RU2699932C1 - Method for prediction of liver cancer risk in experimental animals - Google Patents
Method for prediction of liver cancer risk in experimental animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2699932C1 RU2699932C1 RU2018140179A RU2018140179A RU2699932C1 RU 2699932 C1 RU2699932 C1 RU 2699932C1 RU 2018140179 A RU2018140179 A RU 2018140179A RU 2018140179 A RU2018140179 A RU 2018140179A RU 2699932 C1 RU2699932 C1 RU 2699932C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- risk
- liver cancer
- developing
- blood
- cancer
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/05—Phenols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
- G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
- G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
- G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Computational Mathematics (AREA)
- Mathematical Optimization (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Algebra (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mathematical Analysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mathematical Physics (AREA)
- Pure & Applied Mathematics (AREA)
- Business, Economics & Management (AREA)
- Educational Administration (AREA)
- Educational Technology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно, к экспериментальной онкологии, фармакологии и может быть использовано в качестве способа прогнозирования риска развития рака печени индивидуально у каждого животного в эксперименте.The invention relates to medicine, namely to experimental oncology, pharmacology and can be used as a method for predicting the risk of developing liver cancer individually in each animal in the experiment.
Онкологические заболевания, представляют серьезную медико-социальную проблему. Статистка рака неутешительна, так как во многих странах показатели заболеваемости и распространенности различных форм значительно увеличились за последние годы.Oncological diseases represent a serious medical and social problem. The cancer statistics are disappointing, as in many countries the incidence and prevalence rates of various forms have increased significantly in recent years.
Ежегодно от рака погибает 300000 пациентов, поэтому онкологические заболевания занимают 2 место среди причин смерти населения. По статистке одной из причин такой ситуации является бессимптомное течение процесса и как следствие позднее обращение за медицинской помощью.300,000 patients die every year from cancer, so cancer is the second leading cause of death in the population. According to statistics, one of the reasons for this situation is the asymptomatic course of the process and, as a consequence, the late appeal for medical help.
Известно, что рак печени занимает одно из лидирующих мест в структуре заболеваемости и смертности среди онкологических заболеваний желудочно-кишечного тракта. Зачастую это бывает связано с бессимптомным течением и как следствие поздней обращаемостью, а так же не возможностью проведения оперативного вмешательства из-за распространенности процесса.It is known that liver cancer occupies one of the leading places in the structure of morbidity and mortality among oncological diseases of the gastrointestinal tract. Often this is associated with an asymptomatic course and, as a consequence, late reversibility, as well as the possibility of surgical intervention due to the prevalence of the process.
В связи с этим поиск способов прогнозирования риска развития рака, в частности рака печени, является актуальным, так как может способствовать ранней выявляемости, снижению заболеваемости и ранней смертности от онкологии.In this regard, the search for methods for predicting the risk of developing cancer, in particular liver cancer, is relevant, as it can contribute to early detection, reduce morbidity and early mortality from oncology.
Известен способ прогнозирования риска возникновения рака яичников, заключающийся в том, что пациенту проводят анализ экспрессии гена TUSC3 в биологическом образце (предпочтительно образец ткани) с последующим сравнением экспрессии данного маркера в образцах от здоровых доноров. При низком уровне экспрессии гена TUSC3 у обследуемого индивида прогнозируют риск развития заболевания по определенной формуле (Patent Application Publication №US 2009/0298068 A1, 2009). Недостатками этого метода являются его трудоемкость и необходимость наличия дорогостоящих реактивов. Невозможность использования метода в среднестатистических клинических лабораториях без использования специальной аппаратуры, а также не достаточная точность метода. Данный метод является низкоспецифичным методом, так как рассчитан на прогнозирование риска развития исключительно рака яичников и не способен выявить риск развития рака других локализация.A known method for predicting the risk of ovarian cancer is that the patient is analyzed for the expression of the TUSC3 gene in a biological sample (preferably a tissue sample), followed by comparison of the expression of this marker in samples from healthy donors. With a low level of TUSC3 gene expression in the examined individual, the risk of developing the disease is predicted according to a certain formula (Patent Application Publication No.US 2009/0298068 A1, 2009). The disadvantages of this method are its complexity and the need for expensive reagents. The impossibility of using the method in average clinical laboratories without the use of special equipment, as well as the insufficient accuracy of the method. This method is a low-specific method, as it is designed to predict the risk of developing exclusively ovarian cancer and is not able to identify the risk of developing cancer of others.
