФА, MeCN или вода, и основания, такого как DIPEA или K₂CO₃, при подходящей температуре, такой как от комнатной температуры до 200°C с помощью обычного нагрева или нагрева, вызванного микроволновым излучением. В случаях, когда V защищено (R=PG), защитную группу селективно снимают, чтобы получить I.

В альтернативном варианте, реакцию между III и V с образованием I можно проводить в присутствии катализатора на основе переходного металла с подходящим лигандом и подходящим основанием и в подходящем растворителе при подходящей температуре, такой как от комнатной температуры до 200 °С с помощью обычного нагрева или нагрева, вызванного микроволновым излучением. Типичные переходные металлы включают Pd и Cu, подходящие лиганды включают лиганды на основе P, такие как 2,2'–бис(дифенилфосфино)1,1'–бинафтил и 4,5–бис–дифенилфосфанил–9,9–диметил–9H–ксантен, и лиганды на основе N, такие как N, N'–диметилциклогексан–1,2–диамин, подходящие основания включают Cs₂CO₃, трет–бутоксид натрия и K₃PO₄, а подходящие растворители включают диоксан и толуол. В случаях, когда V защищено (R=PG), защитную группу селективно снимают, чтобы получить I.

Некоторые соединения общей формулы IV–N и IV–O являются либо коммерчески доступными, либо их получают из коммерчески доступных молекул путем синтетических превращений в соответствии со стандартными методиками, известными специалисту в области органического синтеза.

Другие соединения общей формулы IV–N и IV–O коммерчески недоступны и требуют специальных синтетических превращений, как описано в экспериментальной части в разделе «Промежуточные соединения».

Соединения общей формулы V являются либо коммерчески доступными, либо их получают из коммерчески доступных молекул путем синтетических превращений в соответствии со стандартными методиками, известными специалисту в области органического синтеза.

Соединения общей формулы II могут, например, быть получены, как показано на Схеме 2.

Схема 2

Коммерчески доступное VII может быть активировано путем превращения гидроксильной группы в уходящую группу, такую как галоген или Ts, которая затем может далее взаимодействовать с коммерчески доступным IX с получением X. Затем цианогруппу в соединении X можно гидролизовать до соответствующей карбоновой кислоты с последующей эстерификации с получением соединения XI, где Q представляет собой простой алкил, такой как Et. Превращение гидроксигруппы в XI в галоген или Ts с последующим внутримолекулярным замыканием кольца в основных условиях и снятием защиты приводит к рацемическому VI.

Соединение VI может быть соединено с соединениями общей формулы V в условиях SnAr, например, с применением растворителя, такого как ДМФА, MeCN или вода, и основания, такого как DIPEA или K₂CO₃, при подходящей температуре, такой как от комнатной температуры до 200°C с помощью обычного нагрева или нагрева, вызванного микроволновым излучением. Гидролиз эфира карбоновой кислоты дает II.

В альтернативном варианте, реакцию между VI и V можно проводить в присутствии катализатора на основе переходного металла с подходящим лигандом и подходящим основанием и в подходящем растворителе при подходящей температуре, такой как от комнатной температуры до 200 °С с помощью обычного нагрева или нагрева, вызванного микроволновым излучением. Типичные переходные металлы включают Pd и Cu, подходящие лиганды включают лиганды на основе P, такие как 2,2'–бис(дифенилфосфино)1,1'–бинафтил и 4,5–бис–дифенилфосфанил–9,9–диметил–9H–ксантен, и лиганды на основе N, такие как N, N'–диметилциклогексан–1,2–диамин, подходящие основания включают Cs₂CO₃, трет–бутоксид натрия и K₃PO₄, а подходящие растворители включают диоксан и толуол.

Гидролиз эфира карбоновой кислоты дает II.

Соединение VI также можно модифицировать путем синтетических превращений в соответствии со стандартными методиками, известными химику, квалифицированному в области органического синтеза, с получением соединений общей формулы III, которые затем могут быть соединены с соединениями общей формулы V, как показано на Схеме 3.

Схема 3

В альтернативном варианте, соединения общей формулы VI могут быть получены, как показано на Схеме 4.

Схема 4

Коммерчески доступное XII (PG=BOC или Bz) может быть преобразовано в XIII в условиях типа Хорнера–Уодсворта–Эммонса путем реакции, например, с диэтиловым эфиром (метоксиметил)фосфоновой кислоты с последующим расщеплением эфира, окислением и эстерификацией с получением VI.

Альтернативно, коммерчески доступное XII (PG=BOC или Bz) может быть преобразовано в XIV в реакции Ван–Лейзена с использованием тозилметилизоцианида (Tosmic). Гидролиз нитрильной группы и эстерификация дает VI.

В альтернативном варианте, соединения общей формулы VI могут быть получены, как показано на Схеме 5.

Схема 5

Коммерчески доступное XV может быть преобразовано в XVI в условиях типа Хорнера–Уодсворта–Эммонса путем реакции, например, с коммерчески доступным диэтиловым эфиром хлорэтилфосфоновой кислоты с последующим восстановлением нитрила, внутримолекулярной циклизацией и восстановлением алкена с получением VI (Q=Et).

В альтернативном варианте, коммерчески доступное XV может быть преобразовано в XVII, например, в условиях метиленирования Теббе или Виттига с последующим восстановлением нитрила, соответствующей N–защитой и N–аллилированием с получением соединений общей формулы XIX. В условиях метатезиса с замыканием кольца с последующим гидрированием алкенена соединения общей формулы XIX могут быть превращены в соединения общей формулы VI (Q=Et).

ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ

Промежуточное соединение 1

[1–(цианометил)циклопропил]метил 4–метилбензолсульфонат

Раствор п–TsCl (165,0 ммоль, 31,46 г) в ДХМ (60 мл) медленно добавляли к раствору 2–[1–(гидроксиметил)циклопропил]ацетонитрила (150,0 ммоль, 16,67 г) и DABCO (187,5 ммоль, 21,03 г) в ДХМ (200 мл) при 5 °С. Через несколько минут образовывался белый осадок. Перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут и разбавляли Et₂O (150 мл). Белое твердое вещество (DABCO–HCl) отфильтровывали и промывали эфиром. Объединенные органические слои промывали 0,5% HCl (100 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. Промежуточное соединение 1 (36,67 г) выделяли в виде густого прозрачного масла с выходом 92%.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 7.88–7.71 (m, 2H), 7.45–7.29 (m, 2H), 3.93 (s, 2H), 2.48 (d, J=10.0 Гц, 5H), 0.78–0.63 (m, 4H).

Промежуточное соединение 2

2–[1–[[бензил(2–гидроксиэтил)амино]метил]циклопропил]ацетонитрил

Раствор Промежуточного соединения 1 (106 ммоль, 28,0 г) в сухом ТГФ (20 мл) добавляли по каплям (в течение ~45 мин) к смеси N–бензилэтаноламина (211 ммоль, 31,9 г), безводного карбоната калия (106 ммоль, 14,6 г) и NaI (10,6 ммоль, 1,58 г) в сухом ДМСО (100 мл) при 70 °С. Смесь перемешивали в течение ночи при 74 °С в атмосфере аргона. Охлаждали и выливали в воду (400 мл) и экстрагировали Et₂O (4 × 150 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Неочищенный продукт хроматографировали на силикагеле, применяя гептан:EtOAc в качестве элюента. Промежуточное соединение 2 (12,65 г) выделяли в виде бледно–желтого масла с выходом 49%.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 7.40–7.19 (m, 5H), 3.72–3.64 (m, 4H), 2.67 (t, J=5.5 Гц, 2H), 2.52 (s, 2H), 2.48 (s, 2H), 2.18 (t, J=5.4 Гц, 1H), 0.66–0.56 (m, 2H), 0.56–0.47 (m, 2H).

Промежуточное соединение 3

Этил 2–[1–[[бензил(2–гидроксиэтил)амино–]метил]циклопропил]ацетат

Смесь Промежуточного соединения 2 (26,5 ммоль, 6,48 г) и КОН (424 ммоль, 23,8 г) в воде (100 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 2 дней, получая прозрачный бледно–желтый раствор карбоксилата калия. Добавляли концентрированную HCl до рН~3–4 и полученную смесь упаривали досуха. Твердое вещество состоит из карбоновой кислоты и KCl. При просушивании на лиофильной сушке, готовили раствор ацетилхлорида (13 мл, 183 ммоль) в абс. EtOH (400 мл). Этот раствор HCl переносили к данному твердому веществу и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 часов. Все летучие вещества упаривали и остаток обрабатывали 0,5 М NaOH до рН~9–10. Экстракция EtOAc (3 × 100 мл) с последующей сушкой (Na₂SO₄), фильтрованием и упариванием под вакуумом давало

Промежуточное соединение 3 (7,65 г) в виде оранжевого масла с выходом 99%, которое использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.

УЭЖХ–МС: t_R=0,45 (M+H⁺) = 292,3

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 7.37–7.18 (m, 5H), 4.12 (q, J=7.1 Гц, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.60–3.52 (m, 2H), 2.61–2.53 (m, 2H), 2.47 (s, 2H), 2.40 (s, 2H), 1.24 (t, J=7.1 Гц, 3H), 0.59–0.38 (m, 4H).

Промежуточное соединение 4

Этил 5–бензил–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Тионилхлорид (52,6 ммоль, 6,26 г, 3,84 мл) медленно добавляли к раствору Промежуточного соединения 3 (26,3 ммоль, 7,65 г) в ДХМ (80 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Все летучие вещества выпаривали и этил 2–[1–[[бензил(2–хлорэтил)амино]метил]циклопропил]ацетат гидрохлорид (9,11 г) выделяли в виде бледно–желтого твердого вещества с выходом 100% и использовали непосредственно в следующей стадии без дальнейшей очистки. УЭЖХ–МС: t_R=0,99 (M+H⁺) = 310,2

Этил 2–[1–[[бензил(2–хлорэтил)амино]метил]циклопропил]ацетат гидрохлорид (26,3 ммоль, 9,11 г) растворяли в сухом ДМСО (50 мл) и быстро добавляли к раствору трет–бутоксида калия (65,8 ммоль, 7,38 г) в сухом ТГФ (250 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона. Темно–коричневый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, выливали в воду (300 мл) и экстрагировали Et₂O (3 × 100 мл). Эфирный слой промывали солевым раствором (2 × 50 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали через короткую пробку из силикагеля и упаривание давало Промежуточное соединение 4 (5,87 г) в виде оранжевого масла с выходом 81%.

УЭЖХ–МС: t_R=0,53 (M+H⁺) = 274,2

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 7.39–7.16 (m, 5H), 4.11 (qd, J=7.1, 1.5 Гц, 2H), 3.56–3.41 (m, 2H), 2.64–2.47 (m, 2H), 2.35 (d, J=11.6 Гц, 1H), 2.16 (t, J=5.4 Гц, 1H), 2.00 (dtt, J=17.1, 13.1, 6.4 Гц, 3H), 1.24 (t, J=7.1 Гц, 3H), 0.65–0.54 (m, 1H), 0.47–0.30 (m, 3H).

