RU2688658C1 - Antifungal semi-synthetic polyene antibiotic, water-soluble salts thereof and pharmaceutical compositions based thereon - Google Patents
Antifungal semi-synthetic polyene antibiotic, water-soluble salts thereof and pharmaceutical compositions based thereon Download PDFInfo
- Publication number
- RU2688658C1 RU2688658C1 RU2018112831A RU2018112831A RU2688658C1 RU 2688658 C1 RU2688658 C1 RU 2688658C1 RU 2018112831 A RU2018112831 A RU 2018112831A RU 2018112831 A RU2018112831 A RU 2018112831A RU 2688658 C1 RU2688658 C1 RU 2688658C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amphotericin
- aminoethyl
- amide
- pharmaceutical composition
- pharmaceutical compositions
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title abstract description 45
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 title abstract description 4
- 239000002459 polyene antibiotic agent Substances 0.000 title description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims abstract description 113
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims abstract description 110
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims abstract description 105
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 53
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 14
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims abstract description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical class CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical class [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims abstract 2
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 claims abstract 2
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 claims abstract 2
- 240000002355 Celtis tournefortii var. glabrata Species 0.000 claims abstract 2
- 229930195714 L-glutamate Chemical class 0.000 claims abstract 2
- 241000251124 Mustelus canis Species 0.000 claims abstract 2
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 claims abstract 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 55
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- -1 amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide salt Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 12
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 7
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 6
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 4
- BZZLZISANHDNBA-TYYBGVCCSA-N (E)-but-2-enedioic acid ethane-1,2-diamine Chemical compound NCCN.OC(=O)\C=C\C(O)=O BZZLZISANHDNBA-TYYBGVCCSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 claims description 3
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 claims description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical group OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 claims 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims 1
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 claims 1
- 229940080345 gamma-cyclodextrin Drugs 0.000 claims 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 37
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 8
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 8
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical class OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Chemical class OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 23
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 9
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- IENXJNLJEDMNTE-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethane-1,2-diamine Chemical compound CC(O)=O.NCCN IENXJNLJEDMNTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 5
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 4
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 4
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 2
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098178 ambisome Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- CVQGBZGCMIYEGG-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diamine;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound NCCN.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O CVQGBZGCMIYEGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 9h-fluoren-9-ylmethyl carbonate Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CGRYJGULJHMYRL-DFWYDOINSA-N (2s)-2-aminopentanedioic acid;ethane-1,2-diamine Chemical compound NCCN.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O CGRYJGULJHMYRL-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- HAHFLCWVYBLDQV-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl 2,5-dioxopyrrolidine-3-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)C1CC(=O)NC1=O HAHFLCWVYBLDQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N Aspartic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 206010053166 Candida sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010051290 Central nervous system lesion Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920000604 Polyethylene Glycol 200 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010042938 Systemic candida Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPDHNZNLPKYHCN-DZOOLQPHSA-N [[(z)-(1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidene)amino]oxy-morpholin-4-ylmethylidene]-dimethylazanium;hexafluorophosphate Chemical compound F[P-](F)(F)(F)(F)F.CCOC(=O)C(\C#N)=N/OC(=[N+](C)C)N1CCOCC1 GPDHNZNLPKYHCN-DZOOLQPHSA-N 0.000 description 1
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000012871 anti-fungal composition Substances 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- WIYUJTDPESFNJV-UHFFFAOYSA-N chloroform formic acid methanol hydrate Chemical compound O.OC.OC=O.ClC(Cl)Cl WIYUJTDPESFNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- NYWPVFGILHJXGJ-QRHLAUAJSA-L copper;(1s,3r,4e,6e,8e,10e,12e,14e,16e,19r,25r,27r,30r,31r,33s,35r,38r)-3-(4-amino-3,5-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxy-19,25,27,30,31,33,35,37-octahydroxy-18,20,21-trimethyl-23-oxo-22,39-dioxabicyclo[33.3.1]nonatriaconta-4,6,8,10,12,14,16-heptaene-38-carb Chemical compound [Cu+2].CC(C)C1=CC(C(C)C)=C(O)C(C([O-])=O)=C1.CC(C)C1=CC(C(C)C)=C(O)C(C([O-])=O)=C1.OC1C(N)C(O)C(C)OC1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C(C)[C@@H](O)C(C)C(C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(CC(O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 NYWPVFGILHJXGJ-QRHLAUAJSA-L 0.000 description 1
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- HCFPRFJJTHMING-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diamine;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NCC[NH3+] HCFPRFJJTHMING-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 150000002307 glutamic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 208000036732 invasive candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 150000004672 propanoic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229940001607 sodium bisulfite Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940001482 sodium sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L sulfite Chemical class [O-]S([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
- C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Настоящее изобретение относится к медицине, фармации и химико-фармацевтической промышленности, а более конкретно к новому производному амфотерицина В - N-(2-аминоэтил)амиду амфотерицина В (амфамиду), формулы I, обладающему более выраженными противогрибковыми свойствами и более низкой токсичностью в сравнении с амфотерицином В, его солям, а также фармацевтическим композициям на их основе и их медицинскому применению.The present invention relates to medicine, pharmacy and chemical-pharmaceutical industry, and more specifically to a new amphotericin B derivative - N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B (amphamide), formula I, which has more pronounced antifungal properties and lower toxicity compared to with amphotericin B, its salts, as well as pharmaceutical compositions based on them and their medical use.
Уровень техникиThe level of technology
В течение последних лет отмечено значительное увеличение числа грибковых инфекций. Особенно тяжело протекают грибковые инфекции у пациентов с иммунодепрессивными состояниями, в том числе у недоношенных детей, пациентов после трансплантации органов или прогрессирования ВИЧ, а также после химиотерапии онкологических заболеваний. Так, в крупных онкологических учреждениях тяжелые формы кандидоза составляют приблизительно 10-25% среди всех инфекционных осложнений, при этом инвазивный кандидоз характеризуется тяжестью клинических проявлений и высокой (30-70%) летальностью. В настоящее время препаратом выбора для лечения тяжелых системных грибковых инфекций является амфотерицин В, клиническое использование которого значительно ограничено серьезными побочными эффектами лечения (нефро- и гепатотоксичность, поражения центральной нервной системы) и его крайне низкой растворимостью в воде.In recent years there has been a significant increase in the number of fungal infections. Fungal infections are particularly severe in patients with immunosuppressive conditions, including in premature babies, patients after organ transplantation or progression of HIV, and also after chemotherapy of oncological diseases. Thus, in large oncological institutions, severe forms of candidiasis account for approximately 10–25% of all infectious complications, while invasive candidiasis is characterized by the severity of clinical manifestations and high (30–70%) mortality. Currently, the drug of choice for treating severe systemic fungal infections is amphotericin B, the clinical use of which is significantly limited by the serious side effects of treatment (nephrotoxicity, central nervous system lesions) and its extremely low solubility in water.
Таким образом, разработка лекарственного средства для лечения системных грибковых инфекций, подходящего, в частности, иммунокомпрометированным пациентам, обладающего высокой противогрибковой активностью при сниженной токсичности и повышенной растворимостью в воде и высокой стабильностью, является актуальной задачей современной фармацевтики и медицины.Thus, the development of a drug for the treatment of systemic fungal infections, suitable, in particular, for immunocompromised patients, with high antifungal activity with reduced toxicity and increased water solubility and high stability, is an urgent task of modern pharmaceuticals and medicine.
Целью настоящего изобретения является повышение растворимости амфотерицина В в воде и улучшение его фармакологических характеристик (снижение токсичности при сохранении высокой активности или ее увеличении относительно амфотерицина В) за счет химической модификации С16-карбоксильной группы антибиотика с получением N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (амфамида) формулы I) и его солевых форм.The aim of the present invention is to increase the solubility of amphotericin b in water and improve its pharmacological characteristics (reduction of toxicity while maintaining high activity or its increase relative to amphotericin B) due to chemical modification of the C16-carboxyl group of the antibiotic to obtain amphotericin B N- (amphamide) of formula I) and its salt forms.
Другой целью изобретения является улучшение стабильности фармацевтической субстанции амфотерицина В за счет его вышеуказанной модификации, а также разработка на основе производного I и его солей фармацевтических композиций с улучшенными свойствами, применимых для лечения грибковых заболеваний.Another aim of the invention is to improve the stability of the pharmaceutical substance of amphotericin B due to its above modification, as well as the development, on the basis of derivative I and its salts, of pharmaceutical compositions with improved properties applicable to the treatment of fungal diseases.
Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the invention
Настоящее изобретение направлено на решение технических проблем, представленных выше. Полиеновый антибиотик амфотерицин В обладает высокой противогрибковой активностью, однако, его применение ограничивается крайне низкой растворимости в воде и относительно высокой токсичностью. Указанные проблемы могут быть решены получением полусинтетического производного амфотерицина В, модифицированного по карбоксильной группе - N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (амфамид I), а также его солей.The present invention is directed to solving the technical problems presented above. Polyphenol antibiotic amphotericin B has a high antifungal activity, however, its use is limited by extremely low solubility in water and relatively high toxicity. These problems can be solved by obtaining a semi-synthetic derivative of amphotericin B modified by the carboxyl group — N- (2-aminoethyl) amide of amphotericin B (amphamide I), as well as its salts.
N-(2-Аминоэтил)амид амфотерицина В, раскрываемый в настоящем изобретении обладает более высокой противогрибковой активностью в сравнении с амфотерицином В, в экспериментах in vitro на панели штаммов грибков и дрожжей, играющих ведущую роль в патогенезе системных грибковых инфекций человека, а также высокую эффективность в эксперименте in vivo на модели кандидозного сепсиса мышей. Так, в сравнительных экспериментах in vitro на панели штаммов дрожжей и грибков показано, что амфамид I обладает широким спектром противогрибковой активности, превосходя или не уступая по значениям минимальных подавляющих концентраций амфотерицину В (МПК=0,06-0,5 мкг/мл для I; 0,12-2 мкг/мл для амфотерицина В соответственно). На модели кандидозного сепсиса мышей химиотерапевтическая эффективность амфамид I в два-три выше, чем препарата сравнения амфотерицина В в дозах 2,5, 1,25 и 0,63 мг/кг (по критерию высева Candida albicans из почек), так амфотерицин В продемонстрировал низкую противогрибковую активность в условиях эксперимента (падение количества колониеобразующих единиц на грамм почек (КОЕ/г) на два порядка) даже в максимально высокой дозе (2,5 мг/кг в сутки), в то время как новое производное I продемонстрировало высокую противогрибковую активность в диапазоне доз 0,62-2,5 мг/кг в сутки.The amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide disclosed in the present invention has a higher antifungal activity compared to amphotericin B in in vitro experiments on a panel of fungal and yeast strains that play a leading role in the pathogenesis of human systemic fungal infections, as well as high effectiveness in an in vivo experiment on a model of Candida sepsis in mice. Thus, in comparative in vitro experiments on a panel of yeast and fungus strains, it was shown that amphamide I possesses a broad spectrum of antifungal activity, surpassing or not inferior in terms of the values of the minimum inhibitory concentrations to amphotericin B (IPC = 0.06-0.5 μg / ml for 0.12-2 µg / ml for amphotericin B, respectively). On the model of candidal sepsis in mice, the chemotherapeutic efficacy of amphamide I is two to three higher than that of the comparison drug Amphotericin B in doses of 2.5, 1.25 and 0.63 mg / kg (according to the criterion of seeding Candida albicans from the kidneys), so Amphotericin B showed low antifungal activity under experimental conditions (drop in the number of colony forming units per gram of kidney (CFU / g) by two orders of magnitude) even at the highest dose (2.5 mg / kg per day), while the new derivative I showed high antifungal activity in the dose range of 0.62-2.5 mg / kg per day.
Кроме того, указанная модификация привела к снижению токсичности исходного амфотерицина В. Так, дозы, характеризующие острую токсичность амфотерицина В при внутривенном введении составляют: LD50 1,2 мг/кг (мыши), 1,6 мг/кг (крысы), в то время как для N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) и его глутамата - LD50 13,8 мг/кг (мыши), для фармацевтической композиции LD50 - 10,7 мг/кг (крысы).In addition, this modification led to a decrease in the toxicity of the original amphotericin B. Thus, the doses characterizing the acute toxicity of amphotericin B when administered intravenously are: LD 50 1.2 mg / kg (mouse), 1.6 mg / kg (rat), While for N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B (I) and its glutamate - LD 50 13.8 mg / kg (mouse), for the pharmaceutical composition LD 50 - 10.7 mg / kg (rat).