Известен способ прогнозирования риска развития РЯ, заключающийся в выявлении генетических вариантов в гене BRCA2 для определения предрасположенности к ВКСА2-ассоциированным злокачественным новообразованиям, в частности к РМЖ и РЯ. Кроме того, описываемый способ позволяет прогнозировать течение заболеваний и определять ответ и эффективность лечения у пациентов (United States Patent №US 8476020 B1, 2013). Данный способ так же является низко специфичным и дорогим в применении.A known method for predicting the risk of developing ovarian cancer is to identify genetic variants in the BRCA2 gene to determine a predisposition to BKSA2-associated malignant neoplasms, in particular to breast cancer and ovarian cancer. In addition, the described method allows to predict the course of diseases and determine the response and treatment effectiveness in patients (United States Patent No. US 8476020 B1, 2013). This method is also low specific and expensive to use.
В целом, главным недостатком известных способов прогнозирования риска развития РЯ являются: низкая специфичность метода, отсутствие индивидуального прогноза риска развития рака, невозможность использовать метод вне специализированной лаборатории.In general, the main disadvantage of the known methods for predicting the risk of developing OC is the low specificity of the method, the lack of an individual prognosis of cancer risk, and the inability to use the method outside a specialized laboratory.
Наиболее близким к предполагаемому изобретению является способ прогнозирования риска развития рака яичников [патент №2599502 Способ прогнозирования риска развития рака яичников 2016 г Прокофьева Дарья Симоновна, Хуснутдинова Эльза Камилевна, Бермишева Марина Алексеевна, Нургалиева Альфия Хаматьяновна], который осуществляют путем выделения ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, при этом выделение ДНК проводят с помощью наборов реагентов для выделения геномной ДНК из цельной крови, согласно протоколу производителя. Полученную ДНК используют в качестве матрицы при проведении дальнейшего молекулярно-генетического анализа.Closest to the alleged invention is a method for predicting the risk of developing ovarian cancer [patent No. 2599502 Method for predicting the risk of developing ovarian cancer in 2016, Prokofieva Daria Simonovna, Khusnutdinova Elsa Kamilevna, Bermisheva Marina Alekseevna, Nurgalieva Alfiya Hamatyanovna], which is carried out by isolating DNA from peripheral venous lymphocytes blood, while DNA extraction is carried out using reagent kits for the isolation of genomic DNA from whole blood, according to the manufacturer's protocol. The resulting DNA is used as a matrix for further molecular genetic analysis.
Детекцию мутации c.5266dupC в гене BRCA1 проводят с помощью HRM анализа. Специфические последовательности олигонуклеотидных праймеров представлены в работе Bogdanova N. (Bogdanova N. Genetic determinants of breast cancer susceptibility in the Byelorussian population. Dissertation dr. rer. nat. - 2008. - Vol. 193. - P. 1-193). Используются следующие последовательности олигонуклеотидов: (F) 5'-gggaatccaaattacacagc-3', (R) 5'-ccaaagcgagcaagagaatctc-3'. Состав реакционной смеси для ПЦР общим объемом 17 μl включает в себя: 2 μl геномной ДНК (70 нг), 1.88 μl dNTPs, 4 μl MgCl2, 3,4 μl Q-solution, 1 μl смеси праймеров, 2.12 μl однократного буфера для Top-Tag полимеразы, 0.1 μl Top-Tag полимеразы, 0,8 μl EvaGreen и 1.7 μl воды высокой степени очистки. Режим амплификации: предварительная денатурация 7 минут при 95°С, затем 40 циклов со следующими параметрами - 95°С - 15 секунд, 60°С - 45 секунд, 72°С - 45 секунд. Плавление ПЦР-продукта проводят в диапазоне температур 55-95°С. Используют канал SYBR Green I, данные о кривых плавления анализируют в температурных пределах от 65°С до 95°С со скоростью линейного изменения 0,5°С в секунду.The c.5266dupC mutation in the BRCA1 gene is detected using HRM analysis. The specific sequences of oligonucleotide primers are presented in Bogdanova N. (Bogdanova N. Genetic determinants of breast cancer susceptibility in the Byelorussian population. Dissertation dr. Rer. Nat. - 2008. - Vol. 193. - P. 1-193). The following oligonucleotide sequences are used: (F) 5'-gggaatccaaattacacagc-3 ', (R) 5'-ccaaagcgagcaagagaatctc-3'. The composition of the reaction mixture for PCR with a total volume of 17 μl includes: 2 μl of genomic DNA (70 ng), 1.88 μl of dNTPs, 4 μl of MgCl 2 , 3.4 μl of Q-solution, 1 μl of primer mixture, 2.12 μl of a single buffer for Top -Tag polymerase, 0.1 μl Top-Tag polymerase, 0.8 μl EvaGreen and 1.7 μl highly purified water. Amplification mode: preliminary denaturation of 7 minutes at 95 ° C, then 40 cycles with the following parameters - 95 ° C - 15 seconds, 60 ° C - 45 seconds, 72 ° C - 45 seconds. Melting of the PCR product is carried out in the temperature range 55-95 ° C. Use the channel SYBR Green I, the data on the melting curves are analyzed in the temperature range from 65 ° C to 95 ° C with a ramp rate of 0.5 ° C per second.