Промежуточное соединение 5

Этил 5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Промежуточное соединение 4 (6,80 ммоль, 1,86 г) растворяли в МеОН (60 мл) и гидрировали над 10% Pd/C (0,50 г) при 4 бар H₂(г) на шейкере Парра в течение 3 часов. Фильтрование и упаривание давало Промежуточное соединение 5 (1,10 г) в виде бледно–желтого масла с выходом 88%, которое использовали без дополнительной очистки.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 4.13 (qd, J=7.1, 1.8 Гц, 2H), 2.36 (d, J=13.1 Гц, 1H), 2.25 (t, J=5.3 Гц, 1H), 1.94 (dtd, J=13.5, 5.9, 3.5 Гц, 1H), 1.80 (dddd, J=13.5, 8.8, 4.8, 4.0 Гц, 1H), 1.26 (t, J=7.1 Гц, 3H), 0.66–0.56 (m, 1H), 0.46–0.34 (m, 3H).

Промежуточная рац– SEM–кислота

5–[7–(2–триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоновая кислота (рац–SEM–кислота)

S _N Ar реакция:

Смесь Промежуточного соединения 5 (60 г, 330,5 ммоль), 2–[(4–хлорпирроло[2,3–d]пиримидин–7–ил)метокси]этилтриметилсилана (85 г, 330,5 ммоль) и DIPEA (108 мл, 625 ммоль) в сухом MeCN (500 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 16 часов. Все летучие вещества упаривали и полученный остаток обрабатывали водой и экстрагировали этилацетатом (2 × 500 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (500 мл), сушили над Na₂SO₄, упаривали и хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. Этил 5–[7–(2–триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат (рац–SEM этиловый эфир) выделяли в виде светло–коричневого масла (63 г) с выходом 49% и использовали непосредственно на следующей стадии.

Гидролиз сложного эфира:

К раствору вышеуказанного рац–SEM этилового эфира (63 г, 146,5 ммоль) в ТГФ (630 мл) добавляли LiOH.H₂O (61,4 г, 1465 ммоль) и H₂O (190 мл) и кипятили с обратным холодильником в течение 72 часов. По завершении летучие вещества упаривали под вакуумом и полученную реакционную смесь промывали EtOAc. Отделенный водный слой подкисляли 6М HCl (рН~4), и полученное твердое вещество отфильтровывали и сушили под вакуумом, получая 5–[7–(2–триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоновую кислоту (Промежуточная рац–SEM–кислота) в виде белого твердого вещества (33 г) с выходом 56%.

УЭЖХ–МС: t_R=0,76 (M+H⁺) = 403,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 12.27 (s br, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.34 (d, J=3.7 Гц, 1H), 6.65 (d, J=3.8 Гц, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.19 (dt, J=13.4, 4.9 Гц, 1H), 3.82–3.67 (m, 3H), 3.49 (dd, J=8.5, 7.5 Гц, 2H), 2.29 (t, J=5.2 Гц, 1H), 1.95 (m, 2H), 0.80 (dd, J=8.5, 7.4 Гц, 2H), 0.55 (ddd, J=18.1, 9.6, 4.7 Гц, 2H), 0.41 (ddd, J=23.2, 9.4, 4.8 Гц, 2H), –0.10 (s, 9H).

Разделение энантиомеров Промежуточной rac–SEM–кислоты было достигнуто с помощью хиральной SCF хроматографии и дало чистые энантиомеры.

Промежуточная ( S )–SEM–кислота

Первый элюирующий энантиомер, t_R=2,74 мин, химическая чистота 99% и ее=99%.

¹Н ЯМР идентичен Промежуточной рац–SEM–кислоте

Промежуточная ( R )–SEM–кислота

Первый элюирующий энантиомер, t_R=3,37 мин, химическая чистота 99% и ее=99%.

Промежуточная ( S )–кислота

(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоновая кислота

ТФА (35,89 ммоль, 2,75 мл) добавляли к раствору Промежуточной (S)–SEM–кислоты (3,0 ммоль, 1,20 г) в MeCN (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. ЖХМС показала полное превращение в аддукт формальдегида (N–CH₂OH). Все летучие вещества упаривали и остаток растворяли в MeCN (4 мл) и добавляли 1,2–диаминоэтан (30 ммоль, 2,00 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и при 50 °С в течение 20 минут, получая суспензию. Все летучие вещества упаривали и остаток перемешивали в воде (10 мл) и подкисляли до рН=3 с помощью 1М KHSO₄.

Промежуточную (S)–кислоту (2,39 ммоль, выход 80%, 652 мг) выделяли в виде белого твердого вещества.

УЭЖХ–МС: t_R=0,37 (M+H⁺) = 273,3

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.65 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.21–7.08 (m, 1H), 6.54 (d, J=3.6 Гц, 1H), 4.19 (dt, J=13.4, 5.0 Гц, 1H), 3.85–3.64 (m, 3H), 2.29 (t, J=5.2 Гц, 1H), 2.07–1.85 (m, 2H), 0.62–0.34 (m, 4H, cyclopropane).

Промежуточная ( R )–кислота

(8R)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоновая кислота

Соединение получали аналогично тому, как описано для промежуточной (S)–кислоты, но исходя из Промежуточной (R)–SEM–кислоты.

¹Н ЯМР идентичен Промежуточной (S)–кислоте

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,63 (M+H⁺) = 273,13

Промежуточная рац– кислота

5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоновая кислота

Соединение получали аналогично тому, как описано для промежуточной (S)–кислоты, но исходя из Промежуточной рац–SEM–кислоты.

¹Н ЯМР идентичен Промежуточной (S)–кислоте

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,63 (M+H⁺) = 273,13

Промежуточное соединение 6

трет–бутил N–[(1S)–2–циклопентил–1–метил–2–оксоэтил]карбамат

Циклопентилмагнийхлорид (2М в Et₂O, 61,6 ммоль, 30,8 мл) добавляли к раствору трет–бутил N–[(1S)–2–[метокси(метил)амино]–1–метил–2–оксоэтил]карбамата (20,5 ммоль, 4,77 г) в сухом ТГФ (100 мл) в атмосфере аргона при –50 °С. Смесь перемешивали в течение 20 мин при –50 °С, охлаждающую баню убирали и смеси давали нагреться до комнатной температуры. Перемешивали еще 2 часа при комнатной температуре. ТСХ не показала больше исходного материала. Гасили 10% NH₄Cl (50 мл), экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Хроматографировали на сухой колонке на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента.

Промежуточное соединение 6 (15,4 ммоль, 3,71 г) выделяли в виде белого твердого вещества с выходом 75%.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 5.31 (s br, 1H), 4.42 (t br, J=7.3 Гц, 1H), 3.11–2.94 (m, 1H), 2.06–1.52 (m, 8H), 1.44 (s, 9H), 1.33 (d, J=7.2 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 7

трет–бутил N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]карбамат

Три–трет–бутоксиалюмогидрид лития в ТГФ (14,4 ммоль, 14,4 мл) добавляли к раствору Промежуточного соединения 6 (14,4 ммоль, 3,47 г) в сухом ТГФ (100 мл) при –60 °С в атмосфере аргона. Перемешивали в течение 30 минут при этой температуре, охлаждающую баню убирали и нагревали до комнатной температуры. Гасили 3% лимонной кислотой (50 мл), экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Выделяли прозрачное масло, которое содержало 78% (S,S) и 22% (R,S). Хроматографировали дважды на силикагеле, применяя EtOAc:гептан (0 → 40%) в качестве элюента. ТСХ (EtOAc:гептан, 1:1 об/об): R_f (S,S) ≈ 0,70 и R_f (R,S) ≈ 0,63

Промежуточное соединение 7 (2,28 г) выделяли в виде прозрачного масла с выходом 64%.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 4.75 (s br, 1H), 3.74 (t, br, 1H), 3.22 (s, br, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.70–1.50 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.39–1.22 (m, 3H), 1.19 (dd, J=6.9, 0.9 Гц, 3H), 0.99–0.80 (m, 1H).

Промежуточное соединение 8

[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]аммоний хлорид

Промежуточное соединение 7 (13,2 ммоль, 3,21 г) растворяли в 1М HCl в EtOH (40 мл) и перемешивали при 50°C в течение 2 часов (до тех пор, пока ТСХ не показала больше исходного вещества). Упаривали досуха и выделяли Промежуточное соединение 8 (13,2 ммоль, выход 100%, 2,37 г) в виде белого кристаллического твердого вещества. Использовали непосредственно как есть.

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 7.90 (s, 3H, –NH₃ ⁺), 3.31 (t, J=6.0 Гц, 1H), 3.00 (m, J=6.0 Гц, 1H), 1.97 (dt, J=13.5, 7.9 Гц, 1H), 1.73–1.26 (m, 8H), 1.19 (d, J=6.7 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 9

трет–бутил N–[(1S)–2–(5–фтор–2–пиридил)–1–метил–2–оксоэтил]карбамат

Комплекс изопропилмагнийхлорид–хлорид лития (1,3М в ТГФ, 65 ммоль, 50,0 мл) добавляли к раствору 2–бром–5–фторпиридина (60,0 ммоль, 10,6 г) в сухом ТГФ (50 мл) в атмосфере аргона при 0 °С. Смесь перемешивали в течение 20 минут на ледяной бане и затем 2 часа при комнатной температуре, получая раствор кофейного цвета.

Тем временем, 3М MeMgBr в Et₂O (16 мл, 48 ммоль) медленно добавляли к суспензии трет–бутил N–[(1S)–2–[метокси(метил)амино]–1–метил–2–оксоэтил]карбамата (50,0 ммоль, 11,6 г) в сухом ТГФ (250 мл) в атмосфере аргона при –20 °С, что приводило к прозрачному раствору моно–Mg соли (протокол предварительного протонирования).

Раствор Гриньяра канюлировали в раствор Вайнреба с депротонированным NH. Перемешивали при 0 °С в течение 30 мин и при комнатной температуре в течение 1 часа. ЖХМС показала полную конверсию в продукт. Гасили 10% NH₄Cl (100 мл). Слой ТГФ сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Промежуточное соединение 9 (13,45 г) выделяли в виде коричневого масла с количественным выходом и использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.

УЭЖХ–МС: t_R=0,72 (M+H⁺) = 213,1

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 8.53 (d, J=2.8 Гц, 1H), 8.13 (dd, J=8.7, 4.6 Гц, 1H), 7.53 (td, J=8.3, 2.8 Гц, 1H), 5.65 (d broad, J=8.1 Гц, 1H), 5.38 (s, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.43 (d, J=6.5 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 10

(1R,2S)–2–амино–1–(5–фтор–2–пиридил)–пропан–1–ол

Восстановление:

NaBH₄ (20,0 ммоль, 0,76 г) добавляли к раствору Промежуточного соединения 9 (50,1 ммоль, 13,45 г) в 96% EtOH (200 мл) при 0–5°C и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. ЖХМС показала диастереомерную смесь, где (S,S) изомер является мажорным компонентом: ок. 80% и желаемый (R,S) составляет ок. 20%. Реакционную смесь гасили 10% NH₄Cl (100 мл). Большую часть EtOH упаривали и водный слой экстрагировали Et₂O (2 × 100 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали до коричневого сиропа. Хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. Выделяли трет–бутил N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]карбамат в виде оранжевого масла (2,15 г) с выходом 15%.