Таким образом, созданное авторами изобретения новое производное N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (I) и его соли обладает большей растворимостью в воде, большей противогрибковой активностью и эффективностью в сравнении с исходным амфотерицином В и меньшей токсичностью.Thus, the new N- (2-aminoethyl) amide derivative of amphotericin B (I) and its salt created by the authors of the invention has a greater solubility in water, greater antifungal activity and efficiency in comparison with the original amphotericin B and less toxicity.
Амфамид I, описываемый в настоящем изобретении можно получить различными способами. Один из типичных подходов включает активацию С16-карбоксильной группы амфотерицина В методами, известными из уровня техники, например, производными карбодиимида (например DCC или EDC), дифенилфосфорилазидом (DPPA), реагентами Кастро (ВОР или РуВОР) или другими конденсирующими агентами (TBTU, HBTU, COMU) с последующим взаимодействием с этилендиамином. Другой типичный подход включает введение защитной группы для 3'-аминогруппы амфотерицина В, в качестве которой можно использовать различные защитные группы, хорошо известные специалистам в области органического синтеза, предпочтительно 9-флуоренилметилоксикарбонильную группу (Fmoc-группу), активацию С16-карбоксильной группы амфотерицина В методами, известными из уровня техники, например, производными карбодиимида (например DCC или EDC), дифенилфосфорилазидом (DPPA), реагентами Кастро (ВОР или РуВОР) или другими конденсирующими агентами (TBTU и HBTU) с последующим взаимодействием с этилендиамином и удаление Fmoc-защитной группы методами, хорошо известными специалистам в области органического синтеза.Amfamide I described in the present invention can be obtained in various ways. One of the typical approaches involves the activation of the C16-carboxyl group of amphotericin B by methods known from the prior art, for example, derivatives of carbodiimide (for example, DCC or EDC), diphenylphosphoryl azide (DPPA), Castro reagents (BOP or PyVOR), or other condensing agents (TBTU, HBTU , COMU) with subsequent interaction with ethylenediamine. Another typical approach involves the introduction of a protective group for the 3'-amino group of amphotericin B, which can use various protective groups well known to experts in the field of organic synthesis, preferably the 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group (Fmoc group), activation of the C16-carboxyl group of amphotericin B by methods known in the art, for example, derivatives of carbodiimide (for example, DCC or EDC), diphenylphosphoryl azide (DPPA), Castro reagents (BOP or PyBOP), or other condensing agents (TBTU and HBTU) followed by interaction with ethylene diamine and removal of the Fmoc-protective group by methods well known to specialists in the field of organic synthesis.
Одна из возможных схем синтеза N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) (схема 1), подробно описанная в примерах настоящего изобретения и приведенная на схеме А, включает:One of the possible synthesis schemes for amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide (Scheme 1), described in detail in the examples of the present invention and shown in Scheme A, includes:
1. Получение 3'-N-Fmoc-амфотерицина В (2) взаимодействием амфотерицина В (1) с1. Preparation of 3'-N-Fmoc-amphotericin B (2) by interaction of amphotericin B (1) with
9-флуоренилметилоксикарбонил-сукцинимидом (Fmoc-OSu);9-fluorenylmethyloxycarbonyl succinimide (Fmoc-OSu);
2. Взаимодействие 3'-N-Fmoc-амфотерицина В (2) с этилендиамином в присутствии2. The interaction of 3'-N-Fmoc-amphotericin b (2) with ethylenediamine in the presence of
конденсирующего реагента с образованием 3'-N-Fmoc-(N-(2-аминоэтил)амида) амфотерицина В (3);a condensing agent to form 3'-N-Fmoc- (N- (2-aminoethyl) amide) amphotericin B (3);
3. Удаление защитной Fmoc-группы 3'-N-Fmoc-(N-(2-аминоэтил)амида) амфотерицина В (3) действием пиперидина, приводящее к образованию целевому амфамиду I.3. Removal of the protective Fmoc group of the 3'-N-Fmoc- (N- (2-aminoethyl) amide) amphotericin B (3) by the action of piperidine, resulting in the formation of the target amphamide I.
Недостатки фармацевтических композиций на основе амфотерицина обусловлены его амфотерностью, и проявляются в недостаточной растворимости активного агента в фармацевтически приемлемых водных средах. Это сказывается на его биологической доступности, приводит к образованию резких колебаний концентрации при введении и уменьшает время пребывания в организме, что в свою очередь нередко приводит к недостижению необходимого терапевтического эффекта. Кроме того такие композиции нестабильны при длительном хранении [Wiest D.B., Maish W.A., Garner S.S., el-Chaar G.M. Stability of amphotericin В in four concentrations of dextrose injection. Am J Hosp Pharm., 1991, v. 48(11), pp.2430-2433].The drawbacks of pharmaceutical compositions based on amphotericin are due to its amphotericity, and are manifested in the insufficient solubility of the active agent in pharmaceutically acceptable aqueous media. This affects its bioavailability, leads to the formation of sharp fluctuations in concentration with the introduction and reduces the time spent in the body, which in turn often leads to a failure to achieve the desired therapeutic effect. In addition, such compositions are unstable during long-term storage [Wiest D.B., Maish W.A., Garner S.S., el-Chaar G.M. Stability of amphotericin B in dehydrose injection. Am J Hosp Pharm., 1991, v. 48 (11), pp. 2430-2433].
Указанные недостатки также могут быть решены получением N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В, а также его солей, обладающих высокой растворимостью в фармацевтически приемлемых водных средах и созданием их противогрибковых композиций на их основе.These drawbacks can also be solved by obtaining N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B, as well as its salts, which have high solubility in pharmaceutically acceptable aqueous media and the creation of their antifungal compositions based on them.
Применение в составе композиции N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) и/или его солевой формы также способствует повышению растворимости терапевтического агента, увеличению биологической доступности, позволяет контролировать профиль его растворения, чтобы нивелировать резкие скачки концентраций препарата в системном кровотоке, а также увеличить время пребывания лекарственного вещества в организме. Соли амфамида I, входящие в состав фармацевтических композиций имеют противогрибковую активность, не меньшую чем активность исходного соединения.The use of amphotericin B (I) and / or its salt form in the composition of the N- (2-aminoethyl) amide also contributes to increasing the solubility of the therapeutic agent, increasing the bioavailability, allows you to control its dissolution profile to level the sharp jumps in drug concentrations in the systemic circulation, and also increase the residence time of the drug in the body. The salts of amphamide I included in the pharmaceutical compositions have antifungal activity not less than the activity of the parent compound.
Таким образом, технический результат настоящего изобретения относится к получению N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) и его солей, обладающих хорошей растворимостью в водных средах, превышающей растворимость амфотерицина В, характеризующихся высокой противогрибковой активностью, меньшей токсичностью и гемолитической активностью в сравнении с амфотерицином В, а также высокой стабильностью при хранении. Фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно из вышеуказанных соединений, также имеют высокую противогрибковую активность и меньшую гемолитическую активность в сравнении с амфотерицином В, обладают высокой стабильностью при хранении и хорошей растворимостью.Thus, the technical result of the present invention relates to the preparation of amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide and its salts, which have good solubility in aqueous media, exceeding the amphotericin B solubility, characterized by high antifungal activity, less toxicity and hemolytic activity in compared with amphotericin B, as well as high storage stability. Pharmaceutical compositions containing at least one of the above compounds also have high antifungal activity and lower hemolytic activity compared to amphotericin B, have a high storage stability and good solubility.
Подходящими солями в контексте решаемой технической проблемы являются соли амфамида I с дикарбоновыми аминокислотами, предпочтительно аспарагиновой или глутаминовой кислотами, карбоновыми кислотами, предпочтительно уксусной и пропионовой кислотами, карбоновыми ненасыщенными органическими кислотами, предпочтительно фумаровой кислотой, трикарбоновыми органическими кислотами, предпочтительно лимонной кислотой.Suitable salts in the context of a technical problem to be solved are salts of amphamide I with dicarboxylic amino acids, preferably aspartic or glutamic acids, carboxylic acids, preferably acetic and propionic acids, carboxylic unsaturated organic acids, preferably fumaric acid, tricarboxylic organic acids, preferably citric acid.
Фармацевтические композиции для парентерального введения обычно являются стерильными изотоническими растворами для инъекций, которые, помимо терапевтически эффективного количества лекарственного средства, содержат фармакологически приемлемый носитель (растворитель), а также различные эксципиенты (вспомогательные вещества). Фармацевтические композиции могут являться как жидкими готовыми растворами для инъекций, так и суспензиями, стерильными порошками или лиофилизированными композициями, для применения которых необходимо добавление стерильного растворителя (например, воды для инъекций) непосредственно перед использованием. Методики получения парентеральных лекарственных композиций хорошо известны из уровня техники.Pharmaceutical compositions for parenteral administration are usually sterile isotonic solutions for injection, which, in addition to a therapeutically effective amount of the drug, contain a pharmacologically acceptable carrier (diluent), as well as various excipients (adjuvants). Pharmaceutical compositions can be either liquid prepared solutions for injections, or suspensions, sterile powders or lyophilized compositions, which require the addition of a sterile solvent (for example, water for injections) just before use. Techniques for producing parenteral drug compositions are well known in the art.
В качестве носителя (растворителя) для приготовления жидких фармацевтических композиций в настоящем изобретении предпочтительно используется «раствор глюкозы» («изотоническом растворе глюкозы (5%) для внутривенных инъекций»). Кроме «раствора глюкозы», для приготовления жидких лекарственных форм могут быть применены и другие менее предпочтительные носители, включая водные изотонические солевые растворы.As a carrier (solvent) for the preparation of liquid pharmaceutical compositions in the present invention, a “glucose solution” is preferably used (“isotonic glucose solution (5%) for intravenous injection”). In addition to the "glucose solution", other less preferred carriers can be used for the preparation of liquid dosage forms, including aqueous isotonic saline solutions.
Помимо лекарственного средства и носителя, фармацевтические композиции могут содержать один или несколько известных из уровня техники фармацевтически приемлемых эксципиентов (вспомогательных компонентов). В частности, в настоящем изобретении эксципиенты могут быть выбраны из солюбилизаторов, соединений, способствующих поддержанию рН и/или изотоничности, наполнителей, эмульгаторов, консервантов, антиоксидантов и других веществ. Эти хорошо известные из уровня техники компоненты фармацевтических композиций [Modern Pharmaceutics (Fourth Edition). G. Banker et al. (eds.), 2002, 864; Remington's Pharmaceutical Sciences (21th Edition) D B. Troy, P. Beringer (ed.), 2006, 2393, A.J. Spiegel et al. J. Pharm. Sci., 1963, 52 (10), 917 - 927] способствуют улучшению их потребительских или полезных свойств за счет облегчения применения, повышения стабильности, регулирования значения рН, изменения времени удерживания лекарственного соединения в месте введения.In addition to the drug and carrier, the pharmaceutical compositions may contain one or more pharmaceutically acceptable excipients known in the art (auxiliary components). In particular, in the present invention, excipients can be selected from solubilizers, compounds that help maintain pH and / or isotonicity, fillers, emulsifiers, preservatives, antioxidants, and other substances. These are well-known from the prior art components of pharmaceutical compositions [Modern Pharmaceutics (Fourth Edition). G. Banker et al. (eds.), 2002, 864; Remington's Pharmaceutical Sciences (21th Edition) D. B. Troy, P. Beringer (ed.), 2006, 2393, A.J. Spiegel et al. J. Pharm. Sci., 1963, 52 (10), 917-927] contribute to improving their consumer or beneficial properties by facilitating their use, increasing stability, regulating the pH value, and changing the retention time of the drug compound at the injection site.
Так, в соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения растворимость N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I), а также стабильность его фармацевтических композиций и их эффективность дополнительно могут быть повышены за счет одного или нескольких эксципиентов, выбранных независимо из группы солюбилизаторов, наполнителей, эмульгаторов, консервантов, антиоксидантов, буферных солей и веществ для поддержания изотоничности. Количество N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) или его фармацевтически приемлемой соли в фармацевтической композиции не ограничивается, но предпочтительно составляет от 0,1% до 20% (мас./об.), более предпочтительно от 5% до 20% (мас./об.)- Количество растворителя (наполнителя или разбавителя) не ограничивается, но может достигать до 99 масс. % в расчете на общую массу композиции, как хорошо известно в технологии приготовления лекарственных форм. Количество сорастворителя в композиции не ограничивается и может варьироваться, например, от 1% до 60%. Количество солюбилизирующего агента в композиции не ограничивается и может варьироваться, например, от 0,1% до 20%. Количество стабилизатора и антиоксиданта в композиции не ограничивается, но может достигать, например, от 0,1 до 1%. Количество агента для поддержания изотоничности в композиции не ограничивается, но может достигать, например, от 0,5 до 10%. Количество консерванта не ограничивается и может составлять, например от 0,001 до 5%.Thus, in accordance with another aspect of the present invention, the solubility of amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide, as well as the stability of its pharmaceutical compositions and their effectiveness can additionally be enhanced by one or more excipients selected independently from the group of solubilizers , fillers, emulsifiers, preservatives, antioxidants, buffer salts and substances to maintain isotonicity. The amount of amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide or its pharmaceutically acceptable salt in the pharmaceutical composition is not limited, but preferably ranges from 0.1% to 20% (w / v), more preferably from 5% to 20% (w / v) - The amount of solvent (filler or diluent) is not limited, but can reach up to 99 wt. % calculated on the total weight of the composition, as is well known in the technology of preparation of dosage forms. The amount of co-solvent in the composition is not limited and may vary, for example, from 1% to 60%. The amount of solubilizing agent in the composition is not limited and may vary, for example, from 0.1% to 20%. The amount of stabilizer and antioxidant in the composition is not limited, but can reach, for example, from 0.1 to 1%. The amount of agent to maintain isotonicity in the composition is not limited, but can reach, for example, from 0.5 to 10%. The amount of preservative is not limited and may be, for example, from 0.001 to 5%.