Обнаружение одной из указанных мутаций свидетельствует о повышенном риске развития рака яичников.The detection of one of these mutations indicates an increased risk of ovarian cancer.
Недостатком прототипа является, сложность и дороговизна метода, невозможность использования метода в среднестатистических клинических лабораториях без использования специальной аппаратуры, а также не достаточная точность метода. Данный метод является низкоспецифичным методом, так как рассчитан на прогнозирование риска развития исключительно рака яичников.The disadvantage of the prototype is the complexity and high cost of the method, the inability to use the method in average clinical laboratories without the use of special equipment, and also the insufficient accuracy of the method. This method is a low-specific method, as it is designed to predict the risk of developing exclusively ovarian cancer.
Целью изобретения является разработка способа прогнозирования риска развития рака печени в условиях экспериментального канцерогенеза.The aim of the invention is to develop a method for predicting the risk of liver cancer in experimental carcinogenesis.
Поставленная цель достигается тем, что у исследуемых животных формируется модель экспериментального канцерогенеза печени и пищевода путем введения с питьевой водой N-нитрозодиэтиламина в дозе 100 мг/л воды, в течение 4 месяцев и параллельно вводят ресвератрол предварительно равномерно смешав его с пищей в дозе 100 мг/кг веса животного на протяжении 6 месяцев. Через три месяца от начала эксперимента осуществляли забор крови с последующим изучением биохимических показателей крови исследуемых животных, таких как: аланинаминотрансфераза (АлАТ), аспартатаминотрансфераза (АсАТ) (Ед/л); Осмотическая резистентность мембран эритроцитов (% гемолиза); малоновый диальдигид (МДА) (Ммоль/л); супеоксиддисмутазы (СОД) (%) [Камышников, B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. В 2-х томах: справочник / В.С. Камышников. - Минск: Интерпрессервис, 2003 - Т. 1-495 с. Т. 2-463 с.]This goal is achieved by the fact that in the studied animals a model of experimental carcinogenesis of the liver and esophagus is formed by introducing N-nitrosodiethylamine in a dose of 100 mg / l of water with drinking water for 4 months and resveratrol is preliminarily mixed in advance by mixing it with food in a dose of 100 mg / kg animal weight for 6 months. Three months after the start of the experiment, blood sampling was performed, followed by the study of biochemical blood parameters of the studied animals, such as: alanine aminotransferase (AlAT), aspartate aminotransferase (AcAT) (U / L); The osmotic resistance of erythrocyte membranes (% hemolysis); malondialdehyde (MDA) (mmol / L); superoxide dismutase (SOD) (%) [Kamyshnikov, B.C. Clinical and biochemical laboratory diagnostics. In 2 volumes: reference book / V.S. Kamyshnikov. - Minsk: Interpresservis, 2003 - T. 1-495 s. T. 2-463 p.]
Полученные данные экспериментальных животных, заносят в статистическую программу SPSS. С помощью корреляционно-регрессионного анализа выявляют статистически значимую связь рака печени с АлАТ (r=0,72; р<0,05), АсАТ (r=0,76; р<0,05), Осмотическая резистентность мембран эритроцитов (r=0,74; р<0,05), МДА (r=0,8; р<0,05), СОД (r=0,78; р<0,05). Учитывая наличие связи между вышеперечисленными показателями (признаками), в ходе множественного регрессионного анализа получают уравнение регрессии (формулу) для прогностических моделей, с помощью которого прогнозируют развитие рака печени у экспериментальных животных:The obtained data of experimental animals are entered into the statistical program SPSS. A correlation and regression analysis reveals a statistically significant relationship between liver cancer and AlAT (r = 0.72; p <0.05), AcAT (r = 0.76; p <0.05), and the osmotic resistance of erythrocyte membranes (r = 0.74; p <0.05), MDA (r = 0.8; p <0.05), SOD (r = 0.78; p <0.05). Given the relationship between the above indicators (signs), in the course of multiple regression analysis, a regression equation (formula) is obtained for prognostic models, with which the development of liver cancer in experimental animals is predicted:
РП=-118,772+(20,7086хА)+(2,59479хВ)+(2,63444хС)+(0,943407xD)-(1,00467хЕ),RP = -118.772 + (20.7086xA) + (2.59479xB) + (2.63444xC) + (0.943407xD) - (1.00467xE),
гдеWhere
РП- рак печени (в %),RP - liver cancer (in%),
А- АсАТ (Ед/л),A-AsAT (U / L),
В- АлАТ (Ед/л),B-AlAT (U / L),
С - Осмотическая резистентности мембран эритроцитов (в % гемолиза)C - Osmotic resistance of erythrocyte membranes (in% hemolysis)
D - МДА (Ммоль/л)D - MDA (mmol / L)
Е - СОД (в %)E - SOD (in%)
Согласно общепринятым шкалам (Александрович Ю.С., Гордеев В.И. Оценочные и прогностические шкалы в медицине критических состояний. - Изд-во «Сотис». - 2007. - 140 с. ) риск развития патологического процесса подразделяется на низкий, умеренный и высокий. При получения значения в пределах 0-30% риск развития рака печени низкий, в пределах 30-60%-умеренный, в пределах 60-100%- высокий.According to generally accepted scales (Aleksandrovich Yu.S., Gordeev V.I. Estimated and prognostic scales in critical state medicine. - Sotis Publishing House. - 2007. - 140 p.), The risk of developing the pathological process is divided into low, moderate and tall. When receiving a value in the range of 0-30%, the risk of developing liver cancer is low, in the range of 30-60%, moderate, in the range of 60-100% - high.