ТСХ (EtOAc:гептан, 1:1 об/об): R_f (S,S) ≈ 0,53 и R_f (R,S) ≈ 0,48

УЭЖХ–МС: t_R=0,60 (M+H⁺) = 215,2 (потеря изобутилена)

Снятие BOC–защиты и свободное основание:

трет–бутил N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]карбамат (2,15 г) растворяли в 2М HCl в МеОН (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Все летучие вещества упаривали и добавляли 4М NaOH (10 мл). Экстрагировали ДХМ (4 × 40 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Промежуточное соединение 10 выделяли в виде оранжевого масла (1,16 г) с выходом 86%.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 8.41 (dd, J=2.1, 1.0 Гц, 1H), 7.45–7.35 (m, 2H), 4.42 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.20 (qd, J=6.6, 4.5 Гц, 1H), 1.15 (d, J=6.6 Гц, 3H).

Аминоспирт (1R,2S)–2–амино–1–(5–фтор–4–метил–2–пиридил)пропан–1–ол был синтезирован соответствующим образом, исходя из 2–бром–5–фтор–4–метилпиридина

Промежуточное соединение 11

трет–бутил (4S)–4–(4–фторбензоил)–2,2–диметилоксазолидин–3–карбоксилат

2М 4–фторфенилмагнийбромид (26,1 ммоль, 13,1 мл) в Et₂O медленно добавляли к раствору трет–бутил (4S)–4–[метокси(метил)карбамоил]–2,2–диметилоксазолидин–3–карбоксилата (23,8 ммоль, 6,85 г, Tetrahedron Letters (2014), 6903–6906) в сухом ТГФ (80 мл) при 0–5°C в атмосфере аргона. Ледяную баню удаляли и смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. ЖХМС показала полную конверсию. Гасили 10% NH₄Cl (50 мл), экстрагировали Et₂O (2 × 50 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали до оранжевого масла. Хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. Промежуточное соединение 11 (3,10 г) выделяли в виде белых кристаллов с выходом 40%. ¹H ЯМР показал BOC ротамеры в соотношении 4:5.

УЭЖХ–МС: t_R=0,84 (M+H⁺) = 224,2 (потеря BOC)

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 8.00–7.92 (m, 2H), 7.22–7.10 (m, 2H), 5.42 (dd, J=7.4, 3.0 Гц, 0.44H, α–H), 5.36–5.30 (m, 0.56H, α–H), 4.30 (td, J=8.5, 3.9 Гц, 1H), 3.93 (ddd, J=8.9, 5.4, 3.3 Гц, 1H), 1.74 (d, J=10.8 Гц, 2H), 1.59 (d, J=11.1 Гц, 2H), 1.50 (s, 4H, BOC), 1.28 (s, 5H, BOC).

Промежуточное соединение 12

(1S,2S)–2–амино–1–(4–фторфенил)пропан–1,3–диол гидрохлорид и (1R,2S)–2–амино–1–(4–фторфенил)пропан–1,3–диол гидрохлорид

Восстановление:

NaBH₄ (14,1 ммоль, 532 мг) добавляли к раствору Промежуточного соединения 11 (9,37 ммоль, 3030 мг) в 96% EtOH (120 мл) при 0–5 °C. Перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Все летучие вещества упаривали и добавляли 10% NH₄Cl (40 мл). Экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Смесь (2,68 г, 87% объединенный выход) выделяли в виде прозрачного масла и использовали непосредственно на следующей стадии.

Снятие ацетонидной защиты:

Смесь спиртов растворяли в MeOH (15 мл) и добавляли p–TsOH (130 мг) и перемешивали до тех пор, пока ЖХМС не показала полное снятие защиты (~2 часа при комнатной температуре). Добавляли K₂CO₃ (100 мг) для нейтрализации кислоты и смесь фильтровали. Упаривали и хроматографировали на силикагеле. Два диастереомера Промежуточного соединения 12 не могли быть разделены на ТСХ (в нескольких элюентных системах, R_f=0,15 в EtOAc:гептан 1:1). Смесь выделяли в виде прозрачного масла (около 1,20 г).

УЭЖХ–МС: t_R=0,56 (R,S)–изомер и t_R=0,57 (S,S)–изомер

Снятие BOC–защиты:

Смесь диастереомеров растворяли в 2М HCl в МеОН (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Упаривали досуха (0,90 г). Использовали напрямую как есть.

Промежуточное соединение 13

трет–бутил N–[(1S)–2–(4–цианофенил)–1–метил–2–оксоэтил]карбамат

Раствор 1: Комплекс изопропилмагнийхлорид–хлорид лития (1,3 М в ТГФ, 20,0 ммоль, 15 мл) добавляли к раствору 4–бромбензонитрила (20,0 ммоль, 3,64 г) в сухом ТГФ (25 мл) при –20 °С в атмосфере аргона. Полученный желто–оранжевый раствор перемешивали при –20 °С в течение 3 часов.

Тем временем готовили раствор депротонированного амида Вайнреба:

Раствор 2: Циклопентилмагнийхлорид (2М в эфире, 15,0 ммоль, 7,50 мл) медленно добавляли к суспензии трет–бутил N–[(1S)–2–[метокси(метил)амино]–1–метил–2–оксоэтил]карбамата (15,00 ммоль, 3,48 г) в сухом ТГФ (50 мл) при –15°C в атмосфере аргона и перемешивали в течение 5 минут. Получили прозрачный раствор.

Раствор Гриньяра Раствор 1 канюлировали в Раствор 2 и перемешивали при –10 °С в течение 2 часов, охлаждающую баню убирали и медленно нагревали до комнатной температуры и оставляли еще на 2 часа. Реакционную смесь разбавляли Et₂O (50 мл) и гасили добавлением 5% лимонной кислоты (50 мл). Органический слой отделяли, сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Выделяли оранжевое масло, которое затвердевало при стоянии. Растирали с гептаном и при фильтровании получали Промежуточное соединение 13

(12,4 ммоль, выход 62,0%, 3,40 г) в виде сероватого твердого вещества.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 8.08 (d, J=8.3 Гц, 2H), 7.80 (d, J=8.4 Гц, 2H), 5.40 (d, J=7.9 Гц, 1H), 5.26 (p, J=7.3 Гц, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.39 (d, J=7.2 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 14

трет–бутил N–[(1S,2S)–2–(4–цианофенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]карбамат

и

Промежуточное соединение 15

трет–бутил N–[(1S,2R)–2–(4–цианофенил)–2–гидрокси–1–метилэтил]карбамат

NaBH₄ (1,90 ммоль, 72,0 мг) добавляли к раствору Промежуточного соединения 13 (1,27 ммоль, 348 мг) в сухом ТГФ (20 мл) при комнатной температуре. Перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли АсОН (0,25 мл), чтобы погасить избыток NaBH₄. Упаривали и снова растворяли в EtOAc (20 мл) и промывали солевым раствором (10 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента.

Промежуточное соединение 14 (0,160 ммоль, выход 12,6%, 44,1 мг) выделяли в виде прозрачного масла.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 7.67–7.55 (m, 2H), 7.49–7.43 (m, 2H), 4.76 (d, J=8.6 Гц, 1H), 4.66 (t, J=4.4 Гц, 1H), 3.90–3.79 (m, 1H), 1.36 (s, 9H, Boc), 1.13 (d, J=6.7 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 15 (0,637 ммоль, выход 50,2%, 176,1 мг) выделяли в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 7.69–7.59 (m, 2H), 7.51–7.40 (m, 2H), 4.97–4.86 (m, 1H), 4.59–4.52 (m, 1H), 4.01 (br s, 1H), 3.65 (s, 1H), 1.46 (s, 9H), 0.99 (d, J=7.0 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 16

трет–бутил N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)–этил]карбамат

и

Промежуточное соединение 17

трет–бутил N–[(1S,2S)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)–этил]карбамат

Комплекс изопропилмагнийхлорид–хлорид лития (1,3М в ТГФ, 1,20 ммоль, 0,92 мл) добавляли к раствору 2–бром–5–фторпиридина (1,20 ммоль, 210 мг) в сухом ТГФ (3 мл) в атмосфере аргона при 0 °С. Смесь перемешивали в течение 20 минут на ледяной бане и затем ~2 часа при комнатной температуре (раствор кофейного цвета).

Раствор Гриньяра добавляли к раствору (S)–альдегида Гарнера (1,00 ммоль, 230 мг) в сухом толуоле (4 мл) при 0°C в атмосфере аргона. Перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Гасили с нас. NH₄Cl (4 мл). Органический слой сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Выделяли смесь диастереомеров (110 мг, 34%).

Снятие ацетонидной защиты: Неочищенную смесь растворяли в MeOH (2 мл) и добавляли p–TsOH (20 мг). Перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Добавляли нас. NaHCO₃ (5 мл) и экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл). Органический слой сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента.

Промежуточное соединение 16 (выход 43%, 42 мг) выделяли в виде прозрачного масла.

¹H ЯМР (600 МГц, Хлороформ–d): δ 8.39 (d, J=2.9 Гц, 1H), 7.57 (dd, J=8.8, 4.4 Гц, 1H), 7.47 (td, J=8.4, 2.8 Гц, 1H), 5.39 (d, J=7.6 Гц, 1H), 5.15–5.09 (m, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.05–4.00 (m, 1H), 3.92 (dd, J=11.6, 2.9 Гц, 1H), 3.64 (dd, J=11.6, 4.5 Гц, 1H), 1.39 (s, 9H).

Промежуточное соединение 17 (выход 6%, 6 мг) выделяли в виде прозрачного масла.

¹H ЯМР (600 МГц, Хлороформ–d): δ 8.38 (s br, 1H), 7.48–7.45 (m, 2H), 5.17 (d, J=9.0 Гц, 1H), 5.05 (d, J=3.4 Гц, 1H), 4.81 (s br, 1H), 4.01 (dq, J=8.8, 4.2 Гц, 1H), 3.91 (dd, J=11.3, 4.0 Гц, 1H), 3.81 (dd, J=11.3, 5.0 Гц, 1H), 1.30 (s, 9H).

Промежуточное соединение 18

(1R,2S)–2–амино–1–(5–фтор–2–пиридил)пропан–1,3–диол

Промежуточное соединение 16 (42 мг, 0,146 ммоль) растворяли в 4М HCl в диоксане (1 мл) и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Растворитель упаривали, получая продукт с количественным выходом. Промежуточное соединение 18 (27 мг, 82%) использовали без дополнительной очистки.