В качестве эксципиентов, повышающих растворимость N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В, его фармацевтические композиции могут содержать один или несколько фармакологически приемлемых солюбилизирующих агентов, хорошо знакомых специалистам в области фармацевтики, такие как (без ограничения перечисленным) поливинилпирролидон (ПВП), декстран, полисорбат 80 (твин 80), кремофор ЕН, гидроксиалкилированые β-циклодекстрины и γ-циклодекстрины и т.п. Полиэтиленгликоли (ПЭГ400 или ПЭГ200), а также β- или γ-гидроксипропилциклодекстрины не только стабилизируют раствор действующего вещества, но и способствуют его растворению при комнатной температуре. Поэтому в предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения для приготовления стабильных фармацевтических композиций для парентерального применения N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I), являющихся предметом настоящего изобретения, используются ПВП, твин 80, кремофор ЕН, полиэтиленгликоли и β- или γ-(2-гидроксипропил)циклодекстрины.As excipients that increase the solubility of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide, its pharmaceutical compositions may contain one or more pharmacologically acceptable solubilizing agents familiar to pharmaceutical specialists, such as (but not limited to) polyvinylpyrrolidone (PVP), dextran , polysorbate 80 (twin 80), cremophor EH, hydroxyalkylated β-cyclodextrins and γ-cyclodextrins, etc. Polyethylene glycols (PEG400 or PEG200), as well as β- or γ-hydroxypropyl cyclodextrins, not only stabilize the solution of the active substance, but also contribute to its dissolution at room temperature. Therefore, in preferred embodiments of the present invention, for the preparation of stable pharmaceutical compositions for parenteral administration of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B (I), which are the subject of the present invention, PVP,
В качестве консервантов, предохраняющих композицию от воздействия микроорганизмов, в настоящем изобретении могут быть применены различные противомикробные вещества, хорошо знакомые специалистам в области фармацевтики, такие как (без ограничения перечисленным) сульфиты, бензиновый спирт, хлорбутанол, сорбит, ксилит, сорбиновая кислота, бензойная кислота, тимеросал, парабены и их различные соли.As preservatives that protect the composition from exposure to microorganisms, in the present invention can be applied various antimicrobial substances, familiar to experts in the field of pharmaceuticals, such as (without limitation listed) sulfites, benzene alcohol, chlorobutanol, sorbitol, xylitol, sorbic acid, benzoic acid , thimerosal, parabens and their various salts.
В качестве вспомогательных буферных компонентов в фармацевтических композициях настоящего изобретения могут быть предпочтительно использованы кислоты (например, лимонная, уксусная, фосфорная и др.) или их соли с щелочными металлами (например, цитрат, ацетат или дигидрофосфат натрия и др.), или их сочетания (например, лимонная кислота и цитрат натрия). Ионная сила буферного раствора, используемого как компонент жидкой композиции в настоящем изобретении, не ограничивается и может быть, например, на уровне 0,01-0,6.As auxiliary buffer components in the pharmaceutical compositions of the present invention, acids (for example, citric, acetic, phosphoric, etc.) or their salts with alkali metals (for example, citrate, acetate or sodium dihydrogen phosphate, etc.), or combinations thereof can be preferably used. (for example, citric acid and sodium citrate). The ionic strength of the buffer solution used as a component of the liquid composition in the present invention is not limited and may be, for example, at a level of 0.01-0.6.
В качестве антиоксидантов могут быть использованы, например, глюкоза, аскорбиновая кислота, метабисульфит натрия, бисульфит натрия, сульфит натрия, фенолы и тиофенолы.As antioxidants, for example, glucose, ascorbic acid, sodium metabisulfite, sodium bisulfite, sodium sulfite, phenols and thiophenols can be used.
Таким образом, настоящее изобретение описывает готовые фармацевтические композиции для парентерального применения, содержащие N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (I). В некоторых вариантах осуществления композиция является сухой (как, например, лиофилизированной) композицией, которая может быть восстановлена, ресуспендирована или регидратирована для получения жидкой композиции фармацевтического вещества. Так, авторы настоящего изобретения путем лиофилизации жидких композиций получили ряд лиофилизированных препаратов, обладающих превосходной лекарственной стабильностью в процессе приготовления и хранения и легко восстанавливающихся в жидкую композицию при добавлении водного растворителя. Соответственно, настоящее изобретение также включает лиофилизированные композиции амфамида I. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть промежуточной жидкой (как, например, водной) композицией, которую можно высушить (как, например, лиофилизировать) или жидкой (как, например, водной) композицией, полученной посредством восстановления или ресуспендирования сухой композиции.Thus, the present invention describes a finished pharmaceutical composition for parenteral use, containing amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide. In some embodiments, the composition is a dry (as, for example, lyophilized) composition that can be reconstituted, resuspended, or rehydrated to form a liquid pharmaceutical composition. Thus, the authors of the present invention by lyophilization of liquid compositions obtained a number of lyophilized preparations with excellent drug stability in the process of preparation and storage and easily restored to the liquid composition by adding an aqueous solvent. Accordingly, the present invention also includes lyophilized compositions of amphamide I. In some embodiments, the composition may be an intermediate liquid (such as, for example, aqueous) composition, which can be dried (such as, for example, lyophilized) or a liquid (such as, for example, aqueous) composition, obtained by restoring or resuspending the dry composition.
Для получения лиофилизированных композиций, являющихся предметом настоящего изобретения, жидкую композицию амфамида I и/или его солевой формы, полученную, как описано выше, заливают в жесткий сосуд, такой как стерильная ампула, флакон или пузырек и подвергают лиофилизации традиционным способом. Количество жидкого препарата, которым заполняют сосуд, составляет, например от 5 до 50% (об./об.) от объема сосуда, особенно предпочтительно 10-25% (об./об.). Внешнюю температуру при лиофилизации предпочтительно поддерживают от -70 до 0°С, особенно предпочтительно от -60 до -40°С, и применяемое давление для сублимации растворителя предпочтительно составляет от 0,01 до 0,2 мм рт. ст., более предпочтительно от 0,01 до 0,1 мм рт. ст. Предпочтительно скорость лиофилизации регулируется таким образом, чтобы растворитель (в расчете на раствор) сублимировался со скоростью от 10 мкл до 100 мкл на 1 см2 площади поверхности, с которой сублимируется растворитель в течение 1 часа.To obtain lyophilized compositions that are the subject of the present invention, the liquid composition of amphamide I and / or its salt form, prepared as described above, is poured into a rigid vessel, such as a sterile ampoule, vial or vial, and is lyophilized in the traditional way. The amount of liquid preparation with which the vessel is filled is, for example, from 5 to 50% (v / v) of the volume of the vessel, particularly preferably 10-25% (v / v). The external temperature during freeze-drying is preferably maintained at -70 to 0 ° C, particularly preferably from -60 to -40 ° C, and the pressure used to sublimate the solvent is preferably from 0.01 to 0.2 mm Hg. Art., more preferably from 0.01 to 0.1 mm Hg. Art. Preferably, the lyophilization rate is adjusted so that the solvent (based on the solution) sublimates at a rate of 10 μl to 100 μl per 1 cm 2 of surface area from which the solvent sublimates within 1 hour.
Лиофилизируемые композиции могут содержать дополнительные криозащитные компоненты, предотвращающие осаждение лекарственного соединения, такие как поверхностно-активные вещества, смачивающие или эмульгирующие агенты (как, например, лецитин, полисорбат 80, полиоксиэтиленстеарат). Содержание указанных эксципиентов может составлять 0,01-10% от веса лекарственного препарата.The lyophilized compositions may contain additional cryoprotective components that prevent the precipitation of the drug compound, such as surfactants, wetting or emulsifying agents (such as lecithin,
Лиофилизированные композиции, являющиеся предметом настоящего изобретения, приготовленные, как указано выше, обладают отличными свойствами в отношении стабильности действующего вещества N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В) в процессе приготовления или хранения. Вышеописанные лиофилизированные формы, как и жидкие композиции для парентерального применения амфамида I и/или его солевых форм, могут быть упакованы в стерильные флаконы, ампулы или пакеты, пузырьки для однократного или многократного применения. Фармацевтические композиции в сухой (лиофилизированной) или жидкой концентрированной форме, как известно из уровня техники, перед использованием могут быть восстановлены или разбавлены посредством добавления стерильного фармацевтически приемлемого растворителя с получением необходимой концентрации терапевтического агента. Это дает возможность, при необходимости, легко приготовить стерильную жидкую композицию для парентерального применения N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В, которая может быть непосредственно введена пациенту.The lyophilized compositions of the present invention, prepared as described above, have excellent properties with respect to the stability of the active substance N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B) during preparation or storage. The above-described lyophilized forms, as well as liquid compositions for parenteral administration of amphamide I and / or its salt forms, can be packaged in sterile vials, ampoules or bags, vials for single or multiple use. Pharmaceutical compositions in dry (lyophilized) or liquid concentrated form, as is known in the art, can be reconstituted or diluted before use by adding a sterile, pharmaceutically acceptable solvent to obtain the desired concentration of therapeutic agent. This makes it possible, if necessary, to easily prepare a sterile liquid composition for parenteral administration of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide, which can be directly administered to the patient.
N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В и жидкие фармацевтические композиции, содержащие от 0,1 до 5% соединения формулы I или его соли, могут быть применены парентерально (например, внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно, ректально, интраспинально, интраперитонеально, внутриполостно) для лечения инфекций, вызванных грибковыми патогенами.Amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide and liquid pharmaceutical compositions containing from 0.1 to 5% of a compound of formula I or its salt can be administered parenterally (for example, intravenously, intraarterially, intramuscularly, subcutaneously, rectally, intraspinally, intraperitoneally , intracavitary) for the treatment of infections caused by fungal pathogens.
Термином "защитная группа" в настоящем изобретении обозначается группа, подходящая для блокирования функциональной группы в условиях проведения реакций, как описано литературе [Green, Т.W.; Wuts, P.G. М. Protective Groups in Organic Synthesis. 1991, 351]. Пример таких групп для блокирования аминогруппы включает, без ограничения перечисленным, трет-бутоксикарбонильную (Boc),The term "protective group" in the present invention denotes a group suitable for blocking a functional group under reaction conditions, as described in the literature [Green, T.W .; Wuts, P.G. M. Protective Groups in Organic Synthesis. 1991, 351]. An example of such groups for blocking an amino group includes, without limitation, tert-butoxycarbonyl (Boc),
адамантилоксикарбонильную (Adoc), флуоренилметоксикарбонильную (Fmoc), ацетил, карбонибензилокси (Cbz), метоксикарбонильную, этоксикарбонильную.adamantyloxycarbonyl (Adoc), fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc), acetyl, carbonibenzyloxy (Cbz), methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl.
Термин "фармацевтическая композиция", использованный в настоящем описании, означает, например, смесь, содержащую определенное количество терапевтического агента, например, терапевтически эффективное количество лекарственного соединения, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем, предназначенную для введения млекопитающему, например человеку, для лечения инфекций, вызванных грибковыми патогенами.The term "pharmaceutical composition" used in the present description means, for example, a mixture containing a specific amount of a therapeutic agent, for example, a therapeutically effective amount of a drug compound with at least one pharmaceutically acceptable carrier, intended for administration to a mammal, for example a human, for treatment of infections caused by fungal pathogens.
Термин "фармацевтически приемлемый", использованный в настоящем описании, относится к соединениям, композициям и/или лекарственным формам, которые при контакте с тканями млекопитающих, прежде всего, тканями человека, не вызывают аллергических реакций, раздражения, осложнений или других токсических проявлений, и указанные соединения характеризуются достаточно высоким соотношением польза/риск.The term "pharmaceutically acceptable", as used herein, refers to compounds, compositions and / or dosage forms that, upon contact with mammalian tissues, primarily human tissues, do not cause allergic reactions, irritation, complications or other toxic manifestations, and these The compounds are characterized by a rather high benefit / risk ratio.