В полученную формулу подставляют данные испытуемого животного и по полученному результату судят о вероятности развития рака печени у конкретного животного.The data of the test animal is substituted into the obtained formula, and the probability of the development of liver cancer in a particular animal is judged by the result obtained.
Статистические методы исследования.Statistical research methods.
Статистическая обработка данных представленного нами исследования проведена с применением пакета прикладных программ STATGRAPHICS Plus 5,0 for Windows и SPSS 15,0 for Windows. Применялись стандартные статистические методы [Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов.- Л.: Медицина. - 1978. - 294 с. ], включающие вычисление среднеарифметических, стандартных отклонений, стандартных ошибок среднего, множественный регрессионный анализ. Достоверность различий в группах оценивалась с помощью параметрических методов (t- критерий Стьюдента). Различия при уровне значимости р<0,05 расценивались как достоверные.Statistical data processing of the study we presented was carried out using the STATGRAPHICS Plus 5.0 for Windows and SPSS 15.0 for Windows application software package. Standard statistical methods were used [Gubler E.V. Computational methods of analysis and recognition of pathological processes.- L.: Medicine. - 1978. - 294 p. ], including the calculation of arithmetic mean, standard deviations, standard errors of the mean, multiple regression analysis. The significance of differences in the groups was evaluated using parametric methods (t-student test). Differences at a significance level of p <0.05 were regarded as significant.
По имеющимся у авторов сведениям совокупность существенных признаков, характеризующих сущность заявляемого изобретения, не известна, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «новизна».According to the information available to the authors, the set of essential features characterizing the essence of the claimed invention is not known, which allows us to conclude that the invention meets the criterion of "novelty."
По мнению авторов, сущность заявляемого изобретения не следует для специалистов явным образом из известного уровня медицины, так как из него не выявляется вышеуказанная возможность способа индивидуального прогнозирования риска развития рака печени у животных в условиях экспериментального канцерогенеза, что позволяет сделать вывод о соответствии критерию «изобретательский уровень».According to the authors, the essence of the claimed invention should not be obvious for specialists from a known level of medicine, since the above possibility of an individual prediction of the risk of developing liver cancer in animals under experimental carcinogenesis does not come to light from it, which allows us to conclude that the criterion of “inventive step” ".
Совокупность существенных признаков, характеризующих сущность изобретения, в принципе может быть многократно использовано в медицине с получением результата, заключающегося в эффективном и легко воспроизводимом способе прогнозирования индивидуального риска развития рака печени у животных путем внесения биохимических показателей крови в формулу, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».The set of essential features characterizing the essence of the invention, in principle, can be repeatedly used in medicine to obtain a result consisting in an effective and easily reproducible method for predicting the individual risk of developing liver cancer in animals by introducing biochemical blood parameters into the formula, which allows us to conclude that the invention is consistent the criterion of "industrial applicability".
Примеры конкретного выполнения.Examples of specific performance.