¹H ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.51 (s br, 1H), 7.81–7.56 (m, 2H), 5.04 (d, J=3.8 Гц, 1H), 3.74–3.67 (m, 2H), 3.60–3.52 (m, 1H).

Промежуточное соединение 19

(1S,2S)–2–амино–1–(5–фтор–2–пиридил)пропан–1,3–диол

Промежуточное соединение 17 (6 мг, 0,146 ммоль) растворяли в 4М HCl в диоксане (1 мл) и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Растворитель упаривали, получая продукт с количественным выходом. Промежуточное соединение 19 (4 мг, кол. выход) использовали без дополнительной очистки.

¹H ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.70 (s br, 1H), 8.05 (td, J=8.4, 2.8 Гц, 1H), 7.92 (dd, J=8.9, 4.6 Гц, 1H), 5.10 (d, J=5.6 Гц, 1H), 3.81–3.72 (m, 1H).

Промежуточное соединение 20

Рацемический 6–(2–амино–1–гидроксиэтил)пиридин–3–карбонитрил

NaBH₄ (0,227 г, 7,33 ммоль) добавляли к раствору 6–(2–бромацетил)пиридин–3–карбонитрила в MeOH (20 мл) при 0°C в атмосфере аргона. Перемешивали еще 30 минут. Упаривали и добавляли конц. NH₃ (27%, 20 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре Все летучие вещества упаривали. Использовали без дополнительной очистки.

Промежуточное соединение 21

трет–бутил N–[2–(5–фтор–4–метил–2–пиридил)–2–оксоэтил]карбамат

Комплекс изопропилмагнийхлорид–хлорид лития (1,3М в ТГФ, 16,4 ммоль, 13,0 мл) добавляли к раствору 2–бром–5–фтор–4–метилпиридина (3,12 г, 16,4 ммоль) в сухом ТГФ (16 мл) в атмосфере аргона при 0 °С. Смесь перемешивали в течение 20 минут на ледяной бане и затем ~2 часа при комнатной температуре (раствор кофейного цвета).

Раствор Гриньяра канюлировали в раствор трет–бутил N–[2–[метокси(метил)амино]–2–оксоэтил]карбамата (1,75 г, 8,0 ммоль) в сухом ТГФ (20 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 1 часа. Гасили 10% NH₄Cl (20 мл). Слой ТГФ сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Перекристаллизация из гептана давала Промежуточное соединение 21 (1,42 г, 66%) в виде белого твердого вещества.

УЭЖХ–МС: t_R=0,74 (M+H⁺) = 213,1 (потеря изобутилена)

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ–d): δ 8.38 (s, 1H), 7.95 (d, J=6.3 Гц, 1H), 5.33 (s br, 1H), 4.82 (d, J=5.1 Гц, 2H), 2.37 (d, J=1.8Гц, 3H), 1.48 (s, 9H).

Промежуточное соединение 22

2–амино–1–(5–фтор–4–метил–2–пиридил)этанол гидрохлорид

NaBH₄ (99 мг, 2,63 ммоль) добавляли к раствору Промежуточного соединения 21 (1,42 г, 5,26 ммоль) в 96% EtOH (40 мл) при 0–5 °C. Бледно–желтый раствор перемешивали в течение 30 минут. Добавляли АсОН (0,25 мл), чтобы погасить избыток NaBH₄. Все летучие вещества упаривали и остаток распределяли между EtOAc (50 мл):нас. NaHCO₃ (40 мл). Слой EtOAc сушили (Na₂SO₄) и упаривали. BOC–защищенный аминоспирт (1,40 г, 98,6%) повторно растворяли в 1М HCl в МеОН (30 мл) и перемешивали при 50 °С в течение 1 часа. Все летучие вещества упаривали с получением Промежуточного соединения 22 (1,10 г, 92%) в виде бледно–желтого твердого вещества. Использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.

УЭЖХ–МС: t_R=0,28 (M+H⁺) = 171,2

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 8.46 (d, J=1.6 Гц, 1H), 8.22 (s, 3H), 7.59 (d, J=6.4 Гц, 1H), 4.91 (dd, J=8.9, 3.5 Гц, 1H), 3.28–3.15 (m, 1H), 3.01–2.87 (m, 1H), 2.33 (d, J=1.7Гц, 3H).

Промежуточное соединение 23

(2R)–2–гидрокси–3–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропановая кислота

Смесь промежуточной (S)–кислоты (0,367 ммоль, 100 мг), метил (2R)–3–амино–2–гидроксипропаноат гидрохлорида (76 мг, 0,44 ммоль), HOBt (50 мг, 0,367 ммоль) и DIPEA (0,367 ммоль, 65 мкл) в ДМФА (1 мл) перемешивали в течение 5 минут. Добавляли EDCl (78 мг, 0,404 ммоль), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Очищали с помощью ВЭЖХ. Чистые фракции упаривали и снова растворяли в ТГФ (5 мл) и добавляли 1М NaOH (1 мл). Перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, упаривали и подкисляли 1М HCl до рН≈3–4. Осадок отфильтровывали и сушили под вакуумом. Промежуточное соединение 23 выделяли в виде белого твердого вещества.

УЭЖХ–МС: t_R=0,29 (M+H⁺) = 360,3

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 12.53 (s, 1H), 11.63 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 4.23–3.79 (m, 4H), 3.58 (d, J=13.2 Гц, 1H), 2.34 (s, 1H), 1.92 (s, 1H), 1.81 (s, 1H), 0.71–0.30 (m, 4H).

Промежуточное соединение 24

[1–(гидроксиметил)циклопропил]метил (2R)–2–амино–3–[трет–бутил(диметил)силил]оксипропаноат

Стадия 1: EDCI (104 мг, 0,54 ммоль) добавляли к смеси N–Cbz–O–TBDMS–D–серина (200 мг, 0,45 ммоль), 1,1–ди(гидроксиметил)циклопропана (116 мг, 1,13 ммоль) и DMAP (55 мг, 0,45 ммоль) в сухом ДХМ (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. Упаривали и хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. Cbz–сложный эфир выделяли (140 мг, 70%) в виде прозрачного масла.

¹H ЯМР (600 МГц, Хлороформ–d): δ 7.41–7.30 (m, 6H), 5.63 (d, J=8.5 Гц, 1H), 5.18–5.09 (m, 2H), 4.43 (dt, J=8.6, 2.9 Гц, 1H), 4.19 (d, J=11.6 Гц, 1H), 4.10 (d, J=11.6 Гц, 1H), 3.87 (dd, J=10.2, 3.1 Гц, 1H), 3.47–3.39 (m, 2H), 0.85 (s, 9H), 0.61–0.50 (m, 4H), 0.03 (s, 3H), 0.02 (s, 3H).

Стадия 2: Cbz–сложный эфир (140 мг, 0,32 ммоль) гидрировали с помощью шарика с H₂ над 10% Pd/C (20 мг) в EtOAc (10 мл). Смесь фильтровали и упаривали. Полученный материал (98 мг, 100%) использовали непосредственно как есть.

Промежуточное соединение 25

(2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропановая кислота

HATU (419 мг, 1,10 ммоль) добавляли к смеси промежуточной (S)–кислоты (250 мг, 0,92 ммоль), гидрохлорида метилового эфира D–серина (171 мг, 1,10 ммоль) и DIPEA (0,62 мл, 3,67 ммоль) в сухом ДМФА (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Очищали с помощью ВЭЖХ. Метиловый эфир выделяли в виде белого твердого вещества (290 мг, 84%).

УЭЖХ–МС: t_R=0,35 (M+H⁺) = 374,3

Гидролиз сложного эфира: Сложный эфир (290 мг, 0,777 ммоль) гидролизовали с помощью NaOH (62 мг, 2 экв.) в смеси ТГФ/вода (по 5 мл каждого). Перемешивали 2 часа при комнатной температуре. Все летучие вещества упаривали и остаток очищали с помощью ВЭЖХ. Промежуточное соединение 25 (200 мг, 71%) выделяли в виде белого твердого вещества.

УЭЖХ–МС: t_R=0,29 (M+H⁺) = 360,2

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 12.53 (s br, 1H), 11.61 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.90 (d, J=7.9 Гц, 1H), 7.14 (dd, J=3.6, 2.1 Гц, 1H), 6.53 (dd, J=3.7, 1.6 Гц, 1H), 4.28 (dt, J=8.1, 4.9 Гц, 1H), 4.14 (ddd, J=11.8, 7.5, 3.6 Гц, 1H), 4.02–3.82 (m, 2H), 3.74–3.53 (m, 3H), 2.50–2.43 (m, 1H), 2.02–1.75 (m, 2H), 0.63–0.52 (m, 1H), 0.49–0.34 (m, 3H).

Промежуточное соединение 26

рацемической транс–2–(аминометил)–циклопропанкарбонитрил

п–TsCl (215 мг, 1,13 ммоль) добавляли к раствору рацемического транс–2–(гидроксиметил)циклопропанкарбонитрила (100 мг, 1,03 ммоль) и DABCO (144 мг, 1,28 ммоль) в ДХМ (1,25 мл) при 2–6°C. Ледяную баню удаляли и белую суспензию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 30 минут. Выливали в 0,1М HCl (10 мл) и экстрагировали MBTE (2 × 10 мл). Органический слой сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Неочищенный тозилат (206 мг, 78%) выделяли в виде бледно–желтого масла и использовали непосредственно на следующей стадии.

Смесь тозилата (202 мг, 0,78 ммоль) и азида натрия (77 мг, 1,18 ммоль) в сухом ДМФА (1,8 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере аргона. Добавляли воду (16 мл) и экстрагировали Et₂O (2 × 10 мл). Органический слой сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Неочищенный азид выделяли в виде бесцветной жидкости (154 мг, 96%) и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Неочищенный азид (145 мг, 0,71 ммоль) растворяли в EtOAc (3 мл) и гидрировали над 10% Pd/C (10 мг) с помощью шарика с H₂. Смесь фильтровали и добавляли 1М HCl в МеОН (1 мл) и затем все летучие вещества упаривали.

Промежуточное соединение 26 (98 мг, 98%) выделяли в виде соли HCl.

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d6): δ 8.16 (s br, 3H, –NH₃ ⁺), 2.90 (dt, J=12.1, 5.8 Гц, 1H), 2.65 (ddd, J=13.3, 8.0, 5.2 Гц, 1H), 1.86–1.58 (m, 2H), 1.31 (dt, J=8.9, 5.2 Гц, 1H), 1.10 (ddd, J=8.8, 6.2, 5.0 Гц, 1H).

Промежуточное соединение 27

цис/транс–3–(аминометил)циклобутанкарбонитрил

Циклобутановый аналог получали таким же способом, который описан для Промежуточного соединения 26.

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 7.99 (s, 3H), 3.29–3.17 (m, 1H), 2.86 (d, J=7.1 Гц, 2H), 2.63–2.53 (m, 1H), 2.47–2.34 (m, 2H), 2.19–2.04 (m, 2H).