"Фармацевтически приемлемая соль" в настоящем изобретении означает обычные соли, получаемые прибавлением кислоты к основанию, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В и образуются из его свободного основания и подходящих органических кислот. Примеры солей, получаемых прибавлением кислоты, включают соли, полученные из соли дикарбоновых аминокислот, например, аспарагиновой или глутаминовой кислот, органических кислот, например, уксусной кислоты, карбоновой ненасыщенной органической кислоты, например, фумаровой кислоты, трикарбоновой органической кислоты, например, лимонной кислоты. Кроме того, термин "фармацевтически приемлемая соль" также включает фармацевтически приемлемые сольваты, предпочтительно гидраты. Химическое превращение N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В в соль осуществляется способом, хорошо известным химикам-фармацевтам обеспечивающим улучшенную физическую и химическую стабильность, гигроскопичность, сыпучесть и растворимость соединений [см., например, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Edition). R.C. Rowe (Ed.), 1995,1456-1457]."Pharmaceutically acceptable salt" in the present invention means the usual salts obtained by adding acid to the base, which retain the biological efficacy and properties of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide and are formed from its free base and suitable organic acids. Examples of salts obtained by the addition of acid include salts derived from salts of dicarboxylic amino acids, for example, aspartic or glutamic acid, organic acids, for example, acetic acid, carboxylic unsaturated organic acid, for example, fumaric acid, tricarboxylic organic acid, for example, citric acid. In addition, the term "pharmaceutically acceptable salt" also includes pharmaceutically acceptable solvates, preferably hydrates. The chemical conversion of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide to salt is carried out in a manner well known to pharmaceutical chemists to provide improved physical and chemical stability, hygroscopicity, flowability and solubility of compounds [see, for example, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Edition). R.C. Rowe (Ed.), 1995,1456-1457].
Термин "фармакологически приемлемый носитель" в настоящем изобретении означает один или несколько совместимых жидких или твердых разбавителей или наполнителей, которые подходят для введения млекопитающему, предпочтительно человеку. Предпочтительно в качестве фармацевтически приемлемого носителя в фармацевтических композициях по изобретению используются протон-содержащие среды, более предпочтительно водные среды.The term "pharmacologically acceptable carrier" in the present invention means one or more compatible liquid or solid diluents or excipients that are suitable for administration to a mammal, preferably a human. Preferably, proton-containing media, more preferably aqueous media, are used as the pharmaceutically acceptable carrier in the pharmaceutical compositions of the invention.
Концентрация терапевтического агента в фармацевтической композиции составляет определенное значение, обеспечивающее введение терапевтически эффективного количества лекарственного средства, которое зависит от скорости абсорбции, инактивации и выведения из организма препарата, а также от тяжести состояния пациента или от других факторов, известных специалистам в данной области техники.The concentration of the therapeutic agent in the pharmaceutical composition is a certain value, providing the introduction of a therapeutically effective amount of the drug, which depends on the speed of absorption, inactivation and elimination from the body of the drug, as well as on the severity of the patient's condition or on other factors known to those skilled in the art.
"Эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" соединения в настоящем изобретении означает количество N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В или его фармацевтически приемлемой соли, которое значительно подавляет рост клеток грибков или дрожжей и эффективно для предупреждения, ослабления или смягчения симптомов заболевания или увеличения продолжительности жизни субъекта, подвергающегося лечению. Определение терапевтически эффективного количества относится к компетенции специалиста в данной области техники. Терапевтически эффективное количество или дозировка соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, может меняться в широких пределах и может определяться способом, известным в данной области техники.An “effective amount” or “therapeutically effective amount” of a compound in the present invention means an amount of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which significantly inhibits the growth of fungal or yeast cells and is effective in preventing, alleviating or alleviating the symptoms of the disease. or increase the life expectancy of the subject being treated. The determination of a therapeutically effective amount is within the competence of a person skilled in the art. A therapeutically effective amount or dosage of the compound of the invention may vary widely and may be determined in a manner known in the art.
Для конкретного реципиента соответствующий курс лечения подбирается с учетом индивидуальной потребности и мнения врача, который вводит фармацевтические композиции пациенту или назначает введение фармацевтических композиций. Суточную дозу терапевтического агента можно вводить однократно в виде разовой дозы или многократно в виде разделенных доз, которые вводят через определенные периоды времени, или, при парентеральном введении, ее можно вводить путем непрерывного вливания. Таким образом, необходимое количество терапевтического агента, например необходимое терапевтически эффективное количество, определяет специалист в данной области медицины. Например, доза терапевтического агента может варьироваться в зависимости от возраста, веса тела или условий в интервале от приблизительно 1 мг до приблизительно 100 мг в расчете на N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) или его фармацевтически приемлемую соль на килограмм массы тела реципиента в сутки.For a particular recipient, the appropriate course of treatment is selected taking into account the individual needs and opinions of the doctor who injects the pharmaceutical compositions to the patient or prescribes the administration of the pharmaceutical compositions. The daily dose of the therapeutic agent can be administered once as a single dose or multiple times as divided doses, which are administered at certain periods of time, or, for parenteral administration, it can be administered by continuous infusion. Thus, the required amount of therapeutic agent, for example, the required therapeutically effective amount, is determined by a specialist in the field of medicine. For example, the dose of a therapeutic agent may vary depending on age, body weight, or conditions ranging from about 1 mg to about 100 mg per amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide or its pharmaceutically acceptable salt per kilogram of mass. the body of the recipient per day.
Нижеприведенные неограничивающие примеры даны для демонстрации предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения. Специалисты в данной области техники легко поймут, что для стабилизации лекарственных композиций на основе N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) могут быть использованы разные эксципиенты и варианты осуществления настоящего изобретения.The following non-limiting examples are given to demonstrate preferred embodiments of the present invention. Those skilled in the art will readily understand that various excipients and embodiments of the present invention can be used to stabilize medicinal compositions based on N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B (I).
Краткое описание чертежейBrief Description of the Drawings
Рис. 1 ИК-спектр ацетата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина ВFig. 1 IR spectrum of amphotericin B acetate N- (2-aminoethyl) amide
Рис. 2 ИК-спектр L-глутамата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина ВFig. 2 IR spectrum of L-glutamate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B
Рис. 3 ИК-спектр цитрата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина ВFig. 3 IR spectrum of citrate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B
Рис. 4 ИК-спектр фумарата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина ВFig. 4 IR spectrum of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide fumarate
Рис. 5. Результаты высева из почек мышей.Fig. 5. Results of seeding from the kidneys of mice.
Пример 1. Синтез N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (Амфамида I)Example 1. Synthesis of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide (Amphamide I)
Стадия 1. N'-Fmoc-амфотерицин В (2)
В круглодонную колбу объемом 250 мл вносят амфотерицин В (6,00 г) и диметилформамид (60,0 мл), к полученной суспензии прибавляют пиридин (0,62 мл) и N-(9-флуоренилметоксикарбонилокси)сукцинимид (2,32 г). Реакционную массу перемешивают 1,5 ч при комнатной температуре, контролируя протекание реакции методом ТСХ (CHCl3-МеОН-H2O-НСООН, 13:6:1:0,1, система А1). Добавляют метанол (10 мл) и диэтиловый эфир (100 мл). Образовавшийся осадок отфильтровывают, дополнительно промывая его диэтиловым эфиром (20 мл), получая сырец N'-Fmoc-амфотерицин, который далее очищают методом колоночной хроматографии (силикагель, элюент смесь CHCl3-МеОН-H2O-НСООН; 13:6:0,5:0,05; 700 мл). Фракции, содержащие целевое вещество (Rf=0,60, система А1) объединяют, концентрируют до объема 10 мл, добавляют диэтиловый эфир (100 мл). Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывая диэтиловым эфиром (20 мл). Полученный желтый осадок высушивают в вакууме, получая целевой N'-Fmoc-амфотерицин В (2). 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,20-7,33 (8Н, m, Ar-Fmoc); 7,01 (1H, m, 3'-NH); 6,43 (1H, m, 24-CH); 6,38 (1H, m, 22-CH); 6,32 (1H, m, 26-CH); 6,29 (1H, m, 29-CH); 6,29 (1H, m, 30-CH); 6,28 (1H, m, 25-CH); 6,25 (1H, m, 23-CH); 6,16 (1H, m, 31-CH); 6,15 (1H, m, 27-CH); 6,08 (1H, m, 21-CH); 6,07 (1H, m, 32-CH); 5,96 (1H, m, 20-CH); 5,43 (1H, m, 33-CH); 5,20 (3H, m, 37-CH3); 5,0 (2H, m, CH2-Fmoc); 4,66 (1H, m, CH-Fmoc); 4,47 (1H, m, 1'-CH); 4,37 (m, 1H, 19-CH); 4,22 (1H, m, 11-CH); 4,19 (1H, m, 17-CH); 4,05 (1H, m, 3-CH); 3,96 (1H, m, 15-CH); 3,66 (m, 2C'-CH); 3,52 (m, 1H, 5-CH); 3,45 (m, 1H, 9-CH); 3,42 (m, 1H, C3'-H); 3,17 (1H, m, 1H, 4'-CH); 3,17 (1H, m, 5'-CH); 3,09 (1H, m, 35-CH); 3,08 (1H, m, 8-CH); 2,28 (1H, m, 34-CH); 2,16 (2H, m, 2-CH2); 2,06 (1H, m, 18-CH); 1,9 (1H, m, 16-CH); 1,86 (1H, m, 14-CH); 1,72 (1H, m, 36-CH); 1,57 (1H, m, 7-CH); 1,57 (1H, m, 18-CH); 1,55 (1H, m, 10-CH); 1,53 (2H, m, 12-CH2); 1,39 (1H, m, 6-СН);1,39 (1H, m, 4-CH); 1,31 (1H, m, 4-CH); 1,30 (1H, m, 10-CH); 1,25 (1H, m, 6-CH); 1,24 (1H, m, 7-CH); 1,16 (3H, m, 6'-CH3); 1,11 (3H, m, 37-CH3); 1,09 (1H, m, 14-CH); 1,03 (3H, m, 34-CH3); 0,91 (3H, m, 36-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 136,6 (C20); 136,5 (C33); 133,7 (C24; 133,4 (C26); 133,3 (C22); 132,9 (C30); 132,0 (C29); 131,9 (C27); 131,9 (C25); 131,6 (C23); 131,6 (C31); 131,0 (C32); 128,4 (C21); 96,7 (С1'); 76,9 (C8); 74,5 (19); 73,5 (C9); 73,3 (C35); 73,0 (C5'); 69,4 (C4'); 69,0 (5); 68,8 (C2'); 68,6 (C37); 66,0 (C3); 65,4 (С11); 65,2 (C15); 65,1 (C17); 56,7 (C3'); 56,5 (C16); 46,0 (C12); 44,5 (C4); 44,1 (C14); 42,2 (C34); 41,8 (C2); 39,4 (C36); 39,3 (C10); 37,0 (C18); 35,9 (C6); 28,8 (C7); 18,2 (34Me); 17,9 (C6'); 16,7 (C37Me); 11,8 (C36Me).Amphotericin B (6.00 g) and dimethylformamide (60.0 ml) are added to a 250 ml round-bottomed flask, pyridine (0.62 ml) and N- (9-fluorenylmethoxycarbonyloxy) succinimide (2.32 g) are added to the suspension. . The reaction mass is stirred for 1.5 h at room temperature, controlling the course of the reaction by TLC (CHCl 3 -MeOH-H 2 O-HCOOH, 13: 6: 1: 0.1, system A1). Methanol (10 ml) and diethyl ether (100 ml) are added. The precipitate formed is filtered off by further washing it with diethyl ether (20 ml) to obtain crude N'-Fmoc-amphotericin, which is further purified by column chromatography (silica gel, eluant mixture of CHCl 3 -MeOH-H 2 O-HCOOH; 13: 6: 0 5: 0.05; 700 ml). The fractions containing the target substance (R f = 0.60, system A1) are combined, concentrated to a volume of 10 ml, diethyl ether (100 ml) is added. The precipitate formed is filtered off by washing with diethyl ether (20 ml). The resulting yellow precipitate is dried under vacuum to give the desired N'-Fmoc-amphotericin B (2). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 8.20-7.33 (8H, m, Ar-Fmoc); 7.01 (1H, m, 3'-NH); 6.43 (1H, m, 24-CH); 6.38 (1H, m, 22-CH); 6.32 (1H, m, 26-CH); 6.29 (1H, m, 29-CH); 6.29 (1H, m, 30-CH); 6.28 (1H, m, 25-CH); 6.25 (1H, m, 23-CH); 6.16 (1H, m, 31-CH); 6.15 (1H, m, 27-CH); 6.08 (1H, m, 21-CH); 6.07 (1H, m, 32-CH); 5.96 (1H, m, 20-CH); 5.43 (1H, m, 33-CH); 5.20 (3H, m, 37-CH 3 ); 5.0 (2H, m, CH 2 -Fmoc); 4.66 (1H, m, CH-Fmoc); 4.47 (1H, m, 1'-CH); 4.37 (m, 1H, 19-CH); 4.22 (1H, m, 11-CH); 4.19 (1H, m, 17-CH); 4.05 (1H, m, 3-CH); 3.96 (1H, m, 15-CH); 3.66 (m, 2C'-CH); 3.52 (m, 1H, 5-CH); 3.45 (m, 1H, 9-CH); 3.42 (m, 1H, C3'-H); 3.17 (1H, m, 1H, 4'-CH); 3.17 (1H, m, 5'-CH) ; 3.09 (1H, m, 35-CH); 3.08 (1H, m, 8-CH); 2.28 (1H, m, 34-CH); 2.16 (2H, m, 2-CH 2 ); 2.06 (1H, m, 18-CH); 1.9 (1H, m, 16-CH); 1.86 (1H, m, 14-CH); 1.72 (1H, m, 36-CH); 1.57 (1H, m, 7-CH); 1.57 (1H, m, 18-CH); 1.55 (1H, m, 10-CH); 1.53 (2H, m, 12-CH 2 ); 1.39 (1H, m, 6-CH); 1.39 (1H, m, 4-CH); 1.31 (1H, m, 4-CH); 1.30 (1H, m, 10-CH); 1.25 (1H, m, 6-CH); 1.24 (1H, m, 7-CH); 1.16 (3H, m, 6'-CH 3 ); 1.11 (3H, m, 37-CH 3 ); 1.09 (1H, m, 14-CH); 1.03 (3H, m, 34-CH 3 ); 0.91 (3H, m, 36-CH 3 ). 13 C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 136.6 (C20); 136.5 (C33); 133.7 (C24; 133.4 (C26); 133.3 (C22); 132.9 (C30); 132.0 (C29); 131.9 (C27); 131.9 (C25); 131, 6 (C23); 131.6 (C31); 131.0 (C32); 128.4 (C21); 96.7 (C1 '); 76.9 (C8); 74.5 (19); 73, 5 (C9); 73.3 (C35); 73.0 (C5 '); 69.4 (C4'); 69.0 (5); 68.8 (C2 '); 68.6 (C37); 66.0 (C3); 65.4 (C11); 65.2 (C15); 65.1 (C17); 56.7 (C3 '); 56.5 (C16); 46.0 (C12); 44.5 (C4); 44.1 (C14); 42.2 (C34); 41.8 (C2); 39.4 (C36); 39.3 (C10); 37.0 (C18); 35 , 9 (C6); 28.8 (C7); 18.2 (34Me); 17.9 (C6 '); 16.7 (C37Me); 11.8 (C36Me).