Эксперимент проведен на 90 крысах самцах линии Вистар, с исходной массой 180-200 г. Содержание животных осуществляли в соответствии с приказом Минздравсоцразвития России №708н от 23 августа 2010 года «Об утверждении Правил лабораторной практики». Животные находились при 12-часовом световом режиме в условиях свободного доступа к воде и пище. Все животные были разделены на две группы, по 30 в каждой: I группа животные интактного контроля; II группа (животные получавшие только N-нитрозодиэтиламин в дозе 100 мг/л ежедневно, в течение 4 месяцев) и III группа - (животные получавшие одновременно, N-нитрозодиэтиламин и ресвератрол в дозе 100 мг/кг веса животного на протяжении 6 месяцев, предварительно равномерно смешав с творогом). Биохимические показатели крови изучали на третьем месяце эксперимента, т.к. именно в этот период происходит формирование опухолевого процесса в печени в эксперименте, что показано в ранее проведенном исследовании [Кокоев Л.А., Болиева Л.З, Закс Т.В. "Влияние полисахаридов аира болотного на канцерогенез печени и пищевода в эксперименте" Владикавказский медико-биологический вестник 20 29(2014):.]The experiment was carried out on 90 Wistar male rats with an initial weight of 180-200 g. The animals were kept in accordance with the order of the Ministry of Health and Social Development of Russia No. 708n dated August 23, 2010 “On approval of the Laboratory Practice Rules”. The animals were exposed to a 12-hour light regime under conditions of free access to water and food. All animals were divided into two groups, 30 in each: group I animals of intact control; Group II (animals that received only N-nitrosodiethylamine at a dose of 100 mg / l daily for 4 months) and group III (animals that received simultaneously N-nitrosodiethylamine and resveratrol at a dose of 100 mg / kg of animal weight for 6 months, previously evenly mixed with cottage cheese). Blood biochemical parameters were studied in the third month of the experiment, because it is during this period that the formation of a tumor process in the liver occurs in the experiment, as shown in a previous study [Kokoev L.A., Bolieva L.Z., Zaks T.V. "The effect of polysaccharides of calamus swamp on carcinogenesis of the liver and esophagus in the experiment." Vladikavkaz Medical Biological Bulletin 20 29 (2014) :.]
У исследуемых животных, брали кровь, предварительно усыпив внутрибрюшинным введением 0,1-0,2 мл золетила (Zoletil, Франция).Blood was taken from the studied animals, after having been preliminarily euthanized with 0.1-0.2 ml of zoletil (Zoletil, France).
Осмотическую резистентность эритроцитов определяли спектрофотометрически, путем внесения отмытых эритроцитов в образцы с разным объемным содержанием изотонического и гипертонического растворов хлористого натрия и мочевины.The osmotic resistance of red blood cells was determined spectrophotometrically by adding washed red blood cells to samples with different volume contents of isotonic and hypertonic solutions of sodium chloride and urea.
Изучение осмотической резистентности мембран эритроцитов показало, что количество разрушенных эритроцитов в растворе №1 (40% раствор мочевины) у крыс I (контрольной) группы составило 1,7±0,168%, во II группе животных (получавших только N-нитрозодиэтиламин) - 10,2±0,108% и в III группе животных (получавших одновременно N-нитрозодиэтиламин и ресвератрол), процент гемолиза составил 1,26±0,066% (р<0,001). В растворе №2 (45% мочевины) этот показатель составил 14,18±0,127, 34,84±2,414 и 7,59±2,797 (р<0,002) соответственно. Процент гемолизированных эритроцитов в растворе №4, составил: 53,86±2,3 (р<0,05); 68,42±2,1; 49,83±2,5 (р<0,05) (гемолиз в котором является более показательным, так, как концентрация мочевины в этом растворе составляет 55% и только эритроциты с нормальной стойкостью мембран способны оказывать противодействие, а с ослабленной резистентностью начинают в большей степени разрушаться [«Осмотическая резистентность мембран эритроцитов у крыс с гипер- и гипокальциемией» Козаев А.В., Джиоев И.Г. и соавт.]), (Таб. 1). Показатели оптической плотности в растворе №7 нами принимался за 100%.A study of the osmotic resistance of erythrocyte membranes showed that the number of destroyed red blood cells in solution No. 1 (40% urea solution) in rats of the I (control) group was 1.7 ± 0.168%, in group II animals (receiving only N-nitrosodiethylamine) - 10, 2 ± 0.108% and in group III animals (receiving both N-nitrosodiethylamine and resveratrol), the hemolysis percentage was 1.26 ± 0.066% (p <0.001). In solution No. 2 (45% urea), this indicator was 14.18 ± 0.127, 34.84 ± 2.414, and 7.59 ± 2.777 (p <0.002), respectively. The percentage of hemolized red blood cells in solution No. 4 was: 53.86 ± 2.3 (p <0.05); 68.42 ± 2.1; 49.83 ± 2.5 (p <0.05) (in which hemolysis is more indicative, since the urea concentration in this solution is 55% and only erythrocytes with normal membrane resistance can counteract, and with weakened resistance they begin to more degraded ["Osmotic resistance of erythrocyte membranes in rats with hyper- and hypocalcemia" Kozaev A.V., Dzhioev I.G. et al.)), (Table 1). The optical density in solution No. 7 was taken by us as 100%.