ПРИМЕРЫ

Общая методика образования амида с SEM–защищенной кислотой:

Смесь Промежуточной (S)–SEM–кислоты (0,10 ммоль, 40,2 мг), амина (0,15 ммоль), HOBt (0,10 ммоль, 14 мг) и DIPEA (0,20 ммоль, 35 мкл) в ДХМ (1 мл) перемешивали в течение 5 минут. Добавляли EDCl (0.11 ммоль, 21 мг), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Разбавляли ДХМ (3 мл), промывали 0,1М KHSO₄ (2 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента с получением промежуточных SEM–защищенных амидов.

Общая методика снятия SEM–защиты с амидов:

ТФА (4 экв.) добавляли к раствору промежуточных защищенных SEM амидов (1,0 экв.) в ДХМ при комнатной температуре. Перемешивали при комнатной температуре до тех пор, пока ЖХМС не покажет полную конверсию (как правило, 3–6 часов). Упаривали и снова растворяли в MeCN и добавляли 1,2–диаминоэтан (6 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов или дольше, где указано. Упаривали и очищали с помощью ВЭЖХ или растирали с водой, отфильтровывали и сушили под вакуумом.

Пример 5

(8S)–N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]–пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

Образование SEM–амида:

EDCI (11 ммоль, 2,2 г) добавляли к смеси Промежуточного соединения 8 (13,2 ммоль, 2,37 г), Промежуточной (S)–SEM–кислоты (9,0 ммоль, 3,6 г), HOBt (9,0 ммоль, 1,4 г) и DIPEA (27 ммоль, 3,5 г, 4,7 мл) в ДХМ (30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и при 50 °С в течение 1 часа. ЖХМС показала полную конверсию. Разбавляли ДХМ (100 мл), промывали водой, 2% лимонной кислотой, сушили (Na₂SO₄) и упаривали. SEM–защищенный амид (4,79 г) выделяли в виде белого твердого вещества с выходом 100% и использовали непосредственно на следующей стадии. УЭЖХ–МС: t_R=0,88 (M+H⁺) = 528,5

Снятие SEM–защиты:

ТФА (182 ммоль, 20,7 г, 13,9 мл) медленно добавляли к раствору указанного выше SEM–защищенного амида (9,08 ммоль, 4,79 г) в ДХМ (35 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ~3 часов (пока ЖХМС не показала полное снятие защиты). Упаривание летучих веществ с последующим повторным растворением в MeCN (20 мл), охлаждение смеси на ледяной бане и медленное добавление 1,2–диаминоэтана (90,8 ммоль, 5,45 г, 6,07 мл) давало желтый раствор. ЖХМС показала полное снятие защиты после около 30 минут. Упаривание летучих веществ дало белую суспензию. Разбавляли водой (40 мл) и pH доводили до 5–6 с помощью AcOH. Перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре, осадок отфильтровывали, промывали водой и сушили под вакуумом. Перекристаллизовывали, растворяя в кипящем 96% EtOH (около 35–40 мл) и затем медленно добавляя горячую (70 °C) воду (35 мл). Оставляли для медленной кристаллизации. Осадок отфильтровывали и сушили под вакуумом.

(8S)–N–[(1S,2S)–2–циклопентил–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид (2,25 г) выделяли в виде белого твердого вещества с выходом 62,4%.

УЭЖХ–МС: t_R=0,51 (M+H⁺) = 398,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.63 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.29 (d, J=8.8 Гц, 1H), 7.14 (dd, J=3.6, 2.3 Гц, 1H), 6.52 (dd, J=3.7, 1.8 Гц, 1H), 4.64 (d, J=6.1 Гц, 1H), 4.19 (ddd, J=13.0, 7.6, 3.6 Гц, 1H), 3.92 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.90–3.83 (m, 2H), 3.59 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.09 (ddd, J=8.4, 5.5, 2.5 Гц, 1H), 2.37 (dd, J=6.9, 4.8 Гц, 1H), 1.92 (dtd, J=13.1, 7.4, 3.6 Гц, 1H), 1.86–1.76 (m, 2H), 1.75–1.68 (m, 1H), 1.63–1.37 (m, 3H), 1.32 (dq, J=12.3, 8.2 Гц, 1H), 1.12–1.06 (m, 1H), 1.04 (d, J=6.8 Гц, 3H), 0.59 (ddd, J=9.3, 5.3, 3.7 Гц, 1H), 0.44 (dddd, J=26.8, 9.0, 5.4, 3.7 Гц, 2H), 0.37 (ddd, J=8.6, 5.2, 3.9 Гц, 1H).

Пример 41

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

Образование SEM–амида:

Смесь Промежуточной (S)–SEM–кислоты (10,00 ммоль, 4,026 г), Промежуточного соединения 10 (12,7 ммоль, 2,16 г), HOBt (11,00 ммоль, 1,486 г) и DIPEA (20,00 ммоль, 2,585 г, 3,48 мл) в ДХМ (30 мл) перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли EDCI (12,50 ммоль, 2,396 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Разбавляли ДХМ (30 мл), промывали 0,5М KHSO₄ (30 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали до оранжевого сиропа. Хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. SEM–амид (5,01 г) выделяли с выходом 90% в виде прозрачного сиропа.

УЭЖХ–МС: t_R=0,80 (M+H⁺) = 555,5

Снятие SEM–защиты:

ТФА (261,2 ммоль, 20,00 мл) добавляли к раствору SEM–защищенного амида (9,03 ммоль, 5,01 г) в ДХМ (25 мл) при комнатной температуре. Перемешивали при комнатной температуре в течение около 3 часов (пока ЖХМС не показала полную конверсию). Упаривали и снова растворяли в MeCN (25 мл) и добавляли 1,2–диаминоэтан (150 ммоль, 10,0 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов с получением белой суспензии. Упаривали и растирали с водой (50 мл) и нейтрализовали с помощью AcOH. Полученное твердое вещество отфильтровывали и промывали водой. Сушили под вакуумом.

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид (3,20 г) выделяли с выходом 83,5% в виде белого твердого вещества.

УЭЖХ–МС: t_R=0,43 (M+H⁺) = 425,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.71 (s, 1H), 8.48 (d, J=2.9 Гц, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.71 (td, J=8.8, 2.9 Гц, 1H), 7.56 (dd, J=8.7, 4.6 Гц, 1H), 7.42 (d, J=8.7 Гц, 1H), 7.16 (dd, J=3.7, 2.2 Гц, 1H), 6.52 (dd, J=3.7, 1.6 Гц, 1H), 5.75 (d, J=5.1 Гц, 1H), 4.30–4.19 (m, 1H), 4.02 (ddd, J=13.1, 8.0, 3.6 Гц, 1H), 3.86 (ddd, J=13.0, 7.4, 3.9 Гц, 1H), 3.69 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.51 (d, J=13.2 Гц, 1H), 2.23 (dd, J=6.5, 4.9 Гц, 1H), 1.86 (dtd, J=13.6, 6.9, 3.6 Гц, 1H), 1.74 (ddt, J=12.9, 8.6, 4.3 Гц, 1H), 1.07 (d, J=6.8 Гц, 3H), 0.43–0.27 (m, 3H), 0.19–0.07 (m, 1H).

Следующие примеры были получены аналогичным образом, исходя из сочетания Промежуточной (S)–SEM–кислоты с конкретным амином, соответствующим данному примеру, вместо Промежуточного соединения 10 Пример 40 и Пример 152

Следующие примеры были получены аналогичным образом, исходя из сочетания Промежуточной (S)–кислоты вместо (S)–SEM–кислоты, следовательно, избегая стадии снятия SEM–защиты, с конкретным амином, соответствующим данному примеру, вместо Промежуточного соединения 10 Пример 6, 15, 23, 45, 73, 74 и 107.

Следующие примеры были получены аналогично Примеру 154, исходя из сочетания Промежуточной (S)–SEM–кислоты с конкретным амином, соответствующим данному примеру, вместо (3,3–дифторциклобутил)метанола:

Пример 2, 10, 11, и 25

Пример 9

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

и

Пример 50

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

EDCI (3,0 ммоль, 570 мг) добавляли к смеси диастереомеров Промежуточного соединения 12 (0,90 г, 4,0 ммоль), Промежуточной (S)–SEM–кислоты (2,0 ммоль, 800 мг), HOBt (2,2 ммоль, 330 мг) и DIPEA (7,9 ммоль, 1,4 мл) в ДХМ (25 мл). Перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. ЖХМС показала полную конверсию в смесь диастереомерных амидов. Разбавляли ДХМ (100 мл), промывали водой, 5% лимонной кислотой (20 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали до коричневого сиропа (1,20 г, кол. выход).

ТСХ (EtOAc) наблюдается только одно пятно (R_f=0,22)

УЭЖХ–МС: t_R=0,74 (R,S,S)–изомер (ок. 35%) и t_R=0,76 (S,S,S)–изомер (ок. 65%)

Неочищенную смесь SEM–защищенных амидов разделяли с помощью преп. ВЭЖХ. Растворяли в 3 мл МеОН в 10 инъекциях (300 мкл, 120 мг на инъекцию).

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–[7–(2–триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид выделяли в виде белого твердого вещества (0,55 г, 49%) с чистотой 99%.

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–[7–(2–триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид выделяли в виде белого твердого вещества (0,235 г, 21%) с чистотой 99%.

Снятие SEM–защиты c (S,S,S)–изомера:

ТФА (19 ммоль, 1,5 мл) добавляли к раствору (8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–[7–(2–триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида (0,97 ммоль, 0,55 г) в ДХМ (10 мл) при комнатной температуре. Перемешивали при комнатной температуре в течение ~3 часов (пока ЖХМС не показала полную конверсию). Упаривали и снова растворяли в MeCN (10 мл) и добавляли 1,2–диаминоэтан (14 ммоль, 0,97 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов с получением белой суспензии. Упаривали и растирали с водой (10 мл) и нейтрализовали с помощью AcOH. Полученное твердое вещество отфильтровывали и промывали водой. Сушили под вакуумом.

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид (0,32 г) выделяли в виде белого твердого вещества с выходом 75% (чистота 99%).

УЭЖХ–МС: t_R=0,42 (M+H⁺) = 440,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.73 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.37 (dd, J=8.5, 5.6 Гц, 2H), 7.29 (d, J=8.9 Гц, 1H), 7.18–7.07 (m, 3H), 6.53 (dd, J=3.5, 1.7 Гц, 1H), 5.55 (d, J=4.9 Гц, 1H), 4.91 (d, J=3.3 Гц, 1H), 4.77 (s, 1H), 3.97 (dt, J=8.3, 4.1 Гц, 2H), 3.89 (ddd, J=13.2, 7.1, 4.0 Гц, 1H), 3.68 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.55–3.47 (m, 2H), 2.28 (t, J=5.6 Гц, 1H), 1.86 (dtd, J=13.3, 6.7, 3.6 Гц, 1H), 1.75 (ddt, J=13.0, 8.5, 4.3 Гц, 1H), 0.40–0.24 (m, 3H), 0.12–0.04 (m, 1H).