Стадия 2. N'-Fmoc-N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (3)Stage 2. Amphotericin B N'-Fmoc-N- (2-aminoethyl) amide (3)
N'-Fmoc-амфотерицин В (2, 1,7 г) растворяют в ДМСО (20 мл), добавляют при перемешивании гидрохлорид этилендиамина (3 экв., 430 мг) и порциями бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфониум гексафторфосфат (РуВОР, 1,5 экв., 1,16 г (1,5 эквивалента) РуВОР. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов, поддерживая рН смеси около 8 добавлением триэтиламина. По окончании реакции в реакционную смесь добавляют ацетон (5 мл) и диэтиловый эфир (30 мл). Выпавший осадок отфилтровывают, промывают диэтиловым эфиром и высушивают. Очистку целевого соединения проводят методом колоночной хроматографии на силикагеле в системе: хлороформ-метанол-вода-муравьиная кислота 1(3:6:0,5:0,05). Фракции, содержащие целевое вещество объединяют, концентрируют до объема около 10 мл, добавляют диэтиловый эфир (40 мл). Выпавший осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и высушивают в вакууме, получая 650 мг (37%) целевого соединения. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,20-7,33 (8Н, m, Ar-Fmoc); 7,01 (1Н, m, 3'-NH); 6,43 (1H, m, 24-CH); 6,38 (1H, m, 22-CH); 6,32 (1H, m, 26-CH); 6,29 (1H, m, 29-CH); 6,29 (1H, m, 30-CH); 6,28 (1H, m, 25-CH); 6,25 (1H, m, 23-CH); 6,16 (1H, m, 31-CH); 6,15 (1H, m, 27-CH); 6,08 (1H, m, 21-CH); 6,07 (1H, m, 32-CH); 5,96 (1H, m, 20-CH); 5,43 (1H, m, 33-CH); 5,20 (3H, m, 37-CH3); 5,0 (2H, m, CH2-Fmoc); 4,66 (1H, m, CH-Fmoc); 4,47 (1H, m, 1'-CH); 4,37 (m, 1H, 19-CH); 4,22 (1H, m, 11-CH); 4,19 (1H, m, 17-CH); 4,05 (1H, m, 3-CH); 3,96 (1H, m, 15-CH); 3,66 (m, 2C-CH); 3,52 (m, 1H, 5-CH); 3,45 (m, 1H, 9-CH); 3,42 (m, 1H, C3'-H); 3,17 (1H, m, 1H, 4'-CH); 3,17 (1H, m, 5'-CH); 3,09 (1H, m, 35-CH); 3,08 (1H, m, 8-CH); 2,54 (4H, m, NH-CH2-CH2-NH); 2,28 (1H, m, 34-CH); 2,16 (2H, m, 2-CH2); 2,06 (1H, m, 18-CH); 1,90 (1H, m, 16-CH); 1,86 (1H, m, 14-CH); 1,72 (1H, m, 36-CH); 1,57 (1H, m, 7-CH); 1,57 (1H, m, 18-CH); 1,55 (1H, m, 10-CH); 1,53 (2H, m, 12-CH2); 1,39 (1H, m, 6-СН);1,39 (1H, m, 4-CH); 1,31 (1H, m, 4-CH); 1,30 (1H, m, 10-CH); 1,25 (1H, m, 6-CH); 1,24 (1H, m, 7-CH); 1,16 (3H, m, 6'-CH3); 1,11 (3H, m, 37-СН3); 1,09 (1H, m, 14-CH); 1,03 (3H, m, 34-CH3); 0,91 (3H, m, 36-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-de) δ: 136,6 (C20); 136,5 (C33); 133,7 (C24; 133,4 (C26); 133,3 (C22); 132,9 (C30); 132,0 (C29); 131,9 (C27); 131,9 (C25); 131,6 (C23); 131,6 (C31); 131,0 (C32); 128,4 (C21); 96,7 (С1'); 76,9 (C8); 74,5 (19); 73,5 (C9); 73,3 (C35); 73,0 (C5'); 69,4 (C4'); 69,0 (5); 68,8 (C2'); 68,6 (C37); 66,0 (C3); 65,4 (С11); 65,2 (C15); 65,1 (C17); 56,7 (C3'); 56,5 (C16); 50,0 (CNH); 48,0 (CNH); 46,0 (C12); 44,5 (C4); 44,1 (C14); 42,2 (C34); 41,8 (C2); 39,4 (C36); 39,3 (C10); 37,0 (C18); 35,9 (C6); 28,8 (C7); 18,2 (34Me); 17,9 (C6'); 16,7 (C37Me); 11,8 (C36Me).N'-Fmoc-amphotericin B (2.7 g) was dissolved in DMSO (20 ml), ethylenediamine hydrochloride (3 eq., 430 mg) and benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBOR, 1) were added with stirring. , 5 eq., 1.16 g (1.5 equivalents) of PyBOP. The reaction mixture is stirred for 2 hours, maintaining the pH of the mixture at about 8. Adding triethylamine. At the end of the reaction, acetone (5 ml) and diethyl ether (30 ml) are added to the reaction mixture. ml). The precipitated precipitate is filtered off, washed with diethyl ether and dried. m column chromatography on silica gel in the system: chloroform-methanol-water-formic acid 1 (3: 6: 0.5: 0.05). The fractions containing the target substance are combined, concentrated to a volume of about 10 ml, add diethyl ether (40 ml). The precipitated precipitate is filtered off, washed with diethyl ether and dried in vacuum, obtaining 650 mg (37%) of the target compound. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 8.20-7.33 (8H, m Ar-Fmoc); 7.01 (1H, m, 3'-NH); 6.43 (1H, m, 24-CH); 6.38 (1H, m, 22-CH); 6.32 (1H, m, 26-CH); 6.29 (1H, m, 29-CH); 6.29 (1H, m, 30-CH); 6.28 (1H, m, 25-CH); 6.25 (1H, m, 23-CH); 6.16 (1H, m, 31-CH); 6.15 (1H, m, 27-CH); 6.08 (1H, m, 21-CH); 6.07 (1H, m, 32-CH); 5.96 (1H, m, 20-CH); 5.43 (1H, m, 33-CH); 5.20 (3H, m, 37-CH 3 ); 5.0 (2H, m, CH 2 -Fmoc); 4.66 (1H, m, CH-Fmoc); 4.47 (1H, m, 1'-CH); 4.37 (m, 1H, 19-CH); 4.22 (1H, m, 11-CH); 4.19 (1H, m, 17-CH); 4.05 (1H, m, 3-CH); 3.96 (1H, m, 15-CH); 3.66 (m, 2C — CH); 3.52 (m, 1H, 5-CH); 3.45 (m, 1H, 9-CH); 3.42 (m, 1H, C3'-H); 3.17 (1H, m, 1H, 4'-CH); 3.17 (1H, m, 5'-CH) ; 3.09 (1H, m, 35-CH); 3.08 (1H, m, 8-CH); 2.54 (4H, m, NH-CH 2 -CH 2 -NH); 2.28 (1H, m, 34-CH); 2.16 (2H, m, 2-CH 2 ); 2.06 (1H, m, 18-CH); 1.90 (1H, m, 16-CH); 1.86 (1H, m, 14-CH); 1.72 (1H, m, 36-CH); 1.57 (1H, m, 7-CH); 1.57 (1H, m, 18-CH); 1.55 (1H, m, 10-CH); 1.53 (2H, m, 12-CH 2 ); 1.39 (1H, m, 6-CH); 1.39 (1H, m, 4-CH); 1.31 (1H, m, 4-CH); 1.30 (1H, m, 10-CH); 1.25 (1H, m, 6-CH); 1.24 (1H, m, 7-CH); 1.16 (3H, m, 6'-CH 3 ); 1.11 (3H, m, 37-CH 3 ); 1.09 (1H, m, 14-CH); 1.03 (3H, m, 34-CH 3 ); 0.91 (3H, m, 36-CH 3 ). 13 C NMR (100 MHz, DMSO-de) δ: 136.6 (C20); 136.5 (C33); 133.7 (C24; 133.4 (C26); 133.3 (C22); 132.9 (C30); 132.0 (C29); 131.9 (C27); 131.9 (C25); 131, 6 (C23); 131.6 (C31); 131.0 (C32); 128.4 (C21); 96.7 (C1 '); 76.9 (C8); 74.5 (19); 73, 5 (C9); 73.3 (C35); 73.0 (C5 '); 69.4 (C4'); 69.0 (5); 68.8 (C2 '); 68.6 (C37); 66.0 (C3); 65.4 (C11); 65.2 (C15); 65.1 (C17); 56.7 (C3 '); 56.5 (C16); 50.0 (CNH); 48.0 (CNH); 46.0 (C12); 44.5 (C4); 44.1 (C14); 42.2 (C34); 41.8 (C2); 39.4 (C36); 39 , 3 (C10); 37.0 (C18); 35.9 (C6); 28.8 (C7); 18.2 (34Me); 17.9 (C6 '); 16.7 (C37Me); 11 , 8 (C36Me).