Изучение АлАТ и АсАТ проводили по общеизвестной методике. Как видно из полученных результатов активность АлАТ в сыворотке крови животных получавших наряду с канцерогеном ресвератрол была достоверно ниже активности АлАТ в сыворотке крови животных изолированно получавших канцероген в 2 раза (р<0,05) и достоверно не менялась в сравнениями показателей группы интактного контроля. Активность АсАТ, что составило соответственно по группам, в I-0,59±0,031; во II- 0,798±0,0489 и в III- 0,602±0,033 (р<0,05) и была ниже в группе животных получавших ресвератрол. Полученные результаты приведены в таблице 1.The study of AlAT and AsAT was carried out by a well-known method. As can be seen from the results, the activity of AlAT in the blood serum of animals receiving resveratrol along with the carcinogen was significantly lower than the activity of AlAT in the blood serum of animals receiving carcinogen in isolation by 2 times (p <0.05) and did not significantly change in comparisons of the intact control group. The activity of AsAT, which amounted, respectively, in groups, in I-0.59 ± 0.031; in II- 0.798 ± 0.0489 and in III- 0.602 ± 0.033 (p <0.05) and was lower in the group of animals receiving resveratrol. The results are shown in table 1.
Изучение МДА проводили по общеизвестной методике. Принцип метода основан на образовании окрашенного комплекса при взаимодействии малонового диальдигида с тиобарбитуровой кислотой [Камышников, B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. В 2-х томах: справочник / В.С. Камышников. - Минск: Интерпрессервис, 2003 - Т. 1 - 495 с. Т. 2 - 463 с.]. Полученные результаты показали достоверное снижение уровня продукта пероксидации липидов в эритроцитах группы животных получавших наряду с канцерогеном ресвератрол на 17,34 (р<0,05) в группе животных получавших ресвератрол, по сравнению с уровнем МДА в эритроцитах животных получавших изолировано канцероген и практически не отличался от группы интактного контроля.(Таб. 1).The study of MDA was carried out by a well-known method. The principle of the method is based on the formation of a colored complex in the interaction of malondialdehyde with thiobarbituric acid [Kamyshnikov, B.C. Clinical and biochemical laboratory diagnostics. In 2 volumes: reference book / V.S. Kamyshnikov. - Minsk: Interpresservis, 2003 - T. 1 - 495 s. T. 2 - 463 p.]. The results showed a significant decrease in the level of lipid peroxidation product in erythrocytes of the animal group receiving resveratrol along with the carcinogen by 17.34 (p <0.05) in the group of animals receiving resveratrol, compared with the MDA level in the erythrocytes of animals receiving isolated carcinogen and practically did not differ from the intact control group (Tab. 1).
Изучение СОД проводили по общеизвестной методике [Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике / В.С. Камышников. - 3 е изд. - М.: МЕД пресс информ, 2009 - 896 с.]. По нашим данным, активность СОД в III группе была достоверно выше чем во II (р<0,05) и не отличалась от животных I группы. Полученные результаты приведены в таблице 1.The study of SOD was carried out according to the well-known method [Kamyshnikov B.C. Handbook of clinical and biochemical studies and laboratory diagnostics / V.S. Kamyshnikov. - 3rd ed. - M .: MED press inform, 2009 - 896 p.]. According to our data, the activity of SOD in group III was significantly higher than in group II (p <0.05) and did not differ from group I animals. The results are shown in table 1.
Примечание: Различия достоверны: относительно I группы # - р≤0,05; относительно III группы * - р≤0,05Note: The differences are significant: regarding group I # - p≤0.05; relative to group III * - p≤0.05
При этом, в группе животных получавших изолировано канцероген, процент развития новообразований печени, составил 73,4% от общего числа животных данной группы введенных в эксперимент (n=30). В группе животных получавших наряду с канцерогеном ресвератрол частоты возникновения новообразований печени составила 53,3% (р<0,05), что было достоверно ниже относительно II группы. Таким образом, выявленные различия указывают на высокую эффективность ресвератрола в качестве химиопрофилактического средства.Moreover, in the group of animals that received carcinogen isolated, the percentage of liver neoplasms amounted to 73.4% of the total number of animals in this group introduced into the experiment (n = 30). In the group of animals treated with carcinogen resveratrol, the incidence of liver tumors was 53.3% (p <0.05), which was significantly lower relative to group II. Thus, the differences identified indicate the high effectiveness of resveratrol as a chemoprophylactic agent.