Снятие SEM–защиты c (S,S,R)–изомера:

ТФА (8,25 ммоль, 0,62 мл) добавляли к раствору (8S)–N–[(1S, 2R)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–[7–(2–триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил]–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида (0,412 ммоль, 0,235 г) в ДХМ (5 мл) при комнатной температуре. Перемешивали при комнатной температуре в течение ~3 часов (пока ЖХМС не показала полную конверсию). Упаривали и снова растворяли в MeCN (5 мл) и добавляли 1,2–диаминоэтан (6,19 ммоль, 0,414 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов с получением белой суспензии. Упаривали и растирали с водой (6 мл) и нейтрализовали с помощью AcOH. Полученное твердое вещество отфильтровывали и промывали водой. Сушили под вакуумом.

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(4–фторфенил)–2–гидрокси–1–(гидроксиметил)этил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид (0,109 г) выделяли в виде белого твердого вещества с выходом 60% (чистота 99%).

УЭЖХ–МС: t_R=0,40 (M+H⁺) = 440,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.61 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.45 (d, J=8.9 Гц, 1H), 7.39–7.31 (m, 2H), 7.16–7.06 (m, 3H), 6.48 (dd, J=3.6, 1.7 Гц, 1H), 5.43 (d, J=4.9 Гц, 1H), 4.60–4.52 (m, 2H), 4.34 (t, J=5.1 Гц, 1H), 4.09–4.00 (m, 1H), 3.95 (tq, J=8.9, 5.6, 4.6 Гц, 1H), 3.86–3.79 (m, 1H), 3.71 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.63 (dt, J=10.9, 5.5 Гц, 1H), 3.52–3.40 (m, 1H), 2.16 (dd, J=6.8, 4.8 Гц, 1H), 1.86 (ddq, J=13.3, 7.1, 3.6 Гц, 1H), 1.74 (ddt, J=12.5, 8.3, 4.2 Гц, 1H), 0.32–0.22 (m, 2H), 0.18 (ddd, J=8.9, 5.6, 3.8 Гц, 1H), –0.05 (dt, J=9.2, 4.4 Гц, 1H).

Пример 44

(8S)–N–[(2R)–2–(5–фтор–4–метил–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

и

Пример 110

(8S)–N–[(2S)–2–(5–фтор–4–метил]–2–пиридил)–2–гидроксиэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

EDCI (360 мг, 1,90 ммоль) добавляли к раствору Промежуточной (S)–SEM–кислоты (500 мг, 1,20 ммоль), Промежуточного соединения 22 (360 мг, 1,20 ммоль), HOBt (250 мг, 1,90 ммоль) и DIPEA (0,43 мл, 2,50 ммоль) в ДХМ (50 мл) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Промывали водой (40 мл), нас. NaHCO₃ (40 мл), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Неочищенный продукт хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. Смесь диастереомеров (380 мг, 55%) выделяли в виде белого твердого вещества. Два диастереомера (380 мг) разделяли с помощью хиральной SFC с чистотой более 99% de. У обоих изомеров была снята SEM–защита, как описано в общей методике.

Пример 44

Первый элюирующий изомер: Белое твердое вещество (63 мг, 22%), УЭЖХ–МС: t_R=0,44 (M+H⁺) = 425,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.63 (s br, 1H), 8.36 (d, J=1.2 Гц, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.76 (t, J=5.8 Гц, 1H), 7.43 (d, J=6.3 Гц, 1H), 7.14 (d, J=3.6 Гц, 1H), 6.51 (d, J=3.6 Гц, 1H), 4.63 (dd, J=6.8, 5.0 Гц, 1H), 4.08 (ddd, J=13.1, 7.8, 3.6 Гц, 1H), 3.90–3.82 (m, 2H), 3.56 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.41 (dt, J=13.3, 5.3 Гц, 1H), 3.36–3.28 (m, 1H), 2.28 (s, 4H), 1.93–1.84 (m, 2H), 1.82–1.74 (m, 1H), 0.50–0.43 (m, 1H), 0.42–0.34 (m, 2H), 0.29–0.24 (m, 1H).

Пример 110

Второй элюирующий изомер: Белое твердое вещество (70 мг, 24%), УЭЖХ–МС: t_R=0,44 (M+H⁺) = 425,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.64 (s br, 1H), 8.36 (d, J=1.2 Гц, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.82 (t, J=5.8 Гц, 1H), 7.43 (d, J=6.4 Гц, 1H), 7.14 (dd, J=3.6, 1.5 Гц, 1H), 6.52 (d, J=3.5 Гц, 1H), 5.68 (s, 1H), 4.61 (dd, J=7.3, 4.8 Гц, 1H), 4.10 (ddd, J=13.1, 7.6, 3.6 Гц, 1H), 3.91 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.85 (ddd, J=13.1, 7.7, 3.6 Гц, 1H), 3.61–3.51 (m, 2H), 3.17 (ddd, J=13.0, 7.3, 5.3 Гц, 1H), 2.33–2.27 (m, 4H), 1.88 (dtd, J=13.1, 7.4, 3.6 Гц, 1H), 1.82–1.74 (m, 1H), 0.53–0.47 (m, 1H), 0.44–0.37 (m, 2H), 0.33–0.28 (m, 1H).

Примеры 12, 38 и 46 были синтезированы способом, аналогичным описанному для примеров 44 и 110, с применением рацемического 2–амино–1–(5–фтор–2–пиридил)этанола.

Пример 38 был выделен пропустив стадию хирального SFC–разделения, следовательно, представлял собой смесь 1:1 примеров 12 и 46.

Пример 12 был получен методом снятия SEM–защиты у первого элюирующего изомера, выделенного SFC–разделением.

Пример 46 был получен методом снятия SEM–защиты у второго элюирующего изомера, выделенного SFC–разделением.

Пример 75

(8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–4–метил]–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

и

Пример 133

(8S)–N–[(1S,2S)–2–(5–фтор–4–метил]–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

Примеры 75 и 133 были синтезированы способом, аналогичным описанному для Примера 5. Аминоспирт (1R,2S)–2–амино–1–(5–фтор–4–метил–2–пиридил)пропан–1–ол был синтезирован способом, аналогичным описанному для Промежуточных соединений 9 и 10.

УЭЖХ–МС: t_R=0,47 (M+H⁺) = 439,4

Пример 75

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.66 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.46–7.40 (m, 2H), 7.14 (dd, J=3.6, 2.1 Гц, 1H), 6.49 (dd, J=3.7, 1.6 Гц, 1H), 5.77 (br s, 1H), 4.56 (br s, 1H), 4.26–4.18 (m, 1H), 4.03–3.97 (ddd, J=13.1, 7.7, 3.6 Гц, 1H), 3.84–3.78 (ddd, J=13.0, 7.6, 3.8 Гц, 1H), 3.69 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.51 (d, J=13.2 Гц, 1H), 2.27 (br s, 2H), 1.89–1.82 (m, 1H), 1.75–1.68 (m, 1H), 1.06 (d, J=6.9 Гц, 3H), 0.37–0.26 (m, 3H), 0.18–0.11 (m, 1H).

Пример 133

УЭЖХ–МС: t_R=0,48 (M+H⁺) = 439,4

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.67 (s, 1H), 8.38 (d, J=1.1 Гц, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.75 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.40 (d, J=6.4 Гц, 1H), 7.15 (d, J=2.0 Гц, 1H), 6.52 (d, J=3.5 Гц, 1H), 5.68 (d, J=5.3 Гц, 1H), 4.51 (t, J=5.1 Гц, 1H), 4.27–4.16 (m, 2H), 3.88 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.77 (ddd, J=12.6, 8.2, 3.6 Гц, 1H), 3.53 (d, J=13.2 Гц, 1H), 2.32 (dd, J=7.5, 4.7 Гц, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.92–1.85 (m, 1H), 1.80–1.73 (m, 1H), 0.90 (d, J=6.8 Гц, 3H), 0.44–0.34 (m, 2H), 0.30 (ddd, J=9.0, 5.6, 3.7 Гц, 1H), 0.19 (dt, J=9.2, 4.1 Гц, 1H).

Пример 130

(8S)–N–[(2R)–3–[(3,3–дифторциклобутил)метиламино]–2–гидрокси–3–оксопропил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

EDCI (6,4 мг, 0,0334 ммоль) добавляли к смеси Промежуточного соединения 23 (10 мг, 0,0278 ммоль), (3,3–дифторциклобутил)метанамина гидрохлорида (6,6 мг, 0,0417 ммоль), HOBt (3,8 мг, 0,0278 ммоль) и DIPEA (6 мкл, 0,0278 ммоль) в сухом ДМФА (600 мкл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Очищали с помощью ВЭЖХ. Соединение выделяли в виде белого твердого вещества.

УЭЖХ–МС: t_R=0,43 (M+H+) = 463,3

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.64 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.06 (t, J=6.2 Гц, 1H), 7.79 (t, J=5.7 Гц, 1H), 7.14 (d, J=3.6 Гц, 1H), 6.52 (d, J=3.6 Гц, 1H), 5.77 (s, 1H), 4.15 (ddd, J=13.0, 7.6, 3.5 Гц, 1H), 3.97–3.92 (m, 2H), 3.87 (ddd, J=13.1, 7.7, 3.7 Гц, 1H), 3.59 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.38–3.33 (m, 1H), 3.25–3.13 (m, 3H), 2.56 (m, 2H), 2.38–2.21 (m, 4H), 1.97–1.89 (m, 1H), 1.87–1.76 (m, 1H), 0.58–0.53 (m, 1H), 0.47–0.33 (m, 3H).

Пример 129

(8S)–N–[(2R)–3–[[3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метиламино]–2–гидрокси–3–оксопропил]–5–(7Н–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамид

Данное соединение получали способом, аналогичным примеру 130, применяя [1–(аминометил)–3,3–дифторциклобутил]метанол

Пример 116

[1–(гидроксиметил)циклопропил]метил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат

Стадия 1: HATU (56 мг, 0,15 ммоль) добавляли к смеси Промежуточной (S)–SEM–кислоты (50 мг, 0,12 ммоль), Промежуточного соединения 24 (42 мг, 0,14 ммоль) и DIPEA (65 мкл, 0,37 ммоль) в сухом ДХМ (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Упаривали и хроматографировали на силикагеле, применяя EtOAc:гептан в качестве элюента. SEM–защищенный амид выделяли в виде бледно–желтого масла (64 мг, 75%).

УЭЖХ–МС: t_R=1,03 (M+H⁺) = 688,4

Стадия 2 и 3: Группа SEM была удалена, как описано в общей методике.

УЭЖХ–МС: t_R=0,39 (M+H+) = 444,3

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.67 (s, 1H), 8.13 (d, J=7.7 Гц, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.15 (dd, J=3.7, 1.6 Гц, 1H), 6.53 (d, J=3.5 Гц, 1H), 5.07 (s br, 1H), 4.62 (t, J=5.6 Гц, 1H), 4.36–4.31 (m, 1H), 4.13 (ddd, J=13.1, 7.7, 3.5 Гц, 1H), 4.03 (d, J=11.2 Гц, 1H), 3.99–3.88 (m, 3H), 3.73–3.58 (m, 3H), 3.34–3.24 (m, 2H), 2.48–2.42 (m, 1H), 1.97–1.89 (m, 1H), 1.88–1.80 (m, 1H), 0.60–0.51 (m, 1H), 0.49–0.32 (m, 7H).