Стадия 3. N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (I)Stage 3. N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (I)
N'-Fmoc-N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (3) (650 мг) растворяют смеси ДМСО:МеОН (7 мл, 5:2), добавляют пиперидин (200 мкл). Реакционную смесь перемешивают 1 ч, затем добавляют ацетон (3 мл) и диэтиловый эфир (20 мл). Выпавший осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и высушивают. Выход 450 мг (85%) целевого соединения. Тпл, 115-118°С (разл). Вычислено для C49H79N3O16: С, 60,91; H, 8,24; N, 4,35; O, 26,49. Найдено: С, 60,88; Н, 8,26; N, 4,33. 1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7,01 (1H, m, 3'-NH); 6,43 (1H, m, 24-CH); 6,38 (1H, m, 22-CH); 6,32 (1H, m, 26-CH); 6,29 (1H, m, 29-CH); 6,29 (1H, m, 30-CH); 6,28 (1H, m, 25-CH); 6,25 (1H, m, 23-CH); 6,16 (1H, m, 31-CH); 6,15 (1H, m, 27-CH); 6,08 (1H, m, 21-CH); 6,07 (1H, m, 32-CH); 5,96 (1H, m, 20-CH); 5,43 (1H, m, 33-CH); 5,20 (3H, m, 37-CH3); 4,47 (1H, m, 1'-CH); 4,37 (m, 1H, 19-CH); 4,22 (1H, m, 11-CH); 4,19 (1H, m, 17-CH); 4,05 (1H, m, 3-CH); 3,96 (1H, m, 15-CH); 3,66 (m, 2C-CH); 3,52 (m, 1H, 5-CH); 3,45 (m, 1H, 9-CH); 3,42 (m, 1H, C3'-H); 3,17 (1H, m, 1H, 4'-CH); 3,17 (1H, m, 5'-CH); 3,09 (1H, m, 35-CH); 3,08 (1H, m, 8-CH); 2,54 (4H, m, NH-CH2-CH2-NH); 2,28 (1H, m, 34-CH); 2,16 (2H, m, 2-CH2); 2,06 (1H, m, 18-CH); 1,9 (1H, m, 16-CH); 1,86 (1H, m, 14-CH); 1,72 (1H, m, 36-CH); 1,57 (1H, m, 7-CH); 1,57 (1H, m, 18-CH); 1, 55 (1H, m, 10-CH); 1,53 (2H, m, 12-CH2); 1,39 (1H, m, 6-СН);1,39 (1H, m, 4-CH); 1,31 (1H, m, 4-CH); 1,30 (1H, m, 10-CH); 1,25 (1H, m, 6-CH); 1,24 (1H, m, 7-CH); 1,16 (3H, m, 6'-CH3); 1,11 (3H, m, 37-СН3); 1,09 (1H, m, 14-CH); 1,03 (3H, m, 34-CH3); 0,91 (3H, m, 36-CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 136,6 (C20); 136,5 (C33); 133,7 (C24; 133,4 (C26); 133,3 (C22); 132,9 (C30); 132,0 (C29); 131,9 (C27); 131,9 (C25); 131,6 (C23); 131,6 (C31); 131,0 (C32); 128,4 (C21); 96,7 (С1'); 76,9 (C8); 74,5 (19); 73,5 (C9); 73,3 (C35); 73,0 (C5'); 69,4 (C4'); 69,0 (5); 68,8 (C2'); 68,6 (C37); 66,0 (C3); 65,4 (С11); 65,2 (C15); 65,1 (C17); 56,7 (C3'); 56,5 (C16); 50,0 (CNH); 48,0 (CNH);46,0 (C12); 44,5 (C4); 44,1 (CI4); 42,2 (C34); 41,8 (C2); 39,4 (C36); 39,3 (C10); 37,0 (C18); 35,9 (C6); 28,8 (C7); 18,2 (34Me); 17,9 (C6'); 16,7 (C37Me); 11,8 (С36Ме). ЭСП (0,01 мг/мл) 1 λмакс., нм: 235, 345, 365, 385, 406. ИК-спектр, λмакс.: 3394, 3008, 2924, 1774, 1720, 1705, 161, 1635, 1558, 1543, 1458, 1442, 1381, 1319, 1265, 1180, 1111, 1072, 1018, 956, 887, 848, 802 см-1. MW (HR ESI-MS) вычислено для [M+H]+1 C49H79N3O16: 966,5539. Найдено: 966,5775 [M+H]+1. Rt 7.24 мин (Колонка 4×250 мм с октадецилсиланом (С-18) с зернением 5 мкм, подвижная фаза: 0,01 М раствор фосфорной кислоты (рН 2,6): ацетонитрил, линейный градиент ацетонитрила от 30 до 60% за 15 мин).N'-Fmoc-N- (2-aminoethyl) amide of amphotericin B (3) (650 mg) dissolved DMSO: MeOH mixture (7 ml, 5: 2), piperidine (200 μl) is added. The reaction mixture is stirred for 1 h, then acetone (3 ml) and diethyl ether (20 ml) are added. The precipitate is filtered off, washed with diethyl ether and dried. Yield 450 mg (85%) of the title compound. T pl , 115-118 ° C (decomp). Calculated for C 49 H 79 N 3 O 16 : C, 60.91; H, 8.24; N, 4.35; O, 26.49. Found: C, 60.88; H, 8.26; N, 4.33. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 7.01 (1H, m, 3'-NH); 6.43 (1H, m, 24-CH); 6.38 (1H, m, 22-CH); 6.32 (1H, m, 26-CH); 6.29 (1H, m, 29-CH); 6.29 (1H, m, 30-CH); 6.28 (1H, m, 25-CH); 6.25 (1H, m, 23-CH); 6.16 (1H, m, 31-CH); 6.15 (1H, m, 27-CH); 6.08 (1H, m, 21-CH); 6.07 (1H, m, 32-CH); 5.96 (1H, m, 20-CH); 5.43 (1H, m, 33-CH); 5.20 (3H, m, 37-CH 3 ); 4.47 (1H, m, 1'-CH); 4.37 (m, 1H, 19-CH); 4.22 (1H, m, 11-CH); 4.19 (1H, m, 17-CH); 4.05 (1H, m, 3-CH); 3.96 (1H, m, 15-CH); 3.66 (m, 2C — CH); 3.52 (m, 1H, 5-CH); 3.45 (m, 1H, 9-CH); 3.42 (m, 1H, C3'-H); 3.17 (1H, m, 1H, 4'-CH); 3.17 (1H, m, 5'-CH) ; 3.09 (1H, m, 35-CH); 3.08 (1H, m, 8-CH); 2.54 (4H, m, NH-CH 2 -CH 2 -NH); 2.28 (1H, m, 34-CH); 2.16 (2H, m, 2-CH 2 ); 2.06 (1H, m, 18-CH); 1.9 (1H, m, 16-CH); 1.86 (1H, m, 14-CH); 1.72 (1H, m, 36-CH); 1.57 (1H, m, 7-CH); 1.57 (1H, m, 18-CH); 1, 55 (1H, m, 10-CH); 1.53 (2H, m, 12-CH 2 ); 1.39 (1H, m, 6-CH); 1.39 (1H, m, 4-CH); 1.31 (1H, m, 4-CH); 1.30 (1H, m, 10-CH); 1.25 (1H, m, 6-CH); 1.24 (1H, m, 7-CH); 1.16 (3H, m, 6'-CH 3 ); 1.11 (3H, m, 37-CH 3 ); 1.09 (1H, m, 14-CH); 1.03 (3H, m, 34-CH 3 ); 0.91 (3H, m, 36-CH 3 ). 13 C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 136.6 (C20); 136.5 (C33); 133.7 (C24; 133.4 (C26); 133.3 (C22); 132.9 (C30); 132.0 (C29); 131.9 (C27); 131.9 (C25); 131, 6 (C23); 131.6 (C31); 131.0 (C32); 128.4 (C21); 96.7 (C1 '); 76.9 (C8); 74.5 (19); 73, 5 (C9); 73.3 (C35); 73.0 (C5 '); 69.4 (C4'); 69.0 (5); 68.8 (C2 '); 68.6 (C37); 66.0 (C3); 65.4 (C11); 65.2 (C15); 65.1 (C17); 56.7 (C3 '); 56.5 (C16); 50.0 (CNH); 48.0 (CNH); 46.0 (C12); 44.5 (C4); 44.1 (CI4); 42.2 (C34); 41.8 (C2); 39.4 (C36); 39 , 3 (C10); 37.0 (C18); 35.9 (C6); 28.8 (C7); 18.2 (34Me); 17.9 (C6 '); 16.7 (C37Me); 11 , 8 (C36Me). ESP (0.01 mg / ml) 1 λ max ., Nm: 235, 345, 365, 385, 406. IR spectrum, λ max .: 3394, 3008, 2924, 1774, 1720, 1705, 161, 1635, 1558, 1543, 1458, 1442, 1381, 1319, 1265, 1180, 1111, 1072, 1018, 956, 887, 848, 802 cm -1 . MW (HR ESI-MS) calculated for [M + H] +1 C 49 H 79 N 3 O 16 : 966.5539 Found: 966.5775 [M + H] +1 . R t 7.24 min (Column 4 × 250 mm with octadecylsilane (C-18) with
Пример 2. Синтез солевых форм N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I)Example 2. Synthesis of salt forms of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (I)
Солевые формы получали взаимодействием субстанции N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В и соответствующей кислоты.Salt forms were obtained by reacting amphotericin B substance N- (2-aminoethyl) amide and the corresponding acid.
2.1 Ацетат N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В2.1 Amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide acetate
Амфамид (50 мг) добавляли к раствору уксусной кислоты (5,37 мкл) в воде (25 мл). Смесь перемешивали 15 мин при комнатной температуре, затем разливали в стеклянные флаконы по 5 мл раствора. Флаконы выдерживали при -18°С в течение 24 ч, затем высушивали досуха в лиофильной сушке (Рис. 1).Amfamide (50 mg) was added to a solution of acetic acid (5.37 μl) in water (25 ml). The mixture was stirred for 15 minutes at room temperature, then poured into glass vials of 5 ml each. The vials were kept at -18 ° C for 24 h, then dried to dryness in freeze drying (Fig. 1).
2.2. L-глутамат N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В2.2. N- (2-aminoethyl) amide L-glutamate Amphotericin B
N-(2-Аминоэтил)амид амфотерицина В (50 мг) добавляли к раствору L-глутаминовой уксусной кислоты (15,2 мг) в воде (25 мл). Смесь перемешивали 15 мин при комнатной температуре, затем разливали в стеклянные флаконы по 5 мл раствора. Флаконы выдерживали при -18°С в течение 24 ч, затем высушивали досуха в лиофильной сушке (Рис. 2).Amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide (50 mg) was added to a solution of L-glutamic acetic acid (15.2 mg) in water (25 ml). The mixture was stirred for 15 minutes at room temperature, then poured into glass vials of 5 ml each. The vials were kept at -18 ° C for 24 h, then dried to dryness in freeze drying (Fig. 2).
2.3. Цитрат N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В2.3. Amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide citrate
N-(2-Аминоэтил)амид амфотерицина В (50 мг) добавляли к раствору лимонной кислоты (19,9 мг) в воде (25 мл). Смесь перемешивали 15 мин при комнатной температуре, затем разливали в стеклянные флаконы по 5 мл раствора. Флаконы выдерживали при -18°С в течение 24 ч, затем высушивали досуха в лиофильной сушке (рис. 3).Amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide (50 mg) was added to a solution of citric acid (19.9 mg) in water (25 ml). The mixture was stirred for 15 minutes at room temperature, then poured into glass vials of 5 ml each. The vials were kept at -18 ° C for 24 h, then dried to dryness in freeze drying (Fig. 3).
2.4. Фумарат N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В2.4. Fumarate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B
N-(2-Аминоэтил)амид амфотерицина В (50 мг) добавляли к раствору фумаровой кислоты (12,0 мг) в воде (25 мл). Смесь перемешивали 15 мин при комнатной температуре, затем разливали в стеклянные флаконы по 5 мл раствора. Флаконы выдерживали при -18°С в течение 24 ч, затем высушивали досуха в лиофильной сушке (Рис. 4).Amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide (50 mg) was added to a solution of fumaric acid (12.0 mg) in water (25 ml). The mixture was stirred for 15 minutes at room temperature, then poured into glass vials of 5 ml each. The vials were kept at -18 ° C for 24 h, then dried to dryness in freeze drying (Fig. 4).
Полученные соли охарактеризованы ИК-спектрами* (см. рис. 1-4).The salts obtained are characterized by IR spectra * (see Fig. 1-4).
ИК-спектры регистрировали на приборе ИК-Фурье-спектрометр «Nicolet-iS10». Измерение проводили при разрешении 4 см-1; зона спектра 3000-650 см-1. Спектры обрабатывали с использованием программы OMNIC-7.0.IR spectra were recorded on a Nicolet-iS10 FTIR instrument. The measurement was carried out at a resolution of 4 cm -1 ; spectrum area 3000-650 cm -1 . Spectra were processed using the OMNIC-7.0 software.