Пример 1.Example 1
Животное из группы крыс получавших наряду с канцерогеном, ресвератрол 10 мг/кг массы тела с пищей имело следующие биохимические показатели крови:An animal from the group of rats receiving along with the carcinogen, resveratrol 10 mg / kg body weight with food had the following blood biochemical parameters:
АсАТ- 0,57 (Ед/л)-AsAT - 0.57 (U / L) -
АлАТ-1,51 (Ед/л)-AlAT-1.51 (U / L) -
Осмотическая резистентности мембран эритроцитов-48,82 (в % гемолиза)The osmotic resistance of erythrocyte membranes is 48.82 (in% hemolysis)
МДА-58,97 (Ммоль/л)MDA-58.97 (mmol / L)
СОД-77,8 (в %)SOD-77.8 (in%)
Прогноз развития рака печени, по полученной формуле составил 3,03%.The prognosis of liver cancer, according to the obtained formula, was 3.03%.
Животное дожило до конца эксперимента и после вскрытия опухолевого процесса в печени обнаружено не было, то есть фактические данные соответствовали прогнозу по заявляемому способу.The animal survived to the end of the experiment and after opening the tumor process in the liver was not found, that is, the actual data corresponded to the forecast according to the claimed method.
Пример 2.Example 2
Животное из группы крыс получавших изолированно канцероген, имело следующие биохимические показатели крови:An animal from a group of rats receiving an isolated carcinogen had the following blood biochemical parameters:
АсАТ- 0,9 (Ед/л)-AsAT - 0.9 (U / L) -
АлАТ -2,9 (Ед/л)-AlAT -2.9 (U / L) -
Осмотическая резистентности мембран эритроцитов-65,2 (в % гемолиза)The osmotic resistance of erythrocyte membranes is 65.2 (in% hemolysis)
МДА-69,6 (Ммоль/л)MDA-69.6 (mmol / L)
СОД-50,4 (в %)SOD-50.4 (in%)
Прогноз развития рака печени, по полученной формуле составил 94,18%.The prognosis of liver cancer, according to the obtained formula, was 94.18%.
Животное не дожило до конца эксперимента и пало на 5-м месяце эксперимента. При вскрытии был обнаружен опухолевый процесс в печени дифференцированный морфологически как гепатоцеллюлярная карцинома, то есть фактические данные соответствовали прогнозу по заявляемому способу.The animal did not live to see the end of the experiment and fell on the 5th month of the experiment. An autopsy revealed a tumor process in the liver that was differentiated morphologically as hepatocellular carcinoma, that is, the actual data corresponded to the prognosis of the claimed method.
Таким образом, проведение расчетов по представленной выше формуле, которое можно производить с помощью калькулятора или программы Microsoft Excel, позволяет с достаточно высокой точностью предсказать прогноз возникновения рака печени за долго до развития заболевания, что может быть использовано, как в эксперименте так и клинической практике и может способствовать предупреждению развития заболевания.Thus, the calculations according to the above formula, which can be performed using a calculator or Microsoft Excel program, make it possible to predict with high accuracy the prognosis of liver cancer long before the development of the disease, which can be used both in the experiment and in clinical practice. can help prevent the development of the disease.
Заявляемый способ по сравнению с известными, имеет преимущества заключающиеся в том, что позволяет использовать данный способ для раннего выявления рака печени, обладает высокой точностью, позволяет рассчитать индивидуальный прогноз развития заболевания, с минимальными материальными затратами, доступен для широкого использованияThe inventive method in comparison with the known, has the advantages that it allows you to use this method for early detection of liver cancer, has high accuracy, allows you to calculate an individual prognosis of the development of the disease, with minimal material costs, is available for wide use
Claims (9)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018140179A RU2699932C1 (en) | 2018-11-14 | 2018-11-14 | Method for prediction of liver cancer risk in experimental animals |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018140179A RU2699932C1 (en) | 2018-11-14 | 2018-11-14 | Method for prediction of liver cancer risk in experimental animals |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2699932C1 true RU2699932C1 (en) | 2019-09-11 |
Family
ID=67989771
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018140179A RU2699932C1 (en) | 2018-11-14 | 2018-11-14 | Method for prediction of liver cancer risk in experimental animals |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2699932C1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2736238C1 (en) * | 2020-05-12 | 2020-11-12 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing the effectiveness of chemopreventive activity of resveratrol in experimental carcinogenesis of liver cancer |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012156913A1 (en) * | 2011-05-18 | 2012-11-22 | Slavko Ivkovic | An antioxidant composition |
AU2012306285A1 (en) * | 2011-09-07 | 2014-02-27 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Means and methods for treating and/or preventing natural AHR ligand-dependent cancer |
EP2782578A2 (en) * | 2011-11-23 | 2014-10-01 | Quercegen Pharmaceuticals LLC | Method for treating hepatitis c virus infection using quercetin-containing compositions |
RU2568587C2 (en) * | 2014-02-25 | 2015-11-20 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prevention of cancerogenic effect of diethylnitrosamine in experimental animals |