Следующие соединения были получены аналогичным образом, исходя из сочетания Промежуточной (S)–SEM–кислоты с конкретным амином, соответствующим данному примеру, вместо Промежуточного соединения 24 и заменяя ДХМ на ДМФА в стадии 1:

Примеры 1, 3, 4, 7–8, 13–14, 16–18, 20, 22, 24, 27, 29–32, 34, 36–37, 43, 48, 51, 54, 62, 64, 67, 71, 84, 93, 97, 101, 104–105, 122, 126, 132, 135, 146 и 149–151.

Следующие соединения были получены аналогичным образом, исходя из сочетания Промежуточной (S)–SEM–кислоты с конкретным амином, соответствующим данному примеру, вместо Промежуточного соединения 24, но получены аналогично Промежуточному соединению 24, и заменяя ДХМ на ДМФА в стадии 1: 42, 91 и 98.

Следующие соединения были получены аналогичным образом, исходя из сочетания Промежуточной (R)–SEM–кислоты с конкретным амином, соответствующим данному примеру, и заменяя ДХМ на ДМФА в стадии 1: Пример 142 и Пример 145.

Пример 80

Бензил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат

HATU (16,7681 мг, 0,0441 ммоль) добавляли к смеси Промежуточной (S)–кислоты (10 мг, 0,0367 ммоль) и бензилового эфира L–серина HCl (10,2169 мг, 0,0441 ммоль) и DIPEA (18,9858 мг, 0,1469 ммоль, 0,025 мл) растворяли в сухом ДМФА (0,300 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа.

Реакционную смесь очищали с помощью ВЭЖХ (выход 54%).

УЭЖХ–МС: t_R=0,505 (M+H⁺) = 450,46

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.62 (s, 1H), 8.12 (d, J=7.6 Гц, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.52–7.23 (m, 5H), 7.14 (d, J=3.6 Гц, 1H), 6.51 (d, J=3.6 Гц, 1H), 5.22–4.93 (m, 3H), 4.40 (dt, J=5.0, 7.6 Гц, 1H), 4.18–4.02 (m, 1H), 3.95 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.91–3.81 (m, 1H), 3.70 (qd, J=5.1, 11.0 Гц, 2H), 3.60 (d, J=13.2 Гц, 1H), 2.44 (t, J=5.8 Гц, 1H), 2.02–1.70 (m, 2H), 0.69–0.27 (m, 4H).

Следующие соединения были получены аналогичным образом, исходя из сочетания Промежуточной (S)–кислоты с конкретным амином, соответствующим данному примеру, вместо бензилового эфира L–серина HCl:

Примеры 28, 47, 49, 52, 57, 68, 77, 78, 100, 106, 108, 109, 120, 121, 147 и 148.

Следующие соединения были получены аналогичным образом, исходя из сочетания Промежуточной рац–кислоты с конкретным амином, соответствующим данному примеру, вместо бензилового эфира L–серина HCl:

Пример 19, 21, 26, 33, 35, 39, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 63, 66, 69, 70, 76, 79, 81, 82, 83, 85, 86, 88, 90, 94, 95, 99, 102, 103, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 123, 124, 127, 128, 131, 134, 136, 137, 139, 141, 143 и 144.

Пример 138

Бензил (2S)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат

УЭЖХ–МС: t_R=0,49 (M+H⁺) = 450,48

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.62 (s, 1H), 8.14 (d, J=7.6 Гц, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.48–7.24 (m, 5H), 7.14 (d, J=3.5 Гц, 1H), 6.51 (d, J=3.6 Гц, 1H), 5.13 (s, 2H), 5.07 (s, 1H), 4.40 (dt, J=4.9, 7.7 Гц, 1H), 4.21 (ddd, J=3.7, 6.9, 11.1 Гц, 1H), 3.93 (d, J=13.2 Гц, 1H), 3.87–3.61 (m, 3H), 3.56 (d, J=13.2 Гц, 1H), 2.51 (s, 1H), 2.04–1.71 (m, 2H), 0.65–0.45 (m, 2H), 0.45–0.29 (m, 2H).

Пример 87

Циклопентилметил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат

Циклопентилметанол (0,3 мл) добавляли к смеси Me–сложного эфира Промежуточного соединения 25 (13 мг, 0,0348 ммоль) ДМСО (0,3 мл) и DBU (0,1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 65 °С в течение 20 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры.

Реакционную смесь очищали с помощью ВЭЖХ (выход 8.6%).

УЭЖХ–МС: t_R=0,57 (M+H⁺) = 442,47

Пример 96

Циклопентил (2R)–3–гидрокси–2–[[(8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбонил]амино]пропаноат

Циклопентанол (0,5 мл) добавляли к смеси Me–сложного эфира Промежуточного соединения 25 (13 мг, 0,0348 ммоль) ДМСО (0,3 мл) и DBU (0,1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 65 °С в течение 20 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры.

Реакционную смесь очищали с помощью преп. ВЭЖХ (выход 4.1%).

УЭЖХ–МС: t_R=0,51 (M+H⁺) = 428,47

Пример 153

(3,3–дифторциклобутил)метил 5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Промежуточную рац–кислоту (9,8 мг) растворяли в сухом ДМФА (0,5 мл) вместе с (3,3–дифторциклобутил)метанолом (8,8 мг) с последующим добавлением DMAP (11 мг) и EDCI (14 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут и затем очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=2,1 (M+H⁺) = 377,17

Пример 154

(3,3–дифторциклобутил)метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Образование сложного эфира:

Промежуточную (S)–SEM–кислоту (680 мг, 1,7 ммоль) растворяли в сухом ДХМ (35 мл) вместе с (3,3–дифторциклобутил)метанолом (410 мг, 3,4 ммоль) и DMAP (210 мг, 1,7 ммоль) , Затем добавляли EDCl (490 мг, 2,5 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь промывали 0,1М KHSO₄ (20 мл), сушили над Na₂SO₄ и упаривали досуха с получением прозрачного масла, которое непосредственно использовали на следующей стадии.

Снятие SEM–защиты:

Прозрачное масло растворяли в ДХМ (25 мл) с последующим добавлением ТФА (1,56 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Все летучие вещества упаривали и остаток растворяли в MeCN (10 мл) и добавляли 1,2–диаминоэтан (306 ммоль, 5,1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Все летучие вещества упаривали и белое твердое вещество растирали с 2% АсОН (водн., 20 мл), и твердое вещество отфильтровывали с получением желаемого продукта (540 мг, выход 85%).

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=2,1 (M+H⁺) = 377,17

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.66 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.16 (m, 1H), 6.54 (m, 1H), 4.28–4.22 (m, 1H), 4.19–4.10 (m, 2H), 3.79–3.66 (m, 3H), 2.71–2.62 (m, 2H), 2.50–2.36 (m, 4H), 2.05–1.90 (m, 2H), 0.63–0.59 (m, 1H), 0.56–0.45 (m, 2H), 0.41–0.36 (m, 1H).

Пример 155

(3,3–дифторциклобутил)метил (8R)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Пример 155 был синтезирован, как описано для Примера 154, за исключением того, что исходили из (R)–SEM–кислоты.

Очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=2,1 (M+H⁺) = 377,17

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.63 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.16 (m, 1H), 6.53 (m, 1H), 4.31–4.06 (m, 3H), 3.80–3.63 (m, 3H), 2.77–2.57 (m, 2H), 2.50–2.29 (m, 4H), 2.09–1.88 (m, 2H), 0.66–0.33 (m, 4H).

Пример 156

[1–(гидроксиметил)циклопропил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Получали, как описано для Примера 154, исходя из Промежуточной (S)–SEM–кислоты (700 мг, 1,74 ммоль) и [1–(гидроксиметил)циклопропил]метанола (1,78 г, 17,4 ммоль).

Очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,79 (M+H⁺) = 357,18

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.66 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.16 (m, 1H), 6.54 (m, 1H), 4.62 (t, 1H), 4.22–4.14 (m, 1H), 4.04–3.97 (m, 4H), 3.80–3.71 (m, 3H), 3.31–3.29 (br m, 2H), 2.45–2.40 (m, 1H), 2.05–1.90 (br m, 2H), 0.61–0.38 (br m, 8H).

Пример 157

[1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Получали, как описано для Примера 154, исходя из Промежуточной (S)–SEM–кислоты (600 мг, 1,49 ммоль) и [1–(гидроксиметил)циклобутил]метанола (519 мг, 4,47 ммоль).

Очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,88 (M+H⁺) = 371,20

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.66 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.16 (m, 1H), 6.54 (m, 1H), 4.70 (t, 1H), 4.09–4.01 (m, 2H), 3.80–3.66 (m, 3H), 3.42 (m, 2H), 3.30 (s, 1H), 2.39 (m, 1H), 2.06–1.91 (br m, 2H), 1.86–1.71 (br m, 6H), 0.63–0.59 (m, 1H), 0.56–0.51 (m, 1H), 0.49–0.45 (m, 1H), 0.41–0.37 (m, 1H).

Пример 159

[1–(гидроксиметил)циклопентил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Получали, как описано для Примера 154, исходя из Промежуточной (S)–SEM–кислоты (600 мг, 1,49 ммоль) и [1–(гидроксиметил)циклопентил]метанола (485 мг, 3,73 ммоль).

Очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,96 (M+H⁺) = 385,22

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.66 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.16 (m, 1H), 6.52 (m, 1H), 4.68 (t, 1H), 4.29–4.23 (br m, 1H), 3.96–3.90 (m, 2H), 3.79–3.63 (br m, 3H), 3.27 (m, 2H), 2.36 (m, 1H), 2.05–1.90 (br m, 2H), 1.586–1.52 (br m, 4H), 1.47–1.41 (br, 2H), 1.37–1.29 (br, 2H), 0.63–0.59 (m, 1H), 0.55–0.50 (m, 1H), 0.49–0.45 (m, 1H), 0.41–0.36 (m, 1H).

Пример 160

[3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Получали, как описано для Примера 154, исходя из Промежуточной (S)–SEM–кислоты (600 мг, 1,49 ммоль) и [3,3–дифтор–1–(гидроксиметил)циклобутил]метанола (453 мг, 2,98 ммоль). Очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,92 (M+H⁺) = 407,18

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.69 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.16 (m, 1H), 6.55 (m, 1H), 5.10 (t, 1H), 4.31 (br m, 1H), 4.12 (m, 2H), 3.79 (m, 1H), 3.70–3.59 (br m, 2H), 3.46 (m, 2H), 2.48–2.36 (br, 4H), 2.06–2.01 (br m, 1H), 1.98–1.91 (br, 1H), 0.65–0.60 (m, 1H), 0.56–0.51 (m, 1H), 0.48–0.44 (m, 1H), 0.40–0.35 (m, 1H).