Пример 3. Определение стабильности N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) и его солевых формExample 3. Determination of the stability of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (I) and its salt forms
Стабильность при хранении определяли методом ускоренного старения. Для этого три серии каждой соли (пять образцов по 10 мг в каждой серии) в стеклянном пенициллиновом флаконе, закрытом резиновой пробкой и закатанном алюминиевой крышкой помещали в термостат при температуре 60±1°С. Выдерживали в течение 1 месяца в термостате при указанной температуре, оценивая физико-химические характеристики (внешний вид, чистота методом ВЭЖХ) каждой соли в нулевой точке (день закладки на хранение) и через 1 месяц.The storage stability was determined by the method of accelerated aging. To do this, three series of each salt (five samples of 10 mg in each series) in a glass penicillin vial, closed with a rubber stopper and rolled up with an aluminum cap were placed in a thermostat at a temperature of 60 ± 1 ° C. Kept for 1 month in a thermostat at the specified temperature, assessing the physicochemical characteristics (appearance, purity by HPLC) of each salt at the zero point (the day of laying it in storage) and after 1 month.
Данные о стабильности солей при хранении в условиях ускоренного старения, полученные методом ВЭЖХ, представлены на рис. 5-10. ВЭЖХ-анализ проводили на хроматографе Shimadzu (Япония) LC-20 AD с УФ детектором на колонке Kromasil (Швеция) С18 размером 4×250 мм, с зернением 5 мкм или аналогичной. Концентрация вводимого раствора - 0,1 мг/мл; объем петли - 20 мкл. Хроматографирование проводили в системе состоящей из 0,01М фосфорной кислоты (рН 2,6) и ацетонитрила. Элюцию проводили в режиме линейного градиента с увеличением концентрации ацетонитрила от 30 до 60% за 15 мин при скорости потока 1 мл/мин. Результаты представлены в таблице 1.Data on the stability of salts during storage under accelerated aging, obtained by HPLC, are presented in Fig. 5-10. HPLC analysis was carried out on a Shimadzu chromatograph (Japan) LC-20 AD with a UV detector on a Kromasil column (Sweden) C18 4 × 250 mm in size, with a grain size of 5 μm or similar. The concentration of the injected solution is 0.1 mg / ml; loop volume — 20 μl. Chromatography was carried out in a system consisting of 0.01 M phosphoric acid (pH 2.6) and acetonitrile. The elution was carried out in a linear gradient mode with an increase in the concentration of acetonitrile from 30 to 60% in 15 minutes at a flow rate of 1 ml / min. The results are presented in table 1.
Данный пример демонстрирует, что N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (I) обладает более высокой растворимостью в воде и более высокой стабильностью в сравнении с амфотерицином В, а данные солей превосходят показатели N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В.This example demonstrates that amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide has a higher water solubility and higher stability than amphotericin B, and these salts are superior to amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide
Пример 4. Противогрибковая активность N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) и его солевых форм in vitroExample 4. Antifungal activity of N- (2-aminoethyl) amide of amphotericin B (I) and its salt forms in vitro
Для сравнительного исследования противогрибковой активности N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I), его солевых форм и амфотерицина В проведено определением минимальной подавляющей концентрации (МПК) с помощью микрометода серийных разведений в бульоне [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, часть первая, под ред. А.Н. Миронова, Москва, Гриф и К, 2012] для панели грибков и дрожжей, являющихся типичными возбудителями грибковых инфекций. Тестируемая панель патогенов включала штаммы С. albicans АТСС 24433, C. parapsilosis АТСС 22019, С. krusei 432М, С. tropicalis 3019, C. glabrata 61Л, M.canis В-200, Т. rubrum 2002, A. niger 31аFor a comparative study of the antifungal activity of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B (I), its salt forms and amphotericin B was carried out by determining the minimum inhibitory concentration (PBM) using a micromethod of serial dilutions in broth [Guidelines for Preclinical Studies of Drugs, Part first, ed. A.N. Mironova, Moscow, Grif and K, 2012] for a panel of fungi and yeast, which are typical pathogens of fungal infections. The pathogen panel tested included strains C. albicans ATCC 24433, C. parapsilosis ATCC 22019, C. krusei 432M, C. tropicalis 3019, C. glabrata 61L, M.canis B-200, T. rubrum 2002, A. niger 31a
Результаты оценки чувствительности контрольных штаммов патогенов и клинических изолятов к амфамиду (I) и его солям в сравнении с Амфотерицином В приведены в таблице 2.The results of the evaluation of the sensitivity of control strains of pathogens and clinical isolates to amphamide (I) and its salts in comparison with Amphotericin B are shown in Table 2.
На основании результатов экспериментов согласно примерам 3-4 можно сделать вывод о том, что N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (I) и его солевые формы, являющиеся предметом настоящего изобретения, обладают высокой растворимостью в воде, высокой противогрибковой активностью и стабильностью. При этом солевые формы амфамида обладают лучшей растворимостью и большей стабильностью, чем свободное основание амфамида.Based on the results of experiments according to examples 3-4, it can be concluded that the amphotericin B (I) amphotericin B (I) and its salt forms, which are the subject of the present invention, have a high solubility in water, high antifungal activity and stability . At the same time, the salt forms of amphamide have better solubility and greater stability than the free base of amphamide.
Пример 5. Получение лиофилизированных фармацевтических композиций солевых форм N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) для парентерального примененияExample 5. Obtaining lyophilized pharmaceutical compositions of salt forms of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (I) for parenteral use
Растворы амфамида I для получения лиофилизированных фармацевтических композиций готовят в воде для инъекций в стерильной посуде. В мерный сосуд наливают 3/4 от требуемого объема воды, растворяют в ней отвешенное количество N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) и вспомогательных компонентов, при перемешивании смеси. Растворы амфамида I стерилизуют фильтрованием раствора через микропористый фильтр в асептических условиях. Полученный раствор переносят в мерный сосуд и доводят стерильной водой до требуемого объема. После проверки содержания N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (I) методом ВЭЖХ (требуемая концентрация 5±0,2 мг/мл) растворы дозируют по 2 мл в стерильные флаконы из нейтрального стекла. Флаконы с растворами закрывают стерильными марлевыми тампонами и выдерживают при -70°С 12 ч. Флаконы с замороженным раствором вносят в установку для лиофильной сушки и выдерживают 12 ч при давлении 0,01 мм рт.ст. После извлечения из установки флаконы укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками.Solutions of amphamide I to obtain lyophilized pharmaceutical compositions are prepared in water for injection in a sterile container. 3/4 of the required volume of water is poured into the measuring vessel, the weighed amount of amphotericin B (I) and auxiliary components is weighed in it, while stirring the mixture. Solutions of amphamide I are sterilized by filtering the solution through a microporous filter under aseptic conditions. The resulting solution is transferred to a measuring vessel and adjusted to the required volume with sterile water. After checking the content of amphotericin B (I) N- (2-aminoethyl) amide by HPLC (required
Иллюстративные рецептуры лиофилизированных фармацевтических композиций N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В для приготовления инъекционных растворов приведены ниже (представлен состав композиций N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В из расчета на один флакон объемом 10 мл).Illustrative formulations of amphotericin B lyophilized pharmaceutical compositions of N- (2-aminoethyl) amide for the preparation of injection solutions are shown below (the composition of amphotericin B N- (2-aminoethyl) amide compositions is given per 10 ml vial).
Состав 1: 10 мг глутамата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг маннита.Part 1: 10 mg of glutamate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (calculated on the basis of); 20 mg mannitol.
,,
Состав 2: 10 мг глутамата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг поливинилпирролидона К-15.Part 2: 10 mg of glutamate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (calculated on the basis of); 20 mg of polyvinylpyrrolidone K-15.
Состав 3: 10 мг глутамата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 10 мг маннита; 10 мг поливинилпирролидона К-15.Part 3: 10 mg of glutamate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (calculated on the basis of); 10 mg mannitol; 10 mg of polyvinylpyrrolidone K-15.
Состав 4: 10 мг глутамата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг поливинилпирролидона К-9.Ingredients 4: 10 mg glutamate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B (calculated on the basis of); 20 mg of polyvinylpyrrolidone K-9.
Состав 5: 10 мг глутамата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг лактозы.Part 5: 10 mg of glutamate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (calculated on the basis of); 20 mg of lactose.
Состав 6: 10 мг глутамата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 50 мг (2-гидроксипропил)-β-циклодекстрина.Part 6: 10 mg of glutamate N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b (calculated on the basis of); 50 mg of (2-hydroxypropyl) -β-cyclodextrin.
Состав 7: 10 мг ацетата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг маннита.Composition 7: 10 mg of amphotericin B acetate N- (2-aminoethyl) amide (based on base); 20 mg mannitol.
Состав 8: 10 мг ацетата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг поливинилпирролидона К-15.Composition 8: 10 mg of amphotericin B acetate N- (2-aminoethyl) amide (based on the base); 20 mg of polyvinylpyrrolidone K-15.
Состав 9: 10 мг ацетата а N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 10 мг маннита; 10 мг поливинилпирролидона К-15.Composition 9: 10 mg of amphotericin B acetate a and N- (2-aminoethyl) amide (calculated as base); 10 mg mannitol; 10 mg of polyvinylpyrrolidone K-15.
Состав 10: 10 мг ацетата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг поливинилпирролидона К-9.Composition 10: 10 mg of amphotericin B acetate N- (2-aminoethyl) amide (based on the base); 20 mg of polyvinylpyrrolidone K-9.
Состав 11: 10 мг ацетата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 20 мг лактозы.Ingredients 11: 10 mg of amphotericin B acetate N- (2-aminoethyl) amide (calculated as base); 20 mg of lactose.
Состав 12: 10 мг ацетата N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В (в расчете на основание); 50 мг (2-гидроксипропил)-β-циклодекстрина.Ingredients 12: 10 mg of amphotericin B acetate N- (2-aminoethyl) amide (calculated as base); 50 mg of (2-hydroxypropyl) -β-cyclodextrin.
Приготовленные составы стабильны при хранении как в естественных условиях (1 год, 25°С, в затемненном месте), так и в условиях ускоренного старения (30 дней при 60°С). Лиофилизированные композиции легко восстанавливаются в исходный гомогенный раствор при комнатной температуре менее чем через 5 минут при добавлении стерильной воды или «изотонического раствора глюкозы (5%) для внутривенных инъекций». Для приготовления 10 мл 0,1% раствора амфамида I к содержимому флакона прибавляют 10 мл «изотонического раствора глюкозы (5%) для внутривенных инъекций», периодически помешивая содержимое флакона до полного растворения композиции.The prepared formulations are stable when stored in natural conditions (1 year, 25 ° C, in a dark place), and in conditions of accelerated aging (30 days at 60 ° C). Lyophilized formulations are easily reconstituted into the original homogeneous solution at room temperature in less than 5 minutes with the addition of sterile water or "isotonic glucose solution (5%) for intravenous injection." To prepare 10 ml of a 0.1% solution of amphamide I, add 10 ml of “isotonic glucose solution (5%) for intravenous injection” to the contents of the vial, stirring the contents of the vial periodically until the composition is completely dissolved.
Пример 6. Противогрибковая активность композиций солевых форм in vivo Целью исследования являлась определение специфической активности препаратов (композиций солевых форм) амфамида I в сравнении с амфотерицином В на модели кандидозного сепсиса мышей (мыши SHK весом 18-20 г). В качестве инфекционного агента использовали Candida albicans (штамм 14053 АТСС) при внутривенном пути заражения [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, часть первая, под ред. А.Н. Миронова, Москва, Гриф и К, 2012]. Мышей заражали инфекционным инокулюм в дозе 1,0 млн. КОЕ на мышь в объеме 0,1 мл. Через 30 мин после заражения мышам проводили первое внутривенное введение испытуемых препаратов в соответствующих дозах в объеме 0,1 мл. Каждую дозу вводили ежедневно в течение четырех дней, начиная со дня заражения (0, 1, 2 и 3 дни). На 5 день опыта определяли высеваемость Candida albicans на 1 г ткани почек.Example 6. Antifungal activity of in vivo salt formulations The purpose of the study was to determine the specific activity of drugs (salt formulations) of amphamide I in comparison with amphotericin B on a model of candidal sepsis of mice (SHK mice weighing 18-20 g). Candida albicans (strain 14053 ATCC) was used as an infectious agent for the intravenous route of infection [Guidelines for Preclinical Studies of Drugs, Part One, ed. A.N. Mironova, Moscow, Grif and Co., 2012]. Mice were infected with an infectious inoculum at a dose of 1.0 million CFU per mouse in a volume of 0.1 ml. 30 minutes after infection, mice were given the first intravenous administration of the tested drugs in appropriate doses in a volume of 0.1 ml. Each dose was administered daily for four days, starting from the day of infection (0, 1, 2 and 3 days). On
Полученные данные, показанные на рис. 5 показывают, что композиция на основе амфамида I в отношении Candida albicans проявляет более высокую противогрибковую эффективность в экспериментах in vivo по сравнению с амфотерицином В.The data obtained, shown in Fig. 5 show that the composition based on amphamide I against Candida albicans exhibits higher antifungal efficacy in in vivo experiments compared to amphotericin B.