RU2014145029A (en) * | 2014-11-06 | 2016-05-27 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | A method for the prevention of cancer of the liver and esophagus in laboratory animals |
RU2588317C1 (en) * | 2015-03-23 | 2016-06-27 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of increasing erythrocyte membrane stability in conditions of experimental carcinogenesis |
US20160206572A1 (en) * | 2013-08-21 | 2016-07-21 | Concordia University | Compositions comprising a dendrimer-resveratrol complex and methods for making and using the same |
RU2659127C1 (en) * | 2017-04-27 | 2018-06-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of increasing osmotic resistance of erythrocyte membranes |
-
2018
- 2018-11-14 RU RU2018140179A patent/RU2699932C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012156913A1 (en) * | 2011-05-18 | 2012-11-22 | Slavko Ivkovic | An antioxidant composition |
AU2012306285A1 (en) * | 2011-09-07 | 2014-02-27 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Means and methods for treating and/or preventing natural AHR ligand-dependent cancer |
EP2782578A2 (en) * | 2011-11-23 | 2014-10-01 | Quercegen Pharmaceuticals LLC | Method for treating hepatitis c virus infection using quercetin-containing compositions |
US20160206572A1 (en) * | 2013-08-21 | 2016-07-21 | Concordia University | Compositions comprising a dendrimer-resveratrol complex and methods for making and using the same |
RU2568587C2 (en) * | 2014-02-25 | 2015-11-20 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prevention of cancerogenic effect of diethylnitrosamine in experimental animals |
RU2014145029A (en) * | 2014-11-06 | 2016-05-27 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | A method for the prevention of cancer of the liver and esophagus in laboratory animals |
RU2588317C1 (en) * | 2015-03-23 | 2016-06-27 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of increasing erythrocyte membrane stability in conditions of experimental carcinogenesis |
RU2659127C1 (en) * | 2017-04-27 | 2018-06-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of increasing osmotic resistance of erythrocyte membranes |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2736238C1 (en) * | 2020-05-12 | 2020-11-12 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing the effectiveness of chemopreventive activity of resveratrol in experimental carcinogenesis of liver cancer |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101861399B (en) | Use the method for miRNA detection bodies inner cell death condition | |
CN104334742A (en) | Methods for profiling and quantitating cell-free rna | |
EP3802880B1 (en) | Circulating rna signatures specific to preeclampsia | |
US11926873B2 (en) | Methods for predicting onset of a migraine in a subject by detecting STXBP3 RNA levels | |
RU2699932C1 (en) | Method for prediction of liver cancer risk in experimental animals | |
Rauserova-Lexmaulova et al. | Acid-base, electrolyte and lactate abnormalities as well as gastric necrosis and survival in dogs with gastric dilation-volvulus syndrome. A retrospective study in 75 dogs | |
CA2874716A1 (en) | Method for assessing endometriosis | |
Mohammed et al. | Validation of mRNA and microRNA profiling as tools in qPCR for estimation of the age of bloodstains | |
CN105154541A (en) | Application of miRNA to diagnosis and treatment of acute myelogenous leukemia | |
US20210155987A1 (en) | Circulating rna signatures specific to preeclampsia | |
JP7220711B2 (en) | Methods and apparatus for nucleic acid-based real-time determination of pathology | |
CN105063052A (en) | Acute myelogenous leukemia miRNA marker | |
RU2795720C1 (en) | Method for predicting the risk of development of the luminal subtype of breast cancer | |
RU2795897C1 (en) | Method for predicting the risk of developing breast cancer in women using molecular genetic data | |
Al-Omairi et al. | Estimation of SLC25A3 gene expression in chronic myelogenous leukemia Iraqi patients | |
CN110988346A (en) | Marker for auxiliary diagnosis of lung cancer and detection method | |
RU2795726C1 (en) | Method for prediction of breast cancer risk development in non-obese women | |
US7368243B2 (en) | Detection of nucleic acids to assess risk for bovine spongiform encephalopathy | |
Turakulov | The role of angiotensin-converting enzyme of i/d gene polymorphism in the diagnosis of chronic heart failure with anemia of various etiologies | |
RU2736238C1 (en) | Method for assessing the effectiveness of chemopreventive activity of resveratrol in experimental carcinogenesis of liver cancer | |
US20240240253A1 (en) | Methods, kits, and systems for modulating and predicting changes in p16, senescence, and physiological reserve | |
Lee | Screening and molecular characterization of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency among eligible blood donors | |
da Cruz et al. | Polymorphisms in Glutathione S-transferase genes, Development, and Progression of Sepsis | |
Zhu et al. | MAL suppresses OSCC tumorigenesis by maintaining epithelial cell differentiation | |
He et al. | Constructing and validating pan-apoptosis-related features for predicting prognosis and immunotherapy response in hepatocellular carcinoma |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201115 |