Пример 161

[1–(гидроксиметил)циклогексил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Промежуточную (S)–кислоту (27 мг, 0,099 ммоль), [1–(гидроксиметил)циклогексил]метанол (28,6 мг, 0,198 ммоль), DMAP (12,1 мг, 0,099 ммоль) растворяли в ДМСО (1 мл) и ДМФА (1 мл) с последующим добавлением EDCI (19 мг, 0,099 ммоль).

Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=2,05 (M+H⁺) = 398,23

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО–d₆): δ 11.64 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.14 (m, 1H), 6.55 (m, 1H), 4.53–4.47 (br, 1H), 4.31–4.21 (br , 1H), 3.96–3.92 (m, 2H), 3.82–3.62 (br m, 3H), 2.37 (m, 1H), 2.06–1.91 (br m, 2H), 1.46–1.31 (br m, 12H), 0.65–0.36 (m, 4H).

Пример 162

[3–(гидроксиметил)–1,1–диоксотиетан–3–ил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Получали, как описано для Примера 154, исходя из Промежуточной (S)–SEM–кислоты (30 мг, 0,075 ммоль) и [3–(гидроксиметил)–1,1–диоксотиетан–3–ил]метанола (61.9 мг, 0,373 ммоль). Очищали с помощью преп. ВЭЖХ.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,71 (M+H⁺) = 421,15

Пример 163

[1–(цианометил)циклопропил]метил (8S)–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Получали, как описано для Примера 162, применяя 2–[1–(гидроксиметил)циклопропил]ацетонитрил вместо [3–(гидроксиметил)–1,1–диоксотиетан–3–ил]метанола.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,96 (M+H⁺) = 366,19

Пример 164

[1–(цианометил)циклопропил]метил 5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксилат

Получали, как описано для Примера 153, применяя 2–[1–(гидроксиметил)циклопропил]ацетонитрил вместо (3,3–дифторциклобутил)метанола.

УЭЖХ–МС метод 7: t_R=1,95 (M+H⁺) = 366,19

Анализы JAK–киназы:

Экспрессированные бакуловирусом человека JAK1, 2, 3 и TYK2 были приобретены у Carna Biosciences, Inc. Все четыре очищенных фермента содержат только каталитический домен. JAK1 (ак. 850–1154) и TYK2 (ак. 871–1187) экспрессируются с GST–меткой на N–конце, а JAK2 и JAK3 с His–меткой на N–конце.

Ингибирование фосфорилирования синтетического пептида измеряли в анализе HTRF (Анализ методом гомогенной разрешенной во времени флуоресценции) с применением субстрата TK–биотина из набора Cisbio HTRFKinEASE TK. Сначала 2 мкл раствора TK (субстрат TK–биотин в киназном буфере [1x ферментный буфер из набора HTRFKinEASE TK, 1 мМ DTT]) добавляют в планшет, содержащий 1 мкл предварительно разведенного соединения (конечная концентрация анализа в ДМСО: 0,75%). Затем в лунки добавляли 5 мкл смеси киназа–АТФ (приготовленной в киназном буфере) и планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 20–30 минут. Для всех четырех киназ использовали концентрацию АТФ, которая соответствовала Km для АТФ. Конечные концентрации буферов, субстрата, киназы и АТФ составляли: JAK1: 50 мМ буфера Hepes pH 7,0, 0,01% BSA (бычий сывороточный альбумин), 10 мМ MgCl₂, 1 мМ DTT, 7 мкМ АТФ, 50 нМ SEB (стафилококковый энтеротоксин B), 1 мкМ субстрата TK–биотин и 5 нг JAK1; JAK2: 50 мМ буфера Hepes pH 7,0, 0,01% BSA, 5 мМ MgCl₂, 1 мМ DTT, 4 мкМ АТФ, 1 мкМ субстрата TK–биотин и 0,1 нг JAK2; JAK3: 50 мМ буфера Hepes pH 7,0, 0,01% BSA, 5 мМ MgCl₂, 1 мМ DTT, 2 мкМ АТФ, 1 мкМ субстрата TK–биотин и 0,3 нг JAK3; TYK2: 50 мМ буфера Hepes pH 7,0, 0,01% BSA, 5 мМ MgCl₂, 1 мМ DTT, 13 мкМ АТФ, 50 нМ SEB, 1 мкМ субстрата TK–биотин и 0,8 нг TYK2. Затем киназную реакцию останавливали путем добавления 4 мкл смеси для определения (конечные концентрации: 50 мМ буфера Hepes pH 7,0, 0,01% BSA, 0,8 M KF, 20 мМ ЭДТА, 42 нМ Стрептавидина–XL665 и 1:400 Антитела против СК, меченного криптатом) и планшеты инкубировали в течение ночи в темноте. HTRF–сигнал считывали с применением ридера Envision.

В Таблице 1 перечислены выбранные активности по ингибированию JAK–киназы наряду с аналитическим t_R и наблюдаемыми данными M+H⁺ (УЭЖХ–МС метод 7).

Таблица 1: Данные по ингибированию JAK–киназы и аналитические данные

Для оценки метаболической стабильности in vitro, указанные соединения (0,5 мкМ) инкубировали в двух экземплярах с микросомами печени человека (0,5 мг/мл) в фосфатном буфере и НАДФH в 96–луночных планшетах в течение 40 мин (37 °С), применяя робот для обращения с жидкостями (Hamilton Microlab Star). Аликвоты образцов отбирали через 0, 5, 10, 20 и 40 мин и разбавляли в холодном ацетонитриле, чтобы остановить реакции. Планшеты центрифугировали в течение 30 минут, после чего образцы анализировали с помощью жидкостной хроматографии, связанной с масс–спектрометром с времяпролетным детектором (AB Sciex API5600). Израсходование соединения со временем было использовано для оценки константы скорости элиминации, из которой был рассчитан кажущийся собственный клиренс, Clapp, и значения приведены в Таблице 2.

Таблица 2: Данные Cl_app для микросом печени человека

Пример	Clapp (мл/мин/кг)
1		190
2	>	200
3	>	200
4	>	200
5	>	200
6	>	200
7	>	200
8	>	200
9	>	200
10		28
11		148
12		143
13		82
14	>	200
15	>	200
16		180
17		43
18		44
19		88
20		161
21		170
22		123
23		40
24		159
25		46
26		78
27		61
28		132
29		115
30		50
31		166
32		159
34		69
35		41
36		72
37		91
38		73
39		186
40	>	200
41		166
42	>	200
43		166
44	>	200
45	>	200
48		48
49		35
50		109
51	>	200
52		118
54		142
56		63
57		39
58		143
59		28
62		48
63	>	200
64	>	200
68		23
69		44
74		37
76		139
82		198
86	>	200
91		17
94		23
95		135
103		128
105		15
110		195
111		111
127		44
149	>	200
153		160
154		149
155	>	200
156		94
157	>	200
159	>	200
160		121
161	>	200
162	<	10
163	>	200
164	>	200

Claims

1. Соединение, соответствующее общей формуле I

где Х представляет собой NH или О;

R₁ и R₂, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода, дейтерия, гидроксила, (C₁–C₃)алкила и гидрокси(C₁–C₃)алкила;

Y представляет собой химическую связь, –C(O)O–*, –C(O)OR₃–* или –C(O)NHR₃–*, где * обозначает точку присоединения к W и где R₃ представляет собой (C₁–C₄)алкилен;

W выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, (C₃–C₇)циклоалкила и 4–6–членного гетероциклоалкила, содержащего один гетероатом, выбранный из O и S, где указанный фенил, пиридил, (C₃–C₇)циклоалкил и 4–6–членный гетероциклоалкил, содержащий один гетероатом, выбранный из О и S, необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из гидроксила, циано, галогена, оксо, (С₁–С₄)алкила, гидроксил(С₁–С₄)алкила, циано(C₁–C₄)алкила, (C₁–C₄)алкокси и –SO₂NH₂;

или его фармацевтически приемлемые соли, гидраты или сольваты.

2. Соединение по п. 1, где Х представляет собой NH.

3. Соединение по п. 1, где Х представляет собой O.

4. Соединение по любому из пп. 1–3, где n равно 1.

5. Соединение по любому из пп. 1–3, где n равно 2.

6. Соединение по любому из пп. 1–5, где Y представляет собой химическую связь.

7. Соединение по любому из пп. 1–5, где Y представляет собой –C(O)O–*, –C(O)OR₃–* или –C(O)NHR₃–*, где * обозначает точку присоединения к W и где R₃ представляет собой метилен.

8. Соединение по любому из пп. 1–7, где R₁ и R₂ каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, метила и гидроксиметила.

9. Соединение по любому из пп. 1–8, где W выбран из группы, состоящей из (C₃–C₆)циклоалкила, фенила, пиридила, тетрагидропиранила и тиэтанила, где указанный (C₃–C₆)циклоалкил, фенил, пиридил, тетрагидропиранил и тиэтанил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из фтора, циано, –SO₂NH₂, гидроксила, оксо, метила, этила, гидроксиметила, цианометила и метокси.

10. Соединение по любому из пп. 1–9, выбранное из списка, включающего

11. Соединение по любому из пп. 1–10, выбранное из (8S)–N–[(1S,2R)–2–(5–фтор–2–пиридил)–2–гидрокси–1–метилэтил]–5–(7H–пирроло[2,3–d]пиримидин–4–ил)–5–азаспиро[2.5]октан–8–карбоксамида или его фармацевтически приемлемых солей, гидратов или сольватов.

12. Соединение по любому из пп. 1–11 для применения в качестве лекарственного средства.

13. Соединение по любому из пп. 1–11 для применения в профилактике и/или лечении заболеваний иммунной системы, таких как аутоиммунные заболевания, или заболеваний, связанных с нарушением регуляции иммунной системы.

14. Соединение по п. 13 для применения в профилактике и/или лечении заболеваний, выбранных из псориаза и атопического дерматита.

15. Соединение по любому из пп. 1–11 для применения в лечении заболевания, которое отвечает на ингибирование протеинтирозинкиназ семейства JAK протеинтирозинкиназ, таких как JAK1, JAK2, JAK3 или TYK2 протеинтирозинкиназ.

16. Фармацевтическая композиция, ингибирующая активность JAK-киназы, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1–11, вместе с фармацевтически приемлемой несущей средой, или вспомогательным веществом, или фармацевтически приемлемым носителем(носителями).

17. Фармацевтическая композиция по п. 16 вместе с одним или более другими терапевтически активными соединениями.

18. Способ предотвращения, лечения или ослабления заболеваний иммунной системы, таких как аутоиммунные заболевания или заболевания, связанные с дерегуляцией иммунной системы, включающий введение человеку, страдающему по меньшей мере от одного из указанных заболеваний, эффективного количества одного или более соединений по любому из пп. 1–11, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым носителем или одним или более вспомогательными веществами, необязательно в комбинации с другими терапевтически активными соединениями.