Пример 7. Изучение острой токсичности N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В и его солевых форм на мышахExample 7. The study of the acute toxicity of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin b and its salt forms in mice
Изучение острой токсичности глутамата амфамида I проведено на мышах SHK, самках в соответствии с требованиями действующего Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств (2012) [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, часть первая, под ред. А.Н. Миронова, Москва, Гриф и К, 2012] и согласно Правилам лабораторной практики в Российской Федерации (Национальный стандарт Российской федерации, ГОСТ Р 53434 - 2009). Введение животным глутамата амфамида I проводили однократно внутривенно в диапазоне доз от 8 до 20 мг/кг в 0,05% концентрации. Для всех данных рассчитано среднее значение и стандартное отклонение, различия считаются достоверными при р≤0,05. Дозы, характеризующие токсичность глутамата амфамида I, рассчитаны по методу Литчфилда и Уилкоксона:The study of the acute toxicity of glutamate amphamide I was carried out on SHK mice, females, in accordance with the requirements of the existing Guidelines for the Pre-Clinical Studies of Drugs (2012) [Guidelines for the Pre-Clinical Studies of Drugs, Part One, ed. A.N. Mironova, Moscow, Grif and K, 2012] and according to the Rules of laboratory practice in the Russian Federation (National Standard of the Russian Federation, GOST R 53434 - 2009). Glutamate amphamide I was administered to animals once intravenously in a dose range from 8 to 20 mg / kg in a 0.05% concentration. For all data, the mean and standard deviation were calculated, the differences are considered significant when p ≤ 0.05. Doses characterizing the toxicity of glutamate amfamide I, calculated according to the method of Litchfield and Wilcoxon:
ЛД50=13,8 (113÷16,3) мг/кгLD 50 = 13.8 (113 ÷ 16.3) mg / kg
МПД (ЛД10)=9,25 мг/кгMTD (LD 10 ) = 9.25 mg / kg
ЛД16=10,26 мг/кгLD 16 = 10.26 mg / kg
ЛД84=17,4 мг/кгLD 84 = 17.4 mg / kg
ЛД100=19,2 мг/кгLD 100 = 19.2 mg / kg
Из литературных данных [Proffitt R.T., Satorius A., Chiang S.-M., Sullivan L., Adler-Moore J.-P. Pharmacology and toxicology of a liposomal formulation of amphotericin В (AmBisome) in rodents. J.Antimicrob. Chemoth., 1991, v. 28, s._B, pp. 49-61] доза, характеризующая острую токсичность амфотерицина В на мышах, при внутривенном введении составляет:From the literature [Proffitt R.T., Satorius A., Chiang S.-M., Sullivan L., Adler-Moore J.-P. Pharmacology and toxicology of a liposomal formulation of amphotericin B (AmBisome) in rodents. J. Antimicrob. Chemoth., 1991, v. 28, s._B, pp. 49-61] dose, which characterizes the acute toxicity of amphotericin B in mice, with intravenous administration is:
ЛД50=2,3 мг/кг.LD 50 = 2.3 mg / kg.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что глутамат амфамида I обладает достоверно меньшей острой токсичностью в сравнении в амфотерицином В.Thus, the data obtained indicate that glutamate of amphamide I has significantly less acute toxicity in comparison with amphotericin B.
Пример 8. Изучение острой токсичности фармацевтической композиции N-(2-аминоэтил)амида амфотерицина В на крысахExample 8. The study of the acute toxicity of the pharmaceutical composition of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B in rats
Изучение острой токсичности фармацевтической композиции на основе амфамида I (состав 6) проведено на беспородных крысах, самках, в соответствии с требованиями действующего Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств (2012) [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, часть первая, под ред. А.Н. Миронова, Москва, Гриф и К, 2012] и согласно Правилам лабораторной практики в Российской Федерации (Национальный стандарт Российской федерации, ГОСТ Р 53434 - 2009). Введение животным фармацевтической композиции на основе амфамида I (состав 6) проводили однократно внутривенно в диапазоне доз от 1 до 15 мг/кг в 0,1% концентрации в пересчете на амфамид I. Для всех данных рассчитано среднее значение и стандартное отклонение, различия считаются достоверными при р≤0,05. Дозы, характеризующие токсичность глутамата амфамида I, рассчитаны по методу Литчфилда и Уилкоксона:The study of the acute toxicity of the pharmaceutical composition based on amphamide I (composition 6) was carried out on outbred rats, females, in accordance with the requirements of the current Guidelines for preclinical studies of drugs (2012) [Guidelines for conducting preclinical studies of drugs, part one, ed. A.N. Mironova, Moscow, Grif and K, 2012] and according to the Rules of laboratory practice in the Russian Federation (National Standard of the Russian Federation, GOST R 53434 - 2009). The introduction of the animal pharmaceutical composition based on amphamide I (composition 6) was performed once intravenously in the dose range from 1 to 15 mg / kg in 0.1% concentration in terms of amphamide I. For all data, the average value and standard deviation were calculated, the differences are considered significant with p≤0.05. Doses characterizing the toxicity of glutamate amfamide I, calculated according to the method of Litchfield and Wilcoxon:
ЛД50=10,7 (8,0÷13,4) мг/кгLD 50 = 10.7 (8.0 ÷ 13.4) mg / kg
МПД (ЛД10)=3,8 мг/кгMTD (LD 10 ) = 3.8 mg / kg
ЛД16=5,3 мг/кгLD 16 = 5.3 mg / kg
ЛД84=16,1 мг/кгLD 84 = 16.1 mg / kg
ЛД100=18,9 мг/кгLD 100 = 18.9 mg / kg
Из литературных данных [Proffitt R.T., Satorius A., Chiang S.-M., Sullivan L., Adler-Moore J.-P. Pharmacology and toxicology of a liposomal formulation of amphotericin В (AmBisome) in rodents. J.Antimicrob. Chemoth., 1991, v. 28, s. B, pp. 49-61] доза, характеризующая острую токсичность амфотерицина В на крысах, при внутривенном введении составляет:From the literature [Proffitt R.T., Satorius A., Chiang S.-M., Sullivan L., Adler-Moore J.-P. Pharmacology and toxicology of a liposomal formulation of amphotericin B (AmBisome) in rodents. J. Antimicrob. Chemoth., 1991, v. 28, s. B, pp. 49-61] dose, which characterizes the acute toxicity of amphotericin B in rats, with intravenous administration is:
ЛД50=1,6 мг/кг.LD 50 = 1.6 mg / kg.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что фармацевтическая композиция N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В (состав 6) обладает достоверно меньшей острой токсичностью в сравнении в амфотерицином В.Thus, the data obtained indicate that the pharmaceutical composition of N- (2-aminoethyl) amide amphotericin B (composition 6) has significantly less acute toxicity compared to amphotericin B.
Противогрибковый полусинтетический полиеновый антибиотик, его водорастворимые соли и фармацевтические композиции на их основеAntifungal semi-synthetic polyene antibiotic, its water-soluble salts and pharmaceutical compositions based on them
Формула IFormula I
Схема 1
Claims (11)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018112831A RU2688658C1 (en) | 2018-04-10 | 2018-04-10 | Antifungal semi-synthetic polyene antibiotic, water-soluble salts thereof and pharmaceutical compositions based thereon |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018112831A RU2688658C1 (en) | 2018-04-10 | 2018-04-10 | Antifungal semi-synthetic polyene antibiotic, water-soluble salts thereof and pharmaceutical compositions based thereon |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2688658C1 true RU2688658C1 (en) | 2019-05-22 |
Family
ID=66636620
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018112831A RU2688658C1 (en) | 2018-04-10 | 2018-04-10 | Antifungal semi-synthetic polyene antibiotic, water-soluble salts thereof and pharmaceutical compositions based thereon |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2688658C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2751333C1 (en) * | 2020-12-16 | 2021-07-13 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" | Method for obtaining antifungal semisynthetic polyene antibiotic |
| WO2023274313A1 (en) * | 2021-06-29 | 2023-01-05 | 中国科学院上海药物研究所 | Amphotericin b semi-synthetic derivative, preparation method therefor and use thereof |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6284736B1 (en) * | 1989-12-08 | 2001-09-04 | Beecham Group, Plc | Amphotericin derivatives |
| RU2007148974A (en) * | 2005-06-06 | 2009-07-20 | Медфарм Лимитед (Gb) | COMPOSITIONS FOR LOCAL APPLICATION FOR NAILS |
| WO2013186384A1 (en) * | 2012-06-15 | 2013-12-19 | Blirt S.A. | N-substituted second generation derivatives of antifungal antibiotic amphotericin b and methods of their preparation and application |
| WO2015164289A1 (en) * | 2014-04-21 | 2015-10-29 | Cidara Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of fungal infections |
| WO2016112260A1 (en) * | 2015-01-08 | 2016-07-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Concise synthesis of urea derivatives of amphotericin b |
-
2018
- 2018-04-10 RU RU2018112831A patent/RU2688658C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6284736B1 (en) * | 1989-12-08 | 2001-09-04 | Beecham Group, Plc | Amphotericin derivatives |
| RU2007148974A (en) * | 2005-06-06 | 2009-07-20 | Медфарм Лимитед (Gb) | COMPOSITIONS FOR LOCAL APPLICATION FOR NAILS |
| WO2013186384A1 (en) * | 2012-06-15 | 2013-12-19 | Blirt S.A. | N-substituted second generation derivatives of antifungal antibiotic amphotericin b and methods of their preparation and application |
| WO2015164289A1 (en) * | 2014-04-21 | 2015-10-29 | Cidara Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of fungal infections |
| WO2016112260A1 (en) * | 2015-01-08 | 2016-07-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Concise synthesis of urea derivatives of amphotericin b |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2751333C1 (en) * | 2020-12-16 | 2021-07-13 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" | Method for obtaining antifungal semisynthetic polyene antibiotic |
| WO2023274313A1 (en) * | 2021-06-29 | 2023-01-05 | 中国科学院上海药物研究所 | Amphotericin b semi-synthetic derivative, preparation method therefor and use thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2250763C2 (en) | Pharmaceutical echinocandine preparations containing micelle- forming surface-active agents | |
| KR101309409B1 (en) | 3-ether and 3-thioether substituted cyclosporin derivatives for the treatment and prevention of hepatitis c infection | |
| KR101502533B1 (en) | Stable pharmaceutical composition containing Taxane derivatives, and method of manufacturing the same | |
| US8304450B2 (en) | Stable pharmaceutical compositions with docetaxel | |
| US20090221688A1 (en) | Pharmaceutical compositions containing docetaxel and a degradation inhibitor and a process for obtaining the same | |
| US12053502B2 (en) | Daptomycin formulations | |
| KR20070112762A (en) | Preventive/therapeutic composition for free radical disease | |
| EA002776B1 (en) | Pharmaceutical composition containing cyclodextrins and taxoids | |
| Risinger et al. | Targeting and extending the eukaryotic druggable genome with natural products: Cytoskeletal targets of natural products | |
| BG64272B1 (en) | Antimycotic substance-containing and acetate buffer-containing compositions | |
| RU2688658C1 (en) | Antifungal semi-synthetic polyene antibiotic, water-soluble salts thereof and pharmaceutical compositions based thereon | |
| WO2018073269A1 (en) | Liquid formulations of daptomycin | |
| DK2922530T3 (en) | Caspofunginacetatformuleringer | |
| JPS61286325A (en) | Therapy for immune deficiency | |
| EP3806882A1 (en) | Synthesis of echinocandin antifungal agent | |
| US20150196669A1 (en) | Complex of garcinol, cyclodextrin and method thereof | |
| RU2554939C1 (en) | Antitumour anthrafurandione and based pharmaceutical compositions | |
| US20060293242A1 (en) | Transporting of taxoid derivatives through the blood brain barrier | |
| KR20200059221A (en) | Parenteral formulation containing siphonimod | |
| AU2008340179B2 (en) | Pharmaceutical composition for the parenteral administration of ultrashort-effective beta-adrenoreceptor antagonists | |
| RU2827992C1 (en) | Glycopeptide antibiotic salt and pharmaceutical compositions based thereon | |
| CN113952468B (en) | Cyclosporin A nano-drug for treating myocardial ischemia reperfusion injury | |
| WO2017037232A1 (en) | Anidulafungin formulations | |
| KR20240121186A (en) | Injectable composition, pharmaceutical formulation including the same, and method for preparing the composition | |
| CN115960162A (en) | Membrane-disturbed anti-tumor nano lipopeptide and preparation method and application thereof |